EA023079B1 - Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) - Google Patents
Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) Download PDFInfo
- Publication number
- EA023079B1 EA023079B1 EA201201594A EA201201594A EA023079B1 EA 023079 B1 EA023079 B1 EA 023079B1 EA 201201594 A EA201201594 A EA 201201594A EA 201201594 A EA201201594 A EA 201201594A EA 023079 B1 EA023079 B1 EA 023079B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- buffer solution
- extrusion
- liposomes
- irinotecan
- hydration
- Prior art date
Links
Abstract
Description
В настоящее время известно применение препаратов группы камптотецинов, природных пентациклических алкалоидов с пирроло[3,4-Ъ]хинолиновым ядром, сконденсированным с 2-пиридоновым кольцом [1,2], в частности иринотекана, как активного фармацевтического ингредиента для лечения онкологических заболеваний [3,4], таких как местно-распространенный или метастатический колоректальный рак. Каптотецин извлекается из дерева Сатр1о1йеса аситша1а, ΝοίαροάνΙοκ Гоейба [5,6]. Иринотекан представляет собой полусинтетическое соединение с брутто-формулой С33Н3^4О6. Терапевтическое действие иринотекана и его метаболита §N-38 проявляется за счёт стабилизации ковалентного комплекса топоизомеразы I с ДНК, в котором одна из цепей ДНК разорвана, что препятствует ее репликации. Кроме противораковой активности, наиболее значимый фармакологический эффект препарата - ингибирование ацетилхолинэстеразы.Currently, it is known to use preparations of the camptothecin group, natural pentacyclic alkaloids with pyrrolo [3,4-b] quinoline core, condensed with a 2-pyridone ring [1,2], in particular irinotecan, as an active pharmaceutical ingredient for the treatment of cancer [3 , 4], such as locally advanced or metastatic colorectal cancer. Captothecin is extracted from the Satr1o1esa asitsha1a tree, Goeba [5,6]. Irinotecan is a semi-synthetic compound with a gross formula C 33 H 3 ^ 4 O 6 . The therapeutic effect of irinotecan and its metabolite §N-38 is manifested due to the stabilization of the covalent complex of topoisomerase I with DNA, in which one of the DNA chains is broken, which prevents its replication. In addition to anticancer activity, the most significant pharmacological effect of the drug is the inhibition of acetylcholinesterase.
Однако, несмотря на достоинства в клинике, применение иринотекана ограничивается из-за высокой токсичности [7,8,9,10]: гематологической, кардиоваскулярной и реакциях со стороны желудочнокишечного тракта и печени.However, despite the advantages in the clinic, the use of irinotecan is limited due to the high toxicity [7,8,9,10]: hematological, cardiovascular and reactions from the gastrointestinal tract and liver.
Стабильность иринотекана находится в границах рН от 2 до 5. Учитывая, что рН крови составляет 7,37-7,44, при введении иринотекан частично деградирует на неактивные компоненты, которые, однако, могут проявлять признаки токсичности. В экспериментах ίη-νίΐΓο уже через 30 мин нахождения при рН 7,4 (рН крови) в фосфатном буфере от начальной концентрации иринотекана остаётся 89,7%, а через 2 ч изменению подвергается около 50% активного вещества [11].The stability of irinotecan is in the range of pH from 2 to 5. Given that the blood pH is 7.37-7.44, with the introduction of irinotecan partially degrades to inactive components, which, however, may exhibit signs of toxicity. In ίη-νίΐΓο experiments, after 30 minutes of being at pH 7.4 (blood pH) in the phosphate buffer, 89.7% of the initial concentration of irinotecan remained, and after 2 hours about 50% of the active substance undergoes a change [11].
Одним из современных методов преодоления проблемы преждевременной деградации активного ингредиента, снижения токсичности и повышения целенаправленности терапии при лечении онкологических заболеваний является использование липидных транспортных систем - липосом [12,13]. Преимуществом липосом является нахождение активного вещества инкапсулированным внутри фосфолипидной везикулы, в благоприятной среде, в которой вещество не проявляет признаков деградации, или в фосфолипидном бислое. Липосомы, имея размер 50-150 нм способны к пролонгированному циркулированию в организме, повышая период нахождения лекарственного средства в кровеносной системе, и тем самым, улучшая терапевтические показатели.One of the modern methods to overcome the problem of premature degradation of the active ingredient, reduce toxicity and increase the focus of therapy in the treatment of cancer is the use of lipid transport systems - liposomes [12,13]. An advantage of liposomes is that the active substance is encapsulated inside a phospholipid vesicle, in a favorable environment in which the substance shows no signs of degradation, or in a phospholipid bilayer. Liposomes, having a size of 50-150 nm, are capable of prolonged circulation in the body, increasing the period of the drug in the circulatory system, and thereby improving therapeutic parameters.
Опухолевые клетки имеют особенность в строении кровеносных капилляров - их эндотелиальные клетки не плотно прилегают друг к другу, давая возможность частицам до 200 нм проникать в межклеточное пространство. Этот факт, а так же замедленный лимфатический дренаж внутри опухоли создаёт возможности для целевого накопления липосом с цитотоксическим лекарственным средством внутри опухолей, с последующим высвобождением содержимого. Такой эффект даёт повышение концентрации активной субстанции в органе, нуждающемся в терапии, в сравнении с остальным организмом, и ведёт к снижению токсичности.Tumor cells have a peculiarity in the structure of blood capillaries - their endothelial cells do not fit tightly together, allowing particles up to 200 nm to penetrate into the intercellular space. This fact, as well as delayed lymphatic drainage inside the tumor, creates opportunities for the targeted accumulation of liposomes with a cytotoxic drug inside the tumors, followed by release of the contents. This effect gives an increase in the concentration of the active substance in the body in need of therapy, in comparison with the rest of the body, and leads to a decrease in toxicity.
