TW561046B - A pharmaceutical composition for inhibiting cytokine release from human ocular cells - Google Patents

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561046 A7 B7 五、發明說明（b 發明背景 發明領拔 本發明係關於眼用藥學配方。更明確地，本發明係 關於11-(3-二曱基胺基·亞丙烧）-6,11-二氫二苯並[b，e]°惡庚-2-乙酸之治療及預防的用途，其係供用於治療及/或預防 細胞激素由人類眼細胞釋出，而造成眼部之血管新生或非 過敏性發炎症狀。 相關技藝之敘述 如讓渡給Burroughs Wellcome Co.的美國專利第 4,871，865及4,923,892號（「Burroughs Wellcome」之專利案） 中所教示者，多慮平（doxepin)的某些羧酸衍生物，包括 11-(3-二甲基胺基亞丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚-2_羧 酸以及11-(3-^ —甲基胺基-亞丙烧）-6,11-二氫二苯並[b，e]^ 庚-2(E)-丙烯酸，具有抗組織胺與抗氣喘的活性。此二件 專利案將多慮平之羧酸衍生物分類成具有抗組織胺作用之 肥胖細胞安定劑’因為他們認為能抑制内泌素（即組織胺、 血清素等）由肥胖細胞中釋出，並直接抑制組織胺對於標 的組織之影響。該等Burroughs Wellcome專利案教示了含 有多慮平羧酸衍生物的許多藥學配方；在此二件專利案 中，實例8 ( I )揭示一種眼用溶液配方。 讓渡給Kyowa Hakko Kogyo Co·，Ltd·，的美國專利第 5，116,863號（「Kyowa專利案」）教示有多慮平之乙酸衍生 物’包括Z-ll-(3-二甲基胺基亞丙烧）-6，11-二氫二苯並[b，e] 噁庚-2-乙酸，具有抗過敏與抗發炎的活性。抗發炎活性 本纸張尸、度適用中國國家標準（CNSM4規格⑵0 X 297公釐） !·—！ •裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂--- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4

經濟部智慧財產局員工消費合作.社印S 561046 五、發明說明（2) 係歸因於前列腺素生物合成之抑制活性(參見第28欄第η 至57行）。該Kyowa專利案所揭露之多慮平衍生物係以化合 物（I )來表示： Χ-(0Η2)η·Ζ

X代表善、=CH-或-CHr的化合物被描述成具有強力的抗 過敏活性，而X代表=N_的化合物被描述成具有強力的抗 發炎活性（參見第24攔第20至57行）。目此，對於抗發炎之 應用而言，該Kyowa專利案明示了 ^^為二义的化合物（1)多 慮平衍生物。 在Wistar雄鼠中，該Kyowa專利案顯現出抗過敏活性 與抗發炎活性。對於多慮平之乙酸衍生物而言，該 專利案所教示的藥劑形式包括了廣泛範圍的可接受載劑； 然而，但僅述及口服與輸注的投藥形式。在諸如過敏性結 膜炎等過敏性眼疾的治療上，此等投藥方法需要大劑量的 藥物。 美國專利案第5,641，805號揭示含有11-(3-二甲基胺基 亞丙烧）-6，11-一氫二苯並[b#]噁庚乙酸的局部眼用配 方’其供用以治療過敏性眼疾。 發明概诚 本發明係提供一種用以治療或預防與細胞激素由人 類眼細胞中釋出相關的眼部血管新生及非過敏性眼部發炎 病變之方法。該方法包含藉由將一眼用配方投藥至眼部來 適用中國國家見格⑵0 X 297公t)----- -----------裝--------訂---------^^^^1 (t先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 561046 A7 五 、發明說明（ 抑制細胞激素由人類眼細胞中釋出，該配方含有一治療有 效里之二甲基胺基亞丙烷）-6,11-二氫二苯並[b，e]噁 庚-2-乙酸（下稱「化合物a」），或其藥學上可接受之鹽。 該配方可含有化合物A之順式異構物（z_n_(3二甲基胺基 亞丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚-2-乙酸）、化合物a之反 式異構物（Ε-11-(3·二甲基胺基亞丙烷—二氫二苯並[b，e] 噁庚-2-乙酸），或一由化合物a之順式與反式異構物此二 者所構成之組合。除非另行指明，r 11-(3-二甲基胺基亞 丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚_2_乙酸」或r化合物A」 係扎忒順式異構物、該反式異構物或此二者之混合物。「順 式異構物」係指實質上不含有該反式異構物的順式異構 物，「反式異構物」係指實質上不含有該順式異構物的反 式異構物。若存在有低於約2%之非所欲異構物，則一異 構物係「實質上不含有」另一種異構物。 發明詳沭 化合物A為一種習知化合物，且化合物a之順式與反 式異構物均能得自於美國專利案第5，116,863號中所揭露之 方法，孩專利案之全部内容均被納入於本案發明說明書 中，以作為參考資料。 化合物A之藥學上可接受鹽類的例子包括：諸如氫氣 酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽及磷酸鹽等無機鹽；諸如乙酸鹽、 馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽及檸檬酸鹽等有機鹽；諸 如鈉鹽及鉀鹽等鹼金族金屬鹽；諸如鎂鹽及鈣鹽等鹼土族 金屬鹽；諸如鋁鹽及鋅鹽等金屬鹽；以及諸如三乙胺加成 ------------·裝--------訂—— (請先閱讀背®.之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6 561046 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 A7 B7 五、發明說明（4) 孤（亦被稱為緩血酸胺）、嗎琳加成鹽及旅啶加成鹽等有機 胺加成鹽。 化合物A可以許多方式來投藥至眼部。最佳方式為藉 由習用的局部眼部配彳，諸如溶液、_浮液或凝膠。任擇 地化&物A可經由輸注或移植而投藥至眼部。依據配方 之形式而定，習用之組份可與化合物A相組合。用於化合 物A之局部眼部投藥的較佳配方為一種呈眼部滴液來投藥 的溶液。在本發明之眼部配方中，化合物A的較佳形式為 順式異構物。用於製備本發明之眼部滴液配方的一般性方 法係敘述於下文，作為一個非限制性的實例。 將化合物A與一等張劑加入經純化之無菌水中，若有 需要，亦將一緩衝劑、安定劑及稠化載劑等加入該溶液中， 並使之溶解。以該經純化之無菌水為準，化合物人之濃度 為約 0.0001 w/v·% 至約 5%(w/v)，較佳為約 〇〇〇〇1 w/v% 至 約0.001%(w/V)，且尤以約0.0005%(w/v)為最佳。溶解後， 利用一種PH值控制劑，將pH值調整至一適供用作為一眼 用藥物的範圍内，較佳為位在4·5至8的範圍内。 可利用氣化鈉、甘油及甘露糖醇等作為等張劑；口_羥 基苯甲酸醋及氣化苯甲烴銨等作為防腐劑；磷酸氫納、填 酸二氫鈉及硼酸等作為緩衝劑；依地酸鈉等作為安定劑； 聚乙烯醇、聚乙稀口比嘻嗣及聚丙烯酸等作為祠化載劑，·以 及鼠氧化納及風氯酸專作為pH值控制劑。 若有需要’可添加諸如腎上腺素、鹽酸萘峻琳、氣 化小蘗鹼、奠磺酸鈉、溶菌酶及甘草酸酯等其他眼用藥物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公f ) --------1----- (請先¾.讀背面之注意事項再填寫本頁)

n ϋ I 7 561046 A7 B7 五、發明說明（ 由前述方法所製成的眼部滴液通常僅需以一天數次 且每次一至數滴之用量被施加至眼部，在較嚴重的情形 下，眼部滴液可一天施用數次。一顆典型的滴液為約3〇以。 依據本發明之方法，含有化合物A的眼用配方可供用 以抑制源自於諸如人類結膜上皮細胞等人類眼細胞的前· 發炎性細胞激素分泌。此種細胞激素（諸如1^4與il_8)分 泌會刺激眼部血管新生（請參見諸如Yoshida以以，/〇作 39:1097 (1998))及其他非過敏性發炎症，諸如乾眼症、角 膜炎、驗炎、葡萄膜炎及感染相關性發炎。 本發明之某些具體例被例示於下列實例中。 實例1 :較佳之局部眼用溶液配方 濃度（W/V%) 化合物A · HC1 (無水）碌酸納二驗鹽，USP 氣化鈉，USP 氣化苯曱烴銨 氫氧化鈉，NF 氫氣酸，NF 純水 0.111* 0.5 0.65 0.01 q.s. pH=7.0 q.s· ρΗ=7·0 q.s. 100

*0.111%之化合物A · HC1係相當於0.1%之化合物A (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) .裝---- 訂----- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實例2 :局部眼用凝膠配方 姐份 化合物A · HC1 聚羧乙烯974 P EDTA二鈉鹽 聚山梨酸酯80 氣化苯甲烴銨，溶液 氫氧化納 氫氣酸 純水 澧度（W/V%) 0.11*0.80.01 0.05 0.01+5 xs q.s. pH=7.2 q.s. pH=7.2 q.s. 100 *0.11%之化合物A · HC1係相當於o.i%之化合物A 實例3 :細胞激素釋出之抑制 本紙張尺度適用 中國國家標準（CNS)A4規格（2】〇 X 297公爱） ---^ 561046 A7 B7 五、發明說明（3 A :人類結膜上皮細胞（HCE)之培養 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 詳述上皮細胞初期培養物之製備的方法以及利用此等細胞 之細胞激素釋出研究已被敘述。請參見Gamache，d W， "Secretion of Proinflammatory Cytokines by Human Conjunctival Epithelial Cells，’’ /蕭7⑽^加％厕1 5:117-128 (1997)。簡言之， 人類結膜上皮細胞之培養係從各眼庫於個體死後8小時内 所取得捐贈組織開始。以酵素消化該等組織至隔日。由組 織表面溫和地刮下上皮細胞，並令其分開成一種單一細胞 懸浮液，再培養在角質細胞生長培養基（Clonetics®，San Diego, CA)内。僅有經過6次繼代的細胞皮被使用。將培養 物維持在前匯聚狀態，以避免分化。藉由陽性角蛋白染色 法來鑑定出上皮細胞。 B :細胞激素分析 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 針對數種具有組織胺拮抗物活性的化合物，評估 其對於經培養之人類結膜上皮細胞因應組織胺刺激之細胞 激素（諸如IL-6與IL-8)分泌的抑制能力。以2X104個細胞/ 井的密度來塗佈細胞，並於5% C〇2/37°C下培養至隔日。 次曰，將含有測試化合物的新鮮培養基直接地加入井内， 並將細胞予以培養30分鐘之後，再以組織胺（30//M)刺激24 小時。將三個獨立的培養井用於各個處理組。收獲時，收 集上清液，在200 xg下予以離心，並貯存於-20°C下。依據 製造商所指示者，藉由 ELIS A (R&D Systems，Minneapolis，MN) 來分析樣品的IL-6與IL-8。各個ELIS A之敏感性如下：IL-6 0.7 pg/ml及IL-8 3.0 pg/ml。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗〇 X 297公爱） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 561046 A7 ------ B7 五、發明說明（〇 C. 數據分析 才口抗物之效力（IC5〇)被界定為造成同效物刺激性功能 反應之50%抑制所需的藥物濃度。細胞激素分析所衍生出 之數據係被計算成平均值與標準偏差（SEM)之數值，以代 表經鑑定處理之培養井間的存活率。藥劑與IC5g的劑量依 賴性效應係藉由線性回歸來測定。經由3至5次獨立實驗， 而將數據表示成平均值土S E.M.。 D. 結果 令HCE暴露至30// Μ之組織胺分別增加高於基本位準 1.59 ±0.19與1.80 ±〇·28倍的IL-6與IL-8分泌（細胞激素之基 本位準）。 暴露於組織胺之前，以具有抗組織胺活性藥物且得 自於局部眼部投藥來處理HCE，而獲致了 IL-6分泌與几^ 分泌的濃度依賴性抑制。其結果示於下表1。 埃姆達丁（Emedastine)在完整細胞内的效力係符合於 利用組織均質物於受器結合分析中所測得的活性。左卡伯 丁（Levocabastine)亦將IL-6與IL-8之分泌抑制在一相符於其 -受器結合親和力之位準下。相較於由組織胺Ηγ受器結 合親和力所預期者（2(M40倍），安它唑啉（Antazoline)與抗 感明（Pheniramine)此兩種第一代局部眼用抗·組織胺化合物 係戲劇性地為IL-6與IL-8分泌的較低效力抑制劑。但是， 歐巴達丁（Olopatadine)較由其被發表之組織胺仏-受器結合 親和力所預期者（36 nM)更為有效。歐巴達丁、安它唾琳 與抗感明展現出類似的1^-結合親和力（32-39 nM)。但是， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 訂--- 10 561046 A7 B7 五、發明說明（8) 相較於由結合數據所預期者，歐巴達丁係約l〇倍更有效於 作為一細胞分泌之抑制劑（對於IL-6與IL-8分泌之IC5Q分別 為5.5 nM與1.7 nM)。此等結果指出，不同於其他受測化合 物者，歐巴達丁抑制細胞激素分泌的能力係歸因於Hr受 器結合親和力以外的事物。 表1 :組織胺Η〗拮抗劑：人類結膜上皮細胞内之il-6與IL-8 分泌的抑制，以及1^受器結合親和力 瓦拮抗劑 Π^6 Hi結合~ __IC<〇(nM) IC,n(nM) 丁 丁丁琳 達達伯唑明 姆巴卡它感 埃歐左安抗 14 6 5 5 · ' ~~- 2 • .508 2 5 2 14 0 7 15 2 1X 1Χ 2 0 6 4 9 ^6283 13 5 3 3 § ------------·裝---- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1H-苯並咪唑，1-(2-乙氧乙基）-2-(六氫-4-甲基-ΙΗ-1,4-二氮雜 萆-1·基），(E)-2-丁烯二酸醋（1:2) b Z-11-(3-二甲基胺基-亞丙烷）-6,11-二氫二苯並[b，e]噁庚-2-乙 酸 e (-)-反式-1-[順-4-氰基-4-(對氟苯基）環己基]_3_甲基-4-苯基異 尼皮卡酸單氫氣酸鹽 d 4,5·二氫-N-苯基-N-(苯曱基）-1Η-咪唑-2-甲胺 e N，N-二甲基-7 -苯基定-丙胺 * Sharif etaL, J. OcuL Pharmacol. 10:653-664 (1994) § Yanni et al., Ann. Allergy Asthma Immunol. 79:541-545 (1997)

一5J I I I I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張>〇复適闬中國國家標準（CNS)A4規格（2】〇x297公t ) 11

Claims (1)

1. 561046 A B c D

   申請專利範圍 第881 10742號專利申請案申請專利範圍修正本 修正曰期：92年9月 1 · 一種用以治療或預防涉及到由人類眼細胞中釋出之細 胞激素的眼部血管新生及非過敏性眼部發炎病變之藥 學組成物，其包含一治療有效量之n•(弘二甲基胺基· 亞丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚乙酸，或其藥學 上可接受之鹽。 如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該組成物 為一種可局部投藥之溶液，以及η·(3_二甲基胺基_亞 丙烷）·6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚乙酸之含量為0.0001 w/v·%至 5%(w/v) 〇 如申請專利範圍第2項之藥學組成物，其中丨丨气弘二 甲基胺基-亞丙烧）-6山-二氫二苯並[b，e]p惡庚_2_乙酸 之含量為 0.0001 w/v·%至 0 〇〇1%(w/v)。 如申請專利範圍第3項之藥學組成物，其中η·(3_: 甲基胺基-亞丙烷）-65ll•二氫二苯並[b，e]噁庚_2_乙酸 之含量為 0.0005%(W/V)。 如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中η·(3_: 甲基胺基-亞丙烧^山二氫二苯並卜冲惡庚^-乙酸 為實質上不含有（E)-ll-(3-二甲基胺基_亞丙烷）_6，u· 二氫二苯並[b，e]噁庚·2-乙酸的（z)-! 二甲基胺基-亞丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚-2_乙酸。 如申請專利範圍第5項之藥學組成物，其中該組成物 為一種可局部投藥之溶液，以及Ο·〗〗·。-二甲基胺基 本纸張尺,t適用中Θ S家彳I·準（CNS ) _Α4規格(~21 0X297^；^ ) 2. 3. 訂 4. 5. -12- 561046

   -亞丙炫Xu-工氫二苯並[b，e]D惡庚1乙酸之含量為 0.0001 w/v·%至 50/〇(w/v) 〇 7·如申請專利範圍第ό項之藥學組成物，其中（Ζ>11_(3_ —甲基胺基-亞丙烷）-6，11-二氫二苯並[b，e]噁庚_2_乙 酸之含量為 0.0001 w/ν·%至 〇.〇〇1%(w/v)。 8·如申請專利範圍第7項之藥學組成物，其中（z)-11_(3_ I

   二甲基胺基-亞丙烷）-6，ll-二氫二苯並[b，e]噁庚_2•乙 酸之含量為〇.〇〇〇5%(w/v)。 9·如申請專利範圍S 1項之藥學組成物，其巾該非過敏 性眼部發炎病變係擇自於由乾眼症、角膜炎、瞼炎、 葡萄膜炎及感染相關性發炎所構成的群組中。 訂 申％專利犯圍第1項之藥學組成物，其申該眼部血 吕新生及非過敏性眼部發炎病變係有關於細胞激素由 人類結膜上皮細胞中釋出。 線