TWI244484B

TWI244484B - Pharmaceutical composition containing oxy-containing hexacyclic compound

Info

Publication number: TWI244484B
Application number: TW088109429A
Authority: TW
Inventors: Tatsuji Enoki; Jun Tomono; Nobuto Koyama; Katsushige Ikai; Hiroaki Sagawa
Original assignee: Takara Bio Inc
Priority date: 1998-06-09
Filing date: 1999-06-07
Publication date: 2005-12-01
Also published as: AU764582B2; US6531148B1; ATE370144T1; CA2334249A1; EP1086952B1; AU4060699A; DE69936855T2; EP1086952A1; JP3779153B2; JP2006117662A; KR20010025107A; KR20060116034A; EP1086952A4; WO1999064424A8; KR100735139B1; KR100620409B1; WO1999064424A1; CN1131867C; KR20060086454A; CN1312813A

Description

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i'發明說明（1) 發明之範疇本發明係關於來自天然物之生理活性物質之利用，更詳細而言，係關於該生理活性物質、其製造方法，及以該生壞活性物質做爲有效成分之醫藥、食品或飲料、抗氧化劑、鮮度保持劑及化粧材料。發明之背景近年來，關於細胞組織之死亡方面，所謂，，自暴死或細胞自減”（apoptosis)之方式正受到眾所矚目。此等細胞自滅與病理性細胞死亡之壞死不同，係最初即被編入細胞本身基因中之死亡。亦即，將設定有以某些外部或内部之因素爲發動機制之細胞自滅之基因予以活性化，以使設定之死亡蛋白質被生合成，又在一些情況係將以不活性型存在於細胞内之設定死亡蛋白質活性化。一般認爲，藉由此種方式生成之活性型設定死亡蛋白質將細胞分解，以致造成死亡。若能在所期望之組織、細胞中表現如此之細胞自滅，則可能將不要或者有害之細胞以自然之形式從身體中排除，具有極爲深切之意義。發明之目的本發明之目的，乃在提供來自天然物之具有細胞自滅謗發作用等生理機能且安全性高之物質、其製造方法及其用途0 發明之概要説明概略而言，本發明之第1形態，係關於治療劑或預防劑， -4 - 適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) r·裝 · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 B7五、發明說明（2 ) 其含有從式（I)所示化合物： Υ Η (式中，X及Υ爲Η或CH2OH，但是，當X爲CH2OH時，Υ爲 H’以及當X爲η時，Y爲CH2OH)，式（II)所示化合物··

OH

(Π) (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁} 讅 r'裝叮經濟部智慧財產局員Η消費合作社印制衣 (式中’ R爲從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基），及其鹽類選出之化合物以做爲有效成分，以治療或預防需要細胞自滅謗發之疾病、癌症、需要抑制活性氧產生之疾病、需要抑制一氧化氮產生之疾病、需要抑制前列腺素合成之疾病、需要抑制滑膜細胞增殖之疾病、需要謗導熱休克蛋白產1之疾、病、或需要阻礙糖甞酶之疾病。本發月之苐2形悲，係關於一種式（J )所示化合物之製法，其特徵爲將3,6_脱水半乳糖及/或在還原末端具有3,6_脱線 -5- 1244484 A7 ---------- Β7 _ 五、發明說明（3 ) 水半乳糖之化合物於中性至鹼性之條件下處理。本發明之第3形態，係關於一種式（II)所示之化合物或其鹽類。本發明之第4形態，係關於一種式（II)所示化合物之製法 ’其特徵爲將式（I)所示之化合物與含有SH基之化合物反應。本發明之第5形態，係關於一種食品或飲料，其含有從式 (1)所之化合物、式（Π)所示之化合物及其鹽類中選出之化合物，以及經稀釋及/或添加而形成。本發明之第6形態，係關於一種食品或飲料，其含有藉將 3，6-脱水半乳糖及/或在還原末端具有3，6_脱水半乳糖之化泛物於中性至鹼性之條件下處理而得之式（I)化合物，以及經稀釋及/或添加而形成。 w本發明之第7形態，係關於一種抗氧化劑，其特徵爲含有攸式（I)所示之化合物、式（π)所示之化合物及其鹽類中選出之化合物以做爲有效成分。本發明 < 第8形態，係關於一種食品或飲料，其特徵爲含有本發明之第7形態之抗氧化劑。口 #本發明之第9形態，係關於-種式⑴或式（II)所示之抗經濟部智慧財產局員工消費合作社印製乳:用化=物。有關抗氧化用化合物之用途並無特別限制车例而& ’可做爲抑制活性氧產生用之化合物。式之本發明之第10形態，係關於一種鮮度保持劑，其以從 ()所κ化合物、式(11)所示之化合物及化合物做爲有效成分。一員中堯出本紙張尺錢giiii^7eNSM4 (210 χ 297 公釐） 1244484 A7 B7 五、發明說明（4 ) (讀先閱讀背面之注急事項再填寫本頁) 本發明之第1 1形態，係關於一種化粧材料，其以從式（工）所不之化合物、式（II)所示之化合物及其鹽類中選出之化合物做爲有效成分。本發明之第1 2形態，係關於一種α -糖甞酶抑制劑，其以 «式（I)所示之化合物、式（II)所不之化合物及其鹽類中選出之化合物做爲有效成分。本發明之第13形態，係關於一種細胞自滅謗發性物質，其係藉由將3，6-脱水半乳糖及/或在還原末端具有3，6_脱水半乳糖之化合物於中性至鹼性之條件下處理而生成。本發明之第14形態，係關於一種食品或飲料，其含有藉由將3,6-脱水半乳糖及/或在還原末端具有3，6_脱水半乳糖之化合物於中性至鹼性之條件下處理而生成之細胞自滅謗發性物質。以下，參考所附之圖式詳細説明本發明。圖式之簡單説明圖1爲試料②之順向HPLC層析圖。圖2爲保持時間在4 05〜416分鐘範園内之溶出份之圖。、阳經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣圖3爲保持時間在4 〇5〜4 16分鐘範圍内之溶出份之咜_ NMR光譜圖。圖4爲添加DGE且在各個條件下培養時，培養基中HQ _ 度之顯示圖。 2 7 圖5爲在前培養中添加DGE之場合，於各個條件培培養基中NO/濃度之顯示圖。本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -7· A7 1244484 _B7_ 五、發明說明（5 ) 圖6爲在前培養中添加DGE之場合，在各個條件下培養時，培養基中之前列腺素E2濃度之顯示圖。圖7爲DGE與GSH之反應物之質譜圖。圖8爲DGE與GSH之反應物之1H-NMR光譜圖。圖9爲DGE與GSH之反應物之13C-NMR光譜圖。圖10爲在添加DGE而培養之場合中，3H-胸甞攝取量之顯示圖。發明之詳細説明本説明書中，3，6 -脱水半乳糖者，意指式（III)所示之比喃型3,6-脱水半乳糖： (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) i 裝

訂· 式（IV)所示其之醛衍生物： -丨線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

或式（V)所示其之水合物： -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1244484 A7 B7 五、發明說明（6

(V) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製再者，也包含此等之硫酸化物及甲所示化合物之構造也可。式G11)〜⑺ 去人廿，、他万式表不’包含此等構造 ::包含其可能之互換異構體者亦 :物。再者，式㈣〜(v)中之立體配置，對於二:望= =:=別限制，D_型、L·型或其混合物均可被使用。 :=，做爲在還原末端含有36·脱水半乳糖之化合 =並操特別限定，舉例而言，可由36_脱水半乳糖在 PH7以下（酸財水解及/或酵素分解而得到，再者，也可藉由化學合成法而得到^ 本發明中，適合使用之含有3,6^水半乳糖之化合物，例如在其非還原末端爲L_半乳糖_6 •硫酸以外之糖之可溶性糖化口物，例如瓊脂二糖、％ _角又藻二糖和在還原末端具有3，6脱水半乳糖之瓊脂二糖及％ -角叉藻二糖以外之寡糖，在非還原末端爲L-半乳糖之糖化合物，亦即，以瓊脂寡糖做爲原藥最適合。再者’本發明中含有3，6 _脱水半乳糖之化合物，並無特別限足，舉例而言，如瓊脂、瓊脂糖、瓊脂膠、海蘿聚糖、紫菜聚糖、角叉菜膠、帚叉藻聚糖、沙菜聚糖等之紅藻黏貝^糖[共立出版公司發行之多糖生化學化學篇·，第

訂線 -9- 本紙張尺度刺巾國準（CNS)A4規格（210 X 297公f ) 1244484 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（7 ) 314頁（1969)]。再者，此等多糖之含有物也包含於本發明所使用之3,6-脱水半乳糖含有物之中。例如’做爲瓊脂糖、瓊脂膠原料者，可使用石花菜科中 I興草、鬼草、大穗子草、平草、尾羽草、結霧草等，髮菜科I髮菜、大髮菜等，衣吉絲草科之衣吉絲草、鉤凝菜等，及其他紅藻類，通常係將數種藻類配合做爲原料。用熱水將原料藻類萃取後，藉由冷卻，可得到涼粉膠·。由此办粉膠經凍結脱水或壓榨脱水將水分除去，再使其乾燥後可得到瓊脂。通常瓊脂中含有約7〇%之瓊脂糖與約3〇%之壤脂膠，但進一步精製，則可調製更高純度之瓊脂糖。本發明中所使用之3,6_脱水半乳糖含有物，包含上述瓊月曰之原料藻類、涼粉膠、瓊脂、精製瓊脂糖、精製瓊脂膠、及此等在製造工程中所得到之中間產物或副產物。原料藻類通常採用經日曬法使其乾燥者，但本發明中可使用生藻類及已乾燥之藻類。再者，也可使用乾燥時灑水同時漂白之所謂曬乾原藻。瓊脂不管爲何種起源之藻類所形成均可，再者，可使用棒狀、帶狀、板狀、絲狀、粉末狀等種種形式。精製瓊脂糖從低精製度者至高精製度者，各式各樣瓊脂糖含量者均可使用。瓊脂糖爲以交互結合之D_半乳糖與36_脱水_L_半乳糖做爲主構造之多糖，D_半乳糖之第j位與3 6•脱水_l_半乳糖之第4位藉著糖嘗結合而結合，再者，3,6_脱水·l_ 半乳糖之第i位與D-半乳糖之第3位藉著糖苷結合而結口。α - 1，3心結合可藉稀酸溫和地水解、或藉沈_瓊脂糖酶請先閱讀背面之注意事項

頁訂線本紙Κ度過用中國國家標準（CNS)A4規格（2Κ) X 297公釐）_ -10- 1244484

五、發明說明（8) 灭水化合物研究（Carbohydr· Res.)，第66卷，第207頁 (1978)]選擇性地水解而得到，再者，4之結合可藉々 -瓊脂糖酶選擇性地水解而得到。 —再者，角又菜膠爲杉海苔科、味琳藻科、荆海苔科等紅床類^所含有之多糖，角叉菜膠、λ_角叉菜膠、角叉菜膠以爲人所知。欠-角叉菜膠具有以D-半乳糖_4-硫酸 I第1位與3，6-脱水_D·半乳糖之第4位藉著卢-糖甞結合，再在3，6 _脱水-D _半乳糖之第j位與D _半乳糖_ 4 _硫酸之第 3位藉著α-糖甞結合，交互地反覆形成之基本構造。角叉菜膠具有以D _半乳糖之第i位與D _半乳糖_ 2，6 _二硫酸第 4位藉著卢-糖甞結合，再在D-半乳糖_2,6_二硫酸之第工位與D·半乳糖之第3位藉著糖甞結合，交互地反覆形成之基本構造。角叉菜膠係被利用來做爲食品之膠化劑。將3，6-脱水半乳糖含有物藉著化學、物理及/或酵素方法斗刀分解後之產物在本發明中也可使用來做爲3，6 _脱水半乳糖含有物。再者，藉著將3,6_脱水半乳糖含有物經由化學、物理及/或酵素方法部分分解，也可在還原末端調製含有3，6 -脱水半乳糖之化合物。在本發明中，依照目的可使用還原末端含有3,6_脱水半乳糖化合物之精製物及邵分精製物，或者還原末端含有 3，6-脱水半乳糖化合物之未精製含有物。 3,6-脱水半乳糖含有物之化學分解方法，例如在pH 7以下之fe性中水解’物理分解方法’例如電磁波、超音波之照射，酵素分解方法，例如藉由水解酵素如瓊脂糖酶、角本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝·— 訂---------線. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 -11 - 1244484 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 ---— __ B7________ 五、發明說明（9 ) 叉菜膠糖酶水解等。 ,脱水半乳糖含有物在pH 7以下之酸性中分解之條件 ’對返原末端具有3，6 -脱水半乳糖之化合物，例如瓊脂二糖％ _角又藻二糖和在還原末端具有3,6-脱水半乳糖之瓊脂二糖及；^角叉藻二糖以外之化合物之生成條件，並別限制。 μ 舉例而。，將3，6 -脱水半乳糖含有物在〇〇〇〇1〜5當量濃度之酸中溶解或懸浮，經由數秒至數日之反應，生成還$ 末端具有3、，6_脱水半乳糖之化合物。再者，藉由反應時之加熱，可縮短還原末端具有3,6_脱水半乳糖之化合物生成所需要之反應時間。舲3，6 _脱水半乳糖含有物溶解或懸浮所用酸之種類並無特殊限制，可使用鹽酸、硫酸、硝酸等之無機酸，棒樣酸、蟻酸、醋酸、乳酸、抗壞血酸等之有機酸。酸之濃度也無特殊限制，可使用0·0001〜5當量濃度，而以當量濃度爲較佳。再者，反應溫度也無特殊限制，可設定在 0〜200 C，而以MqsoX：爲較佳。再者，反應時間也無特殊限制，可设足爲數秒或數日。酸之種類與濃度、反應溫度及反應時間，可依據成爲原料之3,6_脱水半乳糖含有物，例如瓊脂糖、角叉菜膠之種類及做爲目的之還原末端含有3，6 -脱水半乳糖之化合物，例如瓊脂二糖、％ ·角叉藻二糖和在還原末端具有3,6-脱水半乳糖之瓊脂二糖及％ -角叉藻二糖以外之化合物之生成量、做爲目的之還原末端具有 3,6-脱水半乳糖，瓊脂二糖、％ _角叉藻二糖以外之化合物 -12-