Инкапсуляция активного вещества в липосому возможна несколькими путями, такими как пассивная инкапсуляция на стадии формирования липидного бислоя, химическая адсорбция за счёт образования связи липид-вещество, создание мембранных градиентов на поверхности мембраны, которые позволяют веществу проникать через мембрану липосомы во внутреннюю среду. При этом заряд, сообщённый аминогруппе вещества способствует более выгодному термодинамическому состоянию, и активному накоплению лекарственного средства в наночастице. При таком подходе инкапсуляция может достигать 80-100%. Метод трансмембранных градиентов хорошо зарекомендовал себя при создании ряда липосомальных препаратов - таких как Сае1ух, МуосеГ', ОеросуГ'. Отличительной особенностью активных ингредиентов данных препаратов является наличие свободной аминогруппы, которая обеспечивает необходимое протонирование вещества внутри липосомы и его удержание в инкапсулированном состоянии.Encapsulation of the active substance in the liposome is possible in several ways, such as passive encapsulation at the stage of formation of the lipid bilayer, chemical adsorption due to the formation of a lipid-substance bond, the creation of membrane gradients on the membrane surface, which allow the substance to penetrate through the liposome membrane into the internal environment. In this case, the charge imparted to the amino group of the substance contributes to a more favorable thermodynamic state, and active accumulation of the drug in the nanoparticle. With this approach, encapsulation can reach 80-100%. The transmembrane gradient method has proven itself in creating a number of liposomal preparations - such as Caeuh, MuoseG ', OerosuG'. A distinctive feature of the active ingredients of these preparations is the presence of a free amino group, which provides the necessary protonation of the substance inside the liposome and its retention in the encapsulated state.
Известен способ получения липосомальной формы иринотекана [14] предусматривающий формирование раствора липидов, с соотношением иринотекан-липиды 1 : 2-5, упаривание в вакууме на роторном испарителе, затем непосредственное гидратирование полученной плёнки буферным раствором, экструзию при 1000 атм, замена буфера и формирование градиента концентрации протонов на мембране, загрузку активного компонента иринотекана с последующей инкубацией при 60°С, добавление регулятора осмотического давления в концентрации до 5%, стерилизующую фильтрация с последующим розливом жидкого препарата или лиофилизацией. При этом рН препарата, согласно данным таблицы в блоке 0100, согласно нумерации [14] составляет 6,38-6,47. Размер липосом составляет 10-220 нм, в зависимости от эксперимента.A known method for producing the liposomal form of irinotecan [14] provides for the formation of a lipid solution with an irinotecan lipid ratio of 1: 2-5, evaporation in a vacuum on a rotary evaporator, then direct hydration of the obtained film with a buffer solution, extrusion at 1000 atm, buffer replacement and gradient formation proton concentration on the membrane, loading the active component of irinotecan, followed by incubation at 60 ° C, adding an osmotic pressure regulator at a concentration of up to 5%, sterilizing filtration with osleduyuschim filling liquid formulation or by lyophilization. In this case, the pH of the drug, according to the table in block 0100, according to the numbering [14] is 6.38-6.47. The size of liposomes is 10-220 nm, depending on the experiment.
Однако в [14] используются операции, составы и условия, затрудняющие реализацию способа и способствующие снижению качества получаемой композиции. Во-первых, указывается на непосредственный переход от упаривания раствора липидов и получения плёнки к гидратированию буферным раствором. Опыт, однако, показывает, что на данной стадии необходим этап длительной (не менее 10 часов) сушки под вакуумом около 0,05 атм. Это обусловлено тем, что компоненты раствора липидов, а именно этиловый спирт и хлороформ плохо улетучиваются из полученной плёнки, и далее, являются остаточными органическими растворителями, которые могут проявлять токсические эффекты при терапии (в частности хлороформ), при этом этанол, проявляя свойства детергента, уменьшает стабильность липиднойHowever, in [14], operations, compositions and conditions are used that impede the implementation of the method and contribute to lowering the quality of the resulting composition. Firstly, it indicates a direct transition from evaporation of the lipid solution and obtaining a film to hydration with a buffer solution. Experience, however, shows that at this stage a stage of long-term (at least 10 hours) drying under a vacuum of about 0.05 atm is necessary. This is due to the fact that the components of the lipid solution, namely ethyl alcohol and chloroform, poorly volatilize from the resulting film, and further, they are residual organic solvents that can exhibit toxic effects during therapy (in particular chloroform), while ethanol, exhibiting detergent properties, reduces lipid stability
- 1 023079 мембраны. Во-вторых, в [14] указывается на необходимость нагрева до 60°С для улучшения инкапсуляции. Воспроизводство метода [14] показывает, что даже на сочетании яичный фосфатидилхолин : холестерин 4 : 1 происходит ухудшение инкапсуляции при данной технологической операции. Так же, не учтена необходимость обработки липидной плёнки на стадии гидратирования ультразвуком, поскольку смеси фосфолипидов с холестерином имеют высокие значения фазового перехода (выше 50°С), и не гидратируются при обычном перемешивании даже в случае высокой длительности. В-третьих, в [14] не указана концентрация криопротектора, а указана концентрация осмотического регулятара - вещества группы сахаров в районе до 5%. Выявлено, однако, что концентрация криопротектора крайне важна для предотвращения укрупнения липосом после проведения лиофильного высушивания и регидратации. Вчетвертых, в [14] указывается на рН липосомальной композиции в диапазоне 6,38-6,47, однако, воспроизводство данного параметров, а так же работа [11], указывает, что уже при рН 6,0 за 30 мин происходит деградация иринотекана до 94,5% от начальной концентрации, что соответствует 5,5% примесей и является неприемлемым для качества получаемого лекарственного средства.- 1 023079 membranes. Secondly, in [14] the necessity of heating to 60 ° С is indicated to improve encapsulation. Reproduction of the method [14] shows that even on the combination of egg phosphatidylcholine: 4: 1 cholesterol, encapsulation worsens during this technological operation. Also, the need to treat the lipid film at the stage of hydration with ultrasound was not taken into account, since mixtures of phospholipids with cholesterol have high phase transition values (above 50 ° C), and do not hydrate with normal stirring, even in the case of a long duration. Thirdly, the concentration of the cryoprotectant is not indicated in [14], but the concentration of the osmotic regulator, a substance of the sugar group in the region up to 5%, is indicated. However, it was revealed that the concentration of cryoprotectant is extremely important for preventing liposome enlargement after freeze drying and rehydration. Fourth, in [14] the pH of the liposome composition is indicated in the range 6.38–6.47, however, the reproduction of these parameters, as well as the work [11], indicates that even at pH 6.0, irinotecan degrades in 30 minutes up to 94.5% of the initial concentration, which corresponds to 5.5% of impurities and is unacceptable for the quality of the resulting drug.
Приведенные недостатки снижают эффективность способа прототипа в процессе его воспроизводства, а также стабильность и качество получаемого продукта как лекарственного средства. Задача заявляемого способа сводится к устранению указанных недостатков, при этом результат, полученный при решении поставленной задачи, состоит в повышении качества получаемого продукта, повышении технологичности процесса получения и стабильности препарата при хранении.The above disadvantages reduce the effectiveness of the prototype method in the process of its reproduction, as well as the stability and quality of the resulting product as a drug. The objective of the proposed method is to eliminate these drawbacks, while the result obtained when solving the problem is to improve the quality of the resulting product, improving the manufacturability of the process of preparation and stability of the drug during storage.
