RO133090B1 - Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural - Google Patents
Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural Download PDFInfo
- Publication number
- RO133090B1 RO133090B1 ROA201700578A RO201700578A RO133090B1 RO 133090 B1 RO133090 B1 RO 133090B1 RO A201700578 A ROA201700578 A RO A201700578A RO 201700578 A RO201700578 A RO 201700578A RO 133090 B1 RO133090 B1 RO 133090B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- extraction
- condensed
- precipitate
- liquid
- distilled water
- Prior art date
Links
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 title claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 39
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims description 36
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 16
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 title claims description 11
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 title claims description 11
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 title claims description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 12
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 title 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 21
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 20
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 11
- 241000219095 Vitis Species 0.000 claims description 10
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 9
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 7
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 claims description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229940087559 grape seed Drugs 0.000 description 4
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 4
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 3
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 2
- OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N Favan-3-ol Chemical group OC1CC2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 OEIJRRGCTVHYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 2
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 240000005859 Orthosiphon aristatus Species 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 241001593968 Vitis palmata Species 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 229930182497 flavan-3-ol Natural products 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- -1 flavonoid compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- IRYFCWPNDIUQOW-UHFFFAOYSA-N fluanisone Chemical compound COC1=CC=CC=C1N1CCN(CCCC(=O)C=2C=CC(F)=CC=2)CC1 IRYFCWPNDIUQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000002532 grape seed extract Nutrition 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K15/00—Anti-oxidant compositions; Compositions inhibiting chemical change
- C09K15/04—Anti-oxidant compositions; Compositions inhibiting chemical change containing organic compounds
- C09K15/06—Anti-oxidant compositions; Compositions inhibiting chemical change containing organic compounds containing oxygen
- C09K15/08—Anti-oxidant compositions; Compositions inhibiting chemical change containing organic compounds containing oxygen containing a phenol or quinone moiety
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
RO 133090 Β1
Invenția se referă la un procedeu de extracție etapizată a compușilorfenolici cu alcool etilic, din semințele de struguri delipidate, extracția lichid/lichid (L/L) a extractului concentrat polifenolic cu eter dietilic, pentru obținerea precipitatului brut de proantocianidine (PA) condensate și la o metodă de purificarea acestuia printr-o metodă bazată pe proprietatea de insolubilizare în apă distilată.
Proantocianidinele (PA) numite și taninurile condensate au ca structură de bază unități de flavan-3-ol, secvențial polimerizate, prin legături 4β - 6; 4β - 8; 4β - 8 · 2β - 7. în acest context proantocianidinele denumite în continuare PA condensate de la dimeri la pentameri, sunt numite proantocianidine oligomerice, iar de la hexameri sau cu grad mai înalt de polimerizare sunt numite PA condensate polimerice.
Semințele de struguri reprezintă sursa cea mai bogată în compuși fenolici extractibili în care grupul compușilor flavonidelor este cel mai abundent, incluzând monomeri flavan-3ol, PA condensate oligomerice și PA condensate polimerice.
PA condensate reprezintă o sursă naturală importantă datorită proprietăților biologic active cu efect antiinflamator, antiviral, antitumoral, antibacterian, antifungic și antioxidant (EN-QIN Xia ș.a., Biologica! Activities of Polyphenols from Grapes. Int. J. Mol Sci., 11(2): 622-646, 2010; Bhise S. ș.a., Antioxidant property and health benefits of grape byproducts, J. Post Harvest Technol, 2(1): 1-11, 2014). Astfel, PA condensate din semințele de struguri pot fi utilizate, ca principii bioactive în industria farmaceutică și cosmetică ca antioxidanți naturali în industria alimentară și în agricultură în combaterea unor boli.
Sunt cunoscute diferite procedee de extracție a compușilor fenolici oligomerici și metode de purificare a preparatelor brute. Acestea sunt prezentate atât în literatura nonbrevet din bibliografia anexată cât și în brevetele EP 0632480 (1986), US 5484594 (1996), US 5273262 (1998), US 6800433 (2004). în aceste brevete extracțiile compușilor fenolici PA oligomerice s-au realizat folosind ca solvent apa sau un amestec apă solvent (acetonă, alcool) la temperaturi între 5 și 55°C, timpul de extracție, de la câteva h la 10 zile, extracțiile fiind repetate de două sau mai multe ori.
Metodele de obținere a PA oligomerice din extractele polifenolice brute cunoscute sau efectuat în mai multe etape, prin filtrări pe membrane speciale urmate de extracții și precipitări repetate cu sovenți. Eliminarea contaminanților: acizi fenolici, monomeri, săruri, proteine, zaharuri s-a efectuat prin cromatografia pe coloane, obținându-se în final preparate PA oligomerice cu diferite grade de puritate de la 60% până la 90%.
în studiile analitice cunoscute extracția compușilorfenolici din semințe de struguri se efectuează utilizând concentrații mari de solvenți (acetonă, alcool etilic) în amestec cu apă 80% v/v cât și direct 100% solvent, la diferite temperaturi, 25°C, 35°C și 50°C, timp de 3...12 h, sau mai îndelungat în funcție de temperatură. Scopul urmărit de autori în procesele extractive cu solvenții menționați a fost de a evalua cantitativ diferite clase de compuși fenolici (Negro C. ș.a., Phenolic compounds and antioxidant activity from red grape marc extracts. Bioresource Technology, 87, 41-4, 2003, Wang C.Z., ș.a., Polyphenol contents in grape-seed extracts correlate with antipica effects in cisplatin-treated rats, The Journal of Alternative and Complementary Medicine, voi. 11, nr. 6, pp. 1059-1065, 2005), de a extrage PA condensate cu alcool etilic 96% (Duca Ghe., Studies on the water solubilization processes of oenotannins and their phisico-chemical properties, Chemistry Journal of Moldova, voi. 1, nr. 1 p: 60-64, 2006), de a optimiza extracțiile compușilor fenolici cu etanol folosind diferite concentrații de la 0-100% (Chew K. K. ș.a., Effect of ethanol concentration, extraction time and extraction temperatura on the recovery of phenolic compounds and antioxidant capacity of Orthosiphon stamineus
RO 133090 Β1 extracts, International Food Research Journal, 18(4): 1427-1435,2011) sau dea verifica 1 eficiența solvenților organici (etanol, acetonă) în amestec cu apă v/v și 100% solvent (Vayupharp B. ș.a., Recovery of antioxidants from grape seeds and its application in 3 fried food, J. Food Process Technol 3:152, 2012). în ce privește extracția compușilor fenolici, obișnuit s-a utilizat metoda de extracție pe principiu Soxhlet. 5
Informațiile obținute relevă faptul că PA condensate cu grad de polimerizare înalt, pot fi extrase când se utilizează solvenți în concentrații mari. 7
Noutatea invenției constă într-un procedeu de extracție nou și o metodă de purificare nouă a preparatului brut de proantocianidine (PA) condensate polimerice obținut din 9 semințele de struguri delipidate aparținând soiului Fetească neagră.
Procedeul propus, conform invenției înlătură dezavantajele procedeelor cunoscute 11 prin aceea că, constă într-o serie de patru etape alcătuite din procese și operațiuni care conduc la obținerea preparatului brut de proantocianidine condensate polimerice astfel: 13
A. Extracția etapizată a compușilor fenolici cu alcool etilic 96% din deșeul de semințe de struguri delipidate.15
B. Concentrarea extractului polifenolic cumulat pînă la un volum și densitate determinată.17
C. Extracția lichid/lichid (L/L) a extractului polifenolic concentrat/solvent eter dietilic și obținerea precipitatului brut de PA condensate polimerice.19
Procedeul de extracție este urmat de o metodă de purificare a precipitatului brut de
PA condensate polimerice.21 în cele ce urmează este prezentat în detali procedeul și metoda propuse de inventatori pentru extracția și purificarea preparatului brut de prontocianidine.23
A. Extracția etapizată a compușilor fenolici din deșeul vegetal delipidat se efectuează în trei etape la temperatură de 30°C utilizând ca solvent alcoolul etilic 96%. Prima extracție25 s-a efectuat la un raport solid/lichid de 1/4, în condiții de agitare intermitentă timp de 24 h.
Extractul polifenolic 1 obținut a fost separat de reziduu vegetal. Au urmat încă două extracții 27 ale reziduului vegetal în care raportul solid/lichid a fost de 1/3 și 1/2, obținându-se astfel extractele polifenolice 2 și 3. Extractele 1, 2 și 3 au fost reunite în extractul cumulat, care a 29 fost depozitat timp de 6 zile la temperatura de 4°C.
Această metodă de abordare a proceselor extractive este mult mai eficientă din punct 31 de vedere economic comparativ cu metoda de extracție Soxhlet deoarece:
- permite prelucrarea unor cantități mari de material vegetal în procesul de extracție 33 a compușilor fenolici;
- previne saturarea solventului în compuși fenolici prin separare fazică a extractelor 35 obținute;
- reduce consumul de solvent în etapele II și III, deoarece în prima etapă la raportul 37 1/4 se extrage cea mai mare cantitate de compuși fenolici;
- consumul de energie pentru menținerea temperaturei de 30°C este redus, 39 comparativ cu metoda Soxhlet, în care procesul extractiv se realizează la 7O...8O°C;
- agitarea intermitentă pe parcursul proceselor extractive favorizează reducerea 41 timpului de extracție.
B. Extractul fenolic cumulat, din etapa A, se filtrează, iar filtratul este concentrat sub 43 vid la temperatura de 37°C în două trepte. în prima treaptă, concentrarea este efectuată pînă la un volum de 300-500 ml, urmată de centrifugare timp de 30 min la 8000 rpm pentru 45 eliminarea particolelor fine de material vegetal. în a doua treaptă concentrarea extractului s-a efectuat până la un volum determinat cu densitate de 1,0...1,1 g/ml. 47
RO 133090 Β1 în acesta etapă s-a recuperat solventul, alcoolul etilic, care poate fi reutilizatîn etapa A, pentru extracția compușilor fenolici din deșeul de semințe de struguri delipidat fără a afecta randamentul de extracție. De asemenea, reziduu vegetal rezultat din procesul de extracție poate fi utilizat ca îngrășământ organic natural, nefiind poluant, fapt demonstrat după administrarea în sol, prin analizele microbiologice și analiza enzimatică a dehidrogenazei active și potențiale în sol, utilizată ca enzimă de referință în testarea poluanților.
C. Extracția lichid/lichid (L/L) a extractului polifenolic concentrat, obținut în etapa B, cu eter dietilic conduce la obținerea unui preparat brut de PA condensate sub forma unui precipitat solid consistent, care se separă de faza lichidă după 20...30 min. Precipitatul brut de PA condensate format este adus la greutate constantă la temperatura de 40°C. După dizolvarea precipitatului brut de PA condensate în alcool etilic s-a determinat concentrația totală de polifenoli (CFT) exprimată în mg GAE/mg preparat prin metoda Folin-Ciocâlteu (Singleton și Rossi, Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic phosphotungstic acidreagents, Am. J. Enol. Vitic, voi. 16,144-158,1965) și activitatea antioxidantă (AA%/100 pg preparat) cu reactivul DPPH, conform metodei propuse de BrandWilliams ș.a., (1994), cu modificarea adusă de Miliauskas ș.a., Screening of radical scavenglng actlvlty of some medicinal and aromatic plants extracts, Food Chem. voi. 85, pp: 231-237, (2004). Din analizele efectuate s-a constatat că preparatul brut de PA condensate conține 0,676 mg GAE/mg preparat brut și are o activitate antioxidantă de 94,186%/100 pg. în această etapă, s-a recuperat solventul eter dietilic din faza lichidă.
Metoda de purificare propusă a preparatului brut de PA condensate nu necesită operații complexe deoarece se bazează pe proprietatea PA condensate de a fi insolubile în apă. în vederea utilizării precipitatului brut de PA condensate ca substrat pentru obținerea unui bioprodus natural cu posibilitate de comercializare în industria farmaceutică, cosmetică și alimentară este necesară etapa de purificare.
Prin solubilizarea în alcool etilic a preparatului brut de PA condensate și efectuarea analizei la UHPLC (metoda Castellari ș.a., Analysis of wine phenolics by highperformance liquid chromatography using a monolithic type column, Journal of Chromatography A., voi. 973, pp. 221-227, 2008), conform cromatogramei din fig. 1, s-au identificat pe lângă picul amplu al PA condensate polimerice, picuri ale acizilor fenolici (galic, protocatehic, p-hidroxibenzoic, m-hidroxibenzoic, siringic), picuri ale monomerilor de catechină și epicatechină și un număr de picuri neidentificate. De asemenea, este posibilă prezența și altor contaminanți, de exemplu, zaharuri și proteine, însă cantitativ sunt minimalizați datorită utilizării în procesele extractive a solventului concentrat alcoool etilic 96%, care nu favorizează antrenarea acestora din deșeul de semințe de struguri delipidat.
Protocolul de lucru al metodei de purificare, cuprinde următoarele operațiuni:
1. Precipitatul brut de PA condensate, obținut după 20...30 min, în etapa C a procedeului de extracție, se reia în 20...50 ml apă distilată cu pH 7,0 și se omogenizează pînă la dispariția aglomerărilor de precipitat.
2. Produsul omogenizat se dispersează în 1,950 I apă distilată cu pH 7,0. După 10 min se instalează procesul de depunere gravitațională a PA condensate, care continuă timp de 60 min, formându-se în final un depozit dens. Această operațiune se execută încă o dată.
3. Supernatantele s-au eliminat prin sifonare și au fost analizate la UHPLC, iar depozitul de PA condensate s-a centrifugat la 8000 rpm timp de 30 min. După eliminarea apei distilate din cuvele de centrifugare, precipitatul de PA condensate purificat a fost reluat în 20...40 ml alcool etilic 96%.
RO 133090 Β1
4. Următoarele operațiuni au fost eliminarea solventului la temperatura de 40°C, până 1 la greutate constantă și condiționarea PA condensate purificate în stare solidă în flacoane de sticlă brună la temperatura de -10°C. 3
Proprietatea de solubilizare în alcool etilic 96% a preparatului de PA condensate purificat nu a fost afectată în urma acestui tratament. De asemenea, valorile activității 5 antioxidante (AA%) și cantitatea totală de fenoli(CFT) a preparatului purificat au crescut comparativ cu valorile preparatului nepurificat de la 94,186% până la 94,819% și respectiv 7 de la 0,676 mg GAE/mg preparat brut la 0,898 mg GAE/mg preparat purificat.
Din analiza cromatogramelor la UHPLC (fig. 2, 3 și 4) a probelor de apă rezultate în 9 procesul de purificare a precipitatului brut de PA condensate, s-a constatat reducerea progresivă a amplitudiniii picurilor acizilor fenolici și a monomerilor catechină și epicatechină. 11 Preparatul de PA condensat purificat dizolvat în alcool metilic a fost analizat UHPLC. Conform fig. 5, în cromatogramă nu mai apar picurile acizilor fenolici și monomerilor, ci doar 13 un pic larg, amplu, spre finalul cromatogramei, care corespunde PA condensate polimerice cu o distribuție a indicelui de polimerizare larg comparabil cu metodele de excluziune sferică 15 de minim cinci ordine dimensionale (n indicele de polimerizare).
Gradul de puritate al produsului de PA a fost verificat și prin extracția selectivă cu 17 solvenți a compușilor monomerici și oligomerici (fracția F1 + F2), și a fracției polimerice (F3) prin separarea pe cartuș de tip C18 Sep - PAC (Sun B. ș.a., Separation of grape and wine 19 proanthocyanidins according to theirdegree of polymerization, J. Agric. Food Chem., 46, p. 1390-1396,1998). Eluția s-a efectuat cu apă distilată pH 7,0. După uscarea cartușului, 21 s-a continuat eluția cu acetat de etil pentru a separa PA oligomerice și monometrice și apoi eluția cu alcool etilic pentru separarea PA polimerice. Fracțiile obținute (F1 + F2) și (F3) au 23 fost evaporate, iar reziduurile uscate la 105°C au fost cântărite. Reziduul fracției (F1 + F2) a fost de 2,8 mg/100 mg preparat purificat, iar al fracției polimerice F3 de 95 mg/100 mg 25 preparat purificat. Aceaste rezultate relevă că prin metoda propusă de purificare a precipitatului brut de PA condensate s-a obținut un preparat de PA condensate polimerice 27 cu o puritate de 95%.
Se prezintă în continuare un exemplu de metodă de realizare a invenției. 29
Exemplu kg de deșeu de semințe de struguri delipidat a fost utilizat în extracția etapizată a 31 compușilor fenolici cu raporturile solid/lichid: 1/4,1/3 și 1/2, folosind ca solvent alcoolul etilic de 96%, la temperatura de 30°C, timp de 24 h în fiecare etapă. în total s-au consumat 9 I 33 solvent. Volumul cumulat al extractelor (1 + 2 + 3) a fost după filtrare de 7,650 I.
Extractul cumulat, conform etapelor prezentate în descrierea detaliată a proceselor 35 extractive a fost concentrat până la 500 ml (A), urmat de centrifugare timp de 20 min la 8000 rpm și concentrarea până la volumul de 225 ml (B). Din totalul de 7,650 I solvent s-au 37 recuperat 7,300 I.
Urmează apoi extracția lichid/lichid a extractului concentrat B cu 675 ml eter dietilic 39 pentru obținerea precipitatului brut de proantocianidine (PA) condensate și recuperarea din faza lichidă a eterului dietilic, respectiv 615 ml. 41
Precipitatul brut de PA condensate a fost purificat, conform metodei de purificare prezentată detaliat, iar în final s-a obținut 30,693 g preparat PA condensat purificat, solubil 43 în alcool etilic și insolubil în apă distilată. Inducerea proprietății de solubilizare în apă a PA condensate purificate s-a efectuat prin tratamentul fizico-chimic cu H2O2, în condiții optime 45 determinate privind cantitatea de agent oxidant/preparat PA condensate purificat,
RO 133090 Β1 temperatură și timp de contact al reactanților. Rezultatul tratamentului fizico-chimic a condus la obținerea unui bioprodus natural solubil în apă distilată cu activitate AA de 91,38%, 3 activitate antibacteriană față de bacteriile test Staphilococus aureus și Escherichia coli, precum și activitate antifungică față de Botritis cinerae.
în continuare, se prezintă cromatograma preparatului brut de PA condensate (fig. 1), cromatogramele probelor de apă rezultate în diversele faze ale procesului de purificare (fig.
2, 3 și 4) și cromatograma preparatului de PA condensate purificat (fig. 5).
Claims (2)
- RO 133090 Β1Revendicări 11. Procedeu de extracție a proantocianidelor condensate polimerice din deșeul de 3 semințe de struguri delipidat prin extracția compușilor fenolici cu alcool etilic, caracterizat prin aceea că, deșeul de semințe de struguri delipidat se supune unei extracții totale a 5 compușilor fenolici cu alcool etilic 96% în trei etape, la o temperatură de 30°C, cu rapoarte solid/lichid 1/4,1/3 și 1/2, timp de 24 h, extractele rezultate fiind cumulate și depozitate 6 zile 7 la o temperatură de 4°C, apoi sunt filtrate și filtratul rezultat este concentrat sub vid la o temperatură de 37°C în două trepte, în prima treaptă până la volumul de 300... 500 ml urmată 9 de o centrifugare timp de 30 min la 8000 rpm pentru eliminarea particulelor fine de material vegetal, iar în a doua etapă până la un volum de lichid care are o densitate de 1,0... 1,1 g/ml 11 și în final are loc o extracție lichid/lichid cu eter dietilic a proantocianidinelor condensate polimerice obținându-se un precipitat brut cu un conținut total de polifenoli de 0,676 mg 13 GAE/mg de precipitate și o activitate antioxidantă de 94,186%.
- 2. Metodă de purificare a precipitatului brut obținut prin procedeul descris în 15 revendicarea 1, caracterizată prin aceea că, precipitatul brut de proantocianidine condensate polimerice este preluat în apă distilată ca solvent, omogenizat până la dispariția 17 aglomerărilor de precipitat, după care are loc sedimentarea proantocianidinelor condensate polimerice, sifonarea apei distilate, preluarea din nou a precipitatului în apă distilată 19 respectându-se aceleași operațiuni, urmată de dispersarea precipitatului în apă distilată și centrifugarea acestuia timp de 30 min la 8000 rpm, dizolvarea acestuia în alcool etilic 96% 21 și în final eliminarea solventului la o temperatură de 40°C până la greutate constantă rezultând un produs cu o cantitate total de polifenoli de 0,898 mg GAE/mg preparat, o 23 activitate antioxidantă de 94,819% și un grad de puritate de 95%.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201700578A RO133090B1 (ro) | 2017-08-18 | 2017-08-18 | Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201700578A RO133090B1 (ro) | 2017-08-18 | 2017-08-18 | Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO133090A2 RO133090A2 (ro) | 2019-02-28 |
| RO133090B1 true RO133090B1 (ro) | 2024-02-28 |
Family
ID=65442936
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201700578A RO133090B1 (ro) | 2017-08-18 | 2017-08-18 | Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO133090B1 (ro) |
-
2017
- 2017-08-18 RO ROA201700578A patent/RO133090B1/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO133090A2 (ro) | 2019-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zagklis et al. | Purification of grape marc phenolic compounds through solvent extraction, membrane filtration and resin adsorption/desorption | |
| KR100473278B1 (ko) | 식물체로부터프로안토시아니딘을추출및단리시키는방법 | |
| AU2003295856B2 (en) | Efficient method for producing compositions enriched in total phenols | |
| CN101971901B (zh) | 一种高茶多酚速溶茶的制备方法 | |
| CN101125844B (zh) | 原花青素b2的提取方法 | |
| JP2007518812A (ja) | フェノール化合物に富む組成物及びその製造方法 | |
| RU2359666C2 (ru) | Способ выделения секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина из древесины (варианты) | |
| KR101393359B1 (ko) | 수지상에서 분획하여 얻을 수 있는 포도 씨 추출물 | |
| KR101603733B1 (ko) | 옥수수수염 유래 메이신을 포함하는 유효물질의 고수율 추출방법 | |
| CN103641717A (zh) | 一种从开花期向日葵花盘中提取分离绿原酸的方法 | |
| RU2593014C2 (ru) | Способ производства проантоцианидиновой полимерной композиции | |
| WO2006014499A1 (en) | Cinnamon extract enriched for polyphenols and methods of preparing same | |
| Arend et al. | Is nanofiltration an efficient technology to recover and stabilize phenolic compounds from guava (Psidium guajava) leaves extract? | |
| KR100817876B1 (ko) | 소나무 수피로부터 프로안토시아니딘의 분리방법 | |
| US20080306141A1 (en) | Method of Extraction of Catechin Type-A Proanthocyanidins | |
| RO133090B1 (ro) | Procedeu de extracţie a proantocianidinelor condensate polimerice din seminţe de struguri şi metodă de purificare a acestora pentru obţinerea unui bioprodus natural | |
| CN101445456A (zh) | 从一枝黄花中提取分离绿原酸的方法 | |
| KR101227156B1 (ko) | 구강 항균활성을 갖는 잔소리졸의 제조방법 | |
| DING | Studies on extraction and isolation of flavonoids from ginkgo leaves | |
| DAsCALiUC et al. | Chemical composition of golden root (Rhodiola rosea L.) rhizomes of Carpathian origin | |
| KR100646126B1 (ko) | 메밀허브로부터 루틴 추출물 및 루틴 분말을 제조하는 방법 | |
| Vandanjon et al. | Comparison of different membrane filtration systems for recovering active phenolic compounds from the European spread macroalga Sargassum muticum | |
| CN102584968A (zh) | 一种提取纯化植物大分子活性成分的方法 | |
| KR100741350B1 (ko) | 식물 유효성분의 추출정제방법 | |
| CN109232674B (zh) | 从南山茶中提取白杨素-8-C-β-D-葡萄糖苷的方法 |