TWI283182B

TWI283182B - Inhalable spray dried 4-helix bundle protein powders having minimized aggregation

Info

Publication number: TWI283182B
Application number: TW090119169A
Authority: TW
Inventors: Cynthia Stevenson; Jayne E Hastedt; Russ Lehrman; Hi-Shi Chiang; David B Bennett
Original assignee: Nektar Therapeutics
Priority date: 2000-08-07
Filing date: 2001-08-06
Publication date: 2007-07-01
Also published as: AU8111301A; MXPA03001092A; US20050186143A1; WO2002011695A3; CA2418960A1; AU2001281113B2; WO2002011695A2; US6838075B2; JP2004515467A; KR20030038690A; CN1446077A; EP1309312A2; US6569406B2; US20020065399A1; US20030190291A1

Description

1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（1 ) 發明詳述：本申請案主張下列美國臨時專利申請案的優先權：專利申請案序號60/223 ，144號，於2000年， 8月7日提出；專利申請案序號6 0 / 2 2 8 ，6 3 4號，.於2 0 0 0年’ 8月2 9日提出；以及專利申請案序號 60/240，478 號，於 2000 年 10 月 13 曰提出，此等專利申請案內容以提及的方式倂入本文。發明範圍本發明有關可高度分散噴霧乾燥粉末組成物，更明確地說，有關用於霧化輸送到肺之可吸入乾燥粉末組成物。可藉由在（i)避免該蛋白質凝集，以及（i i)提供適於吸入之粒子（即，顯示較佳氣溶膠性能）兩種條件下，噴霧乾燥一種4 α -螺旋束蛋白質，製造本發明之粉末。發明背景在以往，與更傳統給藥途徑（諸如口服與靜脈給藥）相較，吸入式治療在生物製劑與習用藥物的給藥中扮演較次要角色。注射仍然是輸送生物製劑（例如肽類、蛋白質與核酸）的常用途徑，而且因爲注射伴隨的諸多缺點（例如，不方便、不舒適、病患排斥以針爲基礎的輸送方法），所以需要可替代給藥途徑。肺部輸送是此種替代給藥途徑之一，其可以提供許多優於以針爲基礎的給藥方式之優點。此等優點包括病患自本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐) Τ7Ί "" II—ιί! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（2 ) 行給藥的便利性、減少藥物副作用的可能性、藉由吸入更容易輸送、消除針劑等。許多經吸入蛋白質、肽、D N A 與小分子的臨床前以及臨床硏究已證實，在肺內與體內均可達到該功效。不過，雖然具有此等結果，但是近年來歧入式治療在保健領域中的重要性並未如預期般成長，其中一部分是可吸入藥物調配物發展的獨特問題所致。更明確地說，肺部輸送用的乾燥粉末調配物雖然提供優於麻煩的液態劑.量形式與推進劑驅動調配物之獨特優點，但是已證實具有凝集性與流動性低現象，其大幅削弱乾燥粉末爲底之吸入式治療。近年來，部分基於乾燥粉末氣溶膠輸送的重要性，部分因爲製備乾燥粉末習知技術（例如低壓冷凍乾燥、空氣乾燥與共沉澱）之缺點驅使，已使用噴霧乾燥作爲製備肺部給藥用之微米尺寸粉末的方法（Platz，R.等人，國際專利申請案W〇 9 6 / 3 2 1 4 9 )。噴霧乾燥使用一種熱氣流蒸發藉由霧化液態原料所產生的微分散液滴，以形成乾燥粉末。雖然噴霧乾燥已經長期在食品與藥品工業用以製備乾燥粉末，但是其在治療性蛋白質上的應用受到相當多限制，因爲特定蛋白質會在噴霧乾燥期間被熱降解。雖然目前有愈來愈多證據顯示噴霧乾燥巨分子爲底之生物製劑調配物可以產生適於吸入之生物活性粉末（Foster, L. 等人，國際專利申請案W〇 98/16205 ； Platz, R. 等人，.國際專利申請案W〇 9 7 / 4 1 8 3 3 ； Eljamal, Μ·等人，國際專利申請案W〇 9 6 / 3 2 1 5 2; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐^ " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（3 ) Eljamal，M·等人，國際專利申請案W〇 9 6 / 3 2 1 1 6 ;Eljamal，Μ.等人，國際專利申請案W〇 95/ 2 4 1 8 3 ; Bennett, D·等人，國際專利申請案W〇 0 1 /00312)，但是已證實許多肽類與蛋白質曝於噴霧乾燥的嚴苛條件下時，會有特定程度的伸展。特定蛋白質，特別是特徵屬於4 - α -螺旋束總料（例如 hGH、INF — r 、INF —石、GM-CSF、 M-CSF、IL — 2、IL — 4、IL — 5)之蛋白質極容易變性、伸展、凝集以及沉澱，並失去生物活性。此等蛋白質共用伸展順序與結構（形態）性同系物，其特徵係蛋白質以上、上、下、下、反向平行、左旋折疊，形成具有雙重鎖環拓樸之α -螺旋束。因此，因其不穩定性之故，噴霧乾燥與調配此種供吸入用蛋白質存在猶特的挑戰〇該噴霧乾燥方法某些方面，諸如切變應力、高溫、液滴中之蛋白質曝於液體空氣界面（表面效應）、液壁交互作用等等，會促成此種蛋白質的蛋白質伸展，而且可能導致形成包含凝集形式程度較高之蛋白質的乾燥粒子，此種凝集形式蛋白質的尺寸範圍不適於（或者，至少非最適於 )吸入。於處理時4 一 α -螺旋束蛋白質不穩定性之實例爲數眾多。重組交感α —干擾素（rConIFN )已顯示出在空氣噴射霧化下會減穩，其致使迅速形成不可溶非共價凝集物，而且在噴霧2 5分鐘之後，僅剩下約2 5 %初始單體蛋白質。（Ip，A.Y.等人，/. Phr瓜介人，84(10)，1 995 : (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂秦· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -6- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（4 ) 1210-1214 )。在噴霧乾燥蛋白質（諸如h G Η )的便利實驗中，處理期間已發現2 5 %該蛋白質降解，惟添加 0 · 1% (w/v)聚山梨酸酯20減少70 — 85%於該噴霧乾燥期間形成的不可溶與可溶解凝集物（ Mumenthaler，Μ等人，Phr见 11(1)，1994:12)。已發現於存在二價鋅離子之下添加聚山梨酸酯2 0另外可以抑制噴霧乾燥時之 h G Η 降解（Maa， Y-F 等人，/·尸hri 5W.，87(2)， 1 998:1 52- 1 59 )。在連續浸漬輸送時之印特盧金一 2 ( interleukin-2)生物活性與物理穩定性硏究當中，結合I L - 2與導管套管的暫態表面定義爲觀察到大半生物活性損失的原因（損失〜9 0%) (Tzannis，S·等人，ZVoc， Acad. Sci. tASM，93: 5460 (1996)。在該4 - α -螺旋束蛋白質當中，生長激素特別不穩定，而且迄今已使用許多途徑製造穩定治療調配物。生長激素的降解產物包括脫醯胺化產物或次硫酸化產物，以及二聚物或聚合物產物。特別是，生長激素的主要降解反應係（i )因直接水解脫醯胺化或經由環狀琥珀醯亞胺中間產物形成各種數量之L — a s p — hGH、L —異一 a s p — hGH、D — a s p — hGH 與 D —異—a s p —h G Η，以及（i i )第1 4與1 2 5位中之曱硫胺酸殘留物之氧化作用。人類生長激素的第1 4與1 2 5位也很容易氧化。更重要的是，人類生長激素中形成凝集物很不利，因爲其會導致生物活性降低以及免疫原性（Backer等本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格(210X297公釐） 'Z ' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 秦· 1283182 A7 __ B7_ 五、發明説明（5 ) 乂、Biotech，App;· Biochem., 9:478-487(1987); Leppert, P., Moore，W.V·，/. 6V//7· 5 1: 691-697(1980))。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 因此，蛋白質變性、形成凝集物以及製造流動性佳以及分散性低之粉末仍然plaque製備吸入式治療用之氣溶膠化 4 - α -螺旋束蛋白質粉末的發展。此外，迄今所使用的許多途徑當中有許多是不利於或是不適於吸入式治療的粉末調配物，諸如使用界面活性劑，一般認爲其會干擾肺的病變，.並且對於皮膜具有刺激性，或者提高噴霧乾燥前溶液的蛋白質固體濃度，此情況會導致粒子太大，以致無法有效率地輸送到肺部深處。因此，需要用於肺部輸送4 -螺旋束蛋白質之經改良可吸入粉末氣溶膠，特別是，需要具有優良氣溶膠性質以及凝集性降低之噴霧乾燥粉末。發明總論經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明係以噴霧乾燥4 - α -螺旋束蛋白質的獨特條件發現爲基礎，提出可吸入蛋白質粉末調配物，更明確地說，提出（i )於噴霧乾燥與貯存期間具有抗蛋白質凝集性、（i i )高度可分散性；以及（i i i )大小範圍適於吸入之4 - α -螺旋束蛋白質調配物。所使用之穩定條件與賦形劑有助於在極端的噴霧乾燥條件下保護該蛋白質，因此處理參數（不然（即，沒有此等穩定條件）會致使蛋白質凝集程度很高）此等參數會導致適於而且通常最適於形成（i )包含低於1 0 %總蛋白質凝集物，低於7 % -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（6 ) 總凝集物更佳，低於5 %總凝集物更佳；以及（i i )噴出劑量至少約6 5 %，至少約7 0 %更佳之粒子。本發明之噴霧乾燥粒徑適用於吸入式治療，即Μ M A D小於1 〇微米，小於5微米爲佳，小於3 . 5微米更佳，小於3微米最佳。在本發明較佳具體實施例中，該4 - α -螺旋束蛋白質包括人類生長激素。 ‘ 在特定具體實施例中，本發明之噴霧乾燥調配物包括一種穩定賦形劑，與噴霧乾燥純粹調配物相較，其有助於維持或降低該粉末之凝集物水準（即，不可溶或可溶解凝集物水準）。特別是，穩定賦形劑包括糖、胺基酸以及包括2至5個胺基酸之寡聚物。在具體實施例之一當中，該穩定賦形劑係鹿糖或植物蜜糖。在其他具體實施例中，該穩定賦形劑係亮胺酸、異亮胺酸或正亮胺酸。在其他具體實施例中，該穩定賦形劑係三亮胺酸、本發明一特定具體實施例中，該穩定劑存在噴霧乾燥粒子中的數量少於等於約3 0重量％。在其他特定具體實施例中，本發明之噴霧乾燥包括至少5 0重量％之4 - α -螺旋束蛋白質作爲人類生長激素〇本發明之噴霧乾燥粉末於貯存時亦很穩定，如此在特定具體實施例中，於4 0 °C貯存一個月之後，總凝集物含 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（7 ) 量保持低於約1 0 %。本發明其他具體實施例中，該4 - ^ -螺旋束蛋白質係於最佳化噴霧乾燥條件下噴霧乾燥，如此不需要存在額外穩定劑。令人驚異的是，純粹的噴霧乾燥方法有助於製造保持最少量蛋白質凝集物（可溶解與不可溶凝集物）、具有優良分散性（大於6 5 %，大於7 0 %噴出劑量爲佳 )，以及小氣體動力粒徑（Μ M A D小於約4微米）之噴霧乾燥粒子。在其他方面，本發明提出使該4 - ^ -螺旋束蛋白質次要結構差噴霧乾燥所引發改變最小的調配物與噴霧乾燥條件，即大幅保留α -螺旋束。特別是，本發明提出的噴霧乾燥粉末顯示相對於噴霧乾燥之前的原有結構，其α -螺旋束損失不多於約5 0 %，不多於4 0 %爲佳，不多於 3 0 %更佳，不多於約1 〇 - 2 0 %更佳，此係以F Τ I R或圓形二向色性（C D )測量。用於本發明噴霧乾燥調配物中之特佳結構性穩定劑與溶劑係保留該蛋白質α -螺旋束含量以及不利Θ -層調配物者，包括醇類，特別是乙醇。在保留蛋白質α -螺旋束性之本發明實施樣態一具體實施例中，該噴霧乾燥前溶液中的固體濃度低於2 m g / 0 一倂閱讀下列詳細說明與隨後實施例時，將會更暸解本發明此等與其他目的與特性。本發明詳細說明 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 Φ: 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -10- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（8 ) 1 ·定義本文所使用之下列各辭具有所示之意義。如本文所使用，生長激素可爲來自任何來源之生長激素’諸如鳥類、牛、馬、人類、羊與豬，以人類生長激素最佳。至於蛋白質活性劑，例如本文所述之任何4 - ^ -螺旋束蛋白質，本發明意欲使用天然與合成或是重組衍生之蛋白質，以及其類似物，其範圍包含相當高治療活性而且具有全長肽/蛋白質。本文所使用之「類似物」一辭係指一或多種胺基酸經取代、刪除（即，碎片）、附加（具有Ν —或C 一末端延伸之衍生物，諸如Me t - hGH)之蛋白質，或者由天然野生型）人類順序改良者，而且其顯示至少約爲該天然 (非合成）內生肽的1 〇、2 0、3 0或4 0 %生物活性 ’至少5 0 %、6 0 %或7 0 %生物活性爲佳，至少8 0 %、90%、95%、100%或大於100%生物活性最佳。「胺基酸」係指包含胺基與羧酸基二者的任何化合物。雖然該胺基最常位於該羧基官能基旁的位置，但是該胺基可位於該分子內任何位置。該胺基酸亦可包含其他官能基’諸如胺基、硫代、羧基、甲醯胺、咪唑等。該胺基酸可爲合成或天然胺基酸，而且可使用其消旋或光學活性（ D -或D -）形式，包括各種比率之立體異構物。「亮胺酸」包括D -亮胺酸、L 一亮胺酸、消旋亮胺酸與這兩種對映異構物的各種比率。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂秦· 本紙張尺度適用中·國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -11 - 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（9 ) 本發明的「純」調配物係指噴霧乾燥粉末，其包含一種4 - α -螺旋束蛋白質以及選擇性包括一種緩衝劑（通常佔該乾燥粉末0 - 1 5重量％ )，實質上沒有其他賦形劑，即包含少於約1重量％之其他賦形劑。「肽類」係由肽鍵結合而且少於1 0 0胺基酸所組成。肽類可爲高肽或雜肽（即，由相同或不同上述胺基酸殘基組成），而且其長度自兩個胺基酸至約一百個胺基酸。「二肽」，此處亦指二聚物，係指一種經由肽鍵結合的兩個胺基酸所組成之肽。「三肽」，此處亦指三聚物，係指一種由三個胺基酸組成的肽。「蛋白質」係一種巨分子，其係由1 0 0個认上之胺基酸組成。「總蛋白質凝集物」係指可溶與不可溶蛋白質凝集物相對於1 0 0%單聚4 - α -螺旋束蛋白質之百分比，其分別以大小色譜篩析法與U V光譜測定。除非另有所述，否則「凝集物水準」係指可溶或不可溶凝集物其中一者。「表面活性」材料係具有表面活性（以例如表面張力計測量）之材料，其特徵在於具有降低溶解有此種材料之液體的表面張力。表面張力（其發生在一種液體與其他相的界面）係一種液體的性質，該表面分子藉由表面張力顯不向內的吸力。「迅速作用」乾燥粉末係一種於吸入服用時不具有受 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -12- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（10) 控制或持續釋放特性的粉末。本文所使用之「水性溶劑」一辭係指水或包括水與一或多種可與水互混肋溶劑之混合溶劑系統。「乾燥粉末」係指一種粉末組成物，視該粉末狀組成物之活性劑種類而定，其通常包含約1 〇 %之以下濕氣，少於7 %濕氣爲佳，包含約5 - 6 %以下之濕氣更佳，包含約3 %以下之濕氣更佳，包含2 %以下之濕氣最佳。「可吸入」乾燥粉末——*即，「適用於肺部輸送」乾燥粉末--係指一種包括固體（即，非溶液）粒子之組成物，其可以（i )容易分散或是以吸入裝置分散，以及（i i )被一種物體吸入，如此至少一部分粒子到達肺部，得以滲透至肺泡。此種粉末被視爲「可呼吸的」或「可吸入的「氣溶膠化」粒子係以一種被動或主動吸入裝置分配到氣流中時，仍然懸浮於該氣體一段足以使至少一部分粒子被病患吸入之時間的粒子，如此一部分吸入粒子到達肺部。「噴射劑量」或「E D」提供於燃燒或分散動作之後自適用吸入裝置輸送藥物調配物的指標。更明確地說，就乾燥粉末調配物而言，E D係自一單位劑量包裝取出而且自吸入裝置接口排出之粉末百分比測量標準。該E D定義爲以吸入裝置輸送劑量對額定劑量（即，於燃燒前放置於適用吸入裝置之每單位劑量的粉末質量）之比率。該E D 係實驗測定參數，而且通常使用一種模擬病患劑量之體外 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） -13- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（11 ) 裝置測定。爲了測定E D値，將乾燥粉末的額定劑量（通常爲單位劑量形式）放置於一適用乾燥粉末吸入器（諸如美國專利第5 ，7 8 5 ，0 4 9號所述，由讓受於Inhale Therapeutic Systems)內，然後開動該吸入器，分散該粉末。.然後，藉由該裝置的真空抽出形成的氣溶膠雲霧，於該裝置內時，該氣溶膠被接於該裝置接口的配衡過濾器捕集。到達該過濾器的粉末數量構成該噴射劑量。例如，將5 111 g含乾燥粉末劑量形式放置於吸入裝置內，若該粉末分散作用導致於上述配衡過濾器上回收4 m g粉末，則該乾燥粉末組成物的噴射劑量係：4 m g (輸送劑量）/ 5 mg (額定劑量）x 100 = 80%。就不均勻粉末而言，E D値提供於燃燒後自吸入裝置輸送之藥物指標，而非乾燥粉末指標，而且係以藥物用量爲基準，而非以總粉末重量爲基準。同樣地，就M D I劑量形式而言，E D相當於自劑量形式求得，而且自吸入裝置接口排出之藥物百分比。本發明內容中的「沒有界面活性劑」係指包括約 0 · 1重量％以下之界面活性劑的噴霧乾燥粉末。「細微粒子劑量」（F P D < 3 . 3 ,im )提供氣溶膠品質的測量標準，而且界定爲以儲氣容器衝擊測定之3 . 3微米（F P D < 3 . 3 μ )以下粉末之數量。此參數相當於以流速1 c f m ( 2 8 · 3 L /分鐘）提供之Andersen衝擊器第 3階段之總質量，並且可以體外估計輸送到病患之低於 3 . 3微米劑量。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂秦· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（12) 「細微粒子片斷（F P F < 3 · 3 μΙΏ )」提供自單位劑量形式（例如硬質泡沬塑膠襯墊包裝）輸送到肺部深處之氣溶膠粉末輸送效率之測量標準，並且使用以每分鐘 2 8 · 3公升真空操作之短排氣道Andersen儲氣容器衝擊實驗測定。F P F定義爲粒徑小於3 . 3微米之氣溶膠化粉末總質量（以毫克計）相對於單位劑量形式中所含之粉末質量（以毫克計），並以百分比表示。「可分散」或「可氣溶膠化」粉末係E D値至少約 3 0 %之粉末，E D値至少4 0 — 5 0 %爲佳，至少約 5 0 - 6 0 %或以上更佳。具有較佳氣溶膠化性質之粉末的E D値至少約6 5 %以上。因爲本發明之粉末通常具有多分散性（即，由某一粒徑範圍組成），所以「質量中位直徑」或「Μ M D」係平均粒徑的測量標準。本文所提出之Μ M D値係藉由離心沉積測定，惟亦可使用許多其他常用技術測量平均粒徑（例如電子顯微鏡、光散射、雷射繞射）。「質量中位氣體動力直徑」或〔MMAD〕係已分散粉末之氣體動力大小測量標準。該氣體動力直徑係用以以沉降表現描述經氣溶膠化粉末，而且係在空氣與該粒子具有相同沉降速度之單位密度球體的直徑。該氣體動力直徑包括一種粒子之粒子形狀、密度與物理大小。除非另有所述，否則本文中所使用之Μ M A D係指以儲氣容器衝擊測定之氣溶膠化粉末的氣體動力粒徑分佈中點或中位。「藥學可接受鹽」包括但不局限於以無機酸類製備之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -15- 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（13 ) 鹽類，諸如氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、溴化物與硝酸鹽，或是以有機酸製備之鹽類，諸如蘋果酸鹽、順式丁烯二酸鹽、延胡索酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、乙基號珀酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、甲烷磺酸鹽、苯酸鹽、抗壞血酸鹽、對甲苯磺酸鹽、棕櫚酸鹽、水楊酸鹽與硬脂酸鹽，以及 estolate、gluceptate 與 lactobionate鹽。同樣地，包含藥學可接受陽離子之鹽類包括但不局限於鋰、鈉、鉀.、鋇、鈣、鋁與銨（包括經烷基取代銨）。「藥學可接受賦形劑或載劑」係指一種可以視需要包括在本發明組成物中，並且吸入肺部時對於治療對象沒有明顯不良毒性影響，特別是對於治療對象肺部沒有明顯不良毒性影響之賦形劑。「藥學有效數量」或「生理有效數量」係存在本文所述之微粒子乾燥粉末組成物中的4 - α -螺旋束蛋白質數量，其係經肺部投服此種組成物時，提供欲治療對象血流中所需要之蛋白質水準，以提供預期生理反應必要的數量。精確數量視許多因素而定，例如該4 - α -螺旋束蛋白質、該組成物活性、所使用之特定吸入裝置、粉末物理特徵、預定之病患用途（即，每天投服的劑量）、病患考量等等，而且藉由本文所提供之資訊，熟悉本技藝者極容易決定該數量。 % II , 調配物組份本發明一部分以本申請人之噴霧乾燥分子最適條件發 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -16- 1283182 A7 ____ B7 五、發明説明（14) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 現爲基礎，特別是諸如4 - α -螺旋束蛋白質之蛋白質，製備穩定不凝集可吸入乾燥粉末。本發明人面臨的挑戰係平衡影響蛋白質凝集性、脫醯胺化（降解）以及變性等因素與影響氣體動力粒徑與粒子分散性以及貯存穩定性等因素。此等因素經常以反向作用，因此提供最小蛋白質凝集性的條件經常會形成具有不適於吸入性質（例如大型粒子、低分散性）之粒子。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製下述係較佳之穩定賦形劑與調配物組份，其與下文更詳細說明之特定噴霧乾燥處理參數倂用時，有助於保護/ 屏蔽該蛋白質以免曝於噴霧乾燥的嚴苛條件之下，因此可使用會造成蛋白質高度凝集的條件，而且經常最適於形成吸入粒子。不希望受到任何特定理論限制，該穩定劑可以各種方式作用，例如降低表面張力、提高擴散作用、疏水 /離子性伴隨該蛋白質，使之具有抗伸展、緩衝等之穩定性。因此，此等穩定劑不僅可用以使蛋白質凝集性最小化，亦可以提高所形成之噴霧乾燥組成物之氣溶膠性能，而且在某些情況下，可以在先前不知或無法提供氣溶膠調配物（特別是氣溶膠化4 - α -螺旋束蛋白質調配物）狀態下提供可氣溶膠化調配物。現在茲將說明本發明噴霧乾燥組成物之組份。 A · 4 -α -螺旋束蛋白質本發明有關但不局限於蛋白質藥用製劑，而且特別有關4 - α -螺旋束蛋白質。屬於此種結構族群的蛋白質包本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） " -17- 1283182 Α? Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（15) 括 G — CSF、生長激素、I FN— γ、I FN— β、GM -CSF、IL — 2、IL 一 4、IL 一 5 與M— CSF 。雖然該順序水準之同質性受限，但是此等生長因素與細胞質共用四個螺旋束拓樸（A - D )鎖環連結。更特別的是，此等蛋白質結構當中共用一個皺襞，其特徵係上-上 -下-下、反向平行、左旋 '具有雙重鎖環拓樸之4 - α —螺旋束。4 — α —螺旋束蛋白質範例之一，I L — 2，其原有.結構具有自約4 2 — 6 3 %之α -螺旋束，具有少量或沒有 β—層（Tzannis，S·等人，Proc· A^/7· ZaJ· Scy, /7兄4，93:5460-5465(199 6)。本發明目的之一係製造可吸入蛋白質粉末，其中於噴霧乾燥期間保持該蛋白質α -螺旋束第二結構，並抑制β -層形成。特別適用於本文所述方法與組成物者係生長因素，諸如生長激素，特別是人類生長激素。人·類生長激素（ h G Η )係一種以脈衝方式選自前腦下垂體腺之蛋白質，而且是調節生長的必要物質。h G Η係一種1 9 1個胺基酸，其分子量約22kDa ，而且ρ I接近5 · 3之單鏈多肽。在一生當中，hGH刺激骨骼生長，並且是身體營養物、碳水化合物、蛋白質與脂質正常新陳代謝必要的物質。因爲其可以藉由使用脂肪作爲更有效率能量來源而提高蛋白質合成（合成代謝）並降低蛋白質破壞代謝（分解代謝），所以在蛋白質新陳代謝中扮演重要角色。藏匿在兒童體內的天然h G Η的數量高，於青春期達到最高水準，然後於成年期降低到最低水準。用於本發明組成物之人 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -18- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（16) 類生長激素通常係重組製備（例如藉由大腸桿菌進行）或是由腦下垂體衍生。該調配物中之4 - α -螺旋束蛋白質數量係每單位劑量輸送治療有效量該蛋白質必要的數量，以達到所需結果。實務上，其廣受特定藥劑、其活性、欲治療之情況嚴重性、病患人口、劑量需求與所需之療效影響。該組成物通常包含自約1重量％至約9 9重量％活性蛋白質，通常自約2至約9 5重量％活性蛋白質，更常自約5至8 5重量 % 4 - α -螺旋束蛋白質，而且亦視該組成物所含之賦形劑/添加劑相對數量而定。更明確地說，該噴霧乾燥組成物通常包含至少一種下列活性劑百分比：1 0 5 %、2 0 %、30%、40%、50%以上之4 — α —螺旋束蛋白質。該噴霧乾燥粉末包含至少約5 0重量％ 4 - α -螺旋束蛋白質（諸如人類生長激素）爲佳，例如自約5 0 -1 ◦ 0重量- α -螺旋束蛋白質。本發明特定具體實施例中，該噴霧乾燥粉末包括至少6 0重量％ 4 - α -螺旋束蛋白質，至少約7 0重量％ 4- α -螺旋束蛋白質更佳（例如自約7 0 % — 1 0 0 %活性蛋白質），至少約 8 0重量％以上4 一 α -螺旋束蛋白質更佳（8 0 -100重量％活性蛋白質），或是自約90—100重量 % 4 一 α -螺旋束蛋白質。通常，此等實例中需要高蛋白質含量。本發明之噴霧乾燥組成物特別適用於蛋白質，例如4 一 α -螺旋束蛋白質，其輸送劑量自〇 · 00 1 mg/天至100 mg/天，輸送劑量自 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） -19- A7 B7 1283182 五、發明説明（17) 〇.01111呈/天至75111尽/天爲佳，自0.1〇111尽 /夭至50mg/天更佳。 B ·加強穩定性之隨;形弯丨丨在某些實例中，本發明之組成物包括一或多種保護性或穩定賦形劑。如上述，本發明實施樣態之一係以本申請人之發現爲基礎，即與最佳化噴霧乾燥條件倂用時，如使用範例蛋白質（人類生長激素（h G Η ))之實施例所證實，特定賦形劑或添加劑（例如胺基酸，諸如亮胺酸、寡聚物，諸如三亮胺酸、糖類，諸如蔗糖、甘露糖醇與植物蜜糖，以及鹽類，諸如氯化鈉、氯化鉀等）不僅在使蛋白質凝集性最小化能力方面較佳，亦可以降低氣體動力大小，並且提高所形成粉末組成物的分散性。此外，數種本發明範例組成物可於質期貯存時保持穩定，即，貯存時之凝集物水準大體上不會增加。範例穩定劑包括胺基酸、肽類，特別是包括2 - 9個胺基酸之寡聚物，2 - 5聚物更佳，以及多肽，其全爲高肽或雜肽種類。作爲4 - α -螺旋束蛋白質穩定劑之胺基酸包括甘胺酸（g 1 y )、丙胺酸（a 1 a )、纈胺酸（ v a 1 )、正胺酸（2 —胺基戊酸）、2 -胺基庚酸、亮胺酸（1 e u )、異亮胺酸（i 1 e )、蛋胺酸（m e t )、脯胺酸（pro)、苯基丙胺酸（phe)、色胺酸 (t r ρ )、絲胺酸（s e r )、蘇胺酸（t h r )、半胱胺酸（c y s )、酪胺酸（t y r )、胺羰丙胺酸（本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本.1) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -20- 1283182 Α7 Β7 五、發明説明（18 ) asp)、穀胺酸（g 1 u )、賴胺酸（1 y s )、精胺酸（a r g )、組織胺酸（h i s )、正亮胺酸（η 0 r )與其經改良形式。較佳者係胺基酸，諸如亮胺酸、異亮胺酸、正亮胺酸、纈胺酸、正纈胺酸、2 一胺基庚酸、苯基丙胺酸與色胺酸。特佳之穩定胺基酸/賦形劑係亮胺酸、異亮胺酸與正亮胺酸。慮及lx佳肢基酸1¾疋劑之特徵時，較佳者係於水中溶解性較低之胺基酸，例如自約；L 〇 ni g / 4至約7 5 2 / m g。不希望受到任何理論限制，水溶性降低會致使吸濕性降低以及延遲所形成噴霧乾燥粉末結晶，此二現象都是本發明吸入式粉末需要的特徵（例如，在這方面，亮胺酸優於組織胺酸，組織胺酸優於丙胺酸，而丙胺酸優於甘胺酸）。亦較佳者係具有一些大凡德瓦耳斯（Van · der Waals )體積之胺基酸·，例如大於約1 〇〇 A 3者，例如異亮胺酸、亮胺酸、賴胺酸、蛋胺酸與苯基丙胺酸。凡德瓦耳斯體積增加可能與所形成噴霧乾燥藥學粉末之T g提高有關，因此表示貯存穩定更高。亦較佳者係疏水胺基酸，諸如亮胺酸（1 e u )、纈胺酸（v a 1 )、異亮胺酸（ i s ο 1 e u )、色胺酸（t r y )、丙胺酸（a 1 a ) 、蛋胺酸（m e t )、苯基丙胺酸（p h e )、酪胺酸（ t y r )、組織胺酸（h i s )與脯胺酸（p r 〇 )。胺基酸穩定劑之其他較佳因素係降低水的表面張力之能力，其與較低Μ M D以及所形成噴霧乾燥粒子中蛋白質凝集性降低有關；有助於降低水的表面張力之表面活性胺基酸包 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇χ297公釐） -21 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 ____B7 ___ 五、發明説明（19) 括胺羰丙胺酸、異亮胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、酪胺酸 '亮胺酸與纈胺酸。亦較佳者係玻璃轉化溫度高於4 0 °C 者，高於5 0 t更佳，高於6 0 °C更佳，7 0 °C或以上最佳。噴霧乾燥粉末中包含此等胺基酸通常可以改善氣溶膠性能，特別是Μ M A D與E D可改善約1 0 - 2 5 %。特佳胺基酸之一係亮胺酸，因爲其表面活性之故，其可以濃縮在噴霧乾燥粉末表面上，即噴霧乾燥蛋白質粉末表面上的亮胺酸濃度通常大於整顆粉末內之濃度。可以濃縮在噴霧乾燥蛋白質粉末表面上之其他表面活性胺基酸包括胺羰丙胺酸、異亮胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、正亮胺酸與纈胺酸。此表示本發明穩定劑的其他較佳特性——可於噴霧乾燥期間保護或屏障該藥劑，即，4 - α -螺旋束蛋白質。此特定具體實施例中，因該液滴表面上存在穩定劑分子，而避免該藥劑遭遇噴霧乾燥之嚴苛條件。此實例中，該穩定劑並非包膠藥劑，而且並未形成不連續塗層，而是於噴霧乾燥期間僅以較高濃度地累積在該液滴表面上，形成表面穩定劑濃度較高之粒子。作爲穩.定劑亦較佳者係包含兩個以上白胺醯殘基之二月太與三肽，其描述於I n h a 1 e T h e 1· a p e u t i c S y s t e m的國際專利申請案W ◦ Ο 1 / 3 2 1 4 4中，該專利申請案係以提及的方式倂入本文。此種穩定劑的代表係二亮胺酸與三亮胺酸。包含二白胺醯的三聚物若能包含兩個彼此相鄰之白胺醯殘基（於第1與第2位置），或者其可形成該三聚物的末端（位於位置1與3 )。該三聚物中所含之剩餘胺基酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 22 _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明 (20) 1 I 可爲上述 I 部分所界定之任何胺基酸〇適用者者係胺基酸 1 1 I 諸如甘胺酸 ( g 1 y ) 、丙胺酸 ( a 1 a ) 、纈胺酸 ( 1 1 I V a 1 ) % 亮胺酸 (1 e u )、異亮胺酸 ( i 1 e ) > 蛋 1 I 請 1 I 胺酸 ( 111 e t ) 脯胺酸 (P r c 丨）苯基丙 •胺酸 ( 先閲 1 I 讀 1 I P h e ) 色胺酸 (t r P )、絲胺酸 ( s e r ) 蘇胺背 ίτ 1 I 之 1 酸 ( t h r ) 半胱胺酸 (c y S ) 酪胺酸 ( t y r ) 注 I 1 I N 胺 m 丙胺酸 ( a s p ) 、榖胺酸 ( s 1 u ) 賴胺酸 ( 事項再 1 1 1 y s ) 精胺酸 (a r g )、組織胺酸 ( h i s ) % 正本 k 亮胺酸 ( η 0 r ) 與其經改良形式 0 就含二白胺醯三聚物頁 1 1 而言該三聚物的第三胺基酸組份係下列各者之一爲佳 : 1 1 亮胺酸 ( 1 e u ) 、纈胺酸（v a 1 ) 、異亮胺酸 ( 1 I i S 〇 1 e U ) 色胺酸 (t r y ) 丙胺酸 ( a 1 a ) 1 訂 1 Λ 蛋胺酸 ( m e t )、苯基丙胺酸 ( P h e ) 酪胺酸 ( 1 1 I t y r ) Λ 組織胺酸（h is) 與脯胺酸 ( P r 0 ) 〇用 1 1 於本發明之範例三聚物包括但不局限: 於下列各者： 1 e U 1 1 — 1 e u — S 1 y 、1 e u — 1 e U — a 1 a 1 e U — 1 e u — 1 e u 1 e u - -leu — i 1 e X 1 e u — I 1 e u — m e t l e u - -leu — P r 〇 % 1 e u — 1 1 1 e u — P h e 1 e u - -leu — t r P Λ 1 e u — 1 1 e u 一 s e r l e u - -leu — t h r 1 e u — 1 * 1 1 e u 一 c y s % 1 e u - -leu — t y r Λ 1 e u — I 1 e u — a s P l e u - -leu — g 1 u 1 e u — 1 1 I 1 e u — 1 y s 1 e u - -leu — a r g 1 e u — 1 1 1 e u — h i s leu- -leu — n 〇 r 1 e u — 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX；297公釐） -23- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（21 ) gly- leu、leu - ala - leu、leu - val — leu、leu— ile - leU、leu — met - leu、leu — pro - leU、leu — phe — leu' leu— trp— leU' leu — ser — leu' leu—thr — leU' leu — cys - leu、leu— try - ！eU、leu — asp- leu、leu — glu - leu、leu - lys — leu、leu - arg - leu、leu- hi s — 1 eu 與 1 eu — nor — 1 eU 0 由上述胺基酸任何組合物所組成的二聚物與三聚物亦適用於本發明。最佳者係包含至少兩個下列胺基酸之二聚物與三聚物：亮胺酸、異亮胺酸、纈胺酸、正亮胺酸、苯基丙胺酸與色胺酸。雖然因爲受限制水溶性之故而較不佳’但是可用於本發明之穩定性更高與性能增強的肽類係包含上述胺基酸任何組合物之4聚物與5聚物。該4聚物或5聚物包括兩個以上亮胺酸殘基更佳。該亮胺酸殘基可位於該肽內的任何位置，而其他胺基酸位置係由上述任何胺基酸使用，其先決條件係所形成的4聚物或5聚物於水中之溶解性至少約 1 m g /α。於4聚物或5聚物中之正白胺醯胺基酸係親水胺基酸，諸如賴胺酸，因此可以提高該肽於水中的溶解性。亦較佳者係玻璃轉化溫度高於約4 0 °C之二肽與三肽，高於5 0 °C更佳’高於6 0 t更佳，高於7 0 °C最佳。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） -24- 1283182 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _B7_五、發明説明（22) 聚胺基酸，特別是包括本文所述任一種胺基酸者，亦適於作爲穩定劑。較佳者係聚胺基酸，諸如聚賴胺酸、聚甘胺酸與聚（1 y s，a 1 a )。亦適於在噴霧乾燥期間保護該蛋白質者係碳水化合物賦形劑（例如糖類、衍生糖類，諸如醛醇、糖醛酸、酯化糖與糖聚合物），特別是糖類。適用於本發明之碳水化合物賦形劑包括例如單醣類，諸如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D -甘露糖、山梨糖等；二醣類，諸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多醣類，諸如植物蜜糖、鬆三糖、麥芽糊精、葡聚糖、澱粉等；以及醛醇，諸如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇（葡糖醇 )、吡喃糖醇山梨糖醇、肌醇等。較佳者係非還原糖、可與噴霧乾燥固體之蛋白質形成非晶相或玻璃相的糖，以及具有較高T g之糖（例如T g高於4 0 °C，高於5 0 °C爲佳，高於6 0 °C更佳，高於7 0 °C更佳，T g爲8 0 °C以上最佳。由實施例可看出，作爲穩定賦形劑之特佳者係蔗糖、甘露醇與海藻糖。亦有益於噴霧乾燥4 - α -螺旋束蛋白質者係電解質 ’以濃電解質爲佳。在本申請人進行的初步硏究當中，已發現在一種包含4 - α -螺旋束蛋白質之液態調配物中結合電解質（例如，許多藥學可接受無機鹽中任一者，諸如氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、硝酸鉀等）以調整該溶液離子濃度，亦有助於在噴霧乾燥期間「屏蔽」該蛋白質。不希望受到任何理論限制，假定因爲溶液中電解質濃度提高， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -25- 1283182 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 —_B7___五、發明説明（23 ) 該離子可能於噴霧乾燥期間濃縮在液滴表面上，因此在噴霧乾燥處理期間保護該液滴核心之活性蛋白質。可用於此等組成物與方法之額外賦形劑與添加劑係於 Inhale Therapeutic System的國際專利申請案W〇 96/ 3 2 Q Q Q ，以及Ifandbook of Pharmaceutical Excipients” 第三版，Kibbe，Α·Η· Editor(2000)。較佳之賦形劑係玻璃轉化溫度（T g )高於約3 5 °C者，高於約4 0 °C爲佳，高於4 5 °C更佳，高於約5 5 °C最佳。範例蛋白質賦形劑包括白蛋白，諸如人類血淸白蛋白 (H S A )、重組體人類白蛋白（r H A )、明膠、酪蛋白、血紅素等。本發明之組成物亦包括一種緩衝劑或p Η 値調整劑，通常（但不一定）是由有機酸或鹼所製備之鹽。代表性緩衝劑包括檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、醋酸或苯二甲酸之有機酸鹽類。其他適用之緩衝劑包括氫氯化三胺基丁三醇、硼酸鹽、磷酸甘油酯、與磷酸鹽。胺基酸（諸如甘胺酸）亦適用。本發明之噴霧乾燥組成物通常被認爲會迅速反應，即，以吸入方式投服彼時，其不會顯示出受控制或持續性釋放特徵。通常，本發明組成物係非微球型而且非微脂粒，該粒子可能爲非空心型。此外，本發明之噴霧乾燥人類生長激素粒子沒有界面活性劑（在模型蛋白質中，其呈乳酸脫氫酶），如此對於該噴霧乾燥產物的貯存穩定性具有不良影響（八(^1‘，以.；1^，〇.，人/^訂瓜5^:/^^(^:199-20 8( 1 9 99))。令人驚異的是，本申請人已製造出沒有界面 I I ——is! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26- 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（24 ) 活性劑之無凝集人類生長激素噴霧乾燥粉末，在先前硏究當中，該界面活性劑係於噴霧期間避免蛋白質凝集的必要物質。（Maa，Y-F·，等人，/·凡4/777 6W, 87(2):1 52- 1 59( 1 998))° 該組成物可另外包括調味劑、味道隱匿劑、無機鹽類 (例如氯化鈉）、抗微生物劑（例如，氯化苄烷銨）、增甜劑、抗氧化劑、抗靜電劑、界面活性劑（例如聚山梨酸酯，諸如“TWEEN 20”與“TWEEN 80”，以及普盧蘭尼克 (pluronics)，諸如F68與F88，得自BASF，惟其水準低於約0 · 1重量％ )、山梨聚糖酯類、脂質（例如，磷脂類，諸如卵磷脂與其他磷脂醯膽鹼類、磷脂醯乙醇胺類，惟其不爲微脂粒形式爲佳）、脂肪酸類與脂肪酯類、類固醇（例如，膽甾醇）與螯合劑（例如，E D T A，鋅與其他適用陽離子）。當用於4-α-螺旋束蛋白質中時，普盧蘭尼克存在百分比通常低於約1重量％，低於約 0 · 1重量％爲佳。本發明較佳賦形劑組成物之一包括普盧蘭尼克，諸如F 6 8與三亮胺酸。用於本發明組成物與方法的較佳陽離子包括鋁、錳、鈣、鋅與鎂。若存在此等陽離子時，其存在相對莫耳比自約5 0 : 1陽離子（莫耳 )/蛋白質（莫耳）至約1 ·· 1 ，介於約2 0 ·· 1與2 ·· 1爲佳。特佳者係陽離子對蛋白質之莫耳約爲2 ·· 1、7 ·♦ 1、1 0 : 1、1 5 : 1與2 0 : 1之組成物。在此等比例之下，特佳之陽離子係鋅，惟亦可在沒有鋅或其他二價陽離子情況下製得可溶解凝集物水準不高的噴霧乾燥調 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -參· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -27- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（25 ) 配物。該該組成物不具滲透加強劑爲佳，或者，若存在滲透加強劑，其存在量通常很少，例如該乾燥固體中少於約 1 0重量％左右，少於約5重量％更佳。適用於本發明組成物的其他藥學賦形劑及/或.添加劑 The Science & Practice of Pharmacy ” 第 19版，由 Williams & Williams出版（ 1995)，以及 “Physician’s Desk Reference” 第 52版，由 Medical Economics所出，Montvale，NJ(1998)。大體而言，本發明之藥學組成物包含自約1至約9 9 重量％穩定劑，自約5 - 9 8重量％穩定劑爲佳，自約 1 5 - 9 5重量％穩定劑更佳。該噴霧乾燥組成物包含自約0 - 4重量％穩定劑更佳，自約0 - 3 0重量％更佳，例如，較佳組成物包含下列數量任一者：1、2、3、4 、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30重量 %穩定劑。通常，該噴霧乾燥粉末中需要高蛋白質濃度，特別是噴霧乾燥人類生長激素。因此，因爲本發明穩定劑理想存在濃度低於約3 0重量％ (固體），所以非常有助於在噴霧乾燥保護該蛋白質。通常，穩定劑的最佳數量係由實驗決定，即製備包含不同數量（自少至多）穩定劑的組成物，檢測所形成組成物的蛋白質凝集性、Μ M A D與分散性，然後發現達到最佳氣溶膠性能而且對於蛋白質凝集性或貯存穩定性沒有明顯不良影響的範圍。本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1283182 Α7 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（26) III·製備乾燥粉末在使蛋白質凝集程度最小的條件下，藉由噴霧乾燥製備本發明之乾燥粉末調配物。例如，大體上如“Spray Drying Hnadbook”第 5版，Κ· Maters，John Wiley & Sons，Inc·，NY, NY(1991)與Platz，R等人的國際專利申請案W〇 97/ 41833 (1997)與W〇 96/32149 ( 1 9 9 6 )所述，進行該調配物的噴霧乾燥作用，此等文獻內容係以提及的方式倂入本文。視在所使用之P Η値範圍下，該活性蛋白質的溶解性而定，通常自一種水溶液或懸浮液噴霧乾燥該藥劑（以4 -α-螺旋束蛋白質爲佳，諸如生長激素）。。使用此種方法時，首先將該4 - α -螺旋束蛋白質溶解或懸浮於水中，視需要包含一種生理可接受緩衝劑。在較佳具體實施例中，該蛋白質（例如h G Η )係溶解於一種水溶液中。包含活性劑溶液的ρ Η値範圍通常介於約3與1 1，介於約3 . 5 - 9更佳，在某些實例中，因爲接近中性Ρ Η値爲佳（5 . 5 - 7 · 8 )有助於保持該粉末在肺部內溶解後的粉末生理相容性，所以以此等Ρ Η値爲佳。如此製備之溶液ρ Η値在該蛋白質的ρ I、高於其ρ I或低於其 ρ I。也就是說，該液態調配物係於約3 - 4、4 一 5、 5 — 6、6 - 7、7 — 8或8 — 9的pH値下噴霧乾燥。本文之實施例顯示出，於低Ρ Η値條件下，即，ρ Η値低於約4 (自3 . 5 - 4 )之下噴霧乾燥h G Η粉末，可以獲得令人驚異的優良氣溶膠性質。不過，於接近中性Ρ Η (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） -29- 1283182 A7 B7 五、發明説明（27 ) 値（7 - 8 )噴霧乾燥時，亦能獲得適用的粉末。本發明具體貫5也例虽中，於約等於p ;[(等電點）（於h G Η 的情況下，該ρ I爲5 . 3 )之ρ Η値下噴霧乾燥一種4 一 α -螺旋束蛋白質（諸如h G Η )懸浮液。本發明一特佳具體實施例當中，於ρ Η値爲5 · 3之下，噴霧乾燥一種包括呈溶液形式之三亮胺酸與呈懸浮液形式之4 一 α 一螺旋束蛋白質（h G Η )的懸浮液。該冰性調配物可視需要包含額外的可與水互混溶劑，諸如丙酮、醇類等。代表性醇類係低級醇，諸如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等。此等混合溶劑系統通常包含自約〇 —80%之可與水互混溶劑，自約20 一 40%更佳，自約1 0 - 3 0該可與水互混溶劑最佳。該前噴霧乾燥溶液通常包含溶解濃度自〇 . 〇 1% (重量％ /體積）·至約 20重量％ (重量體積）之固體，通常自〇 · 〇5至 1 0% (重量體積），自約ο · 1至2% (重量％/ 體積，即1 一 2 0 m g /2 )爲佳。更明確地說，該前噴霧乾燥調配物通常具有下列固體濃度之一：〇 · 1 m g / J或以上，0 · 5 m g / 或以上，1 m g / 或以上， 1 · 5 m g / W 或以上，2 m g / 或以上，3 ni g / llvc 或以上，4 m g / 2或以上或5 m g /J或以上。較佳之固體濃度自約1 0 - 1 5 m g /2。本發明一具體實施例中，於固體濃度爲0 . 1 m g / 下噴霧乾燥該蛋白質，其有助於提供一種噴霧乾燥固體，該固體中仍然保持該原有蛋白質結構。因此，本發明之較佳具體實施例於噴霧乾本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂‘ Φ; 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 Δ7 Α7 Β7 五、發明説明（28) 燥期間使用最佳固體濃度，視需要結合一或多種穩定劑，以提供凝集性最小而且具有較佳氣溶膠性質的可吸入粉末〇此外，雖然在保持該蛋白質^螺旋束之固體濃度下操作（如上述），但是噴霧乾燥在較佳濃度範圍內之較高末端（即，較高固體含量）的蛋白質爲佳，此係因爲較高蛋白質濃度相當於液滴中之蛋白質數量較多，如此可以降低與空氣-水界面接觸所致之液滴表面的蛋白質變性相對百分比。因此，若假設僅有特定數量之蛋白質分子固定在液滴表面上，而且僅有此等分子容易（或至少最容易）變性，則其餘非位於表面之蛋白質分子代表「受保護有效荷載 j 0 然後，於一種習用噴霧乾燥粉機（諸如由Niro A/S (丹麥）、Buchi (瑞士）等廠商所售者）中噴霧乾燥該溶液，形成可分散乾燥粉末。噴霧乾燥該溶液的最佳條件視該調配物組份而定，而且通常係由實驗測定。用以噴霧乾燥該材料的氣體通常爲空氣，或亦可使用惰性氣體，諸如氮或氬。此外，用以乾燥該噴霧材料的氣體之入口與出口的溫度均爲不會造成該噴霧材料中之活性劑分解的溫度。此等溫度通常由實驗測定，惟該入口溫度通常自約5 0 °C至約 2 0 〇 °C，而該出口溫度通常自約3 0 °C至約1 5 0 °c。較佳參數包括霧化壓力自約2 0 — 1 5 0 p s i ，自約 3 0 - 40至1 00p s i爲佳。所使用之霧化壓力係下列各者（p S i )之一 ·· 2 〇、3 0、4 0、5 0、6 〇本紙張尺度適用中國國家標準—（CNS ) A4規格（210X297公着) ~ ' —— II——ί‘丨— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（29 ) 、70、80、90>100、110、120或以上。噴霧乾燥粉末與以其他蒸發乾燥方法所製備的粉末具有物理差異，而且通常顯示出與以其他乾燥方法（諸如冷凍乾燥法）所製備之粉末不同的形態與熱歷程（包括玻璃轉化溫度、玻璃轉化寬度與熱函鬆弛分佈圖）。形成該4 - α -螺旋束蛋白質噴霧乾燥組成物之後，其於製造、處理與貯存期間保持在乾燥（即，相對濕度低 )條件下爲佳。不論所使用的特定乾燥參數爲佳，該噴霧乾燥法有利於形成包括一種活性4 - α -螺旋束蛋白質（以人類生長激素爲佳）之可吸入且無蛋白質凝集的高度分散粒子。 V .噹霧乾燥調配物特性本發明粉末的另外具有數個特性，最値得注意的是（ i )即使於貯存時，仍可保持一貫的高度分散性，（i i )氣體動力粒徑小（Μ M A D ) ，（ i i i )改善細微粒子劑量値，即，係一種粒徑小於3 . 3微米Μ M A D之百分比較高的粉末，如此有助於以一種蛋白質（諸如h G Η )改善內吸收時該粉末滲透到較下方呼吸道（即，肺泡）組織的能力。對於將此種粉末氣溶膠化輸送到肺部深處的效率最大化而言，本發明噴霧乾燥粉末的物理特徵（將於下文更詳細說明）相當重要。本發明的乾燥粉末係由可以滲透至肺部內的可氣溶膠粒子組成。本發明之粒子的質量中位直徑（Μ M D )小於 II——-I-如— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

*1T 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) Α4規格（210><297公釐） -32- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（30) 約2 0 μ m，小於約1 0 μ m爲佳，小於約7 · 5 μ m更佳，小於約4 μ m最佳，小於約3 · 5 μ m更佳，其直徑通常在 0 · 1 μ m至5 μ m範圍內。較佳粉末係由Μ M D自約 0 · 2至4 . 0 μ m之粒子所組成。某些情況下，該粉末亦包含非吸入性載體粒子，諸如乳糖，此情況下，該非吸入性粒子大小通常大於約4 0微米。本發明之粉末另外特徵係氣溶膠粒徑分佈小於約 1 Ομιτι質量中位氣體動力直徑（MMAD)，其MMAD 小於約5 μ m爲佳，小於約4 · 0 μ m更佳，小於約 3 · 5 μ m更佳’小於約3 μ m最佳。該粉末的質量中位氣體動力直徑的特徵範圍自約0 . 1 — 1 0 nm，自約〇 . 2 —5 . 0 μ m Μ M A D 爲佳，自約 1 · 〇 — 4 . 0 μ m MMAD 更佳，自約 1 · 5 — 3 · Ομπι MMAD 更佳。實施例中提供範例噴霧乾燥h G Η粉末的代表性Μ M A D 値。此等實例中有數者證實，結合最佳化噴霧乾燥條件以及選用穩定劑濃度，可以改善氣溶膠粒徑分佈。本發明之粉末另外特徵係其密度。該粉末的鬆密度通常自約0 . 1 - 10g/立方公分，自約0 . 1 - 2g/ 立方公分爲佳，自約0·15-1·5g/立方公分更佳〇該粉末的濕氣含量通常低於約2 0重量％，通常低於約1 0重量％，低於約6重量％爲佳。該噴霧乾燥的殘留濕氣含量通常低於約3 %爲佳，低於約2 %更佳，低於約 0 · 5與2重量％最佳。此種濕氣含量少的固體在包裝與 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -33- 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（31 ) 貯存時顯示出穩定性較高。通常，本發明粉末具有收濕性，即，已證實其若不是貯存於密封容器（諸如硬質泡沬塑膠襯墊包裝）下，可能自大氣吸收濕氣。本發明組成物最引人注意的特性係其高度分散性，此係以E D値表示。本文所述之噴霧乾燥方法與穩定劑有助於提供分散性明顯優於非最佳化對應物之調配物。通常，此等粉末的噴射劑量（E D )大於3 0 %，通常大於5 〇 %，而且經常大於5 5%。事實上，參考實施例時，本發明之噴霧乾燥粉末的最佳化E D値通常超過6 5 %，而且經常在約7 0 - 9 0 %或以上。表示乾燥粉末整體氣溶膠性能的額一標準係細微粒子片斷（FPF)，其表示氣體動力直徑小於3 · 3微米之粉末的百分比。本發明粉末特別適用於肺部輸送，而且其 F P F値自約3 0%- 6 4%以上。較佳粉末包含至少約 3 0百分比粒徑小於3 · 3 μ m至〇 · 5 μ m之氣溶膠，因此以氣溶膠化形式輸送時相當有利於到達肺部區域，包括肺泡。本文所述之組成物在化學穩定性與物理穩定性（即，在時間方面的氣溶膠性能）兩方面均具有良好穩定性。通常，在化學穩定性方面，該調配物中所含的4 一 ^ 一螺旋束蛋白質於噴霧乾燥時會降解約1 〇 %以下。也就是說，該粉末具有至少約9 0 %未受損活性蛋白質，至少約9 5 % 未受損活性劑爲佳，包含至少約9 7 %或以上未受損活性劑更佳。該噴霧乾燥方法形成總蛋白質凝集性低於約 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 1283182 A7 A 7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（32) 1 0 %的粉末，總凝集性低於約7 %爲佳’總凝集性低於約5 - 6 %最佳。更明確地說’該噴霧乾燥粉末通常具有少於約1 0 %不可溶凝集物’少於約7 %不可溶凝集物爲佳，包含少於約5 %不可溶凝集物更佳。至於可溶解凝集物，該噴霧乾燥通常包含少於7 %可溶解凝集物’少於6 %可溶解凝集物爲佳，少於5 %可溶解凝集物更佳’少於 4 %、3 %、2 %或1 %可溶解凝集物最佳。該噴霧乾燥粒子中的單體總數量通常大於9 0 % ’大於下列各者之一更佳：91%、92%、93%、94%或 95%。此外，本發明之組成物另外證實於貯存時具有良好穩定性’其特徵係於4 0 °C與室內相對濕度下貯存一個月之後’總蛋白質凝集物含量低於約1 〇 %。也就是說’於4 0 °C貯存一個月時，本發明範例生長激素組成物的總凝集物含量實質上保持不變，因此證實在噴霧乾燥與貯存本發明可吸入生長激素組成物時，可以達到化學與物理穩定性二者的最佳平衡。至於氣溶膠性能，本發明組成物一般特徵係，於環境條件下貯存三個月之時，液滴的噴射劑量不大於約2 0 % ，不大於約1 5 %爲佳，不大於約1 〇 %更佳。本文組成物中値得注意的氣溶膠性質連同最小化蛋白質凝集性，可形成數個相關優點，諸如（i )減少該吸入裝置流失的昂貴藥物，因爲更多粉末被氣溶膠化，因此治療對象可吸入更多藥物；（i i )因爲粉末氣溶膠化效率高之故，所以可以減少每單位劑量所需之乾燥粉末數量， II ——HIL·! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 35 1283182 A7 A7 B7 五、發明説明（33) (i i i )因爲氣溶膠藥物到達治療對象肺部的數量增加，所以可減少每天的吸入次數。 V I . 役服該組成物可使用任何適用之乾燥粉末吸入器（D P I )--即’ 使用病患吸氣作爲載劑，將該乾燥粉末藥物輸送到肺部的吸入裝置--輸送本文所述之調配物。較佳者係Inhale

Therapeutic Systems的乾燥粉末吸入裝置，其描述於Patton, j.S.等人所申請之美國專利第5，4 5 8，1 3 5號（ 1 9 9 5 ) 、A . E ·等人申請的美國專利 5，740，794 號（1998);以及 Smith，A.E.等人申請的美國專利5 ，7 8 5 ，0 4 9號（1 9 9 8 )， Schuler，C.等人申請的國際專利公告W〇 0 1/ 0 0 2 6 3，此等專利係以提及的方式倂入本文。使用此種裝置投服藥物時，該粉末裝在一個具有可刺穿盍或其他到達表面的貯存槽中，以一種硬質泡沫塑膠襯墊包裝或貯存匣爲佳，其中該貯存槽可裝入單次劑量單位或多次劑量單位。將經計量乾燥粉末藥物劑量裝入大量空穴（即單位劑量包裝）的便利方法描述於例如Parks，D·；[.等人提出之W〇 97/41031 (1997)，該專利以提及的方式倂入本文。亦適於輸送本文所述粉末者係描述於例如Cocozza，S.等人提出之美國專利第3，906，950號（ 1974) 以及Cocozza，S.等人提出之美國專利第4，0 1 3，0 7 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -36- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（34) 號（1 9 9 7 )中的乾燥粉末吸入裝置，此等專利以提及的方式倂入本文，其中欲輸送至治療對象的乾燥粉末預先測量劑量係裝在硬質膠囊內。供肺部投服乾燥粉末用的其他乾燥粉末分散裝置包括描述於例如N e a w 11，R · E ·等人提出之歐洲專利第 EP 129985 號（1988) ; Hodson，P.D.等人提出之歐洲專利第E P 4 7 2 5 9 8號（1 9 9 6 )； Cocozza，S·等人提出之歐洲專利第E P 4 6 7 1 7 2號（ 1 9 9 4 )，以及Lloyd，L丄等人提出之美國專利第 5，5 2 2，3 8 5號（1 9 9 6 )者，此等專利係以提及的方式倂入本文。亦適於輸送本發明乾燥粉末者係諸如 Astra-Di*aco“TURBUHALER”之吸入裝置。此種裝置詳細描述於Vii_tanen，R·提出之美國專利第4，6 6 8，2 8 1號（ 1 9 8 7 ) ; Wetterlin，K.等人提出之美國專利第 4，6 6 7，6 6 8 號（1 9 8 7 );以及 Wetterlin，K.等人提出之美國專利第4，805，811號（1989) ，此等專利均以提及的方式倂入本文。其他適用裝置包括乾燥粉末吸入器，諸如 Rotahaler®(Glaxo)、Discus®(Glaxo) 、Spiros™ 吸入器（Dura Pharmaceuticals)與 Spinhaler® (Fisons)。亦適用者係使用活塞以提供空氣的裝置，.其係用於夾帶粉末狀藥物、使空氣通過載體濾網，自該濾網抬升藥物，或是在一混合室中混合空氣與粉末狀藥物，·然後經由該裝置接口將該粉末導入病患體內，諸如描述於 Mulhausei·，P.等人提出之美國專利第5，388，572號 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-、1T ΦΤ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） -37- 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（35) ( 1 9 9 7 )，其以提及的方式倂入本文。亦可使用一種經加壓且計量劑量之吸入器（M D I ) 輸送乾燥粉末，例如Ventolin®計量劑量吸入器，其中藥物的溶液或懸浮液包含在一種藥學惰性液態推進劑中，例如一種氯氟碳化物或氟代烴，其描述於Laube等人提出之美國專利第 5 ，320，094 號（1994)與 Rubsamen， R.M.等人提出之美國專利第5，6 7 2，5 8 1號（ 1 9 9 4 )此二專利均以提及的方式倂入本文。或者，本文所述之粉末可溶解或懸浮於一種溶劑，例如水、乙醇或矽烷中，並藉由噴霧投服。輸送氣溶膠化溶液用的噴霧器包括 AERxTM(Aradigm)、Ultravent®(Mallinkrodt)以及 Acorn II®(Marquest Medical Products) 〇使用前之乾燥粉末通常貯存於環境條件下，貯存於 2 5 °C或以下之溫度，相對濕度自約3 0至6 0 %下爲佳。結合呈第二包裝劑量形式的乾燥劑，可以達到更佳較佳之相對濕度條件，例如低於約3 0 %。 VII. utility 對於哺乳類治療對象經由肺部投服治療有效量本發明組成物時，其適於治療或避免任何I I · A .部分所述之必須投服4 - α -螺旋束蛋白質的情況。特別是’投服治療有效量範例4 一 α —螺旋束蛋白質（h G Η )時’其適於治療兒科生長激素不足、成人生長激素不足、慢性腎功能不全與腫瘤徵候群。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 -Φ: 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -38- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 ____B7_ 五、發明説明（36 ) 下列實施例係用以說明本發明，其不應用以限制本^ 明範圍。熟悉本技藝者將明暸在本揭示範圍內、圖式與φ 文主張該實施例的變化與同等物權利。本文參考的所有文件、書籍、專利與其他公告全文均以提及的方式倂入本文中。實施例材料與方法 A.材料 Des-phe人類生長激素（des-phe hGH)，BresaGen Limited， Adelaide, South Australia 天然人類生長激素，BresaGen Limited，Adelaide，South Australia 獲硫醯胺基-人類生長激素（met-hGH)，BresaGen Limited, Adelaide, South Australia L-亮胺酸（Aldrich，St· Louis, M〇）乙醇，200 試樣（USP/NF，Spectrum Chemical Mfg. Corp., New Brunswick, N.J.) 甲醇（HPLC等級，EM Industries，Gibbstown，N.J.) 三亮胺酸（Bachem California Inc，USA Torrance, CA) 磷酸鈉，二鹼價，7-水合物結晶：J.T· Baker，Lot No·: M30150 磷酸鈉，一驗價，一水合物：J.T. Baker，Lot No·: N50156 II1 — — HIL·! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} -訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -39- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（37) 蔗糖：T.J. Bakei·，Lot No·: N21593 植物蜜糖，五水合物：Pfanstiehl，Lot No·: 25320A 海藻糖，二水合物：Spectrum, Lot No·: OF0359 lie : Sigma，98%，Lot No·: 28H00462 Val : Aldrich，99%，Lot No·: 083 1 1AU Phe : Aldrich，99%，Lot No.: 13022TS Trp : Aldrich，99%，Lot No·: 12729HS B.方法粒徑測量（Η o r i b a) 使用 Horiba CAPA-700粒徑分析器（Horiba Instruments Inc·，Ircine，CA)測量該粉末的質量中位直徑（MMD)。該測量係離心沉降懸浮媒介中之分散粒子爲基礎。使用該粒子密度與該懸浮媒介的密度與黏度計算質量中位直徑，其係以粒子的Stokes直徑爲基礎。所有粉末的粉末密度均設爲1 . 5 g / c m 3。（該額定値係用於所有分析粉末，而且其在噴霧乾燥粉末代表性範圍內）。以懸浮於 5 毫升 Sefisperse A-ll ( Micromeritics， Norcross，GA )中約5 - 1 0 m g粉末進行粒徑測量，並以聲處理分散1 0分鐘。收集粒徑數據範圍設爲0 . 4至 1 0 · 0 μ m範圍內。粒徑（V M D ):使用於2巴sheai•力下操作之 SYMPATEC HELOS粒徑分析器測量粒徑分佈。倂用相點於 R 2之焦距與1 D R型偵測器。由該分佈獲得體積平均直本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I—-I-—ί — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -40- 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（38) 徑（V M D )。化璺穩定性:藉由反相HPLC (RP — HPLC) 測定蛋白質純度/蛋白質降解程度。濕氣含量:使用Misubishi濕度計# C Α - 〇 6型，以 Karl Fischer滴定技術測定該粉末的剩餘濕氣含量。亦可由熱重量分析（T G A )測定濕氣含量。測定可溶解凝集物:使用一種具有溶劑輸送系統、光二極體陣列偵測器、溫度控制自動取樣器以及數據管理系統的Waters HPLC系統，藉由大小篩析高壓液體層析法或 S E C測量可溶解凝集物。測定不可溶凝集物=使用Shimadzu UV-2101 PC雙分光光度計，以紫外線光譜（U V )測定不可溶凝集物。在 3 6 0至2 4 0 n m掃描樣本。藉由測量該溶液的濁度，凝量測定不可溶凝集物（Eckhardt，B.M.等人，戶如//72 A二， 8(11) ， 1360-1364(1991))。氣體動力粒徑測量 Andersen儲氣容器衝擊器。使用一 Andersen儲氣容器衝擊器（具有一連串層的篩狀裝置，其可根據粒子的初始衝擊力將粒子捕集在板上）測定空氣氣流中之氣溶膠化粉末調配物之MMAD及粒徑分佈。於試驗前後秤該板重量，並測定每一層之板上所沈積的粉末質量。除非另有所述，否則使用習用Andersen儲氣容器衝擊器進行硏究，該習用 Andersen儲氣容器衝擊器具有八層（自頂部至底部爲層〇至 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -41 - 1283182 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（39) 、其 cut— of f 尺寸自 9 · 0 至 0 . 4μπι，以 2 8 · 3 L /分鐘之流速操作時，最終過濾層截獲的粒子 <0 . 4μηι。除了該儲氣容器衝撃器與USP ( United States Pharmacopia )喉管（USP 23，第 <601〉章）接於該裝置接口，而非接於過濾之外，該裝置試驗配置與E D試驗類似。通常對每個儲氣容器衝擊作用進行多分散，以達到重量分析精確數據。 △ 皿短排氣道（S S ).方法〇在SS方法中，由上述習用Andersen儲氣容器衝擊器之配置改變放置層之順序。由頂部開始，使用層〇作爲入口錐體固定處，以連接該喉管。其次放置層3，其位於層〇下方，然後是過濾層（層 F )。該包含粉末的空氣氣流僅通過層〇與3 ;空氣（但無粉末）流過置其他層，其係位於層F下方，使該組合體剩餘部分保持在原位。將預先秤重的過濾器置於層F上，而捕集粒子< 3 · 3 μιτι。將第二過濾器置於層3下方的倒逆板上，而捕集粒子< 3 · 3 μπι。爲了進行此處所述之硏究，將一個包含2 m g粉末組成物的Β Ρ (硬質泡沬塑膠襯墊包裝）分散在一個氣溶膠輸送裝置中，並以U S P方法’以2 8 . 3 L /分鐘抽真空。然後，重複該方法兩次 ’其標的質量係每回合6 m g。然後移除該過濾器並秤重，測定所沈積之粉末數量。實施例1 肺部輸送純h G Η調配物本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） _ 49 _ 1..：--------------1Τ------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（40) 將天然全長h GH ( h GH，BresaGen天然全長型，型錄編號h S T - 3，批號Η 〇 5 7 )噴霧乾燥成純化形式（即，沒有賦形劑/穩定劑）。於剛噴霧乾燥後以及貯存1個月之後，以三種不同溫度評估所形成粉末的物理與化學穩定性以及氣溶膠性質。製備溶液。於噴霧乾燥之後，使用具有Υ Μ - 1 0隔膜之 Amicon (millipore) Ultrafiltration單元過濾（diafiltered) 該蛋白質，去除該市售調配物中所含之甘露醇與甘胺酸。製備一種包含h GH ( 7 2 5mg)與5mM之磷酸鈉且 p Η値爲7 . 8的溶液。該液態調配物每2包含 1 0 m g固體（即，1 %總固體含量）。該緩衝劑佔 6 · 9 %總固體，而〔h G Η〕爲9 3 · 1 %總固體，或是 9 · 3 1 m g / id 〇噴霧乾燥。使用Buchi 190小型噴霧乾燥機（Buchi Labor tec nik Ag，Meiersaggstrasse，瑞士）噴霧乾燥該純調配物，該Buchi 190小型噴霧乾燥機具有一個經改良旋風器（ Platz，R·等人，Inhale Therapeutic Systems之國際專利申請案 W 0 97/41833 ，1997 年 11 月 13 曰提出 )、霧化器噴嘴與粉末收集容器。其收集效率在7 〇 %以上；一般收集效率自約7 5 - 9 5 %。粉末包裝與特忤。在一個相對濕度低於5 %的小工具箱內，將形成的粉末手工裝塡成5 m g單位劑量形式（硬質泡沬塑膠襯墊包裝，B P )。此等B P與乾燥劑裝袋’ 並於三種不同溫度—4 °C，2 5 °C與5 0。(：下貯存1個月 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 .争_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） -43- 1283182 A? B7 五、發明説明（41 ) 。然後，使用大致上述方法評估該粉末的物理（氣溶膠性能）與化學性質。表1·噴霧乾燥純hGH的特性 t = 0 t=l 個月，4°C t=l 個月，25t： t=l 個月，40°C E.D，％ 72 76 74 7 3 MMAD, β 3.5. 3.8 3.4 3.6 fpf 45% 40% 47% 41% 濕氣含量 1.9% 2.0% 2.0% 2.2% 不可溶凝集 1.4% 1.8% 2.0% 1.8% 物（UV) 可溶解凝集 5% 2% 4% 6% 物（SEC) 蛋白質純度 97.0% 96.8% 96.0% 94.7% I—I — HIL#! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製上述數據表示，可以使用特定噴霧乾燥條件（固體含量、霧化壓力、pH値等等）製備具有高分散性（ED大於7 0 % )、良好氣體動力大小範圍（Μ M A D平均約 3 · 5微米）、蛋白質凝集度低（低於約5 % )以及於 4 0 °C貯存時可溶解與不可溶凝集物低於8 %，於室內條件貯存時低於約6 %，而於低溫貯存時低於約4 %。之 h G Η乾燥粉.末。實施例2 於各種方法條件下噴霧乾燥純h _G Η 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -44 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 _B7_ 五、發明説明（42) 在上述各種不同方法條件下製備無額外賦形劑/穩定劑之人類生長激素水溶液，並噴霧乾燥之，以檢驗所形成粉末的特性效果。下表2提供相關方法參數與所形成噴霧乾燥粉末性質的總結。I A =不可: 溶凝集物；S A =可溶解凝集物〇表2.噴霧乾燥純hGH 實驗固體霧化 MMAD ED ΙΑ SA hGH 編號 (%) 壓力 (微米） (%) (%) (%) (類型） (psi) S3-01 1 40 3.5 72 0.7 5.1 天然 S4-03 1 80 3.3 76 0.5 2.5 Met S5-04 1.1 60 3.8 76 1.1 2.6 Met S6-01 0.5 60 3.4 83 0.3 5.3 D - P h e S6-02 1 60 3.8 77 0.1 3.9 D-Phe S6-03 1 40 4.1 72 0.5 4·1 D-Phe S6-04 2 40 4.3 72 0.6 3.1 D-Phe S7-07 1 80 3.3 79 0.1 3.3 Met 上ί 述數據進~步支持本文所述製備4 - a 一螺旋束蛋白質粉: 宋之較佳方法參數的效用，該4 一 ^ 一螺旋束蛋白質粉末顯示出噴霧乾燥時蛋白質凝集性最小，而且具有較佳氣溶膠性質 (E D 大於7 C 1 %，而 Μ M A D平均約3微米）〇本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 45 - 1· IAW 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 ___________五、發明説明（43) 實施例3 包括三亮胺酸之可吸入曈露乾燥h G Η調配物本硏究目的在於測定亮胺酸對於氣溶膠性質以及噴霧乾燥M e t — h G Η的1個月穩定性影響。 A .調配方法如下製備五種不同調配物溶液。混合濃度爲7 m g / W ( 7 Ο % w/ w )之獲硫醯胺基-人類生長激素與濃度 1 · 5與3 m g /2之亮胺酸（L 3 )，提供分別包括 1 5重量％與3 0重量％三亮胺酸之粉末。將此等溶液調整至P Η値爲3 . 6或7 . 8。同樣地，製備一種獲硫醯胺基—人類生長激素（1 0 m g /J )與磷酸鈉（5 m Μ )且Ρ Η値爲7 . 8之水溶液。所有調配物均製備成總固體含量爲1 %。 B .噴霧乾燥使用上述實施例1與2所述之Buchi 190實驗室規格噴霧乾燥粉機噴霧乾燥上述h G Η溶液；所使用霧化壓力爲 8 Ο p s i ° C .特徵該噴霧乾燥M e t - h G Η的氣溶膠性質與化學穩定性如下： II ——!ΙΓ·! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 ^91. 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） -46 - 1283182 經濟部智慧財產局消費合作社印製五、發明説明（44 ) 表3·噴霧乾燥hGH-三亮胺酸（L3)粉末 15% L3 30% L3 0% L3 15% L3 30% L3 pH 値3.6 pH値 3.6 pH値 7.8 pH値 7.8 pH値 7.8 ED 92% 88% 76% 75% 73% MMAD 2.6 3.1 3.3 3.3 3.1 VMOD 2.3 2.5 1.9 1.7 2.0 FPF 64% 54% 49% 51% 55% 濕氣含量 0.9% 0.9% 1.0% 1.3% 1.3% 不可溶凝集物可溶解凝集物 1.0% 1.8% 2.5% 0.4% 0.5% 蛋白質純度 95.3% 95.8% 95.2% 95.9% 95.7% 上述數據表示，於代表性4 - α -螺旋束蛋白質（諸如h G Η )噴霧乾燥期間使用時，三亮胺酸是一種有效的穩定劑。此外，於噴霧乾燥期間使用低ρ Η値條件時，顯示出分散性增強，特別是與三亮胺酸倂用時，提供該生長激素分子共同穩定作用，使得粉末顯現的蛋白質降解程度最小，並具有較佳E D (平均約9 0 % )與小氣體動力直徑（自約2 . 6 — 3 · 1微米）。實施例4 包括糖類的可吸入喧霧乾燥h G Η調配物本硏究目的係探究以糖類作爲穩定劑，並以h G Η噴本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） II-----is! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 -47- 經濟部智慧財產局消費合作社印製 1283182 A7 ____B7__·__ 五、發明説明（45) 霧乾燥調配物之最佳化方法參數，以完成具有所需氣溶膠性質與良好h G Η計劃的粉末。在眾多的糖類當中，以非還原糖類、與乾燥固體中的蛋白質倂用時可形成非晶相之糖類、以及具有高T g (例如玻璃轉化溫度高於3 0 °C，高於4 0 °C爲佳，高於5 0 °C更佳，高於6 0 °C更佳，高於7 0 °C最佳）之糖類爲佳。爲保有此等較佳性，本硏究使用蔗糖（T g = 7 4 t )、植物蜜糖（T g = 1 〇 2 .。0 )以及海藻糖（T g = 1 1 5 °C ) ( τ g 數據來自 A· Saleki-Gerdt，Zografi，G. 户如11(8)，1 166- 1 172(1994))。 A .製備調配物。製備pH値爲7 · 8之5mM磷酸鈉緩衝劑。以5 J的Η P L C水重組每個m e t -h G Η親液物管瓶。共使用1 8個管瓶。於重新形成之前過濾（diafiltered )將該h G Η溶液，以去除賦形劑。所使用之過濾（dia filtered )設定係一種具有 Υ Μ 1 0 ，0 0 0 過濾器的 Amicon ( Millip〇re )

Ultrafiltration單元。在4 — 5 °C之下，使用pH値爲 7 · 8之5 m Μ磷酸鈉緩衝劑以及3 7 p s i g氣體壓力過濾（diafiltered )該蛋白質溶液1 1小時。於過濾（ diafiltered )步驟之後，以2 7 7 n m的U V光譜檢查胃亥g 白質濃度，並以P Η値爲7 · 8之5 m Μ磷酸鈉緩衝劑將濃度調整爲1 2 · 1 m g /2。分別製備濃度爲2 2 . 8、2 2 · 7與2 2 . 7 m 〇 I — — I!il#! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -48- 1283182 A7 ____ B7 五、發明説明（46 ) / W之蔗糖、植物蜜糖與海藻糖的糖原料溶液。在ρ η値爲7 · 8之5 m Μ磷酸鈉緩衝劑中製備此等溶液。在分別標不爲S5 — 01 (薦糖）、S5 — 02 (海藻糖）、 S5 - 0 3 (植物蜜糖）與S5 — 04 (僅有緩衝劑）之離心管中製備四種調配物。S 5 - 0 1 :將4 0 J之 1 2 · 1 m g /2的h G Η分配於一個瓶中，並添加1 〇 2之蔗糖原料溶液。將ρ Η値調整至7 · 8。S 5 — 0 2 :將4 0 2之1 2 · 1 m g / 的h G Η分配於一個瓶中，並添加1 0 J之植物蜜糖原料溶液。將Ρ Η値調整至 7 · 8。S 5 — 0 3 :將 3 4 J 之 1 2 · 1 m g / 的 h G Η分配於一個瓶中，並於其中添加8 · 5 W之海藻糖原料溶液。將pH値調整至7 · 8。S5 — 04 :將40 J之1 2 . 1 m g /J的h G Η分配於一個瓶中’並於其中添加8 · 5 W之5 m Μ磷酸鈉緩衝劑。將ρ Η値調整至7 . 8。調配物摘要示於下表4。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -49 - 1283182 Δ7 Α7 Β7 五、發明説明（47) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1¾^鬆 sssi·寸撇總固體 10 10 10 0 .廳緩衝劑 v〇 VsD — v〇 v〇 vd 画海 30.5 30.5 30.5 0 0 hGH 64.9 64.9 64.9 93.4 緩衝劑 (mM) IT) 10 un (mg/ml) 4.55 4.55 4.55 〇海蔗糖植物蜜糖 .海藻糖純緩衝劑 hGH (mg/ml) 卜 ON 5 ON ON pH値 L^ 〇〇 oo OO OO 調配物 S5-01 S5-02 S5-03 S5-04 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) b r all 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） -50- 1283182 A7 B7 五、發明説明（48 ) B ·噴霧乾燥z使用上述實施例中所述之Buchi 190小型噴霧乾燥機噴霧乾燥此等調配物溶液。於6 0 p s i霧化壓力以及出口溫度爲6 0 t之下進行噴霧乾燥作用。收集到的粉末產率自約6 0 - 8 5 %。 C ·穩定性_。將該粉末送到一個相對濕度低於5 %的小工具箱內，並做成單位劑量形式（每個硬質泡沬塑膠襯墊包裝內有5 · 0 m g粉末），以蓋座熱密封該單位劑量形式。將各種調配物的硬質泡沬塑膠襯墊置於4 0 °C溫度狀態下。並將該硬質泡沬塑膠襯墊密封在一個具有乾燥劑的鋁袋內。於一個月時，將樣本自此種溫度狀態移開。在下表中表示氣溶膠性質、蛋白質凝集物、蛋白質純度與剩餘濕氣分析結果。表5.於初始時點以及一個月時點所噴射劑量調配說明 pH値初始時點 —. 個月 3寺黑占物 ED% SD RSD% ED% SD RSD% S5-01 30%蔗糖 7.8 75.0 ±2.8 3.7 75.9 ±3.8 5.1 S5-02 30%植物蜜糖 7.8 77.4 土 3.0 3.8 76.5 ±3.1 4.0 S5-03 30%海藻糖 7.8 80.1 ±2.2 2.7 76.8 土 2.4 3.1 S5-04 純調配物 7.8 82.9 土3.0 3.6 78.5 ±4.3 5.4 此等數據顯示，經試驗之所有調配物的E D均高於 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -參· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 A7 B7 五、發明説明（49) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 PHdd , avslAI^?ii#aIIC孽 1^κ1?ϋ&鋇运迄.9撇一個月時點 VMD (μιη) CN c^i CO csi CO (N οί FPF (%) CO MMAD (μιη) 寸 CO On CO 0 ON VMD (μπι) 寸 cs CS 1/Ί CO cs FPF (%) CO 〇〇 CO ON CO MMAD (μπι) σ\ ON CO 00 CO 00 pH値 00 00 00 卜· 00 卜· 說明 30%蔗糖 30%植物蜜糖 30%海藻糖純調配物調配物 S5-01 S5-02 S5-03 S5-04 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) Γ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 52 - 1283182 Δ7 Α7 Β7 五、發明説明（50) 這四種調配物的粉末具有類似““八0(3.8-3 . 9 μ m )値。觀察到，除了蔗糖調配物（3 _ 4 μ m 之外，於4 0 °C貯存一個月之後，此等Μ M A D仍在相範圍內。蔗糖調配物的Μ M A D降低係該測量的C I E 爲1 1 5% (大於1 0 0%)之意料外實驗誤差所致。他調配物於初始時點與一個月時點之間的粒徑分佈非常致0 調配物說明 pH値初始時點一個月時t (%) (%) 一 S5-01 30%蔗糖 7.8 1.1 1.0__ S5-02 30%植物蜜糖 7.8 1.6 1.4__ S5-03 30%海藻糖 7.8 1.4 1.3__ S5-04 純調配物 7.8 1.2 1.4__

該濕氣含量自1至1 . 6 %。如同預期，於4 0 °C 與乾燥劑一同貯存一個月之後，該濕氣水準並未提高。 « I . 1. 1_ - — «=1 111 . - - ϋ ϋ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂和. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） -53- 1283182 A7 B7 五、發明説明（51 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 _#駛鏗·^长撇：HdH-cmTroom ?i& ass as 33 ass as

Koq § <rL.L 96·ς 0Γ9 寸寸·οτ οίΓΟΤκ·ο=ρ οοΓς 6寸ν 95 02=1= 69·ς scsiI Δ9_0Τ 6ζ,ς οοςτ ογο=ρ ος·ς 95 ζί·9 6¾

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寸0丨SS COSS S.AS 10 丨 ςοο SISH -56- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T -φ. 1283182 A7 B7 五、發明説明（54) 所有調配物於噴霧乾燥之後，可溶解凝集物（S A ) 均稍微增加（至約2 % )。於4 0 °C下以乾燥劑貯存一個月之後，可溶解凝集物稍微增加。純調配物的凸溶解凝集物增加至4 · 7 %。其可看出諸如糖等可以穩定該h G Η 蛋白質，避免其凝集。這三種糖調配物當中，蔗糖調配物在初始時點與一個月時點兩方面顯示出最低可溶解凝集物百分比値。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表10.以UV光譜表示不可溶凝集物特徵時點調配物說明 3次注射平均値（％) (月） hGH SD RDS% 0 H051RP 起始 met-hGH 1.9 0 於d i a f i 11 e r之後預調配物 0.2 0 S5-01 30%蔗糖 0.0 0 S5-02 30%植物蜜糖 2.9 0 S5-03 30%海藻糖 1.6 0 S5-04 純調配物 2.0 1 S5-01 30%蔗糖 1.7 0.2 13.8 1 S5-02 30%植物蜜糖 1.9 0.1 3.7 1 S5-03 30%海藻糖 2.4 0.5 21.5 1 S5-04 純調配物 1.3 0.2 11.9 所有試驗調配物的不可溶凝集物均低於3 %。於 4 0 °C貯存一個月之後，未觀察到不可溶凝集物增加。表 9中，於一個月時點的S D與R D S %係由掃描相同樣本 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 _攀_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 57 - 283182 A7 B7 五、發明説明（55) 三次所獲得。其反應出由相同樣本的U V測量變化，但是並未顯示出樣本與樣本之間的變化。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 亦如同 Β·Μ· Eckhardt, J.Q.OESWEIN 與 Τ·Α· Bew 1 ey，户如/777.天以·，8(11) :1360-1364(1991)所述般g十算總卓體 (TM)百分比。時點調配物說明 3次注射平均値（％) (月） ΙΑ SA ΤΜ 0 H051RP 起始 m e t - h G Η 1.9 0.31 97.5 0 於diafilter之後預調配物 0.2 0.33 99.6 0 S5-01 30%蔗糖 0.0 1.96 99.7 0 S5-02 30%植物蜜糖 4.6 2.26 93.2 0 S5-03 30%海藻糖 1.6 2.34 96.1 0 S5-04 純調配物 2.0 2.53 95·5 一 1 S5-01 30%蔗糖 1.7 2.61 95.7 1 S5-02 30%植物蜜糖 1.9 3.35 94.8 1 S5-03 30%海藻糖 2.4 3.22 94.5 1 S5-04 純調配物 1.3 4.68 94.1一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製此硏究中所評估的糖類並未顯示出其氣溶膠性質（ E D與Μ M A D )比純調配物改善。不過，具有糖類的1)1 配物似乎可以提供更佳穩定性，例如以一種糖調配h G H 時，其可溶解凝集物水準低於純調配物；此外，該蔗糖_ 配物的可溶解凝集物的數量最少。 -58- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1283182 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（56) 實施例5 最佳噴霧乾煥參數此硏究目的係進一步將4 - α -螺旋束蛋白質的 MMAD降低至3微米以下，而且不會犧牲分散性或是增加蛋白質降解。雖然使用de s— Phe hGH，但是不預期天然全長h G Η粉末特徵中會出現明顯差異。已顯不（Mumentlialei·，Μ·，等人户如㈣ 11:12- 20(1994)與 Maa，Y-F 等人於 / 户如⑽介/，87:1 52- 1 59( 1 998)) 出於噴霧乾燥期間無法避免h G Η凝集，而且大部分凝集作用係於霧化步驟期間發生。本申請人以4 0 p s i霧化作用將純天然h G Η噴霧乾燥成乾燥粉末（實施例1 )。此批粉末的Μ M A D爲3· . 5微米（V Μ〇D = 2 · 7微米）’其大於3微米。此硏究的目的係測定可將氣體動力粒徑進一步縮小到3微米以下，而且不會犧牲蛋白質凝集作用最低程度的最佳化處理參數。達到降低Μ M A D的方式之一係縮小主要粒徑，可以藉由提高霧北壓力或是降低欲噴霧乾燥之溶液的固體含量進行此作用。硏究這兩種參數的調整。實驗設計使用霧化壓力（40 - 60p s i )與固體含量（ 0 · 5 — 2 · 0%w/v)作爲設計因素。將霧化器壓力提高至60p s i固體含量1% (S6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ，1T- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ29*7公釐） -59- 1283182 Δ7 Α7 Β7 五、發明説明（57) -02)，其目的在於提供更小粒子。將固體含量降低至〇 · 5% (S6 - 03)，如此縮小該粒徑。此外，須注意在用以製造更小粒徑（固體更少而且霧化度提高）之條件下，先觀察到hGH凝集水準提高。換言之，hGH濃度提高可能會使形成較低凝集性。因此，決定將固體含量提高到2%W/V。實驗S6 - 0 4的目的係使用 4 0 P s i霧化壓力使凝集性保持在最低水準。該設計模型如下。可由表1 3之蛋白質純度値看出起始h G Η材料雜質含量非常高。 I--------II—I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表12·瀆 S驗設計實驗 (編號）固體含量 (% w / w) 霧化壓力 (psig) 備註 (粒徑/凝集性） S6-01 0.5 60 最小粒子最大凝集性 S6-02 1.0 60 較小粒子較大凝集性 S6-03 1.0 40 先前使用者 S6-04 2.0 40 最大粒子最小凝集性如上述實施例所述進行溶液製備與噴霧乾燥作用。以表格提供所形成噴霧乾燥粉末的特徵。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） " ΙΓ. 1283182 A7 B7 五、發明説明（58) 寸9 SO o.e

承 6CS1 5 %IL 里0寸承0·Ι 109 承0.1 -----^——-,#! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ιτ>·τ S.CO9 沴Γ寸 SOso 議 I,寸 οβ ττ 承°°.2 承0寸承 10 ST 沴 6CO οοτ %广广訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 •SCJ09 %ς·〇4ςρΛ3>總鹦画承賴#鹦画戤齠纖®,Π撇

^Γ 寸 9 疹寸“%sS.I 承8寸寸·ε I 制窠ain_ Gws)vs (Λη)νι aosA ddd Qv_ aw 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210><297公釐） -61 - 1283182 A7 ___B7_五、發明説明（59 ) 實施例6 使用胺基酸穩定劑探索於噴霧乾燥期間使用胺基酸作爲4 - α -螺旋束蛋白質之可能穩定劑。於整理數據時，本申請人已發現或是觀察到有關包含胺基酸之粉末調配物特定趨勢。通常，觀察到穩定性降低與濕氣吸收性以及結晶延遲有關（ Leu>His>Ala>Gly) ，·凡德瓦耳斯體積增加與 Tg 提高有關（Leu>Hi s>Al a>Gly) :表面累積力道增加與疏水性提高有關；而表面張力降低與Μ M A D與凝集性降低有關。基於此等資訊，硏究使用特定胺基酸（L e u、 I le、Val 、nLeu、Phe 與 Trp)作爲 4 一 α -螺旋束蛋白質噴霧乾燥穩定劑。在h GH胺基酸調配物中，測得胺基酸百分比低於總固體含量3 0 %。一般認爲胺基酸百分比低可延遲/阻礙結晶作用。如上述製備水性胺基酸-人類生長激素調配物。於下表1 4提供此等調配物摘要。 I—-I-—IL#! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X：297公釐） 1283182 A7 A7 B7 五、發明説明（60) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製芻堪瑶忉鬆gs·趑δ鏗-ΗΟΨΗ撇總固體 to IT) ^T) o 總固體之％緩衝劑 VO vo VO VD VO M3 胺基酸 30.5 30.5 30.5 30.5 30.5 30.5 〇〇 hGH 64.9 65.0 64.9 64.9 64.9 64.9 93.4 緩衝劑 (mM) ^T) 胺基酸 (mg/ml) 4.60 4.59 4.59 4.59 4.60 4.59 〇名稱 Leu Val nLeu Phe 純調配物 hGH (mg/ml) OO 〇\ OO ON OO ON OO ON OO ON OO ON OO pH値 OO OO OO OO OO OO OO 調配物 S7-01 S7-02 S7-03 S7-04 S7-05 S7-06 S7-07 )l·------------IT------φ, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -63- 1283182 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（61 ) 如上述實施例詳述，使用霧化壓力8 0 p s i製備該調配物；粉末回收產率自5 5至6 6 %。粉末特徵提供於下表中。表1 5.噴射劑量調配物說明 pH値 10個樣本的平均値 ED% SD RDS% S7-01 30% Leu 7.8 73.9 土 5·6 7.6 S7-02 30%Ile 7.8 .76.3 ±3.5 4.6 S7-03 30%Val 7.8 74.5 ±3.8 5.2 S7-04 3 0 % n L e u 7.8 76.7 ±2.2 2.9 S7-05 30%Phe 7.8 73.5 土 2·6 3.6 S7-06 30%Trp 7.8 73.7 土 4.6 6.2 S7-07 純調配物 7.8 78.5 土 2.5 3.2 所有試驗調配物之E D自7 3 . 5 %至7 8 · 5 %。 II ——— — — ^0 — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -64- 1283182 A7 A7 B7 五、發明説明（62 ) 表 16.MMAD、FPF、CIE與 VMD結果調配物說明 pH値 MMAD FPF VMD (μΐΉ) (%) (μΐΉ) S7-01 30% Leu 7.8 3.0 56 2.0 • S7-02 30%Ile 7.8 3.1 54 2.0 S7-03 30%Val 7.8 3.4 49 2.1 S7-04 30%nLeu 7.8 3.1 56 2.0 S7-05 30%Phe 7.8 3.2 53 2.0 S7-06 30%Trp 7.8 3.6 43 2.2 S7-07 純調配物 7.8 3.3 49 1.9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製此等調配物的粉末顯示其Μ M A D値自3 · 0 -3 . 6微米。Tr p與Va 1的調配物具有較大MMAD 値，分別爲3 . 6與3 · 4微米。包含Leu、I 1 e與 n L e u之調配物的Μ M A D.沒有明顯差異。純調配物的 Μ M A D爲3 . 3微米，其遠小於先前實施例之純調配物 MMAD數據。可能造成此等差界的因素之一係較高霧化壓力（80psi)，因爲80psi之霧化壓力有助於形成粒徑比霧化壓力爲6 0 P s i小的調配物。此等調配物的V M D趨勢與Μ M A D數據趨勢一致。此等調配物的粒徑分佈很相似。其顯示出作爲噴霧乾燥穩定劑時， L e u、I 1 e與n L e u具有較佳性質，有助於形成具有小氣體動力大小與高F P F之粒子。所有粉末的剩餘濕氣含量自0 · 8至1 . 5 %。本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1283182 A7 A7 B7 五、發明説明（63) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製龜 # 駛盤·^^€:ncm-sr:1.Ar-H概 3次注射平均値（％) EE SD %RSD r-H On 寸〇 CO 寸卜 o r—H O 寸 4.5 0.4 8.7 1 4.3 0.2 4.1 νο 1—Η τ^Η ο 寸 4.6 0.1 2.2 r-H CSI ^"1 o 寸寸 r-H r-H o CO 寸 4.4 0.4 8.6 4.7 0.2 3.2 hGH SD %RSD 95.7 0.4 0.4 95.5 0.5 0.5 95.5 0.4 0.4 95.7 0.2 0.2 95.5 0.1 0.1 Η Ο τ—Η Ο 寸 Ον 95.5 0.1 0.1 1 95.7 0.1 0.1 95.7 0.4 0.4 95.3 0.2 0.2 〇〇〇〇〇〇 ΟΟ 〇〇〇〇〇〇〇〇 Oi r- 卜 r- 卜挪龚口 ή \ (D ι i <D CD r-j Qh •rH ?-Η yU ►—I > Ph H _ ^―» τ—( • rH ο 承 Ο Ο 〇〇 PRg 11m <4-1 cd • f—4 T3 CO CO CO Vw^ CO CO CO 窠 trr^ Ph Ph Ph 蓉 Η 〇 CN 〇 CO 〇寸〇 o v〇 o ο ru 画 τ—Η i—Η 1 卜 1 Γ 1 卜 I 〇· 1 Γ 1 卜 1 Γ Be! 1]1ΙΠ 〇 Ο κ Ο κ 00 ΟΟ 00 00 ΟΟ CO ΟΟ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） _ 66 - 1283182 A7 B7 五、發明説明（64) 該數據表示，所有試驗調配物的類似硏究當中 h GH百分比與早期洗出尖峰（E E )在相同水準。由該 r p - Η P L C分析中並未觀察到此等調配物之間的 h G Η與Ε Ε百分比有明顯差異。與非噴霧乾燥溶液相較，顯示出任一調配物的早期洗出尖峰並未提高。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 67 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 1283182 A7 B7 五、發明説明（65) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (vs)芻搬玀駛键P^JcndH-ss K1.8I 揪承第二製備方法 hGH SD SA SD 96.3 0.15 3.8 0.1 5 96.7 0.20 3.3 0.20 97.5 0.24 2.5 0.24 99.2 0.06 0.8 0.06 98.6 0.09 1.4 0.09 99.2 0.06 0.8 0.06 98.6 0.09 1.4 0.09 V 〇 1 0"N Ό ON Q ΓΛ\ CO 〇 CO o CO o r-H ι—Η ο Ο o 〇 o JL 〇 o o 〇 Ο ο ο o 〇 o 班 1 vf™ CO CO r-H CO CO v 〇 CO Ι/^\ 1/^ ^>4 CO 1 CO co cn ϋ Nl·-/ 鉍Q 1 〇〇 cn 〇 CO o cn o r—H τ—Η νο ο ο ON o ).06 ).09 1 紙〇〇 o o Ο ο ON 卜卜 ON 卜 ο VO 卜卜 ϋ ON ON On ON ON ON CO Os 寸 ON αν ΟΝ VO ON ON ON iM oo OO OO 〇〇 οο oo oo OO E 〇> 卜卜卜卜卜〇· # 龚口 Ο <υ > ^ <D (D r-j a V-I f\ \ v-1 ι 4 1—1 > η-3 f-j cu H 咖i Ptl 4—· 1 < • i-H 沴 Ο 承 ο * Ο s 沴 o 〇 w liiiH 辟 cd • 1—< cn CO CO CO cn CO 窠 pLH Ph Ph 擊 Ρεί τ—Η 〇 οα Ο CO 〇寸 o o Ό 〇 o ra 画 H un t—H I 卜 1 卜 1 卜 1 卜 1 卜 1 Γ 1 卜 Hs! 1|11Π o o ffi O 00 CO οο oo CO ΟΟ 00 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -- 1283182 A7 五、發明説明（66) 以SE-HPLC表示可溶解凝集物（SA)特徵調配物說明 pH値 3次注射平均値（％) hGH SD %RSD SA SD %RSD S7-01 30%Leu 7.8 96.3 0.2 0.2 3.8 0.2 4.1 S7-02 30%Ile 7.8 96.7 0.2 0.2 3.3 0.2 6.1 S7-03 30%Val 7.8 97.5 0.2 0.3 2.5 0.2 9.7 S7-04 3 0 % n L e u 7.8 99.2 0.1 0.1 0.8 0.1 7.6 S7-05 30%Phe 7.8 98.6 0.1 0.1 1.4 0.1 6.1 30%Trp 7.8 99.2 0.1 0.1 0.8 0.1 7.6 S7-07 純調配物 7.8 98.6 0.1 0.1 1.4 0.1 6.1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其顯示出，具有Leu、I 1 e與Va 1的調配物之可溶解凝集物較多，而其他調配物的可溶解凝集物水準較低（〜1 % )。 -69- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1283182 A7 五、發明説明（67 ) g_g〇·以UV光譜表示不可溶凝集物特徵調配物說明 pH値 3次注射平均値（％) ΙΑ SD RDS% H051RP 起始材料 1.2 0.2 13.8 H051RP diafilter 之後 7.8 1.6 0.2 14.7 S7-01 30%Leu 7.8 1.1 0.0 4.1 S7-02 30%Ile 7.8 0.9 0.1 14.0 S7-03 30%Val 7.8 1.5 0.2 12.2 S7-04 30%nLeu 7.8 1.2 0.5 37.6 S7-05 30%Phe 7.8 0.8 0.1 11.6 S7-06 30%Trp 7.8 1.5 0.3 22.7 S7-07 純調配物 7.8 0.3 0.1 42.0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製所有經試驗調配物的不可溶凝集物在0 . .3至1 · 5 %範圍內。觀察到該I A於噴霧乾燥之後不會提高。所有調配物的I A水準相近。表1 1所提供之S D與％ R S D 係掃描同一樣本三次所獲得。 -70- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 1283182 五、發明説明（68) A7 B7 *~~— 調配物說明 pH値 (%) ΙΑ SA TM S7-01 3 0 % L e u 7.8 1.1 3.8 95.2 ---- S7-02 30%Ile 7.8 , 0.9 3.3 95.8 ---- S7-03 30%Val 7.8 1.5 2.5 96.1 ----- S7-04 30%nLeu 7.8 1.2 0.8 98.0 S7-05 30%Phe 7.8 0.8 1.4 97.8 S7-06 30%Trp 7.8 1.5 0.8 97.7 S7-07 純調配物 7.8 0.3 1.4 98.3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 總而言之，所有調配物的E D均高於7 3 %，而 MMAD自約3 . 0至3 . 6微米。調配有Va 1與丁 r p之粉末具有較大MMAD (3 . 4與3 · 6微米），但是自化學穩定性觀點來看時，調配有3 0 %水準 L e u與I 1 e之hGH各者的可溶解凝集物均略高於包含其他胺基酸的調配物。實施例7 噹霧乾燥h G Η之組成物_ 如上述製備並噴霧乾燥四種de s-phe hGH 的調配物：一種純h G Η調配物、一種Ζ η 2 + /

Twe e η 2 O/hGH調配物，以及兩種不同含鋅 hGH 調配物，Zn2+: hGH (7 : 1 與 20 :1)。本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210 X297公釐）訂 f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -71 - 1283182 A7 B7 五、發明説明（69) 藉由添加5 m Μ磷酸鈉緩衝劑調整蛋白質濃度。批次大小自5 00 mg至5 5 0 m g，粉末產率自80%至100 %。調配物相關數據示於下表。表22.hGH調配物組成物實驗編號 [hGH]，mg/ml Tween 20,% Zn:hGH 莫耳比 pH値 1276-52 9.7 0 0 7.7 1276-53 9.5 0.05 2:1 7.5 1276-54 8.6 0 20:1 5.4 1381-72 9/1 0 0 7.7 1381-86 9.3 0 7:1 7.7 測量該噴霧乾燥粉末之物理與化學穩定性以及氣溶膠性質，並摘要如下。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -72- 本紙舉尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1283182 A7 B7 五、發明説明（7〇) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製籤伥^Hoqwi:^纖©•cocsm 可溶解凝集物，％ ΙΟ VO 寸 <N vd <N 〇6 不可溶凝集物，％ CO y—i CS CN r-H CO Q On 卜 CO 卜〇 On v〇 ON VO MMAD, 微米 ON CO CO CO CO 寸 CO <N CO 濕氣含量，重量％ oi CnJ r—I ON cs o ON H 寸 CN 時點初始初始初始 i初始 s张 o $ i,魏〇° s -^ s .^骧 3 _劄 $ i,雖〇° z ^ ^ fm % m 3域初始實驗編號 1276-52 1276-53 1276-54 1381-72 1381-72 1 1381-72 1381-86 I 衣訂 ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -73- 1283182 A7 —_______B7_____ 五、發明説明（71 ) 在室官與加速環境條件二者下貯存一個月之後，該純粉末的噴射劑量與MMAD二者仍然分別固定在大約7 0 %與3 · 5微米，證實該純調配物的穩定性。表8 h G Η霧化硏究進行下列硏究以測定結合特定數量穩定賦形劑時，調配物及/或處理參數（諸如噴霧乾燥代表性4 一 α 一螺旋束蛋白質--h G Η——之最佳化霧化壓力的影響。在先前所述之Buchi 190上進行該霧化硏究，並將霧化溶液收集在 Erlemeyer燒瓶內。除非另有所述，否則所有實驗係以1 〇 m g /2之m e t — r H G Η於5 m Μ磷酸鹽緩衝劑之固定濃度進行並以8 0 p s i霧化。所硏究之賦形劑/溶劑係α磷酸甘油酯、亮胺酸、乙醇三亮胺酸、三苯基丙胺酸、F — 68、rHA、鋅、鎂、鈣與羥基乙基澱粉，其數量如下表24所示。以pH値、UV與SE - HPLC分析所有經預霧化與後霧化之樣本。亦離心處理整份樣本，並以U V分析。測量所有經預霧化樣本的表面張力。本紙張尺度適用中國國家檬準（CNS ) 規格（21〇X297公釐） ----------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -74- 1283182 A7 B7 五、發明説明（72 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表24.調配物化合物賦形劑賦形劑數量 Hgh數量 5mM磷酸鹽緩衝劑 10% Agphos 6m g 2.158ml 3.842ml 30% Agphos 1 8mg 2.158ml 3.842ml 30% Leu 1 8 mg 2.158ml 3.842ml 5%乙醇 300μ1 2.158ml 3.542ml 30%乙醇 1.8ml 2.158ml 2.042ml 5%三亮胺酸 2.9 3 m g 2.158ml 3.842ml 30%三亮胺酸 1 7.9 1 m g 2.158ml 3.842ml 30% Phe-3 1 8.0 3 m g 1.813ml 4.187ml 70% Phe-3 4 2.14 m g 1.813ml 4.187ml 0.01% F68 6μ1 1.813ml 4.181ml 0.1% F68 60μ1 1.813ml 4.127ml 5% ι.ΗΑ 0.012ml 1.813ml 4.175ml 50% rHA 0.120ml 1.813ml 4.067ml Zn 2:1 17μ1 2.406ml 3.577ml Zn 7:1 58μ1 2.406ml 3.536ml Zn 20:1 166μ1 2.406ml 3.428ml Mg 20:1 190μ1 2.406ml 3.404ml Ca 20:1 223μ1 2.406ml 3.371ml 20% HES 1 1.97mg 2.406ml 3.594ml 50% HES 3 0.1 m g 2.406ml 3.594ml (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Γ 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -75- 1283182

7 7 A B 五、發明说明（73) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 SE-HPLC UV pH値 %單體平均 wrt pre %不可溶凝 %不可溶凝集物(未旋製) 集物(經旋製) 40 psi 95.59 95.44 95.52 96.05 4.0 1.9 7.4 60 psi 94.88 94.87 94.88 95.40 4.1 1.8 7.2 80 psi 94.8 94.8 94.80 95.33 3.3 2.1 7.3 前 10/3(3.6/6.8) 86.69 89.22 87.96 2.1 6.3 6.8 後 85.37 85.33 85.35 98.48 7.2 1.5 6.84 前 10/7.5 75.17 75.96 75.57 3.2 1.5 7.46 後 67.86 67.49 67.68 90.28 3.5 3.2 7.46 前 2/7.5 83.06 81.76 82.41 3.5 0.1 7.48 後 61.45 61.61 61.53 73.98 4.1 4.2 7.41 前 10/3.6 86.81 0.7 0.9 3.52 後 82.52 95.06 1.3 1.2 3.51 前 10% agphos 84.98 1.1 5.5 7.27 後 75.55 88.90 3.9 7.8 7.18 前30% agphos 84.02 3.0 6.0 7.37 後 76.13 90.61 6.0 7.8 7.25 前30% leu 85.36 1.9 4.8 7.3 後 75.17 88.06 4.6 3.2 7.16 前5% etoh 85.41 1.2 1.9 7.44 後 76.77 89.88 2.7 4.3 7.29 前 30% etoh 79.46 9.9 1.2 6.97 本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -76- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1283182

A B7 五、發明説明（74) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製後 78.84 99.22 12.8 0.7 6.8 前5 % leu-3 85.82 2.5 2.1 7.31 後 77.19 89.94 2.4 8.2 7.19 前 30% leu-3 86.02 2.8 4.2 7.15 後 82.1 95.44 5.6 2.2 7.04 前30% Ile-3 99.36 1.5% 0.5% 7.44 後 98.6 99.24 0.9% 0.4% 7.37 前 70% Ile-3 99.34 0.4% 0.3% 7.64 後 98.89 99.55 0.6% 0.6% 7.6 前30% Phe-3 99.16 2.2% 0.9% 9.17 後 98.12 98.95 %1.7 0.4% 8.82 前70% Phe-3 97.74 3.1% 1.1% 10.64 後 97.68 99.94 2.8% 1.2% 10.49 前0.01% F-68 99.32 0.2% 0.6% 7.2 後 93.06 93.70 6.3% %4.3 7.08 前0.1% F-68 99.27 -0.5% 0.6% 7.39 後 97.37 98.09 4.4% 3.2% 7.04 前5% ιΉΑ 92.87 -0.6% 1.6% 7.4 後 85.73 92.31 0.8% 0.8% 7.11 前 50% rHA 66.24 0.2% 1.4% 7.28 後 61.88 93.42 7.4% 3.0% 7.04 前 Zn2:l 97.53 7.1% 4.7% 3.04 後 95.59 98.01 23.7% 0.3% 3.05 前 Zn7:l 97.83 16.4% 0.8% 3.43 II ——:——-%1- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -77- 1283182 A7 五、發明説明（75 ) B7 後 96.51 98.65 52.4% 1.0% 3.44 前 Zn 20:1 99.04 49.7% 5.4% 3.31 後 93.09 93.99 57.8% 2.6% 3.2 前Mg 20:1 97.77 9.7% 1.4% 3.39 後 95.59 97.77 26.5% 0.7% 3.43 前 Ca20:l 97.79 8.6% 0.2% 3.16 後 96.08 98.25 37.2% 1.0% 3.21 前20% HES 98.07 3.9% 0.7% 7.21 後 95.03 96.90 4.1% 1.6% 7.16 前50% HES 98.2 3.1% 1.3% 7.28 後 93.64 95.36 4.2% 3.0% 7.28 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） •78- A7 1283182 _____B7 五、發明説明（76 ) 參考上表結果並比較該後噴霧乾燥値與前噴霧乾燥値，當該agphos調配物存在較高濃度agphos時，顯示出凝集性稍微降低；該含亮胺酸調配物並未具有相同表現，但是整體而言具有良好結果。該含乙醇調配物顯示出凝集性降低，特別是於較高濃度時，惟其會自溶液產生出沉澱物，尤其是在較高濃度時。該三亮胺酸調配物顯示出於較高濃度時凝集性會降低，但是低或高濃度P h e - 3調配物的凝集性沒.有改變，二者均表現良好。該含F - 6 8調配物顯示出於較高濃度時凝集性會降低，但是該含鋅調配物當中，以鋅7 : 1調配物表現最佳。（就所有鋅調配物而言，均會自溶液產生沉澱物，最差的是2 0 : 1 )。包含陽離子M g與C a的調配物亦表現良好，但是同樣產生沉澱物調配物。（註：自溶液產生沉澱物之問題）。該含Η E S 調配物顯示出於較高Η E S濃度時，其凝集性稍微降低。 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -79- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）

Claims

A8 B8 C8 D8 1283182 (ill” 六、申請專利範圍 [附W^\ 第90 1 1 91 69號專利申請案中文申請專利範圍無劃線替換本 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 民國92年11月21日修正 1、一種經噴霧乾燥之可吸入4 一 α -螺旋束蛋白質粉末，其具有優良可氣溶膠性與蛋白質穩定性，包括一種 4一α-螺旋束蛋白質，其中，該粉末沒有界面活性劑，而且其特徵係（i ) 噴射劑量至少約6 5 %，（ i i )總蛋白質凝集物含量少於1 0 %，以及‘（i i i )含有4 — α —螺旋束蛋白·質的粒子，具有質量中位數粒徑（m a s s m e d i a n d i a m e t e 1·)小於 1 〇 μιη ° 2、如申請專利範圍第1項之粉末，其中該4 一 α — 螺旋束蛋白質包括生長激素。 3、如申請專利範圍第2項之粉末，其該生長激素係· 人類生長激素。 4、如申請專利範圍第3項之粉末，其基本上係由人類生長激素與緩衝劑組成。 < 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5、如申請專利範圍第4項之粉末，其基本上係由人類生長激素與緩衝劑組成。 6、如申請專利範圍第4項之粉末，另外特徵係其 Μ M A D小於約3 · 5微米。 7、如申請專利範圍第1項之粉末，另外包括一種穩定賦形劑，當於噴霧乾燥期間與該4 - α -螺旋束蛋白質倂用時，其有助於保持該粉末的凝集物水準或使其降至低本紙張尺度適用中國國I標準（CNS ) A4規格（210X297公瘦1 ~ 1283182 A8 B8 C8 D8 -- --1 ~. 六、申請專利範圍於相對應純調配物之水準。 8、如申請專利範圍第7項之粉末，其中該賦形劑係選自包括糖類、胺基酸與包括2 - 5個胺基酸之寡聚物。 9、如申請專利範圍第7項之粉末，其中該粉末會迅速作用。 1 〇、如申請專利範圍第7項之粉末，其具有水溶性〇 i i 、如申請專利範圍第8項之粉末，其中該賦形劑係一種糖。 1 2、如申請專利範圍第1 1項之粉末，其中該糖係蔗糖或植物蜜糖。 1 3、如申請專利範圍第1 2項之粉末，其中該蛋白質係人類生長激素。 1 4、如申請專利範圍第8項之粉末，其中該賦形劑. 係一種胺基酸。 1 5、如申請專利範圍第1 4項之粉末，其中該胺基酸係選自包括胺羰丙胺酸、異亮胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、亮胺酸、正亮胺酸與纈胺酸。 1 6、如申請專利範圍第1 5項之粉末，其中該胺基酸係選自包括亮胺酸、異亮胺酸與正亮胺酸。 1 7、如申請專利範圍第1 5項之粉末，其中該蛋白質係人類生長激素。 1 8、如申請專利範圍第8項之粉末，其中該賦形劑係一種包括2 - 5個胺基酸之寡聚物。 I裝丨| (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 、π 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ：297公釐） 2 283182 A8 B8 C8

其中該賦形申請專利範圍 1 9、如申請專利範圍第1 8項之粉末劑係三亮胺酸。 2 〇、如申請專利範圍第1 9項之粉末質係人類生長激素。 2 1 、如申請專利範圍第2 0項之粉末 Μ M A D小於3 . 0微米。 2 2、如申請專利範圍第7項之粉末，其包括低於，約 3 0重量百分比該穩定賦形劑。 2 3、如申請專利範圍第7項之粉末，另外特徵·係於 4 0 °C貯存一個月之後，總凝集物含量低於約1 〇 %。 2 4、如申請專利範圍第7項之粉末，其包括至少約重量％4-α-螺旋束蛋白質。 2 5、一種製備可吸入4 — α -螺旋束蛋白質之方法，該4 - α -螺旋束蜜白質於噴霧乾燥時具有優良可氣溶其中該蛋白其特徵係其 (請先聞讀背面之注意事裝— 項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製螺 a 膠性與蛋白質穩定性，該方法包括： (a )於不存在界面活性劑之下，將一種4 旋束蛋白質溶解於一水性溶劑中，形成一溶液，並 (b )於有助於產生粉末之條件下噴霧乾燥該溶液，該粉末的特徵係（i )噴射劑量至少約6 5 %，（ i i ) 總蛋白質凝集物含量少於1 Ο %，以及（i i i )含有4 -α -螺旋束蛋白質的粒子，具有質量中位數粒徑小於 1 Ο μπι 〇 2 6 、如申請專利範圍第2 5項之方法，其中該4 一 α -螺旋束蛋白質包括生長激素。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -3 - 1283182 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 2 7、如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該生長激素係人類生長激素。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 8、如申請專利範圍第2 5項之方法，其中於步驟 (a )形成的溶液的固體含量自約〇 · 0 2至約2 0重量 % 〇 2 9、如申請專利範圍第2 8項之方法，其中於步驟 (a )形成之溶液的固體含量自約〇 · 0 5至約5重量％〇 3 0、如申請專利範圍第·2 8項之方法，其中於步驟 (a )形成之溶液的固體含量自約〇 · 0 5至約2重量％ 0 3 1 、如申請專利範圍第2 5項之方法，其中於步驟 (a )形成之溶液基本上係由一種4 一 ^〜螺旋束蛋白質與一種緩衝劑組成。 3 2、如申請專利範圍第3 1項之方法，其中該緩衝劑係磷酸鹽。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3 3、如申請專利範圍第3 1項之方法，其中該蛋白質包括生長激素。 3 4、如申請專利範圍第2 5項之方法，其中於步驟 (b )製造的粉末之Μ M A D小於約3 · 5微米。 3 5、如申請專利範圍第2 5項之方法’另外包括於步驟（a )形成的蛋白質溶液中添加一種穩定賦形劑’其有助於保持該粉末的凝集物水準或使其降至低於相對應純調配物之水準。本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 283182 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3 6 、如申請專利範圍第3 5項.之方法，其中$ 賦形劑係選自包括糖類、胺基酸與包括2 - 5個M $ 寡聚物。 3 7、如申請專利範圍第3 6項之方法，其φ $ 賦形劑係一種糖。 38、如申請專利範圍第37項之方法，其中蔗糖或植物蜜糖。 3 9、如申請專利範圍第3 8項之方法，其ψ冑亥^ _ 質係人類生長激素。 40、如申請專利範圍第36項之方法，其中劑係一種胺基酸。 4 1 、如申請專利範圍第4 0項之方法，宜ώ _ 兵中該胺基酸係選自包括胺羰丙胺酸、異亮胺酸、苯基@ @ @ > 目义、色胺酸、酪胺酸、亮胺酸、正亮胺酸與纈胺酸。 4 2、如申請專利範圍第4 1項之方法，宜Λ_ 具中該胺基酸係選自包括亮胺酸、異亮胺酸與正亮胺酸。 4 3、如申請專利範圍第4 2項之方法，’苴由，卞兵中該蛋白質係人類生長激素。 4 4、如申請專利範圍第3 6之方法，苴中兮日斗^ -、十S4賦形劑係一種包括2 - 5個胺基酸之寡聚物。 4 5、如申請專利範圍第4 4項之方法，其中§亥貞武％劑係三亮胺酸。 4 6、如申請專利範圍第4 5項之方法，其中f亥蛋_ 質係人類生長激素。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ¾-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 、π 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1283182 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 4 7、如申請專利範圍第4 6項之方法，於步驟（b )製造之粉末另外特徵係其Μ M A D小於3 . 0。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 8、如申請專利範圍第4 5項之方法，另外包括於步驟（a )中，將該蛋白質溶液的ρ η値調整至低於約4 〇 4 9 、如申請專利範圍第2 5項之方法，其中溶解於該水齋溶劑中的4 - α -螺旋束蛋白質係存在該溶液中總固體的至少約5 0重量％。 5 0、如申請專利範圍第 2 5項之方法，其中該·條件包括在約3 0 - 1 0 0 p s i範圍內之霧化壓力下噴霧乾燥該溶液。 5 1 、如申請專利範圍第5 0項之方法，該條件包括在約3 0 - 8 0 P s i範圍內之霧化壓力下噴霧乾燥該溶液。 5 2、一種經噴霧乾燥可吸入人類生長激素粉末，其具有優良可氣溶膠性與蛋白質穩定性，其包括人類生長激素，經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中該粉末沒有界面活性劑，而且其特徵係（i )噴射劑量至少約6 5 %，（ i i )總蛋白質凝集物含量少於 1 0 %，以及（i i i )含有人類生長激素的粒子，具有質量中位數粒徑小於1 Ο μηι。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -6 -