CN109464491B - 诃子组合物及其在制备预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了诃子组合物及其在制备用于预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品中的应用，还提供了诃子组合物的抑菌作用，能够有效抑制金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌中的一种或几种细菌的生长。
Description
技术领域
本发明涉及药物组合物领域，特别涉及以诃子为主的组合物及组合物的用途。
背景技术
诃子，为使君子科植物诃子(Terminalia chebula Retz.)或绒毛诃子(Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.)的干燥成熟果实，是常见的中药材，为长圆形或卵圆形，长2～4cm，直径2～2.5cm。表面黄棕色或暗棕色，略具光泽，有5～6条纵棱线和不规则的皱纹，基部有圆形果梗痕。质坚实。果肉厚0.2～0.4cm，黄棕色或黄褐色。果核长1.5～2.5cm，直径1～1.5cm，浅黄色，粗糙，坚硬。种子狭长纺锤形，长约1cm，直径0.2～0.4cm，种皮黄棕色，子叶为白色，相互重叠卷旋。气微，味酸涩后甜，入肺、胃、大肠经。具有涩肠止泻，敛肺止咳，降火利咽之功效。现通过现代检测手段，检测出诃子果实含鞣质23.60～37.36％，其成分为诃子酸、诃黎勒酸、1，3，6-三没食子酰葡萄糖及1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、鞣云实精、原诃子酸、葡萄糖没食子鞣甙、并没食子酸及没食子酸等。又含莽草酸、去氢莽草酸、奎宁酸、阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖和氨基酸。还含番泻甙A、诃子素、鞣酸酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶等。
牲畜乳房炎，又称乳痈、奶黄、奶肿，是由于瘀血毒气凝结于乳房而成为痈肿，乳房出现硬、肿、热、痛，病牛拒绝幼畜吃奶或人工挤奶的一种疾病，多见于产后哺乳期的母牛，特别是泌乳期的奶牛更为多见。据统计，乳房炎占奶牛总发病的21％～23％。因其造成奶量下降，病乳废弃，甚至由于乳区化脓、坏疽、萎缩以至永久失去泌乳能力，导致奶牛淘汰，给奶牛业带来了很大损失。每年因乳房炎而被淘汰的奶牛占总淘汰率的9％～10％。
在牲畜养殖的过程中，牲畜腹泻是较为常见的一个问题，腹泻的发病原因可为感染性或非感染性因素两种，而感染性因素发病的多为细菌感染导致的腹泻。受到细菌感染，牲畜会产生腹泻的症状，严重腹泻会影响营养物质吸收，同时腹泻严重会导致水和电解质(钾钠氯等离子)紊乱，水和电解质的丢失会严重影响细胞正常功能，如低钾可引起心律失常，甚至心跳骤停，血钠低可引起脑水肿等，甚至导致死亡。可见，如果产生腹泻症状而不能即使制止，会严重影响猪的正常生长或生存，如果还导致了大量猪死亡，造成养殖业经济损失。
现有技术中虽有用于乳房炎和腹泻的药物报到，但通常药物味数较多，并且仅针对单独的乳房炎或腹泻。而实际中通常发病原因复杂，治病菌有多种，症状表现常常并不单一。若能研究一种能同时有效预防或治疗乳房炎和腹泻的产品，将会为畜牧养殖业的经济效益带来一定保障。
发明内容
在生产实践中发现，牲畜乳房炎主要受以下几种细菌的影响，分别是：金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌混合感染的影响；腹泻主要受以下几种细菌的影响，分别是：猪霍乱沙门氏菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这两种细菌混合的影响。余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿中一种或几种与诃子组成的组合物对无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌的混合菌，和，猪霍乱沙门氏菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这两种细菌的混合菌的抑菌作用未见报道。
本发明的目的在于提供以诃子为主的组合物，利用组合物对导致牲畜乳房炎和腹泻的相关细菌的抑制(或杀灭)作用，将其用于制备用于预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品或抑菌产品。
本发明提供一种组合物，其原料包括以下重量份计的组分：余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿中的一种1～2份，与诃子1～3份。
进一步地，其原料包括余甘子1份，与诃子1.2～3份。
进一步地，其原料包括余甘子1份，与诃子1.4份，或，包括余甘子1份，与诃子2.8份。
进一步地，其原料包括螃蟹甲1.4份，与诃子1～3份。
进一步地，其原料包括螃蟹甲1.4份，与诃子1份组成，或，由螃蟹甲1.4份与诃子3份。
本发明还提供了另一种组合物，其原料包括以下重量份计的组分：螃蟹甲、多刺绿绒蒿中的一种1.6～2.2份，余甘子1份，与诃子1～3份。
进一步地，其原料包括多刺绿绒蒿1.9份，余甘子1份，与诃子2.8份，或，包括螃蟹甲2份，余甘子1份，与诃子1.4份。
本发明提供了上述组合物的制备方法，它包括如下内容：
(1)按重量份取原料药；
(2)取余甘子、诃子的水提物，螃蟹甲、多刺绿绒蒿的醇提物，制备产品即得。
本发明还提供了一种组合物，包括以下重量份计的组分：余甘子提取物、螃蟹甲提取物、多刺绿绒蒿提取物中的一种1份，与诃子提取物1～4份。
进一步地，包括余甘子提取物1份，与诃子提取物2～4份；或，包括螃蟹甲1份，与诃子1～3份。
进一步地，包括余甘子提取物1份，与诃子提取物2份，或，包括余甘子提取物1份，与诃子提取物4份。
进一步地，包括螃蟹甲提取物1份，与诃子提取物1份，或，包括螃蟹甲提取物1份与诃子提取物3份。
本发明还提供了一种组合物，包括以下重量份计的组分：螃蟹甲提取物、多刺绿绒蒿提取物中的一种1.5～2.2份，余甘子提取物1份，与诃子提取物2～4份。
进一步地，包括多刺绿绒蒿提取物1.7份，余甘子提取物1份，与诃子提取物4份，或，包括螃蟹甲提取物2份，余甘子提取物1份，与诃子提取物2份。
本发明还提供了上述组合物在制备预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品中的用途。
进一步地，所述腹泻为细菌性腹泻；进一步地，所述腹泻的致病菌选自猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌中的一种或多种组合；
所述乳房炎为细菌性乳房炎；所述细菌性乳房炎的致病菌选自金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、大肠埃希杆菌中的一种或多种组合。
大肠埃希杆菌包括肠毒性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌中的一种或几种。
本发明还提供了上述组合物的抑菌用途，所抑制细菌包括猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、肠毒沙门氏菌、溶血性葡萄球菌、粪肠球菌、丹毒杆菌中的一种或多种组合。
本发明中所述原料诃子、余甘子、螃蟹甲和多刺绿绒蒿的提取物，包括水提取物和有机溶剂提取物。
有机溶剂提取物是指采用有机溶剂对原料的活性成分进行溶解提取，浓缩而形成的提取物；水提取物是指采用水做溶剂对原料的活性成分进行溶解提取，浓缩而形成的提取物。所述有机溶剂提取物包括但不限于甲醇提取物、乙醇提取物、正丁醇提取物、乙醚提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、三氯甲烷提取物；所述水提取物包括但不限于中性水提取物、酸性水提取物、碱性水提取物、盐溶液提取物。
在本发明的实施例中，参试药物均是原料的提取物。其中余甘子、诃子为水提物，螃蟹甲、多刺绿绒蒿为醇提物。
本发明的有益效果是：本发明提供了诃子或其提取物的系列组合物在制备用于预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品中的应用，还提供了诃子组合物的抑菌作用，能够有效抑制金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌中的一种或几种细菌的生长，并通过实验证明上述用途的有效性，为牲畜腹泻和乳房炎的治疗开发了新的药物途径，拓展了诃子及其组合物的抑菌应用范围。
具体实施方式
下面通过具体实施例和具体实验对本发明所述应用做进一步说明，对所述诃子或其提取物的系列组合物在制备用于预防和/或治疗乳房炎的产品中和抑菌作用进行验证和说明。
实验材料：柯子、余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿购自西南中草药批发市场；参试细菌金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌(ETEC)购自中国兽医监察所。
一、诃子提取物的制备
称取100g诃子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得诃子水提取物备用。
称取100g诃子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得诃子乙醇提取物备用。
二、余甘子提取物的制备
称取100g余甘子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得余甘子水提取物。
称取100g余甘子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得余甘子乙醇提取物备用。
三、螃蟹甲提取物的制备
称取100g螃蟹甲粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得螃蟹甲水提取物。
称取100g螃蟹甲粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得螃蟹甲乙醇提取物备用。
四、多刺绿绒蒿提取物的制备
称取100g多刺绿绒蒿粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得多刺绿绒蒿水提取物。
称取100g多刺绿绒蒿粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得多刺绿绒蒿乙醇提取物备用。
不同提取物的收率见下表：
| 中药 | 提取方式 | 收率 | 备注 |
| 诃子 | 水提 | 26.15％ | 水溶 |
| 余甘子 | 水提 | 16.50％ | 水溶 |
| 多刺绿绒蒿 | 乙醇提 | 14.88％ | 乙醇溶 |
| 螃蟹甲 | 乙醇提 | 16.22％ | 乙醇溶 |
上述收率可在5％范围内正常波动。
实施例1
一种组合物：由余甘子1份和诃子1.4份组成。
实施例2
一种组合物：由余甘子1份和诃子2.8份组成。
实施例3
一种组合物：由螃蟹甲1.4份和诃子1份组成。
实施例4
一种组合物：由螃蟹甲1.4份和诃子3份组成。
实施例5
一种组合物：由多刺绿绒蒿1.9份，余甘子1份与诃子2.8份组成。
实施例6
一种组合物：由螃蟹甲2份，余甘子1份与诃子1.4份组成。
实施例7
一种组合物：由余甘子水提取物1份与诃子水提取物2份组成。
实施例8
一种组合物：由余甘子水提取物1份与诃子水提取物4份组成。
实施例9
一种组合物：由螃蟹甲乙醇提取物1份与诃子水提取物1份组成。
实施例10
一种组合物：由螃蟹甲乙醇提取物1份与诃子水提取物3份组成。
实施例11
一种组合物：由多刺绿绒蒿乙醇提取物1.7份，余甘子水提取物1份与诃子水提取物4份组成。
实施例12
一种组合物：由螃蟹甲乙醇提取物2份，余甘子水提取物1份与诃子水提取物2份组成。
实施例13最低抑菌浓度(MIC)的测定
1.药物贮存液制备
提取药物根据得率计算各种提取物的浓度，并在4℃保存备用。
2.培养基
金黄色葡萄球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌使用水解酪蛋白(MH)肉汤，pH＝7.2～7.4。无乳链球菌使用含2％～5％溶解马血的MH肉汤。
3.接种物的制备
用接种环挑活化的形态相似待检菌落3～5个，接种于4～5ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中，35℃孵育2～6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1～2×108CFU/ml。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。在15min内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
4.稀释抗菌药物的制备及菌液接种
取无菌试管(13×100mm)9支，排成一排，除第1管加入1.5ml MH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液0.5ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第8管，并从第8管中吸取1ml弃去，第9管为不含药物的生长对照。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。
5.孵育
将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育24h。
6.最低抑菌浓度(MIC)的测定
在读取和报告所测试菌株的最低抑菌浓度前，检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还要检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的最低抑菌浓度值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的最低抑菌浓度。实验结果见表1和表2。
在生产实践中，牲畜乳房炎主要受以下几种细菌的影响，分别是：金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌混合感染的影响。导致腹泻主要受以下几种细菌的影响，分别是：猪霍乱沙门氏菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这两种细菌混合感染的影响。因此，发明人还混合了这几种细菌通过G组混合菌和H组混合菌来进行最低抑菌浓度试验。
表格中15-1表示为诃子水提取物，5-1表示为余甘子水提取物，4-2表示为多刺绿绒蒿乙醇提取物，6-2表示为螃蟹甲乙醇提取物，表格中的提取物质量比表示各参试药物中对应药物的提取物质量浓度比(也即组合物中各组分质量比)，原料药质量比为根据提取物的收率而算出的所需原料药的质量比。表1为各参试药物编号浓度对应表，表2为各参试药物最低抑菌浓度得分表。表2中各参试药物对于不同细菌的最低抑菌浓度得分数为表1中药物浓度对应的编号，如：表2中诃子水提取物与螃蟹甲乙醇提取物的组合物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度得分为4，则表示其对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为表1中编号4对应的浓度3.0322/2.9469mg/mL(诃子水提取物浓度为3.0322mg/mL，螃蟹甲乙醇提取物浓度为2.9469mg/mL)，以此类推。表2中G表示金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌的混合菌，H表示猪霍乱沙门氏菌和肠毒性大肠埃希杆菌的混合菌，乳房炎一栏得分为相应药物对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、肠毒性大肠埃希杆菌以及混合菌G得分的加和，腹泻一栏得分为相应药物对猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌以及混合菌H得分的加和。得分越高，表示所需参试药物的最低抑菌浓度越低，反之则反。
表1.各参试药物编号浓度对应表
表2.各参试药物最低抑菌浓度得分表
由上述结果可知，诃子水提取物的不同组合物对上述细菌均有很好的抑菌效果。诃子水提取物与余甘子水提取物的双组分组合物的得分均较另外两种双组分的组合物得分高，说明其抑菌作用最强，表现为最低抑菌浓度较低，只需较低浓度的药物即可有效抑菌。而诃子水提取物与多刺绿绒蒿乙醇提取物的组合物以及诃子水提取物与螃蟹甲乙醇提取物的组合物得分相对低一些，说明要有效抑菌该两组组合物药物需要相对较高的浓度。对于三组分的药物组合物，其得分均较高，说明本发明三组分的组合物对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌及其混合菌具有很好的抑菌效果。
实施例14各组分药物水提物和醇提物的抑菌效果比较。
采用纸片法，以抗菌药物抑菌圈直径大小为考察目标|(抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小)，结果见下表。
综上所述，本发明诃子或其提取物与余甘子或其提取物、螃蟹甲或其提取物、多刺绿绒蒿或其提取物中的至少一种组合的组合物，对乳房炎和腹泻的病原菌金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌及其混合菌均显示出有效的抗菌作用，可用于制备预防和/或治疗腹泻和/或乳房炎的产品，还可用于相应的抑菌产品的制备。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (1)
1.诃子乙醇提取物在制备抑菌药物中的用途，所述细菌选自副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌；所述诃子乙醇提取物的制备方法如下：称取100g诃子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得诃子乙醇提取物备用。
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