BR112020003262A2 - ativadores da piruvato quinase para uso no tratamento de distúrbios do sangue - Google Patents

ativadores da piruvato quinase para uso no tratamento de distúrbios do sangue Download PDF

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Giovanni Cianchetta
Tao Liu
Anil Kumar Padyana
Zhihua Sui
Zhenwei Cai
DaWei Cui
Jingjing Ji
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Agios Pharmaceuticals, Inc.
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Abstract

  São descritos neste documento compostos que ativam a piruvato quinase, composições farmacêuticas e métodos de uso dos mesmos. Esses compostos são representados pela Fórmula (I): em que R1, R2, Ra, Rb, Rj, Rk e Q são conforme definido neste documento.

Description

Relatório descritivo da patente de invenção para “ATIVADORES DA
PIRUVATO QUINASE PARA USO NO TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS DO SANGUE” REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Provisório US nº 62/673,526 e 62/673,533, ambos depositados em 18 de maio de 2018. Este pedido também reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Internacional nº PCT/CN2017/097496, depositado em 15 de agosto de 2017. Os pedidos de prioridade mencionados acima estão incorporados a este documento por referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS
[002] A deficiência de piruvato quinase (PKD) é uma doença das hemácias causada por uma deficiência da enzima piruvato quinase R (PKR) devido a mutações recessivas do gene PKLR (Wijk et al. Human Mutation, 2008, 30 (3) 446-453). Os ativadores de PKR podem ser benéficos para tratar PKD, talassemia (por exemplo, beta-talessemia), elipocitose hereditária, abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig, doença falciforme, hemoglobinúria paroxística noturna, anemia (por exemplo, anemias congênitas (por exemplo, enzimopatias), anemia hemolítica (por exemplo, anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, anemia hemolítica crônica causada pela deficiência de fosfoglicerato quinase, anemia de doenças crônicas, anemia hemolítica não-esferocítica ou esferocitose hereditária).
SUMÁRIO
[003] São descritos neste documento compostos de Fórmulas (I), (II), (III), (IV) e (V) (coletivamente referidos neste documento como "Formulas (I)-(V)"), que ativam piruvato quinase R (PKR), enzimas do tipo selvagem e/ou mutantes (tais como as descritas neste documento), e sais farmaceuticamente aceitáveis das mesmas.
ME1 33078475v.1
[004] Em uma modalidade, a invenção fornece um composto da Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: (I) em que R1, R2, Ra, Rb, Rj, Rk e Q são conforme definido neste documento.
[005] Em uma modalidade, o composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é selecionado dentre os compostos da Tabela 1 ou Figura
1.
[006] São fornecidas também composições farmacêuticas compreendendo um composto de Fórmulas (I)-(V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[007] A presente divulgação fornece ainda um método de tratamento de anemia em um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a anemia é uma anemia diseritropoética, como anemia diseritropoética congênita tipo I, II, III ou IV.
[008] A presente divulgação fornece ainda um método para tratar doença falciforme em um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente ME1 33078475v.1 aceitável.
[009] A presente divulgação fornece ainda um método para tratar anemia hemolítica (por exemplo, anemia hemolítica crônica causada pela deficiência de fosfoglicerato quinase, Blood Cells Mol Dis, 2011; 46(3):206) em um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia congênita. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é hereditária (por exemplo, anemia hemolítica não-esferocítica ou esferocitose hereditária).
[0010] A presente divulgação fornece ainda um método para tratar a talassemia (por exemplo, beta talassemia), esferocitose hereditária, elipocitose hereditária, abetalipoproteinemia (ou síndrome de Bassen-Kornzweig), hemoglobinúria paroxística noturna, anemia hemolítica adquirida (por exemplo, anemias congênitas (por exemplo, enzimopatias)), doença falciforme ou anemia de doenças crônicas em um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a anemia hemolítica adquirida compreende anemias congênitas. Em certas modalidades, o método fornecido é para tratar a talassemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é beta-talassemia.
[0011] A presente divulgação fornece ainda um método para tratar a deficiência de piruvato quinase (PKD) em um sujeito, o método compreendendo ME1 33078475v.1 administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a PKD é uma deficiência de PKR. Em determinadas modalidades, a deficiência de PKR está associada a uma mutação de piruvato quinase R.
[0012] Compostos e composições farmacêuticas descritos neste documento são ativadores de PKR com atividades mais baixas em comparação com o tipo selvagem, portanto são úteis para métodos da presente divulgação. Em determinadas modalidades, a PKR é do tipo selvagem. Em determinadas modalidades, a PKR é um mutante. Tais mutações na PKR podem afetar a atividade enzimática (eficiência catalítica), propriedades reguladoras (modulação por bisfosfato de frutose (FBP)/ATP) e/ou termoestabilidade da enzima. Exemplos de tais mutações são descritos em Valentini et al, JBC 2002. Alguns exemplos dos mutantes que são ativados pelos compostos descritos neste documento incluem G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486W, R532W, K410E, R510Q e R490W. Sem estar vinculado pela teoria, em determinadas modalidades, os compostos descritos neste documento afetam as atividades de mutantes de PKR mediante ativação de mutantes de PKR não responsivos a FBP, restaurando a termoestabilidade a mutantes com estabilidade reduzida, ou restaurando a eficiência catalítica a mutantes prejudicados. A atividade de ativação dos presentes compostos contra mutantes de PKR pode ser testada seguindo um método descrito nos Exemplos. Em determinadas modalidades, os compostos descritos neste documento também são ativadores da PKR do tipo selvagem.
[0013] Em uma modalidade, a divulgação fornece um método para ativar PKR nas hemácias em um sujeito em necessidade disso compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto divulgado ME1 33078475v.1 neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmacêutica compreendendo um composto divulgado neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a PKR é do tipo selvagem. Em determinadas modalidades, a PKR é um mutante.
[0014] Em uma modalidade, a PKR mutante é selecionada dentre G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q e R490W. Em determinadas modalidades, a PKR mutante é selecionada dentre A468V, A495V, I90N, T408I e Q421K e R498H. Em determinadas modalidades, a PKR mutante é R532W, K410E, ou R510Q.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0015] A Figura 1 é uma listagem das estruturas de outros compostos exemplificativos da invenção.
[0016] A Figura 2 mostra a síntese de intermediários exemplificativos usados nos Exemplos 1-10.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0017] Os detalhes da construção e a disposição dos componentes indicados na descrição a seguir ou ilustrados nas figuras não se destinam a ser limitantes. As modalidades podem ser praticadas ou realizadas de várias maneiras. A fraseologia e a terminologia usadas neste documento são para fins de descrição e não devem ser consideradas como limitantes. Definições
[0018] Os compostos descritos neste documento podem compreender um ou mais centros assimétricos e, assim, podem existir em várias formas estereoisoméricas, por exemplo, enantiômeros e/ou diastereômeros. Por exemplo, os compostos descritos neste documento podem estar na forma de um enantiômero individual, diastereômero ou isômero geométrico, ou podem estar na forma de uma mistura de estereoisômeros, incluindo misturas racêmicas e misturas enriquecidas em um ou mais estereoisômeros. Os isômeros podem ser ME1 33078475v.1 isolados de misturas por métodos conhecidos pelos versados na técnica, incluindo cromatografia líquida de alta pressão quiral (HPLC) e a formação e cristalização de sais quirais; ou isômeros preferenciais podem ser preparados por sínteses assimétricas. Vide, por exemplo, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); e Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).
[0019] Os compostos descritos neste documento também podem ser representados em múltiplas formas tautoméricas, em tais casos, inclui expressamente todas as formas tautoméricas dos compostos descritos neste documento, mesmo que apenas uma única forma tautomérica possa ser representada (por exemplo, a alquilação de um sistema de anel pode resultar na alquilação em múltiplos sítios; todos esses produtos de reação estão expressamente incluídos). Todas essas formas isoméricas de tais compostos estão expressamente incluídas. Se um tautômero de um composto for aromático, este composto é aromático. Da mesma forma, se um tautômero de um substituinte for um heteroaril, este substituinte é heteroaril.
[0020] O termo "alquil” refere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificado com 1 a 10 átomos de carbono ("C1-10 alquil”). Exemplos de grupos C1-6 alquil incluem metil (C1), etil (C2), propil (C3) (por exemplo, n-propil, isopropil), butil (C4) (por exemplo, n-butil, terc-butil, sec- butil, iso-butil), pentil (C5) (por exemplo, n-pentil, 3-pentanil, amil, neopentil, 3- metil-2-butanil, amil terciário) e hexil (C6) (por exemplo, n-hexil). Salvo especificação em contrário, cada caso de um grupo alquil é independentemente não substituído (um "alquil não substituído") ou substituído (um "alquil substituído") por um ou mais substituintes (por exemplo, halogênio, tal como F). Em determinadas modalidades, o grupo alquil é não −C1-10 alquil não ME1 33078475v.1 substituído. Em determinadas modalidades, o grupo alquil é −C1-10 alquil substituído.
[0021] O termo "haloalquil” refere-se a um grupo alquil substituído, em que um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos independentemente por um halogênio, por exemplo, fluoro, bromo, cloro ou iodo e inclui frações de alquil em que todos os hidrogênios foram substituídos por halo (por exemplo, perfluoroalquil). Em algumas modalidades, a fração de haloalquil tem 1 a 8 átomos de carbono (“C”1-8 haloalquil”).
[0022] O termo "alcóxi" ou "alcoxil” refere-se a um radical –O-alquil. Por exemplo, com entre 1 e 6 átomos de carbono.
[0023] O termo "arilóxi” refere-se a um radical –O-aril. Em algumas modalidades, o grupo arilóxi é fenóxi.
[0024] O termo "alquenil” refere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada com 2 a 10 átomos de carbono e uma ou mais ligações duplas carbono-carbono (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ligações duplas). Uma ou mais ligações duplas carbono-carbono podem ser internas (tais como 2-butenil) ou terminais (tal como em 1-butenil). Exemplos de grupos −C2-4 alquenil incluem etenil (C2), 1-propenil (C3), 2-propenil (C3), 1- butenil (C4), 2-butenil (C4), butadienil (C4), pentenil (C5), pentadienil (C5), hexenil (C6), heptenil (C7), octenil (C8), octatrienil (C8) e similares. Salvo especificação em contrário, cada caso de um grupo alquenil é independentemente não substituído (um "alquenil não substituído") ou substituído (um "alquenil substituído") por um ou mais substituintes. Em determinadas modalidades, o grupo alquenil é um −C 2-10 alquenil não substituído. Em determinadas modalidades, o grupo alquenil é um −C2-10 alquenil substituído. Em um grupo alquenil, uma ligação dupla C=C pode ser uma ligação dupla (E)- ou (Z)-.
[0025] O termo "alquinil” refere-se a um radical de um grupo hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada com 2 a 10 átomos de carbono e uma ou mais ligações triplas carbono-carbono (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 ME1 33078475v.1 ligações triplas) (“C2-10 alquinil”). Exemplos de grupos alquinil incluem etinil (C2), 1-propinil (C3), 2-propinil (C3), 1-butinil (C4), 2-butinil (C4), pentinil (C5), hexinil (C6) heptinil (C7), octinil (C8) e similares. Salvo especificação em contrário, cada caso de um grupo alquinil é independentemente não substituído (um "alquinil não substituído") ou substituído (um "alquinil substituído") por um ou mais substituintes. Em determinadas modalidades, o grupo alquinil é um −C 2-10 alquinil não substituído. Em determinadas modalidades, o grupo alquinil é um −C2-10 alquinil substituído.
[0026] O termo "carbociclil" ou "carbocíclico” refere-se a um radical de um sistema de anel de hidrocarboneto não aromático monocíclico, bicíclico, tricíclico ou policíclico, com 3 a 14 átomos de carbono no anel ("C3-14 carbociclil”) e zero heteroátomo no sistema de anel não aromático. Os grupos carbociclil incluem sistemas de anel totalmente saturados (por exemplo, cicloalquis) e sistemas de anel parcialmente saturados. Em algumas modalidades, um grupo carbociclil tem 3 a 10 átomos de carbono no anel ("C3-10 carbociclil”).
[0027] O termo "cicloalquil", conforme empregado neste documento, inclui grupos hidrocarboneto cíclicos, bicíclicos, tricíclicos ou policíclicos com 3 a 14 carbonos contendo o número indicado de anéis e átomos de carbono (por exemplo, um C3-C14 cicloalquil monocíclico, C4-C14 bicíclico, C5-C14 tricíclico ou C6-C14 policíclico). Em algumas modalidades, "cicloalquil" é um cicloalquil monocíclico. Exemplos de grupos cicloalquil monocíclicos incluem ciclopentil (C5), ciclohexil (C5) ciclopropil (C3) ciclobutil (C4), cicloheptil (C7) e ciclo-octil (C8). Em algumas modalidades, "cicloalquil" é um cicloalquil bicíclico. Exemplos de cicloalquis bicíclicos incluem biciclo[1.1.0]butano (C4), biciclo[1.1.1]pentano (C5), espiro[2.2] pentano (C5), biciclo[2.1.0]pentano (C5), biciclo[2.1.1]hexano (C6), biciclo[3.3.3]undecano (C11), deca-hidronaftaleno (C10), biciclo[4.3.2]undecano (C11), espiro[5.5]undecano (C11) e biciclo[4.3.3]dodecano (C12). Em algumas modalidades, "cicloalquil" é um cicloalquil tricíclico. Exemplos de cicloalquis tricíclicos incluem adamantina (C12). Salvo especificação em contrário, cada ME1 33078475v.1 caso de um grupo cicloalquil é independentemente não substituído (um "cicloalquil não substituído") ou substituído (um "cicloalquil substituído") por um ou mais substituintes. Em determinadas modalidades, o grupo cicloalquil é um C 3-14 cicloalquil não substituído. Em determinadas modalidades, o grupo cicloalquil é um C 3-14 cicloalquil substituído.
[0028] O termo "heterociclil" ou "heterocíclico" refere-se a um radical de um sistema de anel não aromático com 3 a 14 membros com átomos de carbono no anel e 1 a 4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterociclil de 3-14 membros"). Em grupos heterociclil que contêm um ou mais átomos de nitrogênio, o ponto de ligação pode ser um átomo de carbono ou nitrogênio, como permissões de valência. Um grupo heterociclil pode ser monocíclico (“heterociclil monocíclico”) ou policíclico (por exemplo, um sistema de anel fundido, em ponte ou espiro, tal como um sistema bicíclico (“heterociclil bicíclico”) ou sistema tricíclico (“heterociclil tricíclicico”)) e pode ser saturado ou pode conter uma ou mais ligações duplas ou triplas carbono-carbono. Os sistemas de anel policíclico do heterociclil podem incluir um ou mais heteroátomos em um ou ambos os anéis. "Heterociclil" também inclui sistemas de anel em que o anel do heterocicil, conforme definido acima, é fundido a um ou mais grupos carbociclil em que o ponto de ligação está no anel do carbociclil ou do heterociclil, ou sistemas de anel em que o anel do heterociclil, conforme definido acima, é fundido a um ou mais grupos aril ou heteroaril, em que o ponto de ligação está no anel do heterociclil e, em tais casos, o número de membros do anel continua a designar o número de membros do anel no sistema de anel do heterociclil. Salvo especificação em contrário, cada caso do heterociclil é independentemente não substituído (um "heterociclil não substituído") ou substituído (um "heterociclil substituído") por um ou mais substituintes. Em determinadas modalidades, o grupo heterociclil é um heterociclil de 3-14 membros não substituído. Em determinadas modalidades, o grupo heterociclil é ME1 33078475v.1 um heterociclil de 3-14 membros substituído. Em algumas modalidades, um grupo heterociclil é um sistema de anel não aromático de 5-10 membros com átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heterociclil de 5-10 membros"). Grupos heterocicil exemplificativos incluem aziridinil, oxiranil, tiiranil, azetidinil, oxetanil, tietanil, tetra-hidrofuranil, di- hidrofuranil, tetra-hidrotiofenil, di-hidrotiofenil, pirrolidinil, di-hidropirrolil, pirrolil- 2,5-dina, dioxolanil, oxatiolanil, ditiolanil, triazolinil, oxadiazolinil, tiadiazolinil,piperidinil, tetra-hidropiranil, di-hidropiridinil, tianil, piperazinil, morfolinil, ditianil, dioxanil, triazinanil, azepanil, oxepanil, tiepanil, azocanil, oxecanil, tiocanil, indolinil, isoindolinil, di-hidrobenzofuranil, di-hidrobenzotienil, tetra-hidrobenzotienil, tetra-hidrobenzofuranil, tetra-hidroindolil, tetra- hidroquinolinil, tetra-hidroisoquinolinil, deca-hidroquinolinil, deca- hidroisoquinolinil, octa-hidrocromenil, octa-hidroisochomenil, deca- hidronaftiridinil, deca-hidro-1,8-naftiridinil, octa-hidropirrolo[3,2-b]pirrol, indolinil, ftalimidil, naftalimidil, cromanil, cromenil, 1H-benzo[e][1,4]diazepinil, 1,4,5,7- tetrahidropirano[3,4-b]pirrolil, 5,6-di-hidro-4H-furo[3,2-b]pirrolil, 6,7-di-hidro-5H- furo[3,2-b]piranil, 5,7-di-hidro-4H-tieno[2,3-c]piranil, 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[2,3- b]piridinil, 2,3-di-hidrofuro[2,3-b]piridinil, 4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[2,3- b]piridinil, 4,5,6,7-tetra-hidrofuro[3,2-c]piridinil, 4,5,6,7-tetra-hidrotieno[3,2- b]piridinil, 1,2,3,4-tetra-hidro-1,6-naftiridinil e similares.
[0029] O termo "aril" refere-se a um radical de um sistema de anel aromático 4n+2 monocíclico ou policíclico (por exemplo, bicíclico ou tricíclico) (por exemplo, com 6, 10 ou 14 π elétrons compartilhados em uma matriz cíclica) com 6-14 átomos de carbono no anel e zero heteroátomo fornecido no sistema de anel aromático ("C6-14 aril"). Em algumas modalidades, um grupo aril tem 6 átomos de carbono no anel ("C6 aril"; por exemplo, fenil). Em algumas modalidades, um grupo aril tem 10 átomos de carbono no anel ("C10 aril"; por exemplo, naftil tal como 1-naftil e 2-naftil). Em algumas modalidades, um grupo ME1 33078475v.1 aril tem 14 átomos de carbono no anel (“C14 aril”;por exemplo, antracil). "Aril" também inclui sistemas do anel em que o anel de aril, conforme definido acima, é fundido a um ou mais grupos carbociclil ou heterociclil em que o radical ou ponto de ligação está no anel de aril e, em tais casos, o número de átomos de carbono continua a designar o número de átomos de carbono no sistema de anel de aril. Salvo especificação em contrário, cada caso de um grupo aril é independentemente não substituído (um "aril não substituído") ou substituído (um "aril substituído") por um ou mais substituintes. Em determinadas modalidades, o grupo aril é um C6-14 aril não substituído. Em determinadas modalidades, o grupo aril é um C6-14 aril substituído.
[0030] O termo "heteroaril" refere-se a um radical de um sistema de anel aromático 4n+2 monocíclico ou policíclico (por exemplo, bicíclico, tricíclico) de 5- 14 membros (por exemplo, com 6 π elétrons compartilhados em uma matriz cíclica) com átomos de carbono no anel e 1-4 heteroátomos no anel fornecidos no sistema de anel aromático, em que cada heteroátomo é independentemente selecionado dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre ("heteroaril de 5-14 membros"). Em algumas modalidades, o heteroaril pode ser um heteroaril monocíclico de 5 ou 6 membros contendo 1-4 heteroátomos. Em algumas modalidades, o heteroaril pode ser um heteroaril bicíclico de 8-12 membros com 1-6 heteroátomos. Um "heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros" ou "heteroaril monocíclico com 5 membros ou 6 membros" refere-se a um sistema de anel aromático 4n+2 monocíclico e não-fundido com 5 ou 6 membros, com átomos de carbono em anel e 1-4 heteroátomos no anel. Exemplos de grupos heteroaril monocíclicos com 5 ou 6 membros incluem pirrolil, furanil, tiofenil, imidazolil, pirazolil, oxazolil, isoxazolil, tiazolil, isotiazolil, triazolil, oxadiazolil, tiadiazolil, tetrazolil, piridinil, piridazinil, pirimidinil, pirazolil, triazinil e tetrazinil. Conforme usado neste documento, se um tautômero de um radical é heteroaril, este radical é heteroaril. O termo "tautômeros" ou "tautomérico" refere-se a dois ou mais compostos/substituintes interconversíveis resultantes de pelo menos ME1 33078475v.1 uma migração formal de um átomo de hidrogênio e pelo menos uma mudança na valência (por exemplo, uma ligação única para uma ligação dupla, uma ligação tripla para uma única ligação, ou vice-versa). A proporção exata dos tautômeros depende de vários fatores, incluindo temperatura, solvente e pH. Tautomerizações (ou seja, a reação que fornece um par tautomérico) podem ser catalisadas por ácido ou base. Tautomerizações exemplificativas incluem tautomerizações de ceto-para-enol, amida-para-imida, lactam-para-lactim, enamina-para-imina e enamina-para-(uma enamina diferente).
[0031] O termo "saturado" refere-se a uma fração que não contém uma ligação dupla ou tripla, ou seja, a fração contém apenas ligações simples.
[0032] O termo "opcionalmente substituído" refere-se a ser substituído ou não substituído. Em geral, o termo "substituído" significa que pelo menos um hidrogênio presente em um grupo é substituído por um substituinte permitido, por exemplo, um substituinte que, após a substituição, resulta em um composto estável, por exemplo, um composto que não sofre espontaneamente transformação, tal como por rearranjo, ciclização, eliminação ou outra reação. Salvo indicação em contrário, um grupo "substituído" tem um substituinte (por exemplo, C1-6 alquil, halogênio, nitro, ciano, hidroxil, C1-6 haloalquil, C1-6 haloalcóxi, C1-6 acil, C3-6 cicloalquil, C6-10 aril, heteroaril monocíclico ou bicíclico e heterociclil monocíclico ou bicíclico), em uma ou mais posições substituíveis do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura é substituída, o substituinte é o mesmo ou diferente em cada posição. O termo "substituído" é contemplado para incluir substituição com todos os substituintes permitidos de compostos orgânicos e inclui qualquer um dos substituintes descritos neste documento que resulta na formação de um composto estável. A presente invenção contempla toda e qualquer combinação de modo a chegar a um composto estável. Para os efeitos desta invenção, heteroátomos, tais como nitrogênio, podem ter substituintes de hidrogênio e/ou qualquer substituinte adequado conforme descrito neste documento que satisfaça as valências dos ME1 33078475v.1 heteroátomos e resulte na formação de uma fração estável. A invenção não se destina a ser limitada de qualquer maneira pelos substituintes exemplificativos descritos neste documento.
[0033] Um “átomo de carbono de anel substituível" refere-se a um átomo de carbono em um anel aril/heteroaril/carbociclil/heterociclil com pelo menos um hidrogênio presente no átomo de carbono que é substituído por um substituinte permitido conforme definido acima. Um “átomo de nitrogênio substituível do anel” refere-se a um átomo de nitrogênio em um anel de heteroaril-heterociclil com pelo menos um hidrogênio presente no átomo de nitrogênio que é substituído por um substituinte permissível.
[0034] Salvo indicação em contrário, um grupo "substituído" tem um substituinte em uma ou mais posições substituíveis do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura é substituída, o substituinte é o mesmo ou diferente em cada posição. O termo "substituído" é contemplado para incluir substituição com todos os substituintes permitidos de compostos orgânicos e inclui qualquer um dos substituintes descritos neste documento que resulta na formação de um composto estável. A presente invenção contempla toda e qualquer combinação de modo a chegar a um composto estável. Para os efeitos desta invenção, heteroátomos, tais como nitrogênio, podem ter substituintes de hidrogênio e/ou qualquer substituinte adequado conforme descrito neste documento que satisfaça as valências dos heteroátomos e resulte na formação de uma fração estável. A invenção não se destina a ser limitada de qualquer maneira pelos substituintes exemplificativos descritos neste documento.
[0035] O termo "halo" ou "halogênio" refere-se a flúor, cloro, bromo ou iodo.
[0036] O termo “acil” refere-se a um grupo com a fórmula geral −C(=O)RX1, −C(=O)ORX1, −C(=O)−O−C(=O)RX1, −C(=O)SRX1, −C(=O)N(RX1)2, −C(=S)RX1, −C(=S)N(RX1)2, e −C(=S)S(RX1), −C(=NRX1)RX1, −C(=NRX1)ORX1, −C(=NRX1)SRX1, and −C(=NRX1)N(RX1)2, em que RX1 é hidrogênio; halogênio; ME1 33078475v.1 hidroxil substituído ou não substituído; tiol substituído ou não substituído; amino substituído ou não substituído; acil substituído ou não substituído, C1-10 alquil cíclico ou acíclico, substituído ou não substituído, ramificado ou não ramificado; C2-10 alquenil cíclico ou acíclico, substituído ou não substituído, ramificado ou não ramificado; C2-10 alquinil substituído ou não substituído; C6-12 aril substituído ou não substituído, heteroaril substituído ou não substituído, quando a valência permitir. Grupos acil exemplificativos incluem aldeídos (−CHO), ácidos carboxílicos (−CO2H), cetonas, halogenetos de acil, ésteres, amidas, iminas, carbonatos, carbamatos e ureias.
[0037] Em determinadas modalidades, o substituinte presente em um átomo de nitrogênio, em um átomo de oxigênio ou em um átomo de enxofre é um grupo protetor de nitrogênio, um grupo protetor de oxigênio ou um grupo protetor de enxofre, respetivamente. Os grupos protetores de nitrogênio, oxigênio e enxofre são bem conhecidos na técnica e incluem aqueles descritos em detalhes em Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3a edição, John Wiley & Sons, 1999, incorporado a este instrumento por referência. Por exemplo, grupos protetores de nitrogênio incluem, mas não estão limitados a, formamida, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, fenilacetamida, carbamato de metila, carbamato de etila, carbamato de 9-fluorenilmetil (Fmoc), carbamato de t-butila (BOC ou Boc), carbamato de 1-adamantila (Adoc), carbamato de vinil (Voc), carbamato de alila (Alloc), 2-(trimetilsilil)etoxi]metil (SEM), p-toluenossulfonamida (Ts), benzenosulfonamida, 2,3,6-trimetil-4-metoxibenzenossulfonamida (Mtr), 2,4,6- trimetoxibenzeno sulfonamida (Mtb), derivado de fenotiazinil-(10)-acil, derivado de N'-p-toluenossulfonilaminoacil, etc. Grupos protetores de oxigênio exemplificativos incluem, mas não estão limitados a, metil, metoximetil (MOM), metiltiometil (MTM), t-butiltiometil, (fenildimetilsilil)metoximetil (SMOM), benziloximetil (BOM), p-metoxibenziloximetil (PMBM), (4-metoxifenoxi)metil (p- AOM), tetra-hidropirranil (THP), metanossulfonato (mesilato), benzilssulfonato e ME1 33078475v.1 tosilato (Ts).
[0038] O termo "grupo lábil" tem seu significado comum na técnica de química orgânica sintética e refere-se a um átomo ou um grupo capaz de ser deslocado por um nucleófilo. Exemplos de grupos lábeis adequados incluem, entre outros, halogênio (tal como F, Cl, Br, ou I (iodo)), alcoxicarboniloxi, ariloxicarboniloxi, alcanossulfoniloxi, arenossulfoniloxi, alquil-carboniloxi (por exemplo, acetoxi), um éster de ácido sulfônico, tal como toluenossulfonato (tosilato, –OTs), metanossulfonato (mesilato, –OMs), p- bromobenzenossulfoniloxi (brosilato, –OBs), –OS(=O)2(CF2)3CF3 (nonaflato, – ONf), ortrifluorometanossulfonato (triflato, –OTf).
[0039] Conforme usado neste documento, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles sais que estão dentro do escopo de julgamento médico, adequado para uso em contato com os tecidos de humanos e animais menores sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares, e são proporcionais a uma relação de benefício/risco razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, Berge et al. descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhes em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, incorporado a este documento por referência. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos desta invenção incluem aqueles derivados de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos adequados. Exemplos de sais de adição de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando outros métodos conhecidos na técnica, tais como troca iônica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, ME1 33078475v.1 dodecilssulfato, etanossulfonato, formato, fumarato, glico-heptanoato, hexanoato, pivalato, propionato, estearato, hexanoato, hidro-iodeto, 2-hidroxi- etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, perssulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p- toluenossulfonato, undecanoato, valerato e similares. Sais derivados de bases apropriadas incluem sais de metal alcalino, metal alcalino terroso, amônio e N+(C1-4 alquil)4−. Sais de metais alcalinos ou alcalino terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e similares. Sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais incluem, quando apropriado, amônio não tóxico, amônio quaternário e cátions de amina formados usando contraíons, tais como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila.
[0040] Os termos "composição" e "formulação" são usados de forma intercambiável.
[0041] Um “sujeito" ao qual a administração é contemplada refere-se a um humano (ou seja, masculino ou feminino de qualquer faixa etária, por exemplo, sujeito pediátrico (por exemplo, bebê, criança ou adolescente) ou sujeito adulto (por exemplo, adulto jovem, adulto em meia-idade ou adulto idoso)) ou animal não humano. Em determinadas modalidades, o animal não humano é um mamífero (por exemplo, primata (por exemplo, macaco cynomologus ou macaco rhesus), um mamífero comercialmente relevante (por exemplo, gado, porco, cavalo, ovelha, cabra, gato ou cachorro), ou uma ave (por exemplo, uma ave comercialmente relevante, como frango, pato, ganso ou peru)). Em determinadas modalidades, o animal não humano é um peixe, réptil ou anfíbio. O animal não humano pode ser macho ou fêmea em qualquer estágio de desenvolvimento. O animal não humano pode ser um animal transgênico ou animal geneticamente manipulado. Em determinadas modalidades, o sujeito é ME1 33078475v.1 um paciente. O termo "paciente" refere-se a um sujeito humano em necessidade do tratamento de uma doença. Em determinadas modalidades, o termo "paciente" é um adulto humano com mais de 18 anos de idade em necessidade do tratamento de uma doença. Em determinadas modalidades, o termo "paciente" é uma criança humana com não mais do que 18 anos de idade em necessidade do tratamento de uma doença. Em determinadas modalidades, o paciente não está sob transfusão regular (por exemplo, não teve mais do que 4 episódios de transfusão no período de 12 meses). Em determinadas modalidades, o paciente está sob transfusão regular (por exemplo, teve pelo menos 4 episódios de transfusão no período de 12 meses). Em determinadas modalidades, o sujeito passou por esplenectomia. Em determinadas modalidades, o sujeito passou por esplenectomia e está sob transfusão regular. Em determinadas modalidades, o sujeito passou por esplenectomia e não está sob transfusão regular.
[0042] O termo "administrar", "administrando" ou "administração" refere-se a implantar, absorver, ingerir, injetar, inalar ou introduzir um composto descrito neste documento, ou uma composição do mesmo, em um sujeito.
[0043] Os termos "tratamento", "tratar" e "tratando" refere-se a reverter, aliviar, retardar o aparecimento ou inibir o progresso de uma doença descrita neste documento. Em algumas modalidades, o tratamento pode ser administrado após um ou mais sinais ou sintomas da doença terem evoluído ou sido observados (ou seja, tratamento terapêutico). Em outras modalidades, o tratamento pode ser administrado na ausência de sinais ou sintomas da doença. Por exemplo, o tratamento pode ser administrado a um sujeito suscetível antes do início dos sintomas (ou seja, tratamento profilático) (por exemplo, à luz de um histórico de sintomas e/ou à luz da exposição a um patógeno). O tratamento também pode ser seguido após a resolução dos sintomas, por exemplo, para retardar ou prevenir a recorrência. Em determinadas modalidades, o tratamento inclui retardar o início de pelo menos um sintoma do distúrbio por um período de ME1 33078475v.1 tempo.
[0044] Os termos "condição", "doença" e "distúrbio" são usados de forma intercambiável.
[0045] Uma "quantidade eficaz" de um composto descrito neste documento refere-se a uma quantidade suficiente para provocar a resposta biológica desejada. Uma quantidade eficaz de um composto descrito neste documento pode variar dependendo de tais fatores como desfecho biológico desejado, a farmacocinética do composto, a condição que está sendo tratada, o modo de administração e a idade e a saúde do sujeito. Em determinadas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade terapeuticamente eficaz. Em determinadas modalidades, a quantidade eficaz é gerar uma resposta de hemoglobina do sujeito ≥1,5 g/dL de aumento na concentração de Hb a partir da referência. A concentração de Hb de referência do sujeito é a média de todas as concentrações de Hb disponíveis antes do tratamento com o composto. Em determinadas modalidades, a quantidade eficaz é gerar uma resposta de hemoglobina do sujeito ≥1,0 g/dL de aumento na concentração de Hb a partir da referência. Em determinadas modalidades, a quantidade eficaz é gerar uma resposta de hemoglobina do sujeito ≥2,0 g/dL de aumento na concentração de Hb a partir da referência. Em determinadas modalidades, uma quantidade eficaz é a quantidade de um composto descrito neste documento em uma dose única. Em determinadas modalidades, uma quantidade eficaz é as quantidades combinadas de um composto descrito neste documento em múltiplas doses. Em determinadas modalidades, a quantidade eficaz é uma quantidade terapeuticamente eficaz.
[0046] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto descrito neste documento é uma quantidade suficiente para fornecer um benefício terapêutico no tratamento de uma condição ou para retardar ou minimizar um ou mais sintomas associados à condição. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto refere-se a uma quantidade de agente ME1 33078475v.1 terapêutico, sozinho ou em combinação com outras terapias, que fornece um benefício terapêutico no tratamento da condição.
O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" pode abranger uma quantidade que melhora a terapia geral, reduz ou previne contra o aparecimento de sintomas, sinais ou causas da condição e/ou potencializa a eficácia terapêutica de outro agente terapêutico.
Em determinadas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para suscitar ativação mensurável de PKR do tipo selvagem ou mutante.
Em determinadas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para regular os níveis de 2,3-difosfoglicerato e/ou ATP no sangue em necessidade disso ou para tratar a deficiência de piruvato quinase (PKD), anemia hemolítica (por exemplo, anemia hemolítica crônica, anemia não-esferocítica hereditária), doença falciforme, talassemia (por exemplo, beta-talassepatina), esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, abetalipoproteinemia (ou síndrome de Bassen- Kornzweig), hemoglobinúria paroxística noturna, anemia hemolítica adquirida (por exemplo, anemias congênitas (por exemplo, enzimopatias)), anemia de doenças crônicas, ou tratar doenças ou condições de tratamento que estão associadas a aumento dos níveis de 2,3-difosfoglicerato (por exemplo, doenças hepáticas). Em determinadas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para suscitar a ativação mensurável de PKR do tipo selvagem ou mutante e para regular os níveis de 2,3-difosfoglicerato no sangue em necessidade disso ou para tratar a deficiência de piruvato quinase (PKD), anemia hemolítica (por exemplo, anemia hemolítica crônica, anemia não- esferocítica hereditária), doença falciforme, talassemia (por exemplo, beta- talassepatina), esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, abetalipoproteinemia (ou síndrome de Bassen-Kornzweig), hemoglobinúria paroxística noturna, anemia hemolítica adquirida (por exemplo, anemias congênitas (por exemplo, enzimopatias)), anemia de doenças crônicas, ou tratar doenças ou condições que estão associadas com aumento dos níveis de 2,3-
ME1 33078475v.1 difosfoglicerato (por exemplo, doenças hepáticas). Em um aspecto, a quantidade terapeuticamente eficaz é a quantidade necessária para gerar uma resposta de hemoglobina do sujeito de ≥1,0 g/dL (tal como ≥1,5 g/dL ou ≥2,0 g/dL) de aumento na concentração de Hb a partir da base de referência. A concentração de Hb basal do sujeito é a média de todas as concentrações de Hb disponíveis dentro de pelo menos duas semanas (por exemplo, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas ou 6 semanas) antes do tratamento com um composto descrito neste documento. Em certos aspectos, a quantidade terapeuticamente eficaz é a quantidade necessária para reduzir a carga de transfusão do paciente. Em um aspecto, a quantidade terapeuticamente eficaz é de entre 0,01 - 100 mg/kg de peso corporal/dia do composto fornecido, tal como, por exemplo, 0,1 - 100 mg/kg de peso corporal/dia. Em determinadas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é para reduzir a carga de transfusão do paciente.
[0047] Conforme usado neste documento, redução na carga de transfusão significa pelo menos 20% de redução no número de unidades de RBC transfectadas dentro de pelo menos 5 semanas de tratamento. Em determinadas modalidades, a redução na carga de transfusão é ≥33% de redução no número de unidades de RBC transfectadas dentro de pelo menos 5 semanas de tratamento. Em determinadas modalidades, a redução da carga de transfusão é observada em pelo menos 10 semanas (por exemplo, pelo menos 20 semanas ou pelo menos 24 semanas) de tratamento.
[0048] Conforme usado neste documento, doença falciforme (SCD), doença de Hemoglobina SS e anemia de células falciformes são usadas intercambiavelmente. Doença falciforme (SCD) descreve um grupo de distúrbios hereditários nas hemácias. Em determinadas modalidades, sujeitos com SCD têm hemoglobina anormal, chamada hemoglobina S ou hemoglobina falciforme, em suas hemácias. Em determinadas modalidades, as pessoas com SCD têm pelo menos um gene anormal fazendo com que o corpo produza a hemoglobina S. Em determinadas modalidades, pessoas com SCD têm dois genes de ME1 33078475v.1 hemoglobina S, Hemoglobina SS.
[0049] A talassemia é um distúrbio sanguíneo hereditário, no qual o corpo produz uma forma anormal de hemoglobina. Em determinadas modalidades, a forma anormal de hemoglobina resulta na deficiência de alfa ou beta-globina. Em determinadas modalidades, o distúrbio resulta em um grande número de hemácias sendo destruídas, o que leva à anemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é alfa-talassemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é beta-talassemia.
[0050] O termo "ativador", conforme usado neste documento, significa um agente que (de forma mensurável) aumenta a atividade da piruvato quinase R do tipo selvagem (wt PKR) ou causa um aumento da atividade da piruvato quinase R do tipo selvagem (wt PKR) a um nível que é maior do que os níveis basais de atividade da wt PKR peso ou um agente que (de forma mensurável) aumenta a atividade de uma piruvato quinase R mutante (mPKR), ou causa um aumento da atividade da piruvato quinase R mutante (mPKR) a um nível que é maior que os níveis basais de atividade da PKR mutante, por exemplo, a um nível que é 20%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 100% da atividade da PKR do tipo selvagem.
[0051] O termo "concentrado de hemácias" ou PRBCs, conforme usado neste documento, refere-se a hemácias produzidas a partir de uma unidade de sangue total por centrifugação e remoção da maior parte do plasma. Em determinadas modalidades, uma unidade PRBC tem um hematócrito de pelo menos cerca de 95%. Em determinadas modalidades, uma unidade de PRBC tem um hematócrito de pelo menos cerca de 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% ou 10%.
[0052] O termo "ex vivo" referindo-se a um método conforme usado neste documento significa que o método ocorre fora de um organismo. Por exemplo, uma célula (por exemplo, hemácias), um tecido ou sangue (contendo pelo menos hemácias, plasma e hemoglobina) pode ser extraído do organismo para ME1 33078475v.1 ser colocado em contato com um ou mais compostos fornecidos neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou uma composição farmacêutica dos mesmos, opcionalmente em condições artificialmente controladas (por exemplo, temperatura).
[0053] O termo "in vitro" referindo-se a um método conforme usado neste documento significa que o método ocorre fora de um organismo e é controlado dentro de um ambiente artificial. Por exemplo, uma célula(por exemplo, hemácias), um tecido ou sangue (contendo pelo menos hemácias, plasma e hemoglobina) pode ser extraído do organismo para ser colocado em contato com um ou mais compostos fornecidos neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou uma composição farmacêutica dos mesmos, em um ambiente artificial controlado (por exemplo, um sistema de cultura), tal como em um tubo de ensaio, em uma cultura, em frasco, em uma placa de microtitulação, em uma placa de Petri e similares. Compostos
[0054] São descritos neste documento compostos e composições que ativam PKR do tipo selvagem e/ou PKRs mutantes, tais como aquelas descritas neste documento. Em uma modalidade, é fornecido um composto de Fórmulas (I)-(V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmulas (I)-(V), ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
[0055] Em uma primeira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I): (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: ME1 33078475v.1
R1 é hidrogênio, um alquil opcionalmente substituído, um haloalquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, –ORo1, –C(=O)Rc1, ou um grupo protetor de nitrogênio; em que: Ro1 é hidrogênio, alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; Rc1 é alquil opcionalmente substituído ou –N(Rcn)2, em que cada caso de Rcn é independentemente hidrogênio, −C1-6 alquil, ou um grupo protetor de nitrogênio; R2 e Q são, cada um independentemente, um heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído; Ra e Rb são, cada um independentemente, hidrogênio, um halogênio, – CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, –ORo3, –N(Rn1)2, – C(=O)N(Rn1)2, ou –C(=O)Rc2; ou alternativamente Ra e Rb podem ser tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar um cicloalquil opcionalmente substituído ou um heterociclil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn1 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; Ro3 é hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; e Rc2 é um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; e Rj e Rk são, cada um, independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN, –ORo7, –N(Rn5)2, –N(Rn5)C(=O) Rc5, –C(=O)N(Rn5)2, –C(=O)Rc5, –C(=O)ORo7, – SRjs, –S(=O)2Rjs, –S(=O)Rjs, ou um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; ou alternativamente Rj e Rk podem ser tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar C=O, um anel C1-C6 cicloalquil monocíclico opcionalmente substituído, ou um anel C3-C6 heterociclil
ME1 33078475v.1 monocíclico opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn5 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, −ORo8, ou um grupo protetor de nitrogênio, em que Ro8 é hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Ro7 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Rc5 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; e cada caso de Rjs é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, um C6-12 aril opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído ou um grupo protetor de enxofre.
[0056] Em uma segunda modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico de 5 ou 6 membros representado por R2 é opcionalmente substituído em cada átomo de carbono substituível do anel por Rp e opcionalmente substituído em cada átomo de nitrogênio substituível do anel por Rn6; em que: cada caso de Rp é independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, –ORo6, –SRs2, –N(Rn3)2, –C(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)C(=O)Rc4, –C(=O)Rc4, –C(=O)ORo6, –OC(=O)Rc4, – S(=O)Rs2, –S(=O)2Rs2, –S(=O)ORo6, –OS(=O)Rc4, –S(=O)2ORo6, –OS(=O)2Rc4,– S(=O)N(Rn3)2, –S(=O)2N(Rn3)2,–N(Rn3)S(=O)Rs2, –N(Rn3)S(=O)2Rs2, – N(Rn3)C(=O)ORo6, –OC(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)ORo6, –N(Rn3)S(=O)2ORo6, –OS(=O)N(Rn3)2, ou –OS(=O)2N(Rn3)2; ou alternativamente dois casos de Rp ligados aos mesmos ME1 33078475v.1 átomos de carbono ou adjacentes, podem ser tomados em conjunto com o(s) átomo(s) de carbono ao(s) qual(is) eles estão ligados para formar um cicloalquil ou um heterocicloalquil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn3 é independentemente hidrogênio, um –C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; cada caso de Ro6 é independentemente hidrogênio, um –C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; e cada caso de Rc4 é um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; cada caso de Rs2 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído ou um grupo protetor de enxofre; e Rn6 é hidrogênio, um –C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; em que as demais variáveis são conforme definido na primeira modalidade.
[0057] Em uma terceira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes: ME1 33078475v.1 em que: cada caso de Rnc e Rnd é independentemente hidrogênio, −C1-C6 alquil opcionalmente substituído ou um grupo protetor de nitrogênio; p é 0, 1, 2, 3 ou 4, conforme a valência permitir; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira ou segunda modalidades.
[0058] Em uma quarta modalidade da invenção, é fornecido um composto ME1 33078475v.1 representado pela Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes: ; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda ou terceira modalidades.
[0059] Em uma quinta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes: ; Em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira ou quarta modalidades.
[0060] Em uma sexta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (II): ME1 33078475v.1
(II) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q é 0, 1, 2 ou 3; e em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta ou quinta modalidades. Em determinadas modalidades, é fornecido um composto representado por uma das seguintes fórmulas: (II-a); (II-b); ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0061] Em uma sétima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (III): (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q é 0, 1, 2 ou 3; e em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta ou sexta modalidades.
[0062] Em uma oitava modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (IV): ME1 33078475v.1
(IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q é 0, 1, 2 ou 3; e em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidades.
[0063] Em uma nona modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (V): (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q é 0, 1, 2 ou 3; e em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima ou oitava modalidades.
[0064] Em uma décima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rn6 é hidrogênio ou a −C1-4 alquil; em que as demais variáveis são conforme definido nas segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava ou nona modalidades.
[0065] Em uma décima primeira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada caso de Rp é independentemente hidrogênio, halogênio, opcionalmente substituído C1-4 alquil, −CN,−NÃO2,−N3, –OUo4, –N(Rn2)2, –C(=O)N(Rn2)2, –C(=O)Rc3, ou –C(=O)ORo4 em que as demais variáveis são conforme definido nas segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, ou décima modalidades.
ME1 33078475v.1
[0066] Em uma décima segunda modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre um dos seguintes:
; em que: cada caso de Rn é independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, –ORo4, –SRs1, –N(Rn2)2, – C(=O)N(Rn2)2, – N(Rn2)C(=O)Rc3, –C(=O)Rc3, –C(=O)ORo4, –OC(=O)Rc3, – S(=O)Rs1, –S(=O)2Rs1, –S(=O)ORo4, –OS(=O)Rc3, –S(=O)2ORo4, –OS(=O)2Rc3, – S(=O)N(Rn2)2, –S(=O)2N(Rn2)2,–N(Rn2)S(=O)Rs1, –N(Rn2)S(=O)2Rs1, – N(Rn2)C(=O)ORo4, –OC(=O)N(Rn2)2, –N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2, –N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2, – N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2, –N(Rn2)S(=O)ORo4, –N(Rn2)S(=O)2ORo4, –OS(=O)N(Rn2)2, ou –OS(=O)2N(Rn2)2; ou dois casos de Rn, ligados aos mesmos átomos de carbono ou adjacentes, tomados em conjunto com os átomos de carbono aos
ME1 33078475v.1 quais eles estão ligados para formar um cicloalquil ou um heterocicloalquil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn2 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; cada caso de Ro4 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Rc3 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; cada caso de Rs1 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído ou um grupo protetor de enxofre; n é 0, 1, 2, ou 3, conforme as permissões de valência; e cada um dentre Rna, Rnb e Rnd é independentemente hidrogênio, −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio. em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidades.
[0067] Em uma décima terceira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre um dos seguintes: ME1 33078475v.1
; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidades.
[0068] Em uma décima quarta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre um dos seguintes: ; em que as variáveis restantes são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda ou décima terceira modalidades.
ME1 33078475v.1
[0069] Em uma décima quinta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Q é ou em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira ou décima quarta modalidades. Em outras modalidades, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Q é em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira ou décima quarta modalidades.
[0070] Em uma décima sexta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Q é em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira ou décima quarta modalidades. Em outras modalidades, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Q é em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, ME1 33078475v.1 décima terceira ou décima quarta modalidades. Em determinadas modalidades, R2 e Q são iguais. Em determinadas modalidades, R2 e Q são diferentes.
[0071] Em uma décima sétima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rna é hidrogênio ou −C1-4 alquil; em que as demais variáveis são conforme definido nas décima segunda, décima terceira, décima quarta ou décima quinta modalidades.
[0072] Em uma décima sétima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rnb é hidrogênio ou −C1-4 alquil; em que as demais variáveis são conforme definido nas décima segunda, décima terceira, décima quarta ou décima quinta modalidades.
[0073] Em uma décima sétima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rnd é hidrogênio ou −C1-4 alquil; em que as demais variáveis são conforme definido nas décima segunda, décima terceira, décima quarta ou décima quinta modalidades.
[0074] Em uma décima oitava modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada caso de Rn é independentemente hidrogênio, halogênio, opcionalmente substituído C1-4 alquil, −CN,−NÃO2,−N3, –OUo4, –N(Rn2)2, –C(=O)N(Rn2)2, –C(=O)Rc3, ou –C(=O)OUo4; em que as demais variáveis são conforme definido nas décima primeira, décima terceira, décima, décima quinta, décima sexta ou décima sétima modalidades.
[0075] Em uma décima nona modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1 é hidrogênio ou um −C1-C4 alquil; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, ME1 33078475v.1 décima, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima ou décima oitava modalidades.
[0076] Em uma vigésima modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1 é metil; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima ou décima oitava modalidades.
[0077] Em uma vigésima primeira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rj e Rk são, cada um independentemente, hidrogênio, um halogênio, –OUo7ou um −C1-C4 alquil; ou alternativamente Rj e Rk são unidos para formar =O; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima, décima oitava, décima nona ou vigésima modalidades.
[0078] Em uma vigésima segunda modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Rj e Rk são cada um hidrogênio; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima ou vigésima primeira modalidades.
[0079] Em uma vigésima terceira modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Ra e Rb são cada um ME1 33078475v.1 hidrogênio; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira ou vigésima segunda modalidades.
[0080] Em uma vigésima quarta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q é 0 ou 1; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda ou vigésima terceira modalidades.
[0081] Em uma vigésima quinta modalidade da invenção, é fornecido um composto representado pela Fórmula (I), (II), (III), (IV), ou (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que n é 0 ou 1; em que as demais variáveis são conforme definido nas primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, décima terceira, décima quarta, décima quinta, décima sexta, décima sétima, décima oitava, décima nona, vigésima, vigésima primeira, vigésima segunda, vigésima terceira ou vigésima quarta modalidades.
[0082] Em uma modalidade, o composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é selecionado dentre os compostos das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1.
[0083] Os compostos descritos neste documento são úteis como ativadores de mutantes de PKR com atividades mais baixas em comparação com os do tipo selvagem, portanto são úteis para métodos da presente invenção. Tais mutações na PKR podem afetar a atividade enzimática (eficiência catalítica), propriedades reguladoras (modulação por bisfosfato de frutose ME1 33078475v.1
(FBP)/ATP) e/ou termoestabilidade da enzima. Exemplos de tais mutações são descritos em Valentini et al, JBC 2002. Alguns exemplos dos mutantes que são ativados pelos compostos descritos neste documento incluem G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486W, R532W, K410E, R510Q e R490W. Sem estar vinculado pela teoria, os compostos descritos neste documento afetam as atividades de mutantes de PKR mediante ativação de mutantes de PKR não responsivos a FBP, restaurando a termoestabilidade a mutantes com estabilidade reduzida, ou restaurando a eficiência catalítica a mutantes prejudicados. A atividade de ativação dos presentes compostos contra mutantes de PKR pode ser testada seguindo um método descrito nos Exemplos 11-17. Os compostos descritos neste documento também são úteis como ativadores de PKR do tipo selvagem.
[0084] Em uma modalidade, para aumentar o tempo de vida das hemácias, um composto, composição ou composição farmacêutica descrita neste documento é adicionada diretamente ao sangue total ou concentrado de hemácias extracorporealmente ou fornecida ao paciente diretamente (por exemplo, por i.p., i.v., i.m., oral, inalação (distribuição aerossolizada), transdérmica, sublingual e outras vias de distribuição). Sem estar vinculado pela teoria, os compostos descritos neste documento aumentam o tempo de vida das RBCs, assim, combatendo o envelhecimento do sangue armazenado, ao impactar o nível de 2,3-DPG e/ou ATP do sangue. Uma diminuição no nível de concentração de 2,3-DPG induz um deslocamento para a esquerda da curva de dissociação de oxigênio-hemoglobina e desloca o equilíbrio alostérico para o R, ou estado oxigenado, produzindo assim uma inibição terapêutica da polimerização intracelular que provoca o afoiçamento ao aumentar a afinidade de oxigênio devido ao esgotamento de 2,3-DPG, estabilizando assim a oxi- hemoglobina mais solúvel. Consequentemente, em uma modalidade, os compostos e composições farmacêuticas descritas neste documento são úteis como agentes anti-afoiçamento. Em outra modalidade, para regular o 2,3- ME1 33078475v.1 difosfoglicerato, um composto, composição ou composição farmacêutica descrita neste documento é adicionada diretamente ao sangue total ou concentrado de hemácias extracorporealmente ou fornecida ao paciente diretamente (por exemplo, por i.p., i.v., i.m., oral, inalação (distribuição aerossolizada), transdérmica, sublingual e outras vias de distribuição). Em outra modalidade, um composto, composição ou composição farmacêutica descrita neste documento pode aumentar o nível de ATP e ajudar a proteger as células contra espécies reativas de oxigênio (Mol Cell. 26 de outubro de 2012; 48(2): 158–167).
[0085] Na Tabela 1, um composto descrito neste documento pode ter um AC50 de PKR, PKR K410E ou PKR 510Q do tipo selvagem. "A" refere-se a um AC50 inferior a 0,300 μM; "B" refere-se a um AC50 de 0,301 μM a 0,800 μM, e "C" refere-se a um AC50 superior a 0,800 μM. O AC50 da PKR do tipo selvagem para certos compostos foi determinado adicionalmente em um ensaio de ATP baseado em células. "AA" refere-se a um AC50 inferior ou igual a 1 μM e "BB" refere-se a um AC50 superior a 1 μM. Tabela 1. Ativação de PKR do tipo selvagem e mutante por compostos exemplificativos PKR PKR PK AC50 do ensaio de Composto WT K410E R510Q ATP baseado AC50 AC50 AC50 em células
A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C C BB A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
B A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A B AA C C C BB A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C C BB A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
B B C BB A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C C BB A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A B AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C A BB
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA H N N O H N A A A AA N N F N N N S A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A B AA
A A B BB ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C B C BB A A A AA A A A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA B A A AA B A C AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A B AA
A A A AA ME1 33078475v.1
B B B BB A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C C BB A A A AA B B B BB A A A AA
C C A BB ME1 33078475v.1
C C C BB B B C BB A A A AA A A A AA C C C BB C* C* C* AA B B A BB B B B BB A A A AA A B A AA
A A A AA ME1 33078475v.1
A A A AA C C C BB A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA A A A AA C C C BB C* C* C* AA B* A* A* AA
C C C BB ME1 33078475v.1
B B A AA C C C Sem ajuste C C C Sem ajuste Sem Sem Sem Sem ajuste ajuste ajuste ajuste
A A A AA A A A AA
B C B AA “*” indica que o valor se baseia na média dos múltiplos resultados testados.
[0086] Os compostos descritos neste documento podem ser feitos usando uma variedade de técnicas sintéticas conforme estabelecido nos Exemplos. Transformações químicas sintéticas e metodologias de grupos protetores (proteção e desproteção) úteis na síntese dos compostos descritos neste documento são conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, aquelas descritas em R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Editora VCH (1989); T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley e Sons (1991); L. Fieser e M. Fieser, Fieser e Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley e Sons (1994); e L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley e Sons (1995), e ME1 33078475v.1 suas edições subsequentes.
[0087] Certos compostos ativadores úteis como ativadores PKR do tipo selvagem e/ou mutantes são aqueles que demonstram especificidade e ativação da enzima PKR (enzima do tipo selvagem e/ou mutante) na ausência de FBP a um nível superior a 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 ou 100% na presença de FBP. Síntese dos compostos da invenção Esquema 1 o-xileno calor Funcionilização 2-Metoxietanol Deslocamento oxidação oxidação nucleofílico
[0088] Em algumas modalidades, compostos da Fórmula (I) pode ser preparado usando métodos ilustrados no Esquema 1. O aldeído tiazolil da fórmula S1 reage com azidoacetato de etila sob condições de adição nucleofílica (por exemplo, uma base) em um solvente apropriado (por exemplo, etanol) para produzir intermediários de fórmula S2. O grupo hidroxil de fórmula S2 pode ser convertido em um grupo lábil e sujeito à eliminação para produzir a fórmula S3. A ciclização e subsequente funcionalização do grupo amino fornece composto bicíclico da fórmula S5, que sofre deslocamento nucleofílico com metanotiolato de sódio, seguido pela oxidação para obter a fórmula S7. Ciclização adicional da fórmula S7 na presença de hidrazina, seguida por deslocamento nucleofílico com LG1-CH2-Q1 na presença de uma base fornece intermediários da fórmula S9. O grupo de enxofre na fórmula S9 pode ser oxidado em sulfinil ou sulfonil ME1 33078475v.1 para fornecer fórmula S10 ou S11, que é um substrato para o deslocamento nucleofílico adicional para gerar uma fórmula geral S12. Conforme usado neste documento, X1 é um grupo lábil, conforme definido neste documento. Em determinadas modalidades, X1 é halogênio, alcananossulfoniloxi, arenossulfoniloxi, diazônio, alquil diazenos, aril diazenos, alquil triazenos, aril triazenos, nitro, alquil nitrato, aril nitrato, alquil fosfato, aril fosfato, alquil carbonil oxi, aril carbonil oxi, alcoxicarbonil oxi, aroxcarbonil oxi amônia, alquil aminas, aril aminas, grupo hidroxil, grupo alquilóxi, grupo arilóxi; LG1 é um grupo lábil conforme definido neste documento; Q1 é cicloalquil opcionalmente substituído, heterociclil opcionalmente substituído, aril opcionalmente substituído, ou heteroaril opcionalmente substituído (por exemplo, heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído); e Nu1 é um nucleófilo conforme definido neste documento (por exemplo, heteroaril alquileno monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído). Nu1 do composto da fórmula S12 pode ser adicionalmente convertido em outras funcionalidades com transformações químicas padrão. R1 é conforme definido na primeira modalidade. Em determinadas modalidades, Q1 é um heteroaril opcionalmente substituído. Esquema 2 o-xileno Funcionilização 2-metoxietanol 2-metoxietanol halogenação acoplamento
[0089] Em algumas modalidades, os compostos da Fórmula (I) podem ser preparados usando métodos mostrados no Esquema 2. Semelhante ao Esquema 1, a fórmula S21 pode ser preparada a partir de aldeído tiazol da ME1 33078475v.1 fórmula S13. A halogenação da fórmula S21 produz a fórmula S22, que pode ser submetida a uma reação de organoacoplamento com um metal alquil, metal alquenil, metal alquinil, metal aril, metal heteroaril, metal heterociclil, ou metal cicloalquil para produzir um composto da fórmula S23. Conforme usado neste documento, X3 é um halogênio; R1 é conforme definido na primeira modalidade da invenção; LG2 é um grupo lábil conforme definido neste documento; Q2 é cicloalquil opcionalmente substituído, heterociclil opcionalmente substituído, aril opcionalmente substituído, ou heteroaril opcionalmente substituído (por exemplo, heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído); M1 é um metal (por exemplo, Li, Na, K, Mg, Zn, Sn, B, Pd, Si, Cu, etc.), X4 é halogênio ou éster de ácido alquil sulfônico ou um éster de ácido aril sulfônico; Rr1 é alquil opcionalmente substituído, alquenil opcionalmente substituído, alquinil opcionalmente substituído, cicloalquil opcionalmente substituído, heterociclil opcionalmente substituído, aril opcionalmente substituído ou heteroaril opcionalmente substituído. Em certas modalidades, a reação de organoacoplamento é uma reação de Negishi; X3 é I; e M1 é Zn.
[0090] Os compostos da fórmula S22 e S23 são intermediários úteis para introduzir mais funcionalidades na posição X3 e/ou Rr1 (Esquema 3). Em certas modalidades, o composto da fórmula 23-i pode ser ainda mais oxidado para formar a fórmula S24. A adição nucleofílica de S24 com um nucleófilo apropriado gera um composto de S25. Em outra modalidade, os compostos da fórmula S22 podem ser acoplados ao metal vinílico para introduzir o grupo vinil ao anel tiazol. A oxidação do grupo vinil seguido por adição nucleofílica fornece um composto da fórmula S28. Conforme usado neste documento, Nu2 é um nucleófilo. Em determinadas modalidades, Rr1 é heteroarilalquileno monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído e Q2 é heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído. Esquema 3 adição nucleofílica ME1 33078475v.1 adição tributil(vinil)estano nucleofílica lutidina
[0091] Conforme usado neste documento, Rr2 é alquil opcionalmente substituído, alquenil opcionalmente substituído, alquinil opcionalmente substituído, cicloalquil opcionalmente substituído, heterociclil opcionalmente substituído, aril opcionalmente substituído, ou heteroaril opcionalmente substituído; e Q2 é conforme definido no Esquema 2. Em determinadas modalidades, Rr2 e Q2 são, cada um independentemente, um heteroaril com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído.
[0092] Conforme usado neste documento, um nucleófilo é uma espécie química que doa um par de elétrons a um eletrófilo para formar uma ligação química relacionada a uma reação. Todas as moléculas ou íons com um par livre de elétrons ou pelo menos uma ligação pi podem agir como nucleófilos. Os nucleófilos exemplares compreendem pelo menos um grupo possuindo funcionalidade nucleofílica, por exemplo, um carbono alfa (por exemplo, o carbono adjacente a carbonil, sulfonil, sulfinil, grupo aril ou heteroaril), um grupo tiol, um grupo hidroxil, um grupo amina primário, um grupo amina secundária, um haleto, cianeto, azida, alcóxido, metal orgânico ou base inorgânica.
[0093] Em algumas modalidades, compostos conforme descritos neste documento podem ser preparados usando métodos mostrados no Esquema 4. O deslocamento nucleofílico das fórmulas S30 e S33 com uma amina cíclica secundária fornece as fórmulas S31 e S34 respectivamente. Reações de organoacoplamento (por exemplo, reação de Suzuki, reação de Stille, etc.) do composto S35 fornecem um composto de fórmulas S36(i)-(ii). Esquema 4 ME1 33078475v.1
[0094] Conforme usado neste documento, representa um anel heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros A com um nitrogênio como um átomo de anel. Conforme usado neste documento, representa o anel heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros B com o ponto de ligação sobre o átomo de anel de carbono.
[0095] R1 é conforme definido na primeira modalidade. X4 é halogênio ou −OTf. M4 é um metal orgânico com ligantes apropriados, se necessário (orgânico ou inorgânico) conforme a valência permitir. M4 exemplificado inclui, entre outros Sn, B (por exemplo, ácidos borônicos e ésteres borônicos), Zn, Mg, Si, Pd, Cu e Li orgânico. Métodos de tratamento
[0096] Em uma modalidade, é fornecido um método para tratar uma doença, condição ou distúrbio, conforme descrito neste documento (por exemplo, tratamento), compreendendo a administração de um composto, um sal farmaceuticamente aceitável de um composto ou composição farmacêutica compreendendo um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto de Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos e na Tabela 1 e Figura 1).
[0097] Os compostos e composições descritos neste documento podem ser administrados a células em cultura, por exemplo, in vitro ou ex vivo ou a um sujeito, por exemplo, in vivo, tratar e/ou diagnosticar uma variedade de distúrbios, incluindo aqueles descritos abaixo neste documento.
[0098] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para ME1 33078475v.1 aumentar o tempo de vida das hemácias (RBCs) em necessidade disso compreendendo o colocar o sangue em contato com uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0099] Em uma outra modalidade, o composto ou composição farmacêutica é adicionado diretamente ao sangue total ou concentrado de hemácias (por exemplo, extracorporealmente). Em outra modalidade, o composto ou composição farmacêutica é administrado a um sujeito em necessidade disso.
[00100] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para regular os níveis de 2,3-difosfoglicerato no sangue em necessidade disso colocando o sangue em contato com uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Formulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[00101] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para tratar a doença falciforme compreendendo administrar a um sujeito em necessidade disso uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[00102] Conforme usado neste documento, doença falciforme (SCD), ME1 33078475v.1 doença de Hemoglobina SS e anemia de células falciformes são usados intercambiavelmente. Doença falciforme (SCD) descreve um grupo de distúrbios hereditários nas hemácias. Em determinadas modalidades, sujeitos com SCD têm hemoglobina anormal, chamada hemoglobina S ou hemoglobina falciforme, em suas hemácias. Em determinadas modalidades, um sujeito com SCD tem pelo menos um gene anormal fazendo com que o corpo produza a hemoglobina S. Em determinadas modalidades, um sujeito com SCD tem dois genes de hemoglobina S, Hemoglobina SS.
[00103] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método de tratamento da deficiência de piruvato quinase (PKD) em um sujeito compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[00104] Conforme descrito neste documento, PKD é uma deficiência de PKR. Em determinadas modalidades, a deficiência de PKR está associada a uma mutação de PKR. Em determinadas modalidades, PKD se refere à presença de pelo menos 2 alelos mutantes no gene PKLR. Em determinadas modalidades, pelo menos 1 dos pelo menos 2 alelos mutantes no gene PKLR é uma mutação missense. Em determinadas modalidades, um paciente com PKD tem uma concentração de Hb menor ou igual a 10,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o paciente não está sob transfusão regular (por exemplo não teve mais do que 4 episódios de transfusão no período de 12 meses). Em determinadas modalidades, o paciente está sob transfusão regular (por exemplo teve pelo menos 4 episódios de transfusão no período de 12 meses). Em determinadas modalidades, o paciente está sob transfusão regular com pelo ME1 33078475v.1 menos 6 episódios de transfusão no período de 12 meses. Em determinadas modalidades, o paciente sob transfusão regular tem hemoglobina (Hb) ≤12,0 g/dL (se masculino) ou ≤11,0 g/dL (se feminino), por exemplo, 15. Em determinadas modalidades, o paciente passou por esplenectomia.
[00105] Em uma modalidade, a mutação de PKR é selecionada do grupo consistindo em A31V, A36G, G37Q, R40W, R40Q, L73P, S80P, P82H, R86P, I90N, T93I, G95R, M107T, G111R, A115P, S120F, H121Q, S130P, S130Y, V134D, R135D, A137T, G143S, I153T, A154T, L155P, G159V, R163C, R163L, T164N, G165V, L167M, G169G, E172Q, W201R, I219T, A221Y, D221N, G222A, I224T, G232C, N253D, G263R, G263W, E266K, V269F, L272V, L272P, G275R, G275R, E277K, V280G, D281N, F287V, F287L, V288L, D293N, D293V, A295I, A295V, I310N, I314T, E315K, N316K, V320L, V320M, S330R, D331N, D331G, D331E, G332S, V335M, A336S, R337W, R337P, R337Q, D339N, D339Q, G341A, G341D, I342F, K348N, A352D, I357T, G358R, G358E, R359C, R359H, C360Y, N361D, G364D, K365M, V368F, T371I, L374P, S376I, T384M, R385W, R385K, E387G, D390N, A392T, N393D, N393S, N393K, A394S, A394D, A394V, V395L, D397V, G398A, M403I, G406R, E407K, E407G, T408P, T408A, T408I, K410E, G411S, G411A, Q421K, A423A, A423A, R426W, R426Q, E427A, E427N, A431T, R449C, I457V, G458D, A459V, V460M, A468V, A468G, A470D, T477A, R479C, R479H, S485F, R486W, R486L, R488Q, R490W, I494T, A495T, A495V, R498C, R498H, A503V, R504L, Q505E, V506I, R510Q, G511R, G511E, R518S, R531C, R532W, R532Q, E538D, G540R, D550V, V552M, G557A, R559G, R559P, N566K, M568V, R569Q, R569L, Q58X, E174X, W201X, E241X, R270X, E440X, R486X, Q501X, L508X, R510X, E538X, R559X. Essas mutações são descritas em Canu et al., Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, pp 100-109. Em uma modalidade, a PKR mutante é selecionada dentre G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q e R490W. Em determinadas modalidades, a PKR mutante é selecionada dentre A468V, A495V, I90N, T408I e Q421K e R498H. Em determinadas ME1 33078475v.1 modalidades, a PKR mutante é R532W, K410E, ou R510Q.
[00106] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método de tratamento de anemia em um sujeito compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em determinadas modalidades, a anemia é uma anemia diseritropoética, tal como anemia diseritropoética tipo I, II, III ou IV. Em determinadas modalidades, a anemia é anemia hemolítica. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é uma forma congênita e/ou hereditária de anemia hemolítica, tal como PKD, doença falciforme, talassemia (por exemplo, alfa ou beta), esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, hemoglobinúria paroxística noturna, abetalipoproteinemia (síndrome de Bassen-Kornzweig). Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica adquirida, tal como anemia hemolítica autoimune, anemia hemolítica induzida por fármaco. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia como parte de uma doença multissistêmica, tal como anemia de Púrpura Eritropoiética Congênita, Fanconi, Diamond-Blackfan.
[00107] Conforme usado neste documento, o termo "anemia" refere- se a uma deficiência de hemácias (RBCs) e/ou hemoglobina. Conforme usado neste documento, a anemia inclui todos os tipos de anemia clínica, por exemplo (sem limitação): anemia microcítica, anemia por deficiência de ferro, hemoglobinopatias, defeito de síntese de heme, defeito de síntese de globina, defeito sideroblástico, anemia normocítica, anemia de doença crônica, anemia aplástica, anemia hemolítica, anemia macrocítica, anemia megaloblástica, anemia perniciciosa, anemia dimórtica, anemia de prematuridade, anemia de Fanconi, esferocitose hereditária, doença falciforme, anemia hemolítica ME1 33078475v.1 autoimune tipo quente, doenças de aglutininas frias, osteopetrose, talassemia e síndrome mielodisplásica.
[00108] Em determinadas modalidades, a anemia pode ser diagnosticada em um hemograma completo. Em determinadas modalidades, a anemia pode ser diagnosticada com base na medição de um ou mais marcadores de hemólise (por exemplo, contagem de RBC, hemoglobina, reticulócitos, esquistócitos, lactato Desidrogenase (LDH), haptoglobina, bilirrubina e ferritina) e/ou volume corpuscular médio de hemossiderinúria (MCV) e/ou largura de distribuição de glóbulos vermelhos (RDW). No contexto da presente invenção, a anemia está presente se um indivíduo tiver uma hemoglobina (Hb) inferior ao nível desejado, por exemplo, a concentração de Hb inferior a 14 g/dL, mais preferencialmente inferior a 13 g/dL, mais preferencialmente inferior a 12 g/dL, mais preferencialmente inferior a 11 g/dL, ou mais preferencialmente inferior a 10 g/dL.
[00109] Em determinadas modalidades, é fornecido neste documento um método para aumentar a quantidade de hemoglobina em um sujeito em necessidade disso administrando uma quantidade terapêutica eficaz de um composto conforme descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou uma composição farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de hemoglobina no sujeito. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb até um nível desejado, por exemplo, acima de 10 g/dL, mais preferencialmente acima de 11 g/dL, mais preferencialmente acima de 12 g/dL, mais preferencialmente acima de 13 g/dL, ou mais preferencialmente acima de 14 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 0,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 1,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo ME1 33078475v.1 menos cerca de 1,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 2,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 2,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 3,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 3,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 4,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 4,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 5,0 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 5,5 g/dL. Em determinadas modalidades, o método fornecido aumenta a concentração de Hb em pelo menos cerca de 6,0 g/dL.
[00110] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para tratar anemia hemolítica compreendendo administrar a um sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[00111] Em uma outra modalidade, a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia congênita. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é hereditária (por exemplo, anemia hemolítica não- esferocítica ou esferocitose hereditária).
[00112] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método de ME1 33078475v.1 tratamento da talassemia; esferocitose hereditária; elipocitose hereditária; abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig; hemoglobinúria paroxística noturna; anemia hemolítica adquirida (por exemplo, anemias congênitas (por exemplo, enzimopatias)); doença falciforme; ou anemia de doenças crônicas compreendendo administrar a um sujeito uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a anemia hemolítica adquirida compreende anemias congênitas. Em certas modalidades, o método fornecido é para tratar a talassemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é beta-talassemia.
[00113] Conforme usado neste documento, a talassemia é um distúrbio sanguíneo herdado no qual o corpo produz uma forma anormal de hemoglobina. Em determinadas modalidades, o distúrbio resulta em um grande número de hemácias sendo destruídas, o que leva à anemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é alfa-talassemia. Em determinadas modalidades, a talassemia é beta-talassemia.
[00114] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para ativar PKR mutante em glóbulos vermelhos, compreendendo administrar a um sujeito em necessidade disso uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, o método é um método ex vivo. Em outra modalidade, o método é um método in ME1 33078475v.1 vitro. Em algumas modalidades, o sangue ou as hemácias são derivadas ou obtidas de um sujeito que sofre de ou é suscetível a uma doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste em deficiência de piruvato quinase (PKD), talassemia (por exemplo, beta talassemia), esferocitose hereditária, elipocitose hereditária, abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig, doença falciforme, hemoglobinúria paroxística noturna, anemia (por exemplo, anemia por dinossassófica), anemia hemolítica e anemia de doenças crônicas. Em algumas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica.
[00115] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método para ativar PKR do tipo selvagem em hemácias compreendendo administrar a um sujeito em necessidade disso uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, o método é um método ex vivo. Em outra modalidade, o método é um método in vitro. Em algumas modalidades, o sangue ou as hemácias são derivadas ou obtidas de um sujeito que sofre de ou é suscetível a uma doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste em deficiência de piruvato quinase (PKD), talassemia (por exemplo, beta talassemia), esferocitose hereditária, elipocitose hereditária, abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig, doença falciforme, hemoglobinúria paroxística noturna, anemia (por exemplo, anemia por dinossassófica), anemia hemolítica e anemia de doenças crônicas. Em algumas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica.
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[00116] Em uma modalidade da invenção fornecida é um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para aumentar o tempo de vida das hemácias (RBCs) em necessidade disso.
[00117] Em outra modalidade, o composto ou composição farmacêutica é formulado para ser adicionado diretamente ao sangue total ou concentrado de hemácias extracorporalmente. Em outra modalidade, o composto ou composição farmacêutica é formulado para ser administrado a um sujeito em necessidade disso.
[00118] Em uma modalidade da invenção é fornecido um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para regular os níveis de 2,3-difosfoglicerato no sangue em necessidade disso.
[00119] Em uma modalidade da invenção é fornecido um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para o tratamento de anemia. Em determinadas modalidades, a anemia é uma anemia ME1 33078475v.1 diseritropoética tal como anemia diseritropoética cogênita tipo I, II, III ou IV. Em determinadas modalidades, a anemia é anemia hemolítica. Em determinadas modalidades, a anemia hemolitica é uma forma congênita e/ou hereditária de anemia hemolítica, tal como PKD, doença falciforme, talassemia (por exemplo, alfa ou beta), esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, hemoglobinúria paroxística noturna, abetalipoproteinemia (síndrome de Bassen-Kornzweig). Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica adquirida, tal como anemia hemolítica autoimune, anemia hemolítica induzida por fármaco. Em determinadas modalidades, a anemia hemolítica é anemia como parte de uma doença multissistêmica, tal como anemia de Púrpura Eritropoiética Congênita, Fanconi, Diamond-Blackfan.
[00120] Em uma modalidade da invenção fornecida é um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para o tratamento de anemia hemolítica.
[00121] Em uma modalidade da invenção fornecida é um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto de Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para o tratamento de doença falciforme.
[00122] Em uma modalidade da invenção fornecida é um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto de ME1 33078475v.1
Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para tratar a deficiência de piruvato quinase (PKD) em um sujeito.
[00123] Conforme descrito neste documento, PKD é uma deficiência de PKR. Em determinadas modalidades, a deficiência de PKR está associada a uma mutação de PKR.
[00124] Em uma modalidade da invenção é fornecido um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para tratamento de talassemia; esferocitose hereditária; elipocitose hereditária; abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig; hemoglobinúria paroxística noturna; anemia hemolítica adquirida; ou anemia de doenças crônicas.
[00125] Em uma modalidade da invenção é fornecido um uso de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto de Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para ativar a PKR mutante em hemácias.
[00126] Em uma modalidade da invenção fornecida é um uso de(1) ME1 33078475v.1 um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para ativar a PKR do tipo selvagem em hemácias.
[00127] Em uma modalidade da invenção, é fornecido um método de ativação de piruvato quinase R (PKR), compreendendo colocar a PKR em contato com uma quantidade eficaz de (1) um composto descrito neste documento (por exemplo, um composto das Fórmulas (I)-(V), nos Exemplos, e na Tabela 1 e Figura 1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (2) uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um composto descrito neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade, a PKR é uma PKR do tipo selvagem. Em outra modalidade, a PKR é uma PKR mutante. Em algumas modalidades, a PKR é expressa em hemácias. Em uma modalidade, o método é um método ex vivo. Em outra modalidade, o método é um método in vitro. Em algumas modalidades, o sangue ou as hemácias são derivadas ou obtidas de um sujeito que sofre de ou é suscetível a uma doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste em deficiência de piruvato quinase (PKD), talassemia (por exemplo, beta talassemia), esferocitose hereditária, elipocitose hereditária, abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig, doença falciforme, hemoglobinúria paroxística noturna, anemia (por exemplo, anemia por dinossassófica), anemia hemolítica e anemia de doenças crônicas. Em algumas modalidades, a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica.
[00128] Uma vez que os compostos e composições descrito neste ME1 33078475v.1 documentos agem na mesma via biológica e têm o modo de ação similar aos compostos descritos em WO2012/151451, os compostos e composições apresentados neste documento podem ativar os mutantes de PKR conforme descrito em WO2012/151451. Composições e vias de administração
[00129] As composições delineadas neste documento incluem os compostos delineados neste documento (por exemplo, um composto descrito neste documento), bem como agentes terapêuticos adicionais, se presentes, em quantidades eficazes para obter uma modulação da doença ou sintomas da doença, incluindo aqueles descritos neste documento.
[00130] O termo "carreador ou adjuvante farmaceuticamente aceitável" refere-se a um carreador ou adjuvante que pode ser administrado a um paciente, juntamente com um composto fornecido com o mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e que não destrua a atividade farmacológica do mesmo e seja não tóxico quando administrado em doses suficientes para distribuir uma quantidade eficaz do composto.
[00131] Carreadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nas composições farmacêuticas fornecidas neste documento incluem, entre outros, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, sistemas de distribuição de fármacos autoemulsificantes (SEDDS), tais como succinato de d-α-tocoferol polietilenoglicol 1000, surfactantes usados em formas de dosagem farmacêuticas como Tweens, ou outras matrizes de distribuição poliméricas similares, proteínas séricas, tais como albumina sérica humana, substâncias tampão como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicerídeos parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato dipotássico, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolidona, substâncias a base de celulose, polietileno glicol, carboximetilcelulose sódica, poliacrilatos, ME1 33078475v.1 ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, polietileno glicol e gordura da lã. Ciclodextrinas tais como α-, β- e γ-ciclodextrina, ou derivados quimicamente modificados, tais como hidroxialquilciclodextrinas, incluindo 2- e 3-hidroxipropil-β-ciclodextrinas, ou outros derivados solubilizados também podem ser vantajosamente usados para melhorar a distribuição do composto das fórmulas descritas neste documento.
[00132] As composições farmacêuticas fornecidas neste documento podem ser administradas oralmente, por via parentérica, por spray inalante, topicamente, via retal, nasal, bucal, vaginal ou através de um reservatório implantado, preferencialmente por administração oral ou administração por injeção. As composições farmacêuticas fornecidas neste documento podem conter quaisquer carreadores, adjuvantes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais.
[00133] As composições farmacêuticas fornecida neste documento podem ser administradas oralmente em qualquer forma de dosagem oralmente aceitável, incluindo, entre outras, cápsulas, comprimidos, emulsões e suspensões aquosas, dispersões e soluções. No caso dos comprimidos para uso oral, os carreadores que são comumente usados incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, também são tipicamente adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando suspensões aquosas e/ou emulsões são administradas oralmente, o ingrediente ativo pode ser suspenso ou dissolvido em uma fase oleosa é combinado com agentes emulsificantes e/ou de suspensão.
[00134] Quando as composições fornecidas neste documento compreendem uma combinação de um composto das fórmulas descritas neste documento e um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos adicionais, tanto o composto quanto o agente adicional devem estar presentes em níveis de dosagem entre cerca de 1 a 100%, e mais preferencialmente entre cerca de 5 a ME1 33078475v.1
95% da dosagem normalmente administrada em um regime de monoterapia. Os agentes adicionais podem ser administrados separadamente, como parte de um regime de dose múltipla, a partir dos compostos fornecidos neste documento. Alternativamente, esses agentes podem ser parte de uma única forma de dosagem, misturados com os compostos fornecidos neste documento em uma única composição.
[00135] Os compostos descritos neste documento podem, por exemplo, ser administrados por injeção, por via intravenosa, intrarterialmente, subdermicamente, intraperitonealmente, por via subcutânea; ou oralmente, via bucal, nasal, transmucosal, topicamente, em uma preparação oftálmica ou por inalação, com uma dosagem variando de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal, alternativamente dosagens entre 1 mg e 1000 mg/dose, a cada 4 a 120 horas, ou de acordo com os requisitos do fármaco em particular. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma única forma de dosagem irá variar dependendo do hospedeiro tratado e do modo de administração específico. Uma preparação típica conterá de cerca de 5% a cerca de 95% de composto ativo (p/p). Alternativamente, tais preparações contêm de cerca de 20% a cerca de 80% de composto ativo.
EXPERIMENTAL Lista de abreviações: abrev. Nome completo abrev. Nome completo anidro anidro aq. aquoso min minuto(s) satd. saturado mL mililitros hrs horas mmol milimol(s) mol mol(s) MS espectrometria de massa NMR ressonância magnética nuclear TLC cromatografia de camada fina HPLC cromatografia líquida de alto desempenho LCMS Cromatografia líquida– MTBE Éter metil terc-butílico espectrometria de massa DAST Dietilaminosulfurtrifluoreto CHCl3 clorofórmio DCM diclorometano DMF dimetilformamida Et2O éter dietílico EtOH álcool etílico EtOAc acetato de etila MeOH álcool metílico ME1 33078475v.1
MeCN acetonitrila PE éter de petróleo THF tetra-hidrofurano DMSO dimetilsulfóxido AcOH acético ácido HCl ácido clorídrico H2SO4 ácido sulfúrico NH4Cl cloreto de amônio KOH hidróxido de potássio NaOH hidróxido de sódio K2CO3 carbonato de potássio Na2CO3 carbonato de sódio TFA ácido trifluoroacético Na2SO4 sulfato de sódio NaBH4 boroidreto de sódio NaHCO3 bicarbonato de sódio LiHMDS hexametildisililamida de lítio NaBH4 boroidreto de sódio Et3N ou Trietilamina Py ou Pyr piridina
TEA DMAP 4-(dimetilamino)piridina DIPEA N,N-di-isopropiletilamina BINAP 2,2'bis(difenilfosfanil) dppf 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno -1,1'-binaftil PEP Ácido fosfo(enol)pirúvico LDH Lactato Desidrogenase DTT DL-Ditiotreitol BSA Albumina sérica bovina NADH Dinucleotídeo de adenina β- SEM 2-(Trimetilsilil)etoximetil nicotinamida, reduzido p-TsOH Ácido p-toluenossulfônico DCE 1,2-dicloroetano Experimental geral
[00136] Nos exemplos a seguir, os reagentes químicos foram comprados de fontes comerciais (tais como Alfa, Acros, Sigma Aldrich, TCI e Shanghai Chemical Reagent Company) e usados sem purificação adicional. Cromatografia flash foi realizada em um Ez Purificfier III através de coluna com partículas de sílica-gel de 200-300 esh. Placas de cromatografia de camada fina (TLC) analítica e preparativa foram HSGF 254 (espessura de 0,15-0,2 mm, Shanghai Anbang Company, China). Os espectros de ressonância magnética nuclear (NMR) foram registrados usando Brucker AMX-300 ou AMX-400 NMR (Brucker, Suíça). As mudanças químicas foram relatadas em partes por milhão (ppm, δ) etero(ESI) de um Espectrômetro de massa Waters LCT TOF (Waters, EUA). As cromatografias de HPLC foram registradas em Cromatografia Líquida Agilent 1200 (Agilent, EUA, coluna: Ultimate 4,6 m x 50 mm, 5 M, fase móvel A: ácido fórmico a 0,1% em água; fase móvel B: acetonitrila). As reações de micro- ondas foram executadas em um Iniciador 2,5 Sintetizador de Micro-Ondas (Biotage, Suécia).
[00137] As condições de HPLC usadas nos experimentos descritos ME1 33078475v.1 neste documento são as seguintes: Método 1: Instrumento: Shimadzu LC-2010AHT Coluna: YMC-Triart C18, 50 × 4,6 mm, 5 µm Fase Móvel: Solvente A:H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0,1, Solvente B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0,1 Vazão: 2,5 mL/min; Temperatura da coluna: 35°C; Comprimento de onda: 220 nm/254 nm Método 2: Instrumento: Shimadzu LC-2010AHT Coluna: YMC-Triart C18, 50 × 4,6 mm, 5 µm Fase Móvel: Solvente A:H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0,1, Solvente B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0,1 Vazão: 2,5 mL/min; Temperatura da coluna: 35°C; Comprimento de onda: 220 nm/254 nm
[00138] As condições de Prep-HPLC usadas nos experimentos descritos neste documento são as seguintes: Instrumento: Waters 2545B/2767 Coluna: YMC-Triart C18, 50 × 4,6 mm, 5 µm Fase Móvel: Solvente A:H2O (01.% FA), Solvente B: CH3OH ou CH3CN Vazão: 20 mL/min; Temperatura da coluna: 35°C; Comprimento de onda: 220 nm/254 nm Exemplo 1. Síntese de 6-(3-metoxibenzil)-2,4-dimetil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona.
o-xileno 2-etoxietanol
[00139] Etapa A. (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il)acrilato de etila.A ME1 33078475v.1 uma solução de NaOEt (803 mg, 11,79 mmol) em EtOH (10 mL) entre cerca de - 10 °C e cerca de -5 °C foi adicionada gota a gota uma solução de 2-metiltiazol-5- carbaldeído (500 mg， 3,93mmol) e 2-azidoacetato de etila (1,53 g, 11,79 mmol ）em EtOH anidro (3 mL). A mistura de reação foi agitada por cerca de 1 hora, enquanto a temperatura se manteve abaixo de 0 °C, então aquecida a r.t. e agitada por mais 2 horas. A mistura resultante foi vertida em NH4Cl aquoso saturado (50 mL) a 0 °C e extraído com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto desejado (500 mg) que foi usado diretamente na etapa seguinte sem nenhuma purificação. LCMS: m/z 239 (M+H)+.
[00140] Etapa B. 2-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila. Uma mistura de (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il)acrilato de etila (500 mg, 2,1 mmol) em o-xileno (5 mL) foi agitada a 140 °C por 2 horas. Então, resfriada até r.t. e então diretamente purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: pentano/EtOAc = 6/1 para obter o produto desejado (220 mg, 49,8 % de rendimento). LCMS: m/z 211(M+H)+.
[00141] Etapa C. 2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila. A uma solução de 2-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila (160 mg, 0,76 mmol) em DMF (3 mL) a 0 °C foi adicionado NaH (36,5 mg, 1,52 mmol). A mistura de reação foi agitada em r.t. por 0,5 hora, seguida pela adição de CH3I (47 μL, 0,76 mmol). A mistura resultante foi agitada em r.t por 0,5 hora, então, vertida em NH4Cl aquoso saturado a 0 °C e extraído com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: pentano/acetato de etila = 6/1) para produzir o produto desejado (124 mg, rendimento de 72,6%). LCMS: m/z 225 (M+H)+.
[00142] Etapa D. 6-formil-2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5- ME1 33078475v.1 carboxilato de etila. A uma mistura de 2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5- carboxilato de etila (100 mg, 0,446 mmol) em DMF (1 mL)) a 0°C foi adicionado POCl3 (122,5 μL, 1,338 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100 °C por 2 horas, então, vertida em NaHCO3 aquoso saturado a 0 °C e extraído com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: pentano/acetato de etila = 5/1) para produzir o produto desejado (57 mg, rendimento de 50,7%). LCMS: m/z 253 (M+H)+.
[00143] Etapa E. 2,4-Dimetil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma mistura de 6-formil-2,4- dimetil-4H-pirrolo[2,3-d] tiazol-5-carboxilato de etila (57 mg, 0,226 mmol) em 2- etoxietanol (2 mL) foi adicionado N2H4.H2O (53,7 μL, 1,130 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100 °C por 1 hora e então vertida em H2O e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: pentano/acetato de etila = 5/1) para produzir o produto desejado (49 mg, rendimento de 98,4%). LCMS: m/z 221 (M+H)+.
[00144] Etapa F. 6-(3-Metoxibenzil)-2,4-dimetil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma mistura de 2,4-dimetil- 4,6-di-hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (49 mg, 0,223 mmol) em DMF (1 mL) a 0°C foi adicionado t-BuOK (50,8 mg, 0,454 mmol). A mistura de reação foi agitada a r.t. por 0,5 hora, seguida pela adição de 1-(clorometil)-3- metoxibenzeno (34,9 mg, 0,223 mmol). A mistura resultante foi agitada em r.t. por 1 hora e então vertida em solução de NH4Cl aquoso saturado a 0 °C e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: ME1 33078475v.1 pentano/acetato de etila = 3/1) para produzir o produto desejado. LCMS: m/z 341 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (s, 1H), 7,23 (t, 1H), 6,92 – 6,72 (m, 3H), 5,32 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 2,85 (s, 3H).
[00145] O Exemplo 1 fornece a síntese exemplificada do composto E1-3. Entende-se que compostos diferentes podem ser sintetizados com o heteroaril-CH2-haleto apropriado. Exemplos 2. Preparação de Compostos da Fórmula E2-vii com Esquema E2 Esquema E2 o-xileno 2-metoxietanol, cat. 2-metoxietanol tolueno
[00146] Em que X é um grupo lábil (por exemplo, Cl, Br ou I, Oms, ou Ots); M é um complexo de metal orgânico (por exemplo, complexo organoboro, tal como ácido borônico ou complexo de boro de pinaco boro, complexo de organotina como -Sn(But)3 complexo organozinco, tal como -Zn(halogênio)); Q e R2 são, cada um independentemente, um heteroaril com 5 membros ou 6 membros opcionalmente substituído. Semelhante à síntese dos compostos da Fórmula E1-v no Exemplo 1, o composto E2-iv pode ser sintetizado a partir de aldeído de tiazol E2-i com algumas modificações (por exemplo, reação do composto E2-ii com MsCl seguido pela eliminação para gerar o composto E2-iii; o sistema tricíclico pode ser formado com cat. AcOH em 2-metoxietanol). A substituição e iodinação do composto E2-iv fornece o composto E2-vi. As reações de acoplamento do composto E2-vi com um organometálico na presença de um catalisador produz o composto E2-vii. Exemplo 2A. Síntese de 4-metil-4,6-di-hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo ME1 33078475v.1
-[2,3-d]piridazin-5-ona o-xileno, cat. 2-metoxietanol 3 horas 2-metoxietanol
[00147] Etapa A. 2-azido-3-hidroxi-3-(tiazol-5-il)propanoato de etila. Sódio (12,2 g, 0,531 mol) foi adicionado lentamente em r.t. a uma solução agitada de EtOH seco (300 mL). A mistura de reação foi então resfriada a -20 °C, seguido pela adição gota a gota de uma solução de 2-azidoacetato de etila (68,5 g, 0,531 mol) e tiazol-5-carbaldeído (20,0 g, 0,177 mol) em EtOH anidro (100 mL), mantendo a temperatura entre -20 °C e -15 °C. Após a adição, a mistura de reação foi agitada a -20 °C por mais 1 hora e então vertida em NH4Cl aquoso saturado (1L). A mistura resultante foi saturada com NaCl e extraída com EtOAc. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel usando (eluente: PE/EtOAc = 6/1 a 5/1 a 1/1) para gerar o produto desejado (34 g) como pálido. LCMS: m/z= 243 (M+H)+.
[00148] Etapa B. (Z)-2-azido-3-(tiazol-5-il)acrilato de etila. A uma mistura agitada de 2-azido-3-hidroxi-3-(tiazol-5-il)propanoato de etila (103 g, 0,426 mol) em DCM seco (1,5 L) a -35 °C foi adicionado MsCl (146 g, 1,28 mol), seguido pela adição em gotas de TEA (301 g, 2,98 mol), mantendo a temperatura entre -35 °C e -30 °C. Após a adição, a mistura de reação foi agitada a -30 °C por mais 15 min, então vertida em NH4Cl aquoso saturado (1,5 L). A mistura resultante foi saturada com NaCl e extraída com DCM duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas em sequência com HCl aquoso (1 M) e salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel usando (eluente: PE/EtOAc = 5/1) para gerar o produto desejado (82,0 g, 86,3% de rendimento). LCMS: m/z= 225 (M+H)+.
[00149] As Etapas C-E para sintetizar 4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5- ME1 33078475v.1 carboxilato de etila, 4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila e 6- formil-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila foram semelhantes aos procedimentos no Exemplo 1A.
[00150] Etapa F. (E)-6-(hidrazonometil)-4-metil-4H-pirrolo[2,3- d]tiazol-5-carboxilato de etila. A uma mistura agitada de N2H4.H2O (2,0 g, 98%, 40 mmol) em 2-metoxietanol (50 mL) em r.t. foi adicionado 6-formil-4-metil- 4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila (4,8 g, 20 mmol), seguido pela adição de 20 gotas de AcOH. A mistura de reação foi agitada em r.t. por cerca de 30 min até a mistura ficar transparente. A mistura resultante foi vertida em água (100 mL) com agitação e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para gerar o produto desejado que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/z= 253 (M+H)+.
[00151] Etapa G. 4-Metil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma suspensão agitada de (E)-6-(hidazonometil)-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5 -carboxilato de etila (4,8 g, 0,19 mol) em 2-metoxietanol (50 mL) em r.t. foi adicionado AcOH (20 gotas). A suspensão reacional foi agitada a 105 °C por 3 horas, e então filtrada. A torta de filtro foi lavada com água e seca sob vácuo alto para obter o primeiro lote do produto desejado. O filtrado foi diluído com água e extraído com DCM duas vezes. As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para gerar o segundo lote do produto desejado. Os dois lotes combinados do produto desejado (2,5 g) foram usados diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/z= 207 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,68(s, 1H), 9,35 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 4,30 (s, 3H) Exemplo 3.Síntese dos compostos E3-vii e E3-viii Esquema E3 ME1 33078475v.1
2-Metoxietanol elaboração adicional opcional de Q
[00152] Em que Hal é halogênio (por exemplo, Cl, Br ou I); LG é um grupo lábil (por exemplo, Cl, Br, I, OMs ou OTs); Q é heteroaril com 5 membros ou 6 membros opcionalmente substituído; e Q' é heteroaril com 5 membros ou 6 membros ainda mais funcionalizado. A reação de substituição aromática do composto E3-i com metanotiolato de sódio fornece o composto E3-ii, que pode ser convertido para o composto E3-v usando a síntese do composto E1-iii a E1- vi. A oxidação do composto E3-v com mCPBA obtém o composto E3-vi e E3-vii respectivamente. Exemplo 3A.Síntese de 4-metil-2-(metiltio)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5-ona 2-etoxietanol
[00153] Etapa A: 4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5- carboxilato de etila. A uma mistura de 2-bromo-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5- carboxilato de etila (500,0 mg, 1,73 mmol) em EtOH (10,0 mL) foi adicionada NaSMe (240,0 mg, 3,5 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25 °C por 3 horas, então suprimida com água gelada e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para gerar o produto desejado (460 mg), ME1 33078475v.1 que foi usado diretamente na etapa seguinte sem nenhuma purificação. LC-MS: m/z 257 (M+H)+.
[00154] Etapa B: 6-formil-4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3- d]tiazol-5-carboxilato de etila. A uma solução de 4-metil-2-(metiltio)-4H- pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila (460,0 mg, 1,8 mmol) e N-metil-N- fenilformamida (490 mg, 3,6 mmol) em DCE (10 mL) foi adicionado POCl3 (550,0 mg, 3,6 mmol). A mistura resultante foi agitada a 130 °C por 3 horas, então suprimida com água gelada e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: PE/EtOAc = 8/1) para obter o produto desejado (320,0 mg, 63% de rendimento). LC-MS: m/z 285 (M+H)+.
[00155] Etapa C: 4-Metil-2-(metiltio)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona.A uma solução de 6-formil-4- metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etila (300,0 mg, 1,06 mmol) em EtOH (5,0 mL) foi adicionado N2H4.H2O (2 mL, 98% em peso). A mistura de reação foi agitada em r.t. por 1 hora, então aquecida até 60 °C durante a noite, então resfriada. O sólido foi coletado por filtração e seco sob vácuo alto para gerar o produto desejado (180,0 mg, 67% de rendimento). LC-MS: m/z 253 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,61 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 4,22 (s, 3H), 2,81 (s, 3H). Exemplo 3B.Síntese de 6-((2-aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2- (metilsulfinil)- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Xantphos, dioxano ME1 33078475v.1
[00156] Etapa A. 2-Bromo-4-(bromometil)piridina. Uma mistura de 2-bromo-4-metilpiridina (1 g, 5,81 mmol), NBS (1,1 g, 6,39 mmol) e uma quantidade catalítica de AIBN (100 mg) em CCl4 (10 mL) foi agitada a 80 °C durante a noite. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: PE/EtOAc = 200/1) para obter o produto desejado E3-4 (500 mg, 34.28% de rendimento).
[00157] Etapa B. 6-((2-Bromopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)- 4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Uma mistura de 4-metil- 2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0,40 mmol), e K2CO3 (164 mg, 1,19 mmol) em DMF (8 mL) foi agitada a 60 °C durante 2 horas, seguida pela adição de uma solução de 2-bromo-4- (bromometil)piridina (199 mg, 0,80 mmol) em DMF (2 mL) e uma quantidade catalítica de TBAB (13 mg). A mistura foi agitada a 60 °C durante a noite, então suprimida com água (20 mL) e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NH4Cl aquoso saturado, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: PE/EtOAc = 10/1) para obter o produto desejado (150 mg, 89,62% de rendimento). LCMS: m/z 423 (M+H)+.
[00158] Etapa C. (4-((4-Metil-2-(metiltio)-5-oxo-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila. Uma mistura de 6-((2-bromopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0,24 mmol), carbamato de terc-butila (83 mg, 0,71 mmol), K3OC4 (201 mg, 0,95 mmol), Pd2(dba)3 (18 mg, 0,02 mmol) e Xantphos (11 mg, 0,02 mmol) em dioxano (10 ME1 33078475v.1 mL) foi agitada a 100 °C sob nitrogênio durante a noite. A mistura resultante foi suprimida com água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluente: PE/EtOAc = 3/1) para obter o produto desejado (100 mg, 92,10% de rendimento). LCMS: m/z 459 (M+H)+.
[00159] Etapa D. (4-((4-Metil-2-(metilsulfinil)-5-oxo-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila. A uma mistura de (4-((4-metil-2-(metiltio)-5-oxo-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc- butila (100 mg, 0,22 mmol) em DCM (5 mL) a 0 °C foi adicionado ácido 3- cloroperoxibenzoico (38 mg, 0,22 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 °C por 1 hora, então, suprimida com água e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 aquoso saturado, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto desejado (100 mg, 96,63% de rendimento) que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/z 475 (M+H)+.
[00160] Etapa E. 6-((2-Aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2- (metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona.Uma mistura de (4-((4-metil-2-(metilsulfinil)-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazina-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila (100 mg, 0,21 mmol) em TFA (1 mL) e DCM (3 mL) foi agitada em r.t. por 1 hora, então, concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para obter o produto desejado (20 mg, 25,35% de rendimento). LCMS: m/z 375 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,67 (s, 1H), 7,73 (d, 1H), 6,30 (d, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,89 (s, 2H), 5,24 – 5,03 (m, 2H), 4,29 (s, 3H), 3,03 (s, 3H).
[00161] O procedimento estabelecido acima foi usado para produzir os seguintes compostos usando matérias-primas apropriadas. Proteção e desproteção padrão podem ser usadas quando necessário.
ME1 33078475v.1
Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Com post o E3-8 LC-MS: m/z 376 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,76 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 6,60 (s, 2H), 6,22 (d, 1H), 5,20 (t, 2H), 4,28 (s, 3H), 3,12 (s, 3H). 6-((2-Aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil- 2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona E3-9 LC-MS: 376 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,29 (s, 2H), 6,66 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 4,28 (s, 3H), 3,10 (s, 3H).
6-((2-Aminopirimidin-5-il)metil)-4-metil- 2-(metilsulfinil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5-ona Exemplo 3C.Síntese de 6-((2-aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metil sulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Oxona
[00162] Etapa A-B. 2-Bromo-5-(bromometil)tiazol e 6-((2-Bromotiazol- 5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona foram sintetizados de forma semelhante ao Exemplo 3B.
[00163] Etapa C. 6-((2-((2,4-dimetoxibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)- ME1 33078475v.1
4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Uma mistura de 6-((2-bromotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-5(6H)-ona (130 mg, 0,30 mmol) e DIPEA (0,1 mL) em NMP (0,1 mL) e (2,4-dimetoxifenil)metanamina (0,1 mL) foi agitada a 150 °C por 4 horas. Então a mistura de reação foi suprimida com água (10 mL), extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (eluído com PE/EtOAc = 5/1) para gerar o produto desejado (60 mg, rendimento de 38,4%). LC-MS: m/z 515 (M+H)+.
[00164] Etapa D. 6-((2-((2,4-dimetoxibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)- 4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A uma mistura de 6-((2-((2,4-dimetoxibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2- (metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,10 mmol) em THF (3 mL) a 0 °C foi adicionado oxona (61 mg, 0,10 mmol). A mistura foi agitada a 0 °C por 1 hora, então, suprimida com solução de Na2S2O3 aquoso saturado (5 mL) e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto desejado (30 mg, 50,1% de rendimento) que foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS: m/z 531 (M+H)+.
[00165] Etapa E. 6-((2-Aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)- 4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona foi sintetizado de forma semelhante ao Exemplo 3B. LC-MS: m/z 381 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,29 (s, 3H), 3,11 (s, 3H).
[00166] O procedimento estabelecido acima foi usado para produzir os seguintes compostos usando matérias-primas apropriadas. Proteção e desproteção padrão podem ser usadas quando necessário.
ME1 33078475v.1
Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Comp osto E3-15 LCMS: m/z 381 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,69 (s, 1H), 6,92 (s, 2H), 6,21 (s, 1H), 5,26 – 5,05 (m, 2H), 4,30 (s, 3H), 3,11 (s, 3H). 6-((2-aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-2- (metilsulfinil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona Exemplos 4. Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Exemplo 4A. Síntese de 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil) etoxi)metil)-1H-pirazol 2 horas 1 1 hora 1 hora 1 hora 1 hora
[00167] Etapa A. 1-((2-(Trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- carboxilato de metila A 0 oC sob atmosfera de N2, a uma solução agitada de 1H-pirazol-3-carboxilato de metila (90 g, 0,72 mol) em THF (1 L) foi adicionado NaH (20,7 g, 0,864 mol, 60 %). A mistura resultante aquecida lentamente até r.t e agitada por 1 hora. A mistura de reação foi então resfriada de volta a 0oC e SEMCl (151,5 mL, 0,842 mol) foi adicionado gota a gota. A agitação foi continuada por mais 2 horas antes de ser interrompida. NH4Cl saturado e extraída com acetato de etila (3 x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre Na2SO4. Os solventes foram removidos sob vácuo para fornecer produto bruto 210 g que foi usado na etapa seguinte sem purificação.
[00168] Etapa B.(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metanol A 0 oC sob atmosfera de N2, à suspensão de LAH (16,9 g, 0,44 mol) em THF (760 mL) foi adicionado o 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- ME1 33078475v.1 carboxilato de metila bruto (76 g). A mistura resultante foi aquecida lentamente até r.t. e agitada por 1 hora. A mistura de reação foi resfriada de volta a 0oC e H2O (15,6 mL), 10% NaOH (15,6 mL), H2O (15,6 mL) foi adicionado sucessivamente. A mistura resultante foi filtrada através de um filtro de celite e lavada com MTBE (4 x). As frações orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para fornece produto bruto 69,4 g, que foi usado na etapa seguinte sem purificação. LC-MS: m/z 229 (M+H)+.
[00169] Etapa C. 3-(Iodometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- o pirazol a 0 C sob atmosfera de N2, a uma solução agitada de (1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol (61,5 g, teoricamente 0,262 mol) em THF (310 mL) foi adicionado TEA (55,42 mL, 0,393 mol) seguido por MsCl (24 mL, 0,314 mol). A reação foi aquecida até r.t e agitada por 1 hora antes da introdução de NaI (196,5 g, 1,31 mol, em 310 mL de DMF). A mistura resultante foi agitada por mais 1 hora e suprimida com água gelada, extraída com MTBE (3 x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com Na2S2O3 saturado e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas para fornecer 77,5 g de produto bruto usado na etapa seguinte sem purificação. LC-MS: m/z 339 (M+H)+.
[00170] Etapa D. 3-((Fenilsulfonil)metil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol A 0 oC sob atmosfera de N2, a uma solução agitada de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol (77,5 g, teoricamente 0,229 mol) em DMF (600 mL) foi adicionado benzenossulfonato de sódio (53,5 g, 0,32 mol) e agitada por 1 hora a 0oC. Após aquecido até r.t., a mistura de reação foi suprimida com água gelada e Na2S2O3 saturado e extraída com acetato de etila (3 x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NAHCO3 saturado e salmoura sucessivamente e secas sobre Na2SO4. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 20% ~ 70% de acetato de etila em éter de petróleo) para fornecer 56,7 g como óleo amarelo claro. LCMS: [M + H]+ 353. 1H ME1 33078475v.1
NMR (400 MHz, DMSO) δ 7,85-7,77 (m, 4H), 7,62 (dd, 2H), 6,19 (d, 1H), 5,35 (d, 2H), 4,70 (d, 2H), 3,44-3,38 (m, 2H), 0,88-0,77 (m, 2H), -0,01 (s, 9H). Exemplo 4B. Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[00171] Etapa A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona.A uma solução de 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (1,8 g, 5,1 mmol) em THF seco (30 mL) a – 40 o C foi adicionada LiHMDS (7,5 mL, 7,5 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 min, seguida pela adição de uma suspensão de 4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (580 mg, 2,7 mmol) em THF seco (30 mL) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em r.t. por mais 1 hora e vertida em NH4Cl aquoso saturado refrigerado a gelo (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (60 mL), secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 2,5% de metanol em diclorometano) para obter o produto desejado (800 mg, 66%). LC-MS（ESI）obtida: 557 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,84-7,78 (m, 3H), 7,67-7,59 (m, 2H), 6,94 (s, 1H), 6,72 (d, 1H), 5,48 (d, 2H), 4,29 (s, 3H), 3,56 (dd, 2H), 0,88 (dd, 2H), 0,00 (s, 9H).
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[00172] Etapa B. 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A uma mistura de 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol- 5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0,8 g, 1,41 mmol) em THF (5 mL) e MeOH (10 mL) sob N2 foi adicionado SmI2 (0,1M/THF, 45 mL) gota a gota sob banho de gelo. Após agitação por 10 min, a reação foi suprimida com NH4Cl (50 mL) aquoso saturado e extraída com EAOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (60 mL), secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 3% de metanol em diclorometano) para obter o produto desejado (310 mg, 51,0%). LC-MS obtida: 417 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,31 (s, 1H), 7,60 (d, 1H), 6,39 (d, 1H), 5,49 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 4,43 (s, 3H), 3,62 (t, 2H), 0,95 (t, 2H), 0,0 (s, 9H).
[00173] Etapa C. 3-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butila. A uma mistura de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-5-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 0,07 mmol) e K2CO3 (25 mg, 0,18 mmol) em DMF (5,0 mL) foi efervescida com argônio e agitada a 50 oC por 1 hora. Então, 3-(bromometil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butila (37 mg, 0,14 mmol) foi adicionado. Após agitação a 50 oC durante a noite sob argônio, a mistura de reação foi resfriada até r.t. e suprimida com NH4Cl aquoso saturado (20 mL) e extraída com EAOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (40 mL), secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-TLC (DCM:MeOH = 15:1) para obter o produto desejado (15 mg, 35,0%). LC-MS （ ESI ） obtida ： 597 (M+H)+.
[00174] Etapa D. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)- 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona.A uma solução ME1 33078475v.1 de 3-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butila (15 mg, 0,025 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite antes de ser concentrada e purificada por Pre-TLC (DCM:MeOH = 15:1) para obter o produto desejado (5 mg, 50%). LC-MS, obtida: 367 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,80 (s, 1H), 12,65 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,71 (brs, 1H), 7,60 (brs, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). Exemplo 5. Síntese de 4-metil-2-(metilsulfinil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona 2 horas 2
[00175] A uma suspensão agitada de 4-metil-2-(metiltio)-4,6-di-hidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (1,01 g, 4,0 mmol) em DCM (20 mL) foi adicionado ácido 3-cloro-benzoperoxoico (0,77 g, 3,8 mmol) em r.t. A mistura foi agitada em r.t. por 2 horas. Então, a mistura foi filtrada, lavada com EtOAc e triturada com MeOH. O sólido foi seco em vácuo para obter 4-metil-2- (metilsulfinil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (600 mg). LCMS: m/z 269 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 4,28 (s, 3H), 3,11 (s, 3H). Exemplo 6. Síntese de 4-metil-2-(metilsulfonil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona durante a noite
[00176] Balão de fundo redondo com três bocas carregado com 4- metil-4,6-di-hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (30 g, 0,119 mol, 1,0 eq) em DCM (600 mL) m-CPBA (61,5 g, 3 eq) foi adicionado a 20 oC em ME1 33078475v.1 três porções. A mistura foi agitada a 30 oC durante a noite, a LC-MS indicou 100% de consumo de matéria-prima, 20% de E4-2 e 80% de E6-1 foram formados. A mistura foi resfriada para r.t., outra porção de m-CPBA (1,0 eq) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a 30 oC por 2 horas, a LC-MS indicou E4-2 (LCMS: m/z 269 (M+H)+.) < 8%. A mistura foi resfriada para r.t. e filtrada. A torta filtrada foi suspensão em MeOH (500 mL) e agitada em r.t. por 1 hora. O sólido foi coletado por filtração, lavado com etilacetato, seco em vácuo para gerar 28 g de mistura de 5% de E4-2 e 95% de E6-1. A mistura (28 g) foi suspensa em DMSO (600 mL), aquecida até 120 oC ~ 130 oC para formar uma solução clara. Em seguida, resfriado até r.t., precipitado sólido. A mistura foi filtrada e seca para fornecer 23 g de E6-1 puro, LCMS: m/z 285 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ12,87 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 4,32 (s, 3H), 3,56 (s, 3H). Exemplo 7. Síntese dos compostos E7-v e E7-viii Esquema E7 e/ou ou base ou Cianometilenotributilfosforano (CMBP), tolueno
[00177] A substituição aromática nucleofílica entre o composto E7-i e o composto E4-2, e/ou o composto E6-1, produz o intermediário E7-ii. A redução do grupo fenilsulfonil do composto E7-ii fornece o intermediário E7-iii. Usar a reação de alquilação padrão de E7-iv e o composto E7-iii na presença de base (por exemplo, K2CO3, K3OC4, t-BuOK ou Cs2CO3) produz o composto E7-vi, em que Xa é um grupo lábil como Cl, Br, I, Oms, Ots; Ar1 e Ar2 são, cada um ME1 33078475v.1 independentemente, um heteroaril monocíclico com 5 membros ou 6 membros opcionalmente substituído. O Composto E7-vi também pode ser sintetizado a partir de uma reação de Mitsunobu do composto E7-iii com E7-v usando Cianometilenotributilfosfosforano (CMBP) em tolueno. Exemplo 7A.Síntese de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[00178] Etapa A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona A uma solução de 3- ((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (26 g, 78,86 mmol, 2,1 eq) em THF anidro (700 mL) foi adicionado LiHMDS (81,2 mL, 81,2 mmol, 1 M em THF, 2,31 eq) em -40 oC. A reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada por 1 hora. Então, 4-metil-2-(metilsulfonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (10 g, 35,17 mmol, 1 eq) foi adicionado à mistura em temperatura ambiente. A reação foi agitada por mais 0,5 hora em temperatura ambiente. A reação foi vertida em solução de cloreto de amônio saturado (500 mL) a 0 oC e extraída com acetato de etila duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas e concentradas para obter um resíduo amarelo. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano:metanol = 100:1 a 30:1) para obter 4- metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (13 g). LC-MS ESI M/Z = 557 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,81 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,84-7,78 (m, 3H), 7,66 (t, 2H), 6,94 (s, 1H), 6,72 (d, 1H), 5,50 (d, 2H), 4,29 (s, 3H), 3,56 (dd, 2H), 0,91 (dd, 2H), 0,02 (s, 9H).
[00179] Etapa B. 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- ME1 33078475v.1 pirazol-3-il)metil)-4,6-di-hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona. A uma solução de 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (8 g, 14,37 mmol, 1 eq) em THF (500 mL) e MeOH (500 mL) foi adicionado SmI2 (503 mL, 50,29 mmol, 0,1 M em THF, 3,5 eq) em temperatura ambiente. A reação foi agitada por 0,5 hora e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Éter de petróleo:Acetato de etila:Metanol = 75:25:0 a 20:20:1) para obter 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (4,3 mg). LC-MS ESI M/Z = 417 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,31 (s, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,39 (d, 1H), 5,49 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 4,43 (s, 3H), 3,62 (t, 2H), 0,95 (t, 2H), 0,0 (s, 9H). Exemplo 7B. Síntese de 6-((1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[00180] Etapa A. 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2- carbaldeído: Uma amostra de NaH foi lavada com hexano (2 x 10 mL) sob N2. O frasco foi carregado com DMF seco (20 mL) e 1H-imidazol-2-carbaldeído (500 mg, 5,2 mmol) foi adicionado em pequenas porções. Após agitação em temperatura ambiente por 1,5 horas, SEMCl (864 mg, 5,2 mmol) foi adicionado em gotas. A mistura de reação foi agitada em r.t. por 30 min. A mistura de reação foi vertida em água, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para gerar 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-carbaldeído bruto (800 mg). LCMS: 227 (M+H)+.
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[00181] Etapa B. (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2- il)metanol: A uma mistura agitada de 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol- 2-carbaldeído (1,6 g, 7 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado NaBH4 (1,34 g, 35 mmol) a 0 oC. A mistura de reação foi agitada em r.t por 30 min. A mistura de reação foi vertida em NH4Cl aquoso e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para gerar (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metanol bruto (1,3 g).
[00182] Etapa C. 2-(clorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- imidazol: A uma mistura agitada de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2- il)metanol (400 mg, 1,75 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados NCS (466 mg, 3,5 mmol) e PPh3 (920 mg, 3,5 mmol) em r.t. A mistura foi agitada em r.t. por 2 horas. A mistura de reação foi vertida em água e extraída com DCM. A mistura foi lavada com água e a camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Pre-TLC (PE: EtOAc=1: 1) para gerar 2-(clorometil)- 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol. LCMS: 247 (M+H)+. A uma mistura agitada de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,12 mmol) em DMF seco (5 mL) foi adicionado K2CO3 (66 mg, 0,48 mmol) a 60oC sob N2. Após 20 min, o composto E7-2 (60 mg, 0,24 mmol), em DMF seco (2 mL) foi adicionado a 60 oC sob N2. A mistura foi agitada a 60 oC por 1,5 horas sob N2. A mistura de reação foi resfriada a r.t e ajustada em pH= 5~6 com 0,5N HCl aquoso. Em seguida, a mistura foi extraída com EtOAc, lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida e purificada por prep-TLC (PE: EtOAc=1: 1,5) para gerar 4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)- 1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (25 mg). LCMS: 627 (M+H)+. Uma mistura de 4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)- 1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (25 mg, ME1 33078475v.1
0,04 mmol) em DCM/TFA (2 mL/2 mL) foi agitada em r.t por 1 hora. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para gerar o produto desejado (1,3 mg). LCMS: 367 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,51 (s, 1H), 7,66 (d, 1H), 6,9 (s, 2H), 6,27 (d, 1H), 5,34 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
[00183] Os seguintes compostos foram sintetizados de acordo com o Esquema E7 e o procedimento do Exemplo 7A-7B usando a matéria-prima apropriada. Métodos de proteção e desproteção padrão são usados quando necessário. Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Compo sto E7-6 LCMS: 384 (M+H)+. . 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 9,03 (d, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,27 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(tiazol- (s, 3H). 4-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-7 LCMS: 385 (M+H)+. 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12,79 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,84 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,28 (s, 3H) 6-((1,2,4-tiadiazol-5-il)metil)-2-((1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-8 LCMS: m/z 399 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,87 (br s, 2H), 6,27 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 4,49 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- 2H), 4,27 (s, 3H). aminotiazol-5-il)metil)-4-metil -4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-9 LCMS: m/z 367 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,25 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,28 (s, 3H).
ME1 33078475v.1
6-((1H-imidazol-4-il)metil)-2-((1H-pirazol- 3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-10 LC-MS: m/z 367 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (brs, 2H), 8,49 (s, 1H), 7,72-7,35 (m, 3H), 6,25 (s,1H), 5,20 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
6-((1H-pirazol-4-il)metil)-2-((1H-pirazol-5- il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-11 LC-MS: m/z 384(M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,46 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,66 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,28 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-(isotiazol-5- (s, 3H). ilmetil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-12 LCMS: m/z 414 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,15 (t, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,66 (d, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,25 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- (hidroximetil)tiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-13 LCMS: m/z 427 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,70-7,60 (m, 2H), 6,27 (d, 1H), 5,50 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)tiazol- 2-carboxamida E7-14 LCMS: m/z 368 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,89 (s, 1H), 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,95-7,54 (m, 2H), 6,26 (d, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- ME1 33078475v.1 tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-15 LCMS: (ESI) m/z 453 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,84 (s, 1H), 10,41 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,71 (s, 2H), 6,34 (s, 1H), 5,52 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), N-(6-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5- 4,33 (s, 3H), 2,08 (s, 3H). oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)-5- fluoropiridin-2-il)acetamida E7-16 LC-MS：384 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,64 (d, 1H), 6,27 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(tiazol- 1H), 5,65 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,27 2-ilmetil)-4H-tiazolo (s, 3H). [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-17 LCMS: m/z 462, 464 (M, M+2H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12,77 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,25 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5- bromotiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-18 LCMS: m/z 399 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,83(s, 2H), 5,27 (s, 2H), 4,49 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5- 2H), 4,27 (s, 3H) aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-19 LCMS: m/z 409 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12,77 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,61 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,25 (s, 3H). 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)tiazol- 5-carbonitrila E7-20 LCMS: m/z 427 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12,78 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,75 (d, 2H), 6,26 (d, 1H), 5,67 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- ME1 33078475v.1
4H-tiazolo[5',4':4,5] 4,25 (s, 3H). pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)tiazol- 5-carboxamida E7-21 LCMS: m/z 398 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12,77 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((5- 2,49 (s, 3H). metiltiazol-4-il)metil)-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-22 LCMS: 421 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,39 (dd, 1H), 6,47 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,27 (s, 2H), 4,47 (m, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,94 (s, 6H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6- (dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil- 4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona E7-23 LCMS: m/z 452 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,85 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,57 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,25 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((5- (trifluorometil) tiazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-24 LCMS: m/z 418 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,79 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5-clorotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-25 LCMS (ESI): m/z 414 (M+H)+. 1 H NMR DMSO-d6 400MHz δ 8,45 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,93 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5- (s, 3H). metoxitazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
ME1 33078475v.1
E7-26 LCMS (ESI): m/z 378 (M+H). 1 H NMR (DMSO-d6 400MHz) δ 12,79 (s, 1H), 8,57 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,48 (dd, 1H), 7,71 (ddd, 2H), 7,35 (ddd, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,38 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(piridin- 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona E7-27 LCMS: m/z 423 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,91 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,72 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-amino-5- 3H). metoxipiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-28 LCMS: m/z 411 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,3-6,2 (m, 2H), 6,18 (d, 1H), 5,27 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-amino-4- fluoropiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-29 LCMS: m/z 426 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (s, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,08 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-cloro-5- metilpiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-30 LCMS: m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,83 (s, 1H), 12,68 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,64 (s, 2H), 6,26 (s, 1H), 5,33 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,24 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-fluoro-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo [2,3-d]piridazin-5-ona ME1 33078475v.1
E7-31 LCMS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,79 (s, 1H), 11,74 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,83 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 6,09 (t, 1H), 5,10 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((2-oxo- (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-32 LCMS: m/z 408 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,78 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,08 (dd, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,16 (d, 1H), 6,90 (dd, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,51 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-metoxi- (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,93 (s, 3H). piridin-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-33 LCMS: m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,88 (s, 1H), 12,61 (s, 1H), 8,61 (d, 1H), 7,78 (s, 1H), 6,33 (d, 1H), 5,89 (d, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,54 (d, 2H), 4,34 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5-fluoro-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-34 LCMS: m/z 407 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,84 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,18 (d, 1H), 6,33 (s, 1H), 6,15 (d, 1H), 5,75 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,33 (s, 3H), 2,05 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-amino-5- (s, 3H). metilpiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]Pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-35 LC-MS: m/z 408 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,87 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,84 – 7,72 (m, 2H), 6,86 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,34 (s, 3H), 3,89 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6- metóxipiridin-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-36 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 11,53 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,40 (d, 1H), 6,27 (dd, 2H), 5,07 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((6-oxo- 1,6-dihidropiridin-3-il)metil)-4,6-dihidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona E7-37 LC-MS: m/z 408 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,86 (s, 1H), 8,65 (d, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,80 (s, 1H), 6,94 – 6,89 (m, 1H), 6,66 (s, 1H), 6,34 (d, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,34 (s, 3H), 3,89 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- metoxipiridin-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-38 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,57 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,23 (t, 1H), 6,27 (d, 1H), 6,07 (dd, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((2-oxo- 1,2-dihidropiridin-4-il)metil)-4,6-dihidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona E7-39 LCMS: m/z 382 (M+H)+. 1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12,80 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,18 (s, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-amino-1H- imidazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-40 LCMS: m/z 409 (M+H)+. 1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12,83 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,55-8,65 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,56 (t, 1H), 6,77 (d, 1H), 6,40 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,52 (s, 2H), 4,31 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6- 3H) (hidroxiamino)piridin-2-il)metil)-4-metil- 4H-tiazolo[5',4':4,5] ME1 33078475v.1 pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-41 LCMS: ESI m/z 384 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,01 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,21 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,50 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-(isotiazol-3- ilmetil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-42 LCMS: ESI m/z 382 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,49 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1- 4,10 (s, 3H). metil-1H- 1,2,3-triazol-5-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-43 LCMS: ESI m/z 382 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,99 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1- metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona E7-44 LCMS: ESI m/z 378 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,94 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,57 (d, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,23 (d, 1H), 6,36 (d, 1H), 5,55 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(piridin- 2H), 4,58 (s, 2H), 4,36 (s, 3H). 2-ilmetil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-45 LCMS: m/z 401 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s, 1H), 12,77 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-cloro-1H- 4,27 (s, 3H). pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona
ME1 33078475v.1
E7-46 LCMS: m/z 410 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,34 (s, 1H), 12,81 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,70 (s, 2H), 7,26 (m, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,28 (s, 3H)
3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6-il)metil)-1H-pirazol-5- carboxamida E7-47 LC-MS m/z 411,0 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,79 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,29 (dd, 1H), 6,34 (dd, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,74 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 4,26 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-amino-3- fluoropiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-48 LC-MS m/z 382,0 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,79 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 4,08 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((2- (s, 3H) metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-49 LC-MS m/z 425 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,31 (t, 1H), 6,33 – 6,26 (m, 3H), 5,34 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,48 (s, 3H)
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((3-fluoro-6- (metilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-50 LCMS: (ESI) m/z 411 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,59 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,29 (dd, 1H), 6,47 – 6,06 (m, 4H), 5,26 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,32 (s, 3H)
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-amino-5- fluoropiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]
ME1 33078475v.1 piridazin-5(6H)-ona E7-51 LCMS: (ESI) m/z 378 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,84 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,57 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,28 (d, 2H), 6,33 (d, 1H), 5,45 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,32 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(piridin- 4-ilmetil) -4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E7-52 LCMS: (ESI) m/z 384 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,85 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,54 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 5,55 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(tiazol- 4,30 (s, 3H) 5-ilmetil)-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-53 LCMS: (ESI) m/z 392 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,61 (dd, 1H), 7,14 (d, 1H), 6,81 (d, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,39 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((6- 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,43 metilpiridin-2-il)metil)-4,6-dihidro-5H- (s, 3H) tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-54 LCMS: (ESI) m/z 384 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,31 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-(isotiazol-4- ilmetil)-4-metil-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-55 LCMS: (ESI) m/z 368 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,85 (s, 1H), 12,78 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,49-8,21 (m, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,49 (s, 6-((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)-2-((1H- 2H), 4,26 (s, 3H) pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona
ME1 33078475v.1
E7-56 LCMS: (ESI) m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,79 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,80 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H) 6-((1,3,4-tiadiazol-2-il)metil)-2-((1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-57 LCMS: (ESI) m/z 476 (M+2H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,57 (s, 1H),7,81 (dd, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,30 (dd, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,43 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H)
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-bromo-5- fluoropiridin-2-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5-ona E7-58 LCMS: (ESI) m/z 401 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,01 (s, 1H), 12,95 (s, 1H), 8,53 (s, 1H),7,68 (dd, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,17 (s, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H)
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5-cloro-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-59 LCMS: (ESI) m/z 399 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,77 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,70 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-fluoro-1- metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6- dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E7-60 LCMS: (ESI) m/z 415 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,82 (s, 1H), 8,52 (s, 1H),7,92 (s, 1H), 7,76 (s, 1H),6,31 (s, 1H), 5,34 (s, 2H), 4,53 (s, 2H), 4,31 (s, 3H), 3,79 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-cloro-1- metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6- dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona
ME1 33078475v.1
E7-61 LCMS: (ESI) m/z 399 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,79 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,27 (s, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- 4,27 (s, 3H). aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5-ona E7-62 LCMS: (ESI) m/z 408 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,79 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,63 (dd, 1H), 6,68 (d, 1H), 6,60 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,36 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6- 2H), 4,51 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,76 metoxipiridin-2-il)metil)-4-metil-4,6- (s, 3H). dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E7-63 LC-MS: m/z 406 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,83 (s, 3H). 3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)-1-metil-1H-pirazol-4- carbonitrila E7-64 LC-MS: m/z 424 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,53 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,69 (s, 3H). 3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)-1-metil-1H-pirazol-4- carboxamida E7-65 LC-MS: m/z 396 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,51 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,61 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-amino-1- metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-66 LC-MS: m/z 392 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13,62 (s, 1H), 12,79 (s, 1H), 8,54 (m, 2H), 7,71 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,45 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-4-carbonitrila E7-67 LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,75 (s, 2H), 8,48 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,57 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida E7-68 LC-MS: m/z 449 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,85 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,34 (d, 1H), 7,77 (s, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,44 (d, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,32 (s, 3H), 3,83 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1- metil-4-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona E7-69 LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,77 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,61 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-metoxi-1- metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-70 LC-MS: m/z 399 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,90- 12,30 (m, 2H), 8,49 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 1,96 (s, 3H).
2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 6-((4-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-71 LC-MS: m/z 402 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,80 (s, 1H), 9,04 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,49-7,39 (m, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 6-(tiazol-4-ilmetil)-4,6-dihidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-72 LC-MS: m/z 395 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,86 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,32 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 1,99 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((1,4-dimetil- 1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-73 LC-MS: m/z 400 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,53 (s, 1 H), 7,80 (s, 1 H), 6,96 (s, 1 H), 5,23 (s, 2 H), 4,50 (s, 2 H), 4,27 (s, 3 H).
6-((4-amino-1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4- fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-74 LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,82 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,71 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4- (hidroximetil)-1-metil-1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-75 LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,80 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,56 (s, 2H), 4,49 (s, 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 2H), 4,26 (s, 3H). 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)oxazol-5-carboxamida ME1 33078475v.1
E7-76 LC-MS: m/z 403 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,82 (s, 1H), 8,94 (d, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,26 (dd, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,55 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,25 (s, 3H).
6-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)nicotinonitrila E7-77 LC-MS: m/z 421 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,82 (s, 1H), 8,92 (d, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,14 (dd, 2H), 7,69 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,23 (d, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,50 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
6-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)nicotinamida E7-78 LC-MS: m/z 421 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,97-7,82 (m, 3H), 7,75-7,60 (m, 2H), 7,26 (dd, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,53 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 6-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)picolinamida E7-79 LC-MS: m/z 403 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,64 (s, 1H), 8,12-7,98 (m, 2H), 7,74 (s, 1H), 7,60 (d, 1H), 6,33 (d, 1H), 5,57 (s, 2H), 4,57 (s, 2H), 4,32 (s, 3H). 6-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)picolinonitrila E7-80 LC-MS: m/z 399 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,58 (s, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5- aminotiazol-2-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-81 LC-MS: m/z 429 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,84 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,29 (t, 1H), 6,34 (dd, 1H), 5,76 (s, 2H), 5,31 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,23 (s, 3H). 6-((6-amino-3-fluoropiridin-2-il)metil)-2- ((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-82 LC-MS: m/z 383 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,85 (s, 1H), 12,10 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,33 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,34 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4-hidroxi-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-83 LC-MS: m/z 415 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,76 (s, 1H), 12,13 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 5,25 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,63 (s, 3H). 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4- metoxi-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-84 LC-MS: m/z 416 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,51 (s, 3H). 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 6-((5-metiltiazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-85 LC-MS: m/z 409 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,80 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,69 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
2-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)tiazol-4-carbonitrila ME1 33078475v.1
E7-86 S N LC-MS: m/z 427 (M+H)+. 1H NMR N N (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,63 (s, HN N 1H), 8,19 (s, 1H), 7,76-7,63 (m, 2H),
N N O S 7,57 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,67 (s, NH2 2H), 4,51 (s, 2H), 4,28 (s, 3H).
O 2-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)tiazol-4-carboxamida E7-87 LC-MS: m/z 436 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,83 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 5,43 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 6-((5-clorotiazol-4-il)metil)-2-((4-fluoro-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-88 LC-MS: m/z 383 (M+H)+ 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,57 (s, 2H), 6,23 (d, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-amino- oxazol-5-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-89 LC-MS: m/z 465 (M+H) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,31 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H), 3,76 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1- metil-4-(trifluorometoxi)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona E7-90 S N LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1H NMR N N (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, HN N 1H), 8,56 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,84
N O O (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), N NH2 6,27 (s, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
O 5-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)oxazol-2-carboxamida ME1 33078475v.1
E7-91 LC-MS: m/z 402 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,57 (d, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,38 (d, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5-fluorotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-92 S N LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1H NMR N N (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,83 (s, HN N 1H), 8,49 (s, 1H), 7,67 (s, 2H), 7,38
N N O (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), N NH2 5,30 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, H 3H).
O 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 6(5H)-il)metil)-1H-imidazol-2-carboxamida E7-93 LC-MS: m/z 402 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,23 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- clorooxazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-94 LC-MS: m/z 418 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,82 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,31 (d, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,31 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-clorotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-95 LC-MS: m/z 382 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,48 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,37 (d, 1H), 6,34 (d, 2H), 6,27 (d, 1H), 6,00 (d, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((1-amino-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-96 LC-MS: m/z 425 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,29-4,25 (m, 5H), 3,73 (s, 3H), 3,11 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4- (metoximetil)-1-metil-1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-97 LC-MS: m/z 402 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5- clorooxazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-98 LC-MS: m/z 469 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13,37- 12,75 (m, 2H), 8,65-8,50 (m, 1H), 8,15-7,58 (m, 2H), 5,49-5,36 (m, 2H), 4,67-4,50 (m, 2H), 4,32 (s, 3H).
2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 6-((4-(trifluorometoxi)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona E7-99 LC-MS: m/z 383 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,84 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,58 (s, 2H), 6,32 (d, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,32 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-amino- oxazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E7-100 LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,89 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,77- 7,64 (m, 2H), 6,33 (d, 1H), 5,39 (s, 2H), 4,57 (s, 2H), 4,33 (s, 3H), 3,96 (s, 2H), 3,82 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4- (aminometil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)- 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona ME1 33078475v.1
E7-101 LC-MS: m/z 438 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,31 (s, 2H). 2-(3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5- oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1-metil-1H- pirazol-4-il)acetamida E7-102 LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 12,10 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,72 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,30 (s, 3H) 4,5-di-hidro-6H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6- il)metil)-1H-imidazol-5-carboxamida E7-103 LC-MS: m/z 402 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,85 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,33 (d, 1H), 5,36 (d, 2H), 4,53 (d, 2H), 4,33 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2-fluorotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-104 LC-MS: m/z 382 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,80 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,16 (d, 1H), 6,30 (s, 2H), 6,27 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,50 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((1-amino-1H- 2H), 4,27 (s, 3H). pirazol-5-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E7-105 LC-MS: m/z 384 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 11,31 (s, 1H), 8,54 (d, 1H), 7,69 (s, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,17 (d, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((5-oxo- 4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)- 4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona ME1 33078475v.1
E7-106 S N LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1H NMR N N (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, HN N 1H), 8,52 (s, 1H), 8,25-8,12 (m, 2H),
N N O 7,84 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,26 (d, O NH2 1H), 5,30 (s, 2H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (s, 3H)
O 4-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo- 4,5-di-hidro-6H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6- il)metil)oxazol-2-carboxamida E7-107 LC-MS: m/z 383 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,36 (s, 2H), 7,67 (s, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((5-oxo- 2,5-di-hidro-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-di- hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E7-108 LC-MS: m/z 382 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,79 (s, 1H), 11,47 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,28 (s, 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((5-amino-1H- 3H) imidazol-4-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5-ona E7-109 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,78 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,11 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,60 (s, 2H), 6,27 (d, 1H), 6,18 (d, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H) 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4,6-di- hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E7-110 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,84 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,77 (s, 1H), 6,86 (s, 2H), 6,44 - 6,16 (m, 2H), 5,28 (s, 2H), 4,57 (s, 2H), 4,32 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((4- (s, 3H) aminopirimidin-2-il)metil)-4-metil-4,6-di- hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona ME1 33078475v.1
Exemplo 8. Síntese dos compostos E8-v, E8-vi e E8-viii Esquema E8 ou Cianometilenotribu tilfosforano e/ou (CMBP), tolueno Ou Oxona ou e/ou Cianometilenotribu tilfosforano (CMBP), tolueno e/ou ou ou
[00184] O composto E8-i pode ser convertido para o intermediário E8- ii através de alquilação ou reação de Mitsunobu de forma semelhante ao Exemplo E7-iii a E7-vi (ver rota (i) no Esquema E8). A oxidação de E8-ii com mCPBA ou oxona gera os compostos E8-v e/ou E8-vi. Ambos os compostos E8- v e E8-vi também podem ser formados a partir de E8-i, primeiro por oxidação seguida pela alquilação ou reação de Mitsunobu (ver rota (ii) no Esquema E8). Em que Xa é um grupo lábil (por exemplo, Cl, Br, I, OMs, OTs); os compostos E8-v e/ou E8-vi podem ser convertidos no intermediário E8-viii através de reação de substituição aromática nucleofílica com o composto E8-xi, usando uma base como LiHMDS ou t-BuOK. O composto E8-viii pode ser sintetizado a partir do composto E8-vii usando SmI2 ou Zn em AcoH ou TES em AlCl3. Conforme usado neste documento, Ar1 e Ar2 são, cada um independentemente, um heteroaril com 5 membros ou 6 membros opcionalmente substituído. Exemplo 8A. Síntese de 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2- ME1 33078475v.1 il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona e 6-((6- aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona 1 hora HCI/dioxano
[00185] Etapa A. N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-({4- metanossulfonil-7-metil-9-oxo-3-tia-5,7,10,11-tetra- azatriciclo[6.4.0.0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il}metil)piridin-2- il]carbamato de terc-butila Uma mistura de 4-metil-2-(metilsulfonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (7,5 g, 26,4 mmol) e K3PO4 (8,3 g, 39,3 mmol) em MeCN anidro (300 mL) foi agitada a 70 oC por 1 hora sob N2. Em seguida , uma solução de N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-(bromometil)piridin-2- il]carbamato de terc-butila (11,2 g, 29,0 mmol) em MeCN (30 mL) foi adicionada. Após agitação a 70 oC por 2,5 horas sob N2, a mistura de reação foi suprimida com NH4Cl saturado e extraída com EA (300 mL X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4, filtradas e a fase orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 50% de acetato de etila em éter de petróleo) para gerar N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-({4-metanossulfonil-7-metil-9-oxo-3-tia- 5,7,10,11-tetra-azatriciclo[6.4.0.0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-10- il}metil)piridin-2-il]carbamato de terc-butila (5,5 g) . LC-MS (ESI) encontrado: 591,1 (M+H)+.
[00186] Etapa B. (6-((4-metil-5-oxo-2-((fenilsulfonil)(1-((2- ME1 33078475v.1
(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila. A uma mistura agitada de 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (11,9 g, 33,8 mmol) em THF anidro (200 mL) foi adicionado LiHMDS (50 mL, 1 M em THF) a -40°C sob argônio. Após 10 min, a mistura foi aquecida até 10 oC e agitada por 1 hora, então N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-({4-metanossulfonil-7- metil-9-oxo-3-tia-5,7,10,11-tetra-azatriciclo[6.4.0.0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11- tetraen-10-il}metil)piridin-2-il]carbamato de terc-butila (9,1 g, 15,4 mmol em 35 mL THF) foi adicionado. A reação foi agitada a 10oC por mais 30 min. A mistura de reação foi vertida em NH4Cl aquoso, extraída com EtOAc (200 mL X 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etila 0 ~ 50 % em éter de petróleo) para gerar (6-((4-metil-5-oxo-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2- il)carbamato de terc-butila (6,6 g). LC-MS (ESI) encontrado: 763,2 (M+H)+.
[00187] Etapa C. (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila Uma solução de (6-((4-metil-5-oxo-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2- il)carbamato de terc-butila (6,0 g, 7,86 mmol) em EtOH/AcOH (35 mL/50 mL) foi aquecida a 50°C com agitação vigorosa na presença de Zn (2,55 g, 117,9 mmol) por 40 min. Zinco adicional foi adicionado a cada 40 min (2,55 g, duas vezes, monitorar a reação por TLC/LC-MS para impedir o subproduto e produto reduzido em excesso). A solução foi filtrada e o resíduo de filtro foi lavado com DCM. O filtrado foi evaporado parcialmente, neutralizado com solução de NaHCO3 saturado, seco sobre MgSO4 e o solvente foi removido sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, DCM: MeOH= ME1 33078475v.1
40:1) para gerar (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2- il)carbamato de terc-butila (3,1 g). LC-MS (ESI) encontrado: 623,3 (M+H)+.
[00188] Etapa D. 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2- il)carbamato de terc-butila (3,0 g, 4,8 mmol) em etanol (30 mL) foi adicionado HCl (30 mL, 4 M em dioxano). A mistura de reação foi agitada a 80 oC por 40 min. A mistura de reação foi resfriada em r.t., filtrada e o sólido foi coletado, suspenso em água e neutralizado com NaHCO3 aquoso a 10 oC. Filtrado para gerar o composto desejado 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)- 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,5 g) . LC-MS (ESI) encontrado: 393,2 (M+H)+. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,78 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,72(s, 1H), 7,25 (dd, 1H), 6,33 – 6,24 (m, 2H), 6,08 (d, 1H), 5,90 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
[00189] Etapa E. Síntese de (6-((4-metil-5-oxo-2-(1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila A uma solução de (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butila (100 mg, 0,16 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionado K2CO3 (88 mg, 0,64 mmol). A mistura foi agitada a 70 oC por 8 horas. A mistura foi vertida em água, o precipitado foi coletado por filtração e purificado por pre-TLC (2% MeOH em DCM) para gerar (6-((4-metil-5- oxo-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc- butila (20 mg). LC-MS (ESI): m/z 637 (M+H)+.
[00190] Etapa F. Síntese de 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2- ME1 33078475v.1
(1H-pirazol-3-carbonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma solução de (6-((4-metil-5-oxo-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol- 3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2- il)carbamato de terc-butila (20 mg, 0,03 mmol) em EtOH (1 mL) foi adicionado HCl (1 mL, 4 mol/L em dioxano). A mistura foi agitada a 80 oC por 1 hora e resfriada. O precipitado foi coletado por filtração e neutralizado com NaHCO3 saturado, lavado com água e seco para gerar 5 mg de 6-((6-aminopiridin-2- il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 407 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 8,75 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,31-7,22 (m, 1H), 6,31 (d, 1H), 6,14 (d, 1H), 5,91 (s, 2H), 5,23 (s, 2H), 4,38 (s, 3H). Exemplo 8B. Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6- (dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona Xantphos, dimetilamina/THF 5 min
[00191] Etapa A. (6-(dimetilamino)piridin-2-il)metanol. A uma solução de (6-cloropiridin-2-il)metanol (500 mg, 2,67 mmol) em dimetilamina em THF (35 mL) foi adicionado Pd(OAc)2 (78 mg, 0,35 mmol), Xantphos (170 mg, 0,29 mmol) e t-BuONa (385 mg, 4,01 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100 oC por 18 horas. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 35% de acetato de etila em éter de petróleo) para gerar (6-(dimetilamino)piridin-2- il)metanol (180 mg). LCMS: 153 (M+H)+.
[00192] Etapa B. 6-(clorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amina. A uma ME1 33078475v.1 mistura agitada de (6-(dimetilamino)piridin-2-il)metanol (170 mg, 1,1 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado SOCl2 (665 mg, 5,6 mmol) a 0 oC. A mistura de reação foi agitada em r.t por 1 hora. A mistura de reação foi ajustada a pH= 7~8 com NaHCO3. Em seguida, a mistura foi extraída com DCM, lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para gerar 6-(clorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amina (70 mg). LCMS: 171 (M+H)+.
[00193] Etapa C. N,N-dimetil-6-((fenilsulfonil)metil)piridin-2-amina. A uma mistura agitada de 6-(clorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amina (500 mg, 2,94 mmol) em DMSO (10 mL) foi adicionado PhSO2Na (1,44 g, 8,82 mmol) em r.t. A mistura foi agitada em r.t por 18 horas. A mistura de reação foi vertida em água e extraída com DCM. A mistura foi lavada com água e a camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 20% de acetato de etila em éter de petróleo) para gerar N,N- dimetil-6-((fenilsulfonil)metil)piridina-2-amina (380 mg). LCMS: 277 (M+H)+.
[00194] Etapa D. 2-((6-(dimetilamino)piridin-2- il)(fenilsulfonil)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A uma mistura agitada de 4-metil-2-(metilsulfonil)-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (180 mg, 0,36 mmol), que foi sintetizada semelhante ao composto E8-1 no Exemplo 8A, em THF seco (10 mL) foi adicionado N,N-dimetil-6-((fenilsulfonil)metil)piridin-2-amina (120 mg, 0,44 mmol) e t-BuOK (122 mg, 1,1 mmol) a 60°C sob N2. A mistura foi agitada a 60°C por 2 horas sob N2. Em seguida, a mistura foi vertida na água e extraída com EtOAc, lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida e purificada por Prep-TLC (PE: EtOAc = 1: 1,5) para gerar 2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)(fenilsulfonil)metil)-4- metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg). LCMS: 691 (M+H)+.
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[00195] Etapa E. 2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-6- ((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A uma mistura de 2-((6- (dimetilamino)piridin-2-il)(fenilsulfonil)metil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,07 mmol) em THF (5 mL) e MeOH (5 mL) em r.t sob N2 foi adicionado SmI2 (5 mL, 0,1 M em THF) a - 40 oC. A mistura de reação foi agitada a - 40 oC por 10 min e então suprimida com água. A mistura a seguir foi extraída com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep-TLC (PE/EtOAc=1/1,5) para gerar o produto desejado (10 mg). LCMS: m/z 551 (M+H)+.
[00196] Etapa F. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6- (dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. Uma mistura de 2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4- metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (10 mg, 0,018 mmol) em DCM/TFA (2 mL/2 mL) foi agitada em r.t por 1 hora. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para gerar o produto desejado (1,4 mg). LCMS: 421 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,51 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,48 (dd, 1H), 6,64 (d, 1H), 6,54 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,05 (s, 6H).
[00197] Os seguintes compostos foram sintetizados de acordo com o Esquema E8 e o Exemplo 8C usando a material de partida apropriado. Proteção e desproteção padrão podem ser usadas quando necessário. Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Compos to E8-7 LCMS: 393 (M+H)+. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,67 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,60 ME1 33078475v.1
6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6- (d, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,11 (d, aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H- 1H), 5,33 (s, 2H), 4,42 (s, 2H), tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 4,26 (s, 3H) 5(6H)-ona E8-8 LCMS: m/z 385 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,60 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 5,65 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-6- 4,27 (s, 3H). (tiazol-2-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-9 LCMS: m/z 368 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,79 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,26 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-(oxazol- (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s, 4-ilmetil)-4H-tiazolo 3H). [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-10 LCMS: m/z 410 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,03 (d, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,42(d, 1H), 7,36 (t, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,35 (d, 1H), 2-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-6- 5,98 (s, 2H), 5,48 (s, 2H), 4,37 (tiazol-4-ilmetil)-4H- (s, 2H), 4,26 (s, 3H) tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-11 LC-MS: m/z 401 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,13 (d, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 5,65 (s, 2H), 4-metil-6-(tiazol-2-ilmetil)-2-(tiazol-4- 4,71 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona E8-12 LC-MS: m/z 395 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,60 (s, 1H), 8,57 (dd, 1H), 7,81 (td, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,51 (d, 1H), 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(tiazol-2- 7,36 – 7,30 (m, 1H), 5,65 (s, ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- 2H), 4,68 (s, 2H), 4,26 (s, 3H) d]piridazin-5(6H)-ona E8-13 LC-MS: m/z 401 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,13 (d, 1H), 9,03 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,44 – 7,41 (m, 1H), 5,48 (s, 4-metil-2,6-bis(tiazol-4-ilmetil)-4H- 2H), 4,71 (s, 2H), 4,27 (s, 3H).
ME1 33078475v.1 tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-14 LC-MS: m/z 385 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,03 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 5,48 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,26 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-6- (s, 3H). (tiazol-4-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-15 LCMS: m/z 392 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (d, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,81 (td, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,32 (dd, 1H), 4-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-2- 6,07 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), (piridin-2-ilmetil)-4H- 4,67 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,76 tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- (s, 3H). 5(6H)-ona E8-16 LCMS: m/z 379 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (d, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,84 – 7,78 (m, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,36 – 7,28 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-2- (m, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,67 (s, (piridin-2-ilmetil)-4H- 2H), 4,26 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-17 LCMS: m/z 378 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,57-8,55 (m, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,81 (dd, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,50 (d, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-(piridin- 1H), 7,34-7,30 (m, 1H), 6,11 2-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] (m, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,67 (s, pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona 2H), 4,26 (s, 3H). E8-18 LC-MS: m/z 414(M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,63 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 6,06 (t, 1H), 5,32 (s, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((2- 2H), 4,70 (d, 2H), 4,60 (s, 2H), (hidroximetil)tiazol-4-il)metil) 4,27 (s, 3H). -4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-19 LC-MS: m/z 431(M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,60 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,10-5,97 (m, 1H), 5,65 (s, 2-((2-(hidroximetil)tiazol-4-il)metil)-4-metil-
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6-(tiazol-2- 2H), 4,70 (d, 2H), 4,61 (s, 2H), ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] 4,26 (s, 3H). pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-20 LC-MS: m/z 428(M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,49 (s, 1H), 7,62 – 7,58 (m, 2H), 6,07-6,03 (m, 2H), 5,26 (s, 2H), 4,70 (d, 2H), 4,60 (s, 2-((2-(hidroximetil)tiazol-4-il)metil)-4-metil- 2H), 4,26 (s, 3H), 3,76 (s, 3H). 6-((1-metil-1H- pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-21 LC-MS: m/z 415(M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14,77 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,05 (t, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,70 (d, 6-((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((2- 2H), 4,60 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). (hidroximetil)tiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-22 LCMS: m/z 416 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,13 (d, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,03 (br s, 2H), 6,22 (s, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,71 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). 6-((2-aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-2- (tiazol-4-ilmetil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-23 LCMS: m/z 382 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,50 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,76 (s, 3H). 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-6- ((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-24 LCMS: m/z 368 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 14,73 (s, 1H), 12,64 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,26 (s, 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-6-((1H- 3H). pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona
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E8-25 LC-MS: m/z 384,0 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,62 (s, 1H), 9,12 (d, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,32 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-(tiazol- (s, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,27 (s, 4-ilmetil)-4,6-dihidro-5H- 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E8-26 LC-MS: 440,0 [M+H]+ 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,55 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,29 – 7,21 (m, 1H), 6,29 (d, 1H), 6,13-6,07 (m, 2H), 5,92 (s, 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-2-((2- 2H), 5,19 (s, 2H), 4,70 (d, 2H), (hidroximetil)tiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- 4,61 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-27 LCMS: 418 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,53 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,92 (s, 2H), 5,43 (s, 2H), 4,27 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((2-amino- 5-fluorotiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-28 LCMS: 403 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,70 (d, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,60 (d, 2H), 4,25 (s, 3H). 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((5- fluorotiazol-4-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5-ona E8-29 LCMS: 429 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (d, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,54 – 5,34 (m, 2H), 4,23 (s, 3H), 3,76 - 3,61 (m, 2H), 1,20 (q, 3H). 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2- (etoxi(tiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona
ME1 33078475v.1
E8-30 LCMS: m/z 398 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,12 (d, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,56 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 4-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-2- 4,70 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,76 (tiazol-4-ilmetil)-4H- (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-31 LCMS: m/z 400 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,50 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,18 (s, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,63 (s, 2H) 4,26 (s, 3H). 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-6-((2- aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-32 LCMS: m/z 419 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,25 (s, 3H).
6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((5- clorotiazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-33 LCMS: m/z 418 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((5-clorotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-34 LC-MS m/z 386,0 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 14,82 (s, 1H), 12,82 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,31 (s, 3H) 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-2-((4-fluoro- 1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona ME1 33078475v.1
E8-35 LCMS: m/z 462 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,64(s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,33(s, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,26(s, 3H).
6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((5-bromotiazol- 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-36 LCMS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 11,71 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,25-6,05 (m, 2H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((6-oxo- 5,75 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,50 1,6-di-hidropiridin-2-il)metil)-4H- (s, 2H), 4,26 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-37 LCMS: m/z 417 (M+H) +. 1 H NMR DMSO-d6 400MHz δ 12,65 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,92 (s, 2H), 6,12 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 4,26 (s, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((2-amino-5- 5H). fluorotiazol-4-il)metil)-4-metil-4,6-di-hidro- 5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5-ona E8-38 LCMS: m/z 402 (M+H) +. 1 H NMR DMSO-d6 400MHz δ12,70 (s, 1H), 8,70 (d, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 4,60 (d, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((5-fluorotiazol- 2H), 4,26 (s, 3H). 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-39 LCMS: m/z 389 (M+H) +. 1 H NMR DMSO-d6 400MHz δ 8,61 – 8,54 (m, 2H), 8,51 – 8,46 (m, 1H), 7,82 (td, 1H), 7,73 (td, 1H), 7,52 (d, 1H), 4-metil-2,6-bis(piridin-2-ilmetil)-4H- 7,34 (ddd, 1H), 7,27 (dd, 1H), tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 7,14 (d, 1H), 5,46 (s, 2H), 5(6H)-ona 4,69 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
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E8-40 LCMS: m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,13 (d, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-2- (tiazol-4-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-41 LCMS: m/z 381 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,77 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1- 5,26 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,27 metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- (s, 3H), 3,76 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-42 LCMS: m/z 407 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,35 (t, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,35 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 5,97 (s, 2-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-6-((1- 2H), 5,26 (s, 2H), 4,36 (s, 2H), metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- 4,26 (s, 3H), 3,76 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-43 LCMS: m/z 382 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,70 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,65 (d, 1H), 6,22 (d, 1H), 5,42 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,81 6-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-2- (s, 3H). ((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-44 LCMS: m/z 395 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (s, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 6,22 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 5,26 (s, 2H), 4-metil-2,6-bis((1-metil-1H-pirazol-3- 4,43 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,82 il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo (s, 3H), 3,76 (s, 3H). [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-45 LCMS: m/z 403 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,02-12,57 (m, 2H), 8,49 (s, 1H), 7,6-7,8 (m, 2H), 5,33 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,27 (s,
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2,6-bis((4-fluoro-1H-pirazol-3-il) 3H). metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-46 LCMS: m/z 410 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,13 (d, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 6,29 (d, 1H), 6,07 (d, 1H), 5,92 (s, 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2- 2H), 5,19 (s, 2H), 4,71 (s, 2H), (tiazol-4-ilmetil)-4H- 4,26 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-47 LCMS: m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,77 (s, 1H), 12,62 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,32 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4-fluoro-1H- (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,26 (s, pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-48 LCMS: m/z 399 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,95 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 4,31 (s, 3H), 2,55 (s, 3H). 6-((1H- 1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil-2-((5- metiltiazol-4-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-49 LCMS: m/z 381 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,64 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,23 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 6-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-2-((1- 5,32 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 4,26 metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- (s, 3H), 3,82 (s, 2H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-50 LCMS: m/z 398 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,63 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,61 6-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-2-((5- (s, 2H), 4,26 (s, 3H) 2,50 (s, metiltiazol-4-il)metil)-4H- 3H sobreposição com DMSO- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d] d6). piridazina-5(6H)-ona
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E8-51 LCMS: m/z 399 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,83 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,34 (s, 3H), 3,81 (s, 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6- 3H). ((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5] pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E8-52 LCMS: m/z 425 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,68 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,43 (t, 1H), 6,62 (d, 1H), 6,46 (dd, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,52 (s, 2H), 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((3-fluoro 4,31 (s, 3H), 2,83 (d, 3H) -6-(metilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-53 LC-MS: m/z 411 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,64 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,36 (t, 1H), 6,41 (dd, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,96 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 4,44 (d, 2H), 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6-amino-3- 4,26 (s, 3H) fluoropiridin-2-il)metil) -4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-54 LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,52 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,40-7,25 (m, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,17 (s, 1H), 5,12 (s, 2H), 6-((2-aminotiazol-4-il)metil)-4-metil-2- 4,67 (s, 2H), 4,26 (s, 3H) (piridin-2-ilmetil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E8-55 LC-MS: m/z 395 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,09 (d, 1H), 8,63 (m, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,57 (d 1H), 7,51 (s, 1H), 7,39 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(tiazol-4- (dd, 1H), 5,54 (s, 2H), 4,73 (s, ilmetil)-4,6-di-hidro-5H- 2H), 4,32 (s, 3H) tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona
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E8-56 LC-MS: m/z 369 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,53 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,74 (s 1H), 5,43 (s, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,26 (s, 3H) 2,6-bis((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-metil- 4,6-di-hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E8-57 LC-MS: m/z 404 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H), 7,51 (d 1H), 7,33 (dd, 1H), 7,27-7,22 (m, 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2- 1H), 6,29 (d 1H), 6,07 (d, 1H), (piridin-2-ilmetil)-4,6-di-hidro-5H- 5,90 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 4,68 tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- (s, 2H), 4,26 (s, 3H) ona E8-58 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,55 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,26 (dd 1H), 6,30 (d, 1H), 6,07 (d 1H), 5,91 (s, 2H), 5,19 2-((1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-6-((6- (s, 2H), 4,64 (s, 2H), 4,26 (s, aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4,6-di- 3H) hidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona E8-59 LC-MS: m/z 396 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,60 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,90-7,80 (m, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,49 (d 1H), 7,31 (dd, 1H), 5,32 (s, 2H), 6-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2- 4,65 (s, 2H), 4,24 (s, 3H) (piridin-2-ilmetil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E8-60 LC-MS: m/z 412 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,00 (s, 1H), 8,67 (d, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,33 (dd, 1H), 5,34 (s, 2H), 4,67 (s, 6-((4-cloro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2- 2H), 4,26 (s, 3H) (piridin-2-ilmetil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona
ME1 33078475v.1
E8-61 LC-MS: m/z 492 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 12,64 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,99 (s, 3H). 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((2-bromo-5- metóxitazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-62 LC-MS: m/z 414 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 12,63 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,11 (d, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,97 (s, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((5-metóxitazol- 3H). 4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-63 LC-MS: m/z 425 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 9,12 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 5,59 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,31 (s, 3H), 3,81 (s, 3H). Ácido 3-((2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- 5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1-metil-1H- pirazol-4-carboxílico E8-64 LC-MS: m/z 419 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 13,28-12,57 (m, 2H), 8,49 (s, 1H), 7,90-7,50 (m, 2H), 5,34 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 6-((4-cloro-1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4- fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-65 LC-MS: m/z 428 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 12,89-12,76 (m, 2H), 8,49 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,57 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 3-((2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4- 4,26 (s, 3H). metil-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-4- carboxamida
ME1 33078475v.1
E8-66 LC-MS: m/z 426 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 12,80 (s, 1H), 8,57 (d, 1H), 8,08 (dd, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,16 (d, 1H), 6,90 (dd, 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-6-((2- 1H), 5,29 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), metóxipiridin-3-il)metil)-4-metil-4H- 4,26 (s, 3H), 3,92 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-67 LC-MS: m/z 412 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 12,78 (s, 1H), 11,71 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,82 (d, 1H), 2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6- 6,08 (dd, 1H), 5,10 (s, 2H), ((2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4H- 4,50 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E8-68 LC-MS: m/z 410 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ: 13,63 (s, 1H), 12,81 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 4,25 (s, 3H). 3-((2-((4-fluoro-1H-pirazol-3-il)metil)-4- metil-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-4- carbonitrila E8-69 LC-MS: m/z 467 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: δ10,35 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,70 (dd, 2H), 7,45 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 2,01 (s, 3H) N-(5-fluoro-6-((4-metil-2-((1-metil-1H- pirazol-4-il)metil)-5-oxo-4,5-di-hidro-6H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6- il)metil)piridin-2-il)acetamida E8-70 LC-MS: m/z 395 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,85 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,38 (s, 1H), 6,12 (d, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,38 (s, 3H), 3,77 4-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)-2- (s, 3H). (1H-pirazol-3-carbonil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona
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Exemplo 9. Síntese dos compostos E9-vi e E9-vii Esquema E9 Via I: Ou Catalisador Via II: Nu: nucleófilo
[00198] O Composto E9-iv pode ser sintetizado por duas abordagens, (i) e (ii) no Esquema 9. Para a abordagem (i), o composto E9-ii pode ser sintetizado do composto E9-i através da reação de alquilação, conforme mostrado no Exemplo 7 ou Exemplo 8. Conforme usado neste documento, Xa é um grupo lábil. A reação de formilação do composto E9-ii com LiHMDS e DMF fornece o intermediário E9-iii. E9-iii reage com um agente redutor (por exemplo, NaBH4) para fornecer o composto E9-iv. Alternativamente, na abordagem (ii), a haloagenação do composto E9-i gera o composto E9-ix. O Composto E9-ix sofre reação de Stille, ozonólise e redução para suprir o composto E9-x. O Composto E9-x pode ser alquilado com E9-viii para fornece composto E9-iv. No Esquema 9, (iii), o Composto E9-iv sofre halogenação para gerar o intermediário E9-v (Xb é halogênio, como Cl ou Br). Um acoplamento catalisado por metal (por exemplo, Pd ou Cu) de E9-v com estanho orgânico, boro, zinco ou magnésio fornece o composto E9-vi. Conforme usado neste documento, M é um complexo de metal orgânico (por exemplo, complexo de organoboro, tal como ácido borônico ou complexo de boro de pinaco, complexo de organotina como - Sn(But)3 complexo organozinco, tal como -Zn(halogênio)); o composto E9-v ME1 33078475v.1 também pode reagir com alguns nucleófilos, tais como nitrogênio em um heterociclo para obter o produto E9-vii. Conforme usado neste documento, Ar1 e Ar2 são, cada um independentemente, heteroaril com 5 membros ou 6 membros opcionalmente substituído, Xa é um grupo lábil (por exemplo, Br, I, OMs ou OTs); e Xb é halogênio. Exemplo 9A. Síntese de 6-((1H-indazol-4-il)metil)-4-metil-2-(tiazol-4- ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona tolueno 40 min
[00199] Etapa A. Síntese de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído. A uma mistura de 4- metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (2,6 g, 5,57 mmol, 1 eq) em THF seco (30 mL) foi adicionado LiHMDS (1 M, 11,14 mL, 2,0 eq) a -78 °C. A mistura foi agitada a -78°C por 2 horas. Então DMF (2,04 g, 27,86 mmol, 2,14 mL, 5,0 eq) foi adicionado em gotas à mistura acima. A mistura foi agitada a -78°C por 2 horas. TLC (PE: EA=2:1, UV=254 nm) mostrou que uma nova mancha principal foi formada. A mistura foi vertida em NH4Cl (20 mL) saturado frio. Em seguida, a mistura foi aquecida à temperatura ambiente. A mistura foi extraída com EtOAc (40 mL x 3). A camada orgânica foi lavada por água (20 mL x 3) e concentrada in vacuo para gerar o produto desejado (2,6 g, bruto). LCMS: m/z 495,2 [M+H]+
[00200] Etapa B. Síntese de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. A uma mistura de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-5,6-di-hidro-4H- ME1 33078475v.1 tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído bruto (1,0 g, 2,02 mmol, 1 eq) em THF (10 mL) e MeOH (10 mL) foi adicionado NaBH4 (152,97 mg, 4,04 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada a 30°C por 14 horas. TLC (DCM:MeOH=10:1, UV=254 nm) mostrou que o material de partida foi consumido completamente e uma nova mancha principal foi formada. A reação foi interrompida pela adição de água (20 mL) e extraída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL). A fase orgânica foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica- gel (ISCO®; 40 g de Coluna Flash SepAflash®, Eluente de 0~5% de MeOH/DCM a 30mL/min). O eluente foi concentrado in vacuo para obter o produto desejado (382 mg). LCMS: m/z 497,1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,61 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,38 (t, 1H), 7,05 (d, 1H), 6,36 (t, 1H), 5,74 (s, 2H), 5,68 (s, 2H), 4,89 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 3,50 (t, 2H), 0,78 (t, 2H), -0,12 (s, 9H).
[00201] Etapa C. Síntese de 2-(clorometil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi) metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona. A uma mistura de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)- 1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (150,0 mg, 302,02 umol, 1 eq) e Et3N (61,12 mg, 604,04 umol, 84,08 uL, 2,0 eq) em DCM (5 mL) foi adicionado cloreto de 4-metilbenzenossulfonil (75,0 mg, 393,40 umol, 1,30 eq). A mistura foi agitada a 30°C por 5 horas. TLC (PE: EA=4:1, UV=254 nm) mostrou que o material de partida foi consumido completamente. Água (10 mL) e DCM (20 mL) foram adicionados à mistura. As camadas orgânicas foram concentradas in vacuo para gerar uma goma amarela (0,1 g). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (ISCO®; 4 g de Coluna Flash SepAflash®, Eluente de 0~20% de acetato de etila/gradiente de éter de petróleo a 30 mL/min). A fração desejada foi concentrada in vacuo para obter o produto desejado (40,0 mg, 76,88 umol). LCMS: m/z 515,1 [M+H]+.
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H NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,27 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,52 (d, 1 H), 7,39 (dd, 1 H), 7,25 (s, 1H), 5,76 (s, 2H), 5,72 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,40 (s, 3H), 3,50-3,57 (m, 2H), 0,84-0,90 (m, 2H), -0,09 a -0,06 (m, 9H).
[00202] Etapa D. Síntese de 4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4,6-di-hidro-5H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona.A uma solução de 2-(clorometil)- 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,97 mmol) e 4- (tributilestanil)tiazol (114 mg, 2,91 mmol) em tolueno (4 mL) foi adicionado Pd(PPh3)4 (402 mg，2,91 mmol). Em seguida, a mistura foi aquecida em reator MW a 120 oC por 30 min sob N2. A solução foi vertida em água e extraída com EtOAc, seca sobre Na2SO4 anidro. A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 50% de acetato de etila em éter de petróleo) para obter 4-metil-2-(tiazol-4- ilmetil)-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg). LCMS: 564 (M+H)+.
[00203] Etapa E. Síntese de 6-((1H-indazol-4-il)metil)-4-metil-2- (tiazol-4-ilmetil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma mistura do composto E9-4 (30 mg, 0,05 mmol) em DCM (3 mL) em r.t. sob N2 foi adicionado TFA (3 mL). A mistura de reação foi agitada em r.t. por 1 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (C18, 0 ~ 90% de acetonitrila em H2O com 0,1% de ácido fórmico) para obter o produto desejado (3,9 mg). LCMS: 434 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13,12 (s, 1H), 9,12 (d, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,35 – 7,24 (m, 1H), 6,96 (d, 1H), 5,65 (s, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,27 (s, 3H). Exemplo 9B. Síntese de 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona ME1 33078475v.1 tolueno durante a noite
[00204] Etapa A. Síntese de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3- ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A -78oC, a uma mistura de 4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona (640 mg, 2,15 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado LiHMDS (4,3 mL, 1 M em THF). Após 30 min, DMF seco (0,84 mL, 10,8 mmol) foi adicionado à mistura. Após o consumo total do material de partida, uma mistura de NaBH4 (164 mg, 4,3 mmol) em EtOH (4 mL) foi adicionada e agitada por 5 min. Então, a mistura foi vertida em NH4Cl saturado, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0~5% de MeOH em DCM) para gerar 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (220 mg). LC-MS (ESI): m/z 328 (M+H)+.
[00205] Etapa B. Síntese de 2-(clorometil)-4-metil-6-(piridin-3- ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0,31 mmol) em DCM (5 mL) foram adicionados Et3N (0,43 mL, 3,1 mmol) e MsCl (0,12 mL, 1,5 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 6 horas. Em seguida, a mistura foi lavada com NH4Cl (aq.) saturado, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0~50% de EtOAc em PE) para gerar 65 mg de 2-(clorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 346 (M+H)+.
[00206] Etapa C. Síntese de 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin- 3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Sob nitrogênio, a uma mistura de 2-(clorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,14 mmol)e 2- ME1 33078475v.1
(tributilestanil)piridina (0,14 mL, 0,43 mmol)emtolueno (3 mL) foi adicionadoPd(PPh3)4 (17 mg, 0,014 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100oC durante a noite. Em seguida, a mistura foi resfriada, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado porprep-TLC (eluente: 10% de MeOH em DCM) para gerar 2 mg de 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 389 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (m, 3H), 8,48 (dd, 1H), 7,81 (td, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,37 - 7,30 (m, 2H), 5,38 (s, 2H), 4,67 (s, 2H), 4,25 (s, 3H). Exemplo 9C. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona e 6- ((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona refluxo dioxano,
[00207] Etapa A. Síntese de 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-3-carbaldeído. A uma suspensão de 1H-pirazol-3-carbaldeído (10,0 g, 104,07 mmol, 1 eq) e DIPEA (33,63 g, 260,18 mmol, 45,32 mL, 2,5 eq) em DCM (500 mL) foi adicionado 2-(clorometoxi)etil-trimetil-silano em gotas (26,03 g, 156,11 mmol, 27,63 mL, 1,5 eq) a -40°C. Então, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 5:1) mostrou que o material de partida foi consumido completamente e foram formadas duas novas manchas. A mistura de reação foi ME1 33078475v.1 concentrada in vacuo. O resíduo foi combinado com outros 2 lotes (10,0 g cada) e purificado por Combiflash (de 100% de éter de petróleo a 40% de EtOAc em éter de petróleo) para gerar o produto desejado a 60,0 g. (observação: mistura de 2 regioisômeros com razão de ~5/4). 1H NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 10,06 (s, 1H), 10,00 (s, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,92 (d, 1H), 5,87 (s, 2H), 5,56 (s, 2H), 3,61-3,67 (m, 4H), 0,91-1,01 (m, 4H), -0,09- 0,05 (m, 18H).
[00208] Etapa B. Síntese de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H- pirazol-3-il)metanol. A uma solução de 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol- 3-carbaldeído (30 g, 132,54 mmol, 1 eq, mistura de 2 regioisômeros com razão de ~5/4) em THF (200 mL)/MeOH (100 mL) foi adicionado NaBH4 (7,52 g, 198,81 mmol, 1,50 eq) em porções a 0°C, a mistura de reação foi agitada a 0°C até temperatura ambiente por 18 horas. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 2:1) mostrou que os materiais de partida foram consumidos completamente e foram formados duas novas manchas. O solvente foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por Combiflash (100% de éter de petróleo até 100% de EtOAc) para gerar 25 g do produto desejado. (Observação: mistura de 2 regioisômeros em razão ~3/2). 1H NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,55 (d, 1H), 7,47 (brs, 1H), 6,36 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 5,57 (s, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,74-4,76 (m, 4H), 3,55-3,60 (m, 4H), 0,85-0,96 (m, 4H), 0,00-0,06 (m, 18H).
[00209] Etapa C. Síntese de 3-(bromometil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol. A uma solução de (1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol (23 g, 100,72 mmol, 1 eq, mistura de 2 regioisômeros em razão ~3/2) e PPh3 (36,98 g, 141,00 mmol, 1,4 eq) em DCM (200 mL) foi adicionado CBr4 (46,76 g, 141,00 mmol, 1,4 eq) a 0°C e a mistura de reação foi agitada a 0°C por 3 horas. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 5:1) mostrou que os materiais de partida foram consumidos completamente e uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi concentrada in vacuo. O resíduo foi combinado com outro lote (2,0 g) e purificado por Combiflash (de 100% ME1 33078475v.1 de éter de petróleo a 50% de EtOAc em éter de petróleo) para gerar o produto desejado 22,0 g (75,53 mmol). 1H NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,51 (d, 1H), 6,39 (d, 1H), 5,38 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 3,52-3,57 (m, 2H), 0,86-0,96 (m, 2H), -0,03-0,02 (m, 9H).
[00210] Etapa D. Síntese de 4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. Suspensão de 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (1,0 g, 4,85 mmol, 1 eq), 3-(bromometil)-1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (2,12 g, 7,27 mmol, 1,5 eq), K3PO4 (2,57 g, 12,12 mmol, 2,5 eq) e NaI (218,05 mg, 1,45 mmol, 0,3 eq) em DMF (15 mL) foi agitado a 60°C por 18 horas sob N2. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:1) mostrou que o material de partida foi consumido completamente, e uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi combinada com outros 3 lotes (1,0 g cada) e vertida em água gelada (250 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (150 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (120 mL x 2), salmoura (120 mL) e secas sobre Na2SO4. O solvente foi concentrado in vacuo. O produto bruto foi purificado por combiflash (forma 100% de éter de petróleo a 80% de EtOA em éter de petróleo) para obter o produto desejado (3,6 g). 1H NMR (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,91 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,49 (d, 1H), 6,36 (d, 1H), 5,51 (s, 2H), 5,40 (m, 2H), 4,45 (s, 3 H), 3,52-3,58 (m, 2H), 0,85-0,90 (m, 2H), -0,05 (s, 9H).
[00211] Etapa E. Síntese de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído. Sob argônio, a uma solução de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,7 g, 4,09 mmol, 1 eq) em THF (30 mL) foi adicionado lentamente LiHMDS (1,0 M, 8,18 mL, 2 eq) a -78°C, a mistura de reação foi agitada a -70°C por 1 hora. Em seguida, uma solução de DMF (1,49 g, 20,45 mmol, 1,57 mL, 5 eq) em THF (3 mL) foi adicionada em ME1 33078475v.1 gotas à mistura. A mistura resultante foi agitada a -70°C por 1 hora. TLC (éter de petróleo: EtOAc = 1:1) mostrou uma nova mancha formada. A mistura de reação foi adicionada em gotas a NH4Cl (50 mL) aquoso a 0°C, então a mistura foi extraída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (40 mL) e secas sobre Na2SO4. O solvente foi removido in vacuo para gerar o produto bruto desejado (1,8 g) que foi usado para a etapa seguinte sem purificação adicional.
[00212] Etapa F. Síntese de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. A uma solução de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-di-hidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído (1,8 g, 3,24 mmol, 1 eq) em THF (20 mL) MeOH (10 mL) foi adicionado NaBH4 (245,08 mg, 6,48 mmol, 2 eq) a 0°C e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:2) mostrou que a matéria-prima foi consumida completamente, e uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, o resíduo foi purificado por combiflash (de 100% de DCM a 5% de MeOH em DCM). O produto desejado (1,1 g) foi obtido. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,63 (s, 1H), 7,86 (d, 1H), 6,44 (t, 1H), 6,27 (d, 1H), 5,40-5,42 (m, 4H), 4,98 (d, 2H), 4,34 (s, 3H), 3,55-3,61 (m, 2H), 0,86-0,91 (m, 2H), 0,00 (s, 9H).
[00213] Etapa G. Síntese de metanossulfonato de (4-metil-5-oxo- 6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-2-il)metila. A uma solução de 2- (hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (700 mg, 1,57 mmol, 1 eq) e Et3N (317,21 mg, 3,13 mmol, 436,33 uL, 2,0 eq) em DCM (15 mL) foi adicionado MsCl gota a gota (269,32 mg, 2,35 mmol, 181,97 uL, 1,5 eq) a 0 °C e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. TLC (éter de ME1 33078475v.1 petróleo:EtOAc = 1:1) mostrou que o material de partida foi consumido completamente, e uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (80 mL) e lavada com água (30 mL x 4), salmoura (40 mL) e seca sobre Na2SO4. O solvente foi removido in vacuo para gerar produto bruto (700 mg) . LCMS: (m/z 525,5(M+H).
[00214] Etapa H. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil- 6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona e 2-((4H-1,2,4-triazol-4- il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Uma mistura de metanossulfonato de (4-metil-5-oxo-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol- 3-il)metil)-5,6-di-hidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-2-il)metila (150 mg, 285,88 mmol, 1 eq) 1H-1,2,4-triazol (197,45 mg, 2,86 mmol, 10 eq) e CsF (86,85 mg, 571,77 umol, 21,08 uL, 2 eq) em MeCN (8 mL) foi agitada a 60 °C sob N2 por 18 horas. LCMS mostrou que a matéria-prima foi consumida completamente, e dois novos picos foram formados. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por Combiflash (de 100% de DCM a 8% de MeOH em DCM). Os produtos 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (55 mg) e 2-((4H-1,2,4-triazol-4- il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg) foram obtidos.
[00215] Etapa I. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona. A uma suspensão de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (55 mg, 110,52 umol, 1 eq) e HCl/dioxano (4 M, 1 mL, 36,19 eq) em DCM (3 mL) foi adicionado H2O (1,99 mg, 110,52 umol, 0,05 mL, 1 eq) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas.
ME1 33078475v.1
LCMS mostrou que o material de partida foi consumido completamente e 84% do produto desejado foi encontrado. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para gerar o produto desejado (24,1 mg, 65,60 umol, 59,35% de rendimento) . Coluna: Xtimate C18 150*25mm*5um, fase móvel: [água(0,225% FA)-ACN]; B%: 13%-43%, 11,2 min. LCMS: m/z 367,9(M+H)+ 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,72 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,52 (brs, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,92 (s, 2H), 5,43 (s, 2H), 4,30 (s, 3H).
[00216] Etapa J. Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4H-1,2,4- triazol-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A uma suspensão de 2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 60,28 umol, 1 eq) e HCl/dioxano (4 M, 1 mL, 66,35 eq) em DCM (3 mL) foi adicionado H2O (50,00 mg, 2,78 mmol, 0,05 mL, 46,04 eq) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. LCMS mostrou que o material de partida foi consumido completamente, o produto desejado foi encontrado. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para obter o produto desejado (2,1 mg, 5,72 umol). Coluna: Xtimate C18 150*25mm*5um; fase móvel: [água (0,225% FA)-ACN];B%: 13%-43%,11,2 min. LCMS: m/z 368,0(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,74 (s, 2H), 8,38 (s, 1H), 7,52 (d, 1H), 6,26 (d, 1H), 5,84 (s, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,31 (s, 3H).
[00217] Os seguintes compostos foram sintetizados de acordo com o Esquema E9 e o procedimento dos Exemplos 9A-9B usando a matéria prima apropriada. Proteção e desproteção padrão podem ser usadas quando necessário. Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Compo sto ME1 33078475v.1
E9-13 LCMS: m/z 367,0 [M+H]+. 1 H NMR (400 MHz, METANOL- d4) δ ppm 8,39 (s, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,59 (brs, 1H), 2-((1H-pirazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol-3- 6,43 (t, 1H), 6,29 (brs, 1H), 5,85 il)metil)-4-metil-4H- (s, 2H), 5,48 (s, 2H), 4,37 (s, tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 3H). 5(6H)-ona E9-14 LCMS: m/z 383,0 [M+H]+. 1 H NMR (400 MHz, METANOL- d4) δ ppm 8,41 (s, 1H), 7,55- 7,57 (m, 1H), 6,64 (d, 1H), 6,51 (d, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,48 (s, 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-((2-oxo- 2H), 5,28 (s, 2H), 4,37 (s, 3H). 2,3-dihidro-1H-imidazol-1-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona E9-15 LCMS: m/z 412,0 [M+H]+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,61 (brs, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,28 (d, 1H), 7,58 (brs, 1H), 7,13 (d, 1H), 6,08 (d, 1H), 6,03 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-((3- (s, 2H), 5,30 (brs, 2H), 4,24 (s, nitro-1H-pirazol-1-il)metil)-4,6-dihidro-5H- 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona E9-16 S N LCMS: m/z 382,0 [M+H]+ 1 N N H NMR (400 MHz, METANOL- N d4) δ ppm 8,35 (s, 1H), 7,53 (d,
N N O N 2H), 6,26 (brs, 1H), 5,71 (d, 1H), H2N NH 5,54 (s, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,33 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((3-amino-1H- (s, 3H). pirazol-1-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E9-17 LCMS: m/z 366,9 [M+H]+. 1 HNMR (400 MHz, METANOL- d4) δ ppm 8,36 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,54 (brs, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,26 (s, 1H), 5,72 2-((1H-imidazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol- (s, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,33 (s, 3-il)metil)-4-metil-4H- 3H). tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E9-18 LCMS: m/z 368 [M+H]+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,53 (brs, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,58 (brs, 1H), 6,17 (s, 2H), 6,07 (brs, 1H), 5,29 (brs, 2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-6-((1H- 2H), 4,23 (s, 3H).
ME1 33078475v.1 pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E9-19 LC-MS: m/z 453 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10,36 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,07-7,84 (m, 2H), 7,70 (t, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,79 (s, 2H), 5,45 (s, 2H), 4,26 (s, 3H), 2,01 (s, 3H) N-(6-((2-((1H-imidazol-1-il)metil)-4-metil- 5-oxo-4,5-dihidro-6H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6- il)metil)-5-fluoropiridin-2-il)acetamida Exemplo 9D. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2- aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona HCI/dioxano
[00218] Etapa A. Síntese de 2-cloro-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de 4-metil- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (3 g, 14,5 mmol) em THF seco (80 mL) foi adicionado LiHMDS (30,5 mL, ) a -65oC em gotas. Após agitação por 1 hora, foi adicionada uma solução de hexacloroetano (1,8 mL, 16 mmol) em THF seco (20 mL). A mistura de reação foi elevada para -20 oC durante 3 horas. Em seguida, a mistura foi suprimida com NH4Cl saturado e agitada em r.t. por 20 min. O precipitado foi coletado por filtração e lavado com EtOAc para gerar 3,5 g de 2-cloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 241 (M+H)+.
ME1 33078475v.1
[00219] Etapa B. Síntese de 4-metil-2-vinil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Sob nitrogênio, a uma mistura de 2-cloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,5 g, 6,2 mmol) e tributil(etenil)stanano (5,5 mL, 18,7 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado Pd(PPh3)4 (0,36 g, 0,31 mmol). A mistura de reação foi agitada a 100 oC por 2 horas. Em seguida, a mistura foi resfriada e diluída com EtOAc, lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 10% de MeOH em DCM) para gerar 1,4 g de 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 233 (M+H)+.
[00220] Etapa C. Síntese de 4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído Sob -60oC, uma mistura de 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (500 mg, 2,15 mmol) em DCM / MecN (500 mL, volume 1:1) foi purgada com O3 por 20 min. Em seguida, a reação foi interrompida com dimetilsolfano e concentrada para gerar 500 mg de 4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído. LC-MS (ESI): m/z 235 (M+H)+.
[00221] Etapa D. Síntese de 2-(hidroximetil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de 4-metil-5- oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldeído (500 mg, 2,13 mmol) em EtOH (3 mL) foi adicionado NaBH4 (81 mg, 2,13 mmol) em 0 o C. A reação foi agitada em temperatura ambiente por 5 min. Então a mistura foi vertida em NH4Cl saturado, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 8% de MeOH em DCM) para gerar 120 mg de 2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 237 (M+H)+.
[00222] Etapa E. Síntese de 6-((2-cloropirimidin-4-il)metil)-2- ME1 33078475v.1
(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de 2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona (200 mg, 0,85 mmol) em DMF (8 mL) foi adicionado K2CO3 (351 mg, 2,54 mmol). Após agitação a 60 oC por 30 min, uma solução de 2-cloro-4- (clorometil)pirimidina (276 mg, 1,7 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada por mais 4 horas, vertida em NH4Cl saturado, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 8% de MeOH em DCM) para gerar 160 mg de 6-((2-cloropirimidin- 4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona. LC-MS (ESI): m/z 363 (M+H)+.
[00223] Etapa F. Síntese de 6-((2-(bis(2,4- dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A uma mistura de 6-((2- cloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (160 mg, 0,44 mmol) em MeCN (5 mL) foi adicionada bis(2,4-dimetoxibenzil)amina (280 mg, 0,88 mmol) e AcOH (1 gota). A mistura de reação foi agitada a 80 oC durante a noite. A mistura de reação foi evaporada e o resíduo foi purificado por prep-TLC (eluente: 5% MeOH em DCM) para gerar 75 mg de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)- 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 644 (M+H)+.
[00224] Etapa G. Síntese de 6-((2-(bis(2,4- dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(clorometil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Sob 0 oC, a uma solução de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (75 mg, 0,12 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado Et3N (0,16 mL, 1,16 mmol) e MsCl (0,05 mL, 0,58 mmol). A mistura foi agitada em r.t. durante a noite. A mistura de reação foi diluída com ME1 33078475v.1
DCM, lavada com NH4Cl saturado e salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada para gerar 70 mg de produto bruto de 6-((2-(bis(2,4- dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(clorometil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 662 (M+H)+.
[00225] Etapa H. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2- (bis(2,4-dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Uma mistura de 4H-1,2,4- triazol (39 mg, 0,57 mmol) e K2CO3 (78 mg, 0,57 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada a 60oC por 30 min. 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4- il)metil)-2-(clorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (75 mg, 0,11 mmol) foi adicionada e agitada por mais 30 min. A suspensão foi vertida em NH4Cl saturado, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, 0 ~ 10% DCM em MeOH) para gerar 60 mg de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis(2,4- dimetoxibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 695 (M+H)+.
[00226] Etapa G. Síntese de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2- aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona A uma mistura de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis(2,4- dimetoxibenzil)amino) pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 0,043 mmol) em EtOH (2 mL) foi adicionado HCl (0,5 mL, 4 M em dioxano). A mistura de reação foi agitada a 80 oC durante a noite. Em seguida, a mistura foi resfriada e vertida em NAHCO3 saturado, extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para gerar 8 mg de 2-((1H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H)+.
ME1 33078475v.1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,80 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,12-8,10 (m, 2H), 6,60 (s, 2H), 6,19 (d, 1H), 6,01 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 4,26 (s, 3H).
Nº do Estrutura e nome químico Caraterização Compo sto E9-31 LC-MS: m/z 394 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,62 (s, 1H), 8,11 (d, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,61 (s, 2H), 6,18 (d, 1H), 5,79 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 2-((1H-imidazol-1-il)metil)-6-((2- 4,26 (s, 3H). aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin- 5(6H)-ona E9-32 LC-MS: m/z 385 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11,32-11,28 (m, 2H), 8,80 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 6,01 (s, 2H), 5,14 (s, 2H), 4,26 (s, 3H). 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6- ((5-oxo-4,5-dihidro-1H-1,2,4-triazol-3- il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona Exemplo 10. Síntese do composto E10-ii Esquema E10
[00227] A reação de E10-i com LiHMDS e um aldeído gera o composto E10-ii, que pode ser separado com HPLC ou SFC quiral para obter dois enantiômeros. Conforme usado neste documento, Ar1 e Ar2 são, cada um independentemente, um heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído. Exemplo 10A. Síntese de (R)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona e (S)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil- ME1 33078475v.1
4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Separação por SFC
[00228] Etapa A. Síntese de 2-(hidroxi(1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona. Sob argônio, a uma solução de 4-metil-6-((1-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (0,5 g, 1,20 mmol, 1 eq) em THF (10 mL) foi adicionado lentamente a LiHMDS (1,0 M, 2,41 mL, 2 eq) a -78°C, e a mistura de reação foi agitada a -70°C por 1 hora. Em seguida, uma solução de 1-(2-trimetilsililetoxi- metil)pirazol-3-carbaldeído (816,97 mg, 3,61 mmol, 3 eq) em THF (1 mL) foi adicionada à mistura de reação. A mistura resultante foi agitada a -70°C por 1 hora. TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:1) mostrou que duas novas manchas foram formadas. A mistura de reação foi suprimida por NH4Cl (5 mL) aquoso a - 70 °C e então aquecida até temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água (10 mL) e extraída com EtOAc (8 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL) e secas sobre Na2SO4. O solvente foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por Combiflash (de 100% de éter de petróleo até 100% de EtOAc) para gerar produto bruto (130 mg) como goma marrom pálida, que foi usada para a etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/z 643,2 [M+H]+
[00229] Etapa B. Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)- ona. A uma solução de 2-(hidroxi(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0,13 g, 202,20 umol, 1 eq) em DCM (8 mL) foi adicionado TFA (4,62 g, 40,52 mmol, 3 mL, 200,38 eq), seguido ME1 33078475v.1 por H2O (500,00 mg, 27,75 mmol, 0,5 mL, 137,26 eq), então, a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas, então, aquecida até 40°C por 18 horas. LCMS mostrou que o material de partida foi consumido completamente. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por Prep-HPLC para obter o produto desejado (20,5 mg). LCMS: m/z 382,9 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,72 (brs, 1H), 12,61 (brs, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,56-7,62 (m, 2H), 6,82 (brs, 1H), 6,18 (d, 1H), 5,99-6,09 (m, 2H), 5,24-5,32 (m, 2H), 4,19 (s, 3H).
[00230] Etapa C. Síntese de (R)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2- (hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5(6H)-ona e (S)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. O composto 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona foi separado por SFC. Condição de SFC: A coluna é DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250 mm*30 mm, 5um); fase móvel: A: 55% de CO2; B: 45% [0,1% NH3H2O em EtOH]/min. A separação de SFC gerou 2-[(R)-hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3- ilmetil)tiazolo[3,4]pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona e 2-[(S)-hidroxi(1H-pirazol-3- il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona. Um isômero (4,4 mg): LCMS: m/z 383 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm 8,39 (s, 1H), 7,61 (brs, 1H), 7,55 (brs, 1H), 6,34 (brs, 1H), 6,25 (brs, 1H), 6,18 (brs, 1H), 5,44 (s, 2H), 4,29 (s, 3H). Outro isômero (4,1 mg): LCMS: m/z 383 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,40 (s, 1H), 7,59 (brs, 1H), 7,54 (brs, 1H), 6,34 (brs, 1H), 6,26 (brs, 1 H), 6,19 (brs, 1 H), 5,44 (s, 2H), 4,29 (s, 3H). Exemplo 10B: Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(difluoro(1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-5-ona ME1 33078475v.1
[00231] Etapa A. 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A uma mistura de 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)(hidroxi)metil)-4-metil-5-oxo- 4,5-di-hidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H- pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 83,80 umol, feitos similarmente a E10-1) em DCM (1,5 mL) foi adicionado MnO2 (72,85 mg, 838,00 umol) e a mistura foi agitada a 15°C por 1,5 hora. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar um produto bruto (60 mg, bruto). LCMS: m/z 595,1 (M+H)+. 1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,34 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 5,54 (s, 2H), 4,49 (s, 3H), 3,10 (s, 6H) 2,93 (s, 6H).
[00232] Etapa B. 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3- il)difluorometil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A uma solução de 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1- sulfonamida (240 mg, 403,60 umol) em DCE (4 mL) foi adicionado BAST (1,34 g, 6,05 mmol, 1,33 mL) e a mistura foi agitada a 50°C por 12 horas. A mistura de reação foi diluída com diclorometano (20 mL) e lavada com NaHCO3 saturado (10 mL *2), seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar um produto bruto (300 mg, bruto) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS: m/z 617,1 (M+H)+.
ME1 33078475v.1
[00233] Etapa C. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(difluoro(1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma mistura de 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)difluorometil)-4- metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N- dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (240 mg, 163,47 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (2,07 g, 18,15 mmol, 1,34 mL) e a mistura foi aquecida até 50°C por 5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Agela ASB 150*25mm*5um; fase móvel: [água (0,05%HCl)-ACN]; B%: 30%-60%, 8 min) para gerar o produto desejado (3,9 mg, 5,45% de rendimento, 92% de pureza) como um sólido branco. LCMS: m/z 403,1 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,67 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,28 (s, 3H). Exemplo 10C: Síntese de 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3- il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[00234] Etapa A: 3-((2-(1-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)- 1-hidroxietil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3- d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A uma solução de 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1- sulfonamida (160 mg, 269,07 umol) em THF (3 mL) foi adicionado CH3MgBr (3 M, 179,38 uL) e a mistura de reação foi suprimida a 0°C por 3 horas. A mistura de reação foi vertida em NH4Cl saturado (10 mL) a 0 °C, extraída com acetato de etila (20mL * 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel flash(ISCO®; 12 g de Coluna Flash SepaFlash®, eluente de 0~90% de ME1 33078475v.1 gradiente de acetato de etila/Éter de petróleo a 40 mL/min) para gerar o produto desejado (50 mg, 81,87 umol). LCMS: m/z 611,1 (M+H)+.
[00235] Etapa B: 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)- 4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A uma mistura de 3-((2-(1-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)-1-hidroxietil)-4-metil- 5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil- 1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 81,87 umol) em DCE (0,5 mL) foi adicionado Et3SiH (19,04 mg, 163,75 umol, 26,15 uL) a 0°C seguido de TFA (1,54 g, 13,51 mmol, 1 mL, 164,96 eq) e foi agitada a 0°C por 1 hora. A mistura foi aquecida a 50°C por mais 1 hora. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Agela ASB 150*25mm*5um; fase móvel: [água (0,05%HCl)-ACN];B%: 25%-55%, 7 min) para gerar 7,0 mg de produto desejado. LCMS: m/z 381,2 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,46 (s, 1H), 8,15 (d, 2H), 6,78 (d, 1H), 6,74 (d, 1H), 5,60 (s, 2H), 5,00 (q, 1H), 4,33 (s, 3H), 1,94 (d, 3H). Exemplo 10D: Síntese de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-(1H- pirazol-3-carbonil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5- ona
[00236] Etapa A. 4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)-6-(1H-pirazol-3- ilmetil)tiazolo[3,4] pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona. A uma solução de 3-(6-((1- (N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H- tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1- sulfonamida (50 mg, 84,08 mmol) em DCE (1,5 mL) foi adicionado TFA (2,31 g, 20,26 mmol, 1,5 mL) e a mistura de reação foi aquecida até 50°C por 12 horas. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por ME1 33078475v.1 prep-HPLC para gerar 6,0 mg de produto desejado.
LCMS: m/z 381,1 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,72 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,49 (d, 1H), 6,19 (d, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,38 (s, 3H). Exemplo 11. Ensaio de Mutante de PKR Procedimento: A solução de enzima mutante de PKR ou PKR foi diluída em uma mistura de reação, que contém 1x tampão (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM MgCl2) bem como PEP (conc depende da enzima), 180 µM NADH, 0,5 unidades LDH, 1 mM DTT, 0,03% BSA; as concentrações finais de ensaio após diluição de 1,11 vezes são indicadas. 2 μL do composto de teste foram adicionados em poços primeiro e, então, uma mistura de reação de 180 μL foi adicionada.
A mistura de reação com o composto de teste foi montada, com exceção de ADP, e as placas foram armazenadas por 60 minutos em temperatura ambiente. 20 uL de ADP foram adicionados para iniciar a reação em temperatura ambiente e o progresso da reação foi medido como alterações na absorbância a 340nm de comprimento de onda em temperatura ambiente.
Preparação do composto de teste: O estoque do composto de teste foi feito a 100x de concentração em 100% de DMSO (10Mm) 1 a 3 diluições foram feitas para 11 pontos (ou seja, 50 μl de primeira concentração adicionada a 100 μl de DMSO 100% para produzir 3,33 mM, 50 μl disto adicionado a 100 μl de DMSO para produzir 1,11 mM, e assim por diante) • 1 a 100 de diluição em ensaio (2μl em 200μl) produziu uma concentração inicial de 100μM, diminuindo 3 vezes para 11 pontos.
Tampão de Ensaio: 100 mM KCl, 50 mM Tris 7,5, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,03% BSA Mistura de Reação: Enzima mutante de PKR: 40-400 ng/poço; ADP: 0,2-
ME1 33078475v.1
1,65 mM; PEP: 0,1-0,5 mM; NADH:180 μM; LDH: 0,5 unidades (Sigma# 59023); DTT: 1 mM; BSA: 0,03%. Exemplo 12. Ensaio de Ativação Percentual de Ponto Único de PKR
WT
[00237] Um composto descrito neste documento foi diluído com DMSO e testado a uma concentração de 1 µM. A enzima foi diluída em uma solução de enzima, que contém 1x tampão (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM MgCl2) bem como PEP (conc depende da enzima), 180 µM NADH, 0,5 unidades LDH, 1 mM DTT, 0,03% BSA; as concentrações finais de ensaio após diluição de 1,11 vezes são indicadas.
[00238] 2 µL da solução de composto foram primeiramente adicionados nos poços e, então, 180 µL de solução de enzima foram adicionados. Os ensaios foram montados com exceção de ADP, e as placas foram armazenadas por 60 minutos em RT. 20 µL de ADP foram adicionados para iniciar o ensaio e o rendimento do ensaio foi avaliado usando OD340. O ensaio foi realizado em temperatura ambiente. Concentração final: PKR wt (100 ng/poço), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0,48 mM), PEP (0,15 mM), NADH (180 µM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) e BSA (0,03%). Exemplo 13. Ensaio de Ativação Percentual de Ponto Único de PKR R510Q
[00239] Um composto descrito neste documento foi diluído com DMSO e testado a uma concentração de 1 µM. A enzima foi diluída em uma solução de enzima, que contém 1x tampão (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM MgCl2), bem como PEP (conc depende da enzima), 180 µM NADH, 0,5 unidades LDH, 1 mM DTT, 0,03% BSA; as concentrações finais de ensaio após diluição de 1,11 vezes são indicadas.
[00240] 2 µL da solução de composto foram primeiramente adicionados nos poços e, então, 180 µL de solução de enzima foram ME1 33078475v.1 adicionados. Os ensaios foram montados com exceção de ADP, e as placas foram armazenadas por 60 minutos em RT. 20 µL de ADP foram adicionados para iniciar o ensaio e o rendimento do ensaio foi avaliado usando OD340. O ensaio foi realizado em temperatura ambiente. Concentração final: PKR R510Q (40 ng/poço), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0,2 mM), PEP (0,11 mM), NADH (180 µM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) e BSA (0,03%). Exemplo 14. Ensaio de Ativação Percentual de Ponto Único de PKR R532W
[00241] Um composto descrito neste documento foi diluído com DMSO e testado a uma concentração de 1 µM. A enzima foi diluída em uma solução de enzima, que contém 1x tampão (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7,5, 5 mM MgCl2), bem como PEP (conc depende da enzima), 180 µM NADH, 0,5 unidades LDH, 1 mM DTT, 0,03% BSA; as concentrações finais de ensaio após diluição de 1,11 vezes são indicadas.
[00242] 2 µL da solução de composto foram primeiramente adicionados nos poços e, então, 180 µL de solução de enzima foram adicionados. Os ensaios foram montados com exceção de ADP, e as placas foram armazenadas por 60 minutos em RT. 20 µL de ADP foram adicionados para iniciar o ensaio e o rendimento do ensaio foi avaliado usando OD340. O ensaio foi realizado em temperatura ambiente. Concentração final: PKR R532W (100 ng/poço), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0,36 mM), PEP (0,1 mM), NADH (180 µM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) e BSA (0,03%). Exemplo 15. Ensaio de Ativação Percentual de Ponto Único de PKR T384M
[00243] Um composto descrito neste documento foi diluído com DMSO e testado a uma concentração de 1 µM. A enzima foi diluída em uma solução de enzima, que contém 1x tampão (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7,5, 5 ME1 33078475v.1 mM MgCl2), bem como PEP (conc depende da enzima), 180 µM NADH, 0,5 unidades LDH, 1 mM DTT, 0,03% BSA; as concentrações finais de ensaio após diluição de 1,11 vezes são indicadas.
[00244] 2 µL da solução de composto foram primeiramente adicionados nos poços e, então, a solução de enzima de 180 µL foi adicionada. Os ensaios foram montados com exceção de ADP, e as placas foram armazenadas por 60 minutos em RT. 20 µL de ADP foram adicionados para iniciar o ensaio e o rendimento do ensaio foi avaliado usando OD340. O ensaio foi realizado em temperatura ambiente. Concentração final: PKR T384M solúvel (300 ng/poço), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0,08 mM), PEP (0,23 mM), NADH (180 µM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) e BSA (0,03%). Exemplo 16. Purificação de hemácias (RBC)
[00245] Sangue fresco retirado de voluntários saudáveis foi coletado em tubos K2EDTA. O sangue total foi peletizado por centrifugação a 500g por 10 minutos. Corte a porta da bolsa de transfusão de neofiltro de redução de leucócitos Purecell (Fisher NC0267633) uma (1) polegada acima do filtro. Anexe um tambor de seringa de 10 ml à tubulação cortada restante acoplada ao neofiltro. A camada de plasma foi removida do pélete do sangue total e o pélete foi ressuspenso em 2x de volume de salina tamponada com fosfato (PBS). Transfira 9 ml de pélete de célula sanguínea ressuspenso para uma seringa preparada de 10 ml que esteja anexada ao neofiltro. Deixe o sangue integral fluir através do filtro até que todo o fluido passe através da tubulação superior para o disco de filtro. Adicione o êmbolo à seringa, remova a seringa da braçadeira e inverta o filtro, então, insira ar através do sistema de filtro da seringa. Usando uma nova seringa de 5 ml, remova as RBCs filtradas da bolsa pela porta da seringa e transfira as RBCs purificadas para um tubo com tampa de pressão de 5 ml que foi incubado no gelo. Gire o tubo com tampa de pressão de 5 ml a 500 g por 10 minutos a 15 °C, aspire sobrenadante e ressuspenda no AGAM (1x ME1 33078475v.1
PBS, 1% glicose, 170 mg/L de adenina, 5,25 g/L de manitol) a uma densidade de 4x109 células/mL. Exemplo 17. Ensaio de ATP Baseado em Células
[00246] Para ensaios de ATP baseados em células, o composto conforme descrito neste documento foi preparado em 100% de DMSO como um estoque de 10 mM. Diluições em série (1:4) foram realizadas em placa de armazenamento de fundo em V de 96 poços e então adicionadas a 1:100 a placas de fundo em V de 96 poços contendo AGAM. As RBCs foram diluídas em meio AGAM a uma densidade de 1x107 células/mL antes de serem adicionadas a 90 μL/poço a placas de ensaio de fundo claro preto (concentração do composto final a 0,1% concentração de DMSO). As placas de ensaio foram vedadas usando vedações de folha de alumínio e incubadas durante a noite a 37 °C em uma câmara umidificada. Os níveis de ATP foram lidos usando Cell- Titer-Glo (Promega).
[00247] Tendo-se assim descrito vários aspectos de várias modalidades, deve ser apreciado várias alterações, modificações e melhorias que ocorrerão prontamente para aqueles versados na técnica. Tais alterações, modificações e melhorias destinam-se a ser parte desta divulgação e destinam- se a estar dentro do espírito e escopo da invenção. Por conseguinte, a descrição precedente e os desenhos são a título de exemplo apenas.
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Claims (42)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto representado pela seguinte fórmula estrutural: (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que: R1 é hidrogênio, um alquil opcionalmente substituído, um haloalquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, –ORo1, –C(=O)Rc1, ou um grupo protetor de nitrogênio; em que: Ro1 é hidrogênio, alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; Rc1 é alquil opcionalmente substituído ou –N(Rcn)2, em que cada caso de Rcn é independentemente hidrogênio, −C1-6 alquil, ou um grupo protetor de nitrogênio; R2 e Q são, cada um, independentemente um heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros opcionalmente substituído; Ra e Rb são, cada um, independentemente hidrogênio, um halogênio, – CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, –ORo3, –N(Rn1)2, – C(=O)N(Rn1)2, ou –C(=O)Rc2; ou alternativamente Ra e Rb podem ser tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar um cicloalquil opcionalmente substituído ou um heterociclil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn1 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; ME1 32631620v.1
Ro3 é hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; e Rc2 é um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; e Rj e Rk são, cada um, independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN, –ORo7, –N(Rn5)2, –N(Rn5)C(=O) Rc5, –C(=O)N(Rn5)2, –C(=O)Rc5, –C(=O)ORo7, – SRjs, –S(=O)2Rjs, –S(=O)Rjs, ou um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; ou alternativamente Rj e Rk podem ser tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados para formar C=O, um anel C1-C6 cicloalquil monocíclico opcionalmente substituído, ou um anel C3-C6 heterociclil monocíclico opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn5 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, −ORo8, ou um grupo protetor de nitrogênio, em que Ro8 é hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Ro7 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Rc5 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; e cada caso de Rjs é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, um C6-12 aril opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de enxofre.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é opcionalmente substituído em cada átomo de carbono do anel substituível por Rp e opcionalmente substituído em cada átomo de nitrogênio do anel substituível por Rn6; em que: cada caso de Rp é independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente ME1 32631620v.1 substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, –ORo6, –SRs2, –N(Rn3)2, – C(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)C(=O)Rc4, –C(=O)Rc4, –C(=O)ORo6, –OC(=O)Rc4, – S(=O)Rs2, –S(=O)2Rs2, –S(=O)ORo6, –OS(=O)Rc4, –S(=O)2ORo6, –OS(=O)2Rc4,– S(=O)N(Rn3)2, –S(=O)2N(Rn3)2,–N(Rn3)S(=O)Rs2, –N(Rn3)S(=O)2Rs2, – N(Rn3)C(=O)ORo6, –OC(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2, –N(Rn3)S(=O)ORo6, –N(Rn3)S(=O)2ORo6, –OS(=O)N(Rn3)2, ou –OS(=O)2N(Rn3)2; ou alternativamente dois casos de Rp ligados aos mesmos átomos de carbono ou adjacentes, podem ser tomados em conjunto com o(s) átomo(s) de carbono ao(s) qual(is) eles estão ligados para formar um cicloalquil ou um heterocicloalquil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn3 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; cada caso de Ro6 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; e cada caso de Rc4 é um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; cada caso de Rs2 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído ou um grupo protetor de enxofre; e Rn6 é hidrogênio, um –C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio.
3. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes: ME1 32631620v.1 em que:
ME1 32631620v.1 cada caso de Rnc e Rnd é independentemente hidrogênio, −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio; e p é 0, 1, 2, 3 ou 4, conforme as permissões de valência.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes:
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por R2 é selecionado dentre um dos seguintes: nd (Rp)p (Rp)p (Rp)p (Rp)pH (Rp)p R (R )pp p (R )p (Rp)p
N N N
N N
S N N O N N N N N N N N .
N Rnc Rnc Rnc
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela seguinte fórmula estrutural: ME1 32631620v.1
(II) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que q é 0, 1, 2 ou 3.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela seguinte fórmula estrutural: (III) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que q é 0, 1, 2 ou 3.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela seguinte fórmula estrutural: (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que q é 0, 1, 2 ou 3.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela seguinte fórmula estrutural: ME1 32631620v.1
Rj Rk p S N (R )q Q
N N N Rb N a
R
O R1 (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que q é 0, 1, 2 ou 3.
10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que Rn6 é hidrogênio ou um −C1-4 alquil.
11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que cada caso de Rp é independentemente hidrogênio, halogênio, C1-4 alquil opcionalmente substituído, −CN,−NO2,−N3, –ORo4, –N(Rn2)2, –C(=O)N(Rn2)2, – C(=O)Rc3, ou –C(=O)ORo4.
12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-11, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre o seguinte: ME1 32631620v.1
; em que: cada caso de Rn é independentemente hidrogênio, um halogênio, −CN,−NO2,−N3, um alquil opcionalmente substituído, um alquenil opcionalmente substituído, um alquinil opcionalmente substituído, um cicloalquil opcionalmente substituído, um aril opcionalmente substituído, um heterociclil opcionalmente substituído, um heteroaril opcionalmente substituído, –ORo4, –SRs1, –N(Rn2)2, – C(=O)N(Rn2)2, – N(Rn2)C(=O)Rc3, –C(=O)Rc3, –C(=O)ORo4, –OC(=O)Rc3, – S(=O)Rs1, –S(=O)2Rs1, –S(=O)ORo4, –OS(=O)Rc3, –S(=O)2ORo4, –OS(=O)2Rc3, – S(=O)N(Rn2)2, –S(=O)2N(Rn2)2,–N(Rn2)S(=O)Rs1, –N(Rn2)S(=O)2Rs1, – N(Rn2)C(=O)ORo4, –OC(=O)N(Rn2)2, –N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2, –N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2, – N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2, –N(Rn2)S(=O)ORo4, –N(Rn2)S(=O)2ORo4, –OS(=O)N(Rn2)2, ou –OS(=O)2N(Rn2)2; ou dois casos de Rn, ligados aos mesmos átomos de carbono ou adjacentes, tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados para formar um cicloalquil ou um heterocicloalquil opcionalmente substituído; em que: cada caso de Rn2 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio;
ME1 32631620v.1 cada caso de Ro4 é independentemente hidrogênio, um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de oxigênio; cada caso de Rc3 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído; cada caso de Rs1 é independentemente um −C1-C6 alquil opcionalmente substituído ou um grupo protetor de enxofre; n é 0, 1, 2, ou 3, conforme as permissões de valência; e cada um dentre Rna, Rnb e Rnd é independentemente hidrogênio, −C1-C6 alquil opcionalmente substituído, ou um grupo protetor de nitrogênio.
13. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre o seguinte: (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n Rna S
N S O
N N
N N (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n
N O N N
N N
N N N N Rna Rna (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n
N N N N
N N
N N N
N
N N N S S N Rna Rna Rna (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn)n (Rn) n Rna N N N
N N N O O
N N N
O Rna .
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-13, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é selecionado dentre o seguinte: ME1 32631620v.1
.
15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é ou .
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o heteroaril monocíclico com 5 ou 6 membros representado por Q é .
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12-15, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que Rna é hidrogênio ou um −C1-4 alquil.
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12-17, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que cada caso de Rn é independentemente hidrogênio, halogênio, C1-4 alquil opcionalmente substituído, −CN,−NO2,−N3, –ORo4, –N(Rn2)2, –C(=O)N(Rn2)2, – ME1 32631620v.1
C(=O)Rc3, ou –C(=O)ORo4.
19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que R1 é hidrogênio ou um −C1-C4 alquil.
20. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-19, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que R1 é metil.
21. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-20, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que Rj e Rk são, cada um, independentemente hidrogênio, um halogênio, –ORo7, ou um −C1-C4 alquil, ou Rj e Rk se juntam para formar =O.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que Rj e Rk são, cada um, hidrogênio.
23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-22, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que Ra e Rb são, cada um, hidrogênio.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5-23, caracterizado pelo fato de que q é 0 ou 1.
25. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12-24, caracterizado pelo fato de que n é 0 ou 1.
26. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
27. Método para aumentar o tempo de vida das hemácias (RBCs), caracterizado pelo fato de que compreende o contato das hemácias com uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da ME1 32631620v.1 composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o composto ou a composição farmacêutica é adicionada diretamente ao sangue total que compreende as hemácias ou as hemácias embaladas compreendendo as hemácias extracorporalmente.
29. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o composto ou a composição farmacêutica é administrada a um sujeito compreendendo as hemácias.
30. Método para regular os níveis de 2,3-difosfoglicerato no sangue, caracterizado pelo fato de que compreende o contato do sangue com uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
31. Método para tratar a anemia em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
32. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a anemia é a anemia diseritropoiética.
33. Método para tratar a anemia hemolítica em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a anemia hemolítica é anemia hemolítica hereditária e/ou congênita, anemia hemolítica adquirida, ou anemia como parte de uma doença multissistêmica.
ME1 32631620v.1
35. Método para tratar a doença falciforme em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
36. Método para tratar a deficiência da piruvato quinase (PKD) em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
37. Método para tratar talassemia, esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária, abetalipoproteinemia ou síndrome de Bassen-Kornzweig, doença falciforme, hemoglobinúria paroxística noturna, anemia hemolítica adquirida, ou anemia de doenças crônicas em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
38. Método para tratar a talassemia em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a talassemia é a beta-talassemia.
40. Método para ativar a piruvato quinase R (PKR) mutante nas hemácias em um sujeito em necessidade, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal ME1 32631620v.1 farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
41. Método para ativar a piruvato quinase R (PKR) do tipo selvagem nas hemácias em um sujeito em necessidade, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
42. Método para aumentar a quantidade de hemoglobina em um sujeito em necessidade, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao sujeito, de uma quantidade eficaz (1) do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; ou (2) da composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 26.
ME1 32631620v.1
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