KR100473278B1 - 식물체로부터프로안토시아니딘을추출및단리시키는방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 생물학적 재료로부터 프로안토시아니딘(proantocyanidine)을 추출 및 단리하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 식물체로부터 채취된 재료를 열수내에서 추출하는 단계; 분리시켜서 고형분과 액상물질을 얻는 단계;

상기 액상 물질을 농축액과 폐기물 스트림으로 분배시키는 단계; 농축액을 건조시켜서 고형 생성물을 수득하는 단계로 이루어진다. 상기 열수는 재순환시틸 수 있다. 잔류물에는 부산물이 초래되고, 탄닌이 풍부한 분획으로부터 탄닌을 회수할 수 있다. 가장 바람직한 생물학적 재료는 수령 15년의 피누스 라디아타(Pinus radiata) 중간부 내지 최상부에서 채취되는 수피이다.

Description

식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법

본 발명은 예컨대 수피(tree bark), 침엽수 잎새, 포도 씨, 표도 껍질, 대두 및 차 등과 같은 식물에서 채취한 재료로부터 프로안토시아니딘(proanto- cyanidine)을 추출하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 수피, 바람직하게는 예컨대 피누스 라디아타(Pinus radiata)와 같은 구과 식물, 즉 침엽수의 껍질로부터 프로안토시아니딘을 추출하는 방법에 관한 것이다. 그러나, 본 발명의 방법에는 상기 구과 식물 이외의 식물체들의 수피에서 채취한 식물체 재료도 사용될 수 있다.

본 명세서에서는 프로안토시아니딘을 대부분의 수피에 존재하고 에틸 아세테이트로 추출할 수 있는 수용성 화합물 군으로 간주하여 이하에서 설명하되, 수목만이 상기 화합물의 유일한 제공원인 것은 아니라는 점을 전제하고자 한다. 상기 화합물들은 주로 히드록실기를 가진 저분자량 페놀성 단량체, 2합체, 3합체, 올리고머 및 중합체이다.

본 명세서에서 사용된 "저분자량"은 분자량이 5000 달톤(D) 이하인 물질을 의미한다. 반대로, "고분자량"은 분자량이 5000 달톤(D) 이상인 물질을 의미한다.

열수(hot water) 추출방법

생물학적 재료로부터 프로안토시아니딘을 뜨거운 물로 추출하는 방법은 종래 기술에 광범위하게 사용되어 왔다. 이하에서는 이러한 기술의 예를 제시하고 그 문제점들을 지적할 것인 바, 본 발명의 방법은 상기 열수 추출방법만을 사용하는 것이 아님을 분명히 하고자 한다.

수피 이외의 재료 : 일본 특허출원 제 62101976호(공개번호 632677774A)에서는 사과, 포도 및 기타 과실류와 대두 등으로부터 프로안토시아니딘 용액을 수득할 수 있다는 내용을 개시하고 있다. 미국 특허 제 4981688호(Ayroles)에는 수성 케톤 용매를 사용하여 징코 빌로바(Ginko biloba)로부터 프로안토시아니딘을 추출하는 방법이 개시되어 있다. 미국 특허 제 5607965호(Kando)에는 포도 추출물로부터 프로안토시아니딘 추출물을 추출하는 방법이 개시되어 있다. 미국 특허 제 5532012호(Balentine)에는 차(tea)로부터 프로안토시아니딘 추출물을 추출하는 방법이 개시되어 있다.

수피(tree bark) 재료 : 논의 대상이 되는 가장 보편적인 수피는 피누스 라디아타(Pinus radiata)의 수피이다. 그러나, 다른 종류의 수피도 프로안토시아니딘의 추출에 사용할 수 있다. 예를 들어, 호주 특허 AU B 58998/80는 파두(Croton) 또는 칼로필룸(Calophyllum) 종을 출발물질로 사용하였고, 호주 특허 AU 26281/77(NZ Forest Products)에서는 아카시아 종을 출발물질로 사용하였다.

피누스 라디아타(Pinus radiata)의 수피(내피 또는 외피)로부터의 추출물은 상세하게 기록되어 있다. 예를 들어, Markham과 Porter는 New Zealand Journal of Science(1973, Vol.16,p.751)에서 에틸 아세테이트 용액으로 추출할 수 있는 페놀성 화합물을 상세하게 개시하였다. 상기 화합물에는 프로안토시아니딘, 고분자량으로 축합된 탄닌( tannin) 및 페놀성 산 화합물이 포함된다.

피누스 라디아타(Pinus radiata)의 열수 추출방법은 범위가 제안된 바 있다: Yazaki(Holzforschung 37(1983)87)는 수피로부터 열수 추출을 한 후, 동결건조하고, 10% 수산화 나트륨 수용액에 용해시키는 방법을 제안하였다. 그 다음으로는, 미세-여과(micro-filtration) 및 한외여과시킨다. 그러나, 균질한 추출물을 얻을 수 있는지는 의문의 여지가 있다.

상기 방법은, 호주 특허출원 제 57753/80호(Csiro)에 개시된 방법과 유사하다. Yazaki(Holzforschung 39(1985)79)는 용매 용액을 사용하여 유사한 공정의 결과를 개시하였는데, 보다 신뢰성 있는 결과를 얻을 수 있었다. 호주 특허 AU 28884/77(NZ Forest Products)에서도 추출물의 균일성 문제가 거론되었다. WO 91/01989(Chem Eng Contracts)에서는, 열수 추출공정에 관한 문제점들에 대하여 광범위한 논의가 이루어졌다. 호주 특허 AU 26281/77(NZ Forest Products)에서는 열수 추출방법이 개시되었으나, 추출 용액의 pH를 2단계로 조절해야 했다.

프로안토시아니딘의 추출공정과 결부된 다른 문제점은, 어떤 기술에서는 추출 공정이 완료되기 전에 프로안토시아니딘 생성물의 분해 반응이 시작된다는 점이다. 이 결과, pH를 조절하거나AU 26281/77(NZ Forest Products), 사용되는 용매를 2단계로 조절해야 한다(예컨대 Yazaki, 1985)는 요건에 직면하게 되었다.

요약하자면, 영수 추출방법에는 3가지 문제점이 있다. 첫째로, 열수만을 사용하였을 때에는 고순도의 수율이 상업적 목적상 공정의 실행가능성이 너무 낮다는 점이다. 이러한 낮은 수율은 일본 특허출원 제 62101976호(공개번호 제 63267774A)에 개시된 수율에 대해서도 지적된 바 있다. 상기 특허에서는 프로안토시아니딘-함유 용액(0.5% v/v 알코올내)을 한외여과 및/또는 역삼투압 방식으로 처리하여 고순도의 용액을 수득할 수 있다고 설명하였다. 그러나, 실시예에 제공된 수율은 0.72%(w/w) 수준의 프로안토시아니딘이었다.

제 2 및 제 3의 문제점에 있어서, 균질성의 문제가 빈번히 제기된다는 점이다. 이는, 추출공정용 재료의 크기나 유형의 선택, 또는 프로안토시아니딘이 공정중에 존재하는 화학물질과 반응하여 분해되거나 순도가 낮은 생성물로 변성된 결과이다.

본 발명의 목적은, 순수한 열수 추출방식의 종래 방법이 가지는 문제점을 극복하고 상업적으로 가능성이 있는 수율로 고순도의 프로안토시아니딘을 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 상기 본 발명의 목적에서는 물 이외의 용매의 사용을 피하고, pH 조절 및 염장(salt down)용으로 예컨대 수산화 나트륨 및 염화나트륨과 같은 기타 화학 첨가제를 사용하지 않는 것을 기초로 한다.

발명의 요약

본 발명은 식물체로부터 채취된 재료로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리하는 다음 단계들로 이루어지는 방법을 제공한다:

식물체로부터 채취된 재료를 15mm 이하 크기의 입자들로 파쇄하는 단계;

반응용기내의, 산소를 완전히 제거한 열수내에서 상기 재료를 1분 내지 20시간동안 지속적으로 추출하는 단계;

분리시켜서 잔류물과 액상을 얻는 단계;

상기 액상 물질을 한외여과 방식, 역삼투압 방식 및 상기 2가지 방식의 조합방식으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 농축액과 폐기물 스트림으로 분배시키는 단계;

상기 농축액을 건조시켜서 고형 프로안토시아니딘 생성물을 수득하는 단계; 및

상기 폐기물 스트림을 물 및 탄닌이 풍부한 분획으로 분리시키고, 상기 탄닌이 풍부한 분획으로부터 한외여과에 의해 탄닌을 회수하는 단계.

상기 식물체 재료로서는 수피가 바람직하고, 특히 피누스 라디아타(Pinus radiata)가 더욱 바람직하다.

상기 수피로서는 수령 8 내지 20년, 바람직하게는 수령 15년 수목의 상부(최상부 또는 중간부)에서 채취한 것이 더욱 바람직하다. 상기 재료는 내피 또는 외피의 혼합물이 바람직하다. 상기 재료는 장대(pole) 또는 기둥(post) 등의 용도로 수목의 중간 이하 부분을 사용하기 위해 벌목된 약간 유년생인 수목들로 이루어진 숲으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 상기 용도에 있어서, 상기 수목들의 중간부 이상의 상부는 달리 상업적 가치를 가지지 못하지만, 기존의 상업적 박피 작업으로 수피를 용이하게 회수할 수 있다. 상기 수피는 싱싱하거나 건조된 것일 수 있다.

사용되는 건조방법으로서는 진공건조, 스프레이 건조 또는 동결건조 방법이 바람직하다. 휘발성 물질과 탄닌이 제거된 수피 처리공정 이후의 잔류물은 공정의 가용 부산물이다.

상기 열수는 비등 과정을 거쳐서 탈산소화된 것이 바람직하다. 상기 추출단계에 사용된 물은 재순환시키는 것이 바람직하다.

이하에서는 피누스 라디아타(Pinus radiata)와 관련하여 첨부된 도면을 참조로 본 발명의 바람직한 실시예에 관하여 설명을 하기로 한다.

도 1은 본 발명의 배취식 공정을 도식적으로 나타낸 것이고,

도 2는 1개 수목의 상이한 부분들로부터 채취된 수피에 대한 최종 생성물의 항산화 활성을 나타내는 그래프이다.

도 1에 있어서, 스크리닝된 수피를 공지의 수단(예를 들어, 햄머 밀, 나이프 밀 또는 멀쳐(mulcher))으로 가공하여 수피(1)의 표면적을 증가시킨다. 스크리닝은 돌, 돌조각 또는 기타 이물질들을 제거하기 위한 공정이다. 수피는 싱싱하거나 습윤한 상태 또는 건조한 상태일 수도 있고, 내피(코르크 형성층(phellogen) 및 약간의 코르크 피층(phelloderm)이 있는 코르크)나 외피(분쇄된 표피세포)또는 이것들의 조합일 수도 있다. 수피(1)은 스크리닝 과정을 거친 수피로부터 수득되는 것이 바람직하다. 그러나, 습윤한 수피의 크기는 초기에 크기가 균일한 것이 바람직하다. 얻어진 수피(1)의 입자는 크기가 15mm인 것이 바람직하고, 이보다 작은 것이 더욱 바람직하다.

수피(1)의 생성 스트림을 반응 용기(3)내의 미리 끓인 물(2)에 넣는다. 추출 공정은 교반공정 유무에 무관하게 배취식 공정으로 이루어지는 것이 바람직하다. 다른 방법으로서는, 일련의 연속식 교반 반응기 또는 플러그 흐름 연속식 반응기를 사용하여 열수 추출공정을 수행할 수도 있다. 배취식 공정의 장점은 일단 열수(2)로부터 고형물이 제거되고나면 각 단계들간의 시간 간격을 원하는대로 조절할 수 있는 점이다.

일련의 연속 교반식 반응기들 또는 플러그 흐름 연속식 반응기들내에서 연속 추출공정을 수행하는 경우에는, 실제로, 추출 시간을 1 내지 10분으로 줄일 수 있다는 것이 밝혀졌다.

도 1에 있어서, 물(2) 대 수피(1)의 모든 비율이 사용될 수 있다. 바람직한 비율은 물 7 L : 수피 1 Kg 이다. 배취식 조작에 있어서는, 혼합물을 반응용기(3)내에서 20분 내지 20 시간, 바람직하게는 30분간, 대기압하에서, 60 내지 100℃의 온도로 가열시킨다. 다른 방법에 있어서는, 반응을 승압조건에서 수행하는 경우에, 반응 용기(3)내 온도는 100 내지 125℃의 온도이다.

추출 시간은 다양하다. 그러나, 실제로는 30분의 반응 시간에서 최적의 수율이 얻어지는 것으로 밝혀졌다.

용기(3)는 내장된 코일이나 외부 자켓에 의해 스팀으로 간접 가열될 수 있다. 생증기(live steam)를 용기내로 분사하여 내용물을 직접 가열하는 방법도 사용할 수 있다. 압력하에 125℃ 이하의 온도에서 열수 추출단계를 수행할 수도 있다.

생성된 액상 스트림(4)은 챔버(5)에서 물리적 분리공정에 의해 분리되어 수피 잔류물(6)과 여액(9)을 생성하게 된다. 이 공정은 원심분리; 분액(decanting); 또는 이 방법들의 조합에 의해서 수행될 수 있다.

수피 잔류물(6)을 더욱 가압(제 7 단계)하여 초과량의 액상 물질을 제거하여 이것을 챔버(5)로부터 나온 여액(9)에 회귀시킨다. 그 다음으로, 가압된 잔류물(8)은 공지의 방법(도시되지 않음; 예를 들어, 오븐내에서 건조시키고/또는 가압하여 볼(bale) 또는 펠릿을 형성시킴)으로 더욱 가공하여 부산물(예를 들어 식물용 성장 배지 또는 연료)로 사용한다.

여액(9)은 열교환기(10)내에서 25 내지 30℃의 온도로 냉각시킨다. 이 단계에서 사용되는 물은 반응 용기(3)에 공급된 물(2)일 수 있다. 여액(9)은 크기가 1㎛ 이상의 완전 분산된 고형체를 제거하는 미세공 필터(11)를 통과시킴으로써 더 여과시킬 수 있다. 분리된 고형 물질은 공정 처리된 잔류물(8)과 합쳐져서 전술한대로 가공할 수 있다.

그 다음으로, 여액(9)은 다음의 3가지 단계중 1개 단계를 선택적으로 거칠 수 있다: 한외여과 단계(12); 역삼투압 단계(13); 및 상기 단계들의 조합. 도 1은 상기 3번째 단계를 도시한다. 상기 공정단계의 결과, 여액(9)에 용해된 성분들은 분자의 크기와 형태에 의해 별도의 스트림(14,15,17)들로 분획화된다.

역삼투압 장치와 한외여과 장치(13,12)에는 스트림(15,17)내의 분자량 크기의 예정된 컷-오프에 따라 미세공의 크기가 정해진 여과막이 장착되어 있다. 예정된 분자 크기는 1000 내지 5000 달톤의 범위 이애이지만 원하는 바에 따라 더 가변적일 수도 있다.

역삼투압 장치와 한외여과 장치(13,12)의 막들은 플럭스 속도를 증가시키기 위해 예컨대 지속적 흐름이나 간헐식 흐름과 같은 상이한 방식으로 작동될 수 있다. 분리 단계를 거치는 여과물의 온도는 막의 작동상태에 따라 실온으로부터 100℃까지의 범위 이내일 수 있다. 작동 압력은 막의 요건에 따라 플럭스 속도를 조절할 수 있도록 변경될 수 있다.

원하는 프로안토시아니딘은 유사한 크기로 용해된 화합물들과 함께 농축액(14)을 통과하게 된다. 프로안토시아니딘은 용기(16)내에서 여러 방법들중 한가지 방법에 의해 물을 제거함으로써 농축액(14)으로부터 회수된다. 상기 방법은 증발법; 결정화법; 동결건조법; 진공건조법; 및 상기 방법들의 조합으로부터 선택될 수 있다. 소규모 제조공정에서는, 동결건조 방법이 최적의 방법인 것으로 밝혀졌다. 그러나, 대규모 공정에서는, 역삼투압법 후에 건조를 시키는 회수방법이 바람직하다. 2-5(최소)의 농축인자를 가지는 막이 가장 바람직하다. 제조된 생성물은 원하는 프로안토시아니딘을 함유하는 갈색 결정성 플레이크이다.

다음의 화합물들은 농축액(14)에서 수집되며, 플라보노이드 범위의 분자량 또는 다른 분자량 범위의 페놀성 화합물들을 포함하는 것으로 밝혀졌다: (+)-카테친, (+)-갈로카테친, (+)-디히드로퀴르세틴(탁시폴린), 퀴르세틴, 미리세틴, 3,5-디히드록시스틸벤(피노실빈), 3,5,3,'4'-테트라히드록시스틸벤(아스트린게닌), 3,5,3',4'-테트라히드록시스틸벤-4'-β-글루코시드(아스트린게닌-4'-β-글루코시드), 및 프로시아니딘 B1, B3, B6 및 C2.

결과의 생성물은 상업적 구입이 가능한 순수한 소나무 수피 추출액 샘플과 동일한 항산화 활성(자유 라디칼의 제거)을 가지는 것으로 밝혀졌다. 항산화 활성을 밝히는데 사용된 검정법은 하기 표 1에 제시하였다.

결과의 생성물에는 일부의 비페놀성 화합물이 잔류하는 것으로 밝혀졌다. 이는 필요에 따라 생성물을 물리적 방법으로 더욱 정제시킴으로써 제거된다.

스트림(15)에는 천연 탄닌을 포함하는 고분자량 화합물이 포함되어 있다. 필요에 따라, 상기 스트림(15)은 후속 공정 및 세척 단계를 거쳐서 수분을 제거하고 탄닌을 고형분 형태로 회수하게 된다(도시되지 않음). 결과의 물(스트림(17)로 나오는)도 또한 후속 정제(필요에 따라)시켜서 안전하게 배출시키거나 반응용기(3)에 재사용하게 된다.

실제로, 오븐에서 건조시킨 수피의 양을 기초로 수득률 0.5 내지 10.0 중량%의 프로안토시아니딘이 얻어졌다(수피의 질 및 수령에 따라). 가장 보편적인 수율은 수령이 15년인 피누스 라디아타(Pinus radiata)의 수피를 사용하여 최상부와 중간 부분을 사용하였을 때 6.5 내지 9.6 중량%인 것으로 밝혀졌다.

도 2에 있어서, 그래프는, 수피를 피누스 라디아타(Pinus radiata)의 상이한 부분으로부터 채취하였을 경우에 대하여 결과생성물의 항산화 활성의 결과를 항산화 억제활성의 백분율로 나타내었다. 얻어진 도면은 9시간의 추출 시간으로부터 얻어졌다. 수목들은 수령이 약 15년이었고, 뉴질랜드 노오쓰 아일랜드 벌목장에서 채취된 것들이었다.

하기의 시험 방법으로 검정을 실행하였다. 각각의 검정에서, 반응 혼합물에는 각각 1 ml/L씩의 수피 재료를 첨가하였다. 실험 시료가 나타내는 지질의 산화 속도의 감소는 항산화 억제제를 전혀 첨가하지 않은 대조 혼합물에 대한 백분율로 나타내었다. 100% 억제는 상기 농도의 항산화제가 연쇄반응을 완전하게 중지시킬 수 있음을 지시한다.

억제제는 결과 생성물을 50% 메탄올과 함께 1 mg/L의 농도로 용해시키고나서 50㎍/㎖로 희석시켜서 제조되며, 이것 20㎕를 1㎖의 과산화 혼합물에 첨가하여 최종 농도가 1㎍/㎖로 되게 하였다.

그러므로, 상기 공정에서, 수목의 모든 부분으로부터 채취된 수피는 용인될 만한 표준의 항산화제를 제조할 수 있고, 이는 수목의 최상부와 중간부로부터 채취된 수피도 동일한 장점을 가지고 있음을 시사하는 것이다. 상기 수피는 상업적으로 구입이 더욱 용이하기 때문에 본 발명의 방법은 상기와 같은 국한된 수피만을 사용해야 하는 제한요인을 배제할 수 있는 것이다.

실험실시예

1. 과산화물 라디칼을 제거하는 항산화제 검정법

본 검정방법은 본 발명의 생성물이 자유 라디칼을 발생시키는 AAPH 화합물에 의해서 리놀레산의 산화작용을 억제하는 능력을 측정하려는 것이다(Jouirnal of Organic Chemistry(1993),Vol.58, 3521-32).

1 mg/l의 결과 생성물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 상업적으로 구입한 순수한 소나무 수피 추출물 샘플을 사용하여 동일한 1가지 비교실험을 수행하였다. 지질의 산화 속도의 감소를, 산화억제제가 전혀 첨가되지 않은 대조 혼합물에 대한 백분율로 나타내었다. 100%의 억제작용은 전술한 농도의 항산화제가 상기 연쇄반응을 완전히 중지시킬 수 있었은을 나타낸다.

결과 생성물 : 시험 샘플에 따라 70-79%의 억제율

샘플⁽¹⁾ : 70% 억제율

⁽¹⁾ 입수원 : 미국 M.W.International Ltd.로부터 순수 프로안토시아니딘으로서 시판중인 순수 소나무 수피 추출물을 사용하였다, 실험된 결과생성물 샘플의 제공원은 8 내지 20년 수령의 뉴질랜드 노오쓰 아일랜드 산 프피누스 라디아타(Pinus radiata)였다.

(2) 독성 시험

결과생성물의 독성시험(급성 및 만성)을 마우스에 대하여 수행하였다.

-급성 : 15마리의 마우스 표준 종을 구입하여 3개 군으로 나누고 상기 군들중 1개 군을 대조군으로 정했다. 제 2군에는 사람의 체중을 기준으로 사람에 대한 투여량으로 조정된 양의 생성물을 24시간 투여하였다. 제 3군에는 제 2군에 투여된 것과 동일한 투여량 수준의 생성물을 24시간동안 100회 투여하였다.

결과:제 2군 및 제 3군에서는 부작용 및 역효과가 전혀 관찰되지 않았다.

-만성 : 상기 급성 실험과 동일한 수준의 투여량을 동일하게 조성된 마우스 군에 대하여 3개월간 지속적으로 제공하였다.

결과:제 3군에서는 사회활동 습관에 있어서 현저한 변화가 관찰되었다. 상기 군은 덜 활동적이었지만 대조군에 비해서 보다 사회적이고 보다 호기심이 강한 면모를 나타내었다. 체중의 증가가 관찰되었고, 대사기능에 대해서도 양호한 효과기 있는 것으로 가설적 결론에 도달하게 되었다. 제 2군이나 제 3군에 대해서는 아무런 부작용이나 역효과가 관찰되지 않았다. 제 3군에서 만성적 투여를 중단했을 때, 평균 활동 수준이 감소하고 체중이 감소하였으나 식품의 섭식량은 변화하지 않았다.

상기 실험 결과에서는 마우스에 대해서 본 발명의 결과 생성물의 독성(급성 또는 만성)이 없다는 것을 알 수 있다.

Claims (12)

1. 식물체로부터 채취된 재료를 15 mm 이하 크기의 입자들로 파쇄하는 단계;

   공급수를 100℃로 가열하여 산소를 제거한 열수를 제공하는 단계;

   상기 재료를 상기 가열에 의해 산소를 제거한 열수에 첨가하는 단계;

   추출 용매로서 물만을 포함하는 상기 가열에 의해 산소를 제거한 열수를 담은 반응 용기에서 상기 재료를 대기압하 60℃ 내지 100℃의 온도에서 1분 내지 20시간동안 지속적으로 추출하는 단계;

   상기 반응용기에서 상기 재료를 분리시켜서 잔류물과 액상 물질을 얻는 단계;

   상기 액상 물질을 한외여과 방식, 역삼투압 방식 및 상기 2가지 방식의 조합방식으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 농축액과 폐기물 스트림으로 분배시키는 단계; 및

   상기 농축액을 동결 건조법 및 진공 건조법 중 하나를 이용하여 건조시켜서, (+)-카테친, (+)-갈로카테친, (+)-디히드로퀴르세틴(탁시폴린), 퀴르세틴, 미리세틴, 3,5-디히드록시스틸벤, 3,5,3',4'-테트라히드록시스틸벤, 3,5,3',4'-테트라히드록시스틸벤-4'-β-글루코시드, 및 프로시아니딘 B1, B3, B6 및 C2를 포함하는 고형 프로안토시아니딘 생성물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 열수의 온도가 대기압 이상에서 100℃ 내지 125℃인 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
3. 제 1 항에 있어서, 상기 반응기가 내장된 가열용 코일로부터의 직접가열방식; 외부 자켓으로부터의 간접가열 방식; 용기내의 생증기 분사방식; 및 상기 방식들의 조합으로부터 선택된 방법에 의해 가열되는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 추출방법이 배취식 공정인 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
5. 제 1 항에 있어서, 1개 이상의 일련적 연속식 교반 반응기내에서 1~10분 동안 추출공정을 수행하는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
6. 제 1 항에 있어서, 1개 이상의 일련적 연속식 플러그 흐름 반응기내에서 1~10분 동안 추출공정을 수행하는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
7. 제 1 항에 있어서, 상기 생물학적 재료가 피누스 라디아타(Pinus radiata) 수피의 내피, 외피 및 이들의 조합물이고, 상기 내피는 코르크 형성층 및 일부의 코르크 피층을 포함하며, 상기 외피는 파쇄된 표피세포인 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
8. 제 7 항에 있어서, 상기 수피가 수령 8년 내지 20년 범위의 수목으로부터 채취되는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
9. 제 8 항에 있어서, 상기 수피가 수령 15년의 수목으로부터 채취되는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
10. 제 7 항에 있어서, 상기 수피가 수목의 중간부 및 상부에서 채취되는 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.
11. 제 1 항에 따른 방법으로 제조된 프로안토시아니딘을 함유하는 고형 생성물.
12. 제 3 항에 있어서, 상기 추출방법이 배취(batch)식 공정인 것을 특징으로 하는, 식물체로부터 프로안토시아니딘을 추출 및 단리시키는 방법.