TW537898B

TW537898B - Enteric formulations of proanthocyanidin polymer antidiarrheal compositions

Info

Publication number: TW537898B
Application number: TW086115262A
Authority: TW
Inventors: Edward J Rozhon; Atul S Khandwala; Akram Sabouni
Original assignee: Shaman Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1996-10-16
Filing date: 1997-10-16
Publication date: 2003-06-21
Also published as: EP2060183A2; ES2326933T3; CA2269078A1; KR20000049206A; WO1998016111A1; PT935417E; EP0935417B1; US20140011869A1; EP0935417A1; EP2255661A2; NZ335317A; EP2060183A3; DE69739394D1; DK0935417T3; EP0935417A4; JP2001524938A; KR100467532B1; US20050019389A1; US20090148397A1; US7323195B2

Description

537898 五、發明説明經濟部中央標準局員工消費合作社印製 !· ：j^|領域藥：f明涉及對治療腹瀉有效的原花青素聚合物組合物的物φ v万特別疋，本發明涉及一種由巴豆屬或胡桐屬植、^刀離出的原花青素聚合物組合物的藥物配方，這些配、二有j μ療分泌性腹瀉，尤其是減少與分泌性腹瀉有關夜毛、失及產生的脱水。本發明之較佳具體實例涉及口 =後f胃的酸性環境中保護組合物之原花青素聚合物組合的藥物配方，特別是腸衣配方。 2.發明背景本發明第二節或其他節中任何參考資料的引用或確認，不應視爲承認這些資料係本發明之先前技術。 2-1.分泌性膻瀉分泌性腹瀉也稱水瀉，在開發中國家是疾病和死亡率之王因，特別是在嬰幼兒中更是如此；其亦影響極大比例由已開發國家前往開發中國家的訪問者，也能影響訪問外國的任何人（稱爲”旅行者腹瀉”）。分泌性腹瀉的特徵是經由腸道流失體液和電解質，導致嚴重且通常威脅命的脱水。分泌性腹瀉是由各種細菌、病毒及原生動物病原體引起的；另外也由其它非傳染性病因導致，例如潰瘍性結腸炎、.炎性細·内综合病症及胃腸道癌症和腫瘤。事實上，咸信各種類型的腹瀉症可能有一個分泌組元。霍亂派菌和大腸桿菌是分泌性腹瀉病菌的兩個主要來源。腸毒型大腸桿菌爲開發中國家分泌性腹瀉的重要來源，並且是旅行者腹瀉病重要起因。引起腹瀉的大腸捍菌其他 -4- 各紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x 297公楚） —-二 - II -- - I m I (請先閱讀背面之注意事頌再填寫本頁j -訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 537898 A7 __B7 五、發明説明（2 ) — 菌株包括腸出血型、腸侵害型、腸病原型及其他菌株。引起分泌性腹瀉的其他細菌病原體包括其他弧菌屬、彎曲桿菌屬、沙門氏菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬、志贺氏菌屬、克氏桿菌屬、檸檬酸菌屬、耶爾森氏菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬、葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬及其他腸細菌。分泌性腹瀉亦可爲像隱孢菌屬的原生動物病原菌所引起，例如小隱孢菌（Cryptosporidium parvum)。請參考 H〇Uand，199〇

Clin. Microbiol. Rev. 3_:345; Harris, 1988, Ann. Clin Lab Sci. 18_.102; Gracey, 1986, Clin, in Gastroent., 15*21* 0〇ms and Degryse, 1986, Veterinary Res. Comm. 10:355； Black 1982，Med. Clin. Nor. Am.，66:611 〇大腸桿菌的腸毒型菌株霍亂弧菌和許多其他腸細菌係經類似機制引起分泌性腹瀉。這些病原體產生一種毒素，在腸上皮的頂膜上與特定受體結合。受體的結合引起了腺嗓呤核酸環化酶或鳥嘌呤核甞酸環化酶傳遞信號轉，導，導致環磷酸腺甞（cAMP)或環磷酸鳥甞（cgmP)增加。這種調節性階式反應明顯地經由特定頂膜蛋白質的磷醯化作用，促進氯化物由腸上皮腺管細胞流入腸内，並抑制腸上皮絨毛細胞對鈉離子和氯離子的正常吸收。所增加的鈉離子和氯離’ 子濃度，滲透性地把水吸至腸腔内，造成脱水和電解液的流失。因此’可減少氣離子分泌之製劑將阻止體液移向腸内，而形成淨體液消失。如此，此種製劑特別適用於治療和預防與分泌性腹瀉有關之危險性脱水和電解質流失。本發明的藥學組合物對於治療和預防旅行者腹瀉和非特 ______-5- 本纸張尺度適用f 票準（CNS ) .— -^ #衣！ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁j 、一叮 537898 A7 ---~______B7 _ 五、發明説明（3 ) 足腹4特別有用。旅行者腹瀉是分泌性腹瀉的一種，定義爲工業國家公民到，，第三世界，，國家旅行所遭受的腹瀉。旅行者腹填的一個例子是，第一次到墨西哥旅行的美國公民 ’在到達的三至五曰内患的腹瀉病（Castelli & Carose， 1995, Chemotherapy 生（supp^):20-3 2)。據估計，85〇/〇旅行者腹癘係細菌引起的，其中之主要病原菌爲腸毒型大腸桿菌（ETEC)、志賀氏屬菌及傑寧彎曲桿菌（Campylobacter jejuni)。原生動物和病毒也引起旅行者腹瀉，但發病率比細菌低（DuPont，1995，Chemotherapy 生（supp. 1):33-39)。在墨西哥夏月（五月至十一月）裡與旅行者腹瀉有關的主要病原動因疋肪母型大腸桿菌’而在冬月裡的主要細菌是傑寧言曲桿菌（DuPont，1995，"Traveler、diarrhea，，，M. Blaser et al·, eds·，pp. 22 9-3 1 1，Raven press，New Y〇rk)。大約 4〇% 首次去墨西哥旅行的美國人都患過旅行者腹瀉。與旅行者腹瀉不同者，也出現有分泌組分的非特定腹瀉 (NSD)則是本土居民患的急性地方性腹瀉病。墨西哥居民之非特足腹4的發病率是7% (H· L. DuPont，私人通訊）。但非特定腹瀉不像旅行者腹瀉，抗生素治療無效而且病因不明。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 自1975年，DuPont及其在休士頓德州大學衛生科學中心的同事們在墨西哥進行了一系列臨床試驗，研究各種抗腹瀉藥物的功效。依據這些研究中安慰治療組的結果，他們已能分別描繪在美國旅行者和墨西哥人中旅行者腹瀉和非特定腹寫的天然病歷特徵。數據顯示，患夏季旅行者腹 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（27^297公釐） W7898 A7 B7 發明説明（ --*--*----^1^5;衣-- (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁j =的病人和患非特定腹瀉病人間腹瀉病的強度和持續時間有=顯差別。在五天的評估中，美國旅行者的病期（從登記 ^最後不成形的大便的平均時間）爲69小時，而墨西哥人疋^8小時.〇·〇⑻υ。如果把由登記的時間起排便的總數進行分析（0 — 120小時），美國旅行者之排便數爲1〇6而墨西哥人爲 5·6 (Ρ = 0·0001) (H‘ L DuP〇nt，私人通訊）。雖然墨西哥冬月發生的旅行者腹瀉數據不多，一般來說，2從美國來的人與已在墨西哥滯留數月的美國人所患的 f瀉是類似的。有比夏季旅行者腹瀉缓和而比非特定腹瀉嚴重之傾向（H. L· DuPont，私人通訊）。分泌性腹瀉與病毒性感染也有關，例如人類免疫缺乏病毒（HIV)感染、愛滋病（AIDS)以及特別是輪狀病毒感染。幾訂 2所有愛滋病病人均在患病期間的某些時刻患腹瀉，3〇% ^滋病病人患慢性腹瀉。伴隨愛滋病的腹瀉已定名爲”人類免疫缺乏病毒-相關性慢性腹瀉，，。這種人類免疫缺乏病毒症的腹瀉組元被認爲是由原生動物病原體引起的二次感染 :尤其是隱孢菌屬，至少對某些病人是如此。此外，輪狀病毒感染是腹瀉的主要病原目，尤其是在開發中國家的嬰幼兒。經濟部中央標準局員工消費合作社印掣刀泌性腹瀉對非人類動物也是一個値得注意的問題，特別是畜牧場動物，例如牛科動物、豬、綿羊（羊科動物）、家禽（例如難）、馬科動物以及家畜，例如犬屬動物和貓科動物。腹寫症對幼彳及和岡㈣乳畜牧場動物特別普遍。在畜牧場動物中，特別是像牛、綿羊、豬等肉用動物腹寫常

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¥ 2由田菌病原體引起的，例如腸毒型、腸出血型細菌病 f體t其他大腸桿菌、沙門氏菌屬、產氣莢膜梭菌、脆弱擬朴菌、穹曲捍菌屬及小腸結腸炎耶耳森氏菌。此外，原生動物病原體（尤其是小隱孢菌）和病毒（尤其是輪狀病毒和冠狀病毒）是畜牧場動物腹瀉的重要原因。其他與畜牧場動物腹瀉有關聯的病毒包括外衣病毒、小病毒、萼狀病毒、腺病毒、bredavlrus及星狀病毒。請參考H〇Uand，199〇,

Clin. Microbiology Rev. U45，及 Gutzwiller and Blum， 1996, AJVR 5J7.560; Strombeck, 1995, Veterinary Quarterly 11 (Suppl.l)；si2; Vermunt, 1994? Austral. Veterinary J. Zl：〇3; Driesen et al.5 1993, Austral. Veterinary J. 70:259; Mouricout, 1991, Eur. J. Epidemiol. 7:588; Ooms and Degryse，1986，Veterinary Res. Comm· 10:355 〇經濟部中央標準局員工消費合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 · 2.含單等或原花青素的植物萃取物和抗腹寫用途單箏見於多種植物内，並被歸爲可水解的和可縮合的。原花青素是一組縮合的單寧，將在下文進一步描述。業經發現多種於傳統醫學中用以治療或預防腹瀉的植物中含有單寧和原花青素（見例如，Yoshida等，1993, Phytochemistry U: 1033; Yoshida 等，1992，Chem. Pharm. Bull., 40_:1997; Tamaka 等，1992，Chem· Pharm. Bull· 姐:2092)。從藥學植物（例如 Pycanthus angolenis 和 Baphia nitida)中得到的粗提物經動物試驗表明具有抗腹瀉性能 (Onwukaeme and Anuforo, 1993, Discovery and Innovation, 5_:317; Onwukaeme and Lot, 1991, Phytotherapy Res., 5.:254) -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 537898 A7 B7 五經濟部中央標準局員工消費合作社印裂、發明説明（6 。。單寧的粗萃物，特別是從角豆樹豆莢和甜栗子木中得到的萃取物已被計劃用於治療或預防腹瀉（美國第 ^043,160號專利；歐洲第481，396號專利）。含原花青素的粗植物萃取物也已被建議用於治療或預防腹瀉。例如含原花青素和其他化合物的果皮粗萃物已經建議用於治療腹瀉（USP 4,857,327)。傳統上用於治療腹瀉的 Q. petrea樹皮已證實含有寡聚原花青素（K〇nig and Sch〇iz， 1994, J. Nat. Prod., 57:1411; Pallenbach, 1993, Planta Med., 1_2_·264)。也含原花青素的Sclerocarya birrea樹皮萃取物可減少與實驗謗發的腹瀉有關的腸收縮（Galvez•等，1993,

Phyt. Res·，2_:25; Galvez 等，1991，Phyt. Res·，么:276)。但這些研究沒有證明該等萃取物的抗腹瀉活性係與原花青素特別有關。其他研究認爲，含原花青素的一些製劑在腸内會干擾霍亂毒素作用。含兒茶酸（原花青素單體）的茶葉粗萃物已證實能防止培養的CH0細胞由霍亂毒素謗發的形態變化，和服用霍亂毒素5分鐘後的小鼠體内霍亂毒素謗發的腸液蓄積（Toda 等，1991，J· App· Bact·，Ιΰ_:1〇9)。但在服用霍亂毒素30分鐘後，茶葉粗萃物不能阻止鼠腸内體液蓄積，且兒茶故尚未被證明是萃取物中的活性劑。此外’少量含原花青素的榆葉梧桐皮的萃取物，在分離的兔腸組織中可減少霍亂毒素謗導的離子流出，經十二烷基硫酸鈉一聚丙烯醯胺凝膠電泳技術（SDS-PAGE)分析測定，該作用明顯地是由於聚合的原花青素與霍亂毒素間之物理性交互作用所致 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁j 、一叮 537898 A7 __ B7 五、發明説明（7 ) (Hor 等，1996，Phytochemistry 42.： 109; Hor 等，1995 Planta Med.，紅:2〇8)。但在加入霍亂毒素後，萃取物之知入對氯離子分泌沒有影響。如此，與本發明完全相反地，該萃取物在與引起分泌性腹瀉的病因接觸之後，無法有效減少或預防體液損失，因此，無法作爲分泌性腹瀉的治療方法。原花青素依其結構和來源有不同的生理作用。別的原花青素對治療或預防腹瀉實際上是禁忌的。由黑豆中分離出的寡聚原花青素被證明在分離的腸組織中可增加氯化物分泌並減少鈉再吸收[Silverstein，1989，，，procyanidin fr〇m Black Bean (Phaseolus Vulgaris):Effects on Transport of Sodium, Chloride, Glucose, and Alanine in the Rat Ileum Washington State University (Dissertation)]。腸内増加的離子濃度將促進腸腔内體液蓄積，並加重與分泌性腹填有關之體液和電解質流失和脱水。事實上，參考資料明確地引導偏離以原花青素治療腹瀉，並建議原花青素可能引起分泌性腹瀉。 2.3. 原花青素原化青素及其聚合物是存在於許多植物中的g分性物質，特別是那些有生長木質習性的植物（例如巴豆屬和胡桐屬）。聚合的原花青素的一般化學結構是經普通C(4)— c(6)和 /或C(4) — (^(8)键聯結的5,7,3’，4’-四起基單元或5 7 3，5，· 五羥基類黃酮-3-醇單元的線型鏈組成的，如下所示。 -10 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） f請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印1i 537898 A7 B7 五、發明説明（8 )

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 生物合成研究顯示，原花青素聚合物係由下示單體單元組成（見 Fletcher 等，1997, J. C· S. Perkin，1:1628)。

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2b H= 0H 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X29"7公釐） 537898 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（9 聚合物鏈的單體單元（通常稱爲無色花青素）可以建立在 C-環的兩種互體化學的基礎上，即在2位和/或4位定爲順式（稱爲表兒茶酸）或反式（稱兒茶酸）。因此，聚合物鏈是建立在不1¾的結構單元的基礎上，這就產生了聚合的原花青素廣泛變化和大量可能的異構體（Hemingway等，HU】 C· S. Perkm，1:1217)。13c-核磁共振已被用來鑑定聚合原花青素的結構，近期研究已闡明产聚、三聚和四聚原二青素的化學結構。類黃酮-3-醇單元的較大的聚合物在大多數植物中是比較多的，平均分子量爲2,〇〇〇道爾镇以上，包含ό個或更多的單元（Newman等，1987，Mag. Res Chem 11:118)。 2·4· 屬和胡桐屬萃取物和化合物的人類生物峯廠用許多不同的巴豆樹種，包括在南美發現的沙可巴研 (Croton sakutads)、流脂巴豆、帕拉巴豆（Cr〇t〇n palan〇stima) 、秘魯巴旦、嗜紅巴豆（Croton erythrochilus)以及擬龍血巴豆，可產生一種紅色黏性乳膠樹液，稱爲”Sangre de Drag(),, 或’’龍血”。龍血最常爲秘魯亞馬遜河流域的混血後裔和土人於治療泥行性感冒和腹;·寫。其内服可治療爲桃腺炎、喉感染、肺結核、消化道潰瘍、腸病症、風濕病和提高生育力’成年人和兒重都用。其亦廣泛地用來止血，治療皰療病毒病灶以及傷口癒合。樹液是直接放在傷口上作爲抗感染藥並加速癒合過程。其亦在出血過多時用來清洗陰道。已證明仔自龍血巴旦和秘魯巴旦的龍血含有一種經名藍定爲塔斯品（taspine)的生物檢，具抗炎活性（Persinos等， -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） .「1#衣-- (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 537898 A7 B7 五、發明説明（1〇 1979, J· Pharm. Sci.，处:124)。亦經證明，塔斯品可在鳥的成髓細胞血癥病毒、Rauscher白血病病毒和猿肉瘤病毒中表現核糖核酸（RNA)指導的脱氧核糖核酸（DNA)聚合岭活性（Sethi，1977，Canadian J. Pharm. Sci.，12:7)。許多由龍血中分離出的驗性和萜婦化合物都經測試驗抗腫瘤、殺菌和傷口癒合性質（Chen等，Plant a Med.，60:541) 。經發現，樹液中的原花青素幾無抗腫瘤或殺菌活性，且傷口癒合活性輕微。美國第5,211，944號專利首次公開了由巴豆屬中分離原花青素聚合物組合物及其用作抗病毒劑的方法（另見

Ubillas 等，1994, Phytomedicine，1:77)。原花青素聚合物組合物經證明對許多病毒有抗病毒活性，包括呼吸塥合體病毒、流感病毒、副流感病毒及皰療病毒。海棠果疋生長於印度到東非再到波利尼西亞範圍内的樹。種子油在民間醫藥中用作殺寄生蟲藥，治療疥瘡、癬和皮膚病及其他用途，例如止痛。在印度支那，粉狀樹脂用於潰瘍和傷口癒合。在印度尼西亞，樹皮被外服治療腫脹腺體並内服作爲利尿藥。樹液用作胸部疼痛和腫瘤及腫脹的軟化劑。葉子萃取物用作發炎眼睛的洗劑。柬埔寨人吸· 入葉子萃取物來治療眩暈和偏頭痛。薩摩亞人把樹液用作箭毒。美國第5,211，944號專利亦揭示由海裳果分離原花青素聚合物組合物及其作爲抗病毒劑之用途。業經確定，本發明原花青素聚合物組合物；F耐酸，在胃 in ! · ......1 f請先閎讀背面之注意事項再填寫本百c 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -13- 537898 11 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明的酸性環境中會失效。在本發明申請之前，未有含巴豆屬或胡桐屬植物分出的原花青素聚合物组合物的藥學组合物經揭示能在胃液的酸度中保護原花青素聚合物組合物，以致原花青素聚合物組合物可以口服以治療分泌性腹瀉。需要的仍是有效的藥學組合物，服用這種組合物可減少腹滴引起的離子向腸内流入。這種藥劑可用於防止分泌性腹瀉引起之體液和電解質流失。夺發明的目的在於提供一種抗腹瀉劑的有效藥物配方，該配方將滿足這種需要，尤其是提供一種在胃酸中能保護抗腹瀉劑的藥物配方，以及用該配方治療腹瀉的方法。 3· 本發明涉及一種包括治療有效量的抗腹瀉劑的藥學組合物，該抗腹瀉劑包含一種原花青素聚合物組合物。原花青素聚合物組合物較佳係製自巴豆屬植物，較佳爲秘魯巴豆。原花青素聚合物組合物也可製自胡桐屬植物，特別是海棠果。本發明樂學組合物被調配成能在胃酸的酸性條件下保護原花青素聚合物組合物免遭降解。較佳之具體實例是把原花青素組合物經腸衣包覆。另一較佳具體實例係併用原花青素聚合物組合物與能減少胃酸分泌或能降低胃液酸度的物質。本發明還包括治療包括人在内的溫血動物之腹湾的方法 ’特別是分泌性腹瀉，其包括將一種藥學組合物施用於患腹瀉的非人動物或人，該藥學組合物包括治療有效量由巴 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

14- 537898 A7 B7 五、發明説明（12) ^ 二屬或胡桐屬植物分離的原化青素聚合物組合物或其藥與可接受衍生物，以及一種藥學可接受載劑，係調配成能在胃酸的作用中保護原花青素聚合物組合物。此外，本發明包括治療動物（包括人）的分泌性腹瀉的方法，其包括對串腹瀉的非人動物或人施用：（a)—種藥學組合物，其包含治療有效量之由巴豆屬或胡桐屬植物中分離出的原花青素聚 •合物組合物或其藥學可接受衍生，及藥學可接受載劑；〇) 一種藥學組合物，其含有能有效抑制胃酸分泌的抑制胃酸分泌有效量化合物，或含有能有效中和胃酸的胃酸中和有效量化合物，及藥學可接受載體。本發明還提供一種預防包括人在内的溫血動物的腹寫的方法，其包括對可能出現腹瀉的非人動物或人施用一種藥學組合物，該組合物含有預防有效量的從巴豆屬或胡桐屬植物分離出來的原花青素聚合物組合物或其藥學可接受衍生物以及藥學可接受載劑，其係調配成可保護原花青素聚合物組合物免受胃酸的作用。 4.圖式簡單説明經濟部中央標準局員工消費合作社印製 mi mil— nm 111 ml In- · 1—· ---1 nn · (請先閲讀背面之注意事顸再填寫本百c 圖1係重疊高效液相層析色譜圖，爲經不同處理之由秘魯巴豆中分離出的原花青素聚合物組合物以毫吸收單位計的紫外吸收對分鐘計之時間之色譜分佈型。虛線所緣譜圖表示原花青素聚合物組合物在水中（”在水中”）培育後的分佈型’實線表示原花青素聚合物組合物在鹽酸中培育〇〇3 小時後（”鹽酸〇·〇3小時後”）的分佈型，波折線表示由秘魯巴旦中分離的原花青素聚合物組合物在鹽酸中培育2 〇小 ___15_ 本纸張尺度適用中國國冬;規格（2丨0X29*7公楚)~~ — ' --— 537898 A7 B7 五、發明説明（13 時後鹽酸2.0小時後”）的分佈型圖2係由秘魯巴旦中分離的原花青素聚合物組合物在 / -Γ 田、L ,.、丄 _ 37 經濟部中央標準員工消費合作社印製。 ^八丁、化I京策w組> π C人工3硬中培育0 03小時後的樣品高效液相色譜圖圖係糸外線吸收（笔吸收單位）對時間（分鐘）之作圖。。圖3=由秘魯巴豆中分離的原花青素聚合物組合物在” C人工a液中培育2小時後的樣品高效液相色譜圖。譜圖係紫外線吸收（毫吸收單位）對時巧（分鐘）之作圖。圖4係由秘魯巴旦中分離的原花青素聚合物組合物在37 胃液中培育2小時後，用人工腸液按i :丨稀釋後，再坨同4小時以上的樣品高效液相色譜圖。譜圖係紫外線吸收（毫吸收單位）對間時（分鐘）之作圖。圖5係由秘魯巴豆中分出的原花青素聚合物、组合物在37 工胃液中培育2小時，用人工腸液按1 ··〗稀釋後，再培目6小時以上的樣品高效液相色譜圖。譜圖係紫外線吸收（¾吸收單位）對時間（分鐘）之作圖。圖6爲峰面積百分圖(，，％峰面積”)，係以由秘魯巴各中分離的原花青素聚合物組合物在試驗介質中的高效液相色譜，佈型：：面積除以原花青素聚合物組合物在水中的高效 Γ:、色：：：型的峰面積，再乘以100而計算得到，爲以小時局早位的培育時間，合物組合物在人工胃液…後的：塊，原花青素聚表示原花青素聚合物組合物在人工胃液中培育虚線再用人工腸液按i : !稀釋後再培育後的百分積後’ 圖7係顯示由秘魯巴豆中分離的原花青素聚合=合物譜 37 丨·-^ T--Ί1!Λ^! I#先聞讀背面之注意事項鼻填寫本頁 ---訂一----

Lf • 1- ί !| I- I !_ I · -16 本纸張尺度it用t s醉縣（ 537898 A7 B7 五、發明説明（14) 的腸衣包覆配方對於曝於霍亂毒素的小鼠腸液蓄積影響之條狀圖。所示結果爲A — C組小鼠中每一組以毫克腸液/ 毫克腸表示的腸液蓄積比的平均値。A組中小鼠僅用水處理，B組小鼠是用每公斤瓜爾膠中含13 1毫克經腸衣包覆的原花青素聚合物組合物處理，C組小鼠施用 ”£UDRAGITtm”和有瓜爾膠的糖。各組小鼠均#曝&霍虜匕毒素後7小時評估。細節請參考丁文第7節。圖8係顯示由秘魯巴豆中分離的原花青素聚合物組合物腸衣包覆配方對於曝於霍亂毒素的小鼠腸液蓄積影響之條狀圖。所示結果爲A及B組小鼠各以毫克腸液/毫克腸表示的腸液蓄積比的平均値。A組小鼠係以 ”EUDRAGITtm”及水處理，而B组小鼠係每公斤經131毫克腸 ·衣包覆的原花青素聚合物組合物處理。 5·發明詳述經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 5.1.原花青素聚合物組合物的製備治療腹瀉有效的原花青素聚合物組合物是由無色花青素的單體單元組成。無色花青素通常是單體的類黃酮，包括兒茶酸、表兒茶酸、倍兒茶酸、倍表兒茶酸、黃烷醇、黃酮醇及黃烷-3,4-二醇。用於治療分泌性腹瀉的原花青素聚合物組合物是由2至30個類黃酮單元的聚合物構成，較佳是2至15個類黃酮單元，更佳爲2至11個類黃酮單元，最佳者平均分子量爲2100道爾頓含平均7個類黃酮單元。本發明使用的原花青素聚合物組合物較佳係以本案參考資料美國第5,21 1，944號專利揭示之方法，由巴豆屬和胡桐 -17- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 537898 A7 五、發明説明 B7 15 經濟部中央標準局員工消費合作社印^ 屬植物中分離。 :車又佳具體貫例中，原花青素聚合物組合物是由秘魯 :中分離而得。另一具體實例中，原花青素聚合物組合物疋由海棠果中分離而得。 5.2.藥學 ggj —原化青素聚合物組合物業經證明在胃的酸性環境中不穩 ^，並經發現在pH 5 〇至約pH 8 〇時是穩定的（見以下第6 二）。因此，本發明提供一種在胃分泌物的酸度中保護原花青素聚合物组合物的藥學配方。在一較佳具體實例中，本發明藥物配方含有經腸衣包覆的原花青素聚合物組合物和樂學可接受賦形劑。在另一具體實例中，含原花青素聚合物組合物的藥學配方，選擇性地含有一或多種能中和胃酸或對抑制胃酸的分泌有效的物質。這些配方可使用此技藝已知的方法製備，例如B^jSiington^ Pharmacentir^l 18th Ed., ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing c〇.，Easton，PA，1990 揭示者。原花青素聚合物組合物可呈任何治療可接受的藥物形式藥學級合物可以配成口服藥，例如藥粉、晶體、粒狀、小粒（包括毫米級大小的顆粒，例如微球體和微膠囊）、釋知(包括微米級大小的顆粒）、珠狀、微珠、丸、片、微片、壓片或片研制劑、模壓片或片研制劑，或製成或硬或軟並含有粉末、顆粒、圓珠、溶液或懸浮液狀的組合物的膠囊’但不限於這些。藥學組合物也可配製成口服藥，像溶液或含水液體的懸浮液、混入液體的凝膠膠囊，或其他任 18- 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐）衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 537898 A7 B7 五、發明説明（16) '~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 何便於…藥的配方，或像栓劑、灌腸劑等的直腸用藥或其他方便的形式。原花青素聚合物組合物也可製成控制釋放系、'充（見例如 Langer，1990，Science，249; 1527_1533)。經濟部中央標準局員工消費合作社印製藥學配万也可包含任何形式的藥學可接受賦形劑、添加劑或載劑。例如，可將稀釋劑或填料（例如，磷酸二鈣、硫酸鈣，扎糖、纖維素、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、澱粉、山梨醇、蔗糖、肌醇、粉末糖二膨潤土、微晶纖維素或羥丙基甲基纖維素，但不限於這些）加至原花青素聚合物組合物中，以增加其體積。另外，黏合劑（如殿粉、明膠、蔗糖、右旋糖、糖蜜、乳糖、阿拉伯膠、藻酸鈉、愛爾蘭蘚萃取物、panwar膠、茄替膠、isap〇i殼膠、羧甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙晞p比p各燒酮、Veegum和落葉松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、乙基纖維素及蠟，但不限於這些）可加至配料中，以增大黏性。此外，潤滑劑（例如滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鋼、乙酸鈉、氯化鈉、白胺氨酸、十二烷基硫酸鈉、十二坑基硫酸鎂，但不限於這些）可加至配方中。另外，像膠體二氧化碎或滑石粉等滑動劑也可加入，以改進粉狀配料的流動性，但不限於這些。最後，崩解劑（例如澱粉、黏土、纖維素、藻酸銨、樹膠、交聯聚合物（例如cr〇scarmelQse 、crospovidone及甘醇酸澱粉鈉）、Veegum、甲基纖維素、遗Bg、膨潤土、纖維素和木材產品、天然海绵、陽離子交換樹脂、藻酸、瓜爾膠、柑桔果肉、羧甲基纖维素、十二烷基硫酸鈉與澱粉，但不限於這些）也可加入，以促使配 -19- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS〉A4規格（210X 297公釐） 537898 A7 B7 五、發明説明（17) 料在腸内崩解。本發明較佳具體實例中，原花青素聚合物組合物是與在胃酸中能保護原花青素聚合物組合物的物質併用。在一更佳具體實例中，原花青素聚合物組合物係經腸衣包覆。腸衣爲在胃中可保持完整但一旦到達小腸便將溶解並釋放劑型内容物之物質。大多數腸衣係以具酸性基團的成分製成的，因此，胃中之極低pH(即pH_ 1.5-2.5)時，酸性基團不離子化，膜衣呈未解離的不溶解的形式。在較高pH時，例如在腸環境中，腸衣則轉化爲離子化形式，能被溶解而放出原花青素組合物。部份腸衣在爲小腸中酵素降解前保持完整，而其餘者在與水分接觸一定時間後便斷裂，如此，包衣在進入小腸之前仍保完整。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 用於製備腸衣的聚合物包括蟲膠、澱粉和乙酸-酞酸直鏈澱粉、苯乙烯-順丁烯二酸共聚物、乙酸-丁二酸纖維素、乙酸-酞酸纖維素、乙酸-酞酸聚乙烯（PVAP)、酞酸羥丙基甲基纖維素（級別HP-50和HP-55)、乙基纖維素、脂肪、硬脂酸丁酯以及具酸可離子化基團的甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物（"EUDRAGITtm”），例如”EUDRAGITtm L 30D” 、"EUDRAGIT™ RL 30D”、"EUDRAGIT™ RS 30D” 和 ” EUDRAGITtm L 100-55”，但不限於這些。在一較佳具體實例中，藥學組合物包括一種原花青素聚合物組合物和腸衣聚合物”EUDRAGITtm L 30D”，這是一種平均分子量爲 25 0,000道爾頓的甲基丙烯酸和丙烯酸甲酯的陰離子型共聚物。 -20- 本纸張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 537898 經濟部中夹樣泽扃負工消费合作社印裝 A7 五、發明説明（腸衣經腸内酶水解而山& ，视所用膜衣類型而定讀，或爲膽鹽乳化和分散而崩解爲丁醇和硬脂酸，去丁醇酉旨酶可把硬脂酸丁酉旨水解此饨 _ ^ 田知，谷解時，硬脂酸便由藥物剝離。此外，膽鹽可乳化並分4 ^ 散乙基纖維素、羥丙基曱基纖維素月曰防及丨EI防衍生物。立的時Η石—”他頒型膜衣之移除視與水分接觸知人疋？如，由粉狀巴西櫬櫚蠟、硬脂酸及石花菜 ^樹皮的植物纖維製成的膜衣是在植物纖維吸收水分並給 < 後破衣崩解所需時間決定於膜衣的厚度和植物纖，、隹與犧的比例。 ’ 取可使用此技藝已知之施用腸衣之方法將之施用原花青素化口物、、且口物上。例如，可使用含重量比爲5_1〇%聚合物 <有機，谷劑，谷液噴霧，及含高達重量比爲3〇%聚合物的溶液進行盤塗復，但不限於此。常用的溶劑有丙酮、丙酮/ 乙酸乙酯混合物、二氯甲烷/甲醇混合物，以及包括這些溶劑的二兀混合物，但不限於這些。有些腸聚合物，例如甲基丙#酸-甲基丙烯酸酯共聚物（”EUdragittm”）可用水作落劑來使用。溶劑系統的揮發性必須特定，以防止由於黏性引起的黏結和防止由於過早噴霧乾燥或溶劑蒸發時聚合物沉澱引起膜衣高孔隙度。此外’腸衣中可加入增塑劑以防止膜衣破裂。合適的增塑劑包括低分子量的苯二甲酸酯，例如苯二甲酸二乙酯、乙醯化單甘油酯、檸檬酸三乙酯/聚檸檬酸乙基乙二醇三丁酉旨及甘油三乙酸醋。通常，添加增塑劑之濃度爲腸衣聚合物的1 0%重量比。其他添加劑，諸如乳化劑（例如洗滌劑和 -21 参紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 537898 A7 B7 五、發明説明 19 經濟部中央標準局員工消費合作社印製消泡劑）和粉劑（例如滑石粉），可以加至膜衣中以增加膜衣的強度和光滑性。此外，可在膜衣中加入顏料使藥學配料帶色。在一較佳具體實例中，原花青素聚合物組合物的藥學組合物是呈含於硬明膠膠囊中之腸衣包覆珠粒。原花青素聚合物珠粒是將原花青素聚合物組合物與羥丙基甲基纖維素 2合後在糖粒種子（糖球）上層覆弩混合物而製成的。珠粒 f後包上OpadryClear(與水混合）的密封層。用於原花青素來p物組合物之較佳腸衣是"EUdragITtm L 30D”，是以含 (重置/重量）乾聚合物的水分散液形式使用，該分散液含〇·7%月桂基硫酸納NF (SLS)和2 3%聚乙氧基醚nf(吐溫 20) ’作爲乳化劑，該分散液加入增塑劑（聚乙二醇和檸檬酸醋）以增加膜衣的彈性，還加入滑石粉以減少使用過程中妨衣凝集的傾向並增加膜衣的光滑性。最終腸衣包覆珠狀組合物含i7.3%重量比糖粒種子、64 5%重量比原花青素聚合物组合物、W重量比幾丙基甲基纖維素、〇5%重里比 Opady clear、14.5%重量比的”eudragitTMl3〇d” 廿U5%重量比檸檬酸三乙酉旨及〇25%重量比甘油醋。此藥學配方可用此技藝已知之任何方法或下= 8·ΐ節中描述的方法製備。 :-較佳具體實施中，原花青素聚合物組合否物是配製成腸衣包覆顆粒或粉末（直徑爲3G(M ^ 微球），這種粉末是呈硬明膠膠囊微未的液之形態。腸衣包覆的原花青科用藥學口服素1合物組合物粉末或顆粒

---------— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁訂 • ί 1= 1 ml ml ί 537898 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 也可以與食物混合，特別是用於小兒科給藥。這種製劑可用此技藝熟知之方法製備，例如，下文第8.2節描述的方法。通常，原化青素聚合物組合物顆料和粉末可用此技藝已知之任何方法製備，例如，結晶、噴霧乾燥或任何粉碎的方法，較佳是用高速混合器/成粒機，但不限於這些。高速混合器/成粒機之實例包括”LITTLEFORD LODIGETM”混合器、”LITTLEFORDLODIGEtm”MGT 混合器及”GRALtm” 混合器/成粒機。在高剪力粉末混合過程中，稱爲黏合劑的成粒劑的溶液被噴灑到粉末上，以引起粉狀顆粒結塊，這樣就形成較大的顆粒。用於製備原花青素聚合物組合物顆粒的成粒劑，包括纖維素衍生物（包括羧甲基纖維素、甲基纖維素及乙基纖維素）、明膠、葡萄糖、聚乙烯基吡咯烷酮 (PVP)、澱粉糊、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、糖蜜、乳糖、阿拉伯膠、海藻酸鈉、愛爾蘭蘚萃取物、panwar膠、茄替膠、isapol殼的膠液、Veegum和落葉松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇及蠟，但不限於這些。成粒劑之添加濃度爲在顆粒重量的1-30%。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 原花青素聚合物組合物粉末或顆粒較佳是以流化床設備. 包覆。顆粒或粉末再包覆Opadry Clear(與水混合）的密封層。用於原花青素聚合物組合物的較佳腸衣是以含3 0 %重量比乾聚合物的水分散液使用的”EUDRAGITtm L 30D” ；該分散液含0.7%月桂基硫酸鈉NF(SLS)和2.3%多乙氧基醚NF( 吐溫20)爲乳化劑；該分散液加入增塑劑聚乙二醇和檸檬酸酯，以改進膜衣的彈性；該分散液加入滑石粉以減少在使 -23- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 537898 A7 -- ——----—____ — B7 五、發明説明（21 ) 用過程中腸衣聚合物凝集的領向，並增加腸衣膜的光滑性。腸衣包覆之粉狀最終組合物含818%重合物組合物、㈣重量比幾丙基甲基纖維素、^^ 比 Opadryclear、M.5%重量比”eudragitTMl3〇d”、 1·45%重量比檸檬酸三乙酯及〇25%重量比甘油單硬脂酸酯。腸衣包覆顆粒的最終組合物含81·8%重量比原花青素聚合物組合物、ίο%重量比聚乙晞基吡咯烷酮、15%重量比的羥丙基甲基纖維素、〇·5%重量比〇padry 、 14.5%重量比”EUDRAGItTm L3〇D”、丨45%重量比檸檬酸二乙酯及0.2 5 %重量比甘油單硬脂酸醋。腸衣包覆原花青素聚合物組合物顆粒或粉粒可以進一步懸浮在溶液中，用於口服，尤其是用於兒科。懸浮液可用水溶液製備，其中加入增稠劑和保護膠質，以增加溶液黏度，來防止包覆粉粒或顆粒之快速沉積。任何由經由分子交互反應增強在懸浮離子周圍所形成水合層強度且與原花青素聚合物組合物藥學上相容的物質均可作爲增稠劑，例如，明膠、天然膠（例如黃蓍膠、黃原膠、瓜爾膠、阿拉伯膠、panwar及茄替膠等）及纖維素衍生物（例如羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素及羥丙基甲基纖維素等），但不限於這些。視需要，可加入表面活性劑（例如吐溫）來增加增稠劑的作用。較佳之懸浮液是含〇·2%吐溫的2%重量比羥丙基甲基纖維素水溶液。在另:具體實施例中，原花青素聚合物組合物係製成腸衣包覆藥片。在這具體實例中，原花青素聚合物組合物係 __24_ 本纸張尺μ财晒 i I m Hi IJ1 i HJ —-卜 In 1 s n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ,ιτI II m I . HI I— !i

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經濟部中央標準局員工消費合泎社印¾ 依前述製備原花青素聚合物組合物顆學可接受稀釋劑（例如、μ ^ 勺万法，與任何藥 J 如則又列示者）製成顆全、、、 J柒以此技藝已知之方法 ”粒。焱顆粒隨後、万凌壓成片劑，例如濕髮私、、土此或直接壓縮法，但不限於這些。較 1，、乾製粒法素（，，AV隐TM PH 200/300”）。此 j釋劑是微晶纖維和潤滑劑（例如前述者）也可加至片劑酉Γ方解中劑(:^^者）配方中含250亳芕眉龙主本取人t 車又佳的片劑无原化㈢素聚合物組合物、古山 :AC-則OL、交聯的幾甲基纖維素納劑硬脂酸鎂和使混合物達到35〇毛:β ， PH卿请”。片劑以由250克”Eudra(HtTM l WD-55"、7.5克檸檬酸三乙酯、制丄 /·)无滑石粉及205克水製成的腸衣混合物進行包覆。可使用任何此技藝已知之方法或下文第8·3節中描述的方法製備該配方。製成小顆粒（包括顆粒大小爲微米級者，例如微球和微膠囊）'顆粒（包括顆粒大小爲毫米級者）、藥晶體、小丸、藥丸及微珠的原花青素聚合物組合物可用流化床的方法包覆。這種方法使用流化床設備，例如由”GLa丁丁ΤΜ”、 "aeR〇mATICtM” ' ”wursterTM”或其他廠牌號流化床設備’原花青素聚合物組合物核經由下方通入的空氣流向上旋轉至封閉的錐形容器内，在流化期間，將腸衣料噴霧乾燥在於核上，製成腸衣。對腸衣藥片或膠囊而言，可使用

Accela-Cota法（，’MANES 丁 ΥΤΜ”）。用這種方法，把藥片或膠囊放在有多孔套管的旋轉錐形包覆盤内，喷霧設備是安放在盤内的，乾燥空氣通過旋轉的藥片或膠囊。也可以使用本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐）

