MXPA04002710A - Metodos de tratamiento neuroprotectores que usan inhibidores selectivos de oxido nitrico cintaza inducible. - Google Patents

Metodos de tratamiento neuroprotectores que usan inhibidores selectivos de oxido nitrico cintaza inducible.

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Abstract

Se describen metodos terapeuticos para la prevencion y tratamiento de condiciones neurodegenerativas, los metodos incluyen administrar a un sujeto que necesita el mismo una cantidad efectiva neuroprotectora de un inhibidor selectivo de oxido nitrico sintasa inducible.

Description

METODOS DE TRATAMIENTO NEUROPROTECTORES QUE USAN INHIBIDORES SELECTIVOS DE OXIDO NITRICO SINTASA INDUCIBLE ANTECEDENTES DE LA INVENCION La presente invención se refiere en general a métodos de tratamiento médico que usan inhibidores selectivos de la forma inducible de óxido nítrico sintasa (¡NOS) y muy particularmente a métodos novedosos útiles para proveer neuroprotección para ayudar en la prevención y tratamiento médico de condiciones y enfermedades neurodegenerativas. La neuroprotección se refiere a la protección de neuronas sanas pero en riesgo que están ubicadas en la vecindad de células muertas o moribundas después del final o remoción de un ataque primario. Los eventos destructivos primarios en el sistema nervioso central incluyen, por ejemplo, trauma físico tal como compresión o lesión por trituración, e hipoxia debido a isquemia llevada a cabo por un evento tal como un accidente vascular cerebral. Estos eventos destructivos primarios pueden ser el resultado de cualquier número de condiciones del sistema nervioso central, incluyendo condiciones de retina tales como glaucoma y retinopatía de etiología variada, así como enfermedades y condiciones del cerebro tales como accidente vascular cerebral, enfermedad de Alzheimer y esclerosis lateral amiotrófica (ALS). Una meta de los neurólogos, neurocirujanos y muy recientemente oftalmólogos por lo tanto ha sido aplicar el principio de neuroprotección en el tratamiento de dichas enfermedades y condiciones, para incrementar la supervivencia de neuronas restantes a mantener la función fisiológica. Una característica importante de estrategia neuroprotectora es que permite el tratamiento de una variedad de trastornos del sistema nervioso central para el cual la etiología específica es ya sea desconocida o difiere de un paciente a otro. El óxido nítrico (NO) es un gas de radicales libres y en el sistema nervioso actúa como un neurotransmisor. En el sistema nervioso central, el NO puede ser neurodestructivo y neuroprotector. Además de complicar el entendimiento de la función de NO en la neurodegeneración del sistema nervioso central, está el hallazgo de que el NO es producido por cualquiera de las diversas isoformas de la enzima óxido nítrico sintasa. La actividad de NO se descubrió inicialmente a principios de la década de 1980 cuando se encontró que la relajación vascular causada por acetilcolina depende de la presencia del endotelio vascular. El factor derivado del endotelio, llamado factor de relajamiento derivado del endotelio (EDRF), que es mediador de dicha relajación vascular, se sabe ahora que es NO que se genera en el endotelio vascular por una isoforma de NOS. La actividad de NO como un vasodilatador se ha conocido durante 100 años. Además, el NO es la especie activa derivada de los nitrovasodilatadores conocidos incluyendo nitrilo de amilo y trinitrato de glicerilo. El óxido nítrico también es un estimulador endógeno de guanílato ciclasa soluble y por lo tanto estimula la producción de monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). Cuando NOS es inhibida por N- monometilarginina (L-NMMA), la formación de GMPc se evita por completo. Además del relajamiento dependiente del endotelio, se sabe que el NO está implicado en un número de acciones biológicas incluyendo citotoxicidad de células fagocíticas y comunicación de célula a célula en el sistema nervioso central. La identificación de EDRF como NO coincidió con el descubrimiento de una vía bioquímica por la cual NO es sintetizado a partir del aminoácido L-arginina por la enzima NO sintasa. Existen por lo menos tres tipos de NO sintasa como sigue: (i) una enzima dependiente de Ca++/calmodulina constitutiva, localizada en el endotelio, que libera NO en respuesta a estimulación de un receptor o estimulación física. (ii) una enzima dependiente de Ca++/calmodulina constitutiva, localizada en el cerebro, que libera NO en respuesta a estimulación del receptor o estimulación física. (¡ii) una enzima independiente de Ca++, una proteína 130 kD, que es inducida después de la activación de músculo liso vascular, macrófagos, células endoteliales y un número de otras células por endotoxinas y citocinas. Una vez expresada esta óxido nítrico sintasa inducible (de aquí en adelante "¡NOS") genera NO continuamente durante largos periodos. Por lo tanto, el óxido nítrico producido por la familia de enzimas óxido nítrico sintasa posee una amplia gama de acciones fisiológicas y fisiopatológicas (Moneada et al, Pharmacol. Rev. 43: 109-142, 1991 ). El NO liberado por cada una de las dos enzimas constitutivas actúa como un mecanismo de transducción en que se basan varias respuestas fisiológicas. Por el contrario, el NO producido por la enzima inducible es una molécula citotóxica para células tumorales y microorganismos invasores. La NOS inducible está asociada también con la inflamación de osteoartritis. En el sistema nervioso central, la forma inducible de NOS parece estar relacionada con la neurodegeneración que caracteriza a varios trastornos humanos. De manera más específica, la iNOS no se expresa normalmente en el cerebro sino que puede ser inducida en astrocitos y microglia después de un ataque tal como infección viral o trauma. Por ejemplo, la isquemia cerebral induce actividad de ¡NOS en el cerebro. Los infartos cerebrales inducidos por isquemia en ratones knockout con ¡NOS son mucho menores en volumen que los infartos en controles de tipo silvestre (Shareef et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40: 2884-91 , 1999). La NOS inducible está implicada en la neurodegeneración asociada con enfermedades y condiciones del sistema nervioso central tales como accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Aizheimer y síndrome de inmunodeficiencia adquirida (Shareef et al). Además, la distribución de isoformas NOS es normal y las cabezas del nervio óptico glaucomatosas implican iNOS en la neurodegeneración de glaucoma (Shareef et al). Las normales parecen expresar tanto las formas constitutivas de NOS (tipo (i) como de tipo (ii)). El tipo (i) está presente en muchos astrocitos en todo el nervio óptico, y en su sistema vascular, y de manera similar juega un papel en la señalización y regulación intercelular de la vasodilatación y flujo sanguíneo. El tipo (ii) está localizado en el endotelio vascular en toda la vasculatura de la cabeza del nervio óptico y puede tener una función neuroprotectora además de ayudar a regular el flujo sanguíneo. Por el contrario, la ¡NOS no es normalmente expresada en la cabeza del nervio óptico, sino que aparece en el nervio óptico de ratas con presión intraocular moderadamente elevada crónica (IOP) inducida experimentalmente (Shareef et al). En ratas con IOP moderadamente elevada crónica, la aminoguanidina, un inhibidor de ¡NOS, bloquea la pérdida de células de ganglios retínales (Neufeld et al., Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 96: 9944-48, 1999). Además, la uveitis que se caracteriza por inflamación, puede implicar actividad incrementada de ¡NOS estimulada por el factor de necrosis tumoral -a (TNF- ) de citocina). Por lo tanto, No producido por ¡NOS puede jugar un papel en condiciones neurodegenerativas del sistema nervioso central que tiene etiología variada. Las siguientes publicaciones individuales describen compuestos que inhiben la síntesis de óxido nítrico y preferiblemente inhiben la isoforma inducible de óxido nítrico sintasa: Solicitud de patente del PCT No. WO 96/35677. Solicitud de patente del PCT No. WO 96/33175. Solicitud de patente del PCT No. WO 96/15 20. Solicitud de patente del PCT No. WO 95/11014.
Solicitud de patente del PCT No. WO 95/11231. Solicitud de patente del PCT No. WO 99/46240. Solicitud de patente del PCT No. WO 95/24382. Solicitud de patente del PCT No. WO 94/12165. Solicitud de patente del PCT No. WO 94/14780. Solicitud de patente del PCT No. WO 93/13055. Solicitud de patente del PCT No. WO 99/62875. Patente europea No. EP0446699A1. Patente de E.U.A No. 5, 32,453. Patente de E.U.A No. 5,684,008. Patente de E.U.A No. 5,830,917. Patente de E.U.A No. 5,854,251. Patente de E.U.A No. 5,863,931. Patente de E.U.A No. 5,919,787. Patente de E.U.A No. 5,945,408. Patente de E.U.A No. 5,981 ,51 1. La solicitud de patente del PCT No. WO 95/25717 describe ciertos derivados de amidino como útiles en la inhibición de óxido nítrico sintasa inducible. La solicitud de patente del PCT No. WO 99/62875 describe compuestos de amidino adicionales como útiles para inhibir la óxido nítrico sintasa inducible. Contra este antecedente, se ha desarrollado un interés cada vez mayor en el hallazgo de agentes neuroprotectores novedosos y métodos para el tratamiento y prevención de varias condiciones neurodegenerativas relacionadas con un exceso de actividad de ¡NOS, y además para mejorar la eficacia de tratamiento global con toxicidad mínima y efectos colaterales adversos. Aunque los hallazgos básicos referentes a la bioquímica y funciones de ¡NOs los implican en varias condiciones incluyendo condiciones neurodegenerativas entre muchas otras, los métodos neuroprotectores conocidos para tratar y prevenir estas condiciones actualmente no incluyen métodos de terapia que usan inhibidores selectivos de ¡NOS. Por lo tanto sería ventajoso encontrar y describir nuevos métodos de terapia neuroprotectora que usen inhibidores selectivos de ¡NOS para tratar condiciones neurodegenerativas que implican un exceso de actividad de ¡NOS.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está dirigida a un método para prevenir o tratar una condición neurodegenerativa en un sujeto que necesita dicho tratamiento o prevención, el método comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva neuroprotectora de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o profármaco del mismo, en donde el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible se selecciona del grupo que consiste de: un compuesto que tiene la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R2 se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más halógenos; con la condición de que por lo menos uno de R1 o R2 contenga un halógeno; R7 se selecciona del grupo que consiste de H e hidroxi; J se selecciona del grupo que consiste de hidroxi, alcoxi y NR3R4 en donde; R3 se selecciona del grupo que consiste de H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo que consiste de H, y un anillo heterocíclico en el cual por lo menos un miembro del anillo es carbono y en el cual 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede ser opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, halogenoalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tío, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquilamidosulfonilo, dialquilamidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquilmonoarilamidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoilo, alquenoilo, aroilo, heteroaroilo, aralcanoilo, heteroaralcanoilo, halogenoalcanoilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilenodioxi, halogenoalquilenodioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halógeno, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, hidroxihalogenoalquilo, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidoxiheteroaralquilo, halogenoalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterociclilo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde X se selecciona del grupo que consiste de -S-, -S(O)-, y -S(O)2-. Preferiblemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo que consiste de alquilo de C C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alcoxi de d-Cs-alquilo de Ci y alquiltio de CrCs-alquilo de Ci en donde cada uno de estos grupos es opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Preferiblemente, R12 es alquilo de CrCs opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Con respecto a R13 y R 8, R18 se selecciona del grupo que consiste de -OR24 y -N(R25)(R26), y R13 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-R27, -C(O)-O-R28 y -C(O)-S-R29; o R 8 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en donde R18 y R 3 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R3 )(R32)-, en donde R 8 y R 3 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. Si R es -C(R )(R )-, entonces R14 es -C(0)-0-R33; de otra manera R 4 es -H. R1 , R15, R 6 y R17 independientemente seleccionados del grupo que consiste de -H, halógeno, alquilo de CrC6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de C1-C5-alquilo de R19 y R20 independientemente se seleccionan del grupo que consiste de -H, alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de CrCs-alquilo de C1. Con respecto a R21 y R22, R21 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -CÍOJ-O-R34 y -C(O)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-O-R36 y -C(O)-S-R37; o R21 es -O- y R22 es -C(O)-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. R23 es alquilo de C1. R24 se selecciona del grupo que consiste de -H y alquilo de CrC6, en donde cuando R24 es alquilo de C-i-Ce, R24 es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Con respecto a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo que consiste de -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(O)-S-R40; en donde cuando R25 y R26 independientemente son alquilo o alcoxi, R25 y R26 independientemente son opcionalmente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroerilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R , R¿ó, RM, R , R , RJ\ Rja, RJ9 y R se seleccionan independientemente del grupo que consiste de -H y alquilo, en donde alquilo es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R11, R12, t- 8 p29 j , , R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 independientemente es una porción seleccionada del grupo que consiste de alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la porción es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes 0 seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto está representado por la fórmula III III sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R4 es H o metilo; y R42 es H o metilo; un compuesto de la fórmula IV IV o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un compuesto de la fórmula V: V o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R43 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R44 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R45 es alquilo de C1-C5 o alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VI: VI o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R46 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VII VII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R47 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R48 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R es alquilo de C C5 o alquilo de C C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VIII: VIII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R50 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; un compuestos de la fórmula IX o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R50 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C-1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R51 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R52 es alquilo de C-1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R53 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; y R54 se selecciona del grupo que consiste de halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; y un compuesto de la fórmula X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R55 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos. La condición neurodegenerativa es, por ejemplo, accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, epilepsia, demencia de síndrome de inmunodeficiencia adquirida, isquemia cerebral incluyendo isquemia cerebral focal, o trauma físico tal como lesión por trituración o compresión en el sistema nervioso central. Los métodos anteriormente descritos por lo tanto son útiles en el tratamiento y prevención de condiciones neurodegenerativas que incluyen la neurodegeneración de accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, epilepsia, demencia de síndrome de inmunodeficiencia adquirida, isquemia cerebral incluyendo isquemia cerebral focal, o trauma físico tal como lesión por trituración o compresión.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La siguiente descripción detallada se provee para ayudar a los expertos en la técnica a poner en práctica la presente invención. Sin embargo, esta descripción detallada no debe considerarse de ninguna manera limitante de la presente invención, ya que los expertos en la técnica pueden hacer modificaciones y variaciones en las modalidades ilustrativas que aquí se describen sin apartarse del alcance de las reivindicaciones anexas. El contenido de cada una de las referencias primarias citadas aquí, incluyendo el contenido de las referencias citadas dentro de las referencias primarias, se incorpora aquí por referencia en su totalidad. La presente invención abarca métodos terapéuticos usando ¡NOS selectivos novedosos para tratar o prevenir condiciones neurodegenerativas, incluyendo métodos terapéuticos de uso en medicina para prevenir y tratar la neurodegeneración de accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, epilepsia, demencia de síndrome de inmunodeficiencia adquirida, isquemia cerebral incluyendo isquemia cerebral focal, o trauma físico tal como lesión por trituración o compresión en el sistema nervioso central, incluyendo una lesión por trituración o compresión del cerebro, médula espinal, nervios o retina. Los métodos terapéuticos incluyen la administración a un sujeto que necesita los mismos de una cantidad efectiva neuroprotectora de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible que tiene una fórmula seleccionada de las fórmulas l-X. a. Definiciones Las siguientes definiciones se proveen para ayudar a entender la descripción detallada de la presente invención: el término "alquilo", solo o en combinación, significa un radical alquilo acíclico, lineal o ramificado, que contiene preferiblemente de 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono y muy preferiblemente que contiene de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. "Alquilo" también abarca radicales alquilo cíclicos que contienen de 3 a aproximadamente 7 átomos de carbono, preferiblemente de 3 a 5 átomos de carbono. Dichos radicales alquilo pueden ser opcionalmente sustituido con grupos como se define más adelante. Ejemplos de dichos radicales incluyen metilo, etilo, cloroetilo, hidroxietilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, cianobutilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, aminopentilo, iso-amilo, hexilo, octilo y similares. El término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo acíclico insaturado, lineal o ramificado, que contiene por lo menos un doble enlace. Dichos radicales contienen de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferiblemente de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono, muy preferiblemente de 2 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Dichos radicales alquenilo pueden ser opcionalmente sustituidos con grupos como se define más adelante. Ejemplos de radicales alquenilo adecuados incluyen propenilo, 2-cloropropilenilo, buten-1-¡lo, isobutenilo, penten-1-ilo, 2-metilbuten-1-ilo, 3-metilbuten-1-ilo, hexen-1-ilo, 3-hidroxihexen-1-ilo, hepten-1-ilo, y octen-1-ilo, y similares. El término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo acíclico insaturado, lineal o ramificado, que contiene por lo menos uno o más triples enlace, dichos radicales contienen de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferiblemente de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono, muy preferiblemente de 2 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Dichos radicales alquinilo pueden ser opcionalmente sustituidos con grupos como se define más adelante. Ejemplos de radicales alquinilo adecuados incluyen radicales etinilo, propinilo, hidroxipropinilo, butin-1-ilo, butin-2-ilo, pentin-1-ilo, pentin-2-ilo, 4-metoxipentin-2-ilo, 3-metilbutin-1 -ilo, hexin-1 -ilo, hexin-2-ilo, hexin-3-ilo, 3,3-dimetilbutin-1 -ilo y similares. El término "alcoxi" abarca radicales que contienen oxi lineales o ramificados que tienen porciones alquilo de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono, tal como un radical metoxi. El término "alcoxialquilo" también abarca radicales alquilo que tienen uno o más radicales alcoxi unidos al radical alquilo, es decir, forman radicales monoalcoxialquilo y dialcoxialquilo. Ejemplos de dichos radicales incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y ter-butoxi alquilos. Los radicales "alcoxi" pueden ser además sustituidos con uno o más átomos de halógeno, tales como flúor, cloro o bromo, para proveer radicales "halogenoalcoxi". Ejemplos de dichos radicales incluyen fluorometoxi, clorometoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoroetoxi, fluoroetoxi, tetrafluoroetoxi, pentafluoroetoxi y fluoropropoxi. El término "alquiltio" abarca radicales que contienen un radical alquilo lineal o ramificado, de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono, unidos a un átomo de azufre divalente. Un ejemplo de "alquiltio inferior" es metiltio (CH3-S-). El término "alquiltioalquilo" abarca radicales alquiltio, unidos a un grupo alquilo. Ejemplos de dichos radicales incluyen metiltiometilo.
El término "halógeno" significa halógenos tales como átomos de flúor, cloro, bromo o yodo. El término "heterociclilo" significa un carbociclo de un solo anillo o de anillos múltiples saturado o insaturado en donde uno o más átomos de carbono es remplazado por N, S, P o O. Esto incluye, por ejemplo las siguientes estructuras: en donde Z, Z1, Z2 o Z3 es C, S, P, O o N, con la condición de que uno de Z, Z1, Z2 o Z3 sea distinto al carbono, pero no sea O o S cuando se una a otro átomo Z por un doble enlace o cuando se una a otro átomo O o S. Además, los sustituyentes opcionales se entiende que se han de unir a Z, Z1 , Z2 o Z3 únicamente cuando cada uno sea C. El término "heterociclilo" también incluye estructuras de anillo completamente saturadas tales como piperazinilo, dioxanilo, tetrahidrofuranilo, oxiranilo, aziridinilo, morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tiazolidinilo y otros. El término "heterociclilo" también incluye estructuras de anillo parcialmente saturadas tales como dihidrofuranilo, pirazolinilo, imidazolinilo, pirrolinilo, cromanilo, dihidrotiofenilo y otras. El término "heteroarilo" significa un heterociclo completamente insaturado. Ya sea "heterociclo" o "heteroarilo", el punto de unión a la molécula de interés puede ser en el heteroátomo o de otra manera dentro del anillo. El término "cicloalquilo" significa un carbociclo de un solo anillo o de anillos múltiples en donde cada anillo contiene de tres a aproximadamente siete átomos de carbono, preferiblemente de tres a aproximadamente cinco átomos de carbono. Ejemplos incluyen radicales tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloalquenilo y cicloheptilo. El término "cicloalquilo" además comprende sistemas espiro en donde el anillo de cicloalquilo tiene un átomo de carbono de anillo en común con el anillo heterocíclico de siete miembros de la benzotiepina. El término "oxo" significa un oxígeno doblemente ligado El término "alcoxi" significa un radical que comprende un radical alquilo que está unido a un átomo de oxígeno, tal como un radical metoxi. Los radicales alcoxi más preferidos son radicales "alcoxi inferior" que tienen de uno a aproximadamente diez átomos de carbono. Los radicales alcoxi aún más preferidos tiene de uno a aproximadamente seis átomos de carbono. Ejemplos de dichos radicales incluyen metoxi, etoxi, propoxi,, isopropoxi, butoxi y ter-butoxi. El término "arilo" significa un carbociclo de un solo anillo o anillos múltiples completamente insaturado, incluyendo pero sin limitarse a fenilo, naftilo o antracenilo sustituido o no sustituido. La frase "opcionalmente sustituido" significa que el radical indicado puede, pero no necesariamente sustituir al hidrógeno. Por lo tanto, la frase "opcionalmente sustituido por uno o más" significa que si se hace una sustitución en la porción indicada, también se contempla más de una sustitución. A este respecto, si existe más de un sustituyente opcional, cualquier sustituyente puede ser seleccionado, o una combinación de sustituyentes pueden ser seleccionados, o más de uno del mismo sustituyente puede ser seleccionado. A manera de ejemplo, y sin limitación, la frase "alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por uno o más halógenos o alcoxi" debe considerarse para significar que, por ejemplo, el metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo pueden tener en todas las posiciones sustituibles: hidrógeno, flúor, cloro u otro halógeno, metoxi, etoxi, propoxi, iso butoxi, íer-butoxi, pentoxi u otros radicales alcoxi, y combinaciones de los mismos. Ejemplos no limitantes incluyen: propilo, /so-propilo, metoxipropilo, fluorometilo, fluoropropilo, 1 -fluoro-metoximetilo y similares. Cuando un compuesto se describe tanto por una estructura como un nombre, se pretende que el nombre corresponda a la estructura indicada, y de manera similar se pretende que la estructura corresponda con el nombre indicado. El término "sujeto" como se usa aquí, se refiere a un animal, en una modalidad un mamífero, y en una modalidad ilustrativa particularmente un ser humano, que es el objeto de tratamiento, observación o experimento. Los términos "dosis" y "tratamiento" como se usa aquí se refieren a cualquier procedimiento, acción, aplicación, terapia o similar, en donde un sujeto, particularmente un ser humano, recibe ayuda médica con el objeto de mejorar la condición del sujeto, ya sea directamente o indirectamente.
El término "compuesto terapéutico" como se usa aquí se refiere a un compuesto útil en la profilaxis o tratamiento de una condición neurodegenerativa. El término "terapia de combinación" significa la administración de dos o más compuestos terapéuticos para tratar una condición terapéutica o trastorno descrito en la presente descripción, por ejemplo glaucoma, retinitis, retinopatía, uveitis y trastornos oftalmológicos caracterizados por lo menos en parte por neurodegeneración retinal. Dicha administración abarca la coadministración de estos agentes terapéuticos de una manera sustancialmente simultánea, tal como en una sola cápsula que tiene una relación fija de ingredientes activos o en cápsulas múltiples separadas para cada ingrediente activo. Además, dicha administración también comprende el uso de cada tipo de agente terapéutico de una manera secuencial. En cualquier caso, el régimen de tratamiento proveerá efectos benéficos de la combinación de fármacos en el tratamiento de las condiciones o trastornos que aquí se describen. El término "combinación terapéutica" como se usa aquí se refiere a la combinación de los dos o más compuestos terapéuticos y a cualesquiera vehículos farmacéuticamente aceptables usados para proveer formas de dosis que produzcan un efecto benéfico de cada compuesto terapéutico en el sujeto en el tiempo deseado, ya sea que los compuestos terapéuticos se administren sustancialmente en forma simultánea o secuencialmente. El término "terapéuticamente efectivo" como se usa aquí se refiere a una característica de una cantidad de un compuesto terapéutico, una característica de cantidades de compuestos terapéuticos combinados en terapia de combinación. La cantidad o cantidades combinadas logran la meta de prevenir, evitar, reducir o eliminar la condición oftalmológica. Los términos "óxido nítrico sintasa inducible" y "¡NOS" como se usa de manera intercambiable aquí se refieren a una isoforma inducible de la enzima óxido nítrico sintasa independiente de Ca*2. Los términos "inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible", "inhibidor de ¡NOS selectivo" e "inhibidor selectivo de ¡NOS" como se usa de manera intercambiable aquí se refieren a un compuesto terapéutico que inhibe selectivamente la isoforma inducible de la enzima óxido nítrico sintasa independiente de Ca+2. Un inhibidor selectivo de ¡NOS se define como que produce la inhibición selectiva de iNOS en comparación con NOS endotelial o NOS neuronal de tal manera que la administración in vivo da por resultado la eficacia (ED50 menor que 100 mg/kg, pero preferiblemente menor que 10 mg/kg en un modelo de endotoxina de roedor) y selectividad de por lo menos 20 veces, pero preferiblemente 100 veces o mayor con respecto a eNOS como se mide por la elevación en la presión sanguínea arterial y selectividad de por lo menos 20 veces, pero preferiblemente 100 veces o mayor con respecto a nNOS como se mide por reducciones en el tránsito gastrointestinal o erección penil. El término "profármaco" se refiere a un compuesto que es un precursor de fármaco que, después de administrarse a un sujeto y de la absorción subsecuente, es convertido a una especie activa in vivo por medio de algún proceso, tal como un proceso metabólico. Otros productos del proceso de conversión son fácilmente dispuestos por el cuerpo. Los profármacos más preferidos son aquellos que implican un proceso de conversión que produce productos que son generalmente aceptados como seguros. El término "neurodegeneración" se refiere a un proceso de destrucción de células que resulta de eventos destructivos primarios, y también mecanismos destructivos secundarios, retardados y progresivos que son inducidos por las células debido a la aparición del evento destructivo primario. Los eventos destructivos primarios incluyen procesos de enfermedad o lesión física o ataque físico, incluyendo accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, epilepsia, demencia de síndrome de inmunodeficiencia adquirida, isquemia cerebral incluyendo isquemia cerebral focal y trauma físico tal como lesión por trituración o compresión en el sistema nervioso central, incluyendo una lesión por trituración o compresión del cerebro, médula espinal, nervios o retina, o cualquier lesión o ataque agudo que produzca neurodegeneración que implique niveles elevados de NO. Los mecanismos destructivos secundarios incluyen cualquier mecanismo que conduzca a la generación y liberación de moléculas neurotóxicas incluyendo NO, incluyendo apoptosis, agotamiento de almacenamiento de energía celular debido a cambios en la permeabilidad de la membrana mitocondrial, liberación o falla para reabsorber exceso de glutamato, lesión por reperfusión y actividad de citocinas e inflamación. El término "condición neurodegenerativa" se refiere a un evento destructivo primario o mecanismo destructivo secundario que da por resultado la neurodegeneración. El término "neuroprotección" se refiere a una estrategia terapéutica para hacer más lenta o prevenir la pérdida irreversible de neuronas debido a la neurodegeneración después de un evento destructivo primario, ya sea que la pérdida neurodegenerativa se deba a mecanismos de enfermedad asociados con el evento destructivo primario o debido a mecanismos destructivos secundarios. El término "efectivo para neuroprotección" como se usa aquí se refiere a una característica de una cantidad de un compuesto terapéutico, o una característica de cantidades de compuestos terapéuticos combinados en terapia de combinación. La cantidad o cantidades combinadas logran la meta de prevenir, evitar, reducir o eliminar la neurodegeneración. En un ejemplo ilustrativo de un inhibidor selectivo de ¡NOS, el tratamiento es facilitado a través de los compuestos que tienen la fórmula I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R2 se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más halógenos; con la condición de que por lo menos uno de R1 o R2 contenga un halógeno; R7 se selecciona del grupo que consiste de H e hidroxi; J se selecciona del grupo que consiste de hidroxi, alcoxi y NR3R4 en donde; R3 se selecciona del grupo que consiste de H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo que consiste de H, y un anillo heterocíclico en el cual por lo menos un miembro del anillo es carbono y en el cual 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede ser opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, halogenoalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquilamidosulfonilo, dialquilamidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquilmonoarilamidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoilo, alquenoilo, aroilo, heteroaroilo, aralcanoilo, heteroaralcanoilo, halogenoalcanoilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilenodioxi, halogenoalquilenodioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halógeno, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, hidroxihalogenoalquilo, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidoxiheteroaralquilo, halogenoalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterociclilo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxicianocicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; En otra modalidad, la presente invención provee tratamiento utilizando un compuesto o una sal del mismo, el compuesto teniendo una estructura correspondiente a la fórmula II en la estructura de la fórmula II, X se selecciona del grupo que consiste de -S-, -S(O)-, y -S(0)2-. Preferiblemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo que consiste de alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alcoxi de Ci-Cs-alquilo de Ci y alquiltio de C-i-C5-alquílo de C en donde cada uno de estos grupos es opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Preferiblemente, R12 es alquilo de C C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Con respecto a R 3 y R18, R18 se selecciona del grupo que consiste de -OR24 y -N(R25)(R26), y R 3 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en donde R18 y R13 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R31)(R32)-, en donde R18 y R13 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. S¡ R13 es -C(R31)(R32)-, entonces R 4 es -C(0)-0-R33; de otra manera R14 es -H. R11, R15, R 6 y R 7 independientemente seleccionados del grupo que consiste de -H, halógeno, alquilo de CrC6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de CrCs- alquilo de C-\ . R 9 y R20 independientemente se seleccionan del grupo que consiste de -H, alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de Ci-C5-alquilo de d . Con respecto a R21 y R22, R21 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-O-R34 y -C(O)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-O-R36 y -C(O)-S-R37; o R21 es -O- y R22 es -C(O)-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R2 es -C(O)-, y R22 es -O-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. R23 es alquilo de C-i. R24 se selecciona del grupo que consiste de -H y alquilo de C1-C6, en donde cuando R24 es alquilo de C1-C6, R24 es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Con respecto a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo que consiste de -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(O)-S-R40; en donde cuando R25 y R26 independientemente son alquilo o alcoxi, R25 y R26 independientemente son opcionalmente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroerilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31 , R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de -H y alquilo, en donde alquilo es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R 1, R12, p13 pU p15 R 16 p17 p18 p19 p20 p21 p22 p23 p24 D25 D26 D27 p28 p29 R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39 y R40 independientemente es una porción seleccionada del grupo que consiste de alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la porción es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno; En un compuesto preferido, R18 es -OH. Cuando R18 es -OH, preferiblemente X es S. En un compuesto adicional, R 1, R15, R16, R17, R 9 y R20 independientemente se seleccionan del grupo que consiste de -H y alquilo de d-C3. Preferiblemente R15, R16, R17, R19 y R20 son cada uno -H. R23 puede ser una variedad de grupos, por ejemplo fluorometilo o metilo. R11 puede ser alquilo de C C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH y halógeno; preferiblemente R11 es alquilo de Ci opcionalmente sustituido con halógeno; muy preferiblemente R 1 se selecciona del grupo que consiste de fluorometilo, hidroximetilo y metilo. En un compuesto importante, R 1 puede ser metilo. Alternativamente, R11 puede ser fluorometilo. En otra modalidad alternativa, R11 puede ser hidroximetilo. En otro compuesto, R 2 es alquilo de CrC6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. En un compuesto preferido, R12 es alquilo de Ci opcionalmente sustituido con halógeno. Por ejemplo, R 2 puede ser metilo. Alternativamente, R 2 puede ser fluorometilo. En otro ejemplo, R12 puede ser hidroximetilo. En otro ejemplo, R 2 puede ser metoximetilo.
En este compuesto ilustrativo, se prefiere que R13, R14, R21 y R22 sea cada uno -H. En este compuesto, se prefiere además que R11, R15, R16, R 7, R19 y R20 independientemente se seleccionan del grupo que consiste de -H y alquilo de d-C3. Preferiblemente R15, R 6, R17, R19 y R20 es cada uno -H. En este compuesto adicional, R23 puede ser, por ejemplo, fluorometilo, o en otro ejemplo R23 puede ser metilo. En compuestos preferidos de estos compuestos, R12 es alquilo de C Ce opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Preferiblemente R12 es alquilo de Ci opcionalmente sustituido con halógeno. En un ejemplo, R12 es fluorometilo. En otro ejemplo R 2 es metilo. Alternativamente R12 puede ser hidroximetilo. En otra alternativa, R12 puede ser metoximetilo. Cuando R23 es metilo, R 1 puede ser, por ejemplo, -H o alquilo de CrC6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH y halógeno. En un compuesto preferido R 1 es -H. Alternativamente R11 puede ser alquilo de C1-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH y halógeno. Por ejemplo R11 puede ser metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, t-butilo, un isómero de pentilo, o un isómero de hexilo. por ejemplo, R puede ser etilo. Alternativamente, R11 puede ser alquilo de Ci opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH y halógeno; por ejemplo R11 puede ser metilo. Alternativamente, R11 puede ser fluorometilo. En otra alternativa, R1 puede ser hidroximetilo. En otro compuesto R18 puede ser -OR24. R24 puede ser como se definió antes. Preferiblemente R24 es alquilo de C1-C6 opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo; muy preferiblemente R24 es alquilo de C1 -C3; y muy preferiblemente aún R24 es metilo. En otro ejemplo del compuesto II, R18 puede ser -N(R25)(R26), en donde R25 y R26 son como se definió antes. En otro compuesto más, R18 puede ser -N(R30)-, y R13 puede ser -C(O)-, en donde R18 y R 3 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. En otro ejemplo más, R18 puede ser -O-, y R13 puede ser -C(R31)(R32)-, en donde R18 y R13 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. En un compuesto de la fórmula II, R21 se puede seleccionar del grupo que consiste de -OH, -C(O)-0-R34, y -C(0)-S-R35. Preferi lemente, R21 es -OH. En un ejemplo adicional, R22 es -H cuando R21 es -OH. Sin embargo, el presente ejemplo también provee ejemplos útiles de la fórmula II en la cual R21 es -O-, y R22 es -C(O)-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. En otro compuesto útil, R21 es -C(O), y R22 es -O-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. Alternativamente, R22 se puede seleccionar del grupo que consiste de -OH, -C(O)-O-R26, y -C(O)-S-R37. En esta alternativa, R21 es preferiblemente -H. En otro inhibidor de ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención, un compuesto está representado por la fórmula III: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R41 es H o metilo; y R42 es H o metilo. Otro inhibidor de ¡NOS útil en la práctica de la presente invención está representado por un compuesto de la fórmula IV o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro inhibidor de ¡NOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención está representado por la fórmula V: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R43 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R44 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R45 es alquilo de C1-C5 o alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos. Un inhibidor de ¡NOS selectivo ilustrativo está representado por la fórmula VI VI o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es alquilo de C-1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos. Otro inhibidor de iNOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención está representado por la fórmula VI I VII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R47 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R48 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de CrC5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R49 es alquilo de CrC5 o alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; Otro inhibidor de iNOS selectivo ilustrativo útil en la presente invención está representado por la fórmula VIII VIII o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R50 es alquilo de C-1-C5, dicho alquilo de C C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos. Otro inhibidor de ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención está representado por un compuesto de la fórmula IX o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R50 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C^Cs opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R51 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R52 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R53 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; y R54 se selecciona del grupo que consiste de halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos. Otro inhibidor de ¡NOS selectivo útil en la práctica de la presente invención está representado por un compuesto de la fórmula X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R55 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos. b. Ejemplos ilustrativos Los siguientes ejemplos de síntesis se muestran para propósitos ilustrativos y de ninguna manera pretenden limitar el alcance de la invención. En donde los isómeros no son definidos, la utilización de métodos de cromatografía apropiados darán isómeros individuales.
EJEMPLO A Diclorhidrato de ácido (2S,5E)-2-amino-6-fluoro-7-f(1-iminoetil)amino1-5- heptenoico monohidratado Ejemplo-A-1 ) Cloruro de trimetilsililo (107.8 g, 1.00 moles) se añadió gota a gota a una solución enfriada de ácido L-glutámico (30.00 g, 0.20 moles) en 300 mi de metanol a 0°C. La solución incolora, clara, resultante se dejó agitar a temperatura ambiente. Después de 18 hr, el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. La reacción se enfrió después a 0°C, se añadió trietilamina (134 g, 1.33 moles), y se formó un precipitado blanco. Se añadió dicarbonato de di-ter-butilo (49 g, 0.23 moles), y la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 3 hr el solvente se removió, y se añadieron 700 mi de éter dietílico. La solución se filtró, y la torta de filtro se enjuagó con 500 mi adicionales de éter dietílico. El filtrado se concentró a 60.8 g (>95%) de un aceite color canela que se llevó a cabo en el siguiente paso sin purificación adicional. EMCL m/z = 298. 1 [M+Na]+. HR S calculado para Ci2H2iN06: 276.1447 [M+H+] encontrado: 276.1462. 1H RMN (CDCI3) ? 145 (s, 9H), 1.95 (m, 1 H), 2.50 (m, 1 H), 2.40 (m, 2H), 3.69 (s. 3H), 3.75 (s. 3H), 4.32 (m, 1 H), 5.15 (m, 1 H).
E¡emplo-A-2) Una solución del producto crudo del ejemplo-A- 1 (60 g, 0.22 moles) en 300 mi de acetonitrilo a temperatura ambiente se añadió 4-dimetilaminopiridina (5.3 g, 0.44 moles) y dicarbonato de di-ter-butilo (79.2 g, 0.36 moles). La mezcla resultante se agitó durante 2 días a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 25%) mostró que la mayor parte del material de partida se consumió. El solvente se removió bajo vacío dando 85 g de un aceite rojo. El material crudo se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :10 de acetato de etilo en hexano para dar 66.4 g (81 %) del producto de di-Boc deseado como un sólido amarillo pálido. EMCL: m/z = 398.2 [M+Na]+. HRMS calculado para C17H29N08: 398.1791 [M+Na]+, encontrado: 398.1790. 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s, 18H), 2.19 (m, 1 H), 2.41 (m, 2H), 2.46 (m, 1 H), 3.66 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 4.91 (dd, 1 H).
Eiemplo-A-3) Una solución de DIBAL (64 mi de una solución 1.0 M en hexanos, 63.9 mmoles) se añadió gota a gota a una solución del ejemplo-A-2 (20 g, 53.3 mmoles) en 400 mi de éter dietílico anhidro a -78°C durante 30 min. Después de 30 min adicionales a -78 °C, la solución se extinguió con agua (12 mi, 666 mmoles) y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla turbia se diluyó con 350 mi de acetato de etilo, se secó sobre MgS04 y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró a un aceite amarillo. El material crudo, 18.9 g de aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :4 acetato de etilo en hexano para dar 13.8 g (75%) del producto de aldehido deseado como un aceite claro.
EMCL: m/z = 368. 2 [M+Naf 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s. 18H), 2.19 (m, 1 H), 2.41 (m, 2H), 2.46 (m, 1 H), 3.70 (s, 3H), 4.91 (dd, 1 H), 9.8 (s, 1 H).
Eiemplo-A-4) A una solución fría (-78°C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo (4.67 g, 19.3 mmoles) en 20 mi de THF se añadió n-butil-litio (10.9 mi de 1.6 M en hexano, 17.5 mmoles). Esta mezcla se agitó a -78°C durante 20 minutos produciendo una solución amarillo brillante. Una solución del producto del ejemplo-A-3 (6.0 g, 17.5 mmoles) en 5 mi de THF se añadió mediante jeringa, y la mezcla resultante se agitó durante 2 hr a -78°C, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. La reacción se extinguió a -78°C con NH4CI acuoso saturado (30 mi). La capa orgánica se recogió, y la capa acuosa se extrajo con éter dietílico (2 x 50 mi). Los compuestos orgánicos se lavaron con agua (100 mi) y salmuera (100 mi), se secó sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 8.6 g de un aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :4 acetato de etilo en hexano para dar 6.05 g (79%) del producto de fluoroolefina deseado como un aceite claro. 1H RMN y 9F RMN indicaron que el producto aislado tuvo una relación de E:2 aproximada de 95:5.
EMCL m/z = 456.2 [M+Na]+ HRMS calculado para C2OH32N08F: 456.2010 [M+Na]\ encontrado: 456.2094. 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s, 18H), 2.0 (m, 1 H), 2.25 (m, 1 H), 2.6 (m, 2H), 3.7 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 4.9 (m, 1 H), 5.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 20 Hz), 6.2 (dt, vinilo, 1 H, J= 30 Hz). 9F RMN (CDCI3) ? - 129.12 (d, 0.09F, J= 31 Hz, 9% Isómero Z), -121.6 (d, 0.91 F, J= 20 Hz, 91 % Isómero E).
Eiemplo-A-5) A una solución del ejemplo-A-4 (805 mg, 1 .86 mmoles) en 20 mi de metanol a temperatura ambiente se añadió NaBH4 sólido (844 mg, 22.3 mmoles) en porciones de 200 mg. La reacción se agitó durante 18 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que la mayor parte del material de partida se consumió. La reacción se extinguió con 20 mi de NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (2 x 35 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre gS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 700 mg de aceite claro, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :4 acetato de etilo en hexano para dar 353 mg (48%) del producto de alcohol alilico deseado como un aceite claro, que contenia principalmente el isómero E deseado por 19F RMN. EMCL: m/z = 414.2 [M+Na]+. 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s, 18H), 1.95 (m, 1 H), 2.1 (m, 1 H), 2.2 (m, 1 H), 2.35 (t, 1 H), 3.7 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 4.8 (m, 1 H), 5.15 (dt, 1 H, J= 20 Hz). 19F RMN (CDCI3) ? -1 19.1 (d, 0.02F, J= 37 Hz, 2% Isómero Z),-1 1 1.8 (d, 0.98F, J= 24 Hz, 98% Isómero E).
E¡emplo-A-6) A una mezcla del ejemplo-A-5 (1.37 g, 3.5 mimóles), tridenilfosfina soportada por polímero (3 mmol/g, 1.86 g, 5.6 mmoles) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (450 mg, 4.55 mmoles) en 50 mi de THF se añadió gota a gota azodicarboxilato de dimetilo (820 mg, 5.6 mmoles). La reacción se agitó durante 1 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (40% acetato de etilo en hexano) mostró que no quedó material de partida. La mezcla se filtró a través de celite; y el filtrado se concentró. El aceite amarillo resultante se dividió entre 30 mi de cloruro de metileno y 30 mi de agua. La capa orgánica se separó, se lavó con agua (1 x 30 mi) y salmuera (1 x 30 mi), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El material crudo, 1.8 g de un aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :4 acetato de etilo en hexano para dar 670 mg (40%) del producto de amidina E- alicíclíca protegido deseado como un aceite claro, que contenía únicamente el Isómero E deseado po 19F RMN. EMCL: miz - 496.2 [ +Na]+. 1H RMN (CDCI3)? 1 -48 (s, 18H), 1.85 (m, 1 H), 2.2 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 4.8 (m, 1 H), 5.3 (dt, H, J= 20 Hz). 19F RMN (CDCI3) ? -110.8 (q, 1 F, J= 20 Hz).
Eiemplo-A-7) El producto del ejemplo-A-6 (670 mg, 1.4 mmoles) se disolvió en 25 mi de metanol y 25 mi de ácido acético al 25% con agua. Se añadió polvo de zinc (830 mg, 12.7 mmoles), y la mezcla se agitó bajo sonicación durante 8 hr, tiempo al cual el análisis de HPLC mostró que únicamente quedó 20% del material de partida. El polvo de Zn se filtró a partir de la mezcla de reacción, y el filtrado se almacenó a -20 °C durante 12 hr. El filtrado se calentó a temperatura ambiente, se añadió ácido acético glacial adicional (7 mi) y polvo de zinc (400 mg, 6.1 mmoles), y la mezcla se sometió a sonicación durante 1 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de HPLC mostró 96% de producto. La mezcla se filtró a través de celite, y el filtrado se concentró. El material crudo se purificó por cromatografía en columna de CLAR de fase inversa sobre una columna YMC Combiprep eluyendo durante 8 minutos usando un gradiente de 20-95% A (A: 100% de acetonitrilo con ácido trifluoroacético al 0.01 %, B: 100% H20 con ácido trifluoroacético al 0.01 %). Las fracciones que contienen producto se combinaron y se concentraron dando 344 mg (45%) del producto de acetamidita deseado como una sal de trifluoroacetato, que contenía únicamente el Isómero E deseado por 19F RMN. E CL: m/z = 432.3 [M+H]+ 1H RMN (CD3OD) ? 1.52 (s, 8H), 2.9 (m, 1 H), 2.2 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 4.2 (d, 1 H), 5.4 (dt, vinilo, 1 H, J= 20 Hz). 9F RMN (CD3OD) ? -110.83 (m, F, J= 20 Hz).
Ejemplo-A-8) Una muestra del producto del ejemplo-A-7 se disuelve en ácido acético glacial. A esta solución agitada se añaden 10 equivalentes de HCI 1 N en dioxano. Después de agitar esta solución durante diez minutos a temperatura ambiente, todo el solvente se removió bajo vacío para generar la sal de diclorhidrato de éster metílico ilustrado.
Eiemplo-A) Una solución del ejemplo-A-7 (344 mg, 1.4 mmoles) en 6 mi de HCI 6.0 N se puso a reflujo durante 1 hr. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces adicionales, seguido por 5 veces subsecuentes en HCI 1.0 N HCI para remover cualesquiera sales de TFA. Al completarse, 160 mg (37%) del producto de diclorhidrato de ácido (2S,5£)-2-amino-]6-fluoro-7-[(1- iminoetil)amino]-5-heptenoico se obtuvo como un sólido blanco, p.f. 51.5-56. 3°C, que contenía únicamente el Isómero E deseado por 19F RMN. EMCL: m/z = 218.1 [ +H]+. HRMS calculado para C9Hi6FN302]: 218.1305 [M+H]+, encontrado: 218. 1325. 1H RMN (D20) ? 1.8 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 2.1 (s, 3H), 3.7 (t, 1 H), 4.00 (d, 2H), 5.3 (dt, vinilo, 1H, J = 21 Hz). 19F RMN (D20) ? -109.9 (m, 1 F, J= 20 Hz).
EJEMPLO B Diclorhidrato de ácido (2S. 5e/z)-2-amtno-6-fluoro-7-f(1-iminoetil) aminol- 5-heptenoico NH-Boc E¡emplo-B-1 ) A una solución enfriada de (0°C) de éster 5-metílico de ácido L-glutámico (50.00 g, 0.31 moles) en 400 mi de 1 :1 de H20 en dioxano se añadió trietilamina (38.35 g, 0.38 moles) seguido por dicarbonato de di-ter-butilo (80.00 g, 0.37 moles). La solución incolora, clara, resultante se dejó agitar a temperatura ambiente. Después de 18 hr, el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. La mezcla de reacción se extinguió con 200 mi de KHSO4 1.0 N aqueous. La capa orgánica se removió, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron para dar 72.00 g (89%) del producto deseado como un aceite amarillo pálido. E CL: m/z - 284.1 [M+Na]+. 1H RMN (CDCI3) ? 1.50 (s, 9H), 2.00 (m, 1 H), 2.20 (m, 1 H), 2.42 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 4.34 (d, 1 H), 5.24 (d, 1 H).
NH-Boc Ejemplo-B-2) A una solución del producto del ejemplo-B-1 (72.60 g, 0.28 moles) en 300 mi de THF a -10°C se añadió rápidamente 4-metilmorfolina (28.1 1 g, 0.28 moles) y cloroformiato de ¡sobutilo (37.95 g, 0.28 moles). La solución amarillo claro formó inmediatamente un precipitado blanco. Después de 4 min, la mezcla amarilla turbia resultante se filtró, el filtrado se enfrió a -10°C y una solución de NaBH4 (15.77 g, 0.42 moles) en 200 mi de H20 se añadió gota a gota mientras se mantenía una temperatura por debajo de cero. Una vez que se añadió todo el NaBH4) el baño de hielo se removió, y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1.5 hr. La mezcla de reacción se extinguió con 200 mi of H20. La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron para dar 58 g (85%) del producto deseado como un aceite amarillo. EMCL m/z = 270.1 [M+Naf 1H RMN (CDCI3) ? 1 .42 (s, 9H), 1.65 (m, 1 H), 1.85 (m, 2H), 2.42 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 4.8 (d, 1 H).
Ejemplo-B-3) A una solución del del ejemplo-B-2 (30.95 g, 0.13 moles) en 100 mi de benceno se añadió 2,2- dimetoxipropano (65.00 g; 0.63 moles) seguido por ácido p-toluensulfónico (2.40 g, 12.5 mmoles) y 5 g de tamices moleculares de 3Á. La mezcla resultante se puso á reflujo durante 2 hr, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró reacción completa. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter dietílico (150 mi) y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (100 mi) seguido por salmuera (100 mi). La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El material crudo, 30.5 g de un aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :10 de acetato de etilo en hexano para dar 15.40 g (42%) del producto deseado como un aceite amarillo pálido.
EMCL: m/z = 310.1 [ +Na]+ 1H RMN (CDCI3) ? 1 .42 (s, 12H), 1 .56 (d, 3H), 1.85 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.7 (d, 1 H), 3.95 (m, 2H).
Eiemplo-B-4) Se añadió DIBAL (6.0 mi de una solución 1 .0 M en tolueno) gota a gota a una solución fría (-78°C) del producto del ejemplo-B-3 (1.00 g, 3.00 mmoles) en 10 mi de cloruro de metileno. Después de 30 minutos, la reacción se extinguió con 5 mi de tartrato de potasio saturado (sal de Rochelle, después se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se filtró después a través de una almohadilla de celite, se secó sobre gS04, se filtró nuevamente y se concentró para dar un aceite amarillo. El material crudo, 610 mg de un aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 : 4 acetato de etilo en hexano para dar 550 mg (71 %) del producto deseado como un aceite claro H RMN (CDCI3) ? 1.50 (s, 12H), 1.58 (d, 3H), 2.00 (m, 2H), 2.5 (m, 2H), 3.7 (d, 1 H), 3.95 (m, 2H), 9.8 (s, 1 H).
Eiemplo-B-5) A una solución enfriada con hielo (0°C) de 2-fluoro-fosfonoacetato de trietilo (6.70 g, 27.6 mmoles) en 100 mi of cloruro de metileno se añadió 1 , 8-diazab¡cyclo[5.4.0]undec-7-eno (4.70 g, 31.0 mmoles). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hr dando por resultado una solución anaranjada. Después, una solución enfriada con hielo (0°C) del producto del ejemplo-B-4 (5.71 g, 22.2 mmoles) en 15 mi of cloruro de metileno se añadió mediante jeringa, y la mezcla resultante se agitó durante 18 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. El solvente se removió bajo vacío, y la mezcla resultante se dividió entre 200 mi de acetato de etilo y 100 mi de agua. La capa orgánica se recogió, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con KHSO4 1.0 M acuoso (100 mi), agua (100 mi) y salmuera (100 mi), se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron para dar el producto de fluoroolefina deseado como un aceite amarillo (8.0 g). 1H RMN and 19F RMN indicaron que el producto aislado tenía una relación de Z:E aproximada de 70: 30. EMCL: m/z = 368.2 [ +Na]+ 1H RMN (CDCI3) ? 5.9-6. 0 (dt, 1 H, J= 20 Hz), 6.05-6. 20 (dt, 1 H, J= 33 Hz). 19F RMN (CDCI3) ? -129.89 (d, 0.7F, J= 38 Hz, 70% Isómero Z), -122. 05 (d, 0.3F, J= 20 Hz, 30% Isómero E). Esta mezcla se llevó a cabo en crudo sin purificación adicional.
Eiemplo-B-6) A una solución enfriada con hielo (0QC) del producto del ejemplo-B-5 (8.0 g, 23.0 mmoles) en 70 mi de THF se añadió LiBH4 (12.7 mi de 2.0 en THF, 25.0 mmoles) mediante jeringa. La mezcla de reacción se agitó durante 18 hr a temperatura ambiente tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. El THF se removió, y la mezcla resultante se disolvió en cloruro de metileno. Después de enfriarse a 0°C, KHSO4 0.1 M acuoso se añadió lentamente para extinguir la reacción. La mezcla se extrajo después con acetato de etilo (3 x 50 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 8.0 g de un aceite claro, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 : 4 acetato de etilo en hexano para dar 900 mg (13%) del producto deseado como un aceite claro. EMCL: m/z = 326.2 [M+Na]+ 1H RMN (CDCI3) ? 4.79-4. 94 (dm, H), 5.10-5. 25 (dt, 1 H). 9F RMN (CDCI3) ? -119.82 (dt, 0.7F, J= 38 Hz, 70% Isómero Z), -11 1. 09 (dt, 0.3F, J= 27 Hz, 30% Isómero E).
E¡emplo-B-7) A una solución enfriada con hielo (0°C) del producto del ejemplo-B-6 (950 mg, 3.1 mmoles) en 5 ml de piridina se añadió cloruro de menansulfonilo (390 mg, 3.4 mmoles). La reacción se agitó durante 5 minutos a 0°C, después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 hr, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. La reacción se diluyó con éter dietílico (10 ml) y se lavó con NaHCC>3 acuoso saturado (20 ml) seguido por ácido cítrico 1.0 M (20 ml). La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar 500 mg (51 %) del producto de cloruro alílicodeseado como un sólido blanco. Este producto se utilizó sin purificación adicional.
Ejemplo-B-8) A una solución bajo agitación del producto del ejemplo-B-7 (440 mg, 1.37 mmoles) en 10 ml de DMF se añadió ftalimida de potasio (290 mg, 1.57 mmoles). La mezcla resultante se calentó bajo reflujo durante 18 hr, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida.
La mezcla enfriada se diluyó con 30 mi de agua, se sxtrajo dos veces con acetato de etilo (30 mi), se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró para dar 540 mg (91 %) del producto deseado as un aceite amarillo. EMCL: m/z = 455.2 [M+Na]+. HRMS calculado para: 433.2139 [M+H]\ encontrado: 433.2144. 1H R N (CDCI3) ? 1 .4 (s, 18H), 1.6 (m, 6H), 2.05 (m, 2H), 3.6-4. 42 (m, 4H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H), 5.2, (m, vinilo, 1 H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H). 19F RMN (CDCI3) ? -1 17.09 (m, 0.7F, J= 38 Hz, 70% Isómero Z), - 1 1 1.61 (m, 0.3F, J= 22 Hz, 30% Isómero E).
Eiemplo-B-9) El producto del ejemplo-B-8 (600 mg, 1.38 mmoles) se disolvió en 8 mi de ácido acético y 2 mi de agua. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) mostró que no quedó material de partida. La solución se concentró bajo una corriente de nitrógeno, y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :2 de acetato de etilo en hexano para dar 248 mg (63%) del producto deseado como un sólido blanco. EMCL: m/z = 415.1 [M+Na]+ H RMN (CDCI3) ? 1.41 (s, 9H), 1.56 (m, 2H), 2.15 (m, 1 H), 3.64 (m, 2H), 4.35 (d, 2H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 37 Hz), 7.73 (m, 2H), 7.86 (m, 2H). 19F RMN (CDCI3) ? -1 16.96 (dt, 0.8F, J= 37 HZ, 80% Isómero Z), -1 11. 09 (dt, 0.2F, J= 22 Hz, 20% Isómero E).
Ejemplo-B-10) A una solución bajo agitación del producto del ejemplo-B-9 (237 mg, 0.605 mmoles) en 6 mi de DMF se añadió dicromato de piridinio (1.14 g, 3.03 mmoles). La solución se tornó anaranjado oscuro y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 hr, tiempo al cual se vació en 20 mi de H20. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (4 x 25 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con KHCO3 al 5% acuoso (3 x 25 mi). La capa acuosa se acidificó con KHSO4 1.0 M a pH=3 seguido por extraction con acetato de etilo (3 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se concentraron para dar 235 mg (95%) del producto de aminoácido deseado. El sólido blanco resultante se usó en crude sin purificación adicional. EMCL m/z = 429.1 [M+Na]+ Ejemplo-B-1 1 ) A una solución en agitación del producto del ejemplo-B-10 (230 mg, 0.56 mmoles) en 7 mi de etanol se añadió hidrato de hidrazina (70 mg, 1.13 mmoles), y la solución resultante se puso a reflujo durante 2 hr formando un precipitado blanco. El solvente se removió bajo vacío. El sólido blanco resultante se disolvió en 8 mi de agua y se acidificó a pH=4 con ácido acético glacial. Después se enfrió en un baño de hielo y se filtró. El filtrado se concentró para dar 136 mg (87%) del producto de alilamina deseado como cristales amarillos que se llevaron al siguiente paso sin purificación. EMCL: miz- 211? [M+H]+ E¡emplo-B-12) A una solución bajo agitación del producto del ejemplo-B-1 1 (136 mg, 0.50 mmoles) en 6 mi de DMF se añadió acetimidato de etilo (252 mg, 2.04 mmoles) en 3 porciones durante intervalos de 1.5 hr. Después de que se completó la adición, la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La solución rosa se filtró, y la torta de filtro se lavó con agua. El solvente se removió bajo vacío, y el aceite amarillo resultante se purificó por CLAR de fase inversa usando una columna semi-prep de YMC Combiprep ODS-A eluyendo con un gradiente de 7 minutos de 1 -50% A (A: 100 acetonitrilo con 0.05% TFA, B: 100 de agua con 0.05% TFA). Fracciones que contenían producto se combinaron y concentraron para dar aproximadamente 50 mg del producto de acetamidina deseado como una sal de trifluoroacetato que se utilizó en el siguiente paso. EMCL: m/z = 318.2 [M+H]+ Ejemplo-B) El producto del ejemplo-B-12 se disolvió en 6 mi de HCI 6.0 N y se agitó durante 1 hr a temperatura ambiente. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces más para remover sales de TFA. cuando 19F RMN indicó que todo el TFA había sido removido, el producto se secó bajo vacío para dar 30 mg (20%, rendimiento combinado en dos pasos) de una mezcla de 20:80 de E:Z que contenía el diclorhidrato de (2S,5E)-2-amino-6-fluoro-7-[(1 -iminoet¡l) amino]-5-heptenoico deseado y diclorhidrato de ácido (2S,5Z)-2-amino-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico como un sólido claro espumoso. HRMS calculado para C9H16FN302:: 218.1305 [M+H]+, encontrado: 218.1309. H RMN (D20) ? 2.01 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.24 (m, 2H), 3.96 (t, 1 H), 4.00 (d, 2H), 5.07 (dt, vinilo, 1 H, J= 37 Hz), 5.4 (dt, vinilo, 1 H, J= 37 Hz). 9F RMN (D20) ? -1 16.8 (m, 0.8F, J= 37 Hz, 80% Isómero Z), -109. 6 (m, 0. 2F, J= 21 Hz, 20% Isómero E).
EJEMPLO C Diclorhidrato de ácido f(2s, 5z)-2-amino-6-fluoro-7-r(1 -iminoetil)am¡no1-5- heptenoico E¡emplo-C-1 ) 2-fluoro-fosfonoacetato de trietilo (3.54 g, 14.6 mmoles) se disolvió en 20 mi de CH2Ci2 a 0°C, y se añadió 1 , 8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-eno (2.4 mi, 16.4 mmoles). La mezcla se agitó a 0°C durante 20 min produciendo una solución anaranjada. Una solución del producto de aldehido del ejemplo-A-3 (4.04 g, 1 1 .7 mmoles) se añadió después a 0°C, y la mezcla café resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente, tiempo al cual EMCL indicó que no quedó material de partida. El solvente se removió, y el residuo se dividió entre agua (60 mi) y acetato de etilo (120 mi). La capa orgánica se recogió, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (60 mi) y KHSO4 acuoso al 10% (60 mi), se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 5.7 g de un aceite anaranjado, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 10% acetato de etilo en hexano para dar 3.5 g (69%) del producto de fluoroolefina deseado como un aceite claro. 1H R N y 19F RMN indicaron que el producto aislado tenía una relación de Z/E de 70:30. HRMS calculado para C2oH3208FN: 456.2010 [M+Na]\ encontrado 456.2017. 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s, 18H), 2.0 (m, 1 H), 2.25 (m, 1 H), 2.6 (m, 2H), 3.7 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 4.9 (m, 1 H), 5.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 21 .2 Hz), 6.1 (dt, vinyl, 1 H, J= 32.4 Hz). 19F RMN (CDCI3) ?:-129. 4 (d, 0.7F, J= 34 Hz, 70% Z isómero), -121. 6 (d, 0.3F, J= 22 Hz, 30% E isómero).
Ejemplo-C-2) El producto de éster del ejemplo-C-1 (3.5 g, 8.1 mmoles) se disolvió en 80 mi de metanol a temperatura ambiente, NaBH4 sólido (3 g, 80 mmoles) después se añadió en porciones. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 hr, tiempo al cual el análisis de CLAR indicó que la reacción estaba >90% completa. La reacción se extinguió con NH4CI saturado. El producto se extrajo con acetato de etilo y se secó sobre a2S04. La capa orgánica se evaporó para dar 3.2 g de producto crudo como un aceite incoloro, que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 20%-acetato de etilo al 30% en hexano para dar 2.1 1 g (67%) de una mezcla de Z/E del producto de fluoroolefina como un aceite claro junto con 0.41 g (13%) producto de Isómero Z (Z:E = 97:3 por 19F RMN) puro deseado como un aceite claro. HRMS calculado para Ci8H3oN07F: 414.1904 [M+Na]\ encontrado 414.191 1. 1H RMN (CDCI3) ? 1 .48 (s, 18H), 2.0 (m, 1 H), 2.2 (m, 3H), 3.7 (s, 3H), 4.1 (dd, 2H, J= 17Hz), 4.8 (dt, 1 H, J= 39 Hz), 4.9 (m, H). 19F RMN (CDCI3) ? -119.1 (dt, 1 F, J= 39 Hz, J= 17 Hz).
Eíemplo-C-3) El producto de Z-alcohol del ejemplo-C-2 (390 mg, 1 mmol) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (130 mg, 1 .3 mmoles) se disolvieron en 20 mi de THF. Después se añadió PPh3 soportado en polímero en la solución, y la mezcla se agitó suavemente durante 10 minutos. Después el azodicarboxilato de dietilo se añadió gota a gota, y la mezcla se agitó durante 1 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó formación de producto y que no estaba presente el material de partida. El polímero se filtró a través de una almohadilla de celite, y la almohadilla se lavó con THF. El filtrado se evaporó para dar 1.0 g de producto crudo que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 20 % a acetato de etilo al 30% en hexano para dar 500 mg de producto, contaminado con algo de subproducto de hidrazida. Este material se purificó posteriormente por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 98:2:0.01 de cloruro de metileno:metanol:hidróxido de amonio para dar 180 mg (38%) de producto de amidina protegido deseado como un aceite claro, que contenía sólo el Isómero Z deseado por 19F RMN. HRMS calculado para C21H32N3O8F: 491.2517 [M+NH4]\ Encontrado: 491.2523. 1H RMN (CDCI3) ? 1.5 (s, 18H), 1 .9 (m, 1 H), 2.1 (m, 3H), 2.3 (s, 3H), 3.7 (s, 3H), 4.2 (d, 2H), 4.8 (m, 1 H). 5.0 (dt, 1 H, J= 36 Hz). 9F RMN (CDCI3) ? -116.5 (dt, 1 F, J= 38 Hz).
Ejemplo-C-4) El producto del ejemplo-C-3 (88 mg, 0.19 mmoles) se disolvió en 4 mi de ácido acético al 25% en agua que contenía algunas gotas de metanol, y después se añadió polvo de Zn (109 mg, 1.67 mmoles). La mezcla se agitó bajo sonicación durante 3 hr. El Zn se filtró después a través de una almohadilla de celite, y la almohadilla se lavó con agua. El filtrado se evaporó a sequedad para dar producto crudo que se purificó por cromatografía en columna de CLAR de fase inversa sobre una columna YMC Combiprep eluyendo durante 8 minutos con un gradiente de 20-80% de A (A: 100% ACN con 0. 01 % TFA, B: 100% H20 con 0. 01 % TFA). El producto deseado se recogió en dos fracciones, y las fracciones combinadas se concentrtaron. El producto se obtuvo como un aceite incoloro como una mezcla de sales de trifluoroacetato que contenían únicamente el Isómero Z deseado por 19F RMN: 30% fue producto mono BOC-protegido: HRMS calculado para Ci5H26N304F: 332.1986 [M+H]+, Encontrado: 332.2001 , y 70% fue producto DI-BOC-protegido: HRMS calculado para C2oH34N306F: 432.2510 [M+H]+, Encontrado: 432.2503. 1H RMN del producto DI-BOC (D20) ? 1.3 (s, 18H), 1.8 (m, 1 H), 2.1 (m, 3H), 2.1 (s, 3H), 3.6 (s, 3H), 3.9 (d, 2H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 37 Hz). 19F RMN (D20) ? -1 17.3 (dt, 1 F, J= 37 Hz).
Ejemplo-C) Los productos mono- y d¡-BOC del ejemplo-C-4 se disolvieron en 30 mi de HCI 6N, y la solución se puso a reflujo durante 4 hr, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó reacción completa. El exceso de HCI y agua se removieron bajo vacío. Al completarse, 9 mg (rendimiento combinado de 40% para los dos pasos) del producto de diclorhidrato de ácido (2S,5Z)-2-am¡no-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado se obtuvo como una espuma muy higroscópica de color amarillo claro, que contenía únicamente el Isómero Z deseado por 19F RMN. HRMS calculado para C9Hi6N302F: 218.1305 [M+H]+, Encontrado: 218.1320. H RMN (D20) ? 1. 3 (s, 18H), 1.9 (m, 2H), 2.1 (m, 2H), 2.1 (s, 3H), 3.8 (t, 1 H), 3.9 (d, 2H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 37Hz). 19F RMN (D20) ? -117.3 (dt, 1 F, J= 37 Hz).
EJEMPLO D Triclorhidrato de ácido (2S,5Z)-2-amino-6-fluoro-7-f(1 -iminoetil) amínol-5- heptenoico dihidratado Eiemplo-D-1 ) El producto del ejemplo-D-2 (3.75 g, 10 mmoles) se disolvió en 60 mi de metanol, y NaBH4 sólido (4 g, 106 mmoles) se añadió en porciones a temperatura ambiente durante 10 hr, tiempo al cual el análisis de CLAR indicó una reducción de aproximadamente 84%. La mezcla de reacción se extinguió con NH4CI saturado, y después se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04, se filtraron y se evaporaron para dar 3.2 g de producto crudo como un aceite amarillo. HR S calculado para Ci6H29N07: 348.2022 [M+H]\ Encontrado: 348.2034. 1H RMN (CD3OD) ? 4.9 (q, 1 H), 3.7 (s, 3H), 3.5 (t, 2H), 3.2 (m, 1 H), 2.1 (m, 1 H), 1.9 (m, 2H), 1.5 (s, 18H).
Eiemplo-D-2) El producto de alcohol del ejemplo-D-1 (3.2 g, 9.0 mmoles) se disolvió en 100 mi dé THF se enfrió en un baño de hielo. Se añadió tetrabromuro de carbono (4.27 g, 12.9 mmoles), y la solución resultante se agitó a 0°C durante 30 minutos bajo nitrógeno. Se añadió PPh3 soportado en polímero, y la mezcla se agitó suavemente a 0°C durante 1 hr y después durante la noche a temperatura ambiente. El polímero se removió por filtración a través de celite, y después la almohadilla de celite se lavó con THF. El filtrado se evaporó para dar producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 1 :3 de acetato de etilo en hexano para dar 2.0 g (54%, rendimiento combinado en 2 pasos) del producto de bromo deseado como un aceite incoloro. HRMS calculado para C16H28N06Br: 410.1 178 [M+H]*, Encontrado: 410.1137. 1H RMN (CDCI3) ? 4.9 (q, H), 3.7 (s, 3H), 3.4 (m, 2H), 2.2 (m, 2H), 1.9 (m, 2H), 1.5 (s, 18H).
Eiemplo-D-3) Una solución de de NaOEt (21% en EtOH, 41.1 mi, 0.1 1 moles) en 60 mi de etanol se trató con p-metoxi bencenotiol (14.0 g, 0.1 moles), seguido por clorofluoroacetato de etilo (18. 3 g, 0.13 moles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 hr y se diluyó con 250 mi de 1:1 de hexano en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua tres veces, y se secó sobre Na2S04. La capa orgánica seca se evaporó para dar 25 g de producto crudo que se llevó a cabo hacia adelante sin purificación adicional. EMCL para CHH13O3SF: m/z = 267.10 [M+Na]+. 1H RMN (CDCI3) ? 7.5 (d, 2H), 6.9 (d, 2H), 6.0 (d, 1 H, J= 51.9 Hz), 4.2 (q, 2H), 3.8 (s, 3H), 1.2 (t, 3H). 19F RMN (CDCI3) ? -146.2 (d, 1 F, J= 53.6 Hz).
Eiemplo-D-4) Una solución del producto crudo del ejemplo-D-3 (24 g, 0.1 moles) en 200 mi de cloruro de metileno se enfrió a -78 °C y se trató con ácido 3-cloroperbenzoico (27 g, 0.12 moles) en 200 mi of cloruro de metileno. La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó formación de producto y que no quedó material de partida. El sólido se filtró, y el filtrado se lavó con NaHC03 saturado y NH4CI. La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se evaporó para dar 30 g de un aceite anaranjado, que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 2:1 de hexano en acetato de etilo para dar 17.5 g (70%) del producto de sulfóxido deseado como un aceite blanquecino. HRMS calculado para CnH1304FS: 261.0597 [M+H]+, Encontrado: 261.0598. 1H MN (CDCI3) ? 7.6 (m, 2H), 7.0 (m, 2H), 5.6 (d, 1 H, J= 50 Hz diastereómero mayor), 5.4 (d, 1 H, J= 49 Hz diastereómero menor), 4.2 (q, 2H), 3.8 (s, 3H), 1.2 (t, 3H). 9F RMN (CDCI3) ? -194.3 (d, 1 F, J= 53.6 Hz diastereómero mayor), -191.7 (d, [1 F, J= 50.] 4 Hz diastereómero menor).
Eiemplo-D-5) Una suspensión de NaH (60% en aceite mineral, 212 mg, 5.3 mmoles) en 6 mi de DMF seco se enfrió a 0°C bajo nitrógeno y se trató con una solución del producto de sulfóxido del ejemplo-D-4 (1 .25 g, 4.8 mmoles) en 2 mi de DMF. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla se enfrió a 5°C, y el producto de bromo del ejemplo-D-2 (2.17 g, 5.3 mmoles) se añadió en una porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 hr, después se calentó a reflujo a 95°C durante 1 hr, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó la formación de producto. La mezcla se vació en una mezcla de hielo/NH4CI. El producto se extrajo con 1 :1 de hexano en acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2S04 y se evaporó para dar 3.17 g de un aceite amarillo crudo, que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con acetato de etilo al 10% en hexano para dar .05 g (50%) del producto de éster de fluoroolefina deseado como un aceite incoloro. 19F RMN indicó que el producto aislado contenía 95:5 del Isómero Z deseado. HRMS calculado para C2oH3208FN: 456.2010 [M+Na]+, encontrado: 456.2017. 1H RMN (CDCI3) ? 1.5 (s, 18H), 2.0 (m, 1 H), 2.3 (M, 4H), 3.7 (s, 3H), 4.3 (m, 2H), 4.9 (m, 1 H), 6.1 (dt, vinilo, 1 H, J= 32.4 Hz, Isómero Z). 19F RMN (CDCI3) ? -129.4 (d, 0.95F, J= 34.8 Hz, 95% Isómero Z), -121. 6 (d, 0.05F, J= 21 .6 Hz, 5% E isomer).
Ejemplo-D-6) El producto de éster del ejemplo-D-5 (1 .05 g, 2.4 mmoles) se disolvió en metanol a temperatura ambiente, y se añadió NaBH4 sólido en porciones. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 hr, después se añadió 2 mi de agua, y la mezcla se agitó durante 3 hr adicionales, tiempo al cual el análisis de CLAR indicó que la reacción era >95 % completa. La reacción se extinguió con NH4CI saturado. El producto se extrajo con acetato de etilo, y la capa orgánica se secó sobre Na2S04 y se evaporó para dar 0.95 g de producto crudo como un aceite incoloro. 9F RMN indicó que el producto crudo aislado contenía sólo el Isómero Z deseado. HRMS calculado para Ci8H3oN07F: 414.1904 [M+Na]+, Encontrado: 414.1949. H RMN (CDCI3) ? 1 -48 (s, 18H), 2.0 (m, 1H), 2.2 (m, 3H), 3.7 (s, 3H), 4.1 (dd, 2H, J= 17 Hz), 4.8 (dt, H, J= 36 Hz), 4.9 (m, 1 H). 19 F, RMN (CDCI3) ? - 9.1 (dt, 1 F, J= 38 Hz, J= 17 Hz).
Eiemplo-D-7) El producto de alcohol de EJEMPLO-D-6 (0.95 g, 2.4 mmoles) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (290 mg, 2.9 mmoles) se disolvieron en 60 mi de THF. Se añadió trifenilfosfina unida a polímero, y la mezcla se agitó suavemente durante 10 minutos. Después se añadió gota a gota azodicarboxilato de dimetilo, y la mezcla se agitó durante 1 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó la formación de producto y que no quedó material de partida. El polímero se filtró a través de una almohadilla de celite, y la almohadilla se lavó con THF. El filtrado se evaporó para dar un residuio que se dividió entre cloruro de metileno y agua. La capa orgánica se lavó dos veces con agua, se secó sobre MgSC , y se evaporó para dar 1.3 g de producto crudo que se purificó por cromatografía en columna instantánea de Biotage eluyendo con 20 % a acetato de etilo al 30% en hexano para dar 390 mg (34%, rendimiento combinado en 2 pasos) de producto de amidina protegido deseado como un aceite incoloro. 9F RMN indicó que el producto aislado contenía sólo el Isómero Z deseado. HRMS calculado para C2iH32N308F: 491.2517 [M+NH4]+ Encontrado: 491.2523. H RMN (CDCI3) ? 1 .5 (s, 18H), 1.9 (m, 1 H), 2.1 (m, 3H), 2.3 (s, 3H), 3.7 (s, 3H), 4.2 (d, 2H), 4.8 (m, 1 H), 5.0 (dt, 1 H, J= 36 H2). 19F RMN (CDCI3) ? -116.5 (dt, LF, J= 38HZ).
E¡emplo-D-8) El producto del ejemplo-D-7 (390 mg, 0. 82 mmoles) se disolvió en 20 mi de HOAc al 25% en agua contenía 4 mi de metanol, y se añadió polvo de Zn (482 mg, 7.42 mmoles) en dos porciones. La mezcla se agitó bajo sonicación durante 3 hr. El Zn se filtró a través de una almohadilla de celite, y la almohadilla se lavó con agua. El filtrado se evaporó a sequedad para dar el producto crudo que se purificó por CLAR de fase inversa. Las fracciones que contenían los productos deseados se recogieron, se combinaron y se concentraron. Los productos se obtuvieron como aceites incoloros como una mezcla de sales de trifluoroacetato, que contenía sólo el Isómero Z deseado por 19F RMN: 30% fue producto mono-Boc protegido: HRMS calculado para C^HzeNaCuF: 332.1986 [M+H]+, Encontrado 332.2001 ; 70% fue producto DíBoc protegido: HRMS calculado para C20H34N3O6F: 432.2510 [M+H]+, 432.2503. 1H RMN de producto diBoc (D20) ? 1.3 (s, 18H), 1.8 (m, 1 H), 2.1 (m, 3H), 2.1 (s, 3H), 3.6 (s. 3H), 3.9 (d, 2H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 37Hz). 19F RMN (D20) ? -117.3 (dt, 1 F, J= 37 Hz).
Eiemplo-D) Los productos mono y diBOC del ejemplo-D-8 se disolvieron en 80 mi de HCI 6N y la solución se calentó a reflujo durante 1 hora, tiempo al cual el análisis de EMCL indicó reacción completa. El exceso de HCI y agua se removió bajo vacío para dar 150 mg (50% de rendimiento combinado durante 2 pasos) del producto de triclorhidrato de ácido (2S, 5Z)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico dihidratado como una espuma muy higroscópica de color amarillo pálido. HRMS calculado para C9H1BN3O2F: 218.1305 [M+H]\ Encontrado: 218. 1290. 1H RMN (D20) ? 1.3 (s, 18H), 1.9 (m, 2H), 2.1 (m, 2H), 2.1 (s, 3H), 3.8 (t, 1 H), 3.9 (d, 2H), 4.9 (dt, vinilo, 1 H, J= 37 Hz). 19F RMN (D20) ??-117. 3 (dt, 1 F, J= 37 Hz). Análisis calculado para C9H16N302F»3HCL*2H20: C, 29.81 ; H, 6.39 ; N, 11.59 ; Encontrado: C, 29.80 ; H, 6.11 ; N, 11.20.
EJEMPLO E Diclorhidrato de ácido (2R, 5E)-2-amino-6-fluorO'7-f(1 -iminoetil) aminoT-5- heptenoico monohidratado Eiemplo-E-1 ) Se añadió gota a gota cloruro de trimetilsililo a una solución enfriada de ácido D-glutámico en metanol a 0°C. La solución incolora, clara, resultante se deja agitar a temperatura ambiente hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada muestra que no queda material de partida. La reacción se enfría después a 0°C, se añade trietilamina, y se forma un precipitado blanco. Se añade dicarbonato de di-ter-butilo, y la mezcla se deja calentar a temperatura ambiente. Después de 3 hr el solvente es removido, y se añade éter dietílico. La solución se filtra, y la torta de filtro se enjuaga con éter dietílico adicional. El filtrado se concentra para dar el producto de diéster mono-Boc deseado que se utiliza en el siguiente paso sin purificación adicional.
Eiemplo-E-2) A una solución del producto crudo del ejemplo-E-1 en acetonitrilo a temperatura ambiente se añade 4-dimetilaminopiridina y dicarbonato de di-ter-butilo. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente, hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada muestra que la mayor parte del material de partida se consume. El solvente se remueve bajo vacío, y el residuo resultante se purifica por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de diéster di-Boc protegido deseado.
E¡emplo-E-3) Una solución de DIBAL se añade gota a gota a una solución del ejemplo-E-2 en éter dietílico anhidro a -78 °C. Después de 30 minutos a 78°C, la solución se extingue con agua y se deja calentar a temperatura ambiente. La mezcla turbia resultante se diluye con acetato de etilo, se secó sobre MgS04 y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró, y el residuo resultante se purifica por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de aldehido deseado Eiemplo-E-4) A una solución fría (-78 °C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo en THF se añade N-butil-litio. Esta mezcla se agita a -78°C produciendo una solución amarillo brillante. Una solución del producto del ejemplo-E-3 en THF se añade después mediante jeringa, y la mezcla resultante se agita a -78°C, hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada muestra que no queda material de partida. La reacción se extingue a -78°C con NH4CI acuoso saturado. La capa orgánica se recoge, y la capa acuosa se extrae con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se lavan con agua y salmuera, se secan sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo se purifica después por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de fluoroolefina deseado.
Eiemplo-E-5) A una solución del ejemplo-E-4 en metanol a temperatura ambiente se añade NaBH4 sólido en porciones. La reacción se agita a temperatura ambiente hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada muestra que la mayor parte del material de partida se consume. La reacción se extingue con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinan, se secan sobre MgS0 , se filtran y se concentran. El material crudo se purifica por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de alcohol alílico deseado.
Eiemplo-E-6) A una mezcla del ejemplo-E-5, trifenilfosfina soportada en polímero y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona en THF se añade gota a gota azodicarboxilato de dimetilo. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente hasta que el análisis de cromatografía de capa delgada muestra que no queda material de partida. La mezcla se filtra a través de celite, y el filtrado se concentra. El aceite amarillo resultante se divide entre cloruro de metileno y agua. La capa orgánica se separa, se lava con agua y salmuera, se seca sobre MgS04, se filtra y se concentra. El material crudo se purifica por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice para dar el producto de amidina E-alílica protegida deseada.
Eiemplo-E-7) El producto del ejemplo-E-6 se disuelve en metanol y ácido acético en agua. Se añade polvo de zinc, y la mezcla se agita hasta sonicación hasta que el análisis de CLAR muestra que queda poco del material de partida. El polvo de Zn se filtra a través de celite de la mezcla de reacción, y el filtrado se concentra. El material crudo se purifica por cromatografía en columna CLAR de fase inversa. Las fracciones que contenían producto se combinan y se concentran dando el producto de acetamidina deseado como una sal de trifluoroacetato.
Ejemplo-E) Una solución del ejemplo-E-7 en HCI 6.0 N se pone a reflujo durante 1 hr. El solvente se remueve bajo vacío. El sólido resultante se disuelve en agua y se concentra repetidamente de HCI 1.0 N para remover cualesquiera sales de TFA restantes para dar el producto de diclorhidrato de ácido (2 5 )-2-amino-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado.
EJEMPLO F Diclorhidrato de ácido (2S,5E)-2-amino-6-f1uoro-7-r(1-im¡noetil)amino1-5- heptenoico monohidratado Eiemplo-F-1 ) A una solución de THF (45 mi) del producto del ejemplo-A-3 (5.0 g, 11 .5 mmoles) bajo nitrógeno se añadió gota a gota a una solución de Red-Al (5.22ml, 17.4 mmoles) en 5.6 mi de THF durante 30 minutos. La temperatura interna se mantuvo por abajo de -10°C. Después de 5 minutos, la reacción se extinguió con 33.7 mi de tartrato de Na»K 1.3M. Se añadió tolueno (1 1 mi) se añadió a la muestra para mejorar la separación. La capa orgánica se lavó con 33. 7ml de tartrato de Na«K 1.3M seguido por salmuera (40 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 3.8 g (84%) de aceite Amarillo claro, se utilizó directamente en el siguiente paso. EMCL: m/z = 414.2 [M+Na]+. 1H RMN (CDCI3) ? 1 . 48 (s, 18H), 1.95 (m, [1 H)J 2.1 (m, [1 H)J 2.2 (m, [1 H)J 2. 35 (t, [1 H)J 3.7 (s, [3H),] 4.25 (m, 2H), 4. [8] (m, 1H), 5.15 (dt, 1 H, J= 20 Hz). iyF RMN (CDC ) 7 -1 19.1 (d, 0.02F, J= 37 Hz, 2% de Isómero Z), -11 .8 (d, 0.98F, J= 24 Hz, 98% de Isómero E).
Ejemplo-F-2) A una solución del producto del ejemplo-F-1 (50.0 g, 0.128 moles) en 500 mi of cloruro de metileno a -10 °C se añadió trietilamina (18.0 g, 0.179 moles). Una solución de cloruro de metansulfonilo (17.5 g, 0.153 moles) en 50 mi cloruro de metileno se añadió lentamente para mantener la temperatura a -10°C. La reacción se agitó durante 45 min a -10°C, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (50% de acetato de etilo en hexano) y EMCL mostró que la mayor parte del material de partida se consumió. La reacción se extinguió con 600 mi de ácido cítrico 1.0 M y se extrajo con acetato de etilo (2 x 400 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 70 g de aceite amarillo, se utilize directamente en el siguiente paso. EMCL m/z = 492.2 [M+Na].
Eiemplo-F-3) A una solución del producto del ejemplo-F-2 (70.0 g, 0.128 moles) en 400 mi de dimetilformamida a temperatura ambiente se añadió 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-onato de potasio (28.7 g, 0.192 moles). La reacción se agitó durante 2.5 hr a temperatura ambiente, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (acetato de etilo al 30% en hexano) y EMCL mostró que el material de partida se consumió. La reacción se diluyó con 400 mi de agua y se extrajo con acetato de etilo (5 x 400 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con 400 mi de agua, 400 mi de salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 70 g de aceite amarillo, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 : 4 acetato de etilo en hexano para dar 38 g (63%) de un aceite ligeramente amarillo.
Ejemplo-F-4) Una composición del producto de varias preparaciones duplicadas del ejemplo-F-3 se purificó por cromatografía en columna HPLC sobre una columna de gel de sílice MODCOL de Merck a un flujo de 500 ml/min ¡socrático a 60: 40 MtBE:heptano. Una segunda purificación sobre los 63 g recuperados fue una cromatografía en columna de CLAR sobre una columna Pak-AD quiral que corre a un flujo de 550 ml/min ¡socrático a 10:90 de A:B (A: 100% etanol, B: 100% heptano). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando 41 g (68%) del producto de amidina L,E aliciclica protegida deseado como un aceite claro, que contenía sólo el L y Isómero E deseado por 9F RMN y cromatografía quiral. EMCL: m/z = 496.2 [M+Naf. [M+NH4]+. HRMS calculado para C2iH32FN308: 491.2507 [[M+NH4]+, Encontrado: 491.2517. 1H RMN (CDCI3) ? 1.48 (s, 18H), 1.85 (m, 1 H), 2.2 (m, 3H), 2.25 (S, 3H), 3.64 (s, 3H), 4.25 (m, 2H), 4.8 (m, 1 H), 5.3 (dt, 1 H, J= 20 HZ). 19F RMN (CDCI3) ? -1 10.8 (q, [1 F,] [J=] 20 Hz).
Ejemplo-F-5) El producto del ejemplo-F-4 (22.5 g, 0.047 moles) se disolvió en 112 mi de metanol. Se empezó la agitación vigorosa y se añadió 225 mi de ácido acético al 40% en agua seguido por polvo de zinc (1 1.5 g, 0.177 mmoles). La reacción de agitación se colocó bajo reflujo (aprox. 60°C) durante 2.5 hr, tiempo al cual el análisis de CLAR mostró que la mayor parte del material de partida se ha consumido. La reacción se enfrió y el Zn se filtró de la mezcla de reacción a través de celite, lavando el celite bien con metanol adicional. El filtrado y los lavados de metanol se combinaron y se concentrtaron. El sólido blanco oleoso resultante se lavó con cloruro de metileno (2 x 500 mi) y se filtró a través de una almohadilla de celite, se realizó un lavado con 500 mi cloruro de metileno adicionales. Los filtrados se combinaron y se concentraron para proveer un aceite amarillo claro. El material crudo, 39 g un aceite amarillo claro, se purificó por filtración de tapón sobre 200 mi de gel de sílice eluyendo con 80:19:1 de metanolxloruro de metileno:ácido acético para dar 13 g (83%) del producto deseado. EMCL: m/z = 432.3 [M+H]+ HRMS calculado para C15H26FN304: 332.1986 [M+H]+, Encontrado: 332.1982. 1H RMN (CD3OD) ? 1.42 (s, 9H), 1.7 (m, 1 H), 1.9 (m, 1 H), 2.17 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 3.3 (m, 1 H), 3.7 (s, 3H), 4.2 (d, 2H), 5.1 (dt, vinilo, 1H, J= 21 Hz). 19F RMN (CD3OD) ? -110.83 (m, 1 F, J=21 HZ).
Ejemplo-F) Una solución del producto del ejemplo-F-5 (22 g, 0.066 moles) en 750 mi de HCI 6.0 N se puso a reflujo durante 45 minutos. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces más. El material crudo se purificó por cromatografía en columna CLAR de fase inversa en una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 minutos bombeando 100% de ¡socrático B durante 30 minutos seguido por un gradiente de 0-100% de A durante 10 min y un lavado de 100% de A durante 20 min (A: 100% acetonitrilo, B: 100% de H20 con ácido acético al 0.0025%). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando 3.5 g (68%) del producto de acetamidina deseado como una sal de d ¡clorhidrato, que contenía sólo el producto de diclorhidrato de ácido (2S,5£)-2-amino-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado se obtuvo como un sólido blanco, p.f. 51.5-56. 3°C, que contenía sólo el Isómero E deseado por 19F RMN. EMCL: m/z = 218. 1 [M+H]+. HRMS calculado para C9H16FN3O2: 218.1305 [M+H]\ Encontrado: 218.1325. 1H RMN (D20) ? 1.8 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 2.1 (s, 3H), 3.7 (t, 1 H), 4.00 (d, 2H), 5.3 (dt, vinilo, H, J= 21 Hz). 19F RMN (D20) ? -109.9 (m, 1 F, J= 20 Hz). [?]539=+15.3 (C, 0.334, (H20);). [?]365 = +52.8 (C, 0.334, (H20) EJEMPLO G Acido(2S,5E)-2-arnino-6-fluoro-7-f(1 -hidroximinoetil)amino1-5-heptenoico Ejemplo-G-1 ) Se hizo burbujear HCI gaseoso durante 5 minutos a través de una solución fría en agitación (0°C) del producto del ejemplo-F-3 (14 g, 30.0 mmoles) en 100 mi de metanol. La solución amarilla oscura resultante se agitó durante 30 minutos adicionales, tiempo al cual la HPLC indicó consumo completo de material de partida. La mezcla resultante se neutralize con NaHC03 saturado a PH=8, y el producto se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró para dar el producto de aminoéster deseadocomo un aceite amarillo oscuro que se utilizó en crudo en el siguiente paso. EMCL : m/z = 274 [ +Na]+. 1H RMN (CDCI3) ? 1.8 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 3.42 (bm, 1H), 3. 80 (s, 3H), 4.4 (dd, 2H), 5.40 (dt, vinilo, 1 H, J= 21 HZ). 19F RMN (CDCI3) ? - 10.38 (m, 1 F, J= 21 Hz).
Eiemplo-G) Una solución del producto del ejemplo-G-1 (8 g, 30 mmoles) en 70 mi de NaOH 2.5N se agitó durante 10 minutos, tiempo al cual el análisis de CLAR indicó el consumo completo del material de partida. La solución resultante se neutralizó con HCI 12N (aproximadamente 50 mi) a pH=7-8 y se concentró. La suspensión resultante se lavó con metanol, se filtró para remover sales y se concentró a un aceite parduzco. El material crudo se purificó por cromatografía en columna CLAR de fase inversa sobre una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 minutos bombeando 100% de ¡socrático B durante 30 minutos seguido por un gradiente de 0-100% de A durante 10 min y un baño de 100% A durante 20 min (A: 100% de acetonitrilo, B: 100%). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando 1.0 g (14%) del producto deseado como un sólido blanco. El producto se recristalizó a partir de agua caliente y alcohol isopropílico y se recogió por filtración para dar ácido (2S, 5E)-2-amino-6-fluoro-7-[(1-hidroximinoetil)amino]-5-heptenoico puro como un sólido cristalino blanco. Punto de fusión: 198.00-200.00°C. EMCL: míz - 234.1 [M+H]+. 1H RMN (D20) ? 1 .8 (m, 4H), 2.05 (m, 2H), 3.6 (t, [1 H),] 3.9 (d, 2H), 5.2 (dt. vinilo, 1 H, J= 21 HZ). 19F RMN (D20) ? -1 12.1 (m, 1 F, J= 20 Hz). Análisis calculado para C9H16FN303: C, 46.35 ; H, 6.91 ; N, 18.02; O, 20.58. Encontrado: C, 46.44 ; H, 6.95 ; N, 7.94 ; O, 20.78. Análisis quiral >97.7% : CrownPak CR (+) un ¡socrático de 0.8 ml/min con 100% A (A: HCI04 acuoso, pH=1.5).
EJEMPLO H Diclorhidrato de (2S. 5E)-2-amino-6-fluoro-7-r 1-¡m¡noetil)amino1-N-MH- tetrazol-5-iM 5-heptenamida Eiemplo-H-1 ) El producto del ejemplo-F-3 (6.1 g, 0.013 moles) se disolvió en 4 mi de metanol. Se empezó la agitación vigorosa y se añadió 10 mi de HCI 6N. La mezcla de reacción se puso bajo reflujo (aprox. 60°C) durante 18 hr, tiempo al cual análisis de CLAR mostró que la mayor parte del material de partida se había consumido. La reacción se enfrió y se concentró a 3.3 g (100%) de aceite anaranjado. EMCL: m/z = 282 [M+Na]+.
Eiemplo-H-2) El producto del ejemplo-H-1 (3.3 g, 0.013 moles) se disolvió en 12 mi de 1 :1 de H20:dioxano. Se empezó la agitación y se añadió trietilamina (1.95 g, 0.019 moles). La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió dicarbonato de di-ter-butilo (3.4 g, 0.016 moles). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, tiempo al cual se añadió acetonitrilo (4 mi) para disolver sólidos. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 hr, tiempo al cual el análisis de CLAR mostró que la mayor parte del material de partida había sido consumida. La reacción se extinguió con KHS04 1 .0 N (25 mi), se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mi) y las capas orgánicas se secaron sobre MgSC y se concentraron. El material crudo, 3.5 g de un aceite oscuro, se purificó por cromatografía instantánea eluyendo con 4:95: 1 de metanolxloruro de metileno:ácido acético para dar 2.4 g (52%) de producto deseado como un aceite amarillo claro. EMCL: m/z = 382 [M+Na]+.
Eiemplo-H-3) El producto del ejemplo-H-2 (2.4 g, 0.007 moles) se disolvió en 13 mi THF. Se empezó la agitación y se añadió 5-aminotetrazol monohidratado (0.83 g, 0.008 moles) seguido por 1 ,3-diisopropicarbodiimida (1.0 g, 0.008 moles). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 hr, tiempo al cual la CLAR mostró que la mayor parte del material de partida había sido consumido. A la reacción se añadió 12 mi de agua y el THF se removió por destilación bajo vacio. Se añadió etanol (30 mi) y la reacción se calentó a reflujo. Después de 15 minutos a reflujo, la reacción se enfrió a -10 °C, tiempo al cual el producto deseado se precipitó de la solución. El producto se recogió por filtración para dar 1 .25 g (50%) de un sólido blanco. EMCL: m/z = 449 [M+Na]+.
Eiemplo-H-4) El producto del ejemplo-H-3 (1 .0 g, 0.0023 moles) se disolvió en 5 mi de metanol. Se empezó la agitación vigorosa y se añadió 10 mi de 40% ácido acético en agua seguido por polvo de zinc (0.5 g, 0.008 moles). La reacción en agitación se puso bajo reflujo (aprox. 60°C) durante 1.5 hr, tiempo al cual el análisis de CLAR mostró que la mayor parte del material de partida había sido consumido. La reacción se enfrió y el Zn se filtró de la mezcla de reacción a través de celite, lavando bien el celite con metanol adicional. El filtrado y los lavados con metanol se combinaron y se concentraron. El sólido blanco oleoso resultante se purificó por cromatografía en columna de CLAR de fase inversa sobre una columna YMC ODS-AQ eluyendo durante 60 minutos bombeando 100% de ¡socrático B durante 30 minutos seguido por un gradiente de 0-100% A durante 10 minutos y un lavado de 100% A durante 20 minutos (A: 100% acetonitrilo, B: 100% H20 con ácido acético al 0.0025%). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando 0.390 g (44%) del producto de acetamidina deseado como un sólido blanco. EMCL: m/z = 407.3 [M+Na].
Ejemplo-H) El producto del ejemplo-H-4 (0.30 g, 0.780 mmoles) se disolvió en 5 mi de HOAC concentrado. A éste se añadió 1 mi de HCI 4N en dioxano. La reacción se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró tres veces más. La CLAR indicó cantidades de material de partida. El sólido se disolvió en HCI 1 N y se agitó durante 3 hr, tiempo al cual la CLAR indicó que la mayor parte del material de partida se había consumido. La solución se concentró dando 290 mg (98%) del producto de acetamidina deseado como una sal de diclorhidrato. EMCL: m/z = 285.1 [M+H].
EJEMPLO I 2HCI Diclorhidrato derS-r2-f(1 -iminoetil)amino1et¡n-2-metil-1 -cisteína Ejemplo-l-1 ) 1 ,3-tiiazolin-3-form¡l-4-carboxilato de (2R, 4R)-metil-2-ter-butilo Véase Jeanguenat y Seebach, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 2291 (1991 ) y Pattenden ef al. Tetrahedron, 49,2131 (1993): clorhidrato de éster metílico de (R)-cisteina (8.58 g, 50 mmoles), pivalaldehído (8.61 g, 100 mmoles), y trietilamina (5.57 g, 55 mmoles) se pusieron a reflujo en pentano (800 mi) con remoción continua de agua usando una trampa de Dean-Stark. La mezcla se filtró y se evaporó. La tiazolidina resultante (9.15 g, 45 mmoles) y formiato de sodio (3.37 g, 49.5 mmoles) se agitaron en ácido fórmico (68 mi) y se trataron con anhídrido acético (13 mi, 138 mmoles), gota a gota durante 1 hora a 0-5°C. La solución se dejó calentar a temperatura ambiente y agitar durante la noche. Los solvents se evaporaron y el residuo se neutralizó con NAHCO3 acuoso al 5% y se extrajo con éter (3X). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04 anhidro), se filtraron y se evaporaron para dar el compuesto que se cristalizó a partir de hexano-éter como cristales blancos (8. 65 g) (80% en general, mezcla de 8:1 de conformadores). H RMN (CDCI3) ?? conformador mayor: 1 .04 (s, 9H), 3.29 (d, 1 H), 3.31 (d, 1 H), 3.78 (s, 3H), 4.75 (s, 1 H), 4.90 (t, 1 H), 8.36 (s, H). EM m/z (electroaspersión) 232 (M+H)+ (100%), 204 (10) 164 (24).
Eiemplo-l-2) 1.3-tiazolino-3-formil-4-metil-4-carboxilato de (2R. 4R)-metil-2-ter-butilo A una solución del producto del ejemplo-1-1 , 1 , 3-tiazolino- 3-formil-4-carboxilato de (2R, 4R)-metil-2-ter-butilo (8.65 g, 37.4 mmoles), en tetrahidrofurano anhidro (130 mi) bajo N2 a -78 °C se añadió DMPU (25 mi) y la mezcla se agitó durante 5 minutos. Se añadió bis (trimetilsililo)amida de litio, 1 M en tetrahidrofurano, (37.5 mi), y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Después de que se añadió yoduro de metilo (5.84 g, 41.1 mmoles), la mezcla se mantuvo a -78CC durante 4 hr y después se calentó a temperatura ambiente con agitación continua. Los solvents se evaporaron bajo vacío y salmuera y se añadió acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo 3x EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con KHS04 al 10%, agua y salmuera. Después se secaron (MgS04 anhidro, se filtraron, y se separó todo el solvente bajo presión reducida. La cromatografía del aceite residual sobre sílice con 1-10% de EtOAc/hexano dio el compuesto del título (5. 78 g, 63%, mezcla de 2.4:1 de conformadores. 1H RMN (CDCI3) ?? conformador mayor, 1.08 (s, 9H), 1.77 (s, 3H), 2.72 (d, 1 H), 3.31 (d, 1 H), 3.77 (s, 3H), 4.63 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H); conformador menor, 0.97 (s, 9H), 1.79 (s, 3H), 2. 84 (d, 1 H), 3.63 (d, 1 H), 3. 81 (s, 3H), 5.29 (s, 1 H), 8.40 (s, 1 H); EM m/z (electroaspersión) 246 (M+H)+ (100%), 188 (55) 160 (95). Tiempo de retención de 16.5 minutos en una columna Daicel Chemical Industries Chiracel OAS, 10-40% IPA/hexano 0-25 min, >95% ee.
Eiemplo-l-3) Clorhidrato de (2F 2-metil-L-cisteína El producto del ejemplo-1-2, (1 ,3-tiazolino-3-formil-4-]metil-4-carboxilato de 2R, 4R)-metil-2-ter-butilo, (5.7 g, 23.2 mmoles) se agitó con HCI 6N (I00 mi) bajo N2 y se mantuvo un reflujo vigoroso durante 2 días. La solución se enfrió, se lavó con EtOAc y se evaporó para dar el producto clorhidrato de (2R) 2-metil-cisteína (3.79 g, 95%) como un polvo amarillo claro 1H R N (DMSO-De) ?? 1.48 (s. 3H, ) 2.82 (t, 1 H), 2.96 (bs, 2H), 8.48 (s, 3H). EM m/z (electroaspersión) 136 [M+H+].
E¡emplo-l-4) Trifluoroacetato de 3-G2-GG? .1-dimetiletoxh carboninaminoletin-2-metil-L-císteína Se añadió hidruro de sodio (2.6 g, 60% en aceite mineral, 65 mmoles) a un matraz de fondo redondo secado en horno, enfriado bajo vacío, que contenía 1-metil-2-pirrolidinona libre de oxígeno (5 mi). La mezcla se enfrió a -10 °C y se agitó bajo N2. El producto del ejemplo- -3, clorhidrato de 2-metil-L-cisteína, (3.6 g, 21 .0 mmoles) disuelto en 1 -metil-2-pirrolidinona libre de oxígeno (25 mi), se añadió en porciones. Después de haber cesado toda la evolución de H2, se añadió bromuro de 2-[(1 ,1-dimetiletoxicarbonil)-amino]etil (4.94 g, 21 mmoles) en 1 -metil-2-pirrolidinona libre de oxígeno (15 mi) a -10°C. La reacción después se agitó durante 4 hr permitiendo el calentamiento a temperatura ambiente. La solución se neutraliza con HCI 1 N y la 1 -metil-2-pirrolidinona se removió por filtración bajo vacío. La cromatografía de fase inversa con 1 -20% de acetonitrilo en una solución acuosa al 0.05% de ácido trifluoroacético dio el compuesto del título (5.9 g), recuperado secando por congelamiento las fracciones apropiadas. 1H R N [(DMSO-De/DaO) ? 1 .31 (s, 9H), 1 .39 (s, 3H), 2.55 (m, 2H), 2.78 (d, 1 H), 3.04 (d, H), 3.06 (t, 2H). HRMS calculado para [CHH22N2O S: 279.1375 [( +H+), Encontrado: 279.1379.
Ejemplo-l-5) Clorhidrato de S-(2-aminoeti0-2-metil-1-cisteína El producto del ejemplo-1-4, trifluoroacetato de S-[2-[[(1 ,1-dimetiletox¡)carbonil]amino]etil]-2-metil-L-cisteína, (5.5 g, 14.0 mmoles) se disolvió en HCI 1 N (100 mi) y se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante la noche. La solución se removió secando por congelamiento para dar el clorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metil-1-cisteína del título. 1H RMN ? [(D SO-Ds/D20)] ? 1.43 (s, 3H), 2.72 (m, 2H), 2.85 (d, 1 H), 2.95 (t, 2H), 3.07 (d, 1 H). m/z [M+H+] 179.
E¡emplo-l) El producto del ejemplo-1-5, se disolvió en H2O, el pH se ajustó a 10 con NaOH 1 N, y se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (1.73 g, 14.0 mmoles). La reacción se agitó 15-30 min, el pH se elevó a 10, y este procedimiento se repitió 3 veces. El pH se ajustó a 3 con HCI y la solución se cargó en una columna DOWEX 50WX4-200. La columna se lavó con H20 y NH4OH 0.25 M, seguido por NH4OH 0.5 M. Las fracciones del lavado con NH4OH 0.5 M se congelaron inmediatamente, se combinaron y se secaron por congelamiento para dar un aceite que se disolvió en HCI 1 N y se evaporó para dar el compuesto del título como un sólido blanco (2.7 g) 1H RMN (DMSO-d6 D20) ? 1.17 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.52 (d, 1H), 2.68 (m, 2H), 2.94 (d, 1 H), 3.23 (t, 2H).
HRMS calculado para C8H18N302S : 220.1120 [M+H+], Encontrado: 220.1133.
EJEMPLO J 2HCI Diclorhidrato de G2-GGG2-G? -iminoetiDlaminoletilltioirmetill-O-metil-D- serina Los procedimientos y métodos utilizados en este ejemplo fueron idénticos a los del ejemplo I excepto que en el paso Ejemplo-l-2 se usó yoduro de metoximetilo en lugar de yoduro de metilo. Estos procedimientos dueron el producto del título como un sólido blanco (2.7 g). 1H RMN (D20) ? 2.06 (s, 3H), 2.70 (m, 3H), 3.05 (d, 1 H), 3.23 (s, 3H), 3.32 (t, 2H), 3.46 (d, 1 H), 3.62 (d, 1 H). HRMS calculado para C9H20N3O3S: 250.1225 [M+H+], Encontrado: 250.1228.
EJEMPLO K Diclorhidrato de S-f(LR)-2-f(1-iminoetil)aminoM-metiletil1-2-metil-1- cisteína Ejemplo-K-1 ) (S)-1 -r(benciloxicarbonil)amino1-2-propanol A una solución de (S)-1-amino-2-propanol (9.76 g, 130 mmoles) en benceno anhidro (60 mi) a 0°C se añadió cloroformiato de bencilo (10.23 g, 60 mmoles) en benceno anhidro (120 mi) lentamente, en porciones, durante un período de 20 min mientras se agitaba vigorosamente bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó durante 1 hora a 0°C, después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 adicionales. La mezcla se lavó con agua (2X) y salmuera (2X) antes de que la capa orgánica se secara sobre MgSCu anhidro. La evaporación de todo el solvente dio el producto del título como un aceite. 1H RMN (CDCI3) ? .22 (d, 3H, ) 2.40 (bs, H), 3.07 (m, H), 3.37 (m, 1 H) ), 3.94 (m, 1 H), 5.16 (s, 2H), 5.27 (m, 1 H), 7.38 (m, 5H). EM m/z (electroaspersión) 232 [M+23 ] (100%), 166 (96).
Eíemplo-K-2) Tosilato de (S)-1 -[(benciloxicarbonil)aminol-2-propanol A una solución del producto del ejemplo-K-1 , (S)-1 -[(benc¡loxicarbonil)]amino]-2-propanol, (9.74 g, 46.7 mmoles) y trietilamina 7.27 g, 72 mmoles) en cloruro de metileno (60 mi) a 0°C se añadió cloruro de toluensulfonilo (9.15 g, 48 mmoles) en cloruro de metileno (18 mi) lentamente, en porciones, durante un período de 20 min mientras se agita vigorosamente bajo nitrógeno. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 36 horas más bajo nitrógeno. La capa orgánica se lavó con HCI 1 N, agua, solución de NaHC03 al 5%, agua y salmuera antes de que se secara sobre MgS04 anhidro. La evaporación de todo el solvente dio un sólido blanco que se hizo pasar a través de un tapón de sílice con acetato de etilo/hexano (1 :4) para remover exceso de cloruro de toluensulfonilo y después con acetato de etilo/hexano (1 : 3) para dar el producto del título como cristales blancos. Este material se recristalizó a partir de acetato de etilo/hexano para dar agujas blancas (10.8 g ). 1H RMN (CDCI3) ?? 1 .22 (d, 3H, ) 2.39 (s, 3H), 3.20 (m, H), 3.43 (dd, 1 H) ), 4.66 (m, 1 H), 5.02 (m, 1 H), 5.04 (ABq, 2H), 7.34 (m, 7H), 7.77 (d, 2H). EM m/z (electroaspersión) 386 [M+23]+ (100%), 320 (66). El producto se examinó en una columna de CLAR Regis Technologies Inc. Perkle Covalent (R,R) 7-GEM1 usando fase móvil de isopropanol/hexano y un gradiente de 10% de isopropanol durante 5 min, después 10 to 40% isopropanol durante un período de 25 minutos, y usando tanto detectores de UV como de polarimetría de láser. Pico mayor del tiempo de retención: 22.2 min, >98 % ee.
Eiemplo-K-3) Trifluoroacetato de S-[(1 R)-2-(benciloxicarbonilaminoV1-metiletil]-2-metiM -cisteína El producto del ejemplo- -3, clorhidrato de 2-metil-L-cisteína (1 g, 6.5 mmoles) se añadió a un matráz de fondo redondo lavado a chorro con N2 secado en horno, disuelto en [1-metil-2-]pirrolidinona libre de oxígeno (5 mi), y el sistema se enfrió a 0°C. Se añadió hidruro de sodio (0.86 g, 60% en aceite mineral, 20.1 mmoles) y la mezcla se agitó a 0°C durante 15 min. Una solución del producto del ejemplo-K-2, se añadió tosilato de (2S)-1-[(N-benciloxizarbonil)amino]-2-propanol (2.5 g, 7 mmoles) disuelto en 1-metil-2-pirrolidinona libre de oxígeno (10 mi) se añadió durante 10 min. Después de 15 minutos a 0°C, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 horas. La solución se acidificó después a pH 4 con HCI 1 N y [1 -metil-2-pirrolidinona se removió por evapporación bajo vacío. La cromatografía de fase inversa con 20-40% de acetonitrilo en una solución acuosa al 0.05% de ácido trifluoroacético dio el compuesto del título en (0.57 g),recuperado mediante secado por congelamiento. 1H RMN (H20, 400 Hz)? 1.0 (d, 3H), 1 .4 (s, 3H), 2.6 (m, 2H), 2.8 (m, 1 H), 3.1 (m, 2H), 3.6 (s, 1 H), 5.0 (ABq, 2H), 7.3 (m, 5H). EM m/z (electroaspersión): 327 [M+H+] (100%), 238 (20), 224 (10), y 100 (25).
Ejemplo-K-4) Clorhidrato de fS-r(1 )-2-am¡no-1 -metilet¡n-2-metil-1 -cisteína El producto del ejemplo-K-3, trifluoroacetato de S-[(1 R)-2-(benciloxizarbonilamino)-1-metiletil]-2-metil-L-cisteína (0.5 g, 1 .14 mmoles) se disolvió en HCI 6N y se puso a reflujo durante 1 .5 hora. La mezcla se enfrió después a temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc. La capa acuosa se concentró bajo vacío para dar el producto del título, clorhidrato de (2R, 5R)-S~ (1 -amino-2-propil)-2-metil-cisteína (0.29 g), que se usó sin purificación adicional. 1H RMN (H20, 400 MHz)? 1 .2 (m, 3H), 1 .4 (m, 3H), 2.7 (m, 1 H), 2.8-3. 2 (m, 2H), 3.4 (m, 1 H). (algunas duplicaciones de picos debido a formas rotaméricas). EM m/z (electroaspersión): 193 [M+H+] (61 %), 176 (53), 142 (34), 134 (100), y 102 (10).
Eiemplo-K) El producto del ejemplo-K-4, clorhidrato de S-[(1 ft)-2-amino-1 -metiletil]-2-metil-1-cisteína, (0.2 g, 0.76 mmoles) se disolvió en 2 mi de H20, el pH se ajustó a 10.0 con NaOH 1 N, y clorhidrato de acetimidato de etilo (0. 38 g, 3 mmoles) se añadió en cuatro porciones durante 10 minutes, ajustando el pH a 10.0 con NaOH 1 N según es necesario. Después de 1 hr, el pH se ajustó a 3 con HCI 1 N. La solución se cargó en una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua. La columna se lavó con H2O y NH4OH 0.5N. Las fracciones básicas se depositaron y se concentraron a sequedad bajo vacío. El residuo se acidificó con HCI 1 N y se concentró al producto del título del ejemplo K, (49 mg). 1H RMN (H20, 400 MHz)? 1 .3-1 . 0 (m, 3H), 1 .5 (m, 3H), 2.1-1. 8 (m, 3H), 3.4-2. 6 (m, 5H), 3.6 (m, 1 H) (rotámeros observados). E m/z (electroaspersión): 234 [M+H+] (100%), 176 (10), y 134 (10).
EJEMPLO L Diclorhidrato de S-r(1S)-2-r(1-iminoetinaminoM-metiletin-2-metil-1- cisteína Los procedimientos y métodos empleados aquí fueron idénticos a los del ejemplo K, excepto que en el paso ejemplo-K-1 (f?)-1 -amino-2-propanol se usó en lugar de (S)-1-amino-2-]propanol para dar el material del título, clorhidrato de S-[(1 S)-2-[(1-iminoetil)amino]-1-metiletil]-2-metil-]-L-cisteína H R N (H2O,400 mhz) ? 3.6 (m, 1 H), 3.4-2. 6 (m, 5H), 2.1-1.8 (m, 3H), 1.5 (m, 3H), y 1 . 3-1.0 (m, 3H). HRMS calculado para C9Hi9N302S [M+H+]: 234.1276. Encontrado: 234.1286.
EJEMPLO M Diclorhidrato de fS-í2-M -iminoetil)amino1etill-2-etil-1 -cisteína Los procedimientos y métodos usados en esta síntesis fueron los mismos que los usados en el Ejemplo I excepto que se usó triflato de etilo en el Ejemplo-1-2 en lugar de yoduro de metilo. La cromatografía de fase inversa, usando un gradiente de 10-40% de acetonitrilo en agua, se usó para purificar el producto del título (rendimiento de 20%). H RMN (D20) ?? 0.83 (t, 3H), 1.80 (m, 2H), 2. [08] (s, 3H), 2.68 (m, 1 H), 2.78 (m, 1 H), 2. 83 (m, 1 H), 3.11 (m, 1 H), 3.36 (t, 2H). HRMS calculado para C9H20N3O2S: 234. 276 [ +H+], Encontrado: 234.1284.
EJEMPLO N Diclorhidrato de 2-GGGG2-(1 -IminoetiQaminoletilItiolmetill-D-valina E¡emplo-N-1 ) Triflato de isopropilo Triflato de plata (25.25 g, 98. 3 mmoles) agitado en éter dietílico (300 mi) bajo nitrógeno se trató con yoduro de isopropilo (16.54 g, 98.5 mmoles) en éter (200 mi) durante 15 minutos. La mezcla se agitó durante 10 minutos y después se filtró. El filtrado se destiló a presión reducida. El destilado se volvió a destilar a presión atmosférica para remover la mayor parte del éter dietílico, dejando una mezcla del triflato de isopropilo-éter dietílico del título (84:16 en peso) (15.64 g, 70% corregido) como un líquido incoloro 1H RMN (CDCI3, 400 MHz)? 1.52 (d, 6H), 5.21 (septuplete, 1 H). Los procedimientos y métodos utilizados aquí fueron los mismos que los usados en el Ejemplo I excepto que el triflato de isopropilo reemplazó al yoduro de metilo en el Ejemplo-1-2. El producto del título crudo se purificó por cromatografía de fase inversa usando una elusión por gradientes de 10-40% de acetonitrilo en agua. 1 H RMN (H20, 400 MHz)? ? 0.94 (dd, 6H), 2.04 (septuplete, 1 H), , 3H), 2.65, 2. 80 (d m, 2H), 2.85, 3.10 (dd, 2H), 3.37 (t, 2H). HRMS calculado para C10H22N3O2S: 248.1433 [M+H+], Encontrado: 248.1450.
EJEMPLO O 2TFA Bistrifluoroacetato de S-r2-(1 -iminoetilamino)et¡n-2-metil-(D/L)-cisteína Eíemplo-O- ) Ester metílico de S-(2-am¡noetil)-L-cisteína Una muestra de 10 g (50 mmoles) de S-(2-aminoetil)-L-cisteína se disolvió en 400 mi de metanol. En esta solución enfriada se hizo burbujear en HCI anhidro durante 30 minutos. Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la solución se concentró para dar 12.7 g del compuesto del título.
Eiemplo-O-2) Ester metílico de N-{4-clorofenil)metilen1-S-f2-ff(4- clorofeniO-metilenlaminoletill-L-cisteína Una muestra de 12.7 g (50 mmoles) del producto del ejemplo-O-1 , éster metílico de S-(2-aminoetil)-L-cisteína, se disolvió en acetonitrilo. A esta solución se añadió 12.2 g (100 mmoles) de MgS04 anhidro, 14 g (100 mmoles) de 4-clorobenzaldehído y 100 mmoles de trietilamina. Esta mezcla se agitó durante 12 horas, se concentró a un volumen pequeño y se diluyó con 500 mi de acetato de etilo. La solución orgánica se lavó sucesivamente con (0.1 %) NaHC03, (2N) NaOH, y una solución de salmuera. La solución orgánica se secó (MgS0 anhidro), se filtró y se concentró para dar 7.5 g del compuesto del título. [M + H+] = 179.
Eiemplo-O-3) Ester metílico de N-f4-clorofenil)metilen1-S-f2-íf(4-clorofenil)-metilenlaminoletin-2-metil-D/L-cisteína Una muestra del producto del ejemplo-O-2, éster metílico de N-{4-clorofenil)metilen]-S-[2-[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-L-cisteína (7.5 g, 17 mmoles), en THF anhidro se trató con 17 mmoles de bis (trimetilsililo) amida de sodio a -78°C bajo nitrógeno, seguido por 2.4 g (17 mmoles) de yoduro de metilo. La solución se mantuvo a -78°C durante 4 hr y después se calentó a temperatura ambiente con agitación continua. Los solventes se evaporaron bajo vacío y se añadió salmuera y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo 3x con EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con KHS04 al 10%, agua y salmuera antes de que se secara (MgS04 anhidro) se filtró y se evaporó para dar el compuesto del título.
Ejemplo-O-4) Clorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metíl-D/L-cisteína Una muestra del producto del ejemplo-0-3, éster metílico de N-[4-clorofenil)metilen]-S-[2-[[(4-clorofenil)metilen]amino]etil]-2-metil-D/L-cisteína (4.37 g, 10 mmoles), se agitó y se calentó (60 °C) con HCI 2N durante la noche y la solución se lavó (3X) con acetato de etilo. La solución acuosa se secó por congelamiento para dar el compuesto del título.
Ejemplo-O) Una muestra del producto del ejemplo-O-4, clorhidrato de S-(2-aminoetil)-2-metil-D/L-cisteína (2.5 g,10 mmoles), se disolvió en H20 y el pH se ajustó a 10 con NaOH 1 N. Clorhidrato de acetimidato de etilo (1 .24 g, 10.0 mmoles) se añadió después a la mezcla de reacción. La reacción se agitó durante 15-30 minutos, el pH se elevó a 10, y este procedimiento se repitió 3 veces. El pH se redujo a 4 con una solución de HCI y la solución se evaporó. El residuo se purificó en CLA de fase inversa con H20 que contenía 0.05% de trifluoroácido acético como la fase móvil dar el producto del título del ejemplo O. M + H = 220.
EJEMPLO P Diclorhidrato de ácido (2ffl-2-amino-3 rrr2-r(1-iminoeti0aminol1etill- sulfinill-2-metilpropanoico Una solución de S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-metil-1-cisteína (Ejemplo I, 0.2g, 0.73 mmoles) en 3 mi de agua se agitó y se enfrió a 0°C y una solución de H202 al 3% (0.8 mi, 0.73 mmoles) en ácido fórmico (0.4 mi, 0.73 mmoles) se añadió en 0.3 mi de porciones. El baño frío se removió y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. La solución se concentró bajo vacío, se diluyó con agua (10 mi) y se concentró nuevamente para dar la sulfota cruda. Este residuo se cromatografió (C-18 de fase inversa, con H20 de fase móvil que contiene 0.05% de ácido trifluoroacético) para dar la sulfona pura. La sulfona se trató con HCI 1 M (10 mi) y se concentró bajo vacío para dar 140 mg de una mezcla de 2 diastereomeros del compuesto del título como un aceite incoloro de las sales de HCI. 1H RMN (300 MHz, D20) ? 1.5 (s, 2H), 1 .6 (s, 1 H), 2.0 (s, 3H), 3.1 (m, 2H), 3.3 (m, 2H) 3.6 (m, 2H). HRMS calculado para CeHisNgOaS: 236.1069 [M+H+], Encontrado: 236.1024.
EJEMPLO Q Diclorhidrato de ácido (2R)-2-amino-3ff2-r(1-iminoetil)amino1et¡n Una solución de diclorhidrato de S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína, el producto del ejemplo I, (0.15 g, 0.54 mmoles) en 2 mi de agua se enfrió a 0°C y se añadió una solución de H2O2 al 3% (1.6 mi, 1.46 mmoles) en ácido fórmico (0.8 mi, 14.6 mmoles). El baño frío se removió y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La solución se concentró bajo vacío, se diluyó con 10 mi de agua y se concentró nuevamente para dar el sulfóxido crudo. El residuo se diluyó con 4 mi de agua y se ajustó a pH 9 con NaOH 2.5 N. Se añadió acetone (5 mi), seguido por Boc20 (0.2 g), y la reacción se agitó durante 48 hr a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se ajustó a pH 6 con HCI 1 M y se concentró bajo vacío.
Este residuo se cromatografió (C-18 de fase inversa; 40 a 50% ACN: H20, 0.05% TFA) para dar el material protegido con Boc puro. Las fracciones se concentraron bajo vacío y el residuo se trató con HCI 1 N (3 mi) durante 1 hr. La solución se concentró para dar 30 mg del compuesto del título como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, D20)? 4.0 (d, 1H), 3.7 (d, 1H), 3.6 (t, 2H), 3.5 (t, 2H), 2.1 (s, 3H), y 1.5 (s, 3H) ppm. HRMS calculado para C8H 8N304S: 252.1018 [M + H+], Encontrado: 252.0992.
EJEMPLO R Diclorhidrato da ácido (2S,52^-2-amino-6-metil-7-f(1 -iminoetil)amino1-5- heptenoico Eíemplo-R-1 ) Una solución de 2-fosfonopropionato de trietilo (6.5 mg, 27.1 mmoles) en tolueno (60 mi) se trató con bis (trimetilsilil) amida de potasio 0.5 M (50.0 mi, en tolueno) y el anión resultante se condensó con el producto de aldehido del ejemplo U-3 por el método del ejemplo U-4 (véase Ejemplo U más adelante). Esto produjo, después de cromatografía, 8 g de una mezcla de 3:7 respectivamente de los diésteres Z y E deseados. (1H) RMN (300 MHz, CDCI3) 6.7-6. 8 ppm (m, 1 H), 5.9 ppm (m, IH), 4.9 ppm (m, 1 H), 4.2 ppm (q, 2H), 3.7 ppm (s, 3H), 2.5 ppm (m, 1 H), 2.2-2. 3 ppm (m, 2H), 2.0 ppm (m, 1 H), 1.9 ppm (s, 3H), 1.8 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H), 1.3 ppm (t, 3H).
Eiemplo-R-2) La mezcla de producto del ejemplo R-1 (850 mg, 2.0 mmoles) en Et20 (30 mi) se redujo durante un período de veinte minutos con diisobutil-aluminio/hidruro (DIBAL) por el método del ejemplo U-5 para producir la mezcla deseada ilustrada cruda de alcohol E y éster Z no reducido. Esta mezcla se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con n-hexano: EtOAc (9:1 ) a n-hexano: EtOAc (1 :1) proveyendo muestras del éster Z (530 mg) y los materiales deseados de alcohol E. Ester Z: (1H) R N (300 MHz, CDCI3) 5.9 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H), 4.2 ppm (q, 2H), 3.7 ppm (s, 3H), 2.5 ppm (m, 1 H), 2.2-2. 3 ppm (m, 2H), 1.9 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H), 1. 3 ppm (t, 3H). Alcohol E: (1 H) RMN (300 MHz, CDCI3) 5.35 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H), 3.95 ppm (s, 1 H), 3.7 ppm (s, 3H), 1.8-2. 2 ppm (m, 6H), 1.6 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H).
Eiemplo-R-3) El producto de éster Z del ejemplo R-2 (510 mg, 1.2 mimóles) en Et20 (30 mi) se redujo durante un período de dos horas con diisobutil-aluminio/hidruro (DIBAL) por el método del ejemplo U-5 para producir el alcohol Z deseado ilustrado crudo. Este material se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con n-hexane: EtOAc (9:1) a n-hexano:EtOAc (8: 2) para dar 340 mg del producto de alcohol Z deseado. (1H) RMN (300 MHz, CDCI3) ? 5.3 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H), 4.2 ppm (d, 1 H), 4.0 ppm (d, 1 H), 2.2 ppm (m, 3H), 1.95 ppm (m, 1 H), 1.8 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H).
E¡emplo-R-4) Una solución de CH2CI2 (5 ML) del alcohol de producto del ejemplo R-3 (340 mg, 0.9 mmoles) se trató con trietilamina (151 mg, 1.5 mmoles). A esta solución enfriada en un baño de hielo se añadió una solución de CH2CI2 (1 .5 mi) de cloruro de metansulfonilo. Después de quince minutos el baño de hielo se removió y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 hr. La mezcla de reacción se lavó después con KHS04 al 10%, se secó sobre Na2S04 y se separó de todo el solvente bajo presión reducida para producir 350 mg del cloruro alílico Z deseado. ( H) RMN (300 MHz, CDCI3) ? 5.4 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H), 4.1 ppm (d, 1 H), 4.0 ppm (d. 1 H), 2.1 ppm (m, 3H), 1 .95 ppm (m, 1 H), 1.8 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H).
Ejemplo-R-5) Una suspensión de 3-metil-1 ,2,4-oxa-diazolin-5-ona de potasio en DMF se hace reaccionar con una solución de DMF del producto del ejemplo R-4 por el método del ejemplo S-2 más adelante para producir el material.
Eiemplo-R-6) El producto del ejemplo R-5 se hace reaccionar con zinc en HOAc por el método del ejemplo U-7 para dar la amidina.
Eiemplo-R-7) El producto del ejemplo R-6 se hizo reaccionar con HCI 4N en dioxano en HOAC glacial para dar la amidina.
Eiemplo-R) El producto del ejemplo R-7 es desprotegido para dar el diclorhidrato de aminoácido.
EJEMPLO S Diclorhidrato de ácido (2S.5E)-2-amino-6-metil-7-rn-Íminoeti0amino1-5- heptenoíco Eiemplo-S-1 ) El producto de alcohol E del ejemplo R-2 (1.3 g, 3.3 mmoles) se hizo reaccionar con trietilamina (525 mg, 5.2 mmoles) y cloruro de metansulfonilo (560 mg, 5.2 mmoles) por el método del ejemplo R-4 para dar 1.4 g del cloruro alílico E deseado. ( H) RMN (400 Hz, CDCI3) 5.5 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H), 4.0 ppm (s, 2H), 3.7 ppm (s, 3H), 2.1-2.3 ppm (m, 3H), 1.9 ppm (m, 1 H), 1.7 ppm (s. 3H), 1.5 ppm (s, 18H).
Ejemplo-S-2) Una suspensión de 3-metil-1 ,2,4-oxa-diazolin-5-ona de pota (460 mg, 3.35 mmoles) en 5 mi de DMF se trató con una solución de DMF (15 mi) del producto del ejemplo S-1. Esta mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 17 hr antes de que se añadieran 50 mg (0.04 mmoles) adicionales de la sal de diazolin-5-ona. El calentamiento de la reacción agitada se continuó durante 3 hr más antes de que se enfriara a temperatura ambiente y se diluyera con 180 mi de agua. Esta mezcla se extrajo con EtOAc y los extractos se diluyeron con 120 mi de n-hexano, se lavaron con agua, se secaron sobre Na2S04 y se separaron de todo el solvente bajo presión reducida para dar 1.3 g del material. ( H) RMN (400 Hz, CDCI3) 5.5 ppm (m, 1 H), 4.9 ppm (m, 1 H) 4.2 ppm (s, 3H), 3.7 ppm (s, 3H), 2.2 ppm (m, 3H), 1.95 ppm (m, 1 H), 1.8 ppm (s, 3H), 1.5 ppm (s, 18H).
Eiemplo-S-3) El producto del ejemplo S-2 (460 mg, 1.0 mmoles) se hizo reaccionar con zinc en HOAc por el método del ejemplo U-7 (véase el Ejemplo U más adelante) para dar 312 mg de la amidina deseada después de la purificación por CLAR.
Eiemplo-S) El producto del ejemplo S-3 (77 mg, 0.2 mmoles) se desprotegió con HCI 2N por el método del ejemplo U para dar 63 mg de diclorhidrato del aminoácido E.
EJEMPLO T Diclorhidrato de ácido (2S.5Z)-2-amino-7-f(1 -íminoetil)amino1-5- heptenoico Eiemplo-T-1 ) BisftrifluoroetiOfosfonoacetato de metilo (4.77 g, 15 mmoles) y 23.7g (90 mmoles) de 18-corona-6 se disolvieron en 80 mi de THF anhidro y se enfriaron a -78°C. A esta solución se añadió 30 mi (15 mmoles) de bis (trimetilsililo)amida de potasio, seguido por 5.1g (14.7 mmoles) de éster metílico de aldehido N,-diBoc glutámico del ejemplo U-3 (véase el Ejemplo U más adelante). Después de agitarse durante 30 minutos a -78°C, la reacción se extinguió con KHSO4 acuoso. La extracción de la mezcla de reacción con EtOAc y la concentración dio 2.95 g (49%) del compuesto deseado. Espectro de masa M + H = 402.
Eiemplo-T-2) El producto del ejemplo T-1 fue reducido por el método del ejemplo U-5 para dar el compuesto deseado.
Eiemplo-T-3) El producto del ejemplo T-2 se dejó reaccionar con 3-metil-1 ,2,4-oxadiazol¡n-5-ona por el método del ejemplo U-6 para dar el compuesto deseado.
Eiemplo-T-4) El producto del ejemplo T-3 fue desprotegido método del ejemplo U-7 para dar el compuesto deseado.
Eiemplo-~n El producto del ejemplo T-4 se disolvió en HCI 2 N y se calentó a reflujo. La mezcla de reacción se enfrió y se concentró para dar 0.12 g del producto deseado. H RMN 1.8-2.0 (m, 2H); 2.05 (s, 3H); 2.15 (q, 2H); 3.75 (d, 2H); 3.9 (t, 1 H); 5.45 (m, 1 H); 5.6 (m, 1 H) EJEMPLO U Diclorhidrato de ácido ( S.5E)-2-amino-7-IY1 -iminoetiO amino1-5- heptenoico E¡emplo-U-1 ) Ácido L-glutámico (6.0 g, 40.78 mmoles) se disolvió en metanol (100 mi). A la mezcla de reacción se añadió cloruro de trimetilsililo (22.9 mi, 180 mmoles) a 0°C bajo nitrógeno y se dejó agitar durante la noche. A la mezcla de reacción a 0°C bajo nitrógeno se añadió trietilamina (37 mi, 256 mmoles) y bicarbonato de di-ter-butilo (9.8 g, 44.9 mmoles) y se agitó durante dos horas. El solvente se removió y el residuo was trituró con éter (200 mi). La mezcla triturada se filtró. El filtrado se evaporó a un aceite y se cromatografio sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo y hexano, para dar el diéster mono boc L-glutámico (10.99 g, 98%).
Eiemplo-U-2) Acido Mono boc L-glutámico (10.95 g, 39.8 mmoles) se disolvió en acetonitrilo (130 mi). A la mezcla de reacción se añadió 4-dimetilaminopir¡dina (450 mg, 3.68 mmoles) y bicarbonato de di-ter-butilo (14.45 g, 66.2 mmoles) y se agitó durante 20 horas. El solvente se evaporó y el residuo se cromatografio sobre sílice y se eluyó con acetato de etilo y hexano para dar el diéster di-boc-L-glutámico (14.63 g, 98 %).
Eiemplo-U-3) El producto del ejemplo U-2 (10.79 g, 28.7 mmoles) se disolvió en éter dietilico (200 mi) y se enfrió en un baño de hielo seco a -80 C. A la mezcla de reacción se añadió hidruro de diisobutolaluminio (32.0 mi, 32.0 mmoles) y se agitó durante 25 minutos. La mezcla de reacción se removió del baño de hielo seco y se añadió agua (7.0 mi). Se añadió acetato de etilo (200 mi) a la mezcla de reacción y se agitó durante 20 minutos. Se añadió sulfato de magnesio (10 g) a la mezcla de reacción y se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y se concentró para dar un aceite amarillotransparente (11.19 g). El aceite amarillo se cromatografió sobre sílice y se eluyó con acetato de etilo y hexano.
El producto (8.6 , 87 %) fue un aceite amarillo claro transparente. Espectrometría de masa: M+H 346, M+Na 378; (1H) R N (400 MHz, CDCI3) 9.74 ppm (s, 1 H), 4.85 ppm (m, 1 H), 3.69 ppm (s, 3H), 2.49 ppm (m, 3H), 2.08 ppm (m, 1 H), 1 .48 ppm (s, 18H). N(Boc)2 Eiemplo-U-4) Fosfonoacetato de trietilo (6.2 mi, 31.2 mmoles) se disolvió en tolueno (30 mi) y se puso en un baño de hielo bajo nitrógeno y se enfrió a 0°C. A la mezcla de reacción, bis(trimetilsilil)amida de potasio (70 mi, 34.9 mmoles) se añadió y se agitó durante 90 minutos. A la mezcla de reacción el producto del ejemplo U-3 (8.51 g, 24.6 mmoles) disuelto en tolueno (20 mi) se añadió y se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se añadió sulfato ácido de potasio (25 mi, 25 mmoles) y se agitó durante 20 minutos. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3X100 mi), se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para dar un aceite amarillo pardusco turbio (12.11 g). El aceite se cromatografió sobre sílice, se eluyó con acetato de etilo y tolueno para dar un aceite amarillo claro (7.21 g, 70 %).
Espectrometría de masa: M+H 416, M+NH4 433, -boc 316,-2 boc, 216. ( H) RMN (400 MHz, CDCI3) 6.88 ppm (m, 1 H), 5.82 ppm (d, 1 H), 4.81 ppm (m, 1 H), 5.76 ppm (s, 3H), 2.50ppm (m, 3H), 2.21 ppm (m, 1 H), 1 .45 ppm (s, 18H).
Eiemplo-U-5) El producto del ejemplo U-4 (5.0 g, 12.03 mmoles) se disolvió en éter dietílico (100 mi) y se colocó en un baño de hielo seco y se enfrió a -80°C. A la mezcla de reacción se añadió hidruro de diisobutilaluminio (21.0 mi, 21.0 mmoles). Y se agitó durante 30 minutos. A la mezcla de reacción agua (10 mi) se añadió, se removió del baño de hielo seco, y se agitó durante 60 minutos. A la mezcla de reacción sulfato de magnesio (10 g) se añadió y se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró para dar un aceite amarillo (5.0 g). El aceite se cromatografió sobre sílice, se eluyó con acetato de etilo y hexano, para dar un aceite amarillo claro (2.14 g, 47 %). Espectrometría de masa: M+H 374, M+NH4 391 (1H) RMN (400 MHz, CDCI3) 5.63 ppm (m, 2H), 4.88 ppm (m, 1 H), 4.02 ppm (s, 2H), 3.68 ppm (s, 3H), 2.12 ppm (m, 4H), 1.47 ppm (s, 18H).
Eiemplo-U-6) El producto del ejemplo U-5 se disolvió en tetrahydrofuran (50mL). A la mezcla de reacción se añadió trifenilfosfina sobre polímero (3.00 g, 8. 84 mmoles), oxadiazolinona (720 mg, 7.23 mmoles), y éster dimetílico de ácido azodicarboxílico (1.17 g, 3.21 mmoles) y se agitaron durante seis horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró sobre celite y se concentró para dar un aceite amarillo turbio (2.81 g). El aceite se cromatografió sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo en hexano, para dar un aceite incoloro transparente (1.66 g, 68 %). Espectrometría de masa: M+H 456, M+NH4 473, -boc 356, -2 boc 256 (1H) RMN (400 MHz, CDCI3) 5.65 ppm (m, 1 H), 5.45 ppm (m, 1 H). 4.79 ppm (m, 1 H), 4.1 1 ppm (d, 2H), 3.68 ppm (s, 3H), 2.17 ppm (m, 4H), 1.47 ppm (s, 18 H).
Eiemplo-U-7) El producto del ejemplo U-6 (300 mg, 0.66 mmoles) se disolvió en una solución de ácido acético y agua (10 mi, 25/75) que contiene zinc metálico y se sometió a sonicacion durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre celite y se cromatografió sobre CLAR de fase inversa para dar un residuo incoloro transparente (13 mg, 4 %). (1H) RMN (400 Hz, CDCI3) 8.89 ppm (m, 1 H), 5.68 ppm (m, LH), 5.47 ppm (m, 1 H), 3. 80 ppm (d, 2H), 3.71 ppm (s. 3H), 2.18 ppm (m, 4H), 1 .41 ppm (s, 18 H).
Eiemplo-U) El producto del ejemplo U-7 (13.0 mg, 0.031 mmoles) se disolvió en HCI 2 N (1.22 mi, 2.44 mmoles) y se puso a reflujo durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró, para dar un aceite incoloro transparente (6.6 mg, 95%) Espectrometría de masa: M+H 200, ( H) RMN (400 MHz, D20) 5.65 ppm (m, 1 H), 5.47 ppm (m, 1 H) 3.80ppm (t, 1 H), 3.72 ppm (d. 2H), 2.0 ppm (m, 5H), 1.87 ppm (m, 2H).
EJEMPLO V Clorhidrato de ácido (R, 2S)-aminohexahidro-7-imÍno-1H-azepin-2- hexanoico trihidratado Ejemplo-V-1 ) Un matraz de 3 litros de tres cuellos se purgó con nitrógeno antes de que se cargue con ciclohexanona (1.27 mol, 132 mi) y 500 mi de tolueno. Esta mezcla agitaada se enfrió a 0°C y se añadió 157.2 g (1 .1 eq) de t-butóxido de potasio. Después de agitar esta mezcla durante 1 hr, se notó un cambio decolor y textura antes de que una solución de bromuro de 5-pentenilo (1.27 moles, 136 mi) en 100 mi de tolueno se añadió gota a gota durante 1 hr a la mezcla de reacción mecánicamente agitada. La mezcla de reacción se dejó calentar a 25°C y se agitó durante la noche. Después se diluyó con 800 mi de KHSO4 1 N y la fase orgánica se secó (MgS04), se filtró y se evaporó a sequedad para dar 208.5 g de producto crudo. Este material se purificó después por destilación bajo vacío (bajo presión de aspirador de agua) para dar el producto del título en un rendimiento de 47%.
H RMN (CDCI3, ppm): 1.0-2.4 (m, 13H), 4.9-5.1 (m, 2H), 5.7-5.9 1 H).
Eiemplo-V-2) El producto del ejemplo V-1 (93.67 g, 0.563 moles) junto con EtOH (600 mi), agua (300 mi), NaOAc (101.67 g, 1 .24 mole), y NH2OH.HCI (78.31 g, 1 .13 moles) en donde se combina en un matraz de 3 litros de tres cuellos. Esta mezcla de reacción agitada se puso a reflujo durante 16 hr y depués se agitó a 25°C durante otras 24 hr. Todo el solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se dividió entre éter dietílico (Et20, 500 mi) y agua (200 mi). La capa acuosa se extrajo 3X con 200 mi de éter. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04, se filtraron y se separaron bajo vacío para dar la oxíma del título (121.3 g, rendimiento crudo de 100%). H RMN (CDCI3 ppm): 1.2-2.6 (m, 13H), 4.9-5.1 (m, 2H), 5.7-5.9 (m, 1 H).
E¡emplo-V-3) Un matraz de 3 litros de tres cuellos se purgó con nitrógeno y después se cargó con hexametidisiloxano (471.7 mi, 2.2 moles), tolueno (500 mi), y pentóxido de fósforo (203.88 g, 1 .4 moles). Esta mezcla heterogénea se puso a reflujo hasta que se obtuvo una solución clara (aproximadamente 1 .5 hr). Después de enfriar esta a temperatura ambiente, el producto de oxima del ejemplo V-1 (102.1 g , 0.563 moles) en 200 mi de tolueno se añadió a la mezcla de reacción anterior durante un período de 1 hr a 25°C. La mezcla de reacción se agitó durante otras 4-6 hr (verificado por TLC: 50% EA en Hex, l2) antes de que se vaciara en agua con hielo con mezclado uniforme. A esta mezcla de suspensión en hielo se añadió 250 g de NACI y la mezcla resultante se ajustó a pH 5 añadiendo carbonato de potasio sólido. Esta suspensión se extrajo 3X con 500 mi de éter dietílico (Et20) y las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre gS04, se filtraron y se separaron bajo vacío para dar la mezcla cruda de lactamas regioisoméricas (84.6 g).
Eiemplo-V-4) Isómero R Isómero S El producto del ejemplo V-3 se sometió después a cromatografía (sílice.acetonitrilo) para purificación y separación regioisomérica. De la muestra cruda, el regioisómero de 7-pentenilo se aisló en un rendimiento de 50% y después de cromatografía quiral, los enantiómeros individuales deseados se aislaron en un rendimiento de 43% cada uno. Isómero R: Análisis elemental calculado para C11H19 O: C, 71.99 ; H, 10.57 ; N, 7.63. Found: C, 71.97 ; H, 10.58 ; N, 7.52 H RMN (CDCI3 ppm): 1.3-1.6 (m, 7H), 1.75-1. 9 (m, 2H), 1.95-2.15 (m, 3H), 2.4-2. 5 (m, 2H), 3.25-3. 35 (m, 1 H), 4.95-5. 05 (m, 2H), 5.7-5.85 (m, 1 H). 13C RMN (CDCI3, ppm): 23.166, 25.169, 29.601 , 33.209, 35.475, 35.624, 36.783, 53.600, 1 14.976, 137.923, 177.703 [ ]25 = +26.9° (CHCI3) a 365nm. Isómero S: Análisis elemental calculado para CnHigNO: C, 71.99; H, 10.57; N, 7.63. Encontrado: C, 72.02 ; H, 10.61 ; N, 7.57 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.3-1. 6 (m, 7H), 1.75-1.9 (m, 2H), 1.95-2.15 (m, 3H), 2.4-2.5 (m, 2H), 3.25-3.35 (m, 1 H), 4.95-5. 05 (m, 2H), 5.7-5. 85 (m, 1 H). 3C RMN (CDCI3) ppm): 23.187, 25.178, 29.630, 33.230, 35.526, 35.653, 36.778, 53.621 , 1 15.032, 137.914, 177.703 [ f ]25 =-25.7° (CHCI3) a 365nm.
Ejemplo-V-5) El producto del Isómero R del ejemplo V-4 (102.1 g, 0.56 moles), THF seco (800 mi), DMAP (68.9 g, 0.56 moles), Dicarbonato de di-t-butilo (B0C2O, 99 g, 0.45 moles) se combinaron en un matraz de 3 litros de tres cuellos purgado con argón. La mezcla de reacción se calentó a 70°C dentro de 30 minutos antes de que se añadiera 52.8 g adicionales de BOC2O y 200 mi de THF seco. Después de 30 minutos se añadieron otros 32 g de BOC20 y la mezcla se agitó durante 1 hr a 70°C. Se añadieron otros 36 g de BOC20 y la mezcla se agitó durante 1 hr. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se separó de THF a 18°C a 20°C bajo presión reducida. Un precipitado se filtró y se lavó con 100 mi de acetato de etilo (EA) y se desechó (-45 g). El filtrado de EA se diluyó con 500 mi de EA adicional antes de que se lavara con 500 mi de KHSO* 1 N, 500 mi de NaHC03 acuoso saturado, y 500 mi de salmuera y después se secó sobre Na2S04 anhidro durante 12 hr. Este extracto de EA se btrató después con 20 g de DARCO, se filtró a través de celite cubierto con MgS04, y se concentró bajo vacío para dar 150 g del producto del título como un aceite café oscuro. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.3-1 .6 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1.6-1.9 (m, 6H), 1.95-2.05 (m, 2H), 2.5-2.7 (m, 2H), 4.2-4.25 (m, 1 H), 4.95-5.05 (m, 2H), 5.7-5.85 (m, 1 H). Eiemplo-V-6 Un matraz de 3 litros de tres cuellos que contenía el producto del ejemplo V-5 (150 g, 0.533) disuelto en 3 litros de CH2CI2 se enfrió a -78°C. Una corriente de 03 se hizo pasar a través de la solución durante 2.5 hr hasta que el color de la nezcla de reacción se tornó azul. Se hizo burbujear argón a través de la solución mantenida a -60°C a -70°C hasta que la solución se volvió clara e incolora (-30 minutos). Después se añadió sulfuro de dimetilo (DMS, 500 mi) antes de que la reacción se llevó a reflujo y este reflujo se continuó durante 24 hr. Se añadieron otros 100 mi de DMS y el reflujo se continuó durante 12 hr. Se añadieron otros 100 mi de DMS y el reflujo se continuó durante 12 hr adicionales. El solvente y exceso de DMS se separaron después en un evaporador giratorio a 20 °C. El aceite amarillo residual obtenido se diluyó con 500 mi de agua desionizada y se extrajo con 3 X 300 mi de EA. La capa de EA se secó sobre MgS04 anhidro, se trató con 20 g de DARCO, se filtró a través de una capa delgada de celite cubierto con MgS04 anhidro, y se separó de todo solvente bajo presión reducida para dar 156 g del producto del título crudo como un aceite amarillo anaranjado. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.3-1.6 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1 .6-1.9 (m, 6H), 2.45-2.75 (m, 4H), 4.2-4.25 (m, 1 H), 9.75 (s, 1 H).
Eiemplo-V-7) A una muestra de éster trimetílico de N-(benciloxicarbonil)-alfa-fosfonoglicina ( 60 g, 0.48 moles) disuelta en 1 litro de diclorometano (CH2CI2) y enfriada a 0°C se añadió una solución de DBU (110.29 g, 0.72 moles) en 100 mi de CH2CI2. Esta mezcla de reacción incolora clara se agitó durante 1 hr a 0°C a 6°C antes del producto de BOC-aldehído del ejemplo V-6 ( 50 g, 0.53 moles) en 600 mi de CH2CI2 se añadió gota a gota a -5°C a -1 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a esta temperatura antes de que se calentara lentamente a 10°C en aproximadamente 1 hr. La mezcla de reacción se lavó con en KHSO4 (500 mi), NaHC03 acuoso saturado (200 mi) y NaCI acuoso al 50% (200 mi). La capa orgánica se secó después sobre MgS04 anhidro, se trató con 40 g of DARCO, se filtró a través de una capa delgada de celite cubierta con MgS04 anhidro, y se concentró para dar 258 g del producto del título crudo como un aceite amarillo. La purificación cromatográfica de este material dio 130 g (55%) del producto del título crudo.
Análisis elemental calculado para C26H36N2O7: C, 63.96; H, 7.42; N, 5.77. Encontrado: C, 63.42 ; H, 8.16; N, 5.31 , 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.25 (m, 2H), 1.5 (s, 9H), 1.51-1.9 (bm, 8H), 2.25 (m, 2H), 2.5 (m, 1 H), 2.65 (m, 1 H), 3.75 (s, 3H), 4.12 (m, 1 H), 5.15 (s, 2H), 6.3 (bs, 1 H), 6.55 (t, 1 H), 7.45 (m, 5H). 13C RMN (CDCI3) ppm): 14.04, 22.62, 23.46, 24.08, 25.27, 27.89, 27.92, 28.34, 28.95, 31.81 , 31.86, 32.05, 39.18, 52.31 , 54.65, 67.27, 82.62, 128.07, 128.18, 128.46, 135.98, 136.82, 154.50, 164.92, 176.68. +10.9° (CHCI3) a 365nm.
Eiemplo-V-8) A una solución de MeOH (1 litro) del producto del ejemplo V-7 (91.3 g, 0.19 moles) se añadió 2.5 g de catalizador S,S-Rh-DIPAMP seguido por hidrógeno. La hidrogenación se llevó a cabo a 25°C en 1 .5 hr en un aparato de Parr. La mezcla de reacción se filtró a través de celite antes de concentrarse para dar el producto del título crudo (90 g, 98%) como un aceite café. 1H RMN (CDCI3, 1 -35 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1.55-1. 95 (m, 10H), 2.4-2.7 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.2 (m, 1 H), 4.4 (m, 1 H), 5.1 (m, 2H), 5.35 (d, 1 H), 7.35 (m, 5H).
Eiemplo-V-9) A una solución del producto del ejemplo V-8 (90 g) en 200 mi de ácido acético glacial se añadió 200 mi de HCI 4 N en dioxano. La mezcla de reacción se agitó a 25°C durante 20 minutos antes de que se separe de todo el solvente bajo presión reducida a 40°C para dar a aceite cxafé rojizo. Este producto oleoso se trató con 500 mi de agua y se extrajo 2X 300 mi de diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio (100 mi), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se separó de todo solvente para dar el producto del título crudo. Este material se cromatografió para proveer 45 g (62%) del producto del título crudo. Análisis elemental calculado para C21 H30N2O5: C, 64.02 ; H, 7.68; N, 7.17. Encontrado: C, 63.10 ; H, 7.88 ; N, 6.60. H RMN (CDCI3, 1 .2-2. 0 (m, 14H), 2.45 (t, 2H), 3.25 (m, IH), 3.75 (s, 3H), 4.38 (m, 1 H), 5.1 (s, 2H), 5.3 (d, 1 H), 5.45 (bs, 1 H), 7.35 (m, 5H). 13C RMN (CDCI3) 14.09, 23.1 1 , 24.89, 25.41 , 29.53, 32.33, 35.52, 35.79, 36.68, 52.26, 53.51 , 53.55, 53.60, 60.26, 66. 86, 127.97, 128.05, 128.40, 136.18, 155.85, 172.85, 177.80. [ ]25 [= -9.9° (CHCI3) a 365 nm Eíemplo-V-10) A una muestra de 45.0 g (0. 15 moles) del producto del ejemplo V-9 en 300 mi de diclorometano purgado con argón se añadió 23.0 g (0.121 moles) de tetrafluoroborato de trietiloxonio. Esta mezcla se agitó durante 1 hr a 25°C antes de que se añadiera 150 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa de diclorometano se separó, se lavó con 150 mi de solución acuosa al 50% de NaCI, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró a través de celite y se concentró a 25°C para dar un aceite amarillo claro, 47.0 g (97%) del producto del título. Análisis elemental calculado para C23H34N2O5: C, 60.01 ; H, 8.19; N, 6.69. Encontrado: C, 65.13; H, 8.45; N, 6.64. H RMN (CDCI3, ppm): 1.2 (t, 3H), 1.25-1.74 (m, 12H), 1.75-1.95 (m, 2H), 2.2-2.3 (m, 1 H), 2.4-2. 5 (m, 1 H), 3.1 (m, 1 H), 3.7 (s, 3H), 3.9-4.0 (m, 2H), 4.35 (m, 1 H), 5.1 (s, 2H), 5.25 (d, 1 H), 7.35 (m, 5H). 13C RMN (CDCI3) ppm): 14.23, 23.38, 25.01 , 25.21 , 26.10, 30.24, 32.16, 32.77, 33.92, 39.15, 52.22, 53.91, 58.05,60. 19,66.92,128. 11,128. 33,128.48,136.27,155.83,166.29, 173.11, 177.64.
Eiemplo-V-11) A 7.0 g (0.130 moles) de cloruro de aluminio en 500 mi de metanol se añadió 31.2 g del material del título del ejemplo V-10 (45.0 g, 0.107 moles). La reacción se puso a reflujo a 65°C durante 5 hr antes de que todo el solvente se había removido bajo presión reducida para dar 40 g (87%) del producto crudo como una masa viscosa espumosa. Este material se purificó por cromatografía en columna para proveer 37 g (81 %) del producto del título. Análisis elemental calculado para C21H31N3O4: C, 59.22 ; H, 7.57; N, 9.86; Cl, 8.32. Encontrado para C^h^NaO* + 1.2 HC1 + 0.5 H20: C, 57.20; H, 7.99 ; N, 9.66; Cl, 9.62. IR (Neto, máxcm- ): 2935,1716, 1669. H RMN (CDCI3, ppm): 1.2-2.0 (m, 13H), 2.5 (t, 1H), 2.95 (m, 1H), 3.4 (bs, 1H), 3.7 (s, 3H), 4.3 (m, 1H), 5.1 (s, 2H), 5.55 (d, 1H), 7.3 (m, 5H), 8.75 (bs, 1H), 8.9 (bs, 1H), 9.5 (s, 1H). 13C RMN (CDCI3, ppm): 23.20, 24.95, 25.22, 28. 94,31. 80,32. 05,33. 75,34. 89,52.33, 53.76, 56.07, 66.83, 127.93, 128.04, 128. 43,136. 26,156. 00,172. 24,172. 87. Masa (ESI): M/Z, 390. [ ]25 = +31.5° a 365 nm.
Eiemplo-V) El producto del título del ejemplo V-1 1 (36.0 g, 0.084 moles) en 1 litro de HCI 2.3 N se puso a reflujo durante 3 hr. Después de enfriar a temperatura ambiente, la solución se lavó con 2 x 150 mi de CH2C12 y después se separó de todo solvente bajo vacío para dar 25.6 g (96%) del producto de aminoácido del título amino como una espuma amarilla pálida. Análisis elemental calculado para C12H23N3O2.2HCI: C, 46.02; H, 8.01 ; N, 13.39; Cl 22.45. Encontrado para C12H23N3O2 + 2.2 HCI + 0.1 H20: C, 42.76; H, 8.02; N, 12.41 ; Cl, 22.79. IR (Neto, máx, cm"1): 2930,2861 , 1738, 1665. 1H RMN (CD3OD, ppm): 1 .3-2. 5 (m, 16H), 2.6 (dd, 1 H), 2.8 (t, 1 H), 3.65 (m, 1 H), 4.0 (t, H), 7. 85 (s, 1H), 8. 85 (s, 1 H), 8.95 (s, H). 13C RMN (CD3OD, ppm): 24.49, 25.67, 26.33, 29.71 , 31.26, 32.45, 35.04, 35.87, 53.73, 57.21 , 171.77, 173.96. UV, 282 nm, ABS 0.015. Masa (M+1) = 242. [ ] = -47.4 (MeOH) a 365 nm. ee = 91 % tal como se determina por CE a = 214 nm.
EJEMPLO W Clorhidrato de ácido (S, 2R)-aminohexahidro-7-imino-1 H-azep¡n-2- hexanoico Eiemplo-W-I ) El producto del isómero S del ejemplo V-4 (5.45 g, 0.030 moles) se convirtió a su derivado de Boc por el método del ejemplo V-5. Después de cromatografía, esta reacción dio 6.3 g (75%) del producto del título deseado. 1H RMN (CDCI3) ppm): 1.3-1. 6 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1.6-1.9 (m, 6H), 1.95-2. 05 (m, 2H), 2.5-2.7 (m, 2H), 4.2-4. 25 (M, 1 H), 4.95-5.05 (m, 2H), 5.7-5. 85 (m, 1 H).
Eiemplo-W-2) El producto del ejemplo W-1 (6.3 g, 0.025 moles) se ozonizó por el método del ejemplo V-6 para producir 8.03 g del aldehido del título crudo que se usó sin purificación adicional. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.3-1.6 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1.6-1.9 (m, 6H), 2.45-2.75 (m, 4H), 4.2-4. 25 (m, 1 H), 9.75 (s, 1 H).
El producto del ejemplo W-2 (8.03 g, 0.024 moles) se condensó con éster trimetílico de N-(benciloxicarbonil)-alfa-fosfonoglicina (7.9 g, 0.024 moles) utilizando el procedimiento del ejemplo V-7 para producir 4.9 g (44%) del producto del título deseado después de cromatografía. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.25 (m, 2H), 1.5 (s, 9H), 1.51-1.9 (bm, 8H), 2.25 (m, 2H), 2.5 (m, 1 H), 2.65 (m, 1 H), 3.75 (s, 3H), 4.15-4.25 (m, 1 H), 5.15 (s, 2H), 6.3-6.4 (bs, 1 H), 6.45- 6.55 (t, 1 H), 7.3-7.4 (m, 5H).
Eiemplo-W-4) El producto del ejemplo W-3 (4.8 g, 0.010 moles) se redujo en presencia de catalizador R,R-Rh-DIPAMP por el método del ejemplo V-8 para producir 2.9 g (60%) del producto del título deseado después de cromatografía.
Eiemplo-W-5) El producto del ejemplo W-4 (2.9 g, 0.006 moles) se desprotegió mediante tratamiento con HCI usando el método del ejemplo V-9 para producir 2.3 g (100%) del producto del título deseado. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.3-2.0 (m, 14H), 2.45 (t, 2H), 3.25 (m, 1 H), 3.75 (s, 3H), 4.38 (m, 1 H), 5.1 (s, 2H), 5.3 (d, 1 H), 5.45 (bs, 1 H), 7.35 (m, 5H).
Eiemplo-W-6) El producto del ejemplo W-5 (0.56 g, 0.0015 moles) se alquiló con tetrafluoroborato de trietiloxonio usando el método del ejemplo V-10 para producir 0.62 g (98%) del producto del título deseado.
E¡emplo-W-7) El producto del ejemplo W-6 (0.62 g, 0.0015 moles) se trató con cloruro de aluminio en metanol usando el método del ejemplo V-1 1 para producir 0.50 g (88%) del producto del título deseado después de purificación cromatográfica.
Eiemplo-W-8) El producto del ejemplo W-7 (0.37 g, 0.0009 moles) disuelto en MeOH se añadió a un aparato de hidrogenación de Parr. A este recipiente se añadió una cantidad catalítica de PD al 5%/C. Se introdujo hidrógeno y la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente a una presión de .35 Kg/cm2 durante un período de 7 hr. El catalizador se removió por filtración y todo el solvente se removió bajo presión reducida del filtrado para producir 0.26 g (cuantitativo) del producto del título deseado.
Eiemolo-W) Una solución del producto del ejemplo W-8 disuelto en HCI 2N (30 mi) se mantuvo a reflujo durante 2 hr antes de que se enfriara a temperatura ambiente. Todo el solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en 50 mi de agua. Esta solución se separó nuevamente de todo el solvente bajo presión reducida antes de que se disolviera de nuevo en 12 mi de agua y después se liofilizó para generar 0.245 g (71%) del compuesto del título. Análisis elemental calculado para C12H23N302. 2.3 HCI. 1.9 H20: C, 40.10; H, 8.16; N, 11.69; Cl 22.69. Encontrado para C12H23N3O2 + 2.1 HCI + 0.7 H20: C, 40.27; H, 8.28; N, 11.62; Cl, 22.70. H R N (CD3OD, ppm): 1.4-2.1 (m, 16H), 2.6 (dd, 1 H), 2.8 (t, 1 H), 3.65 (m, 1 H), 4.0 (t, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 8.45 (s, H), 8.9 (s, 1 H). 3C RMN (CD3OD, ppm): 24.46, 25.64, 26.31 , 29.69, 31.24, 32.54, 35.00, 35.83, 53.75, 57.20, 171.85, 173.93. [ ]25 +25.7° (MeOH) a 365 nm.
EJEMPLO X Trihidrato de ácido (S. 2S)-aminohexahidro-7-imino-1 H-azepin-2- hexanoico Eiemplo-X-1 ) A un matraz de fondo redondo de 22 litros equipado con agitador superior, paleta en forma de media luna, manto de calentamiento, termopar, y una columna de destilación con camisa de plata (5 places) se cargó ciclotiexanona (4500.0 g, 45.85 moles), acetone-dimetilacetal (5252.6 g, 50.43 moles), alcohol alilico (6390.87 g, 1 10.04 moles) y ácido p-toluensulfónico (PTSA) (0.256 g, 0.001 moles). Después de que se empezó la agitación (137 rpm), el crisol se calentó lentamente siendo el punto de fijación inicial 70°C. El calentamiento se incrementó por pasos hasta una temperatura de crisol final de 50°C. La decisión de incrementar el punto de fijación del reactor se hizo con base en la velocidad de destilación. Si la velocidad del destilado se hacía más lenta o se detenía, se aplicaba calor adicional. El calentamiento adicional a 50°C dejó que ocurriera el reordenamiento de Claisen. Después de que la temperatura del crisol se elevó a 150°C y que no se observó destilado, el manto de calentamiento se redujo y la mezcla de reacción se dejó enfriar a 130°C. El PTSA se neutrtalizó después con 3 gotas de NaOH 2.5 N. La separación bajo vacío se inició después con el manto de calentamiento alejado del matraz. Se usó enfriamiento evaporativo para reducir la temperatura del crisol, y la presión se redujo gradualmente a 40 mm Hg. Cuando la temperatura del crisol había disminuido a -100°C, el manto de calentamiento se elevó de nuevo en la posición apropiada para calentamiento. La ciclohexanona sin reaccionar y las impurezas de punto de ebullición bajo se destilaron. La temperatura del crisol se elevó lentamente (la diferencia de temperatura máxima entre el crisol y el vapor fue -12°C). El producto se aisló a 109-112°C @ 40 mm Hg. Los rendimientos típicos fueron de 40-45%. Las fracciones que eran <95% por área (CG) se combinaron y se volvieron a destilar para dar el producto del título en un rendimiento total de 55%. H RMN (CDCI3, d ppm): 5.8-5. 6 (m, 1 H), 4.8-5. 0 (m, 2H), 2.5-2.4 (m, H), 2.3-2.1 (m, 3H), 2.1-1.2 (m, 7H). 3C RMN (CDCI3, d ppm): 212.53, 136.62, 116.32, 50.39, 42.18, 33.91 , 33.52, 28.09. 25.10. CG/EM m/z = 138.
Eiemplo-X-2) Acido hidroxilamino-O-sulfónico (91.8 g) se disolvió en ácido acético (470 g) se añadió a un matraz Bayer de 1 litro equipado con un agitador mecánico, termopar, condensador enfriado a 0°C, y un embudo de adición y se calentó a 70°C. La alicciclohexona (100 g) se añadió gota a gota en aproximadamente 40 minutos a la solución anterior mientras se mantenía la temperatura entre 70 y 78°C. Durante la adición, la apariencia de la reacción cambió de una suspensión blanca a una solución anaranjada clara. Después de la adición, la reacción se calentó y se agitó durante 5 hr adicionales a 75°C. Una muestra de IPC se tomó cada hora. Después de que se completó la reacción, the ácido acético se separó 50°C bajo presión reducida en un evapporador giratorio. Después se añadió agua (200 mi) al residuo y la solución se extrajo con tolueno (2 X 300 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se trataron con agua (150 mi) y se agitaron durante 10 minutos. Una solución de hidróxido de sodio (79.4 g de solución al 50%) se añadió hasta que la capa acuosa se tomó básica (pH 12). La neutralización se llevó a cabo en el reactor controlando la temperatura por abajo de 40°C. Las capas se separaron después y la capa de tolueno se hizo pasar a través de un filtro para remover cualesquiera sólidos o material alquitranado. La solución orgánica se separó después a 50°C bajo presión reducida en un evaporador giratorio. El residuo se recogió en una mezcla de tolueno (510 mi) y heptanos (2040 mi) y se calentó a 60°C en un reactor de 3 litros. Se obtuvo una solución amarillo-anaranjada clara. El producto del título empezó a cristalizarse a 53°C a medida que se enfriaba la solución lentamente a 5°C mientras se estaba agitando. El sólido se filtró, se lavó con heptanos (50 mi) y se secó durante la noche a 40°C bajo para producir 66.3 g (60%) del producto del título como cristales blanquecinos obtenidos. Una porción de este material se recristalizó a partir de tolueno y heptano para generar el producto del título como un sólido cristalino blanco. 1H RMN (CDCI3, d ppm): 5.8-5. 6 (m, 1 H), 5.5 (bs, 1 H), 4.8-5.0 (M, 2H), 3.4-3. 3 (m, 1 H), 2.5-2. 3 (m, 2H), 2.3-2. 1 (m, 2H) 2.0- . 2 (m, 6H). 3C RMN (CDCI3) 6 ppm): 1 17.73, 133.83, 1 19.31 , 52. 88, 40.95, 37.20, 35.75, 29.96, 23.33. CG/EM (modo de El) = 153. p.f. = 97-99 °C.
Eiemplo-X-3) Isómero R Isómero S La mezcla de productos racémicos del ejemplo X-2 se sometió a separación cromatográfica en una columna Chiralpac AS 20 um eluyendo con acetonitrilo al 100%. Se empleó una Ion gitud de onda de 220 nm en el detector. Una carga de muestra de 0.08 g/ml de acetonitrilo se usó para obtener 90% de recuperación de isómeros separados cada uno con >95% ee. Una porción del material de isómero R se recristalizó a partir de tolueno y heptano para generar el producto del título del isómero R como un sólido cristalino blanco. Isómero R: p.f. = 81-82 °C.
Eiemplo-X-4) Un matraz de fondo plano de cinco cuellos equipado con un embudo de goteo, termómetro y agitador mecánico superior se evacuó y se purgó con nitrógeno tres veces. El producto lactama de isómero R del ejemplo X-3 (100.0 g, 0.653 moles), DMAP (7.98 g, 65 mmoles) y n-diisopropiletilamina (base de Hünigs base, 1 13.3 g, 0.876 moles) se disolvieron en tolueno (350 mi) y se añadió dicarbonato de di-ter-butilo (170.2 g, 0.78 moles) disuelto en tolueno (100 mi). (Nota: la reacción funcionó bien, cuando se usó 2.0 eq de base de Hünigs). La mezcla se calentó a 65°C (Nota: se observó desgasificación constante durante la reacción). Después de 1.5 hr se añadieron otros 86.25 g de bicarbonato de di-ter-butilo (0.395 moles) disueltos en tolueno (50 mi). El calentamiento se continuó durante 17 hr y la IPC por CLAR mostró conversión de 75%. Se añadieron otros 42.78 g de dicarbonato de di-ter-butilo (0.196 moles) en tolueno (30 mi) y la mezcla café se calentó durante 5.5 hr. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se trató con HCI 4 M (215 mi), y la capa acuosa se extrajo con tolueno (2x80 mi). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 (170 mi) y 250 mi de agua (Nota: la temperatura interna durante la extinción fue controlada por enfriamiento externo con hielo/agua). Se observó evolución de gas. La capa orgánica se evaporó para dar 257.4 g de líquido café. Este material crudo se purificó por filtración de tapón sobre Si02 (950 g) usando tolueno/EtOAc 9/1 (6 litros) y tolueno/AcOEt 1/1 (0.5 litros) como eluyente dando 139.5 g (51 %) del producto del título líquido amarillo.
Eiemplo-X-5) Eiemplo-X-6) Ejemplo 1f En una autoclave de acero inoxidable de 2 litros equipada con divisores y un propulsor axial de dispersión de gas de seis paletas se cargó Rh(CO)2(acac) (0.248 g, 0.959 mmoles), BIPHEPHOS (estructura que se muestra a continuación y que se prepara como se describe en el ejemplo 13 de la patente de E.U.A. 4,769,498, 2.265 g, 2.879 mmoles), el producto del ejemplo X-4 (N-(ter-t-butoxicarbonil)-S-7-alilcaprolactama BIPHEPHOS (242.9 g, 0.959 moles), y tolueno (965 g). El reactor se selló y se purgó con 100% de monóxido de carbono (8 x 515 kPa). El reactor se presurizó a 308 kPa (2.1 kg/cm2) con 100% de monóxido de carbono y después una mezcla de gases de 1:1 de CO/H2 se añadió para lograr una presión total de 515 kPa (4.2 kg/cm2). Con agitación mecánica vigorosa, la mezcla se calentó a 50°C con una mezcla de gases de 1 :1 de CO/H2 añadida para mantener una presión total de aproximadamente 515 kPa (4.2 kg/cm2). Después de 22 hr, la mezcla se enfrió a aproximadamente 25°C y la presión se liberó cuidadosamente. La filtración bajo vacío de la mezcla del producto y evaporación del filtrado bajo presión reducida dio 267.7 g de un aceite amarillo claro. El análisis por RMN fue consistente con conversión esencialmente cuantitativa del material de partida con aproximadamente 96% de selectividad al producto de aldehido correspondiente del ejemplo V-6. Este aceite se usó sin purificación adicional en el siguiente ejemplo. 1H RMN (CDCI3) 1.47 (s, 9H), 1.6-1.80 (m, 9H), 1.84-1.92 (m, 1 H), 2.41-2.58 (m, 3H), 2.61-2.71 (m, 1 H), 4.2 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 9.74 (s, [1 H).] Eiemplo-X-8) A una muestra de éster trimetílico de N-(benciloxicarbonil)-alfa-fosfonoglicina (901.8 g, 2.7 moles) disuelto en CH2CI2 y enfriado a 0°C se añadió una solución de DBU (597.7 g, 3.9 moles) en CH2CI2. Esta mezcla de reacción incolora clara se agitó durante 1 hr a 0°C a 6°C antes de que se añadiera gota a gota una muestra de producto de Boc-aldehído del ejemplo V- 6 (812.0 g, 2.9 moles) en CH2CI2 a -5°C a -1 °C. La reacción, tratamiento, y purificación se completaron como se describe en el ejemplo V-7 para dar 1550 g del producto del título del ejemplo V-7 que contenía una cantidad pequeña de CH2CI2. Eiemplo-X-9) A una solución de MeOH (1 litro) del producto del ejemplo V-7 (100 g, 0.20 moles) se añadió 3 g de catalizador RR-Rh-DIPAMP. La hidrogenación se llevó a cabo a 25°C en 1.5 hr en un aparato de Parr. La mezcla de reacción se filtró a través de celite antes de concentrarse para proveer el producto del título crudo del ejemplo X-9 como un aceite café (100 g). 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.35 (m, 4H), 1.5 (s, 9H), 1.6-1 .9 (m, 10H), 2.5-2.8 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.25 (m, 1 H), 4.45 (m, 1 H), 5.1 (m, 2H), 5.65 (d, 1 H), 7.35 (m, 5H).
Eiemplo-X-10) A una solución del producto del ejemplo V-8 (100 g) en 200 mi de ácido acético glacial se añadió 25 mi de HCI 4 N en dioxano. La mezcla de reacción se agitó a 25°C durante 20 minutos antes de que se separara de todo el solvente bajo presión reducida a 40°C para dar 105 g de aceite café rojizo. Este producto oleoso se trató con 500 mi de agua y se extrajo 2 X con 300 mi de diclorometano. La capa orgánica combinada se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio (100 mi), se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó de todo el solvente para dar 99.9 g del producto del título como un aceite café rojizo. 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.25-2.0 (m, 14H), 2.45 (t, 2H), 3.25 (m, 1 H), 3.7 (s, 3H), 4.35 (m, 1 H), 5.1 (s, 2H), 5.5 (d, 1 H), 6.45 (bs, H), 7.35 (m, 5H). ee = 95% como se determinó por CLAR quiral.
Eíemplo-X-1 1 ) A una muestra de 30.0 g (0.077 moles) del producto del ejemplo X-10 en 600 mi diclorometano purgado con argón se añadió 15.7 g (0.082 moles) de tetrafluoroborato de trietiloxonio. Esta mezcla se agitó durante 1 hr a 25°C antes de que se añadieran 300 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa de diclorometano se separó, se lavó con 300 mi de solución acuosa al 50% de, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró a través de celite y se concentró a 25°C para dar un aceite amarillo claro, 3 .2 g (-97%) del producto del título. Análisis elemental calculado para C23H34N2O5: C, 60.01 ; H, 8.19; N, 6.69.
Encontrado para: C23H34N2O5 + 0.5 H20: C, 64.66 ; H, 8.24; N, 6.59. H RMN (CDCI3, ppm): 1.25 (t, 3H), 1 .28-1.75 (m, 12H), 1.8-1.98 (m, 2H), 2.2-2. 3 (m, 1 H), 2.4-2.5 (m, 1 H), 3.1 (m, 1 H), 3.78 (s, 3H), 3.9-4.0 (m, 2H), 4. 35 (m, 1 H), 5.1 (s. 2H), 5.25 (d, 1 H), 7.35 (m, 5H). 13C RMN (CDCI3. ppm): 14.27, 23.36, 25.21 , 25.53, 26.09, 30.22, 32.15, 32.73, 33.90, 39.14, 52.21 , 53.89, 58.04, 60.33, 66.89, 128.11 , 128.35, 128.48, 136.29, 155.86, 166.30, 173.14, 177.69. IR (Neto, máx, cm"1): 3295, 2920, 1739, 680. UV. 257 nm, abs 0.015. [ ]25 = +39.8° (CHCI3) a 365 nm.
Eiemplo-X-12) A 4.2 g (0.078 moles) de cloruro de aluminio en 500 mi de metanol se añadió 31.2 g del material del título del ejemplo X-1 1. La reacción se puso a reflujo a 65°C durante 5 hr antes de que todo el solvente fuera removido bajo presión reducida para dar 29 g (92%) del producto crudo como una masa viscosa espumosa. Este material se purificó por cromatografía en columna para proveer 23 g (70%) del producto del título.
Análisis elemental calculado para C2iH31N304.1 HCI) C, 59.28; H.,7.57; N, 9.89; Cl, 8.39. Encontrado para: C21H31 N3O4 + 1HCI + 1 H20): C, 56.73; H, 7.74; N, 9.40; Cl, 8.06. IR (Neto, máx cm"1): 3136, 30348, 2935, 1716, 1669. 1H RMN (CDCb, ppm): 1 .3-2.05 (m, 13H), 2.5 (t, 1 H), 2.98 (m, 1 H), 3.4 (bs, 1 H), 3.75 (s, 3H), 4.35 (m, 1 H), 5.1 (s, 2H), 5.5 (d, 1 H), 7.35 (m, 5H), 8.75 (s, 1 H), 9.0 (s, 1 H), 9.5 (s, 1 H). 13C RMN (CDCI3, ppm): 23.25, 25.01 , 25.34, 29.01 , 31.88, 32.26, 33.89, 35.06, 52.33, 53.73, 56.20, 66.89, 127.95, 128.06, 128.45, 136.27, 155.93, 172.27, 172.80. UV, 257 nm, abs 0.009. Masa (ESI): M/Z, 390. [ ]25 =-42.8° (MeOH) a 365 nm. ee = 96% como se determinó por CLAR quiral.
Eiemplo-X) El producto del título del ejemplo X- 2 (23 g) en 500 mi de HCI 2 N se puso a reflujo durante 5 hr. Todo el solvente se removió después bajo vacío y el residuo redisuelto en agua se lavó con 2x300 mi de CH2CI2. La capa acuosa se concentró después bajo vacío para dar 17 g (100%) del producto del título crudo hidroscópico café claro. Análisis elemental calculado para [C 2H23N302. 2HCI: C, 45.86; H, 8.02; N, 13.37; Cl 22.56.
Encontrado para: C12H23N302 + 2.1 HCI + 0.7 H20: C, 43.94; H, 8.65; N, 12.52; Cl, 22.23. IR [(Neto, máx, crrf ): 2936,1742, 1669. 1H RMN (CD3OD, ppm): 1.3-2.1 (m, 16H), 2.6 (dd, 1 H), 2.8 (t, 1 H), 3.65 (m, 1 H), 4.0 (t, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 8.4 (s, 1 H), 8.95 (s, 1 H). 13C RMN (CD3OD, ppm): 24.49, 25.67, 26.33, 29.71 , 31.26, 32.45, 35.04, 35.87, 53.73, 57.21 , 171.77, 173.96. UV, 209 nm, abs 0.343. Masa (M+L) = 242. [ ]25 = +60.0° (MeOH) a 365 nm. ee = 92% como se determinó por CE a = 210 nm.
EJEMPLO Y Clorhidrato de ácido (R, 2S)-aminohexahidro-7-imino-1H-azepino-2- hexanoico trihidratado Eíemplo-Y-1 ) Una solución del ejemplo X-3 (3.0 g, 0.015 moles) en cloruro de metileno y metanol (75/45 mi) se enfrió a -78°C en un baño de hielo seco. La reacción agitada como ozono se hizo burbujear a través de la solución a una velocidad de flujo de 3 ml/min. Cuando la solución permaneció a un azul profundo consistente, el ozono se removió y la reacción se purgó con nitrógeno. A la solución fría se añadió borhidruro de sodio (2.14 g, .061 moles) muy lentamente para reducir al mínimo la evolución de gas de una sola vez. A la reacción se añadió ácido acético glacial lentamente para llevar el pH a 3. La reacción se neutralizó después con bicarbonato de sodio saturado. Los compuestos orgánicos se lavaron después 3x 50 mi con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se removieron bajo presión reducida. El í aceite pálido se hizo pasar a través de un tapón de sílice (15 g) para dar el alcohol 5.15 g, 0.026 mol (64 %). C9H14N2O3. 1H RMN (CDCI3, ppm) 1.18-2. 15 (m, 8H), 3.59 (m, 2H), 4.39 (m, 1 H). 3C RMN (CDCI3) ppm) 24.45, 25.71 , 26.47, 32.56, 34.67, 5 .16, 58.85, 160.66, 160.89.
Eiemplo-Y-2) A una solución del ejemplo Y-1 (5. 5 g, 0.026 moles) en cloruro de metileno (100 mi) a 0°C en un baño de hielo se añadió tetrabromuro de carbono (10.78 g, 0.033 moles). La solución se enfrió a 0°C en un baño de hielo. Después se añadió trifenilfosfina (10.23 g, 0.39 moles) en porciones para no dejar que la temperatura se elevara por arriba de 3°C. La reacción se agitó durante 2 horas y el solvente se removió bajo vacío. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea para dar el bromuro (5.9 g, 0.023 moles) en un rendimiento de 87%. Análisis elemental calculado para C10H16N2O3: C, 41.40; H, 5.02; N, 10.73; Br, 30.60. Encontrado: C, 41.59 ; H, 5.07 ; N, 10.60, Br, 30.86. 1H RMN (CDCI3, ppm) 1 .50-2. 60 (m, 9H), 2.99 (dd, 1 H), 3.35 (m. 2H), 4.41 (m, 1 H). 3C RMN (CDCI3, ppm) 23.89, 25.33, 26.04, 28.06, 31.59, 35.05, 52.79, 159.3, 160.2.
Eiemplo-Y-3) A una solución del ejemplo Y-2 (5.71 g, 0.026 moles) en tolueno (25 mi) se añadió trifenilfosfina (7.17 g, 0.027 moles). La reacción se puso a reflujo en un baño de aceite durante 16 horas. Después de enfriarse, el tolueno se decantó del sólido vitreo. El sólido se trituró con éter dietílico durante la noche para dar el bromuro de fosfonio (10.21 g, 0.020 moles) en un rendimiento de 90%. H RMN (CDCI3( ppm): 1.50-2. 9 (m, 1 1 H), 3.58 (m, 1 H), 4.16 (m, 1 H), 4.41 (m, 1 H), 7.6-8.0 (m, 15H). 13C RMN (CDCI3, ppm) 24.43, 24.97, 25.50, 55.08, 55.27, 1 6.9, 1 18.1 , 130.4, 130.6, 133.5, 135.1 , 135.2, 159.4, 160. 31P RMN (CDCI3, ppm) 26.0.
Ejemplo-Y-4) A un matraz de fondo redondo de 1 litro se añadió N-benciloxicarbonil-D-homoserinolactona (97 g, 0.442 moles) en etanol (500 mi). A la reacción se añadió solución de hidróxido de sodio (1 M, 50 mi). La reacción se monitoreó por cromatografía de capa delgada durante 12 horas hasta que el material de partida había sido consumido. Se añadió tolueno (60 mi) y después el solvente se removió bajo vacío. El residuo se utilizó sin purificación adicional.
Ejemplo- Y-5) El residuo del ejemplo Y-4 se suspendió en DMF en un matraz de fondo redondo de 1 litro. A la suspensión se añadió bromuro de bencilo (76.9 g, 0.45 moles, 53.5 mi) y la mezcla se agitó durante 1 hora. Una muestra se extinguió y se analizó por espectrometría de masa para indicar el consumo de material de partida y que no había nuevamente formación de lactona. A la reacción se añadió 1 litro of acetato de etilo y 500 mi de salmuera. La capa acuosa se lavó 2 veces más con 500 mi de acetato de etilo. Los compuestos orgánicos se combinaron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron. La cromatografía sobre gel de sílice dio éster bencílico de N-benciloxicarbonil-S- homoserina como un sólido blanco (80 g).
A un matraz de fondo redondo de 2 litros se añadió clorocromato de piridinio (187 g, 0.867 moles) y gel de sílice (197 g) suspendido en CH2CI2 (600 mi). A la suspensión se añadió una solución del producto del ejemplo Y-5 (80 g, 0.233 moles) en CH2CI2 (600 mi). La mezcla se agitó durante 4 horas. La cromatografía de capa delgada indicó que el material de partida se consumió. A la reacción se añadió 1 litro de éter dietílico. La solución se filtró después a través de una almohadilla de ceilite seguido por una almohadilla de gel de sílice. El solvente se removió bajo vacío y el aceite resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para dar el aldehido (58.8 g) en un rendimiento global de 38%. MH+342. 5, MHf NH/359. 5. 1H RMN (CDCI3, ppm) 3.15 (q, 2H), 4.12 (m, 1 H), 5.15 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 7.31 (m, 10H), 9.72 (s, 1 H).
E¡emplo-Y-7) A un matraz de tres cuellos de 3 litros se anadió la sal de fosfonio del ejemplo Y-3 (56.86 g, 0.1 1 moles) que se había secado sobre P205 bajo un vacío en THF (1 litro). La suspensión se enfrió a -78°C en un baño de hielo seco. A la suspensión frío se añadió gota a gota KH DS (220 mi, 0.22 moles) por lo que la temperatura no se elevó por arriba de -72 "C. La reacción se agitó a -78°C durante 20 minutos y después -45 °C durante 2 horas. La temperatura después disminuyó nuevamente a -78 °C y el aldehido (15.9 g, 0.047 moles) del ejemplo Y-6 se añadió gota a gota en THF (50 mi) durante 45 minutos. La reacción se agitó a -77 °C durante 30 minutos después se calentó a -50 °C durante 1 hora antes de que se calentara a temperatura ambiente durante 4 horas. A la reacción se añadió acetato de etilo (200 mi) y cloruro de aluminio saturado. Los compuestos orgánicos se recogieron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron bajo vacío. El aceite crudo se purificó por cromatografía sobre sílice para dar el compuesto de olefina (45.1 g) en un rendimiento de 81 % como un aceite viscoso amarillo pálido. 1H RMN (CDCI3, ppm) 1 .4-2. 6 (m,. 10H), 2.92 (d, 1 H), 4.17 (m, 1 H), 4.38 (m, 1 H), 5.05 (q, 2H), 5.40 (m, 2H), 7.3 (m, 10H). 13C RMN (CDCI3) ppm) 29.49, 29.64, 31.32, 39.60, 49.56, 53.98, 61 .01 , 65.25, 124.14, 127.81 , 128.20, 128.55, 128.79, 129.30, 130.96, 135.68, 137.31 , 152.59, 157.57. 171.61.
Ejemplo-Y) A un frasco de 20 mi se añadió el producto del ejemplo Y-7 ( 9.77 g, 0.039 moles) en dioxano (50 mi) y HCI acuoso 4 N (250 mi). A esta solución se añadió una cantidad catalítica de Pd al 10% sobre carbón en un matraz de hidrogenación. El matraz se presurizó con h (3.5 kg/cm2) durante cinco horas. La reacción se monitoreó por espectrometría de masa y el material de partida se había consumido. La solución se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con agua. El solvente se removió por liofilización para dar el compuesto del título (7.52 g) en un rendimiento de 81%. MH+ 242. 2, MH+NH4+ 259.2. 1H RMN (CD3OD ppm) 1.2-2. 0 (m, 15H), 2.42 (d, 1 H), 2.65 (dd, 1 H), 3.49 (m, 1 H), 3.98 (t, 1 H), 7.26 (s), 8.05 (s), 8. 35 (s). 13C RMN (CDCI3, ppm) 24.43, 25.58, 26.00, 26.10, 32.75, 33.45, 35.31 , 53.76, 54.55, 157.27, 175.13.
EJEMPLO Z Clorhidrato de ácido (S, 2S)-aminohexahidro-7-imino-1 H-azepino-2- A un matraz de tres cuellos de 3 litros se añadió la sal de fosfonio del ejemplo Y-3 (21.21 g, 0.041 moles) en THF (200 mi). La suspensión se enfrió a -78°C en un baño de hielo seco. A la suspensión frío se añadió gota a gota KHMDS (88 mi, 0.044 moles) por lo que la temperatura no se elevó por arriba de -72°C. La reacción se agitó a -78°C durante 20 minutos y después -45 °C durante 1 hora. La temperatura después disminuyó nuevamente a -78 °C y el aldehido (15.9 g, 0.047 moles) (preparado como en el ejemplo Y (4-6) usando N-benciloxicarbonil-1-homoserinolactona) se añadió gota a gota en THF (50 mi) durante 45 minutos. La reacción se agitó a -77 °C durante 30 minutos después se calentó a -50 °C durante 30 minutos después se calentó a temperatura ambiente durante 4 horas. A la reacción se añadió acetato de etilo (100 mi) y cloruro de aluminio saturado. Los compuestos orgánicos se recogieron, se secaron sobre MgS04 y se concentraron bajo vacío. El aceite crudo se purificó por cromatografía sobre sílice para dar el compuesto de olefina (9.0 g) en un rendimiento de 45% como un aceite viscoso amarillo pálido. 1H RMN (CDCI3, ppm) 1.4-2. 6 (m, 10H), 2.92 (d, 1H), 4.17 (m, 1 H), 4.38 (m, 1 H), 5.05 (q, 2H), 5.40 (M, 2H), 7.3 (m, 10H). 13C RMN (CDC ) ppm) 29.49, 29.64, 31.32, 39.60,49. 56,53. 98, 61.01 , 65.25, 124.14, 127.81 , 128.20, 128.55, 128.79, 129.30, 130.96, 135.68, 137.31 , 152.59, 157.57, 171.71.
Eiemplo-Z-2) A un frasco de 20 mi se añadió el producto del Z-1 en dioxano (5 mi) y HCI acuoso 4 N (16 mi). A esta solución se añadió una cantidad catalítica de Pd al 10% sobre carbón en un matraz de hidrogenación. El matraz se presurizó con H2 (3.5 kg/cm2) durante cinco horas. La reacción se monitoreo por espectrometría de masa y el material de partida se había consumido. La solución se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con agua. El solvente se removió por liofilización para dar el compuesto del título (98.7mg) en un rendimiento de 79.4%. Mhf 242. 2, MH+NH4+ 259.2. 1H RMN (CD3OD ppm) 1.2-2. 0 (m, 15H), 2.42 (d, 1 H), 2.6 (dd, 1 H), 3.49 (m, 1 H), 3.98 (t, 1 H). 13C RMN (CDCI3, ppm) ppm) 24.43, 25.58, 26.00, 26.10, 32.75, 33.45, 35.31 , 53.76, 54. 55, 157.27, 175.13.
EJEMPLO AA Acido (2S,4Z)-2-am¡no-6-r(2R)-hexahidro-7-imino-1 H-azepin-2-ill-4- Ejemplo AA-1 ) Ester fenilmetílico de ácido (2S, 4Z)-6-f(2R)-hexahidro-7-imino-1 H-azepin-2-in-2-[í(fenilmetoxi)1carbonil1 amino1-f4-hexenoico A un matraz de 50 mi se añadió una muestra del ejemplo Z-1 (1.5 g, 2.97 mmoles) en metanol (25 mi). Una solución al 60% de ácido acético glacial (16 mi) se añadió después a la mezcla de reacción. Se observó un precipitado. Se añadió metanol adicional para disolver el sólido (1 mi). A la reacción se añadió después polvo de zinc (0.200 g). La reacción se sometió a sonicación durante 4 horas during lo cual la temperatura se mantuvo a 37°C. La reacción se monitoreó por TLC y MS hasta que el material de partida se consumió y se observó una masa correspondiente al producto. La solución se decantó del zinc y se añadió una solución al 30% de acetonitrilo/agua (100 mi) al filtrado. La reacción se purificó con 52% de acetonitrilo/agua en dos operaciones sobre la CLAR preparatoria de Aguas [un gradiente de 20% a 70% de acetonitrilo durante 30 minutos. La liofilización del producto resultante dio el material del título del ejemplo AA-1 (1.01 g) en un rendimiento de 73% como un sólido blanco. MH+ 464.4, MH+Na+ 486.4. 1H RMN (CD3OD, ppm): 1 .2-2.0 (m, 8H), 2.42 (m, 2H), 2.6 (m, 5H), 3.49 (q, 1 H), 4.31 (t, 1 H), 5.15 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 5.43 (q, 1 H), 5.59 (q, 1 H), 7.25 (bs, 10H). 13C RMN (CDCI3, ppm): 24.37, 29.61 , 30.76, 32.45, 33.73, 34.42, 55.40, 57.09, 68.06, 68.07, 122.3, 124.9, 128.76, 129.09, 129.28, 129.39, 129.51 , 129.61 , 155.71 , 158.35, 173.90.
Ejemplo AA) A un matraz de 250 mi se añadió el producto del ejemplo AA-1 (1.0 g, 2.2 mmoles) en HCI 4 M (100 mi). La reacción se puso a reflujo durante la noche, se monitoreó por EM hasta que el material de partida había sido consumido y se observó la masa para el producto. La reacción, sin tratamiento adicional, se purificó en dos operaciones sobre la columna de fase inversa preparativa de Aguas usando 18% de acetonitrilo/agua [0% a 30% acetonitrilo/agua over 30 minutos]. La liofilización de las fracciones combinadas dio el producto del título (0.34 g) en un rendimiento de 64% como una espuma de color crema. MH 240.3, MH+Na+ 486.4. 1H RMN (CD3OD, ppm): 1.2-2.0 (m, 6H), 2.35 (m, 2H), 2.45 (dd, 2H), 2.69 (m, 2H), 3.61 (dt, 1 H), 3.98 (t, 1 H), 5.59 (m, 1 H), 5.65 (m, 1 H). 13C RMN (CDCI3l ppm): 23.65, 24.66, 32.51 , 32.84, 33.1 , 33.25, 54.10, 56.1 , 126.80, 129.33, 153.33, 172.52.
EJEMPLO BB Acido f2S.4E -2-amino-6-r(2R)-hexahidro-7-imino-1 H-azepin-2-in-4- hexenoico Ejemplo BB-1 ) Ester metílico de ácido (2S.4E)-2-ff(fenilmetoxi)carbonillaminol-6-r(5RV6.7,8,9-tetrahidro-3-oxo-3H.5H-n ,2.41oxadiazolor4.3-a1azeDÍn-5-in-4-hexenoico A un matraz de 250 mi se añadió el ejemplo Z-1 (2.0 g, 3.9 mmoles) y disulfuro de fenilo (0.860 g, 3.9 mmoles) en una solución de ciciohexano (70 ml)/benceno (40 mi). Se hizo burbujear nitrógeno a trtavés de la solución para purgar el sistema de oxígeno. La reacción se expuso a una lámpara de onda corta UV durante el fin de semana. La reacción se evaluó por CLAR de fase normal (acetato de etilo/hexano). Se observó 71 % del isómero trans y 29% del isómero cis. La reacción se sometió a 3 días adicionales de UV después de lo cual 84% del material de partida se convirtió al isómero trans y 16% del isómero cis permaneció sin cambiar. La purificación por cromatografía dio el ejemplo BB-1 (0.956 g) en un rendimiento de 48%. MH+ 506. 1 , MH+NlV 523.2. 1H R N (CD3OD, ppm): 1.2-2. 0 (m, 8H), 2.42-2. 6 (m, 6H), 2.91 (dd, 1 H), 4.19 (m, 1 H), 4.31 (dt, 1 H), 5.09 (s, 2H), 5.1 1 (s, 2H), 5.18 (dt, 1 H), 5.27 (m, 1 H), 7.25 (bs, 10H).
Ejemplo BB-2) Monoclorhidrato de éster fenilmetflico de ácido (2S,4E)-6-(2R)-hexa idro-7-amino-1 H-azepin-2-in-2-ff(fenilmetoxi)carbonnamino1-4-riexenoico Una muestra del producto del ejemplo BB-1 (0.956g, 1.9 mmoles) en MeOH (80ml) fue desprotegida mediante el método del ejemplo AA-1 con polvo de Zn (1.5 g) y 60% de HOAc/H20 (40 mi). El producto resultante se purificó por cromatografía de fase inversa para dar el material del titulo (0.248 g) en un rendimiento de 28%.
Ejemplo BB) El producto del ejemplo BB-2 (0.248 g, 0.53 mmoles) se transformó en el producto del título por el método del ejemplo AA usando HCI (2ml), H20 (2 mi), CH3CN (4ml). El producto crudo se purificó por cromatografía de fase inversa para dar el producto del título del ejemplo BB (0.073 g) en un rendimiento de 57%. MH+ 240.3, MH+NA+ 486.4. H RMN (CD3OD, ppm) 1. 2-2. 0 (m, 6H), 2.35 (t, 2H), 2.55-2.82 (m, 4H), 3.68 (dt, 1 H), 4.05 (t, 1 H), 5.65 (m, 2H).
EJEMPLO CC Diclorhidrato de ácido (E)-2-amino-2-metil-6-r(1-iminoetinamino1-4- hexenoico Ejemplo CC-1 ) Clorhidrato de éster etílico de DL-alanina (5 g, 32.5 mmoles) se suspendió en tolueno (50 ml). Trietilamina (4.5 ml, 32.5 mmoles) se añadió seguido por anhídrido itálico (4.8 g, 32.5 ml). El matraz de reacción se equipó con una trampa de Dean-Stark y un condensador de reflujo y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Aproximadamente 10 ml de tolueno/agua se recogieron. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con NH4CI y EtOAc. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (3X). El extracto de acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró bajo vacío para dar el éster de amino protegido con ftalilo del título como un sólido cristalino blanco en un rendimiento casi cuantitativo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, ppm): 1.2 (t, 3H), 1.6 (d, 3H), 4.2 (m. 2H), 4.9 (q, 1 H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Ejemplo CC-2) Se añadió ftalimida de potasio (18.5 g, 0.1 moles) a un matraz de fondo redondo de 250 mi que contenía cloruro de 1 ,4-buteno (25 g, 0.2 moles). La mezcla de reacción se calentó a 150 °C durante 1.5 r. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se dividió entre salmuera y EtaO. La capa orgánica se secó con gS04, se filtró y se concentró bajo vacío. El residuo se recristalizó a partir de etanol caliente para dar el compuesto del título el 1 -cloro-4-ftalimidobuteno (8.9 g, 39%) como cristales anaranjados. HRMS calculado para C 2H10CINO2: m/z = 236.0478 [M+H]. Encontrado: 236.0449 1H RMN (300 MHz, CDCI3, ppm. 4.1 (d, 2H), 4.3 (d, 2H), 5.9 (m, 2H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Ejemplo CC-3) Una muestra del producto del ejemplo CC-2 (2.3g, 9.8 mmoles) se disolvió en acetona (50 mi). Se añadió Nal (3.2 g, 21 mmoles) y la mezcla se puso a reflujo durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se añadió Et20 y la mezcla se lavó secuencialmente con tiosulfato de sodio y salmuera. La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y se concentró bajo vacío para dar el yoduro del título (2.8 g, 87.5%) como un sólido amarillo claro que se usó sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, ppm): 3.8 (d, 2H), 4.2 (d, 2H), 5.7 (m, 1 H), 6.0 (m, 1 H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Masa (M+1 ) =328 Ejemplo CC-4) Una solución de KHMDS (2.6 g, 13.3 mmoles) en THF (50 mi) se enfrió a -78°C. Una solución del producto del ejemplo CC-1 (2.2 g, 8.87 mmoles) en THF (15 mi) se añadió y se añadió 1 ,3-dimetil-3,4, 5,6-tetrahidro-2 (I H)-pirimidinona (DMPU, 1 .0 mi, 8.87 mi) ¡nmediantamente después del mismo. Después de que la solución se agitó a -78°C durante 40 minutos, se añadió una solución del producto del ejemplo CC-3 (2.9 g, 8 87 mmoles) en THF (15 mi). El matraz se removió del baño frío y se agitó a temperatura ambiente durante 3 hr. La mezcla de reacción se dividió entre NaHC03 acuoso saturado y EtOAc. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró bajo vacío para dar el el éster de amino protegido con bis-ftalilo deseado como un sólido amarillo. Este residuo se cromatografió sobre gel de sílice (1 : 1 hexanos: EtOAc) y dio 1.4 g (35%) del material del título como un sólido blanco. 1H RMN (300 Hz, CDCI3, ppm) 1.2 (t, 3H), 1.6 (d, 3H), 2.8 (dd, 1 H), 3.1 (dd, [1 H)f] 4.2 (m, 4H), 5.6 (m, 1 H), 5.8 (m, 1 H), 7.6 (m, 4H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Masa (M+H) = 447 Ejemplo CC-5) El producto del ejemplo CC-4 (0.78 g, 1.76 mmoles) se disolvió en una mezcla de ácido fórmico (10 mi, 95%) y HCI (20 mi, HCI concentrado) y se pueso a reflujo durante 3 días. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se filtró para remover anhídrido itálico. Después de concentrar bajo vacío (T< 40°C), la alfa-metil-lisina insaturada del título se obtuvo como un sólido blanco (0. 38 g, 95 %), que se usó sin purificación adicional. 1H RMN (300 MHz, D20, ppm): 1.4 (s, 3H), 2.4 (dd. 1 H), 2.6 (dd, 1 H), 3.5 (d, 2H), 5.7 (m, 2H) Masa (M+H) = 317 Ejemplo CC-6) El producto del ejemplo CC-5 (0.2 g, 0. 86 mmoles) se disolvió en H20 (8 mi) y se llevó a pH 9 con NaOH 2.5 N. Se añadió acetímidato de etilo-HCI (0.42 g, 3.4 mmoles) en cuatro porciones durante 1 hr. Después de 1 hr, la mezcla se acidificó a pH 4 con HCI al 10% y se concentró bajo vacío. El residuo se hizo pasar después a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente de NH4OH 0.5 N). El residuo se concentró bajo vacío, se acidificó a pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título (17 mg, 6 %) como un aceite. HR S calculado para C9H17N302: m/z = 200.1399 [M+H]. Encontrado: 200.1417 1H RMN (400 MHz, D20, ppm): 1.4 (s, 3H), 2.1 (s, 3H), 2.5 (dd, 1 H), 2.6 (dd, 1 H), 3.8 (d, 2H), 5.6 (m, 2H) EJEMPLO DD Diclorhidrato de ácido (R.E)-2-amino-2-metil-6-r(1 -iminoetiDamino1-4- hexenoico Ejemplo DD-1 ) (2S,4S)-3-benzoil-2-(ter-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona se preparó de acuerdo con el procedimiento de Seebach. Seebach, D.; Fadel, A. Helvética Chimica Acta 1985,68, 1243.
Ejemplo DD-2) Una solución de KHMDS (0.65 g, 3.24 mmoles), DMPU (0.33 mi, 2.7 mmoles) y THF (40 mi) se enfrió a -78°C. Una solución de (2S,4S)-3-benzoil-2-(ter-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona (Ejemplo DD-1 ) (0.70 g, 2.7 mmoles) en THF (10 mi) se añadió gota a gota. Después de 45 min, se añadió una solución del producto del ejemplo CC-3 (0.88 g, 2.7 mmoles) en THF (10 mi). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 hr y se extinguió con NaHC03 acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El aceite amarillo resultante se cromatografió sobre gel de sílice (9:1 después 4:1 de hexanos/acetato de etilo) para dar la alfa-metil-D-lisina insaturada protegida del título (0.26g, 20 %) como un aceite incoloro. HRMS calculado para C27H28N2O5: m/z = 46 .2076 [M+H]. Encontrado: 461.2033 1H RMN (400 MHz, CDCI3, ppm 0.9 (s, 9H), 1.5 (s, 3H), 4.3 (m, 2H), 5.5 (m, 2H), 5.6 (m, 2H), 6.1 (m, 1 H), 7.5 (m, 5H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Ejemplo DD-3 El producto del ejemplo DD-2 (0.255 mg, 0.55 mmoles) se disolvió en HCI 6N (6 mi) y ácido fórmico (6 mi) y se calentó a reflujo durante 24 hr. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y concentró bajo vacío. El residuo se suspendió en agua y se lavó con CH2CI2. La capa acuosa se concentró y se hizo pasar después a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente de NH4OH 0.5 N). El residuo se concentró bajo vacío, se acidificó a pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar la D-lisina insaturada del título (71 mg, 55 %) como un aceite que se usó sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, D20, ppm. 1 .4 (s, 3H), 2.5 (dd, 1 H), 2.6 (dd, 1 H), 3.4 (d, 2H), 5.6 (m, 2H), 5.7 (m, 2H) Ejemplo DD) El producto del ejemplo DD-3 (13 mg, 0.056 mmoles) se disolvió en H20 (5 mi) y se llevó a pH 9 con NoOH 2.5 N. Se añadió acetimidato de etilo-HCI (27 mg, 0.2 mmoles) se añadió en cuatro porciones durante 2 hr. Después de 2 hr, la mezcla se acidificó a pH 4 con HCI al 10% y se concentró bajo vacío. El residuo se hizo pasar después a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (forma H, eluyente de NH4OH 0.5 N). El residuo se concentró bajo vacío, se acidificó a pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título (45 mg) como un aceite. HRMS calculado para C9Hi7N302: m/z = 200.1399 [ +H]. Encontrado: 200.1386 1H RMN (400 MHz, D20, ppm): 1.4 (s, 3H), 2.1 (s, 3H), 2.5 (dd, H), 2.6 (dd, 1 H), 3.8 (d, 2H), 5.6 (m, 2H) EJEMPLO EE Diclorhidrato de ácido (S. E)-2-amino-2-metil-6-f(1-iminoetil)amino1-4- hexenoico Ejemplo EE-1 ) (2R,4R)-3-benzoil-2-(ter-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona se preparó de acuerdo con el procedimiento de Seebach. Seebach, [D. ;] Fadel, A. Helvética Chimica Acta 1985, 68, 1243.
Ejemplo EE-2) Una solución del producto de (2R,4R)-3-benzoil-2-(ter-butil)-4-metil-1 ,3-oxazolidin-5-ona del ejemplo EE-1 (2.0 g, 7.6 mmoles) en THF (50 mi) se enfrió a -78°C. Una solución de KH DS (0.65g, 3.24 mmoles) a -78°C en THF (25 mi) se añadió gota a gota. Después de 30 minutos, se añadió una solución del producto del ejemplo CC-3 (2.8 g, 8.6 mmoles) en THF (25 mi). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hr y se extinguió con NaHC03 acuoso saturado. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera, se secaron con gS04, se filtraron y se concentraron bajo vacío. El aceite anaranjado resultante se cromatografió sobre gel de sílice (9:1 después 4:1 de hexanos/acetato de etilo) para dar la alfa-metil-L-lisina insaturada protegida del título (0.5 g, 15 %) como un sólido blanco. HRMS calculado para C27H28 2O5: m/z = 461.2076 [M+H]. Encontrado: 461.2043 1H RMN (400 MHz, CDCI3, ppm): 0.9 (s, 9H), 1.5 (s, 3H), 4.3 (m, 2H), 5.5 (m, 2H), 5.6 (m, 2H), 6.1 (m, 1H), 7.5 (m, 5H), 7.7 (m, 2H), 7.9 (m, 2H) Ejemplo EE-3) El producto del ejemplo EE-2 (0.5 g, 1 mmol) se disolvió en HCI 12N (10 mi) y ácido fórmico (5 mi) y esta mezcla se calentó a reflujo durante 12 hr. La mezcla de reacción se enfrió en el congelador durante 3 hr y los sólidos se removieron por filtración. El residuo se lavó con CH2CI2 y EtOAc. La capa acuosa se concentró bajo vacío y dio la alfa-metil-L-lisina insaturada del título (0.26 g, 99 %) como un aceite que se usó sin purificación adicional. H RMN (300 MHz, D20, ppm): 1.4 (s, 3H), 2.5 (dd, 1 H), 2.6 (dd, 1 H), 3.4 (d, 2H), 5.7 (m, 2H).
Ejemplo EE) El producto del ejemplo EE-3 (0.13 g, 0.56 mmoles) se disolvió en H20 (1 mi) y se llevó a pH 9 con NaOH 2.5 N. Se añadió acetimidato de etilo-HCI (0.28 g, 2.2 mmoles) en cuatro porciones durante 1 hr. Después de 1 hr, la mezcla se acidificó a pH 4 con HCI al 10% y se concentró bajo vacío. El residuo se hizo pasar después a través de una columna DOWEX 50WX4-200 lavada con agua (eluyente de NH OH 0.5 N). El residuo se concentró bajo vacío, se acidificó a pH 4 con HCI al 10%, y se concentró para dar el producto del título como un aceite (40 mg). HRMS calculado para C9H17N302: m/z = 222.1218 [M+Na]. Encontrado: 222.1213 1H RMN (300 MHz, D20, ppm): 1.4 (s, 3H), 2.1 (s, 3H), 2.4 (dd [1 H),] 2.6 (dd, 1 H), 3.8 (d, 2H), 5.6 (m, 2H) EJEMPLO FF Píclorhidrato de ácido 2-amino-2-metil-6-r(1-iminoetil)amino1-4-hexynoico Ejemplo FF- ) BocNH El N-boc-1-amino-4-clorobut-2-ino se preparó siguiendo el procedimiento descrito en Tetrahedron Lett. 21 ,4263 (1980).
Ejemplo FF-2) N-(Difenilmetilen)-L-alaninato de metilo se preparó siguiendo el procedimiento descrito en J. Org. Chem. , 47,2663 (1982).
Ejemplo FF-3) THF seco (1000 mi) se colocó en un matraz purgado con argón y se añadió NaH al 60% dispersado en aceite mineral (9.04 g, 0.227 moles). A esta mezcla se añadió el producto del ejemplo FF-2 (30.7 g, 0.1 14 moles). La mezcla de reacción se agitó después a 10°C-15°C durante 30 min. Se añadió yoduro de potasio (4 g) y yodo (2 g) e inmediatamente fueron seguidos por la adición del producto del ejemplo FF-2 (23 g, 0. 13 mol en 200 mi THF) en 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó después a 55°C hasta que desapareció el material de partida (~2 hr). La mezcla de reacción se enfrió después a temperatura ambiente y el solvente se evaporó. Se añadió acetato de etilo (500 mi) y la mezcla se lavó cuidadosamente con 2 X 200 mi de agua desionizada. La capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se evaporó para dar 44 g de producto crudo. La purificación por cromatografía usando 20% acetato de etilo en hexano dio la alfa-metíl-lisina insaturada protegida del título (28 g, 57%). Análisis calculado para C26H3oN204 y 0.5 acetato de etilo: C, 70.42 ; H, 7.14 ; N, 5.91 . Encontrado: C, 70.95 ; H, 7.73; N, 6.09 IR (Neto, máx, crn'1): 2981 ,1714, 1631 1H RMN (CDCI3, ppm): 1.28 (s, 9H), 1.4 (s, 3H), 2.65-2.76 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.7 (bs, 2H), 4.6 (bs, 1 H), 6.95-7.4 (m, 10H) 13C RMN (CDCI3, ppm): 24.29, 28.33, 28.39, 33.24, 51.60, 53.55, 127.79, 127.97, 128.26, 128.36, 128.43, 128.54, 128.66, 130.05, 130.22, 132.39 Masa (M+1 ) = 435 Pureza de DSC: 261.95°C Ejemplo FF-4) u M ^^^HZC C02Me - 2HCI El producto del ejemplo FF-3 (16 g, 0.0368 moles) se disolvió en HCI 1 N (300 mi) y se agitó a 25°C durante 2 hr. La mezcla de reacción se lavó con éter (2X 50 mi) y la capa acuosa se separó y y se decoloró con carbón vegetal. La concentración dio -9 g (rendimiento de 100%) del éster de alfa-metil-lisina insaturada desprotegida del título FF-4 como un sólido espumoso blanco. Análisis calculado para C8Hi4N202 que contiene 2.26 HCI y 1 .19 H20: C, 35.06; H, 6.86; N, 10.22; Cl. 29.24. Encontrado: C, 35.31 ; H, 7.38; N, 10.70; Cl, 29.77 1H RMN (D20, ppm): 1 .56 (s, 3H), 2.8-3.0 (2 dt, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.79 (s, 3H) 3C RMN (D20, ppm): 23.89, 29.81 , 32.05, 57.08, 61 .90, 79.57, 82.43, 173.92 Masa (M+1 ) = 171 Pureza de DSC: 114. 22°C UV = 206 nm, abs 0.013 [a en metanol = 0 a 365 nm Ejemplo FF-5) El producto del ejemplo FF-4 (2.43 g, 0.01 moles) se disolvió en deionized agua (25 mi). Una solución de NaOH (400 mg, 0.01 moles) en agua desionizada (25 mi) se añadieron a 25°C para llevar el pH a -7.95 y la agitación se continuó durante otros 10 minutos. Se añadió clorhidrato de acetimidato de etilo (988 mg, 0.008 moles) a la mezcla de reacción con ajuste simultáneo del pH a -8.5 añadiendo NaOH 1 N. La mezcla de reacción se agitó a pH de 8 a 9.5 durante 3 hr después de la adición de acetimidato. Se añadió HCI 1 N a la mezcla de reacción (pH de 4.1 ). El solvente se evaporó a 50°C para dar un residuo higroscópico crudo (4 g, rendimiento >100%) . La purificación se llevó a cabo en el sistema de cromatografía de Wilson usando AcOH al 0.1 %/CH3CN/H2O. Análisis calculado para C10H-17N3O2 que contenía 2.25 de HCI y 1.7 de H20: C, 37.08; H, 7.05; N, 12.97; Cl, 24.63. Encontrado: C, 37.01 ; H, 6.79; N, 12.76; Cl, 24.87 IR (Neto, máx, crn 1): 2953, 2569, 1747, 681 , 1631 1H RMN (D20, ppm): 1.52 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.74-2.96 (2 dt, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.95 (t, 2H) 13C RMN (D20, ppm): 23.89, 29.81 , 32.05, 57.08, 61.90, 79.57, 82.43, 173.92 Masa (M+1 ) = 212 Ejemplo FF) El producto del ejemplo FF-5 (100 mg, 0.0005 moles) se disolvió en HCI 8N (20 mi) y se agitó durante 10 horas a reflujo. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el HCI acuoso se evaporó en un evaporador giratorio. El residuo se disolvió en agua desionizada (10 mi) y agua y se volvió a concentrar bajo vacío para dar el producto del título como un sólido vitreo amarillo en un rendimiento casi cuantitativo (88 mg). Análisis calculado para C9H15N3O2 que contenía 2.4 de HCI y 1.8 de H20: C, 34.08; H, 6.67; N, 13.25; Cl, 26.83. Encontrado: C, 34.32; H, 6.75; N, 13.63; Cl, 26.47 IR (Neto, max, cm"1): 1738, 1677, 1628, 1587 H RMN (D20, ppm): 1 .6 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.8-3.0 (2 dt, 2H), 4.1 (s, 2H) 3C RMN (D20, ppm): 21.22, 24.10, 29.88, 34.58, 80.04, 80.99, 128.39, 168.07. 176.13 Masa (M+1 ) = 198 EJEMPLO GG Diclorhidrato de ácido (2 ¾/S,4Z)-2-amino-2-metil-7-rí1 -iminoetil)amino1-4- heptenoico Ejemplo GG-1 ) 5,6 dihidropiran-2-ona (49.05 g, 0.5 moles) se disolvió en 200 mi de agua. Se añadió hidróxido de potasio (35 g, 0.625 moles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El solvente se removió bajo vacío para dar un sólido vitreo incoloro (65g, 84%) que se caracterizó por RMN de ser predominantemente el isómeros cis del compuesto del título. 1H RMN (CDCI3): 2.7 (m, 2H), 3.6 (t, 2H), 5.8-5.85 (m, 1 H), 5.9- 5.97 (m, 1 H).
Ejemplo GG-2) El producto del ejemplo GG-1 se disolvió en 100 mi de dimetilformamida. Yoduro de metilo (52 mi, 0.84 moles) se añadió después dando por resultado una esoterma a 40 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas y se dividió entre 150 mi de acetato de etilo/éter dietílico en una relación de 20/80 y agua con hielo. La capa acuosa se separó y se volvió a extraer con 100 mi de éter dietílico. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2S04), se filtraron y se separaron para dar el producto de éster metílico deseado (40 g, 71%). Este material se disolvió en 200 mi de cloruro de metileno y la solución se enfrió a 0°C. Se añadieron cloruro de ter-butildimetilsililo, trietilamina y dimetilaminopiridina. La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 10 horas bajo nitrógeno. La reacción se extrajo con 100 mi de una solución de bisulfuro de potasio acuoso 1N. La capa orgánica se lavó dos veces con 100 mi de salmuera y después tres veces con 150 mi de agua. La capa orgánica se secó (Na2S04), se filtró y se separó para dar42g (56%) del material del título. H R N (CDCI3): 0.02 (s, 6H), 0.085 (s, 9H), 2.8-2.85 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.66-3.7 (m 2H), 5.8 (m, 1 H), 6.3 (m, 1 H).
Ejemplo GG-3) El material del ejemplo GG-2 se disolvió en 25 mi de tolueno y se enfrió a 0°C. Hidruro de diisobutilaluminio (1.0 M en tolueno, 32 mi, 48 mmoles) se añadió gota a gota manteniendo la temperatura entre 5 y 10°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1.5 horas entre 6 y 8°C antes de enfriarse a -25°C. A esta mezcla se añadieron 100 mi de tartrato de sodio- potasio 0.5N. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante una hora. Se formó un precipitado gelatinoso el cual se filtró. La capa acuosa se extrajo dos veces con 100 mi de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron bajo vacío para dar el producto del título (3.45 g, 66%) como un aceite incoloro. 1H RMN (CDCI3): 0.02 (s, 6H), 0.085 (s, 9H), 2.25-2.32 (m, 2H), 2.6 (bs, 1 H), 3.6 (t, 2H), 4.08 (d, 2H), 5.45-5.55 (m, 1 H), 5.7-5.75 (m, 1 H).
Ejemplo GG-4) El producto (8 g, 37 mmoles) del ejemplo GG-3 se disolvió en 100 mi de cloruro de metileno y esta solución se enfrió a 0 °C. Después se añadió cloruro de metansulfonilo y esta mezcla se agitó durante 5 minutos. Después se añadió trietilamina. La temperatura se mantuvo entre 0 y -10°C durante la adición de los reactivos antes mencionados. La mezcla de reacción se calentó subsecuentemente hasta temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. Después se extrajo con 100 mi de una solución de bicarbonato de sodio acuoso al 50%. La capa orgánica se lavó con 100 mi de solución de salmuera acuosa saturada, se secó (sulfato de sodio), se filtró y se separó bajo vacío para dar el material del título (8.2 g, 94%). 1H RMN (CDCI3): 0.02 (s, 6H), 0.085 (s, 9H), 2.25-2.32 (m, 2H), 3.6 (t, 2H), 4.08 (d, 2H), 5.6-5.7 (m, 2H) biemplo GG-5) Una solución de éster metílico de N-p-cloro feniliminalanina (8.85 g 34 mmoles) se disolvió en 59 mi de tetrahidrofurano purgado con argón. Se añadió NaH (1 .64 g, 41 mmoles) con lo cual la solución se volvió anaranjado brillante y subsecuentemente rojo profundo. Una solución del material del título del ejemplo GG-4 (8 g, 34 mmoles) en 40 mi de tetrahidrofurano se añadió a la solución aniónica anterior. Se observó una exoterma elevando la temperatura a casi 40°C. La mezcla de reacción se mantuvo entre 48 y 52 °C durante 2 horas. Después se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se separó bajo vacío para dar el material del título (8.4 g, rendimiento crudo de 50%) como un aceite amarillo. H RMN (CDCI3): 0.02 (s, 6H), 0.085 (s, 9H), 1.45 (s, 3H), 1.6 (s, 1 H), 2.2-2.25 (m, 2H), 2.65 (d, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.7 (s, 3H), 5.45-5.55 (m, 2H), 7.35-7.7 (m, 4H) Ejemplo GG-6) El material del título del ejemplo GG-5 (8.4 g, 18.2 mmoles) se trató con 125 mi de ácido clorhídrico 1 N y la reacción se agitó durante una hora a temperatura ambiente. Después de que la mezcla de reacción había sido extraída dos veces en 75 mi de acetato de etilo, la capa acuosa se separó bajo vacío a 56°C para dar 4 g del material del título (rendimiento crudo de 100%). H RMN (CD3OD): 1.6 (s, 3H), 2.3-2.4 (m, 2H), 2.65-2.8 (m, 2H), 3.6-3.65 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 5.4-5.5 (m, 1 H), 5.75-5.85 (m, 1 H) Ejemplo GG-7 El producto del título del ejemplo GG-6 (1.9 g, 8. 5 mmoles) se disolvió en una mezcla de 15 mi de dioxano y 8 mi de agua. Bicarbonato de potasio sólido se añadió cuidadosamente para evitar espumación. La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos antes de que se añadiera anhídrido de tertiaributiloxicarbonilo en porciones y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 100 mi de acetato de etilo y 50 mi de agua antes de que se vaciara en un embudo de separación. La capa orgánica se separó, se secó (Na2S04), se filtró y se separó para dar el material del título como un aceite incoloro ( .9 g, rendimiento crudo de 78%). 1H RMN (CDCI3): 1.42 (s, 9H), 1.55 (s, 3H), 2.3-2.36 (m, 2H), 2.58-2.65 (m, 2H), 3.65-3.7 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 5.42-5.5 (m, 1 H), 5.55-5.62 (m, 1 H) Ejemplo GG-8) Otra muestra de 1.9 g del material del título del ejemplo GG-6 se convirtió por los métodos del ejemplo GG-7 a la mezcla Z/E cruda del producto del título del ejemplo GG-7. Este material posteriormente se purificó sobre gel de sílice con un sistema de solvente de acetato de etilo/hexano en una relación de 20/80 para obtener el isómero E menor así como el isómero Z mayor.
Ejemplo GG-9) El isómero Z del título del ejemplo GG-8 (1.8 g, 6.25 mmoles) se disolvió en 20 mi de acetonitrilo y esta solución se enfrió a 0 °C. Después se añadió piridina (0.76 g, 9.4 mmoles) seguido por la adición en porciones de dibromotrifenilfosforano sólido (3.46 g, 8.2 mmoles) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó bajo argón durante 24 horas a temperatura ambiente. El precipitado que se formó, se filtró. El filtrado se concentró bajo vacío para dar 2.8 g de un aceite que se purificó sobre gel de sílice usando un sistema de solvente de acetato de etilo/hexano en una relación de 60/40. El 1 .1 g del material del título (50 %) se caracterizó por RMN. 1HRMN (CDCI3): 1.44 (s, 9H), 1 .55 (s, 3H), 2.6-2.65 (m, 4H), 3.35-3.4 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 5.4-5.45 (m, H), 5.55-5.6 (m, 1 H) Ejemplo GG-10) El material del título del ejemplo GG-8 (300 mg, 0.86 mmoles) se disolvió en 25 mi de dimetilformamida (DMF). La sal de potasio de 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (130 mg, 0.94 mmoles) se añadió y la mezcla de reacción se calentó a 52°C y se mantuvo así durante 18 horas con agitación. Después se enfrió a temperatura ambiente antes de que la DMF se separara bajo vacío a 60°C. El residuo se purificó sobre gel de sílice con un gradiente de 60/40 a 90/10 de acetato de etilo/hexano para dar 300 mg (95 %) del material del título. H RMN (CD3OD): 1.35 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 2.32 (s, 3H), 2.45- 2.55 (m, 4H), 3.65-3.7 (m, 2H), 3.72 (t, 3H), 5.5-5.6 (m, 2H) Ejemplo GG-11 ) El producto del ejemplo GG- 0 (300 mg) se trató con 0.05 N de HCl acuoso y esta solución se agitó durante 30 minutos. El solvente se removió bajo vacío para dar el material deseado en un rendimiento cercanamente cuantitativo. 1H R N (CD3OD): 1.6 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.45-2.55 (m, 2H), 2.7-2.8 (m, 2H), 3.3-3.4 (m, 5H), 5.5-5.6 (m, 1 H), 5.7-5.8 (m, 1 H) Ejemplo GG-12) El material del título del ejemplo GG-1 1 (198 mg, 0.54 mmoles) se disolvió en 50 mi de MeOH. Después se añadió ácido fórmico (40 mg) seguido por paladio sobre carbonato de calcio (400 mg). La mezcla de reacción se calentó a 65°C con agitación en un tubo sellado durante 24 horas. Después se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró bajo vacío y el residuo se purificó por CLAR de fase inversa para dar 115 mg (75%) del material del titulo. H-RMN (CD3OD): 1 .4 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.4-2.52 (m, 4H), 3.25-3.35 (m, 2H), 3.75 (t, 3H), 5.54-5.62 (m, 2H) Ejemplo GG) El material del título (75 mg) del ejemplo GG-12 se disolvió en 15 mi de ácido clorhídrico 2N. La mezcla de reacción se calentó a reflujo y se agitó durante 6 horas antes de que se enfriara a temperatura ambiente. El solvente se removió bajo vacío. El residuo se disolvió en 25 mi de agua y se separó en un evaporador giratorio para remover el exceso de ácido clorhídrico. El residuo se disolvió en agua y se liofilizó para dar 76 mg H 00 %) del material del título. Análisis elementales calculados para C10H19N3O2 [CLOHL9N302 + 2.2HCI + 2.2 H20: C, 36.06; H, 7.75; N, 12.61 . Encontrado para CioH19 302 + 2.2HCI + 2.2 H20: C, 35.91 ; H, 7.61 ; N, 12.31 1H RMN (CD3OD): 1.47 (S, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.45-2.64 (m, 4H), 2.58-2.65 (m, 2H), 3.65-3.7 (t, 2H), 5.55-5.65 (m, 2H) EJEMPLO HH .HCI Diclorhidrato de ácido (2S.5E)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-r(1 iminoetil)amino1-5-heptenoico Ejemplo HH-1 ) A una solución (-78°C) de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo (25.4 g, 105 mmoles) en 100 mi de THF se añadió n-butil-litio (63 mi de 1.6 M en hexano, 101 mmoles). Este mezcla se agitó a -78°C durante 20 minutos produciendo una solución amarillo brillante. Una solución de 3-[(ter-butildimetilsilil)oxi]propanal cruda (J. Org. Chem., 1994, 59, 1 139-1 148) (20.0 g, 105 mmoles) en 120 mi de THF se añadió después gota a gota durante 10 minutos, y la mezcla resultante se agitó durante 1 .5 h a -78°C, tiempo al cual el análisis de cromatografía de capa delgada (5% acetato de etilo en hexano) mostró que no quedó material de partida. La reacción se extinguió a -78°C con NH4CI acuoso saturado (150 mi). La capa orgánica se recogió, y la capa acuosa se extrajo con éter dietilico (300 mi). Los compuestos orgánicos se lavaron con salmuera (200 mi), se secaron sobre gS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo se filtró a través de un tapón de gel de sílice (150 g) eluyendo con hexano (2 I) para dar 14.38 g (52%) del producto de éster etílico de ácido (2E)-5-[t(1 ,1-dimetiletil)di-metilsilil]oxi]-2-fluoro-2-pentenoico deseado como un aceite claro. 1H RMN y 19F RMN indicaron que el producto aislado tenía una relación E:Z aproximada de 95:5. HRMS calculado para C13H26F03S¡: m/z - 277.1635 [M+H]+, encontrado: 277.1645. 1H RMN (CDCI3) 0.06 (s, 6H), 0.94 (s, 9H), 1.38 (t, 3H), 2.74 (m, 2H), 3.70 (m, 2H), 4.31 (q, 2H), 6.0 (dt, vinilo, 1 H). 19F RMN (CDCI3) -129.78 (d, 0.05 F, J= 35 Hz, 5% isómero Z), -121 . 65 (d, 0.95 F, J= 23 Hz, 95% isómero E).
Ejemplo HH-2) A una solución del ejemplo HH-1 (6.76 g, 24.5 mmoles) en 100 mi de metanol a temperatura ambiente se añadió NaBH4 sólido (4.2 g, 220 mmoles) en porciones de 1.4 g durante tres horas. Después de 3.5 horas, se añadió agua (10 mi). NaBH4 sólido adicional (4.2 g, 220 mmoles) se añadió en porciones de .4 g durante tres horas. La reacción se extinguió con 150 mi de NH4CI acuoso saturado y se extrajo con éter dietilico (2 x 250 mi). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. El material crudo, 4.81 g de aceite claro, se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 10% de acetato de etilo en hexano para dar 2.39 g (42%) del producto (2E)-5-[[(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-fluoro-2-penten-1-ol deseado como un aceite claro, que contenía una relación E:Z de aproximadamente 93:7 por 19F RMN. HRMS calculado para CnH24F02Si: m/z = 235.1530 [M+H]+, encontrado: 235. 536. H-RMN (CDCI3) 0.06 (s, 6H), 0.88 (s, 9H), 2.35 (m, 2H), 3.62 (t. 2H), 4.19 (dd, 2H), 5.2 (dt, vinilo, 1H). 19F RMN (CDCI3) -120.0 (dt, 0.07F, 7% isómero Z), -109.82 (q, 0.93 F, J= 21 Hz, 93% isómero E).
Ejemplo HH-3) A una mezcla del ejemplo HH-2 (2.25 g, 9.58 mmoles), trifenilfosfina soportada en polímero (3 mmol/g, 1.86 g, 15 mmoles) y 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona (1.25 g, 12.5 mmoles) en 60 mi de THF se añadió gota a gota dietilazodicarboxilato (2.35 mi, 14.7 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, y se añadió 3-metil-1 ,2,4-oxadiazolin-5-ona adicional (0.30 g, 3.0 mmoles). Después de 30 minutos, la mezcla se filtró a través de celite, y el filtrado se concentró. El aceite amarillo resultante se trituró con éter dietílico (30 mi) y el sólido se removió por filtración. El filtrado se concentró, se trituró con hexano (30 mi) y se filtró. El filtrado se concentró a un aceite el cual se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 15% de acetato de etilo en hexano para dar 1 .83 g (60%) del producto 4-[(2E)-5-[[(1 ,1 -dimetiletil)dimetilsilil]oxi]-2-fluoro-2-pentenil]-3-metil-1 ,2,4-oxadi-azol-5(4H) -ona deseado como un aceite claro, que contenía sólo el isómero E deseado por 19F RMN. HRMS calculado para C14H2SFN2O3S1: m/z = 317.1697 [M+H]\ encontrado: 317.1699. 1H-RMN (CDCI3) 0.04 (s, 6H), 0.85 (s, 9H), 2.28 (s, 3H), 2.37 (m, 2H), 3.64 (t, 2H), 4.32 (d, 2H), 5.4 (dt, vinilo, 1 H). 19F RMN (CDCI3) -1 10.20 (q, 1 F, J= 21 Hz).
Ejemplo HH-4) Una solución del ejemplo HH-3 (1.83 g, 5.78 mmoles) en una método de ácido acético (6 mi), THF (2 mi) y agua (2 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. La solución resultante se concentró bajo vacío a un aceite el cual se disolvió en éter dietílico (50 mi). La capa orgánica se lavó con NaHC03 saturado, y la capa acuosa se extrajo con éter dietílico (2 x 50 mi) y acetato de etilo (2 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04) se filtraron y se evaporaron para dar 1 .15 g (98%) del producto de 4-[(2E)-2-fluoro-5-hidroxi-2-pentenil]-3-metil-1 ,2,4- oxadiazol-5(4H)-one deseado como un aceite incoloro transparente. HRMS calculado para C8Hi2FN203: m/z - 203.0832 [M+Hf . encontrado: 203.0822. 1H-RMN (CDCI3) 2.31 (3H), 2.4 (m, 2H), 3.66 (t, 2H), 4.37 (d, 2H), 5.42 (dt, vinilo, 1H). 19F RMN (CDCI3) -1 10.20 (q, 1 F, J= 21 Hz).
Ejemplo HH-5) A una solución de CH2CI2 (2 mi) de trifenilfosfina (238 mg, 0.91 mmoles) e imidazol (92 mg) a 0°C se añadió yodo sólido (230 mg, 0.91 mmoles), y la mezcla se agitó durante 5 minutos. A la suspensión amarilla resultante se añadió una solución del ejemplo HH-4 (0.15 g, 0.74 mmoles) en CH2CI2 (1.5 mi). La suspensión se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (10 mi), se lavó con Na2S203 saturado (5 mi) y salmuera (5 mi), se secó (MgSO*), se filtró y se evaporó a un aceite. La adición de éter dietílico (10 mi) al aceite dio un precipitado blanco que se removió por filtración y el filtrado se concentró a un aceite. El material crudo se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30% en hexano para dar 0.18 g (78%) del producto de 4- [(2E)-2-fluoro-5-yodo-2-penten¡l]-3-metil-1 ,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona deseado como un aceite claro, que se solidificó bajo reposo. Pf = 58.1-58.6 °C. Análisis calculado para C8Hi0FIN2O2: C, 30.79 ; H, 3.23; N, 8.98. Encontrado: C, 30.83; H, 3.11 ; N, 8.85. HRMS calculado para 08????? 2?2: m/z = 330.01 15 [M+H]+, encontrado: 330.0104. 1H RMN (CDCI3) 2.31 (s, 3H), 2.75 (q, 2H), 3.21 (t, 2H), 4.31 (d, 2H), 5.39 (dt, vinilo, 1 H). 19F RMN (CDCI3) -108.21 (q, 1 F, J= 21 Hz).
Ejemplo HH-6) A una solución de 1-metil-2-pirrolidinona (12 mi) de (3S,6f?)-6-isopropil-3-metil-5-fenil-3,6-dihidro-2H-1 ,4-oxazin-2-ona (Synthesis, 1999, 4, 704-717) (1 .10 g, 4.76 mmoles), Lil (0.63 g, 4.76 mmoles) y ejemplo-HH-5 (0.85 g, 2.72 mmoles) en un baño de hielo se añadió 2-ter-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilperhidro-1 ,3,2-diazafosforina (1.38 mi, 4.76 mmoles). La solución amarilla se tornó anaranjada mediante la adición de la base, y la solución resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 mi), se lavó con agua (2 X 30 mi), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó a un aceite amarillo. El material crudo se purificó por cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 30% en hexano para dar 0.64 g (57%) del producto alquilado deseado como un aceite claro. 1H RMN (C6D6) 0.57 (d, 3H), 0.89 (d, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.65 (s, 3H), 1.8 (m, 2H), 2.0 (m, 2H), 2.1 (m, 1 H), 3.22 (m, 2H), 4.88 (dt, vinilo, 1 H), 5.49 (d, 1 H), 7.1 (m, 3H), 7.6 (m, 2H). 9F RMN (CDCI3) -1 10.37 (q, 1 F, J= 21 Hz).
Ejemplo HH-7) A una solución de metanol (20 mi) del ejemplo-HH-6 (0.13 g, 0.31 mmoles) se añadió catalizador de Lindiar (1.0 g). La suspensión agitada se calentó a 60°C durante 1 hora y se añadió catalizador de Lindiar adicional (0.30 g). La suspensión se agitó durante 1 hora adicional a 60 °C, después se enfrió a temperatura ambiente. El catalizador se removió por filtración a través de celite y el filtrado se separó para dar 0.58 g (100%) del producto de amidina desprotegido deseado como un aceite amarillo pálido. EM: m/z = 374.2 [M+H]+ 1H RMN (CD3OD) 0.77 (d, 3H), 1.07 (d, 3H), 1 .58 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.8-2.2 (m, 5H), 3.83 (d, 2H), 5.20 (dt, vinilo, 1 H), 5.69 (d, 1 H), 7.4 (m, 3H), 7.7 m, 2H) 19F RMN (CDCI3) -109.4 (m, 1 F, J= 21 Hz) Ejemplo HH) Una solución del producto del ejemplo-HH-7 (0.58 g, 1.54 mmoles) en HCI 1.5 N (25 mi) se lavó con éter dietílico (2 x 20 mi) y se puso a reflujo durante 1 hora. El solvente se separó y el éster de aminoácido crudo se disolvió en HCI 6 N (15 mi) y se calentó a reflujo. Después de seis horas, el solvente se removió bajo vacío, y la espuma resultante se purificó por CLAR de fase inversa eluyendo con un gradiente de 0-40% de CH3CN/H2O (ácido acético al 0.25%) durante 30 minutos. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron a una espuma. El producto se disolvió en HCL 1 N y el solvente se removió bajo vacío (2x) para dar 0.15 g (29%) del producto de diclorhidrato de ácido (2S,5E)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado. HRMS calculado para C10H19FN3O2: m/z = 232.1461 [M+H]+, encontrado: 232.1485. H RMN (D20) 1.43 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.8-2.1 (m, 4H), 3.98 (d, 2H) 5.29 (dt, vinilo, 1 H). 19F RMN (CDCI3) -109.97 (q, 1 F, J= 21 Hz).
EJEMPLO II Diclorhidrato de ácido (2S.5E)-2-am¡no-2-metil-6-fluoro-7-r(1- iminoetil)amino1-5-heptenoico Ejemplo 11-1 ) A una solución de 1 -metil-2-pirrolidinona (7500 mi) de N-[(3,4-diclorofenil)-metilen]-alaninato de metilo (748.5 g, 2.88 moles) bajo nitrógeno se añadió Lil (385.5 g, 2.88 moles) y la suspensión resultante se agitó aproximadamente 20 minutos para dar una solución clara. El sólido del ejemplo-HH-5 (750 g, 2.40 moles) se añadió después y la solución resultante se enfrió en un baño de hielo a 0°C. BTPP neto (900 g, 2.88 moles) se añadió gota a gota durante 25 minutos manteniendo la temperatura interna por abajo de 5°C. Después de agitarse durante 1.5 horas adicionales a 5°C, se determinó que la reacción se había completado por CLAR. En este momento, se añadieron 7500 mi de éter metil t-butílico ( TBE) seguido por la adición de 9750 mi de una me de agua/hielo picado. La temperatura se elevó a 20°C durante esta operación. Después de agitarse vigorosamente durante 5-10 minutos, las capas se separaron y la capa acuosa se lavó dos veces con 6000 mi de MTBE. Las capas de MTBE se combinaron y se lavaron dos veces con 7500 mi de agua. La solución de MTBE resultante se concentró después a -5000 mi, se trató con 1 1625 mi de HCI 1 .0 N, y se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante una hora. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con 7500 mi de MTBE. Se añadió aproximadamente 1 kg de cloruro de sodio a la capa acuosa y la mezcla resultante se agitó hasta que toda la sal se había disuelto. En este punto, se añadieron 7500 mi de acetato de etilo, la mezcla resultante se enfrió a 10°C, y 2025 mi de hidróxido de sodio 6.0 N se añadieron con buena agitación. El pH resultante debe ser de aproximadamente 9. Las capas se separaron y la capa acuosa se saturó con cloruro de sodio y se extrajo nuevamente con 7500 mi de acetato de etilo. Los extractos de acetato de etilo combinados se secaron (MgS04) y se concentraron a un aceite ligero. Se debe notar que el acetato de etilo no se removió completamente. Con agitación, después se añadieron 3000 mi de hexano para generar una suspensión que se enfrió a 10°C. El sólido granulado se recogió por filtración y se lavó con 1500 mi de hexano. Aproximadamente 564 g (rendimiento de 82%) del aminoéster puro deseado (>95% puro por CLAR) se obtuvo como un sólido blanco, Pf 82.9-83.0 °C EMCL: m/z - 288.2 [M+H]+. CLAR quiral (columna de fase normal (Chiralpak-AD, 100% de acetonitrilo, 210 nm, 1 ml/min): Dos picos mayores a 4.71 y 5.36 min (1 :1 ). 1H RMN (CDCI3) 1.40 (s, 3H), 1.7-1.8 (m, 2H), 2.0 (br s, 2H), 2.2 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 4.34 (dd, 2H), 5.33 (dt, 1 H).
Ejemplo II-2) La separación de los enantiómeros individuales del producto del ejemplo 11-1 se completó sobre escala preparativa usando cromatografía de CLAR quiral (columna de fase normal ChiralPak-AD, 100% de acetonitrilo) para dar el producto del título de aminoéster (2S)-2-metíl¡co puro deseado. Columna de fase normal ChiralPak-AD, 100% de acetonitrilo, 210 nm, 1 ml/min): 5.14 min (99%).
Ejemplo 11-3) Una suspensión del producto del ejemplo 11-2 (2.30 g, 8.01 mmoles) en NaOH 0.993 M (30.0 mi, 29.79 mmoles) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. A la solución incolora transparente resultante se añadió HCI 1.023 M (29.10 mi, 29.76 mmoles). La solución resultante transparente se concentró hasta que se empezó a formar un precipitado (aproximadamente 30 mi). La suspensión se calentó para dar una solución transparente que se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se aisló por filtración. El sólido se lavó con agua fría (2x10 mi), metanol frío (2x10 mi) y Et20 (2x20 mi). El sólido blanco se secó bajo vacío a 40°C 4 horas para dar .04 g (53 %) del producto ilustrado N-hidroxi deseado. Pf = 247.2 °C. Análisis calculado para C10H18FN3O3: C, 48.57; H, 7.34 ; N, 16.99; Cl, 0.0. Encontrado: C, 48.49; H, 7.37; N, 16.91 ; Cl, 0.0. HR S calculado para CioH19FN303: m/z = 248.1410 [M+H]+, encontrado: 248.1390. 1H RMN (D20) 1 .35 (s, 3H), 1 .81 (s, 3H), 1 .7-2.0 (m, 4H), 3.87 (d, 2H) 5.29 (dt, vinilo, 1 H) 19F RMN (CDCI3) - 12.51 (q, 1 F, J= 21 Hz).
Ejemplo II-4) A una solución del ejemplo II-3 en metanol se añadió catalizador de Lindiar. La suspensión agitada se puso a reflujo durante 2 horas, después se enfrió a temperatura ambiente. El catalizador se removió por filtración a través de celite, y el filtrado se separó. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró repetidamente a partir de HCI 1 .0 N para dar el producto de diclorhidrato de ácido (2 5E)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico deseado.
Ejemplo 11-5) Una solución de 73.5 g (0.3 moles) del producto del ejemplo 11-2 se disolvió en 300 mi de metanol y se añadió gota a gota a una me preformada de 13.7 g de catalizador de Lindlar y 73.5 g de ácido fórmico (1 .53 moles) en 312 mi de metanol mientras se mantenía la temperatura de reacción entre 22 °C y 26 °C. Después de agitarse a temperatura ambiente durante -15 horas adicionales, se determinó que la reacción se había completado por F19 RMN. La mezcla resultante se filtró a través de celite y el celite se lavó 3 veces con 125 mi de metanol. Los filtrados de metanol se combinaron y se concentraron para generar 1 15 g de producto del título de amidina deseado como un aceite viscoso. E : m/z = 246 (M+H)+. 1H RMN (CD3OD) 1. s m,4H) 2.3 (s, 3H), 3.9 (s, 3H), 4.2 (d, 2H), 5.4 (dt, vinilo), 8.4 (s, 3H). 19F RMN (CD3OD) 1 1 q, J = 21 Hz) -1 1 1.7 (q, J=21 Hz). A fin de remover niveles traza de plomo, el producto crudo se disolvió en 750 mi de metanol y 150 g de una resina a base de tiol ((Deloxan THP 1 ) se añadió. Después se agitarse durante 3 horas a temperatura ambiente, la resina se filtró y se lavó 2 veces con 500 mi de metanol. Los filtrados se recogieron y se concentraron a 99 g del producto del título de amidina deseado como un aceite viscoso.
Alternativamente: Un total de 5.0 g del producto del ejemplo 11-2 (0.0174 moles, 1.0 equiv) se mezcló con 5.0 g de polvo de zinc (0.0765 moles, 4.39 equiv) en 40 mi de 1-butanol y 10 mi de ácido acético. Después de agitarse durante 5 horas a 50°C, análisis de CL indicaron que la reacción se había completado. Los sólidos se filtraron fácilmente. El filtrado, después de enfriarse en agua con hielo a 7°C, se trató con 30 mi de NaOH 6 N (0.180 moles) en una porción con agitación vigorosa. Después de que la mezcla de reacción se enfrió de 33°C a 20°C, la capa de butanol transparente se separó y la capa acuosa se extrajo nuevamente con 40 mi de 1-butanol. Los extractos de butanol se combinaron, se lavaron con 30 mi de salmuera seguido por aproximadamente 10 mi de HCI 6N. Después de concentrarse a 70°C, se obtuvo un vidrio transparente que se identificó como el producto del título de amidina deseado.
Ejemplo II) Una solución de 99 g del producto del ejemplo 11-5 en HCI 6 N se puso a reflujo durante 1 hora, tiempo en el cual análisis de CL indicaron que la reacción se había completado. El solvente se removió bajo vacío para dar 89.2 g de un aceite vitreo que se disolvió en una mezcla de 1466 mi de etanol y 7.5 mi de agua desionizada. THF se añadió a esta solución agitada a temperatura ambiente hasta que se alcanzó el punto de turbidez (5.5 litros). Se añadieron 30 mi de agua desionizada adicionales y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La suspensión resultante se filtró y se lavó con 200 mi de THF para dar 65 g de un sólido blanco identificado como el producto del título deseado [ ]D25 = +7.2 (c=0.9, H20) pf = 126-130° C. EM: m/z = 232 (M+H)+. Análisis calculado para C^z^F^Ck: C, 37.28; H, 6.88; N, 13.04; Cl, 22.01 . Encontrado: C, 37.52, H, 6.84, N, 13.21 , Cl, 21.81. 1H RMN (D20) 1 s, 3H), 1.8-2.1 (m, 4H), 1 .9 (s, 3H), 4.0 (d, 2H), 5.3 (dt, vinilo, 1 H). 9F RMN (D20) 1 q, J=21 Hz) -1 12.1 (q, J-21 Hz).
EJEMPLO JJ 2HC1 Diclorhidrato de ácido (2/?.5.E)-2'am¡no-2-metil-6-fluoro-7-rf1- ¡minoetil)aminol-5-heptenoico Ejemplo JJ-1 ) La separación de los enantiómeros individuales del producto del ejemplo 11-1 se logró en escala preparativa usando cromatografía de CLAR quiral para dar el producto de aminoéster (2R)-2-metílico puro deseado.
Ejemplo JJ-2) El producto del ejemplo JJ-1 se disolvió en agua y ácido acético. Se añadió polvo de zinc, y la mezcla se calentó a 60°C hasta que el análisis de CLAR mostró que quedaba poco del material de partida. El Zn se filtró a través de celite de la mezcla de reacción, y el filtrado se concentró. El material crudo se purificó por cromatografía en columna de CLAR de fase inversa. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando el producto (2ft)-2-metilacetamidina deseado.
Ejemplo JJ) Una solución del ejemplo JJ-2 en HCI 2.0 N se puso a reflujo durante 2 horas. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró repetidamente a partir de HCI 1.0 N para dar el producto de diclorhidrato de ácido (2R,5E)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)]amino]-5-heptenoico deseado.
EJEMPLO KK 2HC1 Diclorhidrato de ácido (2 /S.5a-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-f(1 - iminoetiOaminol-5-heptenoico Ejemplo KK-1 ) A una solución de 1-metil-2-pirrolidinona (5 mi) solutton del N-[(4-clorofenil)metilen]-glicinato de metilo (0.33 g, 1.6 mmoles), Lil (0.20 g, 1.0 mmoles) y una muestra del producto del ejemplo HH-5 (0.30 g, 0.96 mmoles) en un baño de hielo se añadió 2-íer-butilimino-2-dietilamino-1 ,3-dimetilperhidro-1 ,3,2-diazafosforina (0.433 mi, 1.5 mmoles). La solución se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (30 mi), se lavó con agua (2 x 20 mi), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar ¡mina alquilada racémica deseada cruda como un aceite amarillo. El material crudo se disolvió se disolvió en acetato de etilo (10 mi) y se añadió HCI 1N (10 mi). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente, y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se neutralizó con NaHC03 sólida y se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mi). La capa orgánica se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar 0.13 g del producto de aminoéster racémico del título deseado como un aceite amarillo. Este producto se uso en el siguiente paso sin purificación adicional. EMCL: miz - 288.2 [M+H]+.
Ejemplo KK-2) A una solución de CH2CI2 (15 mi) del ejemplo KK-1 (1.36 g, 4.98 mmoles) se añadió 4-clorobenzaldehido (0.70 g, 5.0 mmoles) y MgS04 (~5 g). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La suspensión se filtró y el filtrado se separó para dar 1.98 g (100%) del pr de imina del título deseado como un aceite amarillo pálido. Este producto se uso en el siguiente paso sin purificación adicional. 1H RMN (C6D6) 1.34 (s, 3H), 2.0 (br m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.42 (m, 2H), 3.83 (t, H), 4.98 (dt, vinilo, 1H).
Ejemplo KK-3) A una solución de CH2CI2 (2 mi) del producto del ejemplo KK-2 (0.25 g, 0.63 mmoles) se añadió yoduro de metilo (0.200 mi, 3.23 mmoles) y bromuro de 0(9)-alil-N-(9-antracenilmetil)cinconidinio (40 mg, 0.066 mmoles). La solución se enfrió a-78 °C y se añadió BTPP neto (0.289 mi, 0.95 mmoles). La solución anaranjada resultante se agitó a -78°C durante 2 horas y se dejó que alcanzara -50°C. Después de 2 horas a -50°C, la solución se diluyó con CH2CI2 (10 mi), se lavó con agua (10 mi), se secó (MgS04), se filtró y se evaporó para dar ¡mina alquilada racémica deseada cruda como un aceite amarillo. El material crudo se disolvió en acetato de etilo (10 mi) y se añadió HCI 1 N (10 mi). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se neutralizó con NaHCC>3 sólido y se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mi). La capa orgánica se secó ( gS04), se filtró y se evaporó para dar0.16 g del producto aminoéster 2-metilo deseado como un aceite amarillo. El producto se usa en el siguiente paso sin purificación adicional.
EMCL: m/z = 288.2 [M+H]+ Ejemplo KK-4) El producto racémico del ejemplo KK-3 se disolvió en agua y ácido acético. Se añadió polvo de zinc, y la mezcla se calentó a 60°C hasta que el análisis de CLAR mostró que quedaba poco del material de partida. El polvo de zinc se filtró a través de celite de la mezcla de reacción, y el filtrado se concentró. El material crudo se purificó por cromatografía en columna de CLAR de fase inversa. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se concentraron dando el producto de acetamidina deseado.
Ejemplo KK) Una solución del ejemplo KK-4 racémico en HCI 2.0 N se puso a reflujo durante 1 hora. El solvente se removió bajo vacío. El sólido resultante se disolvió en agua y se concentró repetidamente a partir de HCI 1.0 N para dar el producto de diclorhidrato de ácido (2R/S,5E)-2-amino-2-metil-6-fluoro-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenoico del título deseado.
EJEMPLO LL Diclorhidrato de ácido (2S,5Zl-2-amino-2-metil-7-[(1 -iminoetil\amino1-5- heptenoico 4-f(Tetrahidropiranil)oxnbutino Ejemplo LL-1 ) Una mezcla de 4-dihidro-2H-piridina (293.2 g 3.5 moles) y HCI concentrado (1.1 mi) se enfrió a 5 °C. Mientras se continuaba enfriando externamente, se añadió 3-butin-1-ol (231 .5 g, 3.3 moles) durante un periodo de 30 minutos dejando que la temperatura alcanzara 50°C. La reacción se mantuvo mezclando a temperatura ambiente durante 2.5 horas antes de que se diluyera con MTBE (1.0 I). La mezcla resultante se lavó con bicarbonato de sodio saturado (2 x 150 mi). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida para dar 500 g del producto (rendimiento crudo de 98%); % de área de CG de 96%. 5-(Tetrahidro-piran-2-¡loxi)-Dent-2-in-1-ol Ejemplo LL-2) A una solución del producto 4-[(tetrahidropiranil)oxi]butino del ejemplo LL-1 (50.0 g, 0.33 moles) en THF (125 mi) se añadió una solución de EtMgCI 2N en THF (242 mi, 0.48 moles) bajo una atmósfera de nitrógeno durante un periodo de 30 minutos, dejando que la temperatura se elevara a 48°C. La mezcla se calentó posteriormente a 66 °C y se dejó a esta temperatura durante 2 horas antes de enfriarse a temperatura ambiente. Se añadió paraformaldehido (14.5 g, 0.48 moles) (se observó una exoterma pequeña) y la mezcla resultante se calentó a 45°C. Después de 1 hora de controlar la temperatura entre 45-55°C, la mezcla se volvió clara. En este punto, la mezcla se calentó hasta 66°C y se agitó durante 2.5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y cloruro de amonio saturado (125 mi) se añadió lentamente durante 30 minutos (se observó exoterma fuerte) manteniendo la temperatura por abajo de 40°C. La fase líquida se separó por decantación; se añadió acetato de etilo (250 mi) y salmuera (50 mi). La fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (2x50 mi) y agua (1x50 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró bajo presión reducida para dar 51 g de un aceite color amarillo claro (rendimiento crudo de % de área de CG = 88% de producto del titulo, 6% de material 5-(Tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-en-1-ol Ejemplo LL-3) A una botella de Parr de 500 mi, bajo una atmósfera de nitrógeno, se cargó el producto 5-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-in-1-ol del ejemplo LL-2 (40.2 g, 0.22 moles), catalizador de Lindlar (2.0 g), etanol (120 mi), hexano (120 mi), y 2,6-lutidina (457 mg). La mezcla de reacción se purgó cinco veces cada una con nitrógeno y e hidrógeno gaseoso. La botella de Parr se presurizó con hidrógeno a 0.351 kg/cm2 y se agitó hasta que el 98% del hidrógeno teórico se había consumido. El hidrógeno se liberó del recipiente y la reacción se purgó con nitrógeno cinco veces. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de Solka Floc y el catalizador se enjuagó con etanol (2x50 mi). El filtrado y los enjuagues se combinaron y se concentraron bajo presión reducida para dar 40.3 g (rendimiento de 99%) del material del título como un aceite de color amarillo (% de área de CG - 95%). 3- etil-4-r5-ftelrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-enin-4H-ri .2,41 oxadiazol-5-ona Ejemplo LL-4) A una solución del producto 5-(tetrahidro-p¡ran-2-¡loxi)-pent-2-en-1-ol del ejemplo LL-3 (11.8 g, 0.063 moles) en tolueno (42 mi) se añadió trietilamina (6.4 g, 0.063 moles). La mezcla se enfrió a -5°C y se añadió cloruro de metansulfonilo (7.3 g, 0.63 moles) mediante jeringa a una velocidad tal para mantener la temperatura por abajo de 10°C. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante dos horas. La mezcla se filtró por succión y se enjuagó sobre el filtro con tolueno (2x20 mi). El filtrado y lavados se añadieron a una mezcla de la sal de sodio de 3-metil- ,2,4-oxadiazolin-5-ona (8.6 g, 0.063 moles) en DMF (10 mi). La mezcla se agitó con un agitador mecánico y se calentó a 45°C durante 5 horas. Se añadió agua (40 mi) y la mezcla se agitó durante 5 minutos y después las capas se separaron. La capa de tolueno se lavó con agua (3x20 mi), se secó sobre MgS04 y se concentró para dar 16.5 g (97.3%) de un producto crudo color anaranjado. (% de área de CG consistió de 71 % de producto del título, 18% de tolueno y 4% de una impureza). f4-(5-H¡droxí-pent-2-en¡IV3-metil-4H-f ,2.41 oxad¡azol-5-ona Ejemplo LL-5) A una solución del producto [3-metil-4-[5-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-pent-2-enil]-4H-[1,2,4] [oxadi-az-ol-5-ona del ejemplo LL-4 (16 g, 0.06 moles) en metanol (48 mi) se añadió ácido p-toluensulfónico (0.34 g, 2.0 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante cuatro horas. Se añadió bicarbonato de sodio (0.27 g, 3.0 mmoles) y la mezcla se concentró en un evaporador giratorio. El residuo se diluyó con NaHC03 saturado (20 mi) y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2x60 mi). Los extractos se combinaron y se lavaron con agua (2x25 mi), se secaron sobre MgS04 y se concentraron para dar 8.4 g del producto del título de aceite color anaranjado, crudo. (% de área de CG = 80%) Ester 5-(3-metil-5-oxo-í ,2,41oxadiazol-4-il)-pent-3-enílico de ácido metansulfónico Ejemplo LL-6) A una solución del producto 4-(5-hidroxi-pent-2-enil)-3-metil-4H-[1 ,2,4]oxadiazol-5-ona del ejemplo LL-5 (8.27 g, 0.045 moles) en cloruro de metileno (33 mi) se añadió trietilamina (5.0 g, 0.49 moles). La mezcla se enfrió a -5°C y se añadió cloruro de metansulfonilo (5.5 g, 0.048 moles) a una velocidad tal para mantener la temperatura por abajo de 8°C. El baño de enfriamiento se removió y la mezcla se agitó durante 3 horas hasta que se calentó hasta temperatura ambiente. Se añadió agua (15 mi) y la mezcla se agitó durante 5 minutos y después las capas se separaron. La fase orgánica se lavó con agua (10 mi), se secó sobre gS04 y se concentró para dar un residuo de color ámbar claro. El residuo se disolvió en acetato de etilo (8 mi) y se mantuvo a 5°C durante la noche. Los sólidos precipitados se filtraron por succión y se enjuagaron sobre el filtro con volumen mínimo de acetato de etilo y después se secaron con aire en el filtro para dar 6.8 g (rendimiento de 58%) del producto del título. 1H RMN (CDCI3) d 5.76 (dtt, J=10.9, 7.5, 1.5 Hz, 1H), d 5.59 (dtt, J=t0.9, 7.0, 1.5 Hz, 1 H), d 4.31 (t, J=6.3 Hz, 2H), d 4.27 (dd, J=7.0, 1.5 Hz, 2H), d 3.04 (s, 3H), d 2.67 (q, J=6.7 Hz, 2H), d 2.28 (s, 3H) 1JC (CDCI3) d 159.0, 156.3, 129.9, 125.1 , 68.4, 38.9, 37.2, 27.5, IR (crrf1) 1758, 1605, 1342, 1320, 1170. Análisis calculado para C9H14N2O5S: C, 41.21 ; H, 5.38; N, 10.68. Encontrado: C, 41.15; H, 5.41 ; N, 10.51. 4-(5-vodo-oent-2-enilV3-metil-4H-H ,2,41oxadiazol-5-ona Ejemplo LL-7) A una solución del producto de éster 5-(3-metil-5-oxo-[1,2,4]oxad¡azol-4-il)-pent-3-enílico de ácido metansulfónico del ejemplo LL-6 (20.0 g, 0.076 moles) en acetona (160 mi) se añadió yoduro de sodio (17.15 g, 0.114 moles). La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 3 horas. El calentamiento externo se detuvo y la mezcla se mantuvo a temperatura ambiente durante la noche. Los sólidos se removieron por filtración y se enjuagaron en el filtro. El filtrado y los lavados se combinaron y se concentraron y el residuo heterogéneo se extrajo con acetato de etilo (120 mi). La capa orgánica se lavó con agua (60 mi), una solución acuosa al 15% de tiosulfato de sodio (60 mi) y agua (60 mi); se secó sobre MgS04 y se concentró bajo presión reducida para dar 22.1 g (rendimiento de 98%) del producto de aceite del título.
Ester metílico de ácido r2-í(3.4-d¡cloro-benciliden)-amino1-propiónico Ejemplo LL-8) A una suspensión agitada mecánicamente de clorhidrato de éster metílico de L-alanina (200.0 g, 1.43 moles) en cloruro de metileno (2.1 I) bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió trietilamina (199.7 mi, 1 .43 moles) durante 12 minutos (durante la adición los sólidos se disolvieron parcialmente y después se precipitaron). Después de 10 minutos, 3,4-diclorobenzaldehido (227.5 g, 1.30 moles) y sulfato de magnesio (173.0 g, 1.43 moles) se añadieron (la temperatura se incrementó 6 °C durante 30 minutos). Después de 2.5 horas, la mezcla se filtró. El filtrado se lavó con agua (1 x 1 I) y salmuera (1 x 500 mi), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar 313.3 g, rendimiento de 92.4% del producto de aceite. 1H RMN (400 MHz, CDCI3). 8.25 (s, 1H), 7.91 (d, 1 H), 7.58 (dd, 1 H), 7.49 (d, 1 H), 4.17 (t, 1 H), 3.76 (s, 3H), 1.53 (d, 3H). Análisis calculado para CiiHnCl2N02: C, 50.79; H, 4.26; Cl, 27.26; N, 5.38. Encontrado: C, 50.37; H, 4.10; Cl, 26.87; N, 5.38.
Ester metílico de ácido ac-2-amino-2-metil-7-(3-metil-5-oxo-ri,2,41oxadiazol-4-¡l)-hept-5-eno¡co Ejemplo LL-9) Método 1. Una solución del producto del ejemplo LL-7 (114.2 g, 0.39 moles) y el producto del ejemplo LL-8 (151.5 g, 0.58 moles) en dimetilformamida (1.4 I) bajo atmósfera de nitrógeno se enfrió a -8°C. Yoduro de litio (78.1 g, 0.58 moles) se añadió después en 3 porciones iguales durante 19 minutos. La mezcla se agitó durante 20 minutos a -7°C y después (ter-butilimino)-tris(pirrolidino)fosforano (194.0 mi, 0.62) se añadió durante 36 minutos (temperatura máxima = -2.6°C). Después de 10 minutos, el baño de enfriamiento se removió y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se vació después en agua fría (1.4 I) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 1.0 I). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 400 mi) y salmuera. La capa de acetato de etilo se trató con HCI 1 N (780 mi) y se agitó durante 1 hora. La capa acuosa se separó y se extrajo con acetato de etilo (2 x 400 mi) y después se neutralizó con bicarbonato de sodio ( 10 g). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (1 x 500 mi). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y después se trató con éter metil t-butílico para dar un producto cristalino: primera cosecha 14.4 g; segunda cosecha 6.6 g (pureza por CG = 96.2 y 91.1 %, respectivamente). La fase acuosa se saturó con cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (4 x 500 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron y después se trataron con éter metil t-butílico para dar un producto cristalino: primera cosecha 33.4 g; segunda cosecha 10.8 g (pureza por CG = 89.6 y 88.8%, respectivamente. Rendimiento crudo total 65.2 g, 62.4%.
Método 2. A una solución del producto del ejemplo LL-7 (20.7 g, 0.070 moles) y el producto del ejemplo LL-8 (22.9 g, 0.088 moles) en dimetilformamida (207 mi) bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió carbonato de cesio (29.8 g, 0.092). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y después se diluyó con agua (300 mi) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mi). Las capas de acetato de etilo combinadas se lavaron con agua (3 x 100 mi) y salmuera y después se trataron con HCI 1 N (184 mi). Después de 1 hora, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi) y después se neutralizaron con bicarbonato de sodio (15.5 g). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (1 x 150 mi). La capa acuosa se saturó con cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para dar un sólido amarillo, 1 1.9 g, 62.9%; pureza por CG = 96.6%. El producto crudo se recristalizó a partir de éter metil t-butílico tibio o acetato de etilo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5.68 (m, 1 H), 5.36 (m, 1 H), 4.23 (d, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.18 (m, 2H), 1.81 (m, 1 H), 1.69 (s, br, 2H), 1.66 (m, 1 H), (1.36, 3H) 13C RMN (400 MHz, CDCI3) 177.60, 159.01 , 156.10, 135.12, 121.82, 57.48, 52.29, 40.12, 39.00, 26.62, 22.56, 10.41 Acido ffac-2-arnino-2-metil-7-(3-metil-5-oxo- .2,4] oxadiazol-4-il)-hept-5-enoico Ejemplo LL-10) El producto del ejemplo LL-9 (0.269 g, 1 mmoles) se disolvió en 5 mi de HCI 2 N y se calentó a reflujo bajo argón. Después de ponerse a reflujo durante 6 horas seguido por agitación a temperatura ambiente durante 72 horas, se removió una alícuota y se verificó por 1H R N. Aproximadamente 6% de éster de partida sin reaccionar permaneció junto con el producto deseado (verificado por EMCL). La porción acuosa se removió bajo vacío, dejando 0.38 g de un aceite ámbar espeso. Después de purificación por cromatografía de fase inversa, seguido por liofilización, se obtuvo 0.23 g, 90.2% del compuesto del título como sólidos no delicuescentes, blancos. Análisis calculado para CnH17N304. 0.77H2O: C, 49.09; H, 6.94; Encontrado: C, 48.71; H, 6.94; N, 15.98 Espectro de masa: M+1= 256.
Ester metílico de ácido (2S.5Z)-2-amino-2-metil-7-(3-metil-5-oxo-n^^loxadiazo -iO-hept-S-enoico Ejemplo LL-11 ) El compuesto del título (827.3 g) se separó de su enantiomero R por cromatografía quíral preparativa usando un instrumento Novaprep 200 con opción de reciclaje de estado constante. El material se disolvió en etanol absoluto a una concentración de 40 mg/ml y se cargó en una columna de acero inoxidable Chiral Technologies preempacada de 50x500 mm. El adsorbente fue de 20µ de ChiralPak AD. La fase móvil fue etanol/trietilamina 100/0.1 ; la velocidad de flujo fue igual a 125 mi por minuto. La solución cruda (25 mi) se cargó en la columna cada 12 minutos. Se usó una técnica de reciclaje de estado constante. El solvente se removió usando un evaporador giratorio. El producto final se aisló como un aceite dorado que se solidificó durante el reposo; 399.0 g (recuperación de 96.4%). H RMN (400 MHz, CD3OD) 5.68 (dtt, 1H, Hz), 5.43 (dtt, 1 H, Joteftjfco-10.7 Hz), 4.82 (s, br, 2H), 4.28 (d, 2H, J=5.5 Hz), 3.73 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26 (m, 1 H), 2.14 (m, 1 H), 1.82 (ddd, 1 H, J=13.6, 11.3, 5.4 Hz), 1.67 (ddd, 1 H, J= 3.6, 11.2, 5.5 Hz), 1.34 (s, 3H) 13C RMN (400 MHz, CD3OD) 178.49, 161.13, 158.70, 135.92, 123.47, 58.55, 52.77, 41.38, 39.96, 26.23, 23.47, 10.23 Análisis calculado para C12Hi9N30 : C, 53.52; H, 7.1 1 ; N, 15.60. Encontrado: C 52.35; H, 7.20; N, 5.60. .HCI Diclorhidrato de éster metílico de ácido (2S.5ZV7-acetimidoilamino-2-amino-2-metil-hept-5-enoico hidratado Ejemplo LL-12) A una solución del producto del ejemplo LL- 1 (114.5 g, 0.425 moles) en metanol (2.4 I) se añadió el ácido dibenzoil-L-tartárico sólido (152.5 g, 0.425 moles) y ácido fórmico al 88% (147 mi, 3.428 moles) a temperatura ambiente. Una suspensión de catalizador de Lindlar, paladio al 5% en peso sobre carbonato de calcio al impurificado con acetato de plomo (37.9 g), en metanol (200 mi) se preparó bajo nitrógeno. La solución de material de partida se añadió después a temperatura ambiente a la suspensión de catalizador gris claro seguido por un enjuague de metanol (200 mi). La mezcla de reacción heterogénea se calentó a 45°C durante 1 ½ horas. La evolución de gas constante se observó empezando a aproximadamente a 40°C, lo que indicó la reacción de inicio. La mezcla se enfrió en un baño de hielo/agua y después se filtró a través de un tapón Supercell HyFlo. La solución amarilla se concentró bajo vacío para dar un aceite viscoso, que se disolvió y se dividió entre HCI acuoso 2N (2 I) y acetato de etilo (0.8 I). Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó una vez con acetato de etilo (0.8 I). El solvente y componentes volátiles se removieron bajo vacío a temperaturas elevadas (=79°C). El producto intermediario se uso en el siguiente paso sin purificación adicional o caracterización. EMCL [ +Hf =228.
Ejemplo LL) El producto crudo del ejemplo LL-12 (170 g) se disolvió en HCI acuoso 2N (1 I). La solución anaranjada resultante se puso a reflujo durante la noche antes de que se dejara enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a aproximadamente 1/3 de su volumen y la solución ácida se hizo pasar a través de un cartucho de extracción de fase sólida (25 g de sílice C18) para remover el color y otras impurezas. El solvente se removió bajo vacío (= 70 °C) para dar 208 g de producto crudo como goma amarillenta. La goma cruda (31 .3 g) se recogió en agua (250 mi) y el material se cargó en una columna de intercambio de iones pretratada empacada con la resina ácida Dowex 50WX4-400 (aproximadamente 600 g). La resina se lavó primero con agua (1 I), después con HCI acuoso diluido (1 I de 10/90 v/v de HCI concentrado/agua). El producto se eluyó de la resina con HCI acuoso con una concentración de iones más alta (1-5 I de 20/90 v/v a 25/75 v/v de HCI concetrado/agua). El solvente acuoso se removió bajo vacío (=70°C) y el residuo gomoso se recogió en ácido trifluoroacético acuoso (100 mi) al 4% en volumen. El solvente acuoso se removió bajo vacío (=70 °C), y el procedimiento se repitió una vez más. El residuo se secó después en alto vacío para dar 32.2 g de goma como la sal de ácido trifuoroacético. La sal de ácido ditrifluoroacético de ácido (2S,5Z)-7-acetimidoilamino-2-amino-2-metil-hept-5-enoico hidratado crudo (32.2 g) se purificó por cromatografía preparativa de fase inversa. El producto crudo se disolvió TFA acuoso al 0.1% (50 mi) y se cargó en una columna de acero inoxidable de 5.08 cm de diámetro internp x 1 metro con adsorbente (BHK polar W/S, 50, 1.16 kg). El producto se eluyó a una velocidad de flujo de 120 ml/min con un gradiente de paso de TFA acuoso al 0.1% a 25/75/0.1 de acetonitrilo/agua/TFA. La relación de carga fue de 36:1 p/p de sílice con respecto a la muestra. El solvente se removió bajo vacío, y el material se convirtió a la sal de HCI por enjuagues repetidos con HCI acuoso diluido y remociones de solvente bajo vacío. El secado en alto vacío dio 27.4 g del diclorhidrato del título hidratado como una goma amarillenta. E CL [M+H]+ = 214.16 Da 1H RMN (D20, .: 1.48 (s, 3H), 1.8-1.9 (AB, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.01/2.12 (AB, 2H), 3.78 (d, 2H), rotámero 3.87 (d, 2H), 5.6/5.5 (dt, 2H, 11 Hz) 13C RMN (D20) : 18.7, 21.5, 21.6, 36.4, 39.1 , 59.8, 122.6, 134.3, 164.5, 173.7 Análisis elemental calculado para CioH 9N302 2 HCI 2 H20: C, 36.21 ; H. 8.33; N, 12.67; Cl 23.51. Encontrado: C, 36.03; H, 7.72; N, 12.67; Cl, 23.60.
EJEMPLO MM Diclorhidrato de ácido (2 5Z)-2-amino-2-met¡l-7-r(1-iminoetil)aminol-5- heptenoico El enantiómero R aislado durante la separación descrita en el ejemplo LL-11 (1.13 g, 4.2 mmoles) se disolvió en 11 mi de ácido acético acuoso al 25% y se calentó a 60 °C. Se añadió después polvo de zinc (1.10 g) en 4 porciones iguales a intervalos de 30 minutos. Después de calentarse durante un total de 3 horas, se removió una alícuota y se verificó por EMCL, que indicó que sólo quedaba una traza de material de partida sin reaccionar, junto con el producto deseado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se separó bajo vacío, dejando 2.31 g de un sólido acuoso blanco. El éster metílico se hidrolizó con HCI caliente diluido al compuesto del título. Después de purificación por cromatografía de fase inversa seguido de liofilización, se obtuvieron 0.31 g del compuesto del título como un sólido vitreo. Análisis calculado para C10Hi9N3O2.1.22 HCI.1.15 H2O: C, 46.13; H, 8.15; N, 15.09; Cl, 15.53. Encontrado: C, 46.38; H, 8.51 ; N, 15.13; Cl, 15.80 Espectro de masa: M+ = 214 c. Datos biológicos Algunas o todas las siguientes pruebas se usaron para demostrar la actividad inhibidora de la óxido nítrico sintasa de los compuestos de la invención así como para demostrar las propiedades farmacológicas . útiles.
Prueba de citrulina para óxido nítrico sintasa La actividad de la óxido nítrico sintasa (NOS) se puede medir monitoreando la conversión de L-[2,3-3H]-arg¡nina a L-[2,3-3H]-citrulina (Bredt y Snyder, Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A., 87, 682-685,1990 y Moore et al, J. Med. Chem., 39, 669-672. 1996). La NOS inducible humana (hiNOS), la NOS constitutiva endotelial humana (hecNOS) y la NOS constitutiva neuronal humana (hncNOS) son cada una clonadas a partir de ARN extraído de tejido humano. El ADNc para NOS inducible humana (hiNOS) se aisla de una genoteca de ????? hecha a partir de ARN extraído de una muestra de colon de un paciente con colitis ulcerativa. El ADNc para NOS constitutiva endotelial humana (hecNOS) se aisla de una genoteca de AADNc hecha a partir de ARN extraída de células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) y el ADNc para NOS constitutiva neuronal humana (hncNOS) se aisla de una genoteca de ADNc hecha a partir de ARN extraído de cerebelo humano obtenido de un cadáver. Las enzimas recombinantes se expresan en células de insecto Sf9 usando un vector de baculovirus (Rodi et al, en The Biology of Nitric Oxide, Pt. 4: Enzymology, Biochemistry and Immunology; Moneada, S., Feelisch, M., Busse, R., Higgs, E., Eds.; Portland Press Ltd.: London, 1995; pp 447-450). La actividad de la enzima se aisla de extractos de células solubles y se purifica parcialmente por cromatografía de DEAE-Sepharose. Para medir la actividad de la NOS, 10 µ? de enzima se añade a 40 µ? de Tris 50 mM (pH 7.6) en presencia o ausencia de compuestos de prueba y la reacción se inicia mediante la adición de 50 µ? de una mezcla de reacción que contiene Tris 50 mM (pH 7.6), 2.0 mg/ml de albúmina de suero de bovino, DTT 2.0 mM, CaCI2 4.0 mM, FAD 20 µ?, tetrahidrobiopterina 100 µ?, NADPH 0.4 mM y L-arginina 60 µ? que contiene 0.9 µ?? de L-[2,3-3H]-arginina. La concentración final de L-arginina en la prueba es de 30 µ?. Para hecNOS o hncNOS, la calmodulina es incluida a una concentración final de 40-100 nM. Después de incubarse a 37°C durante 15 minutos, la reacción se termina mediante la adición de 400 µ? de una suspensión (1 parte de resina, 3 partes de regulador de pH) de resina de intercambio de cationes Dowex 50W X-8 en un regulador de pH de interrupción que contiene EGTA 10 mM, HEPES 100 mM, pH 5.5 y L-citrulina 1 mM. Después de mezclar la resina se deja sedimentar y se determina la formación de L-[2,3-3H]-citrulina contando alícuotas del sobrenadante con un contador de escintilación de líquidos. Los resultados se reportan en el cuadro I como valores de Clso de compuestos para hiNOS, hecNOS y hncNOS.
Prueba de nitrito en células Raw Células RAW 264.7 se pueden colocar a confluencia en una placa de cultivo de tejido de 96 pozos creciendo durante la noche (17 hr) en presencia de LPS para inducir NOS. Una hilera de 3-6 pozos se puede dejar sin tratar y servir como controles para la sustracción de fondo no específico. El medio se puede remover de cada pozo y las células se pueden lavar dos veces con Kreb-R'mgers-Hepes (25 mM, pH 7.4) con 2 mg/ml de glucosa. Las células después se colocan sobre hielo y se incuban con 50 µ? de regulador de pH que contiene L-arginina (30 µ?) +/- inhibidores durante 1 hora. La prueba se puede iniciar calentando la placa hasta 37°C en un baño de agua durante 1 hora. La producción de nitrito por ¡NOS intracelular será lineal con el tiempo. Para terminar la prueba celular, la placa de células se puede colocar sobre hielo y el regulador de pH que contiene nitrito se puede remover y analizar para nitrito usando una determinación fluorescente previamente publicada de nitrito (T. P. Misko et al, Analytical Biochemistry, 214, 1 1 - 16 (1993).
Prueba de explante de cartílago humano Piezas de hueso se enjuagan dos veces con solución salina regulada en su pH con fosfato de Dulbecco (GibcoB L) y una vez con medio de Eagles modificado por Dulbecco (GibcoBRL) y se coloca en una caja de Petri con medio esencial mínimo libre de rojo de fenol (MEM) (GibcoBRL).. El cartílago se cortó en pequeños explantes de aproximadamente 15-45 mg en peso y uno o dos explantes por pozo se colocan ya sea en placas de cultivo de 96 o 48 pozos con 200-500 µ? de medio de cultivo por pozo. El medio de cultivo fue ya sea una modificación personalizada de medio esencial mínimo (Eagle) con sales de Earle (GibcoBRL) preparada sin L-arginina, sin L-glutamina y sin rojo de fenol o una modificación personalizada de medio de Neuman y Tytell sin suero (GibcoBRL) preparado sin L-arginina, sin insulina, sin ácido ascórbico, sin L-glutamina y sin rojo de fenol. Ambos se complementaron antes de usarse con L-arginina 100 µ? (Sigma), L-glutamina 2mM, complemento 1X HL-1 (BioWhittaker), 50 mg/ml de ácido ascórbico (Sigma) y 150 pg/ml de IL-1 ß humano recombinante (Sistemas RD) para inducir óxido nítrico sintasa. Los compuestos después se añaden en alícuotas de 10 µ? y los explantes se incuban a 37°C con 5% de CO2 durante 18-24 horas. El sobrenadante de un día se desecha después y es remplazado por medio de cultivo fresco que contiene IL- p humano recombinante y compuesto y se incuba durante otras 20-24 horas. Este sobrenadante se analiza para nitrito con una prueba fluorométrica (Misko et al, Anal. Biochem., 214, 11-16, 1993). Todas las muestras se hacen cuatro veces. Los controles no estimulados se cultivan en un medio en ausencia de IL-1 p humano recombinante. Los valores de CI50 (cuadro I) se determinan a partir de la gráfica de por ciento de inhibición de producción de nitrito a 6 diferentes concentraciones de inhibidor. El cuadro I muestra ejemplos de actividad biológica para algunos de los compuestos de la presente invención.
CUADRO I Actividad biológica: los valores representan promedios en todos los experimentos y todos los lotes estudiados Número de hiNOS CI50 hecNOS CI50 hncNOS CI50 Cartílago ejemplo de (µ ) (µ?) (µ?) humano Clso compuesto (u ) Ejemplo A 0.36 68 3.6 0.1 Ejemplo B 2.2 195 21 0.2 Ejemplo C 12 303 105 Ejemplo D 8.6 112 65 2.5 Ejemplo E <5 279 29 Ejemplo 1 3.1 77 15 0.7 Ejemplo J 4.4 302 58 8.2 Ejemplo K 74 266 86 Ejemplo L 197 1 100 539 Ejemplo M 3.4 78 17 Ejemplo N 0.9 26 6.0 Ejemplo 0 7.2 >100 36 0.7 Ejemplo P 12 >100 181 Ejemplo Q 12 1080 220 Ejemplo S 172 1490 523 Ejemplo T 0.9 89 8 0.1 Ejemplo U 20 418 150 Ejemplo V <3 >30 >3 <10 Ejemplo W <5 >150 >10 >30 Ejemplo X <3 >15 >3 <10 Ejemplo Y <3 >30 >3 <10 Ejemplo Z <3 >15 >3 <10 Ejemplo AA <3 >5 <3 <3 Ejemplo BB <10 >25 <10 Ejemplo CC 2.9 29 9.9 0.5 Ejemplo DD 10 74 31 1.8 Ejemplo EE 1.4 18 5.8 0.5 Ejemplo FF 16 86 45 Ejemplo GG 34 386 122 Ejemplo HH 0.4 37 7.6 0.4 Ejemplo JJ 56 352 584 Ejemplo KK 0.57 52 13 Ejemplo LL 0.7 31 12 0.8 Ejemplo MM 121 1930 1480 Prueba ¡n vivo Las ratas se pueden tratar con inyección intraperitoneal de 1-12.5 mg/kg de endotoxina (LPS) con o sin administración oral de inhibidores de óxido nítrico sintasa. Los niveles de nitrito/nitrato en el plasma se pueden determinar 5 horas después del tratamiento. Los resultados se pueden usar para mostrar que la administración de los inhibidores de óxido nítrico sintasa reducen el aumento en los niveles de nitrito/nitrato en el plasma, un indicador confiable de la producción de óxido nítrico inducida por endotoxina. Como se muestra en el cuadro II, ejemplo A (diclorhidrato de ácido (2S,5E)-2-am¡no-6-fluoro-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico) inhibió en incremento inducido por LPS en los niveles de nitrito/nitrato en el plasma con un valor de ED50 observado de <0.1 mg/kg, demostrando la capacidad para inhibir la actividad de la óxido nítrico sintasa inducible in vivo.
CUADRO II EDSQ para compuestos determinadas en ratas tratadas con endotoxina todos los compuestos se administraron por vía oral a menos que se indicara de otra manera Prueba para inhibición dependiente del tiempo Los compuestos se evalúan para inhibición dependiente del tiempo de isoformas de NOS humana por preincubacion del compuesto con la enzima a 37°C en presencia de los componentes de prueba de enzima de citrulina, menos L-arginina, para tiempos que varían de 0-60 minutos. Las alícuotas (10 µ?) son removidas a 0, 10, 21 y 60 minutos e inmediatamente se añaden a una mezcla de reacción de enzima de prueba de citrulina que contiene L-[2,3-3H]-arginina y una concentración final de L-arginina de 30 µ? en un volumen final de 100 µ?. La reacción se deja proceder durante 15 minutos a 37°C y se termina mediante la adición de regulador de pH de interrupción y cromatografía con resina de intercambio de iones e intercambio de cationes Dowex 50W X-8 como se describe para la prueba de NOS de citrulina. El por ciento de inhibición de la actividad de NOS por un inhibidor se tomó como el por ciento de inhibición en actividad en comparación con la enzima de control preincubada durante el mismo tiempo en ausencia de inhibidor. Los datos mostrados en el cuadro III es el por ciento de inhibición después de 21 y 60 minutos de preincubación de inhibidor con enzima.
CUADRO Prueba de efectos neuroprotectores de inhibidores selectivos de ¡NOS durante isquemia retinal La protección farmacológica contra lesión de células nerviosas durante isquemia retinal es importante para el tratamiento de otras condiciones neurodegenerativas del sistema nervioso central. Los efctos neuroprotectores de inhibidores selectivos de ¡NOS en retinas isquémicas se estudian en retina de rata canulada. Las células de ganglios retínales en ambas retinas de ratas son marcadas en forma retrograduada con fluoro-oro. Después de marcarse, la isquemia retínal se induce canulando ambos ojos de la rata anestesiada y aumentando la presión sanguínea en un ojo por arriba de la presión sanguínea sistólica durante aproximadamente 90 minutos. La presión después se reduce y las cánulas se retiran. Durante las siguientes dos semanas, una porción significativa de células ganglionares retínales se degeneran. Durante el periodo de eventos postisquémicos de dos semanas, un grupo de prueba de ratas recibe un inhibidor selectivo de ¡NOS administrado diariamente en agua para beber o alimento. En varios tiempos durante el periodo de evento postisquémico de dos semanas, las ratas seleccionadas son sacrificadas, sus retinas se recolectan, se montan en plano y se analizan para pérdida de células ganglionares usando microscopía de fluorescencia. La inmunohistoquímica y las inmunotransferencias se realizan en las retinas cosechadas para analizar pérdida de células ganglionares y para localizar óxido nítrico sintasa inducible.
Prueba para protección por inhibidores selectivos de iNOS contra neurodestrucción medida por óxido nítrico en qlaucoma La forma inducible de NOS se presenta en las cabezas del nervio óptico de pacientes con glaucoma de ángulo abierto primario, y se pueden relacionar con daño local de axones de células ganglionares retínales por óxido nítrico (A. H. Neufeld et al., Arch. Opht almol. 115: 497-503, 1997; A. H. Neufeld, Surv. Ophthalmol. 43 (suppl 1 ): S129-S135, 1999). La aminoguanidina, un inhibidor de ¡NOS, ha mostrado proveer neuroprotección a células ganglionares retínales en un modelo de rata de glaucoma crónico (Neufeld et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 96: 9944-48,1999). Para estudiar los efectos del bloqueo selectivo de ¡NOS por los compuestos inhibidores de ¡NOS de conformidad con los métodos de la presente invención, las condiciones similares a glaucoma se producen en ratas como se describe en Neufeld et al., 1999. La presión intraocular (IOP) moderadamente elevada, unilateral, crónica que imita al glaucoma se produce en ratas cauterizando tres vasos episclerales. La presión intraocular se incrementa aproximadamente dos veces. Un grupo experimental de animales se somete a administración oral de un inhibidor de ¡NOS selectivo en agua para beber durante 6 meses. Un grupo de control recibe agua para beber fresca de la misma fuente, en el mismo programa que el grupo experimental. En cada relleno de botella, se registra el volumen total consumido. La IOP es monitoreada mensualmente. Después de 6 meses de IOP moderadamente elevada, se toman fotografías a color de los discos ópticos de cada ojo usando una cámara de fondo. Una semana antes del sacrificio, las células ganglionares retínales son marcadas retrograduadamente usando flúor-oro u otro marcador de retrograduación adecuado mediante microinyección bilateral de los colículos superiores. Una semana después, los animales son sacrificados, las retinas se recolectan y las retinas montadas en plano enteras se someten a prueba para densidad de células ganglionares retínales usando microscopía de fluorescencia. El porcentaje de pérdida de células ganglionares retínales en grupos experimentales y de control se compara y se correlaciona con niveles registrados de cambios en IOP. c. Dosis, formulaciones y vías de administración Muchos de los compuestos inhibidores selectivos de ¡NOS útiles en los métodos de la presente invención puede tener por lo menos dos átomos de carbono asimétricos, y por lo tanto incluyen racematos y estereoisómeros, tales como diaestereómeros y enantiómeros, tanto en forma pura como en mezcla. Los estereoisómeros se pueden preparar usando técnicas convencionales, ya sea mediante reacción de materiales de partida enantioméricos, o separando isómeros de compuestos de la presente invención. Los isómeros pueden incluir isómeros geométricos, por ejemplo isómeros cis o isómeros trans a través de un doble enlace. Todos esos isómeros se contemplan entre los compuestos útiles en los métodos de la presente invención. Los métodos también contemplan el uso de tautómeros, sales, solvatos y profármacos de compuestos inhibidores selectivos de iNOS. Para los métodos de la presente invención, las vías de administración adecuadas de los inhibidores de iNOS selectivos incluyen cualesquiera medios que produzcan contacto de esos compuestos con su sitio de acción en el cuerpo del sujeto, por ejemplo, en la retina de mamífero tal como un humano. De manera más específica, las vías adecuadas de administración incluyen oral, intravenosa, subcutánea, rectal, tópica, bucal (es decir, sublingual), intramuscular e intradérmica. En una modalidad ilustrativa, los inhibidores selectivos de ¡NOS se administran por vía oral. Para la profilaxis o tratamiento de condiciones neurodegenerativas, incluyendo accidente vascular cerebral, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, isquemia cerebral y trauma físico, los métodos incluyen el uso de un inhibidor selectivo de iNOs como el compuesto per se, o como sales farmacéuticamente aceptables del mismo. El término "sales farmacéuticamente aceptables" abarca sales comúnmente usadas para formar sales de metal alcalino y para formar sales de adición de ácidos libres o bases libres. La naturaleza de la sal no es crítica, siempre que sea farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables son particularmente útiles como productos de los métodos de la presente invención debido a su mayor solubilidad acuosa en relación con un compuesto progenitor o neutro correspondiente. Dichas sales deben tener un anión o catión farmacéuticamente aceptable. Las sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptables adecuadas de compuestos de la presente invención se pueden preparar a partir de ácido inorgánico o de un ácido orgánico. Ejemplos de ácidos inorgánicos son ácido clorhídrico, bromhídrico, yorhídrico, nítrico, carbónico, sulfúrico y fosfórico. Los ácidos orgánicos apropiados incluyen las clases alifática, cicloalifática, aromática, aralifática, heterocíclica, carboxílica y sulfónica de ácidos orgánicos, ejemplos de los cuales son el ácido fórmico, acético, propiónico, succíníco, glicólico, glucónico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, glucorónico, maleico, fumárico, pirúvico, aspártico, glutámico, benzoico, antranílico, mesílico, salicílico, p-hidroxibenzoico, fenilacético, mandélico, embónico (pamoic), metanesulfónico, etilsulfónico, bencensulfónico, sulfanílico, esteárico, ciclohexilaminosulfónico, algénico, galacturónico. Las sales básicas de adición farmacéuticamente aceptables adecuadas de compuestos de la presente invención incluyen sales metálicas hechas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, socio y zinc o sales orgánicas hechas de ?,?'-dibenciletilendiamina, colina, cloroprocaína, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (n-metilglucamina) y procaína. Las sales ácidas de adición farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de la presente invención cuando es posible incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, bórico, fluorobórico, fosfórico, metafosfórico, nítrico, carbónico (incluyendo aniones de carbonato y de carbonato ácido), sulfónico y sulfúrico, y ácidos orgánicos tales como ácido acético, bencensulfónico, benzoico, cítrico, etansulfónico, fumárico, glucónico, glicólico, isotiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, metansulfónico, trifluorometansulfónico, succínico, toluensulfónico, tartárico y trifluoroacético. La sal de cloruro es particularmente preferida para propósitos médicos. Las sales básicas farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino tales como sales de sodio y postasio, y sales de metal alcalino térreo tales como sales de magnesio y calcio. Todas estas sales se pueden preparar por medios convencionales a partir de la base conjugada o ácido conjugado correspondientes de los compuestos de la presente invención haciendo reaccionar, respectivamente, el ácido o base apropiada con la base conjugada o ácido conjugado del compuesto. En una modalidad, los inhibidores selectivos de ¡NOS útiles en los métodos de la presente invención se presentan con un vehículo aceptable en forma de una combinación farmacéutica. El vehículo debe ser aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la combinación farmacéutica y no deben ser deletéreos para el sujeto. Las formas adecuadas para el vehículo incluyen sólida o líquida o ambas, y en una modalidad ilustrativa el vehículo se formula con el compuesto terapéutico como una combinación de dosis unitaria, por ejemplo como una tableta que contiene de alrededor de 0.05% a aproximadamente 95% en peso del compuesto activo. En modalidades alternativas, otras sustancias farmacológicamente activas también están presentes, incluyendo otros compuestos de la presente invención. Los compuestos farmacéuticos de la presente invención se preparan por cualquiera délas técnicas bien conocidas de farmacia, que consisten esencialmente en el mezclado de los ingredientes. Las formulaciones de dosis unitarias preferidas son aquellas que contienen una dosis efectiva, como se describe aquí más adelante, o una fracción apropiada de la misma, de uno o más de los compuestos terapéuticos de las combinaciones. En general, una dosis diaria total de un inhibidor selectivo de ¡NOS está en el intervalo de alrededor de 0.001 mg/kg de peso corporal/día a aproximadamente 2500 mg/kg de peso corporal/día. El intervalo de dosis para adultos humano es generalmente de alrededor de de 0.005 mg a aproximadamente 10 g por día. Las tabletas u otras formas de presentación provistas en unidades discretas puede contener convenientemente una cantidad de un compuesto terapéutico que es efectivo a esa dosis, o a un múltiplo de la misma. Por ejemplo, los compuestos inhibidores de ¡NOS selectivos usados en la presente invención se pueden presentar en unidades que contienen 5 mg a 500 mg, y típicamente de alrededor de 10 mg a aproximadamente 200 mg. En el caso de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos terapéuticos, los pesos anteriormente indicados se refieren al peso del equivalente ácido o el equivalente básico del compuesto terapéutico derivado de la sal. Para los métodos que aquí se describen, se debe entender que la cantidad de compuesto inhibidor selectivo de ¡NOS que se requiere para lograr el efecto biológico deseado depende de un número de factores, incluyendo el compuesto o compuestos individuales específicos escogidos, el uso específico, la vía de administración, la condición clínica del sujeto, y la edad, peso, género y dieta del sujeto. Las dosis diarias descritas en los párrafos anteriores para los diversos compuestos terapéuticos se administran en una sola dosis o en subdosis múltiples proporcionales. Las subdosis se administran de dos a seis veces por día. En una modalidad, las dosis se administran en una forma de liberación sostenida efectiva para obtener el efecto biológico deseado. La administración oral de conformidad con los métodos de la presente invención puede incluir formulaciones, como se conocen bien en la técnica, para proveer liberación prolongada o sostenida del fármaco al tracto gastrointestinal por cualquier número de mecanismos. Estos incluyen, pero nos e limitan a liberación sensible al pH de la forma de dosis basada en el pH cambiante del intestino delgado, el desgaste lento de una tableta o cápsula, la retención en el estómago con base en las propiedades físicas de la formulación, la bioadhesión déla forma de dosis al revestimiento de la mucosa del tracto intestinal o liberación enzimática del fármaco activo desde la forma de dosis. La administración oral de conformidad con los métodos de la presente invención se puede lograr usando una forma de dosis sólida, semisólida o líquida. Las formas semisólida y líquida adecuadas incluyen, por ejemplo, un jarabe o líquido contenido en una cápsula de gel. Para poner en práctica los métodos de la presente invención, las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración oral se pueden presentar en unidades discretas, tales como cápsulas, cachets, pastillas o tabletas, cada una conteniendo una cantidad predeterminada de por lo menos uno de los compuestos terapéuticos útiles en los métodos de la presente invención; como un polvo o en gránulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. d. Ejemplos de modalidades Los siguientes ejemplos no limitantes sirven para ilustrar varias composiciones farmacéuticas adecuadas para poner en práctica los métodos de tratamiento de la presente invención.
EJEMPLO 1 Composiciones farmacéuticas Tabletas de 100 mg de la composición expuesta en el cuadro IV se pueden preparar para administración oral usando técnicas de granulación en húmedo: CUADRO IV Ingrediente Peso (mg) Compuesto A-1 25 Lactosa 54 Celulosa microcristalina 15 Hidroxipropilmetilcelulosa 3 Croscarmelosa sódica 2 Estearato de magnesio 1 Peso total de la tableta 100 EJEMPLO 2 Composiciones farmacéuticas Tabletas de 100 mg de la composición expuesta en el cuadro V se pueden preparar usando técnica de compresión directa: CUADRO V Los ejemplos que aquí se describen se pueden realizar sustituyendo los compuestos terapéuticos descritos en forma genérica o específica o ingredientes inertes para aquellos usados en los ejemplos anteriores. Las explicaciones e ilustraciones que aquí se presentan pretenden familiarizar a los expertos en la técnica con la invención, sus principios y su aplicación práctica. Los expertos en la técnica pueden adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, como mejor se adapte a los requerimientos de un uso particular. Por consiguiente, las modalidades específicas de la presente invención como se expone no deben considerarse como exhaustivas o limitantes de la invención.

Claims (8)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES
1.- El uso de un inhibidor selectivo de óxido nítrico sintasa inducible o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o profármaco del mismo, en donde el inhibidor de óxido nítrico sintasa inducible se selecciona del grupo que consiste de: un compuesto que tiene la fórmula I
I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R2 se selecciona del grupo que consiste de H, halógeno y alquilo que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más halógenos; con la condición de que por lo menos uno de R1 o R2 contenga un halógeno; R7 se selecciona del grupo que consiste de H e hidroxi; J se selecciona del grupo que consiste de hidroxi, alcoxi y NR3R4 en donde; R3 se selecciona del grupo que consiste de H, alquilo inferior, alquilenilo inferior y alquinilo inferior; R4 se selecciona del grupo que consiste de H, y un anillo heterocíclico en el cual por lo menos un miembro del anillo es carbono y en el cual 1 a aproximadamente 4 heteroátomos se seleccionan independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre y dicho anillo heterocíclico puede ser opcionalmente sustituido con heteroarilamino, N-aril-N-alquilamino, N-heteroarilamino-N-alquilamino, halogenoalquiltio, alcanoiloxi, alcoxi, heteroaralcoxi, cicloalcoxi, cicloalqueniloxi, hidroxi, amino, tio, nitro, alquilamino inferior, alquiltio, alquiltioalquilo, arilamino, aralquilamino, ariltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonamido, alquilaminosulfonilo, amidosulfonilo, monoalquilamidosulfonilo, dialquilamidosulfonilo, monoarilamidosulfonilo, arilsulfonamido, diarilamidosulfonilo, monoalquilmonoarilamidosulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroariltio, heteroarilsulfinilo, heteroarilsulfonilo, alcanoilo, alquenoilo, aroilo, heteroaroilo, aralcanoilo, heteroaralcanoilo, halogenoalcanoilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilenodioxi, halogenoalquilenodioxi, cicloalquilo, cicloalquenilo, cicloalquilalquilo inferior, cicloalquenilalquilo inferior, halógeno, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, hidroxihalogenoalquilo, hidroxiaralquilo, hidroxialquilo, hidoxiheteroaralquilo, halogenoalcoxialquilo, arilo, aralquilo, ariloxi, aralcoxi, ariloxialquilo, heterociclilo saturado, heterociclilo parcialmente saturado, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariloxialquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, arilalquenilo, heteroarilalquenilo, cianoalquilo, dicianoalquilo, carboxamidoalquilo, dicarboxamidoalquilo, cianocarboalcoxialquilo, carboalcoxialquilo, dicarboalcoxialquilo, cianocicloalquilo, dicianocicloalquilo, carboxamidocicloalquilo, dicarboxamidocicloalquilo, carboalcoxiciano- cicloalquilo, carboalcoxicicloalquilo, dicarboalcoxicicloalquilo, formilalquilo, acilalquilo, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, fosfonoalquilo, dialcoxifosfonoalcoxi, diaralcoxifosfonoalcoxi, fosfonoalcoxi, dialcoxifosfonoalquilamino, diaralcoxifosfonoalquilamino, fosfonoalquilamino, dialcoxifosfonoalquilo, diaralcoxifosfonoalquilo, guanidino, amidino y acilamino; un compuesto que tiene una estructura correspondiente a la fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde X se selecciona del grupo que consiste de -S-, -S(O)-, y -S(0)2-. Preferiblemente, X es -S-. R12 se selecciona del grupo que consiste de alquilo de C-i-Ce, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alcoxi de Ci-Cs-alquilo de Ci y alquiltio de CrC5-alquilo de Ci en donde cada uno de estos grupos es opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Preferiblemente, R12 es alquilo de Ci-C6 opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno. Con respecto a R13 y R 8, R18 se selecciona del grupo que consiste de -OR24 y -N(R2 )(R26), y R13 se selecciona del grupo que consiste de -H, - OH, -C(0)-R27, -C(0)-0-R28 y -C(0)-S-R29; o R18 es -N(R30)-, y R13 es -C(O)-, en donde R18 y R13 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R18 es -O-, y R13 es -C(R3 )(R32)-, en donde R18 y R 3 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. Si R13 es -C(R31 )(R32)-, entonces R es -C(O)-0-R33; de otra manera R14 es -H. R 1, R15, R16 y R17 independientemente seleccionados del grupo que consiste de -H, halógeno, alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de C Cs-alquilo de C R19 y R20 independientemente se seleccionan del grupo que consiste de -H, alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6 y alcoxi de C C5-alquilo de d. Con respecto a R21 y R22, R21 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-O-R34 y -C(O)-S-R35, y R22 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, -C(O)-O-R36 y -C(O)-S-R37; o R2 es -O- y R22 es -C(O)-, en donde R2 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo; o R21 es -C(O)-, y R22 es -O-, en donde R21 y R22 junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo. R23 es alquilo de C1. R24 se selecciona del grupo que consiste de -H y alquilo de Ci-C6l en donde cuando R24 es alquilo de C-,-C6, R24 es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Con respecto a R25 y R26, R25 se selecciona del grupo que consiste de -H, alquilo y alcoxi, y R26 se selecciona del grupo que consiste de -H, -OH, alquilo, alcoxi, -C(O)-R38, -C(O)-O-R39 y -C(O)-S-R40; en donde cuando R25 y R26 independientemente son alquilo o alcoxi, R25 y R25 independientemente son opcionalmente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroerilo; o R25 es -H; y R26 se selecciona del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R35, R37, R38, R39 y R40 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de -H y alquilo, en donde alquilo es opcionalmente sustituido por una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste de cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo. Cuando cualquiera de R11, R 2,
R13, R14, R15, R16, R 7, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, porción seleccionada del grupo que consiste de alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, entonces la porción es opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de -OH, alcoxi y halógeno; un compuesto está representado por la fórmula III
III o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es H o metilo; y R42 es H o metilo; un compuesto de la fórmula IV IV o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un compuesto de fórmula V:
V o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de CrC5 y alquilo de C C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R44 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C Cs sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R45 es alquilo de C1-C5 o alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VI:
VI o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es alquilo de Ci-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VII vn o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R47 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R48 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C5 y alquilo de C^-Cs sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; R49 es alquilo de C1-C5 o alquilo de C1-C5 sustituido por alcoxi o uno o más halógenos; un compuesto de la fórmula VIII: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R50 es alquilo de C^Cs, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; un compuestos de la fórmula IX o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R51 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C-1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R52 es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; R53 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; y R54 se selecciona del grupo que consiste de halógeno y alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C C5 sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos; y un compuesto de la fórmula X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R es alquilo de C1-C5, dicho alquilo de C1-C5 opcionalmente sustituido por halógeno o alcoxi, dicho alcoxi opcionalmente sustituido por uno o más halógenos para la elaboración de un medicamento para tratar o prevenir una condición neurodegenerativa en un sujeto que necesita dicho tratamiento o prevención. 2 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es accidente vascular cerebral. 3. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es esclerosis múltiple. 4. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es esclerosis amiotrófica. 5. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es enfermedad de Alzheimer. 6.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es isquemia cerebral.
7.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es isquemia cerebral focal.
8.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es trauma físico. 9 - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es epilepsia. 10.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha condición neurodegenerativa es demencia de síndrome de inmunodeficiencia adquirida.
MXPA04002710A 2001-09-24 2002-09-24 Metodos de tratamiento neuroprotectores que usan inhibidores selectivos de oxido nitrico cintaza inducible. MXPA04002710A (es)

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