TW589383B - Method for producing hydrolyzed protein - Google Patents

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589383 A7 B7__ 五、發明説明（1 ) 技術領域 本發明關於一種製造被水解之蛋白質的方法’更明確 地說，它關於一種製造被水解之蛋白質的方法’其中在利 用酵素水解法將將一種含固體狀態之蛋白質的植物性蛋白 .質原料水解的步驟中，水解作用是以一種特殊方式進行， 經由此法，所產生的被水解物質不會變成棕色或者是所產 生之水解物質在變成棕色前所經過的時間明顯地延長了。 發明背景 以含有固體狀態之植物性蛋白質爲起始物質，經由酵 素水解法來獲胺基酸的方法已知有很多種。 例如，JP — A— 5 1 — 3 546 1中說明一種用來 製造液體調味料的方法，它包含了：①首先，將一種含可 溶氮指數爲5 0或更低之改良的脫脂大豆與一種碱性蛋白 酶（P Η値爲9到1 2 )反應2小時，經由這個步驟可溶 解並萃取7 0 %或更多之由蛋白質衍生的氮成分以進行固 體—液體分離，②在4 0〜6 0 °C下，於一個密封容器中 以肽酶將萃取物進行水解。 還有’ JP — A — 6 — 125734中說明一種酶的 製品I ’此製品是將一種經由微生物之固體培養所形成的麴 ’經過有機溶劑浸泡後所取得的製品，文中還說明一種含 有經由麴自溶後所得到之肽鏈外切酶的製品及一種製造蛋 白質的液體調味料的方法，此方法包括：將一種動物性或 f直牧/性g 0質原料與蛋白質溶解酶反應，然後再以一種含 本紙張尺度適用中國國家格（210χ297公釐）--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 589383 A7 B7 五、發明説明（2 ) 月太鍵外切酶的製品與此反應產品進行反應。 還有’ J P — A— 9 — 750 32中說明了一種製造 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 言周味料的方法’其中當用於製造醬油的麴，在3 5到4 5 °C下’於醇的存在下進行酵素水解時，必須讓反應物產生 大量蒸氣’以使水解作用完成後，產品中的醇濃度爲2 % 或更少，然後再使用水解物發酵、老化。 還有’ JP — A— 9 — 1 2 1 807中說明了一種多 用途的調味料，此調味料中帶有高麴胺酸鹽含量及一種獨 特之酸水解調味料的味道，而沒有醬油味及釀造味。此調 味料是藉著同時進行麹黴黴菌屬）的培養與介質中之 蛋白質的水解作用而製成的，而此蛋白質之水解作用是藉 著麴黴培養物中所含有的酶來進行的且此製造方法是在不 含鹽或僅有一點鹽的存在下進行的。 然而，當經由這些傳統方法所製出的水解產物被貯存 起來的，它們在很短的時間內就會產生變色的問題，且此 類型品會棕色化的很快因而使其商業價値很明顯地降低了 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 任何將含有固體蛋白質的蛋白質原料經由酵素水解法 來製造胺基酸的已知方法都會牽涉到微生物污染的問題。 在這些方法中，除了那些在水解步驟中用來做爲酵素來源 的微生物外，其它稱爲污染物的微生物都會降低水解物的 品質並減少胺基酸的產量。爲了解決此問題，在傳統方法 中的水解步驟便使用了抑菌物質（如：醇、氯化鈉及醋酸 乙酯）。在這些方法中，於水解步驟完成後必須再多加一 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 589383 A7 B7 五、發明説明（4 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 爲了解決前述問題，本發明者進行了許多實驗及硏究 。這些實驗和硏究是關於一種可將含有不同的植物性蛋白 質的蛋白質原料進行酵素水解的方法以及關於所產生之水 解產物的棕色化作用和其所處狀況之間的關係。結果，本 發明者找到了下列（1 )至（3 )項的新發現。 (1 )水解產物棕色化的發生和進展與水解反應一完 成後所得到之反應產物中的還原糖濃度很有關係。也就是 ，當還原糖的濃度高時，反應後馬上開始棕色化.，且即使 是在平常的保存環境下也會很快地繼續棕色化。 (2 ) —但開始棕色化時，要找到一個能有效抑制棕 色化的進展的方法是很困難的。 (3 )經由特定的方法及其條件可以將水解反應後之 立即產物所含的還原糖濃度控制在低於事先決定的濃度以 下。另外，在此特定之方法和條件中，蛋白質本身的水解 速率和所產生之胺基酸的組成比例大體上沒有改變。 本發明者在關於蛋白質原料和培養介質方面也得到下 歹[J ( 4 )至（6 )的新發現。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (4 )在水解步驟中所生長的污染物爲那些存於固體 蛋白質原料中及做爲酵素來源的微生物培養中的污染物。 (5 )當蛋白質原料和培養介質可以完全無菌化時， 則水解步驟大體上可在無污染物的情況下進行。 (6 )蛋白質原料和培養介質的無菌化會受到其中所 含有之空氣和氣泡的限制。換言之，當將其中所含之空氣 和氣泡完全移除後才開始進行無菌處理時，就可以取得大 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 589383 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) 第六個發明是根據第一個發明來製造被水解蛋白質的 方法，其中該植物蛋白質原料至少有部分爲固體狀態，且 此原料在進行酵素水解前先磨成3 0 0微米或更小的粉末 ’分散於高於8 0 °C的熱水中，當含於磨成粉的產品中的 氣泡大體上被移除後便立即進行無菌化處理。 本發明詳述於下。 本發明中所使用的起始物質是一種含糖類的植物性蛋 白質原料。所使用的起始物質有許多種形式，如：粉末、 顆粒、小九、分佈於水溶性溶劑中的分散體及糊狀物。還 有’只要它爲植物性蛋白質原料，其起源並沒有限制。 植物性蛋白質原料的特殊實施例包括：起始物質如： 麥麩、玉米麩、脫脂大豆、分離出的大豆蛋白質、分離出 的馬鈴薯蛋白質及這些植物性蛋白質原料的處理過的產品 。在這些植物性蛋白質原料中，麥麩及脫脂大豆爲本發明 中特別重要的蛋白質原料。 以酵素水解法處理植物性蛋白質原料的方法是先將無 菌的蛋白質原料或貯於抑菌狀態之蛋白質原料分散於水溶 性溶劑中，然後，將分散物與存於水溶性溶劑中之帶有高 蛋白水解活性的黴菌類培養接觸以水解該蛋白質原料。 在水解反應之初，利用一種體系來進行通入空氣和攪 拌的工作是很重要的。在經過一段時間後，先確定比反應 系統是處於一個預定的狀態下後再將反應溫度很明確地轉 移至一較高的溫度範圍內並繼續上述之接觸反應。以此觀 點來看，本方法很明顯地與傳統用來以酵素水解蛋白質原 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝· 、·ιτ ΙΦ. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -9- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 589383 A7 _____B7 五、發明説明（7 ) 料的方法有所不同。因此，此爲本發明方法的主要特徵。 爲了明確地施f了此體系’需要有一個水解反應容器或 反應槽，其上配備有至少一個控制溫度的儀器、一個拌入 空氣的儀器及攪拌儀器。在反應中，拌入空氣的速率爲 Ί / 1 v v η或更小就足夠了。攪拌的儀器只要能配合反 應容器的大小且能完全禁得起如··起始分散體之濃稠度或 反應系統的負擔即可使用。可使用的拌入空氣裝置有許多 種，例如：於製造胺基酸之發酵作用中所使用的浸沒培養 裝置爲一種特佳的反應裝置。 所使用的起始原料在滅菌時或要開始水解前先被磨成 粉狀或被精細切割過以免阻礙攪拌的步驟。無菌處理是利 用在發酵工業中一般常用的方法和裝置來進行的。爲了在 進行水解反應時沒有細菌污染，培養黴菌以做爲酵素來源 的步驟必須在無污染的情況下進行。還有，理所當然的是 ，在反應中，對付細菌污染的方法和該方法的管理應該要 進行得很完善。 在進行蛋白質的解開步驟前，該蛋白質原料最好先磨 至3 0 0 // m的大小或更小，並分佈於8 0 °C或更高溫的 熱水中。蛋白質原料的硏磨處理可參考乾燥蛋白質原料來 進行。然而，當蛋白質原料被大致磨成粉末並同時被分佈 於熱水中時，此步驟可以很方便地繼續轉換成滅菌步驟。 磨粉的條件及用於分佈蛋白質原料之熱水的溫度條件 已經經由對於不同蛋白質原料的許多測試結果而決定出來 。當磨粉的作用儘可能在這些條件下進行且在將近沸騰的 1-------0^-------1T----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -10- 589383 A7 B7 ___________ 五、發明説明（8 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 高溫下進行處理時，可以在接下來的滅菌步驟中得到較好 的滅菌效果。也就是，當其中之顆粒大小爲3 0 0微米（ 或更大）的分散粉末物以熱交換器處理時，在分散粉末物 中之蛋白質原料的顆粒會沈澱，因此便可能會發生熱交換 器之流通途徑被阻塞的危險。所以，滅菌處理也就會無法 真正完成了。 同時，有一個現象就是：當溫度爲8 0 °C或更高時， 含蛋白質原料之細顆粒分散體的黏稠度會突然降.低。 第1圖是一個線性圖，它顯示出在6 0至9 0 °C之間 ，分佈於熱水中，濃度爲3 2 %的麥麩，其黏稠度與溫度 之間的關係。在第1圖中，縱座標表示在規則期間內的黏 稠度，其單位爲1 0 4 c p s (厘泊），而橫座標表示在規 則期間內的溫度，其單位爲°C。在此實施例中可觀察到溫 度在8 0〜8 5 °C間時，黏稠度很明顯地降低了。 本發明中有一種技術上的進步爲··在特定溫度範圍中 ，當蛋白質原料分散體之黏稠度突然下降後，其可操作性 的顯著改進與有效的熱滅菌作用有關。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 當蛋白質原料經過硏磨並分散於熱水中後，該蛋白質 原料的分散體在許多種情況中都顯示出爲乳狀物。然而， 該分散體的黏稠度並沒有增加且此分散體變成一種低黏稠 度的非黏性溶液。因此，空氣和氣泡便不含於此處理過的 分散體中。 當蛋白質原料經過硏磨並分散在熱水中時，可使用一 種符合目的的方法和儀器。例如，可使用下述之方法，此 本紙張尺度適用中國國―家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) .. 589383 A7 B7 五、發明説明（9 ) 丨：-------0^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 方法是將粉末狀的蛋白質原料送入貯存槽中，槽內所含有 的水溶液，其溫度是維持在事先設定的溫度下，然後，此 分散體再被送入一種乳化器中攪拌以進行乳化作用及分散 處理。 在分散處理中，重要的是要確定空氣和氣泡不會附著 也不會包含在經分散處理過後之分散體的蛋白質原料細粒 內。此時，經分散處理後的分散體需在放大的顯微鏡視野 內觀察一星期，以鑑定氣泡大致上沒有附著在分散的細粒 上，然後再讓這些分散的細粒與液相部分直接接觸。 如果經過分散處理後的分散體中有氣泡存在的話就無 法達到事先預期的滅菌效果，即使是接下來的滅菌步驟中 進行了高溫處理。還有，在滅菌器進行操作時，也有發生 嚴重問題（如：阻塞）的可能性。 4 當分散體中有氣泡存在時，滅菌作用便可能無法完全 進行。因爲熱力無法均勻分佈在滅菌器中並且無法作用在 氣泡所包圍的細菌細胞或孢子上。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經過分散處理後，分佈在熱水中之蛋白質原料便繼續 進行滅菌步驟，用於滅菌步驟中的方法及裝置並沒有特別 限制。使用連續滅菌法或在一種裝置中分批滅菌以進行水 解作用者都可使整個步驟順利進行。經由此滅菌處理後的 蛋白質原料分散體就變成大體上爲無菌狀態。還有，此樣 品也可依需要經收集後再鑑定爲無菌。 盤狀的熱交換器或噴嘴式加熱器特別適合做爲連續式 的滅菌設備。當經由上述方法所製得的蛋白質原料熱水分 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12- 589383 A7 B7 五、發明説明（n) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 到效果，或者，當減菌處理因爲某些原因而無法令人滿意 時也可以在有抑菌物質的存在下進行水解反應，此種抑菌 物質可與細菌共存於相同的系統中並抑制細菌的生長。 加入水解反應系統中的抑菌物質實施例包括：氯化鈉 、乙醇和醋酸乙酯。還有，這些抑菌物質是參考加入的模 式而取適量加入系統中。另外，在乙醇方面，能有效形成 乙醇的酵母也可能共存於系統中。 在任何一種使用這些抑菌物質的情況下，當水解反應 完成後，需將抑菌物質自反應混合物中以分離步驟移除。 如果要將這些物質經分離步驟有效地移除卻不降低水解產 物的品質是很困難的，且這並不符合經濟效益。特別是， 若要將氯化鈉經分離步驟移除的話，會需要一種新的儀器 也因此就只能取得一種含大量氯化鈉的水解產物而無其它 的替代法，而此種產品的用途當然也是有所限制的。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 第2圖的線性圖，所顯示的是在水解系統中，於各個 溫度下所進行的各個反應時間結束後，其中所形成和累積 的麩胺酸（GH)濃度（單位：毫克/百毫升）。還有， 第3圖的線性圖所顯示的是在各個溫度下，當各個反應時 間結束後，於水解系統中的葡萄糖（G 1 c )濃度（單位 :毫克/百毫升）。 虽比較第2圖和第3圖時可以淸楚地看到並推論知： 在水解反應時若故意變動反應溫度的話，由所形成和累積 之葡萄糖濃度所代表之糖類的量（特別是，還原糖的量） 可以選擇性地降低且大致上不會影響此蛋白質的水解反應 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14- 589383 A7 B7 五、發明説明（12 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 速率，也就是，由所形成和累積之麩胺酸濃度所代表的胺 基酸形成速率）。還有’也可以推論知：最後所得到之反 應產品中的糖濃度和量可以調整到低於預定的程度。 第2圖透露出，所形成和累積之麩胺酸的濃度會跟著 反應溫度的增加而增加，也會跟著反應時間的消逝而增加 。同時，第3圖透露出所形成和累積之葡萄糖的濃度在反 應溫度爲3 6至3 9 °C之間時，隨著反應時間的消逝（經 過5至1 0小時）而突然下降。由此點可預測到：在反應 溫度介於3 6至3 9 °C的條件下，於反應期間內，葡萄糖 一旦形成後會很快地分解並被黴菌所消耗掉。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 也就是，將無菌的植物性蛋白質原料及黴菌培養和液 態麹在水解反應瓶中加以混合。然後，將混合物首先在 1 5 °C至3 9 °C間（以2 5 °C至3 8 °C較佳）進行反應， 並一邊拌入空氣一邊攪拌，接著，在4 0 °C至6 0 t的溫 度間（以4 1 °C至5 0 °C較佳）停止拌入空氣以使反應完 成，結果，於水解反應系統中所形成和累積的糖量，尤其 是還原糖，可在大體上不影響到蛋白質水解速率（也就是 胺基酸的形成速率）的情況下，選擇性地降低，而且，在 最後所得之反應產品中所存在之還原糖的比例可以調整到 低於重量百分比5 %或更少（以反應產品中之全部固體含 量爲根據）。 還有，當要將在溫度1 5 °C至3 9 °C的範圍內所進行 之反應轉換成在4 0 °C至6 0 °C間所進行的反應時，其時 間是設定在從起始時間開始算起，約經過了全部反應所需 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 77 589383 A7 B7 五、發明説明（14 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 換之時間的設定及最後反應產物中之還原糖的比例都是從 許多實驗中所得之結果明確歸納出來的。這些實驗是利用 許多種蛋白質原料及許多來自不同種類之種子的液態麴於 不同條件下進行的。 還有，從這許多測試實驗的結果來看，最好儘可能將 上述二種型態的溫度範圍區分淸楚。也就是，水解反應最 好是先在相當低的溫度下開始，然後，在溫度轉換後，再 於相當高的溫度下進行反應。還有，在考慮到於許多情況 中，水解反應所需之全部時間約爲2 4小時後，發現到： 右將溫度轉換的時間設定在約反應開始後的第8小時（也 就是約經過所預期之全部反應時間長的3 0 % )的話可以 得到較好的結果。還有，在最後反應產物中的還原糖比例 應該爲5%或更少，以3%或更少較佳，以1·5%或更 少最佳（此比例是以全部固體含量爲根據）。也就是，5 %的比例是其上限。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 因此，關於在以一種特殊的植物性蛋白質及特殊液態 麴來進行的水解反應中所使用的二種溫度範圍及轉換溫度 的特定時間點的設定就必須在以特定蛋白質原料進行預先 試驗時先決定出在上述範圍內之理想的溫度範圍及時間値 〇 在上述水解反應條件下所得到的水解產物爲一種淡黃 色、半透明的液體，其中含有麴黴細胞分散於其中。經由 加入活性碳來進行脫味和脫色處理後，再以固體-液體分 離法進行分離處理可得到一種淡黃色的透明液體，此液體 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 589383 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（15 ) 一種胺基酸溶液，具有濃稠、可口的味道而且沒有特殊之 令人不舒服或討厭的味道。 經由上述之水解反應所得的酵素水解蛋白質溶液可直 接做爲gj|味料。然而，在許多種情況下，會先將此種溶液 進行脫色處理、去味處理（如：以活性碳處理）或純化處 理（如··濃縮處理）再提供產品。或者，可根據使用的目 的’將匕做成濃縮的糊狀物、成片的粉末、噴霧乾燥的粉 末、顆粒、或方塊。偶而，在水解反應步驟中沒有使用抑 园物質（如：氯化鈉）所得到的產品可具有多用途的特徵 ’因爲它除了不會很容易地棕色化外，其用途也很廣。 圖形的簡單說明 第一圖是一種線性圖，此圖顯示出在熱水中，小麥蛋 白質分散體的黏度和溫度之關係。 桌一圖的線性圖是顯不在使用不同的反應溫度和一種 反應時間時，於水解反應系統中所形成和累積的麩胺酸濃 度與它們的關係。 第二圖的線性圖是顯不當使用不同的反應溫度和一種 反應時間時，於水解反應系統中所形成和累積之葡萄糖濃 度和它們的關係。 弟四圖的線性圖顯不出在反應中經由變化水解反應溫 度條件後所得到的產物與不變換溫度條件時所得到的產品 ，這二者在進行炙熱測試時，吸收度的增加情形有很大的 不同。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I 裝 訂 A (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -18 589383 A7 B7 五、發明説明（16 ) 實行本發明的最好模式 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明可參照下列特殊實施例來說明。另外，下列實 施例並不是要限制本發明的技術範圍。 實施例 實施例1 :抗棕色化之麥麩水解產物的製造方法 (麥麩之乳狀化預先處理） 將4 0 0升的城市水引入一個1 0 0 0升大的槽內， 此槽帶有一個名爲''荷磨麥克林硏磨器〃（由 ''塔庫舒· 吉卡可K · K 〃提供）之用於乳化作用的機器，以衝撞切 剪的方式來進行乳化。將槽內的水加熱，當溫度達到9 5 °C時，乳化器便開始操作。將2 0公斤之活性麥麩加入槽 中。待乳化器操作3 0分鐘後，麥麩便會成爲一種完全乳 化的分散體，同時，麥麩所特有之黏著伸縮性也消失了。 在此分散體中，沒有麥麩凝塊（稱爲 ''團塊〃）也沒有泡 泡可在略爲放大的顯微鏡視野下觀察到。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在乳化之分散體中的麥麩顆粒直徑平均大小爲1 5 0 微米（至少爲10微米，至多爲900微米）。還有，麥 麩顆粒的濃度爲5 0克/升。 (用於液態麴之脫脂大豆的預先處理法） 將經由約略粉碎未改良之脫脂大豆而來的脫脂大豆粉 (由 > 多由·塞玉K · K · 〃提供）在一個能加熱的混合 器中一邊加熱一邊混合，以在9 8 °C下，進行加熱處理 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 589383 A7 _B7___ 五、發明説明（17 ) 2 0分鐘。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (用於液態麴之脫脂大豆的無菌處理） 在一個用來製造胺基酸的 ''浸沒培養發酵型〃反應瓶 中，裝入2 5 °C水2 0 0升，再將3公斤之經加熱處理過 的脫脂大豆粉倒入其中以得到一種不含氣泡之均勻的脫脂 大豆粉分散體。接著，將此分散體以1 2 0 °C之超高熱蒸 汽，加熱2 0分鐘來進行''分批熱滅菌〃處理。. (液態麴的製造方法） 將體積爲1 %的麴黴（米麵黴ATCC15240) 種子培養植入經熱滅菌過之脫脂大豆粉分散體中，此麴黴 的種子培養是經由先將濃度爲1 0 4孢子/毫升的孢子種入 含1 · 5%脫脂大豆粉之介質中，於一個5升大的發酵器 中加以培養而得的。植入後，將此培養物在3 0 °C下，培 養2 4小時以得到液態麴，其中，通入空氣的速率爲1 / 4vvm，攪動速度爲52〇rpm。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (液態麹的評估） 所產生之液態麴的蛋白酶活性爲3 0 4單位/毫升， 並且除了麹黴外沒有其它細菌的污染也沒有觀察到有細菌 的生長。 (麥麩的水解作用） 20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 589383 A7 B7 五、發明説明（19 ) 下，以超高熱蒸汽將此麥麩分散體進行分批熱滅菌處理 2 0分鐘。當滅菌處理完成後’將分散體的溫度降至5 0 °C，再把一半量的液態麴加入其中。進行水解作用時一邊 通入空氣、一邊攪拌，但反應期間’須將分散體的溫度一 直維持在4 5 °C直至第2 4小時反應完成’而不變換溫度 0 在反應期間，反應系統中的胺基酸的濃度（就麩胺酸 的濃度而言）從反應開始便逐漸地增加。同時，反應系統 中的還原糖濃度（就葡萄糖的濃度而言）從反應開始快速 增加至第3小時並從第8小時起大約維持在最大量直到第 2 4小時反應完成。當第2 4時反應完成時，葡萄糖濃度 達到6 . 6 %。在整個反應期間可以看到，麩胺酸濃度增 加的速度與上述之提高並控制反應溶液溫度的情況相比， 其增加的速度總是稍慢了 一些。 將經由上述方法所得到之麥麩測試水解產物（以下稱 爲 > 測試產品〃）與供比較用之麥麩對照水解產物（以下 稱爲 ''對照產品〃）進行離心以分離並移除麴黴細胞。然 後，將剩餘物通過一層釀造用的顆粒活化碳層以取得純化 的水解產物。將這些純化的水解產物各裝入一個帶有瓶塞 的5 0 0毫升大小之無色透明玻璃瓶內以使其上方部分沒 有空間。將這些裝有樣品的瓶子貯存在一個溫度不受特別 控制且偶而有零星燈光的房間內，以肉眼直接觀察是否有 棕色化的情形及其進展，觀察時間是一裝入瓶內後立即觀 察及經過一星期、二星期、一個月、三個月、六個月和十 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ▼裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -22- 589383 A7 _____B7__ 五、發明説明（20 ) 二個月。結果顯示於表1中，同時還列有在貯存期結束後 將瓶塞打開所立即聞到的味道變化。在表1中，、、棕色化 一攔中的十〃號表示評估結果，共分五級。也就是， 棕色化最嚴重的狀態被定爲第5級，而僅有一點棕色化的 程度則被定爲第1級。還有，在、'焦味〃一欄中的 ''十" * 號表示評估結果共分五級。也就是，當有一種不好的味道 伴隨著棕色化（稱爲、、焦味〃）時，若可明顯地聞到時則 定爲第5級，若僅有一點焦味者定爲第1級。還有，共有 五位評論者參與評估，所得結果是由這些評論者所給與的 評估點數再加以平均且所得的點數改以\'十〃號的數目來 表示。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 589383 A7 ____ _B7 五、發明説明（21 ) 表 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 麥麩水解產物的棕色化反應 貯存期 測試產品 對照產品 棕色化反應 焦味 棕色化反應 焦味 一裝塡好時 姐 j \ w ^fnr ΊΤΓΓ Μ Μ J i 一星期後 並 J V NN 4τΐΓ ΤΤΓΓ j \ \\ Μ J \ + 二星期後 姐 J \ 4τχτ. ΙΤΤΓ j \\\ + + 一個月後 /fml 無 4τγτ ΊΤΓΓ j\\\ + + + 三個月後 yfrni 無 >fnr： JILL j\\\ + + + + + 六個月後 + Μ j\\\ + + + + + + + 十二個月後 + + + + + + + + + + + + 如表1 I 中所顯示的 ，測試產品良丨 ]使經過十二 .個月後棕 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 色化的程度仍很微弱，且、、焦味〃也僅有一點點。因此， 測試產品被評定爲維持了令人滿意的商業價値。