TW502037B - Novel water soluble c-ring analogues of 20(s)-camptothecin - Google Patents

Description

502037 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明是有關於一種新穎之2〇(s)-喜樹驗 (Camptothecin) C環水溶性類似物’具有如通式1的結

經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中R1，R2，R3以及R4各自獨立，相同或不相同， 代表氳，羥基，低烷氧基（lower alkoxy)，芳氧基（aryloxy)， 低烧蘼基（lower alkanoyl)，石肖基’氰基’鹵素，叛基 (carboxy)，幾氧基（carbonyloxy)，胺基，具取代之胺基 (substituted amino)，低烧基，具取代之低烧基，咸R2與 R3結合成為-0-(CH2)n-0-，η為1或2之整數；R5代表 氫，低院基，具取代之低烧基，低芳烧基（lower aralkyl)， 經甲基（hydroxymethyl)，叛甲基（carboxymethyl)，甲胺 基，具取代之甲胺基，其中胺基為單取代或雙取代，而 雙取代之兩個取代基為各自獨立，或結合成為含碳的五 員環或六員環，環上或包括1到2個選自氧，氮，以及 硫的雜原子；以及R6代表氮，苯基(phenyl)，或苯曱基 (benzyl)，其中苯基可為無取代或選自下列取代基之單取 代、雙取代或三取代：_素，羥基，低烷氧基，氰基， 羧基，硝基，醯胺基(amide)，胺基或具取代之胺基，低 烷基，具取代之低烷基，環烷基或環烷基低烷基，其中 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格了210X297公釐) 職 502037 A7 B7 五、發明説明（2 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 所指的環為全部含碳的三員環到七員環；具有雜環取代 的低烷基，其中所指的雜環為三員環到七員環，環上至 少包括1個選自氧，氮，以及硫的雜原子；低烷醯基； 苯甲醯基，其中苯基可有取代或沒有取代基；低烯烴基； 低烷基；具取代之低烷基；具取代之低烯烴基；具取代 之低烷醯基，其中所指之取代基係選自鹵素，羥基，烷 氧基，芳氧基，硫基，硫烷基，硫芳基，芳香基，雜芳 香基，羧基，氰基，硝基，醯胺基或胺基，其中胺基可 為無取代、單取代、或雙取代，而雙取代之兩個取代基 為各自獨立，或結合成為含碳的五員環到六員環，環上 或包括1到2個選自氧，氣，或硫的雜原子；但附帶以 下的條件：⑴當R1為甲氧基時，R6不為氫或低烷基；（ii) 當R2為羥基，低烷氧基，硫基，硝基，胺基，烷胺基， 醯胺基，或鹵素時，R6不為氫或低烷基；（iii)當R5為低 烷基，低芳烷基，CH2OH，COOH，COOMe，或 CH2OR” 其中R”代表低烧基或酿基時^ R6不為氫或低烧基；（iv) 當R1為甲氧基，R2為經基，低烧氧基，硫烧基，硝基， 胺基，烷胺基，醯胺基，或鹵素時，R5為低烷基，低芳 烷基，CH2OH，COOH，COOMe，或 CH2OR”其中 R”代 表低烷基或酼基時，R6不為氫或低烷基；（v)當R1到R5 為氫時，R6不為氫或低烷基。 所有的這些化合物1是從具有不對稱碳原子C-20(S) 的化合物2製備而得，其中R1至R5之定義悉如前述。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（3 )

如式2的20(S)-喜樹鹼是一種具有強烈抗腫瘤活性 的生物驗。

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裂· 最早是在1966年由Wall等人從Camptotheca acuminate中分離出來，然而因其對人體會產生不可接受 的副作用，並且具有高毒性以及低水溶性，使得人們曾 一度放棄將此種化合物作為抗癌藥物，直到1985年Liu 等人發現了喜樹驗當作位相異構酶I(topoisomerase I)之 抑制劑時的機制[L.F.Liu，et al·，260. 14873 (1985)]，才又引起各界對此化合物研究的興趣。 過去30年間，為了克服喜樹鹼的低水溶性以及高 毒性，在世界各地的研究困體製備並研究了許多喜樹鹼 類似物，包括將喜樹鹼的A至E環加以修飾，或是在喜 樹鹼的環上導入各種不同的官能基[Μ·Ε· Wall et al·， J.Med.Chem·，2689 (1993) ; R.P. Hertzberg et al., 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐） 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 502037 A7 B7 五、發明説明（4 ) J.Med.Chem” 715 (1989) ; S.W. Sawada et al.5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ϋ(2)，310 (1993)]，到目前為止，在 這麼多各種不同的喜樹鹼中，只有 CPT-11(式 4) [C7iem.jP/mrm.J?w//·, 1446 (1991)]以及 topotecan(式 5) [^MdC/zem·，M，98 (1991)]兩種，最近在市場上被當 作抗癌藥使用，而另一化合物9-胺基喜

樹鹼M，2358 (1986)](式 6)，目前正在進 行第3階段的臨床試驗。喜樹鹼（式3)之結構活性關 經濟部中央樣準局員工消費合作社印褽

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（5 ) 係（Structure-Activity Relationship; SAR)，經過詳細的研 究，其結果顯示喜樹鹼中的20(S)-a-羥基-δ-内酯（E環） 是其活性來源所不可或缺的部份 [M.E.Wall et.al·， J.MeACTiew·，M，2689 (1993)]，然而根據 Ejima 等人最 近的報導，將C-20的羥基以胺基取代後得到一個7-乙 基-10-甲氧基喜樹鹼衍生物（式7)，其所顯現的活體（in vivo)抗癌活性比20(RS)-喜樹鹼（式8)更強[A· Ejima et.al·， Chem.Pharm.Bull., 40(3)· 683 (1992)] 〇 在另一篇報導中 18-

noranhydro喜樹驗類似物（式9)，展現了類似喜樹驗對 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印装

位相異構酶I活性的抑制[Lawrence Snyder et.al·， 处，7033 (1994)]，而這些報導都跟 20(S)-oc-經基是其生物活性來源的假設相反。 根據文獻上對喜樹鹼類似物所做的結構活性關係， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 502037 A7 B7 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) 發現修飾喜樹鹼（式3)上C-9與C-7上的取代基，可以安 定E環上的内酯，因而在增進抗癌活性的功能上扮演了 重要的角色[T.G. Burke et.al·，12., 40 (1994)]。人們同時也發現環上的内酯若形成一開環結 構，亦即叛酸酯結構（the Carboxylate form)，其療效比閉 環的内酯結構更差[Hertzberg et al·，H, 715(1989); J.M.Covey, C Jaxel et al., Cancer Research., li， 5016 (1989); Giovanella et al., Cancer Research., 51，3052 (1991)]。T.G· Burke等人最近研究閉環的喜樹鹼在人類 血清蛋白（Human Serum Albumin; HSA)存在下的穩定 性，其結果顯示出於37°C時在HSA的存在下，比起20(S) 喜樹鹼（式3)與9-胺基喜樹鹼（式6)，CPT-11(式4)、7-乙 基-10-羧基喜樹驗（式7a，SN-38)、以及Topotecan(式5) 具有較高的比例是以内酯的型態存在[T.G. Burke

and Zihou Mi” t/.MedC/id, 1Z，40 (1994);同前 ⑹〇;·, 21，12540 (1994)]。根據這些研究可知， 為了設計出一個新穎且具有療效的喜樹鹼藥物，瞭解影 響其内S旨-叛醋之間平衡的因素疋很重要的。 儘管對喜樹鹼A環與B環上取代基的修飾正以快 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· -訂 502037 五 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 ___B7發明説明（7 ) 速的腳步進行著以製造出新的CPT類似物，C環的喜樹 鹼類似物的研究卻受到限制，可能是因為由於Sawada 等人的研究顯示出，喜樹鹼C-5位置的取代基會降低喜 樹鹼的抗癌活性，而導致形成一個非活性的類似物 [Sawada et al·，P/zarm· 39(10)，2574 (1991)] 〇 Sawada等人所申請專利的05取代喜樹鹼，結構如下（式 10)(JP 58,154,584; U.S. Patent 4,513,138; U.S. Patent 4,473,692; and U.S. Patent 4,339,282)：

10 其中R代表經基，低烧基’低烧氧基’或醢氧基（acyloxy)， R1代表第9位置的氳，或甲氧基；或第10位置的氫， 羥基，低甲烷基，醯氧基，SH，硫烷基，硫醯基，硝基， 胺基，醯胺基，或鹵素，R2代表氫，低烷基，低芳烷基， CH2OH，COOH，COOMe，CH2OR，，其中 R，代表低烷 基或醢基。 K.H. Lee等人最近發現包括，將20(S)喜樹鹼在二 甲基甲醢胺（N，N-dimethylformamide; DMF)下與甲醛及4-六氫吡啶基六氫吡啶（‘PiperWinopipwidine)反應，得到 5-羥甲基喜樹鹼，而這類型的喜樹鹼顧示出較低的抗癌 活性⑽ Ie"·，奴1)，77 (1995)]° 此外 本紙張纽適用中國國家標準（CNS)Α4· (210x297公楚） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 . 502037 A7 B7 五、發明説明（8 )

Danishefsky等人也以全合成製備出一些C-5取代的20-(RS)喜樹鹼衍生物[U.S. Patent 5,391，745 and U.S. Patent 5,446,047] 〇 然而，由Terasawa等人合成製備出的C-5取代喜 樹鹼衍生物（式11)卻宣稱具有可比擬20(S)-喜樹鹼抗癌 活性。

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將這些因素謹記在心，再將焦點放在我們對20(S)-喜樹鹼的研究上，目標是設計出一個新穎的喜樹鹼類似 物，其具有較好的水溶性以及其内酯結構在溶&中具有 較好的安定性。我們確認出一個在醇類溶劑下的氧化反 應可以達到這樣的目的，而研究結果終於發現一個合成 上新穎的轉化，可在20(S)-喜樹鹼的C-5位置導入各種 的烷氧基，再將這些C-5烷氧基喜樹鹼進行官能基的轉 換，可以製造出各種具有通式14的新穎20(S)-喜樹鹼類 似物，

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（9 ) 其中X代表NH或NR，CH2或CHR，R6之定義如前述， 在我們待審中的美國專利裡（序號08/655,259)，已敘述 以此化合物為發明之標的物。 因此，此發現引導至一個簡易且多用途的半合成法 (semi-synthetic approach)，藉由此法幾乎所有的文獻上 已知的衍生物，都可以將其轉換成C-5取代基的喜樹鹼 類似物。因此，本發明提供一個新穎方法，以製備各種 的C-5取代喜樹鹼。此外，根據本發明的方法，可以在 式2之喜樹鹼的C-5位置導入第二個不對稱中心，而不 會影響原有的C-20不對稱中心。再者，化合物1中所表 示的許多種取代基，將水溶性增加了每毫升lmg到1 Omg 不等。所有這些依據本發明製備之化合物，對多種的人 類腫瘤細胞系均表現了顯著的體外（M 抗癌活性。 本發明詳述 本發明特別提供一種C-5-O-取代的水溶性20(S)喜 樹鹼類似物，具有式1的結構，

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中R1到R6之定義悉如前述，在本發明的整個敘述中， 用在表示R1到R6的這些用語，具有以下的定義： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 --------— B7 ___ 五、發明説明（10) “低烷基”表示一個一價的，含碳數1-8的直鏈或支 鏈碳氫化合物。典型的例子包括··甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，第二丁基，特丁基，戊基，異戊基，特 戊基，己基，異己基，以及辛基。 “烯烴基”表示代表一個含碳數1-8、具有sp或sp2 碳中心的直鍵或支鍵碳氣化合物。典型的例子包括：乙 烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，異丙烯基，異丁烯基， 丙炔基，己烯基，辛烯基。 “鹵素”表示氣，溴，或氟。“鹵烷基，，表示一個具鹵 素取代的烷基。典型的例子包括：氣乙基，溴丙基，氟 乙基，三氟乙基，三氣乙基，以及三氟丁基。 低烧氧基”表示一個如上述所定義的低烧基經由氧 連接至分子的其它部份。典型的例子包括：甲氧基，乙 氧基，異丙氧基，特丁氧基，己氧基，康氧基/以及辛 氧基。 “低烷醯基”表示一個如上述所定義的低烷基或低烷 烯基經由魏基連接至分子的其它部份。典型的例子包 括：乙醢基’丙醢基，丙稀醯基（propenoyl)，巴豆醯基， 丁醯基，戊醯基，以及異戊醯基。 “胺烷基”代表一個具有胺取代基的低烷基。典型的 例子包括· 2-胺基丙基’ 4-胺基丁基，5-胺基戍基。胺 基也可以是單取代或雙取代，而具取代的胺基典型的例 子包括：二甲基胺基，二乙基胺基，二苯甲基胺基，乙 基異丙基胺基，11比洛咬基（pyrrolidino)，六氫哺唆 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） '^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 d 502037 Α7 Β7 五、發明説明（11 ) (piperidino)，嗎琳基，以及六氫吼啡基。 “雜原子”代表氫，氮，或氧。“芳香基”或“雜芳香 基”代表具有五或六員環的芳香族，包括選自：聯苯基 (biphenyl)，萘基，吼咬基（pyridyl)，嗜琳（quinoline)， 異喹琳，吲嘌（indole)，吼咯基，呋喃，苯併吱喃 (benzofuran)，嗔吩（thiophene)，癌唆，六氫卩比咬，癌嗤 烧（thiozolidine)，以及咪嗤（imidazol) 〇 “具取代之苯基”在本發明中是指苯基中具有選自下 面所列舉之取代基：羥基，低烷基，鹵烷基，苯基，甲 苯基，_素，低烷氧基，硫烷氧基，苯甲氧基，羧基， 氰基，硝基，醯胺基，胺基，以及烷胺基。這類型的例 子包括：4-羥基苯基，3-甲氧基苯基，4-氟苯基，4-三氟 甲基苯基，N，N-二甲胺基苯基，4-甲氧羰基苯基。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) “具取代之苯基”在本發明中是指苯基中具有選自下 面所列舉之取代基：經基，烧基，幽烧基，苯基，_素， 烷氧基，硫烷氧基，苯甲氧基，羧基，羰氧基，氰基， 硝基，醯胺基，胺基，以及烷胺基。這類型的例子包括： 氟乙基，氣丙基，經乙基，甲氧乙基，Ν，Ν_二乙胺基乙 基，Ν-苯甲醯胺基丙基，三氟乙氧基丙基，苯氧基乙基， 甲氧羰基乙基，（對氟苯甲醯氧基）乙基，胺丙基，以及2-硫乙基。 “具取代之胺基”在本發明中是指胺基中具有選自下 面所列舉之取代基：羥基，烷基，_烷基，苯基，苯甲 醯基，烷氧基，羧基，醢胺基，胺基，以及烷胺基。這 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（12 ) 類型的例子包括：N，N_二乙基胺基，N-苯甲醯基胺基， N-甲氧基胺基，N-乙氧羰基胺基，以及N-氣乙基胺基。 或者胺基上的兩個取代基可以連接成五員或六員環，例 如吼咯唆基，六氫σ比唆基，六氫Τί比讲基，嗎琳基，味〇坐 基，或雀嗤烧基。 本發明亦提供一個製備化合物1的方法，

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中R1，R2，R3以及R4各自獨立，相同或不相同，代 表氳，經基，低烧氧基，芳氧基，低烧醯基，，基，氰 基，幽素，叛基，魏氧基，胺基，具取代之胺基，低燒 基，具取代之低烷基，或R2與R3結合成為-0-(CH2)n-0-， η為1或2之整數；R5代表氫，低烷基，具取代之低烷 基，低芳烷基，羥甲基，羧甲基，甲胺基，具取代之甲 胺基，其中胺基為單取代或雙取代，而雙取代之兩個取 代基為各自獨立，或結合成為含碳的五員環或六員環， 環上或包括1到2個選自氧，氮，以及硫的雜原子；以 及R6代表氫，苯基，或苯甲基，其中苯基可為無取代或 選自下列取代基之單取代、雙取代或三取代：處素，羥 基，低烷氧基，氰基，羧基，硝基，醯胺基，胺基或具 取代之胺基，低烷基，具取代之低烷基，環烷基或環烷 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（13) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 基低烧基，其中所指的環為全部含碳的三員環到七員 環；具有雜環取代的低烷基，其中所指的雜環為三員環 到七員環，環上至少包括1個選自氧，氮，以及硫的雜 原子；低烷醯基；苯甲醢基，其中苯基可有取代或沒有 取代基；低烯烴基；低烧基；具取代之低烧基；具取代 之低烯烴基；具取代之低烷醯基，其中所指之取代基係 選自鹵素，羥基，烷氧基，芳氧基，硫基，硫烷基，硫 芳基，芳香基，雜芳香基，羧基，氰基，硝基，醯胺基 或胺基，其中胺基可為無取代、單取代、或雙取代，而 雙取代之兩個取代基為各自獨立，或結合成為含碳的五 員環到六員環，環上或包括1到2個選自氧，氮，或硫 的雜原子；但附帶以下的條件：⑴當R1為甲氧基時，R6 不為氳或低烷基；（ii)當R2為羥基，低烷氧基，硫基， 硝基，胺基，烷胺基，醢胺基，或鹵素時，R6不為氫或 低烷基；(iii)當R5為低烷基，低芳烷基，CH2OH，COOH， COOMe，或CH2〇R”其中R”代表低烷基或醯基時，R6不 為氫或低烷基；（iv)當R1為甲氧基，R2為羥基，低烷氧 基，硫烷基，硝基，胺基，烷胺基，醯胺基，或_素時， R5為低烷基，低芳烷基，CH2OH，COOH，COOMe，或 CH2OR”其中R”代表低烷基或醢基時，R6不為氫或低烷 基；（V)當R1到R5為氫時，R6不為氫或低烷基。此方法 包括： ⑴將化合物2，其中R1至R5之定義悉如前述，在 酸與鐵鹽的存在下與結構為R6-OH的化合物反應， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 —— ____B7 五、發明説明（l4)

以得到化合物12與化合物13，其中R6代表低烷基，低 稀烴基’ Cs-C7之環燒基，鹵烧基，或窥燒基，

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) :裝· 訂 其中R1至R5之定義悉如前述； (ii) 分離步驟⑴中所製備的化合物12與化合物13 ; __ (iii) 將化合物12水解以得到額外量的化合物13 ; (iv) 將化合物13,在酸的存在下與結構式為 的化合物反應，以得到化合物1， 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（15) 其中R1到R6之定義悉如前述。 根據本發明之另一特徵，本發明提供另一個製備已 知的C-5取代化合物1的方法，

其中R6代表氫或低烷基，R1代表氫或甲氧基，R2代表 氫，羥基，低烷氧基，醯氧基，SH，硫烷基，硫醯基， 硝基，胺基，烷胺基，醢胺基，或鹵素；R3與R4為氫， 以及R5代表氫，低烷基，低芳烷基，CH2OH，COOH， COOMe，CH2OR/其中R/代表低烷基或醯基，為方法包 括： ⑴將化合物2，其中R1至R5之定義悉如前述，在 酸與氧化劑，例如鐵鹽，的存在下與結構為R6-〇H的化 合物

經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 反應，其中R6代表低烷基，以得到化合物12與化合物 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7

五、發明説明（l6)

其中R1至R5的定義悉如前述； (ii)分離步驟⑴中所製備的化合物12與化合物13 ; (Hi)將化合物12水解以得到額外量的化合物13 ; (iv)將化合物13,在酸的存在下與結構式為R6-OH 的化合物反應，以得到化合物1， (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其中R6代表氫或低烷基，R1代表氫或甲氧基，R2代表 氫，經基，低烧氧基，醯氧基，SH，硫烧基，硫醯基， 補基，胺基，烧胺基，醢胺基，或_素；R3與R4為氫， 以及R5代表氫，低烷基，低芳烷基，CH2OH，COOH， COOMe，CH2OR，其中R，代表低烷基或醯基。 本發明所發展出的方法，可在化合物2的C-5位置 產生一個新的不對稱中心，而不會破壞20(S)-ot-羥基E 環内酯的完整性。此外，本發明的製備方法為一新穎的、 便利的、且多用途的半合成法，其以化合物2為起始物， 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 Α7 Β7 五、發明説明（17) 可製備出已知的、以及新穎的化合物1。使用本發明之 方法所合成的化合物1含有新的C-5不對稱中心，而以 20(S)，5(R)與20(S)，5(S)非鏡像立體異構物的混合物存 在，但使用傳統的分析技術即可將兩個非鏡像立體異構 物分離而得到單一光學活性的異構物。 一般而言，所有通式1所代表的化合物都可以從通 式2的化合物合成，在後文中將會舉出實施例加以說明。 在步驟⑴中，由化合物2反應成化合物12(其中Rl至R6 之定義悉如前述）的步驟，在合成上是一個新的轉化方 法，其可在C-5位置導入各式各樣的官能基。 本發明所使用的起始物，A環或A/B環取代的2〇(S)-喜樹鹼2，為一習知的化合物，係以文獻所記載之方法 製備而得。根據下列文獻所述之方法[T.R· Govindachari , 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) et al., Ind. J. Chem. Ιϋ(Β), 453 (1972); S. Sawada et al., Chem. Pharm. Bull, 39(10) 2574 (1991), ibid., 39(12), 3183 (1991); US Patent No. 4,604,463; and US 4,545,880; Jaffery L. Wood et al., J. Org. Chem., 5739 (1995)] » 製備出7_乙基喜樹鹼，10_羥基喜樹鹼，9-硝基喜樹鹼， 12-瑣基喜樹驗，10-經基-7-己基喜樹驗（SN-38) ’ 9-胺基 喜樹鹼，9-甲氧基喜樹鹼，9-羥基喜樹鹼，9_甲氧基-7-乙基喜樹鹼，1〇，11-亞甲二氧基喜樹鹼（1〇，11-11^1:11}^116(11〇乂)^狂11^1:〇1:116(^11)’10，11-亞乙二氧基喜樹 鹼，10-羥基-9-(Ν，Ν-二甲胺基甲基）喜樹鹼，以作為本發 明之合成方法的起始物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（21〇χ297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（18) 舉例來說，化合物12(其中R1至R6之定義悉如前 述），可以用前述的步驟⑴合成，係將化合物2在一強酸 與鐵鹽的存在下，與結構為R6-OH的化合物反應以得到 化合物12，其中R6代表氫，低烷基，低烯烴基，C3-C7 之環烷基，鹵烷基，或羥烷基。其中所使用的酸可為， 過氣酸，鹽酸，硝酸，硫酸、以及三氟化硼，氣化鋅， 氣化錫，四氣化鈦等路易士酸。上述反應所使用之鐵鹽 可擇自：硝酸鐵，硫酸鐵銨，氣化鐵。上述之反應通常 是在40_60°C的溫度進行，而以60-120°C較佳。 在本發明方法中的步驟（ii)，是將步驟⑴中所製備 的化合物12與化合物13之混合物分離。可使用再結晶 或是以矽膠管柱層析法將其分離，所使用之溶劑可擇自 下列有機溶劑之組合：氣仿，乙酸乙酯，甲醇，乙醇， 乙醚，丙酮，以及己烧。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 化合物13亦可經由本發明方法中的步驟（iii)得到。 在40-120°C下，將化合物12經過酸與水的處理即可將 之水解。此步驟所使用之酸，可擇自：氫氣酸，氫溴酸， 硫酸，對-甲苯磺酸，醋酸，以及過氣酸；所使用之溶劑 可為：甲醇，乙醇，丁醇，異丙醇，或1，4-二氧陸圜。 在本發明之步驟（iv)中，將化合物13，以20-140QC 之溫度，在酸的存在下與結構式為R6-〇H的化合物反應， 以得到化合物1。此步驟所使用的酸可擇自：硫酸，氫 氣酸，醋酸，對-甲苯磺酸，吡啶-對-甲苯磺酸，樟腦績 酸，甲烷磺酸，或過氣酸，或是四氣化鈦，三氟化硼-乙 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（19) 醚，以及氣化鋅等路易士酸。此步驟所使用的溶劑可擇 自：己烷，苯，甲苯，二甲苯，氣仿，四氣化礙，二氣 乙烷，二氣甲烷，以及1，4-二氧陸圜。 本發明特別重要之處是在發展出一種C-5取代的 20(S)-喜樹鹼類似物，其為一種新類型的C環修飾-喜樹 鹼類似物，具有抗癌性與/或抗病毒性。本發明另一重要 之處，是本發明之方法用途廣泛，且可以大規模的製備 喜樹鹼類似物1。 本發明中所發展的方法可製備出各式各樣含有不同 A，B環取代的20(S)-喜樹鹼類似物，較佳者為，其中R1 為硝基，胺基，胺烧基，經基，或甲氧基；R2為經基， 羰氧基，或鹵素；R2與R2結合為亞甲二氧基 (methylenedioxy)或亞乙二氧基；R4為氳或綃基；R5為 4 乙基，胺甲基，或具取代之胺甲基；R6為-羥乙基， 烷氧乙基，氣乙基，氟乙基，三氟乙基，胺乙基或胺丙 基，其胺基可為二甲胺基，二乙胺基，吼咯啶基，六氫 吼唆基，嗎琳基，六氩吼讲基，四氫咪嗤基。 化合物1代表性的例子有： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1) 5-甲氧基CPT· 2) 5-乙氧基0?丁· 3) 5-丁氧基0卩丁· 4) 5-氣乙氧基0?丁·

5) 9-甲氧基-5-乙氧基CPT 6) 9-羥基-5-乙氧基0?丁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（20 ) 7) 10-羥基-5-乙氧基CPT· 8) 7-乙基-5-乙氧基0?丁· 9) 7-乙基-5-羥基€?丁·

10) 9-硝基-5-乙氧基CPT

11) 9-硝基-5-羥基CPT

12) 7-乙基-5-氣乙氧基CPT 13) 10-羥基-7-乙基-5-乙氧基CPT*

14) 5-(2f-羥基乙氧基）CPT

15) 7-乙基-9-經基-5-乙氧基CPT

16) 10-羥基-5_(2f•羥基乙氧基）CPT

17) 7-乙基-10-羥基-5-(2f-羥基乙氧基）CPT 18) 9-硝基-5_氟乙氧基0?丁

19) 9-硝基-5-三氟乙氧基CPT 20) 10-羥基-5-三氟乙氧基CPT 4

21) 7-乙基-10-羥基-5-三氟乙氧基CPT

22) 7-乙基-5^比咯啶基乙氧基CPT

23) 7-乙基-5-二甲胺基丙氧基CPT

24) 7-乙基-10-羥基-5-氟乙氧基CPT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

25) 5-(2^羥基乙氧基）-7-乙基CPT

26) 5-(2^甲氧基乙氧基）CPT 其中CPT代表20(S)喜樹鹼，而_代表為文獻中已知的化 合物。

這些由本發明之方法所製備的化合物大都具有水溶 性，在37°C下的每毫升溶解度從lmg到10mg。表1A 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（21 ) 顯示實施例11，26，27的化合物在瑞士白化症老鼠（Swiss Albino mice)的投藥量（MTD)、血液中内酯的安定性（三 小時後>、MTD的藥物動力學、以及暴露一小時後的體 外活性。以下將敘述這些實驗進行的方法：

1.瑞士白化症老鼠之MTD 將每隻瑞士白化症老鼠在第1日注射以單一劑量的 受測化合物，所用的劑量為400、200、100、50、25、12.5、 8.3、6.25、3.13毫克/每公斤體重。之後每天觀察動物的 死亡率以及罹病率，並在第5、第10、及第14天記錄存 活動物的體重。最大容許劑量的標準為不產生任何罹病 率且體重減少率與第1曰相比大於30%(如美國NCI所 議訂的方法）。 2·内_在血液中的安定性 將取自健康自願者的2 ml血液置於含有40 μΐ肝制 凝素（heparin; 572 IU)的試管中，避免產生凝結。將藥物 溶在DMSO中，準備4 mM與4 μΐ的工作溶液，將其加 入分量的血液中，分別得到100 μΜ與1 μΜ的最後濃度。 將藥物在37°C下的血液進行培養。在每個時間間隔（〇、 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1、2、3小時），取出20 μΐ樣品放入180 μΐ的冷凍甲醇 中（-30°C)，然後用一微離心機在室溫下，以11000 rpm 的轉速離心三分鐘後，將100 μΐ的表層浮出物依化合物 的信號反應，以水稀釋至300-500 μΐ不等（濃度100 μΐ以 UV ，濃度1 μΜ以螢光）。將200 μΐ的稀釋樣品注射入 以動相平衡過之HPLC管柱，然後測量内酯吸收峰下的 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（22 ) 面積。將時間零的吸收峰訂為100%，並計算不同時間 下吸收峰面積的比例，以決定兩個連續時間下内酯的穩 定性（偷―_，1994; 33: 10325-10336 and 乂/^隱 5W·，1995; 84: 518-519)。 3. MTD的藥物動力學 所有的研究是以35_40克的瑞士白化症老鼠來進 行。所有的動物在施以藥物之前的前一晚禁食，而在投 藥三小時後再加以餵食。這些動物是經由腹膜内，以 DMSO :水（50:50 ; v/v)的溶液下藥。下藥後的i，2 , 4 , 6，與8小時，自動物的眼窩靜脈竇取出血液樣品，放入 含有肝制凝素的試管中’以13000 rpm的轉速離心10分 鐘後’以HPLC分析並分離出血漿樣品。將1〇〇 μ1的冷 束酸化甲醇混入50 μΐ的血漿樣品，以將蛋白質沈澱， 然後再以13000 rpm的轉速離心1〇分鐘。將1〇〇 μ1的 表層浮出物以甲醇：水（50:50 ; ν/ν)加到200 μΐ，然後注 入HPLC。所測得的藥物吸收峰面積係作為定量之用。 並以同樣的方式，對含有已知量藥物的5〇 μΐ空白血漿 進行實驗’以作為校準用（/· iVai/· Cancer/Vwi.，1996; 88: 817-824)。 4. 以HPLC法測溶解度 在室溫下’將過量的化合物浸泡在0.5 ml的醋酸納 緩衝液中（0·1 M; pH 5.0)24小時。將溶液以0.45 μ之PVDF 注射過濾器（Gelman Sciences)過濾後，將不同體積的濾 液（10 & 20 μΐ )注入HPLC，記錄其色層分析譜。回應記 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 502037 A7 _B7 五、發明説明（23 ) 錄係以校訂曲線作外推而得，因此計算出化合物的溶解 度（X Med· 1995; 38: 400) 〇 5. 以一般方式測溶解唐 將化合物懸浮在5 ml的去離子水中，並加熱至37 °Cl〇分鐘。過濾溶液後，將濾液蒸乾，將所得之固體殘 餘物秤重。 6. 暴露一小時後的體外活性 在15 ml的完全培養基中培養細胞（rpmi-1640以10 %的牛科胎兒血清與0.2 %的破酸氫鈉）3-5天，以達到每 燒瓶有1〇6個細胞的數量。將培養基去除，並以磷酸鹽 緩衝鹽水（PBS)清洗附著的細胞。加入1 ml的0·1。/〇胰 酵素-EDTA，並在37°C下培養5分鐘。輕輕拍打燒瓶， 並加入5 ml的完全培養基。去除細胞懸浮液，然後以2〇〇〇 rpm的轉速離心5分鐘，將表層的浮出物棄置，並將藥 丸懸浮在5 ml的完全培養基中。以血球計係算細胞的數 量，將完全培養基中的細胞懸浮液稀釋至每100 μΐ有 10,000個細胞。將100 μΐ的細胞懸浮液加入有96個凹 槽的微量滴定盤，以37°C與5 %二氧化碳的條件下培養 24小時。以25 μΐ的冷三氣醋酸（50 % TCA)終止空白組 的實驗。在4°C下培養1小時後，以去離子水將滴定盤 清洗五次，利用氣體乾燥，並保持在4。(：下以決定T。值。 將受測化合物以完全培養基作適當稀釋，並在每個凹槽 中加入100 μΐ，以將最後濃度維持在1〇·4Μ到10·8Μ之 間❶以37°C與5 %二氧化碳的條件下培養1小時。將微 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 V. 502037 A7 ____ __ B7 ..............._ . …- _ - ——__ ——-........- —....... 五、發明説明（24 ) 量滴定盤以1〇〇〇 rpm的轉速離心5分鐘。去除表面浮出 物，以100 μΐ的PBS將細胞清洗兩次，以去除殘留的受 測化合物。在每個凹槽加入200 μΐ的完全培養基，並以 37C與5 %·—氧化奴的條件下培養4 8小時。加入5 0 μΐ 的冷TCA(50%)終止細胞的成長。將滴定盤在4°C下培養 1小時後，以去離子水清洗五次，並用氣體乾燥。在每 個滴定盤中加入1 〇〇 μΐ的Sulforhodamine B溶液（在1 % 的醋酸中濃度0.4%) ’在室溫下保持15分鐘。以1 %的 醋酸清洗五次’並用氣體乾燥。加入1〇〇 μΐ的1〇 mM Tdzma鹼（Sigma)，以搖盤器將之輕輕搖動15分鐘，並 以光譜光度計讀取波長490 nm下的光學密度（如美國NCI 所議訂的方法）。 I n I I I I I 1— I n n I in 丁 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

表1A ^

瑞士白化症老鼠的MTD 途徑 實施例11 實施例26 實施例27 腹膜内 400 mg 200 mg 400 mg 靜脈内 100 mg 25-50 mg 200 mg 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 内酯在血液中的安定性 濃度 實施例11 實_】26 實施例27 麵賴構 麵㈣物A 麵賴構物B 100 μΜ 3·73±1·50 6.15±2.53 —- 4.58±1.72 11·9±2·91 1 μΜ ___ _一 53 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037

A B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（25 ) 溶解度 方法 實施例11 實施例26 實施例27 HPLC 法 0.17 mg/ml 0.8 mg/ml 0.5 mg/ml 一般方式 <1 mg/ml 6 mg/ml 2-3 mg/ml MTD的藥物動力學 參數 實施例11 實施例26 實施例27 AUC〇. i(Mh) 18·47±2·1 561.69土 41·8 23.1012.7 cmav_) 6.95±1.2 264·15±21·9 7·4±0·8 Tma,(hrs) 1·00±0·0 1·00±0·0 1·33±0·6 Kelim 0·37±0·07 0·38±0·07 0·29±0·02 半生期（hrs) 1·92±0·4 1·84±0·3 0·38±0·2 暴露一小時後的體外活性（GI 50) 細胞系 實施例11 實施例26 實施例27 SF-268 6χ1〇·6Μ >10'4Μ >10·4Μ OVCAR-8 4·5χ10·6Μ >10·4Μ 7·5χ10·5Μ MCF-7/ADR 1·5χ10·6Μ >10·4Μ 6χ10.6Μ DU-145 3·5χ10·6Μ 5χ10·5Μ 3·5χ10·7Μ ACHN 5·5χ10·7Μ >10·4Μ 8χ10*6Μ HOP-62 6χ106Μ >1〇·4Μ 2χ10'6Μ UACC-62 4χ10*5Μ 7·5χ1(Τ8Μ 9χ106Μ 29 一裝- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 峰 502037 A7 B7 五、發明説明（26) 此外，根據本發明之化合物在美國國家癌症研究中 心（National Cancer Institute; NCI)對六十種人類癌細胞系 的測試結果，本發明之化合物對多種人類癌細胞系展現 良好的體外抗癌活性。 表1顯示依據本發明之各種20(S)-喜樹鹼C-環類似 物對細胞系的體外活性測試結果，以1C 50表示〇圖1-3 的資料為根據NCI的平均表，實施例27、28、43對各 種人體癌細胞系的總生長抑制值（total growth inhibition; TGI)。為了作一比較，亦將topotecan的相對資料列入圖 表中。表2與表3的資料顯示，本發明之20(S)-喜樹鹼 C-環類似物對某些細胞系之不同癌細胞組的抗癌活性， 比topotecan更好或相近。表4顯示實施例32對抗AIDS 相關淋巴瘤（AIDS related lymphoma; ARL)細胞系的數 據。所有用來進行NCI體外抗癌篩選的化合物，實質上 均帶有不同比例之20(S)，5(R)與20(S)，5(S)兩個非鏡像立 體異構物。 圖1-3與表1-4的數據是根據以下NCI議訂的方法， 實驗所得的結果： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 每個受測的化合物，是以由8種器官所得之60種 人類細胞系來進行篩選。在一般的程序中，細胞懸浮液 是根據其種類以及所期望的細胞密度（cell density)來稀 釋（根據每種細胞的生長特性，每個凹槽約有5000-40000 個細胞），將細胞懸浮液加入有96個凹槽的微量滴定盤， 在37°C下經過24小時的前培養(preincubation)使其穩定 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 观037 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 A7 —~___E____ 五、發明説明（27) 後進行接種，然後在時間為零時將稀釋液以1〇〇 μ1的可 分量加入微量滴定盤的凹槽中，通常受測化合物以五個 稀釋10倍的稀釋液中測試，測試中所用濃度最高的凹槽 疋104Μ。接著以5%二氧化碳的大氣與濕度1〇〇%的條 件，將細胞在藥劑（亦即受測化合物）的存在下進行48小 時的培養，之後，以三氣醋酸將附著性的細胞固定在滴 定盤上，經過數次的沖洗後，以染料蛋白Sulf〇rh〇damine B將細胞染色。利用自動化的光譜光度計在波長515nm 讀取其光學密度（optical density)，其大小與蛋白質的質 量成正比，而所讀取的資料會傳送到微電腦，並利用一 套特殊發展的軟體作出最後的結果。 本發明中所有這些具有通式1的化合物，包括其藥 學上可接受的鹽類，以及具有這些化合物或其鹽類的組 合物，都可作為有效的抗癌或抗病毒藥劑。這種新穎的 抗癌化合物1或是其組合物，可使用任何適當的投藥形 式來施與，例如：利用口服，經鼻腔，非經腸地或局部 地’以固態，半固態，真空冷凍乾燥（lyophilized)粉末， 或液態的劑型，包括，藥片，栓劑，藥丸，膠囊，藥粉， 藥液，懸浮藥液，乳劑，藥油，藥水，喷霧劑，軟膏， 注射劑等等，較佳者是使用單位劑量的形式，並可經由 簡單的途徑來投與精確的劑量者。其組合物可包括一傳 統的載劑，稀釋劑或賦形劑，以及一活性化合物1，此 外’可更包括其他的有效藥劑，製藥劑，稀釋劑，載劑， 佐藥等等。 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS)八4驗（21Gx297公羡） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) :裝. 訂 d 502037 A7 B7 五、發明説明（28 ) 以下利用實施例就本發明作一詳細說明，但並非用 以限定本發明之範圍。 表1 No· 化各物 IC50(um)a 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17,18.19.20.21.22.23.24.25.26.27.28.29.30. 5-甲氧基喜樹鹼‘ 5-乙氧基喜樹鹼· 5-正-丁氧基喜樹鹼* 5-(2f-羥基乙氧基)喜樹鹼 5-(2〃-氣乙氧基)喜樹鹼 7-乙基-5-乙氧基喜樹鹼· 9-甲氧基-7-乙基-5-乙氧基喜樹鹼 7-乙基-5-氣乙氧基喜樹鹼 7-乙基-5-胺基乙氧基喜樹鹼 7-乙基-5-°比洛咬基乙氧基喜樹驗 7-乙基-5-六氮0比唆基乙氧基喜樹驗 7-乙基-5-N，N-二甲胺基乙氧基喜樹驗 7-乙基-5-N，N-二甲胺基丙氧基喜樹驗 9- 甲氧基-5-乙氧基喜樹驗 5-三氟乙氧基喜樹鹼 5-胺基乙氧基喜樹鹼 7-乙基-5_三氟乙氧基喜樹鹼 7-乙基-5-(2f•羥基乙氧基)喜樹鹼 5-氟乙氧基喜樹鹼 10- 羥基-5_三氟乙氧基喜樹鹼 9- 硝基-5-三氟乙氧基喜樹驗 10- 羥基-5-(2匕羥基乙氧基)喜樹鹼 9-硝基-5-(2f-羥基乙氧基)喜樹鹼 7-乙基-5-氣乙氧基喜樹驗 5-甲氧基乙氧基喜樹鹼 9-石肖基-5-甲氧基乙氧基喜樹驗 12-硝基-5-乙氧基喜樹鹼 9-石肖基-5-經基喜樹驗 9-瑣基_5_甲氧基喜樹驗 9-經基-5-乙氧基喜樹驗 461713566080520,18886246340068 .5.5.1.5.5.4.1.78.8.303.30.4.80..4.7.5.3.41..9.3.2.0^C>3C.7.6 8961412211>1>2137410087422> >66 I!丨丨_0.. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 d a IC50=對NCI 60種人類細胞系產生50%生長抑制（GI50) 的最小濃度（μπι)的平均值。 Μ戈表已知的C-5取代喜樹鹼衍生物。 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（2令 表2 細胞組 白丘病 CNS 乳癌 腸癌 細胞系 MOLT 4 SF 295 U 251 MCF 7 HT 29 TOPTECAN 1.2 2.18 2.81 100 >100 實施例25 3.0 2.15 3.57 9.2 7.90 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表3 細胞組 細胞系 TOPTEC 實施例26 NSLC EKVX 100 63 Η 460 1.2 1.0 Η 332Μ 16.9 31.6 腸癌 HCC 15.8 10.47 ^ HT 29 >100 46 HCT 15 44.6 36.3 卵巢癌 SK OV3 5.12 3.8 OVCAR 18.19 13.4 腎癌 UO 31 2.51 3.89 CNS SF-268 56 30.9 U 251 2.81 7.58 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 33 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 Β7 五、發明説明（30) 此處資料顯示的總生長抑制（TGI*)是以濃度μπι為單位。 NSLC 是指非小細胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer)， 而CNS是指中樞神經系統（Central Nervous System) 〇 *TGI是受測化合物對NCI 60種人類細胞系在體外產生 完全生長抑制的最小濃度。 表4 : 實施例32對抗AIDS相關淋巴瘤（AIDS related lymphoma; ARL)細胞系的體外活性： 細胞名稱 GI 50* TGI" CCRF-CEM 0.318 1.83 RL 0.463 3.94 KD 488 0.246 2.28 AS 283 0.268 0.678 PA 682 0.456 7.23 SU-DHL-7 0.609 3.51 *GI 50是指受測化合物產生50%細胞生長抑制的最小濃 度（μπ〇〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) **TGI是受測化合物產生完全生長抑制的最小濃度 (μπι)。 圖1 :實施例27之體外抗癌活性 (此處所顯示之數據是以濃度μπι表示之總生長抑制值） NSLC ： 本紙張又度適用中國國家榡準（CNS ) Μ規格（210X297公釐） 502037

7 7 A B 五、淼明説明Μ 細胞系 HOP 62 HOP 92 Η 226 Η 23 Η 460 Η 522 實施例27 4.95 4.88 4.75 0.91 5.09 7.66 TOPOTECAN 0.04 7.90 10.96 0.87 1.20 4.16 腸癌： 細胞系 COLO 205 HCC 2998 HCT116 HCT15 HT29 KM 12 實施例27 19.5 7.67 4.06 20.0 2.41 10.6 TOPOTECAN 7.94 15.8 2.51 44.6 100 6.45 乳癌： 細胞系 MCF 7/ADR MDA-MB-435 MDA-N BT 549 T47D 實施例27 1.25 9.62 11.0 11.4 0.81 TOPOTECAN 1.50 2.5 N.D. >100 1.8 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖2 :實施例28之體外抗癌活性 (此處所顯示之數據是以濃度μπι表示之總生長抑，〗值） NSLC ： 細胞系 HOP 92 H226 H23 H322M H460 H522 實施例28 8.44 43 0.76 30.2 1.22 13.0 TOPOTECAN 7.90 10.96 0.87 16.9 1.20 4.16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 腸癌： 細胞系 COLO 205 HCC 2998 HCT 116 HCT 15 HT29 KM 12 實施例28 9.48 7.65 8.01 >30 7.94 27.4 TOPOTECAN 7.94 15.80 2.51 44.6 100 6.45 35 502037 7 Β 五、發明説明&2 ) 乳癌： 細胞系 MCF 7/ADR MDA-MB-435 BT 549 MDA-N T47D 實施例28 1.21 11.4 32 13.4 1.09 TOPOTECAN 1.5 2.5 >100 N.D. 1.8 腎癌： 細胞系 786-0 A 498 ACHN CAKI RXF393 SN12C U0 31 實施例28 0.85 1.76 0.37 0.75 15.9 2.31 1.23 TOPOTECAN 0.12 1.69 0.28 0.51 1.41 1.58 2.51 圖3 :實施例28之體外抗癌活性 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 乳癌： 細胞系 MCF 7/ ADR/ RES MCF 7 實施例43 9.3 17.8 TOPOTECAN 1.5 100 36 (此處所顯示之數據是以濃度μιη表示之總生長抑制值） NSLC ： 細胞系 HOP 62 Η 226 Η 23 Η 460 實施例43 3.92 6.89 2.52 ,14.2 TOPOTECAN 0.04 10.96 0.87 1.20 腸癌： 細胞系 COLO 205 HCC 2998 HCT116 HT29 KM 12 實施例43 37.3 23.2 23.6 18.9 41.9 TOPOTECAN 7.94 15.8 2.51 100 6.45 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 502037 A7 _B7__ 五、發明説明幻） 實施例1 5-甲氫基真榭鹼的製備 步驟1 :將式3之20(S)-喜樹鹼(2g)與氣化鐵（2g)溶在甲 醇中（80ml)，將10ml之硫酸慢慢滴入，然後在70°C下 持續加熱24小時。之後，在真空下將過量的酸與甲醇除 去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用 水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶 劑抽乾後得到1.8g的黃色粉末，其包含5-甲氧基喜樹鹼 與5-羥基喜樹鹼（比例5 : 1)。 步驟2:利用矽膠管柱層析將混合物分離，以甲醇-氣仿 為沖堤劑，得到1.5g的5-曱氧基喜樹鹼與300mg的5-羥基喜樹鹼。5-甲氧基喜樹鹼的分析數據如下：mp: 156 。(：；28°C下[a]D=+41.74 (c 0.103, CHC13); IR: 3426, 1747， 1664, 1616, 1228, 1155, 1046, 762cm·1; eNMRCCDCU， 200MHz): δ 8·42 (s，1Η)，8·26 (d，J=8 Hz，1H)，7·96 (d，J=8 Hz，1H)，7.88 (t，J=6.8 Hz，1H)，7.68 (t，J=6.8 Hz，1H)， 7.58 (s，0·5Η)，5_74 (d，J=16.5 Hz，0·5Η)，5·72 (d，J=16.5 Hz，0.5H)，5.25 (d，J=16.5 Hz，1H)，3.75 (s，1H)，3·70 (s， 1.5H)，3·50 (s，1·5Η)，2.01_1·82 (m，2H)，1·〇6 (t，J=7 Hz， 3H) ; Mass(m/z) : 379 (M+l)，348，319。 實施例2 5-羥基喜樹驗的製備(已知化合物） 步驟1 : 5-甲氩篡喜樹鹼的製備：以實施例1的方法， 從式3之20(S)-喜樹鹼製備式1之5-甲氧基喜樹鹼，其 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 丨—^ ^ 裝 — 訂 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明) 中 1^=112=113=114=115=11，R6，e。 步驟2 :將1.5g式1之5_甲氧基喜樹鹼，（其中 R1=R2=R3=R4=R5=H，R6=Me)溶在 之甲醇，並以 5福 之50%鹽酸處理，所得之溶液加熱迴流3()小時。反應 末期將過量的水與甲醇的共沸物去除，所得的殘餘用乙 酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗，然 後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱層 析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑將其純化後，得到丨.2g 的 5-羥基喜樹鹼。mp·· 220°C ; 26°C 下[a]D=+28.00 (c 0.1， CHC13) ; IR : 3367，1749，1658，159卜 1159，1046 cm-1 ; W NMR (CDCl3+DMSO，d6, 200MHz): δ 8·50 (s，1H)，8.20 (d，J=8 Hz，1H)，7·94 (d，J=8 Hz，1H)，7·85 (s，0·5Η)，7·56 (s，0·5Η)，7·06 (s，0·5Η)，7·01 (s，〇·5Η)，6.95 (br d，1H，可 與 D20 置換），5·67 (d，J=16.5 Hz，1H)，5·25 (d，J=16.5 Hz， 1H)，5.05 (brd，1H，可與 D20 置換），2·05-1·86(ιη，2Η)， 1·06 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 364 (M+l)，348，320， 277，236，9卜 57 〇 實施例3 5 -乙氧基乙基喜樹驗的製備(已知化合物） 步驟1 :將1.5g式2之7-乙基喜樹鹼（其中 Κ>Ι12=ί13=Ι14=Η，R5=Et)與氣化鐵（1.35g)溶在乙醇中 (150ml)，將9ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持績 加熱30小時。之後，在真空下將過量的酸與甲醇除去， 所得的殘餘用乙酸乙醋萃取’萃取所得的有機層用水以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公瘦） ---Ί — ^----^裝------訂------0. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明@5 ) 及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽 •乾後得到1.6g的棕色粉末，其包含％乙氧基乙基喜 樹鹼與5-羥基-7-乙基喜樹鹼（比例10 : i)。 步驟2 :利用矽膠管柱層析將混合物分離，得到ig的5_ 乙氧基-7-乙基喜樹驗與1〇〇11^的5-經基-7-乙基喜樹驗。 mp: 150°C ; 27°C 下[a]D=+l〇.526 (c 0·085, CHC13) ; IR : 3419，175卜 1662，1613，1157，1075，1050，764cm·1 ; !H NMR (CDC13, 200MHz): δ 8·20 (s，J=8 Hz，1H)，8.15 (d， J=8 Hz，1H)，7.81 (t，J=6.8 Hz，1H)，7.66 (t，J=7.3 Hz， 1H)，7.54 (s，0·5Η)，7·01 (s，0.5H)，6.89 (s，0.5H)，5.72 (d，J=16.5 Hz，0·5Η)，5·71 (d，J=16.5 Hz，0.5H)，5·28 (d， J=16.5 Hz，0·5Η)，5.26 (d，J=16.5 Hz，0·5Η)，4·3-3·6 (m， 3H)，3.5-3.1 (m，2H)，2·05-1·71 (m，2H)，1·45 (t，J=7.5 Hz， 3H)，1.06 (t，J=7 Hz，3H)。 實施例4 經基乙基喜樹驗的掣借i已知化合物） 步驟1 : ^曱氧基-7-乙基真榭鹼的盤備：以實施例3的 方法，從式2之20(S)-喜樹鹼製備式1之5-甲氧基-7-乙 基喜樹鹼，其中 RkRLRLRLH，R5=R6=Et。 步驟2 :將l.〇g式1之5_甲氧基-7-乙基喜樹鹼，（其中 R1=R2=R3=R4=H，R5=R6=Et)溶在 50ml 之乙醇，加入 50ml 之25%硫酸，所得之溶液加熱迴流30小時。反應末期 將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘用乙酸乙 酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水请洗，然後以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） —^Ί---裝------訂------0, (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明Θ6 ) 無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱層析純 化，得到700mg的5-羥基-7-乙基喜樹鹼。mp: 252°C;IR : 3349，1752，1656，1605，1159，1054 , 766 cm·1 ;部 份1HNMR 數據（CDCl3+DMSO_d6):S7.19(brs，lH，可 與 D20 置換），8·20 (d，J=8 Hz，1H)，7.94 (d，J=8 Hz，1H)， 7.85 (s，0·5Η)，7·15 (s，0·5Η)，7.05 (s，0.5H)，5.75 (br s， 1H，可與 D20 置換），5·65 (d, J=16.5 Hz，1H)，5.25 (d， J=16.5 Hz，1H)，3.52麵3.19 (m，2H)，1·45 (t，J=7.5 Hz， 3H)，1·02 (m，3H)。 實施例5 5-乙氧基-9·曱氧基喜榭鹼的製備（式1，其中R^OMe， R2=R3=R4=R5=H，R6=Et) 步驟1 :將lg式2之9-甲氧基喜樹鹼（其中RkOMe， R2=R3=R4=R5=H)與氣化鐵（500mg)溶在50ml的乙醇中， 將10ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持續加熱20 小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去，所得的 殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以及飽和 食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後得 到1.6g的深棕色粉末。 步驟2 :利用矽膠管柱層析將混合物分離，得到500mg 的5_乙氧基-9-甲氧基喜樹鹼（式1)與300mg的5-羥基-9-甲氧基喜樹鹼。mp: 235°C ; 30°C下[a]D=+34.18 (c 0.093, MeOH) ; IR : 3436，1748，1665，1619，1461，1366， 1093，814cm·1;NMR (CDC13, 200MHz): δ 8·81 (s，1H)， (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明$7 ) 7.78 (m，2H)，7·53 (d，J=5.5 Hz，1H)，6·96 (d，J=7 Hz， 1H)，6.68 (s，1H)，6·77 (s，1H)，5·72 (d，J=16 Hz，0.5H)， 5.75 (d，J=16 Hz，0.5H)，5.27 (d, J=16 Hz，1H)，4.24-3.90 (m，2H)，4.06 (s，3H)，3.80 (s，1H，可與 D20 置換），1·90 (m，2H)，1·31 (m，3H)，1·01 (m，3H) ; Mass(m/z) ·· 422(M+1” 394，378，350，305，98，57 o 實施例6 篡_9_甲氣基喜榭鹼的製備（已知化合物） 步驟1 : 5-乙氣基-9-甲氣基喜樹鹼的製備：以實施例5 的方法’製備式1之5-乙氧基-9-甲氧基喜樹驗’其中 R1==OMe ? R2=R3=R4=R5=H j R6=Et ° 步驟2 :將560mg式1之5-乙氧基-9·甲氧基喜樹鹼，（其 中 ，R5=R6=Et)溶在 25ml 之乙醇，加入 50ml之80%鹽酸，所得之溶液加熱迴流16小時。反應 末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘用乙 酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗，然 後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱層 析純化，得到520mg的5-經基-9-甲氧基喜樹驗。mp: 162 °C ; 30°C 下[〇t]D=+39.68 (c 0.012, MeOH); IR: 3398，1749， 1656，1616，1577，1465，1383，1154 cm1 ; β NMR (CDCl3+DMSO-d6): δ 8.81(s，1H)，7·81.7·61 (m，2H)，7·50 (d，J=5.5 Hz，1H)，7·12-6·71 (m，2H)，5·70 (d，J=16 Hz， 1H)，4.60 (s，3H)，1·98“·75 (m，2H)，1·10-0·98 (m，3H); Mass(m/z) : 394(M+1)，377，348，266，149，88，57。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I ^ Ί— 裝 —II 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 502037 A7 ___ B7 五、發明説明P8 ) 實施例7 5-乙氧棊ig:_.甲氧基^_基i樹驗的製備（疲1 ,其中 R1=OMe, R2=R3=R4=H ? R5=R6=Et) 步驟1 :將100mg式2之9-甲氧基-7-乙基喜樹鹼（其中 R^OMe，R2=R3=R4=H，R5=Et)與氯化鐵（l〇〇mg)溶在 32ml 的乙醇中，將2ml之硫酸慢慢滴入，然後在85t下持 續加熱4小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去， 所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以 及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽 乾後得到120mg的殘餘，其包含5-乙氧基-9-甲氧基-7-乙基喜樹驗與5-經基-9-甲氧基-7-乙基喜樹驗（比例1 : 4) 〇 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑 將將混合物分離，得到15mg的5-乙氧基-9-甲 <基-7-乙 基吾樹驗（式1)與55mg的5-經基-9-甲氧基-7-乙基喜樹 鹼。mp: 240°C ; IR : 3443，1747，1663，1609，1458， 1254，1160，1074 cm·1 ; W NMR (CDC13，200MHz): δ 7·80_7·68 (m，2H)，7·50 (s，0·5Η)，7·47 (s，0·5Η)，7.01(s， 0·5Η)，6·98 (d，J=8 Ηζ，1Η)，6.89 (s，0·5Η)，5·76 (d，J=16 Hz，1H)，5·28 (d，J=16 Hz，0.5H)，5·26 (d，J=16 Hz，1H)， 4·25麵3.81 (m，2H)，4.02 (s，3H)，3·72画3.28 (m，2H)，3·15 (brs，1H，可與 D20 置換），2·02-1·82(ιη，2H)，1.374.33 (m， 3H)，1·05-0·95 (m，3H); Mass(m/z): 451(M+1)，406,377， 362，347，331，261，181，149，97 ❶ 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^---^----I------IT------JAW (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 ----—-------五、發明説明P9 ) 實施例8 5-羥墓-9-甲氣基-7-乙基喜擻的^ 13，其中 RkOMe，R2=R3=R4=H，R5=R6=Et) 、 步驟1 : 5-乙氧基-9_·以實施例7 的方法’製備式i之5-乙氧基冬甲氧基^乙基喜樹:， 其中 R1=OMe，R2=R3=R4=H ’ R5=R6=：Et。 步驟2:將100mg式1之5-乙氧基甲氣基_7乙美直 樹鹼（其中 R^OMe，R2=R3=R4=H，,溶在^二 之乙醇，加入5ml之50%鹽酸’所得之溶液加熱迴流％ 小時。反應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得 的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽 水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用 矽膠管柱層析純化，得到80mg的5-羥基-9-甲氧基-7-乙 基喜樹鹼。mp: 242°C ; IR : 3440，1742，1660，' 1610， 1456，1250，1160 cm·1 〇 實施例9 5-乙氣基真嶎鹼的備（已知化合物） 步驟1:將lg式3之20(S)-喜樹鹼與lg的氣化鐵溶在50ml 的乙醇中，將12ml之三氟化硼-乙醚慢慢滴入，然後在 85°C下持續加熱40小時。之後，在真空下將過量的酸與 乙醇除去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有 機層用水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾 燥。將溶劑抽乾後得到lg的黃色粉末，其包含17-乙氧 基喜樹鹼與5·羥基喜樹鹼（比例6 : 1)。 43 本紙適用中ϋ國家標準（cns ) Α4· ( 2獻297公瘦） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 「裝· 訂- J· 502037 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明r〇 ) 步驟2:利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-己烷為沖堤劑 將將混合物分離，得到700mg的5-乙氧基喜樹鹼與120mg 的 5-羥基喜樹鹼。mp: 140°C;28°C 下[〇c]D=+29.703 (c 0·101， CHC13) ; IR: 3423，1746，1663，1616，1155，1070，1040 cm1 ;部份1H NMR 數據（CDC13，200MHz): δ 6·9 (s， 0·5Η)，6.78 (s，0.5H)，4·25-3·85 (m，2H)，3.70 (s，1H)， 2.00-1.80 (m，2H)，1·40-1·22 (m，3H)，1.22-0.98 (m，3H); Mass(m/z) : 393(M+1)，378，362，348，319，247，219， 57 〇 實施例10 5-丁氣基喜樹鹼的製備（已知化合物) 步驟1 :將500mg式3之20(S)-喜樹鹼與500mg的氣化 鐵溶在15ml的正丁醇中，將硫酸慢慢滴入，然後在100 °C下持續加熱20小時。之後，在真空下將過量的酸與正 丁醇除去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有 機層用水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾 燥。將溶劑抽乾後得到粉狀物。 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-己烷為沖堤劑 將將混合物分離，得到300mg的5-丁氧基喜樹鹼與50mg 的 5_羥基喜樹鹼。mp: 82°C ; 28°C下[a]D=+28.00 (c 0.1， CHC13);部份1H NMR 數據（CDC13, 200MHz): δ 6·92 (s， 0·5Η)，6·79 (s，0·5Η)，4·12-3·75 (m，2Η)，3·80 (br s，1Η， 可與 D20 置換），2·00-1·82 (m，2Η)，1·75_1·52 (m，2Η)， 1·50-1·29 (m，2H)，1.15-0.82 (m, 6H) ； Mass(m/z)： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---^---；----^ 裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) tr 502037 Α7 Β7 經濟部中央揉準局員工消費合作社印装 五、發明説明)422(M+1)，363，348，319，84，51。 實施例11 乙氧基經基喜樹驗的掣備f式1，其中ri=〇h， R2=R3=R4=R5=H，R6=Et) 步驟1 :將2〇Omg式2之9_羥基喜樹鹼（其中Ri=〇H， R2=R3=R4=R5=H)與氣化鐵（250mg)溶在40ml的乙醇中， 將1.5ml之硫酸慢慢滴入，然後在85〇c下持續加熱26 小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去，所得的 殘餘用5%的曱醇-氣仿萃取，萃取所得的有機層用水以 及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽 乾後得到170mg的殘餘，其包含5-乙氧基-9-羥基喜樹 鹼與5,9-二羥基喜樹鹼（比例3 : 1)。 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑 嘹 將將混合物分離，得到75mg的5-乙氧基-9-羥基喜樹鹼 (式 1)與 25mg 的 9,5-二羥基喜樹鹼。mp: 230°C;IR:3400， 2920, 1745, 1663, 1597, 1360, 1280, 1228, 1157, 1083 ， 902,816 cm·1; ^NMR^CDCl，200MHz): δ 8·83 (s，1H)， 7·78 (d，J=6.8 Hz，1H)，7·67禱7·56 (m，2H)，7·01 (s，0·5Η)， 6·98 (s，0·5Η)，6·91 (s，0·5Η)，6·81 (s，0·5Η)，5·70 (d，J=16 Ηζ，1Η)，5·33 (d，J=16 Ηζ，1Η)，4·15_3·91 (m，2Η)，1·90 (m，2Η)，1·05 (t，J=7 Ηζ，3H); Mass(m/z): 409(Μ+1)，364， 335，320，291，267，263，221，206，171，159，129， 111 ， 98 ， 85 〇 實施例12 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝- 訂 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7_ 五、發明説明P ) 9,5-二羥基喜榭鹼的製備（式 13 ,其中 Ρ>ΟΗ， R2=R3=R4=R5=H) 步驟1 :以實施例11的方法，製備式1之5-乙氧基-9-羥基喜樹鹼，其中 RLOH，R2=R3=R4=R5=H，R6=Et。 步驟2 :將560mg式1之5-乙氧基冬羥基喜樹鹼（其中 R1==OH，R2=R3=R4=R5=H，R6=Et )，溶在 25ml 之乙醇， 加入25ml之80%鹽酸，所得之溶液加熱迴流16小時。 反應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘 用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗， 然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱 層析純化，得到320mg的9,5-二羥基喜樹鹼。mp: 102。(：； IR : 3440，1744，1659，1594，1462，136卜 1280，1229， 1049，820 cm·1 ; W NMR (DMSO-d6): δ 10.82 (s，1H，可 與 D20 置換），7.63-7.69 (m，2Η)，7·22 (s，0·5Η)，’7·19 (s， 0·5Η)，7.11(d，J=7 Ηζ，1Η)，6·98 (s，0.5Η)，6·95 (s，0·5Η)， 6.50(s，1Η，可與 D20 置換），5.42(s，2H)，1.89(m，2H)， 0·90 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 380(M+1)，320，305， 293 ， 264 ， 235 ， 206 ， 191 ， 160 ， 128 ， 96 ， 85 ° 實施例13 5-乙氣基-9-羥基-7-乙某真榭鹼的製備（式1，其中 Rl=OH，R2=R3=R4=H，R5=R6=Et) 步驟1 :將150mg式2之9-羥基-7-乙基喜樹鹼（其中 RXDH，R2=R3=R4=H，R5=Et)與氣化鐵（150mg)溶在 30ml 的乙醇中，將2ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝· 訂 1· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 五、發明説明幻） 續加熱40小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去， 所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以 及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽 乾後得到120mg的殘餘，其包含5-乙氧基-9-羥基-7-乙 基喜樹鹼與9,5-二羥基-7-乙基喜樹鹼（比例5 : 1)。 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑 將將混合物分離，得到85mg的5-乙氧基-9-羥基-7_乙基 喜樹鹼（式1)與15mg的9,5-二羥基-7-乙基喜樹鹼。mp: 240°C ; IR: 3500，2976，1749，1662，1588，1555，1461， 1390, 1147, 1079,921 cm·1 ; WNMRpMSO-c^): δ 10.77 (s，1H,可與 D20 置換），7.62-7.67 (m，2H)，7.57 (d，J=8 Hz， 1H)，7·08-7·18 (m，2H)，6·50 (s，1H，可與 D20 置換）， 5.39 (s，2H)，4·08 (m，2H)，3·42 (m，2H)，1·87 (m，2H)， 秦 1.35 (t, J=7 Hz, 3H) ，0·87 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z): 437(M+1)，392，363，348，333，29卜 26卜 246，219， 191 ， 149 ， 119 ， 89 〇 實施例14 9,5-二羥基-7-乙篡真榭鹼的製備（式Π，其中, R2=R3==R4==H，R5=Et) 步驟1 :以實施例13的方法，製備式1之5-乙氧基-9· 羥基-7·乙基喜樹鹼，其中R1=OH， R2=R3=R4=H， R5=R6=Et。 步驟2:將560mg式1之5-乙氧基-9-幾基-7-6基喜樹 驗（其中 RkOH，R2=R3=R4=H，R5=R6=Et)，溶在 25ml (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 4 本紙張又度適用中國國家標準（CNS )八4規格（21〇X297公釐） 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製 502037 A7 __B7_____ 五、發明説明㉘4 ) 之乙醇，加入35ml之80%鹽酸，所得之溶液加熱迴流 16小時。反應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所 得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食 鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利 用矽膠管柱層析純化，得到380mg的5,9-二羥基-7-乙基 喜樹鹼。mp: 165。(： ； IR: 335卜 2929，1744，1657，1606， 1460, 1218, 1162, 1035, 872 cm·1; WNMRPMSO-c^): δ 10.62 (s，1H，可與 D20 置換），7·60-7·57 (m，2H)， 7.16-7.00 (m，3H)，5·40 (s，2H)，3·42 (q，J=7.6 Hz，2H)， 2.08 (m，2H)，1.33 (t，J=7 Hz，3H)，0·89 (t，J=7 Hz，3H); Mass(m/z) : 408(M+1)，380，336，319，29卜 267，235， 219 ， 185 ， 127 ， 99 ， 83 。 實施例15 9-硝基-5-乙氣基喜榭鹼的製備（式1 ,其中ί^=Ν02， R2=R3=R4=R5=H，R6=Et) 步驟1 :將lg式2之9_硝基喜樹鹼（其中Ι^=Ν02， R2=R3=R4=R5=H)與氣化鐵（lg)溶在100ml的乙醇中，將 10ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持續加熱24小時。 之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去，所得的殘餘用 乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以及飽和食鹽水 清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後得到9〇〇mg 的黃色粉末。 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述混合物分離，得到700mg的9-硝基_5_乙氧基喜樹鹼（式 本紙張又度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐〉 ---^--J------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 502037 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明&5 ) 1)與80mg的9-硝基-5-羥基喜樹鹼（式13)。mp: 202。(：； IR(KBr) : 3474，1743，1668，1622，1526，1344 , 1154， 1073，831 cm·1 ; 4 NMR (CDC13, 200MHz) : δ 9.23 (s， 1Η)，8·52 (d，J=9 Ηζ，1Η)，8·47 (d，J=9 Ηζ，1Η)，7·92 (t， J=8.2 Hz，1H)，7·55 (s，1H)，6·91 (s，1H)，5·71 (d，J=16 Hz， 1H)，5·28 (d，J=16 Hz，1H)，4·39-3·98 (m，2H)，3·75 (br s， 1H，可與 D20 置換），1·99_1·79 (m，2H)，1.32 (t，J=7 Hz， 3H)，1·04 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 438(M+1)，407， 393 ， 364 ， 349 ， 319 ， 262 ， 118 ° 實施例16 12-硝基-5-乙氣基喜榭鹼的製備（式1，其中R4=N02 , R^R^R^R^H » R6=Et) 步驟1 :將2g式2之12-硝基喜樹鹼（其中R4=N02， R1=R2=R3=R5=H)與氣化鐵(2g)溶在150ml的乙醇中，將 15ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持續加熱24小時。 之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去，所得的殘餘用 乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以及飽和食鹽水 清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後得到一黏 性固體。 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述殘餘分離，得到的淡黃色粉末，包含12-硝基-5-乙氧基喜樹鹼（式1)與l〇〇mg的12·硝基-5-羥基喜樹鹼（式 13)。mp: 250°C ; IR (KBr) : 3450，1750，1666，1618， 1525，1357，1154，1042，766 cm1 ;屮 NMR (CDC13, (請先閲讀背面之注意事項存填寫本覓) :装· 訂 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印裝 502037 A7 ____B7__ 五、發明説明（46) 200MHz): S9.8(brs，1H，可與 D20 置換），8.25(s，1H)， 8·05 (d，J=6 Hz，1H)，7·56-7·39 (m，2H)，7·25 (s，1H)，6·85 (s，0·5Η)，6·70 (s，0·5Η)，5·58 (d，J=16 Hz，1H)，5.35 (d， J=16 Hz，0·5Η)，5·21 (d，J=16 Hz，0.5H)，4.35-3.75 (m， 4H)，3·50 (br s，1H，可與 D20 置換），2.10-3.78 (m，2H)， 1.22 (t，J=7 Hz，3H)，1·〇5 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z): 409(M+1)，392，364，349，335，320，291，235，117， 84 〇 實施例17 10-羥基氧基喜榭鹼的製備（已知化合物） 步驟1 :將200mg式2之10-羥基喜樹鹼（其中R2=〇H， R1=R3=R4=R5=H)與氣化鐵(200mg)溶在10ml的乙醇中’ 將1.5ml之硫酸慢慢滴入，然後在85°C下持續加熱24 小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去，所得的 殘餘用5%的甲醇-乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用 水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶 劑抽乾後得到一黃色固體。 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮_氣仿為沖堤劑將上 述固體純化，得到100mg的10-羥基-5-乙氧基喜樹鹼（式 1)與 20mg 的 10,5_二羥基喜樹鹼（式 13)。mp: 165°C ; IR (KBr) : 3384，1747，1662，1608，1229，1044，831 crrT1 ; 1HNMR(CDC13+DMS0, 200MHz) ： δ 9.8 (s, 1H) ^ 8.17 (d, J=9 Hz，1H)，8·14 (d，J=9 Hz，1H)，7.75 (t，J=8.2 Hz，1H)， 7.54 (s，1H)，6.95 (s，0·5Η)，6·82 (s，0·5Η)，5·71 (d，J=16 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） — I:——一----0^------1T-----JAW (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 A7 B7 五、發明説明“7 )

Hz，1H)，5.26 (d，J=16 Hz，1H)，4.31-3.91 (m，2H)，3.75 (br s，1H，可與 D20 置換），2·05-1·81 (m，2H)，1.35 (t，J=7 Hz，3H)，1.05 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 438(M+1)， 420，393，376，364，349，319 , 84 ° 實施例18 LQ-羥基-7-乙基-5-乙氧基喜樹驗的製備(已知化合物） 步驟1 :將200mg式2之10-羥基-7-乙基喜樹鹼（其中 1^=01^1^=113=114=11，R5=Et)與氣化鐵(200mg)溶在 10ml 的乙醇中，將1.7ml之疏酸慢慢滴入，然後在80°C下持 續加熱20小時。之後，在真空下將過量的酸與乙醇除去， 所得的殘餘用5%的甲醇·乙酸乙酯萃取，萃取所得的有 機層用水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾 燥。將溶劑抽乾後得到一固體。 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述固體純化，得到85mg 10-羥基-7-乙基-5-乙氧基喜樹 鹼的黃色粉末與20mg的10,5-二羥基-7-乙基喜樹鹼（式 13)。mp: 190°C ; IR (KB〇 : 3277，1746，1660，1599， 1231，1078，800 cm·1;屮 NMR (CDC13+DMS0, 200MHz): δ 9·6 (br s，1H，可與 D20 置換），8·01 (d，J=8.7 Hz，1H)， 7·51·7·35 (m，3H)，6·92 (s，0·5Η)，6·80 (s，0·5Η)，5.66 (d， J=16 Hz，1H)，5·22 (d，J=16 Hz，1H)，3·85-3·65 (m，2H)， 3·35-2·95 (m，2H)，1·95-1·75 (m，2H)，1·37 (t，J=7.4 Hz， 3H)，1·17 (t，J=7.2 Hz，3H) ，0.99 (t，J=7.2 Hz，3H);

Mass(m/z) : 437(M+1)，392，363，348，333，29卜 147， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明h ) 84 〇 f施例19 9·胺基^_氣基喜樹驗的掣備η 1 ,其中r1=nh2， R2=R3=R4=R5=H，R6=Et) 步驟1 :將120mg式2之9-胺基喜樹驗（其中ri=Nh2， R2=R3=R4=R=H)與氣化鐵（Ii2mg)溶在l〇mi的乙醇中， 將1.5ml的BF3-El：2〇慢慢滴入，然後在下持續加 熱16小時。之後，在真空下將過量的乙醇除去，所得的 殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以及飽和 食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後得 到一黏性固體。 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述殘餘分離，得到65mg的9-胺基-5-乙氧基喜樹鹼（式 1)。mp: 170°C ; IR : 322卜 1744，1661，1231 , 1157 , 1074，815 cm·1 ;屮 NMR (CDCl3+DMSO-d6) : δ 8·69 (s， 1Η)，7·64 (s，1Η)，7·63_7·51 (m，2Η)，7.06 (d，J=5.41 Ηζ， 1H)，6·90 (s，0·5Η)，6·80 (s，0·5Η)，5.65 (d，J=16 Hz，1H)， 5.26 (d，J=16 Hz，1H)，4.19-3.98 (m，1H)，3.97-3.78 (m， 1H)，2.98(brs，3H，可與 D20 置換），1.95_1.80(m，2H)， 1.39-1.19 (m, 3H) » 1.11-0.95 (m, 3H) ； Mass(m/z)： 407(M+2)，389，363，334，319，290，262，233，101 ° 實施例20 9_一胺基甲氣篡辜嶎鹼的製備（式1，其中Ι^=ΝΗ2 , R2=R3=R4==R5=H，R6=Me) 52 本紙張尺度A用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐Ί —；—^----^ 裝—-----訂------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 502037 A7 B7 經濟部中央樣準局員工消費合作社印裝 五、發明説明β ) 步驟1 :將180mg式2之9-胺基喜樹驗（其中Ri=NH2， R2=R3=R4=R5=H)與氣化鐵（162mg)溶在bml的乙醇中， 將2ml的BF3_Et2〇慢慢滴入，然後在80°C下持續加熱 16小時。之後，在真空下將過量的乙醇除去，所得的殘 餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用水以及飽和食 鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後得到 一黏性固體。 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述殘餘分離，得到125mg的9-胺基-5_甲氧基喜樹鹼（式 1)。mp: 200〇C ; IR : 3364，2925，1744，1660，1610， 1156^ 1081 ^ 811 cm1； lHNMR (CDCl3+DMSO-d6) ： δ 8.82 (s，1Η)，7.60 (s，1Η)，7·63_7·46 (m，2Η)，6·97 (d，J=7 Ηζ， 1H)，6·89 (s，0.5H)，6·80 (s，0·5Η)，5.6 (d，J=16 Hz，1H)， 5.25 (d，J=16 Hz，1H)，3·57 (s，1·5Η)，3·46 (s，1·5Η)，3·41 (br s，1H，可與 D20 置換），3· 15 (br s，2H，可與 D20 置 換），2.05-1.89 (m，2H)，1·01 (t，J=7 Hz，3H); Mass(m/z): 393(M+1)，376，363，349，334，319，290，262，233， 205，116。 實施例21 9-硝基-5-羥某真榭鹼的製備（式Π ,其中Ρ»ί02 , R2=R3=R4=R5=H) 步驟1 ··以實施例13的方法’製備式1之9-*肖基-5-已 氧基喜樹鹼，其中 R1=N02 , R2=R3=R4=R5=H , R6=Et。 步驟2 :將l.Og式1之9-硝基-5-乙氧基喜樹鹼（其中 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) :裝.

、tT J· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 502037 A7 __B7 五、發明説明（50 ) R1==N02，R2=R3=R4=R5=H，R6=Et)溶在 20ml 之 6 醇，加 入80ml之50%鹽酸，所得之溶液加熱迴流3〇小時。反 應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘用 乙酸乙S旨卒取’卒取所得的有機層以飽和食鹽水清洗， 然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱 層析純化，得到700mg的9-硝基-5-羥基喜樹鹼。mp: 278 °C ; IR(KB〇 : 3402，1744，1657，1602，1533，1155， 1051 ^ 833 cm'1 ； !H NMR (CDCl3+DMSO-d6) ： δ 9.28 (s, 1H)，8·50 (d，J=8.6 Hz，1H)，8·45 (d，J=8.6 Hz，1H)，7·96 (t，J=8.2 Hz，1H)，7·59 (s，0·5Η)，7·58 (s，0·5Η)，7·12 (s， 0·5Η)，7·08 (s，0·5Η)，5.67 (d，J=16 Hz，1H)，5.27 (d，J=16 Hz，1H)，1.92 (q，J=7.2 Hz，2H)，1.07 (t，J=7 Hz，3H)。 實施例22 10,5-二羥墓真榭鹼的製備（已知化合物、 經濟部中央樣準局員工消费合作社印製 步驟1 :以實施例17的方法，製備式1之10·羥基-5-乙 氧基喜樹鹼，其中 R2=〇H，Κ>Ι13=ί14=Ι15=Η，R6=Et。 步驟2 :將250mg式1之10-羥基-5-乙氧基喜樹鹼（其中 R2=OH，RkRLRLRLH，R6=Et )溶在 10ml 之乙醇，加 入10ml之50%鹽酸，所得之溶液加熱迴流20小時。反 應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘用 乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗， 然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱 層析純化，得到210mg的10,5-二羥基喜樹鹼。mp: 240 °C ; IR(KBr) : 3326，1743，1659，1596，1382，1231， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（51) 1048，832 cm1 ; W NMR (CDCl3+DMSO_d6) : δ 10.0 (br s， 1H，可與 D20 置換），8.31 (s，0·5Η)，8·29 (s，0·5Η)，8·05 (d，J=6 Ηζ，0·5Η)，7·95 (d，J=6 Ηζ，0.5Η)，7.50睡7·31 (m， 2Η)，7·21 (s，1Η)，6·95 (s，0·5Η)，6·85 (s，0·5Η)，5·55 (d， J=16 Ηζ，1Η)，5·25 (d，J=16 Ηζ，1Η)，3·99 (br s，1Η，可 與 D20 置換），2·05-1·81 (m，2Η)，1·〇 (t，J=7 Ηζ，3Η); Mass(m/z) : 381(M+1)，352，336，320，264，149，83 ο 實施例23 12-硝基-5-羥基真榭鹼的製備（式13，其中R4=N02 , R1=R2=r3=r5=h) 步驟1 :以實施例16的方法，製備式1之12-硝基-5-乙 氧基喜樹鹼，其中 R4=N02，RkRLRLRLH，R6=Et。 步驟2 ··將2g式1之12-硝基-5-乙氧基喜樹鹼（其中 R4=N02，RkRLRLRLH，R6=Et)溶在 30ml 之乙醇，加 入125ml之50%鹽酸，所得之溶液加熱迴流24小時。 反應末期將過量的水與乙醇的共沸物去除，所得的殘餘 用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗， 然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶劑抽乾後，利用矽膠管柱 層析純化，得到1.5g的9-硝基-5-羥基喜樹鹼。mp: 247 °C ; IR(KBr) ·· 3371，1746，1664，1602，1532，1380， 1048，829 cm·1 ; β NMR (CDC13, 200 MHz) : δ 8·58 (s， 1H)，8·17 (d，J=9 Hz，1H)，8·12 (d，J=9 Hz，1H)，7·74 (t， J=8.2 Hz, 1H)，7.58 (s，1H)，7·12 (s，0·5Η) ，7·08 (s， 0·5Η)，5·71 (d，J=16 Hz，1H)，5·26 (d，J=16 Hz，1H)，3·90 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂 d 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 ____B7___ 五、發明説明（52) (brs，1H，可與 D2〇 置換），L99-1.85(m，2H)，l.〇5(t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 409(M+1)，393，380，363，348， 333 ， 318 ， 149 ， 85 〇 實施例24 乏:(Z~氣__里4_基）喜樹驗的製備（式1 ，其中 R^R^R^R^R^H » R6=CH2CH2C1) 步驟1:將lg式3之20(s)-喜樹鹼與lg之氣化鐵溶在25ml 的2-氣乙醇中，將5ml的硫酸慢慢滴入，然後在90°C 下持續加熱24小時。之後，在真空下將過量的2-氣乙 醇除去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機 層用水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。 將溶劑抽乾後得到L2g之棕色固體。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2 :利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述固體純化，得到650mg的5_(2'氣乙氧基）喜樹鹼（式1) 以及 5-羥基喜樹鹼（式 13)。mp: 202。(： ； 28°C 下[a]D=+5.73 (c 0.093, CHC13) ; IR : 3354，1744，1662，1223，1160， 1090, 1044 052 463 0111-1;部份1H NMR 數據（CDC13): δ 6.92 (s, 0.5H)，6.82 (s，0·5Η)，4·51 (t，J=5 Ηζ，1·5Η)， 4·38 (t，J=5 Hz，1·5Η)，3·75 (s，1H，可與 D20 置換）， 3.85-3.58 (m，2H)，2·0(Μ·78 (m，2H)，1.06 (t，J=7.5 Hz， 3H) ; Mass(m/z) : 426(M+1)，39卜 377，363，348，319， 105 ， 84 ， 51 〇 實施例25

5-三氟乙氣篡真榭睑的盤備（式1，其中RkR^RkRLRLH 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（53 ) ，r6=ch2cf3) 步驟1 :將0.5g式3之20(S)-喜樹鹼與0.5g之氣化鐵溶 在18ml的2,2,2-三氟乙醇中，將硫酸慢慢滴入，然後在 80°C下持續加熱24小時。之後，在真空下將過量的2-氣乙醇除去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的 有機層用水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾 燥。將溶劑抽乾後得到600mg的固體。 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述固體純化，得到250mg的5-三氟乙氧基喜樹鹼（式1) 以及150mg的5_羥基喜樹鹼（式13)。mp: 188°C ; IR : 3438，1748，1667，1620，1160，1106，1003 cm·1 ;部 份1H NMR 數據（CDC13) : δ 6·84 (s，0·5Η)，6·75 (s， 0·5Η)，5·21-4·90 (m，1Η)，4·60-4·38 (m，2Η)，3·70 (s，1Η， 可與 D20 置換），2.0-1.79 (m，2Η)，1·15-0·99 (m，3Η); Mass(m/z) : 447(Μ+1)，378，348，304，111，69。 實施例26 5-(2〜羥基乙氣基）喜樹鹼的製備（式1 ，其中 R^R^R^R^R^H » R6=CH2CH2OH) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟1:將lg式3之20(S)-喜樹鹼與lg之氣化鐵溶在25ml 的乙二醇中，將5ml的硫酸慢慢滴入，然後在70°C下 持績加熱36小時。之後，在真空下將過量酸與乙二醇除 去，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層用 水以及飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶 劑抽乾後得到l.lg之淡黃色粉末。 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（54 ) 步驟2:利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將上 述固體純化，得到700mg的5-(2f-羥基乙氧基）喜樹鹼（式 1)以及200mg的5_羥基喜樹鹼（式13)。mp: 190°C ; 26°C 下[ot]D=+28.30 (c 0.106, CHC13) ; IR ·· 3300，3285，1745， 1665，1620，1605，1227，1160，1112，1047 cm·1 ;部 份1H NMR 數據（CDC13) : δ 7·01 (s，0·5Η)，6·92 (s5 0·5Η)，4·30-3·71 (m，4H)，3·75 (br s，2H，可與 D20 置 換），2·0-1·79 (m，2H)，1·15-0·95 (m，3H) ; Mass(m/z): 408(M+1)，390，378，364，348，319，1(Π，76 〇 實施例27 10-羥基-5-三氟乙氣基喜榭鹼的製備(式1 ,其中 R2=OH ^ R^R^R^R^H » R6=CH2CF3) 步驟1 :以實施例22的方法，製備式13之10,5-二羥基 喜樹驗，其中 R2=〇H，RkRLRkRkH。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2:將200mg式13之10,5-二羥基喜樹鹼（其中 R2=OH，RLRLRLR5,與lml之三氟乙醇懸浮在50ml 之二氣乙烷，加入〇.5ml之硫酸，加熱迴流18小時。之 後將反應之混合物濃縮，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取， 萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸 鈉乾燥。將溶劑抽乾後得到一油狀殘餘，利用矽膠管柱 層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將之純化，得到140mg的10-羥基-5-三氟乙氧基喜樹鹼固體。mp·· 237°C ; IR : 3420， 1748, 1664, 1605, 1159 cm·1; β NMR (DMSO-d6): δ 10.48 (s，1H，可與 D20 置換），8·45 (s，1H)，8.04 (d，J=9 Hz， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（55) 1H)，7.47 (d，J=9 Hz，1H)，7·40 (s，1H)，7.18 (s，1H)， 7·11 (s，0·5Η)，7·06 (s，0·5Η)，6·58 (s, 1Η，可與 D20 置 換），5·41 (s，2H)，5.05-4.55 (m，2H)，2·05-1·75 (m，2H)， 1.00-0.8 (m，3H) ; 13C NMR (DMSO-d6) : δ 172·4，161.0， 157.7, 157·卜 151.2 , 147.5，144·3，143·7, 131.0, 130·8， 129.8，129·卜 124·0，121·4，120·7，109.6，96·6，89·7， 72·3，65·卜 30·4，7·8 ; Mass(m/z) : 462(Μ+1)，418，364， 320 ， 29卜 263 〇 實施例28 9-硝基-5-三氟乙氧基喜樹鹼的盤備（式卜其中Ε>Ν02， r2=r3=r4=r5=h , r6=ch2cf3) 步驟1 :以實施例21的方法，製備式13之9-硝基-5-羥 基喜樹驗，其中 R1=N〇2，R2=R3=R4=R5=H。 步驟2:將100mg式13之9-硝基-5-羥基喜樹鹼（其中 Rr=N02，R2=R3=R4=R5=H)與〇·5ιη1之三氟乙醇懸浮在 25ml之二氣乙烧，加入0.3ml之硫酸，加熱迴流18小 時。之後將反應之混合物濃縮，所得的殘餘用乙酸乙酯 萃取，萃取所得的有機層以飽和食鹽水清洗，然後以無 水硫酸納乾燥。將溶劑抽乾後得到一油狀殘餘，利用梦 膠管柱層析，以丙酮·氣仿為沖堤劑將之純化，得到60mg 的9-确基-5-三氟乙氧基喜樹驗固體。mp: 2i〇°c ; IR : 3457 , 1745，1745，1665 , 1623, 1527 , 1154 , 1000 cm·1 ; iH NMR (CDC13) ·· δ 9·30 (s，1H) , 8·53 (d，J=8.6 Hz，1H), 8·49 (d，J=8-6 Hz，1H) , 7·94 (t，J=8 Hz，1H) , 7·62 (s， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） —^^------IT丨一---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 502037 A7 __B7 ___ 五、發明説明（56) 0·5Η)，7.60 (s，0·5Η) ，6·87 (s，0·5Η)，6·81 (s，〇·5Η)， 5·69 (d，J=16 Ηζ，1Η)，5·29 (d，J=16 Ηζ，1Η)，4·97 (m， 1Η)，4·52 (m，1Η)，3·90 (br s，1Η，可與 D20 置換），1·90 (m，2Η)，1·05 (t，J=7 Hz，3H); Mass(m/z): 491(Μ+1)，461， 446，418，393，364，349，319，290，216 ο 實施例29 5-(2〜氟乙氣基）喜榭鹼的贺借f疲1，其中RbRtR3: R4=R5=H , R6=CH2CH2F) 步驟1:以實施例2的方法，製備式13之5-羥基喜樹鹼， 其中 RLRLRL R4=R5=H。 步驟2:將200mg式13之5-羥基喜樹鹼（其中RkRkR3, R4=R5=H)與2ml之三氟乙醇懸浮在30ml之二氣乙烧’ 加入0.3ml之硫酸，加熱迴流18小時。之後將反應之混 合物濃縮，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃取所得的有 機層以飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉乾燥。將溶 劑抽乾後得到一油狀殘餘，利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤劑將之純化，得到130mg的5-(2匕氟乙氧基) 喜樹鹼固體。mp: 147°C ; IR(KBr) : 1745，1664，1615， 1160, 1040,752 cm·1; ^NMR (CDCl3+DMSOd6): δ 8·46 (s，1H)，8·20 (d，J=8 Hz，1H)，7·95 (d，J=8 Hz，1H)，7·83 (t，J=6.8 Hz，1H)，7·65-7·55 (m，2H)，6·86 (s，0·5Η)，6·78 (s，0·5Η)，5·68 (d，J=16.5 Hz，1H)，5.26 (d，J=16.5 Hz， 1H)，4.90-4.20 (m，4H)，4.44 (s，1H，可與 D20 置換）， 2.05-1.85 (m, 2H) » 1.12-0.95 (m, 3H) ； Mass(m/z) ： 410 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝- 、11 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 502037 A7 __B7_ 五、發明説明（57) (M+1)，365，348，319，304。 實施例30 10-羥基j丄2:_-氟1 ,其中Rb R3=R4=R5=H，R2=OH，R6=CH2CH2F) 步驟1 ··以實施例22的方法，製備式13之1〇,5_二羥基 喜樹鹼，其中 R1= R3=R4=R5=H，R2=OH。 步驟2 :將100mg式13之l〇,5-二羥基喜樹鹼（其中Ri = R3=R4=R5=H，R2=OH)與2ml之三氟乙醇懸浮在25ml之 二氣乙烷，加入〇·2ηι1之硫酸，加熱迴流16小時。之後 將反應之混合物濃縮，所得的殘餘用乙酸乙酯萃取，萃 取所得的有機層以飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸鈉 乾燥。將溶劑抽乾後所得之殘餘，利用矽膠管柱層析， 以丙酮-氣仿為沖堤劑將之純化，得到60mg的10-經基-5-(2'-氟乙氧基）喜樹鹼固體。mp:258-260°C ; IR: 3225， 1748，1660，1593，1159 cm·1 ;泔 NMR (CDC13+ DMSO-d6) : δ 10.0 (br s，1H，可與 D20 置換），8·31 (s， 1H)，8·00 (d，J=6 Hz，1H)，7.80 (s，1H)，7·45 (d，J=6 Hz， 1H)，7·40 (s，1H)，6.85 (s，0.5H)，6.80 (s，0·5Η)，6.15 (s， 1H，可與 D20 置換），5.55 (d，J=16 Hz，1H)，5·23 (d，J=16 Hz，1H)，4.854.20 (m，4H)，2·05-1·81 (m，2H)，1·0 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) ·· 426 (M+1)，382，364，320。 實施例31 氟乙氣基V7-乙基喜榭鹼的製備（式1，其中Rb R3=R4=R5=H，R2=OH，R6=CH2CH2F) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS 規格（21〇x297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（58 ) 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹驗，其中 Ι^=Ι12=Κ3=Ι14==Η，R5=Et。 步驟2 :將80mg之5-羥基冬乙基喜樹鹼與〇」mi之對_ 甲苯磺酸懸浮在12ml的苯中，加入20mg之2-氟乙醇， 加熱迴流14小時。之後加入一滴的吼啶將反應終止，並 以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水、碳酸氫鈉、 及飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利 用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑將之純化， 得到60mg的5_(2，_氟乙氧基）-7-乙基喜樹鹼。mp: ii2°C ; IR:3070, 1748, 1665, 1605, 1456, 1155, 1038^67(^1-1 ; 屮 NMR (CDC13): δ 8.21 (d，J=9.2 Hz，1H )，8·17 (d，J=9.2 Hz，1H )，7·82 (t，J=7.4 Hz，1H)，7.67 (t，J=7.4 Hz，1H)， 7.57 (s，0·5Η)，7.54 (s，0·5Η)，7.00 (s，0·5Η)，6.89 (s， 〇·5Η)—，5·69 (d，J=16 Hz，1H)，5·27 (d，J=16 Hz，1H)， 4.81-4.12 (m，4H)，3.51-3.15 (m，2H)，1·93 (m，2H)，1·45 (t，J=7 Hz，3H)，1.05 (m，3H) ; Mass(m/z) : 438 (M+l)， 420 ， 406 ， 376 ， 347 ， 332 ， 317 ， 245 ， 91 。 實施例32 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 觀篡？i氧基V7-乙某真榭鹼的製備 步驟1 ··以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹鹼，其中RLRLRLRLH，R5=Et。 步驟2 :將250mg之5-羥基-7-乙基喜樹鹼與1〇μ1之濃 硫酸懸浮在25ml的二氣乙烷中，加入〇.5ml之乙二醇， 加熱迴流14小時。之後加入一滴的吡啶將反應終止，並 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（59) 以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水與飽和食鹽水 清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽膠管柱層 析，以乙酸乙酯-氣仿為沖堤劑將之純化，得到180mg 的5-(2f-經基乙氧基）-7-乙基喜樹驗以及25mg的起始 物。1H NMR (CDC13, 200MHz) : δ 8·20 (d，J=8 Hz，1H )， 8·15 (d，J=8 Hz，1H )，7·85 (t，J=6.8 Hz，1H)，7·69 (t，J=7.3 Hz，1H)，7.56 (s，0·5Η)，7.54 (s，0.5H)，7.11 (s，0·5Η)， 6.99 (s，0·5Η)，5·72 (d，J=16.5 Hz，1H)，5.28 (d，J=16.5 Hz， 0.5H)，5.26 (d，J=16.5 Hz，0·5Η)，3·95-3·65 (m，4H)，3·78 (br s，2H，可與 D20 置換），3·5-3·18 (m，2H)，1.95-1.81 (m， 2H)，1.45 (t，J=7.5 Hz，3H)，1.06 (m，3H)。 實施例33 5_(2〜羥基乙氣基）-10-羥基喜榭鹼的製備 步驟1 :以實施例22的方法，製備式13之10,5 =二羥基 喜樹鹼，其中 R1= R3=R4=R5=H，R2=OH。 經濟部中央樣率局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2 :將60mg之10,5-二羥基喜樹鹼與5mg之對-苯磺 酸懸浮在10ml之二氣乙烧，加入25mg之乙二醇，加熱 迴流16小時。之後加入一滴的吼咬將反應終止，並以乙 酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水與飽和食鹽水清洗， 然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽膠管柱層析，以 甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到40mg的5-(2f-羥基 乙氧基）-10-羥基喜樹鹼以及l〇mg的起始物。IR: 3070， 1760，1660，1600，1558，1509，1384，1160，1047，832 cm1 ; β NMR (CDCl3+DMSOd6) : δ 10·05 (br s，1H，可 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 A7 B7 五、發明説明（60) 與 D20 置換），8·35 (s，1H)，8·05 (d，J=9 Hz，1H)，7·75 (s， 1H)，7·45 (d，J=9 Hz，1H)，7·28 (s，1H)，6·95 (s，0·5Η)， 6·85 (s，0·5Η)，5.65 (d，J=16 Hz，1H)，5·25 (d，J=16 Hz， 1H)，4.11 (m，2H)，3.78 (m，2H)，4.05 (s，1H，可與 D20 置換），1.98 (m，2H)，1·05 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z): 425，408，380，364，336，320，305，264，235，147， 105 〇 實施例34 5 JO-二羥基-7-乙基喜榭鹼的製備 步驟1 :以實施例18的方法，製備式1之5-乙氧基-10-羥基-7·乙基喜樹鹼，其中RLRLRLH，R5=R6=Et， R2=OH 〇 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2 :將200mg之5-乙氧基-10-羥基-7-乙基喜樹鹼溶 在10ml之乙醇，加入12ml的25%鹽酸，加熱迴流24 小時。之後將過量的酸與乙醇去除，所得的殘餘用乙酸 乙酯萃取，萃取所得的有機層以5%的碳酸氫鈉溶液及 飽和食鹽水清洗，然後以無水硫酸納乾燥◊將溶劑抽乾 後所得之殘餘，利用矽膠管柱層析，以丙酮-氣仿為沖堤 劑將之純化，得到105mg的5，10-二羥基-7-乙基喜樹鹼。 mp: 197°C ; IR : 3268，2975，1748，1656，1597，1514， 1230，1161，1052，841 cm·1 ;屮 NMR (CDC13+ DMSO_ d6) ·· δ 10·0 (br s，1H，可與 D20 置換），8·05 (d，J=9 Hz， 1H)，7·76 (s，1H)，7.42 (m，1H)，7.04 (s，0·5Η)，6.98 (s, 0.5H)，5.65 (d，J=16 Hz，1H)，5·23 (d，J=16 Hz，1H)，3.51 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 502037 A7 B7 五、發明説明（61 ) (br s，1H，可與 D20 置換），3·45_3·12 (m，2H)，1.94 (m， 2H)，1.42 (t，J=7 Hz，3H) ; Mass(m/z) : 408(M+1)，379， 364 ， 347 ， 335 ， 285 ， 169 ， 119 ， 1(H ， 83 。 實施例35 5-(2f-經基乙氧基）-10-經基-7-乙基喜樹驗的製備 步驟1 :以實施例34的方法，製備式13之5，10-二羥基 -7-乙基喜樹鹼，其中 R^R^RkH，R5=R6=Et，R2=OH。 步驟2:將100mg之10,5-二羥基-7_乙基喜樹鹼與5mg 之對-苯磺酸懸浮在10ml之二氣乙烷，加入50mg之乙 二醇，加熱迴流16小時。之後加入一滴的吡啶將反應終 止，並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水與飽和 食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽膠 管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到60mg 的羥基乙氧基）-10-羥基-7-乙基喜樹鹼以及12mg 的起始物。mp: 124。(： ； iHNMR^CDCU+DMSO-dG): δ 10.0 (br s，1Η，可與 D20 置換），8·02 (d，J=9 Ηζ，1Η)，7·55·7·39 (m，3H)，7·02 (s，0·5Η)，6·93 (s，0·5Η)，6.05 (br s，1H，可 與 D2〇 置換），5.63 (d，J=16 Hz，1H)，5·23 (d，J=16 Hz， 1H)，3·94·3·54 (m，2H)，3·41-3·05 (m，2H)，1·93 (m，2H)， 1·40 (t，J=7 Hz，3H)，1·02 (m，3H); Mass(m/z): 408(M+1)， 379，364，347，335，285，169，119，1(U，83 ° 實施例36 1·=!!^胺基乙氧篡樹鹼的製備 步驟1 :以實施例2的方法，製備式13之5-羥基喜樹鹼， 65 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----；---^----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 •丨 經濟部中央樣準局員工消費合作社印裝 502037 A7 B7 五、發明説明（62 ) 其中 Κ>Ι12=Ι13=Ι14=Ι15=Η。 步驟2 :將60mg之5-羥基喜樹鹼與5mg之對-苯磺酸懸 浮在10ml之二氯乙烷，加入15mg之二胺基乙醇，加熱 迴流14小時。之後加入一滴的吼啶將反應終止，並以乙 酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水，碳酸氫鈉，以及 飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用 矽膠管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到 36mg的5-(2f-胺基乙氧基）喜樹鹼以及10mg的起始物。 mp : 170°C ; IR : 345卜 1740，1664，1604，1383，1189， 1042 cm·1 ;部份1H NMR 數據（CDCl3+DMSO，d6) : δ 7.5 (d，1Η，可與 D20 置換），7·15 (d，1Η，可與 D20 置換）， 7·02 (s，0·5Η)，6·92 (s，0·5Η)，5·65 (d，J=16 Hz, 1H)，5·28 (d，J=16 Hz，1H)，4·24_3·85 (m，2H)，2·35 (s，1H，可與 D20 置換），2·34 (m，1H)，2·15-1·85 (m，3H)，1·12-0·95 (m， 3H) ; Mass(m/z) ·· 408(M+1)，364，347，319，305，291， 249，103，62 〇 實施例37 5-(2〜胺某乙氳篡V7-乙基喜榭鹼的製備 步驟1 ··以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹驗，其中 ，R5=Et。 步驟2 :將85mg之5·羥基-7-乙基喜樹鹼與5mg之對-苯 磺酸懸浮在20ml之苯，加入Umg之二胺基乙醇，加熱 迴流10小時。之後加入一滴的比咬將反應終止’並以乙 酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水，碳酸氮鈉，以及 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 502037 A7 B7 五、發明説明（63 ) 飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用 矽膠管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到 65mg的5-(2匕胺基乙氧基）-7-乙基喜樹鹼。mp : 230°C ; 部份1HNMR 數據（CDCl3+DMSO-d6) : δ 7.5 (d，1H，可 與 D20 置換），7·15 (d，1H，可與 D20 置換），7·02 (s， 0·5Η)，6.92 (s，0·5Η)，5·65 (d，J=16 Ηζ，1Η)，5.28 (d，J=16 Hz，1H)，4.24-3.85 (m，2H)，2.35 (s，1H，可與 D20 置換）， 2·34 (m，1H)，2.15-1.85 (m，3H)，1.12-0.95 (m，3H); Mass(m/z) : 408(M+1)，364，347，319，305，103，74， 62 〇 實施例38 5-(3f-二甲胺基丙氣基）-7-乙基喜榭鹼的製備 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹驗，其中 R1=R2=R3=R4=H，R5=Et。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 步驟2 :將50mg之5-羥基-7-乙基喜樹鹼與0·05ιη1之濃 硫酸懸洋在20ιπ1的苯’加入30mg之3-二甲胺基-1 -丙 醇，加熱迴流12小時。之後加入一滴的吼咬將反應終止， 並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水，碳酸氫鈉， 以及飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘， 利用矽膠管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得 到42mg的5-(3匕二甲胺基丙氧基)-7-乙基喜樹鹼。mp : 113°C ;部份1HNMR 數據（CDCl3+DMSO-d6): 5 6.95(s， 0·5Η)，6·85 (s，0·5Η)，5·65 (d，J=16 Ηζ，1Η)，5·35 (d，J=16 Hz，0·5Η)，5·25 (d，J=16 Hz，0·5Η)，3·95-3·57 (m，2H)， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（64 ) 3.30-3.05 (m，2H)，2.85 (s，3Η)，2·83 (s，3Η)，2·15-1·72 (m， 6Η)，1·45 (t，J=7.5 Ηζ，3Η)，1·12-0·95 (m，3Η);

Mass(m/z) : 478(Μ+1)，434，375，347，33卜 169，102， 84 〇 實施例39 5-(2匕Ν-0比咯啶基乙氣基）-7-乙篡喜樹鹼的製備 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹鹼，其中RLRLRkRLH，R5=Et。 步驟2 :將100mg之5-羥基-7-乙基喜樹鹼與之樟 腦磺酸懸浮在25ml的苯，加入30mg之1-(2-羥基乙基) 口比洛咬，加熱迴流12小時。之後加入一滴的吼唆將反應 終止，並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水，碳 酸氫鈉，以及飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得 之殘餘，利用矽膠管柱層析，以甲醇-氯仿為沖堤劑將之 純化，得到85mg的比哈唆基乙氧基）-7-乙基喜 樹鹼。mp : 113°C ; IR : 3424，1749，1666，1616，1384， 1156, 1078, 1049 cm.1;部份1HNMR 數據（CDC13):S 7·02 (s，0·5Η)，6.95 (s，0·5Η)，5·70 (d，J=16 Ηζ，1Η)，5·33 (d， J=16 Ηζ，0·5Η)，5·26 (d，J=16 Ηζ，0·5Η)，4·18-3·88 (m， 2Η)，3·45-3·15 (m，2Η)，3·06-2·58 (m，6Η)，2.05-1.72 (m， 6Η)，1 ·43 (t，J=8 Ηζ，3Η)，1 · 15_0·95 (m，3Η); Mass(m/z): 446 (M+l)，375，347，331，245，169，116，97，84 〇 實施例40 5-(2^氯乙氣基乙基真樹鹼的製備 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4t» 1 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（65 ) 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5_羥基-7-乙 基喜樹鹼，其中 R1=R2=R3=R4=H，R5=Et。 步驟2 :將500mg之5_羥基-7-乙基喜樹鹼與0.1ml之濃 硫酸懸浮在30ml的苯，加入700mg之二氣乙醇，以 Dean-Stark裝置加熱迴流8小時。之後加入一滴的吼咬 將反應終止，並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以 水，碳酸氫鈉，以及飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。 所得之殘餘，利用矽膠管柱層析，以乙酸乙酯-氣仿為沖 堤劑將之純化，得到400mg的5-(2匕氣乙氧基）-7-乙基喜 樹鹼。mp : 168。(：；〖HNMR^CDCb，200MHz) : δ 8·20 (d， J=9.5 Hz，1H)，8.15 (d，J=9.5 Hz，1H)，7.82 (d，J=8 Hz， 1H)，7·67 (d，J=8 Hz, 1H)，7·54 (d，J=6.2 Hz，1H)，7.02 (s， 0.5H)，6.90 (s，0·5Η)，5.70 (d，J=16 Hz，1H)，5.69 (d，J=16 Hz，0·5Η)，5·26 (d，J=16 Hz，0·5Η)，5·25 (d，J=16 Hz， 0·5Η)，4·61_3·95 (m，2H)，3·78_3·58 (m，2H)，3.50-3.15 (m， 2H)，1.98-1.78 (m，2H)，1·45 (t，J=7.5 Hz，3H)，1·12-0·95 (m，3H) ; Mass(m/z) : 455(M+1)，437，409，392，376， 347 ， 331 ， 245 ， 115 ， 8卜 實施例41 5-(2〜二甲胺乙氣基V7-乙基喜榭鹼的M備 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5-羥基-7-乙 基喜樹鹼，其中 Κ>Ι12=Ι13=Ϊ14=Η，R5=Et。 步驟2 :將i〇〇mg之5-羥基-7-乙基喜樹鹼與0.1ml之濃 硫酸懸浮在l〇ml的苯，加入50mg之2-N，N-二甲胺基乙 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 502037 A7 B7 五、發明説明（66) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 醇，以Dean-Stark裝置加熱迴流1〇小時。之後加入一 滴的吡啶將反應終止，並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的 有機層以水，碳酸氫鈉，以及飽和食鹽水清洗，然後將 溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽膠管柱層析，以甲醇-氣 仿為沖堤劑將之純化，得到65mg的5-(2，-二甲胺乙氧 基）-7-乙基喜樹鹼。部份WNMR數據（CDC13):S 7·05 (s， 〇·5Η)，6·93 (s，0·5Η)，5·74 (d，J=16 Hz, 0·5Η)，5·73 (d， J=16 Ηζ，0·5Η)，5·29 (d，J=16 Ηζ，1Η)，4·41·3·75 (m，2Η)， 3·53-3·18 (m，2Η)，2·57 (q，J=16 Ηζ，2Η)，2·26 (s，3Η)， 2·23 (s，3Η)，2·05-1·86 (m，2Η)，1·47 (t，J=8 Ηζ，3Η)， 1.18-1.01 (m，3H) 〇 豐施例42 f -胺基丁氧基）喜榭鹼的製備 % 步驟1:以實施例2的方法，製備式13之5-羥基喜樹鹼， 其中 κ>ιι2=π3=ιι4=ιι5=η。 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 步驟2 :將53mg之5-羥基喜樹鹼與8mg之對-苯磺酸懸 浮在16ml的苯，加入14mg之4-胺基丁醇，加熱迴流10 小時。之後加入一滴的吡啶將反應終止，並以乙酸乙酯 萃取，萃取所得的有機層以水，碳酸氫鈉，以及飽和食 鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽膠管 柱層析，以曱醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到45mg的 5-(4f-胺基丁氧基）喜樹鹼以及l〇mg的起始物。mp : 150 °C ; IR ·· 3397，1745，1664，1617，1384，1224，1162， 1038,684, 570 cm1;部份1H NMR 數據（CDC13+ DMSO-d6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 502037 A7 ___B7_ 五、發明説明（67 ) ):δ 7.5 (d，1H，可與 D20 置換），6·95 (s，0·5Η)，6·85 (s， 0·5Η)，6·25 (d，1Η，可與 D20 置換），5·65 (d，J=16 Ηζ， 1H)，5·35 (d，J=16 Hz，0·5Η)，5·25 (d，J=16 Hz，0·5Η)， 4·15_3·80 (m，2H)，2.15-1.65 (m，8H)，1·15_0·98 (m，3H); Mass(m/z) : 436(M+1)，392，347，333，305，153，123， 105，90，62 〇 實施例43 5-(2〜甲氣基乙氣基）喜樹鹼的製備 步驟1:以實施例2的方法，製備式13之5-羥基喜樹鹼， 其中 Rl=R2=R3=R4=fl5=H。 步驟2 :將120mg之5-羥基喜樹驗與0.13ml之硫酸懸浮 在18ml的氣仿’加入20mg之乙二醇单甲基謎，加熱迴 流10小時。之後加入一滴的吼啶將反應終止，並以乙酸 乙S曰萃取’萃取所得的有機層以水’破酸氣納，以及飽 和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所得之殘餘，利用矽 膠管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將之純化，得到8〇mg 的甲氧基乙氧基）喜樹驗以及1 〇mg的起始物。mp : 123°C ; IR: 3294, 2933, 1748, 1665, 1617, 1384, 1155， 1077，1045，761 cm·1 ; WNMR (CDC13) ·· δ 8·51 (s，1H)， 8.24 (d，J=8 Ηζ，1Η)，7·93 (d，J=8 Ηζ，1Η)，7·79 (t，J=6.8 Hz，1H)，7·65 (t，J=6.8 Hz，1H)，7·58 (s，0·5Η)，7·56 (s， 0·5Η)，6·91 (s，〇·5Η)，6.82 (s，0·5Η)，5·71 (d，J=16 Hz， 1H)，5·28 (d，J=16 Hz，1H)，4·55-4·05 (m，2H)，3·95 (br s， 1H，可與 d2〇 置換），3.81-3.56 (m，2H)，3·48 (s，1·5Η)， 71 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（2l〇x297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 502037 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（68 ) 3·44 (s，1.5H)，1.94 (m，2H)，1·05 (t，J=7 Hz，3H); Mass(m/z) : 423(M+1)，364，347，319，304，275，218， 128，1(H，82。 實施例44 5-(2f-N-甲基吼咯啶某乙筚某V7_乙基喜榭鹼的製備 步驟1 :以實施例4的方法，製備式13之5-羥基_7_乙 基喜樹驗，其中 R1=R2=R3=R4=H，R5=Et。 步驟2 :將50mg之5-羥基-7-乙基喜樹鹼與10mg之對_ 苯續酸懸浮在15 ml的苯，加入18mg之1 -曱基-2-吼略 啶基乙醇，加熱迴流8小時。之後加入一滴的吼啶將反 應終止，並以乙酸乙酯萃取，萃取所得的有機層以水， 碳酸氫鈉，以及飽和食鹽水清洗，然後將溶劑抽乾。所 得之殘餘，利用矽膠管柱層析，以甲醇-氣仿為沖堤劑將 之純化，得到35mg的5-(2，-N_甲基吡咯啶基乙氧基 乙基喜樹驗。mp : l〇2°C ; Mass(m/z) : 504(M+1) , 460 , 375 ， 347 ， 331 ， 275 ， 245 ， 128 ， 110 , g4 。 雖然本發明已以一較佳實施例揭露如上，然其並非 用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明 之精神和範圍内，當可作各種之更動與潤飾，因此本發 明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -----J·^---裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 J·. 公告衣 申請曰期 案 號 γί,〇 Fr 類 別 1 k 0上各搁由本局填註）第8㈣5385號真獅日曰_工 修正 識充 頁 ^專利説明書 J 502037 修正日期：91.6.28 發明 新型 名稱 中 文 新穎之2 0 ( S )-喜樹鹼c環水溶性 類似物 英 文

〇FV2 0 (stTEcLfT〇?HLECICN RING ANAL〇GUES

i Γ 姓 名 (名稱） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印袈 申請人 國 籍 住、居所 (事務所） 代表人 姓 名 1 ·雷戴博士研究基金會 - 2 ·雷戴-克米納公司 1 ·印度2 ·美國 1·印度’海得拉巴，邁亞埔，波拉朗略 2 ·美國，紐澤西洲〇745〇，里复五 + ，、ϋ，南馬波大道 1·Ά·威卡特史瓦路2·卡門羅審 得 準 樣 家 國 國 中 用 適 尺 張 紙 本 I釐 公 7 9 2 66

Claims (1)

1. 502037 v^o —g_6105385號申諸寻刺矜圍修正本D8 六、申請專利範圍 1· 一種如結構式1的化合物 期：91.6.28 公告衣 穆.i

   經 濟 部 智 慧 財 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 或其藥學上可接受的鹽，其中R1，R2，R3以及R4各自獨立， 代表氫或擇自羥基、（Cl — C6)烷氧基、硝基、取代之胺基的群 組，，其中該胺基為單取代或雙取代，其取代基係擇自（Cl-C6) 烧基或取代之（Cl-c6)烷基，其取代基係擇自羥基或（Ci_C6) 烷胺基； R5代表氫或（匕-c6)烷基； 以及R6代表取代之（Cl—C0烷基，其中取代基係擇自鹵素、 經基、（C1—Ce)烷氧基或胺基，其中胺基可為不取代、單取代 或雙取代’且其取代基係擇自羥基或^广^)烷基；當其中之 胺基為雙取代時，兩個取代基為各自獨立，或與氮原子結合 成為六員環之雜環。 2·如申請專利範圍第1項所述之化合物，係擇自： 三氟乙氧基CPT ; 9-硝基-1〇一羥基—5 一（2'-甲氧基乙氧基）cpt; 9- 硝基-5〜（2'-甲氧基乙氧基）CPT; 7一乙基—5-氯乙氧基CPT ; 5一（2^羥基乙氧基）CPT ; 10- If基-5-(2，-羥基乙氧基）CPT; 7—乙基-丨〇-羥基-5-(2,-羥基乙氧基）CPT; (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂——-線—ml丨 73 本紐尺度適用中_家標準（CNS)A4規格（21() χ挪公蓳 502037 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   / 0 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 9- 硝基-5-氟乙氧基CPT ; 10- 羥基-5-三氟乙氧基CPT; 7-乙基-10-羥基-5-三氟乙氧基CPT; 7-乙基-5-吡咯啶基乙氧基CPT; 7-乙基-5-二甲胺基丙氧基CPT ; 7-乙基-10-羥基-5-氟乙氧基CPT; 5-（2'-羥基乙氧基）-7-乙基CPT;以及 5-（2f-甲氧基乙氧基）CPT， 其中CPT代表20(S)喜樹鹼。 3·如申請專利範圍第1項所述之結構式1的化合物，其 中R至R具有申請專利範圍第1項的意義，為兩個非鏡向 立體異構物20(S)，5(R)與20(S)，5(S)的混合。 4.如申請專利範圍第1項所述之結構式1的化合物，其 中每個非鏡向立體異構物具有20(S)，5(R)與20(S)，5(S)的 組態作為獨立的異構物，而實質上不帶有其他任何異構物， 其中R至R6所代表的意義悉如申請專利範圍第1項所述。 5· —種製備化合物1的方法，包括： 戶~(1)將化合物2，其中R1至R1 2 3 4悉如申請專利範圍第i項 所定義，在擇自無機酸或路易士酸的酸和鐵盘 結構為R6,的化合物反應， 在下與 R1 R4 — ！ί!1!ί> · ! I I I — I 1!!11 ^^ 1 ! I — I I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 2 74 3 ^__ 4 張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 502037 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 以得到化合物12與化合物13，其中R6^義如第1項中所述，

   (optionally); (ϋ)分離步驟（i)中所製備的化合物12與化合物i3， 視需要而定； (ill)將化合物12 7jc解以得到額外量的化合物13 ;以 及，視需要而定 (iv)將化合物13,在擇自無機酸或路易士酸的酸和鐵 鹽的存在下與結構式為r6—qh的化合物反應，以得到化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) #: 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 F

   其中R到R5以及悉如申請專利範圍第i項所·定義。i/p如t請專利範圍第5項所述之製備化合物1的方法 ，R，R4’R5代表氫，R2代表羥基，R6代表三氟乙基 其包括下列步驟··

   訂---------線· -n n n ϋ .1 β— I I 502037 六、申請專利範圍

   ，將反應„ ’以得到化合物12與化合物13 ο I V 〇]?° „ 1 ς

   HO Ο 12 其中R R R ’以及R代表氫，r2代表經基，^代表乙基 (11)分離步驟⑴中所製備的化合物12與化合物13; (ill)將化合物12溶解在乙醇水溶液，並與鹽酸加熱迴 流，以將化合物12水解得到額外量的化合物13 ; (IV)將化σ物13在濃硫酸的存在下，與溶在二氯甲炫 的三氟乙醇反應，以得到化合物 13 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   其中R，R3，R4，R5代表氫，R2代表羥基，R6代表三氟乙基。 7·如申請專利範圍第5項所述之方法，其中該鐵鹽為氯 76

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 化鐵。 8 ·種用於治療癌症之 利範圍第卜4項中任—項:…且成物，具有如前述> 請專 分。 之式I化合物或其鹽為主要$ 專利n = Γ°療白血病之f藥組成物，具有如前述申唷. 2竭Η項中任—項所述之式〗化合物或其鹽為:; ▲ 1 〇· 一種用於治療愛滋病毒（HI V)之醫藥組成物，具有如 月J述申明專利範圍第卜4項中任一項所述之式I化合物或其 鹽為主要成分。 7 7 本紙張尺度適用申國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）