NO329614B1 - Anvendelse av en selektiv ostrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for a utvikle insulinresistens - Google Patents

Anvendelse av en selektiv ostrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for a utvikle insulinresistens Download PDF

Info

Publication number
NO329614B1
NO329614B1 NO20020037A NO20020037A NO329614B1 NO 329614 B1 NO329614 B1 NO 329614B1 NO 20020037 A NO20020037 A NO 20020037A NO 20020037 A NO20020037 A NO 20020037A NO 329614 B1 NO329614 B1 NO 329614B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
rats
treatment
day
animals
study
Prior art date
Application number
NO20020037A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20020037D0 (no
NO20020037L (no
Inventor
Yves Deshaies
Denis Richard
Celine Martel
Fernand Labrie
Andre Marette
Original Assignee
Endorech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Endorech Inc filed Critical Endorech Inc
Publication of NO20020037D0 publication Critical patent/NO20020037D0/no
Publication of NO20020037L publication Critical patent/NO20020037L/no
Publication of NO329614B1 publication Critical patent/NO329614B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

OPPFINNELSENS OMRÅDE
Foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av en selektiv østrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for å utvikle insulinresistens.
BAKGRUNN OG KJENT TEKNOLOGI
Fedme, en tilstand som karakteriseres ved for meget kroppsfett, er en velkjent risikofak-tor for mange sykdommer som kardiovaskulære sykdommer, hypertensjon, diabetes og brystkreft. Videre spiller det personlige utseende en viktig rolle for det totale velbefin-nende for de fleste mennesker.
Vanlige behandlinger av fedme som forskjellige dietter (inkludert næringsrestriksjons-dietter), vekttapsprogrammer og øvelse, gir varierende grad av suksess for mange mennesker. Imidlertid er det fremdeles et behov for andre teknikker for de som erfarer util-strekkelige resultater med tidligere kjente teknikker eller for bruk som et supplement til kjente teknikker.
I den senere tid er visse østrogenagonister/antagonister beskrevet for terapi eller prevensjon av fedme: Raloksifen og relaterte forbindelser i EP 0 659 423 Al; østrogenago-nister med en benzotiofenkjerne i EP 0 716 855 A2; 3,4-difenylkromaner i PCT/DK96/00011; naftyløstrogenagonist/antagonist i PCT/TB95/00286.
Det er også rapportert at tamoksifen, en annen østrogenagonist/antagonist, forhindrer sulpiridindusert vektølaiing hos hunrotter (Baptista et al., Pharmacol., "Biochem. Be-hav." (1997), 57 (1/2), 215-222). Det er også rapportert at tamoksifen etterligninger virkningene av østradiol ved næringsinntak, kroppsvekt og kroppssammensetning hos rotter (Wade et al., "American Journal of Physiology", 1993, 33 (6), R1219-1223.).
DHEA har også fordelaktige virkninger ved behandling og/eller prevensjon av fedme. I aldrende Sprague-Dawley rotter har Schwartz (i Kent, "Geriatrics" 37:157-160, 1982), observert at kroppsvekt ble redusert fra 600 til 550 g ved DHEA uten å påvirke næringsinntaket. Schwartz ("Cancer" 39: 1129-1132, 1979) observerte atC3Hmus som gis DHEA (450 mg/kg, 3 ganger i en uke) øket betydelig mindre i vekt og ble eldre enn kontrolldyrene, hadde mindre kroppsfett og var mer aktive. Reduksjonen i kroppsvekten ble oppnådd uten tap av appetitt eller næringsrestriksjoner. Videre kunne DHEA for-hindre vekttapet hos dyr som var avlet for å bli fete som voksne (i Kent, "Geriatrics" 37: 157-160, 1982).
DHEA administrering til magre Zucher rotter redusertre laoppsvekøtloiingen på tross av øket næringsinntak. Behandlede dyr hadde mindre fettputer, noe som totalt sett antyder at DHEA øker næringsmetabolismen, resulterer i lavere vektøkning og fettakkumulering (Svec at al., "Proe. 2<nd> Int. Conf. Cortisol and Anti-Cortisols", Las Vegas Nevada, USA, s. 56 abst., 1997).
Fedme ble funnet å bli forbedret hos A^-mutant mus &Yen at al., "Lipids" 12: 409-413, 1977) og hos Zuckei- rotte (Cleary and Zisk, "Fed. Proe." 42: 536, 1983). DHEA-behandlede C3H mus hadde et yngre utseende enn kontrollene (Schwartz, "Cancer Res." 39: 1129-1132, 1979).
Abdominalfett er assosiert med metabolske risikofaktorer for koronaer brystsykdom (Imbault et al. "Metabolism" 199,48 (3), 355 - 62; Ledoux et al. ("CMAJ", 1997,157 Suppl. 1; 46-53).
WO99/02152 omtaler bruk av ulike SERM-forbindelser for økning av insulmsensitivi-tet. Strukturelt er dog forbindelsene beskrevet i WO99/02152 vesens forskjellig fra de som er beskrevet i foreliggende søknad.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Et første aspekt ved foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av en selektiv østrogenreseptormodulator med den følgende generelle formel:
der
Ri og R2 uavhengig er valgt blant hydrogen, hydroksyl og -OM (der M er valgt blant rett og forgrenet C3-4-alkenyl, rett eller forgrenet C3.4 alkynyl);
G er -CH3; og
R.3 er en gruppe valgt fra gruppen bestående av pyrrolidynyl, piperidin, morfolin og NRaRb (der Ra og Rb uavhengig er hydrogen, rett eller forgrenet CWalkyl, rett eller forgrenet C3^-alkenyl og rett eller forgrenet C3.6-alkynyl), eller et farmasøytisk aksepta-belt salt derav,
for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for å utvikle insulinresistens, hvor nevnte medikament administreres til et individ i behov av slik behandling eller redukasjon.
I en utførelsesform ifølge det første aspekt ved oppfinnelsen omfatter anvendelsen også administrering av en terapeutisk effektiv mengde av et østrogen valgt fra østradiol og premarin.
En spesielt foretrukket østrogenreseptormodulator er EM-652.HC1
En farmasøytisk eksipientbærer eller fortynner kan også tilveiebringes i en eller flere av beholderne og kan inkludere preserveringsmidler og andre additiver som velkjent i teknikken. De foregående kan også inkluderes med en hvilken som helst aktiv bestanddel som benyttes i en hvilken som helst utførelsesform av den her beskrevne oppfinnelse.
Som her brukt er en selektiv østrogenreseptormodulator, SERM, en forbindelse som enten direkte eller ved sin aktive metabolitt, virker som en østrogenreseptorantagonist ("antiøstrogen") i brystvev men som allikevel gir en østrogenlignende effekt på kroppsfett, på benvev og på serum kolesterolnivåer (det vil si reduksjon av serumkolesterol). Lcke-steroide forbindelser som virker som østrogenreseptorantagonister in vivo eller i menneske- eller rottebrystvev (særlig hvis forbindelsen virker som et antiøstrogen på humanbrystcanserceller) vil sannsynligvis virke som en SERM. Ikke-steroide antiøstro-genet som er testet og funnet å virke som SERM'er inkluderer EM-800, EM-652, EM-652.HC1 (EM-01538) Raloxifene, Tamoxifen, Idoxifene, Torimefene, LY 353381, LY 335563, GW 5638 og Droloxifene (beskrevet i større detalj nedenfor). SERM'er blir, i henhold til en hvilken som helst utførelsesform av oppfinnelsen, fortrinnsvis axhninist-rert i den samme dosering som kjent i teknikken når disse forbindelser benyttes som antiøstrogener.
Uten å ønske å være bundet av noen teori antas det at SERM'er, mange av hvilke fortrinnsvis har to aromatiske ringer forbundet med et eller to karbonatomer, er ventet å interagere med østrogenreseptoren ved hjelp av den foregående del av molekylet som best gjenkjennes av reseptoren. Slike SERM'er har også sidekjeder som selektivt kan gi antagonistiske egenskaper i bryst- og endometrialvev uten å ha signifikante antagonistiske egenskaper i andre vev og særlig ben. Således kan SERM'ene fortrinnsvis virke som anti-østrogener i bryst og endometrium mens de overraskende og ønskelig har østrogenlignende aktivitet på kroppsfett.
En pasient som trenger slik behandling eller å redusere risikoen for begynnelse av en gitt sykdom eller tilstand er en som enten er diagnostisert med en slik sykdom eller en
som er tilbøyelig til å erverve en slik sykdom. Oppfinnelsen er spesielt brukbar for indi-vider som, på grunn av arv, miljøfaktorer eller andre erkjente risikofaktorer, har en høy-ere risiko enn den generelle populasjon for å erverve tilstandene foreliggende oppfinnelse angår.
Bortsett fra der annet er sagt er den foretrukne dose av de aktive forbindelser ifølge oppfinnelsen identiske for både terapeutiske og profilaktiske formål. Doseringen for hver aktiv forbindelse som her diskuteres er den samme uavhengig av sykdommen som behandles (eller forhindres).
Der to eller flere forskjellige aktive midler diskuteres som en del av en kombinasjonste-rapi (for eksempel en enzyminbibitor og et antiandrogen), blir et antall forskjellige forbindelser administrert heller enn en enkelt forbindelse med flere aktiviteter.
Bortsett fra der annet er sagt kan uttrykket "forbindelse" og en hvilken som helst assosiert molekylstruktur inkludere hvilke som helst mulige stereoisomerer derav, i form av en racemisk blanding eller i optisk aktiv form.
Bortsett fra der annet er sagt eller der det fremgår av konteksten henviser doser som her nevnt til vekten av aktive forbindelser uansett farmasøytiske eksipienter, fortynnere, bærere eller andre bestanddeler, selv om slike ytterligere bestanddeler med fordel innarbeides slik det skal vises i eksemplene. Enhver doseform (kapsel, tablett, injeksjon eller lignende) som vanligvis benyttes i den farmasøytiske industri, er egnet for bruk her og uttrykkene "eksipient", "fortynner" eller "bærer" inkluderer slike ikke-aktive bestanddeler som karakteristisk inkluderes, sammen med aktive bestanddeler, i slike doseformer i industrien. For eksempel er typiske kapsler, piller, enteriske belegg, faste eller flytende fortynnere eller eksipienter, luktstoffer, preserveringsmidler og lignende, inkludert.
Mange funksjonelle grupper er kjent i den farmasøytiske industri for å omdannes in vivo til funksjonelle grupper av de her beskrevne aktive forbindelser, se for eksempel kapittel 5 "Design and Application of Prodrugs", "A textbook of Drug Design & Deve-lopment", Bundgaard & Larsen, Ed., Harwood Academic Publishers GmbH (Chur, Switzerland, 1991). Prodrugs kan hyppig gi en bedre biotilgjengelighet, lagringsstabili-tet og/eller fremstillingsenkelhet enn tilsvarende aktive forbindelser.
Alle de aktive bestanddeler som benyttes i de terapier som her beskrives kan formuleres i farmasøytiske preparater som også inkluderer en eller flere av de andre aktive bestanddeler. Alternativt kan de administreres separat men tilstrekkelig tidssamtidig til at pasienten til slutt har forhøyede blodnivåer eller på annen måte nyter fordelene av hver av de aktive bestanddeler (eller strategier) samtidig. I enkelte foretrukne utførelsesfor-mer av oppfinnelsen blir for eksempel en eller flere aktive formuleringer formulert i et enkelt farmasøytisk preparat. I andre utførelsesformer av oppfinnelsen tilveiebringes det et sett som inkluderer minst to separate beholdere der innholdet av minst to separate beholdere hvori innholdet i minst en er forskjellig, helt eller delvis, fra innholdet i minst en annen beholder med henblikk på de aktive bestanddeler som inneholdes. To eller flere forskjellige beholdere benyttes i kombinasjonsterapien ifølge oppfinnelsen. Kom-binasjonsterapier som her diskuteres inkluderer også bruken av en aktiv bestanddel av kombinasjonen ved fremstilling av et medikament for behandling (eller prevensjon) av den angjeldende sykdom der behandlingen eller prevensjonen videre inkluderer en ytterligere aktiv bestanddel eller strategi ifølge kombinasjonen.
SERM'er som benyttes ifølge oppfinnelsen antas fordelaktig å redusere blodtriglyserid-nivåene og også insulinresistensen.
I foretrukne utførelsesformer som her diskutert økes virkningen av SERM ved DHEA eller en tilsvarende sex steroid forløper.
Uten å ønske å være bundet av noen teori kan en forklaring på synergien som oppnås ved å kombinere SERM'er og forløpere være i det minste delvise forskjeller i deres virlanngsmekanisrner. DHEA synes for eksempel å øke næringsmetabolismen uten å undertrykke appetitten. EM-52-HC1, en SERM, synes å undertrykke næringsinntak.
KORT BESKRIVELSE AV FIGURENE
Figur 1. Viser virkningen av en 35 ukers behandling med økende doser (0,01, 0,03,0,1, 0,3, 1 mg/kg, oralt, en gang daglig) av SERMene EM-800, raloxifen, tamoxifen og en inaktiv enantiomer, EM-776 (enantiomer av EM-800) på det totale kroppsfett hos ova-ri eektomiserte rotter. Data uttrykkes som gjennomsnitt ± SEM. <**>: P<0,01 eksperimentelt mot respektiv kontroll. Figur 2. Viser vkkningen av en 20 dagers behandling på kroppsvektøkning (A), proteinøkning (B) og fettøkning (C) hos intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter som er behandlet med SERM EM-652.HC1 eller med østradiol. Data uttrykkes i gram (g) som gjennomsnitt ± SEM. <*> p < 0,05 mot intakt gruppe; t p < 0,05 vs OVX + E2 gruppe (kun for EM-652-HCl-gruppen). Figur 3. Viser virkningen av en 20 dagers behandling på kumulativt næringsinntak hos intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter behandlet med EM-652-HC1 eller østradiol. Data er uttrykt i gram (g). Figur 4. Viser virkningen av en 20 dagers behandling på blodenergien som proteiner (A) og kroppsenergien som fett (B) hos intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter behandlet med EM-652-HC1 eller østradiol. Data uttrykkes som kilojuoules (kj) som gjennomsnitt ± SEM; <*> p < 0,05 vs intakt gruppe; t p < 0,05 vs OVS + E2 gruppe (kun for EM-652.HCl-grappen). Figur 5. Viser virkningen av en 20 dagers behandling på seruminsulinnivåene og se-rumglukosenivåene hos intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter behandlet med EM-652-HC1 eller østradiol. Data uttrykkes i nmol/1 som gjennomsnitt ± SEM; <*> p < 0,05 vs intakt gruppe. Figur 6. Viser virkningen av en 20 dagers behandling på hvite adiposvevparametre: inguinal (A) og retroperitoneal (C) adiposevewekt (data uttrykt i gram (g) som gjennomsnitt ± SEM), inguinal (B) og retroperitoneal (D) hvit adiposevevlipoprotein lipaseaktivitet (data uttrykt i 7U/g protein som gjennomsnitt ± SEM; <*> p < 0,05 vs intakt gruppe; t p < 0,05 vs OVX + E2 gruppe (kun for EM-652.HCl-gruppen), i intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter behandlet med EM-652.HC1 eller østradiol. Figur 7. Viser effekten av en 20 dagers behandling på interskapulære brune adipose-vevparametre: (A) brun adiposevewekt (data uttrykt i gram (g) som gjennomsnitt ± SEM, <*> p < 0,05 vs intakt gruppe; t p < 0,05 vs OVX + E2 gruppe (kun for EM-652.HCl-gruppen)); (B) proteininnhold (data uttrykt i % av vewekt som gjennomsnitt ± SEM, <*> p < 0,05 vs intakt gruppe; t p z 0,05 vs OVX + E2 gruppe (kun for EM-652.HCl-gruppen)), i (C) lipoprotein lipaseaktivitet (data uttrykt i ?U/g protein). Figur 8. Viser virkningen av en 20 dagers behandling på Soleus vekten (data uttrykt i gram (g) som gjennomsnitt ± SEM) og lipoprotein lipase (data uttrykt i ?U/g protein som gjennomsnitt ± SEM; <*>p < 0,05 vs intakt gruppe); i intakte rotter, ovarieektomiserte rotter og ovarieektomiserte rotter behandlet med østradiol og EM-652.HC1.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Det er foretrukket å anvende et farmasøytisk preparat omfattende en farmasøytisk ak-septabel eksipient, diluent eller bærer og en terapeutisk effektiv mengde av en selektiv østrogenreseptormodulator med den følgende generelle formel:
der
Ri og R2 uavhengig er valgt blant hydrogen, hydroksyl og -OM (der M er valgt blant rett og forgrenet C3-4-alkenyl, rett eller forgrenet C3-4 alkynyl);
G er -CH3; og
R3 er en gruppe valgt fra gruppen bestående av pyrrolidynyl, piperidin, morfolin og NRaRb (der Ra og Rb uavhengig er hydrogen, rett eller forgrenet Ci^-alkyl, rett eller forgrenet C3^-alkenyl og rett eller forgrenet C3.6-alkynyl), eller et farmasøytisk aksepta-belt salt derav,
for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for å utvikle insulinresistens, hvor nevnte medikament administreres til et individ i behov av slik behandling eller redukasjon.
Det er også foretrukket av stabilitets- og varmoppIøselighets(biotugjengelighet)grunner at SERM'en ifølge oppfinnelsen er et salt av en forbindelse med formel I og av en syre valgt fra gruppen bestående av eddik-, adipin-, benzensulfon-, benzo-, kamforsulfon-, sitron-, furnar-, hydroiod-, hydrobrom-, salt-, hydroklortiazid-, hydroksynafto-, melke-, eple-, metansulfon-, metylsvovel-, 1,5-naftalendisulfon-, salpeter-, palmitin-, pivalin-, fosfor-, propion-, rav-, svovel-, vin-, tereftal-, p-toluen- og valeriansyre.
En spesielt foretrukken forbindelse ifølge oppfinnelsen er EM-652-HC1 (også kalt EM-01538):
EM-652.HC1 gir ytterligere fordeler i forhold til andre SERM'er som EM-800 fordi den ikke inneholder pivaloylgrupper som kan øke risikoen for en reduksjon i seramcarnitin-nivåer.
SERM'er som administreres ifølge oppfinnelsen administreres fortrinnsvis i doseområ-det mellom 0,01 og 10mg/kg kroppsvekt per dag, fortrinnsvis 0,05 til 1,0 mg/kg, mens 60 mg per kg per dag, særlig 20 mg per kg per dag er foretrukken for en person med en midlere kroppsvekt ved oralt inntak, eller i et doseområde mellom 0,003 og 3,0 mg per kg kroppsvekt per dag, fortrinnsvis 0,015 til 0,3 kg mg/kg kroppsvekt, der 20 mg per dag og særlig 10 mg per dag er foretrukket for en person med midlere kroppsvekt ved parenteral adminish-ering (for eksempel intramuskulær, subkutan eller perkutan administrering). Fortrinnsvis administreres SERM'ene sammen med en farmasøytisk aksep-tabel fortynner eller bærer som beskrevet nedenfor.
Bæreren (for enten SERM'en eller forløperen) kan også inkludere forskjellige additiver som vanligvis brukes i den farmasøytiske industri. For eksempel kan duftstoffer, antiok-sydanter, parfymer, geldannere, fortykningsmidler som karboksymetylcellulose, surfak-tanter, stabilisatorer, fukteraidler, farvestoffer og andre tilsvarende midler, være til ste-de. Når aktive bestanddeler adniinistreres transdermalt bør påføringssetet på huden for-andres for å unngå for stor lokal konsentrasjon av aktiv bestanddel og mulig overstimu-lering av huden og sebasøse kjertler på grunn av androgeniske metabolitter av sex steroid forløperen.
SERM forbindelsen kan også administreres oralt og kan formuleres med konvensjonel-le, farmasøytiske drøyemidler, for eksempel spraytørket laktose, mikrokrystallinsk cel-lulose og magnesiurnstearat, til tabletter eller kapsler for oral administrering.
Den aktive substans kan bearbeides til tabletter eller dragekjerner ved blanding med faste, pulverformige bærerstoffer som natriumcitrat, kalsiumkarbonat eller dikalsium-fosfat, og bindemidler som polyvinylpyrrolidon, gelatin eller cellulosederivater, eventuelt ved tilsetning også av smøremidler som magnesiunrstearat, natriumlaurylsulfat, "Carbowax" eller polyetylenglykol. Selvfølgelgi kan smaksforbedrende stoffer settes til når det gjelder orale admmistreringsformer.
Som ytterligere former kan man benytte pluggkapsler, for eksempel av hårdgelatin, så vel som lukkede mykgelatinkapsler omfattende en mykner eller mykgjører, for eksempel glyserol. Pluggkapslene inneholder den aktive substans fortrinnsvis i form av granu-lat, for eksempel i blanding med fyllstoffer som laktose, sakkarose, mannitol, stivelser som potetstivelse eller amylopektin, cellulosederivater eller sterkt dispergert silisiumsy-rer. I mykgelatinkapsler blir den aktive substans fortrinnsvis oppløst eller suspendert i egnede væsker som vegetabilske oljer eller flytende polyetylenglykoler.
Lotion-, salve-, gel- eller kremformer er mulige og bør gnis gunstig inn i huden slik at intet overskudd er direkte synlig, og huden bør ikke vaskes i dette området inntil meste-parten av den transdermale penetrering har inntrådt, fortrinnsvis efter minst 4 timer og helst efter minst 6 timer.
En transdennal pute kan benyttes for å avlevere forløper eller SERM i henhold til kjente teknikker. Denne legges typisk på i et lengre tidsrom, for eksempel 1 til 4 dager, men bringer karakteristisk aktiv bestanddel i kontakt med et mindre overflateareal, noe som tillater en langsom og konstant avlevering av aktiv bestanddel.
Et antall transdermale medikamentavleveringssystemer som er utviklet og som er i bruk, er egnet for avlevering av aktiv bestanddel ifølge oppfinnelsene. Avleveringshas-tigheten kontrolleres karakteristisk ved en matriksdiffusjon eller ved passasje av den aktive bestanddel gjennom en kontrollerende membran.
Mekaniske aspekter ved transdemale innretninger er velkjente i teknikken og forklart for eksempel i US 5 162 037, 5 154 922, 5 135 480, 4 666 441, 4 624 665, 3 742 951, 3 797 444,4 568 343, 5 064 654, 5 071 644,5 071 657. Ytterligere bakgrunn tilveiebringes i EP 0279982 og GB 2185187.
Innretningen kan være av en hvilken som helst av de generelle typer som er kjent i teknikken inkludert adhesiv matriks- og reservoartype transdermale avleveringssystemer. Avleveringen kan inkludere medikamentholdige matriser som inneholder fibre som ab-sorberer den aktive bestanddel og/eller bærer. I en reservoartypeinnreming kan reservo-aret være definert ved en polymermembraan som er impermeabel for bæreren og den aktive bestanddel.
I en transdermal innretning holder innretningen selv den aktive bestanddel i kontakt med den ønskede, lokale hudoverflate. I en slik innretning er viskositeten hos bæreren for den aktive bestanddel av mindre betydning enn med en krem eller gel. Et oppløs-ningsmiddelsystem for en transdermal innretning kan for eksempel inkludere oljesyre, en lineær alkohollaktat eller dipropylenglykol eller andre kjente oppløsninsmiddel-systemer. Den aktive bestanddel kan oppløses eller suspenderes i bæreren.
For festing til huden kan en transdermal pute monteres på en kirurgisk adhesivtape med et hull stanset i midten. Adhesivet dekkes fortrinnsvis av en slippforing for å beskytte den før bruk. Karakteristiske materialer som er egnet for slippelementer inkluderer polyetylen og polyetylenbelagt papir og fortrinnsvis silikonbelagte for lett fjerning. For påføring av innretningen blir shppforingen ganske enkelt trukket av og adhesivet festet til pasientens hud. I US 5 135 480 er det beskrevet en alternativ innretning med ikke-adhesive midler for festing av innretningen til huden.
Det perkutane eller transmukosale avleveringssystem kan også benyttes som et nytt og forbedret avleveringssystem for prevensjon og/eller terapi av fedme.
EKSEMPLER PÅ EFFEKTIVITETEN FOR OPPFINNELSENS METODER
Eksempel 1
Virkningen av 35 ukers behandling med forbindelser ifølge oppfinnelsen på det totale kroppsfettinnhold og kroppsvekten hos ovarieektomiserte rotter.
MATERIELL OG METODER
Ti til tolv uker gamle Sprague-Dawley hunrotter (Crl:CD(SD)Br) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canada) med kroppsvekt rundt 225-250 g ved begynnelsen av behandlingen, ble benyttet. Dyrene ble akklimatisert til omgivelsesbetingelsene (temperatur: 22 ± 3 °C, fuktighet: 50 ± 20 %, 12 timers lys - 12 timers mørke-sykler, lys på kl. 0715) i 1 uke før forsøkets start. Dyrene ble huset tre per bur og tillatt fri tilgang til ledningsvann og et pelletisert, sertifisert gnagerfor (Lab Diet 5002, Ralston Purina, St-Louis, MO). Forsøket ble gjennomført i et anlegg godkjent av Canadian Council of Animal Care i henhold til "CCAC Guide for Care and Use of Experimental Animals".
Tohundreogsyttiseks rotter ble vilkårlig fordelt mellom 23 grupper på 12 dyr i hver gruppe som følger: 1) Intakt kontroll; 2) OVX kontrol; 3 til 7) OVX + EM-800 (0,01, 0,03, 0,1,0,3 eller 1 mg/kg); 8 til 12) OVX + Raloxifen (0,01,0,03, 0,1,0,3, eller 1 mg/kg); 13 til 17) OVX + Tamoxifen (0,01, 0,03, 0,1,0,3 eller 1 mg/kg); 18 til 22) OVX + EM-776 (0,01, 0,03, 0,1, 0,3 eller 1 mg/kg); 23) OVX + østradiol (E2, implantat). På dag 1 av denne studie ble dyrene i de egnede grupper ovarieektomisert bilateralt (OVX) under isofluran anestesi. Et silastisk implantat av østradiol (E2) ble innført subkutant i det dorsale området av hvert dyr i gruppe 13. Implantatene hadde følgende E2 konsentrasjon og størrelse: E2 (E2: kolesterol (1:100, vekt:vekt)), 0,5 cm (lengde), 0,125 tommer (ytre diameter) og 0,062 tommer (indre diameter). Under forsøket ble E2 implantatene erstattet hver måned. Behandlingen med EM-800, Raloxifen, Tamoxifen, og EM-776 eller bærer (4 % etanol, 4 % polyetylen glykol-600, 1 % gelatin og 0,9 % NaCl) ble initiert på dag 2 av studien. Den egnede forbindelse eller bærer alene ble gitt en gang daglig ved oral tvangsforing i 0,5 ml/rotte i 37 uker. Rundt 24 timer efter den siste dosering ble dyr som var fastet over natten avlivet ved exsanguinering ved abdominal aorta under isoflural anestesi.
Kroppsfettsammensetning
Efter 35 ukers behandling ble individuelle rotter under anestesi med isofluran helkroppsskjelett- og høyrefemurscandert ved bruk av dualenergi røntgen absorptiometri (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA) og et "Regional High Resolution Sean" program. Scanfeltstørrelsen som ble benyttet for hele legemet var 30,492 cm x 17,912 cm, oppløsningen var 0,1513 cm x 0,0640 cm og scanningshastigheten var 2,499 mm/sekund. Kroppsfettsammensetningen for hele legemet ble bestemt.
Statistiske analyser
Data er uttrykt som gjennomsnittet ± SEM. Statistisk signifikans ble bestemt i henhold til multippel-områdetesten til Duncan-Rramer (1956).
Resultater
Effektene av økende daglige orale doser av EM-800, Raloxifen, Tamoxifen, og EM-776 på kroppsfett, målt in vivo ved DEXA, er vist i figur 1. Det kan sees at EM-800 ved den laveste dose på 0,01mg/kg reduserer den OVX-induserte stimulering av kroppsfett med 78 %, Raloxifen er mindre aktivt enn EM-800 mens EM-776, enantiomeren av EM-800, ikke har noen signifikant effekt. I tabell 1 er effektene av EM-800 eller Raloxifen på kroppsvekten hos ovarieektomiserte rotter, angitt. Sammenligning er foretatt med intakte og ovarieektomiserte kontrollrotter. Man kan også se at små doser av EM-800 gir en vektkontroll tilsvarende signifikant større mengder Raloxifen (for eksempel gir 0,03 mg/kg EM-800 resultater tilsvarende 0,3 mg/kg Raloxifen). Begge reverserte i vesentlig grad ovarieektomiseringsindusert vektøkning ved meget høyere doser.
Eksempel 2
11 måneders kombinasjonsbehandling med forbindelser ifølge oppfinnelsen.
1. TESTMATERIALE
1.1. Testforbindelser:
DHEA: Tilgj engelig fra Steraloids Inc. Wilton, NH.
Lot: Hl 37;
EM- 800 syntetiseres ved UCPO Department ved Lab. ved Mol. Endo.,
CHUL.
1.2. Bærer
a) Gelatin: Lab-kvalitet, ACP Chemicals Inc.,
Montreal, Qc.
Lot#F0195
b) Etanol: Commercial Alcohols Inc., Brampton, Ontario.
Lot No. 11296
c) Polvetvlenglukol- 600 æEG- 600): Omega
Chemical Company Inc., Lévis, Quebec. Lot#: 00-0117-EZ
d) Normalsaltoppløsnin<g>: 0,9 % natriumklorid irrigering USP.
Abbott Laboratories Limited, St-Laurent, Qc.
e) Propvleneglykol ( 1, 2- propandiol. PPG) :
Sigma Chemical Co., St-Louis, MO.
g) Bærer 1: 4 % ETOH-4 % PEG4600-1 % gelatin - 0,9 % NaCl-H20 for subkutan injeksjon.
h) Bærer 2: 50 % ETOH-50 % PPG for topisk applikasjon.
2. TESTDYRSPESIFIKASJONER:
2.1. Spesier: Rattus norvegicus
2.2. Stamme: Sprague-Dawley rotte (Crl;CD® (SD)
BRVAF/Plus™)
2.3 Kjønn: Hun'er
2.4 Kilde: Charles River Canada Inc.
188 LasalleRoad
St. Constant, Quebec
1-800-561-4975
2.5 Alder ved doseringsstart: Rotter av Gl8-29 var 16 uker gamle
2.6 Bur og opphold
a) Bur: Rottene ble huset 2-3 dyr per bur i skobokser. Alle bur var klart merket med burmerkelapp som indikerte protokollnr., gruppenr. og dy-renr. b) Under studien ble omgivelsesbetingelsene i rommet kontrollert (tilsiktede betingelser: temperatur 20 til 25 °C; fuktighet; 50 ± 20 %). Fotoperioden var 12
timer lys: 12 timer mørke.
c) Diett og vann: Gnagerdiett (pellets) og ledningsvann ble gitt ad libitum.
2.7 AkMimatiseringsperiode: Minst to uker.
2.8 Randomisering: Rottene ble vilkårlig tilskrevet hver gruppe ved ankomst.
2.9 Eutanasimetode: Isofluranindusert generalanestesi.
3. METODE OG FORSØKSOPPSETT
3.1 Fremstilling av vehicle og testgjenstander
a) Femstilling av EM- 800:
EM-800 eller begge oppløses i EtOH: PEG-600 (1:1) under omrøring på
en Fisher Scientific Stirring Hot Plate, derefter tilsettes 1 % GNS til det ønskede volum.
b) Fremstilling av DHEA:
DHEA oppløses i 50 % EtOH, 50 % PEG ved omrøring.
3.2 Dvrepreparering og behandling:
Dyrene behandles en gang daglig som antydet under punkt 6.1.
DHEA, fremstilt i 50 % EtOH, 50 PEG, gis perkutant til tilsvarende dyr en gang daglig (LD.) i et volum på 0,5 ml. EM-800 prepareres i 4 % EtOH, 4 % PEG-600, 1 % gelatin, 0,9 % NaCl, og administreres subkutant til dyrene i de tilsvarende grupper en gang daglig (S.C., LD.) i et volum på 0,5 ml. Rottene ble injisert subkutant med 0,5 ml vehicle 1 hvis de ikke behandles subkutant med en hvilken som helst testforbindelse, og gis topisk 0,5 ml vehicle 2 hvis de ikke behandles med 5-DIOL eller DHEA.
3.3 Observasjoner og målinger
a) Kliniske observasjoner:
Hver rotte observeres minst en gang daglig for generell manisfestering..
b) Kroppsvekter:
Rottene veies ved begynnelsen og slutten av protokollen og hver tredje
måned under behandlingen.
4. RESULTATER:
Som vist i tabell 2 sank effekten av behandlingen med DHEA ved daglig dose på 12,5 mg med 87 % av OVX stimuleringen av kroppsvekten. Administrering av EM-800 ved en daglig dose på 100 u.g gir en synergistisk virkning og en 140 % inhibering av OVX stimuleringen av kroppsvekten oppnås.
Eksempel 3
Effekten av en 20 dagers behandling med EM-652-HC1 på kroppsfett- og kroppsvektparametre i ovarieektomiserte rotter.
MATERIALER OG METODER
Dyr og behandling
Åtte til ti uker gamle Sprague-Dawley hunrotter (Crl:CD (SD) Br) (Charles River Laboratory, St-Constant, Canada) med en kroppsvekt rundt 200-225 g ved begynnelsen av behandlingen, ble benyttet. Dyrene ble akklimatisert til omgivelsesbetingelsene (temperatur: 22 ± 3 °C; 10 timer lys, 10 timer mørke-sykler, lyset på kl. 0600) i 1 uke før opp-start av forsøket. Dyrene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon og tillatt fri tilgang til ledningsvann og en blandet høykarbohydratdiett bestående av (g/100 g): Maisstivelse 31,2; dekstrose 31.2, kasein 20,0; maisolje 6,4; dl-metionin 0,3; vitaminblanding 1,0; AIN-76 mineralblanding 4,9 og fiber 5,0. Forsøket ble gjennomført i en fasilitet godkjent av "Canadina Council on Animal Care" i henhold til CC AC retnmgslinjene for pleie og bruk av forsøksdyr.
Førti rotter ble vilkårlig fordelt mellom 4 grupper på 10 dyr i hver gruppe: a) Intakt kon-toll; 2) OVX kontroll; 3) OVX + EM-652.HC1 (0,5 mg/rotte, ~ 2,5 mg/kg); 4) OVX + østradiol (E2, implantat). På dag 1 av studien ble dyrene i den egnede gruppe ovarieektomisert bilateralt (OVX) under isofluran anestesi. Et silastisk implantat av østradiol (E2) ble ført inn subkutant i det dorsale område av hvert dyr i gruppe 4. Implantatene, valgt i preliminære forsøk for å gi fysiologiske nivåer av E2, hadde følgende stereoid-konsentrasjon og størrelse: E2:kolesterol (1:50, vekt:vekt), 0,5 cm, lengde av fortynnet steroid i silastiske rør, 0,125 tomme ytre diameter av det silastiske rør og 0,062 tommer indre diameter av det silastiske rør. Østradiolimplantatene ble senket til 0,9 % NaCl ved 37 °C over natten før subkutan innføring i dyr. Behandlingen med EM-652.HC1 eller bærer alene (0,4 % metylcelluose i vann) ble initiert på dag 2 av studien. Forbindelsen eller bæreren ble gitt en gang daglig ved oral tvangsforing i 0,5 ml/rotte i 20 dager. Kroppsvekt og næringsforbruk ble notert hver 2. dag.
Cirka 24 timer efter siste dosering ble dyr som var fastet over natten anestetisert med ketaminxylazin og blod trukket ut ved kardialpunktering. Blodet ble samlet så vel som hvitt og brunt adiposevev.
Kroppsvekt, nærrngsinntak og vektøkning i energi-, fett- og proteinmålinger Kroppsvekt, næirågsinntak og kroppsøloiing i energi, fett og protein ble bestemt i henhold til Deshaies et al. i "Am J. Physiol.", 1997; 273, E355-E362 (1997).
Vevmålinger
Lipoprotein lipase aktiviteter ble bestemt i henhold til Deshaies et al. ti "Am J. Physiol.", 1997; 273, E355-E362 (1997).
RESULTATER
Man kan se fra figurene 2 A og C at 20 dagers behandlingen med EM-652.HC1 fullstendig reverserte den 4 gangers kroppsvektøkning henholdsvis 3 gangers kroppsvektøkning man kunne observere efter ovarieektomi mens denne effekt var mindre utpreget på proteinøkningen (figur 2B). Østradiol hadde mindre effekt. Det kumulative næringsinntak er vist i figur 3. Behandlingseffekter reflekterte de på kroppsvektøkningen. Østradiol forhindret partielt økningen i næringsinntak på grunn av OVX mens EM-652.HC1 gjor-de dette mer effektivt enn østradiol, reduserte næringsinntaket til en verdi under den til de intakte dyr.
Hovedvariablene ved energibalansen er oppsummert i tabell 3. OVX øket fordøybart energiinntak med 44 %. Østradiol reduserte energiinntaket i OVX dyr men det totale energiinntak forble 17 % høyere enn det til intakte dyr, mens EM-652.HC1 fullstendig forhindret OVX indusert økning i energiinntaket. Energiøkningen var proporsjonal med næringsinntaket. Nok en gang reduserte østradiol energiøkningen (til nivåer som ikke signifikant var forskjellige fra de til intakte rotter), men EM-652.HC1 var mer effektiv (signifikant forskjellig fra østradiol).
Næringseffektiviteten ble øket med OVX, redusert i OVX dyr med E2 og videre redusert ved EM-652.HC1.
Den 30 %-ige økning i kroppsenergi fra proteiner efter ovarieektomi så vel som
80 % økningen i kroppsenergi fra fett ble også fullstendig reversert av EM-652.HC1
behandling slik det fremgår av figurene 4A og B. Som vist i figur 5A ble utviklingen av insulinresistensen i OVX dyr bekreftet ved nærværet av fastende hyperinsulniemi (som vanligvis er proporsjonal med graden av insulinresistens) og fastende hyperglykemi (en refleksjon av tapet av effektivitet av insulin for å opprettholde normale nivåer av blod-glukose). Både østradiol og EM-652.HC1 forhindret den OVX induserte insulinresistens.
Figurene 6A og 6C viser at OVX øket massen (mengdene) av inguinal og retroperitoneale adiposevev som er representative for den observerte endring i totalkroppsfett. Denne ølming ble fullstendig opphevet ved EM-652.HC1 behandling. Med østradiol var effekten mindre betydelig. Det samme mønster vises i figur 6B og 6D der lipoprotein lipase aktiviteten angis. Dette enzym modulerer den intravaskulære hydrolyse av triglycerider og derved inngangen av fettsyrer i adiposelagrene.
Brunt adiposevev er en hovedtermogenisk effektor hos gnagere. Ovarieektomi viste et annet mønster i interskapulært brunt adiposevev enn i hvitt adiposevev. Den brune adi-posevevvekten var to ganger øket (figur 7A) som observert i hvitt adiposevev. Imidlertid ble proteininnholdet (figur 7B) og lipoproteinaktiviteten (figur 7C) redusert med 33 henholdsvis 30 % efter OVX. På disse tre parametre reverserte EM-652.HC1 behandlingen fullstendig effekten av ovarieektomi.
Vekten av soleus er vanligvis en god indeks på status for proteinmassen i organismen. Som ventet ble soleusvekten, som vist i figur 8, øket ved OVX (økningen i næringsinntak resulterte i en økning i energiavsetningen både som fett og protein). Både østradiol-og EM-652.HC1 behandlinger forhindret økning i muskelvekten. Lipoprotein lipase i muskler er ofte positivt forbundet med insulinsensitivitet (desto bedre sensitivitet, desto mer lipoprotein lipase i muskelen). OVX reduserte lipoprotei lipase aktiviteten i soleus, et indirekte bevis på utviklingen av insulinsresisten i muskelen. Både østradiol- og EM-652.HC1 behandlinger forhindret reduksjon i musei lipoprotein lipasen.
Spiselig energiinntak er den totale mengde energi som fordøyes under en 20 dagers behandling (tar med i betraktning ikke-fordøybare materialer som fiber).
Energigevinsten er mengden i kilojoule som avsettes som fett + protein under 20 dagers behandlingen.
Det tilsynelatende energiforbruk er mengden av energi som brukes for metabolske behov og lokomosjon (beregnet fra energiinntaket og energigevinsten). Forventet å være større når mager masse er større (som OVX dyr).
Næringseffektiviteten er effektiviteten med hvilken fordøyet energi avsettes som fett og protein (i avsatt kJ per fordøyet kJ).
Eksempel 4
Eksempel på syntese av den foretrukne forbindelse ifølge oppfinnelsen
Syntese av (S) - (+) - 7-hydroksy-3-(4'-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4"-(2"'-piperidinoetoksy)fenyl) -2H-l-benzopyran hydroklorid EM-01538 (EM-652, HC1)
Trinn A: BF3 ■ Et20, toluen; 100 °C; 1 time.
Trinn C; 3,4-dihydropyran, p-toluensulfonsyremonohydrat, etylacetat, 25 °C under
nitrogen, 16 timer, og så krystallisering i isopropanol.
Trinn D. E. oe F:
(1) piperidin, toluen, Dean & Stark apparatur, tilbakeløp under nitrogen; (2) 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en, DMF, tilbakeløp 3 timer; (3) CH3MgCl, THF, -20 °C til 0 °C og så romtemperatur i 24 timer;
Trinn G, H: (1S) — (+) -10-karnforsulfonsyre, aceton, vann, toluen, romtemperatur,
48 timer.
Trinn HH: 95 % etanol, 70 °C, så romtemperatur i 3 dager.
Trinn HHR: Resirkulering av moderniten og vasking av trinn HH
(S) -10-kamforsulfonsyre, tilbakeløp; 36 timer, så romtemperatur i 16 timer.
Trinn I:
(1) DMF aq., Na2C03, etylacetat; (2) etanol, fortynnet HC1;
(3) vann.
Syntese av 2-tetraahydropyranyIokxsy-4-hydroksy-2'-(4"-tetrahydropyranyloksyfenyl) acetofenon (4).
En suspensjon av 2,4-dihydroksy-2'-(4"-hydroksyfenyl)acetofenon 3 (97,6 g, 0,4 mol)
(tilgjengelig fra Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansas) in 3,4-dihyropyran (218 ml, 3,39 mol) og 520 ml etylacetat ble behandlet med p-toluensulfonsyremonohydrat (0,03 g, 0,158 mmol) ved rundt 25 °C. Reaksjonsblanding-en ble omrørt under nitrogen uten ekstern oppvarming i rundt 16 timer. Blandingen ble så vasket med en oppløsning av 1 g natriumbikarbonat og 5 g natriumklorid i 100 ml vann. Fasene ble separert og den organiske fase vasket med 20 ml saltoppløsning. Hve vasking ble ekstrahert tilbake med 50 ml etylacetat. Alle organiske faser ble kombinert og filtrert gjennom natriumsulfat.
Cirka 600 ml oppløsningsmiddel ble fjernet ved destillasjon under atmosfærisk trykk og 250 ml isopropanol ble tilsatt. Rundt 300 ml ytterligere oppløsningsmiddel ble destillert ved atmosfærisk trykk og 250 ml isopropanol ble tilsatt. Ytterligere rundt 275 ml opp-løsningsmiddel ble destillert av ved atmosfærisk trykk og 250 ml isopropanol ble tilsatt. Oppløsningen ble avkjølt til rundt 25 °C under omrøring og efter 12 timer ble det krys-tallinske faststoff filtrert, vasket med isopropanol og tørket (116,5 g, 70 %).
Syntese av4-hydroksy-4-metyl-2-(4,-[2,,-piperidino]-etoksy)fenyl-3-(4,<M>'-tetrahydropyranyIoksy)fenyl-7-tetrahydropyranyloksy-kroman (10).
En oppløsning av 2-tetrahydropyranyloksy-4-hydroksy-2'-(4"-tetrahydropyranyloksyfenyl)acetofenon 4 (1 kg, 2,42 mol), 4-[2-(l-piperidin)etoksy]benzaldehyd 5 (594 g, 2,55 mol) (tilgjengelig fra Chemsyn Science Laboratories, Lenexa, Kansas) og piperidin (82,4 g, 0,97 mol) (tilgjengelig fra Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.) i 8 1 toluen ble bragt til tilbakeløp under nitrogen med en Dean & Stark apparatur inntil en ekvivalent vann, 44 ml, var samlet.
6,51 toluen ble fjernet fra oppløsningen ved destillasjon under atmosfærisk trykk. 6,51 dimetylformamid og l,8-diazabicyklo[5,4,0] undec-7-en (110,5 g, 0,726 mol) ble tilsatt. Oppløsningen ble omrørt i rundt 8 timer ved romtemperatur for å isomerisere chalconet 8 til kromanon 9 og så satt til en blanding av 8 1 vann og is og 41 toluen. Fasene ble separert og toluensjiktet vasket med 5 1 vann. De kombinerte vandige vaskevæsker ble ekstrahert med 3x41 toluen. De kombinerte toluenekstrakter ble til slutt vasket med 3 x 41 saltoppløsning, konsentrert under atmosfærisk trykk til 5,5 1 og så avkjølt til - 10 °C.
Med fortsatt ekstern avkjøling og omrøring under nitrogen ble en 3M oppløsning av metylmagnesiumklorid i THF (2,5 1,7,5 mol) (tilgjengelig fra Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.) tilsatt mens temperaturen ble holdt under 0 °C. Efter at all Grignard reagensen var tilsatt ble den ytre avkjøling fjernet og blandingen tillatt oppvarming til romtemperatur. Blandingen ble omrørt ved denne temperatur i rundt 24 timer.
Blandingen ble avkjølt igjen til rundt - 20 °C og under fortsatt ytre avkjøling og omrø-ring ble 200 ml mettet ammoniumkloridoppløsing langsomt tilsatt mens temperaturen ble holdt under 20 °C. Blandingen ble omrørt i 2 timer og så satt til 2 1 mettet ammoni-umkloridoppløsning og 41 toluen og omrørt i 5 minutter. Fasene ble separert og det vandige sjikt ekstrahert med 2x41 toluen. De kombinerte toluenekstrakter ble vasket med fortynnet saltsyre inntil oppløsningen ble homogen og så med 3x41 saltoppløs-ning. Toluenoppløsningen ble til slutt konsentrert under atmosfærisk trykk til 21. Denne oppløsning ble benyttet direkte i det neste trinn.
Syntese av (2R,S)-7-hydroksy-3-(4,-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4,l<->[2",,-piperidin]etoksy)fenyl)-2H-l-benzopyran (lS)-lO-camforsulfonsyresalt (±12).
Til toluenoppløsningen av 4-hydroksy-4-metyl-2-(4'-[-2"-piperidin]-etoksy)-fenyl-3-(4""-tetiahydropyranyloksy)fenyl-7-tetiahydropyranyloksykroman (10) ble det satt 61 aceton, 0,31 varm og (S) -10-kamforsulfonsyre (561 g, 2,42 mol) (tilgjengelig fra Aldrich Chemical Company Inc., Milwaukee, Wis.). Blandingen ble omrørt under nitrogen i 48 timer hvoretter det faste (2R,S) - 7-hydroksy-3-(4'-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4"-[2""-piperidin]etoksy)fenyl)-2H-l-benzopyran (IS) -10-kamforsulfonsyresalt (12) ble filtrert, vasket med aceton og tørket (883 g). Dette materialet ble benyttet i det neste (HH) trinn uten ytterligere rensing.
Syntese av (2S)-7-hydroksy-3-(4'-hydroksyfenyl)-4-me1yl-2-(4t,-[2M*'-piperidin]etoksy)fenyl) -2H-l-benzopyran (IS) -10-kamforsulfonsyresalt (13, (+) - EM-652(lS)-CSAsaIt).
En suspensjon av (2RJS)-7-hydoksy-3-(4'-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4"-[2"n<->piperidin]etoksy)fenyl) -2H-benzopyran (IS) -10-kamforsulfonsyresalt ± 12 (759 g) i 95 % etanol ble oppvarmet under omrøring til rundt 70 °C inntil faststoffet var oppløst. Oppløsningen ble tillatt avkjøling til romtemperatur under omrøring og så ympet med noen krystaller av (2S)-7-hydroksy-3-(4,-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4,,-[2"',-piperidin]etoksy)fenyl)-2H-l-benzopyran (IS)-10-kamforsulfonsyresalt 13. Oppløs-ningen ble omrørt ved romtemperatur i til sammen rundt tre dager. Krystallene ble filtrert, vasket med 95 % etanol og tørket (291 g, 76 %). DE for produktet var 94,2 % og renheten var 98,8 %.
Syntese av (S)-(+)-7-hydroksy-3-(4'-hydroksyfenyl)-4-metyl-2-(4"-(2,,M-piperidinoetoksy)fenyl)-2H-l-benzopyranhydroklorid EM-01538 (EM-652, HC1).
En suspensjon av forbindelsen 13 (EM-652-(+)-CSA salt, 500 mg, 0,726 mmol) i dimetylformamid (11 ul, 0,15 mmol) ble behandlet med en 0,5 M vandig natriumkarbonat-oppløsning (7,0 ml, 3,6 mmol), og omrørt i 15 min. Suspensjonen ble behandlet med 7,0 ml etylacetat og omrørt i 4 timer. Den organiske fase ble så vasket med 2 x 5 ml vandig mettet natriumkarbonatoppløsning og 1 x 5 ml saltoppløsning, tørket over magnesium-sulfat og konsentrert. En oppløsning av det resulterende rosafarvede skum (E-652) 2 ml etanol ble behandlet med 2 N saltsyre (400 ul, 0,80 mmol), omrørt i 1 time og behandlet med 5 ml destillert vann og så omrørt i 30 min. Den resulterende suspensjon ble filtrert, vasket med 5 ml destillert vann, tørket i luft og under høyvakuum (65 °C) og man oppnådde et kremfarvet pulver (276 mg, 77 %) i form av et fint hvitaktig pulver.
Scanderende kalorimetri: Smeltetoppstart ved 219 °C.
DH = 83 J/g.
[a] <24>D = 154 °C i metanol 10 mg/ml.
<*>H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 1,6 (bredde, 2H, H-4'''), 1,85 (bredde, 4H, H-3' "' og 5' <*>"), 2,03 (s, 3H, CH3), 3,0 og 3,45 (bredde, 4H, H-2''" og 6" "), 3,47 (t, J-4.9HZ, 2H, H-3' ■'), 4.26 (t, J=4,9Hz, 2H, H-2'''), 5,82 (s, 1H, H-2), 6,10 (d, J=2,3Hz, 1H, H-8), 6,35 (dd, J=8,4,2,43 Hz, 1H, H-6), 6,70 (d, J=8,6 Hz, 2H, H-3', og H-5'), 6,83 (d, J=8,7Hz, 2H, H-3'1 og H-5''), 7,01 (d, J=8,5 Hz, 2H, H-2' og H-6'), 7,12 (d, J=8,4Hz, 1H, H-5),7,24 (d, J=8,6Hz, 2H, H-2'' og H-61 0; <13>C RMN (CD3OD, 75 MHz) dppm 14,84 22,50,23,99, 54,78, 57,03, 62,97, 81,22, 104,38, 109,11, 115,35, 116,01 118,68, 125,78, 126,33,130,26,130,72,131,29, 131,59, 134,26, 154,42, 157,56, 158,96, 159,33.
Elementsammensetning for C, H, N, Cl:
Eksempel 5 viser forhindring av den LHRH-A-induserte fettøkning ved EM-652.HC1, en forbindelse ifølge oppfinnelsen, alene eller i kombinasjon med DHEA, en sex hor-mon forløper, i intakte hunrotter. Man kan se at 6 måneders LHRH-A behandling signifikant og med 58 % øker prosentandelsen av kroppsvekt hos intakte hunrotter mens det med samtidig admmistrering av EM-652-HC1 eller DHEA kun ble oppnådd et inkrement på 35 henholdsvis 19%. Med kombinasjonen av begge medikamenter ble det ikke observert noen fettøkning efter LHRH-A behandling.
I eksempel 6 presenteres prevensjon av fedme hos hunrotter over en 20 dagers periode. Ovarieektomi øker prosentandelen totalt kroppsfett og vekt av retroperitoneal adiposevev med 20 henholdsvis 68 %. Disse inkrementer forhindres og sogar kroppsfett og retroperitonealt adiposevev reduseres ved administrering av EM-652.HC1, østradiol, DHEA, eller kombinasjoner av EM-652.HC1 og DHEA eller EM-652-HC1 og østradiol med henholdsvis 46 %, 46 %, 59 %, 56 % og 45 % for kroppsfett og med 59 %, 78 %, 75 %, 69 % og 68 % for retroperitonealt adiposevev. Et tilsvarende forsøk er presentert i eksempel 7.1 dette tilfelle følges prevensjon av fedme under en 34 ukers periode og derefter er prosentandelene kroppsfett og retroperitonealt adiposeved øket rundt 60 % ved ovarieektomi. Dette inkrement forhindres ved administrering av etynyløstradiol, Raloxifen (EM-1105), EM-652-HC1 (EM-1538), DHEA, eller kombinasjonen av EM-652.HC1 og DHEA.
Eksemplene 8A (hanner) og 8B (hunner) rapporterer data ved effektiviteten ifølge oppfinnelsen når det gjelder prevensjon så vel som terapi av fedme. For magre og fete Zucker hann- og hunnrotter ble det administrert 2,5 mg/kg/dag EM-652-HC1 i 20 dager. Prevensjonsmodellen representeres ved magre rotter mens behandlingsmodellen for fedme representeres ved allerede fete rotter. Data på kroppsvektsøkning, lipoprotein lipase aktivitet i hvitt retroperitonealt adiposevev og soleus muskel så vel som plasma-konsentrasjoner av insulin, glukose, totalkolesterol og triglycerider, er angitt i tabell 7 for hann- og tabell 8 for hunndyr (se eksempel 3 for signifikansen av disse parametre).
Antiøstrogenet EM-652-HC1 reduserer signifikant kroppsvektsøkningen med 38 % for magre hannrotter og 35 % for fete hannrotter mens lipoprotein lipase aktiviteten i hvitt retroperitonealt adiposevev og soleus muskel ikke modifiseres i noen av kjønnene. Plasmamsulin reduseres med 35 %, 57 % og 48 % i magre hanner, fete hanner henholdsvis magre hunner mens EM-652-HC1 ikke hadde noen signifikant effekt i fete hunner med et meget høyere nivå av msulin. Plasmakolesterol som er høyere i den fete gruppe reduseres også ved EM-652-HC1 administrering. Serumglukose påvirkes ikke av EM-652-HC1 behandling.
I eksempel 9 rapporteres effekten av EM-652.HC1, DHEA eller en kombinasjon av disse på intakte eller ovarieektomiserte hunnrotter som mottar en rik diett av sukrose og
fett, på den totale vekt, vekt og lipoprotein lipase aktivitet for hvitt adipose inguinal- og retroperiotonealvev, brunt adiposevev, soleusmuskel og vastus lateralis muskel (VLM). Plasmainsulin, glukose, totalkolesterol, triglycerider og leptin så vel som leverkolesterol og triglycerider, rapporteres.
Eksempel 10 rapporterer effekten på vektøkning og på lipid-lipoproteinmetabolismen i rotter efter behandling med forskjellige selektive østrogenreseptormodulatorer som beskrevet i litteratuen (TSE 424, Lasofoxifen, LY 353381 og Raloxifen) så vel som med EM-652-HC1, den foretrukne forbindelse ifølge oppfinnelsen. Testede forbindelser ble administrert ved oral tvangsforing i 20 dager (0,5 mg/rotte for hver forbindelse) i 0,4 % metylcellulose til ovarieektomiserte hunnrotter. Intakte kontroller, ovarieektomiserte (OVX) kontroller og OVX rotter som var behandlet med 17p-østradiol (E2) ble benyttet som referanse. Kroppsvekten og næringsforbruket som økes ved ovarieektomi reduseres signifikant ved behandling med de testede forbindelser ved nivået som ble observert i intakte kontroller. Vekt og lipoprotein lipase aktivitet for hvitt adipose inguinal- og retroperitoneal adiposevev reduseres ved behandlingen ovenfor (bortsett fra for TSE 424 og LY 353381for hvitt adipose inguinal vev og TSE-424 og Lasofoxifen for lipoprotein lipase aktivitet av inguinalvev) mens brunt adiposevev og muskel ikke syntes signifikant påvirket. Man kan se at alle testede forbindelser signifikant reduserte plas-makonsentrasjonen av kolesterol og triglycerider men ikke hadde noen effekt på gluko-senivåene. Plasmainsulin ble redusert ved behandling av OVS rotter med EM-652.HC1, TSE 424, Lasofoxifen, LY 353381, og Raloxifen.
I eksemplene 11 og 12 rapporteres in vitro effektiviteteni østrogenavhengige cellelinjer av kjente anti-østerogener og forbindelser ifølge oppfinnelsen. Effekten av anti-østrogener og alkalisk fosfataseaktivitet i humanendometriale adenocarcinom Ishikawa celler er vist i tabell lii eksempel 10. Den anti-østrogene aktivitet rapporteres i den siste kolonne som IC 50 uttrykt i nM inhibering av lnM E2 stimulert alkalisk fosfatase mens den iboende østrogene aktivitet for de testede forbindelser rapporteres i den nest-siste kolonne som prosentandel lnM E2 stimulering av alkalisk fosfataseaktivitet. Man kan se at de mest aktive anti-østrogener er EM-652-HCL LY 353381, Raloxifen, Lasofoxifen, og TSE 424. De andre er minst ti ganger mindre aktive. Blant de beste aktive forbindelser har imidlertid enkelte en signifikant uønsket gjenværende østrøgenaktivitet: LY 33381 (16 %), Lasofoxifen (18 %), og Raloxifen (13 %). De herværende data antyder således at forbindelsene EM-652-HC1 og TSE 424 ikke viser signifikant østrogenisk aktivitet i Ishikawa celler. I eksempel 12 viser en sammenligning mellom EM-652-HC1, den her foretrukne forbindelse, og TSE 424, i humanbrystcancer MCF-7 celler, fordelene ved EM-652-HCI. Således er denne mer enn fire ganger mer aktive enn TSE 424 so anti-østrogen (EC50 for inhibering av 0,8 nM mot 3,7 nM) (tabell 12).
I eksempel 13 ble effekten av 20 dagers behandling med EM-652-HC1, TSE 424 eller Lasofoxifen på kroppsvekt, retroperitonealt adiposevev, uterinvekt og kolesterolnivåer, bedømt i ovarieektomiserte hunnrotter som var matet med kommersiell gnagerføde. Ovarieektomi induserte 17 % og 19 % økning i totalkroppsvekt og retroperitoneal fettvewekt mens admmistreringen av 0,5 mg EM-652.HC1, TSE 424 eller Lasofoxifen forhindret kroppsvektøkning med henholdsvis 64 %, 59 % og 127 %, og førte til adipo-sevewektverdier under de som ble observert i intakte kontrolldyr for alle studerte forbindelser. Administeringen av EM-652.HC1 og TSE 424 hadde ingen virkning på uterinvekten sammenlignet med OVX kontrolldyr. Imidlertid forårsaket administreringen av 0,5 mg Lasofoxifen en 62 % økning (p<0,01) av uterinvekten og som ble fullstendig reversert av den samtidige administrering av 2,5 mg EM-652.HC1, noe som antyder en østrogenisk aktivitet for Lasofoxifen. Til slutt ble den OVX-induserte økning i totalse-rurnkolesterolnivåene fullstendig forhindret ved administrering av EM-652.HC1, TSE 424 og Lasofoxifen og førte til kolesterolverdier signifikant lavere enn det som ble observert i intakte kontrolldyr.
Eksempel 5
Effekt på fettakkumulering ved behandling med EM-652.HC1 og DHEA, administrert alene eller i kombinasjon, til intakte hunnrotter som eventuelt fikk LHRH-A.
RUMA-r-04-99
Formålet med denne studie er å bestemme virkningen av fett på behandling med EM-652.HC1 og dehydroepiandrosteron (DHEA) i intakte hunnrotter som får eller ikke får en luteiniserende hormonfrigivende hormonantagonist (LHRH-A, LHRH etylamiddia-cetat). For dette formål ble intakte hunnrotter, behandlet eller ikke behandlet med LHRH-A (1 ug/rotte), daglig gitt EM-652.HC1 (2,5 mg/kg) og DHEA (100 mg/kg), alene eller i kombinasjon, i 6 måneder. EM-652.HC1 ble administrert oralt, DHEA gitt topisk mens LHRH-A ble injisert subkutant. Alle behandlinger ble administrert en gang daglig.
TESTDYR:
Spesie: Rattus norvegicus
Stamme: Sprague-Dawley rotter (Cr:CD® (SD) BR VAF/Plus™)
Kjønn: Hunner
Alder: Ved starten av doseringen var rottene cirka 10 til 12 uker gamle
Bur og opphold
a) Bnr:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur under alddimaitserings- og studieperioden.
b) Temperatur og fuktighet:
Omgivelsesbetingelsene (temperatur, fuktighet) i rottenes oppholdsrom ble notert kontinuerlig ved bruk av et datastyrt, automatisert system. De tilsiktede betingelser var 22 ± 3 °C og 50 ± 20 % relativ fuktighet.
c) Lys- mørke- svklus:
Fotoperioden var 12 timer lys og 12 timer mørke. Disse parametre ble notert
kontinuerlig ved bruk av et validert, automatisert datasystem. Lyset var på fra 07:15 til 19:15.
d) Diett:
Sertifisert gnagerføde (Lab Diet # 5002, pellets) og ledningsvann ble gitt ad libitum. Rottene ble fastet (med kun tilgang til varm) aftenen før nekropsien.
Randomisering:
Rottene ble tilskrevet hver gruppe vilkårlig under alddimatiseirngsperioden.
METODER OG FORSØKSOPPSETT
Testgrupper:
120 rotter ble separert i 8 grupper på 15 dyr for gjennomføring av studien som skissert nedenfor:
Preparering av testgjenstander:
LHRH-A er tilgjengelig i oppløsning i en konsentrasjon på 1,0 mg/ml. Denne konsentrerte oppløsning fortynnes (for å oppnå en sluttkonsentrasjon på 0,002 mg/ml) ved bruk av den følgende bærer: 0,3 % natriumklorid og 0,25 % monobasisk natriumfosfatmono-hydrat i vann. Vandig natriumhydroksyd ble benyttet for å justere pH-verdien til mellom 5,6-6,2.
Doseringen av supspensjonene/oppløsningene ble preparert hver annen uke i henhold til den siste kroppsvekt (gruppegjennomsnitt) bortsett fra LHRH-A oppløsninen. For EM-652-HCl administrert oralt ble bæreren (0,4 % metylcellulose) satt til den testede forbindelse, på forhånd veiet inn i en glassbeholder, minst 48 timer før den første doseringsdag. For å sikre homogeniteten i doseringssuspensjonen ble den omrørt minst 48 timer ved 2 til 8 °C. Doseringssuspensjonen ble holdt ved 2 til 8 °C. For DHEA oppløs-ningen som ble gitt topisk ble etanolen satt til DHEA og blandingen omrørt inntil opp-løsning av DHEA. Deretter ble propylenglykol tilsatt og oppløsningen omrørt til homogen tilstand. Doseringsoppløsningen ble holdt ved 2 til 8 °C (en del av oppløsningen kunne holdes ved romtemperatur for å lette den topiske applikering på dyret). For LHRH-A oppløsningen som ble injisert subkutant ble en fortynning av den konsentrerte oppløsning ved bruk av den egnede bærer preparert hver måned. Doseringsoppløsnisn-gen ble holdt ved 2 til 8 °C.
Dvreforberedelser:
Før den første doseringsdag og efter behov under studien ble en dela v dorsalhuden (cirka 5 cm x 54 cm) barbert for topisk applikering av DHEA.
Dosering
Administreringen av de testede forbindelser eller bærer begynte studiedag 1 av protokollen. De testede forbindelser ble gitt som suspensjon i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsforing (0,5 ml/fSring/rotte) en gang daglig eller applikert topisk i 50 % etanol - 50 % propylenglykol (0,5 ml/applikasjon/rotte) en gang daglig. Rotter fra gruppene 5 til 8 får også LHRH-A en gang daglig ved subkutan injeksjon (0,5 ml/injeksjon/rotte). Rotter som ikke fikk noen testet forbindelse oralt og/eller topisk fikk kun den egnede bærer.
Måling av kroppsfett
Kroppssammensetningen ble målt på hele gelettet og høyre femur av dyret under Isofluranindusert anestesi ved bruk av dual energi røntgen absorpsiometmri (DEXA; ZDR4500A, Hologic) under akklimatiseringsperioden og efter 6 måneders behandling.
Resultater
Eksempel 6
Effekt av en 20 dagers behandling med EM-652.HC1, østradiol og DHEA på kroppsfett og kroppsvektparametre i ovarieektomiserte hunnrotter.
URMA-r-27-00
Formålet med denne studie var å bedømme effekten på kroppsvekt og kroppsvektparametre av EM-652.HC1, østradiol og DHEA administrert oralt alene eller i kombinasjon til ovarieektomiserte (OVX) hunnrotter som fikk en anriket karbohydratdiett.
TESTDYR:
Spesie: Rattus norvegicus
Stamme: Sprague-Dawley rotte (Crl:CD® (SD) BR VAF/Plus™)
Kjønn: Hunner
Kroppsvekt: Ved starten av doseringen var kroppsvekten rundt 200-250 mg
Bnr og opphold
a) Bur:
Dyrene ble huset individuelt i nistfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon
under akklimatisering og studie.
b) Temperatur og fuktighet:
Omgivelsesbetingelser (temperatur, fuktighet) i rotterommet ble notert kontinuerlig ved bruk av et automatisert datastyrt system. De tilsiktede betingelser var 22 ± 3 °C og 50 ± 20 % relativ fuktighet.
c) Lvs- mørke- sykms:
Fotoperioden var 12 timer lys og 12 timer mørke. Disse parametre ble notert
kontinuerlig ved bruk av et validert, automatisert datasystem. Lyset var på fra 07:15 til 19:15.
d) Diett:
Sertifisert gnagerføde (Lab Diet # 5002, pellets) og ledningsvann ble gitt ad libitum under akklimatiseringsperioden. Under studieperioden fikk dyrene en anriket karbohydratdiett ad Ubitum. Den anrikede diett (diett nr. 3) bestod av (g/100 g): Maisstivelse 31,5, dekstrose 31,2, kasein 20,0; maisolje 6,4; dl-metionin 0,3;
vitaminblanding 1,0; AIN-76 mineralblanding; fiber 5,0.
Dagen før nekropsi ble rottene sultet (med tilgang til kun vann) ved slutten av ettermiddagen (rundt 1600).
Randomisering:
Rottene ble tilskrevet hver gruppe vilkårlig på dag 0 av studien.
METODER OG EKSPERIMENTELT OPPSETT
Testgrupper:
80 rotter ble tilskrevet 8 grupper på 10 rotter for gjennomføring av studien som skissert nedenfor:
Dvre<p>reparering:
På dag 0 av studien ble rotter fra gruppene 2 til 8 ovarieektomisert ved bilateral flanke-innsnitt under isofluranindusert anestesi. Rottene fra gruppe 1 ble skamoperert.
Dosering:
Administreringen av testgjenstandene eller bærer begynte dag 1 (dagen efter ovarieektomi). De testede forbindelser ble gitt som suspensjoner i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsfSring (0,5 ml/foring) i 20 dager.
Måling av kroppssammensetning
På dag 21 av studien (før nekropsien) ble kroppssammensetningen bestemt på hele dy-reskjelett under isofluranindusert anestesi ved bruk av dual energi røntgen absorpsio-metri (DEXA; ZDR 4500A, Hologic) for å bestemme virkningene av behandlingene på fettprosentandelen.
Samle de organer og vev
Høyre og venstre retroperitoneale adiposevev ble samlet og veiet.
Eksempel 7
Effekten av en 34 ukers behandling med etynyløstradiol, EM-652.HC1, Raloxifen og DHEA på kroppsfett og kroppsvektparametre i ovarieektomiserte hunnrotter.
URMA-r-42-98
Formålet med denne studie var å bedømme effekten av en kombinert behandling med EM-652.HC1 og DHEA på kroppsfett og kroppsvektparametre i ovarieektomiserte rotter. For dette formål fikk ovarieektomiserte rotter en daglig administrering av EM-652.HC1 (1 mg/kg) og DHEA (80 mg/kg) alene eller i kombinasjon, i 34 uker. EM-652.HC1 ble adminisrert oralt mens DHEA ble gitt topisk på dorsalhuden. En gruppe dyr ble behandlet oralt med 17a-etynyløstradiol (0,1 mg/kg) og Raloxifen (EM-1105; 1 mg/kg) for sammenligning.
MATERIELL OG METODER
Dyr og behandling
Det ble benyttet ti til tolv uker gamle Sprague-Dawley hunnrotter (Crl :CD(SD)Br) med en kroppsvekt rundt 235-250 g ved behandlingens start. Åtti rotter ble vilkårlig fordelt mellom 7 grupper på 11 til 12 dyr per gruppe som følger: 1) Intakt kontroll; 2) OVX kontroll; 3) OVX + EE2 (,1 mg/kg); 4) OVX + raloxifen (1 mg/kg); 5) OVX + Em— 652.HC1 (1 mg/kg); 6) OVX + DHEA (80 mg/kg); 7) OVX + EM-652.HC1 + DHEA. På dag 1 av studien ble dyrene i de egnede grupper ovarieektomisert bilateralt (OVX) under isoflurananestesi. EM-652.HC1, raloxifen og EE2 (Steraloider) ble administrert en gang daglig ved oral tvangsforing som suspensjon i 0,4 % metylcellulose (0,5 ml/rotte) i 34 uker mens DHEA ble gitt topisk en gang daglig på dorsalhuden som en oppløsning i 50 % etanol - 50 % propylenglykol med 0,5 ml/rotte i det samme tidsrom. Cirka 24 timer efter den siste dosering ble nattfastede dyr avlivet ved exsanguinering via abdominal aorta under isoflurananestesi. Venstre og høyre retroperitoneale adiposevev ble samlet og veiet.
Måling av kroppssammensetningen
Efter 34 ukers behandling fikk individuelle rotter under anestesi med isofluran hele kroppsskjelettet scannet ved bruk av dual energi røntgen absorptiometri (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA) og en "Regional High Resolution Sean" programvare. Kroppssammensetningen (inkludert fettprosentandel) ble bestemt.
Statistisk analyse
Data uttrykt som gjennomsnitt ± SEM.
Resultater
Eksempel 8 A
Effekten av EM-652.HC1 på energibalansen og Iipid-lipoprotein metabolismen i magre og fete Zucker hannrotter.
URMA-r-61-99
Formålet med denne studie var å bestemme virkningen av EM-652.HC1 på energibalansen og lipid-lipoproteinmetabolismen i magre og fete Zucker hannrotter. For dette formål ble EM-652.HC1 (2,5 mg/kg) administrert oralt ved tvangsforing en gang daglig i 14 dager til intakte og fete Zucker rotter.
TESTDYR
Spesie: Rattus norvegicus
Stamme: Zucker
Kjønn: Hanner
Kroppsvekt: Ved starten av doseringen var kroppsvektene omtrent:
magre rotter: 175 ± 15 g; fete rotter; 235 ± 15 g
AkklimatiserfnfT
Rottene ble akklimatisert til laboratoirebetingelser minst fem dager før begynnelsen av forsøket.
Bnr og opphold
a) Bnr:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon
under akklimatiserings- og studieperiodene.
b) Temperatur:
Temperaturen i rotterommet ble notert en gang daglig. Den tilsiktede temperatur
var 22 ± 3 °C.
c) Lys- mørke- s vklus:
Fotoperioden var 10 timer lys og 14 timer mørke. Lyset ble slått på 07:00 og
slått av 17:00.
d) Diett:
Under akklimah^ermgsperiodene får rottene en kommersiell gnagerdiett (Purina,
# 5075 ) og ledningsvann ad libitum. Under studieperiodene får rottene følgende diett (diett nr. 3) bestående av (g/100 g): Stivelse 31,2; dekstrose 31,2, kasein 20,0, maisolje 6,4; dl-Metioninin 0,3; vitaminblanding 1,0; AIN-niineral-blanding 4,9; fiber 5,0.
Rottene ble sultet (med adgang kun til vann) fra rundt 07:00 på morgenen for nekropsidagen.
Randomisering:
En dag før den første doseringsdag ble rottene veiet og tilskrevet hver gruppe for å ha grupper med ekvivalente midlere kroppsvekter.
METODER OG EKSPERIMENTELT OPPSETT
Testgrnpper:
Seksten magre og seksten fete intakte hannrotter ble tilskrevet 4 grupper på 8 dyr for gjennomføringen av studien som skissert nedenfor.
Dosering:
Administrering av testforbindelsen eller bærer startet av studiens dag 1. Den testede forbindelse EM-652.HC1 ble gitt som suspensjon i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsforing (0,5 ml/foring/rotte) en gang daglig i 14 dager. Rotter fra kontrollgruppene fikk bærer alene (0,5 ml/tvangsforing/rotte) i samme tidspunkt.
Kroppsvekter
Under akklimatisermgsperioden ble dyrene veiet en dag før start av doseringen for randomisering. Derefter ble rottene veiet den første doseringsdag og hver 2. dag derefter så vel som på nekropsidagen. Kroppsvektene noteres med en nøyaktighet på 1 g.
Næringsforbruk
Næringsforbruket ble evaluert hver 2. dag under studieperioden.
Avlivningsmetode
Efter en cirka 6 timers fasteperiode ble dyrene nekropsert (cirka 30 timer efter den siste dosering). De ble anestetisert med ketarnin-xylazin og blod trukket av ved kardialpunktering.
Blodprøver
Blodlipider (totalkolesterol (CHOL) og triglycerider (TG)) og glukose ble målt på frosne plasmaprøver ved bruk av en Boehrmger Mannheim Diagnostic Hitachi 911 Analyzer (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems). Sirkulerende hormoner og substrater (Leptin, Insulin) ble målt på frosne plasmaprøver med de følgende kit:
Leptin: Linco RIA kit
Insulin: Linco RIA kit
Samlede organer og vev
En del av leveren (~1 g) ble frosset i flytende nitrogen for ytterligere bestemmelse av TG- og CHOl^innholdet (Folch's metode). Det retroperiotoneale adiposevev og soleus (muskel) ble samlet og frosset i flytende nitrogen for ytterligere undersøkelse av lipoprotein lipase (LPL) aktiviteten. Den ventrale prostata, testikler og seminalvesikler ble samlet. Prostata testes (høyre og venstre sammen) og høyre seminalvesikel (tom for fluid) ble veiet. De høyre seminalvesikler ble kassert.
Eksempel 8b
Virkningen av EM-652.HCI på energibalanse og lipid-lipoproteinmetabolisme i magre og fete Zucker hunnrotter.F
URMA-r-47-99
Formålet med denne studie er å bestemme effekten av EM-652.HC1 på energibalanse og Upid-lipoproteinmetabolisme i magre og fete Zucker hunnrotter. For dette formål ble EM-652.HC1 (2,5 mg/kg) administrert oralt (tvangsforing) en gang daglig i 14 dager til intakte magre og fete Zucker hunnrotter.
TESTDYR SPESIFISERING:
Spesie: Rattus norvegicus
Stamme: Zucker
Kjønn: Hunner
Kroppsvekt: Ved start av dosering var kroppsvekten omtrent: magre rotter: 114 ± 2 g; fete rotter; 182 ± 6 g
Akklimatisering
Rottene ble akklimatisert til laboratoriebetingelser minst fem dager før begynnelsen av forsøket.
Bnr og opphold
a) Bur:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon under akklimatiserings- og studieperioden.
b) Temperatur:
Temperaturen i rotterommet ble notert en gang daglig. Den tilsiktede temperatur
var22±3°C.
c) Lvs- mørke- svklns:
Fotoperioden var 10 timer lys og 14 timer mørke. Lyset ble slått på 07:00 og
slått av 17:00.
d) Diett:
Under akklimatiseringsperiodene får rottene en kommersiell gnagerdiett (Purina,
# 5075 ) og ledningsvann ad libitum. Under studieperiodene får rottene følgende diett (diett nr. 3) bestående av (g/100 g): Stivelse 31,2; dekstrose 31,2, kasein 20,0, maisolje 6,4; dl-Metioninin 0,3; vitaminblanding 1,0; AIN-mineralblanding 4,9; fiber 5,0. Rottene ble sultet (med adgang kun til vann) fra rundt 07:00 på morgenen for nekropsidagen.
Randomiseringen:
To dager før den første doseringsdag ble rottene veiet og tilskrevet hver gruppe for å ha grupper med ekvivalent midlere kroppsvekter.
METODER OG FORSØKSOPPSETT
Testgrupper:
Seksten magre og seksten fete intakte hunnrotter ble tilskrevet 4 grupper med 8 rotter for å gjennomføre studien som skissert nedenfor.
Dosering:
Administrering av den testede forbindelse eller bærer startet dag 1 av studien. Den testede forbindelse EM-652.HC1 ble gitt som suspensjon i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsforing (0,5 ml/foring/rotte) en gang daglig i 14 dager. Rotter fra kontrollgruppen fikk bæreren alene (0,5 mVtvangsforing/rotte) i samme tidsrom.
Kroppsvekter:
Under akklimatiseringsperioden ble dyrene veiet to dager før starten av doseringen for randomisering. Derefter ble rottene veiet på dag 1 av studien og hver 2. dag under studieperioden så vel som på dagen for nekropsi. Kroppsvektene ble notert med en nøyak-tighet på 1 g.
Næringsforbruk
Næringsforbruket ble bedømt hver 2. dag under studieperioden
Avlivningsmetode
Efter en rundt 6 timers fasteperiode ble dyrene nekropsert (rundt 30 timer efter siste dosering). De ble anestetissert med ketamin-xylazin og blod trukket av ved kardialpunktering.
Blodprøver
Blodlipider (totalkolesterol (CHOL) og triglycerider (TG)) og glukose ble målt på frosne plasmaprøver ved bruk av en Boehringer Mannheimd Diagnostic Hitachi 911 Analyzer (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems). Sirkulerende hormoner og substrater (leptin, insulin, kortikosteron) ble målt på frosne plasmaprøver med de føl-gende kits:
Samlede organer oe vev
Leveren ble samlet og veiet. En del av leveren (~ 1 g) ble frosset i flytende nitrogen for ytterligere bestemmelse av TG og CHOL innholdet (Folch's metode). Adrenalene ble samlet, veiet (venste og høyre sammen) og kassert. Uterus og ovarier ble samlet, veiet og holdt i 10 % bufret formalin for ytterligere histologiske undersøkelser. Venstre og høyre ovarier (uten ovidukt) ble veiet sammen.
Eksempel 9
Effektene av EM-652.HC1 og DHEA, administrert alene eller i kombinasjon, på energibalansen og lipid-lipoproteinmetabolismen hos rotter.
URMA-r-03-99
Formålet med denne studie var å bestemme vkkningene av EM-652.HC1 og DHEA, administrert alene eller i kombinasjon, på energibalansen og lipid-npoprotrinmetabolismen hos rotter. Effekten av behandlingene ble bedømt på mange parametre efter en 20 dagers behandling med EM-652.HC1 (0,5 mg/rotte, ~ 2,5 mg/kg, per os) og DHEA (20 mg/rotte, -100 mg/kg, topisk applikering), administrert alene eller i kombinasjon, til intakte (INT) og ovarieektomiserte (OVX) hunnrotter som fikk en høysukrose-høyfettdiett. For sammenligningens skyld fikk en intakt og ovarieektomisert kontrollgruppe den anrikede diett mens andre kontrolldyr (intakte og OVX) mottok den kommersielle gnagerdiett.
TESTDYR:
Spesie: Rattus norvegicus
Stamme: Sprague-Dawley rotter (Crl:CD® (SD) BR VAF/Plus™) Kjønn: Hunner
Kroppsvekt: Ved starten av doseringen var kroppsvekten rundt 190-220 g.
Akklimatisering
Rottene ble akklimatisert til laboratoriumbetingelser minst fem dager før begynnelsen av forsøket.
Bur og opphold
a) Bur:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon under akklimatiserings- og studieperioden.
b) Temperatur:
Temperaturen i rotterommet ble notert en gang daglig. Den tilsiktede temperatur
var 22±3°C.
c) Lys- mørke- s vklus:
Fotoperioden var 10 timer lys og 14 timer mørke. Lyset ble slått på 06:00 og
slått av 16:00.
d) Diett:
Under akMimatiseringsperioden får rottene en kommersiell gnagerdiett (Purina,
# 5075 ) og ledningsvann ad libitum. Under studieperioden får gruppene 1 og 2 den kommersielle dietten mens gruppene 3 til 10 får en høysukrose-høyfett-diett bestående av (g/100 g): Sukrose 45; maisolje 10; spekk 10; casein 22,5;
dLmetionin 0,3; vitaminblanding 1,2; AIN-76 mmeralblandrng 5,5; fiber 5,5. Rottene ble sultet (med adgang kun til vann) fra rundt 22:00 på kvelden før nekropsidagen.
Randomiseringen:
Noen dager efter ankomsten ble rottene veiet og tilskrevet hver gruppe for å ha grupper med ekvivalent midlere kroppsvekter.
METQDEER OG FORSØKSOPPSETT
Testgrupper:
80 rotter ble tilskrevet 10 grupper a 8 rotter for gjennomføring av studien nedenfor.
Dyrepreparering:
På dagen 0 av studien ble rotter fra de egnede ovarieektomisert (ved bilateralt flanke-innsnitt) under isoflurananestesi. Intakte rotter ble skamoperert.
Dosering:
Administrering av de testede forbindelser eller bærer startet dagen efter ovarieektomi (dag 1). Den testede forbindelse EM-652.HC1 ble gitt som suspensjon i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsforing (0,5 ml/foring/rotte) en gang daglig i 20 dager mens DHEA ble gitt topisk på dorsalhuden (0,5 ml/applikasjon/rotte) en gang daglig i samme periode. Rotter fra kontrollgrupper mottok bæreren alene (per os og topisk). Rottene ble avlivet på dag 21 av studien cirka 24 timer efter siste dosering.
Kroppsvekter
Rottene ble veiet p dag 0 (kirurgi) og hver 2. dag under studieperioden og på nekropsidagen. Kroppsvektene er angitt med en nøyaktighet på 1,0 g.
Næringsforbrnk
