TWI298256B

TWI298256B - Chloride channel opener

Info

Publication number: TWI298256B
Application number: TW091119830A
Authority: TW
Inventors: Ueno Ryuji; Cuppoletti John
Original assignee: Sucampo Ag
Priority date: 2001-08-31
Filing date: 2002-08-30
Publication date: 2008-07-01
Also published as: US20060122411A1; AU2002330747B2; JP2011102313A; JP5568021B2; EP1420794B1; BR0212233A; US7064148B2; US7253295B2; CA2458471A1; WO2003030912A1; JP4786866B2; EP1420794A1; AR036391A1; JP2005504836A; US20030130352A1; MXPA04002006A; NZ531503A; CA2458471C

Description

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五、發明說明（2 例如’於試圖找出囊性纖維變性病因時，發現稱作 CFTR(囊性纖維變性穿膜傳導調節物質）的氯離子通道。囊性纖維變性是一種最常出現於白種人的正染色體隱性遺傳病。發生於CFTR基因之基因變異（基因的變異是本病起因）係由於呼吸道、胰臟、腸道、汗腺、營養器官等之上皮細胞的CFTR功能缺陷，導致氣離子通透性減低而引起者。又由電魚的發電器官選殖的氯離子通道稱作C1C-0 者’後來發現構成一大家族（C1C家族）。C1C家族的成員例如有·存在於哺乳動物骨骼肌之dcd;存在於各種器官之上皮細胞之C1C-2 ;分部於下視丘、小腦等之ciC-3及 C1C-4 ;存在於肺、腎等之C1(>5 ;存在於腦、睪丸、骨骼肌、腎等之C1C-6-及C1C-7 ;以及特別只出現於腎臟之 C1CK-1及C1CK_2。已知CK>1之異常會造成先天性肌僵直病；C1C-5之異常會引發遺傳性腎石病。經濟部智慧財產局消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 因此，可開啟氯離子通道且可促進氣離子輸送之化合物咸認可影響各種細胞功能以及細胞防禦機轉，也視為口用於治療因某些因素造成氣離子通透性減低，導致細胞" 外氣離子平衡異常而發生之病變。前列腺素（下文稱作PG(S))屬於有機羧酸類成員，前另腺素包含於人類或其它哺乳類之組織或器引列 τ且具有寬廇範圍之生理活性。前列腺素出現於自然界（_次前列腺〜者通常具有式（A)所示之前列腺烷酸骨架： ” 本紐尺度適用中_家標準（CNS)A4規格（21G x 297公爱） 1298256 A7 ----- B7 五、發明說明（3 ) (α鏈)

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 另一方面，若干一次前列腺素之合成類似物具有經修飾之骨架。一次前列腺素根據五員環部分的結構可被分類成 PGAs、PGBs、PGCs、PGDs、PGEs、PGFs、PGGs、PGHs、 PGIs及PGs，又藉碳鏈部分之未飽和鍵結數目及鍵結位置可進一步分成以下三類：

種類1 : 13，14-未飽和_i5_OH

種類2 : 5,6-以及3，14-二未飽和-15-0H 種類3:5,6-、13，14-及17，18_三未飽和-15-011。此外PGFs根據9位置之羥基組態可分成α型（羥基係 α組態）以及/5型（羥基係泠組態）。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製已知PGEi、PGES及PGE3具有血管擴張、降血壓、減低胃分泌、促進腸道活動、子宮收縮、利尿、支氣管擴張以及抗潰癌活性。已知PGFla、PGF2a&卞〇卩^具有升高血壓、血管收縮、增強腸道活動、子宮收縮、黃體萎縮及支氣管縮窄等活性。也曾報告，PGEi& PGFw可於兔迴腸刺激氣離子分泌 (自然，238期26-27頁1972年，參考文獻以引用方式併入此處）；以及PGE2於人類十二指腸中誘生氣離子分泌（胃腸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） 3 313974 A7 1298256 B7___ 五、發明說明（4 ) 道學，78期32至42頁1980年，參考文獻以引用方式併入此處）。也曾報告PGE2調節子宮内膜上皮細胞的氯離子輸送（生理學期刊，508期31至47頁1998年，參考文獻以引用方式併入此處）。同時也曾報告囊性纖維變性病人之血小板氯離子輸送無法對PGEi^生反應（歐洲臨床化學及臨床生物化學期刊，33卷第6期329至335頁1995年，參考文獻以引用方式併入此處）；以及前列腺素類似物（米索普斯托（misoprostol))用於囊性纖維變性病人無法促進氯離子的分泌（美國人類遺傳學期刊，第67卷第6期1422 至1427頁2000年，參考文獻以引用方式併入此處）。此外，曾經報告PGE2開啟兔之維挎作用基底外側氣離子通道（生物化學期刊，270(32) 1995，參考文獻以引用方式併入此處）。此外也曾報告PGE2及PGF2a透過CFTR 可活化小鼠子宮内膜上皮細胞氣離子的傳導（生殖生物學，60(2) 1999) 〇但未知前列腺素化合物如何作用於氣離子通道，特別如何作用於C1C通道。 [發明之揭示] 發明人.徹底進行研究，發現前列腺素化合物可開啟氯離子通道’特別C1C通道，結果導致完成本發明。換s之’本發明係有關一種於哺乳動物體開啟Clc通道之方法，包含對該個體投予有效量之前列腺素化合物。特別本發明係有關一種治療與氣離子通透性減低相關疾病之方法’該方法包含經由對需要此種治療個體投予有效量本^@國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) --------- 4 313974 丨丨丨丨丨丨丨丨—丨丨丨丨—丨丨丨丨訂-*丨丨丨---I (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 Α7 Β7 五、發明說明（5 ) 之前列腺素化合物來開啟C1C通道。本發明進一步係有關一種開啟C1C通道之醫藥組成物，該組成物包含有效量之前列腺素化合物。特別本發明係有關一種治療哺乳動物體之與氯離子通透性減低相關疾病之醫藥組成物，其包含有效量之前列腺素化合物。又復，本發明係有關利用前列腺素化合物製造於哺乳動物體開啟C1C通道用之醫藥組成物。特別，本發明係有關利用前列腺素化合物製造用於治療與氣離子通透性減低相關疾病之醫藥組成物。 [發明之詳細說明] 此處使用之前列腺素化合物之命名係基於上式（A)表示之前列腺烷酸之編號系統。式（A)顯示C-20碳原子基本骨架，但本發明非僅囿限於具有相同破原子數之化合物。式（A)中組成前列腺素化合物基本月架之碳原子編號始於叛酸（編號1)，α鍵之碳原子朝向五員環分別編號為2至7,環中原子編號為8至12以及ω鏈原子編號為13至20。當α鏈之碳原子數減少時係始於位置2之序列開始刪減編號；而當qj鏈之碳原子數增加時，化合物係以取代化合物命名，取代化合物具有於位置2的取代基來替代羧基（c」）。同理，當ω鏈之碳原子數減少時，碳原子編號始於位置20順序刪減；以及當ω鏈之碳原子數增加時，超出位置20之碳原子以取代基命名。除非另行載明，否則化合物之立體化學同上式立體化學。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---- 幻·▲---^-----線！概略言之，依據PGD ' PGE及PGF等術語個別表示於

1298256 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 a/ 五、發明說明（6 ) 位置9及/或11帶有羥基之化合物，本說明書中，此等術語也包括於位置9及/或11有羥基以外之取代基之化合物。此種化合物稱作9_去羥-9-取代-PG化合物或11-去經-11-取代-PG化合物。帶有氫替代羥基之pg化合物簡稱為9 -或11-去經-PG化合物。如前述PG化合物之命名係基於前列腺烷酸骨架。但當化合物有類似前列腺素之部分結構時，可使用r PG」縮寫。如此α鏈延長兩個碳原子之pg化合物，換言之α鏠有9個碳原子之PG化合物命名為2-去羧-2-(2-羧乙基）-PG 化合物。同理α鏈有11個碳原子之PG化合物命名為2-去羧-2-(4-羧丁基）-?〇化合物。此外，0鏈延長兩個碳原子之PG化合物亦即ω鏈帶有1〇個碳原子之pG化合物命名為20-乙基-PG化合物。但此等化合物也可根據jupac 命名體系命名。類似物（包括經取代之衍生物）或衍生物之實例包含於 α鏈末端之羧基經酯化之Pg化合物；α鏈經延長之化合物；其生理可接受性鹽；於2_3位置有雙鍵或位置有參鍵之化合物；於位置3、5、6、16、17、18、19及/或20 ▼有取代基之化合物；以及於位置9及/或11帶有低碳數烷基或羥（低碳數）烷基以置換羥基之化合物。根據本發明，於位置3、17、18及/或19之較佳取代基包括含1至4個碳原子之烷基，特別為甲基及乙基。位置16之較佳取代基包括低碳數烷基如子基及乙基、羥基、鹵原子如氯及氟，以及芳氧基例如三氟甲基苯氧基。位置本紙張尺度適國國家F準（CNS)A4七格⑵G x 297公爱） ----.—,-------------訂· —^-----線— (請先閱讀背面之注音3事項再填寫本頁) 1298256 A7 -~------βΐ________ 五、發明說明（7 ) 17之較佳取代基包括低碳數烷基如甲基及乙基、羥基、_ 原子如氯及氟，芳氧基如三氟甲基苯氧基。位置20之較佳取代基包括飽和或未飽和低碳數烷基如C1-4烷基、低碳數烧氧基如C1-4烷氧基以及低碳數烷氧烷基如C1-4烷氧-C1-4烷基。位置5之較佳取代基包括幽原子如氯及氟。位置6之較佳取代基包括形成羰基之氧代基。位置9及/或u 帶有經基、低碳數烷基或羥（低碳數）烷基取代基之前列腺素之立體化學可為α、点或其混合物。此外前述類似物或衍生物可為於ω鏈末端帶有烷氧基、環烷基、環烷氧基、苯氧基或苯基之化合物，此處該鏈比一次PGs更短。本發明中所使用之較佳化合物可以式（I)表示： [基、鹵素、低碳數烷基、羥 (低碳數）烷基或氧代基，其中L及Μ中之至少一者為氫以外之基團，以及五員環可具有至少一個雙鍵； Α為-CH2OH、_COCH2OH、_COOH或其官能衍生物； B 為-CH2_CH2_、-CH=CH-或 _<：三 C-; Z為 --------------------訂— (請先閱讀背面之注音心事項再填寫本頁)

