BR112013018688B1

BR112013018688B1 - Método de produção de uma composição polimérica de proantocianidina

Info

Publication number: BR112013018688B1
Application number: BR112013018688-7A
Authority: BR
Inventors: Mubeen Ahmad Khan; Sukumar Sinha; Vikas Parashar; Vipin Kumar Pandey; Snehal Shah
Original assignee: Napo Pharmaceuticals, Inc
Priority date: 2011-01-27
Filing date: 2012-01-17
Publication date: 2021-08-24
Also published as: RU2013134704A; WO2012101008A1; RU2593014C2; BR112013018688A2; AR084940A1

Abstract

processo para a produção de composição polimérica de proantocianidina. a presente invenção se refere a um processo para o isolamento e purificação de uma composição polimérica de proantocianidina, tendo a composição elevada pureza, sendo adequada para emprego em formulações farmaceuticamente eficazes. particularmente, a invenção refere-se a um processo para a produção de crofelemer, adequado para formulações farmacêuticas tendo um nível de pureza e concentração que o capacita ser usado num modo terapeuticamente eficaz.

Description

Pedidos relacionados

[0001] Este pedido reivindica benefício dos Pedidos Provisórios Indianos nos 233/MUM/2011, depositado em 27 de janeiro de 2011; 245/MUM/2011, depositado em 28 de janeiro de 2011; 569/MUM/2011, depositado em 1° de março de 2011; e pedidos provisórios norte-americanos nos 61/444,803, depositado em 21 de fevereiro de 2011, 61/445,046, depositado em 22 de fevereiro de 2011 e 61/452,730, depositado em 15 de março de 2011, todos os quais estando ora incorporados por referência em sua totalidade.

Campo técnico

[0002] A presente invenção se refere a um processo para o isolamento e purificação de uma composição polimérica de proantocianidina, tendo a composição pureza elevada e apropriada para utilização em formulações farmaceuticamente eficazes. Em particular, a invenção refere-se a um processo para a produção de Crofelemer adequado para uso numa formulação farmacêutica tendo um nível de pureza e de concentração que lhe permite ser utilizado de forma terapeuticamente eficaz.

[0003] A presente invenção também se refere a uma composição polimérica de proantocianidina, especificamente, Crofelemer, obtida a partir do processo desta invenção. Além disso, a invenção também proporciona uma composição polimérica de proantocianidina e/ou polímeros de proantocianidinas, especificamente, Crofelemer, obtido (seja direta ou indiretamente) por meio do processo da invenção.

Antecedentes da Invenção

[0004] Proantocianidinas e polímeros de proantocianidina são substâncias fenólicas encontradas como substâncias incolores ou acastanhadas qsue ocorrem naturalmente em uma ampla variedade de plantas, particularmente aquelas com um hábito lenhoso de crescimento (por exemplo, as espécies Croton e Calophyllum inophylum). A estrutura química geral de uma proantocianidina polimérica consiste em cadeias lineares de 5, 7, 3', 4' unidades tetra- hidróxi ou 5, 7, 3 ', 5' unidades penta-hidróxi flavonoides 3-ol ligadas entre si por ligações comuns C(4)-(6) e/ou C(4)- C(8), tal como mostrado abaixo.

[0005] Testes biossintéticos indicaram que, os polímeros proantocianidinas consistem de unidades de monômeros do tipo mostrado abaixo, Ver Fletcher et. al., 1977, J.C.S. Perkin, 1:1628

[0006] A unidade monomérica (geralmente denominada "leucoantocianidina") da cadeia polimérica pode ser baseada em qualquer um de duas estereoquímicas do anel-C, nas posições 2 e/ou 4 cis (denominada epicatequinas) ou trans (denominado catequina). Portanto, as cadeias poliméricas são baseadas em diferentes unidades estruturais, as quais criam uma grande variação de proantocianidinas poliméricas e um grande número de possíveis isômeros.

[0007] Proantocianidinas têm uma variedade de atividades biológicas, incluindo atividade antitumoral, antiinflamatória, antienvelhecimento, antioxidante, antialérgica, antibacteriana, e atividade de crescimento de cabelo.

[0008] Crofelemer é um membro desta classe de proantocianidinas. É um polímero fenólico isolado a partir do látex vermelho e viscoso da espécie vegetal Croton lechleri (Euphorbiaceae). Este látex, comumente referido como "Sangre de Drago" ou "Sangre de Grado" ("sangue de dragão"), é um dos medicamentos tradicionais à base de plantas mais comuns na América Latina. Assim como contendo Crofelemer, "Sangre de Drado" também foi visto conter um alcaloide identificado como taspina. Taspina (número de registro CAS 602-07-33, 8-dimetóxi-1-[2- (dimetilamino)etil][1]benzo-pirano[5,4,3-cde][1] benzopirano-5,10-diona) foi visto ainda ser dotado de várias propriedades farmacêuticas, tais como propriedades bacteriostáticas, propriedades de cicatrização de feridas, citotoxicidade, atividade de imunossupressão, inibição de acetilcolinesterase e os efeitos inibidores da atividade da angiogênese tumoral.

[0009] Crofelemer é uma composição polimérica com o Número de Registro CAS 148465-45-6, sendo quimicamente representado pela seguinte fórmula estrutural:

R = H (procianidina) e/ou R = OH (prodelfinidina) Média de n ~ 5 (7 unidades) em que, a estrutura das unidades monoméricas é:

2R = H, (+)-catequina, 3 R = H, (-)-epicatequina 4R = OH, (+)- galocatequina R = OH, (-)- epigalocatequina.

[0010] Como uma composição polimérica, Crofelemer pode conter adicionalmente, uma ou mais impurezas, por exemplo, taspina ou outras impurezas, tais como acetona, n-butanol e álcool de diacetona.

[0011] A Patente norte-americana n° 5,211,944 descreveu, primeiramente, o isolamento de uma composição polimérica solúvel em água de proantocianidina de Croton spp. e o uso da composição tal como um agente antiviral. A composição polimérica de proantocianidina demonstrou ter atividade antiviral contra uma variedade de vírus incluindo, vírus sincicial respiratório, influenza, parainfluenza e vírus do herpes. Mais recentemente, Crofelemer foi visto ser útil no tratamento da diarreia sendo atualmente desenvolvido para o tratamento de diarreia secretora. Diarreias secretoras (também conhecido como diarreias aquosas) constituem uma fonte significativa de mortalidade e morbidade em todo o mundo, particularmente nos países em desenvolvimento e, particularmente, em relação a lactentes e crianças jovens. A diarreia secretora é ocasionada por uma série de agentes patogênicos, incluindo as bactérias, vírus e protozoários, bem como por outras etiologias não infecciosas, tais como a proliferação anormal de células do trato gastrintestinal, por exemplo câncer. É caracterizada pelo aumento da secreção de fluidos aquosos ao intestino, resultando na perda de fluidos e eletrólitos através do trato gastrointestinal, o que pode conduzir a uma grave desidratação.

[0012] O desenvolvimento de Crofelemer como um tratamento para a diarreia representa um progresso significativo no tratamento de numerosas condições em que a diarreia, em particular, diarreia secretora, é um sintoma. Os ensaios clínicos têm demonstrado que Crofelemer está ativo no tratamento da diarreia em pessoas que convivem com HIV e AIDS e Síndrome do Intestino Irritável (IBS) e. em conexão com diarreia infecciosa aguda (incluindo a cólera) e diarreia pediátrica. Há, portanto, uma necessidade médica significativa para Crofelemer e, conseqüentemente, para os métodos eficientes, de baixo custo e ambientalmente favoráveis para a preparação de composições de Crofelemer e Crofelemer. Os métodos para isolamento das composições poliméricas de proantocianidinas são conhecidos na arte. Em particular, a Patente dos EUA No. 5211944 descreve em pormenor um método para o isolamento de uma composição polimérica de proantocianidina. A patente dos EUA N ° 7323195 também divulga um método para o isolamento de uma composição polimérica de proantocianidina. No entanto, apesar dessas divulgações, a produção em grande escala de polímeros de proantocianidinas, como Crofelemer, e as suas composições associadas é uma tarefa difícil e desafiante em termos de custo de produção eficaz, bem como no que respeita à gestão de resíduos e de rendimento. Portanto, continua a existir uma necessidade de um processo melhor para o isolamento de uma composição polimérica de proantocianidina, como uma composição de Crofelemer com elevado grau de pureza e alto rendimento para utilização em formulações farmacêuticas. Surpreendentemente, os inventores foram capazes de melhorar os métodos da técnica anterior para a produção de Crofelemer, em relação à qualidade do produto obtido. O método da presente invenção utiliza uma temperatura elevada (quando comparado com os métodos da técnica anterior) e este método produz Crofelemer com pureza e rendimento aperfeiçoados.

Objetivo da invenção

[0013] É, portanto, um objeto da presente invenção proporcionar um processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina de Crofelemer com pureza melhorada, por exemplo, com níveis reduzidos de taspina.

[0014] É também um objetivo da presente invenção proporcionar um processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina, tal como Crofelemer com rendimento melhorado.

[0015] É um outro objetivo da presente invenção proporcionar um processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina, como Crofelemer, sendo mais favorável ao meio ambiente do que qualquer um dos processos descritos anteriormente.

[0016] É ainda um objetivo da presente invenção proporcionar um processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina, como Crofelemer que é mais eficiente do que qualquer um dos processos descritos anteriormente.

[0017] É um outro objetivo da presente invenção proporcionar um processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina, como Crofelemer que é mais rentável do que qualquer um dos processos descritos anteriormente.

[0018] A presente invenção refere-se a processo para a produção de uma composição polimérica de proantocianidina, como Crofelemer que trata cada um dos objetos acima mencionados, individualmente ou em qualquer combinação dos mesmos.

Sumário da Invenção

[0019] A presente invenção refere-se a um processo para o isolamento e purificação de uma composição polimérica de proantocianidina, tendo a composição pureza elevada e sendo apropriada para utilização em formulações farmaceuticamente eficazes. Em particular, a invenção refere-se a um processo eficiente, econômico e/ou ambientalmente favorável para a produção de Crofelemer adequado para formulações farmacêuticas com um grau de pureza e de concentração que lhe permite ser utilizado de forma terapeuticamente eficaz.

[0020] A presente invenção também se refere a uma composição polimérica de proantocianidina, especificamente, Crofelemer, que pode ser obtida a partir do processo da invenção. Além disso, a invenção também proporciona uma composição polimérica de proantocianidina e/ou polímeros de proantocianidinas, especificamente, Crofelemer obtido (seja direta ou indiretamente) por meio do processo da invenção.

[0021] Num aspecto, a presente invenção proporciona Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura do látex vegetal em bruto ou do pó liofilizado do látex da planta e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0022] Num outro aspecto, a presente invenção proporciona Crofelemer caracterizado pelo fato de taspina está presente numa quantidade inferior a 500 ppm, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado de látex da planta e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15 °C a 60°C; e B) purificar parcialmente o Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0023] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um ensaio Crofelemer tendo mais do que 85%, obtidos por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex da planta e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar parcialmente Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0024] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15% de uma impureza, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex da planta e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15 °C a 60°C; e B) purificar parcialmente Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna. Numa concretização deste aspecto, Crofelemer possui menos de 0,15% de uma impureza conforme medido a RRT 0,07.

[0025] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso), obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar parcialmente o Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna. Numa concretização deste aspecto, o teor de água foi analisado pela técnica KF.

[0026] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de produção de Crofelemer, método esse que compreende as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar parcialmente Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0027] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um processo para o isolamento de Crofelemer parcialmente purificado (tal como descrito na etapa (A) dos aspectos da invenção acima mencionados), que compreende as etapas de: (a) agitação de uma mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex da planta e água ou solvente (s) miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; (b) separar a fase líquida; (c) opcionalmente, concentrar a fase líquida para se obter o xarope de sólido, líquido ou concentrado; e (d) opcionalmente, adicionar água ou solventes miscíveis em água ao xarope sólido, líquido ou concentrado.

[0028] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM- Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose fica na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando colunas em dois conjuntos de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 para 90:1.

[0029] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer, onde a taspina está presente numa quantidade menor do que 500 ppm, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento do Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar parcialmente Crofelemer purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0030] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer testado me mais que 85%, obtido por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0031] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15% de uma impureza, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1. Numa concretização deste aspecto, Crofelemer tem menos de 0,15% de uma impureza conforme medido pelo RRT 0,07.

[0032] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7-17% (% em peso), obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1. Numa concretização deste aspecto, o teor de água foi analisado pela técnica KF.

[0033] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo pureza superior a cerca de 98%.

[0034] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer sendo submetido a teste em mais do que aproximadamente 85%.

[0035] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2.

[0036] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer, caracterizado por taspina estar presente numa quantidade inferior a 500 ppm medidos por HPLC.

[0037] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15% de uma impureza. Numa concretização deste aspecto, Crofelemer tem menos de 0,15% de uma impureza conforme medido a RRT 0,07.

[0038] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso). De preferência, o teor de água é analisado pelo método KF.

[0039] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso, e tendo um teor total de impureza de composto orgânico menor do que cerca de 1%, conforme medido por HPLC.

[0040] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer contendo menos do que 1.000 ppm de qualquer um dentre acetona, n-butanol, álcool de diacetona e quaisquer combinações destes.

[0041] Outro aspecto da presente invenção proporciona Crofelemer amorfo tendo a fórmula

R = H (procianidina) e/ou R = OH (prodelfinidina) Média de n ~ 5 (7 unidades) em que, a estrutura das unidades monoméricas são

2R = H, (+)-catequina, 3 R = H, (-)-epicatequina 4R = OH, (+)-5 galocatequina, R = OH, (-)- epigalocatequina

[0042] Ainda um outro aspecto da presente invenção proporciona Crofelemer amorfo tendo um teor de água de 7 a 17 por cento em peso (de preferência, analisado pelo método KF).

[0043] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer amorfo tendo: i) um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2; ii) taspina presente numa quantidade inferior a 500 ppm; iii) um ensaio superior a 85%; iv) menos do que 0,15% de uma impureza (de preferência, medido no RRT 0,07), v) o teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso) (de preferência, como analisado pelo método KF); obtenível por um método compreendendo as etapas de:

[0044] isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e

[0045] purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0046] A presente invenção também se relaciona com o processo para a produção de composições poliméricas de proantocianidinas purificadas para utilização em formulações farmaceuticamente eficazes. Em particular, são aqui proporcionados processos para a produção de um Crofelemer puro utilizando a técnica de purificação em coluna.

[0047] Num aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo: i) um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2 ii) taspina presente numa quantidade inferior a 500 ppm; iii) um ensaio superior a 85%; iv) menos do que 0,15% de uma impureza (de preferência, medido a RRT 0,07), v) o teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso) (de preferência, analisado pelo método KF); vi) na forma amorfa

[0048] obtenível por um método compreendendo as etapas de: (a) proporcionar uma solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex vegetal; (b) extrair a solução de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado (liofilizado) do látex vegetal com um solvente orgânico; (c) separar o solvente orgânico, e (d) concentrar a camada aquosa para se obter sólidos, alternativamente separação da camada aquosa e (d) concentração do solvente orgânico para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado; (d) dissolução do xarope sólido, líquido ou concentrado em água ou solventes miscíveis com a água e remover as partículas insolúveis, caso se apresentem na solução; (e) purificar a solução usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0049] Outro aspecto da presente invenção proporciona um método de produção de Crofelemer compreendendo as etapas de: (a) proporcionar uma solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó (liofilizado) do látex vegetal; (b) extrair a solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó (liofilizado) do látex vegetal com um solvente orgânico; (c) separar o solvente orgânico, e (d) concentrar a camada aquosa para se obter sólidos, alternativamente, separar a camada aquosa e (d) concentre o solvente orgânico para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado, (d) dissolver o xarope sólido, líquido ou concentrado em água ou solventes miscíveis com a água e remover as partículas insolúveis, caso se apresentem, a partir da solução; (e) purificar a solução usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

Descrição Detalhada da Invenção

[0050] A Patente EUA N ° 5211944 (a patente US'944) descreve, em detalhe, um método para isolar uma composição polimérica de proantocianidina. A patente US'944 descreve o isolamento de uma composição polimérica solúvel em água de proantocianidina de Croton spp. e o uso da composição tal como um agente antiviral. De acordo com o método divulgado na patente US'944, a almejada composição polimérica de proantocianidina é obtida a partir de várias plantas, incluindo mas não se limitando às, classes Filices, Coniferae, Monocotyledoneae e Dicotyledonae. Elas podem ser obtidas utilizando toda a árvore ou planta, a casca de árvore, caules, raízes ou o látex. O exemplo descreve a composição polimérica de proantocianidina obtida a partir do látex de Croton lechleri.

[0051] A patente dos EUA N° 7325195 (a US'195) descreve um método para isolar uma composição polimérica de proantocianidina a partir da planta Croton lechleri.

[0052] Infelizmente, estes métodos conhecidos não permitem a produção conveniente, em grande escala, eficiente e econômica de composição polimérica de proantocianidina, como, por exemplo, Crofelemer. A gestão de resíduos é também agora uma consideração importante, pois tornou-se uma parte essencial e fundamental das questões regulamentares associadas com a indústria farmacêutica e/ou indústria química mundial. Isso cria uma necessidade de processos ambientalmente favoráveis para a produção do mesmo.

[0053] Os inventores da presente invenção descobriram surpreendentemente, que o processo da liofilização do látex bruto ou a adição de água ao látex das plantas durante o isolamento de Crofelemer parcialmente purificado ajudou a aumentar o rendimento e reduzir a necessidade de etapas de processamento, que, por fim reduz o custo de produção de Crofelemer.

[0054] O material de partida utilizado para a produção no presente, tratou-se de látex de plantas obtido a partir de árvores de Croton lechleri. Árvores C. lechleri foram derrubadas e removidas perto da aldeia de San Pablo de Cuyana no Rio Nanay, 100 quilômetros a partir de Iquitos, no Peru. O látex foi obtido ao longo de um período de 24 horas, marcando-se as árvores. A origem natural e fonte do material de partida aqui usado é um fator importante no que respeita ao custo da produção. O material de látex tem de ser transportado para diferentes países (por exemplo Índia) para a produção em grande escala para uso farmacêutico. Assim, o látex é seco por congelamento para se obter um sólido seco por congelamento (pó), que pode ser mais convenientemente transportado ou a planta do látex bruto pode ser utilizada para a produção de Crofelemer.

[0055] O material de partida aqui usado é o látex planta que é obtido a partir da casca de Croton lechleri. O látex da planta em bruto, látex da planta parcialmente purificado, látex vegetal concentrado em bruto, ou látex vegetal parcialmente purificado e concentrado, compreendendo lama, ou ainda pode ser seco por congelamento, pó (liofilizado) obtido do látex da planta.

[0056] Como aqui empregado, "lama" refere-se ao sedimento formado durante a armazenagem. Látex vegetal em bruto pode ser obtido a partir da casca de Croton lechleri. Este látex é coletado e armazenado em barris. Ao armazenamento, o sedimento depositado é referido como "lama". Esta lama é geralmente descartada.

[0057] Como aqui empregado, "seco por congelamento" ou "liofilização" envolve soluções de congelamento ou suspensões de materiais termossensíveis, seguido de secagem primária e secundária. A técnica baseia-se na sublimação da água a temperatura abaixo de zero sob vácuo, sem fusão da solução.

[0058] A presente invenção refere-se a um processo para o isolamento e purificação de uma composição polimérica de proantocianidina, tendo a composição pureza elevada, sendo apropriada para utilização em formulações farmaceuticamente eficazes. Em particular, a invenção refere-se a um processo eficiente, econômico e/ou ambientalmente favorável para a produção de Crofelemer adequado para formulações farmacêuticas, com um grau de pureza e de concentração que lhe permite ser utilizado de forma terapeuticamente eficaz.

[0059] Num aspecto, a presente invenção proporciona Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex da planta e água ou solvente miscível em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0060] Num outro aspecto, a presente invenção proporciona Crofelemer caracterizado pela presença de taspina numa quantidade inferior a 500 ppm, obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0061] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer com um ensaio maior que 85%, podendo ser obtido por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0062] Num outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15% de uma impureza; obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou do pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna. Numa concretização deste aspecto, o Crofelemer tem menos que 0,15% de uma impureza conforme medido a RRT 0,07.

[0063] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso); obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou do pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna. Numa concretização deste aspecto, o teor de água foi analisado pela técnica KF.

[0064] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2; obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna simples de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1, ou mediante emprego de duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 é na faixa de cerca de 8:1 para 90:1.

[0065] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer, caracterizado por taspina estar presente numa quantidade de menos do que 500 ppm; obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna simples de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1, ou mediante emprego de duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 é na faixa de cerca de 8:1 para 90:1.

[0066] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo mais do que 85%, de um ensaio obtidos por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna simples de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1, ou mediante emprego de duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 é na faixa de cerca de 8:1 para 90:1.

[0067] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15%, obtido por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou do pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna simples de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1, ou mediante emprego de duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 para 90:1. Numa concretização deste aspecto, Crofelemer possui menos de 0,15% de uma impureza conforme medido a RRT 0,07.

[0068] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso); obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou do pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificação do Crofelemer parcialmente purificado usando uma coluna simples de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1, ou mediante emprego de duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 para 90:1. Numa concretização deste aspecto, o teor de água foi analisado pela técnica KF.

[0069] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo pureza superior a cerca de 98%.

[0070] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo mais do que cerca de 85% em um ensaio.

[0071] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2.

[0072] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer em que taspina está presente numa quantidade inferior a 500 ppm conforme medidos por HPLC.

[0073] Em outro aspecto ainda da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo menos do que 0,15% de uma impureza (preferivelmente medido a RRT 0,07).

[0074] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso). De preferência, o teor de água é analisado pelo método KF.

[0075] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer tendo um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso, com um teor total de impurezas de composto orgânico inferior a cerca de 1%, conforme medido por HPLC.

[0076] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer contendo menos do que 1000 ppm de qualquer um dentre acetona, n-butanol, álcool de diacetona e suas combinações.

[0077] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer amorfo tendo a fórmula

[0078] Ainda um outro aspecto da presente invenção proporciona Crofelemer amorfo tendo um teor de água de 7 a 17 por cento em peso. De preferência, analisado pelo método KF.

[0079] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado Crofelemer amorfo tendo: a) um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2; b) taspina presente numa quantidade inferior a 500 ppm; c) um ensaio superior a 85%; d) menos do que 0,15% de uma impureza (de preferência, medido no RRT 0,07); e) o teor de água na faixa de 7% a 17% (% em peso) (de preferência, como analisado pelo método KF);

[0080] obtenível por um método compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0081] Outro aspecto da presente invenção proporciona um método para a preparação Crofelemer compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar parcialmente o Crofelemer purificado usando uma técnica de cromatografia em coluna.

[0082] Em ainda outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método para a preparação Crofelemer compreendendo as etapas de: A) isolamento de Crofelemer parcialmente purificado por meio de agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex vegetal e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C; e B) purificar o Crofelemer parcialmente purificado usando uma única coluna de CM-Sepharose, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1, ou usando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH -20 para a alimentação em uma coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 a 90:1.

[0083] Ainda um outro aspecto da presente invenção proporciona um processo para isolar Crofelemer parcialmente purificado (conforme aqui descrito na etapa (A)), que compreende as etapas de: (a) agitação da mistura de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado da planta de látex e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 15 °C a 60°C, (b) separar a fase líquida; (c) opcionalmente, concentrar fase líquida para se obter o xarope na forma sólida, líquida ou concentrado; e (d) opcionalmente, adição de água ou de solventes miscíveis em água ao xarope sólido, líquido ou concentrado.

[0084] O método de isolamento de Crofelemer parcialmente purificado na etapa (A), pode envolver uma ou mais formas de realização. Deve ser entendido que, as formas de realização a seguir são ilustrativas da presente invenção e não se destinam a limitar as reivindicações às concretizações específicas exemplificadas. Deve ficar entendido ainda, que as concretizações aqui descritas poderão ser utilizadas de forma independentemente, ou em conjunto com qualquer definição ou reivindicação ou qualquer outro modo de realização aqui definido. Assim, a invenção abrange todas as combinações e permutações possíveis das várias concretizações independentemente descritas.

[0085] Numa concretização, o método envolve o isolamento de Crofelemer parcialmente purificado de látex vegetal em bruto.

[0086] Numa concretização, o método envolve o isolamento de Crofelemer parcialmente purificado de látex (liofilizado) das plantas;

[0087] Numa concretização, a etapa (a) compreende adição de água ou de solvente miscível em água ao látex vegetal em bruto ou látex liofilizado da planta. A mistura resultante pode ser agitada a uma temperatura na faixa de 15°C a 60°C ou mais durante um período de 5 minutos a cerca de uma ou mais horas. Nesta concretização, de preferência, a mistura é aquecida, a uma temperatura de cerca de 35°C a 45°C durante 30 a 60 minutos, mais preferencialmente a 40°C durante 60 minutos. Nesta concretização, a etapa de isolamento pode ser opcionalmente seguida de separação, concentração e adição de água ou de solventes miscíveis em água para se obter o xarope de sólido, líquido ou concentrado.

[0088] Numa concretização, a etapa (b) compreende a separação da fase líquida usando, mas não limitado aos método(s) conhecidos na arte, como filtração, sedimentação, centrifugação e/ou decantação ou qualquer combinação destes.

[0089] Numa concretização, a etapa (b) de separação pode ser feita por meio de filtração o que pode ser realizado usando auxiliar de filtração. Nesta concretização, o material de filtração compreende um ou mais de terra diatomácea, carvão vegetal, bentonita, celulose, vidro, areia, ou papel de filtro ou um filtro comercialmente disponível (por exemplo, o filtro sparkler).

[0090] Numa concretização, a etapa (b) de separação pode ser feita por sedimentação que pode ser realizado mantendo-se a mistura de látex de plantas sem ser perturbada por um ou mais minutos e até várias horas com ou sem arrefecimento, de preferência, com arrefecimento a uma temperatura próxima na faixa de 5 °C a 15 °C, de preferência a 10°C. Nesta concretização, o sedimento pode ser deixado em repouso durante um período de tempo de pelo menos 1 hora, de preferência mais de uma hora, mais de preferência, pelo período de tempo entre 10 a 20 horas, mais preferivelmente, 15 horas.

[0091] Numa concretização, a etapa (b) de separação pode ser feita utilizando a técnica de centrifugação. A centrifugação da solução, suspensão ou mistura pode ser feita a uma temperatura de refrigeração, tal como a 10°C utilizando uma velocidade de 100 a 10.000 rotações por minuto (RPM), utilizando de preferência qualquer velocidade na faixa de 2000 a 4000 RPM RPM, preferivelmente, usando 3000 rpm, seguido por decantação.

[0092] Numa concretização, a etapa (b) de separação pode ser realizada utilizando uma ou mais de uma combinação do método (s) conhecidos na arte, independentemente selecionados de filtração, sedimentação, centrifugação e /ou decantação, como acima. Nesta concretização, de preferência a separação usando qualquer combinação de método(s) pode ser realizada na sequência de filtração, sedimentação seguido por centrifugação e decantação.

[0093] Numa concretização, na etapa (c) a fase líquida é concentrada para se obter o xarope concentrado, líquido ou sólido, o qual pode ser utilizado na próxima etapa. Nesta concretização, a concentração da fase líquida, pode ser feita usando, mas não limitado aos processos ou métodos, ou a sua combinação conhecida na arte, tais como a ultrafiltração e/ou por meio do evaporador rotativo, ou combinação(ões) dos citados. Nesta concretização, de preferência, os métodos utilizados são ultrafiltração, seguido por evaporação rotativa.

[0094] Numa concretização, a ultrafiltração é realizada com uma membrana semipermeável.

[0095] Numa concretização, a membrana semipermeável permite a passagem de solutos com peso molecular na faixa de 1 a 1000 Da. Nesta concretização, é preferível que a membrana semipermeável permita a passagem de solutos de até um peso molecular selecionado dentre o grupo consistindo de 500 Da e 1 kDa, e é de preferência uma membrana semipermeável que permite a passagem de solutos até um peso molecular de 1 kDa.

[0096] Numa concretização, a concentração e a secagem podem ser feita preferencialmente utilizando um evaporador rotativo a uma temperatura de aproximadamente 37°C (+2°C) ou qualquer outra temperatura, ou usando outra metodologia de secagem adequada, incluindo, mas não limitado a, secagem em tabuleiro ou secagem por pulverização.

[0097] Numa concretização, o processamento da etapa (c), que é a concentração e secagem para se obter o xarope concentrado na forma líquida ou sólida, pode ser selecionado a partir do grupo constituído por ultrafiltração, seguido por liofilização, evaporação por calor, a evaporação sem calor, evaporação com vácuo, evaporação sem vácuo, secagem por pulverização, secagem em bandeja, e quaisquer combinações dos mesmos.

[0098] Numa concretização, em que na etapa (d) água ou solventes miscíveis em água, (por exemplo, cerca de 5 mL por grama de látex) podem ser adicionados ao xarope concentrado, ou sólido ou líquido, com ou sem misturação, de preferência com misturação, para se obter a solução desejada, que pode ou não conter partículas insolúveis. Esta solução pode ser filtrada, se as partículas insolúveis estiverem presentes na solução. A filtração pode ser realizada usando auxiliar de filtração. Nesta concretização, o material de filtragem compreende um ou mais dentre: terra diatomácea, carvão vegetal, bentonita, celulose, vidro, areia, ou papel de filtro ou um filtro comercialmente disponível (por exemplo, o filtro sparkler).

[0099] O método de purificação de Crofelemer parcialmente purificado na etapa (B), pode envolver uma ou mais formas de realização. Deve ser entendido que, as formas de realização a seguir são ilustrativos da presente invenção e não se destinam a limitar as reivindicações às concretizações específicas exemplificadas. Deve ficar entendido também que, as concretizações aqui definidas poderão ser utilizadas de forma independente ou em conjunto com qualquer definição ou reivindicação ou qualquer outra concretização aqui indicada. Assim, a invenção abrange todas as possíveis combinações e permutações das várias formas de realização descritas de forma independente.

[00100] Numa concretização, a purificação pode ser realizada utilizando técnicas cromatográficas, tais como, mas não limitado a, cromatografia de troca de íons e/ou cromatografia de exclusão por tamanho ou uma combinação destas utilizando água e/ou solventes miscíveis em água como o eluente. Nesta concretização a técnica cromatográfica preferida utilizada é a cromatografia de troca iônica usando adsorvente, marcial, matriz ou resina concebidos ou podem utilizar a partir da fonte comercial, para o mesmo, mais preferencialmente, a resina aqui utilizada é CM-Sepharose.

[00101] Em uma concretização a cromatografia de exclusão de tamanho é Sephadex LH-20.

[00102] A purificação da coluna pode ser feita por meio de uma única coluna de CM-Sepharose Fast Flow ou usando duas colunas do conjunto de CM-Sepharose Fast Flow e Coluna Sephadex LH-20. Os dois conjuntos de coluna quando empregados podem ser usados em conjunto numa série ou separadamente.

[00103] Numa concretização, a purificação realizada utilizando uma única coluna de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM- Sepharose fica na faixa de cerca de 3,5: 1 a 11: 1.

[00104] Numa concretização, a purificação realizada utilizando duas colunas de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 fica na faixa de cerca de 8:1 para 90:1.

[00105] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna é de pelo menos cerca de 3,5:1, mais preferivelmente na proporção de pelo menos, 4:1 (por exemplo, 4 mL ou 4 g de CM-Sepharose para um g do látex da planta). Na concretização preferida, a relação de CM- Sepharose para a alimentação numa coluna é de pelo menos cerca de 6: 1 (por exemplo, 6 mL ou 6 mg de CM-Sepharose para 1 mg de alimentação de látex da planta).

[00106] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna está na faixa de cerca de 3.5: 1 a 11:1, de preferência a proporção fica na faixa de cerca de 4:1 a 9:1.

[00107] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna é menor que 11:1, de preferência, a proporção é inferior a 9:1.

[00108] Numa concretização, a suspensão de CM- Sepharose pode ser preenchida na coluna para se obter um volume de leito de pelo menos cerca de 35 mL (para 10 g de alimentação de látex vegetal sólido ou substrato), de preferência, pelo menos cerca de 40,0 mL por 10 g da alimentação de látex da planta ou substrato.

[00109] Numa concretização, a coluna CM-Sepharose pode ser enchida para se obter uma largura de leito (coluna de diâmetro interno) de pelo menos cerca de 3,2 cm (para 10 g de alimentação de látex vegetal sólido ou substrato), de preferência pelo menos 3,4 cm de comprimento por 10 g de alimentação de planta de látex.

[00110] Numa concretização, a suspensão de CM- Sepharose pode ser enchida na coluna para se obter altura de leito apropriado (ou comprimento da coluna) de pelo menos cerca de 4,2 cm (para 10 g de alimentação de látex vegetal sólido ou substrato), de preferência pelo menos 4,5 centímetros por 10 g de alimento de látex vegetal ou de substrato.

[00111] Numa concretização, a proporção de Sephadex LH-20 para a alimentação em uma coluna é de pelo menos cerca de 8:1 a 90:1, mais preferivelmente, na proporção de, pelo menos, 12:1 a 90:1 (por exemplo, 12 g de CM-Sepharose para 1 g da alimentação de látex da planta).

[00112] Numa concretização, o Sephadex LH-20 preenchido na coluna para a obtenção do comprimento da coluna ou altura do leito de pelo menos cerca de 8 cm (para 10 g de alimentação de látex planta ou substrato sólido utilizado na coluna de troca iônica), de preferência pelo menos 13 cm por 10 g de substrato ou da alimentação.

[00113] Numa concretização, o Sephadex LH-20 enchido na coluna para se obter o diâmetro interno da coluna ou largura do leito de pelo menos cerca de 3,2 cm (para 10 g de alimentação de látex da planta sólido ou substrato utilizado na coluna de troca iônica), de preferência pelo menos 3,4 centímetros por 10 g de substrato ou da alimentação.

[00114] Numa concretização, o Sephadex LH-20 enchido na coluna para se obter um volume de leito apropriado de pelo menos cerca de 110 mL (para 10 g de alimentação de látex planta sólido ou de substrato utilizado na coluna de troca iônica), preferencialmente pelo menos 118 ml por 10 g de sólido ou da alimentação.

[00115] Numa concretização, o material carregado para a coluna de troca de íons (por exemplo, CM-Sepharose) e a coluna são lavados com água purificada. Em seguida, o material é eluído da coluna com uma solução aquosa de acetona, e, portanto, introduzindo o material numa coluna de exclusão de tamanho (por exemplo, Sephadex LH-20).

[00116] A coluna de exclusão de tamanho pode ser então desligada da coluna de resina de troca iônica e o material é eluído com uma solução aquosa de acetona.

[00117] Eluentes podem ser selecionados a partir de água e de solventes miscível em água e respectivas combinações. O eluente preferido aqui utilizado é a água seguido por uma solução aquosa de acetona (de preferência 50% de acetona em água, mais preferencialmente 45% de acetona em água, mais preferencialmente 30% de acetona em água).

[00118] As frações são coletadas e monitorizadas com um detector. As frações contendo polímeros de proantocianidinas (por exemplo, Crofelemer) são combinadas. Os polímeros de proantocianidina (por exemplo, Crofelemer) produzido como aqui descrito podem ser analisados ou detectados por quaisquer métodos conhecidos na arte. Por exemplo, os polímeros de proantocianidina podem ser detectados por absorbância de ultravioleta (lambda max.) Alguns monômeros e polímeros de proantocianidinas, por exemplo, têm picos largos em torno de 200 a cerca de 300 nm, por exemplo entre cerca de 200 e cerca de 215 nm (por exemplo, cerca de 205-210 nm) e entre cerca de 260 e cerca de 295 nm (por exemplo, cerca de 275 - 280 nm). As frações contendo polímeros de proantocianidinas podem ter absorção de UV principal adicional máxima de cerca de 400 nm a cerca de 500 nm.

[00119] Numa concretização, a concentração de eluente pode ser feita por meio de, mas não se limitando a, processos ou métodos ou suas combinações conhecidos na técnica, tais como ultrafiltração ou por meio do evaporador rotativo, ou da combinação de ambos.

[00120] Numa concretização, a ultrafiltração é realizada com uma membrana semipermeável.

[00121] Numa concretização, a membrana semipermeável permite a passagem de solutos com peso molecular na faixa de 1 a 1000 Da. Nesta concretização a membrana semipermeável permite a passagem de solutos até um peso molecular selecionado dentre o grupo consistindo de 500 Da e 1 kDa, preferencialmente, da membrana semipermeável que permite a passagem de solutos de um peso molecular de até 1 kDa.

[00122] De preferência, a concentração seguida de secagem pode ser feita usando evaporador rotativo a uma temperatura de aproximadamente 37°C (± 2°C) ou qualquer outra temperatura, ou quaisquer outros métodos de secagem adequados que incluem, mas não estão limitados a, secagem em bandeja ou secagem por pulverização.

[00123] Numa concretização, o processamento da concentração e secagem para se obter sólidos pode ser selecionado dentre o grupo consistindo de ultrafiltração, liofilização, evaporação com calor, evaporação sem calor, evaporação com vácuo, evaporação, sem vácuo, secagem por pulverização, secagem em bandeja, e combinações dos citados.

[00124] Os processos aqui descritos fornecem Crofelemer compreendendo pureza superior a cerca de 90% (pureza cromatográfica a qual, pode ser, por exemplo, determinada através da análise dos componentes detectáveis em comparação com um padrão de referência utilizando cromatografia), preferivelmente maior do que cerca de 95%, de preferência superior a cerca 98%, de preferência superior a cerca de 99%, mais preferivelmente maior do que cerca de 99,9%, e mais preferivelmente maior do que cerca de 99,95%. Por exemplo, a pureza dos Crofelemer é de cerca de 98% a cerca de 99,9%, ou de cerca de 99,5% a cerca de 99,99%.

[00125] Numa concretização preferida, Crofelemer produzido de acordo com a invenção possui uma concentração mais baixa de taspina do que a concentração de taspina no material de partida (por exemplo, látex da planta). Por exemplo, a quantidade de taspina que está presente no látex inicial pode ser reduzida por meio do processo de acordo com a invenção. Os níveis de taspina no Crofelemer produzido de acordo com a invenção pode variar entre 1% em pureza cromatográfica até abaixo dos limites detectáveis. Por exemplo, o nível superior para a quantidade de taspina no Crofelemer pode ser de 1,0%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, ou 0,05% em pureza cromatográfica, ou qualquer valor entre ou abaixo dos valores cotados abaixo do limite de detecção. Numa concretização preferida, os níveis de taspina estão abaixo de 0,1% de pureza por cromatografia líquida (isto é, 1000 ppm) em Crofelemer. O Crofelemer possui 0,1% de pureza por cromatografia de taspina e 0% de pureza cromatográfica de taspina (isto é, nenhuma quantidade detectável de taspina), quando produzido de acordo com o processo da invenção. Numa concretização preferida, o Crofelemer possui níveis de taspina inferiores a 500 ppm.

[00126] Numa concretização, a invenção inclui Crofelemer tendo um teor de impureza do composto orgânico total inferior a cerca de 1 por cento por área por cromatografia líquida de alto desempenho.

[00127] Numa concretização, a invenção inclui Crofelemer com o aumento da homogeneidade. Por exemplo, numa concretização, Crofelemer tem um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2.

[00128] Numa concretização, a invenção inclui Crofelemer amorfo tendo um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso, e tendo um teor de impureza de composto orgânico total inferior a cerca de 1 por cento de área por cromatografia líquida de alto desempenho.

[00129] Numa concretização, é proporcionado Crofelemer obtido com menos de 0,15% de uma impureza. Preferencialmente o Crofelemer obtido tem menos de 0,15% de impurezas medido a RRT 0,07.

[00130] É do conhecimento dos peritos na arte, que o processo de gestão de impurezas é grandemente aumentado por compreender as suas estruturas químicas e as vias sintéticas, e ainda, por identificação dos parâmetros que influenciam a quantidade de impurezas no produto final.

[00131] As impurezas são identificadas espectroscopicamente e por outros métodos físicos, e, em seguida, as impurezas são associadas com uma posição do pico no cromatograma um (ou uma mancha numa placa de TLC). Posteriormente, a impureza pode ser identificada pela sua posição no cromatograma, que é convencionalmente medido em minutos entre a injeção da amostra na coluna e a eluição do componente específico através do detector, conhecido como o "tempo de retenção" ("rt"). Este período de tempo varia, dependendo da condição da instrumentação e de muitos outros fatores. Para atenuar o efeito que essas variações têm sobre a identificação precisa de uma impureza, os praticantes usam o "tempo de retenção relativo" ("RRT") para identificar as impurezas.

[00132] Num outro aspecto da presente invenção, Crofelemer tem um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso, e tem um teor de impureza de composto orgânico total inferior a cerca de 1% por HPLC.

[00133] Num outro aspecto da presente invenção, Crofelemer contém menos do que 1.000 ppm de qualquer um dentre acetona, n-butanol, álcool de diacetona, ou quaisquer combinações destes.

[00134] A presente invenção refere-se também à composição polimérica de proantocianidinas substancialmente pura. Para a finalidade da presente invenção, substancialmente pura é mais do que cerca de 98% de pureza, de preferência, a composição polimérica de proantocianidina da presente invenção tem mais do que cerca de 99% de estado puro.

[00135] Numa concretização, a presente invenção refere-se a um processo para a produção de Crofelemer substancialmente puro para ser usado para a composição farmacêutica terapeuticamente eficaz. O Crofelemer é de preferência preparado a partir do látex de Croton spp, preferencialmente Croton lechleri.

[00136] O isolamento e a purificação da composição polimérica de proantocianidina com uma pureza desejada é desafiante, devido às propriedades químicas semelhantes, de muitos outros, isômeros, bem como suas impurezas associadas.

[00137] Os inventores do presente pedido descobriram que, a repetição do método da técnica anterior não produz a composição polimérica de proantocianidina desejada com elevada pureza. Os inventores da presente invenção ultrapassaram o problema relacionado com o isolamento de Crofelemer puro com um processo alternativo para o isolamento e purificação de Crofelemer.

[00138] O isolamento de Crofelemer envolve principalmente, um sistema de duas colunas para purificação, em que o material é fornecido, primeiramente, para um sistema de cromatografia que consiste numa resina de troca de íons, que é ainda ligado a uma coluna que consiste de resina de exclusão de tamanho.

[00139] A resina de troca iônica, como CM-Sepharose Fast Flow, presta-se a remover as impurezas catiônicas do material, enquanto a resina de exclusão de tamanho, tal como LH-20, purifica a composição polimérica e fornece a composição na faixa de peso molecular desejado.

[00140] Surpreendentemente, os inventores do presente pedido descobriram que, a mistura eficaz do material inicial com o sistema solvente adequado, que pode incluir água ou água em combinação com o solvente miscível em água e depois passá-la através do sistema de duas colunas fornece Crofelemer com elevada pureza e melhor perfil analítico.

[00141] Verificou-se que, a mistura incompleta do material de partida, antes do carregamento para uma coluna, resulta em utilização ineficiente do leito de resina. Além disso, verificou-se que, as partículas insolúveis presentes na solução de alimentação chocam-se com a coluna e afetam a eficácia da resina consideravelmente. Verificou-se que, devido à presença de partículas insolúveis, a solução de alimentação falhou em contatar muitos sítios ativos da resina. Assim, a falha em se conseguir um tempo mínimo de contato pode resultar na passagem de impurezas catiônicas tais como taspina e outras impurezas através da coluna para o nível seguinte.

[00142] A fim de superar os problemas mencionados acima, os inventores do presente pedido de patente desenvolveram um processo que envolve a dissolução do material inicial num sistema solvente adequado tal como a água e filtração através de um filtro Sparkler para remover as partículas insolúveis. A solução de alimentação que é substancialmente livre de partículas insolúveis é então aplicada a um sistema de cromatografia em duas fases.

[00143] Para o funcionamento eficiente do sistema de coluna, é necessário que o sistema de coluna permaneça no estado 'molhado'. A secagem da coluna pode resultar em rachaduras da composição da coluna, e verificou-se que isto pode levar à obtenção da composição polimérica de proantocianidina com menor pureza.

[00144] Num aspecto da presente invenção, a composição polimérica de proantocianidina (por exemplo, Crofelemer) é isolada num estado de elevada pureza por um método que compreende: (a) proporcionar uma solução de látex da planta; (b) adicionar um(uns) solvente(s) orgânico(s) para a solução de látex da planta; (c) separar o solvente orgânico e concentrar a camada aquosa para se obter um sólido, alternativamente, (d) separar a camada aquosa e concentrar o solvente orgânico para se obter um sólido; (e) dissolver o sólido num solvente aquoso; (f) remover as partículas insolúveis da solução (d); (g) submeter a solução à cromatografia, e (h) isolar a composição polimérica de proantocianidina.

[00145] Numa concretização, Crofelemer é isolado de Croton lechleri.

[00146] Numa outra concretização, Crofelemeris isolados de Calophylum Calophyllum. O material de látex pode conter lama que também pode ser opcionalmente removida.

[00147] Numa concretização, o látex é mantido abaixo da temperatura ambiente (por exemplo, abaixo de 25°C) durante um período de tempo para permitir a sedimentação, que é, por exemplo, desde cerca de 1 hora a cerca de 30 dias. O látex é então misturado com a água abaixo da temperatura ambiente (por exemplo, a 2 - 8°C) e deixado em repouso durante pelo menos 12 horas, ou pode ser misturado com metil etil cetona. O material sólido sedimentado é descartado e o sobrenadante é coletado. Opcionalmente, o sobrenadante pode ser passado através de um filtro para remover o material sólido. A operação pode ser efetuada abaixo da temperatura ambiente.

[00148] Numa concretização, o conteúdo da etapa (a) em que se usa água, esta é misturada com um solvente miscível ou imiscível selecionado de metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, etileno-glicol, propileno- glicol, acetato de etila, diclorometano, triclorometano, tetraclorometano, dicloroetano, éter dietílico, acetona, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, éter, suas misturas, e semelhantes. A camada aquosa foi, de preferência misturada com o solvente imiscível. Numa concretização, o solvente é imiscível é n-butanol. A camada aquosa foi lavada sucessivamente com n-butanol.

[00149] Numa concretização, a camada que contém Crofelemer pode ser processada por ultrafiltração seguido por evaporação, com ou sem calor, evaporação com ou sem vácuo, liofilização, secagem por pulverização, e semelhantes, incluindo combinações de técnicas de processamento, para se obter sólidos.

[00150] Numa concretização, o sólido obtido na etapa (c) é misturado com um solvente adequado, como água ou numa mistura de água e solvente miscível em água. Numa concretização preferida, o solvente é a água.

[00151] As partículas insolúveis são removidas por filtração da solução através de um meio apropriado, tal como um filtro Sparkler.

[00152] Numa concretização, a solução obtida na etapa (e) é submetida a cromatografia em coluna.

[00153] Numa concretização, o isolamento de Crofelemer envolve essencialmente purificação num sistema de duas colunas, em que o material é fornecido, primeiramente, a um sistema de cromatografia que consiste de uma resina de troca iônica que é ainda ligada a uma coluna que consiste em resina de exclusão de tamanho.

[00154] Numa concretização, a resina de troca iônica pode ser CM-Sepharose, que é agarose carbóxi-metil modificada.

[00155] Numa concretização, a coluna usada na cromatografia compreende uma única coluna de CM-Sepharose Fast Flow ou coluna em dois conjuntos de CM-Sepharose Fast Flow e Sephadex LH-20.

[00156] Numa concretização, a eluição da fase sólida foi realizada com um sistema solvente selecionado do grupo que consiste em água, acetona, metanol, etanol, glicol e suas misturas. Numa concretização preferida, o eluente utilizado é a água.

[00157] Numa concretização, o material é carregado sobre a coluna de troca iônica e a coluna é lavada com água purificada. Em seguida, o material é purificado da coluna com uma solução aquosa de acetona, sendo assim feito o carregamento do material numa coluna de exclusão de tamanho.

[00158] Numa concretização, a segunda coluna é constituído de resina de exclusão de tamanho que é, por exemplo, Sephadex LH-20, que é dextrana hidroxipropilado reticulado. A coluna de exclusão por tamanho é então desligada da coluna de resina de troca iônica e o material é eluído com uma solução aquosa de acetona. As frações são recolhidas e monitoradas com um detector. As frações contendo material Crofelemer são combinadas. Na próxima etapa, o Crofelemer é isolado na forma sólida.

[00159] Numa concretização, o isolamento pode ser realizado por processamento, selecionado do grupo que compreende ultrafiltração, liofilização, evaporação com calor, evaporação sem calor, evaporação a vácuo, evaporação sem vácuo, secagem por pulverização, e suas combinações.

[00160] O Crofelemer produzido como aqui descrito pode ser analisado por quaisquer métodos conhecidos na arte. Por exemplo, Crofelemer pode ser detectado por absorbância de ultravioleta (lambda máx.) Crofelemer tem picos largos em torno de 200 a cerca de 300 nm, por exemplo entre cerca de 200 e cerca de 215 nm (por exemplo, cerca de 205-210 nm) e entre cerca de 260 e cerca de 295 nm (por exemplo, cerca de 275-280 nm). As frações contendo Crofelemer podem ter absorção máxima de UV principal adicional entre cerca de 400 nm a cerca de 500 nm, entre 425 e 475 nm, e cerca de 460 nm.

[00161] Numa concretização, o Crofelemer altamente puro tem um grau de pureza superior a cerca de 98%, especificamente superior a cerca de 99%, mais especificamente superior a cerca de 99,9%, e mais especificamente superior a cerca de 99,95% conforme medido por HPLC. Por exemplo, a pureza do Crofelemer é de cerca de 98% a cerca de 99,9%, ou cerca de 99,5% a cerca de 99,99%.

[00162] Numa concretização, o Crofelemer aqui divulgado é dotado de um ensaio maior do que cerca de 85%.

[00163] A faixa e distribuição de peso molecular de um polímero é geralmente estabelecida usando cromatografia de permeação em gel (GPC), e caracterizada pelo peso molecular médio numérico (Mn), o peso molecular médio ponderal (Mw) e o índice de polidispersibilidade. O índice de polidispersidade é uma medida da amplitude da distribuição de peso molecular.

[00164] Numa concretização, a invenção inclui Crofelemer com o aumento da homogeneidade. Por exemplo, numa concretização, Crofelemer preparado tem um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2.

[00165] Numa concretização, Crofelemer produzido de acordo com a invenção tem uma concentração mais baixa de taspina do que a concentração de taspina no material de partida de látex. Por exemplo, a quantidade de taspina que está presente no látex inicial pode ser reduzida por meio do processo de acordo com a invenção. Níveis de taspina no Crofelemer produzido de acordo com a invenção podem variar entre 1% em pureza cromatográfica até abaixo dos limites detectáveis. Por exemplo, o nível superior para a quantidade de taspina no Crofelemer pode ser de 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, ou 0,05% em pureza cromatográfica, ou qualquer valor entre ou abaixo dos valores quantificados até abaixo do limite de detecção. Numa concretização preferida, os níveis de taspina são inferiores a 0,05% por pureza cromatográfica (ou seja, 500 ppm) no material Crofelemer.

[00166] De acordo com uma concretização, é proporcionado um Crofelemer obtido com menos do que 0,15% de uma impureza (de preferência, medido a RRT 0,07).

[00167] De acordo com uma forma de realização, a impureza medida a RRT 0,07 pode ser utilizada como um marcador de referência para determinação do grau de pureza do Crofelemer e uma quantidade residual de água.

[00168] De acordo com uma concretização, é proporcionado Crofelemer, em que, o conteúdo de água é de cerca de 7-17% (% em peso). De preferência, o teor de água é analisado pelo método KF.

[00169] De acordo com uma concretização, o Crofelemer é seco sob vácuo.

[00170] De acordo com uma concretização, o Crofelemer é seco sob vácuo, e a temperatura para secagem a vácuo é menor do que 40°C.

[00171] Numa concretização preferida, a temperatura para a secagem a vácuo é 20-35°C.

[00172] Em ainda outro aspecto da presente invenção, o Crofelemer está na forma amorfa.

[00173] Em ainda outro aspecto da presente invenção, Crofelemer amorfo tem um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso.

[00174] Em ainda outro aspecto da presente invenção, Crofelemer amorfo tem um teor de água de cerca de 7 a cerca de 17 por cento em peso, tendo um teor de impureza de composto orgânico total inferior a cerca de 1 por cento por área medidos por HPLC.

[00175] Em ainda outro aspecto da presente invenção, Crofelemer contém cerca de 50 ppm a cerca de 1000 ppm de qualquer solvente residual. Numa concretização preferida, Crofelemer contém cerca de 100 ppm a cerca de 1000 ppm de qualquer um dentre acetona, n-butanol, álcool de diacetona (isto é, 4-hidróxi-4-metil-2-pentanona).

[00176] A presente invenção também se relaciona com o processo para a produção de composições poliméricas de proantocianidinas purificadas, para utilização em formulações farmaceuticamente eficazes. Em particular, são aqui proporcionados processos para a produção de um Crofelemer puro utilizando a técnica de purificação em coluna.

[00177] A Patente dos EUA n° 7325195 revela um método para isolar a composição polimérica de proantocianidina da planta Croton lechleri. O látex de Croton lechleri é misturado com água purificada e em seguida, qualquer material insolúvel na solução de látex é deixado assentar. O sobrenadante é bombeado para fora do resíduo e, em seguida extraído com n-butanol várias vezes. Após cada extração, a fase de álcool é descartada e a fase aquosa retida. A fase aquosa é concentrada, por exemplo, utilizando um dispositivo de ultrafiltração com uma membrana com 1 kD de corte. O retido da ultrafiltração é então concentrado até secura, por exemplo utilizando os secadores de bandeja a aproximadamente 37 °C (±2°C). O material seco é depois dissolvido em água e, em seguida, cromatografado sobre um sistema de duas colunas, em que o material é administrado ao longo de uma CM-Sepharose e depois uma coluna LH-20 em série. Especificamente, o material dissolvido é carregado numa coluna de troca catiônica e, em seguida, lavado com água purificada. O material polimérico de proantocianidina é eluído da coluna de troca catiônica com uma solução aquosa de acetona (de preferência 30% de acetona), e assim introduzindo o material de polímero de proantocianidina na coluna de dimensionamento. As frações são coletadas e monitoradas com um detector de UV, por exemplo, a um comprimento de onda de 460 nm. As frações contendo o material polimérico de proantocianidina são combinadas e concentradas, por exemplo, por ultrafiltração, utilizando, por exemplo, uma membrana de corte de 1 kD (como descrito acima para a etapa de ultrafiltração antes das etapas de cromatografia). O retido pode em seguida ser concentrado até secura usando um método de secagem adequado, como por exemplo, mas não limitado a um evaporador rotativo, a uma temperatura de aproximadamente 37°C (±2 °C). Outros métodos de secagem adequados incluem, mas não estão limitados a, secagem por pulverização e secagem em bandeja.

[00178] Os inventores do presente pedido descobriram que a repetição do método da técnica anterior não obtém a composição polimérica proantocianidina desejada com elevada pureza. O problema associado à obtenção do produto desejado, foi estudado verificando-se estar relacionado com a purificação em coluna, altura do leito da coluna e proporção de alimentação para o material cromatográfico utilizado no enchimento da coluna.

[00179] Os inventores da presente invenção aperfeiçoaram o comprimento da coluna (altura de leito), o diâmetro interno da coluna (largura do leito) e volume da coluna (volume do leito) em relação para obter o Crofelemer desejado com elevada pureza e consistência para emprego com as composições farmacêuticas terapeuticamente eficazes.

[00180] A composição polimérica de proantocianidina pode conter taspina indesejada em quantidade elevada. Taspina é um alcaloide também encontrado em espécies Croton avaliado de utilidade como composição antiinflamatória, porém tem outros efeitos colaterais, o que a torna indesejável. Assim, é conveniente manter o seu conteúdo a um nível mínimo. Também é desejável desenvolver um processo que iria minimizar o conteúdo de taspina na composição polimérica final de proantocianidina.

[00181] A resina de troca iônica, como CM-Sepharose Fast Flow, serve para remover impurezas catiônicas como taspina do material, enquanto a resina de exclusão de tamanho, tal como LH-20, purifica a composição polimérica e fornece a composição na faixa de peso molecular desejada.

[00182] Num aspecto da presente invenção, Crofelemer tem: i) um índice de polidispersibilidade na faixa de 0,9 a 1,2; ii) taspina numa quantidade inferior a 500 ppm; iii) um ensaio superior a 85%; iv) menos do que 0,15% de uma impureza (de preferência, medido no RRT 0,07), v) o teor de água na faixa de 7-17% (% em peso) (de preferência, analisadas pelo método KF); vi) forma amorfa;

[00183] obtenível por um método compreendendo as etapas de: (a) proporcionar uma solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex da planta; (b) extração da solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado em do látex da planta com solvente(s) orgânico(s); (c) separar o solvente orgânico, e (d) concentrar a camada aquosa para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado; alternativamente, separar a fase aquosa e (d) concentrar o solvente orgânico para se obter o xarope de sólido, líquido ou concentrado; (d) dissolver do xarope sólido, líquido ou concentrado em água ou solventes miscíveis em água e remover as partículas insolúveis, caso se apresentem, da solução; (e) purificar a solução por meio de uma única coluna de CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1, ou dois conjuntos selecionados de CM- Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH- 20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 está na faixa de cerca de 8:1 a 90:1;

[00184] Num outro aspecto da presente invenção, é apresentado um método de produção de Crofelemer compreendendo as etapas de: (f) proporcionar uma solução de látex vegetal em bruto ou pó liofilizado do látex da planta; (g) extração da solução de látex vegetal em bruto ou liofilizado em pó do látex da planta com um solvente orgânico(s); (h) separar o solvente orgânico, e (d) concentrar a camada aquosa para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado; alternativamente, separar a fase aquosa e (d) concentrar o solvente orgânico para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado; (i) dissolver o xarope sólido, líquido ou concentrado em água ou solventes miscíveis em água e remover as partículas insolúveis, se presentes a partir da solução; (j) purificar a solução por meio de uma única coluna CM-Sepharose, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1, ou dois conjuntos selecionados de CM- Sepharose e Sephadex LH-20, em que, a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna de CM-Sepharose está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH- 20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH-20 está na faixa de cerca de 8:1 a 90:1;

[00185] O material de partida, látex vegetal em bruto ou liofilizado do látex da planta é oriundo de Croton spp. ou Calophyllum spp. O látex bruto da planta, látex da planta parcialmente purificado, látex concentrado vegetal bruto, ou látex da planta purificado parcialmente concentrado pode compreender a lama obtida a partir do látex da planta.

[00186] Numa concretização, o Crofelemer é oriundo de Croton lechleri. Numa outra concretização, o Crofelemer é oriundo de Inophylum Calophyllum. O material de látex pode conter lama também que pode ser opcionalmente removida.

[00187] Como aqui empregado, lama refere-se ao sedimento formado durante a armazenagem. O látex vegetal em bruto pode ser obtido a partir da casca de Croton lechleri. Este látex é coletado e armazenado em barris. No armazenamento, o sedimento depositado é referido como "Lama". Esta lama é geralmente descartada.

[00188] Numa concretização, em que na etapa (a), o látex é mantido abaixo da temperatura ambiente (por exemplo, abaixo de 25 °C) durante um período de tempo para permitir a sedimentação, que é, por exemplo, de cerca de 1 hora a cerca de 30 dias. O látex é então misturado com a água abaixo da temperatura ambiente (por exemplo 2-8°C) e deixada em repouso durante pelo menos 12 horas, podendo ser misturado com metil-etil-cetona. O material sólido sedimentado foi descartado e o sobrenadante é colhido. Opcionalmente, o sobrenadante pode ser passado através de um filtro para remover o material sólido. A operação pode ser efetuada abaixo da temperatura ambiente.

[00189] Numa concretização, na etapa (b) a solução sobrenadante vermelha da etapa (a) é extraída com um solvente miscível ou imiscível em água (s) selecionados a partir de metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, etilenoglicol, propilenoglicol, acetato de etila, diclorometano, triclorometano, tetraclorometano, dicloroetano, éter dietílico, acetona, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, éter, bem como misturas dos citados. A camada aquosa foi, de preferência, misturada com o solvente imiscível. Numa concretização, o solvente imiscível é n- butanol. A camada aquosa é lavada sucessivamente com n- butanol.

[00190] Numa concretização, em que na etapa (c), a camada contendo Crofelemer pode ser tratada por ultrafiltração, seguido pela etapa (d) a evaporação, com ou sem calor, evaporação, com ou sem vácuo, secagem por congelamento, secagem por pulverização, e semelhantes, incluindo combinações de técnicas de processamento, para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado.

[00191] Numa concretização, a etapa (c) compreende a separação da camada aquosa usando, mas não limitado ao(s) método(s) do conhecimento da técnica, tais como filtração, decantação, centrifugação e/ou decantação ou combinação dos mesmos.

[00192] Numa concretização, na etapa (c), a separação pode ser feita por meio de filtração o que pode ser realizado usando auxiliar de filtração. Nesta concretização, o material de filtragem compreende um ou mais dentre: terra diatomácea, carvão vegetal, bentonita, celulose, vidro, areia, ou papel de filtro ou um filtro comercialmente disponível (por exemplo, o filtro Sparkler).

[00193] Numa concretização, na etapa (c), a separação pode ser realizada por sedimentação, que pode ser realizado mantendo-se a mistura de látex de plantas sem ser perturbado por alguns minutos a várias horas (s) com ou sem arrefecimento, de preferência, com arrefecimento, na faixa de temperatura de 5°C a 15°C, de preferência a 10°C. Nesta concretização, o sedimento pode ser deixado assentar por um período de tempo de pelo menos 1 hora ou mais, preferivelmente mais de uma hora, mais preferencialmente um período de tempo entre 10 a 20 horas, mais preferencialmente 15 horas.

[00194] Numa concretização, na etapa (c), a separação pode ser realizada por meio da técnica de centrifugação. A centrifugação da solução, suspensão ou mistura pode ser feita à temperatura de refrigeração, tal como a 10°C por meio de velocidade de 100 a 10.000 rotações por minuto (rpm), utilizando de preferência, qualquer velocidade na faixa de 2000 a 4000 rpm, de preferência utilizando mais de 3000 rpm, seguido por decantação.

[00195] Numa concretização, na etapa (c), a separação pode ser efetuada utilizando um ou uma combinação de mais de um método conhecido na arte e independentemente selecionado do grupo de filtração, sedimentação, centrifugação e/ou decantação, como acima descrito. Nesta concretização, de preferência, a separação usando métodos combinados, pode ser realizada na sequência de filtração, sedimentação seguido por centrifugação e decantação.

[00196] Numa concretização, a etapa (d) é a concentração da camada aquosa para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado que pode ser usado na etapa seguinte. Nesta concretização, a concentração da camada aquosa pode ser feita usando, mas não limitado, aos processos ou métodos ou suas combinações conhecidos na técnica, tais como a ultrafiltração e/ou por meio do evaporador rotativo, ou combinação de ambos. Nesta concretização, de preferência, os métodos utilizados são ultrafiltração, seguido por evaporação rotativa.

[00197] Numa concretização, a ultrafiltração é realizada com uma membrana semipermeável.

[00198] Numa concretização, a membrana semipermeável permite a passagem de solutos com peso molecular na faixa de 1 a 1000 Da. Nesta concretização preferida a membrana semipermeável permite a passagem de solutos com um peso molecular selecionado entre o grupo consistindo de 500 Da e 1 kDa, preferencialmente, a membrana semipermeável que permite a passagem de solutos de um peso molecular de até 1 kDa.

[00199] Numa concretização, a concentração e a secagem podem ser feita preferencialmente, utilizando evaporador rotativo a uma temperatura de aproximadamente 37°C (±2 °C) ou qualquer outra temperatura, ou quaisquer outros métodos de secagem adequados que incluem, mas não estão limitados a, secagem em bandeja ou secagem por pulverização.

[00200] Numa concretização, o processamento da etapa (d), que é a concentração e secagem para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado pode ser conseguido através da realização das técnicas selecionadas do grupo constituído por ultrafiltração, seguido por liofilização, evaporação com aquecimento, evaporação sem aquecimento, evaporação com vácuo, evaporação sem vácuo, secagem por pulverização, secagem em bandeja, e suas combinações.

[00201] Na etapa (e), o sólido aqui referido como "alimentação" ou xarope concentrado ou líquido é misturado com um solvente adequado, tal como água ou mistura de água e de solventes miscíveis em água, com ou sem mistura, de preferência com misturação, para se obter a solução desejada que pode ou não conter partículas insolúveis.

[00202] Numa concretização preferida, 10 gramas de látex vegetal sólido é misturado com aproximadamente 125 ml de água.

[00203] Como aqui utilizado, o solvente miscível em água utilizado é, preferivelmente, álcool de 1-3 átomos de carbono (por exemplo, etanol) ou acetona.

[00204] As partículas insolúveis, se presentes, podem ser, em seguida, removidas por filtração da solução através de um meio apropriado, tal como um filtro Sparkler.

[00205] Na etapa seguinte, a solução obtida na etapa (e) é submetida a cromatografia em coluna.

[00206] Numa concretização, a purificação é realizada em dois sistemas de coluna, em que o material é carregado em primeiro lugar, num sistema de cromatografia consistindo de uma resina de troca iônica (por exemplo, CM-Sepharose Fast Flow), que está ainda ligado a uma coluna que consiste em resina de exclusão de tamanho (por exemplo, Sephadex LH-20).

[00207] Numa concretização, a purificação é realizada em sistema de uma única coluna de uma resina de troca iônica (por exemplo, Coluna CM-Sepharose Fast Flow).

[00208] Numa concretização, a resina de troca iônica ou meio pode ser CM-Sepharose , que é agarose carbóxi-metil modificada.

[00209] Numa concretização, a resina de exclusão de tamanho ou meio pode ser Sephadex LH-20, que é dextrana hidroxipropilado reticulado.

[00210] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação em uma coluna é de pelo menos cerca de 3,5:1, mais preferivelmente, na proporção de, pelo menos, 4:1 (por exemplo, 4 mL ou 4 g de CM-Sepharose para um g do látex de planta).

[00211] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna é pelo menos cerca de 6:1 (por exemplo, 6 mL ou 6 g de CM-Sepharose para 1 g da alimentação de látex da planta).

[00212] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação de uma coluna está na faixa de cerca de 3,5:1 a 11:1, de preferência a proporção está na faixa de cerca de 4:1 a 9:1.

[00213] Numa concretização, a relação de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna é inferior a 11:1, de preferência, a proporção é inferior a 9:1.

[00214] Numa concretização, a suspensão de CM- Sepharose pode ser enchida na coluna para se obter um volume de leito de, pelo menos cerca de 35 mL (para 10 g de látex vegetal sólido ou substrato), de preferência pelo menos cerca de 40,0 mL por 10 g de alimentação do látex da planta ou substrato.

[00215] Numa concretização preferida, a suspensão de CM-Sepharose pode ser enchida na coluna para se obter um volume de leito de pelo menos cerca de 60 mL por 10 g de alimentação de látex vegetal sólido ou substrato.

[00216] Numa concretização, CM-Sepharose pode ser enchida na coluna para se obter a largura de leito (diâmetro interno da coluna) de pelo menos cerca de 3,2 cm (para 10 g de alimentação de látex vegetal sólido ou substrato), de preferência pelo menos 3,4 cm de comprimento por 10 g de alimentação de látex da planta.

[00217] Numa concretização, a suspensão de CM- Sepharose pode ser preenchida na coluna para se obter a altura do leito, tal como, mas não limitado, a altura do leito (ou o comprimento da coluna) de pelo menos cerca de 4,2 cm (para 10 g de alimentação de látex da planta ou de substrato sólido), de preferência pelo menos 4,5 cm de comprimento por 10 g de alimentação ou substrato para plantas de látex.

[00218] Numa concretização, a proporção de Sephadex LH-20 para a alimentação de uma coluna é de pelo menos cerca de 8:1 a 90:1, mais preferivelmente na proporção de, pelo menos, 12:1 a 90:1 (por exemplo, 12 g de CM-Sepharose para 1 g de alimentação de látex da planta).

[00219] Numa concretização, o Sephadex LH-20 enchido na coluna para a obtenção do comprimento da coluna ou altura do leito de pelo menos cerca de 8 cm (para 10 g de alimentação de látex planta ou substrato sólido utilizado na coluna de troca iônica), de preferência pelo menos 13 cm por 10 g de substrato ou alimentação.

[00220] Num concretização, o Sephadex LH-20 preenchido na coluna para se obter o diâmetro interno da coluna ou leito de largura, pelo menos, cerca de 3,2 cm (para 10 g de alimentação de látex planta ou substrato sólido utilizado na coluna de troca iônica), de preferência pelo menos 3,4 centímetros por 10 g de substrato ou alimentação.

[00221] Numa concretização, o Sephadex LH-20 preenchido na coluna para se obter volume de leito (da coluna) de pelo menos cerca de 110 ml (para 10 g de sólidos na alimentação ou substrato de látex de planta utilizada na coluna de troca iônica), preferencialmente pelo menos 118 ml por 10 g de sólido.

[00222] Numa concretização, o material carregado para a coluna de CM-Sepharose e a coluna é lavada com água purificada. Em seguida, o material é eluido a partir da coluna com uma solução aquosa de acetona, desse modo, fazendo-se o carregamento do material sobre a coluna Sephadex LH-20.

[00223] A coluna Sephadex LH-20 pode ser desligada da coluna CM-Sepharose e o material é eluído com uma solução aquosa de acetona.

[00224] Numa concretização, a purificação cromatográfica pode ser feita usando eluente(s), que são selecionados de água e solventes miscíveis em água e suas combinações. O eluente preferido aqui utilizado é água seguido por uma solução aquosa de acetona (de preferência 50% de acetona em água e /ou com menos de 50%, mais preferivelmente 45% de acetona em água e /ou menos que 45%, e mais preferencialmente 45% de acetona em água e/ou 30% de acetona em água ou uma combinação dos mesmos).

[00225] As frações são recolhidas e monitoradas com um detector. O Crofelemer produzido como aqui descrito pode ser analisado ou detectado por quaisquer métodos conhecidos na arte. Por exemplo, Crofelemer pode ser detectado por absorbância ultravioleta (lambda máx.) Crofelemer tem picos amplos em torno de 200 a cerca de 300 nm, por exemplo entre cerca de 200 e cerca de 215 nm (por exemplo, cerca de 205 - 210 nm) e entre cerca de 260 e cerca de 295 nm (por exemplo, cerca de 275 - 280 nm). As frações contendo Crofelemer possuem absorção máxima UV principal adicional de cerca de 400 nm a cerca de 500 nm, entre 425 e 475 nm, e cerca de 460 nm.

[00226] Na próxima etapa, Crofelemer é isolado na forma sólida.

[00227] Numa concretização, o isolamento pode ser feito por processamento o qual é selecionado dentre o grupo constituído por ultrafiltração, liofilização, evaporação com calor, a evaporação sem calor, evaporação a vácuo, a evaporação sem vácuo, secagem por pulverização, e suas combinações.

[00228] Numa concretização, o Crofelemer é seco sob vácuo.

[00229] Numa concretização, o Crofelemer é seco sob vácuo e a temperatura para a secagem a vácuo é menor do que 40°C. Numa concretização preferida, a temperatura de secagem a vácuo é 20-35 °C.

[00230] Numa concretização, o nível de taspina é inferior a 2000 ppm por HPLC no Crofelemer, quando produzido de acordo com o processo da invenção. Por exemplo, o nível superior para a quantidade de taspina no Crofelemer pode ser de 2000 ppm, 1500 ppm, 1000 ppm, 500 ppm, 400 ppm, 300 ppm, 200 ppm, 100 ppm, 50 ppm ou por meio de HPLC, ou qualquer proporção entre ou abaixo dos valores cotados abaixo do limite de detecção.

[00231] Numa concretização, o Crofelemer puro aqui divulgado tem pureza superior a cerca de 90%, especificamente superior a cerca de 95%, mais especificamente superior a cerca de 99% e, mais especificamente superior a cerca de 99,5% medidos por HPLC. Por exemplo, a pureza do Crofelemer é de cerca de 90% a cerca de 95%, ou cerca de 99% a cerca de 99,5% ou mais.

[00232] Numa concretização, o Crofelemer aqui divulgado possui um ensaio superior a cerca de 85% e, mais especificamente, superior a cerca de 90%.

[00233] Numa concretização, o Crofelemer aqui descrito tem um peso molecular médio dentre cerca de 1100 Da (Daltons) até cerca de 3000 Da, ou por exemplo, um peso molecular entre cerca de 2000 Da a cerca de 2500 Da, ou por exemplo, um peso molecular entre cerca de 1500 a cerca de 3000 Da. e uma polidispersibilidade na faixa de 0,5 a 1.8, ou, por exemplo, na faixa de 0,9 a 1,2, ou na faixa de 0,5 a 1,5, ou na faixa de 0,8 a 1,2. Numa concretização preferida, o índice de polidispersidade de Crofelemer fica na faixa de 0,9 a 1.20.

[00234] Exemplos de solventes miscíveis em água incluem, mas não estão limitados a, metanol, n-propanol, isopropanol, etanol, dioxano, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, tetraidrofurano, acetona, ácido acético ou acetonitrila.

[00235] Proantocianidina são um grupo de taninos condensados. A proantocianidina compreende unidades monoméricas de leucoantocianidinas. Leucoantocianidinas inclui catequinas, epicatequinas, galocatequinas, galoepicatequinas, flavonoides, flavonóis, flavan-3,4- dióis, leucocianidinas e antocianidinas. Numa concretização, o polímero proantocianidina compreende polímeros entre cerca de 2 a cerca de 30 unidades de flavonoides, entre cerca de 2 e cerca de 15 unidades flavonoides, entre cerca de 2 a cerca de 11 unidades flavonoides ou uma média dentre cerca de 7 a cerca de 8 unidades flavonoides com um número do peso molecular médio compreendido entre cerca de 2000 a cerca de 3000 Da, ou por exemplo, um peso molecular entre cerca de 1100 daltons a cerca de 2.900 daltons, ou por exemplo, um peso molecular entre cerca de 1500 Da a cerca de 3000 Da.

[00236] Numa concretização preferida, uma composição polimérica de proantocianidina da invenção é Crofelemer. A estrutura de Crofelemer é mostrada abaixo.

R = H (procianidina) e/ou R = OH (prodelfinidina) Média de n ~ 5 (7 unidades) em que, a estrutura das unidades monoméricas são:

2R = H, (+)-catequina, 3 R = H, (-)-epicatequina 4R = OH, (+)- galocatequina R = OH, (-)-epigalocatequina

Dados analíticos Ensaio e Teor de Taspina

[00237] O ensaio é um método utilizado para analisar ou quantificar uma substância numa amostra. Um ensaio é uma análise feita para determinar a presença de uma substância e a quantidade dessa substância. Um ensaio mais elaborado pode promover a potência e a eficácia clínica do referido fármaco. Ensaio realizado pelo método de HPLC usando coluna C 18 (150 cm x 4,6 mm) e 0,1% de ácido trifluoroacético em água. Tetraidrofurano, metanol e acetonitrila foram usados como a fase móvel com 1.5mL/minuto de velocidade de fluxo. Medir a resposta para Crofelemer a 280 nm de UV e a 248 nm UV para taspina. Calcular a porcentagem (%) do ensaio e o conteúdo de taspina contra o padrão.

SUBSTÂNCIAS RELACIONADAS

[00238] O termo "impurezas" refere-se a algo que é impuro ou que faz com que algo se torne impuro. Atualmente, às impurezas são dados vários nomes alguns dos termos, tais como os compostos relacionados, podem tender a abafá-las. No mundo farmacêutico, uma impureza é geralmente considerada como qualquer outro material orgânico além da substância do fármaco ou do ingrediente farmacêutico ativo (API), que se origina da síntese. Na maioria dos casos, os contaminantes inorgânicos não são tidos em consideração adequada, como as impurezas, a menos que sejam tóxicas, tais como metais pesados ou arsênico. Impurezas orgânicas voláteis (OVI, as quais são geralmente compostas por solventes residuais, bem como outras impurezas voláteis orgânicas utilizadas na síntese), são muitas vezes consideradas impurezas virtuais. Os produtos da interação produzidos durante os processos de formulação e os produtos de degradação (frequentemente referidos coloquialmente como degradantes, na indústria farmacêutica, os termos têm sido utilizados indistintamente neste texto) que podem ser produzidos antes da utilização pelo paciente, são fontes adicionais de impurezas. É importante reconhecer que, nesta fase, qualquer material que conduz a uma diminuição no valor do grau de pureza do API deve ser considerado uma impureza. Portanto, para todos os efeitos, vários contaminantes mencionados aqui podem ser chamados de impurezas e devem ser rotulados como tal, porque eles diminuem a pureza do API. As impurezas são, quer de ocorrência natural, ou adicionadas durante a síntese de um produto químico ou um produto comercial. Durante a produção, as impurezas podem ser propositadamente, acidentalmente, inevitavelmente, ou incidentalmente adicionadas à substância. Impurezas maiores presentes no fármaco, podem afetar a potência e a eficácia clínica do referido fármaco. Uma medida da % de impureza foi realizada pelo método de HPLC utilizando coluna C18 (150 cm x 4,6 mm) e 0,1% de ácido trifluoroacético em água. Tetraidrofurano, metanol e acetonitrila foram usados como a fase móvel com velocidade de fluxo de 1.5mL/minutos. Medir a resposta em UV a 280 nm.

[00239] A polidispersidade foi medida utilizando um sistema HPLC com bombas de gradiente quaternário, detector de UV de comprimento de onda variável acompanhado de gravador de dados e opção de Software GPC Software.

[00240] Coluna Jordi DVB, 500 A°., 500 x 10mm usando fase móvel DMF / ácido fórmico 50 mM. Taxa de fluxo 1,0 mL/minuto a 280nm UV realiza injeções de padrão de calibração como uma norma ampla, utilizando valores conhecidos de Mn, Mw e Mz Mp. A ordem 1ST (linear) foi obtida. Para a adequabilidade do sistema, o valor de r2 da curva de calibração foi verificado em 0,99 ou superior,

[00241] A Distribuição de Tamanho do Polímero foi calculada através da seguinte fórmula,

[00242] Polidisperssidade (D) ou Heterogeneidade (H)

onde Mw é o peso molecular médio em peso e Mn é o peso molecular médio numérico;

Conteúdo de Diacetona

[00243] O conteúdo de diacetona do Crofelemer é determinado por cromatografia de gás equipado com detector FID e amostragem automática usando coluna HP-5 (5% fenil 95% metil polissiloxano) dimensão: 30mts*0,32 mm* 0.5um.

Conteúdo de água (pelo método ou técnica KF:

[00244] O Instrumento de Karl Fischer é um instrumento usado para se determinar o conteúdo de água de uma amostra. A titulação de Karl Fischer é um método clássico de titulação em química analítica, que utiliza a titulação coulométrica ou volumétrica para determinar quantidades vestigiais de água numa amostra.

[00245] Encher o vaso de titulação com 15-20 mL de metanol. Pressionar o botão de partida do instrumento e esperar até aparecer no visor 'deriva OK'. Alterar os parâmetros de "modo KFT 'e começar. Adicionar cerca de 30,0 mg de água e ingressar com o peso pressionando o botão iniciar. Quando a titulação for concluída, o visor mostra a leitura da bureta. Anote a leitura da bureta e calcular o Fator de KF, (ou seja, Fator de KF = peso da água em mg / leitura da bureta). Alterar o instrumento para o 'modo KF'. Pressione o botão iniciar. Triturar a amostra para torná-la uniforme. Transferir cerca de 150 mg da amostra de ensaio para o recipiente de titulação, e introduzir o peso da amostra. Novamente pressionar Enter. Quando a titulação for concluída, o visor mostra a leitura da bureta. Anote a leitura da bureta. Calcular o teor de água da amostra de teste usando a seguinte equação.

[00246] A(s) composiç(ao/ões) farmacêutica(s) aqui descrita(s) compreende(m) Crofelemer e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, veículos, diluentes ou uma mistura destes. Crofelemer como aqui descrito, pode ser associado com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, veículos, diluentes ou uma mistura destes, na forma de uma cápsula, saquinho, papel ou em qualquer outro recipiente.

[00247] Exemplos de veículos adequados incluem, mas não estão limitados a, água, soluções salinas, álcoois, polietilenoglicóis, óleo de rícino poliidroxietoxilado, óleo de amendoim, azeite, gelatina, lactose, terra alba, sacarose, dextrina, carbonato de magnésio, açúcar, ciclodextrina, amilose, estearato de magnésio, talco, gelatina, agar-agar, pectina, acácia, ácido esteárico ou éteres de alquila inferior de celulose, ácido silícico, os ácidos graxos, as aminas de ácidos graxos, monoglicérideos de ácido graxo e diglicerideos, ésteres de ácidos graxos de pentaeritritol, polioxietileno, hidroximetil celulose e polivinilpirrolidona.

[00248] O veículo ou diluente pode incluir um material de liberação prolongada, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila, sozinho ou misturado com uma cera.

[00249] A composição farmacêutica pode também incluir um ou mais agentes auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, agentes de umectação, agentes emulsionantes, agentes de suspensão, agentes conservantes, sais para influenciar a pressão osmótica, tampões, agentes adoçantes, agentes aromatizantes, corantes, ou quaisquer combinações dos citados. A composição farmacêutica do pedido de patente pode ser formulada de modo a proporcionar uma liberação rápida, sustentada ou retardada do ingrediente ativo após administração ao indivíduo, através da utilização de métodos conhecidos na arte.

[00250] As composições farmacêuticas do presente pedido de patente podem ser preparadas por técnicas convencionais, por exemplo, como descrito em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. 2003 (Lippincott Williams & Wilkins). Por exemplo, Crofelemer é misturado com um veículo, ou diluído por meio de um veículo, ou encerrado num veículo, o qual pode estar na forma de uma ampola, cápsula, saquinho, papel ou outro recipiente. Quando o veículo se presta como um diluente, ele pode ser um material sólido, semissólido ou líquido que age como um veículo, excipiente ou meio para o composto ativo. O composto ativo é adsorvido num recipiente sólido granular, por exemplo, num saquinho.

[00251] As composições farmacêuticas podem estar em formas convencionais, por exemplo, cápsulas, comprimidos, aerossóis, soluções, suspensões ou produtos para aplicação tópica.

[00252] A via de administração pode ser qualquer via que transporte eficazmente Crofelemer ao local de ação desejado ou apropriado. As vias adequadas de administração incluem, mas não estão limitadas a, pulmonar, oral, nasal, oftálmica, bucal, subcutânea, intradérmica, transdérmica, parentérica, retal, depósito, por via subcutânea, intravenosa, intrauretral, intramuscular, intranasal, nasal, oftálmica, (por exemplo, com uma solução oftálmica) ou tópica (como um unguento tópico). A via oral é a preferida.

[00253] As formulações orais sólidas incluem, mas não estão limitadas a, comprimidos, cápsulas (de gelatina mole ou dura), drágeas (contendo o ingrediente ativo na forma de pó ou granulada), trociscos e pastilhas. Comprimidos, drágeas, ou cápsulas contendo talco e/ou um ligante portador de carboidratos ou semelhantes são particularmente adequadas para aplicação oral. Veículos preferidos para os comprimidos, drágeas, ou cápsulas incluem lactose, amido de milho e/ou amido de batata. Um xarope ou elixir é usado nos casos em que se emprega um veículo adoçado.

[00254] As formulações líquidas incluem, mas não estão limitadas a, xaropes, emulsões, gelatina mole e liquidos estéreis injetáveis, tais como soluções ou suspensões líquidas aquosas ou não aquosas.

[00255] Para aplicação parenteral, são particularmente adequadas as soluções ou suspensões injetáveis, de preferência soluções aquosas com Crofelemer dissolvido em óleo de rícino poli-hidroxilado.

[00256] As doses adequadas do Crofelemer para utilização no tratamento das doenças e distúrbios aqui descritos podem ser determinadas por aqueles peritos na arte relevante. As doses terapêuticas são geralmente identificadas por meio de um estudo de avaliação de dose em seres humanos com base em evidências preliminares derivadas de estudos com animais. As doses devem ser suficientes para resultar num benefício terapêutico desejado sem causar efeitos secundários indesejados. Por exemplo, a dosagem diária do Crofelemer pode variar desde cerca de 0,1 a cerca de 30,0 mg/kg. Modo de administração, formas de dosagem, os excipientes farmacêuticos adequados, diluentes ou veículos também podem ser utilizados e bem ajustados por aqueles peritos na arte. Todas as alterações e modificações estão previstas no âmbito do presente pedido de patente.

[00257] Numa concretização, é uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, para utilização no tratamento da diarreia, em particular diarreia secretora. Numa concretização preferida, é uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, para o tratamento de diarreia associada com HIV/AIDS, síndrome do intestino irritável, infecção aguda e diarreia infantil.

Parte Experimental

[00258] O material de partida de látex vegetal bruto utilizado nos exemplos seguintes é látex vegetal obtido a partir da casca de Croton lechleri. Árvores de Croton lechleri foram "riscadas" e derrubadas perto da aldeia de San Pablo de Cuyana no Rio Nanay 100 quilômetros a partir de Iquitos, no Peru. O látex foi obtido ao longo de um período de 24 horas, riscando-se as árvores.

[00259] As seguintes abreviaturas foram aqui utilizadas: HPLC: cromatografia líquida de alto desempenho FID: Detector de ionização de chama RPM: rotações por minuto mL = mililitros g = grama kg: quilograma °C = grau Celsius

Exemplo 1

[00260] Etapa A: Seis volumes de água foram adicionados ao látex vegetal em bruto (250 ml), compreendendo a lama e a mistura resultante foi agitada a 40°C durante 30 minutos e depois filtrou-se. O filtrado foi mantido em repouso durante 15 horas a 2 até 10°C. A solução foi submetida à centrifugação durante 10 minutos a 10°C e 3000 rpm, seguido de decantação do licor mãe (1750 mL).

[00261] Etapa B: 500 mL de água purificada foram adicionados ao licor mãe. A mistura (2250 ml) foi submetida a purificação em coluna, utilizando uma coluna de 300 mL Sepharose (1,2 volume de látex). A eluição foi realizada utilizando 1500 mL de água, seguido de solução aquosa de acetona a 30% (1100 mL). O eluente inicial de 300 mL foi descartado e, em seguida, 750 ml de eluente (de cor escura) foi retirado, concentrando-se para se obter 10,0 g -11,0 g de Crofelemer.

Exemplo 2

[00262] Etapa A: 250 ml de solução de látex vegetal em bruto compreendendo lama foi liofilizado para obtenção de pó de cerca de 45-55 g de látex seco em pó. 50 g de látex liofilizado foi agitado com 2250 mL de água purificada a 40°C durante duas horas. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente, filtrando-se para obter 2250 ml do licor mãe.

[00263] Etapa B: A massa foi submetida a purificação em coluna, utilizando uma coluna Sepharose (300 mL, 6 volumes de látex seco). A eluição foi realizada utilizando 2000 mL de água, seguida de solução aquosa de acetona a 30% (1100 mL). Os 300 mL de eluente inicial foi descartado e, em seguida, 750 ml de eluente (de cor escura) foi retirado e concentrou-se para se obter 10,0-11,0 g de Crofelemer.

Exemplo 3

[00264] Etapa A: Látex vegetal em bruto (35 kg) foi misturado com água (240 L). A mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 60 minutos. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de um filtro Sparkler para se obter uma solução límpida. A solução límpida foi submetida a ultrafiltração e concentrou-se até 50 L.

[00265] Etapa B: 215 litros de água purificada foram adicionados à massa concentrada. A solução resultante foi submetida à purificação em coluna, utilizando uma coluna Sepharose (36 L). Inicialmente, a coluna foi lavada com 240 litros de água purificada e a eluição foi realizada utilizando solução aquosa de acetona a 30% (125 L). O eluente inicial de 30-36L foi descartado e, em seguida, 90L de eluente (de cor escura) foi retirado, concentrando-se para obter 0,9 kg de Crofelemer.

Exemplo 4

[00266] Etapa A: 500 ml de solução de látex vegetal em bruto compreendendo lama foi liofilizado para obtenção de pó de látex seco, cerca de 100-110 g de látex seco. 100 g de látex liofilizado foi agitado com 4500 mL de água purificada a 40 °C durante duas horas. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrou-se para obter 5000 ml do licor mãe.

[00267] Etapa B: O licor mãe foi submetido à purificação em coluna, utilizando uma coluna Sepharose (600 mL, 6 volumes de látex seco). Inicialmente, a coluna foi lavada com 4 litros de água purificada e a eluição foi realizada utilizando solução aquosa de acetona a 30% (2200 mL). Os 500 mL de eluente iniciais foram descartados e, em seguida, 1500 ml de eluente (de cor escura) foram retirados, concentrando-se para obter 20,0-22,0 g de Crofelemer.

[00268] Os dados analíticos para o Exemplo 1 até Exemplo 4 estão apresentados na Tabela 1 Tabela 1

BDL = Abaixo do limite de detecção, * ND = não detectado

Exemplo de Referência 1: Preparação de Crofelemer Fase 1:

[00269] 450 kg de látex foram misturados com 925 L de água. A mistura resultante foi cuidadosamente misturada a 2 - 8°C durante uma hora e deixou-se assentar a 2-8°C durante 12 horas. As camadas foram separadas. A camada superior foi misturada com 200 L de n-butanol. A mistura foi bem agitada. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída duas vezes com 200 L de n-butanol a cada vez. A fase aquosa foi passada através de um filtro Sparkler e depois concentrouse sob pressão reduzida para se obter um sólido. Fase 2:

[00270] Os 10 g de material sólido foram misturados em 125 ml de água purificada. A solução obtida foi utilizada no Exemplo de Referência 1.1 a 1.7.

Exemplo de referência 1.1

[00271] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 118,0 ml de CM-Sepharose (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de referência 1.2

[00272] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 59 ml de CM- Sepharose (em que a altura do leito = 6.5 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de referência 1.3

[00273] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 41,3 ml de CM-Sepharose (em que a altura do leito = 4,55 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de referência 1.4

[00274] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 35,4 ml de CM-Sepharose (em que a altura do leito = 3,9 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de Referência 1.5

[00275] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 29,5 ml de CM-Sepharose (em que a altura do leito = 3,25 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de referência 1.6

[00276] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 14,7 ml de CM-Sepharose (em que a altura do leito = 1,62 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

Exemplo de Referência 1,7

[00277] A solução obtida do material foi aplicada em um sistema de cromatografia em coluna contendo 7,2 ml de CM- Sepharose (em que a altura do leito = 0,8 cm e largura do leito = 3,4 cm) ligada em série a uma coluna LH-20 de 118 ml (em que a altura do leito = 13 cm e largura do leito = 3,4 cm).

[00278] Após a aplicação da alimentação ao topo da coluna, as colunas foram lavadas com 230 mL de água purificada e 680 mL de acetona a 30%. As colunas foram separadas. A composição polimérica de proantocianidina foi eluída da coluna LH-20 com 450 mL de acetona a 45%. As frações que continham a composição polimérica de proantocianidina desejada foram concentradas até secura, sendo adicionalmente secas.

[00279] Os dados analíticos para Exemplo de Referência 1.1 e Exemplo de Referência 1.7 estão apresentados na Tabela 2 Tabela 2

Exemplo de Referência 2: Preparação de Crofelemer (US 7,323,195) Estágio A:

[00280] 450 kg de látex foi misturados com 925 L de água. A mistura resultante foi cuidadosamente misturada a 28°C durante uma hora e depois deixou-se assentar a 2-8°C durante 12 horas. As camadas foram separadas. A camada superior foi, então misturada com 200 L de n-butanol. A mistura foi bem agitada. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi novamente extraída duas vezes com 200 L de n- butanol de cada vez. A fase aquosa foi passada através de um filtro Sparkler e depois concentrou-se sob pressão reduzida. Estágio B:

[00281] O material da etapa A (6 kg) foi misturado em 75 L de água purificada. O material obtido foi aplicado em um sistema de cromatografia em coluna CM-Sepharose contendo 35 L conectada em série a uma coluna de 70 L de LH-20. Após a aplicação da alimentação ao topo da coluna, as colunas foram lavadas com 140 L de água purificada e 408 L de acetona a 30%. As colunas foram separadas. A composição polimérica de proantocianidina foi eluída da coluna LH-20 com 272 L de acetona a 45%. As frações que continham a composição polimérica de proantocianidina desejada foram concentradas até secura com secagem adicional.

[00282] A análise dos dados foi coletada para seguintes lotes. Os detalhes analíticos para a composição da composição polimérica de proantocianidina final estão apresentados na tabela 3. Tabela 3

Exemplo 5 Preparação de Crofelemer Estágio A:

[00283] Os tambores contendo látex foram mantidos a 2-8°C por não menos de 48 horas antes do uso. 450 kg de látex foram misturados com 925 L de água pré-arrefecida. A solução resultante foi cuidadosamente misturada a 2-8°C durante uma hora e depois deixou-se assentar a 2-8°C durante 12 horas. O precipitado resultante foi descartado. O sobrenadante foi filtrado através de um filtro Sparkler e depois misturado com 200 L de n-butanol. A mistura foi bem agitada. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída novamente, duas vezes com 200 L de n-butanol de cada vez. A fase aquosa foi concentrada até secura sob pressão reduzida. Estágio B:

[00284] O material da etapa A foi dissolvido em 75 L de água purificada e a solução foi filtrada através de um filtro Sparkler. Repetiu-se a operação para remover as partículas em suspensão. O material dissolvido foi aplicado em um sistema de cromatografia em coluna contendo 35 L de CM Fast Flow Sepharose ligada em série a uma coluna LH-20 de 70 L. Após a aplicação da alimentação ao topo da coluna, as colunas foram lavadas com 140 L de água purificada e 408 L de acetona a 30%. As colunas foram separadas. A composição polimérica de proantocianidina foi eluída da coluna LH-20 com 272 L de acetona a 45%. As frações foram concentradas e secas para se obter Crofelemer.

[00285] Os detalhes analíticos para alguns lotes representativos para Crofelemer são ilustrados na tabela 4 a seguir. Tabela 4

Claims

1. Método de produção de uma composição polimérica de proantocianidina caracterizado por compreender as etapas de: A) isolar a composição polimérica de proantocianidina por meio de agitação da mistura do látex vegetal bruto de Croton lechleri ou do pó liofilizado do látex vegetal de Croton lechleri e água ou solventes miscíveis em água a uma temperatura na faixa de 35°C a 45°C e separar a fase líquida compreendendo a composição polimérica de proantocianidina; e B) purificar a composição polimérica de proantocianidina usando uma técnica de cromatografia em coluna.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o processo de isolamento da composição polimérica de proantocianidina na etapa (A) compreender ainda as etapas de: - concentrar a fase líquida para se obter o xarope sólido, líquido ou concentrado; e - adicionar água ou solventes miscíveis em água ao xarope sólido, líquido ou concentrado.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a etapa (B) ser realizada usando-se uma combinação de cromatografia de troca iônica e cromatografia de exclusão por tamanho.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a etapa (B) ser realizada empregando-se dois conjuntos de coluna de CM-Sepharose e Sephadex LH-20, em que a razão de CM-Sepharose para a alimentação numa coluna CM-Sepharose está na faixa de 3,5:1 a 11:1 e a razão de Sephadex LH-20 para a alimentação numa coluna Sephadex LH- 20 está na faixa de 8:1 a 90:1.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina compreender uma pureza maior do que 98%.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina compreender uma pureza maior do que 85%.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina ter um índice de polidispersidade na faixa de 0,9 a 1,20.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina compreender taspina numa quantidade inferior a 500 ppm, preferivelmente, conforme medido por HPLC.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina ter menos de 0,15% de uma impureza, preferivelmente, conforme medido a RRT 0,07;

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina ter um teor de água na faixa de 7% a 17% (em peso), preferivelmente, conforme analisado pelo método KF.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição polimérica de proantocianidina ter: a) um índice de polidispersidade na faixa de 0,9 a 1,2; b) taspina numa quantidade inferior a 500 ppm; c) um ensaio maior do que 85%; d) menos que 0,15% de uma impureza, preferivelmente, conforme medido a RRT 0,07; e) teor de água na faixa de 7 a 17% (em peso), preferivelmente, conforme analisado pelo método KF; e f) forma amorfa.