Næringsforbruket ble bedømt hver 2. dag under studieperioden.
Avlivningsmetode
På dag 21 av studien ble nattfastede rotter avlivet cirka 24 timer efter siste dosering. De ble anestetisert med ketamin-xylazin og blod trukket ved kardial punktering.
Blodprøver
Blodlipider (totalkolesterol og triglycerider) ble målt på frosne serumprøver ved bruk av en "Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 Analyzer" (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems). Sirkulerende hormoner og substrater (insulin, leptin, glukose) ble målt på serumprøver som følger:
Samlede organer og vev
De følgende vev ble samlet og veiet for alle dyr:
Muskel (soleus og VLM), fett (retroperitonealt og inguinalf), hjerte, brunt adiposevev. Hjernen ble også samlet.
Et stykke lever ble frosset for senere bestemmelse av TG og CHOL innholdet (Folchs metode) og de andre vev ble bearbeidet for bestemmelse av LPL aktivitet. Uterus (og ovarier i intakte grupper) ble fjernet, strippet for gjenværende fett, veiet og holdt i 10 % bufret formalin.
Eksempel 10
Effekten av EM-652-HC1, TSE 424, Lasofoxifen, LY 353381 og Raloxifen på energibalansen og lipid-lipoproteinmetabolismen i ovarieektomiserte hunnrotter.
URMA-r-45-00
Gjenstanden for denne studie var å bestemme effekten på energibalanse og lipid-lipoproteinmetabolismen i rotter efter behandling med forskjellige selektive østrogenreseptormodulatorer som beskrevet i litteraturen og for å sammenligne de oppnådde resultater med de for EM-652.HC1. For dette formål ble testforbindelsene administrert ved oral tvangsforing i 20 dager (0,5 mg/rotte for hver forbindelse, 0,5 ml/rotte) i 0,4 % metylcellulose til ovarieektomiserte hunnrotter. Intakte kontroller, ovarieektomisert (OVX) kontroll og OVX rotter behandlet med 17p-østradiol (E2) ble benyttet som referanse.
TESTDYR:
Bur og opphold
a) Bur:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon under akklimatiserings- og studieperioden.
b) Temperatur:
Omgivelsesbetingelsene (temperatur, fuktighet) i rotterommet ble notert kontinuerlig ved anvendelse av et komputerstyrtautomatisert system. Målbetingelsene var 22 ± 3 °C og 50 ± 20 % relativ fuktighet.
c) Lys- mørke- s yklus:
Fotoperioden var 10 timer lys og 14 timer mørke. Lyset ble slått på 07:15 og
slått av 17:15.
d) Diett:
Under akMmiau^eringsperioden fikk rottene en sertifisert gnagerdiett (Lab Diett
nr. 5002, pellet) og ledningsvann ad libitum mens de under studieperioden mottok en høykarbohydratdiett (diett nr. 3) og ledningsvann ad libitum. Dietten bestod av (g/100 g): Stivelse 31,2; dekstrose 31,2, kasein 20,0, maisolje 6,4; dl-Metioninin 0,3; vitaminblanding 1,0; ATN-76 mineralblanding 4,9; fiber 5,0.
Rottene ble sultet (med adgang kun til vann) fra rundt 07:00 om morgenen for nekropsidagen.
Randomisering:
Rottene ble tilskrevet hver gruppe for å ha ekvivalent midlere kroppsvekter.
METODER OG FORSØKSOPPSETT
Testerupper:
77 rotter ble tilskrevet 8 grupper på 9-10 rotter for gjennornføring av den nedenfor skis-serte studie.
Dvrepreparering:
På dag 0 av studien ble rotter fra gruppene 2 til 8 ovaiieektomiset (ved bilateral flanke-innsnitt) under Isofluran anestesi. Rotter fra gruppe 1 ble skam-operert.
Kroppsvekter
Rottene ble veiet på dag 0 (kirurgi) og så hver annen dag under studieperioden så vel som på nekroskopidagen.
Næringsforbruket
Næringsforbruket ble bedømt hver 2. dag.
Kroppssammensetning ( fettprosent)
For å bestemme effekten av behandlingen på fettprosenten ble kroppssarmnensetning målt på dag 17 av studien ved bruk av dual energi røntgen absorptiometri (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA).
Avlivningsmetode
På dag 21 av studien og rundt 24 timer efter den siste dosering og efter 6 timers fasting ble dyrene avlivet under Ketamin-Xylarnin anestesi ved exsanguinering via abdominal aorta.
Blodprøver
Blodlipider (totalkolesterol og triglycerider) og glukose ble målt på frosne serumprøver ved bruk av en "Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911 Analyzer" (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems). Sirkulerende hormoner og substrater (insulin og leptin) ble målt på serumprøver ved bruk av de følgnede kits:
Insulin: Linco RIA kit
Leptin: Linco RIA kit
Samlede organger og vev
De følgende vev ble samlet og veiet:
Muskel (høyre soleus og høyre VLM), fett (høyre retriperitoneale og høyre inguinale), brunt adiposevev, hjerte, lever, uterus og vagina.
Et stykke av leveren (~ 0,5 g) ble frosset i flytende nitrogen for senere bestemmelse av TG og CHOL innhold (Folchs metode). Et stykke på ~ 0,1 g av alle vev (bortsett fra uterus og vagina) ble frosset i flytende nitrogen og holdt ved - 800 for senere bestemmelse av lipoprotein-lipase (LPL) aktiviteten. Uterus og vagina ble holdt i 10 % bufret formalin for ytterligere histologisk undersøkelse. Dyrekadaveret ble anbragt i en metall-boks og holdt ved - 20 °C inntil målinger av energibalansen.
Resultater
Eksempel 11
Effekten av forbindelsen ifølge oppfinnelsen så vel som for kjente forbindelser på alka-Iifosfataseaktiviteten i humane endometriale Ishikawa aenokarcinomceller.
MATERIELL
Opprettholdelse av forrådscellekulturer
Den humane Ishikawa cellelinje avledet fra en godt differensiert endometrial adenokar-cino ble vennlig stilt til disposisjon av Dr. Erlio Gurpide, The Mount Sina Medical Cen-ter, New York, NY. Ishikawa cellene ble rutinemessig holdt i Eagle's Minimum Essen-tielt Medium (MEM) inneholdende 5 % (vol/vol) FBS og supplert med 100 U/ml penicillin, 100 ug/ml streptomycin, 0,1 mM ikke-essensielle aminosyreoppløsning. Cellene ble anbragt i Falcon T75 kolber ved en densitete på 1,5 x 10<6> celler ved 37 °C.
Cellekulturforsøk
24 timer før starten av et forsøk ble medium av nærkonfluente Ishikawaceller erstattet med frist østrogenfritt basalmedium, (EFBM) bestående av 1:1 (v:v) blanding av fenol rød-fri Hams F-12 og Dulbeccos modifiserte Eagle's Medium (DMEM), supplert med 100U/ml penicillin, 100 ug/ml streptomycin, 2 mM glutamin, og 5 % FBS, behandlet to ganger med dekstran-belagte trekull for å fjerne endogene steroider. Cellene ble så høs-tet med 0,1 % pancreatin (Sigma) og 0,25 mM HEPES, resuspendert i EFBM og anbragt på plate i Falcon 96 brønners flatbunnede mikrotiterplatler ved en densitet på 2,2 x IO<4> celler per brønn i et volum på 100 ul og tillatt adhesjon til overflaten av platen i 24 timer. Derefter ble medium erstattet med friskt EFBM inneholdende de indikerte kon-sentrasjoner av forbindelser i et sluttvolum på 200 u/l. Celler ble inkubert i fem dager med en mediumforandring efter 48 timer.
Alkalisk fosfataseanalyse
Ved slutten av inkuberingsperioden ble mikrotiterplatene invertert og vekstmedium dekantert. Platene ble skyllet med 200 ul per brønn PBS (0,15 M NaCl, 10 mM natrium-fosfat, pH 7,4). PBS ble så fjernet fra platene mens man forsiktig efterlot noe gjenværende PBS, og vaskeprosedyren ble gjentatt en gang. Den bufrede saltoppløsning ble så dekantert og de inverte plater ble forsiktig behandlet med et papirhandkle. Efter erstat-ning av dekslene ble platene anbragt med - 80 °C i 15 min. fulgt av tining ved romtemperatur i 10 min. Platene ble så anbragt på is og 50 ul av en iskold oppløsning inneholdende 5 mM p-nitrofenylfosfat, 0,24 mM MgCb og 1 M dietanolamin (pH 9,8) ble tilsatt. Platene ble så oppvarmet i romtemperatur og den gule farve fra produksjonen av p-nitrofenyl ble tillatt utvikling (8 min). Platene ble overvåket ved 405 nm i en en-zymforbundet immunoabsorbentanalyseplateleser (BIO-RAD, modell 2550 EIA Rea-der).
Beregninger
Dose-responskurvene så vel som ICso-verdiene ble beregnet ved bruk av en veiet iterativ ikke-lineær kvadratregresjon.
Eksempel 12
Effekten av EM-652.HC1 og FCE 424 på proliferering av humanbrystcancer MCF-7 cellelinjen.
Metoder:
Opprettholdelse av forrådscellekulturer
MCF-7 humanbrystcancerceller ble oppnådd fa the American Type Culture Collection # HTB 22 ved passasje 147 og ble dyrket rutinemessig i fenol rød-fritt Dulbeccos modi-fisert Eagles Ham Fl2 medium med supplementene som nevnt ovenfor og 5 % FBS. MCF-7 human biystadeonokarcmomcellelinjen ble avledet fra pleuraleffusjonen av en kaukasisk 69 år gammel Icvinnelig pasient. MCF-celler ble benyttet mellom passasjen 148 og 165 og subdyrket hver uke.
Celleprolifereringsstudier
Celler i den sene logaritmiske vektfase ble høstet med 0,1 % pankreatin (Sigma) og resuspendert i det egnede medium inneholdende 50 ng bovin insulin/ml og 5 % (volum/volum) FBS som var behandlet to ganger med dekstranbelagte trekull for å fjerne endogene steroider. Cellene ble bragt på plate i 24 brønners Falcon plastkulturplater (2 cm<2>/brønn) med den antydede densitet og tillatt adhesjon til overflaten av platen i 72 timer. Derefter ble mediet erstatttet med friskt medium inneholdende de antydede kon-sentrasjoner av forbindelser fortynnet fra 1000 x forrådsoppløsninger i en 99 % redestil-lert etanol i nærvær eller fravær av E2. Kontrollceller mottok kun den etanoliske bærer (0,1 % EtOH, volum/volum). Celler ble inkubert i de spesifiserte tidsintervaller med mediumforandring i 2- eller 3-dagers intervaller. Celleantallet ble bestemt ved måling av DNA innholdet.
Beregninger og statistisk analyse
Dose-responskurvene så vel som ICso-verdiene ble beregnet ved bruk av en veiet, iterativ ikke-lineær siste kvadratregresjon. Alle resultater er uttrykt som gjennomsnitt
±SEM.
Eksempel 13
Sammenligning av effekt på uteri nvekt, fett og lipid av EM-652.HC1, TSE 424 og lasofoxifen, administrert alene eller i kombinasjon med EM-652.HCI, til ovarieektomiserte hunnrotter.
URMA-r-44-00
Formålet med denne studie er å sammenligne effekten på uterin- og vaginalhistologien efter behandling med EM-652.HC1, TSE 424 og lasofoxifen, administrert alene eller i kombinasjon med EM-652.HC1, til ovarieektomiserte hunnrotter. For dette formål administreres hver forbindelse oralt i 20 dager til ovarieektomiserte hunnrotter og ved slutten av behandlingsperiodene samles og veies uterus og fett.
TESTDYRSPESIFIKAS JONER:
Bur og opphold
a) Bur:
Rottene ble huset individuelt i rustfrie stålbur av konvensjonell konstruksjon under akklimaitserings- og studieperioden.
b) Temperatur:
Omgivelsesbetingelsene (temperatur, fuktighet) i rotterommet ble notert kontinuerlig ved anvendelse av et komputerstyrtautomatisert system. Målbetingelsene var 22 ± 3 °C og 50 ± 20 % relativ fuktighet.
c) L vs- mørke- s vklus:
Fotoperioden var 12 timer lys og 12 timer mørke. Disse parametre ble angitt
kontinuerlig ved bruk av et validert datastyrtautomatisert system. Lyset ble slått på 07:15 og slått av 19:15.
d) Diett:
Sertifisert gnagerføde (Lab Diet # 5002, pellets) og ledningsvann ble tilveiebragt
adUbitum.
Randomisering:
Rottene ble tilskrevet hver gruppe vilkårlig på tidspunkte for ovariektomi.
Testgrupper:
70 rotter ble separert i 7 grupper på 9 til 11 dyr for gjennomføring av studien som skissert nedenfor.
Dyrepreparering:
Dyr fra gruppene 2 til 9 ble ovarieektomisert under isofluranindusert anestesi dag 1 av studien.
Dosering;
Bæreren eller de testede forbindelser ble gitt som suspensjon i 0,4 % metylcellulose ved oral tvangsffiring (0,5 ml/foring/rotte) fra studiens dag 2 til dag 21.
Kroppsvekter:
Rottene ble veiet på studiens dag 1 og ved nekropsi (SD 22).
Avlivnin<g>smetode:
Cirka 24 timer efter den siste dosering ble overnattfastede rotter avlivet under isofluranindusert anestesi ved eksanguinering via abdominal aorta.
Samlede organer og vev
Uteri og retroperitonealt adiposevev ble fjernet og veiet.
FARMASØYTISKE PREPARATEKSEMPLER
Nedenfor følger som ikke-begrensende eksempler flere farmasøytiske preparater som anvender foretrukne aktive SERM EM-800 eller EM-652.HC1 alene eller i kombinasjon med en av de foretrukne aktive sex steroid forløpere DHEA, androst-5-en-3b,17b-diol 3-acetat elel androst-5-en-3b,17b-diol dmemisuksinat. Andre forbindelser ifølge oppfinnelsen eller kombinasjoner derav kan benyttes i stedet for (eller i tillegg til) EM-800 eller EM-652.HC1, DHEA, androst-5-en-3b, 17b-diol 3-aceta eller androst-5-en-3b-17b-diol dibemisuksinat. Konsentrasjonen av aktiv bestanddel kan varieres over et vidt område som her beskrevet. Mengdene og typene av andre bestanddeler som kan inkluderes er velkj ente i teknikken.
Eksempel A
De foretrukne SERMer ifølge oppfinnelsen administreres oralt.
Tablett
Eksempel B
Kapsler
Farmasøytisk preparat for kombinasionsterapier Eksempel C
Tablett
KIT EKSEMPLER
Som angitt nedenfor vises det som ikke-begrensende eksempler forskjellige kits som benytter foretrukne aktive SERM'er EM-800 og EM-652.HC1 og foretrukne sex steroid forløpere DHEA, androst-5-en-3b,17b-diol 3-acetat eller androst-5-en-3b,17b-diol dihemisuksinat.
Andre forbindelser ifølge oppfinnelsen eller kombinasjoner derav kan benyttes i stedet for (eller i tiUegg til) EM-800 eller EM-652.HC1, DHEA, androst-5-en-3b,17b-diol 3-acetat eller androst-5-en-3b, 17b-diol dihemisuksinat. Konsentrasjonen av en eller flere aktive bestanddeler kan varieres over et vidt spektrum som diskutert her. Mengdene og typene av andre bestanddeler som kan inkluderes er velkjente i teknikken.
Eksempel A
SERM'en administreres oralt mens sex steroid forløperen administreres perkutant.
SERM sammensetning
for oral administrering (kapsler)
Sex steroid forløper preparat for topisk administrering (gel)
Eksempel B
SERM'er og sex steroid forløperen administreres oralt.
Ikke-steroid antiøstxogensammensetning for oraladmimstrering.
Kapsler
Sex steroid forløper sammensetning for oraladmimstrering.
G^latinkapsler
Andre SERM'er kan benyttes i stedet for EM-800 eller EM-652.HC1 i formuleringene ovenfor og videre kan andr sex steroid inhibitorer benyttes i stedet for DHEA, androst-5-en-3b,17b-diol 3-acetat eller andros-5-en-3b,17b-diol dmernisuksinat. Mer enn en SERM eller mer enn en forløper kan innarbeides, i hvilket tilfelle den kombinerte vekt-% andel fortrinnsvis er den for vekt-% andelen for den enkle forløper eller enkle SERM som er gitt i eksemplene ovenfor.
Oppfinnelsen er beskrevet uttrykt ved foretrukne utførelsesformer og eksempler men er ikke begrenset til dette. Fagmannen på området vil lett erkjenne den bredere anvende-lighet og ramme for oppfinnelsen slik den er begrenset kun av de vedlagte krav.

Claims (3)

1. Anvendelse av en selektiv østrogenreseptormodulator med den følgende generelle formel: der Ri og R2 uavhengig er valgt blant hydrogen, hydroksyl og -OM (der M er valgt blant rett og forgrenet C3^-alkenyl, rett eller forgrenet C3.4 alkynyl); Ger-CH3; og R3 er en gruppe valgt fra gruppen bestående av pyrrolidynyl, piperidin, morfolin og NRaRb (der Ra og Rb uavhengig er hydrogen, rett eller forgrenet Ci-e-alkyl, rett eller forgrenet C3-6-alkenyl og rett eller forgrenet C3-6-alkynyl), eller et farmasøytisk aksepta-belt salt derav, for fi-emstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for å utvikle insulinresistens, hvor nevnte medikament administreres til et individ i behov av slik behandling eller redukasjon.
2. Anvendelse ifølge krav 1, hvor nevnte behandling ytterligere omfatter administrering av en terapeutisk effektiv mengde av et østrogen valgt fra østradiol og premarin.
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvori nevnte østrogenreseptormodulator er EM-652.HC1
NO20020037A 1999-07-06 2002-01-04 Anvendelse av en selektiv ostrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for a utvikle insulinresistens NO329614B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14240799P 1999-07-06 1999-07-06
PCT/CA2000/000798 WO2001001969A2 (en) 1999-07-06 2000-07-05 Methods of treating and/or suppressing weight gain

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20020037D0 NO20020037D0 (no) 2002-01-04
NO20020037L NO20020037L (no) 2002-03-04
NO329614B1 true NO329614B1 (no) 2010-11-22

Family

ID=22499734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20020037A NO329614B1 (no) 1999-07-06 2002-01-04 Anvendelse av en selektiv ostrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for a utvikle insulinresistens

Country Status (25)

Country Link
US (2) US6710059B1 (no)
EP (1) EP1196163B1 (no)
JP (1) JP4790178B2 (no)
KR (1) KR101141763B1 (no)
CN (1) CN1390126B (no)
AR (1) AR034091A1 (no)
AT (1) ATE447947T1 (no)
AU (3) AU5957500A (no)
BR (1) BR0012354A (no)
CA (1) CA2376158C (no)
DE (1) DE60043305D1 (no)
DK (1) DK1196163T3 (no)
HK (1) HK1046240B (no)
HU (1) HU230543B1 (no)
IL (2) IL147485A0 (no)
MX (1) MX270786B (no)
MY (1) MY134574A (no)
NO (1) NO329614B1 (no)
NZ (1) NZ516453A (no)
PL (1) PL208972B1 (no)
RU (3) RU2327461C2 (no)
TR (2) TR200502284T2 (no)
TW (1) TWI359015B (no)
WO (1) WO2001001969A2 (no)
ZA (1) ZA200200085B (no)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6465445B1 (en) * 1998-06-11 2002-10-15 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US7005428B1 (en) * 1998-06-11 2006-02-28 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
MXPA00012304A (es) * 1998-06-11 2003-05-15 Endorech Inc Composiciones farmaceuticas y usos para el androst-5-ene-3beta, 17 beta-diol.
US6560217B1 (en) 1999-02-25 2003-05-06 3Com Corporation Virtual home agent service using software-replicated home agents
HU230543B1 (hu) * 1999-07-06 2016-11-28 Endorecherche, Inc. Inzulinrezisztencia kezelésére és/vagy megakadályozására szolgáló gyógyszerkészítmények
WO2001026651A2 (en) * 1999-10-14 2001-04-19 Endorecherche, Inc. Selective estrogen receptor modulators in the treatment or reduction of the risk of acquiring hypertension, cardiovascular diseases, and insulin resistance
RU2342145C2 (ru) * 2000-01-28 2008-12-27 Андорешерш, Инк. Селективные модуляторы рецептора эстрогена в комбинации с эстрогенами
ES2252524T3 (es) 2001-09-24 2006-05-16 Bayer Pharmaceuticals Corporation Preparacion y uso de derivados de 1,5,6,7-tetrahidropirrolo(3,2-c)piridina para el tratamiento de la obesidad.
WO2003077847A2 (en) 2002-03-12 2003-09-25 Merck & Co., Inc. Substituted amides
WO2004054573A1 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 N.V. Nutricia Method and composition for inhibiting carbohydrate digestion
US7074779B2 (en) 2003-07-02 2006-07-11 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Estrieno[3,2-b]/[3,4-c]pyrrole derivatives useful as modulators of the estrogen receptors
EP1802312B1 (en) 2004-10-20 2015-09-16 Endorecherche Inc. Sex steroid precursor in combination with a selective estrogen receptor modulator for the prevention and treatment of vaginal atrophy in postmenopausal women
US20060234993A1 (en) * 2005-04-13 2006-10-19 Eric Marchewitz Use of androstane derivatives for enhancing physical performance
US20070009564A1 (en) * 2005-06-22 2007-01-11 Mcclain James B Drug/polymer composite materials and methods of making the same
JP2008545012A (ja) * 2005-06-29 2008-12-11 ワイス 結合型エストロゲンおよびバゼドキシフェンの医薬処方
US20090062909A1 (en) * 2005-07-15 2009-03-05 Micell Technologies, Inc. Stent with polymer coating containing amorphous rapamycin
JP5756588B2 (ja) 2005-07-15 2015-07-29 ミセル テクノロジーズ、インコーポレイテッド 制御されたモルホロジーの薬剤粉末を含むポリマーコーティング
PL2019657T3 (pl) 2006-04-26 2015-10-30 Micell Technologies Inc Powłoki zawierające wiele leków
US8636767B2 (en) 2006-10-02 2014-01-28 Micell Technologies, Inc. Surgical sutures having increased strength
US9539593B2 (en) * 2006-10-23 2017-01-10 Micell Technologies, Inc. Holder for electrically charging a substrate during coating
US11426494B2 (en) 2007-01-08 2022-08-30 MT Acquisition Holdings LLC Stents having biodegradable layers
EP2111184B1 (en) 2007-01-08 2018-07-25 Micell Technologies, Inc. Stents having biodegradable layers
NZ580469A (en) * 2007-04-17 2012-05-25 Micell Technologies Inc Coronary stents having biodegradable layers
JP2010527746A (ja) * 2007-05-25 2010-08-19 ミセル テクノロジーズ、インコーポレイテッド メディカルデバイスコーティング用ポリマーフィルム
US8268806B2 (en) 2007-08-10 2012-09-18 Endorecherche, Inc. Pharmaceutical compositions
WO2009051780A1 (en) * 2007-10-19 2009-04-23 Micell Technologies, Inc. Drug coated stents
MX2010011485A (es) 2008-04-17 2011-03-01 Micell Technologies Inc Stents que contienen capas bioadsorbibles.
WO2011009096A1 (en) 2009-07-16 2011-01-20 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
AU2009270849B2 (en) 2008-07-17 2013-11-21 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US8834913B2 (en) * 2008-12-26 2014-09-16 Battelle Memorial Institute Medical implants and methods of making medical implants
EP2411440B1 (en) * 2009-03-23 2018-01-17 Micell Technologies, Inc. Improved biodegradable polymers
EP2410954A4 (en) * 2009-03-23 2014-03-05 Micell Technologies Inc PERIPHERAL STENTS WITH LAYERS
CA2756386C (en) * 2009-03-23 2019-01-15 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
JP2012522589A (ja) 2009-04-01 2012-09-27 ミシェル テクノロジーズ，インコーポレイテッド 被覆ステント
WO2010121187A2 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Micell Techologies, Inc. Stents having controlled elution
AU2014201406B2 (en) * 2009-06-16 2016-08-11 Endorecherche, Inc. Treatment of hot flushes, vasomotor symptoms, and night sweats with sex steroid precursors in combination with selective estrogen receptor modulators
US20100317635A1 (en) * 2009-06-16 2010-12-16 Endorecherche, Inc. Treatment of hot flushes, vasomotor symptoms, and night sweats with sex steroid precursors in combination with selective estrogen receptor modulators
EP2455082A4 (en) * 2009-07-16 2012-12-19 Univ Kyushu Nat Univ Corp INSULIN-PRODUCING CELL INDUCER, GLUCOSE ABSORPTION ACTIVATOR AND THERAPEUTIC AGENT FOR DIABETES OR COMPLICATIONS OF DIABETES
US11369498B2 (en) 2010-02-02 2022-06-28 MT Acquisition Holdings LLC Stent and stent delivery system with improved deliverability
US8795762B2 (en) * 2010-03-26 2014-08-05 Battelle Memorial Institute System and method for enhanced electrostatic deposition and surface coatings
CA2797110C (en) 2010-04-22 2020-07-21 Micell Technologies, Inc. Stents and other devices having extracellular matrix coating
EP2580210B1 (en) 2010-06-10 2017-03-01 Seragon Pharmaceuticals, Inc. Estrogen receptor modulators and uses thereof
KR20170127044A (ko) 2010-06-16 2017-11-20 앙도르쉐르슈 인코포레이티드 에스트로겐-관련 질병의 치료 또는 예방 방법
CA2805631C (en) 2010-07-16 2018-07-31 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US10464100B2 (en) 2011-05-31 2019-11-05 Micell Technologies, Inc. System and process for formation of a time-released, drug-eluting transferable coating
US10117972B2 (en) 2011-07-15 2018-11-06 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US10188772B2 (en) 2011-10-18 2019-01-29 Micell Technologies, Inc. Drug delivery medical device
US9187460B2 (en) 2011-12-14 2015-11-17 Seragon Pharmaceuticals, Inc. Estrogen receptor modulators and uses thereof
MD20140054A2 (ro) 2011-12-16 2014-10-31 Olema Pharmaceuticals, Inc. Compuşi noi de benzopiran, compoziţii şi utilizări ale acestora
CN105307597A (zh) 2013-03-12 2016-02-03 脉胜医疗技术公司 可生物吸收的生物医学植入物
WO2014186532A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Micell Technologies, Inc. Bioabsorbable biomedical implants
US9744177B2 (en) * 2014-03-10 2017-08-29 Endorecherche, Inc. Treatment of male androgen deficiency symptoms or diseases with sex steroid precursor combined with SERM
BR112018011817A2 (pt) * 2015-12-22 2018-12-04 Jiangsu Hengrui Medicine Co derivado de benzopiperidina, método de preparação do mesmo, e uso médico do mesmo
US20180207177A1 (en) * 2017-01-23 2018-07-26 Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Air Force TREATMENT OF TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER UTILIZING ANDROST-5-ENE-3b,17b-DIOL (b-AED), ANDROST-5-ENE-3b,7b,17b-TRIOL (b-AET) AND ESTRADIOL (E2)
CN114315851B (zh) * 2022-01-03 2023-10-24 安徽大学绿色产业创新研究院 一种光甘草定药物中间体的合成方法
JP7440838B1 (ja) 2023-07-06 2024-02-29 株式会社インタートレードヘルスケア 卵巣機能欠落生体の内臓脂肪蓄積抑制飲食品、及び卵巣機能欠落生体の内臓脂肪蓄積抑制薬

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504119B1 (fr) * 1981-04-17 1985-09-20 Aury Jean Pierre Beton isolant ainsi que son procede de fabrication
DE3117979A1 (de) * 1981-05-07 1983-01-20 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Neue(delta)1-pyrrolin-thiolactimaether und verfahren zu ihrer herstellung
US5395842A (en) * 1988-10-31 1995-03-07 Endorecherche Inc. Anti-estrogenic compounds and compositions
US5254568A (en) * 1990-08-09 1993-10-19 Council Of Scientific & Industrial Research Benzopyrans as antiestrogenic agents
US6060503A (en) * 1991-12-02 2000-05-09 Endorecherche, Inc. Benzopyran-containing compounds and method for their use
TW366342B (en) 1992-07-28 1999-08-11 Lilly Co Eli The use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in inhibiting bone loss
TW275584B (no) 1993-06-24 1996-05-11 Fli Lilly And Co
US5446061A (en) * 1993-11-05 1995-08-29 Eli Lilly And Company Methods for lowering serum cholesterol
US5527788A (en) * 1994-01-18 1996-06-18 Louisiana State Univ. Medical Center Foundation Method and composition for treating obesity comprising dehydroepiandrosterone (DHEA), or a derivative thereof, and an anorectic agent
US5441986A (en) 1994-07-19 1995-08-15 Pfizer Inc. Estrogen agonists as remedies for prostate and cardiovascular diseases
US5552412A (en) * 1995-01-09 1996-09-03 Pfizer Inc 5-substitued-6-cyclic-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen2-ol compounds which are useful for treating osteoporosis
ZA965346B (en) * 1995-06-30 1997-12-24 Lilly Co Eli Methods of treating neuropeptide Y-associated conditions.
IL120266A (en) * 1996-02-28 2005-05-17 Pfizer Use of estrogen antagonists and estrogen agonists in the preparation of medicaments for inhibiting pathological conditions
US5843984A (en) 1996-05-09 1998-12-01 Eli Lilly And Company Sulfated benzothiophene derivatives, methods of use and formulations containing same
AU8102398A (en) * 1997-07-09 1999-02-08 Central Drug Research Institute (dl)-2,3-diaryl-2h-1-benzopyrans
WO1999002152A1 (en) * 1997-07-10 1999-01-21 Novo Nordisk A/S Use of 3,4-diphenylchromans for the manufacture of a pharmaceutical composition for increasing insulin sensitivity
EE200000077A (et) * 1997-08-15 2000-12-15 Duke University Östrogeenist sõltuvate haiguste ja häirete vältimise ja ravi meetod
DE59804350D1 (de) * 1997-10-08 2002-07-11 Genesiscosmetics Rigths & Lice Straffung und/oder verkleinerung von fettzellen-haltigen körperpartien
UA66861C2 (uk) 1998-05-15 2004-06-15 Уайт 2-феніл-1-[4-(2-аміноетокси)бензил]індол в комбінації з естрогенами, способи лікування та продукт для лікування
MXPA00012304A (es) 1998-06-11 2003-05-15 Endorech Inc Composiciones farmaceuticas y usos para el androst-5-ene-3beta, 17 beta-diol.
US6465445B1 (en) * 1998-06-11 2002-10-15 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US7005428B1 (en) 1998-06-11 2006-02-28 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
AU771352B2 (en) * 1999-06-18 2004-03-18 Stephen James Cordell Finishing tool
HU230543B1 (hu) 1999-07-06 2016-11-28 Endorecherche, Inc. Inzulinrezisztencia kezelésére és/vagy megakadályozására szolgáló gyógyszerkészítmények

Also Published As

Publication number Publication date
ATE447947T1 (de) 2009-11-15
AU2009200258A1 (en) 2009-02-26
US6710059B1 (en) 2004-03-23
TWI359015B (en) 2012-03-01
HK1046240B (zh) 2010-09-30
JP4790178B2 (ja) 2011-10-12
KR101141763B1 (ko) 2012-05-08
CA2376158C (en) 2011-03-15
HUP0202363A3 (en) 2005-02-28
CN1390126A (zh) 2003-01-08
EP1196163A2 (en) 2002-04-17
WO2001001969A2 (en) 2001-01-11
TR200403328T2 (tr) 2005-03-21
RU2013148518A (ru) 2015-05-10
EP1196163B1 (en) 2009-11-11
DE60043305D1 (de) 2009-12-24
BR0012354A (pt) 2002-04-02
RU2008101793A (ru) 2009-07-27
DK1196163T3 (da) 2010-03-29
PL352993A1 (en) 2003-09-22
US20040034000A1 (en) 2004-02-19
AU5957500A (en) 2001-01-22
AR034091A1 (es) 2004-02-04
MY134574A (en) 2007-12-31
TR200502284T2 (tr) 2005-08-22
RU2327461C2 (ru) 2008-06-27
MXPA02000075A (es) 2003-05-23
HU230543B1 (hu) 2016-11-28
RU2636498C2 (ru) 2017-11-23
MX270786B (es) 2009-10-08
ZA200200085B (en) 2003-06-25
NO20020037D0 (no) 2002-01-04
RU2519642C2 (ru) 2014-06-20
AU2009200258B2 (en) 2012-01-12
HK1046240A1 (en) 2003-01-03
WO2001001969A3 (en) 2001-08-02
IL195860A (en) 2013-06-27
HUP0202363A2 (en) 2002-10-28
KR20020020776A (ko) 2002-03-15
IL147485A0 (en) 2002-08-14
CN1390126B (zh) 2012-06-13
NZ516453A (en) 2004-04-30
AU2005229713A1 (en) 2005-12-01
TW200803838A (en) 2008-01-16
CA2376158A1 (en) 2001-01-11
NO20020037L (no) 2002-03-04
PL208972B1 (pl) 2011-07-29
JP2003503446A (ja) 2003-01-28
US8609695B2 (en) 2013-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO329614B1 (no) Anvendelse av en selektiv ostrogenreseptormodulator for fremstilling av et medikament for behandling eller redusering av risiko for a utvikle insulinresistens
TWI258369B (en) Pharmaceutical compositions of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
KR20210048609A (ko) 선택적 에스트로겐 수용체 조절자와 복합된 성 스테로이드 전구체에 의한 안면 홍조, 혈관 운동성 증상 및 도한증의 치료
US20030040510A1 (en) Selective estrogen receptor modulators in combination with estrogens
JP2009511609A (ja) 乳癌の治療に使用されるアロマターゼ阻害薬による副作用の低減
TWI293246B (no)
TWI293251B (en) Selective estrogen receptor modulators incombination with estrogens
Kearney et al. Hormone replacement therapy-present and future

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired