TWI237018B

TWI237018B - Method of producing reduced coenzyme Q10 crystals

Info

Publication number: TWI237018B
Application number: TW091115490A
Authority: TW
Inventors: Takahiro Ueda; Shiro Kitamura; Yasuyoshi Ueda
Original assignee: Kaneka Corp
Priority date: 2001-07-13
Filing date: 2002-07-12
Publication date: 2005-08-01
Also published as: CN1266101C; EP1415970A1; AU2002318844B2; CA2453160A1; DK1415970T3; US8853464B2; US8003828B2; KR100876756B1; EP1415970B1; JP2009046495A; KR20040017294A; US20040214301A1; WO2003006409A1; CA2453160C; AU2002318844A2; US20110263906A1; CN1527806A; EP1415970A4; JP4220381B2; JPWO2003006409A1

Description

A7 1237018 ___B7 _____ 五、發明說明（ί ) 〔技術領域〕本發明係關於還原型輔酶Qn結晶之製造法。還原型輔酶Q!。，相較於氧化型輔酶Q!。，係顯示較高的經口吸收性，而能應用於食品、營養機能食品、特定保健用食品、營養輔助劑、營養劑、飮料、飼料、動物用藥、化粧品、醫藥品、治療藥、預防藥等。〔背景技術〕廣泛分布於生物界之苯醌衍生物之氧化型輔酶Q1〇, 基於其維他命般的機能也稱作維他命Q ’係使衰弱的細胞活性返回健康狀態之營養源，而爲使身體年輕化的成份。另一方面，還原型輔酶Qn，係氧化型輔酶Qi〇之2電子還原體，相對於氧化型輔酶Qi〇爲橙色結晶，還原型輔酶Qi〇爲白色結晶。還原型輔酶Qh及氧化型輔酶Q1Q，係存在於粒線體、溶酶體、高爾基體、微粒體、過氧化物酶體或細胞膜等，已知其作爲電子傳達系統之構成成份而和ΑΤΟ產生賦活、活體內之抗氧化作用、膜安定化有關，而爲維持活體之機能所不可缺的物質。還原型輔酶Qi〇，已知例如藉合成、發酵、從天然物萃取等以往公知的方法來獲得輔酶q1q後，藉層析法來濃縮流出液中的還原型輔酶Qh區，藉此等方法來製得（曰本專利特開平10 - 109933號公報）。依該公報之記載，這時，可將上述還原型輔酶QiG中所含之氧化型輔酶Q1Q用氫硼化鈉、亞連二硫酸鈉（連二亞硫酸鈉）等還原劑實施還原後，藉層析法來進行濃縮；或令上述還原劑作用於既存的 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 ϋ I n ον fl n an 1^1 n I _ •線p· A7 1237018 五、發明說明（> ) 高純度輔酶Q!〇(氧化型）中來製得還原型輔酶Q10。然而，如此所得之還原型輔酶Qi。，不一定能達成合適的結晶化，例如，容易取得的爲含有以氧化型輔酶Ql0 爲首的雜質之低純度結晶、半固狀或油狀物。又，就算能結晶化，由於漿料特性等不佳，漿料之流動性不佳而難以攪拌，不易從結晶析出罐取出，過濾性差而須花費長時間才能達成結晶分離’而有種種問題。又’速原型輔酶Q10 ，對各種有機溶劑之溶解度高，故同時有結晶析出產率不一定夠高的問題。還原型輔酶Qw，具有易被分子氧氧化成氧化型輔酶 Q!0之性質，在工業規模之製造上，要完全除去氧相當困難，且各操作所需時間係實驗室規模的製造上所無法相比之極長時間，因此所殘存的氧會產生極大影響。單離操作之長時間化，會增大該氧化的風險，而和難除去性的氧化型輔酶Q1()之附帶產生及混入製品中所造成之產率、品質面的問題有直接關聯。這種狀況下，係強烈的期盼著能確立出：改善漿料特性和結晶特性，而在高產率下、過濾性良好的取得還原型; 輔酶Q!。之結晶析出法；以及，爲取得高純度的還原型輔酶Qi〇結晶，使包含結晶分離的單離製程、或是包含該單離製程之全製程達成最短化且簡便化之製造法。〔發明之摘述〕本發明係有鑑於上述問題，其目的係爲獲得還原型輔酶Qi〇結晶，而提供一適用於工業規模的生產之優肆製造 4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線Λ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1237018 五、發明說明（5 ) 法。本發明人等，爲了使還原型輔酶Q1()結晶進行良好的結晶成長，經深入硏究的結果發現到，藉由將還原型輔酶 Qi〇在醇類及/或酮類之溶液中進行結晶析出，能以高產率來獲得漿料特性及結晶特性優異的還原型輔酶Q1Q結晶，而導致本發明的完成。亦即，本發明係關於一種還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其特徵在於，係在醇類及/或酮類之溶液中進行還原型輔酶Q!。之結晶析出。又，本發明係漏於一種還原型輔酶Q1()結晶之製造法，係在含有還原型輔酶Q1Q之醇類及/或酮類之溶液中進行還原型輔酶Q1Q之結晶析出，該溶液中之還原型輔酶Q1〇，係將氧化型輔酶Q1Q在醇類及/或酮類之溶液中還原成還原型輔酶Q1()而製得。依據本發發明之方法，可將包含結晶分離之單離製程、或包含該單離製程之全製程最短化及簡便化，而能以高產率來取得高純度的還原型輔酶Q10。〔發明之詳細揭示〕以下詳細說明本發明。首先說明還原型輔酶Q1()結晶之製造法，即還原型輔酶Qio之結晶析出法。本發明之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，係在醇類及/ 或酮類溶液中，進行還原型輔酶Q1()之結晶析出者。較佳爲使用醇類。 5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線邊本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1237018 _____B7__ __ 五、發明說明（〜）結晶析出所用之還原型輔酶Q1q，例如可爲合成、發酵、自天然物萃取等依據以往周知的方法所得者。較佳爲將還原型輔酶Qio中所含之氧化型輔酶Q1()予以還原、或將氧化型輔®B Qi〇予以還原而得者，更佳爲使用後述本發明之還原反應所得者。本發明之結晶析出法，雖對於含較多氧化型輔酶Q10 者也能適用，但對後述還原方法等所調製出之高純度還原型輔酶Q1Q特別有效。對以往周知方法所得、或後述還原方法等所製造出之含還原型輔酶Q1()之反應液或萃取液，本發明對於可同時除去其等所含的雜質之精製結晶析出特別有效。這時，較佳爲自母液中除去雜質。藉此，可除去共存的雜質、特別是通常不一定能容易地除去之構造類似的類化合物(具體有還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、還原型輔酶q7等）。醇類及/或酮類，對除去上述構造類似的化合物而言係特別有效的溶劑。當然，上述精製結晶析出，作爲用來再精製還原型輔酶Q1Q結晶之再結晶法也是非常有效的。本發明之最佳形態，係從將氧化型輔酶Q1()在醇類及/ 或酮類(較佳爲醇類)溶液中還原成還原型輔酶。而成之溶 '液中，進行還原型輔酶Q1Q之結晶析出(較佳爲精製結晶析出）之直接單離法。藉此，可極簡便且高效率地、在高產率下取得特性良好的高品質結晶。本發明所用之醇類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。 _ 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線遽 1237018 ae_ ----------. " 五、發明說明（s) 例如作爲1價醇，可列舉如碳數1〜20者、較佳爲碳數 1〜12、更佳爲碳數1〜6、特佳爲碳數1〜5、再佳爲碳數1〜4 、再佳爲碳數1〜3者。又最佳爲碳數2〜3之1價醇。也能使用碳數2〜5、較佳爲碳數2〜3之2價醇’碳數3之3價醇。I述醇類中’碳數1〜5之1價醇’其和水的相溶性高，當作和水的混合溶劑來使用時可適當的使用。作爲1價醇，可舉例如：甲醇、乙醇、1 —丙醇、2 — 丙醇、丁醇、2- 丁醇、異丁醇、特丁醇、I-戊醇、2 一戊醇、3 __戊醇、2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇、特戊醇、 3 —甲基-2- 丁醇、新戊醇、1_己醇、2 -甲基-丨-戊醇、4 -甲基- 2 -戊醇、2-乙基-1 - 丁醇、1 -庚醇、2-庚醇、3 -庚醇、1 -辛醇、2 —辛醇、2 _乙基—1 —己醇、 1 -壬醇、卜癸醇、卜十一烷醇、1 —十二烷醇、烯丙醇、丙炔醇、苄醇、環己醇、1 -甲基環己醇、2-甲基環己醇、3 -甲基環己醇、4 -甲基環己醇等等。較佳爲甲醇、乙醇、1 —丙醇、2 —丙醇、1 — 丁醇、2 一丁醇、異丁醇、特丁醇、1 -戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、 2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇、特戊醇、3 -甲基-2 - 丁醇、新戊醇、1-己醇、2 -甲基-1-戊醇、4 -甲基-2-戊醇、2 -乙基-1 - 丁醇、環己醇。更佳爲甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、特丁醇、1 -戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇、特戊醇、3 -甲基-2 - 丁醇、新戊醇。再佳爲甲醇、乙醇、1 —丙醇、2 -丙醇、1 — 丁醇、2- 丁醇、異丁醇、2- 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------訂---------屬 A7 1237018 ________B7__ 五、發明說明（b ) 甲基-1 - 丁醇、異戊醇。特佳爲甲醇、乙醇、i _丙醇、2 -丙醇，更佳爲乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇，最佳爲乙醇。作爲2價醇，可舉例如：1，2 -乙二醇、1，2 -丙二醇、1，3 -丙二醇、1，2 - 丁二醇、1,3- 丁二醇、i，4 — 丁二醇、2,3- 丁二醇、1，5-戊二醇等等。較佳爲丨，2__乙二醇、 1，2 _丙二醇、1，3 -丙二醇，最佳爲1，2 -乙二醇。作爲3價醇，可使用例如丙三醇等。作爲酮類，並沒有特別的限制，可使用碳數3〜6者。其具體例，可舉例如：丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、甲基異丁酮等。較佳爲丙酮、甲基乙基酮，最佳爲丙酮。作爲結晶析出方法，並沒有特別的限制，可使用冷卻結晶析出、濃縮結晶析出、溶劑取代結晶析出等中之至少一種來實施。上述醇類及/或酮類中之還原型輔酶Q10之溶解度，係顯示極佳的溫度依存性，適當的減少還原型輔酶 Q1〇之溶解量有助於以高產率來移往結晶狀態。爲將該特性發揮到最大極限，特佳爲採用冷卻結晶析出，或將冷卻結晶析出組合其他結晶析出方法來進行。結晶析出濃度也是一重要因子，結晶析出終了時的濃度，即相對於結晶析出終了時結晶析出溶劑之重量、還原型輔酶Qio之重量，較佳爲約15w/w%以下，更佳爲約13 w/w%以下，再佳爲約1〇 w/w%以下。藉由維持上述濃度’ 能獲得適用於工業規模的操作性之結晶析出。基於生產性之觀點，濃度之下限通常爲約lw/w%以上’較佳爲約2 w/w%以上。 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 1111111 •線#. A7 1237018 五、發明說明（Ί ) 結晶析出較佳爲在強制流動下實施。爲抑制過_和的形成，而順利地進行核化、結晶成長’又基於尚品質之觀點，每單位容積之攪拌所需動力通常爲約0.01kw/m3以上，較佳爲約（MkW/m3以上，更佳爲約〇.3kW/m3以上的流動。上述強制流動，通常是藉攪拌葉片之轉動來實施’但只要能獲得該流動則不一定要使用攪拌葉片’例如可利用液體循環之方法等。在進行結晶析出時，爲抑制過飽和之形成而順利地進行核化、結晶成長，較佳爲添加種晶。還原型輔酶Q1()之結晶析出溫度(結晶析出時的冷卻溫度），並沒有特別的限制，基於產率等之觀點’較佳爲25 °C以下，更佳爲2(TC以下，再佳爲15°C以下，更佳爲10 °C以下。下限爲系之固化溫度。因此，藉由將冷卻溫度設定在較佳之0〜25°C左右，可適當的實施結晶析出。結晶析出時，較佳爲控制每單位時間的結晶之結晶析出量，來抑制過飽和的形成。較佳之單位時間的結晶析出量，例如控制在每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約 50%量之速度以下(即最大爲50%量/時間），較佳爲每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約25%量之速度以下(即最大爲25%量/時間）。又，冷卻結晶析出時，其冷卻速度通常爲約40°C/時間以下，較佳爲約20°C/時間以下。本發明之結晶析出法，通常基於結晶析出所得之漿料特性與結晶特性之觀點，以使用上述溶劑爲佳，但在上述醇類及/或酮類溶液中，也能使其他溶劑共存或添加其他溶 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂i -------線 A7 1237018 五、發明說明（？）劑。該等其他溶劑並沒有特別的限制，可列舉如烴類、脂肪酸酯類、醚類、脂肪酸類、氮化合物類(包含腈類、醯胺類）、硫化合物類、水等。作爲烴類、脂肪酸酯類、醚類、及腈類’可適當的使用作爲還原反應的溶劑之後述溶劑。作爲脂肪酸類，例如可舉甲酸、乙酸、丙酸等。較佳爲甲酸、乙酸，最佳爲乙酸。作爲除腈類外之氮化合物類，可列舉如：硝基甲烷、三乙胺、毗啶、甲醯胺、N-甲基甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺、N，N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮等。作爲硫化合物類，例如可列舉二甲亞硼、環丁硼等。該等其他溶劑，爲改善還原型輔酶Q1()之溶解度、結晶析出濃度、產率、漿料特性、結晶特性等可左右結晶析出條件之條件，依據該等其他溶劑的特性，以較佳比例和上述醇類及/或酮類的溶液一起使用，可得良好的效果。上述其他溶劑中，基於可適當減少還原型輔酶Q1()之溶解性而獲得高產率、可改善漿料特性、特別値得注目的是可大幅改善固液分離性（過濾性）之觀點，特佳爲使用水〇該等其他溶劑和上述醇類及/或酮類的比例，依溶劑種類不同並無法一槪而論，實質上只要是以醇類及/或酮類爲主成份之溶劑即可，並沒有特別的限制。較佳爲，溶劑中醇類及/或酮類之比例，醇類及酮類之合計爲約8〇w/w%以 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) « ϋ n ϋ n n n 一-OJI n an n n A7 1237018 ___B7___ 五、發明說明（1 ) 上，更佳爲約90w/w%以上’再佳爲約93w/w%以上。特別是基於改善固液分離性的觀點，當使用水作爲輔助溶劑時，溶劑中醇類及/或酮類之比例’其下限約 90w/w%以上，較佳爲約91 w/w%以上，更佳爲約92w/w% 以上，再佳爲約93w/w%以上；其上限約99.5w/w%以下，較佳爲約99w/w%以下，更佳爲約98w/w%以下，再佳爲約 97w/w%以下。通常在約90〜99.5w/w%的範圍可適當的實施，而在約93〜約97w/w%的範圍可更適當的實施。如此所得之還原型輔酶Qh之結晶，較佳爲例如藉由離心分離、加壓過濾、減壓過濾等來實施固液分離，再視需要而使用以醇類及/或酮類爲首之本發明所記載的溶劑來進行濾餅洗淨，而以濕體的形態來取得。又，進一步將濕體置入內部經非活牲氣體取代之減壓乾燥器（真空乾燥器) ，於減壓下乾燥，而能以乾體的形態來取得；而以乾體的形態來取得爲較佳。本發明之製造法，藉由在脫氧環境氣氛下實施，在氧化防護上有良好的效果。脫氧環境氣氛，可藉由利用非活性氣體之取代、減壓、沸騰或其等的組合來達成。至少利用非活性氣體之取代、即使用非活性氣體環境氣氛是合適的。非活性氣體可舉例如氮氣、氮氣、氬氣、氫氣、碳酸氣等，較佳爲氮氣。接著，說明適合使用在本發明之還原型輔酶Q1()之合成法、亦即從氧化型輔酶q1q還原成還原型輔酶Q1Q之反應。 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝i --- --------- A7 1237018 五、發明說明（卜）如前述般，上述還原反應，較佳爲在上述結晶析出法所描述之醇類及/或酮類溶液中進行，並附加於直接單離法中。藉此，能使操作簡便化且最短化，而能使分子氧所造成之氧化形成最小化。這時最好的還原劑，係後述之抗壞血酸類，又，爲了即使在長時間操作下仍能防護還原型輔酶 Qw不致受分子氧的氧化，上述還原反應及/或萃取、水洗操作，較佳爲使用氧化防護效果高的溶劑來實施。作爲這種氧化防護效果高的溶劑，較佳爲使用擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種，最佳爲烴類〇作爲烴類並沒有特別的限制，可舉例如脂肪族烴、芳香族烴、鹵化烴等。較佳爲脂肪族烴、芳香族烴，更佳爲脂肪族烴。作爲脂肪族烴，不管環狀、非環狀、飽和、不飽和均可，通常是使用碳數3〜20，較佳爲碳數5〜15者。作爲其具體例，可舉例如丙烷、丁烷、異丁烷、戊院、2 -甲基丁院、環戊院、2 -戊烯、己院、2 -甲基戊院、 2,2 -二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷、1 -己烯、環己烯、庚烷、2 -甲基己烷、3 —甲基己烷、2,3 -二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、甲基環己烷、1 — 庚烯、辛烷、2,2,3 -三甲基戊烷、乙基環己烷、1 —辛烯、壬烷' 2,2,5 -三甲基己烷、1-壬烯、癸烷、1 —癸烯、對盖烷、十一碳烷、十二碳烷等等。 12 本紙張^度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）" " ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----I---訂·-------- β A7 1237018 ____ B7__ 五、發明說明（Λ ) 其中，較佳爲碳數5〜8之飽和脂肪族烴’較佳爲使用碳數5之戊烷、2 -甲基丁烷、環戊烷(稱戊烷類）；碳數6 之己烷、2 -甲基戊烷、2,2 -二甲基丁烷、2,3 -二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷(稱己烷類）；碳數7之庚烷、2一甲基己烷、3 -甲基己烷、2,3 -二甲基戊烷、2,4 -二甲基戊烷、甲基環己烷(稱庚烷類）；碳數8之辛烷、2,2,3 -三甲基戊院、異辛院、乙基環己院（稱半院類），以及其寺之混合物。特別是上述庚類之氧化防護效果最高’特佳爲庚烷。作爲芳香族烴並沒有特別的限制，通常是使用碳數 6〜20、較佳爲碳數6〜12、更佳爲碳數7〜10者。具體例可列舉出：苯、甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、萘滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二烷基苯、苯乙烯等等。較佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、萘滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯。更佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、異丙苯、萘滿，最佳爲異丙苯。鹵化烴爲環狀、非環狀、飽和、不飽和均可，並沒有特別的限制，但以使用非環狀者爲佳。較佳爲氯化烴、氟化烴，更佳爲氯化烴。又，可使用碳數1〜6、較佳爲碳數 1〜4、更佳爲碳數1〜2者。

其具體例可舉例如··二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、U 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公f ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1237018 ___B7__ 五、發明說明（，） -二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1 -三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1，1，2-四氯乙烷、1，1，2,2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、U -二氯乙烯、1，2 -二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2 -二氯丙烷、1，2,3_三氯丙烷、氯苯、 1，1，1，2-四氟乙烷等等。較佳爲二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、U -二氯乙烷、 1，2 -二氯乙烷、1,1，1 -三氯乙烷、1，1，2 -三氯乙烷、1，1 -二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、1，1，1，2-四氟乙烷。更佳爲二氯甲烷、氯仿、1，2_二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、1，1，1,2-四氟乙烷。作爲脂肪酸酯類並沒有特別的限制，可舉例如：丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。較佳爲乙酸酯、甲酸酯，更佳爲乙酸酯。作爲酯基並沒有特別的限制，可舉例如碳數1〜8 之烷基酯、碳數1〜8之芳烷基酯等，較佳爲碳數1〜6之烷基酯，更佳爲碳數1〜4之烷基酯。作爲丙酸酯可舉例如丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸異戊酯等，較佳爲丙酸乙酯。作爲乙酸酯可舉例如：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸第二丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯、乙酸苄酯等。較佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸第二丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯。更佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線· A7 1237018 五、發明說明（ή) 、乙酸異丁酯，最佳爲乙酸乙酯。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 作爲甲酸酯可舉例如甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸異丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸第二丁酯、甲酸戊酯等。較佳爲甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸戊酯，最佳爲甲酸乙酯。作爲醚類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但使用飽和者爲較佳。通常是使用 fe數3〜20、較佳爲碳數4〜12、更佳爲碳數4〜8者。具體例可舉例如··二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、二異丙基醚、二丁基醚、二己基醚、乙基乙烯醚、丁基乙烯醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、呋喃、2 -甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、乙二醇單丁基醚等等。較佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、二異丙基醚、二丁基醚、二己基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、2_甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚。更佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、苯甲醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚。再佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、苯甲醚；最佳爲甲基特丁基醚。作爲腈類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和 ’並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。通常是使 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1237018 A7 B7 ：Η 五、發明說明（用碳數2〜2〇、較佳爲碳數2〜I2、更佳爲碳數2〜g者。作爲其具體例可舉例如··乙腈、丙騰、丙二腈、丁腈丄異丁腈、丁二腈、戊腈、戊二腈、己_、庚基氰化物、辛基氰化物、十一烷腈、十二烷腈、十s烷腈、十五烷腈、十八烷腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、缜丙腈、甲氧基乙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、甲苯臏、苄腈' ^ 节腈、溴〒腈、氰基苯甲酸、硝基节腈、爾香睛、駄膳条溴甲苯腈、甲基氰基苯甲酸鹽、甲氧基苄_、乙醯苄腈、萘腈、聯本腈、苯基丙腈、苯基丁腈、甲赛苯其乙腈、一苯基乙腈、萘基乙腈、硝基苯基乙腈 '氧$基^化物、環丙烷腈、環己烷腈、環庚烷腈、苯基環己燒腈、甲苯严己烷腈等等。展較佳爲乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈、丁二腈、戊腈、氯丙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、申苯腈、苄腈，更佳爲乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈，最佳爲乙腈。上述溶劑中，較佳爲考慮沸點、粘性等的性質來作選定。例如，所具備的沸點（1大氣壓下，約3〇〜i5〇；c)係可適當進行提昇溶解度之加溫，且容易進行來自濕體的溶劑之乾燥除去、及來自結晶析出過濾液的溶劑回收，又所具備的熔點(約2〇。(：以下，較佳爲約lot：以下，更佳爲約〇 °C以下)係在室溫下處理時或冷卻至室溫以下時仍^易固化，又具備低粘性(20°C下約10cp以下等）。基於工業之作業上的觀點，較佳爲常溫下不易揮發者，例如沸點約8〇°C以上者’更佳爲沸點約90°C以上者。 16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) tr---------線屬 1237018 B7 五、發明說明（6 ) 還原型輔酶Q1Q有溶液濃度越高越不易被氧化的傾向。由於還原型輔酶Q1Q對上述溶劑顯示高溶解性’故在這點也顯現上述溶劑係適用於氧化防護。爲防護還原型輔酶 Q10受氧化之較佳濃度，視溶劑種類等的不同雖無法一槪而論，但還原型輔酶Q1()在該溶劑中之濃度，通常爲1w/w% 以上，較佳爲2w/w%以上。上限雖沒有特別的限定’但基於實際操作性的觀點係取400w/w%以下，較佳爲200w/w% 以下，更佳爲l〇〇w/w%以下，特佳爲50w/w%以下。如此般，藉由使用上述溶劑，不想要之氧的副反應，經由還原過程會形成最小化。還原反應，可使用氫化金屬氧化物、鐵(金屬或鹽形態的鐵）、鋅(金屬形態的鋅）、連二亞硫酸類、抗壞血酸類等作爲還原劑來實施。又，使用氫化金屬氧化物、鐵（金屬或鹽形態的鐵）、鋅(金屬形態的鋅）、連二亞硫酸類來進行之還原，較佳爲在上述氧化防護效果高的溶劑中實施。又，使用抗壞血酸類之還原，除上述氧化防護效果高的溶劑外，也能用醇類及/或酮類等各種溶劑來實施，但較佳爲，使用醇類（更佳爲和水相溶性高之醇）、和水相溶性高之醚類、和水相溶性高之腈類、和水相溶性高之酮類來實施。作爲氫化金屬化合物並沒有特別的限制，例如可舉氨化硼鈉、氫化鋰鋁等。上述氫化金屬化合物的用量，依氣化金屬化合物種類之不同無法一槪而論，通常爲理論氯當量之1〜3倍量。 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 111111 ^ ·11111111 •^邊 A7 1237018 _____B7___ 五、發明說明（θ ) 使用鐵或鋅之還原，通常是用酸來實施。酸並沒有特別的限制，可舉例如醋酸等的脂肪酸，甲磺酸等的磺酸，鹽酸和硫酸等的無機酸等。較佳爲無機酸，更佳爲硫酸。鐵之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Qk之加入重量，例如爲約1/5重量以上。其上限雖沒有特別的限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。鐵不拘金屬鐵的形態，也能使用硫酸鐵(Π)等鹽的形態。鋅之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Qio之加入重量，例如爲約1/10重量以上。其上限雖沒有特別的限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。連二亞硫酸類並沒有特別的限制，通常爲連二亞硫酸之鹽類。連二亞硫酸之鹽類並沒有特別的限制，較佳爲鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽等，更佳爲鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等的鹼金屬鹽，最佳爲鈉鹽。連二亞硫酸之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Qio之加入重量，例如爲約1/5 重量以上，較佳爲約2/5重量以上，更佳爲約3/5重量以上。雖過多也不致產生問題，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下，較佳爲同重量以下。因此，適當的實施範圍爲約2/5重量〜約相同重量的範圍。抗壞血酸類並沒有特別的限制，不限於抗壞血酸，例如可舉rhamno -抗壞血酸、arabo -抗壞血酸、gluco -抗壞血酸、fuco -抗壞血酸、glucohepto -抗壞血酸、xylo -抗壞血酸、galacto -抗壞血酸、gulo -抗壞血酸alio -抗壞血酸、erythro -抗壞血酸、6 -脫氧抗壞血酸等的抗壞血 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1237018 五、發明說明（) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 酸類；又亦可爲其等之酯體或鹽類。又，這些爲L體、D 體或消旋體皆可。具體而言，可舉例如L -抗壞血酸、L -抗壞血酸十六烷酯、L -抗壞血酸十八烷酯、D - arabo -抗壞血酸等。在製造還原型輔酶Q1()時，雖上述任一抗壞血酸類均可使用，但考慮到和生成之還原型輔酶Qio之分離容易性等的觀點，在上述抗壞血酸類中，較佳爲使用水溶性者，基於取得容易性、價格等之觀點，更佳爲L -抗壞血酸、D - arabo -抗壞血酸等的單體。上述抗壞血酸之用量並沒有特別的限制，只要是能將氧化輔酶Q1()轉換成還原型輔酶Q1()之有效量即可，相對於氧化型輔酶Q1()，通常爲1倍莫耳量以上，較佳爲L2倍莫耳量以上。其上限沒有特別的限制，考慮經濟性時，通常爲1〇倍莫耳量以下，較佳爲5倍莫耳量以下，更佳爲3 倍旲耳量以下。上述還原劑中，基於還原能力、產率、品質之觀點，較佳爲鋅、連二亞硫酸類、抗壞血酸類，特佳爲連二亞硫酸類(具體而言爲連二亞硫酸鹽）、抗壞血酸類。還原反應中，可適當的倂用醇類及/或水。水，特別適用於還原劑爲鐵、鋅、連二亞硫酸類的情形。使用氫化金屬化合物來當作還原劑時，可倂用醇類。水、醇類之倂用 ’可發揮水、醇類之特性，而有助於反應速度和反應產率的提昇等。以下詳細說明較佳的還原方法。使用連二亞硫酸類之還原較佳爲，倂用水，而以擇自 19 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） A7 1237018 五、發明說明（J ) 烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種有機溶劑(較佳爲烴類，更佳爲脂肪族烴，再佳爲庚烷類，特佳爲庚烷)和水所組成之混合溶劑系來實施。這時，反應時之pH，基於產率等之觀點，通常爲pH7以下，較佳爲pH3〜7，更佳爲 pH3〜6。pH可用酸(例如鹽類和硫酸等之無機酸）、鹼(例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物)來作調整。使用連二亞硫酸類之還原中，水的用量沒有特別的限制，只要是能適度溶解還原劑之連二亞硫酸類之量即可，例如，連二亞硫酸類對水的重量，通常調整爲30w/w%以下，較佳爲20w/w%以下。又，基於生產性等之觀點，通常爲lw/w%以上，較佳爲5w/w%以上，更佳爲l〇w/w%以上。使用抗壞血酸類之還原，在上述烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中，特別是和水相溶性高的溶劑，其中又以和水相溶性高的醚類、腈類，具體而言可使用四氫呋喃、二噁烷、乙腈等來實施。但特佳爲，使用本發明之結晶析出法所用之醇類及/或嗣類(較佳爲和水相溶性高之醇類及/或醒類(具體而目’作爲醇類係碳數1〜5、較佳爲碳數1〜4、更佳爲碳數1〜3之1或2價(較佳爲1價)醇；作爲酮類，係丙酮、甲基乙基酮等）。又，使用抗壞血酸類之還原中，基於促進反應之觀點( 例如，降低反應溫度、縮短反應時間等），可在鹼性物質或亞硫酸氫鹽等的具有反應促進效果之添加劑的同時存在下，來實施還原。 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) m 裝 H ϋ I n 一 ον · i «ϋ n I ϋ I · A7 1237018 ____B7___ 五、發明說明（，°| ) 上述鹼性物質並沒有特別的限制，例如不拘無機化合物、有機化合物均可使用。無機化合物並沒有特別的限制，可舉例如金屬（較佳爲鹼金屬、鹼土金屬等）的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等。其代表者可舉例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物、碳酸鈉等的鹼金屬碳酸鹽、碳酸氫鈉等的鹼金屬碳酸氫鹽、碳酸鎂等的鹼土類金屬碳酸鹽等等。有機化合物並沒有特別的限制，可舉例如三乙胺等的胺等。鹼性物質中，較佳爲使用金屬(較佳爲鹼金屬、鹼土類金屬等）之碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等的無機化合物，三乙胺等的胺等之有機化合物，即屬弱鹼性物質者(弱鹼或弱鹼性）。更佳爲上述弱鹼性的無機化合物。亞硫酸氫鹽，例如可舉亞硫酸氫鈉等的鹼金屬亞硫酸氫鹽等。添加劑的量，只要是能發揮所期待程度的反應促進效果之量（有效量）即可，並沒有特別的限制，同時考慮經濟性時，相對於抗壞血酸類，通常爲20倍莫耳量以下，較佳爲10倍莫耳量以下，更佳爲5倍莫耳量以下，再佳爲2倍莫耳量以下。下限並沒有特別的限制，通常爲〇_〇1倍莫耳量以上，較佳爲0.05倍莫耳量以上，更佳爲〇·1倍莫耳量以上，再佳爲0.2倍莫耳量以上。本發明之還原反應，較佳爲在強制流動下來實施。每單位容積之攪拌所需動力，通常爲約〇.〇lkW/m3以上，較佳爲約O.lkW/m3以上，更佳爲約〇.3kW/m3以上。上述強制流動，通常是藉攪拌葉片之轉動來實施，但只要能獲得 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）" (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂i -------線® A7 1237018 ____________ 五、發明說明（/ ) 該流動則不一定要使用攪拌葉片，例如可利用液體循環之方法等。還原溫度，會因還原劑的種類和量而有不同，並無法一槪而論。例如，在使用連二亞硫酸類進行還原時，通常爲100°C以下，較佳爲80°c以下，更佳爲60°c以下。下限爲系之固化溫度。因此，還原通常是在0〜l〇(TC左右、較佳爲0〜80°C左右、更佳爲0〜60°C左右來實施。使用抗壞血酸類之還原中，通常爲30°C以上，較佳爲40°C以上，更佳爲50°C以上。上限爲系之沸點。因此，還原通常是在 30〜l5〇C左右、較佳爲40〜l2〇°C左右、更佳爲50〜100。〇左右來實施。反應濃度並沒有特別的限制，相對於溶劑重量，氧化型輔酶Q1()之重量通常約lw/w%以上、較佳爲3w/w%以上、更佳爲10w/w%以上、再佳爲15w/w%以上。上限並沒有特別的限制，通常約60w/w%以下、較佳爲50w/w%以下、更佳爲40w/w%以下、再佳爲30w/w%以下。因此，反應濃度可在約1〜60w/w%、較佳爲約3〜50w/w%、更佳爲約 10〜40 w/w%下來實施。還原反應，雖會因還原劑的種類和量而有不同，並無法一槪而論，但通常可在48小時以內、較佳爲24小時以內、更佳爲10小時以內、再佳爲5小時以內完成。還原反應最好在脫氧環境氣氛下來實施，令人吃驚的是發現到，特別是使用連二亞硫酸類之還原反應，能大幅提昇還原反應產率並減少還原劑用量。脫氧環境氣氛，可 22 -----------裝--------訂---------線^|^- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1237018 五、發明說明（/ ) 藉由利用非活性氣體之取代、減壓、沸騰或其等的組合來達成。至少利用非活性氣體之取代' 亦即使用非活性氣體環境氣氛是合適的。非活性氣體可舉例如氮氣、氦氣、蠢氣、氫氣、碳酸氣等，較佳爲氮氣。從如此般所得之還原反應液中，採取含有所產生的還原型輔酶Q1q之有機相，視需要(較佳爲），用水或食鹽水等來反覆進行有機相之水洗，完全除去夾雜物後，用醇類及/ 或酮類進行溶劑取代，即可使用於上述結晶析出。基於防護氧化之觀點，還原型輔酶q1q，其溶解於擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少1種溶劑而成之溶液，較佳爲使用醇類及/或酮類進行溶劑取代。特別是，使用連二亞硫酸鈉等之連二亞硫酸類來作爲還原劑時，爲了完全除去來自連二亞硫酸類之夾雜物、或使水相之pH安定化，較佳爲進行反覆水洗。又如上述般，使用本發明之結晶析出法所採用之醇類及/或酮類(較佳爲和水相溶性高之醇類及/或酮類(具體而言，作爲醇類係碳數1〜5、較佳爲碳數1〜4、更佳爲碳數1〜3 之1或2價(較佳爲1價)醇；作爲酮類，係丙酮、甲基乙基酮等），並以抗壞血酸類進行還原時，依據前述結晶析出法，從還原反應液中直接將還原型輔酶Qb結晶析出(直接單離法），乃極簡便且效率良好的結晶析出法。這時，在上述方法中進行還原反應後，較佳爲，進行冷卻、濃縮或弱溶劑添加（較佳爲添加水），更佳爲冷卻或濃縮’再佳爲冷卻，再將還原型輔酶Qi〇予以結晶析出。又，這時，還原 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •.«I裝 --------40. A7 1237018 ___B7 ___ 五、發明說明（户）反應中之溶劑雖沒有特別的限制，但較佳爲主成份爲上述醇類及/或酮類之溶劑。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 通常，基於反應速度、反應產率之觀點’溶劑中上述醇類及/或酮類之比例，約50w/w%以上，較佳爲約 60w/w%以上，更佳爲約70w/w%以上；若考慮到要利用於接下來的結晶析出，再佳爲約80w/w%以上，特佳爲約 90w/w%以上，極佳爲約93w/w%以上。反應時倂用水的情形，溶劑中上述醇類及/或酮類之比例，其下限爲約90w/w%以上，較佳爲約91w/w%以上，更佳爲約92w/w%以上，再佳爲約93w/w%以上；其上限爲約 99.5w/w%以下，較佳爲約99w/w%以下，更佳爲約 98w/w%以下，再佳爲約97w/w%以下。最適當的範圍爲約 93〜97w/w% 〇依據本發明，可作業性且經濟性良好的製得高品質的還原型輔酶Q1()結晶。依本發明所得之還原型輔酶Qi◦結晶，還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1()之重量比96/4以上、較佳爲98/2以上、更佳爲99/1以上是可期待的。〔用以實施本發明之最佳形態〕以下列舉實施例來對本發明作更詳細的說明，但本發明並不限於該等實施例中。又，實施例中還原型輔酶Q10 之純度、還原型輔酶Q1()和氧化型輔酶Qh之重量比係依下述HPLC分析來求得，但所得還原型輔酶Q1()之純度並非用來規定本發明的純度之界限値。同樣地，還原型輔酶 Q10和氧化型輔酶Q1()之重量比也不是用來規定其上限値。 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1237018 ____B7_ 五、發明說明（) (HPLC分析條件） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 管柱：SYMMETRY C18(Waters 製），250mm(長度）， 4.6111111(內徑），移動相：（：2115011:(：113011=4:3〇:¥)，檢測波長·· 210nm，流速：lml/min，還原型輔酶Q1G之保持時間·· 9.1分，氧化型輔酶Q1()之保持時間：13_3分。 (實施例1) 線ρ· 將100g氧化型輔酶Q1()(含0.40%之氧化型輔酶Q9，純度99.4%)於25°C下溶解於l〇〇〇g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉( 純度75%以上）100g溶解於1000ml水而成之水溶液，於25 °C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水l〇〇〇g對庚烷相進行6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將該庚烷相在減壓下進行溶劑取代，調製成50°C的還原型輔酶Q1()之 7%(w/w)乙醇溶液(含100g還原型輔酶Q1G(含0.40%還原型輔酶Q9)。於氮環境氣氛之攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3) 下，以l〇°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得95g白色的乾燥結晶(含0.19%還原型輔酶Q9，除去率53%)(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1q/氧化型輔酶Q10 之重量比爲99.3/0.7，還原型輔酶Qio之純度爲99.0%。又 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1237018 μ _______B7__ 五、發明說明（：4 ) ，獎料之過濾係使用鋪設濾紙之直徑2〇cm的吸爐器 (nutsch)，用吸氣器進行減壓。過濾所需時間爲12分。 (實施例2) 和實施例1在完全相同的條件下進行從還原反應到水洗之一連串的操作，製得還原型輔酶Qk之庚烷溶液（含 l〇〇g還原型輔酶Qi〇(含〇·40%還原型輔酶Q9)。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，調製成50°C的還原型輔酶 Qio之7%(w/w)2 -丙醇溶液。將該溶液於氮環境氣氛之攪拌(攪拌所需動力0.3kw/m3)下，以10°c/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好），依冷2-丙醇、冷水、冷2 -丙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(2〇〜40°C，1〜30mmHg)，獲得94g白色的乾燥結晶(含0.20%還原型輔酶Q9,除去率 50%)(有效產率94莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q1(>之重量比爲99.3/0.7，還原型輔酶Q1q之純度爲 99.0%。 (實施例3) 將100g氧化型輔酶Q1G(含0.4〇%之氧化型輔酶Q9，純度99.4%)於25°C下溶解於1000g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉( 純度75%以上）100g溶解於1000ml水而成之水溶液，於25 °C、PH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去 26 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線座 A7 1237018 ______B7___ 五、發明說明（/) 水相’用脫氣後的飽和食鹽水1000g對庚烷相進行6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將該庚烷相在減壓下進行溶劑取代，調製成50°C的還原型輔酶Q1()之 7%(w/w)丙酮溶液(含100g還原型輔酶q1q(含0.40%還原型輔酶Q9)。於氮環境氣氛之攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3) 下’以10°C/小時的冷卻速度冷卻至，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好) ’依冷丙酮、冷水、冷丙酮的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2它）濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40 t：，1〜30mmHg)，獲得93g白色的乾燥結晶(含0.21%還原型輔酶Q9，除去率48%)(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1G之重量比爲99.2/0.8，還原型輔酶Q1G之純度爲98.9%。 (實施例4) 和實施例1在完全相同的條件下進行還原反應，再進行溶劑取代，調製成50°C的還原型輔酶Q1()之7%(w/w)乙醇溶液(含100g還原型輔酶Q1()(含0.40%還原型輔酶Q9)。在該乙醇溶液中添加50g水，在攪拌（攪拌所需動力〇.3kW/m3)下，以10°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示非常良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾(相較於實施例1，其過濾性極爲良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨（洗淨所用 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1237018 _____B7___ 五、發明說明（> ) 之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥 (20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得97g白色的乾燥結晶（含〇·21%還原型輔酶Q9，除去率48%)(有效產率97莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1()之重量比爲 99.2/0.8，還原型輔酶Q1G之純度爲98.9%。 (實施例5) 將100g氧化型輔酶Q1Q(純度99.4%)於25°C下溶解於 1000g醋酸乙酯。邊攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉(純度75%以上）100g溶解於1000ml水而成之水溶液，於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水1000g對醋酸乙酯相進行6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將ll〇〇g之該醋酸乙酯相，在減壓下、於48°C濃縮成300g，於氮環境氣氛下，邊維持 48°C邊添加乙醇1100g及水50g後，在攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下，以10°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(相較於實施例1，其過濾性極爲良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨 (洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得91g白色的乾燥結晶(有效產率91莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1q/氧化型輔酶Q!。之重量比爲99_1/0·9，還原型輔酶Qi。之純度爲 98.8%。 28 才、紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂---------· A7 1237018 ________ Β7___ 五、發明說明（ >飞） (實施例6) 將100g氧化型輔酶QM純度99·4%)於25°C下溶解於 1000g庚烷，添加2.9N硫酸ll〇〇g及鋅粉15g後，在攪拌 (攪拌所需動力0.3kW/m3)下，於25°C進行6小時的還原反應。添加濃鹽酸l〇〇〇g後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水1000g對庚烷相進行6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將該庚院相，在減壓下進行溶劑取代，調製成50°C之還原型輔酶Q1()之7%(w/w)乙醇溶液。於氮環境氣氛下，邊攪拌（攪拌所需動力 0.3kW/m3)邊以l〇°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得95g白色的乾燥結晶(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶 Q1〇之重量比爲99.3/0.7，還原型輔酶Q1()之純度爲99.0% 〇 (比較例1) 和實施例1完全相同的，經飽和食鹽水進行水洗後製得含有l〇〇g還原型輔酶q1g之庚烷相(含0.4〇%還原型輔酶 Q9，純度99.4%)。將該庚烷相，於攪拌（攪拌所需動力 0.3kW/m3)下，以1(TC/小時的冷卻速度從50〇c冷卻至2〇c ’使結晶析出。漿料的流動性差，從結晶析出容器中取出 29 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（2iq X 297公楚） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

0 n H ϋ n n n n 一：OJI ϋ I n 1 n I I I A7 1237018 ________B7___ 五、發明說明（/ ) 要比實施例1來得困難。以上所有的操均在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇、冷庚烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜4〇°C ’ 1〜30mmHg)，獲得93g白色的乾燥結晶(含〇·29%還原型輔酶Q9，除去率28%)(有效產率93莫耳％) ◦所得結晶之還原型輔酶QW氧化型輔酶Qw之重量比爲99_6/0·4，還原型輔酶Q1()之純度爲99.2%。又，漿料之過濾係使用鋪設濾紙之直徑20cm的吸濾器(nutsch)，用吸氣器進行減壓。過濾所需時間爲37分。在光學顯微鏡下觀察所得的結晶和實施例1〜6的結晶，其係呈現明顯小於實施例1〜6之針狀結晶。 (實施例7) 將100g氧化型輔酶Q1G(純度99·4%)於25°C下溶解於 l〇〇〇g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉（純度75%以上）40g溶解於 1000ml水而成之水溶液，於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水l〇〇〇g對庚烷相進行6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將該庚烷相在減壓下進行溶劑取代，調製成50°C的還原型輔酶q1g之7%(w/w)乙醇溶液(含100g 還原型輔酶Q1Q。於氮環境氣氛之攪拌（攪拌所需動力 0.3kW/m3)下，以urc/小時的冷卻速度冷卻至2T：，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容 30 才、紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^碰 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝

n n n I 一 (OJa I n n I n ϋ I A7 1237018 ____Β7_ 五、發明說明（) 器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨（洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°c)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得95g白色的乾燥結晶(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1G之重量比爲99·2/0·8，還原型輔酶Q1G之純度爲 98.9%。 (實施例8) 除所使用之氧化型輔酶Qio中的純度爲98.4%(含 1.00%氧化型輔酶Q9、0.3〇%氧化型輔酶Q8、0.04%氧化型輔酶Q7)以外，和實施例1完全相同的，調製出50°C之還原型輔酶Q1Q之7%(w/w)乙醇溶液(含1.00%還原型輔酶Q9 、〇·3〇%還原型輔酶Q8、0.〇4%還原型輔酶Q7)。在該乙醇溶液中添加50g水，於攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下，以3°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出◦以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1相比，過濾性極爲良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg) ，獲得95g白色的乾燥結晶(含0.52%還原型輔酶Q9，除去率48%，未檢測出還原型輔酶Q8及還原型輔酶Q7)(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q10 之重量比爲99.3/0.7，還原型輔酶Q1G之純度爲98.7%。 31 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1237018 ________B7__ 五、發明說明（俨） (實施例9) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在1000g乙醇中，加入100g氧化型輔酶Qi。(純度 99.4%)、60g之L -抗壞血酸，於78°C攪拌，進行還原反應。30小時後，冷卻至50°C，維持該溫度而添加400g乙醇。邊攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)該乙醇溶液，邊以10 °C/小時的冷卻速度冷卻至YC，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲 2 °C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜40 °C， 1〜30mmHg)，獲得95g白色的乾燥結晶(有效產率95莫耳 %)。所得結晶之還原型輔酶QW氧化型輔酶Q1()之重量比爲99.5/0.5，還原型輔酶Q!。之純度爲99.2%。 (實施例1〇) 在1000g乙醇中，加入100g氧化型輔酶Q1q(純度 99.4%)、60g之L-抗壞血酸，於78°C攪拌，進行還原反應。30小時後，冷卻至50°C，維持該溫度而添加330g乙醇和70g水。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)該乙醇溶液，邊以10°C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示非常良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1相比，過濾性極爲良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨（洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得97g白色的乾燥結晶(有效 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1237018 _____B7_ 五、發明說明（W ) 產率97莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶 Q10之重量比爲99·5/0.5，還原型輔酶Q1()之純度爲99.2% 〇 (實施例11) 在1000g丙酮中，加入100g氧化型輔酶Qi。(純度 99.4%)、60g之L -抗壞血酸、30g碳酸氫鈉，於50°C攪拌，進行還原反應。45小時後，維持該溫度而添加400g丙酮。邊攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)該丙酮溶液，邊以10 °C/小時的冷卻速度冷卻至2°C，使結晶析出。漿料顯示良好的流動性，能容易的從結晶析出容器中取出。將所得漿料實施減壓過濾(和實施例1同樣的過濾性良好），依冷丙酮、冷水、冷丙酮的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲 2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜40°C， 1〜30mmHg)，獲得93g白色的乾燥結晶(有效產率93莫耳 %)。所得結晶之還原型輔酶QW氧化型輔酶Qn之重量比爲99.5/0_5，還原型輔酶Qi。之純度爲"·2%。 (參考例1) 在表1所示之各種溶劑20g中，於25°C下溶解lg之還原型輔酶Q!。(還原型輔酶Q!。/氧化型輔酶Qk之重量比爲99.6/0.4)。在大氣中，於25°C攪拌24小時後，測定液中之還原型輔酶Qi〇/氧化型輔酶Q1()之重量比，其結果顯於表1。 33 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -n n 1 n n 一一^· n ϋ n ϋ ·ϋ βϋ 線響· 1237018 A7 ___________B7 五、發明說明（:〗>) 表1 溶劑 R _ 庚院 99.1/0.9 己烷 98.7/1.3 甲苯 98.8/1.2 氯仿 98.9/1.1 醋酸乙酯 98.9/1.1 甲基特丁基醚 98.6/1.4 四氫呋喃 98.5/1.5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) R :還原型輔酶Qio/氧化型輔酶Qi〇之重量比 (參考例2) 在表2所示之各種溶劑l〇〇g中，於35°C下溶解lg之還原型輔酶Q1()(還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲99.6/0.4)。在大氣中，於35t攪拌24小時後，測定液中之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1()之重量比，其結果顯於表2。表2 溶劑 _R__ 庚烷 96.7/3.3 醋酸乙酯 96.4/3.6 乙腈 96.0/4.0 R :還原型輔酶Qi。/氧化型輔酶Q!。之重量比〔產業上之可利用性〕本發明由於具備上述構成，實爲一工業規模的作業性 34 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1237018 A7 __B7___ 五、發明說明（V)) 、經濟性優異之方法，而能簡便且富效率的製得高品質的還原型輔酶Qi。結晶。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) « elm I ϋ n n n n 一 ον I ϋ in n ϋ ϋ n < 公告本申請曰期案號類別伞兔H (以上各欄由本局填註）

A4 C4 1237018 發明薪型專利説明書 -、2名稱新型中文還原型輔酶QK)結晶之製造法英文姓1 名國籍 1. 植田尙宏 2. 北村志郎 3. 上田恭義一發明一、創作 1·2·3·臼本住、居所 1 ·日本兵庫縣垂水區塩屋町6 丁目31 -17-2018 2. 日本兵庫縣明石市相生町1 丁目1〇_36-601 3. 日本兵庫縣姬路市網干區和久140-15 姓名 (名稱）鐘淵化學工業股份有限公司國籍日本三、申請人住、居所 (事務所）日本大阪府大阪市北區中之島3-2-4 代表人姓名武田正利 -3- 訂 --;--1- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）裝

Claims

£. 2.-2H AH B8 C8 D8 申請專利範圍 1、一種還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其特徵在於，係在醇類及/或酮類之溶液中進行還原型輔酶Q1Q之結晶析 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 出。 2、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係在醇類溶液中進行還原型輔酶Q1Q之結晶析出。 3、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q10結晶之製造法，其中，該醇類爲碳數1〜20之1價醇。 4、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q10結晶之製造法，其中，該醇類爲碳數1〜5之1價醇。 5、如申請專利範圍第4項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，該碳數1〜5之1價醇爲乙醇。 ^0. 6、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係在酮類溶液中進行還原型輔酶Q1Q之結晶析出。 7、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，該酮類爲碳數3〜6之酮。 8、如申請專利範圍第7項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，該碳數3〜6之酮爲丙酮。 9、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q1〇結晶之製造法，其中，溶劑中醇類及/或酮類之比例爲 80w/w%以上。 10、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q10結晶之製造法，其中，係倂用水作爲輔助溶劑。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1237018 - - cs D8 六、申請專利範圍 11、如申請專利範圍第10項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，溶劑中醇類及/或酮類之比例爲 90〜99.5w/w% 〇 12、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q1〇結晶之製造法，其中，該結晶析出，係以冷卻結晶析出、或將冷卻結晶析出組合擇自濃度結晶析出及溶劑取代結晶析出之其他結晶析出方法來進行。 13、如申請專利範圍第12項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，結晶析出時之冷卻溫度爲25°C以下。 14、如申請專利範圍第12項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，冷卻速度爲4〇°C/小時以下。 15、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q10結晶之製造法，其中，結晶析出濃度，相對於結晶析出終了時之結晶析出溶劑的重量，還原型輔酶Qio之重量爲 15w/w% 以下。 16、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Qm結晶之製造法’其中’結晶析出’係在每單位容積之攪拌所需動力爲0.01kW/m3以上的強制流動下實施。 17、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q1 〇結晶之製造法’其中’結晶析出係添加種晶。 18、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q](>結晶之製造法’係在脫氧環境氣氛下實施。 19、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Qio結晶之製造法’係將雜質自母液中除去。 2 ^張尺標準(CNS)A4 規格(210 X 297 公H — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1237018 i C8 D8 I ；~ 六、申請專利範圍 20、如申請專利範圍第19項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，所除去的雜質，係擇自還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、及還原型輔酶Q7中之至少1種。 21、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶q1q結晶之製造法，其中，還原型輔酶Q1()之醇類及/或酮類溶液，係將還原型輔酶Q1()溶解在擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類及腈類中之至少1種溶劑而成之溶液，用醇類及/或酮類進行溶劑取代而得者。 22、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，還原型輔酶Q1()溶解在擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類及腈類中之至少1種溶劑而成之溶液，係使用氫化金屬化合物、鐵、鋅、連二亞硫酸鹽類、或抗壞血酸類作爲還原劑，並使用擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類及腈類中之至少1種溶劑來將氧化型輔酶Q1G還原後，採取含有所生成之還原型輔酶Q1()之有機相，視需要將該有機相實施水洗而得者。 23、如申請專利範圍第22項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係使用連二亞硫酸鹽類作爲還原劑。 24、如申請專利範圍第23項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，使用連二亞硫酸鹽類之還原，係在水共存下、於pH3〜7的範圍實施。 25、如申請專利範圍第22項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係使用抗壞血酸類作爲還原劑。 26、如申請專利範圍第22〜25項中任一項之還原型輔_ 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁)

A8B8C8D8 1237018 六·、申請專利範圍酶Q1()結晶之製造法，其中，該還原係在脫氧環境氣氛下進行。 27、如申請專利範圍第1〜8項中任一項之還原型輔酶 Q]〇結晶之製造法，其中，係從含有還原型輔酶Q1()之醇類及/或酮類溶液中，進行還原型輔酶Q1()之結晶析出；該溶液，係藉由將氧化型輔酶Q1()在醇類及/或酮類溶液中還原成還原型輔酶Q!。而得者。 28、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係從含有還原型輔酶Q1()之醇類溶液中，進行還原型輔酶QI()之結晶析出；該醇類溶液，係藉由將氧化型輔酶Q1()在醇類溶液中還原成還原型輔酶。而得者。 29、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，該醇類爲碳數1〜20之1價醇。 30、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，該醇類爲碳數1〜5之1價醇。 31、如申請專利範圍第30項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，該碳數1〜5之1價醇爲乙醇。 32、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1()結晶之製造法，其中，係從含有還原型輔酶Q1Q之酮類溶液中，進行還原型輔酶Q]()之結晶析出；該酮類溶液，係藉由將氧化型輔酶QI(>在酮類溶液中還原成還原型輔酶Q1Q而得者。 33、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1()結晶之 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297 W爱) ------------------............._1Τ----------------t· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1237018 - C8 D8 六、申請專利範圍 _製造法，其中，該酮類爲碳數3〜6之酮。 34、如申請專利範圍第33項之還原型輔酶Q1G結晶之製造法，其中，該碳數3〜6之酮爲丙酮。. 35、如申請專利範圍第27項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係使用抗壞血酸類作爲還原劑。 36、如申請專利範圍第35項之還原型輔酶Q1Q結晶之製造法，其中，係在鹼性物質或亞硫酸氫鹽之共存下進行還原。 5 ------------------...........IT----------------t· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐)