CN109276602A - 余甘子的用途及其组合物和组合物用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了余甘子或其提取物及其组合物在制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻、猪呼吸系统疾病中至少一种疾病的产品中的应用，还提供了余甘子或其提取物及其组合物的抑菌作用，能够有效抑制金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌、A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌、肠毒沙门氏菌、溶血性葡萄球菌、粪肠球菌、丹毒杆菌中的一种或几种细菌的生长，并通过实验证明上述用途的有效性，拓展了余甘子及其组合物的应用范围。

Description

余甘子的用途及其组合物和组合物用途

技术领域

本发明涉及余甘子的应用领域，特别是涉及余甘子在制备用于预防和/或治疗乳房炎的产品中的应用及其组合物。

背景技术

余甘子，属大戟科叶下珠属植物，其果鲜食酸甜酥脆而微涩，回味甘甜，故名余甘，又名喉甘子，庵罗果，牛甘果等。该品呈球形或扁球形，直径1.2～2cm。表面棕褐色至墨绿色，有浅黄色颗粒状突起，具皱纹及不明显的6棱，果梗约1mm。余甘子树耐旱耐瘠，适应性非常强，喜光喜温。生长期1～3年。甘、酸、涩，凉。归肺、胃经。有清热凉血，消食健胃，生津止咳的功效。现通过现代检测手段，检测出余甘子含有12种维生素，尤以Vc含量高而著称，还含有16种氨基酸(天门冬氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、丝氨酸、甘氨酸、赖氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸)，含有丰富的钙、铁、钾、磷、硒、锗等人体必须的常量和微量元素、有机酸(亚麻酸8.8％、亚油酸44％、油酸28.4％、硬脂酸2.2％、棕榈酸35％、肉豆酸1％)、蛋白质、糖类等。可见，余甘子营养丰富，含有多种活性物质，是一种具有较高的食用和药用价值的野生植物资源。最新研究表明，余甘果中含有大量的超氧化歧化酶(SOD)，具有抗衰老、抗癌等功效，为此，余甘子被联合国卫生组织指定为在全世界推广种植的三种保健植物之一。

乳房炎，又称乳痈、奶黄、奶肿，是由于瘀血毒气凝结于乳房而成为痈肿，乳房出现硬、肿、热、痛，病牛拒绝幼畜吃奶或人工挤奶的一种疾病，多见于产后哺乳期的母牛，特别是泌乳期的奶牛更为多见。据统计，乳房炎占奶牛总发病的21％～23％。因其造成奶量下降，病乳废弃，甚至由于乳区化脓、坏疽、萎缩以至永久失去泌乳能力，使产奶量大幅下降，导致奶牛淘汰。奶牛乳房炎是奶牛最常见的、也是对奶牛业生产危害最大的一种疾病。由于中国正处于奶牛业高速发展期，相关技术、措施和设施还不配套和完善，因此，乳房炎所造成的损失就更加严重，每年因乳房炎而被淘汰的奶牛占总淘汰率的9％～10％，每年的经济损失高达上百亿元，沉重打击了中国奶牛业的发展。

目前国内治疗奶牛乳房炎的方法多是使用抗生素，而抗生素的滥用会破坏机体天然免疫屏障，给有害菌大开方便之门。目前常用的几种抗生素对奶牛场广泛传播的致病菌己大部分失效，造成隐性乳房炎和慢性乳房炎病例越来越多；特别是在大量使用抗生素后形成的L-型变种菌，既使施用再多抗生素，它仍会隐藏在乳房内生存，慢性感染乳腺，随时引起乳房炎复发。这也是造成牛乳房炎不但无法根治，而且有蔓延之势的根本原因。如果能有有效预防或治疗奶牛的乳房炎，将会为奶牛业带来可观的经济效益。

在此严峻的新形势下，研发一种安全有效的防治牛乳房炎的新方法，开发并应用既无药残、又无污染，又能提高饲养经济效益的治疗牛乳房炎的抗生素替代品，是全球奶牛饲养业发展的大方向和迫切需求，也是世界各国畜牧科学家和医药界的使命。

在牲畜养殖的过程中，牲畜腹泻是较为常见的一个问题，腹泻的发病原因可为感染性或非感染性因素两种，而感染性因素发病的多为细菌感染导致的腹泻。受到细菌感染，牲畜会产生腹泻的症状，严重腹泻会影响营养物质吸收，同时腹泻严重会导致水和电解质(钾钠氯等离子)紊乱，水和电解质的丢失会严重影响细胞正常功能，如低钾可引起心律失常，甚至心跳骤停，血钠低可引起脑水肿等，甚至导致死亡。可见，如果产生腹泻症状而不能即使制止，会严重影响猪的正常生长或生存，如果还导致了大量猪死亡，造成养殖业经济损失。

猪呼吸系统疾病，是以猪生长速度降低、饲料利用率降低、食欲减退、咳嗽、呼吸困难为特征的疾病，虽然总体死亡率不高，但可严重影响猪场的经济效益。呼吸道疾病综合征一般表现为肺炎支原体、繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、2型圆环病毒(PCV-2)与细菌混合感染。断奶后各个阶段的猪均可发病，即从断奶后2周开始，一直到育肥期都可以发生呼吸道疾病综合征。可见，如果产生猪呼吸系统疾病症状而不能即使制止，会严重影响猪的正常生长或生存，对猪的生长发育有很大的不利，会影响猪的食欲，导致猪的生长速度缓慢。如果能有有效预防或治疗猪呼吸系统疾病症状，将会为猪场带来可观的经济效益。

现有技术中虽有用于腹泻、猪呼吸系统疾病的相关药物，但通常配方复杂，并且出于这两种病症发病率高，发病时间长，难以段时间治愈的问题考虑，研究出新的配方简单，治愈和预防效果好的产品具有重要意义。

发明内容

余甘子，多用于配伍药方中，主要是针对治疗食积呕吐、高血压等病症。而对于预防和/或治疗乳房炎的产品中，并未见到有关余甘子的应用。

在生产实践中发现，奶牛乳房炎主要受以下几种细菌的影响，分别是：金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌混合感染的影响，余甘子提取物对于无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌的混合菌的抑菌作用未见报道。

本发明的目的在于提供余甘子的新的用途，以及以余甘子为主的抑菌组合物，利用余甘子对导致牲畜乳房炎的相关细菌的抑制(或杀灭)作用，将余甘子或其提取物用于制备用于预防和/或治疗乳房炎的产品或抑菌产品。

本发明提供一种组合物，其原料包括以下重量份计的组分：多刺绿绒蒿1～2份，与余甘子1～1.3份。

进一步地，其原料包括多刺绿绒蒿1.9份与余甘子1份，或，包括多刺绿绒蒿1份与余甘子1.1份。

本发明提供上述组合物的制备方法，它包括如下内容：

(1)按重量份取原料药；

(2)取余甘子、诃子的水提物，螃蟹甲、多刺绿绒蒿的醇提物，制备产品即得。

本发明还提供了一种组合物，包括以下重量份计的组分：多刺绿绒蒿提取物4.5～6.5份，与余甘子提取物2.5～7.5份。

进一步地，包括多刺绿绒蒿提取物5份与余甘子提取物3份，或，包括多刺绿绒蒿提取物6份与余甘子提取物7份。

本发明中所述原料余甘子和多刺绿绒蒿的提取物，包括水提取物和有机溶剂提取物。

有机溶剂提取物是指采用有机溶剂对原料的活性成分进行溶解提取，浓缩而形成的提取物；水提取物是指采用水做溶剂对原料的活性成分进行溶解提取，浓缩而形成的提取物。所述有机溶剂提取物包括但不限于甲醇提取物、乙醇提取物、正丁醇提取物、乙醚提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、三氯甲烷提取物；所述水提取物包括但不限于中性水提取物、酸性水提取物、碱性水提取物、盐溶液提取物。

在本发明的实施例中，参试药物均是原料的提取物。其中余甘子为水提物，多刺绿绒蒿为醇提物。

本发明还提供了上述组合物在制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻中的至少一种疾病的产品中的应用。

本发明还提供了余甘子或其提取物在制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻、猪呼吸道疾病中的至少一种疾病的产品中的应用。

所述产品可以是预防和/或治疗乳房炎、腹泻、猪呼吸道疾病中的至少一种疾病的药物、饲料或其他牲畜食物。

进一步地，所述乳房炎为细菌性乳房炎。

细菌性乳房炎是指由细菌感染引起的乳房炎。

进一步地，所述细菌性乳房炎的致病菌选自金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、大肠埃希杆菌中的一种或几种。

进一步地，所述腹泻为细菌性腹泻。

进一步地，所述细菌性腹泻的致病菌包括猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌中的一种或多种组合。

进一步地，所述猪呼吸系统疾病为细菌性猪呼吸系统疾病；更进一步地，所述猪呼吸系统疾病细菌的致病菌包括A族乙型溶血性链球菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌中的一种或多种组合。

大肠埃希杆菌包括肠毒性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌中的一种或几种。

本发明还提供了余甘子或其提取物的抑菌用途，所抑制细菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌、A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌、肠毒沙门氏菌、溶血性葡萄球菌、粪肠球菌、丹毒杆菌中的一种或多种组合。

本发明还提供了上述组合物的抑菌用途，所抑制细菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌、A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌、肠毒沙门氏菌、溶血性葡萄球菌、粪肠球菌、丹毒杆菌中的一种或多种组合。

本发明的有益效果是：本发明提供了余甘子或其提取物及其组合形式在制备用于预防和/或治疗乳房炎的产品中的应用，还提供了余甘子或其提取物及其组合物的抑菌作用，能够有效抑制金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、大肠埃希杆菌中的一种或几种细菌的生长，并通过实验证明上述用途的有效性，用于乳房炎安全无副作用，为乳房炎的治疗开发了新的药物途径，拓展了余甘子及其组合物的抑菌应用范围。

具体实施方式

下面通过具体实施例和具体实验对本发明所述应用做进一步说明，对所述余甘子或其提取物及其组合物的抑菌作用进行验证和说明。

实验材料：余甘子、多刺绿绒蒿购自西南中草药批发市场；参试细菌金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌(ETEC)、A族乙型溶血性链球菌、副猪嗜血杆菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌购自中国兽医监察所，猪链球菌为猪场分离纯化而得。

一、余甘子提取物的制备

称取100g余甘子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得余甘子水提取物。

称取100g余甘子粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得余甘子乙醇提取物备用。

二、多刺绿绒蒿提取物的制备

称取100g多刺绿绒蒿粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入中性去离子水索氏提取5h，回收水提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得多刺绿绒蒿水提取物。

称取100g多刺绿绒蒿粉末，用滤纸包好后，放入索氏抽提器中，加入无水乙醇索氏提取6h，回收醇提取物，在水浴锅上浓缩并定容，即得多刺绿绒蒿乙醇提取物备用。

不同提取物的收率见下表：

中药	提取方式	收率	备注
				余甘子	水提	16.50％	水溶
多刺绿绒蒿	乙醇提	14.88％	乙醇溶

上述收率可在5％范围内正常波动。

实施例1

一种组合物：由多刺绿绒蒿1.9份与余甘子1份组成。

实施例2

一种组合物：由多刺绿绒蒿1份与余甘子1.1份组成。

实施例3

一种组合物：由多刺绿绒蒿乙醇提取物5份与余甘子水提取物3份组成。

实施例4

一种组合物：由多刺绿绒蒿乙醇提取物6份与余甘子水提取物7份组成。

实施例5最低抑菌浓度(MIC)的测定

1.药物贮存液制备

提取药物根据得率计算各种提取物的浓度，并在4℃保存备用。

2.培养基

金黄色葡萄球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌、A族乙型溶血性链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌使用水解酪蛋白(MH)肉汤，pH＝7.2～7.4；副猪嗜血杆菌使用HTM肉汤；无乳链球菌、猪链球菌使用含2％～5％溶解马血的MH肉汤。

3.接种物的制备

用接种环挑活化的形态相似待检菌落3～5个，接种于4～5ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中，35℃孵育2～6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1～2×10⁸CFU/ml。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。在15min内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。

4.稀释抗菌药物的制备及菌液接种

取无菌试管(13×100mm)9支，排成一排，除第1管加入1.5ml MH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液0.5ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第8管，并从第8管中吸取1ml弃去，第9管为不含药物的生长对照。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×10⁵CFU/ml。

5.孵育

将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育24h。

6.最低抑菌浓度(MIC)的测定

在读取和报告所测试菌株的最低抑菌浓度前，检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还要检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的最低抑菌浓度值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的最低抑菌浓度。实验结果见表1和表2。

在生产实践中，奶牛乳房炎主要受以下几种细菌的影响，分别是：金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这几种细菌混合感染的影响，因此，发明人还混合了这几种细菌通过G组混合菌来进行最低抑菌浓度试验。猪呼吸系统疾病主要受以下几种细菌的影响，分别是：A族乙型溶血性链球菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌以及这几种细菌混合感染的影响。腹泻主要受以下几种细菌的影响，分别是：猪霍乱沙门氏菌和肠毒性大肠埃希杆菌以及这两种细菌混合的影响。

表格中5-1表示为余甘子水提取物，4-2表示为多刺绿绒蒿乙醇提取物，表格中的提取物质量比表示各参试药物中对应药物的提取物质量浓度比(也即组合物中各组分质量比)，原料药质量比为根据提取物的收率而算出的所需原料药的质量比。表1为各参试药物编号浓度对应表，表2为各参试药物最低抑菌浓度得分表。表2中各参试药物对于不同细菌的最低抑菌浓度得分数为表1中药物浓度对应的编号，如：表2中余甘子水提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度得分为4，则表示其对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为表1中编号4对应的浓度3.0331mg/mL，以此类推。表2中G表示金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌的混合菌，乳房炎一栏得分为相应药物对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌和肠毒性大肠埃希杆菌单独得分的加和，腹泻一栏得分为相应药物对猪霍乱沙门氏菌、肠毒性大肠埃希杆菌以及混合菌H得分的加和，猪呼吸系统疾病一栏得分为相应药物对A族乙型溶血性链球菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌抑菌作用得分的加和。得分越高，表示所需参试药物的最低抑菌浓度越低，反之则反。

表1.各参试药物编号浓度对应表

	5-1	5-1/4-2	5-1/4-2
				提取物质量比		3∶5	7∶6
原料药质量比		1∶1.9	1.1∶1
				1(mg/ml)	24.2647	12.1324/20.6667	10.7843/9.1852
2(mg/ml)	12.1324	6.0662/10.3333	5.3922/4.5926
				3(mg/ml)	6.0662	3.0331/5.1667	2.6961/2.2963
4(mg/ml)	3.0331	1.5165/2.5833	1.3480/1.1481
				5(mg/ml)	1.5165	0.7583/1.2917	0.6740/0.5741
6(mg/ml)	0.7583	0.3791/0.6458	0.3370/0.2870
				7(mg/ml)	0.3791	0.1896/0.3229	0.1685/0.1435

表2.各参试药物最低抑菌浓度得分表

由上述结果可知，余甘子水提取物对上述细菌的抑菌效果的得分均较组合物高，说明其抑菌作用最强，表现为最低抑菌浓度较低。而余甘子水提取物与多刺绿绒蒿乙醇提取物的组合物得分相对低一些，说明要有效抑菌该组合物药物需要相对较高的浓度。从实验结果还可以看出，当余甘子水提取物与多刺绿绒蒿乙醇提取物的比值为7∶6时抑菌效果优于其比值为3∶5时的抑菌效果。

实施例6各组分药物水提物和醇提物的抑菌效果比较。

采用纸片法，以抗菌药物抑菌圈直径大小为考察目标|(抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小)，结果见下表。

		直径cm
			水提取药敏	多刺绿绒蒿	余甘子
猪霍乱沙门氏菌	0	1.1
			肠毒沙门氏菌	0	1.1
波氏杆菌	0	1.7
			多杀性巴氏杆菌	0.8	1.6
假单胞菌	0	0
			大肠杆菌	0	1.2
金黄色葡萄球菌	0	1.2
			溶血性葡萄球菌	0	1.5
副猪嗜血杆菌	0	1.2
			粪肠球菌	0	1.6
丹毒杆菌	0	1.7
			链球菌	0	0.9
			醇提取药敏	多刺绿绒蒿	余甘子
猪霍乱沙门氏菌	1.1	0
			肠毒沙门氏菌	1.1	0
波氏杆菌	1.1	1.2
			多杀性巴氏杆菌	1.7	2
假单胞菌	0.7	0
			大肠杆菌	1.4	0.8
金黄色葡萄球菌	1.6	1
			溶血性葡萄球菌	1.4	1.6
副猪嗜血杆菌	1.8	1.9
			粪肠球菌	0	1.7
丹毒杆菌	1	1.2
			链球菌	0	1.7

综上所述，本发明余甘子水提取物、余甘子水提取物与多刺绿绒蒿乙醇提取物的组合物，对乳房炎、腹泻和猪呼吸系统疾病的病原菌显示出有效的抗菌作用，可用于制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻、猪呼吸系统疾病中至少一种疾病的产品，还可用于相应的抑菌产品的制备。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，其原料包括以下重量份计的组分：多刺绿绒蒿1～2份，与余甘子1～1.3份。

2.根据权利要求7所述组合物，其特征在于，其原料包括多刺绿绒蒿1.9份与余甘子1份，或，包括多刺绿绒蒿1份与余甘子1.1份。

3.权利要求1或2所述组合物的制备方法，其特征在于：它包括如下内容：

(1)按重量份取原料药；

(2)取余甘子水提物，多刺绿绒蒿的醇提物，制备产品即得。

4.一种组合物，其特征在于，包括以下重量份计的组分：多刺绿绒蒿提取物4.5～6.5份，与余甘子提取物2.5～7.5份。

5.根据权利要求4所述组合物，其特征在于，包括多刺绿绒蒿提取物5份与余甘子提取物3份，或，包括多刺绿绒蒿提取物6份与余甘子提取物7份。

6.根据权利要求4或5所述组合物，其特征在于，所述多刺绿绒蒿提取物为醇提物，所述余甘子提取物为水提物。

7.余甘子或其提取物在制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻、猪呼吸道疾病中的至少一种疾病的产品中的用途。

8.权利要求1～5任一项所述组合物在制备用于预防和/或治疗乳房炎、腹泻中的至少一种疾病的产品中的用途。

9.根据权利要求7或8所述应用，其特征在于，所述乳房炎为细菌性乳房炎；进一步地，所述细菌性乳房炎的致病菌选自金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、大肠埃希杆菌中的一种或几种；

所述腹泻为细菌性腹泻；进一步地，所述细菌性腹泻的致病菌包括猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌中的一种或多种组合；

进一步地，所述猪呼吸系统疾病为细菌性猪呼吸系统疾病；更进一步地，所述猪呼吸系统疾病的致病菌包括A族乙型溶血性链球菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌中的一种或多种组合。

10.余甘子或其提取物，或，权利要求1～5任一项所述组合物的抑菌用途，所述细菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞菌、猪霍乱沙门氏菌、大肠埃希杆菌、A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴式杆菌、肠毒沙门氏菌、溶血性葡萄球菌、粪肠球菌、丹毒杆菌中的一种或多种组合。