I I k' 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 7 313974 1298256

五、發明說明（8 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製八 Λ 丨丨 R4 R5， R4 R5 或〇其中R·4及Rs為氫、經基、鹵素、低碳數燒基、低碳數烷氧基或羥（低碳數）烷基，其中&及Rs非同時為經基以及低碳數烷氧基；心為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基’其為未經取代或經以鹵素、烧基、經基、氧代基、芳基或雜環基取代，於脂肪族烴之至少一個碳原子係視需要地經以氧、氮或硫取代；以及

Ra為飽和或未飽和低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以鹵素、氧代基、羥基、低碳數烧氧基 '低碳數烷醯氧基、環（低礙數）烷基、環（低碳數）烷氧基、芳基、芳氧基、雜環基或雜環氧基取代；環（低碳數）烷基；環（低碳數）烷氧基；芳基；芳氧基；雜環基；雜環氧基。本發明中所使用之較佳化合物以式（II)表示： ----^ — — κ-----S.------ninl·----^« — φ, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 313974 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 B7 五、發明說明（9 ) 其中L及Μ為氫、羥基、齒素、低碳數烷基、羥（低碳數）烧基或氧代基，其中L及Μ中之至少一者為氫以外之基團，以及五員環可具有至少一個雙鍵； Α為-CH2OH、-COCH2OH、-COOH或其官能衍生物； B 為 _CH2_CH2-、-CH=CH_或-C 三 C-; Z為 /\ A 丨丨 R4 只5 ， ^4 只5 或〇其中R4及R5為氫、羥基、鹵素、低碳數烷基、低碳數烷氧基或羥（低碳數）烷基，其中114及R5非同時為羥基以及低碳數烷氧基；

Xi及x2為氫、低碳數烷基或鹵素；心為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以_素、烷基、羥基、氧代基、芳基或雜環基取代，於脂肪族烴之至少一個碳原子係視需要地經以氧、氮或硫取代； r2為單鍵或低碳數伸烷基；以及 r3為低碳數烷基、低碳數烷氧基、環（低碳數）烷基、環（低碳數）烷氧基、芳基、芳氧基、雜環基或雜環氧基。上式中，RiARa定義中「未飽和」一詞意圖包括至少一個或多個雙鍵及/或參鍵其隔離、分開、或順序存在於主鏈及/或分支鏈的各個碳原子間。根據尋常命名體系，存 I I-----— II--I--------^ I i^KW— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） 9 313974 A7 1298256 五、發明說明（) 在於一序列位置間之未飽和鍵係以兩個位置中較低編號表示，存在於兩個遠端位置間之未飽和鍵係以兩者的位署υ 不° 「低碳數或中等碳數脂肪族烴基」一詞表示含丨至Μ 個碳原子（對分支鏈而言以1至3個碳原子為佳杯至10個，特別1至8個碳原子之直鏈或分支鏈煙基。… 「鹵原子」一詞涵蓋氟、氣 '溴及碘。全文說明書中「低碳數」一詞除非另行載明，否則意圖包括含1至6個碳原子之基團。 " 「低碳數烷基」一詞表示含〗至6個碳原子之直鏈或分支鏈飽和烴基’包括例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基及己基。「低碳數伸烷基」一詞表示含i至6個碳原子之直鍵包括例如亞甲基、伸乙基、伸丙伸異丁基、伸第三丁基、伸戊基詞表示低碳數烷基_〇_基團，其中詞表示如前文定義之低碳數烷 A —y · --------------^---Awl (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 或分支鏈二價飽和烴基，基、伸異丙基、伸丁基，及伸己基。「低碳數烷氧基」-該低碳數烷基定義如前£ 「羥（低碳數）烷基」 ____________ 基其經以至少一個羥基取代例如經甲基、1-羥乙基、2-ϋ 乙基及1-甲基-1-經乙基。「低碳數烷醯氧基」一詞係指以式RCO-O-表示之基團，其中RCO-為經由如上定義之低碳數烷基氧化形成的醯基，例如乙醯基。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚） 10 313974 A7 1298256 五、發明說明（11 ) 「環（低碳數）烧基」一詞表示經由如上定義之烷基但含有三個或三個以上碳原子，該低碳數烷基經環化形成的環狀基團，包括例如環丙基、環丁基、環戊基及環己基。「環（低碳數）烧氧基」一詞表示環（低碳數）烷基-〇_基團，其中環（低碳數）烷基定義如前。「芳基」一詞包括未經取代或經取代之芳香族烴環（較佳為單環基）之實例苯基、甲笨基、二甲苯基。取代基之實例為齒原子及南（低碳數）烷基，其中該齒原子及低碳數烷基定義如前。「芳氧基」一詞係指以式ArO-表示的基團，其中Ar 為如前文定義之芳基。「雜環基」一詞包括單環至參環且較佳為單環系雜環基’其為5至14’且較佳5至1〇員環帶有視需要經取代之碳原子以及1至4個且較好1至3個1或2類型選自氮原子、氧原子及硫原子之雜原子。雜環基之實例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噚唑基、異噚唑基、噻唑基、異噻唑基、咪唑基、吡唑基、呋贊基、吡喃基、吡基、嗒哄基、 ’咬基、吡畊基、2-吡咯啉基、吡咯烷基、2-咪唑啉基、咪嗤咬基、2-吡唑啉基、哦唑啶基、哌啶基、哌哄基、嗎琳基、吲哚基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、嘌呤基、嗟嗤啉基、卡巴唑基、吖啶基、菲啶基、苯并咪唑基、苯并咪嗤啉基、苯并噻唑基、吩噻畊基。此種情況下取代基之實例包括_素以及經鹵原子取代之低碳數烧基，其中該鹵原子及低碳數烧基之定義如前。 illllllllllll — — — — — — — ^ ^ — — —- — — — 1« IIAWI (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本，，，氏烺尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 11 313974

五、發明說明（12 ) 1298256 「雜環氧基」一詞係指以式HcO-表示之基團，其中該 He為如前文定義之雜環基。 A之「官能衍生物」一詞包括鹽類（較佳為醫藥可接受性鹽類）、醚類、酯類及醯胺類。適當的「醫藥可接受性鹽類」包括習用之無毒鹽類，例如與無機鹼生成之鹽類如鹼金屬鹽（例如鈉鹽及鉀鹽）、鹼土金屬鹽（例如鈣鹽及鎂鹽）、銨鹽；或與有機鹼生成之鹽例如胺鹽（例如甲胺鹽、二甲胺鹽、環己胺鹽、胺鹽、哌啶鹽、伸乙基二胺鹽、乙醇胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、參（羥甲胺基）乙烷鹽、單甲基_單乙醇胺鹽、普羅卡因（procaine)鹽及咖啡因鹽）、驗性胺基酸鹽（例如精胺酸鹽及離胺酸鹽）、四烷基銨鹽等。此等鹽類可藉習知方法製備，例如由對應酸與鹼製備或經由鹽交換製備。驗類之實例包括燒基轉類如低碳數烧基醚類如甲醚、乙醚、丙醚、異丙醚、丁醚、異丁醚、第三丁醚、戊醚及 1-環丙基乙醚；以及中等碳數或高碳數烷基醚類如辛醚、二乙基己趟、月桂醚及鯨蠟醚；未飽和醚類如油醚以及亞麻鱗；低碳數烯基醚類如乙烯醚、烯丙醚；低碳數炔基醚類如乙炔醚及丙炔醚；羥（低碳數）烷基醚類如羥乙醚及羥異丙醚；低碳數烷氧（低碳數）烷基醚類如甲氧甲醚及^甲氧乙視需要地經取代之芳基醚類如苯醚'甲苯磺醯醚、第三丁基苯醚、水楊醯醚、3，4-二-甲氧苯醚以及苯甲醯胺基苯醚；以及芳基（低碳數）烷基醚類如醚、三苯甲醚及二苯甲醚。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規-12-Π397Τ -------------^ —Awl (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 1298256 五、發明說明（13 ) 酯類之實例包括脂肪族酯類例如低碳數烷基酯類如甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、丁酯、異丁酯、第三丁酯、戊酯及1-環丙基乙酯；低碳數烯基酯類如乙烯酯及烯丙酯；低碳數炔基酯類如乙炔酯及丙炔酯；羥（低碳數）烷基酯類如羥乙酯；低碳數烷氧（低碳數）烷基酯類如甲氧甲酯及1-甲氧乙酯；以及視需要地經取代之芳基酯類例如苯酯、甲苯酯、第三丁苯酯、水楊酯、3,4-二-甲氧苯酯以及苯甲醯胺基苯酯；以及芳基（低碳數）烷基酯例如酯、三苯甲酯及二苯甲酯。 A之醯胺表示由式-CONR’R”表示之基團，其中R，及 R”各自為氳、低碳數烷基、芳基、烷基-或芳基_績醯基、低碳數烯基及低碳數炔基以及包括例如低碳數烷基醯胺類例如甲醯胺、乙醯胺、二甲醯胺及二乙醯胺；芳基醯胺類例如苯醯胺及甲苯醯胺以及烷基-或芳基磺醯胺類例如甲基續醯胺、乙基磺醯胺及甲苯基續醯胺。 L及Μ之較佳實例包括羥基及氧代基，特別％為羥基以及L為氧代基其具有所謂的Pge型5員環結構。 Α之較佳實例為_CO〇H、其醫藥可接受性鹽、酯或醯胺。 \及X2之較佳實例為氟，所謂的16，16_二氟型。較佳之I為含i至10個碳原子，較佳6至1〇碳個原子之烴殘基。此外脂肪族烴之至少一個碳原子係視需要地經以氧、氮或硫取代。

