CN113924107B - 用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物 - Google Patents

用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN113924107B
CN113924107B CN202080041222.1A CN202080041222A CN113924107B CN 113924107 B CN113924107 B CN 113924107B CN 202080041222 A CN202080041222 A CN 202080041222A CN 113924107 B CN113924107 B CN 113924107B
Authority
CN
China
Prior art keywords
yeast
composition
cystitis
strain
use according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202080041222.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113924107A (zh
Inventor
A·德谢尔夫
N·巴莱
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lesaffre et Cie SA
Original Assignee
Lesaffre et Cie SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lesaffre et Cie SA filed Critical Lesaffre et Cie SA
Publication of CN113924107A publication Critical patent/CN113924107A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113924107B publication Critical patent/CN113924107B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/14—Yeasts or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎如由尿道致病性大肠杆菌细菌引起的膀胱炎的包含至少一种酵母的组合物。

Description

用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物
技术领域
本发明涉及尿路感染领域。本发明更特别地涉及用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的酵母。
背景技术
尿路感染是全世界细菌感染的主要病因。性别和年龄是尿路感染的重要危险因素。通常并且对于所有年龄组，女性更有发生尿路感染的风险。因此，超过50％的女性在其一生中将会有至少一次尿路感染，而高达30％的女性将患有复发性尿路感染。此外，10-15％的男性将患有至少一次感染性发作。
在医院环境中，尿路感染代表肺部感染之后的第二常见的医院感染。最常见的病因是施用导尿管。
尿路感染也可根据并发症分类。当没有尿道结构或功能异常，没有肾水平的感染(没有肾病)和没有共病(其它疾病，如糖尿病、高血压等)时，尿路感染被认为是不复杂的。当肾脏受到影响时，尿路感染被认为是复杂的，其临床特征与其它疾病(如肿瘤、代谢原因或肾衰竭)有关。此外，男性的尿路感染被归类为具有并发症风险，因为它们几乎总是与解剖学原因相关。
一般人群的尿路感染通常由单一微生物引起：80％以上的尿路感染中的病原体大肠杆菌(Escherichia coli)。在10-15％的感染中，病原体腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticus)是原因。
特别地，在大肠杆菌尿道致病性菌株(UPEC)中的抗生素耐药性正在增加并且令人担忧。这促使科学家和医疗保健专业人员鉴定新的治疗策略。因此，使用没有副作用的天然方案被认为是抗生素的替代方案。
例如，Alkil et al.(Pediatr.Nephrol,2006)评价了口服施用布拉迪酿酒酵母变种(Saccharomyces cerevisiae var.boulardii)对儿童结肠中大肠杆菌菌落总数的作用。证明了施用布拉迪酿酒酵母变种可显著降低结肠中大肠杆菌菌落，同时显著增加布拉迪酿酒酵母变种的菌落。作者得出结论，布拉迪酿酒酵母变种可有效降低粪便中的大肠杆菌菌落的总数。但是，没有说明该酵母是否具有预防尿路感染的作用。
因此，真正需要新的天然方案来预防尿路感染。
发明概述
因此，本申请人已经令人惊讶地证明，使用酵母可以预防膀胱炎的发生。
因此，根据本发明的第一方面，本发明涉及用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的包含至少一种酵母的组合物，所述酵母为活酵母或死酵母的形式，为酵母衍生物(如酵母细胞壁和酵母细胞壁的纯化级分)的形式，或其混合物的形式。
根据本发明的第二方面，本发明人还开发了用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的包含至少一种酵母的膳食补充剂或食品组合物，所述酵母为活酵母或死酵母的形式，酵母衍生物(如酵母细胞壁和酵母细胞壁的纯化级分)的形式，或其混合物的形式。
根据第三方面，本发明涉及用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的包含含有至少一种酵母的组合物的医疗装置，所述酵母为活酵母或死酵母的形式，为酵母衍生物(如酵母细胞壁和酵母细胞壁的纯化级分)的形式，或其混合物的形式。
发明详述
本发明涉及用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的包含至少一种酵母的组合物。
“单纯性膀胱炎”是指不存在并发症风险的尿路感染。这仅涉及在仅存在膀胱炎的特征性症状(如急迫或更频繁需要排尿、灼烧感或麻刺感)而无发热的情况下无风险因素的女性。
“复发性膀胱炎”是指导致单纯性膀胱炎的一系列感染发作。为了将其称为“复发性膀胱炎”，感染发作的次数必须大于或等于每年4次。
术语“酵母”表示酵母菌株、通过培养酵母菌株获得的酵母，该酵母是活的或死的形式，并且是酵母衍生物(例如酵母细胞壁和酵母细胞壁的纯化级分)的形式，或其混合物的形式。
表述“酵母菌株”表示通过培养(或增殖)起始菌株获得的相对同质的酵母细胞群。
从克隆开始获得酵母菌株，克隆是从单个酵母细胞开始获得的酵母细胞群。
酵母菌株的培养可以通过任何合适的方法进行。用于培养酵母的方法在现有技术中是已知的，并且本领域技术人员知道如何根据其性质优化每种菌株的培养条件。通过在培养基中增殖酵母菌株获得酵母，例如参考书“Yeast Technology”，第2版，1991,G.Reedand T.W.Nagodawithana，由Van Nostrand Reinhold出版，ISBN 0-442-31892-8所描述。
因此，例如，在工业规模上，可用于本发明上下文的酵母细胞可通过包括以下步骤的方法获得：
-在培养基中分几个阶段培养酵母菌株，首先在半厌氧生活中，然后在需氧生活中(富氧培养基/气氛)，以获得起始酵母细胞的增殖；和
-通过离心分离由此产生的酵母细胞，以获得含有12％-25％酵母干物质的液体酵母膏。
如此获得的酵母是活酵母。活酵母或活性酵母表示代谢是活性的酵母细胞群。
在本发明的上下文中，活酵母是干酵母的形式。干酵母的特征在于低水含量，并且通常包含高于90％的酵母干物质水平，优选93％-96％的干物质水平。干酵母的优点之一是保存期长。
因此，生产酵母细胞的方法可以进一步包括干燥细胞以获得干燥形式的酵母的后续步骤。干燥可以例如是通过冻干、流化床干燥、转鼓式干燥或喷雾干燥进行的干燥。
根据另一个实施方案，所述酵母菌株以死酵母的形式使用。死酵母也可称为“去活性酵母”或“失活酵母”或“灭活酵母”。它是其代谢永久停止的酵母。
死酵母可以通过本领域技术人员熟悉的技术获得，例如酵母的热处理、由使酵母经历冷冻和连续解冻的几个循环组成的处理、通过辐射的处理、通过雾化的处理或这些处理的组合。失活酵母通常为干燥形式。
在另一个实施方案中，它是用于本发明上下文的酵母细胞的衍生物。该衍生物选自酵母细胞壁和酵母细胞壁的纯化级分。
酵母细胞壁对应于酵母细胞的不溶性部分，即酵母细胞壁和质膜。
通常，酵母细胞壁通过包括以下的方法获得：酵母细胞的自溶或酶水解步骤，随后是将可溶性级分与不溶性级分分离的步骤，分离的不溶性级分对应于酵母细胞壁，并且可溶性级分对应于酵母提取物。然后，可以干燥不溶性级分。酵母细胞壁可以是液体形式、干燥形式或粘性形式。当它们的干物质含量为至少85％时，它们被认为是干燥形式。相反，如果它们的干物质含量小于20wt％，则认为它们是液体形式。从干物质的20wt％开始至低于85wt％，酵母细胞壁被认为是粘性形式。酵母细胞壁优选以干燥形式使用。获得酵母细胞壁的方法使得其保留细胞壁的结构多糖，即β-葡聚糖和甘露聚糖，这些甘露聚糖为甘露糖蛋白的形式。获得酵母细胞壁的方法在现有技术中是已知的(参见例如参考文献“YeastTechnology”，第2版，1991,G.Reed and T.W.Nagodawithana，由Van Nostrand Reinhold出版，ISBN 0-442-31892-8)。
因此，酵母细胞壁的纯化级分特别涉及葡聚糖和甘露聚糖。
甘露糖蛋白和葡聚糖通过本领域技术人员熟悉的常规方法获得。它们从细胞壁的提取可以通过选择性溶解或通过化学、酶或物理化学水解进行。
特别地，术语“细胞壁β-葡聚糖”表示酵母细胞壁的β-葡聚糖，其基本上是葡萄糖聚合物，其主链的葡萄糖单元通过β-1,3键连接在一起并且其支链通过β-1,6键连接在一起。酵母β-葡聚糖是不溶性的并且具有低粘度。本领域技术人员知道如何从酵母细胞壁中提取β-葡聚糖。一种常用的方法包括用碱和酸(例如乙酸)连续热提取，随后通过水洗操作以除去酵母细胞壁的任何可溶性化合物，并回收由细胞壁β-葡聚糖组成的不溶性材料。
术语“细胞壁甘露糖蛋白”表示酵母多糖，更准确地说是通过糖苷键结合在一起并与蛋白质结合的中性或酸性单糖(具有5或6个碳原子)的共聚物。在酵母细胞壁中，葡聚糖构成网络，其它葡聚糖、壳多糖和甘露糖蛋白共价结合在该网络上。甘露糖蛋白通过含有5个甘露糖残基的链的糖基磷酸酯固定到葡聚糖上。本领域技术人员知道如何从酵母细胞壁中提取甘露糖蛋白。一种常用的方法包括用β-葡聚糖酶制剂酶促消化酵母细胞壁，然后通过离心分离水解产物，并通过超滤纯化。另一种方法是基于热化学萃取。
因此，本发明涉及用于预防单纯性膀胱炎和/或复发性膀胱炎的包含至少一种根据本发明的酵母的组合物。根据本发明的酵母选自活酵母、死酵母、酵母细胞壁、酵母细胞壁的纯化级分或其混合物。不希望受任何理论的束缚，本发明人认为施用根据本发明的酵母使得可以调节病原体的毒力因子，导致其致病性降低。此外，发明人认为将涉及酵母-病原体共聚集，从而促进病原体的消除。
根据本发明的优选实施方案，单纯性和/或复发性膀胱炎是由尿道致病性大肠杆菌(UPEC)引起的膀胱炎。
令人惊讶的是，本发明人已经发现施用包含根据本发明的酵母的组合物具有减少在尿路中携带UPEC的作用，如将在实施例中所证明。
术语“携带”表示病原体在其定殖或感染的解剖位点的水平上的存在和/或增殖。
根据本发明的另一个优选实施方案，根据本发明的酵母是选自酵母属的酵母，特别地，所述酵母是酿酒酵母。
根据本发明的优选实施方案，该酵母通过培养根据布达佩斯条约于2007年10月17日以保藏号I-3856保藏于国家微生物培养物保藏中心(Collection nationale deCultures de Microorganismes，CNCM)，Institut Pasteur,25rue du Docteur Roux,75724Paris cedex 15的酿酒酵母菌株获得。
该酿酒酵母酵母菌株之前已由本申请人描述于文献WO2009/103884中，其中它被描述为可用于预防和/或治疗肠疾病、病症或障碍；并且描述于文献WO2014/009656中，其中它被描述为可用于预防和/或治疗阴道霉菌病，特别是阴道或外阴阴道念珠菌病。
根据本发明的优选实施方案，该酵母通过培养根据布达佩斯条约于2007年8月21日以保藏号I-3799保藏于在国家微生物培养物保藏中心(CNCM)，Institutpasteur，25ruedu docteur roux，75724Paris cedex 15的酿酒酵母菌株获得。
该菌株布拉迪酿酒酵母变种之前已由本申请人描述于文献WO2009/103884中，其中其被呈现为可用于预防和/或治疗肠疾病、病症或障碍。
微生物群系对应于构成特定环境微生物群系的所有微生物。存在不是一种，而是几种微生物群系，其组成根据机体区域而变化。其组成例如根据需氧或厌氧培养基、根据微生物群系的酸度、根据培养基的干燥度或含水量或是否为脂肪区而变化。因此，皮肤微生物群系、阴道微生物群系、泌尿道微生物群系、呼吸道微生物群系、ORL微生物群系和最大的肠道微生物群系之间存在区别。因此，重要的是记住涉及尿道疾病的病原体和阴道粘膜或肠粘膜疾病的病原体是不同的。因此，病原体和益生菌对于阴道粘膜或肠粘膜的行为不能转移到对于尿道采用的行为，因为这些粘膜的环境是不同的。
根据本发明的具体实施方案，根据本发明的酵母是干酵母的形式。
根据本发明的另一个实施方案，用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含至少一种酵母的组合物旨在用于口服或局部施用。
本发明特别涉及如上定义的用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的组合物，其特征在于，所述组合物为硬胶囊、锭剂、丸剂、片剂、软胶囊、粉末、悬浮液、液体溶液、颗粒、阴道栓剂、凝胶或乳膏的形式。本领域技术人员能够选择用于制备给定类型的制剂的最适合的载体和赋形剂。
根据本发明的组合物还可以包含添加剂，例如防腐剂、甜味剂、调味剂、增稠剂、着色剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、润滑剂等。
本发明特别涉及如上定义的用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的组合物，其特征在于，所述组合物是食品组合物或膳食补充剂。
“食品组合物”表示任何食物、饮料或糖果。
食品组合物可以是例如饮料、谷物棒、口香糖或乳制品。
“膳食补充剂”是指目的在于补充正常膳食并且构成单独或组合的营养物或具有营养或生理效应的其它物质的浓缩来源的食品。
膳食补充剂以剂型销售，例如剂型，诸如胶囊、锭剂、片剂、丸剂和其它类似形式、粉末的小袋、液体的安瓿、具有滴管的瓶和其它类似形式的液体或粉末制剂，其旨在以少量的测量单位服用。
本发明还涉及如上定义的用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的组合物，其特征在于，其还包含另一种活性成分。
当组合物旨在用于口服使用时，其它活性成分是基于植物的，选自蔓越莓、越橘、红蔓越莓、杨梅、石南或其混合物的提取物。
在本发明的一个具体实施方案中，其它活性成分不是酵母。
本发明还涉及用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的医疗装置，其特征在于，其包含如上所述的组合物。
根据本发明的有利实施方案，医疗装置是棉塞或卫生巾、乳膏、凝胶、阴道栓剂、片剂、胶囊、锭剂、丸剂和其它类似形式。
现在将通过下文提供的实施例和附图来说明本发明，这些实施例和附图出于说明的目的而提供，并且不以任何方式进行限制。
附图说明
[图1]显示每个测试组的肠切片中UPEC菌株的CFU数量。
[图2]显示每个测试组的尿中的以CFU/mL(Log10)计的细菌载量。
[图3]显示每个测试组的膀胱中的以CFU/mL(Log10)计的细菌载量。
[图4]显示每个测试组的肾中以CFU/mL(Log10)计的细菌载量。
具体实施方式
实施例1：酵母与UPEC菌株的共聚集测试
材料和方法
UPEC菌株
两个尿道致病性大肠杆菌菌株用于本实施例中，并从中段尿样中分离。
所用的第一大肠杆菌菌株称为UPEC1，对所有抗生素敏感。
所用的第二大肠杆菌菌株称为UPEC2，对抗生素具有多重耐药性。
UPEC菌株的生长条件
在测试前将大肠杆菌菌株在37℃下在米勒-海顿琼脂上培养过夜。然后，将菌株通过以11000rpm离心5分钟收集，用磷酸缓冲盐水(PBS)的无菌溶液洗涤两次，将浓度调节至所需浓度，并重悬于相同缓冲液中。
测试的酵母
对两种UPEC菌株中的每一种测试的酵母如下：
-失活酵母酿酒酵母CNCMI-3856(IY)，其干物质含量为≥94％并且pH为5.5-6.3，
-活酵母酿酒酵母CNCMI-3856(GI)，其含量为≥5.109CFU/g，
-活酵母布拉迪酿酒酵母变种CNCMI-3799(SCB)，含量为≥2.1010CFU/g，
-细胞壁葡聚糖(WG)，其β-葡聚糖含量为≥50％。
在测试之前，用PBS缓冲液再水合酵母。
共聚集方案
以等于酵母(10mg/mL)的体积添加PBS缓冲液中的UPEC菌株(1×109个细胞/mL)。
将该混合物涡旋至少10秒并在37℃下在搅拌下以每孔1mL的速率在24孔板中沉积4小时。
然后，在倒置透射光学显微镜中观察悬浮液以评价聚集程度并根据以下等级给出得分：
0＝无聚集；
1＝包含小可见簇的小聚集体；
2＝在孔的中心建立的包含大量微生物的聚集体；
3＝包含在孔的中心建立的更大组的肉眼可见的簇；
4＝分配用于描述孔的中心处的大的肉眼可见的簇的最大分数。
平行地，也根据上文给出的相同方案(但不向混合物中加入UPEC菌株)测试不同酵母彼此自聚集的能力。单独测试酵母。
结果
结果来自3个彼此独立的测试，每个测试用双份样品进行(下文称为dp)。
自聚集和共聚集测试的结果在下表1和2中给出。
[表1]
UPEC1和酵母之间的自聚集和共聚集测试的结果
[表2]
UPEC2和酵母之间的自聚集和共聚集测试的结果
酵母和UPEC菌株的自聚集能力
活酵母(GI)、UPEC1和UPEC2的分离物不能自聚集，这些分离物中的每一种获得的得分为0。
布拉迪酿酒酵母变种(SCB)的分离物显示出有限的自聚集能力，这些分离物的得分为1。
失活酵母(IY)和细胞壁葡聚糖(WG)的分离物显示出强的自聚集，这些分离物中每一种的得分为4。
酵母诱导与UPEC菌株聚集的能力
IY、GI、SCB和WG的分离物能够聚集大肠杆菌的2个分离物UPEC1和UPEC2。
特别地，分离物UPEC2具有与GI、SCB和WG的最大共聚集得分，然后与IY具有略低的得分(参见表2)。UPEC1的分离物与SCB、WG具有最大得分，然后与GI和IY具有略低的得分(参见表1)。
结论
诱导与大肠杆菌共聚集的能力可能构成建立和维持健康泌尿生殖菌群的重要现象和对抗泌尿生殖感染的重要防御机制。
因此，本实施例表明：
-所测试的所有化合物能够诱导与UPEC1和UPEC2菌株的共聚集。
-酵母SCB和WG能够与UPEC1和UPEC2共聚集，具有最大得分；
酵母GI和IY能够与UPEC1和UPEC2共聚集。
因此，益生菌可以与对抗生素具有多重耐药性的菌株共聚集。因此，在治疗对抗生素具有多重耐药性的尿路感染期间，使用酵母部分替代或补充抗生素疗法作为辅助手段存在真实益处。
实施例2：通过尿道致病性菌株评价酵母对鼠肠定殖的作用
材料和方法
鼠模型
使用的动物模型是7周龄的BALB/cYJ系雌性小鼠。将小鼠以5只一组圈养在通风支持物上。
尿道致病性菌株
实施例中使用的尿道致病性菌株是对抗生素多重耐药的大肠杆菌的尿道致病性菌株，下文称为UPEC3。
测试的酵母
所测试的酵母如下：
失活酵母酿酒酵母CNCMI-3856(IY)，其干物质含量为≥94％并且pH为5.5-6.3，
-活酵母酿酒酵母CNCMI-3856(GI)，含量为≥5.109CFU/g。
方案
在D(＝天)-2天，收集粪便并将硫酸链霉素(5mg/mL)加入饮用水中，持续2天以减少常驻需氧/厌氧细菌。通过将每只动物放置在空笼中持续收集2-4个粪便团粒所花费的时间来收集粪便，然后将其转移至预称重的2mL无菌管中。然后，称重试管，并将粪便样品重悬于1mL PBS中，系列稀释至1:10，并沉积在添加100μg/ml链霉素和卡那霉素的Drigalski琼脂培养基的培养皿上。
D＝0，接种UPEC3菌株。
在细菌接种之前，收集小鼠的粪便以证实不存在对链霉素和卡那霉素具有耐药性的肠细菌。
UPEC3菌株的接种通过口服灌胃以1×107CFU的剂量进行。从LB(“溶原性肉汤”)液体培养基中的过夜培养物获得接种物，然后在200μL碳酸氢钠溶液中稀释。
同时，用1mg/mL硫酸卡那霉素水溶液代替饮用水2天。
D＝1，通过灌胃按如下每日施用实验处理：
第1组(对照)：分配在2个笼中的10只小鼠接受200μL PBS；
第2组(IY)：分配在2个笼中的10只小鼠接受1mg重悬于200μL PBS中的化合物IY；
第3组(GI)：分配在2个笼中的10只小鼠接受1mg重悬于200μL PBS中的化合物GI。
D＝14，未施用处理。
将动物处死并解剖以去除回肠肠切片和结肠。在去除过程中，将器官的内容物排空，并在无菌条件下用无菌PBS洗涤。
将称重的肠切片在温和的MACSTM Octo解离器中在PBS中匀化，并在微量滴定板中从10稀释至10。然后，将来自各稀释液的等分试样沉积在添加100μg/mL链霉素和卡那霉素的Drigalsky琼脂培养基的培养皿上，用于计数粘附的UPEC3菌株。一式三份进行沉积。手动进行计数。
结果
来自第3组(GI)的一只小鼠在第7天死亡，没有确切原因，但可能是由于重复灌胃的压力。
来自第2组(IY)的一只小鼠的结肠的肠切片不可用。
图1显示了在第14天测试的各组的肠切片中UPEC3菌株的CFU数量。(*p<0.05；***p<0.0001)
在第2组(IY)的肠回肠切片部分中观察到UPEC3菌株数量的显著降低(Mann-Whitney检验)。
观察到第2组(IY)和第3组(GI)结肠中UPEC3菌株的数量显著降低。
结论
对照组的回肠和结肠中的粘附菌群水平显著高于接受酵母的其它两组。更准确地说，在结肠切片中可以看出，两种产物导致粘附的UPEC3菌株水平的显著降低，而在回肠切片中仅产物IY具有显著的作用。但是，对于产品GI，回肠切片中的作用几乎是显著的，因为对于9只小鼠中的4只，粘附的UPEC3菌株的水平达到检测阈值。
因此，活酵母和失活酵母这两种产物显示出降低粘附于肠上皮的大肠杆菌的尿道致病性菌株水平的能力。
因此，这两种酵母能够折中UPEC3菌株的肠贮库的维持。
实施例3：酵母的抗感染功效的评价
材料和方法
大肠杆菌菌株
使用在本实施例中称为UPEC4的尿道致病性大肠杆菌菌株。
测试的化合物
缓冲液
使用的缓冲溶液是PBS1X缓冲溶液。
酵母
评价的酵母是干燥形式的活酵母酿酒酵母CNCMI-3856，下文称为GI。在再水化之前，酵母为干燥形式并且具有≥5.109CFU/g的含量。在测试之前，用PBS缓冲液再水合酵母。
妥布霉素
妥布霉素被用作强力抗生素和参考药品。在测试之前，用PBS缓冲液悬浮妥布霉素。
动物模型
使用的动物模型是8周龄的C57BL/6J系雌性小鼠。将小鼠以5只一组饲养在约22℃的温度下的碎木屑上。将它们用供大鼠和小鼠的标准的完全维持饮食(如)喂养，并且随意饮水。
测试组
使用8周龄的每组10只雌性小鼠(除了第1组，其仅5只雌性)。
测试组如下：
G1：小鼠+UPEC4+缓冲液＝对照；
G2：小鼠+UPEC4+妥布霉素(30mg/kg)＝阳性对照；
G3：小鼠+UPEC4+GI(13.5mg/kg)。
方案
测试化合物的施用
对于第1组和第3组，在感染前24小时和1小时局部施用(经尿道施用)化合物。在第3组中，在感染前1小时腹膜内施用参考药品妥布霉素。
感染UPEC4小鼠
首先用异氟烷(3％)麻醉小鼠。感染前将尿液从膀胱中排出。然后，用50μL的UPEC4感染小鼠(在2-3秒内施用)，即通过经尿道途径施用6x107CFU(菌落形成单位)的UPEC4。
经尿道途径的感染通过将与30G皮下注射针连接的无菌聚乙烯管(内部尺寸0.28mm，外部尺寸0.61mm)插入尿道中来进行。
感染后20小时，从每只小鼠收集尿样。取出膀胱和肾并匀浆用于CFU计数。
用于测定细菌载量(CFU)的样品制备
接种UPEC菌株20小时后，通过吸入CO2处死动物。使用一次性灭菌使用的匀浆体系将右肾和一半膀胱在灭菌等渗盐水中匀浆。用等渗盐水溶液对样品(尿、肾和膀胱匀浆物)进行1/10的连续稀释。然后，将各稀释液的10μl等分试样沉积在BHI(“脑心浸液”)琼脂培养基的培养皿上。一式两份进行沉积。然后，将培养皿在37℃下孵育过夜以测定CFU中活细菌的数目。由两名受试者手动进行计数。
结果的统计分析
在开始统计分析之前，进行Agostino和Pearson测试以确定变量是否遵循正常规律。
基于正态性检验的结果，使用参数检验(单因子ANOVA，随后是Dunnett事后检验，用于正态分布数据)或非参数检验(Kruskal Wallis，随后是Dunn检验的多重比较，用于异常分布)进行实验组之间差异的统计学评价。
Grubb测试用于确定组中的值之一是否是显著的异常值。
数值表示为平均值±SEM。P≤0.05的值被认为是统计学显著的。
结果
图2显示了每个测试组的尿液中CFU的细菌载量(n.s：不显著，与G1相比的G2和G3，*p<0.05，***p<0.001)。
相对于感染UPEC4的第1组中的小鼠，在感染UPEC4并用GI(第3组)和妥布霉素(第2组)处理的小鼠中观察到尿中CFU的显著降低。
图3显示了每个测试组的膀胱中CFU的细菌载量(n.s：不显著，与G1相比的G2和G3，*p<0.05，***p<0.001)。
相对于感染UPEC4的第1组中的小鼠，在感染UPEC4并用GI(第3组)和妥布霉素(第2组)处理的小鼠中观察到膀胱中CFU的显著降低。
图4显示了每个测试组的肾中CFU的细菌载量(n.s：不显著，与G1相比的G2和G3，*p<0.05，***p<0.001)。
相对于感染UPEC4的第1组中的小鼠，在感染UPEC4并用GI(第3组)和妥布霉素(第2组)处理的小鼠中观察到肾中CFU的显著降低。
结论
在小鼠模型中，UPEC4菌株诱导细菌载量的显著增加。
在感染UPEC4菌株的小鼠中局部施用活酵母酿酒酵母CNCMI-3856诱导尿、膀胱和肾中细菌载量的显著降低。
因此，通过局部施用活酵母酿酒酵母CNCMI-3856，尿道致病性大肠杆菌菌株对尿道的感染被非常活性地抑制。

Claims (7)

1.包含至少一种酵母的组合物在制备用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的药物中的用途，其特征在于：
-所述酵母为活酵母、死酵母、酵母细胞壁、酵母细胞壁的纯化级分或其混合物的形式，
-所述酵母是通过培养于2007年10月17日以保藏号I-3856保藏于CNCM的酿酒酵母菌株获得的酵母，
-所述单纯性和/或复发性膀胱炎是由尿道致病性大肠杆菌细菌引起的膀胱炎。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述酵母为干酵母的形式。
3.权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物旨在用于局部或口服施用。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为硬胶囊、丸剂、锭剂、片剂、软胶囊、粉末、悬浮液、液体溶液、颗粒、阴道栓剂、凝胶或乳膏的形式。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物是食品组合物或膳食补充剂。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，当旨在口服施用时，所述组合物包含选自蔓越莓、越橘、杨梅、红蔓越莓、石南或其混合物的提取物的另一种活性成分。
7.用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的医疗装置，其特征在于，它包含权利要求1-6中任一项所述的组合物。
CN202080041222.1A 2019-06-04 2020-05-29 用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物 Active CN113924107B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FRFR1905888 2019-06-04
FR1905888A FR3096891B1 (fr) 2019-06-04 2019-06-04 Composition pour la prevention de la cystite simple et/ou recidivante
PCT/EP2020/065046 WO2020245057A1 (fr) 2019-06-04 2020-05-29 Composition comprenant une levure pour la prevention de la cystite simple et/ou recidivante

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113924107A CN113924107A (zh) 2022-01-11
CN113924107B true CN113924107B (zh) 2023-11-17

Family

ID=69104482

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080041222.1A Active CN113924107B (zh) 2019-06-04 2020-05-29 用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220233618A1 (zh)
EP (1) EP3979834A1 (zh)
CN (1) CN113924107B (zh)
FR (1) FR3096891B1 (zh)
WO (1) WO2020245057A1 (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101918536A (zh) * 2007-12-26 2010-12-15 勒萨弗尔公司 用于人类和/或动物的营养的组合物、它们的应用和酵母菌

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2993179B1 (fr) 2012-07-13 2016-01-08 Lesaffre & Cie Levure saccharomyces cerevisiae pour prevenir et/ou traiter les mycoses vaginales

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101918536A (zh) * 2007-12-26 2010-12-15 勒萨弗尔公司 用于人类和/或动物的营养的组合物、它们的应用和酵母菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Efficacy of Fluoroquinolone/Probiotic Combination Therapy for Recurrent Urinary Tract Infectionin Children: A Retrospective Analysis;Ramiro J et al.;《Clinical Therapeutics》;20151231;第1-5页，尤其是第1页右栏第2段，第2页左栏第1段 *
Update on Associated Risk Factors, Diagnosis, and Management of Recurrent Urinary Tract Infections in Children;Anum Khan et al.;《Journal of the Pediatric Infectious Diseases Society》;20181231;第1-8页，尤其是第1页摘要，第5页左栏第3段、右栏第2段 *

Also Published As

Publication number Publication date
FR3096891B1 (fr) 2022-05-13
EP3979834A1 (fr) 2022-04-13
US20220233618A1 (en) 2022-07-28
FR3096891A1 (fr) 2020-12-11
CN113924107A (zh) 2022-01-11
WO2020245057A1 (fr) 2020-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101048168B (zh) 用于改善的阴道健康的益生菌乳杆菌属菌株
JP4455333B2 (ja) プロバイオティック細菌：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ
EP0199535B2 (en) Lactobacillus acidophilus strains of bacteria and compositions thereof
KR20110104557A (ko) 프로바이오틱 및 프리바이오틱 성분 및 무기 염을 락토페린과 함께 포함하는 조성물
EP3812452A1 (en) Bifidobacterium lactis bl-99 and application thereof
KR102063757B1 (ko) 가드네렐라 바기날리스 및 칸디다 알비칸스에 항균 효과를 갖는 질염 치료 또는 개선용 유산균
CN112458007A (zh) 用于预防和/或治疗生殖道菌群紊乱相关疾病的卷曲乳杆菌
CN114990011A (zh) 一种能够降胆固醇及抑制加德纳菌的罗伊氏乳杆菌和应用
CN113577218A (zh) 一种抑制幽门螺旋杆菌的灭活益生菌中药组合物及其制备方法和应用
WO2018112741A1 (zh) 一种嗜酸乳杆菌及其培养方法和应用
CN114774315B (zh) 鼠李糖乳杆菌菌株LRa05在制备增强免疫力制品和/或缓解湿疹制品方面的用途
JPS62145026A (ja) 抗発癌剤
US20130309212A1 (en) Lactobacillus salivarius and method for preparing metabolite thereof, composition of lactobacillus salivarius and metabolite thereof and use of the composition
CN111568919A (zh) 一种含壳寡糖的抗幽门螺旋杆菌制剂
CN114287633A (zh) 含蔓越莓的益生菌组合物及其在抗幽门螺旋杆菌中的应用
CN117645955A (zh) 具有促进肠上皮细胞恢复作用的直肠真杆菌及其应用
JP4603116B2 (ja) 乳酸菌含有組成物、医薬及び食品
CN113924107B (zh) 用于预防单纯性和/或复发性膀胱炎的包含酵母的组合物
JP2019509312A (ja) ガードネレラ・バギナリスによる細菌腟感染症及び存在する場合には併発真菌感染症を治療するための乳酸菌組成物
CN112057601B (zh) 一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用
CN116396884A (zh) 鼠李糖乳杆菌和一种抑制幽门螺杆菌的组合物
CN111560335B (zh) 一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用
JP2969017B2 (ja) 感染防御剤
EP0820292B1 (en) Inhibition of c. difficile infections by indigestible oligosaccharides
US20240148778A1 (en) Glycoside inhibitors of yeast

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant