MXPA02000075A - Metodos de tratamiento y/o supresion del incremento de peso. - Google Patents

Abstract

Se describen metodos novedosos para el tratamiento medico y/o la prevencion de la obesidad, grasa abdominal y la resistencia a la insulina en animales susceptibles de sangre caliente, incluyendo a los humanos, que envuelven la administracion de moduladores de estrogeno selectivos (SERMs). Tambien se describe una combinacion de un SERM con una cantidad de estrogeno o un precursor esteroidal sexual seleccionado del grupo que consiste de dehidroepiandrosterona, sulfato de dehidroepiandrosterona, androst-5-ene-3b,17b-diol y compuestos transformados in vivo a uno de los precursores anteriormente mencionados o estrogeno.

Description

MÉTODOS PARA TRATAR Y/0 SUPRIMIR EL AUMENTO DE PESO Campo de la Invención La presente invención se refiere a un ' método para tratar y/o prevenir la obesidad (especialmente la obesidad abdominal), y para tratar o suprimir la adquisición de resistencia anormal a la insulina, en animales de sangre caliente susceptibles incluyendo seres humanos. Los métodos implican administrar compuestos de la fórmula general I detallada más adelante, o sus composiciones farmacéuticas. En otras modalidades, los métodos implican administrar un modulador selectivo receptor de estrógeno ("SERM") en combinación con un precursor de esteroides sexuales .

Antecedentes de la Invención La obesidad, una condición caracterizada por la grasa corporal excesiva, es un factor de riesgo bien conocido para muchas enfermedades tales como trastornos cardiovasculares, hipertensión, diabetes y cáncer de mama. Por otra parte, el aspecto personal juega una parte importante en bienestar total de la mayoria de la gente.

Los tratamientos comunes de la obesidad tales como varias dietas (incluyendo dietas de restricción del alimento) , programas de pérdida de peso y ejercicio proporcionan diferentes grados de éxito para mucha gente. Sin embargo, siguen siendo necesarias otras técnicas para aquellos que han logrado resultados insuficientes con las técnicas del arte anterior, o para el uso como un suplemento 'a las técnicas del arte anterior. Recientemente, algunos agonistas/ antagonistas de estrógeno fueron descritos para el tratamiento o prevención de la obesidad: Raloxifeno y compuestos relacionados en la Solicitud de Patente Europea No. EP 0 659 423 Al; los agonistas de estrógeno que tienen un núcleo de benzotiofeno en la Solicitud de Patente Europea No. EP 0 716 855 A2 ; 3, 4-difenilocromanos en la Solicitud Internacional PCT/DK96/00011 ; agonista/antagonista de estrógeno de naftilo en la Solicitud Internacional No. PCT/IB95/00286. También se describió que Tamoxifen, otro agonista/antagonista de estrógeno, previene aumento de peso inducido por sulpirido en ratas hembras (Baptista y colaboradores, Pharmacol., Biochem. Behav. (1997), 57(1/2), 215-222). También se informó que Tamoxifen imita el efecto del estradiol en la toma de alimentos, peso y composición corporal en las ratas (Wade y colaboradores, American Journal of Physiology 1993, 33(6), R1219-1223) . DHEA tiene también efectos beneficiosos en el tratamiento y/o prevención de la obesidad. En las ratas envejecidas de Sprague-Dawley, Schwartz (en Kent, geriatria 37: 157-160, 1982) ha observado que el peso corporal fue reducido de 600 a 550g por DHEA sin afectar la toma de alimento. Schwartz (Cáncer 39: 1129-1132, 1979) observó que los ratones de C3H proporcionados con DHEA (450 mg/kg, 3 veces a la semana) ganaron perceptiblemente menos peso y envejecieron más que los animales de control, tuvieron menos grasa corporal y fueron más activos. La reducción en peso corporal fue alcanzada sin la pérdida de apetito o restricción de alimento. Además, DHEA puede prevenir aumento de peso en los animales criados para llegar a ser obesos en edad adulta (en Kent, geriatria 37: 157-160, 1982) . La administración de DHEA para las ratas Zucher delgadas disminuyó el peso corporal ganado a pesar de la toma de alimentos incrementada. Los animales asi tratados tuvieron sus patas menos obesas, en general, sugeriendo que DHEA aumenta el metabolismo del alimento, dando por resultado en un aumento de peso y acumulación de grasa inferiores (Svec y colaboradores, Proc. 2n Int. Conf. Cortisol y Anti-Cortisols, Las Vegas, Nevada, Estados Unidos, p. 56 extracto, 1997). Se descubrió que la obesidad puede mejorarse en el ratón mutante Av? (Yen y colaboradores, Lipids 12: 409-413, 1977) y en la rata Zucker (Cleary y Zis ., Fed. Proc. 42: 536, 1983) . Los ratones C3H tratados con DHEA tuvieron un aspecto más joven que los de control (Schwartz, Cáncer Res. 39: 1129-1132, 979). La grasa abdominal se ha asociado a factores de riesgo metabólicos para la enfermedad coronaria de pecho (Imbault y colaboradores Metabolism 1999, 48 (3), 355-62; Ledoux y colaboradores (CMAJ 1997, 157 Suppl. 1; 46-53).

Breve Descripción de la Invención Por consiguiente es un objeto de la presente invención reducir el tejido adiposo, especialmente la grasa abdominal.

Es otro objeto de la presente invención reducir el riesgo de las enfermedades cardiacas coronarias, y otras enfermedades o condiciones para que la obesidad o tejidos adiposos excesivos sean factores de riesgo. En una modalidad, la presente invención proporciona un método novedoso para tratar o suprimir el aumento de peso en animales de sangre caliente susceptibles, incluyendo seres humanos, el método abarca administrar a un sujeto, en necesidad del tratamiento o supresión, una cantidad terapéuticamente efectiva, con o sin un excipiente o portador diluyente farmacéutico, de por lo menos un compuesto de la fórmula general I: en donde Ri y R son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, - OM (M se selecciona del grupo que consiste de alquilo C?~C lineal o ramificado, alquenilo C3-C4 lineal o ramificado, alquinilo C3-C4 lineal o ramificado) y un radical convertible in vi vo a hidroxilo; en donde G es -H o -CH3; y en donde R3 es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidinilo, piperidina, morfolina, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo Ci-Ce lineal o ramificado, alquenilo C -Cß linea o ramificado, alquinilo C3-C6 lineal o ramificado) ; un método de tratamiento o reducción del desarrollo de la obesidad, el cual comprende administrar a un sujeto en necesidad del tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la siguiente fórmula general: caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquinilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible in vi vo a hidroxilo; donde G es -H o -CH3; y donde R es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidinilo, piperidino, morfolino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado; y alquinilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado) ; en donde Ri o R2 no es un grupo pivaloiloxi . En otra modalidad, el modulador selectivo receptor de estrógeno o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está administrada para reducir la obesidad abdominal o reducir la acumulación de la grasa abdominal. En otra modalidad, el precursor de esferoides sexuales (por ejemplo, deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, 17b-diol) es administrado además a un Modulador Receptor de Estrógeno Selectivo (SERM) para el tratamiento de la obesidad o para suprimir el aumento de peso. Seres humanos de o alrededor de cincuenta años de edad se cree responden bien a la terapia de combinación, probablemente porque los niveles del precursor tienden a disminuir indeseablemente con la edad. Por lo tanto, en este aspecto, la invención proporciona un método para el tratamiento de la obesidad o supresión del aumento de peso que abarca administrar a un sujeto, en necesidad de tal supresión o tratamiento, una cantidad terapéutica efectiva con o sin un portador o diluyente farmacéutico, de por lo menos un SERM y una cantidad efectiva de por lo menos un precursor de esteroides sexuales seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, 17b-diol y compuestos convertidos in vi vo a cualquiera de los precursores anteriores. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar o reducir el riesgo de desarrollar una resistencia a la insulina que abarca administrar, a un sujeto en necesidad de tal tratamiento o reducción, una cantidad terapéutica efectiva de por lo menos un SERM. En algunas modalidades, una cantidad efectiva de por lo menos un precursor de esteroides sexuales seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene- 3b, 17b-diol y compuestos convertidos in vi vo para administrarse también como parte de una terapia de combinación . En otro aspecto, la invención proporciona un kit para el tratamiento de la obesidad que tiene un primer recipiente que incluye por lo menos un SERM y un segundo recipiente que incluye por lo menos un precursor de esteroides sexuales seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, 17b-diol , y compuestos convertidos in vivo a cualquiera de los precursores anteriores. Un portador excipiente farmacéutico o diluyente se puede también proporcionar en uno o más de los recipientes y puede incluir preservativos y otros aditivos conocidos en la técnica. El precedente se puede también incluir con cualquier ingrediente activo usado en cualquier modalidad de las varias invenciones descritas adj unto . Según lo utilizado en la presente, un modulador selectivo receptor de estrógeno (SERM) es un compuesto que ya sea directamente o a través de su metabolito activo funciona como un antagonista del receptor de estrógeno ("antiestrógeno") en el tejido de mama, que aún proporciona un efecto igual que el estrógeno en la grasa corporal, en el tejido de huesos y en niveles de colesterol en suero (es decir reduciendo el colesterol en suero) . Los compuestos sin esteroides que funcionan como antagonistas del receptor de estrógeno in vi tro o en el tejido de mama de humano o de rata (especialmente si el compuesto actúa como antiestrógeno en las células humanas del cáncer de mama) es probables que funcione como un SERM. Los antiestrógenos sin esteroides que se ha probado y descubierto para funcionar como SERMs incluyen EM-800, EM-652, Raloxifeno de EM-652.HC1 (EM-01538), Tamoxifeno, Idoxifeno, Torimefeno, LY 353381, LY 335563, GW 5638 y Droloxifeno (descrito en detalle más adelante). Los SERMs, de acuerdo con cualquier modalidad de la invención, se administran preferiblemente a la misma dosificación según lo conocido en la técnica cuando estos compuestos se utilizan como antiestrógenos . Sin desear que se limite por la teoria, se cree que los SERMs, muchos de los cuales tienen preferiblemente dos anillos aromáticos ligados de uno a dos átomos de carbono, se desean para interactuar con el receptor de estrógeno en virtud de la porción anterior de la molécula que es mejor reconocida por el receptor. Los SERMs tienen cadenas laterales que pueden provocar selectivamente caracteristicas en tejidos de mama y endometriales sin tener caracteristicas antagónicas significativas en los otros tejidos finos especialmente en huesos. Asi, los SERMs pueden funcionar deseablemente como antiestrógenos en la mama y endometrio mientras que asombrosa y deseablemente tienen actividad igual a la del estrógeno en grasas corporales. La invención también incluye suprimir deseablemente el aumento de peso adicional o de manera deseable proporcionar la pérdida de peso, incluso si no se alcanza el peso normal. Según lo utilizado en la presente, el término obesidad implica un exceso de tejido adiposo que conduce al aumento de peso. Los métodos de prevención y de tratamiento de la invención incluyen la inhibición del ' aumento de peso e inducción de la pérdida de peso. La invención incluye el tratamiento de seres humanos obesos reduciendo su peso a (y manteniéndolo en) el normal. La invención también incluye la prevención de la obesidad para personas que son susceptibles a adquirir tal enfermedad. Los pacientes en la necesidad de la presente invención, incluyen aquellos que son obesos (con respecto a normas médicamente reconocidas) o en riesgo de contraer el sobrepeso . El SERM se puede también utilizar para bajar los niveles de triglicéridos en la sangre de acuerdo con la invención. Por ejemplo, EM-800 (descrito en la presente) se cree que es eficaz para este propósito. En otra modalidad, se proporcionan los compuestos y composiciones farmacéuticas de novedad para realizar la invención. Un paciente en necesidad de tal tratamiento o disminución del riesgo de contraer una enfermedad o condición es una persona a la cual se le ha diagnosticado esta enfermedad o una que es susceptible a adquirir tal enfermedad. La invención es especialmente conveniente para los individuos que, debido a la herencia, a los factores ambientales o a otro factor de riesgo reconocido, están en más alto riesgo que la población en general de adquirir las condiciones a las cuales la presente invención se relaciona. Excepto donde se indique de otra manera, la dosificación preferida de los compuestos activos de la invención es idéntica para los propósitos terapéuticos y profilácticos. La dosificación para cada componente activo discutido en la presente es igual sin importar la enfermedad que es tratada (o prevenida) . En donde dos agentes activos muy diferentes están aceptados como parte de una terapia de combinación en la presente (por ejemplo, un inhibidor enzimático y un antiandrógeno) , una pluralidad de diversos compuestos serán administrados en lugar de un solo compuesto que tenga actividades múltiples. Excepto donde por otro lado se indique, el término "compuesto" y cualquier estructura molecular asociada puede incluir cualquier estereoisómero posible del mismo, en la forma de una mezcla racémica o en forma ópticamente activa.

Excepto donde por otro lado se observe o cuando sea evidente del contexto, las dosificaciones adjuntas refieren al peso de compuestos activos inafectados por excipientes, diluyentes, portadores u otros ingredientes farmacéuticos, aunque tales ingredientes adicionales sean convenientemente incluidos, según lo mostrado en los ejemplos anexos. Cualquier forma de dosificación (cápsula, tableta, inyección o similares) usada comúnmente en la industria farmacéutica es apropiada para usarse en la presente, y los términos "excipiente", "diluyente" o "portador" incluyen los ingredientes inactivos tal y como son normalmente incluidos, junto con los ingredientes activos en las formas de dosificación en la industria. Por ejemplo, se incluyen cápsulas típicas, pildoras, capas entéricas, diluyentes o excipientes sólidos o líquidos, saborizantes, conservadores o similares. En ciertas modalidades, se utilizan profármacos de los ingredientes activos discutidos en la misma (es decir compuestos que convierten in vivo a los ingredientes activos) . Se conocen varios grupos funcionales en la industria farmacéutica para convertir in vi vo a los grupos funcionales de los compuestos activos discutidos en la misma. Ver, por ejemplo, Capitulo 5 "Desing and Application of Prodrugs", A Textbook of Desing & Development, Bundgaard & Larsen, Ed., Harwood Academic Publishers GmbH (Chur, Suiza, 1991) . Los profármacos pueden proporcionar frecuentemente una mejor biodisponibilidad, una estabilidad de almacenamiento /o una fácil elaboración, y compuestos activos correspondientes. Todos los ingredientes activos usados en cualquiera de las terapias discutidas en la presente se pueden formular en composiciones farmacéuticas que también incluyen uno o más de los otros ingredientes activos. Alternativamente, cada uno puede administrarse por separado pero suficientemente simultáneos en tiempo de modo que un paciente eventualmente haya elevado los niveles de sangre o por otra parte gozar de las ventajas de cada uno de los ingredientes activos (o estrategias) simultáneamente. En algunas modalidades preferidas de la invención, por ejemplo, uno o más ingredientes activos deben formularse en una sola composición farmacéutica. En las modalidades de la invención, se proporciona un kit que incluye por lo menos dos recipientes separados en donde el contenido de al menos dos recipientes separados donde el contenido de al menos un recipiente difiere, en su totalidad o en parte, del contenido de al menos el otro recipiente con respecto a los ingredientes activos contenidos en los mismos. Dos o más recipientes diferentes se utilizan en las terapias de combinación de la invención. Las terapias de combinación discutidas en la presente también incluyen el uso de un ingrediente activo de la combinación en la elaboración de un medicamento para el tratamiento (o prevención) de la enfermedad en cuestión en donde el tratamiento o prevención adicionalmente incluye otro ingrediente activo o estrategia de la combinación. La grasa abdominal se cree que es diferente de, y puede ocurrir en ausencia de la obesidad corporal total. También se cree que es un factor más de riesgo en enfermedades cardiacas. La grasa abdominal responde favorablemente a la presente invención. Los SERMs preferidos de la invención, por ejemplo, los de la fórmula 1 anterior, carecen de efectos estrogénicos indeseables en el endometrio, representando una mejora muy importante en relación con las terapias de SERM utilizadas en algunos métodos de la técnica anterior. Los SERMs usados en la invención se desean para reducir de manera beneficiosa los triglicéridos de la sangre y también la resistencia a la insulina. En las modalidades preferidas discutidas en la presente, la acción de SERM es aumentada por DHEA o el precursor de esteroides sexuales similar. Sin desear limitarse por la teoria, una explicación de la sinergia obtenida combinando SERMs y precursores podria ser por lo menos diferencias parciales en sus mecanismos de accionamiento. DHEA, por ejemplo, parece aumentar el metabolismo de alimentos sin suprimir el apetito. EM-652.HC1, SERM, parecen suprimir la toma de alimentos.

Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1. Muestra el efecto del tratamiento de 35 semanas con las dosis incrementadas (0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1 mg/kg, oral, una vez al dia) de SERMs EM-800, raloxifeno, tamoxifeno, y un enantiómero inactivo, EM-776 (eniantómero de EM-800) en grasas corporales totales en una rata ovariectomizada. Los datos se expresan como medios + SEM. **: P < 0.01 experimental en función del control respectivo. La Figura 2. Muestra el efecto de un tratamiento de 20 dias en el aumento de peso corporal (A), el aumento de proteina (B) y el aumento de grasas (C) en ratas intactas, ratas ovariectomizadas, y ratas ovariectomizadas tratadas con SERM EM-652.HC1 o con estradiol. Los datos se expresan en gramos (g) asi como el medio + SEM. * p < 0.05 en función del grupo intacto; t p < 0.05 en función del grupo OVX + E2 (para el grupo EM-652. HCl solamente). La Figura 3. Muestra el efecto de un tratamiento 20 dias en to a de alimentos acumulativa en ratas intactas, ratas ovariectomizadas, y ratas ovariectomizadas tratadas con EM-652.HC1 o estradiol. Los datos se expresan en gramos ( g) . La Figura 4. Muestra el efecto de un tratamiento 20 dias para la energia del cuerpo como las proteínas (A) y una energia del cuerpo como las grasas (B) en ratas intactas, ratas ovariectomizadas y ratas ovariectomizadas tratadas con EM-652.HC1 o estradiol. Los datos se expresan en kilojoules (Kj) asi como el medio +_ SEM; * p < 0.05 en función del grupo intacto; t p < 0.05 en función del grupo OVX + E2 (para el grupo EM- 652. HCl solamente). La Figura 5. Muestra el efecto de un tratamiento de 20 dias para los niveles de insulina en suero y para los niveles de glucosa en suero en ratas intactas, ratas ovariectomizadas y ratas ovariectomizadas tratadas con EM-652.HC1 o estradiol. Los datos se expresan en nmol/L asi como el medio + SEM; * p < 0.05 en función del grupo intacto . La Figura 6. Muestra el efecto de un tratamiento de 20 dias para los parámetros del tejido adiposo blanco: inguinal (A) y peso del tejido adiposo retroperitoneal (C) (los datos se expresan en gramos (g) asi como el medio + SEM), inguinal (B) y actividad de la lipasa de lipoproteina del tejido adiposo retroperitoneal blanco (datos expresados en ?U/g de proteina asi como el medio +_ SEM; * p < 0.05 en función del grupo intacto; t p < 0.05 en función del grupo OVX + E2 (para el grupo EM-652.HC1 solamente)), en ratas intactas, ratas ovariectomizadas y ratas ovariectomizadas tratadas con EM-652.HC1 o estradiol . La Figura 7. Muestra el efecto de un tratamiento de 20 dias en los parámetros del tejido adiposo café interescapular: (a) peso del tejido adiposo café (datos expresados en gramos (g) asi como el medio + SEM, * p < 0.05 en función del grupo intacto; t p < 0.05 en función del grupo OVX + E2 (para el grupo EM-652.HC1 solamente)); (B) contenido de proteina (datos expresados en % del peso del tejido asi como el medio + SEM; * p < 0.05 en función del grupo intacto; t p < 0.05 en función del grupo OVX + E2 (para el grupo EM-652.HC1 solamente)), en (C) actividad de la lipasa de lipoproteina (datos expresados en ?U/g de proteina ) . La Figura 8. Muestra el efecto de un tratamiento de 20 dias en el peso de Soleus (datos expresados en gramos (g) asi como el medio SEM) y en la lipasa de lipoproteina (datos expresados en ?U/g de proteina asi como el medio ^ SEM; * p < 0.05 en función del grupo intacto); en ratas intactas, ratas ovariectomizadas y ratas ovariectomizadas tratadas con estradiol y EM-652. HCl.

Descripción Detallada de la Invención Se prefiere administrar una composición farmacéutica que abarca un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable, y una cantidad terapéutica efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo que cieñe la fórmula general I siguiente: en donde Rx y R2 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, - OM (M se selecciona del grupo que consiste de alquilo C?-C4 lineal o ramificado, alquenilo C3-C linea o ramificado, alquinilo C3-C lineal o ramificado) y un radical convertible in vi vo a hidroxilo; en donde G es -H o -CH3; y en donde R3 es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidinilo, piperidina, morfolina, y NRaRb (Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo Ci-Cß lineal o ramificado, alquenilo C3-C6 linea o ramificado, alquinilo C3-C6 lineal o ramificado); y un precursor de esteroides sexuales seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, 17b-diol y compuestos convertidos in vi vo a cualquiera de los precursores anteriores. Un SERM de acuerdo a la fórmula I anterior, proporciona la ventaja inesperada de tener un efecto menor o no estrogénico en el endometrio distinto al de los SERMs conocido en la técnica anterior. Se prefiere que el SERM de la invención sea ópticamente activo y tenga más del 50% de un compuesto estereoisomérico que tiene una configuración absoluta ? en el carbono 2. También se prefiere por razones de estabilidad y solubilidad en agua (biodisponibilidad) que el SERM de la invención sea una sal de un compuesto de la fórmula I y de un ácido seleccionado del grupo que consiste de ácido acético, ácido adipico, ácido bencensulfónico, ácido benzoico, ácido camforsulfónico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido yodhidrico, ácido bromhidrico, ácido clorhídrico, ácido hidroclorot iazido, ácido hidroxi-naftóico, ácido láctico, ácido maleico, ácido metansulfónico, ácido metilsulfúrico, ácido 1-5-naftalendisulfónico, ácido nítrico, ácido palmitico, ácido piválico, ácido fosfórico, ácido propiónico, ácido succinico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido tereftálico, ácido p-toluensulfónico, y ácido valérico . Uno compuesto preferido de la invención es EM-800 descrito en el documento PCT/CA96/00097 (WO 96/26201) . La estructura molecular de EM-800 es: Otro compuesto mayormente preferido de la invención es EM-652.HC1 (también llamado EM-01538): El EM-652.HC1 proporciona ventajas adicionales con respecto a los otros SERMs tal como EM-800 debido a que no contiene grupos pivaloilo que pueden aumentar el riesgo de una disminución de niveles de carnitina en suero. Otros SERMs preferidos de la invención incluyen Tamoxifen ( ( Z ) -2- [ 4- ( 1 , 2-difenil-1-butenil ) ] -N, N-dimetiletanamina ) (disponible de Zeneca, Reino Unido), Toremifeno (disponible de Orion-Farmos Pharmaceuticla, Finlandia, o Schering-Plough), Droloxifeno y CP-336,156 (sal de cis-lR- [4' -pirrolidino-etoxifenil] -2S-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4, -tetrahidronaftaleno D-(-)-tartrato) (Pfizer Inc., Estados Unidos, descrito en US 5,889,042) (también referido como Lasofoxifeno ) Raloxifeno (Eli Lilly y Co., Estados Unidos), LY 335563 y LY 353381 (Eli Lilly and Co . , Estados Unidos, descritos en WO 98/45287, WO 98/45288, y WO 98/45286), Idoxifeno (SmithKIine Beecham, Estados Unidos), Levormeloxifeno ( 3, 4-t rans-2 , 2-dimet il-3-fenil-4- [4- (2- (2- (pirrolidin-1-il ) etoxi ) fenil] -7-metoxicroman ) (Nova Nordisk, A/S, Dinamarca) que se describe en Shalmi y colaboradores WO 97/25034, WO 97/25035, WO 97/25037, WO 97/25038; y Korsgaard y colaboradores WO 97/25036) , GW5638 (descrito por Willson y colaboradores, Endocrinología, 138(9), 3901-3911, 1997) y derivados indol (descritos por Miller y colaboradores EP 0802183A1) y TSE 424, y ERA 923 desarrollados por Wyeth Ayerst (Estados Unidos) y descritos en JP10036347 (American home products corporation) y derivados de estrógeno no esferoidal descritos en WO 97/32837. Otros SERMs de la invención se describen en: WO 99/07377; WO 98/48806; EP 0823437A2; EP 0838464A1; EP 0835867A1, EP 0835868A1; EP 0792641A1; EP 0873992A1 y EP 0895989A1. Cualquier SERM usado según lo requerido por la eficacia (de acuerdo a lo recomendado por el fabricante para el tratamiento y/o prevención del cáncer de mama u osteoporosis) puede utilizarse. Las dosificaciones apropiadas se conocen en la técnica. Cualquier otro antiestrógeno no esferoidal comercialmente disponible se puede utilizar de acuerdo a la invención. Cualquier compuesto que tiene actividad similar a SERMs (por ejemplo: puede utilizarse Raloxifeno) . Los SERMs administrados de acuerdo con la invención se administran preferiblemente en un rango de dosificación de entre 0.01 a 10 mg/kg de peso corporal por dia (preferiblemente 0.05 a 1.0 mg/kg), con 60 mg por día, especialmente 20 mg por dia, siendo preferido para una persona de peso corporal medio cuando se administran oralmente, o en un rango de dosificación de entre 0.003 a 3.0 mg/kg de peso corporal por día (preferiblemente 0.015 a 0.3 mg/kg de peso corporal), con 20 mg por día, especialmente 10 mg por día, siendo preferido para una persona de peso corporal medio cuando se administran de forma parental (es decir administración intramuscular, subcutánea o percutánea) . Preferiblemente los SERMs se administran junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable según lo descrito más adelante. Los precursores de esteroides sexuales preferidos son dehidroepiandroesterona (DHEA) (disponible de Diosynth Inc., Chicago, Illinois, Estados Unidos), sus profármacos (disponibles de Steraloids, Wilton, New Hampshire, Estados Unidos), 5-androsten-3b, 17b-diol y sus profármacos 3-acetato de androst-5-ene-3b, 17b-diol y dihemisuccinato de androst-5-ene-3b, 17b-diol (disponible de Steraloids, Wilton, New Hampshire, Estados Unidos). 3-acetato de androst-5-ene-3b, 17b-diol Dihemisuccinato de androst-5-ene-3b, 17b-diol El precursor de esteroides sexuales se puede formular como gel alcohólico que contiene de 2.0 a 10% de triglicéridos caprí licos-cápricos (Neobee M-5); de 10 a 20% de hexilenglicol; de 2.0 a 10% de monometiléter de dietilenglicol (Transutol); de 2.0 a 10% de Ciclometicona (Dow Corning 345); de 1.0 a 2% de alcohol de benzilo y de 1.0 a 5.0% de hidroxipropicelulosa (Klucel HF) . El portador (para el SERM o precursor) puede también incluir varios aditivos usados comúnmente en la industria farmacéutica. Por ejemplo, pueden estar presentes fragancias, antioxidantes, perfumes, agentes de gelificación, agentes de espesamiento tales como carboximetilcelulosa, surfactantes, estabilizadores, emolientes, agentes colorantes y otros agentes similares. Cuando los ingredientes activos se administran de forma transdermal, el sitio de aplicación en la piel se debe cambiar para evitar la concentración local excesiva del ingrediente activo y la posible sobre-estimulación de la piel y glándulas sebáceas por metabolitos andrógenos del precursor de esteroides sexuales. En una composición farmacéutica para la administración oral, DHEA o el otro precursor está preferiblemente presente en una concentración entre 5 y 98% por peso con relación al peso total de la composición, preferiblemente entre 50 y 98 por ciento, especialmente entre 80 y 98 por ciento. Un solo precursor tal como DHEA puede ser el único ingrediente activo, o alternativamente, una pluralidad de precursores y/o sus análogos pueden utilizarse (es decir, una combinación de DHEA, DHEA-S, 5-diol, o una combinación de dos o más compuestos convertidos in vi vo a DHEA, DHEA-S o 5-diol o una combinación de DHEA o 5-diol y uno o más análogos de los mismos que se convierten a DHEA o 5-diol in vi vo, etc. El nivel de sangre de DHEA es el criterio final de la dosificación adecuada que considera la variación individual en la absorción y metabolismo. Preferiblemente, el clínico que atiende, especialmente al inicio del tratamiento, supervisa una respuesta total del paciente individual y los niveles de suero de DHEA (en comparación a las concentraciones preferidas de suero discutidas anteriormente), y supervisar la respuesta total del paciente al tratamiento, ajustando las dosificaciones como sea necesario en donde sea anormal la reacción o metabolismo del paciente dado. El tratamiento de acuerdo con la invención es conveniente para la continuación indefinida. Se espera que el tratamiento con DHEA y/o 5-diol u otro precursor, mantenga simplemente los niveles de DHEA dentro de un rango similar al que se presenta naturalmente en mujeres antes de la menopausia (concentración de suero entre 4 y 10 microgramos por litro), o naturalmente en los hombres jóvenes adultos (concentración de suero entre 4 y 10 microgramos por litro) .

El compuesto de SERM y/o el precursor de esteroides sexuales se pueden también administrar, por ruta oral, y pueden formularse con excipientes farmacéuticos convencionales, por ejemplo, lactosa secada a presión de aire, celulosa microcristalina, y estearato de magnesio en tabletas o cápsulas para la administración oral. La sustancia activa se puede trabajar en tabletas o núcleos de grageas mediante mezclas con sustancias portadoras sólidas, pulverizadas, tales como citrato de sodio, carbonato de calcio o fosfato de dicalcio, y aglutinantes tales como polivinilpirrolidona, derivados de gelatina o celulosa, posiblemente agregando también lubricantes tales como estearato de magnesio, laurilsulfato de sodio, "Carbowax" o polietilénglicol. Por supuesto, las sustancias que mejoran el sabor se pueden agregar en el caso de formas de administración oral. Como otras formas, una puede ser utilizar cápsulas rellenas, por ejemplo de gelatina dura, así como cápsulas cerradas de gelatina suave que abarcan un ablandante o plastificante, por ejemplo, glicerina. Las cápsulas rellenas contienen la sustancia activa preferiblemente en forma granular, por ejemplo en mezcla con rellenadores, tales como lactosa, sacarosa, manitol, almidones, tales como almidón o de patata o amilopectina, derivados de celulosa o ácidos silícicos altamente dispersados. En cápsulas de gelatina suave, la sustancia activa preferiblemente se disuelve o se suspende en líquidos convenientes, tales como aceites vegetales o poliet ilénglicoles líquidos. Las formas de loción, ungüento, gel o crema son posibles y deben frotarse completamente en la piel de tal modo que no quede exceso visible, y la piel no se debe lavar en la región hasta que la mayor parte de la penetración transdermal haya ocurrido preferiblemente en por lo menos 4 horas y, más preferiblemente, en por lo menos 6 horas. Un parche transdermal se puede utilizar para suministrar el precursor o SERM de acuerdo con las técnicas conocidas. Se aplica normalmente por un período mucho más largo, por ejemplo, de 1 a 4 días, pero normalmente contacta el ingrediente activo en un área superficial más pequeña, permitiendo un suministro constante y lento del ingrediente activo. Un número de sistemas transdermales para el suministro de fármaco que se han desarrollado, y que están en uso, son convenientes para suministrar el ingrediente activo de la presente invención. La proporción de liberación es controlada normalmente por una difusión de matriz, o por el paso del ingrediente activo a través de una membrana de control . Los aspectos mecánicos de dispositivos transdermales son bien conocidos en la rata, y se explican, por ejemplo, en las Patentes norteamericanas nos. 5.162.037, 5.154.922, 5.135.480, 4.666.441, 4.624.665, 3.742.951, 3.797.444, 4.568.343, 5.064.654, 5.077.644, 5,071.657, los descritos de los cuales son incorporados en la presente por referencia. El antecedente adicional es proporciona por la Patente Europea 0279982 y por la Solicitud de Patente Británica 2185187. El dispositivo puede ser cualquiera de los tipos conocidos en la técnica incluyendo los dispositivos transdermales de suministro de tipo depósito o matriz adhesiva. El dispositivo puede incluir matrices que contienen el fármaco que incorporan fibras que absorben el ingrediente activo y/o portador. En un dispositivo tipo depósito, el depósito se puede definir por una membrana de polímero impermeable al portador y al ingrediente activo. En un dispositivo transdermal, el dispositivo por sí mismo mantiene el ingrediente activo en contacto con la superficie localizada deseada de la piel. En tal dispositivo, la viscosidad del portador para el ingrediente activo es menos preocupante que con una crema o gel. Un sistema disolvente para un dispositivo transdermal puede incluir, por ejemplo, ácido oleico, lactato alcohólico lineal y dipropilenglicol, u otros sistemas disolventes conocidos en la técnica. El ingrediente activo se puede disolver o suspender en el portador. Para su unión a la piel, un parche transdermal se puede montar en una cinta adhesiva quirúrgica que tiene un orificio perforado en el centro. El adhesivo está preferiblemente cubierto por un revestimiento desprendible para protegerlo antes de su uso. Normalmente el material conveniente para el desprendimiento incluye polietileno y papel revestido con polietileno, y preferiblemente revestido con silicona para el retiro fácil. Para aplicar el dispositivo, el revestimiento de desprendimiento se desprende simplemente y el adhesivo es unido a la piel del paciente. En la Patente Norteamericana No. 5,135,480, descripción de la cual es incorporada por referencia, Bannon y colaboradores describe un dispositivo alternativo que tiene medios no adhesivos para asegurar el dispositivo a la piel. El sistema de suministro transmucosal o percutáneo de la invención se puede también utilizar como un sistema de suministro mejorado y de novedad para la prevención y/o tratamiento de la obesida . EJEMPLOS DE LA EFECTIVIDAD DE LOS MÉTODOS DE LA INVENCIÓN Ejemplo 1 Efecto del tratamiento de 35 semanas con los compuestos de la invención en grasas y peso corporales totales de la rata ovariectomizada .

MATERIALES Y MÉTODOS Animales y tratamiento Fueron utilizadas ratas hembras de Sprague-Dawley de diez a doce semana de edad (Crl: CD (SD) Br) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canadá) que pesan aproximadamente 225- 250g al inicio del tratamiento. Los animales fueron aclimatados a las condiciones ambientales (temperatura: 22 +_ 3°C; humedad: 50 +_ 20%; ciclos de luz de 12 horas, de oscuridad de 12 horas, luces encendidas a las 07:15 h) durante 1 semana antes de comenzar el experimento. Los animales fueron contenidos tres por jaula y se les permitió el acceso libre al agua corriente y a una alimentación certificada granulada del roedor (Lab Diet 5002, Ralston Purina, St-Louis, Mo ) . El experimento fue conducido en instalaciones del Consejo Canadiense sobre el Cuidado Animal, aprobadas de acuerdo con la guía CCAC para el Cuidado y Uso de Animales de Experimento . Doscientas setenta y seis ratas fueron distribuidas aleatoriamente entre 23 grupos de 12 animales cada uno como sigue: 1) control intacto; 2) control de OVX; 3 a 7) OVX + EM-800 (0.01, 0 . 03 , 0.1, 0.3 ó 1 mg/kg); 8 a 12) OVX + Raloxlfeno (0.01, 0.03, 0.1, 0.3 ó 1 mg/kg); 13 a 17) OVX + Tamoxifeno (0.01, 0.03, 0.1, 0.3 ó 1 mg/kg); 18 a 22) OVX + EM-776 (0.01, 0.03, 0.1, 0.3 ó 1 mg/kg); 23) OVX + estradiol (E2, implante) . El día 1 del estudio, los animales de los grupos apropiados fueron bilateralmente ovariectomizados (OVX) bajo anestesia de isoflurano. Un implante Silastic de estradiol (E2) fue insertado subcutáneamente en el área dorsal de cada animal del grupo 13. Los implantes tuvieron la concentración E2 y tamaño siguientes: E (E2: colesterol (1:100, p:p)), 0.5 cm (longitud), 0.317 cm (0.125 pulgadas) (diámetro externo) y 0.157 cm (0.062 pulgadas) (diámetro interno) . Durante el curso del experimento, los implantes E2 fueron substituidos mensualmente. El tratamiento con EM-800, Raloxifeno, Tamoxifeno, y EM-776 o vehículo (4% de etanol, 4% de poliet ilénglicol-600 , 1% de gelatina y 0 . 9% de NaCl) fue iniciado el día 2 del estudio. El compuesto o vehículo apropiado solamente fue dado una vez al día a través de alimentación por sonda oral en 0.5 ml/rata durante 37 semanas. Aproximadamente 24 horas después de la última dosificación, los animales ayunados durante la noche fueron sacrificados por exsanguinación en la aorta abdominal bajo anestesia de isoflurano.

Composición de la Grasa Corporal Después de 35 semanas del tratamiento, las ratas individuales bajo anestesia con isoflurano tuvieron su esqueleto corporal entero tan bien como su fémur derecho explorado usando la absorptiometría de rayos x de energía dual (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA) y un conjunto de programas y sistemas de Exploración de Alta Resolución Regional. El tamaño del campo de exploración usado para el cuerpo entero fue de 30.492 x 17.912 cm, la resolución fue de 0.1512 x 0 . 064 0 cm y la velocidad de exploración fue 2.499 mm/sec. Fue determinada la composición de grasa corporal del cuerpo entero.

Análisis Estadísticos Los datos se expresan como el medio + SEM. La significación estadística fue determinada de acuerdo a la prueba de rango múltiple de Duncan-Kra er (1956) .

Resultados El efecto de aumentar diariamente las dosis orales de EM-800, Raloxifeno, Tamoxifeno, y EM-776 en la grasa corporal según lo medido in vi vo por DEXA, se ilustra en la Figura 1. Puede verse que EM-800 en la dosis más baja de 0.01 mg/kg disminuye 78% la estimulación inducida por OVX de grasas corporales, el Raloxifeno es menos activo que EM-800 mientras que EM-776, el enantiómero de EM-800, no tienen ningún efecto significativo. En la tabla 1, se describen los efectos de EM-800 o Raloxifeno en peso corporal en ratas ovariectomizadas. Se hizo la comparación con las ratas de control intactas y ovariectomizadas. Puede observarse también que las dosis pequeñas de EM-800 logran el control de peso similar a las cantidades perceptiblemente mayores o del Raloxifeno (por ejemplo 0.03 mg/kg de EM-800 logra resultados similares a 0.3 mg/kg de Raloxifeno) . Ambas ovariectomizaciones sustancialmente inversas inducen el aumento de peso en dosis mucho más altas . Tabla 1 Peso corporal Grupo er necropsia (gramos) Control de Intactas 356 ± 16 ** Control de OVX 491 ± 16 OVX + EM800 (0.01 mg/jg) 385 ± 17** (0.03 + mg/kg) 364 ± 10** (0.1 + mg/kg) 369 ± 17** (0.3 + mg/kg) 359 ± 7** (1 mg/kg) 368 ± g*** OVX + Raloxifeno (0.01 mg/kg) 439 ± 13* "(0.03 mg/kg) 451 ± 14* "(0.1 mg/kg) 389 ± 14** "(0.3 mg/kg) 367 ± 9* + "(1 mg/kg) 342 + 12** Ejemplo 2 Tratamiento de combinación de 11 meses con los compuestos de la invención. 1. MATERIALES DE PRUEBA 1.1 Compuestos de Prueba: DHEA: Disponible de Steraloids Inc. Wilton, NH. Lote: H137; EM-800 se sintetiza en el departamento de UCPO de Lab. of Mol. Endo., CHUL. 1.2 Vehículo a) Gelatina : Lab-Grade, ACP Chemicals Ine . , Montreal, Qc . Lote # F0195 Etanol : Comercial Alcohols Inc., Brampton, Ontario Lote No. 11296 c) polietilénglicol-600 (Peg-600) : Omega Chemical Company Inc., Lévis, Quebec. Lote #: 00-0117-EZ d) Salina Normal: 0.9% de irrigación Cloruro de Sodio USP.

Abbott Laboratories Limited, St-Laurent, Qc. e) Propilénglicol (1, 2-PropandioI, PPG): Sigma Chemical Co . , St-Louis, MO . g) Vehículo 1: 4% ETOH-4% PEG-600-1% gelatina-O.9% NaCl-H20 para la Inyección Subcutánea, h) Vehículo 2: 50% ETOH-50% PPG para aplicación tópica 2. ESPECIFICACIONES DE ANIMALES DE PRUEBA: 2.1 Especie : Ra t tus norvegi cus 2.2 Cepa : Rata de Sprague-Dawley (Crl:CD (SD) Br VAF/Plus™) 2.3 Sexo: Hembra 2.4 Fuente : Charles River Canadá Inc. 188 Lasalle Road St. Constant, Quebec 1-800-561-4975 2.5 Edad al inicio de la dosificación: Ratas de G18-20 tenían 16 semanas de edad. 2.6 Alojamiento y mantenimiento a) Alojamiento: Las ratas fueron contenidas 2-3 por jaula en cajas de zapato. Todas las jaulas estaban claramente etiquetadas con una etiqueta de jaula que indica en número de protocolo, número de grupo y número de animal. b) Durante el estudio, las condiciones ambientales en el cuarto serán controladas (condiciones marcadas: temperatura de 20 a 25°C; humedad: 50 +_ 20%) . El fotoperíodo será 12 horas de luz: 12 horas a la oscuridad. c) Dieta y agua: Dieta del roedor (granos), y agua corriente será proporcionada ad libi tum . 2.7 Período de Aclimatación: Por lo menos dos semanas. 2.8 Aleatorización : Las ratas serán asignadas de manera aleatoria a cada grupo a su llegada . 2.9 Método de Eutanasia: Isoflurano inducido en anestesia general. 3. MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL INTACTO 11 ratas/grupo OVX CONT OVX + DHEA 12.5 mg OVX + DHEA 12.5 mg + EM-800 (100 µg) 1 Preparación de vehículo y artículos de prueba a) Preparación de EM-800: EM-800 o ambos de ellos serán disueltos en ETOH:PEG-600 (1:1) con agitación en Fisher Scientific Stirring Hot Píate, luego, 1% de GNS será agregado al volumen requerido. b) Preparación de DHEA: DHEA se disuelve en 50% de ETOH, 50% de PPG por agitación . 2 Preparación y tratamiento animal: Los animales serán tratados una vez al día según lo indicado en el cuadro 6.1. DHEA, preparado en 50% de ETOH, 50% de PPG, se aplicará de manera percutánea (P.C.) a los animales correspondientes una vez al día (I.D) en un volumen de 0.5 ml . EM-800 será preparado en 4% de ETOH, 4% de PEG- 600, 1% de gelatina, 0.9% de NaCl, y será administrado de manea subcutánea a los animales de grupos correspondientes una vez al día (S.C., I.D.) en un volumen de 0.5 ml . Las ratas se inyectan de manera subcutánea con 0,5 ml del vehículo 1 si no se tratan de manera subcutánea con ningún compuesto de prueba, y de forma tópica se aplican con 0.5 ml del vehículo 2 si no se tratan con 5-DIOL ni DHEA. 3.3 Observaciones y mediciones a) Observaciones clínicas: Cada rata será observada por lo menos una vez al día para la manifestación general, b) Pesos Corporales: Las ratas serán pesadas al comienzo y final del protocolo, y cada tres meses durante el tratamiento . 4. RESULTADOS: Según lo mostrado en la Tabla 2, el efecto del tratamiento con DHEA en la dosis diaria de 12.5 mg disminuye 37% la estimulación de OVX del peso corporal. La administración de EM-800 en la dosis diaria de 100 µg da un efecto sinérgico y se obtiene una inhibición de 140% de la estimulación OVX del peso corporal.

Tabla 2 Tratamiento Poso Total (g) Intacta 479.5 ± 20. 4 OVX 567.4 ± 25. 7 OVX+DHEA ( 12 .5 g/día/rata ) 490 . 8 ± 24 . 1 OVX+DHEA ( 12 . 5 mg/dia/rata) + EM800 (100 µg/día/rata ) 444 . 5 ± 20 . 5 Ej emplo 3 Efecto de un tratamiento de 20 días con EM-652.HC1 en parámetros de grasas y pesos corporales en ratas ovariectomizadas. MATERIALES Y MÉTODOS Animales y tratamiento Fueron utilizadas ratas hembras de Sprague-Dawley de ocho a diez semana de edad (Crl:CD(SD) Br) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canadá) que pesan aproximadamente 200-225g al inicio del tratamiento. Los animales fueron aclimatados a las condiciones ambientales (temperatura: 22 + 3°C; ciclos de luz de 10 horas, de oscuridad de 14 horas, luces encendidas a las 06:00 h) durante 1 semana antes de comenzar el experimento. Los animales fueron contenidos individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional y se les permitió el acceso libre al agua corriente y a una dieta mixta alta en carbohidratos compuesta de (g/lOOg): Almidón de maíz, 31.2; dextrosa, 31.2; caseína, 20.0; aceite de maíz, 6.4; dl- et ionina, 0.3; vitamina mixta, 1.0; AIN-76 mineral mixta, 4.9 y fibra, 5.0. El experimento fue conducido en instalaciones del Consejo Canadiense en el Cuidado Animal aprobadas de acuerdo con la guía de CCAC para el Cuidado y Uso de Animales de Experimento. Cuarenta ratas fueron distribuidas aleatoriamente entre 4 grupos de 10 animales cada uno como sigue: 1) control de intactas; 2) control de OVX; 3) OVX + EM-652.HC1 (0,5 mg/rata, -2.5 mg/kg); 4) OVX + estradiol (E2, implante). El día 1 del estudio, los animales de los grupos apropiados fueron bilateralmente ovariectomizados (OVX) bajo anestesia de isoflurano. Un implante silástico de estradiol (E2) fue insertado de manera subcutánea en el área dorsal de cada animal del grupo 4. Los implantes, elegidos en experimentos preliminares que dan niveles fisiológicos de E2, tuvieron la concentración y tamaño de esteroides siguientes: E2 : colesterol (1:50, w:w), 0.5 cm (longitud del esteroide diluido en tubería silástica), 0.317 cm (0.125 pulgadas) (diámetro externo de la tubería silástica) y 0.157 cm (0.062 pulgadas) (diámetro interno de la tubería silástica) . Los implantes de estradiol fueron sumergidos en 0.9% de NaCl a 37°C durante la noche antes de su inserción subcutánea en animales. El tratamiento con EM652.HC1 o el vehículo solamente (0.4 % de metilcelulosa en agua) fue iniciado el día 2 del estudio. El compuesto o vehículo fue dado una vez al día a través de alimentación por sonda oral en 0.5 ml/rata durante 20 días. Los pesos corporales y el consumo de alimentos fueron registrados cada 2 días. Aproximadamente 24 horas después de la última dosificación, los animales ayunados durante la noche fueron anestesiados con quetaminexilazina y extraída la sangre por puntura cardiaca. La sangre fue colectada así como los tejidos adiposos blancos y marrones.

Mediciones del peso corporal, coma de alimento y aumentos del cuerpo en energía, grasa y proteínas. El peso corporal, la toma de alimento, y los aumentos del cuerpo en energía, grasa, y proteína fueron determinados de acuerjdo a Deshaies et el al, Am. J. Physiol., 1997; 273, E355-E362 (1997) .

Medidas del tejido Las actividades de la lipasa de lipoproteína fueron determinadas de acuerdo a Deshaies y colaboradores, Am. J. Physiol., 1997; 273, E355-E362 (1997) .

RESULTADOS Puede observarse en las Figuras 2 A y C que el tratamiento de 20 días con EM-652.HC1 invirtió totalmente el aumento de peso corporal 4 veces y el aumento de grasas tres veces, respectivamente, observados después de la ovariectomía, mientras que este efecto fue acentuado menos en el aumento de proteína (figura 2b) . El estradiol tuvo un efecto menor. La toma de alimentos acumulativa se muestra en la Figura 3. Los efectos del tratamiento se reflejan en aumento de peso corporal. El estradiol previno parcialmente el aumento en la toma de alimentos debido a Ovx, mientras que EM-652.HC1 fue más eficientemente que el estradiol, reduciendo la toma de alimentos a un valor inferior que el de animales intactos.

Las variables principales del balance energético se resumen en la tabla 3. Ovx aumenta la toma de energía digerible por 44%. El estradiol redujo la toma la energía en animales Ovx, pero la toma de energía total permaneció 17$ más arriba que la de animales intactos, mientras que EM-652.HC1 previno totalmente el aumento inducido por Ovx en la toma de energía. El aumento de energía fue proporcional a la toma de alimentos. Nuevamente, el estradiol redujo el aumento de energía (a niveles no perceptiblemente diferentes de los de ratas intactas), pero EM-652.HC1 fue más eficiente (perceptiblemente diferente del estradiol). La eficiencia alimenticia fue aumentada Ovx, reducida en animales OVX por E2 , y reducida adicionalmente por EM-652.HC1 El 30% de aumento en energía corporal a partir de proteínas después de la ovariectomía así como el 80% de aumento en energía corporal a partir de grasas fueron también completamente invertidos por el tratamiento de EM-652.HC1 como puede verse en la figura 4A y B. Como se muestra en la figura 5A, el desarrollo de resistencia a la insulina en animales Ovx fue confirmado por la presencia de hiperinsulinemia en ayunas (que es generalmente proporcional al grado de resistencia a la insulina) y de hiperglicemia en ayunas (un reflejo de la pérdida efectividad de insulina para mantener niveles normal de glucosa en la sangre) . El estradiol y EM-652.HC1 previnieron la resistencia a la insulina inducida por Ovx. Las figuras 6A y 6C muestran que OVX aumentó la masa (cantidades) de los tejidos adiposos retroperitoneales y inguinales que son representativos del cambio observado en las grasas corporales totales. Este aumento fue suprimido totalmente por el tratamiento de EM-652.HC1. Con estradiol,. el efecto fue menos importante. El mismo patrón se muestra en las figuras 6B y 6D donde se reporta la actividad de la lipasa de lipoproteína. Esta enzima modula la hidrólisis intravascular de los triglicéridos y de tal modo la entrada de ácidos grasos en almacenes adiposos. El tejido adiposo café es un efector importante en roedores. La ovariectomía mostró un diverso patrón en el tejido adiposo café interescapular que en el tejido adiposo blanco. El peso del tejido adiposo café fue incrementado 2 veces (figura 7A) como se observo en el tejido adiposo blanco. Sin embargo, el contenido proteínico (figura 7B) y la actividad de la lipoproteína (figura 7C) fueron disminuidos por 33 y 30%, respectivamente, después de la OVX. En estos tres parámetros, el tratamiento de EM-552.HC1 invirtió totalmente el efecto de la ovariectomía. El peso de soleus es generalmente un buen índice del estado de la masa de proteína del organismo. Según lo esperado, el peso de soleus, según lo mostrado en la Figura 8, fue aumentado por Ovx (el aumento en la toma de alimento da lugar a un aumento en la deposición de energía co o la grasa y proteína). El estradiol y los tratamientos de EM-652.HC1 previnieron el aumento en peso muscular. La lipasa de lipoproteína en músculo frecuentemente se asocia positivamente con la sensibilidad a la insulina (cuanto mejor es la sensibilidad, es más la lipasa de lipoproteína en músculo) . Ovx redujo la actividad de la lipasa de lipoproteína en el soleus, una evidencia indirecta del desarrollo de la resistencia a la insulina en músculo. El estradiol y los tratamientos de EM652.HC1 previnieron la disminución de la lipasa de lipoproteína en músculo.

Tabla 3 Balance Energético Estado del Ovario Intacto ovx Tratamiento ninguno E2 EM-652 Toma de Energia Digerible (kJ) 4708 6758a 5511a 4479b Aumento de Energía (kJ) 532 1677a 903 278b Gasto de Energético Evidente (kJ) 4176 5081a 4609a 4201b Eficacia del Alimento (%) 10.2 24.1a 15.9 5.9b Diferente de Intacto p<0.05. Diferente de Ovar?ectora?;ado + E2.p<0.05.

La toma de energía digerible es la cantidad total de energía ingerida durante un tratamiento de 20 días (considerando la materia no digerible tal como fibra) . El aumento de energía es la cantidad de kilojoules depositados como grasa + proteína a lo largo del tratamiento de 20 días. Los gastos energéticos evidentes son la cantidad de energía expendida para las necesidades metabólicas y locomoción (calculadas de la toma de energía y aumento de energía) . Se esperaba que fuera mayor cuando la masa delgada es más grande (tal como los animales Ovx) . La eficiencia del alimento es la eficiencia con la cual la energía ingerida se deposita como grasa y proteína (en kJ depositados por 100 kJ injeridos).

Ej emplo 4 Ejemplo de la síntesis del compuesto preferido de la invención Síntesis de clorhidrato de (S)-(+)-7-hidroxi-3- (4 -hidroxifenil) -4-metil-2- (4' ' - (2' ' ' -piperidinetoxi) fenil) -2H-l-benzopiran EM-01538 (EM-652, HCl) Esquema de Reacción í Etapa A: BF3 Et20, tolueno; 100°C; 1 hora Etapa C: 3, 4-dihidropirano, monohidrato del ácido p-toluenesulfónico, etilacetato; 25ÜC bajo nitrógeno, 16 horas, y luego la cristalización en isopropanol .

Etapas D, E, y F: (1) piperidina, tolueno, aparato Dean & Stark, reflujo bajo nitrógeno; (2) 1 , 8-diazabiciclo [ 5 , 4, 0 ] undec-7-ene, DMF, 3 horas a reflujo; (3) CH3MgCl, THF, -20 a 0°C y luego a temperatura ambiente durante 24 horas; Etapa G, H: ácido de ( ÍS ) - (+) -10-canforsulfónico, acetona, agua, tolueno, temperatura ambiente, 48 horas .

Etapa HH : 95% de etanol, 70°C, luego a temperatura ambiente, 3 días.

Etapa HHR: Reciclar del licor madre y lavado de la etapa HH ácido de ( S ) -10-canforsulfónico, reflujo; 35 horas, luego a temperatura ambiente durante 16 horas.

Etapa I : ( 1 ) DMF aq . , Na2C03 , eti lacetato ; ( 2 ) etanol , HCl diluido; 3) agua.

Sintesis de 2-tetrahidropiraniloxi-4-hidroxi-2' - (4' '-tetrahidropiraniloxifenil) acetofenona (4) . Una suspensión de 2 , 4-dihidroxi-2' - ( 4 ' ' -hidroxifenil ) acetofenona 3 (97.6 g, 0.4 mol) (disponible de Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansas) en 3, 4-dihidropiran (218 ml, 3.39 mols) y el etilacetato (520 ml ) fue tratada con monohidrato del ácido p-toluensulfónico (0.03 g, 0.158 mmol) en aproximadamente 25°C. La mezcla de reacción fue mezclada bajo nitrógeno sin calentamiento externo por aproximadamente 16 horas. La mezcla luego fue lavada con una solución de bicarbonato de sodio (1 g) y cloruro de sodio (5 g) en agua (100 ml ) . Las fases fueron separadas y la fase orgánica fue lavada con salmuera (20 ml ) . Cada lavado fue extraído nuevamente con 50 ml del etilacetato. Todas las fases orgánicas fueron combinadas y filtradas a través de sulfato de sodio . El disolvente (cerca de 600 ml ) fue eliminado por destilación a presión atmosférica y se agregó isopropanol (250 ml) . El solvente adicional (cerca de 300 ml) fue destilado a presión atmosférica y se agregó isopropanol (250 ml ) . El solvente adicional (cerca de 275 rnl) fue destilado a presión atmosférica y se agregó isopropanol (250 ml) . La solución fue enfriada a aproximadamente 25°C con agitación y después de aproximadamente 12 horas, el sólido cristalino fue filtrado, lavado con isopropanol y secado (116.5 g, 70%). Sintesis de 4-hidroxi-4-metil-2- (4' - [2' ' -piperidina] -etoxi) fenil-3- (4' ' ' -tetrahidropi aniloxi) fenil-7-tetra idropiraniloxi-croxnano (10) . Una solución de 2-tetrahidropiraniloxi-4-hidroxi-2' - ( 4' ' -tetrahidropiraniloxifenil) acetofenona 4 (1 kg, 2.42 mols), 4- [2- ( 1-piperidina) etoxi] benzaldehído 5 (594 g, 2.55 mols) (disponible de Chemsyn Laboratories Science, Lenexa, Kansas) y piperidina (82.4 g, 0.97 mol) (disponibles de Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.) en tolueno (8L) se puso a reflujo bajo nitrógeno con un aparato de Dean & Stark hasta que se colectó un equivalente de agua (44 L) . El tolueno (6.5 L) fue eliminado de la solución por destilación a presión atmosférica. Se agregaron dimetilformamida (6.5 L) y 1,8-diazabiciclo [5, 4, 0] undec-7-ene (110.5 g, 0.726 mol). La solución fue agitada por aproximadamente 8 horas a temperatura ambiente para isomerizar calcona 8 a cromanona 9 y después se agregó a una mezcla de agua y hielo (8 L) y tolueno (4 L). Las fases fueron separadas y la capa de tolueno fue lavada con agua (5 L) . Los lavados acuosos combinados fueron extraídos con tolueno (3 x 4 L) . Los extractos combinados de tolueno finalmente fueron lavados con salmuera (3 x 4 L) , concentrados a presión atmosférica a 5.5 L y después enfriados a 10°C. Con enfriamiento y agitación externos continuos bajo nitrógeno, se agregó una solución 3M de cloruro de metilmagnesio en THF (2.5 L, 7.5 mols) (disponible de Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.), manteniendo la temperatura por debajo de 0°C. Después que todo el reactivo de Grignard fue agregado, el enfriamiento externo fue eliminado y la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente. La mezcla fue agitada a esta temperatura por aproximadamente 24 horas. La mezcla fue nuevamente enfriada a aproximadamente -20°C y con enfriamiento y agitación externos continuos, la solución saturada de cloruro de amonio (200 ml) fue agregada lentamente, manteniendo la temperatura por debajo de 20°C. La mezcla fue agitada durante 2 horas y luego se agregó a una solución saturada de cloruro de amonio (2 L) y el tolueno (4 L) y agitada por cinco minutos. Las fases fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con tolueno (2 x 4L) . Los extractos combinados de tolueno fueron lavados con ácido clorhídrico diluido hasta que la solución fue homogénea y después con salmuera (3 x 4 L) . La solución de tolueno finalmente fue concentrada a presión atmosférica a 2L. Esta solución fue utilizada directamente en la etapa siguiente. S ntesis de la sal del ácido (2 ,S)-7-hidroxi-3- (4' -hidroxifenil) -4-metil-2- (4' ' - [2' ' ' -piperidina] toxi) fenil) -2H-1 benzopirano (ÍS) -10-can orsulfónico (+12) . A la solución de tolueno de 4 -hidroxi-4 -meti1-2- (4' - [-2' ' -piperidina] -etoxi ) -fenil-3- (4' ' ' -tetrahidropiraniloxi) feni 1-7-tetrahidropiraniloxicromano (10) se le agregó acetona (6 L), agua (0.3 L) y el ácido de (S)-10-canforsulfónico (561 g, 2.42 mol) (disponible de Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.). La mezcla fue agitada bajo nitrógeno durante 48 horas, después de este tiempo el sólido de la sal del ácido (2R, S) -7-hidroxi-3- (4' -hidroxifenil) -4-metil- 2-(4''-[2'" -piperidina] etoxi) fenil) -2H-1-benzopiran ( ÍS ) -10-canforsulfónico (12) fue filtrado, lavado con acetona y secado (883 g) . Este material fue utilizado en la etapa siguiente (HH) sin la purificación adicional. Sintesis de la sal del ácido (2S) -7-hidroxi-3- (4' -hidroxi enil) -4-metil-2- (4' ' - [2' ' ' -piperidina] etoxi) fenil) -2H-l-benzopiran (ÍS) -10-canforsulfónico (sal 13 , (+) -EM-652 (ÍS) -CSA) . Una suspensión de sal del ácido (2R, S ) -7-hidroxi-3- (4' -hidroxifenil) -4-metil-2- (4' ' - [2' ' ' -piperidina] etoxi) fenil )-2H-benzopirán (1S)-10-canforsulfónico + 12 (759 g) en 95% de etanol fue calentada con agitación aproximadamente a 70°C hasta que se disolvió el sólido. La solución fue dejada enfriar a temperatura ambiente con agitación, luego germinada con algunos cristales de sal del ácido (2S ) -7-hidroxi-3- ( 4' -hidroxifenil ) -4-metil-2- (4f ' - [ 2 ' ' ' -piperidina] etoxi) fenil) -2H-1-benzopiran ( ÍS ) -10-canforsulfónico 13. La solución fue agitada a temperatura ambiente por aproximadamente tres días en total. Los cristales fueron filtrados, lavados con 95% de etanol y secados (291 g, 76%). El de del producto fue 94.2% y la pureza 98.8%.

Síntesis de EM-01538 de (S) - (+) -7-hidroxi- 3- (4' -hidroxifenil) -4-metil-2- (4' ' - (2' ' ' -piperidinetoxi) fenil) -2H-l-benzopiran clorhidrato (EM-652, HCl). Una suspensión del compuesto 13 (sal de EM-652- (-t ) -CSA, 500 mg, 0.726 mmol) en dimetilformamida (11 µL, 0.15 mmol) fue tratada con una 0.5 M de solución acuosa de carbonato de sodio (7.0 mL, 3.6 mmol), y agitada durante 15 minutos.

La suspensión fue tratada con etilacetato (7.0 mL) y agitada durante 4 h. La fase orgánica luego fue lavada con una solución saturada acuosa de carbonato de sodio (2 x 5 mL ) y salmuera (1 x 5 ml), secada sobre sulfato de magnesio, y concentrada. Una solución de espuma rosada resultante (EM-652) en etanol (2 mL) fue tratada con el ácido 2 N clorhídrico ( 400 µL, 0.80 mmol), agitada durante 1 h, tratada con agua desrilada (5 mL) y agitada durante 30 minutos. La suspensión resultante fue filtrada, lavada con agua destilada (5 mL ) , secada en aire y bajo alto vacío (65°Cj para dar un polvo cremoso (276 mg, 77%) : Polvo grisáceo fino; Calorimetría de la exploración: Inicio máximo de fusión a 219°C, DH = 83 J/g; [ ]2 D = 154° en metanol de 10 mg/ml; H NMR ( 300 MHz, CD30D) d (ppm) 1.6 (amplitud, 2H, H-4"')# 1.85 (amplitud, 4H, H-3"" y 5'"'), 2.03 (s, 3H, CH3), 3.0 y 3.45 (amplitud, 4H, H-2"" y 6 " " ) , 3.47 (t, J=4.9 Hz, 2H, H-3r''), 4.26 (t, J=4.9 Hz, 2H, H-2"'), 5.82 (s, 1H, H-2), 6.10 (d, J=2.3Hz, 1H, H-8), 6.35 (dd, J=8.4, 2,43 Hz, 1H, H-6), 6.70 (d, J=8.6 Hz, 2H, H-3', y H-5'), 6.83 (d, J=8.7 Hz, 2H, H-3" y H-5''), 7.01 (d, J=8.5 Hz, 2H, H-2' y H- 6'), 7.12 (d, J=8.4Hz, 1H, H-5), 7.24 7.24 (d, J=8.6Hz, 2H, H-2'' y H-6' ' ) ; 13C RMN (CD30D, 75 MHz) d ppm 14.84, 22.50, 23.99, 54.78, 57.03, 62.97, 81.22, 104.38, 103.11, 115.35, 116.31, 118.68, 125.78, 126.33, 130.26, 130.72, 131.29, 131.59, 134.26, 154.42, 157.56, 158.96, 159.33. Composición Elemental: C, H, N, Cl : Teoría; 70.51, 6.53, 2.84, 7.18, %, se encontró: 70.31, 6.75, 2.65, 6.89%. El ejemplo 5 muestra la prevención del aumento de grasa inducida por LHRH-A a través de EM-652.HC1, un compuesto de la invención, sólo o en conjunto con DHEA, un precursor de hormona sexual, en ratas femeninas intactas. Puede observarse que i el tratamiento de seis meses de LHRH-A aumenta perceptiblemente en 58% el porcentaje de las grasas corporales de ratas femeninas intactas, mientras que con la administración concomitante de EM- 652. HCl o DHEA, este incremento fue solamente de 35 % y 19 %, respectivamente. Con la combinación de ambos fármacos, ningún aumento de grasas fue observado después del tratamiento con LHRH-A. En el ejemplo 6, se presenta la prevención de la obesidad en ratas femeninas sobre un período de 20 días. La ovariectomía aumenta el porcentaje de grasas y peso corporales totales del tejido adiposo retroperitoneal en 20% y 68%, respectivamente. Se previenen estos incrementos e incluso las grasas corporales y el tejido adiposo ' retroperitoneal son disminuidos por la administración de EM652.HC1, estradiol, DHEA, o combinaciones de EM-652.HC1 y DHEA o de EM-652.HC1 y estradiol de 46%, 46%, 59%, 56%, y 45%, respectivamente, para grasas corporales y por 59%, 78%, 75%, 69%, y 68%, respectivamente para el tejido adiposo retroperitoneal. Un experimento similar se presenta en el ejemplo 7. En este caso, la prevención de obesidad se continúa durante 34 semanas y luego los porcentajes de grasas corporales y del tejido adiposo retroperitoneal son aproximadamente incrementados el 60% por la ovariectomía. Este incremento es prevenido por la administración de estradiol de etinilo, Raloxifeno (EM-1105), EM-652.HC1 (EM-1538), DHEA, o la combinación de EM652.HC1 y DHEA. Los ejemplos 8A (macho) y 8B (hembra) reportan datos de la efectividad de la invención en la prevención así como en el tratamiento de la obesidad. Para las ratas macho y hembra de Zucker obesas y delgadas fueron administrados 2.5 mg/kg/día de EN4-652.HCI durante 20 días. El modelo de prevención es representado por las ratas delgadas mientras que el modelo del tratamiento de obesidad es representado por las ratas ya obesas. Los datos sobre el aumento de peso corporal, la actividad de la lipasa de lipoproteína en el músculo soleus y tejido adiposo retroperitoneal blanco así como las concentraciones del plasma de insulina, glucosa, colesterol total, y triglicéridos se describen en la tabla 7 para el macho y la tabla 8 para los animales hembra (véase el ejemplo 3 para la significación de estos parámetros) . El EM-652.HC1 de antiestrógeno disminuyó perceptiblemente el aumento de peso corporal por 38% para las ratas macho delgadas y 35% para las ratas macho obesas mientras que la actividad de la lipasa de lipoproteína en el músculo soleus y tejido adiposo retroperitoneal blanco no se modifica en ambos sexos. La insulina del plasma es reducida por 35%, 57%, y 48% en machos magros, machos obesos y hembras delgadas respectivamente, mientras en las hembras obesas que muestran un nivel mucho mayor de insulina, el EM-652.HC1 no tiene ningún efecto significativo. El colesterol del plasma que es mayor en el grupo obeso también es reducido por la administración de EM-652.HCI. El suero de glucosa no es afectado por el tratamiento de EM-652.HC1. En el ejemplo 9 el efecto de EM-652.HC1, DHEA o combinación de ambos en ratas hembras intactas o ovariectomizadas que reciben una rica dieta en sucrosa y grasas, es reportado con respecto al peso total, peso y actividad de la lipasa de lipoproteína del tejido inguinal y retroperitoneal adiposo blanco, del tejido adiposo café, del músculo soleus y del músculo lateralis vastus (VLM) . También se reportan la insulina del plasma, glucosa, colesterol total, triglicéridos, y leptina así como el colesterol y triglicéridos del hígado . El ejemplo 10 informa el efecto en aumento de peso y en metabolismo del lípido-lipoproteína en ratas que continúan el tratamiento con diversos moduladores selectivos receptores de estrógeno descritos en la literatura (TSE 424, Lasofoxifeno, LY 353381 y Raloxifeno) así como con el compuesto preferido de la invención, EM-652.HC1. Los compuestos probados fueron administrados a través de alimentación por sonda oral durante 20 días (0.5 mg/rata para cada compuesto) en 0 . 4 % de metilcelulosa a ratas hembras ovariectomizadas. Ratas de control intactas, de control ovariectomizadas (OVX) y OVX tratadas con 17ß-estradiol (E2) fueron utilizadas como referencia. El peso corporal y el consumo de alimentos que son aumentados por la ovariectomía, son significativamente disminuidos por el tratamiento con los compuestos probados al nivel observado en controles intactos. El peso y ia actividad de la lipasa de lipoproteína del tejido adiposo inguinal y adiposo retroperitonal blanco son disminuidos por el tratamiento anterior (a excepción de TSE 424 y LY 353381 para el tejido inguinal adiposo blanco y TSE 424 y Lasofoxifeno para la actividad de la lipasa de lipoproteína del tejido inguinal) mientras que el tejido adiposo y músculo marrones no parecen perceptiblemente afectados. Puede observarse que en todos los compuestos se probó la concentración de plasma del colesterol y triglicéridos perceptiblemente más baja sin tener ningún efecto en los niveles de glucosa. La insulina del plasma fue disminuida por el tratamiento de las ratas OVX con EM-652.HC1, TSE 424, Lasofoxifeno, LY 353381, y Raloxifeno. En los ejemplos 11 y 12, se informa la eficacia in vi tro en las líneas celulares dependientes del estrógeno de antiestrógenos y compuestos conocidos de la invención. El efecto de antiestrógenos en actividad de fosfatasa alcalina en células de Ishikawa adenocarcinomas endometriales humanas se muestra en la tabla 11 del ejemplo 10. La actividad antiestrogénica se informa en la última columna como IC 50 expresada en nM de la inhibición de InM de fosfatasa alcalina estimulada de E2 mientras que la actividad estrogénica intrínseca de los compuestos probados se reporta en la penúltima columna como porcentaje de 1 nM de estímulo de E2 de la actividad de fosfatasa alcalina. Puede observarse que los antiestrógenos más activos son EM-652.HC1, LY 353381, Raloxifeno, Lasofoxifeno, y TSE 424. Los otros son por lo menos diez veces menos activos. No obstante, entre los mejores compuestos activos, algunos poseen una actividad estrogénica indeseada residual significativa: LY 353381 (16%), Lasofoxifeno (18%), y Raloxifeno (13%). Por lo tanto, los actuales datos indican que los compuestos de EM-652.HC1 y TSE 424 no muestran actividad estrogénica significativa en células de Ishikawa. En el ejemplo 12 una comparación entre EM-652.HC1, nuestro compuesto preferido, y TSE 424 en células humanas del cáncer de mama MCF-7 muestra la ventaja de EM-652.HCI. Por lo tanto, es más de cuatro veces más activo que TSE 424 como antiestrógeno (EC50 de inhibición de 0.8 nM contra 3.7 nM) (tabla 12) . En el ejemplo 13, el efecto del tratamiento de 20 días con EM-652.HC1, TSE 424 o Lasofoxifeno en peso corporal, tejido adiposo retroperitoneal, peso uterino y niveles de colesterol, fue evaluado en ratas hembras ovariectomizadas alimentadas con una dieta comercial para roedores. La ovariectomía indujo los aumentos del 17% y 19% en el peso corporal y el peso del tejido graso retroperitoneal totales, respectivamente, mientras que la administración de 0.5 mg de EM-652.HC1, TSE 424 o Lasofoxifeno previno el aumento de peso corporal por 64%, 59% y 127%, respectivamente, y condujo a los valores del peso del tejido adiposo por debajo de los observados en los animales de control intactos para todos los compuestos estudiados. La administración de EM-652.HC1 y TSE 424 no tuvo ningún efecto en el peso uterino comparado a los animales de control OVX. Sin embargo, la administración de 0.5 mg de Lasofoxifeno provocó un aumento del 62% (p>0.01) del peso uterino que fue invertido totalmente por la administración simultánea de 2.5 mg de EM652.HC1, así sugiriendo la actividad estrogénica de Lasofoxifeno. Finalmente, el aumento inducido por OVX en los niveles totales del suero de colesterol fue totalmente prevenido por la administración de EM-652.HC1, TSE424 y Lasofoxifeno y condujo a valores del colesterol perceptiblemente más bajos que los observados en animales de control intactos . Ejemplo 5 El efecto en la acumulación de grasas por el tratamiento con EM-652.HC1 y DHEA, administrados solos o en combinación, a las ratas hembras intactas que recibieron o no un LHRH-A.

URMA-r-04-99 El objetivo de este estudio debe determinar el efecto sobre las grasas del tratamiento con EM2.HC1 y dehidroepiandroesterona (DHEA) en ratas hembras intactas que reciben o no una hormona luteinizante que libera el agonista de la hormona (diacetato de etilamida de LHRH-A, LHRH) . Para este propósito, ratas hembras intactas, tratadas o no con LHRH-A (1 µg/rata), reciben la administración diaria de EM-652.HC1 (2.5 mg/kg) y DHEA (100 mg/kg), solos o en combinación, durante 6 meses. EM-652.HC1 fue administrado oralmente, DHEA se aplicó tópicamente mientras que LHRH-A se inyectó de forma subcutánea. Todos los tratamientos fueron administrados una vez al día.

ANIMAL DE PRUEBA: Especie: Ra t tus norvegi cus Cepa: Rata de Sprague-Dawley (Crl: CD® (SD)BR VAF/Plus™ ) Sexo: Hembra Edad: Al inicio de la dosificación, las ratas eran aproximadamente de 10 a 12 semanas de edad.

Alojamiento y Mantenimiento a ) Aloj amiento : Las ratas fueron contenidas individualmente en jaulas de acero inoxidable durante la aclimatación y períodos de estudio. b ) Temperatura y Humedad: Las condiciones ambientales (temperatura, humedad) en el cuarto de la rata fueron registradas continuamente utilizando sistemas automatizados computarizados. Las condiciones designadas fueron de 22 + 3°C y 50 + 20 % con relación a la humedad. c ) Ciclo de luz-oscuridad: El fotoperíodo fue de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Estos parámetros se registraron continuamente utilizando un sistema automatizado computarizado validado. Las luces estuvieron encendidas de las 07:15 horas a las 19:15 horas. d) Dieta: La alimentación certificada para roedores (Lab Diet # 5002, granos) y el agua corriente fueron proporcionados ad l ibi tum . Las ratas fueron ayunadas (solamente con acceso al agua) la tarde anterior a la necropsia.

Aleatorización: Las ratas fueron asignadas a cada grupo al azar durante el período de aclimatación.

MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL Grupos de prueba: Ciento veinte ratas fueron separadas en 8 grupos de 15 animales para conducir el estudio detallado más adelante: Preparación de artículos de prueba: LHRH-A está disponible en solución en una concentración de 1.0 mg/ml. Se diluirá esta solución concentrada (para obtener una concentración final de 0.002 mg/ml) usando el vehículo siguiente: 0.3% de cloruro de sodio y 0.25% de fosfato monobásico, monoohidrato de sodio en agua. El hidróxido de sodio (acuoso) fue utilizado para el ajuste del pH entre 5.6-6.2. Las suspensiones/soluciones de dosificación fueron preparadas cada dos semanas de acuerdo al peso corporal más reciente (grupo promedio) a excepción de la solución de LHRH-A. Para EM-652.HC1 administrado oralmente, el vehículo (0.4% de metilcelulosa) fue agregado al compuesto probado, previamente vertido en una botella de cristal, por lo menos 48 horas antes del primer día de dosificación. Para asegurar la homogeneidad de la suspensión de dosificación, se agitó por lo menos 48 horas de 2 a 8°C. Las suspensión de dosificación se mantuvo de 2 a 8°C. Para la solución de DHEA aplicada tópicamente, el etanol fue agregado a DHEA y la mezcla fue agitada hasta la disolución de DHEA. Después, el polipropilenglicol se agregó y la solución agitada hasta homogeneidad. La solución de dosificación se mantuvo de 2 a 8°C (una parte de la solución se mantuvo a temperatura ambiente para facilitar la aplicación tópica en el animal) . Para la solución de LHRH-A inyectada de manera subcutánea, se preparó cada mes una dilución de la solución concentrada utilizando el vehículo apropiado. La solución de dosificación se mantuvo de 2 a 8°C.

Preparación animal: Anterior al primer día de la dosis y como necesidad durante el estudio, una porción de piel dorsal (aproximadamente de 5 x 5 cm) fue afeitada para la aplicación tópica de DHEA.

Dosificación : La administración de compuestos o vehículo probados fue iniciada el día 1 del estudio del protocolo. Los compuestos probados fueron dados como suspensión en 0.4% de metolcelulosa vía alimentación por sonda oral (0.5 ml/alimentación por sonda/rata) una vez al día o aplicados tópicamente en 50% de etanol-50% de propilenglicol (0.5 ml/aplicación/rata ) una vez al día. Las ratas de los grupos 5 a 8 también recibirán LHRH-A una vez al día por inyección subcutánea (0.5 ml/inj ección/rata ) . Las ratas que no recibieron un compuesto probado oralmente y/o tópicamente recibirán el vehículo apropiado solamente.

Medida de Grasas Corporales La composición corporal fue medida en el esqueleto entero y el fémur derecho del animal bajo anestesia de isoflurano inducido utilizando absorciometría de rayos x de energía dual (DEXA; QDR4500A, Hologic) durante el período de aclimatación y después de 6 meses del tratamiento.

Resultados Tabla 4 Tratamiento % de grasa INTACTAS 23.1±1.6 EM-652.HCI 19.111.4 DHEA 20.2±2.3 DHEA+EM-652.HCI 18.811.3 LHRH-A 36.412.2 LHRH-A+EM-652. HCl 31.2±2.0 LHRH-A+DHEA 27.412.1 LHRH+DHEA+EM-652.HCI 25.0±1.7 Ejemplo 6 Efecto de un tratamiento de 20 días con EM-652.HC1, estradiol, y DHEA en parámetros de grasa corporal y peso corporal en ratas hembra ovariectomizadas .

URMA-r-27-00 El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto sobre parámetros de grasas y peso corporales de EM-652.HC1, estradiol y DHEA administrados oralmente solos o en combinación, a las ratas hembras ovariectomizadas (OVX) que recibieron una dieta de carbohidratos enriquecidos .

PRUEBA ANIMAL: Especie: Ra t tus norvegi cus : Cepa: Rata de Sprague-Dawley (Crl: CD® BR VAF/Plus™) Sexo: Hembra Peso Corporal: Al inicio de la dosificación, sus pesos corporales eran aproximadamente de 200-250g.

Alojamiento y mantenimiento a) Alojamiento : Las ratas fueron contenidas individualmente en jaulas del acero inoxidable de diseño convencional durante la aclimatación y períodos de estudio. b ) Temperatura y Humedad: Las condiciones ambientales (temperatura, humedad) en el cuarto de la rata fueron registradas continuamente usando un sistema computarizado automatizado. Las condiciones designadas fueron de 22 ± 3°C y 50 ± 20 % con relación a la humedad, c) Ciclo de luz-Oscuridad: El fotoperíodo fuer 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Estos parámetros fueron registrados continuamente usando un sistema automatizado computarizado. Las , luces fueron encendidas de las 07:15 a 19:15. d) Dieta: La alimentación certificada del roedor (Lab Diet # 5002, granos) y agua corriente fueron proporcionados ad libi t?m durante el período de aclimatación. Durante el período de estudio, las ratas recibirán una dieta rica en carbohidratos ad libitum. La dieta enriquecida (dieta # 3) fue compuesta de (g/lOOg): Almidón de maíz, 31.2, dextrosa, 31.2; caseína, 20.0; aceite de maíz, 6 . 4 ; dl-metionina, 0.3; vitamina mixta, 1.0; AIN-76 mineral mixta, 4.9; fibra, 5.0. El día anterior de su necropsia, las ratas fueron ayunadas (solamente con acceso al agua) al final de la tarde (alrededor de 16:00 h) .

Aleatorización: Las ratas fueron asignadas a cada grupo al azar el día 0 del estudio.

MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL Grupos de prueba: 80 ratas fueron asignadas a 8 grupos de 10 ratas para conducir el estudio detallado más adelante : Preparación animal: El día 0 del estudio, ratas de los grupos 2 a 8 fueron ovariectomizadas, por incisión de flanco bilateral bajo anestesia de isoflurano inducido.. Las ratas del grupo fueron operadas de manera simulada.

Dosificación: La administración de los artículos de prueba o vehículo fue iniciada el día 1 (al día siguiente de la ovariectomía) . Los compuestos probados fueron dados como suspensiones en 0 . 4 % de metilcelulosa por sonda oral (0.5 ml/por sonda) durante 20 días.

Medida de la Composición Corporal El día 21 del estudio (anterior a la necropsia), la composición corporal fue determinada en el esqueleto del cuerpo entero de animales bajo anestesia de isoflurano inducido usando la absorciometría de rayos x de energía dual (DEXA; QDR 4500A, Hologic) para determinar el efecto de tratamientos en porcentajes de grasas. Órganos y Tejidos Colectados El tejido adiposo retroperitoneal derecho e izquierdo fueron colectados y pesados.

Resultados Tabla 5 Ejemplo 7 Efecto del tratamiento de 34 semanas con estradiol de etinilo, EM-652.HC1, Raloxifeno, y DHEA en parámetros de grasa y peso corporales en ratas hembras ovariectomizadas . URMA-r-42-98 El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de un tratamiento combinado con EM652.HC1, y DHEA en parámetros de peso y grasa corporales ratras ovariectomizadas. Para este propósito, las ratas ovariectomizadas recibieron la administración diaria de EM-652.HC1 (1 mg/kg), y DHEA (50 mg/kg) solos o en combinación, durante 34 semanas. EM-652.HC1 fue administrado oralmente mientras que DHEA fue aplicado tópicamente sobre la piel dorsal. Un grupo de animales fue tratado oralmente con 17 a-etinilest radiol (0.1 mg/kg) y Raloxifeno (EMI1105; 1 mg/kg) para comparación. MATERIALES Y MÉTODOS Se utilizaron ratas de Sprague-Dawley hembras de 10 a 12 semanas de edad (Crl: CD(SD)Br) que pesaban aproximadamente 235-250 g al inicio del tratamiento. Ochenta ratas fueron distribuidas al azar entre 7 grupos de 11 a 12 animales por grupo como sigue: 1) control intacto; 2) control OVX; 3) OVX+EE2 (0.1 mg/kg); 4) OVX+raloxifeno (lmg/kg); 5)0VX+EM-652.HC1 (1 mg/kg); 6) OVX+DEA (80mg/kg); 7)0VX+EM-652.HC1+DEA. El día 1 del estudio, los animales de los grupos apropiados fueron ovariectomizados bilateralmente (OVX) bajo anestesia de isoflurano. EM-652.HC1, raloxifeno y EE2 (Steraloids) fueron administrados una vez al día por alimentación por sonda oral como suspensión en 0.4% de metilcelulosa (0.5 ml/rata) durante 34 semanas mientras DEA fue aplicada tópicamente una vez al día en la piel dorsal como una solución en 50% de etanol, 50% propilenglicol (0.5 ml/rata) durante el mismo período de tiempo. Aproximadamente 24 horas después de la última dosificación, los animales ayunados durante la noche fueron sacrificados por exsanguinación en la aorta abdominal bajo anestesia de isoflurano. Los tejidos adiposos retroperitoneales izquierdo y derecho fueron colectados y pesados.

Medidas de la composición corporal Después de 34 semanas de tratamiento, se les exploró a las ratas individuales bajo anestesia con isoflurano, su esqueleto corporal completo usando absorciometría de rayos x de energía dual (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA) y un software de Regional High Resolution Sean. Fue determinada la composición corporal (incluyendo el porcentaje de grasa) . Resultados Tabla 6 Ejemplo 8A Efecto de EM-652.HC1 sobre el balance energético, y metabolismo de lípidos de lipoproteína en las ratas hembras Zucker obesas y delgadas .

URMA-r-61-99 El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de EM-652.HC1 sobre el balance energético y el metabolismo de lípidos de lipoproteína en ratas hembras Zucker obesas y delgadas. Para este propósito, EM-652.HC1 (2.5 mg/kg) fue administrado oralmente (por sonda) una vez al día durante 14 días a ratas hembra Zucker obesas y delgadas intactas . ANIMAL DE PRUEBA: Especie: Ra t tus norvegi cus Cepa: Zucker Sexo: hembra Peso Corporal: Al inicio de la dosificación, los pesos corporales eran de aproximadamente: Ratas delgadas: 175 ± 17g; ratas obesas: 235 ± 15g.

Aclimatación : Las ratas se aclimataron a las condiciones de laboratorio por lo menos 5 días antes del inicio del experimento.

Alojamiento y mantenimiento: a ) Aloj amiento : Las ratas fueron contenidas individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional durante la aclimatación y períodos de estudio. b) Temperatura : La temperatura en el cuarto de la rata fue registrada una vez al día. La temperatura designada fue 22 ± 3°C. c ) Ciclo de Luz-Oscuridad: El fotoperíodo fue de 10 horas de luz y 14 horas de oscuridad. Las luces fueron encendidas a las 07:00, y apagadas a las 17:00. d) Dieta: Durante el período de aclimatación, las ratas recibieron una dieta comercial de roedor (Purina # 5075) y agua corriente a d libi tum .

Durante el período de estudio, las ratas recibieron la siguiente dieta (dieta#3) compuesta de (g/lOOg): Almidón, 31.2; dextrosa, 31.2; caseína, 20.0; aceite de maíz, 6.4; dl-metionina, 0.3; vitamina mixta, 1.0; AIN-76 mineral mixta, 4.9; fibra, 5.0.

Las ratas fueron ayunadas (con acceso únicamente al agua) alrededor de las 07:00 hr de la mañana de su día de necropsia.

Aleatori zación Un día anterior al primer día de dosificación, las fueron pesadas y asignadas a cada grupo para tener grupos con pesos corporales medios equivalentes .

MÉTODO Y DISEÑO EXPERIMENTAL: Grupos de Prueba: Dieciséis ratas hembras obesas y dieciséis delgadas intactas fueron asignadas a 4 grupos de 8 ratas para conducir el estudio detallado más adelante .

Número de Estado de la Dosis Tratamiento Ratas /grupo Rata (mg/kg) 8 Delgada EM-652.HCI 2.5 8 Obesa EM-652. HCl 2.5 8 Delgada CONTROL 0 8 Obesa CONTROL 0 Dosificación : La administración del compuesto de prueba o vehículo se inició el Día 1 del estudio. El compuesto de prueba EM-652.HC1 fue dado como suspensión en 0.4% de metilcelulosa a través de alimentación por sonda oral (0.5 ml/sonda/rata) una vez al día durante 14 días. Las ratas de grupos de control recibieron sólo el vehículo (0.5 ml/sonda/rata) durante el mismo período.

Pesos Corporales Durante el período de aclimatación, los animales fueron pesados al azar una vez al día antes del inicio de la dosificación. Luego, las ratas fueron pesadas en el primer día de dosificación y después cada 2 días así como el día de la necropsia. Los pesos corporales fueron registrados con una precisión de Ig.

Consumo de Alimentos El consumo de alimentos fue evaluado cada 2 días durante el período de estudio. Método de Sacrificio Después de un período de ayuno de aproximadamente 6 horas, a los animales se les práctico la necropsia (aproximadamente 30 horas después de la última dosificación) . Fueron anestesiados con quetamina-xilazina y extraída la sangre por medio de punción cardiaca.

Muestras de Sangre Lípidos sanguíneos (colesterol total (CHOL) y triglicéridos (TG) ) y glucosa fueron medidos en muestras de plasma congeladas utilizando un Analizador de Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems) . Hormonas y sustratos de circulación (Leptina, Insulina) fueron medidos en muestras de plasma congeladas con los siguientes kits : Leptina: kit Lineo RÍA Insulina: kit Lineo RÍA Órganos y tejidos colectados Una parte de hígado (~lg) fue congelada en nitrógeno líquido para la determinación adicional del contenido de TG y CHOL (método de Folch) . El tejido adiposo retroperitoneal y el soleus (músculo) fueron colectados y congelados en nitrógeno líquido para la determinación adicional de la actividad de la lipasa de lipoproteína (LPL) . La próstata ventral, testículos y vesícula seminal fueron colectados. Fueron pesados la próstata, testículos (izquierdo y derecho) y la vesícula seminal derecha (libre de fluidos). Se eliminaron las vesículas seminales derechas.

Tabla 7 Ejemplo 8B Efecto de EM-652.HC1 sobre el balance energético, y metabolismo de lípidos de lipoproteína en ratas hembras Zucker obesas y delgadas .

URMA-r-47-99 El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de EM-652.HC1 sobre el balance energético y el metabolismo de lípidos de lipoproteína en ratas hembras Zucker obesas y delgadas. Para este propósito, EM-652.HC1 (2.5 mg/kg) fue administrado oralmente (por sonda) una vez al día durante 14 días a ratas hembra Zucker obesas y delgadas intactas .

ANIMAL DE PRUEBA: Especie: Ra t tus norvegi cus Cepa: Zucker Sexo: hembra Peso Corporal: Al inicio de la dosificación, los pesos corporales eran de aproximadamente: Ratas delgadas: 114 ± 2g; ratas obesas: 182 ± 6g .

Aclimatación : Las ratas se aclimataron a las condiciones de laboratorio por lo menos 5 días antes del inicio del experimento. Alojamiento y mantenimiento: a ) Alojamiento : Las ratas fueron contenidas individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional durante la aclimatación y períodos de estudio. b ) Temperatura : La temperatura en el cuarto de la rata fue registrada una vez al día. La temperatura designada fue 22 ± 3°C. c) Ciclo de Luz-Oscuridad: El fotoperíodo fue de 10 horas de luz y 14 horas de oscuridad. Las luces fueron encendidas a las 07:00, y apagadas a las 17:00. d) Dieta : Durante el período de aclimatación, las ratas recibieron una dieta comercial de roedor (Purina # 5075) y agua corriente ad l ibi tum .

Durante el período de estudio, las ratas recibieron la siguiente dieta (dieta#3) compuesta de (g/lOOg) : Almidón, 31.2; dextrosa, 31.2; caseína, 20.0; aceite de maíz, 6.4; dl-metionina, 0.3; vitamina mixta, 1.0; AIN-76 mineral mixta, 4.9; fibra, 5.0.

Las ratas fueron ayunadas (con acceso únicamente al agua) alrededor de las 07:00 hr de la mañana de su día de necropsia.

Aleatorización : Dos días anteriores al primer día de dosificación, las fueron pesadas y asignadas a cada grupo para tener grupos con pesos corporales medios equivalentes .

MÉTODO Y DISEÑO EXPERIMENTAL: Grupos de Prueba: Dieciséis ratas hembras obesas y dieciséis delgadas intactas fueron asignadas a 4 grupos de 8 ratas para conducir el estudio detallado más adelante .

Número de Estado de la Tratamiento Dosis (mg/kg) Ratas /grupo Rata 8 Delgada EM-652.HCI 2.5 O u Obesa EM-652.HCI 2.5 8 Delgada CONTROL 0 8 Obesa CONTROL 0 Dosificación : La administración del compuesto de prueba o vehículo se inició el Día 1 del estudio. El compuesto de prueba EM-652.HC1 fue dado como suspensión en 0.4% de metilcelulosa a través de alimentación por sonda oral (0.5 ml/sonda/rata) una vez al día durante 14 días. Las ratas de grupos de control recibieron sólo el vehículo (0.5 ml/sonda/rata) durante el mismo período.

Pesos Corporales Durante el período de aclimatación, los animales fueron pesados al azar una vez al día antes del inicio de la dosificación. Luego, las ratas fueron pesadas en el primer día del estudio y cada 2 días durante el perí.odo de estudio así como también el día de la necropsia. Los pesos corporales fueron registrados con una precisión de lg. Consumo de Alimentos El consumo de alimentos fue evaluado cada 2 días durante el período de estudio.

Método de Sacrificio Seguido de un período de ayuno de aproximadamente 6 horas, a los animales se les practicó la necroscopia (aproximadamente 30 horas después de la última dosis) . Fueron anestesiadas con cetamina-xilazina y extraída la sangre por punción cardiaca.

Muestras sanguíneas Lípidos sanguíneos (Total de colesterol (CHOL) y triglicéridos (TG) ) y glucosa fueron medidos en muestras de suero congeladas utilizando el analizador Bochringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems) . Las hormonas y sustratos de circulación (Leptina, Insulina, cort icosterona ) se midieron en muestras de plasma congeladas con los siguentes kits: Leptina: kit Lincon RÍA Insulina: kit Lineo RÍA Órganos y Tejidos Colectados El hígado se colectó y pesó. Una parte de hígado (~1 g) se congeló en nitrógeno líquido para determinación adicional del contenido de TG y CHOL (método de Folch) . Los sobrenadantes se colectaron, se pesaron (derecho e izquierdo juntos) y se descargaron. Los úteros y ovarios se colectaron, pesaron y almacenaron en 10% de formalina amortiguada para el examen histológico adicional. Los ovarios izquierdo y derecho (sin oviducto) se pesaron juntos. Tabla 8 Ejemplo 9 Efecto de EM-652.HC1, y DHEA, administrados solos o en combinación, en un balance energético y metabolismo de lípido-lipoproteína en ratas.

URMA-r-03-99 El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de EM-652.HC1 y DHEA, administrados solos o en combinación, en un balance energético y metabolismo de lípido-lipoproteína en ratas. El efecto del tratamiento fue evaluado en varios parámetros siguientes al día 20 de tratamiento con EM-652.HC1 (0.5 mg/rata, -2.5 mg/kg, por os) y DHEA (20 mg/rata, ~100 mg/kg, aplicación tópica), administrados solos o en combinación, para ratas hembra intactas (INT) y ovariectomizadas (OVX) que reciben una diete alta en grasa-alta en sucrosa. Por comparación, un grupo control intacto y ovariectomizado recibe la dieta enriquecida mientras otros animales control (intacto y OVX) recibirán la dieta comercial para roedor.

ANIMAL DE PRUEBA: Especies : Ra tus norvegi cus Sepa : Sprague-Dawley Rat (Crl:CD® (SD) BR VAF/PlusMR) Sexo : hembra Peso corporal : al inicio de ia dosificación, ios pesos corporales fuero de aproximadamente 190-220 Aclimatación Las ratas se aclimataron a las condiciones del laboratorio al menos cinco días anteriores al inicio del experimento.

Alojamiento y mantenimiento a ) Alojamiento : Las ratas se alojaron individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional durante la aclimatación y períodos de estudio. b ) Temperatura : La temperatura en el . cuarto de la rata se registró una vez al día. La temperatura marcada fue de 22±3°C. c) Ciclo de luz-oscuridad: Ei fotoperíodo fue de 10 horas de luz y 14 horas de oscuridad. La luz fue prendida a las 06:00 y se apagó a las 16:00 h. d! Dieta Durante el período de aclimatación, las ratas recibieron una dieta comercial de roedor (Purina, # 5075) y agua corriente ad libi tum . Durante el período de estudio, los grupos 1 & 2 continuaron recibiendo la dieta comercial mientras los grupos grupo 3 a 10 recibieron una dieta alta en grasa-alta en sucrosa compuesta de (g/100 g) : Sucrosa, 45; aceite de maíz, 10; Manteca, 10; Caseína, 22.5; dl-metionina, 0.3; Vitamina mixta, 1.2; mineral mixto AIN-5.5; fibra, 5.5. Las ratas ayunaron (únicamente con acceso a agua) alrededor de las 22:00 h la noche anterior a su necroscopia.

Aleatorización: Algunos días después de su llegada, las ratas se pesaron y asignaron a cada grupo para tener grupos con pesos corporales medios equivalentes .

Mti'rOuOS Y Dl StiNO grupos ae prueoa: Ochenta ratas se asignaron a 10 grupos de 8 ratas para conducir ei estudio representado enseguida : Alimento comercial ae roeaor uieta alta en grasa-alta en sucrosa Preparación del animal: En el día 0 del estudio, las ratas de los grupos apropiados se ovariectomizaron (por incisión del flanco bilateral) bajo anestesia de . isoflurano . Las ratas intactas se operaron de manera simulada.

Dosificación : i La administración de los compuestos de prueba o vehículos inició el día siguiente de la ovariectomía (Día 1) . El compuesto de prueba EM- 652. HCl se proporcionó como una suspensión en 0.4% de metiicelulosa por sonda oral (0.5 ml/sonda/rata) una vez ai día durante 20 días mientras el DHEA se aplica tópicamente en ia piel dorsal (0.5 ml/apiicación/rata) una vez al día durante ei mismo período. Las ratas de ios grupos control recibieron sólo ei vehículo (per os y tópicamente) . Las ratas fueron sacrificadas en días 21 del estudio aproximadamente 24 horas después de la última dosis : ÍU Pesos corporales Las ratas fueron pesadas ei día 0 (cirugía), cada 2 días durante el periodo ?e estudio y ei día de ia necroscopia. Los pesos corporales se registraron con una precisión de 1.0 g- Consumo de alimentos El consumo de alimento deberá evaluarse 20 cada 2 días durante el perío>do de estudio.

Método de Sacrificio El día 21 del estudio, toda la noche de ayuno las ratas fueron sacrificadas aproximadamente 5 24 horas después de la última dosis. Fueron anestesiadas con cetamina-xilazina y ia sangre extraíaa por punción cardiaca.

Muestras sanguíneas Los lípidos sanguíneos (Total de colesterol y triglicéridos) fueron medidos en muestras de suero congeladas utilizando el analizador Bochringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 (Boehringer Mannheim Diagnostic laboratory Systems) . Las hormonas y sustratos de circulación (Insulina, Leptina, glucosa) se midieron en muestras de suero como sigue: Insulina: kit Lineo RÍA Glucosa: Analizador de glucosa automático Beckmann Leptina: kit Lincon RÍA Órganos y Tejidos Colectados Los siguientes tejidos se colectaron y pesaron para todos los animales: Músculo (soleus y VLM) , grasa (retroperitoneal y inguinal), corazón, tejido adiposo café. El cerebro también fue colectado.

Una parte de hígaao se congeló durante ia úitima determinación del contenido de TG y CHOL (método de Foich) y otros tejidos se procesaron para ia determinación de ia actividad de LPL. Los úteros (y ovarios en grupos intactos) fueron removidos, retirados de ia grasa restante, pesados y almacenados en 10% de formalina amortiguada.

Resultados Tabla 9 Taoxa y icontinuacionj Músculo Ssleus 'v??t s L¿. ?ralÍB Hígado íriglicépdos Grupo P Actividad de Actividad de Peso la Lipasa de Peso la Lipasa de Colesterol Lipoprot lna Lipopro teína Dieta Tratamiento (g) µU/g (g) µU/g rp ol/L mmol/L Ejemplo 10 Erecto de EM-Ó52.HC1, TSE 424, Lasofoxireno , L? 353381 y Raioxifeno en el balance energético y ei metabolismo de iipido-iipoproteina en ratas hembra ovariectomizadas.

URMA-r-45-00 El objetivo de este estudio fue determinar el efecto del balance energético y el metabolismo de lipido-lipoproteina en ratas siguiendo el tratamiento con diferentes moduladores receptores de estrógeno selectivos descritos en la literatura y para comparar los resultados obtenidos con los de EM-652.HC1. Para este propósito, los compuestos probados se administraron por sonda oral durante 20 dias (0.5 mg/rata por cada compuesto; 0.5 ml/rata) en 0.4% de metilcelulosa a ratas hembras ovariectomizadas. Se utilizaron como referencia ratas de control intactas, de control ovariectomizadas (OVX) y OVX tratadas con 17ß-estradiol ( E2 ) .

ANIMAL DE PRUEBA: Especies : Ra t us norvegi cus Sepa : Sprague-Dawley Rat ( Cri : CDl!il ( SD ) BR — / . MU . VAt / flUS""J Sexo : hembra Peso corporal : ai inicio de la dosificación, ios pesos corporales fueron de aproximadamente 200-225 g.

Alojamiento y mantenimiento a ) Alojamiento : Las ratas se alojaron individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional durante la aclimatación y los periodos de estudio. b ) Temperatura : Las condiciones ambientales (temperatura, humedad) en el cuarto de rata se registraron continuamente utilizando un sistema de computadora automatizado. Las condiciones designadas fueron de 22±3°C y 50±20 con relación a la humedad. c) Ciclo luz-oscuridad: El fotoperiodo fue de 10 horas de luz y 14 horas de oscuridad. La luz se encendió a las 07:15 y se apagó a las 17:15 h. d) Dieta : Durante el periodo de aclimatación, las ratas recibieron una dieta certificada de roedor (Dieta de Laboratorio # 5002, granos) y agua corriente ad l ibi tum mientras dure el periodo de estudio, recibieron una dieta alta en carbohidratos (dieta # 3) y agua corriente ad libi tum . La dieta se compuso de (g/100 g) : Almidón de maiz, 31.2; Dextrosa, 31.2; Caseína, 20.0; aceite de maiz, 6.4; dl-met ionina, 0.3; Vitamina mixta, 1.0; Minerales mixtos AIN-76, 4.9; fibras, 5.0. Las ratas se ayunaron (únicamente con acceso a agua) alrededor de las 07:00 h de la mañana de su necroscopia.

Aleatorización : Las ratas se asignaron a cada grupo para tener los pesos corporales medios equivalentes.

MÉTODOS Y DISEÑO EXPERIMENTAL Grupos de prueba: Setenta y siete ratas se asignaron a 8 grupos de 9-10 ratas para conducir el estudio representado enseguida: Preparación del animal: En el dia 0 del estudio, las ratas del grupo 2 a 8 se ovariectomizaron (por incisión del flanco bilateral) bajo anestesia de isoflurano. Las ratas del grupo 1 se operaron de manera simulada. Pesos corporales Las ratas pesadas el dia 0 (cirugía) y después, cada 2 dias durante el periodo de estudio asi como en el dia de la necroscopia.

Consumo de alimento El consumo de alimentos se evaluó cada 2 dias .

Composición corporal (porcentaje de grasa) Para aeterminar ei efecto de tratamientos en porcentaje ae grasa, ia composición corporal es medida ei dia 17 del estudio utilizando absorciometría de rayos x de energía dual (DEXA; QDR 4500A, Hoiogic, aitham, MA) .

Método de Sacrificio El día 21 del estudio, aproximadamente 24 horas después de la última dosis y 6 horas de ayuno, los animales bajo anestesia de cetamina-xilazina se sacrificaron por exsanginación en la aorta abdominal.

Muestras sanguíneas Los lípidos sanguíneos (total de colesterol y Triglicéridos) y glucosa fueron medidos en muestras de suero congeladas utilizando el analizador Bochringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 (Boehringer Mannheim Diagnostic laboratory Systems) . Las hormonas y sustratos de circulación (Insulina y Leptina) se midieron en muestras de suero utilizando los siguientes kits: Insulina: kit Lineo RÍA Leptina: kit Lincon RÍA órganos y Tejidos Colectados Los siguientes tejidos fueron colectados y pesados : Músculo ( sol eus derecho y VLM izquierdo , grasa ( retroperitoneai derecho e inguinal derecho), tejido adiposo café, corazón, hígado, útero y vagina . Un fragmento de hígado (~ 0.5 g) se congeló en nitrógeno líquido para una última determinación del contenido de TG y CHOL (método de Folch) . Un fragmento de ~0.1 g de todos los tejidos (excepto útero y vagina) se congeló en nitrógeno líquido y se mantuvo a -80"C durante ia última determinación de la actividad de lipoproteína-lipasa (LPL) . El útero y vagina se mantuvieron en 10% de formalina amortiguada para el examen adicional histológico. Los cadáveres de los animales se colocaron en una caja metálica y se mantuvieron a -20°C hasta que se midió ei balance energético.

Resultados Tabla 10 Músculo Soleus Músculo Vastus Zate?alis Actividad de Actividad de la Tratamiento Peso la Lipasa de Peso Lipasa de Lipoproteina Lipoproteina (g) µU/g (g) µU/g 10/ Ejemplo 11 Efecto de compuestos de ia invención así como los compuestos de la técnica anterior en la actividad de fosfatasa alcalina en células Ishikawa adenocarcinomas endoteliales humanas.

MATERIALES Mantenimiento de cultivos celulares de base La linea celular de [shi awa humana derivada de un pozo de adenocarcmoma endome riai diferenciado fue favorable por Eí Dr. Eriio Gurpide, The Mount Smai Medical Center, New York, NY. Las células de Ishikawa se mantuvieron rutinariamente en Eagle' s Mmmum Essentiai Meaium (MEM) que contenía el 5% (vol/vol) ae t BS y suplementado con 100 U/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina, 0.1 mM de solución de Aminoácidos no esenciales. Las células se colocaron en placas en matraces T75 Falcon a una densiaad de 1.5 x 10r: células a 37"C. Experimentos de cultivos celulares Setenta y cuatro horas después del inicio de un experimento, el medio de células de Ishikawa confluente próximo se remplazó por un medio basal libre de estrógeno fresco (EFBM) que contenía una mezcla 1:1 (v:v) de Medio de Ham F-12 libre de fenol rojo y Dulbecco'" s Modificado de Eagie's (DMEH) complementado con 100 U/mi de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina, 2 M de glutamina, y 5% de FBS tratado dos veces con carbón revestido con dextran para eliminar los esteroides endógenos. Las células entonces se cosecharon con 0.1% de pancreatina (Sigma) y 0.25 mM de HEPES, resuspendidas en EFBM y colocadas en placas, en placas de microtitulación de fondo plano de 96 pozos de Faicon a una densidad de 2.2 x 10" células/pozo en un volumen de 100 µl y permitiéndoles adlrierirse a la superficie de las placas durante 24 horas. Por consiguiente el medio se remplazó con EFBM fresco que contenía las concentraciones indicadas de los compuestos en un volumen final de 200 µl . Las células se incubaron durante cinco días, con un cambio de medio después de 48 horas. Ensayo de fosfatasa alcalina Al final del período de incubación, las placas microtituladas se invirtieron y el medio de crecimiento se decantó. Las placas se enfriaron con 200 µl por pozo de PBS (0.15 M de Na l, JO M de fosfato ae sodio, pH de 7.4) . El PBS entonces se eliminó de las placas mientras se retiró cuidadosamente un poco del PBS residual, y el procedimiento de lavado se repitió una vez. La solución salina amortiguada después se decantó, y las placas invertidas se secaron ligeramente sobre un papel toalla. Al reemplazo siguiente de las capas, las placas se colocaron a -80"C durante 15 minutos seguido por derretido a temperatura ambiente durante 10 minutos. Las placas después se colocaron en hielo, y se agregaron 50 µl de una solución enfriada con hielo que contenía 5 mM de p-nitrofenilfosfato, 0.24 mM de MgCl2, y 1 M de dietanolamina (pH de 9.8) . Las placas después se calentaron a temperatura amoiente, y ei color amarillo de la producción de p-nitrofenilo se dejó desarrollar (8 minutos) . Las placas se supervisaron a 405 nm en un lector de placa de ensayo inmunoabsorbente similar a enzima (BIO-RAD, modelo 2550EIA Reader) . uaicuios lias curvas ae respuesta a« a?sis asi cumo ios valores de ICsu se calcularon utilizando una regresión cuaaraaa no uneal reiterativa pesada Tabla 11 NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por estimulación los dé la compuestos fosfatasa probados alcalina por los compuestos % de 1 nM E2 probados estimulación* IC50 (nM) (nb de (nb de experimentos) experimento 1.8810.26 s) 1.5210.22 EM-1538 NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por estimulación los dé la compuestos fosfatasa probados alcalina por los compuestos °/o ae i nfvi E2 prooaaos estimulación* ICa, (nM) experimentos) experimentos) ¿. tlí i. 31 9±6 0 1 72 1 ±7 6 (3) NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por Estimulación los de la compuestos fosfatasa probados alcalina por los compuestos % de 1 nM E2 probados estimulación* IC50 (nM) (pb de (nb de expepmentos) expepmentos) 25 1+1 5 >1000 Idoxifepo EM-1750 (5) (2) GW-5638 EM-1796 7 75?5 5 Sin inhibición (2) NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por los Estimulación compuestos de la probados fosfatasa alcalina por los % de 1 nM E2 compuestos estimulación* probados (nb e IC50 (nM) experimentos) (nb de 23.8+3.1 expepmento s) 291+115 Droloxifen EM-835 (7) (4) K .9 NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por Estimulación los de la compuestos fosfatasa probados alcalina por los compuestos % de 1 pM E2 probados estimulación* ICso (nM) (pb de (nb de expepmentos) expepmentos) 15.5i0.25 1.8710.07 LY 3o33ti1 bM-l bb (5) (2) Lasofoxifepo EM-3114 17.9 4.24 (base libre) (D (D NOMBRE NOMBRE ESTRUCTURA Estimulación Inhibición de DE de fosfatasa 1 nM E2 CÓDIGO alcalina por Estimulación los dé la compuestos fosfatasa probados alcalina por los compuestos % de 1 nM E2 probados estimulación* ICso (nM) (nb de (pb de experimentos) experimentos) 0.6 5.84 i*SE 424 E?V?-3527 ? i ) íl i *% de estimulación de 1 nM E2 M = OD 405 nm compuesto-OD 405 nm basal/OD 405 nm 1 nM E2-OD 405 nm basal Favor de ver también Labrie y colaboradores EM-652 (SCH 57068), una tercer generación de SERM que actúa como antiestrógeno puro en la glándula mamaría y endometrio, J. Steroid Biochem, y Mol. Biol.. 69, 51-84, 1999.

Ejemplo 12 Efecto de EM-652.HC1 y FCE 424 en la proliferación de la línea celular MCF-7 de cáncer de mama humano .

Métodos : Mantenimiento de los cultivos celulares de base Las células MCF-7 cancerosas de mama humanas se obtuvieron de ia American Type Culture Collection #HTB 22 en la etapa 47 y rutinariamente crecieron en un medio F12 de Dulbecco' s Modified Eagle' s-Ham libre de fenol rojo, los suplementos mencionados anteriormente y 5% de FBS. La línea celular de adenocarcinoma de mama humana MCF-7 se derivó de la efusión pleural de una paciente hembra caucásica de solo 69 años. Las células se utilizaron entre las etapas 148 y 165 y se subcultivaron semanalmente.

Estudios de Proliferación Celular Las células en su fase de crecimiento logarítmico tardío son cosechadas con 0.1 % de pancreatina (Sigma) y resuspendidas en el medio apropiado que contiene 50 ng de insulina de bovino/ml y 5% (v/v) de FBS tratadas dos veces con carbón revestido con textran para eliminar los esteroides endógenos. Las células se colocaron en placas, en placas de cultivo de plástico Falcon de 24 pozos (2 cm'/pozo) en la densidad indicada y permitiendo adherirse a ia superficie de ias placas durante 72 horas. Después de esto, eL medio se reemplazó con medio fresco que contenía ias concentraciones indicadas de compuestos diluidos de 1000 :•: soluciones de base en 99% de etanol redestiia o en presencia o ausencia de E2. Las células control recibidas solo en ei vehículo etanóiico (0.1% EtOH, v/v) . Las células se incubaron durante ios intervalos de tiempo especificados con cambios de medio a intervalos de 2 ó 3 días. Ei número de células se determinó por ia medición dei contenido de ADN.

Cálculos y análisis estadísticos Las curvas de respuesta de dosis así como los valores de IC50 se calcularon utilizando una regresión de cuadros menores no lineales reiterativos pesados. Todos los resultados se expresaron como los medios ± SEM. Tabla 12 Inhibición de la Estimulación del „ . . , Estimulación de InM .,-_,-_- „„,___ .,_-, „i-. _. ADN por Compuestos „, J?1 A t Probados % de InM Compuestos Probados E2 Estimulación* , IP„.;0 (.n.M..) EM-652.HCI EM-652. HCl; EM-1538 N.S. 0.796 c í c *3 c o Ejemplo 13 Efecto comparativo en peso uterino, grasa, y iípido de EM-652.HC1, TSE 424 y iasofoxi feno, administrados solos o en combinación con EM-652. HCl, a ratas hembras ovariectomizadas.

URMA-r-44-00 El objetivo de este estudio es para comparar el efecto en una histología uterina y vaginal del siguiente tratamiento con EM-652.HC1, TSE 424 y lasofoxifeno, administrado solo o en combinación con EM-652.HCI, a ratas hembras ovariectomizadas. Para estos propósitos, cada compuesto fue administrado oralmente durante 20 días a ratas hembras ovariectomizadas y al final del periodo de tratamiento, ei útero y grasa se colectaron y pesaron.

ESPECIFICACIONES DEL ANIMAL DE PRUEBA: Especie: Reztus norvegi cus Cepa : Sprague-Danwley de Rata (Crl:cD (Sd) BR VAF/PlusHrJ Sexo: Hembra Peso corporal; Ai inico de ia dosificación, los pesos corporales fueron de aproximadamente 225-250 g- Alojamiento y mantenimiento Alojamiento : Las ratas se alojaron individualmente en jaulas de acero inoxidable de diseño convencional durante los periodos de aclimatación y estudio. b ) Temperatura y humedad: Las condiciones ambientales (temperatura, humedad) en el sitio de la rata son registradas continuamente utilizando un sistema de computadora automatizado. Las condiciones marcas son de 22 ± 3UC y 50 ± 20% de humedad relativa. c ) Ciclo luz/oscuridad: El fortoperíodo fue de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Estos parámetros se registraron continuamente utilizando un sistema de computadora automatizado validado. La luz fue encendida de las 07:15 a 19:15. d) Dieta: Alimentación del roedor Certificada (dieta de laboratorio # 5002, granos) y en agua corriente se proporcionó a d i ibi cum . Alea ori zación : i rata se asigno ai :ar a cada grupo ai momento ae ía ovariectomia .

Grupos de prueba: Setenta ratas de separaron en 7 grupos de 9 a 11 animales para conducir el estudio representado enseguida: Preparación del Animal: Los animales del grupo 2 a 9 se ovariectomi zaron bajo anestesia de isoflurano inducida el día 1 del estudio.

Dosificación: Ei vehículo o compuestos de prueba se proporcionan corno suspensión al 0.4% de metiiceluiosa a través de alimentación por sonda oral (0.5 mi/alimentación por sonda/rata) del día 2 ai día 21 del estudio.

Pesos corporales Las ratas se pesaron el día 1 del estudio y en la necroscopia (SD 22) .

Método de sacrificio Aproximadamente 24 horas después de la última dosificación, toda la noche ayunaron las ratas bajo anestesia de isoflurano inducido, sacrificadas por exsanguinación en la aorta abdominal . Órganos y Tejidos Finos Colectados El tejido adiposo uterino y retroperitoneal se retiraron y pesaron.

Tabla 13 EJEMPLOS DE COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Como se indica más adelante, a modo de ejemplo y no limitante, son varias las composiciones farmacéuticas que utilizan el EM-800 o EM-2-HC1 de SERM activo preferido solo o en combinación con uno de los DHEAs precursores de esteroide sexuales activos preferidos, 3-acetato de androst-5-ene-3b, 17b-diol o dihemisuccinato de androst-5-ene-3b, 17b-diol . Otros compuestos de la invención o combinación de los mismos, pueden utilizarse en lugar de (o en adición a) EM-800 o EM-852.HC1, DHEA, 3-acetato de androst-5-ene- 3b, 17b-diol o dihemisuccinato de androst-5-ene- 3b,17b-diol. La concentración del ingrediente activo puede variarse sobre un amplio rango como se discutió en ia presente. Otras cantidades y tipos de ingredientes que pueden incluirse son bien conocidos en ia técnica. tijempio . Los SERMs preferidos de ia invención se adrninistron oralmen e Table as 1U lD bjempio b Capsulas u 25 Composición farmacéutica para terapias de combinación Ejemplo C Tableta Ejemplo D Cápsula de gelatina EJEMPLOS DE KITS Corno se indica más adelante, a modo cié ejemplo y no de limitación, varios kits son ios que utilizan EM-600 o EM- 652. HCl de SERM activo preferido y DHEA precursor de esteroides sexuales preferido, 3-acetato de androst-5-ene-3b, 17b-diol o dihemisuccinate de androst-5-ene-3b, 17b-dioi . Otros compuestos de ia invención o combinación de ios mismos, se puede utilizar en lugar de (o en adición a) EM-800 o ?M-652.HC1, DHEA, 3-acetato de androst-5-ene-3b, I7'o-dioi o dihemisuccinato de androst-5-ene-3b, I7b-dioI . La concentración dei ingrediente í s ) activo puede variarse sobre un amplio rango como se discutió en ia presente. Cantidades y tipos de otros ingredientes que pueden incluirse son bien conocidos en ia técnica.

Ejemplo A El SERM es administrado oralmente mientras el precursor de esteroides sexuales es administrado precuténeamente .

Composición SI^ para administración oral (cápsulas) Composición del precursor de esteroides sexuales para administración tópica (gel) Ejemplo B El SERM y el precursor de esteroides sexuaesl son administrados oralmente Composición de Antiestrógeno no es eroidai para ia administración oral caps uias ) Composición del precursor de esteroides sexuales para la administración oral (Cápsula de gelatina) Otros SERMs pueden sustituirse por EM-800 o EM-652.HC1 en las formulaciones anteriores, así como otros inhibidores de esteroides sexuales pueden sustituirse por DHEA, 3-acetato de androst-5-ene-3b, 17b-diol o dihemisuccinato de androst-5-ene-3b, 17b-diol . Más de un SERM o más de un precursor puede incluirse según el caso donde se prefiere más ei porcentaje de peso combinado que ei porcentaje de peso para un soio precursor o un soio SERM dado en los ejemplos anteriores. La invención se ha descrito en términos de ias modalidades preferidas y ejemplos, y por consiguiente no se limitan. Los expertos en ia técnica reconocerán fácilmente la aplicabilidad más amplia y ei alcance de la invención que es limitada solamente por las reivindicaciones de ia patente adj untas .

Claims (1)

1. w?vauAU DE LA INVJÜI U W Habiendo Descrito ia presente invención, se considera como novedad y por io tanto, se reclama como propiedad io contenido en ias siguientes REIVINDICACIONES i. ün método para ei tratamiento, o reducción dei desarrollo de ia obesidad que comprende administrar a un sujeto en necesidad del tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sai farmacéuticamente aceptable del mismo ae xa siguiente fórmula general: caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados de grupo que consiste de Hidrógeno, hidroxilo, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, aiquiniio de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible i n vi vo a hidroxi io; donde G es -H o -CH3; y donde Rj es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidiniio, piperidino, morfolino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de i a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado; y aiquiniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado) ; donde R o R2 no son un grupo pivaioiioxi. 2. El método de conformidad con ia reivindicación 1, caracterizado porque ei compuesto es ópticamente activo, debido a que tiene más dei 50% de un compuesto de estereoisómero que tiene una configuración S absoluta en ei carbono 2. 3. Ei método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque ei corapuesto o sai carecen sustanciairnente dei enantiómero (2R) . 4. El método de conformidad con ia reivindicación I, caracterizado porque el compuesto es una sai de un ácido seleccionado del grupo que consiste de ácido acético, ácido adípico, ácido bencensuifónico, ácido benzoico, ácido canforosuifónico , ácido cítrico, ácido furnárico, ácido yodhídrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido hidrociorot iazida, ácido idroxi-naftóico , ácido láctico, ácido rnaieico, ácido metansulfónico, ácido rnetiisuif rico, ácido 1 , 5-naftaiendisuifónico, ácido nítrico, ácido palmítico, ácido piváiico, ácido fosfórico, ácido propiónico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, acido tereftáiico, ácido p- 1U toiuensulfónico, y ácido valérico. 5. El método de conformidad con la reivindicación i, caracterizado porque ei ácido es ácido clorhídrico. 6. Ei método de conformidad con ia ID reivindicación 3, caracterizado porque comprende administrar a un paciente en necesidad dei tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de sai clorhídrica de la siguiente estructura: ¿ A~ Ü.M- b 5 ¿ . Ht l . un metoao para ei ratamiento, reauccion aei aesarrono ae ooesiaaa caracterizado porque comprende administrar a un paciente en necesidad del tratamiento o reducción dei desarrollo, una cantidad terapéuticamente efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo, y una cantidad terapéu icamente efectiva de estrógeno o un esteroide seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiand oesteron , sulfato íu de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, 17b- dioi, y compuestos convertidos in vi vo a cualquiera de ios esteroides; en donde ei modulador receptor de estrógeno selectivo no posee en su estructura química un grupo pivaioioxi. í o . Ei método de conformidad con ia reivindicación 7, en donde el modulador receptor de estrógeno selectivo tiene ia siguiente fórmula general : caracterizado porque R y ¿ son independientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxiio, -OM (M es seleccionado dei grupo que consiste de alquilo de i a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, aiquiniio de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible in vi vo a hidroxiio; donde G es -H o -CHJ ; y doride R3 es una especie seleccionada dei grupo que consiste de pirroiidiniio, piperidino, orf?iino, y NRaRb (Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de i a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, y alquiniio de 3 a ó átomos de carbono lineal o ramificado) ; donde Ri o R2 no son un grupo pivaioiioxi. 9. Una composición farmacéutica que comprende un diiuyente o portador farmacéu icamente aceptable, una cantidad terapéuticamente efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo que tiene ia siguiente fórmula general: caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquinilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible in vi vo a hidroxilo; donde G es -H o -CH3; donde R3 es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidiniio, piperidino, morfolino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, y alquiniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado) ; y un estrógeno donde Ri o R2 no son un grupo pivaloiloxi; donde ei compuesto o las sales sustancialmente carecen dei enantiómero (2Rj . 10. Una composición farmacéutica que comprende un diiuyente o portador excipiente farmacéuticamente aceptable, una cantidad terapéuticamen e efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo seleccionado dei grupo que consi s te de : EM- 652 . HCi ID y un estrogeno. ii. ün método para reducir ia grasa abdominal o reducir ia acumulación de ia grasa abdominal que comprende administrar a un sujeto en u necesidad dei tratamiento o reducción una cantidad terapéu icamente efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo o sai farmacéu icamente aceptable dei mismo, que tiene la siguiente fórmula general : ZD caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados dei grupo que consiste de hidrógeno, hidroxiio, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquinilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible i n vi vo a hidroxilo; donde G es -H o -CH3; y donde R3 es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirrolidinilo, piperidino, morfoiino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, alqueniio de 3 a 6 átomos ae carbono lineal o ramificado, y alqumilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado); donde Rx o R2 no son un grupo pivaloiloxi. 12. Ei método de conformidad con ia reivindicación 11, caracterizado porque ei modulador receptor de estrógeno selectivo es ópticamente activo con más dei 50-s de un compuesto de estereoisómero que tiene una configuración S absoluta en ei carbono 2. 13. Ei método de conformidad con ia reivindicación ii, caracterizado porque ei compuesto o sai modulador receptor de estrógeno selectivo carecen sustancialmente dei enantiómero (2R) . 14. El método de conformidad con ia reivindicación ii, caracterizado porque ei compuesto es una sai de un ácido seleccionado dei grupo que consiste de ácido acético, ácido adípico, ácido bencensulfónico, ácido benzoico, ácido canfo osuifónico , ácido cítrico, ácido fumárico, ácido yodhídrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido hidroclorotiazida, ácido hidroxi-naftóico , ácido láctico, ácido maléico, ácido metansuifónico, ácido metiisuifúrico, ácido i , 5-naftaiendisuifónico, ácido nítrico, ácido palmítico, ácido piváiico, ácido fosfórico, ácido propiónico, ácido succinico, ácido sulfúrico, ácido tart ico. dClü? ter ltanc?, aC -?.ao p-toiuensuironico, y aciao vaiepco. 15. Ei método de conformidad con ia reivindicación ii, caracterizado porque ei ácido es ácido clorhídrico. 16. El método de conformidad con ia reivinaicacion ?o, caractep zaao porque comprenae aaministrar un paciente una cant íaaa terapéuticamente electiva ae un compuesto ae sai clorhídrica de ia siguiente estructura: EM-652.HCl . 17. Un método para reducir la grasa abdominal o reducir el desarrollo de la acumulación de grasa abdominal que comprende administrar a un paciente en necesidad del tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquier modulador receptor de estrógeno selectivo, que tiene la siguiente fórmula general: caracterizado porque Ri y R2 son inaependientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxiio, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquinilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible i n vi vo a hidroxilo; donde G es -H o -CH3; y donde R es una especie seleccionada del grupo que consiste de pirroiidinilo, piperidino, morfolino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de caroono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, y alquinilo de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado); donde K o 2 no son un grupo pivaioiioxi; y ei estrogeno o una can ?aaa terapéuticamente erectiva ae un esteroiae seieccionaao ae grupo que consis te ae aesniaroepiandroes erona, suixato ae aesniaroep anaroesterona , y anaros t- -ene- o, x/o-dioi, y compuestos convertidos in vi vo a cualquiera de ios precursores. 18. Ei método de conformidad con ia reivindicación 3, caracterizado porque ei modulador receptor de estrógeno selectivo es seleccionado dei grupo que consiste de: EM- 017 32 ; EM- 01903-C ; 19. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el modulador receptor de estrógeno selectivo es seleccionado del grupo que consiste de: EM-01872-B; EM-01900-B; Lj^ uia aii i — L QU <_ c J_ o ¿-/ c; «_ < i un modulador receptor de estrogeno sexectiv? oe. grupo que consiste de EM-01732; EM-01872-B; EM-01900-B; 0 S ?-ui ^UJ-L; y un estrogeno seieccionaao aei grupo que consiste de estradioi y prernarin o un precursor de esteroide sexual seleccionado dei grupo que consiste de deshidroepiand oesterona, sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-5b, 17b-dioi y compuestos convertidos in vi vo en cualquiera de ellos . 21. Un método para tratar o reducir ei riesgo dei d sarrollo de resistencia a ia insulina que comprende administrar a un sujeto en necesidad del tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de un modulador receptor de estrógeno selectivo, que tiene ia siguiente fórmuia general: caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 4 átomos de caroono rineai o ramificado, aiquiniio de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado) y un radical convertible i n vivo a hidroxiio; donde G es -CH3; y donde R3 es una especie seleccionada dei grupo que consiste de pirroiiainiio, piperidino, morfoi ino, y NRaRb (Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de I a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, y aiquiniio de 3 a ó átomos de carbono lineal o ramificado) . 22. Ei método de conformidad con ia reivindicación 2í, caracterizado porque adicionaimente comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un estrógeno seleccionado dei grupo que consiste de estra ioi y pre arin o un precursor de esteroide sexual seleccionado dei grupo que consiste de deshidroepiandroesterona, sulfato de deshidroepiandroe=terona , andros -5-ene-3b, 17b-dioi y compuestos convertidos i n vi vo en cualquiera de ei ios . Z 7 n,l me oao ae conrormiaaa con a reivindicación ¿i, caractepzaao porque ex recepto: de estrógeno es hM-üo¿.Ht? 24. Un método para reducir el nivel de triglicérido sanguíneo en un paciente en necesidaa de la reducción de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sal farmacéu icamente aceptable de ia misma de la siguiente fórmula general : caracterizado porque Ri y R2 son independientemente seleccionados de grupo que consiste de hidrógeno, hidroxilo, -OM (M es seleccionado del grupo que consiste ae alquilo de 1 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, alquenilo de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificado, aiquiniio de 3 a 4 átomos de carbono lineal o ramificaao) y un radical convertible i n vi vo a hidroxiio; donde G es -H o -CHj; y donde R3 es una especie seleccionada dei grupo que consiste de pirroiidiniio, piperidino, morfoiino, y NRaRb ( Ra y Rb son independientemente hidrógeno, alquilo de i a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, aiqueniio de 3 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado, y aiquiniio de 3 a ó átomos de carbono lineal o ramificado) ; donde Rx y R2 no son un grupo pivaloiioxi . 25. ?i método de conformidad con ia reivindicación 24, caracterizado porque ei corapuesto es ó?t icamente activo debido a que tiene más dei 50% de un compuesto estereoisómero que tiene una configuración 5 absoluta en ei carbono 2. 26. Ei método de conformidad con ia reivindicación 25, caracterizado porque ei compuesto o sai sustanciaimente carece dei enantiomero (2R) . 27. ?i método de confo idad con ia reivindicación 24, caracterizado porque ei compuesto es una sai de un ácido seleccionado dei grupo que consiste de ácido acético, ácido adípico, cido bencensulfónico, ácido benzoico, ácido canforosuifónico, ácido cítrico, ácido furaárico, ácido yodhídrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido hidroclorotiazida, ácido hidroxi-naf óico , ácido láctico, ácido maiéico, ácido metansuifónico, ácido raetiisuifúrico, ácido I , 5-naftaiendisuifónico, ácido nítrico, ácido paimítico, ácido piváiico, ácido fosfórico, ácido 1U propiónico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido tereftáiico, ácido p- toiuensuifónico, y ácido vaiérico. o . ,? rnetoao ae con r orraiaaa con ía reivinaicacion 24, caracterizado porque ei aciao es lD aciao ciorniarico ¿ y metoao ae con x urraiaaa con xa reivinaicacion ¿o, caracterizado porque lomprenae aarninistrar un paciente en necesiuaa aei tratamiento o reauccion una can íaaa 2u terapéu icamente efectiva de un compuesto de sai clorhídrica de ia siguiente estructura: 30. ün raétodo para el tratamiento, o reducción dei desarrollo de ia obesidad, caracterizado porque comprende administrar a un paciente en necesidad dei tratamiento o reducción una cantidad terapéuticamente efectiva de un modulador xeceptor de estrógeno selectivo, y una terapéuticamente efectiva de un esteroide seleccionado del grupo que consiste de deshidroepiandroesterona , sulfato de deshidroepiandroesterona, androst-5-ene-3b, l 'i o' -dioi, estrógeno y compuestos convertidos in vi vo en cualquiera de ios esteroides. 31. Un compuesto ia siguiente estructura molecular : ^ a i. cx 4- ,-. ~ -. --. A . . 4- . -^ -. , ^, 4- , . . , ^ ,-. ,-, 4- -I -. , ,-j . . trr.? ¿ e u r i cip c: u « i- A l _ = c: . c *_. i — i a >_? '_/ ^- . i i ^ ???