KR20050059051A - 위장 증상의 치료 및 예방 방법 - Google Patents

위장 증상의 치료 및 예방 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명에는 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 선택적 억제제의 치료상 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 유도성 산화질소 신타제에 의한 산화질소 과생성을 포함하는 위장관 증상 및 질환의 예방 및 치료를 위한 치료 방법이 기재되어 있다. 본 발명은 또한 항미생물제 및 항분비제를 비롯한 다른 치료제와 함께 iNOS 선택적 억제제를 사용하는 방법을 포함한다.

Description

위장 증상의 치료 및 예방 방법 {Methods for Treatment and Prevention of Gastrointestinal Conditions}
표제 35 미국 코드, §119 하에 2002년 8월 2일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 제60/400,660호를 우선권으로 청구하고, 그 개시내용을 본원에 참고로 포함한다.
본 발명은 일반적으로 위장 질환 및 증상을 치료하는 방법에 관한 것이며, 보다 구체적으로 산화질소 과생성을 포함하는 궤양을 비롯한 위장관 증상 및 질환의 치료 및 예방에 대한 신규 방법에 관한 것이다.
소화성 궤양 질환은 약 10％ 이하의 미국 인구가 일생동안의 어떤 시기에 걸리는 위 및 십이지장의 만성 염증성 증상이다. 소화성 궤양 질환은 사망률이 높지는 않지만, 그럼에도 불구하고 비용이 많이 들고, 다수의 개체에게 심각한 고통을 준다. 상부 위장 (G.I.)관에서의 다른 형태의 만성 염증, 예를 들어 표재성 위염 및 식도염이 또한 인간에게 상당한 고통을 준다.
최근까지, 상부 G. I. 질환은 주로 위산과 같은 소화액의 과다 분비로 인한 것으로 여겨져서, 치료 방법은 식이요법 및 스트레스-관련 인자를 제어하는 것에 집중되었다. 제산제 요법이 선택된 방법이었다. 1971년에, 히스타민 수용체 아형인 H2 수용체가 처음으로 확인되었고, 이는 위산 분비의 1차 조정자로 여겨졌다. H2 수용체 길항제가 사용가능하며 소화성 궤양 질환을 위한 안전하고 효과적인 요법을 구성하는 것으로 밝혀졌다. 이후에, 양성자-펌프 억제제, 비스무쓰 화합물, 수그랄페이트 및 프로스타글란딘을 비롯한, 소화성 점막 방어를 향상시키는 기타 작용제가 치료를 위한 안전하고 효과적인 작용제임이 입증되었다. 그러나, 완벽하게 효과적인 치료에도 불구하고, 소화성 궤양 질환은 높은 재발율을 유지하고 있다.
1982년에, 박테리아 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) (에이치. 파일로리(H. pylori))가 처음으로 위 상피 세포 표면과 그위에 놓인 점액 젤 층 사이의 좁은 계면으로부터 단리되었다. 에이치. 파일로리는 이후에 그자체로 확인되었고 또한 현재 위십이지장 궤양 및 발암에 포함되는 중요한 병인임이 공지되어 있다. 염증 및 궤양을 유도하는 에이치. 파일로리 감염에 대한 병리학이 아직 잘 이해되지는 않지만, 2가지 이상의 가능한 메카니즘이 산소 라디칼 수준에 대한 에이치. 파일로리 효과를 야기한다. 에이치. 파일로리는 염증이 생긴 위 상피를 침투하는 호중구로부터 산소 라디칼의 방출을 유도함으로써, 또는 위 상피에서 직접적으로 산소 라디칼의 생성을 유도함으로써 산소 라디칼 수준을 증가시킬 수 있다. 각 경우에, 높아진 수준의 산소 라디칼이 세포막 손상을 증가시킬 것이다.
에이치. 파일로리와 소화성 궤양 질환 간의 인과 관계가 잘 성립되어 있지는 않지만, 상기 박테리아가 표재성 위염에 인과적으로 관련되어 있음은 명백하다. 에이치. 파일로리에 대해 양성으로 검사된 대부분의 모든 환자는 전정부 위염으로 증명되고, 에이치. 파일로리 감염을 제거함으로써 위염을 치료한다. 만성 표재성 위염은 에이치. 파일로리를 위내로 투여함으로써 동물 모델에서 발병되고, 2인 이상에서는 박테리아의 경구 투여시 위염이 발생하는 것으로 보고되었다. 에이치. 파일로리와 소화성 궤양 질환 간의 인과적인 연결에 대한 가장 강력한 증거는 에이치. 파일로리 감염을 근절시키면 재발율이 유의하게 감소한다는 것이다. 이러한 감소는 위 궤양에 대해서는 십이지장 궤양에 대해서 만큼 잘 확증되지는 않았으나, 유효한 증거가 유사한 효과를 제안하고 있다. 일반적으로, 아마도 소화성 궤양 질환에 대한 적합한 동물 모델이 부족하고, 단지 감염된 일부 개체에서만 실제 궤양이 발병하기 때문에, 에이치. 파일로리 감염과 소화성 궤양 질환 간의 관계를 확립하기가 더 어렵다.
따라서, 에이치. 파일로리에 대해 양성으로 검사된 위염에 걸린 환자에서 및 소화성 궤양 질환에 걸린 환자에서, 현재 통상적으로 항미생물제를 투여하는 요법을 포함시킨다. 그러나, 소화성 궤양 질환에 대한 적합한 동물 모델의 계속적인 부족으로 잠재적인 항미생물제 요법을 평가하는 능력이 제한된다. 따라서, 항미생물제 요법의 효능에 대한 데이타는 대부분 인간에서 수행될 수 있는 제한된 시도에 의존하고, 현재, 진행 중이다. 따라서, 소화성 궤양 질환의 경우에는 항미생물제 요법의 단일 기준이 존재하지 않고, 대신 효능, 순응성, 부작용 및 비용을 비롯한 다양한 인자를 반드시 고려하여 항미생물제 요법적 섭생의 선택이 달라진다. 연구되고 사용되는 작용제로는 메트로니다졸, 테트라시클린, 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 화합물, H2 수용체 길항제 및 양성자-펌프 억제제가 단독으로 또는 서로 함께 포함된다.
산화질소 (NO)는 현재 많은 체조직에서 염증성 반응에 포함되는 인자로 공지되어 있다. 산화질소는 1980년대에 처음으로 기재된 내피-의존성 혈관 이완 현상을 초래하는 인자이다. 그 이래로, 효소 산화질소 신타제 (NOS)에 의한 NO 생합성이 밝혀졌고, 본 발명자들은 NOS가 아미노산 L-아르기닌으로부터 NO를 합성한다는 것을 본 발명에서야 알게되었다. 그러나, 산화질소는 혈관 내피에만 유일하게 존재하지 않고, 대신 많은 상이한 조직에서 다양한 자극에 반응하여 발생하고, 다양한 생리학상 역할을 수행하는 것으로 보인다. 내피-의존성 혈관 이완 외에도, NO는, 예를 들어 식세포의 세포독성 및 중추 신경계에서의 세포-대-세포 전달을 비롯한 다수의 생물학적 작용에 포함된다. 산화질소는 또한 가용성 구아닐레이트 시클라제의 내인성 자극자이다. 늘어가는 증거물은 관절염과 같은 특정 증상의 결과로서 발생하는 연골 퇴화에서의 NO와 관련되고, 증가된 NO 합성은 류마티스 관절염 및 골관절염과 연관된다.
소정 증상을 나타내는 임의의 소정 조직에서의 NO의 정밀한 역할이 NO를 발생시키는 산화질소 신타제의 특정 이소형에 밀접하게 연관되어 있는 것으로 보인다. 하기와 같이, 3가지 유형 이상의 NOS가 존재한다.
(i) 수용체 또는 물리적 자극에 대한 반응으로 NO를 방출하는, 내피에 위치하는 구성 Ca++/칼모듈린 의존성 효소 (이하 "eNOS").
(ii) 수용체 또는 물리적 자극에 대한 반응으로 NO를 방출하는, 뇌에 위치하는 구성 Ca++/칼모듈린 의존성 효소 (이하 "nNOS").
(iii) 내독소 및 사이토킨에 의해 혈관 평활근, 대식세포, 내피 세포 및 다수의 기타 세포를 활성화시킨 후에 유도되는 Ca++ 의존성 효소. 이 유도성 산화질소 신타제 (이하 "iNOS")가 발현되면, NO가 장기간 동안 계속적으로 발생한다.
각각의 2종의 구성 효소에 의해 방출되는 NO는 몇몇 생리적인 반응을 기초로 하는 전달 메카니즘으로서 작용한다. 반대로, 유도성 효소에 의해 생성되는 NO는 종양 세포, 박테리아, 바이러스 및 기생충에 대한 세포독성 분자이고, 따라서 암 및 미생물 침해에 대한 숙주 방어의 성분이다. 그러나, 또한 과도한 NO 생성의 역효과, 특히 병리학상 혈관확장 및 조직 손상이 iNOS에 의해 합성되는 NO로부터 주로 발생할 수 있는 것으로 보인다. iNOS에 의해 생성되는 대량의 NO는 NO와 초산화물과의 반응으로부터 생성되는 퍼옥시아질산염을 생성하기 때문에 조직에 유해하다. 소화계에서, 위십이지장 염증과 연관된 증가된 iNOS 활성은 궤양을 유도하는 조직 손상에 연결될 수 있다.
증가된 iNOS 활성은 위 상피 세포의 에이치. 파일로리 감염으로 관찰되는 조직 손상에 기여할 수 있다. 증가된 iNOS 활성은 에이치. 파일로리-양성 십이지장 궤양에 걸린 환자에서 관찰된다. 아포프토시스(Apoptosis) 또는 예정된 세포 죽음은 몇몇 세포 시스템에서는 NO에 의해 유도되고, 에이치. 파일로리 감염은 위 상피 세포의 아포프토시스를 발생시킨다. 증가된 수준의 iNOS 발현 및 위 상피 세포 아포프토시스는 에이치. 파일로리 감염과 연관된다. 따라서, 증가된 iNOS 발현으로 인한 만성적으로 높은 수준의 NO는 에이치. 파일로리-유도성 위 아포프토시스에 포함될 수 있다.
NOS의 비선택적 및 선택적 억제제가 공지되어 있다. 보다 구체적으로, 치료 용도를 목적으로 하는 일부 NO 신타제 억제제는 이들이 구성 NO 신타제 및 유도성 NO 신타제 둘다를 억제한다는 점에서 비선택적이다. 따라서, 비선택적 NO 신타제 억제제는 구성 NO-신타제의 과도 억제로 인한 잠재적으로 심각한 역효과를 피하기 위해 주의를 기울여 사용할 필요가 있다. 이러한 역효과에는 고혈압 및 가능한 혈전증 및 조직 손상이 포함된다. 예를 들어, 독소 쇼크를 치료하기 위해 NOS 억제제 L-NMMA를 치료적으로 사용하는 경우, 치료 전반에 걸쳐 계속적으로 환자의 혈압을 모니터링해야만 함을 주지한다. 특히, eNOS 활성을 실질적으로 방해하는 비선택적 iNOS 억제제를 사용하면, 환자는 위 상피 세포를 비롯한 상피 세포가 손상되어 가능한 위 출혈이 유도되는 위험에 있을 수 있다.
따라서, 비선택적 NO 신타제 억제제를 사용하는 염증성 증상의 치료 및 예방 방법이 치료적 유용성을 가질 수 있지만, 단 적절한 주의를 기울여야 하므로, NO 신타제 선택적 억제제를 사용하는 방법, 즉 NO 신타제의 구성 이소형보다 상당히 더 넓은 범위로 유도성 NO 신타제를 억제하는 화합물을 사용하는 방법이 보다 더 큰 치료 이익이 되고 보다 용이하게 시행될 것이다 (문헌[S. Moncada and E. Higgs, FASEB J., 9, 1319-1330, 1995]).
하기 개개의 문헌에는 산화질소 합성을 억제하고 잠재적으로 산화질소 신타제의 유도성 이소형을 억제하는 화합물이 개시되어 있다:
PCT 특허 출원 WO 96/35677호.
PCT 특허 출원 WO 96/33175호.
PCT 특허 출원 WO 96/15120호.
PCT 특허 출원 WO 95/11014호.
PCT 특허 출원 WO 95/11231호.
PCT 특허 출원 WO 99/46240호.
PCT 특허 출원 WO 95/24382호.
PCT 특허 출원 WO 94/12165호.
PCT 특허 출원 WO 94/14780호.
PCT 특허 출원 WO 93/13055호.
PCT 특허 출원 WO 99/62875호.
유럽 특허 제EP0446699A1호.
U.S. 특허 제5,132,453호.
U.S. 특허 제5,684,008호.
U.S. 특허 제5,830,917호.
U.S. 특허 제5,854,251호.
U.S. 특허 제5,863,931호.
U.S. 특허 제5,919,787호.
U.S. 특허 제5,945,408호.
U.S. 특허 제5,981,511호.
U.S. 특허 제6,586,474호에는 유도성 산화질소 신타제를 억제하는데 유용한 특정 아미디노 유도체가 개시되어 있다.
PCT 특허 출원 WO 99/62875호에는 유도성 산화질소 신타제를 억제하는데 유용한 추가 아미디노 화합물이 개시되어 있다.
이러한 배경을 바탕으로, 소화성 궤양 질환 및 위염을 포함하나 이에 제한되지 않는 위장관 증상 및 질환을 치료하기 위한 새로운 방법을 확인하는 것에 대한 관심이 증가되었다. 또한, 각각 상이한 작용 방식을 갖는 2종 이상의 작용제의 저용량의 조합을 사용하여 각 작용제의 독성 및 역부작용이 최소화되도록 전체 치료 효능을 증진시키는 방법을 확인하는 것에 대한 큰 관심이 존재한다. 따라서, 신규 iNOS 선택적 억제제의 사용을 포함하는, 위장관 염증성 증상 및 질환의 치료 및 예방을 위한 새로운 방법을 확인하고 기재하는 것이 유리할 것이다. 또한, iNOS 선택적 억제제와 항미생물제와 같은 다른 작용제와의 조합물을 사용하여 위장관의 염증성 증상 및 질환의 예방 및 치료에서 각 작용제의 효능을 유지하거나 증진시키는 방법을 확인하고 기재하는 것이 유리할 것이다.
발명의 요약
본 발명은 iNOS 선택적 억제제로서 작용하는 신규 화합물을 사용하는, iNOS에 의한 산화질소 과생성을 포함하는 위장관 증상 및 질환의 치료 및 예방에서 효율적인 잇점을 갖는 방법을 기재하고 있다.
넓은 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 화학식 II의 상응하는 구조를 갖는 화합물, 화학식 III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X의 화합물 또는 화학식 XI의 2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노)]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로로로부터 선택되는 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 선택적 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 항염증성 유효량을 iNOS에 의한 산화질소 (NO) 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, iNOS에 의한 산화질소 (NO) 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방하는 신규 화합물 및 제약 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
상기 식 중,
R1은 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되나; 단, R1 또는 R2 중 하나 이상은 할로를 함유하고;
R7은 H 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
J는 히드록시, 알콕시 및 NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
여기서, R3은 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R4는 H 및 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 상기 고리 중 하나 이상의 구성원은 탄소이고, 1 내지 약 4개의 헤테로원자는 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복스아미도알킬, 디카르복스아미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복스아미도시클로알킬, 디카르복스아미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있다.
상기 식 중,
X는 -S-, -S(O)- 및 -S(O)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, X는 -S-이다. R12는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C5 알콕시-C1 알킬 및 C1-C5 알킬티오-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 이들 기들은 각각 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환된다. 바람직하게는, R12는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. R13 및 R18에 대하여, R18은 -OR24 및 -N(R25)(R26)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R13은 -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 및 -C(O)-S-R29로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R18은 -N(R30)-이고, R13은 -C(O)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R18은 -O-이고, R13은 -C(R31)(R32)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. R13이 -C(R31)(R32)-인 경우, R14는 -C(O)-O-R33이거나; 다르게는, R14는 -H이다. R11, R15, R 16 및 R17은 독립적으로 -H, 할로겐, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 C1-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로보터 선택된다. R19 및 R20은 독립적으로 -H, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 Cl-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. R21 및 R22에 대하여, R21은 -H, -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택되고, R22는 -H, -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R21 은 -O-이고, R22는 -C(O)-인데, 여기서 R21과 R22가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하거나; R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21과 R22 가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성한다. R23은 C1 알킬이다. R24는 -H 및 C1-C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 R24가 C1-C6 알킬인 경우, R24 는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R25 및 R26에 대하여, R25는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R26은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 및 -C(O)-S-R40으로 이루어진 군으로부터 선택되는데; 여기서 R25 및 R26이 독립적으로 알킬 또는 알콕시인 경우, R25 및 R26은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기로 임의 치환되거나; R25는 -H이고; R26은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. R27, R28, R29, R30, R31 , R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R11, R12, R13, R14 , R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24 , R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40이 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기이면, 상기 잔기는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 임의 치환된다.
상기 식 중,
R41은 H 또는 메틸이고;
R42는 H 또는 메틸이다.
상기 식 중,
R43은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R44는 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R45는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
상기 식 중,
R46은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
상기 식 중,
R47은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R48은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R49는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
상기 식 중,
R50은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환된다.
상기 식 중,
R50은 수소, 할로 및 Cl-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
R51은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R52는 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R53은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R54는 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1 -C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
상기 식 중,
R55는 C1-C5 알킬인데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
본 발명의 방법을 이용하여 치료되거나 예방되는 위장관의 증상 또는 질환에는 크론병(Crohn's disease) 및 궤양성 결장염을 비롯한 염증성 장 질환, 위궤양 및 십이지장 궤양을 비롯한 소화성 궤양 질환, 위염, 결장염, 회장염, 식도염, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 마비성 장폐쇄증 및 설사가 포함되나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 방법은 또한 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제의 양 및 항생제 화합물의 양이 함께 위장관 증상 및 질환에 대한 유효량을 구성하는, 하기 화학식 I의 화합물, 화학식 II의 상응하는 구조를 갖는 화합물, 화학식 III, IV, V, VI, VII, VIII, IX 또는 X의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 양, 및 항미생물성 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 양을 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 및 미생물 감염에 의한 산화질소 (NO) 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 유도성 산화질소 신타제 및 미생물 감염에 의한 산화질소 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방 방법을 포함한다.
<화학식 I>
상기 식 중,
R1은 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되나;
단, R1 또는 R2 중 하나 이상은 할로를 함유하고;
R7은 H 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
J는 히드록시, 알콕시 및 NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
여기서, R3은 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R4는 H 및 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 상기 고리 중 하나 이상의 구성원은 탄소이고, 1 내지 약 4개의 헤테로원자는 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복스아미도알킬, 디카르복스아미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복스아미도시클로알킬, 디카르복스아미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있다.
<화학식 II>
상기 식 중,
X는 -S-, -S(O)- 및 -S(O)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, X는 -S-이다. R12는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C5 알콕시-C1 알킬 및 C1-C5 알킬티오-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 이들 기들은 각각 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환된다. 바람직하게는, R12는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. R13 및 R18에 대하여, R18은 -OR24 및 -N(R25)(R26)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R13은 -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 및 -C(O)-S-R29로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R18은 -N(R30)-이고, R13은 -C(O)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R18은 -O-이고, R13은 -C(R31)(R32)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. R13이 -C(R31)(R32)-인 경우, R14는 -C(O)-O-R33이거나; 다르게는, R14는 -H이다. R11, R15, R 16 및 R17은 독립적으로 -H, 할로겐, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 C1-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로보터 선택된다. R19 및 R20은 독립적으로 -H, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 Cl-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. R21 및 R22에 대하여, R21은 -H, -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택되고, R22는 -H, -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R21은 -O-이고, R22는 -C(O)-인데, 여기서 R21과 R22가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하거나; R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21과 R22 가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성한다. R23은 C1 알킬이다. R24는 -H 및 C1-C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 R24가 C1-C6 알킬인 경우, R24 는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R25 및 R26에 대하여, R25는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R26은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 및 -C(O)-S-R40으로 이루어진 군으로부터 선택되는데; 여기서 R25 및 R26이 독립적으로 알킬 또는 알콕시인 경우, R25 및 R26은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기로 임의 치환되거나; R25는 -H이고; R26은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. R27, R28, R29, R30, R31 , R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R11, R12, R13, R14 , R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24 , R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40이 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기이면, 상기 잔기는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 임의 치환된다.
<화학식 III>
상기 식 중,
R41은 H 또는 메틸이고;
R42는 H 또는 메틸이다.
<화학식 IV>
<화학식 V>
상기 식 중,
R43은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R44는 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R45는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
<화학식 VI>
상기 식 중,
R46은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
<화학식 VII>
상기 식 중,
R47은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R48은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R49는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
<화학식 VIII>
상기 식 중,
R50은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환된다.
<화학식 IX>
상기 식 중,
R50은 수소, 할로 및 Cl-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
R51은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R52는 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R53은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R54는 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1 -C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
<화학식 X>
상기 식 중,
R55는 C1-C5 알킬인데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
또다른 예시 화합물에서, 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제는 화학식 XI의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이고, 상기 화합물 XI의 2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노)]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로로는 2000년 5월 11일에 공개된 국제 출원 번호 제00/26195호에 이미 기재되어 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다.
<화학식 XI>
본 발명은 또한 다른 선택적 iNOS 억제제의 사용도 고려한다. 예를 들어, 본 발명에 또한 유용한 iNOS 선택적 억제제는 하기 화학식 XII를 갖는 선택적인 iNOS 억제제를 기재하고 청구하는, 2000년 11월 29일에 출원되고 2002년 3월 12일에 특허허여된 U.S. 특허 제6,355,689호 (베스윅 등(Beswick et al.))에 기재된 것이다.
상기 식 중,
R79는 C1-4 알킬, C3-4 시클로알킬, C1-4 히드록시알킬 및 C 1-4 할로알킬로부터 선택된다. U.S. 특허 제6,355,689호의 기재는 R79가 바람직하게는 C1-4 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸인 것으로 언급된다. U.S. 특허 제6,355,689호에 개시되고 본 발명의 방법 및 조성물에 적합한 특정 실시양태에는
S-((R)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((R)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)부틸)-L-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노, 2-시클로프로필)에틸)-L-시스테인; 및
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노, 3-히드록시)프로필)-L-시스테인, 또는 이들의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 또는 생리학상 관능성 유도체가 포함된다.
상기 선택적 iNOS 억제제는 iNOS 효소에 대한 기질로서의 아르기닌과 경쟁적으로 작용하는 것으로 여겨진다. NOS 억제에 대한 또다른 방법은 1998년 8월 27일에 공개된 아르나이즈 등(Arnaiz et al.)의 국제 특허 출원 번호 PCT/US98/03176호, 공개 번호 WO 98/37079호 (아르나이즈) (94804-0099 캘리포니아주 리치몬드 소재의 베를렉스 래버레이토리스, 인크.(Berlex Laboratories, Inc.) 및 08540 뉴저지주 프린스톤 소재의 파마코페이아, 인크.(Pharmacopeia, Inc.))에 기재되어 있다. 아르나이즈 출원에는 iNOS 단량체의 이량체화에 대한 억제제가 기재되어 있다. iNOS 효소는 동종이량체이고; 각 단량체는 플라빈 보조인자 (FAD 및 FMN)에 대한 결합 부위 및 NADPH에 대한 결합 부위를 포함하는 리덕타제 도메인을 갖는다. 상기 리덕타제 도메인은 또다른 단량체의 옥시다제 도메인에 전자를 공급하는데, 여기서 L-아르기닌은 활성 부위에서 산화되어, 헴(heme) 기 (Fe) 사이토크롬 P-450 도메인을 혼입시킨다. 테트라히드로비오프테린 (BH4)은 동종이량체화에 요구되고 전자 전달 동안 헴 산화환원 상태를 조절한다. iNOS 단량체는 불활성이고, 활성을 위해 이량체화를 요구한다.
예를 들어, 본 발명의 또다른 실시양태에서, 선택적 iNOS 억제제는 단일 입체이성질체로서의 하기 화학식 XIII, 화학식 XIV 또는 화학식 XV의 화합물, 또는 이들의 혼합물, 또는 이들의 제약상 허용되는 염으로 나타내는 이량체화 억제제이다.
상기 식 중,
A는 -R56, -OR56, C(O)N(R56)R57, P(O)[N(R56)R 57]2, -N(R56)C(O)R57, -N(R76)C(O)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(O)N(R56 )R71, -S(O)tR56, -SO2NHC(O)R56, -NHSO2R77,- SO2NH(R56)H, -C(O)NHSO2R77 또는 -CH=NOR56이고;
각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 C(R19)이고;
각각의 U는 N 또는 C(R60)이나, 단, X가 N이고 Z 및 Y가 CR74인 경우에만 U가 N이고;
V는 N(R59), S, O 또는 C(R59)H이고;
각각의 W는 N 또는 CH이고;
Q는 직접 결합, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(O)t 및 -N(R61)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
m은 0 또는 1 내지 4의 정수이고;
n은 0 또는 1 내지 3의 정수이고;
q는 0 또는 1이고;
r은 0 또는 1이나,
단, Q 및 V가 헤테로원자인 경우, m, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR57, -N(R 56)R76, -N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (여기서, t는 0임) 또는 -NHSO2R77인 경우, n, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
Q가 헤테로원자이고 A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR 57, -N(R56)R76, N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (t가 0인 경우) 또는 -NHS02R77인 경우, m 및 n은 둘다 0일 수는 없고;
t는 0, 1 또는 2이고;
은 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
는 임의 치환된 카르보시클릴 또는 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
각 R56 및 R57은 독립적으로 수소, 임의 치환된 Cl-C20 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, -[C0-C8 알킬]-R64, -[C2-C8 알케닐]-R 64, -[C2-C8 알키닐]-R64, -[C2-C8 알킬]-R65 (히드록시로 임의 치환됨), -[C1-C8]-R66 (히드록시로 임의 치환됨), 임의 치환된 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
R56과 R57은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
R58은 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 할로알킬, -[C1-C8 알킬]-C(O)N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2-C8 알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66 및 헤테로시클릴 (할로, 알킬, 알콕시 및 이미다졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Q가 -N(R58)- 또는 R58로의 직접 결합인 경우, R58은 추가로 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐 및 -C(=NR73)-NH2일 수 있거나;
-Q-R58이 함께 -C(O)OH, -C(O)N(R56)R57 또는
을 나타낼 수 있고;
R59는 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬 및 시클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되나;
단, A가 -R56 또는 -OR56인 경우, R59는 수소일 수 없고, V가 CH인 경우, R59는 추가로 히드록시일 수 있고;
R60은 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬, 할로알킬, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 아릴, -OR71, -S(O)t-R71, N(R71)R76, N(R 71)C(O)N(R56)R71, N(R71)C(O)OR71, N(R71)C(O)R71, -[C0-C8 알킬]-C(H)[C(O)R71]2 및 -[C0-C8 알킬]-C(O)N(R56)R71로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R61은 수소, 알킬, 시클로알킬, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2 -C8]알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66, 아실, -C(O)R63, -C(O)-[C1-C8 알킬]-R63, 알콕시카르보닐, 임의 치환된 아릴옥시카르보닐, 임의 치환된 아르알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 알콕시카르보닐알킬, 카르복시알킬, 임의 치환된 아릴술포닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 임의 치환된 아릴아미노카르보닐, 아미노술포닐, 모노알킬아미노술포닐 디알킬아미노술포닐, 아릴아미노술포닐, 아릴술포닐아미노카르보닐, 임의 치환된 N-헤테로시클릴, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(O)R78-N(R56)R57, -C(O)-N(R56 )R78-C(O)OR56으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R63 및 R64는 독립적으로 할로알킬, 시클로알킬 (할로, 시아노, 알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨), 카르보시클릴 (할로, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨) 및 헤테로시클릴 (알킬, 아르알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨)로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 R65는 독립적으로 할로, 알콕시, 임의 치환된 아릴옥시, 임의 치환된 아르알콕시, 임의 치환된 -S(O)tR77, 아실아미노, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, (트리페닐메틸)아미노, 히드록시, 머캅토, 알킬술폰아미도로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R66은 독립적으로 시아노, 디(알콕시)알킬, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐 및 디알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R67, R68, R69, R70, R72 및 R75는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
각각의 R71은 독립적으로 수소, 알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬 또는 시클로알킬이고;
R73은 수소, NO2 또는 톨루엔술포닐이고;
각각의 R74는 독립적으로 수소, 알킬 (히드록시로 임의 치환됨), 시클로프로필, 할로 또는 할로알킬이고;
각각의 R76은 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, -C(O)R77 또는 -SO2R77이거나;
R76은 R56 및, 이들이 부착된 질소와함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이거나;
R76은 R71 및, 이들이 부착된 질소와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
각각의 R77은 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴 또는 임의 치환된 아르알킬이고;
R78은 아미노산 잔기이다.
또다른 iNOS 이량체화 억제제인 3-(2,4-디플루오로페닐)-6-{2-[4-(1H-이미다졸-1-일메틸)페녹시]에톡시}-2-페닐피리딘 (PPA250)은 문헌[Ohtsuka et al., J Phamacol Exp Ther Vol. 303, Issue 1,52-57, October 2002]에 기재되어 있다. PPA250은 하기 구조를 갖는다.
따라서, 본 발명의 또다른 실시양태에서는, 화합물 PPA250를 선택적 iNOS 억제제로서 사용할 수 있다.
항미생물성 화합물은, 예를 들어, 니트로이미다졸, 양성자-펌프 억제제, 비스무쓰 화합물, 또는 임의의 항생제 화합물, 예를 들어 페니실린이다. 본 발명의 방법에 따라 선택적 iNOS 억제제와 함께 유용한 항미생물성 화합물에는 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 서브살리실레이트, 메트로니다졸, 오메프라라졸, 라니티딘 및 테트라시클린이 단독으로 또는 서로 함께 포함된다. 본 발명의 방법에 유용한 이중 항미생물성 화합물은, 예를 들어, 오메프라졸과 아목시실린의 조합물이다. 본 발명의 방법에 유용한 삼중 항미생물성 화합물은, 예를 들어, 라니티딘, 메트로니다졸 및 아목시실린의 조합물이다.
하기 상세 설명은 본 발명을 시행하려는 당업자들을 보조하기 위해 제공된다. 그러나, 이 상세 설명은 본 발명을 제한하는 것으로 해석되지 않으며, 본원에 개시된 예시적 실시양태에서 가능한 많은 개선 및 변형이 첨부된 청구항의 범주를 벗어나지 않는 한 당업자들에 의해 만들어질 수 있다.
본원에 인용된 각각의 1차 문헌의 내용 및 1차 문헌 내에 인용된 참고문헌의 내용은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본 발명은 크론병 및 궤양성 결장염을 비롯한 염증성 장 질환, 위궤양, 십이지장 궤양 및 식도 궤양을 비롯한 소화성 궤양 질환, 및 위염, 회장염, 식도염, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 마비성 장폐쇄증 및 설사를 비롯한 다른 염증성 증상을 예방 및 치료하기 위해 약물을 사용하는 치료 방법을 비롯한, 신규 선택적 iNOS 억제제를 사용하여 위장관의 염증성 증상 또는 질환을 치료 또는 예방하는 치료 방법을 포함한다. 치료 방법은 화학식 I 내지 X로부터 선택되는 화학식을 갖는 유도성 산화질소 신타제의 선택적 억제제의 항염증성 유효량을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
a. 정의
하기 정의는 본 발명의 상세 설명을 이해하는 것을 보조하기 위해 제공된다.
용어 "알킬"은 단독 또는 조합으로, 바람직하게는 1 내지 약 10개의 탄소 원자를 함유하고, 보다 바람직하게는 1 내지 약 6개의 탄소 원자를 함유하는 선형 또는 분지형 비시클릭(acyclic) 알킬 라디칼이다. "알킬"은 또한 3 내지 약 7개의 탄소 원자, 바람직하게는 3 내지 5개의 탄소 원자를 함유하는 시클릭 알킬 라디칼을 포함한다. 상기 알킬 라디칼은 하기 정의되는 기로 임의 치환될 수 있다. 상기 라디칼의 예로는 메틸, 에틸, 클로로에틸, 히드록시에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 시아노부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 아미노펜틸, 이소-아밀, 헥실, 옥틸 등이 포함된다.
용어 "알케닐"은 선형 또는 분지형의 불포화 비시클릭 탄화수소 라디칼이고, 이는 하나 이상의 이중 결합을 함유한다. 상기 라디칼은 2 내지 약 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 약 4개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 약 3개의 탄소 원자를 함유한다. 상기 알케닐 라디칼은 하기 기재된 기로 임의 치환될 수 있다. 적합한 알케닐 라디칼의 예로는 프로페닐, 2-클로로프로필레닐, 부텐-1-일, 이소부테닐, 펜텐-1-일, 2-메틸부텐-1-일, 3-메틸부텐-1-일, 헥센-1-일, 3-히드록시헥센-1-일, 헵텐-1-일 및 옥텐-1-일 등이 포함된다.
용어 "알키닐"은 선형 또는 분지형의 불포화 비시클릭 탄화수소 라디칼을 나타내고, 이는 하나 이상의 삼중 결합을 함유하며, 상기 라디칼은 2 내지 약 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 약 4개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 약 3개의 탄소 원자를 함유한다. 상기 알키닐 라디칼은 하기 기재된 기로 임의 치환될 수 있다. 적합한 알키닐 라디칼의 예로는 에티닐, 프로피닐, 히드록시프로피닐, 부틴-1-일, 부틴-2-일, 펜틴-1-일, 펜틴-2-일, 4-메톡시펜틴-2-일, 3-메틸부틴-1-일, 헥신-1-일, 헥신-2-일, 헥신-3-일, 3,3-디메틸부틴-1-일 라디칼 등이 포함된다.
용어 "알콕시"는 각각 1 내지 약 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 약 3개의 탄소 원자의 알킬 부분을 갖는, 선형 또는 분지형 옥시-함유 라디칼, 예를 들어 메톡시 라디칼을 포함한다. 용어 "알콕시알킬"은 또한 하나 이상의 알콕시 라디칼이 알킬 라디칼에 부착되어, 즉, 모노알콕시알킬 및 디알콕시알킬 라디칼을 형성하는 알킬 라디칼을 포함한다. 상기 라디칼의 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시 및 tert-부톡시 알킬이 포함된다. "알콕시" 라디칼은 하나 이상의 할로 원자, 예를 들어 플루오로, 클로로 또는 브로모로 추가 치환되어 "할로알콕시"라디칼을 제공할 수 있다. 상기 라디칼의 예로는 플루오로메톡시, 클로로메톡시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 플루오로에톡시, 테트라플루오로에톡시, 펜타플루오로에톡시 및 플루오로프로폭시가 포함된다.
용어 "알킬티오"는 2가 황 원자에 부착된, 탄소 원자가 1 내지 약 6개인 선형 또는 분지형 알킬 라디칼을 함유하는 라디칼을 포함한다. "저급 알킬티오"의 예로는 메틸티오 (CH3-S-)가 있다.
용어 "알킬티오알킬"는 알킬 기에 부착된 알킬티오 라디칼을 포함한다. 상기 라디칼의 예로는 메틸티오메틸이 포함된다.
용어 "할로"는 할로겐, 예를 들어 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.
용어 "헤테로시클릴"은 하나 이상의 탄소 원자가 N, S, P 또는 O로 대체된, 포화 또는 불포화 단일-고리 또는 다중-고리 카르보사이클을 의미한다. 이것은, 예를 들어, 하기 구조를 포함한다.
상기 식 중, Z, Z1, Z2 또는 Z3은 C, S, P, O 또는 N이나, 단, Z, Z1 , Z2 또는 Z3 중 하나는 탄소 이외의 것이지만, 또다른 Z 원자에 이중 결합으로 부착되는 경우, 또는 또다른 O 또는 S 원자에 부착되는 경우, O 또는 S는 아니다. 또는, 임의 치환기는 각각이 C인 경우에만 Z, Z1, Z2 또는 Z3에 부착되는 것으로 이해된다. 용어 "헤테로시클릴"은 또한 피페라지닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 옥시라닐, 아지리디닐, 모르폴리닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 티아졸리디닐 등과 같은 완전 포화 고리 구조를 포함한다. 용어 "헤테로시클릴"은 또한 디히드로푸라닐, 피라졸리닐, 이미다졸리닐, 피롤리닐, 크로마닐, 디히드로티오페닐 등과 같은 부분 불포화 고리 구조를 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 완전 불포화 헤테로사이클을 의미한다.
"헤테로사이클" 또는 "헤테로아릴"에서, 해당 분자에 대한 부착점은 헤테로원자에 또는 고리내의 또다른 위치에 있을 수 있다.
용어 "시클로알킬"은 단일-고리 또는 다중-고리의 카르보사이클을 의미하는데, 각 고리는 3 내지 약 7개의 탄소 원자, 바람직하게는 3 내지 약 5개의 탄소 원자를 함유한다. 그 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로알케닐 및 시클로헵틸과 같은 라디칼을 포함한다. 용어 "시클로알킬"은 스피로계를 추가로 포함하는데, 여기서 시클로알킬 고리는 7원 헤테로시클릭 고리인 벤조티에핀과 같이 탄소 고리 원자를 갖는다.
용어 "옥소"는 이중 결합된 산소를 의미한다.
용어 "알콕시"는 산소 원자에 결합된 알킬 라디칼을 포함하는 라디칼, 예를 들어 메톡시 라디칼을 의미한다. 보다 바람직한 알콕시 라디칼은 1 내지 약 10개의 탄소 원자를 갖는 "저급 알콕시" 라디칼이다. 보다 더 바람직한 알콕시 라디칼은 1 내지 약 6개의 탄소 원자를 갖는다. 상기 라디칼의 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시 및 tert-부톡시가 포함된다.
용어 "아릴"은 완전 불포화 단일-고리 또는 다중-고리 카르보사이클을 의미하며, 치환 또는 비치환된 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.
어구 "임의 치환된"이란 상기 나타낸 라디칼의 수소가 치환될 수 있지만 필수적이지는 않은 것을 의미한다. 따라서, 어구 "하나 이상에 의해 임의 치환된"이란 상기 나타낸 잔기에서 치환되는 경우, 하나 이상의 치환이 또한 고려되는 것을 의미한다. 이와 관련하여, 하나 이상의 임의 치환기가 존재하는 경우, 치환기 중 하나가 선택될 수 있거나, 치환기 조합이 선택될 수 있거나, 하나 이상의 동일 치환기가 선택될 수 있다. 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 어구 "하나 이상의 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환된 C1-C5 알킬"이란, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 펜틸이 치환가능한 모든 위치에서 수소, 불소, 염소 또는 다른 할로겐, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소 부톡시, tert-부톡시, 펜톡시 또는 다른 알콕시 라디칼, 및 이들의 조합에 의해 치환될 수 있음을 의미할 것이다. 비제한적인 예로는 프로필, 이소-프로필, 메톡시프로필, 플루오로메틸, 플루오로프로필, 1-플루오로-메톡시메틸 등이 포함된다.
화합물이 구조 및 명칭으로 기재된 경우, 그 명칭은 나타낸 구조에 상응하는 것으로 의도되고, 유사하게, 구조는 그 나타낸 명칭과 상응하는 것을 의도한다.
본원에 사용되는 용어 "대상체"란 동물, 한 실시양태에서는 포유동물, 및 예시적 실시양태에서는 특히 치료, 관찰 또는 실험의 목적인 인간을 나타낸다.
본원에 사용되는 용어 "투여" 및 "치료"는 대상체, 특히 인간에게 대상체의 증상을 직간접적으로 증진시키려는 목적으로 의학적 도움을 주는 임의의 과정, 행동, 적용, 요법 등을 나타낸다.
본원에 사용되는 용어 "치료 화합물"이란 위장관의 염증성 증상 또는 질환의 예방 또는 치료에 유용한 화합물을 나타낸다.
용어 "조합 요법"이란 본원에 기재된 치료 증상 또는 장애, 예를 들어 크론병 및 궤양성 결장염을 비롯한 염증성 장 질환, 위궤양, 십이지장 궤양 및 식도 궤양을 비롯한 소화성 궤양 질환, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 및 위염, 회장염, 식도염, 마비성 장폐쇄증 및 설사를 비롯한 다른 염증성 증상을 치료하기 위해 2개 이상의 치료 화합물을 투여하는 것을 의미한다. 상기 투여는 실질적으로 동시적인 방식으로, 예를 들어 고정 비율의 활성 성분을 갖는 단일 캡슐제로, 또는 각각의 활성 성분에 대한 다중 분리 캡슐제로 상기 치료제들을 공동 투여하는 것을 포함한다. 또한, 상기 투여는 또한 순차적 방식으로 각 유형의 치료제를 사용하는 것을 포함한다. 각 경우에, 치료 섭생은 본원에 기재된 증상 또는 장애를 치료하는 데 약물 조합의 유익한 효과를 제공할 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료 조합물"이란, 치료 화합물을 실질적으로 동시에 또는 순차적으로 투여하든지 간에 목적하는 시간에 대상체에서 각각의 치료 화합물의 유익한 효과를 생성하는 투여 형태를 제공하는, 2개 이상의 치료 화합물 및 사용되는 임의의 제약상 허용되는 담체의 조합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "치료상 효과적인"이란 치료 화합물의 특정량, 또는 조합 요법에서의 조합된 치료 화합물들의 특정량을 나타낸다. 상기 양 또는 조합량은 위장관의 염증성 증상 또는 질환을 예방하거나 피하거나 감소시키거나 제거하려는 목적을 달성한다.
본원에서 호환가능하게 사용되는 용어 "유도성 산화질소 신타제" 및 "iNOS"는 효소 산화질소 신타제의 Ca+2-비의존성의 유도성 이소형을 나타낸다.
본원에서 호환가능하게 사용되는 용어 "유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제", "선택적 iNOS 억제제" 및 "iNOS 선택적 억제제"는 효소 산화질소 신타제의 Ca+2-비의존성의 유도성 이소형을 선택적으로 억제하는 치료 화합물을 나타낸다. 선택적 iNOS 억제제는 생체내로 투여하여 효능 (설치류 내독소 모델에서 ED50 100 mg/kg 미만, 그러나 바람직하게는 10 mg/kg 미만), 및 평균 동맥 혈압의 상승에 의해 측정되는 eNOS에 대하여 20-배 이상, 그러나 바람직하게는 100-배 이상의 선택률 및 위장 통과 또는 음경 발기의 감소로 측정되는 nNOS에 대하여 20-배 이상, 그러나 바람직하게는 100-배 이상의 선택률을 생성하도록, 내피 NOS 또는 신경 NOS와 비교시 iNOS의 선택적인 억제를 생성하는 것으로 정의된다.
용어 "프로드럭"은 대상체로의 투여 및 추후의 흡수 다음에 일부 과정, 예를 들어 물질대사 과정을 통해 생체내에서 활성종으로 전환되는 약물 전구체인 화합물을 나타낸다. 전환 과정으로부터의 다른 생성물은 신체에 의해 용이하게 처리된다. 보다 바람직한 프로드럭은 일반적으로 안전하게 흡수되는 생성물을 생성하는 전환 과정을 포함하는 것들이다.
용어 "위장관"이란 식도, 위, 및 십지지장, 회장 및 결장을 포함하는 소장 및 대장을 나타낸다. 위장관의 염증성 증상으로는 크론병 및 궤양성 결장염을 비롯한 염증성 장 질환, 위궤양, 십이지장 궤양 및 식도 궤양을 비롯한 소화성 궤양 질환, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 및 위염, 회장염, 결장염, 식도염, 마비성 장폐쇄증 및 설사를 비롯한 다른 만성 염증성 증상이 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "항염증에 효과적인"이란 치료 화합물의 특정량, 또는 조합 요법에서의 조합된 치료 화합물들의 특정량을 나타낸다. 상기 양 또는 조합량은 염증을 예방하거나 피하거나 감소시키거나 제거하는 목적을 달성한다.
본원에 사용되는 용어 "항미생물제"는 박테리아를 비롯한 미생물에 의한 감염, 및 구체적으로는 박테리아 에이치. 파일로리에 의한 감염을 감소시키거나 제거하기에 유용한, 또는 상기 미생물 감염에 대해 위 및 십이지장의 점막 방어를 강화시키기에 유용한 특정 화합물 또는 작용제를 나타낸다. 항미생물제로는 항생제, 세포보호제, 또는 비스무쓰 서브살리실레이트 및 콜로이드성 비스무쓰 서브시트레이트 형태의 비스무쓰 화합물, 수크랄페이트 및 카르베녹살론과 같은 화합물이 포함된다. 따라서, 본 발명의 방법에 유용한 항미생물제로는 예를 들어, 니트로이미다졸, 양성자-펌프 억제제, 비스무쓰 화합물, 또는 임의의 항생제 화합물, 예를 들어 페니실린이 포함된다. 보다 구체적으로, 본 발명의 방법에 따른 선택적 iNOS 억제제와 함께 유용한 항미생물성 화합물로는 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 서브살리실레이트, 메트로니다졸, 오메프라라졸, 라니티딘, 및 테트라시클린이 단독으로 또는 서로 함께 포함된다. 본 발명의 방법에 유용한 이중 항미생물성 화합물은, 예를 들어, 오메프라졸 및 아목시실린의 조합물이다. 본 발명의 방법에 사용되는 삼중 항미생물성 화합물은, 예를 들어, 라니티딘, 메트로니다졸 및 아목시실린의 조합물이다.
용어 "항분비제"란 H2 히스타민 수용체 길항제 및 양성자-펌프 억제제를 비롯한, 위산 분비를 억제하는데 유용한 임의의 화합물 또는 작용제를 나타낸다. H2 히스타민 수용체 길항제에는 부림아미드, 시메티딘, 라니티딘, 파모티딘 및 니자티딘이 포함된다. 양성자-펌프 억제제, 즉 H+,K+-ATP-ase의 특이적 억제제로는 치환된 벤즈이미다졸 화합물, 예를 들어 란소프라졸 및 오메프라졸이 포함된다.
본 발명의 방법에 유용한 선택적 iNOS 억제제의 한 실시예에서, 치료는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 통해 용이해진다.
<화학식 I>
상기 식 중,
R1은 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되나;
단, R1 또는 R2 중 하나 이상은 할로를 함유하고;
R7은 H 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
J는 히드록시, 알콕시 및 NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
여기서, R3은 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R4는 H 및 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 상기 고리 중 하나 이상의 구성원은 탄소이고, 1 내지 약 4개의 헤테로원자는 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복스아미도알킬, 디카르복스아미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복스아미도시클로알킬, 디카르복스아미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있다.
또다른 실시양태에서, 하기 화학식 II에 상응하는 구조를 갖는 화합물 또는 그의 염을 사용하는 치료를 제공한다.
<화학식 II>
상기 화학식 II 중,
X는 -S-, -S(O)- 및 -S(O)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, X는 -S-이다. R12는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C5 알콕시-C1 알킬 및 C1-C5 알킬티오-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 이들 기들은 각각 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환된다. 바람직하게는, R12는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. R13 및 R18에 대하여, R18은 -OR24 및 -N(R25)(R26)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R13은 -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 및 -C(O)-S-R29로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R18은 -N(R30)-이고, R13은 -C(O)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R18은 -O-이고, R13은 -C(R31)(R32)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. R13이 -C(R31)(R32)-인 경우, R14는 -C(O)-O-R33이거나; 다르게는, R14는 -H이다. R11, R15, R 16 및 R17은 독립적으로 -H, 할로겐, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 C1-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로보터 선택된다. R19 및 R20은 독립적으로 -H, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 Cl-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. R21 및 R22에 대하여, R21은 -H, -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택되고, R22는 -H, -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R21은 -O-이고, R22는 -C(O)-인데, 여기서 R21과 R22가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하거나; R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21과 R22 가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성한다. R23은 C1 알킬이다. R24는 -H 및 C1-C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 R24가 C1-C6 알킬인 경우, R24 는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R25 및 R26에 대하여, R25는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R26은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 및 -C(O)-S-R40으로 이루어진 군으로부터 선택되는데; 여기서 R25 및 R26이 독립적으로 알킬 또는 알콕시인 경우, R25 및 R26은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기로 임의 치환되거나; R25는 -H이고; R26은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. R27, R28, R29, R30, R31 , R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된다. R11, R12, R13, R14 , R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24 , R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40이 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기이면, 상기 잔기는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 임의 치환된다.
바람직한 화합물에서, R18은 -OH이다. R18이 -OH인 경우, 바람직하게는 X는 S이다. 추가 화합물에서, R11, R15, R16, R17, R19 및 R20은 독립적으로 -H 및 C1-C3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, R15, R16, R17, R 19 및 R20은 각각 -H이다. R23은 다양한 기, 예를 들어 플루오로메틸 또는 메틸일 수 있다. R11은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬일 수 있고; 바람직하게는 R11은 할로겐으로 임의 치환된 C1 알킬이고; 보다 바람직하게는 R11은 플루오로메틸, 히드록시메틸 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 중요 화합물에서, R11은 메틸일 수 있다. 별도로, R11은 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 별법에서, R11은 히드록시메틸일 수 있다. 또다른 화합물에서, R12는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. 한 바람직한 화합물에서, R12는 할로겐으로 임의 치환된 C1 알킬이다. 예를 들어, R12는 메틸일 수 있다. 별도로, R12는 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 예에서, R12는 히드록시메틸일 수 있다. 또다른 예에서, R12는 메톡시메틸일 수 있다.
상기 예시 화합물에서, R13, R14, R21 및 R22가 각각 -H인 것이 바람직하다. 이 화합물에서, 추가로 R11, R15, R16, R17, R19 및 R20이 독립적으로 -H 및 C1-C3 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다. 바람직하게는 R15, R16, R17 , R19, R20이 각각 -H이다. 이 추가 화합물에서, R23은, 예를 들어, 플루오로메틸일 수 있거나, 다른 예에서, R23은 메틸일 수 있다. 이들 예의 바람직한 화합물에서, R12는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. 바람직하게는 R12는 할로겐으로 임의 치환된 C1 알킬이다. 상기 하나의 예에서, R12는 플루오로메틸이다. 또다른 예에서, R12는 메틸이다. 별도로, R12는 히드록시메틸일 수 있다. 추가 별법에서, R12는 메톡시메틸일 수 있다.
R23이 메틸인 경우, R11은, 예를 들어, -OH 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 -H 또는 C1-C6 알킬일 수 있다. 바람직한 화합물에서, R11은 -H이다. 별도로, R11은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 C1-C6 알킬일 수 있다. 예를 들어 R11은 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸 이성질체, 또는 헥실 이성질체일 수 있다. 예를 들어, R11은 에틸일 수 있다. 별도로, R11은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환기로 임의 치환된 C1 알킬일 수 있고; 예를 들어 R11은 메틸일 수 있다. 별도로, R11은 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 별법에서, R11은 히드록시메틸일 수 있다.
또다른 화합물에서, R13은 -OR24일 수 있다. R24는 상기에 정의된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는 R24는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환된 C1-C6 알킬이고; 보다 바람직하게는 R24는 C1-C3 알킬이고; 보다 더 바람직하게는 R24 는 메틸이다. 화합물 II의 추가 예에서, R13은 -N(R25)(R26)일 수 있는데, 여기서 R25 및 R26은 상기 정의된 바와 같다. 또다른 화합물에서, R18은 -N(R30)-일 수 있고, R13은 -C(O)-일 수 있는데, 여기서 R18 및 R13은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. 또다른 예에서, R18은 -O-일 수 있고, R13은 -C(R31)(R32)-일 수 있는데, 여기서 R18 및 R13은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다.
화학식 II의 화합물에서, R21은 -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 R21은 -OH이다. 추가 예에서, R21이 -OH인 경우 R22는 -H이다.
그러나, 본 발명의 예는 또한 R21이 -O-이고 R22가 -C(O)-인 유용한 화학식 II의 화합물을 제공하는데, 여기서, R21 및 R22는 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성한다. 또다른 유용한 화합물에서, R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21 및 R22는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. 별도로, R22는 -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이 별법에서, R21은 -H가 바람직하다.
본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제에서, 화합물은 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 III>
상기 식 중,
R41은 H 또는 메틸이고;
R42는 H 또는 메틸이다.
본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 IV의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 IV>
본 발명에 유용한 또다른 예시적 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 V의 화합물 또는 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 V>
상기 식 중,
R43은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R44는 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R45는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
추가의 예시적인 iNOS 억제제는 하기 화학식 VI의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 VI>
상기 식 중,
R46은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
본 발명에 유용한 또다른 예시적인 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 VII의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 VII>
상기 식 중,
R47은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R48은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R49는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이다.
본 발명에 유용한 또다른 예시적인 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 VIII의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 VIII>
상기 식 중,
R50은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환된다.
본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는 화학식 IX의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 IX>
상기 식 중,
R50은 수소, 할로 및 Cl-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
R51은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R52는 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R53은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
R54는 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1 -C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 X의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 나타낸다.
<화학식 X>
상기 식 중,
R55는 C1-C5 알킬인데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환된다.
또다른 예시 화합물에서, 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제는 하기 화학식 XI의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 화합물 XI의2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노)]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로로는 2000년 5월 11일에 공개된 국제 출원 번호 WO 00/26195호에 이미 기재되어 있으며, 이 문헌은 본원에 참고로 포함된다.
<화학식 XI>
본 발명은 또한 다른 선택적 iNOS 억제제의 사용도 고려한다. 예를 들어, 본 발명에 또한 유용한 iNOS 선택적 억제제는 하기 화학식 XII를 갖는 선택적인 iNOS 억제제를 기재하고 청구하는, 2000년 11월 29일에 출원되고 2002년 3월 12일에 특허허여된 U.S. 특허 제6,355,689호 (베스윅 등)에 기재된 것이다.
<화학식 XII>
상기 식 중,
R79는 C1-4 알킬, C3-4 시클로알킬, C1-4 히드록시알킬 및 C 1-4 할로알킬로부터 선택된다. U.S. 특허 제6,355,689호의 기재는 R79가 바람직하게는 C1-4 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸인 것으로 언급된다. U.S. 특허 제6,355,689호에 개시되고 본 발명의 방법 및 조성물에 적합한 특정 실시양태에는
S-((R)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-L-시스테인;
S-((R)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)프로필)-D-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노)부틸)-L-시스테인;
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노, 2-시클로프로필)에틸)-L-시스테인; 및
S-((R/S)-2-(1-이미노에틸아미노, 3-히드록시)프로필)-L-시스테인, 또는 이들의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 또는 생리학상 관능성 유도체가 포함된다.
상기 선택적 iNOS 억제제는 iNOS 효소에 대한 기질로서의 아르기닌과 경쟁적으로 작용하는 것으로 여겨진다. iNOS 억제에 대한 또다른 방법은 1998년 8월 27일에 공개된 아르나이즈 등의 국제 특허 출원 번호 PCT/US98/03176호, 공개 번호 WO 98/37079호 (아르나이즈) (94804-0099 캘리포니아주 리치몬드 소재의 베를렉스 래버레이토리스, 인크. 및 08540 뉴저지주 프린스톤 소재의 파마코페이아, 인크.)에 기재되어 있다. 아르나이즈 출원에는 iNOS 단량체의 이량체화에 대한 억제제가 기재되어 있다. iNOS 효소는 동종이량체이고; 각 단량체는 플라빈 보조인자 (FAD 및 FMN)에 대한 결합 부위 및 NADPH에 대한 결합 부위를 포함하는 리덕타제 도메인을 갖는다. 상기 리덕타제 도메인은 또다른 단량체의 옥시다제 도메인에 전자를 공급하는데, 여기서 L-아르기닌은 활성 부위에서 산화되어, 헴 기 (Fe) 사이토크롬 P-450 도메인을 혼입시킨다. 테트라히드로비오프테린 (BH4)은 동종이량체화에 요구되고 전자 전달 동안 헴 산화환원 상태를 조절한다. iNOS 단량체는 불활성이고, 활성을 위해 이량체화를 요구한다.
예를 들어, 본 발명의 또다른 실시양태에서, 선택적 iNOS 억제제는 단일 입체이성질체로서의 하기 화학식 XIII, 화학식 XIV 또는 화학식 XV의 화합물, 또는 이들의 혼합물, 또는 이들의 제약상 허용되는 염으로 나타내는 이량체화 억제제이다.
<화학식 XIII>
<화학식 XIV>
<화학식 XV>
상기 식 중,
A는 -R56, -OR56, C(O)N(R56)R57, P(O)[N(R56)R 57]2, -N(R56)C(O)R57, -N(R76)C(O)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(O)N(R56 )R71, -S(O)tR56, -SO2NHC(O)R56, -NHSO2R77,- SO2NH(R56)H, -C(O)NHSO2R77 또는 -CH=NOR56이고;
각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 C(R19)이고;
각각의 U는 N 또는 C(R60)이나, 단, X가 N이고 Z 및 Y가 CR74인 경우에만 U가 N이고;
V는 N(R59), S, O 또는 C(R59)H이고;
각각의 W는 N 또는 CH이고;
Q는 직접 결합, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(O)t 및 -N(R61)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
m은 0 또는 1 내지 4의 정수이고;
n은 0 또는 1 내지 3의 정수이고;
q는 0 또는 1이고;
r은 0 또는 1이나,
단, Q 및 V가 헤테로원자인 경우, m, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
A가 -OR56, N(R)C(O56)R57, -N(R71)C(O)OR57, -N(R 56)R76, -N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (여기서, t는 0임) 또는 -NHSO2R77인 경우, n, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
Q가 헤테로원자이고 A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR 57, -N(R56)R76, N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (t가 0인 경우) 또는 -NHS02R77인 경우, m 및 n은 둘다 0일 수는 없고;
t는 0, 1 또는 2이고;
은 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
는 임의 치환된 카르보시클릴 또는 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
각 R56 및 R57은 독립적으로 수소, 임의 치환된 Cl-C20 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, -[C0-C8 알킬]-R64, -[C2-C8 알케닐]-R 64, -[C2-C8 알키닐]-R64, -[C2-C8 알킬]-R65 (히드록시로 임의 치환됨), -[C1-C8]-R66 (히드록시로 임의 치환됨), 임의 치환된 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
R56과 R57은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
R58은 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 할로알킬, -[C1-C8 알킬]-C(O)N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2-C8 알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66 및 헤테로시클릴 (할로, 알킬, 알콕시 및 이미다졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Q가 -N(R58)- 또는 R58로의 직접 결합인 경우, R58은 추가로 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐 및 -C(=NR73)-NH2일 수 있거나;
-Q-R58이 함께 -C(O)OH, -C(O)N(R56)R57 또는
을 나타낼 수 있고;
R59는 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬 및 시클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되나;
단, A가 -R56 또는 -OR56인 경우, R59는 수소일 수 없고, V가 CH인 경우, R59는 추가로 히드록시일 수 있고;
R60은 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬, 할로알킬, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 아릴, -OR71, -S(O)t-R71, N(R71)R76, N(R 71)C(O)N(R56)R71, N(R71)C(O)OR71, N(R71)C(O)R71, -[C0-C8 알킬]-C(H)[C(O)R71]2 및 -[C0-C8 알킬]-C(O)N(R56)R71로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R61은 수소, 알킬, 시클로알킬, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2 -C8]알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66, 아실, -C(O)R63, -C(O)-[C1-C8 알킬]-R63, 알콕시카르보닐, 임의 치환된 아릴옥시카르보닐, 임의 치환된 아르알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 알콕시카르보닐알킬, 카르복시알킬, 임의 치환된 아릴술포닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 임의 치환된 아릴아미노카르보닐, 아미노술포닐, 모노알킬아미노술포닐 디알킬아미노술포닐, 아릴아미노술포닐, 아릴술포닐아미노카르보닐, 임의 치환된 N-헤테로시클릴, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(O)R78-N(R56)R57, -C(O)-N(R56 )R78-C(O)OR56으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R63 및 R64는 독립적으로 할로알킬, 시클로알킬 (할로, 시아노, 알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨), 카르보시클릴 (할로, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨) 및 헤테로시클릴 (알킬, 아르알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨)로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
각각의 R65는 독립적으로 할로, 알콕시, 임의 치환된 아릴옥시, 임의 치환된 아르알콕시, 임의 치환된 -S(O)tR77, 아실아미노, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, (트리페닐메틸)아미노, 히드록시, 머캅토, 알킬술폰아미도로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R66은 독립적으로 시아노, 디(알콕시)알킬, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐 및 디알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R67, R68, R69, R70, R72 및 R75는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
각각의 R71은 독립적으로 수소, 알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬 또는 시클로알킬이고;
R73은 수소, NO2 또는 톨루엔술포닐이고;
각각의 R74는 독립적으로 수소, 알킬 (히드록시로 임의 치환됨), 시클로프로필, 할로 또는 할로알킬이고;
각각의 R76은 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, -C(O)R77 또는 -SO2R77이거나;
R76은 R56 및, 이들이 부착된 질소와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이거나;
R76은 R71 및, 이들이 부착된 질소와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
각각의 R77은 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴 또는 임의 치환된 아르알킬이고;
R78은 아미노산 잔기이다.
또다른 iNOS 이량체화 억제제인 3-(2,4-디플루오로페닐)-6-{2-[4-(1H-이미다졸-1-일메틸)페녹시]에톡시}-2-페닐피리딘 (PPA250)은 문헌[Ohtsuka et al., J Phamacol Exp Ther Vol. 303, Issue 1, 52-57, October 2002]에 기재되어 있다. PPA250은 하기 구조를 갖는다.
따라서, 본 발명의 또다른 실시양태에서는, 화합물 PPA250를 선택적 iNOS 억제제로서 사용할 수 있다.
b. 예시적 실시예
하기 합성예는 예시적인 목적을 나타내는 것으로서 본 발명의 범주를 제한 하기 위한 것은 아니다. 이성질체를 한정하지 않은 경우, 적절한 크로마토그래피 방법을 이용하여 단일 이성질체를 수득할 것이다.
실시예 A
(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드, 일수화물
EX-A-1) 염화트리메틸실릴 (107.8 g, 1.00 mol)를 메탄올 300 ㎖ 중 L-글루탐산 (30.00 g, 0.20 mol)의 냉각된 용액에 0℃에서 적가하였다. 생성된 투명한 무색 용액을 실온에서 교반하였다. 18 시간 후에, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 이어서, 반응물을 0℃로 냉각시키고, 트리에틸아민 (134 g, 1.33 mol)을 첨가하여, 백색 침전물을 형성시켰다. 디-tert-부틸디카르보네이트 (49 g, 0.23 mol)를 첨가하고, 그 혼합물을 실온으로 가온하였다. 3 시간 후에, 용매를 제거하고, 디에틸 에테르 700 ㎖를 첨가하였다. 이 용액을 여과하고, 필터 케이크를 디에틸 에테르 추가 500 ㎖로 헹구었다. 여액을 60.8 g ( > 95％)의 황갈색 오일로 농축하여, 추가 정제없이 다음 단계를 수행하였다.
EX-A-2) 아세토니트릴 300 ㎖ 중 EX-A-1로부터의 조 생성물 (60 g, 0.22 mol) 용액에 실온에서 4-디메틸아미노피리딘 (5.3 g, 0.44 mol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (79.2 g, 0.36 mol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2일 동안 실온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 25％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하여 85 g의 적색 오일을 수득하였다. 조 물질을 헥산 중 1:10 에틸 아세테이트로 용출하는 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 66.4 g (81 ％)의 목적하는 디-Boc 생성물을 담황색 고체로서 얻었다.
EX-A-3) DIBAL 용액 (헥산 중 1.0 M 용액 64 ㎖, 63.9 mmol)을 무수 디에틸 에테르 400 ㎖ 중 EX-A-2 (20 g, 53.3 mmol)의 냉각 용액에 -78℃에서 30분에 걸쳐 적가하였다. -78℃에서 추가 30분 후에, 용액을 물 (12 ㎖, 666 mmol)로 켄칭하고 실온으로 가온하였다. 흐린 혼합물을 에틸 아세테이트 350 ㎖로 희석하고, MgS04상에서 건조시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 황색 오일로 농축하였다. 조 물질인 황색 오일 18.9 g을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하는 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 13.8 g (75％)의 목적 알데히드 생성물을 투명한 오일로서 얻었다.
EX-A-4) THF 20 ㎖ 중 트리에틸 2-플루오로포스포노아세테이트 (4.67 g, 19.3 mmol)의 차가운 (-78℃) 용액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 1.6 M, 10.9 ㎖, 17.5 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 -78℃에서 20 분동안 교반하여 연황색 용액을 생성하였다. 이어서, THF 5 ㎖ 중 EX-A-3로부터의 생성물 (6.0 g, 17.5 mmol)의 용액을 주사기를 통해 첨가하고, 생성된 혼합물을 2 시간동안 -78℃에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 반응물을 -78℃에서 포화 수성 NH4Cl (30 ㎖)로 켄칭하였다. 유기 층을 수집하고, 수성 층을 디에틸 에테르 (2 × 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 물 (100 ㎖) 및 염수 (100 ㎖)로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 황색 오일 8.6 g을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 6.05 g (79％)의 목적 플루오로 올레핀 생성물을 투명한 오일로서 얻었다.
EX-A-5) 메탄올 20 ㎖ 중 EX-A-4 (805 mg, 1.86 mmol) 용액에 실온에서 고체 NaBH4 (844 mg, 22.3 mmol)를 200 mg 부분씩 첨가하였다. 반응물을 18 시간 동안 상온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl 20 ㎖로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 × 35 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합해서, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 투명한 오일 700 mg을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 19F NMR에 의해 목적하는 E-이성질체를 주로 함유하는 353 mg (48％)의 목적 알릴계 알콜 생성물을 투명한 오일로서 수득하였다.
EX-A-6) THF 50 ㎖ 중 EX-A-5 (1.37 g, 3.5 mmol), 중합체-지지된 트리페닐포스핀 (3 mmol/g, 1.86 g, 5.6 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (450 mg, 4.55 mmol)의 혼합물에 디메틸아조디카르복실레이트 (820 mg, 5.6 mmol)를 적가하였다. 반응물을 1 시간 동안 실온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 40％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 그 여액을 농축하였다. 생성된 황색 오일을 염화메틸렌 30 ㎖ 및 물 30 ㎖에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 물 (1 × 30 ㎖) 및 염수 (1 × 30 ㎖)로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 황색 오일 1.8 g을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 670 mg (40％)의 목적하는 보호된 E-알릴계 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 얻었는데, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적하는 E-이성질체만을 함유하는 것으로 나타났다.
EX-A-7) EX-A-6으로부터의 생성물 (670 mg, 1.4 mmol)을 메탄올 25 ㎖ 및 물 중 25％ 아세트산 25 ㎖에 용해시켰다. 아연 분진 (830 mg, 12.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 초음파처리하에 8 시간동안 교반하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 단 20％의 출발 물질이 잔류함을 나타냈다. Zn 분진을 반응 혼합물로부터 여과하고, 그 여액을 -20℃에서 12 시간 동안 저장하였다. 그 여액을 실온으로 가온하고, 추가 빙초산 (7 ㎖) 및 아연 분진 (400 mg, 6.1 mmol)을 첨가하고, 그 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 초음파처리하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 96％ 생성물을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 그 여액을 농축하였다. 구배 20 내지 95％ A (A: 0.01％ 트리플루오로아세트산을 함유한 100％ 아세토니트릴, B: 0.01％ 트리플루오로아세트산을 함유한 100％ H20)를 사용하여 8분에 걸쳐 용출하면서 조 물질을 YMC 콤비프렙(Combiprep) 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 344 mg (45％)의 목적 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득했는데, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적 E-이성질체 만을 함유하는 것으로 나타났다.
EX-A-8) EX-A-7 생성물의 샘플을 빙초산에 용해시켰다. 이 교반된 용액에 디옥산 중 10 당량의 1 N HCl을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 10분 동안 교반한 후, 모든 용매를 진공하에 제거하고 예시된 메틸 에스테르 디히드로클로라이드 염을 생성하였다.
실시예 A) 6.0 N HCl 6 ㎖ 중 EX-A-7 (344 mg, 1.4 mmol) 용액을 1 시간 동안 환류하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물 중 용해시키고, 추가 3회 농축한 후에, 1.0 N HCl에서 추후 5회 농축하여 임의의 잔류 TFA 염을 제거하였다. 완료 후에, 160 mg (37％)의 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 백색 고체(m.p. 51.5-56.3℃)로서 얻었는데, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적하는 E-이성질체 만을 함유하는 것으로 나타났다.
실시예 B
(2S,5E/Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
EX-B-1) 디옥산 중 1:1 H20 400 ㎖ 중의 L-글루탐산 5-메틸 에스테르 (50.00 g, 0.31 mol)의 냉각 (0℃) 용액에 트리에틸아민 (38.35 g, 0.38 mol) 다음 디-tert-부틸디카르보네이트 (80.00 g, 0.37 mol)를 첨가하였다. 생성된 투명한 무색 용액을 실온에서 교반하였다. 18 시간 후에, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 반응 혼합물을 1.0 N 수성 KHS04 200 ㎖로 켄칭하였다. 유기 층을 제거하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 × 100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 72.00 g (89％)의 목적 생성물을 담황색 오일로서 얻었다.
EX-B-2) THF 300 ㎖ 중 EX-B-1로부터의 생성물 (72.60 g, 0.28 mol) 용액에 -10℃에서 빠르게 4-메틸모르폴린 (28.11 g, 0.28 mol) 및 이소부틸클로로포르메이트 (37.95 g, 0.28 mol)를 첨가하였다. 투명한 황색 용액에는 즉시 백색 침전물이 형성되었다. 4 분 후에, 생성된 흐린 황색 혼합물을 여과하고, 그 여액을 -10℃로 냉각시키고, H20 200 ㎖ 중 NaBH4 (15.77 g, 0.42 mol) 용액을 0℃ 이하 온도를 유지하면서 적가하였다. 일단 모든 NaBH4를 첨가하면, 빙조를 제거하고, 반응물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 200 ㎖로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 × 100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 58 g (85％)의 목적 생성물을 황색 오일로서 얻었다.
EX-B-3) 벤젠 100 ㎖ 중 EX-B-2 (30.95 g, 0.13 mol) 용액에 2,2-디메톡시 프로판 (65.00 g, 0.63 mol)을 첨가한 후에 p-톨루엔술폰산 (2.40 g, 12.5 mmol) 및 3Å 분자체 5 g을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2 시간 동안 환류하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 반응 완결을 나타냈다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 디에틸 에테르 (150 ㎖)로 희석하고, 포화 수성 NaHC03 (100 ㎖) 다음 염수 (100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 황색 오일 30.5 g을 헥산 중 1:10 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬(flash) 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 15.40 g (42％)의 목적 생성물을 담황색 오일로서 얻었다.
EX-B-4) DIBAL (톨루엔 중 1.0 M 용액, 6.0 ㎖)을 염화메틸렌 10 ㎖ 중 EX-B-3으로부터의 생성물 (1.00 g, 3.00 mmol)의 저온(-78℃) 용액에 적가하였다. 30 분 후에, 반응물을 5 ㎖ 포화 칼륨 나트륨 타르트레이트 (로첼(Rochelle) 염)로 켄칭한 다음, 실온으로 가온하였다. 혼합물을 이어서 셀라이트 패드를 통해 여과하고, MgS04상에서 건조시키고, 재여과하고 농축하여 황색 오일을 얻었다. 조 물질인 황색 오일 610 mg을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 550 mg (71％)의 목적 생성물을 투명한 오일로서 얻었다.
EX-B-5) 염화메틸렌 100 ㎖ 중 트리에틸 2-플루오로-포스포노아세테이트 (6.70 g, 27.6 mmol)의 빙냉 (0℃) 용액에 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (4.70 g, 31.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1 시간 동안 교반하여 오렌지색 용액을 생성하였다. 이어서, 염화메틸렌 15 ㎖ 중 EX-B-4로부터의 생성물 (5.71 g, 22.2 mmol)의 빙냉 (0℃) 용액을 주사기를 통해 첨가하고, 생성된 혼합물을 18 시간동안 상온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 용매를 진공하에 제거하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 200 ㎖ 및 물 100 ㎖에 분배하였다. 유기 층을 수집하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 × 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 1.0 M 수성 KHS04 (100 ㎖), 물 (100 ㎖) 및 염수 (100 ㎖)로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 목적 플루오로 올레핀 생성물을 황색 오일 (8.0 g)로서 얻었다. 1H NMR 및 19F NMR은 단리된 생성물의 Z:E 비가 대략 70:30임을 나타냈다.
이 혼합물을 추가 정제없이 조물질로 사용하였다.
EX-B-6) THF 70 ㎖ 중 EX-B-5로부터의 생성물 (8.0 g, 23.0 mmol)의 빙냉 (0℃) 용액에 LiBH4 (THF 중 2.0 M, 12.7 ㎖, 25.0 mmol)를 주사기를 통해 첨가하였다. 반응 혼합물을 18 시간 동안 상온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. THF를 제거하고, 생성된 혼합물을 염화메틸렌에 용해시켰다. 0℃로 냉각시킨 후에, 1.0 M 수성 KHS04를 서서히 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 이어서 에틸 아세테이트 (3 × 50 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 투명한 오일 8.0 g을 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 900 mg (13％)의 목적 생성물을 투명한 오일로서 얻었다.
EX-B-7) 피리딘 5 ㎖ 중 EX-B-6으로부터의 생성물 (950 mg, 3.1 mmol)의 빙냉 (0℃) 용액에 염화메탄술포닐 (390 mg, 3.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 5 분동안 0℃에서 교반한 다음, 실온으로 가온하고 3 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 반응물을 디에틸 에테르 (10 ㎖)로 희석하고 포화 수성 NaHCO3 (20 ㎖)로 세척한 다음 1.0 M 시트르산 (20 ㎖)으로 세척하였다. 유기 층을 MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 500 mg (51 ％)의 목적 알릴계 클로라이드 생성물을 백색 고체로서 얻었다. 상기 생성물을 추가 정제없이 사용하였다.
EX-B-8) DMF 10 ㎖ 중 EX-B-7로부터의 생성물 (440 mg, 1.37 mmol)의 교반 용액에 칼륨 프탈리미드 (290 mg, 1.57 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 18 시간동안 환류 가열하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 냉각된 혼합물을 물 30 ㎖로 희석하고, 에틸 아세테이트 (30 ㎖)로 2회 추출하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 540 mg (91 ％)의 목적 생성물을 황색 오일로서 얻었다.
EX-B-9) EX-B-8로부터의 생성물 (600 mg, 1.38 mmol)을 아세트산 8 ㎖와 물 2 ㎖에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)에 의한 분석은 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 용액을 질소 스트림 하에서 농축하고, 조 생성물을 헥산 중 1:2 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 248 mg (63％)의 목적 생성물을 백색 고체로서 얻었다.
EX-B-10) DMF 6 ㎖ 중 EX-B-9로부터의 생성물 (237 mg, 0.605 mmol)의 교반 용액에 피리디늄 디크로메이트 (1.14 g, 3.03 mmol)를 첨가하였다. 용액이 어두운 오렌지색으로 전환되면, 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 이를 H20 20 ㎖에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (4 × 25 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 5％ 수성 KHCO3 (3 × 25 ㎖)으로 세척하였다. 수성 층을 1.0 M KHS04를 사용하여 pH=3으로 산성화시킨 다음, 에틸 아세테이트 (3 × 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축하여 235 mg (95％)의 목적 아미노산 생성물을 얻었다. 생성된 백색 고체를 추가 정제없이 조물질로 사용하였다. LCMS: m/z = 429.1 [M+Na]+.
EX-B-11) 에탄올 7 ㎖ 중 EX-B-10으로부터의 생성물 (230 mg, 0.56 mmol)의 교반 용액에 히드라진 수화물 (70 mg, 1.13 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 2 시간 동안 환류하여 백색 침전물을 형성하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 백색 고체를 물 8 ㎖ 중에 용해시키고 빙초산을 사용하여 pH=4로 산성화시켰다. 이어서, 이를 빙조에서 냉각시키고 여과하였다. 그 여액을 농축하여 136 mg (87％)의 목적 알릴아민 생성물을 황색 결정으로서 얻었는데, 이를 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS: m/z = 277.1 [M+H]+.
EX-B-12) DMF 6 ㎖ 중 EX-B-11로부터의 생성물 (136 mg, 0.50 mmol)의 교반 용액에 에틸 아세트이미데이트 (252 mg, 2.04 mmol)를 3 부분으로 1.5 시간의 간격에 걸쳐 첨가하였다. 첨가를 완료한 후에, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 핑크색 용액을 여과하고, 필터 케이크를 물로 세척하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 생성된 황색 오일을 YMC 콤비프렙 ODS-A 세미-프렙(semi-prep) 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 7 분 구배 1-50％ A (A: 0.05％ TFA를 함유하는 100 아세토니트릴, B: 0.05％ TFA를 함유하는 100 물)로 용출하면서 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 대략 50 mg의 목적 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득하고, 이를 다음 단계에 사용하였다. LCMS: m/z = 318.2 [M+H]+.
실시예 B) EX-B-12로부터의 생성물을 6.0 N HCl 6 ㎖에 용해시키고 1 시간동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 추가 3회 농축하여 TFA 염을 제거하였다. 19F NMR이 모든 TFA가 제거되었음을 나타내는 경우, 생성물을 진공하에 건조시켜 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 및 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드를 함유하는 20:80 E:Z 혼합물 30 mg (20％, 2단계에 걸쳐 합한 수율)을 발포성의 투명한 고체로서 얻었다.
실시예 C
(2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
EX-C-1) 트리에틸 2-플루오로-포스포노아세테이트 (3.54 g, 14.6 mmol)를 0℃에서 CH2Cl2 20 ㎖에 용해시키고, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (2.4 ㎖, 16.4 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 20 분동안 교반하여 오렌지색 용액을 생성하였다. 이어서, EX-A-3으로부터의 알데히드 생성물 (4.04 g, 11.7 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고, 생성된 갈색 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 이 시점에서 LCMS는 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 용매를 제거하고, 잔류물을 물 (60 ㎖) 및 에틸 아세테이트 (120 ㎖)에 분배하였다. 유기 층을 수집하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 × 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (60 ㎖) 및 10％ 수성 KHS04 (60 ㎖)로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 오렌지색 오일 5.7 g을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 헥산 중 10％ 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 3.5 g (69％)의 목적 플루오로 올레핀 생성물을 투명한 오일로서 얻었다. 1H NMR 및 19F NMR은 단리된 생성물이 Z/E 비율 70:30을 갖는 것을 나타냈다.
EX-C-2) EX-C-1로부터의 에스테르 생성물 (3.5 g, 8.1 mmol)을 메탄올 80 ㎖에 실온에서 용해시키고, 이어서 고체 NaBH4 (3 g, 80 mmol)를 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC 분석은 반응이 90％ 초과로 완결되었음을 나타냈다. 반응을 포화 NH4Cl로 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 층을 증발시켜 3.2 g의 조 생성물을 무색 오일로서 수득하고, 이를 바이오티지(Biotage) 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20％ 내지 30％ 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 투명한 오일로서의 플루오로 올레핀 생성물의 Z/E 혼합물 2.11 g (67％)을 투명한 오일로서의 목적하는 순수한 (Z:E = 19F NMR에 의해 97:3) Z-이성질체 생성물 0.41 g (13％)과 함께 수득하였다.
EX-C-3) EX-C-2로부터의 Z-알콜 생성물 (390 mg, 1 mmol) 및 3-메틸-1,2,4- 옥사디아졸린-5-온 (130 mg, 1.3 mmol)을 THF 20 ㎖ 중에 용해시켰다. 이어서, 중합체 지지된-PPh3을 상기 용액에 첨가하고, 혼합물을 부드럽게 10 분동안 교반하였다. 이어서, 디에틸 아조디카르복실레이트를 적가하고, 혼합물을 1 시간동안 실온에서 교반하였고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물 형성을 나타내고 출발 물질이 존재하지 않음을 나타냈다. 중합체를 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 이 패드를 THF로 세척하였다. 그 여액을 증발시켜 1.0 g의 조 생성물을 얻고, 이를 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20％ 내지 30％ 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 500 mg의 생성물을 수득하였는데, 이는 일부 히드라지드 부산물로 오염되어 있다. 이 물질을 추가로 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 98:2:0.01의 염화메틸렌:메탄올:수산화암모늄으로 용출하면서 정제하여 180 mg (38％)의 목적하는 보호 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 수득하였는데, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적하는 Z-이성질체를 함유하였다.
EX-C-4) EX-C-3으로부터의 생성물 (88 mg, 0.19 mmol)을 메탄올 몇방울을 함유하는 물 중 25％ 아세트산 4 ㎖에 용해시키고, 이어서 Zn 분진 (109 mg, 1.67 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 초음파처리 하에 3 시간동안 교반하였다. Zn을 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 상기 패드를 물로 세척하였다. 여액을 증발 건조시켜 조 생성물을 얻었는데, 이를 YMC 콤비프렙 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 8 분에 걸쳐 구배 20-80％ A (A: 0.01 ％ TFA를 함유하는 100％ ACN, B: 0.01 ％ TFA 함유하는 100％ H20)로 용출하면서 정제하였다. 목적 생성물을 2개 분획으로 수집하고, 합한 분획들을 농축하였다. 생성물을 무색 오일로서, 19F NMR에 의해 목적하는 Z-이성질체 만을 함유하는 트리플루오로아세테이트 염의 혼합물로서 수득하였다: 30％는 모노 Boc-보호 생성물이었다: C15H26N3O 4F에 대한 HRMS 계산치: 332.1986 [M+H]+, 실측치 332.2001, 및 70％는 디-Boc-보호된 생성물이었다:
실시예 C) EX-C-4로부터의 합한 모노- 및 디-BOC 생성물을 6N HCl 30 ㎖에 용해시키고, 용액을 4 시간동안 환류시키고, 이 시점에서 LCMS 분석이 반응 완결을 나타냈다. 과량의 HCl 및 물을 진공하에 제거하였다. 완결되면, 9 mg (2단계 동안 합한 수율 40％)의 목적하는 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 연황색의 매우 흡습성 발포체로서 얻었는데, 이는 19F NMR에 의해 목적하는 Z-이성질체 만을 함유하는 것으로 나타났다.
실시예 D
(2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 트리히드로클로라이드, 이수화물
EX-D-1) EX-D-2로부터의 생성물 (3.75 g, 10 mmol)을 메탄올 60 ㎖에 용해시키고, 고체 NaBH4 (4 g, 106 mmol)를 부분씩 실온에서 10 시간에 걸쳐 첨가하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대략 84％ 환원을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 MgS04상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 3.2 g의 조 생성물을 황색 오일로서 얻었다.
EX-D-2) EX-D-1로부터의 알콜 생성물 (3.2 g, 9.0 mmol)을 THF 100 ㎖에 용해시키고 빙조에서 냉각시켰다. 사브롬화탄소 (4.27 g, 12.9 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 O℃에서 30 분동안 질소하에 교반하였다. 중합체-지지된 PPh3을 첨가하고, 그 혼합물을 부드럽게 O℃에서 1 시간동안 교반한 다음, 밤새 실온에서 교반하였다. 중합체를 셀라이트를 통해 여과하여 제거하고, 셀라이트 패드를 THF로 세척하였다. 여액을 증발시켜 조 생성물을 얻었는데, 이를 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 1:3 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 2.0 g (54％, 2단계에 걸쳐 합한 수율)의 목적하는 브로모 생성물을 무색 오일로서 얻었다.
EX-D-3) 에탄올 60 ㎖ 중 NaOEt 용액 (EtOH 중 21 ％, 41.1 ㎖, 0.11 mol)을 p-메톡시 벤젠티올 (14.0 g, 0.1 mol)로 처리한 다음, 에틸 클로로플루오로아세테이트 (18.3 g, 0.13 mol)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간동안 교반하고, 에틸 아세테이트 중 1:1 헥산 250 ㎖로 희석시켰다. 유기 층을 물로 3회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 건조된 유기 층을 증발시켜 25 g의 조 생성물을 얻었는데, 이를 추가 정제없이 다음에 사용하였다.
EX-D-4) 염화메틸렌 200 ㎖ 중 EX-D-3으로부터의 조 생성물 (24 g, 0.1 mol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 염화메틸렌 200 ㎖ 중 3-클로로벤조산 (27 g, 0.12 mol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물 형성 및 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 고체를 여과 제거하고, 여액을 포화 NaHC03 및 NH4Cl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에 건조시키고 농축하여 30 g의 오렌지색 오일을 수득하였고, 이를 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트 중 2:1 헥산으로 용출하면서 정제하여 17.5 g (70％)의 목적 술폭시드 생성물을 회백색 오일로서 수득하였다.
EX-D-5) 건조 DMF 6 ㎖ 중 NaH (광유 중 60％, 212 mg, 5.3 mmol) 현탁액을 질소하에서 0℃로 냉각시키고, DMF 2 ㎖ 중 EX-D-4로부터의 술폭시드 생성물 (1.25 g, 4.8 mmol)의 용액으로 처리하였다. 실온에서 20 분동안 교반한 후에, 혼합물을 5℃로 냉각시키고, EX-D-2로부터의 브로모 생성물 (2.17 g, 5.3 mmol)을 한번에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 다음, 95℃에서 1 시간 동안 환류 가열하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물 형성을 나타냈다. 혼합물을 빙/수성 NH4Cl 혼합물에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 중 1:1 헥산으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 3.17 g의 황색 조 오일을 얻고, 이를 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 10％ 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 1.05 g (50％)의 목적 플루오로 올레핀 에스테르 생성물을 무색 오일로서 수득하였다. 19F NMR은 단리된 생성물이 95:5 목적 Z-이성질체를 함유하는 것을 나타냈다.
EX-D-6) EX-D-5로부터의 에스테르 생성물 (1.05 g, 2.4 mmol)을 실온에서 메탄올에 용해시키고, 고체 NaBH4를 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반한 다음, 물 2 ㎖를 첨가하고, 이 혼합물을 추가 3 시간동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC 분석은 반응이 95％ 초과로 완결되었음을 나타냈다. 반응물을 포화 NH4Cl로 켄칭하였다. 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 0.95 g의 조 생성물을 무색 오일로서 얻었다. 19F NMR은 조 생성물이 단지 목적하는 Z-이성질체 만을 함유함을 나타냈다.
EX-D-7) EX-D-6으로부터의 알콜 생성물 (0.95 g, 2.4 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (290 mg, 2.9 mmol)을 THF 60 ㎖에 용해시켰다. 중합체 결합된 트리페닐 포스핀을 첨가하고, 혼합물을 부드럽게 10 분동안 교반하였다. 이어서, 디메틸 아조디카르복실레이트를 적가하고, 혼합물을 1 시간 동안 실온에서 교반하였고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물 형성 및 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타냈다. 중합체를 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 상기 패드를 THF로 세척하였다. 여액을 증발시켜 잔류물을 얻어, 이를 염화메틸렌 및 물에 분배하였다. 유기 층을 물로 2회 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 증발시켜 1.3 g의 조 생성물을 얻고, 이를 바이오티지 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 20％ 내지 30％ 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 390 mg (34％, 2단계에 걸쳐 합한 수율)의 목적하는 보호된 아미딘 생성물을 무색 오일로서 얻었다. 19F NMR은 단리된 생성물이 단지 목적하는 Z-이성질체 만을 함유함을 나타냈다.
EX-D-8) EX-D-7로부터의 생성물 (390 mg, 0.82 mmol)을 메탄올 4 ㎖를 함유하는 물 중 25％ HOAc 20 ㎖에 용해시키고, Zn 분진 (482 mg, 7.42 mmol)을 2 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 초음파처리 하에 3 시간 동안 교반하였다. Zn을 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 상기 패드를 물로 세척하였다. 여액을 증발 건조시켜 조 생성물을 얻고, 이를 역상-HPLC로 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 합하고 농축하였다. 생성물을 무색 오일로서의 트리플루오로아세테이트 염의 혼합물로서 수득하였고, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적하는 Z-이성질체 만을 함유하였다: 30％는 모노-Boc 보호 생성물이었다:
실시예 D) EX-D-8로부터의 모노- 및 디-BOC 생성물을 6N HCl 80 ㎖에 용해시키고, 용액을 1 시간동안 환류 가열하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 반응 완결을 나타냈다. 과량의 HCl 및 물을 진공하에 제거하여 150 mg (50％, 2단계에 걸쳐 합한 수율)의 목적하는 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 트리히드로클로라이드, 이수화물 생성물을 연황색의 매우 흡습성 발포체로서 얻었다.
실시예 E
(2R,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드, 일수화물
EX-E-1) 염화트리메틸실릴을 메탄올 중 D-글루탐산의 냉각된 용액에 0℃에서 적가하였다. 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타낼 때까지 생성된 투명 무색 용액을 실온에서 교반하였다. 반응물을 이어서 0℃로 냉각시키고, 트리에틸아민을 첨가하고, 백색 침전물을 형성하였다. 디-tert-부틸디카르보네이트를 첨가하고, 그 혼합물을 실온으로 가온하였다. 3 시간 후에, 용매를 제거하고, 디에틸 에테르를 첨가하였다. 용액을 여과하고, 필터 케이크를 추가 디에틸 에테르로 헹구었다. 여액을 농축하여 목적하는 모노-Boc 디에스테르 생성물을 얻고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
EX-E-2) 아세토니트릴 중 EX-E-1로부터의 조 생성물 용액에 실온에서 4-디메틸아미노피리딘 및 디-tert-부틸디카르보네이트를 첨가하였다. 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타낼 때까지, 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 용매을 진공하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 디-Boc 보호된 디에스테르 생성물을 얻었다.
EX-E-3) DIBAL 용액을 무수 디에틸 에테르 중 EX-E-2의 저온 용액에 -78℃에서 적가하였다. -78℃에서 30분 후에, 상기 용액을 물로 켄칭하고 실온으로 가온하였다. 생성된 흐린 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, MgS04상에서 건조시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 농축하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 알데히드 생성물을 얻었다.
EX-E-4) THF 중 트리에틸 2-플루오로포스포노아세테이트의 차가운 (-78℃) 용액에 n-부틸 리튬을 첨가하였다. 이 혼합물을 -78℃에서 교반하여 연황색 용액을 생성하였다. 이어서, THF 중 EX-E-3으로부터의 생성물 용액을 주사기를 통해 첨가하고, 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타낼 때까지 생성된 혼합물을 -78℃에서 교반하였다. 반응물을 -78℃에서 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 유기 층을 수집하고, 수성 층을 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 유기물을 물 및 염수로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 이어서, 조 물질을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 플루오로 올레핀 생성물을 얻었다.
EX-E-5) 메탄올 중 EX-E-4의 용액에 실온에서 고체 NaBH4를 부분씩 첨가하였다. 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타낼 때까지 반응물을 상온에서 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 알릴계 알콜 생성물을 얻었다.
EX-E-6) THF 중 EX-E-5, 중합체-지지된 트리페닐포스핀 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온의 혼합물에 디메틸아조디카르복실레이트를 적가하였다. 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔류하지 않음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 그 여액을 농축하였다. 생성된 황색 오일을 염화메틸렌 및 물에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 보호된 E-알릴계 아미딘 생성물을 얻었다.
EX-E-7) EX-E-6으로부터의 생성물을 물 중 메탄올 및 아세트산에 용해시켰다. 아연 분진을 첨가하고, HPLC 분석이 극미량의 출발 물질이 잔류함을 나타낼 때까지 혼합물을 초음파처리하에 교반하였다. Zn 분진을 셀라이트를 통해 반응 혼합물로부터 여과하고, 그 여액을 농축하였다. 조 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 목적하는 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득하였다.
실시예 E) 6.0 N HCl 중 EX-E-7의 용액을 1 시간동안 환류하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물에 용해시키고 1.0 N HCl로부터 반복적으로 농축하여 임의의 잔류 TFA 염을 제거함으로써 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 얻었다.
실시예 F
(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드, 일수화물
EX-F-1) EX-A-3의 생성물 (5.0 g, 11.5 mmol)의 THF (45m1) 용액에 질소하에서 30분에 걸쳐 THF 5.6 ㎖ 중 Red-Al (5.22 ㎖, 17.4 mmol) 용액을 적가하였다. 내부 온도를 -10℃ 미만으로 유지하였다. 5 분 후에, 반응물을 1.3M Na·K 타르트레이트 33.7 ㎖로 켄칭하였다. 톨루엔 (11 ㎖)을 혼합물에 첨가하여 분리를 증진시켰다. 유기 층을 1.3M Na·K 타르트레이트 33.7 ㎖로 세척한 다음 염수 (40 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 합하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 3.8 g (84％)의 연황색 오일을 다음 단계에 직접 사용하였다.
EX-F-2) 염화메틸렌 500 ㎖ 중 EX-F-1 생성물 (50.0 g, 0.128 mol)의 용액에 -10℃에서 트리에틸아민 (18.0 g, 0.179 mol)을 첨가하였다. 염화메틸렌 50 ㎖ 중 염화메탄술포닐 (17.5 g, 0.153 mol) 용액을 서서히 첨가하여 온도 -10℃에 유지하였다. 반응물을 45 분 동안 -10℃에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 50％ 에틸 아세테이트) 및 LCMS에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 1.0 M 시트르산 600 ㎖로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 400 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 70 g의 황색 오일을 다음 단계에 직접 사용하였다. LCMS: m/z = 492.2 [M+Na].
EX-F-3) 디메틸 포름아미드 400 ㎖ 중 EX-F-2로부터의 생성물 (70.0 g, 0.128 mol)의 용액에 실온에서 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-오네이트 (28.7 g, 0.192 mol)를 첨가하였다. 반응물을 2.5 시간동안 실온에서 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트) 및 LCMS에 의한 분석은 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 물 400 ㎖로 희석하고 에틸 아세테이트 (5 × 400 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물 400 ㎖, 염수 400 ㎖로 세척하고, MgS04상에서 건조시키고, 여과 및 농축하였다. 조 물질인 70 g의 황색 오일을 실리카겔 상의 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 1:4 에틸 아세테이트로 용출하면서 정제하여 38 g (63％)의 약간 황색 오일을 얻었다.
EX-F-4) EX-F-3의 몇몇 중복 제조로부터의 생성물 조합물을 머크(Merk) 실리카겔 MODCOL 컬럼 상의 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 유속 500 ㎖/분에서 60:40 MtBE:헵탄의 등용매(isocratic)로 정제하였다. 회수된 63 g에 대한 제2 정제는 유속 550 ㎖/분으로 10:90 A:B (A: 100％ 에탄올, B: 100％ 헵탄)의 등용매를 흘려주는 키랄 팩(Chiral Pak)-AD 컬럼 상에서 키랄 HPLC 컬럼 크로마토그래피하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 41 g (68％)의 목적하는 보호된 L,E-알릴계 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 수득하였고, 이는 19F NMR 및 키랄 크로마토그래피에 의해 단지 목적하는 L 및 E-이성질체 만을 함유하는 것으로 나타났다.
EX-F-5) EX-F-4로부터의 생성물 (22.5 g, 0.047 mol)을 메탄올 112 ㎖에 용해시켰다. 격렬한 교반을 개시하고, 물 중 40％ 아세트산 225 ㎖ 다음 아연 분진 (11.5 g, 0.177 mmol)을 첨가하였다. 교반 반응물을 환류 (대략 60℃)하에 2.5 시간동안 두었고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 냉각시키고, Zn을 셀라이트를 통해 반응 혼합물로부터 여과하고, 셀라이트를 추가 메탄올로 잘 세척하였다. 여액 및 메탄올 세척액을 합하고 농축하였다. 생성된 유성-백색 고체를 염화메틸렌 (2 × 500 ㎖)으로 세척하고 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 추가 500 ㎖의 염화메틸렌 세척을 수행하였다. 여액을 합하고 농축하여 연황색 오일을 수득하였다. 조 물질인 39 g의 연황색 오일을 실리카겔 200 ㎖ 상의 플러그 여과에 의해 80:19:1의 메탄올:염화메틸렌:아세트산으로 용출하면서 정제하여 13 g (83％)의 목적 생성물을 얻었다.
실시예 F) 6.0 N HCl 750 ㎖ 중 EX-F-5로부터의 생성물 (22 g, 0.066 mol) 용액을 45분 동안 환류하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물에 용해시키고 추가 3회 농축하였다. 30분 동안 100％ 등용매 B 다음 10분 동안 0 내지 100％의 A 구배 및 20분 동안 100％ A 세척액 (A: 100％ 아세토니트릴, B: 0.0025％ 아세트산을 함유하는 100％ H20)을 펌핑하면서 60분에 걸쳐 용출하여 조 물질을 YMC ODS-AQ 컬럼 상에서 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 3.5 g (68％)의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 디히드로클로라이드 염으로서 수득하였고, 이는 단지 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 함유하는 백색 고체 (m.p. 51.5-56.3℃)로서 얻어졌는데, 이는 19F NMR에 의해 단지 목적하는 E-이성질체 만을 함유하는 것으로 나타났다.
실시예 G
(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-히드록스이미노에틸)아미노]-5-헵텐산
EX-G-1) 기체성 HCl을 메탄올 100 ㎖ 중 EX-F-3으로부터의 생성물 (14 g, 30.0 mmol)의 교반 저온 (0℃) 용액을 통해 5분 동안 버블링하였다. 생성된 암황색 용액을 추가 30 분 교반하였고, 이 시점에서 HPLC는 출발 물질의 완전 소비를 나타냈다. 생성된 혼합물을 포화 NaHC03을 사용하여 pH=8로 중성화시키고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgS04상에 건조시키고 농축하여 목적하는 아미노 에스테르 생성물을 암황색 오일로서 얻고, 이를 다음 단계에 조물질로 사용하였다.
실시예 G) 2.5N NaOH 70 ㎖ 중 EX-G-1의 생성물 (8 g, 30 mmol) 용액을 10분 동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC 분석은 출발 물질의 완전 소비를 나타냈다. 생성된 용액을 12N HCl (대략 50 ㎖)을 사용하여 pH=7 내지 8로 중성화하고 농축하였다. 생성된 슬러리를 메탄올로 세척하고, 여과하여 염을 제거하고, 갈색빛 오일로 농축하였다. 30분 동안 100％ 등용매 B 다음, 10분 동안 0 내지 100％ A 구배 및 20분 동안 100％ A 세척액 (A: 100％ 아세토니트릴, B: 100％)을 펌핑하면서 60 분에 걸쳐 용출하여 조 물질을 YMC ODS-AQ 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의헤 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 1.0 g (14％)의 목적 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 생성물을 고온수 및 이소프로필 알콜로부터 재결정화하고 여과로 수집하여 순수한 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-히드록스이미노에틸)아미노]-5-헵텐산을 백색 결정질 고체로서 수득하였다. 융점: 198.00-200.00 ℃.
키랄 분석 >97.7％: 크라운팩(CrownPak) CR(+), 0.8 ㎖/분, 등용매 100％ A 사용 (A: 수성 HClO4, pH = 1.5)
실시예 H
(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(이미노에틸)아미노]-N-(1H-테트라졸-5-일) 5-헵텐아미드, 디히드로클로라이드
EX-H-1) EX-F-3으로부터의 생성물 (6.1 g, 0.013 mol)을 메탄올 4 ㎖에 용해시켰다. 격렬한 교반을 개시하고, 6N HCl 10 ㎖를 첨가하였다. 교반된 반응물을 환류 (대략 60℃)하에 18 시간 동안 두고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 냉각시키고 3.3 g (100％)의 오렌지색 오일로 농축하였다. LCMS: m/z = 282 [M+Na]+.
EX-H-2) EX-H-1로부터의 생성물 (3.3 g, 0.013 mol)을 1:1 H20:디옥산 12 ㎖에 용해시켰다. 교반을 개시하고, 트리에틸아민 (1.95 g, 0.019 mol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 디-tert-부틸디카르보네이트 (3.4 g, 0.016 mol)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 이 시점에서 아세토니트릴 (4 ㎖)을 첨가하여 고체를 용해시켰다. 반응물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 1.ON KHS04 (25 ㎖)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 × 50 ㎖)로 추출하고, 유기 층을 MgS04상에서 건조시키고 농축하였다. 조 물질인 3.5 g의 어두운색 오일을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 4:95:1의 메탄올:염화메틸렌:아세트산으로 용출하면서 정제하여 2.4 g (52％)의 목적 생성물을 연황색 오일로서 수득하였다. LCMS: m/z = 382 [M+Na]+.
EX-H-3) EX-H-2로부터의 생성물 (2.4 g, 0.007 mol)을 THF 13 ㎖에 용해시켰다. 교반을 개시하였고, 5-아미노테트라졸 일수화물 (0.83 g, 0.008 mol)을 첨가한 다음 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (1.0 g, 0.008 mol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC는 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물에 물 12 ㎖를 첨가하고, THF를 진공 증류로 제거하였다. 에탄올 (30 ㎖)을 첨가하고, 반응물을 환류 가열하였다. 환류에서 15 분 후에, 반응물을 -10℃로 냉각시키고, 이 시점에서 목적 생성물을 용액으로부터 침전시켰다. 생성물을 여과로 수집하여 1.25 g (50％)의 백색 고체를 수득하였다. LCMS: m/z = 449 [M+Na]+.
EX-H-4) EX-H-3으로부터의 생성물 (1.0 g, 0.0023 mol)을 메탄올 5 ㎖에 용해시켰다. 격렬한 교반을 개시하고, 물 중 40％ 아세트산 10 ㎖를 첨가한 다음 아연 분진 (0.5 g, 0.008 mol)을 첨가하였다. 교반된 반응물을 환류 (대략 60℃)하에 1.5 시간 동안 두고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 반응물을 냉각시키고, 추가 메탄올로 셀라이트를 세척하면서 셀라이트를 통해 Zn을 반응 혼합물로부터 여과하였다. 여액 및 메탄올 세척액을 합하고 농축하였다. 생성된 유성-백색 고체를 30분 동안 100％ 등용매 B 다음, 10분 동안 0 내지 100％ A 구배 및 20분 동안 100％ A 세척액 (A: 100％ 아세토니트릴, B: 0.0025％ 아세트산을 함유하는 100％ H20)으로 펌핑하면서 60분에 걸쳐 용출하여 YMC ODS-AQ 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 0.390 g (44％)의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: m/z = 407.3 [M+Na].
실시예 H) EX-H-4로부터의 생성물 (0.30 g, 0.780 mmol)을 농축 HOAc 5 ㎖에 용해시켰다. 여기에 디옥산 중 4N HCl 1 ㎖를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5분 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물에 용해시키고 3회 추가로 농축하였다. HPLC는 출발 물질의 양을 나타냈다. 고체를 1 N HCl에 용해시키고 3 시간동안 교반하였고, 이 시점에서 HPLC는 대부분의 출발 물질이 소비되었음을 나타냈다. 상기 용액을 농축하여 290 mg (98％)의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 디히드로클로라이드 염으로서 수득하였다. LCMS: m/z = 285.1 [M+H].
실시예 I
S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드
실시예-I-1) (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-카르복실레이트
문헌[Jeanguenat and Seebach, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2291 (1991); 및 Pattenden et al. Tetrahedron, 49, 2131 (1993)]을 참조한다. 딘-스타크 트랩(Dean-Stark trap)을 이용하여 물을 연속 제거하면서, (R)-시스테인 메틸 에스테르 히드로클로라이드 (8.58 g, 50 mmol), 피발알데히드 (8.61 g, 100 mmol) 및 트리에틸아민 (5.57 g, 55mmol)을 펜탄 (800 ㎖) 중 환류하였다. 이 혼합물을 여과하고 증발시켰다. 생성된 티아졸리딘 (9.15 g, 45 mmol) 및 나트륨 포르메이트 (3.37 g, 49.5 mmol)를 포름산 (68 ㎖) 중에서 교반하고 아세트산 무수물 (13 ㎖, 138 mmol)를 1 시간에 걸쳐 0 내지 5℃에서 적가 처리하였다. 이 용액을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 그 잔류물을 수성 5％ NaHC03을 사용하여 중화시키고 에테르 (3X)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (무수 MgS04), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 얻고, 이를 헥산-에테르로부터 백색 결정 (8.65 g)으로서 결정화하였다 (총 80％, 이형태체의 8:1 혼합물).
실시예-I-2) (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-메틸-4-카르복실레이트
무수 테트라히드로푸란 (130 ㎖) 중 실시예-1-1로부터의 생성물인 (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-카르복실레이트 (8.65 g, 37.4 mmol)의 용액에 N2하의 -78℃에서 DMPU (25 ㎖)를 첨가하고, 이 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란, (37.5 ㎖) 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드를 첨가한 후에, 혼합물을 30 분 동안 교반하였다. 요오드화메틸 (5.84 g, 41.1 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 4 시간동안 유지한 다음, 계속 교반하면서 실온으로 가온하였다. 용매를 진공하에 증발시키고, 염수와 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 수성 상을 3× EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 10％ KHS04, 물 및 염수로 세척하였다. 이어서, 이들을 건조시키고 (무수 MgS04), 여과하고, 감암하에 모든 용매를 스트리핑(strip)하였다. 1 내지 10％ EtOAc/헥산으로 잔류 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물 (5.78 g, 63％, 이형태체 2.4:1 혼합물)을 수득하였다.
다이셀 케미칼 인더스트리스 키라셀(Daicel Chemical Industries Chiracel) OAS 컬럼 상에서 체류 시간 16.5분, 10 내지 40％ IPA/헥산 0 내지 25 분, > 95％ ee.
실시예-I-3) (2R) 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드
실시예-I-2의 생성물인 (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀- 4-메틸-4-카르복실레이트 (5.7 g, 23.2 mmol)를 6N HCl (100 ㎖)과 함께 N2 하에 교반하고 2일 동안 격렬한 환류에서 유지하였다. 용액을 냉각시키고 EtOAc로 세척하고 증발시켜 생성물 (2R) 2-메틸-시스테인 히드로클로라이드 (3.79 g, 95％)를 연황색 분말로서 수득하였다.
실시예-I-4) S-[2-[[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트
수소화나트륨 (2.6 g, 광유 중 60％, 65 mmol)을 산소-무함유 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖)이 담긴 오븐-건조되고 진공-냉각된 RB 플라스크에 첨가하였다. 혼합물을 -10℃로 냉각시키고 N2 하에 교반하였다. 산소-무함유 1-메틸-2-피롤리디논 (25 ㎖)에 용해된 실시예-I-3의 생성물인 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (3.6 g, 21.0 mmol)를 부분씩 첨가하였다. 모든 H2 발생이 그친 후에, 산소-무함유 1-메틸-2-피롤리디논 (15 ㎖) 중 2-[(1,1-디메틸에톡시카르보닐)-아미노]에틸 브로마이드 (4.94 g, 21 mmol)를 -10℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온하면서 4 시간 동안 교반하였다. 이 용액을 1 N HCl로 중화시키고, 1-메틸-2-피롤리디논을 진공하에 증발시킴으로써 제거하였다. 0.05％ 수성 트리플루오르아세트산 용액 중 1 내지 20％ 아세토니트릴을 사용하는 역상 크로마토그래피로 표제 화합물 (5.9 g)을 수득하고, 동결 건조시켜 적절한 분획을 회수하였다.
실시예-I-5) S-(2-아미노에틸)-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드
실시예-I-4의 생성물인 S-[2-[[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노]에틸]-2- 메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트 (5.5 g, 14.0 mmol)를 1 N HCl (100 ㎖)에 용해시키고 실온의 질소하에서 밤새 교반하였다. 용액을 동결 건조에 의해 제거하여 표제의 S-(2-아미노에틸)-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드를 얻었다.
실시예 I) 실시예-I-5의 생성물을 H20에 용해시키고, 1 N NaOH를 사용하여 pH를 10으로 조정하고, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (1.73 g, 14.0 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15 내지 30 분 교반하고, pH를 10으로 상승시키고, 이 과정을 3회 반복하였다. HCl로 pH를 3으로 조정하고, 이 용액을 세척된 다우엑스(DOWEX) 50WX4-200 컬럼 상에 로딩하였다. 컬럼을 H20 및 0.25 M NH40H로 세척한 다음, 0.5 M NH40H로 세척하였다. 0.5 M NH40H 세척액으로부터의 분획을 즉시 동결시키고 합해서 동결-건조함으로써 1 N HCl에 용해되어 있는 오일을 얻고 이를 증발시켜 표제 화합물을 백색 고체 (2.7 g)로서 수득하였다.
실시예 J
2-[[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]티오]메틸]-O-메틸-D-세린, 디히드로클로라이드
본 실시예에서 이용되는 절차 및 방법은 단계 실시예-I-2에서 요오드화메톡시메틸을 요오드화메틸 대신 사용한 것을 제외하고는 실시예 I의 절차 및 방법과 동일하였다. 이러한 절차로 표제 생성물을 백색 고체 (2.7 g)로서 수득하였다.
실시예 K
S-[(1R)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드
실시예-K-1) (S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올
무수 벤젠 (60 ㎖) 중 (S)-1-아미노-2-프로판올 (9.76 g, 130 mmol) 용액에 0℃에서 무수 벤젠 (120 ㎖) 중 벤질 클로로포르메이트 (10.23 g, 60 mmol)를 부분씩 20분의 기간에 걸쳐 서서히 첨가하면서 질소 분위기 하에 격렬하게 교반하였다. 혼합물을 1 시간 동안 0℃에서 교반한 다음, 실온으로 가온하고 추가 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (2×) 및 염수 (2×)로 세척한 후에, 유기 층을 무수 MgS04상에서 건조시켰다. 모든 용매를 증발시켜 표제 생성물을 오일로서 수득하였다.
실시예-K-2) (S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 토실레이트
염화메틸렌 (60 ㎖) 중 실시예-K-1의 생성물인 (S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 (9.74 g, 46.7 mmol)과 트리에틸아민 (7.27 g, 72 mmol)의 용액에 0℃에서 염화메틸렌 (18 ㎖) 중 톨루엔 염화술포닐 (9.15 g, 48 mmol)을 부분씩 20분의 기간에 걸쳐 서서히 첨가하면서 질소하에 격렬하게 교반하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고 질소하에 추가 36 시간동안 교반하였다. 유기 층을 1 N HCl, 물, 5％ NaHCO3 용액, 물 및 염수로 세척한 후에, 이를 무수 MgS04상에서 건조시켰다. 모든 용매를 증발시켜 백색 고체를 얻고, 이를 실리카 플러그를 통해 에틸 아세테이트/헥산 (1:4)을 통과시켜 잉여의 톨루엔 염화술포닐을 제거한 다음 에틸 아세테이트/헥산 (1:3)을 통과시켜 표제 생성물을 백색 결정으로서 얻었다. 이 물질을 에틸 아세테이트/헥산으로부터 재결정화하여 백색 침상물 (10.8 g)을 수득하였다.
MS m/z (전기분무) 386 [M+23]+ (100％), 320(66). 레지스 테크놀로지스 인크.(Regis Technologies Inc.)의 퍼클 코발런트(Perkle Covalent) (R,R) δ-GEM1 HPLC 컬럼 상에서 이동상 이소프로판올/헥산 및 10％ 이소프로판올 구배를 5분 동안 사용한 다음 25분의 기간에 걸쳐 10 내지 40％ 이소프로판올을 사용하고, UV 및 레이저 편광계(Laser Polarimetry) 검출기를 사용하여 생성물을 검사하였다. 체류 시간 주요 피크: 22.2 분, > 98 ％ ee.
실시예-K-3) S-[(1R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트
실시예-I-3의 생성물인 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (1 g, 6.5 mmol)를 오븐 건조되고 N2 플러싱된 RB 플라스크에 첨가하고 산소-무함유 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖)에 용해시키고, 상기 시스템을 0℃로 냉각시켰다. 수소화나트륨 (0.86 g, 광유 중 60％, 20.1 mmol)을 첨가하고, 그 혼합물을 0℃에서 15 분동안 교반하였다. 산소-무함유 1-메틸-2-피롤리디논 (10 ㎖)에 용해된 실시예-K-2의 생성물 (2S)-1-[(N-벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 토실레이트 (2.5 g, 7 mmol) 용액을 10 분에 걸쳐 첨가하였다. 0℃에서 15분 후에, 반응 혼합물을 실온에서 4.5 시간 동안 교반하였다. 이어서, 1N HCl을 사용하여 용액을 pH 4로 산성화하고, 1-메틸-2-피롤리디논을 진공하에 증발로 제거하였다. 0.05％ 수성 트리플루오르아세트산 용액 중 20 내지 40％ 아세토니트릴을 사용하는 역상 크로마토그래피로 표제 화합물 (0.57g)을 수득하고 동결 건조로 회수하였다.
실시예-K-4) S-[(1R)-2-아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드
실시예-K-3의 생성물 S-[(1R)-2-(벤질옥시카르보닐아미노)-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트 (0.5 g, 1.14 mmol)를 6N HCl에 용해시키고 1.5시간 동안 환류하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc로 추출하였다. 수성 층을 진공하에 농축하여 표제 생성물, (2R,5R)-S-(1-아미노-2-프로필)-2-메틸-시스테인 히드로클로라이드 (0.29 g)를 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
실시예 K) 실시예-K-4의 생성물, S-[(1R)-2-아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (0.2 g, 0.76 mmol)를 H20 2 ㎖에 용해시키고, 1 N NaOH을 사용하여 pH는 10.0으로 조정하고, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (0.38 g, 3 mmol)를 10분에 걸쳐 4 부분으로 첨가하면서, 필요하다면 1 N NaOH를 사용하여 pH를 10.0으로 조정하였다. 1 시간 후에, 1 N HCl을 사용하여 pH를 3으로 조정하였다. 상기 용액을 물-세척된 다우엑스 50WX4-200 컬럼 상에 로딩하였다. 컬럼을 H20 및 0.5N NH40H로 세척하였다. 염기성 분획을 모으고 진공하에 농축 건조시켰다. 그 잔류물을 1 N HCl로 산성화하고 실시예 K의 표제 생성물 (49 mg)로 농축하였다.
실시예 L
S-[(1S)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드
여기서 이용되는 절차 및 방법은 단계 실시예-K-1에서의 (S)-1-아미노-2-프로판올 대신에 (R)-1-아미노-2-프로판올을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 K의 절차 및 방법과 동일하게 하여 표제 물질, S-[(1S)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드를 얻었다.
실시예 M
S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-에틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드
이 합성에서 사용되는 절차 및 방법은 실시예-I-2에서의 요오드화메틸 대신에 에틸 트리플레이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 I에서 이용되는 절차 및 방법과 동일하다. 물 중 10 내지 40％ 아세토니트릴 구배를 사용하는 역상 크로마토그래피를 사용하여 표제 생성물 (수율 20％)을 정제하였다.
실시예 N
2-[[[[2-(1-이미노에틸)아미노]에틸]티오]메틸]-D-발린, 디히드로클로라이드
실시예-N-1) 이소프로필 트리플레이트
질소 하의 디에틸 에테르 (300 ㎖) 중에서 교반된 은 트리플레이트 (25.25 g, 98.3 mmol)를 에테르 (200 ㎖) 중 요오드화이소프로필 (16.54 g, 98.5 mmol)로 15분에 걸쳐 처리하였다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음 여과하였다. 여액을 감압하에 증류시켰다. 이 증류액을 대기압하에서 재증류하여 대부분의 디에틸 에테르를 제거하고, 표제 이소프로필 트리플레이트-디에틸 에테르 (중량비 84:16) (15.64 g, 70％ 보정) 혼합물을 무색 액체로 수득하였다.
여기서 이용되는 절차 및 방법은 실시예-I-2에서의 요오드화메틸을 이소프로필 트리플레이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 I에서 이용된 절차 및 방법과 동일하였다. 조 표제 생성물을 물 중 10 내지 40％ 아세토니트릴의 구배 용출액을 사용하여 역상 크로마토그래피로 정제하였다.
실시예 O
S-[2-(1-이미노에틸아미노)에틸]-2-메틸-(D/L)-시스테인, 비스트리플루오로아세테이트
실시예-0-1) S-(2-아미노에틸)-L-시스테인, 메틸 에스테르
S-(2-아미노에틸)-L-시스테인 10 g (50 mmol)의 샘플을 메탄올 400 ㎖에 용해시켰다. 상기 냉각된 용액 내로 무수 HCl을 30분 동안 버블링하였다. 실온에서 밤새 교반한 후에, 용액을 농축하여 12.7 g의 표제 화합물을 수득하였다.
실시예-O-2) N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-L-시스테인, 메틸 에스테르
실시예-0-1의 생성물인 S-(2-아미노에틸)-L-시스테인 메틸 에스테르 12.7 g (50 mmol)의 샘플을 아세토니트릴에 용해시켰다. 이 용액에 무수 MgS04 12.2 g (100 mmol), 4-클로로벤즈알데히드 14 g (100 mmol) 및 트리에틸아민 100 mmol을 첨가하였다. 이 혼합물을 12 시간 동안 교반하고, 작은 부피로 농축하고, 에틸 아세테이트 500 ㎖로 희석하였다. 유기 용액을 (0.1％) NaHC03, (2N) NaOH 및 염수 용액으로 차례로 세척하였다. 유기물을 건조시키고 (무수 MgS04), 여과 및 농축하여 7.5 g의 표제 화합물을 수득하였다. [M + H+] = 179.
실시예-O-3) N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-2-메틸-D/L-시스테인 메틸 에스테르
무수 THF 중 실시예-0-2의 생성물인 N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-L-시스테인 메틸 에스테르 (7.5 g, 17 mmol)의 샘플을 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드 17 mmol로 -78℃의 질소하에서 처리한 다음, 요오드화메틸 2.4 g (17mmol)으로 처리하였다. 이 용액을 -78℃에서 4 시간 동안 유지한 다음, 계속 교반하면서 실온으로 가온하였다. 용매를 진공하에 증발시키고, 염수와 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 수성 상을 3× EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 10％ KHS04, 물 및 염수로 세척한 후에, 이를 건조시키고 (무수 MgS04), 여과 및 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
실시예-0-4) S-(2-아미노에틸)-2-메틸-D/L-시스테인, 히드로클로라이드
실시예-0-3의 생성물인 N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-2-메틸-D/L-시스테인 메틸 에스테르 (4.37 g, 10 mmol) 샘플을 2N HCl과 함께 밤새 교반하면서 가열하고 (60℃), 이 용액을 에틸 아세테이트 (3X)로 세척하였다. 수성 용액을 동결 건조시켜 표제 화합물을 얻었다.
실시예 O) 실시예-0-4의 생성물인 S-(2-아미노에틸)-2-메틸-D/L-시스테인 디히드로클로라이드 (2.5 g, 10 mmol) 샘플을 H20에 용해시키고, 1N NaOH를 사용하여 pH를 10으로 조정하였다. 이어서, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (1.24 g, 10.0 mmol)를 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 15 내지 30분 교반하고, pH를 10으로 상승시키고, 이 과정을 3회 반복하였다. HCl 용액을 사용하여 pH를 4로 감소시키고, 이 용액을 증발시켰다. 0.05％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 H20를 이동상으로 사용하여 잔류물을 역상 HPLC 상에서 정제하여 실시예 O의 표제 생성물을 수득하였다. M + H = 220.
실시예 P
(2R)-2-아미노-3[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]술피닐]-2-메틸프로판산, 디히드로클로라이드
물 3 ㎖ 중 S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드 (실시예 I, 0.2 g, 0.73 mmol) 용액을 교반하고 0℃로 냉각시키고, 포름산 (0.4 ㎖, 0.73 mmol) 중 3％ H202 (0.8 ㎖, 0.73 mmol) 용액을 0.3 ㎖ 부분씩 첨가하였다. 저온 조를 제거하고, 이 반응 혼합물을 실온에서 48 시간동안 교반하였다. 용액을 진공하에 농축하고 물 (10 ㎖)로 희석시키고 다시 농축하여 조 술폰을 얻었다. 이 잔류물을 크로마토그래피하여 (C-18 역상, 이동상: 0.05％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 H20) 순수한 술폰을 얻었다. 술폰을 1 M HCl (10 ㎖)로 처리하고 진공하에 농축하여 표제 화합물의 2개 부분입체이성질체의 혼합물 140 mg을 HCl 염의 무색 오일로서 수득하였다.
실시예 Q
(2R)-2-아미노-3[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]술포닐]-2-메틸프로판산 디히드로클로라이드
물 2 ㎖ 중 실시예 I의 생성물인 S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인 디히드로클로라이드 (0.15 g, 0.54 mmol) 용액을 0℃로 냉각시키고, 포름산 (0.8 ㎖, 14.6 mmol) 중 3％ H202 (1.6 ㎖, 1.46 mmol) 용액을 첨가하였다. 저온 조를 제거하고, 이 반응 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반하였다. 용액을 진공하에 농축하고, 물 10 ㎖로 희석하고 재농축하여 조 술폭시드를 얻었다. 잔류물을 물 4 ㎖로 희석하고, 2.5 N NaOH를 사용하여 pH 9로 조정하였다. 아세톤 (5 ㎖)을 첨가한 다음, Boc20 (0.2 g)를 첨가하고, 반응물을 48 시간동안 실온에서 교반하였다. 1 M HCl을 사용하여 반응 혼합물을 pH 6으로 조정하고 진공하에 농축하였다. 이 잔류물을 크로마토그래피하여 (C-18 역상; 40 내지 50％ ACN: H20, 0.05％ TFA) 순수한 Boc 보호 물질을 얻었다. 분획을 진공하에 농축하고, 잔류물을 1 N HCl (3 ㎖)로 1 시간 동안 처리하였다. 용액을 농축하여 30 mg의 표제 화합물을 무색 오일로서 얻었다.
실시예 R
(2S,5Z)-2-아미노-6-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 R-1)
톨루엔 (60 ㎖) 중 트리에틸-2-포스포노프로피오네이트 (6.5 mg, 27.1 mmol) 용액을 0.5 M 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (50.0 ㎖, 톨루엔 중)로 처리하고, 생성된 음이온을 실시예 U-4 방법에 의해 실시예 U-3의 알데히드 생성물 (하기 실시예 U 참조)과 축합하였다. 크로마토그래피 후에, 목적하는 각각의 Z 및 E 디에스테르 3:7 혼합물 8 g을 생성하였다.
실시예 R-2)
Et2O (30 ㎖) 중 실시예 R-1의 생성물 혼합물 (850 mg, 2.0 mmol)을 실시예 U-5의 방법에 의해 디이소부틸 알루미늄/수화물 (DIBAL)로 20 분에 걸쳐 환원시켜 E-알콜과 환원되지 않은 Z-에스테르의 조질의 도시된 목적하는 혼합물을 생성하였다. 이 혼합물을 n-헥산:EtOAc (9:1) 내지 n-헥산:EtOAc (1:1)로 용출하면서 실리카겔상 크로마토그래피하여 목적하는 물질인 Z-에스테르 (530 mg) 및 E-알콜을 수득하였다.
실시예 R-3)
Et2O (30 ㎖) 중 실시예 R-2의 생성물 Z-에스테르 (510 mg, 1.2 mmol)를 실시예 U-5의 방법에 의해 디이소부틸 알루미늄/수화물 (DIBAL)로 2 시간에 걸쳐 환원시켜 조질의 도시된 목적하는 Z-알콜을 생성하였다. 이 물질을 n-헥산:EtOAc (9:1) 내지 n-헥산:EtOAc (8:2)로 용출하면서 실리카겔상 크로마토그래피하여 목적하는 Z-알콜 생성물 340 mg을 수득하였다.
실시예 R-4)
실시예 R-3의 생성물 알콜 (340 mg, 0.9 mmol)의 CH2Cl2 용액 (5 ㎖)를 트리에틸아민 (151 mg, 1.5 mmol)로 처리하였다. 빙조에서 냉각시킨 이 용액에 염화메탄술포닐의 CH2Cl2 용액 (1.5 ㎖)을 첨가하였다. 15 분 후에 빙조를 제거하고 반응물을 20시간 동안 상온에서 교반하였다. 그 다음, 상기 반응 혼합물을 10％ KHS04로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 감압하에 모든 용매를 스트리핑하여 목적하는 Z-알릴계 클로라이드를 생성하였다.
실시예 R-5)
DMF 중 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사-디아졸린-5-온의 현탁액을 하기 실시예 S-2의 방법에 의해 실시예 R-4의 생성물의 DMF 용액과 반응시켜 상기 물질을 생성하였다.
실시예 R-6)
실시예 R-5의 생성물을 실시예 U-7의 방법에 의해 HOAc 중 아연과 반응시켜 상기 아미딘을 수득하였다.
실시예 R-7)
빙상의 HOAc 중에서 실시예 R-6의 생성물을 디옥산 중 4N HCl과 반응시켜 아미딘을 수득하였다.
실시예 R)
실시예 R-7의 생성물을 탈보호하여 아미노산, 디히드로클로라이드를 수득하였다.
실시예 S
(2S,5E)-2-아미노-6-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 S-1)
실시예 R-2의 E-알콜 생성물 (1.3 g, 3.3 mmol)을 실시예 R-4의 방법에 의해 트리에틸아민 (525 mg, 5.2 mmol) 및 염화메탄술포닐 (560 mg, 5.2 mmol)와 반응시켜 목적하는 E-알릴계 클로라이드 1.4 g을 수득하였다.
실시예 S-2)
DMF 5 ㎖ 중 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사-디아졸린-5-온 (460 mg, 3.35 mmol)의 현탁액을 실시예 S-1의 생성물의 DMF (15 ㎖) 용액으로 처리하였다. 이 반응 혼합물을 17 시간 동안 50℃에서 교반한 후, 디아졸린-5-온 염 50 mg (0.04 mmol)을 추가로 첨가하였다. 교반시킨 반응물을 3 시간 동안 추가로 계속 가열한 다음, 이를 실온으로 냉각시키고 물 180 ㎖로 희석하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 추출물을 n-헥산 120 ㎖로 희석하고, 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 감압하에 모든 용매를 스트리핑하여 상기 물질 1.3 g을 수득하였다.
실시예 S-3)
실시예 S-2의 생성물 (460 mg, 1.0 mmol)을 실시예 U-7의 방법(하기 실시예 U를 참고)에 의해 HOAc 중에 아연과 반응시켜 HPLC 정제 후 목적하는 아미딘 312 mg을 수득하였다.
실시예 S)
실시예 S-3의 생성물 (77 mg, 0.2 mmol)을 실시예 U의 방법에 의해 2N HCl로 탈보호하여 E-아미노산, 디히드로클로라이드 63 mg을 수득하였다.
실시예 T
(2S,5Z)-2-아미노-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 T-1)
메틸 비스(트리플루오로에틸)포스포노아세테이트 (4.77 g, 15 mmol) 및 18-크라운-6 23.7 g (90 mmol)을 무수 THF 80 ㎖ 중 용해시키고 -78℃로 냉각시켰다. 이 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 30 ㎖ (15 mmol)를 첨가한 후, 실시예 U-3 (하기 실시예 U 참고)으로부터의 N,N-디Boc 글루탐산 알데히드 메틸 에스테르 5.1 g (14.7 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 반응물을 수성 KHS04로 켄칭하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고 농축하여 목적하는 화합물 2.95 g (49％)을 수득하였다. 질량 분석 스펙트럼 M + H = 402.
실시예 T-2)
실시예 T-1로부터의 생성물을 실시예 U-5의 방법에 의해 환원시켜 목적하는 화합물을 수득하였다.
실시예 T-3)
실시예 T-2로부터의 생성물을 실시예 U-6의 방법에 의해 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온과 반응시켜 목적하는 화합물을 수득하였다.
실시예 T-4)
실시예 T-3으로부터의 생성물을 실시예 U-7의 방법에 의해 탈보호하여 목적하는 화합물을 수득하였다.
실시예 T)
실시예 T-4로부터의 생성물을 2 N HCl에 용해시키고 환류 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 냉각시키고, 농축하여 목적하는 생성물 0.12 g을 수득하였다.
실시예 U
(2S,5E)-2-아미노-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 U-1)
L-글루탐산 (6.0 g, 40.78 mmol)을 메탄올 (100 ㎖)에 용해시켰다. 0℃에서 질소하에 상기 반응 혼합물에 염화트리메틸실릴 (22.9 ㎖, 180 mmol)를 첨가하고, 밤새 교반시켰다. 0℃에서 질소하에 상기 반응 혼합물에 트리에틸아민 (37 ㎖, 256 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (9.8 g, 44.9 mmol)를 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 에테르 (200 ㎖)로 연화처리하였다. 연화처리된 혼합물을 여과하였다. 여액을 오일로 증발시키고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출하면서 실리카 상에서 크로마토그래피하여 모노 Boc L-글루타믹 디에스테르 (10.99 g, 98％)를 수득하였다.
실시예 U-2)
모노 Boc L-글루탐산 (10.95 g, 39.8 mmol)을 아세토니트릴 (130 ㎖)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물에 4-디메틸아미노피리딘 (450 mg, 3.68 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (14.45 g, 66.2 mmol)를 첨가하고 20시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출하면서 실리카 상에서 크로마토그래피하여 디-Boc-L-글루타믹 디에스테르 (14.63 g, 98％)를 수득하였다.
실시예 U-3)
실시예 U-2로부터의 생성물 (10.79 g, 28.7 mmol)을 디에틸 에테르 (200 ㎖)에 용해시키고, 드라이아이스조에서 -80℃로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물에 디이소부틸알루미늄 수화물 (32.0 ㎖, 32.0 mmol)을 첨가하고, 25분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 드라이아이스조로부터 제거하고, 물 (7.0 ㎖)을 첨가하였다. 에틸 아세테이트 (200 ㎖)를 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 황산마그네슘 (10 g)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축하여 투명한 황색 오일 (11.19 g)을 수득하였다. 황색 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피를 하고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시켰다. 생성물 (8.61, 87％)은 투명한 연황색 오일이었다.
실시예 U-4)
트리에틸 포스포노아세테이트 (6.2 ㎖, 31.2 mmol)을 톨루엔 (30 ㎖)에 용해시키고, 질소하에 빙조에 위치시켜 0℃로 냉각하였다. 상기 반응 혼합물에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (70 ㎖, 34.9 mmol)를 첨가하고 90분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 톨루엔 (20 ㎖) 중 용해된 실시예 U-3으로부터의 생성물 (8.51 g, 24.6 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 상기 반응 혼합물에 황산수소칼륨 (25 ㎖, 25 mmol)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 100 ㎖)로 추출하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 농축하여 흐리게 갈색을 띠는 황색 오일 (12.11 g)을 수득하였다. 오일을 에틸 아세테이트 및 톨루엔으로 용출하면서 실리카 상에서 크로마토그래피하여 연황색 오일 (7.21 g, 70％)을 수득하였다.
실시예 U-5)
실시예 U-4로부터의 생성물 (5.0 g, 12.03 mmol)을 디에틸 에테르 (100 ㎖)에 용해시키고, 드라이아이스조 중에 위치시키고, -80℃로 냉각하였다. 상기 반응 혼합물에 디이소부틸알루미늄 수화물 (21.0 ㎖, 21.0 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 30분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 물 (10 ㎖)을 첨가하고, 드라이아이스조로부터 제거하고 60분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 황산마그네슘 (10 g)을 첨가하고 10분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 농축하여 황색 오일 (5.0 g)을 수득하였다. 오일을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출하면서 실리카 상에서 크로마토그래피하여 연황색 오일 (2.14 g, 47％)을 수득하였다.
실시예 U-6)
실시예 U-5로부터의 생성물을 테트라히드로푸란 (50 ㎖)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물에 중합체 상 트리페닐 포스핀 (3.00 g, 8.84 mmol), 옥사디아졸리논 (720 mg, 7.23 mmol) 및 아조디카르복실산 디메틸 에스테르 (1.17 g, 3.21 mmol)를 첨가하고, 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고 농축하여 흐린 황색 오일 (2.81 g)을 수득하였다. 오일을 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출하면서 실리카 상에서 크로마토그래피하여 투명한 무색의 오일 (1.66 g, 68％)을 수득하였다.
실시예 U-7)
실시예 U-6으로부터의 생성물 (300 mg, 0.66 mmol)을 아연 금속을 함유하는 아세트산과 물의 용액 (10 ㎖, 25/75)에 용해시키고, 3시간 동안 초음파처리하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 역상 HPLC상 크로마토그래피하여 투명한 무색의 잔류물 (13 mg, 4％)을 수득하였다.
실시예 U)
실시예 U-7으로부터의 생성물 (3.0 mg, 0.031 mmol)을 2 N HCl (1.22 ㎖, 2.44 mmol)에 용해시키고 1 시간 동안 환류하였다. 상기 반응 혼합물을 냉각하고, 농축하여 투명한 무색의 오일 (6.6 mg, 95％)을 수득하였다.
실시예 V
(αR,2S)-α-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 삼수화물 히드로클로라이드
실시예 V-1)
3-구 3 L 플라스크를 질소로 퍼징(purging)한 후, 시클로헥사논 (1.27 mol, 132 ㎖) 및 톨루엔 500 ㎖로 충전하였다. 상기 교반한 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 칼륨 t-부톡시드 157.2 g (1.1 당량)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 색 및 질감의 변화가 나타난 다음, 기계적으로 교반되는 반응 혼합물에 톨루엔 100 ㎖ 중 5-펜테닐 브로마이드 (1.27 mol, 136 ㎖)의 용액을 1시간에 걸쳐 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 그 다음, 1 N KHSO4 800 ㎖로 희석하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고 건조되도록 증발시켜 조 생성물 208.5 g을 수득하였다. 그 다음, 이 물질을 진공 증류 (수분 흡기기 압력하에)로 정제하여 표제 생성물을 47％ 수율로 수득하였다.
실시예 V-2)
실시예 V-1의 생성물 (93.67 g, 0.563 mole)을 EtOH (600 ㎖), 물 (300 ㎖), NaOAc (101.67 g, 1.24 mole) 및 NH2OH. HCl (78.31 g, 1.13 mole)과 함께 3-구 3 L 플라스크에 합하였다. 상기 교반한 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시킨 다음, 추가로 24 시간 동안 25℃에서 교반하였다. 모든 용매를 감압하게 제거하고, 잔류물을 디에틸에테르 (Et2O, 500 ㎖) 및 물 (200 ㎖)에 분배하였다. 수성 층을 3 ×200 ㎖ 에테르로 추출하였다. 합한 유기 층들을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 스트리핑하여 표제 옥심 (121.3 g, 조 수율 100％)을 수득하였다.
실시예 V-3)
3-구 3 L 플라스크를 질소로 퍼징한 다음, 헥사메틸디실록산 (471.7 ㎖, 2.2 mol), 톨루엔 (500 ㎖) 및 오산화인 (203.88 g, 1.4 mol)으로 충전시켰다. 투명한 용액이 수득될 때까지 (약 1.5 시간) 불균일 혼합물을 환류시켰다. 이 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 톨루엔 200 ㎖ 중 실시예 V-1의 옥심 생성물 (102.1 g, 0.563 mol)을 상기 반응 혼합물에 25℃에서 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 추가로 4 내지 6 시간 동안 (TLC: Hex 중 50％ EA로 검사함, I2) 교반한 후, 이를 전체적으로 혼합하면서 빙수 내에 부었다. 이 빙 슬러리 혼합물에 NaCl 250 g을 첨가하고, 생성된 혼합물을 고체 탄산칼륨을 첨가하여 pH가 5가 되도록 조정하였다. 이 슬러리를 디에틸에테르 (Et2O) 3 × 500 ㎖로 추출하고, 합한 유기 분획을 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하여 스트리핑하여 위치이성질체 락탐의 조 혼합물 (84.6 g)을 수득하였다.
실시예 V-4)
그 다음, 실시예 V-3의 생성물을 정제 및 위치이성질체 분리를 위하여 크로마토그래피 (실리카:아세토니트릴)를 수행하였다. 조 샘플로부터 7-펜테닐 위치이성질체를 50％ 수율로 단리하고, 키랄 크로마토그래피 후에, 목적하는 단일 거울상이성질체를 각각 43％ 수율로 단리하였다.
실시예 V-5)
실시예 V-4의 R-이성질체 생성물 (102.1 g, 0.56 mol), 건조 THF (800 ㎖), DMAP (68.9 g, 0.56 mol), 디-t-부틸 디카르보네이트 (Boc2O, 99 g, 0.45 mol)을 아르곤으로 퍼징한 3-구 3 L 플라스크에서 합하였다. 상기 반응 혼합물을 30분 내에 70℃로 가온시키고, Boc20 52.8 g 및 건조 THF 200 ㎖를 추가로 첨가하였다. 30 분 후, Boc20 32 g을 추가로 첨가하고, 상기 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. Boc20 36 g을 추가로 첨가하고, 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압하에 18℃ 내지 20℃에서 THF를 스트리핑하였다. 침전물을 여과하고, 에틸아세테이트 (EA) 100 ㎖로 세척하고 버렸다 (약 45 g). EA 여액을 추가의 EA 500 ㎖로 희석하고, 1 N KHS04 500 ㎖, 포화 수성 NaHCO3 500 ㎖ 및 염수 500 ㎖로 세척한 다음, 무수 Na2SO4로 12시간 동안 건조하였다. 그 다음, 이 EA 추출물을 DARCO 20 g으로 처리하고, MgSO4가 상부에 있는 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 농축하여 표제 생성물 150 g을 암갈색 오일로서 수득하였다.
실시예 V-6)
CH2Cl2 3 L에 용해되어 있는 실시예 V-5의 생성물 (150 g, 0.533)을 함유하는 3-구 3L 플라스크를 -78℃로 냉각하였다. 상기 반응 혼합물의 색이 청색으로 바뀔 때까지 O3의 스트림을 용액에 2.5시간 동안 통과시켰다. 용액이 투명한 무색이 될 때까지 (약 30 분) 아르곤을 -60℃ 내지 -70℃에서 유지되는 용액에 버블링시켰다. 그 다음, 디메틸술피드 (DMS, 500 ㎖)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물에 환류를 일으키고, 24 시간 동안 계속 환류시켰다. DMS 추가 100 ㎖를 첨가하고, 12시간 동안 계속 환류시켰다. DMS 추가 100 ㎖를 첨가하고, 추가로 12 시간 동안 계속해서 환류시켰다. 그 다음, 용매 및 과량의 DMS를 20℃에서 회전 증발기 상에 스트리핑하였다. 수득한 잔류성 황색 오일을 DI 물 500 ㎖로 희석하고, EA 3 × 300 ㎖로 추출하였다. EA 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, DARCO 20 g으로 처리하고, 무수 MgSO4가 상부에 있는 셀라이트 박층을 통해 여과하고, 감압하에 모든 용매를 스트리핑하여 조질의 표제 생성물 156 g을 오렌지색 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 V-7)
디클로로메탄 (CH2Cl2) 1 L에 용해되고 0℃로 냉각된 N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (160 g, 0.48 mol)의 샘플에 CH2Cl2 100 ㎖ 중 DBU (110.29 g, 0.72 mol)의 용액을 첨가하였다. 이 투명한 무색의 반응 혼합물을 1시간 동안 0℃ 내지 6℃에서 교반하고, CH2Cl2 600 ㎖ 중 생성물 실시예 V-6의 Boc-알데히드 (150 g, 0.53 mol)를 -5℃ 내지 -1℃에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 후, 대략 1 시간 동안 10℃로 서서히 가온시켰다. 상기 반응 혼합물을 1 N KHS04 (500 ㎖), 포화 수성 NaHCO3 (200 ㎖) 및 50％ 수성 NaCl (200 ㎖)로 세척하였다. 그 다음, 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고, DARCO 40 g으로 처리하고, 무수 MgS04가 상부에 있는 셀라이트 박층을 통해 여과하고, 농축하여 조질의 표제 생성물 258 g을 황색 오일로서 수득하였다. 이 물질을 크로마토그래피 정제를 하여 순수한 표제 생성물 130 g (55％)을 수득하였다.
실시예 V-8)
실시예 V-7의 생성물 (91.3 g, 0.19 mol)의 MeOH (1 L) 용액에 S,S-Rh-DIPAMP 촉매 2.5 g을 첨가한 후, 수소를 첨가하였다. 수소화를 파르(Parr) 기구 내에서 1.5 시간 동안 25℃에서 수행하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 후, 농축하여 조질의 표제 생성물 (90 g, 98％)을 갈색 오일로서 수득하였다.
실시예 V-9)
빙초산 200 ㎖ 중 실시예 V-8의 생성물 (90 g)의 용액에 디옥산 중 4N HCl 200 ㎖를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃에서 20분 동안 교반한 후, 감압하에 40℃에서 모든 용매를 스트리핑하여 적갈색 오일을 수득하였다. 이 오일성 생성물을 물 500 ㎖로 처리하고, 디클로로메탄 2 × 300 ㎖로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 중탄산나트륨 용액 (100 ㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 모든 용매를 스트리핑하여 조질의 표제 생성물을 수득하였다. 이 물질을 크로마토그래피하여 순수한 표제 생성물 45 g (62％)을 수득하였다.
실시예 V-10)
아르곤으로 퍼징된 디클로로메탄 300 ㎖ 중 실시예 V-9의 생성물 샘플 45.0 g (0.115 mol)에 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 23.0 g (0.121 mol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반한 후, 중탄산나트륨 포화 수용액 150 ㎖를 첨가하였다. 디클로로메탄 층을 분리하고, 50％ 수성 NaCl 용액 150 ㎖로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과하고 25℃에서 농축하여 투명한 황색 오일인 표제 생성물 47.0 g (97％)을 수득하였다.
실시예 V-11)
메탄올 500 ㎖ 중 염화암모늄 7.0 g (0.130 mol)에 실시예 V-10의 표제 물질 (45.0 g, 0.107 mol) 31.2 g을 첨가하였다. 상기 반응물을 5시간 동안 65℃에서 환류시킨 후 모든 용매를 감압하에 제거하여 조 생성물 40 g (87％)을 발포성 점성 질량체로서 수득하였다. 이 물질을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물 37 g (81％)을 수득하였다.
실시예 V)
2.3 N HCl 1 L 중 실시예 V-11의 표제 생성물 (36.0 g, 0.084 mol)을 3 시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 CCH2Cl2 2 × 150 ㎖로 세척한 다음, 진공하에 모든 용매를 스트리핑하여 표제 아미노산 생성물 25.6 g (96％)을 담황색 발포체로서 수득하였다.
실시예 W
(αS,2R)-α-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 삼수화물 히드로클로라이드
실시예 W-1)
실시예 V-4의 S-이성질체 생성물 (5.45 g, 0.030 mol)을 실시예 V-5의 방법에 의해 그의 Boc 유도체로 전환시켰다. 크로마토그래피 후, 이 반응으로 목적하는 표제 생성물 6.3 g (75％)을 수득하였다.
실시예 W-2)
실시예 W-1의 생성물 (6.3 g, 0.025 mol)을 실시예 V-6의 방법에 의해 오존화시켜 조질의 표제 알데히드 8.03 g을 생성하고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 W-3)
실시예 W-2의 생성물 (8.03 g, 0.024 mol)을 실시예 V-7의 절차를 사용하여 N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (7.9 g, 0.024 mol)와 축합하여 크로마토그래피 후 목적하는 표제 생성물 4.9 g (44％)을 생성하였다.
실시예 W-4)
실시예 W-3의 생성물 (4.8 g, 0.010 mol)을 실시예 V-8의 방법에 의해 R,R-Rh-DIPAMP 촉매의 존재하여 환원시켜 크로마토그래피 후 목적하는 표제 생성물 2.9 g (60％)을 생성하였다.
실시예 W-5)
실시예 W-4의 생성물 (2.9 g, 0.006 mol)을 실시예 V-9의 방법을 사용하여 HCl로 처리하여 탈보호하여 목적하는 표제 생성물 2.3 g (100％)을 생성하였다.
실시예 W-6)
실시예 W-5의 생성물 (0.56 g, 0.0015 mol)을 실시예 V-10의 방법을 사용하여 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트로 알킬화하여 목적하는 표제 생성물 0.62 g (98％)을 생성하였다.
실시예 W-7)
실시예 W-6의 생성물 (0.62 g, 0.0015 mol)을 실시예 V-11의 방법을 사용하여 메탄올 중 염화암모늄으로 처리하여 크로마토그래피 정제 후, 목적하는 표제 생성물 0.50 g (88％)을 생성하였다.
실시예 W-8)
MeOH에 용해된 실시예 W-7의 생성물 (0.37 g, 0.0009 mol)을 파르 수소화 기구에 첨가하였다. 이 용기에 촉매량의 5％ Pd/C를 첨가하였다. 수소를 도입하고 상기 반응물을 실온에서 5 psi 기압에서 7시간에 걸쳐 수행하였다. 촉매를 여과로써 제거하고 모든 용매를 감압하에 여액으로부터 제거하여 목적하는 표제 생성물 0.26 g (정량적)을 생성하였다.
실시예 W)
2N HCl (30 ㎖)에 용해된 실시예 W-8의 생성물의 용액을 2 시간 동안 환류에 유지시키고 이를 실온으로 냉각시켰다. 모든 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 물 50 ㎖에 용해시켰다. 다시 이 용액을 감압하에 모든 용매를 스트리핑시키고, 이를 물 12 ㎖ 중에 다시 용해시킨 다음, 동결건조하여 표제 화합물 0.245 g (71％)을 생성하였다.
실시예 X
(αS,2S)-α-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 삼수화물 히드로클로라이드
실시예 X-1)
오버헤드 교반기, 반달 형상의 패들, 가열 맨틀, 열전대 및 은 진공 피복 증류 컬럼 (5개의 판)를 장착한 22 L 둥근 바닥 플라스크에 시클로헥사논 (4500.0 g, 45.85 mol), 아세톤 디메틸 아세탈 (5252.6 g, 50.43 mol), 알릴 알콜 (6390.87 g, 110.04 mol) 및 p-톨루엔 술폰산 (PTSA) (0.256 g, 0.001 mol)을 충전하였다. 교반 (137 rpm)을 시작한 후 개시 설정점을 70℃로 하여 포트를 서서히 가열하였다. 가열을 150℃의 최종 포트 온도로 단계적으로 증가시켰다. 반응기 설정점의 증가는 증류 속도를 기초로 하여 결정하였다. 증류의 속도가 느리거나 또는 정지한 경우, 추가 열을 적용하였다. 추가로 150℃로 가열하여 클라이젠 전위(Claisen rearrangement)가 일어나도록 하였다. 포트 온도가 150℃로 상승된 후, 증류물이 관찰되지 않았으며, 가열 맨틀을 낮추고, 상기 반응 혼합물을 130℃로 냉각시켰다. 그 다음, PTSA를 2.5 N NaOH 3 방울로 중화시켰다. 그 다음, 진공 스트리핑을 시작하고, 가열 맨틀을 플라스크로부터 낮추었다. 증발 냉각을 사용하여 포트 온도를 낮추고, 압력을 40 mm Hg로 점차적으로 낮추었다. 포트 온도를 약 100℃로 감소시켰을 때, 가열 맨틀을 가열을 위해 다시 적당한 위치에 올려놓았다. 반응하지 않은 시클로헥사논 및 저비점 불순물을 증류시켰다. 포트 온도를 서서히 증가시켰다 (포트 및 증기 사이의 최대 온도 차이가 약 12℃였음). 생성물을 109 내지 112℃ 및 40 mm Hg에서 단리시켰다. 전형적인 수율은 40 내지 45％였다. 면적 (GC)에 의해 95％ 미만인 분획을 합하고, 증류시켜 표제 생성물을 전체 수율 55％로 수득하였다.
실시예 X-2)
아세트산 (470 g)에 용해된 히드록실 아민-O-술폰산 (91.8 g)을 0℃로 냉각시킨 기계적 교반기, 열전대, 응축기 및 추가 깔때기를 장착한 1 L 바이엘(Bayer) 플라스크에 첨가하고 70℃로 가열하였다. 70 내지 78℃의 온도를 유지하면서 알릴 시클로헥손 (100 g)을 대략 40분 내에 상기 용액에 적가하였다. 첨가하는 동안, 상기 반응물 외형은 백색 슬러리에서 투명한 오렌지색 용액으로 변화하였다. 첨가한 후, 상기 반응물을 가열하고, 75℃에서 추가로 5시간 동안 교반하였다. IPC 샘플을 각각의 시간에 취하였다. 상기 반응이 완료된 후, 아세트산을 50℃에서 감압하에 회전 증발기 상에서 스트리핑하였다. 그 다음, 물 (200 ㎖)을 잔류물을 첨가하고, 용액을 톨루엔 (2 ×300 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물 (150 ㎖)로 처리하고, 10 분 동안 교반하였다. 수성층이 염기성 (pH 12)이 될 때까지 수산화나트륨 용액 (50％ 용액 79.4 g)을 첨가하였다. 중화를 온도를 반응기 내에서 40℃ 미만으로 조절하여 수행하였다. 그 다음, 층들을 분리하고, 톨루엔 층을 필터를 통과시켜 임의의 고체 또는 타르 물질을 제거하였다. 그 다음, 유기 용액을 회전 증발기 상에서 감압하에 50 ℃에서 스트리핑하였다. 잔류물을 톨루엔 (510 ㎖)과 헵탄 (2040 ㎖)의 혼합물을 용해시키고, 3 L 반응기 중에서 60℃로 가열하였다. 투명한 황색-오렌지색 용액을 수득하였다. 교반하면서 용액을 5℃로 서서히 냉각하자 표제 화합물이 53℃에서 결정화되기 시작하였다. 고체를 여과하고, 헵탄 (50 ㎖)으로 세척하고, 밤새 40℃에서 하우스 진공하에 건조하여 표제 생성물 66.3 g (60％)을 회백색 결정으로서 수득하였다. 이 물질의 일부를 톨루엔 및 헵탄으로부터 재결정화하여 표제 생성물을 백색 결정질 고체로서 생성하였다.
실시예 X-3)
실시예 X-2의 라세미 생성물 혼합물을 100％ 아세토니트릴로 용출하면서 키랄팩 AS 20 ㎛ 컬럼상 키랄 크로마토그래피 분리를 수행하였다. 검출기에서 220 nM 파장을 사용하였다. 아세토니트릴 0.08 g/mL의 샘플 로딩을 사용하여 95％ ee 초과의 분리된 이성질체 각각을 90％ 회수율로 얻었다. R-이성질체 물질의 일부를 톨루엔 및 헵탄으로부터 재결정화하여 R-이성질체 표제 생성물을 백색 결정질 고체로서 생성하였다.
R-이성질체: m. p. = 81-82℃.
실시예 X-4)
적하 깔때기, 온도계 및 기계적 오버헤드 교반기를 장착한 5-구 편평 바닥 플라스크를 비우고, 질소로 3회 퍼징하였다. 실시예 X-3의 R-이성질체 생성물 락탐 (100.0 g, 0.653 mol), DMAP (7.98 g, 65 mmol) 및 N-디이소프로필에틸 아민 (휘니그 염기(Huenigs base), 113.3 g, 0.876 mol)을 톨루엔 (350 ㎖)에 용해시키고, 톨루엔 (100 ㎖)에 용해된 디-tert-부틸 디카르보네이트 (170.2 g, 0.78 mol)를 첨가하였다 (주의: 상기 반응은 휘니그 염기 2.0 당량을 사용하였을 때 더욱 잘 작용함). 상기 혼합물을 65℃로 가열하였다 (주의: 상기 반응을 관찰하는 동안 꾸준히 기체가 발생함). 1.5 시간 후에, 톨루엔 (50 ㎖)에 용해된 디-tert-부틸-디카르보네이트 (0.395 mol) 추가 86.25 g을 첨가하였다. 가열을 17 시간 동안 계속하고, HPLC에 의한 IPC가 75％ 전환률을 보였다. 톨루엔 (30 ㎖) 중 디-tert-부틸 디카르보네이트 (0.196 mol) 추가 42.78 g을 첨가하고, 갈색 혼합물을 추가 5.5 시간 동안 가열하였다. 상온으로 냉각한 후, 상기 혼합물을 4M HCl (215 ㎖)로 처리하고, 수성 층을 톨루엔 (2 × 80 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층들은 NaHCO3 (170 ㎖) 및 물 250 ㎖로 세척하였다. (주의: 켄칭하는 동안 얼음/물로 외부 냉각으로 내부 온도를 조절하였음). 기체 발생이 관찰되었다. 유기층을 증발시켜 갈색 액체 257.4 g을 수득하였다. 이 조물질을 용출액으로 톨루엔/EtOAc 9/1 (6 L) 및 톨루엔/AcOEt 1/1 (0.5 L)을 사용하는 Si02 (950 g) 상 플러그 여과에 의해 정제하여 황색 액체 표제 생성물 139.5 g (51％)을 수득하였다.
실시예 X-5)
실시예 X-6)
배플 및 6-날 기체 분산 축 추진기를 장착한 2-L 스테인레스 스틸 오토클레이브에 Rh(CO)2(acac) (0.248 g, 0.959 mmol), 비페포스(BIPHEPHOS) (구조는 하기에서 보여진 바와 같고, 미국 특허 제4,769,498,2호의 실시예 13에 기재된 바와 같이 제조함. 265 g, 2.879 mmol), 실시예 X-4의 생성물 (N-(tert 부톡시카르보닐)-S-7-알릴카프로락탐) (242.9 g, 0.959 mol) 및 톨루엔 (965 g)을 충전하였다.
반응기를 밀폐하고, 100％ 일산화탄소 (8 × 515 kPa)로 퍼징하였다. 반응기를 100％ 일산화탄소로 308 kPa (30 psig)으로 가압시킨 다음, 1:1 CO/H2 기체 혼합물을 첨가하여 전체 압력을 515 kPa (60 psig)로 달성하였다. 격렬한 기계적 교반과 함께, 상기 혼합물을 첨가된 1:1 CO/H2 기체 혼합물과 함께 50℃로 가열시켜 전체 압력이 약 515 kPa (60 psig)로 유지되도록 하였다. 22시간 후에 상기 혼합물을 약 25℃로 냉각하고, 압력을 조심스럽게 방출하였다. 생성물 혼합물을 진공 여과시키고, 여액을 감압하에 증발시켜 연황색 오일 267.7 g을 수득하였다. 1H NMR로 분석은 출발 물질의 본질적으로 정량적인 전환과 일치하였는데, 상응하는 실시예 V-6의 알데히드 생성물에 대한 선택률은 약 96％였다. 이 오일을 추가의 정제 없이 다음 실시예에서 사용하였다.
실시예 X-8)
CH2Cl2에 용해되고 0℃로 냉각된 N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (901.8 g, 2.7 mol)의 샘플에 CH2Cl2 중 DBU (597.7 g, 3.9 mol)의 용액을 첨가하였다. 이 투명한 무색의 반응 혼합물을 0℃ 내지 6℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, CH2Cl2 중 실시예 V-6의 Boc-알데히드 생성물 (812.0 g, 2.9 mol)의 샘플을 -5℃ 내지 -1℃에서 적가하였다. 상기 반응물을 후처리하고, 실시예 V-7에 기재된 바와 같이 정제를 완료하여 소량의 CH2Cl2를 함유하는 실시예 V-7의 표제 생성물 1550 g을 수득하였다.
실시예 X-9)
실시예 V-7의 생성물 (100 g, 0.20 mol)의 MeOH (1 L) 용액에 RR-Rh-DIPAMP 촉매 3 g을 첨가하였다. 수소화를 파르 기구 내에서 1.5 시간 동안 25℃에서 수행하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축하여 조질의 실시예 X-9 표제 생성물을 갈색 오일 (100 g)로서 수득하였다.
실시예 X-10)
빙초산 200 ㎖ 중 실시예 V-8의 생성물 (100 g)의 용액에 디옥산 중 4N HCl 25 ㎖를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃에서 20분 동안 교반한 다음, 감압하에 40℃에서 모든 용매를 스트리핑하여 적갈색 오일 105 g을 수득하였다. 이 오일성 생성물을 물 500 ㎖로 처리하고, 디클로로메탄 2 × 300 ㎖로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 중탄산나트륨 용액 (100 ㎖)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 모든 용매를 스트리핑하여 표제 생성물 99.9 g을 적갈색 오일로서 수득하였다.
실시예 X-11)
아르곤으로 퍼징한 디클로로메탄 600 ㎖ 중 실시예 X-10의 생성물의 샘플 30.0 g (0.077 mol)에 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 15.7 g (0.082 mol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반시키고, 중탄산나트륨 포화 수용액 300 ㎖를 첨가하였다. 디클로로메탄 층을 분리시키고, 50％ 수성 NaCl 용액 300 ㎖로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 25℃에서 농축하여 표제 생성물 31.2 g (약 97％)을 투명한 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 X-12)
메탄올 500 ㎖ 중 염화암모늄 4.2 g (0.078 mol)에 실시예 X-11의 표제 물질 31.2 g을 첨가하였다. 상기 반응물을 65℃에서 5 시간 동안 환류시키고 모든 용매를 감압하에 제거하여 조 생성물 29 g (92％)을 발포성 점성 질량체로서 수득하였다. 이 물질을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물 23 g (70％)을 수득하였다.
실시예 X)
2N HCl 500 ㎖ 중 실시예 X-12의 표제 생성물 (23 g)을 5시간 동안 환류시켰다. 그 다음, 모든 용매를 진공하에 제거하고 물 중에 재용해된 잔류물을 CH2Cl2 2 × 300 ㎖로 세척하였다. 그 다음, 수성물을 진공하에 농축하여 연갈색 흡습성 고체 표제 생성물 17 g (100％)을 수득하였다.
실시예 Y
(αR,2S)-α-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 삼수화물 히드로클로라이드
실시예 Y-1)
염화메틸렌 및 메탄올 (75/45 ㎖) 중 실시예 X-3의 용액 (3.0 g, 0.015 mol)을 드라이아이스조에서 -78℃로 냉각하였다. 상기 용액에 오존을 버블링하면서 상기 반응물을 3 ㎖/분의 유속으로 교반하였다. 용액이 일관된 진한 청색으로 유지될 때, 오존을 제거하고, 반응물을 질소로 퍼징하였다. 차가운 용액에 수소화붕소나트륨 (2.14 g, 0.061 mol)을 매우 서서히 첨가하여 동시에 기체의 발생을 최소화하였다. 상기 반응물에 빙초산을 서서히 첨가하여 pH가 3이 되도록 하였다. 그 다음, 상기 반응물을 포화 중탄산나트륨으로 중화시켰다. 그 다음, 유기물을 염수 3 × 50 ㎖로 세척하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 감압하에 제거하였다. 옅은 오일을 실리카 (15 g)의 플러그를 통과시켜 알콜 5.15 g, 0.026 mol (64％)을 수득하였다. C9H14N2O3.
실시예 Y-2)
0℃에서 빙조 내의 염화메틸렌 (100 ㎖) 중 실시예 Y-1의 용액 (5.15 g, 0.026 mol)에 사브롬화탄소 (10.78 g, 0.033 mol)를 첨가하였다. 빙조 중에서 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 그 다음, 온도가 3℃를 초과하여 상승되지않도록 하면서 트리페닐포스핀 (10.23 g, 0.39 mol)을 부분씩 첨가하였다. 상기 반응물을 2 시간 동안 교반시키고, 용매를 진공하에 제거하였다. 상기 조물질을 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 브로마이드 (5.9 g, 0.023 mol)를 87％ 수율로 수득하였다.
실시예 Y-3)
톨루엔 (25 ㎖) 중 실시예 Y-2의 용액 (5.71 g, 0.026 mol)에 트리페닐 포스핀 (7.17 g, 0.027 mol)을 첨가하였다. 상기 반응물을 오일조에서 16시간 동안 환류시켰다. 냉각시킨 후, 톨루엔을 유리질 고체로부터 기울여 따라내었다. 상기 고체를 디에틸 에테르로 밤새 연화처리하여 포스포늄 브로마이드 (10.21 g, 0.020 mol)를 90％ 수율로 수득하였다.
실시예 Y-4)
1 L 둥근 바닥 플라스크에 에탄올 (500 ㎖) 중 N-벤질옥시카르보닐-D-호모세린 락톤 (97 g, 0.442 mol)을 첨가하였다. 상기 반응물에 수산화나트륨의 용액 (1 M, 50 ㎖)을 첨가하였다. 상기 반응물을 출발 물질이 소모될 때까지 12시간 동안 박층 크로마토그래피로 모니터링하였다. 톨루엔 (60 ㎖)을 첨가한 다음, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 Y-5)
1 L 둥근 바닥 플라스크에서 실시예 Y-4로부터의 잔류물을 DMF 중에 현탁시켰다. 상기 현탁액에 벤질 브로마이드 (76.9 g, 0.45 mol, 53.5 ㎖)를 첨가하고, 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 샘플을 켄칭하고, 질량 스펙트럼으로 분석하여 출발 물질이 소모되고 재형성된 락톤이 없음을 나타내었다. 상기 반응물에 에틸 아세테이트 1 L 및 염수 500 ㎖를 첨가하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 500 ㎖로 추가 2회 세척하였다. 유기물질들을 합하고, MgSO4상에서 건조시키고, 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피하여 N-벤질옥시카르보닐-S-호모세린 벤질 에스테르를 백색 고체 (80 g)로서 수득하였다.
실시예 Y-6)
2L 둥근 바닥 플라스크에 CH2Cl2 (600 ㎖) 중에 현탁된 피리디늄 클로로크로메이트 (187 g, 0.867 mol) 및 실리카겔 (197 g)을 첨가하였다. 슬러리에 CH2Cl2 (600 ㎖) 중 실시예 Y-5의 생성물 (80 g, 0.233 mol) 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피에서 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 상기 반응물에 디에틸 에테르 1 L를 첨가하였다. 그 다음, 이 용액을 셀라이트의 패드에 통과시킨 후 실리카겔의 패드에 통과시켜 여과하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 생성된 오일을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 알데히드 (58.8 g)를 전체 수율 38％로 수득하였다.
실시예 Y-7)
3 L 3-구 플라스크에 THF (1 L) 중에 진공하에 P205로 건조시킨 실시예 Y-3으로부터의 포스포늄 염 (56.86 g, 0.11 mol)을 첨가하였다. 슬러리를 드라이아이스조에서 -78℃로 냉각시켰다. 온도가 -72℃ 초과로 상승하지 않도록 냉각된 슬러리에 KHMDS (220 ㎖, 0.22 mol)를 적가하였다. 상기 반응물을 -78℃에서 20분 동안 교반한 다음, -45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 온도를 다시 -78℃로 떨어뜨리고, 실시예 Y-6으로부터의 알데히드 (15.9 g, 0.047 mol)를 THF (50 ㎖) 중에 45분에 걸쳐 적가하였다. 상기 반응물을 -77℃에서 30분 동안 교반한 다음, 1시간 동안 -50℃로 가온시키고, 4시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 상기 반응물에 에틸 아세테이트 (200 ㎖) 및 포화 염화암모늄을 첨가하였다. 유기물질들을 수집하고, MgSO4상에서 건조시키고 진공하에 농축시켰다. 상기 조 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피로 정제하여 올레핀 화합물 (45.1 g)을 81％ 수율로 담황색 점성 오일로서 수득하였다.
실시예 Y)
20 ㎖ 바이알에 디옥산 (50 ㎖) 및 4N 수성 HCl (250 ㎖) 중 실시예 Y-7로부터의 생성물 (19.77 g, 0.039 mol)을 첨가하였다. 수소화 플라스크 내에서 이 용액을 촉매량의 탄소상 10％ Pd에 첨가하였다. 플라스크를 5시간 동안 H2 (50 psi)로 가압시켰다. 상기 반응물을 질량 스펙트럼으로 출발 물질이 소모되었는지 모니터링하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 물로 세척하였다. 용매를 동결건조로 제거하여 표제 화합물 (7.52 g)을 81％ 수율로 수득하였다.
실시예 Z
(αS,2S)-α-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 삼수화물 히드로클로라이드
실시예 Z-1)
1 L 3-구 플라스크에 THF (200 ㎖) 중 실시예 Y-3으로부터의 포스포늄 염 (21.21g, 0.041 mol)을 첨가하였다. 드라이아이스조에서 슬러리를 -78℃로 냉각하였다. 내부 온도가 -72℃ 초과로 상승되지 않도록 차가워진 슬러리에 KHMDS (88 ㎖, 0.044 mol)를 적가하였다. 상기 반응물을 -78℃에서 20분 동안 교반한 다음, -45℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 온도를 다시 -78℃로 떨어뜨리고, 알데히드 (15.9 g, 0.047 mol) (N-벤질옥시카르보닐-L-호모세린 락톤을 사용하여 실시예 Y (4-6)에서와 같이 제조하였음)를 THF (50 ㎖) 중에 45분에 걸쳐 적가하였다. 상기 반응물을 30분 동안 -77℃에서 교반한 다음, 30분 동안 -50℃로 가온시키고, 그 다음 4시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 상기 반응물에 에틸 아세테이트 (100 ㎖) 및 포화 염화암모늄을 적가하였다. 유기물질들을 수집하고, MgSO4상에서 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 상기 조 오일을 실리카 상에서 크로마토그래피하여 올레핀 화합물 (9.0 g)을 45％ 수율로 담황색 점성 오일로서 수득하였다.
실시예 Z)
20 ㎖ 바이알에 디옥산 (5 ㎖) 및 4N 수성 HCl (16 ㎖) 중 실시예 Z-1로부터의 생성물을 첨가하였다. 수소화 플라스크 내에서 이 용액을 촉매량의 탄소상 10％ Pd에 첨가하였다. 플라스크를 5시간 동안 H2 (50 psi)로 가압시켰다. 상기 반응물을 질량 스펙트럼으로 출발 물질이 소모되었는지 모니터링하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 물로 세척하였다. 용매를 동결건조로 제거하여 표제 화합물 (98.7 mg)을 79.4％ 수율로 수득하였다.
실시예 AA
(2S,4Z)-2-아미노-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-4-헥센산
실시예 AA-1)
(2S,4Z)-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르
50 ㎖ 플라스크에 메탄올 (25 ㎖) 중 실시예 Z-1의 샘플 (1.5 g, 2.97 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 상기 반응 혼합물에 빙초산의 60％ 용액 (16 ㎖)을 첨가하였다. 침전물이 관찰되었다. 추가의 메탄올을 첨가하여 고체 (1 ㎖)를 용해시켰다. 그 다음, 상기 반응물에 아연 분진 (0.200 g)을 첨가하였다. 온도를 37℃로 유지시키면서 상기 반응물을 4시간 동안 초음파처리하였다. 상기 반응물을 TLC 및 MS로 출발 물질이 소모되고, 생성물에 상응하는 질량체가 관찰될 때까지 모니터링하였다. 용액을 아연으로부터 기울여 따라내고, 아세토니트릴/물(100 ㎖)의 30％ 용액을 여액에 첨가하였다. 상기 반응물을 52％ 아세토니트릴/물로 워터스 정제용 HPLC [30분에 걸쳐 아세토니트릴의 20％ 내지 70％ 구배] 상에서 2회 수행하여 정제하였다. 생성된 생성물을 동결건조하여 실시예 AA-1의 표제 물질 (1.01 g)을 73％ 수율로 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 AA)
250 ㎖ 플라스크에 4 M HCl (100 ㎖) 중 실시예 AA-1의 생성물 (1.0 g, 2.2 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응물을 밤새 환류시키고, MS로 출발 물질이 소모되고 생성물에 대한 질량체가 관찰될 때까지 모니터링하였다. 상기 반응물을 추가 후처리 없이 18％ 아세토니트릴/물을 사용하는 워터스 정제용 역상 컬럼 [30분에 걸쳐 아세토니트릴/물의 0％ 내지 30％ 구배] 상에서 2회 수행하여 정제하였다. 합한 분획을 동결건조하여 표제 생성물 (0.34 g)을 64％ 수율로 크림 색상의 발포체로서 수득하였다.
실시예 BB
(2S,4E)-2-아미노-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-4-헥센산
실시예 BB-1)
(2S,4E)-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-6-[(5R)-6,7,8,9-테트라히드로-3-옥소-3H,5H-[1,2,4]옥사디아졸로[4,3-a]아제핀-5-일]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르
250 ㎖ 플라스크에 시클로헥산 (70 ㎖)/벤젠 (40 ㎖) 용액 중 실시예 Z-1 (2.0 g, 3.9 mmol) 및 페닐 디술피드 (0.860 g, 3.9 mmol)를 첨가하였다. 질소를 용액에 버블링하여 산소 시스템을 퍼징하였다. 상기 반응물을 주말 동안 단파장 UV 램프에 노출시켰다. 상기 반응물을 정상 상 HPLC (에틸 아세테이트/헥산)에 의해 평가하였다. 트랜스 이성질체 71％ 및 시스 이성질체 29％가 관찰되었다. 상기 반응물을 추가로 3일 동안 UV에 처리하자 출발 물질의 84％가 트랜스 이성질체로 전환되고, 출발 시스 이성질체의 16％는 유지되었다. 크로마토그래피로 정제하여 실시예 BB-1 (0.956 g)을 48％ 수율로 수득하였다.
실시예 BB-2)
(2S,4E)-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르, 모노히드로클로라이드
MeOH (80 ㎖) 중 실시예 BB-1의 생성물의 샘플 (0.956 g, 1.9 mmol)을 실시예 AA-1의 방법에 의해 Zn 분진 (1.5g) 및 60％ HOAc/H2O (40 ㎖)로 탈보호시켰다. 생성된 생성물을 역상 크로마토그래피 정제하여 표제 물질 (0.248 g)을 28％ 수율로 수득하였다.
실시예 BB)
실시예 BB-2의 생성물 (0.248 g, 0.53 mmol)을 HCl (2 ㎖), H2O (2 ㎖), CH3CN (4 ㎖)을 사용하여 실시예 AA의 방법에 의해 표제 생성물로 전환시켰다. 상기 조 생성물을 역상 크로마토그래피로 정제하여 실시예 BB의 표제 생성물 (0.073 g)을 57％ 수율로 수득하였다.
실시예 CC
(E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드
실시예 CC-1)
DL-알라닌 에틸 에스테르 히드로클로라이드 (5 g, 32.5 mmol)를 톨루엔 (50 ㎖) 중에 현탁시켰다. 트리에틸 아민 (4.5 ㎖, 32.5 mmol)을 첨가한 후, 프탈산 무수물 (4.8 g, 32.5 ㎖)을 첨가하였다. 상기 반응 플라스크에는 딘-스타르크 트랩 및 환류 응축기가 장착되었으며, 상기 혼합물을 밤새 환류 가열하였다. 톨루엔/물 대략 10 ㎖를 수집하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 수성 NH4Cl 및 EtOAc로 희석하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (3 ×)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 추출물을 염수로 세척하고 MgSO4상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 표제 프탈릴-보호된 아미노 에스테르를 거의 정량적 수율로 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
실시예 CC-2)
칼륨 프탈이미드 (18.5 g, 0.1 mol)를 1,4-부텐 디클로라이드 (25 g, 0.2 mol)를 함유하는 250 ㎖ 둥근 바닥 플라스크에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 1.5시간 동안 150℃로 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 염수 및 Et2O에 분배하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 진공하에 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 고온의 에탄올로부터 재결정화시켜, 표제 1-클로로-4-프탈이미도부텐 (8.9 g, 39％)을 오렌지색 결정으로서 수득하였다.
실시예 CC-3)
실시예 CC-2의 생성물 샘플 (2.3 g, 9.8 mmol)을 아세톤 (50 ㎖) 중에 용해시켰다. NaI (3.2 g, 21 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 밤새 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에 Et2O를 첨가하고, 상기 혼합물을 티오황산나트륨 및 염수를 순차적으로 사용하여 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 진공하에 여과 및 농축시켜 표제 요오드화물 (2.8 g, 87.5％)을 연황색 고체로서 수득하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 CC-4)
THF (50 ㎖) 중 KHMDS (2.6 g, 13.3 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. THF (15 ㎖) 중 실시예 CC-1의 생성물 (2.2 g, 8.87 mmol)의 용액을 첨가한 직후에, 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논 (DMPU, 1.0 ㎖, 8.87 ㎖)을 첨가하였다. 상기 용액을 -78℃에서 40분 동안 교반한 후, THF (15 ㎖) 중 실시예 CC-3의 생성물 (2.9 g, 8 87 mmol)의 용액을 첨가하였다. 플라스크를 빙조에서 꺼내어 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 및 EtOAc에 분배하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하여 MgSO4상에서 건조시키고, 진공하에 여과 및 농축시켜 목적하는 비스-프탈릴 보호된 아미노 에스테르를 황색 고체로서 수득하였다. 상기 잔류물을 실리카겔상 크로마토그래피 (1:1 헥산:EtOAc)하여, 표제 물질 1.4 g (35％)을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 CC-5)
실시예 CC-4의 생성물 (0.78 g, 1.76 mmol)을 포름산 (10 ㎖, 95％) 및 HCl (20 ㎖, 진한 HCl)의 혼합물 중에 용해시키고 3일 동안 환류시켰다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 여과하여 프탈산 무수물을 제거하였다. 진공하에 농축 (T < 40℃)시킨 후에, 표제의 불포화 알파 메틸 라이신을 백색 고체 (0.38 g, 95％)로서 수득하였고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 CC)
실시예 CC-5의 생성물 (0.2 g, 0.86 mmol)을 H2O (8 ㎖) 중에 용해시키고, 2.5 N NaOH를 사용하여 pH 9로 만들었다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (0.42 g, 3.4 mmol)을 1시간에 걸쳐 4부분으로 나누어 첨가하였다. 1시간 후, 상기 혼합물을 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화시키고 진공하에 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 물로 세척된 다우엑스 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH4OH 용출액)에 통과시켰다. 잔류물을 진공하에 농축하고 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화하고 농축시켜, 표제 생성물 (17 mg, 6％)을 오일로서 수득하였다.
실시예 DD
(R,E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드
실시예 DD-1)
(2S,4S)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온을 시바하(Seebach)의 절차 [Seebach, D.; Fadel, A. Helvetica Chimica Acta 1985, 68, 1243]에 따라 제조하였다.
실시예 DD-2)
KHMDS (0.65 g, 3.24 mmol), DMPU (0.33 ㎖, 2.7 mmol) 및 THF (40 ㎖)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. THF (10 ㎖) 중 (2S,4S)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온 (실시예 DD-1) (0.70 g, 2.7 mmol)의 용액을 적가하였다. 45분 후, THF (10 ㎖) 중 실시예 CC-3의 생성물 (0.88 g, 2.7 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하였다. 층들을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층들을 합하여 염수로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 진공하에 여과 및 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 실리카겔상 크로마토그래피 (9:1 이후에 4:1 헥산/에틸 아세테이트)하여, 표제의 보호된 불포화 알파 메틸 D-라이신 (0.26 g, 20％)을 무색의 오일로서 수득하였다.
실시예 DD-3)
실시예 DD-2의 생성물 (0.255 mg, 0.55 mmol)을 6 N HCl (6 ㎖) 및 포름산 (6 ㎖) 중에 용해시키고 24시간 동안 환류 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 물 중에 현탁시켜 CH2Cl2로 세척하였다. 수성 층을 농축시키고 물로 세척된 다우엑스 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH4OH 용출액)에 통과시켰다. 잔류물을 진공하에 농축하고 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화시키고 농축시켜, 표제의 불포화 D-라이신 (71 mg, 55％)을 오일로서 수득하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 DD)
실시예 DD-3의 생성물 (13 mg, 0.056 mmol)을 H2O (5 ㎖) 중에 용해시키고 2.5 N NaOH를 사용하여 pH 9로 만들었다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (27 mg, 0.2 mmol)을 2시간에 걸쳐 4부분으로 나누어 첨가하였다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화시키고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 물로 세척된 다우엑스 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH4OH 용출액)에 통과시켰다. 잔류물을 진공하에 농축하고 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화시키고 농축시켜, 표제 생성물 (45 mg)을 오일로서 수득하였다.
실시예 E
(S,E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드
실시예 EE-1)
(2R,4R)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온을 시바하의 절차 [Seebach, D.; Fadel, A. Helvetica Chimica Acta 1985, 68, 1243]에 따라 제조하였다.
실시예 EE-2)
THF (50 ㎖) 중 실시예 EE-1의 (2R,4R)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온 생성물 (2.0 g, 7.6 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. THF (25 ㎖) 중 KHMDS (0.65 g, 3.24 mmol)의 -78℃ 용액을 적가하였다. 30분 후, THF (25 ㎖) 중 실시예 CC-3의 생성물 (2.8 g, 8.6 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하였다. 층들을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층들을 합하고 염수로 세척하여 MgSO4로 건조시키고 진공하에 여과 및 농축시켰다. 생성된 오렌지색 오일을 실리카겔상 크로마토그래피 (9:1 이후에 4:1 헥산/에틸 아세테이트)시켜, 표제의 보호된 불포화 알파 메틸 L-라이신 (0.5 g, 15％)을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 EE-3)
실시예 EE-2의 생성물 (0.5 g, 1 mmol)을 12 N HCl (10 ㎖) 및 포름산 (5 ㎖) 중에 용해시키고, 상기 혼합물을 12시간 동안 환류 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 동결기에서 3시간 동안 냉각시키고, 고체를 여과로써 제거하였다. 잔류물을 CH2Cl2 및 EtOAc로 세척하였다. 수성 층을 진공하에 농축시켜 표제의 불포화 알파 메틸 L-라이신 (0.26 g, 99％)을 오일로서 수득하였으며, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
실시예 EE)
실시예 EE-3의 생성물 (0.13 g, 0.56 mmol)을 H2O (1 ㎖) 중에 용해시키고 2.5 N NaOH를 사용하여 pH 9로 만들었다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (0.28 g, 2.2 mmol)을 1시간에 걸쳐 4부분으로 나누어 첨가하였다. 1시간 후, 상기 혼합물을 10％ HCl을 사용하여 pH 4로 산성화시키고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 물로 세척된 다우엑스 50WX4-200 컬럼 (0.5 N NH4OH 용출액)에 통과시켰다. 잔류물을 진공하에 농축시키고 10％ HCl로 pH 4로 산성화하여 농축시켜, 표제 생성물을 오일 (40 mg)로서 수득하였다.
실시예 FF
2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥신산, 디히드로클로라이드
실시예 FF-1)
N-boc-1-아미노-4-클로로부트-2-인을 문헌 [Tetrahedron Lett. 21, 4263 (1980)]에 기재된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 FF-2)
메틸 N-(디페닐메틸렌)-L-알라니네이트를 문헌 [J. Org. Chem., 47, 2663 (1982)]에 기재된 절차에 따라 제조하였다.
실시예 FF-3)
건조 THF (1000 ㎖)를 아르곤으로 퍼징한 플라스크에 넣고, 광유 중에 분산시킨 60％ NaH (9.04 g, 0.227 mol)를 첨가하였다. 상기 혼합물에 실시예 FF-2의 생성물 (30.7 g, 0.114 mol)을 첨가하였다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 10 내지 15℃에서 30분 동안 교반하였다. 요오드화칼륨 (4 g) 및 요오드 (2 g)를 첨가한 직후, 30분 내에 실시예 FF-2의 생성물 (23 g, THF 200 ㎖ 중 0.113 mol)을 첨가하였다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 출발 물질이 사라질 때까지 (약 2시간) 55℃에서 교반하였다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 용매를 증발시켰다. 에틸 아세테이트 (500 ㎖)를 첨가하고, 상기 혼합물을 2 ×200 ㎖ 탈이온수로 조심스럽게 세척하였다. 유기 층을 무수 MgSO4상에서 건조시키고 여과 및 증발시켜 조 생성물 44 g을 수득하였다. 헥산 중 20％ 에틸 아세테이트를 사용한 크로마토그래피로 정제하여 표제의 보호된 불포화 알파-메틸 라이신 (28 g, 57％)을 수득하였다.
실시예 FF-4)
실시예 FF-3의 생성물 (16 g, 0.0368 mol)을 1 N HCl (300 ㎖) 중에 용해시키고 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에테르 (2 ×150 ㎖)로 세척하였고, 수성 층을 분리하여 목탄으로 탈색시켰다. 이를 농축하여, 약 9 g (100％ 수율)의 탈보호된 불포화 알파메틸 라이신 에스테르 FF-4를 백색 발포성 고체로서 수득하였다.
실시예 FF-5)
실시예 FF-4의 생성물 (2.43 g, 0.01 mol)을 탈이온수 (25 ㎖) 중에 용해시켰다. 탈이온수 (25 ㎖) 중 NaOH (400 mg, 0.01 mol)의 용액을 25℃에서 첨가하여 pH를 약 7.95로 만들고, 교반을 10분 더 계속하였다. 상기 반응 혼합물에 에틸아세트이미데이트 히드로클로라이드 (988 mg, 0.008 mol)를 첨가함과 동시에 1 N NaOH를 첨가하여 pH를 약 8.5로 조정하였다. 상기 반응 혼합물을 pH 8 내지 8.5에서 3시간 동안 교반한 후에 아세트이미데이트를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물 (4.1 pH)에 1 N HCl을 첨가하였다. 용매를 50℃에서 증발시켜 황색 조 흡습성 잔류물 (4 g, > 100％ 수율)을 수득하였다. 0.1％ AcOH/CH3CN/H2O를 사용하는 길슨(Gilson) 크로마토그래피 시스템에서 정제하였다.
실시예 FF)
실시예 FF-5의 생성물 (100 mg, 0.0005 mol)을 8 N HCl (20 ㎖) 중에 용해시키고 10시간 동안 환류하에 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 수성 HCl을 회전증발기상에서 증발시켰다. 잔류물을 탈이온수 (10 ㎖) 및 물 중에 용해시키고 진공하에 재농축시켜, 표제 생성물을 거의 정량적 수율 (88 mg)의 황색 유리질 고체로서 수득하였다.
실시예 GG
(2R/S,4Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 GG-1)
5,6-디히드로피란-2-온 (49.05 g, 0.5 mol)을 물 200 ㎖ 중에 용해시켰다. 수산화칼륨 (35 g, 0.625 mol)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하여 무색의 유리질 고체 (65 g, 84％)를 수득하였으며, 이것을 NMR로 특징규명하여 표제 화합물이 우세하게 시스 이성질체임을 알아내었다.
실시예 GG-2)
실시예 GG-1의 생성물을 디메틸 포름아미드 100 ㎖ 중에 용해시켰다. 이어서, 요오드화메틸 (52 ㎖, 0.84 mol)을 첨가하자 40℃로의 발열이 일어났다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 10시간 동안 교반하고 20/80 비율의 에틸아세테이트/디에틸에테르 150 ㎖ 및 빙수에 분배하였다. 수성 층을 분리하여 디에틸 에테르 100 ㎖로 재추출하였다. 유기 층들을 합하여 건조 (Na2SO4)시키고 여과하였으며, 모든 용매를 스트리핑하여 목적하는 메틸 에스테르 생성물 (40 g, 71％)을 수득하였다. 상기 물질을 염화메틸렌 200 ㎖ 중에 용해시키고, 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 3급 부틸 디메틸실릴클로라이드, 트리에틸아민 및 디메틸아미노피리딘을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고, 10시간 동안 질소하에 교반하였다. 상기 반응물을 1 N 중황산칼륨 수용액 100 ㎖로 추출하였다. 유기 층을 염수 2 ×100 ㎖로 세척한 후에 물 3 ×150 ㎖로 세척하였다. 유기 층을 건조 (Na2SO4)시키고 여과 및 스트리핑하여, 표제 물질 42 g (56％)을 수득하였다.
실시예 GG-3)
실시예 GG-2의 물질을 톨루엔 25 ㎖ 중에 용해시키고 0℃로 냉각시켰다. 온도를 5 내지 -10℃ 사이로 유지시키면서 디이소부틸알루미늄 수화물 (톨루엔 중 1.0 M, 32 ㎖, 48 mmol)을 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 6 내지 -8℃ 사이에서 1.5시간 동안 교반한 후에 -25℃로 냉각시켰다. 상기 혼합물에 0.5 N 나트륨 칼륨 타르트레이트 100 ㎖를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온시켜 1시간 동안 교반하였다. 젤라틴성 침전물이 형성되었고, 이를 여과하였다. 수성물질을 EtOAc 2 ×100 ㎖로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조 (황산나트륨)시키고, 진공하에 여과 및 농축하여 표제 생성물 (3.45 g, 66％)을 무색의 오일로서 수득하였다.
실시예 GG-4)
실시예 GG-3의 생성물 (8 g, 37 mmol)을 염화메틸렌 100 ㎖ 중에 용해시키고, 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 염화메탄술포닐을 첨가하고, 상기 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 이어서, 트리에틸아민을 첨가하였다. 상기한 시약들을 첨가하는 동안에는 온도를 0 내지 -10℃ 사이로 유지시켰다. 이어서, 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 50％ 중탄산나트륨 수용액 100 ㎖로 추출하였다. 유기 층을 염수 포화 수용액 100 ㎖로 세척하고 건조 (황산나트륨)시켜 여과하고 진공하에 스트리핑함으로써, 표제 물질 (8.2 g, 94％)을 수득하였다.
실시예 GG-5)
테트라히드로푸란 59 ㎖ 중에 용해시킨 N-p-클로로 페닐이민 알라닌 메틸 에스테르 (8.85 g, 34 mmol)의 용액을 아르곤으로 퍼징하였다. NaH (1.64 g, 41 mmol)를 첨가한 후에는 상기 용액이 밝은 오렌지색으로 변하였다가 짙은 적색으로 변하였다. 테트라히드로푸란 40 ㎖ 중 실시예 GG-4의 표제 물질 (8 g, 34 mmol)의 용액을 상기한 음이온성 용액에 첨가하였다. 온도가 거의 40℃로 상승하는 발열이 관찰되었다. 상기 반응 혼합물을 48 내지 약 52℃ 사이에서 2시간 동안 유지시켰다. 이어서, 이것을 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 여액을 진공하에 스트리핑하여 표제 물질 (8.4 g, 50％ 조 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
실시예 GG-6)
실시예 GG-5의 표제 물질 (8.4 g, 18.2 mmol)을 1 N 염산 125 ㎖로 처리하고, 상기 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸아세테이트 2 ×75 ㎖로 추출한 후, 수성 층을 진공하에 56℃에서 스트리핑하여, 표제 물질 (100％ 조 수율) 4 g을 수득하였다.
실시예 GG-7)
실시예 GG-6의 표제 생성물 (1.9 g, 8.5 mmol)을 디옥산 15 ㎖ 및 물 8 ㎖의 혼합물 중에 용해시켰다. 이어서, 고체 중탄산칼륨을 조심스럽게 첨가하여 발포를 피하였다. 상기 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 3급 부틸옥시카르보닐 무수물을 부분씩 첨가하고, 반응 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸아세테이트 100 ㎖ 및 물 50 ㎖로 희석한 후에 분별 깔때기에 부었다. 유기 층을 분리하여 건조 (Na2S04)시키고 여과 및 스트리핑하여, 표제 물질을 무색의 오일 (1.9 g, 78％ 조 수율)로서 수득하였다.
실시예 GG-8)
실시예 GG-6의 표제 물질의 또다른 1.9 g 샘플을 실시예 GG-7의 방법에 따라 실시예 GG-7의 표제 생성물의 조 Z/E 혼합물로 전환시켰다. 상기 물질을 20/80 비율의 에틸아세테이트/헥산 용매 시스템을 사용하여 실리카상에서 추가로 정제하여, 주요 Z-이성질체 뿐만이 아니라 부수적 E-이성질체까지 수득하였다.
실시예 GG-9)
실시예 GG-8의 표제 Z-이성질체 (1.8 g, 6.25 mmol)를 아세토니트릴 20 ㎖ 중에 용해시키고, 상기 용액을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 피리딘 (0.76 g, 9.4 mmol)을 첨가한 후에 고체 디브로모트리페닐포스포란 (3.46 g, 8.2 mmol)를 10분에 걸쳐 부분씩 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 아르곤하에 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 형성된 침전물을 여과해 냈다. 여액을 진공하에 농축시켜 오일 2.8 g을 수득하였으며, 이것을 60/40 비율의 에틸아세테이트/헥산 용매 시스템을 사용하여 실리카겔상에서 정제하였다. 표제 물질 1.1 g (50％)을 NMR로 특징규명하였다.
실시예 GG-10)
실시예 GG-8의 표제 물질 (300 mg, 0.86 mmol)을 디메틸포름아미드 (DMF) 25 ㎖ 중에 용해시켰다. 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (130 mg, 0.94 mmol)의 칼륨 염을 첨가하여 상기 반응 혼합물을 52℃로 가열하고, 교반하면서 이 온도로 18시간 동안 유지시켰다. 이어서, 이것을 실온으로 냉각시킨 후에 DMF를 진공하에 60℃에서 스트리핑하였다. 잔류물을 60/40 내지 90/10 구배의 에틸 아세테이트/ 헥산을 사용하여 실리카겔상에서 정제하여, 표제 물질 300 mg (95％)을 수득하였다.
실시예 GG-11)
실시예 GG-10의 생성물 (300 mg)을 0.05 N 수성 HCl로 처리하고, 상기 용액을 30분 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하여 목적하는 물질을 거의 정량적 수율로 수득하였다.
실시예 GG-12)
실시예 GG-11의 표제 물질 (198 mg, 0.54 mmol)을 MeOH 50 ㎖ 중에 용해시켰다. 이어서, 포름산 (40 mg)을 첨가한 후에 탄산칼슘상 팔라듐 (400 mg)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밀폐된 튜브에서 24시간 동안 교반하면서 65℃로 가열하였다. 이어서, 이것을 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 여액을 진공하에 농축시키고 잔류물을 역상 HPLC로 정제하여, 표제 물질 115 mg (75％)을 수득하였다.
실시예 GG)
실시예 GG-12의 표제 물질 (75 mg)을 2 N 염산 15 ㎖ 중에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 환류 가열하고 6시간 동안 교반한 후에 실온으로 냉각시켰다. 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 물 25 ㎖ 중에 용해시키고 회전 증발기에서 스트리핑하여, 잉여 염산을 제거하였다. 잔류물을 물 중에 용해시키고 동결건조하여, 표제 물질 76 mg (약 100％)을 수득하였다.
실시예 HH
(2S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예-HH-1)
THF 100 ㎖ 중 트리에틸 2-플루오로포스포노아세테이트 (25.4 g, 105 mmol)의 차가운 (-78℃) 용액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 1.6 M 63 ㎖, 101 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 -78℃에서 20분 동안 교반하여 연황색 용액이 생성되었다. 이어서, THF 120 ㎖ 중 조 3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]프로파날 [J. Org. Chem., 1994, 59, 1139-1148] (20.0 g, 105 mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 적가하고, 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 -78℃에서 교반하였는데, 이 시점에 박층 크로마토그래피 (헥산 중 5％ 에틸 아세테이트)에서 수행한 분석에서는 출발 물질이 남아있지 않은 것으로 나타났다. 상기 반응물을 -78℃에서 포화 수성 NH4Cl (150 ㎖)로 켄칭하였다. 유기 층을 수집하고 수성 층을 디에틸 에테르 (300 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물질들을 염수 (200 ㎖)로 세척하여 MgSO4상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 조 물질을 헥산 (2 ℓ)으로 용출시키는 실리카겔 플러그 (150 g)로 여과하여, 목적하는 (2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜텐산 에틸 에스테르 생성물 14.38 g (52％)을 투명한 오일로서 수득하였다. 1H NMR 및 19F NMR는 단리된 생성물의 대략적인 E:Z 비율이 95:5인 것으로 나타내었다.
실시예-HH-2)
메탄올 100 ㎖ 중 실시예-HH-1 (6.76 g, 24.5 mmol)의 용액에 고체 NaBH4 (4.2 g, 220 mmol)를 1.4 g씩 3시간에 걸쳐 실온에서 첨가하였다. 3.5시간 후에는 물 (10 ㎖)을 첨가하였다. 추가의 고체 NaBH4 (4.2 g, 220 mmol)를 1.4 g씩 3시간에 걸쳐 첨가하였다. 상기 반응물을 포화 수성 NH4Cl 150 ㎖로 켄칭하고 디에틸 에테르 (2 ×250 ㎖)로 추출하였다. 유기 층들을 합하여 MgSO4상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 상기 조 물질인 투명한 오일 4.81 g을 헥산 중 10％ 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔상 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 (2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜텐-1-올 생성물 2.39 g (42％)을 투명한 오일로서 수득하였으며, 19F NMR에 의해서 이것은 대략적인 E:Z 비율을 93:7로 함유하는 것으로 나타났다.
실시예-HH-3)
THF 60 ㎖ 중 실시예-HH-2 (2.25 g, 9.58 mmol), 중합체-지지된 트리페닐포스핀 (3 mmol/g, 1.86 g, 15 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (1.25 g, 12.5 mmol)의 혼합물에 디에틸아조디카르복실레이트 (2.35 ㎖, 14.7 mmol)를 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 추가의 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (0.30 g, 3.0 mmol)을 첨가하였다. 30분 후에, 상기 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 디에틸 에테르 (30 ㎖)로 연화처리하고, 고체를 여과로써 제거하였다. 여액을 농축시켜 헥산 (30 ㎖)으로 연화처리하고 여과하였다. 여액을 오일로 농축시키고 헥산 중 15％ 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔상 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 4-[(2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물 1.83 g (60％)을 투명한 오일로서 수득하였고, 19F NMR에 의해서 이것은 오직 목적하는 E-이성질체만을 함유하는 것으로 나타났다.
실시예-HH-4)
아세트산 (6 ㎖), THF (2 ㎖) 및 물 (2 ㎖)의 혼합물 중 실시예-HH-3 (1.83 g, 5.78 mmol)의 용액을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 진공하에 오일로 농축시켜 디에틸 에테르 (50 ㎖) 중에 용해시켰다. 유기 층을 포화 NaHCO3으로 세척하고, 수성 층을 디에틸 에테르 (2 ×50 ㎖) 및 에틸 아세테이트 (2 ×50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고 여과 및 증발시켜, 목적하는 4-[(2E)-2-플루오로-5-히드록시-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물 1.15 g (98％)을 투명한 무색의 오일로서 수득하였다.
실시예-HH-5)
트리페닐포스핀 (238 mg, 0.91 mmol) 및 이미다졸 (92 mg)의 CH2Cl2 (2 ㎖) 용액에 0℃에서 고체 요오드 (230 mg, 0.91 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 생성된 황색 슬러리에 실시예-HH-4 (0.15 g, 0.74 mmol)의 CH2Cl2 (1.5 ㎖) 용액을 첨가하였다. 상기 슬러리를 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 CH2Cl2 (10 ㎖)로 희석하고, 포화 Na2S 2O3 (5 ㎖) 및 염수 (5 ㎖)로 세척하여 건조 (MgSO4)시키고 여과 및 증발시켜 오일을 수득하였다. 상기 오일에 디에틸 에테르 (10 ㎖)를 첨가하여 생성된 백색 침전물을 여과로써 제거하고, 여액을 오일로 농축시켰다. 상기 조 물질을 헥산 중 30％ 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔상 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 4-[(2E)-2-플루오로-5-요오도-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물 0.18 g (78％)을 투명한 오일로서 수득하였으며, 이것은 방치후에 고화되었다. 융점 = 58.1 내지 58.6℃.
실시예-HH-6)
빙조에서 (3S,6R)-6-이소프로필-3-메틸-5-페닐-3,6-디히드로-2H-1,4-옥사진-2-온 [Synthesis, 1999, 4, 704-717] (1.10 g, 4.76 mmol), LiI (0.63 g, 4.76 mmol) 및 실시예-HH-5 (0.85 g, 2.72 mmol)의 1-메틸-2-피롤리디논 (12 ㎖) 용액에 2-tert-부틸이미노-2-디에틸아미노-1,3-디메틸퍼히드로-1,3,2-디아자포스포린 (1.38 ㎖, 4.76 mmol)을 첨가하였다. 상기 황색 용액은 염기 첨가 후에 오렌지색이 되었고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 ㎖)로 희석시켜 물 (2 ×30 ㎖)로 세척하고 건조 (MgSO4), 여과 및 증발시켜 황색 오일을 수득하였다. 상기 조 물질을 헥산 중 30％ 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔상 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 알킬화 생성물 0.64 g (57％)을 투명한 오일로서 수득하였다.
실시예-HH-7)
실시예-HH-6 (0.13 g, 0.31 mmol)의 메탄올 (20 ㎖) 용액에 린들라(Lindlar) 촉매 (1.0 g)를 첨가하였다. 교반된 슬러리를 1시간 동안 60℃로 가열하고, 린들라 촉매 (0.30 g)를 더 첨가하였다. 상기 슬러리를 60℃에서 1시간 더 교반한 후에 실온으로 냉각시켰다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과로써 제거하고 여액을 스트리핑하여, 목적하는 탈보호된 아미딘 생성물 0.58 g (100％)을 담황색 오일로서 수득하였다.
실시예-HH)
1.5 N HCl (25 ㎖) 중 실시예-HH-7의 생성물 (0.58 g, 1.54 mmol)의 용액을 디에틸 에테르 (2 ×20 ㎖)로 세척하고 1시간 동안 환류시켰다. 용매를 스트리핑하고 조 아미노산 에스테르를 6 N HCl (15 ㎖) 중에 용해시키고 환류 가열하였다. 6시간 후에 용매를 진공하에 제거하고, 생성된 발포물을 30분 구배의 0 내지 40％ CH3CN/H2O (0.25％ 아세트산)으로 용출시키는 역상 HPLC로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하여 발포체로 농축시켰다. 생성물을 1 N HCl 중에 용해시키고 용매를 진공하에 제거 (2 ×)하여 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물 0.15 g (29％)을 수득하였다.
실시예 II
(2S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예-II-1)
메틸 N-[(3,4-디클로로페닐)-메틸렌]-알라니네이트 (748.5 g, 2.88 mol)의 1-메틸-2-피롤리디논 (7500 ㎖) 용액에 LiI (385.5 g, 2.88 mol)를 질소하에 첨가하고, 생성된 슬러리를 대략 20분 동안 교반하여 투명한 용액을 수득하였다. 이어서, 실시예-HH-5의 고체 (750 g, 2.40 mol)를 첨가하고, 생성된 용액을 빙조에서 약 0℃로 냉각시켰다. 순수한 BTPP (900 g, 2.88 mol)를 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 25분에 걸쳐 적가하였다. 1.5시간 동안 5℃에서 더 교반한 후에는, HPLC에 의해 상기 반응이 완료된 것으로 측정되었다. 이때, 메틸 t-부틸 에테르 (MTBE) 7500 ㎖를 첨가한 후에 물/얼음 조각 혼합물 9750 ㎖ 첨가하였다. 이러한 작업 동안에 온도는 20℃로 상승하였다. 5 내지 10분 동안 격렬하게 교반한 후, 층들을 분리하고 수성 층을 MTBE 6000 ㎖로 2회 세척하였다. MTBE 층들을 합하여 물 7500 ㎖로 2회 세척하였다. 이어서, 생성된 MTBE 용액을 약 5000 ㎖로 농축하여 1.0 N HCl 11625 ㎖로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반하였다. 층들을 분리하고 수성 층을 MTBE 7500 ㎖로 세척하였다. 염화나트륨 약 1 kg을 수성 층에 첨가하고 생성된 혼합물을 모든 염이 용해될 때까지 교반하였다. 이 시점에, 에틸 아세테이트 7500 ㎖를 첨가하고, 생성된 혼합물을 10℃로 냉각시켜 양호하게 교반하면서 6.0 N 수산화나트륨 2025 ㎖를 첨가하였다. 생성된 pH는 약 9였다. 층들을 분리하고 수성 층을 염화나트륨으로 포화시키고 에틸 아세테이트 7500 ㎖로 다시 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물들을 건조 (MgSO4)시키고 밝은색 오일로 농축시켰다. 에틸 아세테이트가 완전히 제거되지 않았음에 주목해야 한다. 이어서, 교반하면서 헥산 3000 ㎖를 첨가하여 슬러리가 생성되었으며, 이것을 10℃로 냉각시켰다. 과립상 고체를 여과로써 수집하고 헥산 1500 ㎖로 세척하였다. 목적하는 순수한 아미노에스테르 약 564 g (82％ 수율) (HPLC에 의한 순도 > 95％ )을 백색 고체로서 수득하였다. 융점 = 82.9 내지 83.0℃. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]+. 키랄 HPLC (키랄팍-AD 정상 상 컬럼, 100％ 아세토니트릴, 210 nm, 1 ㎖/분): 4.71분 및 5.36분에 2개의 주요 피크가 나타남 (1:1).
실시예-II-2)
실시예-II-1의 생성물의 개개의 거울상이성질체를 키랄 HPLC 크로마토그래피 (키랄팍-AD, 정상 상 컬럼, 100％ 아세토니트릴)에서 정제용 규모로 분리하여, 목적하는 순수한 (2S)-2-메틸 아미노 에스테르 표제 생성물을 수득하였다. 키랄팍-AD, 정상 상 컬럼, 100％ 아세토니트릴, 210 nm, 1 ㎖/분): 5.14분 (99％).
실시예-II-3)
0.993 M NaOH (30.0 ㎖, 29.79 mmol) 중 실시예-II-2의 생성물 (2.30 g, 8.01 mmol)의 슬러리를 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 투명한 무색 용액에 1.023 M HCl (29.10 ㎖, 29.76 mmol)을 첨가하였다. 생성된 투명한 용액을 침전물이 형성되기 시작할 때까지 농축시켰다 (대략 30 ㎖). 슬러리를 가온시켜 투명한 용액을 생성하고, 이것을 실온에서 밤새 방치하였다. 침전물을 여과로써 단리하였다. 고체를 냉수 (2 ×10 ㎖), 차가운 메탄올 (2 ×10 ㎖) 및 Et2O (2 ×20 ㎖)로 세척하였다. 백색 고체를 진공하에 40℃에서 4시간 동안 건조시켜 예시된 목적하는 N-히드록시 생성물 1.04 g (53％)을 수득하였다. 융점 = 247.2℃.
실시예 II-4)
메탄올 중 실시예 II-3의 용액에 린들라 촉매를 첨가하였다. 교반된 슬러리를 2시간 동안 환류시킨 후에 실온으로 냉각시켰다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과로써 제거하고, 여액을 스트리핑하였다. 생성된 고체를 물 중에 용해시키고 1.0 N HCl로부터 반복적으로 농축시켜 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득하였다.
실시예-II-5)
실시예-II-2의 생성물 73.5 g (0.3 mol)의 용액을 메탄올 300 ㎖ 중에 용해시키고, 메탄올 312 ㎖ 중 린들라 촉매 13.7 g 및 포름산 73.5 g (1.53 mol)의 혼합물을 만들어 여기에 적가하였으며, 이때의 반응 온도는 22℃ 내지 26℃ 사이로 유지시켰다. 실온에서 약 15시간 더 교반한 후에는, 19F NMR에 의해서 상기 반응이 완료된 것으로 측정되었다. 생성된 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 셀라이트를 메탄올 125 ㎖로 3회 세척하였다. 메탄올 여액을 합하고 농축시켜 목적하는 아미딘 표제 생성물 115 g을 점성 오일로서 수득하였다.
미량 수준의 납을 제거하기 위해서, 조 생성물을 메탄올 750 ㎖ 중에 용해시키고 티올-기재의 수지 (델록산(Deloxan) THP 11) 150 g을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 수지를 여과해 내어 메탄올 500 ㎖로 2회 세척하였다. 여액을 수집하고 농축하여, 목적하는 아미딘 표제 생성물 99 g을 점성 오일로서 수득하였다.
별법의 방법:
실시예-II-2의 생성물 총 5.0 g (0.0174 mol, 1.0 당량)을 1-부탄올 40 ㎖ 및 아세트산 10 ㎖ 중에서 아연 분진 5.0 g (0.0765 mol, 4.39 당량)과 혼합하였다. 5시간 동안 50℃에서 교반한 후, LC 분석에서는 상기 반응이 완료된 것으로 나타났다. 고체를 쉽게 여과해 냈다. 여액을 빙수 중에서 7℃로 냉각시킨 후에, 격렬히 교반시키면서 6 N NaOH (0.180 mol) 30 ㎖를 한번에 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 33℃에서 20℃로 냉각시킨 후에 투명한 부탄올 층을 분리해 내고, 수성 층을 1-부탄올 40 ㎖로 다시 추출하였다. 부탄올 추출물들을 합하여 염수 30 ㎖로 세척한 후에 6 N HCl 대략 10 ㎖로 세척하였다. 70℃에서 농축시킨 후에 생성된 투명한 유리는 목적하는 아미딘 표제 생성물인 것으로 확인되었다.
실시예-II)
6 N HCl 중 실시예-II-5의 생성물 99 g의 용액을 1시간 동안 환류시켰는데, 이 시점에서의 LC 분석에서는 상기 반응이 완료된 것으로 나타났다. 용매를 진공하에 제거하여 유리질 오일 89.2 g을 수득하였으며, 이것을 에탄올 1466 ㎖ 및 탈이온수 7.5 ㎖의 혼합물 중에 용해시켰다. 상기 교반된 용액에 THF를 흐림점에 도달할 때까지 상온에서 첨가하였다 (5.5 ℓ). 탈이온수 30 ㎖를 더 첨가하고, 상기 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 생성된 슬러리를 여과하고 THF 200 ㎖로 세척하여, 목적하는 표제 생성물이라고 확인된 백색 고체 65 g을 수득하였다.
실시예 JJ
(2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예-JJ-1)
실시예-II-1의 생성물의 개개의 거울상이성질체를 키랄 HPLC 크로마토그래피에서 정제용 규모로 분리하여, 목적하는 순수한 (2S)-2-메틸 아미노 에스테르 생성물을 수득하였다.
실시예-JJ-2)
실시예-JJ-1의 생성물을 물 및 아세트산 중에 용해시켰다. 아연 분진을 첨가하고, HPLC 분석에서 출발 물질이 거의 남아있지 않은 것으로 나타날 때까지 상기 혼합물을 60℃에서 가열하였다. Zn을 상기 반응 혼합물로부터 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 농축시켰다. 상기 조 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 농축시켜, 목적하는 (2R)-2-메틸 아세트아미딘 생성물을 수득하였다.
실시예-JJ)
2.0 N HCl 중 실시예-JJ-2의 용액을 2시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물 중에 용해시키고 1.0 N HCl로부터 반복적으로 농축시켜, 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득하였다.
실시예 KK
(2R/S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산 디히드로클로라이드
실시예-KK-1)
빙조에서 메틸 N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-글리시네이트 (0.33 g, 1.6 mmol), LiI (0.20 g, 1.0 mmol) 및 실시예-HH-5의 생성물 샘플 (0.30 g, 0.96 mmol)의 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖) 용액에 2-tert-부틸이미노-2-디에틸아미노-1,3-디메틸퍼히드로-1,3,2-디아자포스포린 (0.433 ㎖, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 ㎖)로 희석하여 물 (2 ×20 ㎖)로 세척하고 건조 (MgSO4)시켜 여과하고 증발시켜, 목적하는 조 라세미 알킬화 이민을 황색 오일로서 수득하였다.
상기 조 물질을 에틸 아세테이트 (10 ㎖) 중에 용해시키고 1 N HCl (10 ㎖)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 고체 NaHCO3으로 중화시키고 에틸 아세테이트 (2 ×30 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 건조 (MgSO4), 여과 및 증발시켜 목적하는 표제 라세미 아미노 에스테르 생성물 0.13 g을 황색 오일로서 수득하였다. 상기 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]+.
실시예-KK-2)
실시예-KK-1 (1.36 g, 4.98 mmol)의 CH2Cl2 (15 ㎖) 용액에 4-클로로벤즈알데히드 (0.70 g, 5.0 mmol) 및 MgSO4 (약 5 g)을 첨가하였다. 상기 슬러리를 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 슬러리를 여과하고 여액을 스트리핑하여, 목적하는 표제 이민 생성물 1.98 g (100％)을 담황색 오일로서 수득하였다. 상기 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
실시예-KK-3)
실시예-KK-2의 생성물 (0.25 g, 0.63 mmol)의 CH2Cl2 (2 ㎖) 용액에 요오드화메틸 (0.200 ㎖, 3.23 mmol) 및 O(9)-알릴-N-(9-안트라세닐메틸)-신초니디늄 브로마이드 (40 mg, 0.066 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 -78℃로 냉각시키고 순수한 BTPP (0.289 ㎖, 0.95 mmol)를 첨가하였다. 생성된 오렌지색 용액을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고 -50℃가 되도록 하였다. -50℃에서 2시간이 지난 후에, 상기 용액을 CH2Cl2 (10 ㎖)로 희석하여 물 (10 ㎖)로 세척하고 건조 (MgSO4), 여과 및 증발시켜, 목적하는 조 라세미 알킬화 이민을 황색 오일로서 수득하였다.
상기 조 물질을 에틸 아세테이트 (10 ㎖) 중에 용해시키고 1 N HCl (10 ㎖)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 고체 NaHCO3으로 중화시키고 에틸 아세테이트 (2 ×30 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 건조 (MgSO4), 여과 및 증발시켜 목적하는 라세미 2-메틸아미노 에스테르 생성물 0.16 g을 황색 오일로서 수득하였다. 상기 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]+.
실시예-KK-4)
실시예-KK-3의 라세미 생성물을 물 및 아세트산 중에 용해시켰다. 아연 분진을 첨가하고, HPLC 분석에서 출발 물질이 거의 남아있지 않은 것으로 나타날 때까지 상기 혼합물을 60℃에서 가열하였다. Zn 분진을 상기 반응 혼합물로부터 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 농축시켰다. 상기 조 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 농축시켜, 목적하는 아세트아미딘 생성물을 수득하였다.
실시예-KK)
2.0 N HCl 중 실시예-KK-4의 라세미 화합물 용액을 1시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공하에 제거하였다. 생성된 고체를 물 중에 용해시키고 1.0 N HCl로부터 반복적으로 농축시켜, 목적하는 표제 (2R/S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득하였다.
실시예 LL
(2S,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
4-[(테트라히드로피라닐)옥시]부틴
실시예 LL-1)
4-디히드로-2H-피리딘 (293.2 g 3.5 mol) 및 진한 HCl (1.1 ㎖)의 혼합물을 5℃로 냉각시켰다. 외부 냉각을 지속시키면서, 3-부틴-1-올 (231.5 g, 3.3 mol)을 30분의 기간에 걸쳐 첨가하여 온도가 50℃에 이르게 하였다. 반응물을 실온에서 2.5시간 동안 혼합하면서 유지시킨 후에 MTBE (1.0 ℓ)로 희석시켰다. 생성된 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (2 ×150 ㎖)으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 생성물 500 g (98％ 조 수율)을 수득하였다. GC 면적％ = 96％.
5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-인-1-올
실시예 LL-2)
THF (125 ㎖) 중 실시예 LL-1의 4-[(테트라히드로피라닐)옥시]부틴 생성물 (50.0 g, 0.33 mol)의 용액에 THF (242 ㎖, 0.48 mol) 중 2 N EtMgCl 용액을 질소 대기하에서 30분의 기간에 걸쳐 첨가하여, 온도가 48℃로 상승되게 하였다. 혼합물을 66℃로 추가 가열하고, 이 온도에서 2시간 동안 유지시킨 후에 상온으로 냉각시켰다. 파라포름알데히드 (14.5 g, 0.48 mol)를 첨가 (약간의 발열이 관찰되었음)하고, 생성된 혼합물을 45℃로 가열하였다. 온도를 45 내지 55℃ 사이로 제어하면서 1시간이 지난 후에는 상기 혼합물이 투명해졌다. 이 시점에, 상기 혼합물을 최대 66℃로 가열하고 2.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 온도를 40℃ 미만으로 유지시키면서 포화 염화암모늄 (125 ㎖)를 30분에 걸쳐 서서히 첨가하였다 (강력한 발열이 관찰되었음). 액체 상은 기울여 따라내어 분리하였다; 에틸 아세테이트 (250 ㎖) 및 염수 (50 ㎖)를 첨가하였다. 유기 상을 분리하여 염수(2 ×50 ㎖) 및 물 (1 ×50 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 연황색 색상의 오일 51 g (85％ 조 수율)을 수득하였다; GC 면적％ = 88％ 표제 생성물, 6％ 출발 물질.
5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-엔-1-올
실시예 LL-3)
500 ㎖ 파르 병에 실시예 LL-2의 5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-인-1-올 생성물 (40.2 g, 0.22 mol), 린들라 촉매 (2.0 g), 에탄올 (120 ㎖), 헥산 (120 ㎖) 및 2,6-루티딘 (457 mg)을 질소 대기하에 충전하였다. 상기 반응 혼합물을 질소 및 수소 기체 각각으로 5회씩 퍼징하였다. 파르 병을 수소를 사용하여 5 psi로 가압하고 이론치 수소의 98％가 소모될 때까지 진탕시켰다. 수소를 용기로부터 방출시키고 상기 반응물을 질소로 5회 퍼징시켰다. 상기 혼합물을 솔카 플록(Solka Floc) 패드를 통해 여과하고, 촉매를 에탄올 (2 ×50 ㎖)로 헹구었다. 여액 및 헹군액을 합하여 감압하에 농축시켜, 표제 물질 40.3 g (99％ 수율)을 황색 색상의 오일로서 수득하였다 (GC 면적％ = 96％).
3-메틸-4-[5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-에닐]-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온
실시예 LL-4)
톨루엔 (42 ㎖) 중 실시예 LL-3의 5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-엔-1-올 생성물 (11.8 g, 0.063 mol)의 용액에 트리에틸아민 (6.4 g, 0.063 mol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 -5℃로 냉각시키고 염화메탄술포닐 (7.3 g, 0.63 mol)을 주사기를 통해 포트 온도를 10℃ 미만으로 유지시키는 속도로 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가온시키고 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 흡입 여과하고 필터상에서 톨루엔 (2 ×20 ㎖)으로 헹구었다. 여액 및 세척액을 DMF (10 ㎖) 중 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (8.6 g, 0.063 mol)의 나트륨 염의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 기계적 교반기로 교반하고 5시간 동안 45℃에서 가열하였다. 물 (40 ㎖)을 첨가하고 상기 혼합물을 5분 동안 교반한 후에 층들을 분리하였다. 톨루엔 층을 물 (3 ×20 ㎖)로 세척하여 MgSO4상에서 건조시키고 농축시켜 오렌지색 색상의 조 생성물 16.5 g (97.3％)을 수득하였다 (GC 면적％는 71％ 표제 생성물, 18％ 톨루엔 및 4％의 불순물로 구성됨).
4-(5-히드록시-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온
실시예 LL-5)
메탄올 (48 ㎖) 중 실시예 LL-4의 3-메틸-4-[5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-에닐]-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온 생성물 (16 g, 0.06 mol)의 용액에 p-톨루엔술폰산 (0.34 g, 2.0 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 (0.27 g, 3.0 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 회전 증발기상에서 농축시켰다. 잔류물을 포화 NaHCO3 (20 ㎖)로 희석하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 ×60 ㎖)로 추출하였다. 추출물들을 합하여 물 (2 ×25 ㎖)로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고 농축하여 오렌지색 색상의 조 오일 표제 생성물 8.4 g을 수득하였다 (GC 면적％ = 80％).
메탄술폰산 5-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-펜트-3-에닐 에스테르
실시예 LL-6)
염화메틸렌 (33 ㎖) 중 실시예 LL-5의 4-(5-히드록시-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온 생성물 (8.27 g, 0.045 mol)의 용액에 트리에틸아민 (5.0 g, 0.49 mol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 -5℃로 냉각시키고, 염화메탄술포닐 (5.5 g, 0.048 mol)을 온도가 8℃ 미만으로 유지되는 속도로 첨가하였다. 냉각조를 치우고, 상기 혼합물이 실온으로 가온되도록 하면서 3시간 동안 교반하였다. 물 (15 ㎖)을 첨가하고, 상기 혼합물을 5분 동안 교반한 후에 층들을 분리하였다. 유기 상을 물 (10 ㎖)로 세척하여 MgSO4상에서 건조시키고 농축하여, 밝은 호박 색상의 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (8 ㎖) 중에 용해시키고 5℃에서 밤새 유지시켰다. 침전된 고체를 흡입하여 여과해 내고, 최소 부피의 에틸 아세테이트를 사용하여 필터상에서 헹군 후에 필터상에서 공기 건조시켜, 표제 생성물 6.8 g (58％ 수율)을 수득하였다.
4-(5-요오도-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온
실시예 LL-7)
아세톤 (160 ㎖) 중 실시예 LL-6의 메탄술폰산 5-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-펜트-3-에닐 에스테르 생성물 (20.0 g, 0.076 mol)의 용액에 요오드화나트륨 (17.15 g, 0.114 mol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 환류 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 외부 가열을 중단하고, 혼합물을 실온에서 밤새 방치하였다. 고체를 여과로써 제거하고 필터상에서 헹구었다. 여액 및 세척액을 합하여 농축시키고, 불균일 잔류물을 에틸 아세테이트 (120 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 물 (60 ㎖), 15％ 티오황산나트륨 수용액 (60 ㎖) 및 물 (60 ㎖)로 세척하였다. MgSO4상에서 건조시키고 감압하에 농축하여 표제 오일 생성물 22.1 g (98％ 수율)을 수득하였다.
2-[(3,4-디클로로-벤질리덴)-아미노]-프로피온산 메틸 에스테르
실시예 LL-8)
염화메틸렌 (2.1 ℓ) 중 L-알라닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드 (200.0 g, 1.43 mol)를 질소 대기하에서 기계적으로 교반한 슬러리에 트리에틸아민 (199.7 ㎖, 1.43 mol)을 12분에 걸쳐 첨가하였다 (첨가 동안에 고체는 부분적으로 용해되었다가 재침전되었음). 10분 후, 3,4-디클로로벤즈알데히드 (227.5 g, 1.30 mol) 및 황산마그네슘 (173.0 g, 1.43 mol)을 첨가하였다 (온도는 30분에 걸쳐 6℃ 증가함). 2.5시간 후, 상기 혼합물을 여과하였다. 여액을 물 (1 ×1 ℓ) 및 염수 (1 ×500 ㎖)로 세척하여 황산나트륨상에서 건조시키고 여과 및 농축시켜 오일 생성물 313.3 g (92.4％ 수율)을 수득하였다.
Rac-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산 메틸 에스테르
실시예 LL-9)
방법 1. 디메틸포름아미드 (1.4 ℓ) 중 실시예 LL-7의 생성물 (114.2 g, 0.39 mol) 및 실시예 LL-8의 생성물 (151.5 g, 0.58 mol)의 용액을 질소 대기하에 -8℃로 냉각시켰다. 이어서, 요오드화리튬 (78.1 g, 0.58 mol)을 3 등분하여 19분에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 -7℃에서 교반한 후에 (tert-부틸이미노)-트리스(피롤리디노)포스포란 (194.0 ㎖, 0.62)을 36분에 걸쳐 첨가하였다 (최고 온도 = -2.6℃). 10분 후, 냉각조를 치우고 용액을 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 냉수 (1.4 ℓ)에 붓고 에틸 아세테이트 (2 ×1.0 ℓ)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 물 (2 ×400 ㎖) 및 염수로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 1 N HCl (780 ㎖)로 처리하고 1시간 동안 교반하였다. 수성 층을 분리하여 에틸 아세테이트 (2 ×400 ㎖)로 추출한 후에 중탄산나트륨 (110 g)으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (1 ×500 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 여과 및 농축한 후에 메틸 t-부틸 에테르로 처리하여 결정질 생성물을 수득하였다: 제1 수득물 14.4 g; 제2 수득물 6.6 g (GC 순도 = 각각 96.2％ 및 91.9％). 수성 상을 염화나트륨으로 포화시키고 에틸 아세테이트 (4 ×500 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 황산나트륨상에서 건조시키고 여과 및 농축한 후에 메틸 t-부틸 에테르로 처리하여 결정질 생성물을 수득하였다: 제1 수득물 33.4 g; 제2 수득물 10.8 g (GC 순도 = 각각 89.6％ 및 88.8％). 총 조 물질의 수득량 65.2 g, 62.4％.
방법 2. 디메틸포름아미드 (207 ㎖) 중 실시예 LL-7의 생성물 (20.7 g, 0.070 mol) 및 실시예 LL-8의 생성물 (22.9 g, 0.088 mol)의 용액에 탄산세슘 (29.8 g, 0.092)를 질소 대기하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후에 물 (300 ㎖)로 희석하여 에틸 아세테이트 (2 ×200 ㎖)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층들을 물 (3 ×100 ㎖) 및 염수로 세척한 후에 1 N HCl (184 ㎖)을 처리하였다. 1시간 후, 층들을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖)로 추출한 후에 중탄산나트륨 (15.5 g)으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (1 ×150 ㎖)로 추출하였다. 수성 층을 염화나트륨으로 포화시키고 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층들을 황산나트륨상에서 건조시키고 여과 및 농축시켜 황색 고체, 11.9 g, 62.9％를 수득하였다: GC 순도 = 96.6％. 상기 조 생성물을 따뜻한 메틸 t-부틸 에테르 또는 에틸 아세테이트로부터 재결정화시켰다.
Rac-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산
실시예 LL-10)
실시예 LL-9의 생성물 (0.269 g, 1 mmol)을 2 N HCl 5 ㎖ 중에 용해시키고 아르곤하에 환류 가열하였다. 6시간 동안 환류시킨 후에 실온에서 72시간 동안 교반하고, 분취액을 취하여 1H NMR로 확인하였다. 대략 6％의 미반응 출발 에스테르가 목적하는 생성물 (LC-MS로 입증함)과 함께 잔류하였다. 수성 부분을 진공하에 제거하여 농후한 호박색 오일 0.38 g이 남았다. 역상 크로마토그래피로 정제한 후에 동결건조시켜, 표제 화합물 0.23 g, 90.2％를 백색의 비-조해성 고체로서 수득하였다.
(2S,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산 메틸 에스테르
실시예 LL-11)
표제 화합물 (827.3 g)을 노바프렙(Novaprep) 200 기기의 정상 상태(steady state) 재순환 옵션을 사용하는 정제용 키랄 크로마토그래피를 통해 그의 R 거울상이성질체로부터 분리하였다. 상기 물질을 무수 에탄올 중에 40 mg/㎖의 농도로 용해시키고 50 ×500 mm의 미리 패킹된 키랄 테크놀로지스(Chiral Technologies) 스테인레스 스틸 컬럼에 로딩하였다. 흡착제는 20 μ키랄팍 AD였다. 이동 상은 에탄올/트리에틸아민 100/0.1이었고, 유속은 1분 당 125 ㎖이었다. 상기 조 용액 (25 ㎖)을 컬럼에 12분 마다 로딩하였다. 정상 상태 재순환 기술을 이용하였다. 회전 증발기를 사용하여 용매를 제거하였다. 최종 생성물을 금색 오일로서 단리하였고, 이는 방치 후에 고화되었다: 399.0 g (96.4％ 회수율).
(2S,5Z)-7-아세트이미도일아미노-2-아미노-2-메틸-헵트-5-엔산 메틸 에스테르, 디히드로클로라이드 수화물
실시예 LL-12)
메탄올 (2.4 ℓ) 중 실시예 LL-11의 생성물 (114.5 g, 0.425 mol)의 용액에 고체 디벤조일-L-타르타르산 (152.5 g, 0.425 mol) 및 88％ 포름산 (147 ㎖, 3.428 mol)을 상온에서 첨가하였다. 메탄올 (200 ㎖) 중 린들라 촉매, 납 아세테이트 (37.9 g)로 피독시킨 탄산칼슘상 5 중량％ 팔라듐의 슬러리를 질소하에 제조하였다. 이어서, 상기 밝은 회색의 촉매 슬러리에 출발 물질의 용액을 상온에서 첨가한 후에 메탄올 (200 ㎖)을 첨가하여 헹구었다. 불균일 반응 혼합물을 45℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 약 40℃에서 정상 기체가 방출되기 시작하는 것으로 관찰되었고, 이는 반응이 진행중임을 지시하였다. 상기 혼합물을 빙/수조 중에서 냉각시킨 후에 수퍼셀 하이플로(Supercell HyFlo) 플러그를 통해 여과하였다. 상기 황색 용액을 진공하에 농축시켜 점성 오일을 수득하였고, 이것을 용해시켜 2 N 수성 HCl (2 ℓ) 및 에틸 아세테이트 (0.8 ℓ)에 분배하였다. 층들을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트 (0.8 ℓ)로 1회 세척하였다. 용매 및 휘발물질들을 승온 (= 70℃)에서 진공하에 제거하였다. 중간체 생성물을 추가의 정제 또는 특징규명 없이 다음 단계에 사용하였다. LC-MS [M+H]+ = 228.
실시예 LL)
실시예 LL-12 (170 g)의 조 생성물을 2 N 수성 HCl (1 ℓ) 중에 용해시켰다. 생성된 오렌지색 용액을 밤새 환류시킨 후에 다시 상온으로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 그의 부피의 약 1/3로 농축시키고, 산성 용액을 고체 상 추출 카트리지 (C18 실리카 25 g)에 통과시켜 유색의 불순물 및 기타 불순물을 제거하였다. 용매를 진공하에 제거 (= 70℃)하여 조 생성물 208 g을 황색빛 고무로서 수득하였다.
상기 조 고무 (31.3 g)를 물 (250 ㎖) 중에 취하고, 상기 물질을 산성 수지 다우엑스 50WX4-400 (약 600 g)로 패킹하여 예비 처리해 둔 이온 교환 컬럼에 로딩하였다. 상기 수지를 먼저 물 (1 ℓ)로 세척한 후에 묽은 수성 HCl (10/90 v/v 농도의 HCl/물 1 ℓ)로 세척하였다. 이온 강도가 더 높은 수성 HCl (20/90 v/v 내지 25/75 v/v 농도의 HCl/물 1.5 ℓ)을 사용하여 상기 생성물을 수지로부터 용출해 냈다. 수성 용매를 진공하에 제거 (= 70℃)하고, 고무성 잔류물을 4 부피％ 수성 트리플루오로아세트산 (100 ㎖) 중에 취하였다. 수성 용매를 진공하에 제거 (= 70℃)하고, 상기 절차를 1회 더 반복하였다. 이어서, 잔류물을 고진공하에 건조시켜 고무 32.2 g을 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다.
조 (2S,5Z)-7-아세트이미도일아미노-2-아미노-2-메틸-헵트-5-엔산, 디트리플루오로아세트산 염 수화물 (32.2 g)을 역상 정제용 크로마토그래피로 정제하였다. 상기 조 물질을 0.1％ 수성 TFA (50 ㎖) 중에 용해시키고, 흡착제 (BHK 극성 W/S, 50 □, 1.16 kg)로 패킹된 2-인치 ID ×1 m 스테인레스 스틸 컬럼에 로딩하였다. 생성물을 120 ㎖/분의 유속으로 0.1％ 수성 TFA 내지 25/75/0.1 아세토니트릴/물/TFA의 단계 구배를 사용하여 용출시켰다. 로딩 비율은 36:1 (w/w)의 실리카:샘플이었다. 용매를 진공하에 제거하고, 묽은 수성 HCl에 의한 헹굼과 진공하에서의 용매 제거를 반복함으로써 상기 물질을 HCl 염으로 전환시켰다. 고진공하에 건조시켜 표제 디히드로클로라이드 수화물 27.4 g을 황색빛 고무로서 수득하였다.
실시예 MM
(2R,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드
실시예 LL-11에 기재한 분리 단계 동안 단리된 R-거울상이성질체 (1.13 g, 4.2 mmol)를 25％ 수성 아세트산 11 ㎖ 중에 용해시키고 60℃로 가열하였다. 이어서, 아연 분진 (1.10 g)을 4등분하여 30분 간격으로 첨가하였다. 총 3시간 동안 가열한 후, 분취액을 취하여 LC-MS로 확인하였으며, 이것은 오직 미량의 미반응 출발 물질이 목적하는 생성물과 함께 잔류함을 지시하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켜 여과하고 진공하에 스트리핑하여, 질퍽한 백색 고체 2.31 g이 남았다. 메틸 에스테르를 고온의 묽은 HCl로 가수분해하여 표제 화합물을 생성하였다. 역상 크로마토그래피로 정제하고 동결건조시킨 후, 표제 화합물 0.31 g을 유리질 고체로서 수득하였다.
실시예 NN
2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로라이드
NN-1 디메틸포름아미드 (DMF) 20 ㎖ 중 Boc-L-Lys(Cbz)-OH (5 g, 13.18 mmol), 5-아미노테트라졸 일수화물 (1.36 g, 13.18 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA) (5.1 g, 6.9 ㎖, 39.54 mmol)의 교반 용액에 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP) (6.4 g, 14.49 mmol)를 상온에서 첨가하였다.
1시간 동안 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (EtOAc) 60 ㎖ 및 물 50 ㎖에 분배하였다. 층들을 분리하였다. 유기 층을 1 M KHSO4 용액 50 ㎖로 세척하고, 물 50 ㎖로 2회 세척하였다. 생성물이 침전되기 시작했고, 상기 현탁액을 진공하에 농축시켜 조 화합물 9 g을 수득하였다. 건조시킨 후, 상기 생성물을 염화메틸렌 중에서 비등시킨 후에 여과로써 정제하여, 1A (62.7％) 3.7 g을 수득하였다. 상기 화합물을 1H NMR로 특징규명하였다.
NN-2 (2 g, 4.5 mmol)를 Pd 블랙을 사용한 촉매적 수소화 조건하에서 5 psi로 50％ EtOH/AcOH 용액 중에서 12시간 동안 환원시켜, NN-2 1.55 g (100％)을 수득하였다. 상기 화합물을 1H NMR로 특징규명하였다.
NN-3 DMF 25 ㎖ 중 NN-2 (1.55 g, 4.15 mmol) 및 메틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (0.91 g, 8.31 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (TEA) (1.26 g, 1.74 ㎖, 12.45 mmol)을 첨가하였다. 16시간 상온에서 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 트리에틸아민 히드로클로라이드로부터 여과하고, 여액을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 50％ AcOH 중에 용해시키고 동결건조시켰다. 상기 조 생성물 (2 g)을 C-18 컬럼상에서의 역상 크로마토그래피를 이용하여 정제하여, 1C 0.9 g (52.3％)을 수득하였다. 상기 생성물을 1H NMR로 특징규명하였다.
NN-4 (0.9 g, 2.17 mmol)를 아세트산 30 ㎖ 중에 용해시키고 4 N HCl/디옥산 3 ㎖를 첨가하였다. 상기 반응물을 20분 동안 상온에서 교반한 후에 에틸 에테르 150 ㎖를 첨가하였다. 2시간 후, 침전물을 여과하고 에틸 에테르로 세척하고 건조시켜 1을 0.78 g (96％) 수득하였다.
실시예 NN은 2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노]헥산아미드 (NIL 아미드) 또는 NIL 디메틸아미드보다 더욱 강력한 i-NOS 억제제였다. 또한, 실시예 1은 더욱 선택적이었다. 실시예 NN은 그의 모든 중간체가 양호하게 결정질인 생성물이었다. 반대로, NIL는 유리였으며 취급이 곤란하였다.
c. 생물학적 데이타
하기 분석법의 일부 또는 전부가 본 발명의 화합물의 산화질소 신타제 억제 활성을 증명하고 유용한 제약 성질을 증명하는데 이용된다.
산화질소 신타제용 시트룰린 검사법
산화질소 신타제 (NOS) 활성은 L-[2,3-3H]-아르기닌에서 L-[2,3-3H]-시트룰린으로의 전환을 모니터링 함으로써 측정될 수 있다 (문헌[Bredt and Snyder, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. , 87, 682-685, 1990; 및 Moore et al, J. Med. Chem., 39, 669-672, 1996]). 인간의 유도성 NOS (hiNOS), 인간의 내피 구성 NOS (hecNOS) 및 인간의 신경 구성 NOS (hncNOS)를 각각 인간 조직으로부터 추출된 RNA로부터 클로닝하였다. 인간의 유도성 NOS (hiNOS)에 대한 cDNA를 궤양성 결장염에 걸린 환자로부터의 결장 샘플로부터 추출한 RNA로 제작된 λcDNA 라이브러리(library)에서 단리하였다. 인간의 내피 구성 NOS (hecNOS)를 위한 cDNA는 인간의 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)로부터 추출된 RNA로 제작된 λcDNA 라이브러리에서 단리하고, 인간의 신경 구성 NOS (hncNOS)를 위한 cDNA는 시신으로부터 얻은 인간 소뇌에서 추출한 RNA로 제작된 λcDNA 라이브러리에서 단리하였다. 재조합 효소를 배큘로바이러스 벡터를 사용하는 Sf9 곤충 세포에서 발현시켰다 (문헌[Rodi et al, in The Biology of Nitric Oxide, Pt. 4: Enzymology, Biochemistry and Immunology; Moncada, S., Feelisch, M. , Busse, R. , Higgs, E., Eds.; Portland Press Ltd.: London, 1995; pp 447-450]). 효소 활성을 가용성 세포 추출물로부터 단리하고 DEAE-세파로스(Sepharose) 크로마토그래피로 부분 정제하였다. NOS 활성을 측정하기 위해, 효소 10 ㎕를 시험 화합물 존재하에 또는 부재하에 50 mM 트리스 (pH 7.6) 40 ㎕에 첨가하고, 50 mM 트리스 (pH 7.6), 2.0 mg/mL 소 혈청 알부민, 2.0 mM DTT, 4.0 mM CaCl2, 20 μM FAD, 100 μM 테트라히드로바이오프테린, 0.4 mM NADPH, 및 0.9 μCi의 L-[2,3-3H]-아르기닌을 함유한 60 μM L-아르기닌을 함유하는 반응 혼합물 50 ㎕를 첨가함으로써 반응을 개시하였다. 검사에서 L-아르기닌의 최종 농도는 30 μM였다. hecNOS 또는 hncNOS에 대하여, 칼모듈린은 최종 농도 40 내지 100 nM로 포함되었다. 37℃에서 15분동안 인큐베이션한 후에, 10 mM EGTA, 100 mM HEPES, pH 5.5 및 1 mM L-시트룰린을 함유하는 정지 완충액 중 다우엑스 50W X-8 양이온 교환 수지 현탁액 (수지 1 부, 완충액 3 부) 400 ㎕를 첨가함으로써 반응을 종결하였다. 상기 수지를 혼합한 후 그대로 두어, 액체 신틸레이션 카운터(liquid scintillation counter)를 이용하여 상청액 분취액을 카운팅함으로써 L-[2,3-3H]-시트룰린 형성을 측정하였다. hiNOS, hecNOS 및 hncNOS에 대한 화합물의 IC50 값으로서의 결과를 표 I에 보고하였다.
로우(RAW) 세포 아질산염 검사법
LPS 존재하에 밤새 (17h) 성장시키는 96-웰 조직 배양 플레이트 상에 로우 264.7 세포를 플레이팅하여 전면생장시켜 NOS를 유도할 수 있다. 3 내지 6열의 웰을 비처리 상태로 두어 비특이적 배경을 삭감하기 위한 대조군으로서 작용시킬 수 있다. 배지를 각 웰로부터 제거할 수 있고, 이 세포들을 2 mg/ml 글루코스를 함유한 크렙-링거스-헵스(Kreb-Ringers-Hepes) (25 mM, pH 7.4)로 2회 세척하였다. 이어서, 상기 세포들을 얼음 상에 두고 L-아르기닌 (30 μM) +/- 억제제를 함유한 완충액 50 ㎕과 함께 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 수조에서 1 시간동안 37℃로 가온함으로써 검사를 개시할 수 있다. 세포내 iNOS에 의한 아질산염 생성은 시간에 대해 선형일 것이다. 세포 검사법을 종결하기 위해, 세포 플레이트를 얼음 위에 두고, 아질산염-함유 완충액을 제거하고, 아질산염에 대해 이전에 확립된 형광 측정을 이용하여 아질산염을 분석하였다 (문헌[T. P. Misko et al, Analytical Biochemistry, 214, 11-16 (1993)]).
인간 연골 체외이식편 검사법
골 조각을 둘베코(Dulbecco) 인산염 완충된 염수 (깁코(Gibco)BRL)로 2회, 둘베코 개질 이글스(Eagles) 배지 (깁코BRL)로 1회 헹구고, 페놀 레드를 함유하지 않은 최소 필수(Minimum Essential) 배지 (MEM) (깁코BRL)가 있는 페트리 디쉬에 놓았다. 연골을 대략 15 내지 45 mg의 중량을 갖는 작은 체외이식편으로 절단하고, 웰 당 배양 배지 200 내지 500 ㎕를 갖는 96 또는 48웰 배양 플레이트 내에 웰 당 1 또는 2개의 체외이식편을 놓았다. 배양 배지는 L-아르기닌, L-글루타민 및 페놀 레드를 함유하지 않도록 제조된 얼(Earle) 염을 갖는 최소 필수 배지 (이글(Eagle)) (깁코BRL)의 사용자 개질물, 또는 L-아르기닌, 인슐린, 아스코르브산, L-글루타민 및 페놀 레드를 함유하지 않도록 제조된 혈청이 없는 뉴만(Neuman) 및 타이텔(Tytell) 배지 (깁코BRL)의 사용자 개질물이었다. 상기 둘다 사용전에 100 μM L-아르기닌 (시그마(Sigma)), 2 mM L-글루타민, 1× HL-1 보충물 (바이오위타커(BioWhittaker)), 50 mg/ml 아스코르브산 (시그마) 및 150 pg/ml 재조합 인간 IL-1β (알디 시스템스(RD Systems))를 보충하여 산화질소 신타제를 유도하였다. 이어서, 화합물을 10 ㎕ 분취액에 첨가하고, 체외이식편을 5％ C02 하의 37℃에서 18 내지 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 하루 지난 상청액을 따라 버리고 재조합 인간 IL-1β 및 본 화합물을 함유한 신선한 배양 배지로 교체하고 추가 20 내지 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 이 상청액을 형광계측 검사법 (문헌[Misko et al, Anal. Biochem., 214, 11-16, 1993])으로 아질산염에 대해 분석하였다. 모든 샘플을 4회 수행하였다. 자극되지 않은 대조군은 재조합 인간 IL-1β 부재하의 배지에서 배양하였다. 억제제의 6가지 상이한 농도에서의 아질산염 생성에 대한 퍼센트 억제를 플로팅하여 IC50 값 (표 I)을 결정하였다.
표 I은 본 발명의 일부 화합물에 대한 생물학적 활성의 예를 나타낸다.
생체내 검사법
산화질소 신타제 억제제의 경구 투여와 함께 또는 산화질소 신타제 억제제의 경구 투여 없이 내독소 (LPS) 1 내지 12.5 mg/kg를 복막내로 주사하여 래트를 처리할 수 있다. 혈장 아질산염/질산염 수준을 처리 5시간 후에 측정할 수 있다.
그 결과는 산화질소 신타제 억제제 투여가 혈장 아질산염/질산염 수준 상승 (내독소에 의해 유도되는 산화질소 생성에 대한 확실한 지시제)을 감소시킨다는 것을 나타내는데 사용될 수 있다. 표 II에 나타낸 바와 같이, 실시예 A ((2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드)는 혈장 아질산염/질산염 수준에서 LPS-유도성 증가를 억제하고, 관찰된 ED50 값이 0.1 mg/kg 미만이며, 유도성 산화질소 신타제 활성을 생체내에서 억제하는 능력을 증명한다.
시간 의존성 억제에 대한 검사법
L-아르기닌을 제외한 시트룰린 효소 검사법 성분들 존재하에 0 내지 60 분 범위의 시간 동안 본 화합물을 인간 NOS 이소형효소와 함께 37℃에서 예비 인큐베이션함으로써, 상기 화합물을 인간 NOS 이소형의 시간 의존성 억제에 대해 평가하였다. 분취액 (10 ㎕)을 0, 10, 21 및 60 분에 수거하고, 이를 즉시 L-[2,3-3H]-아르기닌을 함유하고 최종 부피 100 ㎕ 중 L-아르기닌 최종 농도가 30 μM인 시트룰린 검사 효소 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 37℃에서 15분 동안 진행하고, 정지 완충액을 첨가함으로써 종결하고 시트룰린 NOS 검사법에 대해 기재된 바와 같이 다우엑스 50W X-8 양이온 교환 이온 교환 수지로 크로마토그래피하였다. 억제제에 의한 NOS 활성의 ％ 억제를 억제제 없이 동일한 시간동안 예비인큐베이션한 대조군 효소와 비교한 활성의 퍼센트 억제로서 취하였다. 표 III에 나타낸 데이타는 억제제를 효소와 예비인큐베이션한 21분 및 60분 후의 ％ 억제이다.
에이치. 파일로리로 감염된 인간의 위 상피 세포 상에서의 선택적 iNOS 억제제의 항세포독성 효과 검사법
위 상피 세포 상에서의 iNOS 억제제의 항세포독성 효과를 측정하기 위해, 인간의 위 상피 세포주 AGS (위 선암종, ATCC CRL 1739; 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 구입)로부터 얻은 세포를 10％ 소태아 혈청 및 항생제 (100 U/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신)가 보충된 RPMI-1640 배지에서 성장시켰다. 세포를 24웰 배양 플레이트 상에 부피 1 ㎖ 중 웰 당 4 × 105의 세포 밀도로 시딩(seed)하고 밤새 배양하여 80％ 전면생장에 도달하게 하였다. 자극 전에, 항생제를 함유하지 않은 신선한 배양 배지 1 ㎖로 세포를 3회 세척하였다. 이어서, 상기 세포를 에이치. 파일로리 존재하에 박테리아 대 세포 비율 300:1에서, 예를 들어 1 μM 내지 1 mM 용량의 iNOS 선택적 억제제로 처리하거나 (처리군) 또는 처리하지 않고 (대조군) 12 내지 36 시간동안 배양하였다. 세포독성의 지표로서, 세포 수를 트리판 블루 배제 분석으로 평가하였다. 살아있는 세포를 12 내지 36 시간 기간 내에 한 고정 시점 또는 다중 고정 시점에서 카운팅하였다. 대조군 및 처리군 세포 샘플에서의 세포 수를 비교하였다.
에이치. 파일로리로 감염된 인간의 위 상피 세포 상에서의 선택적 iNOS 억제제의 항아포프토시스 효과 검사법
AGS 세포를 상기 바로 위에 기재한 바와 같이 배양하였다. AGS 세포 (4 × 105/웰)를 24웰 플레이트에서의 유리 커버슬립 위에 플레이팅하고, iNOS 선택적 억제제를 사용하거나 (처리군) 또는 사용하지 않고 (대조군) 처리하고, 에이치. 파일로리 존재하에 (박테리아 대 세포 비율 300:1) 24 시간동안 배양하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하고, 세포 단일층을 4％ 파라포름알데히드로 고정하고, 세포를 획스트(Hoechst) 33258와 같은 DNS-특이적 염료로 염색하였다. 아포프토시스의 지표로서, DNA 파편화를 형광 현미경을 이용하여 평가하였다. 처리군 및 대조군 샘플에서의 DNA 파편화 및 아포프토시스되는 세포 수를 측정하고 비교하였다.
d. 투여량, 제제 및 투여 경로
본 발명의 방법에 유용한 다수의 iNOS 선택적 억제제 화합물은 2개 이상의 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있고, 따라서 라세미체 및 입체이성질체, 예를 들어 부분입체이성질체 및 거울상이성질체를 둘다 순수한 형태로 및 혼합물로 포함한다. 상기 입체이성질체는 거울상이성질체성 출발 물질을 반응시킴으로써, 또는 본 발명의 화합물의 이성질체를 분리함으로써 종래 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 이성질체는 기하 이성질체, 예를 들어 이중 결합을 교차하는 시스-이성질체 또는 트랜스-이성질체를 포함할 수 있다. 모든 상기 이성질체는 본 화합물 중 본 발명에 방법에 유용한 것으로 고려된다. 또한, 본 방법은 iNOS 선택적 억제제 화합물의 호변이성질체, 염, 용매화물 및 프로드럭의 사용을 고려한다.
본 발명의 방법을 위해, 선택적 iNOS 억제제의 적합한 투여 경로에는 대상체의 신체에서, 예를 들어 인간과 같은 포유동물의 식도, 위 및 소장을 비롯한 위장관에서 상기 화합물을 이들의 작용 부위와 접촉시키는 임의의 수단이 포함된다. 보다 구체적으로, 적합한 투여 경로에는 경구, 정맥내, 피하, 직장, 국소, 구강 (예를 들어, 설하), 근육내 및 피부내 경로가 포함된다. 예시적인 실시양태에서, 선택적 iNOS 억제제는 경구 투여된다.
크론병 및 궤양성 결장염을 비롯한 염증성 장 질환, 위궤양 및 십이지장 궤양을 비롯한 소화성 궤양 질환, 위염, 결장염, 회장염, 식도염, 마비성 장폐쇄증, 설사 및 과민성 장 증후군을 비롯한 위장관 증상의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 방법은 화합물 자체로서의 iNOS 선택적 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염으로서의 iNOS 선택적 억제제를 사용하는 것을 포함한다. 본 발명의 방법은 또한 iNOS 선택적 억제제를 항미생물제와 함께, 항분비제와 함께, 또는 항미생물제 및 항분비제 둘다와 함께 사용하는 것을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 알칼리 금속 염을 형성하는 데 일반적으로 사용되는 염 및 유리산 또는 유리 염기의 부가 염을 형성하는 데 일반적으로 사용되는 염을 포함한다. 염의 본질은 그것이 제약상 허용된다면 중요하지 않다. 제약상 허용되는 염은, 특히 상응하는 모화합물 또는 중성 화합물보다 큰 수성 용해도 때문에 본 발명의 방법의 생성물로서 유용하다. 상기 염은 제약상 허용되는 음이온 또는 양이온을 가져야만 한다. 적합하고 제약상 허용되는 본 발명의 화합물의 산 부가 염은 무기산 또는 유기산으로부터 제조될 수 있다. 무기산의 예로는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 탄산, 황산 및 인산이 있다. 적절한 유기산으로는 유기산의 지방족, 시클로지방족, 방향족, 아르지방족, 헤테로시클릭, 카르복실산 및 술폰산 부류가 포함되고, 이들의 예로는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 글루코론산, 말레산, 푸마르산, 피루브산, 아스파르트산, 글루탐산, 벤조산, 안트라닐산, 메실산, 살리실산, p-히드록시벤조산, 페닐아세트산, 만델산, 엠본산 (팜산), 메탄술폰산, 에틸술폰산, 벤젠술폰산, 술파닐산, 스테아르산, 시클로헥실아미노술폰산, 알겐산, 갈락투론산이 있다. 본 발명의 화합물의 적합한 제약상 허용되는 염기 부가염에는 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연으로부터 제조되는 금속 염, 또는 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 콜린, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민 (N-메틸글루카민) 및 프로카인으로부터 제조되는 유기 염이 포함된다. 본 발명의 화합물의 적합한 제약상 허용되는 산 부가염에는 가능한 경우 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 플루오르화수소산, 붕산, 플루오로붕산, 인산, 메타인산, 질산, 탄산 (탄산염 및 탄산수소염 음이온 포함), 술폰산 및 황산, 및 유기산, 예를 들어 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루콘산, 글리콜산, 이소티온산, 락트산, 락토비온산, 말레산, 말산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 숙신산, 톨루엔술폰산, 타르타르산 및 트리플루오로아세트산으로부터 유래된 염들이 포함된다.
염화물 염은 의료 목적에 특히 바람직하다. 적합한 제약상 허용되는 염기 염에는 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예를 들어 나트륨 및 칼륨 염, 및 알칼리 토금속 염, 예를 들어 마그네슘 및 칼슘 염이 포함된다. 모든 이러한 염들은 적절한 산 또는 염기를 각각 본 발명의 화합물의 짝염기 또는 짝산과 함께 반응시킴으로써 본 발명의 화합물의 상응하는 짝염기 또는 짝산으로부터 종래 방식에 의해 제조될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 방법에 유용한 iNOS 선택적 억제제는 허용되는 담체와 함께 제약 조합물의 형태로 존재할 수 있다. 담체는 제약 조합물의 다른 성분과 융화성인 점에서 허용가능해야만 하고, 대상체에게 유독하지 않아야만 한다. 담체의 적합한 형태로는 고체 또는 액체, 또는 둘다가 포함되고, 예시 실시양태에서, 담체는 치료 화합물과 함께 단일용량 조합물로서, 예를 들어 활성 화합물 약 0.05 중량％ 내지 약 95 중량％를 함유하는 정제로서 제제화된다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 다른 화합물을 비롯한 다른 약리학상 활성 성분이 또한 존재한다. 본 발명의 제약 화합물은 상기 성분들을 혼합하는 것을 필수적으로 포함하는 공지된 제약 기술로 제조된다.
바람직한 단위 투여량 제제는 조합물 중 하나 이상의 치료 화합물의, 하기 기재되는 바와 같은 유효량 또는 그의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
일반적으로, iNOS 선택적 억제제의 총 1일 투여량은 약 0.001 mg/체중 kg/일 내지 약 2500 mg/체중 kg/일의 범위이다. 성인을 위한 투여량 범위는 일반적으로 일일 당 약 0.005 mg 내지 약 10 g이다. 정제 또는 분리 단위를 제공하는 다른 제제 형태는 상기 투여량으로 또는 다중 동일 투여량으로 효과적인 치료 화합물 양을 편리하게 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서 사용되는 선택적 iNOS 억제 화합물은 5 mg 내지 500 mg, 및 전형적으로 대략 10 mg 내지 약 200 mg을 함유하는 단위로 존재할 수 있다.
일반적으로, iNOS 선택적 억제제와 조합되는 항미생물성 화합물로서, 성인을 위한 항생제 화합물의 총 일일 투여량은 일일 당 약 0.1 g 내지 일일 당 약 15 g의 범위이다. 전형적으로, 성인을 위한 총 일일 투여량은 일일 당 약 0.25 g 내지 일일 당 약 4 g의 범위이다.
일반적으로, iNOS 선택적 억제제와 조합되는 항미생물성 화합물로서, 성인을 위한 비스무쓰 화합물의 총 일일 투여량은 일일 당 약 100 mg 내지 일일 당 약 1000 mg, 및 전형적으로 약 500 mg/일의 범위이다.
일반적으로, iNOS 선택적 억제제와 조합되는 항분비성 화합물로서, 성인을 위한 H2 수용체 길항제 화합물의 총 일일 투여량은 일일 당 약 10 mg 내지 일일 당 약 1000 mg, 전형적으로는 약 300 mg/일 내지 약 800 mg/일의 범위이다.
일반적으로, iNOS 선택적 억제제와 조합되는 항분비성 화합물로서, 성인을 위한 양성자-펌프 억제제 화합물의 총 일일 투여량은 약 10 mg/일 내지 약 200 mg/일의 범위이다. 전형적으로, 총 일일 투여량은 오메프라졸 약 20 mg/일 내지 약 60 mg/일, 또는 란소프라졸 약 15 mg/일 내지 약 30 mg/일의 범위이다.
iNOS 선택적 억제제와 함께 항미생물제 및 항분비제의 조합물을 사용하는 이중 또는 삼중 요법이 또한 본 발명의 방법에 유용하다. 이중 요법에는, 예를 들어, 오메프라졸과 같은 항분비제와 클라리트로마이신 또는 아목시실린과 같은 항생제와의 조합물이 포함된다. 삼중 요법에는, 예를 들어, 메트로니다졸, 비스무쓰 화합물 및, 테트라시클린 또는 아목시실린의 투여가 포함된다. 본 발명의 방법에 유용한 또다른 삼중 요법은 라니티딘을 비스무쓰 화합물 및 항생제 화합물에 부가한 것이다.
치료 화합물의 제약상 허용되는 염의 경우에, 상기 나타내는 중량은 염으로부터 유래되는 치료 화합물의 산 등가 중량 또는 염기 등가 중량을 나타낸다.
본원에 기재된 방법에 대하여, 목적하는 생물학적 효과를 달성하는데 요구되는 선택적 iNOS 억제 화합물의 양은 선택된 특이적 개별 화합물 또는 화합물들, 특정 용도, 투여 경로, 대상체의 임상 증상, 및 대상체의 연령, 체중, 성 및 식이요법을 비롯한 다수의 인자에 의존적임을 이해할 것이다. 유사하게, 목적하는 생물학적 효과를 달성하는데 요구되는, 임의의 다른 치료제 또는 치료제들과 조합된 선택적 iNOS 억제 화합물의 총량은 선택된 특이적 개별 화합물 또는 화합물들, 특정 용도, 투여 경로, 대상체의 임상 증상, 및 대상체의 연령, 체중, 성 및 식이요법을 비롯한 다수의 인자에 의존적임을 이해할 것이다.
다양한 치료 화합물에 대해 상기 문단에서 기재한 일일 투여량은 단일 투여량으로 또는 비례하는 다중 하위투여량으로 투여된다. 하위투여량은 일일 당 2회 내지 6회 투여된다. 한 실시양태에서, 투여량은 목적하는 생물학적 효과를 얻기에 효과적인 지속 방출형으로 투여된다.
본 발명의 방법에 따른 경구 전달은 당업계에 공지된 바와 같이 임의의 수의 메카니즘에 따라 위장관에 약물을 지연 또는 지속 전달하는 제제를 포함할 수 있다. 이들에는, 이에 제한되지는 않지만, 소장 pH의 변화에 따른 투여 형태로부터의 pH 민감성 방출, 정제 또는 캡슐제의 느린 붕괴, 제제의 물성을 기초로 하는 위에서의 체류, 투여 형태의 소장관의 점막 내층으로의 생체접착, 또는 투여 형태로부터의 활성 약물의 효소적 방출이 포함된다.
본 발명의 방법에 따른 경구 전달은 고체, 반고체 또는 액체 투여 형태를 사용하여 달성될 수 있다. 적합한 반고체 및 액체 형태에는, 예를 들어, 시럽 또는 젤 캡슐제에 함유된 액체가 포함된다.
본 발명의 방법을 시행하기 위해, 경구 투여에 적합한 제약 조성물은 각각 본 발명의 방법에 유용한 1종 이상의 치료 화합물의 예정량을 함유하는 분리 단위, 예를 들어 캡슐제, 카세제, 로젠지제, 또는 정제로; 산제 또는 과립제로서; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액제 또는 현탁제로서; 또는 유중수 또는 수중유 에멀젼으로서 존재할 수 있다.
e. 실시양태의 예
하기의 비제한적인 실시예는 본 발명의 치료 방법을 시행하기에 적합한 다양한 제약 조성물을 설명하는 역할을 한다.
실시예 1: 제약 조성물
표 IV에 나타낸 조성물의 100 mg 정제를 습식 과립화 기술을 이용하여 경구 투여용으로 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 II 25
락토스 54
미세결정질 셀룰로스 15
히드록시프로필 메틸셀룰로스 3
크로스카르멜로스 나트륨 2
마그네슘 스테아레이트 1
총 정제 중량 100
실시예 2: 제약 조성물
표 V에 나타낸 조성물의 100 mg 정제를 직접 압착 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 I 25
미세결정질 셀룰로스 69.5
콜로이드성 이산화규소 0.5
활석 2.5
크로스카르멜로스 나트륨 0.5
마그네슘 스테아레이트 1
총 정제 중량 100
본 발명의 방법은 또한 선택적 iNOS 억제제를 항미생물제와 함께 또는 항미생물제들과 함께 사용하는 조합 요법, 선택적 iNOS 억제제를 항분비제와 함께 사용하는 조합 요법, 및 선택적 iNOS 억제제를 항미생물제 및 항분비제 둘다와 함께 사용하는 조합 요법을 고려한다.
실시예 3: 제약 조성물
표 VI에 나타낸 조성물의 100 mg 정제를 습식 과립화 기술을 이용하여 경구 투여용으로 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 II 5
오메프라졸 20
락토스 54
미세결정질 셀룰로스 15
히드록시프로필 메틸셀룰로스 3
크로스카르멜로스 나트륨 2
마그네슘 스테아레이트 1
총 정제 중량 100
실시예 4: 제약 조성물
표 VII에 나타낸 조성물의 100 mg 정제를 직접 압착 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 II 5
오메프라졸 20
미세결정질 셀룰로스 69.5
콜로이드성 이산화규소 0.5
활석 2.5
크로스카르멜로스 나트륨 0.5
마그네슘 스테아레이트 1
총 정제 중량 100
실시예 5: 제약 조성물
표 VIII에 나타낸 조성물의 150 mg 정제를 습식 과립화 기술을 이용하여 경구 투여용으로 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 II 5
아목시실린 50
락토스 65
미세결정질 셀룰로스 20
히드록시프로필 메틸셀룰로스 5
크로스카르멜로스 나트륨 3
마그네슘 스테아레이트 2
총 정제 중량 150
실시예 6: 제약 조성물
표 IX에 나타낸 조성물의 150 mg 정제를 직접 압착 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
성분 중량 (mg)
화합물 II 10
아목시실린 50
미세결정질 셀룰로스 81
콜로이드성 이산화규소 1.0
활석 5.0
크로스카르멜로스 나트륨 1.0
마그네슘 스테아레이트 2
총 정제 중량 150
본원에 기재된 실시예는 상기 실시예에서 사용된 치료 화합물 또는 비활성 성분을 일반적으로 또는 구체적으로 기재된 치료 화합물 또는 비활성 성분으로 대체함으로써 수행될 수 있다.
본원에 나타낸 설명 및 예시는 본 발명이 속하는 당업계의 업자들에게 그의 원리 및 그의 실제 사용을 알리고자 하는 것이다. 당업자들은 특정 용도의 요건에 가장 적합할 수 있도록 그의 다양한 형태를 개선하고 적용할 수 있다. 따라서, 본 발명에 제시된 특정 실시양태는 본 발명을 총망라한 것이거나 제한하려는 것은 아니다.

Claims (43)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 화학식 II의 상응하는 구조를 갖는 화합물, 화학식 III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X의 화합물, 화학식 XI의 2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노)]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로로, 화학식 XII, XIII, XIV 또는 XV의 화합물, 및 PPA250으로 이루어진 군으로부터 선택되는 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 선택적 억제제, 또는 상기 유도성 산화질소 신타제 억제제의 제약상 허용되는 염 또는 프로드럭의 항염증성 유효량을 유도성 산화질소 신타제에 의한 산화질소 (NO) 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서의 상기 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방 방법.
    <화학식 I>
    상기 식 중,
    R1은 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되나;
    단, R1 또는 R2 중 하나 이상은 할로를 함유하고;
    R7은 H 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    J는 히드록시, 알콕시 및 NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
    여기서, R3은 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R4는 H 및 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 상기 고리 중 하나 이상의 구성원은 탄소이고, 1 내지 약 4개의 헤테로원자는 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복스아미도알킬, 디카르복스아미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복스아미도시클로알킬, 디카르복스아미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있고;
    <화학식 II>
    상기 식 중,
    X는 -S-, -S(O)- 및 -S(O)2-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R12는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C 6 알키닐, C1-C5 알콕시-C1 알킬 및 C1-C5 알킬티오-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 이들 기들은 각각 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환되고,
    R18은 -OR24 및 -N(R25)(R26)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R13은 -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 및 -C(O)-S-R29로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R18은 -N(R30)-이고, R13은 -C(O)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R18은 -O-이고, R13은 -C(R31)(R32)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하고; 여기서 R13이 -C(R31)(R32)-인 경우, R14는 -C(O)-O-R33이거나; 다르게는, R14는 -H이고,
    R11, R15, R16 및 R17은 독립적으로 -H, 할로겐, C1-C 6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 C1-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로보터 선택되고,
    R19 및 R20은 독립적으로 -H, C1-C6 알킬, C2-C 6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 Cl-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R21은 -H, -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택되고, R22는 -H, -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R21은 -O-이고, R22는 -C(O)-인데, 여기서 R21과 R22가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하거나; R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21과 R22 가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하고,
    R23은 C1 알킬이고,
    R24는 -H 및 C1-C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 R24 가 C1-C6 알킬인 경우, R24는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환되고,
    R25는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R26은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 및 -C(O)-S-R40으로 이루어진 군으로부터 선택되는데; 여기서 R25 및 R26이 독립적으로 알킬 또는 알콕시인 경우, R25 및 R26은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기로 임의 치환되거나; R25는 -H이고; R26은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33 , R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환되고, 여기서 R11, R12, R13, R14, R15 , R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28 , R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40이 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기이며, 상기 잔기는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 III>
    상기 식 중,
    R41은 H 또는 메틸이고;
    R42는 H 또는 메틸이고;
    <화학식 IV>
    <화학식 V>
    상기 식 중,
    R43은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R44는 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R45는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이고;
    <화학식 VI>
    상기 식 중,
    R46은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 VII>
    상기 식 중,
    R47은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R48은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R49는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이고;
    <화학식 VIII>
    상기 식 중,
    R50은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
    <화학식 IX>
    상기 식 중,
    R50은 수소, 할로 및 Cl-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
    R51은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R52는 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R53은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R54는 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1 -C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 X>
    상기 식 중,
    R55는 C1-C5 알킬인데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 XI>
    <화학식 XII>
    상기 식 중,
    R79는 C1-4 알킬, C3-4 시클로알킬, C1-4 히드록시알킬 및 C 1-4 할로알킬로부터 선택되고;
    <화학식 XIII>
    <화학식 XIV>
    <화학식 XV>
    상기 식 중,
    A는 -R56, -OR56, C(O)N(R56)R57, P(O)[N(R56)R 57]2, -N(R56)C(O)R57, -N(R76)C(O)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(O)N(R56 )R71, -S(O)tR56, -SO2NHC(O)R56, -NHSO2R77,- SO2NH(R56)H, -C(O)NHSO2R77 또는 -CH=NOR56이고;
    각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 C(R19)이고;
    각각의 U는 N 또는 C(R60)이나, 단, X가 N이고 Z 및 Y가 CR74인 경우에만 U가 N이고;
    V는 N(R59), S, O 또는 C(R59)H이고;
    각각의 W는 N 또는 CH이고;
    Q는 직접 결합, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(O)t 및 -N(R61)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    m은 0 또는 1 내지 4의 정수이고;
    n은 0 또는 1 내지 3의 정수이고;
    q는 0 또는 1이고;
    r은 0 또는 1이나,
    단, Q 및 V가 헤테로원자인 경우, m, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
    A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR57, -N(R 56)R76, -N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (여기서, t는 0임) 또는 -NHSO2R77인 경우, n, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
    Q가 헤테로원자이고 A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR 57, -N(R56)R76, N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (t가 0인 경우) 또는 -NHS02R77인 경우, m 및 n은 둘다 0일 수는 없고;
    t는 0, 1 또는 2이고;
    은 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    는 임의 치환된 카르보시클릴 또는 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    각 R56 및 R57은 독립적으로 수소, 임의 치환된 Cl-C20 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, -[C0-C8 알킬]-R64, -[C2-C8 알케닐]-R 64, -[C2-C8 알키닐]-R64, -[C2-C8 알킬]-R65 (히드록시로 임의 치환됨), -[C1-C8]-R66 (히드록시로 임의 치환됨), 임의 치환된 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    R56과 R57은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    R58은 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 할로알킬, -[C1-C8 알킬]-C(O)N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2-C8 알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66 및 헤테로시클릴 (할로, 알킬, 알콕시 및 이미다졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Q가 -N(R58)- 또는 R58로의 직접 결합인 경우, R58은 추가로 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐 및 -C(=NR73)-NH2일 수 있거나;
    -Q-R58이 함께 -C(O)OH, -C(O)N(R56)R57 또는
    을 나타낼 수 있고;
    R59는 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬 및 시클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되나;
    단, A가 -R56 또는 -OR56인 경우, R59는 수소일 수 없고, V가 CH인 경우, R59는 추가로 히드록시일 수 있고;
    R60은 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬, 할로알킬, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 아릴, -OR71, -S(O)t-R71, N(R71)R76, N(R 71)C(O)N(R56)R71, N(R71)C(O)OR71, N(R71)C(O)R71, -[C0-C8 알킬]-C(H)[C(O)R71]2 및 -[C0-C8 알킬]-C(O)N(R56)R71로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R61은 수소, 알킬, 시클로알킬, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2 -C8]알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66, 아실, -C(O)R63, -C(O)-[C1-C8 알킬]-R63, 알콕시카르보닐, 임의 치환된 아릴옥시카르보닐, 임의 치환된 아르알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 알콕시카르보닐알킬, 카르복시알킬, 임의 치환된 아릴술포닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 임의 치환된 아릴아미노카르보닐, 아미노술포닐, 모노알킬아미노술포닐 디알킬아미노술포닐, 아릴아미노술포닐, 아릴술포닐아미노카르보닐, 임의 치환된 N-헤테로시클릴, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(O)R78-N(R56)R57, -C(O)-N(R56 )R78-C(O)OR56으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R63 및 R64는 독립적으로 할로알킬, 시클로알킬 (할로, 시아노, 알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨), 카르보시클릴 (할로, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨) 및 헤테로시클릴 (알킬, 아르알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨)로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    각각의 R65는 독립적으로 할로, 알콕시, 임의 치환된 아릴옥시, 임의 치환된 아르알콕시, 임의 치환된 -S(O)tR77, 아실아미노, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, (트리페닐메틸)아미노, 히드록시, 머캅토, 알킬술폰아미도로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R66은 독립적으로 시아노, 디(알콕시)알킬, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐 및 디알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R67, R68, R69, R70, R72 및 R75는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
    각각의 R71은 독립적으로 수소, 알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬 또는 시클로알킬이고;
    R73은 수소, NO2 또는 톨루엔술포닐이고;
    각각의 R74는 독립적으로 수소, 알킬 (히드록시로 임의 치환됨), 시클로프로필, 할로 또는 할로알킬이고;
    각각의 R76은 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, -C(O)R77 또는 -SO2R77이거나; R76은 R56 및, 이들이 부착된 질소와함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이거나; R76은 R71 및, 이들이 부착된 질소와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    각각의 R77은 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴 또는 임의 치환된 아르알킬이고;
    R78은 아미노산 잔기이다.
  2. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 소화성 궤양 질환, 위궤양, 십이지장 궤양, 위염, 회장염, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 마비성 장폐쇄증 및 설사로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 염증성 장 질환인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 크론병인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 궤양성 결장염인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위염인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 회장염인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 소화성 궤양인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위궤양인 방법.
  10. 제8항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 십이지장 궤양인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환 식도염인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위식도 역류성 질환인 방법.
  13. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 과민성 장 증후군인 방법.
  14. 제1항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 소화성 궤양 질환 및 위염으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제의 양 및 항미생물성 화합물의 양이 함께 위장관의 증상 또는 질환에 대한 유효량을 구성하는, 항미생물성 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 양을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 항미생물성 화합물이 항생제 화합물을 포함하는 방법.
  16. 제14항에 있어서, 항미생물성 화합물이 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 서브살리실레이트, 메트로니다졸 및 테트라시클린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 방법.
  17. 제1항에 있어서, 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제의 양 및 항분비성 화합물의 양이 함께 위장관의 증상 또는 질환에 대한 유효량을 구성하는, 항분비성 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 프로드럭의 양을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 벙법.
  18. 제17항에 있어서, 항분비성 화합물이 양성자-펌프 억제제를 포함하는 방법.
  19. 제17항에 있어서, 항분비성 화합물이 오메프라졸을 포함하는 방법.
  20. 제17항에 있어서, 항분비성 화합물이 H2 수용체 길항제를 포함하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 항분비성 화합물이 라니티딘을 포함하는 방법.
  22. 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제의 양 및 항생제 화합물의 양이 함께 위장관 증상 및 질환에 대한 유효량을 구성하는, 하기 화학식 I의 화합물, 화학식 II의 상응하는 구조를 갖는 화합물, 화학식 III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X의 화합물, 화학식 XI의 2S-아미노-6-[(1-이미노에틸)아미노)]-N-(1H-테트라졸-5-일)헥산아미드, 수화물, 디히드로클로로, 화학식 XII, XIII, XIV 또는 XV의 화합물, 및 PPA250으로 이루어진 군으로부터 선택되는 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 선택적 억제제, 또는 상기 유도성 산화질소 신타제 억제제의 제약상 허용되는 염 또는 프로드럭의 양, 및 항미생물성 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 양을 유도성 산화질소 신타제 (iNOS) 및 미생물 감염에 의한 산화질소 (NO) 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 유도성 산화질소 신타제 및 미생물 감염에 의한 산화질소 과생성을 포함하는 위장관의 증상 또는 질환의 치료 또는 예방 방법.
    <화학식 I>
    상기 식 중,
    R1은 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 H, 할로, 및 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되나;
    단, R1 또는 R2 중 하나 이상은 할로를 함유하고;
    R7은 H 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    J는 히드록시, 알콕시 및 NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
    여기서, R3은 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R4는 H 및 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 상기 고리 중 하나 이상의 구성원은 탄소이고, 1 내지 약 4개의 헤테로원자는 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복스아미도알킬, 디카르복스아미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복스아미도시클로알킬, 디카르복스아미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있고;
    <화학식 II>
    상기 식 중,
    X는 -S-, -S(O)- 및 -S(O)2-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R12는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C 6 알키닐, C1-C5 알콕시-C1 알킬 및 C1-C5 알킬티오-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 이들 기들은 각각 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환되고,
    R18은 -OR24 및 -N(R25)(R26)으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R13은 -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 및 -C(O)-S-R29로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R18은 -N(R30)-이고, R13은 -C(O)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R18은 -O-이고, R13은 -C(R31)(R32)-인데, 여기서, R18과 R13이 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하고; 여기서 R13이 -C(R31)(R32)-인 경우, R14는 -C(O)-O-R33이거나; 다르게는, R14는 -H이고,
    R11, R15, R16 및 R17은 독립적으로 -H, 할로겐, C1-C 6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 C1-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로보터 선택되고,
    R19 및 R20은 독립적으로 -H, C1-C6 알킬, C2-C 6 알케닐, C2-C6 알키닐 및 Cl-C5 알콕시-C1 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R21은 -H, -OH, -C(O)-O-R34 및 -C(O)-S-R35로 이루어진 군으로부터 선택되고, R22는 -H, -OH, -C(O)-O-R36 및 -C(O)-S-R37로 이루어진 군으로부터 선택되거나; R21은 -O-이고, R22는 -C(O)-인데, 여기서 R21과 R22가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하거나; R21은 -C(O)-이고, R22는 -O-인데, 여기서 R21과 R22 가 이들이 부착되는 원자와 함께 고리를 형성하고,
    R23은 C1 알킬이고,
    R24는 -H 및 C1-C6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 R24 가 C1-C6 알킬인 경우, R24는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환되고,
    R25는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R26은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 및 -C(O)-S-R40으로 이루어진 군으로부터 선택되는데; 여기서 R25 및 R26이 독립적으로 알킬 또는 알콕시인 경우, R25 및 R26은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기로 임의 치환되거나; R25는 -H이고; R26은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33 , R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 임의 치환되고, 여기서 R11, R12, R13, R14, R15 , R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28 , R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 및 R40이 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기이며, 상기 잔기는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 III>
    상기 식 중,
    R41은 H 또는 메틸이고;
    R42는 H 또는 메틸이고;
    <화학식 IV>
    <화학식 V>
    상기 식 중,
    R43은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R44는 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R45는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이고;
    <화학식 VI>
    상기 식 중,
    R46은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 VII>
    상기 식 중,
    R47은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R48은 수소, 할로, C1-C5 알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1-C5 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    R49는 C1-C5 알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C1 -C5 알킬이고;
    <화학식 VIII>
    상기 식 중,
    R50은 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
    <화학식 IX>
    상기 식 중,
    R50은 수소, 할로 및 Cl-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;
    R51은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R52는 C1-C5 알킬인데, 상기 Cl-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R53은 수소, 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시에 의해 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    R54는 할로 및 C1-C5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 상기 C1 -C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 X>
    상기 식 중,
    R55는 C1-C5 알킬인데, 상기 C1-C5 알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로에 의해 임의 치환되고;
    <화학식 XI>
    <화학식 XII>
    상기 식 중,
    R79는 C1-4 알킬, C3-4 시클로알킬, C1-4 히드록시알킬 및 C 1-4 할로알킬로부터 선택되고;
    <화학식 XIII>
    <화학식 XIV>
    <화학식 XV>
    상기 식 중,
    A는 -R56, -OR56, C(O)N(R56)R57, P(O)[N(R56)R 57]2, -N(R56)C(O)R57, -N(R76)C(O)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(O)N(R56 )R71, -S(O)tR56, -SO2NHC(O)R56, -NHSO2R77,- SO2NH(R56)H, -C(O)NHSO2R77 또는 -CH=NOR56이고;
    각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 N 또는 C(R19)이고;
    각각의 U는 N 또는 C(R60)이나, 단, X가 N이고 Z 및 Y가 CR74인 경우에만 U가 N이고;
    V는 N(R59), S, O 또는 C(R59)H이고;
    각각의 W는 N 또는 CH이고;
    Q는 직접 결합, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(O)t 및 -N(R61)-로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    m은 0 또는 1 내지 4의 정수이고;
    n은 0 또는 1 내지 3의 정수이고;
    q는 0 또는 1이고;
    r은 0 또는 1이나,
    단, Q 및 V가 헤테로원자인 경우, m, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
    A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR57, -N(R 56)R76, -N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (여기서, t는 0임) 또는 -NHSO2R77인 경우, n, q 및 r 모두가 0일 수는 없고;
    Q가 헤테로원자이고 A가 -OR56, N(R56)C(O)R57, -N(R71)C(O)OR 57, -N(R56)R76, N(R71)C(O)N(R56)R71, -S(O)tR56 (t가 0인 경우) 또는 -NHS02R77인 경우, m 및 n은 둘다 0일 수는 없고;
    t는 0, 1 또는 2이고;
    은 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    는 임의 치환된 카르보시클릴 또는 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    각 R56 및 R57은 독립적으로 수소, 임의 치환된 Cl-C20 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, -[C0-C8 알킬]-R64, -[C2-C8 알케닐]-R 64, -[C2-C8 알키닐]-R64, -[C2-C8 알킬]-R65 (히드록시로 임의 치환됨), -[C1-C8]-R66 (히드록시로 임의 치환됨), 임의 치환된 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    R56과 R57은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    R58은 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 할로알킬, -[C1-C8 알킬]-C(O)N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-N(R56)R57, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2-C8 알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66 및 헤테로시클릴 (할로, 알킬, 알콕시 및 이미다졸릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Q가 -N(R58)- 또는 R58로의 직접 결합인 경우, R58은 추가로 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐 및 -C(=NR73)-NH2일 수 있거나;
    -Q-R58이 함께 -C(O)OH, -C(O)N(R56)R57 또는
    을 나타낼 수 있고;
    R59는 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬 및 시클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되나;
    단, A가 -R56 또는 -OR56인 경우, R59는 수소일 수 없고, V가 CH인 경우, R59는 추가로 히드록시일 수 있고;
    R60은 수소, 알킬, 아릴, 아르알킬, 할로알킬, 임의 치환된 아르알킬, 임의 치환된 아릴, -OR71, -S(O)t-R71, N(R71)R76, N(R 71)C(O)N(R56)R71, N(R71)C(O)OR71, N(R71)C(O)R71, -[C0-C8 알킬]-C(H)[C(O)R71]2 및 -[C0-C8 알킬]-C(O)N(R56)R71로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R61은 수소, 알킬, 시클로알킬, -[C1-C8 알킬]-R63, -[C2 -C8]알킬]-R65, -[C1-C8 알킬]-R66, 아실, -C(O)R63, -C(O)-[C1-C8 알킬]-R63, 알콕시카르보닐, 임의 치환된 아릴옥시카르보닐, 임의 치환된 아르알콕시카르보닐, 알킬술포닐, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 알콕시카르보닐알킬, 카르복시알킬, 임의 치환된 아릴술포닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, 임의 치환된 아릴아미노카르보닐, 아미노술포닐, 모노알킬아미노술포닐 디알킬아미노술포닐, 아릴아미노술포닐, 아릴술포닐아미노카르보닐, 임의 치환된 N-헤테로시클릴, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(O)R78-N(R56)R57, -C(O)-N(R56 )R78-C(O)OR56으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R63 및 R64는 독립적으로 할로알킬, 시클로알킬 (할로, 시아노, 알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨), 카르보시클릴 (할로, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 임의 치환됨) 및 헤테로시클릴 (알킬, 아르알킬 또는 알콕시로 임의 치환됨)로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    각각의 R65는 독립적으로 할로, 알콕시, 임의 치환된 아릴옥시, 임의 치환된 아르알콕시, 임의 치환된 -S(O)tR77, 아실아미노, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, (트리페닐메틸)아미노, 히드록시, 머캅토, 알킬술폰아미도로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R66은 독립적으로 시아노, 디(알콕시)알킬, 카르복시, 알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 모노알킬아미노카르보닐 및 디알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R67, R68, R69, R70, R72 및 R75는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
    각각의 R71은 독립적으로 수소, 알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬 또는 시클로알킬이고;
    R73은 수소, NO2 또는 톨루엔술포닐이고;
    각각의 R74는 독립적으로 수소, 알킬 (히드록시로 임의 치환됨), 시클로프로필, 할로 또는 할로알킬이고;
    각각의 R76은 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 아르알킬, -C(O)R77 또는 -SO2R77이거나; R76은 R56 및, 이들이 부착된 질소와함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이거나; R76은 R71 및, 이들이 부착된 질소와 함께 임의 치환된 N-헤테로시클릴이고;
    각각의 R77은 독립적으로 알킬, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴 또는 임의 치환된 아르알킬이고;
    R78은 아미노산 잔기이다.
  23. 제22항에 있어서, 항미생물성 화합물이 항생제 화합물을 포함하는 방법.
  24. 제22항에 있어서, 항미생물성 화합물이 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 서브살리실레이트, 메트로니다졸 및 테트라시클린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 방법.
  25. 제22항에 있어서, 유도성 산화질소 신타제 선택적 억제제의 양, 항생제 화합물의 양 및 항분비성 화합물의 양이 함께 위장관의 증상 또는 질환에 대한 유효량을 구성하는, 항분비성 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 프로드럭의 양을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 항분비성 화합물이 양성자-펌프 억제제를 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 항분비성 화합물이 오메프라졸을 포함하는 방법.
  28. 제25항에 있어서, 항분비성 화합물이 H2-수용체 길항제를 포함하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 항분비성 화합물이 라니티딘을 포함하는 방법.
  30. 제22항에 있어서, 항미생물성 화합물이 아목시실린, 클라리트로마이신, 리파부틴, 비스무쓰 서브살리실레이트, 메트로니다졸 및 테트라시클린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개의 화합물의 조합으로 이루어지는 2중 항미생물성 조성물을 포함하는 방법.
  31. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 소화성 궤양 질환, 위궤양, 십이지장 궤양, 식도염, 위염, 회장염, 결장염, 위식도 역류성 질환, 과민성 장 증후군, 과민성 장 증후군, 마비성 장폐쇄증 및 설사로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  32. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 염증성 장 질환인 방법.
  33. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 크론병인 방법.
  34. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 궤양성 결장염인 방법.
  35. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 소화성 궤양 질환인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위궤양인 방법.
  37. 제35항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 십이지장 궤양인 방법.
  38. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위염인 방법.
  39. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 회장염인 방법.
  40. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 결장염인 방법.
  41. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 식도염인 방법.
  42. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 위식도 역류성 질환인 방법.
  43. 제22항에 있어서, 위장관의 증상 또는 질환이 과민성 장 증후군인 방법.
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