TWI481410B - 克羅非莫(crofelemer)用於治療與腹瀉型腸躁症(d-IBS)相關聯之腹痛及腹部不適的醫藥用途 - Google Patents

Description

克羅非莫(crofelemer)用於治療與腹瀉型腸躁症(d-IBS)相關聯之腹痛及腹部不適的醫藥用途

本發明係為用於治療腹瀉型腸躁症的方法。

發明背景

腸躁症(IBS)乃常見的腸道功能障礙，對生活品質造成重大影響。界定IBS的特徵為腹部不適或腹痛。IBS之羅馬II診斷標準(Rome II diagnostic Criteria)(基於症狀來診斷功能性胃腸障礙之系統)如下：至少12週或更長，無需為連續，於先前12個月的腹部不適或腹痛期間伴隨有下列特徵中之至少二者：(1)排便可緩解及/或(2)開始係與排便頻率的改變有關，及/或(3)開始係與糞便形式(外觀)的改變有關。

其它可證實IBS之診斷之症狀包括腹痛；腹部糞便的通過(裏急後重、急迫感、或排空不完全感)；黏液的通過；及腹脹或腹部膨脹感。病人經由其潛在排便習慣可再劃分為：(i)腹瀉型IBS，(ii)便秘型IBS，及(iii)便秘與腹瀉交替(交替型IBS)。

儘管英國約有四分之一人口出現IBS症狀，美國約有15%成人報告有符合IBS診斷的症狀，但對IBS的病理生理學的瞭解仍然不夠透徹。估計只有25% IBS病人尋求醫療協助。此外，被診斷患有IBS的病人患有其它非胃腸道功能障礙的風險性增高，諸如纖維肌痛及間質性膀胱炎。

IBS是美國胃腸醫生所最常做的診斷，占基層醫療病人的12%。直接醫療成本約為80億美元，美國每年耗費在IBS的診斷及治療上的間接醫療成本約達250億美元。如此IBS占美國每年醫療照護成本的重大比例。

IBS的主要治療係涉及諮詢以及飲食調整。若個別症狀有需要，則藥物治療被視為有利。對腹瀉型IBS病例，使用抗腹瀉藥諸如洛皮拉邁(loperamide)，該藥可治療腹瀉，但無法治療腹痛。因腹痛為IBS的確切特徵之一，故抗腹瀉藥無法充分治療IBS(Jailwala等人,2000,Ann Intern Med.2000；133：136－147；Cremonini等人,2004,Minerva Med 95：427－441)。用於便秘型IBS，常使用伊斯帕瓜拉(ispaghula)來增加膳食纖維。當病人具有腹痛和腹脹為主要症狀時，常使用解痙藥。此種情況下常使用美伯菲林(M ebeverine)及薄荷油。其它曾經嘗試用來治療IBS的藥劑包括貝它阻斷劑、拿洛松(naloxone)、翁丹色左(ondansetron)、鈣通道阻斷劑、西美希康(simethicone)、盧普瑞林(leuprorelin)、歐克萃太(octreotide)及膽囊激肽拮抗劑而獲得各種效果(Martindale，額外藥典，第31版(1996年)，1197頁)。

阿洛色左(Alosetron)鹽酸鹽亦即洛左涅斯(Lotronex)(葛蘭素史克公司(GlaxoSmithKline)，美卡羅萊納州研究三角公園市)屬於選擇性5－羥基色胺3(5－HT₃ )拮抗劑目前為唯一核准用於患有重度腹瀉型腸躁症(d－IBS)之女性的藥物。由於安全性的考量，包括缺血性結腸炎以及嚴重威脅生命的便秘，甚至此種單一藥物也只核准用於患有重度d－IBS的女性。雖然有其它藥物可用於治療腹瀉(例如洛皮拉邁、戴芬諾西萊(diphenoxylate))，但該等藥物無法解決d－IBS的多重症狀，包括腹痛和腹部不適，因而並非長期用藥選項(參考Wood,2003,AJJ.NEWJ 349：2136－2146)。需要有d－IBS之改良治療之道，可解決d－IBS的多重症狀，包括腹痛和腹部不適。

核准給Tempesta之美國專利第5,211,944及5,494,661號揭示使用分離自巴豆屬(Croton spp.)或君子樹屬(Calophyllum spp.)之前花青素(proanthocyanidin)聚合物組成物來治療病毒感染。Rozhon等人，美國專利公告案第2005/0019389號揭示由巴豆屬或君子樹屬分離之前花青素聚合物組成物用於治療分泌型腹瀉或旅行者腹瀉。Di Cesare等人，2002,Am J Gastroenterol 10：2585－2588揭示克羅非莫用作為旅行者腹瀉的治療與安慰劑比較之臨床試驗。本研究使用之劑量為500毫克/日(每日四次每次125毫克)；1000毫克/日(每日四次每次250毫克)；及2000毫克/日(每日四次每次500毫克)連續二日。研究顯示該組成物可用於改善旅行者腹瀉病人之排便頻率及胃腸道症狀。

於本案之此章節或任何其它章節引用或識別任何參考文獻不可解譯為承認該參考文獻乃本案之先前技術。

發明概要

本發明係有關經由投予可抑制細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)，來治療腹瀉型腸躁症(d－IBS)之至少一種症狀之方法。抑制劑分子之實例為可抑制氯陰離子通過囊性纖維化穿膜傳導調節劑氯陰離子通道(CFTR)分泌之分子。其它抑制劑分子之實例包括鉀離子通道開啟劑。d－IBS之症狀實例包括腹痛、腹部不適、腹瀉、異常排便頻率、異常糞便稠度和急迫感的存在。如此，於一個實施例中，本發明提供一種治療d－IBS之一種或多種症狀之方法，包含對需要此種治療之一病人投予可有效治療d－IBS之一項或多項症狀之數量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。於較佳實施例中，抑制劑分子之劑量為於每日約50毫克至每日約750毫克劑量口服投予腸衣克羅非莫之生物當量。於一個實施例中，生物當量為一種抑制劑分子產生類似另一種抑制劑分子於特定劑量時，例如克羅非莫於約50毫克/日至約750毫克/日劑量時之類似療效之足夠劑量。於另一個實施例中，生物當量係如美國食品藥物管理局所定義，或係根據美國食品藥物管理局核准的方法測定。於特定實施例中，抑制劑分子係與可抑制COX－2，且較佳選擇性抑制COX－2優於抑制COX－1之化合物合併投予，該化合物較佳未經系統性吸收。此等化合物包括5－ASA、磺胺薩拉辛(sulfasalazine)、米薩拉明(mesalamine)、APAZA以及其它市售COX－2抑制劑諸如希樂堡(celecoxib)及羅菲考希(rofecoxib)。

於一特定實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之腹痛及腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹痛及腹瀉用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。於另一個實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之腹部不適及腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹部不適及腹瀉用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。於另一個特定實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之腹痛之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹痛用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。於另一個實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之腹部不適之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹部不適用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。任選地，止痛劑或消炎劑可與抑制劑分子合併投予。特別該等藥劑經過調配或經改性因此不會被系統性吸收。

於另一個實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)，限制條件為該抑制劑分子非為由巴豆屬或君子樹屬所分離之聚合物前花青素組成物，或該抑制劑分子非為克羅非莫。於又另一個實施例中，本發明係針對一種治療d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)，限制條件為該抑制劑分子非為由巴豆屬或君子樹屬所分離之聚合物前花青素組成物，或該抑制劑分子非為克羅非莫。

於另一個實施例中，本發明係針對一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之經腸衣保護之克羅非莫(CAS 148465－45－6)，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。於又另一個實施例中，本發明係針對一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之經腸衣保護之克羅非莫，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。於若干實施例中，此處克羅非莫例如係調配於控制釋放調配物(未經腸衣保護)，投予的克羅非莫劑量為口服投予經腸衣保護之克羅非莫之約50毫克/日至約750毫克/日之劑量之生物當量。

於另一個實施例中，本發明係針對一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之由巴豆屬或君子樹屬所分離之聚合物前花青素組成物，其中該用量為口服投予克羅非莫約50毫克/日至約750毫克/日之劑量之生物當量。於又另一個實施例中，本發明係針對一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之巴豆屬或君子樹屬所分離之聚合物前花青素組成物，其中該用量為口服投予克羅非莫約50毫克/日至約750毫克/日之劑量之生物當量。

圖式簡單說明

第1圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫125毫克每日二次對排便頻率之功效。

第2圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫125毫克每日二次對急迫感之功效。

第3圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對充分緩解IBS症狀之功效。

第4圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對疼痛分數之功效。

第5圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對無痛日數百分比之功效。

第6圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對疼痛分數之功效。

第7A－7H圖顯示可用於本發明之方法之CFTR抑制劑分子之實例。第7A圖為3－[(3－三氟甲基)苯基]－5－[(3－羧基苯基)亞甲基]－2－硫酮基－4－噻唑啶酮；第7B圖及第7F圖為甘胺酸醯肼類；第7C、7D、7E、7G及7H圖為丙胺酸醯肼類。如後文討論，此等分子視需要可經PEG化來讓其變成於腸道中無法吸收。

較佳實施例之詳細說明

本發明係有關經由投予可抑制細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)，來治療腹瀉型腸躁症(d－IBS)之至少一種症狀之方法。抑制劑分子之實例為可抑制氯陰離子通過囊性纖維化穿膜傳導調節劑氯陰離子通道(CFTR)分泌之分子。其它抑制劑分子之實例包括鉀離子通道開啟劑。d－IBS之症狀實例包括腹痛、腹部不適、腹瀉、異常排便頻率、異常糞便稠度和急迫感的存在。如此，於一個實施例中，本發明提供一種治療d－IBS之一種或多種症狀之方法，包含對需要此種治療之一病人投予可有效治療d－IBS之一項或多項症狀之數量之可抑制由一細胞分泌氯陰離子之分子(抑制劑分子)。

本發明部分係植基於發現分離自巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物例如克羅非莫可緩解與d－IBS相關聯之腹痛及腹部不適。此外，本發明部分係植基於於上皮細胞例如通過囊性纖維化穿膜傳導調節劑氯陰離子通道(CFTR)之氯陰離子轉運不僅涉及分泌型(急性)腹瀉，同時出乎意外地也涉及腹瀉型腸躁症(d－IBS)的病因。此外，本發明部分係植基於發現分離自巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物例如克羅非莫可減輕d－IBS的腹瀉症狀，諸如異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在，而其使用劑量係顯著低於先前用來治療分泌型腹瀉的劑量。例如先前教示可有效治療分泌型腹瀉的劑量包含兩日經口投予5500毫克經腸衣保護之克羅非莫，而本發明之劑量包含每日口服投予約50毫克至約750毫克經腸衣保護之克羅非莫。

氯陰離子轉運可由多項機轉抑制。例如氯陰離子分泌可經由影響囊性纖維化穿膜傳導調節劑氯陰離子通道(CFTR)之功能讓氯陰離子轉運受抑制來抑制氯陰離子的分泌。氯陰離子之分泌也可藉開啟細胞之鉀離子通道來加以抑制。氯陰離子之分泌也可經由阻斷cAMP的向上調節來加以抑制。

囊性纖維化穿膜傳導調節劑氯陰離子通道(CFTR)是一種1480胺基酸蛋白質，該蛋白質與多種類型真核細胞的氯陰離子傳導的表現有關。參考Rommens等人，1989，科學245：1059；Riorden等人，1989，科學245：1066；Kerem等人，1989，科學245：1073；Drumm等人，1991，細胞64：681；Kartner等人，1991，細胞64：681；Gregory等人，1990，自然347：382；Rich等人，1990，自然347：358；及Rommens等人，1991,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 88：7500。CFTR之缺陷破壞或減少呼吸道、汗腺、胰臟及其它組織回應於cAMP媒介之激動劑分泌氯陰離子，且藉cAMP相依性蛋白質激酶A(PKA)損害尖頂膜通道的活化來分泌氯陰離子。參考Frizell等人，1987，神經科學趨勢10：190；Welsh,1990,FASEB J.4：2718。

CFTR之核苷酸及胺基酸序列已經經過轉殖(Riordan等人，1989，科學245：1066－1073)，於GenBank存取號碼M28668及SwissProt存取號碼P13569可得。

本發明方法有用之抑制劑分子包括任一種可抑制氯陰離子分泌的分子，例如經由抑制CFTR之功能，或經由開啟鉀離子通道或經由抑制cAMP的向上調節，如此防止氯陰離子通道的開啟來抑制氯陰離子的分泌。於特定實施例中，本發明之抑制劑分子包括經調配而制動於聚合物上來限制系統性吸收的小型分子以及天然分離之CFTR抑制劑、鉀離子通道開啟劑、cAMP阻斷劑/抑制劑及其合成形式或半合成形式。也涵蓋本發明之抑制劑之類似物、衍生物及修改形式。

技藝界已知多種分子可用於本發明之方法。例如可抑制CFTR功能之分子實例包括鷹爪豆鹼(sparteine)(美國專利第5,100,647號)；噻唑啶酮化合物諸如描述於美國專利申請公告案第2004－0063695及2004－0235800號諸如2－硫酮基－4－噻唑啶酮化合物及3－[(3－三氟甲基)苯基]－5－[(3－羧基苯基)亞甲基]－2－硫酮基－4－噻唑啶酮，該化合物係說明於Thiagarjah等人，2004，胃腸學126：511－519(參考第7圖)或其它2－硫酮基－4－噻唑啶酮類似物及其衍生物；N－(2－萘基)－[(3,5－二溴－2,4－二羥基苯基)亞甲基甘胺酸醯肼或其它甘胺酸醯肼類似物或其衍生物(參考第7圖)；丙二酸二醯肼或其類似物或衍生物(參考第7圖)；磺醯脲類諸如妥布它邁(tolbutamide)、葛利本可它邁(glibenclamide)及相關類似物例如說明於美國專利第5,234,922號；螢光素或其衍生物諸如說明於美國專利申請公告案第2004－0092578號；及可抑制CFTR功能而非活化CFTR功能之cAMP或cGMP之非可水解類似物，諸如8－溴－cAMP、8－(4－氯苯硫基)(CPT)－cAMP、及8－溴－cGMP、CPT－cGMP。

額外抑制劑分子實例包括但非限於：維拉帕米(verapamil)；尼菲迪恩(nifedioine)；帝提贊(diltiazem)；二磺酸二苯乙烯化合物；芳基胺基苯甲酸酯或其類似物或衍生物諸如二苯基胺－2－羧酸酯(DPC)或5－硝基－2(3－苯基丙胺基)苯甲酸酯(NPPB)或蒽－9－羧酸(9－AC)；福費那米酸(flufenamic acid)(FFA)；9－(四氫－2－呋喃基)腺嘌呤(SQ22536)；2’,5’－二去氧基腺苷(DDA)；洛皮拉邁；瑞希卡朵萃(racecadotril)；立達米丁(lidamidine)鹽酸鹽；洛尼達明(lonidamine)；釩酸；布米它邁(bumetanide)；pp2a；PP1；PP2B；次水楊酸鉍；二苯氧酸酯鹽酸鹽；及鷹爪豆鹼。有關前述化合物之額外討論及資訊可參考Fedorak等人，1987，消化疾病與科學32(2)：195－205；Farthing,2004，藥物研究之專家意見13(7)：777－785；Suzuki等人，2003,J.Physiol.546(3)：751－763；Sullivan等人，1996，國際腎臟49：1586－1591；Galietta等人，2004,Curr.Opin.Pharmacol.4：497－503。氯通道抑制劑之額外討論及實例係揭示於Greger,1990,酶學方法191：793－810。全部前述專利案及非專利參考案全文皆以引用方式併入此處。

本發明之抑制劑分子也包括鈣離子通道開啟劑諸如戴左賽(diazoxide)、利馬卡林(lemakalim)及米莫西迪(minoxidil)硫酸鹽及其相關類似物諸如說明於美國專利第5,234,922號。

抑制劑分子之額外實例包括天然CFTR抑制劑及其合成形式或半合成形式例如包括類黃酮包括但非限於由可可豆分離的可可相關類黃酮，說明於Schuier等人，2005,J.Nutr.135：2320－2325；脂肪酸包括但非限於花生四烯酸、亞油酸、油酸、反油酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸、溶磷脂酸、及尼弗米酸(niflumic acid)；黃鹼醇類；多酚類；前花青素類；寡聚物前花青素類(OPC)；前菊花醇寡聚物(PCO)；鞣酸類；縮合鞣酸類；白菊花素類；花青素類；前菊花素類(例如B1－B5及C1－C2)；菊花素類；前飛燕草素類；飛燕草素類；兒茶素類；表兒茶素類；五倍子兒茶素類；表五倍子兒茶素類；表五倍子兒茶素五倍子酸鹽；表兒茶素五倍子酸鹽；兒茶素五倍子酸鹽；五倍子兒茶素五倍子酸鹽；槲黃素；倍半萜類；二萜類；萜類及類萜衍生物；生物鹼類；皂素類；桑色素；葉黃酮；貝加黃酮(baicalein)；及芹鹼素(apigenin)；及前述任一者之寡聚物、聚合物、共聚物及衍生物。

於一個較佳實施例中，抑制劑分子為前花青素聚合物組成物。於另一個實施例中，前花青素聚合物組成物為水溶性前花青素聚合物組成物。於另一個實施例中，本發明之抑制劑分子當口服投藥時不會被系統性吸收或經過修改而當口服投藥時不會被系統性吸收。

前花青素類屬於一類縮合鞣酸。鞣酸出現於寬廣多種植物而可被分類為可水解鞣酸或縮合鞣酸。傳統藥物中使用多種植物來治療或預防腹瀉特別皆含有鞣酸類及前花青素類(例如參考Yoshida等人，1993，植物化學32：1033；Yoshida等人，1992,Chem.Pharm.Bull.,40：1997；Tamaka等人，1992,Chem.Pharm.Bull.40：2092)。得自藥用植物例如Pycanthus angolenis及光澤豆(Baphia nitida)之粗產物萃取物顯示於動物實驗中具有抗腹瀉品質(Onwukaeme及Anuforo,1993，發現與創新，5：317；Onwukaeme及Lot,1991,植物治療研究，5：254)。含有鞣酸之粗產物萃取物，特別為得自於佳樂素(carob)豆莢及歐洲栗木之萃取物提示可用於治療或預防腹瀉(美國專利案第5,043,160號；歐洲專利案第481,396號)。

前花青素包含至少兩個或多個單體單位，可具有相同或相異的單體結構。單體單位(通稱為「白花青素」)通常為單體類黃酮，包括兒茶素類、表兒茶素類、五倍子兒茶素類、五倍子表兒茶素類、黃鹼醇類、黃酮醇類、及黃鹼－3,4－二醇類、白菊花素類及花青素類。因此聚合物鏈係基於不同結構單位，可形成聚合物前花青素的寬廣變化及多種可能的異構物(Hemingway等人，1982,J.C.S.Perkin,1：1217)。類黃酮3－醇單位之更大型聚合物主要出現於大部分植物，具有平均分子量高於2,000道爾頓，含有6單位或更多個單位(Newman等人，1987,Mag.Res.Chem.,25：118)。

前花青素係出現於多種植物，特別為有木質生長習性的植物(例如巴豆屬及君子樹屬)多種不同巴豆樹種屬包括Croton sakutaris、棉葉巴豆(Croton gossypifolius)、Croton palanostima、Croton lechleri、紅巴豆(Croton erythrochilus)及龍巴豆(Croton draconoides)，出現於南美產生一種紅色黏稠乳膠汁液稱作為Sangre de Drago或稱「龍血」。此種紅色黏稠的乳膠廣泛已知具有藥用性質。例如美國專利第5,211,944號首次說明由巴豆屬分離水溶性前花青素聚合物組成物，及該組成物用作為抗病毒劑之用途(也參考Ubillas等人，1994，草藥，1：77)。前花青素聚合物組成物顯示對寬廣多種病毒包括呼吸道融合病毒、流行性感冒病毒、副流行性感冒病毒及疱疹病毒具有抗病毒活性。美國專利第5,211,944號也揭示由Calophyllum inophylum君子樹所分離之水溶性前花青素聚合物組成物及該組成物用作為抗病毒劑之用途。

本發明有用之前花青素聚合物組成物之實例較佳係藉技藝界已知方法分離自巴豆屬或君子樹屬。舉例言之，前花青素聚合物組成物可藉後文實例2揭示之方法或美國專利第5,211,944號或Ubillas等人，1994，草藥，1：77－106所揭示之方法而分離自巴豆屬或君子樹屬。

於一個較佳實施例中，本發明之前花青素聚合物組成物為克羅非莫。克羅非莫(CAS 148465－45－6)為衍生自大戟科(Euphorbiaceae)之Croton lecheri巴豆之龍血的具有不等鏈長度之寡聚物前花青素。克羅非莫具有平均分子量約為1900道爾頓至約2700道爾頓。包含克羅非莫之單體包含兒茶素、表兒茶素、五倍子兒茶素及表五倍子兒茶素。克羅非莫之鏈長度係由約3單位至約30單位，平均鏈長度約為8單位。克羅非莫之結構式顯示如下。

R＝H或OH n＝3－30其中平均值n＝6。

另一種分離克羅非莫之範例方法可參考美國專利公告案第2005/0019389號，其內容以引用方式併入此處。

於本發明之其它實施例中，得自於巴豆屬或君子樹屬之生乳膠或萃取物自巴豆屬或君子樹屬但非特別為聚合物前花青素組成物之萃取物可用於本發明之方法。萃取物之實例說明於Persinos等人，1979,J.Pharma.Sci.68：124及Sethi,1977，加拿大藥物科學期刊，12：7。

於特定實施例中，可用於本發明之方法之本發明之抑制劑分子為可抑制CFTR表現之CFTR核苷酸序列之反訊息寡核苷酸。此種可用於本發明之方法之反訊息核酸為雙股或單股寡核苷酸、RNA或DNA或其修飾物或衍生物，可直接投予，或可藉由外部導入序列之轉錄而於細胞內製造。反訊息核酸可藉已知方法測試，經由抑制CFTR的表現來證實其抑制CFTR功能之能力。

於若干實施例中，CFTR反訊息核酸至少含6個核苷酸，且較佳為寡核苷酸(由6至約50個寡核苷酸)。於特定態樣中，寡核苷酸長度至少為10核苷酸，至少為15核苷酸，至少為100核苷酸，或至少為200核苷酸。寡核苷酸可為DNA或RNA或嵌合體混合物或其衍生物或修飾版本，包括單股或雙股。寡核苷酸可使用技藝界眾所周知的技術於鹼基部分、糖部分或磷酸主鏈經修改。寡核苷酸可包括其它旁懸基團諸如胜肽類或其它特別當經口投藥時可抑制系統性吸收之化合物。寡核苷酸可以技藝界一般已知之取代基於其結構上的任何位置經過改性。

RNA干擾(RNAi)分子可經由降低CFTR的表現來用作為CFTR功能抑制劑。RNAi被定義為雙股RNA(dsRNA)抑制與其本身的序列相對應之基因表現的能力。RNAi也稱作為轉錄後基因寂靜或PTGS。由於只有通常出現於細胞的胞質的RNA分子屬於單股mRNA分子，故細胞具有酶可辨識dsRNA且將dsRNA切成含有21－25個鹼基對之片段(約為兩匝雙螺旋)。該片段之反訊息股與訊息股充分隔開，故於內生性細胞mRNA分子(例如人CFTR)上之互補訊息序列雜交。此種雜交觸發雙股區的mRNA切斷，因此摧毀其轉譯成多胜肽的能力。導入與特定基因相對應之dsRNA，讓細胞本身不能於特定組織及/或於選定的時間表現該基因。

於其它實施例中，CFTR功能或表現之抑制劑可為CFTR之適體(aptamers)。如技藝界所已知，適體為由核酸(例如RNA、DNA)所組成之巨分子緊密結合至特定分子標靶(例如CFTR)。特定適體可以線性核苷酸序列作說明，典型長約15－60核苷酸。除了高度特異性之外，適體對其標靶有極高親和力(例如對蛋白質於皮莫耳至低奈莫耳範圍之親和力)。可與CFTR或其片段結合之適體之選擇可透過技藝界已知方法來達成。例如，適體可使用SELEX(藉指數豐富之配體之系統性演進)方法來選擇(Tuerk及Gold,1990，科學249：505－510)。

於若干實施例中，與CFTR結合之抗體可用於本發明之方法。CFTR之抗體實例係說明於WO 95/06066，其揭示全文以引用方式併入此處。於較佳實施例中，CFTR抗體結合至CFTR之胞外部分。CFTR抗體或免疫原性片段較佳為CFTR胞外片段之抗體之製法為技藝界眾所周知。一旦已經製造抗體，則可使用已知方法(參見上文)篩檢，來判定其用於抑制CFTR功能諸如氯陰離子轉運之功效。

根據本發明，CFTR、其片段或其它衍生物或其類似物可用作為免疫原，來產生可辨識此種用於本發明方法之免疫原之抗體。此等抗體包括但非限於多株抗體、單株抗體、嵌合體抗體、單鏈抗體、Fab片段及Fab表現存庫。於一個實施例中，製造暴露於細胞外側之CFTR部分之抗體。

含有CFTR之特異基因型之抗體片段可藉已知技術產生。例如此等片段包括但非限於：可藉胃蛋白酶消化抗體分子所產生之F(ab’)2片段；可藉還原F(ab’)2片段之雙硫橋所產生之Fab’片段；以及可經由使用木瓜蛋白酶及還原劑處理抗體分子所產生之Fab片段。於抗體之製造中，期望之抗體篩檢可藉技藝界已知方法例如ELISA(酶聯結免疫吸附檢定分析)完成。

任一種測定氯陰離子轉運之技藝界已知方法皆可適當使用或修改來測試候選分子是否可抑制氯陰離子轉運。舉例言之，氯陰離子轉運可用來測試其對CFTR功能影響之候選分子。測試候選化合物是否可抑制CFTR功能之方法之實例係說明於美國專利案第5,234,922號。簡言之，候選分子與可表現CFTR(內生CFTR或重組CFTR)之細胞接觸，視需要可與CFTR活化劑諸如cAMP激動劑(例如CPT－cAMP、db－cAMP、福斯科素(forskolin)、IBMX、霍亂毒素或大腸桿菌(E.coli)脂多醣)接觸，測定全細胞膜電流。若於候選分子存在下，電流比未接觸候選分子之細胞之電流低，則該分子可抑制CFTR功能。另一種使用Ussing室測定氯陰離子媒介電流之篩檢方法實例係說明於Schuier等人，2005,J.Nutr.135：2320－2325。類似方法說明於Fischer等人，2004,J.thnopharm.93：351－357。特高產出量之CFTR功能抑制劑之篩檢方法係說明於Galietta等人，2004,Curr.Opin.Pharmacol.4：497－503。

於一個實施例中，該方法包含一候選分子及一CFTR功能抑制劑與可表現CFTR之一細胞接觸，測量細胞所產生的氯陰離子相依性電流，比較接觸的細胞所產生的電流與只與CFTR功能活化劑接觸的第二細胞所產生之電流，其中由與候選分子接觸之細胞所產生之電流位準比由第二細胞所產生之電流位準低，指示該候選分子為CFTR功能抑制劑。於本實施例之一個態樣中，CFTR功能活化劑為cAMP激動劑。於另一個態樣中，CFTR係於細胞重組表現。

於本發明之另一個實施例中，綜合化學可用來識別可抑制氯陰離子轉運劑，諸如CFTR功能抑制劑。綜合化學可形成含有數十萬種化合物之存庫，其中多種化合物之結構式類似。雖然高產出量篩檢計劃可篩檢如此大量存庫對多種已知標靶的親和力，但已經發展出新穎辦法其可達成更小尺寸但提供最大化學多樣化之存庫(例如參考Matter,1997，藥物化學期刊40：1219－1229)。

於一較佳實施例中，用於本發明方法之分子當經口投藥時實質上不會被系統性吸收。當經口輸送時可被系統性吸收的小型分子及其它藥物可經修改來防止系統性吸收。此等修改為技藝界所已知。舉例言之，本發明之抑制劑分子諸如小分子抑制劑可共價附接至非系統性吸收化合物，其於胃腸道中實質上呈惰性，且不會干擾抑制劑分子功能。此種非系統性吸收化合物包括多種聚合物。偏好用於本發明之抑制劑分子來對抗於胃腸道中分解與吸收之聚合物，亦即於胃和腸的生理條件下實質上不會崩解成為被身體組織吸收的片段之聚合物。具有非可水解主鏈，於胃腸道條件下實質為惰性之聚合物為佳。此種聚合物較佳有夠高分子量來對抗從胃腸道部分或完全吸收入身體其它部分。聚合物具有分子量由約500道爾頓至約500,000道爾頓，較佳由約2,000道爾頓至約150,000道爾頓。適當聚合物之實例包括但非限於多醣類、聚乙二醇聚合物、纖維素聚合物、聚苯乙烯聚合物、聚丙烯酸酯聚合物及聚醯胺聚合物。

不會被系統性吸收且經以下列中之一者或多者取代之聚合物分子可篩檢其CFTR功能之抑制活性：妥布它邁、葛利本可它邁、戴左賽、利馬卡林、米莫西迪硫酸鹽、表兒茶素、兒茶素、槲黃素、桑色素、葉黃酮、貝加黃酮、芹鹼素、螢光素、3－[(3－三氟甲基)苯基]－5－[(3－羧基苯基)亞甲基]－2－硫酮基－4－噻唑啶酮、維拉帕米、尼菲迪恩、帝提贊、洛皮拉邁、二苯基胺－2－羧酸酯(DPC)、5－硝基－2(3－苯基丙胺基)苯甲酸酯(NPPB)、蒽－9－羧酸(9－AC)；福費那米酸(FFA)、9－(四氫－2－呋喃基)腺嘌呤(SQ22536)、2’,5’－二去氧基腺苷、鷹爪豆鹼、及其衍生物、片段及/或類似物。

本發明涵蓋於溫血動物包括男人及女人治療及/或預防與腹瀉型腸躁症(d－IBS)相關聯之一種或多種症狀之方法，該等症狀包括但非限於腹痛、腹部不適、腹瀉、急迫感的存在、異常排便頻率、及異常糞便稠度。本發明方法通常包含對有需要d－IBS治療的個體投予根據本發明之氯陰離子轉運抑制劑。於一較佳實施例中，抑制劑係經口投予，而未系統性吸收。較佳病人為女性。

於一個實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹痛及腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹痛及腹瀉用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)。於另一個實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹部不適及腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹部不適及腹瀉用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)。於若干實施例中，該抑制劑分子係與止痛化合物及/或抗炎化合物諸如可抑制COX－2且較佳可抑制COX－2優於抑制COX－1之化合物共同投予。

於一個實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹痛之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹痛用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)。於另一個實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹部不適之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹部不適用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)。於若干實施例中，該抑制劑分子係與止痛化合物及/或抗炎化合物諸如可抑制COX－2且較佳，可抑制COX－2優於抑制COX－1之化合物共同投予。

本發明之抑制劑分子可以單一劑量投予，或以平分劑量每日投予一次、兩次、三次或四次。於一特定實施例中，抑制劑分子每日投予兩次。於又另一個實施例中，抑制劑分子每日投予兩次至少連續二日。於又另一個實施例中，抑制劑分子係投予選自於由24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、1個月、2個月或3個月所組成之組群中之至少一段時間。於若干實施例中，此處d－IBS為慢性病，抑制劑分子須無限期服用。

腹痛和腹部不適可藉技藝界已知之任一種方法測定，例如以腹痛或腹部不適的量尺測定，其中係以0分至5分來規定病人的腹痛或腹部不適程度，0分為無腹痛或無腹部不適，5分為最高度腹痛或腹部不適。於若干實施例中，腹痛或腹部不適的改善係以腹痛或腹部不適平均程度的降低，無腹痛或腹部不適日數的增加來測定。於若干實施例中，無疼痛或不適的日數比較處理前至少增加5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、或至少增加50%。於其它實施例中，疼痛或腹部不適程度比較處理前降低至少0.1、0.2、0.3、0.4單位或降低至少0.5單位。

於另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)，限制條件為抑制劑分子非為選自於巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物，或該聚合物分子非為克羅非莫。又另一個實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對需要此種治療之病人投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之可抑制氯陰離子由細胞分泌之分子(抑制劑分子)，限制條件為抑制劑分子非為選自於巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物，或該聚合物分子非為克羅非莫。

於特定實施例中，排便頻率比較處理前減少至少10%、20%、30%、40%、或50%。於其它實施例中，排便頻率比較處理前減少每日腸道運動至少一次。於其它實施例中糞便稠度增加，亦即糞便中的水量減少，比較處理前達至少10%、20%、25%、30%、40%、或50%。又有其它實施例中，急迫感的存在比較處理前至少減少10%、20%、30%、40%、或至少減少50%。

於另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之經腸衣保護之克羅非莫(CAS 148465－45－6)，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。於又另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之經腸衣保護之克羅非莫，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。

於另一實施例中，一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之克羅非莫(CAS 148465－45－6)。於又另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之克羅非莫。於此等實施例中，克羅非莫係以其它方式調配(並非經腸衣保護)，克羅非莫之投藥劑量為經口投予經腸衣保護之克羅非莫之約50毫克/日至約750毫克/日劑量之生物當量。其中一種調配物實例為控制釋放調配物。

於另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之腹瀉之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之腹瀉用量之分離自巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。於又另一實施例中，本發明提供一種治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在之方法，包含對有需要此種治療之病人經口投予可有效治療與d－IBS相關聯之異常排便頻率、異常糞便稠度或急迫感的存在用量之分離自巴豆屬或君子樹屬之聚合物前花青素組成物，其中該用量為約50毫克/日至約750毫克/日。

投予氯陰離子轉運抑制劑之方法包括但非限於經腸道外投予(例如皮內、肌肉、腹內、靜脈內及皮下)及經黏膜投予(鼻內途徑及經口途徑)。於特定實施例中，抑制劑分子係經肌肉、靜脈或皮下投予。包含抑制劑分子之組成物可藉任何方便的途徑投予，例如可經輸注或大劑量注射投予，通過表皮或黏膜襯層(例如口腔黏膜、直腸及胃腸道黏膜等)吸收，且可連同其它生物活性劑一起投予。投藥可為系統性或局部。較佳抑制劑分子係經口投藥。

於本發明之若干較佳實施例中，抑制劑分子為克羅非莫(CAS 148465－45－6)。於其它較佳實施例中，抑制劑分子係經口投予。於又有其它較佳實施例中，抑制劑分子經調配成可保護組成物免於接觸胃部環境，換言之免於接觸酸性環境以及胃中的消化作用蛋白質。於較佳實施例中，經口途徑投予及抑制劑分子為經腸衣保護之克羅非莫。

於若干較佳實施例中，克羅非莫係以經腸衣保護形式(經腸衣包衣)係以總量不大於約750毫克/日經口投予。如此處使用，約一詞係表示於誤差邊際範圍內。於特定實施例中，包腸衣之克羅非莫係以由約50毫克/日至750毫克/日之數量經口投予個體。於另一實施例中，包腸衣之克羅非莫係以不大於約500毫克/日之總量經口投予個體。於特定實施例中，包腸衣之克羅非莫係以由約50毫克/日至500毫克/日之數量經口投予個體。於其它實施例中，包腸衣之克羅非莫係以不大於約700毫克/日，約650毫克/日，約600毫克/日，約550毫克/日，約500毫克/日，約450毫克/日，約400毫克/日，約350毫克/日，約300毫克/日，約250毫克/日，約200毫克/日，約150毫克/日，或約100毫克/日包腸衣之克羅非莫經口投予個體。於又另一個實施例中，包腸衣之克羅非莫係以由約100毫克/日至750毫克/日之數量經口投予個體。於其它實施例中，包腸衣之克羅非莫係以由約125毫克/日至500毫克/日、由約250毫克/日至500毫克/日、由約250毫克/日至450毫克/日、由約250毫克/日至400毫克/日、由約250毫克/日至350毫克/日、由約250毫克/日至300毫克/日。於其它特定實施例中，經口投予個體之包腸衣之克羅非莫之總劑量為約50毫克、約55毫克、約60毫克、約65毫克、約70毫克、約75毫克、約80毫克、約85毫克、約90毫克、約95毫克、約100毫克、約105毫克、約110毫克、約115毫克、約120毫克、約125毫克、約130毫克、約135毫克、約140毫克、約145毫克、約150毫克、約155毫克、約160毫克、約165毫克、約170毫克、約175毫克、約180毫克、約185毫克、約190毫克、約195毫克、約200毫克、約205毫克、約210毫克、約215毫克、約220毫克、約225毫克、約230毫克、約235毫克、約240毫克、約245毫克、約250毫克、約255毫克、約260毫克、約265毫克、約270毫克、約275毫克、約280毫克、約285毫克、約290毫克、約295毫克、約300毫克、約305毫克、約310毫克、約315毫克、約320毫克、約325毫克、約330毫克、約335毫克、約340毫克、約345毫克、約350毫克、約355毫克、約360毫克、約365毫克、約370毫克、約375毫克、約380毫克、約385毫克、約390毫克、約395毫克、約400毫克、約405毫克、約410毫克、約415毫克、約420毫克、約425毫克、約430毫克、約435毫克、約440毫克、約445毫克、約450毫克、約455毫克、約460毫克、約465毫克、約470毫克、約475毫克、約480毫克、約485毫克、約490毫克、約495毫克或約500毫克，每日投予一次、兩次或三次。

於本發明之其它實施例中，抑制劑分子無論為前花青素聚合物組成物或為CFTR功能抑制劑，較佳係以經口投予約50毫克/日至約750毫克/日劑量之包腸衣之克羅非莫之生物當量或前述任一種劑量之生物當量投予。於一個實施例中，生物當量為可產生如同使用另一種抑制劑分子於例如克羅非莫於約50毫克/日至約750毫克/日之劑量之特定劑量所能達成之類似治療效果之抑制劑分子的足夠劑量。於另一個實施例中，生物當量係由美國食品藥物管理局定義，或根據美國食品藥物管理局所核准之方法測定。

於較佳實施例中，克羅非莫經包腸衣來保護克羅非莫避免被胃中酸性環境分解，及/或避免與存在於胃的蛋白質諸如胃蛋白酶交互作用，換言之克羅非莫為經腸衣保護之調配物。於一特定實施例中，克羅非莫係呈錠劑劑型。於又另一個實施例中，錠劑包腸衣例如優拉吉(EUDRAGIT)。於一較佳實施例中，克羅非莫係調配成包腸衣之珠粒或顆粒於包腸衣之膠囊殼體。於另一個實施例中，克羅非莫係調配成延遲釋放組成物，例如默克公司(Merck)GEM、阿薩(Alza)OROS、蠟基質(釋放延遲主要係直到調配物由胃送出而進入小腸)。

於若干實施例中，抑制劑分子係使用可中和胃酸之化合物調配。另外，含有抑制劑分子之藥學組成物係與中和胃酸之藥學組成物同時、或隨後或於其後投予。諸如制酸劑之化合物可用於中和胃酸，包括但非限於碳酸鋁、氫氧化鋁、次硝酸鉍、次水楊酸鉍、碳酸鈣、碳酸二羥基鋁鈉、馬嘉葛萊特(magaldrate)、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂及其混合物。可降低胃酸分泌及/或可降低胃液酸度之化合物為技藝界眾所周知，包括但非限於制酸劑(氫氧化鋁、碳酸鋁、甘胺酸鋁、氧化鎂、氫氧化鎂、碳酸鎂、碳酸鈣、碳酸氫鈉)、胃酸阻斷劑[西美提丁(cimetidine)(塔加邁(Tagamet))、法莫提丁(famotidine)(麥蘭塔(Mylanta)、派西(Pepcid))、尼薩提丁(nizatidine)(阿西(Axid))、拉尼提丁(ranitidine)(珊塔(Zantac))、歐米帕左(omeprazole)(席格瑞(Zegerid))]及前述任一者之組合。通常由相關政府單位核准銷售且可降低胃酸製造量及/或降低胃液酸度之任一種藥物皆可組合根據本發明方法之抑制劑分子諸如克羅非莫投予。

於其它實施例中，抑制劑分子係與可用於治療腹瀉或腹痛之化合物一起投予。此等化合物包括但非限於COX－2抑制劑諸如5－ASA、磺胺薩拉辛、米薩拉明、APAZA及其它市售COX－2抑制劑諸如希樂堡及羅菲考希。較佳此等化合物不會被系統性吸收，或經過改性而不會被系統性吸收。

於一特定實施例中，此處克羅非莫未包腸衣，克羅非莫係與一種或多種可減少胃酸分泌及/或可降低胃液酸度之化合物一起調配。較佳此種調配物中之克羅非莫劑量為以約50毫克日至約750毫克/日劑量經口投予包腸衣之克羅非莫之生物當量。於一具體實施例中，克羅非莫係調配成控制釋放(延遲釋放)組成物。

於其它實施例中，本發明之抑制劑分子可組合止痛劑或抗炎劑一起投予。於較佳實施例中，止痛劑或抗炎劑經調配或改性讓其實質上不會被系統性吸收，或只有20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%或0.5%給予的劑量被吸收。

本發明也提供本發明之氯陰離子轉運抑制劑(抑制劑分子)之藥學調配物，包含一抑制劑分子連同藥學上可接受之載媒劑，及劑量為治療上有效處理及/或改善與d－IBS相關聯之一種或多種症狀之劑量。於一個實施例中，可直接壓縮之前花青素聚合物組成物(亦即可不含賦形劑而直接被壓縮成具有藥學上可接受之硬度及脆性之錠劑)視需要與潤滑劑諸如但非限於硬脂酸鎂一起被壓縮成為錠劑，經包腸衣。於另一實施例中，含有本發明之抑制劑分子之藥學組成物另外包括一種或多種可中和胃酸及/或酶或具有活性可防止胃酸分泌之物質。此等調配物可藉技藝界已知方法製備，例如參考雷明頓製藥科學第18版，編輯Alfonso R.Gennaro，默克出版公司，賓州伊士頓1990年所述方法。

於另一較佳實施例中，該藥學組成物包含由巴豆屬所製備之前花青素聚合物組成物，其劑量不超過750毫克/日，較佳低於250毫克/日。於較佳實施例中，本發明之前花青素聚合物組成物為克羅非莫(CAS 148465－45－6)。

抑制劑分子可以任一種治療上可接受的藥物劑型提供。藥學組成物可調配成下列劑型供經口投藥：例如但非限於藥物散劑、晶體、粒劑、小型粒子(包括微米級之粒子例如微球及微囊)、粒子(包括毫米級粒子)、珠粒、微珠粒、丸粒劑、丸劑、微錠劑、壓縮錠劑或錠劑研磨物、模製錠劑或模製錠劑研磨物及膠囊劑，可為硬膠囊或軟膠囊且含有呈粉末、粒子、珠粒、溶液或懸浮液形式之組成物。藥學組成物也可調配成於水性液體之溶液劑或懸浮液劑、液體摻混於凝膠膠囊中經口投予；或可調配成其它方便投藥劑型，或呈栓劑、浣腸劑或其它方便劑型經直腸投予。本發明之抑制劑分子也可呈控制釋放系統提供(例如參考Langer，1990，科學249：1527－1533)。

藥學調配物可包括任一型藥學上可接受之賦形劑、添加劑或載媒劑。例如但非限制性，稀釋劑或填充劑諸如葡萄糖酸鹽類、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、纖維素、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、乾澱粉、山梨糖醇、蔗糖、肌糖醇、粉狀糖、膨潤土、微晶纖維素、或羥基丙基甲基纖維素可添加至抑制劑分子來增加組成物的體積。此外黏結劑諸如但非限於澱粉、明膠、蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、乳糖、金合歡膠、褐藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚萃取物、潘沃膠(panwar gum)、印度膠(ghatti gum)、伊薩果(isapgol)果殼黏質、羧甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮、維膠(Veegum)及落葉松阿拉伯糖半乳聚糖、聚乙二醇、乙基纖維素及蠟類可添加至調配物來提高其內聚品質。此外，潤滑劑諸如但非限於滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、氫化植物油類、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、卡博蠟(carbowax)、硫酸月桂酯鈉及硫酸月桂酯鎂可添加至調配物。同時滑動劑諸如但非限於膠體二氧化矽或滑石也可添加來改良粉狀調配物之流動特性。最後，崩散劑諸如但非限於澱粉類、黏土類、纖維素類、褐藻素類、樹膠類、交聯聚合物(例如交聯甲基纖維素、交聯普維龍(crospovidone)、及乙醇酸澱粉鈉)、維膠、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、纖維素及木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、褐藻酸、瓜爾膠(guar gum)、柑橘渣、羧甲基纖維素或硫酸月桂酯鈉與澱粉也可添加至其中來輔助調配物於腸道中崩散。

於本實施例之一個態樣中，克羅非莫係調配供經口投予。於其它態樣中，藥學劑型係調配來保護抑制劑分子例如克羅非莫免於受胃部酸性條件的分解，且免於與存在於胃部的蛋白質諸如胃蛋白酶交互作用。如此於一較佳態樣中，調配物係包腸衣。例如，包腸衣之調配物為包腸衣之錠劑、珠粒或粒劑，其視需要可含有潤滑劑諸如硬脂酸鎂。包腸衣之調配物包括於膠囊劑之包腸衣之珠粒、於膠囊劑之包腸衣之微球、提供於懸浮液或與食物混合之包腸衣之微球，該等懸浮液特別方便供小兒投予，及包腸衣之壓縮錠劑。膠囊可為硬殼明膠膠囊劑或纖維素膠囊劑。特別，藥學組成物調配成包腸衣之膠囊劑。於一個特定態樣中，前花青素聚合物組成物係呈錠劑劑型投予，該錠劑係以微晶纖維素回填。

於一個實施例中，抑制劑經直接壓縮，換言之，抑制劑分子含或未含任何賦形劑可被壓縮成為錠劑或其它藥學調配物且具有藥學上可接受之硬度或脆性。較佳可直接壓縮之藥學組成物可被壓縮成具有硬度大於4 kp(千磅)，較佳硬度8至14 kp，更佳硬度10至13 kp之錠劑。可直接壓縮組成物可被壓縮成為有脆性不超過1%重量損耗，較佳低於0.8%重量損耗，及更佳低於0.5%重量損耗之錠劑。

於一較佳實施例中，可直接壓縮之調配物包含99.93%克羅非莫及0.07%硬脂酸鎂，且係包衣以甲基丙烯酸共聚物。於另一較佳實施例中，藥學調配物含有可直接壓縮之抑制劑分子，但除了腸衣之外不含賦形劑、添加劑或載媒劑；但調配物含有潤滑劑，諸如但非限於硬脂酸鎂。較佳可直接壓縮之前花青素聚合物組成物調配物係調配成具有藥學上可接受之硬度(大於4 kp，較佳8－14 kp，及更佳10－13 kp)以及脆性(不大於1%重量損耗，較佳低於0.8%重量損耗，及更佳低於0.5%重量損耗)之錠劑。

於更佳實施例中，抑制劑分子經包腸衣。腸衣為於胃部維持完好的包衣，但一旦進入小腸則溶解且釋放出劑型的內容物。使用具有酸性基團因此於胃部所存在的極低pH之下以及pH 1.5至pH 2.5，酸性基團不會游離，包衣維持呈未解離之不可溶性形式之成分所製備。於較高pH範圍諸如於腸道環境中，腸衣轉換成可游離形式，溶解而釋放出抑制劑分子。其它腸衣維持完好直到被小腸中的酵素所分解，其它腸衣則於經過界定之暴露於水分後崩解，故直到進入小腸之前包衣皆維持完好。

可用於製備腸衣之聚合物包括但非限於蟲膠、澱粉及戊糖乙酸酯鄰苯二甲酸、苯乙烯－順丁烯二酸共聚物、乙酸丁二酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)、聚乙烯基乙酸酯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素(等級HP－50及HP－55)、乙基纖維素、脂肪、硬脂酸丁酯及含有酸可游離基之甲基丙烯酸－甲基丙烯酸酯共聚物(包括「阿奎里茲(ACRYLEZE)」及「優拉吉(EUDRAGIT)」)諸如「優拉吉L 30D」、「優拉吉RL 30D」、「優拉吉RS 30D」、「優拉吉L 100－55」及「優拉吉L 30D－55」。於一較佳實施例中，藥學組成物含有氯陰離子轉運抑制劑，諸如前花青素聚合物組成物及腸衣聚合物「優拉吉L 30D」，此乃有平均分子量250,000道爾頓之甲基丙烯酸及丙烯酸甲酯之陰離子共聚物。於另一個較佳實施例中，腸衣聚合物為「優拉吉L 30D－55」。

依據所使用之包衣類型而定，腸衣之崩解係藉腸道酵素的水解或藉膽鹽的乳化與分散。例如酯酶可將硬脂酸丁酯水解成為丁醇及硬脂酸，當丁醇溶解時硬脂酸由藥物剝落。此外，膽鹽乳化且分散乙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、脂肪及脂肪衍生物。依據與水分接觸時間而定，其它類型之包衣被去除，例如於植物纖維吸水膨脹後，由粉狀巴西棕櫚蠟、硬脂酸、瓊脂與榆木樹皮之植物纖維所製備的包衣破裂。崩散所需時間係依據包衣厚度及植物纖維對蠟之比例決定。

施用腸衣至本發明之抑制劑分子可藉技藝界已知之施用腸衣之任一種方法達成。例如但非限制性，腸衣聚合物可使用含5至10% w/w聚合物之基於有機溶劑之溶液施用(供噴霧施用)及含有高達30% w/w聚合物之基於有機溶劑之溶液施用(用於平盤包衣)。常用之溶劑包括但非限於丙酮、丙酮/乙酸乙酯混合物、二氯甲烷/甲醇混合物、及含有此等溶劑之第三混合物。若干腸衣聚合物諸如甲基丙烯酸－甲基丙烯酸酯共聚物可使用水作為分散劑施用。溶劑系統之揮發性可經調整來避免因沾黏性造成沾黏，且防止當溶劑蒸發去除時由於聚合物的過早噴乾或沉澱而形成包衣的高孔隙度。

此外，可添加增塑劑至腸衣來防止塗膜的裂開。適當增塑劑包括低分子量鄰苯二甲酸酯類諸如鄰苯二甲酸二乙酯、乙醯化一酸甘油酯類、檸檬酸三乙酯、多乙基二醇三丁基檸檬酸酯、及三醋精。大致上，增塑劑係以占腸衣聚合物重量為10%重量比之濃度添加。也可添加其它添加劑諸如乳化劑例如分散劑及西美希康(simethicone)及粉末如滑石來改良包衣的強度及光滑度。此外，可添加顏料至包衣來增加藥學調配物的色彩。

於較佳實施例中，抑制劑分子之藥學組成物係呈於硬殼明膠膠囊劑中之包腸衣珠粒而提供。於較佳實施例中，經由混合前花青素聚合物組成物與羥基丙基甲基纖維素，且經該混合物與種芯(糖球)上形成層狀物。於一更佳實施例中，除了腸衣之外不含任何賦形劑、添加劑或載媒劑之可直接壓縮之克羅非莫經過研磨及分選成為珠粒(亦即呈未含有種芯糖球之珠粒)。珠粒可以歐帕吉透明(Opadry Clear)密封包衣(與水混合)覆蓋。珠粒之較佳腸衣為「優拉吉L 30D」、或「優拉吉L 30D－55」呈含有20%－30% w/w無水聚合物物質之水性分散液施用，該無水聚合物物質係被供給0.7%硫酸月桂酯鈉NF(SLS)及2.3%聚山梨酸酯80NF(吞恩(Tween^TM )20)作為乳化劑，於其中添加諸如聚乙二醇及檸檬酸酯類之增塑劑來改良包衣的彈性，且可添加滑石來降低腸衣聚合物於施用過程中凝集的傾向，且提高膜衣的光滑度。

於較佳調配物中，含有種芯之包腸衣之前花青素聚合物組成物之最終組成為17.3% w/w種芯、64.5% w/w前花青素聚合物組成物、1.5% w/w羥基丙基甲基纖維素、0.5% w/w歐帕吉透明、14.5% w/w「優拉吉L 30D」、1.45% w/w檸檬酸三乙酯及0.25% w/w一硬脂酸甘油酯。此種藥學調配物可藉技藝界已知之任一種方法或藉下文實例1所述之方法製備。

未含種芯之前花青素聚合物組成物珠粒之較佳配方為78% w/w可直接壓縮之前花青素聚合物組成物(例如藉實例所述方法分離)，0.76% w/w歐帕吉透明、19% w/w「優拉吉L 30D－55」、1.9% w/w檸檬酸三乙酯及0.34% w/w一硬脂酸甘油酯。此種藥學調配物可藉技藝界已知之任一種方法或藉下文實例2之方法製備。

另一種較佳配方含有54.58% w/w前花青素聚合物組成物珠粒(不含種芯，係由可直接壓縮之前花青素聚合物組成物製備)，1.78% w/w歐帕吉透明、39% w/w「優拉吉L 30D－55」、3.9% w/w檸檬酸三乙酯及0.74% w/w一硬脂酸甘油酯。

於另一個實施例中，包含本發明之抑制劑分子之藥學組成物係調配呈包腸衣之粒劑或散劑(具有直徑300－500微米之微球)提供於硬殼明膠膠囊內或懸浮於小兒投藥用之口服溶液劑內。包腸衣之散劑或粒劑可與食物混合，特別供小兒投藥。此種製劑可使用技藝界眾所周知之技術，如下文實例1C所示方法製備。

大致上，粒劑及散劑可使用技藝界已知之任一種方法製備，該等方法諸如但非限於結晶化、噴乾或任一種研磨方法，較佳係使用高速混合機/造粒機研磨。高速混合機/造粒機之實例包括「小福特拉吉(LITTLEFORD LODIGE)」混合機，「小福特拉吉」MGT混合機/造粒機及「葛雷(GRAL)」混合機/造粒機。於高速切變粉末混合期間，造粒劑溶液稱作為黏結劑噴灑至粉末上來造成粉末粒子的凝結，如此形成更大型粒子或顆粒。可用於製備顆粒之造粒劑包括但非限於纖維素衍生物(包括羧基甲基纖維素、甲基纖維素及乙基纖維素)、明膠、葡萄糖、聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、澱粉糊、山梨糖醇、蔗糖、右旋糖、糖蜜、乳糖、金合歡膠、褐藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚萃取物、潘沃膠、印度膠、伊薩果果殼黏質、維膠及落葉松阿拉伯糖半乳聚糖、聚乙二醇、及蠟類。造粒機可以占粒子或粒劑由1%至30%重量比範圍之濃度添加。

粉劑或粒劑較佳係使用流化床設備包衣。粒劑或散劑可以歐帕吉透明(與水混合)之密封包衣覆蓋。較佳腸衣為「優拉吉L 30D」呈含有30% w/w無水聚合物物質之水性分散液施用，該無水聚合物物質係被供給0.7%硫酸月桂酯鈉NF(SLS)及2.3%聚山梨酸酯80NF(吞恩20)作為乳化劑，於其中添加諸如聚乙二醇及檸檬酸酯類之增塑劑來改良包衣的彈性，且可添加滑石來降低腸衣聚合物於施用過程中凝集的傾向，且提高膜衣的光滑度。於一較佳實施例中，包腸衣散劑之最終組成為81.8% w/w前花青素聚合物組成物、1.5% w/w羥基丙基甲基纖維素、0.5% w/w歐帕吉透明、14.5% w/w「優拉吉L 30D」、1.45% w/w檸檬酸三乙酯及0.25% w/w一硬脂酸甘油酯。包腸衣粒劑之最終組成為81.8% w/w前花青素聚合物組成物、10%聚乙烯基吡咯啶酮、1.5% w/w羥基丙基甲基纖維素、0.5% w/w歐帕吉透明、14.5% w/w「優拉吉L 30D」、1.45% w/w檸檬酸三乙酯及0.25% w/w一硬脂酸甘油酯。

經過包腸衣之顆粒或粉末粒子可進一步懸浮於口服投藥用之溶液劑，特別適合小兒投藥。懸浮液劑可由其中添加增稠劑及保護性膠體之水溶液製備，添加增稠劑及保護性膠體可提高溶液的黏度，來防止經過包衣的粉末粒子或顆粒的快速沉降。任一種可提高水合成通過分子交互作用環繞懸浮粒子形成之水合層強度，且與抑制劑分子於藥學上可相容之用作為增稠劑之材料，包括但非限於明膠、天然樹膠(例如西黃蓍膠、黃膠、瓜爾膠、金合歡膠、潘沃膠、印度膠等)、及纖維素衍生物(例如羧基甲基纖維素鈉、羥基丙基纖維素及羥基丙基甲基纖維素等)。任選地，可添加諸如吞恩之界面活性劑來改良增稠劑的作用。較佳懸浮液為2% w/w羥基丙基纖維素於含0.2%吞恩之水之溶液。

抑制劑分子也可調配成腸衣錠。於一個較佳實施例中，前花青素聚合物組成物係藉前文說明用於製造粒劑之任一種方法以任一種藥學上可接受之稀釋劑(諸如前文列舉之稀釋劑)造粒。然後，使用技藝界眾所周知之任一種方法，例如但非限於濕造粒法、乾造粒法或直接壓縮法，將粒劑壓縮成錠劑。較佳稀釋劑包括但非限於微晶纖維素(「阿維賽(AVICEL)PH200/300」)及右旋糖類(「英戴斯(EMDEX)」)。此外，諸如前述崩散劑及諸如前述潤滑劑也可添加至錠劑調配物。較佳錠劑調配物含有250毫克前花青素聚合物組成物、7毫克崩散劑「AC－DI－SOL」(交聯羧甲基纖維素鈉)、1.75毫克潤滑劑硬脂酸鎂及將混合物調整至350毫克所需之「阿維賽PH200/300」之重量。錠劑可以由250克「優拉吉L 30D－55」、7.5克檸檬酸三乙酯、37.5克滑石及205克水製成之腸衣混合物包腸衣。此種調配物可藉技藝界眾所周知之任一種方法製備。

於較佳實施例中，可直接壓縮之前花青素聚合物組成物藉縮小尺寸(例如前文說明)造粒，且與潤滑劑較佳為硬脂酸鎂混合。然後，經過潤滑之顆粒使用技藝界已知之方法，包括但非限於直接壓縮法壓縮成錠劑。較佳各錠劑為125毫克含有99.6% w/w可直接壓縮之前花青素聚合物組成物及0.40% w/w硬脂酸鎂。然後錠劑較佳以腸衣混合物包腸衣，該腸衣混合物相對於每100克錠劑為30%「優拉吉L 30D－55」懸浮液(6.66克於22.22克)、0.67克檸檬酸三乙酯、1.67克滑石及20.44克純水。錠劑可藉技藝界已知之任一種方法或藉後文實例1E所述方法製備。

於更佳實施例中，可直接壓縮之前花青素聚合物組成物被調製成125毫克、250毫克或500毫克之芯錠，含有99.6% w/w可直接壓縮之前花青素聚合物組成物及0.40% w/w硬脂酸鎂。然後錠劑較佳係以腸衣混合物包腸衣。錠劑之最終組成為86.6% w/w可直接壓縮之前花青素聚合物組成物、0.4%硬脂酸鎂、6.5%「優拉吉L 30D－55」、0.9%檸檬酸三乙酯、2.87%滑石及2.74%白分散液。錠劑可藉技藝界已知之任一種方法製備，例如但非限於後文說明之方法製備。

被成形為小型粒子(包括微米級粒子諸如微球及微囊)、粒子(包括毫米級粒子)、藥物晶體、片粒、丸及微珠粒之組成物可使用流化床方法包衣。此種方法係使用流化床設備，諸如「葛萊特(GLATT)」、「艾洛麥提克(AEROMATIC)」、「烏斯特(WURSTER)」或其它商品名供應之流化床設備，藉此組成物係於封閉的缸狀容器內被由下方導入之氣流攪動，經由於流化期間於組成物芯上噴乾腸衣來包腸衣。欲包衣錠劑或膠囊劑，可使用阿希臘－科塔(Accela－Cota)包衣設備(「馬尼斯提(MANESTY)」)。藉此方法，錠劑或膠囊劑被置於有穿孔夾套及噴霧單元之旋轉缸包衣盤上，噴霧單元架設於盤內部，乾燥空氣被抽取通過旋轉中的錠劑或膠囊劑。另一型旋轉盤諸如「康普－實驗室(COMPU－LAB)」盤、高包衣機(Hi－coates)「葛萊特」浸沒矛方法、「左恩(DRIAM)」乾燥包衣機(Dricoater)、「史丁柏格(STEINBERG)」設備、「派勒葛尼(PELLEGRINI)」設備或「沃塞(WALTHER)」設備也可使用。

本發明之藥學調配物也可用於非人動物特別為農場動物處理d－IBS，非人動物諸如但非限於牛、豬、羊、家禽(諸如雞)及馬及其它家畜諸如犬及馬。特別本發明之藥學調配物可經由將本發明之藥學組成物摻混於動物飼料，用來於非人動物特別為飼料動物諸如牛、羊及豬治療d－IBS疾病。

根據本發明之方法，包含本發明之氯陰離子轉運抑制劑(抑制劑分子)之藥學組成物係以不大於750毫克/日經口投予腸衣克羅非莫之生物當量投予個體。於特定實施例中，包含克羅非莫之藥學組成物係於約50毫克/日至約250毫克/日之用量投予個體。

於判定個體是否患有腹瀉型IBS時，可使用技藝界用來診斷個體之任一種方法，包括但非限於診斷腸躁症之羅馬II標準(Thompson等人，1999，腸45(Suppl II)：II－43－II47)。簡言之羅馬II診斷標準陳述於先前12個月的腹部不適或腹痛期間中之至少12週(12週無需為連續)至少有以下三種特徵中之二者：(1)排便可緩解及/或(2)開始係與排便頻率的改變有關，及/或(3)開始係與糞便形式(外觀)的改變有關。下列症狀可累進證實d－IBS的診斷：(i)異常排便頻率例如大於每日3次；(ii)異常糞便形式例如鬆軟/水樣糞便；(iii)急迫感的存在(有排便的衝動)。

定義

除非另行定義，否則此處所使用之全部技藝界術語標示法及其它科學名詞或術語意圖具有本發明相關技藝界之熟諳技藝人士一般所瞭解的定義。於若干情況下，具有一般瞭解定義之術語於此處定義以求清晰及/或方便參照，含括此等定義於此處並非必然解譯為與技藝界一般瞭解有實質差異。除非另行指示，否則本發明之實務將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學、核酸化學及免疫學之習知技術，係屬於熟諳技藝人士之技巧範圍。此等技術完整說明於參考文獻，諸如免疫學之流行方案(J.E.Coligan等人，編輯，1999年，包括至2001年之補遺)；分子生物學之流行方案(F.M.Ausubel等人，編輯，1987年，包括至2001年之補遺)；分子轉殖：實驗室手冊，第三版(Sambrook及Russel，2001)；PCR：聚合酶連鎖反應，(Mullis等人，編輯，1994年)；免疫檢定分析手冊(D.Wild編輯，史塔敦出版社(Stockton Press)紐約，1994年)；生物軛合技術(Greg T.Hermanson編輯，學術出版社，1996年)；免疫學分析方法(R.Masseyeff,W.H.Albert及N.A.Staines編輯，Weinheim：VCH Verlags gesellschaft mbH,1993)；Harlow及Lane使用抗體：實驗室手冊，冷泉港實驗室出版社，冷泉港紐約1999年；及Beaucage等人編輯，核酸化學之流行方案，約翰威利父子公司，紐約，2000年)。

如此處使用，於多胜肽及蛋白質中使用「衍生物」一詞係指包含已經藉導入胺基酸殘基之取代、刪除或添加變更之胺基酸序列之多胜肽或蛋白質。如此處使用，「衍生物」一詞也表示亦即已經藉將任一型分子共價附接至多胜肽或蛋白質而修飾之多胜肽或蛋白質。例如但非限制性，抗體例如可經由糖基化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、藉已知保護基/封阻基衍生蛋白質分解鍵聯至細胞配體或其它蛋白質等而修飾。衍生物多胜肽或蛋白質可藉熟諳技藝人士已知之技術化學修飾製造，該等技術包括但非限於特定化學裂解、乙醯化、甲醯化、土尼卡黴素(tunicamycin)之代謝合成等。此外，衍生物多胜肽或蛋白質衍生物具有與其衍生自其中之多胜肽及蛋白質之類似或相同的生物功能。

如此處使用，於非蛋白質衍生物之內文中之「衍生物」一詞係指基於第一有機分子或無機分子之結構式而形成的第二有機分子或無機分子。有機分子之衍生物包括但非限於經由羥基、甲基、乙基、羧基、胺基之添加或刪除、酯化、烷化、或磷酸化、聚合物之制動或添加作分子改性。

如此處使用，「聚合物」一詞係指包含三個或多個單體單位可相同或相異之化合物。如此，「聚合物」係指高分子量及/或不溶性聚合物以及低分子量及/或可溶性寡聚物。

如此處使用，「片段」一詞係指包含至少5個連續胺基酸殘基之胺基酸序列之胜肽或多胜肽。於一個實施例中，多胜肽片段保有該多胜肽之至少一項功能。

如此處使用，「抑制CFTR功能」一詞係指藉任一種手段，包括但非限於抑制氯陰離子轉運及抑制CFTR分子表現來抑制CFTR分子之任何功能。

如此處使用，「核酸類」及「核苷酸序列」等詞包括DNA分子(例如cDNA或基因體DNA)、RNA分子(例如mRNA)、DNA分子與RNA分子的組合或混成DNA/RNA分子及DNA分子或RNA分子之類似物。

如此處使用，「個體」及「病人」等詞於此處互換使用。

如此處使用，「個體」係指動物，較佳為哺乳動物包括非靈長類(例如牛、豬、馬、貓、犬、大鼠及小鼠)及靈長類(例如猴諸如馬來猴及人)且更佳為人類。於一較佳實施例中，該個體為人類。於一個實施例中，「個體」一詞包括患有或已經被診斷患有分泌型(急性)腹瀉之個體。

如此處使用，「治療」、「處理」及「療法」等詞係指預防、減少、改善或消除d－IBS之症狀或併發症。於本發明之內文中，「預防、減少、改善或消除d－IBS之症狀」係指下列中之至少一者：於例如過去曾經患有d－IBS但現在處於緩解期之病人，於d－IBS出現前防止d－IBS0去除已經確立之d－IBS(例如由回復正常排便頻率測定)；消除與d－IBS相關之腹痛；減少d－IBS既有病情嚴重程度而表現出非期望之疾病症狀的減輕；去除或減量於治療個體所使用之一種或多種藥劑。非期望之症狀的減少例如可藉由測量排便頻率、判定糞便稠度、測定急迫感的存在、比較處理前測定d－IBS相關聯的腹痛來測定。任何症狀嚴重度的減輕，甚至若干症狀維持於較低的較可接受的程度(「處置措施」)，皆係涵蓋於此處定義之術語。此等補救經由排便頻率的減少、糞便稠度的增加、急迫感存在的減少、疼痛的減輕可證。

因d－IBS經常性伴隨有其它非腹瀉相關症狀，諸如腹部不適、腹痛、腹脹、倦怠、睡眠擾亂、性功能障礙、頭痛、纖維肌痛(肌肉痛)、消化不良(上腹部不適或上腹部疼痛)、胸痛、泌尿道症狀或婦科症狀、焦慮及不安。故此等症狀中之至少一者減輕也伴隨有「預防、減少、改善或消除d－IBS之症狀或併發症」。

如此處使用，「治療有效量」一詞係指足夠導致d－IBS之治療，防止d－IBS的進展，造成d－IBS的退行或促進或改善投予用來治療或預防d－IBS的另一種治療劑的療效之治療劑用量。

下列實例系列係供舉例說明本發明但非限制性。

實例 實例1：藥學調配物之製備

後文說明根據本發明得自C.lechleri之前花青素聚合物組成物之不同較佳藥學調配物之製造及包裝方法。

1A.經包膠之腸衣珠粒用來製備基於糖球之經包膠之腸衣前花青素聚合物組成物珠粒調配物所使用之批次配方及方法提供如下。各硬殼明膠膠囊劑含有250毫克前花青素聚合物組成物腸衣珠粒。膠囊劑包裝於HDPE瓶內每瓶含16顆250毫克膠囊。腸衣前花青素聚合物組成物珠粒之配方含有17.3%(w/w)種芯(糖球40/60篩目，跑拉(Paulaur)批號60084060)，64.5%得自C.lechleri之前花青素聚合物組成物，1.5%羥基丙基甲基纖維素(美索賽爾(Methocel)E5普密爾(Premium)，陶氏化學公司(Dow Chemical Co.)，批號MM9410162E)，0.5%歐帕吉透明(可羅康(Colorcon)，批號S83563)，14.5%「優拉吉L30D」(羅門技術公司(Rohm Tech)，批號1250514132)，1.45%檸檬酸三乙酯(莫富萊斯(Morflex)，批號N5X291)，一硬脂酸甘油酯(印維妥(Imwitor)－900，羅門技術公司，批號502－229)，及水純(USP)。

含有前花青素聚合物組成物之層狀包衣溶液之製法，係經由添加羥基丙基甲基纖維素及前花青素聚合物組成物至純水(USP)，混合至溶解。種芯載荷至流體床處理器(尼歐(Nior)－精密塗覆機)之產品碗中。然後聚合物溶液經由以標靶床溫度30℃－35℃噴霧於流化種芯上來於種芯上形成層狀物。一旦已經完成前花青素聚合物層，以標靶床溫度30－35℃使用歐帕吉透明(經由將歐帕吉透明與純水USP混合而製備)施用密封塗層。於施用密封塗層後，丸粒排放出且通過1000微米篩及425微米篩過篩，大於425微米而小於1000微米的層狀球送回流化床處理器。同時，經由將檸檬酸三乙酯及一硬脂酸甘油酯與已經加熱至65℃之水混合，製備腸衣溶液，然後將此腸衣溶液與「優拉吉L 30D－55」混合。所得腸衣溶液於標靶溫度30－35℃於流化床處理器內噴霧於層狀球上，直到全部腸衣溶液皆於珠粒上形成層狀物為止。基於HPLC檢定分析結果，指示前花青素聚合物組成物係於52.9%濃度存在，腸衣珠粒以手動填充入0號硬殼明膠膠囊內部來提供250毫克劑量，然後包裝入適當HDPE瓶內附有熱感應內襯蓋。

1B.經包膠之腸衣珠粒後文說明用來製備不含種芯糖球之經包衣之腸衣珠粒調配物所使用之配方及方法。一種調配物含有83.3% w/w前花青素聚合物組成物，0.5% w/w歐帕吉透明，14.5% w/w「優拉吉L 30D－55」，1.9% w/w檸檬酸三乙酯及0.34%一硬脂酸甘油酯。

珠粒首先於附有50毫米烏斯特(Wuster)管柱之16升氣動式MP－1流化床處理器中以5%歐帕吉透明溶液密封包衣。施用密封包衣之參數為進氣口溫度50℃至60℃，出氣口溫度25℃至40℃，空氣量30 CMH至40 CMH，噴霧速率每分鐘6克至12克及氣壓2.5巴。於施用密封包衣後，珠粒經排放出，過篩篩選大於425微米而小於1000微米的珠粒。然後有適當大小之珠粒回饋入流體床處理器包腸衣。對各1000克前花青素聚合物組成物珠粒，由811.97克「優拉吉L30D－55」、24.36克檸檬酸三乙酯、4.36克一硬脂酸甘油酯及248.55克純水製備腸衣懸浮液。此懸浮液係經由連續溫和攪拌「優拉吉L 30D－55」懸浮液，於分開容器中懸浮與均化檸檬酸三乙酯及滑石於純水而製備。然後檸檬酸三乙酯/滑石混合物添加至「優拉吉L 30D－55」懸浮液，於噴霧過程中，所得包衣分散液經攪拌以免沉澱。然後珠粒於下列參數下於流化床處理器內包衣：進氣口溫度為42℃至47℃；出氣口溫度為28℃至34℃；空氣量為30－40 CMH；噴霧速率為6－12克/分鐘；及氣壓為2.5巴。然後所得腸衣珠粒填充入0號大小之硬殼明膠膠囊內。

1C.腸衣顆粒及粉末粒子後文說明調配於硬殼明膠膠囊劑或懸浮於口服溶液劑中呈腸衣顆粒或粉末(直徑300－500微米之微球)之前花青素聚合物組成物之調配方法。前花青素聚合物組成物粉末粒子係經由將前花青素聚合物組成物及羥基丙基甲基纖維素於高速混合機/造粒機中藉高切變粉末混合而製備。前花青素聚合物組成物顆粒之製法係經由於高速混合機/造粒機中將聚乙烯基吡咯啶酮噴霧於粉末上，讓粉末粒子凝聚來形成較大型顆粒而製備。使用流化床設備，顆粒及粉末隨後以歐帕吉透明(混合水)之密封包衣覆蓋，然後以腸衣「優拉吉L 30D」包衣，腸衣「優拉吉L 30D」係呈水性分散液供應，含有30% w/w無水甲基丙烯酸酯聚合物物質，被提供以0.7%硫酸月桂酯鈉NF(SLS)及2.3%聚山梨酸酯80NF(吞恩20)作為乳化劑，於其中添加增塑劑、檸檬酸三乙酯及一硬脂酸甘油酯來改良包衣的彈性。腸衣粉末之最終組成為81.8% w/w前花青素聚合物組成物，1.5% w/w羥基丙基甲基纖維素，0.5% w/w歐帕吉透明，14.5% w/w「優拉吉L 30D」，1.45% w/w檸檬酸三乙酯及0.25%一硬脂酸甘油酯。腸衣顆粒之最終組成為81.8% w/w前花青素聚合物組成物，10%聚乙烯基吡咯啶酮，1.5% w/w羥基丙基甲基纖維素，0.5% w/w歐帕吉透明，14.5% w/w「優拉吉L 30D」，1.45% w/w檸檬酸三乙酯及0.25%一硬脂酸甘油酯。

腸衣前花青素聚合物組成物顆粒或粒子可以提供適當劑量之用量填充入硬殼明膠膠囊內。

腸衣前花青素聚合物組成物顆粒或粉末粒子也懸浮於口服投藥特別供小兒投藥用之溶液。懸浮液之製法係於97.8毫升蒸餾水及0.2克吞恩80中濕潤2克羥基丙基甲基纖維素；將此製劑藉超音波處理混合至均質，溶液加熱至40℃及攪拌3小時；然後添加腸衣前花青素聚合物組成物粉末粒子或顆粒至該均質溶液。

1D.腸衣壓縮錠劑調配含稀釋劑之前花青素聚合物組成物呈腸衣錠之方法說明如下。對各個350毫克錠劑，250毫克前花青素聚合物組成物使用7毫克交聯羧甲基纖維素鈉(「AC－DI－SOL^TM 」)及足量微晶纖維素(「阿維賽PH200/300」)造粒來將總量調整至350毫克。此等成分於V摻混機中混合20至30分鐘。經20至30分鐘之混合後，加入1.75克硬脂酸鎂，混合物又摻混4至5分鐘。所得顆粒於旋轉錠劑壓機上，使用5/16吋標準凹面衝頭衝壓。錠劑以腸衣混合物包衣，腸衣混合物係由250克「優拉吉L 30D－55」、7.5克檸檬酸三乙酯、37.5克滑石及205克水製備。然後錠劑置於穿孔盤式包衣機(例如阿希臘－科塔系統)中於40℃以15 rpm旋轉。腸衣調配物係使用下示條件噴霧：進氣口空氣溫度44℃－48℃，出氣口空氣溫度29℃－32℃，產品溫度26℃－30℃，1毫米噴霧噴嘴，盤速度30至32 rpm，空氣流速30－32 CFM，及噴霧壓力20 PSI。當盤以15 rpm旋轉，進氣口空氣溫度為60℃時，錠劑硬化30分鐘，然後於切斷熱源後，錠劑於15 rpm旋轉至錠劑冷卻至室溫為止。

1E.腸衣直接壓縮錠劑調配不含稀釋劑之前花青素聚合物組成物成為腸衣錠之方法係如下進行。可直接壓縮之前花青素聚合物組成物係根據實例1F(容後詳述)之方法製造。125毫克錠劑之製法係將99.6% w/w可直接壓縮之前花青素聚合物組成物與0.40% w/w硬脂酸鎂摻混2分鐘，然後於旋轉壓機上，使用1/4吋圓形標準凹面衝頭將材料直接衝壓成125毫克錠劑，獲得錠劑硬度4－10 Kp。

芯錠經測試，發現具有硬度(n＝10)為4－10 Kp，脆性(n＝20)小於0.7%，平均錠劑重量(n＝10)125毫克±7毫克平均厚度(n＝10)3.9毫米至4.1毫米，崩散時間(n＝6)不大於20分鐘。

包衣分散液之製法係相對於每100克錠劑，混合22.22克30% w/w「優拉吉L 30D－55」懸浮液，與已經混合之0.67克檸檬酸三乙酯，1.67克滑石及20.44克純水之混合物維持溫和攪拌至均質。包衣分散液連續攪拌以防沉澱。

錠劑(每批次100,000錠)係使用包衣分散液於康普－實驗室24吋/30升盤中包衣。錠劑於預先溫熱至35℃至40℃溫度之盤中以3－5 rpm速度輕輕搖動。然後錠劑以腸衣分散液包衣至6%至8%增重，參數如下：進氣口溫度45℃至65℃；出氣口空氣27℃至34℃；產品溫度28℃至32℃；盤速度8－14 rpm；氣流180至240 CHM；空氣噴霧壓力10－20 psi(每平方吋之磅數)；初噴霧速率3至4克/分鐘/千克；及最終噴霧速率4至8克/分鐘/千克。然後錠劑於盤中硬化30分鐘，進氣口溫度45℃至50℃，盤速度3至5 rpm。最後，允許錠劑於盤中於盤速度3至5 rpm冷卻至室溫。然後四顆125毫克錠填充入零號不透明瑞典橙色明膠膠囊內。

包腸衣之前花青素聚合物組成物錠劑測試內容物之均勻度、藥物之釋放、微生物測試及安定性，於製程測試中也進行若干分析。於安定性研究中，於室溫儲存6個月後，以及於加速溫度及濕度條件下儲存6個月後，前花青素聚合物組成物維持安定。最後，芯錠經測試，發現具有硬度(n＝10)為4－10 Kp，脆性(n＝20)小於0.7%，平均錠劑重量(n＝10)125毫克±7毫克平均厚度(n＝10)3.9毫米至4.1毫米，崩散時間(n＝6)不大於20分鐘。

1F.腸衣直接壓縮錠劑不含稀釋劑之前花青素聚合物組成物調配成腸衣錠係如後文說明進行。可直接壓縮之前花青素聚合物組成物係如實例2(參見後文)之說明分離。芯錠之製法係於裝配有024R(30網眼)篩之夸左可蜜(Quadro Comil)中將每錠250毫克前花青素聚合物組成物(共約16千克)研磨，然後將研磨後之組成物於派特森凱利(Patterson Kelley)2立方呎雙殼摻混劑中摻混。然後於摻混機中將每錠1毫克硬脂酸鎂(光譜品質產品公司(Spectrum Quality Products,Inc.)，紐澤西州新布司威克)添加至該組成物及摻混2分鐘。摻合物於旋轉錠劑壓機上壓縮成251毫克錠(含有250毫克前花青素聚合物組成物)，壓縮至錠劑硬度＝8－15 Kp及脆性低於0.5%。

包衣分散液之製法係經由首先於第一容器混合25克(7.5克固體)「優拉吉L 30D－55」(哈斯美國公司(Huls America,Inc.)，紐澤西州桑默賽)(重量係以每115克包衣錠表示)分散液而製備。顏料分散液之製法係經由於第二容器內以恆常攪拌循序加入39.59克純水、3.30克滑石(阿法菲爾(Alphafil)500)(惠泰克，克拉及丹尼爾公司(Whittaker,Clark&Daniels,Inc.)，紐澤西州南平原)、6.06克(3.15克固體)白分散液(顏料)(華納－傑更森公司(Warner－Jenkinson,Inc.)，蒙大拿州聖路易)以及然後加入1.05克檸檬酸三乙酯(莫富萊斯公司(Morflex,Inc.)，北卡羅萊那州葛林斯柏洛)而製備。然後混合物均化15分鐘或均化至均質。於徐緩攪拌下，顏料分散液添加至「優拉吉L 30D－55」分散液，然後於噴霧前攪拌30分鐘。噴霧過程中維持攪拌以防沉澱。

錠劑以下列設定值，於康普－實驗室24吋/30升盤中以50,000錠批料包衣：10－20 psi霧化空氣壓力；35℃－60℃盤進氣口空氣溫度；5至6吋噴嘴梢端至錠劑床距離；及4/2檔板/噴嘴。錠劑添加至盤後，盤以3至5 rpm及加熱至40℃輕輕搖動。然後錠劑被噴霧至增重11%至13%，有下列參數：27℃－33℃目標出氣口溫度(於噴霧之10分鐘內達成)；盤速度8至12 rpm；180－240 CFM空氣流速；及噴霧速率2－5克/分鐘/千克。於達到期望的增重後，關閉熱源，盤輕搖3－5 rpm直到錠劑冷卻至低於30℃。

錠劑包囊於AA尺寸不透明瑞典橙色DB明膠膠囊(膠囊明膠公司(Capsugel)，南卡羅萊那州格林伍)中。

也如前文說明製造500毫克錠劑，但包衣係以25,000錠之批料進行至增重8%至10%。

實例2：可直接壓縮之前花青素聚合物組成物之分離

可直接壓縮之前花青素聚合物組成物(用來製備如上實例1E及1F之調配物)係由Croton lechleri巴豆樹之乳膠分離如下：460升Croton lechleri乳膠與940升純水混合10分鐘，然後允許於4℃靜置隔夜(12小時)。紅上清液泵送至盛裝槽，拋棄殘餘物。然後經由混合10分鐘，以200升正丁醇萃取上清液，然後允許各項分離。拋棄正丁醇相，每次以200升正丁醇又萃取水相兩次。萃取後，經由使用1 kD截留膜(低蛋白質結合作用之纖維素膜)藉超濾濃縮水相，然後截留物於托盤乾燥器中於約37℃(±2℃)乾燥。

欲藉管柱層析術純化，6千克經乾燥後之萃取物溶解於75升純水，攪拌90分鐘。溶解後之物質於兩根管柱之管柱層析術系統中層析，該系統係由35升CM－西法羅斯(Sepharose)管柱(弱陽離子交換樹脂)及70升LH－20管柱(尺寸排除樹脂)串聯連接所組成。材料載荷至CM－西法羅斯管柱上，以140升純水洗滌，然後以375升30%丙酮洗提至LH－20管柱上。此時，拆開二管柱的連接，以250升45%丙酮由LH－20管柱洗提前花青素聚合物組成物。洗提分收集於10升瓶內，使用紫外光檢測器於460奈米監測。含有於460奈米有可檢測之吸收之材料之洗提分經匯集，藉1kD截留膜(低蛋白質結合作用纖維素膜)藉超濾濃縮。截留膜使用旋轉蒸發器於約37℃(±2℃)水浴乾燥。

測試前花青素聚合物組成物之直接壓縮性。於無任何黏結劑或賦形劑存在下將每份250毫克前花青素聚合物組成物置於打錠機內，然後壓縮成為不等厚度之錠劑(亦即於組成物上施加愈大壓力來打成錠劑，則所得之錠劑愈薄)。然後於習知硬度測試機中測定錠劑硬度。具有硬度8－15 kp之錠劑之脆性係如USP 23<1216>測定。脆性係少0.5%重量損耗。

實例3：藥品之成分、組成及製造

3A.藥品藥品克羅非莫包含腸衣125毫克錠劑包囊於00號不透明瑞典橙色明膠膠囊內，且以微晶纖維素回填充。各膠囊劑含有1、2或4錠腸衣錠。錠芯係由99.93%克羅非莫及0.07%硬脂酸鎂所組成，且以甲基丙烯酸共聚物包衣。

3B.藥品成分克羅非莫係由那普藥品公司(Napo Pharmaceuticals,Inc.,)供應，且係遵照現行優良製造規範(cGMP)製造。硬脂酸鎂係由莫林克拉(Mallinckridt)製造(或相當物)，符合如27USP/NF所述硬脂酸鎂之規格。硬脂酸鎂由製造商證實係衍生自植物來源。微晶纖維素係由FMC製造(或相當物)，符合27 USP/NF所述微晶纖維素之規格。採用高密度微晶纖維素及低密度微晶纖維素。甲機丙烯酸共聚物係由德古沙公司(DeGussa)以商品名優拉吉(L30－D55)製造，符合如27 USP/NF所述甲基丙烯酸共聚物C型的規格。檸檬酸三乙酯係由莫富萊斯製造(或相當物)且符合27 USP/NF所述檸檬酸三乙酯之規格。滑石係由惠泰克，克拉及丹尼爾公司製造(或相當物)且符合於27 USP/NF所述滑石之規格。純水係由藥品製造商供應且符合於27 USP/NF所述純水之規格。瑞典橙色不透明00號硬明膠膠囊囊體和囊帽係由膠囊明膠公司(南卡羅萊那州格林伍)供應。製造商證實膠囊係由遵照cGMP符合現行國家處方集(NF)對明膠之要求之明膠所製造。

3C.藥品組成錠芯及腸衣錠之組成分別如表2及表3所述。克羅非莫及硬脂酸鎂之數量係基於藥物之無水強度調整，無水強度係對克羅非莫之水含量作校正。包衣後之增重量約為10%。臨界批次大小由100,000至150,000腸衣錠。隨後將1、2或4錠腸衣錠置於00號膠囊內，以微晶纖維素回填來配合各膠囊強度及安慰劑之重量。

3D.藥品之製法I.錠芯之製造基於克羅非莫強度(以無水基準來調整水含量)足量克羅非莫及硬脂酸鎂於製造前經稱重。克羅非莫加入摻混機，硬脂酸鎂經過篩選且添加至克羅非莫。克羅非莫與硬脂酸鎂摻混，取出代表性摻合物樣本，測定產率。產率須為100±3%。由於摻合物具有99.9%活性，故摻合物之均勻度未經測定(除非必須)。使用1/4吋圓凹面衝頭將摻合物於旋轉錠劑壓機上直接壓縮。錠芯成品經過去除粉塵，置於容器中等候包衣。恰在製造回合開始前，進行製造前之處理回合來調整壓機的速度及壓縮力俾便配合目標錠芯重量、厚度及硬度。此外測量脆性及崩散。於製造回合期間，以週期性間隔取錠芯樣本來確保錠劑可持續滿足目標錠劑的重量、厚度及硬度。於製造回合之初、之中及結束期間取出代表性錠芯，額外進行硬度、厚度、重量、脆性及崩散度的測定。平均錠芯重量係於目標錠芯重量之±5%範圍內。錠芯、樣本錠芯、錠芯廢料及摻合物廢料之數目經過彙總，計算可計數百分比。可計數百分比須為低於95%至不高於103%。錠芯製法之示意圖顯示如下。

II.錠芯之包衣優拉吉、檸檬酸三乙酯、滑石及純水之數量經計算且基於名目錠芯重量增益之10%稱重。純水進給入裝配有高切變混合機之適當容器內。檸檬酸三乙酯及滑石添加至容器，混合至均化。於裝配有槳葉混合機之分開容器內進給及混合優拉吉分散液。檸檬酸三乙酯及滑石分散液添加至優拉吉分散液，整個噴霧過程中連續攪拌。盤式包衣機之參數視需要調整，於管線內進給包衣分散液。錠芯進給入包衣盤中，於輕輕搖動包衣盤期間溫熱至35℃至40℃。一旦達到該溫度，記錄錠芯的平均重量，算出目標包衣錠重量。隨後，錠芯經噴霧，定期檢驗重量直到符合目標增重。於經常性間隔時間，監視目標噴霧速率(4至8克/分鐘/千克錠芯)、目標出氣口溫度(35℃至40℃)及進氣口溫度。錠劑於45℃至50℃硬化30分鐘然後冷卻。取出代表性腸衣樣本接受測試。平均腸衣錠重量係於目標腸衣錠重量之±5%以內。

腸衣錠、腸衣錠樣本重量及腸衣錠之理論重量經測定，計算可計數百分比。可計數百分比必須不低於95%而不高於103%。錠芯噴霧程序顯示如下。

III.包囊腸衣錠之製造腸衣錠及微晶纖維素係對各種膠囊強度之包囊分開稱重。欲包囊之微晶纖維素數量經計算來依據確切劑型(125毫克、250毫克或500毫克)達到名目600毫克至800毫克膠囊重量。膠囊平均重量係基於100膠囊之平均值計算。膠囊係使用半自動化包囊機裝配有00號更換零組件來填充，零組件將過調整可輸送適當錠劑及微晶纖維素。進行預製造回合來調整托盤填充重量、填塞機的轉數、及填塞次數，來符合目標膠囊粗重(膠囊殼加錠劑及微晶纖維素)。各托盤之準備係將膠囊囊體置於膠囊托盤內。各膠囊囊體被填充以目標量之錠劑及微晶纖維素來達成目標填充。囊蓋置於囊體上及封閉。膠囊由托盤上取下，去除粉塵。來自各托盤之膠囊之複合物經收集及稱重用於線內處理及釋放試驗。平均膠囊重量係於目標膠囊重量之±5%以內。然後重複處理程序直到填裝期望數目之膠囊。破損的膠囊、腸衣錠廢料及微晶纖維素經收集用於最後產物之彙總。最終膠囊複合物送至接受釋放試驗。最終膠囊數目、樣本膠囊、破損的膠囊及藥物物質廢料經過彙總，算出可計數百分比。可計數百分比須低於95%而不低於103%。腸衣錠的包囊顯示如下。

實例4：腸衣前花青素聚合物組成物對患有腹瀉型腸躁症之病人的功效

4A.處理研究為於患有腹瀉型腸躁症(d－IBS)之個體進行為期16週之多中心第二期隨機分配之雙盲式有安慰劑對照組之研究。如IBS診斷之羅馬II標準證實，符合d－IBS定義之246位個體隨機分成4組：安慰劑組、每日兩次(bid)、每次125毫克組、250毫克bid組及500毫克bid組。研究包含2週無處理之篩檢期、12週盲目處理期、接著為2週無處理之追蹤期。

於2週篩檢期間，個體透過按鍵電話自己每日報告有關其d－IBS症狀的現況。如此含括有關腹痛及腹部不適、排便頻率、糞便稠度及急迫感之相關資訊。若篩檢期結束時，個體仍然持續符合含括於研究中的要求，則於篩檢期間於日誌中所收集的資訊指示其患有活性d－IBS[平均每日排便次數2；腹痛分數1；糞便稠度3(腹痛及糞便稠度之5點Lickert量尺)]，個體係根據電腦所產生之中心隨機方案分成四組之一。

於12週雙盲處理期間，個體接受指示透過按鍵電話日誌系統持續進行每日記錄和每週評估。於治療期間個體每4週接受研究評估訪視，此時接受額外的治療藥物。

於兩週之無治療追蹤期間，個體持續作每日記錄及每週評估。

結果：並無嚴重的藥物相關不良反應。不良反應率跨全部給藥組的結果皆類似，如表4所示。於便秘方面並無藥物相關或劑量相關的差異。

大致上，如表5所示，克羅非莫125毫克bid於大部分女性之功效終點獲得一致性反應。男性顯然極少有效；但群組大小過小(每組13－16人)無法分開分析。因克羅非莫未產生便秘，糞便稠度分數趨近於正常，與安慰劑無義。於全部其它終點(頻率、急迫感、適當緩解、及疼痛)，連續每個月的活性改良，於2週無處理之追蹤期間，如所預期，症狀開始趨近於基準線。克羅非莫500毫克bid也對疼痛有統計顯著影響(疼痛分數降低0.48；無疼痛日數增加22.44%)。有5位女性離開實驗(於基準線時每日排便>9次，以全部隨機分配的女性個體之平均排便頻率的差異>3標準差)並未表示本研究使用之d－IBS族群，而從本摘要所呈現的全部分析結果中剔除。

如表6所示，克羅非莫於250毫克bid及500毫克bid比安慰劑組對排便頻率及糞便稠度的影響較小。使用克羅非莫500毫克bid處理個體每日排便平均值比較安慰劑組的排便頻率平均大於一半；比較安慰劑組糞便稠度更高0.22點(較為接近鬆軟稠度)。

如第4圖可知，以克羅非莫125毫克bid處理的女性個體之排便頻率於臨床上顯著減少，使用克羅非莫可導致每日排便減少次數大於一次。排便頻率的每月改善與安慰劑組成對比，隨著數值趨近於基準線，於第二個月效果開始降低。當第三個月結束時開始無處理期，個體停止使用克羅非莫，如所預期，效果開始消失。

如第5圖可知，克羅非莫可產生無急迫感日數的增加。於第三個月，克羅非莫組之無急迫感日數增加35.1%，相對於安慰劑組觀察得無急迫感日數增加23.9%，如一般可知，逐月改善。安慰劑組之功效尖峰出現於第二個月，而於數值開始趨近於基準線時功效遽降。於第三個月結束時當開始無處理期，個體停止服用克羅非莫，如所預期，效果開始消失。

如第6圖可知，投予克羅非莫造成報告d－IBS症狀充分緩解之個體百分比增加。因d－IBS包含一組症狀，充分緩解終點為病人總體評估治療對其d－IBS症狀的解決情況的效果如何。克羅非莫於125毫克bid比較安慰劑組造成d－IBS症狀充分緩解比例增高16%。使用觀察得之分析，克羅非莫活性逐月改良，亦即病人服用克羅非莫的期間愈長，則劑量的緩解愈大。如同先前使用其它終點可知，安慰劑功效的尖峰係出現於第二個月，隨後效果降低。

腹瀉型IBS與其它功能性腸道疾病的差異在於腹痛與排便習慣的改變密切相關聯。如對IBS診斷之羅馬II標準定義，腹痛必然與排便習慣的改變相關聯，排便習慣的改善將與腹痛的改善相關聯。於本研究中，發明人以5分來測量疼痛分數，0分為無疼痛，5分為嚴密的疼痛；以及以無疼痛日數的存在來評分。如第4圖及第5圖所示，使用克羅非莫(125毫克bid及500毫克bid)處理的女性就腹痛分數以及無腹痛日數而言皆有臨床上和統計上顯著(p<0.05)降低。此項效果係與第6圖所示每週腹痛分數結果之觀察值符合一致。此種對疼痛緩解的功效為未預期且出乎意外。

總結而言，克羅非莫於125毫克bid安全，女性個體投藥導致功效的改良，包括腹痛、充分緩解、排便頻率及急迫感功效終點的改良。克羅非莫於250毫克bid及500毫克bid為安全，比較安慰劑組，腹瀉稠度症狀及頻率症狀的惡化顯著減輕。於125毫克bid及500毫克bid之克羅非莫可造成患有d－IBS女性病人之疼痛分數及無痛日數有統計上顯著減少。

實例5：克羅非莫作用機轉之調查研究

為了進一步研究克羅非莫的作用機轉，克羅非莫於10及100微克/毫升係於選定之細胞激素釋放檢定分析(IL－1α；TNF－α－誘導及IL－1－誘導PGE2之釋放；IFN－γ；IL－2、IL－4；IL－5；IL－6；IL－8；IL－10及TNF－α)及分子檢定分析(COX－1及COX－2酶檢定分析，及糖皮質激素、血清素5HT3、δ－鴉片劑、－鴉片劑、μ－鴉片劑、及非選擇性鴉片劑受體結合檢定分析)評審評估。克羅非莫也於與ConA－誘導及LPS－誘導細胞激素釋放檢定分析之相對應胞毒性檢定分析、以及與TNF－α誘導及IL－1誘導PGE釋放檢定分析相對應之胞毒性檢定分析測試。

克羅非莫於10及100微克/毫升於IFN－γ；IL－2、IL－4；IL－6；IL－8；IL－10及TNF－α細胞激素釋放檢定分析、以及TNF－α誘導及IL－1誘導PGE2釋放檢定分析皆具有顯著(>50%)抑制效果(亦即於全部細胞激素釋放檢定分析皆具有顯著抑制效果，IL－5除外)。克羅非莫於ConA誘導及IL－1誘導PGE2胞毒性檢定分析也顯示顯著胞毒性，提示於ConA－媒介之細胞激素釋放檢定分析(IFN－γ、IL－2、IL－4及IL－10)中及IL－1－誘導PGE2釋放檢定分析可能係由於一般胞毒性所致。

此外，於10及100微克/毫升，克羅非莫於COX1及COX2酶檢定分析分別造成73%抑制及100%抑制。

如熟諳技藝人士顯然易知，未悖離其精髓及範圍，可於本發明做出多項修改及變化。此處所述特定實施例僅供舉例說明之用，本發明僅受隨附之申請專利範圍連同申請專利範圍之完整相當範圍所限。此等修改例預期皆落入隨附之申請專利範圍。

此處引用之全部參考文獻、專利案及非專利案全文皆以引用方式併入此處，且彷彿個別公開文獻或專利案或專利申請案係特別地且個別地全文併入此處以供參考般之同等程度之目的。

第1圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫125毫克每日二次對排便頻率之功效。

第2圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫125毫克每日二次對急迫感之功效。

第3圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對充分緩解IBS症狀之功效。

第4圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對疼痛分數之功效。

第5圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對無痛日數百分比之功效。

第6圖為線圖顯示用於女性，克羅非莫對疼痛分數之功效。

第7A－7H圖顯示可用於本發明之方法之CFTR抑制劑分子之實例。第7A圖為3－[(3－三氟甲基)苯基]－5－[(3－羧基苯基)亞甲基]－2－硫酮基－4－噻唑啶酮；第7B圖及第7F圖為甘胺酸醯肼類；第7C、7D、7E、7G及7H圖為丙胺酸醯肼類。

Claims (9)

1. 一種克羅非莫(crofelemer)在製備用於治療個體中與腹瀉型腸躁症(d-IBS)相關聯之腹痛及腹部不適之藥物的用途，其中該克羅非莫係被調配成以每日250毫克之量投予。
2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該克羅非莫為腸衣塗覆之克羅非莫。
3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該克羅非莫係被調配成經口投予。
4. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該個體是人類女性。
5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之用途，其中在投予該克羅非莫之後，該不會腹痛及/或腹部不適之日數增加至少10%。
6. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之用途，其中該克羅非莫不是系統性吸收。
7. 如申請專利範圍第5項之用途，其中該克羅非莫不是系統性吸收。
8. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之用途，其中該克羅非莫係被調配成以每日兩次125毫克之量投予。
9. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之用途，其中克羅非莫是製備用於治療個體中與腹瀉型腸躁症(d-IBS)相關聯之腹痛之藥物。