537898 A7 B7 五、發明説明（23 ) 其他任何類型的包覆盤，例如”GLATTtm”浸刀設備、 ” DRIAMtm” Dricoater 、 ” STEINBERGtm” 設備、 ”PELLEGRINI™”設備或”WALTHERTMf’設備也都能用。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在另一較佳具體實例中，原花青素聚合物組合物係呈供直腸給藥之栓劑形式。可使用任何製備栓劑可接受且與原花青素聚合物組合物相容之基質製備栓劑。因爲直腸給藥不使原花青素聚合物組合物與胃㊅酸性環境接觸，直腸給藥的藥學配方不需要配成在酸性條件下能保護該組合物的配方。可用以與原花青素聚合物組合物製成检劑的检劑基質包括可可黃油、經甘油處理的明膠、氫化植物油、聚乙二醇或聚乙二醇脂肪酸酯，或甘油-表面活性劑組合物或非離子型表面活性物質（例如聚氧乙晞山梨糖醇脂肪酸酯（吐溫）的混合物、聚氧乙烯硬脂酸酯及山梨醇酐脂肪酸酯（Span and Arlace 1)的混合物），但不限於這些。然而，由於原花青素聚合物組合物的親水性，建議栓劑用親水性基質。較佳之原花青素聚合物組合物栓劑配方是用9 1克甘油、9克硬脂酸鈉、5克純化水及能達到重量比爲5%到50%的原花青素聚合物組合物所製成。或者，栓劑可含1 〇克原花青素聚合物組合物、20克明膠和70克甘油。可使用任何此技藝已知之方法使原花青素聚合物組合物所製栓劑成型，包括壓模法、熔融、或者最佳是熔化成型，但不限於這些。茲於下文第8.4節中描述由原花青素聚合物組合物製備栓劑的方法。在另一具體實例中，原花青素聚合物組合物是與一或多 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'乂 297公釐） 537898 經濟部中央標率局員工消费合阼杜印裝 A7 B7 五、發明説明（24 ) 種能中和胃酸的化合物併用。或者，可使含原花青素聚合物組合物之醫藥組合物與中和胃酸的藥學組合物一起給藥 ’也可在後者給藥後再給藥。用於中和胃酸的化合物（例如解酸藥）包括碳酸鋁、氫氧化鋁、鹼式硝酸鉍、鹼式水楊酸 #必、後酸鈣、氫氧化誤鋁、碳酸二輕鋁鈉、緩酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂及其混合物。在另一具體實例中，原花青素考合物組合物是與一或多種抑製胃酸分泌的化合物併用。或者，可使含原花青素聚合物組合物的藥學組合物與能抑製胃酸分泌的藥學组合物同時給藥’也可在後者給藥後再給藥。用於抑製胃酸分泌的化合物包括悦尼替丁（ranitldlne)、尼扎替丁（nizatidine) 、甲氰咪i(Cemmdlne)、法莫替丁（fam〇tidine)和米索前列醇（misoprostol)，但不限於這些。 5.3· 應用或使用方法原化青素聚合物組合物能減少氯化物流過腸上皮細胞和減少體液移入腸腔，這種體液的移動造成與分泌性腹瀉有關之體液流失和脱水。因此，本發明藥學配方和方法可用於腹瀉的預防和治療，尤其是預防伴隨腹瀉而來的脱水和電解質流失。原花青素聚合物組合物的藥學配方能用於治療和預防人 =動物的任何類型的分泌性腹瀉。在一較佳具體實例中，藥學配方係用以治療腸細菌引起的分泌性腹瀉。這些腸細菌包括霍亂弧菌、大腸桿菌（包括腸病原型、腸產毒型、腸黏連型、腸出血型或腸侵害型大腸桿菌）、其他弧菌屬、鄰 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-27 537898 A7 B7 五、發明説明（25 ) f請先聞讀背面之注意事項再填寫本買) 單胞菌屬、志賀氏菌屬、克氏桿菌屬、檸檬酸細菌屬、耶爾森氏菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬、葡萄球菌屬及芽孢桿菌屬，但不限於這些。此一具體實例尚還包括旅行者腹瀉的治療0 另一具體實例中，藥學配方是用於治療原蟲引起的分泌性腹瀉，包括賈第蟲屬和隱孢子屬原蟲，尤其是小隱孢菌，但不限於這些。另一具體實例中，藥學配方是用於治療非傳染性病原，例如非特定腹瀉、炎性腸综合症、潰瘍性結腸炎及胃腸道的癌症和腫瘤，但不限於這些。另一具體實例中，本發明藥學配方是用於治療愛滋病病人與人類免疫缺陷病毒相關的慢性腹瀉。再者，另一具體實例中，藥學配方是用於治療嬰兒或兒童的腹瀉，包括輪狀病毒引起的腹瀉，但不限於此。經濟部中央標準局員工消费合作社印裝本發明藥學配方還可用於治療非人動物的腹瀉，尤其是農場動物，例如牛類的動物、豬、羊類的動物、家禽（例如難）、馬科動物及其他家畜，例如犬屬動物和貓科動物，但不限於此。特別是，本發明藥學配方能用於治療非人動物的腹瀉’尤其是食用動物，例如牛、羊和豬，這種腹瀉是由細菌病原體引起的，例如腸產毒型、腸出血型細菌病原體及其他大腸桿菌、沙門氏菌屬、產氣莢膜梭菌、脆弱擬桿菌、彎曲桿菌屬、小腸結腸炎耶爾森氏菌、原生動物病原體（特別是小隱孢菌）及病毒病原體（尤其是輪狀病毒和冠狀病毒），此外還有外衣病毒、細小病毒、萼狀病毒、腺病 -28- 本紙張尺度通州宁國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X 297公發） 537898 A7 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製五、發明説明（26) 毒、bredavirus及星狀病毒。此外，本發明藥學配方對人和非人動物也可預防性地认藥，以防止分泌性腹瀉的發展，例如，可將原花青素聚二物組合物的藥學配方施用於前任可能出現腹湾的國家的ς 行者一或數次，以有效預防腹瀉，但不限於此。本發明二藥學组合物可施用於芰滋病患者以防止與人類免疫缺陷病 ^相關的慢性腹瀉。另外，本發ρ的藥學組合物也可在= 崔亂泥行病或輪狀病毒流行病威脅的國家，施用於兒童以防止這種疾病的蔓延。同樣地，本發明藥學組合物〇用於農場動物，以防止腹瀉病的發展，尤其是年幼或新近礼的展動物。當按照本發明配方和方法治療分泌性腹瀉時，原花青夯聚合物組合物的藥學配方口服有效劑量範圍爲每天二 100毫克/千克，較佳是每天約〇」至約4〇毫克/千克，视: 要可為每天0.1至25毫克/千克，亦可爲每日〇1至1〇亳2 /千克。當瞭解，適當之劑量視分泌性腹瀉的類型和嚴重性而定。已經發現，人們在高至2天内可耐受高達每天至少蛙克的原花青素聚合物組合物（25-30毫克/千克/日）。二、劑量可以超過每天40毫克/千克，若爲治療分泌性腹瀉= 需’可視需要高達每天1〇〇毫克/千克。尸當按照本發明配方和方法預防分泌性腹瀉，原花青素取合物組合物藥學配方的口服有效劑量範圍是每天〇丨至·、水毫克/千克，較佳是每天約〇」至約40毫克/千克：視需: 可爲每天0.1至25毫克/千克，亦可爲是每天〇1至1〇产 29- 本，”氏張尺度適用中關家標準（CNS ) A4規格（公楚 , ΐ 衣— Γ請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) -丁、=口 537898 明説明發五 A7 B7 /千克。應當知道，適當之劑量視所預防分泌性腹瀉的類型和嚴重性而定。已經發現，人們在高至2天内可耐受高達每天至少2克的原花青素聚合物組合物（25至30毫克/千克/ 曰）。咸k該劑量可以超過每天40毫克/千克，若爲預防分泌性腹瀉所需，可視需要爲高至每天1〇〇亳克/千克。原化㈢素Jc合物組合物可以任何一種治療上可以接受的藥物形式給藥’以治療或預防分孕性腹瀉。藥學組合物口服的形式可以是藥晶體、粒劑、小粒（包括粒度大小爲微米級者，例如微球和微膠囊）、顆粒（包括粒度大小爲毫米級者）、珠狀、微珠、小丸、丸劑、微片劑、壓片或片研製劑、模片或片研製劑以及可硬可軟並包含粉狀、粒狀、珠狀岭液或磕汙液狀組合物的膠囊，但不限於這些。藥學組合物也:以溶液或水懸浮液、裝人膠囊的液體或任何其他便万…藥的配万口服给藥，4以栓劑、灌腸劑或其他方便的形式直腸給藥。在較佳具體實例中，係施用經腸衣合物組合物的藥學组合物以治療或預防分泌性 …包覆配方包括硬明膠膠囊中的腸衣包覆珠、硬㈣膠膠囊中腸衣包覆微球、以懸浮液或與：球，這種製劑Ie ^ W 口 k供的微士兒科給藥特別方便，還有腸衣另一具體實例中，仅、A ，柄农包覆壓片。胃酸或抑製胃酸八、，， πD物和中和刀泌的化合物的藥學組合物腹瀉。另一種JL俨奋^ 口物以Μ療分泌性〜隨只例係施用含原花青素聚人舲藥學組合物以治瘃八、同f東口物組合物的療刀泌性腹瀉，該藥學組合物是與一種本紙張尺度適用中國國家標準（ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -30- 537898 A7 B7 五、發明説明（28) 和胃酸或抑製胃酸分泌的藥學組合物同時給藥，或在後一種組合物給藥後再給藥。原花青素聚合物組合物也可製成栓劑供直腸給藥。本發明藥學配方可單獨給藥或與其他能治療分泌性腹瀉或改善其症狀的其他藥劑合併給藥，例如，再水化劑、抗生素、抗蠕動劑及體液吸收劑（例如綠坡縷石）。本發明藥學配料也可摻入動物巧料中給藥，用來治療動物的分泌性腹瀉，例如牛類動物、豬、羊類動物、家禽、難類動物、犬類動物及雜類動物。下示系列實例係用以説明本發明，並不作爲本發明範圍的限制。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 6.實例：人工胃液、人工腸液及鹽酸對得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物的影響由秘魯巴豆得到的原花青素聚合物組合物經口服後，在人或動物的血漿樣品内既未檢出聚合物也未檢出聚合物的衍生物。但經靜脈内給藥後的動物血漿樣品中可測出並定量聚合物。是而有原花青素聚合物組合物經口服時在胃腸道中被改變而由原花青素聚合物組合物所衍生但無法爲南壓液相色譜檢測出之物種被吸收進體循環之假設之出現.。第二種可能性是，原花青素聚合物組合物在胃腸道中被完整地吸收，但於吸收後迅速地地轉形。還有一種可能性是，高分子量的原花青素聚合物既沒有在胃中也沒有在腸中被吸收。因此，本實驗係爲瞭解鹽酸、人工胃液和人工腸液對得 -31 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐) 537898 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（29 ) 自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物的穩定性的麥變選擇條件係人工消化道的化學條件。以鹽酸培育時所分鐘内原花青素聚合物組合物的濃度減少大約乃％。在^ 青素聚合物組合物以人工胃液培育後，數分鐘内減，培育2小時減少48%。與在鹽酸中培育後觀察到_ = 相比較，在人工胃液中培育後觀察到的額外損失，可由於原花青素聚合物組合物與人子胃液所含蛋白酶相：：的緣故m胃液培育後，以人工腸液培育原青素匕物組合物和人工胃液的混合物，則未見濃度明顯的減少： 6.1·材料和方法藥物經π服後，在通到胃液與藥物迅速與腸液混合之十二指腸之前，與胃液接觸約2至3小時。因此，要得到最佳的人工體内條件，原花青素聚合物組合物先在人工胃= 中培育2小時，然後用人工腸液以i ·· i的比例進行稀釋’，在37。。下再培育6小時。另外，使原花青素聚合物組合物在人工胃液、鹽酸或水中在37。。時培育。在不同的時間間隔内，由每-處理樣品中取出部分，％高效液相色譜定量測定原花青素聚合物組合物的量。 _試驗混合物和樣品的塑 K ^工胃液（SGF)是按照美國藥典XX第1105頁的方法配製，將2.0克氣化鈉和3·2克胃蛋白酶（得自豬的胃黏膜，Slgma)溶於70亳升鹽酸和足量水（HPLC級，Fisher) 中’製成1000毫升。此試驗液之pH約1.2。 2·人工腸液（SIF)是按照美國藥典乂乂第n〇5頁配製，將6 8 A4規格（21 Οχ 297公釐） „ liI衣-- (讀先聞讀背面之注意事項再填寫本頁〕 -訂 537898 30 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（克轉酸氫㈣於25〇毫升水，加入19〇毫升〇 2n氣氧化 .内t 400毫升水。然後加入10.〇克胰酶製劑（得自豬胰腺，Slgma)，混合後將得到的溶液用〇 2ΝΝ_調至沖 7·5±〇·1。此溶液用水稀釋至1〇〇〇亳升。. 鹽酸_=1.7)是將8〇〇微升UN鹽酸加至ι〇〇製得。 4.原花青素聚合物儲液是將克得自秘魯巴豆的原花青袭永合物組合物落於1 0亳升蒸餘水中製得。步驟 : 將原花青素聚合物組合物按i : 20的比例在人工胃液或水中稀釋（總體積爲i0亳升）。試驗液在37乇的烘箱中培育，並在0.03、0.5和2·0小時的時間間隔中攪拌下分別取出 1耄升試驗液。該試驗液經14,〇〇〇轉/分鐘離心1〇分鐘後，取出700微升上層清液，以含5〇毫莫耳磷酸氫鉀的ιΝ NaOH中和至pH 7·0±〇· 1。在2小時培育時間的末尾，按工 :1的比例將人工腸液加至原花青素聚合物組合物在人工胃液中的試驗液内，並把pH調至7.0土01。按照上述的用人工胃液混合的試液的操作過程，在2、2.5、4和6小時的培育時間分別取出一份試驗液。中和過的上層清液提1 :9的比例以四氫呋喃（HpLC級，Fisher)稀釋。使用5米長的 PLgel 5 00A 柱（P〇lyiner Laboratories)(3 00 X 7.5 毫米）和5米長的保護柱（5〇 X 75毫米），在Hewlett Packard 105 0 型南效液相色？晋儀上測定樣品，流動相爲95%四氫吱喃和 5%水，進樣量爲50毫升，流速爲1毫升/分鐘，運轉時間 33- 本纸張尺度適用中國國豕標準（CNS) A4規格（2i〇x297公釐 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

537898 Μ Β7 五、發明説明（31 爲11分鐘。檢測原花青素聚合物組合物於波長280毫微米的紫外吸收。 6.2.結果和討論用於定量原花青素聚合物組合物的高效液相色譜法不包括衍生法或離子交換，測量未結合的或，，游離的，，原花青素聚合物及未與蛋白質結合的原花青素聚合物。此外，高效液相色1晋法是以尺寸排斥色譜爲基礎的，因而可檢剛原花青素聚合物分子尺寸之變化（聚合或降解），而不是不影響 2 80毫微米時尺寸或莫耳消光系數的化學變化。聲酸對原花青素聚合物組合物的影響：爲了試驗鹽酸（胃液的一種主要組分）對得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物在體外的影響，使原花青素聚合物組合物在pH 1.2的鹽酸中培育2小時。於培育〇〇3、〇 $ 和2.0小時時取樣，並用肌c進行分析。將原花青素聚合物組合物在鹽酸中培育後的HPLC圖形的峰面積，與原^ 青素聚合物組合物在水中培育後的圖形的峰面積進行比較 (表 1)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I衣. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 ^ 1鹽酸（pH=1.7)對原花青素聚合物組合物

私紙張尺度適财® CNS - 34- 五、發明説明 4導面積是將原花青素入形的峰面積除以原花+^人2組合物在試驗介質中圖形的峰面積再乘以1〇〇^v出；;合物在水中（對照物）圖結果顯示，在鹽酸中培育組合物圖形的峰面積（即辛取^時後’原花青素聚合物了 19%。用鹽酸培育。·5;時：：物組合物的農綱物圖形的锋面積分別減少了 28〇/和、時後’原花青素聚合原花青素聚合物組合物大。6%。运些結果顯示， 3分鐘内與鹽酸接觸的么夕數的下降是由於在培育最初2- '. Γ ? ?上圖1係顯示原花青素聚人仏2 α 〜〇·〇3小時和在鹽酸中培育：广：物在水和鹽酸中培育青素聚合物組合物在；中2時的樣品譜圖。除了原花明顯減少外，尚可見二：：二小時後圖形的峰面積有在鹽酸中培育後看到：：:：=明顯的移動。組合物種可能的解釋，是鹽酸把原間從:.8移至6.2的- 低的物質，這種物質的、·：月素聚合物斷裂成分子量較長。、貝的㈤留時間比母化合物的滞留時間爲 ~物的影響: 液=得花青素聚合物組合物加至… 田此口物生成一種暗紅色沉澱。爲了測定沉 :::酶或氣化鈉引起的，把最後濃度爲5毫克/毫升的原胃匕合物組：物加至不含氣化納的人工胃液中或不含 I ^酶的人工野液中。把樣品在14,〇〇〇轉/分鐘的轉速〜1〇分鐘後，僅含胃蛋白酶的混合物有暗紅色沉澱，、這本纸張尺度適用中國國家標準 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁}

-35 - (CNS ) A4規格（ 210X297 公釐） 537898 A7 B7 五、發明説明（33 ) 表明❿澱是由原花青素聚合物組合物與胃蛋白酶的相互作用產生的。 I 」I- -- - - - ·-1- is - - - - I (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 原花3素聚合物組合物在人工胃液的溶液中培育2分鐘 ( 】時）後，HPLC色譜顯示原花青素聚合物圖形的峰。減/ 了大約32%。在37 °C培育0.5和2.0小時取出的樣顯不，原花青素聚合物圖形的峰面積沒有更明顯的改變二^ 2和圖3分別爲在人工胃液中^培育2分鐘和2小時的原化青素聚合物樣品的譜圖，這一實驗得到的峰面積數於表2。表2人工胃液在體外對原花青素聚合物組合物

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 /〇學面積是將原花青素聚合物組合物在試驗介質中圖形的岭面積除以原花青素聚合物組合物在水中（對照物）圖形的峰面積再乘以1 〇〇計算的。原花青素聚合物大多數在濃度上的減少是在與人工胃液接觸2分鐘内發生的。此外，用高效液相色譜分析檢測出的原花青素聚合物組合物的降低，可能是由於被人工胃液中酸所降解而與人工胃液中胃蛋白酶結合的緣故。知原花青素聚合物組合物加至人工胃液後，曲線下峰面 -36 ‘紙張尺度適用中關家標準（c 视似297讀）五 w/898 .、發明説明（34) 積的迅速下降示於圖4和圖5中，素聚合物組合物在人工胃；夜中择J 4和圖5分別爲原花肩品譜圖。。θ 2分鐘和2小時後的携灼了更好地了解得自秘魯巴豆在小腸中的結局，對腸液對广素4合物組合物作了體外研究。爲了最佳地二工=合物组合物的影響物組合物先在人工胃液…二内原花青素聚合的比例稀M $ k Α小時後以人工腸液按i:】的比例#釋，再於3VC下培育6小時。人工腸液加青素聚合物組合物在人工胃 ’、化八、，，设中的岭硬後，在各時間間隔刀別取以w效液相“進行分析1 譜圖。結果顯示在表3和圖6，並 α係抜 .^ ^ , 口 6，並表明人工腸液沒有顯著地減y原化青素聚合物組合物的量。表3在人工胃液中培育2小時並以人工腸液按^ : ^稀釋後再培育4小時的人工胃液-原花青素聚合物組合物混合物與人工腸液之相互作用。

(讀先閱讀背面之注意事項、再填寫本百C A衣 -訂經濟部中央標隼局員工消費合作社印製時間（小時） -------- 2.0 1號樣品％峰面積 2號樣品％+面積平均（n=2) 44 52 48 2.5 50 42 46 · 4.0 59 45 52 6.0 45 55 50 •-。只&何你化貫方取贫奶却L节、奶杜氣驗介質中圖的峰面積除以原花青素聚合物組合物在水中（對照物形的峰面積再乘以1 〇〇計算的。 -37- r/ 張紙 I本 L度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 537898 A7 B7 五、發明説明（35) 6. j. 、结本研究中試驗的培育條件，人工了口服得自秘魯巴豆中的原花青素聚合物組合物後遇到的條件。有些原花青素聚合物組合物的損失（25-32%)是在用稀鹽酸和人工胃液培育組合物數分鐘内看到的。所看到的用人工胃液培育後比用鹽酸培育後的更大的損失，是原花青素聚合物組合物與人工胃液中的胃蛋白酶的結合引起巧。當原花青素聚合物組合物在人工胃液中的溶液用人工腸液培育時，沒有看到原花青素聚合物組合物有更明顯的減少。因爲分析原花青素聚合物組合物使用的方法是以尺寸排斥色譜法爲基礎的，應注意所出現結果的解釋，因爲這種方法不能區分天然原花青素聚合物組合物和在不會改變其分子大小的方法中在化學上已有改變的原花青素聚合物組合物。 7.實例··腸衣的原花青素聚合物組合物對霍亂毒素處理的小鼠體内體液蓄積的影響的評估本研究的目的，是確定得自秘魯巴、豆的腸衣的原花青素聚合物組合物對以霍亂毒素處理的小鼠腸道中體液蓄積的影響。霍亂毒素在小鼠體内產生體液蓄積的病理生理學機制與霍亂毒素或其它細菌毒素在人體内產生體液蓄積的機制是相同的。在這個模型中，一種試驗化合物造成體液的_ 減少，顯示這個化合物可作爲一種抗腹瀉劑。開始時（to) ，將小鼠以強制餵食法口服霍亂毒素（每平均體重20克給藥1 5微克）並用氰基丙烯醯胺酯作肛門直腸封堵。三小時 _-38-_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） — _! |_·: — ！夢-丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、訂 537898 A7 B7 五、發明說明（36 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 後小時），將懸浮在〇·75%瓜爾膠（賦形劑）内的包腸衣的原花青素聚合物組合物單劑（131毫克/千克），強制銀食口服給藥。將水和含於賦形劑中之當量濃度”eudra⑺ 和糖對照組落液施用於兩組對照組。與霍亂毒素接觸7小時⑴小時）後，將小鼠殺死，將從幽門到直腸包括盲腸在内的整個鼠腸道分離出來。因爲體液蓄積發生在小腸内，有些體液會滲入大腸内，所以要分夢整個鼠腸道。體液蓄積疋以腸迢和包括盲腸在内的直腸的總量與腸道的總體液的總量所得差數之比計算的。在實驗條件下，口服腸农的原花青素聚合物組合物明顯地減少了以霍亂毒素處理的和封堵的成年小鼠腸道内的體液蓄積。腸衣的原花青素聚合物組合物（131毫克/千克）與以水爲對照組和 EUDRAGITtm”/糖/賦形劑對照組的平均體液蓄積比相比較，體液蓄積比分別減少了 45%和38%。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 7.1. 霍亂毒素和原花青素聚合物組合物的製備以下材料是得自商業供應者：霍亂毒素（List生物實驗室 ’批號CVX-48-3D);氰基丙晞醯胺醋（Borden公司，哥儉布’俄亥俄州）；動物銀食針（Popper and Sons，海德公園 ’紐約）；碳酸氫鈉（ACROS，批號83559/1);瓜爾膠（Signja ，Φ匕號 94H0195) ; ,fEUDRAGIT™ L30Dff (PMRS ，批號 R10538) ; 40-60 目糖球（PMRS，批號 R10542)。爲了製備霍亂毒素儲液，將1毫升高效液相色譜級水 (MiU Q)加至一裝有1毫克霍亂毒素的小瓶中，分裝在兩個不同的小瓶中於4 °C下貯藏。爲動物給藥的霍亂毒素溶液 -39 表纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 537898 Μ -----------Β7 五、發明説明（37 ) 是用560微升7%(重量/體積）NaHC〇3溶液稀釋240微升霍亂毒素儲液新配製的。NaHC〇3最終濃度是4·9%。每隻小鼠開始時（tG)以強制餵食法口服5〇微升含有15微克霍亂毒素的溶液。得自秘魯巴旦的原花青素聚合物組合物腸衣配方包含 ^(重量/重量搶粒種子^唐球^〜仙^办^抓^批號60084060)、64·6%原花青素聚合物組合物，1 5〇/〇羥丙基甲基纖維素（HPMC ，道化學公司，批號MM9410162E) 、〇·5% Opadry Clear (Colorcon.，批號 S835563)、14.5% ’’EUDRAGITTM L30D’’（Rohm Tech·，批號 1250514132)、 1.45%檸檬酸三乙酯（Morflex，批號N5X291)、單硬脂酸甘油酯（Rohmm Tech.,批號502-229)、純化水（美國藥典）。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 在糖球上爲原花青素聚合物組合物塗層的溶液是將輕丙基曱基纖維素和原花青素聚合物組合物加至純化水（美國藥典）中並混合至溶解所製。糖球種子放在流化床加工器的產品滾筒（Niro-Precision Coater)内。在乾床溫度保持在 3 0-35 °C時，把原青素聚合物組合物-複丙基曱基纖維素溶液噴灑在流化的糖球種子上。塗層過程繼續進行至所有溶液都用完。一旦原花青素聚合物組合物塗層完畢，就塗覆 Opadry Clear的密封層（將Opadry Clear與純化水（美國藥典 )混合製成），並保持乾床溫度爲30-35 °C。當密封層塗完後御下藥丸，並經1000微米和425微米的篩子篩分，將大於 1〇〇〇微米和小於425微米的塗層球放回流化床加工器内。腸衣溶液是將檸檬酸三乙酯和單硬脂酸甘油酯於不斷攪拌 -40 - 本紙張尺^^?^國家標準（〇阳）八4^格（21〇、乂 297公釐] ' " A7 B7 經濟部中央標準局差消S作社 537898 五、發明説明（38 下加至65 C的水中製说 ,，EUDRAGITTM L30D 55内成的。授拌下將此溶液加至 ^ Y 内。然後將所製腸衣溶液在一床溫馬3 0 _ 3 5 C的流化床加工哭一、、、冲内嘴灑到塗層球上，直至所有的％衣落液都噴灑到珠上。爲便於強制銀食法口服和一 , 和防止小珠的瞬時間沉降，使用增稠劑瓜爾膠。製成一百古& Λ 、 I成百笔升〇·7%的瓜爾膠並用2毫升 •目Μ:酸㈤土 ρΗ 2。將腸衣的!花♦素聚合物组合物小珠緣子在0.7。/〇瓜爾膠溶液内。只以〇 7%瓜爾膠溶液配製包含最終濃度相當的，·ΕυΜΑ〇πτΤΜ，，和糖的對照溶液。 7.2· 方法和結果貝知疋接照 Rlchardson and Kuhn，1986，and

Immun· ^:522-528所述方法進行。使用5〇至52日齡體重範圍爲15.7克至18 7克的雄性小鼠。試驗動物爲野生型 C5 7B 1/6小鼠，得自查耳斯河實驗室。所有動物都是隨意供養在有水的新陳代謝蘢内，以便實驗的繼續。小鼠在實驗開始W 24小時和實驗過程中都不供給食物。開始時… 小時），小鼠是由強制餵食法口服i 5微克霍亂毒素，並用氰基丙晞醯胺酯（Superglue)進行肛門直腸封閉。三小時後 (h小時），小鼠以強制餵食法口服腸衣的原花青素聚合物輕合物在瓜爾膠溶液中的懸浮液，或者口服對照溶液。接觸崔亂母素7小時（ο小時），殺死小鼠，並將從幽門到直腸包括腸在内的整個鼠腸道分離出來。要小心以避免組織破裂和體液損失，接合的腸系膜和結缔組織都要去除。組織和體液的重量是用分析天平秤量的。然後把組織縱向剖開 -41 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

537898 五、發明説明（39) ，除去體液，組織及時乾燥。一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在内的小腸和大腸)蓄積的體液:腸内(包括盲腸比計算的。重里，、鮮重減去體液重之不同處理的體液蓄積比

ExceW、,0統计比較是用Microsoft heel (version 5.0)對變化的分析用於確定意義。進行了鄧止& 、 .〇5的P値衣的原花青素聚合=二巧圍試驗，以確定接受腸液蓄積比，與僅接受水戈^、巧體内霍亂毒素謗發的體，，EUdrAGITw,^ 〇 75%瓜爾膠溶液中的 tUDRAGIT和糖的動物相顯的減少。㈣焱疋否發生了統計學上明下面描述的實驗中，總數爲24 (每次處理8隻）·· 又j - &以下万法處理 A組：接受霍|L毒素的小氣於3小時後再给單劑在給藥霍亂毒素7小時後將它殺死。 η B組：小鼠在起始時接受霍乱毒素，3小時時以單劑的細农的原花青素聚合物組合物给藥（丨3 1毫克/公斤踢重賦形劑由酸㈣0.75%瓜爾膠溶液組成。7小時時:動物全部殺死。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 C組：小氣在開始時接受霍亂毒素。3小時時將小鼠以单劑的當量濃度的"EUDRAGITtm"和糖給藥（1 33毫克 "EUDRAGITtm’、丨· 046毫克糖/公斤體重）。賦形劑由=化的〇. 75%瓜爾膠溶液組成。所有動物在7小時時殺死。初期的研究顯示需要較長的培育時間以保證腸衣的藥粒冗全轉入腸内，基於此，所有動物在霍亂毒素給藥後7小 42 - 本纸張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 537898 A7 B7 五、發明説明（4〇) 時時殺死。爲了得到更可靠的結果，動物的數量增至每組8 隻。表4和圖7係腸衣的原花青素聚合物組合物對封閉成年小鼠模型中霍亂毒素謗導的體液分泌的影響。可以看出，13 1毫克原花青素聚合物組合物/公斤的單劑，明顯地（P < 0.05)減少以霍亂毒素培育7小時後的體液蓄積。與對照處理（A和C組）後的結果相比較，腸衣的原花青素聚合物組合物藥粒（B組）明顯地把體液蓄積比平均分別、減少45%和 3 8%。這一實驗中，沒有小鼠是因爲強制餵法口服的結果而死去的。表4腸衣的原花青素聚合物組合物對霍亂毒素處理的小鼠腸液蓄積的影響組別小鼠數處理體液蓄積* (毫克腸液/毫克腸） A 8 H20 L28±0.09a B 8 131毫克原花青素聚合物組合物在瓜爾膠溶液内/公斤 0.71±0.17b C 8 ”EUDRAGIT™” 及糖 / 瓜爾膠溶液 1.15 土 0.16a 用鄧肯氏多範圍試驗明顯地（P < 0.05)區分帶不同字母的數値。在此實驗條件下，腸衣的原花青素聚合物組合物明顯地減少了以霍亂毒素處理封閉的小鼠腸内體液蓄積。基於這 -43- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） : ·--衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 537898 A7 B7 五、發明説明（41) 些結果，口服腸衣的原花青素聚合物組合物（131毫克/千克 )與在’’EUDRAGITtm”加糖對照中的平均體液蓄積比相比較，體液蓄積比平均減少3 8%。用每組1 8至20隻小鼠作進一步實驗的結果示於圖8和表 5 。這些結果進一步肯定了最初實驗的結果。接觸霍IL毒素後三小時（t3)接受131毫克原花青素聚合物組合物/公斤的B組小鼠與三小時後接受水中：EUDRAGITtm ”和糖的小鼠相比較，在體液蓄積上呈現出明顯的減少。表5 :腸衣的原花青素聚合物組合物藥粒對霍亂毒素處理的小鼠腸液蓄積的影響組別小鼠數 t〇小時 t3小時體液蓄積 (毫克體液/毫克腸） A 20 CT/NaHC03 ”EUDRAGIT™’’ 1.34 土 0.09a* 及糖/h2o B 80 CT/NaHC03 131毫克/公斤原花 0.75±0.10b* 青素聚合物組合物 *用T試驗顯著地（P < 0.001)區分帶不同字母的數値。 8.實例：藥學配方的製備 . 下面描述的是按照本發明製備和包裝得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物不同的較佳藥學配方的解説性方法。 8.1. 嚢封的腸衣藥珠下面提供的詳細描述，是用於製備囊封腸衣原花青素聚合物組合物藥珠配方的分批配方和方法。每個硬殼明膠膠 -44- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

537898 Α7 Β7 五、發明説明（42 ) 囊包括25 0毫克包腸衣的原花青素聚合物組合物藥珠。膠嚢是裝在鬲密度聚乙烯瓶中，每瓶裝16個各重250毫克的膠囊。腸衣的原花青素聚合物組合物藥珠的配方包括 ”^。/。（重量/重量谈球種子懷球⑽/^篩孔，？^“!!!·"* 號60〇84〇60)、64.5%得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物、1.5%羥丙基甲基纖維素（Methocel E5 Premium，道化學公司，批號 MM9410162E)、0.5%Opadry Clear (Colorcon ，批號 S83563)、14.5% ”EUDRAGITtmL30D”（Rohm Tech·, 批號1250514132)、1.45%檸檬酸三乙酯（Morflex，批號 N5X291)、單硬脂酸甘油 g旨（imwitor_9〇〇, Rohm Tech·，批號 502-229)及純化水（美國藥典）。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 含原花青素聚合物組合物的塗層溶液是將羥丙基甲基纖維素和原花青素聚合物組合物加至純化水内並混合至溶解。糖球種子放至流化床加工器（Nior-Precision Coater)的產品杯内。用靶床溫度爲30-35 °C時把溶液噴灑在流化的糖球種子上的方法將聚合物溶液包層在糖球種子上，一旦原花青素聚合物塗層完成，在靶床溫度爲30-35 T：時用〇padry Clear(將Opadry Clear與純化水（美國藥典）混合製成）實施密封塗層。密封塗層完成後，將藥丸御下，並通過1〇〇〇微米和425微米的篩子進行篩分，大於425微米和小於1〇〇〇微米的塗層球放回流化床加工器内。同時，腸衣溶液是將檸檬酸三乙酯和單硬脂酸甘油酯混入65。(：的水中，再將此溶液與”EUDRAGITtm L30D-55”混合製成。然後在床溫爲 3〇-35 °C時將製成的腸衣溶液在流化床加工器内嘴麗在塗 __ -45- 本纸張尺度家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）一~~---- 537898 A7 B7 五、發明説明（43 ) 層球上，直到所有的腸衣溶液都包在藥丸上。高效液相色譜分析結果顯示原花青素聚合物組合物的濃度爲52.9%，將腸衣藥珠用手裝入零號大小硬殼明膠膠囊中，以提供一種250毫克劑量，然後裝入一帶熱感應襯罩的大小適宜的高密度聚乙烯瓶中。表6 :分批生產配方產品：原花青素聚合物腸衣丸批量大小：578.0克原料每批用量糖粒球，NF(40/60) 100.0 克原花青素聚合物組合物 372.8 克羥丙基曱基纖維素E5，美國藥典(K29/32) 8.7克 Opadiy Clear (YS-1-19025A) 2.9克 ”EUDRAGIT™ L30D-55”（30%固體） 279.4 克檸檬酸三乙酯，NF 8.4克單硬脂酸甘油酯 1.4克水，美國藥典(加工中去掉） 1284.8 克 · 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 8.2. 腸衣的顆粒和粉粒下面描述的是配製腸衣或粉狀（直徑爲300-500微米的微球）原花青素聚合物組合物的方法，這種組合物既可裝入硬殼明膠膠囊中也可懸浮在口服溶液内。原花青素聚合物組 -46- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 537898 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（44 百物粉粒，是用高剪切粉化把原花青素聚合物組合物和羥丙基甲基纖維素在高速混合器/成粒器中混合製成的。原花 =素聚合。物組合物，顆粒是將聚乙烯吡咯烷酮在高速混合斋/成粒器中噴灑在粉末上，這樣粉粒就結塊而形成較大的顆粒。然後用流化床設備把顆粒和粉末包上〇padry Clear( 與水混合）的密封層，接著用含30%(重量比）乾甲基丙烯酸酯聚合物的水分散體的腸衣” eudragitTM L 3〇D”進行包層，分散體是用0.7%十二烷基硫酸鈉NF和23%多乙氧基醚8 0NF(吐溫20)作爲分散劑施用的，分散體中還加入增塑 eJ檸檬酸一乙醋和單硬脂酸甘油g旨，以改進塗層的彈性。腸衣粉末的最終成分爲81.8%(重量比）原花青素聚合物組合物、1.5% (重量比）幾丙基甲基纖維素、〇 5% (重量比）

Opadry Clear、14·5%(重量比）”EUdraGITtm L 30D”、 1.45% (重量比）檸檬酸三乙酯及〇·25% (重量比）單硬脂酸甘油酯。腸衣顆粒的最後成分是8 i 8% (重量比）原花青素聚合物組合物、10%聚乙烯吡咯烷酮、1.5%(重量比）羥丙基甲基纖維素、0.5% (重量比）0padry clear、14 5%(重量比 )EUDRAGIT L 30D”、1.45%(重量比）檸檬酸三乙酯及〇·25%(重量比）單硬脂酸甘油酯。腸衣的原花青素聚合物組合物的顆粒或微粒可以適宜劑量的量裝入硬殼明膠膠囊中。腸衣的原花青素聚合物組合物顆粒或粉粒也可懸浮在口月良的溶液内，尤其是兒科用藥。懸浮液是將2克羥丙基曱基纖維素加至97·8毫升蒸餾水中和〇·2克吐溫80製成的， -_____ - 47_ 本紙張尺^) Α4規格（2iGX 297讀） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

537898 A7 B7 五、發明説明（45) 將此製劑用超音波破碎技椒：曰人设術w合均勻，將溶液熱至40 °C # 檟:掉3小時，然後將腸衣斤亦主取录化5素I合物組合物粉粒或粒加至均勻的溶液中。 ^

8.3 . 壓縮 I 下面描述配製原花青素聚合物組合物腸衣錠劑的一法。爲製成每個350毫克的鍵劑，將25〇毫克原花青素聚合物組合物與7毫克交聯的每甲基纖維素鈉（”ac_di_ soltm”）及足夠量的微晶纖維素（”avicelTM PH 2〇〇/3卯

使總重達35〇毫克的料製成顆粒。將這些組份在V形摻和機中混合20至30分鐘。混合2〇至3〇分鐘後，加入丨刀5 毫克硬脂酸鎂，並將此混合物再混和4至5分鐘。將製成的顆粒用5/16英吋標準凹形沖壓機，在旋轉式壓片機上壓製成錠。將藥錠用由250克”EUDRAGITtm L 30D-55”、7 5 克擰檬酸三乙醋、37.5克滑石及250克水製成的腸衣混合物進行塗層。然後將藥鍵放入一多孔盤式塗料器（例如 ACCELA-COTA 系統）内’並於40 C以I5轉/分鐘的轉速旋轉。腸衣配料是用以下條件噴灑的：入口氣溫爲44 °C 至48 °C，排氣溫度爲29 °C -32 °C，產品溫度爲26 °C -30 °C ，一個1毫米噴咀，盤轉速爲30-32轉/分鐘，30_32立方英尺/分鐘的氣流及20時/平方英寸的噴壓。在盤以15轉/ 分的轉速旋轉和入口氣溫爲6 0 °C的情況下，將藥鍵最終熟化30分鐘，停止供熱後將藥錠在15轉/分下旋轉直至藥錠冷至室溫。 48- 各紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） .、---- (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 537898 、發明説明（46) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 8·4.栓劑製m:!:給藥的原花青素聚合物組合物栓劑的配聚合物組合物的检劑配料可以下法炊克甘油熱至12。1將9克硬脂酸納落…油，克純化水。將5%至50%原花青素聚合物：合物加下：製1二將此混合物倒至—適宜的模内。或者，可使 ^成㈣：將20克明膠和_7〇克甘油熱至7代並授掉 i^:二'、、*加人經超讀破碎5分鐘後溶於純化水的1〇ί ::t聚，物組合物，於4〇r攪拌至成爲均勾的混合 …後如製劑倒至一適於作栓劑的模具中。 9’ 物在患者腹瀉人中的作用茲以下文摘述由於起始20名病人得到的臨時結果，這些病人是屬於得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物，爲根據病情治療急性非特異性腹瀉和旅行者腹瀉的安全和效果而做的公開標記臨床試驗的。 9· 1 · ^類安全和藥效研究參與研究的旅行者腹瀉病人總數爲20名。病人族群包括年輕（平均年齡爲24歲）男性和女性病人，爲從美國來到墨西哥的學生。這些學生一進入這個國家便爲研究者所吸收，並被告知出現腹瀉後和開始任何其它藥物處理前要向診所報告。受試者依下示參數評估·· a) —般大便頻率（每日或每周大便次數）。 ______-49- 本纸張尺g财關家辟（CNS ) I..... I ?! - - - I— n u -- !!- ϋ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、ν" • Is ......I - --I · .1 - ί I- -1 ί ^ϋ· 1 537898 A7 B7 五、發明説明（47) b)出現腹瀉的曰期和時間。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) e)過去24小時的大便次數，按照下面的稠度分類： -成形的：在水中保持原來形狀。、軟的··呈現容器的形狀。 ''水樣：可倒出的。 (混合型大便（例如，軟的/水樣）計入最低之成形類（例如水樣））。 _ d)過去24小時内出現之症狀，包括： -痛性痙攣一肛門刺激 -裡急後重 -急迫（無法延持15分鐘） -糞便失禁（腸蠕動控製降低） -不方便（干擾正常活動） -口區心 -p區吐 *腸氣增加經濟部中央標準局員工消費合作社印製篩檢評價完成後，取基線實驗室樣品，施用試驗療法之第一次劑。受試者在治療期間的前24小時，每6小時給藥 2 5 0毫克腸衣的原花青素聚合物組合物，共給12 5 〇毫克；第二天分四次給藥，每次5〇〇毫克，共2克。原花青素聚合物組合物僅给藥2曰。在基線臨床觀察期間，研究參加者要受訓練，使其能正確填寫曰語和研究表格，考慮下述評價參數： -50- Μ氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐 537898 A7 五、發明説明（48) 1. 安全性詢問病人於研究期間經歷的任何不利事件。這些事件依嚴重性、持續時間、與研究藥物之關係及所採取之任何疒動分類。以開始和研究完成時採得之血液和尿液評估2 何變化。 2. 藥效依病人日誌和臨床觀察評估藥$。所計算之重要藥效參數包括大便頻率、稠度及最後不成形大便的時間。 9.2.結杲研究期間，任何病人無肇因於原花青素聚合物組合物的明顯副作用。此試驗之基礎藥效參數包括自報大便頻率和到最後不成形大便的時間。結果示於表7。表7 :自報大便頻率（20名受治病人） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁j 訂時間每日大便次數（平均）經濟部中央標準局員工消費合作社印製登記前24小時 5.6 1天 4.0 2天 2.9 3天 2.1 平常 1.6 平均要經過三天的研究時間，不正常的大便頻率才趨於正常。每天平均的大便次數轉向接近正常要三天。4名病人轉向正常大便頻率是在研究的第三天。此外，到最後不 -51 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 537898 A7 B7 五、發明説明（49) 成形大便的時間平均是3 〇. 3小時。取得胃腸症狀的基準和追跛報告。病人被要求對九種症狀的嚴重程度（溫和的、中等的或嚴重的）進行評分，包括嘔心、嘔吐、痙攣、放氣、急迫、裡急後重、肛門刺激、失禁及煩擾。共九名病人之症狀在研究3天終了時完全解除。表8所示係在指定時間完全解除症狀之寒人數。表8 :即時解除所有症狀（2〇名受治病人） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 時間解除之病人數 24小時 48小時 60小時 72小時 1 2 4 2 以〇爲症狀消失、1爲溫和症狀、2爲中度症狀而3爲嚴重症狀計分，計算症狀之總許分。取每一時間間隔時所有病人之總評分之平均値，示於表9。、一叮經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -52 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 537898 A7 五、發明説明（5〇) B7 _____— 表9 依時間計之症狀評分（20名受治病人）

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 對所得數據評估之結論如下·· L大體而了病人對藥物之耐受性良好，但有3名病人感到嚴重的自我限制性嘔心，可能與受試藥物有關。但無任一個病人因爲副作用而退出研究。 2 ·心療期間内’血清化學或血液學無明顯變化。確有6 名病人之尿液分析顯示輕度之變化。我們相信這些尿液分析之交化並非明顯之副作用。不明白的是，這些變化係受試藥物或彼等原有之病症所造成。〇.大便頻率經過3天的研究階段傾向於轉向正常頻率。， 4.與病歷對照呈報之69小時相較，平均到最後不成形大便的時間是30.3小時。總心，進一步之結論爲，得自秘魯巴豆的原花青素聚合物組合物的腸溶配方可用於改善旅行者腹瀉病人之大便頻率和胃腸症狀。整體而言，該藥物係安全的，而嘔心爲其 -53 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2丨〇'x 297公旋） ,ιτ 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 537898 A7 B7 五、發明説明（51) 最常見之副作用。本文所載發明不爲所述特定具體實施例所限定，蓋該等具體實施例係用以説明本發明之多種事宜。任何相當之具體實施例均涵括於本發明之範圍内。確實，除本文所示及所述者之外，各種對本發明之修飾，對技藝人士而言係可依前述敎示易於推知的。此等修飾亦落於本發明之範圍内。本文所引文獻之全文併於本文J爲本文之參考。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣' 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -54- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐）

Claims

537898 BCD 第86115262號專利申請案中文申请專利範圍修正本（9i年元月) 六、申請專利範圍 t L ~ 1. 一種用於治療及預防慢性及急性腹瀉之醫藥組合物，其含有治療有效量之由巴豆屬5即.）或胡桐屬植物（Calophyllum spp.)分離之原、花音素聚合蜘级合物或其醫藥上可接受衍生物，該原花青素聚合物组合物係包以口服用腸衣以保護該原花青素聚合物組合物免於胃環境作用，及其醫藥上可接受載劑。 2. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該巴豆屬植物係秘魯巴豆（〇〇/⑽/ec/2/er/)。 3. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該組合物係製成經腸衣或未腸衣之膠囊。 4. 根據申請專利範圍第1或2項之醫藥組合物，其中該腸衣是由具酸可離子化基團之甲基丙烯酸及甲基丙烯酸酯共聚物所組成。 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該腸衣另含有一或多種增塑劑化合物。 6. 根據申請專利範圍第5項之醫藥組合物，其中該增塑劑化合物是聚乙二醇酯及檸檬酸酯。 7·根據申凊專利範圍第1或2項之醫藥組合物’其中該組合物係製成錠劑。 8. 根據申请專利範圍第1或2項之醫藥組合物’其中該組合物係製成含藥粒之膠囊，該藥粒則含一糖球、一原花青素聚合物組合物層及一腸衣層。 9. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該組合物係製成300微米至500微米之微球，該微球含原花本紙張尺度適巧關家料(CNS) Μ規格(_〉〈撕公复) 537898 8 8 8 8 A B c D 六、申請專利範圍青素聚合物組合物藥粒及一腸衣層。 10. 根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中該微球係充填至膠囊中。 11. 根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中該微球進一步調製成懸浮液。 12. —種用於治療及預防慢性及急性腹瀉之醫藥組合物，其含有治療有效量之由巴豆屬（〇 0/(9/7 57?户.）或胡桐屬植物v/?.)分離之原花青素聚合物組合物或其醫藥上可接受衍生物，該原花青素聚合物組合物經與抑制胃酸分泌物質調製成口服型態，及其醫藥上可接受載劑。 13. —種用於治療及預防慢性及急性腹瀉之醫藥組合物，其含治療有效量之由巴豆屬（〇(9/(9/7 5即.）或胡桐屬植物（C α / 〇户/2少/ / w m .)分離之原花青素聚合物組合物或其醫藥上可接受衍生物，其係調製成含於醫藥上可接受載劍内之栓劑。 -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐）