CN108042578A - 一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶 - Google Patents
一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其由如下方法制备而成：（1）制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物；（2）配置凝胶：按照每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：5ml，β葡聚糖0.5g，鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物3ml，黄柏提取液3ml，柠檬酸0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。本发明的凝胶温和无刺激，可以有效抑制炎症反应，促进阴道粘膜损伤的修复，并且对念珠菌有很强的抑制作用，对阴道内存在的益生菌则没有明显抑制作用，可以有效避免破坏阴道内环境。
Description
技术领域
本发明涉及一种保健阴道凝胶，尤其涉及一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶。
背景技术
妇科凝胶是一种妇科药品，凝胶剂，用于各种妇科阴道炎、宫颈炎的治疗，包括：细菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、混合性阴道炎、淋球菌感染、慢性宫颈炎、宫颈糜烂。具有消炎、杀菌、止痒作用。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、淋球菌、白色念珠球菌、真菌、酵母菌等病原体微生物的生长有明显抑制作用。
理想的阴道药物缓释系统除了应该具有易操作、应用可逆、对患者无痛、成本低、来源广泛与安全持续给药等特点之外，还要求该系统能持续稳定释放药物，对身体机能与日常生活的影响最低及释放的药物拥有高生物利用度。采用阴道方式给药的优势在于，可避免肝脏首过代谢，降低药物对胃肠道副作用的严重程度，减弱药物（如类固醇）对肝脏的副作用，减少疼痛感、组织损伤及传染。常见的阴道药物载体形式多种多样，譬如半固态制剂、片剂、胶囊、阴道栓、液体药剂、阴道薄膜、阴道环、阴道泡沫。目前最广泛应用于阴道药物释放系统的半固态制剂包括奶油状物质、软膏类物质与水凝胶。这类制剂的共同特点是具有一定稠度，并且在清洗掉之前的一段合理释药时间内具有一定的阴道表面粘着能力。这类半固态制剂的最大优点是具有可被接受性、易用性及低成本。主要缺陷是可能引起不适及在治疗时间段内从阴道中脱落。
本发明旨在提供一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其温和无刺激，可以有效抑制炎症反应，促进阴道粘膜损伤的修复，并且对念珠菌有很强的抑制作用，对阴道内存在的益生菌则没有明显抑制作用，可以有效避免破坏阴道内环境。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明针对目前现有技术的缺点，提供了一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其温和无刺激，可以有效抑制炎症反应，促进阴道粘膜损伤的修复，并且对念珠菌有很强的抑制作用，对阴道内存在的益生菌则没有明显抑制作用，可以有效避免破坏阴道内环境。
壳聚糖(chitosan)又称脱乙酰甲壳素，是由自然界广泛存在的几丁质(chitin)经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。自1859年，法国人Rouget首先得到壳聚糖后，这种天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等优良性能被各行各业广泛关注，在医药、食品、化工、化妆品、水处理、金属提取及回收、生化和生物医学工程等诸多领域的应用研究取得了重大进展。针对患者，壳聚糖降血脂、降血糖的作用已有研究报告。同时，壳聚糖被作为增稠剂、被膜剂列入国家食品添加剂使用标准GB-2760。
鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)是从健康人肠道分离出的乳杆菌。鼠李糖乳杆菌能够耐受动物消化道环境，在人和动物肠道内定植，起到调节肠道菌群，提高机体免疫力等。
苦丁茶提取物具有降血脂，增加冠状动脉血流量，增加心肌供血，抗动脉粥样硬化等作用，对心脑血管疾病患者的头晕，头痛，胸闷，乏力，失眠等症状均有较好的防治作用。
本发明人在大量的实践基础上，通过不断改进配方，研制出适用于阴道的制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物。
本发明的技术方案如下：
一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其由如下方法制备而成：
（1）制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆30-50g，脱乙酰99%的壳聚糖2-3g，苦丁茶提取物0.5-1.6g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆5-9%、脱乙酰99%的壳聚糖0.5-0.8%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持100-120min，然后继续升值至40℃继续发酵5-8h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物；
（2）配置凝胶：
按照每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：5ml，β葡聚糖0.5g，鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物3ml，黄柏提取液3ml，柠檬酸0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。
所述防腐剂优选为：天然防腐剂CMG，化学组成：脂肪酸异构体，辛酸单甘油酯。
作为优选，当温度降低至40℃以下时加入鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物均质。
本发明的有益之处在于：
提供一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其温和无刺激，可以有效抑制炎症反应，促进阴道粘膜损伤的修复，并且对念珠菌有很强的抑制作用，对阴道内存在的益生菌则没有明显抑制作用，可以有效避免破坏阴道内环境。
具体实施方式
本发明所有实施例用到的提取液可购自任意公司，许多厂家都有出售。
本发明的实验在香港雪奈美实验室完成，雪奈美乳液和面膜已经投入生产，市场反响很好。
实施例1：
制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆30g，脱乙酰99%的壳聚糖2g，苦丁茶提取物0.5g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆5%、脱乙酰99%的壳聚糖0.5%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持100min，然后继续升值至40℃继续发酵5h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物；
实施例2：
制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆50g，脱乙酰99%的壳聚糖3g，苦丁茶提取物1.6g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆9%、脱乙酰99%的壳聚糖0.8%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持120min，然后继续升值至40℃继续发酵8h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物；
实施例3：
制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆42g，脱乙酰99%的壳聚糖2.6g，苦丁茶提取物1.2g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆7%、脱乙酰99%的壳聚糖0.7%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持110min，然后继续升值至40℃继续发酵7h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物；
实施例4：
不加罗汉果新鲜未成熟果实浆：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：脱乙酰99%的壳聚糖2.6g，苦丁茶提取物1.2g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：脱乙酰99%的壳聚糖0.7%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持110min，然后继续升值至40℃继续发酵7h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物。
实施例5：
不加苦丁茶提取物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆42g，脱乙酰99%的壳聚糖2.6g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆7%、脱乙酰99%的壳聚糖0.7%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持110min，然后继续升值至40℃继续发酵7h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物。
实施例6：
采用恒温发酵：
制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆42g，脱乙酰99%的壳聚糖2.6g，苦丁茶提取物1.2g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆7%、脱乙酰99%的壳聚糖0.7%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％、磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；时间：10-12h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物。
实施例7 功效测定：
1.抗炎效果
抗二甲苯致小鼠耳肿胀试验： 将20g 左右小鼠性别、体重均衡后, 随机分为: 阴性对照组( 蒸馏水) 、阳性对照组( 米可定、洁尔阴) 、鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物。将二甲苯涂于动物右耳前后两面, 每鼠0.01ml。半小时后在试验部位涂凝胶剂和对照药米可定、洁尔阴。4h 后断颈处死动物, 每鼠剪下左右两耳, 用7mm 直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片, 电子天平称重。以每鼠右耳片重量减去左耳片重量为肿胀程度。结果如下所示：
表1
| 剂量(ml/Kg) | 抑制率( %) | |
| 蒸馏水 | 0.50 | 无 |
| 米可定 | 0.50 | 53.62 |
| 洁尔阴 | 0.25 | 51.99 |
| 实施例1 | 0.20 | 62.31 |
| 实施例2 | 0.20 | 89.36 |
| 实施例3 | 0.20 | 55.27 |
| 实施例4 | 0.20 | 12.83 |
| 实施例5 | 0.20 | 18.74 |
| 实施例6 | 0.20 | 25.79 |
可见，加入苦丁茶提取物和罗汉果，设置特殊的发酵工艺起到了显著的协同作用，大大增强了鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物的抗炎效果。
稳定性：
放置3个月后，进行同样的试验，实施例1-3的抗炎效果几乎没有变化，折证明可以稳定存放。
乳酸杆菌抑菌效果测评：
采用牛津杯法进行乳酸杆菌抑菌试验。放置直径为8mm的牛津杯，加入实施例1-6合成的鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物。放入:37℃培养箱中培养２４ｈ，用游标卡尺测量抑菌圈直径。测试结果见表2所示：
表2
| 抑菌圈直径（mm） | |
| 实施例1 | 9.9 |
| 实施例2 | 3.5 |
| 实施例3 | 4.2 |
| 实施例4 | 9.9 |
| 实施例5 | 10.1 |
| 实施例6 | 9.9 |
从上表可以明显的看出，复配之后，本发明的鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物对乳酸杆菌的毒作用很小，不容易造成阴道生态失衡。
念珠菌抑菌实验：
将白色念珠菌接种于灭菌好的培养基中，37℃过夜培养后，用无菌生理盐水校正浓度至107-108CFU/ml。用接种环于培养好的白色念珠菌的培养基上划取一个菌落分装在3ml的MH肉汤(双料)中，放置于摇床(37℃，50r)中，培养6小时，即为供试菌的菌液。
将实施例1-6的鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物取0.5ml，MH单料1ml分别置于1-5号试管中，并依次加入100ul白色念球菌，将试管均放置于摇床(37℃，50r)中，培养16-18小时。转种到营养琼脂平板培养基上，用接种环涂布，置37℃电热恒温培养箱培养16～18小时，最后观察菌落的生长状况。平行做3次，以2次或3次相同结果为准，结果均无白色念珠菌菌落生长。
抑菌试验结果表明：实施例1-3的鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物对白色念珠菌具有极强的抑制作用，几乎观察不到菌落的生长；实施例4-6则对白色念珠菌只有很少的抑制作用，可以观察到大量菌落生长。
毒理学测试：
选用小鼠进行毒理学测试，结果：
25 % 水溶液下：
急性口服毒性：无毒
眼睛刺激：非常耐受
致敏试验：无致敏
单次表皮斑贴试验：极好耐受性
对3T3-NRU 3T3成纤维细胞中性红摄取光毒性试验(评估光毒性)：无光毒性。
结果显示，本发明的鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物具有非常优异的皮肤耐受性，接受性，无毒不致敏。
实施例8：
配置凝胶：
按照每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：5ml，β葡聚糖0.5g，鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物3ml，黄柏提取液3ml，柠檬酸0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。
所述防腐剂优选为：天然防腐剂CMG，化学组成：脂肪酸异构体，辛酸单甘油酯。
作为优选，当温度降低至40℃以下时加入鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物均质。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种含有复合益生菌成分的保健阴道凝胶，其由如下方法制备而成：
（1）制备鼠李糖乳杆菌发酵产物溶胞物：
a、将鼠李糖乳杆菌于种子培养基中扩培；
所述种子培养基配方：罗汉果新鲜未成熟果实浆30-50g，脱乙酰99%的壳聚糖2-3g，苦丁茶提取物0.5-1.6g，葡萄糖10g、蛋白胨15g、氯化钠6g、吐温-80 1ml、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.65g、一水硫酸锰0.19g、加水至1000ml，调pH至6.5，灭菌备用；
b、将扩培的鼠李糖乳杆菌种子接种至发酵培养基中发酵，得到发酵液；
发酵培养基：罗汉果新鲜未成熟果实浆5-9%、脱乙酰99%的壳聚糖0.5-0.8%，苦丁茶提取物0.05%，蛋白胨1％、海藻糖2%、葡萄糖1.5％、吐温-80 0.1％、一水硫酸锰0.019％磷酸氢二钾0.2％、七水硫酸镁0.058％；
发酵参数：38℃、控制起始pH:6.5，发酵pH:5.0，搅拌转速：100r/min；发酵2h后，降温至10℃，保持100-120min，然后继续升值至40℃继续发酵5-8h；
c、离心处理：
将发酵液离心处理，离心转速8000r/min，时间25min，倾倒上清液收集菌泥；
d、乳化：
加入菌泥质量20%的海藻糖，经高速搅拌器进行充分乳化，得到乳化液；
e、消毒：
将乳化液进行巴氏消毒，得到鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物；
（2）配置凝胶：
作为优选，当温度降低至40℃以下时加入鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物均质。
2.权利要求1所述的保健阴道凝胶，其特征在于：
所述防腐剂为天然防腐剂CMG，化学组成：脂肪酸异构体，辛酸单甘油酯。
3.权利要求1或2所述的保健阴道凝胶，其特征在于，按照每100ml凝胶含：脂肪重聚氧乙烯醚硫酸盐(AES：98％)：15ml，十二烷基苯磺酸钠：0.18g，甘油：5ml，β葡聚糖0.5g，鼠李糖乳杆菌发酵溶胞产物3ml，黄柏提取液3ml，柠檬酸0.1g，薄荷脑：1.0g，NaCl：4g，防腐剂：0.5g；余量为蒸馏水定容至100ml。
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