Ri例如包括下列基團：本紙張尺度適用中國㈣標準（CNS)A4規格⑵〇 χ挪公楚） __ ---------V--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 訂L---〆----線—— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 _ B7 五、發明說明（14 ) -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-， -CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-， -ch2-ch2-ch2-ch2-ch=ch- ^ -CH2_C 三 C-CH2-CH2-CH2_， -ch2-ch2-ch2-ch2-o-ch2-， -ch2-ch=ch-ch2-o-ch2-， -CH2-CeC-CH2-0-CH2-， _CH2'CH2_CH2-CH2_CH2_CH2_CH2-， -CH2-CH—CH-CH2~CH2"CH2~CH2- 9 -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-， -CH2-C= C-CH2-CH2-CH2-CH2--CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-， -CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-， -ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2-ch2- ^ -CH2-CH2-CH2_CH2_CH2_CH2_CH=CH-， -CH2_C 三 C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，以及 -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2·。較佳之Ra為含1至10個碳原子及更佳1至8碳個原子之烴。Ra可有一或二個帶有一個碳原子之支鏈。上式（I)及（II)之環與α鏈及/或ω鏈之組態可與一次 PGs之組態相同或相異。但本發明也包括帶有一次型組態化合物與帶有非一次型組態化合物之混合物。本發明中，位置13與14間為二氫以及位置15為酮基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨丨丨丨丨丨丨丨—丨丨丨丨· I . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 14 313974 1298256 A7 B7 五、發明說明（15 (=〇)之PG化合物可經由於位置u之㈣與位置15之嗣基間形成半縮藤而達成酮基-半縮駿平衡。例如當X1及\皆為由原子特別皆為氟原子時，已顯出該化合物含有互變異構物亦即雙環化合物。若存在有此種前述互變異構物，則兩種互變異構物之比例隨分子其餘部分之結構或存在的取代基種類改變。有時與另一種異構物相比，其中一種異構物為主要之異構物。但須瞭解本發明涵蓋兩種異構物。此外本發明中所使用之15-iq基前列腺素化合物包括雙ί衣化合物及其類似物或衍生物。雙環化合物以式（III)表示 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製物；其中Α為-CH2OH、-COCH2OH、-COOH或其官能衍生 Xi’及x2’為氫、低碳數烷基或_素； Y為

或本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 ------ B7 五、發明說明（16 ) 其中R/及R5’為氫、經基、画素、低碳數烧基、低碳數烷氧基或羥（低碳數）烷基，其中r4，及r5，非同時為羥基以及低碳數烷氧基；心為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以幽素、烷基、羥基、氧代基、芳基或雜環基取代；以及 R2 ’為飽和或未飽和低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基’其為未經取代或經以自素、氧代基、經基、低碳數烧氧基、低碳數烷醯氧基 '環（低碳數）烷基、環（低碳數）烷氧基、芳基、芳氧基；雜環基或雜環氧基取代；環（低碳數）烷基；環（低碳數）烷氧基；芳基；芳氧基；雜環基；雜環氧基。 R3’為氳、低碳數烷基、環（低碳數）烷基、芳基或雜環此外，雖然本發明中使用之化合物無論是否存在有異構物皆可以基於酮類型之化學式或化學名表示，但須注意此種結構式或名稱絕非意圖排除半縮醛型化合物。本發明中任一種異構物例如個別互變異構物、其混合物或光學異構物、其混合物、外消旋混合物及其它立體異構物皆可用於相同目的。本發明中所使用之若干化合物可藉USP第 5,073,569、5，166，174、5,221，763、5,212,324、5,739，161 及6,242,485號所揭示之方法製備（此等參考文獻以引用方式併入此處）。 *Μ --------------------訂· -------！線-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 16 313974 1298256 A7

Ri_CONR-R" B7 五、發明說明（17 ) 此外，發明人發現新穎式（IV)化合物 (IV) 其中L、Μ、N、B、及Ra定義如式（I);以及 R’及R”為氫、低碳數烷基、芳基、烷基-或芳基-續醯基、低碳數烯基或低碳數炔基也可有效開啟氯離子通道。如此本發明也涵蓋前述新穎化合物。根據本發明，哺乳動物體可藉投予本發明化合物而利用本發明治療。個體可為哺乳動物體包括人類。化合物可系統性或局部施用。通常化合物係經口、靜脈注射（包括輪注）、皮下注射、直腸内、陰道内、經皮、眼部等途徑投藥。劑量係依據動物種系、年齡、體重、欲治療的症狀、期望療效、投藥途徑、治療期長短等改變。每日系統性投予i 至4次或以每曰0.0001-100毫克/千克劑量連續投藥可獲得滿意的效果。化合物較佳係調配成適合以習知方式投藥之醫率、組成物。組成物可適合供口服投藥、注射或輸注劑型，以及該組成物可為外用藥、眼用藥、栓劑或塞劑。本發明組成物進一步含有生理可接受性添加劑。此等添加劑包括用於1 5酮基-前列腺素化合物之各種成分，{列本紙張尺度剌巾® @家標準（CNS)A4規格⑵G X 2的公爱） -------- 17 313974 ‘ r - - - - - - - --------I ^.111--11 ·ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 J298256 B7 五、發明說明（18 ) =賦形劑、稀釋劑、填充劑、再溶劑、潤滑劑、佐劑、黏、:：、崩散劑、塗覆劑、包囊劑、軟膏基劑、栓劑基質、 :務劑、札化劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑、張力調節劑、 Ϊ衝劑、緩和劑、保藏劑、抗氧化劑、橋味劑、香味劑、 !色劑’功能物質例如環糊精以及可生物分解聚合物、安疋劑。添加劑為業界眾所周知，τ由製藥劑之—般蚩所逑添加劑中選用。曰前文界定化合物於本發明組成物之含量係依據組成物之配方改變’通常為0·_4 1〇〇wt%且更好為請〇1 至 1.0 wt% 〇 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製口服投藥用固體組成物之實例包括錠劑、片劑、舌下錠、膠囊劑、丸劑、散劑、粒劑等。固體組成物可經由混口或多種活性成分與至少一種無活性稀釋劑而製備。組 j物進一步含有無活性稀釋劑以外之添加劑例如潤滑劑、朋散劑及安定劑。若有所需，旋劑及丸劑可包覆腸衣或胃腸衣。錠劑及丸劑可以兩層或兩層以上覆蓋。也可吸附至持續釋放材料或接受微包囊。此外，該組成物可利用易分解材料例如明膠包囊。進-步溶解於適當溶劑如脂肪酸或脂肪酸之一-、二-或三酸甘油酯而製作成軟膠囊。舌下錠可於需要作用迅速時使用。口服投藥用之液體組成物之實例包括乳液劑溶液劑、懸浮液劑、糖漿劑以及酏劑等。該組成物進一步含有習用無活性稀釋劑如純水或乙醇。該組成物含有無活性稀釋劑以外之其它添加劑例如佐劑，例如濕潤劑及懸浮劑、本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公楚）— 訂線 313974 1298256 五、發明說明（l9 ) 甜味劑、矯味劑、香料及保藏劑。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ，種=月：成物可呈喷霧組成物形式，組成物含有-或夕種/陡成刀且可根據已知方法製備。供腸C外杈藥用之本發明之注射用組成物之實例包括無國水性或非水性溶液劑、懸浮液劑及乳液劑。水性溶液劑或懸洋液劑用之稀釋劑包括例如注射用蒸館水、生理食鹽水及林格氏溶液。溶液劑及懸浮液劑用之非水性稀釋劑包括例如丙二醇、聚乙二醇、植物油類如撖欖油，醇類如乙醇及聚山梨酸醋。該組成物進-步包含添加劑例如保藏劑、濕潤齊卜、礼化劑、分散劑等。該組成物可經由例如細菌留滞過濾器過濾、與消毒殺菌劑一起混料、或利用氣體或放射性同位素照射滅菌等方法滅菌。注射用組成物也可呈無菌粉末組成物包裝，將在使用前溶解於無菌注射用溶劑。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製組成物可為眼用組成物例如眼用滴劑或眼用軟膏劑。眼用滴劑之製法可經由將活性成分溶解於無菌水溶液例如生理食鹽水及緩衝溶液而提供’或經由組合粉末組成分提供粉狀組成物而於使用前溶解。眼用軟膏劑可經由將活性成分混合入習知軟膏基劑製備。本外用製劑包括皮膚科及耳鼻喉科使用之外用製劑，包括軟膏劑、乳膏劑、洗劑及喷霧劑。本發明之另一種劑型為栓劑或塞劑，其製法係經由將活性成分混合入習知基劑例如可可脂等可於體溫軟化之基劑，使用具有適當軟化溫度之非離子性界面活性劑來改良本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 19 313974 1298256 a? ___B7 五、發明說明（2G ) 吸收能力。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 「處理」一詞用於此處包括任一種控制手段例如預防、照顧、緩解病情、退行病情以及停止病情的進展。前述化合物開啟氯離子通道特別C1C通道，因而可_ 節各項細胞功能及細胞防禦機轉。特別本化合物可應用於治療由氣離子通透性減低引發的疾病。「開啟C1C通道」一詞用於此處包括經由開啟cic通道而活化、增進、或調節cr流、C1-分泌或C1·輸送。乳離子通透性減低引起的疾病之實例包括但非限於萎縮性肌強直病、顯示高鈣尿疾病如腎結石、便秘、焦慮、失眠、囊性纖維變性、癲癇、麻醉、氣喘、支氣管炎及神經病變。因本發明化合物特別開啟clc_2通道，故本發明化合物可用於治療囊性纖維變性、先天性肌強直病及遺傳性腎石病等疾病，該等疾病係由於C1C-2通道以外的氣離子通道功能減低所引起。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明醫藥組成物額外含有其它藥理成分，只要該等藥理成分與本發明之用途無相互抵觸即可。後文將參照試驗例說明本發明之進一步細節，但該等試驗例絕非意圖囿限本發明之範圍。合成例1 13,14-二氫-15__基_17_苯基_18，192〇_降三挪^_乙醯胺（5)之製備本紙張尺度適財關家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公着） 1298256 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（21 )

0 J (1)

AeOH/HzO/THF (2:1:1) sot: 97.7% Ο 人

1Ν·Ν·ΟΗ 於 EK3H rt , 16hr >100%

HPLC製備 (18:82 ) 回收率 rt, Ihr «4.1% 得自(¾

⑴一(2) 將3,4-二氳-2H_D比喃（〇·7〇毫升，7·67毫莫耳）添加至化合物（1)(0.350克，0.737毫莫耳）於無水二氯甲烷（10毫升）之溶液。溶液内加入樟腦磺酸（7毫克，0.03亳莫耳）。混合物於室溫授拌3 0分鐘。反應混合物倒入飽和水性碳酸氳鈉及以二氯甲烷萃取兩次。有機層以無水硫酸鎂脫水及蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（BW-300 150克，乙酸乙酯：己烷= 1:3)，蒸發獲得化合物（2)(0.463克，0.720毫莫耳， 97.7%產率）呈無色油。 (2)-(3) 於化合物（2)(0.889克，1.38毫莫耳）於乙醇（14毫升）之溶液内加入1N氫氧化鈉水溶液（6.9毫升，6.9毫莫耳）。反應混合物於室溫攪拌16小時。混合物於冰浴冷卻，然後將乙酸乙酯及水加至混合物。添加1N鹽酸（7毫升，7毫莫耳）至混合物pH變成4。混合物以乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層以飽和水性氯化鈉萃取兩次然後以無水硫酸 ----：----------------訂---------線---^1 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 21 313974 A7 B7 1298256 五、發明說明（22 ) 鎂脫水。有機層經蒸發獲得粗製化合物（3)(0.878克）呈無色油。粗製化合物（3)未經純化即用於隨後反應。 (3) -(4) 將羰基二咪唑（0.448克，2.77毫莫耳）添加至粗製化合物（3)(0.878克，1.38毫莫耳）於無水THF (9.0毫升）之溶液。混合物於室溫攪拌2小時。將2M乙基胺於THF溶液 (2.77毫升，5.54亳莫耳）添加至反應混合物。混合物於室溫攪拌1小時，倒入1N鹽酸，然後以乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層以飽和水性碳酸氫鈉及飽和水性氣化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水及蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（FL-60D 150克，乙酸乙酯：己烷=3:1)獲得化合物 (4) (0.817克，1.30毫莫耳以化合物（2)為基準94.1%產率）。 (4)-(5) 將乙酸（9.8亳升）及水（4.9亳升）添加至化合物 (4)(0.815克，1.30亳莫耳）於THF (4.9亳升）之溶液。混合物於50°C攪拌3小時然後冷卻至0°C。添加2N氫氧化鈉水溶液至混合物直至混合物pH變成9。混合物以乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層以水及飽和水性氯化納洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水及蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析 (FL-60D 100克，2-丙醇：乙酸乙酯=5·· 100)獲得無色油 (0.485克，1.17毫莫耳，89.9%產率）。進一步使用製備性 HPLC (YMC-PaK RI-053-15, φ 50* 250 毫米-SIL 120 A，2-丙醇：正己烷= 18:82，溶劑流速= 100毫升/分鐘）純化，獲得化合物（5)(0.417亳克，1.12亳莫耳，86.3%產率）。 ··- --------------------訂---------線— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 22 313974 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 _____ B7 五、發明說明（23 ) 化合物（5)之1H-NMR 光譜（200MHz/CDC13) δ (TMS=Oppm) 7·33_7·13 (5H，m)5 5·84 (1H，br)，5.28-5.50 (2H，m)， 4.184.07 (1H，m)5 3.90-3.80 (1H，m)，3·26 (2H，dq， J=5.6，7·3Ηζ), 3.20 (2H, br)，2.94-2.86 (2H，m)， 2.80-2.71 (2H，m)5 2.60-2.52 (2H，m)，2·50_1.90 (4H， m)，2·17 (2H，t，J=7.0Hz)，1.90-1.56 (6H, m)5 1·47·1·25 (2H? m)? 1.13 (3H? t? J=7.3Hz) 合成例2

Nl-乙基-7-[(2,4&11，511，7化)-2-(1，1-二氟戊基）-2_羥-6_氧代基全氫環戊烷并[b]吡喃-5-基]庚醯胺（7)之製備

亞批次-1 將羰基二咪唑（79.5毫克，0.490毫莫耳）添加至化合物 (6)(174.0毫克，0.446毫莫耳）於無水THF (5毫升）之溶液。混合物於室溫攪拌3小時，然後2M乙胺於THF溶液（〇.87 毫升，1 · 7 4毫莫耳）添加至混合物。混合物於室溫攪拌j 2 小時。飽和水性氯化銨（10毫升）及乙酸乙酯（10毫升）以攪拌加至反應混合物。水層自有機層分離，且以乙酸乙酯萃取3次。合併之有機層以硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（FL-60D 10克，己烷：乙酸乙酯=1:2)獲得無 -ϋ ϋ ·ϋ ί ί βϋ 11 I ϋ· 1 ·ϋ ^1 1« ϋ «ϋ J , 0 ϋ A·.— 1·— ·ϋ ϋ I #^71 ^1 1 言矣 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 23 313974 1298256 A7

五、發明說明（24 ) 色油（117.5毫克，0.281毫莫耳，63〇%產率）。亞批次-2 將羰基二咪唑（105.9毫克，0·653毫莫耳）添加至化合物（6)(229.2毫克，0.5 87毫莫耳）於無水THF (3亳升）之溶液。混合物於室溫攪拌2小時，然後2]y[乙基胺於THF溶液（1.2毫升，2.4毫莫耳）添加至混合物。混合物於室溫攪拌1小時。飽和水性氯化銨（1〇毫升）及乙酸乙酯（1〇亳升）以攪拌加至反應混合物。水層自有機層分離及以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機層以硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（FL-60D 10克，己烷：乙酸乙酯=2:3)獲得無色油（195.7亳克，0.469毫莫耳，79.8 %產率）。前述2亞批次經合併。合併產物（301 ·4毫克）使用製備性 HPLC(默克里克索伯（Merck Lichrosorb) DIOL-7 微米， 25 * 250亳米，2_丙醇：正己烷=1〇: 1〇〇，溶劑流速二4〇請先閱面之注意項再填寫本頁

訂經濟部智慧財產局員工合作社印製毫升/分鐘）進一步純化，獲得化合物（7)(209.6毫克，69.5% 回收率）。化合物（7)之1H-NMR 光譜（200MHz/CDC13)^ (TMS = 0ppm) 5.42 (1H，br)，4.26-4.10 (1H，m)，3·29 (2H，dq，J=5.6, 7·2Ηζ)，2.83 (1H，br)，2·58 (1H，dd，J=17.6, 7·3Ηζ)， 2.21 (1H, dd5 J=17.6, 11·5Ηζ)，2·14 (2H，t，J=7.5Hz)， 2·1〇_1·73 (5H，m)5 1.73-1.21 (17H，m)，1·14 (3H，t5 J=7.2Hz)5 0.94 (3H，t，J=7.1Hz) 合成例3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 24 313974 線

A7 B7 1298256 五、發明說明（25 )

Nl_ 乙基7-[(2,4&11，511，6 8,7&11)_2-(1，1-二氟戊基）_2,6_二羥全氫環戊烷并[b]D比喃-5-基]庚醯胺（15)之製備

(8) -(9) 3,4-二氫-2H4比喃（4.22亳升，46.11亳莫耳）及樟腦磺酸（42· 16毫克，0.181毫莫耳）於0°C添加至化合物（8)(2.87 克，4.216毫莫耳）於無水二氯甲烷（90毫升）之溶液。反應混合物於0°C攪拌50分鐘。飽和水性碳酸氫鈉添加至反應混合物。混合物溫熱至室溫，然後以二氣甲烷（50毫升）萃取3次。合併之有機層以水（180毫升）及飽和水性氯化鈉 (180亳升）洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（BW-300 154克，己烷：乙酸乙酯=8:1) 獲得化合物（9)(3.42克，4.476毫莫耳，定量產率）。 (9) -(10) 1M四丁基氟化銨於THF溶液（5.371毫升’5.371亳莫 0 9 ----.—-------------訂'·—：-----線— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 25 313974 1298256 A7

五、發明說明（26 ) 耳）逐滴添加至化合物（9)(3.42克，4.476毫莫耳）於無水 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) THF (10.7毫升）於0°C之溶液。混合物於室溫攪拌4小時。水性乙酸銨（200 ^:克/毫升，1 〇 3亳升）添加至混合物。混合物攪拌10分鐘，然後以二異丙基醚萃取3次。合併之有機層以水性碳酸氫鈉及飽和水性氯化鈉（5〇毫升）洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析 (6\¥_300 170克，己烧：乙酸乙酯=3:1)獲得化合物（1〇)(2.73 克，4.200毫莫耳，93·8%產率）。 (10)-(11) 化合物（10)(130.4毫克，〇·2〇〇毫莫耳）於乙醇（2毫升）經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣之溶液冷卻至0°C。1Ν氫氧化鈉水溶液（〇 8毫升，0 8〇毫莫耳）於低於15°C逐滴加至該溶液。混合物於室溫攪拌3 6 小時然後蒸發。殘餘物内加水（1毫升），混合物pH藉添加稀鹽酸調整至3至4。混合物以乙酸乙酯（2〇毫升）萃取三次。合併之有機層以水洗滌（30毫升，兩次）及飽和水性氯化納（30毫升）洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於石夕膠管柱層析（含15%水之FL-60D 10克，己燒：乙酸乙酯=3 :2)獲得化合物（11 )(ι〇6·2毫克，〇. 1894毫莫耳，94.7%產率）。 (11)一（12) 迪斯馬汀過碘烷（1.68克，3.970毫莫耳）於〇°C添加至化合物（11)(1.21克，1·985毫莫耳）於無水二氯甲烷（63毫升）之溶液。反應混合物於室溫攪拌1小時。水性硫代硫酸鈉（3 9.8毫升）添加至反應混合物。然後反應混合物以乙酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 26 313974 1298256 A7 經濟部智慧財產局消費合作社印製 B7 五、發明說明（27 ) 乙酯（50毫升）萃取3次。合併之有機層以飽和水性碳酸氫納及飽和水性氣化納洗滌。有機層以無水硫酸鎮脫水然後蒸發。殘餘物於碎膠管柱層析（含15 %水之FL-60D 55克，己烷：乙酸乙酯=3 ·1)獲得化合物（12)(1.06克，1.890毫莫耳，95.2%產率）。 (12) -(13) 10%鈀/碳（69·1亳克）添加至化合物（12)(345.7毫克， 0.619毫莫耳）於乙酸乙酯（34.6毫升）之溶液。混合物於氫氣氣氛下攪拌3小時。反應混合物通過西萊特（Celite⑱）襯墊過濾去除催化劑。前述連續操作重複5次而完成氫化反應。濾液經濃縮獲得化合物（13)(3 30.4毫克，0.589毫莫耳，95.2%產率）。 (13) -(14) Μ基二味嗤（143.4毫克，0.884毫莫耳）添加至化合物 (13) (3 30.4毫克，〇·5 89毫莫耳）於無水THF (6·7毫升）之溶液。混合物於室溫攪拌3小時。反應混合物内，添加2Μ 乙胺於THF溶液（0.589毫升，1.179毫莫耳）及於室溫授拌 1小時。反應混合物内加入飽和水性氣化銨。混合物以乙酸乙酯（20毫升）萃取3次。合併之有機層以飽和水性碳酸氫鈉（50毫升）及飽和水性氯化鈉（50毫升）洗滌。有機層以無水硫酸鎮脫水然後蒸發。殘餘物於石夕膠管柱層析（含丨5% 水之FL-60D 16·5克，己烷：乙酸乙酯=2:1)獲得化合物 (14) (311.6 毫克，0· 530 毫莫耳，90· 0%產率）。 (14)-(15) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱 -------^---------線— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 ___ B7 五、發明說明（28 ) 乙酸（4·2毫升）及水（2.1毫升）添加至化合物（14)(344.0 毫克，0.585毫莫耳）於THF (2.1毫升）之溶液。混合物於 50C授拌3小時’然後冷卻至〇°c。添加2N氳氧化納水溶液至反應混合物。混合物以乙酸乙酯（50毫升）萃取3次。合併之有機層以水（35毫升）及飽和水性氯化鈉（35毫升）洗兩次。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（含15%水之FL-60D 14克，己烷：乙酸乙酿=1:1，然後改成乙酸乙酯）獲得化合物（15)(227.9毫克，0.543毫莫耳’ 92· 8%產率）。進一步使用製備性jjPLC純化（默克里克索伯DIOL-7微米，p 25 * 250毫米，2-丙醇：正己燒 = 12:88，溶劑流速=35毫升/分鐘）獲得化合物（15)(151 〇毫克，0.3599毫莫耳，61.5%產率）。化合物（15)之1H-NMR 光譜（200MHz/CDC13) (5 5·43 (1H，br)，4.32-4.15 (1H，m)，3.96-3.84 (0.28H， m)，3.79-3.61 (0.72H, m)，3·29 (2H，dq5 J=5.6, 7·3Ηζ)， 2·86_2·80 (0.55H，m)，2·70_2·64 (0.55H，m)，2·54 ((K72h dd，J=15.8，7.0 Hz), 2·43 (0.72H，dd5 J=15 8，5·2Ηζ)

2·15 (2H，J=7.1Hz)，2.25-1.09 (23.45H，m)，1·14 (3H t，J=7.2Hz)，0.92 (3H，t5 J=7.1Hz) 合成例4 13,14·二氫-15·酮基-20-乙基-PGF2a N-乙醯胺（20)之製備本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） Γ— ^ ϋ ieel 1— ϋ n 1_1 elai I I ϋ in §mmm —B_i l_i ft·— J ^ · ·1« 11 κ ϋ ·ϋ am§ mmKmm I I 1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1298256 五、發明說明（29 ) A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (16) -(17) 3,4-二氫-211-口比喃（2毫升，21.9亳莫耳）及樟腦磺酸（20 毫克，0.09毫莫耳）添加至化合物（16)(1.00克，2.36毫莫耳）於無水二氣甲烷（30亳升）之溶液。混合物攪拌2小時。反應混合物内加入飽和水性碳酸氫鈉（20亳升）及激烈攪拌。水層自有機層分離及以二氯甲烷萃取兩次。合併之有機層以水及飽和水性氯化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（BW-300 70克’己烷：乙酸乙酯=3:7)獲得化合物（17)(1.45克，2·45亳莫耳，定量產率）。 (17) -(18) 1N氫氧化鈉水溶液（11.8毫升，11.8毫莫耳）於0°C添加至化合物（17)(1.45克，2.36毫莫耳）於乙醇（20毫升）之溶液。混合物溫熱至室溫及攪拌5.5小時。混合物於〇°C 以IN鹽酸（12.4毫升，12.4亳莫耳）酸化。混合物以乙酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 29 313974

1298256 五、發明說明（30 ) 乙醋萃取3次。合併之有機層以水及飽和水性氯化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（含15 %水之FL-60D 14克，己燒：乙酸乙酯=1〇:〇 —9:1—8:2—7:3-> 6:4— 5:5— — 4:6— 3 :7)獲得化合物 (18)(119 克，2.16 毫莫耳，92.0%產率）。 (18)-(19) 羰基二咪唑（265毫克，1.64亳莫耳）添加至化合物 (18)(600.3毫克，1·〇9毫莫耳）於無水THF (10毫升）之溶液。混合物於室溫攪拌1.5小時。混合物内加入2Μ乙胺 THF溶液（3.0毫升，6.0毫莫耳）及攪拌1小時。反應混合物冷卻至0°C，藉添加冷1Ν鹽酸酸化（ρΗ=3)。混合物以乙酸乙酯萃取3次◎合併之有機層以飽和水性碳酸氫鈉及飽和水性氣化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。殘餘物於矽膠管柱層析（FL-60D 25克，己烷：乙酸乙酯=1:1) 獲得化合物（19)(497·0毫克，0.86亳莫耳，78·9%產率）。同時回收化合物（18)(117.4毫克，19.6%回收率）。羰基二咪唾（69.0亳克，0.43毫莫耳）添加至回收之化合物（18)(117.4毫克）於無水THF (2亳升）之溶液。混合物於室溫攪拌2小時。混合物内加入2M乙胺THF溶液（3.0 毫升，6.0毫莫耳）及擾拌1小時。反應混合物冷卻至〇。〇然後藉加入冷1N鹽酸酸化（ρΗ=3)。混合物以乙酸乙醋萃取3次。合併之有機層以飽和水性碳酸氳鈉及飽和水性氯化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發殘餘物於石夕膠管柱層析（FL-60D 5克，己烧：乙酸乙酯=1:1)獲得化 --------------------^--------I I AW. (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 30 313974 1298256 A7 ------—____ B7 五、發明說明（31 ) 合物（19)(113.2毫克，0.20毫莫耳，92.0%產率）。前述2 批次合併共獲得610毫克化合物（19)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (19)-(20) 乙酸（6毫升）及水（2毫升）添加至化合物（19)(603.0 克，1·〇7毫莫耳）於THF (2毫升）之溶液。混合物於45°C 擾抖* 2 · 5小時然後冷卻至室溫。反應混合物内加入§ n氮氧化鈉水溶液（13毫升），乙酸乙酯（20毫升）及水（20毫升）。激烈攪拌混合物。水層自有機層分離然後以乙酸乙酯萃取 3次。合併之有機層以水及飽和水性氯化鈉洗滌。有機層以無水硫酸鎂脫水然後蒸發。於矽膠管柱層析兩次（第一次純化：FL-60D 25克，己烷：2-丙醇= 100 : 10/第二次純化： ?1^600 18克，己烷：2_丙醇=1〇〇:5)獲得化合物（20)(336.4 毫克，0.918毫莫耳，85.8%產率）。化合物（20)之1H-NMR 光譜（200MHz/CDC13) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 5·74 (1H，br)，5.45-5.36 (2H，m)，4.19-4.11 (1H，m)， 3.96-3.84 (1H，m)，3·28 (2H，dq，J=5.7, 7.3Hz)，3.05 (1H， br)，2·70·1·95 (9H，m)，2.42 (2H，t，J=7.4Hz)，1.95-1.20 (18H，m)，1.14 (3H，t，7.2Hz)，0.88 (3H，t，J=7.3Hz) 試驗例1 (方法）採用全細胞貼片夾方法來評估化合物1 (13,14-二氫-15-酮基_16，16_二氟-PGE!)及化合物2 (13，14-二氫_15_酮基 -16,16-二氟-18(3)-甲基_卩0£1)對重組11(：102氯離子通道之影響。本實施例檢驗個別化合物對以人類C1C_2 (hclc_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 31 313974 1298256 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明說明（32 ) 2)轉移感染之人類上皮腎（HEK)細胞之影響，其結果與對未經轉移感染HEK細胞作比較。準備及使用C1C-2轉移感染人類上皮腎（HEK)細胞。得自美國種型培養收集會（ATCC ;維吉尼亞州曼那薩斯）之 HEK-293細胞於37°C於不含血清之培養基使用李波非它明（Lipofectamine)(吉伯可 /英微徹真（GIBCO/Invitrogen)) 於哺乳類表現載體pcDNA3.1(吉伯可/英微徹真），以His_ 及T7-標籤之人類C1C-2 cDNA轉移感染5小時。然後細胞再懸浮於含血清培養基，於300微克/毫升G-418(吉伯可 /英微徹真）存在下培養。然後將存活細胞脹大，試驗證實氯離子流及C1C_2 mRNA之表現，將表現C1C_2 mRNA之細胞冷凍儲存。研究時，儲存之細胞經解凍，維持於3 7 °c 於5%/95%二氧化碳/氧於MEM(吉伯可/英微徹真），MEM 培養基補充5 %去活化馬血清、〇 · 1 mM非必需胺基酸、2 mM L麩胺、1 mM丙酮酸納、100單位/毫升青黴素、及1〇〇微克/毫升鏈黴素硫酸鹽。全細胞貼片夾試驗中氯離子流係由開始維持電位_3〇毫伏特，以20毫伏特增量藉+40毫伏特與-14〇毫伏特間之電壓夾脈衝（1500毫秒時間）提引出。脈衝開始後5〇_1〇〇毫秒測里電流。外部溶液為普通泰洛氏（Tyr〇(je)溶液，含有

135 mM NaC卜 1.8 mM CaCl2、1 mM MgCl2、5.4 mM KC卜l〇 mM葡萄糖以及10 mM HEPES (pH 7·35)。吸量管溶液為 130 mM Csa、 1 mMMgCl2、 5 mM EGTA 以及 10 mM HEPES (pH 7·35);吸量管中也含有 i mM ATP-Mg2+ 撕長尺度適用中關剛（CNS)A4規格⑵G χ挪公爱)--55-5™- -------tl.--------線-- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) A7 B7 1298256 五、發明說明（33 ) (pH 7.4)。吸量管係由硼矽酸鹽玻璃製造，藉二階段式那洛西吉 (Nar as hi ge)抽拉機抽拉獲得1-1.5百萬歐姆電阻。資料係使用艾克索帕奇（Axopatch) CV-4頂台帶有迪吉碟塔 (Digidata) 1200數位化器以及艾克索帕奇1D放大器獲得。資料係使用pClamp 6.04(艾克頌（Axon)儀器公司’加州佛斯特城）、Lotus 123 (IBM)以及Origin(邁克卡 (Microcal))軟體分析。化合物1及化合物2係以1 // Μ於1 % DMSO終濃度使用。 (結果）如表1所示，1 % DMSO對對照電流並無影響。使用 hClC-2轉移感染之ΗΕΚ細胞（對照組）之氯離子流藉1//Μ 化合物1以及1 // Μ化合物2活化。化合物1及化合物2 不會增加未經轉移感染細胞之氯離子流。研究證實化合物1及化合物2為C1C-2通道開啟物。表1.化合物1及化合物2對重組人類C1C-2氣離子通道之影響 --------------------訂 h—-----線— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 33 313974 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 __B7 五、發明說明（34 ) 組別數目氯離子通道活性 nS/pF 以 hClC-2 轉移感染對照 1% DMSO 3 3 0.057土 0.056 士 0.008 0.010 iTs：^· 之HEK細胞對照 1 // Μ化合物1 3 3 0.196土 1.820土 0.075 0.114 Ρ^οΤοι^ 對照 1 " Μ化合物2 3 3 0.067土 0.558土 0.026 0.100 未經轉移感染之細對照 1//Μ化合物1 4 4 0.016土 0 035土 0.003 0.014 胞對照 1 // Μ化合物2 5 5 0.018土 0.036土 0.004 0.010 N.S.:無效。化合物 1 : 13，14-二氫 _15_ 酮基-16，16-二氟-PGEi ((-)-7-[(2尺，4化55173尺）-2-(151-二氟戊基）_2_ 羥_6_氧代基全氫環戊烧并[b]B比喃-5-基]庚酸）化合物 2 ·· 13，14-二氫-15-酮基-16，16·二氟-18 (S)-甲基-PGEi (()-7-[(4&11，511，7&11)-2-[(38)-1，1-二氟-3-乙基戊基）-2_羥-6-氧代基全氫環戊烷并[b]吡喃-5-基]庚酸）試驗例2 (方法）使用16HBE140-細胞亦即衍生自健康個體之人類呼吸道細胞系，其含有C1C-2以及囊性纖維變性穿膜調節劑，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 34 -------^---------線-- rtt先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁} 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 B7 五、發明說明（35 ) C1通道（CFTR);以及CFBE41o_細胞亦即衍生自囊性纖維變性病人之人類呼吸道細胞系，其含有功能形式C1C-2以及缺陷形式CFTR(A F508 CFTR)。二細胞於補充10% FBS(海克隆（Hyclone))、20 mM 1-麩胺及青黴素/鏈黴素之 MEM於塗覆以纖維膠/膠原/BSA之燒瓶内培養。若有所需細胞接種於0.3平方厘米經過膠原塗覆之可透性過濾膜（拜爾扣特（Biocoat))上。經24小時後，移開尖頂培養基，讓細胞於空氣-水界面生長。細胞於空氣-水界面生長時細胞之基底外側被饋以培養基，每隔一日更換培養基。讓細胞生長至融合。測量短路電流用來評估生長於空氣-水界面之細胞之偏極化且融合培養中之氯離子輸送。使用樹脂玻璃腔室對生長於0.3平方厘米可透性支持過濾膜上方的融合細胞單層作短路電流測量（世界經濟儀器公司，佛羅里達州沙拉梭達）。以7402C電壓夾具裝置（愛荷華大學生物工程部門）作電測量。將熱水循環通過腔室之水夾套而維持溫度恆定於37°C。放大器之輸出係於類比圖形記錄器上作圖。加入試驗化合物後短路電流變化（A Isc)係對過濾膜面積（0.3平方厘米）規度化且以△ Isc/平方厘米報告。 16HBE140-以及CFBE410-細胞之短路電流測量係如 Lofling等人所述進行。（美國生理期刊，277 (4 Pt l):L700-8, 1999，參考文獻以引用方式併入此處）。基底外側膜溶液含有 116 mM NaC卜 24 mM HC03 、3mM KC卜 2 mM MgCl2 、0.5 mM CaCl2 、3.6 mM 鈉 HEPES、 4.4 mM 氫 --------------------訂·‘—-----線— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 35 313974 A7 1298256 ___B7___ 五、發明說明（36 ) HEPES(pH7·4)以及10mM葡萄糠；尖頂膜浴溶液同基底外側膜溶液，但氣離子濃度以葡萄糖酸鈉替代氯化鈉降低，氣化約由0.5 mM升高至2 mM而考慮Ca2 +被葡萄糖酸鹽螯合。二溶液内通入二氧化碳/氧氣（5 %/9 5%)，也用來輔助溶液的混合。各例中基底外側膜係以200微克/毫升奈史塔ί丁（nystatin)變成具有通透性。化合物1及化合物2係使用1 /z Μ終濃度。DMSO終濃度為1 % 〇 (結果）如表2所示，1//Μ化合物1提高161^只14〇-細胞的短路電流。化合物1之活化程度為9.56± 0.095微安培/平方厘米。化合物2也於16ΗΕΒ 14〇-細胞提高短路電流達 11·6± 1.3微安培/平方厘米。1% DMSO有重大負面影響約 -1〇·5± 2·0微安培/平方厘米。儘管DMSO造成短路電流如此大的下降，但化合物1及化合物2於此等細胞之淨效應為正。如表2所示，1//Μ化合物1於CFBE410-細胞升高短路電流達5·0± 0.04微安培/平方厘米。1〇/〇DMSO降低短路電流達-5·7± 1.8微安培/平方厘米。儘管DMSO有重大負面影響，但化合物1造成CFBE細胞之C1電流之淨正向升高。結果顯示化合物1及化合物2於16ΗΒΕ14ο-細胞皆為氯離子通道開啟物，化合物1於CFBE410·細胞為hClC-2 開啟物。 —------------------訂 h--------線— (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 36 3 1298256

五、發明說明（37 ) 表2.使用16HBE14o-以及CFBE41o-細胞之短路電流變化別數目短路電流微安培/平方厘米 16HEB140- 細胞 CFBE41o- 細胞 1% DMSO // Μ化合物1 // Μ化合物2 1% DMSO // Μ化合物1 3 6 4 3 3 -10 · 5 ± 2 · 0 9·56± 0.95 11.6± 1.3 -5·7± 1.8 5·0± 0·4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製試驗例3(方法） AS-HBE為一種可於反訊息方向表現CFTR之頭131 核苷酸之人類支氣管上皮（HBE)細胞系（反訊息CFTR 16HBE140-細胞，HBE-AS;也稱作 AS-HBE)。結果 AS-HBE 細胞缺乏CFTR轉錄本以及缺乏功能性CFTR。但AS-HBE 細胞確實係以其衍生來源之親代細胞系16ΗΒΕ14ο·細胞完全相同之方式表現功能性C1C-2。AS-HBE細胞於37。(：於 5%/95%二氧化碳/氧氣維持於最低必需培養基（MEN ;吉伯可/英微徹真，加州卡斯貝），該MEM培養基補充有厄爾斯 (Earl’s)鹽、L麩胺（吉伯可/英微徹真）、10%熱失活化胎牛血清、100單位/毫升青黴素、100微克/毫升鏈黴素硫酸鹽及400微克/毫升G-418(吉伯可/英微徹真）。細胞於空氣_ 液體界面生長於拜爾扣特插子上（費雪（Fisher)科學公司，伊利諾州芝加哥），該拜爾扣特插子塗覆以人類血漿纖維膠 (吉伯扣/英微徹真）以及微徹真（vitrogen)(内聚技術公司，加州保羅奥圖）。根據實施例2所述相同方式，於AS-HBE細胞進行短本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮） 37 -------—-----^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1298256

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（38 ) 路電流之測量。短路電流之變化（AIsc)對過濾膜面積（〇 3 平方厘米）Φ癌化且以△Isc/cm2報告。試驗化合物係於250 n]V[終濃度使用。 (結果）表3顯示試驗化合物對AS-HBE細胞之短路電流的影響。結果顯示本發明化合物為有效Cic-2通道開啟物。 A 3 & AS-HBE細胞試驗化合物對短路電流之影響組別濃度nM 短路電流變化（A Isc)微安培/平方厘米化合物1 250 4.3 化合物2 250 9.0 化合物3 250 2.7 化合物4 250 1.0 化合物5 250 0.3 化合物6 250 0.7 化合物7 250 1.0 化合物1及2 :參考試驗例1。化合物 3 : 13，14-二氫-15-||^基_16，16-二氟-PGEiN-乙醯胺 (^^1-乙基-7-[(2,4&11551^7&11)-2-(1，1-二氟戊基） -2-羥-6-氧代基全氫環戊烷并[b]吡喃基]庚醯胺）化合物4 : 15-酮基-16，16-二氟-PGEr 化合物5 ·· 2-去羧基-2-(2-羧乙基）_13，14_二氫_15-_基-16,16-二氟-20-乙基-PGEi異丙酯 ((-)-9-[(4化，511，7化）-2_(151-二氟庚基）-2-羥-6-氧代基全氫環戊烧弁[b]D比喃-5-基]壬酸異丙醋）化合物6 : PCF2a ------^^_-----$ — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 38 313974 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1298256 A7 — —_______ _ ------~____ 五、發明說明（39 ) 化合物7 : PGI2_Na 試驗例4 (方法）根據實施例1所述相同方式，進行全細胞貼片夾測量。試驗化合物誘生之電流升高係以添加試驗化合物後與對照組比較之p A/Pf變化（A pA/pF)報告。試驗化合物係以100 ηΜ終濃度使用。 (結果）表4顯示於C1C-2轉移感染ΗΕΚ細胞，試驗化合物對 C1C-2活化之影響。結果顯不本發明化合物為有效cic_2 通道開啟物。表4 試驗化合物對重組人類C1C-2氣離子通道之影響。組別濃度ηΜ C1C-2通道之活化 — △ pA/pF 化合物1 100 39.8 化合物2 100 22.6 — 化合物8 100 24^6 ' 化合物9 100 38.2 化合物1及2 :參考試驗例1。化合物 8 : 13，14-二氫-16，16-二氟-PGEi 化合物 9 ·· 13，14-二氫-15-酮基-16，16-二氟-PGEla N-乙酿胺（N1-乙基-7-[(2,4aR，5R，6S，7aR)-2-(1，1-二氟戊基）-2,6-二羥全氳環戊烷并[b]D比喃-5-基]庚醯胺）試驗例5 ^^-1--------'-----— — ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 39 313974 1298256 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（40 ) (方法）使用T84細胞，τΜ細胞是一種人類腸細胞系帶有緊密接合之衍生形式融合單層。該細胞系廣用於使用短路電流 (Isc)研究氣離子的輸送。此等細胞含有cftR及C1C-2二者。 ΤΗ人類腸上皮細胞於162平方厘米燒瓶（康寧可司達 (Corning Costar)，麻省）於pH 7·4生長至融合，燒瓶内帶有杜別克（Dulbecco’s)改性Eagle’s培養基以及漢斯（Ham，s) F-12營養混合物之1:1混合物，且補充6%胎牛血清（^^8)、 15 Mm HEPES、14.3 mM碳酸氳鈉、及抗生素/抗黴劑。燒瓶内週繼代培養，每3日饋料。實驗細胞單層於塗覆有膠原之可透性支持體（拜爾扣特）上生長至融合。每3日饋料單層’且於達成穩定穿上皮電阻後使用，約為接種後7_14 日。根據實施例2所述相同方式，進行τ84細胞之短路電流測量。短路電流變化（△ Isc)對過濾膜面積（0.3平方厘米）常態化且以△ Isc/cm2報告。化合物1係於50 nM終濃度使用。 (結果）表5顯示於T84細胞中化合物1對短路電流的影響。結果顯示化合物1可活化於人類腸細胞系Τ84之氯離子輪送0 ----------------------------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 40 313974

化合物1 :參考試驗例1。 1298256 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 試驗例6 (方法）化合物1 (13，14-二氫-15__基-16，16_二氟·前列腺素 EJ以1、10或100微克/千克呈5毫升容積/千克經口投予至少已經空腹16小時之雄威斯達大鼠（六週齡體重：18〇-210克）。對照組接受相等容積媒劑（含〇 5〇/。乙醇及〇〇1〇/〇聚山梨醇酯（polysorbate) 80之蒸餾水）。投予後％分鐘，大鼠於乙醚麻醉下接受剖腹。十二指腸頂部及迴腸端部個別結紮取出腸。各動物之腸液經收集以及藉1〇,〇〇〇 xg離心5分鐘。收集上清液，腸液之上清液之氯離子濃度係使用氯離子計數器（CL-7，希拉奴馬（Hiranuma)產業公司）測量。採用丹尼特氏（Dunnett’s)試驗比較各劑量之對照組以經濟部智慧財產局員工消費合作社印製及化合物1接受組。P值小於〇.05被視為統計上有意義。 (結果）表6顯示各組腸液中的氯離子濃度。投予1、10及100 微克/千克化合物1可以劑量相依性方式提高腸道之氯離子濃度。比較對照組，接受1微克/千克化合物1該組顯示腸液中氣離子濃度顯著升高。前述結果指出化合物1可開啟腸道之氣離子通道，俾正面促進氯離子的輸送。本紙張尺錢财_家標準 41 313974

I 298256 A7 B7 五、發明說明（42 ) 表6.化合物1對氯離子輸送入大鼠腸液之影響組別 η 對照（媒劑） 7 化合物1 1微克/千克 7 口服化合物1 10微克/千 7 克口服化合物1 100微克/千 7 克口服_ 腸液内之氣離子濃£ 平均±標準差，毫當詈/升 41.8± 3.9 82·2± 7.0** 11〇·1± 5.6** 126·6± 2.4** 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製丹尼特氏試驗：與對照組相比，**ρ<〇·〇ΐ 試驗例7 (方法） 100微克/千克化合物2 (13,14-二氫-15-酮基-16,16_二氟-18 (S)-甲基-前列腺素ED每日三次投予雄威斯達大鼠 (六週齡，體重：180-210克）連續7日。對照組（n=7)接受等容積媒劑（蒸顧水含0.01%聚山梨醇酯80及0.5%乙醇）。最末投予曰之翌晨（約為末次投藥後之1 7小時），聚乙嫦導管（PE10，貝騰狄金森（Becton Dickinson)公司）插入於乙醚麻醉下之大鼠的總膽管。大鼠置於玻爾曼（B〇rrmann，s)籠内，留置1小時讓其由麻醉中甦醒。距離插管後1至2小時，於1小時内排放膽汁，收集膽汁以及使用氣離子計數器（CL_7 ’希拉奴馬產業公司）測量膽汁之氣離子濃度。採用學生t試驗來比較對照組及化合物2接受組。P值小於 0 · 0 5被視為具有統計意義。 (結果）表7顯示各組膽汁中之氯離子濃度。比起對照組，接本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 42 313974 -------^ —------^ ^請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1298256 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明說明（43 ) 受化合物2該組膽汁中之氯離子濃度顯著增高。如上結果指出化合物2可開啟肝臟之氣離子通道，俾正面促進氯離子的輸送。表7.化合物2對大鼠之風離子輸送入膽汁之影響組別劑量微克/千克，每曰三次連續7 日，口服 η 膽汁中之氣離子濃度平均±標準差，亳當量/升對照 - 7 91.1+ 2.7 (媒劑）化合物2 100微克/千克 8 98.4± 1.8* 口服學生t試驗：與對照組相比，*p<〇.05 試驗例8 (方法）生理食鹽水、眼用滴劑媒劑、或含〇〇〇〇1%或〇 001% 化合物1之眼用滴劑以3 0微升/眼之容積滴注於雄白兔。滴注前（〇小時）以及滴注後2、4、6及8小時，使用毛細吸量管由内眼臉結膜囊收集淚液5微升。收集得之淚液以蒸餾水稀釋5倍’使用氯離子計數器（CL-7，希拉奴馬產業公司）測量氯離子濃度。採用學生t試驗及威爾克森氏 (Wilcoxon’s)試驗比較各計量之對照組與接受化合物1之組別。P值小於0·05被視為統計上有意義。 (結果）表8顯示各組淚液之氣離子濃度。與對照組相比，化合物1可以劑量相依性方式提高淚液之氣離子濃度。與對照組相比，接受0.0001 %化合物1眼滴劑該組以及接受 313974 -----------暴 — I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·'——------線丨丨-#- A7 B7 1298256 五、發明說明（44 ) 0.001 %化合物1眼滴劑該組於滴注眼藥水後4小時及8小時以及滴注後2、4及8小時分別顯示淚液中之氯離子濃度顯著增高。前述結果指出試驗化合物1經由滴注於眼球，開啟氯離子通道而正向促進氯離子的輸送。 --------·-------------訂：---------線 — 1# (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 44 313974 1298256 _B7 五、發明說明（45 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

啷阼tlt#: tcr效潍海翁：ρ<0.05 :*ρ<0.01 姝邈^笋粦繆·· tcr涔凉漭翁二*】ρ<0.05二JPAOol Ρ 命g !i I—» 0s 冷醵 00 00 00 00 H-* U) U\ ο 1—» 〇\ U) Os U) ON U) K) ϋί U) l/» 缉声t 鞣屮卡 1+ 麴 Η-* to 1-^ Ki OJ 左 Kj H-k 1—k ON 左 ·: Η-* LO Κί κ> '-J bO m ΐ* s 4 (—* Lh t—» 左 to VO »—* ON 00 K) u> h—» to •00 一 U) I—* 1—* U) to to NJ ο a〇> |φ $ H—» U) 00 '^o U) U) l—i OJ σ\ oo K) o ΰ K) 含 K) isj b〇 K) ο On I—» LO 00 00 H—* ON 社: 1—* oo K) bo t—» u> K) bo t—* On I—* I—1 oo OO --------------------訂；—------線—^w. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 45 314034

Claims

1298256 附 Z .......... I 、 _ _ . WJ_"丨丨丨-务 91119830號專利申請案申請專利範圍修正本一種於哺乳動物體開啟C1C 括有效量之前列腺素化合物如下通式（I)所示之化合物： (93年9月7曰）通道之組成物，該組成物包，其中該前列腺素化合物為

中L、Μ及N為氫、羥基、鹵原子、低碳數烧基、羧（低碳數）烷基或氧代基，其中L及Μ中之至少一者為氫以外之基團，以及五員環具有至少一個雙鍵； Α 為-CH2OH、-COCH2OH、-COOH 或其官能衍生物； B 為-CH2-CH2-、-CH=CH-或-C= C-; Z為

其中R4及R5為氫、羥基、鹵素、低碳數烷基、低 3]39*74(修正版) 1298256 碳數烷氧基或羥（低碳數）烷基，其中1及&非同時為經基以及低碳數烷氧基； R】為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族少二玟基’其為未經取代或經以鹵素、燒基、羥基、氧代基、芳基或雜環基取代，以及於脂肪族烴之至少一個碳原子視需要地經以氧、氮或硫取代；以及 Ra為飽和或未飽和低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以鹵素、氧代基、羥基、低碳數烷氧基、低碳數烷醯氧基、環（低碳數）烷基、環（低碳數）烧氧基、芳基、芳氧基、雜環基或雜環氧基取代；環（低碳數）烷基；環（低碳數）烷氧基；芳基；芳氧基；雜環基；雜環氧基。 2· —種於哺乳動物體治療氣離子通透性減低相關疾病之組成物’該組成物包括有效量之前列腺素化合物，其中該前列腺素化合物為如下通式（I)所示之化合物··

中L、Μ及N為氫、經基、鹵原子、低碳數烧基、經（低碳數）烧基或氧代基，其中L及Μ中之至少一者為氫以外之基團，以及五員環具有至少一個雙鍵； 2 313974(修正版) 1298256 A 為-CH2OH、-COCH2OH、-COOH 或其官能衍生物； β 為-CH2-CH2-、-CH=CH-或-CE C-; z為

其中R4及R5為氫、羥基、鹵素、低碳數烷基、低石反數烷氧基或羥（低碳數）烷基，其中I及&非同時為經基以及低碳數烷氧基； R】為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族少二殘基，其為未經取代或經以鹵素、烧基、經基、氧代基、方基或雜環基取代，以及於脂肪族烴之至少一個碳原子視需要地經以氧、氮或硫取代；以及 Ra為飽和或未飽和低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以函素、氧代基、羥基、低碳數烷氧基、低碳數烷醯氧基、環（低碳數）烷基、環（低碳數）烧氧基芳基彡氧基、雜環基或雜環氧基取代；環（低碳數）燒基；環（低碳數）燒氧基；芳基；芳氧基；雜環基；雜壤氧基。 3 ·如申請專利範圍第2項之έ日#% ^ - 斗友貝 < 組成物，其中，該氣離子通透性減低相關疾病為囊性纖維變性。 3】3974(修正版) 1298256 4·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13，14-二氫-16-—-或二鹵素-前列腺素化合物。 5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為1 3，14 -二鼠-1 5 -嗣基-16 -—-或二鹵素-前列腺素化合物。 6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13，14-二氫-16-—-或二氟-前列腺素化合物。 7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13，14-二氫-15-酮基-16-—-或二氟 -前列腺素化合物。 8. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13,14 -二氫-16 -— ·或二鹵素-前列腺素Ε化合物。 9. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，呂亥列腺素化合物為1 3，14 -二氮-1 5 -酉同基-1 6 - ^ — -或二鹵素-前列腺素E化合物。 10·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13,14 -二鼠-16,16 -二氟^-前列腺素 E!化合物。 11 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13,14-二氫-15-酮基-16,16-二氟- 4 3] 3974(修正版) 1298256 則歹】腺素E ]化合物或1 3，14 -二氫-1 5 -酮基-1 6,1 6 -二氧 -18_曱基-前列腺素E】化合物。 12.如申請專利範圍第1或2項之組成物，其中，A為式（v) 表示之-C0〇H之官能衍生物： (V) -CONR，R，，其中R’及R”為氫、低碳數烷基、芳基、烷基·或芳基酿基、低碳數烯基或低碳數炔基。 1 3 ·如申請專利範圍第12項之組成物，其中，該前列腺素化合物為心二氫-15·酮基-16,16-二氟-PGEi N-乙酿胺〇 14·如申請專利範圍第12項之組成物，其中，該前列腺素化合物為13,14-二氫-15-酮基-16，16-二氟-PGF】a N-乙醯胺。 •種式（ϊν)表示之新穎化合物：

其中之L、Μ及Ν為氫、經基、函素、低碳數统基、經（低碳數）烷基或氧代基，其中L及Μ中之至少一者為氫以外之基團，以及五員環具有一或多個雙鍵； R’及R”為氫、低碳數烷基、芳基、烷基-或芳基_ 5 3] 3974(修正版) 1298256 石黃醯基、低碳數烯基或低碳數炔基； β 為-CH2_CH2-、-CH=CH-或-Ce C-; 為飽和或未飽和二價低碳數或中等碳數脂肪族煙殘基’其為未經取代或經以_素、烧基、羥基、氧代基、芳基或雜環基取代，於脂肪族烴之至少一個碳原子視需要地經以氧、氮或硫取代；以及 Ra為飽和或未飽和低碳數或中等碳數脂肪族烴殘基，其為未經取代或經以鹵素、氧代基、羥基、低碳數烧氧基、低碳數烷醯氧基、環（低碳數）烷基、環（低碳數）烧氧基、芳基、芳氧基、雜環基或雜環氧基取代；環（低礙數）烧基；環（低碳數）院氧基；芳基；芳氧基；雜環基；雜環氧基。 16·如申請專利範圍第15項之化合物，其中，該化合物為 13,14-二氫-15-酮基-16,16-二氟-PGE】N-乙醯胺。 1 7·如申請專利範圍第1 5項之化合物，其中，該化合物為 13，14-二氫-15-酮基-16，16-二氟-PGFm N-乙醯胺。 18·如申請專利範圍第15項之化合物，其中，該化合物為 13，14-二氫-15-酮基-17-苯基-18，19,20-降三-?〇?2«>^乙醯胺。 1 9 ·如申請專利範圍第1 5項之化合物，其中，該化合物為 13，14-二氫-l5-酮基-2(^乙基-PGF2crN-乙醯胺。 6 3] 3974(修正版)