TW202323258A - 用於治療血液病症之丙酮酸激酶活化劑 - Google Patents

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Abstract

本文描述活化丙酮酸激酶之化合物、其醫藥組合物及使用方法。此等化合物由式(I)表示：
Figure 111135803-A0101-11-0001-1
其中R 1、R 2、R a、R b、R j、R k及Q如本文所定義。

Description

用於治療血液病症之丙酮酸激酶活化劑
丙酮酸激酶缺乏症(PKD)為因PKLR基因之隱性突變所致的丙酮酸激酶R (PKR)酶缺乏引起的紅血球疾病(Wijk等人 Human Mutation, 2008, 30(3) 446-453)。PKR活化劑有助於治療PKD、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群(Bassen-Kornzweig syndrome)、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、貧血(例如先天性貧血(例如酶病)、溶血性貧血(例如遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、由磷酸甘油酸激酶缺乏引起之慢性溶血性貧血、慢性疾病貧血、非球形溶血性貧血或遺傳性球形紅血球症)。
本文描述活化丙酮酸激酶R (PKR)、野生型及/或突變型酶(諸如本文所述之彼等酶)之式(I)、(II)、(III)、(IV)及(V) (在本文中統稱為「式(I)-(V)」)之化合物，及其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image005
其中R 1、R 2、R a、R b、R j、R k及Q如本文所定義。
在一個實施例中，該化合物或其醫藥學上可接受之鹽係選自表1或圖1之化合物。
亦提供醫藥組合物，其包含式(I)-(V)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
本發明進一步提供治療受試者之貧血的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。在某些實施例中，貧血為紅血球生成障礙性貧血，諸如I型、II型、III型或IV型先天性紅血球生成障礙性貧血。
本發明進一步提供用於治療受試者之鐮狀細胞疾病的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
本發明進一步提供用於治療受試者之溶血性貧血(例如由磷酸甘油酸激酶缺乏引起之慢性溶血性貧血，Blood Cells Mol Dis, 2011; 46(3):206)的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在某些實施例中，溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為先天性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為遺傳性的(例如非球形溶血性貧血或遺傳性球形紅血球症)。
本發明進一步提供用於治療受試者之地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群)、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))、鐮狀細胞疾病或慢性疾病貧血的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在一個實施例中，後天性溶血性貧血包含先天性貧血。在某些實施例中，所提供之方法為治療地中海貧血症。在某些實施例中，地中海貧血症為β-地中海貧血症。
本發明進一步提供用於治療受試者之丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的方法，該方法包含向該受試者投與有效量之(1)本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在某些實施例中，PKD為PKR缺乏症。在某些實施例中，PKR缺乏症與丙酮酸激酶R突變相關聯。
本文所述之化合物及醫藥組合物為與野生型相比具有較低活性之PKR的活化劑，因此可用於本發明之方法。在某些實施例中，PKR為野生型。在某些實施例中，PKR為突變型。PKR中之此類突變可影響酶之酶活性(催化效率)、調節特性(藉由果糖二磷酸(FBP)/ATP調節)及/或熱穩定性。此類突變之實例描述於Valentini等人, JBC 2002中。由本文所述之化合物活化的突變體的一些實例包括G332S、G364D、T384M、R479H、R479K、R486W、R532W、K410E、R510Q及R490W。在不受理論束縛的情況下，在某些實施例中，本文所述之化合物藉由活化FBP非反應性PKR突變體、恢復穩定性降低之突變體的熱穩定性或恢復受損突變體之催化效率來影響PKR突變體的活性。可按照實例中所述之方法測試本發明化合物對PKR突變體之活化活性。在某些實施例中，本文所述之化合物亦為野生型PKR之活化劑。
在一個實施例中，本發明提供用於活化有需要受試者之紅血球中之PKR的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所揭示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在某些實施例中，PKR為野生型。在某些實施例中，PKR為突變型。
在一個實施例中，突變型PKR係選自G332S、G364D、T384M、K410E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q及R490W。在某些實施例中，突變型PKR係選自A468V、A495V、I90N、T408I、Q421K及R498H。在某些實施例中，突變型PKR為R532W、K410E或R510Q。
相關申請案之交叉引用本申請案主張2018年5月18日申請之美國臨時專利申請案第62/673,526號及第62/673,533號之優先權。本申請案亦主張2017年8月15日申請之國際專利申請案第PCT/CN2017/097496號之優先權。前述優先權申請案中之每一者以全文引用之方式併入本文中。
在以下描述中闡述或在圖式中示出之構造的細節及組件的佈置不意欲為限制性的。實施例可以各種方式實踐或實施。本文所用之措詞及術語係出於描述之目的且不應視為限制性的。
定義本文所述之化合物可包含一或多個不對稱中心，且因此可以各種立體異構形式存在，例如對映異構體及/或非對映異構體。舉例而言，本文所述之化合物可呈個別對映異構體、非對映異構體或幾何異構體形式，或可呈立體異構體混合物形式，包括外消旋混合物及一或多種立體異構體增濃之混合物。異構體可藉由熟習此項技術者已知的方法自混合物中分離，包括對掌性高壓液相層析(HPLC)及對掌性鹽的形成及結晶；或較佳異構體可藉由不對稱合成來製備。參見例如Jacques等人, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981)；Wilen等人, Tetrahedron 33:2725 (1977)；Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962)；及Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions 第268頁(E.L. Eliel編, Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)。
本文所述之化合物亦可以多種互變異構形式表示，在此類情況下，明確包括本文所述之化合物的所有互變異構形式，即使僅可表示單個互變異構形式(例如環系統之烷基化可在多個位點導致烷基化；明確包括所有此類反應產物)。明確包括此類化合物之所有此類異構形式。若化合物之互變異構體為芳族，則此化合物為芳族。類似地，若取代基之互變異構體為雜芳基，則此取代基為雜芳基。
術語「 烷基」係指具有1至10個碳原子之直鏈或分支鏈飽和烴基的基團(「C 1 - 10烷基」)。C 1 - 6烷基之實例包括甲基(C 1)、乙基(C 2)、丙基(C 3) (例如正丙基、異丙基)、丁基(C 4) (例如正丁基、第三丁基、第二丁基、異丁基)、戊基(C 5) (例如正戊基、3-戊基、戊基、新戊基、3-甲基-2-丁基、第三戊基)及己基(C 6) (例如正己基)。除非另外說明，否則烷基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之烷基」)或經一或多個取代基(例如鹵素，諸如F)取代的(「經取代之烷基」)。在某些實施例中，烷基為未經取代之-C 1 - 10烷基。在某些實施例中，烷基為經取代之-C 1 - 10烷基。
術語「 鹵烷基」係指經取代之烷基，其中一或多個氫原子獨立地經鹵素(例如氟、溴、氯或碘)置換，且包括其中所有氫已經鹵基置換之烷基部分(例如全氟烷基)。在一些實施例中，鹵烷基部分具有1至8個碳原子(「C 1 - 8鹵烷基」)。
術語「 烷氧基 ( alkoxy / alkoxyl )」係指-O-烷基。例如具有1至6個碳原子。
術語「 芳氧基」係指-O-芳基。在一些實施例中，芳氧基為苯氧基。
術語「 烯基」係指具有2至10個碳原子及一或多個碳-碳雙鍵(例如1、2、3或4個雙鍵)之直鏈或分支鏈烴基的基團。一或多個碳-碳雙鍵可為內部的(諸如在2-丁烯基中)或末端的(諸如在1-丁烯基中)。-C 2 - 4烯基之實例包括乙烯基(C 2)、1-丙烯基(C 3)、2-丙烯基(C 3)、1-丁烯基(C 4)、2-丁烯基(C 4)、丁二烯基(C 4)、戊烯基(C 5)、戊二烯基(C 5)、己烯基(C 6)、庚烯基(C 7)、辛烯基(C 8)、辛三烯基(C 8)及其類似基團。除非另外說明，否則烯基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之烯基」)或經一或多個取代基取代的(「經取代之烯基」)。在某些實施例中，烯基為未經取代之-C 2 - 10烯基。在某些實施例中，烯基為經取代之-C 2 - 10烯基。在烯基中，C=C雙鍵可為(E)-或(Z)-雙鍵。
術語「 炔基」係指具有2至10個碳原子及一或多個碳-碳參鍵(例如1、2、3或4個參鍵)之直鏈或分支鏈烴基的基團(「C 2 - 10炔基」)。炔基之實例包括乙炔基(C 2)、1-丙炔基(C 3)、2-丙炔基(C 3)、1-丁炔基(C 4)、2-丁炔基(C 4)、戊炔基(C 5)、己炔基(C 6)、庚炔基(C 7)、辛炔基(C 8)及其類似基團。除非另外說明，否則炔基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之炔基」)或經一或多個取代基取代的(「經取代之炔基」)。在某些實施例中，炔基為未經取代之-C 2 - 10炔基。在某些實施例中，炔基為經取代之-C 2 - 10炔基。
術語「 碳環基」或「 碳環」係指在非芳族環系統中具有3至14個環碳原子(「C 3 - 14碳環基」)及零個雜原子之非芳族單環、雙環、三環或多環烴環系統的基團。碳環基包括完全飽和環系統(例如環烷基)及部分飽和環系統。在一些實施例中，碳環基具有3至10個環碳原子(「C 3 - 10碳環基」)。
如本文所用之術語「 環烷基」包括具有3至14個碳之飽和環狀、雙環、三環或多環烴基，其含有指定數目之環及碳原子(例如C 3-C 14單環、C 4-C 14雙環、C 5-C 14三環或C 6-C 14多環環烷基)。在一些實施例中，「環烷基」為單環環烷基。單環環烷基之實例包括環戊基(C 5)、環己基(C 6)、環丙基(C 3)、環丁基(C 4)、環庚基(C 7)及環辛基(C 8)。在一些實施例中，「環烷基」為雙環環烷基。雙環環烷基之實例包括雙環[1.1.0]丁烷(C 4)、雙環[1.1.1]戊烷(C 5)、螺[2.2]戊烷(C 5)、雙環[2.1.0]戊烷(C 5)、雙環[2.1.1]己烷(C 6)、雙環[3.3.3]十一烷(C 11)、十氫萘(C 10)、雙環[4.3.2]十一烷(C 11)、螺[5.5]十一烷(C 11)及雙環[4.3.3]十二烷(C 12)。在一些實施例中，「環烷基」為三環環烷基。三環環烷基之實例包括金剛烷(C 12)。除非另外說明，否則環烷基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之環烷基」)或經一或多個取代基取代的(「經取代之環烷基」)。在某些實施例中，環烷基為未經取代之C 3 - 14環烷基。在某些實施例中，環烷基為經取代之C 3 - 14環烷基。
術語「 雜環基」或「 雜環」係指具有環碳原子及1至4個環雜原子之3員至14員非芳族環系統的基團，其中各雜原子獨立地選自氮、氧及硫(「3-14員雜環基」)。在含有一或多個氮原子之雜環基中，在價數允許時，連接點可為碳或氮原子。雜環基可為單環(「單環雜環基」)或多環(例如稠合、橋連或螺環系統，諸如雙環系統(「雙環雜環基」)或三環系統(「三環雜環基」))，且可為飽和的或可含有一或多個碳-碳雙鍵或參鍵。雜環基多環環系統可在一個或兩個環中包括一或多個雜原子。「雜環基」亦包括如上文所定義之雜環基環與一或多個碳環基稠合之環系統，其中連接點在碳環基或雜環基環上；或如上文所定義之雜環基環與一或多個芳基或雜芳基稠合之環系統，其中連接點在雜環基環上，且在此類情況下，環成員之數目繼續表示雜環基環系統中環成員之數目。除非另外說明，否則雜環基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之雜環基」)或經一或多個取代基取代的(「經取代之雜環基」)。在某些實施例中，雜環基為未經取代之3-14員雜環基。在某些實施例中，雜環基為經取代之3-14員雜環基。在一些實施例中，雜環基為具有環碳原子及1-4個環雜原子之5-10員非芳族環系統，其中各雜原子獨立地選自氮、氧及硫(「5-10員雜環基」)。例示性雜環基包括氮丙啶基、環氧乙烷基、硫雜環丙烷基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫噻吩基、吡咯啶基、二氫吡咯基、吡咯基-2,5-啶、二氧雜環戊烷基、氧硫雜環戊烷基、二硫雜環戊烷基、三唑啉基、噁二唑啉基、噻二唑啉基、哌啶基、四氫哌喃基、二氫吡啶基、噻烷基、哌嗪基、嗎啉基、二噻烷基、二噁烷基、三氮雜環己烷基、氮雜環庚烷基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基、氮雜環辛烷基、氧雜環辛烷基、硫雜環辛烷基、吲哚啉基、異吲哚啉基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、四氫苯并噻吩基、四氫苯并呋喃基、四氫吲哚基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、十氫異喹啉基、八氫𠳭烯基、八氫異𠳭烯基、十氫㖠啶基、十氫-1,8-㖠啶基、八氫吡咯并[3,2-b]吡咯、吲哚啉基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘二甲醯亞胺基、𠳭烷基、𠳭烯基、1H-苯并[e][1,4]二氮呯基、1,4,5,7-四氫吡喃并[3,4-b]吡咯基、5,6-二氫-4H-呋喃并[3,2-b]吡咯基、6,7-二氫-5H-呋喃并[3,2-b]哌喃基、5,7-二氫-4H-噻吩并[2,3-c]哌喃基、2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、2,3-二氫呋喃并[2,3-b]吡啶基、4,5,6,7-四氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、4,5,6,7-四氫呋喃并[3,2-c]吡啶基、4,5,6,7-四氫噻吩并[3,2-b]吡啶基、1,2,3,4-四氫-1,6-㖠啶基及其類似基團。
術語「 芳基」係指具有芳環系統中提供之6-14個環碳原子及零個雜原子之單環或多環(例如雙環或三環) 4n+2芳環系統(例如具有環狀陣列中共享之6、10或14個π電子)的基團(「C 6 - 14芳基」)。在一些實施例中，芳基具有6個環碳原子(「C 6芳基」；例如苯基)。在一些實施例中，芳基具有10個環碳原子(「C 10芳基」；例如萘基，諸如1-萘基及2-萘基)。在一些實施例中，芳基具有14個環碳原子(「C 14芳基」；例如蒽基)。「芳基」亦包括如上文所定義之芳基環與一或多個碳環基或雜環基稠合之環系統，其中連接基團或連接點在芳基環上，且在此類情況下，碳原子數繼續表示芳基環系統中之碳原子數。除非另外說明，否則芳基之各實例獨立地為未經取代的(「未經取代之芳基」)或經一或多個取代基取代的(「經取代之芳基」)。在某些實施例中，芳基為未經取代之C 6 - 14芳基。在某些實施例中，芳基為經取代之C 6 - 14芳基。
術語「 雜芳基」係指具有芳環系統中提供之環碳原子及1-4個環雜原子之5-14員單環或多環(例如雙環、三環) 4n+2芳環系統(例如具有環狀陣列中共享之6個π電子)的基團，其中各雜原子獨立地選自氮、氧及硫(「5-14員雜芳基」)。在一些實施例中，雜芳基可為含有1-4個雜原子之5員或6員單環雜芳基。在一些實施例中，雜芳基可為具有1-6個雜原子之8-12員雙環雜芳基。「5員或6員單環雜芳基」係指具有環碳原子及1-4個環雜原子之5員或6員單環且未稠合之4n+2芳環系統。例示性單環5員或6員雜芳基包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基及四嗪基。如本文所用，若基團之互變異構體為雜芳基，則此基團為雜芳基。術語「互變異構體」或「互變異構」係指兩個或更多個可相互轉化的化合物/取代基，其由氫原子之至少一次形式遷移及價數之至少一次變化(例如單鍵變為雙鍵，參鍵變為單鍵或反之亦然)產生。互變異構體之確切比率視若干因素而定，包括溫度、溶劑及pH。互變異構化(亦即提供互變異構對之反應)可由酸或鹼催化。例示性互變異構化包括酮-烯醇、醯胺-醯亞胺、內醯胺-內醯亞胺、烯胺-亞胺及烯胺-(不同的烯胺)互變異構化。
術語「 飽和」係指不含雙鍵或參鍵之部分，亦即該部分僅含有單鍵。
術語「 視情況經取代」係指經取代或未經取代的。一般而言，術語「經取代」意謂基團上存在的至少一個氫經可容許的取代基置換，該可容許的取代基為例如在取代後產生穩定化合物之取代基，該穩定化合物為例如不自發進行諸如藉由重排、環化、消除或其他反應之轉化的化合物。除非另外指明，否則「經取代」之基團在該基團之一或多個可取代位置處具有取代基(例如C 1 - 6烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6鹵烷氧基、C 1 - 6醯基、C 3 - 6環烷基、C 6 - 10芳基、單環或雙環雜芳基，及單環或雙環雜環基)，且當任何給定結構中之多於一個位置經取代時，取代基在各位置處相同或不同。術語「經取代」預期包括經有機化合物之所有可容許的取代基取代，且包括導致形成穩定化合物之本文所述之任何取代基。本發明涵蓋任何及所有此類組合以得到穩定化合物。出於本發明之目的，雜原子諸如氮可具有氫取代基及/或如本文所述之任何適合之取代基，其滿足雜原子之價數且導致形成穩定部分。本發明不欲以任何方式受本文所述之例示性取代基限制。
「 可取代之環碳原子」係指芳基/雜芳基/碳環基/雜環基環上之碳原子，其中該碳原子上存在的至少一個氫經如上文所定義之可容許的取代基置換。「 可取代之環氮原子」係指雜芳基-雜環基環上之氮原子，其中該氮原子上存在的至少一個氫經可容許的取代基置換。
除非另外指明，否則「經取代」之基團在該基團之一或多個可取代位置處具有取代基，且當任何給定結構中之多於一個位置經取代時，取代基在各位置處相同或不同。術語「經取代」預期包括經有機化合物之所有可容許的取代基取代，且包括導致形成穩定化合物之本文所述之任何取代基。本發明涵蓋任何及所有此類組合以得到穩定化合物。出於本發明之目的，雜原子諸如氮可具有氫取代基及/或如本文所述之任何適合之取代基，其滿足雜原子之價數且導致形成穩定部分。本發明不欲以任何方式受本文所述之例示性取代基限制。
術語「 鹵基」或「 鹵素」係指氟、氯、溴或碘。
術語「 醯基」係指具有通式-C(=O)R X1、-C(=O)OR X1、-C(=O)-O-C(=O)R X1、-C(=O)SR X1、-C(=O)N(R X1) 2、-C(=S)R X1、-C(=S)N(R X1) 2及-C(=S)S(R X1)、-C(=NR X1)R X1、-C(=NR X1)OR X1、-C(=NR X1)SR X1及-C(=NR X1)N(R X1) 2之基團，其中當價數允許時，R X1為氫；鹵素；經取代或未經取代之羥基；經取代或未經取代之硫醇；經取代或未經取代之胺基；經取代或未經取代之醯基；環狀或非環狀、經取代或未經取代之分支鏈或未分支鏈C 1 - 10烷基；環狀或非環狀、經取代或未經取代之分支鏈或未分支鏈C 2 - 10烯基；經取代或未經取代之C 2 - 10炔基；經取代或未經取代之C 6 - 12芳基、經取代或未經取代之雜芳基。例示性醯基包括醛(-CHO)、羧酸(-CO 2H)、酮、醯基鹵、酯、醯胺、亞胺、碳酸酯、胺基甲酸酯及脲。
在某些實施例中，存在於氮原子上、氧原子上或硫原子上之取代基分別為氮保護基、氧保護基或硫保護基。氮、氧及硫保護基為此項技術中所熟知的且包括以引用的方式併入本文中之Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 第3版, John Wiley & Sons, 1999中詳細描述之彼等保護基。舉例而言，氮保護基包括但不限於甲醯胺、乙醯胺、氯乙醯胺、三氯乙醯胺、三氟乙醯胺、苯基乙醯胺、胺基甲酸甲酯、胺基甲酸乙酯、胺基甲酸9-茀基甲酯(Fmoc)、胺基甲酸第三丁酯(BOC或Boc)、胺基甲酸1-金剛烷基酯(Adoc)、胺基甲酸乙烯酯(Voc)、胺基甲酸烯丙酯(Alloc)、2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基(SEM)、對甲苯磺醯胺(Ts)、苯磺醯胺、2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯磺醯胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺醯胺(Mtb)、啡噻嗪基-(10)-醯基衍生物、N'-對甲苯磺醯基胺醯基衍生物等。例示性氧保護基包括但不限於甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、第三丁基硫甲基、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、對甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、四氫哌喃基(THP)、甲磺酸酯基、苯甲基磺酸酯基及甲苯磺酸酯基(Ts)。
術語「 離去基」在合成有機化學技術中具有其普通含義，且係指能夠由親核試劑置換之原子或基團。適合之離去基之實例包括但不限於鹵素(諸如F、Cl、Br或I (碘))、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、烷磺醯氧基、芳烴磺醯氧基、烷基-羰基氧基(例如乙醯氧基)、磺酸酯基，諸如甲苯磺酸酯基(-OTs)、甲磺酸酯基(-OMs)、對溴苯磺醯氧基(溴苯磺酸酯基，-OBs)、-OS(=O) 2(CF 2) 3CF 3(九氟丁磺酸酯基，-ONf)或三氟甲磺酸酯基(-OTf)。
術語「 醫藥學上可接受之鹽」係指在合理的醫學判斷範疇內適用於與人類及低等動物之組織接觸而無異常毒性、刺激、過敏反應及其類似情況且與合理的益處/風險比相稱的彼等鹽。醫藥學上可接受之鹽為此項技術中所熟知的。舉例而言，Berge等人在J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19中詳細描述醫藥學上可接受之鹽，該文獻以引用的方式併入本文中。本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽包括衍生自適合的無機及有機酸及鹼之彼等鹽。醫藥學上可接受之無毒性酸加成鹽之實例為胺基與無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及高氯酸，或與有機酸，諸如乙酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸形成之鹽，或藉由使用此項技術中已知之其他方法，諸如離子交換形成之鹽。其他醫藥學上可接受之鹽包括己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似鹽。衍生自適當鹼之鹽包括鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽以及N +(C 1 - 4烷基) 4 -鹽。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其類似鹽。適當時，其他醫藥學上可接受之鹽包括使用相對離子諸如鹵離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根及芳基磺酸根形成之無毒銨、四級銨及胺陽離子。
術語「 組合物」及「 調配物」可互換使用。
考慮投藥之「 受試者」係指人類(亦即任何年齡組之男性或女性，例如兒科受試者(例如嬰兒、兒童或青少年)或成人受試者(例如年輕人、中年人或老年人))或非人類動物。在某些實施例中，非人類動物為哺乳動物(例如靈長類動物(例如食蟹獼猴或恆河猴)、商業相關之哺乳動物(例如牛、豬、馬、綿羊、山羊、貓或狗)或鳥類(例如商業相關之鳥類，諸如雞、鴨、鵝或火雞))。在某些實施例中，非人類動物為魚類、爬行動物或兩棲動物。非人類動物可為處於任何發育階段之雄性或雌性。非人類動物可為轉殖基因動物或經基因工程改造之動物。在某些實施例中，受試者為患者。術語「患者」係指需要治療疾病之人類受試者。在某些實施例中，術語「患者」為需要治療疾病之18歲以上的人類成人。在某些實施例中，術語「患者」為需要治療疾病之不超過18歲的人類兒童。在某些實施例中，患者未定期輸血(例如在12個月期間具有不超過4次輸血事件)。在某些實施例中，患者定期輸血(例如在12個月期間具有至少4次輸血事件)。在某些實施例中，受試者已進行脾切除術。在某些實施例中，受試者已進行脾切除術且定期輸血。在某些實施例中，受試者已進行脾切除術且未定期輸血。
術語「 投與」或「 投藥」係指在受試者體內或體表植入、吸收、攝取、注射、吸入或以其他方式引入本文所述之化合物或其組合物。
術語「 治療」係指逆轉、緩解本文所述之疾病、延緩其發作或抑制其進展。在一些實施例中，可在已出現或已觀察到疾病之一或多個病徵或症狀之後投與治療(亦即治療性治療)。在其他實施例中，可在無疾病之病徵或症狀的情況下投與治療。舉例而言，可在症狀發作之前向易感受試者投與治療(亦即預防性治療) (例如根據症狀之病史及/或根據暴露於病原體)。亦可在症狀已消退之後繼續治療，例如以延緩或預防復發。在某些實施例中，治療包括使病症之至少一種症狀的發作延緩一段時間。
術語「 病況」、「 疾病」及「 病症」可互換使用。
本文所述之化合物的「 有效量」係指足以引發所需生物反應的量。本文所述之化合物的有效量可視諸如所需生物端點、化合物之藥物動力學、所治療之病況、投藥模式以及受試者之年齡及健康狀況之因素而變化。在某些實施例中，有效量為治療有效量。在某些實施例中，有效量將產生使Hb濃度相對於基線增加≥1.5 g/dL之受試者的血紅素反應。受試者之基線Hb濃度為在用化合物處理之前所有可獲得之Hb濃度的平均值。在某些實施例中，有效量將產生使Hb濃度相對於基線增加≥1.0 g/dL之受試者的血紅素反應。在某些實施例中，有效量將產生使Hb濃度相對於基線增加≥2.0 g/dL之受試者的血紅素反應。在某些實施例中，有效量為單劑量中本文所述之化合物的量。在某些實施例中，有效量為多劑量中本文所述之化合物的組合量。在某些實施例中，有效量為治療有效量。
本文所述之化合物的「 治療有效量」為足以在病況之治療中提供治療益處或足以延緩或使與病況相關之一或多個症狀減至最少的量。化合物之治療有效量意謂單獨或與其他療法組合之治療劑的量，其在病況治療中提供治療益處。術語「治療有效量」可涵蓋改善整體療法，減少或避免病況之症狀、病徵或病因，及/或增強另一種治療劑之治療功效的量。在某些實施例中，治療有效量為足以引發野生型或突變型PKR之可量測活化的量。在某些實施例中，治療有效量為足以調節有需要之血液中2,3-二磷酸甘油酸及/或ATP水準或用於治療丙酮酸激酶缺乏症(PKD)、溶血性貧血(例如慢性溶血性貧血、遺傳性非球形貧血)、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群)、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))、慢性疾病貧血或治療與2,3-二磷酸甘油酸水準升高相關之疾病或病況(例如肝病)的量。在某些實施例中，治療有效量為足以引發野生型或突變型PKR之可量測活化及用於調節有需要之血液中的2,3-二磷酸甘油酸水準或用於治療丙酮酸激酶缺乏症(PKD)、溶血性貧血(例如慢性溶血性貧血、遺傳性非球形貧血)、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群)、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))、慢性疾病貧血或治療與2,3-二磷酸甘油酸水準升高相關之疾病或病況(例如肝病)的量。在一個態樣中，治療有效量為產生使Hb濃度相對於基線增加≥1.0 g/dL (諸如≥1.5 g/dL或≥2.0 g/dL)之受試者的血紅素反應所需的量。受試者之基線Hb濃度為在用本文所述之化合物處理之前至少兩週(例如3週、4週、5週或6週)內所有可獲得之Hb濃度的平均值。在某些態樣中，治療有效量為減少患者之輸血負擔所需的量。在一個態樣中，治療有效量為每天每公斤體重0.01-100 mg所提供之化合物，諸如每天每公斤體重0.1-100 mg。在某些實施例中，治療有效量將減少患者之輸血負擔。
如本文所用，輸血負擔之減少意謂在至少5週之治療內輸注之RBC單位數量減少至少20%。在某些實施例中，輸血負擔之減少為在至少5週之治療內輸注之RBC單位數量減少≥33%。在某些實施例中，在至少10週(例如至少20週或至少24週)之治療中觀察到輸血負擔之減少。
如本文所用，鐮狀細胞疾病(SCD)、血紅素SS疾病及鐮狀細胞貧血可互換使用。鐮狀細胞疾病(SCD)描述一組遺傳性紅血球病症。在某些實施例中，患有SCD之受試者在其紅血球中具有異常血紅素，稱為血紅素S或鐮狀血紅素。在某些實施例中，患有SCD之人具有至少一種導致身體產生血紅素S之異常基因。在某些實施例中，患有SCD之人具有兩種血紅素S基因，亦即血紅素SS。
地中海貧血症為身體產生異常形式之血紅素的遺傳性血液病症。在某些實施例中，異常形式之血紅素導致α或β血球蛋白之缺乏。在某些實施例中，該病症導致大量紅血球被破壞，其導致貧血。在某些實施例中，地中海貧血症為α地中海貧血症。在某些實施例中，地中海貧血症為β地中海貧血症。
如本文所用，術語「 活化劑」意謂(可量測地)增加野生型丙酮酸激酶R (wt PKR)活性或使野生型丙酮酸激酶R (wt PKR)活性水準增加至大於wt PKR之基礎活性水準的藥劑，或(可量測地)增加突變型丙酮酸激酶R (mPKR)活性或使突變型丙酮酸激酶R (mPKR)活性水準增加至大於突變型PKR之基礎活性水準，例如增加至野生型PKR活性之20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之水準的藥劑。
如本文所用，術語「 紅血球濃厚液」或PRBC係指藉由離心及移除大部分血漿而由全血單位製成的紅血球。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約95%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%之血容比。
涉及如本文所用之方法的術語「 離體」意謂該方法在生物體外進行。舉例而言，可自生物體提取細胞(例如紅血球)、組織或血液(含有至少紅血球、血漿及血紅素)以視情況在人工控制的條件(例如溫度)下，與本文所提供之一或多種化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物接觸。
涉及如本文所用之方法的術語「 活體外」意謂該方法在生物體外進行且包含在人造環境中。舉例而言，可自生物體提取細胞(例如紅血球)、組織或血液(含有至少紅血球、血漿及血紅素)以在包含的人造環境(例如培養系統)中，諸如在試管中、在培養物中、在燒瓶中、在微量滴定盤中、在皮氏培養皿上及其類似情況與本文所提供之一或多種化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥組合物接觸。
化合物本文描述活化野生型PKR及/或突變型PKR之化合物及組合物，諸如本文所述之彼等化合物及組合物。在一個實施例中，提供式(I)-(V)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，或包含式(I)-(V)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物。
在本發明之第一實施例中，提供由式(I)表示之化合物：
Figure 02_image007
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之鹵烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基、-OR o1、-C(=O)R c1或氮保護基；其中： R o1為氫、視情況經取代之烷基或氧保護基； R c1為視情況經取代之烷基或-N(R cn) 2，其中R cn之各實例獨立地為氫、-C 1 - 6烷基或氮保護基； R 2及Q各自獨立地為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基； R a及R b各自獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之烷基、-OR o3、-N(R n1) 2、-C(=O)N(R n1) 2或-C(=O)R c2；或R a及R b可與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之環烷基或視情況經取代之雜環基；其中： R n1之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基； R o3為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氧保護基；及 R c2為視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 R j及R k各自獨立地為氫、鹵素、-CN、-OR o7、-N(R n5) 2、-N(R n5)C(=O)R c5、-C(=O)N(R n5) 2、-C(=O)R c5、-C(=O)OR o7、-SR js、-S(=O) 2R js、-S(=O)R js或視情況經取代之-C 1-C 6烷基；或R j及R k可與其所連接之碳原子一起形成C=O、視情況經取代之C 1-C 6單環環烷基環或視情況經取代之C 3-C 6單環雜環基環；其中： R n5之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基、-OR o8或氮保護基，其中R o8為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氧保護基； R o7之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氧保護基； R c5之各實例獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 R js之各實例獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 6 - 12芳基、視情況經取代之雜芳基或硫保護基。
在本發明之第二實施例中，提供由式(I)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之5員或6員單環雜芳基視情況在各可取代之環碳原子處經R p取代且視情況在各可取代之環氮原子處經R n6取代；其中： R p之各實例獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之雜芳基、-OR o6、-SR s2、-N(R n3) 2、-C(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)C(=O)R c4、-C(=O)R c4、-C(=O)OR o6、-OC(=O)R c4、-S(=O)R s2、-S(=O) 2R s2、-S(=O)OR o6、-OS(=O)R c4、-S(=O) 2OR o6、-OS(=O) 2R c4、-S(=O)N(R n3) 2、-S(=O) 2N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)R s2、-N(R n3)S(=O) 2R s2、-N(R n3)C(=O)OR o6、-OC(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)C(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O) 2N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)OR o6、-N(R n3)S(=O) 2OR o6、-OS(=O)N(R n3) 2或-OS(=O) 2N(R n3) 2；或與相同或相鄰碳原子連接之R p的兩個實例可與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之環烷基或雜環烷基；其中： R n3之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基； R o6之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氧保護基；及 R c4之各實例為視情況經取代之-C 1-C 6烷基； R s2之各實例獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基或硫保護基；及 R n6為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基； 其中其餘變數如第一實施例中所定義。
在本發明之第三實施例中，提供由式(I)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下中之一者：
Figure 02_image009
Figure 02_image011
其中： R nc及R nd之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基； 在價數允許時，p為0、1、2、3或4； 其中其餘變數如第一或第二實施例中所定義。
在本發明之第四實施例中，提供由式(I)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下中之一者：
Figure 02_image013
Figure 02_image015
； 其中其餘變數如第一、第二或第三實施例中所定義。
在本發明之第五實施例中，提供由式(I)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下中之一者：
Figure 02_image017
； 其中其餘變數如第一、第二、第三或第四實施例中所定義。
在本發明之第六實施例中，提供由式(II)表示之化合物：
Figure 02_image019
或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四或第五實施例中所定義。在某些實施例中，提供由下式中之一者表示之化合物：
Figure 02_image021
(II-a)；
Figure 02_image023
(II-b)； 其醫藥學上可接受之鹽。
在本發明之第七實施例中，提供由式(III)表示之化合物：
Figure 02_image025
或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五或第六實施例中所定義。
在本發明之第八實施例中，提供由式(IV)表示之化合物：
Figure 02_image027
或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七實施例中所定義。
在本發明之第九實施例中，提供由式(V)表示之化合物：
Figure 02_image029
或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八實施例中所定義。
在本發明之第十實施例中，提供由式(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R n6為氫或-C 1 - 4烷基；其中其餘變數如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八或第九實施例中所定義。
在本發明之第十一實施例中，提供由式(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R p之各實例獨立地為氫、鹵素、視情況經取代之C 1 - 4烷基、-CN、-NO 2、-N 3、-OR o4、-N(R n2) 2、-C(=O)N(R n2) 2、-C(=O)R c3或-C(=O)OR o4；其中其餘變數如第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十實施例中所定義。
在本發明之第十二實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由Q表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下：
Figure 02_image031
Figure 02_image033
； 其中： R n之各實例獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之雜芳基、-OR o4、-SR s1、-N(R n2) 2、-C(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)C(=O)R c3、-C(=O)R c3、-C(=O)OR o4、-OC(=O)R c3、-S(=O)R s1、-S(=O) 2R s1、-S(=O)OR o4、-OS(=O)R c3、-S(=O) 2OR o4、-OS(=O) 2R c3、-S(=O)N(R n2) 2、-S(=O) 2N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)R s1、-N(R n2)S(=O) 2R s1、-N(R n2)C(=O)OR o4、-OC(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)C(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O) 2N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)OR o4、-N(R n2)S(=O) 2OR o4、-OS(=O)N(R n2) 2或-OS(=O) 2N(R n2) 2；或與相同或相鄰碳原子連接之R n的兩個實例與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之環烷基或雜環烷基；其中： R n2之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基； R o4之各實例獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氧保護基； R c3之各實例獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基； R s1之各實例獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基或硫保護基； 在價數允許時，n為0、1、2或3；及 R na、R nb及R nd中之每一者獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或氮保護基。
其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十或第十一實施例中所定義。
在本發明之第十三實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由Q表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下：
Figure 02_image035
； 其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二實施例中所定義。
在本發明之第十四實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由Q表示之5員或6員單環雜芳基係選自以下：
Figure 02_image037
； 其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二或第十三實施例中所定義。
在本發明之第十五實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Q為
Figure 02_image039
；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三或第十四實施例中所定義。在其他實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Q為
Figure 02_image041
；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三或第十四實施例中所定義。
在本發明之第十六實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Q為
Figure 02_image043
；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三或第十四實施例中所定義。在其他實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Q為
Figure 02_image045
；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三或第十四實施例中所定義。在某些實施例中，R 2及Q為相同的。在某些實施例中，R 2及Q為不同的。
在本發明之第十七實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R na為氫或-C 1 - 4烷基；其中其餘變數如第十二、第十三、第十四或第十五實施例所述。
在本發明之第十七實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R nb為氫或-C 1 - 4烷基；其中其餘變數如第十二、第十三、第十四或第十五實施例所述。
在本發明之第十七實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R nd為氫或-C 1 - 4烷基；其中其餘變數如第十二、第十三、第十四或第十五實施例所述。
在本發明之第十八實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R n之各實例獨立地為氫、鹵素、視情況經取代之C 1 - 4烷基、-CN、-NO 2、-N 3、-OR o4、-N(R n2) 2、-C(=O)N(R n2) 2、-C(=O)R c3或-C(=O)OR o4；其中其餘變數如第十二、第十三、第十四、第十五、第十六或第十七實施例中所定義。
在本發明之第十九實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1為氫或-C 1-C 4烷基；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七或第十八實施例中所定義。
在本發明之第二十實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1為甲基；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七或第十八實施例中所定義。
在本發明之第二十一實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R j及R k各自獨立地為氫、鹵素、-OR o7或-C 1-C 4烷基； 或R j及R k連接在一起形成=O，其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九或第二十實施例中所定義。
在本發明之第二十二實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R j及R k各自為氫；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十或第二十一實施例中所定義。
在本發明之第二十三實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R a及R b各自為氫；其中其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一或第二十二實施例中所定義。
在本發明之第二十四實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0或1；其中其餘變數如第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二或第二十三實施例中所定義。
在本發明之第二十五實施例中，提供由式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)表示之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為0或1；其中其餘變數如第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三或第二十四實施例中所定義。
在一個實施例中，其醫藥學上可接受之鹽之化合物係選自實例、表1及圖1中之式(I)-(V)化合物。
本文所述之化合物可用作與野生型相比具有較低活性之PKR突變體的活化劑，因此可用於本發明之方法。PKR中之此類突變可影響酶之酶活性(催化效率)、調節特性(藉由果糖二磷酸(FBP)/ATP調節)及/或熱穩定性。此類突變之實例描述於Valentini等人, JBC 2002中。由本文所述之化合物活化的突變體的一些實例包括G332S、G364D、T384M、R479H、R479K、R486W、R532W、K410E、R510Q及R490W。在不受理論束縛的情況下，本文所述之化合物藉由活化FBP非反應性PKR突變體、恢復穩定性降低之突變體的熱穩定性或恢復受損突變體之催化效率來影響PKR突變體的活性。可按照實例11-17中所述之方法測試本發明化合物對PKR突變體之活化活性。本文所述之化合物亦可用作野生型PKR之活化劑。
在一個實施例中，為增加紅血球之壽命，將本文所述之化合物、組合物或醫藥組合物直接添加至全血或體外紅血球濃厚液，或直接提供至患者(例如藉由i.p.、i.v.、i.m.、口服、吸入(氣溶膠化遞送)、經皮、舌下及其他遞送途徑)。在不受理論束縛的情況下，本文所述之化合物藉由影響來自血液之2,3-DPG及/或ATP的水準來增加RBC之壽命，從而抵消所儲存血液之老化。2,3-DPG濃度水準之降低誘導氧-血紅素解離曲線之向左移動且使異位平衡移向R或氧化狀態，由此藉由增加因2,3-DPG消耗所致的氧親和力而產生對引起鐮狀細胞形成之細胞內聚合的治療性抑制，從而穩定更可溶的氧基血紅素。因此，在一個實施例中，本文所述之化合物及醫藥組合物可用作抗鐮狀細胞形成劑。在另一個實施例中，為調節2,3-二磷酸甘油酸，將本文所述之化合物、組合物或醫藥組合物直接添加至全血或體外紅血球濃厚液，或直接提供至患者(例如藉由i.p.、i.v.、i.m.、口服、吸入(氣溶膠化遞送)、經皮、舌下及其他遞送途徑)。在另一個實施例中，本文所述之化合物、組合物或醫藥組合物可增加ATP水準且有助於保護細胞免受反應性氧物種的影響(Mol Cell. 2012年10月26日; 48(2): 158-167)。
在表1中，本文所述之化合物可具有野生型PKR、PKR K410E或PKR 510Q之AC 50。「A」係指AC 50小於0.300 μM；「B」係指AC 50為0.301 μM至0.800 μM；且「C」係指AC 50大於0.800 μM。在基於細胞之ATP分析法中另外測定野生型PKR對某些化合物之AC 50。「AA」係指AC 50小於或等於1 μM且「BB」係指AC 50大於1 μM。
表1.野生型及突變型PKR藉由例示性化合物之活化
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Figure 02_image079
「*」表示該值係基於多個測試結果之平均值。
本文所述之化合物可使用如實例中所闡述之各種合成技術製備。可用於合成本文所述之化合物的合成化學轉化及保護基方法(保護及去保護)為此項技術中已知的，且包括例如R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989)；T.W. Greene及P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第2版, John Wiley and Sons (1991)；L. Fieser及M. Fieser, Fieser and Fieser ' s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)；及L. Paquette編, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)及其後續版本中所述之彼等方法。
可用作PKR野生型及/或突變型活化劑之某些活化劑化合物為表現出PKR酶(野生型及/或突變型酶)在FBP不存在下之特異性及活化達到比在FBP存在下大10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100%的水準的彼等活化劑化合物。
本發明化合物之合成 流程 1
Figure 02_image081
在一些實施例中，式(I)化合物可使用流程1中所示之方法製備。式S1之噻唑基醛與疊氮基乙酸乙酯在親核加成條件(例如鹼)下在適合溶劑(例如乙醇)中反應，得到式S2之中間物。式S2之羥基可轉化成離去基且進行消除，得到式S3。胺基之環化及後續官能化得到式S5之雙環化合物，其用甲硫醇鈉進行親核取代，隨後氧化，得到式S7。式S7在肼存在下進一步環化，隨後在鹼存在下用LG 1-CH 2-Q 1親核取代，得到式S9之中間物。式S9中之硫基可氧化成亞磺醯基或磺醯基，得到式S10或S11，其為進一步親核取代以產生通式S12之受質。如本文所用，X 1為如本文所定義之離去基。在某些實施例中，X 1為鹵素、烷磺醯氧基、芳烴磺醯氧基、重氮、烷基二氮烯、芳基二氮烯、烷基三氮烯、芳基三氮烯、硝基、硝酸烷基酯基、硝酸芳基酯基、磷酸烷基酯基、磷酸芳基酯基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧氨、烷基胺、芳基胺、羥基、烷氧基、芳氧基；LG 1為如本文所定義之離去基；Q 1為視情況經取代之環烷基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基(例如視情況經取代之5員或6員單環雜芳基)；且Nu 1為如本文所定義之親核試劑(例如視情況經取代之5員或6員單環雜芳基伸烷基)。式S12化合物之Nu 1可藉由標準化學轉化進一步轉化成其他官能基。R 1如第一實施例中所定義。在某些實施例中，Q 1為視情況經取代之雜芳基。
流程 2
Figure 02_image083
在一些實施例中，式(I)化合物可使用流程2中所示之方法製備。與流程1類似，式S21可由式S13之噻唑醛來製備。式S21之鹵化產生式S22，其可與烷基金屬、烯基金屬、炔基金屬、芳基金屬、雜芳基金屬、雜環基金屬或環烷基金屬進行有機偶合反應，得到式S23化合物。如本文所用，X 3為鹵素；R 1如本發明之第一實施例中所定義；LG 2為如本文所定義之離去基；Q 2為視情況經取代之環烷基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基(例如視情況經取代之5員或6員單環雜芳基)；M 1為金屬(例如Li、Na、K、Mg、Zn、Sn、B、Pd、Si、Cu等)，X 4為鹵素或烷基磺酸酯或芳基磺酸酯；R r1為視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。在某些實施例中，有機偶合反應為根岸反應(Negishi reaction)；X 3為I；且M 1為Zn。
式S22及S23之化合物為在X 3及/或R r1位置處引入更多官能基之有用中間物(流程3)。在某些實施例中，式23-i之化合物可進一步氧化形成式S24。S24與適當親核試劑之親核加成產生S25之化合物。在另一個實施例中，式S22之化合物可與乙烯基金屬偶合以將乙烯基引入噻唑環。乙烯基氧化，隨後親核加成，得到式S28之化合物。如本文所用，Nu 2為親核試劑。在某些實施例中，R r1為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基伸烷基且Q 2為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基。
流程 3
Figure 02_image085
如本文所用，R r2為視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且Q 2如流程2中所定義。在某些實施例中，R r2及Q 2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基。
如本文所用，親核試劑為向親電子試劑提供電子對以形成與反應相關之化學鍵的化學物種。具有自由電子對或至少一個π鍵之所有分子或離子可充當親核試劑。例示性親核試劑包含至少一個具有親核官能性的基團，例如α碳(例如與羰基、磺醯基、亞磺醯基、芳基或雜芳基相鄰的碳)、硫醇基、羥基、一級胺基、二級胺基、鹵化物、氰化物、疊氮基、醇化物、有機金屬或無機鹼。
在一些實施例中，如本文所述之化合物可使用流程4中所示之方法製備。式S30及S33與二級環胺之親核取代分別提供式S31及S34。化合物S35之有機偶合反應(例如鈴木偶合(Suzuki coupling)、施蒂勒偶合(Stillecoupling)等)提供式S36(i)-(ii)之化合物。
流程 4
Figure 02_image087
如本文所用，
Figure 02_image089
表示具有氮作為環原子之5員或6員單環雜芳基環A。如本文所用，
Figure 02_image091
表示在碳環原子上具有連接點之5員或6員單環雜芳基環B。
R 1如第一實施例中所定義。X 4為鹵素或-OTf。在價數允許時，M 4為若需要具有適當配體(有機或無機)之有機金屬。例示性M 4包括但不限於有機Li、Sn、B (例如
Figure 111135803-A0304-1
酸及
Figure 111135803-A0304-1
酸酯)、Zn、Mg、Si、Pd及Cu。
治療方法在一個實施例中，提供用於治療如本文所述之疾病、病況或病症(例如治療)的方法，其包含投與化合物、化合物之醫藥學上可接受之鹽或包含本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)的醫藥組合物。
本文所述之化合物及組合物可投與例如活體外或離體培養之細胞，或例如活體內投與受試者，以治療及/或診斷多種病症，包括下文所述之彼等病症。
在本發明之一個實施例中，提供用於增加有需要之紅血球(RBC)之壽命的方法，其包含使血液與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V))，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物接觸。
在另一個實施例中，將化合物或醫藥組合物直接添加至全血或紅血球濃厚液(例如體外)。在另一個實施例中，向有需要受試者投與化合物或醫藥組合物。
在本發明之一個實施例中，提供用於調節有需要之血液中2,3-二磷酸甘油酸水準的方法，其包含使血液與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物接觸。
在本發明之一個實施例中，提供用於治療鐮狀細胞疾病之方法，其包含向有需要受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。
如本文所用，鐮狀細胞疾病(SCD)、血紅素SS疾病及鐮狀細胞貧血可互換使用。鐮狀細胞疾病(SCD)描述一組遺傳性紅血球病症。在某些實施例中，患有SCD之受試者在其紅血球中具有異常血紅素，稱為血紅素S或鐮狀血紅素。在某些實施例中，患有SCD之受試者具有至少一種導致身體產生血紅素S之異常基因。在某些實施例中，患有SCD之受試者具有兩種血紅素S基因，亦即血紅素SS。
在本發明之一個實施例中，提供治療受試者之丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。
如本文所述，PKD為PKR缺乏症。在某些實施例中，PKR缺乏症與PKR突變相關聯。在某些實施例中，PKD係指PKLR基因中存在至少2個突變對偶基因。在某些實施例中，PKLR基因中至少2個突變對偶基因中之至少1個為誤義突變。在某些實施例中，PKD患者之Hb濃度小於或等於10.0 g/dL。在某些實施例中，患者未定期輸血(例如在12個月期間具有不超過4次輸血事件)。在某些實施例中，患者定期輸血(例如在12個月期間具有至少4次輸血事件)。在某些實施例中，患者定期輸血，在12個月期間具有至少6次輸血事件。在某些實施例中，定期輸血之患者的血紅素(Hb) ≤12.0 g/dL (若為男性)或≤11.0 g/dL (若為女性)。在某些實施例中，患者已進行脾切除術。
在一個實施例中，PKR突變係選自由以下組成之群：A31V、A36G、G37Q、R40W、R40Q、L73P、S80P、P82H、R86P、I90N、T93I、G95R、M107T、G111R、A115P、S120F、H121Q、S130P、S130Y、V134D、R135D、A137T、G143S、I153T、A154T、L155P、G159V、R163C、R163L、T164N、G165V、L167M、G169G、E172Q、W201R、I219T、A221Y、D221N、G222A、I224T、G232C、N253D、G263R、G263W、E266K、V269F、L272V、L272P、G275R、G275R、E277K、V280G、D281N、F287V、F287L、V288L、D293N、D293V、A295I、A295V、I310N、I314T、E315K、N316K、V320L、V320M、S330R、D331N、D331G、D331E、G332S、V335M、A336S、R337W、R337P、R337Q、D339N、D339Q、G341A、G341D、I342F、K348N、A352D、I357T、G358R、G358E、R359C、R359H、C360Y、N361D、G364D、K365M、V368F、T371I、L374P、S376I、T384M、R385W、R385K、E387G、D390N、A392T、N393D、N393S、N393K、A394S、A394D、A394V、V395L、D397V、G398A、M403I、G406R、E407K、E407G、T408P、T408A、T408I、K410E、G411S、G411A、Q421K、A423A、A423A、R426W、R426Q、E427A、E427N、A431T、R449C、I457V、G458D、A459V、V460M、A468V、A468G、A470D、T477A、R479C、R479H、S485F、R486W、R486L、R488Q、R490W、I494T、A495T、A495V、R498C、R498H、A503V、R504L、Q505E、V506I、R510Q、G511R、G511E、R518S、R531C、R532W、R532Q、E538D、G540R、D550V、V552M、G557A、R559G、R559P、N566K、M568V、R569Q、R569L、Q58X、E174X、W201X、E241X、R270X、E440X、R486X、Q501X、L508X、R510X、E538X、R559X。此等突變描述於Canu等人, Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, 第100-109頁中。在一個實施例中，突變型PKR係選自G332S、G364D、T384M、K410E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q及R490W。在某些實施例中，突變型PKR係選自A468V、A495V、I90N、T408I、Q421K及R498H。在某些實施例中，突變型PKR為R532W、K410E或R510Q。
在本發明之一個實施例中，提供治療受試者之貧血的方法，其包含向該受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。在某些實施例中，貧血為紅血球生成障礙性貧血，諸如I型、II型、III型或IV型先天性紅血球生成障礙性貧血。在某些實施例中，貧血為溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為先天性及/或遺傳性形式的溶血性貧血，諸如PKD、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如α或β)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症)、陣發性夜間血紅素尿症、無β脂蛋白血症(巴-科症候群)。在某些實施例中，溶血性貧血為後天性溶血性貧血，諸如自體免疫溶血性貧血、藥物誘導之溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為作為多系統疾病之一部分的貧血，諸如先天性紅血球生成性紫癜之貧血、範可尼(Fanconi)貧血、戴-布二氏(Diamond-Blackfan)貧血。
如本文所用，術語「貧血」係指紅血球(RBC)及/或血紅素缺乏症。如本文所用，貧血包括所有類型之臨床貧血，例如(但不限於)：小紅血球性貧血、缺鐵性貧血、血紅素病、血紅素合成缺陷、血球蛋白合成缺陷、鐵粒幼細胞性缺陷、正常紅血球性貧血、慢性疾病貧血、再生不全性貧血、溶血性貧血、大紅血球性貧血、巨紅血球貧血、惡性貧血、二形性貧血、早產性貧血、範可尼貧血、遺傳性球形紅血球症、鐮狀細胞疾病、溫抗體型自體免疫溶血性貧血、冷凝集素溶血性貧血、骨質石化病、地中海貧血症及骨髓發育不良症候群。
在某些實施例中，可在全血球計數上診斷貧血。在某些實施例中，貧血可基於一或多種溶血標誌物(例如RBC計數、血紅素、網狀紅血球、裂血球、乳酸脫氫酶(LDH)、結合球蛋白、膽紅素及鐵蛋白)及/或含鐵血黃素尿症平均紅血球體積(MCV)及/或紅血球分佈寬度(RDW)之量測來診斷。在本發明之上下文中，若個體之血紅素(Hb)小於期望水準，例如Hb濃度小於14 g/dL，更佳小於13 g/dL，更佳小於12 g/dL，更佳小於11 g/dL或最佳小於10 g/dL，則存在貧血。
在某些實施例中，本文提供藉由投與有效量之如本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其醫藥學上可接受之組合物來增加有需要受試者之血紅素量的方法。在某些實施例中，所提供之方法增加受試者之血紅素濃度。在某些實施例中，所提供之方法將Hb濃度增加至所需水準，例如高於10 g/dL，更佳高於11 g/dL，更佳高於12 g/dL，更佳高於13 g/dL或最佳高於14 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約0.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約1.0 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約1.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約2.0 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約2.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約3.0 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約3.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約4.0 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約4.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約5.0 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約5.5 g/dL。在某些實施例中，所提供之方法使Hb濃度增加至少約6.0 g/dL。
在本發明之一個實施例中，提供用於治療溶血性貧血之方法，其包含向受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。
在另一個實施例中，溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為先天性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為遺傳性的(例如非球形溶血性貧血或遺傳性球形紅血球症)。
在本發明之一個實施例中，提供治療地中海貧血症；遺傳性球形紅血球症；遺傳性橢圓形紅血球增多症；無β脂蛋白血症或巴-科症候群；陣發性夜間血紅素尿症；後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))；鐮狀細胞疾病；或慢性疾病貧血之方法，其包含向受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。在一個實施例中，後天性溶血性貧血包含先天性貧血。在某些實施例中，所提供之方法為治療地中海貧血症。在某些實施例中，地中海貧血症為β-地中海貧血症。
如本文所用，地中海貧血症為身體產生異常形式之血紅素的遺傳性血液病症。在某些實施例中，該病症導致大量紅血球被破壞，其導致貧血。在某些實施例中，地中海貧血症為α地中海貧血症。在某些實施例中，地中海貧血症為β地中海貧血症。
在本發明之一個實施例中，提供用於活化紅血球中之突變型PKR的方法，其包含向有需要受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。在一個實施例中，該方法為離體方法。在另一個實施例中，該方法為活體外方法。在一些實施例中，血液或紅血球來源於或獲自罹患或易患選自由以下組成之群之疾病或病症的受試者：丙酮酸激酶缺乏症(PKD)、地中海貧血症(例如β地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、貧血(例如紅血球生成障礙性貧血)、溶血性貧血及慢性疾病貧血。在一些實施例中，溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。
在本發明之一個實施例中，提供用於活化紅血球中之野生型PKR的方法，其包含向有需要受試者投與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物。在一個實施例中，該方法為離體方法。在另一個實施例中，該方法為活體外方法。在一些實施例中，血液或紅血球來源於或獲自罹患或易患選自由以下組成之群之疾病或病症的受試者：丙酮酸激酶缺乏症(PKD)、地中海貧血症(例如β地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、貧血(例如紅血球生成障礙性貧血)、溶血性貧血及慢性疾病貧血。在一些實施例中，溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於增加有需要之紅血球(RBC)之壽命的藥劑。
在另一個實施例中，化合物或醫藥組合物經調配以直接添加至全血或體外紅血球濃厚液。在另一個實施例中，化合物或醫藥組合物經調配以投與有需要受試者。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於調節有需要之血液中2,3-二磷酸甘油酸水準的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於治療貧血的藥劑。在某些實施例中，貧血為紅血球生成障礙性貧血，諸如I型、II型、III型或IV型先天性紅血球生成障礙性貧血。在某些實施例中，貧血為溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為先天性及/或遺傳性形式的溶血性貧血，諸如PKD、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如α或β)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症)、陣發性夜間血紅素尿症、無β脂蛋白血症(巴-科症候群)。在某些實施例中，溶血性貧血為後天性溶血性貧血，諸如自體免疫溶血性貧血、藥物誘導之溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為作為多系統疾病之一部分的貧血，諸如先天性紅血球生成性紫癜之貧血、範可尼貧血、戴-布二氏貧血。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於治療溶血性貧血的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於治療鐮狀細胞疾病的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於治療受試者之丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的藥劑。
如本文所述，PKD為PKR缺乏症。在某些實施例中，PKR缺乏症與PKR突變相關聯。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於治療地中海貧血症；遺傳性球形紅血球症；遺傳性橢圓形紅血球增多症；無β脂蛋白血症或巴-科症候群；陣發性夜間血紅素尿症；後天性溶血性貧血；或慢性疾病貧血的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於活化紅血球中之突變型PKR的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物的用途，其用於製備用於活化紅血球中之野生型PKR的藥劑。
在本發明之一個實施例中，提供活化丙酮酸激酶R (PKR)之方法，其包含使PKR與有效量之(1)本文所述之化合物(例如實例以及表1及圖1中之式(I)-(V)之化合物)，或其醫藥學上可接受之鹽；或(2)包含本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的醫藥學上可接受之組合物接觸。在一個實施例中，PKR為野生型PKR。在另一個實施例中，PKR為突變型PKR。在一些實施例中，PKR在紅血球中表現。在一個實施例中，該方法為離體方法。在另一個實施例中，該方法為活體外方法。在一些實施例中，血液或紅血球來源於或獲自罹患或易患選自由以下組成之群之疾病或病症的受試者：丙酮酸激酶缺乏症(PKD)、地中海貧血症(例如β地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、貧血(例如紅血球生成障礙性貧血)、溶血性貧血及慢性疾病貧血。在一些實施例中，溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。
由於本文所述之化合物及組合物與WO2012/151451中所述之化合物作用於相同的生物途徑且具有類似的作用模式，因此本文提供之化合物及組合物可如WO2012/151451中所述活化PKR突變體。
組合物及投藥途徑本文描述之組合物包括本文描述之化合物(例如本文所述之化合物)以及額外治療劑(若存在)，其量能有效實現疾病或疾病症狀(包括本文所述之彼等疾病或疾病症狀)的調節。
術語「醫藥學上可接受之載劑或佐劑」係指可與本文提供之化合物一起投與患者，且當以足以遞送有效量之化合物的劑量投與時，不破壞化合物之藥理學活性且無毒的載劑或佐劑。
可用於本文提供之醫藥組合物中的醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑包括但不限於離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物遞送系統(SEDDS) (諸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、用於醫藥劑型中之界面活性劑(諸如Tweens或其他類似聚合物遞送基質)、血清蛋白(諸如人類血清白蛋白)、緩衝物質(諸如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(諸如硫酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。環糊精(諸如α-環糊精、β-環糊精及γ-環糊精)或經化學改質之衍生物(諸如羥烷基環糊精，包括2-及3-羥丙基-β-環糊精)或其他溶解的衍生物亦可有利地用於增強本文所述式之化合物的遞送。
本文提供之醫藥組合物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、經頰、經陰道或經由植入式貯器投與，較佳藉由經口投與或藉由注射投與。本文提供之醫藥組合物可含有任何習知無毒的醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。
本文提供之醫藥組合物可以任何經口可接受之劑型經口投與，包括但不限於膠囊、錠劑、乳液及水性懸浮液、分散液及溶液。在用於口服使用之錠劑的情況下，常用載劑包括乳糖及玉米澱粉。通常亦添加潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式經口投與，有用的稀釋劑包括乳糖及乾燥玉米澱粉。當經口投與水性懸浮液及/或乳液時，活性成分可懸浮或溶解於油相中，與乳化劑及/或懸浮劑組合。
當本文提供之組合物包含本文所述式之化合物與一或多種額外治療劑或預防劑之組合時，化合物及額外藥劑應以通常在單一療法方案中投與之劑量的約1至100%且更佳約5至95%的劑量水準存在。額外藥劑可作為多劑量方案之一部分，與本文提供之化合物分開投與。或者，彼等藥劑可作為單一劑型之一部分，與本文提供之化合物一起混合在單一組合物中。
本文所述之化合物可例如藉由注射、靜脈內、動脈內、真皮下、腹膜內、肌肉內或皮下；或經口、經頰、經鼻、經黏膜、局部、以眼用製劑形式或藉由吸入投與，劑量範圍介於約0.5至約100 mg/kg體重，或者劑量為每4至120小時一劑1 mg至1000 mg，或根據特定藥物之要求。可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分之量將視所治療之主體及特定投藥模式而變化。典型的製劑將含有約5%至約95%活性化合物(w/w)。或者，此類製劑含有約20%至約80%活性化合物。
實驗 縮寫表：
縮寫 全稱 縮寫 全稱
anhy. 無水 aq. 水溶液
min 分鐘 satd. 飽和
mL 毫升 hrs 小時
mmol 毫莫耳 mol 莫耳
MS 質譜 NMR 核磁共振
TLC 薄層層析 HPLC 高效液相層析
LCMS 液相層析-質譜 MTBE 甲基第三丁基醚
DAST 二乙基胺基三氟化硫 CHCl 3 氯仿
DCM 二氯甲烷 DMF 二甲基甲醯胺
Et2O 乙醚 EtOH 乙醇
EtOAc 乙酸乙酯 MeOH 甲醇
MeCN 乙腈 PE 石油醚
THF 四氫呋喃 DMSO 二甲亞碸
AcOH 乙酸 HCl 鹽酸
H 2SO 4 硫酸 NH 4Cl 氯化銨
KOH 氫氧化鉀 NaOH 氫氧化鈉
K 2CO 3 碳酸鉀 Na 2CO 3 碳酸鈉
TFA 三氟乙酸 Na 2SO 4 硫酸鈉
NaBH 4 硼氫化鈉 NaHCO 3 碳酸氫鈉
LiHMDS 六甲基二矽烷基胺基鋰 NaBH 4 硼氫化鈉
Et 3N或TEA 三乙胺 Py或Pyr 吡啶
DMAP 4-(二甲胺基)吡啶 DIPEA N,N-二異丙基乙胺
BINAP 2,2'雙(二苯基磷烷基)-1,1'-聯萘 dppf 1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵
PEP 磷酸(烯醇)丙酮酸 LDH 乳酸脫氫酶
DTT DL-二硫蘇糖醇 BSA 牛血清白蛋白
NADH β-菸醯胺腺嘌呤二核苷酸，還原型 SEM 2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基
p-TsOH 對甲苯磺酸 DCE 1,2-二氯乙烷
通用實驗在以下實例中，化學試劑購自商業來源(諸如Alfa、Acros、Sigma Aldrich、TCI及Shanghai Chemical Reagent Company)，且未經進一步純化即使用。急驟層析在Ez Purifier III上經由具有200-300目矽膠粒子之管柱進行。分析型及製備型薄層層析盤(TLC)為HSGF 254 (0.15-0.2 mm厚，Shanghai Anbang Company, China)。使用Brucker AMX-300或AMX-400 NMR (Brucker, Switzerland)記錄核磁共振(NMR)譜。以來自Waters LCT TOF質譜儀(Waters, USA)之百萬分率(ppm，δ) etero(ESI)報告化學位移。在Agilent 1200液相層析(Agilent, USA，管柱：Ultimate 4.6 m × 50 mm，5 M，移動相A：0.1%甲酸+水；移動相B：乙腈)上記錄HPLC層析。在Initiator 2.5微波合成儀(Biotage, Sweden)上進行微波反應。
本文所述實驗中使用的HPLC條件如下： 方法 1 ： 儀器：Shimadzu LC-2010AHT 管柱：YMC-Triart C18, 50 × 4.6 mm, 5 µm 移動相：溶劑A：H 2O/CH 3OH/TFA = 90/10/0.1， 溶劑B：H 2O/CH 3OH/TFA = 90/10/0.1 流速：2.5 mL/min；管柱溫度：35℃；波長：220 nm/254 nm 方法 2 ： 儀器：Shimadzu LC-2010AHT 管柱：YMC-Triart C18, 50 × 4.6 mm, 5 µm 移動相： 溶劑A：H 2O/CH 3OH/TFA = 90/10/0.1， 溶劑B：H 2O/CH 3OH/TFA = 90/10/0.1 流速：2.5 mL/min；管柱溫度：35℃；波長：220 nm/254 nm 本文所述實驗中使用的製備型HPLC條件如下： 儀器：Waters 2545B/2767 管柱：YMC-Triart C18, 50 × 4.6 mm, 5 µm 移動相： 溶劑A：H 2O (01.% FA)， 溶劑B：CH 3OH或CH 3CN 流速：20 mL/min；管柱溫度：35℃；波長：220 nm/254 nm
實例 1. 合成 6-(3- 甲氧基苯甲基 )-2,4- 二甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 .
Figure 02_image093
步驟 A. (Z)-2- 疊氮基 -3-(2- 甲基噻唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯 .在約-10℃與約-5℃之間，向NaOEt (803 mg，11.79 mmol)於EtOH (10 mL)中之溶液中逐滴添加2-甲基噻唑-5-甲醛(500 mg，3.93mmol)及2-疊氮基乙酸乙酯(1.53 g，11.79 mmol)於無水EtOH (3 mL)中之溶液。當溫度維持在0℃以下時，反應混合物攪拌約1小時，隨後升溫至室溫且再攪拌2小時。將所得混合物在0℃下倒入飽和NH 4Cl水溶液(50 mL)中且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到所需產物(500 mg)，其未經任何純化即直接用於下一步驟中。LCMS: m/z 239 (M+H) +。
步驟 B. 2- 甲基 -4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 .(Z)-2-疊氮基-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙烯酸乙酯(500 mg，2.1 mmol)於鄰二甲苯(5 mL)中之混合物在140℃下攪拌2小時，隨後冷卻至室溫，且接著藉由矽膠管柱層析(溶離劑：戊烷/EtOAc = 6/1直接純化，得到所需產物(220 mg，49.8%產率)。LCMS: m/z 211(M+H) +。
步驟 C. 2,4- 二甲基 -4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 . 在0℃下，向2-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(160 mg，0.76 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加NaH (36.5 mg，1.52 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌0.5小時，隨後添加CH 3I (47 μL，0.76 mmol)。所得混合物在室溫下攪拌0.5小時，隨後在0℃下倒入飽和NH 4Cl水溶液中且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：戊烷/乙酸乙酯= 6/1)純化殘餘物，得到所需產物(124 mg，72.6%產率)。LCMS: m/z 225 (M+H) +。
步驟 D. 6- 甲醯基 -2,4- 二甲基 -4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 . 在0℃下，向2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(100 mg，0.446 mmol)於DMF (1 mL))中之混合物中添加POCl 3(122.5 μL，1.338 mmol)。反應混合物在100℃下攪拌2小時，隨後在0℃下倒入飽和NaHCO 3水溶液中且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：戊烷/乙酸乙酯= 5/1)純化殘餘物，得到所需產物(57 mg，50.7%產率)。LCMS: m/z 253 (M+H) +。
步驟 E. 2,4- 二甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 . 向6-甲醯基-2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(57 mg，0.226 mmol)於2-乙氧基乙醇(2 mL)中之混合物中添加N 2H 4.H 2O (53.7 μL，1.130 mmol)。反應混合物在100℃下攪拌1小時，隨後倒入H 2O中且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：戊烷/乙酸乙酯= 5/1)純化殘餘物，得到所需產物(49 mg，98.4%產率)。LCMS: m/z 221 (M+H) +。
步驟 F. 6-(3- 甲氧基苯甲基 )-2,4- 二甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 . 在0℃下，向2,4-二甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮(49 mg，0.223mmol)於DMF (1 mL)中之混合物中添加t-BuOK (50.8 mg，0.454 mmol)。反應混合物在室溫下攪拌0.5小時，隨後添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(34.9 mg，0.223 mmol)。所得混合物在室溫下攪拌1小時，隨後在0℃下倒入飽和NH 4Cl水溶液中且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：戊烷/乙酸乙酯= 3/1)純化殘餘物，得到所需產物。LCMS: m/z 341 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.56 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.92 - 6.72 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.85 (s, 3H)。
實例1提供化合物E1-3之例示性合成。應理解，不同化合物可用適當雜芳基-CH 2-鹵化物合成。
實例 2.用流程E2製備式E2-vii之化合物 流程 E2
Figure 02_image095
其中X為離去基(例如Cl、Br或I、OMs或OTs)；M為有機金屬錯合物(例如有機硼錯合物，諸如
Figure 111135803-A0304-1
酸或頻哪醇硼錯合物；有機錫錯合物，諸如-Sn(Bu t ) 3；有機鋅錯合物，諸如-Zn(鹵素))；Q及R 2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員雜芳基。與實例1中式E1-v之化合物的合成類似，化合物E2-iv可藉由若干修飾由噻唑醛E2-i合成(例如化合物E2-ii與MsCl反應，隨後消除得到化合物E2-iii；三環系統可用催化劑AcOH在2-甲氧基乙醇中形成)。化合物E2-iv之取代及碘化提供化合物E2-vi。化合物E2-vi與有機金屬在催化劑存在下偶合，得到化合物E2-vii。
實例 2A. 合成4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并-[2,3-d]噠嗪-5-酮
Figure 02_image097
步驟 A. 2- 疊氮基 -3- 羥基 -3-( 噻唑 -5- 基 ) 丙酸乙酯 . 將鈉(12.2 g，0.531 mol)在室溫下緩慢添加至無水EtOH (300 mL)之攪拌溶液中。反應混合物隨後冷卻至-20℃，接著逐滴添加2-疊氮基乙酸乙酯(68.5 g，0.531 mol)及噻唑-5-甲醛(20.0 g，0.177 mol)於無水EtOH (100 mL)中之溶液，同時將溫度保持在-20℃至-15℃之間。在添加後，將反應混合物在-20℃下再攪拌1小時，且隨後倒入飽和NH 4Cl水溶液(1L)中。所得混合物用NaCl飽和且用EtOAc萃取。合併之有機相用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析使用(溶離劑：PE/EtOAc= 6/1至5/1至1/1)純化殘餘物，得到呈淺色之所需產物(34 g)。LCMS: m/z= 243 (M+H) +。
步驟 B. (Z)-2- 疊氮基 -3-( 噻唑 -5- 基 ) 丙烯酸乙酯 . 在-35℃下，向2-疊氮基-3-羥基-3-(噻唑-5-基)丙酸乙酯(103 g，0.426 mol)於無水DCM (1.5 L)中之攪拌混合物中添加MsCl (146 g，1.28 mol)，隨後逐滴添加TEA (301 g，2.98 mol)，同時將溫度保持在-35℃至-30℃之間。在添加之後，將反應混合物在-30℃下再攪拌15分鐘，隨後倒入飽和NH 4Cl水溶液(1.5 L)中。所得混合物用NaCl飽和且用EtOAc萃取兩次。合併之有機層依次用HCl (1 M)水溶液及鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析使用(溶離劑：PE/EtOAc= 5/1)純化殘餘物，得到所需產物(82.0 g，86.3%產率)。LCMS: m/z= 225 (M+H) +。
合成4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯、4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯及6-甲醯基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯之 步驟 C-E與實例1中之程序類似。
步驟 F. (E)-6-( 亞肼基甲基 )-4- 甲基 -4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 .在室溫下，向N 2H 4.H 2O (2.0 g，98%，40 mmol)於2-甲氧基乙醇(50 mL)中之攪拌混合物中添加6-甲醯基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(4.8 g，20 mmol)，隨後添加20滴AcOH。將反應混合物在室溫下攪拌約30分鐘，直至混合物變澄清。將所得混合物在攪拌下倒入水(100 mL)中且用DCM萃取。合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到所需產物，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS: m/z= 253 (M+H) +。
步驟 G. 4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 . 在室溫下，向( E)-6-(亞肼基甲基)-4-甲基-4H- 吡咯并[2,3-d]噻唑-5 -甲酸乙酯(4.8 g，0.19 mol)於2-甲氧基乙醇(50 mL)中之攪拌懸浮液中添加AcOH (20滴)。反應懸浮液在105℃下攪拌3小時且隨後過濾。濾餅用水洗滌且在高真空下乾燥，得到第一批所需產物。濾液用水稀釋且用DCM萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到第二批所需產物。合併之兩批次所需產物(2.5 g)未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS: m/z= 207 (M+H) +。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.68(s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 4.30 (s, 3H)
實例 3.合成化合物E3-vii及E3-viii 流程 E3
Figure 02_image099
其中Hal為鹵素(例如Cl、Br或I)；LG為離去基(例如Cl、Br、I、OMs或OTs)；Q為視情況經取代之5員或6員雜芳基；且Q'為經進一步官能化之5員或6員雜芳基。化合物E3-i與甲硫醇鈉之芳族取代反應提供化合物E3-ii，其可使用化合物E1-iii至E1-vi之合成轉化成化合物E3-v。化合物E3-v用mCPBA氧化分別產生化合物E3-vi及E3-vii。
實例 3A.合成4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮
Figure 02_image101
步驟 A ： 4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 . 向2-溴-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(500.0 mg，1.73 mmol)於EtOH (10.0 mL)中之混合物中添加NaSMe (240.0 mg，3.5 mmol)。將反應混合物在25℃下攪拌3小時，隨後用冰水淬滅且用DCM萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到所需產物(460 mg)，其未經任何純化即直接用於下一步驟中。LC-MS: m/z 257 (M+H) +。
步驟 B ： 6- 甲醯基 -4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-4H- 吡咯并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸乙酯 . 向4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(460.0 mg，1.8 mmol)及N-甲基-N-苯基甲醯胺(490 mg，3.6 mmol)於DCE (10 mL)中之溶液中添加POCl 3(550.0 mg，3.6 mmol)。將所得混合物在130℃下攪拌3小時，隨後用冰水淬滅且用DCM萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：PE/EtOAc = 8/1)純化殘餘物，得到所需產物(320.0 mg，63%產率)。LC-MS: m/z 285 (M+H) +。
步驟 C ： 4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 . 向6-甲醯基-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(300.0 mg，1.06 mmol)於EtOH (5.0 mL)中之溶液中添加N 2H 4.H 2O (2 mL，98重量%)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，隨後加熱至60℃隔夜，接著冷卻。藉由過濾收集固體且在高真空下乾燥，得到所需產物(180.0 mg，67%產率)。LC-MS: m/z 253 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.61 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 4.22 (s, 3H), 2.81 (s, 3H)。
實例 3B.合成6-((2-胺基吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮
Figure 02_image103
步驟 A. 2- 溴 -4-( 溴甲基 ) 吡啶 . 2-溴-4-甲基吡啶(1 g，5.81 mmol)、NBS (1.1 g，6.39 mmol)及催化量之AIBN (100 mg)於CCl 4(10 mL)中之混合物在80℃下攪拌隔夜。減壓濃縮所得混合物且藉由矽膠管柱層析(溶離劑：PE/EtOAc = 200/1)純化殘餘物，得到所需產物E3-4 (500 mg，34.28%產率)。
步驟 B. 6-((2- 溴吡啶 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 . 4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(100 mg，0.40 mmol)及K 2CO 3(164 mg，1.19 mmol)於DMF (8 mL)中之混合物在60℃下攪拌2小時，隨後添加2-溴-4-(溴甲基)吡啶(199 mg，0.80 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液及催化量之TBAB (13 mg)。將混合物在60℃下攪拌隔夜，隨後用水(20 mL)淬滅且用EtOAc萃取。合併之有機層用飽和NH 4Cl水溶液洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：PE/EtOAc = 10/1)純化殘餘物，得到所需產物(150 mg，89.62%產率)。LCMS: m/z 423 (M+H) +。
步驟 C. (4-((4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-5- 側氧基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 . 6-((2-溴吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(100 mg，0.24 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(83 mg，0.71 mmol)、K 3PO 4(201 mg，0.95 mmol)、Pd 2(dba) 3(18 mg，0.02 mmol)及Xantphos (11 mg，0.02 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃下在氮氣下攪拌隔夜。所得混合物用水淬滅且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(溶離劑：PE/EtOAc = 3/1)純化殘餘物，得到所需產物(100 mg，92.10%產率)。LCMS: m/z 459 (M+H) +。
步驟 D. (4-((4- 甲基 -2-( 甲基亞磺醯基 )-5- 側氧基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 . 在0℃下，向(4-((4-甲基-2-(甲硫基)-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.22 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中添加3-氯過氧苯甲酸(38 mg，0.22 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌1小時，隨後用水淬滅且用DCM萃取。合併之有機層用飽和NaHCO 3水溶液洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到所需產物(100 mg，96.63%產率)，其未經任何純化即直接用於下一步驟中。LCMS: m/z 475 (M+H) +。
步驟 E. 6-((2- 胺基吡啶 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 甲基亞磺醯基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 . (4-((4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.21 mmol)於TFA (1 mL)及DCM (3 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時，隨後減壓濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(20 mg，25.35%產率)。LCMS: m/z 375 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.67 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 6.30 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 5.24 - 5.03 (m, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.03 (s, 3H)。
使用上述程序，使用適當起始物質來產生以下化合物。必要時可使用標準保護及去保護。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E3-8
Figure 02_image105
6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 376 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.76 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 6.60 (s, 2H), 6.22 (d, 1H), 5.20 (t, 2H), 4.28 (s, 3H), 3.12 (s, 3H)。   
E3-9
Figure 02_image107
6-((2-胺基嘧啶-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: 376(M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.70 (s, 1H), 8.29 (s, 2H), 6.66 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 4.28 (s, 3H), 3.10 (s, 3H)。   
實例 3C.合成6-((2-胺基噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮
Figure 02_image109
Figure 02_image111
步驟 A-B. 與實例3B類似地合成2-溴-5-(溴甲基)噻唑及6-((2-溴噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。
步驟 C. 6-((2-((2,4- 二甲氧基苯甲基 ) 胺基 ) 噻唑 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 甲硫基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 . 6-((2-溴噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(130 mg，0.30 mmol)及DIPEA (0.1 mL)於NMP (0.1 mL)及(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.1 mL)中之混合物在150℃下攪拌4小時。隨後反應混合物用水(10 mL)淬滅，用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析(用PE/EtOAc = 5/1溶離)純化殘餘物，得到所需產物(60 mg，38.4%產率)。LC-MS: m/z 515 (M+H) +。
步驟 D. 6-((2-((2,4- 二甲氧基苯甲基 ) 胺基 ) 噻唑 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 甲基亞磺醯基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 . 在0℃下，向6-((2-((2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg，0.10 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加過硫酸氫鉀(61 mg，0.10 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，隨後用飽和Na 2S 2O 3水溶液(5 mL)淬滅且用DCM萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮，得到所需產物(30 mg，50.1%產率)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LC-MS: m/z 531 (M+H) +。
步驟 E.與實例3B類似地合成6-((2-胺基噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4H-噻唑并 [5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS: m/z 381 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.70 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.11 (s, 3H)。
使用上述程序，使用適當起始物質來產生以下化合物。必要時可使用標準保護及去保護。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E3-15
Figure 02_image113
6-((2-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: m/z 381 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.69 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.21 (s, 1H), 5.26 - 5.05 (m, 2H), 4.30 (s, 3H), 3.11 (s, 3H)。   
實例 4. 合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 實例 4A. 合成 3-(( 苯磺醯基 ) 甲基 )-1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑
Figure 02_image115
步驟 A. 1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 甲酸甲酯在0℃下在N 2氛圍下，向1H-吡唑-3-甲酸甲酯(90 g，0.72 mol)於THF (1 L)中之攪拌溶液中添加NaH (20.7 g，0.864 mol，60 %)。將所得混合物緩慢升溫至室溫且攪拌1小時。隨後將反應混合物冷卻回至0℃且逐滴添加SEMCl (151.5 mL，0.842 mol)。再繼續攪拌2小時，隨後用飽和NH 4Cl淬滅且用乙酸乙酯萃取(3×)。合併之有機層用鹽水洗滌且經Na 2SO 4乾燥。真空移除溶劑，得到粗產物210 g，其未經純化即用於下一步驟中。
步驟 B.( 1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲醇在0℃下在N 2氛圍下，向LAH (16.9 g，0.44 mol)於THF (760 mL)中之懸浮液中添加粗製1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(76 g)。將所得混合物緩慢升溫至室溫且攪拌1小時。將反應混合物冷卻回至0℃且相繼添加H 2O (15.6 mL)、10 % NaOH (15.6 mL)、H 2O (15.6 mL)。所得混合物經由矽藻土墊過濾且用MTBE洗滌(4×)。合併之有機溶離份經Na 2SO 4乾燥。減壓移除溶劑，得到粗產物69.4 g，其未經純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 229 (M+H) +。
步驟 C. 3-( 碘甲基 )-1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑在0℃下在N 2氛圍下，向(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(61.5 g，理論上0.262 mol)於THF (310 mL)中之攪拌溶液中添加TEA (55.42 mL，0.393 mol)，隨後添加MsCl (24 mL，0.314 mol)。將反應物升溫至室溫且攪拌1小時，隨後引入NaI (196.5 g，1.31 mol，於310 mL DMF中)。將所得混合物再攪拌1小時且用冰水淬滅，用MTBE萃取(3×)。合併之有機層用飽和Na 2S 2O 3及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到77.5 g粗產物，其未經純化即用於下一步驟中。LC-MS: m/z 339 (M+H) +。
步驟 D. 3-(( 苯磺醯基 ) 甲基 )-1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑在0℃下在N 2氛圍下，向(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(77.5 g，理論上0.229 mol)於DMF (600 mL)中之攪拌溶液中添加苯亞磺酸鈉(53.5 g，0.32 mol)且在0℃下攪拌1小時。在升溫至室溫後，反應混合物用冰水及飽和Na 2S 2O 3淬滅，用乙酸乙酯萃取(3 x)。合併之有機層相繼用飽和NaHCO 3及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥。真空移除溶劑且藉由急驟層析(矽膠，20 % ~ 70 %乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到56.7 g淡黃色油狀物。LCMS: [M + H] +353。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.85-7.77 (m, 4H), 7.62 (dd, 2H), 6.19 (d, 1H), 5.35 (d, 2H), 4.70 (d, 2H), 3.44-3.38 (m, 2H), 0.88-0.77 (m, 2H), -0.01 (s, 9H)。
實例 4B. 合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image117
步驟 A. 4- 甲基 -2-(( 苯磺醯基 )(1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在-40℃下，向3-((苯磺醯基)甲基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(1.8 g，5.1 mmol)於無水THF (30 mL)中之溶液中逐滴添加LiHMDS (7.5 mL，7.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，隨後在室溫下添加4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(580 mg，2.7 mmol)於無水THF (30 mL)中之懸浮液。將混合物在室溫下再攪拌1小時，倒入冰冷卻之飽和NH 4Cl水溶液(20 mL)中且用EtOAc (3×100 mL)萃取。將合併之有機層用水(60 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 2.5 %甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到所需產物(800 mg，66 %)。LC-MS (ESI)實驗值：557 (M+H) +。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.67-7.59 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.48 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.88 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H)。
步驟 B. 4- 甲基 -2-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在N 2下，在冰浴下向4-甲基-2-((苯磺醯基)(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(0.8 g，1.41 mmol)於THF (5 mL)及MeOH (10 mL)中之混合物中逐滴添加SmI 2(0.1M/THF，45 mL)。在攪拌10分鐘後，反應物用飽和NH 4Cl水溶液(50 mL)淬滅且用EAOAc (50 mL × 3)萃取。將合併之有機層用水(60 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 3 %甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到所需產物(310 mg，51.0 %)。LC-MS實驗值：417 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H)。
步驟 C. 3-((4- 甲基 -5- 側氧基 -2-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -1- 甲酸第三丁酯 .向4-甲基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(30 mg，0.07 mmol)及K 2CO 3(25 mg，0.18 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物中鼓泡氬氣且在50℃下攪拌1小時。隨後添加3-(溴甲基)-1H-吡唑-1-甲酸第三丁酯(37 mg，0.14 mmol)。在50℃下在氬氣下攪拌隔夜後，將反應混合物冷卻至室溫，用飽和NH 4Cl水溶液(20 mL)淬滅且用EAOAc (30 mL × 3)萃取。將合併之有機層用水(40 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由製備型TLC (DCM:MeOH = 15:1)純化殘餘物，得到所需產物(15 mg，35.0 %)。LC-MS(ESI)實驗值：597 (M+H) +。
步驟 D. 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((1H- 吡唑 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .向3-((4-甲基-5-側氧基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-吡唑-1-甲酸第三丁酯(15 mg，0.025 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加TFA (1 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜，隨後濃縮且藉由製備型TLC (DCM:MeOH = 15:1)純化，得到所需產物(5 mg，50 %)。LC-MS，實驗值：367(M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.80 (s, 1H), 12.65 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.71 (brs, 1H), 7.60 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
實例 5. 合成 4- 甲基 -2-( 甲基亞磺醯基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image119
在室溫下，向4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮(1.01 g，4.0 mmol)於DCM (20 mL)中之攪拌懸浮液中添加3-氯-過氧苯甲酸(0.77 g，3.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。隨後，將混合物過濾，用EtOAc洗滌且用MeOH濕磨。真空乾燥固體，得到4-甲基-2-(甲基亞磺醯基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮(600 mg)。LCMS: m/z 269 (M+H) +。1H NMR(400 MHz, DMSO) δ 12.78(s,1H), 8.64 (s,1H), 4.28 (s,3H), 3.11 (s, 3H)。
實例 6. 合成 4- 甲基 -2-( 甲基磺醯基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image121
在20℃下，將m-CPBA (61.5 g，3 eq)分三份添加至裝有含4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮(30 g，0.119 mol，1.0 eq)之DCM (600 mL)的三頸燒瓶。將混合物在30℃下攪拌隔夜，LC-MS表明起始物質100%消耗，形成20%之E4-2及80%之E6-1。將混合物冷卻至室溫，再添加一份m-CPBA (1.0 eq)。將反應混合物在30℃下攪拌2小時，LC-MS表明E4-2 (LCMS: m/z 269 (M+H) +.) ＜ 8 %。將混合物冷卻至室溫且過濾。將濾餅懸浮於MeOH (500 mL)中且在室溫下攪拌1小時。藉由過濾收集固體，用乙酸乙酯洗滌，真空乾燥，得到28 g 5%之E4 -2與95%之E6-1之混合物。將混合物(28 g)懸浮於DMSO (600 mL)中，加熱至120℃~ 130℃以形成澄清溶液。隨後冷卻至室溫，沈澱固體。過濾混合物且乾燥，得到23 g純E6-1，LCMS: m/z 285 (M+H) +。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ12.87 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 4.32 (s, 3H), 3.56 (s, 3H)。
實例 7. 合成化合物 E7-v 及 E7-viii流程E7
Figure 02_image123
化合物E7-i與化合物E4-2及/或化合物E6-1之間的親核芳族取代產生中間物E7-ii。化合物E7-ii之苯磺醯基還原得到中間物E7-iii。使用E7-iv及化合物E7-iii在鹼(例如K 2CO 3、K 3PO 4、t-BuOK或Cs 2CO 3)存在下之標準烷基化反應產生化合物E7-vi，其中X a為離去基，諸如Cl、Br、I、OMs、OTs；Ar 1及Ar 2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基。化合物E7-vi亦可由化合物E7-iii與E7-v使用含氰基亞甲基-三丁基磷烷(CMBP)之甲苯的光延反應(Mitsunobu reaction)合成。
實例 7A.合成4-甲基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮
Figure 02_image125
步驟 A. 4- 甲基 -2-(( 苯磺醯基 )(1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮在-40℃下，向3-((苯磺醯基)甲基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(26 g，78.86 mmol，2.1 eq)於無水THF (700 mL)中之溶液中添加LiHMDS (81.2 mL，81.2 mmol，1 M於THF中，2.31 eq)。將反應物升溫至室溫且攪拌1小時。隨後在室溫下，將4-甲基-2-(甲基磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(10 g，35.17 mmol，1 eq)添加至混合物中。在室溫下再攪拌反應物0.5小時。在0℃下，將反應物倒入飽和氯化銨溶液(500 mL)中且用乙酸乙酯萃取兩次。將合併之有機層用水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到黃色殘餘物。藉由矽膠層析(二氯甲烷:甲醇= 100 : 1至30 : 1)純化殘餘物，得到4-甲基-2-((苯磺醯基)(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(13 g)。LC-MS ESI M/Z = 557 (M+H) +。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.81 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.66 (t, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.50 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.91 (dd, 2H), 0.02 (s, 9H)。
步驟 B. 4- 甲基 -2-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮. 在室溫下，向4-甲基-2-((苯磺醯基)(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(8 g，14.37 mmol，1 eq)於THF (500 mL)及MeOH (500 mL)中之溶液中添加SmI 2(503 mL，50.29 mmol，0.1 M於THF中，3.5 eq)。將反應物攪拌0.5小時且濃縮。藉由矽膠層析(石油醚:乙酸乙酯:甲醇 = 75:25:0至20:20:1)純化殘餘物，得到4-甲基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(4.3 g)。LC-MS ESI M/Z = 417 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H)。
實例 7B. 合成 6-((1H- 咪唑 -2- 基 ) 甲基 )-2-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image127
步驟 A. 1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 咪唑 -2- 甲醛：NaH之樣品在N 2下用己烷(2 × 10 mL)洗滌。燒瓶裝有無水DMF (20 mL)且以小份添加1H-咪唑-2-甲醛(500 mg，5.2 mmol)。在室溫下攪拌1.5小時後，逐滴添加SEMCl (864 mg，5.2 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將反應混合物倒入水中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，減壓濃縮，得到粗製1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醛(800 mg)。LCMS: 227 (M+H) +。
步驟 B. (1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ) 甲醇：在0℃下，向1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醛(1.6 g，7 mmol)於THF (20 mL)中之攪拌混合物中添加NaBH 4(1.34 g，35 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將反應混合物倒入NH 4Cl水溶液中且用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，減壓濃縮，得到粗製(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲醇(1.3 g)。
步驟 C. 2-( 氯甲基 )-1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 咪唑：在室溫下，向(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲醇(400 mg，1.75 mmol)於DCM (20 mL)中之攪拌混合物中添加NCS (466 mg，3.5 mmol)及PPh 3(920 mg，3.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物倒入水中且用DCM萃取。用水洗滌混合物且減壓濃縮有機層。藉由製備型TLC (PE:EtOAc=1:1)純化殘餘物，得到2-(氯甲基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑。LCMS: 247 (M+H) +。在60℃下在N 2下，向4-甲基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg，0.12 mmol)於無水DMF (5 mL)中之攪拌混合物中添加K 2CO 3(66 mg，0.48 mmol)。在20分鐘後，在60℃下在N 2下，添加含化合物 E7 - 2(60 mg，0.24 mmol)之無水DMF (2 mL)。在60℃下在N 2下攪拌混合物1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫且用0.5N HCl水溶液調節至pH= 5~6。隨後用EtOAc萃取混合物，用水及鹽水洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，減壓濃縮且藉由製備型TLC (PE:EtOAc=1:1.5)純化，得到4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(25 mg)。LCMS: 627 (M+H) +。將4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(25 mg，0.04 mmol)於DCM/TFA (2 mL/2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(1.3 mg)。LCMS: 367 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 6.9 (s, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
根據流程E7及實例7A-7B之程序，使用適當起始物質合成以下化合物。必要時使用標準保護及去保護方法。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E7-6
Figure 02_image129
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: 384 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 9.03 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-7
Figure 02_image131
6-((1,2,4-噻二唑-5-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: 385 (M+H)+。 1HNMR(400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)
E7-8
Figure 02_image133
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 399 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.78 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.87 (br s, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-9
Figure 02_image135
6-((1H-咪唑-4-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 367 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)。
E7-10
Figure 02_image137
6-((1H-吡唑-4-基)甲基)-2-((1H-吡唑-5-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 367 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (brs, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.72-7.35 (m, 3H), 6.25 (s,1H), 5.20 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-11
Figure 02_image139
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-(異噻唑-5-基甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 384(M+1) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.46 (d, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)。
E7-12
Figure 02_image141
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 414 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.15 (t, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.66 (d, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。
E7-13
Figure 02_image143
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噻唑-2-甲醯胺 		LCMS: m/z 427 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.70-7.60 (m, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-14
Figure 02_image145
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 368 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.89 (s, 1H), 12.78 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.95-7.54 (m, 2H), 6.26 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-15
Figure 02_image147
N-(6-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-5-氟吡啶-2-基)乙醯胺 		LCMS: (ESI) m/z 453 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.84 (s, 1H), 10.41 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.71 (s, 2H), 6.34 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.33 (s, 3H), 2.08 (s, 3H)。
E7-16
Figure 02_image149
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS：384 [M+H]+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-17
Figure 02_image151
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-溴噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 462, 464 (M, M+2H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.77 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。   
E7-18
Figure 02_image153
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78(s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.83(s, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)
E7-19
Figure 02_image155
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噻唑-5-甲腈 		LCMS: m/z 409 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.77 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.61 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。
E7-20
Figure 02_image157
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噻唑-5-甲醯胺 		LCMS: m/z 427 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.78 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.75 (d, 2H), 6.26 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。
E7-21
Figure 02_image159
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((5-甲基噻唑-4-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: m/z 398 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.77 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.49 (s, 3H)。   
E7-22
Figure 02_image161
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: 421 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.39 (dd, 1H),  6.47 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 6.17 (d, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.47 (m, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.94 (s, 6H)。   
E7-23
Figure 02_image163
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((5-(三氟甲基)噻唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 452 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.85 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。
E7-24
Figure 02_image165
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-氯噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 418 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-25
Figure 02_image167
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-甲氧基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS (ESI): m/z 414 (M+H) +。 1H NMR DMSO-d6 400MHz δ 8.45 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.93 (s, 3H)。
E7-26
Figure 02_image169
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS (ESI): m/z 378 (M+H)。 1H NMR (DMSO-d6 400MHz) δ 12.79 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.48 (dd, 1H), 7.71 (ddd, 2H), 7.35 (ddd, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-27
Figure 02_image171
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基-5-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 423 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.17 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.72 (s, 3H)。
E7-28
Figure 02_image173
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基-4-氟吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.56 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.3-6.2 (m, 2H), 6.18 (d, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。   
E7-29
Figure 02_image175
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-氯-5-甲基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 426 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.56 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.30 (s, 3H)。
E7-30
Figure 02_image177
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.83 (s, 1H), 12.68 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.64 (s, 2H), 6.26 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.24 (s, 3H)。   
E7-31
Figure 02_image179
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 11.74 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 6.09 (t, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。   
E7-32
Figure 02_image181
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-甲氧基-吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 408 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.08 (dd, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.90 (dd, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.93 (s, 3H)。
E7-33
Figure 02_image183
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.88 (s, 1H), 12.61 (s, 1H), 8.61 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 6.33 (d, 1H), 5.89 (d, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.54 (d, 2H), 4.34 (s, 3H)。
E7-34
Figure 02_image185
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基-5-甲基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 407 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.84 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.33(s, 1H), 6.15 (d, 1H), 5.75 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.33 (s, 3H), 2.05 (s, 3H)。
E7-35
Figure 02_image187
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 408 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.87 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.84 - 7.72 (m, 2H), 6.86 (d, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.89 (s, 3H)。   
E7-36
Figure 02_image189
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 11.53 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.47 (dd, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.27 (dd, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-37
Figure 02_image191
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 408 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.86 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.94 - 6.89 (m, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.89 (s, 3H)。
E7-38
Figure 02_image193
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.57 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.27 (d, 1H), 6.07 (dd, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。   
E7-39
Figure 02_image195
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基-1H-咪唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 382 (M+H) +。 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12.80 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.18 (s, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-40
Figure 02_image197
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-(羥胺基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 409 (M+H) +。 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12.83 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.55-8.65 (m, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.56 (t, 1H), 6.77 (d, 1H), 6.40 (d, 1H), 6.32 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.31 (s, 3H)
E7-41
Figure 02_image199
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-(異噻唑-3-基甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: ESI m/z 384 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.01 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-42
Figure 02_image201
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H- 1,2,3-三唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: ESI m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 4.10 (s, 3H)。
E7-43
Figure 02_image203
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-1,2,3- 三唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5] 吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: ESI m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.99 (s, 3H)。
E7-44
Figure 02_image205
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(吡啶-2-基甲基)- 4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: ESI m/z 378 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.94 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 7.82 (m, 2H), 7.36 (m, 1H), 7.23 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.36 (s, 3H)。
E7-45
Figure 02_image207
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-氯-1H-吡唑-5-基)甲基)-4-甲基-4H- 噻唑并[5',4':4,5] 吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 401 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.96 (s, 1H), 12.77 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-46
Figure 02_image209
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺 		LCMS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.34 (s, 1H), 12.81 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.70 (s, 2H), 7.26 (m, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)
E7-47
Figure 02_image211
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基-3-氟吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS m/z 411.0 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 6.34 (dd, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-48
Figure 02_image213
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((2-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS m/z 382.0 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 4.08 (s, 3H)
E7-49
Figure 02_image215
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((3-氟-6-(甲胺基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS m/z 425 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.31 (t, 1H), 6.33 - 6.26 (m, 3H), 5.34 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.48 (s, 3H)
E7-50
Figure 02_image217
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基-5-氟吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: (ESI) m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.59 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 6.47 - 6.06 (m, 4H), 5.26 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)
E7-51
Figure 02_image219
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(吡啶-4-基甲基) -4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: (ESI) m/z 378 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.28 (d, 2H), 6.33 (d, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)
E7-52
Figure 02_image221
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-5-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 384 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.85 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.54 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.30 (s, 3H)
E7-53
Figure 02_image223
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 392 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.14 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.43 (s, 3H)
E7-54
Figure 02_image225
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-(異噻唑-4-基甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 384 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (s, 1H),  5.48 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.31 (s, 3H)
E7-55
Figure 02_image227
6-((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 368 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.85 (s, 1H), 12.78 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.49-8.21(m, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.27 (d, 1H),  5.41 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-56
Figure 02_image229
6-((1,3,4-噻二唑-2-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.79 (s, 1H), 9.57 (s, 1H),8.61 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H),  5.80 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)   
E7-57
Figure 02_image231
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-溴-5-氟吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 476 (M+2H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.57 (s, 1H),7.81 (dd, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.30 (dd, 1H), 6.26 (d, 1H),  5.43 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-58
Figure 02_image233
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-氯-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 401 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.01 (s, 1H), 12.95 (s, 1H), 8.53 (s, 1H),7.68 (dd, 1H), 6.26 (d, 1H),  6.17 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-59
Figure 02_image235
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-氟-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.77 (s, 1H), 8.47 (s, 1H),7.75 (d, 1H), 7.71 (s, 1H),6.26 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.70 (s, 3H)
E7-60
Figure 02_image237
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-氯-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 415 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.82 (s, 1H), 8.52 (s, 1H),7.92 (s, 1H), 7.76 (s, 1H),6.31 (s, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 3.79 (s, 3H)
E7-61
Figure 02_image239
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.79 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.27 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。      
E7-62
Figure 02_image241
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: (ESI) m/z 408 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.79 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.63 (dd, 1H), 6.68 (d, 1H), 6.60 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。   
E7-63
Figure 02_image243
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲腈 		LC-MS: m/z 406 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.83 (s, 3H)。   
E7-64
Figure 02_image245
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醯胺 		LC-MS: m/z 424 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.69 (s, 3H)。   
E7-65
Figure 02_image247
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 396 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.51 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.61 (s, 3H)。   
E7-66
Figure 02_image249
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-吡唑-4-甲腈 		LC-MS: m/z 392 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.62 (s, 1H), 12.79 (s, 1H), 8.54 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-67
Figure 02_image251
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-吡唑-4-甲醯胺 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.75 (s, 2H), 8.48 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-68
Figure 02_image253
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-4-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 449 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.85 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.44 (d, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.32 (s, 3H), 3.83 (s, 3H)。   
E7-69
Figure 02_image255
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.77 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.61 (s, 3H)。   
E7-70
Figure 02_image257
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((4-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.90-12.30 (m, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 1.96 (s, 3H)。   
E7-71
Figure 02_image259
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-4-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 9.04 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.49-7.39 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-72
Figure 02_image261
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1,4-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.86 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.32 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 1.99 (s, 3H)。   
E7-73
Figure 02_image263
6-((4-胺基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 400 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.53 (s, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 6.96 (s, 1 H), 5.23 (s, 2 H), 4.50 ( s, 2 H), 4.27 ( s, 3 H)。   
E7-74
Figure 02_image265
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.82 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.71 (s, 3H)。   
E7-75
Figure 02_image267
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噁唑-5-甲醯胺 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-76
Figure 02_image269
6-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)菸鹼腈 		LC-MS: m/z 403 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.82 (s, 1H), 8.94 (d, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.26 (dd, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。   
E7-77
Figure 02_image271
6-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)菸鹼醯胺 		LC-MS: m/z 421 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.82 (s, 1H), 8.92 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (dd, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.23 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-78
Figure 02_image273
6-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶醯胺 		LC-MS: m/z 421 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.97-7.82 (m, 3H), 7.75-7.60 (m, 2H), 7.26 (dd, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E7-79
Figure 02_image275
6-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶甲腈 		LC-MS: m/z 403 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.64 (s, 1H), 8.12-7.98 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.33 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)。   
E7-80
Figure 02_image277
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-胺基噻唑-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.58 (s, 2H), 5.36 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。   
E7-81
Figure 02_image279
6-((6-胺基-3-氟吡啶-2-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 429 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.84 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 6.34 (dd, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.23 (s, 3H)。   
E7-82
Figure 02_image281
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-羥基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 383 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.85 (s, 1H), 12.10 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.33 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.34 (s, 3H)。   
E7-83
Figure 02_image283
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-甲氧基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 415 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.76 (s, 1H), 12.13 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.63 (s, 3H)。
E7-84
Figure 02_image285
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((5-甲基噻唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 416 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.51 (s, 3H)。
E7-85
Figure 02_image287
2-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噻唑-4-甲腈 		LC-MS: m/z 409 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.69 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-86
Figure 02_image289
2-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噻唑-4-甲醯胺 		LC-MS: m/z 427 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.63 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.76-7.63 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)。
E7-87
Figure 02_image291
6-((5-氯噻唑-4-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 436 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.83 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-88
Figure 02_image293
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基噁唑-5-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 383 (M+H) +  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.57 (s, 2H), 6.23 (d, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-89
Figure 02_image295
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-4-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 465 (M+H) 。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
E7-90
Figure 02_image297
5-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)噁唑-2-甲醯胺 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-91
Figure 02_image299
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.38 (d, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-92
Figure 02_image301
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醯胺 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.83 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.67 (s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-93
Figure 02_image303
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-氯噁唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-94
Figure 02_image305
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-氯噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 418 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.82 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.31 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.31 (s, 3H)。
E7-95
Figure 02_image307
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1-胺基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.48 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 6.34 (d, 2H), 6.27 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-96
Figure 02_image309
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 425 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.29-4.25 (m, 5H), 3.73 (s, 3H), 3.11 (s, 3H)。
E7-97
Figure 02_image311
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-氯噁唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E7-98
Figure 02_image313
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((4-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 469 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.37-12.75 (m, 2H), 8.65-8.50 (m, 1H), 8.15-7.58 (m, 2H), 5.49-5.36 (m, 2H), 4.67-4.50 (m, 2H), 4.32 (s, 3H)。
E7-99
Figure 02_image315
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基噁唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 383 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.84 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.58 (s, 2H), 6.32 (d, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)。
E7-100
Figure 02_image317
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-(胺基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.89 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.77-7.64 (m, 2H), 6.33 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.33 (s, 3H), 3.96 (s, 2H), 3.82 (s, 3H)。
E7-101
Figure 02_image319
2-(3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙醯胺 		LC-MS: m/z 438 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.31 (s, 2H)。
E7-102
Figure 02_image321
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-1H-咪唑-5-甲醯胺 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 12.10 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.72 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.30 (s, 3H)
E7-103
Figure 02_image323
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ:  12.85 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.33 (d, 1H), 5.36 (d, 2H), 4.53 (d, 2H), 4.33 (s, 3H)
E7-104
Figure 02_image325
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1-胺基-1H-吡唑-5-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.30 (s, 2H), 6.27 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-105
Figure 02_image327
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((5-側氧基-4,5-二氫-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 384 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 11.31 (s, 1H), 8.54 (d, 1H), 7.69 (s, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.17 (d, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-106
Figure 02_image329
4-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)噁唑-2-甲醯胺 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.25-8.12 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-107
Figure 02_image331
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((5-側氧基-2,5-二氫-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 383 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.36 (s, 2H), 7.67 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.31 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E7-108
Figure 02_image333
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((5-胺基-1H-咪唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (s, 1H), 11.47 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)
E7-109
Figure 02_image335
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.60 (s, 2H), 6.27 (d, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E7-110
Figure 02_image337
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((4-胺基嘧啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.84 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.77 (s, 1H), 6.86 (s, 2H), 6.44 - 6.16 (m, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)
實例 8. 合成化合物 E8-v 、 E8-vi 及 E8-viii流程E8
Figure 02_image339
化合物E8-i可經由與實例E7-iii至E7-vi類似之烷基化或光延反應轉化成中間物E8-ii (參見流程E8中之途徑(i))。用mCPBA或過硫酸氫鉀氧化E8-ii產生化合物E8-v及/或E8-vi。化合物E8-v及E8-vi亦可藉由首先氧化，隨後烷基化或光延反應而由E8-i形成(參見流程E8中之途徑(ii))。其中X a為離去基(例如Cl、Br、I、OMs、OTs)；化合物E8-v及/或E8-vi可經由與化合物E8-xi之親核芳族取代反應，使用諸如LiHMDS或t-BuOK之鹼轉化成中間物E8-vii。化合物E8-viii可使用SmI 2或含Zn之AcOH或含TES之AlCl 3而由化合物E8-vii合成。如本文所用，Ar1及Ar2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員雜芳基。
實例 8A. 合成 2-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-6-((6- 胺基吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮及 6-((6- 胺基吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-(1H- 吡唑 -3- 羰基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image341
步驟 A N-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ]-N-[6-({4- 甲磺醯基 -7- 甲基 -9- 側氧基 -3- 硫雜 -5,7,10,11- 四氮雜三環 [6.4.0.0{2,6}] 十二 -1(8),2(6),4,11- 四烯 -10- 基 } 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ] 胺基甲酸第三丁酯在N 2下，在70℃下攪拌4-甲基-2-(甲基磺醯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(7.5 g，26.4 mmol)及K 3PO 4(8.3 g，39.3 mmol)於無水MeCN (300 mL)中之混合物1小時。隨後添加N-[(第三丁氧基)羰基]-N-[6-(溴甲基)吡啶-2-基]胺基甲酸第三丁酯(11.2 g，29.0 mmol)於MeCN (30 mL)中之溶液。在N 2下在70℃下攪拌2.5小時後，反應混合物用飽和NH 4Cl淬滅且用EA (300 mL × 3)萃取。將合併之有機層用水及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮有機相。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 50 %乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到N-[(第三丁氧基)羰基]-N-[6-({4-甲磺醯基-7-甲基-9-側氧基-3-硫雜-5,7,10,11-四氮雜三環[6.4.0.0{2,6}]十二-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]胺基甲酸第三丁酯(5.5 g)。LC-MS (ESI)實驗值：591.1 (M+H) +。
步驟 B. (6-((4- 甲基 -5- 側氧基 -2-(( 苯磺醯基 )(1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯 .在-40℃下在氬氣下，向3-((苯磺醯基)甲基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(11.9 g，33.8 mmol)於無水THF (200 mL)中之攪拌混合物中添加LiHMDS (50 mL，1 M於THF中)。在10分鐘後，將混合物升溫至10℃且攪拌1小時，隨後添加N-[(第三丁氧基)羰基]-N-[6-({4-甲磺醯基-7-甲基-9-側氧基-3-硫雜-5,7,10,11-四氮雜三環[6.4.0.0{2,6}]十二-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]胺基甲酸第三丁酯(9.1 g，15.4 mmol於35 mL THF中)。將反應物在10℃下再攪拌30分鐘。將反應混合物倒入NH 4Cl水溶液中，用EtOAc (200 mL × 3)萃取。將合併之有機層用水及鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 50 %乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到(6-((4-甲基-5-側氧基-2-((苯磺醯基)(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(6.6 g)。LC-MS (ESI)實驗值：763.2 (M+H) +。
步驟 C. (6-((4- 甲基 -5- 側氧基 -2-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯在Zn (2.55 g，117.9 mmol)存在下，在劇烈攪拌下，將(6-((4-甲基-5-側氧基-2-((苯磺醯基)(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(6.0 g，7.86 mmol)於EtOH/AcOH (35 mL/50 mL)中之溶液加熱至50℃持續40分鐘。每隔40分鐘再添加鋅(2.55 g，兩次，藉由TLC/LC-MS監測反應以避免副產物及過度還原之產物)。過濾溶液且用DCM洗滌濾餅。將濾液部分蒸發，用飽和NaHCO 3溶液中和，經MgSO 4乾燥且真空移除溶劑。藉由急驟層析(矽膠，DCM : MeOH= 40:1)純化粗產物，得到(6-((4-甲基-5-側氧基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(3.1 g)。LC-MS (ESI)實驗值：623.3 (M+H) +。
步驟 D. 2-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-6-((6- 胺基吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮向(6-((4-甲基-5-側氧基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(3.0 g，4.8 mmol)於乙醇(30 mL)中之混合物中添加HCl (30 mL，4 M於二噁烷中)。將反應混合物在80℃下攪拌40分鐘。將反應混合物冷卻至室溫，過濾且收集固體，懸浮於水中且在10℃下用NaHCO 3水溶液中和。過濾得到所需化合物2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(1.5 g)。LC-MS (ESI)實驗值：393.2 (M+H) +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.78 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.25 (dd, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 2H), 6.08 (d, 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
步驟 E. 合成 (6-((4- 甲基 -5- 側氧基 -2-(1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 羰基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6(5H)- 基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯向(6-((4-甲基-5-側氧基-2-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.16 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加K 2CO 3(88 mg，0.64 mmol)。將混合物在70℃下攪拌8小時。將混合物倒入水中，藉由過濾收集沈澱物且藉由製備型TLC (2% MeOH/DCM)純化，得到(6-((4-甲基-5-側氧基-2-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(20 mg)。LC-MS (ESI): m/z 637 (M+H) +。
步驟 F. 合成 6-((6- 胺基吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-(1H- 吡唑 -3- 羰基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮向(6-((4-甲基-5-側氧基-2-(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(20 mg，0.03 mmol)於EtOH (1 mL)中之溶液中添加HCl (1 mL，4 mol/L於二噁烷中)。將混合物在80℃下攪拌1小時且冷卻。藉由過濾收集沈澱物且用飽和NaHCO 3中和，用水洗滌且乾燥，得到5 mg 6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 407 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 8.75 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31-7.22 (m, 1H), 6.31 (d, 1H), 6.14 (d, 1H), 5.91 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.38 (s, 3H)。
實例 8B. 合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((6-( 二甲基胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image343
步驟 A. (6-( 二甲基胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲醇 .向(6-氯吡啶-2-基)甲醇(500 mg，2.67 mmol)於含二甲胺之THF (35 mL)中之溶液中添加Pd(OAc) 2(78 mg，0.35 mmol)、Xantphos (170 mg，0.29 mmol)及 t-BuONa (385 mg，4.01 mmol)。將反應混合物在100℃下攪拌18小時。過濾反應混合物且減壓濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 35 %乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到(6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)甲醇(180 mg)。LCMS: 153 (M+H) +。
步驟 B. 6-( 氯甲基 )-N,N- 二甲基吡啶 -2- 胺 .在0℃下，向(6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)甲醇(170 mg，1.1 mmol)於DCM (10 mL)中之攪拌混合物中添加SOCl 2(665 mg，5.6 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。用NaHCO 3水溶液將反應混合物調節至pH= 7~8。隨後將混合物用DCM萃取，用水及鹽水洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，減壓濃縮，得到6-(氯甲基)-N,N-二甲基吡啶-2-胺(70 mg)。LCMS: 171 (M+H) +。
步驟 C. N,N- 二甲基 -6-(( 苯磺醯基 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 胺 .在室溫下，向6-(氯甲基)-N,N-二甲基吡啶-2-胺(500 mg，2.94 mmol)於DMSO (10 mL)中之攪拌混合物中添加PhSO 2Na (1.44 g，8.82 mmol)。將混合物在室溫下攪拌18小時。將反應混合物倒入水中且用DCM萃取。用水洗滌混合物且減壓濃縮有機層。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 20 %乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到N,N-二甲基-6-((苯磺醯基)甲基)吡啶-2-胺(380 mg)。LCMS: 277 (M+H) +。
步驟 D. 2-((6-( 二甲基胺基 ) 吡啶 -2- 基 )( 苯磺醯基 ) 甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在60℃下在N 2下，向4-甲基-2-(甲基磺醯基)-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(180 mg，0.36 mmol) (其與實例8A中化合物E8-1類似地合成)於無水THF (10 mL)中之攪拌混合物中添加N,N-二甲基-6-((苯磺醯基)甲基)吡啶-2-胺(120 mg，0.44 mmol)及 t-BuOK (122 mg，1.1 mmol)。在60℃下在N 2下攪拌混合物2小時。隨後將混合物倒入水中且用EtOAc萃取，用水及鹽水洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，減壓濃縮且藉由製備型TLC (PE: EtOAc=1: 1.5)純化，得到2-((6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)(苯磺醯基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg)。LCMS: 691 (M+H) +。
步驟 E. 2-((6-( 二甲基胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在室溫下在N 2下，向2-((6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)(苯磺醯基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg，0.07 mmol)於THF (5 mL)及MeOH (5 mL)中之混合物中添加-40℃下之SmI 2(5 mL，0.1 M於THF中)。將反應混合物在-40℃下攪拌10分鐘且隨後用水淬滅。後續混合物用EtOAc萃取兩次。合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且減壓濃縮。藉由製備型TLC (PE/EtOAc =1/1.5)純化殘餘物，得到所需產物(10 mg)。LCMS: m/z 551 (M+H)+。
步驟 F. 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((6-( 二甲基胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在室溫下攪拌2-((6-(二甲基胺基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(10 mg，0.018 mmol)於DCM/TFA (2 mL/2 mL)中之混合物1小時。濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(1.4 mg)。LCMS: 421 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.51 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.48 (dd, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.05 (s, 6H)。
根據流程E8及實例8C，使用適當起始物質合成以下化合物。必要時可使用標準保護及去保護。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E8-7
Figure 02_image345
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: 393(M+H) + 。 1H-NMR(400 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.60 (d, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-8
Figure 02_image347
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-9
Figure 02_image349
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(噁唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 368 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.79 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-10
Figure 02_image351
2-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.42(d, 1H), 7.36 (t, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.35 (d, 1H), 5.98 (s, 2H), 5.48 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-11
Figure 02_image353
4-甲基-6-(噻唑-2-基甲基)-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 401 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.13 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-12
Figure 02_image355
4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(噻唑-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.60 (s, 1H), 8.57 (dd, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.68 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-13
Figure 02_image357
4-甲基-2,6-雙(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 401 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.13 (d, 1H), 9.03 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.44 - 7.41 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-14
Figure 02_image359
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 385 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.03 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-15
Figure 02_image361
4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 392 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.56 (d, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.32 (dd, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
E8-16
Figure 02_image363
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 379 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.56 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-17
Figure 02_image365
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 378 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.63 (s, 1H), 8.57-8.55 (m, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.34-7.30 (m, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-18
Figure 02_image367
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 414(M+1)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.63 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.06 (t, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.70 (d, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-19
Figure 02_image369
2-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-(噻唑-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 431(M+1)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.60 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.10-5.97 (m, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.70 (d, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-20
Figure 02_image371
2-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 428(M+1) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.49 (s, 1H), 7.62 - 7.58 (m, 2H), 6.07-6.03 (m, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.70 (d, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
E8-21
Figure 02_image373
6-((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 415(M+1)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14.77 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.05 (t, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.70 (d, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-22
Figure 02_image375
6-((2-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 416 (M+H)+。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.13 (d, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.03 (br s, 2H), 6.22 (s, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-23
Figure 02_image377
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 382 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
E8-24
Figure 02_image379
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 368 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.73 (s, 1H), 12.64 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-25
Figure 02_image381
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 384.0 (M+H)+。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.62 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-26
Figure 02_image383
6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-2-((2-(羥甲基)噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: 440.0 [M+H] +。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.55 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 1H), 6.29 (d, 1H), 6.13-6.07 (m, 2H), 5.92 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.70 (d, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-27
Figure 02_image385
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((2-胺基-5-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: 418 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.53 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.27 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-28
Figure 02_image387
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((5-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: 403 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.70 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.60 (d, 2H), 4.25 (s, 3H)。
E8-29
Figure 02_image389
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-(乙氧基(噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: 429 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.09 (d, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.54 - 5.34 (m, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.76 - 3.61 (m, 2H), 1.20 (q, 3H)。   
E8-30
Figure 02_image391
4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 398 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.12 (d, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
E8-31
Figure 02_image393
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-6-((2-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 400 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.50 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.90 (s, 2H), 6.18 (s, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.63 (s, 2H) 4.26 (s, 3H)。   
E8-32
Figure 02_image395
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((5-氯噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 419 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.09 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。   
E8-33
Figure 02_image397
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((5-氯噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 418 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.09 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-34
Figure 02_image399
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS m/z 386.0 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14.82 (s, 1H), 12.82 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.31 (s, 3H)
E8-35
Figure 02_image401
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((5-溴噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 462 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.64(s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.33(s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.26(s, 3H)。   
E8-36
Figure 02_image403
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 394 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.25-6.05 (m, 2H), 5.75 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-37
Figure 02_image405
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((2-胺基-5-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: m/z 417 (M+H) +。 1H NMR DMSO-d6 400MHz δ 12.65 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.12 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.26 (s, 5H)。   
E8-38
Figure 02_image407
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((5-氟噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 402 (M+H) +。 1H NMR DMSO-d6 400MHz δ12.70 (s, 1H), 8.70 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.60 (d, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E8-39
Figure 02_image409
4-甲基-2,6-雙(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 389 (M+H) +。 1H NMR DMSO-d6 400MHz δ 8.61 - 8.54 (m, 2H), 8.51 - 8.46 (m, 1H), 7.82 (td, 1H), 7.73 (td, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.34 (ddd, 1H), 7.27 (dd, 1H), 7.14 (d, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.26 (s, 3H) 。
E8-40
Figure 02_image411
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.13 (d, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E8-41
Figure 02_image413
2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 381 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.77 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。   
E8-42
Figure 02_image415
2-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 407 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.48 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.35 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。   
E8-43
Figure 02_image417
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 382 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 14.70 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.81 (s, 3H)。
E8-44
Figure 02_image419
4-甲基-2,6-雙((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.48 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。   
E8-45
Figure 02_image421
2,6-雙((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 403 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.02-12.57 (m, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.6-7.8 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
E8-46
Figure 02_image423
6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.13 (d, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.25 (t, 1H), 6.29 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-47
Figure 02_image425
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 12.62 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
E8-48
Figure 02_image427
6-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-((5-甲基噻唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 399 (M+H)+。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.95 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 2.55 (s, 3H)。
E8-49
Figure 02_image429
6-((1H-吡唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 381 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.64 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.82 (s, 2H)。
E8-50
Figure 02_image431
6-((1H-吡唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-((5-甲基噻唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 398 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.63 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.26 (s, 3H) 2.50 (s, 3H與DMSO-d6重疊)。
E8-51
Figure 02_image433
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 399 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.83 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.81 (s, 3H)。   
E8-52
Figure 02_image435
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((3-氟-6-(甲胺基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 425 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.68 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (t, 1H), 6.62 (d, 1H), 6.46 (dd, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 2.83 (d, 3H)
E8-53
Figure 02_image437
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((6-胺基-3-氟吡啶-2-基)甲基) -4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 411 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 12.64 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.36 (t, 1H), 6.41 (dd, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.96 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.44 (d, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-54
Figure 02_image439
6-((2-胺基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.52 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.40-7.25 (m, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.17 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-55
Figure 02_image441
4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(噻唑-4-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 9.09 (d, 1H), 8.63 (m, 1H),  8.59 (s, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.57 (d 1H), 7.51 (s, 1H), 7.39 (dd, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.32 (s, 3H)
E8-56
Figure 02_image443
2,6-雙((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 369 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.53 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.74 (s 1H), 5.43 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-57
Figure 02_image445
6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 404 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.57 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.51 (d 1H), 7.33 (dd, 1H), 7.27-7.22 (m, 1H), 6.29 (d 1H), 6.07 (d 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H),4.68 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-58
Figure 02_image447
2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-6-((6-胺基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.55 (s, 1H), 7.90  (s, 1H), 7.26 (dd 1H), 6.30 (d, 1H), 6.07 (d 1H), 5.91 (s, 2H), 5.19 (s, 2H),4.64 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)
E8-59
Figure 02_image449
6-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 396 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 12.60 (s, 1H), 8.57 (s, 1H),  8.55 (s, 1H), 7.90-7.80  (m, 1H), 7.68  (s, 1H), 7.49 (d 1H), 7.31 (dd, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.24 (s, 3H)
E8-60
Figure 02_image451
6-((4-氯-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LC-MS: m/z 412 (M+H) +。 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 13.00 (s, 1H), 8.67 (d, 1H),  8.46 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.82  (dd, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.33 (dd, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H
E8-61
Figure 02_image453
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((2-溴-5-甲氧基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 492 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.64 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.99 (s, 3H)。   
E8-62
Figure 02_image455
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((5-甲氧基噻唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 414 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.63 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.97 (s, 3H)。   
E8-63
Figure 02_image457
3-((2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸 		LC-MS: m/z 425 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.12 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.59 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 3.81 (s, 3H)。   
E8-64
Figure 02_image459
6-((4-氯-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 419 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.28-12.57 (m, 2H), 8.49 (s, 1H), 7.90-7.50 (m, 2H), 5.34 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E8-65
Figure 02_image461
3-((2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-吡唑-4-甲醯胺 		LC-MS: m/z 428 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.89-12.76 (m, 2H), 8.49 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E8-66
Figure 02_image463
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 426 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.08 (dd, 1H), 7.92 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.90 (dd, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.92 (s, 3H)。   
E8-67
Figure 02_image465
2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 412 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.78 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.08 (dd, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E8-68
Figure 02_image467
3-((2-((4-氟-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6(5H)-基)甲基)-1H-吡唑-4-甲腈 		LC-MS: m/z 410 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.63 (s, 1H), 12.81 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。   
E8-69
Figure 02_image469
N-(5-氟-6-((4-甲基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基)-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)吡啶-2-基)乙醯胺 		LC-MS: m/z 467 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: δ10.35 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.70 (dd, 2H), 7.45 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 2.01 (s, 3H)   
E8-70
Figure 02_image471
4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.85 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.38 (s, 3H), 3.77 (s, 3H)。   
實例 9. 合成化合物 E9-vi 及 E9-vii 流程 E9
Figure 02_image473
化合物E9-iv可藉由兩種方法合成，亦即流程9中之(i)及(ii)。對於方法(i)，化合物E9-ii可經由如實例7或實例8中所示之烷基化反應由化合物E9-i合成。如本文所用，X a為離去基。化合物E9-ii與LiHMDS及DMF之甲醯化反應提供中間物E9-iii。E9-iii與還原劑(例如NaBH 4)反應，得到化合物E9-iv。或者，在方法(ii)中，化合物E9-i之鹵化作用產生化合物E9-ix。化合物E9-ix經歷施蒂勒反應、臭氧分解及還原，得到化合物E9-x。化合物E9-x可用E9-viii烷基化，得到化合物E9-iv。在流程9 (iii)中，化合物E9-iv經歷鹵化，得到中間物E9-v (X b為鹵素，諸如Cl或Br)。金屬(例如Pd或Cu)催化之E9-v與有機錫、硼、鋅或鎂之偶合提供化合物E9-vi。如本文所用，M為有機金屬錯合物(例如有機硼錯合物，諸如
Figure 111135803-A0304-1
酸或頻哪醇硼錯合物；有機錫錯合物，諸如-Sn(Bu t ) 3；有機鋅錯合物，諸如-Zn(鹵素))；化合物E9-v亦可與一些親核試劑(諸如雜環中之氮)反應，得到產物E9-vii。如本文所用，Ar 1及Ar 2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員雜芳基，X a為離去基(例如Br、I、OMs或OTs)；且X b為鹵素。
實例 9A. 合成 6-((1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 噻唑 -4- 基甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image475
步驟 A. 合成 4- 甲基 -5- 側氧基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-5,6- 二氫 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -2- 甲醛 . 在-78℃下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(2.6 g，5.57 mmol，1 eq)於無水THF (30 mL)中之混合物中添加LiHMDS (1 M，11.14 mL，2.0 eq)。將混合物在-78℃下攪拌2小時。隨後將DMF (2.04 g，27.86 mmol，2.14 mL，5.0 eq)逐滴添加至上述混合物中。將混合物在-78℃下攪拌2小時。TLC (PE:EA=2:1，UV=254 nm)顯示形成一個主要的新斑點。將混合物倒入冷的飽和NH 4Cl (20 mL)中。隨後將混合物升溫至室溫。用EtOAc (40 mL × 3)萃取混合物。有機層用水(20 mL × 3)洗滌且真空濃縮，得到所需產物(2.6 g，粗物質)。LCMS: m/z 495.2 [M+H] +
步驟 B. 合成 2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .向粗物質4-甲基-5-側氧基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-甲醛(1.0 g，2.02 mmol，1 eq)於THF (10 mL)及MeOH (10 mL)中之混合物中添加NaBH 4(152.97 mg，4.04 mmol，2 eq)。將混合物在30℃下攪拌14小時。TLC (DCM:MeOH=10:1，UV=254 nm)顯示起始物質完全消耗且形成一個主要的新斑點。藉由添加水(20 mL)淬滅反應物且用EtOAc (30 mL × 3)萃取。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機層。真空濃縮有機相。藉由急驟矽膠層析(ISCO®；40 g SepaFlash®矽膠急驟管柱，30 mL/min之0~5% MeOH/DCM溶離劑)純化殘餘物。真空濃縮溶離劑，得到所需產物(382 mg)。LCMS: m/z 497.1 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm  8.61 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.36 (t, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.68 (s, 2H), 4.89 (d, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.50 (t, 2H), 0.78 (t, 2H), -0.12 (s, 9H)。
步驟 C. 合成 2-( 氯甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .向2-(羥甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(150.0 mg，302.02 umol，1 eq)及Et 3N (61.12 mg，604.04 umol，84.08 uL，2.0 eq)於DCM (5 mL)中之混合物中添加4-甲基苯磺醯氯(75.0 mg，393.40 umol，1.30 eq)。將混合物在30℃下攪拌5小時。TLC (PE:EA=4:1，UV=254 nm)顯示起始物質完全消耗。將水(10 mL)及DCM (20 mL)添加至混合物中。真空濃縮有機層，得到黃色膠狀物(0.1 g)。藉由急驟矽膠層析(ISCO®；4 g SepaFlash®矽膠急驟管柱，30 mL/min之0~20%乙酸乙酯/石油醚梯度溶離劑)純化殘餘物。真空濃縮所需溶離份，得到所需產物(40.0 mg，76.88 umol,)。LCMS: m/z 515.1 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ ppm  8.27 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (dd, 1 H), 7.25 (s, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.40 (s, 3H), 3.50-3.57 (m, 2H), 0.84-0.90 (m, 2H),  -0.09 to -0.06 (m, 9H)。
步驟 D. 合成 4- 甲基 -2-( 噻唑 -4- 基甲基 )-6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 .向2-(氯甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg，0.97 mmol)及4-(三丁基錫烷基)噻唑(114 mg，2.91 mmol)於甲苯(4 mL)中之溶液中添加Pd(PPh 3) 4(402 mg，2.91 mmol)。隨後混合物在MW反應器中在N 2下在120℃下加熱30分鐘。將溶液倒入水中且用EtOAc萃取，經無水Na 2SO 4乾燥。減壓濃縮有機層。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 50 %乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(30 mg)。LCMS: 564 (M+H) +。
步驟 E. 合成 6-((1H- 吲唑 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-( 噻唑 -4- 基甲基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 . 在室溫下在N 2下，向化合物E9-4 (30 mg，0.05 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中添加TFA (3 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。減壓濃縮混合物。藉由製備型HPLC (C18，0 ~ 90 %乙腈/H 2O + 0.1%甲酸)純化殘餘物，得到所需產物(3.9 mg)。LCMS: 434 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.12 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)。
實例9B. 合成4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮
Figure 02_image477
步驟 A. 合成 2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -6-( 吡啶 -3- 基甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮在-78℃下，向4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(640 mg，2.15 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中添加LiHMDS (4.3 mL，1 M於THF中)。30分鐘後，將無水DMF (0.84 mL，10.8 mmol)添加至混合物中。在起始物質完全消耗後，添加NaBH 4(164 mg，4.3 mmol)於EtOH (4 mL)中之混合物且攪拌5分鐘。隨後將混合物倒入飽和NH 4Cl中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0~5% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到2-(羥甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(220 mg)。LC-MS (ESI): m/z 328 (M+H) +。
步驟 B. 合成 2-( 氯甲基 )-4- 甲基 -6-( 吡啶 -3- 基甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮向2-(羥甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(100 mg，0.31 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中添加Et 3N (0.43 mL，3.1 mmol)及MsCl (0.12 mL，1.5 mmol)。將反應物在室溫下攪拌6小時。隨後混合物用飽和NH 4Cl (aq.)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0~50 % EtOAc/PE)純化殘餘物，得到65 mg 2-(氯甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 346 (M+H) +。
步驟 C. 合成 4- 甲基 -2-( 吡啶 -2- 基甲基 )-6-( 吡啶 -3- 基甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮在氮氣下，向2-(氯甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(50 mg，0.14 mmol)及2-(三丁基錫烷基)吡啶(0.14 mL，0.43 mmol)於甲苯(3 mL)中之混合物中添加Pd(PPh 3) 4(17 mg，0.014 mmol)。在100℃下攪拌反應混合物隔夜。隨後冷卻混合物，減壓濃縮且藉由製備型TLC (溶離劑：10% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到2 mg 4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 389 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (m, 3H), 8.48 (dd, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.25 (s, 3H)。
實例 9C. 合成 2-((1H-1,2,4- 三唑 -1- 基 ) 甲基 )-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮及 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((4H-1,2,4- 三唑 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image479
步驟 A. 合成 1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 甲醛 .在-40℃下，向1H-吡唑-3-甲醛(10.0 g，104.07 mmol，1 eq)及DIPEA (33.63 g，260.18 mmol，45.32 mL，2.5 eq)於DCM (500 mL)中之懸浮液中逐滴添加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基-矽烷(26.03 g，156.11 mmol，27.63 mL，1.5 eq)。隨後將反應混合物升溫至室溫且攪拌16小時。TLC (石油醚:EtOAc = 5:1)顯示起始物質完全消耗，且形成兩個新的斑點。真空濃縮反應混合物。將殘餘物與另2批次(各10.0 g)合併且藉由Combiflash (100%石油醚至40% EtOAc/石油醚)純化，得到所需產物60.0 g。(注意：比率~5/4之2種區位異構體之混合物)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ ppm 10.06 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.56 (s,  2H), 3.61-3.67 (m, 4H), 0.91-1.01 (m, 4H), -0.09-0.05 (m, 18H)。
步驟 B. 合成 (1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲醇 .在0℃下，向1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲醛(30 g，132.54 mmol，1 eq，比率~5/4之2種區位異構體之混合物)於THF (200 mL)/MeOH (100 mL)中之溶液中逐份添加NaBH 4(7.52 g，198.81 mmol，1.50 eq)，將反應混合物在0℃至室溫下攪拌18小時。TLC (石油醚:EtOAc = 2:1)顯示起始物質完全消耗，且形成兩個新的斑點。真空濃縮溶劑。藉由Combiflash (100%石油醚至100%EtOAc)純化殘餘物，得到25 g所需產物。(注意：比率~3/2之2種區位異構體之混合物)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ ppm  7.55 (d, 1H), 7.47 (brs, 1H), 6.36 (d, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.74-4.76 (m, 4H), 3.55-3.60 (m, 4H), 0.85-0.96 (m, 4H), 0.00-0.06 (m, 18H)。
步驟 C. 合成 3-( 溴甲基 )-1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 .在0℃下，向(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(23 g，100.72 mmol，1 eq，比率~3/2之2種區位異構體之混合物)及PPh 3(36.98 g，141.00 mmol，1.4 eq)於DCM (200 mL)中之溶液中添加CBr 4(46.76 g，141.00 mmol，1.4 eq)，且將反應混合物在0℃下攪拌3小時。TLC (石油醚:EtOAc = 5:1)顯示起始物質完全消耗，且形成新的斑點。真空濃縮反應混合物。殘餘物與另一批次(2.0 g)合併且藉由Combiflash (100%石油醚至50% EtOAc/石油醚)純化，得到所需產物22.0 g (75.53 mmol)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ ppm 7.51 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.52-3.57 (m, 2H), 0.86-0.96 (m, 2H), -0.03-0.02 (m, 9H)。
步驟 D. 合成 4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在N 2下，將4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(1.0 g，4.85 mmol，1 eq)、3-(溴甲基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(2.12 g，7.27 mmol，1.5 eq)、K 3PO 4(2.57 g，12.12 mmol，2.5 eq)及NaI (218.05 mg，1.45 mmol，0.3 eq)於DMF (15 mL)中之懸浮液在60℃下攪拌18小時。TLC (石油醚:EtOAc = 1:1)顯示起始物質完全消耗，且形成新的斑點。將反應混合物與另外3批次(各1.0 g)合併且倒入冰水(250 mL)中。用EtOAc (150 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用水(120 mL × 2)、鹽水(120 mL)洗滌，且經Na 2SO 4乾燥。真空濃縮溶劑。藉由combiflash (100%石油醚至80% EtOA/石油醚)純化粗產物，得到所需產物(3.6 g)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ ppm 8.91 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.40 (m, 2H), 4.45 (s, 3 H), 3.52-3.58 (m, 2H), 0.85-0.90 (m, 2H), -0.05 (s, 9H)。
步驟 E. 合成 4- 甲基 -5- 側氧基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-5,6- 二氫 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -2- 甲醛 .在氬氣下，在-78℃下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(1.7 g，4.09 mmol，1 eq)於THF (30 mL)中之溶液中緩慢添加LiHMDS (1.0 M，8.18 mL，2 eq)，將反應混合物在-70℃下攪拌1小時。隨後將DMF (1.49 g，20.45 mmol，1.57 mL，5 eq)於THF (3 mL)中之溶液逐滴添加至混合物中。將所得混合物在-70℃下攪拌1小時。TLC (石油醚:EtOAc = 1:1)顯示形成新的斑點。在0℃下，將反應混合物逐滴添加至NH 4Cl水溶液(50 mL)中，隨後用EtOAc (30 mL × 3)萃取混合物。合併之有機層用鹽水(40 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥。真空移除溶劑，得到粗製所需產物(1.8 g)，其未經進一步純化即用於下一步驟。
步驟 F. 合成 2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮. 在0℃下，向4-甲基-5-側氧基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-甲醛(1.8 g，3.24 mmol，1 eq)於THF (20 mL) MeOH (10 mL)中之溶液中添加NaBH 4(245.08 mg，6.48 mmol，2 eq)，且在室溫下攪拌反應混合物18小時。TLC (石油醚:EtOAc = 1:2)顯示起始物質完全消耗，且形成新的斑點。真空濃縮反應混合物，藉由combiflash (100% DCM至5% MeOH/DCM)純化殘餘物。獲得所需產物(1.1 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm  8.63 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 6.44 (t, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.40-5.42 (m, 4H), 4.98 (d, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.55-3.61 (m, 2H), 0.86-0.91 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。
步驟 G. 合成甲磺酸 (4- 甲基 -5- 側氧基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-5,6- 二氫 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -2- 基 ) 甲酯. 在0℃下，向2-(羥甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(700 mg，1.57 mmol，1 eq)及Et 3N (317.21 mg，3.13 mmol，436.33 uL，2.0 eq)於DCM (15 mL)中之溶液中逐滴添加MsCl (269.32 mg，2.35 mmol，181.97 uL，1.5 eq)，且在室溫下攪拌反應混合物1小時。TLC (石油醚:EtOAc = 1:1)顯示起始物質完全消耗，且形成新的斑點。將反應混合物用EtOAc (80 mL)稀釋，用水(30 mL × 4)、鹽水(40 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥。真空移除溶劑，得到粗產物(700 mg)。LCMS: (m/z 525.5(M+H)。
步驟 H. 合成 2-((1H-1,2,4- 三唑 -1- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮及 2-((4H-1,2,4- 三唑 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在N 2下，將甲磺酸(4-甲基-5-側氧基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-基)甲酯(150 mg，285.88 umol，1 eq)、1H-1,2,4-三唑(197.45 mg，2.86 mmol，10 eq)及CsF (86.85 mg，571.77 umol，21.08 uL，2 eq)於MeCN (8 mL)中之混合物在60℃下攪拌18小時。LCMS顯示起始物質完全消耗且形成兩個新的峰。真空濃縮反應混合物，且藉由Combiflash (100% DCM至8% MeOH/DCM)純化殘餘物。獲得產物2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(55 mg)及2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(30 mg)。
步驟 I. 合成 2-((1H-1,2,4- 三唑 -1- 基 ) 甲基 )-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮. 向2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(55 mg，110.52 umol，1 eq)及HCl/二噁烷(4 M，1 mL，36.19 eq)於DCM (3 mL)中之懸浮液中添加H 2O (1.99 mg，110.52 umol，0.05 mL，1 eq)，且在室溫下攪拌反應混合物18小時。LCMS顯示起始物質完全消耗，且發現84%的所需產物。真空濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(24.1 mg，65.60 umol，59.35%產率)。管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um，移動相：[水(0.225%FA)-ACN]；B%：13%-43%，11.2min。LCMS: m/z 367.9(M+H) +  1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.72 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.52 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.30 (s, 3H)。
步驟 J. 合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-((4H-1,2,4- 三唑 -4- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .向2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(30 mg，60.28 umol，1 eq)及HCl/二噁烷(4 M，1 mL，66.35 eq)於DCM (3 mL)中之懸浮液中添加H 2O (50.00 mg，2.78 mmol，0.05 mL，46.04 eq)，且在室溫下攪拌反應混合物18小時。LCMS顯示起始物質完全消耗，且發現所需產物。真空濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(2.1 mg，5.72 umol)。管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um；移動相：[水(0.225% FA)-ACN]；B%：13%-43%，11.2min。LCMS: m/z 368.0(M+H) +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.74 (s, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.31 (s, 3H)。
根據流程E9及實例9A-9B之程序，使用適當起始物質合成以下化合物。必要時可使用標準保護及去保護。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E9-13
Figure 02_image481
2-((1H-吡唑-1-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 367.0 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.59 (brs, 1H), 6.43 (t, 1H), 6.29 (brs, 1H), 5.85 (s, 2H), 5.48 (s, 2H), 4.37 (s, 3H)。
E9-14
Figure 02_image483
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-((2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 383.0 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.41 (s, 1H), 7.55-7.57 (m, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.51 (d, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.37 (s, 3H)。
E9-15
Figure 02_image485
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-((3-硝基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4,6-二氫-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5-酮 		LCMS: m/z 412.0 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 12.61 (brs, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 7.58 (brs, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.08 (d, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.30 (brs, 2H), 4.24 (s, 3H)。
E9-16
Figure 02_image487
6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((3-胺基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 382.0 [M+H] + 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.35 (s, 1H), 7.53 (d, 2H), 6.26 (brs, 1H), 5.71 (d, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.33 (s, 3H)。   
E9-17
Figure 02_image489
2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 366.9 [M+H] +。 1HNMR(400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.36 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.54 (brs, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.72 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.33 (s, 3H)。
E9-18
Figure 02_image491
2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LCMS: m/z 368 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 8.53 (brs, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.58 (brs, 1H), 6.17 (s, 2H), 6.07 (brs, 1H), 5.29 (brs, 2H), 4.23 (s, 3H)。   
E9-19
Figure 02_image493
N-(6-((2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-5-氟吡啶-2-基)乙醯胺 		LC-MS: m/z 453 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.36 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.07-7.84 (m, 2H), 7.70 (t, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.01 (s, 3H)   
實例9D 合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮
Figure 02_image495
步驟 A.合成 2- 氯 -4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮在-65℃下，向4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(3 g，14.5 mmol)於無水THF (80 mL)中之混合物中逐滴添加LiHMDS (30.5 mL)。在攪拌1小時後，添加六氯乙烷(1.8 mL，16 mmol)於無水THF (20 mL)中之溶液。反應混合物經3小時升溫至-20℃。隨後將混合物用飽和NH 4Cl淬滅且在室溫下攪拌20分鐘。藉由過濾收集沈澱物且用EtOAc洗滌，得到3.5 g 2-氯-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 241 (M+H) +。
步驟 B.合成4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 在氮氣下，向2-氯-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(1.5 g，6.2 mmol)及三丁基(乙烯基)錫烷(5.5 mL，18.7 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物中添加Pd(PPh 3) 4(0.36 g，0.31 mmol)。將反應混合物在100℃下攪拌2小時。隨後冷卻混合物且用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 10% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到1.4 g 4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 233 (M+H) +。
步驟 C.合成 4- 甲基 -5- 側氧基 -5,6- 二氫 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -2- 甲醛在-60℃下，用O 3淨化4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(500 mg，2.15 mmol)於DCM/MeCN (500 mL，1:1體積)中之混合物20分鐘。隨後反應物用二甲基碸淬滅且濃縮，得到500 mg 4-甲基-5-側氧基-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-甲醛。LC-MS (ESI): m/z 235 (M+H) +。
步驟 D.合成 2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮在0℃下，向4-甲基-5-側氧基-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-甲醛(500 mg，2.13 mmol)於EtOH (3 mL)中之混合物中添加NaBH 4(81 mg，2.13 mmol)。將反應物在室溫下攪拌5分鐘。隨後將混合物倒入飽和NH 4Cl中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 8% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到120 mg 2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 237 (M+H) +。
步驟 E.合成 6-((2- 氯嘧啶 -4- 基 ) 甲基 )-2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮向2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(200 mg，0.85 mmol)於DMF (8 mL)中之混合物中添加K 2CO 3(351 mg，2.54 mmol)。在60℃下攪拌30分鐘後，添加2-氯-4-(氯甲基)嘧啶(276 mg，1.7 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液。將反應混合物再攪拌4小時，倒入飽和NH 4Cl中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 8% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到160 mg 6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 363 (M+H) +。
步驟 F.合成 6-((2-( 雙 (2,4- 二甲氧基苯甲基 ) 胺基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 甲基 )-2-( 羥甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮向6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(160 mg，0.44 mmol)於MeCN (5 mL)中之混合物中添加雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺(280 mg，0.88 mmol)及AcOH (1滴)。將反應混合物在80℃下攪拌隔夜。蒸發反應混合物且藉由製備型TLC (溶離劑：5% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到75 mg 6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 644 (M+H) +。
步驟 G.合成 6-((2-( 雙 (2,4- 二甲氧基苯甲基 ) 胺基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 甲基 )-2-( 氯甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮在0℃下，向6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(羥甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(75 mg，0.12 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加Et 3N (0.16 mL，1.16 mmol)及MsCl (0.05 mL，0.58 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DCM稀釋，用飽和NH 4Cl及鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮，得到70 mg粗產物6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(氯甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 662 (M+H) +。
步驟 H.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮  將4H-1,2,4-三唑(39 mg，0.57 mmol)及K 2CO 3(78 mg，0.57 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物在60℃下攪拌30分鐘。添加6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(氯甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(75 mg，0.11 mmol)且再攪拌30分鐘。將懸浮液倒入飽和NH 4Cl中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0 ~ 10% DCM/MeOH)純化殘餘物，得到60 mg 2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 695 (M+H) +。
步驟 I .合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮  向2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(雙(2,4-二甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(30 mg，0.043 mmol)於EtOH (2 mL)中之混合物中添加HCl (0.5 mL，4 M於二噁烷中)。將反應混合物在80℃下攪拌隔夜。隨後冷卻混合物且倒入飽和NaHCO 3中，用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到8 mg 2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.12-8.10 (m, 2H), 6.60 (s, 2H), 6.19 (d, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。
化合物編號 結構及化學名稱 表徵
E9-31
Figure 02_image497
2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-6-((2-胺基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 394 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.62 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.61 (s, 2H), 6.18 (d, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
E9-32
Figure 02_image499
2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((5-側氧基-4,5-二氫-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮 		LC-MS: m/z 385 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.32-11.28 (m, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 4.26 (s, 3H)。   
實例 10. 合成化合物 E10-ii流程E10
Figure 02_image501
E10-i與LiHMDS及醛反應產生化合物E10-ii，其可用對掌性HPLC或SFC分離，得到兩種對映異構體。如本文所用，Ar 1及Ar 2各自獨立地為視情況經取代之5員或6員單環雜芳基。
實例 10A. 合成 (R)-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 羥基 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮及 (S)-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 羥基 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮
Figure 02_image503
步驟 A. 合成 2-( 羥基 (1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -6-((1-((2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .在氬氣下，在-78℃下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(0.5 g，1.20 mmol，1 eq)於THF (10 mL)中之溶液中緩慢添加LiHMDS (1.0 M，2.41 mL，2 eq)，且將反應混合物在-70℃下攪拌1小時。隨後將1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吡唑-3-甲醛(816.97 mg，3.61 mmol，3 eq)於THF (1 mL)中之溶液添加至反應混合物中。將所得混合物在-70℃下攪拌1小時。TLC (石油醚:EtOAc = 1:1)顯示形成兩個新的斑點。反應混合物在-70℃下藉由NH 4Cl水溶液(5 mL)淬滅，且隨後升溫至室溫。混合物用水(10 mL)稀釋，用EtOAc (8 mL × 3)萃取。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌且經Na 2SO 4乾燥。真空濃縮溶劑。藉由Combiflash (100%石油醚至100% EtOAc)純化殘餘物，得到呈淺棕色膠狀之粗產物(130 mg)，其未經進一步純化即用於下一步驟。LCMS: m/z 643.2 [M+H] +
步驟 B. 合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 羥基 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .向2-(羥基(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮(0.13 g，202.20 umol，1 eq)於DCM (8 mL)中之溶液中添加TFA (4.62 g，40.52 mmol，3 mL，200.38 eq)，接著添加H 2O (500.00 mg，27.75 mmol，0.5 mL，137.26 eq)，隨後在室溫下攪拌反應混合物18小時，接著加熱至40℃持續18小時。LCMS顯示起始物質完全消耗。真空濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到所需產物(20.5 mg)。LCMS: m/z 382.9 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 12.72 (brs, 1H), 12.61 (brs, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.56-7.62 (m, 2H), 6.82 (brs, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.99-6.09 (m, 2H), 5.24-5.32 (m, 2H), 4.19 (s, 3H)。
步驟 C. 合成 (R)-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 羥基 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮及 (S)-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 羥基 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5(6H)- 酮 .藉由SFC分離化合物6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羥基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-5(6H)-酮。SFC條件：管柱為DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250mm*30mm，5um)；移動相：A：55% CO2；B：45% [含0.1% NH 3H 2O之EtOH]/min。SFC分離得到2-[(R)-羥基(1H-吡唑-3-基)甲基]-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基甲基)噻唑并[3,4]吡咯并[1,3-d]噠嗪-5-酮及2-[(S)-羥基(1H-吡唑-3-基)甲基]-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基甲基)噻唑并[3,4]吡咯并[1,3-d]噠嗪-5-酮。一種異構體(4.4 mg)：LCMS: m/z 383 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (brs, 1H), 7.55 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.25 (brs, 1H), 6.18 (brs, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H)。另一種異構體(4.1 mg)：LCMS: m/z 383 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.59 (brs, 1H), 7.54 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.26 (brs, 1 H), 6.19 (brs, 1 H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H)。
實例 10B ：合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 二氟 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image505
步驟 A. 3-(6-((1-(N,N- 二甲基胺磺醯基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -5- 側氧基 -5,6- 二氫 -4H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -2- 羰基 )-N,N- 二甲基 -1H- 吡唑 -1- 磺醯胺 .向3-((2-((1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)(羥基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(50 mg，83.80 umol，類似於E10-1製得)於DCM (1.5 mL)中之混合物中添加MnO 2(72.85 mg，838.00 umol)，且將混合物在15℃下攪拌1.5小時。過濾反應混合物且減壓濃縮，得到粗產物(60 mg，粗物質)。LCMS: m/z 595.1 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.49 (s, 3H), 3.10 (s, 6H) 2.93 (s, 6H)。
步驟 B. 3-((2-((1-(N,N- 二甲基胺磺醯基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ) 二氟甲基 )-4- 甲基 -5- 側氧基 -4,5- 二氫 -6H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6- 基 ) 甲基 )-N,N- 二甲基 -1H- 吡唑 -1- 磺醯胺 .向3-(6-((1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(240 mg，403.60 umol)於DCE (4 mL)中之溶液中添加BAST (1.34 g，6.05 mmol，1.33 mL)，且將混合物在50℃下攪拌12小時。反應混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋且用飽和NaHCO 3(10 mL *2)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到粗產物(300 mg，粗物質)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS: m/z 617.1 (M+H) +。
步驟 C. 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-2-( 二氟 (1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 .向3-((2-((1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)二氟甲基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(240 mg，163.47 umol)於DCM (2 mL)中之混合物中添加TFA (2.07 g，18.15 mmol，1.34 mL)，且將混合物升溫至50℃持續5小時。減壓濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC (管柱：Agela ASB 150*25mm*5um；移動相：[水(0.05%HCl)-ACN]；B%：30%-60%，8 min)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之所需產物(3.9 mg，5.45%產率，92%純度)。LCMS: m/z 403.1 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.67 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.28 (s, 3H)。
實例 10C ：合成 2-(1-(1H- 吡唑 -3- 基 ) 乙基 )-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image507
步驟 A ： 3-((2-(1-(1-(N,N- 二甲基胺磺醯基 )-1H- 吡唑 -3- 基 )-1- 羥乙基 )-4- 甲基 -5- 側氧基 -4,5- 二氫 -6H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -6- 基 ) 甲基 )-N,N- 二甲基 -1H- 吡唑 -1- 磺醯胺 .向3-(6-((1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(160 mg，269.07 umol)於THF (3 mL)中之溶液中添加CH 3MgBr (3 M，179.38 uL)，且在0℃下攪拌反應混合物3小時。在0℃下，將反應混合物倒入飽和NH 4Cl (10 mL)中，用乙酸乙酯(20 mL * 3)萃取。合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由急驟矽膠層析(ISCO®；12 g SepaFlash®矽膠急驟管柱，40 mL/min之0~90%乙酸乙酯/石油醚梯度溶離劑)純化殘餘物，得到所需產物(50 mg，81.87 umol)。LCMS: m/z 611.1 (M+H) +。
步驟 B ： 2-(1-(1H- 吡唑 -3- 基 ) 乙基 )-6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮 .在0℃下，向3-((2-(1-(1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)-1-羥乙基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(50 mg，81.87 umol)於DCE (0.5 mL)中之混合物中添加Et3SiH (19.04 mg，163.75 umol，26.15 uL)，隨後添加TFA (1.54 g，13.51 mmol，1 mL，164.96 eq)，且在0℃下攪拌1小時。再將混合物升溫至50℃持續1小時。減壓濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC (管柱：Agela ASB 150*25mm*5um；移動相：[水(0.05%HCl)-ACN]；B%：25%-55%，7 min)純化殘餘物，得到7.0 mg所需產物。LCMS: m/z 381.2 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.46 (s, 1H), 8.15 (d, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.33 (s, 3H), 1.94 (d, 3H)。
實例 10D ：合成 6-((1H- 吡唑 -3- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -2-(1H- 吡唑 -3- 羰基 )-4,6- 二氫 -5H- 噻唑并 [5',4':4,5] 吡咯并 [2,3-d] 噠嗪 -5- 酮
Figure 02_image509
步驟 A. 4- 甲基 -2-(1H- 吡唑 -3- 羰基 )-6-(1H- 吡唑 -3- 基甲基 ) 噻唑并 [3,4] 吡咯并 [1,3-d] 噠嗪 -5- 酮 .向3-(6-((1-(N,N-二甲基胺磺醯基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-側氧基-5,6-二氫-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]噠嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺醯胺(50 mg，84.08 umol)於DCE (1.5 mL)中之溶液中添加TFA (2.31 g，20.26 mmol，1.5 mL)，且將反應混合物升溫至50℃持續12小時。真空濃縮反應混合物。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到6.0 mg所需產物。LCMS: m/z 381.1 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.72 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.38 (s, 3H)。
實例 11 . PKR 突變體分析 程序： 將PKR或PKR突變體酶溶液稀釋至反應混合物中，該反應混合物含有1×緩衝液(100 mM KCl，50 mM Tris pH 7.5，5 mM MgCl 2)以及PEP (濃度視酶而定)、180 µM NADH、0.5單位LDH、1 mM DTT、0.03% BSA；指定1.11倍稀釋後之最終分析濃度。
首先將2 μL測試化合物添加至孔中，且隨後添加180 μL反應混合物。
除ADP之外，組裝反應混合物與測試化合物，且將盤在室溫下儲存60分鐘。
添加20 uL ADP以在室溫下開始反應，且以在室溫下340 nm波長處之吸光度變化量測反應進程。
測試化合物製備： 在100% DMSO中以100×濃度製備測試化合物儲備液(10mM) 進行1至3倍稀釋，獲得11個點(亦即將50 μl第一濃度添加至100 μl 100% DMSO中以產生3.33 mM，將50 μl此濃度添加至100 μl DMSO中以產生1.11 mM，以此類推) • 1至100倍稀釋於分析緩衝液(2 μl於200 μl中)產生100 μM之起始濃度，降低3倍，獲得11個點。 分析緩衝液 ：100 mM KCl，50 mM Tris 7.5，5 mM MgCl 2，1 mM DTT，0.03% BSA 反應混合物 ：PKR突變酶：40-400 ng/孔；ADP：0.2-1.65 mM；PEP：0.1-0.5 mM；NADH：180 μM；LDH：0.5單位(Sigma# 59023)；DTT：1 mM；BSA：0.03%。
實例 12 . PKR WT 單一點百分比活化分析本文所述之化合物用DMSO稀釋且以1 µM濃度測試。酶在酶溶液中稀釋，該酶溶液含有1×緩衝液(100 mM KCl，50 mM Tris pH 7.5，5 mM MgCl 2)以及PEP (濃度視酶而定)、180 µM NADH、0.5單位LDH、1 mM DTT、0.03% BSA；指定1.11倍稀釋後之最終分析濃度。
首先將2 µL化合物溶液添加至孔中，且隨後添加180 µL酶溶液。除ADP之外，組裝分析，且將盤在室溫下儲存60分鐘。添加20 µL ADP以開始分析，且使用OD340評估分析輸出。分析在室溫下進行。
最終濃度：PKR wt (100 ng/孔)，Tris pH 7.5 (50 mM)，KCl (100 mM)，MgCl 2(5 mM)，ADP (0.48 mM)，PEP (0.15 mM)，NADH (180 µM)，LDH (0.5單位，Sigma 59023)，DTT (1 mM)及BSA (0.03%)。
實例 13 . PKR R510Q 單一點百分比活化分析本文所述之化合物用DMSO稀釋且以1 µM濃度測試。酶在酶溶液中稀釋，該酶溶液含有1×緩衝液(100 mM KCl，50 mM Tris pH 7.5，5 mM MgCl 2)以及PEP (濃度視酶而定)、180 µM NADH、0.5單位LDH、1 mM DTT、0.03% BSA；指定1.11倍稀釋後之最終分析濃度。
首先將2 µL化合物溶液添加至孔中，且隨後添加180 µL酶溶液。除ADP之外，組裝分析，且將盤在室溫下儲存60分鐘。添加20 µL ADP以開始分析，且使用OD340評估分析輸出。分析在室溫下進行。
最終濃度：PKR R510Q (40 ng/孔)，Tris pH 7.5 (50 mM)，KCl (100 mM)，MgCl 2(5 mM)，ADP (0.2 mM)，PEP (0.11 mM)，NADH (180 µM)，LDH (0.5單位，Sigma 59023)，DTT (1 mM)及BSA (0.03%)。
實例 14.  PKR R532W 單一點百分比活化分析本文所述之化合物用DMSO稀釋且以1 µM濃度測試。酶在酶溶液中稀釋，該酶溶液含有1×緩衝液(100 mM KCl，50 mM Tris pH 7.5，5 mM MgCl 2)以及PEP (濃度視酶而定)、180 µM NADH、0.5單位LDH、1 mM DTT、0.03% BSA；指定1.11倍稀釋後之最終分析濃度。
首先將2 µL化合物溶液添加至孔中，且隨後添加180 µL酶溶液。除ADP之外，組裝分析，且將盤在室溫下儲存60分鐘。添加20 µL ADP以開始分析，且使用OD340評估分析輸出。分析在室溫下進行。
最終濃度：PKR R532W (100 ng/孔)，Tris pH 7.5 (50 mM)，KCl (100 mM)，MgCl 2(5 mM)，ADP (0.36 mM)，PEP (0.1 mM)，NADH (180 µM)，LDH (0.5單位，Sigma 59023)，DTT (1 mM)及BSA (0.03%)。
實例 15.  PKR T384M 單一點百分比活化分析本文所述之化合物用DMSO稀釋且以1 µM濃度測試。酶在酶溶液中稀釋，該酶溶液含有1×緩衝液(100 mM KCl，50 mM Tris pH 7.5，5 mM MgCl 2)以及PEP (濃度視酶而定)、180 µM NADH、0.5單位LDH、1 mM DTT、0.03% BSA；指定1.11倍稀釋後之最終分析濃度。
首先將2 µL化合物溶液添加至孔中，且隨後添加180 µL酶溶液。除ADP之外，組裝分析，且將盤在室溫下儲存60分鐘。添加20 µL ADP以開始分析，且使用OD340評估分析輸出。分析在室溫下進行。
最終濃度：PKR T384M可溶物(300 ng/孔)，Tris pH 7.5 (50 mM)，KCl (100 mM)，MgCl 2(5 mM)，ADP (0.08 mM)，PEP (0.23 mM)，NADH (180 µM)，LDH (0.5單位，Sigma 59023)，DTT (1 mM)及BSA (0.03%)。
實例 16 . 紅血球 ( RBC ) 純化收集自健康志願者抽取至K 2EDTA管中之新鮮血液。藉由在500 g下旋轉10分鐘使全血集結。在過濾器上方一(1)吋處切斷輸血袋端口的Purecell白血球減少新濾器(Fisher NC0267633)。將10 ml注射器針筒附接至與新濾器附接之剩餘切割管。自全血集結粒移除血漿層，且將集結粒再懸浮於2×體積之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中。將9 ml再懸浮之血球集結粒轉移至製備的10 ml注射器，該注射器附接至新濾器。使全血重力流經過濾器，直至所有流體經由上部管道進入濾片。將柱塞添加至注射器，自夾具移出注射器且倒置過濾器，隨後使空氣通過注射器過濾器系統。使用新的5 ml注射器，藉由注射器端口自袋中移出經過濾之RBC，且將經純化之RBC轉移至已在冰上培育之5 ml彈扣蓋管中。在15℃下以500 g旋轉5 ml彈扣蓋管10分鐘，吸出清液層且以4×10 9個細胞/毫升之密度再懸浮於AGAM (1× PBS，1%葡萄糖，170 mg/L腺嘌呤，5.25 g/L甘露糖醇)中。
實例 17 . 基於細胞之 ATP 分析對於基於細胞之ATP分析，如本文所述之化合物在100% DMSO中製備為10 mM儲備液。在96孔V型底儲存盤中進行連續稀釋(1:4)，且隨後以1:100添加至含有AGAM之96孔V型底盤。將RBC在AGAM培養基中稀釋至1×10 7個細胞/毫升之密度，隨後添加90微升/孔至黑色透明底部分析盤(最終化合物濃度為0.1% DMSO濃度)。使用鋁箔密封件密封分析盤，且在37℃下在潮濕腔室中培育隔夜。使用Cell-Titer-Glo (Promega)讀出ATP水準。
已如此描述若干實施例之若干態樣，應瞭解，熟習此項技術者將容易想到各種改變、修改及改良。此類改變、修改及改良意欲為本發明之一部分，且意欲在本發明之精神及範疇內。因此，前文描述及圖式僅作為實例。
圖1為本發明之例示性化合物之結構的列表。 圖2展示實例1-10中所用之例示性中間物的合成。
Figure 111135803-A0101-11-0002-3

Claims (35)

  1. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物由以下結構式表示：
    Figure 03_image003
    其中： R 1為氫、視情況經取代之C 1 - 10烷基、視情況經取代之C 1 - 8鹵烷基、視情況經取代之C 2 - 10烯基、視情況經取代之C 2 - 10炔基、視情況經取代之C 3 - 14環烷基、視情況經取代之3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基、視情況經取代之C 6 - 14芳基、-OR o1或-C(=O)R c1；其中： R o1為氫或視情況經取代之C 1 - 10烷基； R c1為視情況經取代之C 1 - 10烷基或-N(R cn) 2，其中各R cn獨立地為氫或-C 1 - 6烷基； R 2為視情況經取代之5員或6員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之單環雜芳基； Q為視情況經取代之6員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之單環雜芳基； R a及R b各自獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之C 1 - 10烷基、-OR o3、-N(R n1) 2、-C(=O)N(R n1) 2或-C(=O)R c2；或R a及R b可與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之C 3 - 14環烷基或視情況經取代之3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基；其中： 各R n1獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； R o3為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 R c2為視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 R j及R k各自獨立地為氫、鹵素、-CN、-OR o7、-N(R n5) 2、-N(R n5)C(=O)R c5、-C(=O)N(R n5) 2、-C(=O)R c5、-C(=O)OR o7、-SR js、-S(=O) 2R js、-S(=O)R js或視情況經取代之-C 1-C 6烷基；或R j及R k可與其所連接之碳原子一起形成C=O、視情況經取代之C 1-C 6單環環烷基環或視情況經取代之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之C 3-C 6單環雜環基環；其中： 各R n5獨立地為氫、視情況經取代之-C 1-C 6烷基或-OR o8，其中R o8為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R o7獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R c5獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 各R js獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 6 - 12芳基或視情況經取代之5-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜芳基。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之該5員或6員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之單環雜芳基視情況在各可取代之環碳原子處經R p取代且視情況在各可取代之環氮原子處經R n6取代；其中： 各R p獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之C 1 - 10烷基、視情況經取代之C 2 - 10烯基、視情況經取代之C 2 - 10炔基、視情況經取代之C 3 - 14環烷基、視情況經取代之C 6 - 14芳基、視情況經取代之3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基、視情況經取代之5-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜芳基、-OR o6、-SR s2、-N(R n3) 2、-C(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)C(=O)R c4、-C(=O)R c4、-C(=O)OR o6、-OC(=O)R c4、-S(=O)R s2、-S(=O) 2R s2、-S(=O)OR o6、-OS(=O)R c4、-S(=O) 2OR o6、-OS(=O) 2R c4、-S(=O)N(R n3) 2、-S(=O) 2N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)R s2、-N(R n3)S(=O) 2R s2、-N(R n3)C(=O)OR o6、-OC(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)C(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O) 2N(R n3) 2、-N(R n3)S(=O)OR o6、-N(R n3)S(=O) 2OR o6、-OS(=O)N(R n3) 2或-OS(=O) 2N(R n3) 2；或連接同一或相鄰碳原子之兩個R p可與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之C 3 - 14環烷基或3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基；其中： 各R n3獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R o6獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 各R c4為視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R s2獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 R n6為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基。
  3. 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由R 2表示之該5員或6員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之單環雜芳基係選自以下中之一者：
    Figure 03_image512
    其中： R nc及R nd之各者獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基；及 在價數允許時，p為0、1、2、3或4。
  4. 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中(a)該化合物由以下結構式表示：
    Figure 03_image514
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；或 (b)    該化合物由以下結構式表示：
    Figure 03_image516
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3。
  5. 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中(a)該化合物由以下結構式表示：
    Figure 03_image518
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3；或 (b)    該化合物由以下結構式表示：
    Figure 03_image520
    或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0、1、2或3。
  6. 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中各R p獨立地為氫、鹵素、視情況經取代之C 1 - 4烷基、-CN、-NO 2、-N 3、–OR o6、–N(R n3) 2、–C(=O)N(R n3) 2、–C(=O)R c4或–C(=O)OR o6。
  7. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中由Q表示之該6員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之單環雜芳基係選自以下：
    Figure 03_image522
    ； 其中： 各R n獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO 2、-N 3、視情況經取代之C 1 - 10烷基、視情況經取代之C 2 - 10烯基、視情況經取代之C 2 - 10炔基、視情況經取代之C 3 - 14環烷基、視情況經取代之C 6 - 14芳基、視情況經取代之3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基、視情況經取代之5-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜芳基、-OR o4、-SR s1、-N(R n2) 2、-C(=O)N(R n2) 2、- N(R n2)C(=O)R c3、-C(=O)R c3、-C(=O)OR o4、-OC(=O)R c3、-S(=O)R s1、-S(=O) 2R s1、-S(=O)OR o4、-OS(=O)R c3、-S(=O) 2OR o4、-OS(=O) 2R c3、-S(=O)N(R n2) 2、-S(=O) 2N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)R s1、-N(R n2)S(=O) 2R s1、-N(R n2)C(=O)OR o4、-OC(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)C(=O)N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)N(R n2) 2、- N(R n2)S(=O) 2N(R n2) 2、-N(R n2)S(=O)OR o4、-N(R n2)S(=O) 2OR o4、-OS(=O)N(R n2) 2或-OS(=O) 2N(R n2) 2；或連接同一或相鄰碳原子之兩個R n與其所連接之碳原子一起形成視情況經取代之C 3 - 14環烷基或3-14員之含有1至4個獨立地選自氮、氧及硫的雜原子之雜環基；其中： 各R n2獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R o4獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R c3獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 各R s1獨立地為視情況經取代之-C 1-C 6烷基； 在價數允許時，n為0、1、2或3；及 R na、R nb及R nd中之每一者獨立地為氫或視情況經取代之-C 1-C 6烷基。
  8. 如請求項7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中各R n獨立地為氫、鹵素、視情況經取代之C 1 - 4烷基、-CN、-NO 2、-N 3、-OR o4、-N(R n2) 2、-C(=O)N(R n2) 2、-C(=O)R c3或-C(=O)OR o4。
  9. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1為氫或-C 1-C 4烷基；及/或 其中R j及R k各自為氫；及/或 其中R a及R b各自為氫。
  10. 如請求項4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中q為0或1。
  11. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係選自以下化合物：
    Figure 03_image524
    Figure 03_image526
    Figure 03_image528
    Figure 03_image530
    Figure 03_image532
    Figure 03_image534
    Figure 03_image536
    Figure 03_image538
    Figure 03_image540
    Figure 03_image542
    Figure 03_image544
    Figure 03_image546
    Figure 03_image548
    Figure 03_image550
    Figure 03_image552
    Figure 03_image554
    Figure 03_image556
    Figure 03_image558
    Figure 03_image560
    Figure 03_image562
    Figure 03_image564
    Figure 03_image566
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    Figure 03_image570
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    Figure 03_image574
    Figure 03_image576
    Figure 03_image578
    Figure 03_image580
    Figure 03_image582
    Figure 03_image584
    Figure 03_image586
    Figure 03_image588
    Figure 03_image590
    Figure 03_image592
    Figure 03_image594
    Figure 03_image596
    Figure 03_image598
    Figure 03_image600
    Figure 03_image602
    Figure 03_image604
    Figure 03_image606
    Figure 03_image608
    Figure 03_image610
       
  12. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image554
    。
  13. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image526
    。
  14. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image536
    。
  15. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image540
    。
  16. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image552
    。
  17. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image534
    。
  18. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image556
    。
  19. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image564
    。
  20. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image604
    。
  21. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image606
    。
  22. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image546
    。
  23. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image544
    。
  24. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image548
    。
  25. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image584
    。
  26. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image602
    。
  27. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係由以下結構式表示：
    Figure 03_image608
    。
  28. 一種醫藥組合物，其包含有效量之如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑。
  29. 一種如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項28之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療貧血之藥物。
  30. 如請求項29之用途，其中該貧血為紅血球生成障礙性貧血或溶血性貧血。
  31. 如請求項30之用途，其中該溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。
  32. 一種如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項28之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療鐮狀細胞疾病之藥物。
  33. 一種如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項28之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療丙酮酸激酶缺乏症(PKD)之藥物。
  34. 一種如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項28之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療地中海貧血症之藥物。
  35. 如請求項34之用途，其中該地中海貧血症為β-地中海貧血症。
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