TW502010B

TW502010B - A pharmaceutical composition for use as nitric oxide synthase inhibitor

Info

Publication number: TW502010B
Application number: TW087100434A
Authority: TW
Inventors: Richard Mansfield Beams; Martin James Drysdale; Karl Witold Franzmann; Anthony Joseph Frend; Harold Francis Hodson
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1997-01-13
Filing date: 1998-01-14
Publication date: 2002-09-11
Also published as: TR199901680T2; KR20000070070A; HUP0001539A3; ES2168737T3; PL334368A1; CA2277877A1; CY2263B1; WO1998030537A1; PL189973B1; CA2277877C; IL130551A0; NO993429L; EP0958277A1; IS1847B; BR9806870B1; PE44599A1; TW538021B; NO312192B1; NZ336379A; ZA98179B

Description

50201° 立、發明説明（本發明係關於含有新穎脒基化合物之醫藥組成物，及其用於治療之用途，特別作用可謗生性一氧化氮合成酶之選擇性抑制劑。一氧化氮為可溶鳥糞核苷酸環化酶之内生刺激劑，涉及多種生物過程。產生過量一氧化氮也牽涉到多種病情^包含敗血性休克及多種發炎病。由L-精胺酸以生物化學方式合成一氧化氮’係由一氧化氮Ν Ο合成酶催化。曾經敛述多種一氧化氮NO合成酶抑制劑並提示供治療用。更為晚近’本領域之目的係提供對可謗生No合成酶 (iNOS)或神經元NO合成酶（nN0S)比較内皮no合成酶 (eNOS)具有選擇性的NO合成酶抑制劑。如此，W0 93/13055敘述下式選擇性N〇合成酶抑制 — ^1------! (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

N H R1 c

H N a

• Η Η NIC

Η 2 ο C 4 及其鹽，及醫藥可接受性酯類及醯胺類，其中：

Ri為C!·6直鏈或分支鏈烷基，Cm婦基，Cm块基， C3_6環烷基或C3-6環烷基Ci_6烷基；經潦部中央梂準爲員工消費合作社印製 Q為含3至6個碳原子，且選擇性由一或多個Cu垸基取代之伸烷基，伸烯基或伸炔基；式- (CH2)pX(CH2)q-基，此處p為2或3，q為1或2及X 為S (Ο) x ’此處X為〇、1或2，Ο或NR2，此處Rz為η或 C 1 - 6坑基；或 -4- 本紙張尺度適用不國國家標準（CNS 規格（2丨οχ297公楚 1 ^- A7

s為〇、】其可選擇性 C 1-6烷氧基胺基，Cu 式-(CH2)rA(CH2)s-基，此處 ^ 〇、 2七二A為°至6員碳環系環或雜環系環由一或'個適當取代基取代，例如C“燒基，：基，由原子’硝基’氰基，三氟c"燒基烷基胺基，或二CN6烷基胺基。發明人發現屬於wo 93/13055範圍之化合物亦為選擇卜 S抑制劑，具有優‘點包括半生期長1活體内投藥時』有口服生體利用性。 / 因此，根據本發明提供一種包括式⑴化合物

CK --------丨. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) HN-

CO，H (!) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製或其鹽、落劑合物或生理功能衍生物及醫藥上可接受載劑或賦形背丨之醫藥組成物。式⑴於胺基酸基包含非對稱中心，雖然以精胺酸之天然 L 4(s)組態為佳，但預期式⑴包含（S)&(R)對映異構物呈大體純質形式，或以任一種比例混合。如此於替代例中，本發明提供一種包括選自下列之化合物之醫藥組成物： (R/SH2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基]-DL-高半胱胺酸 (S)-[2-(l-亞胺基乙基胺基）乙基高半胱胺酸；及 (R)_[2-(卜亞胺基乙基胺基）乙基]高半胱胺酸及其鹽、溶劑合物及生理功能衍生物。 -5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（2丨0X297公釐） PU2010 五、發明説明（3 ) ’本發明提供包括⑻例卜亞胺基乙基胺基權組成物。特佳態樣中，本發明提供包括⑻二：胺基乙基！基)乙基]_L-高半胱胺酸或其鹽之醫藥組成物。通合醫藥用之式⑴化合物之鹽類及溶劑合物為其中相對離子或結合溶劑為醫藥可接受性者。但含有非醫藥可接受性相對離子或相關溶劑之鹽類及溶劑合物屬於本發明之範圍」例如作為製備其它式⑴化合物及其醫藥可接受性鹽、落劑合物及生理功能衍生物之中間物。生理功能衍生物，，一詞表示具有與自由態式⑴化合物相同生理功旎之式⑴化合物之化學衍生物，例如經由於體内轉化而可具有相同功能。根據本發明，生理功能衍生物範例包含酿類’醯胺類及胺甲酸酯類；較佳酯類及醯胺類。根據本發明之適當鹽類包含與有機及無機酸或鹼生成之鹽類。醫樂可接受性酸加成鹽包含由下列各種酸生成之鹽 *氫氯故，氫溴酸，硫酸，檸檬酸，酒石酸，磷酸，乳酸，丙酮酸，乙酸，三氟乙酸，丁二酸，草酸，反丁烯二酸，順丁晞二酸，草醯乙酸，甲烷磺酸，乙烷磺酸，對-曱苯 % ’苯磺酸及羥乙基磺酸。醫藥可接受性鹼鹽包含銨鹽，驗金屬鹽如鈉及鉀鹽，鹼土金屬鹽如鈣及鎂鹽，及與有機驗如二環己基胺及N-甲基-D-葡萄糖胺形成的鹽。式⑴化合物之醫藥可接受性酯類及醯胺類具有酸基轉化成C^1貌基，芳基，芳基c1-6燒基或胺基酸酯或龜胺。式⑴化合物之醫藥可接受性醯胺類及胺基甲酸酯類具有 !II In —1 I 1---Μ-1 . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（4 ) 胺基轉化成Ci_6燒基’芳基，芳基cN6烷基或胺基酸醯胺或胺基甲酸酯。如前述，式⑴化合物如下N0S抑制檢定分析驗證為NO 合成酶抑制劑。因此’式（I)化合物及其醫藥可接受性鹽類、溶劑合物及生理功能衍生物可用於預防及治療適合使用N〇合成酶抑制劑，特別iNOS抑制劑的臨床病情。此等病情包含發炎清心，休克狀怨，免疫障礙，及胃腸活動力障礙。式⑴化 β物及其酱藥可接文性鹽類、溶劑合物及生理功能衍生物也可用於預防及治療中樞神經系統病包含偏頭痛。休克狀毖表示因過量產生Ν 〇引起的病症，例如敗血性休克出皿性休克，創傷性休克，或因猛暴性肝衰竭引起的休克，或使用細胞激素如TNF，匕-丨及IL_2治療，或細胞激素#生刎如5,6-二甲基黃婦酮乙酸治療引起的休克。發火病情及免疫障礙範例包含關節疾病例如關節炎（例如類風濕性關節炎，骨關節炎，彌補術關節衰竭），或胃腸例如潰瘍性結腸炎，柯恩氏病，及其它發炎性腸病）， =火及因感染引起的黏膜發炎，因非類固醇抗炎藥誘發的腸病變），肺臟方面（例如成人呼吸窘迫症候群，氣喘，囊性纖維化，或慢性阻塞性肺疾），心臟方面（例如心肌炎），神經組織方面（例如多發性硬化），胰臟方面（例如糖尿病及其f發症）、，腎臟方面（例如腎小球性腎炎），皮膚方面<例如皮炎，乾癬，濕疹，蓴痲疹），眼方面（例如青光眼）以及移植器官（例如排斥），及多器官病（例如系統性紅斑性狼瘡夕) -7- 準(CNS ) 210x^7^7 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

發明説明（5) 及病毒或細菌感染的發炎後遣症。此外，有證據顯示動玄自十从奶屑硬化因iNOS產生過量NO及 : = :(有或無再灌流)例如腦病變或缺血性心臟病。之股二，力病夂包含腸絞塞例如手術後腸絞塞及敗血病足％紋塞障礙。納中樞神經系統病一詞表低碑e α』衣不屋生過量NO促成的疾病例如 :、神病’焦慮不安，精神分裂，睡眠障礙，腦缺區神經系統（CNS)創傷，癲癇，多發性硬化，愛滋丙含）性癡呆，慢性神經變性病（例如LeWyB〇dy性癡呆、，了丁員氏病，巴金森氏病，或阿兹海默氏病）及急慢性疼、田及有關非用上腺素激性非膽鹼激性神經相關病症，例如異常勃起、肥胖及攝食過度。二陡疼痛a例包含肌肉骨頭痛，手術後疼痛及手術疼痛广丨又^疼，、只例包含慢性發炎性疼痛（例如類風濕性關節人及·關即火），神經病變疼痛（例如疱疹後神經痛，糖尿病相關神經病變，r π ^ + ,, —又神纟生痛，功能性腸障礙相關疼痛例如刺激性腸症候蕤，非、、α ，辟非心源性胸痛及交感神經維持的疼痛）以及癌症及纖維肌肉痛引起的疼痛。此外抑制Ν0合成酶具有下列優點··預防ΗΙν感染引起淋巴細胞知失，增加放射性治療過程腫瘤對放射性的敏感度及減少腫瘤生長、腫瘤進行、血管新生及腫瘤轉移。如此，本發明提供一種於哺乳類例如人類治療適合使用一氧化氮合成酶抑制劑例如1N0S抑制劑的臨床病情之預防或…療方去’遠方法包括投予治療有效量之式（I)化合物 8- 本纸張从適用中國國家標 --1^- n - I - i -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

、1T 經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 A7 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（6 ) 別，本鹽、溶劑合物或生理功能衍生物。^ 炎或氣喘之方法==療發炎及/或免疫病症如㈣療:自關節炎，氣喘，及:::提供一— 性合式⑴化合物或其醫藥可接受治療，特別用於哺乳，:力忐何生物心醫藥組成物，係用於抑制劑，例如1N〇==人類治療適合—氧化氮合成酶別，浐供一 # ^ ,劑的臨床病情的預防或治療。特」物=!式⑴化合物或其醫藥可接受性鹽、溶劑二二.、理功此何生物之醫藥組成物供預防或治療發炎及或免疫顯如關節炎或氣喘。較佳態樣中，提供—種包格式（I)化合物或其醫藥可拉a 、、寸丨人生物之醫藥组成物龜物偏頭痛。、…療關即犬、氣喘、腸絞塞及 f f治療效果需要的式⑴化合物或其醫藥可接受性鹽冷d D物或生理功能衍生物數量當然隨特定化合物、投藥途徑、接受治療的個體’及接受治療的特定障礙或疾病而異。本發明化合物可經口或藉注射以〇」至15〇〇毫克/ 千克/日，較佳0. 1至500毫克/千克/日之劑量投藥。成人之劑量範圍通常為5毫克至35毫克/日，及較佳5毫克至2克 /日。錠劑或其它以分立單元提供的劑型，方便地含有可以此種劑量或其數倍劑量發揮效果的本發明化合物，例如每單位含有5毫克至500毫克，通常約1〇毫克至2〇〇毫克。雖然式⑴化合物或其醫藥可接受性鹽、溶劑合物或生理 -9 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

• u n U 1/ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁j 訂-- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製發明説明（7 功能衍生物可單獨浐如此，本發明又：：二呈醫藥組成物投藥。其醫藥可接受^二二醫樂组成物包括式⑴化合物或可接爲性盡心7 物或生理功能衍生•，及醫藥分。又 a ^ $、形劑，及選擇性一種或多種其它治療成 ,:::t提供包括式⑴化合物或其醫藥可接受性鹽、溶二：二理功能衍生物之醫藥組成物用於製造適合使用 :=口成酶抑制劑如lN〇S抑制劑的臨床病情，例如發犬及/或免疫病症如關節炎或氣喘之預防或治療用藥之 =。較佳態樣中，提供一種包括式⑴化合物或其醫藥可 :=陡皿=^合物或生理功能衍生物之醫藥組成物用於迨k自關節火、氣喘、腸絞塞及偏頭痛等臨床病情之預防或治療用藥。 ’、 /交又中，’’活性成分”表示式⑴化合物或其醫藥可接受性鹽、溶劑合物或生理功能衍生物。、且成物包含適合經由下列途徑投藥者··經口，經腸外（，含皮下，皮内，肌肉，靜脈及關節内），吸入（包含利用多=計量劑量加壓氣霧劑，霧化器或吸入器）產生的細粒塵或霧，直腸及局部（包含經皮，頰用，舌下及眼内）投葵，但，適當途徑依據接受者病情及病理決定。組成物可:便地呈單位劑型，且可藉藥界眾所周知之任一種方法製備。各方法皆包含使活性成分與組成一種或多種附屬成分的载劑結合的步騾。通常，组成物係經由將活性成分與液體载㈣或細分固體載劑或二者均句緻密結合在一起，然後若有 10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 4! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 B7 五、發明説明（8 ) 所需將產物成型為所需組成物。本發明之適合經口投藥之組成物可呈分立單位例如膠囊劑，扁膠囊劑或錠劑各自含預定量活性成分；呈散劑或粒劑；呈於水液或非水液之溶液劑或懸浮液劑；或呈油/水乳液劑，或水/油乳液劑。活性成分也可呈大丸藥，紙劑或糊劑。錠劑選擇性可與一種或多種辅助成分藉壓縮或模塑製造。壓縮錠係於適當機器内壓縮呈自由流動形式的活性成分如粉末或顆粒’選擇性混合黏結劑，潤滑劑，惰性稀釋劑，潤滑、界面活性或分散劑。模塑錠係於適當機器内模塑粉狀化合物以惰性液體稀釋劑濕潤的混合物。錠劑可選擇性包衣或加刻.痕，且可調配成缓慢或以控制方式釋放其中所含活性成分。細外技藥用組成物包含水性及非水性無菌注射溶液劑其含有抗氧化劑，緩衝劑，制菌劑及溶質，溶質可使組成物與接受者的血液呈等張性；及水性及非水性無菌懸浮液劑其包含懸浮劑及增稠劑。配方可呈單位劑量或多劑量容器包裝例如密封安瓿及小瓶，且可儲存於凍乾情況，恰在使經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 用前僅需添加無菌液體載劑如簦水或注射用水。臨時注射溶液劑及懸浮液劑彳由前述無菌散^、粒劑及鍵劑製備。直腸投藥組成物可呈含尋常載劑，如可可脂或聚乙二醇之栓劑劑型。口腔内局部投藥組成物例如頻用或舌下用包含活性成分於經錄味基劑如蔑糖及阿拉伯膠或西黃蓍膠的口含粒，及本紙張尺度適财> Α4· ( *· 11 - 五、發明説明（9) 包括活性成分於明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯糖等基劑之舌下錠。較佳單位劑量組成物含有前述活性成分有效劑量或其適當分量。須了解除前文特別說明之成分外，本發明組成物包含業界習知用於該類型組成物的化學劑，例如適合經口投藥之化學劑包含矯味劑。 —根據本發明之又一態樣，提供一種製備式⑴化合物或其鹽、溶劑合物或生理功能衍生物之方法，該方法包括·· (1)式（Π)化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) CO,Η ΝΗ (Π) 或其對映異構物、鹽或經保護衍生物與式（ΙΠ)化合物 η,Λ； (HI) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製或其鹽反應，其中L為離去基，最適合Gw烷氧基，如乙氧基或烷硫基，芳烷硫基或芳硫基例如芊硫基或丨_或其基T硫基；接著為下列各步驟可以任一種順序進行： (ii) 選擇性去除保護基； (iii) 選擇性由對映兴構物混合物中分離一種對映異構物· 12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 502010 A7 B7

C〇,H 五、發明説明（1〇) (iv)將產物選擇性轉化成對應鹽、溶劑合物或其生理功能衍生物。當L為Cw烷氧基時，如上步騾⑴之反應可於鹼性例如1)118至11，適合1^10.5，及於適當溫度例如-5。〇至 20。〇,適合0至R進行。當[為燒硫基，芳垸硫基，或芳硫基時，反應可於有機溶劑如四氫呋喃或Cw醇如乙醇於中等溫度如10至40 °C，適合於周圍溫度進行。式（III)化合物及其鹽類為市面可得，或可藉業界人士眾所周知的有機化學方法製備，例如由shearer等述於四面體函件 1997, 1L 179-182。式（II)化合物及其鹽，及經保護衍生物可由高胱胺酸：

HOX 我其經保護衍生物製備胱胺酸或其經保護衍生物；及與式（丨v)化合物 L·1 (IV) 或其經保護衍生物偶合，其中Li為離去基如卣原子如溴或烷基，芳基或芳烷基磺酸酯如甲苯磺醯基。割裂高胱胺酸或其經保護衍生物之雙硫鍵聯形成高半胱 -13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ................... i_____— 1雪1 —屋 1 ·__ί I—............. in ·ϋι —j |墨| I 1 ====— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 502010 經濟部中央標準局員工消費合作社印裳 A7 B7 五、發明説明（11) 胺酸或其經保護衍生物可藉業界人士眾所周和之方法，例如使用鈉於液態氨，二硫赤絲醇或硼氬化鈉進行。咼半胱胺酸之經保護衍生物，例如N -第三丁氧裝基古半腕胺酸第三丁酯可與式（IV)化合物於反應條件下於適Z有機溶劑（例如甲苯）於鹼如1，8_二吖雙環[5 4 〇]十_硝7 或類似化學劑（業界人士已知）媒介的反應反應。高胱胺酸，式（IV)化合物及其經保護衍生物為市售，/ 可藉業界人士眾所周知的有機化學方法製備。 3 製備式（I)化合物使用的保護基可以習知方式使用，例使用TheodoraWGreen述於，，有機合成保護基"第二版口威利父子公司，1991年）之方法，其中也敘述保護美的= 除方法。前述反應中，第一胺類適合使用醯基如第二卞氧羧基保護，可於酸性條件下例如使用氨氯酸 ^ 處理，或藉氫解去除。欠1 上如業界人士了解，使用此等保護基包含於式（⑴化合叉保護胺基，以輔助於其它基存在下選擇 1千1王舌除一個姜，擇性官能化單一胺基官能基。例如爷氧羰基π :除。業界人士了解其它習知手段可利用的：人保邊東略，如Theodora W Green(參見上、、… . 又）所述。本發明之對映異構化合物可藉下列方法庐用光學活性層析柱，酶光學分割方法如利非對映齐構物而分離對應外消旋混合物中之各、、^ (b)藉前述方法由適當光學活性中間物直種成$ ，或钱' 3成。 -14- 本紙張尺度適用f關家縣（CNS ) M規格（2iQx 297公楚 II. 蜷— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 、11 502010 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12) 式（I)化合物選擇性轉化成對應鹽可方便地經由與適當酸或鹼反應進行。式（I)化合物選擇性轉化成對應溶劑合物或生理功能衍生物，可藉業界人士眾所周知的方法進行。根據又一態樣，本發明提供製備式⑴化合物之新穎中間物，例如如上定義之式（11)化合物，或其對映異構物、鹽或經保護衍生物；特別選自下列之化合物： (S)-2,7-一胺基-5-疏庚酸； (S)-7N-+氧羰基-2,7-二胺基硫庚酸； (R，S)-2,7-二胺基〇-硫庚酸； (R，S)-7N-芊氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸； (S)-2N-第三丁氧羰基-2，^二胺基硫庚酸； (S)-2N-第三丁氧羰基-7N-苄氧羰基_2,7_二胺基_5·硫庚酸； (8)-第三丁基-2〜第三丁氧羰基-7〜芊氧羰基_2,7-二胺基_ 5-硫庚酸酯； (S) -第二丁基_2N-第二丁氧羰基_2,7 -二胺基硫庚酸酿· (1^，8)-21^-弟二丁氧叛基-2,7-二胺基-5-硫庚酸； (R,S)-2N-第三丁氧羰基-7N-苄氧羰基-2,7-二胺基硫庚酸； (11，8)-第三丁基-2氺第三丁氧羰基刀>4-芊氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸酯；及 (R，S)-第三丁基-2N-第三丁氧羰基-2,7-二胺基〇_硫庚酸醋。某些式（I)化合物之經保護基衍生物也可用作製備式⑴ 化合物，特別選自下列化合物之中間物： (S)-2N-第三丁氧羰基-7N-(卜亞胺基乙基二胺基石丸 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} -- 訂 502010 A7 __ B7 五、發明説明（13) 酸； (S)-第三丁基-2N-第三丁氧羰基亞胺基乙基）_2,7-二胺基〇-硫庚酸酯； (R，S)-2N-第三丁氧羰基-7N-(1_亞胺基乙基）_2,7_二胺基_5- 硫庚酸； (R，S)-第三丁基·2Ν-第三丁氧羧基-7n_(1-亞胺基乙基）-2,7-二胺基-5-硫庚酸酯；及其鹽及溶劑合物。 4更了醉本發明’舉出下列實例供舉例說明。合成例實例1 (D..-[2-(l-亞胺基乙基胺基）乙基二^半胱胺酸或（s)_7N: 亞胺基乙基）-2,7-二胺基-5-硫庚酸合成 ⑴(8)-7〜爷氧鍰基-2,7-二胺基-5-硫！^^ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂於液態氨（130毫升）冷卻至_80t：内加入^高胱胺酸（3克 )，接著加入鈉金屬（1.06克）至藍色持續15分鐘。經此時間伋，加入甲苯磺酸N-苄氧羰基·乙醇胺鹽（816克），及反應 .於周圍溫度攪摔至氨氣揮發為止。殘餘物溶解於水（8〇毫升 )’及以O.SMEDTA·鋼鹽（2毫升）處理。溶液pH以2N硫酸调整至7.0 ，過濾去除生成的白色沉澱，以冷水及丙酮洗烏及於真空乾燥器脫水獲得標題化合物呈白色固體5 · 3 克。質譜M + H 3 13

502010 A7 _______ _B7 _ 五、發明説明（14) (ii) (-二胺基-5-硫庚酸 (S)-7N-苄氧羰基_2,7_二胺基-5-硫庚酸（5.3克）以45%溴化氫於乙酸（23亳升）處理1小時。形成棘手膠體，添加醚至混合物確保產物完全沉澱。傾析去除液體，固體溶解於 SVM。熱溶液以吡啶處理至沉澱持續不退，使混合物冷卻至室溫。所得沉澱經過濾去除’及由SVM/水再結晶獲得標題化合物呈白色固體2.2克，mp 222。(：（分解）。 (沿)(2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基]-1-而半脱胺酸 (S)-2,7-二胺基-5·硫庚酸（2 Π克）於0_5它攬拌入ιΝ •氯氧化鈉（16.75毫升）至pH 10.5。溶液内分成數份加入乙月亏酸乙酯氫氯酸鹽（2.07克），pH以IN NaOH維持於1〇 5。反應完成時’ pH以IN HC1調整至3，混合物施用至杜威 (Dowex)AGX8H +離子交換柱。拄洗滌至中性，然後以2 5M 口比呢洗滌’然後再度以水洗滌至中性。以〇. 5 Μ氨溶離，及於蒸發後收集所得寧德林（ninhydiin)陽性部分。所得殘餘物以IN HC1處理至PH 4.5，蒸發至乾。然後殘餘物以乙醇處理及蒸發至乾，然後以乙_處理，及乙醚蒸發至乾，獲得標題化合物之一鹽酸鹽呈硬質白色發泡體。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 產物之顯微分析與1.75水合物符合一致：實測值（計算值）·· C 33.56 (33.45) ; Η 7.11 (7.49)，N 13.74 (14.63) 實例2 (R/S)-[2-(卜亞胺基乙基胺基）乙基高半胱胺酸係藉類似實例1所述方法始於D，L_高胱胺酸製備。產物之4 NMR係與提示之結構符合一致。 -17- 本纸張尺度適^ 502010 A7 B7 五、發明説明（15) 實例2a 實例2外消旋產物使用光學活性Crownpac( + )HPLC柱及於pH 2以三氟乙酸溶離，而大體光學分割成兩種组成對映異構物[同實例1及4之（S)產物及實例3之（R)產物]。 (S) -丨2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基1-L -南半脱胺酸產物之顯微分析係與二-三氟乙酸鹽水合物C8H17N3〇2S. (cf3co2h)2. h2o 符合一致。實測值（計算值）：C 3 1.06 (30.97) ; Η 4.53(4.55)，Ν 9.08 (9.03)〇〇光譜（0.川鹽酸水液）210( + 0.80)11111。 (R) -U-(i-亞胺基乙基胺基）乙基1-D-高半胱胺酸產物之顯微分析係與鹽形式符合一致。1.67三氟乙酸鹽 • 0.3 鹽酸鹽.1.5 水合物 C8H17N302S. (CFsCC^Hh.u. HC10 3. 1.5 H20 實測值（計算值）·· C 30.18 (30.40); Η 4.92 (4.97)，Ν 9.53 (9.41)，S 7.41(7.18)，Cl 1.86 (2.38)，F 2 1.36 (2 1.28) 〇 CD 光譜（〇. IN 鹽酸水液）2 10 (-0.64) nm。實例3 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} (R)-[2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基；|-D-高半胱胺酸係籍類似實例1使用之方法始於D-高胱胺酸製備。實例4 (S) -〖2-n-亞胺基乙基胺基）乙基高半胱胺丝:^合成_ (1) (S)-7N-苄氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸於冷卻至-80 °C之液態氨（430毫升）内加入卜高胱胺酸 - 18- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標率局員工消費合作社印製五、發明説明（16) (1〇克，〇7.45耄莫耳）。移開冷卻浴，及以25分鐘時間逐伤加入鈉金屬（318克，138 %毫莫耳），使溫度升高至回 "丨iw皿度又持績回流>攪拌3〇分鐘，隨後加入曱苯磺酸N-节氧羧基-乙醇胺鹽（25克，74 9毫莫耳），及反應於周圍溫度抗拌隔夜土氨氣揮發去除。殘餘物於4〇與水（25〇毫升 )共同攪拌10分鐘’冷卻至室溫及過濾。溶液之ρΗ以2Μ 硫fe调整至7.0 ，所得白色沉澱經過濾出，以冷水及丙酮洗滌及於真至乾燥器脫水獲得（S)-7N_罕氧羰基夂7_二胺基-5-¾庚酸呈白色固體，Mp 24〇它（分解）。 (11) 酸 (8)-7心卞氧羰基-2,7-二胺基_5-硫庚酸（155克，49 67 毫莫耳）添加至氫氧化鈉（6·357克，159毫莫耳）於水（110 毫升），接著加入二呤烷（55毫升）。混合物内加入二碳酸二第二丁酯（16.26克，74.5毫莫耳），及混合物於室溫於氮氣下攪拌隔夜。於此段時間後，過遽去除沉殿固體，加入甲苯（300毫升）及分離各層。水層經冷卻，及使用1N HC1調整為酸性至pH約3。酸化部分以甲苯（4 X 1 〇〇亳升）及乙酸乙酯（3 X 1 〇〇毫升）萃取，合併有機部分以硫酸鎂脫水。於減壓下濃縮合併有機層獲得（S)jN-第三丁氧羰基-7N_ 芊氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸呈白色膠體。質譜M + H 4 13 (iii) (S)-2N-第二丁氧幾基-2,7-二胺基-5-硫庚酸甲酸鹽 -19 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐） ---I-------~ (请先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 502010 A7 B7 五、發明説明（1乃於氮氣氛下於冷卻至5 °c之甲醇（50亳升）内全部—、A力入鈀黑（0.678克）。冷溶液内以1分鐘時間加入甲醇（5〇矣升）及甲酸（11毫升，196毫莫耳）之混合物，接著以2分= 時間加入（S)-2N-第三丁氧羰基-7N-苄氧羰基_2,7_二胺基^ 5-硫庚酸（2克，4.85毫莫耳）於甲醇（50毫升）。任混合物於周溫攪掉隔夜，加入更多量鈀黑（257毫克），及又持續攪摔 3小時。反應混合物經海夫洛（Hyflo)過濾，及於減壓下濃縮。殘餘物分配於水與乙酸乙酯，水層以更多量乙酸乙醋洗滌，水層濃縮獲得（S)-2N-第三丁氧羰基-2,7-二胺基_5_ 硫庚酸甲酸鹽呈白色固體。質譜 M + H 279(65%)，223(100%) ㈣(S)-2N-第三丁氧幾基- 亞胺基乙基）-2,7 -二胺基- 5-硫庚酸鹽酸鹽於室溫於氮下於（S)-2N-第三丁氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸甲酸鹽（2.154克，6.59毫莫耳）於乙醇（50毫升）内加入 S-(l-莕基甲基）硫乙Μ酸鹽鹽酸鹽（3.70克，14.75毫莫耳），接著加入乙醇（5 0毫升）。於周圍溫度攪;拌，2小時後固體溶解及溶液攪拌隔夜。反應經真空濃縮，殘餘物以水處理，水相以乙醚（4 X 50毫升）洗滌。真空濃縮水液部分獲得（S)-2N-第三丁氧羰基-7Ν-(1-亞胺基乙基）-2,7-二胺基_5_ 硫庚酸鹽酸鹽呈白色吸濕性固體。質譜 Μ + Η 320(75%)，264(100%)，220(15%) (ν) (S)-『2-n-亞胺基乙基胺基）乙基1-L-高半胱胺酉 20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂泉經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中夬標隼局員工消費合作杜印製 502010 A7 B7 五、發明説明（18) 於（S)-2N-第三丁氧羰基-7N-(1-亞胺基乙基）_2,二胺基 -5 -硫庚酸鹽酸鹽（3.0 8 6克，8 · 69亳莫耳）缓慢加入4N鹽酸 /二哼烷（20毫升），反應混合物於周圍溫度攪拌隔夜。反應經真空濃縮，殘餘物溶解於水及以乙鍵（3 X 20毫升）洗務。水層經真空丨辰纟街獲付標題化合物呈鹽酸鹽，呈吸濕性固體。質譜 M + H 220 ; 4 NMR(D20)5 : 2.1-2.35 (5H，m)，2.76 (2H，t)，2·87 (2H，t)，3·51 (2H，t)，4.12 (1H，t)。實例5 ) - [2 - (1 -亞肤_基乙基胺基）乙基1-L-高半跣胺酸之合邊^ ⑴(s)_第三丁基_2心第三丁氧羰基-逆-芊氧羰基基-5-硫庚酸酯於N_第三丁氧羰基半胱胺酸第三丁酯（經由以二硫赤絲醇還原N-第三丁氧羰基胱胺酸第三丁酯製備）（291毫克， 1氅莫耳）於無水甲苯（20毫升）之溶液内加入N_苄氧藏基乙 S手胺甲苯磺酸鹽（3 4 9毫克，1毫莫耳）及1,8 -二η丫雙環 [5.4.0 ] *[ 碳-7 -烯( 1 5 0微升，1毫莫耳），混合物於室溪於氮下激烈攪拌隔夜。混合物分配於各5 0毫升乙酸乙酿及5 0 氅升1Ν鹽酸水液。合併額外有機萃出物，萃出物以碳酸氫鈉水液、水及鹽水洗滌，然後脫水及蒸發。藉柱式層析純化獲得標題化合物。質譜 Μ + Η 469(25%)，369(100%) 替代方法中，實例4步驟（ii)產物使用Ν，Ν-二甲基甲趋胺 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0'〆297公楚） (请先閲讀背面之注意事項存填寫本頁) · 訂 502010 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（19) 二-0-第三丁基縮醛或〇-第三丁基M，卜三氯乙肟酸鹽轉化獲得標題化合物呈白色結晶固體。 (ii)(S)-第―三丁基-2N-第三丁氧羞羞^2,7-二朦酸酯甲酸鹽於（S)-第三丁基-2N-第三丁氧羰基氧羰基-2,7-二胺基-5-硫庚酸酯（1克，2.1¾莫耳）於乙醇（5〇毫升）之溶液内加入氫氧化鈀/碳（20%，0.5克）及甲酸銨（134克）。懸浮液回流2.5小時，冷卻及經過氧化矽柱塞過濾，以1 ; 1 乙醇-水徹底洗滌，及蒸發獲得標題化合物呈甲酸鹽。質譜M + H 335

(in) (S)-第三丁基-2N-第三丁氧羰某-7Ν-Π -眨腌^乙某V 2.7- 二胺基-5-硫庚酸酯鹽酸鹽步騾（]^)所得粗製（5)-第三丁基-2〜第三丁氧藏基-257-二胺基-5-硫庚酸酯甲酸鹽以50毫升四氫呋喃調成漿液，液體經清洗及與S-(l-莕基甲基）硫乙肟酸鹽鹽酸鹽（〇.5克，2 毫莫耳）混合，及於室溫攪拌24小時。蒸發去除溶劑，殘餘物分配於各25毫升醚及水，接著以醚洗2次；合併水液回萃出物，及蒸發獲得白色糊狀物。凍乾兩次獲得標題化合物呈白色吸濕性固體。質譜 M + H 376(100%)，320(15%)，276(12%)。 (iv) (S)-S-『2-(卜亞胺基乙基胺基）乙羞上胺酸 (S)-第三丁基-2N-第三丁氧羰基JN-O-亞胺基乙基）- 2.7- 二胺基-5-硫庚酸酯鹽酸鹽使用4N鹽酸於二哼烷藉實 -22- 本纸悵尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) • 衣. 502010 A7

例4步驟（v)所述方法脫去休邊獲侍（S)_S-[2-(l-亞胺基乙土胺基）乙基]-鬲半胱胺酸。標題化合物之特徵資料符合實例4產物。生物活性 1'^^ΛΛ動脈環_立一eNOS及iNOS夕抑丑於大鼠主動脈環原位抑制eN〇s& iN〇s係藉測量因N〇合成的抑制引起環張力增高而評估。供研究基本張力（反映 eNOS)如㈤述準備附有完整内皮的胸腔主動脈環（Rees et aj.，（1989) Br· J. Pharm〇l·丛，418_424)及對抑制劑於閥值濃度之phenylephnne(ED1G約等於10nM)#在下獲得累進濃度曲線。欲研究謗生平滑肌張力（反映lN〇s)，剥除内皮之環如觔述於约ED9〇之phenylephrine存在下曝露於 LPS(0.1微克/毫升，得自傷寒桿菌）歷6小時（以^ ^ (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. JJX 541-547)。於此期間因謗生xNOS造成張力漸漸損失。然後對抑制劑獲得累進濃度如下。結果示於下表： -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

*1T 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 iNOS IC5〇 (μΜ) eNOS %抑制@300 μΜ 選擇性iNOS相對於eN〇s 實例1 0.73 43 >500 倍實例2 0.45 53 >500 倍實例3 6.6 20 >150 倍 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 502010 A7 B7 五、發明説明（21) 相反地，相同試驗中2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基半胱胺鹽鉍鹽（WO 93/13055之實例4)對iNOS之選擇性相對於 eNOS僅為33倍。 2♦多片之nNOS抽制作m 化合物於大鼠腦切片對nNOS之影響係如FurHiie et al (1994) J. Biol· Chem·逾，26677,26683 及 LiZasoain et al (1995) J. Neurochem. 6±y 63 6-642 所述測定。 KC1 (54 mM)刺激NO合成之測量方式係於37 t於 Mcllwain剁碎（〇 2毫米χ 〇 2毫米）大鼠大腦皮質切片將 14C-精胺酸轉成14C-瓜胺酸經歷2小時時間，接著於無化合物或咼KC1存在下前培育1小時測量j

貫例1化合物測得IC5〇為220 μΜ，提示iNOS相對nNOS 之選擇性約300倍。乂匕合物之口服生體利用率之測哥古法動物處理：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 小氣（每個時間點3頭）經靜脈給藥（1〇毫克/千克）及以水 ♦液4驗化合物口服給藥（5〇毫克/千克）。投藥後於固定時間間隔採血樣，藉離心準備血漿。樣本儲存於-20 t：至分析。血漿内化合物之分析·· 血瘦（50微升）脫去蛋白質，及化合物使用第四銨劑衍生。然後樣品注射至HPLC系統，使用質譜檢測測定化合物濃度。藥力學分析：如上方法所得血漿濃度輸入藥力學軟體包封（PKCAL v -24- 观010 A7 B7 五、發明説明（22) 1 · 2 s)’及資料使用未分腔室方法匹配。化合物之口月良生體利用率係藉比較軟體對口服算出的曲線下方面積（AUC)值與靜脈投藥之AUC值測定。將靜脈投藥之末相時間點配合獲得半生期。發現（S)-[2_(l-亞胺基乙基胺基）乙基高半胱胺酸具有口服生體利用率55%，及半生期5.7小時。於大鼠以靜脈注射及口服劑量10毫克/千克重複試驗， (SH2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基]-L-高半胱胺酸具有生體利用率92% 〇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）

Claims

502010 A8 B8 C8 m Η,Ν* 申請專利範圍 .C〇，H (11)· 或其對映異構物、鹽或經保護衍生物與式（III)化合物 CHn (ΠΙ) HN L 或其鹽反應，其中L為離去基；接著為下列各步騾可以任一種順序進行： (li)選擇性去除保護基； (iii) 選擇性由對映異構物混合物中分離一種對映異構物； (iv) 將產物選擇性轉化成對應鹽、溶劑合物或其生理功能衍生物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） /K 申請曰期 87· 1· 14. 案號 87100434 類別修正 _•觸 ⑽年3月修正本) A4 C4 502010 翁1專利説明書中文發明新型名稱英文姓名國籍作為一氧化氮合成酶抑制劑之醫藥組成物 A PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR USE AS NITRIC OXIDE SYNTHASE inhibitor 發明創作人住、居所 1·理查笑斯风德賓斯 2·馬丁詹姆士崔斯路爾 3.卡爾維透德法蘭茲曼 4.安松尼約瑟法蘭德 5·哈歐德法蘭西斯侯德森 6.理查葛雷漢諾雷^ 7·岱爾大衛瑞斯 8.大衛艾倫守爾均英國 1·英國薩瑞郡雪雷市比菜爾路1號 2. 英國劍橋市史岱勳路1號 3. 英國倫敦市菟思山莊北史堤德路6號 4. 英國赫茲郡史蒂芬奇市甘奈兒梧得路 5. 英國肯德郡北肯漢市派克蘭雷區白寇符特路69號 6. 英國赫茲郡史蒂芬奇市甘奈兒梧得路 7. 英國肯特郡凱斯東市雷克斯路13號 8. 英國肯特郡北肯漢市彤奇巷9號裝訂經濟部4曰慧时是，^;Η工消骨合作社印製三、申請人姓名 (名稱）國籍住、居所 (事務所）代表人姓名

英商葛蘭素集團有限公司英國英國米“賽克斯郡格林福德市柏克力大道葛蘭素大廈格拉罕布瑞登本纸掁尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐線括種用於作為一氧化氮合成酶抑式（1)化合物：制劑之醫藥組成物，包 HN-

co2h (I) 2 (請先¾讀背面之注意事項再填寫本頁) 或其鹽、溶劑合物、或生理功能衍生物及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。根據申請專利範圍第丨項之醫藥組成物，包括下列之式 (1)化合物 (汉/s)-[2-(l-亞胺基乙基胺基）乙基]_dl_高半胱胺酸亞胺基乙基胺基）乙基]-L•高半胱胺酸；及 (R)-[2-(l-亞胺基乙基胺基）乙基]-高半胱胺酸或其鹽、溶劑合物或生理功能衍生物。〇·根據申請專利範圍第i項之醫藥組成物，包括其為（s)_ [2-(1-亞胺基乙基胺基）乙基]-L -高半胱胺酸之式（！）化合物或其鹽、溶劑合物或生理功能衍生物。經濟部中夬榡準局員工消費合作社印製 4.根據申請專利範圍第1至3項中任一項之醫藥組成物，用於預防或治療選自關節炎，氣喘’腸絞塞及偏頭痛之臨床病況。 '根據申請專利範圍第1至3項中任一項之醫藥組成物，其中式（I)化合物或其鹽、溶劑合物或生理功能衍生物係製備自包括下列之方法： (1)式（II)化合物 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）