本紙張又度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 請先閱讀背面之注咅？事項寫本頁) 裝訂· •線j 1244484 A7 ---------B7__ 五、發明說明（10) 之聚合度作適宜選擇。一般而言，根據強酸大於弱酸、低 k度酸大於高濃度酸、高溫大於低溫之選擇，決定酸分解反應進行之快慢。舉例而言，將瓊脂在0.1 N之HC1中以1〇重量％懸浮，在 100°C加熱溶解1 3分鐘所得到酸分解物，冷卻也好、放置於其凝固點也好，已經不再成爲膠化狀態。將此種包含在液體中之糖類，藉著凝膠濾過HPLC、順相HPLC等方法分析，高分子之糖類幾乎不再出現，大部分已經分解至成爲可溶性之1 0糖以下。核葡乙之經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣本發明中所使用之還原末端具有3,6_脱水半乳糖，瓊脂二糖、^角叉藻二糖以外之化合物者，爲例如3 6_脱水半 2糖第1位以外之羥基以糖結合者，特殊限制則無。舉例而 T，瓊脂糖之酸分解物或Λ _瓊脂糖酶分解物，如瓊脂二糖、瓊脂四糖、瓊脂六糖、瓊脂八糖、瓊脂十糖等。再者，角叉菜膠之酸分解物或角叉菜膠糖酶分解物。更且，葡萄糖、甘露糖、半乳糖等六碳糖，木質糖、樹膠糖、糖等五碳糖，葡萄糖酸酸、半乳糖趁酸、答露糖趁酸、萄糖酸等之糖醛酸，葡萄糖胺、半乳糖胺等之胺糖，Ν 醯基神經胺酸等之唾液酸，岩藻糖等之去氧糖，及醋、醯胺及/或内酉旨與3,6_脱水半乳糖第W : =也包：在本發明中所使用之還原末端具有3,二 +礼糖，瓊脂二糖、％ _角叉蔆— 月又澡一糖以外炙化合物中。，上述瓊脂二糖、角叉藻二丰乳擠$擔炉-址遂原末嘀具有3，6-脱水牛礼椐 < 瓊知一糖，及還原末爪偭县哥3，6-脫水半乳糖之；本紙張尺度剌中國國家標準格⑵0 -13- 1244484 A7 B7 五、發明說明（n) 角叉藻二糖以外之化合物中，以丙酮酸及/或硫酸結合者，或該化合物之羥基被甲基化者，也被定義爲本發明中所使用之還原末端具有3，6 -脱水半乳糖，瓊脂二糖、％ _角叉讓二糖以外之化合物。由於還原末端之3，6 -脱水半乳糖之第1位爲異頭後原子，因此還原末端具有3，6 -脱水半乳糖之化合物以“型及广型存在，但任何一個還原末端具有3,6_脱水半乳糖之化合物在本發明中均可使用。再者，還原末端之3,6_脱水半乳糖之第1位爲醛型者，也可做爲還原末端具有3,6-脱水半乳糖之化合物使用。更且，3,6-脱水半乳糖無所謂爲D_型或爲 L·型。再者，也可使用上述之“型、"型、醛型之混合物及0_型、L-型之混合物。本發明之細胞自滅謗發性物質，可藉由將還原末端具有 3，6 -脱水半乳糖之化合物，例如瓊脂二糖、％ _角又藻二糖和在返原末端具有3,6-脱水半乳糖之瓊脂二糖及角叉藻二糖以外之化合物於中性至鹼性之條件下處理而得到。再者，可藉由將3,6-脱水半乳糖含有物在ρΗ 7以下之酸性中進行水解及/或酵素分解，並將所得酸分解物及/或酵素分解物於中性至鹼性之條件下處理而得到。 ’、經濟部智慧財產局員工消費合社印製返原末端含有3，6-脱水半乳糖之化合物，例如瓊脂二糖 :欠-角叉藻二糖和在還原末端具有3，6_脱水半乳糖之瓊脂一糖及；c _角叉藻二糖以外之化合物在ρΗ 7以上之鹼性中處理：將從此等化合物中選出之至少”個化合物溶解或懸浮〈驗〈種類並無特別限制，但可使用氫氧化鈉、氫氧化抑

1244484 A7 B7 五、發明說明（12) 、氫氧化#5、氨等無機驗，Tris(三經甲基胺基甲燒）、乙胺、三乙胺等之有機鹼。鹼之濃度也無特殊限制，可使用 0.0001〜5當量濃度，而以0.001〜1當量濃度爲較佳。再者，反應溫度也無特殊限制，可設定在〇〜2〇(TC，而以20〜13(TC 爲較佳。再者，反應時間也無特殊限制，可設定爲數秒〜數曰。鹼之種類與濃度、反應溫度及反應時間，可依據做爲原料之上述化合物之種類以及做爲目的之細胞自滅謗發性物質之生成量而適宜選擇。一般而言，宜超過pH 7，又選擇高濃度鹼比選擇低濃度鹼、選擇高溫比選擇低溫，更能加速本發明之細胞自滅謗發性物質之生成。舉例而言，藉著調製瓊脂二糖或；ί _角叉藻二糖之pH 11.5之溶液，在3 7°C保持5分鐘，即可生成本發明之細胞自滅謗發性物質。 - 所生成之含有本發明之細胞自滅謗發性物質之鹼性溶液，可依照目的中和後使用，或者也可做成pH 7以下之酸性溶液使用。本發明之細胞自滅謗發性物質之細胞自滅活性，舉例而言，可以將對癌細胞之增殖抑制作用做爲指標而測定。本發明之細胞自滅謗發性物質，可以以該活性爲指標而精製。精製方法可使用化學方法、物理方法等公知之精製方法 ’也可使用凝膠過滤法、藉分子量篩分膜之篩分法、溶媒萃取法、離子交換樹脂等各種層析法之精製方法組合而加以精製。本發明之細胞自滅謗發性物質之精製物，舉例而言，爲 -15- 國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297 請先閱讀背面之注意事項經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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如上述之式（1)所示之化合物。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製例如從瓊脂一糖在中性至驗性條件下之處理物中，可，式（I)所示化合物中之x爲CH2〇H而丫爲11之化合物精製， k欠·角叉藻二糖在中性至鹼性條件下之處理物中，可將式 (1)所示化合物中X爲Η而Y爲CH2〇H之化合物精製。本發明使用之式（1)所示化合物依上述之方式，將3 6-脱水^乳糖或還原末端具有3,6_脱水半乳糖之化合物，’例如瓊月曰糖％ _角叉藻二糖和在還原末端具有3，6 -脱水半乳糖 < 瓊脂二糖及；^ _角叉藻二糖以外之化合物，於中性至鹼性之條件下處理而生成，又，本發明中所使用式⑴所示化合物二以及以顯現其生理作用爲目的之3,6•脱水半乳糖及/ 或在還原末端含有3,6_脱水半乳糖化合物之用途，均被包含於本發明之中。以在身體中表現本發明之式（1)化合物爲目的之原藥之使用亦被包含於本發明之中。做爲原藥者，以具有臟器親和 =、組織親和性之配位體之3,6_脱水半乳糖爲較佳，該原藥被細胞攝取後，在其之生理條件下，形成式（1)所示化合物，而顯現種種之生理機能。做爲配位體者，例如有半乳糖。在配位體爲半乳糖之情況下，對肝組織之尋靶特別有良好政率。具配位體之化合物例如有在非還原末端具有半乳糖之瓊脂二糖、瓊脂六糖、瓊脂八糖等瓊脂寡糖，此等瓊脂寡糖可做爲原藥使用。在非還原末端具有半乳糖之瓊脂寡糖爲人類長時間食用至今。此等瓊脂寡糖藉著在中性或鹼性中非還原末端之 -16 - (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 5· 線.

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484 A7 B7 五、發明說明（14) 3,6-脱水半乳糖脱落，且該3,6_脱水半乳糖轉變成式（1)所示化合物，因而顯現生理活性。亦即在身體内被吸收而做爲原藥之瓊脂寡糖，轉變成式（I)所示化合物，因而顯現生理機能。此等瓊脂寡糖由於具有易於吸收之適度分子量，在消化管中易被吸收，更且，由於非還原末端爲半乳糖，在肝臟中被積極吸收，也易於被通過肝臟之血流所運載。吸收後’在對非還原末端之半乳糖具有親和性之組織部位 ’轉受成式（I)所示化合物，因而顯現生理活性。亦即藉由投與做爲原藥之瓊脂寡糖，在安定性上優異，在攝取效率上良好，且在局部濃縮狀態下轉變成式（1)所示化合物，而可顯現其生理活性。式（I)所示化合物之鹽類者，爲做爲醫藥被容許之鹽類，但也可經由公知之方法轉變而得到。本發明中使用之式（II)所示化合物，係藉由使式（1)所示化合物與含有SH基之化合物反應，而在反應液中生成。所用含有SH基之化合物應無特殊限制，舉例而言有甲硫醇、丁硫醇、氫硫基乙醇、含有SH基之胺基酸、含有sjj 基之胺基酸衍生物等。含有SH基胺基酸例如有半胱胺酸、類半胱胺酸等。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製含有SH基之胺基酸衍生物，爲上述胺基酸之衍生物，舉例而言，如半胱胺酸衍生物、含有半胱胺酸之肽、含有^ 胱胺酸衍生物之肽等。含有半胱胺酸之肽者，只要肽中半胱胺酸爲構成成分即可，並無特別之限定^本發明之含有半胱胺fe之肽者，包含寡聚肽，例如從榖胱芬肽等低分子

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化合物至蛋白質等高分子化合物。再者，含有胱胺酸脱胺酸I肤者，在會形成含有半胱胺酸或類半胱胺酸之肽之反應條件下（例如藉由組合還原處理），亦可被用做本發明之含有半胱胺酸或類半胱胺酸之肽。又，含有半脱胺酸之肤者亦包括含有糖質或脂質等之含有半胱胺酸之肽。再者，亦可使用上述各種物質之鹽類、酸酐及酯類等。在製造式（II)所示化合物時，將式所示化合物與含有 SH基之化合物反應，該反應宜採取公知之反應條件，除了含SH基化合物之SH基必須具有反應性外，無特別限制。式（I)化合物與含有s Η基之化合物（例如含有s H基之化合物或其衍生物）反應所生成之式（π)化合物，在精製及單離上，可使用化學方法、物理方法等公知之精製方法進行精製。式（I)所示化合物在身體中，例如與811基含有化合物（例如半胱胺酸、榖胱甞肽等）反應，而生成可做爲醫藥之式 (II)所示之代謝衍生物。因而，該代謝衍生物所示之藥效在投與式（I)所示化合物之場合也可以得到；以使式（Η )所示化5物在身體内生成爲目的之式（I)所示化合物之使用也被包含在本發明之内。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製做爲式（II)所示化合物之鹽者，有醫藥上容許之鹽，其可藉公知方法轉變。在本發明中使用之式（I)所示之化合物、式（11)所示之化合物及其鹽具有細胞自減謗發活性，癌抑制活性，活性氧產生抑制活性、過氧化脂質自由基產生抑制活性、一氧化 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484

五、經濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明說明（16) 氮產生抑制活性等抗氧化法地 t. m 、乳化/舌性，抗病原微生物活性，抗突愛原活性’ α -糖答酶抽制、、去从人、母钟制/舌性，免疫調節作用，前列腺素口，抑制作用’抗炎症作用，抗過敏作用，細胞激素產生碉節作用，抗風濕作用，括輪 f J抗糖尿病作用，滑膜細胞增殖抑制活性，熱休克蛋白質產生謗導作用等生理活性。藉著此寺活性，以從式⑴所示化合物、切υ所示化合物及並瞒選出之化合物做爲有效成分，製造治療或預防下列疾病之 ’口療劑或預防劑：需要謗發細胞自滅之疾病、癌症、需要抑制活性氧產生之疾病、需要抑制過氧化脂質自由基產生之疾病、需要抑制一氧化氮產生之疾病、病原、微生物引起之疾病、由突變原謗發之疾病、需要抑制^糖#酶之疾病、需要免疫調節之疾病、需要抑制前列腺素合成之疾病、需要抑制炎症之疾病、需要抑制過敏之疾病、需要調節細胞激素產生之疾病、風濕病、糖尿病、需要抑制滑膜細胞增殖之疾病、需要熱休克蛋白質產生謗導作用之疾病，亦即製造細胞自滅謗發劑、癌症抑制劑、活性氧產生抑制劑、過氧化脂質自由基產生抑制劑、一氧化氮產生抑制劑等抗氧化劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗突變原劑、血糖上升抑制劑、抗南脂質劑、免疫調節劑、前列腺素合成抑制劑、抗炎症劑、抗過敏劑、細胞激素產生調節劑、滑膜細胞增殖抑制劑、抗風濕劑、抗糖尿病劑及熱休克蛋白質產生謗導劑等。 ' 又，以從式（I)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分之本發明細胞自減謗發劑，在排 -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）請先閱讀背面之注意事項

t 訂線 1244484 A7 ---—-^--- 五、發明說明（17) 除自體免疫疾病患者之自體反應性淋巴球、癌細胞及病毒感木細胞等上有效，藉著在所期望之組織及細胞表現細胞自滅，可用自然之方式從身體排除不期望或有害的細胞。以本發明 < 細胞自減謗發劑治療有效的疾病例如爲全身性天皰瘡樣紅斑、免疫媒介性絲球體腎炎、多發性硬化症、膠原病等自體免疫疾病及風濕病等。本發明之細胞自減謗發劑可用於細胞自滅謗發方法，該万法在細胞自滅謗發機構之解明以及細胞自滅謗發劑及細胞自減謗發抑制劑之篩選等上有用。又，本發明之細胞自滅謗發劑引起之細胞自滅謗發作用，由於能藉凱氏酶（Caspase)抑制劑[例如il-1 轉換酶抑制劑-V (Z_Val-Ala-DL-Asp (OMe) _氟甲基酮），寶酒製造公司製]抑制，所以係凱氏酶依存性細胞自滅造成之細胞死亡。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Μ凱氏酶於各種細胞死亡之時先行上升，藉著其之過剩表現房導細胞死亡；藉著爲肽抑制劑或抑制蛋白質之^瓜八及P 3 5，可以抑制細胞自滅；以及由於凱氏酶_丨及凱氏酶 -3使在被擊昏鼠中通常見到之細胞自滅之一部份受到抑制，所以其爲細胞自滅之重要媒介者等事已被明白[生化學，第70卷，第14〜21頁（1998)]。亦即在細胞自滅之過程中，爲半胱胺酸蛋白酶之凱氏酶被活性化，而分解核或細胞質之蛋白質。凱氏酶首先被合成以做爲前驅體，其藉著接人成爲活性化型。該凱氏酶之活性化路徑之控制決定細胞之生死。在哺乳類中存在10種以上之凱氏酶，藉著上位之*几氏酶與下位之凱氏酶接合，細胞内蛋白質分解活性被雪崩 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484 A7 ___B7 五、發明說明（18) 式地增幅[細胞工學，第17卷，第875〜880頁（ 1998)]。相反地，藉著使用凱氏酶（一種半胱胺酸蛋白酶）之抑制劑抑制接合活性，則可終止凱氏酶依賴型細胞自滅造成之細胞死亡0 在本發明中使用之式（I)所示化合物，式（Π)所示化合物及彼等之鹽在氧化物質（例如活性氧）之產生抑制上有用，以藏化合物爲有效成分之活性氧產生抑制劑等抗氧化劑可用於治療或預防以活性氧之產生及/或過剩爲起因之疾病。活性氧大致可被分類爲自由基或非自由基活性氧。在自由基系活性氧中有羥基自由基、過氧羥基自由基、過氧自由基、燒氧基自由基、二氧化氮、一氧化氮（以下簡略寫做 NO)、硫醇自由基及超氧化物。另一方面，在非自由基系活性氧中有游離氧、過氧化氫、脂質氫過氧化物、次氯酸、臭氧及過氧亞硝酸。該活性氧與多種疾病，亦即各種發炎性疾病、糖尿病、癌症、動脈硬化、神經疾病及缺血性再灌流障害等相關。 4在身體内，於幾個經常路徑中生成低濃度的活性氧。其爲從粒線體等電子傳遞系統生理性漏出之超氧化物或過氧化，、藉用銅或鐵等過渡金屬做爲觸媒而得之羥基自由基、精—由嗜中性球或單核球等生成之供防禦感染用之次氯酸以及藉著精胺酸分解生成之恥等，其無論如何無法避免生 =相對1此m氧（生成，身體保有做爲活性氧消去系、，酵素及低分子化合物，而保持生成與消去之平衡。仁疋’在生成系統由於某種原因被活性化，且相反地消去請先閱讀背之注意事項

