TW424095B - Novel opioid peptides - Google Patents

Description

4 24095' A7 ______B7 五、發明説明（彳） 發明領域 本發明係有關類鴉片胜肽化合物。更特定言之，其係有 關具有周圍止痛活性及對^-次類類鴉片受體具有選擇性之 類鴉片胜肽化合物〇 發明背景 哺乳動物和兩棲動物來源的許多内源性胜肽可結合到特 定的類鴉片受體且發生類似於傳統麻醉性鴉片製劑的止痛 反應。有許多不同類別的類鴉片受體經證明共同存在於高 級動物體内。例如，參看 w. Martin et al., J. Pharmacol. g^Ther·，i£7, p. 517(1975); and J. Lord et al., Nature p. 495〇977)。有三種不同類型的類鴉片受 體被鑑定出。第一種，《，顯示出對於類腦啡肽胜肽的區 別親和性，第二種，#，顯示出對於嗎啡和其他多環系生 物驗的增進親和性，第三種，X，顯示出對任一種上述配 體的同等親和性及對代諾吩（dynorphin)的優先親和性。概 括而言’卜受體似乎是參與止痛效應較多者。扣受趙似 乎與行爲效應有關，不過和卜受體兩者也都可能促成 止痛作用。 經濟部中央榡準局貝工消費合作杜印製 (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 每一種類鴉片受體在與鴉片製劑偶合時，會引起對該類 受體的獨具的特定生學反應。當一種鴉片製劑活化一種以 上妁受體時，每一受體的生物反應都會受影響，因而產生 副作用。鴉片製劑的特定性和選擇性愈低，則經由服用該 鴉片製劑引起副作用增加的機率愈大。 於先前技藝中，鴉片製劑，類鴉片胜肽，及其類似物， 4 2 4095 A7 B7 五、發明説明（2 都不能顯示出’或只顯示有限度的對其所結合的受體或諸 受體之類別的選擇率。 鸦片製劑可能？丨起嚴重且潛在致命性副作用。其副作用 例如呼吸壓抑’耐受性，物理依賴性容量，及沉澱斷除徵 候群’都X經由肖中樞#㈣統受體的非#定性交互作用 所引起的。可參看 κ. Budd，In International Encyclopedia of Pharmacology andjrherapeutics; N.E. Williams and H. Wilkmson，Eds” Pergammon: (0xf〇rd)，112 p 51 (1983)。所 以，主要是透過周圍神經系統中的類鴉片受體發生作用之 類鴉片止痛劑預料不會引起與影響中樞神經系統的類鴉片 止痛劑所關聯的副作用相類似之不良副作用。 到目前爲止，已知可發生周圍止痛作用的少數藥劑類別 中之一爲非類固醇消炎劑，例如阿司匹林（aspirin),異丁 苯丙酸（lbuprofen)，和ketorolac。這些藥劑不會與類鴉片 受體交互作用但已知可抑制環氧酶及調制前列腺素合成。 k些的止痛劑不具有中極促成的副作用，不過彼等可能引 起其他的副作用，例如胃腸道溃瘍。 經濟部中夬標準局員工消費合作杜印製 I丨~ΓΤΙΊ---囔II (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 一般認爲非極性胜肽比極性胜肽更容易經由穿過血腦障 壁而進入中榧神經系統。據報導，TAPP(H-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-NH2)同時展現出周圍和中樞兩種抗感受傷害性質（p Schiller et al., Proceedings of the 20^ European Peptide Symposium, 1988)。但相異者，本案發明人發現該四肽即 使在100¾克/公斤劑量之下也不會有中柩作用性。 本發明的目的爲提出一種類捣片胜肽化合物，其具周圍 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 424095 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明U ) 作用性但實質地避免掉與傳統周園作用性止痛劑相關聯的 不良副作用《本發明的另一目的爲提出可選擇性地結合到 類鴉片受體的胜肽化合物。 發明概述 本發明提出新穎胜肽化合物，其具周圍作用性且對卜類 鴉片受體具選擇性，其係式（1)所表化合物： X—1—R—H3~R4— Υ (1) 及其鹽，衍生物和類似物 其中， 1^爲Tyr或2'，6、二甲基酪胺酸，或其類似物或衍生物； R2爲 D-Ala或 D-Arg ; R3爲 Phe(p-F); R4爲 Phe或 Phe(p-F); X爲Η或Cu烷基；且 Y和Z獨立地各爲Η，芳烷基或Cy烷基。 於本發明另一部份中，提出醫藥組合物，其係由式（1)化 合物與醫藥可接受載劑及/或第二種治療活性劑的混合物 所構成的。 於本發明另一部份中，提出一種治療疼痛的方法，其包 括給需要彼種治療的哺乳動物服用醫藥有效量的式（1)化 ' 6 · 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（SiOxi公釐） ' ----- ----------^-- * - -- (請先閱讀背面之注項再填寫本頁) 丁 A7 B7 [24095 五、發明説明（4 ) 合物。 於本發明又另-部份中，提出式⑴化合物對於製 疼痛所用醫藥之用途。 "療 圖式之簡略説明 圖1’ 2和4闡tf本發明化合物在兩種不同熱板檢定中的 抑制效應。 圖3闡π H-Tyr_nphe_pheNHe熱板檢定中的抑制效 應。 圖5閣示本發明化合物在尾擊檢定assay)中的 抑制效應。 發明説明 於説明書中及申請專利範園内用到下列共同縮窝：

Ala •丙胺酸

Afg -精胺酸

Phe -苯丙胺酸

Tyr -酪胺酸

Ser -絲胺酸 TAPP - H-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-NH2 GPI -天竺鼠迴腸 MVD -小鼠輸精管

Phe(p-F)-對-氟苯丙胺酸 HOBT - N-經基苯并三峰 BOP -苯幷三唑基-N-伸氧基-三-(二甲胺基）銹六氟磷 酸鹽 本紙張尺度適用巾翻家標準（CNS ) ^雖（21〇><297公幻 I— I mr ri - I I - I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 424095 B7 ------—---- 五、發明説明（5 ) DMF -二曱基甲醯胺 TFA 三氟乙酸 tBU •第三丁基

Pmc - 2,2,5,7,8-五甲基咣-6-磺醯基 FMOC - 9-苐基甲氧羰基 PBQ -苯基-P-苯醌 表1所示對PBQ致苦痛檢定的"ED5〇"—項係定義爲引起相 對於對照組所觀察到的苦痛値減少50%之藥物劑量。表1 中所示對結合檢定的一項爲已知的#·受體配體 〇八皿(30與（^-受體配體〇八〇1^之抑制常數。"《^/«：/"—項 係用來指示選擇率之値。該比例表類鴉片胜肽對於結合到 和受體的親和性關係。 本發明化合物係用式（1)表出者： /2 X— Rt—R£—R—R—νΓ Υ ⑴ 及其鹽，衍生物和類似物。 X爲Η或甲基且較佳者爲Η。 1^爲丁丫1·或2·，6、二甲基酪胺酸，且較佳者爲Tyr。1^的《-胺 基係經X取代而形成於X爲Η時的胺基或於X爲甲基時的烷 胺基15 R2爲D-Ala或D-Arg，且較佳者爲D-Ala。 R3 爲 Phe(p-F)。 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） ------1----東-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424095 A7 ______B7 五、發明説明（6 ) 尺4爲Phe或Phe(p-F)，且較佳者爲Phe。 Y和Z獨立地各爲Η ;芳烷基，例如苄基；及Ci 6烷基，例 如甲基。較佳者Y和Z兩者皆爲Η。 本發明化合物包括但不限於： 化合物#1B H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 ； 化合物 #1C H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe-NH2 ； 化合物 #2B H-Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 ;和 化合物 #2C H-Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe-NH2。 於較佳實施例中，本發明化合物係選自下列之中者： 化合物社1C H-Tyr-D-Ala-Plie(p-F)-Phe-NH2 ;和 化合物 #2C H-Tyr_D-Arg-Phe(p-F)-Phe-NH2。 於一更佳實施例中，本發明化合物爲： 化合物社1C H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe-NH2 ° 胺基酸衍生物2'，6'-二甲基酪胺酸（Dmt)可在類鴉片胜肽 化合物中取代酪胺酸。實驗證明Dmt對於在式1中位置 ，第一胺基酸殘基的酪胺酸之取代可使該類鴉片胜肽在只_ 受體的效力増加高達2級次之大小値。且當該化合物在& 位置含有Dmt時，可增加其對受體的選擇率。此取代會 引起結合抑制常數比例的對應偏移以反映所增加的受體 選擇率。 該胜肽的類鴉片活性係在活體外（in vitro)用天竺鼠迴腸 (GPI)縱肌製備物檢定的而其抗感受傷害活性則在活體内 (in vivo)於齧齒類PBQ誘導痛苦模型（周園活性）和兩種熱板 試驗（中樞活性）中測定的。本發明化合物的止痛活性也在 ______- 9 - ______ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐1 " — ----------^-- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424 09 5 A7 B7_ 五、發明説明（7 ) 尾擊檢定中評估。尾擊檢定係用以評估化合物所具中樞止 痛活性。本發明化合物在致苦痛，和尾擊諸檢定中所得活 性經比較後顯示其止痛作用主要是在周圍系統中促成。周 圍止痛作用係由致苦痛試驗中的高效力配合熱板試驗或尾 擊試驗中的低效力而得證的。 PBQ (苯基-P-苯醌）在小鼠體内謗導的苦痛係一種同時對 中樞和周園兩種止痛作用之評估，其實驗程序可參看 Sigmund et al., Proc. Soc· Exp, Biol. Med.，95, p. 729(1957) ，其併於本文作爲參考。中樞止痛作用係經由在小鼠體内 的熱板反應之抑制而測定的。其實驗程序可參考G. Wolfe and A. MacDonald, J. Pharmacol. Exp. Ther., 80，p.300 (1944) ，其併於本文作爲參考。測量對A和β受體的類鴉片受體 結合親和性之檢定及GPI檢定都是經由Schiller et al.， Biophys. Res. Commun., 85，p. 1322 (1975)中所述實驗程序 而測定者，該文併於本文作爲參考。 本發明化合物可以用肽化學技藝中熟知的方法予以製成 。例如，參看 Principle of Peptide synthesis，Bodansky M., Spinger-Verlag，Berlin，Heidelberg, New York, Tokyo 1984或 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, edited by Erhard Gross and Johannes Meienhofer，Academic Press 1979 ° 本發明化合物係使用下文所概述的根據肽合成技藝中已 建立的程序之固相合成予以製備的。市售對-氟-苯丙胺酸 (Phe(p-F))係用於恰當的合成步驟。合成中也可以摻加 21,6·-二甲基酪胺酸，其係根據已建立的化學合成技術製備 ____ -10-_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' ----:1 — 1--->II (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 424〇9 5 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五'發明説明（8 ) 成的β 本發明胜肽的醫藥可接受鹽可以慣常地經由與恰當的酸 予以形成。適當的酸加成鹽可以經由添加酸例如鹽酸，氣 溴酸，磷酸，乙酸，反丁烯二酸，柳酸，檸檬酸，乳酸， 杏仁酸，酒石酸，茴酸，甲烷磺酸，及諳於此技者所知悉 的其他適當酸而形成。 本發明也提出醫藥组合物，適當的組合物具有醫藥有效 量的本發明化合物，或其醫藥可接受的鹽，與醫藥可接受 載劑或佐劑之混合物。治療有效量的本發明胜肽和醫藥可 接受的載劑物質（例如碳酸鎂或乳糖）可經調配形成治療组 合物，例如⑴丸，錠，膠囊，或液體，供病人經口服用者 ;(ii)液體或軟膏，可經由吸入，透皮，經鼻，經直腸或 經舌下給用者；（iii)能夠經靜脈内，非經腸，經皮下或腹 膜内給用的液體；或（ίν)經口或非經腸的持續釋放性調配 物0 本發明也提出一種治療哺乳動物，包括人類的疼痛之方 法。該方法包括以一種傳統方式，例如經口，非經腸，透 皮’或透黏膜，使用生物可分解的生物相容性聚合物之持 續釋放調配物，或經由使用膠囷，凝膠和微脂粒進行的部 位上輸送’給用醫藥有效量的式1胜肽或其醫藥可接受鹽 或其组合物。該胜肽可以給人類患者以約〇 01至100毫克/ 公斤，較佳者約0.05至20毫克/公斤且最佳者約ο Μ毫克/ 公斤的劑量服用。 下面的實施例係用來更佳的說明本發明，這些實施例是 ___ -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0X2^7公釐_)~— — ----ΊΙ—---京------tT------y- (諳先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424095 A7 ___B7_ 五、發明説明（9 ) 僅供闡述目的而提出者，不預期對本發明有任何方式的限 制。 實施例1 1C H-Tyr-D-Ala-Phe(p_F)-Phe-NH2之製備 使用Knorr樹脂製備合成肽。所用的胺基酸係經以Fmoc 保護其α胺基而以tBu保護路胺酸的侧鍵。偶合步驟中所 用的二曱基甲醯胺不含二甲胺。洗滌步驟中所用DMF及 TFA皆具生物級純度。對於純化步驟係使用USP經純化 H20和HPLC級乙腈。所有其他的溶劑皆具ACS純度且未經 任何純化即使用^ 固相合成係以人工在樹脂上以0.84毫莫耳/克的裝料量進 行的。使用各爲1.5至2當量的Fmoc-胺基酸，HOBT和BOP 在DMF内於室溫下進行肤縮合3-24小時。or-胺基Fmoc去保 護步驟係使用20% (v/v)六氫吡啶在DMF中進行25分鐘。肽 切斷和侧鏈去保護保經由用TFA/CH2C12/甲苯醚處理而完 成的。用TFA在室溫氮氣圜下處理肽樹脂兩個各90分鐘之 期間。於CH2C12洗滌與蒸發後，用乙醚處理剩餘物，過遽 沉澱物及在眞空下乾燥。 所得粗肽在Ci8 10只·15μ 300A逆相管柱上，用〇.〇6% TFA/i^O與0.06% TFA/乙腈梯度洗提進行HPLC純化。在 200 nm進行監測。合併純洗提份並予以冷凍乾燥。將經純 化的物質交換成其鹽酸鹽形式而得純標題化合物。 以類似的方式也合成出下列肽： 1A H-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-NH2 ___-12- 太紙張尺度適用中國國家標华（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----1--- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 24 0 9 5 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（1〇 ) IB H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 實施例2 2C H-Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe-NH2之製備 使用Knorr樹脂製備合成肽。所用的胺基酸係經以Fmoc 保護其α胺基而以（pmc)保護D_精胺酸的側鏈並以tBu保護 路胺酸的侧鏈。偶合步驟中所用的二甲基甲醯胺不含二甲 胺β洗務步驟中所用DMF及TFA皆具生物級純度。釾於純 化步驟係使用USP經純化Η20和HPLC級乙腈。所有其他的 溶劑皆具ACS純度且未經任何純化即使用。 固相合成係以人工在樹脂上以〇· 84毫莫耳/克的裝料量進 行的。使用分別爲2當量的Fmoc-胺基酸，HOBT和BOP在 DMF内於室溫下進行肽縮合2_5小時。a -胺基Fmoc去保護 步骤係使用20% (v/v)六氫吡啶在DMF中進行25分鐘。肽切 斷和侧鏈去保護係經由用TFA/CH2Cl2/甲苯醚處理而完成 的。用TFA在室溫氮氣圜下處理肽樹脂兩個各90分鐘之期 間°於CH2C12洗滌與蒸發後，用乙醚處理剩餘物，過濾沉 澱物及在眞空下乾燥。 所得粗肽在C18 lOy -15μ 300A逆相管柱上，用0.06% TFA/H20與0.06% TFA/乙腈梯度洗提進行HPLC純化。在 200 mn進行監測。合併純洗提份並予以冷凍乾燥。 以類似的方式合成下列肽化合物： 2A H-Tyr-D-Arg-Phe-Phe-NH2 2B H-Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 --—---------~ 13 -_ 本紙張尺度制㈣㈣辟（CNS ) Λ4· ( 2獻297公酱〉 ----:丨丨丨----京—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ，1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424095 A7 __B7_ 五、發明説明（11 ) 實施例3 放射性配禮結合檢定 膜製備 將重量爲350-450克的雄Sprague-Dawley老鼠經由吸入 C02予以殺死。將老鼠斷頭，取出除去小腦的腦部並放置 在冰冷鹽水液中並隨後於冰冷的50 mM Tris緩衝液pH 7,4 内句化（10毫升/腦），將膜在4°C以14000 rpm離心30分鐘。 將沉積丸再懸浮於約6毫升/腦的冰冷Tris緩衝液50 mM pH 7.4内並貯存在-78°C直到要用爲止。該腦勻化物的蛋白質 定量分析係根據購得的蛋白質檢定套劑（Bio-Rad)進行的。 放射性配體抑制 使用（3H)-DAMGO和（3H) DAGLE分別作爲只和d受體的 放射性配體。將放射性配體50 /d，膜100 //1和經系列地稀 釋過之受體一起溫浸在22°C下一小時。於示踪劑和膜存在 中，使用500倍超量的未標示配體測定非特定性結合。用 Whatman GF/B濾紙（預先浸在1%聚伸乙基亞胺水溶液中）過 ;慮並用Brandel細胞收取器以冰冷的50 mM Tris pH 7.4沖洗 而將自由配體與結合配體分離β將濾紙乾燥並置於24洞微 板内在500毫升閃爍劑/洞存在中計數其放射性。使用 Wallac 1450 Microbeta計數器測量其放射性。 用IC5〇根據Cheng and Prusoff方程式定出各化合物的尺丨値 。結合檢定的結果摘列於表1之中。 使用天竺鼠迴腸（GPI)檢定（縱肌製備物）根據Schiller et al., Biophys. Res. Commun., 85, p. 1322 (1975)中所述程序測 -14- 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（21 〇 X 297公釐） I In I ^^1 —II ^^1 I --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 424095 A7 _____B7_ 五、發明説明（12 ) 定肽化合物在y受體上的活性。活性結果摘列於表1之中 Ο 實施例4 在55°C進行熱板檢定（止痛活性之測量） 此檢定係使用重量爲20至25克之間的CD #1雄小鼠。將 小鼠稱重，標記並以每1 〇隻一組分組。 以相等於0.1毫升/10克P.C. (10毫升/公斤）的注射體積皮 下注射化合物（或標準樣或介質）處理小鼠。 對小鼠個別地評估在熱板上的反應時間，熱板（sorel， model DS37)的溫度係設定在55°C。觀察小鼠不舒服徵狀 例如舐舌，足掌顫抖，試著逃走（跳離該板）或發抖。在出 現這些徵狀中之一者時即計數反應時間並以"秒"記錄下來 。對每一隻小鼠觀察30秒之最長期間以防止對足掌組織造 成傷害。 對於每一時間讀値，將對照組的平均反應時間乘以L5 。將每一經處理小鼠的反應時間相對於"對照组平均値χ 1-5"進行比較β若反應時間比該"對照組平均値χ 15"還差 ’則該小鼠可視爲不具有止痛作用。若反應時間優於該” 對照組平均値χ丨.5"，則該小鼠即視爲具有止痛作用。一 组内有止痛的小鼠之數目測定該化合物對該讀值的止痛百 分比。若止痛百分比較30%爲差時，該化合物即視爲無作 用。 其結果不於圖1至3之中。 --------- 本紙張尺度賴中酬家縣（CNS ) Μ規格（2.1()><297公赛） ΓΙ.Ι— 束 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂- ___B7_ 五、發明説明（13 ) 實施例5 致苦痛檢定 此試驗是在重18至22克之間的CD #1雄性小鼠上實施的 。將小鼠稱重和標記。用〇 02%苯基醌溶液以〇.3毫升/20克 重量經由腹膜内途徑注射彼等。將注射後15分鐘期間出現 的扭曲現象計數下來。於經皮下途徑給入化合物（或介質 ’或標準樣）及，以5，20或60分鐘間隔注射苯基醌。 以下面所述方式製備0.02%苯基醌"溶液。於20毫克的 苯基酿溶解在5毫升的90%乙醇（Sigma，試藥級，醇）之内 。於連續振盪且預熱（但不沸騰）過的95毫升蒸餾水中慢慢 加入該已溶解的苯基醌。在使用前將該苯基醌溶液靜置2 小時，且於其間都要避光。每天都要準備新的溶液供試驗 所用。 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 1^^· i^i» In I ^^^1 n (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 檢定結果摘列於下面表1之中。可以看出在本發明胜肽 化合物中’ R3和R_4任一者或兩者爲Phe(p-F)者顯示出比對 應的無Phe(p-F)的化合物較爲大的對#類鴉片受體之選擇 率及於GPI檢定所測定出之較大受體轉導率。此外，如在 致苦痛檢定中所測定者，本發明化合物顯示出較大的周圍 止痛活性。 ** 2-苯基-1，4·苯醌（Sigma) _-16- 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（2丨0X297公嫠） 424095 A7 B7 五、發明説明（14 ) 表1 實施例 結合檢定 致苦痛 GPI κγ (nM) V (nM) K^/K/ ed50 (毫克/公/^ IC50 (nM) 1A 1.53 625.8 409 1.4 3 1B 0.2 199.6 998 0.2 0.12 1C 0.36 201.2 559 0.5 2A 0.68 1652.6 2430 0.5 6.7 2B 0.22 >1000 0.3 2C 0.57 952.5 1671 0.3 1.5 實施例6 熱板檢定（止痛活性之測量），在58°C實施 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 使用重量在20至25克的NMR1雄小鼠於此檢定中。將小 鼠稱重，標記並以每組6隻分組。 以相當於0.1毫升/10克P.C· (10毫升/公斤）注射體積經皮 下注射化合物（或標準品或介質）處理該等小鼠。 對小鼠個別地評估在熱板上的反應時間《熱板（IITC，Inc; Model 35·0)的溫度係設定在58°C。觀察小鼠不舒服微狀例 如舐舌，足掌顫抖，試著逃走（跳離該板）或發抖。在出現 這些徵狀中之一者時即計數反應時間並以"秒"記錄下來。 對每一隻小鼠觀察20秒之最長期間以防止對足掌組織造成 傷害。

若反應時間明顯地不同於對照組（P<0 〇5 ;雙向ANOVA ___ -17- _________ 本紙張尺度適财1¾家標準（CNS ) A4規格（21GXM7公釐） ' 424095 A7 ___B7 五、發明説明（15 ) ，sigma slot)，則化合物即視爲具止痛作用。 其結果示於圖4之中。 實施例7 尾擊檢定 使用重量爲20至25克的NMR1雄小鼠於此檢定之中。將 該小鼠稱重，標記並以每6隻一組分組。 以相當於0.1毫升/10克p.c. (10毫升/公斤）的注射體積經 皮下注射化合物（或標準品或介質）處理小鼠。 對小鼠個別地評估在尾擊試驗中的反應時間。於用經電 阻器控制的光束照射在尾尖（IITC，Inc; Model 33)時測量其 對尾節受輕擊的潛伏（latency)。對每隻小鼠觀察1〇秒之最 長期間以防止傷害到组織。 若其反應時間明顯不同於對照組（p<〇.〇5，雙向AN0VA ，sigma stat)則化合物即視爲具止痛作用。 其結果示於圖5之中。 nn K (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央梂準局員工消費合作社印製 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格( 210X297公釐）

Claims (1)

1. 424095 i 第851099IS號專利申請案 Μ 中文Φ請專利範团修正本(89本丨1月） C8 D8 、申請專利範圍肌u. 24修正 _補无 1. 一種式（I )化合物： X— R1 —fi2—R3~~R4~— 入丫 及其鹽， 其中， RjATyr或2\6'-二甲基酪胺酸； R_2為 D-Ala或 E)-Arg ; R3為 Phe(p-F); R4為 Phe 或 Phe(p-F); X為Η ;且 Υ和Ζ獨立地各為η。 2. 根據申請專利範圍第！項之化合物，其中h為D_Ala。 3·根據申請專利範圍第！項之化合物，其中心為〇_八^。 4. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中^為phe。 5. 根據申請專利範園第4項之化合物，其中尺2為D_Aia。 6. 根據申蜻專利範圍第4項之化合物，其中h為D-Arg。 7. 根據申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物，其中 X為H’且γ和ζ兩者皆為H。 8_根據申請專利範圚第1項之化合物，其係選自下列之中 者： H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 ;及 H-Tyr-D-Ala-Phe(p-F)-Phe-NH2 - -1 - 本紙張尺度適用t國國家橾準（CNS )从祕（21〇)<297公疫 --^-------7装------訂------沐 {請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局貝工消費合作社印策 424095 A8 B8 CS D8____ 六、申請專利範圍 9. —種化合物，其為 H-Tyr-D-Ala-Phe(p_F)-Phe-NH2。 10. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其係選自下列之中 者： H-Tyi：-D-Arg-Phe(p-F)-Phe(p-F)-NH2 ;及 H~Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe-NH2。 u.—種化合物，其為 H-Tyr-D-Arg-Phe(p-F)-Phe-NH2。 12_ —種用於治療及/或控制疼痛之醫藥組合物，其含有 根據申請專利範圍第1，2，3，4，5，6，8，9，1〇和 11項中任一項的化合物與醫藥可接受的載劑之混合 物。 13- —種用於治療及/或控制疼痛之醫藥組合物，其含有 根據申請專利範圍第7項之化合物與醫藥可接受之載劑 的混合物β 14. 根據申請專利範圍第1，2，3，4，5，6，8，9，10和 11項中任一項的化合物’其係用於製備有治療疼痛效 用的？周配物。 15. 根據申請專利範圍第7項之化合物，其係用於製備有仏 療疼痛效用的調配物^ "" --^------i------IT------來 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS Μ4規格U10X297公釐）