同時，在 對照產品中，一塡入瓶內就可觀察到棕色化的現象，且可 聞到一點 '、焦味〃。經過一個月後，、、棕色化〃及、、焦味 〃可淸楚地觀察到。三個月後，''棕色化〃及''焦味〃都 很明顯了。所以，對照產品被評定爲僅具有極少的商業價 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 589383 A7 ____B7 五、發明説明（22 ) 値。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例2 :從其它植物性蛋白質原料製造對棕色化反應有 抗性的被水解蛋白質 以實施例1的方法，利用玉米麩和脫脂大豆來製造對 棕色化反應有抗性的被水解蛋白質 (植物性蛋白質原料的預先處理法） 將由美國明尼蘇達所購得的粉狀玉米麩以實施例1的 方法進行乳化作用。另外，將未經改良的脫脂大豆（從、、 多由·塞玉K · K · " ( Toyoseiyu Κ· K.)購得）磨成 粉末並以實施例1的方法加以乳化。在這些乳化的產品中 看不到任何凝塊（也就是團塊）的產生也沒有出現或含有 任何泡泡。 (液態麴的製造方法） 以實施例1的方法，從脫脂大豆粉來製造液態麴。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (植物性蛋白質原料的水解方法） 將各個玉米麩的乳化分散體和脫脂大豆的乳化分散體 轉移至一個3 0公升大小的發酵器內並進行滅菌。當分散 體的溫度降至5 0 °C時，以實施例1的方法將液態麴加至 各個發酵器內。此水解反應是在和實施例1相同的條件下 進行的。也就是，從反應開始至第8小時，此水解反應中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 17 " ' 589383 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7____五、發明説明（23 ) 的分散體溫度是控制在3 5 °C，並一邊通入空氣一邊攪拌 ，而從第8小時起至反應完成之第2 4小時間則沒有通入 空氣並將分散體的溫度控制在4 5 °C。當水解反應完成時 ，反應產物的葡萄糖濃度重量百分比爲〇 · 9% (此百分 比是以反應產物的全部固體含量爲根據）。 (做爲對照組之植物性起始物質的水解作用） 將依上述方法製得的各個玉米麩乳化分散體和脫脂大 豆乳化分散體個別移至3 0公升大小的發酵器內並進行滅 菌。當分散體的溫度降至5 0 °C時，在各發酵器內加入液 態麴。將分散體的溫度控制在4 5 °C並一邊攪拌以進行水 解反應，但從反應開始至反應完成的2 4小時間溫度並不 做任何改變。當水解反應完成時，反應產物的葡糖糖濃度 重量百分比爲6 · 4% (此百分比是以全部的固體含量爲 根據來計算的）。 (水解產物的貯存試驗） 將所得之水解產物以實施例1中的相同方法進行貯存 試驗。所得結果列於表2和3中以進行比較。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 26- 589383 A7 B7 五、發明説明（24 ) 表 2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 玉米麩水解產物的棕色化反應 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 貯存期 測試產品 對照產品 棕色化反應 焦味 棕色化反應 焦味 一裝塡好時 /fnr ΤΤΓΓ > i ml： 、、 Μ J \ w M j \ \\ 1星期後 ittr j\\\ dfml ΤΤΤΓ j \ \\ M te j \ w 2星期後 4rrr. ΊΤΤΓ 4nt ΙΊΤΤ： + + 1個月後 >fnT ΤΠΤ： J \ w ^fnT ΤΤΓΠ J\\\ + + + 3個月後 ΤΤΓΓ j\w >fnT llrr J \ w + + + + + 6個月後 + >frrr ΙΓΓΓ J i + + + + + + + 12個月後 + + + + + + + + + + + + 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -27- 589383 A7 B7 五、發明説明（25 表 3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 脫脂大豆水解產物的棕色化反應 貯存期 測試產品 對照產品 棕色化反應 焦味 棕色化反應 焦味 一裝塡好時 /firr TlTL· J\\\ J\\\ /fnrr Mil： J\\\ 無 1星期後 jnr J\\\ ±_ 2星期後 4ytt 1111- J \ NN 4πτ 1111. J \ NN + + 1個月後 1111： j\\\ 4rrr ITN： j\\\ + + + + 3個月後 >frnl Titr J\\\ j\\\ + + + + + + 6個月後 + ^fnr ΊΤΓΓ J\\\ + + + + + + + + 1 2個月後 + + + + + + + + + + + + 如表2和3中所顯示的，玉米麩之測試產品和脫脂大 豆之測試產品即使在經過1 2個月後，棕色化反應的程度 仍很弱，也僅有一點點的焦味。因此，本測試產品可被評 定爲能夠維持令人滿意的商業價値。同時，玉米麩和脫脂 大豆之對照產品在一塡入瓶內後就可觀察到棕色化的徵兆 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 έ 589383 A7 B7 五、發明説明（26 ) (雖然它們之間有點不一樣），而且也發現有一點的焦味 ° 1個月後，可以淸楚地發現棕色化反應和焦味，三個月 後’棕色化反應和焦味都很明顯了。因此，該對照產品被 評定爲僅具有極差的商業價値。 工業上的應用 根據本發明的方法，在液態反應系統中，利用一種黴 菌培養從植物性蛋白質原料所製成之被水解的蛋白質可以 在經過一段長時間後仍維持穩定的商業價値而不會有棕色 化反應。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1裝_

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 29

Claims (1)

1. 589383 Η Hr 8 8 8 8 ABCD 六、申請專利範圍 第8 8 1 0 6 4 5 1號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國8 9年1〇月修正 1 · 一種用來製造被水解之蛋白質的方法’其係利用 麴黴（K〇ji mold )之黴菌培養物，，在液態反應系統中’ 將一種含糖類的植物性蛋白質原料進行酵素水解，此方法 包括將植物性蛋白質原料與該麴黴之黴菌培養物混合’然 後，先於1 5 °C至3 9 t的溫度範圍內進行反應並一邊通 入空氣、一邊攪拌，然後在4 0 °C至6 0 °C的溫度範圍內 ，進行並完成此反應。 2 ·如申請專利範圍第1項之用來製造被水解之蛋白 質的方法，其中該植物性蛋白質原料係選自如下之群體： 麥麩、玉米麩、脫脂大豆及其被處理過的產品。 經濟部智慧財/I局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

   3 ·如申請專利範圍第1項之用來製造被水解之蛋白 質的方法，其中該於1 5 °c至3 9 °C之溫度範圍內所進行 的反應在反應開始後、，經過了 1 0 %至6 0 %之完成反應 所需的全部時間後,，便轉變成在4 0 °C至6 0 °c的溫度範 圍內所進行的反應。 4 ·如申請專利範圍第1項之用來製造被水解之蛋白 質的方法，其中在反應完成後所得之反應產品中所存在的 is原糖比例’其重量百分比是調整爲5 %或更少彳此百分 比是以反應產物中之全部固體含量爲根據）。 5 ·如申請專利範圍第1項之用來製造被水解之蛋白 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ：297公釐） 589383 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 質的方法，其中該黴菌培養物的製備及植物性蛋白質原料 的水解反應是在、、浸沒培養槽〃型的反應瓶中進行的。 6 ·如申請專利範圍第1項之用來製造被水解之蛋白 質的方法，其中該植物性蛋白質原料至少有部分爲固體狀 態並在其進行酵素水解之前先被硏磨成3 0 0 // m或更小 ，然後才被分佈於高於8 0 °C的熱水中，且當粉狀產品中 所含之氣泡大致上被移除後便立即進行滅菌作用。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）