TWI359015B - Pharmaceutical composition for treatment or preve - Google Patents

Pharmaceutical composition for treatment or preve Download PDF

Info

Publication number
TWI359015B
TWI359015B TW096104627A TW96104627A TWI359015B TW I359015 B TWI359015 B TW I359015B TW 096104627 A TW096104627 A TW 096104627A TW 96104627 A TW96104627 A TW 96104627A TW I359015 B TWI359015 B TW I359015B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
group
rats
ovx
weight
fat
Prior art date
Application number
TW096104627A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200803838A (en
Inventor
Labrie Fernand
Deshaies Yves
Richard Denis
Martel Celine
Marette Andre
Original Assignee
Endorech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Endorech Inc filed Critical Endorech Inc
Publication of TW200803838A publication Critical patent/TW200803838A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI359015B publication Critical patent/TWI359015B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones

Description

九、發明說明：
t發明戶斤屬之技術領域:J 發明領域 本申請案請求主張於1999年7月6日提出專利申請之美 國臨時專利申請案第60/142,407號之優先權。 本發明係有關於一種用於對易罹患之溫血動物（包括 人類）來治療及/或制止肥胖（尤其是腹部肥胖）以及治療或 抑制不正常胰島素抗性之發生之新穎方法。該等方法涉及 投藥以具有下列通式I之化合物或其等之藥學組成物。於其 他之具體例中，本案方法涉及投藥以一種選擇性雌激素受 體調節劑（“SERM”)與一種性類固醇前驅物之組合。 t ^tT Ji 發明背景 肥胖’亦即一種以過多之體脂肪為特徵之病狀，對於 許多疾病（例如心血管疾病' 高血壓、糖尿病和乳癌）而言係 為一熟知之危險因子。更甚者，個人之外貌在大多數人的 整體幸福上扮演一個重要之部份。 肥胖之常見治療[例如各種減肥餐（包含食物限定飲食) 、體重減輕程序和運動]對於許多人提供了各種不同程度之 減肥成功。然而，對那些利用習知技術而經驗到不足夠結 果之人而言’對於其他技術或是將之用作為習知技術之補 助’仍存在有一需求。 近來’一些雌激素同效劑/拮抗劑被揭露供用於治療或 制止肥胖：歐洲專利申請案編號EP 0 659 423 A1中之雷洛 1359015 t Λ •. 赛分(Raloxifene)和相關之化合物，歐洲專利申请案編號EP 0 659 423 A2中之具有一苯並噻吩核心的雌激素同效劑；國 際專利申請案編號PCT/DK96/0011中之3,4-二苯基苯並二 氫哌喃；國際專利申請案编號PCT/IB95/00286中之萘基雌 … 5 激素同效劑/拮抗劑。 亦曾有報導指出，檀莫赛芬(Tamoxifen)，亦即另一個 雌激素同效劑/拮抗劑，會制止雌性大鼠體内之止嘔靈 (sulpiride)-誘發的體重增加（Baptista et al·，Pharmacol·， φ Biochem. Behav. (1997)，57(1/2), 215-222)。亦曾有報導指出 10 ’檀莫賽芬會模擬雌二醇(estradiol)對大鼠的食物攝取、體 重和身體組成之作用（Wade et al., American Journal of
Physiology 1993, 3(6)，R1219-1223)。 脫氫異雄固酮（DHEA)於治療及/或制止肥胖上也具有 有利之效用。於老化之司培瑞格_多利（Sprague-Dawley)大 15 鼠身上’史瓦茲（Schwartz)(於Kent，Geriatrics 37:157-160, 1982)觀察到藉由DHEA而使體重由600公克減低至500公克 Φ 且不影響食物的攝取。史瓦茲（Cancer 39:1129-1132, 1979) 觀察到被給予DHEA (450毫克/公斤，一週3次)之C3H小鼠 相較於對照組動物得到顯著較輕之體重且活得更久、具有 〜20較少的體朐肪和更好的活動力。體重之減少被達成而沒有 失去胃口或是食物限制。更甚者，DHEA能夠制止被培育成 在成年期會變成肥胖之動物的體重增加(於Kent，
Geriatrics 37:157-160, 1982) 〇 DHEA技藥對於苗條之盧丘(Zucher)大氣雖有增加食物 6 1359015 I t • » 攝取但是減少了體重增加。接受處理之之動物具有較小之 脂肪塊而因此，整體而言’暗示了DHEA會增加食物代謝’ 而造成較低之體重增加和脂肪積聚（5代(；6|:&1.，211£11加· Conf. Cortisol and Anti-Cortisols, Las Vegas, Nevada, USA, • 5 p56, abst, 1997) ° -· 肥胖被發現於Avy突變株小鼠（Yen et al.，Lipids 12:409-413，1977)和盧克(Zucker)大鼠（Cleary and Zisk，Fed. Proc. 42: 536, 1983)身上有被改善》DHEA治療之C3H小鼠 ^ 相較於對照組具有一較年輕之外貌（8^1\^1^，€3似^1^8· 10 39:1129-1132.1979)。 腹部脂肪與有關於心血管胸部疾病之代謝性危險性因 子相關聯（Imbault et al.，Metabolism 1999, 48 (3)，355-62 ;
Ledoux et al. (CMAJ 1997, 157 Suppl.l，46-53)。 C 明内】 15 發明概要 於是，本發明之一個目的是減少脂肪組織，尤其是腹 • 部脂肪。 本發明之另一個目的是降低心血管疾病以及肥胖或過 多脂肪組織對之係為危險因子的其他疾病或病狀之風險。 _ 2〇 於一個具體例中’本發明係要提供一種用於治療或抑 制易罹患之溫血動物（包括人類）之體重增加的新穎方法，該 方法包含對一需要該治療或抑制之個體投藥以含有或不 3有藥學稀釋賦形劑或載劑，—治療有效量之至少一個 具有通式I之化合物： 7 1359015
化學式1 其中.R2是各自選自於下 ·
係選自於由直鏈或支叫c4烷基、直鏈二：基、’ (M 直鏈或支鏈CVC4絲所構成之群組中)^缔基、 轉化為羥基之部分； 固可於活體内 其中G是-H或-CH3 ;以及 10 其中選自於下顺組巾之物種 °辰。定並基、嗎琳並基和NRaRb (RW分別β Γ啤基、 支鍵Cl_C成基、直鍵蚊鏈CVQ縣、直^二、直鏈或 炔基）。 ^^^C3-c5 於另^固具體例中，選擇性雌激素受體調節 之 學上可接<鹽被投藥以供減低腹部脂肪或減低心s、藥 積聚。 °ρ脂妨 於另一個具體例中，除了一個選擇性雌數素受， 劑（SERM)之外，性類固醇前驅物（例如脫氫異雄固 脱· 異雄固酮硫酸鹽、雄_5-歸-3b, 17b-二醇)被投藥以供治療肥 胖或抑制體重增加。處於5〇歲或超過5〇歲的年齡之人類被 相信為對該組合治療有良好反應，有可能是因為前驅物的 8 含量傾向於會非所欲地隨年齡而減低。 因此’在那方面，本發明提供一種用於治療肥胖或抑 制體重增加之方法，其包含對—需要 而要該治療或抑制之個體 投藥以含有-藥學稀釋賦形物或載劑一治療 有效量之至少-個SERM和-有效量之至少—個選自Μ 列群組中之性類固醇前驅物：脫氫異雄_、脫氫異雄固 酮硫酸鹽、雄-5-烯-3b，17b-二醇，以》 砰乂及可於活體内被轉化成 前述前驅物之任一者的化合物。 於另-方面，本發明提供—種用於治療或減低發展出 胰島素抗性之危險的方法，其包合— 、匕3需要該治療或減低之 個體投藥以一治療有效量之至少—個 個SERM。於某些具體例 中，-有效量之至少-種選自於由脫氣異雄固綱、脫氮異 雄固嗣硫雜 '雄·彿_3b鳥及可於謂㈣轉化
成此專之任一者之化合物的性$目妒W _㈣驅物亦被投藥以作 為一個組合治療之部分。 於另-方面，本發明提供—種用於治療肥胖之套組， 其具有一個第一容器包含至少-種SERM，以及一個第二個 容器包含至少一種性類固醇前驅物’該前驅物係選自於下 列群組：脫氫異雄固嗣、脫氫異雄固嗣硫酸鹽、雄-5-烯 -3b’17b-二醇，以及可於活體内被轉化成此等之任一者的化 合物。 -個藥學賦形劑載劑或稀釋劑也可被提供於一或多個 容器内，且可包含本技藝中已知之防腐劑和其他添加劑。 前述也能夠與此處所描述之各種不同發明之任—具體例内 所用的任一活性成份被包含之。 如此處所使用的’一個選擇性類固醇受體調節劑 (SERM)是為一個化合物，其直接地或是經由其活性代謝物 功能來當做乳房組織内之一個雌激素受體拮抗劑（“抗雌激 素），但對體脂肪、骨骼組織和血清膽固醇含量仍提供類 似雌激素之作用（亦即，藉由減低血清膽固醇）。於活體外或 是於人類或大鼠乳房組織内會產生有如雌激素受體拮抗劑 之功能之非類固醇化合物（尤其是若該化合物對於人類乳 房癌細胞發揮有如一抗雌激素化合物之作用）有可能產生 有如一 SERM之功能。我們曾測試過並發現可產生有如 SERMs功能之非類固醇雌激素包含EM 8〇〇、EM 652、 EM-652.HC1 (EM-01538)、雷洛賽芬(Raloxifene)、檀莫赛芬 (Tamoxifene)、伊多赛芬(id〇xifene)、托里美芬(T〇rimefene) 、LY 35338卜 LY 335563、GW 5638和爵洛赛芬(Dr〇l〇xifene)( 將於後文中作更詳盡之描述）。依照本發明之任一具體例， 當這些化合物被用作為抗雌激素時，SERMs較佳地理係以 相同於本技藝中所知之予以投藥。 不欲為理論所限制，據信SERMs[有許多較佳地係具有 兩個藉由1至2個碳原子來連接之芳族環]被預期係經由最 容易被雌激素受體所辨識之上述分子部份來與雌激素受體 交互作用。該等SERMs也具有支鏈，該支鏈可選擇性地造 成在乳房和子宮内膜組織内之拮抗特性但於其他組織（尤 其是骨路）内不具有拮抗特性。因此，SERMs能夠如所欲的 於乳房和子宮内膜組織内產生有如抗雌激素之功能，同時 令人訝異地且如所欲地對體脂肪具有類似雌激素之活性。 本發明同時包含如所欲地抑制額外的體重增加或如所 欲地提供體重減輕，即令正常體重沒有被達到。 如此處所使用的，肥胖此辭隱含一會導致一體重增加 之過多脂肪組織。本發明之制止和治療方法包含抑制體重 增加和誘發體重減少。本發明包含人體肥胖治療，其係藉 由減低該人體之體重至(和維持體重於)正常體重。本發明也 同時包含制止那些容易引發肥胖此種疾病之個體去產生肥 胖。需要此處所示之本發明的病患包含那些體重過重者(相 較於醫學上所認知之正常體重）或是那些有變成體重過重 之危機者。 依照本發明SERMs也可以被用來降低血液甘油三酸酯 含量。舉例而言，ΕΜ·800(描述於本案中）被認為對此目的 而言是有效的。 於另一個具體例中，用於實施本發明之新穎的化合物 和藥學組成物被提供之。 一需要該治療或降低一給定疾病或病狀之開始的風險 之病患係為已被診斷為帶有此疾病者或是易於得到此疾病 者。本發明特別適用於，基於遺傳、環境因素或其他被確 認之危險因子，在得到本發明有關之病狀上要比—般群眾 處於更尚危險度之個體。 除非於他處另有敘明，本發明之活性化合物的較佳劑 量就治療和預防目的而言是-樣的。於本案中所討論之每 一個活性紐_量是一樣的，獨純轉(_止™)的疾 1359015. 病為何。 當兩個或多個不相同之活性試劑於本案中被討論以當 做-組合治療之部份(例如-酵素抑制劑和一抗雄激素），數 個不同之化合物而非-個具有多重活性之單—化合物被投 5藥之。 ° 除非於他處另有㈣，“化合物，，此詞和任何相關之分 子結構可包含其任何可能之相關立體異構物，呈一消旋混 合物或光學活性之形式β 除非於他處另有註明或從前後文可明顯知悉的，本案 10之劑量係指不受藥學賦形劑、稀釋劑、載劑或其他成份所 影響的活性化合物之重量’雖然該等额外的成份如所欲地 被包含之’此如本案之實施例中所顯示的。一般被用於製 藥工業之任何劑量型態（膠囊、藥錠、注射物或類似物）是適 合於供本案之使用’而且該等術語“賦形劑，，、“稀釋劑，，或“ 15載劑”包含那些典型地在工業上與活性成份一起被包含在 該等劑量形式内之非活性成份。舉例而言，典型之膠囊、 藥丸、腸溶衣、固體或液體稀釋物或賦形劑、調味劑、防 腐劑或類似物被包含之。 於某些具體例中，於本案中所討論之活性成份的前驅 20 藥（亦即會於活體内轉化成活性成份之化合物)被使用之。在 製藥工業上已知許多官能基於活體内會轉化成本案中所討 論的活性化合物之官能基。參閱，例如Chaptet 5, “Design and Application of Prodrugs,5, A Textbook of Drug Design & Development, Bundgaard & Larsen, Ed., Harwood Academic 12
Publishers GmbH (Chur, Switzerland，1991)。前驅藥通常能 夠提供較佳之生物可利用性、儲存安定性及/或製造之容易 度、對應之活性化合物。 被使用於此處所討論之任一種治療之所有活性成份可 被配方成亦包含有一或多個其他活性成份之藥學組成物。 任擇地，其等可被各自分開地投藥但在時間上要能充分地 同時’藉此，一病患最終具有升高之血液位準或者是同時 地享受到每個活性成份（或策略)之效益。舉例而言，於本發 明之某些較佳具體例中’一或多個活性成份係要被配方於 一個單一藥學組成物内。於本發明之其他具體例中，提供 一個包含至少兩個分開之容器的套組，其中至少一個容器 之内含物’就當中所含有之活性成份而言，全部或部分地 相異於至少一個另外的容器的内含物。二個或多個不同之 容器被使用於本發明之組合治療中。於本案中所討論之組 合治療也包含使用該組合中之一個活性成份以製造一用於 治療（或制止）討論中的疾病之藥劑’其中該治療或制止進一 步包含該組合之另一活性成份或策略。 腹部脂肪被認為不同於整個身體肥胖，且可於沒有整 個身體肥胖時發生之。其亦被認為在心臟疾病上是一個更 加危險之因子。腹部脂肪對於本發明能有利地產生反應。 本發明之較佳的SERMs，例如上述化學式1中的那些， 對於子呂内膜不會有非所欲之雌激素作用，對於某些習知 方法中所應用之SERM療法是一個非常重要之改善。 被用於本發明之SERMs被認為有利地減低血液甘油三 酸酯還有胰島素抗性。 於本案中所討論之較佳具體例中，SERM之作用被 DHEA或類似乏性類固醇前驅物所增強。 不欲為理論親制，由組合SERMs^u前㈣所得到之 協同作用的-個解釋可能為其等的作用機制上之至少部分 差異。舉例而言，DHEA顯現會增加食物代謝而不抑制胃 口。EM撒HC1 ’ iSERM，顯現會抑制食物攝取。 圖式簡單說明 第1圖係顯不’以增高的劑量(〇 〇1、〇 〇3、〇」、们 I mg/Jcg 母天—次）之SERMs EM-800、雷洛賽 芬、檀莫赛芬和一個無活性锫 任心鏡像異構物EM-776 (EM-800 之鏡像異構物）對於_巢切除的大鼠來處㈣週之整體體 脂肪之作用。數據係以平均值±平均值之標準誤差(觀)來 表示。P<G.G1實驗組相對於個狀對照組。 第2圖係顯示，印巢完整之大鼠、㈣切除的大鼠以及 以S疆EM_652.HC1或雌：醇來處理之料崎的大氣， 在-個20天之處理期下，對於體重增加(a)、蛋白質增加⑻ 以及脂肪增加⑹之作用。輯係时克狀平均值土讓 來表示。*Ρ<0·05相對於即巢完整矣且；+ρ<〇·〇5相對於即巢 切除的（OVX_二醇址(僅有關於em_652 HC⑻。 第3圖係顯不’印巢完整之大鼠、印巢切除的大鼠以及 以SERM EM-652.HC1或雌：醇來處理之㈣切除的大鼠， 在-個2G天之處理期下，對於累積食物攝取量上之作用。 數據係以公克來表示。 丄丄j 丄丄j 以及 其中G是-η或_CHl 其中R3是-個選自於下列群組中之物種：料咬基、 纽並基、嗎㈣基㈣RaRb(R雜分別是氫直鍵或支 鏈匸!^6烧基、直鏈或支鍵c rA . 5 基），以及 3-<：6烯基、直鏈或支鏈c3-c6炔 i 、 ， Γ， » 個選自於下列群組中之性類固醇前驅物：脫氮異雄 固酮、脫氫異雄_硫酸鹽、雄傅3b，nb•二醇，以及可 於活體内被轉化成此等之任—者的化合物。 • +同於習知技藝中已知之SERMs，-個依據上述化學 1〇式I之S麵對於子宮内膜提供具有很少或無雕激素作用之 意想不到之優點。 較佳的是本發明的S E R M係為具有光學活性的且有大 於5〇%係為一個於2號碳原子上具有一絕對組態S之立體異 構物化合物。 15 對於安定性和水溶解性（生物可利用性）亦較佳的是，本 發明之SERM是為一個具有化學式〖之化合物和一個選自於 # 下列群組中之酸所構成之鹽類：醋酸、己二酸、苯績酸、 苯甲酸、d-樟腦磺酸、檸檬酸、延胡索酸' 氫碘酸、氫溴 酸、氫氯酸、氫氯苯嘆酸(hydrchlorothiazide acid)、經基-2〇 萘甲酸、乳酸、馬來酸、甲磺酸、甲基硫酸、1,5-萘二磺酸、 硝酸、棕櫚酸、三甲基乙酸、填酸、丙酸、琥拍酸、硫酸、 酒石酸、對-狄酸、對-甲苯續酸和戊酸。 本發明之一個較佳的化合物是PCT/CA96/00097 (W0 96/262〇1)中所報導之EM-800。EM-800的分子結構是： 17 1359015
本發明之另一個更佳的化合物是EM-652·HC1(也稱為 EM-01538):
5 EM-652.HC1對於其他SERMs(例如EM-800)提供額外 之優點，因為其不含會增高血清中肉驗(carnitine)含量之降 低的危險性之三甲基乙醯基。 本發明之其他較佳的SERMs包含譚莫赛芬 (Tamoxifen)((z)-2-[4-(l，2-二苯基-1-丁烯基)]-N,N-二曱基乙 10 烷胺）（可得自於Zeneca, UK)、多里米芬（Toremifene) (Orion-Farmos Pharmaceuticla, Finland 或 Schering-Plough) 、爵洛賽芬(Droloxifene)和CP-336，156(順式-lR-[4’-吡咯啶 並-乙氧苯基]-2S-苯基-6-羥基-1，2,3,4，-四氫萘D-(-)-酒石酸 鹽）（Pfizer Inc.，USA，描述於US 5,889,042中）[另名為拉梭 15 福賽芬(Lasofoxifene)]、雷洛賽芬(Raloxifene) (Eli Lilly and Co.，USA)，LY 335563和LY353381(Eli Lilly and Co·，USA 描述於WO 98/45287、WO 98/45288和 WO 98/452864 中）、 18 1359015 伊多赛芬(Idoxifene)( SmithKline Beecham，USA)、黎佛美洛 賽芬（Levormelxifene)(3,4-反式-2,2-二甲基-3-笨基 -4-[4-(2-(2-吼咯啶-1-基）乙氧基)苯基]-7-甲氧基苯並二氫哌 喊）(Novo Nordisk, A/S，Denmark ’ 該化合物被揭露於Shalmi ， 5 等人之W0 97/25034、WO 97/25037、WO 97/25038中；以 〜 及Korsgaard等人之WO 97/25036]、GW5638 (描述於Willson et al·，Endocrinology，138 (9)，3901-3911，1997)和°弓卜朵衍生 物（被揭露於Miller等人之EP 0802183A1)，和TSE 424，以 • 及ERA 923(由Wyrth Ayerst (USA)所研發且被揭露於 10 JP10036347 (Ameican home products corporation) ’ 及描述於 WO 97/32837之非類固醇雌激素衍生物。本發明之其他 SERMs被揭露於：WO 99/07377 ; WO 98/48806 ； EP 0823437A2 ； EP 0838464A1 ； EP 0834567A1 ； EP 0835868A1 ;EP0792641A1 ; EP 0873992A1 ;和 EP0895989A1。
15 可以採用任何為達所需要之有效性而被使用之SERM (如製造商所建議的來供治療及/或制止骨質疏鬆症或乳癌） # 。適當之劑量係為本技藝中已知的。任何其他商業上可購 得之非類固醇性抗雌激素能夠依照本發明而被使用之。任 何具有類似於SERMs之活性的化合物（例如：雷洛賽芬）可以 20 被使用。 依照本發明被投藥之SERMs較佳地係以一劑量範圍為 0.01至10 mg/kg體重/天(較佳是0.05至丨〇 mg/kg)，每天為6〇 毫克（尤其是每天20毫克）來投藥，這對於一具平均體重且以 口服來投藥之個體而言係較為理想的，或以一劑量範圍在 19 1359015
0.03至3.0mg/kg體重/天(較佳是0.015至0.3mg/kg體重），每 天為20毫克（尤其是每天1〇毫克），最為理想係對於一具平均 體重且以非經腸道方式(例如肌肉内、皮下或經皮投藥）來投 藥之個體而言係較為理想的。較佳地，SERMs是如下所述 與一藥學上可接受之稀釋劑或載劑一起被投藥。 理想之性類固醇前驅物是脫氫異雄固酮(DHEA)(可得 自於Diosynth Inc.，Chicago, Ilinois，USA)和其前驅藥（可得 自於Steraloids，Wilton, New Hampshire, USA)、5-雄-3b，17b-二醇和其前驅藥雄-5-烯-3b,17b-二醇3-二醋酸鹽和雄-5-烯 -31)，1713-二醇二半琥珀酸鹽（可得自於；5比1^1〇1(18，別11〇11,
New Hampshire, USA)。
性類固醇前驅物可以被配方為一種醇性凝膠，該凝膠 含有2.0-10%之辛基_癸基甘油三酸酯（Ne〇bee Μ·5); 1〇·2〇% 之己二醇；2.〇-1〇%之二甘醇單乙醚(Transut〇1); 2 〇_1〇%之
1.0-2% 之經基丙基纖維素(Klucel HF)。 载劑（供SERM或前驅物之用）也同時可以包含一般被 20 1359015 使用於製藥工業之各種不同的添加物。舉例而言，香料、 抗氧化劑、香水、膠凝劑、稠化劑（例如羧基甲基纖維素) 、表面活性劑、安定劑、保濕劑、調色試劑和其他類似之 試劑可以存在。當活性成份被經皮投藥時，皮膚上之投藥 5 位置應做變換以避免活性成份之過高的局部濃度及可能之 由性類固醇前驅物之雄激素代謝物所致之皮膚和皮脂腺過 度刺激。 於一供口服投藥之藥學組成物中，較佳地DHEA或其他 前驅物之存在量係為，相對於組成物之總重量，一濃度介 10 於5和98%重量百分比，更理想是介於50和98百分比，尤其 是介於80和98百分比。一個單一之前驅物（如DHEA)可以為 唯一之活性成份，或任擇地，數種前驅物及/或此等之類似 物能夠被使用（例如：DHEA、DHEA-S、5-二醇之一組合 ，或是一個兩個或多個化合物可於活體内被轉化為DHEA 15 、DHEA-S或5-二醇之化合物所構成之組合，或是一個由 DHEA、5-二醇以及一個或多個此等之可於活體内被轉化為 DHEA或5-二醇的類似物所構成之組合等等。DHEA之血液 含量是為足夠劑量之終極指標，該指標考量了吸收和代謝 上之個體差異。 2〇 理想地，治療醫師會（尤其於治療開始時)監測一病患個 體之整體反應和DHEA之血清含量（相較於上述所討論之較 佳的血清含量），和監測病患對治療之整體反應，且當一病 患之代謝或治療之反應是非正常時依需要來調整劑量。 依照本發明之治療是適合供無限定之持續治療。預期 21 1359015 的是，DHEA及/或5-二醇或其他前驅物之治療將單純維持 DHEA a里於一範圍，該範圍近似於婦女停經前自然之狀熊 (血清濃度介於4和10毫克/每公升），或自然之年輕成年男性 (血清濃度介於4和10毫克/每公升）。 5 SERM化合物及/或性類固醇前驅物也能夠經由口服途 徑被投藥，且可以配方以傳統的藥學賦形劑（例如喷濃乾燥 的乳糖、微晶粒纖維素和硬脂酸鎂）而形成藥錠或膠囊來供 口服投藥。 活性物質可被製造成藥錠或糖衣藥丸之核心，此係經 10由將之混合以固體、粉狀載劑物質（例如檸檬酸鈉、碳酸妈 或磷酸氫鈣），及結合劑(例如聚乙烯基咄咯啶、明膠或纖維 素衍生物）’亦可能同時添加潤滑劑（例如硬脂酸鎂、十二烷 基硫酸鈉、’’Carbowax”或聚乙二醇）。當然，就口服投藥之 型態而言，改善味道之物質可被添加之。 15 作為進一步之形式，可以使用塞劑膠囊，例如硬明膠 ，和密合式軟明膠膠囊(含有一軟化劑或塑化劑，例如甘油 )。塞劑膠囊含有之活性物質理想是呈顆粒型態，例如佳有 填充物之混合物’該填充物係如乳糖、蔗糖、甘露醇、澱 粉(例如馬鈴薯澱粉或支鏈澱粉)、纖維素衍生物或高分散度 2〇之矽酸。於軟明膠膠囊中，活性物質理想是被溶解或懸浮 於適當之液體(例如蔬菜油或液態聚乙二醇）内。 乳液、油膏、凝膠或乳霜形式是可能的且應被徹底按 摩入皮膚内至沒有多餘留存可清晰看見者，且皮膚上該區 域不應被沖洗直至絕大部份之經皮膚渗透已被達成’理想 22 地是至少4小時’且更理想是至少6小時。 一經皮膚貼劑可以依照已知之技術被使用來傳遞前驅 物或SERM。其一般被施用歷時一更長之時間，例如丨至4 天，但通常是使活性成份接觸一較小表面區域，而允許一 慢而恆定之活性物質傳遞。 許多已被研發且被使用之經皮藥物傳遞系統是適合供 傳遞本發明之活性物質。釋放速率典型地是由一基質擴散 來控制’或是藉由使活性成份通經一控制膜。 經皮裝置之機械方面是本技藝所熟知的且被闡釋於， 例如，美國專利案5，162,037、5，154,922、5，135,480、4,666,441 、4,624,665、3,742,951、3,797,444、4,568,343、5,064,654 、5,〇71，644、5,071，657 ’此等之揭露内容於此併入本案以 為參考文獻。額外之背景技藝是由歐洲專利案〇279982和英 國專利申請案2185187所提供。 該裝置可為本技藝中已知之任何一般型態，這包含黏 著性基質和蓄積槽-型經皮傳遞裝置。該裝置可以包含含有 藥物之基質，該基質結合有會吸收活性成份及/或載劑之纖 維。於一蓄積槽型之裝置中，該蓄積槽可被定義為一個無 法為載劑和活性成份所渗透之聚合物膜片。 於一經皮裝置中，該裝置本身維持活性成份與所欲之 局部化皮膚表面相接觸。於如此之一裝置中，相較於一乳 霜或膠體，供活性成份用之鋪之黏度係是較不需考慮的 。-供-經皮裝置用之溶劑系統可以包含，舉例而言，油 酸、直鏈醇乳酸S旨和二丙二醇，或於本技藝中已知之其他 1359015 溶劑系統。該活性成份能夠被溶解或懸浮於該載劑中。 對於貼附至皮膚，一經皮貼劑可以固定至一於中央處 被穿打有一洞之外科黏貼膠帶上。該黏貼物較佳地被覆蓋 有一可撕性護膜以保護該黏貼物至使用前。適用於該可撕 〜 5 性護膜之典型材料包含聚乙烯和聚乙烯塗覆之紙，且較佳 .. 為矽酮-塗覆的以供容易移除。於使用該裝置上，僅是將該 可撕性護膜撕除，然後將之黏貼至病患之皮膚上。於美國 專利案5,135,480 (該案之揭露内容於此併入本案做為參考 φ 文獻）中，Bannon等人描述一任擇性裝置，該裝置具有一用 10 以固定該裝置至皮膚之非黏貼構件。 本發明之經皮或經由黏膜的傳遞系統也能夠被使用為 一全新或改良之傳遞系統以供用於制止及/或治療肥胖》 本發明方法之有效性的實施例 實施例1 15 使用本發明化合物之35週之處理對於切除卵巢的大鼠 之體脂肪和體重之作用 • 材料與方法 動物及治痪 10至12週大之雕性司培瑞格-多利（Sprague-Dawley)大 20 鼠（Crl:CD(SD)Br)(Charles River Laboratory, St-Constant，
Canada)體重約225-250公克，於開始處理時使用。動物適應 周圍環境(溫度：22 ±3 °C ;濕度：50 ±20%; 12小時-光亮 -12小時-黑暗之循環，光量於上午〇7:15)—週於試驗開始前 。動物每3隻一籠，且允許其等自由飲水和一丸狀檢驗合格 24 1359015 之嚅齒動物飼料（製造商：Lab Diet 5002，Ralston Purina, St-Louis，MO)。試驗之進行是以加拿大動物管理委員會 (CCAC)核准之設備，並依照(：(：八(：:之實驗動物照料與使用 指導。 5 276隻大鼠被隨機地分組’至每組12隻動物的23組如下 :1)卵巢完整鼠對照組；2)0VX對照組；3-7)OVX + EM-800 (0.01、0.03、0.1、〇_3或 1 mg/kg) ; 8-12) OVX + 雷洛赛芬(0.01 、0.03、0.1、0.3或 1 mg/kg) ; 13-17) OVX + 檀莫賽芬(〇.〇1 、0.03、0.1、0.3或 1 mg/kg) ; 18-22)〇VX + EM-776 (0.01 10 、〇·〇3、0.1、0.3或 1 mg/kg) ; 23) OVX + 雌二醇(e2，植入 物）。試驗之第1天’條件項目符合之群組的動物於愛舒活 能(Isoflurane)麻醉下來進行兩側卵巢切除(〇νχ)。一個含雌 二醇(Ed之矽橡膠植入物是經由皮下至第13組之每隻動物 的背部區域。植入物内之Ε2濃度和大小如下：ε2 (ε2 :膽固 15醇(I:100，重量：重量)），0.5公分（長度），0.125英吋（外圍直 徑)和0.062英吋（内圍直徑）。於試驗過程，植入物内之&於 每個月更換。使用ΕΜ-800、雷洛赛芬、檀莫赛芬、和εμ-766 或載劑(4%乙醇、4%聚乙二醇-600、1 %明膠或〇 〇9%氣化鈉 )之處理於試驗之第2天開始。適當之化合物或載劑每曰予 20以給藥一次，此係藉由口服硬性餵食每隻大鼠〇.5毫升持續 37週。最後一次給藥後大約24小時，被過夜絕食之動物是 藉由於愛舒福能麻醉下從腹部主動脈處予以放血而將之殺 死。 脂肪體組成物 25 1359015 處理35週後’每隻大鼠於愛舒福能麻醉下做其全身之 骨骼（包括其右股骨)之掃瞄，該掃瞄是使用雙倍數能量又射 線吸光分析儀(DEXA ; QDR 4500A，Hologic，Waltham, MA) 和一局部高解析度掃瞄軟體。使用於全身之掃瞄區域大小 • 5是30.492 X 17.912公分’解析度是〇.1512^〇 〇64公分且掃瞄 -- 速度是每秒2·499毫米。全身之體脂肪組成被測定之。 統計分析 數據表示是以平均土標準差（SEM)。統計顯著性之決 _ 疋疋依據杜月克拉瑪氏（Duncan-Kramer)(1956)之多重範圍 10 測試。 結果 當以DEXA分析儀於活體内來作測量，增加EM-800、 雷洛赛芬、檀莫赛芬和EM-776之每日口服劑量對於體脂肪 的作用係圖解於第1圖中。能夠看aEM800於最低劑量〇 〇1 15 mg/kg下會降低78%之〇vx誘導的體脂肪刺激，雷洛賽芬要 比EM-800之活性為低，而EM_776(其為EM 8〇〇的鏡像立體 ® 異構物）不具顯著差異之作用。於表1中所報導的是，EM-800 或雷洛赛芬對於卵巢切除的大鼠之體重之作用。比較是以 卵巢完整的大鼠和卵巢切除的對照組大鼠來進行。能夠看 20出小劑量之EM-800達到之重量控制係類似於明顯較高數 S之雷洛赛芬（亦即〇 〇3 mg/kg之EM 8〇〇達到類似於〇 3 • mg/kS之雷洛赛芬所得的結果）。此二者於較高之劑量下實 質地逆轉卵巢切除所誘導之體重增加。 表1 26 1359015 組別 在Necropsy下之體重 卵巢完整的大鼠對照組 公克 356 ±16** OVX對照組 491 ± 16 OVX + EM-800 (0.01 毫克/公斤） 385 ±17** 〃 （〇-〇3毫t公斤） 364 ±10** " (〇1毫克/公斤） 369 ±17** " (0.3毫克/公斤） 359 ±7** // (1毫克/公斤） 368 ±6** OVX+雷洛賽芬(〇_〇1毫克/公斤） 439 ±13** OVX+雷洛赛芬(0.03毫克/公斤） 451 ±14** OVX+雷洛賽芬(0.1毫克/公斤） 389 ±14** OVX+雷洛賽芬(0.3毫克/公斤） 367 ±9** OVX+雷洛赛芬(1毫克/公斤） 342 ±12**
實施例2 11個月之組合處理使用本發明之化合物 1 .測試材料 5 1.1測試化合物： DHEA ：可購自於Steraloids Inc. Wilton, NH. Lot: H137 : EM-800 :是合成於UCPO部門，Lab. Of Mol. Endo·，
CHUL. 10 1.2載劑 a) 明膠:Lab-Grade, ACP Chemicals Inc.，Montreal, Qc.
Lot#F0195 b) 乙醇:Commercial Alcohols Inc., Brampton,
Ontario. 批號編號11296 27 15 1359015
c)聚乙二薛-600 (PEG-600) : Omega Chemical Company Inc., Levis, Quebec·批號編號 00-0117-EZ
d)生理鹽水:0.9 %氣化鈉 5 灌注USP
Abbot Laboratories Limited, St-Laurent, Qc.. e)丙二醇（1,2-丙烷二醇，PPG)：
Sigma Chemical Co., St-Louis, MO.
f) 載劑1 :供皮下注射之4%乙醇-4% PEG-600-1%明 10 膠-0.9%氣化鈉-水。 g) 載劑2 ：供局部使用之50%乙醇-50%PPG。 2.測試動物之特徵： 2.1 品種：Rattus norvegicus 2.2品系:司培瑞格-多利大鼠（Crl : CD® (SD) BR 15 VAF/Plus™) 2.3性別=雌性
2.4 供應源:Charles River Canada Inc. 188 Lasalle Road
St. Constant, Quebec 1-800-561-4975 2.5劑量起始時之年齡：第18-29組之大鼠是16週大。 2.6動物房和飼養 a)動物房：大鼠每2-3隻關1籠之鞋盒。所有之鼠籠清 楚標記有一箱籠標記註明實驗編號、組別號碼和 28 1359015 動物編號。 b)於試驗中’動物房之環境狀態將予以調控（目標狀 態：溫度20至25。(：；濕度：50±20 %)。光週期為 12小時亮：12小時暗。 5 飲水：嚆齒動物飼料（丸粒），和自來水的提 供是採不限制之供給。 2.7適應時間:至少兩週。 2.8隆蠱分散:於抵達時大鼠被隨機地指定至每一組。
2·9安.樂死之方法.:愛舒福能誘導的全身麻醉。 10 3.方法和實驗設計 1卵巢完整之大鼠 11隻大鼠/每組 2 OVX對照組 共44隻大鼠 3 OVX + DHEA 12.5 毫克 4 OVX + DHEA 12.5 毫克+ΕΜ-800 (100 μβ) 15 3.1載劑和測試物件之f偌 a)EM-800之配製: EM-800或與EM-776此二者將被溶解於 EtOH:PEG-600 (1:1)内，並於 Fisher Scientific Stirring Hot Plate上加以搖晃，然後，1 % GNS將被 添加至所需體積。 b)DHEA之配製：
DHEA經由搖晃處理被溶解於5〇%乙醇、50% PPG 3.2動物之製備和處理: 29 1359015 動物將如項目6.1所示每日被處理一次。 配製於50%乙醇、50% ppg内之DHEA將呈每日一次 (I.D.)且體積為〇_5毫升而藉由經皮施用（p c )至對應 之動物。 5 EM·800將被配製於4 %乙醇、4 %PEG-600、1 %明勝 • - 、〇·9 %氣化鈉内，然後呈每日一次(S.C.，I.D.)且體 積為0.5毫升而經皮下注射被投藥至對應之組別的 動物體内。 • 大鼠當其未被皮下注射以任何之測試化合物時，係 10 被皮下注射以一體積為〇_5毫升的載劑1，且當大鼠 無5-DIOL或DHEA之處理時被局部給予〇 5毫升之載 劑2。 3.3觀察和量測 a)臨床觀察: 15 每隻大鼠將被觀察至少每日一次以供一般性之表 示。 • b)體重： 大鼠將於試驗開始和結束時，以及於處理期間中 每隔三個月被稱重之。 20 4.結果: 如顯示於表2，在每日劑量為12.5毫克之DHEA處理 - 的作用是降低87%之OVX刺激產生之體重。以每日劑量 100pg之EM-800投藥產生協同性作用，且對於〇νχ刺激 產生之體重得到一為140 %的抑制作用。 25 表2 30 1359015 處理 總體重(公克） 卵巢完整之大鼠 479.5 ±20.4 0VX 567.4 土 25.7 OVX + DHEA (12.5 mg/ 日 /大鼠） 490.8 ±24_1 OVX + DHEA (12.5 mg/ 日 /大鼠）+ EM-800 444.5 ± 20.5 (ΙΟΟμβ日/大鼠） 實施例3 使用EM-652.HC1之20天處理對於切除卵巢的大鼠之體 脂肪和體重參數之作用 φ 5 材料與方法 動物及處理 於處理開始時係使用8至10週大之雌性司培瑞格-多利 (Sprague-Dawley)大鼠（Crl:CD(SD)Br)(Charles River Laboratory，St-Constant, Canada)體重約200-225公克。於試 10 驗開始前，令動物適應周圍環境(溫度：22 ±3 °C ; 10小時 -光亮-14小時-黑暗之循環，燈量於06:00h)歷時一週《動物 個別飼養於一般設計之不鏽鋼籠，且允許其等自由飲水和 # 一高碳水化合物之混合飼料，該飼料含有（公克/每100公 克）：玉米澱粉，31.2 ;葡萄糖，31.2 ;酪蛋白，20.0 ;玉 15 米油，6.4 ; dl-曱硫胺酸，0.3 ;混合維生素，1.0 ; AIN-76 混合礦物質，4.9 ;和纖維素，5.0。試驗之進行是以加拿大 動物管理委員會(CCAC)核准之設備，並依照CCAC之實驗 ' 動物照料與使用指導。 4〇隻大鼠被隨機地分組至每組10隻動物的4組如下： 卵巢完整鼠對照組；2)OVX對照組；3)0VX + EM-652.HC1 31 20 1359015 (0.5毫克/每隻大鼠’〜2·5毫克/每公斤）；4) OVX +雌二醇 (E2，植入物）。試驗之第1天’條件項目符合之群組的動物 於愛舒活能麻醉下被進行兩側卵巢切除(OVX)。一個雌二 醇(E2)之矽橡膠植入物經由皮下被插入至第4組之每隻動物 5 的背部區域。植入物(於初步試驗被選定以提供E2之生理含 ·. 量）具有下列膽固醇濃度和大小：E2 :膽固醇（1:5〇，重量: 重量））’ 0.5公分(位於石夕橡膠管内之稀釋之類固醇的長度) ，0.125英吋(石夕橡膠管之外圍直徑)和0.062英吋(石夕橡膠管之 g 内圍直徑）。在皮下插入至動物體内之前，雕二醇植入物於 10 37°C下被浸泡於0.9 %氣化納溶液内過夜後被使用之。僅含 有EM-652.HC1或載劑(0.4 %甲基纖維素溶於水中）本身之 處理係開始於試驗起始之第2天。本案化合物或載劑係以每 日一次藉由口服硬性餵食0.5 ml/大鼠歷時共20天。體重和 食物攝取量是每2天記錄一次。 15 於最後一次給藥之後大約24小時，經隔夜絕食之動物 在利用易他明-來拉辛（ketamine-xylazine)之麻醉下以心臟 • 穿刺將血液抽出。血液還有白色和棕色脂肪組織被收集之 〇 能量、脂肪和蛋白質量測中之體重、食物摄取和身體增加 20 體重、食物攝取身體增加之能量、脂肪和蛋白質之定 量是依照Deshaies et al.，Am. J. Physiol.，1997; 273, •’ E355-E362(1997)。 組織之測定 脂蛋白脂肪酶活性之測定是依照Deshaies et al.，Am. J. 32 1359015
Physiol” 1997; 273, E355-E362 (1997)。 結果 可以由第2A和C圖看出20天之EM-652.HC1處理係完全 逆轉4倍之體重增加和3倍之脂肪增加，該作用是分別的， 5觀察係於卵巢切除之後，而此作用是較不顯著於蛋白質的 -- 增加（第2B圖）。雌二醇具有較小之作用。累積性食物攝取 是顯示於第3圖。處理作用反應於體重之增加。雌二醇部份 地制止食物攝取之增加係由於卵巢切除，而EM-652.HC1之 • 作用較雌二醇更有效，其降低食物攝取至一數量是較卵巢 10 無切除之動物更低。 主要之能量平衡變異是摘要說明於表3。卵巢切除(Ovx) 增加之消化性能量攝取為44 %。雌二醇減低Ονχ動物之能 量攝取’但總能量攝取維持17 %係高於卵巢無切除動物之 總能量攝取，而EM-652.HC則完全制止Ονχ誘導所增加之能 15 量攝取。能量增加與食物攝取成正比。再度的是，雌二醇 減低能量增加（其達到之程度係非顯著不同於卵巢無切除 # 動物之能量增加），但EM-652.HC1則較為有效（其顯著不同 於雌二醇）。 食物之利用效率是由Ονχ所增加，其降低係發生於Ονχ動物 2〇 由Ε2所導致，和進一步之降低是由EM-652.HC1所導致。 身體能量經由蛋白質之30 %的增加於卵巢無切除手術 ' 之後同時還有身體能量經由脂肪之80 %的增加皆完全由 EM-652.HC1處理所逆轉該等可見於第4Α和Β圖。如顯示於 第5Α圖，胰島素抗性之產生於〇νχ動物體之確認是經由出 33 1359015 現fasting高血中胰島素症狀（其通常正比於胰島素抗性之程 度）和fasting高血糖症狀（一回應係為損失之胰島素效能該 效能使胰島素能維持正常之血糖濃度）。雌二醇和 EM-652.HC1二者皆可制止〇νχ誘導之胰島素抗性。 5 第6Α和6C圖顯示〇VX增加鼠蹊部和腹膜之後脂肪組 織的質量（數量)該等代表觀察之總體脂肪的變化。此變化之 完全破壞是由EM-652.HC1處理所致。而雌二醇，其作用則 較不重要。相同之作用方式顯示於第6B*6D圖該處有脂蛋 白脂肪酶之酵素活性的結果報告。此酵素調控血管内三酸 10甘油酯之水解及因此之所有脂肪酸進入至脂肪組織的儲存 〇 棕色脂肪組織是一主要之產熱作用組織於嚅齒動物體 。卵巢切除手術顯示一不同之型態於肩胛骨之間之棕色脂 肪組織其不同係相較於白色脂肪組織。棕色脂肪組織的重 15量是兩倍增加（第7A圖）係相較所觀察於白色脂肪組織。然 而’蛋白質含量（第7B圖）和脂蛋白活性（第7C圖）是分別減低 33和30 %於卵巢切除之後。就此三個參數，EM-652.HC1處 理是完全逆轉卵巢切除之作用。 比目魚肌(Soleus)之重量通常是一很好的指標係對生 2〇 物體之蛋白質質量的狀態。如所預期，比目魚肌之重量， 如顯示於第8圖，其增加係由於卵巢切除（食物攝取之增加 產生增加的能量儲存在脂肪和蛋白質兩方面）。雌二醇和 EM-652.HC1之處理二者皆制止肌肉重量的增加。於肌肉中 之脂蛋白脂肪酶是通常正面相關於胰島素敏感性（敏感性 34 1359015 愈好，肌肉中之脂蛋白脂料愈多Hp巢切除減低比目魚 肌之脂蛋自脂_活性，其為產生騰島素抗性之—間接證 據。雕二醇和EM_652.HC1之處理二者皆制止肌肉之脂蛋白 脂肪酶的減少。 表3 能量平衡 卵巢之狀態 處理 卵巢卵巢完整 卵巢切除 E2 EM-652 消4匕'!4能量之攝取(千焦耳） 4708 7658a 5511a 4479b 能量之增加(千焦耳） 532 1677a 903 278 b 顯示之能量消耗(千焦耳） 4176 5081a 4609a 4201b 食物之利用效率(％) 10.2 24. la 15.9 5.9b 興卯果卯果兀S之差異’ jxO.05。與卵巢切除 +氏處理之差異， p<0.05 消化性能量之攝取是所有攝入能量之總和於2〇天之處 理期間内（一併計算的有不可消化物例如纖維）。 能量增加是以千焦耳之計量儲存為脂肪+蛋白質於2〇 天之處理期間内。 10 顯示之能量消耗的計量係消耗於代謝所需和運動力（ 計算是由能量之攝取和能量之增加）。預期量會較高是當無 脂肪的質量較高（例如卵巢切除之動物）。 實施例4 合成本發明理想化合物之實施例 15 合成（S)-(+)-7-羥基-3-(4，-羥基苯基）-4-甲基 -2·(4”-(2’’’-哌啶基乙氧基）苯基)_2H-1-1苯基吡喃氫氣酸鹽 EM-01538 (EM-652, HC1) 35 1359015
步驟A : BF3 · Et20，甲苯；100°C ; 1小時。 步驟C : 3,4-二氫基吡喃，對-甲苯磺酸單一結晶水，醋酸 乙酯；25°C於氮氣之下，16小時，然後於異丙醇中結晶。 5 步驟D，E和F ： (1)六氫0比°定，曱苯，迪恩&司塔克裝置（dean & Stark apparatus)，迴流於氮氣之下，（2)1,8-二咪唑雙環[5，4, 鲁 0]undec-7-ene，DMF(二甲基曱酿胺），迴流3小時； (3)CH3MgCl, THF (四氫呋喃），-20至0°C然後回溫至室溫 10 24小時； 步驟G和Η ： (lS)-(+)-10-樟腦磺酸，丙酮，水，曱苯，室溫 ，48小時。 ' 步驟HH : 95 %乙醇，70°C，然後室溫下3天。 步驟HHR ：母溶液再循環然後沖洗之步驟HH 15 (S)-10-樟腦磺酸，迴流；36小時，然後室溫下16小時。 36 1359015 ±m： (1) DMF(溶液），碳酸鈉，醋酸乙酯； (2) 乙醇’稀釋之氫氣酸； (3) 水。 m 5合成2_四氫吡喃基氧-4-羥基-2，-(4，，-四氫吡喃基氧苯基）乙 一 醯苯（4)。一2,4-二羥基-2’-(4，，-羥基苯基）乙醯笨3 (97.6克 〇·4莫耳)(可講自製造商.chemsyn Science Laboratories,
Lenexa，Kansas)溶於3,4-二氫吡喃（218毫升，3·39莫耳)和醋 鲁 k乙醋（520毫升）然後加入對-曱苯項酸單一結晶水(〇.〇3克 10 ，〇.158毫莫耳)於約25°c。反應混合物攪拌於氮氣下無另外 之加熱共16小時。然後混合物之沖洗係以一溶液其為碳酸 氫鈉（1克)和氣化鈉(5克)溶於水（100毫升）。分層區分後有機 層之沖洗係以高濃度食鹽水(20毫升）。每一次沖洗是以5〇 宅升之醋酸乙酯再萃取。所有之有機層合併然後過德通過 15 硫酸鈉。 溶劑（約600毫升)之移除係以蒸館法於大氣壓力下且有 Φ 異丙醇(250毫升）之添加。添加之溶劑（約3〇〇毫升）以蒸顧除 去於大氣壓力下且有異丙醇(250毫升）之添加。溶液冷卻於 大約25°C且加以攪拌然後於12小時之後，結晶之固體進行 2〇 過濾，異丙醇沖洗然後乾燥（116.5克，70 %)。 合成4-羥基-4-甲基-2-(4’-[2’’-六氫吡啶基_]乙氧基）苯基 -3-(4’’’-四氩吼喃氧）苯基-7--四氫η比喃氧_苯并二氫^比喃 (10)—溶液含有2-四氫吼喃氧-4-羥基_2’_(4’，-四氫„比喃氧 笨基）乙醯苯4(1公斤’2.42莫耳），4-[2-(1-六氫《»比咬基）乙氧 37 1359015 基]苯甲醛5 (594克，2.55莫耳）(可購自製造商：Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansas)和六氫比咬（82.4克， 0.97莫耳）（可購自製造商：Aldrich Chemical Company Inc·， Milwaukee, Wis.)溶於甲苯(8公升）迴流於氮氣之下係使用 ' 5 迪恩&司塔克裝置(dean & Stark apparatus)直至一相當量之 水(44毫升）的收集完成。 甲苯(6·5公升）移除自溶液是以蒸餾於大氣壓下。添加 DMF(二甲基甲醯胺）(6.5公升）和1，8-二咪唑雙環[5，4, • 0]undec-7-ene(110.5克，0.726莫耳）。溶液進行搖晃約8小時 10 於室溫下以進行異構化使Chalcone 8轉變成Chalcone 9然後 加入至一混合物含有水和冰(8公升）及甲苯(4公升）。各分層 分開且甲苯層之沖洗是以水(5公升）。合併之溶液沖洗液之 萃取是以曱苯(3 X 4公升合併之甲苯萃取液最後以高濃度 食鹽水(3 X 4公升）’濃縮於大氣壓力下至5 5公升然後冷卻 15 至-10°C。 連續之外部冷卻和授拌於氮氣下，一 3重量莫耳濃度(M) • 之溶液：曱基鎂氣溶於THF(四氫呋喃）(2.5公升，7.5莫耳)（ 可購自製造商：Aldrich Chemical Company Inc.，Milwaukee,
Wis.)被加入，維持溫度於(TC以下。於所有格里那試劑 20 (Grinard reagent)添加後，外部冷卻移除然後混合物回溫至 室溫。混合物攪拌於此溫度下共約24小時。 混合物再次冷卻至約-2 0 X：且持續以外部冷卻及攪拌 ，飽和之氣化氨溶液(200毫升）以緩慢添加’維持溫度於_2〇 °C以下》混合物攪拌2小時然後添加飽和之氣化氨溶液(2公 38 工359015
升）和甲苯(4公升）然後搖晃5分鐘。各分層分開且溶液層之 萃取是以甲笨(2 X 4公升）。合併之甲苯萃取液是以稀釋之氫 氣酸直至溶液變成均一然後以高濃度食鹽水(3 X 4公升）。甲 笨溶液最後濃縮於大氣壓力下至2公升。此溶液直接使用於 下一步驟。 合成（2R，S)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基）-4-甲基-2-(4’’-[2’”-六 氫咣啶基]乙氧基）苯基)-2Η-1-苯并二氫吡喃（1S)-10-樟腦 磺酸鹽(±12). 於4-羥基-4-甲基-2-(4，-[2”-六氫吡啶基-]乙氧基）苯基 -3-(4’’，-四氩咄喃氧）苯基-7--四氫°比喃氧-苯并二氫吼喃 (10)之曱苯溶液中加入丙酮(6公升），水(0.3公升）和（S)-10-樟腦磺酸（561克，2.42莫耳）（可購自製造商：Aldrich Chemical Company Inc.，Milwaukee，Wis.)。該混合物攪拌於 氮氣之下48小時之後固體之(2R，S)-7-羥基_3_(4，_羥基苯基 )-4-甲基-2-(4’’-[2’”-六氫咣啶基]乙氧基）苯基）_2H小苯并 二氫吼喃（1S)-10-樟腦磺酸鹽（12)進行過濾，沖洗是以丙酮 然後乾燥（重量883公克）。此產物使用於下一個（HH)步驟無 需進一步之純化。 合成（2S)-7-經基-3-(4，-羥基苯基）_4 -曱基-2-(4’’-[2’’’-
基)-2H-1 -苯并二氫π比喃 溶於95%乙醇之懸 (1S)-10_樟腦磺酸鹽（±12)(759克) 浮液進行加熱並攪拌i約贼且固體已 39 1359015 溶解。溶液可以冷卻至室溫並加以授摔然後壤下一些 (2S)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基M-甲基-2-(4’’-[2’’’-六氫吡咬 基]乙氧基）苯基)-2Η-1-苯并二氫°比喃（1S)-10-樟腦確酸鹽 13的晶粒。該溶液攪拌於室溫下總計約三天。晶體過濾， 5 沖洗是以95 %乙醇然後乾燥(291克，76%)。產物之產率是 94.2%其純度是98.9 %。 合成（S)-(+)-7-羥基-3-(4’-羥基苯基）_4_甲基 -2-(4”-[2’’’-六氫吼啶基]乙氧基）苯基)-2Η-1-苯并二氫。比喃 氫氯酸EM-01538 (EM-652,氫氣酸)化合物13之一懸浮液 10 (EM-652-(+)-CSA鹽，500毫克，0.726毫莫耳)溶於二甲基曱 醯胺(11 fiL，0.15毫莫耳)加入一0.5重量莫耳濃度(M)液態碳 酸鈉溶液(7.0毫升’ 3.6毫莫耳)然後進行攪拌15分鐘。懸浮 液加入醋酸乙酯（7.0毫升）然後進行攪拌4小時。有機層之 沖洗是以一液態飽和碳酸鈉溶液(2 X 5毫升)和高濃度食鹽 15水（1 X 5毫升）再乾燥於硫酸鎂之上，而濃縮。於一溶液為產 生之粉紅色泡沫(EM-652)溶於乙醇(2毫升）加入2N之氫氣 酸(400 mL，0.08毫莫耳）’攪拌1小時，加入蒸餾水(5毫升 )，於空氣中乾燥然後於一高真空(65。〇產生一乳霜狀粉末 (276毫克，77 %):細純白粉末；溶於曱醇1〇毫克/毫升。掃 20瞄卡路里儀：熔解峰值起動於219 t：，DH=83 J/g ; [脉]24d=154 °C ; 1H NMR (300 MHz，CD3OD)讦(ppm)1.6 (broad，2H，H-4”’)，1.85 (broad, 4H，H-3”” and 5，，，’)，2.03 (s，3H，CH3)，3.0 and 2.45 (broad, 4H，H-2’，，，and 6’’’，)，3.47 (t，J=4.9Hz，2H，H-3’’’），4.26 (t，J=4.9Hz，2H，H-2，’，），5.82 40 1359015 (s, 1H, H-2), 6.10 (d, J=2.3Hz, 1H, H-8), 6.35 (dd, J=8.4, 2.43 Hz, 1H, H-6), 6.70 (d, J=8.6 Hz, 2H, H-35, and H-55), 6.83 (d，J=8.6Hz, 2H, H-2” and H-6”）； 13C RMN (CD3OD), 75 MHz)讦 ppm 14.84, 22.50, 23.99, 54.78, 57.03, 62.97, *' 5 81.22, 104.38, 109.11, 115.35, 116.01, 118.68, 125.78, ·- 126.33, 130.26, 130.72, 131.29, 131.59, 134.26, 154.42, 157.56, 158.96, 159.33。元素組成物：C，Η, N, Cl :理論值 :70.51，6.53, 2.84, 7.18, %，實際值：70.31，6.75, 2.65,6.89 % ° 10 實施例5顯示制止LHRH-A誘導之脂肪增加其係以 EM-652.HC1，其為一本發明之化合物，單獨或組合有DHEA ’其為一性荷爾蒙前驅物，於卵巢完整之雌性大鼠。能夠 看見的是6個月大之LHRH-A處理顯著增加卵巢完整之雌性 大鼠之58 %體脂肪百分比，然而於EM-652.HC1或DHEA同 15 時投藥，此增加分別僅為35 %和19 %。組合兩藥物，觀察 到無脂肪增加於LHRA-A處理之後。 • 於實施例6’制止肥胖產生於雌性大鼠在20天之期間内是顯 現的。卵巢切除增加總體脂肪和腹膜後脂肪組織之百分比 分別是20%和68%。這些增加被制止且甚至體脂肪和腹膜後 20 脂肪組織減少是由投藥：EM-652.HC1、雌二醇、DHEa或 組合之EM-652.HC1與DHEA或EM-652.HC1與雌二醇產生分 別為46 %，46 % ’ 59 %，56 %，和45 %之減少於體脂肪方 面，及產生分別為59 % ’ 78 % ’ 75 % ’ 69 %，和68 %之減 少於腹膜後脂肪組織方面。一類似之試驗顯示於實施例7。 41 1359015 於此實施例中，制止肥胖是追蹤於34週然後體脂肪和腹膜 後脂肪組織之百分比是大約增加60 %經由卵巢切除。此增 加之制止是由投藥：ethynyl雌二醇，雷洛賽芬(EM-1105) ’ EM-652.HC1(EM-1538)，DHEA或EM-652.HC1 與DHEA之 ' 5 組合。 '' 實施例8A(雄性）和實施例8B(雌性）的結果報告數據是 本發明之效力於制止和治療肥胖。於痩和肥胖之盧克 (Zucker)雄性和雌性大鼠進行投藥：EM-652.HC1 2.5毫克/ φ 每公斤/每天共20天。制止之模式是以無脂肪之痩大鼠代表 10而處理之模式是以原來就肥胖之大鼠代表。數據為體重之 增加，脂蛋白脂肪酶活性於白色腹膜後之脂肪組織與比目 魚肌’還有血漿之胰島素、葡萄糖、總膽固醇、和三酸甘 油酯濃度均結果報告於表7為雄性和表8為雌性動物（參閱 實施例3有關該等參數之顯著性說明）。 15 抗雌激素EM-652.HC1之顯著降低體重增加是38 %於 無脂肪之痩雄性大鼠和35 %於肥胖之雄性大鼠而脂蛋白脂 Φ 肪活性於白色腹膜後之脂肪組織與比目魚肌無任何變化於 兩種不同之性別。血漿胰島素的降低是35 %，57 %和48% 分別為瘦的雄性大鼠，肥胖的雄性大鼠和瘦的雌性大鼠， 20而肥胖之雌性大鼠顯示一較高濃度之胰島素，且 EM-652.HC1無顯著之作用。血漿膽固醇於肥胖組中較高也 • 是會受EM-652.HC1投藥所降低。血清葡萄糖不受 EM-652.HC1處理之影響。 於實施例9中EM-652.HC卜DHEA或二者之組合的作用 42 1359015 於卵巢完整或印巢切除之雄性大鼠該大鼠係給予_富含薦 糖和脂肪之食物的結果報告是作用產生於總重量、:量和、 鼠蹊部及腹膜後之白色月旨肪組織，棕色脂肪組織，比目备 肌和股肌外側肌肉（VLM)的脂蛋白活性。血漿胰島素、葡 5萄糖、總膽固醇、二酸甘油g旨和leptin，及肝臟膽固醇和三 -- 酸甘油酯也一併有結果報告。 實施例10結果報告的是作用產生於重量增加和於脂質 -脂蛋白質代謝於大鼠的處理之後該處理係以不同之選擇 • 性雌二醇受體調節劑該等係描述於文獻（為ERA 923，拉梭 10 福赛芬Lasofoxifene，LY353381和雷洛賽芬）還有 EM-652.HC1，其為本發明之理想化合物。測試化合物之投 藥是以口服強行餵入共20天(0.5毫克/每隻大鼠餵給之每一 種化合物）溶於0.4 %甲基纖維素儀食給卵巢切除之雌性大 鼠。卵巢完整之對照組，卵巢切除(0VX)之對照組和以丨7刍_ 15雌二醇(E2)0VX大鼠使用為參考組。體重和食物消耗之增加 係由於卵巢切除其顯著降低是由測試化合物之處理其程度 • 同卵巢完整之對照組。重量和鼠蹊部與腹膜後脂肪組織之 脂蛋白脂肪皞活性的減少是由以上之處理（除了 ERA 923* LY353381對白色之鼠蹊部脂肪組織及era_923和拉梭福赛 20芬對鼠蹊部之脂蛋白脂肪酶活性）而棕色脂肪組織和肌肉 似乎沒有顯著之影響。能夠看見的是所有測試化合物顯著 降低血漿膽固醇、三酸甘油酯之濃度但不影響葡萄糖濃度 。血漿胰島素之降低是由處理〇VX大鼠以EM-652.HC1， ERA-923 ’拉梭福賽芬，LY 353381和雷洛赛芬。 43 1359015 於實施例11和12，生物體外之效率於雌二醇倚賴性細 胞株產生係以已知之抗雌激素和本發明之化合物做結果報 告。抗雌激素之作用產生於驗性碟酸酶活性於人體之子葉 内膜腺癌Ishikawa細胞的結果顯示於實施例丨〇之表丨丨。抗雕 5激素活性的列出報告於最後一欄係以1C 50表示其單位為 -- nM係為抑制受lnM E2刺激之驗性碟酸酶而測試化合物本 體之雌激素活性列出報告於倒數第二欄以受1〇1^ &刺激之 鹼性磷酸酶活性的百分比。能夠看出最具活性之抗雌激素 • 是EM-652.HC1，LY 353381，雷洛賽芬，拉梭福賽芬，和 10 ERA-923。其他則至少小10倍活性。然而，當中最具活性 之化合物’某些具有一顯著之殘基之非希望之雌激素活性 :LY 353381(16 %)，拉梭福賽芬（18 %)，和雷洛赛芬（13 %) 。因此，顯示之數據指出化合物EM-652.HC1和ERA-923並 未顯示顯著之雌激素活性於Lhikawa細胞。於實施例12中一 15 比較為EM-652.HC1，我們理想之化合物，和ERA-923於人 體乳癌MCF-7細胞顯示出EM-652.HC1之優點。因此， φ EM-652.HC1是比四倍更高之更具活性當相較於ERA-923做 為一抗雌激素藥物（抑制作用之EC5〇(50 %有效濃度）為0.8 nM對3.7 nM)(表 12)。 20 於實施例13，作用為20天之處理係以EM-652.HC1， ERA-923或雷洛赛芬而作用產生於體重，腹膜後之脂肪組 • 織’子宮之重量和膽固醇含量做評估於卵巢切除雌性大鼠 其餵食的是一販售之嚆齒動物飼料。卵巢切除誘導17 %和 19 %之增加分別於總體重和腹膜後之脂肪組織之重量，而 44 1359015 . 投藥0.5毫克之ΕΜ_652.Ηα，ERA_923或拉梭福賽芬制止之 體重增加分別為64%，59%和127%，且引發脂肪組織重量 之值低於卵巢完整對照組所觀察之值是指所有試驗之化合 物。投藥EM-652.HC1和ERA-923不具作用於子宮之重量當 "5相較於卵巢切除對照組之動物。然而，投藥〇.5毫克之拉梭 福赛芬產生一 62%之增加（ρ<0·01)於子宮之重量此增加被 完全逆轉是以同時投藥2.5毫克之EM-652.HC1，係因此闡釋 拉梭福赛芬之一雌激素活性。最後，〇νχ誘導之增加於總 φ 血清膽固醇含量被完全制止是以投藥EM-652.HC1和 10 ERA-923和拉梭福赛芬且引發膽固醇之含量值顯著低於印 巢完整對照組所觀察之值。 實施例5 作用產生於脂肪積聚是以EM-652.HC1和DHEA之處理 ’投藥是單獨或組合，投藥於卵巢完整之雌性大鼠其接受 15 或無一LHRH-A。 URMA-r-04-99 • 本試驗之目的是測定作用其產生於脂肪係以以 EM-652.HC1和脫氫上雄固酮（DHEA)之處理於卵巢完整之 雌性大鼠其接受或無一黃體荷爾蒙釋放荷爾蒙同效劑 20 (LHRH-A，LHRH-乙基乙醯胺）。為此目的，卵巢完整之雌 性大鼠，其處理有或無LHRH-A(丨陴/每隻大鼠），接受每曰 * 投藥為EM-652.HC1 (2.5毫克/每公斤）和DHEA(100毫克/每 公斤），單獨或組合，共6個月。EM-652.HC1之投藥是口服 ，DHEA是使用於局部而HRH-A是以皮下注射。所有之處 45 1359015 η 5 理是投藥每日一次。 測_試動物 品種：以·ί：Μ·5 品系：Sprague-Dawley 大鼠（Crt: CD®(SD)BR VAF/Plus TM) 性別：雌性 年齡：於開始給藥，大鼠是大約10-12週大。 動物房和朝養 a)動物碑： • 10 大鼠之動物房是個別於不鏽鋼籠子於適應和試驗之期間 〇 15 • b) 溫度和溻唐： 環境狀態（溫度和濕度）於大鼠動物房是持續記錄使用一 電腦化自動系統。目標設定狀態是22 ± 3°C和50 ± 20 % 之相對濕度。 c) 光-暗彳盾琿： 光週期是12小時光亮和12小時黑暗。這些參數是持續 記錄使用一有效之電腦化自動系統。光亮自〇7:15至19:15 〇 20 句飲食： 有認證之嚅齒動物飼料(Lab Diet # 5002,丸狀)和自來水 的提供是採不限制之供給。 亂數分西?，： 大鼠被指定至每一組是以亂數於適應之期間内。 方法和試驗設計 46 1359015 測試分組： 120隻大鼠區分至8組每組15隻動物供進行試驗摘要於下： 處理 懸浮浓 L劑量 &藥 溶液劑量 — 局部使用 "uSHX L皮下注射) 劑量 (毫克/公斤) 碰積/大鼠 (毫升） 劑量 (毫級斤) 體積/大鼠 (毫升） 劑量 (1㈣大鼠） 卵巢完整 - 05 0.5 EM-652HQ 25 0.5 0.5 DHEA - 0·5 100 0.5 DHEA+ EM-652.HQ 2.5 05 100 0.5 - LHRH-A - 0.5 - 0.5 0.5 ml LHRH-A+ EM-652.HC1 25 0.5 - 0.5 0.5 ml LHRH-A+ DHEA - 0.5 100 0.5 0.5 ml LHRH-A+DHE A+EM-652.HQ 2.5 0.5 100 0.5 〇.5ml 5 測試動物之準備： LHRH-A是配製為溶液其濃度是1.0毫克/毫升。我們將 稀釋此濃縮溶液（以得到一最終濃度為0.002毫克/毫升）我 們使用下列載劑：0.3 %氮化鈉和0.25 %磷酸鈉單一鹼基， 單一結晶水溶於水中。氫氧化納（溶液)被使用來調整酸驗值 10 介於5.6-6.2之間。 劑量之懸浮液/溶液的製備是每隔兩週依據最新測量 之體重（組平均）除外的是LHRH_A溶液。對εμ_652 Ηα之口 服投藥，載劑(0.4 %甲基纖維素)被添加至測試化合物，之 刖先稱重至一破璃瓶，至少48小時於第一個劑量日之前。 15確疋劑量懸浮液之均一度，該懸浮液至少檀拌48小時於2-8 47 C。劑量懸浮液保存於2·8Ό。對臟A溶液之局部使用， 乙醇被添加至DHEA然後混合物搖晃直至DHEA溶解。然後 ，聚乙二_添加至溶液並搖晃至均勻。劑量溶液保存於 2-8°C。（一部份之溶液能夠被保存於室溫以促進局部使用於 動物體。對LHRH_A溶液之皮下注射，_濃縮溶液之稀釋液 其稀釋係使用適當之載劑該稀釋液的製備是每個月一次。 劑量溶液保存於2-8°C。 動物之準備： 於第一個劑量日之前及所需於試驗期間，一部份之背 部皮膚（大約5x5公分)刺毛供局部使用〇肪八。 劑量： 測試化合物或載劑之投藥是開始於試驗程序之試驗日 1。測試化合物的給藥是以藥物溶於0.4 %曱基纖維素之懸 浮液以強行餵食(0.5毫升/每次強行餵食/每隻大鼠)每曰一 次或局部使用溶於50 %乙醇-50 %丙二醇(〇5毫升/每次使 用/每隻大鼠）每日一次。第5-8組之大鼠同時接受LHRHa 每曰一次以皮下注射及/或單獨之局部接受適當的載劑。 麓JI肪測量 身體組成物的測量是於全身骨骼和動物之右股骨於吸 入性麻醉劑愛舒福能麻醉下使用雙倍數能量\射線吸光分 析儀（型號·· DEXA : QDR 4500A)於適應期和處理六個月之 1359015 處理 卵巢完整 EM-652.HC1
DHEA DHEA+EM-652.HC1
LHRH-A LHRH-A+ EM-652.HC1 LHRH-A+ DHEA LHRH-A+DHEA+ EM-652.HC1 實施例6
脂肪(％) 23.1 ±1.6 19.1 ±1.4 20.2 土 2.3 18.8 ±1.3 36.4 ±2.2 31.2 ±2.0 27.4 ±2.1 25.0 ±1.7 作用是一20天之處理該處理係以EM-652.HC1雌二醇和 DHEA，產生作用於卵巢切除之雌性大鼠之體脂肪和體重參 5 數。
URMA-r-27-OO 本試驗之目的是評估作用其產生於體脂肪和體重參數 係以EM-652.HC1和雌二醇和OHEA投藥為口服之單一或組 合’至卵巢切除之雌性大鼠其接受一富含碳水化合物之飼
測試動物 品種：Rattus norvegicus 品系：Sprague-Dawley 大鼠(Crt: CD®(SD)BR VAF/Plus TM) 性別：雌性 體重：劑量開始時，體重大約是200-250公克》 動物房和铜# a)動物廣: 大鼠之動物房是個別於不鏽鋼籠子於適應和試驗之期間。 49 1359015 b)溫度和濕度： 環境狀態（溫度和濕度)於大鼠動物房是持續記錄使用 一電腦化自動系統。目標設定狀態是22 ± 3t*5〇 ± 2〇 % 之相對濕度。 • 5 c)光-暗循璜: 光週期是12小時光亮和U小時黑暗。這些參數是持續 記錄使用一有效之電腦化自動系統。光亮自〇7:15至19:15 〇 • d)飲兔： 10 有保證之嗡齒動物飼料(Lab Diet #5002,丸狀)和自來 水的提供是採不限制之供給於適應之期間。試驗期間，大 鼠將接受一富含碳水化合物之飼料以不限制之供給。營養 飼料(0丨61#3)之組成是（公克/每公克）：玉米殿粉，312;葡 萄糖’ 31.2 ;酷蛋白，20_0 ;玉米油，64 ; dl曱硫胺酸， 〇.3，混合維生素，1.〇，AIN-76混合礦物質，4.9和纖維素 ，5.0。 ® 解剖前一天，大鼠絕食（只允許飲水）至下午結束（共約 16小時）。 氣皇分酋广: 2〇 *- 大鼠被指定至每一組是以亂數於試驗之第〇曰。 • 1^^·試驗設計 /則試分組： 鼠區分至8組每組15隻動物供進行試驗摘要於下： 處理 懸浮液劑量 ------- 口服投藥 50 1359015
動物之車借： 大鼠自第1組開 於試驗第0日，第2至8組之大鼠做卵巢切除，以雙侧切 除，於吸入性麻醉劑愛舒福能麻醉下進乇 始皆做虛擬手術。 劑量: 測試化合物或載劑之投藥是開始於試驗曰】（該曰為印 除之次一日）。測試化合物的給藥是以藥物溶於〇.4 % 2甲〇基纖維素之懸浮液強行银食(〇.5毫升/每:欠強行银食）共
• 於試驗之第21日（解剖之前），身體組成物的測量是於全 身月路於吸入性麻醉劑愛舒福能麻醉下使用雙倍數能量X 射線°及光分析儀（型號：DEXA ; QDR4500A)以測定處理作 • 15用產生於脂肪之百分比。 織之收| ' 右侧和左側之腹膜後的脂肪組織被收集並稱重。 結考_ 表5 51 1359015. 處理 脂肪 腹膜後的脂肪組織 % 公克 卵巢完整 15.7±0.8 2.20±0.20 OVX 18.9± 1.5 3.70±0.41 OVX +EM-652.HC1 10.2±1.2 1.52±0.18 OVX + Ez 10.3±0.6 0.81±0.17 OVX + DHEA 7.8±0.8 0.92±0.17 OVX + EM-652.HC1 + DHEA 8.4±0.9 1.15±0.17 OVX + EM-652.HC1 + E2 10.4±0.7 1.17±0.19 實施例7 • 作用是一 34週之處理該處理係以乙炔基雌二醇， EM-652.HC1，雷洛赛芬，和DHEA作用產生於卵巢切除雌 5 性大鼠之體脂肪和身體重量參數。 URMA-r-42-98 本試驗之目的是評估一組合處理之作用該處理係以 EM-652.HC1 ’和DHEA其作用產生於卵巢切除大鼠之體脂 肪和體重。為此目的，卵巢切除之大鼠接受每日之投藥是 10 EM-652.HC1 (1毫克/每公斤），和DHEA (80毫克/每公斤）單 _ 一或組合共34週。EM-652.HC1的投藥是以口服而DHEA是 局部使用於背部皮膚。一組動物是口服處理其係以17a-乙 炔基雌二醇（0.1毫克/每公斤）和雷洛賽芬（EM-1105 ; 1毫 . 克/每公斤）供做比較。 15 材料與方法 動物和處理 10-12週大之雌性SpΓague-Dawley大鼠（品系CΓt: CD®(SD)BR)體重大約是200-250公克於處理開始時使用。 52 1359015 80隻大鼠以亂數區分至7組每組11至12隻動物說明如下：i) 印巢完整之對照組；2)OVX對照組；3)OVX + ΕΕ2 (0.1毫克 /母公斤）4) OVX +雷洛赛芬（1毫克/每公斤）；5) 〇νχ +EM-652.HC1 (1 毫克/每公斤）；6) OVX +DHEA (80毫克/ '5 每公斤）；7)〇VX +EM-652.HC1 +DHEA。試驗之第 1 日，條 ' 件相符之組別的動物進行雙側卵巢切除（ovx)其切除手 術於吸入性麻醉藥：愛舒活能麻醉下進行。EM-652.HC1， 雷洛賽芬’和EE2 (Steraloids)之投藥是每曰一次由口服強行 • 餵食藥物是藥物溶於0.4 %甲基纖維素之懸浮液(〇5毫升/ 10 每隻大鼠）共34週而DHEA是局部使用每日一次於背部皮膚 是一藥物溶於50 %乙醇-50 %丙二醇（〇_5毫升/每隻大鼠） 於相同之期間。最後一次劑量後大約24小時，隔夜停飼動 物之處死是以放血法其係於吸入性麻醉劑愛舒福能麻醉下 由腹部主動脈處放血。右侧和左側之腹膜後的脂肪組織被 15 收集並稱重。 身體組成物· j»·谓|丨斧 Φ 處理34週之後，每隻大鼠於吸入性麻醉劑愛舒福能麻 醉下進行全身骨骼使用雙倍數能量X射線吸光分析儀（型號 DEXA , qdr 4500A ’ Hologic，Waltham，MA)並使用 .20 一局°卩同解析度之掃瞄軟體。身體組成物（包含脂肪百分比 ’ ）由此測得。 ' 統計分析 數據表示為平均土標準差。 結果 53 1359015 表6
右側腹膜後 左側腹膜後之 處理 之 脂肪組織 脂肪組織 脂肪 卵巢完整對照組 1.43±0.12 1.80±0.26 25.7+2.5 OVX對照組 2.53±0.24 2.64±0.18 42.1+1.5 OVX+EE2 1.29±0.22 1.15±0.18 19.8+1.9 (〇. 1毫克/公斤） 1.29±0.12 1.4110.13 22.8+1.6 OVX+雷洛赛芬 (1毫克/公斤） 2.07±0.18 2.19±0.28 27.7+1 R OVX + EM-652.HC1 (1毫克/公斤） OVX + DHEA 2.16+0.25 1.98±0.17 26.8+2.3 (80毫克/公斤） 1.62±0.18 1.47±0.18 25.1+1 « OVX + EM-652.HC1 + DHEA ----»»= 54 瘦大鼠：175土15公克；肥胖大鼠：235±15公克 環境調適 大鼠調適至實驗室狀態至少於開始試驗前5天。 動物层和飼養 a) 動物房= 大鼠之動㈣是⑽说獨鋼籠子於適應和試驗之期間 〇 b) 溫度： 溫度於大鼠動物房之記錄是每日—次。目標設定溫度是
22 ± 3°C c) 光-暗循環： 光週期是10小時光亮和Μ小時黑暗。燈亮自〇7:〇〇，然後 燈關於17:00。 d) 飲食: 於調適期’大鼠將得到-販賣之之儒齒動物飼料(pudna ’# 5075)和自來水是採不關之供給。於試驗期間，大 鼠將得到下列飼料(diet#3)組成為公克/每1 〇〇公克）：澱粉 ’ 31.2 ;葡萄糖，31.2 ;酪蛋白，20.0 ;玉米油，6.4 ; dl~甲硫胺酸’ 0.3 ;混合維生素，丨〇 ;八队76混合礦物 質，4.9和纖維素，5.0。 大鼠停飼（只允許飲水)於解剖當天早上711〇〇。 息息分配： 第-個劑量曰之前-曰，大鼠稱重然後指定至每一組 乂使各組具有相當之平均體番 .丨— 〇 試驗設計 1359015 16隻痩和肥胖之卵巢完整之雄性大鼠被指定至4組其 每組有8隻大鼠以供進行試驗其摘要如下 大鼠數量/每組 大鼠狀態 處理 劑量 (毫克/每公斤） 8 瘦 EM-652.HC1 2.5 8 肥胖 EM-652.HC1 2.5 8 〇 瘦 對照組 0 0 一肥1 對照組 0 給藥劑暑 5 測試化合物或載劑之投藥開始於試驗之第1天。測試化 合物EM-652.HC1之給藥是藥物溶於〇 4 %甲基纖維素之懸 洋液由口服強行餵食藥物(〇5毫升/每次強行餵藥/每隻大 鼠)每曰一次是共14天。對照組之大鼠接受單純載劑(〇5毫 升/每次強行餵藥/每隻大鼠)於相同之期間内。 10 體重 於適應期間’動稱重於開始給藥之前一天以供亂數分 配。然後，大鼠稱重於給藥之第一天和此後之每隔兩天及 解剖當天。體重之記錄精確至i公克。 食物之洎耗 15 食物雜之評估是以每隔兩天-次於試驗之期間。 動物犧姓之方法 緊接於大約6小時之停飼#月，動物進行解剖（大物小 時於最後-次給藥之後）。動物以麻醉藥物易他明來拉辛 (ketamine-xylazine)麻醉下以心臟壓縮機將血液抽出。 20 血液樣品 56 1359015 血液脂質（總膽固醇（CHOH)和三酸甘油酯（TG)及葡萄 糖的測定是以冷凍血漿樣品其分析是以Boehringer Mannheim診斷分析儀（型號：Hitachi 911)(製造商： Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems)。體循 5 環之荷爾蒙和受質（Leptin，胰島素)之測定是以冷凍血漿樣 品使用下列套組：
Leptin : Linco放射性免疫分析套組 胰島素：Linco放射性免疫分析套組 器官和組織之故集
10 一葉肝臟(約1克）置入液態氮供進一步測定TG和CHOL 之含量（佛氏測定法，Folch’s method)腹膜後之脂肪組織和 比目魚（肌）收集並置入液態氮供進一步測定脂蛋白脂肪酶 (LPL)活性。腹部之前列腺，睪丸（左側和右側一起)和右側 半月vesicle (排空液體）進行稱重。丟棄右側半月vesicle。 15 表7
月綠白脂 體重增肪酶活挫 加 於白色腹 膜背面 雄性盧克大鼠 月綠白 外表型態瘦痩 肥胖 處理
G 活14^血島素 比目魚 肌 μυ/ 每公克 μ U/每公 nmol nmol/L 蛋白質 克蛋白質 錄葡萄 糖 血 有⑽ 固醇 血 西由 酯
nmoI/L nmoI/L 對照組 73佩2 ΕΜ-652Ή 44.9±35 α 23mg/Kg 對照組 1105+6.7 2066B53 71.m9 0.095dfl.0Q25 10.74±0.87 2.1QM).15 1.471020 1701+348 69i±8.4 0.062±0.005 9.35±051 1.1肚0.09 1·52ώ.13 7233±511 51.9+8.8 1.092Μ)369 11.06*0.84 5.07±0.28 4.21±0.78 57 1359015 肥 ΕΜ·651Η 71.6^13 7046±1185 58·1±4_6 0.475±0·087 11.84*0.62 Z2&b025 716±106 胖Cl 2img^Kg
實施例8B EM-652.HC1的作用產生於痩和肥胖盧克雌性大鼠之能 量平衡和脂肪-脂蛋白質代謝。 5 URMA-r-47-99 本試驗之目的是測定EM-652_HC1的作用產生於瘦和肥 胖盧克雌性大鼠之能量平衡和脂肪_脂蛋白質代謝。為此目 的’ EM-652.HC1(2.5毫克/每公斤）進行投藥以口服（強行顧 食)每曰一次共14天至卵巢完整之瘦和肥胖盧克雌性大鼠。 1〇 測試動物 品系：盧克 性別：雌性 體重：於開始給藥，體重是大約： 15瘦大鼠：114土2公克；肥胖大鼠：ι82±6公克 環境調i商 大鼠調適至實驗室狀態至少於開始試驗前5天。 動物廣和朝養 a) 動物廣： 2〇 大鼠之動物房是個別於不鏽鋼籠子於適應和試驗之期間 〇 b) 溫度： 溫度於大鼠動物房之記錄是每日—次。目標設定溫度是 58 1359015 22 ± 3〇C c)光-暗循環: 光週期是10小時光亮和14小時黑暗。燈亮自07:00，然後 燈關於17:00。 ' 5 d)飲食: 、 於調適期，大鼠將得到一販賣之之嚅齒動物飼料(Purina ，#5075)和自來水是採不限制之供給。於試驗期間，大 鼠將得到下列飼料(diet#3)組成為公克/每100公克）：澱粉 ·，31.2 ;葡萄糖，31.2 ;酪蛋白，20.0 ;玉米油，6.4 ; 10 dl-甲硫胺酸，0.3 ;混合維生素，1.0 ; AIN-76混合礦物 質，4.9和纖維素，5.0。 大鼠停飼（只允許飲水)於解剖當天早上7h00。 亂數分配: 第一個劑量日之前2日，大鼠稱重然後指定至每一組以 15 使各組具有相當之平均體重。 59 1359015 _方法和試驗設計 測試组： 16隻瘦和肥胖之卵巢完整之雌性大鼠被指定至4組其每 組有8隻大鼠以供進行試驗其摘要如下 大鼠數量/每組 大鼠狀態 處理 劑量 (毫克/每公斤） 8 瘦 EM-652.HC1 2.5 8 肥胖 EM-652.HC1 2.5 8 瘦 對照組 0 8 肥胖 對照組 0 5 給藥劑詈 測試化合物或載劑之投藥開始於試驗之第1天。測試化 合物EM-652.HC1之給藥是藥物溶於〇 4 %甲基纖維素之懸 洋液由口服強行餵食藥物(0·5毫升/每次強行餵藥/每隻大 鼠)每曰一次是共14天。對照組之大鼠接受單純載劑(〇5毫 1〇升/每次強行餵藥/每隻大鼠)於相同之期間内。 體重 於適應期間’動稱重於開始給藥之前一天以供亂數分 配。然後，大鼠稱重於給藥之第一天和此後之每隔兩天及 解剖當天。體重之記錄精確至1公克。 15 食物之消耗 食物消耗之評估是以每隔兩天一次於試驗之期間。 動物犧牲之方法 緊接於大約6小時之停飼期，動物進行解剖（大約3〇小 時於最後-次給藥之後）。動物以麻醉藥物易他明來拉辛 20 (ketamine-XylaZine)麻醉下以心臟壓縮機將血液抽出。 60 1359015 液才袠品 血液脂質（總膽固醇(CHOH)和三酸甘油酯（TG)及葡萄 糖的測定是以冷凍血槳樣品其分析是以Boehringer Mannheim診斷分析儀（型號：Hitachi 911)(製造商： 5 Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems)。體循 環之荷爾蒙和受質（Leptin，胰島素)之測定是以冷凍血漿樣 品使用下列套組：
Leptin : Linco放射性免疫分析套組 騰島素：Linco放射性免疫分析套組 10 官和組織之收隼 —葉肝臟(約1克）置入液態氮供進一步測定TG和CHOL 之含量（佛氏測定法，Folch’s method)腹膜後之脂肪組織和 比目魚（肌）收集並置入液態氮供進一步測定脂蛋白脂肪酶 (LPL)活性。子宮和卵巢進行收集，稱重並保存於1〇%緩衝 15 液福馬林供進一步組織學檢測。左側和右側之卵巢(無卵巢 切除者）一起稱重。 61 1359015 表8 雌性盧克大鼠 组別體重增脂蛋白脂脂蛋白 血楽騰島 血紫葡萄 加 肪酶活挫脂肪酶 於白级活狀 膜背面比目魚 肌 素 糖 有禮 固醇 米由酯 外表處理 g 型態 μυ/每公克μυ/每公克nmol/L 蛋白質 蛋白質 nmol/L nmol/L nmol/L 痩對照組175±4 1586±155 55.8tt8.1 0.122+0.022 9.45±0.68 233±0.10 125+0.16 痩 ΕΜ·652· 154±5 HC1 2.5 1349±246 60.肚 11.1 0.063e+£).012 9細.41 15W)_14 0.83*0.07 IIigri\g 肥胖對照組313±9 398Qi327 36.948.6 0.4腦.033 10.63±055 4.83±027 125\±325 肥胖 HVW52. 291±9 HQ 2.5 mg^Kg 實施例9 3819!«85 36.6i7.1 0·515±0‘091 11.70*0.47 327±0.97 222QM.44 5 EM-652.HC1和DHEA的作用，投藥是單一或組合，作 用產生於大鼠之能量平衡和脂肪-脂蛋白質代謝。 URMA-r-〇3-99 本試驗之目的是測定EM-652.HC1的作用，投藥是單一 或組合，作用產生於大鼠之能量平衡和脂肪_脂蛋白質代謝 10 。處理產生之評估係以數個參數於20天之處理：EM-652.HC1 (0.5毫克/每隻大鼠，約2.5毫克/每公斤，每一個口服投藥) 和DHEA(20毫克/每隻大鼠，約100毫克/每公斤，局部使用 )’投藥是單一或組合，投藥之動物是卵巢完整(INT)和卵巢 切除(OVX)之雌性大鼠該大鼠係接受一高蔗糖高脂肪之飼 15料。為做比較，一卵巢完整和卵巢切除之對照組接受高營 62 1359015 養飼料而其他對照組動物（卵巢完整和ovx)將接受販售之 嚅齒動物飼料。 測試動物 品種· /lorvegicf/s 5 品系：Sprague-Dawley 大鼠（Crt: CD®(SD)BR VAF/Plus TM) 性別：雌性 年齡：於開始給藥，體重約190±220公克。 環境調適 大鼠調適至實驗室狀態至少於開始試驗前5天。 10 動物房和飼養 a) 動物房: 大鼠之動物房是個別於一般設計之不鏽鋼籠子於適應和 試驗之期間。 b) 溫度：
I5 溫度於大鼠動物房之記錄是母日一次。目標設定溫度是 22 ± 3°C c) 光-暗循環： 光週期是10小時光亮和14小時黑暗。燈亮自〇6:〇〇，然後 燈關於16h00。 20 d)飲食： 於調適期，大鼠將得到一販賣之之嚅齒動物飼料(pudna ，# 5075)和自來水是採不限制之供給。於試驗期間，第 1和2組之大鼠將得到販售之飼料而第3至1〇組將接受一 高蔗糖-高脂肪之飼料組成為公克/每1〇〇公克）：蔗糖， 63 1359015 45 ;玉米油，10 ;豬油，10 ;酪蛋白，22.5 ; dl-曱硫胺 酸，0.3;混合維生素，1.2;八11^-76混合礦物質，5.5和 纖維素，5.5。 大鼠停飼（只允許飲水)於解剖前一天晚上22h00。 5 亂數分配： 於動物運抵後數日，大鼠稱重然後指定至每一組以使 各組具有相當之平均體重。 方法和試驗言史計
10 測 '試組： 80隻大鼠被指定至10組以供進行試驗其摘要如下
劑量 (毫克/每公斤） 飼料 處理 每一個 口服劑 局部使用 量 飼料1 INT 0 0 OVX 0 0 INT 0 0 INT + EM-652.HC1 0.5 0 特殊飼料2 INT+DHEA 0 20 INT + EM-652.HC1 + DHEA 0.5 20 OVX 0 0 OVX + EM-652.HC1 0.5 0 OVX + DHEA 0 20 OVX + EM-652.HC1 + DHEA 0.5 20 動物之準備： 15 於試驗之第0日，大鼠其屬於條件符合之組別進行卵巢 切除以雙侧切除，於吸入性麻醉劑愛舒福能麻醉下進行。 卵巢完整之大鼠做虛擬手術。 64 給樂劑晉 測試化合物或載劑之投藥開始於卵巢切除之隔曰（第i 日）。測試化合物EM-652.HC1之給藥是藥物溶於〇4 %甲基 纖維素之懸浮液由口服強行餵食藥物(〇5毫升/每次強行 健藥/每隻大鼠)每日一次是共20天。而DHEA是局部使用於 责。P皮膚（0.5毫升/每次使用/每隻大鼠）每曰—次於一相同 之期間。對照組之大鼠接受單純載劑(每次口服投藥和局部 使用）。大鼠犧牲於試驗之第21日於最後一次劑量後大約24 小時。 大鼠稱重於第0日（手術之日）’每隔2日於試驗期間和解 剖當日。體重之記錄精確至1公克。 食物之洁耗 食物消耗之δ平估是以每隔兩天一次於試驗之期間。 動物犧牲之方法 緊接於大約6小時之停飼期’動物進行解剖（大約3〇小 時於最後一次給藥之後）。動物以麻醉藥物易他明來拉辛 (ketamine-xylazine)麻醉下以心臟壓縮機將血液抽出。 血液樣品 血液脂質（總膽固醇和三酸甘油醋）的測定是以冷珠血 漿樣品其分析是以Boehringer Mannheim診斷分析儀（型號 :Hitachi 911)(製造商：Boehringer Mannheirn Diagn〇stic
Laboratory Systems)。體循環之荷爾蒙和受質（騰島素，leptin ，葡萄糖)之測定是以冷凍血漿樣品描述如下： 1359015 姨島素：Linco放射性免疫分析套組 葡萄糖：貝克曼自動葡萄糖分析儀 Leptin : Linco放射性免疫分析套組 器官和組織之收集 5 下列組織進行收集並稱重係對於所有之動物體。 肌肉（比目魚肌和VLM)，脂肪（腹膜背面和鼠蹊部），心 臟，棕色脂肪組織和大腦皆一併收集。 一葉肝臟(約1克）置入液態氮供進一步測定TG和CHOL 之含量（佛氏測定法，Folch’s method)腹膜後之脂肪組織和 10 比目魚（肌）收集並置入液態氮供進一步測定脂蛋白脂肪酶 (LPL)活性。子宮（和卵巢於卵巢完整之組別）做移除，去除 多餘之脂肪，稱重並保存於10%緩衝液福馬林。 66 m- m 表9 總重量鼠溪部白色^朝?组織鼠溪部白色脂肪组織腹膜背面白色脂肪组織 脂蛋白 脂蛋白 脂蛋白 重量 脂肪酶活 重量 麟酶活 重量 脂肪酶活 性 性 性 g g μΙΙ/g g μυ/g g μυ/g 239+6 0.410±0.043 252+55 0.983±0.1〇4 15264217 0329*0.035 1053+138 OVX對照 組 294« 0.888ii).146 57fttl00 1.472±0.199 2415±147 0.466di).041 688188 斧檐+月匕 ; 曰 概组 257±10 0.716*0.107 344±73 1.765*0.292 1470+242 0.376di).033 10731152 蔗糖+脂模擬4EM,
肪 ·652Ηα 蔗糖+脂模 擬 肪 4DHEA 238±5 252±5
蔗糖+脂f擬心 时 ·652Ηα+ 24肚4 肪 DHEA 蔗糖+脂OVX對照 肪. 組 蔗糖+脂Ονχ+ΪΜ-肪 652HC1 蔗糖+脂OVX+ 肪 DHEA 316±8 268+5 274±9 0.435±0.043 16ftt23 1.058±0.162 1277±56 0.306*0.044 1196±83 0,65她.075 194±45 1.067±0.149 1177±188 0373+0.036 982t72 0.48ft+j〇.083 224145 0.90ftM).124 1349+133 0.322M).026 885+78 1.80QM).251 725±106 3.058+0.297 25031215 0.519±0.064 867i59 0.70ftM).085 310±63 1.370+0.211 1612±186 0.408*0.025 678+65 0.885±0.156 583±134 j06"1015 1905±112 0.342±0.049 106ftt96
肪 DHEA 0.658±0.088 306±42 10436*0.16 2 1542±118 0.373±0.040 876±75 蝴 比目魚肌肉 脂蛋白 脂肪酶活性 處理 g μυ/g 模擬對照組 0.106±0.002 62.713.0 OVX對照 組 蔗糖 +脂肪模擬對照組0.096±0.005 55.0±5.1 蔗糖 + 脂肪 Hf4 0.〇98±0_005 53_ftt3.3 蔗糖 + 脂肪 擬〇.105±0.004 53.6±7.5 +DHEA 模擬+EM 蔗糖 + 脂肪-652.HQ+ 0.098±0.005 56.6±4.5 DHEA OVX對·日召 蔗糖 + 脂肪. '、0.110i0.004 39.2±3.9 組 0.104+0.004 39.1±5.0 蔗糖 + 脂肪 OVX + EM 0.103±0.005 45.肚4.7 飼料 飼料 飼料 重量 重量 g
Vastus Lateiralis muscle 脂蛋白 脂肪酶活性 μυ/g mm〇]/L 總膽固醇總膽固醇 '0.116+0.005 43.8i3.3 0.872±0.027 11.713.5 1.000±0.042 13.1±3.7 0.927±0.04 13.1±3.2 0.965±0.034 16.2±3.1 0.893+0.043 11.512.0 0.971±0.029 19.513.5 1.037+0.026 10.fttl.82 0.944+0.030 10.8±3.2 0.920*0.049 13.1+5.4 0.076*0.004 0.082±0.004 0.083+0.002 0.096*0.011 0.068+0.003 0.101±0.008 0.097+0.007 mmol/L 0.134±0.01 9 0.169±0.02 0.123±0.01 4 0.36QH).10 2 0·038±0_00 7 0.184+0.03 3 0.262±0.05 2 0.092±0.006 ^3481007 0.079+0.00 0.165+0.04 67 1359015 -652.Ηα +
DHEA 蔗糖 + 脂肪 0.101+0.001 48.4+4.8 0.92ftM).038 11.0±4.1 5 7 0.106ii)_00 0.273±0.03 蝴 血棠 胰島素 血漿 葡萄糖 飼料處理 飼料 模擬對照組
飼料 OVX對照組 £糖+脂槪對照組 肪 蔗糖 + 脂 ΜΜ+ΕΜ 肪 蔗糖+知iM^+DHEA 肪 蔗糖+脂模擬+EM ·652.Ηα +
肪 DHEA 藉、糖+脂OVX對照組 肪 蔗糖+脂OVX +
肪 EM~652.HC1 蔗糖 + 脂 OVX + EM ·652.Ηα 肪 +DHEA
蔗糖+脂OVX + 肪 DHEA nmol/L 0Ό71±0.010 0.146±0Ό27 0.07910.013 0.057±0.004 0.048+0.012 0.049+0.013 0.125±0Ό22 0.089±0.013 0.052±0Ό09 0.060+0.010 nmol/L 7.56±0.24 8.69±0.57 9.07±0.48 9.03±0.49 8.05±0.51 7.99±0.44 10.46±0.72 9.06+0.30 8.64+0.24 8.65±0.38 血蒙 總膽固醇 nmol/L 1_61±0_17 2.1010.10 1.60±0.12 1.1510.06 1.59±0.17 0.93±0.08 1.6210.26 1.15+0.11 1.57±0.12 0.87±0.09
血漿 血漿 三酸甘油酷 \ep0n Nmol/L nmol/L 0.49±0.12 0.68±0.10 0.66±0.17 0.60±0.12 0.61±0.11 0.95±0.21 0.8310.13 0.97±0.16 0.62±0.08 0.92+0.21 1.404±0.22 4 2.388±0.73 7 3.57210.69 9 2.019±0.40 2 1.977±0.25 5 1.071±0.16 2 7.900±1.98 2 1.98910.32 6 2.75710.63 1 1.672±0.32 實施例10 EM-652.HC1，ERA-923，拉梭福赛芬，LY 353381 和雷 洛赛芬的作用產生於卵巢切除之雌性大鼠之能量平衡和脂 5 肪-脂蛋白質代謝。
URMA-r-45-OO 本試驗之目的測定作用產生於大鼠之能量平衡和脂肪 -脂蛋白質代謝其處理係以不同之選擇性雌激素受體調節 劑該等描述於文獻本試驗並比較得到之結果和 10 EM-652.HCL之結果。為此目的，測試化合物之投藥是以口 服強行餵食共20天(0.5毫克/每隻大鼠，對每一個化合物， 68 1359015 . 0.5毫升/每隻大鼠）藥物係溶解於〇4 %甲基纖維素再投藥 給卵巢切除之雌性大鼠。卵巢完整對照組，卵巢切除(〇νχ) 對照組和OVX大鼠以17b-雌二醇(Ε2)處理係為參考之用。 測試動物 5 品種：ΛαίίΜί nweg/cMi 品系：Sprague-Dawley 大鼠(Crt: CD®(SD)BR VAF/plus 顶） 性別：雌性 年齡：於開始給藥，體重約200-225公克。 動物层和翻養 1〇 a)動物廣： 大鼠之動㈣是侧於-般設狀不_籠子於適應和 試驗之期間。 b) 溫度: 環境狀態（溫度和濕度)於以動_是持續記錄使用一 15 電腦化自動系統。目標設定狀態是22±3。(：和50±20% 之相對濕度。 c) 光-暗循環: 光週期是10小時光亮和14小時黑暗。燈亮自〇7:15，然後 燈關於17hl5。 20 d)飲食： 於調適期’大鼠接受-有認證之㈣動物飼料_胸 # 5002，丸狀)和自來水的提供是採不限制之供給。試驗 期間’大鼠將接受-富含碳水化合物之飼料(Diet#3)和 自來水以不限制之供、給。飼料之級成是（公克/每公克）_ 69 1359015 玉米澱粉，31.2 ;葡萄糖，31.2 ;酪蛋白，20.0 ;玉米油 ，6.4 ; dl-曱硫胺酸，0.3 ;混合維生素，1.0 ; AIN-76混 合礦物質，4.9和纖維素，5.0。大鼠停飼（只允許飲水) 於解剖當天早上07h00。 5 亂數分配： 大鼠被指定至每一組以使各組具有相當之平均體重。 方法和試驗設計 測試組： 77隻大鼠被指定至8組每組9-10隻大鼠以供進行試驗 10 其摘要如下。 大鼠數量 處理 懸浮液劑量 劑量 (毫克/大鼠） 體積/大鼠 (毫升） 9 卵巢完整 0 0.5 ml 9 OVX 0 0.5 ml 10 OVX + EM-652.HC1 0.5 0.5 ml 10 OVX + ERA-923 (EM-3527) 0.5 0.5 ml 10 OVX +拉梭福赛芬 (EM-3555) 0.5 0.5 ml 10 OVX + LY 35381 (EM-1665) 0.5 0.5 ml 10 OVX + 雷洛赛芬(EM-1105) 0.5 0.5 ml 9 OVX + E2 0.5 0.5 ml 動物之準備： 於試驗之第0日，大鼠其屬於第2-8組進行卵巢切除（以 雙側切除），於吸入性麻醉劑愛舒福能麻醉下進行。大鼠其 15 屬於第1組做虛擬手術。 體重 70 1359015 大鼠稱重於第0日（手術之日），然後，每隔2日於試驗期 間和解剖當曰。 食物之消耗 食物消耗之評估是以每隔兩天一次於試驗之期間。 .· 5 身體組成物（脂肪百分比) 、 為測定處理之作用產生於脂肪百分比，身體組成物測 定於第17日使用雙倍數能量X射線吸光分析儀（型號：DEXA ;QDR 4500A，Hologic，Waltham，ΜΑ) 〇 • 動物犧牲之方法 10 於試驗之第21曰’大約24小時於最後一次給藥之後和6 小時之停飼。動物以麻醉藥物易他明-來拉辛 (ketamine-xylazine)麻醉下犧牲其方法是以腹部主動脈放血 〇 血液樣品 15 血液脂質（總膽固醇和三酸甘油酯）的測定是以冷凍血 漿樣品其分析是以Boehringer Mannheim診斷分析儀（型號 # : Hitachi 911)(製造商：Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems)。體循環之荷爾蒙和受質（胰島素和 leptin)之測定是以冷凍血漿樣品描述如下： 20 騰島素：Linco放射性免疫分析套組 Lepdn : Linco放射性免疫分析套組 器官和組鐵之收集 下列組織進行收集並稱重： 肌肉（比目魚肌和VLM)，脂肪（腹獏背面和鼠蹊部），心 71 1359015 臟，棕色脂肪組織和大腦皆一併收集。 • 一葉肝臟（約1克）置入液態氮供之後測定TG和CHOL之 含量（佛氏測定法，Folch’s method)。一片約0.1克之所有組 織（除了子宮和陰道）凍入液態氮供之後測定脂蛋白脂肪酶 ^ 5 (LPL)活性。子宮和陰道保存於10%緩衝液福馬林供進一步 -- 組織學檢驗。動物之屍體置於一金屬盒並保存於-20°C直至 能量平衡之測定。 結果 72 1359015 . 表ίο 處理 總重 量 鼠溪部白色脂肪组織腹膜背面白色^旨肪组織腹膜背面棕色脂肪紐織 重量 脂蛋白 重量 脂蛋白 重量 脂蛋白 脂肪酶 脂肪酶 脂肪酶 活性 g g μυ/g g μυ/g g μυ/g 卵巢完整 232±7 0.350+0.037 379+69 1.31+0.09 1537+253 0.410*0.030 9731115 26641338 0.380*0.027 880±130 OVX 284±5 0.320+0.048 797i97 1.55±0.15 1917+365 0.339±0.038 900+91 175Q+140 0.350*0.019 1017183 0.187±0.023 801±138 0.867+0.132 1417±163 0.244+0.022 982±98 0.290*0.038 559±165 0.968+0.120 1365±119 0.368±0.031 888+65 0.24510.047 57%46 1.32±0.24 1510+52 0.307±0.26 960+116 0.15810.019 416±74 0.550+0.102 1442i243 0.211+0.021 1198±62 處理 比目魚肌肉 Vastus Laterralis muscle 重量 脂蛋白 重量 脂蛋白 脂肪酶活性 脂肪酶活性 g μυ/g g μυ/g 卵巢完整 0.11310.020 17.2±2.2 0.92410.031 ND OVX 0.108±0.006 17.6±3.9 0.963±0.045 ND OVX + EM-652.HC1 0.118±0.018 14.5±4.1 1.000+0.047 ND OVX + ERA-923 0.100+0.004 11_7±1.9 0.993±0.33 ND OVX +拉梭福赛芬 0.096±0.003 10.9±1.5 0.800±0.048 ND OVX + LY 353381 0.92±0.002 10.1±1.0 0.95510.20 ND OVX+雷洛赛芬 0.099±0.003 10.2±2.0 0.795±0.055 ND OVX+Ez 0.086+0.003 10.9±2.0 0.718±0.026 處理 累積 血漿 血衆 血衆 血衆 姨島素 葡萄糖 總膽固醇 三酸甘油酯 Ιφύη g nmol/L nmol/L nmol/L nmol/L nmol/L 卵巢完整 332±14 0.086±0.11 13.610.7 2.4110.16 0.62±0.07 2.46+0.37 OVX 389±8 0.17810.030 15.9±1.9 2.58±0.11 0.63±0.05 3.48+0.40 OVX + EM-652.HC1 32415 0.122±0.021 15.9±1.4 1.4110.09 0.91+0.17 1·10±0.22 OVX + ERA-923 347+9 0.113+0.029 16.5±2.7 1.66+0.16 0.93±0.24 2.12±0.44 OVX + 拉梭福赛芬 283±14 0.095±0.017 15.肚 1.32 1.29±0.06 0.81±0.21 0.97±0.29 OVX + LY 353381 312±7 0.104±0.11 17.1+0.72 1.15±0.08 1.23±.28 1.22±0.21 OVX + 雷洛賽芬 307+8 0.07710.10 13.肚 1.2 1.19±0.08 1.20±0.35 1.39±.30 OVX+E2 255±9 0.070±0.〇〇7 11.肚 1.35 2.03+0.15 0.4310.04 0.309+0.097
OVX + EM-652.HQ OVX +ERA-923 OVX+拉梭福賽芬 OVX + LY 353381 OVX+雷洛赛芬 OVX+Ez 252±4 0.24410.028 684i216 1.32±0.21 260±5 0.326±0.042 766±173 1.27+0.15 210±2 231±4 230±3 198±4 實施例1_ 1 73 1359015 . 本發明化合物之作用和前置技藝之化合物其產生作用 於人體之子宮内膜腺癌石川氏（Ishikawa)細胞之驗性填酸 酶活性。 材料 5 維護保存株之細胞培養 人體石川氏細胞株係分離自一分化良好之子宮内膜腺 癌細胞該細胞株是由Erlio Gurpide博士（Mount Sinai Medical Center，New York, NY)所慨然提供。石川氏細胞一 般培養於伊果最低限必需培養基（Eagle’s Minimum 10 Essential Medium)(MEM)含有5%(體積/體積）胎牛血清(FBS) 並補充有100 U/毫升之盤尼西林，100 pig/ml鏈黴素，0.1 mM 非必需胺基酸溶液。細胞植於商品名：Falcon T75細胞培養 瓶其培養濃度是1.5 X 106培養溫度是37°C。 細胞培養之試驗 15 於一試驗開始前24小時，幾近黏連稠密之石川式細胞 培養液置換為無雌激素之基礎培養液(EFBM)含有一無酚 紅之商品名：Ham’s F-12和Dulbecco氏修改之伊果最低限必 需培養基(DMEM)二者的1 : 1(體積：體積）混合液補充有1〇〇 U/毫升之盤尼西林，100 ^/ml鏈黴素，2 nM穀胺醯胺和5% 20 胎牛血清此培養液以裹覆聚葡萄糖(dextran)之焦碳處理兩 次以移除内含性之類固醇。然後細胞之收取是以0.1 %之姨 酶(pancreatin)(製造商：Sigma)溶於0.25 mM之HEPES緩衝 液，再重新懸浮於EFBM並植於商品名：Faicon 96凹槽平底 式微量細胞培養盤培養之密度是2.2 X 1〇4個細胞/每一凹槽 74 且每-凹槽之體積是__後以24小時使細胞黏附至培 養盤表面。此後，培養液之置換是以新鮮之聊贿有註明 之化合物濃度其一最終體積為200 μ!。細胞培養共5日，置 換培養液於每隔48小時之後。 驗性磷酸酶分析測定 培養期終止時，微量細胞培養盤反轉倒置並丟棄生長 培養液。細胞培養盤之沖洗是以每一凹槽2〇〇叫之磷酸鹽
緩衝液(PBS)(0.15M氣化納，1〇 mM填酸鈉，pH 7·4)。PBS 移除自細胞培養盤並小心留下一點殘餘之PBS，然後沖洗步 驟再重覆一次。緩衝之生理食鹽水於此時丟棄，且細胞培 養盤反轉倒置之細胞培養盤小心拍乾於一紙巾。於置換— 盤蓋後，細胞培養盤置放於-8(TC共15分鐘接著解凍於室溫 下10分鐘。細胞培養盤於此時放置於沐上，且添加50 |〇L之 —冰冷溶液其含有5 mM對-硝基苯磷酸鹽，0.24 mM氣化鎂 ’和1 Μ二乙醇胺(pH 9.8)。細胞培養盤於此時回溫至室溫 ’然後黃色其來自對-硝基苯基之產物進行呈色（8分鐘）。細 胞培養盤監測以波長：405 nm於一酵素連結免疫分析測定 儀（製造商：BIO-RAD，機型：2550 EIA Reader)。 劑量-反應曲線和IC50值之計算是使用一加權反覆非線 性平方回歸法。 表11 化學名 編碼名 結構 以測試化合物刺以測試化合物抑 激 制InMEz 鹼性磷酸酶 刺激之鹼性 填酸酶活性 1 nM Ej刺激* 之 ICsoCnM) 1359015 EM-652.HC1 OH-檀莫赛芬 OH-托里美芬 EM-880 OH-伊多赛芬 EM-1750 %(試驗數量）
29.6±2.1
UJU 'I/O ⑹ (¾¾數量) 1.5210.22 (18) 31-^±6.0 ⑶ GW-5638 爵洛賽芬 雷洛賽芬 LY 156758 LY 353381 拉梭福賽芬 (無驗基） EM-1796 EM-835 EM-1105 EM-1665 EM-3114
72·1±7.6 ⑶ >1000 (2) 無抑制作用 291±li5 (4) 3.39+0.9 ⑹ ^-87+0.07 ⑵ 42.4 (1) ERA-923 EM-3527 π *1 ηΜ Ε2刺激*之％= 化合物之OD 405 nm讀值-基準之〇d 405 nm讀值/i nM E2之OD 405 nm讀值-基準之〇D 405 nm讀值。請同時參 閱Labrie等人所發表之期刊EM-652(SCH 5768)，一第三代 SERM作用如乳腺和子宮内膜之純抗雌激素，j Ster〇idBiochem. and Mol· Bio. 69, 51-84, 1999。 實施例12EM-652.HC1和ERA-923之作用產生於人體乳癌MCF-7 細胞株。 76 1359015 方法 維謨保存株之細胞培養 MCF-7人體乳癌細胞係取得自美國型態收集中心 #HTB22之147號許可且常務性生長於無酚紅-Dulbecco’s 5 修正Eagle’s-Ham，s F12培養液，補充物如以上所提及5%胎 牛血清。MCF-7人體乳腺癌細胞株係分離自一高加索69歲 女性病患之肋膜滲出液。MCF-7細胞使用係以介於148號許 可和165號許可且每週增殖培養。 .細胞增殖研究 1〇 細胞於其指數成長後期收取是以〇· 1 %胰酶(pancreatin) (製造商：Sigma)然後再懸浮於適當之培養液含有5〇ng之胎 牛騰島素和5 %(體積/體積)FBS以裹覆聚葡萄糖卿論)之 焦碳處理兩次以移除内含性之類固醇。細胞植於24凹槽之 商品名：灿⑽9塑膠培養盤(2 一每_凹槽）以指定之密 b度且以72小時使細胞黏附至培養盤表面。此後，培養液之 置換是輯鮮之培養液含有註明之化合物濃度稀釋 自 1000 倍貯存溶液含有99%二次蒸餘之乙醇含有或無仏。對照組細 $接受只有乙醇載劑(o.1%Et〇H，體積,體積）。細胞培養於 專一之時間間隔是培養液更換收幻天之間隔。細胞數量 20的測定是以DNA含量測定。 1十算和餅朽· 劑量-反應曲線和IC5〇值之計算是使用一加權反覆非線 性平方簡法。所有之結果的表相平均±標準差。 表12 77 化學名 編瑪名 以測試化合物 刺激DNA 以測試化合物抑 制 InMEj EM-652.HC1 EM-652.HC1 ； EM-1538 1 nM氏刺激*之％ N.S. 刺激DNA IC5〇 (nM) 0.796 ERA-923 EM-3527 N.S. 3.68 實施例13
比較作用產生於子宮的重量，脂肪，和脂質該作用係 由EM-652.HC1，ERA-923和拉梭福赛芬，投藥是單一投藥 或組合有EM-652.HC1 ’投藥至卵巢切除之雌性大鼠。 URMA-r-44-OO 本试驗之目標疋比較作用產生於子宮和陰道組織學於 EM-652.HC1，ERA-923和拉梭福赛芬處理下，投藥是單— 投藥或組合有EM-652.HC1，投藥至卵巢切除之雌性大鼠。 為此目的，每一個化合物的投藥是以口服共2〇日投藥至卵 巢切除之雌性大鼠且於處理期結束時，子宮和脂肪做收集 和稱重。 測試動物之專一性: 品種： 品系：Sprague-Dawley 大鼠（Crt: CD®(SD)BR VAF/Plus TM) 性別：雌性 體重：劑量開始時’體重大約是200—250公克。 動物房和飼養 a)動物房: 大鼠之動物房是個別於不鏽鋼籠子於適應和試驗之期間 1359015 b)溫度和濕度: 環境狀態（溫度和濕度）於大鼠動物房是持續記錄使用一 電腦化自動系統。目標設定狀態是22 土 3°C和50 ± 20 % • 5 之相對濕度。 • c)光-暗循壞. 光週期是12小時光亮和12小時黑暗。這些參數是持續記 錄使用一有效之電腦化自動系統。光亮自07:15至19:15 10 d)飲食: 有保證之嚅齒動物飼料(Lab Diet # 5002,丸狀)和自來水 的提供是採不限制之供給。 亂數分配: 大鼠被指定至每一組是以亂數於卵巢切除之時。 15 測試分組： 70隻大鼠區分至7組每組9-11隻動物供進行試驗摘要於下： 處理 懸浮液劑量 (毫克/每隻大鼠） 卵巢完整 - OVX - OVX + EM-652.HC1 0.5 OVX + EM-3527 0.5 OVX + EM-652.HC1 + EM-3527 2.5+ 0.5 OVX +EM-3555 0.5 OVX + EM-652.HC1 + EM-3555 2.5 + 0.5 79 1359015 動物之準備： 第2-9組之動物進行卵巢切除手術於其切除手術於吸 入性麻醉藥：愛舒活能Isoflurane麻醉下進行於試驗之第1 、5曰。 ' 劑量： 載劑或測試化合物之給予是以懸浮劑溶於0.4%之甲基 纖維素其以口服強行餵食(0.5毫升/強行餵食/每隻大鼠）從 • 試驗第2至第21曰。 10 體重： 大鼠稱重於試驗之第1日和解剖之日（第22日）。 動物犧牲之方法 最後一次給藥之後大約24小時，隔夜停飼大鼠以麻醉 藥物愛舒福能(Isoflurane)誘導之麻醉下犧牲其方法是以腹 15 部主動脈放血。 器官和組.镟之收集 • 子宮和腹膜背面之脂肪組織進行移除和稱重。 處理 最後之體重 腹糢背面之 子宮重量 膽固醇 (g) 脂肪組織(g) (mg) (mmol/L) 卵巢完整 232±5** 1.04+0.13** 485.8128.4* L52±0.09* 氺 本 0VX 266±5 1.42±0.24 152.9±4.7 1.91+0.09 OVX + EM-652.Ha 238+4** 0.63±0.08** 173.0+7.1 1.0010.11* * 0VX + ERA-923 248±5** 0.84±0.09** 162.6±5.2 1.20+0.10* * OVX+ERA-923+EM-65 2.HC1(2.5 毫克） 241±1** 0.91+0.17** 180.2±5.2 0.99±0.07* * 80 1359015. GVX+拉梭福賽芬 095+009* 貧才 210±3** 0.52±0.05料 274.4±9.1料 t OVX+拉梭福赛芬+ 0 95+0 07* EM^652.HC1(2.5 毫克）234±3** 0.7410.10** 182.3±4.6 U^-U/ *，ρ<0·05 ; **，ρ<〇·〇〇卜試驗對比於ονχ對照組 藥學組成物之宭施你丨 於以下所列，是以實施例之方式而不做限制，是多種 藥學組成物其使用是以理想之活性SERM ΕΜ-800或 5 EM-652.HC1單獨或組合有一個理想之活性的一個性類固醇 前驅物DHEA， 雄-5-烯-3b,17b-二醇3-醋酸鹽或雄_5-稀 -3b，17b-二醇二半琥珀鹽。活性成份之濃度可以變化於一很 寬之範圍如在此所討論。其他成份之數量和型態其可能被 包含者是技藝中所以知。
10 實施例A 本發明理想之SERMs是以口服投藥 藥錠 成份 重量％ (以所有之組成物之重量) EM-652.HC1 5.0 明膠 5.0 乳糖 73.5 澱粉 163
實施例B 膠囊 成份 重量％ (以所有之組成物之重 量） EM-652.HC1 5.0 水合乳糖 80.0 81 1359015 澱粉 4.8 纖維素微晶粒 9.8 硬脂酸鎂 0.4 藥學組成物供組合式處理 實施例c 5 藥錠 成份 重量％ (以所有之組成物之重量） EM-652.HC1 5.0 DHEA 15.0 明膠 5.0 乳糖 58.5 澱粉 16.5
實施例D 明膠膠囊 成份 重量％ (以所有之組成物之重量） EM-652.HC1 5.0 DHEA 15.0 水合乳糖 65.0 澱粉 4.8 纖維素微晶粒 9.8 硬脂酸鎂 0.4 10 套組之實施例 於以下所列，是以實施例之方式而不做限制，是多種 套組其使用是以理想之活性SERM EM-800或EM-652.HC1 單獨或組合有一個理想之活性的一個性類固醇前驅物 82 1359015 DHEA，雄-5-烯-3b,17b-二醇3-醋酸鹽或雄-5-烯-3b,17b-二 醇二半琥珀酸鹽。 本發明其他之化合物或相關之組合，可以使用於（或添 加於）EM-800或EM-652.HC1單獨或組合有一個理想之活性 5 的一個性類固醇前驅物DHEA、雄-5-烯-3b，17b-二醇3-醋酸 * 鹽或雄-5-烯-3b,17b-二醇二半琥珀酸鹽。活性成份之濃度可 以變化於一很寬之範圍如在此所討論。其他成份之數量和 型態其可能被包含者是技藝中所以知。 83 1359015
實施例A SERM是口服投藥而性類固醇前驅物是經皮膚投藥。 SERM組成物供口服投藥（膠囊） 成份 重量％ (以所有之組成物之重量） EM-652.HC1 5.0 水合乳糖 80.0 澱粉 4.8 纖維素微晶粒 9.8 硬脂酸鎂 0.4
性類固醇前驅物組成物供局部投藥 (凝膠）
成份 重量％ (以所有之組成物之重量） DHEA 10.0 癸基-癸酸三酸甘油酯 (編碼名：Neobee M-5) 5.0 全思庫妥(Transcotol) (二乙二醇單甲基醚） 15.0 苯基乙醇 5.0 賽卡美塞康 (編媽名：Dow coring 345) 2.0 乙醇（純乙醇） 56.0 羥基丙基纖維素 (1500cps)(KLUCEL) 2.0 84 SERM和性類固醇前驅物是以口服投藥。 非類固醇抗雌激素組成物係供口服投藥。 (膠囊) 成份 重量％ (以所有之組成物之重量） EM-652.HC1 5.0 水合乳糖 80.0 澱粉 4.8 纖維素微晶粒 9.8 硬脂酸鎂 0.4 10 %性類固醇前驅物組成物係供口服投藥 (明膠膠囊) 成份 重量％ (以所有之組成物之重量） DHEA 15.0 纖維素微晶粒 84.6 硬脂酸鎮 0.4 其他SERMs可以替代em-800或EM-652.HC1於以上之 配方當中’與此相同的是其他性類固醇抑制劑可以替代 〇HEA ’ 雄-5-稀-3b，17b-二醇3-醋酸鹽或雄-5-稀-3b，17b-二 醇二半琥珀酸鹽。不止一個SERM或不止一個前驅物可以被 包含於此個例時組合之重量百分比之理想是等於重量百分 比供單一前驅物或單— SERM列於以上之實施例。 本發明之描述是以理想之具體例和實施例，但不因此 而有所限制。該等技藝中之技術將易於確認更廣範之可應 用性且本發明之範疇其限制僅由本專利案於此之申請專利 範圍。 1359015 【圖式簡單說*明】 第1圖係顯示’以增高的劑量（0.0卜0.03、0.1、0.3 、1 mg/kg，口服，每天一次)之SERMs EM-800、雷洛賽 芬、檀莫赛芬和一個無活性之鏡像異構物EM_776 (Em-8〇〇 5之鏡像異構物）對於卵巢切除的大鼠來處理35週之整體體 脂肪之作用。數據係以平均值±平均值之標準誤差(SEM)來 表示。** . Ρ<〇·〇1實驗組相對於個別之對照組。 第2圖係顯示’㈣完整之大11、印巢切除的大鼠以及 以SERM EM-652.HC1或雌二醇來處理之卵巢切除的大鼠， 10在一個20天之處理期下，對於體重增加(a)、蛋白質增加 以及脂肪增加（c)之作用。數據係以公克計之平均值土SEM 來表示。*Ρ<0·05相對於卵巢完整組；+p<〇 〇5相對於卵巢 切除的（ovx)+雌二醇組(僅有關於EM_652卫^组）。 第3圖係顯示，卵巢完整之大鼠、卵巢切除的大鼠以及 15 WSERM EM-652.HC1或雌二醇來處理之卵巢切除的大鼠， 在一個20天之處理期下，對於累積食物攝取量上之作用。 數據係以公克來表示。 第4圖係顯示，卵巢完整之大鼠、卵巢切除的大鼠以及 以SERM EM-652.HC1或雌二醇來處理之卵巢切除的大鼠， 20在一個20天之處理期下，對於當作蛋白質之身體能量（A)與 當作脂肪(B)之身體能量的作用。數據係以千焦耳(kj)計之 平均值±SEM來表示。* ρ<〇·〇5相對於卵巢完整組；+P<〇 〇5 相對於OVX+雌二醇組(僅有關於em_652.HC1組）。 第5圖係顯示，卵巢完整之大鼠、卵巢切除的大鼠以及 86

Claims (1)

1359015 . Όδό. 11.09 補充ί -------_ if
第96104627號翻再錢財請專利 十、申請專利範圍·· 一種用於治療或預防至少-種選自於肥胖、腹部肥胖以 (--一1及胰島素抗性的赫H組錢，其包含—藥學上可 接受之賦形劑、稀釋劑或載劑，—治療上可接受量之一 具有下列通式的選擇性雌激素受體調節劑：
R々r2是各自選自於由下列所組成之群植：氣、 羥基、-OM (M係選自於由直鍵或支鍵Ci_c4烧基、 直鏈或支鏈cvc4烯基、直鏈或支鍵〇3'块基所構 成之群組中）和-個可於活體内轉化為經基之部 • 分； G是-H 或-CH3 ; R3是-個選自於由下列所組成之群組中之物種： 対。定基“瓜咬並基、嗎琳並基和術灿⑽和 Rb分別是氫、直鍵或支鏈CrC6院基、直鍵或支鍵 CrC6烯基、直鏈或支鏈CrC6炔基）；以及 一性類固醇前驅物，該前驅物是選自於由下列所組成之 群組：脫氫異雄固_、脫氫異雄固綱硫酸鹽 '雄_5_稀 89 1359015 .. _、 第96104627號專利再審查案申請專利範圍修正本 100.11.09 -3b，17b-二醇和可於活體内轉化成為該等前驅物之任一 者的化合物。 2.如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該選擇性雌 激素受體調節劑是選自於由下列所組成之群組：
3.如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該選擇性雌 激素受體調節劑是選自於由下列所組成之群組：
90 1359015 第96104627號專利再審查案申請專利範圍修正本 100.11.09 EM-01732
EM-01872-B EM-01900-B EM-01903-C 4. 一種用於在一需要的個體體内治療胰島素抗性或降低 發展出胰島素抗性之風險的藥學組成物，其包含一治療 有效量之一選擇性雌激素受體調節劑以及一治療有效 ® 量之一性類固醇前驅物，該前驅物係選自於下列群組： 脫氫異雄固酮、脫氫異雄固酮硫酸鹽、雄-5-烯-3b，17b-二醇，和可於活體内轉化成為該等前驅物之任一者的化 合物。 91 1359015
第96104627號專利申請案中文圖式修正頁97年7月 第5圖 血清葡萄糖 血清腺島素 nmol/L
完整的 卵巢切除的 mmol/L
.無； E2 EM652 完整的 卵巢切除的 *與卵巢完整.纟且之差異 +與卵巢切除+E2之差異. 13.59015 第96104627號專利申請案中文圖式修正頁97年7月 第6圖 白色脂肪组織 鼠鼷部白色脂肪组織之重量 鼠路部白色脂肪组織脂蛋白脂肪酶 A B 1,5* 1800- 9 6 3 1* ο· ο* ο· 6
ϊφσ)、η: 完整的 切.除的V—: H2 ΕΜ-652 HCI 1200 完整的! S | 切除的 對照組 C 腹膜背面之白色脂肪組織之重量 腹膜背'面之白色脂肪組織脂蛋白脂肪酶 3.0-2,5- 2.0-® 1,5- 1.0- 0,5 .0,0 D 鉍 ΦΚΜ6/Π3. .完整的 •切除的 對照缉 ε2
‘卵巢免整組之差異 +與卵巢切除+Ε2組之差異 04有關於OVX+EM) 13.59015 ^ 第96104627號專利申請案中文圖式修正頁97年7月夕沒
肩胛骨之間棕色脂肪组織 棕色脂肪組織之重量 蛋白質含量
脂蛋白脂肪酶活性.
*與卵巢完整組之差異 +與卵巢切除+E2組之差異 (僅有關於OVX+EM) 1359015 第96104627號專利申請案中文圖式修正頁97年7月 第8圖 0.15-, 比目魚肌孓重量 脂蛋白脂肪酶 75-, 0.15 0.15 0.15
完整的 E2 EM-652 卵巢切除 完整的 卵巢切除 *與卵巢完整組之差異 +與印「巢切除+E2組之差異
TW096104627A 1999-07-06 2000-07-05 Pharmaceutical composition for treatment or preve TWI359015B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14240799P 1999-07-06 1999-07-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200803838A TW200803838A (en) 2008-01-16
TWI359015B true TWI359015B (en) 2012-03-01

Family

ID=22499734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW096104627A TWI359015B (en) 1999-07-06 2000-07-05 Pharmaceutical composition for treatment or preve

Country Status (25)

Country Link
US (2) US6710059B1 (zh)
EP (1) EP1196163B1 (zh)
JP (1) JP4790178B2 (zh)
KR (1) KR101141763B1 (zh)
CN (1) CN1390126B (zh)
AR (1) AR034091A1 (zh)
AT (1) ATE447947T1 (zh)
AU (3) AU5957500A (zh)
BR (1) BR0012354A (zh)
CA (1) CA2376158C (zh)
DE (1) DE60043305D1 (zh)
DK (1) DK1196163T3 (zh)
HK (1) HK1046240B (zh)
HU (1) HU230543B1 (zh)
IL (2) IL147485A0 (zh)
MX (1) MX270786B (zh)
MY (1) MY134574A (zh)
NO (1) NO329614B1 (zh)
NZ (1) NZ516453A (zh)
PL (1) PL208972B1 (zh)
RU (3) RU2327461C2 (zh)
TR (2) TR200502284T2 (zh)
TW (1) TWI359015B (zh)
WO (1) WO2001001969A2 (zh)
ZA (1) ZA200200085B (zh)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6465445B1 (en) * 1998-06-11 2002-10-15 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US7005428B1 (en) * 1998-06-11 2006-02-28 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
IL140225A0 (en) * 1998-06-11 2002-02-10 Endorech Inc PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND KITS CONTAINING ANDROST-5-EN-3beta; 17beta;-DIOL OR PRODRUGS THEREOF
US6560217B1 (en) 1999-02-25 2003-05-06 3Com Corporation Virtual home agent service using software-replicated home agents
WO2001001969A2 (en) * 1999-07-06 2001-01-11 Endorecherche, Inc. Methods of treating and/or suppressing weight gain
AU7896100A (en) * 1999-10-14 2001-04-23 Endorecherche Inc. Selective estrogen receptor modulators in the treatment or reduction of the riskof acquiring hypertension, cardiovascular diseases, and insulin resistance
MXPA02007165A (es) * 2000-01-28 2003-09-22 Endorech Inc Moduladores del receptor selectivo de estrogenos en combinacion con estrogenos.
ES2252524T3 (es) 2001-09-24 2006-05-16 Bayer Pharmaceuticals Corporation Preparacion y uso de derivados de 1,5,6,7-tetrahidropirrolo(3,2-c)piridina para el tratamiento de la obesidad.
ATE486842T1 (de) 2002-03-12 2010-11-15 Merck Sharp & Dohme Substituierte amide
WO2004054573A1 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 N.V. Nutricia Method and composition for inhibiting carbohydrate digestion
US7074779B2 (en) 2003-07-02 2006-07-11 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Estrieno[3,2-b]/[3,4-c]pyrrole derivatives useful as modulators of the estrogen receptors
US8835413B2 (en) * 2004-10-20 2014-09-16 Endorecherche, Inc. Sex steroid precursors alone or in combination with a selective estrogen receptor modulator and/or with estrogens and/or a type 5 cGMP phosphodiesterase inhibitor for the prevention and treatment of vaginal dryness and sexual dysfunction in postmenopausal women
US20060234993A1 (en) * 2005-04-13 2006-10-19 Eric Marchewitz Use of androstane derivatives for enhancing physical performance
US20070009564A1 (en) * 2005-06-22 2007-01-11 Mcclain James B Drug/polymer composite materials and methods of making the same
CA2613102A1 (en) * 2005-06-29 2007-01-04 Wyeth Formulations of conjugated estrogens and bazedoxifene
PL1909973T3 (pl) 2005-07-15 2019-01-31 Micell Technologies, Inc. Polimerowe powłoki zawierające proszek leku o kontrolowanej morfologii
WO2007011708A2 (en) 2005-07-15 2007-01-25 Micell Technologies, Inc. Stent with polymer coating containing amorphous rapamycin
US8852625B2 (en) 2006-04-26 2014-10-07 Micell Technologies, Inc. Coatings containing multiple drugs
US8636767B2 (en) 2006-10-02 2014-01-28 Micell Technologies, Inc. Surgical sutures having increased strength
CN102886326A (zh) * 2006-10-23 2013-01-23 米歇尔技术公司 用于在涂覆过程中为基底充电的保持器
US9737642B2 (en) 2007-01-08 2017-08-22 Micell Technologies, Inc. Stents having biodegradable layers
US11426494B2 (en) 2007-01-08 2022-08-30 MT Acquisition Holdings LLC Stents having biodegradable layers
JP5443336B2 (ja) * 2007-04-17 2014-03-19 ミセル テクノロジーズ、インコーポレイテッド 生分解性層を有するステント
EP2170418B1 (en) * 2007-05-25 2016-03-16 Micell Technologies, Inc. Polymer films for medical device coating
US8268806B2 (en) 2007-08-10 2012-09-18 Endorecherche, Inc. Pharmaceutical compositions
WO2009051780A1 (en) * 2007-10-19 2009-04-23 Micell Technologies, Inc. Drug coated stents
AU2009251504B2 (en) * 2008-04-17 2013-09-05 Micell Technologies, Inc. Stents having bioabsorbable layers
JP2011528275A (ja) 2008-07-17 2011-11-17 ミセル テクノロジーズ，インク． 薬物送達医療デバイス
US9510856B2 (en) 2008-07-17 2016-12-06 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US8834913B2 (en) * 2008-12-26 2014-09-16 Battelle Memorial Institute Medical implants and methods of making medical implants
WO2010111196A2 (en) * 2009-03-23 2010-09-30 Micell Technologies, Inc. Peripheral stents having layers
EP2411083A4 (en) * 2009-03-23 2013-11-13 Micell Technologies Inc MEDICAL DEVICE FOR DELIVERY OF MEDICAMENT
CA2756388C (en) * 2009-03-23 2015-10-27 Micell Technologies, Inc. Biodegradable polymers with low acidic impurity
CN102481195B (zh) 2009-04-01 2015-03-25 米歇尔技术公司 涂覆支架
EP2419058B1 (en) 2009-04-17 2018-02-28 Micell Technologies, Inc. Stents having controlled elution
US20100317635A1 (en) * 2009-06-16 2010-12-16 Endorecherche, Inc. Treatment of hot flushes, vasomotor symptoms, and night sweats with sex steroid precursors in combination with selective estrogen receptor modulators
AU2014201406B2 (en) * 2009-06-16 2016-08-11 Endorecherche, Inc. Treatment of hot flushes, vasomotor symptoms, and night sweats with sex steroid precursors in combination with selective estrogen receptor modulators
JPWO2011007882A1 (ja) * 2009-07-16 2012-12-27 国立大学法人九州大学 インスリン産生細胞誘導剤、グルコース取込み促進剤および糖尿病または糖尿病合併症の治療薬
EP2531140B1 (en) 2010-02-02 2017-11-01 Micell Technologies, Inc. Stent and stent delivery system with improved deliverability
US8795762B2 (en) * 2010-03-26 2014-08-05 Battelle Memorial Institute System and method for enhanced electrostatic deposition and surface coatings
WO2011133655A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Micell Technologies, Inc. Stents and other devices having extracellular matrix coating
JP2013528223A (ja) 2010-06-10 2013-07-08 アラゴン ファーマシューティカルズ，インク． エストロゲン受容体モジュレーターおよびその用途
US11576891B2 (en) 2010-06-16 2023-02-14 Endorecherche, Inc. Methods of treating or preventing estrogen-related diseases
CA2805631C (en) 2010-07-16 2018-07-31 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US10464100B2 (en) 2011-05-31 2019-11-05 Micell Technologies, Inc. System and process for formation of a time-released, drug-eluting transferable coating
US10117972B2 (en) 2011-07-15 2018-11-06 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US10188772B2 (en) 2011-10-18 2019-01-29 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
EA029559B1 (ru) 2011-12-14 2018-04-30 Серагон Фармасьютикалс, Инк. Фторированные модуляторы рецепторов эстрогенов и их применение
CA2857061A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Olema Pharmaceuticals, Inc. Novel benzopyran compounds, compositions and uses thereof
JP6330024B2 (ja) 2013-03-12 2018-05-23 マイセル・テクノロジーズ，インコーポレイテッド 生体吸収性バイオメディカルインプラント
CN105377318A (zh) 2013-05-15 2016-03-02 脉胜医疗技术公司 可生物吸收的生物医学植入物
US9744177B2 (en) 2014-03-10 2017-08-29 Endorecherche, Inc. Treatment of male androgen deficiency symptoms or diseases with sex steroid precursor combined with SERM
US10398689B2 (en) * 2015-12-22 2019-09-03 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Benzopiperidine derivative, preparation method thereof and medical use thereof
US20180207177A1 (en) * 2017-01-23 2018-07-26 Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Air Force TREATMENT OF TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER UTILIZING ANDROST-5-ENE-3b,17b-DIOL (b-AED), ANDROST-5-ENE-3b,7b,17b-TRIOL (b-AET) AND ESTRADIOL (E2)
CN114315851B (zh) * 2022-01-03 2023-10-24 安徽大学绿色产业创新研究院 一种光甘草定药物中间体的合成方法
JP7440838B1 (ja) 2023-07-06 2024-02-29 株式会社インタートレードヘルスケア 卵巣機能欠落生体の内臓脂肪蓄積抑制飲食品、及び卵巣機能欠落生体の内臓脂肪蓄積抑制薬

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504119B1 (fr) * 1981-04-17 1985-09-20 Aury Jean Pierre Beton isolant ainsi que son procede de fabrication
DE3117979A1 (de) * 1981-05-07 1983-01-20 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Neue(delta)1-pyrrolin-thiolactimaether und verfahren zu ihrer herstellung
US5395842A (en) * 1988-10-31 1995-03-07 Endorecherche Inc. Anti-estrogenic compounds and compositions
US5254568A (en) * 1990-08-09 1993-10-19 Council Of Scientific & Industrial Research Benzopyrans as antiestrogenic agents
US6060503A (en) * 1991-12-02 2000-05-09 Endorecherche, Inc. Benzopyran-containing compounds and method for their use
TW366342B (en) 1992-07-28 1999-08-11 Lilly Co Eli The use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in inhibiting bone loss
ATE157869T1 (de) 1993-06-24 1997-09-15 Lilly Co Eli Antiöstrogene 2-phenyl-3-aroylbenzothiophene als hypoglykämische mittel
US5446061A (en) * 1993-11-05 1995-08-29 Eli Lilly And Company Methods for lowering serum cholesterol
US5527788A (en) * 1994-01-18 1996-06-18 Louisiana State Univ. Medical Center Foundation Method and composition for treating obesity comprising dehydroepiandrosterone (DHEA), or a derivative thereof, and an anorectic agent
US5441986A (en) * 1994-07-19 1995-08-15 Pfizer Inc. Estrogen agonists as remedies for prostate and cardiovascular diseases
US5552412A (en) * 1995-01-09 1996-09-03 Pfizer Inc 5-substitued-6-cyclic-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen2-ol compounds which are useful for treating osteoporosis
ZA965346B (en) * 1995-06-30 1997-12-24 Lilly Co Eli Methods of treating neuropeptide Y-associated conditions.
IL120266A (en) * 1996-02-28 2005-05-17 Pfizer Use of estrogen antagonists and estrogen agonists in the preparation of medicaments for inhibiting pathological conditions
US5843984A (en) * 1996-05-09 1998-12-01 Eli Lilly And Company Sulfated benzothiophene derivatives, methods of use and formulations containing same
AU8102398A (en) * 1997-07-09 1999-02-08 Central Drug Research Institute (dl)-2,3-diaryl-2h-1-benzopyrans
WO1999002152A1 (en) * 1997-07-10 1999-01-21 Novo Nordisk A/S Use of 3,4-diphenylchromans for the manufacture of a pharmaceutical composition for increasing insulin sensitivity
NZ502738A (en) * 1997-08-15 2002-06-28 Univ Duke Triphenylethylene derivatives similar to tamoxifen or toremifene derivatives
DE59804350D1 (de) * 1997-10-08 2002-07-11 Genesiscosmetics Rigths & Lice Straffung und/oder verkleinerung von fettzellen-haltigen körperpartien
AP1424A (en) 1998-05-15 2005-06-06 Wyeth Corp 2-Phenyl-1-[4-(2-aminoethoxy)-benzyl]-indole in combination with estrogens.
IL140225A0 (en) 1998-06-11 2002-02-10 Endorech Inc PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND KITS CONTAINING ANDROST-5-EN-3beta; 17beta;-DIOL OR PRODRUGS THEREOF
US6465445B1 (en) * 1998-06-11 2002-10-15 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US7005428B1 (en) * 1998-06-11 2006-02-28 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
AU771352B2 (en) * 1999-06-18 2004-03-18 Stephen James Cordell Finishing tool
WO2001001969A2 (en) * 1999-07-06 2001-01-11 Endorecherche, Inc. Methods of treating and/or suppressing weight gain

Also Published As

Publication number Publication date
IL195860A (en) 2013-06-27
AR034091A1 (es) 2004-02-04
JP4790178B2 (ja) 2011-10-12
JP2003503446A (ja) 2003-01-28
US8609695B2 (en) 2013-12-17
ZA200200085B (en) 2003-06-25
AU5957500A (en) 2001-01-22
BR0012354A (pt) 2002-04-02
NO20020037L (no) 2002-03-04
TR200403328T2 (tr) 2005-03-21
MX270786B (es) 2009-10-08
HU230543B1 (hu) 2016-11-28
EP1196163B1 (en) 2009-11-11
HUP0202363A2 (en) 2002-10-28
KR20020020776A (ko) 2002-03-15
CN1390126B (zh) 2012-06-13
EP1196163A2 (en) 2002-04-17
AU2009200258A1 (en) 2009-02-26
TW200803838A (en) 2008-01-16
US6710059B1 (en) 2004-03-23
US20040034000A1 (en) 2004-02-19
RU2327461C2 (ru) 2008-06-27
RU2519642C2 (ru) 2014-06-20
ATE447947T1 (de) 2009-11-15
KR101141763B1 (ko) 2012-05-08
TR200502284T2 (tr) 2005-08-22
IL147485A0 (en) 2002-08-14
HUP0202363A3 (en) 2005-02-28
HK1046240B (zh) 2010-09-30
CA2376158C (en) 2011-03-15
RU2013148518A (ru) 2015-05-10
NO329614B1 (no) 2010-11-22
NO20020037D0 (no) 2002-01-04
MY134574A (en) 2007-12-31
WO2001001969A3 (en) 2001-08-02
PL208972B1 (pl) 2011-07-29
AU2009200258B2 (en) 2012-01-12
CN1390126A (zh) 2003-01-08
DK1196163T3 (da) 2010-03-29
PL352993A1 (en) 2003-09-22
WO2001001969A2 (en) 2001-01-11
CA2376158A1 (en) 2001-01-11
MXPA02000075A (es) 2003-05-23
RU2636498C2 (ru) 2017-11-23
DE60043305D1 (de) 2009-12-24
HK1046240A1 (en) 2003-01-03
NZ516453A (en) 2004-04-30
RU2008101793A (ru) 2009-07-27
AU2005229713A1 (en) 2005-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI359015B (en) Pharmaceutical composition for treatment or preve
TWI258369B (en) Pharmaceutical compositions of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
TWI612044B (zh) 以性類固醇前驅物組合選擇性雌激素受體調節物治療熱潮紅、血管舒縮症狀及夜汗之技術
CA2601773A1 (en) Compositions of unconjugated estrogens and methods for their use
JPS62500451A (ja) ホルモン依存性がんの併用治療のための医薬組成物
JP2020176149A (ja) 性ステロイド前駆体とｓｅｒｍとの併用による男性アンドロゲン欠乏症状又は疾患の治療
TWI293246B (zh)
EP0850647B1 (fr) Application de composés stéroides substitués en ll pour la fabrication de médicaments ayant une activité estrogène dissociée
TWI293251B (en) Selective estrogen receptor modulators incombination with estrogens
TW200908985A (en) Hormone replacement formulation
JPH05500947A (ja) 薬剤製造のための抗ゲスターゲンの使用

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Expiration of patent term of an invention patent