CN111410661B

CN111410661B - 帽依赖性内切核酸酶抑制剂及其用途

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Publication number: CN111410661B
Application number: CN201910829970.5A
Authority: CN
Inventors: 周雨恬; 刘建波
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-01-04
Filing date: 2019-09-04
Publication date: 2023-05-05
Anticipated expiration: 2039-09-04
Also published as: CN111410661A

Abstract

本发明公开了一种帽依赖性内切核酸酶抑制剂及其用途，依赖性内切核酸酶抑制剂含有下式(I)、(II)、(III)所示的杂环化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物或结晶，

Description

帽依赖性内切核酸酶抑制剂及其用途

技术领域

本发明涉及具有帽依赖性核酸内切酶抑制活性的多取代多环化合物、其前药和含有它们的药物组合物。

背景技术

正粘病毒具有负义单链RNA基因组，并且在感染细胞的细胞核中复制，因为它们缺乏产生帽结构以产生其自身mRNA的机制。正粘病毒家族的成员具有带内切核酸酶活性的RNA依赖性RNA聚合酶，其切割细胞mRNA的带帽5'末端的一部分；然后RNA聚合酶使用切割产物作为合成病毒mRNA的引物。这个过程被称为抢帽。该核酸内切酶已被公认为开发有效针对正粘病毒的抗病毒药物的有希望的靶标。ACS Med.Chem.Letters,2014,vol.5,61-64.该内切核酸酶的抑制剂已有公开，例如，在WO2015038660和US20150072982、WO2010147068和US20130197219中，其报道了这些抑制剂可用于治疗哺乳动物的流感感染。

正粘病毒家族包括甲型流感、乙型流感和丙型流感(所有这些都可以感染人类)，以及一些通常不感染人类的其他几种病毒。甲型流感是人类中这些病原体中毒性最强的，通常占典型流感季节期间严重流感病例中的大多数。流感是由于流感病毒的感染而引起的急性呼吸道感染病，据估计，尽管广泛使用疫苗来降低流感的发病率，但全世界每年有多达29万至65万人死于流感；而在中国，每年有数千万人感染流感，流感伴随有高的罹患率和死亡率。在婴幼儿、老年人等高风险人群中是特别重要的疾病，老年人中，肺炎并发率高，老年人占了因流感而死亡的人数的大多数。因此非常需要有效治疗流感尤其是甲型流感的抗病毒疗法。现在市场上常用的抗流感药物是：抑制病毒的脱壳过程的兴梅屈尔(Symmetrel，商品名：金刚烷胺(Amantadine))或盐酸金刚乙胺(Flumadine，商品名：金刚乙胺(Rimantadine))、抑制病毒自细胞中出芽释放的作为神经氨酸酶抑制剂的奥塞米韦(Oseltamivir，商品名：达菲(Tamiflu))或扎那米韦(Zanamivir，商品名：瑞乐沙(Relenza))。但是，出于对耐药株的出现或副作用的问题、以及病原性或致死性高的新型流感病毒的世界性大流行等的担心，人们希望开发出新型机理的抗流感药物。

发明内容

本发明的目的是提供具有抗病毒作用、特别是流感病毒的增殖抑制活性的化合物。本发明另外的目的通过将用于向生物体施与(例如口服施与)的化合物进行前药化，提供在施与后可高效率地在体内被吸收、显示高的药理效果的化合物。本发明更优选提供通过在向生物体施与后、具有帽依赖性核酸内切酶抑制活性，而抑制流感病毒的增殖的化合物和含有该化合物的药物。

本发明提供以下所示的发明。

本发明提供抑制正粘病毒(包括甲型流感、乙型流感和丙型流感)复制的化合物。不受理论束缚地，据信这些化合物通过抑制病毒聚合酶的内切核酸酶功能而实现其抗病毒作用。因为这种内切核酸酶在甲型流感病毒(同上)中高度保守，所以这些化合物特别适用于治疗甲型、乙型流感。

本发明的技术解决方案：

一种帽依赖性内切核酸酶抑制剂，其含有下式(I)、(II)、(III)所示的杂环化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物或结晶，其特征是：

其中：

(1)X代表CR^a或N,R^a独立地表示氢原子，卤素，氰基，烷基等。

(2)Y¹,Y²代表O或S。

(3)P^R选自H、-C(＝0)-P^RO、-C(＝0)-P^R1、-C(＝0)-L-P^R1、-C(＝0)-L-0-P^R1、-C(＝0)-L-O-L-O-P^R1、-C(＝O)-L-0-C(＝0)-P^R1、-C(＝0)-0-P^R2、-C(＝0)-N(P^R2)₂、-C(＝0)-0-L-0-P^R2、-CH₂-0-P^R3、-CH₂-0-L-0-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-0-P^R3、-CH(-CH₃)-0-C(＝0)-0-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-N(-K)-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-O-L-O-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-0-L-N(P^R3)₂、-CH₂-0-C(＝0)-N(-K)-L-O-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-N(-K)-L-N(P^R3)₂、-CH₂-0-C(＝0)-0-L-0-L-0-P^R3、-CH₂-0-C(＝0)-0-L-N(-K)-C(＝0)-P^R3、-CH₂-O-P(＝0)(-OH)₂、-CH₂-O-P(＝0)(-OBn)₂、-CH₂-P^R4、-C(＝N-P^R5 ₂)(-NP^R5 ₂)；式中，L为直链或支链状的低级亚烷基、或直链或支链状的低级亚烯基；K为氢、或直链或支链状的低级亚烷基；P^R0为可被取代基组F取代的低级烷基或可被取代基组F取代的低级烯基；P^R1为可被取代基组F取代的碳环基、可被取代基组F取代的杂环基、可被取代基组F取代的低级烷基氨基或可被取代基组F取代的低级烷基硫基；P^R2为可被取代基组F取代的低级烷基、可被取代基组F取代的碳环基或可被取代基组F取代的杂环基；P^R3为可被取代基组F取代的低级烷基、可被取代基组F取代的碳环基、可被取代基组F取代的杂环基、可被取代基组F取代的低级烷基氨基、可被取代基组F取代的碳环低级烷基、可被取代基组F取代的杂环低级烷基或低级烷基甲硅烷基；P^R4为可被取代基组F取代的碳环基或可被取代基组F取代的杂环基；P^R5为可被取代基组F取代的低级烷基。

(4)取代基组F为氧代、低级烷基、羟基低级烷基、氨基、低级烷基氨基、碳环低级烷基、低级烷基羰基、卤素、羟基、羧基、低级烷基羰基氨基、低级烷基羰基氧基、低级烷基氧基羰基或低级烷基氧基、氰基、硝基；其中，碳环低级烷基表示被1或2个以上的碳环基取代的低级烷基。

(5)A¹代表CR^1AR^1B、S或O；A²代表CR^2AR^2B、S或O；A³代表CR^3AR^3B、S或O；A⁴独立代表CR^4AR^4B、S或O；由A¹，A²，A³，A⁴所形成的环的成环原子，与A¹相邻的氮原子和与A⁴相邻的碳原子包括1或2个杂原子；R^1A和R^1B独立地表示氢原子，卤素，烷基等；R^2A和R^2B独立地表示氢原子，卤素，烷基等；R^3A和R^3B独立地表示氢原子，卤素，烷基等；R^4A独立地表示氢原子，卤素，烷基，R^4B独立地表示氢原子，卤素，烷基等；并且R^3A和R^3B可以与其相邻的碳原子一起形成非芳族碳环或非芳族杂环。m是0、1或2；n是0、1或2。

(6)B¹是氢、任选被取代基组Q取代的低级烷基、任选被取代基组Q取代的碳环式基、任选被取代基组Q取代的碳环低级烷基、任选被取代基组Q取代的杂环式基或者任选被取代基组Q取代的杂环低级烷基。

(7)B²是氢、低级烷氧基、低级烷基硅烷基、任选被取代基组Q取代的低级烷基、任选被取代基组Q取代的低级烯基、任选被取代基组Q取代的碳环式基、任选被取代基组Q取代的碳环低级烷基、任选被取代基组Q取代的碳环氧基低级烷基、任选被取代基组Q取代的杂环式基、任选被取代基组Q取代的杂环低级烷基、－Z－N(R^Z1)－SO₂－R^Z2、－Z－N(R^Z3)－C(＝O)－R^Z4、－Z－C(＝O)－N(R^Z7)(R^Z8)或－Z－N(R^Z9)(R^Z10)，其中，R^Z1、R^Z3、R^Z4、R^Z7、R^Z8、R^Z9、R^Z10分别独立地是氢、任选被取代基组Q取代的低级烷基或任选被取代基组Q取代的碳环式基，R^Z2是任选被取代基组Q取代的低级烷基或任选被取代基组Q取代的碳环式基，Z是单键或者直链或支链状的低级亚烷基。

(8)B³是低级烷氧基、低级烷基硅烷基、低级烷基、低级烯基、碳环式基、碳环低级烷基、碳环氧基低级烷基、杂环式基、杂环低级烷基、－Z－N(R^Z1)－SO₂－R^Z2、－Z－N(R^Z3)－C(＝O)－R^Z4、－Z－C(＝O)－N(R^Z7)(R^Z8)或－Z－N(R^Z9)(R^Z10)，其中，R^Z1、R^Z2、R^Z3、R^Z4、R^Z7、R^Z8、R^Z9、R^Z10分别独立地是低级烷基或碳环式基，Z是单键或者直链或支链状的低级亚烷基。

取代基组Q：氢、卤素、氰基、羟基、羧基、低级烷基、卤代低级烷基、低级烷基氧基、羟基低级烷基、碳环式基、杂环式基、碳环低级烷基氧基、卤代低级烷基氧基、低级烷基羰基、低级烷基羰基氧基、低级烷基氧基羰基、低级烷基氨基、低级烷基羰基氨基、低级烷基氨基羰基或低级烷基磺酰基；

低级烷基是碳原子数为1～6的直链或支链状的烷基；直链或支链状的低级亚烷基是2价的碳原子数为1～6的直链或支链状的烷基；低级烯基是碳原子数为2～6的直链或支链状的烯基；碳环式基或碳环是碳原子数为3～20的碳环式基或碳环；杂环式基或杂环是环内具有1个以上从O、S和N中任意选择的相同或不同杂原子的杂芳基、非芳族杂环式基、双环稠合杂环式基或三环稠合杂环式基、或者杂芳环、非芳族杂环、双环稠合杂环或三环稠合杂环。

(9)R¹为氢、卤素、羧基、氰基、氧代基、硫代基、甲酰基、磺酰胺基、低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷基硫代基、低级烷基氧基、低级烯基氧基、低级烷基羰基、低级烷基氧基羰基、碳环基、碳环低级烷基、碳环羰基、碳环氧基、碳环氧基羰基、杂环基、杂环低级烷基、杂环羰基、杂环氧基或杂环氧基羰基。

(10)R²是以下所示的基团:

R³选自取代基组W，k是0或1以上的整数，其中k个R³是选自取代基组W中的相同或不同的基团；

取代基组W：卤素、氰基、羟基、巯羟基、基、羧基、氨基、氧代基、低级烷基、卤代低级烷基、低级烷基氧基、低级烷基硫代基、羟基低级烷基、碳环式基、杂环式基、碳环低级烷基氧基、碳环氧基低级烷基、碳环低级烷基氧基低级烷基、杂环低级烷基氧基、杂环氧基低级烷基、杂环低级烷基氧基低级烷基、卤代低级烷基氧基、低级烷基羰基、低级烷基羰基氧基、低级烷基氧基羰基、低级烷基氨基、低级烷基羰基氨基、低级烷基氨基羰基、低级烷基磺酰基或低级烷基磺酰基氨基。

所述的多环化合物选自如下母体化合物、以及这些母体化合物与上述(3)中的P^R基团结合而成的前药：

一种药物组合物，其含有所述的多环化合物、或其制药上可接受的盐、或它们的溶剂化物。

一种所述的药物组合物在制备具有抗流感作用的药物中的应用。

一种所述的药物组合物在制备具有帽依赖性核酸内切酶抑制作用的制剂中的应用。

发明详述

除非另有明确规定，否则以下定义适用：

如本文所用，术语“卤素”或卤是指氟、溴、氯或碘，特别是当与烷基连接时是指氟或氯，并且当在芳基或杂芳基上时还包括溴或碘。

除非另有说明，本文所用的术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子。

如本文所用，术语“烷基”是指具有至多10个碳原子的完全饱和的支链或无支链的烃部分。除非另外提供，否则烷基是指具有1至6个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。取代的烷基是含有一个或多个取代基代替氢的烷基，例如1、2或3个取代基，最多达未取代烷基上的存在的氢的数目。如果没有另外说明，烷基的合适取代基可以选自卤素、CN、氧代、羟基、C1-4烷氧基、取代或未取代的C3-6环烷基、取代或未取代的苯基、氨基、(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C＝O)-C1-4烷基，-NHC(＝O)C1-4烷基和-NHC(＝O)OC1-4烷基；其中，对于取代的环烷基或苯基，取代基是最多三个选自Me、Et、-OMe、-OEt、CF₃、卤素、CN、OH和NH₂的基团。

如本文所用，术语“亚烷基”是指具有1至10个碳原子和两个开放化合价以连接至其他特征的二价烷基。除非另外提供，否则亚烷基是指具有1至6个碳原子的烃部分。亚烷基的代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、正亚丁基、仲亚丁基、异亚丁基、叔亚丁基、正亚戊基、异亚戊基、新亚戊基、正亚己基、2,2-二甲基亚丁基等。取代的亚烷基是含有一个或多个，例如1、2或3个取代基的亚烷基；除非另有说明，合适的烯烃取代基选自上述所列的烷基取代基。

如本文所用，术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基被一个或多个卤素基团取代。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基或包括全卤代烷基的多卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基内具有一个氯或氟。氯和氟通常作为在烷基或环烷基上的取代基存在；氟、氯和溴通常存在于芳基或杂芳基上。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基上具有两个或多个相同的卤素原子或不同的卤素基团的组合。典型地，多卤代烷基含有最多12或10或8或6或4或3或2个卤素基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子被卤素原子取代的烷基，例如三氟甲基。

如本文所用，术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。通常，烷氧基具有1-6个碳，更通常1-4个碳原子。

“取代的烷氧基”是在烷氧基的烷基部分上含有一个或多个，例如一个、两个或三个取代基的烷氧基。除非另有说明，否则合适的取代基选自上面针对烷基所列的取代基，除了羟基和氨基通常不存在于被取代的“烷基-O'基团的氧所直接连接的碳上。

类似地，其它基团如“烷基氨基羰基”、“烷氧基烷基”、“烷氧基羰基”、“烷氧基-羰基烷基”、“烷基磺酰基”、“烷基亚砜基”、“烷基氨基”、“卤代烷基”的各烷基部分如上述“烷基”定义中所述。当以这种方式使用时，除非另有说明，烷基通常是1-4个碳的烷基并且不被除了所述组分以外的基团进一步取代。当这样的烷基被取代时，除非另有说明，合适的取代基是上面针对烷基而言的那些。

如本文所用，术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基-O-，其中卤代烷基如上定义。卤代烷氧基的代表性实例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氯乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙氧基等等。通常，卤代烷基具有1-4个碳原子。如本文所用，术语“环烷基”是指3-12个碳原子的饱和或不饱和的非芳族单环、双环、三环或螺环烃基：环烷基可以是不饱和的，并且可以与另一个可以是饱和的、不饱和的或芳族的环稠合，条件是与目标分子式连接的环烷基的环原子不是芳环碳。除非另有说明，否则环烷基是指具有3至9个环碳原子或3至7个环碳原子的环状烃基。优选地，环烷基是具有3-7个环原子的饱和单环，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基，除非另有说明。

取代的环烷基是被一个、或两个、或三个、或多于三个取代基、直至未取代的基团上氢的数目所取代的环烷基。通常，除非另有说明，取代的环烷基将具有1-4个取代基。除非另有说明，合适的取代基独立地选自卤素、羟基、硫醇、氰基、硝基、氧代、C1-C4烷基亚氨基、C1-C4-烷氧基亚氨基、羟基亚氨基、C1-C4烷基、C2-C4-烯基、C2-C4-炔基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷基、C2-C4-烯氧基、C2-C4-炔氧基、C1-C4-烷基羰基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、氨基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基、C1-C4-烷基氨基羰基、二-C1-C4-烷基氨基羰基、C1-C4-烷基羰基氨基，C1-C4-烷基羰基(C1-C4-烷基)氨基、C1-C4-烷基磺酰基、C1C4-烷基氨磺酰基和C1-C4-烷基氨基磺酰基，其中每个上述烃基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基残基)可以进一步被一个或多个在每次出现时独立选自本文中“烷基”取代基列表的基团取代。环烷基的优选取代基包括C1-C4烷基和上面列出的作为烷基合适取代基的取代基。示例性的单环烃基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基等。示例性双环烃基包括：冰片基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基双环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基双环[3.1.1]庚基、双环[2.2.2]辛基等。示例性的三环烃基包括金刚烷基等。类似地，其它基团的各环烷基部分如“环烷氧基”、“环烷氧基烷基”、“环烷氧基羰基”、“环烷氧基-羰基烷基”、“环烷基磺酰基”、“卤代环烷基”应具有与上述“环烷基”定义中所述相同的含义。当在这些术语中使用时，环烷基通常是单环3-7碳环，其是未取代的或被1-2个基团取代。当任选被取代时，取代基通常选自C1-C4烷基和上述适合于烷基的那些。

如本文所用，术语“芳基”是指环部分中具有6-14个碳原子的芳族烃基。通常，芳基是具有6-14个碳原子、通常为6-10个碳原子的单环、双环或三环芳基，例如苯基或萘基。此外，如本文所用的术语“芳基”是指芳族取代基，其可以是单个芳族环，或稠合在一起的多个芳族环。非限制性实例包括苯基、萘基和1,2,3,4-四氢萘基，条件是四氢萘基通过四氢萘基的芳环的碳与所述式连接。除非另有说明，优选的芳基是苯基。取代的芳基是被1-5个(例如一个、或两个或三个)取代基取代的芳基，所述取代基独立地选自羟基、硫醇、氰基、硝基、C1-C4烷基、C2-C4-烯基、C2-C4-炔基、C1-C4-烷氧基、C1-C4-硫代烷基、C2-C4-烯氧基、C2-C4-炔氧基、卤素、C1-C4-烷基羰基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、氨基、C1-C4-烷基氨基、二-C1-C4-烷基氨基、C1-C4-烷基氨基羰基、二-C1-C4-烷基氨基羰基、C1-C4-烷基羰基氨基、C1-C4-烷基羰基(C1-C4-烷基)氨基、C1-C4-烷基磺酰基、氨磺酰基、C1-C4-烷基氨磺酰基和C1-C4-烷基氨基磺酰基，其中每个上述烃基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基残基)可以进一步被一个或多个在每次出现时独立选自上面列出的作为烷基合适取代基的基团取代。取代的芳基的优选取代基是C1-4烷基，以及上述作为烷基的合适取代基的那些基团，不包括二价基团如氧代。

类似地，其它基团的各环烷基部分如“芳氧基”、“芳氧基烷基”、“芳氧基羰基”、“芳氧基-羰基烷基”应具有与上述“芳基”定义中所述相同的含义。

如本文所用，术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和但不是芳香族的杂环基，并且可以是单环或多环(在多环的情况下，特别是双环、三环或螺环)；并且具有3至14个、更常见的是4至10个、最优选5或6个环原子；其中一个或多个、优选一至四个、尤其是一个或两个环原子是独立地选自O、S和N的杂原子(其余的环原子因此是碳)。即使被描述为例如C5-6原子环，杂环含有至少一个杂原子作为环原子，其它环原子是碳，并且具有所述的环原子数，例如在此示例中是5-6。优选地，杂环基具有一个或两个这样的杂原子作为环原子，并且优选地，杂原子不直接彼此连接。除非另有说明，键合环(即连接到目标式的环)优选具有4-12个、特别是5-7个环原子。杂环基团可以稠合到芳环上，条件是与目标化学式连接的杂环基团的原子不是芳香性的。杂环基团可以通过杂原子(通常为氮)或杂环基团的碳原子与目标式连接。杂环基可以包括稠环或桥环以及螺环，并且只要多环杂环基团的一个环含有杂原子作为环原子。杂环的示例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二氧六环、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫杂环戊烷、二硫杂环戊烷、1,3-二氧六环、1,3-二噻烷、氧硫杂环己烷、硫代吗啉等。取代的杂环基是独立地被1-5个(例如一个、或两个或三个)取代基取代的杂环基，所述取代基选自上述环烷基的取代基。

类似地，其他基团的各杂环基部分如“杂环基氧基”、“杂环基氧基烷基”、“杂环基氧基羰基”应具有与上述“杂环基”定义中所述相同的含义。

如本文所用，术语“杂芳基”是指5-14元单环-或双环-或三环-芳族环系统，具有1至8个杂原子作为环成员，其余环原子为碳，并且杂原子选自N、O和S。通常，杂芳基是5-10元环系，特别是5-6元单环或8-10元双环基团。典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5异噻唑基，2-、4-或5-恶唑基，3-、4-或5-异恶唑基，3-或5-1,2,4-三唑基，4-或5-1,2,3-三唑基，1-或2-四唑基，2-、3-或4-吡啶基，3-或4-哒嗪基，3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基。

术语“杂芳基”还指其中杂芳环与一个或多个芳基、环烷基或杂环基环稠合的基团。非限制性实例包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基，2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基，2-、4-、5-、6-或7-苯并恶唑基，2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基，和2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。

取代的杂芳基是含有一个或多个取代基的杂芳基，通常是一个或两个取代基，选自上述适合于芳基的取代基。

类似地，其他基团的各杂芳基部分如“杂芳氧基”、“杂芳氧基烷基”、“杂芳氧基羰基”应具有与上述“杂芳基”定义中所述相同的含义。

本文描述了本发明的各种实施方式。将认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的进一步实施方式。

如本文所用，术语“光学异构体”或“立体异构体”是指对于给定的本发明化合物可存在的各种立体异构构型中的任一种，并且包括几何异构体。应该理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心。术语“手性”是指在其镜像伴侣上具有不可重叠性质的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像伴侣上的分子。因此，本发明包括该化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是一对彼此不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋”混合物。该术语在适当时用于指定外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但其不是彼此的镜像。根据Cahnlngold-Prelog‘R-S'系统确定绝对立体化学。当化合物为纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以由R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物可以根据它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)命名为(+)或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。根据起始原料和合成过程的选择，这些化合物能以可能的异构体之一的形式或作为其混合物存在，例如作为纯的光学异构体，或作为异构体混合物，例如外消旋体和非对映异构体混合物，取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型，除非另有说明。如果化合物含有二取代的环烷基，除非另有说明，环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有的互变异构形式也意在包括在内。

在许多情况下，本发明化合物能由于存在氨基和/或羧基或类似基团而形成酸和/或碱盐。如本文所用，术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学可接受的盐”。术语“药学可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质并且通常不是生物学上或其他方面不合需要的盐。

药学可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。其他合适盐的列表可见例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1985)和Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)的“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use”。可由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学上可接受的碱加成盐可以与无机碱或有机碱形成并且可以具有无机或有机平衡离子。用于这种碱盐的无机平衡离子包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方式中，平衡离子选自钠、钾、铵、具有1至4个C1-C4烷基的烷基铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。合适的有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由碱性或酸性部分合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当碱(例如Na、Ca、Mg或K氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的合适的酸反应。这样的反应通常在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，使用非水介质如醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈是理想的。

本文给出的任何式也旨在表示化合物的未标记形式(即，化合物中所有原子以天然同位素丰度存在，且非同位素富集)以及同位素富集或标记形式。同位素富集或标记的化合物具有本文给出的通式描述的结构，不同之处在于该化合物的至少一个原子被原子质量或质量数不同于天然存在的原子质量或原子量分布的原子替代。可以掺入本发明的富集或标记化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中放射性同位素如3H和14C，或其中非放射性同位素如2H和13C的存在显著高于这些同位素的天然丰度的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如，用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。具体地，18F标记的化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。式(I)、(II)、(III)的同位素标记化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于所附实施例中所述的方法使用适当的同位素标记试剂代替另外使用的未标记试剂来制备。此外，用较重同位素特别是氘(即2H或D)取代可以提供由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求或改善的治疗指数。这种较重同位素特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基被表示为氘，则这种化合物对于指定的各氘原子具有至少3500的氘同位素富集因子(在每个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)，至少4000(60％的氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％的氘掺入)，至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮，d6-DMSO以及具有非富集态溶剂的溶剂合物。

本发明的化合物，即含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的式(I)、(II)、(III)化合物可以能够与合适的共晶形成物形成共晶。这些共晶可以由式(I)、(II)、(III)的化合物通过已知的共晶形成过程制备。此类过程包括研磨、加热、共升华、共熔融或在结晶条件下于溶液中使式(I)、(II)、(III)化合物与共晶形成物接触并分离由此形成的共晶。因此，本发明进一步提供了包含式(I)、(II)、(III)化合物的共晶。如本文所用，术语“药学可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员已知(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第22版)。除了与活性成分不相容的任何常规载体之外，还考虑其在治疗或药物组合物中的用途。

术语“治疗有效量”的本发明化合物是指在对象中引发生物或医学反应的本发明化合物的量，例如，足以减少一种或多种症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等的量。在一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指当施用于对象时，本发明化合物有效减少与流感病毒感染相关的一种或多种症状，或缩短流感病毒感染的症状阶段的持续时间，或减缓流感病毒感染的进展，或减少或阻止流感病毒感染引起的潜在病症的恶化的量。

在另一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞、组织或非细胞生物材料或培养基时，能有效地引起正粘病毒株的复制或增殖速率的统计学显著降低的量。

本文所用术语“对象”是指动物。通常对象是人。

如本文所用，术语“抑制”是指减少或抑制给定的病症、症状或紊乱或疾病，或者显著降低生物活动或过程的基线活性。

如本文所用，任何疾病或紊乱的术语“治疗”、“处治”或“处理”在一个实施方式中指改善所述疾病或紊乱(即减缓或阻滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括那些患者可能无法识别的身体参数。在另一个实施方式中,“治疗”、“处治”或“处理”是指在身体上(例如稳定可辨别的症状)、生理上(例如稳定身体参数)或两方面调节疾病或紊乱。在另一种实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指预防或延迟疾病或紊乱的发展或进展。

如本文所用，如果对象会从某种治疗中于生物学、医学或生活质量上受益，则该对象对该治疗“有需要”。

如本文所使用的，在本发明语境(特别是在权利要求语境)中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或与语境明显矛盾。

本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或另外明显与语境相矛盾。本文提供的任何和所有示例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不是对本发明另行要求保护的范围进行限制。

本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型的形式存在。在某些实施方式中，每个不对称原子具有至50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％或至少99％对映体过量的(R)-或(S)-构型；即，对于光学活性化合物，通常优选使用一种对映体来基本上排除另一对映体，因此通常优选至少95％的对映体纯度。如果可能，具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。因此，如本文所用，本发明化合物可以是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。如本文所用，“基本纯”或“基本不含其他异构体”是指相对于优选异构体，产物含有的其他异构体的量按重量计少于5％，并且优选少于2％。得到的异构体混合物可以通常基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶，分离成纯的或基本纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。

可通过已知方法将最终产物或中间体的外消旋体拆分成光学对映体，例如通过分离用光学活性酸或碱获得的其非对映异构体盐，并释放光学活性的酸性或碱性化合物。具体地，碱性部分可由此被用来将本发明的化合物拆分成它们的光学对映体，例如通过用光学活性酸例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O，O'-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸所形成盐的分级结晶。外消旋产物也可以通过手性色谱法拆分，例如使用手性固定相的高压液相色谱(HPLC)。

此外，本发明的化合物，包括它们的盐，也可以以其水合物的形式获得，或者包括用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可以固有地或经设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明意在包括溶剂合和非溶剂合两种形式。术语“溶剂合物”是指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是药物领域中常用的那些，已知其对接受者无害，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。

另一方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学可接受的载体。在一些实施方式中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的赋形剂或载体。药学上可接受的载体和其它赋形剂是本领域技术人员已知的，并且可以选自例如通过类似施用途径来施用的已批准(注册)配制治疗剂中使用的载体和赋形剂。可以配制药物组合物用于特定的给药途径，例如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。此外，本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或以液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)制成。药物组合物可以进行常规的药物操作，例如灭菌和/或可以包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。在一个实施方式中，配制本发明化合物用于口服递送。通常，这些药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分(至少一种式(I)、(II)、(III)化合物)和一种或多种选自以下的赋形剂：

a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

根据本领域已知的方法，片剂可以是薄膜包衣或肠溶包衣。

用于口服给药的合适组合物包括以片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。旨在用于口服使用的组合物根据本领域就制备药物组合物已知的任何方法来制备，并且此类组合物可以含有选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种试剂以提供药学上优雅和适口的制品。片剂可含有活性成分，混以适于制造片剂的无毒药学可接受赋形剂。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂未经包衣或通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供较长时期的持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分混以惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶囊，其中活性成分混以水或油性基质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。某些可注射组合物是水性等渗溶液或悬浮液，且栓剂有利地由脂肪乳剂或混悬剂制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们也可能含有其他有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或含有约1-50％的活性成分。

用于透皮施用的合适组合物包含有效量的本发明化合物与合适的载体。适合透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，其包含背衬构件，含有化合物以及可选有载体的储库，可选地速率控制屏障来在长时间段以受控并预定的速率作宿主皮肤的化合物递送，以及将装置固定到皮肤的手段。

用于局部施用(例如皮肤和眼睛)的合适组合物包括水溶液、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾制剂，例如用于通过气雾剂递送等。这些局部递送系统可以涉及(例如)可适用于治疗流感的吸入或鼻内应用且可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。使用或不使用合适的推进剂，它们可以方便地以干粉(单独地，作为混合物，例如与乳糖的干混物，或混合组分颗粒，例如与磷脂)形式从干粉吸入器递送或以气溶胶喷雾剂形式递送自加压容器、泵、喷器、雾化器或喷雾器。

本发明进一步提供了包含本发明化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可能促进某些化合物的降解。

本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或含水量低的成分和低水分或低湿度条件来制备。无水药物组合物可以制备和储存使其保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料来包装无水组合物，使得它们可以包含在合适的配方药盒中。合适的包装的实例包括但不限于气密密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条形包装。

本发明进一步提供了药物组合物和剂型，其包含降低作为活性成分的本发明化合物的分解速率的一种或多种试剂。在本文中称为“稳定剂”的这些试剂包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

游离形式或盐形式的式(I)、(II)、(III)化合物显示出有价值的药理学性质，例如，它们抑制或阻止正粘病毒的复制，如下部分中提供的试验数据所示，并因此用于治疗或用作研究化学品，例如作为工具化合物，例如用于研究正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感的复制。因此，本发明化合物可用于治疗由正粘病毒，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感引起的感染，特别是在人类对象中。在一些实施方式中，待治疗的对象是罹患或有风险感染流感病毒的人。例如,具有可被流感感染大大加剧的预先存在的病症例如哮喘或COPD的对象，可以在表现出流感感染的症状之前用本发明的方法或化合物治疗,特别是如果他们由于与患有或似乎患有流感的家庭成员等人员非常接近而有感染风险的话。在其他实施方式中，通过本发明的方法和组合物治疗的对象是被诊断为具有与流感感染一致的症状的对象。在其他实施方式中，对象可以是已用已知诊断方法例如快速流感诊断测试(RIDT)或逆转录酶PCT(RT-PCR)方法测试来检测流感病毒存在的人，并且被发现感染流感，不论是否存在典型的流感症状。

作为另一实施方式，本发明提供了式(I)、(II)、(III)或如本文所述的式(I)、(II)、(III)范围内任何实施方式的化合物在治疗中的用途。特别地，该化合物适用于治疗患有或特别高风险患有正粘病毒病毒感染的对象，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感。

在另一个实施方式中，本发明提供治疗由正粘病毒引起的疾病的方法，包括施用治疗有效量的式(I)、(II)、(III)化合物或如本文所述的式(I)、(II)、(III)范围内的任何实施方式给需要该治疗的对象。在一些实施方式中，式(I)、(II)、(III)化合物口服施用。在另一个实施方式中，所述疾病选自甲型流感、乙型流感和丙型流感。该方法通常包括将有效量的本文所述的化合物或包含有效量的所述化合物的药物组合物施用于对此类治疗有需要的对象。该化合物可以通过任何合适的方法例如本文所述的那些方法来施用，并且可以以治疗医师可选择的间隔重复施用。在一些实施方式中，化合物或药物组合物口服施用。因此，作为另一实施方式，本发明提供式(I)、(II)、(III)化合物或如本文所述这些化合物的任意实施方式在制备药物中的用途。在一个具体实施方式中，该药物用于治疗正粘病毒感染，尤其是甲型流感、乙型流感或丙型流感。

本发明的化合物可以与一种或多种联合试剂同时或之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的给药途径分开给药，或者作为联合试剂在同一药物组合物中一起给药。适用于本发明化合物的联合药物包括对流感病毒有活性的抗病毒药，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦、辛酸拉尼米韦和金刚烷，如金刚烷胺和金刚乙胺。用于这些方法的其他联合试剂包括M2蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂、PB2抑制剂、法匹拉韦、流感酶、ADS-8902、贝前列素、利巴韦林、VX-787、和在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)、(II)、(III)化合物和至少一种其他治疗联合试剂的产品，作为用于同时、分开或顺序用于治疗的组合制品。在一个实施方式中，该疗法是治疗由正粘病毒引起的病毒感染，特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感。作为组合制品提供的产品包括在相同的药物组合物中一起包含式(I)、(II)、(III)化合物和至少一种其它治疗性联合试剂的组合物，或者式(I)、(II)、(III)化合物和至少一种其他治疗性联合试剂以单独的形式，例如以套件的形式用于通过本文所述的方法治疗对象。

在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)、(II)、(III)化合物和另一治疗联合试剂(一种或多种)的药物组合物。合适的联合试剂包括对流感病毒有活性的抗病毒剂，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦，以及金刚烷，例如金刚烷胺和金刚乙胺。可选地，药物组合物可以包含如上所述的药学可接受的载体。

在一个实施方式中，本发明提供了包含两种或更多种分开的药物组合物的药盒，其中至少一种药物组合物含有式(I)、(II)、(III)的化合物。另一种药物组合物可含有一种合适的联合试剂。在一个实施方式中，药盒包含用于分开保存所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶子或分开的箔包装。这种药盒的一个例子是泡罩包装，如片剂、胶囊等通常所用的包装。本发明的药盒可以用于施用不同的剂型，例如口服和肠胃外，用于以不同剂量间隔施用分开的组合物，或者用于滴定彼此分开的组合物。为帮助依从性，本发明的药盒通常包含给药指导。

在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和治疗性联合试剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，可以将本发明的化合物和治疗联合剂一起整合入联合疗法中：(i)在向医师发布组合产品之前(例如在药盒包含本发明化合物和其他治疗剂的情况下)；(ii)在施用前不久由医师自己(或在医师指导下)；(iii)患者本身，例如在顺序施用本发明化合物和治疗联合剂的过程中。因此，本发明提供式(I)、(II)、(III)化合物用于治疗由正粘病毒、特别是流感病毒(其可以是甲型流感、乙型流感或丙型流感)引起的病毒感染的用途，其中所述药物制备用于与治疗联合剂一起施用。通常在使用本发明化合物的方法中，治疗前未鉴定流感血清型。本发明还提供治疗性联合试剂用于治疗疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)、(II)、(III)的化合物一起施用。因此，本发明还提供了式(I)、(II)、(III)化合物供用于治疗由由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述式(I)、(II)、(III)化合物被制备用于与一种治疗联合剂一起施用。本发明还提供另一种治疗性联合试剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述治疗性联合试剂被制备用于与式(I)、(II)、(III)化合物一起施用。因此，本发明还提供了式(I)、(II)、(III)化合物供用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述式(I)、(II)、(III)化合物与一种治疗联合剂一起施用。本发明还提供一种治疗性联合试剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染的方法，其中所述治疗性联合试剂与式(I)、(II)、(III)化合物一起施用。本发明提供了式(I)、(II)、(III)化合物用于治疗由正粘病毒、特别是流感例如甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染，其中患者先前(例如，在24小时内)已用另一种治疗剂治疗。本发明提供了另一种治疗剂用于治疗由正粘病毒、特别是甲型流感、乙型流感或丙型流感病毒引起的病毒感染，其中患者先前(例如，在24小时内)已用式(I)、(II)、(III)化合物治疗。

在一个实施方式中，治疗性联合剂选自据称可用于治疗由流感病毒引起的感染的抗病毒剂，例如神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦和拉尼米韦，以及金刚烷，例如金刚烷胺和金刚乙胺。对于约50-70kg的人类对象，本发明的药物组合物或组合的单位剂量可含有约11000mg活性成分(一种或多种)，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg，或约1-50mg活性成分。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于对象的种类、体重、年龄和个体状况、所治疗的紊乱或疾病或其严重程度。普通技术的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗或抑制病症或疾病进展所必需的各活性成分的有效量。

上述剂量特性可以有利地使用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或分离的器官、组织和制品进行体外和体内测试来证明。本发明化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式体外施用，并且可以肠内、肠胃外、有利地静脉内体内施用，例如作为悬浮液或水溶液。体外剂量范围可以在约10-3摩尔浓度和10-9摩尔浓度之间。体内治疗有效量可取决于给药途径，范围在约0.1-500mg/kg或约0.1-50mg/kg。本发明进一步包括制备本文公开的式(I)、(II)、(III)化合物的方法，以及本发明方法的任何变体，其中在其任何阶段可获得的中间体产物用作原料并进行剩余步骤，或者其中原料在反应条件下原位形成，或其中反应组分以其盐或光学纯物质的形式使用。

本发明化合物和中间体也可以根据本领域技术人员通常已知的方法互相转化。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

具体实施方式

化合物a-5的合成

在0℃，氮气下，向丁-3-烯酸a-2(1.42mL，16.37mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液中加入DCC(3.38g，16.38mmol)，DMAP(167mg，1.36mmol)在二氯甲烷(5mL)的溶液，以及2-甲基-丙-2-烯-1-胺(1.28mL，13.64mmol)的二氯甲烷(10mL)。然后将所得混合物升温至室温。搅拌4小时后，将反应溶液用1N HCl(2×10mL)和NaHCO₃(饱和水溶液，10mL)洗涤。收集有机层并用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂后，将粗残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化(己烷/乙醚：6/1)得到相应的酰胺(1.89g，99％收率)，为无色油状物。在-25℃下，向NaH(60％矿物油中的分散体，2.35g，58.65mmol)THF(250mL)的溶液中加入DMAP(250mg，18.05mmol)，然后向所得混合物中分别加入上述酰胺(6.28g，45.12mmol)的THF(50mL)溶液和Boc₂O(40mL，178.21mmol)的THF(60mL)溶液。搅拌12小时后，将混合物用饱和氯化铵溶液淬灭(50mL)。将混合物用水稀释，并减压浓缩除去THF。然后将残余物用乙酸乙酯稀释。收集有机层，水层用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的萃取液用饱和NaHCO₃水溶液(20×20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。真空除去溶剂后，得到粗残余物通过硅胶快速柱色谱法(己烷/乙酸乙酯：50/1)纯化，得到产物(7.0g，65％收率)，为无色油状物。

将Grubbs-II催化剂(21.7mg，25.07μmol)溶解在甲苯(20mL)中，将溶液加热到100℃。然后向所得混合物中加入上述酰胺(200mg，0.84mmol)的甲苯溶液(20mL)溶液，搅拌2小时。将反应混合物冷却后，在室温下，真空除去溶剂，残余物通过硅胶快速柱层析(己烷/乙酸乙酯：10/1)纯化，得到无色油状物a-3(157mg，88％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ5.41(s,1H),4.10(s,2H),3.04(s,2H),1.76(s,3H),1.54(s,9H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ168.9,152.3,129.2,116.3,83.4,51.0,35.1,28.2,20.2；LCMS:212.1[M+H]⁺

将化合物a-3(157mg，0.74mmol)溶解于4M HCl的二氧六环溶液(1.5mL)中，在室温下搅拌2小时。将反应溶液的溶剂在减压下蒸馏除，向得到的残渣中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，用高真空油泵干燥16小时，加入4毫升无水四氢呋喃将得到化合物溶解并冷却至-78℃。向溶液中滴加2.5M正丁基锂-己烷溶液(0.3mL，0.75mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌2小时。氯甲酸烯丙酯(90毫克，0.75毫摩尔)的THF(0.4mL)溶液逐滴加入到反应混合物中,-78℃搅拌2小时,将反应溶液用饱和氯化铵水溶液淬灭，升至室温，用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到化合物a-4(110毫克，产率75％)。

向化合物a-4(195mg，1.0mmol)的THF(4.0mL)溶液中加入1M DIBAL-H己烷溶液(1.4mL，1.4毫摩尔)，并将该混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应溶液用丙酮淬灭后，加入酒石酸钾钠水溶液，搅拌并用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到粗产物。在室温下，向得到的粗产物溶解于5毫升甲醇中，加入对甲苯磺酸一水合物(19毫克，0.1毫摩尔)，搅拌过夜。将反应溶液用碳酸氢钠水溶液淬灭，浓缩，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物a-5(143mg，收率68％)，LCMS:212.2[M+H]⁺。

类似的方法可以合成如下化合物：

参考文献Collection of Czechoslovak Chemical Communications,49(8),1800-9；1984；47(1),65-71；1982.提供的方法合成以下三环化合物：

化合物I-160a和I-172a的合成

化合物b-2的制备向化合物b-1(10.0g，40.5mmol)的DMF(40mL)溶液中加入碘乙烷(11.4g，73mmol)和DBU(9.2mL，61mmol)，室温下搅拌过夜。将反应溶液倒入10％氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物b-2(11g，收率98％)。

1H-NMR(CDCl₃)δ：1.26(t，J＝8.0Hz，3H)，4.29(q，J＝8.0Hz，2H)，5.17(s，2H)，6.58(d，J＝4.1Hz，1H)，7.27-7.49(m，5H)，8.20(d，J＝4.2Hz，1H)。

化合物b-3的制备

将对甲苯磺酸吡啶鎓(4.11g，16.4mmol)和NH₂NHBoc(1.08g，8.21mmol)加入到化合物b-2(1.5g，5.46mmol)的DMA(13.0mL)溶液中，60℃下搅拌反应过夜。将反应溶液加入水中并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和氯化铵水溶液，饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，残留物用硅胶柱色谱法(氯仿-甲醇)分离，得到化合物b-3(1.39g，收率65％)。

1H-NMR(CDCl₃)δ：1.24(t，J＝8.0Hz，3H)，1.43(s，9H)，4.28(q，J＝8.2Hz，2H)，5.31(s，2H)，6.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.25-7.36(m，4H)，7.41-7.46(m，2H)。

化合物b-4的制备

将化合物b-3(1.39g，3.59mmol)溶解于4M HCl的乙酸乙酯溶液(15mL)中，在室温下搅拌2小时。将反应溶液的溶剂在减压下蒸馏除，向得到的残渣中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物b-4(950mg，收率92％)。

1H-NMR(CDCl₃)δ：1.25(t，J＝8.0Hz，3H)，4.33(q，J＝8.0Hz，2H)，5.25(s，2H)，6.49(d，J＝8.0，1H)，7.28-7.46(m，5H)，7.66(d，J＝8.0,1H)。

化合物b-6的制备

在氮气氛下向化合物b-4(730mg，2.54mmol)和化合物a-5(608mg，3.04mmol)的乙腈(16mL)溶液中加入四氯化锡(446uL，3.8mmol)，并在-25℃下搅拌50分钟。反应溶液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，加入二氯甲烷，在室温下搅拌，通过硅藻土过滤，滤液用二氯甲烷萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸镁干燥后，减压蒸馏去溶剂，得到化合物b-5的粗产物。得到的化合物b-5溶解在THF(16毫升)，吗啉(2.20毫升，25.4毫摩尔)，四三苯基膦钯(292毫克，0.254毫摩尔)，并将混合物搅拌在室温下2小时。乙醚(35毫升)加入到该反应溶液中，过滤收集沉淀的固体，干燥得到的固体化合物b-6(664毫克，产率78％)。

LCMS：336.1(M+1)^+，。

化合物b-7的制备

(R)-四氢呋喃-2-羧酸(1.28g，14.72mmol)，化合物b-6(4.10g，12.2mmol)的乙酸乙酯(20ml)悬浮液中依次加入吡啶(8.00ml，12mmol)和丙基膦酸酐溶液(T 3P)(50％乙酸乙酯溶液，22.0ml，37.0mmol)并搅拌过夜。过滤收集固体，依次用乙酸乙酯(10ml)和乙醇(10ml)洗涤。将得到的固体悬浮于乙醇(12ml)中，在室温下搅拌8小时。过滤悬浮液所得固体用乙醇(4ml)洗涤两次，得到化合物b-7(2.23g，收率42％)。

LCMS：434.1(M+1)^+，。

化合物b-9的制备

将化合物b-7(1.0克，2.30毫摩尔)在乙醇(7ml)的悬浮液中加入DBU(70ul，0.046毫摩尔),在室温下搅拌30分钟。向得到的悬浮液中加入二异丙基醚(7ml)，在室温下搅拌30分钟。过滤收集固体，用乙酸乙酯(3ml)洗涤两次，得到化合物b-9(730mg，收率94％)。LCMS：336.2(M+1)^+，。

化合物b-10的制备

将化合物b-9(3.3g，9.8mmol)和a-10(2.64g，10.0mmol)加入到3.3ml 50wt％丙基膦酸酐溶液(T3P)的乙酸乙酯(9.62g，10.8mmol)。在室温下向反应溶液中加入甲磺酸(1.31ml，20.2mmol)，在70℃下搅拌6小时。在冰冷下向反应溶液中加入水，在室温下搅拌1小时后，加入THF，用乙酸乙酯萃取。将有机层用水和8％碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压下蒸馏除去溶剂。加入碳酸钾(2.37g,19.4mmol),升温至50℃，滴加苄基溴(0.72ml，6.03mmol)，在60℃下搅拌8.5小时。在冰水浴冷却下，将2M盐酸水溶液滴加至反应溶液中，在室温下搅拌10分钟，并用乙酸乙酯萃取。有机层用水和8％碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。加入活性炭(0.75g)，通过硅藻土过滤，减压蒸发滤液。向所得残余物中加入乙酸乙酯和己烷，沉淀出固体，然后过滤收集，得到化合物b-10(3.25g，收率57％)。LCMS：582.2(M+1)^+，。

化合物I-160a的制备

在室温下，将氯化锂(665mg，15.75mol)加入到化合物b-10(1.83g，3.15mmol)的DMA(12ml)溶液中，并在80℃下搅拌3小时。在冰冷下向反应溶液中加入丙酮(1.8ml)，0.5M盐酸水溶液(9ml)和水(3.6ml)，搅拌1小时,过滤收集固体。将得到的固体溶解于氯仿中，加入异丙醚析出固体，过滤，得到化合物I-160a(1.31g，收率85％)。LCMS：492.2(M+1)^+，。

化合物I-172a的制备

化合物I-160a(200mg,0.407mmol)和P₂S₅(137mg,0.62mmol)加入2毫升吡啶，在预热至100度的油浴中搅拌25分钟。减压除去溶剂，柱层析，以二氯甲烷/甲醇(20:1)淋洗、浓缩得到化合物I-172a(157mg，收率76％)。LCMS：508.1(M+1)^+，。

以中间体b-4为原料与化合物a-9反应，最终可合成化合物：

类似的方法可以合成如下化合物：

化合物c-16、c-17和c-18的合成

化合物c-5的合成

在室温下，将NaH(1.17g，60％，29.25mmol)加入到含有苄氧基乙酸甲酯c-1(4.965g，27.6mmol)、二乙基草酸酯c-2(4.030g，27.6mmol)和无水乙醇(0.1mL)的无水THF(50mL)中，反应混合物继续搅拌24小时。在旋转蒸发器上除去THF，将残余物溶于乙醇(30mL)中，然后加入乙醇钠溶液(由635mg Na在20ml EtOH中制备)和化合物c-4(2.65g，27.6mmol)。在60℃下搅拌1.5小时后，将所得悬浮液冷却至室温并除去溶剂。向所得油状物中加入CH₂Cl₂(100mL)和水(50mL)，并将pH调节至约6，必要时进行过滤。分出有机层，水相用二氯甲烷(2x 30mL)萃取，合并后的有机相用水、食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，残余物加入乙醚(30mL)摇动，沉淀出白色固体。用己烷稀释(～10％体积)后，过滤溶液，用冷乙醚(3×10mL)洗涤滤饼。干燥后，得到固体产物c-5(4.78g，41％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)：δ1.31(t，3H，J＝7.1Hz)，2.52(s，3H)，4.35(q，2H，J＝7.1Hz)，5.25(s，2H)，7.32-7.51(m，10H)，9.12(s,1H)；LCMS:424.3(M+1)⁺。

化合物c-6的合成

将化合物c-5(1.0g，2.36mmol)溶解于12％HCl的水溶液(30mL)中，安装Dean-Stark分水器，加热搅拌回流4小时，随时分出生成的苯甲醛。反应结束后，将反应溶液在减压下浓缩蒸干，收集捣碎的固体残留物，用乙醚洗涤，干燥后，得到化合物c-6(805mg，收率92％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)：δ1.32(t，3H，J＝7.2Hz)，2.51(s，3H)，4.36(q，2H，J＝7.1Hz)，5.25(s，2H)，7.32-7.56(m，5H)；LCMS:336.2(M+1)⁺。

化合物c-9的合成

在氮气氛下向化合物c-6(942mg，2.54mmol)和化合物a-9(612mg，3.04mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入四氯化锡(446uL，3.8mmol)，并在-25℃下搅拌1小时。反应溶液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，加入二氯甲烷，在室温下搅拌，混合物通过硅藻土过滤，滤液用二氯甲烷萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，硫酸镁干燥后，减压蒸去溶剂，得到粗产物c-8。得到的化合物c-8溶解在THF(15毫升)，吗啉(2.20毫升，25.4毫摩尔)，四三苯基膦钯(292毫克，0.254毫摩尔)，并将混合物搅拌在室温下2小时。将40毫升乙醚加入到该反应溶液中，过滤收集沉淀的固体，干燥，得到所需的固体化合物c-9(931毫克，产率98％)。

LCMS:375.2(M+1)⁺。

化合物c-10和c-11的合成

参照b-7和b-8的合成方法合成c-10和c-11

c-10：LCMS:473.2(M+1)⁺；c-11：LCMS:473.2(M+1)⁺。

化合物c-12的合成

以c-10为原料，参照b-9的合成方法合成化合物c-12

LCMS:375.1(M+1)⁺。

化合物c-14的合成

将化合物c-12(3.74g，10.0mmol)和a-10(2.64g，10.0mmol)加入到3.3ml 50wt％丙基膦酸酐(T3P)的乙酸乙酯溶液中，参照b-10的合成方法，得到化合物c-14(3.65g，收率59％)。

LCMS：621.2(M+1)^+，。

化合物c-15的合成

向带有PTFE/硅酮隔片并连接氮气鼓泡器管线的21x 72mm小瓶中加入10％Pd/C(干粉，36mg)，THF(3ml)和化合物c14(1.04g，1.67mmol)。将小瓶置于0℃的冰浴中，加入三乙硅烷(800μL，5.01mmol)，反应物在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌4.5小时。将粗混合物通过45μMPTFE注射器过滤器过滤，将滤液浓缩成油状物。通过硅胶柱纯化(20至100％EtOAc/己烷，然后0至10％MeOH/DCM)，得到目标化合物c15(700mg,73％)。

LCMS:575.3(M+1)⁺。

化合物c-18(I-31a)的合成

在室温下，将LiCl(424mg，10mol)加入到化合物c-14(1.15g，2.0mmol)的DMA(5ml)溶液中，并在80℃下搅拌3小时。在冰冷下向反应溶液中加入丙酮(1.5ml)，0.5M盐酸水溶液(6ml)和水(3.0ml)，搅拌1小时,过滤收集固体。将得到的固体溶解于氯仿中，加入异丙醚析出固体，过滤，得到化合物c-18(I-31a)(860mg，收率81％)。

LCMS:531.2(M+1)⁺。

在与合成化合物c-18相同反应条件下，c-15脱去苄基得到化合物c-16(I-1a)。LCMS:485.1(M+1)⁺。

化合物c-17的合成

化合物c-16(180mg,0.37mmol)和P₂S₅(124mg,0.56mmol)加入1.5毫升吡啶，在预热至100度的油浴中搅拌25分钟。减压除去溶剂，柱层析，以二氯甲烷/甲醇(20:1)淋洗、浓缩得到化合物c-17(126mg，收率68％)。LCMS:501.1(M+1)⁺。

类似的方法可以合成如下化合物：

化合物IV-153和IV-159的合成

化合物d-3的合成

0℃下，将1-羟基-1-环丙羧酸甲酯d-1(33.84g，0.291mol)加到四氢呋喃(240mL)中，氮气保护，同温度下分批加入质量分数60％的氢化钠(15.17g，0.379mol)，加完0℃下反应15分钟，再加入溴乙腈d-2(56.06g，0.467mol)，0℃下反应15分钟后，0℃下缓慢滴加水(20mL)淬灭，加水(80mL)，乙酸乙酯(40mL*2)萃取水相，合并有机相，饱和食盐水(40mL)洗涤有机相，浓缩有机相，经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1～3:1)得41.10g淡黄色液体，即中间体d-3，收率为91％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)4.21(s,2H)，3.56(s,3H)，0.81-0.69(m,4H)。LCMS:156.1[M+H]⁺。

化合物d-4的合成

将中间体d-3(20g，0.128mol)，Pd/C(20g)和浓盐酸(11mL)依次加入甲醇(200mL)中，40℃下，通氢气在一个大气压下反应16h，过滤除去Pd/C，浓缩母液，残渣加入乙酸乙酯(500mL)打浆，过滤，干燥得白色固体20.7g，即中间体d-4，收率82％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)3.80-3.78(m,2H)，3.56(s,3H)，3.08-3.06(m,2H),0.81-0.71(m,4H).

化合物d-5的合成

将中间体d-4(7.46g，0.0382mol)加入到甲醇(40mL)中，再加入三乙胺(7.72g，0.0763mol)，20℃反应8h，浓缩经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:10)得白色固体4.1g，即中间体d-5，收率85％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm)3.84-3.81(m,2H),3.10-3.08(m,2H),0.81-0.71(m,4H)。LCMS:128.2[M+H]⁺。

化合物d-6的合成

将化合物d-5(191毫克，1.5毫摩尔)溶解于8毫升无水四氢呋喃并冷却至-78℃。向溶液中滴加2.5M正丁基锂-己烷溶液(0.72毫升，1.8毫摩尔)，并将混合物在-78℃下搅拌2小时。氯甲酸烯丙酯(216毫克，1.8毫摩尔)的THF(0.4毫升)溶液逐滴加入到反应混合物中,-78℃搅拌2小时,将反应溶液用饱和氯化铵水溶液淬灭，升至室温，用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到化合物d-6(292毫克，产率77％)。

化合物d-7的合成

向化合物d-6(211毫克，1.0毫摩尔)的THF(4.0毫升)溶液中加入1M DIBAL-H己烷溶液(1.4毫升，1.4毫摩尔)，并将该混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应溶液用丙酮淬灭后，加入酒石酸钾钠水溶液，搅拌并用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到粗产物。在室温下，向得到的粗产物溶解于5毫升甲醇中，加入对甲苯磺酸一水合物(19毫克，0.1毫摩尔)，搅拌过夜。将反应溶液用碳酸氢钠水溶液淬灭，浓缩，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物d-7(161mg，收率71％)，LCMS:228.2[M+H]⁺。

类似方法合成d-8

LCMS:242.1[M+H]⁺。

用合成I-61a的方法以中间体d-7和d-8为原料与化合物a-8反应制备化合物IV-153和IV-159

化合物VIII-98的合成

(1R，4S，5R，6S)-5,6-二羟基-2-氮杂双环[2.2.1]庚-3-酮(e-2)。

向含有4.33g(39.7mmol)(1R，4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(e-1)和5.14g(43.9mmol)N-甲基吗啉N-氧化物在20mL异戊醇和20mL水的溶液的可再密封的管中，加入3mL(0.24mmol)2.5％(w/w)四氧化锇的叔丁醇溶液。将管用PTFE盖密封，并将反应在70℃下加热1-4小时。TLC(20％i-PrOH/80％EtOAc，硅胶板，高锰酸钾或对茴香醛染色)显示在此时间之后原料完全消耗。(如果剩余任何原料，可以加入额外的四氧化锇溶液。)除去加热，加入500mg(4.81mmol)亚硫酸氢钠，并将混合物搅拌45分钟，同时冷却至环境温度。在40℃下真空除去溶剂。将浓稠的深棕色油状残余物悬浮在30mL甲醇中，并加入30mL 2-丙醇。将混合物真空浓缩，以除去尽可能多的水和N-甲基吗啉，得到棕色固体。将该固体悬浮在50mL甲醇中，用50mL硅胶浆化，并在40℃下真空浓缩至干。将120g硅胶柱用10％2-丙醇/90％乙酸乙酯平衡，并将硅胶产物混合物装配到柱的顶部。柱子以85mL/min的速率用10％i-PrOH/EtOAc洗脱5分钟，10％至30％i-PrOH/EtOAc梯度洗脱20分钟，然后30％i-PrOH/EtOAc洗脱。5分钟。产物在约20％i-PrOH/EtOAc洗脱，在254nm处产生非常弱的UV吸光度。TLC(20％i-PrOH/EtOAc，用新制备的对茴香醛染色剂染色)显示不需要的全顺式异构体首先洗脱并产生粉红色斑点，而所需的异构体紧密接着显示黄色斑点，其变为褐色进一步加热。将含产物的级分在30-40℃下真空浓缩，得到白色固体。将该物质溶于20mL热甲醇中并真空浓缩以除去残留的色谱溶剂。白色结晶固体e-2，产量4.27g，75％。熔点152-153℃；¹HNMR(D₂O)δ4.06(dd，1H，J＝5.9,0.7Hz，H5)，4.01(dd，1H，J＝5.9,0.7Hz，H6)，3.78(m，1H，H1)，2.62(m，1H，H4)，2.07(m，2H，H7)；¹³C NMR(D2O)δ182.0(C3)，71.7(C6-H)，68.4(C5-H)，59.3(C1-H)，51.9(C4-H)，36.3(C7-H2)；LCMS(ESI)m/z([M+1]⁺)144.1。

e-3的制备

在室温下，向含e-2(6.5g，45mmol)的乙二醇(50ml)溶液中分批加入碳酸钾(12.4g，2当量)。在室温下滴加1,2-二溴乙烷(7.8ml，2当量)，并将反应混合物加热至回流7-8小时。通过TLC(乙酸乙酯/己烷)监测反应进程。反应完成后，过滤反应内容物，滤液用水(200ml)和乙酸乙酯(200ml)稀释。分离出形成的层，水层用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，柱层析(乙酸乙酯/己烷)得到所需产物e-3(4.9g，65％收率)。LCMS(ESI)m/z([M+1]⁺)170.1。

e-4的制备

将化合物e-3(255毫克，1.5毫摩尔)溶解于8毫升无水四氢呋喃并冷却至-78℃。向溶液中滴加2.5M正丁基锂-己烷溶液(0.72毫升，1.8毫摩尔)，并将混合物在-78℃下搅拌2小时。氯甲酸烯丙酯(216毫克，1.8毫摩尔)的THF(0.4毫升)溶液逐滴加入到反应混合物中,-78℃搅拌2小时,将反应溶液用饱和氯化铵水溶液淬灭，升至室温，用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到化合物e-4(307毫克，产率81％)。

e-5的制备

向化合物e-4(253毫克，1.0毫摩尔)的THF(4.0毫升)溶液中加入1M DIBAL-H己烷溶液(1.4毫升，1.4毫摩尔)，并将该混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应溶液用丙酮淬灭后，加入酒石酸钾钠水溶液，搅拌并用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到粗产物。在室温下，向得到的粗产物溶解于5毫升甲醇中，加入对甲苯磺酸一水合物(19毫克，0.1毫摩尔)，搅拌过夜。将反应溶液用碳酸氢钠水溶液淬灭，浓缩，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物e-5(194mg，收率72％)，LCMS:270.2[M+H]⁺。

类似方法合成下列化合物

化合物IV-01的合成

反应瓶中加入CuI(1.1毫克，0.006毫摩尔)、Pd(PPh₃)Cl₂(3.65毫克，0.005毫摩尔)、三乙胺(59微升，0.42毫摩尔)、化合物IV-11(60.5毫克，0.1毫摩尔)、三甲基硅乙炔(18.9微升，0.135毫摩尔)和0.3毫升乙酸乙酯，加热至70度并搅拌1小时，冷却至室温后，经硅藻土过滤并以乙酸乙酯淋洗。滤液经旋转蒸发浓缩后，加入0.5毫升四氢呋喃和0.15毫升四丁基氟化铵(1M in THF)，搅拌1小时后，加入10毫升乙酸乙酯，用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，所得残渣用C18反向柱纯化，得到化合物IV-01(34mg，收率68％)。LC/MS：m/z＝504.2[M+H]⁺。

化合物IV-13的合成

反应瓶中加入Pd(PPh₃)₄(4.6毫克，0.004毫摩尔)、化合物IV-11(60.5毫克，0.1毫摩尔)、1M碳酸钠(0.22毫升，0.22毫摩尔)、3-呋喃硼酸(0.12毫摩尔)、55微升甲醇和0.3毫升甲苯，加热至80度并搅拌6小时，冷却至室温后，将溶剂减压蒸馏除去，所得残渣用C18反向柱纯化，得到化合物IV-13(39.2mg，收率72％)。LC/MS：m/z＝546.2[M+H]⁺。

用合成I-61a、IV-01和IV-13的方法制备化合物VIII-98以及其它下列化合物

化合物IV-177的合成

f-17和f-18混合物的制备

参考文献Tetrahedron Letters,1972,4029，在干燥氮气氛下，在0℃下向含有等摩尔量的f-15和1,1'-二氯二甲醚f-16的乙醚中滴加1.5至2当量的CH₃Li/LiI乙醚溶液。混合物在0℃搅拌下反应1小时后倒入水中。分离醚层并经无水干燥硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂后，残余物柱层析分离得到混合物f-17和f-18，产率55％。

f-19和f-20混合物的制备将化合物f-17和f-18(179mg，0.74mmol)溶解于4M HCl的二氧六环溶液(1.5mL)中，在室温下搅拌2小时。将反应溶液的溶剂在减压下蒸馏除，向得到的残渣中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，用高真空油泵干燥16小时，加入4毫升无水四氢呋喃将得到化合物溶解并冷却至-78℃。向溶液中滴加2.5M正丁基锂-己烷溶液(0.3mL，0.75mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌2小时。氯甲酸烯丙酯(90毫克，0.75毫摩尔)的THF(0.4mL)溶液逐滴加入到反应混合物中,-78℃搅拌2小时,将反应溶液用饱和氯化铵水溶液淬灭，升至室温，用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到化合物f-19和f-20混合物(128毫克，产率77％)。

f-21和f-22的制备

向含有化合物f-17和f-18(225毫克，1.0毫摩尔)的THF(4.0毫升)溶液中加入1MDIBAL-H己烷溶液(1.4毫升，1.4毫摩尔)，并将该混合物在-78℃下搅拌1小时。将反应溶液用丙酮淬灭后，加入酒石酸钾钠水溶液，搅拌并用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥有机层，将溶剂减压蒸馏除去，得到粗产物。在室温下，向得到的粗产物溶解于5毫升甲醇中，加入对甲苯磺酸一水合物(19毫克，0.1毫摩尔)，搅拌过夜。将反应溶液用碳酸氢钠水溶液淬灭，浓缩，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压蒸馏除去溶剂，得到f-19和f-20的混合物(181mg，收率75％)，手性柱分离得到纯化合物f-19和f-20，LCMS:242.2[M+H]⁺。用合成I-61a的方法制备化合物IV-177以及其它下列化合物

化合物IV-196和IV-201的合成

g-5和g-6的制备

在0℃条件下，将二乙基锌(71.6mL，71.4mmol)滴加到二氯甲烷(90mL)中，(注意：氩气源不能来自针头。只能使用合适的玻璃适配器。也可以在烧瓶上安装第二个起泡器，以防止压力过大。)滴加完毕，待瓶中无白烟时，缓慢滴加三氟乙酸(8.16g，71.6mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。滴加完毕，搅拌30min后，滴加二碘甲烷(19g，71.4mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。滴加完毕，搅拌30min后，滴加g-1(2.31g，23.8mmol)的二氯甲烷溶液(50mL)，滴加完毕，升至室温反应30min。TLC显示反应完全，倒入饱和氯化铵中，搅拌10min后，分液，取水相用二氯甲烷(100mL)萃取一次，取有机相用饱和亚硫酸钠洗、饱和碳酸氢钠洗、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，剩余物经柱层析得产物g-2和g-3混合物(1.35g，产率51％)，手性柱分离得到纯化合物g-2和g-3。分别以化合物g-2和g-3为原料，用合成e-5的方法合成g-5和g-6。

用合成I-61a的方法制备化合物IV-196和IV-201

化合物IV-171的合成

h-4的制备

在氮气氛和0℃下，向NaH(3.96g，99mmol)的DMF(36mL)悬浮液中，在30分钟内滴加h-1(6.62g，45mmol)的DMF(45mL)溶液，然在10分钟内滴加h-2(14.85g,90mmol)的DMF(10mL)溶液，混合物在3小时内由0℃升至室温，然后在室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入水(90mL)中并浓缩。将水层用乙醚洗涤，加入盐酸将pH调节至3.3，乙酸乙酯(2x 100mL)萃取，合并有机层，用硫酸钠干燥，减压蒸发溶剂，得到化合物h-3的粗产物。

在氮气氛下，在0℃下将甲磺酸(6.32mL，97mmol)加入到化合物h-3的粗产物的甲醇(33mL)溶液中，并在室温下搅拌18小时。减压蒸发反应混合物的溶剂，并将95Bf14

得到的残余物在0℃下加入到碳酸钾水溶液中。用氯仿(50mL)萃取5次。合并有机层，用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发溶剂，得到化合物h-4(3.0g，两步收率：38％)。

h-5的制备

在氮气氛下，将1M氢氧化锂的水溶液(20.4mL，20.4mmol)加入到化合物b3(3.16g，8.14mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中，并在110℃下搅拌，微波反应15分钟。向反应溶液中加入2M盐酸水溶液(11mL)，然后进一步加入水。过滤收集沉淀的固体，用水洗涤得到的固体，得到化合物h-5(2.81g，收率96％)。LC/MS：m/z＝361.3[M+H]⁺。

h-6的制备

在氮气氛下，化合物h-4(356mg，2.03mmol)和化合物h-5(541mg，1.50mmol)在DMF(11mL)中的溶液，在0℃下HOBt(263mg，1.95mmol)，WSCD.HCl(加入374mg，1.95mmol)并在0℃下搅拌2小时，然后在室温下搅拌1小时。将水(20mL)加入到反应溶液中，并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤有机层。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发溶剂。所获残余物通过硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇)纯化，得到化合物h-6(630mg，收率81％)。LC/MS：m/z＝518.3[M+H]⁺。

h-7的制备

在氮气氛下，将水(0.46mL)和甲磺酸(0.041mL，0.63mmol)加入到化合物h-6(109mg，0.21mmol)的乙腈(2.3mL)溶液中，并在60℃下搅拌3小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)，用氯仿(10mL)萃取混合物三次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(5mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压蒸发溶剂。所得残渣用硅胶柱色谱法(二氯甲烷-甲醇)精制，得到化合物h-7(57.1mg，收率77％)。LC/MS：m/z＝354.2[M+H]⁺。

IV-171的制备

以类似由b6合成化合物I-61a的方法，用h-7合成化合物IV-171。类似方法合成其它化合物

前药化合物I-196的合成

化合物I-61a(491mg，1mmol)，加入DMA(10ml)搅拌，加入氯甲基碳酸甲酯(240mg)及碳酸钾(290mg)，碘化钾(170mg)，升温至50℃并搅拌6小时。再加DMA(1ml)继续搅拌6小时。将反应液冷却至室温，加入DMA(2ml)，于50℃下搅拌5分钟，过滤。0-5℃下向所滤液滴加1N盐酸水(5ml)及水(2ml)并搅拌1小时。过滤得到固体，于60℃下减压干燥，得前药化合物I-196(527mg)，收率91％.LCMS:580.2(M+1)⁺。

类似的方法可以合成如下前药化合物。

生物学评价

帽依赖性核酸内切酶(CEN)抑制活性的测定

1)底物的制备

购入将5′末端的G进行二磷酸化修饰、且2′位的羟基进行甲氧基化修饰、将自5′末端第6位的U进行Cy3标记、3′末端进行BHQ2标记的30merRNA(5′-pp-[m2′ -0]GAA UAU(-Cy3)GCA UCA CUA GUA AGCUUU GCU CUA-BHQ2-3′)，使用ScriptCap系统，附加帽结构(产物为m7G[5′]-ppp-[5′][m2′ -0]GAA UAU(-Cy3)GCA UCA CUA GUA AGC UUUGCU CUA(-BHQ2)-3′)。将其通过改性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行分离、纯化，作为底物使用。

2)酶的制备

RNP是按照规定方法，由病毒颗粒制备(参考文献：VIROLOGY(1976)73，327-338页。LGA M.ROCHOVANSKY)。具体来说，将200μL1x10³PFU/mL A/WSN/33病毒接种于10日龄发育鸡卵中，在37℃下培养2天，然后回收鸡卵的尿囊液。通过使用了20％庶糖的超速离心分离来纯化病毒颗粒，使用TritonX-100和溶血卵磷脂，使病毒颗粒溶解，然后通过使用了30～70％甘油密度梯度的超速离心分离，收集RNP级分(50～70％甘油级分)，作为酶液(含有约1nM的PB1·PB2·PA复合物)使用。

3)酶促反应

在聚丙烯制的384孔板上分注2.5μL酶促反应液(组成：53mM Tris盐酸盐(pH7.8)、1mM氯化镁、1.25mM二硫苏糖醇、80mM NaCl、12.5％甘油、0.15μL酶液)。接着在0.5μL用DMSO连续稀释的受试化合物溶液、阳性对照(PC)和阴性对照(NC)中加入0.5μL DMSO，充分混合。接着加入2μL底物溶液(1.4nM底物RNA、0.05％Tween20)，引发反应，在室温下孵育60分钟，然后将1μL反应液加入到10μL高纯甲酰胺溶液(含有GeneScan120LizSize Standard作为尺寸标记(Sizing marker)：Applied Biosystem(ABI)公司制造)中，终止反应。NC是在反应开始前，通过加入EDTA(4.5mM)来预先中止反应(标记浓度全部为终浓度)。

4)抑制率(IC₅₀值)的测定

将反应终止后的溶液在85℃下加热5分钟，在冰上骤冷2分钟，然后用ABIPRIZM3730Genetic Analyzer(基因分析仪)进行分析。通过分析软件ABI Genemapper对帽依赖性核酸内切酶产物的峰进行定量，分别以PC、NC的荧光强度作为0％抑制、100％抑制，求出受试化合物的CEN反应抑制率(％)，然后使用曲线拟合软件求出IC₅₀值。

CPE抑制效果确认试验

<材料>

1)2％FCS E-MEM(在MEM(最小必须培养基)中添加卡那霉素和FCS进行调制)

2)0.5％BSA E-MEM(在MEM(最小必须培养基)中添加卡那霉素和BSA进行调制)

3)HBSS(Hanks平衡盐溶液)

4)MDBK细胞：用2％FCS E-MEM调整为适当的细胞数(3X10⁵/mL)。

5)MDCK细胞：用HBSS清洗2次，然后用0.5％BSA E-MEM调整为适当的细胞数(5X10⁵/mL)。

6)胰蛋白酶溶液

将来自猪胰腺的胰蛋白酶(SIGMA)用PBS(-)溶解，用0.45μm的滤器过滤。

7)酶标仪

8)WST-8试剂盒

9)10％SDS溶液

<操作流程>

1)受试样品的稀释、分注

作为培养液，使用MDBK细胞时是使用2％FCS E-MEM，使用MDCK细胞时是使用0.5％BSA E-MEM。以下，对病毒·细胞·受试样品的稀释，使用同样的培养液。

预先将受试样品用培养液稀释为适当的浓度，在96孔板上制作2-5倍连续稀释系列(50μL/孔)。制作抗流感活性测定用、细胞毒性测定用两块。对于各药物实施一式三份测定。.

使用MDCK细胞时，只在抗流感活性测定用时，向细胞中添加胰蛋白酶，使终浓度为3μg/mL。

2)流感病毒的稀释、分注

预先将流感病毒用培养液稀释为适当的浓度，各自以50μL/孔分注到加入了受试样品的96孔板中。以50μL/孔将培养液分注到细胞毒性测定用板中。

3)细胞的稀释、分注

以100μL/孔将调整为适当的细胞数目的细胞各自分注到加入了受试样品的96孔板中。

用孔板混合器(plate mixer)混合，在CO2培养箱中培养。抗流感活性测定用、细胞毒性测定用均培养3天。

4)WST-8的分注

将培养了3天的96孔板在肉眼、显微镜下观察，从板上以没有吸走细胞的方式清除上清。

将WST-8试剂盒用培养液稀释10倍，以各100μL将该WST-8溶液分注到各孔中。用孔板混合器混合，然后在CO 2培养箱中培养1～3小时。

对于抗流感活性测定用板，培养后，在各孔中各自分注10μL 10％SDS溶液，使病毒失活。

5)吸光度的测定

对于混合的96孔板，用EnVision、以450nm/620nm的双波长测定吸光度。

<各测定项目值的计算>

基于以下的计算式，使用Microsoft Excel程序进行计算。

50％流感感染细胞死亡抑制浓度(EC₅₀)的计算

EC₅₀＝10^Z

Z＝(50％-High％)/(High％-Low％)x{log(High conc.)-log(Low conc.)}+log(High conc.)

作为母体化合物的受试物质(实施例化合物)的测定结果示于表1。

表1 CPE抑制效果测试结果

0.1nM≤+++++≤1nM<++++≤10nm≤+++≤50nM

A≥100μM≥B≥50μM≥C≥10μM≥D≥1μM≥E≥0.1μM

由以上结果可知，所有化合物显示很高的CPE抑制效果，许多化合物CPE抑制效果是S-033188A的两倍以上，毒性比S-033188A小5倍甚至10倍以上。因此，实施例化合物可以制备用作由流感病毒感染所诱发的症状/疾病的预防/治疗药物。

生物利用度(BA)试验

口服吸收性的研究实验材料和方法

(1)使用动物：使用大鼠。

(2)饲养条件：使大鼠自由摄取固形饲料和灭菌自来水。

(3)施与量、分组的设定：利用规定的施与量进行口服施与、静脉内施与。如以下这样设定组。(各化合物的施与量有变化)

口服施与1～30mg/kg(n＝2～3)

静脉内投与0.5～10mg/kg(n＝2～3)

(4)施与液的制备：口服施与以溶液或悬浮液的方式施与。静脉内施与以可溶化的方式施与。

(5)施与方法：口服施与是通过口服饲管强制性地向胃内施与。静脉内施与是通过带有注射针的注射器从尾静脉施与。

(6)评价项目：经时地采血，使用LC/MS/MS测定血浆中药物浓度。

(7)统计分析：对于血浆中浓度变化，使用非线性最小二乘法程序算出血浆中浓度-时间曲线下面积(AUC)，由口服施与组和静脉内施与组的AUC算出生物利用度(BA)。

使用大鼠测定的测定结果示于下表2。

表2母体化合物及前药的生物利用度

Preparation of Chloromethyl Esters.According to a previously reportedprocedure[22]，AcCl(20g，268mmol)was added dropwise to a mixture ofparaformaldehyde(8g，268mmol，1equiv.)and ZnCl2(0.73g，5.4mmol，0.02equiv.)at 08，and the mixture was stirred for 1h at this temp.Then，the cooling bath wasremoved，and the mixture was stirred for 6h.Distillation at 758/1.5mbarafforded chloromethyl acetate(16.4g，150mmol，57％)as a colorlessliquid.Similarly，propanoyl chloride(26.5g，0.289mol)

afforded chloromethyl propanoate(20g，58％)，isobutyryl chloride(40g，0.38mol)gave chloromethyl isobutyrate(18g，35％)，cyclopropanoyl chloride(8.6g，80mmol)provided chloromethyl cyclopropa-noate(8.2g，78％)，hexanoyl chloride(9.7g，74mmol)afforded chloromethyl hexanoate(10g，83％)，

octanoyl chloride(9.5g，58mmol)gave chloromethyl octanoate(9.4g，84％)，decanoyl chloride(18.6g，97mmol)gave chloromethyl decanoate(8g，37％)，andstearoyl chloride(18.2g，60mmol)pro-vided chloromethyl stearate(14.3g，71％

由以上的结果可知，前药与母体化合物相比，绝大多数生物利用度得到提高。因此，本发明化合物较S-033188A/S-033188B的口服吸收性优异，可形成用作由感染流感病毒而引发的症状和/或疾病的治疗和/或预防剂的药药物，预示给药剂量可以更小、副作用更低。

Claims

1.一种帽依赖性内切核酸酶抑制剂，其特征是结构如下所示的化合物:

2.一种药物组合物，其含有权利要求1中任一项所述的多环化合物、或其制药上可接受的盐。

3.一种权利要求2所述的药物组合物在制备具有抗流感作用的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的药物组合物在制备具有抗流感作用的药物中的应用，所述抗流感作用的药物是抗流感作用的制剂。