MXPA05001255A - Metodos para el tratamiento y prevencion de condiciones gastrointestinales. - Google Patents

Metodos para el tratamiento y prevencion de condiciones gastrointestinales.

Info

Publication number
MXPA05001255A
MXPA05001255A MXPA05001255A MXPA05001255A MXPA05001255A MX PA05001255 A MXPA05001255 A MX PA05001255A MX PA05001255 A MXPA05001255 A MX PA05001255A MX PA05001255 A MXPA05001255 A MX PA05001255A MX PA05001255 A MXPA05001255 A MX PA05001255A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
alkyl
optionally substituted
group
halo
alkoxy
Prior art date
Application number
MXPA05001255A
Other languages
English (en)
Inventor
Pamela T Manning
Original Assignee
Pharmacia Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmacia Corp filed Critical Pharmacia Corp
Publication of MXPA05001255A publication Critical patent/MXPA05001255A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • C07D257/06—Five-membered rings with nitrogen atoms directly attached to the ring carbon atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-aminoacids, e.g. alanine, edetic acids [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/02—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D223/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D223/12—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical

Abstract

Se describen metodos terapeuticos par ala prevencion y el tratamiento de condiciones y enfermedades del tracto gastrointestinal que involucran una sobreproduccion de oxido nitrico mediante una sintasa de oxido nitrico inducible, los metodos incluyen la administracion a un sujeto que necesite de al misma una cantidad terapeuticamente efectiva de un inhibidor selectivo de sintasa de oxido nitrico inducible (INOS). Los metodos tambien incluyen el uso de inhibidores selectivos de INOS en combinacion con otros agentes terapeuticos, incluyendo agentes antimicrobianos y agentes antisecretores.

Description

METODOS PASA EL TRATAMIENTO Y PREVENCION DE CONDICIONES GASTROINTESTINALES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere en general a métodos para tratar enfermedades y dolencias gastrointestinales, y más en particular a nuevos métodos de tratamiento y prevención de dolencias y enfermedades del tracto gastrointestinal, incluyendo ulceración, que implican una sobreproducción de óxido nítrico. La enfermedad de úlcera péptica es una dolencia inflamatoria crónica del estómago y el duodeno que afecta a aproximadamente el 10% de la población de los Estados Unidos en algún momento de su vida. Aunque la enfermedad de úlcera péptica no tiene un alto índice de mortalidad, tiene no obstante un alto coste económico y produce como resultado un grave malestar en un amplio número de personas. Otras formas de inflamación crónica en el tracto gastrointestinal (G.i) superior, como la gastritis superficial y la esofagitis, tienen también como resultado un sufrimiento humano importante. Hasta fechas recientes, los métodos de tratamiento se centraban en el control de la dieta y los factores relacionados con el estrés, en la convicción de que la enfermedad G.l. superior era principalmente resultante de la secreción excesiva de líquidos digestivos como ácido gástrico. El método de elección era la terapia con antiácidos. En 1971, se identificó por primera vez un subtipo del receptor de histamina, el receptor H2, y se creyó que era el mediador primario de la secreción de ácido gástrico. Comenzó a disponerse de antagonistas de receptor H2 y se encontró que constituían una terapia segura y eficaz para la enfermedad de úlcera péptica. Más tarde, otros agentes que potencian la defensa de la mucosa péptica, entre ellos inhibidores de la bomba de protones, compuestos de bismuto, sucralfato y prostaglandinas, demostraron ser agentes seguros y eficaces para el tratamiento. Sin embargo, incluso con un tratamiento completamente eficaz, la enfermedad de úlcera péptica ha mantenido un alto índice de recurrencia. En 1982, se aisló por primera vez la bacteria Helicobacter pylori (H. pylori) a partir de la estrecha interfaz entre la superficie celular epitelial gástrica y la capa de gel mucoso superpuesta. Más tarde se identificó H. pylori en sí y hoy se sabe también que es un patógeno importante implicado en la ulceración gastroduodenal y la carcinogénésis. Mientras que la patología de la infección por H. pylori que conduce a inflamación y ulceración todavía no se conoce bien, al menos dos mecanismos posibles invocan el efecto de H. pylori en niveles de radicales de oxígeno. H. pylori puede aumentar los niveles de radicales de oxígeno induciendo la liberación de radicales de oxígeno a partir de neutrófilos que infiltran el epitelio gástrico inflamado, o induciendo la producción de radicales de oxígeno directamente en el epitelio gástrico. En cualquier caso, los niveles potenciados de radicales de oxígeno podrían potenciar el daño en las membranas celulares. Mientras que aún no se ha establecido una relación causal entre H. pylorí y la enfermedad de úlcera péptica, la bacteria está claramente relacionada en sentido causal con la gastritis superficial. Casi todos los pacientes que dan positivo para H. pylorí muestran gastritis antral, y la eliminación de la infección por H. pylorí resuelve la gastritis. La gastritis superficial crónica se produce en modelos de animales mediante administración intragástrica de H. pylorí, y se ha informado de que al menos dos personas han desarrollado gastritis después de la administración oral de la bacteria. La evidencia más poderosa de un vínculo causal entre H. pylorí y la enfermedad de úlcera péptica es un descenso sustancial en el índice de recurrencia después de la erradicación de la infección por H. pylorí. Aunque el descenso no se ha establecido tan bien para úlceras gástricas como para úlceras duodenales, la evidencia disponible sugiere un efecto similar. En general, la relación entre infección por H. pylori y enfermedad de úlcera péptica ha sido más difícil de establecer, tal vez porque la enfermedad de úlcera péptica carece de un modelo animal adecuado, y porque sólo una pequeña fracción de personas infectadas desarrolla realmente la ulceración. Así, en pacientes con gastritis, y pacientes con enfermedad de úlcera péptica que dan positivo para H. pylori, la terapia incluye comúnmente en la actualidad administración de antimicrobianos. Sin embargo, la continua carencia de un modelo animal adecuado para la enfermedad de úlcera péptica ha limitado la capacidad de evaluar terapias antimicrobianas potenciales. Los datos sobre la eficacia de la terapia antimicrobiana dependen, por tanto, en gran medida de las pruebas limitadas que se han realizado en seres humanos, y en la actualidad están evolucionando. Así, no existe un único patrón de terapia antimicrobiana en el caso de enfermedad de úlcera péptica, y en su lugar la elección de regímenes terapéuticos antimicrobianos varía, teniendo necesariamente en cuenta una variedad de factores entre los que se incluyen la eficacia, el cumplimiento, los efectos secundarios y el coste. Entre los agentes que se han estudiado y empleado se incluyen metronidazol, tetraciclina, amoxicilina, claritromicina, rifabutina, compuestos de bismuto, antagonistas de receptor H2 e inhibidores de la bomba de protones, solos o en combinación unos con otros. Hoy se conoce que el óxido nítrico (NO) es el factor responsable de las reacciones inflamatorias en numerosos tejidos corporales. El óxido nítrico es el factor responsable del fenómeno de la relajación vascular dependiente del endotelio que se describió por primera vez en la década de 1980. Desde entonces, se ha revelado la biosíntesis de NO por la enzima óxido nítrico sintasa (NOS), y hoy se sabe que el NO se sintetiza a partir del aminoácido L-arginina por NOS. Sin embargo, el óxido nítrico no está presente exclusivamente en el endotelio vascular sino que, al contrario, se genera en muchos tejidos diferentes como respuesta a diversos estímulos, y parece jugar diferentes roles fisiológicos. Además de la relajación vascular dependiente del endotelio, el NO participa en numerosas acciones biológicas incluyendo, por ejemplo, citotoxicidad de células fagocíticas y comunicación intercelular en el sistema nervioso central. El óxido nítrico es también un estimulador endógeno de la guanilato ciclasa soluble. Un grupo creciente de evidencias implica al NO en la degeneración de cartílago que tiene lugar como resultado de ciertas dolencias como la artritis, y la síntesis aumentada de NO se asocia con artritis reumatoide y osteoartritis. El rol preciso del NO en cualquier tejido dado bajo condiciones dadas parece estar estrechamente ligado a la isoforma particular de óxido nítrico sintasa que genera el NO. Existen al menos tres tipos de NO, que son: (i) Una enzima constitutiva dependiente de Ca++/calmodulina, situada en el endotelio (en lo sucesivo, "eNOS"), que libera NO como respuesta a un receptor o a estimulación física. (¡i) Una enzima constitutiva dependiente de Ca^/calmodulina, situada en el encéfalo (en lo sucesivo, "nNOS"), que libera NO como respuesta a un receptor o a estimulación física. (iii) Una enzima independiente de Ca++ que se induce después de activación de músculo liso vascular, macrófagos, células endoteliales y una serie de otras células por endotoxina y citoquinas. Una vez expresada, esta óxido nítrico sintasa inducible (en lo sucesivo, "¡NOS") genera NO continuamente durante largos períodos. El NO liberado por cada una de las dos enzimas constitutivas actúa como un mecanismo de transducción subyacente a varias respuestas fisiológicas. En contraste, el NO producido por la enzima inducible es una molécula citotóxica para células tumorales, bacterias, virus y parásitos, y es así un componente de defensas del huésped contra cánceres y microorganismos invasores. Sin embargo, también parece que los efectos adversos de producción de NO, en particular vasodilatación patológica y daño tisular, puede provocarse principalmente por el NO sintetizado por ¡NOS. Las grandes cantidades de NO producidas por ¡NOS son perjudiciales para los tejidos al producir peroxinitrilo resultante de la reacción de NO con superóxido. En el sistema digestivo, la actividad aumentada de ¡NOS asociada a la inflamación gastroduodenal puede vincularse a daño tisular que conduce a ulceración. La actividad aumentada de ¡NOS puede contribuir al daño tisular observado con infección por H. pylori de células epiteliales gástricas. La actividad aumentada de ¡NOS se observa en pacientes con úlceras duodenales positivas para H. pylori. La apoptosis, o muerte celular programada, es inducida por NO en varios sistemas celulares, y la infección por H. pylori tiene como resultado la apoptosis de células epiteliales gástricas. Los niveles aumentados de expresión de ¡NOS y la apoptosis de células epiteliales gástricas se han asociado a infección por H. pylori. Así, niveles crónicamente altos de NO debidos a expresión aumentada de iNOS pueden estar implicados en la apoptosis gástrica inducida por H. pylori. Se conocen inhibidores selectivos y no selectivos de NOS. Más en concreto, algunos de los inhibidores de la NO sintasa propuestos para uso terapéutico son no selectivos, en el sentido de que inhiben tanto las NO sintasas constitutivas como las inducibles. El uso de un inhibidor de NO sintasa no selectivo requiere por tanto que se adopte gran precaución con el fin de evitar los efectos adversos potencialmente graves de la sobreinhibición de la NO-sintasa constitutiva. Entre dichos efectos adversos se incluye hipertensión y posible trombosis y daño tisular. Por ejemplo, en el caso del uso terapéutico del inhibidor de NOS L-NMMA para el tratamiento de shock tóxico se ha recomendado que se someta al paciente a una monitorización continua de la presión arterial durante todo el tratamiento. En particular, el uso de un inhibidor de NOS no selectivo que interfiera sustancialmente en la actividad de eNOS puede poner al paciente en riesgo de sufrir daño en las células epiteliales, incluidas las células epiteliales gástricas, para conducir a una posible hemorragia gástrica. Así, mientras los métodos de tratamiento y prevención de dolencias inflamatorias que usan inhibidores de NO sintasa no selectivos pueden tener utilidad terapéutica siempre que se adopten las precauciones adecuadas, los métodos que usan inhibidores selectivos de NO sintasa, es decir, compuestos que inhiben la NO sintasa inducible en una magnitud considerablemente mayor que las isoformas constitutivas de NO sintasa, tendrían todavía mayor beneficio terapéutico y más facilidad de puesta en práctica (S. Moneada y E. Higgs, FASEB J., 9, 1319-1330, 1995). Las siguientes publicaciones individuales desvelan compuestos que inhiben la síntesis de óxido nítrico e inhiben preferentemente la isoforma inducible de la óxido nítrico sintasa: Solicitud de patente PCT n° WO 96/35677. Solicitud de patente PCT n° WO 96/33175. Solicitud de patente PCT n° WO 96/15120. Solicitud de patente PCT n° WO 95/11014. Solicitud de patente PCT n° WO 95/11231. Solicitud de patente PCT n° WO 99/46240. Solicitud de patente PCT n° WO 95/24382. Solicitud de patente PCT n° WO 94/12165. Solicitud de patente PCT n° WO 94/14780. Solicitud de patente PCT n° WO 93/13055. Solicitud de patente PCT n° WO 99/62875. Patente europea n° EP0446699A1. Patente de EE.UU. n° 5.132.453. Patente de EE.UU. n° 5.684.008. Patente de EE.UU. n° 5.830.917. Patente de EE.UU. n° 5.854.251. Patente de EE.UU. n° 5.863.931. Patente de EE.UU. n° 5.9 9.787. Patente de EE.UU. n° 5.945.408. Patente de EE.UU. n° 5.981.511. La patente de EE.UU. n° 6.586.474 desvela ciertos derivados de amidino como útiles en la inhibición de la óxido nítrico sintasa. La solicitud de patente PCT n° WO 99/62875 desvela más compuestos de amidino como útiles en la inhibición de la óxido nítrico sintasa. Frente a estos antecedentes, se ha desarrollado un interés creciente en la identificación de nuevos métodos para tratar dolencias y enfermedades del tracto gastrointestinal incluyendo, pero sin limitarse a ellas, la enfermedad de úlcera péptica y la gastritis. Existe también un gran interés en la identificación de métodos que usan combinaciones de dosis bajas de dos o más agentes, cada uno de ellos con diferentes modos de acción, de manera que la eficacia global del tratamiento se mejora a la vez que se reducen al mínimo la toxicidad y los efectos secundarios adversos. Por tanto, sería ventajoso identificar y describir nuevos métodos para tratar y prevenir dolencias y enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal que incluyan el uso de nuevos inhibidores selectivos ¡NOS. También sería ventajoso identificar y describir métodos que usen combinaciones de inhibidores selectivos ¡NOS con otros agentes como los antimicrobianos para mantener o mejorar la eficacia de cada agente en la prevención y el tratamiento de dolencias y enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se describen métodos que tendrán la ventaja de ser eficaces en el tratamiento y prevención de dolencias y enfermedades del tracto gastrointestinal que implican una sobreproducción de óxido nítrico por ¡NOS, usando nuevos compuestos que actúan como inhibidores selectivos ¡NOS. En un aspecto amplio, la presente invención se dirige a métodos de uso de nuevos compuestos y composiciones farmacéuticas para tratar o prevenir dolencias o enfermedades del tracto gastrointestinal que implican una sobreproducción de NO por ¡NOS, en un sujeto necesitado de dicho tratamiento o prevención, por administración al sujeto de una cantidad antiinflamatoria eficaz de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible se selecciona del fórmula I: I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R1 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; R2 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; con la salvedad de que al menos uno de R1 o R2 contiene un halo; R7 se selecciona del grupo constituido por H e hidroxi; J se selecciona del grupo constituido por hidroxi, alcoxi y NR3R4 en el que: selecciona del grupo constituido por H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; - R4 se selecciona del grupo constituido por H, y un anillo heterocíclico en el que al menos un eslabón del anillo es carbono y en el que de 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionad independientemente entre oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede estar opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, haloalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquil amidosulfonilo, dialquil amidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquil monoaril amidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoílo, alquenoílo, aroílo, heteroaroílo, aralcanoílo, heteroaralcanoílo, haloalcanoílo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilendioxi, haloalquilendioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halo, haloalquilo, haloalcoxi, hidroxihaloalqulio, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidroxiheteroaralquilo, haloalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterocicliclo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la Fórmula II: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X se selecciona del grupo constituido por -S-, -S(O)- y -S(0)2-. Preferentemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo constituido por alquilo C C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alcoxi CrC5-alquilo Ci y alquiltio Ci-C5-alquilo Ci, en el que cada uno de estos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. Preferentemente, R12 es alquilo C C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. En lo que respecta a R13 y R 8, R18 se selecciona del grupo constituido por -OR24 y -N(R25)(R26), y R13 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(O)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. Si R13 es -C(R3 )(R32)-, entonces R14 es -C(0)-0-R33; en caso contrario, R14 es -H. R11, R15, R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, halógeno, alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi C-i-Cs-alquilo C1. R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, alquilo C-1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi d-Cs-alquilo C1. En lo que respecta a R21 y R22, R2 se selecciona del grupo constituido por-H, -OH, -C(O)-O-R34 y -C(0)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(O)-O-R36 y -C(O)-S-R37; o R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. R23 es alquilo C-i. R24 se selecciona del grupo constituido por -H y alquilo C-t-Ce, en el que cuando R24 es alquilo C1-C-6, R24 está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. En lo que respecta a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo constituido por -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(O)-S-R40; en el que cuando R25 y R26 son independientemente alquilo o alcoxi, R25 y R26 están independientemente opcionalmente sustituidos por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo constituido por cicloaiquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo, en el que alquilo está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloaiquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, p25 p26 p27 ^28 p29 p^30 ^31 p32 p33 p34 ^35 p36 37 p38 p39 y ^40 eg independientemente una fracción seleccionada del grupo constituido por alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloaiquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la fracción está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto que tiene la Fórmula III: m o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R41 es H o metilo; y R42 es H o metilo; un compuesto que tiene la Fórmula IV: IV o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un compuesto que tiene la Fórmula V: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R43 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo Ci-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R44 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R45 es alquilo CrC5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula VI: Vi o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R46 es alquilo G1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula VII: Vil o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R47 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C-1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R48 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R49 es alquilo C1-C5 y alquilo C-1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula VIII: VIH o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R50 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula IX: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R50 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C-1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R51 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R52 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R53 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y R54 se selecciona del grupo constituido por halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula X: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R55 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y un compuesto de Fórmula XI: Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-iminoetil)amino]-N-(1 H-tetrazol-5-ií) hexanamida hidratado o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las dolencias o enfermedades del tracto gastrointestinal que se tratan o previenen usando los métodos de la presente invención incluyen, sin limitación, enfermedad inflamatoria intestinal que incluye enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica que incluye ulceración gástrica y ulceración duodenal, gastritis, colitis, ileítis, esofagitis, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable, íleo paralítico y diarrea. Los métodos de la presente invención incluyen también métodos para el tratamiento o prevención de dolencias o enfermedades del tracto gastrointestinal que implican una sobreproducción de óxido nítrico (NO) por óxido nítrico sintasa inducible (¡NOS) e infección microbiana, en un sujeto necesitado de dicho tratamiento o prevención, en los que el método incluye la administración al sujeto de una cantidad de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, y una cantidad de un compuesto antimicrobiano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que la cantidad de inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible y la cantidad del compuesto antibiótico constituyen conjuntamente una cantidad eficaz contra dolencias y enfermedades del tracto gastrointestinal, y el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible se selecciona del grupo constituido por: un compuesto que tiene la fórmula I: l o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: R1 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; R2 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; ( con la salvedad de que al menos uno de R1 o R2 contiene un halo; R7 se selecciona del grupo constituido por H e hidroxi; J se selecciona del grupo constituido por hidroxi, alcoxi y NR3R4 en el que: R3 se selecciona del grupo constituido por H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo constituido por H, y un anillo heterocíclico en el que al menos un eslabón del anillo es carbono y en el que de 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente entre oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede estar opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, haloalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquil amidosulfonilo, dialquil amidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilam'idosulfonilo, monoalquil monoaril amidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoílo, alquenoílo, aroílo, heteroaroílo, aralcanoílo, heteroaralcanoílo, haloalcanoílo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilendioxi, haloalquilendioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halo, haloalquilo, haloalcoxi, hidroxihaloalqulio, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidroxiheteroaralquilo, haloalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterocicliclo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicícloalquiio, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, dlaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, . diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la Fórmula II: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X se selecciona del grupo constituido por -S-, -S(O)- y -S(0)2- Preferentemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo constituido por alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6l alcoxi C-i-Cs-alquilo C1 y alquiltio Ci-C5-alquiIo C1, en el que cada uno de estos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. Preferentemente, R12 es alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. En lo que respecta a R13 y R18, R18 se selecciona del grupo constituido por -OR24 y -N(R25)(R26), y R13 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(O)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. Si R13 es -C(R31)(R32)-, entonces R14 es -C(0)-0-R33; en caso contrario, R14 es -H. R1 , R15, R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, halógeno, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi C-i-C5-alquilo C1. R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi C-i-Ce-alquilo C1. En lo que respecta a R21 y R22, R21 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R34 y -C(0)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R36 y -C(0)-S-R37; o R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. R23 es alquilo Ci. R24 se selecciona del grupo constituido por -H y alquilo C1-C6, en el que cuando R24 es alquilo C1-C6, R24 está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. En lo que respecta a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo constituido por -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(0)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(0)-S-R40; en el que cuando R25 y R26 son independientemente alquilo o alcoxi, R25 y R26 están independientemente opcionalmente sustituidos por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo, en el que alquilo está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R11, R12, R13, R14, R15, R 6, R17, R18, R19, R20, R2 , R22, R23, R24, ^25 p26 p27 p28 p29 p30 p31 p32 p33 p34 p35 p36 p37 p38 p39 y p40 eg independientemente una fracción seleccionada del grupo constituido por alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la fracción está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto representado por la Fórmula III: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R4 es H o metilo; y R42 es H o metilo; un compuesto de Fórmula IV: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un compuesto de Fórmula V: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R43 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R44 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R45 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi más halo; un compuesto de Fórmula VI: VI o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R46 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto que tiene la Fórmula VII: VII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R47 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R48 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R49 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto de Fórmula VIII: VIII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R50 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula IX: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R50 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R51 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R53 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y R54 se selecciona del grupo constituido por halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula X: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R55 es alquilo C-1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo. En otro compuesto ilustrativo, el inhibidor selectivo de la óxido nítrico sintasa inducible es el compuesto que tiene la fórmula XI, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto XI se ha descrito anteriormente en la Publicación Internacional n° 00/26195 publicada el 11 de mayo de 2000, que se incorpora como referencia en la presente memoria descriptiva.
Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-iminoetil)am¡no]-N-(1 H-tetrazol- 5-il) hexanamida hidratado La invención contempla asimismo el uso de otros inhibidores ¡NOS selectivos. Por ejemplo, inhibidores selectivos ¡NOS también útiles en la presente invención se describen en la patente de EE.UU. n° 6.355.689, Beswick y col., presentada el 29 de noviembre de 2000 y concedida el 12 de marzo de 2002, que describe y reivindica un inhibidor ¡NOS selectivo con la en la que R se selecciona entre alquilo C1-C4, cicloalquilo C3- C4, hidroxialquilo C1-C4 y haloalquiio Ci-C4. La descripción de la patente de EE.UU. n° 6.355.689 establece que R79 es preferentemente alquilo C1-C4, y más preferentemente metilo. Entre las formas de realización específicas desveladas en la patente de EE.UU. n° 6.355.689 y adecuadas para su uso en los presentes métodos y composiciones se incluyen: S-((R)-2-(1-im¡noetilamino)propil)-L-cisteína; S-((S)-2-(1-iminoetilam¡no)propil)-L-c¡steína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil)-L-cisteína; S-((R)-2-(1 -iminoet¡Iamino)propil)-D-c¡steína; S-((S)-2-(1-iminoet¡Iamino)propil)-D-cisteína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilam¡no)propil)-D-cisteína; S-((R/S)-2-(1-im¡noetilamino)butil)-L-c¡steína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino,2-ciclopropil)etil)-L-cisteína; y S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino,3-hidroxi)prop¡l)-L-cisteína, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato o un derivado fisiológicamente funcional de las mismas. Se cree que los inhibidores ¡NOS selectivos anteriores actúan en competición con arginina como un sustrato para la enzima ¡NOS. Otra estrategia para la inhibición de ¡NOS ha sido descrita por Arnaiz y col. en la solicitud de patente internacional número PCT/US98/03176, número de publicación WO 98/37079 (Berlex Laboratories, Inc., Richmond, CA 94804-0099 y Pharmacopeia, Inc. Princeton, NJ 08540), publicada el 27 de agosto de 1998 (Arnaiz). La solicitud de Arnaiz describe inhibidores de dimerización de monómeros ¡NOS. La enzima ¡NOS es un homodímero; cada monómero tiene un dominio reductasa, que incorpora sitios de unión para cofactores de flavina (FAD y FMN) y para NADPH. El dominio reductasa suministra electrones al dominio oxidasa del otro monómero, en el que la L-arginina se oxida en el sitio activo, que incorpora un dominio P-450 de citocromo de grupo hemo (Fe). La tetrahidrobiopterina (BH4) se requiere para homodimerización y modula el estado redox de hemo durante la transferencia de electrones. Los monómeros iNOS son inactivos, y para su actividad se requiere dimerización. Así, en otra forma de realización de la presente invención, el inhibidor de ¡NOS selectivo es un inhibidor de dimerización representado por un compuesto de Fórmula XIII, Fórmula XIV o Fórmula XV: Fórmula XIII; Fórmula XIV; o Fórmula XV; en las que: A es -R56, -OR56, C(0)N(R56)R57, P(0)[N(R56)R57]2, -N(R56)C(0)R57 -N(R76)C(0)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56, -S02NHC(0)R56, -NHS02R77, -S02NH(R56)H, -C(0)NHS02R77 y -CH=NOR56; cada X, Y y Z son independientemente N o C(R19); cada U es N o C(R60), siempre que U sea N sólo cuando X es N y Z e Y son CR74; V es N(R59), S, O ó C(R59)H; Cada W es N o CH; Q se elige del grupo constituido por un enlace directo, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(0)t y -N(R61)-; m es cero o un entero de 1 a 4; n es cero o un entero de 1 a 3; q es cero o uno; r es cero o uno, siempre que cuando Q y V son heteroátomos, m, q y r no pueden ser todos cero; cuando A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R71)C(0)OR57, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (en la que t cero) o -NHS02R77, n, q y r no pueden ser todos cero; y cuando Q es un heteroátomo y A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R71)C(0)OR57, -N(R56)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (cuando t es cero) o -NHSO2R77, m y n no pueden ser los dos cero; t es cero, uno o dos; es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; es un carbociclilo opcionalmente sustituido o un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; cada R56 y R57 se eligen independientemente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C20 opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, -[alquilo Co-C8]-R64, -[alquenilo C2-C8]-R64, -[alquinilo C2-C8]-R64, -[alquilo C2-C8]-R65 (opcionalmente sustituido por hidroxi), -[Ci-C8]-R66 (opcionalmente sustituido por hidroxi), heterociclilo opcionalmente sustituido; o R5b y R57 junto con el átomo de hidrógeno al que están unidos es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; R58 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, -[alquilo Ci-Cs]-C(0)N(R 6)R57, -[alquilo d-C8]-N(R56)R57, -[alquilo CrC8]-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo d-Cej-R66 y heterociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo, alcoxi e imidazolilo); o cuando Q es -N(R58)- o un enlace directo con R58, R58 puede ser adicionalmente aminocarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo y -C(=NR73)-NH2; o -Q-R58 tomado conjuntamente representa -C(0)OH, - por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo y cicloalquilo; siempre que cuando A es -R56 ó -OR56, R59 no puede ser hidrógeno, y cuando V es CH, R59 puede ser adicionalmente hidroxi; R60 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, haloalquilo, aralquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, -OR71, -S(0)tR71, N(R71)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, N(R71)C(0)OR71, N(Rn)C(0)R , -[alquilo C0-C8]-C(H)[C(O)Rn]2 y -[alquilo C0-C8]-C(0)N(R56)R71; R61 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, -[alquilo Ci-C8]-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo C C8]-R66, acilo, -C(0)R63, -C(O), -[alquilo CrCsJ-R63, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo opcionalmente sustituido, aralcoxicarbonilo opcionalmente sustituido, alquilsulfonilo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilalquilo, carboxialquilo, arilsulfonilo opcionalmente sustituido, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido, aminosulfonilo, monoalquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, N-heterociclilo opcionalmente sustituido, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(0)R78-N(R56)R57, -C(0)-N(R56)R78-C(0)OR56; cada R63 y R64 se eligen independientemente del grupo constituido por haloalquilo, cicloalquilo (opcionalmente sustituido con halo, ciano, alquilo o alcoxi), carbociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo y alcoxi) y heterociclilo (opcionalmente sustituido con alquilo, aralquilo o alcoxi); cada R65 se elige independientemente del grupo constituido por halo, alcoxi, ariloxi opcionalmente sustituido, aralcoxi opcionalmente sustituido, -S(0)t-R77 opcionalmente sustituido, acilamino, amino, monoalquilamino, dialquilamino, (trifenilmetil)amino, hidroxi, mercapto, alquilsulfonamido; cada R se elige independientemente del grupo constituido por ciano, di(alcoxi)alquilo, carboxi, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo y dialquilaminocarbonilo; cada R67, R68, R69, R70, R72 y R75 son independientemente hidrógeno o alquilo; cada R71 es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo; R73 es hidrógeno, NO2 o toluensulfonilo; cada R74 es independientemente hidrógeno, alquilo (opcionalmente sustituido por hidroxi), ciclopropilo, halo o haloalquilo; cada R76 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, -C(0)R77 o -S02R77; o R76 tomado conjuntamente con R56 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; o R76 tomado conjuntamente con R71 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; cada R77 es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R78 es un residuo de aminoácido; como un estereoisómero simple o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro inhibidor de dimerización de ¡NOS, 3-(2,4-difluorofenil)-6-{2- [4-(1H-imidazol-1-ilmetil)fenoxi]etoxi}-2-fenilp¡rid¡na (PPA250) se ha descrito en Ohtsuka y col., J Pharmacoi Exp Ther VoL 303, número 1 , 52-57, octubre 2002. PPA250 tiene la estructura: PPA250 Por tanto, en otra forma de realización de la presente invención, el compuesto PPA250 puede emplearse como inhibidor ¡NOS selectivo. El compuesto antimicrobiano es, por ejemplo, un nitroimidazol, un inhibidor de la bomba de protones, un compuesto de bismuto o cualquier compuesto antibiótico, como penicilina. Entre los compuestos antimicrobianos útiles en combinación con un inhibidor ¡NOS selectivo según los métodos de la presente invención se incluyen amoxicilina, claritromicina, rifabutina, subsalicilato de bismuto, metronidazol, omeprazol, ranitidina y tetraciclina, en solitario o en combinación entre sí. Un compuesto antimicrobiano doble útil en los métodos- de la presente invención es, por ejemplo, una combinación de omeprazol y amoxicilina. Un compuesto antimicrobiano triple útil en los métodos de la presente invención es, por ejemplo, una combinación de ranitidina, metronidazol y amoxicilina.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La siguiente descripción detallada se proporciona para ayudar a los expertos en la materia a poner en práctica la presente invención. Sin embargo, esta descripción detallada no debe entenderse como limitativa indebidamente de la presente invención, por cuanto que los expertos habituales en la materia pueden realizar modificaciones y variaciones en las formas de realización expuestas en la presente memoria descriptiva sin apartarse del ámbito de las reivindicaciones anexas. El contenido de cada una de las referencias principales citadas en la presente memoria descriptiva, que incluye el contenido de las referencias citadas en las referencias primarias, se incorporan en la presente memoria descriptiva como referencia en su totalidad. La presente invención comprende métodos terapéuticos que usan nuevos inhibidores iNOS selectivos para tratar o prevenir dolencias o enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal, incluidos métodos terapéuticos de uso en medicina para prevenir y tratar enfermedad inflamatoria intestinal que incluye enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica que incluye ulceración gástrica, ulceración duodenal y ulceración esofágica, y otras dolencias inflamatorias que incluyen gastritis, colitis, ileítis, esofagitis, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable, íleo paralítico y diarrea. Los métodos terapéuticos incluyen administración a un sujeto necesitado de ello de una cantidad antiinflamatoria eficaz de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible que tiene una fórmula seleccionada entre las Fórmulas l-X. a. Definiciones Las siguientes definiciones se proporcionan con el fin de ayudar a comprender la descripción detallada de la presente invención: El término "alquilo", solo o en combinación, significa un radical alquilo acíclico, lineal o ramificado, que contiene preferentemente de 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono y que contiene más preferentemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. "Alquilo" comprende también radicales alquilo cíclicos que contienen de 3 a aproximadamente 7 átomos de carbono, preferentemente de 3 a 5 átomos de carbono. Dichos radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por grupos como los definidos más adelante. Entre los ejemplos de dichos radicales se incluyen metilo, etilo, cloroetilo, hidroxietilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, cianobutilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, pentilo, aminopentilo, iso-amilo, hexilo, octilo y similares. El término "alquenilo" se refiere a un radical de hidrocarburo acíclico insaturado, lineal o ramificado, que contiene al menos un doble enlace. Dichos radicales contienen de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferentemente de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono, más preferentemente de 2 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Dichos radicales alquenilo pueden estar opcionalmente sustituidos por grupos como los definidos más adelante. Entre los ejemplos de radicales alquenilo adecuados se incluyen propenilo, 2-cloropropilenilo, buten-1-ilo, isobutenilo, penten-1-ilo, 2-metilbuten-1-ilo, 3-metilbuten-1-ilo, hexen-1-ilo, 3-hidroxihexen- 1 -No, hepten-1-ilo y octen-1-ilo, y similares. El término "alquinilo" se refiere a un radical de hidrocarburo acíclico insaturado, lineal o ramificado, que contiene uno o más triples enlaces, conteniendo dichos radicales de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferentemente de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono, más preferentemente de 2 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Dichos radicales alquinilo pueden estar opcionalmente sustituidos por grupos como los definidos más adelante. Entre los ejemplos de radicales alquinilo adecuados se incluyen radicales etinilo, propinilo, hidroxipropinilo, butin-1-ilo, butin-2-ilo, pentin-1-ilo, pentin-2-iIo, 4-metoxipentin-2-ilo, 3-metilbutin-1-ilo, hexin-1-iIo, hexin-2-ilo, hexin-3-ilo, 3,3-dimetilbutin-1-ilo y similares. El término "alcoxi" comprende radicales que contienen oxi lineal o ramificado, cada uno con porciones alquilo de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferentemente de 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono, como un radical metoxi. El término "alcoxialquilo" comprende también radicales alquilo que tienen uno o más radicales alcoxi unidos al radical alquilo, es decir, para formar radicales monoalcoxialquilo y dialcoxialquilo. Entre los ejemplos de dichos radicales se incluyen alquilos metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y ferc-butoxi. Los radicales "alcoxi" pueden estar sustituidos además por uno o más átomos halo, como fluoro, cloro o bromo, para proporcionar radicales "haloalcoxi". Entre los ejemplos de dichos radicales se incluyen fluorometoxi, clorometoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoroetoxi, fluoroetoxi, tetrafluoroetoxi, pentafluoroetoxi y fluoropropoxi.
El término "alquiltio" comprende radicales que contienen un radical alquilo lineal o ramificado, de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, unido a un átomo de azufre divalente. Un ejemplo de "alquiltio inferior" es metiltio (CH3-S-). El término "alquiltioalquilo" comprende radicales alquiltio, unidos a un grupo alquilo. Entre los ejemplos de dichos radicales se incluye metiltiometilo. El término "halo" significa halógenos como átomos de flúor, cloro, bromo o yodo. El término "heterocicliio" significa un carbociclo saturado o ¡nsaturado mono- o multianillo en el que uno o más átomos de carbono están sustituidos por N, S, P u O. Esto incluye, por ejemplo, las siguientes estructuras: en las que Z, Z1, Z2 o Z3 es C, S, P, O ó N, con la salvedad de que uno de Z, Z1, Z2 o Z3 es distinto de carbono, pero no es O ó S cuando está unido a otro átomo Z por un doble enlace o cuando está unido a otro átomo O ó S. Por otra parte, se entiende que los sustituyentes opcionales están unidos a Z, Z1, Z2 o Z3 sólo cuando cada uno es C. El término "heterocicliio" incluye también estructuras en anillo totalmente saturadas como piperazinilo, dioxanilo, tetrahidrofuranilo, oxiranilo, aziridinilo, morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tiazolidinilo y otros. El término "heterocicliio" incluye también estructuras en anillo parcialmente insaturadas como dihidrofuranilo, pirazolinilo, imidazolinilo, pirrolinilo, cromanilo, dihidrotiofenilo y otros. El término "heteroarilo" significa un heterociclo totalmente insaturado. En "heterociclo" o "heteroarilo", el punto de unión a la molécula de interés puede estar en el heteroátomo o en cualquier otra parte del anillo. El término "cicloalquilo" significa un carbociclo mono- o multianillo en el que cada anillo contiene de tres a aproximadamente siete átomos de carbono, preferentemente de tres a aproximadamente cinco átomos de carbono. Entre los ejemplos se incluyen radicales como ciclopropiio, ciciobutilo, ciciopentilo, ciclohexilo, cicloalquenilo y cicloheptilo. El término "cicloalquilo" comprende adicionalmente sistemas espiro en los que el anillo de cicloalquilo tiene un átomo del anillo de carbono en común con el anillo heterocíclico de siete eslabones de la benzotiepina. El término "oxo" significa un oxígeno con doble enlace. El término "alcoxi" significa un radical que comprende un radical alquilo que está unido a un átomo de oxígeno, como un radical metoxi. Los radicales alcoxi más preferidos son radicales "alcoxi inferior" que tienen de uno a aproximadamente diez átomos de carbono. Más preferidos aún son los radicales alcoxi que tienen de uno a aproximadamente seis átomos de carbono. Entre los ejemplos de dichos radicales se incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi y terc-butoxi. El término "arilo" significa un carbociclo insaturado mono- o multianillo, que incluye, sin limitarse a ello, fenilo, naftilo o antracenilo sustituidos o sin sustituir. La frase "opcionalmente sustituido" significa que el radical indicado puede, aunque no necesariamente, tener un hidrógeno sustituido. Así, la frase "opcionalmente sustituido por uno o más" significa que si se realiza la sustitución en la fracción indicada, se contempla asimismo más de una sustitución. A este respecto, si existe más de un sustituyente opcional, puede elegirse el sustituyente o una combinación de sustituyentes, o más de uno del mismo sustituyente. Por ejemplo, y sin limitarse a ello, la frase "alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por uno o más halo o alcoxi" debería entenderse con el significado, por ejemplo, de que metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo pueden tener posiciones sustituibles: hidrógeno, flúor, cloro u otro halógeno, metoxi, etoxi, propoxi, /'so-butox¡, ferc-butoxi, pentoxi u otros radicales alcoxi, y combinaciones de los mismos. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen: propilo, /'so-propilo, metoxipropilo, fluorometilo, fluoropropilo, 1-fluoro-metoximetilo y similares. Cuando un compuesto se describe por una estructura y un nombre, se pretende que el nombre corresponda a la estructura indicada, y análogamente se pretende que la estructura corresponda al nombre indicado. El término "sujeto" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a un animal, en una forma de realización un mamífero, y en una forma de realización ilustrativa particularmente a un ser humano, que es el objeto de tratamiento, observación o experimento.
Los términos "dosificación" y "tratamiento" según se usan en la presente memoria descriptiva se refieren a cualquier método, acción, aplicación, terapia o similar, en los que un sujeto, en particular un ser humano, recibe ayuda médica con el objeto de mejorar la dolencia del sujeto, ya sea directa o indirectamente. El término "compuesto terapéutico" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a un compuesto útil en la prevención o tratamiento de una dolencia o enfermedad inflamatoria del tracto gastrointestinal. El término "terapia de combinación" significa la administración de dos o más compuestos terapéuticos para tratar una dolencia o trastorno terapéutico descrito en la presente descripción, por ejemplo, enfermedad inflamatoria intestinal que incluye enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica que incluye ulceración gástrica, ulceración duodenal y ulceración esofágica, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable y otras dolencias inflamatorias que incluyen gastritis, ileítis, esofagitis, íleo paralítico y diarrea. Dicha administración comprende coadministración de estos agentes terapéuticos de un modo sustancialmente simultáneo como, por ejemplo, en una cápsula única que tiene una proporción fija de ingredientes activos o en cápsulas múltiples y separadas para cada ingrediente activo. Además, dicha administración comprende asimismo el uso de cada tipo de agente terapéutico de un modo secuencial. En cualquier caso, el régimen de tratamiento proporcionará efectos beneficiosos de la combinación de fármacos en el tratamiento de las dolencias o trastornos descritos en la presente memoria descriptiva. El término "combinación terapéutica" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a la combinación de dos o más compuestos terapéuticos y a cualquier vehículo farmacéuticamente aceptable usado para proporcionar formas de dosificación que producen un efecto beneficioso de cada compuesto terapéutico en el sujeto en el momento deseado, ya se administren los compuestos terapéuticos sustancialmente de forma simultánea o en secuencia. El término "terapéuticamente eficaz" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a una característica de una cantidad de un compuesto terapéutico, o a una característica de las cantidades de compuestos terapéuticos combinados en terapia de combinación. La cantidad o cantidades combinadas consiguen el objetivo de prevenir, evitar, reducir o eliminar la dolencia o enfermedad inflamatoria del tracto gastrointestinal. Los términos "óxido nítrico sintasa inducible" e "¡NOS" según se usan indistintamente en la presente memoria descriptiva se refieren a la isoforma inducible independiente de Ca2+ de la enzima óxido nítrico sintasa. Los términos "inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible", "inhibidor ¡NOS selectivo" e "inhibidor selectivo ¡NOS" según se usan indistintamente en la presente memoria descriptiva se refieren a un compuesto terapéutico que inhibe selectivamente la isoforma inducible independiente de Ca2+ de la enzima óxido nítrico sintasa. Un inhibidor iNOS selectivo se define como productor de la inhibición selectiva de ¡NOS en comparación con NOS endotelial o NOS neuronal, de manera que la administración en vivo produce eficacia (DE5o menor que 100 mg/kg, pero preferentemente menor que 10 mg/kg en un modelo de endotoxinas en roedores) y selectividad de al menos 20 veces, pero preferentemente de 100 veces o más con respecto a eNOS según se mide por elevación en la presión sanguínea arterial media y selectividad de al menos 20 veces, pero preferentemente 100 veces o más con respecto a nNOS según se mide por reducciones en el tránsito gastrointestinal o la erección peneana. El término "profármaco" se refiere a un compuesto que es un precursor de fármaco que, después de la administración a un sujeto y la absorción subsiguiente, se convierte en una especie activa en vivo a través de algún método como, por ejemplo, un método metabólico. Otros productos del método de conversión son fácilmente desechados por el cuerpo. Los profármacos más preferidos son los que implican un método de conversión que produce productos que en general se aceptan como seguros. El término "tracto gastrointestinal" se refiere al esófago, el estómago y el intestino grueso y delgado, incluyendo el duodeno, el íleon y el colon. Las dolencias inflamatorias del tracto gastrointestinal incluyen enfermedad inflamatoria intestinal que incluye enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica que incluye ulceración gástrica, ulceración duodenal y ulceración esofágica, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable y otras dolencias inflamatorias que incluyen gastritis, ileítis, colitis, esofagitis, íleo paralítico y diarrea. El término "antiinflamatorio eficaz" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a una característica de una cantidad de un compuesto terapéutico o a una característica de cantidades de compuestos terapéuticos combinados en terapia de combinación. La cantidad o cantidades combinadas consiguen el objetivo de prevenir, evitar, reducir o eliminar la inflamación. El término "antimicrobiano" según se usa en la presente memoria descriptiva se refiere a la característica de un compuesto o agente útil para reducir o eliminar la infección por un microbio, incluyendo una bacteria, y en particular la infección por la bacteria H. pylori, o para reforzar las defensas mucosas del estómago y el duodeno frente a dicha infección microbiana. Entre los antimicrobianos se incluyen antibióticos, agentes citoprotectores o compuestos como compuestos de bismuto en forma de subsalicilato de bismuto y subcitrato, sucralfato y carbenoxaiona de bismuto coloidal. Así, entre los agentes antimicrobianos útiles en la presente invención se incluyen, por ejemplo, un nitroimidazol, un inhibidor de la bomba de protones, un compuesto de bismuto o cualquier compuesto antibiótico como penicilina. Más específicamente, entre los compuestos antimicrobianos útiles en combinación con un inhibidor ¡NOS selectivo según los métodos de la presente invención se incluyen amoxicilina, claritromicina, rifabutina, subsalicilato de bismuto, metronidazol, omeprazol, ranitidina y tetraciclina, solos o en combinación entre sí. Un compuesto antimicrobiano doble útil en los métodos de la presente invención es, por ejemplo, una combinación de omeprazol y amoxicilina. Un compuesto antimicrobiano triple útil en los métodos de la presente invención es, por ejemplo, una combinación de ranitidina, metronidazol y amoxicilina. El término "antisecretor" se refiere a cualquier compuesto o agente útil en la inhibición de la secreción de ácido gástrico incluyendo antagonistas de receptores de histamina H2 e inhibidores de la bomba de protones. Entre los antagonistas de receptores de histamina H2 se incluyen burimamida, cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina. Entre los inhibidores de la bomba de protones, es decir, inhibidores específicos de H\K+-ATP-asa, se incluyen los compuestos de bencimidazol sustituidos lansoprazol y omeprazol. En un ejemplo ilustrativo de un inhibidor ¡NOS selectivo útil en los métodos de la presente invención, el tratamiento se facilita a través de compuestos que tienen la fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R1 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; R2 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; con la salvedad de que al menos uno de R1 o R2 contiene un halo; R7 se selecciona del grupo constituido por H e hidroxi; y J se selecciona del grupo constituido por hidroxi, alcoxi y NR3R4 en el que: R3 se selecciona del grupo constituido por H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; y R4 se selecciona del grupo constituido por H, y un anillo heterocíclico en el que al menos un eslabón del anillo es carbono y en el que de 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente entre oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede estar opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, haloalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquil amidosulfonilo, dialquil amidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquil monoaril amidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoílo, alquenoílo, aroílo, heteroaroílo, aralcanoílo, heteroaralcanoílo, haloalcanoílo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilendioxi, haloalquilendioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo 4 inferior, halo, haloalquilo, haloalcoxi, hidroxihaloalqulio, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidroxiheteroaralquilo, haloalcoxialquilo, arilo, aralquiio, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterocicliclo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino. En otra forma de realización, la presente invención proporciona tratamiento que usa un compuesto o una sal del mismo, teniendo el compuesto una estructura correspondiente a la Fórmula II: II En la estructura de la Fórmula II, X se selecciona del grupo constituido por -S-, -S(O)- y -S(0)2-. Preferentemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo constituido por alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alcoxi CrCe-alquilo Ci y alquiltio d-Cs-alquilo Ci, en el que cada uno de estos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. Preferentemente, R 2 es alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. En lo que respecta a R13 y R18, R18 se selecciona del grupo constituido por -OR24 y -N(R25)(R26), y R13 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(O)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(0)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. Si R13 es -C(R31)(R32)-, entonces R14 es -C(0)-0-R33; en caso contrario, R14 es -H. R11, R15, R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, halógeno, alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi CrC5-alquilo C1. R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi C-i-Cs-alquilo C1. En lo que respecta a R2 y R22, R2 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R34 y -C(0)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R36 y -C(0)-S-R37; o R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es - O-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. R23 es alquilo Ci. R24 se selecciona del grupo constituido por -H y alquilo Ci-C6, en el que cuando R24 es alquilo Ci-C6, R24 está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterocicliio, arilo y heteroarilo. En lo que respecta a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo constituido por -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(0)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(0)-S-R40; en el que cuando R25 y R26 son independientemente alquilo o alcoxi, R25 y R26 están independientemente opcionalmente sustituidos por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterocicliio, arilo y heteroarilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, heterocicliio, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo, en el que alquilo está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterocicliio, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R3 , R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 es independientemente una fracción seleccionada del grupo constituido por alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterocicliio, arilo y heteroarilo, entonces la fracción está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. En un compuesto preferido, R18 es -OH. Cuando R18 es -OH, preferentemente X es S. En un compuesto más, R11, R15, R16, R 7, R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo Ci-C3. Preferentemente, R 5, R16, R17, R19 y R20 son cada uno -H. R23 puede ser una diversidad de grupos como, por ejemplo, fluorometilo o metilo. R11 puede ser alquilo CrC6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH y halógeno; preferentemente, R11 es alquilo Ci opcionalmente sustituido con halógeno; más preferentemente, R11 se selecciona del grupo constituido por fluorometilo, hidroximetilo y metilo. En un compuesto importante, R11 puede ser metilo. Alternativamente, R11 puede ser fluorometilo. En otra alternativa, R11 puede ser hidroximetilo. En otro compuesto, R12 es alquilo d-Ce opcionalmente sustituido con un sustituyente elegido del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. En un compuesto preferido, R12 es alquilo Ci opcionalmente sustituido con halógeno. Por ejemplo, R12 puede ser metilo. Alternativamente, R12 puede ser fluorometilo. En otro ejemplo más, R12 puede ser hidroximetilo. En un ejemplo más todavía, R12 puede ser metoximetilo. En este compuesto ilustrativo, se prefiere que R13, R14, R21 y R22 sean cada uno -H. En este compuesto, se prefiere además que R11, R15, R16, R 7, R19 y R20 se seleccionen independientemente del grupo constituido por -H y alquilo C1-C3. Preferentemente, R15, R 6, R17, R19, R20 son cada uno rH. En este compuesto, además, R23 puede ser, por ejemplo, fluorometilo, o en otro ejemplo R23 puede ser metilo. En compuestos preferidos de estos ejemplos, R12 es alquilo Ci-C5 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno. Preferentemente, R 2 es alquilo Ci opcionalmente sustituido con halógeno. En dicho ejemplo, R 2 es fluorometilo. En otro ejemplo, R12 es metilo. Alternativamente, R12 puede ser hidroximetilo. En otra alternativa, R12 puede ser metoximetilo. Cuando R23 es metilo, R11 puede ser, por ejemplo, -H o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH y halógeno. En un compuesto preferido, R11 es -H. Alternativamente, R11 puede ser alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH y halógeno. Por ejemplo, R 1 puede ser metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, t-butilo, un isómero de pentilo o un isómero de hexilo. Por ejemplo, R11 puede ser etilo. Alternativamente, R11 puede ser alquilo C1 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por -OH y halógeno; por ejemplo, R11 puede ser metilo. Alternativamente, R11 puede ser fluorometilo. En otra alternativa, R11 puede ser hidroximetilo. En otro compuesto, R18 puede ser -OR24. R24 puede ser según se ha definido anteriormente. Preferentemente, R24 es alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido por una o varias fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; más preferentemente R24 es alquilo Ci-C6; y más preferentemente todavía R24 es metilo. En otro ejemplo más de compuesto II, R18 puede ser -N(R25)(R26), en el que R25 y R26 son según se ha definido anteriormente. En un compuesto más, Ria puede ser -N(R ), y R" puede ser -C(0)-, en el que R16 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. En otro ejemplo más, R18 puede ser -O-, y R 3 puede ser -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. En un compuesto de Fórmula II, R21 puede seleccionarse del grupo constituido por -OH, -C(0)-0-R34, y -C(0)-S-R35. Preferentemente, R21 es -OH. En un ejemplo más, R22 es -H cuando R21 es -OH. Sin embargo, el presente ejemplo proporciona también compuestos útiles de Fórmula II en los que R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. En otro compuesto útil, R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en e! que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo. Alternativamente, R22 puede seleccionarse del grupo constituido por -OH, -C(O)-O-R36 y -C(O)-S-R37. En esta alternativa, R21 es preferentemente -H. En otro inhibidor ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención, un compuesto se representa por la Fórmula III: III o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R41 es H o metilo; y R42 es H o metilo.
Otro inhibidor ¡NOS selectivo en la práctica de la presente invención se representa por un compuesto de Fórmula IV: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro inhibidor ¡NOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención se representa por la Fórmula V: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R43 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R44 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R45 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo. Un inhibidor ¡NOS selectivo ilustrativo se representa por la Fórmula VI: VI o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R46 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo. Otro inhibidor ¡NOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención se representa por la Fórmula VII: il o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R47 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R48 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R49 es alquilo C Ce y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo.
Otro inhibidor ¡NOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención se representa por la Fórmula VIII: VIII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionaimente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionaimente sustituido por uno o más halo. Otro inhibidor ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención se representa por la Fórmula IX: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R50 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionaimente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionaimente sustituido por uno o más halo; R51 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionaimente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R52 es alquilo C-1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R53 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y R54 se selecciona del grupo constituido por halo y alquilo C-1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo. Otro inhibidor ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención se representa por un compuesto de Fórmula X: X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: R55 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo. En otro compuesto ilustrativo, el inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible es el compuesto que tiene la Fórmula XI, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto XI se ha descrito previamente en la Publicación Internacional n° WO 00/26195, publicada el 11 de mayo de 2000, que se incorpora en la presente memoria descriptiva como referencia.
Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-iminoetil)amino]-N-(1 H-tetrazol-5-il) hexanamida hidratado La invención contempla asimismo el uso de otros inhibidores ¡NOS selectivos. Por ejemplo, inhibidores selectivos ¡NOS también útiles en la presente invención se describen en la patente de EE.UU. n° 6.355.689, Beswick y col., presentada el 29 de noviembre de 2000 y concedida el 12 de marzo de 2002, que describe y reivindica un inhibidor ¡NOS selectivo con la fórmula XII: XII en la que R79 se selecciona entre alquilo C1-C4, cicloalquilo C3-C4, hidroxialquilo C1-C4 y haloalquilo C1-C4. La descripción de la patente de EE.UU. n° 6.355.689 establece que R79 es preferentemente alquilo Ci-C4, y más preferentemente metilo. Entre las formas de realización específicas desveladas en la patente de EE.UU. n° 6.355.689 y adecuadas para su uso en los presentes métodos y composiciones se incluyen: S-((R)-2-(1-iminoetilamino)propil)-L-cisteína; S-((S)-2-(1-iminoetilamino)propil)-L-c¡steína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil)-L-cisteína; S-((R)-2-(1-im¡noetilamino)propil)-D-cisteína; S-((S)-2-(1-iminoetilamino)propiI)-D-cisteína; S-((R S)-2-(1-iminoetilamino)prop¡I)-D-cisteína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino)butiI)-L-c¡steína; S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino,2-ciclopropil)etil)-L-cisteína; y S-((R/S)-2-(1-iminoetilamino,3-hidroxi)prop¡l)-L-cisteína, o una sal farmacéuticamente aceptable, un solvato o un derivado fisiológicamente funcional de las mismas. Se cree que los inhibidores ¡NOS selectivos anteriores actúan en competición con arginina como un sustrato para la enzima ¡NOS. Otra estrategia para la inhibición de ¡NOS ha sido descrita por Arnaiz y col. en la solicitud de patente internacional número PCT/US98/03176, número de publicación WO 98/37079 (Berlex Laboratories, Inc., Richmond, CA 94804-0099 y Pharmacopeia, Inc. Princeton, NJ 08540), publicada el 27 de agosto de 1998 (Arnaiz). La solicitud de Arnaiz describe inhibidores de dimerización de monómeros ¡NOS. La enzima ¡NOS es un homodímero; cada monómero tiene un dominio reductasa, que incorpora sitios de unión para cofactores de flavina (FAD y FMN) y para NADPH. El dominio reductasa suministra electrones al dominio oxidasa del otro monómero, en el que la L-arginina se oxida en el sitio activo, que incorpora un dominio P-450 de citocromo de grupo hemo (Fe). La tetrahidrobiopterina (BH4) se requiere para homodimerización y modula el estado redox de hemo durante la transferencia de electrones. Los monómeros ¡NOS son inactivos, y para su actividad se requiere dimerización. Así, en otra forma de realización de la presente invención, el inhibidor ¡NOS selectivo es un inhibidor de dimerización representado por un compuesto de Fórmula XIII, Fórmula XIV o Fórmula XV: Fórmula XIII; Fórmula XIV; o Fórmula XV; en las que: A es -R56, -OR56, C(0)N(R56)R57, P(0)[N(R56)R57]2, -N(R56)C(0)R57, -N(R76)C(0)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56, -S02NHC(0)R56, -NHS02R77, -S02NH(R56)H, -C(0)NHS02R77 y -CH=NOR56; cada X, Y y Z son independientemente N o C(R19); cada U es N o C(R60), siempre que U sea N sólo cuando X es N y Z e Y son CR74; V es N(R59), S, O ó C(R59)H; Cada W es N o CH; Q se elige del grupo constituido por un enlace directo, -C(O)-, -0-, -C(=N-R5B)-> S(0)t y -N(R61)-; m es cero o un entero de 1 a 4; n es cero o un entero de 1 a 3; q es cero o uno; r es cero o uno, siempre que cuando Q y V son heteroátomos, m, q y r no pueden ser todos cero; cuando A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R71)C(0)OR57, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (en la que t cero) o -NHS02R77, n, q y r no pueden ser todos cero; y cuando Q es un heteroátomo y A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R71)C(0)OR57, -N(R56)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (cuando t es cero) o -NHSO2R77, m y n no pueden ser los dos cero; t es cero, uno o dos; es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; es un carbociclilo opcionalmente sustituido o un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; cada R56 y R57 se eligen independientemente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C20 opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, -[alquilo C0-C8]-R64, -[alquenilo C2-C8]-R64, -[alquinilo C2-C8]-R64, -[alquilo C2-C8]-R65 (opcionalmente sustituido por hidroxi), -[CrC8]- R66 (opcionalmente sustituido por hidroxi), heterociclilo opcionalmente sustituido; o R55 y R57 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; R58 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, haloalquilo, -[alquilo Ci-C8]-C(0)N(R56)R57, -[alquilo Ci-C8]-N(R56)R57, -[alquilo Ci-C8]-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo Ci-C8]-R66 y heterociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo, alcoxi e imidazolilo); o cuando Q es -N(R58)- o un enlace directo a R58, R58 puede ser adicionalmente aminocarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo y -C(=NR73)-NH2; o -Q-R58 tomado conjuntamente representa -C(0)OH, - elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo y cicloalquilo; siempre que cuando A es -R56 ó -OR56, R59 no puede ser hidrógeno, y cuando V es CH, R59 puede ser adicionalmente hidroxi; R60 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, haloalquilo, aralquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, -OR71, -S(O)tR71, N(R71)R76, N(R71)C(O)N(R56)R71, N(R71)C(O)OR71, N(R71)C(0)R71, -[alquilo C0-C8]-C(H)[C(O)R71]2 y -[alquilo C0-C8]- C(0)N(R56)R71; R61 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, -[alquilo C^-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo d-CeJ-R66, acilo, -C(0)R63, -C(O), -[alquilo Ci-C8]-R63, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo opcionalmente sustituido, aralcoxicarbonilo opcionalmente sustituido, alquilsulfonilo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilalquilo, carboxialquilo, ariisulfonilo opcionalmente sustituido, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido, aminosulfonilo, monoalquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, N-heterociclilo opcionalmente sustituido, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(0)R78-N(R56)R57, -C(0)-N(R56)R76-C(0)OR56; cada R63 y R64 se eligen independientemente del grupo constituido por haloalquilo, cicloalquilo (opcionalmente sustituido con halo, ciano, alquilo o alcoxi), carbociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo y alcoxi) y heterociclilo (opcionalmente sustituido con alquilo, aralquilo o alcoxi); cada R65 se elige independientemente del grupo constituido por halo, alcoxi, ariloxi opcionalmente sustituido, aralcoxi opcionalmente sustituido, -S(0)t-R77 opcionalmente sustituido, acilamino, amino, monoalquilamino, dialquilamino, (trifenilmetil)amino, hidroxi, mercapto, alquilsulfonamido; cada R66 se elige independientemente del grupo constituido por ciano, di(alcoxi)alquilo, carboxi, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo y dialquilaminocarbonilo; cada R67, R68, R69, R70, R72 y R75 son independientemente hidrógeno o alquilo; cada R71 es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo; R73 es hidrógeno, NO2 o toluensulfonilo; cada R74 es independientemente hidrógeno, alquilo (opcionalmente sustituido por hidroxi), ciclopropilo, halo o haloalquilo; cada R76 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, -C(0)R77 o -S02R77; o R76 tomado conjuntamente con R56 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; o R76 tomado conjuntamente con R71 y el nitrógeno al que está unido es un aralquilo opcionalmente sustituido; cada R77 es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R78 es un residuo de aminoácido; como un estereoisómero simple o mezcla del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro inhibidor de dimerización de ¡NOS, 3-(2,4-difluorofenil)-6-{2-[4-(1H-imidazol-1-ilmetil)fenoxi]etoxi}-2-fenilpiridina (PPA250) se ha descrito en Ohtsuka y col., J Pharmacol Exp Ther Vol. 303, número 1, 52-57, octubre 2002. PPA250 tiene la estructura: PPA250 Por tanto, en otra forma de realización de la presente invención, el compuesto PPA250 puede emplearse como inhibidor ¡NOS selectivo. b. Ejemplos ilustrativos Los siguientes ejemplos de síntesis se muestran con fines ilustrativos y en ningún modo pretenden limitar el alcance de la invención. Cuando no se definen isómeros, el uso de los métodos apropiados de cromatografía producirá isómeros únicos. Ejemplo A Diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico monohidratado EJ-A-1) Se añadió gota a gota cloruro de trimetilsililo (107,8 g, 1 ,00 moles) a una solución enfriada de ácido L-glutámico (30,00 g, 0,20 moles) en 300 mL de metanol a 0°C. La solución incolora y transparente resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente. Al cabo de 18 h, el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. A continuación se enfrió la reacción a 0°C, se añadió trietilamina (134 g, 1,33 moles) y se formó un precipitado blanco. Se añadió di-terc-butildicarbonato (49 g, 0,23 moles), y se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente. Al cabo de 3 h se eliminó el disolvente, y se añadieron 700 mL de éter dietílico. Se filtró la solución y se lavó la torta del filtro con 500 mL adicionales de éter dietílico. Se concentró el filtrado a 60,8 g (>95%) de un aceite tostado que se pasó a la siguiente etapa sin más purificación. LCMS: m/z = 298,1 [M+Na]+. HRMS cale, para Ci2H2iN06: 276,1447 [M+H]+, encontrado: 276,1462. RMN 1H (CDCI3) d 1,45 (s, 9H), 1,95 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,40 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,32 (m, 1H), 5,15 (m, 1H). Woc^ V CHgO^^^OCHg o o EJ-A-2) A una solución del producto en bruto del EJ-A-1 (60 g, 0,22 moles) en 300 mL de acetonitrilo a temperatura ambiente se añadió 4-dimetilaminopiridina (5,3 g, 0,44 moles) y di-terc-butildicarbonato (79,2 g, 0,36 moles). La mezcla resultante se agitó durante 2 días a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 25% en hexano) reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se eliminó el disolvente al vacío para producir 85 g de un aceite rojo. Se purificó el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :10 en hexano para dar 66,4 g (81 %) del producto d¡-Boc deseado como un sólido amarillo pálido. LCMS: m/z = 398,2 [M+Na]+. HRMS cale, para C17H29N08: 398,1791 [M+Na]+, encontrado: 398,1790. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,48 (s, 18H), 2,19 (m, 1 H), 2,41 (m, 2H), 2,46 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 4,91 (dd, 1 H).
EJ-A-3) A una solución de DIBAL (64 mL de solución 1,0 M en hexanos, 63,9 mmoles) se añadió gota a gota una solución fría del EJ-A-2 (20 g, 53,3 mmoles) en 400 ml_ de éter dietílico anhidro a -78°C durante 30 min. Después de 30 min adicionales a -78°C, se enfrió la solución con agua (12 mL, 666 mmoles) y se dejó calentar a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla turbia con 350 mL de acetato de etilo, se secó sobre MgS04 y se filtró a través de un lecho de celita. Se concentró el filtrado como un aceite amarillo. El material en bruto, 18,9 g de aceite amarillo, se purificó por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1:4 en hexano para dar 13,8 g (75%) del producto de aldehido deseado como un aceite transparente. LCMS: m/z = 368,2 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,48 (s, 18H), 2,19 (m, 1 H), 2,41 (m, 2H), 2,46 (m, 1 H), 3,70 (s, 3H), 4,91 (dd, 1 H), 9,8 EJ-A-4) A una solución en frío (-78°C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo (4,67 g, 19,3 mmoles) en 20 mL de THF se añadió /7-butil litio (10,9 mL de 1,6 M en hexano, 17,5 mmoles). Esta mezcla se agitó a -78°C durante 20 min para producir una solución amarilla brillante. Se añadió a continuación con jeringuilla una solución del producto a partir del EJ-A-3 (6,0 g, 17,5 moles) en 5 mL de THF, y se agitó la mezcla resultante durante 2 h a -78°C, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se enfrió la reacción a -78°C con NH4CI acuoso saturado (30 mL). Se recogió la capa orgánica, y se extrajo la capa acuosa con éter dietílico (2 x 50 mL). Se lavaron los productos orgánicos combinados con agua (100 mL) y salmuera ( 00 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. Se purificó el material en bruto, 8,6 g de un aceite amarillo, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :4 en hexano para dar 6,05 g (79%) del producto fluoro-olefínico deseado como un aceite transparente. RMN 1H y RMN 19F indicaron que el producto aislado tenía una proporción E:Z aproximada de 95:5. LCMS: m/z = 456,2 [M+Na]+. HRMS cale, para C20H32NO8F: 456,2010 [M+Na]+, encontrado: 456,2094. RMN 1H (CDCI3) ? 1 ,48 (s, 18H), 2,0 (m, 1 H), 2,25 (m, 1 H), 2,6 (m, 2H), 3,7 (m, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 5,9 (dt, vinilo, 1H, J = 20 Hz), 6,2 (dt, vinilo, J = 30 Hz). RMN 19F (CDC ) d -129,12 (d, 0,09F, J = 31 Hz, 9% isómero Z), -121 ,6 (d, 0,91 F, J = 20 Hz, 91% isómero E).
EJ-A-5) A una solución del EJ-A-4 (805 mg, 1,86 mmoles) en 20 mL de metanol a temperatura ambiente se añadió NaB U sólido (844 mg, 22,3 mmoles) en porciones de 200 mg. Se agitó la reacción durante 18 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción con 20 mL de NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (2 x 35 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgSC>4, se filtró y se concentró. Se purificó el material en bruto, 700 mg de aceite transparente, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :4 en hexano para dar 353 mg (48%) del producto de alcohol alíüco deseado como un aceite transparente, que contenía principalmente el isómero E deseado por RMN 19F. LCMS: m/z = 414,2 [M+Na]+. RMN 1H (CDCI3) d 1,48 (s, 18H), 1,95 (m, 1H), 2,1 (m, 1 H), 2,2 (m, 1H), 2,35 (t, 1 H), 3,7 (s, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,15 (dt, 1 H, J = 20 Hz). RMN 19F (CDCI3) ? -119,1 (d, 0.02F, J = 37 Hz, 2% isómero Z), -111 ,8 (d, 0,98F, J = 24 Hz, 98% isómero E).
EJ-A-6) A una mezcla del EJ-A-5 (1 ,37 g, 3,5 mmoles), trifenilfosfina con soporte de polímero (3 mmol/g, 1 ,86 g, 5,6 mmoles) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (450 mg, 4,55 mmoles) en 50 mL de THF se añadió gota a gota dimetilazodicarboxilato (820 mg, 5,6 mmoles). Se agitó la reacción durante 1 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 40% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se filtró la mezcla a través de celita, y se concentró el filtrado. El aceite amarillo resultante se dividió entre 30 mL de cloruro de metileno y 30 mL de agua. Se separó la capa orgánica, se lavó con agua (1 x 30 mL) y salmuera (1 x 30 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. Se purificó el material en bruto, 1 ,8 g de un aceite amarillo, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :4 en hexano para dar 670 mg (40%) del producto de amidina E-alílíca protegido deseado como un aceite transparente, que contenía sólo el isómero E deseado por RMN 9F. LCMS: m/z = 496,2 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) ? 1 ,48 (s, 18H), 1,85 (m, 1 H), 2,2 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,8 (m, 1 H), 5,3 (dt, 1 H, J = 20 Hz). RMN 19F (CDCI3) ? -110,8 EJ-A-7) El producto del EJ-A-6 (670 mg, 1 ,4 mmoles) se disolvió en 25 mL de metanol y 25 mL de ácido acético en agua al 25% en agua. Se añadió polvo de cinc (830 mg, 12,7 mmoles), y se agitó la mezcla bajo sonicación durante 8 h, momento en el cual el análisis por HPLC reveló que sólo quedaba el 20% del material de partida. El polvo de Zn se filtró de la mezcla de reacción, y se almacenó el filtrado a -20°C durante 12 h. Se calentó el filtrado a temperatura ambiente, se añadieron ácido acético glacial adicional (7 mL) y polvo de cinc (400 mg, 6,1 mmoles), y se sónico la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por HPLC reveló 96% de producto. Se filtró la mezcla a través de celita y se concentró el filtrado. Se purificó el material en bruto por cromatografía de columna HPLC de fase inversa en una columna YMC Combiprep eluyendo durante 8 min usando un gradiente del 20 al 95% A (A: acetonitrilo al 100% con ácido trifluoroacético al 0,01%, B: H20 al 100% con ácido trifluoroacético al 0,01%). Se combinaron las fracciones que contenían el producto y se concentró para producir 344 mg (45%) del producto de acetamidina deseado como una sal de trifluoroacetato, que contenía sólo el isómero E deseado por RMN 19F. LCMS: m/z = 432,3 [M+Hf. RMN 1H (CD3OD) d 1 ,52 (s, 18H), 2,9 (m, 1H), 2,2 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 4,2 (d, 1 H), 5,4 (dt, vinilo, J = 20 Hz). RMN 19F (CD3OD) ? -110,83 (m, 1 F, J = 20 Hz).
EJ-A-8) Una muestra del producto del EJ-A-7 se disolvió en ácido acético glacial. A esta solución agitada se añaden 10 equivalentes de HCI 1 N en dioxano. Después de agitar esta solución durante diez minutos a temperatura ambiente, se elimina todo el disolvente al vacío para generar la sal de diclorhidrato de éster metílico ilustrada. Ejemplo A) Un solución del EJ-A-7 (344 mg, 1 ,4 mmoles) en 6 mL de HCI 6,0 N se mantuvo a reflujo durante 1 h. El disolvente se eliminó al vacío. El sólido resultante se lavó en agua y se concentró tres veces adicionales, seguido de 5 veces posteriores en HCI 1,0 N para eliminar cualquier sal de TFA remanente. Al terminar se obtuvieron 160 mg (37%) del producto de diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico como un sólido blanco, p.f. 51 ,5-56,3°C, que contenía sólo el isómero E deseado por RMN 19F. LCMS: m/z = 218,1 [M+H]+. HRMS cale, para C9H16F 3O2: 218,1305 [M+H , encontrado: 218,1325. RMN 1H (D20) d 1 ,8 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 3,7 (t, 1H), 4,00 (d, 2H), 5,3 (dt, vinilo, 1 H, J = 21 Hz). RMN 19F (D20) d -109,9 (m, 1 F, J = 20 Hz).
Diclorhidrato del ácido (2S,5£/Z)-2-amíno-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico &JH-Boc O o EJ-B-1) A una solución enfriada (0°C) de éster 5-metílico de ácido L-glutámico (50,00 g, 0,31 moles) en 400 mL de H20 1 :1 en dioxano se añadió trietilamina (38,35 g, 0,38 moles) seguido de di-terc-butildicarbonato (80,00 g, 0,37 moles). Se dejó en agitación la solución incolora transparente resultante a temperatura ambiente. Al cabo de 18 h, el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se enfrió la reacción con 200 mL de KHSO4 acuoso 1 ,0 N. Se eliminó la capa orgánica, y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (3 x 100 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar 72,00 g (89%) del producto deseado como un aceite amarillo pálido. LCMS: m/z = 284,1 [M+Na]+. RMN 1H (CDCIs) d 1 ,50 (s, 9H), 2,00 (m, 1 H), 2,20 (m, 1 H), 2,42 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 4,34 (m, 1 H), 5,24 (d, 1 H). EJ-B-2) A una solución del producto en bruto del EJ-B-1 (72,60 g, 0,28 moles) en 300 mL de THF a -10°C se añadieron rápidamente 4-metilmorfolina (28,11 g, 0,28 moles) e isobutilcloroformato (37,95 g, 0,28 moles). La solución amarilla transparente formó inmediatamente un precipitado blanco. Al cabo de 4 min, la mezcla amarilla turbia resultante se filtró, se enfrió el filtrado a -10°C y se añadió gota a gota una solución de NaBhU (15,77 g, 0,42 moles) en 200 mL de H20 mientras se mantenía una temperatura por debajo de cero. Una vez añadido todo el NaBH4, se eliminó el baño de hielo, y se dejó la reacción en agitación a temperatura ambiente durante 1 ,5 h. Se enfrió la mezcla de reacción con 200 mL de H2O. Se separó la capa orgánica, y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (3 x 100 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar 58 g (85%) del producto deseado como un aceite amarillo. LCMS: m/z = 270,1 [M+Na]+. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,42 (s, 9H), 1 ,65 (m, 1 H), 1 ,85 (m, 2H), 2,42 (t, 2H), 3,66 (s, 3H), 4,8 (d, 1 H).
EJ-B-3) A una solución del EJ-B-2 (30,95 g, 0,13 moles) en 100 mL de benceno se añadió 2,2-dimetoxipropano (65.00 g, 0,63 moles) seguido de ácido p-toluensulfónico (2,40 g, 12,5 mmoles) y 5 g de tamices moleculares de 3 ángstroms. La mezcla resultante se mantuvo a reflujo durante 2 h, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló una reacción completa. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente, se diluyó con éter dietílico (150 mL) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (100 mL) seguido de salmuera (100 mL). Se secó sobre MgS04 y se concentró. El material en bruto, 30,5 g de aceite amarillo, se purificó por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :10 en hexano para dar 15,40 g (42%) del producto deseado como un aceite amarillo pálido. LCMS: m/z = 310,1 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,42 (s, 12H), 1 ,56 (m, 3H), 1 ,85 (m, 2H), 2,38 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,7 (d, 1 H), 3,95 (m, 2H).
EJ-B-4) Se añadió gota a gota DIBAL (6,0 mL de solución 1,0 M en tolueno) a una solución en frío (-78°C) del producto del EJ-B-3 (1 ,00 g, 3,00 mmoles) en 10 mL de cloruro de metileno. Al cabo de 30 min, se enfrió la reacción con 5 mL de tartrato sódico potásico saturado (sal de Rochelle), y luego se dejó calentar a temperatura ambiente. A continuación se filtró la mezcla a través de un lecho de celita, se secó sobre MgS04, se volvió a filtrar y se concentró para dar un aceite amarillo. Se purificó el material en bruto, 610 mg de un aceite amarillo, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :4 en hexano para dar 550 mg (71%) del producto deseado como un aceite transparente. RMN H (CDCI3) d 1 ,50 (s, 12H), 1 ,58 (d, 3H), 2,00 (m, 2H), 2,5 (m, 2H), 3,7 (d, 1 H), 3,95 (m, 2H), 9,8 (s, 1 H). EJ-B-5) A una solución enfriada en hielo (0°C) de 2-fluoro-fosfonoacetato de trietilo (6,70 g, 27,6 mmoles) en 100 mL de cloruro de metileno se añadió 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (4,70 g, 31 ,0 mmoles). Se agitó la mezcla a 0°C durante 1 h, dando como resultado una solución naranja. A continuación, se añadió una solución enfriada en hielo (0°C) del producto del EJ-B-4 (5,71 g, 22,2 mmoles) en 15 mL de cloruro de metileno mediante jeringuilla, y se agitó la mezcla resultante durante 18 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se eliminó el disolvente al vacío, y la mezcla resultante se dividió entre 200 mL de acetato de etilo y 100 mL de agua. Se recogió la capa orgánica, y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 50 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con KHSO4 acuoso 1 ,0 M (100 mL), agua (100 mL) y salmuera (100 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar el producto fluoro-olefínico deseado como un aceite amarillo (8,0 g). RMN 1H y RMN 9F indicaron que el producto aislado tenía una proporción Z:E aproximada de 70:30. LCMS: m/z = 368,2 [M+Na]+. RMN 1H (CDCI3) d 5,9-6,0 (dt, 1H, J = 20 Hz), 6,05-6,20 (dt, 1H, J = 33 Hz). RMN 9F (CDCI3) d -129,89 (d, 0,7F, J = 38 Hz, 70% isómero Z), -122,05 (d, 0,3F, J = 20 Hz, 30% isómero E). La mezcla se llevó adelante en bruto sin más purificación. EJ-B-6) A una solución enfriada en hielo (0°C) del producto del EJ-B-5 (8,0 g, 23,0 mmoies) en 70 mL de THF se añadió LiBH (12,7 mL de 2,0 M en THF, 25,0 mmoies) mediante jeringuilla. Se agitó la mezcla de reacción durante 18 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se eliminó THF y se disolvió la mezcla resultante en cloruro de metileno. Después de enfriar a 0°C, se añadió lentamente KHSO4 acuoso 1 ,0 M. para enfriar la reacción. A continuación se extrajo la mezcla con acetato de etilo (3 x 50 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgSCu, se filtró y se concentró. Se purificó el material en bruto, 8,0 g de un aceite transparente, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1:4 en hexano para dar 90 mg (13%) del producto deseado como un aceite transparente. LCMS: m/z = 326,2 [M+Na]+. RMN 1H (CDCI3) d 4,79-4,94 (dm, 1H), 5,10-5,25 (dt, 1 H). RMN 19F (CDCI3) d -119,82 (dt, 0,7F, 70% isómero Z), -111 ,09 (dt, 0,3F, J = 27 Hz, 30% isómero E).
EJ-B-7) A una solución enfriada en hielo (0°C) del producto del EJ-B-6 (950 mg, 3,1 mmoles) en 5 mL de piridina se añadió cloruro de metanosulfonilo (390 mg, 3,4 mmoles). Se agitó la reacción durante 5 min a 0°C, a continuación se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se diluyó la reacción con éter dietílico (10 mL) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (20 mL) seguido de ácido cítrico 1,0 M (20 mL). Se secó la capa orgánica sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar 500 mg (51%) del producto de cloruro alílico deseado como un sólido blanco. Este producto se llevó adelante sin más purificación. LCMS: m/z - 344,1 [M+Na]+.
EJ-B-8) A una solución en agitación del producto del EJ-B-7 (440 mg, 1,37 mmoles) en 10 mL de DMF se añadió ftalimida de potasio (290 mg, 1 ,57 mmoles). Se calentó a reflujo la mezcla resultante durante 18 h, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se diluyó la mezcla enfriada con 30 mL de agua, se extrajo dos veces con acetato de etilo (30 mL), se secó sobre gS04, se filtró y se concentró para dar 540 mg (91%) del producto deseado como un aceite amarillo. LCMS: miz = 455,2 [M+Na]+. HRMS cale: 433,2139 [M + H]+, encontrado: 433,2144. RMN 1H (CDCI3) d 1,4 (s, 18H), 1 ,6 (m, 6H), 2,05 (m, 2H), 3,6-4,42 (m, 4H), 4,9 (dt, vinilo, 1 H), 5,2 (m, vinilo, 1H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). R N 19F (CDCI3) d -117,09 (m, 0,7F, J = 38 Hz, 70% isómero Z), -111,61 (m, 0,3F, J = 22 Hz, 30% isómero E).
EJ-B-9) Se disolvió el producto del EJ-B-8 (600 mg, 1 ,38 mmoles) en 8 mL de ácido acético y 2 mL de agua. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se concentró la solución bajo una corriente de nitrógeno, y se purificó el producto en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :2 en hexano para dar 248 mg (63%) del producto deseado como un sólido blanco. LCMS: m/z = 415,1 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) d 1,41 (s, 9H), 1 ,56 (m, 2H), 2,15 (m, 1 H), 3,64 (m, 2H), 4,35 (d, 2H), 4,9 (dt, vinilo, 1 H, J = 37 Hz), 7,73 (m, 2H), 7,86 (m, 2H). RMN 19F (CDCI3) d -116,96 (dt, 0,8F, J = 37 Hz, 80% isómero Z), -111 ,09 (m, 0,2F, J = 22 Hz, 20% isómero E).
EJ-B-10) A una solución en agitación del producto del EJ-B-9 (237 mg, 0,605 mmoles) en 6 mL de DMF se añadió dicromato de piridinio ( , 4 g, 3,03 mmoles). La solución viró a naranja oscuro y se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 18 h, momento en el cual se vertió en 20 mL de H2O. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (4 x 25 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con KHCO3 acuoso al 5% (3 x 25 mL). Se aciduló la capa acuosa con KHS04 1 ,0 M a un pH = 3 seguido de extracción con acetato de etilo (3 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se concentraron para producir 235 mg (95%) del producto aminoácido deseado. El sólido blanco resultante se llevó adelante en bruto sin más purificación. LCMS: m/z = 429,1 [M+Na]+.
EJ-B-11) A una solución en agitación del producto del EJ-B-10 (230 mg, 0,56 mmoles) en 7 mL de etanol se añadió hidrato de hidracina (70 mg, 1,13 mmoles) y se mantuvo a reflujo la solución resultante durante 2 h para formar un precipitado blanco. Se eliminó el disolvente al vacío. El sólido blanco resultante se disolvió en 8 mL de agua y se aciduló a un pH = 4 con ácido acético glacial. A continuación se enfrió en un baño de hielo y se filtró. Se concentró el filtrado para dar 136 mg (87%) del producto de alilamina deseado como cristales amarillos que se llevaron a la siguiente etapa sin purificación. LCMS: m/z = 277,1 [M+H]+.
EJ-B-12) A una solución en agitación del producto del EJ-B-11 (136 mg, 0,50 mmoles) en 6 mL de DMF se añadió acetimidato de etilo (252 mg, 2,04 mmoles) en 3 porciones en intervalos de 1 ,5 h. Después de completar la adición, se agitó la mezcla durante toda la noche a temperatura ambiente. Se filtró la solución rosa, y se lavó la torta del filtro con agua. Se eliminó el disolvente al vacío, y el aceite amarillo resultante se purificó por HPLC de fase inversa usando una columna semipreparada Y C Combiprep ODS-A eluyendo con un gradiente de 7 minutos del 1 al 50% A (A: acetonitrilo 100% con 0,05% de TFA, B: agua 100% con 0,05% de TFA). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y concentraron para producir aproximadamente 50 mg del producto de acetamidina deseado como una sal trifluoroacetato que se llevó a la etapa siguiente. LCMS: m/z = 318,2 [M+H]+. Ejemplo B) El producto del EJ-B-12 se disolvió en 6 ml_ de HCI 6,0 N y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Se eliminó el disolvente al vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces adicionales para eliminar sales de TFA. Cuando la RMN 19F indicó que todo el TFA había sido eliminado, el producto se secó al vacío para dar 30 mg (20%, rendimiento combinado en dos etapas) de una mezcla E:Z 20:80 que contenía el diclorhidrato del ácido (2S,5E)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico y el diclorhidrato del ácido (2S,52)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico como un sólido transparente espumoso. HRMS cale, para C9H16FN3O2: 218,1305 [M+H]+, encontrado: 218,1309. RMN 1H (D20) d 2,01 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,24 (m, 2H), 3,96 (t, 1H), 4,00 (d, 2H), 5,07 (dt, vinilo, 1H, J = 37 Hz), 5,4 (dt, vinilo, 1 H, J = 37 Hz). RMN 19F (D20) d -116,8 (m, 0,8F, J = 37 Hz, 80% isómero Z), -109,6 (m, 0,2F, J = 21 Hz, 20% isómero E). Ejemplo C Diclorhidrato dei ácido (2S,5Z)-2-amino-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico EJ-C-1) Se disolvió 2-fluoro-fosfonoacetato de trietilo (3,54 g, 14,6 mmoles) en 20 mL de CH2CI2 a 0°C, y se añadió ,8-diazabiciclo[5.4.0]-undec-7-eno (2,4 mL, 16,4 mmoles). Se agitó la mezcla a 0°C durante 20 min para producir una solución naranja. A continuación se añadió una solución del producto aldehido del EJ-A-3 (4,04 g, 11 ,7 mmoles) a 0°C, y se agitó la mezcla marrón resultante durante toda la noche a temperatura ambiente, momento en el cual LCMS indicó que no quedaba material de partida. Se eliminó el disolvente, y se dividió el residuo entre agua (60 mL) y acetato de etilo (120 mL). Se recogió la capa orgánica, y se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 50 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (60 mL) y KHS04 acuoso (60 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El producto en bruto, 5,7 g de un aceite naranja, se purificó por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexano para dar 3,5 g (69%) del producto fluoro-olefínico deseado como un aceite transparente. R N 1H y RMN 19F indicaron que el producto aislado tenía una proporción Z/E de 70:30. HRMS cale, para C2oH3208FN: 456,2010 [M+Na]+, encontrado: 456,2017. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,48 (s, 18H), 2,0 (m, 1 H), 2,25 (m, 1 H), 2,6 (m, 2H), 3,7 (m, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,9 (m, 1 H), 5,9 (dt, vinilo, 1H, J = 21,2 Hz), 6,1 (dt, vinilo, 1 H, J = 32,4 Hz). RMN 19F (CDCI3) d -129,4 (d, 0,7F, J = 34 Hz, 70% isómero Z), -121 ,6 (d, 0,3F, J = 22 Hz, 91% isómero E).
EJ-C-2) El producto éster del EJ-C-1 (3,5 g, 8,1 mmoles) disolvió en 80 mL de metanol a temperatura ambiente y a continuación se añadió NaBH4 (3 g, 80 mmoles) en porciones. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 h, momento en el cual el análisis por HPLC indicó que la reacción estaba completa a >90%. Se enfrió la reacción con NH4CI saturado. Se extrajo el producto con acetato de etilo y se secó sobre Na2S04. Se evaporó la capa orgánica para dar 3,2 g de producto en bruto como un aceite incoloro, que se purificó por cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con acetato de etilo al 20%-30% en hexano para dar 2,11 g (67%) de una mezcla Z/E del producto fluoro-olefínico como un aceite transparente junto con 0,41 g (13%) del producto de isómero Z puro deseado (Z:E = 97:3 por RMN 19F) como un aceite transparente. HRMS cale, para Ci8H3oN07F: 414,1904 [M+Na]+, encontrado: 414,1911. RMN 1H (CDCI3) d 1,48 (s, 18H), 2,0 (m, 1 H), 2,2 (m, 3H), 3,7 (s, 3H), 4,1 (dd, 2H, J = 17 Hz), 4,8 (dt, 1H, J = 39 Hz), 4,9 (m, 1H). RMN 19F (CDCI3) d -1 9,1 (dt, 1 F, J = 39 Hz, J = 17 Hz).
EJ-C-3) Se disolvieron el producto de alcohol Z del EJ-C-2 (390 mg, 1 mmoles) y 3-met¡l-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (130 mg, 1 ,3 mmoles) en 20 ml_ de THF. A continuación se añadió a la solución PPh3 con soporte de polímero, y se agitó suavemente la mezcla durante 10 min. A continuación se añadió gota a gota azodicarboxilato de dietilo, y se agitó la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por LCMS indicó formación de producto y que no estaba presente ningún material de partida. Se filtró el polímero a través de un lecho de celita, y se lavó el lecho con THF. Se evaporó el filtrado para dar 1 ,0 g de producto en bruto que se purificó mediante cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con acetato de etilo del 20% al 30% en hexano para dar 500 mg de producto, contaminado con algo de subproducto de hidracida. Este material se purificó además mediante cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con 98:2:0,01 de cloruro de metileno:metanol:hidróxido de amonio para dar 180 mg (38%) del producto de amidina protegido deseado como un aceite transparente, que contenía sólo el isómero Z deseado por RMN 19F. HRMS cale, para C21H32 3O8F: 491 ,2517 [M+NH4 , encontrado: 491,2523. RMN H (CDCI3) d 1 ,5 (s, 18H), 1 ,9 (m, 1 H), 2,1 (m, 3H), 2,3 (s, 3H), 3,7 (s, 3H), 4,2 (d, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,0 (dt, 1H, J = 36 Hz). RMN 19F (CDCl3) d -116,5 (dt, 1F, J = 38 Hz).
EJ-C-4) Se disolvió el producto del EJ-C-3 (88 mg, 0,19 mmoles) en 4 mL de ácido acético al 25% en agua que contenía unas gotas de metanol, y a continuación se añadió polvo de Zn (109 mg, 1 ,67 mmoles). Se agitó la mezcla bajo sonicación durante 3 h. El polvo de Zn se filtró a través de un lecho de celita, y se lavó el lecho con agua. Se evaporó el filtrado hasta sequedad para dar un producto en bruto que se purificó por cromatografía de columna HPLC de fase inversa en una columna YMC Combiprep eluyendo durante 8 min con un gradiente del 20 al 80% A (A: ACN al 100% con TFA al 0,01%, B: H20 al 00% con TFA al 0,01%). Se recogió el producto deseado en dos fracciones, y se concentraron las fracciones. Se obtuvo el producto como un aceite incoloro como una mezcla de sales de trifluoroacetato que contenían sólo el isómero Z deseado por RMN 19F: el 30% fue producto mono-Boc protegido: HRMS cale, para C15H26N30 F: 332,1986 [M+H]+, encontrado: 332,2001 , y el 70% fue producto di-Boc protegido: HRMS cale, para C20H34N3O6F: 432,2510 [M + Hf, encontrado 432,2503. RMN 1H del producto di-Boc (D20) d 1 ,3 (s, 18H), 1 ,8 (m, 1H), 2,1 (m, 3H), 2,1 (s, 3H), 3,6 (s, 3H), 3,9 (d, 2H), 4,9 (dt, vinilo, 1 H, J = 37 Hz). RMN 19F (D20) d -117,3 (dt, 1 F, J = 37 Hz). Ejemplo C) Los productos combinados mono- y di-Boc del EJ- C-4 se disolvieron en 30 mL de HCI 6 N y se mantuvo a reflujo la solución durante 4 h, momento en el cual el análisis por LCMS indicó reacción completa. El exceso de HCI y agua se eliminó al vacío. Al terminar, se obtuvieron 9 mg (rendimiento combinado 40% para dos etapas) del diclorhidrato del ácido (2S,5Z)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico como una espuma muy higroscópica de color amarillo claro, que contenía sólo el isómero Z deseado por RMN 19F. HRMS cale, para CgHieNsOaF: 218,1305 [M+Hf, encontrado: 218,1320. RMN 1H (D20) d 1,3 (m, 18H), 1,9 (m, 2H), 2,1 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 3,8 (t, 1H), 3,9 (d, 2H), 4,9 (dt, vinilo, 1H, J = 37 Hz). RMN 9F (D20) d -117,3 (dt, 1F, J = 37 Hz). Ejemplo D Triclorhidrato de ácido iminoetil)amino]-5-heptenoico, dihidratado EJ-D-1) Se disolvió el producto del EJ-D-2 (3,75 g, 10 mmoles) en 60 mL de metanol, y NaBH4 (4 g, 106 mmoles) en porciones a temperatura ambiente durante 10 h, momento en el cual el análisis por HPLC indicó reducción de aproximadamente el 84%. Se enfrió la mezcla de reacción con NH4CI saturado y a continuación se extrajo tres veces con acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSC , se filtró y se evaporó para dar 3,2 g de producto en bruto como un aceite amarillo. HRMS cale, para C16H29N07: 348,2022 [M+Hf , encontrado: 348,2034. RMN 1H (CD3OD) d 4,9 (q, 1 H), 3,7 (s, 3H), 3,5 (t, 2H), 3,2 (m, 1H), 2,1 (m, 1 H), 1,9 (m, 2H), 1 ,5 (s, 18H) W ck ~ ~ .OCH3 O EJ-D-2) El producto alcohol del EJ-D-1 (3,2 g, 9,0 mmoles) se disolvió en 100 mL de THF y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió tetrabromuro de carbono (4,27 g, 12,9 mmoles), y se agitó la solución resultante a 0°C durante 30 min bajo nitrógeno. Se añadió PPh3 con soporte de polímero, y se agitó suavemente la mezcla a 0°C durante 1 h y después durante toda la noche a temperatura ambiente. Se eliminó el polímero por filtración a través de celita, y se lavó el lecho de celita con THF. Se evaporó el filtrado para dar producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con acetato de etilo 1 :3 en hexano para dar 2,0 g (54%, rendimiento combinado en 2 etapas) del producto bromado deseado como un aceite incoloro. HRMS cale, para Ci6H28 OeBr. 410,1178 [M+Hf, encontrado: 410,1137. RMN 1H (CDCI3) 54,9 (q, 1 H), 3,7 (s, 3H), 3,4 (m, 2H), 2,2 (m, 2H), 1 ,9 (m, 2H), 1 ,5 (s, 18H).
EJ-D-3) Una solución de NaOEt (21% en EtOH, 41 ,1 mL, 0,11 moles) en 60 mL de etanol se trató con p-metoxi bencenotiol (14,0 g, 0,1 moles), seguido por clorofluoroacetato de etilo (18,3 g, 0,13 moles). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h y se diluyó con 250 mL de hexano 1 :1 en acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con agua tres veces, y se secó sobre Na2S04. Se evaporó la capa orgánica seca para dar 25 g de producto en bruto que se llevó adelante sin más purificación. LCMS para CiiH1303SF: m/z = 267,10 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) d 7,5 (d, 2H), 6,9 (d, 2H), 6,0 (d, 1 H, J = 51 ,9 Hz), 4,2 (q, 2H), 3,8 (s, 3H), 1 ,2 (t, 3H). RMN iaF (CDCI3) d -146,2 (d, 1F, J = 53,6 Hz).
EJ-D-4) Una solución del producto en bruto del EJ-D-3 (24 mg, 0,1 moles) en 200 ml_ de cloruro de metileno se enfrió a -78°C y se trató con ácido 3-cloroperbenzoico (27 g, 0,12 moles) en 200 mL de cloruro de metileno. Se calentó lentamente la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche, momento en el cual el análisis por LCMS indicó formación de producto y que no quedaba material de partida. Se filtró el sólido, y se lavó el filtrado con NaHC03 saturado y NH4CI. Se secó la capa orgánica sobre MgS04 y se evaporó para dar 30 g de un aceite naranja, que se purificó mediante cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con hexano 2:1 en acetato de etilo para dar 17,5 g (70%) del producto de sulfóxido deseado como un aceite blanco mate. HRMS cale, para C11H13O4FS: 261 ,0597 [M+H]+, encontrado: 261 ,0598. RMN 1H (CDCI3) d 7,6 (m, 2H), 7,0 (m, 2H), 5,6 (d, 1H, J = 50 Hz diastereómero mayor), 5,4 (d, 1 H, J = 49 Hz diastereómero menor), 4,2 (q, 2H), 3,8 (s, 3H), 1 ,2 (t, 3H). RMN 19F (CDCI3) d - 94,3 (d, F, J = 53,6 Hz diastereómero mayor), - 91,7 (d, 1 F, J = 50,4 Hz diastereómero menor).
EJ-D-5) Una suspensión de NaH (60% en aceite mineral, 212 mg, 5,3 mmoles) en 6 mL de DMF seco se enfrió a 0°C bajo nitrógeno y se trató con una solución del producto de sulfóxido del EJ-D-4 (1 ,25 mg, 4,8 mmoles) en 2 mL de DMF. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 min, se enfrió la mezcla a 5°C, y el producto bromado del EJ-D-2 (2,17 g, 5,3 mmoles) se añadió en una porción. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 h, a continuación se calentó a reflujo a 95°C durante 1, momento en el cual el análisis por LCMS indicó formación de producto. Se vertió la mezcla en una mezcla de hielo/NH4CI acuoso. El producto se extrajo con hexano 1:1 en 3,17 g de un aceite amarillo bruto, que se purificó mediante cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexano para dar 1 ,05 g (50%) del producto de éster fluoro-olefínico deseado como un aceite incoloro. RMN 19F indicó que el producto aislado contenía 95:5 del isómero Z deseado. HRMS cale, para C20H32O8FN: 456,2010 [M+Na]+, encontrado: 456,2017. RMN H (CDCI3) d 1 ,5 (s, 18H), 2,0 (m, 1 H), 2,3 (m, 4H), 3,7 (s, 3H), 4,3 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 6,1 (dt, vinilo, H, J = 32,4 Hz, isómero Z). RMN 19F (CDCI3) d -129,4 (d, 0.95F, J = 34,8 Hz, 95% isómero Z), -121 ,6 (d, 0,05F, J = 21 ,6 Hz, 5% isómero E).
EJ-D-6) El producto de éster del EJ-D-5 (1 ,05 g, 2,4 mmoles) se disolvió en metanol a temperatura ambiente, y se añadió NaBH4 en porciones. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 h, a continuación se añadieron 2 ml_ de agua y se agitó la mezcla durante otras 3 h, momento en el cual el análisis por HPLC indicó que la reacción estaba completa en > 95%. Se enfrió la reacción con NH4CI saturado. Se extrajo el producto con acetato de etilo, y se secó la capa orgánica sobre Na2SÜ4 y se evaporó para dar 0,95 g de producto en bruto como un aceite incoloro. La RMN 19F indicó que el producto en bruto aislado contenía sólo el isómero Z deseado. HRMS cale. para Ci8H30NO7F: 414,1904 [M+Na]+, encontrado: 414,1949. RMN 1H (CDCI3) d 1 ,48 (s, 18H), 2,0 (m, 1 H), 2,2 (m, 3H), 3,7 (s, 3H), 4,1 (dd, 2H, J = 17 Hz), 4,8 (dt, 1H, J = 36 Hz), 4,9 (m, 1H). RMN 19F (CDCfe) d -119,1 (dt, 1 F, J = 38 EJ-D-7) El producto de alcohol del EJ-D-6 (0,95 g, 2,4 mmoles) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (290 mg, 2,9 mmoles) se disolvieron en 60 mL de THF. Se añadió trifenilfosfina con soporte de polímero, y se agitó suavemente la mezcla durante 10 min. A continuación se añadió gota a gota dimetilazodicarboxilato, y se agitó la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por LCMS indicó formación de producto y que no quedaba material de partida. Se filtró el polímero a través de lecho de celita, y se lavó el lecho con THF. Se evaporó el filtrado para dar un residuo que se dividió entre cloruro de metileno y agua. Se lavó la capa orgánica con agua dos veces, se secó sobre MgS04 y se evaporó para dar 1 ,3 g de producto en bruto que se purificó por cromatografía de columna instantánea Biotage eluyendo con acetato de etilo a entre el 20% y el 30% en hexano para dar 390 mg (34%, rendimiento combinado en 2 etapas) del producto de amidina protegida deseado como un aceite incoloro. La RMN 19F indicó que el producto aislado contenía sólo el isómero Z deseado. HRMS cale, para C21H32N3O8F: 491,2517 [M+NH4]+, encontrado: 491,2523. RMN 1H (CDCI3) d 1,5 (s, 18H), 1,9 (m, 1 H), 2,1 (m, 3H), 2,3 (s, 3H), 3,7 (s, 3H), 4,2 (d, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,0 (dt, 1H, J = 36 Hz). RMN 19F (CDCI3) d - 16,5 (dt, 1F, J EJ-D-8) Se disolvió el producto del EJ-D-7 (390 mg, 0,82 mmoles) en 20 ml_ de HOAc al 25% en agua que contenía 4 mL de metanol, y se añadió polvo de Zn (482 mg, 7,42 mmoles) en dos porciones. Se agitó la mezcla bajo sonicación durante 3 h. El polvo de Zn se filtró a través de un lecho de celita, y se lavó el lecho con agua. Se evaporó el filtrado hasta sequedad para dar un producto en bruto que se purificó por HPLC de fase inversa. Se recogieron las fracciones que contenían los productos deseados, se combinaron y se concentraron. Se obtuvieron los productos como aceites incoloros como una mezcla de sales de trifluoroacetato, que contenían sólo el isómero Z deseado por RMN 19F: el 30% fue producto mono-Boc protegido: HRMS cale, para Ci5H26N304F: 332,1986 [M+H]+, encontrado: 332,2001; el 70% fue producto di-Boc protegido: HRMS cale, para C20H34N3O6F: 432,2510 [M + H]\ 432,2503. RMN 1H del producto di-Boc (D20) d 1 ,3 (s, 18H), 1 ,8 (m, 1 H), 2,1 (m, 3H), 2,1 (s, 3H), 3,6 (s, 3H), 3,9 (d, 2H), 4,9 (dt, vinilo, 1 H, J = 37 Hz). RMN 19F (D20) d -117,3 (dt, 1 F, J = 37 Hz). Ejemplo D) Los productos combinados mono- y di-Boc del EJ- D-8 se disolvieron en 80 mL de HCl 6 N y se mantuvo a reflujo la solución durante 1 h, momento en el cual el análisis por LCMS indicó reacción completa. El exceso de HCl y agua se eliminó al vacío para dar 150 mg (rendimiento combinado del 50% en 2 etapas) del producto de triclorhidrato del ácido (2S,5Z)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-¡minoetil)amino]-5-heptenoico dihidratado deseado como una espuma muy higroscópica de color amarillo claro. HRMS cale, para C9H16 302F: 218,1305 [M+H]+, encontrado: 218,1290. RMN 1H (D20) d 1 ,3 (m, 18H), 1 ,9 (m, 2H), 2,1 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 3,8 (t, 1 H), 3,9 (d, 2H), 4,9 (dt, vinilo, 1 H, J = 37 Hz). RMN 19F (D20) d d -117,3 (dt, 1F, J = 37 Hz). Anal. cale, para C, 29,81 ; H, 6,39; N, 11 ,59; encontrado C, 29,80; H, 6,11 ; N, 11 ,20. Ejemplo E Diclorhidrato del ácido (2 ?,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico, monohidratado EJ-E-1) Se añade gota a gota cloruro de trimetilsililo a una solución enfriada de ácido D-glutámico en metanol a 0°C. La solución incolora y transparente resultante se deja en agitación a temperatura ambiente hasta que el análisis por cromatografía de capa fina revela que no queda material de partida. A continuación se enfria la reacción a 0°C, se añade trietilamina y se forma un precipitado blanco. Se añade di-terc-butildicarbonato, y se deja calentar la mezcla a temperatura ambiente. Al cabo de 3 h se retira el disolvente, y se añade éter dietílico. Se filtra la solución y se lava la torta del filtro con éter dietílico adicional. Se concentra el filtrado para dar el producto diéster mono-Boc, que se pasa a la siguiente etapa sin más purificación.
EJ-E-2) A una solución del producto en bruto del EJ-E-1 en acetonitrilo a temperatura ambiente se añaden 4-dimetilaminopiridina y di-terc-butildicarbonato. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente, hasta que el análisis por cromatografía de capa fina revela que la mayoría del material de partida se ha consumido. Se elimina el disolvente al vacío, y el residuo resultante se purifica por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de diéster di-Boc protegido deseado.
EJ-E-3) A una solución de DIBAL se añade gota a gota una solución fría del EJ-E-2 en éter dietílico anhidro a -78°C. Después de 30 min a -78°C, se enfría la solución con agua y se deja calentar a temperatura ambiente. Se diluye la mezcla turbia resultante con acetato de etilo, se seca sobre MgS04 y se filtra a través de un lecho de celita. Se concentra el filtrado, y el residuo resultante se purifica por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de aldehido deseado.
EJ-E-4) A una solución en frío (-78°C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo en THF se añade n-butil litio. Esta mezcla se agita a -78°C para producir una solución amarilla brillante. Se añade a continuación con jeringuilla una solución del producto a partir del EJ-E-3 en THF, y se agita la mezcla resultante a -78°C hasta que el análisis por cromatografía de capa fina revela que no queda material de partida. Se enfría la reacción a -78°C con NH4CI acuoso saturado. Se recoge la capa orgánica, y se extrae la capa acuosa con éter dietílico. Se lavan los productos orgánicos combinados con agua y salmuera, se seca sobre MgSC>4, se filtra y se concentra. A continuación se purifica el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto fluoro-olefínico deseado.
EJ-E-5) A una solución del EJ-E-4 en metanol a temperatura ambiente se añade NaBH4 sólido en porciones. Se agita la reacción a temperatura ambiente hasta que el análisis por cromatografía de capa fina revela que la mayoría del material de partida se ha consumido. Se enfría la reacción con NH4CI acuoso saturado y se extrae con acetato de etilo. Se combinan las capas orgánicas, se seca sobre MgS04, se filtra y se concentra. Se purifica el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de alcohol alílico deseado.
EJ-E-6) A una mezcla del EJ-E-5, trifenilfosfina con soporte de polímero y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona en THF se añade gota á gota dimetilazodicarboxilato. Se agita la reacción a temperatura ambiente hasta que el análisis por cromatografía de capa fina revela que no queda material de partida. Se filtra la mezcla a través de celita, y se concentra el filtrado. El aceite amarillo resultante se divide entre cloruro de metileno y agua. Se separa la capa orgánica, se lava con agua y salmuera, se seca sobre MgS04, se filtra y se concentra. Se purifica el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de amidina E-alílica protegido deseado.
EJ-E-7) El producto del EJ-E-6 se disuelve en metanol y ácido acético en agua. Se añade polvo de cinc, y se agita la mezcla bajo sonicación hasta que el análisis por HPLC revela que queda poco material de partida. El polvo de Zn se filtra a través de lecho de celita desde la mezcla de reacción, y se concentra el filtrado. Se purifica el material en bruto por cromatografía de columna HPLC de fase inversa. Se combinan las fracciones que contienen el producto y se concentra para producir el producto de acetamidina deseado como una sal de trifluoroacetato. Ejemplo E) Un solución del EJ-E-7 en HCl 6,0 N se mantiene a reflujo durante 1 h. El disolvente se elimina al vacío. El sólido resultante se lava en agua y se concentra repetidamente a partir de HCl 1 ,0 N para eliminar cualquier sal de TFA remanente y dar el producto de diclorhidrato del ácido (2 ,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado. Ejemplo F Diclorhidrato del ácido (2S,5E)-2-amino-6-fIuoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico monohidratado EJ-F-1) A una solución de THF (45 mL) del producto del EJ-A-3 (5,0 g, 11 ,5 mmoles) bajo nitrógeno se añadió gota a gota una solución de Red-Al (5,22 mL, 17,4 mmoles) en 5,6 mL de THF durante 30 minutos. La temperatura interna se mantuvo por debajo de -10°C. Al cabo de 5 minutos, se enfrió la reacción con 33,7 mL de tartrato de Na-K 1 ,3 M. Se añadió tolueno (11 mL) a la mezcla para mejorar la separación. Se lavó la fase orgánica con 33,7 mL de tartrato de Na-K 1,3 M seguido de salmuera (40 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El material en bruto, 3,8 g (84% de aceite amarillo claro, se pasó directamente a la siguiente etapa. LCMS: m/z = 414,2 [M+Naf. RMN 1H (CDCI3) d 1,48 (s, 18H), 1 ,95 (m, 1H), 2,1 (m, 1 H), 2,2 (m, 1H), 2,35 (t, 1 H), 3,7 (s, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,15 (dt, 1 H, J = 20 Hz). RMN 19F (CDCI3) d -119,1 (d, 0,02F, J = 37 Hz, 2% isómero Z), -11 ,8 (d, 0.98F, J = 24 Hz, 98% isómero E).
EJ-F-2) A una solución del producto en bruto del EJ-F-1 (50,0 g, 0,128 moles) en 500 mL de cloruro de metileno a -10°C se añadió trietilamina ( 8,0 g, 0,179 moles). Se añadió lentamente una solución de cloruro de metanosulfonilo (17,5 g, 0,153 moles) en 50 mL de cloruro de metileno para mantener la temperatura a -10°C. Se agitó la reacción durante 45 min a -10°C, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 50% en hexano) y LCMS reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción con 600 mL de ácido cítrico 1,0 M y se extrajo con acetato de etilo (2 x 400 ml_). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El material en bruto, 70 g de aceite amarillo, se pasó directamente a la siguiente etapa. LCMS: m/z EJ-F-3) A una solución del producto del EJ-F-2 (70,0 g, 0,128 moles) en 400 ml_ de dimetil formamida a temperatura ambiente se añadió 3-metil-1,2,4-oxadiazolin-5-onato de potasio (28,7 g, 0,192 moles). Se agitó la reacción durante 2,5 h a temperatura ambiente, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 30% en hexano) y LCMS reveló que el material de partida se había consumido. Se diluyó la reacción con 400 mL de agua y se extrajo con acetato de etilo (5 x 400 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se lavó con 400 mL de agua y 400 mL de salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El material en bruto, 70 g de aceite amarillo, se purificó por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo 1 :4 en hexano para dar 38 g (63%) de un aceite ligeramente amarillo. EJ-F-4) Se purifrcó una combinación de producto de varios preparados duplicados del EJ-F-3 por cromatografía de columna HPLC sobre columna MODCOL de gel de sílice Merck a un flujo de 500 mL/min ¡socrático en MtBE:heptano 60:40. Una segunda purificación en los 63 g recuperados fue una cromatografía de columna HPLC quiral en una columna Chiral Pak-AD que funcionaba a un flujo de 550 mlJmin ¡socrático a 10:90 A:B (A: etanol al 100%, B: eptano al 100%). Se combinaron las fracciones que contenían el producto y se concentró para producir 41 g (68%) del producto de amidina L,E-alílica protegido deseado como un aceite transparente, que contenía sólo el isómero L y E deseado por RMN 9F y cromatografía quiral. LCMS: m/z = 496,2 [ +Na]+. HRMS cale, para C21H32FN3O8: 491,2507 [M+Na , encontrado: 491,2517. RMN 1H (CDCI3) d 1,48 (s, 18H), 1,85 (m, 1H), 2,2 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,3 (dt, 1H, J = 20 Hz). RMN 19F (CDCI3) d -110,8 (q, 1 F, J = 20 Hz).
EJ-F-5) El producto del EJ-F-4 (22,5 g, 0,047 moles) se disolvió en 112 mL de metanol. Se inició agitación vigorosa y se añadieron 225 mL de ácido acético al 40% en agua seguido de polvo de cinc (11,5 g, 0,177 mmoles). Se colocó la reacción en agitación bajo reflujo (60°C aproximadamente) durante 2,5 h, momento en el cual el análisis por HPLC reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción y se filtró el Zn de la mezcla de reacción a través de celita, lavando la celita bien con metanol adicional. Se combinaron el filtrado y los lavados de metanol y se concentró. Se lavó el sólido blanco aceitoso resultante con cloruro de metiieno (2 x 500 mL) y se filtró a través de lecho de celita, y se realizó un lavado adicional con 500 mL de cloruro de metiieno. Se combinaron los filtrados y se concentró para proporcionar un aceite amarillo claro. El material en bruto, 39 g de aceite amarillo claro, se purificó por filtración con tapón en 200 mL de gel de sílice eluyendo con metanohcloruro de metileno:ácido acético 80:19:1 para dar 13 g (83%) del producto deseado. LCMS: m/z = 432,3 [M+H]+. 1 [M+Hf. HRMS cale, para C^HzeFNsC : 332,1986 [M+Hf, encontrado: 332,1982. RMN 1H (CD3OD) d 1,42 (s, 9H), 1 ,7 (m, 1H), 1,9 (m, H), 2,17 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 3,3 (m, 1H), 3,7 (s, 3H), 4,2 (d, 2H), 5,1 (dt, vinilo, 1H, J = 21 Hz). RMN 19F (CD3OD) d -110,83 (m, 1F, J = 21 Hz). Ejemplo F) Un solución del producto del EJ-F-5 (22 g, 0,066 moles) en 750 mL de HCI 6,0 N se mantuvo a reflujo durante 45 min. El disolvente se eliminó al vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces adicionales. El producto en bruto se purificó por cromatografía de columna HPLC de fase inversa sobre una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 min bombeando B ¡socrático al 00% durante 30 min seguido de un gradiente de A del 0 al 100% durante 10 min y un lavado A al 100% durante 20 min (A: acetonitrilo al 00%, B: H20 al 100% con 0,0025% de ácido acético). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y concentraron para producir 3,5 g (68%) del producto de acetamidina deseado como una sal diclorhidrato, que contenía sólo el isómero diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico como un sólido blanco, p.f. 51 ,5-56,3°C, que contenía sólo el isómero E deseado por RMN 9F. LCMS: m/z = 218,1 [M+Hf. HRMS cale, para C9H16F 3O2: 218,1305 [M+H]+, encontrado: 218,1325. RMN 1H (D20) d 1 ,8 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 3,7 (t, 1 H), 4,00 (d, 2H), 5,3 (dt, vinilo, 1 H, J = 21 Hz). RMN 19F (D20) d -109,9 (m, 1 F, J = 20 Hz). [d 589 = +15,3 (C, 0,334, (H20)). +52,8 (C, 0,334, (H20)). Ejemplo G Ácido (2S,5£)-2-am¡no-6-fluoro-7-[(1 -hidroximinoetil)amino]-5-heptenoico EJ-G-1) Se hizo burbujear HCI gaseoso durante 5 min a través de una solución fría (0°C) en agitación del producto del EJ-F-3 (14 g, 30,0 mmoles) en 100 mL de metanol. Se agitó la mezcla amarilla oscura resultante 30 min adicionales, momento en el cual la HPLC indicó consumo completo del material de partida. Se neutralizó la mezcla resultante con NaHC03 a pH = 8, y se extrajo el producto con EtOAc. Se secó la capa orgánica sobre MgS04 y se concentró para dar el producto de aminoéster deseado como un aceite amarillo oscuro que se pasó en bruto a la siguiente etapa. LC S: m/z = 274 [M+Na]+. RMN 1H (CDCfe) d 1 ,8 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 3,42 (ancho m, 1 H), 3,80 (s, 3H), 4,4 (dd, 2H), 5,40 (dt, vinilo, 1H, J = 21 Hz). RMN 19F (CDCI3) d -110,38 (m, 1 F, J = 21 Hz). Ejemplo G) Se agitó durante 10 min una solución del producto del EJ-G-1 (8 g, 30 mmoles) en 70 mL de NaOH 2,5 N, momento en el cual el análisis por HPLC indicó el consumo completo del material de partida. La solución resultante se neutralizó con HC1 12 N (50 mL aproximadamente) a pH = 7-8 y se concentró. Se lavó la suspensión espesa resultante con metanol, se filtró para eliminar las sales y se concentró en forma de un aceite parduzco. Se purificó el material en bruto por cromatografía de columna HPLC de fase inversa en una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 min bombeando B ¡socrático al 100% durante 30 min seguido de un gradiente de A del 0 al 100% durante 10 min y un lavado A al 100% durante 20 min (A: acetonitrilo al 100%, B: 100%). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y concentraron para producir 1,0 g (14%) del producto deseado como un sólido blanco. Se recristalizó el producto a partir de agua caliente y alcohol isopropílico y se recogió por filtración para producir ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-h¡droximinoetil)amino]-5-heptenoico como un sólido cristalino blanco. Punto de fusión: 198,00-200,00°C. LCMS: miz = 234,1 [ +Hf. RMN 1H (D20) d 1,8 (m, 4H), 2,05 (m, 2H), 3,6 (t, 1H), 3,9 (d, 2H), 5,2 (dt, vinilo, 1H, J = 21 Hz). RMN 19F (D20) d -112,1 (m, 1F, J = 20 Hz). Anal. cale, para C9H16FN3O3: C, 46,35; H, 6,91; N, 18,02; O, 20,58. Encontrado: C, 46,44; H, 6,95; N, 17,94; O, 20,78. Análisis quiral > 97,7%: CrownPak CR(+) a 0,8 mL/min ¡socrático con A al 100% (A: HCIO4 acuoso, pH = 1,5). Ejemplo H 4 Diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-íminoetil)amino]-N-(1H-tetrazol-5-H)-5-heptenamída EJ-H-1) Se disolvió el producto del EJ-F-3 (6,1 g, 0,013 moles) en 4 mL de metanol. Se inició agitación vigorosa y se añadieron 10 mL de HCI 6 N. Se colocó la reacción en agitación bajo reflujo (60°C aproximadamente) durante 18 h, momento en el cual el análisis por HPLC reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción y se concentró a 3,3 g (100%) de aceite naranja. LCMS: m/z = 282 [M+Na]+.
EJ-H-2) Se disolvió el producto del EJ-H-1 (3,3 g, 0,013 moles) en 12 mL de H20:dioxano 1 :1. Se inició la agitación y se añadió trietilamina (1 ,95 g, 0,019 moles). Se enfrió la reacción a 0°C y se añadió di-terc-butildicarbdnato (3,4 g, 0,016 moles). Se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente, momento en el cual se añadió acetonitrilo (4 mL) para disolver los sólidos. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 h, momento en el cual el análisis por HPLC reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción con KHSO4 ,0 N (25 mL), se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y se secaron las capas orgánicas sobre MgSC¼ y se concentró. El material en bruto, 3,5 g de un aceite oscuro, se purificó por cromatografía instantánea eluyendo con metanohcloruro de 05 metileno:ácido acético 4:95:1 para dar 2,4 g (52%) de producto deseado como un aceite amarillo claro. LCMS: m/z = 382 [M+Na]+.
EJ-H-3) Se disolvió el producto del EJ-H-2 (2,4 g, 0,007 moles) en 13 mL de THF. Se inició la agitación y se añadió 5-aminotetrazol monohidratado (0,83 g, 0,008 moles) seguido de 1 ,3-diisopropilcarbodiimida (1 ,0 g, 0,008 moles). Se dejó en agitación la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h, momento en el cual HPLC reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se añadieron a la reacción 12 mL de agua y se eliminó el THF por destilación al vacío. Se añadió etanol (30 mL) y se calentó la reacción a reflujo. Después de 15 min a reflujo, se enfrió la reacción a -10°C, momento en el cual el producto deseado precipitó desde la solución. Se recogió el producto por filtración para producir 1 ,25 g (50%) de un sólido blanco. LCMS: m/z = 449 [M+Naf.
EJ-H-4) Se disolvió el producto del EJ-H-3 (1 ,0 g, 0,0023 moles) en 5 mL de metanol. Se inició agitación vigorosa y se añadieron 10 mL de ácido acético al 40% en agua seguido de polvo de cinc (0,5 g, 0,008 moles). Se colocó a reflujo la reacción en agitación (60°C aproximadamente) durante 1 ,5 h, momento en el cual el análisis por HPLC reveló que la mayoría del material de partida se había consumido. Se enfrió la reacción y se filtró el Zn de la mezcla de reacción a través de celita, lavando bien la celita con metanol adicional. Se combinaron y concentraron el filtrado y los lavados de metanol. Se purificó el sólido blanco aceitoso resultante por cromatografía de columna HPLC de fase inversa sobre una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 min bombeando B ¡socrático al 100% durante 30 min seguido de un gradiente de A del 0 al 100% durante 10 min y un lavado A al 100% durante 20 min (A: acetonitrilo al 100%, B: H20 al 100% con 0,0025% de ácido acético). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y concentraron para producir 0,390 g (44%) del producto de acetamidina deseado como un sólido blanco. LCMS: m/z = 407,3 [M+Na]+. Ejemplo H) El producto del EJ-H-4 (0,30 g, 0,780 mmoles) se disolvió en 5 mL de HOAc concentrado. A esto se añadió 1 mL de HCI 4 N en dioxano. Se agitó la reacción durante 5 min a temperatura ambiente. Se eliminó el disolvente al vacío. Se disolvió el sólido resultante en agua y se concentró tres veces adicionales. La HPLC indicó cantidades de material de partida. Se disolvió el sólido en HCI 1 N y se agitó 3 h, momento en el cual HPLC indicó que la mayoría del material de partida se había consumido. Se concentró la solución para dar 290 mg (98%) del producto de acetamidina deseado como una sal de diclorhidrato. LCMS: m/z = 285,1 [M+H]+.
Ejemplo I 2HCI Díclorhidrato de S-2-[(1-¡minoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína Ejemplo-I-1 ) (2 4 ?)-metil-2-terc-butil-1 ,3-tiazolin-3-formiI-4-carboxilato Véase Jeanguenat y Seebach, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2291 (1991) y Pattenden y col. Tetrahedron, 49, 2131 (1993): se mantuvieron a reflujo clorhidrato de éster metílico de (R)-cisteína (8,58 g, 50 mmoles), pivalaldehído (8,61 g, 100 mmoles) y trietilamina (5,57 g, 55 mmoles) en pentano (800 mL) con eliminación continua de agua usando una trampa de Dean-Stark. Se filtró la mezcla y se evaporó. Se agitaron la tiazolidina (9,15 g, 45 mmoles) y formiato de sodio (3,37 g, 49,5 mmoles) resultantes en ácido fórmico (68 mL) y se trató con anhídrido acético (13 mL, 138 mmoles), gota a gota durante 1 hora a entre 0 y 5°C. Se dejó calentar la solución a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. Se evaporaron los disolventes y se neutralizó el residuo con NaHC03 al 5% acuoso y se extrajo con éter (3x). Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgS0 anhidro), se filtró y se evaporó para dar el compuesto del título, que se cristalizó a partir de hexano-éter como cristales blancos (8,65 g) (80% total, mezcla de conformadores 8:1). RMN 1H (CDCI3) d d conformador mayor: 1 ,04 (s, 9H), 3,29 (d, 1H), 3,31 (d, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,75 (s, 1H), 4,90 (t, 1H), 8,36 (s, 1 H). EM m/z (electropulverización) 232 (M+H)+ (100%), 204 (10) 164 (24). Ejemplo-l-2) (2 ?)4R)-metil-2-terc-butil-1,3-tiazoIin-3-formil-4-metil-4-carboxilato A una solución del producto del Ejemplo-l-1, (2 4/?)-metil-2-terc-butil-1,3-tiazolin-3-formil-4-carboxilato (8,65 g, 37,4 mmoles), en tetrahidrofurano anhidro (130 mL) bajo N2 a -78°C se añadió DMPU (25 mL) y se agitó la mezcla durante 5 min. Se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio, 1 M, en tetrahidrofurano (37,5 mL), y se agitó la mezcla durante 30 min. Después se añadió yoduro de metilo (5,84 g, 41,1 mmoles), se mantuvo la mezcla a -78°C durante 4 h y luego se calentó a temperatura ambiente con agitación continua. Se evaporaron los disolventes al vacío y se añadieron salmuera y acetato de etilo. Se extrajo la fase acuosa con 3 x EtOAc, y se lavaron las capas orgánicas combinadas con KHS04 al 10%, agua y salmuera. A continuación se secó (MgS04 anhidro), se filtró y se depuró todo el disolvente bajo presión reducida. La cromatografía del aceite residual sobre sílice con EtOAc/hexano al 1-10% produjo el compuesto del título (5,78 g, 63%, mezcla de conformadores 2:4:1). RMN 1H (CDCI3) d d conformador mayor: 1,08 (s, 9H), 1,77 (s, 3H), 2,72 (d, 1H), 3,31 (d, 1 H), 3,77 (s, 3H), 4,63 (s, 1H), 8,27 (s, 1 H); cnformador menor, 0,97 (s, 9H), 1 ,79 (s, 3H), 2,84 (d, 1H), 3,63 (d, 1 H), 3,81 (s, 3H), 5,29 (s, 1H), 8,40 (s, 1H); EM m/z (electropulverización) 246 (M+H)+ (100%), 188 (5) 160 (95). Tiempo de retención de 16,5 min en una columna de Daicel Chemical Industries Chiracel OAS, IPA/hexano al 10-40% durante 0-25 min, > 95% ee. Ejemplo-l-3) Clorhidrato de (2R)-2-metil-L-cisteína Se agitó el producto del Ejemplo-l-2, (2R,4R)-metil-2-terc-butil-1 ,3-tiazolin-3-formil-4-metil-4-carboxilato (5,7 g, 23,2 mmoles) con HCI 6 N (100 mL) bajo N2 y se mantuvo a reflujo vigoroso durante 2 días. Se enfrió la solución, se lavó con EtOAc y se evaporó para producir el producto clorhidrato de (2R)-2-metil-L-cisteína (3,79 g, 95%) como un polvo amarillo claro. RMN 1H (DMSO-de) d d 1,48 (s, 3H), 2,82 (t, 1H), 2,96 (ancho s, 2H), 8,48 (s, 3H). EM m/z (electropulverización) 136 [M+H+]. Ejemplo-l-4) Trifluoroacetato de S-[2-[[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]etil]-2-metil-L-cisteína Se añadió hidruro de sodio (2,6 g, 60% en aceite mineral, 65 mmoles) a un matraz RB enfriado al vacío y secado en horno que contenía 1-metil-2-pirrolidinona sin oxígeno (5 mL). Se enfrió la mezcla a -10°C y se agitó bajo 2. Se añadió en porciones el producto del Ejemplo-I-3, clorhidrato de 2-metil-L-cisteína (3,6 g, 21,0 mmoles) disuelto en 1-metil-2-pirrolidinona sin oxígeno (25 mL). Después de que cesara toda la evolución de H2, se añadió bromuro de 2-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)-amino]etilo (4,94 g, 21 mmoles) en 1-metil-2-pirrolidinona sin oxígeno (15 mL) a -10°C. A continuación se agitó la reacción durante 4 h permitiendo calentar a temperatura ambiente. Se neutralizó la solución con HCI 1 N y se eliminó la 1-met¡I-2-pirrolidinona al vacío. La cromatografía de fase inversa con acetonitriio al 1-20%) en solución de ácido trifluoroacético acuosa al 0,05% produjo el compuesto del título (5,9 g), recuperado con fracciones apropiadas de liofilización. RMN 1H (DMSO-d6/D20) d 1,31 (s, 9H), 1,39 (s, 3H), 2,55 (m, 2H), 2,78 (d, 1H), 3,04 (d, 1 H), 3,06 (t, 2H). HRMS calc.-para C11H22N2O4S: 279,1375 (M+H)+, encontrado 279,1379. Ejemplo-l-5) Clorhidrato de S-(2-am¡noetil)-2-metil-L-c¡steína El producto del Ejemplo-l-4, trifluoroacetato de S-[2-[[(1 ,1,-dimetiletoxi)carbonil]amino]etil]-2-met¡l-L-c¡steína (5,5 g, 14,0 mmoles) se disolvió en HG1 1 N (100 ml_) y se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante toda la noche. Se eliminó la solución por liofilización para dar el clorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metil-L-cisteína del título, RMN H ? (DMSO-de/D20) d 1,43 (s, 3H), 2,72 (m, 2H), 2,85 (d, 1H), 2,95 (t, 2H), 3,07 (d, 1 H). m/z [M+H]+ 179. Ejemplo I) El producto del Ejemplo-l-5 se disolvió en H2O, se ajustó el pH a 10 con NaOH 1 N y se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (1 ,73 g, 14,0 mmoles). Se agitó la reacción durante 15 a 30 min, se elevó el pH a 10 y se repitió este método 3 veces. Se ajustó el pH a 3 con HCI y se cargó la solución en una columna DOWEX 50WX4-200. Se lavó la columna con H20 y NH4OH 0,25 M, seguido de NH4OH 0,5 M. Se lavaron las fracciones del NH4OH 0,5 M y se congelaron de inmediato, se combinaron y se liofilizaron para dar un aceite que se disolvió en HCI 1 N y se evaporó para dar el compuesto del título como un sólido blanco (2,7 g). RMN 1H (DMSO-d6/D20) d 1,17 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,52 (d, 1H), 2,68 (m, 2H), 2,94 (d, 1 H), 3,23 (t, 2H). HRMS cale, para C8H18N302S: 220,1120 [M + H+], encontrado 220,1133. Ejemplo J metil-D-serina Los métodos y métodos usados en este ejemplo fueron idénticos a los del Ejemplo I, con la salvedad de que en la etapa Ejemplo-l-2 se usó yoduro de metoximetilo en vez de yoduro de metilo. Los métodos produjeron el producto del título como un sólido blanco (2,7 g). RMN 1H (D20) d 2,06 (s, 3H), 2,70 (m, 3H), 3,05 (d, 1H), 3,23 (s, 3H), 3,32 (t, 2H), 3,46 (d, 1H), 3,62 (d, 1H). HRMS cale, para C9H20N3O3S: 250,1225 [M + H+j, encontrado 250,1228. Ejemplo K Diclorhidrato de S-I(1/?)-2-[(1-iminoet¡l)amino]-1-metilet¡l]-2-metil-L-cisteína Ejemplo-K-1) (S)-1-[(benciloxicarbonil)amino]-2-propanol A una solución de (S)-1-amino-2-propanol (9,76 g, 130 mmoles) en benceno anhidro (60 mL) a 0°C se añadió cloroformato de bencilo (10,23 g, 60 mmoles) en benceno anhidro (120 mL) lentamente, en porciones, en un período de 20 min mientras se agitaba vigorosamente bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agitó la mezcla durante 1 hora a 0°C, y luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas más. Se lavó la mezcla con agua (2x) y salmuera (2x) antes de secar la capa orgánica sobre MgS04 anhidro. La evaporación de todo el disolvente dio el producto del título como un aceite. RMN 1H (CDCI3) d 1,22 (d, 3H), 2,40 (ancho s, 1H), 3,07 (m, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,94 (m, 1 H), 5,16 (s, 2H), 5,27 (m, 1H), 7,38 (m, 5H). EM m/z (electropulverización) 232 [M+23]+ (100%), 166 (96). EjempIo-K-2) Tosilato de (S)-1-[(benciloxicarbonil)amino]-2-propanol A una solución del producto del Ejemplo-K-1, (S)-1-[(benciloxicarbonil)amino]-2-propanol (9,74 g, 46,7 mmoles) y trietilamina (7,27 g, 72 mmoles) en cloruro de metileno (60 ml_) a 0°C se añadió cloruro de toluensulfonilo (9,15 g, 48 mmoles) en cloruro de metileno (18 ml_) lentamente, en porciones, en un período de 20 min mientras se agitaba vigorosamente bajo nitrógeno. Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 36 horas más bajo nitrógeno. Se lavó la capa orgánica con HCI 1 N, agua, NaHC03 al 5%, agua y salmuera antes de secarla sobre MgSCv» anhidro. La evaporación de todo el disolvente dio un sólido blanco que se pasó a través de un tapón de sílice con acetato de etilo/hexano (1:4) para eliminar el exceso de cloruro de toluensulfonilo y después con acetato de etilo/hexano (1 :3) para dar el producto del título como cristales blancos. Este material se recristalizó a partir de acetato de etilo/hexano para dar agujas blancas (10,8 g). RMN 1H (CDCI3) d d 1,22 (d, 3H), 2,39 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,43 (dd, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,04 (ABq, 2H), 7,34 (m, 7H), 7,77 (d, 2H). EM m/z (electropulverización) 386 [M+23]+ (100%), 320 (66). El producto se examinó en una columna de HPLC Perkle Covalent (R,R) d -GEM1 de Regis Technologies Inc. usando fase móvil de isopropanol/hexano y un gradiente de isopropanol al 10% durante 5 min, luego isopropanol del 10 al 40% durante un período de 25 min, y usando tanto detectores UV como de polarimetría láser. Máximo principal del tiempo de retención: 22,2 min, > 98% ee. Ejemplo-K-3) Trifluoroacetato de S-[(1ft)-2-(benc¡loxicarbonilam¡no)-1-metiletil]-2-metil-L-cisteína Se añadió el producto del Ejemplo-l-3, clorhidrato de 2-metil-L-cisteína (1 g, 6,5 mmoles) a un matraz RB lavado con N2 secado en horno disuelto en 1-metil-2-pirrolidinona sin oxígeno (5 ml_), y se enfrió el sistema a 0°C. Se añadió hidruro de sodio (0,86 g, 60% en aceite mineral, 20,1 mmoles) y se agitó la mezcla a 0°C durante 15 min. Se añadió una solución del producto del Ejemplo-K-2, tosilato de (S)-1-[(N-benciloxicarbonil)amino]-2-propanol (2,5 g, 7 mmoles) disuelto en 1-metil-2-pirrolidinona sin oxígeno (10 mL) durante 10 min. Después de 15 min a 0°C se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4,5 horas. A continuación se aciduló la solución a un pH 4 con HC1 1 N y se eliminó la 1-metil-2-pirrolidinona por evaporación al vacío. La cromatografía de fase inversa con acetonitrilo al 20-40% en solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,05% produjo el compuesto del título en (0,57 g), recuperado por liofilizacíón. RMN 1H (H20, 400 MHz) d 1,0 (d, 3H), 1,4 (s, 3H), 2,6 (m, 2H), 2,8 (m, 1H), 3,1 (m, 2H), 3,6 (s, 1H), 5,0 (ABq, 2H), 7,3 (m, 5H). EM m/z (electropulverización) 327 [M+H+], 238 (20), 224 (10) y 100 (25). Ejemplo-K-4) Clorhidrato de S-[(1ft)-2-amino-1-metiletil]-2-metil- L-cisteína Se disolvió el producto del Ejemplo-K-3, trifluoroacetato de S- [(1R)-2-(benciloxicarbonilamino)-1-metiletil]-2-metil-L-cisteína (0,5 g, 1,14 mmoles) en HCI 6 N y se mantuvo a reflujo durante 1,5 horas. A continuación se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc. Se concentró la capa acuosa al vacío para dar el producto del título, clorhidrato de (2R,5R)-S-(1-amino-2-propil)-2-metil-cisteína (0,29 g), que se usó sin más purificación. RMN 1H (H20, 400 MHz) d 1,2 (m, 3H), 1,4 (m, 3H), 2,7 (m, 1H), 2,8-3,2 (m, 2H), 3,4 (m, 1H) (mismo desdoblamiento de máximos debido a formas rotaméricas). EM miz (electropulverización): 193 [M+H+] (61%), 176 (53), 142 (34), 134 (100) y 102 (10). Ejemplo-K) El producto del Ejemplo-K-4, clorhidrato de S-[(1R)- 2-amino-1-met¡letil]-2-metil-L-cisteína (0,2 g, 0,76 mmoles), se disolvió en 2 ml_ de H20, se ajustó el pH a 10,0 con NaOH 1 N y se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (0,38 g, 3 mmoles) en cuatro porciones durante 10 minutos, ajustando el pH a 10,0 con NaOH 1 N en caso necesario. Al cabo de 1 h, se ajustó el pH a 3 con HCI 1 N. Se cargó la solución en una columna DOWEX 50VWX4-200 lavada con agua. Se lavó la columna con H20 y NH4OH 0,5 N. Se agruparon las fracciones básicas y se concentraron hasta sequedad al vacío. Se aciduló el residuo con HCI 1 N y se concentró como producto del título del Ejemplo K (49 mg). RMN 1H (H20, 400 MHz) d 1,3-1 ,0 (m, 3H), 1,5 (m, 3H), 2,1-1,8 (m, 3H), 3,4-2,6 (m, 5H), 3,6 (m, 1H) (rotámeros observados). EM m/z (electropulverización): 234 [M+H+] (100%), 176 (10) y 134 (10). Ejemplo L Diclorhidrato de S-[(1S)-2-[(1-iminoetil)amino-1-metiletíl]-2-metil-L-cisteína Los métodos y métodos usados en este ejemplo fueron idénticos a los del Ejemplo K, con la salvedad de que en la etapa Ejemplo-K-1 se usó (R)-1-amino-2-propanol en vez de (S)-1-amino-2-propanol para dar el compuesto del título, clorhidrato de S-[(1S)-2-[(1-iminoetil)amino]-1-metiIetil]-2-metil-L-cisteína. RMN 1H (H20, 400 MHz) d 3,6 (m, 1H), 3,4-2,6 (m, 5H), 2,1-1,8 (m, 3H), 1,5 (m, 3H) y 1,3-1,0 (m, 3H). HRMS cale, para CgHigNsOaS: 234,1276. Encontrado 234,1286. Ejemplo M Diclorhidrato de S-[2-1-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-etil-L-cisteína Los métodos y métodos usados en esta síntesis fueron idénticos a los del Ejemplo I, con la salvedad de que en la etapa Ejemplo-l-2 se usó triflato de etilo en vez de yoduro de metilo. Se usó cromatografía de fase inversa, usando un gradiente del 10 al 40% de acetonitrilo en agua, para purificar el producto del título (rendimiento 20%). RMN 1H (D20) d d 0,83 (t, 3H), 1 ,80 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 2,68 (m, 1 H), 2,78 (m, 1H),.2,83 (m, 1H), 3,11 (m, 1H), 3,36 (t, 2H). HR S cale, para C9H20N3O2S: 234,1276 [M + H , encontrado 234,1284. Ejemplo N Diclorhidrato de 2-[[[[2-(1-iminoetil)amino]etil]t¡o]met¡l]-D-valina Ejemplo-N-1) Triflato de isopropilo Se trató triflato de plata (25,25 g, 98,3 mmoles) agitado en éter dietílico (300 ml_) bajo nitrógeno con yoduro de isopropilo (16,54 g, 98,5 mmoles) en éter (200 mL) durante 15 minutos. Se agitó la mezcla durante 10 minutos y luego se filtró. Se destiló el filtrado a presión reducida. Se redestiló el destilado a presión atmosférica para eliminar la mayoría del éter dietílico, dejando una mezcla del triflato de isopropilo del título-éter dietílico (84:16 en peso) (15,64 g, 70% corregido) como un líquido incoloro. RMN 1H (CDCI3, 400 MHz) d ,52 (d, 6H), 5,21 (septeto, 1 H). Los métodos y métodos usados en este ejemplo fueron idénticos a los del Ejemplo I, con la salvedad de que el triflato de isopropilo sustituyó al yoduro de metilo del Ejemplo-l-2. El producto del título en bruto se purificó por cromatografía de fase inversa usando una elución con gradiente de acetonitrilo al 10-40% en agua. RMN 1H (H20, 400 MHz) d d 0,94 (dd, 6H), 2,04 (septeto, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,65, 2,80 (d m, 2H), 2,85, 3,10 (dd, 2H), 3,37 (t, 2H). HR S cale, para C10H22N3O2S: 248,1433 [M+H+], encontrado 248,1450. Ejemplo O 2TFA Bistrifluoroacetato de S-[2-(1-iminoetilamino)etil]-2-metil-(D/L)-cisteína Ejemplo-O-1) Ester metílico de S-(2-aminoetil)-L-cisteína Se disolvió una muestra de 10 g (50 mmoles) de S-(2-aminoet¡l)-L-cisteína en 400 mL de metanol. Esta solución enfriada se hizo burbujear en HCI anhidro durante 30 minutos. Después de agitación a temperatura ambiente durante toda la noche, se concentró la solución para producir 12,7 g del compuesto del título. Ejemplo-O-2) Ester metílico de A/-(4-clorofenilmetilen)-S-[2-[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-L-cisteína Se disolvió una muestra de 12,7 g (50 mmoles) del producto del Ejemplo-O-1, éster metílico de S-(2-aminoetil)-L-cisteína, en acetonitrilo. A esta solución se añadieron 12,2 g (100 mmoles) de MgS04 anhidro, 14 g (100 mmoles) de 4-clorobenzaldehído y 100 mmoles de trietiiamina. Se agitó esta mezcla durante 12 horas, se concentró a un volumen pequeño y se diluyó con 500 mL de acetato de etilo. Se lavó sucesivamente la solución orgánica con solución de NaHC03 (0,1%), NaOH (2 N) y salmuera. Se secó la fase orgánica (MgS04 anhidro), se filtró y se concentró para producir 7,5 g del compuesto del título. [M + H+] = 179. Ejemplo-O-3) Éster metílico de /V-[4-clorofenilmetilen]-S-[2[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-2-metil-D/L-cisteína Una muestra del producto del Ejemplo-O-2, éster metílico de ?/-(4-clorofenilmetilen)-S-[2-[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-L-cisteína (7,5 g, 17 mmoles), en THF anhidro se trató con 17 mmoles de bis(trimetilsilil)amida sódica a -78°C bajo nitrógeno, seguido de 2,4 g (17 mmoles) de yoduro de metilo. Se mantuvo la solución a -78°C durante 4 h y a continuación se calentó a temperatura ambiente con agitación continua. Se evaporaron los disolventes al vacío y se añadieron salmuera y acetato de etilo. Se extrajo la fase acuosa con 3 x EtOAc, y se lavaron las capas orgánicas combinadas con KHSO4 al 10%, agua y salmuera antes de secar (MgS04 anhidro), filtrar y evaporar para producir el compuesto del título. Ejemplo-O-4) Clorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metil-D/L-cisteína Una muestra del producto del Ejemplo-O-3, éster metílico de N-[4-clorofenilmetilen]-S-[2[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-2-metil-D/L-cisteína (4,37 g, 10 mmoles) se agitó y se calentó (60°C) con HCI 2 N durante toda la noche y se lavó la solución (3x) con acetato de etilo. Se liofilizó la solución acuosa para dar el producto del título. Ejemplo O) Se disolvió una muestra del producto del Ejemplo- 0-4, diclorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metil-D/L-cisteína (2,5 g, 10 mmoles) en H2O y se ajustó el pH a 10 con NaOH 1 N. A continuación se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (1 ,24 g, 10,0 mmoles) a la mezcla de reacción. Se agitó la reacción durante 15 a 30 min, se elevó el pH a 10 y se repitió este método 3 veces. Se redujo el pH a 4 con solución de HCI y se evaporó la solución. Se purificó el residuo en HPLC de fase inversa con H20 que contenía ácido trifluoroacético al 0,05% como fase móvil para producir el producto del título del Ejemplo O. M + H = 200. Ejemplo P Diclorhidrato del ácido (2R)-2-amino-3-[[2-[(1-iminoetil)amino]etil]sulfinil]-2-metilpropanoico Una solución de diclorhidrato de S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína, el producto del Ejemplo I (0,2 g, 0,73 mmoles), en 3 mL de agua se agitó y enfrió a 0°C y se añadió una solución de H2O2 al 3% (0,8 mL, 0,73 mmoles) en ácido fórmico (0,4 mL, 0,73 mmoles) en porciones de 0,3 mL. Se eliminó el baño frío y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 48 horas. Se concentró la solución al vacío, se diluyó con agua ( 0 mL) y se volvió a concentrar para dar la sulfona en bruto. Se purificó por cromatografía este residuo (fase inversa C-18, con fase móvil H2O que contenía ácido trifluoroacético al 0,05%) para dar la sulfona pura. Se trató la sulfona con HCI 1 M (10 mL) y se concentró al vacío para dar 140 mg de una mezcla de 2 diastereómeros del compuesto del título como un aceite incoloro de las sales de HCI. RMN 1H (300 Hz, D20) d 1,5 (s, 2H), 1,6 (s, 1H), 2,0 (s, 3H), 3,1 (m, 2H), 3,3 (m, 2H), 3,6 (m, 2H). HRMS cale, para CeH-isNsOaS: 236,1069 [M+H+], encontrado 236,1024. Ejemplo Q Diclorhidrato del ácido (2R)-2-amino-3-[[2-[(1-iminoetil)amino]etil]suifonil]-2-metilpropanoico Una solución de diclorhidrato de S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína (Ejemplo I, 0,15 g, 0,54 mmoles) en 2 mL de agua se enfrió a 0°C y se añadió una solución de H202 al 3% (1 ,6 mL, 1,46 mmoles) en ácido fórmico (0,8 mL, 14,6 mmoles). Se eliminó el baño frío y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se concentró la solución al vacío, se diluyó con 10 mL de agua y se volvió a concentrar para dar el sulfóxido en bruto. Se diluyó el residuo con 4 mL de agua y se ajustó a pH 9 con NaOH 2,5 N. Se añadió acetona (5 mL), seguido de Boc20 (0,2 g), y se agitó la reacción durante 48 h a temperatura ambiente. Se ajustó la mezcla de reacción a pH 6 con HCI 1 M y se concentró al vacío. Se purificó por cromatografía este residuo (fase inversa C-18; ACN 40 a 50%: H2O, TFA al 0,05%) para dar el material protegido Boc puro. Se concentraron las fracciones al vacío y se trató el residuo con HCI 1 N (3 mL) durante 1 h. Se concentró la solución para dar 30 mg del compuesto del título como un aceite incoloro. RMN 1H (400 Hz, D20) d 4,0 (d, 1 H), 3,7 (d, 1 H), 3,6 (t, 2H), 3,5 (t, 2H), 2,1 (s, 3H) y 1 ,5 (s, 3H) ppm. HRMS calc. para CBHIBNSOAS: 252,1018 [M+H+], encontrado 252,0992. Ejemplo R Diclorhidrato del ácido (2S,5Z)-2-amino-6-metil-7-[(1 iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-R-1) Z E Se trató una solución de trietil-2-fosfonopropionato (6,5 mg, 27, 1 mmoles) en tolueno (60 mL) con bis(trimetilsilil)amida potásica 0,5 (50,0 mL, en tolueno) y se condensó el anión resultante con el producto de aldehido del Ejemplo-U-3 por el método del Ejemplo-U-4 {véase Ejemplo U más adelante). Esto produjo, después de cromatografía, 8 g de una mezcla 3:7 respectivamente de los diésteres Z y. E.deseados. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) 6,7-68 ppm (m, H), 5,9 ppm (m, 1H), 4,9 ppm (m, 1 H), 4,2 ppm (q, 2H), 3,7 ppm (s, 3H), 2,5 ppm (m, 1 H), 2,2-2,3 ppm (m, 2H), 2,0 ppm (m, 1H), 1 ,9 ppm (s, 3H), 1,8 ppm (s, 3H), 1 ,5 ppm (s, 18H), 1 ,3 ppm (t, 3H). 22 Ejemp!o-R-2) Z E La mezcla de productos del Ejemplo-R-1 (850 mg, 2,0 mmoles) en Et20 (30 mL) se redujo en un período de veinte minutos con diisobutil aluminio/hidruro (DIBAL) por el método del Ejemplo-U-5 para producir la mezcla deseada ilustrada en bruto de alcohol E y éster Z sin reducir. Esta mezcla se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con n-hexano:EtOAc (9:1) a n-hexano:EtOAc (1 :1) proporcionando muestras de los materiales deseados del éster Z (530 mg) y del alcohol E. Éster Z: R N 1H (300 MHz, CDCI3) 5,9 ppm (m, 1H), 4,9 ppm (m, 1H), 4,2 ppm (q, 2H), 3,7 ppm (s, 3H), 2,5 ppm (m, 1H), 2,2-2,3 ppm (m, 2H), 1 ,9 ppm (s, 3H), 1 ,5 ppm (s, 18H), 1 ,3 ppm (t, 3H). Alcohol E: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) 5,35 ppm (m, 1 H), 4,9 ppm (m, 1H), 3,95 ppm (s, 1H), 3,7 ppm (s, 3H), 1,8-2,2 ppm (m, 6H), 1 ,6 ppm (s, 3H), 1 ,5 ppm (s, 18H). Ejemplo-R-3) El producto éster Z del Ejemplo-R-2 (510 mg, 1,2 mmoles) en Et20 (30 mL) se redujo durante un período de dos horas con diisobutil aluminio/hidruro (DIBAL) por el método del EjempIo-U-5 para producir el alcohol Z deseado ilustrado en bruto. Este material se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con n-hexano:EtOAc (9:1) a n-hexano:EtOAc (8:2) para producir 340 mg del producto de alcohol Z deseado. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5,3 ppm (m, 1H), 4,9 ppm (m, 1H), 4,2 ppm (d, H), 4,0 ppm (d, 1H), 2,2 ppm (m, 3H), 1,95 ppm (m, 1H), 1,8 ppm (s, 3H), 1,5 ppm (s, 18H). Ejemplo-R-4) Se trató una solución (5 mL) del alcohol del producto del Ejemplo-R-3 (340 mg, 0,9 mmoles) con trietilamina (151 mg, 1,5 mmoles). A esta solución enfriada en un baño de hielo se añadió una solución de CH2CI2 (1,5 mL) de cloruro de metanosulfonilo. Al cabo de quince minutos se eliminó el baño de hielo y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 20 h. A continuación se lavó la mezcla de reacción con KHSO4 al 10%, se secó sobre Na2S04 y se depuró todo el disolvente bajo presión reducida para producir 350 mg del cloruro Z-alílico deseado. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5,4 ppm (m, 1H), 4,9 ppm (m, 1H), 4,1 ppm (d, 1H), 4,0 ppm (d, 1H), 2,1 ppm (m, 3H), 1,95 ppm (m, 1H), 1,8 ppm (s, 3H), 1,5 ppm (s, 18H).
Ejemplo-R-5) Se hizo reaccionar una suspensión de 3-metiI-1 ,2,4-oxa-diazolin-5-ona potásica en DMF con una solución de DMF del producto del Ejemplo-R-4 por el método del Ejemplo-S-2 posterior para producir el material. Ejemplo-R-6) Se hizo reaccionar el producto del Ejemplo-R-5 con cinc en HOAc por el método del Ejemplo-U-7 para producir la amidina. Ejemplo-R-7) Se hizo reaccionar el producto del Ejemplo-R-6 con HCI 4 N en dioxano en HOAc glacial para producir la amidina. Ejemplo R) Se desprotegió el producto del Ejemplo-R-7 para producir el diclorhidrato del aminoácido. Ejemplo S Diclorhidrato del ácido (2S,5E)-2-amino-6-metil-7-[(1- iminoetil)am¡no]-5-heptenoico Ejemplo-S-1) Se hizo reaccionar el producto de alcohol E del Ejemplo-R-2 (1,3 g, 3,3 mmoles) con trietilamina (525 mg, 5,2 mmoles) y cloruro de metanosulfonilo (560 mg, 5,2 moles) por el método del Ejemplo-R-4 para producir 1,4 g del cloruro alílico E deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5,5 ppm (m, 1 H), 4,9 ppm (m, 1H), 4,0 ppm (s, 2H), 3,7 ppm (s, 3H), 2,1-2,3 ppm (m, 3H), 1,9 ppm (m, 1H), 1,7 ppm (s, 3H), 1,5 ppm (s, 18H). Ejemplo-S-2) Se trató una suspensión de 3-metil-1 ,2,4-oxa-diazolin-5-ona de potasio (460 mg, 3,35 mmoles) en 5 mL de DMF con una solución de DMF (15 mL) del producto del Ejemplo-S-1. Se agitó esta mezcla de reacción a 50°C durante 17 h antes de añadir 50 mg (0,04 mmoles) adicionales de la sal de diazolin-5-ona. Se continuó calentando la reacción agitada durante 3 h adicionales antes de enfriarla a temperatura ambiente y de diluirla con 180 mL de agua. Se extrajo esta mezcla con EtOAc y se diluyeron los extractos con 120 mL de n-hexano, se lavó con agua, se secó sobre Na2S04 y se depuró todo el disolvente bajo presión reducida para producir 1 ,3 g del material. RMN H (400 MHz, CDCI3) 5,5 ppm (m, 1H), 4,9 ppm (m, 1 H), 4,2 ppm (s, 3H), 3,7 ppm (s, 3H), 2,2 ppm (m, 3H), 1,95 ppm (m, 1H), 1 ,8 ppm (s, 3H), 1,5 ppm (s, 18H). Ejemplo-S-3) Se hizo reaccionar el producto del Ejemplo-S-2 (460 mg, 1 ,0 mmoles) con cinc en HOAc por el método del Ejemplo-U-7 (véase Ejemplo U más adelante) para producir 312 mg de la amidina deseada después de purificación por HPLC.
Ejemplo S) Se desprotegió el producto del Ejemplo-S-3 (77 mg, 0,2 mmoles) con HCI 2 N por el método del Ejemplo U para producir 63 mg del diclorhidrato del aminoácido E. Ejemplo T Diclorhidrato del ácido (2S,5Z)-2-am¡no-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-T-1) Se disolvieron bis(trifluoroetil)fosfonoacetato de metilo (4,77 g, 15 mmoles) y 23,7 g (90 mmoles) de 18-corona-6 en 80 ml_ de THF anhidro y se enfrió a -78°C. A esta solución se añadieron 30 mL (15 mmoles) de bis(trimetilsilil)amida de potasio, seguido de 5,1 g (14,7 mmoles) de éster metílico de aldehido glutámico de ?,?-diBoc del Ejemplo-U-3 (véase Ejemplo U más adelante). Después de agitar durante 30 minutos a -78°C, se enfrió la reacción con KHS04 acuoso. La extracción de la mezcla de reacción con EtOAc y la concentración produjeron 2,95 g (49%) del compuesto deseado. Espectros de masas M + H = 402.
Ejemplo-T-2) El producto del Ejemplo-T-1 se redujo por ei método del Ejemplo-U-5 para producir el compuesto deseado.
EjempIo-T-3) Se permitió que el producto del Ejemplo-T-2 reaccionara con 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona por el método del Ejemplo-U-6 para producir el compuesto deseado.
Ejemplo-T-4) Se desprotegió el producto del Ejemplo-T-3 por el método del Ejemplo-U-7 para producir el compuesto deseado. Ejemplo T) Se disolvió el producto del Ejemplo-T-4 en HCI 2 N y se calentó a reflujo. Se enfrió y concentró la mezcla de reacción para producir 0,12 g del producto deseado. RMN 1H 1 ,8-2,0 (m, 2H); 2,05 2,15 (q, 2H); 3,75 (d, 2H); 3,9 (t, H); 5,45 (m, 1H); 5,6 (m, 1H). Ejemplo U Diclorhidrato del ácido (2S,5E)-2-amino-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-U-1) Se disolvió ácido L-glutámico (6,0 g, 40.78 mmoles) en metanol (100 ml_). A la mezcla de reacción se añadió cloruro de trimetilsililo (22,9 mL, 180 mmoles) a 0°C bajo nitrógeno y se dejó en agitación durante toda la noche. Se añadieron a la mezcla de reacción a 0°C bajo nitrógeno trietilamina (37 mL, 256 mmoles) y di-terc-butildicarbonato (9,8 g, 44,9 mmoles) y se agitó durante dos horas. Se eliminó el disolvente y se trituró el residuo con éter (200 mL). Se filtró la mezcla triturada. Se evaporó el triturado para dar un aceite y se purificó por cromatografía sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo y hexano, para dar el diéster L-glutámico de mono-Boc (10,99 g, 98%).
Ejemplo-U-2) Se disolvió ácido L-glutámico de mono-Boc (10,95 g, 39,8 mmoles) en acetonitrilo (130 mL). A la mezcla de reacción se añadieron 4-dimetilaminopiridina (450 mg, 3,68 mmoles) y di-terc-butildicarbonato (14,45 g, 66,2 mmoles) y se agitó durante 20 horas. Se evaporó el disolvente y se purificó por cromatografía el residuo en sílice y eluyendo con acetato de etilo y hexano para dar el diéster L-glutámico de di-Boc (14,63 g, 98%).
Ejemplo-U-3) Se disolvió el producto del Ejemplo-U-2 (10,79 g, 28,7 mmoles) en éter dietílico (200 mL) y se enfrió en un baño de hielo seco a -80°C. A la mezcla de reacción se añadió hidruro de diisobutilaluminio (32,0 mL, 32,0 mmoles) y se agitó durante 25 minutos. Se retiró la mezcla de reacción del baño de hielo seco y se añadió agua (7,0 mL). Se añadió acetato de etilo (200 mL) a la mezcla de reacción y se agitó durante 20 minutos. Se añadió sulfato de magnesio (10 g) a la mezcla de reacción y se agitó durante 10 minutos. Se filtró la mezcla de reacción a través de celita y se concentró para dar un aceite amarillo transparente (11,19 g). Se purificó el aceite amarillo por cromatografía sobre sílice y eluyendo con acetato de etilo y hexano. El producto (8,61 , 87%) fue un aceite amarillo claro transparente. Espectrometría de masas: M+H 346, M+Na 378 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 9,74 ppm (s, 1 H), 4,85 ppm (m, 1H), 3,69 ppm (s, 3H), 2,49 ppm (m, 3H), 2,08 ppm (m, 1 H), 1 ,48 ppm (s, 8H).
Ejemplo-U-4) Se disolvió fosfonoacetato de trietilo (6,2 mL, 31,2 mmoles) en tolueno (30 mL) y se colocó en un baño de hielo bajo nitrógeno y se enfrió a 0°C. A la mezcla de reacción se añadió bis(trimetilsilil)amida de potasio (70 mL, 34,9 mmoles) y se agitó durante 90 minutos. A la mezcla de reacción se añadió el producto del Ejemplo-U-3 (8,51 g, 24,6 mmoles) disuelto en tolueno (20 mL) y se agitó durante 1 hora. Se calentó la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se añadió a la mezcla de reacción hidrogenosulfato de potasio (25 mL, 25 mmoles) y se agitó durante 20 minutos. Se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo (3 x 100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para dar un aceite amarillo parduzco turbio (12,11 g). Se purificó el aceite por cromatografía sobre sílice, eluido con acetato de etilo y tolueno para dar un aceite amarillo claro (7,21 g, 70%). Espectrometría de masas: M+H 416, M+NH4 433, -boc 316, -2 boc, 216 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 6,88 ppm (m, 1H), 5,82 ppm (d, 1H), 4,81 ppm (m, 1H), 5,76 ppm (s, 3H), 2,50 ppm (m, 3H), 2,21 ppm (m, 1H), 1 ,45 ppm (s, 18H).
Ejemplo-U-5) Se disolvió el producto del Ejemplo-U-4 (5,0 g, 12,03 mmoles) en éter dietílico (100 mL) y se colocó en un baño de hielo seco y se enfrió a -80°C. A la mezcla de reacción se añadió hidruro de diisobutilaluminio (21,0 mL, 21,0 mmoles) y se agitó durante 30 minutos. Se añadió agua (10 mL) a la mezcla de reacción, se retiró del baño de hielo seco y se agitó durante 60 minutos. Se añadió a la mezcla de reacción sulfato de magnesio (10 g) y se agitó durante 10 minutos. Se filtró la mezcla de reacción a través de celita y se concentró para dar un aceite amarillo (5,0 g). Se purificó el aceite por cromatografía sobre sílice, eluido con acetato de etilo y hexano, para dar un aceite amarillo claro (2,14, 47%). Espectrometría de masas: M+H 374, M+NH4391 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5,63 ppm (m, 2H), 4,88 ppm (m, 1 H), 4,02 ppm (s, 2H), 3,68 ppm (s, 3H), 2,12 ppm (m, 4H), 1,47 ppm (s, 18H).
Ejemplo-U-6) Se disolvió el producto del Ejemplo-U-5 en tetrahidrofurano (50 mL). A la mezcla de reacción se añadieron trifenilfosfina sobre polímero (3,00 g, 8,84 mmoles), oxadiazolinona (720 g, 7,23 mmoles) y éster dimetílico del ácido azodicarboxílico (1,17 g, 3,21 mmoles) y se agitó durante seis horas a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla de reacción sobre celita y se concentró para dar un aceite amarillo turbio (2,81 g). Se purificó el aceite por cromatografía sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo en hexano, para dar un aceite incoloro transparente (1,66 g, 68%). Espectrometría de masas: M+H 456, M+NH4 473, -boc 356, -2 boc 256 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5,65 ppm (m, 1H), 5,45 ppm (m, 1 H), 4,79 ppm (m, 1H), 4,11 ppm (d, 2H), 3,68 ppm (s, 3H), 2,17 ppm (m, 4H), 1 ,47 Ejemplo-U-7) Se disolvió el producto del Ejemplo-U-6 (300 mg, 0,66 mmoles) en una solución de ácido acético y agua (10 ml_, 25/75) que contenía metal de cinc y se sónico durante 3 horas. Se filtró la mezcla de reacción sobre celita y se purificó por cromatografía en HPLC de fase inversa para dar un residuo incoloro transparente (13 mg, 4%). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8,89 ppm (m, 1 H), 5,68 ppm (m, 1H), 5,47 ppm (m, 1H), 3,80 ppm (d, 2H), 3,71 ppm (s, 3H), 2,18 ppm (m, 4H), 1,41 ppm (s, 18H). Ejemplo U) Se disolvió el producto del Ejemplo-U-7 (13,0 mg, 0,031 mmoles) en HCI 2 N (1 ,22 mL, 2,44 mmoles) y se mantuvo a reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió y se concentró para dar un aceite incoloro transparente (6,6 mg, 95%). Espectrometría de masas: M+H 200 RMN 1H (400 MHz, D20) 5,65 ppm (m, H), 5,47 ppm (m, H), 3,80 ppm (t, 1H), 3,72 ppm (d, 2H), 2,0 ppm (m, 5H), 1 ,87 ppm (m, 2H). Ejemplo V Clorhidrato del ácido (nfl,2S)-D-aminohexahidro-7-imino-1W-azepina-2-hexanoico, trihidratado Un matraz de tres bocas de 3 L se purgó con nitrógeno antes de cargarlo con ciclohexanona (1,27 moles, 132 mL) y 500 mL de tolueno. Esta mezcla agitada se enfrió a 0°C y se añadieron 157,2 g (1,1 eq) de t-butóxido de potasio. Después de agitar esta mezcla durante 1 hora, se observó un cambio de color y textura antes de que se añadiera gota a gota una solución de bromuro de 5-pentenilo (1,27 moles, 136 mL) en 00 mL de tolueno durante 1 h a la mezcla de reacción agitada mecánicamente. Se dejó calentar la mezcla de reacción a 25°C y se agitó durante toda la noche. A continuación se diluyó con 800 mL de KHS04 1 N y se secó la fase orgánica (MgS04), se filtró y se evaporó hasta sequedad para producir 208,5 g de producto en bruto. Después se purificó este material por destilación al vacío (bajo presión de aspirador de agua) para dar el producto del título en un rendimiento del 47%. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,0-2,4 (m, 13H), 4,9-5,1 (m, 2H), 5,7- 5,9 (m, 1H). Ejemplo-V-2) En un matraz de tres bocas de 3 L se combinó el producto del Ejemplo-V-1 (93,67 g, 0,563 moles) junto con EtOH (600 mL), agua (300 mL), NaOAc (101 ,67 g, 1 ,24 moles) y NH2OH HCI (78,31 g, 1 ,13 moles). Se mantuvo a reflujo esta mezcla de reacción agitada durante 16 h y a continuación se agitó a 25°C durante otras 24 h. Se eliminó todo el disolvente bajo presión reducida y se dividió el residuo entre éter dietílico (EtaO, 500 mL) y agua (200 mL). Se extrajo la capa acuosa con 3 x 200 mL de éter. Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre MgSC , se filtró y se depuró al vacío para dar la oxima del título (121 ,3 g, rendimiento en bruto 100%). RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,2-2,6 (m, 13H), 4,9-5,1 (m, 2H), 5,7- 5,9 (m, 1 H).
Ejemplo-V-3) Un matraz de tres bocas de 3 L se purgó con nitrógeno y después se cargó con hexametildisiloxano (471 ,7 mL, 2,2 moles), tolueno (500 ml_) y pentóxido de fósforo (203,88 g, 1,4 moles). Esta mezcla heterogénea se mantuvo a reflujo hasta que se obtuvo una solución transparente (1,5 h aproximadamente). Después de enfriar esta mezcla a temperatura ambiente, se añadió el producto de oxima del Ejemplo-V-1 (102,1 g, 0,563 moles) en 200 mL de tolueno a la mezcla de reacción anterior durante un período de 1 h a 25°C. Se agitó la mezcla de reacción durante otras 4-6 h (verificado por TLC: EA al 50% en Hex, ½) antes de verterlo en un baño de hielo con mezclado minucioso. A esta mezcla de suspensión espesa de hielo se añadieron 250 g de NaCI y se ajustó a 5 el pH de la mezcla resultante añadiendo carbonato de potasio sólido. Se extrajo esta suspensión espesa con 3 x 500 mL de dietiléter (EÍ2Ü) y se secaron las fracciones orgánicas combinadas sobre gS04, se filtró y se depuró al vacío para dar la mezcla en bruto de Iactamas regioisoméricas (84,6 g). EjempIo-V-4) Isómero R Isómero S Se sometió a continuación el producto del EjempIo-V-3 a cromatografía (sílice:acetonitrilo) para purificación y separación regioisomérica. A partir de la muestra en bruto, se aisló el regioisómero 7-pentenilo en rendimiento del 50% y, después de cromatografía quiral, se aislaron los enantiómeros únicos deseados en un rendimiento del 43% cada uno. Isómero R: Análisis elemental Cale, para CnHi9NO: C, 71,99; H, 10,57; N, 7,63. Encontrado: C, 71,97; H, 10,58; N, 7,52. RMN H (CDCI3, d ppm): 1 ,3-1,6 (m, 7H), 1,75-1,9 (m, 2H), 1 ,95- 2,15 (m, 3H), 2,4-2,5 (m, 2H), 3,25-3,35 (m, 1H), 4,95-5,05 (m, 2H), 5,7-5,85 (m, 1H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 23,166, 25,169, 29,601 , 33,209, 35,475, 35,624, 36,783, 53,600, 114,976, 137,923, 177,703. [a]25 = +26,9° (CHCI3) a 365 nm. Isómero S: Análisis elemental Cale, para C11H19NO: C, 71,99; H, 10,57; N, 7,63. Encontrado: C, 72,02; H, 10,61 ; N, 7,57. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,3-1,6 (m, 7H), 1 ,75-1,9 (m, 2H), 1 ,95-2,15 (m, 3H), 2,4-2,5 (m, 2H), 3,25-3,35 (m, 1H), 4,95-5,05 (m, 2H), 5,7-5,85 (m, 1H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 23,187, 25,178, 29,630, 33,230, 35,526, 35,653, 36,778, 53,621, 115,032, 137,914, 177,703. [af = -25,7° (CHCIs) a 365 nm. Ejemplo-V-5) En un matraz de 3 bocas de 3 L purgado con argón se combinaron el producto de! isómero R del Ejemplo-V-4 (102,1 g, 0,56 moles), THF en seco (800 mL), DMAP (68,9 g, 0,56 moles), dicarbonato de di-t-butilo (Boc20, 99 g, 0,45 moles). Se calentó la mezcla de reacción a 70°C en 30 min antes de añadir 52,8 g adicionales de B0C2O y 200 mL de THF en seco. Al cabo de 30 min se añadieron otros 32 g de B0C2O y se agitó la mezcla durante 1 h a 70°C. Se añadieron otros 36 g de Boc20 y se agitó la mezcla durante 1 h. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se depuró el THF a entre 18°C y 20 °C bajo presión reducida. Se filtró el precipitado y se lavó con 100 mL de acetato de etilo (EA) y se desechó (~45 g). Se diluyó el filtrado de EA con 500 mL de EA adicional antes de lavar con 500 mL de KHSO4 1 N, 500 mL de NaHCC«3 acuoso saturado y 500 mL de salmuera, y después se secó sobre Na2S04 anhidro durante 12 h. Este extracto de EA se trató a continuación con 20 g de DARCO, filtrado a través de celita cubierta con MgS04, y se concentró al vacío para dar 150 g del producto del título como un aceite marrón oscuro. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,3-1,6 (m, 4H), 1 ,5 (s, 9H), 1,6-1 ,9 (m, 6H), 1,95-2,05 (m, 2H), 2,5-2,7 (m, 2H), 4,2-4,25 (m, 1H), 4,95-5,05 (m, 2H), 5,7-5,85 (m, 1H).
Ejemplo-V-6) Un matraz de tres bocas de 3 L que contenía el producto del Ejemplo-V-5 (150 g, 0,533) disuelto en 3 L de CH2CI2 se enfrió a -78°C. Se hizo pasar una corriente de O3 a través de la solución durante 2,5 h hasta que el color de la mezcla de reacción se volvió azul. A continuación se hizo burbujear argón a través de la solución mantenida a entre -60°C y -70°C hasta que la solución se volvió transparente e incolora (~30 min). A continuación se añadió dimetilsulfuro (DMS, 500 mL) antes de llevar la solución a reflujo, y se mantuvo este reflujo durante 24 h. Se añadieron otros 100 mL de DMS y se mantuvo el reflujo durante 12 h. Se depuraron a continuación el disolvente y el exceso de DMS en un evaporador rotatorio a 20°C. Se diluyó el aceite amarillo residual obtenido con 500 mL de agua DI y se extrajo con 3 x 300 mL de EA. Se secó la capa de EA sobre MgS04 anhidro, se trató con 20 g de DARCO, se filtró a través de una fina capa de celita cubierta con MgS04 anhidro y se depuró todo el disolvente bajo presión reducida para producir 156 g del producto del título en bruto como un aceite amarillo anaranjado. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,3-1 ,6 (m, 4H), 1 ,5 (s, 9H), 1 ,6-1 ,9 (m, 6H), 2,45-2,75 (m, 4H), 4,2-4,25 (m, 1H), 9,75 (s, 1H).
Ejemplo-V-7) A una muestra de éster trimetílico de N-(benciloxicarbon¡l)-alfa-fosfonoglicina (160 g, 0,48 moles) disuelta en 1 L de diclorometanb (CH2CI2) y enfriada a 0°C se añadió una solución de DBU (110,29 g, 0,72 moles) en 100 ml_ de CH2CI2. Esta mezcla de reacción incolora transparente se agitó durante 1 h a entre 0°C y 6°C antes de añadir gota a gota el producto Boc-aldehído del Ejemplo-V-6 (150 g, 0,53 moles) en 600 ml_ de CH2CI2 a entre -5°C y -1°C. Se agitó la mezcla de reacción durante 30 min a esta temperatura antes de calentar lentamente hasta 0 °C en 1 h aproximadamente. Se lavó la mezcla de reacción con KHSO4 1 N (500 mL), NaHCCb acuoso saturado (200 mL) y NaCI acuoso al 50% (200 mL). A continuación se secó la capa orgánica sobre MgSÜ4 anhidro, se trató con 40 g de DARCO, se filtró a través de una capa de celita cubierta con MgS04 anhidro y se concentró para dar 258 g del producto del título en bruto como un aceite amarillo. La purificación cromatográfica de este material dio 130 g (55%) del producto del título en bruto. Análisis elementales Cale, para C26H36N207: C, 63,96; H, 7,42; N, 5,77. Encontrado: C, 63,42; H, 8,16; N, 5,31. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,25 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1 ,51-1,9 (ancho m, 8H), 2,25 (m, 2H), 2,5 (m, 1H), 2,65 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,12 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 6,3 (ancho s, 1H), 6,55 (t, 1H), 7,45 (m, 5H).
RMN 13C (CDCI3, d ppm): 14,04, 22,62, 23,46, 24,08, 25,27, 27,89, 27,92, 28,34, 28,95, 31 ,81, 31 ,86, 32,05, 39,18, 52,31 , 54,65, 67,27, 82,62, 128,07, 128,18, 128,46, 135,98, 136,82, 154,50, 164,92, 176,68. [a]25 = +10,9° (CHCI3) a 365 nm. Ejemplo-V-8) A una solución de MeOH (1 L) del producto del Ejemplo-V-7 (91 ,3 g, 0,19 moles) se añadieron 2,5 g de catalizador S,S-Rh-DIPAMP seguido de hidrógeno. La hidrogenación se llevó a cabo a 25°C en 1 ,5 h en un aparato de Parr. Se filtró la mezcla de reacción a través de celita antes de concentrar para dar el producto del título en bruto (90 g, 98%) como un aceite marrón. RMN H (CDCI3, d ppm): 1,35 (m, 4H), 1 ,5 (s, 9H), 1,55-1 ,95 (m, 10H), 2,4-2,7 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,2 (m, 1 H), 4,4 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 5,1 (m, 2H), 5,35 (d, 1H), 7,35 (m, 5H). Ejemplo-V-9) A una solución del producto del Ejemplo-V-8 (90 g) en 200 mL de ácido acético glacial se añadieron 200 mL de HCI 4 N en dioxano. Se agitó la mezcla de reacción a 25°C durante 20 min antes de depurar todo el disolvente bajo presión reducida a 40°C para dar un aceite marrón-rojo. Este producto oleoso se trató con 500 mL de agua y se extrajo con 2 x 300 mL de diclorometano. Se lavó la capa orgánica combinada con solución de bicarbonato de sodio saturada ( 00 mL), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se depuró todo el disolvente para dar el producto del título en bruto. Este material se purificó por cromatografía para proporcionar 45 g (62%) del producto del título en bruto. Análisis elementales Cale, para C21H30 2O5: C, 64,02; H, 7,68; N, 7,17. Encontrado: C, 63,10; H, 7,88; N, 6,60. RMN H (CDCI3, d ppm): 1,2-2,0 (m, 14H), 2,45 (t, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,38 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 5,3 (d, 1H), 5,45 (ancho s, 1 H), 7,35 (m, 5H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 14,09, 23,11, 24,89, 25,41, 29,53, 32,33, 35,52, 35,79, 36,68, 52,26, 53,51 , 53,55, 53,60, 60,26, 66,86, 127,97, 128,05, 128,40, 136,18, 155,85, 172,85, 177,80. [a]25 = -9,9° (CHCI3) a 365 nm. Ejemplo-V-10) A una muestra de 45,0 g (0,115 moles) del producto del Ejemplo-V-9 en 300 mL de diclorometano purgado con argón se añadieron 23,0 g (0,121 moles) de tetrafiuoroborato de trietiloxonio. Se agitó esta mezcla durante 1 h a 25°C antes de añadir 150 mL de solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada. Se separó la capa de diclorometano, se lavó con 150 mL de solución de NaCI acuoso al 50%, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró a través de celita y se concentró a 25°C para dar un aceite amarillo transparente, 47,0 g (97%), del producto del título. Análisis elementales Cale, para C23H34N2O5: C, 60,01; H, 8,19; N, 6,69. Encontrado: C, 65,13; H, 8,45; N, 6,64. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,2 (t, 3H), 1,25-1,74 (m, 12H), 1,75-1 ,95 (m, 2H), 2,2-2,3 (m, 1H), 2,4-2,5 (m, 1 H), 3,1 (m, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,9-4,0 (m, 2H), 4,35 (m, 1 H), 5,1 (s, 2H), 5,25 (d, 1H), 7,35 (m, 5H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 14,23, 23,38, 25,01, 25,21, 26,10, 30,24, 32,16, 32,77, 33,92, 39,15, 52,55, 53,91, 58,05, 60,19, 66,92, 128,11, 128,33, 128,48, 136,27, 155,83, 166,29, 173,11 , 177,64. Ejemplo-V-11) A 7,0 g (0,130 moles) de cloruro de amonio en 500 mL de metanol se añadieron 31,2 g del material del título del Ejemplo-V-10 (45,0 g, 0,107 moles). Se mantuvo a reflujo la reacción a 65°C durante 5 h antes de eliminar todo el disolvente bajo presión reducida para producir 40 g (87%) del producto en bruto como una masa viscosa espumosa. Se purificó este producto por cromatografía de columna para proporcionar 37 g (81%) del producto del título. Análisis elementales Cale, para C21H31N3O4: C, 59,22; H, 7,57; N, 9,86; Cl 8,32. Encontrado para C21H31N3O4 + 1,2 HCI + 0,5 H20: C, 57,20; H, 7,99; N, 9,66; Cl, 9,62. IR (neto, ? max cm"1): 2935, 1716, 1669. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,2-2,0 (m, 13H), 2,5 (t, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,4 (ancho s, 1H), 3,7 (s, 3H), 4,3 (m, 1 H), 5,1 (s, 2H), 5,55 (d, 1H), 7,3 (m, 5H), 8,75 (ancho s, 1H), 8,9 (ancho s, 1H), 9,5 (s, 1H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 23,20, 24,95, 25,22, 28,94, 31,80, 32,05, 33,75, 34,89, 52,33, 53,76, 56,07, 66,83, 127,93, 128,04, 128,43, 136,26, 56,00, 172,24, 172,87. Masa (ESI): m/z, 390. [a]25 = +31,5° a 365 nm. Ejemplo V) Se mantuvo a reflujo el producto del título del Ejemplo-V-11 (36,0 g, 0,084 moles) en 1 L de HCI 2,3 N durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se lavó la solución con 2 x 150 mL de CH2CI2 y después se depuró todo el disolvente al vacío para dar 25,6 g (96%) del producto de aminoácido del título como una espuma amarilla pálida. Análisis elementales Cale, para C12H23 302-2HCI: C, 46,02; H, 8,01; N, 13,39; Cl 22,45. Encontrado para C12H23N3O2 + 2,2 HCI + 0,1 H20: C, 42,76; H, 8,02; N, 12,41; Cl, 22,79. IR (neto, ? max cm"1): 2930, 2861, 1738, 1665.
RMN 1H (CD3OD, d ppm): 1,3-2,5 (m, 16H), 2,6 (dd, 1 H), 2,8 (t, 1H), 3,65 (m, 1H), 4,0 (t, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,85 (s, 1H), 8,95 (s, H). RMN 13C (CD3OD, d ppm): 24,49, 25,67, 26,33, 29,71, 31 ,26, 32,45, 35,04, 35,87, 53,73, 57,21, 171 ,77, 173,96. UV, 282 nm, abs. 0,015. Masa (M+1) = 242 [a]25 = -47,4° (MeOH) a 365 nm. ee = 91% determinado por CE a ? = 214 nm. Ejemplo W: Clorhidrato del ácido (aS,2 )-a-aminohexahidro-7-imino-1H-azepina-2-hexanoico, trihidratado Ejemplo-W-1) El producto de isómero S del Ejemplo-V-4 (5,45 g, 0,030 moles) se convirtió en su derivado Boc por el método del Ejemplo-V-5. Después de cromatografía, esta reacción produjo 6,3 g (75%) del producto del título deseado. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,3-1 ,6 (m, 4H), 1 ,5 (s, 9H), 1 ,6-1 ,9 (m, ,95-2,05 (m, 2H), 2,5-2,7 (m, 2H), 4,2-4,25 (m, 1 H), 4,95-5,05 (m, 2H), 5,7-5,85 (m, 1H). Ejemplo-W-2) El producto del Ejemplo-W-1 (6,3 g, 0,025 moles) se ozonizó por el método del Ejemplo-V-6 para producir 8,03 g del aldehido del título en bruto que se usó sin más purificación. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,3-1,6 (m, 4H), 1,5 (s, 9H), 1,6-1 ,9 (m, 6H), 2,45-2,75 (m, 4H), 4,2-4,25 (m, 1H), 9,75 (s, 1H). Ejemplo-W-3) El producto del Ejemplo-W-2 (8,03 g, 0,024 moles) se condensó con éster trimetílico de N-(benciloxicarboniI)-alfa-fosfonoglicina (7,9 g, 0,024 moles) usando el método del Ejemplo-V-7 para producir 4,9 g (44%) del producto del título deseado después de cromatografía. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,25 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,51-1,9 (ancho m, 8H), 2,25 (m, 2H), 2,5 (m, 1 H), 2,65 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,15-4,25 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 6,3-6,4 (ancho s, 1H), 6,45-6,55 (t, 1H), 7,3-7,4 (m, 5H).
Ejemplo-W-4) Se redujo el producto del Ejemplo-W-3 (4,8 g, 0,010 moles) en presencia de catalizador R,R-Rh-DIPA P por el método del Ejemplo-V-8 para producir 2,9 g (60%) del producto del título deseado después de cromatografía. Ejemplo-W-5) Se desprotegió el producto del Ejemplo-W-4 (2,9 g, 0,006 moles) por tratamiento con HCI usando el método del EjempIo-V-9 para producir 2,3 g (100%) del producto del título deseado. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,3-2,0 (m, 14H), 2,45 (t, 2H), 3,25 (m, 1 H), 3,75 (s, 3H), 4,38 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 5,3 (d, 1H), 5,45 (ancho s, 1 H), 7,35 (m, 5H). Ejemplo-W-6) Se alquiló el producto del Ejemplo-W-5 (0,56 g, 0,0015 moles) con tetrafluoroborato de trietiloxonio usando el método del Ejemplo-V-10 para producir 0,62 g (98%) del producto del título deseado.
Ejemplo-W-7) Se trató el producto del Ejemplo-W-6 (0,62 g, 0,0015 moles) con cloruro de amonio en metanol usando el método del Ejemplo-V-11 para producir 0,50 g (88%) del producto del título deseado después de purificación cromatográfica. Ejemplo-W-8) Se añadió el producto del Ejemplo-W-7 (0,37 g, 0,0009 moles) disuelto en eOH a un aparato de hidrogenación de Parr. A este vaso se añadió una cantidad catalítica de Pd/C al 5%. Se introdujo hidrógeno y se realizó la reacción a temperatura ambiente y a una presión de 34,48 kPa (5 psi) durante un período de 7 horas. Se eliminó el catalizador por filtración y se eliminó todo el disolvente bajo presión reducida desde el filtrado para producir 0,26 g (cuantitativos) del producto del título deseado. Ejemplo W) Se mantuvo a reflujo durante 2 h una solución del producto del Ejemplo-W-8 disuelto en HCI 2 N (30 mL) antes de enfriarlo a temperatura ambiente. Se eliminó todo el disolvente bajo presión reducida y se disolvió el residuo en 50 mL de agua. Esta solución se depuró de todo el disolvente bajo presión reducida antes de disolverlo de nuevo en 12 mL de agua y después de liofilizó en 0,245 g (71%) generados del compuesto del título. Análisis elementales Cale, para Ci2H23N302-2,3 HCI-1 ,9 H20: C, 40,10; H, 8,16; N, 11 ,69; Cl 22,69. Encontrado para C12H23 3O2 + 2,1 HCI + 0,7 H20: C, 40,27; H, 8,28; N, 11,62; Cl, 22,70. RMN 1H (CD3OD, d ppm): 1,4-2,1 (m, 16H), 2,6 (dd, 1H), 2,8 (t, 1H), 3,65 (m, 1H), 4,0 (t, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,45 (s, 1H); 8,9 (s, 1H). RMN 13C (CD3OD, d ppm): 24,46, 25,64, 26,31, 29,69, 31,24, 32,54, 35,00, 35,83, 53,75, 57,20, 171,85, 173,93. [a]25 = +25,7° (MeOH) a 365 nm. Ejemplo X: Clorhidrato del ácido (aS,2S)-a-aminohexahidro-7-im¡no-1H-azepina-2-hexanoico, trihidratado Ejemplo-X En un matraz de fondo redondo equipado con un agitador superior, paleta en forma de media luna, manta calefactora, termopar y una columna de destilación revestida al vacío con plata (5 placas) se cargó ciclohexanona (4.500,0 g, 45,85 moles), acetona dimetil acetal (5.252,6 g, 50,43 moles), alcohol alílico (6.390,87 g, 110,04 moles) y ácido p-toluensulfónico (PTSA) (0,256 g, 0,001 moles). Después de iniciar la agitación (137 rpm), se calentó lentamente el recipiente con el punto de ajuste inicial situado a 70°C. Se aumentó el calentamiento por pasos hasta una temperatura final del recipiente de 150°C. Se tomó la decisión de aumentar el punto de ajuste del reactor basándose en la velocidad de destilación. Si la velocidad del destilado se reducía o se detenía, se aplicaba calor adicional. El calentamiento adicional a 150°C permitió que se produjera reagrupamiento de Claisen. Después de elevar la temperatura del recipiente a 150°C y no observar destilado, se bajó la manta calefactora y se dejó que la mezcla de reacción se enfriara a 130°C. A continuación se neutralizó el PTSA con 3 gotas de NaOH 2,5 N. A continuación se inició la depuración al vacío con la manta calefactora retirada del matraz. Se usó refrigeración por evaporación para reducir la temperatura del recipiente, y se redujo gradualmente la presión a 40 mm Hg. Cuando la temperatura del recipiente había descendido a ~100°C, se volvió a elevar la manta calefactora en la posición adecuada para calentamiento. Se destilaron la ciclohexanona sin reaccionar y las impurezas de bajo punto de ebullición. Se elevó lentamente la temperatura del recipiente (la máxima diferencia de temperatura entre el recipiente y el vapor fue ~12°C). Se aisló el producto a entre 109 y 112°C @ 40 mm Hg. Los rendimientos típicos estuvieron entre el 40 y el 45%. Se combinaron las fracciones que eran < 95% por área (CG) y se volvieron a destilar para producir el compuesto del título en un rendimiento total del 55%. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 5,8-5,6 (m, 1H), 4,8-5,0 (m, 2H), 2,5-2,4. (m, 1H), 2,3-2,1 (m, 3H), 2,1-1,2 (m, 7H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 212,53, 136,62, 116,32, 50,39, 42,18, 33,91 , 33,52, 28,09, 25,10. CG/EM m/z = 138. EjempIo-X-2) Se añadió ácido amino-O-sulfónico de hidroxilo (91,8 g) disuelto en ácido acético (470 g) a un matraz Bayer de 1 L equipado con un agitador mecánico, termopar, condensador enfriado a 0°C y un embudo de adición y se calentó a 70°C. Se añadió gota a gota la alil ciclohexona (100 g) en aproximadamente 40 min a la solución anterior al tiempo que se mantenía la temperatura entre 70 y 78°C. Durante la adición, el aspecto de la reacción cambió desde una suspensión espesa blanca a una solución naranja transparente. Después de la adición, se calentó la reacción y se agitó durante 5 h adicionales a 75°C. Se tomó una muestra de IPC cada hora. Después de completarse la reacción, se depuró el ácido acético a 50°C bajo presión reducida en un evaporador rotatorio. A continuación se añadió agua (200 mL) al residuo y se extrajo la solución con tolueno (2 x 300 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se trató con agua (150 mL) y se agitó durante 10 min. Se añadió una solución de hidróxido de sodio (79,4 g de solución al 50%) hasta que la capa acuosa se hizo básica (pH 12). Se llevó a cabo la neutralización en el reactor controlando la temperatura por debajo de 40°C. A continuación se separaron las capas y se pasó la capa de tolueno a través de un filtro para eliminar cualquier material sólido o alquitranado. A continuación se depuró la solución orgánica a 50°C bajo presión reducida en un evaporador rotatorio. Se tomó el residuo en una mezcla de tolueno (510 mL) y heptanos (2.040 mL) y se calentó a 60°C en un reactor de 3 L. Se obtuvo una solución amarilla-naranja transparente. El producto del título empezó a cristalizar a 53°C conforme la solución se enfriaba lentamente a 5°C mientras se agitaba. Se filtró el sólido, se lavó con heptanos (50 mL) y se secó durante toda la noche a 40°C bajo vacío cerrado para producir 66,3 g (60%) del producto del título como cristales de color blanco mate. Una parte de este material se volvió a cristalizar a partir de tolueno y heptano para generar el producto del título como un sólido cristalino blanco. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 5,8-5,6 (m, 1H), 5,5 (ancho s, 1H), 4,8-5,0 (m, 2H), 3,4-3,3 (m, 1H), 2,5-2,3 (m, 2H), 2,3-2,1 (m, 2H), 2,0-1,2 (m, 6H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 117,73, 133,83, 119,31 , 52,88, 40,95, 37,20, 35,75, 29,96, 23,33. CG/EM (modo El) = 153. p.f. = 97-99°C.
Isómero R Isómero S Se sometió la mezcla racémica del producto del Ejemplo-X-2 a separación cromatográfica quiral en una columna Chiralpac AS 20 µ?? eluyendo con acetonitrilo al 100%. Se empleó una longitud de onda de 200 nM en el detector. Se usó una carga de muestra de 0,08 g/mL para obtener recuperación al 90% de isómeros separados cada uno por > 95% ee. Se recristalizó una parte del material del isómero R a partir de tolueno y heptano para generar eí producto del título de isómero R como un sólido cristalino blanco. Isómero R: p.f. = 81-82°C. Ejemplo-X-4) Un matraz de fondo redondo de cinco bocas equipado con embudo de goteo, termómetro y agitador mecánico superior se evacuó y purgó tres veces con nitrógeno. La lactama del producto del isómero R del Ejemplo-X-3 (100,0 g, 0,653 moles), DMAP (7,98 g, 65 mmoles) y N-diisopropiletilamina (base de Hünigs, 113,3 g, 0,876 moles) se disolvió en tolueno (350 mL) y se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (170,2 g, 0,78 moles) disuelto en tolueno (100 ml_). (Nota: la reacción funcionó mejor cuando se usaron 2,0 eq de base de Hünigs). Se calentó la mezcla a 65°C (Nota: sé observó desgasificación uniforme durante la reacción). Al cabo de 1,5 h se añadieron otros 86,25 g de dicarbonato de di-terc-butilo (0,395 moles) disueltos en tolueno (50 ml_). Se continuó con el calentamiento durante 17 h y la IPC por HPLC reveló una conversión del 75%. Se añadieron otros 42,78 g de dicarbonato de di-terc-butilo (0,196 moles) en tolueno (30 mL) y se calentó la mezcla marrón durante 5,5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se trató la mezcla con HCI 4 M (215 mL), y se extrajo la capa acuosa con tolueno (2 x 80 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaHCC>3 (170 mL) y 250 mL de agua (Nota: la temperatura interna durante el enfriamiento se controló por refrigeración externa con hielo/agua). Se observó evolución de gas. Se evaporó la capa orgánica para dar 257,4 g de un líquido marrón. Este material en bruto se purificó por filtración en tapón sobre Si02 (950 g) usando tolueno/EtOAc 9/1 (6 L) y tolueno/AcOEt 1/1 (0,5 L) como eluyente, para dar 139,5 g (51 %) del producto del título como un líquido amarillo. Ejemplo-X-5) Ejemplo-X-6) Ejemplo 1f En un autoclave de acero Inoxidable de 2 L equipado con tabiques y un impulsor axial dispersante de gas de seis hojas se cargó Rh(CO)2 (acac) (0,248 g, 0,959 moles), BIPHEPHOS (estructura mostrada más abajo y preparado según se describe en el Ejemplo 13 de la patente de EE.UU. 4.769.498, 2,265 g, 2,879 moles), el producto del Ejemplo-X-4 (N-(ferc-butoxicarbonil)-S-7-alilcaprolactama BIPHEPHOS (242,9 g, 0,959 moles) y tolueno (965 g). Se selló el reactor y se purgó con monóxido de carbono al 100% (8 x 515 kPa). Se presurizó el reactor a 308 kPa (30 psig) con monóxido de carbono al 100% y luego se añadió una mezcla gaseosa CO/H2 1 :1 para conseguir una presión total de 515 kPa (60 psig). Con vigorosa agitación mecánica, se calentó la mezcla a 50°C con mezcla gaseosa CO/H2 1 :1 de manera que se mantuviera una presión total de 515 kPa (60 psig) aproximadamente. Al cabo de 22 h, se enfrió la mezcla a 25°C aproximadamente y se liberó cuidadosamente la presión. La filtración al vacío de la mezcla del producto y la evaporación del filtrado bajo presión reducida produjeron 267,7 g de un aceite amarillo claro. El análisis por RMN 1H fue consistente con una conversión esencialmente cuantitativa del material de partida con selectividad del 96% aproximadamente al correspondiente producto de aldehido del Ejemplo-V-6. Este aceite se usó sin más purificación en el ejemplo siguiente. RMN 1H (CDCI3, d ppm) 1,47 (s, 9H), 1,6-1,80 (m, 9H), 1,84-1,92 (m, 1 H), 2,41-2,58 (m, 3H), 2,61-2,71 (m, 1H), 4,2 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 9,74 (s, 1 H). Ejemplo-X-8) Ejemplo 1g A una muestra de éster trimetílico de N-(benciloxicarbonil)-aIfa-fosfoglicina (901,8 g, 2,7 moles) disuelto en CH2CI2 y enfriado a 0°C se añadió una solución de DBU (597,7 g, 3,9 moles) en CH2CI2. Esta mezcla de reacción incolora transparente se agitó durante 1 h a entre 0°C y 6°C antes de que se añadiera gota a gota una muestra del producto de aldehído-Boc del Ejemplo-V-6 (812,0 g, 2,9 moles) en CH2CI2 a entre -5°C y -1°C. La reacción, desarrollo y purificación se completaron según se describe en el EjempIo-V-7 para dar 1.550 g del producto del título del Ejemplo-V-7 que contenía una pequeña cantidad de CH2CI2. Ejemplo-X-9) A una solución de MeOH (1 L) del producto del Ejemplo-V-7 (100 g, 0,20 moles) se añadieron 3 g de catalizador RR-Rh-DIPAMP. Se realizó la hidrogenación a 25°C en 1,5 h en un aparato de Parr. Se filtró la mezcla de reacción a través de celita antes de concentrar para proporcionar el producto del título del Ejemplo-X-9 en bruto como un aceite marrón (100 g). RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,35 (m, 4H), 1 ,5 (s, 9H), 1,6-1,9 (m, 10H), 2,5-2,8 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 5,65 (d, 1H), 7,35 (m, 5H). Ejemplo-X-10) A una solución del producto del Ejemplo-V-8 (100 g) en 200 mL de ácido acético glacial se añadieron 25 mL de HCI 4 N en dioxano. Se agitó la mezcla de reacción a 25°C durante 20 min antes de depurar todo el disolvente bajo presión reducida a 40°C para dar 105 g de un aceite marrón rojizo. Este producto oleoso se trató con 500 mL de agua y se extrajo con 2 x 300 mL de diclorometano. Se lavó la capa orgánica combinada con solución de bicarbonato de sodio saturada (100 mL), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se depuró todo el disolvente para dar 99,9 g del producto del título como un aceite marrón rojizo. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,25-2,0 (m, 14H), 2,45 (t, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,7 (s, 3H), 4,35 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 5,5 (d, 1H), 6,45 (ancho s, 1H), 7,35 (m, 5H).
EE = 95% determinado por HPLC quiral. Ejemplo-X-11) A una muestra de 30,0 g (0,077 moles) del producto del Ejemplo-X-10 en 600 mL de diclorometano purgado con argón se añadieron 15,7 g (0,082 moles) de tetrafluoroborato de trietiloxonio. Se agitó esta mezcla durante 1 h a 25°C antes de añadir 300 mL de solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada. Se separó la capa de diclorometano, se lavó con 300 mL de solución de NaCI acuosa al 50%, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró a través de celita y se concentró a 25°C para dar un aceite amarillo transparente, 31,2 g (~97%) del producto del título. Análisis elementales Cale, para C23H34 2O5: C, 60,01 ; H, 8,19; N, 6,69. Encontrado para C23H34N2O5 + 0,5 H20: C, 64,66; H, 8,24; N, 6,59. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1 ,25 (t, 3H), 1,28-1,75 (m, 12H), 1,8-1 ,98 (m, 2H), 2,2-2,3 (m, H), 2,4-2,5 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,9-4,0 (m, 2H), 4,35 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 5,25 (d, 1H), 7,35 (m, 5H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 14,27, 23,36, 25,21, 25,53, 26,09, 30,22, 32,15, 32,73, 33,90, 39,14, 52,21, 53,89, 58,04, 60,33, 66,89, 128,11, 128,48, 136,29, 155,86, 166,60, 173,14, 177,69. IR (neto, ? max cm-1): 3295, 2920, 1739, 1680. UV, 257 nm, abs. 0,015. [af = +39,8° (CHCI3) a 365 nm. Ejemplo-X-12) A 4,2 g (0,078 moles) de cloruro de amonio en 500 mL de metanol se añadieron 31 ,2 g del material del título del Ejemplo-X-11. Se mantuvo a reflujo la reacción a 65°C durante 5 h antes de retirar todo el disolvente bajo presión reducida para producir 29 g (92%) del producto en bruto como una masa viscosa espumosa. Este material se purificó por cromatografía de columna para proporcionar 23 g (70%) del producto del título. Análisis elementales Cale, para C2iH3i 304-1 HCl: C, 59,28; H, 7,57; N, 9,89, Cl, 8,39. Encontrado para C21H31N3O4 + 1 HCl + 1 H20: C, 56,73; H, 7,74; N, 9,40, Cl, 8,06. IR (neto, ? max ern-1): 3136, 30348, 2935, 1716, 1669. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,3-2,05 (m, 13H), 2,5 (t, 1H), 2,98 (m, 1H), 3,4 (ancho s, 1H), 3,75 (s, 3H), 4,35 (m, 1H), 5,1 (s, 2H), 5,5 (d, 1H), 7,35 (m, 5H), 8,75 (s, 1 H), 9,0 (s, 1 H), 9,5 (s, 1 H). RMN 13C (CDCIg, d ppm): 23,25, 25,01, 25,34, 29,01, 31,88, 32,26, 33,89, .35,06, 52,33, 53,73, 56,20, 66,89, 127,95, 128,06, 128,45, 136,27, 55,93, 172,27, 172,80. UV, 257 nm, abs. 0,009.
Masa (ESI): M/Z, 390. [a]25 = -42,8° (MeOH) a 365 nm. ee = 96% determinado por HPLC quiral. Ejemplo X) Se mantuvo a reflujo el producto del título del Ejemplo-X-12 (23 g) en 500 mL de HCI 2 N durante 5 h. A continuación se eliminó todo el disolvente al vacío y el residuo redisuelto en agua se lavó con 2 x 300 mL de CH2CI2. A continuación se concentró la solución acuosa al vacío para dar 17 g (100%) del producto del título sólido higroscópico de color marrón claro. Análisis elementales Cale, para C12H23N302-2 HCI: C, 45,86; H, 8,02; N, 13,37, Cl, 22,56. Encontrado para C12H23N3O2 + 2,1 HCI + 0,7 H20: C, 43,94; H, 8,65; N, 12,52, Cl, 22,23. IR (neto, ? max cm"1): 2936, 1742, 1669. RMN 1H (CD3OD d ppm): 1,3-2,1 (m, 16H), 2,6 (dd, 1H), 28 (t, 1 H), 3,65 (m, 1H), 4,0 (t, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,4 (s, 1H), 8,95 (s, 1H). RMN 13C (CD3OD, d ppm): 24,49, 25,67, 26,33, 29,71, 31,26, 32,45, 35,04, 35,87, 53,73, 57,21, 171 ,77, 173,96. UV, 209 nm, abs. 0,343. Masa (M+1): 242. [a]25 = +60,0° (MeOH) a 365 nm. ee = 92% determinado por CE a ? = 210 nm.
Ejemplo Y Clorhidrato del ácido (a ?,2S)-a-aminohexahidro-7-imino-1H-azepina-2-hexanoico, trihidratado Ejemplo-Y-1) Se enfrió una solución del Ejemplo-X-3 (3,0 g, 0, 015 moles) en cloruro de metileno y metanol (75/45 ml_) a -78°C en un baño de hielo seco. Se agitó la reacción mientras se hacía burbujear ozono a través de la solución a una velocidad de flujo de 3 mL/min. Cuando la solución adoptó un color azul oscuro consistente, se retiró el ozono y se purgó la reacción con nitrógeno. A la solución en frío se añadió borohidruro de sodio (2,14 g, 0,061 moles) muy lentamente para reducir al mínimo la evolución de gas de una vez. Se añadió a la reacción ácido acético glacial lentamente para llevar el pH a 3. A continuación se neutralizó la reacción con bicarbonato de sodio saturado. Se lavaron a continuación los compuestos orgánicos con 3 x 50 ml_ de salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se eliminó bajo presión reducida. Se hizo pasar el aceite claro a través de un tapón de sílice (15 g) para producir el alcohol en 5,15 g, 0,026 moles (64%). C9H14N2O3.
RMN ? (CDCIs d ppm): 1 ,18-2,15 (m, 8H), 3,59 (m, 2H), 4,39 (m, 1H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,45, 25,71, 26,47, 32,56, 34,67, 51,16, 58,85, 160,66, 160,89. Ejemplo-Y-2) A una solución del Ejemplo-Y-1 (5,15 g, 0,026 moles) en cloruro de metileno (100 mL) a 0°C en un baño se hielo se añadió tetrabromuro de carbono (10,78 g, 0,033 moles). Se enfrió la solución a 0°C en un baño de hielo. A continuación se añadió trifenilfosfina (10,23 g, 0,39 moles) en porciones para que la temperatura no subiera por encima de 3°C. Se agitó la reacción durante 2 horas y se eliminó el disolvente al vacío. Se purificó el producto en bruto por cromatografía instantánea para producir el bromuro (5,9 g, 0,023 moles) en un rendimiento del 87%. Análisis elemental calculado para ?10?16?2?3: C, 41,40; H, 5,02; N, 10,73, Br, 30,60. Encontrado: C, 41 ,59; H, 5,07; N, 10,60; Br, 30,86. RMN ? (CDCI3 d ppm): 1,50-2,60 (m, 9H), 2,99 (dd, 1H), 3,35 (m, 2H), 4,41 (m, 1H). RMN 1dC (CDCI3, d ppm): 23,89, 25,33, 26,04, 28,06, 31 ,59, 35,05, 52,79, 159,3, 160,2.
Ejemplo-Y-3) A una solución del Ejemplo-Y-2 (5,71 g, 0,026 moles) en tolueno (25 mL) se añadió trifenilfosfina (7,17 g, 0,027 moles). Se mantuvo la reacción a reflujo en un baño de aceite durante 16 horas. Después de enfriar, se decantó el tolueno a partir del sólido vitreo. Se trituró el sólido con éter dietílico durante toda la noche para producir el bromuro de fosfonio (10,21 g, 0,020 moles) en un rendimiento del 90%. RMN 1H (CDCI3 d ppm): 1 ,50-2,9 (m, 11H), 3,58 (m, 1 H), 4,16 (m, 1 H), 4,41 (m, 1 H), 7,6-8,0 (m, 15H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,43, 24,97, 25,50, 55,08, 55,27, 116,9, 118,1, 130,4, 130,6, 133,5, 135,1 , 135,2, 159,4, 160. RMN 31P (CDCI3, d ppm): 26,0. Ejemplo-Y-4) A un matraz de fondo redondo de 1 L se añadió N-benciloxicarbonil-D-homoserina lactona (97 g, 0,442 moles) en etanol (500 mL). Se añadió a la reacción solución de hidróxido de sodio (1 M, 50 mL). Se monitorizó la reacción por cromatografía de capa fina durante 12 horas hasta que se hubo consumido el material de partida. Se añadió tolueno (60 mL) y después se eliminó el disolvente al vacío. El residuo se pasó a la etapa siguiente sin más purificación. Ejemplo-Y-5) Se suspendió el residuo del Ejemplo-Y-4 en DMF en un matraz de fondo redondo de 1 L. Se añadió a la suspensión bromuro de bencilo (76,9 g, 0,45 moles, 53,5 mL) y se agitó la mezcla durante 1 hora. Se enfrió la muestra y se analizó por espectrometría de masas para indicar el consumo del material de partida y que no existía reformación de lactona. Se añadió a la reacción 1 L de acetato de etilo y 500 mL de salmuera. Se lavó la fase acuosa 2 veces más con 500 mL de acetato de etilo. Se combinaron los compuestos orgánicos, se secó sobre MgS04 y se concentró. La cromatografía sobre gel de sílice proporcionó éster bencílico de N-benciloxicarbonil-S-homoserina como un sólido blanco (80 g). Ejemplo-Y-6) A un matraz de fondo redondo de 2 L se añadió clorocromato de piridinio (187 g, 0,867 moles) y gel de sílice (197 g) suspendidos en CH2CI2 (600 mL). Se añadió a la suspensión espesa una solución del producto del Ejemplo-Y-5 (80 g, 0,233 moles) en CH2CI2 (600 mL). Se agitó la mezcla durante 4 horas. La cromatografía de capa fina indicó que el material de partida se había consumido. Se añadió a la reacción 1 L de éter dietílico. A continuación se filtró la solución a través de un lecho de celita seguido de un lecho de gel de sílice. Se eliminó el disolvente al vacío y se purificó el aceite resultante por cromatografía sobre gel de sílice para producir el aldehido (58,8 g) en un rendimiento total del 38%. Mhf 342,5, MH+NH4+ 359,5. RMN 1H (CDCI3 d ppm): 3,15 (q, 2H), 4,12 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 7,31 (m, 10H), 9,72 (s, 1H). Ejemplo-Y-7) A un matraz de 3 bocas de 3 L se añadió la sal de fosfonio del Ejemplo-Y-3 (56,86 g, 0,11 moles) que se había secado sobre P205 bajo un vacío en THF (1 L). Se enfrió la suspensión espesa a -78°C en un baño de hielo seco. Se añadió a la suspensión espesa KHMDS (220 mL, 0,22 moles) gota a gota de manera que la temperatura no subiera por encima de -72°C. Se agitó la reacción a -78°C durante 20 minutos y luego a -45°C durante 2 horas. Se rebajó a continuación la temperatura a -78°C y se añadió el aldehido (15,9 g, 0,047 moles) del Ejemplo Y-6 en THF (50 mL) gota a gota durante 45 minutos. Se agitó la reacción a -77°C durante 30 minutos y luego se calentó a -50°C durante 1 hora antes de que se calentara a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añadió a la reacción acetato de etilo (200 ml_) y cloruro de amonio saturado. Se recogieron los compuestos orgánicos, se secó sobre MgS04 y se concentró al vacío. Se purificó el aceite en bruto por cromatografía sobre sílice para producir el compuesto olefínico (45,1 g) en un rendimiento del 81% como un aceite viscoso amarillo pálido. RMN 1H (CDCI3 d ppm): 1,4-2,6 (m, 10H), 2,92 (d, 1H), 4,17 (m, 1 H), 4,38 (m, 1H), 5,05 (q, 2H), 5,40 (m, 2H), 7,3 (m, 10H). RMN 13C (CDCI3> d ppm): 29,49, 29,64, 31,32, 39,60, 49,56, 53,98, 61 ,01, 65,25, 124,14, 127,81, 128,20, 128,55, 128,79, 129,30, 130,96, 135,68, 137,31, 152,59, 157,57, 171,61. Ejemplo Y) A un vial de 20 ml_ se añadió el producto del Ejemplo-Y-7 (19,77 g, 0,039 moles) en dioxano (50 ml_) y HCI acuoso 4 N (250 ml_). Se añadió a esta solución una cantidad catalítica de Pd sobre carbono al 10% en un matraz de hidrogenación. Se sometió a presión el matraz con H2 (344,8 kPa (50 psi)) durante cinco horas. Se monitorizó la reacción por espectrometría de masas y el material de partida se había consumido. Se filtró la reacción a través de un lecho de celita y se lavó con agua. Se eliminó el disolvente por liofilización para producir el compuesto del título (7,52 g) en un rendimiento del 81%. MH+ 242,2, MH+NH4+ 259,2.
RMN 1H (CD3OD d ppm): 1,2-2,0 (m, 15H), 2,42 (d, 1 H), 2,65 (dd, 1H), 3,49 (m, 1H), 3,98 (t, 1H), 7,26 (s), 8,05 (s), 8,35 (s). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,43, 25,58, 26,00, 26,10, 32,75, 33,45, 35,31, 53,76, 54,55, 157,27, 175,13. Ejemplo Z Clorhidrato del ácido (aS,2S)-a-amínohexahidro-7-imino-1H-aze pi n a-2-h exa n o ico, tri h id ratado A un matraz de 3 bocas de 1 L se añadió la sal de fosfonio del Ejemplo-Y-3 (21,21 g, 0,041 moles) en THF (200 mL). Se enfrió la suspensión espesa a -78°C en un baño de hielo seco. Se añadió a la suspensión espesa fría KHMDS (88 mL, 0,044 moles) gota a gota, de manera que la temperatura interna no subiera por encima de -72°C. Se agitó la reacción a -78°C durante 20 minutos y luego a -45°C durante 1 hora. Se bajó a continuación la temperatura a -78°C y se añadió el aldehido (15,9 g, 0,047 moles) (preparado como en el Ejemplo-Y(4-6) usando N-benciloxicarbonil-L-homoserina lactona) en THF (50 mL) gota a gota durante 45 minutos. Se agitó la reacción a -77°C durante 30 minutos y luego se calentó a -50°C durante 30 minutos y después a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añadió a la reacción acetato de etilo (100 ml_) y cloruro de amonio saturado. Se recogieron los compuestos orgánicos, se secaron sobre MgS04 y se concentraron al vacío. Se purificó el aceite en bruto por cromatografía sobre sílice para producir el compuesto olefínico (9,0 g) en un rendimiento del 45% como un aceite viscoso amarillo pálido. RMN 1H (CDCI3 d ppm): 1 ,4-2,6 (m, 10H), 2,92 (d, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 5,05 (q, 2H), 5,40 (m, 2H), 7,3 (m, 10H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 29,49, 29,64, 31,32, 39,60, 49,56, 53,98, 61 ,01 , 65,25, 124,14, 127,81, 128,20, 128,55, 128,79, 129,30, 130,96, 135,68, 137,31, 152,59, 157,57, 171,71. Ejemplo Z) A un vial de 20 ml_ se añadió el producto del Ejemplo-Z-1 en dioxano (5 mL) y HCI acuoso 4 N (16 ml_). Se añadió a esta solución una cantidad catalítica de Pd sobre carbono al 10% en un matraz de hidrogenación. Se sometió a presión el matraz con H2 (344,8 kPa (50 psi)) durante cinco horas. Se monitorizó la reacción por espectrometría de masas y el material de partida se había consumido. Se filtró la reacción a través de un lecho de celita y se lavó con agua. Se eliminó el disolvente por liofilización para producir el compuesto del título (98,7 mg) en un rendimiento del 79,4%. MH+ 242,2, MH+NH4+ 259,2. RMN 1H (CD3OD d ppm): 1,2-2,0 (m, 15H), 2,42 (d, 1H), 2,6 (dd, 1 H), 3,49 (m, 1H), 3,98 (t, 1 H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,43, 25,58, 26,00, 26,10, 32,75, 33,45, 35,31 , 53,76, 54,55, 157,27, 175,13. Ejemplo AA Ácido (2S,4Z)-2-amíno-6-[(2R)-hexahidro-7-im¡no-1W-azep¡n-2-¡l]-4-hexenoico Ejemplo-AA-1) Ester fenilmetílico del ácido (2S,4Z)-2-amino-6-[(2 ?)-hexahidro-7-imino-1W-azepin-2-il]-2-[[(fenílmetoxi)carboníl]amino]-4-hexenoico A un matraz de 50 mL se añadió una muestra del EjempIo-Z-1 (1 ,5 g, 2,97 moles) en metanol (25 mL). A continuación se añadió una solución al 60% de ácido acético glacial (16 mL) a la mezcla de reacción. Se observó un precipitado. Se añadió metanol adicional para disolver el sólido (1 mL). A continuación se añadió a la reacción polvo de cinc (0,200 g). Se sónico la reacción durante 4 horas, en el curso de lo cual se mantuvo la temperatura a 37°C. Se monitorizó la reacción por TLC y EM hasta que se consumió el material de partida y se observó una masa correspondiente al producto. Se decantó la solución a partir del cinc y se añadió al filtrado una solución al 30% de acetonitrilo/agua (100 mL). Se purificó la reacción con acetonitrilo/agua al 52% en dos pasadas en HPLC Preparativa de Waters [un gradiente del 20% al 70% durante 30 minutos). La liofilízación del producto resultante produjo el material del título del Ejemplo-AA-1 (1,01 g) en un rendimiento del 73% como un sólido blanco. MH+ 464,4, MH+NlV 486,4. RMN 1H (CD3OD d ppm): 1 ,2-2,0 (m, 8H), 2,42 (m, 2H), 2,6 (m, 5H), 3,49 (q, 1 H), 4,31 (t, 1H), 5,15 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 5,43 (q, 1H), 5,59 (q, 1 H), 7,25 (ancho s, 10H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,37, 29,61, 30,76, 32,45, 33,73, 34,42, 55,40, 57,09, 68,06, 68,07, 122,3, 124,9, 128,76, 129,09, 129,28, 129,39, 129,51, 129,61, 155,71, 158,35, 173,90. Ejemplo AA) A un matraz de 250 mL se añadió el producto del Ejemplo-AA-1 (1 ,0 g, 2,2 mmoles) en HCI 4 M (100 mL). Se mantuvo a reflujo la reacción durante toda la noche, se monitorizó por EM hasta que el material de partida se había consumido y se observó la masa del producto. La reacción, sin mayor evolución, se purificó en dos pasadas en columna de fase inversa preparativa de Waters usando acetonitrilo/agua al 18% [del 0% al 30% de acetonitrilo/agua en 30 minutos]. La liofilización de las fracciones combinadas produjo el producto del título (0,34 g) en un rendimiento del 64% como una espuma de color crema. MH+ 240,3, MH+NH4+ 486,4.
RMN 1H (CD3OD d ppm): 1,2-2,0 (m, 6H), 2,35 (m, 2H), 2,45 (dd, 2H), 2,69 (m, 2H), 3,61 (dt, 1H), 3,98 (t, 1H), 5,59 (m, 1H), 5,65 (m, 1 H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 23,65, 24,66, 32,51, 32,84, 33,1, 33,25, 54,10, 56,1, 126,80, 129,33, 153,33, 172,52. Ejemplo BB Ácido (2S,4E)-2-amino-6-[(2 ?)-hexahidro-7-ímino-1 H-azepin-2-il]-4-hexenoico Ejemplo-BB-1) Ester fenilmetílico del ácido (2S,4E)-2-am¡no-6-[(5 ?)-6,7,8,9-tetrahídro-S-oxo-SH.SH-tl^^loxadiazolo^.S-alazepin-S-ill^-hexenoico A un matraz de 250 mL se añadió EjempIo-Z-1 (2,0 g, 3,9 moles) y disulfuro de fenilo (0,860 g, 3,9 mmoles) en una solución de ciclohexano (70 ml_)/benceno (40 mL). Se hizo burbujear nitrógeno a través de la solución para purgar el sistema de oxígeno. Se expuso la reacción a una lámpara UV de onda corta durante el fin de semana. Se evaluó la reacción por HPLC de fase normal (acetato de etilo/hexano). Se observó un 71% del isómero trans y un 29% del isómero cis. Se sometió la reacción a 3 días adicionales de UV después de lo cual el 84% del material de partida se convirtió al isómero trans y el 16% del material de partida siguió siendo isómero cis. La purificación por cromatografía produjo Ejemplo-BB-1 (0,956 g) en un rendimiento del 48%. MH+ 506,1, H+NH4+ 523,2. RMN 1H (CD3OD 5 ppm): 1 ,2-2,0 (m, 8H), 2,42-2,6 (m, 6H), 2,91 (dd, 1 H), 4,19 (m, 1H), 4,31 (dt, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,18 (dt, 1H), 5,27 (m, 1 H), 7,25 (ancho s, 10H). Ejemplo-BB-2) onoclorhidrato de éster fenilmetílico del ácido (2S,4£)-6-[(2 ?)-7-imino-1H-azepin-2-¡l]-2-[[(fenilmetoxi)carbonil]am¡no]-4-hexenoíco Se desprotegió una muestra del producto del Ejemplo-BB-1 (0,956 g, 1,9 mmoles) en MeOH (80 mL) por el método del Ejemplo-AA-1 con polvo de cinc (1,5 g) y HOAc/H20 al 60% (40 mL). Se purificó el producto resultante por cromatografía de fase inversa para producir el material del título (0,248 g) en un rendimiento del 28%. Ejemplo BB) Se transformó el producto del Ejemplo-BB-2 (0,248 g, 0,53 mmoles) en el producto del título por el método del Ejemplo AA usando HCl (2 mL), H20 (2 mL), CH3CN (4 mL). Se purificó el producto en bruto por cromatografía de fase inversa para producir el producto del título del Ejemplo BB (0,073 g) en un rendimiento del 57%. MH+ 240,3, MH+NH4+ 486,4. RMN 1H (CD3OD, d ppm): 1,2-2,0 (m, 6H), 2,35 (t, 2H), 2,55-2,82 (m, 4H), 3,68 (dt, 1 H), 4,05 (t, 1 H), 5,65 (m, 2H). Ejemplo CC Diclorhidrato del ácido (£)-2-amino-2-metil-6-[(1-iminoetil)amino]-4-hexenoico EjempIo-CC-1) Se suspendió clorhidrato de éster etílico de DL-alanina (5 g, 32,5 mmoles) en tolueno (50 mL). Se añadió trietilamina (4,5 mL, 32,5 mmoles) seguido de anhídrido ftálico (4,8 g, 32,5 mL). El matraz de reacción se equipó con una trampa de Dean-Stark y condensador de reflujo y se calentó la mezcla a reflujo durante toda la noche. Se recogieron aproximadamente 10 mL de tolueno/agua. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se diluyó con NH4CI acuoso y EtOAc. Se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3x). Se lavó el extracto de acetato de etilo con salmuera, se secó sobre MgSC>4, se filtró y se concentró al vacío para dar el éster de amino protegido en ftalilo del título como un sólido cristalino blanco en un rendimiento casi cuantitativo. R N 1H (400 MHz, CDCI3, d ppm): 1 ,2 (t, 3H), 1 ,6 (d, 3H), 4,2 (m, 2H), 4,9 (q, 1 H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). Ejemplo-CC-2) Se añadió ftalimida de potasio (18,5 g, 0,1 moles) a un matraz de fondo redondo de 250 mL que contenía cloruro de 1 ,4-buteno (25 g, 0,2 moles). Se calentó la mezcla de reacción a 150°C durante 1,5 h. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se dividió entre salmuera y EtaO. Se secó la capa orgánica con MgSC^, se filtró y se concentró al vacío. Se recristalizó el residuo a partir de etanol caliente para dar el 1-cloro-4-pftalimidobuteno del título (8,9 g, 39%) como cristales naranjas. HRMS cale, para Ci2Hi0CINO2: m/z = 236,0478 [M+H]. Encontrado: 236,0449. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d ppm): 4,1 (d, 2H), 4,3 (d, 2H), 5,9 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). Ejemplo-CC-3) Se disolvió una muestra del producto del Ejemplo-CC-2 (2,3 g, 9,8 mmoles) en acetona (50 mL). Se añadió Nal (3,2 g, 21 mmoles) y se mantuvo a reflujo la mezcla durante toda la noche. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió Et^O y se lavó la mezcla en secuencia con tiosulfato de sodio y salmuera. Se secó la capa orgánica con gS04, se filtró y se concentró al vacío para dar el yoduro del título (2,8 g, 87,5%) como un sólido amarillo claro que se usó sin más purificación. RMN 1H (400 MHz, CDCI3, d ppm): 3,8 (d, 2H), 4,2 (d, 2H), 5,7 (m, 1 H), 6,0 (m, 1 H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). Masa (M+1) = 328. Ejemplo-CC-4) Una solución de KHMDS (2,6 g, 13,3 mmoles) en THF (50 ml_) se enfrió a -78°C. Se añadió una solución del producto del Ejemplo-CC-1 (2,2 g, 8,87 mmoles) en THF (15 ml_) e inmediatamente después se añadió 1 ,3-dimetiI-3,4,5,6-tetrahidro-2(1 H)-pirimidinona (DMPU, 1,0 ml_, 8,87 mL). Después se agitó la solución a -78°C durante 40 minutos y se añadió una solución del producto del Ejemplo-CC-3 (2,9 g, 8,87 mmoles) en THF (15 mL). Se retiró el matraz del baño frío y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se dividió la mezcla de reacción entre NaHCÜ3 acuoso saturado y EtOAc. Se lavó el extracto orgánico con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío para dar el éster amino protegido bis-ftalilo como un sólido amarillo. Se purificó por cromatografía este residuo sobre gel de sílice (hexanos:EtOAc 1 :1) y dio 1 ,4 g (35%) del material del título como un sólido blanco. RMN 1H (300 MHz, CDCI3, d ppm): 1,2 (t, 3H), 1,6 (d, 3H), 2,8 (dd, 1H), 3,1 (dd, 1H), 4,2 (m, 4H), 5,6 (m, 1H), 5,8 (m, 1H), 7,6 (m, 4H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). Masa (M+H) = 447. Ejemplo-CC-5) H3C NH2 HaN-^^^COaH " 2HCI Se disolvió el producto del Ejemplo-CC-4 (0,78 g, 1,76 mmoles) en una mezcla de ácido fórmico (10 mL, 95%) y HCI (20 mL, HCl concentrado) y se mantuvo a reflujo durante 3 días. Se enfrió la mezcla de reacción a 0°C y se filtró para eliminar el anhídrido itálico. Después de concentrar al vacío (T < 40°C), se obtuvo la alfa-metil lisina insaturada del título como un sólido blanco (0,38 g, 95%), que se usó sin más purificación. RMN 1H (300 MHz, D20, d ppm): 1 ,4 (s, 3H), 2,4 (dd, 1H), 2,6 (dd, 1H), 3,5 (d, 2H), 5,7 (m, 2H). Masa (M+H) = 317. Ejemplo CC) Se disolvió el producto del Ejemplo-CC-5 (0,2 g, 0,86 mmoles) en H2O (8 mL) y se llevó a un pH 9 con NaOH 2,5 N. Se añadió acetimidato de etilo - HCl (0,42 g, 3,4 mmoles) en cuatro porciones durante 1 h. Al cabo de 1 h, se aciduló la mezcla a un pH 4 con HCl al 10% y se concentró al vacío. A continuación se pasó el residuo a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente NH4OH 0,5 N). Se concentró el residuo al vacío, se aciduló a un pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título (17 mg, 6%) como un aceite. HRMS cale, para C9H17N3O2: m/z 200,1399 [M+H]. Encontrado: 200,1417. RMN 1H (400 MHz, D20, d ppm): 1,4 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,5 (dd, 1 H), 2,6 (dd, 1 H), 3,8 (d, 2H), 5,6 (m, 2H). Ejemplo DD Diclorhidrato del ácido (R,£)-2-amino-2-metil-6-[(1-im¡noetil)amino]-4-hexenoico Ejemplo-DD-1) Se preparó (2S,4S)-3-benzoíl-2-(terc-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona según el método de Seebach. Seebach, D.; Fadel, A. Helvética Chimica Acta 1985, 68, 1243. Ejemplo-DD-2) Se enfrió una solución de KHMDS (0,65 g, 3,24 mmoles), DMPU (0,33 ml_, 2,7 mmoles) y THF (40 mL) a -78°C. Se añadió gota a gota una solución de (2S,4S)-3-benzoíl-2-(terc-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona (Ejemplo-DD-1) (0,70 g, 2,7 mmoles) en THF (10 mL). Al cabo de 45 min, se añadió una solución del producto del Ejemplo-CC-3 (0,88 g, 2,7 mmoles) en THF (10 mL). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 h y se enfrió con NaHCC>3 acuoso saturado. Se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con EtOAc. Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSC>4, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó por cromatografía sobre gel de sílice el aceite amarillo resultante (hexanos/acetato de etilo 9:1 y luego 4:1) para dar la alfa-metil D-lisina insaturada protegida del título (0,26 g, 20%) como un aceite incoloro. HRMS cale, para C27H28N2O5: m/z 461,2076 [M+H]. Encontrado: 461 ,2033. RMN 1H (400 MHz, CDCI3, d ppm): 0,9 (s, 9H), 1 ,5 (s, 3H), 4,3 (m, 2H), 5,5 (m, 2H), 5,6 (m, 2H), 6,1 (m, 1 H), 7,5 (m, 5H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). EjempIo-DD-3) Hs^NHa _2HC| H2N'^^^ C02H Se disolvió el producto del Ejemplo-DD-2 (0,255 mg, 0,55 mmoles) en HCI 6 N (6 mL) y ácido fórmico (6 mL) y se calentó a reflujo durante 24 h. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se 79 concentró al vacío. Se suspendió el residuo en agua y se lavó con CH2CI2. Se concentró la capa acuosa y se pasó a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente NH4OH 0,5 N). Se concentró el residuo al vacío, se aciduló a un pH 4 con HCI al 10% y se concentró para dar la D-lisina insaturada del título (71 mg, 55%) como un aceite que se usó sin más purificación. RMN 1H (400 MHz, D20, 5 ppm): 1 ,4 (s, 3H), 2,5 (dd, 1H), 2,6 (dd, 1 H), 3,4 (d, 2H), 5,6 (m, 2H), 5,7 (m, 2H). Ejemplo DD) Se disolvió el producto del Ejemplo-DD-3 (13 mg, 0,056 mmoles) en H2O (5 mL) y se llevó a un pH 9 con NaOH 2,5 N. Se añadió acetimidato de etilo - HCI (27 mg, 0,2 mmoles) en cuatro porciones durante 2 h. Al cabo de 2 h, se aciduló la mezcla a un pH 4 con HCI al 10% y se concentró al vacío. Se pasó el residuo a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente NH4OH 0,5 N). Se concentró el residuo al vacío, se aciduló a un pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título (45 mg) como un aceite. HRMS cale, para C9H17N3O2: /z 200,1399 [M+H]. Encontrado: 200,1386. RMN 1H (400 MHz, D20, d ppm): 1 ,4 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,5 (dd, 1H), 2,6 (dd, 1H), 3,8 (d, 2H), 5,6 (m, 2H).
Ejemplo EE Diclorhidrato del ácido (S,£)-2-amino-2-metil-6-[(1-iminoetil)amino]-4-hexenoico Ejemplo-EE-1) Se preparó (2R,4R)-3-benzoíl-2-(terc-butil)-4-metil-1,3-oxazolidin-5-ona según el método de Seebach. Seebach, D.; Fadel, A. Helvética Chimica Acta 1985, 68, 1243. Ejemplo-EE-2) Se enfrió una solución del producto de (2 ?,4R)-3-benzoíl-2-(terc-butil)-4-metil-1,3-oxazol¡d¡n-5-ona del Ejemplo-EE-1 (2,0 g, 7,6 mmoles) en THF (50 mL) a -78°C. Se añadió gota a gota una solución de KHMDS (0,65 g, 3,24 mmoles) en THF (25 mL). Al cabo de 30 min, se añadió una solución del producto del Ejemplo-CC-3 (2,8 g, 8,6 mmoles) en THF (25 mL). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 h y se enfrió con NaHC03 acuoso saturado. Se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con EtOAc. Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. Se purificó por cromatografía sobre gel de sílice el aceite naranja resultante (hexanos/acetato de etilo 9:1 y luego 4:1) para dar la alfa-metil L-lisina insaturada protegida del título (0,5 g, 15%) como un sólido blanco. HRMS cale, para C27H28N2O5: m/z 461 ,2076 [M+H]. Encontrado: 461 ,2043. R N 1H (400 MHz, CDCI3, d ppm): 0,9 (s, 9H), 1 ,5 (s, 3H), 4,3 (m, 2H), 5,5 (m, 2H), 5,6 (m, 2H), 6,1 (m, 1H), 7,5 (m, 5H), 7,7 (m, 2H), 7,9 (m, 2H). Ejemplo-EE-3) ?2?? Ate w, -2HCI Se disolvió el producto del Ejemplo-EE-2 (0,5 g, 1 mmoles) en HCI 12 N (10 mL) y ácido fórmico (5 mL) y se calentó esta mezcla a reflujo durante 12 h. Se enfrió la mezcla de reacción en el congelador durante 3 h y se eliminaron los sólidos por filtración. Se lavó el residuo con CH2CI2 y EtOAc. Se concentró la capa acuosa al vacío y dio la alfa-metil L-lisina insaturada del título (0,26 g, 99%) como un aceite que se usó sin más purificación. RMN 1H (400 MHz, D2O, d ppm): 1 ,4 (s, 3H), 2,5 (dd, 1 H), 2,6 (dd, 1H), 3,4 (d, 2H), 5,7 (m, 2H).
Ejemplo EE) Se disolvió el producto del Ejemplo-EE-3 (0,13 g, 0,56 mmoles) en H2O (1 mL) y se llevó a un pH 9 con NaOH 2,5 N. Se añadió acetimidato de etilo - HCI (0,28 g, 2,2 mmoles) en cuatro porciones durante 1 h. Al cabo de 1 h, se aciduló la mezcla a un pH 4 con HCI al 10% y se concentró al vacío. Se pasó el residuo a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (eluyente NH4OH 0,5 N). Se concentró el residuo al vacío, se aciduló a un pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título como un aceite (40 mg). HRMS cale, para C9H17N3O2: m/z 222,1218 [M+Na]. Encontrado: 222,1213. RMN 1H (300 MHz, D20, d ppm): 1,4 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,4 (dd, 1 H), 2,6 (dd, 1 H), 3,8 (d, 2H), 5,6 (m, 2H). Ejemplo FF Diclorhidrato del ácido 2-amino-2-metil-6-[(1-iminoetil)amino]-4-hexinoico Ejemplo-FF-1) El N-boc-1-amino-4-clorobut-2-ino se preparó según el método descrito en Tetrahedron Lett. 21, 4263 (1980).
Ejemplo-FF-2) El N-(difenilmetilen)-L-alaninato de metilo se preparó según el método descrito en J. Org. Chem., 47, 2663 (1982). Ejemplo-FF-3) Se colocó THF en seco (1.000 ml_) en un matraz purgado con argón y se añadió NaH al 60% disperso en aceite mineral (9,04 g, 0,227 moles). A esta mezcla se añadió el producto del Ejemplo-FF-2 (30,7, 0,114 moles). A continuación se agitó la mezcla de reacción a entre 10°C y 15°C durante 30 min. Se añadieron yoduro de potasio (4 g) y yodo (2 g) y se siguió inmediatamente de la adición del producto del Ejemplo-FF-2 (23 g, 0,113 moles en 200 mL de THF) en 30 min. A continuación se agitó la mezcla de reacción a 55°C hasta que desapareció el material de partida (~2 h). A continuación se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se evaporó el disolvente. Se añadió acetato de etilo (500 mL) y se lavó cuidadosamente la mezcla con 2 x 200 mL de agua desionizada. Se secó la capa orgánica sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó para dar 44 g del producto en bruto. La purificación por cromatografía usando acetato de etilo al 20% en hexano produjo la alfa-metil lisina insaturada protegida del título (28 g, 57%).
Análisis Cale, para C26H30N2O4 y 0,5 de acetato de etilo: C, 70,42; H, 7,14; N, 5,91. Encontrado: C, 70,95; H, 7,73; N, 6,09. IR (neto, A max crrf1): 2981 , 1714, 1631. RMN 1H (CDCI3, d ppm): 1,28 (s, 9H), 1,4 (s, 3H), 2,65-2,76 (m, 2H), 3,15 (s, 3H), 3,7 (ancho s, 2H), 4,6 (ancho s, 1H), 6,95-7,4 (m, 10H). RMN 13C (CDCI3, d ppm): 24,29, 28,33, 28,39, 33,24, 51,60, 53,55, 127,79, 127,97, 128,26, 128,36, 128,43, 128,54, 128,66, 130,05, 130,22, 132,39. Masa (M+1) = 435. Pureza DSC: 261 ,95°C. Ejemplo-FF-4) H2N^^H3C^C02Me " 2HCI Se disolvió el producto del EjempIo-FF-3 (16 g, 0,0368 moles) en HCI 1 N (300 mL) y se agitó a 25°C durante 2 h. Se lavó la mezcla de reacción con éter (2 x 150 mL) y se separó la capa acuosa y se decoloró con carbón vegetal. La concentración produjo ~9 g (rendimiento 100%) del éster de alfa-metil lisina instaurada desprotegida FF-4 como un sólido espumoso blanco. Análisis Cale, para C8H14N2O2 que contenía 2,26 HCI y 1,19 H20: C, 35,06; H, 6,86; N, 10,22; Cl, 29,24. Encontrado: C, 35,31; H, 7,38; N, 10,70; Cl, 29,77. RMN 1H (D20, d ppm): 1,56 (s, 3H), 2,8-3,0 (2 dt, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,79 (s, 3H). RMN 13C (D20, d ppm): 23,89, 29,81 , 32,05, 57,08, 61 ,90, 79,57, 82,43, 173,92. Masa (M+1) = 171. Pureza DSC: 114,22°C. UV = 206 nm, abs. 0,013. [a]25 en metanol = 0 a 365 nm. Ejemplo-FF-5) Se disolvió el producto del Ejemplo-FF-4 (2,43 g, 0,01 moles) en agua desionizada (25 ml_). Se añadió una solución de NaOH (400 mg, 0,01 moles) en agua desionizada (25 mL) a 25°C para llevar el pH a ~7,95 y se siguió agitando otros 10 min. Se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (988 mg, 0,008 moles) a la mezcla de reacción con ajuste simultáneo del pH a -8,5 añadiendo NaOH 1 N. Se agitó la mezcla de reacción a pH entre 8 y 8,5 durante 3 h seguido de adición de acetimidato. Se añadió HCl 1 N a la mezcla de reacción (pH 4,1). Se evaporó el disolvente a 50°C para producir un residuo higroscópico amarillo en bruto (4 g, rendimiento > 100%). Se realizó la purificación en el sistema de cromatografía de Gilson usando AcOH/CH3CN/H20 al 0,1%. Análisis Cale, para C10H17 3O2 que contenía 2,25 HCl y 1 ,7 H20: C, 37,08; H, 7,05; N, 12,97; Cl, 24,63. Encontrado: C, 37,01 ; H, 6,79; N, 12,76; Cl, 24,87. IR (neto, ? max cm_1): 2953, 2569, 1747, 1681, 1631. R N 1H (D20, d ppm): 1 ,52 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,74-2,96 (2 dt, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,95 (t, 2H). RMN 13C (D20, d ppm): 23,89, 29,81 , 32,05, 57,08, 61 ,90, 79,57, 82,43, 173,92. Masa (M+1) = 212. Ejemplo FF) Se disolvió el producto del Ejemplo-FF-5 (100 mg, 0,0005 moles) en HCI 8 N (20 mL) y se agitó durante 10 h a reflujo. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se evaporó el HCI acuoso en evaporador rotatorio. Se disolvió el residuo en agua desionizada (10 mL) y agua y se reconcentró al vacío para producir el compuesto del título como un sólido vitreo amarillo en rendimiento casi cuantitativo (88 mg). , Análisis Cale, para CgHi5N302 que contenía 2,4 HCI y 1 ,8 H20: C, 34,08; H, 6,67; N, 13,25; Cl, 26,83. Encontrado: C, 34,32; H, 6,75; N, 13,63; Cl, 26,47. IR (neto, ? max cm"1): 1738, 1677, 1628, 1587. RMN 1H (D20, d ppm): 1,6 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 2,8-3,0 (2 dt, 2H), 4,1 (s, 2H). RMN 13C (D20, d ppm): 21 ,22, 24,10, 29,88, 34,58, 80,04, 80,99, 128,39, 168,07, 176,13. Masa (M+1) = 198.
Ejemplo GG Diclorhidrato del ácido (2R/S,42)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-4-heptenoico Ejemplo-GG-1) Se disolvió 5,6-hidropiran-2-ona (49,05 g, 0,5 moles) en 200 mL de agua. Se añadió hidróxido de potasio (35 g, 0,625 moles) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 horas. Se eliminó el disolvente al vacío para producir un sólido vitreo incoloro (65 g, 84%) que, según se caracterizó por RMN, era predominantemente el isómero cis del compuesto del título. RMN ? (CDCI3) d: 2,7 (m, 2H), 3,6 (t, 2H), 5,8-5,85 (m, H), 5,9- Ejemplo-GG-2) Se disolvió el producto del Ejemplo-GG-1 en 100 mL de dimetil formamida. Se añadió a continuación yoduro de metilo (52 mL, 0,84 moles), de lo que resultó una exotermia a 40°C. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 10 horas y se dividió entre 150 mL de acetato de etilo/éter dietílico en una proporción de 20/80 y agua helada. Se separó la capa acuosa y se reextrajo con 100 mL de éter dietílico. Se combinaron las capas orgánicas, se secó (Na2S04), se filtró y se depuró todo el disolvente para producir el producto de éster metílico deseado (40 g, 71%). Este material se disolvió en 200 mL de cloruro de metileno y se enfrió la solución a 0°C. Se añadieron dimetilsililcloruro de tere-butilo, trietilamina y dimetilaminopiridina. Se calentó lentamente la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 10 horas bajo nitrógeno. Se extrajo la reacción con 100 mL de solución de bisulfato de potasio acuoso 1 N. Se lavó la capa orgánica con 2 x 100 mL de salmuera y a continuación con 3 x 150 mL de agua. Se secó la capa orgánica (Na2S04), se filtró y se depuró para producir 42 g (56%) del material del título. RMN 1H (CDCI3) d: 0,02 (s, 6H), 0,085 (s, 9H), 2,8-2,85 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,66-3,7 (m, 2H), 5,8 (m, 1H), 6,3 (m, 1H).
Ejemplo-GG-3) Se disolvió el material del Ejemplo-GG-2 en 25 mL de tolueno y se enfrió a 0°C. Se añadió gota a gota hidruro de diisobutilaluminio (1,0 en tolueno, 32 mL, 48 mmoles) manteniendo la temperatura entre 5 y - 0°C. Se agitó la mezcla de reacción durante 1,5 horas entre 6 y -8°C antes de enfriar a -25°C. A esta mezcla se añadieron 100 mL de tartrato sódico potásico 0,5 N. Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante una hora. Se formó un precipitado gelatinoso que se filtró. Se extrajo la fase acuosa con 2 x 100 mL de EtOAc. Se secaron las capas orgánicas combinadas (sulfato de sodio), se filtró y se concentró al vacío para producir el producto del título (3,45 g, 66%) como un aceite incoloro. RMN 1H (CDCI3) d: 0,02 (s, 6H), 0,085 (s, 9H), 2,25-2,32 (m, 2,6 (ancho s, 1H), 3,6 (t, 2H), 4,08 (d, 2H), 5,45-5,55 (m, 1H), 5,7-5,75 Ejemplo-GG-4) Se disolvió el producto (8 g, 37 mmoles) del Ejemplo-GG-3 en 100 mL de cloruro de metileno y se enfrió esta solución a 0°C. Se añadió a continuación cloruro de metanosulfonilo y se agitó esta mezcla durante 5 min. A continuación se añadió trietilamina. La temperatura se mantuvo entre 0 y -10°C durante la adición de los reactivos mencionados. Posteriormente se calentó la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. A continuación se extrajo con 100 mL de solución de bicarbonato de sodio acuosa al 50%. Se lavó la capa orgánica con 00 mL de solución de salmuera acuosa saturada, se secó (sulfato de sodio), se filtró y se depuró al vacío para producir el material del título (8,2 g, 94%). RMN H (CDCI3) 5: 0,02 (s, 6H), 0,085 (s, 9H), 2,25-2,32 (m, 2H), 3,6 (t, 2H), 4,08 (d, 2H), 5,6-5,7 (m, 2H).
Ejemplo-GG-5) Una solución de éster metílico de N-p-cloro- fenilimina alanina (8,85 g, 34 mmoles) disuelto en 59 mL de tetrahidrofurano se purgó con argón. Se añadió NaH (1 ,64 g, 41 mmoles), después de lo cual la solución viró a naranja brillante y posteriormente a rojo oscuro. Se añadió una solución del material del título del Ejemplo-GG-4 (8 g, 34 mmoles) en 40 mL de tetrahidrofurano a la anterior solución amónica. Se observó una exotermia que elevó la temperatura a casi 40°C. Se mantuvo la mezcla de reacción entre 48 y -52°C durante 2 horas. A continuación se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. Se depuró el filtrado al vacío para producir el material del título (8,4 g, rendimiento en bruto 50%) como un aceite amarillo. RMN 1H (CDCI3) d: 0,02 (s, 6H), 0,085 (s, 9H), 1 ,45 (s, 3H), 1,6 (s, 1 H), 2,2-2,25 (m, 2H), 2,65 (d, 2H), 3,55 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 5,45-5,55 (m, EjempIo-GG-6) Se trató el material del título del Ejemplo-GG-5 (8,4 g, 18,2 mmoles) con 125 mL de ácido clorhídrico 1 N y se agitó la reacción durante una hora a temperatura ambiente. Después de haber extraído la mezcla de reacción con 2 x 75 mL de acetato de etilo se depuró la capa acuosa al vacío a 56°C para producir 4 g del material del título (rendimiento en bruto 100%). RMN 1H (CD3OD) d: 1 ,6 (s, 3H), 2,3-2,4 (m, 2H), 2,65-2,8 (m, 2H), 3,6-3,65 (m, 2H), 3,87 (s, 3H), 5,4-5,5 (m, 1 H), 5,75-5,85 (m, 1 H).
Ejemplo-GG-7) Se disolvió el producto del título del Ejemplo- GG-6 (1 ,9 g, 8,5 mmoles) en una mezcla de 15 mL de dioxano y 8 mL de agua. Se añadió a continuación cuidadosamente bicarbonato de potasio sólido para evitar la formación de espuma. Se agitó la mezcla de reacción durante 10 min antes de añadir en porciones anhídrido terc-butiloxicarbonílico y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 24 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con 100 mL de acetato de etilo y 50 mL de agua antes de verterla en un embudo de separación. Se separó la capa orgánica, se secó (Na2S04), se filtró y se depuró para producir el material del título como un aceite incoloro ( ,9 g, rendimiento en bruto 78%). RMN 1H (CDCI3) d: 1 ,42 (s, 9H), 1 ,55 (s, 3H), 2,3-2,36 (m, 2H), 2,58-2,65 (m, 2H), 3,65-3,7 (t, 2H), 3,75 (s, 3H), 5,42-5,5 (m, H), 5,55-5,62 (m, 1 H). Ejemplo-GG-8) Se convirtió otra muestra de 1 ,9 g del material del título del Ejemplo-GG-6 por los métodos del Ejemplo-GG-7 en la mezcla Z E en bruto del producto del título del Ejemplo-GG-7. Este material se purificó posteriormente sobre sílice con un sistema de disolvente de acetato de etilo/hexano en una proporción del 20/80 para obtener el isómero E menor, así como el isómero Z mayor.
Ejemplo-GG-9) Se disolvió el isómero Z del título del Ejemplo-GG-8 (1 ,8 g, 6,25 mmoles) en 20 mL de acetonitrilo y se enfrió esta solución a 0°C. A continuación se añadió piridina (0,76 g, 9,4 mmoles) seguido de la adición en porciones de dibromotrifenilfosforano sólido (3,46 g, 8,2 mmoles) durante 10 min. Se agitó la mezcla de reacción bajo argón durante 24 horas a temperatura ambiente. Se filtró el precipitado que se formó. Se concentró el filtrado al vacío para dar 2,8 g de un aceite que se purificó sobre gel de sílice usando un sistema de disolvente de acetato de etilo/hexano en una proporción de 60/40. El 1 ,1 g del material del título (50%) se caracterizó por RMN. RMN 1H (CDCI3) d: 1 ,44 (s, 9H), 1 ,55 (s, 3H), 2,6-2,65 (m, 4H), 3,35-3,4 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 5,4-5,45 (m, 1 H), 5,55-5,6 (m, 1H).
Ejemplo-GG-10) Se disolvió el material del título del Ejemplo-GG-8 (300 mg, 0,86 mmoles) en 25 mL de dimetilformamida (DMF). Se añadió la sal de potasio de la 3-metil- ,2,4-oxadiazolin-5-ona (130 mg, 0,94 mmoles) y se calentó la mezcla de reacción a 52°C y se mantuvo así durante 18 horas con agitación. A continuación se enfrió a temperatura ambiente antes de depurar la DMF al vacío a 60°C. Se purificó el residuo sobre gel de sílice con un gradiente de 60/40 a 90/10 de acetato de etilo/hexano para producir 300 mg (95%) del material del título. RMN 1H (CD3OD) d: 1 ,35 (s, 3H), 1 ,43 (s, 9H), 2,32 (s, 3H), 2,45-2,55 (m, 4H), 3,65-3,7 (m, 2H), 3,72 (t, 3H), 5,5-5,6 (m, 2H).
Ejemplo-G-11) Se trató el producto del Ejemplo-GG-10 (300 mg) con HCI acuoso 0,05 N y se agitó esta solución durante 30 min. Se eliminó el disolvente al vacío para producir el material deseado en rendimiento casi cuantitativo. RMN H (CD3OD) d: 1 ,6 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,45-2,55 (m, 2H), 2,7-2,8 (m, 2H), 3,3-3,4 (m, 5H), 5,5-5,6 (m, 1 H), 5,7-5,8 (m, 1 H).
Ejemplo-GG-12) Se disolvió el material del título del Ejemplo- GG-11 (198 mg, 0,54 mmoles) en 50 mL de MeOH. A continuación se añadió ácido fórmico (40 mg) seguido de paladio sobre carbonato de calcio (400 mg).
Se calentó la mezcla de reacción a 65°C con agitación en un tubo sellado durante 24 horas. A continuación se enfrió a temperatura ambiente y se filtró.
Se concentró el filtrado al vacío y se purificó el residuo por HPLC de fase inversa para producir 115 mg (75%) del material del título. RMN 1H (CD3OD) d: 1 ,4 (s, 3H), 1 ,95 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,4- 2,52 (m, 4H), 3,25-3,35 (m, 2H), 3,75 (t, 3H), 5,54-5,62 (m, 2H). Ejemplo GG) Se disolvió el material del título (75 mg) del Ejemplo-GG-12 en 15 mL de ácido clorhídrico 2 N. Se calentó la mezcla de reacción a reflujo y se agitó durante 6 horas antes de enfriar a temperatura ambiente. Se eliminó el disolvente al vacío. Se disolvió el residuo en 25 mL de agua y se depuró en el evaporador rotatorio para eliminar el excesó de ácido clorhídrico. Se disolvió él residuo en agua y se Iiofilizó para dar 76 mg (~100 mg) del material del título. Análisis elemental Cale, para C10H19N3O2 + 2,2 HCI + 2,2 H20: C, 36,60; H, 7,75; N, 12,61. Encontrado para C10H19N3O2 + 2,2 HCI + 2,2 H20: C, 35,91; H, 7,61 ; N, 12,31. RMN 1H (CD3OD) d: 1,47 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,45-2,64 (m, 4H), 2,58-2,65 (m, 2H), 3,65-3,7 (t, 2H), 5,55-5,65 (m, 2H). Ejemplo HH .Ha Diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7- [(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-HH-1) A una solución en frío (-78°C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo (25,4 g, 105 mmoles) en 100 mL de THF se añadió /7-butil litio (63 mL de 1,6 M en hexano, 101 mmoles). Se agitó esta mezcla a -78°C durante 20 min produciendo una solución amarilla brillante. A continuación se añadió una solución de 3-[(ferc-butildimetilsilil)oxi]propanal en bruto (J. Org. Chem., 1994, 59, 1139-1148) (20,0 g, 105 mmoles) en 120 mL de THF gota a ,gota durante diez minutos, y se agitó la mezcla resultante durante 1 ,5 h a -78°C, momento en el cual el análisis por cromatografía de capa fina (acetato de etilo al 5% en hexano) reveló que no quedaba material de partida. Se enfrió la reacción a -78°C con NH4CI (150 mL). Se recogió la capa orgánica, y se extrajo la capa acuosa con éter dietílico (300 mL). Se lavaron los compuestos orgánicos combinados con salmuera (200 mL), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. Se filtró el material en bruto a través de un tapón de gel de sílice (150 g) eluyendo con hexano (2 L) para dar 14,38 g (52%) del producto éster etílico del ácido (2E)-5-[[(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-fluoro-2-pentenoico deseado como un aceite transparente. RMN 1H y RMN 19F indicaron que el producto aislado tenía una proporción E:Z aproximada de 95:5. Análisis elemental Cale, para C13H26FO3SÍ: m/z 277,1635 [M+Hf, encontrado: 277,1645. RMN H (CDCI3) d: 0,06 (s, 6H), 0,94 (s, 9H), 1 ,38 (t, 3H), 2,74 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 4,31 (q, 2H), 6,0 (dt, vinilo, H). RMN 19F (CDCI3) d: -129,78 (d, 0,05F, J = 35 Hz, 5% isómero Z), -121 ,65 (d, 0.95F, J = 23 Hz, 95% isómero E).
Ejemplo-HH-2) A una solución del Ejemplo-HH-1 (6,76 g, 24,5 mmoles) en 100 mL de metanol a temperatura ambiente se añadió NaBH4 (4,2 g, 220 mmoles) en porciones de 1,4 g durante tres horas. Al cabo de 3,5 horas se añadió agua (10 mL). Se añadió NaBH4 sólido adicional (4,2 g, 220 mmoles) en porciones de 1 ,4 g durante tres horas. Se enfrió la reacción con 150 mL de NH4CI acuoso saturado y se extrajo con éter dietílico (2 x 250 mL). Se combinaron las capas orgánicas, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. Se purificó el material en bruto, 4,81 g de aceite transparente, por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexano para dar 2,39 g (42%) del producto (2E)-5-[[(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-fluoro-2-penten-1-ol deseado como un aceite transparente, que contenía una proporción E:Z aproximada de 93:7 por RMN 19, F. Análisis elemental Cale, para Ci2H24F02Si: m/z 235,1530 [M+H]+, encontrado: 235,1536. RMN 1H (CDCI3) d: 0,06 (s, 6H), 0,88 (s, 9H), 2,35 (m, 2H), 3,62 (t, 2H), 4,19 (dd, 2H), 5,2 (dt, vinilo, 1 H). RMN 1 F (CDCI3) d: -120,0 (dt, 0,07F, 7% isómero Z), -109,82 (q, 0.93F, J = 21 Hz, 93% isómero E).
Ejemplo-HH-3) A una mezcla del Ejemplo-HH-2 (2,25 g, 9,58 mmoles), trifenilfosfina soportado por polímero (3 mmol/g, 1,86 g, 15 mmoles) y 3-metil-1,2,4-oxadiazolin-5-ona (1 ,25 g, 12,5 mmoles) en 60 mL de THF se añadió gota a gota dietildicarboxilato (2,35 mL, 14,7 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción durante 1 h a temperatura ambiente, y se añadió 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona adicional (0,30 g, 3,0 mmoles). Al cabo de 30 minutos, se filtró la mezcla a través de celita, y se concentró el filtrado. Se trituró el aceite amarillo resultante con éter dietílico (30 mL) y se eliminó el sólido por filtración. Se concentró el filtrado, se trituró con hexano (30 mL) y se filtró. Se concentraron los filtrados hasta un aceite que se purificó por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 15% en hexano para dar 1,83 g (60%) del producto 4-[(2E)-5-[[(1 ,1-dimetiletiI)dimetilsilil]oxi]-2-fluoro-2-pentenil]-3-metil-1 ,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona deseado como un aceite transparente, que contenía sólo el isómero E deseado por RMN 19F. HRMS cale, para C^HzeFNzOsSi: m/z 317,1697 [ +H]+, encontrado: 317,1699. RMN ? (CDCI3) d: 0,04 (s, 6H), 0,85 (s, 9H), 2,28 (s, 3H), 2,37 (m, 2H), 3,64 (t, 2H), 4, 32 (d, 2H), 5,4 (dt, vinilo, 1H). RMN 19F (CDCI3) d: -110,20 (q, 1 F, J = 21 Hz).
Ejemplo-HH-4) Se agitó a temperatura ambiente una solución del EjempIo-HH-3 (1 ,83 g, 5,78 moles) en una mezcla de ácido acético (6 mL), THF (2 mL) y agua (2 mL) durante 2,5 horas. La solución resultante se concentró al vacío para dar un aceite que se disolvió en éter dietílico (50 mL).
Se lavó la capa orgánica con NaHCC>3 saturado y se extrajo la capa acuosa con éter dietílico (2 x 50 mL) y acetato de etilo (2 x 50 ml_). Se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSC ), se filtró y se evaporó para dar 1,15 g (98%) del producto 4-[(2E)-2-fluoro-5-hidroxi-2-pentenil]-3-metil-1,2,4-oxadiazoI-5(4H)-ona deseado como un aceite de color claro. HRMS cale, para C8H12FN203: m/z 203,0832 [M+H]+, encontrado: 203,0822. R N 1H (CDCI3) d 2,31 (3H), 2,4 (m, 2H), 3,66 (t, 2H), 4,37 (d, 2H), 5,42 (dt, vinilo, H). RMN 19F (CDCI3) ? -110,20 (q, 1F, J = 21 Hz).
Ejemplo-HH-5) A una solución de CH2CI2 (2 mL) de trifenilfosfina (238 mg, 0,91 mmoles) e imidazol (92 mg) a 0°C se añadió yodo sólido (230 mg, 0,91 mmoles) y se agitó la mezcla durante 5 minutos. A la suspensión espesa resultante se añadió una solución de CH2CI2 (1 ,5 mL) del Ejemplo-HH-4 (0,15 g, 0,74 moles). Se dejó calentar la suspensión espesa a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos. Se diluyó la mezcla de reacción con CH2CI2 (10 mL), se lavó con a2S2C>3 saturado (5 mL) y salmuera (5 mL), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar un aceite. La adición de éter dietílico (10 mL) al aceite dio un precipitado blanco que se eliminó por filtración y se concentró el filtrado para dar un aceite. Se purificó el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30% en hexano para dar 0,18 g (78%) del producto 4-[(2E)-2-fluoro-5-yodo-2-pentenil]-3-met¡l-1 ,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona deseado como un aceite transparente, que solidificó en reposo, p.f. = 58,1-58,6°C. Análisis cale, para C8H-10FIN2O2: C, 30,79; H, 3,23; N, 8,98. Encontrado: C, 30,83; H, 3,11; N, 8,85. HRMS cale, para C8HnFI 202: m/z 330,0115 [M+Hf, encontrado: 330,0104. RMN 1H (CDCI3) d 2,31 (s, 3H), 2,75 (q, 2H), 3,21 (t, 2H), 4,31 (d, 2H), 5,39 (dt, vinilo, 1 H). RMN 19F (CDCI3) d -108,21 (q, 1 F, J = 21 Hz).
EjempIo-HH-6) A una solución de 1-metil-2-pirrolid¡nona (12 mL) de (3S,6R)-6-isopropil-3-metil-5-fenil-3,6-dihidro-2W-1,4-oxaz¡n-2-ona (Synthesis, 1999 4, 704-717) (1 ,10 g, 4,76 mmoles), Lil (0,63 g, 4,76 mmoles) y Ejemplo-HH-5 (0,85 g, 2,72 mmoles) en un baño de hielo se añadió 2-ferc-butil¡mino-2-dietilamino-1 ,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforina (1 ,38 mL, 4,76 mmoles). La solución amarilla viró a naranja después de la adición de la base, y la solución resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (100 mL), se lavó con agua (2 x 30 mL), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar un aceite amarillo. Se purificó el material en bruto por cromatografía de columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30% en hexano para dar 0,64 g (57%) del producto alquilado deseado como un aceite transparente. RMN 1H (C6D6) d 0,57 (d, 3H), 0,89 (d, 3H), 1 ,30 (s, 3H), 1 ,65 (s, 3H), 1 ,8 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 2,1 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 4,88 (dt, vinilo, 1 H), 5,49 (d, 1 H), 7,1 (m, 3H), 7,6 (m, 2H). RMN 19F (CDCI3) d -110,37 (q, 1 F, J = Ejemplo-HH-7) A una solución de metanol (20 ml_) del Ejemplo-HH-6 (0,13 g, 0,31 mmoles) se añadió catalizador de Lindlar (1 ,0 g). Se calentó la suspensión espesa agitada a 60°C durante 1 hora, y se añadió catalizador de Lindlar adicional (0,30 g). Se agitó la suspensión espesa 1 hora más a 60°C, y después se enfrió a temperatura ambiente. Se eliminó el catalizador por filtración a través de celita, y se depuró el filtrado para dar 0,58 g (100%) del producto de amidina desprotegida deseado como un aceite amarillo pálido. EM: m/z = 374,2 ]M+H]+. RMN 1H (CD3OD) d 0,77 (d, 3H), 1 ,07 (d, 3H), 1 ,58 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,8-2,2 (m, 5H), 3,83 (d, 2H), 5,20 (dt, vinilo, 1H), 5,69 (d, 1 H), 7,4 (m, 3H), 7,7 (m, 2H). RMN 19F (CDCI3) d -109,4 (q, F, J = 21 Hz). Ejemplo HH) Se lavó una solución del producto del Ejemplo-HH-7 (0,58 g, 1 ,54 mmoles) en HCI 1 ,5 N (25 mL) con éter dietílico (2 x 20 mL) y se mantuvo a reflujo durante 1 hora. Se depuró el disolvente y se disolvió el éster de aminoácido en bruto en HCI 6 N (15 mL) y se calentó a reflujo. Al cabo de seis horas, se eliminó el disolvente al vacío, y se purificó la espuma resultante por HPLC de fase inversa eluyendo con un gradiente de 30 minutos del 0 al 40% de CH3CN/H20 (ácido acético al 0,25%). Se combinaron las fracciones que contenían el producto y se concentró para dar una espuma. Se disolvió el producto en HC1 1 N y se eliminó el disolvente al vacío (2x) para dar 0,15 g (29%) del producto de diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico. HRMS cale, para C10H19FN3O2: m/z 232,1461 [M+H]+, encontrado: 232,1485. RMN 1H (D20) d 1 ,43 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1 ,8-2,1 (m, 4H), 3,98 (d, 2H), 5,29 (dt, vinilo, 1 H). RMN 19F (CDCI3) d -109,97 (q, 1 F, J = 21 Hz). Ejemplo II Diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-ll-1) A una solución de 1-metil-2-pirrolidinona (7.500 mL) de N-[(3,4-diclorofenil)-metilen]alaninato de metilo (748,5 g, 2,88 moles) bajo nitrógeno se añadió Lil (385,5 g, 288 moles) y la suspensión espesa resultante se agitó durante 20 minutos aproximadamente para dar una solución transparente. A continuación se añadió el sólido del Ejemplo-HH-5 (750 g, 2,40 moles) y se enfrió la solución resultante en un baño de hielo a ~0°C. Se añadió BTPP limpio (900 g, 2,88 moles) gota a gota durante 25 minutos manteniendo la temperatura interna por debajo de 5o C. Después de agitar durante 1,5 horas adicionales a 5°C, mediante HPLC se determinó que la reacción estaba completa. En ese momento, se añadieron 7.500 mL de éter metil t-butílico (MTBE) seguido de la adición de 9.750 mL de mezcla de agua/hielo triturado. La temperatura subió a 20°C durante esta operación. Después de agitar vigorosamente durante 5 a 10 minutos, se separaron las capas y se lavó la capa acuosa dos veces con 6.000 mL de MTBE. Se combinaron las capas de MTBE y se lavó dos veces con 7.500 mL de agua. A continuación se concentró la solución de MTBE resultante hasta ~5.000 mL, se trató con 11.625 mL de HCI 1,0 N y se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante una hora. Se separaron las capas y se lavó la capa acuosa con 7.500 mL de MTBE. Se añadió 1 kg aproximadamente de cloruro de sodio a la capa acuosa y se agitó la mezcla resultante hasta que se hubo disuelto toda la sal. En este punto, se añadieron 7.500 mL de acetato de etilo, se enfrió la mezcla resultante a 10°C y se añadieron 2.025 mL de hidróxido de sodio 6,0 N con buena agitación. El pH resultante debería ser 9 aproximadamente. Se separaron las capas y se saturó la capa acuosa con cloruro de sodio y se extrajo de nuevo con 7.500 mL de acetato de etilo. Se secaron los extractos de acetato de etilo combinados (MgSO- y se concentró para dar un aceite claro. Debe advertirse que el acetato de etilo no se eliminó completamente. Con agitación, se añadieron a continuación 3.000 mL de hexano para generar una suspensión espesa que se enfrió a 10°C. Se recogió el sólido granular por filtración y se lavó con 1.500 mL de hexano. Se obtuvieron 564 g aproximadamente (rendimiento 82%) del aminoéster puro deseado (pureza > 95% por HPLC) como un sólido blanco, p.f. 82,9 a 83,0°C. LCMS: m/z = 288,2 [M+Hf. HPLC quiral (Chiralpak-AD, columna de fase normal, acetonitrilo al 100%, 210 nm, 1 mL/min): dos máximos principales a 4,71 y 5,36 min (1 :1). RMN 1H (D20) d 1 ,40 (s, 3H), 1,7-1 ,8 (m, 2H), 2,0 (ancho s, 2H), 2,2 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 4,34 (dd, 2H), 5,33 (dt, 1H).
Ejemplo-ll-2) Se realizó la separación de los enantiómeros individuales del producto del Ejemplo-ll-1 en escala preparativa usando cromatografía HPLC quiral (Chiralpak-AD, columna de fase normal, acetonitrilo al 100%) para dar el producto del título éster de (2S)-2-metil-amino deseado. Chiralpak-AD, columna de fase normal, acetonitrilo al 100%, 210 nm, 1 mUmin: 5,14 (99%). HO-HN H Ejemplo-ll-3) Se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente una suspensión espesa del producto del Ejemplo-ll-2 (2,30 g, 8,01 mmoles) en NaOH 0,993 M (30,0 mL, 29,79 mmoles). A la solución incolora transparente resultante se añadió HC1 1 ,023 M (29,10 mL, 29,76 mmoles). Se concentró la solución transparente resultante hasta que empezó a formarse un precipitado (30 mL aproximadamente). Se calentó la suspensión espesa para dar una solución transparente que se dejó en reposo a temperatura ambiente durante toda la noche. Se aisló el precipitado por filtración. Se lavó el sólido con agua fría (2 x 10 mL), metanol frío (2 x 10 mL) y Et20 (2 x 20 mL). Se secó el sólido blanco al vacío a 40°C durante 4 horas para dar 1 ,04 g (53%) del producto ilustrado N-hidroxi deseado, p.f. = 247,2°C. Análisis cale, para C10H18FN3O3: C, 48,57; H, 7,34; N, 16,99; Cl, 0,0. Encontrado: C, 48,49; H, 7,37; N, 16,91; Cl, 0,0. HRMS cale, para C10H19FN3O3: m/z 248,1410 [M+H]+, encontrado: 248,1390. RMN 1H (D20) d 1 ,35 (s, 3H), 1 ,81 (s, 3H), 1,7-2,0 (m, 4H), 3,87 (d, 2H), 5,29 (dt, vinilo, 1 H). RMN 19F (CDCI3) d -112,51 (q, 1 F, J = 21 Hz). Ejemplo-II-4) A una solución del Ejemplo-ll-3 en metanol se añade catalizador de Lindlar. Se mantiene a reflujo la suspensión espesa agitada durante 2 horas, y luego se enfría a temperatura ambiente. Se elimina el catalizador por filtración a través de celita, y se depura el filtrado. Se disuelve en agua el sólido resultante y se concentra repetidamente a partir de HCI 1 ,0 N para dar el producto de diclorhidrato del ácido (2S,5E)-2-amino-6- fluoro-7[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado.
Ejemplo-ll-5) Se disolvió una solución de 73,5 g (0,3 moles) del producto del Ejemplo-ll-2 en 300 mL de metanol y se añadió gota a gota para dar una mezcla preformada de 13,7 g de catalizador de Lindlar y 73,5 g de ácido fórmico (1 ,53 moles) en 312 mL de metanol mientras se mantenía la temperatura de reacción a entre 22°C y 26°C. Después de agitar a temperatura ambiente durante ~15 horas adicionales, se determinó por RMN 19F que la reacción estaba completa. Se filtró la mezcla de reacción resultante a través de celita y se lavó la celita 3 veces con 125 mL de metanol. Se combinaron los filtrados de metanol y se concentró para generar 115 g del producto del título de amidina deseado como un aceite viscoso. EM: m/z 246 [M+H]+. RMN 1H (CD3OD) d 1 ,6 (s, 3H), 2,0-2,2 (m, 4H), 2,3 (s, 3H), 3,9 (s, 3H), 4,2 (d, 2H), 5,4 (dt, vinilo), 8,4 (s, 3H). RMN 19F (CD3OD) d -1 0,4 (T, J = 21 Hz), -111 ,7 (q, J = 21 Hz). Para eliminar los niveles de traza de plomo, se disolvió el producto en bruto en 750 mL de metanol y se añadieron 150 g de una resina con base de tiol (Deloxan THP 11). Después de 3 horas de agitación a temperatura ambiente, se filtró la resina y se lavó 2 veces con 500 mL de metanol. Se recogieron los filtrados y se concentró a 99 g del producto del título de amidina deseado como un aceite viscoso.
Alternativamente: Se mezcló un total de 5,0 g del producto del Ejemplo-ll-2 (0,0174 moles, 1,0 equiv) con 5,0 g de polvo de cinc (0,0765 moles, 4,39 equiv) en 40 mL de 1 -butanol y 10 mL de ácido acético. Después de agitación durante 5 horas a 50°C, los análisis de cromatografía líquida indicaron que la reacción estaba completa. Se filtraron fácilmente los sólidos. Después de enfriar en agua con hielo a 7°C, se trató el filtrado con 30 mL de NaOH 6 N (0,180 moles) en una porción con agitación vigorosa. Después de enfriar la mezcla de reacción desde 33°C a 20°C, se separó la capa de butanol . transparente y se extrajo la capa acuosa de nuevo con 40 mL de 1-butanol. Se combinaron los extractos de butanol, se lavó con 30 mL de salmuera seguido de aproximadamente 10 mL de HCI 6 N. Después de concentración a 70°C, se obtuvo como resultado un vidrio transparente que se identificó como el producto del título de amidina deseado. Ejemplo II) Se mantuvo a reflujo una solución de 99 g del producto del Ejemplo-ll-5 en HCI 6 N durante 1 hora, momento en el cual los análisis de cromatografía líquida indicaron que la reacción estaba completa. Se eliminó el disolvente al vacío para producir 89,2 g de un aceite vitreo que se disolvió en una mezcla de 1.466 mL de etanol y 7,5 mL de agua desionizada. Se añadió THF a esta solución agitada a temperatura ambiente hasta que se alcanzó el punto de turbidez (5,5 litros). Se añadieron 30 mL adicionales de agua desionizada y se agitó la solución durante toda la noche a temperatura ambiente. Se filtró la suspensión espesa resultante y se lavó con 200 mL de THF para producir 65 g de un sólido blanco identificado como el producto del título deseado. [a]D25 = +7,2 (c = 0,9, H2O) p.f. = 126-130°C EM: m/z = 232 ( +H)+ Análisis Cale, para C-10H22N3F1O3CI2: C, 37,28; H, 6,88; N, 13,04; Cl, 22,01. Encontrado: C, 37,52; H, 6,84; N, 13,21; Cl, 21,81. RMN 1H (D20) d 1 ,4 (s, 3H), 1 ,8-2,1 (m, 4H), 1,9 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 5,3 (dt, vinilo, 1H). RMN 9F (D20) 5 -109,6 (0, J = 21 Hz), -112,1 (q, J = 21 Hz). Ejemplo JJ Diclorhidrato del ácido (2R,5£)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico Ejemplo-JJ-1) Se realizó la separación de los enantiómeros individuales del producto a partir del Ejemplo-ll-1 en escala preparativa usando cromatografía HPLC quiral para dar el producto del éster de (2R)-2-metilamino deseado.
Ejemplo-JJ-2) Se disuelve el producto del Ejemplo-JJ-1 en agua y ácido acético. Se añade polvo de cinc, y se calienta la mezcla a 60°C hasta que el análisis por HPLC revela que queda poco material de partida. Se filtra el Zn a través de celita desde la mezcla de reacción y se concentra el filtrado. Se purifica el material en bruto por cromatografía de columna HPLC de fase inversa. Se combinan las fracciones que contienen el producto y se concentra para producir el producto de (2R)-2-metil-acetadimina deseado. Ejemplo JJ) Se mantiene a reflujo una solución del Ejemplo-JJ-2 en HCl 2,0 N durante 2 h. Se elimina el disolvente al vacío. Se disuelve el sólido resultante en agua y se concentra repetidamente desde HCl 1,0 N para dar el producto de diclorhidrato del ácido (2 5£)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico. Ejemplo KK 2HCI Diclorhldrato del ácido (2/¾ S,5£)-2-amíno-2-metil-6-fluoro-7 Ejemplo-KK-1) A una solución de 1-metil-2-pirrolidinona (5 mL) de N-[(4-clorofenil)met¡leno]-glicinato de metilo (0,33 g, 1 ,6 mmoles), Líl (0,20 g, 1 ,0 mmoles) y una muestra del producto del EjempIo-HH-5 (0,30 g, 0,96 mmoles) en un baño de hielo se añadió 2-ferc-butilimino-2-dietilamino-1 ,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforina (0,433 mL, 1,5 mmoles). Se dejó en agitación la solución a temperatura ambiente durante 1 ,5 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (30 mL), se lavó con agua (2 x 20 mL), se secó ( gS04), se filtró y se evaporó para dar la imina alquilada racémica en bruto deseada como un aceite amarillo. Se disolvió el material en bruto en acetato de etilo (10 mL) y se añadió HCI 1 (10 mL). Se agitó la mezcla durante 2 horas a temperatura ambiente y se separó la capa orgánica. Se neutralizó la capa acuosa con NaHC03 sólido y se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mL). Se secó la capa orgánica (MgS04), se filtró y se evaporó para dar 0,13 g del producto del éster amino racémico del título deseado como un aceite amarillo. Este producto se usó en la etapa siguiente sin más purificación. LCMS: m/z = 288,2 [M+H]+.
EjempIo-KK-2) A una solución de CH2CI2 del Ejemplo-KK-1 (1,36 g, 4,98 mmoles) se añadió 4-clorobenzaldehído (0,70 g, 5,0 mmoles) y gS04 (~5 g). Se agitó la suspensión espesa a temperatura ambiente durante 18 horas. Se filtró la suspensión espesa, y se depuró el filtrado para dar 1 ,98 g (100%) del producto de ¡mina del título deseado como un aceite amarillo pálido. Este producto se usó en la siguiente etapa sin más purificación. R N 1H (C6D6) d 1 ,34 (s, 3H), 2,0 (ancho m, 4H), 3,32 (s, 3,42 (m, 2H), 3,83 (t, 1 H), 4,98 (dt, vinilo, 1 H).
Ejemplo-KK-3) A una solución de CH2CI2 (2 mL) del producto del Ejemplo-KK-2 (0,25 g, 0,63 mmoles) se añadió yoduro de metilo (0,200 mL, 3,23 mmoles) y bromuro de 0(9)-alil-N-(9-antracenilmetil)-cinconidinio (40 mg, 0,066 mmoles). Se enfrió la solución a -78°C y se añadió BTPP limpio (0,289 mL, 0,95 mmoles). Se agitó la solución naranja resultante a -78°C durante 2 horas y se dejó que alcanzara -50°C. Al cabo de 2 horas a -50°C, se diluyó la solución con CH2CI2 (10 mL), se lavó con agua (10 mL), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar la imina alquilada racémica deseada en bruto como un aceite amarillo. Se disolvió el material en bruto en acetato de etilo (10 mL) y se añadió HCI 1 N (10 mL). Se agitó la mezcla durante 1 hora a temperatura ambiente, y se separó la capa orgánica. Se neutralizó la capa acuosa con NaHC03 sólido y se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mL). Se secó la capa rgánica (MgS04), se filtró y se evaporó para dar 0, 6 g del producto del éster de 2-metilamino racémico deseado como un aceite amarillo. El producto se usó en la etapa siguiente sin más purificación. LCMS: m/z = 288,2 [M+H]+.
Ejemplo-KK-4) Se disuelve el producto racémico del Ejemplo-KK-3 en agua y ácido acético. Se añade polvo de cinc, y se calienta la mezcla a 60°C hasta el análisis por HPLC revela que queda poco material de partida. Se filtra el polvo de Zn a través de celita desde la mezcla de reacción, y se concentra el filtrado. Se purifica el material en bruto por cromatografía de columna HPLC de fase inversa. Se combinan las fracciones que contienen el producto y se concentra para producir el producto de acetamidina deseado. Ejemplo KK) Se mantiene a reflujo una solución del Ejemplo-KK-4 racémico en HCI 2,0 N durante 1 h. Se elimina el disolvente al vacío. Se disuelve el sólido resultante en agua y se concentra repetidamente a partir de HC1 1,0 N para dar el producto de diclorhidrato del ácido (2f? S,5E)-2-amino-2-metil-6-f luoro-7[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico del título deseado. Ejemplo LL Diclorhídrato del ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico 4-[(tetrahidropiranil)oxi]butino Ejemplo-LL-1) Se enfrió a 5°C una mezcla de 4-dihidro-2H-piridina (293,2 g, 3,5 moles) y HCl concentrado (1,1 mL). Mientras se seguía enfriando externamente, se añadió 3-butin-1-oI (231,5 g, 3,3 moles) en un período de 30 minutos dejando que la temperatura alcanzara 50°C. Se mantuvo la reacción con mezclado a temperatura ambiente durante 2,5 horas antes de diluir con MTBE (1,0 L). Se lavó la mezcla resultante con bicarbonato de sodio saturado (2 x 150 mL). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida para producir 500 g (rendimiento en bruto 98%) del producto: % área CG de 96%). 5-[(tetrahidro-piran-2-Hoxi)-pent-2-in-1-ol Ejemplo-LL-2) A una solución del producto 4- [(tetrahidropiranil)oxi]butino del Ejemplo-LL-1 (50,0 g, 0,33 moles) en THF (125 mL) se añadió una solución de EtMgCI en THF (242 mL, 0,48 moles) bajo atmósfera de nitrógeno durante un período de 30 minutos, dejando que la temperatura se eleve a 48°C. Se calentó más la mezcla a 66°C y se mantuvo a esta temperatura durante 2 horas antes de enfriar a temperatura ambiente. Se añadió paraformaldehído (14,5 g, 0,48 moles) (se observó una pequeña exotermia) y se calentó la mezcla resultante a 45°C. Al cabo de 1 hora controlando la temperatura entre 45 y 55°C, la mezcla se hizo transparente. En este punto, se calentó la mezcla a 66°C y se agitó durante 2,5 horas. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se añadió lentamente cloruro de amonio saturado (125 ml_) durante 30 minutos (se observó una fuerte exotermia) manteniendo la temperatura por debajo de 40°C. Se separó la fase líquida por decantación; se añadieron acetato de etilo (250 mL) y salmuera (50 mL). Se separó la fase orgánica y se lavó con salmuera (2 x 50 mL) y agua (1 x 50 mL). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida para producir 51 g de un aceite de color ligeramente amarillo (rendimiento en bruto 85%); % área CG = 88% del producto del título, 6% del material de partida. 5-[(t9trahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-en-1-ol Ejemplo-LL-3) En un frasco de Parr de 500 mL, bajo una atmósfera de nitrógeno, se cargó el producto 5-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-¡n-1-ol del Ejemplo-LL-2 (40,2 g, 0,22 moles), catalizador de Lindlar (2,0 g), etanol (120 mL), hexano (120 mL) y 2,6-lutidina (457 mg). Se purgó la mezcla de reacción cinco veces cada vez con nitrógeno e hidrógeno gaseoso. Se sometió a presión el frasco de Parr con hidrógeno a 34,48 kPa (5 psi) y se agitó hasta que el 98% del hidrógeno teórico se había consumido. Se liberó el hidrógeno del vaso y se purgó la reacción cinco veces con nitrógeno. Se filtró la mezcla a través de un lecho de Solka Floc y se enjuagó el catalizador con etanol (2 x 50 mL). Se combinaron el filtrado y los enjuagados y se concentró bajo presión reducida para producir 40,3 g (rendimiento 99%) del material del título como un aceite de color amarillo (% área CG = 96%). 3-metil-4-[5-(tetrahidro-piran-2-iIoxi)-pent-2-enil]-4H-[1 ,2,4]oxadiazol-5-ona Ejemplo-LL-4) A una solución del producto de 5-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-en-1-ol del Ejemplo-LL-3 (11,8 g, 0,063 moles) en tolueno (42 mL) se añadió trietilamina (6,4 g, 0,063 moles). Se enfrió la mezcla a -5°C y se añadió cloruro de metanosulfonilo (7,3 g, 0,63 moles) a través de una jeringuilla a una velocidad tal que se mantuvo la temperatura del recipiente por debajo de 10°C. Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante dos horas. Se filtró la mezcla por succión y se enjuagó en el filtro con tolueno (2 x 20 mL). Se añadieron el filtrado y los lavados a una mezcla de sal de sodio de 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (8,6 g, 0,063 moles) en DMF (10 mL). Se agitó la mezcla con un agitador mecánico y se calentó a 45°C durante 5 horas. Se añadió agua (40 mL) y se agitó la mezcla durante 5 minutos y a continuación se separaron las capas. Se lavó la capa de tolueno con agua (3 x 20 mL), se secó sobre MgS04 y se concentró para producir 16,5 g (97,3%) de un producto en bruto de color naranja (el porcentaje de área CG consistió en el 71% del producto del título, el 18% de tolueno y el 4% de una impureza). 4-(5-h¡droxi-pent-2-eniI)-3-met¡l-4H-[1,2,4]oxadiazol-5-ona Ejemplo-LL-5) A una solución del producto 3-metil-4-[5- (tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-enil]-4H-[ ,2,4]oxadiazol-5-ona del Ejemplo-LL-4 (16 g, 0,06 moles) en metanol (48 ml_) se añadió ácido p-toluensulfónico (0,34 g, 2,0 mmoles). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante cuatro horas. Se añadió bicarbonato de sodio (0,27 g, 3,0 mmoles) y se concentró la mezcla en un evaporador rotatorio. Se diluyó el residuo con NaHCC>3 saturado (20 ml_) y se extrajo la mezcla resultante con acetato de etilo (2 x 60 mL). Se combinaron los extractos y se lavó con agua (2 x 25 ml_), se secó sobre MgS04 y se concentró para producir 8,4 g del producto del título, un aceite de color naranja en bruto (% área CG = 80%).
Ester 5-(3-metíl-5-oxo-[1,2,4]oxodiazol-4-ll)-pent-3-enil del ácido metanosulfónico E]emplo-LL-6) A una solución del producto 4-(5-hidroxi-pent-2-enil)-3-metil-4H-[1,2,4]oxadiazol-5-ona del Ejemplo-LL-5 (8,27 g, 0,045 moles) en cloruro de metileno (33 mL) se añadió trietilamina (5,0 g, 0,49 moles). Se enfrió la mezcla a -5°C y se añadió cloruro de metanosulfonilo (5,5 g, 0,048 moles) a una velocidad tal que la temperatura se mantuvo por debajo de 8°C. Se eliminó el baño de refrigeración y se agitó la mezcla durante 3 horas mientras se calentaba a temperatura ambiente. Se añadió agua (15 mL) y se agitó la mezcla durante 5 minutos y a continuación se separaron las capas. Se lavó la fase orgánica con agua (10 mL), se secó sobre MgSC»4 y se concentró para dar un residuo de color ámbar claro. Se disolvió el residuo en acetato de etilo (8 mL) y se mantuvo a 5°C durante toda la noche. Se filtraron los sólidos precipitados por succión y se enjuagó en el filtro con un volumen mínimo de acetato de etilo y a continuación se secó al aire en el filtro para producir 6,8 g (rendimiento 58%) del producto del título. RMN 1H (CDCI3) d 5,76 (dtt, J = 10,9, 7,5, 1,5 Hz, 1H), d 5,59 (dtt, J = 10,9, 7,0, 1,5 Hz, H), d 4,31 (t, J = 6,3 Hz, 2H), ? 4,27 (dd, J = 7,0, 1,5 Hz, 2H), d 3,04 (s, 3H), ? 2,67 (q, J = 6,7 Hz, 2H), d 2,28 (s, 3H). RMN 13C (CDCI3) d 159,0, 156,3, 129,9, 125,1 , 68,4, 38,9, 37,2, 27,5, 10,2. IR (crn-1) 1758, 1605, 1342, 1320, 1170. Análisis Cale, para C9H14 205S: C, 41 ,21; H, 5,38; N, 10,68.
Encontrado: C, 41,15; H, 5,41; N, 10,51. 4-(5-yodo-pent-2-eníl)-3-metil-4H-[1 ,2,4]oxad¡azol-5-ona Ejemplo-LL-7) A una solución del producto del éster 5-(3-metil-5-oxo-[1,2,4]oxodiazol-4-il)-pent-3-enil del ácido metanosulfónico del Ejemplo-LL-6 (20,0 g, 0,076 moles) en acetona (160 mL) se añadió yoduro de sodio (17,15 g, 0,114 moles). Se calentó la mezcla a reflujo y se agitó durante 3 horas. Se detuvo el calentamiento externo y se mantuvo la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. Se eliminaron los sólidos por filtración y se enjuagó en el filtro. Se combinaron el filtrado y los lavados y se concentró y se extrajo el residuo heterogéneo con acetato de etilo (120 mL). Se lavó la capa orgánica con agua (60 mL), solución acuosa al 15% de tiosulfato de sodio (60 mL) y agua (60 mL); se secó sobre MgS04 y se concentró bajo presión reducida para producir 22,1 g (rendimiento 98%) del producto de aceite del título.
Ester metílico del ácido 2-[(3,4-dicloro-bencilideno)-amino]-propiónico Ejemplo-LL-8) A una suspensión agitada mecánicamente de clorhidrato de éster metílico de L-alanina (200,0 g, 1 ,43 moles) en cloruro de metileno (2,1 L) bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió trietilamina (199,7 mL, 1 ,43 moles) durante 12 min (durante la adición, los sólidos se disolvieron parcialmente y después volvieron a precipitar). Al cabo de 10 min, se añadieron 3,4-diclorobenzaldehído (227,5 g, 1,30 moles) y sulfato de magnesio (173,0 g, 1 ,43 moles) (la temperatura aumentó 6°C en 30 minutos). Al cabo de 2,5 h, se filtró la mezcla. Se lavó el filtrado con agua (1 x 1 L) y salmuera (1 x 500 ml_), y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró para dar 313,3 g, rendimiento del 92,4%, de producto de aceite. RMN ? (400 MHz, CDCI3) d 8,25 (s, 1H), 7,91 (d, 1H), 7,58 (dd, 1H), 7,49 (d, 1H), 4,17 (t, 1H), 3,76 (s, 3H), 1,53 (d, 3H). Análisis Cale, para C11H11CI2NO2: C, 50,79; H, 4,26; N, 5,38; Cl, 27,26. Encontrado: C, 50,37; H, 4,10; N, 5,38; Cl, 26,87.
Ester metílico del ácido /¾c-2-amino-2-metil-7-(3-metii-5-oxo-[1,2,4]oxadiazol-4-il)-hept-5-enoico Ejemplo-LL-9) Método 1. Una solución del producto del Ejemplo-LL-7 (114,2 g, 0,39 moles) y del producto del Ejemplo-LL-8 (151,5 g, 0,58 moles) en dimetilformamida (1 ,4 L) bajo atmósfera de nitrógeno se enfrió a -8°C. A continuación se añadió yoduro de litio (78,1 g, 0,58 moles) en 3 porciones iguales durante 19 min. Se agitó la mezcla durante 20 min a -7°C y a continuación se añadió (terc-butilim¡no)-tr¡s(pirrolidino)fosforano (194,0 ml_, 0,62) durante 36 min (temperatura máxima = -2,6°C). Al cabo de 10 min, se eliminó el baño de refrigeración y se agitó la solución a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación se vertió la mezcla en agua fría (1,4 L) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 1,0 L). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (2 x 400 ml_) y salmuera. Se trató la capa de acetato de etilo con HCI 1 N (780 ml_) y se agitó durante 1 h. Se separó la capa acuosa y se extrajo con acetato de etilo (2 x 400 ml_) y a continuación se neutralizó con bicarbonato de sodio (110 g). Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (1 x 500 mL). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtró, se concentró y después se trató con éter t-butílico metílico para dar un producto cristalino: primera recogida, 14,4 g; segunda recogida, 6,6 g (pureza CG = 96,2 y 91 ,9%, respectivamente). Se saturó la capa acuosa con cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (4 x 500 mL). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró y después se trató con éter t-butílico metílico para dar un producto cristalino: primera recogida, 33,4 g; segunda recogida 10,8 g (pureza CG = 89,6 y 88,8%, respectivamente). Rendimiento en bruto total, 65,2 g, 62,4%. Método 2. A una solución del producto del Ejemplo-LL-7 (20,7 g, 0,070 moles) y del producto del Ejemplo-LL-8 (22,9 g, 0,088 moles) en dimetilformamida (207 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió carbonato de cesio (29,8 g, 0,092). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 h y a continuación se diluyó con agua (300 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mL). Las capas de acetato de etilo combinadas se lavaron con agua (3 x 100 mL) y salmuera y a continuación se trataron con HC1 1 N (184 mL). Al cabo de 1 h, se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (3 x 100 mL) y a continuación se neutralizó con bicarbonato de sodio (15,5 g). Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (1 x 150 mL). Se saturó la capa acuosa con cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar un sólido amarillo, 11,9 g, 62,9%; pureza CG = 96,6%. Se recristalizó el producto en bruto a partir de acetato de etilo o éter t-butílico metílico caliente. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 5,68 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 4,23 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,18 (m, 2H), 1 ,81 (m, 1H), 1,69 (s, ancho, 2H), 1 ,66 (m, 1H), (1,36, 3H). RMN 13C (400 MHz, CDCI3) d 117,60, 159,01 , 156,10, 135,12, 121 ,82, 57,48, 52,29, 40,12, 39,00, 26,62, 22,56, 10,41. Ácido /?ac-2-amino-2-metil-7-(3-metil-5-oxo-[1,2,4]oxadiazoI- 4-il)-hept-5-enoico Ejemplo-LL-10) Se disolvió el producto del EjempIo-LL-9 (0,269 g, 1 mmol) en 5 mL de HCI 2 N y se calentó a reflujo bajo argón. Después de reflujo durante 6 horas seguido de agitación a temperatura ambiente durante 72 horas, se eliminó una parte alícuota y se verificó por RMN 1H. Aproximadamente un 6% del éster de partida sin reaccionar permaneció junto con el producto deseado (verificado por CL-EM). Se eliminó al vacío la parte acuosa, dejando 0,38 g de un aceite ámbar denso. Después de purificación por cromatografía de fase inversa, seguido de liofilización, se obtuvieron 0,23 g, 90,2%, del compuesto del título como sólidos blancos no delicuescentes. Análisis Cale, para ?????7?3?4·0,77?2?: C, 49,09; H, 6,94; N, 15,61. Encontrado: C, 48,71 ; H, 6,94; N, 15,98. Espectrometría de masas: M + 1 = 256.
Ester metílico del ácido (2S,52)-2-amino-2-metil-7-(3-metil-5-oxo-[1 ,2,4]oxadíazol-4-¡l)-hept-5-enoico Ejemplo-LL-11) El compuesto del título (827,3 g) se separó de su enantiomero R por cromatografía quiral preparativa usando instrumento Novaprep 200 con opción de reciclado de régimen permanente. Se disolvió el material en etanol absoluto a una concentración de 40 mg/mL y se cargó en una columna de acero inoxidable preempaquetada de Chiral Technologies de 50 x 500 mm. El adsorbente fue ChiralPak AD 20µ. La fase móvil fue etanol/trietilamina 100/0,1; la velocidad de flujo fue igual a 125 mL por minuto. La solución en bruto (25 mL) se cargó en la columna cada 12 minutos. Se usó una técnica de reciclado de régimen permanente. Se eliminó el disolvente con un evaporador rotatorio. Se aisló el producto final como aceite dorado que solidificó en reposo: 399,0 g (recuperación 96,4%). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) d 5,68 (dtt, 1H, J0ief¡nico = 10,7 Hz), 5,43 (ddt, Joiefinico = 10,7 Hz), 4,82 (s, ancho, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 5,5 Hz), 3,73 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,26 (m, 1H), 2,14 (m, 1H), 1 ,82 (ddd, 1H, J = 13,6, 11 ,3, 5,4 Hz), 1 ,67 (ddd, 1 H, J =13,6, 11 ,2, 5,5 Hz), 1 ,34 (s, 3H). RMN 13C (400 MHz, CD3OD) d 178,49, 161 ,13, 158,70, 135,92, 123,47, 58,55, 52,77, 41,38, 39,96, 26,23, 23,47, 10,23. Análisis Cale, para Ci2Hi9N304: C, 53,52; H, 7,11 ; N, 15,60.
Encontrado: C, 52,35; H, 7,20; N, 15,60. .HCI Diclorhidrato del éster metílico del ácido (2S,5Z)-7-acetimido¡lamino-2-amino-2-metil-hept-5-enoico Ejemplo-LL-12) A una solución del producto del EjempIo-LL-11 (114,5 g, 0,425 moles) en metanol (2,4 L) se añadieron ácido dibenzoíl-L-tartárico sólido (152,5 g, 0,425 moles) y ácido fórmico al 88% (147 ml_, 3,428 moles) a temperatura ambiente. Se preparó bajo nitrógeno una suspensión espesa de catalizador de Lindlar y paladio sobre carbonato de calcio al 5% en peso impurificado con acetato de plomo (37,9 g) en metanol (200 mL). Se añadió a continuación la solución del material de partida a temperatura ambiente para dar una suspensión espesa de catalizador de color gris claro seguido de un enjuagado con metanol (200 mL). Se calentó la mezcla de reacción heterogénea a 45°C durante 1 ½ horas. Se observó que a partir de 40°C aproximadamente se iniciaba una evolución de gas constante, lo que indicaba que seguía la reacción. Se enfrió la mezcla en un baño de hielo/agua y a continuación se filtró a través de un tapón de Supercell HyFlo. Se concentró la solución amarilla al vacío para dar un aceite viscoso, que se disolvió y se dividió entre HCI acuoso 2 N (2 L) y acetato de etilo (0,8 L). Se separaron las capas y se lavó una vez la capa acuosa con acetato de etilo (0,8 L). Se eliminaron al vacío el disolvente y los compuestos volátiles a temperatura elevada (= 70°C). El producto intermedio se usó en la siguiente etapa sin más purificación o caracterización. CL-EM [M+H]+ = 228. Ejemplo LL) Se disolvió el producto en bruto del Ejemplo-LL-12 (170 g) en HCI acuoso 2 N (1 L). Se mantuvo a reflujo la solución naranja resultante durante toda la noche antes de dejarla enfriar de nuevo a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla de reacción a 1/3 aproximadamente de su volumen, y se hizo pasar la solución ácida a través de un cartucho de extracción de fase sólida (25 g de sílice C18) para eliminar el color y otras impurezas. Se eliminó el disolvente al vacío (= 70°C) para dar 208 g del producto en bruto como una goma amarillenta. Se tomó la goma en bruto (31,3 g) en agua (250 ml_) y se cargó el material en una columna de intercambio iónico pretratada empaquetada con la resina ácida Dowex 50WX4-400 (600 g aproximadamente). Primero se lavó la resina con agua (1 L), a continuación con HCI acuoso diluido (1 L de HCI conc./agua 10/90 en volumen). Se eluyó el producto de la resina con HCI acuoso de alta afinidad iónica (1,5 L de HCI conc./agua de 20/90 en volumen a 25/75 en volumen). Se eliminó el disolvente acuoso al vacío (= 70°C), y se tomó el residuo gomoso en ácido trifluoroacético acuoso al 4% en volumen (100 ml_). Se eliminó el disolvente acuoso al vacío (= 70°C) y se repitió una vez más el método. A continuación se secó el residuo bajo alto vacío para dar 32,2 g de goma como la sal del ácido trifluoroacético. Se purificó la sal del ácido (2S,5Z)-7-acetimido¡lamino-2-amino-2-metil-hept-5-enoico, ácido trifluoroacético hidratada (32,2 g) por cromatografía preparativa de fase inversa. Se disolvió el producto en bruto en TFA acuoso al 0,1% (50 mL) y se cargó en una columna de acero inoxidable de 1 metro x 5 cm (2 pulgadas) de DI empaquetada con adsorbente (W/S polar BHK, 50 µ, 1,16 kg). Se eluyó el producto a una velocidad de flujo de 120 mlJmin con un gradiente escalonado desde TFA acuosa al 0,1% a acetonitrilo/agua/TFA 25/75/0,1. La proporción de carga entre sílice y muestra fue de 36:1 en peso. Se eliminó el disolvente al vacío, y el material de partida se convirtió en la sal del HCI por enjuagados repetidos con HCI acuoso diluido y eliminaciones de disolvente al vacío. El secado bajo alto vacío dio 27,4 g del diclorhidrato hidratado del título como una goma amarillenta. CL-EM [M+H]+ = 214,16 Da RMN 1H (D20) d 1,48 (s, 3H), 1 ,8-1 ,9 (AB, 2H), 2,10 (s, 3H), 2,01/2,12 (AB, 2H), 3,78 (d, 2H), rotámero 3,87 (d, 2H), 5,6/5,5 (dt, 2H, 11 Hz). RMN 13C (D20) d 18,7, 21,5, 21,6, 36,4, 39,1, 59,8, 122,6, 134,3, 164,5, 73,7. Análisis elemental Cale, para C10H19N3O2 ¦ 2,2 HCI · 2 H20: C, 36,21 ; H, 8,33; N, 12,67; Cl, 23,51. Encontrado: C, 36,02; H, 7,72; N, 12,67; Cl, 23,60. Ejemplo MM Diclorhídrato del ácido (2f?,5Z)-2-amino-7- iminoetil)amino]-5-heptenoico El enantiómero R aislado durante la separación descrita en el Ejemplo-LL-11 (1 ,13 g, 4,2 mmoles) se disolvió en 11 mL de ácido acético acuoso al 25% y se calentó a 60°C. A continuación se añadió polvo de cinc (1 ,10 g) en 4 porciones iguales a intervalos de 30 minutos. Después de calentamiento durante un total de 3 horas, se eliminó una parte alícuota y se verificó por CL-EM, lo que indicó que sólo quedaba una traza de material de partida sin reaccionar, junto con el producto deseado. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente, se filtró y se depuró al vacío, dejando 2,31 g de un sólido blanco fangoso. Se hidrolizó el éster metílico con HCI caliente diluido para dar el compuesto del título. Después de purificación por cromatografía de fase inversa seguida de liofilización, se obtuvieron 0,31 g del compuesto del título como un sólido vitreo. Análisis Cale, para C10H19N3O2 ¦ 1 ,22 HCI · 1 ,15 H20: C, 46,13; H, 8,15; N, 15,09; Cl, 15,53. Encontrado: C, 46,38; H, 8,51; N, 15,13; Cl, 15,80. Espectrometría de masas: M+1 = 214. Ejemplo NN Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-im¡noetil)amino]-tetrazol-5-¡l)hexanamida hidratada NN-1 A una solución en agitación de Bo-L-Lys(Cbz)-OH (5 g, 13,18 mmoles), 5-aminotetrazol monohidratado (1 ,36 g, 13,18 mmoles) y N,N-düsopropiletilamina (DI PEA) (5,1 g, 6,9 mL, 39,54 mmoles) en 20 mL de dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente se añadió hexafluorofosfato de benzotr¡azol-1-il-oxi-tris-(dimetiIamino)fosfonio (BOP) (6,4 g, 14,49 mmoles). Después de estar en agitación durante 1 h, se concentró la mezcla de reacción al vacío. Se distribuyó el residuo entre 60 mL de acetato de etilo (EtOAc) y 50 mL de agua. Se separaron las capas. Se lavó la capa orgánica con 50 mL de KHS04 1 M y 2 veces con 50 mL de agua. El producto empezó a precipitar y se concentró la suspensión al vacío para dar 9 g del compuesto en bruto. Después de secado, se purificó el producto por ebullición en cloruro de metileno seguido de filtración, dando 3,7 g de 1A (62,7%). El compuesto se caracterizó por RMN 1H. NN-2 Se redujeron (2 g, 4,5 mmoles) en condiciones de hidrogenación catalítica usando negro de Pd a 34,48 kPa (5 psi) en solución de EtOH/AcOH al 50% durante 12 h, para dar 1 ,55 g (100%) de NN-2. El compuesto se caracterizó por RMN 1H. NN-3 A una solución en agitación de NN-2 (1 ,55 g, 4,15 mmoles) y clorhidrato de acetimidato de metilo (0,91 g, 8,31 mmoles) en 25 mL de DMF se añadió trietilamina (TEA) (1,26 g, 1 ,74 mL, 12,45 mmoles). Después de estar en agitación durante 16 h a temperatura ambiente, se filtró la mezcla de reacción desde clorhidrato de trietilamina y se concentró el filtrado al vacío. Se disolvió el residuo en AcOH al 50% y se liofilizó. Se purificó el producto en bruto (2 g) usando cromatografía de fase inversa en una columna C-18 para dar 0,9 g (52,3%) de 1C. El producto se caracterizó por RMN 1H. NN-4 Se disolvieron (0,9 g, 2,17 mmoles) en 30 ml_ de ácido acético y se añadieron 3 ml_ de HCI/dioxano 4 N. Se agitó la reacción durante 20 min a temperatura ambiente y a continuación se añadieron 50 mL de éter etílico. AI cabo de 2 h, se filtró el precipitado, se lavó con éter etílico y se secó para dar 0,78 g de 1 (96%). Análisis Cale, para C9Hi8N8 ¦ 0,2 HCI ¦ 1,25 H20: C, 30,91 ; H, 6,48; N, 32,04; Cl 20,27. Encontrado: C, 31,64; H, 6,43; N, 32,19; Cl, 20,19. p.f. DSC 144,9°C. El ejemplo NN es un inhibidor ?-NOS más potente que 2S-amino-6-[(1-iminoetil)amino]hexanamida (amida NIL) o dimetilamida NIL. EL ejemplo 1 es también más selectivo. El ejemplo NN es un producto bellamente cristalino, al igual que todos sus productos intermedios. En contraste, NIL es vitreo, lo que hace más difícil su manejo. c. Datos biológicos Algunos o todos los ensayos siguientes se usaron para demostrar la actividad inhibidora de la óxido nítrico sintasa de los compuestos de la invención, así como para demostrar las propiedades farmacológicas útiles. Ensayo de citrulina para óxido nítrico sintasa La actividad de la óxido nítrico sintasa (NOS) puede medirse por monitorización de la conversión de L-[2,3-3H]-arginina a L-[2,3-3H]-citrulina (Bredt y Snyder, Proc. Nati. Acad. Sel. USA, 87, 682-685, 1990, y Moore y col., J. Med. Chem., 39, 669-672, 1996). A partir de ARN extraído de tejido humano se clonan NOS inducible humana (hiNOS), NOS constitutiva endotelial humana (hecNOS) y NOS constitutiva neuronal humana (hncNOS). El ADNc de NOS inducible humana (hiNOS) se aisla a partir de una biblioteca de ????µ hecha con ARN extraído de una muestra de colon de un paciente con colitis ulcerosa. El ADNc de NOS constitutiva endotelial humana (hecNOS) se aisla a partir de una biblioteca de ????µ hecha con ARN extraído células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) y el ADNc de NOS constitutiva neuronal humana (hncNOS) se aisla a partir de una biblioteca de ????µ hecha con ARN extraído de cerebelo humano obtenido de un cadáver. Las enzimas recombinantes se expresan en células de insectos Sf9 usando un vector de baculovirus (Rodi y col., en The Biology of Nitric Oxide, Pt. 4: Enzymology, Biochemistry and Immunology; Moneada, S.; Feelisch, M.; Busse, R.; Higgs, E; eds.; Portland Press Ltd.: Londres, 1995; págs. 447-450). La actividad enzimática se aisla a partir de extractos de células solubles y se purifica parcialmente por cromatografía DEAE-Sefarosa. Para medir la actividad NOS, se añaden 10 µ? de enzima a 40 µL· de Tris 50 mM (pH 7,6) en presencia o ausencia de compuestos de prueba y se inicia la reacción por adición de 50 µL· de una mezcla de reacción que contiene Tris 50 mM (pH 7,6), 2,0 mg/mL de albúmina de suero bovino, DTT 2,0 mM, CaCl24,0 mM, FAD 20 µ?, tetrahidrobiopterina 100 µ?, NADPH 0,4 mM y L-arginina 60 µ? que contiene 0,9 µ?? de L-[2,3-3H]-arginina. La concentración final de L- arginina en el ensayo es de 30 µ?. Para hecNOS o hncNOS, se incluye calmodulina a una concentración final de 40 a 100 nM. Después de incubación a 37°C durante 15 minutos, se termina la reacción por adición de 400 µL· de una suspensión (1 parte de resina, 3 partes de tampón) de resina de intercambio iónico Dowex 50W X-8 en un tampón de detención que contiene EGTA 10 mM, HEPES 100 mM, pH 5,5 y L-citrulina 1 mM. Después de mezclar la resina se deja sedimentar y la formación de L-[2,3-3H]-citrulina se determina por recuento de partes alícuotas en el sobrenadante con un contador de centelleo líquido. Los resultados se recogen en la Tabla I dependiendo de los valores CI50 de los compuestos para hiNOS, hecNOS y hncNOS. Ensayo de nitrito en células RAW Las células RAW 264.7 pueden depositarse en placa para confluencia en una placa de cultivo tisular de 96 pocilios cultivada durante toda la noche (17 h) en presencia de LPS para inducir NOS. Una fila de 3 a 6 pocilios puede dejarse sin tratar y servir como control para sustracción de fondo no específico. Pueden retirarse los medios de cada pocilio y lavarse las células dos veces con Kreb-Ringers-Hepes (25 mM, pH 7,4) con 2 mg/mL de glucosa. A continuación se colocan las células en hielo y se incuban con 50 pL de tampón que contiene L-arginina (30 µ?) +/- inhibidores durante 1 h. El ensayo puede iniciarse calentando la placa a 37°C en un baño de agua-durante 1 h. La producción de nitrito por iNOS intracelular será lineal con el tiempo. Para terminar el ensayo celular, la placa de células puede colocarse en hielo y eliminarse y analizarse el nitrito del tampón que contiene nitrito usando una determinación fluorescente de nitrito publicada con anterioridad (T. P. Misko y col., Analytical Biochemistry, 214, 11-16 (1993)). Ensayo de explante de cartílago humano Se enjuagan dos veces piezas óseas con Solución Salina Fosfato Tamponada de Dulbecco (GibcoBRL) y una vez con Medio de Eagle Modificado de Dulbecco (GibcoBRL) y se colocan en una placa de Petri con Medio Esencial Mínimo (MEM) sin rojo de fenol (GibcoBRL). El cartílago se cortó en pequeños explantes de aproximadamente 15 a 45 mg de peso y se colocaron uno o dos explantes por pocilio en placas de cultivo de 96 ó 48 pocilios con entre 200 y 500 iL de medio de cultivo por pocilio. El medio de cultivo fue bien una modificación a medida de Medio Esencial Mínimo (Eagle) con sales de Earle (GibcoBRL) preparado sin L-arginina, sin L-glutamina y sin rojo de fenol o bien una modificación a medida de medio de Neumann y Tytell sin suero (GibcoBRL) preparado sin L-arginina, sin insulina, sin ácido ascórbico, sin L-glutamina y sin rojo de fenol. Ambos se suplementan antes del uso con L-arginina 100 mM (Sigma), L-glutamina 2 mM, suplemento 1X HL-1 (BioWhittaker), 50 mg/mL de ácido ascórbico (Sigma) y 150 pg/mL de IL-1 ß humana recombinante (RD Systems) para inducir óxido nítrico sintasa. A continuación se añaden los compuestos en partes alícuotas de 10 µ? y se incuban los explantes a 37°C con C02 al 5% durante 18 a 24 horas. Después se desecha el sobrenadante de un día de antigüedad y se sustituye por medio de cultivo nuevo que contiene IL-1 ? humana recombinante y compuesto y se incuba durante otras 20 a 24 horas. Se analiza el nitrito de este sobrenadante con un ensayo fluorométrico (Misko y col., Anal. Biochem., 214, 11-16, 1993). Todas las muestras se dan por cuadruplicado. Se cultivan controles no estimulados en medios en ausencia de IL-?ß humana recombinante. Los valores de CI50 (Tabla I) se determinan representando gráficamente la inhibición porcentual de producción de nitrito en seis concentraciones diferentes de inhibidor. La tabla I muestra ejemplos de actividad biológica para algunos de los compuestos de la presente invención. TABLA 1 Actividad biológica: Los valores representan promedios de todos los experimentos y todos los lotes estudiados.
Número de a50 (µ?) Clso (µ?) ejemplo de Clso (µ?) hiNOS Clso (µ??) hecNOS cartílago hncNOS compuesto humano Ejemplo A 0,36 68 3,6 0,1 Ejemplo B 2,2 195 21 0,2 Ejemplo C 12 303 105 Ejemplo D 8,6 112 65 2,5 Ejemplo E < 5 279 29 Ejemplo 1 3,1 77 15 0,7 Ejemplo J 4,4 302 58 8,2 Ejemplo K 74 266 86 Ejemplo L 197 1.100 539 Ejemplo 3,4 78 17 Ejemplo N 0,9 26 6,0 Ejemplo 0 7,2 >100 36 0,7 Ejemplo P 12 >100 181 Ejemplo Q 12 1.080 220 Ejemplo S 172 1.490 523 Ejemplo T 0,9 89 8 0,1 Ejemplo U 20 418 150 Ejemplo V <3 >30 >3 < 10 Ejemplo W <5 >150 >10 >30 Ejemplo X <3 > 15 >3 < 10 Ejemplo Y <3 >30 >3 < 10 Ejemplo Z <3 > 15 >3 < 10 Ejemplo AA <3 >5 <3 <3 Ejemplo BB <10 >25 <10 Ejemplo CC 2,9 29 9,9 0,5 Ejemplo DD 10 74 31 1,8 Ejemplo EE 1,4 18 5,8 0,5 Ejemplo FF 16 86 45 Ejemplo GG 34 386 122 Ejemplo HH 0,4 37 7,6 0,4 Ejemplo JJ 56 352 584 Ejemplo KK 0,57 52 13 Ejemplo LL 0,7 31 12 0,8 Ejemplo 121 1.930 1.480 Ejemplo NN 21,4 2.425 Ensayo en vivo Las ratas pueden tratarse con una inyección intraperitoneal de 1 g de endotoxina (LPS) con o sin administración oral de los inhibidores de óxido nítrico sintasa. Los niveles plasmáticos de nitritos/nitratos pueden determinarse 5 horas después del tratamiento. Los resultados pueden usarse para demostrar que la administración de los inhibidores de óxido nítrico sintasa disminuyen el aumento en los niveles plasmáticos de nitritos/nitratos, un indicador fiable de la producción de óxido nítrico inducido por endotoxina. Como se muestra en la Tabla II, el Ejemplo A (diclorhidrato del ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-([(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico) inhibió el aumento inducido por LPS en los niveles plasmáticos de nitritos/nitratos con un valor de DE5o observado de < 0,1 mg/kg, demostrando la capacidad de inhibir la actividad de óxido nítrico sintasa inducible en vivo. TABLA II DE50 para compuestos determinados en ratas tratadas con endotoxina. Todos los compuestos se administraron por vía oral, salvo que se advierta lo contrario. Compuesto DE50 (mg/kg) Ejemplo A <0,1 Ejemplo D > 10 Ejemplo G < 0,1 Ejemplo H < 0,3 Ejemplo V < 3 Ejemplo W > 10 Ejemplo X < 5 Ejemplo Y < 3 Ejemplo Z < 5 Ejemplo AA < 10 Ejemplo CC < 3 Ejemplo EE 0,2 Ejemplo HH 0,4 Ejemplo KK 0,3 Ejemplo LL 0,3 Ensayo dé inhibición dependiente del tiempo Se evaluó la inhibición dependiente del tiempo de los compuestos de isoformas de NOS humana por preincubación del compuesto con la enzima a 37°C en presencia de componentes de ensayo enzimático de citrulina, menos L-arginina, para tiempos comprendidos entre 0 y 60 minutos. Se retiraron partes alícuotas (10 µ?_) a 0, 10, 21 y 60 minutos y se añadió de inmediato a una mezcla de reacción enzimática de ensayo de citrulina que contenía L-[2,3-3H]-arginina y una concentración final de L-arginina de 30 µ? en un volumen final de 100 pl_. Se dejó que prosiguiera la reacción durante 15 minutos a 37°C y se terminó por adición de tampón de detención y cromatografía con resina de intercambio iónico de intercambio catiónico Dowex 50W X-8 según se describe en el ensayo NOS de citrulina. Se tomó la inhibición porcentual de actividad NOS por un inhibidor como la inhibición porcentual en la actividad comparada con una enzima de control preincubada durante el mismo tiempo en ausencia de inhibidor. Los datos mostrados en la Tabla III son los porcentajes de inhibición después de 21 y 60 minutos de preincubación de inhibidor con enzima.
Ensayo del efecto anticitotóxico de los inhibidores ¡NOS selectivos en células epiteliales gástricas humanas infectadas con H. pylorí Para determinar los efectos anticitotóxicos de los inhibidores ¡NOS selectivos en células epiteliales gástricas, se cultivaron células obtenidas de la línea celular epitelial gástrica humana AGS (adenocarcinoma gástrico, ATCC CRL 1739; disponible a partir de American Type Culture Collection) en medio RPMI- 640 suplementado con suero bovino fetal al 10% y antibióticos (100 U/mL de penicilina y 100 µg/mL de estreptomicina). Las células se siembran en una placa de cultivo de 24 pocilios a una densidad de 4 x 105 células por pocilio en un volumen de 1 mL y se mantuvieron en cultivo durante toda la noche hasta alcanzar una confluencia del 80%. Antes de la estimulación, las células se lavaron tres veces con 1 mL de medio de cultivo nuevo que no contenía antibióticos. A continuación, se cultivaron células en presencia de H. pylori en una proporción entre bacterias y células de 300:1 durante 12 a 36 horas, con (tratadas) o sin (control) tratamiento con un inhibidor selectivo ¡NOS a una dosis de, por ejemplo, 1 µ? a 1 mM. Como índice de citotoxicidad, se evaluó el número de células por análisis de exclusión con azul de tripano. Se contaron las células viables en un instante fijo, o en múltiples instantes fijos, dentro del período de 12 a 36 horas. Se compararon los números de células de las muestras celulares de control y tratadas. Ensayos del efecto antiapoptótico de los inhibidores ¡NOS selectivos en células epiteliales gástricas humanas infectadas con H. pylori Se cultivaron células AGS según se ha descrito inmediatamente antes. Las células AGS se depositaron en placa (4 x 105/pocillo) en cubreobjetos de vidrio en placas de 24 pocilios, y se trataron con (tratadas) o sin (control) un inhibidor selectivo ¡NOS y se mantuvieron en cultivo en presencia de H. pylori (con una proporción entre bacterias y células de 300:1) durante 24 horas. Se lavaron dos veces las células con PBS, se fijaron monocapas celulares con paraformaldehído al 4% y se tiñeron las células con una tinción específica de DNS como Hoechst 33258. Como índice de apoptosis se evaluó la fragmentación de ADN usando microscopía por fluorescencia. Se determinaron y compararon la fragmentación de ADN y los números de células apoptóticas en muestras tratadas y de control. d. Dosificaciones, formulaciones y rutas de administración Muchos de los compuestos inhibidores selectivos ¡NOS útiles en los métodos de la presente invención pueden tener al menos dos átomos de carbono asimétricos, y por tanto incluyen racematos y estereoisómeros, como diastereómeros y enantiómeros, tanto en forma pura como en mezcla. Dichos estereoisómeros pueden prepararse usando técnicas convencionales, ya sea por reacción de materiales de partida enantioméricos o por separación de isómeros de compuestos de la presente invención. Los isómeros pueden incluir isómeros geométricos como, por ejemplo, isómeros cis o isómeros trans en un doble enlace. Todos estos isómeros se contemplan entre los compuestos útiles en los métodos de la presente invención. Los métodos contemplan asimismo el uso de tautomeros, sales, solvatos y profármacos de compuestos inhibidores selectivos ¡NOS. Para los métodos de la presente invención, entre las rutas de administración adecuadas de los inhibidores ¡NOS selectivos se incluye cualquier medio que produzca contacto de estos compuestos con su sitio de acción en el cuerpo del sujeto como, por ejemplo, en el tracto gastrointestinal, incluyendo el esófago, el estómago y los intestinos de un mamífero, como un ser humano. Más específicamente, entre las rutas de administración adecuadas se incluyen las vías oral, subcutánea, rectal, tópica, bucal (es decir, sublingual), intramuscular e intradérmica. En una forma de realización ilustrativa, los inhibidores ¡NOS selectivos se administran por vía oral. Para la profilaxis o tratamiento de dolencias del tracto gastrointestinal, incluyendo enfermedad inflamatoria intestinal que incluye enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica que incluye ulceración gástrica y ulceración duodenal, gastritis, colitis, ileítis, esofagitis, íleo paralítico, diarrea y síndrome del colon irritable, los métodos incluyen el uso de un inhibidor selectivo ¡NOS como el compuesto en sí o como sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Los métodos de la presente invención incluyen asimismo el uso de un inhibidor selectivo ¡NOS en combinación con un agente antimicrobiano o un agente antisecretor, o en combinación con un agente microbiano y un agente antisecretor al mismo tiempo. El término "sales farmacéuticamente aceptables" comprende sales usadas comúnmente para formar sales de metales alcalinos para formar sales de adición de ácidos libres o bases libres. La naturaleza de la sal no es fundamental, siempre que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables son particularmente útiles como productos de los métodos de la presente invención debido a su mayor solubilidad acuosa con respecto al compuesto neutro o principal correspondiente. Dichas sales deben tener un anión o catión farmacéuticamente aceptable. Las sales de compuestos de adición de ácido farmacéuticamente aceptables adecuadas de la presente invención pueden prepararse a partir de un ácido inorgánico o de un ácido orgánico. Algunos ejemplos de dichos ácidos inorgánicos son los ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Entre los ácidos orgánicos apropiados se incluyen clases alifáticas, cicloalifáticas, aromáticas, aralifáticas, heterocíclicas, carboxílicas y sulfónicas de ácidos orgánicos, ejemplo de los cuales son los ácidos fórmico, acético, propiónico, succínico, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucorónico, maleico, fumárico, purívico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoico), metanosulfónico, etilsulfónico, bencenosulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico y galacturónico. Entre las sales de adición básica farmacéuticamente aceptables de la presente invención se incluyen sales metálicas formadas a partir de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales orgánicas formadas a partir de ?,?'-dibenciletileneldiamina, colina, cloroprocaína, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procaína. Entre las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención cuando es posible se incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, bórico, fluorobórico, fosfórico, metafosfórico, nítrico, carbónico (incluidos los aniones carbonato e hidrogenocarbonato), sulfónico y sulfúrico, y de ácidos orgánicos como los ácidos acético, bencenosulfónico, benzoico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glicólico, isotiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, metanosulfónico, trifluorometanosulfónico, succínico, toluensulfónico, tartárico y trifluoroacético. La sal cloruro se prefiere particularmente para fines médicos. Entre las sales básicas farmacéuticamente aceptables se incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos como sales de sodio y de potasio y sales de metales alcalinotérreos como sales de magnesio y de calcio. Todas estas sales pueden prepararse por medios convencionales a partir de la base conjugada o el ácido conjugado correspondiente de los compuestos de la presente invención por reacción, respectivamente, del ácido o la base apropiados con la base conjugada o el ácido conjugado del compuesto. En una forma de realización, los inhibidores selectivos ¡NOS útiles en los métodos de la presente invención se presentan con un vehículo aceptable en forma de una combinación farmacéutica. El vehículo debe ser aceptable en el sentido de que sea compatible con los demás ingredientes de la combinación farmacéutica y no debe ser perjudicial para el sujeto. Entre las formas adecuadas del vehículo se incluyen las sólidas, líquidas o ambas, y en una forma de realización ilustrativa el vehículo se formula con el compuesto terapéutico como una combinación de dosis unitaria, por ejemplo como un comprimido que contiene desde el 0,05% aproximadamente al 95% aproximadamente en peso del compuesto activo. En formas de realización alternativas, están presentes también otras sustancias farmacológicamente activas, entre ellas otros compuestos de la presente invención. Los compuestos farmacéuticos de la presente invención se preparan por cualquiera de las técnicas bien conocidas en farmacia, consistentes esencialmente en la mezcla de los ingredientes. Las formulaciones de dosificación unitaria preferidas son las que contienen una dosis eficaz, como se describe más adelante en la presente memoria descriptiva, o una fracción apropiada de la misma, de uno o más de los compuestos terapéuticos de las combinaciones. En general, una dosis total diaria de un inhibidor selectivo ¡NOS se sitúa en el intervalo de 0,001 mg/kg de peso corporal/día aproximadamente a 2.500 mg/kg de peso corporal/día aproximadamente. El intervalo de dosis para seres humanos adultos se sitúa generalmente entre 0,005 mg aproximadamente y 10 g aproximadamente al día. Los comprimidos u otras formas de presentación proporcionadas en unidades discretas pueden contener convenientemente una cantidad de un compuesto terapéutico que sea eficaz para dicha dosificación, o un múltiplo de la misma. Por ejemplo, los compuestos inhibidores ¡NOS selectivos de la presente invención pueden presentarse en unidades que contienen de 5 mg a 500 mg, y típicamente de 10 mg aproximadamente a 200 mg aproximadamente. En general, como un agente microbiano en combinación con un inhibidor selectivo ¡NOS, la dosis total diaria de un compuesto antibiótico para seres humanos adultos se sitúa en el intervalo entre 0,1 g al día aproximadamente y 15 g al día aproximadamente. Típicamente, la dosis total diaria para seres humanos adultos se sitúa en el intervalo entre 0,25 g aproximadamente y 4 g aproximadamente al día. En general, como un compuesto antimicrobiano en combinación con un inhibidor selectivo ¡NOS, la dosis total diaria de un compuesto antibiótico para seres humanos adultos se sitúa en el intervalo entre 100 mg/día aproximadamente y 1.000 mg/día aproximadamente, y típicamente de 500 mg/día. En general, como un compuesto antisecretor en combinación con un inhibidor selectivo ÍNOS, la dosis total diaria de un compuesto antagonista de receptor l-½ para seres humanos adultos se sitúa en el intervalo entre 10 mg/día aproximadamente y 1.000 mg/día aproximadamente, y típicamente entre 300 mg/día aproximadamente y 800 mg/día aproximadamente. En general, como un compuesto antisecretor en combinación con un inhibidor selectivo ¡NOS, la dosis total diaria de un compuesto inhibidor de la bomba de protones para seres humanos adultos se sitúa en el intervalo entre 10 mg/día aproximadamente y 200 mg/día aproximadamente. Típicamente, la dosis total diaria se sitúa en el intervalo entre 20 mg/día aproximadamente y 60 mg/día aproximadamente de omeprazol, o entre 15 mg/día aproximadamente y 30 mg/día aproximadamente de lansoprazol. Terapias dobles o triples que usen combinaciones de agentes antimicrobianos y agentes antisecretores, en combinación con un inhibidor selectivo ¡NOS, son también útiles en los métodos de la presente invención. Una terapia doble incluye, por ejemplo, una combinación de un agente antisecretor como omeprazol con un antibiótico como claritromicina o amoxicilina. Una terapia triple incluye, por ejemplo, la administración de metronidazol, un compuesto de bismuto y tetraciclina o amoxicilina. Otra terapia triple útil en los métodos de la presente invención es ranitidina más un compuesto de bismuto y un compuesto antibiótico. En el caso de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos terapéuticos, los pesos indicados anteriormente se refieren al peso del equivalente del ácido o del equivalente de la base del compuesto terapéutico derivado de la sal. Para los métodos descritos en la presente memoria descriptiva debe entenderse que la cantidad de un compuesto inhibidor ¡NOS selectivo que se requiere para obtener el efecto biológico deseado depende de diversos factores, entre los que se incluyen el compuesto o compuestos específicos individuales elegidos, el uso específico, la ruta de administración, la dolencia clínica del sujeto y la edad, el peso, el sexo y la dieta del sujeto. Análogamente, debe entenderse que la cantidad total de un compuesto inhibidor ¡NOS selectivo en combinación con cualquier otro agente o agentes terapéuticos requerida para conseguir el efecto biológico deseado depende de diversos factores, entre los que se incluyen el compuesto o compuestos específicos individuales elegidos, el uso específico, la ruta de administración, la dolencia clínica del sujeto y la edad, el peso, el sexo y la dieta del sujeto. Las dosis diarias descritas en los párrafos precedentes para los diversos compuestos terapéuticos se administran en una dosis única o en múltiples subdosis proporcionadas. Las subdosis se administran de dos a seis veces al día. En una forma de realización, las dosis se administran en una forma de liberación sostenida eficaz para obtener el efecto biológico deseado. El suministro oral según los métodos de la presente invención puede incluir formulaciones bien conocidas en la técnica para proporcionar un suministro prolongado o sostenido del fármaco al tracto gastrointestinal por cualquier número de mecanismos. Entre éstos se incluyen, sin limitarse a ellos, la liberación sensible al pH a partir de la forma de dosificación basada en el pH cambiante del intestino delgado, la lenta erosión del comprimido o la cápsula, la retención en el estómago basada en las propiedades físicas de la formulación, la bioadhesión de la forma de dosificación al revestimiento mucoso del tracto intestinal o la liberación enzimática del fármaco activo a partir de la forma de dosificación. El suministro oral según los métodos de la presente invención puede lograrse usando una forma de dosificación sólida, semisólida o líquida. Entre las formas semisólidas y líquidas adecuadas se incluyen, por ejemplo, un jarabe o líquido contenido en una cápsula de gel. Para poner en práctica los métodos de la presente invención, las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración oral pueden presentarse en unidades discretas, como cápsulas, sellos, grageas o comprimidos, cada uno de los cuales comprende una cantidad predeterminada de al menos uno de los compuestos terapéuticos útiles en los métodos de la presente invención; en forma de polvo o gránulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. e. Ejemplos de formas de realización Los siguientes ejemplos no limitativos sirven para ilustrar varias composiciones farmacéuticas adecuadas para la puesta en práctica de los métodos de tratamiento de la presente invención. EJEMPLO 1 : Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 100 mg de la composición presentada en la Tabla IV para administración oral usando técnicas de granulación húmeda: TABLA IV EJEMPLO 2: Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 100 mg de la composición presentada en la Tabla V usando técnicas de compresión directa: TABLA V Ingrediente Peso (mg) Compuesto 1 25 Celulosa microcristalina 69,5 Dióxido de silicio coloidal 0,5 Talco 2,5 2 Los métodos de la presente invención contemplan asimismo terapia de combinación que usa Inhibidores ¡NOS selectivos en combinación con un agente antimicrobiano o una combinación de agentes antimicrobianos, usando inhibidores ¡NOS selectivos en combinación con agentes antisecretores y usando inhibidores ¡NOS selectivos en combinación con agentes antimicrobianos y agentes antisecretores al mismo tiempo. EJEMPLO 3: Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 100 mg de la composición presentada en la Tabla VI para administración oral usando técnicas de granulación húmeda: TABLA VI Ingrediente Peso (mg) Compuesto II 5 Omeprazol 20 Lactosa 54 Celulosa microcristalina 15 Hidroxipropil metilcelulosa 3 Croscarmelosa de sodio 2 Estearato de magnesio 1 Peso total del comprimido 100 EJEMPLO 4: Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 100 mg de la composición presentada en la Tabla VII usando técnicas de compresión directa: TABLA VII EJEMPLO 5: Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 150 mg de la composición presentada en la Tabla VIH para administración oral usando técnicas de granulación húmeda: TABLA VIII EJEMPLO 6: Composiciones farmacéuticas Pueden prepararse comprimidos de 150 mg de la composición presentada en la Tabla IX usando técnicas de compresión directa: TABLA IX Los ejemplos descritos en la presente memoria descriptiva realizarse sustituyendo los compuestos terapéuticos o ingredientes inertes descritos genérica o específicamente por los usados en los ejemplos precedentes. Las explicaciones e ilustraciones presentadas en la presente memoria descriptiva pretenden informar a los expertos en la materia de la invención, sus principios y su aplicación práctica. Los expertos en la materia pueden adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, según resulte más adecuado para los requisitos de un uso en particular. Por consiguiente, las formas de realización específicas de la presente invención según se presentan no pretenden ser exhaustivas ni limitativas de la invención.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1.- Un método para el tratamiento o prevención de dolencias o enfermedades del tracto gastrointestinal que implican una sobreproducción de óxido nítrico (NO) por óxido nítrico sintasa inducibie (¡NOS), en un sujeto necesitado de dicho tratamiento o prevención, en el que dicho método comprende la administración al sujeto de una cantidad antünflamatoria eficaz de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducibie o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducibie se selecciona del grupo constituido por un compuesto que tiene la fórmula I: en la que: R1 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; R2 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; con la salvedad de que al menos uno de R1 o R2 contiene un halo; R7 se selecciona del grupo constituido por H e hidroxi; J se selecciona del grupo constituido por hidroxi, alcoxi y NR3R4 en el que: R3 se selecciona del grupo constituido por H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo constituido por H, y un anillo heterocíclico en el que al menos un eslabón del anillo es carbono y en el que de 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente entre oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede estar opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, haloalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquil amidosulfonilo, dialquil amidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquil monoaril amidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoílo, alquenoílo, aroílo, heteroaroílo, aralcanoílo, heteroaralcanoílo, haloalcanoílo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilendioxi, haloalquilendioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halo, haloalquilo, haloalcoxi, hidroxihaloalqulio, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidroxiheteroaralquilo, haloalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterocicliclo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la Fórmula II: en la que X se selecciona del grupo constituido por -S-, -S(O)- y -S(0)2-, R12se selecciona del grupo constituido por alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alcoxi CrC5-alquilo Ci y alquiltio CrC5-alquilo Ci, en el que cada uno de estos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno, R18 se selecciona del grupo constituido por -OR24 y -N(R25)(R26), y R 3 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(O)- S-FT; o R es -N(R )-, y R es -C(O)-, en el que R y R junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo, en el que si R13 es -C(R31)(R32)-, entonces R14 es -C(0)-0-R33; en caso contrario, R 4 es -H, R11, R15, R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, halógeno, alquilo C-i-Ce, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C5 y alcoxi Ci-C5-alquilo Ci, R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi Ci-C5-alquilo C1, R21 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R34 y -C(0)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -0(O)-0-R36 y -C(0)-S-R37; o R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R2i es -C(O)-, y R22 es -O-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo, R23 es alquilo Ci, R24 se selecciona del grupo constituido por -H y alquilo C1-C6, en el que cuando R24 es alquilo C-i-Ce, R24 está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R25 se selecciona del grupo constituido por -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(0)-R38, -C(0)-0-R39 y -C(0)-S-R40; en el que cuando R25 y R26 son independientemente alquilo o alcoxi, R25 y R26 están independientemente opcionalmente sustituidos por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R¿l, R¿°, R¿», R3Ü, R , R , R , R , R , R , R , R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo, en el que alquilo está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, en el que cuando cualquiera de R11, R12, R 3, R14, R15, R16, R17, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 es independientemente una fracción seleccionada del grupo constituido por alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la fracción está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto representado por la Fórmula III: III en la que: R es H o metilo; y R es H o metilo; un compuesto de Fórmula IV: IV; un compuesto de Fórmula V: V en la que: R43 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R44 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo;. R45 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto de Fórmula VI: VI en la que: R46 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula VII; Vü en la que: R47 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R48 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R49 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto de Fórmula VIII: en la que: R50 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula IX: en la que: R50 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C-1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R51 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R52 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R53 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y R54 se selecciona del grupo constituido por halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula X: en la que: R55 es alquilo Ci-C5) con dicho alquilo C1-C5 opcionaimente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionaimente sustituido por uno o más halo; y un compuesto que tiene la Fórmula XI: XI Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-iminoetil)amino]-N-(1 H-tetrazol-5-il) hexanamida hidratado Un compuesto de fórmula XII: en la que R se selecciona entre alquilo C1-C4, cicloalquilo C3-C4, hidroxialquilo C1-C4 y haloalquilo C1-C4; un compuesto de Fórmula XIII, Fórmula XIV o Fórmula XV: Fórmula XIII; Fórmula XIV; o Fórmula XV; en las que: A es -R56, -OR56, C(0)N(R56)R57, P(0)[N(R56)R57]2, -N(R56)C(0)R57, -N(R76)C(0)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56, -S02NHC(0)R56, -NHS02R77, -S02NH(R56)H, -C(0)NHS02R77 y -CH=NOR5S; cada X, Y y Z son independientemente N o C(R19); cada U es N o C(R60), siempre que U sea N sólo cuando X es N y Z e Y son CR74; V es N(R59), S, O ó C(R59)H; Cada W es N o CH; Q se elige del grupo constituido por un enlace directo, -C(O)-, -O-, -C(=N-R56)-, S(0)t y -N(R61)-; m es cero o un entero de 1 a 4; n es cero o un entero de 1 a 3; q es cero o uno; r es cero o uno, siempre que cuando Q y V son heteroátomos, m, q y r no pueden ser todos cero; cuando Á es -OR56, NÍR^CÍOJR57, -NÍR^CÍOJOR57, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (en el que t cero) o -NHS02R77, n, q y r no pueden ser todos cero; y cuando Q es un heteroátomo y A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R71)C(0)OR57, -N(R56)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (cuando t es cero) o -NHS02R77, m y n no pueden ser los dos cero; t es cero, uno o dos; es un N-heterociclilo opcíonalmente sustituido; es un carbociclilo opcíonalmente sustituido o un N-heterociclilo opcíonalmente sustituido; cada R56 y R57 se eligen independientemente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C20 opcíonalmente sustituido, cicloalquilo opcíonalmente sustituido, -[alquilo Co-C8]-R64, -[alquenilo C2-Ca]-R64, -[alquinilo C2-C8]-R64, -[alquilo C2-C8]-R65 (opcíonalmente sustituido por hidroxi), -[C-i-C8]-R66 (opcíonalmente sustituido por hidroxi), heterociclilo opcíonalmente sustituido; o R56 y R57 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos es un N-heterociclilo opcíonalmente sustituido; R58 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcíonalmente sustituido, haloalquilo, -[alquilo Ci-C8]-C(0)N(R56)R57, -[alquilo d-C8l-N(R56)R57, -[alquilo d-CaJ-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo Ci-C8]-R66 y heterociclilo (opcíonalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo, alcoxi e imidazolilo); o cuando Q es -N(R )- o un enlace directo a R , R58 puede ser adicionalmente aminocarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo y -C(=NR73)-NH2; o -Q-R58 tomado conjuntamente representa -C(0)OH, - hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo y cicloalquilo; siempre que cuando A es -R56 ó -OR56, R59 no puede ser hidrógeno, y cuando V es CH, R69 puede ser adicionalmente hidroxi; R60 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquilo, haloalquilo, aralquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, -OR71, -S(0)tR71, N(R71)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, N(R71)C(0)OR71, N(R71)C(0)R71, -[alquilo Co-C8]-C(H)[C(0)R71]2 y -[alquilo C0-C8]-C(0)N(R56)R71; R61 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, -[alquilo C-|C8]-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo Ci-C8]-R66, acilo, -C(0)R63, -C(O), -[alquilo Ci-C8]-R63, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo opcionalmente sustituido, aralcoxicarbonilo opcionalmente sustituido, alquilsulfonilo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilalquilo, carboxialquilo, arilsulfonilo opcionalmente sustituido, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido, aminosulfonilo, monoalquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, N-heterociclilo opcionalmente sustituido, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(0)R78-N(R56)R57, -C(0)-N(R56)R78-C(0)OR56; cada R63 y R64 se eligen independientemente del grupo constituido por haloalquilo, cicloalquilo (opcionalmente sustituido con halo, ciano, alquilo o alcoxi), carbocicliio (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo y alcoxi) y heterociclilo (opcionalmente sustituido con alquilo, aralquilo o alcoxi); cada R65 se elige independientemente del grupo constituido por halo, alcoxi, ariloxi opcionalmente sustituido, aralcoxi opcionalmente sustituido, -S(0)t-R77 opcionalmente sustituido, acilamino, amino, monoalquilamino, dialquilamino, (trifenilmetil)amino, hidroxi, mercapto, < alquilsulfonamido; cada R66 se elige independientemente del grupo constituido por ciano, di(alcoxi)alquilo, carboxi, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo y dialquilaminocarbonilo; cada R67, R68, R69, R70, R72 y R75 son independientemente hidrógeno o alquilo; cada R71 es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo; R73 es hidrógeno, N02 o toluensulfonilo; cada R es independientemente hidrógeno, alquilo (opcionalmente sustituido por hidroxi), ciclopropilo, halo o haloalquilo; cada R76 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, -C(0)R77 o -S02R77; o R76 tomado conjuntamente con R56 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; o R76 tomado conjuntamente con R7 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; cada R7T es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R78 es un residuo de aminoácido; y PPA250 PPA250 o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los inhibidores de dicha óxido nítrico sintasa inducible. 2.- El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal se selecciona del grupo constituido por enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica, ulceración gástrica, ulceración duodenal, gastritis, ileítis, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable, íleo paralítico y diarrea. 3.- El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad inflamatoria intestinal. 4.- El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad de Crohn. 5. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es colitis ulcerosa. 6. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es gastritis. 7. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ileítis. 8. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ulceración péptica. 9.- El método de la reivindicación 8 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ulceración gástrica. 10. - El método de la reivindicación 8 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ulceración duodenal. 11. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es esofagitis. 12. - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad de reflujo gastroesofágico. 13 - El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es síndrome del colon irritable. 14.- El método de la reivindicación 1 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal se selecciona del grupo constituido por enfermedad de úlcera péptica y gastritis, en el que dicho método comprende además la administración al sujeto de una cantidad de compuesto antimicrobiano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que la cantidad del inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible y la cantidad del compuesto antimicrobiano constituyen conjuntamente una cantidad eficaz contra la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal. 15 - El método de la reivindicación 14 en el que el compuesto antimicrobiano comprende un compuesto antibiótico. 16. - El método de la reivindicación 14 en el que el compuesto antimicrobiano comprende al menos un compuesto seleccionado del grupo constituido por los siguientes: amoxicilina, claritromicina, rifabutina, subsalicilato de bismuto, metronidazol y tetraciclina. 17. - El método de la reivindicación 1 que comprende además la administración al sujeto de una cantidad de un compuesto antisecretor o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que la cantidad del inhibidor selectivo de la óxido nítrico sintasa inducible y la cantidad del compuesto antisecretor constituyen conjuntamente una cantidad eficaz contra la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal. 18. - El método de la reivindicación 17 en el que el compuesto antisecretor comprende un inhibidor de la bomba de protones. 19. - El método de la reivindicación 17 en el que el compuesto antisecretor comprende omeprazol. 20.- El método de la reivindicación 17 en el que el compuesto antisecretor comprende un antagonista de receptor H2. 21. - El método de la reivindicación 20 en el que el compuesto antisecretor comprende ranitidina. 22. - Un método para el tratamiento o prevención de trastornos o enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal que implican una superproducción de óxido nítrico (NO) mediante óxido nítrico sintasa inducible (¡NOS) e infección microbiana, en un sujeto necesitado de dicho tratamiento o prevención, en el que dicho método incluye la administración al sujeto de una cantidad de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, y una cantidad de un compuesto antimicrobiano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que la cantidad de inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible y la cantidad del compuesto antibiótico constituyen conjuntamente una cantidad eficaz contra dolencias y enfermedades del tracto gastrointestinal, en el que el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible se selecciona del grupo constituido por: un compuesto que tiene la Fórmula I: R1 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; R2 se selecciona del grupo constituido por H, halo y alquilo que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más halo; con la salvedad de que al menos uno de R1 o R2 contiene un halo; R7 se selecciona del grupo constituido por H e hidroxi; J se selecciona del grupo constituido por hidroxi, alcoxi y NR3R4 en el que: R3 se selecciona del grupo constituido por H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo constituido por H, y un anillo heterocíclico en el que al menos un eslabón del anillo es carbono y en el que de 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente entre oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede estar opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N- heteroarilamino-N-alquilamino, haloalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tío, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, aiquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquil amidosulfonilo, dialquil amidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquil monoaril amidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoílo, alquenoílo, aroílo, heteroaroílo, aralcanoílo, heteroaralcanoílo, haloalcanoílo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilendioxi, haloalquilendioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halo, haloalquilo, haloalcoxi, hidroxihaloalqulio, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidroxiheteroaralquilo, haloalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterocicliclo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la Fórmula II: en la que X se selecciona del grupo constituido por -S-, -S(O)- y -S(0)2-, 12 se selecciona del grupo constituido por alquilo Ci-C6l alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alcoxi CrC5-alqu¡lo Ci y alquiltio CrCs-alquilo Ci, en el que cada uno de estos grupos está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno, R18 se selecciona del grupo constituido por -OR24 y -N(R25)(R26), y R13 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en el que R18 y R13 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo, en el que si R13 es -C(R31)(R32)-, entonces R 4 es -C(0)-0-R33; en caso contrario, R14 es -H, R11, R15, R16 y R 7 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, halógeno, alquilo CrC6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 y alcoxi Ci-C5-alquilo Ci, R19 y R20 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C-6 y alcoxi Ci-C5-alquilo C1 , R21 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R34 y -C(0)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, -C(0)-0-R36 y -C(0)-S-R37; o R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en el que R21 y R22 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo, R23 es alquilo d, R24 se selecciona del grupo constituido por -H y alquilo C1-C6, en el que cuando R24 es alquilo Ci-C6, R24 está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R25 se selecciona del grupo constituido por -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo constituido por -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(0)-R38, -C(0)-0-R39 y -C(0)-S-R40; en el que cuando R25 y R26 son independientemente alquilo o alcoxi, R25 y R26 están independientemente opcionalmente sustituidos por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R38, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo constituido por -H y alquilo, en el que alquilo está opcionalmente sustituido por una o más fracciones seleccionadas del grupo constituido por cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, en el que cuando cualquiera de R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, D18 R19 D20 P21 P22 P23 P24 P25 P26 P27 P28 p29 p30 p31 p32 p33 R34 R35, R36, R37, R38, R39 y R40 es independientemente una fracción seleccionada del grupo constituido por alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la fracción está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto representado por la Fórmula III: en la que: R41 es H o metilo; y R42 es H o metilo; un compuesto de Fórmula IV: IV; un compuesto de Fórmula V: V en la que: R43 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R44 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R45 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto de Fórmula VI: VI en la que: R46 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C-1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula VII: VII en la que: R47 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R48 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo, alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; R49 es alquilo C1-C5 y alquilo C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halo; un compuesto de Fórmula VIH: VIH en la que: R50 es alquilo Ci-C5) con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula IX: IX en la que: R50 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo Ci-C5) con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R51 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; R53 se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, halo y alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; y R54 se selecciona del grupo constituido por halo y alquilo C Cs, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo; un compuesto de Fórmula X: X en la que: R55 es alquilo C1-C5, con dicho alquilo C1-C5 opcionalmente sustituido por halo o alcoxi, y dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halo. un compuesto que tiene la Fórmula X!: NH Diclorhidrato de 2S-amino-6-[(1-iminoet¡l)amino]-N-(1H-tetrazol 5-il) hexanamida hidratado Un compuesto de fórmula XII: en cicloalquilo C3 C4, hidroxialquilo C1-C4 y haloalquilo C1-C4; un compuesto de Fórmula XIII, Fórmula XIV o Fórmula XV: Fórmula XIII; -(C(Re8)R75)n—A Fórmula XIV; o Fórmula XV; en las que: A es -R0D, -OROD, C(0)N(R00)R0', P(0)[N(R°D)Ro/]2> N(R56)C(0)R57, -N(R76)C(0)OR56, -N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56, -S02NHC(0)R56, -NHS02R77, -S02NH(R56)H, -C(0)NHS02R77 y -CH=NOR5B; cada X, Yy Z son independientemente N o C(R19); cada U es N o C(R60), siempre que U sea N sólo cuando X es N y Z e Y son CR74; V es N(R59), S, O ó C(R59)H; Cada W es N o CH; Q se elige del grupo constituido por un enlace directo, -C(O)-, - O-, -C(=N-R56)-, S(0)t y -N(R61)-; m es cero o un entero de 1 a 4; n es cero o un entero de 1 a 3; q es cero o uno; r es cero o uno, siempre que cuando Q y V son heteroátomos, m, q y r no pueden ser todos cero; cuando A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -NÍR^CflDJOR57, . N(R56)R76, -N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (en la que t cero) o -NHS02R77, n, q y r no pueden ser todos cero; y cuando Q es un heteroátomo y A es -OR56, N(R56)C(0)R57, -N(R7 )C(0)OR57, -N(R56)R76, N(R71)C(0)N(R56)R71, -S(0)tR56 (cuando t es cero) o -NHS02R77, m y n no pueden ser los dos cero; t es cero, uno o dos; es un N-heterociclilo opcionaimente sustituido; es un carbociclilo opcionaimente sustituido o un N-heterociclilo opcionaimente sustituido; cada R56 y R57 se eligen independientemente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C20 opcionaimente sustituido, cicloalquilo opcionaimente sustituido, -[alquilo Co-C8]-R64, -[alquenilo C2-C8]-R64, -[alquinilo C2-C8]-R64, -[alquilo C2-Ce]-R65 (opcionaimente sustituido por hidroxi), -[C Ce]-R66 (opcionaimente sustituido por hidroxi), heterociclilo opcionaimente sustituido; o R y R junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; R58 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, haioalquilo, -[alquilo Ci-C8]-C(0)N(R56)R57, -[alquilo Ci-C8]-N(R56)R57, -[alquilo d-CeJ-R53, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo Ci-Ce]-R66 y heterociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo, alcoxi e imidazolilo); o cuando Q es -N(R58)- o un enlace directo a R58, R58 puede ser adicionalmente aminocarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo y -C(=NR73)-NH2; o -Q-R58 tomado conjuntamente representa -C(0)OH, - o por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquiio y cicloalquilo; siempre que cuando A es -R56 ó -OR56, R59 no puede ser hidrógeno, y cuando V es CH, R59 puede ser adicionalmente hidroxi; R60 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, arilo, aralquiio, haioalquilo, aralquiio opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, -OR71, -S(0)tR71, N(R71)R76, N(R71)C(0)N(R55)R71, N(R71)C(0)OR71, N(Rn)C(0)R , -[alquilo C0-C8]-C(H)[C(O)R71]2 y -[alquilo C0-C8]-C(0)N(R56)R71; R61 se elige del grupo constituido por hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, -[alquilo CrC8]-R63, -[alquilo C2-C8]-R65, -[alquilo C CsJ-R66, acilo, -C(0)R63, -C(O), -[alquilo d-C8]-R63, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo opcionalmente sustituido, aralcoxicarbonilo opcionalmente sustituido, alquilsulfonilo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alcoxicarbonilalquilo, carboxialquilo, arilsulfonilo opcionalmente sustituido, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo opcionalmente sustituido, aminosulfonilo, monoalquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, N-heterociclilo opcionalmente sustituido, -C(=NH)-N(CN)R56, -C(0)R78-N(R56)R57, -C(0)-N(R56)R78-C(0)OR56; cada R63 y R64 se eligen independientemente del grupo constituido por haloalquilo, cicloalquilo (opcionalmente sustituido con halo, ciano, alquilo o alcoxi), carbociclilo (opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo constituido por halo, alquilo y alcoxi) y heterociclilo (opcionalmente sustituido con alquilo, aralquilo o alcoxi); cada R65 se elige independientemente del grupo constituido por halo, alcoxi, ariloxi opcionalmente sustituido, aralcoxi opcionalmente sustituido, -S(0)t-R77 opcionalmente sustituido, acilamino, amino, monoalquilamino, dialquilamino, (trifenilmetil)amino, hidroxi, mercapto, alquilsulfonamido; cada R se elige independientemente del grupo constituido por ciano, di(alcoxi)alquilo, carboxi, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, monoalquilaminocarbonílo y dialquilaminocarbonilo; cada R67, R68, R69, R70, R72 y R75 son independientemente hidrógeno o alquilo; cada R71 es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo; R73 es hidrógeno, O2 o toluensulfonilo; cada R74 es independientemente hidrógeno, alquilo (opcionalmente sustituido por hidroxi), ciclopropilo, halo o haloalquilo; cada R76 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, -C(0)R77 o - o R76 tomado conjuntamente con R56 y el nitrógeno al que está unido es un N-heterociclilo opcionalmente sustituido; o R76 tomado conjuntamente con R71 y el nitrógeno al que está unido es un aralquilo opcionalmente sustituido; cada R77 es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo opcionalmente sustituido o aralquilo opcionalmente sustituido; y R78 es un residuo de aminoácido; y PPA250 o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los inhibidores de dicha óxido nítrico sintasa inducible. 23 - El método de la reivindicación 22 en el que el compuesto antimicrobiano comprende un compuesto antibiótico. 24. - El método de la reivindicación 22 en el que el compuesto antimicrobiano comprende al menos un compuesto seleccionado del grupo constituido por los siguientes: amoxicilina, claritromicina, rifabutina, subsalicilato de bismuto, metronidazol y tetraciclina. 25. - El método de la reivindicación 22 que comprende además la administración al sujeto de una cantidad de un compuesto antisecretor o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un profármaco del mismo, en el que la cantidad del inhibidor selectivo de la óxido nítrico sintasa inducible y la cantidad del compuesto antisecretor constituyen conjuntamente una cantidad eficaz contra la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal. 26. - El método de la reivindicación 25 en el que el compuesto antisecretor comprende un inhibidor de la bomba de protones. 27. - El método de la reivindicación 26 en el que el compuesto antisecretor comprende omeprazol. 28 - El método de la reivindicación 25 en el que el compuesto antisecretor comprende un antagonista de receptor H2. 29.- El método de la reivindicación 28 en el que el compuesto antisecretor comprende ranitidina. 30.- Él método de la reivindicación 22 en el que el compuesto antimicrobiano comprende una composición antimicrobiana doble que consiste en una combinación de dos compuestos seleccionados del grupo constituido por los siguientes: amoxicilina, claritromicina, rifabutina, subsalicilato de bismuto, metronidazol y tetraciclina. 31.- El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal se selecciona del grupo constituido por enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad de úlcera péptica, ulceración gástrica, ulceración duodenal, esofagitis, gastritis, ileítis, colitis, enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del colon irritable, íleo paralítico y diarrea. 32. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad inflamatoria intestinal. 33. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad de Crohn. 34.- El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es colitis ulcerosa. 35.- El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad de úlcera péptica. 36. - El método de la reivindicación 35 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ulceración gástrica. 37. - El método de la reivindicación 35 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ulceración duodenal. 38.- El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es gastritis. 39. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es ileítis. 40. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es colitis. 41. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es esofagitis. 42. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es enfermedad de reflujo gastroesofágico. 43. - El método de la reivindicación 22 en el que la dolencia o enfermedad del tracto gastrointestinal es síndrome del colon irritable.
MXPA05001255A 2002-08-02 2003-07-25 Metodos para el tratamiento y prevencion de condiciones gastrointestinales. MXPA05001255A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US40066002P 2002-08-02 2002-08-02
PCT/US2003/023324 WO2004012726A2 (en) 2002-08-02 2003-07-25 Methods for treatment and prevention of gastrointestinal conditions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA05001255A true MXPA05001255A (es) 2005-06-08

Family

ID=31495851

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05001255A MXPA05001255A (es) 2002-08-02 2003-07-25 Metodos para el tratamiento y prevencion de condiciones gastrointestinales.

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20040127569A1 (es)
EP (1) EP1528921A2 (es)
JP (1) JP2006500342A (es)
KR (1) KR20050059051A (es)
CN (1) CN1674885A (es)
AU (1) AU2003256810A1 (es)
BR (1) BR0313204A (es)
CA (1) CA2494284A1 (es)
IL (1) IL166083A0 (es)
MX (1) MXPA05001255A (es)
PL (1) PL375375A1 (es)
TW (1) TW200412940A (es)
WO (1) WO2004012726A2 (es)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8207188B2 (en) * 2006-04-07 2012-06-26 Michalis Nicolaou Treatment of diseases modulated by a H4 receptor agonist
IL277071B1 (en) 2018-03-08 2024-03-01 Incyte Corp Aminopyrizine diol compounds as PI3K–y inhibitors
US11046658B2 (en) 2018-07-02 2021-06-29 Incyte Corporation Aminopyrazine derivatives as PI3K-γ inhibitors

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4668651A (en) * 1985-09-05 1987-05-26 Union Carbide Corporation Transition metal complex catalyzed processes
US5132453A (en) * 1991-03-22 1992-07-21 Cornell Research Foundation, Inc. N6 -(hydrazinoiminomethyl)lysine and method of inhibiting nitric oxide formation in body
GB9127376D0 (en) * 1991-12-24 1992-02-19 Wellcome Found Amidino derivatives
PT751930E (pt) * 1994-03-24 2000-04-28 Searle & Co Derivados amidino uteis como inibidores da sintetase de oxido nitrico
US5684008A (en) * 1994-11-09 1997-11-04 G. D. Searle & Co. Aminotetrazole derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US5830917A (en) * 1995-09-11 1998-11-03 G. D. Searle & Co. L-N6 -(1-iminoethyl) lysine derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
DE19541146A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Schering Ag Imidazolderivate und deren Verwendung als Stickstoffmonoxid-Synthase-Inhibitoren
US5981511A (en) * 1996-03-06 1999-11-09 G.D. Searle & Co. Hydroxyamidino derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US5945408A (en) * 1996-03-06 1999-08-31 G.D. Searle & Co. Hydroxyanidino derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
MY117948A (en) * 1997-01-13 2004-08-30 Glaxo Group Ltd Nitride oxide synthase inhibitors.
JP4495257B2 (ja) * 1997-02-19 2010-06-30 バーレツクス ラボラトリーズ インコーポレーテツド Ｎｏｓ抑制剤としてのｎ−複素環誘導体
GB9811599D0 (en) * 1998-05-30 1998-07-29 Glaxo Group Ltd Nitric oxide synthase inhibitors
DE19836697A1 (de) * 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Substituierte 4-Amino-2-aryl-pyrimidine, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
AU2001247745B2 (en) * 2000-03-24 2006-08-31 Pharmacia Corporation Amidino compounds useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR030416A1 (es) * 2000-04-13 2003-08-20 Pharmacia Corp COMPUESTO DERIVADO HALOGENADO DEL ACIDO 2-AMINO-3,4 HEPTENOICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE Y SU USO EN LA FABRICACION DE UN MEDICAMENTO uTIL COMO INHIBIDOR DE LA OXIDO NITRICO SINTETASA
AR032318A1 (es) * 2000-04-13 2003-11-05 Pharmacia Corp Compuesto derivado halogenado del acido 2-amino-5,6 heptenoico; composicion farmaceutica que lo comprende y su uso en la fabricacion de un medicamento util como inhibidor de la oxido nitrico sintetasa
US6545170B2 (en) * 2000-04-13 2003-04-08 Pharmacia Corporation 2-amino-5, 6 heptenoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US6586747B1 (en) * 2000-06-23 2003-07-01 Ebco Industries, Ltd. Particle accelerator assembly with liquid-target holder
EP1295880A4 (en) * 2000-06-28 2004-05-06 Ssp Co Ltd IMIDAZOLE DERIVATIVES OR SALTS THEREOF, AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING DERIVATIVES OR SALTS
TWI290130B (en) * 2000-09-15 2007-11-21 Pharmacia Corp 2-Amino-2alkyl-5 heptenoic and heptynoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR031129A1 (es) * 2000-09-15 2003-09-10 Pharmacia Corp Derivados de los acidos 2-amino-2-alquil-4-hexenoico y -hexinoico utiles como inhibidores de oxido nitrico sintetasa

Also Published As

Publication number Publication date
KR20050059051A (ko) 2005-06-17
JP2006500342A (ja) 2006-01-05
IL166083A0 (en) 2006-01-15
WO2004012726A2 (en) 2004-02-12
CN1674885A (zh) 2005-09-28
EP1528921A2 (en) 2005-05-11
CA2494284A1 (en) 2004-02-12
BR0313204A (pt) 2005-06-28
PL375375A1 (en) 2005-11-28
US20040127569A1 (en) 2004-07-01
TW200412940A (en) 2004-08-01
WO2004012726A3 (en) 2004-06-03
AU2003256810A1 (en) 2004-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11034668B2 (en) Compounds for the treatment of HIV
AU2021215177A1 (en) Modulators of Sestrin-GATOR2 interaction and uses thereof
US7012098B2 (en) Inhibitors of inducible nitric oxide synthase for chemoprevention and treatment of cancers
US20050203082A1 (en) Combination therapy with inhibitors of inducible nitric oxide synthase and alkylating agents
EP1505972A2 (en) A selective inos inhibitor and a pde inhibitor in combination for the treatment of respiratory diseases
MXPA04002710A (es) Metodos de tratamiento neuroprotectores que usan inhibidores selectivos de oxido nitrico cintaza inducible.
MXPA05001255A (es) Metodos para el tratamiento y prevencion de condiciones gastrointestinales.
US20040077639A1 (en) Methods for the treatment of respiratory diseases and conditions using a selective iNOS inhibitor
US20030109522A1 (en) Ophthalmologic treatment methods using selective iNOS inhibitors
JP2005506986A5 (es)

Legal Events

Date Code Title Description
FA Abandonment or withdrawal