CN111568919A

CN111568919A - 一种含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂

Info

Publication number: CN111568919A
Application number: CN202010424868.XA
Authority: CN
Inventors: 韩旺全; 韩睿乾
Original assignee: Shanghai Zhongdi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Zhongdi Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-05-19
Filing date: 2020-05-19
Publication date: 2020-08-25

Abstract

本发明公开了一种包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε‑聚赖氨酸，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂至少还包括溶菌酶、乳铁蛋白中的一种；添加薄荷醇、纯化水，或添加天然菊粉、麦芽糊精、淀粉，可制成抗幽门螺旋杆菌制剂的含潄剂或喷剂或颗粒剂。该发明制剂可以克服现有抗幽门螺旋杆菌制剂存在严重副作用、效果差等缺陷，以具有杀菌功能的纯天然成分壳寡糖等为主要原料制成的制剂，生产成本低，杀菌功能强、无毒副作用、不产生耐药性。可以在临床上用于口腔和胃部预防和治疗幽门螺旋杆菌感染以及与之相关疾病。

Description

一种含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂。

背景技术

幽门螺杆菌，简称HP，是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌，国外研究者从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜中分离出幽门螺杆菌之后，经过多年的研究显示，幽门螺杆菌感染已被认为是慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的主要致病因素，与胃癌的发生有密切关系，1994年世界卫生组织/国际癌症研究所(WH0/1ARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原，此外，Hp感染还是一些非消化道疾病的诱因；

此后国外有研究者相继从牙菌斑、唾液中分离培养出幽门螺杆菌(Hp)，表明口腔中Hp与胃内Hp具同源性，口腔环境也适宜于Hp聚集和定植，近年来多项研究证明，幽门螺杆菌与牙周炎、口腔溃疡、龋病、口臭等疾病相关，并且口腔作为幽门螺杆菌的储存地，是胃幽门螺杆菌的重要来源，幽门螺杆菌伴随唾液和食物吞到胃内，引起胃部炎症的发生和复发；

胃内幽门螺杆菌反复感染与口腔幽门螺杆菌感染密切相关，已经成为当今国际医学界的主流观点，因此，必须针对胃部和口腔两处的Hp感染同步进行综合干预，才能彻底根治Hp带来的感染，根据口腔和胃部Hp的相关性，本发明提出具有系统性、创新性的临床解决新方案，采用无副作用，不产生耐药性的壳寡糖为主要原料，先杀灭口腔内的幽门螺旋杆菌，切断输入源头，再根治胃部幽门螺旋杆菌；

目前现有抗口腔幽门螺旋杆菌的主要有两类：

(1)含中药的牙膏，中药成分复杂，杀菌能力弱，有副作用，用药时间久，效果差，牙膏剂型存在很大功能缺陷，因为一般刷牙时间较短，只有1-2分钟，并且牙膏是局部作用，不能全方位充分接触到口腔的所有部位，所以杀菌不彻底，杀菌效果差，因此本发明针对口腔杀灭HP成分不选择中药，剂型选择含漱剂。

(2)含化学成分的杀菌剂，副作用太大，口腔微生态平衡会被破坏，因此这类型临床方案存在很多技术缺陷；

目前临床上针对胃部的幽门螺旋杆菌的诊疗多采用抗生素疗法，但是长期服用抗生素会产生大量的副作用以及耐药性，并且治愈效果差，抗生素的广泛使用，其本身就是诱导幽门螺旋杆菌耐药的原因之一，而且根除失败率高，同时合并有口腔的Hp感染就是其中一个不容忽视的重要原因，另外一种是使用中药治疗，虽然中药副作用相对较小，但是服药周期长，杀菌效果差、根治率低，以上两种临床治疗模式都存在被胃酸环境破坏制剂本身功效的情况；

因此，克服现有抗Hp临床方案存在严重缺陷和副作用情况，研发一种可靠、低成本抗HP感染和治疗与其相关的疾病的制剂，是非常重要和必要的新课题，这样可以服务更多的HP感染患者。

发明内容

本发明目的在于提供一种壳寡糖在抗幽门螺旋杆菌制剂中的应用及其制备方法，解决了现有临床治疗方案中存在耐药性、治愈率低等缺陷的问题，提供了一种以天然原料壳寡糖等为成分的生物制剂，用于杀灭幽门螺旋杆菌，为了让复合配方产生抗菌协同增效，该制剂主要成分包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、乳铁蛋白、溶菌酶等，这些成分均为纯天然，对人体无副作用。

本发明提供如下技术方案，一种包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂主要成分至少还包括溶菌酶、乳铁蛋白中的一种。

作为优选，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、溶菌酶、薄荷醇、纯化水，在1000毫升的抗幽门螺旋杆菌制剂中，所述的壳寡糖使用量为35-40克，所述的ε-聚赖氨酸使用量为3-5克，所述的溶菌酶使用量为8-15克，所述的薄荷醇使用量为0.001克，上述各组分材料依次加入所述的纯化水中形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

作为优选，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、乳铁蛋白、天然菊粉、麦芽糊精、淀粉，在1000克的抗幽门螺旋杆菌制剂中，所述的壳寡糖含量为40-45克，所述的ε-聚赖氨酸含量为3-15克，所述的乳铁蛋白含量为0.1-0.5克，所述的天然菊粉含量为9-11克，所述的麦芽糊精含量为29-31克，上述各组分材料加入淀粉混合形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

作为优选，采用如下制作方法：将纯化水加热至40度，按照组分使用量，依次加入壳寡糖、ε-聚赖氨酸，充分搅拌至溶解然后再冷却至室温，再加入溶菌酶、薄荷醇，再次搅拌至所有内容物全部溶解，然后用0.22μm滤膜进行过滤，用乳酸调节所需PH值，即可分装，根据需要，制成含潄剂或喷剂。

作为优选，采用如下制作方法：将各组分材料按含量依次加入不锈钢罐，然后混合均匀，用70％乙醇作湿润剂，湿法制成颗粒状，用筛子过筛，然后再烘干，即得所述的抗幽门螺旋杆菌制剂颗粒剂。

选择壳寡糖，因为在胃部强酸性环境下，抑菌功能反而会增强。迄今为止，除壳寡糖之外，尚未发现其他在胃部强酸环境下能充分发挥抗菌功效的成分。大多数成分在胃酸强酸环境下，功效被破坏严重，但是壳寡糖在强酸环境下抗菌效果更好，这是本发明的独特之处。壳寡糖(β-1，4-寡糖-葡萄糖胺)又叫壳低聚糖，是一种天然氨基多糖高分子化合物，是自然界中目前为止发现少有带正电荷的膳食纤维。被国际学术界誉为继蛋白质、脂肪、糖、维生素和矿物质之后的“第六生命要素”。分子量低、水溶性好、易被人体吸收、生物活性高等优势。不仅具有良好的生物相容性和可降解性，还有广谱抗菌、抗感染和很强的凝血作用，以及促进伤口愈合、增强免疫和抗肿瘤等多种生理活性作用。在酸性条件下，壳寡糖分子中的游离氨基质子化，质子化氨基与细菌带正电的细胞膜作用，干扰细菌细胞膜功能，造成细菌体内细胞质流失，因此对病源微生物有很强的杀灭作用。

壳寡糖在抗幽门螺旋杆菌制剂中的应用，包括如下步骤：

先通过抑菌试验确定影响壳寡糖抑菌效果的因素。

抑菌试验：

A.试验材料：

幽门螺旋杆菌标准菌株Hp-ss1，壳寡糖(分子量1500)、抗凝羊血、哥伦比亚琼脂、布氏肉汤、高压灭菌器、蒸馏水。

B.试验方法：

(1)培养基制备：

选择性哥伦比亚血培养基配制，哥伦比亚琼脂20g，β-环状糊精2.5g，选择性抑菌母液2ml，抗凝羊血40ml，调PH值为7.0，加纯化水至500ml。置于高压灭菌器中121℃高压灭菌20min，待培养基室温中冷却至55℃左右时，加入抗凝羊血和抑菌剂母液，混匀后倾注于8cm灭菌培养皿，制成厚约6mm的选择性哥伦比亚血培养基平板，待血培养基冷却凝固后。

含30％甘油的布氏肉汤500ml：含葡萄糖0.5g、胰蛋白胨5g、酵母浸膏1g、蛋白胨10g、氯化钠2.5g、葡萄糖0.5g、甘油150ml。

(2)抑菌试验操作方法：

取0.3ml含菌4×10⁷ml^-1布氏肉汤菌液，均匀涂布于培养基上待干燥后，采用滤纸片法将沾取不同样品的滤纸片贴在培养基表面，对照沾取灭菌纯化水的滤纸片，水平放置平皿在密封盒中，置入微氧气袋(气体成分85％N₂、10％CO₂、5％O₂)37℃的培养箱培养48h后，用游标卡尺测量抑菌环直径，每种样品至少做5次重复，取其平均值。

C.试验结果

(1)浓度对幽门螺旋杆菌的抑菌试验影响。

采用打孔法分别检测浓度为1％、2％、3％、4％、5％一系列浓度溶液的抑菌效果，用游标卡尺测量抑菌环直径，取其平均值，通过下图的试验结果，看出不同浓度的壳寡糖溶液对幽门螺旋杆菌的抑制作用结果如图1所示。

根据图2中曲线可以看出不同浓度的壳寡糖对幽门螺旋杆菌都有抑制作用，随着浓度的增加抑菌作用也显著增强。

(2)pH值对幽门螺旋杆菌的抑菌试验影响。

配置浓度为5％的壳寡糖溶液，分别调pH为2、3、4、5、6、7，将滤纸片浸泡其中待用。将已灭菌的培养基倾倒于培养皿中，均匀摊开凝固，用无菌注射器吸取0.3mL的菌液于培养基上，用无菌涂布器涂布，然后用镊子将滤纸片放置于培养皿内，每个培养皿放四片滤纸片，水平放置于37℃的培养箱中培养24h后，测量抑菌圈的直径(mm)，取平均值，由图3可以看出，壳寡糖对幽门螺旋杆菌菌在pH值为3-4时抑菌效果处于最佳状态，随着ph值降低，抑菌效果逐渐增强，在ph值在3-4之间，抑菌效果较为显著，这是由于壳寡糖具有一定的解离常数(pKa)，当pH值低于pKa时，壳寡糖分子氨基基团即质子化，从而使整个分子带正电荷，此时与Hp菌外膜形成的交联作用最强，因此抗Hp作用也最强，壳寡糖与细菌表面带负电荷的物质相互作用使其膜功能发生紊乱，出现凹陷、变形和泄露。同时透过损伤的细胞外膜进入细菌内部，进一步与细胞质发生作用，扰乱细菌DNA的转录，从而抑制细菌繁殖。

(3)最低抑菌浓度(MIC)，最低杀菌浓度(MBC)的选择：

(a)取不同浓度梯度的壳寡糖稀释液，加入相应的培养基，同时以含有等量纯化水的培养基作为空白对照，121℃灭菌20min后，倾倒在平皿，待其冷凝后，吸取菌液10μL种在培养基上，每个平板上滴3滴(呈三角形，每滴为10μL)，同时接种不含壳寡糖的培养基作为空白对照试验，试验重复3次，待菌液吸收后，平皿平放培养箱中37℃下培养，连续4d观察菌落的生长情况，以培养24h后不长菌的浓度为壳寡糖及其衍生物对酵母菌的最低抑菌浓度(MIC)，以连续培养4d不长菌的浓度为其最低抗菌浓度(MBC)，试验详情见表1(注：+表示有菌生长，-表示无菌生长)。

表1.最低抑菌浓度(MIC)，最低抗菌浓度(MBC)确定表

浓度

0.5％

1.0％

1.5％

2.0％

2.5％

3.0％

3.5％

4.0％

4.5％

24h

+

-

72h

+

-

96h

+

-

(b)由表1可以看出，壳寡糖在对幽门螺旋杆菌的最低抑菌浓度为1.5％，最低抗菌浓度为3.5％，综上整个试验结果得出结论，壳寡糖在ph值3-4之间，抑菌效果最强，最低抗菌浓度为3.5％。

综上试验结果，壳寡糖在酸性环境下抑菌效果更强这一特点，(1)运用在口腔临床诊疗使用方案中，口腔内微生物是以共生、竞争及拮抗等方式共存于口腔内，因此需要复合配方，才能保护口腔微生态环境的情况下，进行杀灭幽门螺旋杆菌以及口腔其他致病菌；(2)运用在胃部杀灭幽门螺旋杆菌方案中，壳寡糖正好利用胃酸这一酸性环境，激发更强的杀菌能力，同时还可以中和胃酸。

本发明除壳寡糖成分外，还选择ε-聚赖氨酸、溶菌酶、乳铁蛋白等存在于人体内的天然抗菌成分与之配伍，为了保证配方更优化，起到抗菌协同增效作用，复合制剂不但抗菌能力增强，而且可以拓宽抗菌谱。

ε-聚赖氨酸，它是一种具有抑菌功效的多肽，能在人体内分解为赖氨酸，而赖氨酸是人体必需的8种氨基酸之一，因此ε-聚赖氨酸是一种安全、无毒、营养型抑菌剂，抑菌谱广，对革兰氏阴性菌中的幽门螺旋杆菌等很多致病菌都有明显的抑制和杀灭作用。ε-聚赖氨酸富含阳离子，与带有阴离子的有害菌有强的静电作用力并且对生物膜有良好的穿透力，基于这一特性，多聚赖氨酸可用于某些药物的载体，因此在医疗和制药方面得到广泛应用。在本发明中，正是使用ε-聚赖氨酸这一特性，配合壳寡糖，在不同临床应用场景下杀灭幽门螺旋杆菌，起到协同增效作用。

溶菌酶(lysozyme)是一种无毒、无副作用的生物活性蛋白，广泛存在于人体多种组织中。可瞬间激活亿万个活性酶分子，主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物溢出而使细菌溶解。能够直接溶解口腔病菌的细胞壁，迫使其凋亡，且能促使受损组织修复，帮助平衡口腔菌群。因而可以有效改善多种口腔问题。

乳铁蛋白(lactoferrin，LF)是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，中性粒细胞颗粒中具有杀菌活性的单体糖蛋白。其杀菌机理：首先通过离子结合区捕获铁离子，由此剥夺了细菌生长所必须的铁，引起细菌生长延迟；并且同革兰氏阴性菌上的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)中的脂质A相互作用，引起LPS从细胞壁内释放，导致细菌死亡。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1.本发明通过主要选择壳寡糖成分外，还选择ε-聚赖氨酸、溶菌酶、乳铁蛋白等存在于人体内的天然抗菌成分。复合制剂配方不但抗菌能力增强，而且可以拓宽抗菌谱。更重要的是配方安全、无副作用、不产生耐药性、根治率高。有利于规模化生产，可以使更多患者受益。

2.目前已有的很多诊疗手段和发明，只考虑理论上杀灭幽门螺旋杆菌并没有考虑胃酸这个特殊的强酸性环境，但是本发明选择使用的壳寡糖成分，这种成分正巧符合在酸性环境下抗菌能力增强这一苛刻的条件。填补了目前临床上很多方案在胃酸环境下功效被破坏这一技术缺陷。

附图说明

图1是本发明不同浓度溶液对幽门螺旋杆菌的抑制作用结果图。

图2是本发明不同浓度对幽门螺旋杆菌抑菌作用的影响图。

图3是本发明不同pH值对幽门螺旋杆菌抑菌作用的影响图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供如下技术方案：一种包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸，抗幽门螺旋杆菌制剂至少还包括溶菌酶、乳铁蛋白中的一种；

实施例1，抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、溶菌酶、薄荷醇、纯化水，在1000毫升的抗幽门螺旋杆菌制剂中，壳寡糖使用量为35-40克，ε-聚赖氨酸使用量为3-5克，溶菌酶使用量为8-15克，薄荷醇使用量为0.001克，上述各组分材料依次加入所述的纯化水中形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

实施例2，抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、乳铁蛋白、天然菊粉、麦芽糊精、淀粉，在1000克的抗幽门螺旋杆菌制剂中，壳寡糖含量为40-45克，ε-聚赖氨酸含量为3-15克，乳铁蛋白含量为0.1-0.5克，天然菊粉含量为9-11克，麦芽糊精含量为29-31克，上述各组分材料加入淀粉混合形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

具体实施过程是，

1)制备1000ml抗菌制剂，配比如下：

2)制备1000ml抗菌制剂，配比如下：

3)制备1000ml抗菌制剂，配比如下：

4)制备1000ml抗菌制剂，配比如下：

5)制备1000ml抗菌制剂，配比如下：

以上1)-5)的配方实施例，在净化车间进行，将纯化水加热至40度，按照上述组分，依次加入壳寡糖、ε-聚赖氨酸，充分搅拌至溶解然后再冷却至室温，再加入溶菌酶、薄荷醇，再次搅拌至所有内容物全部溶解，然后用0.22μm滤膜进行过滤，用乳酸调节所需PH值，即可分装，根据需要，制成含潄剂、喷剂。根据本方案制成的成品可以预防治疗口腔、咽喉部位幽门螺旋杆菌的滋生。本发明做成的含漱剂在含漱过程中可以充分作用口腔内任何一处，解决了现在大多使用牙膏剂型的治疗不彻底、作用不充分的严重缺陷。

6)制备1000g抗菌制剂，配比如下：

7)制备100g抗菌制剂，配比如下：

8)制备100g抗菌制剂，配比如下：

9)制备100g抗菌制剂，配比如下：

以上6)-9)的配方实施例，在净化车间进行。根据上述实施例配比成分，依次加入不锈钢罐，然后混合均匀，用70％乙醇作湿润剂，湿法制成颗粒状，用筛子过筛，然后再烘干，即得颗粒冲剂。此法制剂可用于预防和治疗胃部幽门螺旋杆菌的感染临床治疗。根据前面实验证明本发明在胃酸环境下抗菌性能会增强这一特性。填补了目前临床上很多方案在胃酸环境下功效被破坏这一技术缺陷。

抗菌试验：

A.试验器材：

(1)试验菌株：幽门螺旋杆菌标准菌株(HP-SS1)。

(2)中和剂：中和肉汤，1/3倍中和肉汤，TSB肉汤。

(3)培养基：营养琼脂培养基，压力蒸汽灭菌后备用。

(4)稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液。

B.试验方法幽门螺旋杆菌中和剂鉴定试验：

(1)样品原液，中和剂中和肉汤，第1、2组作用杀菌时间为0.5min；19-21℃条件下，试验重复3次，1/3倍样品原液，中和剂1/3倍中和肉汤，第1、2组杀菌作用时间为0.5min；19-21℃条件下，试验重复3次。

(2)对细菌繁殖体的抗菌试验：

将细菌繁殖体24h斜面培养物用稀释液洗下，制成适宜浓度的菌悬液备用，取被试样液4管，每管5mL，分别在每个被试样液滴加100μL上述菌悬液，混匀，开始计时，作用2min，5min，10min，20min，取0.5mL投入含4.5mL中和剂试管中，充分混匀，作适当稀释，然后取2-3稀释度，分别吸取1.0mL，置于2个平皿，倾注15mL琼脂(40℃-45℃)，摇匀，待凝固后翻转平板，置于35℃±2℃培养48h，用作活菌培养计数，用稀释液代替被试样液，进行平行试验，作为阳性对照：并计算杀菌率，X＝(Nc-Ns)/Nc×100％(X：杀菌率％；Nc：对照样品平均菌落数；Ns：被试样品平均菌落数)。

C、试验结果：

(1)中和剂鉴定试验：样品原液，作用0.5min，第1组平均生长菌落数为0cfu/mL；第2组平均生长菌落数为0cfu/mL；第3、4和5组平均生长菌落数分別为2.20×10⁴cfu/mL，2.02×10⁴cfu/mL、2.38×10⁴cfu/mL，组间误差率为5.56％，第6组无菌生长，试验结果见表2。

表2.样品原液的中和剂鉴定试验结果

(2)1/3倍样品原液，作用0.5min，第1组平均生长菌落数为0cfu/mL；第2组平均生长菌落数为75cfu/mL；第3、4和5组平均生长菌落数分别为2.06x10⁴cfU/mL、1.94x10⁴cfu/mL、2.23xl0⁴cfu/mL，组间误差率为4.89％，第6组无菌生长，试验结果见表3。

表3.1/3倍样品原液的中和剂鉴定试验结果

(3)对细菌繁殖体的杀灭效果：在19℃-21℃条件下，试验重复3次，用本发明原液，作用2min、5min、10min、20min，对幽门螺旋杆菌杀菌率分为99.99％、100％、100％、100％，试验结果见表4；阴性对照无菌生长。

表4.原液对幽门螺旋杆菌的抗菌性能测试试验结果

试验菌株	试验次数	2min	5min	10min	20min
						幽门螺旋杆菌	1	99.99％	100％	100％	100％
幽门螺旋杆菌	2	99.98％	100％	100％	100％
						幽门螺旋杆菌	3	99.97％	100％	100％	100％
平均值		99.98％	100％	100％	100％

D.试验结论：

(1)在19℃-21℃条件下，中和肉汤中和剂及其与原液形成的中和产物对受试菌(幽门螺旋杆菌)生长及培养基无影响，且在载体定量杀灭试验中可有效中和本发明原液对细菌繁殖体的抑制作用。

(2)在19℃-21℃条件下，本发明原液，作用2min、5min、10min、20min，对幽门螺旋杆菌的杀菌率为99.98％、100％、100％、100％符合发明预期。

用本发明前面设计的1)-5)配方针对口腔，6)-9)配方针对胃部幽门螺旋杆菌抗菌实施例，进行抗菌试验，试验结果证实配方3)为针对口腔优选配方，配方8)为针对胃部优选配方。

小鼠急性经口毒性试验

A.材料和动物：

(1)受试样品：样品为上述实施例8作为受试物。

(2)动物和饲料：SPF级健康ICR小鼠20只，雌雄各半。

(3)试验条件：环境温度：22±2℃，相对湿度40-70％。

B.方法：

(1)检测目的：急性经口毒性试验。

(2)试验方法：一次最大限度试验，设计量为5000mg/kgb.wt.称取样品5000mg加纯净水至20ml配制成受试物，小鼠禁食过夜后，经口一次性灌胃给予，灌胃容量20ml/kgb.wt.，灌胃后5h给食，观察期14d。

C.试验结果：

小鼠灌胃后未见中毒表现，观察期内无动物死亡，试验结果见表5。

表5.小鼠急性经口毒性试验结果

D.试验结论：

本发明制剂中所使用的成分均为天然原料没有任何副作用，通过上述试验结果也证明样品对雌雄小鼠急性经口LD₅₀值均大于5000mg/kgb.wt.，雌雄小鼠体重未见异常，试验结果证明本配方属于无毒级。

临床试验

A.受试者选定：在上海5家三甲医院消化科，随机随访，征集到106名志愿者，这批志愿者首先通过唾液抗原检测法(HPS)测定为阳性者；要求试验期间不服用抗生素，受试者的HPS阳性程度是通过金标比色卡上的数值(1-2表示阴性；3-5表示弱阳性。6-10表示阳性；11-15表示强阳性)来显示受试者口腔感染螺旋杆菌的程度。

B.受试者人数：106名(男性55人，女性51人)。

C.受试者年龄范围：23岁-67岁。

D.临床测试方案：

(1)治疗前：46名受试者为强阳性，51名受试者为阳性，9名受试者为弱阳性。

(2)治疗过程：受试者使用优选实施例3的含漱剂漱口，每日一次，每次10毫升原液，每次含漱时间不少于2分钟，连续使用14天。

(3)治疗结果：99名受试者完全转变为阴性，治愈率为93.4％，5名受试者人转变为弱阳性，2名受试者为阳性，这7名受试者继续按照上述治疗方案再坚持7天使用，通过唾液抗原检测法(HPS)检测，治疗结果表6，因此建议使用者必须至少连续使用3周即可达到理想的临床治疗效果。

表6.临床自愿受试者3周情况数据

综合前面所有试验结果看，抗幽门螺旋杆菌制剂在试验室杀菌率100％，但是在临床上因为存在患者个体差异，以及受试者使用不规范，或不排除有新的幽门螺旋杆菌新感染可能等等其他因素影响，但是目前这个结果相比其他现有临床解决方案更优化、更有效，科学研究永无止境，发明人后续会把壳寡糖在医药领域多方面应用继续作为重要的研究方向。

稳定性试验

试验方法参照前面杀菌试验过程，进行本发明样品稳定性测试，随机取一款样品，两个生产批号，先在20±1℃恒温条件下，试验重复三次，再选择置于恒温箱密闭环境，温度稳定在37℃，湿度大于75％条件下，存放3个月，样品颜色无变化，无沉底，无分层，然后做杀菌试验，试验结果见表7。

表7.稳定性试验结果

编号	温度及时间	2min	5min	20min
					A1	0天	99.81	100	100
B1	0天	99.93	100	100
					A1	37℃3个月	99.32	99.79	99.82
B1	37℃3个月	99.56	99.83	99.85

从以上试验结果看出，该制剂在放置三个月后，杀菌率依然大于99％。证明本发明配方稳定性可靠，至少可以保存两年。

综述，尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，其特征在于，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂至少还包括溶菌酶、乳铁蛋白中的一种。

2.根据权利要求1所述的包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，其特征在于，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、溶菌酶、薄荷醇、纯化水，在1000毫升的抗幽门螺旋杆菌制剂中，所述的壳寡糖使用量为35-40克，所述的ε-聚赖氨酸使用量为3-5克，所述的溶菌酶使用量为8-15克，所述的薄荷醇使用量为0.001克，上述各组分材料依次加入所述的纯化水中形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

3.根据权利要求1所述的包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，其特征在于，所述的抗幽门螺旋杆菌制剂包括壳寡糖、ε-聚赖氨酸、乳铁蛋白、天然菊粉、麦芽糊精、淀粉，在1000克的抗幽门螺旋杆菌制剂中，所述的壳寡糖含量为40-45克，所述的ε-聚赖氨酸含量为3-15克，所述的乳铁蛋白含量为0.1-0.5克，所述的天然菊粉含量为9-11克，所述的麦芽糊精含量为29-31克，上述各组分材料加入淀粉混合形成抗幽门螺旋杆菌制剂。

4.根据权利要求2所述的包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，其特征在于，采用如下制作方法：将纯化水加热至40度，按照组分使用量，依次加入壳寡糖、ε-聚赖氨酸，充分搅拌至溶解然后再冷却至室温，再加入溶菌酶、薄荷醇，再次搅拌至所有内容物全部溶解，然后用0.22μm滤膜进行过滤，用乳酸调节所需PH值，即可分装，根据需要，制成含潄剂或喷剂。

5.根据权利要求3所述的包含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂，其特征在于，采用如下制作方法：将各组分材料按含量依次加入不锈钢罐，然后混合均匀，用70％乙醇作湿润剂，湿法制成颗粒状，用筛子过筛，然后再烘干，即得所述的抗幽门螺旋杆菌制剂颗粒剂。