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1244484 A7 五、發明說明（19) 系統被不活性化，而導致活性氧生成系統比消去系統佔優勢（場合，身體將受到氧化的障害。此種狀態被稱爲氧化壓力。再者，不僅是在身體内平衡破壞之場合，來自大氣或食品等身體外之因素也使身體經常暴露於氧化壓力下，而使日常生活無法避免氧化壓力。亦即，氧化壓力如上述與種種疾病有關，而使身體經常暴露於氧化壓力造成之疾病或疾病變得惡化之狀況下。因而’本發明〈氧化劑，例如活性氧產生抑制劑在預防及治療氧化壓力引起之疾病或防止此等疾病惡化上有用。再者，氧化壓力中必然發生者爲脂質過氧化反應，該反應爲與過氧化脂質自由基產生一起進行之反應。其中，生成羥基_2_壬醛（HNE)爲以榖胱甞肽或蛋白質爲特異標的之毒性酸。前NE與蛋白質之反應生成物在各種病態組織中被檢出，而被考量是否爲氧化壓力相關疾病之謗發因子。因此，以本發明所用之以能抑制過氧化脂質自由基生成之抗氧化物質（即從式（1)表示之化合物，式（π)表示之化合物及其鹽選出之化合物）做爲有效成分之抗氧化劑，可被用於預防及治療氧化壓力引起之生活習慣疾病。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 NO爲來自内皮細胞之血管平滑肌鬆弛因子（edrf)之本體 [Nature，第327卷，第524〜526頁（1987)]。藉著本發明，可以提供需要抑制1^〇產生之疾病之治療劑或預防劑。在本發明中，對於需要抑制NO產生之疾病沒有限定，例如包含毒性休克或藉某種細胞激素治療等引起之全身性低血壓，直1性低血壓，糖尿病，血管機能不全，病因性血 -22 A7

1244484 i、發明說明（20) 管擴張，組織損傷，心臟血管系統缺血，痛感過敏症，腦缺血，伴隨血管新生之疾病以及癌症等疾病。在從L_精胺酸生產瓜胺酸及NO之一氧化氮合成酵素 (NOS)之中，有經常被發現之cNOS及謗導型之iNOS。在巨噬細胞中，iNOS藉著細胞毒素或細胞激素（LPS、INF- r等）之刺激而被謗導，生產NO。iNOS本身在身體系之維持上必須存在。然而，另一方面亦已明白iNOS若因爲種種因素超過需要地過剩表現，將產生過剩的NO，而引起各種疾病。本發明者，經由西方氏吸潰得到之蛋白濃度及經由RT _ PCR得到之傳信RNA濃度，可以確認式（I)所示化合物、式 (II)所示化合物及其鹽會抑制此等iNOS之表現。換言之，本發明所用從式（I)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽選出之化合物，藉著抑制因種種因素而過剩表現及生產過剩Ν Ο之iNOS之表現，在治療及預防需要抑制Ν Ο產生之疾病上有效。因此，本發明所用之式（I)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽會抑制巨噬細胞產生Ν Ο，而在治療及預防因巨噬細胞產生NO引起之疾病及癌症等上有用。又，本發明所用化合物之NO產生抑制作用，對於爲NO產生謗發物質之LPS 或INF_ r沒有拮抗抑制作用。再者，藉著預先添加本發明所用之化合物，可以見到Ν Ο產生抑制效果增強，所以本發明所用之從式（I)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽選出之化合物在做爲抗氧化物質產生預防劑之有效成分上極爲有用。 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 厂 ___ B7 五、發明說明（2〇又’本發明之NO產生抑制劑在NO產生機構及㈣作用機制之研究上有用，也可用於篩選與NO產生機構相關之物質。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 在固體癌增大上，血管新生固爲必須，血管内皮增殖因子/血管透過性亢進因子（VEGF)在該過程中亦扮有重要角色。在各種癌細胞中，VEGF藉著NO而被謗導。本發明之 Ν Ο產生抑制劑藉著抑制Ν Ο產生，亦抑制癌細胞之vegf產生，結果在癌組織週邊之血管新生被抑制。在將癌細胞移植至皮下而形成固體腫瘤之小鼠中，若投與本發明iN〇產生抑制劑，則癌組織週邊之血管變得無法充分形成，癌因而脱落。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製亞硝胺爲將亞硝基附加於2級胺所成之一群化合物，已知有數百種，其中多個藉著對DNA造成損傷而對動物顯示致癌性。亞硝胺與人類罹患癌症有深切關係，其通常在胃中藉著亞硝酸鹽與胺反應而生成。Ν Ο在p Η中性之生理條件下，與胺反應而生成亞硝胺。又，在病理學上與癌症有高度關係之肝吸蟲患者或肝硬變患者中，Ν0產生亢進。因而 ’藉著投與本發明之Ν Ο產生抑制劑以防止Ν Ο產生亢進，特別能夠預防高危險群罹患癌症。如上所述，本發明之Ν 〇產生抑制劑顯示所謂抑制癌症發生及阻止癌組織中血管新生之二階段抗癌作用。再者，本發明使用之化合物，藉著謗導細胞自滅以使癌細胞死亡之直接效果，與藉著抑制癌細胞生產Ν 〇而阻止被 Ν Ο謗導之VEGF造成之血管新生，以使細胞死亡之間接效果之相乘作用而發揮癌症抑制作用。 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1244484 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（22) NO又會謗發爲炎症性病變特徵之浮腫，亦即血管透過性尤進作用（Maeda et al·，Japanese Journal of Cancer Research，第85卷，第331〜334頁（1994))，或者使爲炎症媒介者之前列腺素類之生合成尤進[Salvemini et al.，Proceedings of National Academy of Sciences, USA，第 90 卷，第 7240〜7244頁 ( 1993)]。另一方面，NO與超氧化物自由基快速反應，生成過氧亞硝酸離子，該過氧亞硝酸離子被認爲亦會引起炎症性之細胞及組織傷害。若被活性化之免疫細胞進入内臟器官，放出細胞激素，將謗導Ν Ο之產生。胰島素依存性糖尿病爲胰島細胞被特異性破壞所引起之疾病，該破壞由Ν Ο引起。又，在慢性關節性風濕病、變形性關節風濕病、痛風性關節炎、伴隨佩姬氏症之關節炎之患者之病變部之關節液中，與同一患者之正常關節或健康人之關節之關節液相比，含有較高濃度之NO。若將本發明之NO產生抑制劑投給此等患者，會抑制病變部中Ν Ο之產生，而改善症狀。在腦缺血期間及再灌流後，NO產生增大，伴隨其者爲腦組織受到損傷。腦缺血時，藉著將本發明之NO產生抑制劑投給此等患者，腦組織之損傷將被減輕以及預後將被改善。組織之炎症及疼痛之引起與花生四烯酸代謝有重大關係。來自細胞膜磷脂質之花生四烯酸，藉著體内環氧酶之作用，被代謝成前列腺素、前列腺環素及凝血噁烷胺三者。其中，前列腺素有血管擴張作用，以及伴隨該作用，流向内臟器官之血流增加。特別在炎症部位中，前列腺素E2& -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) F1裝 . --線· 1244484 A7 五、發明說明（23) 12=藉著該血流增加作用，使浮腫及白血球浸潤增加。亦即，藉著投與本發明之前列腺素匕合成抑制劑，能夠抑制前列腺素之生合成，而表現鎮痛及抗炎症作用。再者，由於浸潤至炎症部分之白血球生產活性氧，而引起氧化壓力狀態，所以能抑制前列腺素生合成之本發明前列腺素I合成抑制劑，可用於預防及治療如前述因氧化壓力引起之各種疾病或防止其之惡化。又，如上述，由於!^0會謗發爲炎症性病變特徵之浮腫（亦即血管透過性亢進作用）以及會使爲炎症媒介者之前列腺素類之生合成亢進，本發明iN〇產生抑制效果與前列腺素 E2合成抑制效果相乘地作用，而在鎮痛、抗炎症作用以及預防及治療氧化壓力引起之種種疾病或惡化防止上表現相乘效果。本發明之免疫調節劑有淋巴球年輕化反應抑制作用、混合淋巴球反應抑制等免疫調節作用，所以本發明之免疫調節劑可做爲此等免疫系統或免疫因子異常引=之疾病之治療劑或預防劑。再者’淋巴球年輕化反應爲—種有絲分裂原結合至淋巴球表面之受器，使淋巴球活化，而促進其分裂及增殖之反應。混合淋巴球反應爲-種藉著混合培養從同種異系動物所得之淋巴球，依據主要組織適合抗原之不一致球之活性化，而促進淋巴球之分裂及增殖之反應。本發明 =免疫調節劑會抑制此等反應，在治療或預防淋巴球異常 =進引起之自體免疫性疾病例如慢性腎炎、慢性大腸炎」开乂糖尿病、慢性關節風濕症等慢性疾病上特別有用，在抑本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297^jy (請先閱讀背面之注意事項δ、寫本頁) r1壯衣訂· 線- -26- 五、發明說明（24) 制移植片排斥反應上亦有用。式（I)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽有千道爾，（HSP7G)、等熱休克蛋白質產生謗導活性，以及對於肝炎病毒、愛滋病毒、流行性感冒病毒、水疱性口内炎病毒、疤疹病毒等RNA病毒及DNA病毒有抗病毒作用。又，熱休克蛋白質亦與癌免疫有關，所以此等化合物對於癌免疫亦有效。再者，與抗炎症等之身體防禦作用亦有關。因此，藉著攝取式（I)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽，能夠預防及治療流行性慼冒病毒引起之感冒等病毒性疾病。本發明之細胞自滅謗發劑以式（1)所示化合物，式（ιι)所示化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分，並可將該有效成分與公知之醫藥用載體組合而製成製劑。一般而言，將孩組成物與醫藥上容許之液狀或固體狀載體配合，且於需要時添加溶劑、分散劑、乳化劑、缓衝劑、安定劑、賦形劑、結合劑、崩散劑及潤滑劑等，可做成錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等固形製劑，或溶液、懸浮液及乳液等液劑。再者，也可以做成於使用前藉著添加載體而能成爲液狀之乾燥品。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明之細胞自滅謗發劑，藉口服劑，或者注射劑及點滴用劑等非口服劑中之任一種投與。醫藥用載體，依照上述投與形式及劑型而選擇，在口服劑之場合’例如可以利用澱粉、乳糖、白糖、茹露醇、瘦甲基纖維素、玉米澱粉及無機鹽等。又在調製口服劑時，另外亦可以配合結合劑、崩散劑、界面活性劑、潤滑劑、 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1244484

流動性促進劑、矯味劑、著色劑及香料等。另一方面，在非口服劑之場合，依照一般方法，將爲本發明之有效成分之從式（τ)所示化合物、式（π)所示化合物及其鹽所選出之化合物溶解或懸浮於做爲稀釋劑之注射用二餘水、生理食鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、落花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，以及於需要時藉著添加殺菌劑、安定劑、等張劑、袅痛化劑等而調製。 … 本發明之細胞自滅謗發劑以適合製劑形態之投與途徑投與。投與方法沒有特殊限制，可以藉内服、外用及注射投藥。注射劑例如可投與至靜脈内、肌肉内、皮下及皮内等 ’又外用劑亦包含栓劑。本發明之細胞自滅謗發劑之投與量，依照其之製劑形態、投與方法、使用目的以及適用其之患者之年齡、體重及症狀而設定，製劑中所含有效成分之量雖然並非一定，但般爲成人每日10微克〜200毫克/公斤。當然，由於投與量隨著種種條件而變化，也有比上述投與量少之量即已足夠之惴況，或者必須超過該範圍之情況。本發明之藥劑除了以原樣投與外，也可以添加至任意之飲食品而日常地攝取。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明之癌症抑制劑，若以式（1)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分，並將該有效成分與公知之醫藥用載體組合製成製劑，可以製造癌症抑制劑。癌症抑制劑之製造係依照上述細胞自滅謗發劑之製法進行。 -28- 本紙張尺度適用中國嗎標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公爱）— 1244484 A7 B7 五、發明說明（26) 該癌症抑制劑以適合製劑形態之投與途徑投與。投與方法/又有特殊限制，可以藉内服、外用及注射投藥。注射劑例如可投與至靜脈内、肌肉内、皮下及皮内等，又外用劑亦包含检劑。癌症抑制劑之投與量，依照其之製劑形態、投與方法、使用目的以及適用其之患者之年齡、體重及症狀而設定，製劑中所含有效成分之量雖然並非一定，但一般爲成人每日10微克〜200¾克/公斤。當然，由於投與量隨著種種條件而變化，也有比上述投與量少之量即已足夠之情況，或者必須超過該範圍之情況。本發明之藥劑除了以原樣投與外，也可以添加至任意之飲食品而日常地攝取。風濕症爲一種在骨膜細胞或軟骨細胞發生障害之自體免疫疾病。式（I)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽對滑膜細胞有細胞自滅謗發作用。因而以式（1)所示化合物，= (II)所示化合物及其鹽做爲有效成分，能夠製造抗風濕症劑。亦即，以式（1)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分，並將該有效成分與公知之醫藥用載體組合製成製劑，可以製造抗風濕症劑。抗風濕症劑之製造係依照上述方法進行。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製抗風濕劑，藉口服劑，或者注射劑及點滴用劑等非口服劑中之任一種投與。醫藥用載體’按照上述投與形式及劑型而選擇，若如上述細胞自滅謗發劑所使用者則佳。該抗風濕劑以適合製劑形態之投與途徑投與。投與方法 -29- 1244484 A7

五、發明說明（27) 沒有特殊限制，可以藉内服、外用及注射投藥。注射劑例如可Hi至靜脈内、肌肉内、皮下及皮内等，又外用劑亦包含拾劑。二從式（I)所示化合物，式（π)所示化合物及其鹽選出之泛物做爲有效成分之抗風濕劑之投與量，依照其之製劑夕〜技與方法、使用目的以及適用其之患者之年齡、體重及症狀而設定，製劑中所含有效成分之量雖然並非一定 '成人般爲母日0·01〜5 0毫克，以1〜1 0毫克爲較佳。當然，由於投與量隨著種種條件而變化，也有比上述投與量少 < 量即已足夠之情況，或者必須超過該範園之情況。本發明之藥劑除了以原樣投與外，也可以添加至任食品而曰常地攝取。 ’ 再者，以從式（I)所示化合物，式（11)所示化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分之抗氧化劑、活性氧產生抑制劑、過氧化脂質自由基產生抑制劑、一氧化氮產生抑制劑、抗菌劑、抗病原微生物劑、抗突變原劑、前列腺素合成抑制劑、滑膜細胞增殖抑制劑、熱休克蛋白質產生謗導劑及抗病毒劑可以依照上述細胞自滅謗發劑而被製造，其用 i及用法’參照上述細胞自滅謗發劑，視症狀使用。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製式（I)所示化合物，式（Π)所示化合物及其鹽對於種種糖嘗酶，例如蔗糖酶、麥芽糖酶等顯示抑制活性，可以製造以式（I)所示化合物爲有效成分之血糖上升抑制劑、抗高脂血症劑、抗肥胖劑、抗糖尿病劑等。此等醫藥可以依照上述細胞自滅謗發劑而被製造，其用量及用法，參照上述 -30 -

1244484 A7 五、發明說明（28) 細胞自滅謗發劑，視症狀使用。又，以從式⑴所示化合物，式（Π)所π化合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分之 “糖嘗酶抑制劑可依照-般方法製造。使用該f糖嘗酶抑制劑，能夠進行^糖嘗酶之抑制方法。本4月ί疋仏種含有從式（I)所示化合物，式（π)所示化合物及其鹽選出之化合物，並經稀釋及/或添加而成之食品及奴料纟發明之食品及飲料，藉著其之細胞自滅謗發作

用，抑制癌作用，抗氧化作用、抗病原微生物活性、抗突變原活性：前列腺素合成抑制作用、熱休克蛋白質產生謗導作用—抗病母作用、“ n酶抑制活性等，在對於從式 ⑴所化合* ’式(11)所示化合物及其鹽選出之化合物顯訂丁感又欧之疾病之症&改善或預防上極爲彳用，此等疾病例如有需要謗發細胞自滅之疾病、癌性疾病、需要抑制活 =生之疾病、需要抑制一氧化氮產生之疾病、病原微生物引起由突變原或前列腺素合成等引起之疾病線戈蛋白質產生料作用之疾病、病毒性疾病、或耑要凋郎α _糖:y：酶之疾病。本發明之食品或飲料之製造法，㈣沒有特別限定，_ 例如可藉調理、加工及一妒蚯、主...^ 般所用'^食品或飲料製造法而製 ,TTW. - , 口有攸式（I)所示化合物，式（II)所π化合物及其鹽選出之化合物做爲經添加及/或稀釋而成。风刀且 Γ二仙所示之化合物，在食品或飲料之製造工程中 ’精由將3,6-脱水半乳糖及/或還原末端具有3,6_脱水半乳本紙張尺5適时關家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐Τ 31 J244484 五發明說明（ 29) :3之lit半Ϊ:性至鹼性條件下處理而得到。再者，形合物及/或還原末端具有3,6_脱水半乳糖之化分解而得到。力物在知性下分解或酵素 :广ΐ水半乳糖含有物者，可使用例如瓊脂、瓊脂糖及/ 戍角叉菜膠。還斤支波1古可使用水半乳糖之化合物者， :末端具有3,6-脱水半乳糖之壤脂二糖及外之化合物。月又朵一糖以 =者’式(I)所示之化合物，在食品或飲料之製造工程中，與含有SH基之化合物反應生成含有式⑼所示之化合物成稀釋及/或添加後所形成之食品或飲料，也被包含於本發明之食品或飲料中。細本發明之食品或飲料，雖無特別限定，但舉例而言，有毅物加工品（小麥粉加工品、澱粉類加工品、預混合加工品麵讀通〜粕類、麵包類、滷菜類、驀麵類、麥糠、米知知絲、包裝餅等）、油脂加工品（可塑性油脂、炸蝦油 ^拉/由、沙拉醬類、調味醬等）、大豆加工品（豆腐類、味噌、甘納豆等）、食肉加工品（火腿、培根肉、擠壓火腿、香腸等水產製品（冷凍魚肉醬、魚糕、魚捲、蒸餅、薩摩炸魚丸、魚丸、魚肉筋、魚肉火腿、香腸、柴魚、魚卵加工品、水產罐頭、魚貝醬菜等）、乳製品（原料乳、乳霄、優酪乳、奶油、乳酪、煉乳、奶粉、冰淇淋等）、蔬菜果實加工品（果菜膏類、果醬類、醃潰食物類、水果飲料、 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規& (21Q X 297公餐）請先閱讀背面之注意事項

I 線 1244484 A7 —----_______ 五、發明說明（30) 蔬菜飲料、；昆合飲料等）、點心類（巧克力糖、餅乾、帶餘麵包、蛋糕、餅乾點心、米製點心等）、酒精飲料（日本酒、中國酒、葡萄酒、威士忌酒、燒酒、伏特加酒、白蘭地酒、琴酒、蘭姆酒、啤酒、清涼酒精飲料、果實酒、香甜酒等）、嗜好飲料（綠茶、紅茶、烏龍茶、咖啡、清涼飲料、乳酸飲料等）、調味料（醬油、醬汁、醋、料酒等）、罐頭、瓶裝、袋裝食品（牛飯、小鍋燴飯、紅豆飯、咖哩飯、及其他各種調理好之食品）、半乾燥或濃縮食品（豬肝醬、其他澆淋之驀麵、烏龍麵調味汁、濃縮湯類）、乾燥食品（速食麵類、速食咖哩飯、速成咖啡、粉末果汁、粉末湯、速成味噌湯、調理好之食品、調理好之飲料、調理好之湯）、冷凍食品（火鍋、茶碗蒸、烤鱔魚片、漢堡牛肉餅、燒賣、餃子、各種濃稠肉湯、果汁難尾酒等）、固態食品、液態食品（湯等）、香辣類等之農產、林產加工品、畜產加工品、水產加工品等。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明之食品或飲料者，含有從式所示之化合物、式 (II)所示之化合物、及其等之鹽類中選出之化合物，經稀釋及/或添加後所形成，其只要含有爲了呈現生理機能之必要含量，對形狀就無特別限定，對於錠劑、顆粒狀、膠囊狀等可經口攝取之形狀物也被包含在内。本發明之食品或飲料爲一種健康食品或飲料，特別是有益於保持胃腸健康之食品或飲料，其含有從具生理活2之式（I)所示化合物、式（II)所示化合物、及其鹽中選出之化合物，藉著其等之細胞自滅謗發作用、抑制癌症作用7能 -33· ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） ----- ----—-^ 1244484

&«部智慧財產局員工消費合作社印製改善對於式⑴所示化合物、式（II)所示化合物、及直睡顧 -感受性(即經由攝取此等化合物而產生預防癌症發生、癌症抑制效果等）之疾病之症狀或預防其發生。再者，藉由其之“_糖甞酶抑制活性，含有從式（1)所示化合物、式（Π)所示化合物、及其鹽選出之化合物，經稀釋及/或添加後所形成之食品，可做爲具血糖上升抑制作用之食品或飲料，而可做爲抗糖尿病用食品或抗糖尿病用飲料二抗肥胖用食品或抗肥胖用飲料、抗高脂血症用食品或杬高脂血症用飲料等。再者，式（I)所示化合物、式（Η)所示化合物及其鹽具有抑制活性氧產生之作用、抑制過氧化脂質自由基產生之作用等抗氧化活性，在抗氧化用食品或抗氧化用飲料之製造上I做爲抗氧化用食品用之抗氧化劑或抗氧化用飲料用之抗氧化劑（例如活性氧產生抑制劑、過氧化脂質自由基產生抑制劑、Ν Ο產生抑制劑等）。以仗上述化合物中選出之至少一種化合物做爲有效成分 <本發明抗氧化劑之劑型，並無特別限制，可依照常法視做爲添加對象之食品或飲料之種類，做成粉末狀、膏狀、乳化物等適立劑型’以本發明化合物做爲有效成份之食品或飲料可藉使用本發明之抗氧化劑而簡單地製造。再者’在本發明中提供式（I)或式（II)所示之抗氧化用化合物。式（I)所不抗氧化用化合物，例如可藉3，6 _脱水半乳糖含有物在ρΗ7以下之酸性下產生之酸分解物及/或酵素分解物 -34- 本紙張尺度翻^ 公髮） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) I!裝訂：線- 1244484 A7

，在中性至驗性之條件下進行處理而得到其之精製物、部分精製物等。再者，3,6-脱水半乳糖含有物者，可使用例 ^ 類之3,6-脱水半乳糖含有物，例如瓊自叉菜膠。居及/或角再者’可使用式（II)所示之抗氧化用化合物含有S Η基之化合物反應而得到，精製物等。 ’可藉式（I)所示化合物與可使用其之精製物、部分本發明I抗氧化用化合物能去除身體内氧化物質性氧)或抑制其產生，又該抗氧化糖化合物在改善或預：以活性氧之產生及/或過剩爲主因之疾病上有用。請先閱讀背之注意事項

頁經濟部智慧財產局員工消費合社印製如上述’身體内活性氧生心統相對於消去系統居優勢地位之情況，由於身體受到氧化障害而生成之氧化壓力與各種疾病有關，所以身體經常暴露於氧化壓力引起之疾病或疾病惡化之狀況下。因此，爲了預防、治療此等氧化= 力引起疾病或防止其惡化，乃期望每日攝取適量之抗氧化物質。每日攝取適量可望從食品及/或飲料中攝取，而含有本發明之抗氧化化合物，經稀釋及/或添加後所形成之食品在做爲抗氧化用飲料、或做爲抗氧化壓力食品或抗氧化壓力飲料上非常有用。本發明使用之化合物也兼有保水性，可製造以本發明所用化合物爲有效成分之抗便秘劑。可以製造抗便秘用食品、抗便秘用飲料。本發明中更提供以從式（1)所示化合物、式（11)所示化合

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部智慧員工消費社印 1244484 五、發明說明（33) 物及其鹽中選出之化合物做爲有效成分之化粒材料。化粒材料可用上述糖化合物做爲有效成份，調製成面霜、乳液、洗液、洗面材料、潤膚膏等基礎化粒材料，口 2 知底等上粒化粧材料，或浴皀、面皂等之形態。再者，因對頭髮有效，可做成頭髮營養劑、整髮液、頭髮定型液、整髮劑、髮膏、塗髮劑等頭髮製品，及洗髮精、潤：精顽髮處理液等頭髮用掖粒品等之護髮製品形態。對於化，料之配合量，可視美白作用、保濕作用、抗氧化作用寺而做適宜決定。化粒材料之其他成分，可使用化粒材料通常所配合者。再者，美白作用、保濕作用可藉由—般方法而測定，舉例而言，可藉由特開平8_31〇937號公報記載 <方法測定。本發明之化粧材料，顯示對皮膚之美白作用、保濕作用縣ΪΓ匕作用、活性氧產生抑制作用、抗氧化壓力作用， ^叙保濕作用、抗氧化作用、活性氧產生抑制作用、几氧化壓力作用等具有更優良之性質。物二提供以從式⑴所示化合物、式(11)所示化合匕合物做爲有效成分之鮮度保持劑。式⑴ ::匕合物、式(Π)所示化合物及其鹽具有抗氧化作用 2度呆持作用 '路胺酸酶活性抑制作用、抗病原微生物卜抗突變原活性，以從式⑴所示化合物合物及其鹽選出之化合物做爲有效成分者，可藉由八:、製2化方法，製造能有效地防止食品變二鮮度保持劑。本發明之鮮度保持劑對各種食品、生活化之 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝------ . _線· I _ - 36 本紙張尺度涵 A7 1244484 ______B7__ 五、發明說明（34) 鮮食品、加工食品等之味道、鮮度之保持極爲有用。在本發明中，可以用3,6-脱水半乳糖及/或還原末端具有 3，6 -脱水半乳糖之化合物’於中性至驗性之條件下處理而生成之細胞自滅謗發性物質（以下僅以本發明之細胞自滅謗發性物質稱之）做爲有效成分，製造細胞自滅謗發劑。該細胞自滅謗發劑，可依照上述細胞自滅謗發劑而製造。以本發明之細胞自滅謗發性物質做爲有效成分之細胞自滅謗發劑之投與量，可依據其之製劑型態、投與方法、使用目的、及其適用之患者年齡、體重、症狀而適宜設定，雖然沒有一定標準，但一般而言，製劑中所含有有效成分之里’爲成人母日平均10微克〜200毫克。當然投與量隨著各種條件而變動，可有比上述投與量更少量即已足夠之情況’或者也有必須超過上述範圍之情況。本發明之藥劑，除可依原樣直接經口投與外，也可添加於任何飲食品，而由曰常生活中攝取。以本發明之細胞自滅謗發性物質做爲有效成分之細胞自滅謗發性物質，具有癌細胞之增殖抑制活性，可製造以本發明之細胞自滅1秀發性物質爲有效成分之癌抑制劑。以本發明之細胞自滅謗發性物質做爲有效成分之癌抑制劑之製造方法、用量、用法，可依照上述細胞自滅謗發劑而製造、使用。本發明之細胞自滅謗發性物質，可做爲癌症患者等之治療藥物使用。再者，使用本發明之細胞自滅謗發性物質所示之化合物做爲有效成分之細胞自滅謗發方法，在身體防 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項'寫本頁) 裝 . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1244484 A7 五、發明說明（ 35 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製禁機構、癌症車去签> Xxr . 發等上有用。研死以及細胞自滅謗發防止劑之開。有本發明〈細胞自減謗發性物質，以及經稀釋及/或添加所形成〈食品或飲料中，爲出現本發明之細胞自滅謗發 :生，、貝心生理作用’需含有相當之有效量。本發明之食品人料ί列如，細胞自減誘發用食品或細胞自滅謗發用飲料:抑制癌症用食品或抑制癌症用飲料等各個之製造方法 ^特限制’可使用調理、加工及—般使用之食品或 :、製去，、要製成之食品或飲料中含有可顯示細胞自 ^發作用或抑制癌作用之有效量之本發明細胞自滅謗發生物質。3,6-脱水半乳糖及/或還原末端含有3,6_脱水半乳 ^料在食w或飲料之製造過程中，藉著在超過pH 7 =性條件下處理而生成之含有本發明之細胞自滅謗發性貝再^稀釋及/或添加所形成之食品或飲料，也被包含在本發明之食品或飲料中。蔡t =之食品或飲料，只要爲含有本發明之細胞自滅謗 '八質，經稀釋及/或添加後所形成者，對形狀並無特別叙劑、顆粒狀、膠囊狀等可經口攝取之形狀物也包含在内。 ^發明之食品或飲料，藉由其細胞自滅誘發作用及癌抑 1乍用，對消化系統癌症等之症狀改善及預防極爲有用。、：（1)所不化合物、式(Π)所示化合物、其鹽以及本發明自滅謗發性物質中之任—者，即使將觸毫克/公斤 4里單次經口給與小鼠，也確認沒有死亡案例。本紙張尺度適用家標準（CNS)A4規格（g χ 297公釐）請先閱讀背面之注意事項再4··!裝賣訂線 -38- 1244484 A7 --- —— _B7___ 五、發明說明（36) 如上述，式（1)所示化合物、式（π)所示化合物、其鹽以及本發明之細胞自滅謗發性物質，由於其種種之生理機能，爲醫藥、食品、飲料等廣大範圍中極爲有用之化合物。又3,6-脱水半乳糖及/或在還原末端含有3，6_脱水半乳糖疋原料，在食品或飲料之製造過程中，藉由在超過pH 7之鹼性條件下處理而生成，人工合成之式（1)所示化合物及/ 或本發明細胞自滅謗發性物質之使用也被包含在本發明之中。再者，式（I)所示化合物與含有SH基之化合物（例如含有 SH基之胺基酸或其衍生物諸如半胱胺酸，含有半胱胺酸之胺基酸衍生物諸如榖胱苷肽）之反應物也在食品、飲料中生成’邊人工合成之式（II)化合物之使用也被包含在本發明之中。以下，列舉實例以進一步具體地説明本發明，但本發明並不被此等實例之範圍所限定。實例1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 L -甘油-1，5 -環氧基-1 α /?，6 -二羥基-順式-己_ 3 -晞_ 2 _ 明（DGE)及D-甘油基_1，5_環氧基-1 α ，6_二羥基_順式_ 己-3 -烯· 2 -酮（欠_ DGE)之調製 (1)將市售之瓊脂（Agar Noble、狄夫可（DIFCO)公司製 )2.5公克懸浮於50毫升之01NHC1中，在100。(：加熱13分鐘以溶解。冷卻至室溫並以NaOH調整至pH中性附近後，用柯士摩奈斯過濾器過濾，藉以下之順向HPLC分離。管柱：TSK凝膠醯胺_8〇(21.5毫米X 300毫米，東層公司本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297 -39 - 1244484 A7 B7 五、發明說明（37) 製）媒A : 9 0 %乙腈水溶液溶媒B : 5 0 %乙腈水溶液流速·· 5毫升/分鐘溶出：從溶媒A至溶媒B之線性濃度梯度（溶析80分鐘）— 溶媒B (溶析2 0分鐘）檢出：測定於195 nm之吸光度試料用量：2毫升分離取得保持時間爲66.7分鐘、78.5分鐘及85.5分鐘之尖峰溶出份及進行質量分析，此等物質各爲瓊脂二糖、瓊脂四糖及瓊脂六糖。由上述HPLC反覆分離8次，再於減壓下乾燥固化，得到122毫克之瓊脂二糖、111亳克之瓊脂四糖及55毫克之瓊脂六糖。 (2 )在實例1 _ ( 1 )所得到瓊脂二糖之i〇〇mM水溶液（試料 ①）600微升中，加入in之NaOH 12微升並調整至pH 11.5 , 在37°C保持5分鐘。其次將in之HC1 12微升加入，調整至 pH 5附近（試料②），再在其中之5〇微升中，加入in之HC1 1微升，進一步調整至pH 2附近（試料③）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製試料①〜③之細胞自減謗發活性，係以以下之方法測定其癌細胞增殖抑制活性。其結果顯示，各個試料具有大致相等之癌細胞增殖抑制活性。將試料①〜③各個過濾滅菌後，以滅菌水適宜地稀釋，並將其以每1 0微升分別加入9 6凹穴之顯微滴定平皿中。在其中加入含有5000個HL_60細胞（ATCC CCL-240)，於5 6°C處 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x 297公釐） 1244484 A7 B7 五、發明說明（38) 理3 0分鐘且含有i 〇 %牛胎兒血清（吉伯可公司製）之RPMI 1640培養基（日水公司製）9〇微升，在5%二氧化碳存在下，在3 7°C培養48小時。藉光學顯微鏡觀察細胞之形態後，加入5毫克/毫升之3_(4,5_二甲基噻唑-2-基）_2,5-二苯基四吐鑕溴化物（錫古瑪公司製）之磷酸緩衝食鹽水溶液1〇微升 ’繼續培養4小時，加入含有〇·〇4Ν HC1之2_丙醇100微升並充分攪拌後，在590 nm處測定吸光度做爲細胞增殖度。 (3)將實例1-(2)所記載之試料①〜③點在矽凝膠片 60F254(美而克公司製）上，使用乙醇：^丁醇：水=5 : 5 : 1爲展開丨谷媒展開後’以5 -甲基間苯二驗·硫酸試藥嘴霧檢驗。其結果，在試料②及試料③中，觀察不到瓊脂二糖之點，卻可觀察到數個新的點。試料①及試料②各10微升藉下述之順向HPLC分離。管柱：帕耳帕克S型（4· 6 X 250毫米，寶酒造公司製）移動相A : 9 0 %乙腈水溶液 B : 5 0 %乙腈水溶液流速：1毫升/分鐘溶出··移動相A(10分鐘從移動相八至移動相b之線性濃度梯度（溶析4 0分鐘）-> 移動相B (溶析1 〇分鐘）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

檢出：測定於195 nm之吸光度管柱溫度：40°C 其結果’在試料①能見到之瓊脂二糖之尖净，在試料② 中見不到，但可見到多數個新尖峰。分別取出試料②之各個尖峰，於減壓下乾燥固化後在水中溶解，藉由上述方法本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297 -41 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 ____ B7 --—-- —~^ 五、發明說明（39) 測定各溶出份之癌細胞增殖抑制活性。其結果發現在保持時間爲4.05分鐘〜4.16分鐘之溶出份存在活性。以上之結果被示於圖1。亦即圖1爲顯示試料②之順向 HPLC之層析圖，圖1中之橫軸爲保持時間（分鐘），縱軸爲析光度。 (4 )將實例1 - ( 1 )所調製之瓊脂四糖、瓊脂六糖，及藉由 X-角叉菜膠之0.1N鹽酸分解物調製之角叉菜二糖，依據實例1-(2)所記載之方法，調製鹼處理物，並依據實例i (2 )所記載之方法，測定其癌細胞增殖抑制活性。結果確認各個驗處理物具癌細胞增殖抑制活性。再者’以下面所述之方法調製角叉菜二糖。知冗-角叉菜一糖（西格瑪公司（Sigma)製，C - 1263) 2 · 5公克懸浮在50毫升之〇·ιν HC1中，在loot加熱16分鐘溶解。冷卻至室溫並以NaOH中和至ρ η中性附近後，用柯士摩奈斯過濾器過濾，藉實例1-(3)所記載之順向Hplc分離，收集溶出時間爲27.8分鐘之；c -角叉菜二糖並於減壓下乾燥固化，以調製；t：-角叉菜二糖。 (5)將市售之瓊脂（Agar Noble)2· 5公克懸浮在50毫升之〇 · 1 N HC1中’在100 C加熱1 3分鐘溶解。冷卻至室溫並以 NaOH調整至pH 12，繼而進行中和處理。令中和處理物進行實例1-(3)記載之順向HPlc，分取各個尖峰，於減壓下乾燥固化後在水中溶解，藉由上述方法測定各溶出份之癌細胞增殖抑制活性。確認保持時間爲4 〇5 分鐘〜4.16分鐘溶出份具癌細胞增殖抑制活性。再者，確, ------------«裝·丨- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} a叮· 線· -42- 1244484

形成細胞自減小體。八里刀離取得保持時間爲4.05分鐘〜4.16分鐘之溶出份以製作構造解析用試料。接著’㈣其進行高速原子衝擊質量分析（FAB-MS)、DX· 302質量分析（日本電子公司製）。再者，將試料在重二甲基亞颯中岭解，藉核磁共振法解析其構造。其結果如以下所示。再者保持時間爲4.05分鐘〜4.16分鐘之溶出份之質譜圖如圖2所不’保持時間爲《μ分鐘〜分鐘之溶出份之士- 光譜圖如圖3户斤#。圖2中户斤示橫轴爲_，縱軸爲相對強度（％)。又圖3中所示橫軸爲化學移位値，縱軸爲信號強度。 FAB-MS : m/z 145[M + H] + 將試料在二甲基亞砜中溶解，用甘油做爲基質進行測定。 ^-NMR ; δ3.50 (1H，m，6·Η)，3·59 (1H，m，6-Η)，4·52 (1H，m，5_H)，4.95 (1Η，d，J=5.〇Hz，1·Η)，5·〇2 (1Η，t，J=6.〇Hz，6-〇Η®Η)，6·〇5 (1Η, dd，J-2.5，10·5Ηζ，3-H)，7.20 (1H，dd，J=1.5，l〇.5Hz，4-H)，7·35 (1H? d9 J=5.0Hz? 1-OH0H) 其中，各値係以重二甲基亞颯殘留質子之化學位移値爲 2.49 ppm而表示。再者，iH-NMR中信號所屬之編號，一律如下列式中所編。 -43 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝--------訂---------線I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 Α7 Β7 五、發明說明（

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製由以上可發現’保持時間爲4 05分鐘〜416分鐘之溶出份顯然爲L-甘油-1;5_環氧基二羥基_順式_己_3_埽 _ 2 _酮（以下簡稱爲DGE)。同樣地，依照上述實例進行％ _角叉菜二糖之鹼處理，其之鹼處理後，依照上述實例，將爲細胞自滅謗發活性物質之D_甘油-環氧基q 0，6_二羥基_順式_己-3_烯_2_ 酮（以下稱爲％ -DGE)加以精製。 (6)將瓊脂粉末（納卡來公司製）45公克懸浮於4〇〇毫升之瘵餘^水中，繼而加入i 1N HC1 4」毫升，再以蒸餾水加滿至 450毫升。將此酸性懸浮液在9〇。〇加熱35分鐘。其後，將此酸性加熱物用10NNa〇H中和，繼而添加1NNa〇H27毫升，在鹼性、37°C下加熱15分鐘溶解。將此鹼性加熱物用1N HC1中和後，蒸發濃縮至15〇毫升。將此濃縮液以等量之醋酸乙醋進行10次萃取，將此10次之醋酸乙酯層合併，蒸發濃縮至2毫升後，溶解在20毫升之氯仿：甲醇=9 : 。將此溶液以管柱容量：250毫升，流壓：〇·2公斤力/平方公分，移動相溶媒：氯仿：甲醇=9 : 1，溶出份分容量：8毫升之條件，以矽凝膠管柱層析法分離。其後將各溶出份之一 -44- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇χ 297公釐） 1244484 Α7 Β7 五、發明說明（42) 小部份使用薄層層析法（展開溶媒：氯仿：甲醇=9 : 1 )分析，含有Rf値僅在0.25附近之點之第52〜78溶出份爲dGe 部分，將其合併，蒸發濃縮至2毫升。再度將此濃縮液以上述方法相同之方法進行矽凝膠管柱層析，將爲DGE部分之第6 4〜9 6溶出份予以合併，蒸發濃縮後，在8毫升之蒸餾水中溶解。將此D GE水溶液凍結乾燥，得到樣品113毫克。實例2細胞自滅謗發試驗 (1)在經56C、30分鐘處理且含有牛胎兒血清（jrh 公司製）之RPM11640培養基（BIOWHITTAKER公司製）中，於 37 C培養HL-60細胞，將此等細胞懸浮於RpMI 164〇培養基中，並使其濃度爲2.5xl〇5細胞/4.5毫升。在該懸浮液4.5毫升中，添加125 "Μ、250"Μ、500"Μ、 1 mM、2 mM 或 4 mM 之 DGE 各 500 微升，於 37。(：及 5% C02 存在下培養2 4小時。將培養細胞在光學顯微鏡下觀察，確認在最終濃度爲5 〇 "Μ以上之DGE添加培養細胞中出現核凝縮，細胞縮小及形成細胞自滅小體。又，在做爲對照之添加生理食鹽水5〇〇微升之培養細胞中沒有發現此等現象。

接著，使用以與上述同樣之方法培養2 4小時及4 8小時之細胞，按照細胞工程學別册實驗方法系列細胞自滅實驗方法（秀潤公司）第129〜130頁記載之方法，用FACScan進行細胞自滅之細胞之測定，以及依照伊歐操作手册UP系列之最新細胞自滅實驗法（羊土公司）第6 1〜6 3頁記載之方法進行 DNA之片段化之解析。結果，在最終濃度50 # Μ以上之DGE -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）請先閱讀背面之注意事項頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 經濟部智慧財產局消費合作社印製 A7 ---------B7______ 五、發明說明（43) 添加培養細胞中確認有細胞自滅之細胞，在5 〇及1〇〇 # Μ 之DGE添加培養細胞中確認有DNA之片段化。又，在做爲對照之添加生理食鹽水500微升之培養細胞中沒有發現到此等現象。 (2)將以與實例2-(1)同樣之方法培養24小時之細胞取樣 ’用0.4 %錐蟲藍染色後，在光學顯微鏡下觀察，以測定未被染色之活細胞及被染成藍色之死細胞之細胞數，而求得使殘活率爲5 0 %之DGE之濃度[殘活率5 〇 ( # Μ)]。結果，殘活率5 0爲8 1 · 7 " Μ]。如上所示，DGE藉著細胞自滅謗發作用’顯示癌細胞增殖抑制活性。又，％ _dge亦顯示同樣之活性。實例3過氧化脂質自由基產生抑制試驗將金育色葡萄球菌3A(類型培養物之國家收集所，NCTC 8319)接種於5毫升之腦心浸液培養基[狄夫可（Difc〇)公司製，0〇37-17·8]，並於37°C培養一夜。藉離心收集菌體，用磷酸緩衝食鹽水洗淨3次後，懸浮於磷酸緩衝食鹽水中並使其濃度爲1 X 1 0 7克隆（clone)形成單位/毫升。將1〇〇微升之上述菌懸浮液，100微升之1〇、100 mM之DGbk溶液，1〇〇微升之1毫克/毫升變性血紅素水溶液[西格瑪公司製， M9250]及600微升之磷酸緩衝食鹽水與1〇〇微升之5〇第三丁基氫過氧化物（片山化學公司製，〇3_ 499〇)混合，並於3 7 °C反應3 0分鐘。添加1毫升之2 XNMp培養基[將8公克之養分培養液（狄夫可公司製，〇〇03_01_6)，5公香乏疋占蝻, 狄夫可公司製，嶋17_3),5公克之觸，10/克白之腺甘( 請先閱讀背面之注意事項

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1244484 鬥 A7 B7 五、發明說明（44) 露醇（拿卡來泰斯克公司製，213-03)及0.035公克之酚紅（拿卡來泰斯克公司製，268-07)溶解於蒸餾水成爲500毫升，用NaOH調整至pH 7.4後過濾滅菌而得者]使反應停止，將以NMP培養基（將2 X NMP培養基用滅菌水稀釋2倍）3倍12 段稀釋所得者各160微升加至9 6凹穴顯微滴定平m之凹穴中，並於3 7 °C培養一夜。培養基之顏色用肉眼觀察，菌生長發育而培養基從紅色變爲黃色之凹穴被見到之試料具有過氧化脂質自由基產生抑制活性。將其結果列於表1中。在表1中，” + "顯示菌生長發育之凹穴被見到之試料，” -π顯示菌生長發育之凹穴未被見到之試料。又，表最上一列所示濃度爲第三-丁基氫過氧化物及菌體於37°C反應30分鐘之反應液中DGE之濃度。表1 DGE 1 mM 1 0 mM 菌之生長發育麵 + 以上結果顯示DGE有過氧化脂質自由基產生抑制活性。又，；^ -DGE及後來出現之DGE-GSH亦顯示同樣活性。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實例4 NO產生抑制試驗 (1)將RAW 264.7細胞（ATCC TIB 71)懸浮於含有10%牛胎兒血清[吉柏可（Gibco)公司製]、不含酚紅、含2 mM L -穀胺醯胺（東方生命科技公司製，25030- 149)之經戴爾拜克 (Delbeco)改良之伊格氏（Eagle)培養基（溫塔克生物公司製， -47- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1244484 A7 B7 五、發明說明（45) 1 2_917F)中，並使其濃度爲3 X 1 05細胞/毫升，將其以500 微升之量加至4 8凹穴顯微滴定平皿之各凹穴中，並於5 %二氧化碳存在下，於37 °C培養12小時。在各凹穴中添加10微升之25微克/毫升脂多糖（LPS，西格瑪公司製，L_2012)， 500 U/毫升之干擾素r (inf- r，科斯摩生物公司販售， GZM-MG-IFN)水溶液以及1〇微升之250及500# M DGE水溶液並再培養1 2小時後，測定NO在培養基中被氧化所生成之NO/之濃度。又，設定未添加LPS及INF- r之區域及未添加DGE之區域，以做爲對照。上述培養後，在100微升之培養基中添加100微升之4 %油脂試藥（西格瑪公司製，G4410)，放置於室溫1 5分鐘後，測定在490 nm之吸光度。從用溶解於上述培養基之已知濃度之NaN02製作之檢量線計算培養基中之N(V濃度。對全部3 組進行測定。結果，DGE濃度依存性地抑制LPS及INF- r所謗導之NO 產生。其結果被示於圖4中。亦即，圖4顯示添加DGE且於各培養條件下培養時，培養基中NO,濃度之圖。在圖4中，橫軸表示培養條件，縱軸表示N02-濃度（"M)。又，在與上述同樣之培養條件下，從培養4，6及8小時之RAW264.7細胞中調製RNA，藉RT-PCR法調查該RNA所含之編碼iNOS[可謗導之NO合成酶，Biochem· Biophys. Res. (：〇1111111111.第215卷，第 148- 153 頁（1995)]之1111^八量。結果在未添加DGE水溶液之對照系列中發現來自iNOS mRNA之片段增幅，而在添加DGE水溶液者中未發現片段增幅。此等 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 1244484 _B7 _ 五、發明說明（46) 結果暗示DGE造成之NO產生抑制係經由iNOS之轉錄抑制而引起。 (2 )將RAW 264. 7細胞懸浮於含有1 0 %牛胎兒血清、不含酚紅、含2 mM L -穀胺醯胺之經戴爾拜克改良之伊格氏培養基中，並使其濃度爲3X105細胞/毫升，將其以500微升之量加至4 8凹穴顯微滴定平皿之各凹穴中，並於5 %二氧化碳存在下，於37°C培養6小時。將DGE溶解於水並使其濃度爲0.5 mM，經過濾滅菌後，將所得水溶液添加至各凹穴中，每凹穴各1 0微升，然後培養0.5小時或5小時。之後，在各凹穴中添加含5微克/毫升LPS及2000U/毫升INF- r之水溶液1 0微升，培養1 2小時後，測定NO在培養基中被氧化所生成之NO,濃度。又，設定未添加LPS及IFN- r之區域及未添加DGE之區域，以做爲對照。上述培養後，在100微升之培養上清液中添加100微升之 4 %油脂試藥，放置於室溫1 5分鐘後，測定在490 nm之吸光度。從用溶解於上述培養基之已知濃度之NaN02製作之檢量線計算培養基中之no2_濃度。對全部3組進行測定。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製結果發現與在LPS及IFN_ r添加前於DGE存在下培養0.5 小時之區域相比，培養5小時之區域具較強之NO產生抑制作用。其結果被示於圖5中。亦即，圖5顯示在前培養中添加 DGE之場合，於各培養條件下培養時，培養基中NO,濃度之圖。在圖5中，橫軸表示培養條件，縱軸表示N02_濃度（ -49- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484 A7 五、發明說明（47 "M) 〇從上述可知，DGE顯示NO產生抑制作用。又，％ _〇〇£亦顯示同樣的活性。實例5 抗菌試驗 DGE對於大腸样菌W311〇(菌1)、傷寒沙門氏桿菌lt2(菌 2)、枯草桿»^0302〗（菌3)、綠膿假單胞菌IF〇3〇8〇(菌= 及突變鏈球菌GS5(菌5)之抗菌作用以下述之方法檢討。菌1至4在L-培養基中培養一夜，測定其之培養液之濁度並在感受性細菌培養基中稀釋成菌數爲約2 x i〇5細胞微升（日水公司製）。另一方面，菌5在腦心浸液培養基中培養一夜，測定其之培養液之濁度並在腦心浸液培養基中稀釋成菌數爲約2 X 1〇5細胞/180微升。將此等菌稀釋液以約 180微升之量裝入9 6凹穴之顯微滴定平皿之各凹穴中。另一方面，將細菌稀釋液再稀釋之後，塗佈於L _培養液或腦心浸液培養基之平皿中，於3 7χ：培養一夜計測克隆數，以測定開始時之活菌數。將14.4毫克/毫升之DGE各稀釋2倍以製作一系列稀釋液，在注入細菌稀釋液之各凹穴中各注入2 〇微升，並於3 71靜置培養2 4小時。培養後，測定各培養液之濁度，濁度比添經濟部智慧財產局員工消費合作社印製加生理食鹽水之對照組者低之凹穴之試料濃度被當做最小增殖抑制濃度。再者’將未見到細菌生長發育之凹穴之培養液塗佈於平皿上’於3 7 C培養一夜後，計測克隆數以及測定活菌數。從添加試料起靜置培養2 4小時之培養液之活菌數比預先測 -50-

本紙張尺㈣时關家標準（CNS)A4規格⑽X 297公釐I A7 1244484 _B7 _ 五、發明說明（48) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 定之開始時活菌數低之培養液之試料濃度被當做最小殺菌濃度。對於菌1至菌5，DGE之最小增殖抑制濃度及最小殺菌濃度如表2所示。表2 最小增殖濃度 (微克/毫升）最小殺菌濃度 (微克/毫升）菌1 360 720 菌2 360 720 菌3 360 720 菌4 360 720 菌5 90 180 從上述可知，DGE顯示抗菌作用。又，％ - DGE及後來出現之DGE- GSH亦顯示同樣的活性。實例6 抗突變原性試驗經濟部智慧財產局員工消費合作社印製遵循藉著用卢-半乳糖甞酶之活性判定突變強度之蛾試驗而檢出環境突變原之方法[Mutation research，第147卷，第 219頁（ 1985)]進行抗突變原性試驗。亦即，在50微升之調製成各濃度（1.0、5.0、10、15 mM)之DGE中，添加25微升之突變原物質[絲裂黴素C(DNA交聯劑）1 0微克/毫升、 4 -硝基喹啉-1 -氧化物（NQO DNA甲基化劑）7微克/毫升]。在該混合液中，添加事先在TGA培養基中培養至OD600爲 0.12之傷寒沙門氏桿菌TA1535/pSK1002，並使其最終容量爲 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1244484 at B7 五、發明説明（^) 49 1 . 5毫升，然後於3 7 °c進行2小時之振搖培養。使用該培養液200微升，依照米勒之方法[分子遣傳之實驗（Experiments in molecular genetics)，第 352頁（ 1972)]測定冷-半乳糖苷酶活性。將其結果示於表3。表3 β - 半乳糖替酶活性 DGE最終濃度(mM) 0 0.03 0.17 0.33 0.5 絲裂黴素C 611 590 570 451 383 NQO 1437 1376 1212 1038 926 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製如該表明白所示，DGE在最終濃度為〇 · 5 mM下，對於為 DNA交聯劑之絲裂黴素C顯示3 7 %之抗突變原活性，對於為甲基化劑之NQO顯示3 6 %之抗突變原活性。又，/c - DGE 及後來出現之DGE- GSH亦顯示同樣的活性。實例7 癌症抑制活性試驗 (1 )將壤脂粉末（和光純藥公司製）加入5 0 mM捧樣酸溶液中，並使其終濃度為3%，然後進行95 °C、160分鐘之加熱處理，用時則進行pH 12之鹼處理，中和後做為癌抑制試驗用之被檢液。從曰本查爾斯河公司購入4週齡之雄性裸鼠（SPF/VAFB alb/c AnNCrj-nu)，並進行一星期之預備飼育。將人類大腸癌細胞株HCT116 (ATCC CCL-247)以1 · 5 X 1 06細胞/小鼠之量皮下移植入此等鼠中。從移植大腸癌細胞株第二星期起，每週5日將上述癌抑制 -52-

準檩家國國中用適尺張紙尽釐公

1244484 五、發明說明（50) 試驗用被檢液於即將使用前調整至pH 6 5，以做爲飲料水讓小鼠自由攝取。每隻小鼠每日平均攝取3 5毫升。又，用東方酵母公司製之MF做爲飼育用餌，讓小鼠自由攝取。開始投與被檢液後第四星期，將被檢液投與群之各小鼠 <固形癌摘出，並將其之重量與攝取通常飲料水之對照群之固形癌重量相比。又，本試驗各群用1〇隻進行。結果，在癌抑制試驗用被檢液之經口投與群中發現有意義之癌增殖抑制作用。 (2)使用18隻之5週齡雌性ddY系小鼠（體重約25公克），腹腔内投與艾里西癌（ΐ·2χι〇ό細胞/小鼠），觀察:〇日: 計算平均生存日數、延命率及30日期間存活數。設定對照群，DGE 2毫克/公斤投與群&DGE 2〇毫克/公斤投與群三群，每群6隻。從癌投與之翌日起，從腹腔内投與〇〇£ *日。結果被示於表4中。亦即，相對於對照群之平均生存日數爲14.3曰，在DGE 2毫克/公斤及20毫克/公斤投與群中， 3 0日期間之存活例分別出現1例及3例，平均生存日數八別爲23·7日及28.0日，延命率分別爲以上及以上，此顯示有顯著的延命效果。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂.· --線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製適度尺張紙本釐公 7 29 X 1210 格規 A4 S) N (C 準標家國國 -53- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 . A7 B7 五、發明說明（51) 表4 平均生存曰數（曰）延命率(％) 30日期間存活數對照群 14.3 100 0 DGE 2毫克/公斤 23.7 > 141 1 投與群 DGE 20毫克/公斤 28.0 > 195 3 投與群從以上可知， DGE顯示癌抑制活性。又，冗-DGE及後來出現之DGE- GSH亦顯示同樣的活性。實例8 黑色素產生抑制試驗將懸浮於含有1 0%牛胎兒血清之RPM11640培養基之鼠黑色素細胞B16BL6，以5 X 1 04細胞/凹穴/2毫升培養基之量，分別注入6凹穴平m中。在第二日，添加100微升之DGE 溶液（2毫克/毫升〜0.2毫克/毫升），於第7日交換培養基，同時添加100微升之DGE溶液（2毫克/毫升〜0.2毫克/毫升）。於第8日回收細胞，分解處理DNA、RNA及蛋白質後，測定400 nm之吸光度，然後檢定黑色素產生抑制作用。亦即，吸引除去培養基後，添加溶解於20 mM EDTA之 0.25%胰蛋白酶，每凹穴0 · 3毫升，然後於3 7 °C培育1 0分鐘。其次，添加2毫升之新培養基，並將細胞懸浮及回收於試驗管中。接著，離心除去培養基後，將細胞懸浮於2毫升之 PBS中，並再度離心分離。除去上清液後，將3 0微升含5 mM氯化镇之50 mM醋酸鋼緩衝液（pH 5.0)及1微升之 -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝--------訂---------線L 1244484 A7 B7 五、發明說明（52) 70000U/毫升DNasel (寶酒製造公司製）加至細胞中並充分混合後，於3 7 °C培育2小時，而分解DNA。然後加入i微升之 1 〇毫克/毫升核酸酶A(西格瑪公司製），於5 〇培育1小時而分解RNA。最後添加含1〇〇微克/毫升蛋白酶κ(西格瑪公司製）、0 · 1 %三硝基甲苯X及10 mM EDTA之100 mM Tris-HC1緩衝液（pH 7·8)，並使細胞數爲2 χ ι〇6之液體總量爲2〇〇微升，於3 7 °C培育1 6小時後，測定400 nm之吸光度。結果發現DGE具黑色素產生抑制活性，而確認其有美白效果。又，冗-DGE及後來出現之DGE-GSH亦顯示同樣的活性。實例9 α ·葡萄糖苷酶抑制試驗 (1)令來自酵母之α -葡萄糖苷酶與爲葡萄糖甞酶顯色文質之對-硝基苯基_ a _ D _吡喃型葡萄糖甞酶作用，藉水解及用比色法定量游離之4 -硝基酚，而測定DGE之α _葡萄糖嘗酶抑制活性。亦即，將10微升之含檢體溶液[溶解於1〇 mM磷酸緩衝溶液（ΡΗ 7.2，3 7t)]混合入1〇微升之“-葡萄糖甞酶溶液[40 mU/毫升，來自啤酒酵母菌，西格瑪公司製 ’溶解於10 mM磷酸缓衝溶液（pH 7.2，3 7X：)]後，添加1.5 笔克/毫升之受質溶液[西格瑪公司製，溶解於mM磷酸緩衝溶液（pH 7.2，3 7°C)] 8 0微升而開始反應。於3 反應 4〇分鐘後，測定在41〇 nm(島津uv2200)之吸光度。其結果被不於表5中。又，以未添加檢體者當作ι〇〇%算出該場合之殘存活性。 -55- 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線g 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 a7 B7 五、發明說明（53) 表5 DGE添加量吸光度殘存活性 (μΜ) (OD 410 nm) (%) 0 0.444 100 5 0.433 98 50 0.401 90 500 0.221 50 1000 0.114 26 5000 0.083 19 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製從上述結果可知，DGE顯示^ -葡萄糖甞酶抑制活性。DGE 使α -葡萄糖甞酶活性抑制50%之濃度（IC5〇)爲500a Μ。 (2)使用從大鼠小腸黏膜得到之α -葡萄糖甞酶粗酵素標準品[藉 Arne Dahlqvist，Anal. Biochem，7，18-25 (1964)之方法調製]，按下述方法進行DGE之α -葡萄糖甞酶抑制活性測定。酵素反應係在用10 mM磷酸緩衝溶液（ρ Η 7.0)適宜稀釋之被驗物質溶液1 0微升中，添加蔗糖、麥芽糖、海藻糖及可溶性澱粉之相同緩衝溶液8 0微升以做爲受質，並使其最終濃度爲100 mM (對可溶性澱粉而言爲0 · 5 % )，添加從1 0微升之大鼠小腸調製之粗酵素液，並於37°C反應20分鐘。酵素反應量，以上述反應液所含之葡萄糖量計，藉添加3 亳升之葡萄糖測定用試藥（和光純藥公司製），於3 7 °C反應 5分鐘後測定505 nm之吸光度而求得。 -56- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484 A/ B7 五、發明說明（54 藉上述方法，使用4種不同之DGE濃度，測定DGE對各受質藉α -葡萄糖苷酶分解之抑制活性。α -葡萄糖苷酶抑制活性，以將未添加DGE之對照組當做100%時之相對活性 (%)來表示。結果被示於表6中。表6 DGE (mM) 0.2 0.5 1.0 2.0 蔗糖 91 92 83 71 麥芽糖 96 97 100 96 海藻糖 98 96 99 100 可溶性澱粉 100 95 91 92 DGE對蔗糖之抑制物質常數（Ki)，藉狄克森圖求得時，爲 6.0 mM。再者，DGE顯示π -葡萄糖甞酶抑制活性在以蔗糖做爲受質之時比以麥芽糖等做爲受質之時強。又，％ -DGE及後來出現之DGE- GSH亦顯示同樣的π -葡萄糖甞酶抑制活性。實例1 0 抗風濕症試驗

將DSEK細胞（從人類慢性風濕症患者之滑膜建立之纖維母細胞株，做爲試管内之風濕症模型，由埼玉醫科大學综合醫療中心第二内科保有），在含1 〇%FBS(生物溫塔克公司製）之Iscov-MEM培養基（IMDM，吉柏可BRL公司製）中，於 5 % C Ο 2存在下，於3 7 °C培養至細胞在培養器中達到飽和，用胰蛋白酶-EDTA溶液（生物溫塔克公司製）將細胞以3 X 57- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）請先閱讀背面之注意事項頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 - --—-_—__B7___— _ 五、發明說明（55) 1 〇 4細胞/毫升之量懸浮於上述培養基中，在9 6凹穴顯微滴足平皿（法爾孔（FALCON)公司製）之各凹穴中分別注入200 微升。培養5〜7日後，在細胞約達8 0 %飽和時交換培養基 ’加入含有 25、50、75、1〇〇、200 或 400" Μ 之 DGE 之 200 微升上述培養基。在經過24小時及72小時之時，加入1 〇微升之預混物 1灯-1(寶酒製造公司製，]^1^ 400)並於37。(：反應3.5小時，將在450 nm之吸光度（Α450)與在650 nm之吸光度（Α650) 之差値當做細胞增殖度。其結果被示於表7。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表7 DGE濃度（μΜ) 培養時間 2 4小時 7 2小時細胞增殖度（α450_ 650) 0 3.98 3.94 25 3.86 3.33 50 3.24 3.25 100 2.88 2.05 200 1.26 0.48 400 0.71 0.35 又，藉著A#5。·㈣之數據求得之半數細胞增殖抑制濃度 (IC5。）在24小時爲207" Μ，在72小時爲112" Μ。訂---------線- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -58- 1244484 A7 B7 五、發明說明（56) 以上，在試管内之風濕症模型-DSEK細胞中添加DGE之場合’與添加PBS之對照區相比，添加各化合物之區域中風濕細胞之增殖被較強地抑制。又，長時間觀察發現此等化合物不僅繼續發揮增殖抑制活性，且該活性有隨時間增強之傾向。以上結果顯示DGE具有強抗風濕活性，可以期待被開發做爲慢性風濕症之有用治療藥及健康食品。又，％ -〇(}£及後來出現之DGE- GSH顯示同樣的活性。再者’在DSEK細胞培養中，在經過24小時及72小時時，回收150微升/凹穴之培養上清液，DGE對於來自該細胞之細胞激素（人類TGF- /?、人類FGF_ /?、人類IL_ 1 “及人類il _ 10)之產生之影響（表現之影響），分別用對各細胞激素特異之ELISA-套組[人類FGF-卢及人類il-10 ,因特金 (INTERGEN)公司製；人類IL _ 1 “及人類TGF- 0，普羅美佳（Promega)公司製]測定。結果，DGE顯示人類a-〗Q之產生抑制作用，人類κ-ΐ 〇之產生增強作用，人類FGF-卢之產生抑制作用以及人類TGF-卢之產生增強作用。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實例1 1 前列腺素E2產生抑制試驗將RAW 264. 7細胞懸浮於含有〗0%牛胎兒血清之經戴爾拜克改良之伊格氏培養基中，並使其濃度爲3 χ ι〇5細胞/ 笔升，將其以各5〇〇微升之量加至4 8凹穴顯微滴定平皿之凹穴中，並於5%二氧化碳存在下，於3 7χ：培養6小時。將 DGE溶解於水並使其濃度爲〇·5 mM，經過濾滅菌後，將所 59 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 r____B7_ 五、發明說明（57 ) 得水落液添加至各凹穴中，每凹穴各i 〇微升，然後培養〇 · 5小時或5小時。之後，在各凹穴中添加5 〇微克/毫升之 LPS 1 0微升，培養1 2小時後，測定前列腺素E 2之量。又，汉足未添加LPS之區域及未添加DGE之區域，以做爲對照。上述培養後，用前列腺素E2 ELISA套組（新基因公司製，產品編碼：404110)測定培養上清液中之前列腺素1之量。其結果被示於圖6中。亦即，圖6顯示在前培養中添加 D GE之％合，於各培養條件下培養時之培養基中前列腺素 E2濃度之圖。在圖6中，橫軸表示培養條件，縱軸表示前列腺素E2濃度（ng/ml)。結果，DGE會抑制由LPS謗導之前列腺素1之產生。又發現在LPS添加前’於DGE存在下培養5小時之區域比培養〇 5 小時之區域具有更強之抑制前列腺素1產生之作用。實例1 2 熱休克蛋白質之謗導試驗將包含2 X 1 05細胞/毫升之hl_60細胞之含10%牛胎兒血清之RPMI 1640培養基5毫升注入6凹穴平皿之各凹穴中，於37°C及5%C〇2存在下培養24小時後，添加DGE並使其最終i辰度刀別爲0、6.25、12.5、2 5、5 0、1〇〇 // ]y[，然後再繼續培養6小時。培養終了後，计測細胞數，藉離心分離回收細胞，用PBs 洗淨，以及調製DGE處理細胞。再者，進行4 5 °C、1 〇分鐘之熱處理後，同樣地調製培養細胞。使用此等經處理細胞，依照分子選殖（冷泉港實驗室出版社（ 1989))記載之方法進行SDS_PAGE。將經處理細胞懸浮於 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂_ ·

A7 1244484 _B7__ 五、發明說明（58) SDS-PAGE樣品緩衝液中並使其濃度爲2.5 X 106細胞/毫升，將該細胞懸浮液於100°C處理1 0分鐘後，在2個SDS- PAGE 凝膠（5 %積層凝膠，1 0 %分離凝膠）中各加入5微升，並進行電泳。其中一凝膠予以科麥西（Coomassie)染色，另一凝膠，吸潰至聚（二氟亞乙烯）移轉膜[ImmobilonTM :迷你孔公司製，目錄編號：IPVH000- 1 0 ]上。將該膜在Block Ace ( 大日本製藥股份有限公司製，目錄編號：UK_B25)中，於4 °C吸潰一夜。使該經吸潰之膜與會和被熱謗導之70 kDa熱休克蛋白質反應之單株抗體HSP 72/73 (Ab-Ι)(致癌物質研究產品公司製，目錄編號：HSP01)後，用含0.05% Tween 20之TBS洗淨，然後再用TBS洗淨。接著，使其與過氧化酶複合二次抗體 HRT-兔抗鼠IgG (H + L)[資麥德（ZYMED)實驗室，目錄編號 :6 1 - 6520]反應，然後與先前操作同樣地洗淨。與一次抗體及二次抗體如此反應之膜，然後與化學發光試藥 Renaissance™ (杜邦公司製，目錄編號：NEL· 100)反應，之後感光X -光濾器而確認7 0 kDa之熱休克蛋白質之謗導。結果，確認DGE能謗導7 0 kDa熱休克蛋白質。該謗導之強弱被示於表8中。又，在表8中，” ”表示謗導強度，多個” + "意味謗導強。又，” "意味沒有發現謗導。再者，％ -DGE及後來出現之DGE-GSH亦顯示同樣的熱休克謗導活性。 -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： --線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 1244484 B7_ 五、發明說明（59) ^_ 表8 處理細胞熱休克蛋白質謗導

4 5 °C，1 0分鐘熱處理 Ο V M DGE 6.25" M DGE 12.5// M DGE 25.0// M DGE 50.0// M DGE 100 β M DGE + + + + + + + + + + + + + + (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) r裝實例Ι3 5_L -榖胱苷肽-S-基_2_羥基_3,7_二氧雜二環 [2·2·2]辛_1 _ 醇（DGE-GSH)之調製 (1 )將DGE與還原型榖胱甞肽（GSH :拿卡來泰斯克公司製 )溶解於PBS並使其濃度各爲20 mM，然後讓其於37°C反應一夜。將該反應液1〇〇微升在順向管柱PAL- PAK S型中溶析。層析之條件爲：流速：1毫升/分鐘；用含〇 1 % TFA之 9 0 %乙腈水溶液溶析〇〜1 〇分鐘，及用含〇」％ TFA之9 0 % 乙腈水溶液至含0 · 1 % TFA之5 0 %乙腈水溶液線性梯度溶析 10〜5 0分鐘；於195 nm檢出；以及每1 . 5分鐘收集溶出份。將各溶出份濃縮乾固，再溶解於5 0微升之蒸餾水中，用 HL-60細胞，以與實例1-(2)同樣的方法測定癌細胞增殖抑制活性。結果，在添加3 0〜4 0分鐘附近之溶出份之區域中觀察到細胞自滅小體，與添加水之對照區域相比，於59〇 nm之吸光度低，細胞增殖被抑制。然後將與上述太々，夭同樣訂· ，線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -62- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 !244484 A7

、發明説明（J =方法調製得之活性溶出份5 ο微升在逆向層析管柱（TSK凝膠〇DS_80Ts(5//m)，東層公司製，4 6 x 25〇mm)中溶析。層析之條件為：流速：1毫升/分鐘；用含〇 .丨％ TFA之蒸餾水洛析0〜1 5分鐘，及用含〇丨％ TF A之蒸餾水至含 1 /〇 TFA之5 0 %乙腈水溶液線性梯度溶析1 5〜3 〇分鐘；用各〇 · 1 %TFA之5 0%乙腈水溶液溶析3 〇〜45分鐘，於215 nm 核出，以及每1 . 5分鐘收集溶出份。將各溶出份濃縮乾固，再溶解於50微升之蒸餾水中，用hL_6〇細胞，以與實例^ (2 )同樣的方法測定癌細胞增殖抑制活性。結果，在添加 4〜9分鐘附近之溶出份之區域中觀察到細胞自滅小體，與、、加水之對區域穴相比’於59〇 nm之吸光度低，細胞增殖被抑制，而顯示具細胞自滅謗發活性。於是重覆進行先前之順向層析丨〇次，分離取出該細胞自滅誘發活性溶析份，濃縮乾固後，再溶解於i毫升之蒸餾水並藉著順向層析調製精製之溶析份。接著，將藉順向層析知至]之知製各析份加到先前之逆向層析管柱中，分離取出細胞自滅謗發活性溶析份，並將之濃縮乾固。結果，從2 〇 mM DGE與20 mM穀胱苷肽之反應液i毫升，得到5毫克細胞自滅誘發活性化合物。使用該化合物進行構造決定。 (2)用DX：3〇2質量分析計進行實例13_(1)得到之細胞自滅謗發物質（即DGE與穀胱苷肽之反應物）之質量分析。又，將試料溶解於重水，然後藉核磁共振法（NMR)解析其構造。其結果被示於下文。又’在貫例1 3 - ( 1 )中得到之細胞自滅謗發物質之質譜圖 -63- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4^Τ7ί^97公釐了

1244484 A7 B7 61 五、發明説明（被示於圖7中，光譜圖被示於二、、_ 8 中，瑨圖被示於圖9中。在圖7中，橫轴表示 C - NMR光軸表示相學位移值（ppm) 對強度（％)。又，在圖8及9中，橫軸表示/z，縱軸表示相 ’縱軸表示訊號強度。 FAB-MS : m/z 452 [M + H] + 474[ Μ + N a ] + 544[M + 甘油 + h] + 566[M +甘油+Na] + 使用甘油做為基質。 ^-NMR ： δ1.62(1Η，t，J=13.5 Hz，6-H)、1·96 (1H，dd5 J=4,〇, 13 5Hz，6_ H)、2.07 (2H，m，5’-H)、2·42 (2H，m，4，_H)、2.85 (1H，dd，J=8.5, 13.5Hz，Γ-Η)、2.90 (1H，ddd，J=4.0, 10.5, 13 5Hz，5-H)、3 〇6 (1H，dd，J=5.0，13·5Ηζ，1’·Η)、3.44 (1H，dt5 J=5.0，ι〇·5Ηζ，4-H) 3.52 (1H，t，J-10.5Hz，H-8)、3·66 (1H，dd，1=5.0，i〇 5Hz，H-8) 、3.82 (1H，t，J二6.5Hz，6，-H)、3.88 (2H，S，9，-H)、4.47 (1H，dd, J=5.0, 8.5Hz，2，-H)、4.65 (1H，S，2-H) 1 H-NMR之化學位移值係將HOD之化學位移值當做4.65 ppm來表示。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 13C-NMR : δ26.6 (5，-C)、31.9 (4，-C)、32.7 (Γ-C)、35.6 (6-C)、42.0 (9，-C) 、45.2 (5-C)、53.9 (6’-C)、54.4 (2，-C)、64.7 (8-C)、70.4 (4-C)、 92.1(2-C)、97.2(l-C)、173.4(7’-C)、173.5(8’-C)、173.8(l〇’_ C)、175.4 (3，-C) -64- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1244484 A7 B7五、發明說明（62) 13 C - NMR之化學位移値係將二氧六圜之化學位移値當做 67.4 ppm來表示。又，1Η-NMR及"C-NMR之尖峰之編號如下式所列者。

OH

Tss E9I n I ii KK m ϋ— mmmmmf n 1_1 n. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製從上述可以明白，實例13_(1)所得之細胞自滅性謗發物貝爲5-L -秀又脱月；月太_s·基-2-經基-3,7 -二氧雜二環[2.2 2] 辛-1 -醇（以下簡稱爲DGE· GSH)。實例14 細胞自滅謗發試驗將實例13-(1)所得之DGE_GSHi10毫克/亳升水溶液過濾滅菌，用滅菌水稀釋2倍、4倍、8倍、μ倍、32倍、64 倍、128倍、256倍及512倍。用實例1-(2)記載之方法測定此等稀釋液對於HL-60細胞之增殖抑制活性。結果，在添加DGE- GSH之區域中，觀察到細胞自滅小體，與添加水之對知區域相比’於590 nm之吸光度低，細胞增殖被抑制。該結果同時以GI5〇表示，GI5〇爲50%增殖抑制濃度，其係在 590哋之吸光度爲添加水之對照群之1 /2之濃度。GI5g爲約 -65- 本紙張瓦度適用中國國家標準（cns)A4規格（21〇x 297公釐）訂： -線』經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1244484 A7 B7 五、發明說明（63) 48.7微克/毫升。實例15 NO產生抑制試驗將RAW 264.7細胞懸浮於含有1 0 %牛胎兒血清、不含酚紅、含2 mM 1^_穀胺醯胺之經戴爾拜克改良之伊格氏培養基中，並使其濃度爲3 X 1 0 5細胞/毫升，將其以500微升之量加至4 8凹穴顯微滴定平皿之各凹穴中，並於5 %二氧化竣存在下，於3 7 °C培養1 2小時。在各凹穴中添加1 0微升含5 0 微克/毫升脂多糖及5000 U/毫升干擾素-r之水溶液，以及實例1 3 - ( 1 )調製之DGE- GSH溶解於水（濃度爲1 mM)並經過濾滅菌之水溶液1 0微升，再培養1 6小時後，測定Ν Ο在培養基中被氧化所生成之N02_之濃度。又，設定未添加LPS及 INF- r之區域及未添加DGE- GSH之區域，以做爲對照。上述培養後，在100微升之培養基中添加100微升之4 %油脂試藥（西格瑪公司製，G4410)，放置於室溫1 5分鐘後，測定在490 nm之吸光度。從用溶解於上述培養基之已知濃度之NaN02製作之檢量線計算培養基中之N02_濃度。結果，什麼也未添加之培養基中之N02_濃度爲4.6// Μ，添加LPS及IFN- r而未添加DGE- GSH之對照群之培養液中之 1^0，濃度爲12.1//]^1，相對於此，添加〇〇£-〇811之培養液中之N02_濃度較低，爲9.4 a Μ，，此顯示DGE- GSH會抑制由 LPS及IFNr謗導之NO之產生。實例1 6 前列腺素E 2產生抑制試驗將RAW 264.7細胞懸浮於含有1 0 %牛胎兒血清、不含酚紅、含2 mM L-穀胺醯胺之經戴爾拜克改良之伊格氏培養基中 -66 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -I線· 1244484 A7 ______B7__ 五、發明說明（64) ，並使其;辰度爲3 X 1 〇 5細胞/毫升，將其以各5⑼微升之量加至48凹穴顯微滴定平皿之凹穴中，並於5 %二氧化碳存在下，於37C培養12小時。在各凹穴中添加1〇微升之5〇微克/毫升爿曰夕糖水溶液，以及實例1 3 _ ( 1 )調製之dge- GSH 落解於水（濃度爲i mM)並經過濾滅菌之水溶液1 〇微升，再培養1 6小時後，測定前列腺素I之量。又，設定未添加 LP S之區域及未添加DGE_ GSH之區域，以做爲對照。上述培養後’用前列腺素E 2 ELISA套組（新基因公司製，產品編碼：404110)測定培養上清液中之前列腺素匕之量。結果，什麼也未添加之培養基中之前列腺素農度爲5〇 3 宅微克/愛升，添加LPS而未添加DGE· GSH之對照群之培養液中之前列腺素E2濃度爲63.4毫微克/毫升，相對於此，添加DGE-GSH之培養液中之前列腺素匕濃度較低，爲5〇7毫微克/笔升，此顯示DGE- GSH會抑制由LPS謗導之前列腺素 E 2之產生。實例1 7 淋巴球活性化抑制試驗經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -—線_ ddY鼠（雌，7周齡，體重約25公克）從日本SLC購入，經一星期之預備飼育後，用於實驗，從此等小鼠摘出脾臟，細細磨碎，懸浮於含i 0 %牛胎兒血清（百克隆公司製）之 RPMI 1640培養基中而得到單細胞液。使接著性細胞接著於塑膠器皿而除去，非接著性細胞則做爲脾臟淋巴球使用。將脾臟淋巴球懸浮於含1 〇 %牛胎兒血清之RPMI 164〇培養基中並调整成2 X 1 0 6細胞/毫升，以2〇〇微升/凹穴之量播種於 9 6凹穴顯微滴定平皿中，將各濃度之〇〇£添加於對照群以 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1244484 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明說明（65) 外之各凹穴中，再於全部凹穴中添加5微克之conA(拿卡來泰斯克公司製），然後在37°C，5%二氧化碳培養器中培養 2曰。在培養終了 1曰前，將37kBq之3H-胸苷（第一化學藥品公司製）加至各凹穴中並進行脈衝標記，培養後，將細胞回收於玻璃濾器上並測定放射活性。結果被示於圖1 0中。DGE對於藉有絲分裂原刺激而活性化之淋巴球之增殖顯TF用量依存性之抑制作用，在〇 3微克 /毫升之濃度下大體完全抑制，顯示對淋巴球活性化具抑制作用。如以上記載者’藉著本發明可以提供在做爲細胞自滅謗發劑、癌症抑制劑、活性氧產生抑制劑、過氧化脂質自由基產生抑制劑、一氧化氮產生抑制劑等抗氧化劑、前列腺素合成抑制劑、抗病原微生物劑、鮮度保持劑、抗突變原劑、血糖上升抑制劑、抗高脂血症劑、熱休克蛋白質產生謗導劑、抗病毒劑及“ ·糖甞酶抑制劑之有效成分上有用之式（I)所示化合物、式（II)所示化合物、其鹽以及本發明之細胞自滅謗發性物質。含有此等物質且經稀釋及/或添加而成之食品或飲料可做爲具有細胞自滅謗發作用，抑制癌作用，活性氧產生抑制作用、一氧化氮產生抑制作用等抗氧化作用，前列腺素合成抑制作用’抗病原微生物作用，抗突變原作用，血糖上升抑制作用，抗肥胖作用等，熱休克蛋白質產生謗導作用及抗病毒作用之機能性食品或飲料，對於癌症患者或病毒性疾病患者之病變細胞能謗發細胞自滅，而提供在此等疾 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -1線. -68 - 1244484 A7 五、發明說明（邱）病之預防以及症狀改善上有效之食品或飲料。尤其是大腸癌、胃癌等消化系統癌症之場合，藉著以本發明之上述化合物做爲食品或飲料經口攝取，對於癌症細胞能夠引起細胞自滅，所以本發明之食品或飲料在消化系統癌症之預防及症狀改善上有優異之效#。再纟，藉著其之活性氧產生抑制作用等抗氧化作用，上述食品或飲料在做爲抗氧化壓力用之食品或飲料上效果優異。又，式⑴或式（II)所示化合物可以做爲活性氧產生抑制用之抗氧化用化合物。含有本發明之抗氧化用化合物且經稀釋及/或添加而成之食品或飲料，可以改善活性氧等身^ 内氧化物質引起之疾病之症狀。再者可尽發明<食品或飲料在便秘改善或預防上亦有效果。本發明提供之式⑴所示化合物、式（11)所示化合物及並鹽爲能賦與食品或飲料活性氧產生抑制了新機能性化合物。下用寺抗乳化性4 又’該化合物具有鮮度保持效果，在道或鮮度保持上極爲有用。、生鮮物之味再者’含有該化合物之化粧材料可以。用之化粧材料。文馬吴白用及保頁訂線濕 -69 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐）~

Claims

8 8 8 8 A B c D 124#&4〇9429號專利申請案中文申請專利範圍替換本(94年7月) 申讀專利範圍 1 · 一急再於當要育胞自滅誘發之疾病乏I藥避吾|勿，其含有從式（I)所示化合物、式（11)所示化合物及其鹽類選出之化合物作為有效成分，

0H Η 0 (I) (式中’X及Υ為Η或CH2OH，但是，當X為 CH2OH時，Υ為Η，以及當X為Η時，γ為 CH2OH)； OH

Η (H) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。 2. 一種用於癌症疾病之醫藥組合物，其含有從式（1)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽類選出之化合物作為有效成分， 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱) -------- 1244484 申請專利範園 8 8 8 8 ABCD Y

X -Q Η

OH Η 〇 (ΐ) (式中，X及Υ為Η或CH2OH，但是，當χ為 ch2oh時，Υ4 Η，以及當χ為 CH2OH)； Η時，Y為 OH

Η (Π) 3. (弋中R為從含有SH基之化合物中除去基後*：殘基）。種用於需要抑制活性氧產生之疾病之醫藥組合物，其1 有k式（I)所示化合物、式（π)所示化合物及其鹽類選出二化合物作為有效成分， Υ

X Q Η

OH Η 〇 (I) (式中，X及Υ為Η或CH20H，但是，當X為 58839-940722.DOC -2 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 8 8 8 8 A B c D 1244484 六、申請專利範圍 CH2OH時，Y為 Η，以及當 X為 Η時，Y為 CH2OH)； OH

(Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。一種用於需要抑制一氧化氮產生之疾病之醫藥組合物，其含有從式（I)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽類選出之化合物作為有效成分，

0H (I) (式中，X及Y為Η或CH2OH，但是，當X為 CH2〇H時，Y為 Η，以及當 X為 Η時，Y為 CH2〇H )； -3- 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1244484六、申請專利範園 8 8 8 8 A Β c D

5. (H) ^式中R為從含有SH基之化合物中除去川殘基）。本種t而要抑制前列腺素合成之疾病之醫藥組合物，名含有從式（I)所示化合物、式（π)所示化合物及其鹽類之化合物作為有效成分，

0H Η 0 (I) (式中，X及丫為H*CH2〇H，但是，當χ為 CH2OH時，γ為Η，以及當X為Η時，γ為 CH2OH); OH

Η (Π) 58839-940722.DOC -4 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1244484 A8 B8 C8 申請專利範園 (式中，R為從含有SH基之化合物中除去sh基後之殘基）。 6入種用於需要抑制滑膜細胞增殖之疾病之醫藥組合物，其 έ有從式（I)所示化合物、式（〗〗）所示化合物及其鹽類選出之化合物作為有效成分，

(式中，X及γ為Η或CH2OH，但是，當χ為 CH2〇H時，γ為Η，以及當X為Η時，γ為 ch2oh)； OH

(式中’ R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。一種用於需要謗導熱休克蛋白產生之疾病之醫藥組合物，其含有從式（I)所示化合物、式（II)所示化合物及其鹽類選出之化合物作為有效成分， 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(2：i〇X297公釐)

Y

X •Q Η

OH X H O (I) (中， X及Y為H或CH2OH，但是，當x為 2 ]^時’丫為Η，以及當X為η時，Y為 CH2〇H )； OH

Η (Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。 8 · 種用於需要抑制α _糖荅酶之疾病之醫藥組合物，其含有從式（I)所示化合物、式（11)所示化合物及其鹽類選出化合物作為有效成分，之 Υ

X Κ ·〇· Η

OH (I) (式中’X及Υ為Η或CH2OH，但是，當χ為 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 8 8 8 8 ABCD 1244484 六、申請專利範園 CH2〇H時，Y為H，以及當X為Η時，Y為 CH2〇H)； OH

Η (Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去sh基後之殘基）。 9· 一種式（1)所示化合物之製法，其特徵為將3,6_脫水半乳糖及/或在還原末端具有3,6-脫水半乳糖之化合物於中性至驗性之條件下處理；

58839-940722.DOC 1 (式中，X及Y為Η或CH2OH，但是，當χ為 CH2OH時，Y為Η，以及當X為Η時，γ為 CH2OH ) 〇 10·如申請專利範圍第9項之製法，其中該3,6-脫水半乳糖及 /或在還原末端具有3,6-脫水半乳糖之化合物為將3,6-脫水半乳糖含有物於酸性下藉水解或酵素分解而得者。 11·如申請專利範圍第1〇項之製法，其中該在還原末端具有 1244484 A8 B8 C8 -— ____Ρβ _ 六、申請專利範圍 3,6-脫水半乳糖之化合物為從瓊脂二糖、^ -角叉藻二糖以及在還原末端具有3,6•脫水半乳糖之瓊脂二糖及角叉& 一糖以外之化合物選出之至少一種以上之化合物。 12·如申請專利範圍第10項之製法，其中該3,6_脫水半乳糖含有物為瓊脂、瓊脂糖及/或角叉菜膠。 13. —種式（II)所示化合物或其鹽， 0Η

Η (Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去基後之殘基）。 14· 一種用於製備式（11)化合物之方法，其特徵為將（1)所示之化合物與含有SH基之化合物反應，

(式中，X及Υ為Η或CH2OH，但是，當义為 CH2OH時，Y為Η，以及當X為Η時，γ為 CH2OH)； -8 - 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1244484 申請專利範圍 A8 B8 C8 D8 OH

(Π) 殘^中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之及具鹽類中選出之化合物而形成， 0H

(Π) SH基後之 (式中，R為從含有SH基之化合物中除去殘基）。 16. —種食品或飲料，其係含有、稀釋及/或添加化合物及其鹽類中選出之化合物而形成，）所不之 Υ

X Η Η

OH 〇 Λ (I) 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(21〇 χ 297公釐) 1244484 8 8 8 8 A BCD 六、申請專利範圍

(式中，X及+ 為Η或CH2OH，但是，告γ么 CH2OH時，γ為口田八局 ’以及當X為Η時，γ為 ch2〇h )。 7 γ 為 1 7· —種抗氧化醫藥組合物，並人铷、々πη所-、仏，、特欲為口有式（1)所示之化合 :::)所㈣合物及其鹽類中選出之化合物作為有

0H (I) 當X為 H，以及當X為Η時，γ為 (式中’X及Y為Η或CH20H，但是， ch2oh 時，Y 為 ch2〇h )； 0Η

(Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。 18.如申請專利範圍第17項之抗氧化醫藥組合物，其為活性氧產生抑制劑。 19· 一種抗氧化用食品或飲料，其含有式（1)所示之化合物、式 -10- 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1244484

8 8 8 8 A BCD 為有效成 (II)所示之化合物及其鹽麴由八I頌甲選出I化合物作分， Y

X Η ,Η 、0Η Λ 〇 (I) (式中，X及Υ為Η或ch2〇h，但是，當χ為 CH2OH 時，Y 為 Η， CH2OH )；以及當X為Η時，γ 為 0Η

(Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基殘基）。 20. —種抗氧化用或抗菌用鮮度保持劑組合物，其含有式Q)所示之化合物、式（π)所示之化合物及其鹽類中選出之化2 物作為有效成分， ϋ -11 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1244484 A8 B8 C8

(式中，χ ch2oh 時， CH2OH); 及Y為H或CH2〇H，但是，當x為 Y為H，以及當X為Η時，γ為 0Η

Η (Π) (式中，R 殘基）。為從含有SH基之化合物中除去 SH基後之 21. —種美白用、枋备 1 人 ^乳化用或活性氧產生抑制用化妝材料組合 ' 气（I)所示之化合物、式（II)所示之化合物及並鹽類中選出之化合物作為有效成分， ’、

(I) (式中，X及γ為η或CH2OH，但是，當X為 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1244484 六、申請專利範圍

CH2〇H時，Y為H，以及各γ么乂及田X為Η時，Y CH2OH )；為 0H

Η (Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去殘基）。 SH基後之 22· —種糖甞酶抑制醫藥組合物，其含有式（ι)所示之化合物、式（II)所示之化合物及其鹽類中選出之化合物作為有效成分，

0Η Η '〇 (I) (式中，X及Υ為Η或CH2OH，但是，當X CH20H時’Y為H，以及當X為Η時，γ CH20H )；為為 58839-940722.DOC -13- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1244484 六、申請專利範圍 8 8 8 8 A B c D 0H

Η (Π) (式中，R為從含有SH基之化合物中除去SH基後之殘基）。 23. —種式（I)化合物，其係用於細胞自滅性謗發，

0Η (I) (式中，X及Υ為Η或CH2OH，但是，當X為 CH2〇H時，Y為 Η，以及當 X為 Η時，Y為 CH2OH ) 〇 -14 - 58839-940722.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210χ 297公釐)