Для достижения поставленного результата предлагаются варианты способа получения липосомальной системы на основе фосфолипидов (яичный фосфатидилхолин, гидрогенезованый соевый фосфатидилхолин, фосфатидилглицерол), холестерина и иринотекана.To achieve the desired result, variants of a method for producing a liposome system based on phospholipids (egg phosphatidylcholine, hydrogenated soybean phosphatidylcholine, phosphatidylglycerol), cholesterol and irinotecan are proposed.
Так, первый из заявленных вариантов способа получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме включает получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляют добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии, или после добавления иринотекана.So, the first of the claimed variants of the method for producing an antitumor drug in liposomal form includes the preparation of a lipid film based on phospholipids and cholesterol, drying it to remove the solvent, hydration with a buffer solution in an ultrasonic bath, extrusion at 1500 atm until the liposomes are 80-120 nm in size, creating a gradient of hydrogen ions between the internal and external environment of liposomes and the addition of irinotecan hydrochloride to the resulting emulsion, followed by sterile filtration and freeze drying or asept by pouring the resulting preparation into liquid storage vials, cryoprotectant is added during or after extrusion or fractionally, initially by hydration in an ultrasonic bath, and then during extrusion, or after the addition of irinotecan.
Такой вариант может предполагать использование при гидратировании цитратного буферного раствора, при этом создание градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом проводят путем его замены на фосфатный буферный раствор, при этом рН раствора на стадии замены составляет не более 5,2. Кроме того, в качестве криопротектора может быть использована лактоза, трегалоза, сахароза, мальтоза или их смеси в количестве не менее 6 обьёмно-массовых %, а в качестве фосфолипидов - фосфатидилхолин, или фосфатидилглицерол, или их семи.This option may involve the use of a citrate buffer solution during hydration, while creating a gradient of hydrogen ions between the internal and external environment of liposomes is carried out by replacing it with a phosphate buffer solution, while the pH of the solution at the stage of replacement is not more than 5.2. In addition, lactose, trehalose, sucrose, maltose, or a mixture thereof, in an amount of at least 6% by volume, and phosphatidylcholine, or phosphatidylglycerol, or seven of them, can be used as a cryoprotectant.
Второй из заявленных вариантов способа получения противоопухолевого препарата в липосомальной форме включает получение липидной пленки на основе фосфолипидов и холестерина, её сушку до удаления растворителя, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане, экструзию при 1500 атм. до достижения размеров липосом 80-120 нм, и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляют добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии.The second of the claimed variants of the method for producing an antitumor drug in liposomal form involves the preparation of a lipid film based on phospholipids and cholesterol, drying it to remove the solvent, hydration with a buffer solution in an ultrasonic bath, extrusion at 1500 atm. until the liposome size reaches 80-120 nm, and hydrochloride is added to the resulting emulsion of irinotecan, followed by sterile filtration and freeze-drying or aseptic filling of the resulting preparation into liquid storage bottles, cryoprotectant is added during or after extrusion or fractionally, initially when hydrated in an ultrasonic bath, and then in the process of extrusion.
Второй вариант также предполагает использование в качестве криопротектора лактозы, трегалозы, сахарозы, мальтозы или их смеси в количестве не менее 6 обьёмно-массовых %, а в качестве фосфолипидов - фосфатидилхолина или фосфатидилглицерола или их смеси.The second option also involves the use as a cryoprotectant of lactose, trehalose, sucrose, maltose or a mixture thereof in an amount of at least 6% by volume, and phosphatidylcholine or phosphatidylglycerol or a mixture thereof as phospholipids.
В общем виде первый из вариантов предусматривает получение липидной смеси фосфолипиды : холестерин в соотношении 4:1, соответственно, путём их растворения в хлороформе, упаривание при пониженном давлении до образования плёнки, хранение в течении 10 ч в вакуум-сушильном шкафу при давлении 0,05 атм и температуре 20°С, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане (мощность генератора 100 Вт) при 30°С в течении 90 мин, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80-120 нм с созданием градиента ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом, и добавление к полученной эмульсии иринотекана гидрохлорида с последующей стерильной фильтрацией и лиофильной сушкой или асептическим розливом полученного препарата во флаконы для хранения в жидком виде, при этом осуществляли добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии, или после добавления иринотекана.In general terms, the first of the options involves obtaining a lipid mixture of phospholipids: cholesterol in a ratio of 4: 1, respectively, by dissolving them in chloroform, evaporating under reduced pressure to form a film, and storing it for 10 hours in a vacuum oven at a pressure of 0.05 atm and a temperature of 20 ° С, hydration with a buffer solution in an ultrasonic bath (generator power 100 W) at 30 ° С for 90 min, extrusion at 1500 atm until liposome sizes of 80-120 nm are reached with the creation of a gradient of hydrogen ions between the internal and external medium of liposomes, and addition of irinotecan hydrochloride to the resulting emulsion, followed by sterile filtration and freeze drying or aseptic filling of the resulting preparation into liquid storage bottles, while cryoprotectant was added during or after extrusion or fractionally, initially by hydration in an ultrasonic bath, and then during the extrusion process, or after the addition of irinotecan.
Второй из вариантов предусматривает получение липидной смеси фосфолипиды : холестерин в соотношении 4:1, соответственно, путём их растворения в хлороформе, упаривание при пониженном давлении до образования плёнки, хранение в течении 10 ч в вакуум-сушильном шкафу при давлении 0,05 атм и температуре 20°С, гидратирование буферным раствором на ультразвуковой бане (мощность гене- 2 023079 ратора 100 Вт) при 30°С в течении 90 мин, экструзию при 1500 атм до достижения размеров липосом 80120 нм, лиофилизацию полученной липосомальной эмульсии и соединение при перемешивании лиофильно высушенной эмульсии и раствора иринотекана непосредственно перед введением, при этом осуществляли добавление криопротектора в процессе или после экструзии или дробно, первоначально при гидратировании на ультразвуковой бане, а затем - в процессе экструзии.The second option involves obtaining a lipid mixture of phospholipids: cholesterol in a ratio of 4: 1, respectively, by dissolving them in chloroform, evaporation under reduced pressure to form a film, storage for 10 hours in a vacuum oven at a pressure of 0.05 atm and temperature 20 ° С, hydration with a buffer solution in an ultrasonic bath (generator power 023079 100 W) at 30 ° С for 90 min, extrusion at 1500 atm until the liposome size is 80 120 nm, lyophilization of the obtained liposomal emulsion and connection eshivanii lyophilized emulsion and irinotecan solution immediately prior to administration, was carried out with the addition of a cryoprotectant during or after extrusion or fractional initially when hydrated in an ultrasonic bath, and then - during the extrusion process.
Способ иллюстрируется графиками фармакокинетических профилей иринотекана в печени, мозге, почках и сердце крыс (рис. 1-4, соответственно).The method is illustrated by graphs of the pharmacokinetic profiles of irinotecan in the liver, brain, kidneys and heart of rats (Fig. 1-4, respectively).
Качество полученного продукта оценивалось методом гель-фильтрации на колонке Тпсот 5 мм на 150 мм в среде 0,1М фосфатного буфера с рН 5,0 для определения инкапсуляции. Количественное определение и определение состава примесей проводили высокоэффективной жидкостной хроматографией на колонке заполненной октадецилсиликагелем (на приборе δΐιίιηηάζιι ЬС-20, при длине волны 220 нм).The quality of the obtained product was evaluated by gel filtration on a Tpsot column of 5 mm by 150 mm in 0.1 M phosphate buffer with a pH of 5.0 to determine encapsulation. Quantitative determination and determination of the composition of impurities was carried out by high performance liquid chromatography on a column filled with octadecyl silica gel (on a δΐιίιηηάζιι ЬС-20 instrument, at a wavelength of 220 nm).
Размер частиц оценивался на приборе фирмы Ма1уегп ΖοΙαδίζοΓ папо Ζδ, методом фотонной корелляционной спектроскопии. Размер частиц измерялся при помощи полупроводникового лазера при длине волны 375 ни.Particle size was estimated on a Papo Ζδ instrument made by Ma1uegp ΖοΙαδίζοΓ using the method of photon correlation spectroscopy. Particle size was measured using a semiconductor laser at a wavelength of 375 ni.
Приведенные конкретные примеры иллюстрируют процесс получения липосомальной композиции согласно заявленному способу, примеры 1-5, и способу согласно прототипу 6, 7.The specific examples given illustrate the process of obtaining a liposome composition according to the claimed method, examples 1-5, and the method according to the prototype 6, 7.
Пример 1. 4 г смеси (яичный фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при температуре при 36°С до получения липидной плёнки. Далее колбу с липидной плёнкой помещали в вакуумсушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.Example 1. 4 g of the mixture (egg phosphatidylcholine: cholesterol in a ratio of 4: 1) was dissolved in 100 ml of chloroform, filtered through 0.22 μm membranes, evaporated in vacuo at 36 ° C until a lipid film was obtained. Next, the flask with the lipid film was placed in a vacuum oven and kept for 10 h at 20 ° С and 0.05 atm to remove the residual amount of chloroform.
Липидную плёнку гидратировали стерильным раствором нитратного буфера с рН 2,0 с 4,5 г криопротектора лактозы на ультразвуковой бане при температуре 30°С в течении 90 мин в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгойшДюк М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером не менее 85 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5 и 4,5 г криопротектора лактозы, что создавало градиент ионов водорода между внутренней и внешней средой липосом. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом отсечения 30 КЭа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 150 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составил 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида (в пересчёте на безводное основание). Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.The lipid film was hydrated with a sterile solution of nitrate buffer with a pH of 2.0 with 4.5 g of lactose cryoprotectant in an ultrasonic bath at a temperature of 30 ° C for 90 min in the presence of nitrogen. The resulting emulsion was extruded on a MyugoyshDyuk M-110P instrument at 1500 atm. Conducted 6 cycles of extrusion to obtain liposomes with a size of at least 85 nm. Then, a citrate buffer with pH 2.0 was replaced with 0.1 M phosphate buffer with a pH of 4.5 and 4.5 g of lactose cryoprotectant, which created a gradient of hydrogen ions between the internal and external environment of the liposomes. Replacement of the buffer was carried out on the installation of tangential filtration company Ra11 M1pcs 2, on a cartridge with a cutoff threshold of 30 KEa. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm. According to correlation spectroscopy, particles larger than 150 nm were absent. The volume of the emulsion obtained was 150 ml. 300 mg of irinotecan hydrochloride (in terms of anhydrous base) was added to the emulsion. Encapsulation was carried out at 20 ° C for 25 minutes. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm.
По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 86%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в среде инертного газа (азота). Продукт представлял собой лёгкую бело-жёлтую аморфную массу с характерным запахом. Основная масса частиц после регидратации продукта представлена размером - 98 нм. Частицы крупнее 200 нм отсутствовали. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,8%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : холестерин : лактоза - (1:8:2:30)According to gel filtration, the degree of encapsulation was 86%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an inert gas (nitrogen). The product was a light white-yellow amorphous mass with a characteristic odor. The bulk of the particles after rehydration of the product is represented by a size of 98 nm. Particles larger than 200 nm were absent. Storage of the drug at temperatures from 2 to 8 ° C for 6 months showed a high stability of the drug. The chromatographic purity of irinotecan, according to HPLC, was 99.8%. The ratio of components in the preparation of irinotecan: phosphatidylcholine: cholesterol: lactose - (1: 8: 2: 30)
Пример 2.Example 2
г смеси (гидрогенезованный соевый фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при температуре при 36°С до получения плёнки при 36°С. Далее колбу с липидной плёнкой помещали в вакуум-сушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.g of the mixture (hydrogenated soybean phosphatidylcholine: cholesterol in the ratio 4: 1) was dissolved in 100 ml of chloroform, filtered through 0.22 μm membranes, evaporated in vacuo at 36 ° С until a film was obtained at 36 ° С. Next, the flask with the lipid film was placed in a vacuum drying oven and kept for 10 h at 20 ° С and 0.05 atm to remove the residual amount of chloroform.
Липидную плёнку гидратировали стерильным раствором цитратного буфера с рН 2,0 на ультразвуковой бане при температуре 30°С в течении 90 мин в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгойшДюк М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером не менее 67 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом отсечения 30 КЭа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 120 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составил 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида (в пересчёте на безводное основание). Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин, затем добавляли хлорид натрия до концентрации 9 г/л. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.The lipid film was hydrated with a sterile solution of citrate buffer with a pH of 2.0 in an ultrasonic bath at a temperature of 30 ° C for 90 min in the presence of nitrogen. The resulting emulsion was extruded on a MyugoyshDyuk M-110P instrument at 1500 atm. Conducted 6 cycles of extrusion to obtain liposomes with a size of at least 67 nm. Then, a citrate buffer with a pH of 2.0 was replaced with a 0.1 M phosphate buffer with a pH of 4.5. Replacement of the buffer was carried out on the installation of tangential filtration company Ra11 M1pcs 2, on a cartridge with a cutoff threshold of 30 KEa. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm. According to correlation spectroscopy, particles larger than 120 nm were absent. The volume of the emulsion obtained was 150 ml. 300 mg of irinotecan hydrochloride (in terms of anhydrous base) was added to the emulsion. Encapsulation was carried out at 20 ° C for 25 min, then sodium chloride was added to a concentration of 9 g / L. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm.
По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 85%. Эмульсию разливали во флаконы и герметизировали в среде инертного газа (азота). Продукт представлял собой лёгкую светложёлтую опалесцирующую эмульсию. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 мес продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,6%. Увеличения частиц при хранении по данным корреляционной спектро- 3 023079 скопии не происходило. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : гидрогенезованый соевый фосфатидилхолин : холестерин : натрия хлорид - (1:8:2:30).According to gel filtration, the degree of encapsulation was 85%. The emulsion was poured into vials and sealed in an inert gas (nitrogen). The product was a light light yellow opalescent emulsion. Storage of the drug at temperatures from 2 to 8 ° C for 6 months showed a high stability of the drug. The chromatographic purity of irinotecan, according to HPLC, was 99.6%. An increase in particles during storage according to the data of correlation spectroscopy did not occur. The ratio of the components in the preparation irinotecan: hydrogenated soybean phosphatidylcholine: cholesterol: sodium chloride - (1: 8: 2: 30).
Пример 3.Example 3
г смеси (яичный фосфатидилхолин : яичный фосфатидилглицерол : холестерин в соотношении 3,5 : 0,5 : 1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм, упаривали в вакууме при 36°С до получения липидной плёнки. Далее липидную плёнку помещали в вакуумсушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа.g of the mixture (egg phosphatidylcholine: egg phosphatidylglycerol: cholesterol in a ratio of 3.5: 0.5: 1) was dissolved in 100 ml of chloroform, filtered through a filter with a pore size of 0.22 μm, evaporated in vacuum at 36 ° C to obtain a lipid film . Next, the lipid film was placed in a vacuum oven and kept for 10 h at 20 ° С and 0.05 atm to remove the residual amount of chloroform.
Плёнку гидратировали стерильным цитратным буфером с рН 2,0, на ультразвуковой бане в течении 90 мин при 30°С в присутствии азота. Полученную липидную эмульсию подвергали экструзии на приборе МэстойшФск М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с основной массой частиц размером 94 нм. Затем проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5. Замену буфера осуществляли на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 Μίη1т 2, на кассете с порогом отсечения 30 КОа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 120 нм отсутствовали. Объем полученной эмульсии составлял 150 мл. К эмульсии прибавляли 300 мг иринотекана гидрохлорида, в пересчёте на безводное основание. Инкапсуляцию проводили при 20°С в течении 25 мин, затем добавляли 9 г безводной трегалозы в качестве криопротектора. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации через 0,22 мкм.The film was hydrated with sterile citrate buffer at pH 2.0 in an ultrasonic bath for 90 min at 30 ° C in the presence of nitrogen. The resulting lipid emulsion was extruded on a MestoishFsk M-110P instrument at 1500 atm. Conducted 6 cycles of extrusion to obtain liposomes with a bulk particle size of 94 nm. Then, a citrate buffer with a pH of 2.0 was replaced with a 0.1 M phosphate buffer with a pH of 4.5. The buffer was replaced on a tangential filtration unit of the company Pa11 Μίη1t 2, on a cartridge with a cutoff threshold of 30 KOa. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm. According to correlation spectroscopy, particles larger than 120 nm were absent. The volume of the emulsion obtained was 150 ml. 300 mg of irinotecan hydrochloride was added to the emulsion, calculated on the basis of the anhydrous base. Encapsulation was carried out at 20 ° C for 25 min, then 9 g of anhydrous trehalose was added as a cryoprotectant. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step through 0.22 μm.
По данным гель фильтрации - степень инкапсуляции составляла 97%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа. Продукт представлял собой лёгкую беложёлтую аморфную массу с характерным запахом. Основная масса липосом после регидратации представлена частицами с размером - 108 нм. Частицы крупнее 220 нм отсутствовали. Хранение препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, по данным ВЭЖХ составляла 99,7%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : фосфатидилглицерол : холестерин : трегалоза (1:7:1: 2 : 30).According to gel filtration, the degree of encapsulation was 97%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an inert gas. The product was a light white-yellow amorphous mass with a characteristic odor. The bulk of liposomes after rehydration is represented by particles with a size of 108 nm. Particles larger than 220 nm were absent. Storage of the drug at temperatures from 2 to 8 ° C for 6 months showed a high stability of the drug. The chromatographic purity of irinotecan, according to HPLC, was 99.7%. The ratio of the components in the preparation irinotecan: phosphatidylcholine: phosphatidylglycerol: cholesterol: trehalose (1: 7: 1: 2: 30).
Пример 4.Example 4
г смеси (яичный фосфатидилхолин : холестерин в соотношении 4:1) растворяли в 100 мл хлороформа, фильтровали через фильтр 0,22 мкм, и упаривали в вакууме при 36°С до получения липидной плёнки. Далее плёнку помещали в вакуум-сушильный шкаф и выдерживали в течении 10 ч при 20°С и 0,05 атм для удаления остаточного количества хлороформа. Липидную плёнку гидратировали на ультразвуковой бане стерильным цитратным буфером с рН 2,0 в течении 90 мин при 30°С в присутствии азота. Полученную эмульсию подвергали экструзии на приборе МюгоЛшбЖ М-110Р при 1500 атм. Проводили 6 циклов экструзии до получения липосом с размером 98 нм (основная масса). Проводили замену цитратного буфера с рН 2,0 на 0,1 М фосфатного буфера с рН 4,5, на установке тангенциальной фильтрации фирмы Ра11 М1шт 2, на кассете с порогом разделения 30 КДа. Полученную эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финальной стадией фильтрации 0,22 мкм. По данным корреляционной спектроскопии частицы крупнее 140 нм отсутствуют. Объем полученной эмульсии составлял 150 мл, к эмульсии добавляли 9 г безводной лактозы в качестве криопротектора.g of the mixture (egg phosphatidylcholine: cholesterol in the ratio 4: 1) was dissolved in 100 ml of chloroform, filtered through a 0.22 μm filter, and evaporated in vacuo at 36 ° С until a lipid film was obtained. Then the film was placed in a vacuum drying oven and kept for 10 hours at 20 ° С and 0.05 atm to remove the residual amount of chloroform. The lipid film was hydrated in an ultrasonic bath with sterile citrate buffer at pH 2.0 for 90 min at 30 ° C in the presence of nitrogen. The resulting emulsion was extruded on a MugoLshbZh M-110R instrument at 1500 atm. Conducted 6 cycles of extrusion to obtain liposomes with a size of 98 nm (bulk). The citrate buffer with pH 2.0 was replaced with 0.1 M phosphate buffer with pH 4.5, on a tangential filtration unit manufactured by Ra11 M1pcs 2, on a cassette with a separation threshold of 30 KDa. The resulting emulsion was filtered through a cascade of filters, with a final filtration step of 0.22 μm. According to correlation spectroscopy, particles larger than 140 nm are absent. The volume of the obtained emulsion was 150 ml, 9 g of anhydrous lactose was added to the emulsion as a cryoprotectant.
Эмульсию разливали во флаконы по 10 мл, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа. Одновременно готовили раствор иринотекана 20 мг/мл в пересчёте на безводное основание, с содержанием лактозы 1%, фильтровали через фильтр 0,22 мкм, разливали во флаконы вместимостью 10 мл по 1 мл, лиофилизировали и укупоривали в среде инертного газа.The emulsion was poured into 10 ml vials, lyophilized and sealed in an inert gas medium. At the same time, an irinotecan solution of 20 mg / ml was prepared, calculated on an anhydrous base, with a lactose content of 1%, filtered through a 0.22 μm filter, poured into 10 ml 1 ml vials, lyophilized and sealed in an inert gas.
К высушенному раствору иринотекана одноразовым шприцем прибавляли 10 мл воды, размешивали, не доставая шприц. Далее, этим же шприцем, отбирали 10 мл раствора и переносили во флакон с лиофилизированной эмульсией. Полученный раствор интенсивно перемешивали в течение 15 мин и выдерживали 20 мин при комнатной температуре. По данным гель фильтрации степень инкапсуляции составляла 89%.10 ml of water was added to the dried irinotecan solution with a disposable syringe, stirred, without reaching the syringe. Then, with the same syringe, 10 ml of the solution was taken and transferred to a vial with lyophilized emulsion. The resulting solution was stirred vigorously for 15 minutes and kept at room temperature for 20 minutes. According to gel filtration, the degree of encapsulation was 89%.
Размер частиц после регидратации - 111 нм (основная масса частиц). Частицы крупнее 220 нм отсутствовали. Хранение лиофильно высушенного препарата при температурах от 2 до 8°С в течении 6 месяцев продемонстрировало высокую стабильность препарата. Хроматографическая чистота иринотекана, после смешивания с водой для иньекций и лиофильно высушенной эмульсией по данным ВЭЖХ составляла 99,72%. Соотношение компонентов в препарате иринотекан : фосфатидилхолин : холестерин : лактоза - (1:8:2:31).The particle size after rehydration is 111 nm (bulk particles). Particles larger than 220 nm were absent. Storage of freeze-dried preparation at temperatures from 2 to 8 ° C for 6 months has demonstrated high stability of the preparation. The chromatographic purity of irinotecan, after mixing with water for injection and freeze-dried emulsion according to HPLC was 99.72%. The ratio of components in the preparation of irinotecan: phosphatidylcholine: cholesterol: lactose - (1: 8: 2: 31).
Пример 5.Example 5
Аналогичен примеру 1 за исключением добавления после стадии ультрафильтрации 5% безводной лактозы. По данным корреляционной спектроскопии, после регидратации появлялись частицы крупнее 4 мкм, что делало невозможным иъекционное применение препарата. Это доказывало необходимость в добавлении криопротектора в концентрации не менее 6%.Similar to example 1 except for the addition of 5% anhydrous lactose after the ultrafiltration step. According to correlation spectroscopy, particles larger than 4 μm appeared after rehydration, which made it impossible to inject the drug. This proved the need for the addition of a cryoprotectant at a concentration of at least 6%.
Пример 6.Example 6
- 4 023079- 4 023079
Аналогичен примеру 1 за исключением стадии инкубации с иринотеканом, которую проводили при 60°С, согласно прототипу. По результатам гель-фильтрации степень инкпсуляции составляла 24%, при этом раствор становился мутным и по результатам корреляционной спектроскопии появлялись частицы с размером более 4 мкм, что исключало инъекционное применение препарата.Similar to example 1 except for the incubation stage with irinotecan, which was carried out at 60 ° C, according to the prototype. According to the results of gel filtration, the degree of encapsulation was 24%, while the solution became cloudy and according to the results of correlation spectroscopy particles with a size of more than 4 μm appeared, which excluded the injection use of the drug.
Пример 7.Example 7
Аналогичен примеру 1 за исключением того, что рН фосфатного буфера на стадии ультрафильтрации согласно прототипу, составляло 6,4. После проведения стадии инкапсуляции, по данным гель фильтрации, степень инкапсуляции составляла 93 %. По данным ВЭЖХ, хроматографическая чистота иринотекана составляла 92,3 %, что не соответствовало требованиям к чистоте готовой лекарственной формы и делало невозможным использование препарата.Similar to example 1 except that the pH of the phosphate buffer in the ultrafiltration step according to the prototype was 6.4. After the encapsulation stage, according to gel filtration, the degree of encapsulation was 93%. According to HPLC, the chromatographic purity of irinotecan was 92.3%, which did not meet the purity requirements of the finished dosage form and made it impossible to use the drug.
Пример 8. Исследование фармакокинетики липосомального и нелипосомального иринотекана.Example 8. The study of the pharmacokinetics of liposomal and non-liposomal irinotecan.
При однократном инъекционном введении крысам наблюдается быстрое выведение иринотекана из плазмы крови с максимальной концентрацией около 500 нг/мл. Уровни концентраций в плазме липосомального и нелипосомального иринотекана существенно не различались.With a single injection to rats, rapid excretion of irinotecan from blood plasma with a maximum concentration of about 500 ng / ml is observed. Plasma concentrations of liposomal and non-liposomal irinotecan did not differ significantly.
Существенные различия наблюдались при определении иринотекана в печени крыс. Стах для липосомальной формы составляла около 37,5 мкг/г (Ттах - 0,25 ч), для нелипосомальной - около 105 мкг/г (Ттах - 8 ч). Липосомальный иринотекан практически полностью выводился из печени к 72 ч, в отличие от нелипосомального, который сохраняется в печени к 72 ч после введения на уровне 84 мкг/г, причем наблюдается тенденция к его кумуляции.Significant differences were observed in the determination of irinotecan in the liver of rats. The max for the liposomal form was about 37.5 μg / g (T max - 0.25 h), for the non-liposomal form - about 105 μg / g (T max - 8 h). Liposomal irinotecan was almost completely eliminated from the liver by 72 hours, in contrast to non-liposomal, which remains in the liver by 72 hours after administration at 84 μg / g, with a tendency to its cumulation.
Также различия наблюдались для мозга - липосомальный иринотекан практически не проникал через ГЭБ и обнаруживался в небольших не позднее 2 ч после введения. Нелипосомальный иринотекан обнаруживался в мозге крыс даже спустя 72 ч после введения в диапазоне концентраций 800-3500 нг/г).Differences were also observed for the brain - liposomal irinotecan practically did not penetrate the BBB and was detected in small ones no later than 2 hours after administration. Non-liposomal irinotecan was detected in rat brain even 72 h after administration in the concentration range 800-3500 ng / g).
Схожие фармакокинетические профили наблюдались для почек: для липосомального иринотекана Стах составила около 57 мкг/г, для нелипосомального - 45 мкг/г (Ттах - 0,25 ч в обоих случаях).Similar pharmacokinetic profiles were observed for the kidneys: for liposomal irinotecan, C max was about 57 μg / g, for non-liposomal C 45 max / g (T max 0.25 h in both cases).
Аналогичная, как и для почек, картина наблюдалась и для сердца. Для липосомального иринотекана Стах составила около 27 мкг/г, для нелипосомального - 17 мкг/г (Ттах - 0,25 ч в обоих случаях). При этом в отличие от нелипосомальной формы, фармакокинетический профиль у липосомального иринотекана в сердце наблюдался второй максимум (около 5,3 мкг/г) спустя 24 ч после введения.A similar pattern as for the kidneys was observed for the heart. For liposomal irinotecan, C max was about 27 μg / g, for non-liposomal, 17 μg / g (T max 0.25 h in both cases). Moreover, in contrast to the non-liposomal form, the pharmacokinetic profile of liposomal irinotecan in the heart showed a second maximum (about 5.3 μg / g) 24 hours after administration.
Таким образом, в связи с низким проникновением липосомального иринотекана в печень и мозг, можно предположить о его потенциально низкой гепатотоксичности и нейротоксичности.Thus, due to the low penetration of liposomal irinotecan into the liver and brain, we can assume its potentially low hepatotoxicity and neurotoxicity.
Список литературыList of references
1. Ла11 Μ. Е., Лаш М. С, Соок С. Е., ек а1. // Т Ат. Скет. 8ос. - 1966. -Р. 3888.1. La11 Μ. E., Lash M. S, Sook S. E., EC A1. // T At. Sket. 8os. - 1966. -R. 3888.
2. Ли Т. 8.; Ьеи У.-Ь.; На: Н.-С.; ек а1. // Ркукоскет1зкгу - 1995. - Р. 383.2. Lee T. 8 .; Ley W.-b .; To: N.-S .; Ek A1. // Rkukosket 1zkgu - 1995 .-- P. 383.
3. Ьибу1д Р1зскег уои Ле1кегз1ка1к, Апбгеаз 8ска1кота, ек.а1.// Еигореап 1оигпа1 ок Сапсег // - 2011/ уо1.47 (2), Р. 206-214.3. Bibu1d R1zskeg uoy Le1kegz1ka1k, Apgegaz 8ska1kota, ek.a1. // Eigoreap 1oigpa1 ok Sapseg // - 2011 / yo1.47 (2), P. 206-214.
4. Р1ойз А. бе 1опд, Ма.)а ТА. бе 1опде, ек а1. // Ко1е ок ркаттасодепейсз ίη тпокесап ккегару // Сапсег 1еккегз - 2006/ -уо1.234 (1), Р. 90-106.4. R1oyz A. be 1opd, Ma.) And TA. be 1opde, ek a1. // Ko1e ok rkattasodepeys ίη tpokesap kkegaru // Sapseg 1ekkegz - 2006 / -uo1.234 (1), P. 90-106.
5. Соушбаскап Т. К.; У1зуапаккап N. // Ркукоскет1зкгу - 1972. - Р. 3529.5. Saushbaskap T. K .; U1zuapakkap N. // Rkukosket 1zkgu - 1972.- R. 3529.
6. Эаз В.; Афат С.;Казк1паккат А.; ек а1. // №к Ргоб. Ьей. - 1998. - Р. 285.6. Eaz B .; Afat S.; Kazk1pakkat A .; Ek A1. // №k rgob. Yeah. - 1998 .-- R. 285.
7. М1уа Т., Риркауа К., РикизЫта Т ек а1. // Вгабусагб1а шбисеб ку тпокесап: а сазе герогк // 1рп. Т Сйп. Опсо1. 1998. Уо1. 28 (11). Р. 709-711.7. M1ua T., Rirkaua K., Rikizyta Tek a1. // Vgabusagb1a shbiseb ku tpokesap: a sase gerogk // 1rp. T syp. Opso1. 1998. V1. 28 (11). R. 709-711.
8. Матяш М.Г., Кравчук Т.Л, Высоцкая В.В., Чернов В.И., Гольдберг В.Е. // Неантрациклиновая токсичность // Сибирский Онкологический Журнал, - 2009. -№5 (35). Стр.73-82.8. Matyash M.G., Kravchuk T.L., Vysotskaya V.V., Chernov V.I., Goldberg V.E. // Non-anthracycline toxicity // Siberian Oncological Journal, - 2009.-№5 (35). Page 73-82.
9. Эшетапе К\уееке1а, НепкЧап Сиске1аага, Напз Се1бегк1отк // СИтса1 апб ркагтасодепейс каскогз аззоаакеб уйк тпокесап кохкйу // Сапсег Тгеактепк Ке\ае\уз. -2008. Уо1. 34(7). Р 656-669.9. Eshetape K \ ueke1a, NepkChap Siske1aaga, Napz Se1begk1otk // Sitsa apb rkagtasodepeys kaskogz azzoakake uyk tpokesap kokhkyu // Sapseg Tgeaktepk Ke \ ae \ uz. 2008. Yo1. 34 (7). P 656-669.
10. Апбгеа Айтопйа, А1аш Оейккегк, 1ба Рауезе // №у арргоаскез ко ртеуепк ткезйпа1 кохкйу ок тпокесап-казеб гедитепз // Сапсег Тгеактепк Ке\ле\уз. -2004. Уо1. 30(6). Р 555-562.10. Apbgea Aitopya, A1ash Oeykkegk, 1ba Raueze // No. arrgoaskez k rteuepk tkezypa1 kohkyu ok tpokesap-kazeb godetypz // Sapseg Tgeaktepk Ke \ le \ uz. 2004. Yo1. 30 (6). P 555-562.
11. Леп Уеп П К, Кокегк Т. Коба // 8каЫ1йу ок тпокесап кубгоск1опбе т ациеоиз 8о1ийои8. Ат. Т Неа1кк-8узк Ркагт. -2002. -Уо1. 59 Р. 539-544.11. Lep Uep PK, Kokegk T. Koba // 8kaY1yu ok tpokesap kubgoskopb t aceioiz 8o1iyoi8. At T Nea1kk-8uzk Rkagt. -2002. -Wo1. 59 R. 539-544.
12. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Технологические аспекты получения липосомальных препаратов в условиях СМР. Биофармацевтический журнал. 2009. 1. № 3. С. 18-29.12. Krasnopolsky Yu.M., Stepanov A.E., Shvets V.I. Technological aspects of obtaining liposome preparations in the conditions of construction and installation. Biopharmaceutical Journal. 2009. 1. No. 3. S. 18-29.
13. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Липидная технологическая платформа для создания новых лекарственных форм и транспорта фармацевтических субстанций. Биофармацевтический журнал. 2011.Т. 3.№2, сс. 10-18.13. Krasnopolsky Yu.M., Stepanov A.E., Shvets V.I. Lipid technology platform for the creation of new dosage forms and transport of pharmaceutical substances. Biopharmaceutical Journal. 2011.T. 3.№2, ss. 10-18.
14. Хтуопд Топд, Сиокепд Ье1, Скпдх1а Уи, Папд Скеп // Прозоте ок тпокесап ог йз кубгосЫойбе апб ртерагайоп теккоб ккегеок // № публикации И8 2012/0282325 А1, дата публикации 08 ноября 2012 прототип.14. Htuopd Topd, Siokepd Le1, Skpdh1a Wu, Papd Skep // Prozote ok tpokesap ogz kubgosoybe apb rteragayop tekkob kgegeok // Publication number I8 2012/0282325 A1, publication date November 08, 2012 prototype.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201201594A EA023079B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA201201594A EA023079B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201201594A1 EA201201594A1 (en) | 2014-06-30 |
| EA023079B1 true EA023079B1 (en) | 2016-04-29 |
Family
ID=51013732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201201594A EA023079B1 (en) | 2012-12-24 | 2012-12-24 | Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA023079B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2663291C1 (en) * | 2017-09-05 | 2018-08-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" ("Томский НИМЦ") | Anti-tumor liposomal drug and method of its preparation |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2216315C2 (en) * | 1998-06-18 | 2003-11-20 | Дзе Секретэри Оф Стейт Фор Дефенс | Method for preparing liposomes |
| EA011612B1 (en) * | 2004-06-01 | 2009-04-28 | Терумо Кабусики Кайся | Irinotecan preparation |
| US20120282325A1 (en) * | 2009-12-03 | 2012-11-08 | Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. | Liposome of irinotecan or its hydrochloride and preparation method thereof |
-
2012
- 2012-12-24 EA EA201201594A patent/EA023079B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2216315C2 (en) * | 1998-06-18 | 2003-11-20 | Дзе Секретэри Оф Стейт Фор Дефенс | Method for preparing liposomes |
| EA011612B1 (en) * | 2004-06-01 | 2009-04-28 | Терумо Кабусики Кайся | Irinotecan preparation |
| US20120282325A1 (en) * | 2009-12-03 | 2012-11-08 | Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. | Liposome of irinotecan or its hydrochloride and preparation method thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CTPEKAJIOBA ОКСАНА СЕРГЕЕВНА. Фосфолипидные наночастицы: получение, характеристика, использование для транспорта лекарств в организме. Автореферат, Москва, 2010 [он-лайн] [найдено 19.06.2013]. Найдено в Интернет : , с. 7 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2663291C1 (en) * | 2017-09-05 | 2018-08-03 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" ("Томский НИМЦ") | Anti-tumor liposomal drug and method of its preparation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201201594A1 (en) | 2014-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102554628B1 (en) | Remote loading of sparingly water-soluble drugs into liposomes | |
| Tang et al. | Systemic study of solvent-assisted active loading of gambogic acid into liposomes and its formulation optimization for improved delivery | |
| CA2962709C (en) | Remote loading of sparingly water-soluble drugs into lipid vesicles | |
| CN102188377B (en) | Method for preparing medicine encapsulating liposome | |
| US20070178147A1 (en) | Liposomal compositions | |
| JP4891912B2 (en) | Pharmaceutical formulations for increasing the solubility of 10-hydroxycamptothecin compounds in non-aqueous polar solvents | |
| EA023079B1 (en) | Process for preparing irinotecan liposomal form (variants) | |
| CN102188379B (en) | Preparation method of drug-carrying liposome | |
| CN108578368B (en) | Irinotecan-cholesterol succinic acid monoester ion pair, liposome, preparation method and application | |
| KR20220100904A (en) | Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing IDO antagonist prodrugs useful for the treatment of cancer and methods thereof | |
| JP2013534523A (en) | Pharmaceutical composition of poorly soluble tricyclic derivatives with improved solubility | |
| CN116459224A (en) | Butylphthalide nano liposome freeze-dried powder injection and preparation method thereof | |
| AU2014200717B2 (en) | Liposome composition | |
| EA022182B1 (en) | Method of producing docetaxel liposome form | |
| CN117024381A (en) | Cabazitaxel derivative and liposome preparation thereof | |
| Anderson et al. | Liposomal, Ring-Opened Camptothecins with Prolonged, Site-Specific Delivery of Active Drug to Solid Tumors | |
| PL197939B1 (en) | Anti-cancer liposome preparation, method for its manufacture and compound pharmaceutical containing such preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |