CN112057601B - 一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用 - Google Patents
一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用。本发明通过优化菌体组合筛选得到了乳酸杆菌CGMCC NO.12422和嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124与抗菌肽进行配合使用，具有极好的治疗阴道炎的效果。而且，通过针对冻干方法以及冻干保护剂的优化，特别是三段式的冷冻形式配合保护剂使得菌剂的存活率以及保质期都可到到显著的延长。本发明制备得到的菌剂可以由于阴道炎的治疗，具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，具体的涉及一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用。
背景技术
益生菌为有益于肠道微生物平衡的有机物质。近几十年来, 益生菌的应用获得很大的发展, 如在各种腹泻、炎性肠病、短肠综合征和贮袋炎的治疗等。作为益生菌, 必须具备的要素包括:能与人体细胞黏附;在胃酸和胆汁中有较好的稳定性;能产生抗微生物物质或有抗菌活性。临床上较常用的有嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、卷曲乳杆菌和酵母菌等。1995年, Gibson等提出具有选择性刺激肠道有益菌群或益生菌本身的生长或和增强其活性,从而对机体产生有益作用。
目前的研究表明益生菌的功能和作用主要有以下几个方面。改善肠道内环境：益生菌主要通过改善肠道微生态平衡而促进人体健康。它可合成维生素, 形成有抗菌作用的物质乙酸和脂肪酸等, 也能影响肠道先天免疫系统, 如加强肠道紧密连接、增加黏液分泌和促进胃肠蠕动等。总之, 益生菌作用于肠道菌群的多方面, 最终有利于建立一个正常的共生菌群,防止潜在致病性病原微生物的侵袭。免疫增强作用：微生态制剂可刺激宿主的免疫应答, 增强体液免疫和细胞免疫。Schultz等研究结果表明, 乳杆菌对健康人细胞免疫系统有直接的作用。此外, 微生态制剂还可增强巨噬细胞的吞噬活性以及补体和网状内皮系统功能。抗肿瘤作用：益生菌的细胞壁主要组分为细胞壁酰二肽( MDP)和脂磷壁酸等,可激活免疫系统中的巨噬细胞、自然杀伤( NK)细胞和B细胞等免疫效应细胞, 使之分泌具有杀瘤活性的细胞毒性效应分子, 如IL-1、IL-6、TNF-α、NO以及多种抗体。同时, 益生菌还可通过诱导机体产生NO、促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞端粒酶活性等机制,以达到抗肿瘤的作用。降低胆固醇作用：一系列体外研究认为,益生菌可能通过以下机制达到降低血胆固醇水平的作用:①产生游离胆酸盐与胆固醇共沉淀;②细菌的酶对胆酸盐的去结合作用;③胆固醇结合至细菌细胞膜或壁上;④细菌对胆固醇的吸收;⑤共沉淀和吸收作用同时发生。Lieske等的临床研究显示, 摄入益生菌可降低尿草酸盐排泄率, 从而预防和治疗肠源性尿草酸盐过多及其引起的泌尿系结石的目的。其作用主要是通过调整肠道菌群, 限制肠道草酸盐吸收。
健康女性阴道菌群以乳杆菌为主，同时包含少量厌氧菌及兼性厌氧菌，包括奇异菌属、棒状杆菌、动弯杆菌、普氏菌属、阴道加德纳菌、纤毛菌属、气球菌属（anaerococcus）和微单胞菌属（pepto⁃niphilus）等。除乳杆菌外，一些其他细菌如奇异菌属也可产生乳酸，属于潜在的益生菌或致病菌。这些细菌可使阴道pH值轻度升高。阴道菌群变化与微生态失调及疾病相关。月经、激素波动、性行为、卫生行为、新的性伴侣及阴道微生物构成变化引起菌群变化，最终导致临床疾病如细菌性阴道病（bacterial vaginosis，BV）、外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis，VVC）和需氧性阴道炎（aerobic vaginitis，AV）等。
近年来我国的妇女泌尿系统细菌感染发病率有了明显的上升，并且呈现出一定的年轻化趋势，越来越多的年轻女性成为了泌尿系统细菌感染的“受害者”。药物治疗是妇女泌尿系统细菌感染治疗的主要方式，科学合理的药物治疗可以有效改善患者的疾病状态，促进患者的健康恢复。益生菌应用于妇女泌尿系统细菌感染治疗中的研究近年来不断增多，多数认为益生菌的应用效果明显，能够充分发挥出在抗感染方面的作用。益生菌制剂治疗阴道感染和复发的基本原理是根据阴道正常菌群在阴道的调节作用以及受损微生态需要恢复。乳杆菌是最常见的益生菌制剂。乳杆菌抑制阴道病原体生长的机制有以下几种：（1）乳杆菌发酵阴道上皮的糖原，产生D-及L-乳酸。（2）乳杆菌可在体外产生过氧化氢。（3）乳杆菌可产生细菌素，杀灭其他细菌。（4）乳杆菌吸收营养剂与阴道受体结合的能力也超过其他菌。一些临床试验也显示出益生菌可减少假丝酵母菌在阴道和肠道定植，减轻临床症状以及在某些情况下减少危重患者真菌感染，并提高常规治疗的抗真菌作用。此外益生菌对曲霉、青霉菌和镰刀菌的抑制作用，表明益生菌有维持一个健康的机体微生态的作用，可以作为预防和辅助治疗真菌病的用药。益生菌治疗阴道感染的推荐也有。大部分研究应用益生菌治疗的阴道栓剂包括各类乳杆菌，通常有L-乳酸菌、鼠李糖乳杆菌或罗伊乳杆菌RC-14，治疗5 d至4周。体外实验显示益生菌用于治疗及预防VVC有益。临床试验研究显示乳杆菌益生菌制剂有利于阴道感染治疗及预防。
随着公众对真菌病危害的日益认知，开发新的安全和有效的针对阴道炎或者皮肤真菌危害的抗菌剂的要求越来越强烈。因此，开发一种抗菌效果更好的益生菌组合物是本领域研发的方向和难点。
发明内容
本发明针对现有技术提供了改进。
提供了一种活性益生菌冻干粉制备方法。该方法将发明人前期筛选并获得的具有较好协同作用的乳酸杆菌CGMCC NO.12422,嗜酸乳酸杆菌，CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，培养并收获菌体。将二个菌株按照1:1体积比混合，再用等体积的生理盐水(0.85%)充分悬浮混合菌体，离心收集菌体，备用。将上述混合后的菌体按照重量比100:1加入SEQID NO：1的抗菌肽后一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用。在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品。其中保护剂（质量浓度，g/100mL蒸馏水）的组成为海藻糖1%，谷氨酸钠0.5%，脱脂乳1%，抗坏血酸0.25%，葡聚糖0.25%。
本发明还提供一种冻干菌剂，采用活性益生菌冻干粉制备方法制备。该方法将发明人前期筛选并获得的具有较好协同作用的乳酸杆菌CGMCC NO.12422,嗜酸乳酸杆菌，CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，培养并收获菌体。将二个菌株按照1:1体积比混合，再用等体积的生理盐水(0.85%)充分悬浮混合菌体，离心收集菌体，备用。将上述混合后的菌体按照重量比100:1加入SEQ ID NO：1的抗菌肽后一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用。在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品。其中保护剂（质量浓度，g/100mL蒸馏水）的组成为海藻糖1%，谷氨酸钠0.5%，脱脂乳1%，抗坏血酸0.25%，葡聚糖0.25%。
本发明前期通过筛选也获得了具有较好抗菌活性的抗菌肽，其氨基酸序列如SEQID NO：1所示。
本发明另外提供一种药物组合物，其中含有前述制备的菌剂。
进一步地，所述医药组合物的剂型包括固体剂型、液体剂型或外用剂型。
固体剂型包括粉体剂型。固体剂型具有物理化学稳定性好、生产制造成本较低、携带方便等特点，液体剂型具有吸收快、起效迅速、生物利用度较高等特点。
进一步地，所述外用剂型包括乳膏、喷雾剂、凝胶、卫生棉条、卫生巾、散剂或霜剂。本申请可用于抗微生物菌群失衡引起的阴道炎，可用于喷雾、软膏或卫生巾等妇女用品。
跟进一步的，本发明同时还提供一种阴道抑菌载体的制备方法，包括如下步骤：(1)取将基体材料聚乙烯醇溶解于60℃-100℃的水中，完全溶解后，冷却至40℃-55℃，加入益生菌菌剂并混合均匀，得益生菌层材料； (2)将明胶加热使其熔化，对其进行高压高温灭菌，再冷却至50℃-60℃，得明胶凝胶，即为隔离层材料；()取适量的益生菌层材料，加入模具中，在室温条件下冷却成型，得益生菌层；50℃-60℃条件下在益生菌层表面均匀涂覆配方量的隔离层材料，室温条件下冷却成型，得隔离层包覆益生菌层的半成品；最后在半成品表面均匀涂覆配方量的抑菌层材料中，于-5℃-0℃温度下预冷冻成型，随后在室温下进一步凝固成型，包装即得成品。
选用不同形状的模具，益生菌层就可以做成各种不同的形状，例如圆球形、鸭嘴形、椭球形、圆柱形等，在益生菌层表面依次均匀涂覆隔离层和抑菌层材料后，最终得到的成品也具有相应的形状，为了方便使用，本发明优选为圆球形和椭球形。
为了避免引入额外的杂质和致病菌，本发明中所用到的培养基、明胶、芦荟凝胶等，以及制备过程用到的工具，包括模具、涂覆工具等均经过灭菌处理。
有益效果
本发明通过优化菌体组合筛选得到了乳酸杆菌CGMCC NO.12422和嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124与抗菌肽进行配合使用，具有极好的治疗阴道炎的效果。而且，通过针对冻干方法以及冻干保护剂的优化，特别是三段式的冷冻形式配合保护剂使得菌剂的存活率以及保质期都可到显著的延长。本发明制备得到的菌剂可以用于阴道炎的治疗，具有较好的应用前景。
具体实施方式
为了更进一步的说明本发明的目的、技术方案和优点，我们结合以下具体实施例来阐述本发明，这些实施例仅为了更好的说明本发明专利，而不用于限制本发明范围。基于本发明中的实施例，本领域的技术人员在没有做出创造性的情况下所得到的其他所有实施方式均属于本发明所保护的范围。如将本发明的组合物以一定比例加入其他常见的或者作为本领域专业人员常用的药用辅料，制备成合适的制剂形式，如片剂、泡腾片、胶囊、栓剂，凝胶剂，粉剂，喷剂，膏剂等。都属于本发明的保护范围。
实施例1 冻干保护剂的筛选
将乳酸杆菌CGMCC NO.12422用MRS培养基活化，接种量为2.5%，将活化好的菌种，按照5%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养22h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，接种量为2%，将活化好的菌种，按照4%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养25h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将二个菌株按照1:1体积比混合，再用等体积的生理盐水(0.85%)充分悬浮混合菌体，菌液浓度为大约4.253×109 cfu/mL，离心收集菌体，备用。
将上述混合后的菌体加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用。在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品。其中保护剂A（质量浓度，g/100mL蒸馏水）的组成为海藻糖1%，谷氨酸钠0.5%，脱脂乳1%，抗坏血酸0.25%，葡聚糖0.25%。保护剂B（质量浓度，g/100mL蒸馏水）的组成为海藻糖2%，谷氨酸钠1%，脱脂乳5%，抗坏血酸0.5%，葡聚糖1%。保护剂C（质量浓度，g/100mL蒸馏水）的组成为脱脂乳5%。
将冻干后的菌粉中加入与冻干前等体积的生理盐水(0.85%)进行复水，进行稀释涂布活菌计数，测定冻干存活率，平行3次实验。结果如下表1所示。
表1 冻干菌剂冻干存活率
从表1可以看出，采用保护剂A制备的冻干保护剂具有较好的针对二种乳酸菌的冻干存活率，具有菌株冻干保护特异性。
实施例2 冻干菌剂的制备
将乳酸杆菌CGMCC NO.12422用MRS培养基活化，接种量为2.5%，将活化好的菌种，按照5%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养22h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，接种量为2%，将活化好的菌种，按照4%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养25h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将二个菌株按照1:1体积比混合，再用等体积的生理盐水(0.85%)充分悬浮混合菌体，再次离心收集菌体，备用。
将上述混合后的菌体按照重量比100:1加入SEQ ID NO：1的抗菌肽后一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用。在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品。
将冻干的菌剂分别在4 ℃和25 ℃保存菌粉，每隔2月测每种菌粉的活菌数，平行3次实验。结果如表2所示。
表2 存活率结果
| 时间/月 | 4 ℃存活率% | 25 ℃存活率% |
| 2 | 99.57±1.31% | 99.13±1.03% |
| 4 | 99.01±1.02% | 98.76±1.31% |
| 6 | 98.53±1.55% | 97.43±1.52% |
| 8 | 98.01±1.11% | 94.01±0.96% |
| 10 | 97.46±1.19% | 92.33±1.24% |
| 12 | 96.83±2.01% | 90.17±1.46% |
由表2可知，冻干的菌剂在4℃和25 ℃保存12个月后，活菌数仍保持在较高的水平。在25 ℃保存下的稳定性较4 ℃保存下虽然有一定的差距，但是仍然保持在90%的存活水平。
实施例3 对照不含多肽的冻干菌剂的制备
将乳酸杆菌CGMCC NO.12422,嗜酸乳酸杆菌，CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，接种量为2.5%，将活化好的菌种，按照5%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养22h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，接种量为2%，将活化好的菌种，按照4%接种量转接到MRS大瓶中在37 ℃培养25h，离心(6000 g，15 min)收获菌体。
将二个菌株按照1:1体积比混合，再用等体积的生理盐水(0.85%)充分悬浮混合菌体，再次离心收集菌体，备用。
将上述混合后的菌体一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用。在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品，即为对照不含肽的冻干菌剂。
实施例4 大鼠混合性阴道炎模型建立
将大鼠分别于给药前第3天皮下注射0.5 mg/只的苯甲酸雌二醇注射液（每日上午进行），大鼠阴道内注入链霉素50μg/只/次，然后向阴道内注入混合菌（加德纳菌，白色念珠菌，B 族链球菌悬液（1:1:1菌落数））（1 × 108 CFU/mL）50 μL/只/次，每天1次，连续3 天，复制混合性阴道:炎模型，空白组大鼠阴道接种 50 μL不含菌株的PBS。模型组和空白组大鼠分别于分组前向大鼠阴道内注入50 μL 无菌 PBS，移液枪轻轻吹打5 次后吸出冲洗液（约250μL），取50μL用于显微镜下观察发现给药第5天混合感染率为92.13%，致病性菌落数显著增加，阴道分泌物涂片转阴率显著减少，清洁度评分显著增加，同时阴道pH显著增加，其异常症状与临床上阴道炎的临床表现相似，说明模型构建成功。
实施例5 模型治疗验证
（1）造模成功后进行 7 次给药治疗。甲硝唑阳性对照治疗组给药剂量，根据所购买甲硝唑药品说明以及经过等效剂量换算后得出，大鼠给药剂量 16.2 mg/200g；将81 mg甲硝唑溶于 250 µL 无菌 PBS 中配制 0.32 g/mL 浓度溶液，使每只大鼠给药剂量为16.2 mg/200 g。将医用吸收性明胶海绵剪成 0.5 cm×0.5 cm 大小，吸取50 µL 药物使明胶海绵充分吸收药物后，放入大鼠阴道内；菌剂实验治疗组为实施例2的冻干菌粉，经过冻干粉活菌数评价后，称取菌粉 0.3g，用无菌 PBS 配制 1×1011CFU/mL的混合菌液；将医用吸收性明胶海绵剪成 0.5 cm×0.5 cm 大小，吸取 50µL 菌液，使明胶海绵充分吸收菌液后，放入大鼠阴道内，每只实验大鼠 5×109CFU；实施例3的对照不含多肽的冻干菌剂作为治疗组2采用相同的治疗方法进行实验；（2）治疗恢复 7 天后，向大鼠阴道内注入50 μL 无菌 PBS，移液枪轻轻吹打5 次后吸出冲洗液（约250μL），取50μL用于显微镜下观察菌落数。结果如下表3所示。
表3 治疗前后三种致病菌的菌落数的变化
| 组别 | 给药前 | 给药后 |
| 模型组（作为对照，不给药） | 1.47±0.21（×10<sup>3</sup>CFU/μL） | 3.79±0.48（×10<sup>3</sup>CFU/μL） |
| 复方甲硝唑对照组 | 1.26±0.09（×10<sup>3</sup>CFU/μL） | 0.91±0.33（×10<sup>3</sup>CFU/μL） |
| 实施例2菌剂实验治疗组 | 1.35±0.17（×10<sup>3</sup>CFU/μL） | 1.16±0.11（×10<sup>2</sup>CFU/μL） |
| 实施例3菌剂治疗组 | 1.40±0.13（×10<sup>3</sup>CFU/μL） | 6.82±0.11（×10<sup>2</sup>CFU/μL） |
从表3可以看出，本发明实施例2制备的菌剂能够较好的抑制致病菌的活性，而从实施例2的菌剂和实施例3的菌剂对比可以看出，活性肽还是能够协同的增加二种益生菌的活性，提高治疗阴道炎的效果。
实施例6 动物安全性动物试验
每批制品取体重 24-26g 雌性小鼠 5 只，每日一次，连续三日，将每只小鼠阴道内置入实施例2的菌剂10mg，从给药第一天开始观察小鼠健康情况同时观察小鼠阴道口局部有无红肿分泌物等症状，观察至第七天，小鼠应健康、阴道局部无症状、体重应增加，若出现不健康、体重减轻或出现红肿或有分泌物等情况应判该批制品为不合格。结果如表4所示。
表4 小鼠阴道有无异常观察结果
| 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | 6天 | 7天 | |
| 实施例2菌剂 | 无异常 | 无异常 | 无异常 | 无异常 | 无异常 | 无异常 | 无异常 |
从表4的结果可有看出，本发明的菌剂具有较好的动物安全性，对健康小鼠的阴道基本没有刺激性，具有较好的应用前景。
实施例7 阴道给药载体的制备
(1)将聚乙烯醇基体材料溶解于60℃-100℃的水中，完全溶解后，冷却至40℃-55℃，加入实施例2制备的益生菌菌剂并混合均匀，得益生菌层材料；
(2)将明胶加热使其熔化，对其进行高压高温灭菌，再冷却至50℃-60℃，得明胶凝胶，即为隔离层材料；
(3)取配方量的益生菌层材料，加入模具中，在室温条件下冷却成型，得益生菌层；50℃-60℃条件下在益生菌层表面均匀涂覆配方量的隔离层材料，室温条件下冷却成型，得隔离层包覆益生菌层的半成品；最后在半成品表面均匀涂覆配方量的抑菌层材料中，于-5℃-0℃温度下预冷冻成型，随后在室温下进一步凝固成型，包装即得成品载体。
序列表
<110> 北京达熙生物科技有限公司
<120> 一种活性益生菌冻干粉制备方法及在皮肤和妇科疾病中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Glu Gln His Val Tyr Phe Trp Phe Gln Met Ile Gly Arg Pro Cys Asp
1 5 10 15
Gln Leu
Claims (7)
1.一种活性益生菌冻干粉制备方法，其特征在于：将乳酸杆菌CGMCC NO.12422,嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，培养并收获菌体；将二个菌体配制相同浓度后按照1:1体积比混合，再用等体积的0.85%的生理盐水充分悬浮混合菌体，离心收集菌体，备用；将上述混合后的菌体按照重量比100:1加入SEQ ID NO：1的抗菌肽后一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用；在进行冷冻干燥之前，样品需在-80℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品；其中保护剂质量浓度，g/100mL蒸馏水的组成为海藻糖1%，谷氨酸钠0.5%，脱脂乳1%，抗坏血酸0.25%，葡聚糖0.25%。
2.一种冻干菌剂，采用活性益生菌冻干粉制备方法制备；其特征在于：活性益生菌冻干粉制备方法为：将乳酸杆菌CGMCC NO.12422,嗜酸乳酸杆菌CCTCC NO：M2011124用MRS培养基活化，培养并收获菌体；将二个菌体配制相同浓度后按照1:1体积比混合，再用等体积的0.85%的生理盐水充分悬浮混合菌体，离心收集菌体，备用；将上述混合后的菌体按照重量比100:1加入SEQ ID NO：1的抗菌肽后一起加入到保护剂中，其中保护剂与菌体的体积比为3∶1，混合均匀备用；在进行冷冻干燥之前，样品需在-80 ℃超低温冰箱预冻3 h，随后采用三段式冷冻干燥，在512 Pa压力下冻干6h，随后在256 Pa压力下冻干5h，之后在103 Pa下冻干直至获得粉末产品；其中保护剂质量浓度，g/100mL蒸馏水的组成为海藻糖1%，谷氨酸钠0.5%，脱脂乳1%，抗坏血酸0.25%，葡聚糖0.25%。
3.一种药物组合物，其中含有权利要求2所述的冻干菌剂。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中药物组合物的剂型包括固体剂型、液体剂型或外用剂型。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述外用剂型包括乳膏、喷雾剂、凝胶、卫生棉条、卫生巾、散剂或霜剂。
6.一种阴道抑菌载体的制备方法，包括如下步骤：(1)将基体材料聚乙烯醇溶解于60℃-100℃的水中，完全溶解后，冷却至40℃-55℃，加入权利要求2的菌剂并混合均匀，得益生菌层材料； (2)将明胶加热使其熔化，对其进行高压高温灭菌，再冷却至50℃-60℃，得明胶凝胶，即为隔离层材料；(3)取适量的益生菌层材料，加入模具中，在室温条件下冷却成型，得益生菌层；50℃-60℃条件下在益生菌层表面均匀涂覆配方量的隔离层材料，室温条件下冷却成型，得隔离层包覆益生菌层的半成品；最后在半成品表面均匀涂覆配方量的抑菌层材料中，于-5℃-0℃温度下预冷冻成型，随后在室温下进一步凝固成型，包装即得成品。
7.权利要求3所述的药物组合物在用于制备治疗阴道炎的药物中的用途。
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