KR102642408B1

KR102642408B1 - 피루브산 키나아제 조절제 및 이의 용도

Info

Publication number: KR102642408B1
Application number: KR1020207007346A
Authority: KR
Inventors: 지오반니 시안체타; 찰스 컹; 타오 리우; 아닐 쿠마 파다이아나; 지후아 수이; 첸웨이 카이; 다웨이 쿠이; 징징 지
Original assignee: 아지오스 파마슈티컬스 아이엔씨.
Priority date: 2017-08-15
Filing date: 2018-08-15
Publication date: 2024-02-28
Also published as: WO2019035865A8; US20220233541A1; JP2020531432A; US11040036B2; SI3668513T1; US20200206225A1; KR20200054200A; PE20200724A1; WO2019035865A1; AU2018316588B2; US20230226055A1; US20200207785A1; CN111032046B; RU2020110573A3; WO2019035863A1; PL3668513T3; EP3668881B1; US11464775B2; EP3668512B1; HRP20220039T1

Abstract

화학식 I의 화합물을 사용해 대상체에서 PKM2 활성을 조절하는 방법이 본원에 기술된다. 이들 화합물은 화학식 I로 표시되고:

(화학식 I)
식 중 R¹, R², L¹ 및 L²는 본원에서 정의된 바와 같다.

Description

피루브산 키나아제 조절제 및 이의 용도

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2018년 5월 18일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/673,526호 및 제62/673,533호의 우선권의 이익을 주장한다. 본 출원은 또한 2017년 8월 15일에 출원된 국제 특허 출원 제PCT/CN2017/097496호의 우선권의 이익을 주장한다. 전술한 우선 출원 각각은 그 전체가 참조로써 본원에 통합된다.

피루브산 키나아제(PK)는 당분해 도중에 포스포에놀피루브산염을 피루브산염으로 전환시키는 대사 효소이다. 포유류에는 4개의 PK 이소형이 존재하는데, (PKLR 유전자에서 유래된) L 및 R 이소형은 각각 간세포와 적혈구세포에서 발현되고, PKM 유전자는 다음의 2개의 스플라이스 변이체를 암호화한다: 대부분의 성체(adult) 조직에서 발현되는 M1 이소형; 및 신장 및 조혈 줄기 세포를 포함하여, 일부 성체 조직에서 발현되고 배아 발달 도중에 발현되는 M2 이소형. 많은 종양 세포도 PKM2를 발현한다. 다른 자리성으로 조절된(allosterically regulated) 이러한 사량체 이소형은, 번역 후 변형, 일부 아미노산을 포함하는 소분자 리간드에 의한 다른 자리성 조절을 통하거나 (이량체 형태로의) 서브유닛 해리에 의해 그 활성을 하향 조절하도록 본질적으로 설계되는데, 이는 마지막 단계에서 당분해의 부분적 억제를 초래한다. 이는 지질 및 핵산의 합성을 위한 동화 탄소 공급원으로서 상류의 당분해 중간체를 축적하는 반면, 활성 사량체로의 PKM2의 재결합은 세포 분열 후 피드백으로서, 정상적인 이화 상태를 보충한다(Protein Sci. 2010 Nov; 19(11): 2031-2044 참조). PKM2의 조절(예: 억제 또는 활성화)은 다수의 장애, 예를 들어, 암, 비만, 당뇨성 질환(예: 당뇨성 신병증(DN)), 관상 동맥 질환(CAD), 블룸 증후군(BS), 자가면역 병태, 및 증식 의존성 질환(예: 양성 전립선 비대증(BPH))의 치료에 효과적일 수 있다.

피루브산 키나아제 M2(PKM2)의 활성 조절을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 본원에 기술되며, 상기 방법은 PKM2, 야생형 및/또는 돌연변이체 효소(예컨대, 본원에 기술된 것들)를 조절하는 화학식 I, II, III, IV, V-a, V-b, VI, 또는 IX(본원에서 "화학식 I~IX"로서 통칭됨)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 화학식 I', II', III', IV', V'(본원에서 "화학식 I'~V'"으로서 통칭됨) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 피루브산 키나아제 M2(PKM2) 활성을 조절하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되

(화학식 I)

식 중 Q, R¹, R², L¹, L²및 Q는 본원에서 정의된 바와 같다.

일 구현예에서, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 표 1, 및 도 1a~1c, 2a~2c 및 3의 화합물로부터 선택된다.

또한, 피루브산 키나아제 M2(PKM2)의 활성 조절을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I~IX의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 화학식 I'~V'의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 구현예에서, PKM2 활성의 수준 조절(예: 증가 또는 감소)을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 화합물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 PKM2를 이의 활성 형태로 유지시키는데 사용되거나, 환자에서 포도당 대사 산물을 동화 과정보다는 이화 과정으로 전환하는 수단으로서, 증식 세포에서 피루브산 키나아제 활성을 활성화시키는 데 사용된다. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에서 PKM2 활성의 수준을 증가(즉, 활성화)시킨다. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에서 PKM2 활성의 수준을 감소시킨다.

또 다른 구현예에서, 혈장 포도당 수준의 조절(예: 증가 또는 감소)을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 화합물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에서 혈장 포도당 수준을 증가시킨다. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에서 혈장 포도당 수준을 감소시킨다.

또 다른 구현예에서, 세포 증식의 억제가 필요한 대상체에서 이를 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 화합물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 이러한 방법은 형질변환된 세포, 예컨대 암 세포의 성장을 억제하거나, 일반적으로 호기성 당분해를 겪는 PKM2 의존성 세포의 성장을 억제할 수 있다.

또 다른 구현예에서, PKM2의 기능과 연련된 질환 또는 장애를 앓고 있거나 이에 걸리기 쉬운 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 화합물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 PKM2 및/또는 혈장 포도당의 조절(예: 활성화)로부터 혜택을 받을 대상체를 식별하거나 선택하는 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, PKM2 기능과 연관된 암의 치료 대상인 환자의 세포에서 PKM2 활성 수준에 기초하여 환자를 식별할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 선택된 환자는 본원에 식별된 장애 또는 질환, 예를 들어 원하지 않는 세포 성장 또는 증식을 특징으로 하는 장애를 앓고 있거나 이에 걸리기 쉬운 대상체이다. 특정 구현예에서, 질환은 신생물 장애(neoplastic disorder)이다. 특정 구현예에서, 질환은 암, 비만, 당뇨성 질환(예를 들어, 당뇨성 신병증(DN)), 동맥경화증, 재발 협착증, 관상 동맥 질환(CAD), 블룸 증후군(BS), 양성 전립선 비대증(BPH) 또는 자가 면역 질환이다. 특정 구현예에서, 질환은 암이다. 특정 구현예에서, 질환은 당뇨성 질환다. 특정 구현예에서, 당뇨성 질환은 당뇨성 신병증이다. 특정 구현예에서, 질환은 관상 동맥 질환(CAD)이다.

일 구현예에서, 전술한 본 발명의 방법 중 하나에 있어서 본원에 기술된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 용도가 제공된다. 일 구현예에서, 전술한 본 발명의 방법 중 하나에 사용하기 위한, 본원에 기술된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 또 다른 구현예에서, 전술한 본 발명의 방법 중 하나를 위한 위약의 제조를 위한, 본원에 기술된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물의 용도가 제공된다.

도 1a 내지 도 1c는 본 발명의 방법에 사용된 다른 예시적인 화합물의 구조를 나열한 것이다.
도 2a 내지 도 2c는 본 발명의 방법에 사용된 다른 예시적인 화합물의 구조를 나열한 것이다.
도 3은 본 발명의 방법에 사용된 다른 예시적인 화합물의 구조를 나열한 것이다.
도 4는 실시예 1~10에 사용된 예시적인 중간체의 합성을 도시한다.

하기 설명에 제시되거나 도면에 도시된 구성 요소의 구성 및 배치의 상세한 내용은 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 구현예는 다양한 방식으로 실시되거나 수행될 수 있다. 본원에서 사용되는 구절 및 용어는 설명을 목적으로 하는 것이며, 제한적인 것으로 간주되어서는 안 된다.

정의

본 발명의 방법에 사용되고, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 포함할 수 있으므로, 거울상 이성질체 및/또는 부분 입체 이성질체와 같은 다양한 입체 이성질체의 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물은 개별 거울상 이성질체, 입체 이성질체 또는 기하학적 이성질체의 형태이거나, 하나 이상의 입체 이성질체가 풍부한 혼합물 및 라세미 혼합물을 포함하는 입체 이성질체의 혼합물 형태일 수 있다. 키랄 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 키랄 염의 형성과 결정화를 포함하여, 당업자에게 공지된 방법에 의해 혼합물로부터 이성질체를 단리하거나; 비대칭 합성에 의해 바람직한 이성질체를 제조할 수 있다. 예를 들어, Jacques 등, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen 등, Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); 및 Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)을 참조한다.

일 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 동위원소 치환을 포함할 수도 있다. 예를 들어, 수소가 중소소 또는 삼중수소로, ¹⁹F가 ¹⁸F로, 또는 ¹²C가 ¹³C 또는 ¹⁴C로 치환된 것을 제외하면, 본 구조를 갖는 화합물은 본 발명의 범위에 포함한다. 이러한 화합물은, 예를 들어 생물학적 분석법에서 분석 도구나 프로브로서 유용하다.

본원에 기술된 화합물은 다수의 호변이성질체 형태로 나타낼 수 있으며, 이러한 경우에는, 단일 호변이성질체만으로 나타낼 수 있더라도 본원에 기술된 화합물의 모든 호변이성질체 형태를 명시적으로 포함한다(예: 고리 시스템의 알킬화가 다수의 부위에서 알킬화를 초래할 수 있고; 이러한 모든 반응 생성물이 명시적으로 포함됨). 이러한 화합물의 모든 이성질체 형태가 명시적으로 포함된다. 화합물의 호변이성질체가 방향족인 경우, 이러한 화합물은 방향족이다. 마찬가지로, 치환기의 호변이성질체가 헤테로아릴인 경우, 이러한 치환기는 헤테로아릴이다.

용어 "알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소기의 라디칼("C_1-10 알킬")을 지칭한다. C_1-6 알킬기의 예는, 메틸 (C₁), 에틸 (C₂), 프로필 (C₃) (예: n-프로필, 이소프로필), 부틸 (C₄) (예: n-부틸, 터트-부틸, 세크-부틸, 이소-부틸), 펜틸 (C₅) (예: n-펜틸, 3-펜타닐, 아밀, 네오펜틸, 3-메틸-2-부타닐, 3차 아밀), 및 헥실 (C₆) (예: n-헥실)을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 알킬기의 각각의 경우는 독립적으로 치환되지 않거나("미치환 알킬") 하나 이상의 치환기(예: F와 같은 할로겐)로 치환된다("치환된 알킬"). 특정 구현예에서, 알킬기는 미치환된 -C_1-10 알킬이다. 특정 구현예에서, 알킬기는 치환된 -C_1-10 알킬이다.

용어 "할로알킬"은 수소 원자 중 하나 이상이 할로겐(예: 플루오로, 브로모, 클로로, 또는 요오드)에 의해 독립적으로 치환되는, 치환된 알킬기를 지칭하며, 모든 수소가 할로로 치환된 알킬 모이어티(예: 퍼플루오로알킬)를 포함한다. 일부 구현예에서, 할로알킬 모이어티는 1개 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다("C_1-8 할로알킬").

용어 "알콕시" 또는 "알콕실"은 -O-알킬 라디칼을 지칭한다. 예: 1 내지 6개의 탄소 원자를 가짐.

용어 "아릴옥시"는 -O-아릴 라디칼을 지칭한다. 일부 구현예에서, 아릴옥시기는 페녹시(phenoxy)이다.

"히드록시알킬" 또는 "히드록실알킬" 은 하나 이상의 히드록실기로 치환되는 알킬 구조를 포함할 수 있다.

용어 "헤테로알킬" 은 산소, 질소, 또는 황으로부터 선택된 적어도 하나의(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의) 헤테로원자를 부모 사슬의 하나 이상의 말단 위치(들) 내에(즉, 이에 인접한 탄소 원자 사이에 삽입됨) 및/또는 상기 위치(들)에 추가로 포함하는 알킬기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 10개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 부모 사슬 내에 갖는 포화된 기를 지칭한다("헤테로C_1-10 알킬"). 달리 명시되지 않는 한, 헤테로알킬기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 헤테로알킬") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 헤테로알킬"). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 미치환된 헤테로C_1-10 알킬이다. 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 치환된 헤테로C_1-10 알킬이다.

용어 "알케닐"은 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1개 이상의(예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개의) 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소기의 라디칼을 지칭한다. 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합은 (2-부테닐에서와 같이) 내부 또는 (1-부테닐에서와 같이) 말단에 있을 수 있다. -C_2-4 알케닐기의 예는 에테닐(C₂), 1-프로페닐(C₃), 2-프로페닐(C₃), 1-부테닐(C₄), 2-부테닐(C₄), 부타디에닐(C₄) 등을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 알케닐기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 알케닐") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 알케닐"). 특정 구현예에서, 알케닐기는 미치환된 -C_2-10 알케닐이다. 특정 구현예에서, 알케닐기는 치환된 -C_2-10 알케닐이다. 알케닐기에서, C=C 이중 결합은 (E)- 또는 (Z)- 이중 결합일 수 있다.

용어 "알키닐"은 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1개 이상의(예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개의) 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소기의 라디칼을 지칭한다("C_2-10 알키닐"). 알키닐기의 예는 에티닐(C₂), 1-프로피닐(C₃), 2-프로피닐(C₃), 1-부티닐(C₄), 2-부티닐(C₄), 펜티닐(C₅), 헥시닐(C₆), 헵티닐(C₇), 옥티닐(C₈) 등을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 알키닐기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 알키닐") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 알키닐"). 특정 구현예에서, 알키닐기는 미치환된 -C_2-10 알키닐이다. 특정 구현예에서, 알키닐기는 치환된 -C_2-10 알키닐이다.

용어 "카보시클릴" 또는 "카보시클릭" 은 비-방향족 고리 시스템에서 3 내지 14 개의 고리 탄소 원자를 갖고("C3-14 카르보시클릴") 헤테로원자를 갖지 않는 비-방향족 단환, 이환, 또는 삼환 또는 다환 탄화수소 고리 시스템의 라디칼을 지칭한다. 카보시클릴기는 완전히 포화된 고리 시스템(예: 시클로알킬) 및 부분적으로 포화된 고리 시스템을 포함한다. 일부 구현예에서, 카보시클릴기는 3 내지 10개의 고리 탄소 원자를 갖는다("C_3-10 카보시클릴").

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "시클로알킬"은 표시된 수의 고리 및 탄소 원자를 포함하는 3 내지 14개의 탄소를 갖는 포화된 단환, 이환, 삼환, 또는 다환 탄화수소기를 포함한다(예를 들어, C₃-C₁₄ 단환, C₄-C₁₄ 이환, C₅-C₁₄삼환, 또는 C₆-C₁₄ 다환 시클로알킬). 일부 구현예에서, "시클로알킬"은 단환 시클로알킬이다. 단환 시클로알킬기의 예는 시클로펜틸(C₅), 시클로헥실(C₅). 시클로프로필(C₃) 시클로부틸(C₄), 시클로헵틸(C₇) 및 시클로옥틸(C₈)을 포함한다. 일부 구현예에서, "시클로알킬"은 이환 시클로알킬이다. 이환 시클로알킬의 예는 바이시클로[1.1.0]부탄(C₄), 바이시클로[1.1.1]

펜탄(C₅), 스피로[2.2]펜탄(C₅), 바이시클로[2.1.0]펜탄(C₅), 바이시클로[2.1.1]헥산(C₆), 바이시클로[3.3.3]운데칸(C₁₁), 데카하이드로나프탈렌(C₁₀), 바이시클로[4.3.2]운데칸(C₁₁), 스피로[5.5]운데칸(C₁₁) 및 바이시클로[4.3.3]도데칸(C₁₂)을 포함한다. 일부 구현예에서, "시클로알킬"은 삼환 시클로알킬이다. 삼환 시클로알킬의 예는 아다만틴(C₁₂)을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 시클로알킬기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 시클로알킬") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 시클로알킬"). 특정 구현예에서, 시클로알킬기는 미치환된 C_3-14 시클로알킬이다. 특정 구현예에서, 시클로알킬기는 치환된 C_3-14 시클로알킬이다.

용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭"은 고리 탄소 원자 및 1 내지 4개의 고리 헤테로원자를 갖는 3-원 내지 14-원 비-방향족 고리 시스템의 라디칼을 지칭하며, 여기서 각각의 헤테로원자는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된다("3~14원 헤테로시클릴"). 하나 이상의 질소 원자를 포함하는 헤테로시클릴기에서, 부착점은, 허용되는 원자가에 따라 탄소 또는 질소 원자일 수 있다. 헤테로시클릴기는 단환("단환 헤테로시클릴") 또는 다환(예: 이환 시스템("이환 헤테로시클릴") 또는 삼환 시스템("삼환 헤테로시클릴")일 수 있고, 포화되거나, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수 있다. 헤테로시클릴 다환 고리 시스템은 1개 또는 2개의 고리 모두에서 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 또한 "헤테로시클릴"은, 위에서 정의된 바와 같이 헤테로시클릴 고리가 하나 이상의 카보시클릴기와 융합되고, 부착점이 카르보시클릴 고리 또는 헤테로시클릴 고리 상에 있는 고리 시스템을 포함하거나; 위에서 정의된 바와 같이 헤테로시클릴 고리가 하나 이상의 아릴 또는 헤테로아릴기와 융합되고, 부착점이 헤테로시클릴 고리 상에 있는 고리 시스템을 포함하며, 이러한 경우에, 고리 원(ring member)의 개수가 헤테로시클릴 고리 시스템에서 고리 원의 개수를 연속해서 지정한다. 달리 명시되지 않는 한, 헤테로시클릴의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 헤테로시클릴") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 헤테로시클릴"). 특정 구현예에서, 헤테로시클릴기는 미치환된 3~14원 헤테로시클릴이다. 특정 구현예에서, 헤테로시클릴기는 치환된 3~14원 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로시클릴기는 고리 탄소 원자 및 1~4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-10원 비-방향족 고리 시스템이고, 여기서 각각의 헤테로원자는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된다("5-10원 헤테로시클릴").

예시적인 헤테로시클릴기는 아지리디닐, 옥시라닐, 티이라닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 테트라하이드로푸라닐, 다이하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에페닐, 다이하이드로티로페닐, 피롤리디닐, 다이하이드로피롤일, 피롤일-2,5-다인, 다이옥솔라닐, 옥사티올라닐, 다이티올라닐, 트리아졸리닐, 옥사다이아졸리닐, 티아다이아졸리닐, 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 다이하이드로피리디닐, 티아닐, 피페라지닐, 모폴리닐, 다이티아닐, 다이옥사닐, 트라아지나닐, 아제파닐, 옥세파닐, 티에파닐, 아조카닐, 옥세카닐, 티오카닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 다이하이드로벤조푸라닐, 다이하이드로벤조티에닐, 테트라하이드로벤조티에닐, 테트라하이드로벤조푸라닐, 테트라하이드로인돌릴, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 데카하이드로이소퀴놀리닐, 옥타하이드로크로메닐, 옥타하이드로이소크로메닐, 데카하이드로나프티리디닐, 데카하이드로-1,8-나프티리디닐, 옥타하이드로피롤로[3,2-b]피롤, 인돌리닐, 프탈리미딜, 나프탈리미딜, 크로마닐, 크로메닐, 1H-벤조[e][1,4]다이아제피닐, 1,4,5,7-테트라하이드로피라노[3,4-b]피롤릴, 5,6-다이하이드로-4H-푸로[3,2-b]피롤릴, 6,7-다이하이드로-5H-푸로-b]피라닐, 5,7-다이하이드로-4H-티에노[2,3-c]피라닐, 2,3-다이하이드로-1H-피롤로[2,3-b]피리디닐, 2,3-다이하이드로푸로[2,3-b]피리디닐, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-피롤로-b]피리디닐, 4,5,6,7-테트라하이드로푸로[3,2-c]피리디닐, 4,5,6,7-테트라하이드로티에노[3,2-b]피리디닐, 1,2,3,4-테트라하이드로-1,6-나프티리디닐 등을 포함한다.

용어 "아릴" 은 6~14개의 고리 탄소 원자를 갖고(예: 환상 어레이로 공유된 6, 10, 또는 14π개의 전자를 갖고), 방향족 고리 시스템으로 제공된 헤테로원자는 갖지 않는 단환 또는 다환(예: 이환 또는 삼환) 4n+2 방향족 고리 시스템의 라디칼을 지칭한다("C_6-14 아릴"). 일부 구현예에서, 아릴기는 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다("C₆ 아릴"; 예를 들어, 페닐). 일부 구현예에서, 아릴기는 10개의 고리 탄소 원자를 갖는다("C₁₀ 아릴"; 예를 들어, 1-나프릴 및 2-나프틸과 같은 나프틸). 일부 구현예에서, 아릴기는 14개의 고리 탄소 원자를 갖는다("C₁₄ 아릴"; 예를 들어, 안트라실). 또한 "아릴"은, 위에서 정의된 바와 같이 아릴 고리가 하나 이상의 카보시클릴 또는 헤테로시클릴기와 융합되고, 라디칼 또는 부착점이 아릴 고리 상에 있는 고리 시스템을 포함하며, 이러한 경우에, 탄소 원자의 개수가 아릴 고리 시스템에서 탄소 원자의 개수를 연속해서 지정한다. 달리 명시되지 않는 한, 아릴기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 아릴") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 아릴"). 특정 구현예에서, 아릴기는 미치환된 C_6-14 아릴이다. 특정 구현예에서, 아릴기는 치환된 C_6-14 아릴이다.

"아릴알킬" 또는 "아랄킬"은 "알킬"의 하위집합이고, 아릴기로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기서 부착점은 알킬 모이어티 상에 있다. "아릴알킬" 또는 "아랄킬"의 예는 벤질, 2-페닐에틸, 3-페닐프로필, 9-플루오레닐, 벤즈히드릴 및 트리틸기를 포함한다.

용어 "헤테로아릴" 은 고리 탄소 원자 및 방향족 고리 시스템으로 제공된 1~4개의 헤테로원자를 갖는 5-14원 단환 또는 다환(예: 이환, 삼환) 4n+2 방향족 고리 시스템(예: 환상 어레이로 공유된 6, 10, 또는 10개의 전자를 가짐)의 라디칼을 지칭하며, 여기서 각각의 헤테로원자는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된다("5-14원 헤테로아릴"). 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 1~4개의 헤테로원자를 포함하는 5-8원 단환 헤테로아릴일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 1~6개의 헤테로원자를 포함하는 8-12원 이환 헤테로아릴일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 1~9개의 헤테로원자를 포함하는 11-14원 삼환 헤테로아릴일 수 있다. 하나 이상의 질소 원자를 포함하는 헤테로아릴기에서, 부착점은, 허용되는 원자가에 따라 탄소 또는 질소 원자일 수 있다. 헤테로아릴 다환 고리 시스템은 1개 또는 2개의 고리 모두에서 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. "헤테로아릴"은, 위에서 정의된 바와 같이 헤테로아릴 고리가 하나 이상의 카보시클릴 또는 헤테로시클릴기와 융합되고, 부착점이 헤테로아릴 고리 상에 있는 고리 시스템을 포함하며, 이러한 경우에, 고리 원의 개수가 헤테로아릴 고리 시스템에서 고리 원의 개수를 연속해서 지정한다. 또한 "헤테로아릴"은, 위에서 정의된 바와 같이 헤테로아릴 고리가 하나 이상의 아릴기와 융합되고, 부착점이 아릴 또는 헤테로아릴 고리 상에 있는 고리 시스템을 포함하며, 이러한 경우에, 고리 원의 개수가 융합된 다환 (아릴/헤테로아릴) 고리 시스템에서 고리 원의 개수를 연속해서 지정한다. 하나의 고리가 헤테로원자를 함유하지 않는 다환 헤테로아릴기(예: 인돌릴, 퀴놀리닐, 카바졸릴 등)의 경우, 부착점은 헤테로원자를 가진 고리(예: 2-인돌릴) 또는 헤테로원자를 함유하지 않는 고리(예: 5-인돌릴) 상에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 고리 탄소 원자 및 방향족 고리 시스템으로 제공된 1~4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-10원 방향족 고리 시스템이고, 여기서 각각의 헤테로원자는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된다("5-10원 단환 헤테로아릴"). 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 고리 탄소 원자 및 방향족 고리 시스템으로 제공된 1~6개의 고리 헤테로원자를 갖는 8-12원 방향족 고리 시스템이고, 여기서 각각의 헤테로원자는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된다("8-12원 이환 헤테로아릴"). 달리 명시되지 않는 한, 헤테로아릴기의 각각의 경우는 독립적으로, 치환되지 않거나("미치환 헤테로아릴") 하나 이상의 치환기로 치환된다("치환된 헤테로아릴"). 특정 구현예에서, 헤테로아릴기는 미치환된 5~14원 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 5~14원 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, 헤테로아릴기는 임의 치환된 5-원 단환 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, 헤테로아릴기는 임의 치환된 6-원 단환 헤테로아릴이다.

예시적인 단환 헤테로아릴기는 피롤릴, 푸라닐, 티오페닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이소옥사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 테트라졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 트리아지닐, 테트라지닐, 아제피닐, 옥세피닐, 티에피닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 인다졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤조티오페닐, 이소벤조티오페닐, 벤조푸라닐, 벤조이소푸라닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈이소옥사졸릴, 벤즈옥사다이아졸릴, 벤즈티아졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤즈티아다이아졸릴, 인돌리지닐, 퓨리닐, 나프티리디닐, 프테리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 신놀리닐, 퀴녹살리닐, 프탈라지닐, 퀴나졸리닐페난트리디닐, 다이벤조푸라닐, 카바졸릴, 아크리디닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐 및 페나지닐을 포함한다.

"헤테로아랄킬" 또는 "헤테로아릴알킬"은 헤테로아릴기로 치환된 알킬기를 지칭하며, 여기서 부착점은 알킬 모이어티 상에 있다.

용어 "포화"는 이중 또는 삼중 결합을 함유하지 않는 모이어티, 즉 단일 결합만을 함유하는 모이어티를 지칭한다.

기 다음에 접미사 "-엔(-ene)"이 붙으면 기가 2가 모이어티라는 것을 나타내는데, 예를 들어, 알킬렌은 알킬의 2가 모이어티이고, 알케닐렌은 알케닐의 2가 모이어티이고, 알키닐렌은 알키닐의 2가 모이어티이고, 헤테로알킬렌은 헤테로알킬의 2가 모이어티이고, 헤테로알케닐렌은 헤테로알케닐의 2가 모이어티이고, 헤테로알키닐렌은 헤테로알키닐의 2가 모이어티이고, 카보시클릴렌은 카보시클릴의 2가 모이어티이고, 헤테로시클릴렌은 헤테로시클릴의 2가 모이어티이고, 아릴렌은 아릴의 2가 모이어티이며, 헤테로아릴렌은 헤테로아릴의 2가 모이어티이다.

용어 "임의 치환된(optionally substituted)"은 치환된 것 또는 치환되지 않은 것을 지칭된다. 일반적으로, 용어 "치환된(substituted)"은 기 상에 존재하는 적어도 하나의 수소가 허용 가능한 치환기, 예를 들어, 치환 시 안정한 화합물(재배열(rearrangement), 환화(cyclization), 제거(elimination) 또는 기타 반응 등에 의한 형질변환을 자발적으로 겪지 않는 화합물)을 생성하는 치환기로 대체되는 것을 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된" 기는 기의 하나 이상의 치환 가능한 위치에서 치환기(예: C_1-6알킬, 할로겐, 니트로, 시아노, 히드록실, C_1-6 할로알킬, C_1-6 할로알콕시, C_1-6 아실, C_3-6 시클로알킬, C_6-10아릴, 단환 또는 이환 헤테로아릴, 및 단환 또는 이환 헤테로시클릴)를 가지며, 임의의 주어진 구조에서 하나 이상의 위치가 치환될 때, 치환기는 각각의 위치에서 동일하거나 상이하다. 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용 가능한 치환기와의 치환을 포함하는 것으로 고려되며, 안정한 화합물이 형성되도록 하는 본원에 기술된 치환기 중 임의의 하나를 포함한다. 본 개시는 안정한 화합물에 도달하기 위해 임의의 모든 이러한 조합을 고려한다. 본 개시의 목적을 위해, 질소와 같은 헤테로원자는 수소 치환기 및/또는 헤테로원자의 원자가를 만족시키고 안정적인 모이어티를 형성하는 본원에 기술된 바와 같은 임의의 적절한 치환기를 가질 수 있다. 본 개시는 본원에 기술된 예시적인 치환기에 의해 어떤 방식으로도 제한되도록 의도되지 않는다.

용어 "할로" 또는 "할로겐" 는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.

용어 "아실" 은 일반 화학식 -C(=O)R^X1, -C(=O)OR^X1, -C(=O)-O-C(=O)R^X1, -C(=O)SR^X1, -C(=O)N(R^X1)₂, -C(=S)R^X1, -C(=S)N(R^X1)₂, 및 -C(=S)S(R^X1), -C(=NR^X1)R^X1, -C(=NR^X1)OR^X1, -C(=NR^X1)SR^X1, 및 -C(=NR^X1)N(R^X1)₂를 갖는 기를 지칭하며, 식 중, R^X1은 원자가가 허용되는 경우, 수소; 할로겐; 치환되거나 미치환된 히드록실기; 치환되거나 미치환된 티올; 치환되거나 미치환된 아미노; 치환되거나 미치환된 아실, 환상 또는 비환상, 분지형 또는 비분지형 C_1~10 알킬; 환상 또는 비환상, 치환되거나 미치환된, 분지형 또는 비분지형 C_2-10 알케닐; 치환되거나 미치환된 C_2-10알키닐; 치환되거나 미치환된 C_6-12 아릴; 치환되거나 미치환된 헤테로아릴이다. 예시적인 아실기는 알데히드(-CHO), 카르복실산(-CO₂H), 케톤, 아실 할라이드, 에스테르, 아미드, 이민, 카보네이트, 카바메이트 및 우레아를 포함한다.

특정 구현예에서, 질소 원자 상에, 산소 원자 상에 또는 황 원자 상에 존재하는 치환기는 각각 질소 보호기, 산소 보호기 또는 황 보호기이다. 질소, 산소 및 황 보호기는 당업계에 잘 알려져 있으며, 본원에 참조로서 통합된 문헌[Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3^rd edition, John Wiley & Sons, 1999]에서 상세히 기술된 것들을 포함한다.

예를 들어, 질소 보호기는 포름아미드, 아세트아미드, 클로로아세타아미드, 트리클로로아세타아미드, 트리플루오로아세트아미드, 페닐아세트아미드, 메틸 카바메이트, 에틸 카바메이트, 9-플루오레닐메틸 카바메이트(Fmoc), t-부틸 카바메이트(BOC 또는 Boc), 1-아다만틸 카바메이트(Adoc), 비닐 카바메이트(Voc), 알릴 카바메이트(Alloc), 2-(트리베틸실릴)에톡시]메틸(SEM), p-톨루엔설폰아미드(Ts), 벤젠설폰아미드, 2,3,6-트리메틸-4-메톡시벤젠설폰아미드(Mtr), 2,4,6-트리메톡시벤젠설폰아미드(Mtb), 페노티아닐-(10)-아실 유도체, N'-p-톨루엔설포닐아미노아실 유도체를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.

예시적인 산소 및 황 보호기는 메틸, 메톡시메틸(MOM), 메틸티오메틸(MTM), t-부틸티오메틸, (페닐다이메틸실릴)메톡시메틸(SMOM), 벤질옥시메틸(BOM), p-메톡시벤질옥시메틸(PMBM), (4-메톡시페녹시)메틸(p-AOM), 테트라하이드로피라닐(THP), 메탄설포네이트(메실레이트), 벤질설포네이트, 및 토실레이트(Ts)를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.

용어 "이탈기(leaving group)"에는 합성 유기 화학업계에서의 통상적인 의미가 부여되며, 이는 친핵제(nucleophile)에 의해 변위될 수 있는 원자 또는 기를 지칭한다. 적절한 이탈기의 예는 할로겐(예컨대, F, Cl, Br, 또는 I(요오드)), 알콕시카르보닐옥시, 아릴옥시카르보닐옥시, 알칸설포닐옥시, 아렌설포닐옥시, 알킬-카르보닐옥시(예: 아세톡시), 설폰산 에스테르, 예컨대 톨루엔설포네이트(토실레이트, -OTs), 메탄설포네이트(메실레이트, -OMs), p-브로모벤젠설포닐옥시(브로실레이트, -OBs), -OS(=O)₂(CF₂)₃CF₃ (노나플레이트, -ONf), 오트리플루오로메탄설포네이트(트리플레이트, -OTf) 등을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "염(salt)"은 임의의 모든 염을 지칭하며, 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 믿을 만한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 인간과 하등 동물의 조직과 접촉한 상태로 사용하는 데 적합하고, 타당한 이익/위험 비율에 적합한 염들을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Berge 등은 본원에 참조로서 통합된 문헌[J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19]에서 약학적으로 허용 가능한 염에 대해 상세히 기술하고 있다. 본 개시의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 적절한 무기 및 유기산과 염기로부터 유래된 것들을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 비독성의 산 부가염의 예는 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산 및 과염소산과 같은 무기산을 사용해 형성된 아미노기의 염; 또는 아세트산, 옥살산, 말레산, 타르타르산, 구연산, 숙신산, 또는 말론산과 같은 유기산을 사용해 형성된 아미노기의 염; 또는 이온 교환과 같은 당업계에 공지된 다른 방법을 사용함으로써 형성된 아미노기의 염이다. 기타 약학적으로 허용 가능한 염은, 아디핀산염, 알긴산염, 아스코르브산염, 아스파르트산염, 벤젠설폰산염, 벤조산염, 중황산염, 붕산염, 부티르산염, 캠퍼산염, 캠퍼설폰산염, 구연산염, 시클로펜탄프로피온산염, 다이글루콘산염, 도데실황산염, 에탄황산염, 포름산염, 푸마르산염, 글루코헵톤산염, 글리세로인산염, 글루콘산염, 헤미황산염, 헵타논산염, 헥사논산염, 요오드화수소산염, 2-히드록시-에탄황산염, 락토비온산염, 락트산염, 라우린산염, 라우릴황산염, 말산염, 말레산염, 말론산염, 메탄황산염, 2-나프탈렌황산염, 니코틴산염, 질산염, 올레산염, 옥살산염, 팔미트산염, 파모산염, 펙틴산염, 과황산염, 3-페닐프로피온산염, 인산염, 피크르산염, 피발산염, 프로피온산염, 스테아르산염, 숙신산염, 황산염, 타르타르산염, 티오시안산염, p-톨루엔황산염, 운데카논산염, 발레르산염 등을 포함한다. 적절한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄, 및 N⁺(C_1-4 알킬)₄ ^- 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 추가의 약학적으로 허용 가능한 염은, 적절한 경우, 무독성 암모늄, 사차 암모늄, 및 할라이드, 수산화물, 카르복실산염, 황산염, 인산염, 질산염, 저급 알킬 황산염, 및 아릴 황산염과 같은 반대이온을 사용해 형성된 아민 양이온을 포함한다.

용어 "조성물" 및 "제형"은 상호 교환적으로 사용된다.

투여가 고려되는 "대상체(subject)"는 인간(즉, 임의의 연령군의 남성 또는 여성으로서, 예를 들어, 소아 대상체(예: 유아, 소아 또는 청소년) 또는 성인 대상체(예: 청소년, 중년의 성인 또는 노년의 성인)) 또는 비인간 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 비인간 동물은 포유류(예: 영장류(예: 시노몰구스 원숭이 또는 붉은털 원숭이), 상업적으로 관련된 포유동물(예: 소, 돼지, 말, 양, 염소, 고양이 또는 개), 또는 조류(예: 상업적으로 관련된 조류, 예컨대 닭, 오리, 거위 또는 칠면조)이다. 특정 구현예에서, 비인간 동물은 어류, 파충류 또는 양서류이다. 비인간 동물은 임의의 발달 단계에 있는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 비인간 동물은 유전자이식 동물 또는 유전자 조작된 동물일 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 환자이다. 용어 "환자"는 질환의 치료를 필요로 하는 인간 대상체를 지칭한다. 특정 구현예에서, 용어 "환자"는 질환의 치료를 필요로 하는 18세를 넘긴 인간 성인이다. 특정 구현예에서, 용어 "환자"는 질환의 치료를 필요로 하는 18세 이하의 인간 소아이다. 특정 구현예에서, 환자는 정기적으로 수혈을 받지 않는다(예를 들어, 12개월 이내의 기간에 4회 이하의 수혈 에피소드를 가짐). 특정 구현예에서, 환자는 정기적으로 수혈을 받는다(예를 들어, 12개월 이내의 기간에 적어도 4회의 수혈 에피소드를 가짐).

용어 "투여(administer, administering 또는 administration)"는 대상체에게 또는 대상체 내에 본원에 기술된 화합물 또는 이의 조성물을 이식, 흡수, 섭취, 주입, 흡입 또는 달리 도입하는 것을 지칭한다.

용어 "치료(treatment, treat 및 treating)"는 본원에 기술된 질환을 역전 또는 완화시키거나, 질환의 발병을 지연시키거나, 질환의 진행을 억제하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료는 질환의 하나 이상의 징후 또는 증상이 발생하였거나 관찰된 후에 투여될 수 있다(치료적 치료). 다른 구현예에서, 치료는 질환의 징후나 증상이 없을 때 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료는 증상 발병 전에 (예를 들어, 증상의 이력에 비추어 및/또는 병원균에 대한 노출을 고려하여) 취약한 대상체에게 투여될 수 있다(예방적 치료). 치료는 증상이 해결된 후에도, 예를 들어, 재발을 지연시키거나 예방하기 위해 계속될 수 있다. 특정 구현예에서, 치료는 일정 기간 동안 질환의 적어도 하나의 증상의 발생을 지연시키는 것을 포함한다.

용어 "병태(condition)", "질환(disease)" 및 "장애(disorder)"는 상호 교환적으로 사용된다.

본원에 기술된 화합물의 "유효량(effective amount)"는 원하는 생물학적 반응을 유도하기에 충분한 양을 지칭한다. 본원에 기술된 화합물의 유효량은, 원하는 생물학적 종점, 화합물의 약동학, 치료되는 병태, 투여 방식, 및 대상체의 연령 및 건강과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 특정 구현예에서, 유효량은 치료적으로 유효한 양이다. 특정 구현예에서, 유효량은 베이스라인 대비 Hb 농도가 ≥1.5 g/dL 증가한 대상체의 헤모글로빈 반응을 생성하는 것이다. 대상체의 베이스라인 Hb 농도는 화합물로 치료하기 전에 이용 가능한 모든 Hb 농도의 평균이다. 특정 구현예에서, 유효량은 베이스라인 대비 Hb 농도가 ≥1.0 g/dL 증가한 대상체의 헤모글로빈 반응을 생성하는 것이다. 특정 구현예에서, 유효량은 베이스라인 대비 Hb 농도가 ≥2.0 g/dL 증가한 대상체의 헤모글로빈 반응을 생성하는 것이다. 특정 구현예에서, 유효량은 본원에 기술된 화합물의 1회 투약량의 양이다. 특정 구현예에서, 유효량은 본원에 기술된 화합물의 다회 투약량을 합친 양이다.

본원에 기술된 화합물의 "치료적으로 유효한 양(therapeutically effective amount)"은 병태의 치료에 치료적 이점을 제공하거나, 병태와 연관된 하나 이상의 증상을 지연시키거나 최소화하는 데 충분한 양이다. 치료적으로 유효한 양의 화합물은 병태의 치료에 치료적 이점을 제공하는 치료제 한 가지의 양 또는 다른 요법과 조합된 양을 의미한다. 용어 "치료적으로 유효한 양"은 전체 치료를 개선하고, 병태의 증상, 징후 또는 원인을 감소시키거나 회피하고/하거나, 또 다른 치료제의 치료 효능을 강화시키는 양을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 치료적으로 유효한 양은 야생형 또는 돌연변이체 PKM2의 측정 가능한 활성화를 유발하기에 충분한 양이다. 특정 구현예에서, 치료적으로 유효한 양은 혈장 포도당 조절(예: 감소)를 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하기에 충분한 양이다. 특정 구현예에서, 치료적으로 유효한 양은 증식성 질환(예를 들어, 암, 자가면역 질환)을 치료하기 위해 측정 가능한 효능을 유도하기에 충분한 양이다. 특정 구현예에서, 치료적으로 유효한 양은 당뇨성 질환(예를 들어, DN)을 치료 및/또는 예방하기 위해 측정 가능한 효능을 유도하기에 충분한 양이다. 특정 구현예에서, 치료적으로 유효한 양은 CAD를 치료 및 예방하기 위해 측정 가능한 효능을 유도하기에 충분한 양이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "활성화제(activator)"는 피루브산 키나아제(예: PKM2)의 활성을 (측정 가능하게) 증가시키거나, 피루브산 키나제(예를 들어, PKM2)의 활성을 PKM2 활성의 기저 수준보다 더 큰 수준으로 증가시키는 제제를 의미한다. 예를 들어, 활성화제는 천연 리간드(예를 들어, FBP)에 의해 야기되는 효과를 모방할 수 있다. 본원에 제공된 화합물에 의해 야기되는 활성화제 효과는 천연 리간드에 의해 야기되는 활성화 효과와 동일하거나, 이보다 더 크거나, 더 적은 정도일 수 있지만, 동일한 유형의 효과가 야기된다. 본원에 제공된 화합물은, 상기 화합물을 투여했을 때의 피루브산 키나아제의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 측정함으로써 이 화합물이 활성화제인지 여부를 결정하도록 평가될 수 있다. 본원에 제공된 화합물의 활성은 예를 들어, 대조군 물질에 대해 측정될 수 있다. 일부 경우에, 시험 화합물의 측정된 활성은 PKM2의 활성화를 위한 것이다. PKM2의 활성은, 예를 들어, 결합된 효소 분석 시스템에 사용된 ATP와 같은 생성물의 농도 또는 NADH와 같은 공동 인자의 수준을 모니터링함으로써 측정될 수 있다(PCT/US2010/040486 참조).　

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "억제제(inhibitor)"는 피루브산 키나아제(예를 들어, PKM2)의 효소 활성을 늦추거나, 정지시키거나, 감소시키거나, 불활성화시켜서 피루브산염 키나제(예를 들어, PKM2)의 활성을 기저 수준 미만으로 감소시키는 제제를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같은 방법을 지칭하는 용어 "생체 외(ex vivo)"는 상기 방법이 유기체 외부에서 일어남을 의미한다. 예를 들어, 세포 또는 조직을 유기체로부터 추출하여, 선택적으로 인위적으로 제어된 조건(예: 온도) 하에서 본원에 제공된 하나 이상의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 약학적 조성물과 접촉시킬 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 방법을 지칭하는 용어 "시험관 내( in vitro )"는 상기 방법이 유기체 외부에서 일어나고 인위적인 환경 내에 포함됨을 의미한다. 예를 들어, 세포 또는 조직을 유기체로부터 추출하여, 포함된 인위적인 환경(예: 배양 시스템) 내, 예컨대 시험관 내, 배양물 내, 플라스크 내, 마이크로타이터 플레이트 내, 페트리 접시 위 등에서, 본원에 제공된 하나 이상의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 약학적 조성물과 접촉시킬 수 있다.

화합물

PKM2를 조절하는 화합물 및 약학적 조성물과 관련된 방법, 및 이들 방법을 위한 이들 화합물 및 약학적 조성물의 용도가 본원에 기술된다. 구체적으로, 이들 방법은 대상체에서 피루브산 키나아제 M2(PKM2) 활성을 조절하는 방법, PKM2 활성 수준의 조절(예: 증가 또는 감소)을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법, 혈장 포도당 수준의 조절(예: 증가 또는 감소)을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법, 세포 증식의 억제를 필요로 하는 대상체에서 이를 억제하는 방법(암세포와 같은 형질 변환된 세포, 또는 일반적으로 호기성 당분해를 겪는 PKM2-의존성 세포에서 성장을 억제하는 방법), PKM2의 기능과 관련된 질환 또는 장애를 앓고 있거에 이에 걸리기 쉬운 대상체를 치료하는 방법을 포함한다. 일 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 및 조성물은 알로스테릭 결합 포켓(allosteric binding pocket)에서의 결합에 의해 PKM2를 조절한다. 일 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 및 조성물은 PKM2를 억제한다. 일 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 및 조성물은 PKM2를 활성화시킨다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 화학식 I-IX, 또는 화학식 I'-V'의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염이거나, 화학식 I-IX 또는 화학식 I'-V'의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물이다. 일 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용된 화합물은 국제 특허 출원 번호 PCT/CN2017/09496 및 미국 특허 가출원 번호 62/673,533 및 62/673,526에 기술된 화합물이며, 이들 각각의 개시 내용은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.

본 발명의 제1 구현예에서, 피루브산 키나아제 M2(PKM2) 활성의 조절을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되

(화학식 I)

식 중, Q는 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이고;

R¹은 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 할로알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, -OR^o1, -C(=O)R^c1, 또는 질소 보호기이고;

L¹은 결합, 임의 치환된 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH₂-, -S(=O)CH₂-, -S(=O)₂CH₂-, -NR³-, -NR³C(=O)- , -C(=O)NR³-, -C(=O)-, -OC(=O)- , -C(=O)O-, -NR³C(=O)O-, -OC(=O)NR³-, -NR³C(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂O-, -NR³C(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂NR³-, -S(=O)₂-, -S(=O)-, -S(=O)₂O-, -OS(=O)₂-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)₂-, -S(=O)NR³-, -NR³S(=O)-, - NR³S(=O)₂O-, -OS(=O)₂NR³-, - NR³S(=O)O-, -OS(=O)NR³-, 또는 -S(=O)(=NR³)-이고(여기서, R²에 대한 부착점은 좌측에 있음);

L²는 결합, 임의 치환된 알킬렌, -C(=O)-, -S(=O)₂-, 또는 -S(=O)-이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);

R²는 수소, 할로겐, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알콕시, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이거나, L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, - NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산호 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이고;

R³의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -OR^o2, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 질소 보호기이고;

R^o1, 및 R^o2의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^C1의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 알킬 또는 -N(R^cn)₂이고, R^cn의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C_1-6 알킬, 또는 질소 보호기이며;

R⁴의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이다.

본 발명의 제2 구현예에서, 혈장 포도당 수준의 조절을 필요로 하는 대상체에서 이를 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 화학식 I은 제1 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제3 구현예에서, PKM2의 기능과 연관된 질환 또는 장애를 앓고 있거나 이에 걸리기 쉬운 대상체에서 세포 증식을 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 화학식 I은 제1 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제4 구현예에서, PKM2의 비정상 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 화학식 I은 제1 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제5 구현예에서, 전술한 제4 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 질환은 증식성 질환이다.

본 발명의 제6 구현예에서, 전술한 제4 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서, 질환은 암, 비만, 당뇨성 질환(예를 들어, 당뇨성 신병증(DN)), 동맥경화증, 재발 협착증, 관상 동맥 질환(CAD), 블룸 증후군(BS), 양성 전립선 비대증(BPH) 또는 자가 면역 질환이다.

본 발명의 제7 구현예에서, 고혈당증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 화학식 I은 제1 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제8 구현예에서, 당뇨성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하되, 화학식 I은 제1 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제9 구현예에서, 전술한 제8 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 당뇨성 질환은 당뇨성 신병증이다.

본 발명의 제10 구현예에서, 전술한 제1 내지 제9 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 상기 방법은 PKM2의 조절으로부터 혜택을 받을 대상체를 식별하는 단계를 추가로 포함한다.

본 발명의 제11 구현예에서, 전술한 제1 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 조절하는 것은 활성화하는 것이다.

본 발명의 제12 구현예에서, 전술한 제1 내지 제11 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서:

Q는 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 6-원 내지 14-원 아릴, 또는 임의 치환된 5-원 내지 14-원 헤테로아릴이고;

R¹은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₁-C₆ 할로알킬, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알케닐, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알키닐, 임의 치환된 -C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 6-월 내지 12-원 아릴, -OR^o1, -C(=O)R^c1, 또는 질소 보호기이고;

L¹은 결합, 임의 치환된 C_1-6 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH2-, -S(=O)CH2-, -S(=O)2CH2-, -NR3-, -NR3C(=O)- , -C(=O)NR3-, --C(=O)-, -OC(=O)- , -C(=O)O-, -NR3C(=O)O-, -OC(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-, -OC(R4)2-, -C(R4)2O-, -NR3C(R4)2-, -C(R4)2NR3-, -S(=O)2-, -S(=O)-, -S(=O)2O-, -OS(=O)2-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)2NR3-, -NR3S(=O)2-, -S(=O)NR3-, -NR3S(=O)-, - NR3S(=O)2O-, -OS(=O)2NR3-, - NR3S(=O)O-, -OS(=O)NR3-, 또는 -S(=O)(=NR3)-이고(여기서, R2에 대한 부착점은 좌측에 있음);

L2는 결합, 임의 치환된 C₁-C₆ 알킬렌, -C(=O)-, -S(=O)2-, 또는 -S(=O)-이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);

R²는 수소, 할로겐, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알콕시, 임의 치환된 -C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 -C₆-C₁₂ 아릴, 또는 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로아릴이거나, L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, - NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산소 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이고;

R³의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -OR^o2, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알케닐, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알키닐, 임의 치환된 -C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 -C₃-C₁₂ 헤테로시클릴, 임의 치환된 -C₆-C₁₂ 아릴, 임의 치환된 -C₅-C₁₂ 헤테로아릴, 또는 질소 보호기이고;

R^o1 및 R^o2의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^c1의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬 또는 -N(R^cn)₂이고, R^cn의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이며;

R⁴의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알케닐, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알키닐, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 C₆-C₁₂ 아릴, 또는 임의 치환된 5-원 내지 14-원 헤테로아릴이다.

본 발명의 제13 구현예에서, 전술한 제1 내지 제12 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서:

Q는 C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴, 또는 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴이고, 이들 각각은 R^c의 0 내지 3개의 경우 중 하나와 치환되며;

R¹은 수소, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, C₃-C₇ 단환 시클로알킬 및 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴, -OR^o1, -C(=O)R^C1, 또는 질소 보호기로부터 선택되고(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 R^d의 0 내지 3개의 경우 중 하나와 치환됨);

R²는수소, 할로겐, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 알콕시, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, C₆-C₁₂ 이환 시클로알킬, 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴, C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴, 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴로부터 선택되거나(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 R^e의 0 내지 3개의 경우 중 치환됨), L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, - NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산소 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이며;

R³은 수소, -OR^o2, -C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, C₆-C₁₂ 이환 시클로알킬, 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴, C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴 및 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴로부터 선택되고(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 R^f의 0 내지 3개의 경우 중 하나와 치환됨);

R⁴는 수소, -C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, 및 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴로부터 선택되고(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 R^g의 0개 내지 1개의 경우 중 하나와 치환됨);

L¹은 결합, R^h의 0개 내지 3개의 경우 중 하나와 치환된 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH₂-, -S(=O)CH₂-, -S(=O)₂CH₂-, -NR³-, -NR³C(=O)- , -C(=O)NR³-, --C(=O)-, -OC(=O)- , -C(=O)O-, -NR³C(=O)O-, -OC(=O)NR³-, -NR³C(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂O-, -NR³C(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂NR³-, -S(=O)₂-, -S(=O)-, -S(=O)₂O-, -OS(=O)₂-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)₂-, -S(=O)NR³-, -NR³S(=O)-, - NR³S(=O)₂O-, -OS(=O)₂NR³-, - NR³S(=O)O-, -OS(=O)NR³-, 또는 -S(=O)(=NR³)-이고(여기서, R²에 대한 부착점은 좌측에 있음);

L²는 결합, R^h의 0개 내지 3개의 경우 중 하나와 치환된 알킬렌, -C(=O)-, -S(=O)₂-, 또는 -S(=O)-이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);

각각의 R^c는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬 )₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), - NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 R^c의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴C(=O)OH를 형성하고;

각각의 R^d는 할로, -C₁-C₆알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -NH₂ 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R^c는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 R^e의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;

각각의 R^f는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 알콕시, -OH, -NH₂, -CN 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R^g는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 알콕시, -OH, -NH₂, -CN 및 NO₂로부터 독립적으로 선택되며;

각각의 R^h는 할로, -C1-C6 알킬, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), - NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆ 알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂, S(=O)₂아릴, S(=O)₂헤테로아릴 및 =NOH로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 R^h의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성한다.

본 발명의 제14 구현예에서, 전술한 제1 내지 제13 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 II에 의해 표시되는 화합물

(화학식 II)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며, 식 중

R^a 및 R^b는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO_{2, -}N₃, 임의 치환된 알킬, -OR^o3, -N(Rⁿ¹)₂, -C(=O)N(Rⁿ¹)₂, 또는 -C(=O)R^c2이거나, R^a 및 R^b는 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 임의 치환된 헤테로시클릴을 형성할 수 있고;

Rⁿ¹의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^o3의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이며;

R^c2의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이고;

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제12 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제15 구현예에서, 전술한 제1 내지 제13 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 식 중 L¹은 결합, 임의 치환된 -C_1-6 알킬렌, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)₂-, -NR³C(=O)- , 또는 -C(=O)NR³이고; 상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제14 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제16 구현예에서, 전술한 제1 내지 제14 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 식 중 L¹은 R^j 및 R^k로 치환된 C_1-6 알킬렌이고;

여기서, R^j 및 R^k의 각각의 경우는 H, 할로겐, -CN, -OR^o7, -N(Rⁿ⁵)₂, -N(Rⁿ⁵)C(=O) R^c5, -C(=O)N(Rⁿ⁵)₂, -C(=O)R^c5, -C(=O)OR^o7, -SR^js, -S(=O)₂R^js, 또는 -S(=O)R^js, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬이거나; R^j 및 R^k는 탄소 원자와 합쳐져 C=O, C=NR, 임의 치환된 C₃-C₆ 단환 시클로알킬 고리 또는 임의 치환된 C₃-C₆ 단환 헤테로시클릴 고리를 형성할 수 있고;

Rⁿ¹의 R^jn의 각각은 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, -OR^o8, 또는 질소 보호기이고;

R^o7의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^c5의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이며;

R^js의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 C_6-12 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 황 보호기이며;

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제15 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제17 구현예에서, 전술한 제1 내지 제16 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 I'에 의해 표시되는 화합물

(화학식 I')

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며, 식 중

R¹은 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 할로알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, -OR^o1, -C(=O)R^c1, 또는 질소 보호기이고; 여기서

R^o1은 수소, 임의 치환된 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^C1은 임의 치환된 알킬 또는 -N(R^cn)₂이고, R^cn의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C_1-6 알킬, 또는 질소 보호기이고;

R²및 Q는 각각 독립적으로 임의 치환된 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴이고;

R^a 및 R^b는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO_{2, -}N₃, 임의 치환된 알킬, -OR^o3, -N(Rⁿ¹)₂, -C(=O)N(Rⁿ¹)₂, 또는 -C(=O)R^c2이거나, 대안적으로, R^a 및 R^b는 이들이 부착되는 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 임의 치환된 헤테로시클릴을 형성할 수 있고;

Rⁿ¹의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;

R^o3은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^c2는 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이며;

R^j 및 R^k는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -OR^o7, -N(Rⁿ⁵)₂, -N(Rⁿ⁵)C(=O) R^c5, -C(=O)N(Rⁿ⁵)₂, -C(=O)R^c5, -C(=O)OR^o7, -SR^js, -S(=O)₂R^js, -S(=O)R^js, 또는 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬이거나; 대안적으로, R^j 및 R^k는 이들이 부착되는 탄소 원자와 합쳐져 C=O, 임의 치환된 C₁-C₆ 단환 시클로알킬 고리, 또는 임의 치환된 C₃-C₆ 단환 헤테로시클릴 고리를 형성할 수 있고;

Rⁿ⁵의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, -OR^o8, 또는 질소 보호기이고, 여기서 R^o8은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^js의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 C_6-12 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 황 보호기이다.

본 발명의 제18 구현예에서, 전술한 제17 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 I'으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 식 중 R²로 표시된 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 각각의 치환 가능한 고리 탄소 원자에서 R^p에 의해 임의 치환되고, 각각의 치환 가능한 고리 질소 원자에서 Rⁿ⁶에 의해 임의치환되고; 여기서

R^p의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO2, -N3, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 헤테로아릴, -C(=O)R^c4, -C(=O)OR^o6, -OC(=O)R^c4, -S(=O)R^s2, -S(=O)₂R^s2, -S(=O)OR^o6, -OS(=O)R^c4, -S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)₂R^{c4, -}S(=O)N(Rⁿ³)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ³)_{2, -}N(Rⁿ³)S(=O)R^s2, -N(Rⁿ³)S(=O)₂R^s2, -N(Rⁿ³)C(=O)OR^o6, - OC(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)N(Rⁿ³)₂, - N(Rⁿ³)S(=O)₂N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)OR^o6, -N(Rⁿ³)S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)N(Rⁿ³)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ³)₂이거나, 대안적으로는 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 R^p의 2가지 경우는 이들이 부착되는 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;

Rⁿ³의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;

R^o6의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이며;

R^c4의 각각의 경우는 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이고;

R^s2의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이며;

Rⁿ⁶은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이며;

상기 변수 중 나머지는 제17 구현예에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제19 구현예에서, 전술한 바와 같은 제1 내지 제18 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q는 임의 치환된 5-원 내지 6-원 단환 헤테로아릴이고, 상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제18 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제20 구현예에서, 전술한 제1 내지 제19 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q는 다음 화학식 중 하나이며:

식 중,

Rⁿ의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 헤테로아릴, -OR^o4, -SR^s1, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, - N(Rⁿ²)C(=O)R^c3, -C(=O)R^c3, -C(=O)OR^o4, -OC(=O)R^c3, -S(=O)R^s1, -S(=O)₂R^s1, -S(=O)OR^o4, -OS(=O)R^c3, -S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)₂R^c3, -S(=O)N(Rⁿ²)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ²)_{2, -}N(Rⁿ²)S(=O)R^s1, -N(Rⁿ²)S(=O)₂R^s1, -N(Rⁿ²)C(=O)OR^o4, -OC(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)N(Rⁿ²)₂, - N(Rⁿ²)S(=O)₂N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)OR^o4, -N(Rⁿ²)S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)N(Rⁿ²)₂, 또는 -OS(=O)₂N(Rⁿ²)₂이거나; 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 Rⁿ의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고; 여기서,

Rⁿ²의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;

R^o4의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^c3의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이고;

R^s1의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이고;

n은 허용되는 원자가가 따라 0, 1, 2 또는 3이며;

R^na의 R^nb 및 R^nd의 각각은 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬 또는 질소 보호기이며;

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제19 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제21 구현예에서, 전술한 제1 내지 제20 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q로 표시되는 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 다음으로부터 선택되며:

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제20 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제22 구현예에서, 전술한 제1 내지 제21 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q로 표시되는 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 다음으로부터 선택되며:

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제21 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제23 구현예에서, 전술한 제1 내지 제22 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q로 표시되는 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 다음으로부터 선택되며:

본 발명의 제24 구현예에서, 전술한 제1 내지 제23 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q로 표시되는 5-원 내지 6-원 단환 헤테로아릴은 이며; 상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제23 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제25 구현예에서, 전술한 제1 내지 제16 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q는 임의 치환된 8-원 내지 12-원 이환 헤테로아릴 또는 임의 치환된 8-원 내지 12-원 이환 헤테로시클리이고; 상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제16 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제26 구현예에서, 전술한 제1 내지 제16 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Q는 다음 화학식 중 하나이며:

식 중 Rⁿ의 각각의 경우는 수소, 할로겐, -CN, -NO2, -N₃, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 헤테로아릴, -OR^o4, -SR^s1, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, - N(Rⁿ²)C(=O)R^c3, -C(=O)R^c3, -C(=O)OR^o4, -OC(=O)R^c3, -S(=O)R^s1, -S(=O)₂R^s1, -S(=O)OR^o4, -OS(=O)R^c3, -S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)₂R^{c3, -}S(=O)N(Rⁿ²)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ²)_{2, -}N(Rⁿ²)S(=O)R^s1, -N(Rⁿ²)S(=O)₂R^s1, -N(Rⁿ²)C(=O)OR^o4, - OC(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)N(Rⁿ²)₂, - N(Rⁿ²)S(=O)₂N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)OR^o4, -N(Rⁿ²)S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)N(Rⁿ²)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ²)₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 Rⁿ의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;

R^na 및 R^nb의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;

Rⁿ²의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

n은 허용되는 원자가가 따라 0, 1, 2 또는 3이며;

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제16 구현예 및 제25 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제27 구현예에서, 전술한 바와 같은 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R²는 수소, 히드록실, 할로겐, -C₁-C₆알킬, -C₂-C₆알케닐, -C₂-C₆알콕실, 페닐, 나프탈레닐, C_3-6 시클로알킬, 5-원 헤테로아릴, 6-원 헤테로아릴, 8-원 이환 헤테로아릴, 9-원 이환 헤테로아릴을 포함하며, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 페닐, 및 헤테로아릴은 치환되지 않거나 R^e의 3가지 경우 중 하나와 치환되며; 상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제28 구현예에서, 전술한 제1 내지 제27 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R²는 다음 화학식 중 하나이며:

식 중 R^p의 각각의 경우는 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 헤테로아릴, -OR^o6, -SR^s2, -N(Rⁿ³)₂, -C(=O)N(Rⁿ³)₂, - N(Rⁿ³)C(=O)R^c4, -C(=O)R^c4, -C(=O)OR^o6, -OC(=O)R^c4, -S(=O)R^s2, -S(=O)₂R^s2, -S(=O)OR^o6, -OS(=O)R^c4, -S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)₂R^{c4, -}S(=O)N(Rⁿ³)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ³)_{2, -}N(Rⁿ³)S(=O)R^s2, -N(Rⁿ³)S(=O)₂R^s2, -N(Rⁿ³)C(=O)OR^o6, - OC(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)N(Rⁿ³)₂, - N(Rⁿ³)S(=O)₂N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)OR^o6, -N(Rⁿ³)S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)N(Rⁿ³)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ³)₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 R^p의 2가지 경우는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 임의 치환된 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;

Rⁿ³, R^nc 및 R^nd의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C1-C6 알킬, 또는 질소 보호기이고;

R^o6의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;

R^c4의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆알킬이고;

R^s2의 각각의 경우는 독립적으로 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이고;

p는 허용되는 원자가가 따라 0, 1, 2 또는 3이며;

상기 변수 중 나머지는 제1 내지 제27 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제29 구현예에서, 전술한 제1 내지 제28 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R²로 표시되는 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 다음 중 하나로부터 선택되며:

식 중,

R^nc 및 R^nd의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;

p는 허용되는 원자가가 따라 0, 1, 2, 3 또는 4이며;

나머지 변수는 제1 내지 제28 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제30 구현예에서, 전술한 제1 내지 제29 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R²로 표시되는 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴은 다음 중 하나로부터 선택되며:

; 변수 중 나머지는 제1 내지 제29 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제31 구현예에서, 전술한 제1 내지 제30 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R²는 다음 중 하나로부터 선택되며:

변수 중 나머지는 제1 내지 제30 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제32 구현예에서, 전술한 제27 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R^p의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, 임의 치환된 C_1-4 알킬, -CN, -NO_{2, -}N₃, -OR^o4, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -C(=O)R^c3, 또는 -C(=O)OR^o4이며; 변수 중 나머지는 제28 내지 제31 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제33 구현예에서, 전술한 제1 내지 제16 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 III의 화합물:

(화학식 III)

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 변수는 제1 내지 제16 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제34 구현예에서, 전술한 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 IV의 화합물:

(화학식 IV);

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 변수는 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제35 구현예에서, 전술한 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 V-a의 화합물:

(화학식 V-a)

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 m은 0, 1 또는 2이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제36 구현예에서, 전술한 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 V-b의 화합물:

(화학식 V-b),

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 m은 0, 1 또는 2이고; R^nc는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제37 구현예에서, 전술한 제1 내지 제16 구현예 및 제25 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 VI의 화합물:

(화학식 VI)

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 Rⁿ⁷은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제16 구현예 및 제25 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제38 구현예에서, 전술한 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 IX의 화합물:

(화학식 IX),

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 R^nc는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제24 구현예 및 제27 내지 제32 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제39 구현예에서, 전술한 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 II'의 화합물:

(화학식 II')

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 Rⁿ⁶은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고; q는 0, 1, 2 또는 3이며; 변수 중 나머지는 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다. 대안적으로, 변수는 제17, 제18, 제29, 제30, 및 제31 구현예 중 어느 하나에 기술된 바와 같다.

본 발명의 제40 구현예에서, 전술한 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 III'의 화합물:

(화학식 III')

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 q는 0, 1, 2 또는 3이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제41 구현예에서, 전술한 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 IV'의 화합물:

(화학식 IV')

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이며, 여기서 Rⁿ⁶은 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고; q는 0, 1, 2 또는 3이며; 변수 중 나머지는 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제42 구현예에서, 전술한 제1 내지 제38 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 화합물은 화학식 V'의 화합물:

(화학식 V')

본 발명의 제43 구현예에서, 전술한 제39 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Rⁿ⁶ 수소 또는 -C_1-4 알킬이고; 변수 중 나머지는 제39 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제44 구현예에서, 전술한 제39 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R^p의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, 임의 치환된 C_1-4 알킬, -CN, -NO_{2, -}N₃, -OR^o4, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -C(=O)R^c3, 또는 -C(=O)OR^o4이며; 변수 중 나머지는 제39 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제45 구현예에서, 전술한 제26 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R^na는 수소 또는 -C_1-4 알킬이고; 변수 중 나머지는 제26 내지 제42 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제46 구현예에서, 전술한 제20 내지 제45 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 Rⁿ의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, 임의 치환된 C_1-4 알킬, -CN, -NO₂, -N₃, -OR^o4, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -C(=O)R^c3, 또는 -C(=O)OR^o4이며; 변수 중 나머지는 제20 내지 제45 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제47 구현예에서, 전술한 제1 내지 제46 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R¹은 수소 또는 -C₁-C₄ 알킬이고; 변수 중 나머지는 제1 내지 제46 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제48 구현예에서, 전술한 제16 내지 제47 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, R^j 및 R^k는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -OR^o7, 또는 -C₁-C₄ 알킬이거나; R^j 및 R^k는 서로 결합되어 =O를 형성하고; 변수 중 나머지는 제16 내지 제47 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제49 구현예에서, 전술한 제16 내지 제48 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 R^j 및 R^k는 각각 수소이며; 변수 중 나머지는 제16 내지 제48 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제50 구현예에서, 전술한 제14 내지 제49 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며,

여기서 R^a 및 R^b는 각각 수소이며; 변수 중 나머지는 제14 내지 제49 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제51 구현예에서, 전술한 제45 내지 제50 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며,

상기 q는 0 또는 1이며; 변수 중 나머지는 제45 내지 제50 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제52 구현예에서, 전술한 제20 내지 제51 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 n은 0 또는 1이며; 변수 중 나머지는 제20 내지 제51 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다.

본 발명의 제53 구현예에서, 전술한 제1 내지 제52 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 상기 화합물은 표 1로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.

본 발명의 제54 구현예에서, 피루브산 키나아제 M2(PKM2)의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 PKM2를 제1 내지 제53 구현예 중 어느 하나에 기술된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.

본 발명의 제55 구현예에서, 피루브산 키나아제 M2(PKM2)를 발현하는 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 세포를 상기 제1 내지 제53 구현예 중 어느 하나에 기술된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다.

본 발명의 제56 구현예에서, 전술한 제54 및 제55 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 상기 방법은 생체 외 방법이다.

본 발명의 제57 구현예에서, 전술한 제54 및 제55 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 상기 방법은 생체 내 방법이다.

본 발명의 제58 구현예에서, 전술한 제54 및 제57 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 상기 방법은 PKM2의 활성을 억제한다.

본 발명의 제59 구현예에서, 전술한 제54 및 제57 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 상기 방법은 PKM2의 활성을 활성화시킨다.

본 발명의 제60 구현예에서, 제54 내지 제59 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 PKM2는 적혈구 세포가 아닌 세포에서 발현된다.

본 발명의 제61 구현예에서, 제54 내지 제60 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 세포는 PKM2의 기능과 연관된 질환 또는 장애를 앓고 있거나 이에 걸리기 쉬운 대상체로부터 유래되거나 수득된다.

본 발명의 제62 구현예에서, 제61 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 질환이나 장애는 PKM2의 비정상적인 활성과 관련이 있다.

본 발명의 제63 구현예에서, 제61 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 질환이나 장애는 암, 비만, 당뇨성 질환(예를 들어, 당뇨성 신병증(DN)), 동맥경화증, 재발 협착증, 관상 동맥 질환(CAD), 블룸 증후군(BS), 양성 전립선 비대증(BPH) 또는 자가 면역 질환이다.

본 발명의 제64 구현예에서, 제63 구현예에 따른 방법이 제공되며, 여기서 당뇨성 질환은 당뇨성 신병증이다.

본 발명의 제65 구현예에서, 제55 내지 제64 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 세포는 PKM2를 과발현하는 세포이다.

본 발명의 제66 구현예에서, 제55 내지 제65 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 세포는 이상 활성을 가진 PKM2를 과발현하는 세포이다.

본 발명의 제67 구현예에서, 제55 내지 제66 구현예 중 어느 하나에 따른 방법이 제공되며, 여기서 세포는 암 세포, 췌장 세포, 간 세포, 신경 세포 또는 신장 세포이다.

화학식 I-IX, I'-V'의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 특정 구현예에서, R² 및 Q는 각각 독립적으로 임의 치환된 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴이다. 화학식 I-IX, I'-V'의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 특정 구현예에서, R² 및 Q는 모두 임의 치환된 5-원 또는 6-원 단환 헤테로아릴이고; L₁ 및 L₂는 각각 독립적으로 임의 치환된 C1-4 알킬렌이다. 특정 구현예에서, R² 및 Q는 동일하다. 특정 구현예에서, R² 및 Q는 상이하다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 본원에 기술된 방법 및 조성물에 이용되는 PKM2의 활성화제로서 유용하고 다음의 메커니즘 또는 특성 중 하나 이상에 의해 작동하거나 이를 갖는다:

a. PKM2의 알로스테릭 활성화제이고;

b. PKM2의 결합 포켓에서 FBP의 결합을 조절(예: 안정화)하고;

c. PKM2의 결합 포켓으로부터 FBP의 방출을 조절(예: 촉진)하고;

d. 조절제(예: 작용제), 예를 들어 FBP의 유사체, 예를 들어 FBP에 결합하는 것보다 더 낮거나, 거의 동일하거나, 더 높은 친화도로 PKM2에 결합하는 작용제이고;

e. 사량체 PKM2의 용해를 조절(예: 촉진)하고;

f. 사량체 PKM2의 조립을 조절(예: 촉진)하고;

g. PKM2의 사량체 형성을 조절(예: 안정화)하고;

h. 포스포티로신 함유 폴리펩티드가 PKM2에 결합하는 것을 조절(예: 촉진)하고;

i. 예를 들어, Lys 433의 위치에서 PKM2의 형태 변화를 유도하여 FBP의 방출을 방해함으로써, PKM2로부터 FBP의 방출을 유도하는 포스포티로신 함유 폴리펩티드의 능력을 조절(예: 촉진)하고;

j. 효소의 활성에 영향을 미치는 번역 후 변형(예: Cys358에서의 산화 또는 Lys305에서의 아세틸화)을 거치도록 PKM2의 경향을 조절하고;

k. Lys433에 결합하거나, Lys 433의 위치를 FBP 결합 포켓에 대해 상대적으로 변경시키고;

l. PK의 적어도 하나의 다른 이소형에 비해 PKM2를 선택적으로 조절(예: 활성화)하고(예를 들어, PKR, PKM1 또는 PKL 중 하나 이상에 비해 PKM2에 대해 선택적임);

m. PKR, PKM1, 또는 PKL과 같은 PK의 적어도 하나의 다른 이소형에 대한 친화도보다 PKM2에 대해 더 큰 친화도를 갖는다.

본원에 기술된 화합물을 PKM2를 활성화하는 능력에 대해 시험할 수 있다. 간략화를 위해, 이들 화합물의 활성화 활성은 AC₅₀으로서 표 2에 표시한다. 표 2에서, 본원에 기술된 화합물은 야생형 PKM2의 AC50을 가질 수 있다. "A"는 0.300 μM 미만의 AC50을 지칭하고; "B"는 0.301 μM 내지 0.800 μM의 AC50을 지칭하고, "C"는 0.800 μM을 초과하는 AC50을 지칭한다.

Cpd 번호	PKM2 WT AC50	Cpd 번호	PKM2 WT AC50
1	A	74	A
2	A	75	A
3	B	76	A
4	B	77	A
5	C	78	A
6	B	79	C
7	C	80	A
8	A	81	C
9	B	82	B
10	A	83	A
11	A	84	A
12	C	85	A
13	B	86	A
14	C	87	A
15	C	88	A
16	B	89	A
17	C	90	A
18	C	91	A
19	C	92	A
20	C	93	A
21	A	94	A
22	C	95	C
23	B	96	A
24	C	97	C
25	C	98	B
26	B	99	A
27	B	100	A
28	A	101	A
29	B	102	B
30	A	103	A
31	A	104	A
32	A	105	A
33	C	106	C
34	C	107	A
35	C	108	A
36	B	109	A
37	C	110	A
38	A	111	A
39	A	112	A
40	C	113	A
41	B	114	C
42	C	115	A
43	A	116	C
44	C	117	C
45	B	118	B
46	A	119	B
47	C	120	C
48	C	121	B
49	B	122	A
50	C	123	A
51	A	124	B
52	C	125	C
53	C	126	A
54	A	127	B
55	C	128	A
56	C	129	A
57	C	130	C
58	C	131	B
59	C	132	A
60	C	133	C
61	C	134	A
62	C	135	A
63	A	136	B
64	C	137	B
65	A	138	C
66	A	139	C
67	C	140	C
68	A	141	C
69	A	142	C
70	A	143	C
71	C	144	C
72	A	145	C
73	A

특정 구현예에서, 화학식 I-IX, I'-V'의 화합물은 표 1 및 실시예에서 제시된 화합물 중 어느 하나로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 화학식 I-IX, I'-V'의 화합물은 아래의 어느 하나의 화학식이다:

식 중 R^na, R^nc, R^o2, 및 R^o6은 본원에 정의된 바와 같고, R^ox는 수소 또는 산소 보호기이다. 특정 구현예에서, R^na는 질소 보호기(예를 들어, SEM 또는 BOC)이다. 특정 구현예에서, R^nc는 질소 보호기(예를 들어, SEM 또는 BOC)이다. 특정 구현예에서, R^o2는 산소 보호기(예: THP)이다. 특정 구현예에서, R^o6은 산소 보호기(예: TBS)이다. 특정 구현예에서, R^ox는 산소 보호기(예: THP)이다.

본원에 기술된 화합물은 실시예에 제시된 바와 같은 다양한 합성 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 본원에 기술된 화합물을 합성하는데 유용한 합성 화학 변형 및 보호기 방법론(보호 및 탈보호)은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene 및 P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser 및 M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) 및 이의 후속 개정판에 기술된 바와 같은 것들을 포함한다.

PKM2 야생형 및/또는 돌연변이체 활성화제로서 유용한 특정 활성화제 화합물은, FBP 존재 시의 특이성 및 PKM2 효소(야생형 및/또는 돌연변이체 효소)의 활성화보다 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 또는 100% 더 큰 수준까지 특이성 및 PKM2 효소의 활성화를 FBP 부재 시에 나타내는 것들이다.

일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 반응식 1에 예시된 방법을 사용해 제조할 수 있다. 화학식 S1의 티아졸릴 알데히드를 적절한 용매(예: 에탄올) 중에서 친핵성 첨가 조건(예: 염기) 하에 에틸 아지도아세테이트와 반응시켜 화학식 S2의 중간체를 수득한다. 화학식 S2의 히드록실기를 이탈기로 전환한 후 제거하여 화학식 S3을 수득할 수 있다. 아미노기의 고리화 및 후속 기능화를 통해 화학식 S5의 이환 화합물을 수득하고, 소듐 메탄티올레이트와의 친핵성 변위를 거친 후 산화룰 통해 화학식 S7을 수득한다. 하이드라진의 존재 하에 화학식 S7을 추가로 고리화한 다음, 염기의 존재하에 LG¹-CH₂-Q¹과의 친핵성 변위를 통해 화학식 S9의 중간체를 수득한다. 화학식 S9의 황기를 설피닐 또는 설포닐로 산화시켜 화학식 S10 또는 S11을 수득하는데, 이는 일반적인 화학식 S12를 생성하기 위한 추가 친핵성 변위를 위한 기질이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, X¹은 본원에서 정의된 바와 같은 이탈기이다. 특정 구현예에서, X¹은 할로겐, 알칸설포닐옥시, 아렌설포닐옥시, 다이아조늄, 알킬 다이아젠, 아릴 다이아젠, 알킬 트리아젠, 아릴 트리아젠, 니트로, 질화알킬, 질화아릴, 인산알킬, 인산아릴, 알킬 카르보닐옥시, 아릴 카르보닐옥시, 알콕스 카르보닐옥시, 아리옥스 카르보닐옥시 암모늄, 알킬 아민, 아릴 아민, 히드록실기, 알킬옥시기, 아릴옥시기이고; LG¹은 본원에 정의된 바와 같은 이탈기이고; Q¹은 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이며; Nu¹은 본원에 정의된 바와 같은 친핵체이다. 화학식 S12의 화합물의 Nu¹은 표준 화학 변형을 사용해 다른 작용기로 추가로 변환될 수 있다. R¹은 제1 구현예에서 정의된 바와 같다.

반응식 1

반응식 2

일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 반응식 2에 도시된 방법을 사용해 제조할 수 있다. 반응식 1과 유사하게, 화학식 S21은 화학식 S13의 티아졸 알데히드로부터 제조될 수 있다. 화학식 S21의 할로겐화를 통해 화학식 S22를 수득하고, 알킬 금속, 알케닐 금속, 알키닐 금속, 아릴 금속, 헤테로아릴 금속, 헤테로시클릴 금속, 또는 시클로알킬 금속과 유기 결합 반응을 거쳐 화학식 S23의 화합물을 수득할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, X³은 할로겐이고; R¹은 본 발명의 제1 구현예에 정의된 바와 같고; LG²는 본원에 정의된 바와 같은 이탈기이고; Q²는 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이고; M¹은 금속(예: Li, Na, K, Mg, Zn, Sn, B, Pd, Si, Cu 등)이고; X⁴는 할로겐 또는 알킬 설폰산 에스테르 또는 아릴 설폰산 에스테르이고; R^r1은 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, 유기 결합 반응은 네기시 반응(Negishi reaction)이고; X³은 I이며; M¹는 Zn이다.

화학식 S22 및 S23의 화합물은 X³ 및/또는 R^r1 위치에서 더 많은 기능을 도입하는 데 유용한 중간체이다(반응식 3). 특정 구현예에서, 화학식 23-i의 화합물은 추가로 산화되어 화학식 S24를 형성할 수 있다. 적절한 친핵체로 S24에 친핵성을 첨가하여 S25의 화합물을 생성한다. 또 다른 구현예에서, 화학식 S22의 화합물은 비닐 금속과 결합하여 비닐기를 티아졸 고리에 도입할 수 있다. 비닐기의 산화에 이어서 친핵성 첨가를 통해 화학식 S28의 화합물을 수득한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, Nu²는 친핵체이다.

반응식 3

본원에서 사용되는 바와 같이, R^r2는 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이다. Nu¹ 및 Q2는 반응식 2에서 정의된 바와 같다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 친핵체는 전자 쌍을 친전자체에 공여하여 반응과 관련하여 화학적 결합을 형성하는 화학종이다. 유리 전자쌍 또는 적어도 하나의 pi 결합을 갖는 모든 분자 또는 이온은 친핵체으로 작용할 수 있다. 예시적인 친핵체는 친핵성 기능을 갖는 적어도 하나의 군, 예를 들어, 알파 탄소(예를 들어, 카보닐, 설포닐, 설피닐, 아릴기 또는 헤테로아릴에 인접한 탄소), 티올기, 히드록실기, 일차 아민기, 이차 아민기, 할라이드, 시안화물, 아지드화물, 알콕시드, 유기 금속 또는 무기 염기를 포함한다.

일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 반응식 4에 도시된 방법을 사용해 제조할 수 있다. 2차 환상 아민으로 화학식 S30을 친핵성 변위하면 화학식 S31이 수득된다. 화합물 S32의 유기-결합 반응(예를 들어, 스즈키 결합, Pd 결합 등)을 통해 화학식 S33(i)-(iii)의 화합물을 수득한다. 또한, 화학식 S34의 설피닐기를 카르밤산암모늄으로 기능화하여 화학식 S35의 이미노-설파논(imino-sulfanone)을 수득할 수 있다.

반응식 4

본원에서 사용되는 바와 같이, 는 고리 원자로서 질소를 갖는 고리 A를 나타낸다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 는 탄소 고리 원자 상에 부착점을 갖는 고리 B를 나타낸다.

R¹은 제1 구현예에서 정의된 바와 같다. R³⁵, R³⁶ 및 R³⁷의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 헤테로시클릴, 또는 임의 치환된 시클로알킬이다.

X⁴는 할로겐 또는 -OTf이다. M⁴는 필요한 경우, 허용되는 원자가에 따라 적절한 (유기 또는 무기) 리간드를 갖는 유기 금속이다. 예시적인 M⁴는 유기 Li, Sn, B(예: 붕산 및 보론 에스테르), Zn, Mg, Si, Pd, 및 Cu를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.

치료 방법

일 구현예에서, 본원에 기술된 바와 같은 질환, 병태 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 본원에 기술된 화합물(예: 실시예, 표 1 및 도 1a~1c, 2a~2c 및 3에서의 화학식 I-IX, I'-V'의 화합물)을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 기술된 화합물 및 조성물은 아래 본원에 기술된 것들을 포함하는 다양한 장애를 치료 및/또는 진단하기 위해 배양 중인 세포에, 예를 들어, 시험관 내 또는 생체 외 투여되거나, 대상체에게, 예를 들어, 생체 내 투여될 수 있다.

증식 질환

일부 구현예에서, 증식 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "증식 질환(proliferative disease)"은 세포 승화에 의한 비정상적인 성장 또는 증식에 기인하여 발생하는 질환을 지칭한다(Walker, Cambridge Dictionary of Biology; Cambridge University Press: Cambridge, UK, 1990 참조). 증식 질환은 다음과 관련이 있을 수 있다: 1) 일반적으로 휴지기인 세포(quiescent cell)의 병리적 증식; 2) 세포의 정상적인 위치로부터의 세포의 병리적 이동(예: 신생물 세포의 전이); 3) 기질 금속단백분해효소(예: 콜라게나아제, 젤라틴나아제, 및 엘라스타아제)와 같은 단백질 분해 효소의 병리적 발현; 또는 4) 증식성 망막증 및 종양 전이에서와 같은 병리적 혈관신생. 예시적인 증식 질환은 암("악성 신생물"), 양성 신생물, 혈관신생, 염증성 질환, 자가면역 질환을 포함한다. 특정 구현예에서, 증식 질환은 암이다. 특정 구현예에서, 증식 질환은 자가면역 질환이다.

용어 "신생물(neoplasm)" 및 "종양"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 조직의 비정상적인 덩어리를 지칭하는데, 이 덩어리는 정상 조직의 성장을 능가하며 정상 조직의 성장과 조화를 이루지 않는다. 신생물 또는 종양은 다음의 특성에 따라 "양성" 또는 "악성"일 수 있다: 세포 분화 정도(형태 및 기능 포함); 성장 속도; 국소 침입; 및 전이. "양성 종양"은 일반적으로 잘 구별되고, 악성 신생물보다 특징적으로 느리게 성장하며, 원발 부위에 국소화된 채 유지된다. 또한, 양성 신생물은 먼 부위에 침윤, 침입 또는 전이할 수 있는 능력을 갖지 않는다. 예시적인 양성 신생물은 지방종(lipoma), 연골종(chondroma), 선종(adenoma), 연성 섬유종(acrochordon), 노인성 혈관종(senile angioma), 지루성 각화증(seborrheic keratoses), 검버섯(lentigo) 및 피지샘 증식증(sebaceous hyperplasias)을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 일부 경우에, 특정 "양성" 종양은 추후 악성 신생물을 이르킬 수 있는데, 이는 종양의 신생물 세포 하위집단에서의 추가적인 유전적 변화에 기인하며, 이러한 종양은 "전악성 신생물(pre-malignant neoplasms)"로 지칭된다. 예시적인 전악성 신생물은 기형종(teratoma)이다. 대조적으로, "악성 신생물"은 일반적으로 잘 분화되지 않으며(역분화), 주변 조직의 점진적인 침윤, 침투 및 파괴를 동반하는 빠른 성장을 특징으로 한다. 또한, 악성 신생물은 일반적으로 먼 부위까지 전이하는 능력을 갖는다. 용어 "전이(metastasis)", "전이성(mestastatic)", 또는 "전이하다(mestastasize)"는 암세포가 1차 종양 또는 원발 종양으로부터 다른 기관 또는 조직으로 확산 또는 이동하는 것을 지칭하며, 2차(전이성) 종양이 위치한 기관이나 조직의 것이 아닌 1차 또는 원발 종양의 조직 유형의 "2차 종양" 또는 "2차 세포 덩어리"가 존재하는 것에 의해 일반적으로 식별할 수 있다. 예를 들어, 뼈로 이동한 전립선 암은 전이성 전립선암이라고 말하며 뼈 조직에서 성장하는 암성 전립선암 세포를 포함한다.

용어 "암"은 통제할 수 없을 정도로 증식하고, 정상적인 신체 조직을 침윤하고 파괴할 수 있는 능력을 갖는 비정상 세포의 발생을 특징으로 하는 질환 부류를 지칭한다. 예를 들어, Stedman's Medical Dictionary, 25th ed.; Hensyl ed.; Williams & Wilkins: Philadelphia, 1990을 참조한다. 예시적인 암은 고형 종양, 연조직 종양, 및 이의 전이를 포함한다. 개시된 방법은 비고형 암의 치료에도 유용하다. 예시적인 고형 종양은 다양한 기관 시스템의 악성 종양(예를 들어, 육종, 선암종, 암종)을 포함하며, 예컨대 폐, 유방, 림프구, 위장(예를 들어, 결장), 및 비뇨생식기(예를 들어, 신장, 요로 상피 또는 고환 종양)의 관, 인두, 전립선 및 난소의 악성 종양을 포함한다. 예시적인 선암종은 결장직장암, 신세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 및 소장암을 포함한다. 다른 예시적인 암은 다음을 포함한다: 성인 급성 림프구성 백혈병(Acute Lymphoblastic Leukemia, Adult); 소아 급성 림프구성 백혈병(Acute Lymphoblastic Leukemia, Childhood); 성인 급성 골수성 백혈병(Acute Myeloid Leukemia, Adult); 부신 피질 암종(Adrenocortical Carcinoma); 소아 부신 피질 암종(Adrenocortical Carcinoma, Childhood); AIDS-관련 림프종; AIDS-관련 악성 종양; 항문암; 소아 소뇌 성상 세포종(Astrocytoma, Childhood Cerebellar); 소아 대뇌 성상 세포종; 간 외 담도암; 방광암; 소아 방광암; 골암, 골육종/악성 섬유 조직구종(Bone Cancer, Osteosarcoma/Malignant Fibrous Histiocytoma); 소아 뇌간 교종(Brain Stem Glioma, Childhood); 성인 뇌종양(Brain Tumor); 소아 뇌종양, 뇌간 신경 교종; 소아 뇌종양, 소뇌 성상 세포종; 소아 뇌종양, 대뇌 성상 세포종/악성 뇌교종; 소아 뇌종양, 뇌실막종(Brain Tumor, Ependymoma); 소아 뇌종양, 수아세포종(Brain Tumor, Medulloblastoma, Childhood); 소아 뇌종양, 천막위 원시신경 외배엽 종양(Brain Tumor, Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors, Childhood); 소아 뇌종양, 시각경로 및 시상하부 신경아교종(Brain Tumor, Visual Pathway and Hypothalamic Glioma, Childhood); 기타 소아 뇌종양; 유방암(Breast Cancer); 임신 중 유방암(Breast Cancer and Pregnancy); 소아 유방암(Breast Cancer, Childhood); 남성 유방암(Breast Cancer, Male); 소아 기관지 선종/유암종(Bronchial Adenomas/Carcinoids, Childhood); 소아 유암종(Carcinoid Tumor, Childhood); 위장 유암종(Carcinoid Tumor, Gastrointestinal); 부신 피질 암종(Carcinoma, Adrenocortical); 섬세포 암종(Carcinoma, Islet Cell); 알 수 없는 원발성 암종(Carcinoma of Unknown Primary); 원발성 중앙 신경계 림프종(Central Nervous System Lymphoma, Primary); 소아 소뇌 성상 세포종(Cerebellar Astrocytoma, Childhood); 소아 대뇌 성상 세포종/악성 뇌교종(Cerebral Astrocytoma/Malignant Glioma, Childhood); 자궁 경부암(Cervical Cancer); 소아암(Childhood Cancers); 만성 림프구성 백혈병(Chronic Lymphocytic Leukemia); 만성 골수성 백혈병(Chronic Myelogenous Leukemia); 만성 골수증식성 장애(Chronic Myeloproliferative Disorders); 건초 투명세포 육종(Cell Sarcoma of Tendon Sheaths); 대장암(Colon Cancer); 소아 결장암(Colorectal Cancer, Childhood); 피부 T-세포 림프종(Cutaneous T-Cell Lymphoma); 자궁 내막암(Endometrial Cancer); 소아 뇌실막종(Ependymoma, Childhood); 난소 상피암(Epithelial Cancer, Ovarian); 식도암(Esophageal Cancer); 소아 식도암(Esophageal Cancer, Childhood); 유잉 계열 종양(Ewing's Family of Tumors); 소아 두개 외 생식세포 종양(Extracranial Germ Cell Tumor, Childhood); 성선 외 생식세포 종양(Extragonadal Germ Cell Tumor); 간 외 담도암(Extrahepatic Bile Duct Cancer); 안암, 안구 내 흑색종(Eye Cancer, Intraocular Melanoma); 안암, 망막아종(Eye Cancer, Retinoblastoma); 담낭암(Gallbladder Cancer); 위암(Gastric (Stomach) Cancer); 소아 위암(Gastric (Stomach) Cancer, Childhood); 소화관 유암 종양(Gastrointestinal Carcinoid Tumor); 소아 두개 외 생식세포 종양(Germ Cell Tumor, Extracranial, Childhood); 성선 외 생식세포 종양(Germ Cell Tumor, Extragonadal); 난소 생식세포 종양(Germ Cell Tumor, Ovarian); 임신 중 융모성 종양(Gestational Trophoblastic Tumor); 소아 뇌간 신경교종(Glioma, Childhood Brain Stem); 소아 시각 경로 및 시상하부 신경아교종(Glioma, Childhood Visual Pathway and Hypothalamic); 모양세포 백혈병(Hairy Cell Leukemia); 두경부암(Head and Neck Cancer); 성인 원발성 간세포암(간암)(Hepatocellular (Liver) Cancer, Adult (Primary)); 소아 원발성 간세포암(간암)(Hepatocellular (Liver) Cancer, Childhood (Primary)); 성인 호지킨 림프종(Hodgkin's Lymphoma, Adult); 소아 호지킨 림프종(Hodgkin's Lymphoma, Childhood); 임신 중 호지킨 림프종(Hodgkin's Lymphoma During Pregnancy); 식도암(Hypopharyngeal Cancer); 소아 시상하부 및 시각 경로 신경아교종(Hypothalamic and Visual Pathway Glioma, Childhood); 안구내 흑색종(Intraocular Melanoma); 섬세포 암종(췌장 내분비)(Islet Cell Carcinoma (Endocrine Pancreas)); 카포시 육종(Kaposi's Sarcoma); 신장암(Kidney Cancer); 후두암(Laryngeal Cancer); 소아 후두암(Laryngeal Cancer, Childhood); 성인 급성 림프구성 백혈병(Leukemia, Acute Lymphoblastic, Adult); 소아 급성 림프구성 백혈병(Leukemia, Acute Lymphoblastic, Childhood); 성인 급성 골수성 백혈병(Leukemia, Acute Myeloid, Adult); 소아 급성 골수성 백혈병(Leukemia, Acute Myeloid, Childhood); 만성 림프구성 백혈병(Leukemia, Chronic Lymphocytic); 만성 골수성 백혈병(Leukemia, Chronic Myelogenous); 모양세포 백혈병(Leukemia, Hairy Cell); 구순 및 구강암(Lip and Oral Cavity Cancer); 성인 원발성 간암(Liver Cancer, Adult (Primary)); 소아 원발성 간암(Liver Cancer, Childhood (Primary)); 비소세포 폐암(Lung Cancer, Non-Small Cell); 소세포 폐암(Lung Cancer, Small Cell); 성인 급성 림프모구성 백혈병(Lymphoblastic Leukemia, Adult Acute); 소아 급성 림프모구성 백혈병(Lymphoblastic Leukemia, Childhood Acute); 만성 림프구성 백혈병(Lymphocytic Leukemia, Chronic); AIDS-관련 림프종(Lymphoma, AIDS-Related); 원발성 중추 신경계 림프종(Lymphoma, Central Nervous System (Primary)); 피부 T-세포 림프종(Lymphoma, Cutaneous T-CeIl); 성인 호지킨 림프종(Lymphoma, Hodgkin's, Adult); 소아 호지킨 림프종(Lymphoma, Hodgkin's, Childhood); 임신 중 호지킨 림프종(Lymphoma, Hodgkin's During Pregnancy); 성인 비호지킨 림프종(Lymphoma, Non-Hodgkin's, Adult); 소아 비호지킨 림프종(Lymphoma, Non-Hodgkin's, Childhood); 임신 중 비호지킨 림프종(Lymphoma, Non-Hodgkin's During Pregnancy); 원발성 중추 신경계 림프종(Lymphoma, Primary Central Nervous System); 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Macroglobulinemia, Waldenstrom's); 남성 유방암(Male Breast Cancer); 성인 악성 중피종(Malignant Mesothelioma, Adult); 소아 악성 중피종(Malignant Mesothelioma, Childhood); 악성 흉선종(Malignant Thymoma); 소아 수아세포종(Medulloblastoma, Childhood); 흑색종(Melanoma); 안구 내 흑색종(Melanoma, Intraocular); 머켈 세포 암종(Merkel Cell Carcinoma); 악성 중피종(Mesothelioma, Malignant); 잠복 원발성 전이성 편평 경부암(Metastatic Squamous Neck Cancer with Occult Primary); 소아 다발성 내분비 신생물 증후군(Multiple Endocrine Neoplasia Syndrome, Childhood); 다발성 골수종/형질세포 신생물(Multiple Myeloma/Plasma Cell Neoplasm); 균상 식육종(Mycosis Fungoides); 골수 형성이상 증후군(Myelodysplastic Syndromes); 만성 골수성 백혈병(*Myelogenous Leukemia, Chronic); 소아 급성 골수성 백혈병(Myeloid Leukemia, Childhood Acute); 다발성 골수종(Myeloma, Multiple); 만성 골수증식성 장애(Myeloproliferative Disorders, Chronic); 비강 및 부비동암(Nasal Cavity and Paranasal Sinus Cancer); 비인두암(Nasopharyngeal Cancer); 소아 비인두암(Nasopharyngeal Cancer, Childhood); 신경아 세포종(Neuroblastoma); 성인 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's Lymphoma, Adult); 소아 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's Lymphoma, Childhood); 임신 중 비호지킨 림프종(Non- Hodgkin's Lymphoma During Pregnancy); 비소세포 폐암(Non-Small Cell Lung Cancer); 소아 구강암(Oral Cancer, Childhood); 구강 및 구순암(Oral Cavity and Lip Cancer); 구인두암(Oropharyngeal Cancer); 골육종/뼈의 악성 섬유 조직구종(Osteosarcoma/Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone); 소아 난소암(Ovarian Cancer, Childhood); 난소 상피암(Ovarian Epithelial Cancer); 난소 생식세포 종양(Ovarian Germ Cell Tumor); 난소 저악성의 잠재성 종양(Ovarian Low Malignant Potential Tumor); 췌장암(Pancreatic Cancer); 소아 췌장암(Pancreatic Cancer, Childhood); 섬세포 췌장암(Pancreatic Cancer, Islet Cell); 부비동 및 비강암(Paranasal Sinus and Nasal Cavity Cancer); 부갑상선암(Parathyroid Cancer); 음경암(Penile Cancer); 호크롬세포종(Pheochromocytoma); 소아 송과체 및 천막위 원시신경 외배엽 종양(Pineal and Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors, Childhood); 하수체 종양(Pituitary Tumor); 셩질세포 신생물/다발성 골수종(Plasma Cell Neoplasm/Multiple Myeloma); 흉막과 폐의 모세포종(Pleuropulmonary Blastoma); 임신 중 유방암(Pregnancy and Breast Cancer); 임신 중 호지킨 림프종(Pregnancy and Hodgkin's Lymphoma); 임신 중 비호지킨 림프종(Pregnancy and Non-Hodgkin's Lymphoma); 원발성 중추신경계 림프종(Primary Central Nervous System Lymphoma); 성인 원발성 간암(Primary Liver Cancer, Adult); 소아 원발성 간암(Primary Liver Cancer, Childhood); 전립선암(Prostate Cancer); 직장암(Rectal Cancer); 신세포(신장)암(Renal Cell (Kidney) Cancer); 소아 신세포암(Renal Cell Cancer, Childhood); 신장 골반 및 요관 이행세포암(Renal Pelvis and Ureter, Transitional Cell Cancer); 망막아종(Retinoblastoma); 소아 횡문 근육종(Rhabdomyosarcoma, Childhood); 침샘암(Salivary Gland Cancer); 소아 침샘암(Salivary Gland Cancer, Childhood); 유잉 육종계열 종양(Sarcoma, Ewing's Family of Tumors); 카포시 육종(Sarcoma, Kaposi's); 육종(골육종)/뼈의 악성 섬유 조직구종(Sarcoma (Osteosarcoma)/Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone); 소아 육종, 횡문 근육종(Sarcoma, Rhabdomyosarcoma, Childhood); 성인 연조직 육종(Sarcoma, Soft Tissue, Adult); 소아 연조직 육종(Sarcoma, Soft Tissue, Childhood); 세자리 증후군(Sezary Syndrome); 피부암(Skin Cancer); 소아 피부암; 피부암(흑색종); 머켈 세포 피부 육종(Skin Carcinoma, Merkel Cell); 소세포 폐암(Small Cell Lung Cancer); 소장암(Small Intestine Cancer); 성인 연조직 육종(Soft Tissue Sarcoma, Adult); 소아 연조직 육종; 잠복 원발성 전이성 편평 경부암(Squamous Neck Cancer with Occult Primary, Metastatic); 위암(Stomach (Gastric) Cancer); 소아 위암; 소아 천막위 원시신경 외배엽 종양(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors, Childhood); 피부 T-세포 림프종(T-CeIl Lymphoma, Cutaneous); 고환암(Testicular Cancer); 소아 흉선종(Thymoma, Childhood); 악성 흉선종(Thymoma, Malignant); 갑상선암(Thyroid Cancer); 소아 갑상선암; 신장 골반 및 요관의 이행세포암(Transitional Cell Cancer of the Renal Pelvis and Ureter); 임신 중 융모성 종양(Trophoblastic Tumor, Gestational); 소아의 알 수 없는 원발 부위 암(Unknown Primary Site, Cancer of, Childhood); 소아 희귀암(Unusual Cancers of Childhood); 요관 및 신장 골반 이행세포암(Ureter and Renal Pelvis, Transitional Cell Cancer); 요도암(Urethral Cancer); 자궁육종(Uterine Sarcoma); 질암(Vaginal Cancer); 소아 시각경로 및 시상하부 신경아교종(Visual Pathway and Hypothalamic Glioma, Childhood); 외음부암(Vulvar Cancer); 발덴스트롬 마크로글로불린 혈증(Waldenstrom's Macro globulinemia); 및 빌름스 종양(Wilms' Tumor). 전술한 암의 전이 또한 본원에 기술된 방법에 따라 치료하거나 예방할 수 있다.

암 병용 요법

일부 구현예에서, 제공된 방법은 하나 이상의 추가적인 암 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 예시적인 암 치료제는 예를 들어, 화학 요법, 항체 요법과 같은 표적 요법, 면역 요법, 및 호르몬 요법을 포함한다. 이들 치료제 각각의 예는 아래에 제공된다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 화학 요법과 함께 투여된다. 화학 요법은 암 세포를 파괴할 수 있는 약물로 암을 치료하는 것이다. "화학 요법"은 표적 요법과 대조적으로, 신속하게 분열하는 세포에 전반적으로 영향을 미치는 세포독성 약물을 일반적으로 지칭한다. 화학 요법 약물은 가능한 다양한 방식으로, 예를 들어 DNA 복사 또는 새로 형성된 염색체의 분리를 통해 세포 분열을 방해한다. 대부분의 형태의 화학 요법은 신속하게 분열하는 모든 세포를 표적으로 하며, 많은 암세포가 DNA 손상을 복구할 수 없기 때문에 (정상 세포는 복구할 수 있음) 암세포에 대해 어느 정도의 특이성이 있을 수 있지만, 암세포에 특이적이지는 않다.

암 치료에 사용되는 화학 요법제의 예는, 예를 들어, 항대사물질(예: 엽산, 퓨린, 및 피리미딘 유도체) 및 알킬화제(예: 머스타드질소(nitrogen mustard), 질소 공급원, 백금, 황산알킬, 하이드라진, 트리아진, 아지리딘, 방추체 저해제(spindle poison), 세포독성제, 토포시머라아제 억제제(toposimerase inhibitor) 등)를 포함한다. 예시적인 제제는, 아클라루비신(Aclarubicin), 액티노마이신(Actinomycin), 알리트레티노인(Alitretinon), 알트레타민(Altretamine), 아미노프테린(Aminopterin), 아미노레불린산(Aminolevulinic acid), 암루비신(Amrubicin), 암사크린(Amsacrine), 아나그렐리드(Anagrelide), 삼산화비소(Arsenic trioxide), 아스파라기나아제(Asparaginase), 아트라센탄(Atrasentan), 벨로테칸(Belotecan), 벡사로텐(Bexarotene), 벤다무스틴(Bendamustine), 블레오마이신(Bleomycin), 보르테조밉(Bortezomib), 부설판(Busulfan), 캄토테신(Camptothecin), 카페시타빈(Capecitabine), 카보플라틴(Carboplatin), 카보쿠온(Carboquone), 카모푸르(Carmofur), 카무스틴(Carmustine), 셀레콕시브(Celecoxib), 클로람부실(Chlorambucil), 클로르메틴(Chlormethine), 시스플라틴(Cisplatin), 클라드리빈(Cladribine), 클로파라빈(Clofarabine), 크리산타스파제(Crisantaspase), 시클로포스파미드(Cyclophosphamide), 시타라빈(Cytarabine), 다카바진(Dacarbazine), 닥티노마이신(Dactinomycin), 다우노루비신(Daunorubicin), 데시타빈(Decitabine), 데메콜신(Demecolcine), 도세탁셀(Docetaxel), 독소루비신(Doxorubicin), 에파프록시랄(Efaproxiral), 엘레스클로몰(Elesclomol), 엘사미트루신(Elsamitrucin), 에노시타빈(Enocitabine), 에피루비신(Epirubicin), 에스트라무스틴(Estramustine), 에토글루시드(Etoglucid), 에토포시드(Etoposide), 플록수리딘(Floxuridine), 플루다라빈(Fludarabine), 플루오로우라실(Fluorouracil(5FU)), 포테무스틴(Fotemustine), 젬시타빈(Gemcitabine), 글리아델 임플란트(Gliadel implants), 히드록시카바마이드(Hydroxycarbamide), 히드록시우레아(Hydroxyurea), 이다루비신(Idarubicin), 이포스파마이드(Ifosfamide), 이리노테칸(Irinotecan), 이로풀벤(Irofulven), 익사베필론(Ixabepilone), 라로탁셀(Larotaxel), 류코보린(Leucovorin), 리포솜 독소루비신(Liposomal doxorubicin), 리포솜 다우노루비신(Liposomal daunorubicin), 로니다민(Lonidamine), 로무스틴(Lomustine), 루칸톤(Lucanthone), 만노설판(Mannosulfan), 메소프로콜(Masoprocol), 멜팔란(Melphalan), 메르캅토퓨린(Mercaptopurine), 메스나(Mesna), 메토트렉세이트(Methotrexate), 메틸 아미노레불리네이트(Methyl aminolevulinate), 미토브로니톨(Mitobronitol), 미토구아존(Mitoguazone), 미토탄(Mitotane), 미토마이신(Mitomycin), 미톡산트론(Mitoxantrone), 네다플라틴(Nedaplatin), 니무스틴(Nimustine), 오블리머센(Oblimersen), 오마세탁신(Omacetaxine), 오타탁셀(Ortataxel), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 파클리탁셀(Paclitaxel), 페가스파가제(Pegaspargase), 페메트렉시드(Pemetrexed), 펜토스타틴(Pentostatin), 피라루비신(Pirarubicin), 픽산트론(Pixantrone), 플리카마이신(Plicamycin), 포르피머나트륨(Porfimer sodium), 프레드니무스틴(Prednimustine), 프로카바진(Procarbazine), 랄티트렉시드(Raltitrexed), 라니무스틴(Ranimustine), 루비테칸(Rubitecan), 사파시타빈(Sapacitabine), 세무스틴(Semustine), 시티마진 세라데노벡(Sitimagene ceradenovec), 사트라플라틴(Satraplatin), 스트렙토조신(Streptozocin), 탈라포르핀(Talaporfin), 테가푸르-우라실(Tegafur-uracil), 테모포르핀(Temoporfin), 테모졸로마이드(Temozolomide), 테니포시드(Teniposide), 테세탁셀(Tesetaxel), 테스토락톤(Testolactone), 테트라니트레이트(Tetranitrate), 티오테파(Thiotepa), 티아조푸린(Tiazofurin), 티오구안틴(Tioguanine), 티파파닙(Tipifarnib), 토포테칸(Topotecan), 트라벡테딘(Trabectedin), 트라이지쿠온(Triaziquone), 트리에틸렌멜라민(Triethylenemelamine), 트리플라틴(Triplatin), 트레티노인(Tretinoin), 트레오설판(Treosulfan), 트로포스파미드(Trofosfamide), 우라무스틴(Uramustine), 발루비신(Valrubicin), 베르테포르핀(Verteporfin), 빈블라스틴(Vinblastine), 빈크리스틴(Vincristine), 빈데신(Vindesine), 빈플루닌(Vinflunine), 비노렐빈(Vinorelbine), 보리노스타트(Vorinostat), 조루비신(Zorubicin), 및 기타 세포 분열 억제제 또는 본원에 기술된 세포독성제를 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 표적 요법과 함께 투여된다. 표적 요법은 암세포의 탈조절된 단백질에 특이적인 제제를 사용하는 것으로 이루어진다. 소분자 표적 요법 약물은 일반적으로 암 세포 내에서 돌연변이되거나, 과발현되거나, 달리 중요한 단백질 상의 효소 도메인의 억제제이다. 잘 알려진 예로는 티로신 키나제 억제제, 예컨대 액시티닙(Axitinib), 보수티닙(Bosutinib), 세디라닙(Cediranib), 다사티닙(dasatinib), 엘로티닙(erlotinib), 이마티닙(imatinib), 게피티닙(gefitinib), 라파티닙(lapatinib), 레스타우르티닙(Lestaurtinib), 닐로티닙(Nilotinib), 세막사닙(Semaxanib), 소라페닙(Sorafenib), 수니티닙(Sunitinib), 및 반데타닙(Vandetanib)이고, 또한 사이클린 의존성 키나제 억제제(cyclin-dependent kinase inhibitor), 예컨대 알보시딥(Alvocidib) 및 셀리시클립(Seliciclib)이다. 단클론 항체 요법은 치료제가 암세포의 표면 상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체인 또 다른 전략이다. 예로는 유방암에 일반적으로 사용되는 항-HER2/neu 항체인 트라스투주맙(Herceptin®), 및 다양한 B-세포 악성 종양에 사용되는 항-CD20 항체인 리툭시맙 및 토시투모맙이 포함된다. 다른 예시적인 항체는 세툭시맙, 파니투무맙, 트라스투주맙, 알렘투주맙, 베바시주맙, 에드레콜로맙 및 게무투즈맙을 포함한다. 예시적인 융합 단백질은 애플리버셉트(Aflibercept) 및 데니류킨 디프티톡스(Denileukin diftitox)를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 요법은 본원에 기술된 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.

표적 요법은 또한 세포 표면 수용체에 결합할 수 있거나 종양을 둘러싸는 병에 걸린 세포외 기질에 결합할 수 있는 작은 펩티드를 "자동 유도 장치"로서 포함할 수 있다. 이들 펩티드에 부착되는 방사성 핵종(예컨대, RGD)은, 핵종이 세포 부근에서 붕괴되는 경우 결국 암 세포를 죽인다. 이러한 요법의 예는 BEXXAR®을 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 면역 요법과 함께 투여된다. 암 면역 요법은 종양과 싸우도록 대상체 자체의 면역계를 유도하도록 설계된 다양한 치료 전략을 가리킨다. 종양에 대항하는 면역 반응을 생성하기 위한 현대적인 방법은, 상피 방광암에 대한 소포 내 BCG 면역요법, 및 신세포 암종 및 흑색종 환자에서 면역 반응을 유도하기 위해 인터페론 및 다른 사이토카인의 사용을 포함한다.

동종 조혈 줄기 세포 이식은 면역 요법의 형태로 간주될 수 있는데, 그 이유는 공여자의 면역 세포가 종종 이식편 대 종양 효과로 종양을 공격할 것이기 때문이다. 일부 구현예에서, 면역 요법제는 본원에 기술된 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기술된 화합물은 하나 이상의 호르몬 요법과 함께 투여된다. 일부 암의 성장은 특정 호르몬을 제공하거나 차단함으로써 억제될 수 있다. 호르몬 민감성 종양의 일반적인 예는 특정 유형의 유방 및 전립선 암을 포함한다. 에스트로겐 또는 테스토스테론을 제거하거나 차단하는 것은 종종 중요한 추가 치료이다. 특정 암에서, 프로게스토겐(progestogen)과 같은 호르몬 작용제를 투여하는 것으로 치료적으로 유익할 수 있다. 일부 구현예에서, 호르몬 요법제는 본원에 기술된 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.

비만 및 지방 장애

일부 구현예에서, 인간 대상체(예: 소아 또는 성인)에게 본원에 기술된 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 약학적 조성물의 유효량을 투여함으로써 인간 대상체에서 비만을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. "비만(obesity)"은 대상체가 30 이상의 체질량 지수를 갖는 병태를 지칭한다. 본원에서 기술된 많은 화합물이 과체중 병태를 치료하거나 예방하는 데 사용될 수 있다. "과체중(over-weight)"은 대상체가 25.0 이상의 체질량 지수를 갖는 병태를 지칭한다. 체질량 지수(BMI) 및 기타 정의는 "NIH Clinical Guidelines on the Identification and Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults(1998)"를 따른다. 화합물을 사용하는 치료는 대상체의 체중을, 예를 들어, 적어도 2, 5, 7, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 25, 40, 45, 50 또는 55%만큼 바꾸기에 유효한 양으로 이루어질 수 있다. 화합물을 사용하는 치료는 대상체의 체질량 지수를, 예를 들어, 30, 28, 27, 25, 22, 20 또는 18 미만으로 낮추기에 유효한 양으로 이루어질 수 있다. 화합물은 비정상적이거나 부적절한 체중 증가, 대사율, 또는 지방 침적(fat deposition), 예를 들어, 거식증(anorexia), 폭식증(bulimia), 비만, 당뇨병 또는 고지혈증(예: 중성지질 상승 및/또는 콜레스테롤 상승)뿐만 아니라 지방 또는 지질 대사 장애를 치료하거나 예방하는 데 사용될 수 있다.

본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 프라더-윌리 증후군(Prader-Willi Syndrome, PWS)과 관련된 비만를 치료하기 위해 투여될 수 있다. PWS는 비만(예를 들어, 병적 비만)과 연관된 유전적 장애이다.

본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 체지방을 감소시키고, 체지방 증가를 예방하고, 콜레스테롤(예를 들어, 총 콜레스테롤 및/또는 HDL 콜레스테롤에 대한 총 콜레스테롤의 비율)을 감소시키고/시키거나, 비만와 관련된 PWS를 가진 개체에서 식욕을 감소시키고/시키거나, 당뇨병, 심혈관 질환 및 뇌졸중과 같은 동반이환(comorbidity)을 감소시키는 데 사용될 수 있다.

고혈당증

높은 포도당 수준은 포도당 대사 경로에서 대사 이상을 유도하고 미토콘드리아 기능장애를 유도한다. 이는 또한 반응성 산소종(ROS)을 과도하게 생산한다. 세포 내 포도당 상승은 미세혈관 합병증(예: DN)에 기여하는 것으로 지목된 독성 포도당 대사물질인, 소르비톨, 메틸글리옥살(MG) 및 다이아실글리세롤(DAG)의 축적으로 이어진다. 소분자 PKM2 활성화제는 고혈당증 의해 유도된 독성 포도당 대사산물 증가 및 미토콘드리아 기능장애를 역전시키는 것으로 밝혀졌다(Nat Med. 2017, 23(6): 753-762; 미국 특허 제9921221호 참조).

특정 구현예에서, 대상체에서 고혈당증을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

특정 구현예에서, 대상체에서 당뇨성 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 이, "당뇨성 질환(diabetic disease)"은 당뇨병 및 전당뇨병뿐만 아니라 당뇨성 징후를 지칭한다. 당뇨병은, 신체가 충분한 인슐린을 생산하지 않거나, 세포가 생성된 인슐린에 반응하지 않기 때문에 사람이 고혈당 상태가 되는 일단의 대사 질환을 지칭한다. 이러한 고혈당은 고전적 증상인 다뇨증(잦은 배뇨), 조갈증(갈증의 증가) 및 다식증(허기의 증가)을 생성한다. 당뇨병에는 여러 종류가 있다. I형 당뇨병은 신체가 인슐린을 생산하지 못하기 때문에 발생하는데, 현재로서는 사람이 인슐린을 주입하거나 인슐린 펌프를 착용하는 것이 필요하다. II형 당뇨병은 세포가 인슐린을 적절히 사용하지 못하고, 때로는 절대적 인슐린 결핍과 조합되는 인슐린 내성 상태에 의해 발생한다. 임신성 당뇨병은 당뇨병 진단이력이 없는 임산부에게서 고혈당 수준이 나타날 때 발생한다. 당뇨병의 다른 형태는, 인슐린 분비의 유전적 결합에 의한 선천성 당뇨병, 낭성 섬유증 관련 당뇨병, 고용량의 글루코코티코이드(glucocorticoids)에 의해 유도된 스테로이드 당뇨병, 및 소아의 성인발증형 당뇨병(예: MODY 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10)과 같은 여러 형태의 단일 유전자성 당뇨병을 포함한다. 전당뇨병은 사람의 혈당 수치가 정상보다 높지만 당뇨병으로 진단할 정도로 충분히 높지 않은 경우에 발생하는 병태를 나타낸다. 모든 형태의 당뇨병은 장기적인 합병증의 위험을 증가시킨다. 이들은 전형적으로 수년 후에 발생하지만, 그 시점 이전에 진단을 받지 않은 사람에게는 첫 증상일 수 있다. 주요 장기 합병증은 혈관 손상과 관련이 있다. 예시적인 당뇨병성 합병증은 심혈관 질환, 큰 혈관 질환, 예컨대 허혈성 심장 질환(예: 협심증, 심근경색), 뇌졸중, 및 말초 혈관 질환, 미세혈관 합병증(예: 작은 혈관에 대한 손상), 당뇨병성 망막증(눈의 망막 내 혈관 형성에 당뇨병이 미치는 영향), 당뇨병성 신병증(신장에 당뇨병이 미치는 영향), 당뇨병성 신경병증(예: 신경계에 당뇨병이 미치는 영향; 가장 흔하게는 발에서의 무감각, 따끔거림 및 통증을 초래하고, 감각 변화로 인해 피부 손상 위험이 증가함), 당뇨성 족부 궤양, 및 증후군 X. 특정 구현예에서, "당뇨성 질환"은 고혈당증, 고인슐린혈증, 당뇨병, 인슐린 저항성, 혈당 대사 손상, 내당능 장애(IGT) 상태, 공복 혈장 장애 상태, 당뇨성 망막증, 당뇨성 신병증, 사구체 경화증, 당뇨성 신경병증과 증후군 X로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 대상체에서 반응성 산소종(ROS) 및/또는 포도당 대사산물(예를 들어, 소르비톨, 메틸글리옥살(MG) 및 다이아실글리세롤(DAG)) 중 적어도 하나를 낮추는 데 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 미세혈관 합병증의 치료에 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 DN의 치료에 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, DN의 치료는 식욕 변화, 수면 변화, 혈청 내 단백질, 무력감 및/또는 메스꺼움을 포함하되 이들로 한정되지 않는, DN과 관련된 임의의 증상을 줄이는 것을 포함할 수 있다.

특정 구현예에서, 상기 방법은 DN 보호 인자 중 하나 이상의 수준 또는 활성을 증가시키는 하나 이상의 2차 제제의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 예시적인 DN 보호 인자는 SOD1-수퍼옥사이드 디스뮤타아제; TPI1―트리오세포스페이트 이소머라제 이소형 2; SORD―소르비톨 탈수소효소; ALDOA―알돌라아제 A, 프룩토오스-비스포스페이트; GAPDH―글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소; PKM―피루브산 키나아제 이소자임 M1/M2; ENO1-알파-에놀라아제; FGB-피브리노겐 베타 사슬; SELENBP1-셀레늄 결합 단백질 1; PEBP1-포스파티딜에탄올아민-결합 단백질 1; CRYL1-람다-크리스탈린 동족체(그 전체가 참조로서 본원에 통합되는 미국 특허 제9921221호 참조)를 포함하나 이들로 한정되지는 않는다. 2차 제제는 보호 인자의 수준 또는 활성을 증가시키거나 위험 인자의 수준 또는 활성을 적어도 50%, 100%(1배), 1½배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 15배, 20배만큼 또는 그 이상으로 감소시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 제공된 방법은, 대상체에서 보호 인자의 수준 또는 활성을 미세혈관 합병증의 발생으로부터 보호되는 수준 또는 활성까지 본질적으로 유도하는 단계를 포함한다. "본질적으로 그 수준 이내로(essentially within its level)"는, 대조군 값의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 이내인 것을 의미한다.　2차 제제는 소분자이거나, 보호 인자 또는 이의 생물학적 활성 변이체(예: 단편)를 포함하는 단백질, 또는 보호 인자 또는 이의 생물학적 활성 변이체(예: 단편)를 포함하는 단백질을 암호화하는 핵산일 수 있다. 보호인자의 단백질의 생물학적 활성 단백질은 자연 발생 서열 또는 이의 단편과 최대 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 또는 100개 아미노산의 결실, 추가 또는 치환(예컨대 보존적 아미노산 치환)에 있어서 상이한 아미노산 서열을 포함하는 전장 미성숙 및 성숙한 형태 또는 이의 단편을 또한 포함한다. DN 보호 인자의 단백질의 생물학적 활성 단백질은 전장 성숙 또는 전구체 인간 PEBP1 단백질(또는 본원에서 식별된 다른 바이오마커) 또는 이의 단편과 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 변이체를 포함할 수도 있다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 치료를 위해 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, 대상체가 DN을 가지고 있거나 발병할 위험이 있는 경우, 예를 들어, 당뇨병(예: 1형 또는 2형 당뇨병)을 가진 대상체, 또는 전당뇨성(예를 들어, 대사증후군, 인슐린 저항성, 고혈당증, 고지혈증을 가진) 대상체, 또는 과체중이거나 비만(예를 들어, BMI≥25)인 대상체인 경우, 대상체로 선택될 수 있다. 일부 경우에, 대상체가 제1형 및/또는 제2형 당뇨병을 가지고 있거나 발병 위험이 있는 경우, 대상체로 선택될 수 있다. 일부 경우에, 대상체가 예를 들어 당뇨병을 치료하기 위해 인슐린을 투여하고 있거나 투여하게 될 경우, 대상체로 선택될 수 있다.

심혈관 질환은 만성 염증성 병태이다. 포도당 흡수의 증가 및 당분해 플럭스(glycolytic flux)는 미토콘드리아에서 반응성 산소종을 촉진한다. ROS는 PKM2의 이량체화를 촉진하고 이의 핵 전좌를 가능하게 한다. 핵 PKM2는 단백질 키나아제로서 기능하며 IL-6 및 IL-1β 생성을 증가시킨다. 이는 전신 및 조직 염증을 초래한다. 당분해를 감소 및 PKM2 사량체화의 강화는 관상동맥 질환(CAD) 대식세포의 전염증성 표현형을 보정하는 것으로 밝혀졌다(J. Exp. Med. 2016, 213(3): 337-354).

특정 구현예에서, 대상체에서 심혈관 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 대상체에서 혈장 혈당 수준을 낮출 수 있다. 본 출원에서 정의된 바와 같은 "심혈관 질환"은 고혈압, 울혈성 심부전, 당뇨병, 사구체 경화증, 만성 신부전, 관상 심장 질환, 협심증, 심근경색, 뇌졸중, 혈관 재협착 내피 기능 장애, 혈관 탄성도 손상 및 울혈성 심부전을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 관상 동맥 질환(CAD)이다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 화합물 또는 조성물은 대상체의 미토콘드리아에서 반응성 산소종(ROS)를 낮추는 데 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 대상체에서 자가면역 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. PKM2의 활성화가 M2 대식세포의 전형적인 형질을 촉진하면서 LPS-유도 전염증성 M1 대식세포 표현형을 약독화시켰음이 밝혀졌다. 또한, 생체 내에서 TEPP-46에 의한 PKM2의 활성화는 IL-10의 생성을 증가시키면서 LPS 및 IL-1β 생성을 억제하였음이 밝혀졌다(Cell Metab. 2015, 21(1): 65-80). 따라서, PKM2 활성화제는 IL-1β 및/또는 IL-10 생성을 촉진함으로써 자가면역 질환을 치료하는 데 유용할 수 있다.

"자가 면역 질환"은 정상적으로 신체에 존재하는 물질 및 조직에 대한 대상체 신체의 부적절한 면역 반응에 기인하는 질환을 지칭한다. 예시적인 자가 면역 질환은 사구체 신염, 굿파스처 증후군, 괴사화 맥관염, 림프절염, 결절성 동맥주위염, 전신 홍반성 루푸스, 류머티스성 관절염, 건선성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 건선, 궤양성 대장염, 전신 경화증, 피부근염/다발성근염, 항인지질 항체 증후군, 경피증, 심상성 천포창, ANCA-관련 혈관염(예: 베게너 육아종증, 현미경 다발혈관염), 포도막염, 쇼그렌 증후군, 크론병, 라이터 증후군, 강직성 척추염, 라임병, 귈랑-바레 증후군, 하시모토 갑상선염 및 심근증을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.

조성물 및 투여 경로

본원에 기술된 조성물은 본원에 기술된 화합물(예: 본원에 기술된 화합물)뿐만 아니라 추가의 치료제(존재하는 경우)를 본원에 기술된 것들을 포함하는 질환 또는 질환 증상을 조절하는 데 효과적인 양으로 포함한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 담체 또는 보조제"는 본원에 제공된 화합물과 함께 환자에게 투여될 수 있고, 화합물의 약학적 활성을 파괴하지 않으며, 화합물의 치료량을 전달하기에 충분한 투약량으로 투여될 때 독성이 없는 담체 또는 보조제를 지칭한다.

약학적 조성물에 사용될 수 있는 약학적으로 허용 가능한 담체, 보조제 및 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 자가 유화 약물 전달 시스템(self-emulsifying drug delivery system, SEDDS), 예컨대 d-α-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙신산염, 약학적 투여량 형태로 사용되는 계면활성제, 예컨대, 트윈(Tween) 또는 기타 유사한 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민, 완충 물질, 예컨대 인산염, 글리신, 소르브산, 소르브산 칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 황산프로타민, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연염, 콜로이드 규산, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀루로오스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀루로오스, 폴리아크릴산, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지(wool fat)를 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다. α-, β-, 및 γ-시클로덱스트린과 같은 시클로덱스트린, 또는 2- 및 3-히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 포함하는 히드록시알킬시클로덱스트린과 같은 화학적으로 변형된 유도체, 또는 가용화된 다른 유도체도 본원에 기술된 화학식의 화합물의 전달을 강화시키는 데 유리하게 사용될 수 있다.

본원에 제공된 약학적 조성물은 경구로, 비경구로, 흡입 분무에 의해, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 구강으로, 질로 또는 이식된 저장조를 통해 투여될 수 있고, 바람직하게는 경구 투여 또는 주사에 의한 투여로 투여될 수 있다. 본원에 제공된 약학적 조성물은 임의의 약학적으로 허용 가능한 종래 비독성 담체, 보조제 또는 비히클을 함유할 수 있다. 일부 경우에, 제형의 pH는 제형화된 화합물 또는 그의 전달 형태의 안정성을 향상시키기 위해 약학적으로 허용 가능한 산, 염기 또는 완충제로 조정될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 비경구는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활액내, 흉골내, 척추강내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

본원에 제공된 약학적 조성물은 캡슐, 정제, 유화액 및 수성 현탁액, 분산액 및 용액을 포함하지만 이에 한정되지 않는 임의의 경구로 허용 가능한 투약 형태로 경구 투여될 수 있다. 경구 사용을 위한 정제의 경우, 흔히 사용되는 담체는 락토오스 및 옥수수 전분을 포함한다. 스테아린산 마그네슘과 같은 윤활제 또한 일반적으로 첨가된다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 락토오스 및 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 유화액이 경구 투여되는 경우, 활성 성분은 유화제 및/또는 현탁제와 결합된 유성상(oily phase)에 현탁되거나 용해될 수 있다. 원하는 경우, 소정의 감미제 및/또는 향미제 및/또는 착색제를 첨가할 수 있다.

본원에 제공된 조성물이 본원에 기술된 화학식의 화합물 및 하나 이상의 부가적인 치료제 또는 예방제의 조합을 포함하는 경우, 화합물과 추가적인 제제 둘 다는 일반적으로 단일 요법 처방으로 투여되는 투약량의 약 1 내지 100%, 보다 바람직하게는 약 5 내지 95%의 투약량 수준으로 존재해야 한다. 추가 제제는 다중 투약량 처방의 일부로서, 본원에 제공된 화합물과 별개로 투여될 수 있다. 대안적으로, 이들 제제는 단일 투약량 형태의 일부로서, 본원에 제공된 화합물과 함께 단일 조성물로 혼합될 수 있다.

본원에 기술된 화합물은, 예를 들어, 체중 1 kg당 약 0.5 내지 약 100mg 범위의 투약량, 대안적으로는 투여당 1 mg 내지 1000 mg의 투약량으로 4 내지 120시간마다 1회, 또는 특정 약물의 요건에 따라 주사에 의해 정맥 내, 동맥 내, 진피하(subdermally), 복강 내, 근육 내, 또는 피하(subcutaneously) 투여되거나; 경구로, 구강으로, 비강으로, 점막을 경유하여, 안과용 제제로서 투여되거나, 흡입에 의해 투여될 수 있다. 본원의 방법은 원하는 효과 또는 명시된 효과를 달성하기 위해 화합물 또는 화합물 조성물의 유효량을 투여하는 것을 고려한다. 전형적으로, 본원에 제공된 약학적 조성물은 매일 약 1 내지 약 6회 투여되거나, 대안적으로는 연속 주입으로서 투여되게 된다. 이러한 투여는 만성 또는 급성 요법으로서 사용될 수 있다. 단일 투약량 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료 받는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 통상적인 제제는 약 5% 내지 약 95%의 활성 화합물(w/w)을 함유할 것이다. 대안적으로, 이러한 제제는 약 20% 내지 약 80%의 활성 화합물을 함유한다.

실험

일반 실험

다음의 실시예들에서, 화학 시약은 상업적 공급원(예컨대, Alfa, Acros, Sigma Aldrich, TCI 및 Shanghai Chemical Reagent Company)으로부터 구입하였고, 추가 정제 없이 사용하였다. Ez Purifier III을 이용해 200~300 esh의 실리카 겔 입자가 포함된 컬럼을 통해 플래시 크로마토그래피를 수행하였다. 분석 및 제조용 박막 크로마토그래피 플레이트(TLC)는 HSGF 254(0.15~0.2 mm 두께, Shanghai Anbang Company, 중국)이었다. Brucker AMX-300 또는 AMX-400 NMR(Brucker, 스위스)를 사용해 핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼을 기록하였다. 화학적 이동은 Waters LCT 질량 분석계(Waters, USA)로부터 백만분의 1(ppm, δ) etero(ESI)로 보고되었다. Agilent 1200 액체 크로마토그래피(미국 Agilent, 컬럼: Ultimate 4.6 m x 50 mm, 5 M, 이동상 A: 물 중 0.1% 포름산; 이동상 B: 아세토니트릴)를 이용해 HPLC 크로마토그래프를 기록하였다. Initiator 2.5 마이크로파 합성기(Biotage, 스웨덴)를 이용해 마이크로파 반응을 실행하였다.

본원에 기술된 실험에 사용된 HPLC 조건은 다음과 같다:

방법 1:

기기: Shimadzu LC-2010AHT

컬럼: YMC-Triart C18, 50 Х 4.6 mm, 5 ?m

이동상: 용매 A: H₂O/CH₃OH/TFA = 90/10/0.1,

용매 B: H₂O/CH₃OH/TFA = 90/10/0.1

유속: 2.5 mL/분

컬럼 온도: 35℃

파장: 220 nm/254 nm

방법 2:

기기: Shimadzu LC-2010AHT

컬럼: YMC-Triart C18, 50 Х 4.6 mm, 5 ?m

이동상: 용매 A: H₂O/CH₃OH/TFA = 90/10/0.1,

용매 B: H₂O/CH₃OH/TFA = 90/10/0.1

유속: 2.5 mL/분

컬럼 온도: 35℃

파장: 220 nm/254 nm

본원에 기술된 실험에 사용된 분취 HPLC 조건은 다음과 같다:

기기: Waters 2545B/2767

컬럼: YMC-Triart C18, 50 Х 4.6 mm, 5 ?m

이동상: 용매 A:H₂O (01.% FA),

용매 B: CH₃OH 또는 CH₃CN

유속: 20 mL/분

컬럼 온도: 35℃

파장: 220 nm/254 nm

실시예 1 반응식 E1을 이용한 화합물 E1-vii의 제조

반응식 E1

식 중 R^e1은 임의 치환된 알킬(예: C_1-3 알킬)이고; Q는 본 발명의 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같으며; Q'은 추가로 기능화된 Q이고, X는 이탈기(예: Br 또는 I와 같은 할로겐; OM; 또는 OT)이다. 티아졸 5-카브알데히드 E1-i를 2-아지도아세테이트와 농축하여 화학식 E1-ii의 화합물을 수득한다. 화합물 E1-ii를 가열된 o-크실렌에서 고리화하여 E1-iii의 이환 시스템을 수득한 다음, 아미노기를 메틸화하고 이어서 산화시켜 화합물 E1-iv를 수득한다. 화합물 E1-iv를 히드라진과 반응시킨 다음 고리화하여 화합물 E1-v를 수득한다. E1-v는 X-CH₂-Q와 같은 친핵체와 반응시켜 E1-vi를 수득할 수 있는데, 이는 추가로 기능화하여 Q'을 갖는 E1-vii로 만들 수 있다.

실시예 1A. 6-(3-메톡시벤질)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5] 피롤로[2,3-d]피리다진-5-온

단계 A. 에틸 (Z)-2-아지도-3-(2-메틸티아졸-5-일)아크릴레이트: 약 -10℃내지 약 -5℃에서, EtOH (10 Ml) 중 NaOEt(803 mg, 11.79 mmol)의 용액에 무수 EtOH(3 mL) 중 2-메틸티아졸-5-카브알데히드(500 mg， 3.93 mmol) 및 에틸 2-아지도아세테이트(1.53 g, 11.79 mmol）의 용액을 적가하였다. 온도를 0℃미만으로 유지한 상태로, 반응 혼합물을 약 1시간 동안 교반한 다음, 실온(r.t.)까지 승온시킨 후 2시간 동안 추가로 교반하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 포화 수성 NH₄Cl(50 mL)에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(500 mg)을 수득하고, 이를 아무런 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: m/z 239 (M+H)⁺.

단계 B. 에틸 2-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: o-크실렌(5 mL) 중의 에틸 (Z)-2-아지도-3-(2-메틸티아졸-5-일)아크릴레이트(500 mg, 2.1 mmol)의 혼합물을 140℃에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 실온까지 냉각시킨 다음, 실리카 겔을 이용한 컬럼 크로마토그래피(용리제: 펜탄/EtOAc = 6/1)로 직접 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(220 mg, 49.8 % 수율). LCMS: m/z 211(M+H)⁺.

단계 C. 에틸 2,4-다이메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: O℃에서, DMF(3 mL) 중 에틸 2-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(160 mg, 0.76 mmol)의 용액에 NaH(36.5 mg, 1.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음 CH₃I(47 μL, 0.76 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: 펜탄/아세트산에틸 = 6/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다 (124 mg, 72.6% 수율). LCMS: m/z 225 (M+H)⁺.

단계 D. 에틸 6-포르밀-2,4-다이메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: O℃에서, DMF(1 mL) 중 에틸 2,4-다이메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(100 mg, 0.446 mmol)의 용액에POCl₃(122.5 μL, 1.338 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 포화 수성 NaHCO₃에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: 펜탄/아세트산에틸 = 5/1)을 이용해 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다 (57 mg, 50.7% 수율). LCMS: m/z 253 (M+H)⁺.

단계 E. 2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d] 피리다진-5-온: 2-에톡시에탄올(2 mL) 중의 6-포르밀-2,4-다이메틸-4H-피롤로[2,3-d] 티아졸-5-카르복실레이트(57 mg, 0.226 mmol)의 용액에 N₂H₄.H₂O (53.7 μL, 1.130 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반한 다음, H₂O에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: 펜탄/아세트산에틸 = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다 (49 mg, 98.4% 수율). LCMS: m/z 221 (M+H)⁺.

단계 F. 6-(3-메톡시벤질)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5] 피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DMF(1 mL) 중 2,4-다이메틸-4,6-다이히드로- 5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(49 mg, 0.223 mmol)의 혼합물에 t-BuOK(50.8 mg, 0.454 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 다음 1-(클로로메틸)-3-메톡시벤젠(34.9 mg, 0.223 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 포화 수성 NH₄Cl 용액(50 mL)에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: 펜탄/아세트산에틸 = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다. LCMS: m/z 341 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.56 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.92 - 6.72 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).

상기 기재된 절차를 사용하여 적절한 출발 물질을 사용해 다음의 화합물을 제조하였다. 필요한 경우, 표준 보호 및 탈보호를 사용할 수 있다.

실시예 1B. 1-(3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d] 피리다진-6(5H)-일)메틸)페닐)우레아의 합성

단계 A. 2,4-다이메틸-6-(3-니트로벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d] 피리다진-5(6H)-온: DMF(5 mL) 중 2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 1-(브로모메틸)-3-니트로벤젠(194 mg, 0.9 mmol) 및 t-BuOK(76 mg, 0.68 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg, 62.5% 수율). LCMS: m/z 356 (M+H)⁺.

단계 B. 6-(3-아미노벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: N₂ 하에 MeOH/THF(10 mL/10 mL) 중의 2,4-다이메틸-6-(3-니트로벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.28 mmol)의 혼합물에 Pd/C(10%, 50 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂ 하에 40℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다(80 mg, 88% 수율). LCMS: m/z 326 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.54 (s, 1H), 6.94 (t,, 1H), 6.57 - 6.32 (m, 3H), 5.19 (s, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).

단계 C. 1-(3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d] 피리다진-6(5H)-일)메틸)페닐)우레아: HOAc(2 mL) 중 6-(3-아미노벤질) -2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(65 mg, 0.2 mmol)의 혼합물에 KOCN(HOAc:H2O=2 mL:4 mL 중 160 mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO₃에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다(4 mg, 5% 수율). LCMS: m/z 369 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.60-8.50 (m, 2H), 7.39 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.16 (t, 1H), 6.85 (d, 1H), 5.78 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

실시예 1C. 2,4-다이메틸-6-(3-(메틸아미노)벤질)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 터트-부틸 (3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)페닐)카르바메이트: 1,4-다이옥산(10 mL) 중 6-(3-아미노벤질)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(90 mg, 0.28 mmol)의 혼합물에 Boc₂O(73 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류에서 밤새 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(90 mg, 76.3% 수율). LCMS: m/z 426 (M+H)⁺.

단계 B. 터트-부틸 (3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)페닐)(메틸)카르바메이트: 0℃에서, 무수 DMF(5 mL) 중 터트-부틸 (3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)페닐)카르바메이트(90 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 NaH(13 mg, 0.32 mmol, 60%wt)를 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서, MeI를 적가하였다. 생성된 혼합물을 0~5℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(70 mg, 75.2% 수율). LCMS: m/z 440 (M+H)⁺.

단계 C. 2,4-다이메틸-6-(3-(메틸아미노)벤질)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로 [5',4':4,5] 피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DCM(3 mL) 중의 터트-부틸 (3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)페닐)(메틸)카르바메이트(90 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(25 mg, 46.4% 수율). LCMS: m/z 340 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.54 (s, 1H), 7.12 (t, 1H), 6.66-6.61 (m, 3H), 5.26 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.85 (s, 3H), 2.68 (d, 3H).

실시예 1D. 6-(3-히드록시벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

0℃에서, DCM(4 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5] 피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(53 mg, 0.16 mmol)의 혼합물에 BBr₃(195 mg, 0.778 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 MeOH로 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(15.6 mg, 30.70% 수율). LCMS: m/z 327 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.34 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.12 (t, 1H), 6.78 - 6.56 (m, 3H), 5.26 (s, 2H), 4.278(s, 3H), 2.86 (s, 3H).

실시예 1E. 6-[3-(1-아미노-에틸)-벤질]-2,8-다이메틸-6,8-다이하이드로-3-티아-1,5,6,8-테트라아자-시클로펜타[a]인덴-7-온의 합성

MeOH(4 mL) 중 6-(3-아세틸벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.142 mmol)의 교반 혼합물에 NH₄OAc(109 mg, 1.42 mmol) 및 NaBH₃CN(18 mg, 0.284 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 35℃에서 13시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg, 40.0% 수율). LC-MS: m/z 354 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.48 (s, 1H), 7.25 (dd, 3H), 7.12 (d, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.17 (s, 3H), 4.15 - 4.06 (m, 1H), 2.76 (s, 3H), 1.27 (d, 3H).

실시예 1F. 6-(3-(아미노메틸)벤질)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 2-(3-(브로모메틸)벤질)이소인돌린-1,3-디온: DMF(20 mL) 중 1,3-비스(브로모메틸)벤젠(1.3 g, 4.96 mmol)의 교반 혼합물에 칼륨 1,3-다이옥소이소인돌린-2-이드(0.918 g, 4.96 mmol) 및 K₂CO₃(1.03g, 7.44mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 30/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1.1g, 67.4% 수율). LC-MS: m/z 330 (M+H)⁺.

단계 B. 2-(3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진- 6(5H)-일)메틸)벤질)이소인돌린-1,3-디온: DMF(4 mL) 중 2-(3-(브로모메틸)벤질)이소인돌리-1,3-디온(100 mg, 0.303 mmol)의 교반 혼합물에 2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(66.7 mg, 0.303 mmol) 및 K₂CO₃(83.6 mg, 0.606 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl(15 mL)에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(80 mg, 56.3% 수율). LC-MS: m/z 470 (M+H)⁺.

단계 C. 6-(3-(아미노메틸)벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : EtOH(5 mL) 중 2-(3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤질)이소인돌린-1,3-디온(80 mg, 0.17 mmol)의 교반 혼합물에 N₂H₄.H₂O(44 mg, 98%wt, 0.85 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl(15 mL)에 붓고, DCM으로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 2회 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(30 mg, 52.1% 수율). LC-MS: m/z 324 (M+H-NH₃)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.57 (s, 1H), 7.32 (m, 3H), 7.23 (d, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 2.86 (s, 3H).

실시예 1G. 6-(4-(히드록시메틸)벤질)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로-5H- 티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 메틸 4-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조에이트: DMF(20 mL) 중 2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.4 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃(181 mg, 1.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 30분 동안 교반한 다음, 0℃에서 메틸 4-(브로모메틸)벤조에이트(100 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 50/1 내지 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(120 mg, 74.61% 수율). LCMS: m/z 369 (M+H)⁺.

단계 B. 6-(4-(히드록시메틸)벤질)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: O℃에서, THF(20 mL) 중 4-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조에이트(100 mg, 0.3 mmol)의 혼합물에 LAH(30 mg, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 N₂ 하에 30분 동안 교반한 다음, NaSO₄-10H₂O로 켄칭시켜 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(3 mg, 3.25% 수율). LCMS: m/z 341 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.12 (s, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.25 (d, 2H), 5.37 (s, 2H), 4.59 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 2.80 (s, 3H).

실시예 1H. 6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-2,4-다이메틸-4,6-다이하이드로- 5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온

단계 A: 6-((6-((2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리딘-2-일)메틸)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: NMP(1 mL) 중 6-((6-플루오로피리딘-2-일)메틸)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]-피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(40 mg, 0.12 mmol) 및 (2,4-다이메톡시페닐)메탄아민(102 mg, 0.6 mmol)의 혼합물을 완료될 때까지 140℃에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg, 34.5% 수율). LC-MS: 477(M+H)⁺.

단계 B. 6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DCM(1 mL) 중 6-((6-((2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리딘-2-일)메틸)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.042 mmol) 및 TFA(45 mg, 0.42 mmol)의 혼합물을 완료될 때까지 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg, 34.5% 수율). LC-MS: 327(M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.55 (s, 1H), 7.26 (t, 1H), 6.30 (d, 1H), 6.09 (d, 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.25 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).

실시예 1I. 6-(히드록시메틸)-2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

다이옥산(2 mL) 중 2,4-다이메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.14 mmol), 포름알데히드(1.5 mL, 40%wt) 및 NH₃(0.75 mL, 33%wt)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고 DCM으로 추출하였다. 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(4.40 mg, 17% 수율). LCMS: 251 (M+H). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.55 (s, 1H), 6.63 (t, 1H), 5.44 (d, 2H), 4.27 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).

실시예 2 반응식 E2를 이용한 화합식 E2-vii의 화합물의 제조

반응식 E2

식 중 Xa는 이탈기(예를 들어, Br 또는 I와 같은 할로겐; OM; 또는 OT)이고; X_b는 할로겐(예를 들어, Cl, Br 또는 I)이고; n1은 0 또는 1이고; M은 (예를 들어, Heck 반응을 위한) 수소이거나 유기 금속 복합체(예를 들어, 보론산과 같은 유기보론 복합체 또는 피나코 보론 복합체; -Sn(Bu ^t )₃와 같은 유기주석 복합체; -Zn(할로겐)과 같은 유기아연 복합체)이며; Q 및 R²는 본 발명의 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, Q 및 R²는 각각 독립적으로 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소 고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 알킬이다. 실시예 1에서의 화학식 E1-v의 합성과 유사하게, 화합물 E2-iv는 몇 가지 변형을 사용해 티아졸 알데히드 E2-i로부터 합성할 수 있다(예를 들어, 화합물 E2-ii를 MsCl와 반응시킨 후 제거하여 화합물 E2-iii을 수득하고; 2-메톡시에탄올 중 촉매 AcOH를 사용해 삼환 시스템을 형성할 수 있음). 화합물 E2-iv를 치환하고 할로겐화(예: LiHMDS 존재 하의 CBr₄ 또는 Cl₃CCCl₃; 또는 t-BuOK 및 톨루엔의 존재 하의 1,2,3,4,5-펜타플루오로-6-요오드벤젠)하면 화합물 E2-vi가 수득된다. 촉매의 존재 하에 화합물 E2-vi를 유기금속과의 결합 반응시키면 화합물 E2-vii 또는 E2-viii가 수득된다. E2-vi를 친핵체(Nu)와 직접 친핵성 반응시키면 화합물 E2-ix를 생성할 수 있다.

실시예 2A. 2-(4-플루오로벤질)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 2-아지도-3-히드록시-3-(티아졸-5-일)프로파노에이트: 건조 EtOH의 교반 용액(300 mL)에 나트륨(12.2 g, 0.531 mol)을 실온에서 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 -20℃로 냉각시킨 다음, 온도를 -20℃내지 -15℃로 유지하면서 무수 EtOH (100 Ml) 중 에틸 2-아지도아세테이트(68.5 g, 0.531 mol) 및 티아졸-5-카브알데히드(20.0 g, 0.177 mol)의 용액을 적가하였다. 첨가후, 반응 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl(1 L)에 부었다. 생성된 혼합물을 NaCl로 포화시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 6/1 내지 5/1 내지 1/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 회백색 물질로 수득하였다(34 g). LCMS: m/z= 243 (M+H)⁺.

단계 B. 에틸 (Z)-2-아지도-3-(티아졸-5-일)아크릴레이트: -35℃에서, 건조 DCM(1.5 L) 중 에틸 2-아지도-3-히드록시-3-(티아졸-5-일)프로파노에이트(103 g, 0.426 mol)의 교반 혼합물에 MsCl(146 g, 1.28 mol)을 첨가한 다음, 온도를 -35℃내지 -30℃로 유지하면서 TEA(301 g, 2.98 mol)를 적가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 -30℃에서 15분 동안 추가로 교반한 다음 포화 수성 NH₄Cl(1.5 L)에 부었다. 생성된 혼합물을 NaCl로 포화시키고 DCM으로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 수성 HCl(1 M)와 염수로 순차적으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(82.0 g, 86.3% 수율). LCMS: m/z= 225 (M+H)⁺.

에틸 4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트, 에틸 4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트 및 에틸 6-포르밀-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트를 합성하기 위한 단계 C-E는 실시예 1A에서의 절차와 유사하였다.

단계 F. 에틸 (E)-6-(하이드라조노메틸)-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트 : 실온의 2-메톡시에탄올(50 mL) 중 N₂H₄H₂O(2.0 g, 98%, 40 mmol)의 교반 혼합물에 에틸 6-포르밀-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(4.8 g, 20 mmol)를 첨가한 다음, AcOH를 20방울 첨가하였다. 반응 혼합물을, 혼합물이 투명해질 때까지 약 30분 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 교반하면서 물 (100 mL)에 붓고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물을 수득하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS: m/z= 253 (M+H)⁺.

단계 G. 4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온 : 실온의 2-메톡시에탄올(50 mL) 중 에틸 (E)-6-(하이드라조노메틸)-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(4.8 g, 0.19 mol)의 교반 현탁액에 AcOH(20 방울)를 첨가하였다. 반응 현탁액을 105℃에서 3시간 동안 교반한 다음 여과하였다. 필터 케이크를 물로 세척하고 고진공 하에 건조시켜 원하는 생성물의 제1 회분(batch)을 수득하였다. 여과물을 물로 희석하고 DCM으로 2회 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물의 제2 회분을 수득하였다. 원하는 생성물(2.5g)의 2개의 회분을 합치고, 합쳐진 2개의 회분을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: m/z= 207 (M+H)⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.68(s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 4.30 (s, 3H).

단계 H. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DMF(15 mL) 중 4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(2 g, 10.0 mmol) 및 K₂CO₃(2.7 g, 20 mmol)의 교반 혼합물에 1-(클로로메틸)-3-메톡시벤젠(2.3g, 15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2 g, 67% 수율). LCMS: m/z= 327 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.36 (s, 1H),8.64 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.88-6.80 (m, 3H), 5.33 (s, 2H),. 4.31 (s, 3H) 3.72 (s, 3H).

단계 I. 2-요오드-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: 실온의 톨루엔(30 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸 -4,6-다이히드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(1 g, 3 mmol) 및 t-BuOK(688 mg, 6 mmol)의 교반 혼합물에 1,2,3,4,5-펜타플루오로-6-요오드벤젠(3.6 g, 12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 135℃에서(유조를 미리 가열해 둠) 4시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 6/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1 g, 72% 수율). LCMS: m/z= 453 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.61 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.88-6.80 (m, 3H), 5.31 (s, 2H),. 4.26 (s, 3H) 3.71 (s, 3H).

단계 J. (4-플루오로벤질)아연(II) 브롬화물: 25 mL의 3구형 둥근 바닥 플라스크에 Zn 분말(1300 mg, 20 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 고진공 하에 탈기하고 N₂로 3회 백퍼징(back purge)하였다. 실온에서 주사기를 통해 건조 THF(15 mL), TMSCl(108 mg, 1 mmol), 및 1,2-다이브로모에탄(186 mg, 1 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 30분 동안 65℃로 가열한 다음 0℃로 냉각시키고, 이어서 1-(브로모메틸)-4-플루오로벤젠(1.89 g, 10 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하였다. 상청액을 다음 단계에 직접 사용하였다.

단계 K. 2-(4-플루오로벤질)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 25 mL의 3구형 둥근 바닥 플라스크에 2-요오드-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.22 mmol) 및 Pd(PPh₃)₄(25.4 mg, 10 mol%)를 첨가하였다. 플라스크를 고진공 하에 탈기하고 N₂로 3회 백퍼징하였다. (4-플루오로벤질)아연(II) 브롬화물의 상청액(6 mL)을 주사기를 통해 플라스크에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N₂ 하에 65℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(6 mg). LCMS: m/z= 435 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.53 (s, 1H), 7.75-7.50 (m, 1H), 7.47 (s, 2H), 7.23 (s, 3H), 6.84 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).

상기 기재된 절차를 사용하여 적절한 출발 물질을 사용해 다음의 화합물을 제조하였다. 적절한 때에 표준 아미노기 보호 및 탈보호를 사용할 수 있다. 아미노 보호기의 예는 SEM을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. SEM의 탈보호는 TFA 및 DCM에서 수행될 수 있다.

실시예 2B. 2-벤질-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 2-브로모-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: 무수 DMF(10 mL) 중 에틸 2-브로모-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트 (1.1 g, 4 mmol)의 용액에 NaH(320 mg, 오일 중 60%, 8 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음 MeI(852 mg, 6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 추가로 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(950 mg, 82.2% 수율). LCMS: m/z 289 (M+H)⁺.

단계 B. 에틸 2-벤질-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: N₂ 하의 건조 THF 중 에틸 2-브로모-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(720 mg, 2.5 mmol) 및 Pd(PPh₃)₄(145 mg, 0.125 mmol)의 혼합물에 벤질아연 브로마이드(20 mL, 0.5 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 4/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(600 mg, 80.0% 수율). LCMS: m/z 301 (M+H)⁺.

단계 C. 에틸 2-벤질-6-포르밀-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: 1,2-다이클로로에탄(6 mL) 중 에틸 2-벤질-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(600 mg, 2 mmol)의 용액에 옥시염화인(612 mg, 4 mmol) 및 N-메틸-N-페닐포름아미드(540 mg, 4 mmol)의 혼합물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류시킨 후 냉각시키고, 얼음물에 부은 다음 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 황색 오일로서 수득하였다(140 mg). LCMS: m/z 329 (M+H)⁺.

단계 D. 2-벤질-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 2-에톡시에탄올(3 mL) 중 에틸 2-벤질-6-포르밀-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(140 mg, 미정제)의 용액에 하이드라진 수화물(0.5 mL, 98%wt)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온까지 냉각시켰다. 여과에 의해 침전물을 수집하고 MeOH로 세척하여 원하는 생성물을 수득하였다(2단계에 걸쳐 60 mg, 10.1% 수율). LCMS: m/z 297 (M+H)⁺.

단계 E. 2-벤질-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d] 피리다진-5(6H)-온: N₂ 하의 DMA(1 mL) 중 2-벤질-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5] 피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.169 mmol) 및 NaHCO₃(28 mg, 0.338 mmol)의 혼합물에 1-(클로로메틸)-3-메톡시벤젠(40 mg, 0.254 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(8 mg, 11.4% 수율). LCMS: m/z 417 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.53 (s, 1H), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.30-7.32 (m, 1H), 7.20-7.25 (m, 1H), 6.82-6.85 (m, 3H), 5.31 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).

실시예 2C. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(1-페닐에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 실시예 2A와 유사한 절차를 사용해 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 합성하였다. LCMS: m/z 467 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 2A와 유사한 절차를 사용해 2-요오드-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 합성하였다. LCMS: 593 (M+H)⁺.

단계 C. 2-벤질-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온. N₂ 하에 아연 분말(1.3 g, 20 mmol)을 무수 THF(5 mL) 중에 현탁시킨 다음, 1,2-디브로모에탄(0.01 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 5분 동안 가열한 다음, 클로로트리메틸실란(0.01 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 15분 동안 추가로 가열한 다음 0℃까지 냉각시키고, 이어서 무수 THF(5 mL) 중 (브로모메틸)벤젠(1.7 g, 10 mmol)의 용액의 적가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 교반한 다음 냉각시켜 벤질아연 (II) 브롬화물(THF 중 약 1 M)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. N₂ 하의 건조 THF(2 mL) 중 2-요오드-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg, 0.5 mmol)의 혼합물에 Pd(PPh₃)₄(58 mg, 0.05 mmol) 및 위의 벤질아연(II) 브롬화물(5 ml, 1 M)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 65℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 물에 붓고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/2)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(230 mg, 82.7% 수율). LCMS: 557 (M+H)⁺.

단계 D. 2-벤조일-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DMF(5 mL) 중 2-벤질-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃(74 mg, 0.53 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 대기 하에 50℃에서 4시간 동안 교반한 다음 물에 부었다. 여과에 의해 침전물을 수집하여 PE로 세척하고, 고진공하에 건조시켜 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg, 98% 수율). LCMS: 571 (M+H)⁺.

단계 E. 2-(1-히드록시-1-페닐에틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : 얼음조에서 건조 THF(2 mL) 중 메틸 마그네슘 브롬화물(0.6 mL, 1.5 M)의 화합물에 건조 THF 중 2-벤조일-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.175 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하여 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 오일로서 수득하였다(30 mg, 29.4% 수율). LCMS: 587 (M+H)⁺.

단계 F. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(1-페닐에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : TFA/TES(2 mL/0.5 mL)의 혼합 용액 중 2-(1-히드록시-1 -페닐에틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.05 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg, 22.7% 수율). LCMS: m/z 441 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.11 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 3H), 7.37 (t, 2H), 7.28 (m, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.71 (q, 1H), 4.28 (s, 3H), 1.78 (d, 3H).

부산물인, 4-메틸-6-((1-메틸-1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(1-페닐에틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온도 분취-HPLC로 수득하였다.

LCMS: m/z 455 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.52 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.42 - 7.30 (m, 6H), 6.97 (d, 1H), 5.64 (s, 2H), 4.70 (q, 1H), 4.27 (s, 3H), 4.09 (s, 3H), 1.77 (d, 3H).

실시예 2D. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(1-히드록시-1-페닐에틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-벤조일-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DCM(2 mL) 중 2-벤조일-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(75 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(30 mg, 52.6% 수율). LCMS: 441 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(1-히드록시-1-페닐에틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 얼음조에서 건조 THF(1 mL) 중 메틸 마그네슘 브롬화물(0.22 mL, 1.5 M)의 혼합물에 건조 THF 중 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-벤조일-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.068 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 다음 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(8 mg, 25.8% 수율). LCMS: 457 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.62 (d, 2H), 7.45 (d, 1H), 7.34 (t, 2H), 7.29-7.23 (m, 2H), 6.99 - 6.93 (m, 2H), 5.65 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.01 (s, 3H).

상기 기재된 절차를 사용하여 적절한 출발 물질을 사용해 다음의 화합물을 제조하였다.

실시예 2E. 2-(히드록시(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-벤조일-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : DMF(1 mL) 중 2-벤질-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(40 mg, 0.135 mmol) 및 K₂CO₃(37 mg, 0.27 mmol)의 용액에 1-(클로로메틸)-3-메톡시벤젠(31 g, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 공기 중에 밤새 교반한 후 물에 부었다. 여과에 의해 침전물을 수집하고 EtOAc로 세척하여 원하는 생성물을 수득하였다(30 mg, 51.7% 수율). LCMS: m/z 431 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.76 (s, 1H), 8.46-8.49 (m, 2H), 7.78 (t, 1H), 7.66 (t, 2H), 7.25 (t, 1H), 6.84-6.89 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 4.37 (s, 3H), 3.73 (s, 3H)

단계 B. 2-(히드록시(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: THF(1 mL)와 MeOH(1 mL) 중 2-벤조일-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.047 mmol)의 혼합물에 NaBH₄(3.5 mg, 0.093 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 분리하고 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(13 mg, 64.0% 수율). LCMS: m/z 433 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.58 (s, 1H), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.36-7.40 (m, 2H), 7.28-7.33 (m, 1H), 7.20-7.25 (m, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.82-6.85 (m, 3H), 6.08 (d, 1H), 5.31 (d, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).

실시예 2F. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(페닐)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 실시예 2E와 유사한 절차를 사용해 2-(히드록시(페닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 합성하였다. LCMS: m/z 573 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 2D와 유사한 절차를 사용해 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(페닐)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 합성하였다. LCMS: m/z 443 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.56-7.42 (m, 3H), 7.37 (s, 2H), 7.28 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.21 (s, 3H).

실시예 2G. 메틸 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복실레이트의 합성

MeHO(5 mL) 중 2-요오드-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(40 mg, 0.088 mmol)의 교반 혼합물에 Et₃N(27 mg, 0.264 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂(6.5mg, 0.009mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO하에 85℃에서 12시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2 mg, 5.88% 수율). LC-MS: m/z 385 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.72 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.95 - 6.81 (m, 3H), 5.34 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.72 (s, 3H).

2-클로로-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온으로 유사한 반응을 수행하여, 2-메톡시-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 주요 부산물로서 생성하였다. LC-MS: m/z 357 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.50 (s, 1H), 7.26-7.21 (m, 1H), 6.88 - 6.80 (m, 3H), 5.30 (s, 2H), 4.19 (brs, 6H), 3.72 (s, 3H).

실시예 2H. 2-(플로오로(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

-78℃미만의 DCM(2 mL) 중 2-(히드록시(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.046 mmol)의 용액에 DAST(0.3 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2.5 mg, 12.5% 수율). LCMS: 435. (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.64 (s, 1H), 7.55-7.48 (m, 5H), 7.26-7.07 (m, 2H), 6.92-6.74 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.25 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).

실시예 2I. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(아미노(페닐)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. (Z)-2-((히드록시이미노)(페닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 무수 MeOH(5 mL) 중 2-벤조일-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.175 mmol) 및 NH₂OH.HCl(123 mg, 1.75 mmol)의 혼합물을 밀봉된 시험관 내에서 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그런 다음 포화 수성 NH₄Cl(20 mL)에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EA = 2/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(40 mg, 39.1% 수율). LC-MS: m/z 586 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(아미노(페닐)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : TFA(3 mL) 중 (Z)-2-((히드록시이미노)(페닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(40 mg, 0.068 mmol)의 교반 혼합물에 Zn(44 mg, 0.68 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO₃(20 mL)에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(4.6 mg, 14.8% 수율). LC-MS: m/z 442 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.11 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.52-7.40 (m, 3H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 5.49 (s, 1H), 4.20 (s, 3H).

실시예 2J. N-((6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2일)(1H-피라졸-3-일)아세트아미드의 합성

단계 A. N-((6-((1-아세틸-1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2일)(1-아세틸-1H-피라졸-3-일)메틸아세트아미드: DCM/MeCN(1 mL/1 mL) 중 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(아미노(1H- 피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.046 mmol)의 교반 혼합물에 Et₃N(14 mg, 0.139 mmol) 및 무수 아세트산(24 mg, 0.23 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 23℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조생성물(30 mg)을 수득하고, 이를 아무런 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS: m/z 558 (M+H)⁺.

단계 B. N-((6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2일)(1H-피라졸-3-일)아세트아미드:. N₂ 하에 MeOH(3 mL) 중 N-((6-((1-아세틸-1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)(1-아세틸-1H-피라졸-3-일)메틸)아세트아미드(30 mg, 0.053 mmol)의 교반 혼합물에 K₂CO₃(22 mL, 0.16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 23℃에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2.0 mg, 9% 수율). LC-MS: m/z: 474 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 8.57 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.48-7.60 (d, 1H), 7.31-7.27 (t, 1H), 7.00-6.98 (d, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.33 (s, 3H), 1.97 (s, 3H).

실시예 2K. 2-(다이플로오로(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(2-페닐-1,3-다이티올란-2-일)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸라[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: 톨루엔(3 mL) 중 2-벤조일-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(86 mg, 0.2 mmol)의 혼합물에 p-TsOH(36 mg, 0.2 mmol) 및 에탄-1,2-다이티올(39 mg, 0.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(80 mg, 80% 수율). LCMS: m/z 507 (M+H)⁺.

단계 B. 2-(다이플로오로(페닐)메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온 : DCM(5 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(2-페닐-1,3-다이티올란-2-일)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(65 mg, 0.13 mmol) 및 NIS(소량)의 혼합물에 Py.HF(1 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 하에 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 고형분을 수득하였다(50 mg, 76% 수율). LCMS: m/z 595 (M+H)⁺.

THF/MeOH(3 mL/2mL) 중 상기 고형분(25 mg, 0.04 mmol)의 혼합물에 Pd/C(5 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 H₂ 하에 실온에서 40분 동안 교반한 다음 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(7 mg, 36.8% 수율). LCMS: 453 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.70 (s, 1H), 7.74-7.70 (m, 2H), 7.64-7.56(m, 3H), 7.26-7.20 (m, 1H), 6.88-6.84 (m, 3H), 5.33 (s, 2H), 4.25 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).

실시예 2L. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(1-페닐시클로프로필)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 4-메틸-2-(1-페닐시클로프로필)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)

메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 건조 DMF(2 mL) 중 2-벤질-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg, 0.1 mmol)의 혼합물에 1,2-다이브로모에탄(10 μL, 0.1 mmol) 및 TBAB(3 mg, 0.01 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음 NaH(8 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(26 mg, 44.7% 수율). LCMS: 583 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(1-페닐시클로프로필)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 다이옥산(4 M, 2 mL) 중의 HCl 용액 중 4-메틸-2-(1-페닐시클로프로필)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(26 mg, 0.044 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(3 mg, 15% 수율). LCMS: 453 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.50 - 7.38 (m, 4H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 6.95 (d, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.24 (s, 3H), 1.84-1.81 (m, 2H), 1.59-1.57 (m, 2H).

실시예 2M. 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤즈아미드의 합성.

단계 A. 3-((2-브로모-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴의 합성: -40℃에서 N₂ 분위기 하에, THF(15 mL) 중 3-((4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴(200 mg, 0.62 mmol) 및 CBr₄(1.03 g, 3.11 mmol)의 혼합물에 LiHMDS(1.24 mL, THF 중 1 M)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~25% EtOAc)로 정제하여 3-((2-브로모-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5])피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴을 수득하였다(200 mg, 80.6% 수율). LC-MS (ESI): m/z 400 (M+H)⁺.

단계 B. 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴: 톨루엔(2 mL) 중 3-((2-브로모-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴(100 mg, 0.25 mmol) 및 메틸보론산(45 mg, 0.75 mmol)의 혼합물에 Na₂CO₃(53 mg, 0.5 mmol)에 이어서 Pd₂(dba)₃(23 mg, 0.025 mmol) 및 잔트포스(14 mg, 0.025 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 증발시켰다. 여액을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5])피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴을 수득하였다(60 mg, 71.4% 수율). LC-MS (ESI): m/z 336 (M+H)⁺.

단계 C. 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤즈아미드의 합성: H2SO4(1 mL) 중 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤조니트릴(60 mg, 0.18 mmol)의 용액을 30℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO₃으로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 증발시켰다.. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 3-((2,4-다이메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5])피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)벤즈아미드를 수득하였다(10 mg, 15.7% 수율). LC-MS (ESI): m/z 354 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.41 (t, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 2.86 (s, 3H).

실시예 2N. 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다질-5-온의 합성

단계 A. 3-요오드-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸의 합성: DCM(15 mL) 중 3-요오드-1H-피라졸(1 g, 5.16 mmol) 및 p-TsOH(88 mg, 0.52 mmol)의 혼합물에 DHP(0.56 mL, 6.19 mmol)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~10% EtOAc)로 정제하여 3-요오드-1-(옥산-2-일)-1H-피라졸(1.4 g)을 수득하였다. LC-MS (m/z 279 (M+H)⁺.

단계 B. (E)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-3-(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)비닐)-1H-피라졸의 합성: 질소 하에, 톨루엔(3 mL) 중 3-요오드-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸(150 mg, 0.54 mmol)의 혼합물에 2-에테닐-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란(0.18 mL, 1.08 mmol), Et₃N(0.37 mL, 2.7 mmol) 및 Pd(PBu₃)₂(14 mg, 0.03 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 분취-TLC(PE 중 35% EtOAc)로 정제하여 1-(옥산-2-일)-3-[(E)-2-(테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)에테닐]-1H-피라졸을 수득하였다(60 mg, 37% 수율). LC-MS (ESI): m/z 305 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DMF (15 mL) 중 4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(500 mg, 2.42 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃(335 mg, 2.42 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 30분 동안 교반한 후, DMF(2 mL) 중 3-(브로모메틸)-1-메틸-1H-피라졸(636 mg, 3.64 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 현탁액을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~100 EtOAc)로 정제하여 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(280 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 301 (M+H)⁺.

단계 D. 2-요오드-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 톨루엔(10 mL) 중 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(280 mg, 0.93 mmol)의 혼합물에 펜타플루오로요오드벤젠(0.50 mL, 3.73 mmol) 및 t-BuOK(209 mg, 1.86 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 135℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~100% EtOAc)로 정제하여 2-요오드-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다(300 mg). LC-MS (ESI): m/z 427 (M+H)⁺.

단계 E. (E)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)비닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]

피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 질소 하에, DME(5 mL)와 물(1 mL) 중 2-요오드-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg, 0.71 mmol) 및 (E)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-3-(2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)비닐)-1H-피라졸(300 mg, 0.99 mmol)의 혼합물에 Na₂CO₃(149 mg, 1.41 mmol) 및 Pd(PPh₃)₂Cl₂(49 mg, 0.071 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~100% EtOAc)로 정제하여 (E)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)비닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(170 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 477 (M+H)⁺.

단계 F. 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(3 mL)와 MeOH(3 mL) 중 (E)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)비닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(80 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 Pd/C(10 mg)를 첨가하였다. 반응물을 H₂ 하에 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(EtOAc)로 정제하여 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다(20 mg). LC-MS (ESI): m/z 479 (M+H)⁺.

단계 G. 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 에탄올(2 mL) 중 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.042 mmol)의 혼합물에 HCl(0.5 mL, 디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고 포화 NaHCO₃으로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다 (10 mg, 61% 수율). LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.56 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.12 (d, 1H), 6.08 (d, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.48 (t, 2H), 3.13 (t, 2H).

실시예 2O. 2-((1H-피라졸-5-일)옥시)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 5-히드록시-1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-4-카르복실레이트의 합성: 메탄올(50 mL)과 물(10 mL) 중 (4-메톡시벤질)하이드라진 다이하이드로클로라이드(2.25 g, 10 mmol) 및 K₂CO₃(4.14 g, 30 mmol)의 혼합물에 다이에틸 2-(에톡시메틸렌)말로네이트(2.16 g, 10 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 그런 다음 혼합물을 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 1.1g의 에틸 5-히드록시-1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-4-카르복실레이트를 수득하였다.

단계 B. 5-히드록시-1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-4-카르복실산의 합성: 메탄올(10 mL) 중 에틸 5-히드록시-1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-4-카르복실레이트(800 mg, 2.9 mmol)의 용액에 물(10 mL) 중 KOH(800 mg, 15 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 농축시키고, 여액을 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS (ESI): m/z 249 (M+H)⁺.

단계 C. 1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-5-올의 합성: 5-히드록시-1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-4-카르복실산의 혼합물을 2 M HCl(50 mL)에 용해시키고, 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 여액을 분취-TLC로 정제하여 120 mg의 1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-5-올을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 205 (M+H)⁺.

단계 D. 터트-부틸 N-(터트-부톡시)카르보닐 (6-((2-((1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-5-일)옥시)-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트의 합성: DMF(8 mL) 중 1-[(4-메톡시페닐)메틸]-1H-피라졸-5-올(60 mg, 0.29 mmol)의 용액에 5℃에서 KOH(18 mg, 0.32 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5℃에서 30분 동안 교반하고, DMF(2 mL) 중 터트-부틸 N-(터트-부톡시)카르보닐 (6-((2-브로모-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(174 mg, 0.29 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 1 M 수성 구연산에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(EA:PE=1:1)로 정제하여 80 mg의 터트-부틸 N-(터트-부톡시)카르보닐(6-((2-((1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-5-일)옥시)-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트를 수득하였다. LC-MS: m/z 715 (M+H)⁺.

단계 E. 2-((1H-피라졸-5-일)옥시)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: TFA(2 mL) 중 터트-부틸 N-(터트-부톡시)카르보닐(6-((2-((1-(4-메톡시벤질)-1H-피라졸-5-일)옥시)-4-메틸-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(60 mg, 0.08 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 농축시키고 분취-HPLC로 정제하여 15 mg의 2-((1H-피라졸-5-일)옥시)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS(ESI): m/z 395(M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.41 (s, 1H), 7.76 - 7.63 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.31 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).

실시예 3 반응식 E3를 이용한 화합식 E3-ii의 화합물 및 유도체의 제조

반응식 E3

화합물 E3-ii는 화합물 E3-i과 트리부틸(비닐)스탄난 간의 스틸레 반응(Stille reaction)에 의해 합성할 수 있다. 촉매(예: Pd(Pt-Bu3)2, DMF와 같은 팔라듐 촉매)의 존재 하에 E3-ii의 Heck 반응에 이어서 알케닐기를 환원하면 화합물 E3-ix를 생성할 수 있다. 대안적으로, 화합물 E3-ii의 표준 수소화에 의해 화합물 E3-iii을 생성한다. 화합물 E3-ii의 수소화에 이어서 과붕산 나트륨과의 산화에 의해 생성물 E3-vii를 수득한다. 산화 오스뮴(VIII) 및 과요오드산나트륨과 화합물 E3-ii의 직접 산화로 알데히드 E3-iv를 수득한다. 알데히드 E3-iv의 친핵성 첨가로 생성물 E3-v를 수득한다. 소듐 보로하이드라이드와 화합물 E3-iv의 표준 환원으로 화합물 E3-vi를 수득한다. 화합물 E3-iv의 환원성 아미노화로 화합물 E3-viii을 수득한다. 여기서, Q 및 R²는 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, Q 및 R²는 각각 독립적으로 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소 고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴이다.

실시예 3A. 2-에틸-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로

[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DMF(6 mL) 중 2-클로로-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(600 mg, 1.67 mmol) 및 트리부틸(비닐)스탄난(1 mL, 3.4 mmol)의 혼합물에 Pd(PPh₃)₄를 첨가하였다. 혼합물을 N₂ 하에 100℃에서 밤새 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/2)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(410 mg, 68% 수율). LCMS: m/z 353 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 7.10 (dd, 1H), 6.89 - 6.80 (m, 3H), 6.28 (d, 1H), 5.75 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.72 (s, 3H).

단계 B. 2-에틸-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]

피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: N₂ 하에 MeOH(1 mL)와 THF(1 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.88 mmol)의 혼합물에 Pd/C(10mg)를 첨가하였다. 혼합물을 H₂ 하에 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg, 16.7% 수율).

LCMS: m/z 355 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.56 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.89 - 6.78 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.17 (q, 2H), 1.38 (t, 3H).

실시예 3B. 2-(히드록시메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카브알데히드: 다이옥산(6 mL)와 물(2 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(410 mg, 1.16 mmol)의 혼합물에 NaIO₄(1 g, 4.6 mmol), 2,6-다이메틸피리딘(0.27 mL, 2.32 mmol) 및 OSo₄(촉매)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 Na₂S2O₃로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 1/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(130 mg, 31.7% 수율). LCMS: m/z 387 (M+MeOH+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.08 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.88-6.83 (m, 3H), 5.34 (s, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.72 (s, 3H).

단계 B. 2-(히드록시메틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 메탄올(2 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카브알데히드(30 mg, 0.08 mmol)의 혼합물에 NaBH₄(6 mg, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg, 35.7% 수율). LCMS: m/z 357 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.59 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.86-6.82 (m, 3H), 6.34 (t, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.89 (d, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H).

실시예 3C: 2-(2-히드록시프로판-2-일)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-(1-히드록시에틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 0℃에서 THF(3 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카브알데히드(100 mg, 0.28 mmol)의 혼합물에 염화메틸마그네슘(0.19 mg, 0.56 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/2)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(40 mg). LCMS: m/z 371 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.58 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.97 - 6.77 (m, 3H), 6.41 (d, 1H), 5.40 - 5.23 (m, 2H), 5.18 - 5.02 (m, 1H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 1.55 (d, 3H).

단계 B. 2-아세틸-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로

[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DCM(3 mL) 중 2-(1-히드록시에틸)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.08 mmol)의 혼합물에 산화망간(IV)(35 mg, 0.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물을 수득하였다(25 mg). LCMS: m/z 369 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.83 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 6.99-6.94 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 4.45 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).

단계 C. 2-(2-히드록시프로판-2-일)-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 0℃에서 THF(1 mL) 중 2-아세틸-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(20 mg, 0.05 mmol)의 혼합물에 염화메틸마그네슘(0.08 mg, 0.15 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg). LCMS: m/z 385(M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.58 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.89 - 6.81 (m, 3H), 6.28 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 1.60 (s, 6H).

실시예 3D. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(2-히드록시에틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 2-(2-히드록시에틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: 0℃에서 N₂ 하에, THF(2 mL) 중 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-2-비닐-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(100 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 BH₃-THF(0.2 mL, 1 mol/L, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 이어서 물(1 mL)과 NaBO₃.4H₂O(154 mg, 1.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 서서히 가온한 다음, 해당 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(30 mg). LC-MS: m/z 511 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(2-히드록시에틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: 0℃에서, DCM(3 mL) 중 2(30 mg, 0.18 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2.0 mg). LC-MS: m/z 381 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 5.02-5.00 (m, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.85-3.81 (m, 2H), 3.32-3.25 (m, 2H).

실시예 3E. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-((메틸아미노)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 4-메틸-2-((메틸아미노)메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)

메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : 0℃에서, THF(10 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-카브알데히드(50 mg, 0.1 mmol)의 혼합물에 MeNH₂(MeOH 중 30%, 21 mg, 0.2 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 소듐 시아노보로하이드라이드(19 mg, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(35 mg). LCMS: m/z 511 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-((메틸아미노)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 0℃에서, DCM(10 mL) 중 4-메틸-((메틸아미노)메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(35 mg, 0.07 mmol)의 혼합물에 TFA(3 mg)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg). LCMS: m/z 380(M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.13 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 4.09 (s, 2H), 2.40 (s, 3H).

실시예 3F. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(아미노메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. (E)-4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카브알데히드 옥심: 0℃에서, MeOH(10 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-카브알데히드(120 mg, 0.24 mmol)의 혼합물에 히드록실아민 수화염화물(50 mg, 0.73 mmol)을 첨가하고, 이어서 KOAc(71 mg, 0.73 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(90 mg). LCMS: m/z 510 (M+H)⁺.

단계 B. 2-(아미노메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온.: 아세트산(10 mL) 중 (E)-4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-카브알데히드 옥심(90 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 Zn 분말(58 mg, 0.88 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(70 mg). LCMS: m/z 496 (M+H)⁺.

단계 C. 실시예 3D에서의 절차를 사용해 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(아미노메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 합성하였다. LCMS: m/z 366 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.13 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.33 - 7.20 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.24 (d, 3H), 4.17 (s, 2H).

실시예 3G. N-((6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2일)아세트아미드의 합성

단계 A. N-((4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)메틸)아세트아미드: 0℃에서, DCM(10 mL) 중 2-(아미노메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(35 mg, 0.07 mmol)의 혼합물에 무수 아세트산(22 mg, 0.21 mmol)을 첨가하고, 이어서 트리에틸아민(22 mg, 0.21 mmol)과 DMAP(0.8 mg, 0.007 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 황색 오일로서 수득하였다(25 mg). LCMS: m/z 538 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 3D에서의 절차를 사용해 N-((4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)메틸)아세트아미드를 합성하였다. LCMS: m/z 408 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.31 - 7.21 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.31 (s, 3H), 1.93 (s, 3H).

실시예 3H. N-((6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2일)메탄설폰아미드

단계 A. N-((4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)메틸)메탄설폰아미드: 0℃에서, DCM(5 mL) 중 2-(아미노메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg，0.1 mmol）의 혼합물에 Et₃N(30.62 mg，0.3 mmol)에 이어서 MsCl(9.24 mg, 0.081 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg).

단계 B. 실시예 3D에서의 절차를 사용해 N-((6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)메틸)메틸설폰아미드를 합성하였다. LCMS: m/z 444 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.11 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.34 - 7.20 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.64 (d, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.04 (s, 3H).

실시예 3I. 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-브로모-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트: -40℃에서 N₂ 분위기 하에, THF(20 mL) 중 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트(1.4 g, 2.73 mmol) 및 CBr₄(4.52 g, 13.65 mmol)의 혼합물에 LiHMDS(5.46 mL, 5.46 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반한 다음, 물(4 mL)로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE/EA=10:1~3:1)로 정제하여 500 mg의 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-브로모-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트를 수득하였다.　LC-MS: m/z 591(M+H)⁺.

단계 B. 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-비닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트의 합성: DMF(10 mL) 중 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-브로모-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트 (500 mg, 0.85 mmol)의 혼합물에 트리부틸(에테닐)스탄난(536 mg, 1.69 mmol)과 DIPEA(327 mg, 2.53 mmol)에 이어서 Pd(PPh₃)₄(105 mg, 0.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 분위기 하에 80℃에서 3시간 동안 교반한 다음, H₂O로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE/EA=10:1~5:1)로 정제하여 300 mg의 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-비닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트를 수득하였다.　LC-MS: m/z 539(M+H)⁺.

단계 C. 터트-부틸 (E)-3-(2-(6-((6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)비닐)-1H-피라졸-1-카르복실레이트의 합성: DMF(4 mL) 중 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-비닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트(300 mg, 0.56 mmol)의 용액에 터트-부틸 3-요오드-1H-피라졸-1-카르복실레이트(180 mg, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(PE/EA=1:1)로 정제하여 200 mg의 터트-부틸 (E)-3-(2-(6-((6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)비닐)-1H-피라졸-1-카르복실레이트를 수득하였다. LC-MS: m/z 705 (M+H)⁺.

단계 D. 터트-부틸 3-(2-(6-((6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)에틸)-1H-피라졸-1-카르복실레이트의 합성: THF/MeOH(4 mL, 1:1) 중 터트-부틸 (E)-3-(2-(6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)비닐)-1H-피라졸-1-카르복실레이트(200 mg, 0.28 mmol)의 용액에 Pd/C(6 mg, 10%wt)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 하에 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 세라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(PE/EA=1:1)로 정제하여 100 mg의 터트-부틸 3-(2-(6-((6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)에틸)-1H-피라졸-1-카르복실레이트를 수득하였다. LC-MS: m/z 707 (M+H)⁺.

단계 E. 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 0℃에서 N₂ 분위기 하에, EtOH(2 mL) 중 터트-부틸 3-(2-(6-((6-((터트-부톡시카르보닐)[(터트-부톡시)카르보닐]아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)에틸)-1H-피라졸-1-카르복실레이트(100 mg, 0.14 mmol)의 혼합물에 HCl(2 mL, 다이옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 80℃에서 1시간 동안, 혼합물을 포화 NaHCO₃에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM/MeOH=10:1)로 정제하여 10 mg의 2-(2-(1H-피라졸-3-일)에틸)-4-메틸-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 407 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.60 - 7.10 (m, 2H), 6.30 (d, 1H), 6.18 - 6.02 (m, 2H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.61 - 3.41 (m, 2H), 3.19 - 3.12 (m, 2H).

실시예 4 화합물 E4-vii 및 E4-viii의 합성

반응식 E4

식 중 Hal은 할로겐(예: Br 또는 I)이고; LG는 이탈기(예: Br 또는 I와 같은 할로겐; OM; 또는 OT)이고; Q는 제1 내지 제20 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같고; Q'은 추가로 기능화된 Q(예: 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소 고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴)이다. 화합물 E4-i와 나트륨 메탄티올레이트의 방향족 치환 반응을 통해 화합물 E4-ii를 수득하는데, 이는 화합물 E1-iii를 E1-vi로 합성하는 방법을 사용해 화합물 E4-v로 전환될 수 있다. mCPBA로 화합물 E4-v를 산화시켜 화합물 E4-vi 및 E4-vii를 각각 수득한다. Q를 Q'으로 추가로 기능화함으로써 E4-v를 E4-viii로 변환할 수 있다.

실시예 4A. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A: 에틸 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: EtOH(10.0 mL) 중 2-브로모-4-메틸-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(500.0 mg, 1.73 mmol)의 혼합물에 NaSMe(240.0 mg, 3.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 얼음물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(460 mg)을 수득하고, 이를 아무런 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS: m/z 257 (M+H)⁺.

단계 B: 에틸 6-포르밀-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트: DCE(10 mL) 중 에틸 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(460.0 mg, 1.8 mmol)와 N-메틸-N-페닐포름아미드(490 mg, 3.6 mmol)의 용액에 POCl₃(550.0 mg, 3.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 얼음물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 8/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(320.0 mg). LC-MS: m/z 285 (M+H)⁺.

단계 C: 4-메틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: EtOH(5.0 mL) 중 에틸 6-포르밀-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(300.0 mg, 1.06 mmol)의 용액에 N₂H₄.H₂O(2 mL, 98%wt)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 밤새 60℃까지 가열한 다음 냉각시켰다. 여과에 의해 고형분을 수집하여, 고진공 하에 건조시켜 원하는 생성물을 수득하였다(180.0 mg). LC-MS: m/z 253 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 12.61 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 4.22 (s, 3H), 2.81 (s, 3H).

단계 D: 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DMF(5.0 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)=4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(180 mg, 0.7 mmol)의 용액에 탄산칼륨(200 mg, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 1-(클로로메틸)-3-메톡시벤젠(170 mg, 1.07 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 얼음물(100.0 mL)로 켄칭시키고 DCM(10.0 mL x 3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: DCM/MeOH = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(200.0 mg). LC-MS: m/z 373 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.57 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.88 - 6.82 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.24 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.82 (s, 3H).

실시예 4B. 4-메틸-2-(메틸티오)-6-((2-옥소-2,3-다이히드로피리딘-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

HCl(10 mL) 중 6-((2-클로로피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5.0 mg, 10.51% 수율). LCMS: m/z 361 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 11.82 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.24 (s, 3H), 2.82 (s, 4H).

실시예 4C. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

0℃에서, DCM(3.0 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(30.0 mg, 0.08 mmol)의 용액에 m-CPBA(14.0 mg ,0.08 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 얼음물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: DCM/MeOH = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(15.0 mg). LC-MS: m/z 389(M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.74 (s, 1H), 7.25 (t, 1H), 6.86 (dd, 3H), 5.35 (s, 2H), 4.30 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).

실시예 4D. 4-((4-메틸-2-(메틸설피닐)-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)벤즈아미드의 합성

단계 A: 4-((4-메틸-2-(메틸티오)-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)벤즈아미드: H₂SO₄(1.0 mL) 중 4-((4-메틸-2-(메틸티오)-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)벤조니트릴(50.0 mg, 0.13 mmol)의 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO₃으로 중화시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: DCM/MeOH = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20.0 mg). LC-MS: m/z 386 (M+H)⁺.

단계 B: 4-((4-메틸-2-(메틸설피닐)-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)벤즈아미드 : 0℃에서, DCM(2.0 mL) 중 4-((4-메틸-2-(메틸티오)-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)벤즈아미드(20.0 mg, 0.052 mmol)의 용액에 m-CPBA(10.0 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 얼음물(10.0 mL)로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: DCM/MeOH = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5.0 mg). LC-MS: m/z 402(M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.75 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.82 (d, 2H), 7.38-7.33 (m, 3H), 5.42 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).

실시예 4E. 6-(3-(2-히드록시프로판-2-일)벤질)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 6-(3-(2-히드록시프로판-2-일)벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온. 0℃에서, 건조 THF(5 mL) 중 6-(3-아세틸벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(120 mg, 0.31 mmol)의 혼합물에 메틸마그네슘 염화물(0.3 mL, 0.9 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 분리하고 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(70 mg). LCMS: m/z 401 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.56 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.98 (s, 1H), 4.24 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 1.39 (s, 6H).

단계 B. 6-(3-(2-히드록시프로판-2-일)벤질)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 0℃에서, DCM(3 mL) 중 6-(3-(2-히드록시프로판-2-일)벤질)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(46 mg, 0.115 mmol)의 혼합물에 m-CPBA(20 mg, 0.1 mmol, 85%w/w)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 수성 Na₂S₂O₃로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 유기층을 분리하고 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg). LCMS: m/z 417 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.73 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.24 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.98 (s, 1H), 4.30 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 1.39 (s, 6H).

실시예 4F. 6-((2-아미노피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-브로모-4-(브로모메틸)피리딘: CCl₄(10 mL) 중 2-브로모-4-메틸피리딘(1 g, 5.81 mmol), NBS(1.1 g, 6.39 mmol) 및 촉매량의 AIBN(100 mg)의 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 200/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물(500 mg)을 수득하였다.

단계 B. 6-((2-브로모피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DMF(8 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100mg, 0.40 mmol), 및 K₂CO₃(164 mg, 1.19 mmol)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반한 다음, DMF(2 mL) 중 2-브로모-4-(브로모메틸)피리딘(199 mg, 0.80 mmol)의 용액과 촉매량의 TBAB(13 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 포화 수성 NH₄Cl로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(150 mg). LCMS: m/z 423 (M+H)⁺.

단계 C. 터트-부틸 (4-((4-메틸-2-(메틸티오)-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트: 다이옥산(10 mL) 중 6-((2-브로모피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.24 mmol), 터트-부틸 카르바메이트(83 mg, 0.71 mmol), K₃PO₄(201 mg, 0.95 mmol), Pd₂(dba)₃(18 mg, 0.02 mmol) 및 잔트포스(11 mG, 0.02 mmol)의 혼합물을 100℃에서 질소 하에 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg). LCMS: m/z 459 (M+H)⁺.

단계 D-E: 실시예 4C와 유사한 공정을 사용해 터트-부틸 (4-((4-메틸-2-(메틸설피닐)-5-옥소-4H-티아졸로[5',4':4,5]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트를 합성하고, 실시예 3G와 유사한 절차를 사용해 6-((2-아미노피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 합성하였다. LCMS: m/z 375 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.67 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 6.30 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 5.24 - 5.03 (m, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.03 (s, 3H).

실시예 4G. 6-((2-아미노티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A~B. 실시예 4F와 유사하게 2-브로모-5-(브로모메틸)티아졸 및 6-((2-브로모티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 합성하였다.

단계 C. 6-((2-((2,4-디메톡시벤질)아미노)티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: NMP(0.1 mL)와 (2,4-디메톡시페닐)메탄아민(0.1 mL) 중 6-((2-브로모티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로

[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(130 mg, 0.30 mmol)와 DIPEA (0.1 mL)의 혼합물을 150℃에서 4시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 반응 혼합물을 물(10 mL)로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(60 mg, 38.4% 수율). LC-MS: m/z 515 (M+H)⁺.

단계 D. 6-((2-((2,4-디메톡시벤질)아미노)티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : 0℃에서, THF(3 mL) 중 6-((2-((2,4-디메톡시벤질)아미노)티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.10 mmol)의 혼합물에 oxone(61 mg, 0.10 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 Na₂S2O₃(5 mL)으로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(30 mg, 50.1% 수율)을 수득하고, 이를 아무런 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS: m/z 531 (M+H)⁺.

단계 E. 실시예 3G와 유사하게 6-((2-아미노티아졸-5-일)메틸)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 합성하였다. LC-MS: m/z 381 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.70 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).

실시예 4H. 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

0℃에서, DCM(3.0 mL) 중 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(메틸설피닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(30.0 mg, 0.08 mmol)의 용액에 m-CPBA(35.0 mg ,0.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 얼음물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: DCM/MeOH = 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10.0 mg, 32% 수율). LC-MS: m/z 405 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.78 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.92 - 6.82 (m, 3H), 5.35 (s, 2H), 4.33 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.57 (s, 3H).

실시예 5. 반응식 E5를 이용한 화합식 E5-ii의 화합물 및 유도체의 합성

반응식 E5

식 중 Q는 본 발명의 제1 내지 제26 구현예 중 어느 하나에 정의된 바와 같고; Nu는 친핵체(전자쌍을 친전자체에게 공여하여 반응과 관련된 화학 결합을 형성하는 화학종)이다. Nu'은 임의 치환된 알콕실, 임의 치환된 티올, 임의 치환된 아미노, 또는 임의 기능화된 탄소 친핵체이다.

실시예 5A. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(벤질티오)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 2-(벤질티오)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온.: 0℃에서, DCM(5 mL) 중 페닐메탄티올(91.21 mg, 734.32 μmol)의 용액에 DIPEA(142.3 mg, 1.10 mmol) 및 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(200 mg, 0.37 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1 내지 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(200 mg). LCMS: m/z 589 (M+H)⁺

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(벤질티오)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H -티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DCM/TFA(V:V = 3:1) 중 2-(벤질티오)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 50.95 μmol)의 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg). LCMS: m/z 459 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.11 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.49 (d, 2H), 7.45 (d, 1H), 7.34 (t, 2H), 7.28 (dd, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).

실시예 5B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-설폰아미드의 합성

단계 A. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-설폰아미드: HOAc/H₂O(V:V = 1:1, 10 mL) 중 2-(벤질티오)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.169 mmol)의 용액에 NCS(45 mg, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 0℃까지 냉각시키고, 이어서, 그 온도에서 pH 9가 될 때까지 NH₃/THF(5 mL)를 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(용리제: PE/EtOAc - 1/1)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg). LCMS: m/z 546 (M+H)⁺.

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-설폰아미드: DCM/TFA(V/V=3/1) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-설폰아미드(20 mg, 36.65 μmol)의 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반한 후 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1.7 mg). LCMS: m/z 416 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.13 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.31 (brs, 2H), 8.17 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.36 - 7.20 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.30 (s, 3H).

실시예 5C. 다이메틸 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)말론산

단계 A. 다이메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)말론산: N₂ 하에, THF(5 mL) 중 t-BuOK(103 mg, 0.92 mmol) 및 말론산다이메틸(91 mg, 0.69 mmol)의 혼합물에 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(250 mg, 0.46 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg, 36.48% 수율). LC-MS: m/z 597 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 5A와 유사하게 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)말론산을 합성하였다. LC-MS: m/z 467 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.77 (s, 6H).

실시예 5D. 메틸 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세테이트의 합성

단계 A. 메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세테이트 : N₂ 하에, DMSO(2 mL) 중 다이메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)말론산(130 mg, 0.22 mmol)의 용액에 포화 수성 LiCl(0.1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 130℃에서 10분 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 그런 다음, 여액을 실리카 겔을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg). LC-MS: m/z 539 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 5A에서와 같이 메틸 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세테이트를 합성하였다. LC-MS: m/z 409 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.70 (s, 3H).

실시예 5E. 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세트아미드의 합성

단계 A. 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세트산: 0℃에서 N₂ 하에, MeOH/H₂O(3 mL/1 mL) 중 메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세테이트(100 mg, 0.186 mmol)의 혼합물에 LiOH(23 mg, 0.558 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 수성 HCl(1 M)로 산성화시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LC-MS: m/z 525 (M+H)⁺.

단계 B. 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세트아미드: 0℃에서, DCM(5 mL) 중 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세트산(50 mg, 0.095 mmol), EDCI(37 mg, 0.190 mmol), HOBT(26 mg, 0.190 mmol) 및 DIPEA(0.05 mL, 0.286 mmol)의 혼합물에 NH₄Cl(26 mg, 0.477 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg). LC-MS: m/z 524 (M+H)⁺.

단계 C. 실시예 5A에서와 같은 절차를 사용해 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)아세트아미드를 합성하였다. LCMS: m/z 394 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.15 (s, 1H)，7.77 (s, 1H)，7.45 (d, 1H), 7.33-7.22 (m, 2H), 6.96 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.27 (s, 3H), 4.07 (s, 2H).

실시예 5F. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이히드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복스아미드의 합성

단계 A. 4-메틸-2-(메틸티오)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온.: 0℃에서, DMF(25 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(1 g, 3.96 mmol)의 혼합물에 NaH(318 mg, 7.93 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 0℃에서 DMF(10 mL) 중 4-(브로모메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸(2 g, 5.94 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 50/1 내지 10/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1.85 g). LCMS: m/z 513 (M+H)⁺.

단계 B. 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시) 메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : 0℃에서 DCM(20 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(700 mg, 1.37 mmol)의 혼합물에 m-CPBA(831 mg, 4.01 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 포화 수성 Na₂SO₃으로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(360 mg). LCMS: m/z 545 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르보니트릴: 0℃의 DMF(10 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg, 0.552 mmol)의 혼합물에 KCN(72 mg, 1.10 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(210 mg). LCMS: m/z 492 (M+H)⁺.

단계 D. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복스아미드: 농축 H₂SO₄(3 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-카르보니트릴(50 mg, 0.1 mmol)의 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO₃(aq)으로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(6 mg). LCMS: m/z 380 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.12 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 1H), 6.98 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.33 (s, 3H).

실시예 5G. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-N-히드록시-4-메틸-5-옥소-5,6-다이히드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복스아미드의 합성

단계 A. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복실레이트: 0℃에서, MeOH(10 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-카르보니트릴(100 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 MeONa(110 mg, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 포화 HCl(1 M)로 켄칭시키고 DCM(30 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(85 mg)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: m/z 525 (M+H)⁺ .

단계 B. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복실산. 0℃에서, THF(10 mL) 중 메틸 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복실레이트(90 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 H₂O(10 mL) 중 LiOH(12 mg, 0.48 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 수성 HCl(1 M)로 pH 5까지 서서히 조정하고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(70 mg, 84% 처리 전 수율)을 수득하고, 이를 아무런 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: m/z 511 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-5-옥소-N-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복스아미드 : 0℃에서, DCM(10 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복실산(70 mg , 0.14 mmol)의 혼합물에 O-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)히드록실아민(24 mg, 0.21 mmol), EDCI(39 mL, 0.21 mmol) 및 HOBT(28 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC에 의해 정제하여 원하는 생성물을 황색 오일로서 수득하였다(35 mg). LCMS: m/z 610 (M+H)⁺.

단계 D. 실시예 5A에서의 절차를 사용해 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-N-히드록시-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르복스아미드를 합성하였다. LCMS: m/z 396 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.12 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.31 (s, 3H).

실시예 5H. 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세트아미드

단계 A. 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세토니트릴: THF(3 mL) 중 2-페닐아세토니트릴(43 mg, 0.36 mmol)의 혼합물에 NaH(14 mg, 0.36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(100 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 추가로 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(63 mg, 59% 수율). LCMS: 582 (M+H)⁺.

단계 B. 실시예 5F에 유사하게 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세트아미드를 합성하였다. LCMS: m/z 470 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 13.11 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.13 (s, 1H) 8.01 (s, 1H),7.54-7.24 (m, 8H), 6.94 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 5.51 (s, 1H), 4.24 (s, 3H).

실시예 5I. 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-히드록시-2-페닐아세트아미드의 합성

농축 H₂SO₄(1 mL) 중 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세토니트릴(100 mg, 0.18 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 MeOH(3 mL)에 용해시킨 다음 NH₃H₂O(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(2 mg). LCMS: 486 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.12 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.14 (s, 1H),7.71 (d, 2H), 7.64 (d, 2H),7.52 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.40-7.24 (m, 4H), 6.95 (d, 1H), 5.66 (s, 2H) 4.27 (s, 3H).

실시예 5J. 메틸 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6 -다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세테이트의 합성

단계 A. 메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세테이트의 합성: THF(3 mL) 중 메틸 2-페닐아세테이트(43 mg, 0.29 mmol)의 혼합물에 NaH(11 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸설포닐)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(82 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시키고 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 3/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(20 mg). LCMS: 615 (M+H)⁺.

단계 B. 메틸 2-(6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세테이트: DCM/FTA(V:V = 1:1, 2 mL) 중 메틸 2-(4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)-2-페닐아세테이트(40 mg, 0.07 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음 물에 붓고 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg). LCMS: 485 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.11 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.13 (s, 1H) 7.54-7.50 (m, 2H), 7.46-7.36 (m, 4H), 7.30-7.24 (m, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.87 (s, 1H),5.65 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.73 (s, 3H).

실시예 6 6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-2-(트리플루오로메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

DMF(5 mL) 중 2-요오드-6-(3-메톡시벤질)-4-메틸-4,6-다이히드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(90 mg, 0.2 mmol) 및 CuI(촉매)의 교반 혼합물에 메틸 2,2-다이플루오로-2-(플루오로설포닐)아세테이트(58 mg, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EtOAc = 5/1)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg). LCMS: m/z= 395 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.78 (s, 1H), 7.24 (t, 1H), 6.90-6.82 (m, 3H), 5.34 (s, 2H), 4.32 (s, 3H) 3.72 (s, 3H).

실시예 7. 화합물 E7-v 및 E7-viii의 합성

반응식 E7

화합물 E7-iii과 화합물 E7-i 및/또는 화합물 E7-ii 간의 친핵성 방향족 치환을 통해 중간체 E7-iv를 수득하였다. 화합물 E7-iv의 페닐설포닐기를 환원시켜 중간체 E7-v를 수득한다. E7-vi 및 염기(예: K2CO3, K3PO4, t-BuOK 또는 Cs2CO3)의 표준 알킬화 반응을 사용해 화합물 E7-viii을 수득하며, 식 중 X^a는 Cl, Br, I, OM, OT와 같은 이탈기이고; Ar₁ 및 Ar₂는 각각 독립적으로 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴; 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알킬아릴, 임의 치환된 알킬헤테로아릴, 임의 치환된 알키닐, 및 임의 치환된 알키닐기이다. 화합물 E7-viii은 톨루엔 중 시아노메틸렌트리부틸포스포란(CMBP)을 사용하는 미쯔노부 반응을 통해 중간체 E7-v로부터 합성할 수도 있다. 특정 구현예에서, Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의 치환된 헤테로아릴이다.

실시예 7A. 4-메틸-2-(메틸설피닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(중간재 E7-i)의 합성

DCM(20 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(1.01 g, 4.0 mmol)의 교반 현탁액에 3-클로로-벤조과산화산(0.77 g, 3.8 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음 혼합물을 여과하여 EtOAc로 세척하고 MeOH와 함께 분쇄하여 4-메틸-2-(메틸설피닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(600 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 269 (M+H)⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78(s, 1H), 8.64 (s, 1H), 4.28 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).

실시예 7B. 4-메틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(E7-ii)의 합성

DCM(600 mL) 중 4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(30 g, 0.119 mol, 1.0 당량)의 용액으로 채운 3구 플라스크에, 20℃에서 m-CPBA(61.5 g, 3당량)를 3번으로 나누어 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 밤새 교반하였고, LC-MS는 물질의 100%가 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, m-CPBA(1.0당량)를 한 번 더 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였고, LC-MS는 E7-ii을 나타냈다(LCMS: m/z 269 (M+H)⁺). 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과된 케이크를 MeOH(500 mL)에 현탁시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 여과에 의해 고형분을 수집하고, 에틸아세테이트로 세척하고, 진공에서 건조시켜 5%의 E7-i과 95%의 E7-ii의 혼합물 28g을 수득하였다. 혼합물(28g)을 DMSO(600 mL)에 현탁시키고, 120℃~130℃로 가열하여 투명한 용액을 형성하였다. 그런 다음, 실온까지 냉각시켜 고형분을 침전시켰다. 혼합물을 여과하고 건조시켜 23g의 순수 E5-1을 수득하였다(LCMS: m/z 285 (M+H)⁺). 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ12.87 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 4.32 (s, 3H), 3.56 (s, 3H).

실시예 7C. 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸의 합성

메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르복실레이트: 0℃에서 N₂ 하에, THF(1 L) 중 메틸 1H-피라졸-3-카르복실레이트(90 g, 0.72 mol)의 교반 용액에 NaH(20.7 g, 0.864 mol, 60%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, SEMCl(151.5 mL, 0.842 mol)를 적가하였다. 추가로 2시간 동안 계속해서 교반한 후, 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다(3 x). 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다 용매를 진공 하에 제거하여 미정제 생성물 210g을 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메탄올: 0℃에서 N₂ 분위기 하에, THF(760 mL) 중 LAH(16.9 g, 0.44 mol)의 현탁액에 미정제 메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(76 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 다시 냉각시키고, H₂O(15.6 mL), 10% NaOH(15.6 mL), H₂O(15.6 mL)를 연속적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 MTBE로 세척하였다(4 x). 합쳐진 유기 분획을 Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다. 용매를 감압 하에 제거하여 미정제 생성물 69.4g을 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS: m/z 229 (M+H)⁺.

3-(요오드메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸: 0℃에서 N₂ 분위기 하에, THF(310 mL) 중 (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메탄올(61.5 g, 이론적으로 0.262 mol)의 교반 용액에 TEA(55.42 mL, 0.393 mol)에 이어서 MsCl(24 mL, 0.314 mol)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고 1시간 동안 교반한 후, NaI(DMF 310 mL 중 196.5g, 1.31 mol). 생성된 혼합물을 1시간 동안 추가로 교반하고, 얼음물로 켄칭시키고 MTBE로 추출하였다(3 x). 합쳐진 유기층을 포화 Na₂S₂O₃와 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축하여 77.5g의 미정제 생성물을 수득하고, 이를 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS: m/z 339 (M+H)⁺.

3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸: 0℃에서 N₂ 분위기 하에, DMF(600 mL) 중 (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메탄올(77.5 g, 이론적으로 0.229 mol)의 교반 용액에 나트륨 벤젠설피네이트(53.5g, 0.32mol)를 첨가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온까지 가온한 후, 반응 혼합물을 얼음물과 포화 Na₂S₂O₃로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다(3 x). 합쳐진 유기층을 포화 NaHCO₃과 염수로 연속 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 여액은 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 20%~70% 아세트산에틸)로 정제하여 56.7g을 수득하였다. LCMS: [M + H]⁺ 353. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.85-7.77 (m, 4H), 7.62 (dd, 2H), 6.19 (d, 1H), 5.35 (d, 2H), 4.70 (d, 2H), 3.44-3.38 (m, 2H), 0.88-0.77 (m, 2H), -0.01 (s, 9H).

실시예 7D. 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-5-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: -40℃에서, 건조 THF(30 mL) 중 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(1.8 g, 5.1 mmol) 용액에 LiHMDS(7.5 mL, 7.5 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 건조 THF(30 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설피닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(580 mg, 2.7 mmol)의 현탁액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음, 얼음처럼 차가운 포화 수성 NH₄Cl(20 mL)에 붓고, EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(60 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 다이클로로메탄 중 0~2.5% 메탄올)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(800 mg). 확인된 LC-MS（ESI）: 557 (M+H)⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.67-7.59 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.48 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.88 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H).

4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-5-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: N₂ 하에, THF(5 mL)와 MeOH(10 mL) 중 4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-5-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(0.8 g, 1.41 mmol)의 혼합물에 SmI₂(0.1 M/THF, 45 mL)를 얼음조에서 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 반응물을 포화 수성 NH₄Cl(50 mL)로 켄칭시키고 EAOAc(50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(60 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 다이클로로메탄 중 0~3% 메탄올)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(310 mg). 확인된 LC-MS: 417 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).

실시예 7E. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트: 건조 DMF(10 mL) 중 메틸 1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트(900 mg, 5.1 mmol)의 용액에 NaH(305 mg, 7.6 mmol, 60%)를 0℃에서 여러 번 나눠 첨가하였다. 현탁액을 얼음조에서 15분 동안 교반한 후, (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란(1.07 mL, 6.0 mmol)을 적가하고 실온에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 그런 다음 혼합물을 포화 NH₄Cl(aq.)에 붓고, 아세트산에틸로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 아세트산에틸)로 정제하여 메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트(1.32 g)를 수득하였다. LCMS: m/z 308 (M+H)⁺.

단계 B. (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메탄올: 건조 THF(10 mL) 중 메틸 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트(1 g, 3.2 mmol)의 용액에 LiHAl₄(146 mg, 3.8 mmol)을 얼음조에서 여러 번 나눠 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 그런 다음, 현탁액을 포화 NH₄Cl(aq.)에 붓고, 아세트산에틸로 추출하였다(2 x). 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~60% 아세트산에틸)로 정제하여 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메탄올(500 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 280 (M+H)⁺.

단계 C. 4-(클로로메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘: 디클로로메탄(2 mL) 중 (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메탄올(120 mg, 0.43 mmol)의 용액에 PPh₃(225 mg, 0.86 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 NCS(114 mg, 0.86 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 실온으로 가온시키고 1시간 동안 추가로 교반하였다. 그런 다음 반응물을 포화 NaHCO₃(aq.)에 부었다. 수성층을 디클로메탄으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 아세트산에틸)로 정제하여 4-(클로로메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘(70 mg)을 오일로서 수득하였다. LCMS: m/z 298 (M+H)⁺.

단계 D. 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 무수 DMF(2 mL) 중 K₂CO₃(41 mg, 0.3 mmol)의 혼합물에 4-메틸-2-((1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(41 mg, 0.1 mmol)을 첨가하고, 아르곤 하에 50℃에서 30분 동안 교반하였다. DMF(1 mL) 중 4-(클로로메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘(30 mg, 0.1 mmol)의 용액을 첨가하고 4시간 동안 추가로 교반하였다. 현탁액을 실온까지 냉각시켜 0.5 N HCl(aq.)에 부었다. 층을 분리시키고 수성층을 아세트산에틸로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다(40 mg, 60% 수율). LCMS: m/z 678 (M+H)⁺.

단계 E. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : 35% TFA(디클로로메탄 중 1 mL) 중 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.044 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(3 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 418 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.51 (s, 1H), 12.78 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.78 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.25 (s, 3H).

실시예 7F. 6-((1H-이미다졸-2-일)메틸)-2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-카르브알데히드: NaH의 샘플을 N₂ 하에 헥산(2 x 10 mL)으로 세척하였다. 건조 DMF(20 mL)를 플라스크에 채우고, 1H-이미다졸-2-카르브알데히드(500 mg, 5.2 mmol)를 조금 씩 나눠 첨가하였다. 실온에서 1.5 시간 동안 교반한 후, SEMCl(864 mg, 5.2 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압하에 농축시켜 미정제 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-카르브알데히드(800 mg)를 수득하였다. LCMS: 227 (M+H)⁺.

단계 B. (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-일)메탄올: THF(20 mL) 중 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-카르브알데히드(1.6 g, 7 mmol)의 교반 혼합물에 0℃에서 NaBH₄(1.34 g, 35 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압하에 농축시켜 미정제 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-일)메탄올(1.3 g)을 수득하였다.

단계 C. 2-(클로로메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸: DCM(20 mL) 중 (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-일)메탄올(400 mg, 1.75 mmol)의 교반 혼합물에 NCS(466 mg, 3.5 mmol) 및 PPh₃(920 mg, 3.5 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 DCM으로 추출하였다. 혼합물을 물로 세척하고, 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(PE: EtOAc=1: 1)에 의해 정제하여 2-(클로로메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸을 수득하였다. LCMS: 247 (M+H)⁺. 건조 DMF(5 mL) 중 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.12 mmol)의 교반 혼합물에, 60℃에서 N₂ 하에 K₂CO₃(66 mg, 0.48 mmol)를 첨가하였다. 20분 후, 60℃에서 N₂ 하에 건조 DMF(2 mL) 중의 화합물 E7-3(60 mg, 0.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 N₂ 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 0.5N aq. HCl로 pH= 5~6으로 조절하였다. 그런 다음, 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 물과 염수로 세척하였다. Na₂SO₄를 이용해 유기층을 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 분취-TLC(PE:EtOAc=1:1.5)로 정제하여 4-메틸-6-((1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-일)메틸)-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(25 mg)을 수득하였다. LCMS: 627 (M+H)⁺. DCM/TFA(2 mL/2 mL) 중 4-메틸-6-((1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-이미다졸-2-일)메틸)-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(25 mg, 0.04 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1.3 mg). LCMS: 367 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 6.9 (s, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).

하기 화합물들을 적절한 출발 물질을 사용해 반응식 E7 및 실시예 7C~7E에 따라 합성하였다.

실시예 7F. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 2-(티아졸-4-일)아세테이트의 합성: THF(30 mL) 중 에틸 2-(2-아미노티아졸-4-일)아세테이트(2 g, 10.7 mmol)의 용액에 t-BuONO(1.6 g, 16.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 에틸 2-(티아졸-4-일)아세테이트 (400mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 172 (M+1)⁺.

단계 B. 2-(티아졸-4-일)에탄올의 합성: DCM(20 mL) 중 에틸 2-(티아졸-4-일)아세테이트(400 mg, 2.3 mmol)의 교반 용액에 DIBAL-H(4.7 mL, 7.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 N₂ 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO₃으로 켄칭시키고, DCM으로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 50~100% EtOAc)로 정제하여 2-(티아졸-4-일)아세테이트(200 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 130 (M+1)⁺.

단계 C. 4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 톨루엔(5 mL) 중 4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg, 0.14 mmol)과 2-(티아졸-4-일)에탄올(55 mg, 0.4 mmol)의 혼합물에 CMBP(104 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 N₂ 하에 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 60 mg의 4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 528 (M+1)⁺.

단계 D. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(1 mL) 중 4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg, 0.1 mmol)의 용액에 TFA(0.5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 무수 NaHCO₃으로 pH = 7.5까지 조정하고, DCM으로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 10 mg의 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-(2-(티아졸-4-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 398 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 4.58 - 4.40 (m, 4H), 4.26 (s, 3H), 3.23 (t, 2H).

실시예 8. 화합물 E8-v, E8-vi, 및 E8-viii의 합성

반응식 E8

화합물 E8-i는 실시예 E7-v 내지 E7-viii에서 같이 알킬화 또는 미츠노부 반응 중 어느 하나를 통해 중간체 E8-ii로 변환될 수 있다. mCPBA 또는 oxone으로 E8-ii을 산화시켜 화합물 E8-v 및 E8-vi를 생성한다. E8-v와 E8-vi의 두 화합물 모두는 먼저 산화에 이어서 알킬화 또는 미츠노부 반응에 의해 E8-i로부터 형성될 수도 있다. 여기서, X^a는 이탈기(예: Cl, Br, I, OM, OT)이고; 화합물 E8-v 및 E8-vi는 LiHMDS 또는 t-BuOK를 염기로서 사용하는 E8-vii와의 친핵성 방향족 치환을 통해 중간체 E8-viii로 변환될 수 있다. 화합물 E8-xi는 AcOH 중 SmI2 또는 Zn을 사용하거나 AlCl₃을 가진 TES를 사용해 화합물 E8-viii로부터 합성될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, R1은 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소 고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴이고; Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소 고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴; 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알킬아릴, 임의 치환된 알킬헤테로아릴, 임의 치환된 알케닐, 및 임의 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R1은 임의 치환된 C1-6 알킬(예컨대 메틸 또는 에틸)이다. 특정 구현예에서, R1은 C1-6 알킬이고; Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의 치환된 헤테로아릴이다.

실시예 8A. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-((5-클로로-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

에틸 5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트: 건조 DCM(10 mL) 중 에틸 5-클로로-1H-피라졸-3-카르복실레이트(100 mg, 0.575 mmol) 및 TEA(0.24 mL, 1.44 mmol)의 교반 혼합물에 TrtCl(192 mg, 0.689 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, H₂O에 부었다. 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(용리제: 석유 에테르 중 0~4% 아세트산에틸)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(미정제, 240 mg, 100%).

(5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메탄올: 건조 THF(10 mL) 중 에틸 5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1.20 g, 2.88 mmol)의 교반 혼합물에 LAH(400 mg, 10.5 mmol)을 -30℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -30℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. Na₂SO₄10H₂O(2 g)를 서서히 첨가하여 반응물을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 희석하고 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 10%~15% 아세트산에틸)로 정제하여 원하는 생성물(540 mg)을 수득하였다.

(5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메틸 메탄술포네이트: 건조 DCM(10 mL) 중 (5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메탄올 (100 mg, 0.267 mmol) 및 DIPEA(0.14 mL, 0.801 mmol)의 교반 혼합물에 MsCl(46 mg, 0.401 mmol)을 10℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다(2 X). 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 원하는 생성물(미정제, 150 mg)을 점착성 오일로서 수득하였다.

5-클로로-3-((페닐설포닐)메틸)-1-트리틸-1H-피라졸: 건조 DMF(10 mL) 중 (5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메틸 메탄설포네이트(150 mg 미정제, 0.267 mmol)의 교반 혼합물에 PhSO₂Na(100 mg, 0.610 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc으로 추출하였다(2 X). 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(용리제: PE/EtOAc = 3/1)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(80 mg). LCMS: m/z 521 (M+Na)⁺.

2-((5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)(페닐설포닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: 건조 THF(10 mL) 중 5-클로로-3-((페닐설포닐)메틸)-1-트리틸-1H-피라졸(100 mg, 0.2 mmol) 및 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.2 mmol)의 혼합물에 LiHMDS(1 mL, 10 mmol, THF 중 1 M)를 10℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고 수성 NH₄Cl에 부었다. EtOAc로 다음 혼합물을 추출하였다(2 X). 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(용리제: 석유 에테르 중 0~30% 아세트산에틸)로 정제하여 원하는 생성물 E8-3(75 mg)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS: m/z 985 (M+Na)⁺.

2-((5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴))에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 실온에서 N₂ 하에, THF(5 mL)와 MeOH(5 mL) 중 화합물 E8-3(75 mg, 0.0779 mmol)의 혼합물에 SmI₂(5 mL, THF 중 0.1 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시켰다. EtOAc로 다음 혼합물을 추출하였다(2 X). 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(PE/EtOAc=2/1)로 정제하여 2-((5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실리)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 845 (M+23)+.

6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-((5-클로로-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 실온에서 N₂ 하에, DCM(6 mL) 중 2-((5-클로로-1-트리틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.0608 mmol)에TFA(2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 수성 NaHCO₃으로 다음 혼합물을 pH=8로 조정하고, 80% DCM/iPrOH로 추출하였다(2 X). 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC(C18, 0.1% 포름산이 포함된 H₂O 중 0~50% 아세토니트릴)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg). LCMS: m/z 451 (M+H)+. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.10-13.2 (brs, 2H), 8.58 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.43-7.46 (m, 1H), 7.25-7.30 (m, 1H), 6.94-6.97 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).

실시예 8B. 2-((1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 4-메틸-2-(메틸티오)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 0℃에서 N₂ 하에, DMF(4 mL) 중 NaH(130 mg, 3.2 mmol)의 용액에 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(270 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 5분 후, DMF(2 mL) 중 1-(브로모메틸)-3-(트리플루오로메톡시)벤젠 (420 mg，1.65 mmol)의 혼합물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 NH₄Cl로 반응물을 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기층을 포화 NaCl로 세척하고(3x), 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% 아세트산에틸)로 정제하여 4-메틸-2-(메틸티오)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(420 mg)을 수득하였다. LCMS: 427 (M+H)^{+ .}

단계 B. 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 0℃에서 N₂ 하에, DCM(10 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(420 mg, 0.99 mmol)의 용액에, mCPBA(520 mg, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 계속하여 교반하였다. 포화 Na₂S₂O₃으로 용액을 켄칭시키고 DCM으로 추출하였다(3x). 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 아세트산에틸)로 정제하여 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(330 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 459 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: 65℃의 건조 THF(10 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(165 mg, 0.36 mmol) 및 4-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸(50 mg, 0.54 mmol)의 혼합물에 Cs₂CO₃(351 mg, 1.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 교반하고 수성 NH₄Cl에 부었다. 생성된 혼합물을 EtOAc으로 추출하였다(2x). 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 아세트산에틸)로 정제하여 원하는 생성물 4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(E8-6]을 수득하였다(200 mg). LCMS: m/z 732 (M+H)⁺.

단계 D. 2-((1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-6-(3-(트리플루오로메톡시)벤질)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 실시예 8A와 유사하게, 화합물 E8-6을 SmI₂와 반응시킨 다음, TFA로 탈보호하여 원하는 생성물을 수득하였다. LCMS: 462 (M+H)⁺ _. ¹HNMR (400 MHz, DMSO) δ 8.52 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.46 (dd, 1H), 7.39-7.2 (m, 3H), 5.40 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).

실시예 8C. 2,6-bis((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 4-((페닐티오)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸: DMF(10 mL) 중 4-(브로모메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸(340 mg, 1.0 mmol)의 용액에 나트륨 벤젠티올레이트(265 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 얼음물(10.0 mL)로 켄칭시키고 EtOAc(3 x 50.0 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물(370 mg)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. LCMS: m/z 371 (M+H)⁺.

단계 B. 4-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸: 0℃에서 THF(20 mL) 중 4-((페닐티오)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)-1H-인다졸(370 mg)의 용액에 H₂O(20 mL) 중 oxone(2.15 g, 3.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 얼음물(50 mL)로 켄칭시키고 AcOEt(3 x 50.0 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 실리카 겔(용리제: PE/EA = 1/5)을 이용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(300 mg). LCMS: m/z 403 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-6-((1-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: -40℃에서, 건조 THF(5 mL) 중 4-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸(163 mg, 0.40 mmol, 2.2당량)의 용액에 LiHMDS(0.46 mL, 0.46 mmol, 2.5당량)를 적가하였다. 혼합물을 이 온도에서 10분 동안 교반한 다음, -40℃에서, 건조 THF(3 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.18 mmol, 1.0당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을, 완료될 때까지 이 온도에서 30분 동안 추가로 교반하였다. 생성된 혼합물을 얼음처럼 차가운 포화 수성 NH₄Cl(20 mL)에 붓고, EtOAc(3 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물(20 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(100 mg). LCMS: m/z 867 (M+H)⁺.

단계 D. 2,6-비스((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 : N₂ 하에, 건조 DCE(2 mL) 중 4-메틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.06 mmol, 1.0당량)의 용액에 AlCl₃(38 mg, 0.30 mmol, 5.0당량) 및 TES(34 mg, 0.30 mmol, 5.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 60℃까지 가열한 다음, 실온까지 냉각시켜 물(10 mL)에 붓고, DCM/MeOH(V:V=20:1, 3 x 10 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(5 mg). LCMS: m/z 467 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 13.15 (s, 1H), 13.10 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 1H), 7.14 (d, 1H), 6.93 (d, 1H), 5.64 (s, 2H), 4.84 (s, 2H), 4.28 (s, 3H).

실시예 8D. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-2-(1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온

단계 A. 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-메탄설포닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트: 무수 MeCN(300 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(7.5 g, 26.4 mmol) 및 K₃PO₄(8.3 g, 39.3 mmol)의 혼합물을 70℃에서 N₂ 하에 1시간 동안 교반하였다. 이어서, MeCN(30 mL) 중 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-(브로모메틸)피리딘-2-일]카르바메이트(11.2 g, 29.0 mmol)의 용액을 첨가하였다. 70℃에서 2.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EA(300 mL X 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물과 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고, 유기상을 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 아세트산에틸)로 정제하여 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-메탄설포닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트를 수득하였다(5.5 g). 확인된 LC-MS (ESI): 591.1 (M+H)⁺.

단계 B. 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트: 무수 THF(200 mL) 중 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(11.9 g, 33.8 mmol)의 교반 혼합물에, -40℃에서 아르곤 하에 LiHMDS(50 mL, THF 중 1 M)를 첨가하였다. 10분 후, 혼합물을 10℃까지 가온시켜 1시간 동안 교반한 다음, 터트-부틸 N-[(터트-부톡시)카르보닐]-N-[6-({4-메탄설포닐-7-메틸-9-옥소-3-티아-5,7,10,11-테트라아자트리시클로[6.4.0.0{2,6}]도데카-1(8),2(6),4,11-테트라엔-10-일}메틸)피리딘-2-일]카르바메이트(9.1 g, 35 mL THF 중 15.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 30분 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH₄Cl에 붓고, EtOAc(200 mL X 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 아세트산 에틸)로 정제하여 터트-부틸(6-((4-메틸-5-옥소-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(6.6g)를 수득하였다. 확인된 LC-MS (ESI): 763.2 (M+H)⁺.

단계 C. 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트: EtOH/AcOH(35 mL / 50 mL) 중 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(6.0 g, 7.86 mmol)의 용액을 Zn(2.55 g, 117.9 mmol)의 존재 하에 격렬하게 교반하면서 40분 동안 50℃까지 가열하였다. 추가의 아연을 40분마다 첨가하였다(2.55 g, 2회, 생성물의 과도한 환원과 부산물을 피하기 위해 TLC/LC-MS에 의해 반응을 모니터링함). 용액을 여과하고 필터 케이크를 DCM으로 세척하였다. 여과물을 부분적으로 증발시키고, 포화 NaHCO₃으로 중화시키고, MgSO₄를 이용해 건조시키고, 진공 하에 용제를 제거하였다. 미정제 생성물을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM:MeOH=40:1)로 정제하여 터트-부틸(6-((4-메틸-5-옥소-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(3.1 g)를 수득하였다. 확인된 LC-MS (ESI): 623.3 (M+H)⁺.

단계 D. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 에탄올(30 mL) 중 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(3.0 g, 4.8 mmol)의 혼합물에 HCl(30 mL, 디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하고, 고형분을 수집하고, 물에 현탁시키고, 10℃에서 수성 NaHCO₃으로 중화시키고 여과하여 원하는 화합물 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(1.5g)을 수득하였다. 확인된 LC-MS (ESI): 393.2 (M+H)⁺. ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.78 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.25 (dd, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 2H), 6.08 (d, 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).

단계 E. 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-(1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트: DMF(2 mL) 중 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-((1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(100 mg, 0.16 mmol)의 용액에 K₂CO₃(88 mg, 0.64 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, 여과에 의해 침전물을 수집하고, 분취-TLC(DCM 중 2% MeOH)로 정제하여 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-트리아졸[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(20 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 637 (M+H)⁺.

단계 F. 6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-2-(1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: EtOH(1 mL) 중 터트-부틸 (6-((4-메틸-5-옥소-2-(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6(5H)-일)메틸)피리딘-2-일)카르바메이트(20 mg, 0.03 mmol)의 용액에 HCl(1 mL, 다이옥산 중 4 mol/L)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하고 냉각하였다. 여과에 의해 침전물을 수집하고, 포화 NaHCO₃으로 중화시키고, 물로 세척하고, 건조시켜 6-((6-아미노피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-2-(1H-피라졸-3-카르보닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 407 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.75 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31-7.22 (m, 1H), 6.31 (d, 1H), 6.14 (d, 1H), 5.91 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).

실시예 8E. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. (6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메탄올: THF(35 mL) 중의, 다이메틸아민 중 (6-클로로피리딘-2-일)메탄올(500 mg, 2.67 mmol)의 용액에 Pd(OAc)₂(78 mg, 0.35 mmol), 잔트포스(170 mg, 0.29 mmol) 및 t-BuONa(385 mg, 4.01 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~35% 아세트산에틸)로 정제하여 (6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메탄올(180 mg)을 수득하였다. LCMS: 153 (M+H)⁺.

단계 B. 6-(클로로메틸)-N,N-다이메틸피리딘-2-아민: DCM(10 mL) 중 (6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메탄올(170 mg, 1.1 mmol)의 교반 혼합물에, 0℃에서 SOCl₂(665 mg, 5.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO₃을 사용해 pH= 7~8로 조정하였다. 그런 다음, 혼합물을 DCM으로 추출하고, 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 6-(클로로메틸)-N,N-다이메틸피리딘-2-아민(70 mg)을 수득하였다. LCMS: 171 (M+H)⁺.

단계 C. N,N-다이메틸-6-((페닐설포닐)메틸)피리딘-2-아민: DMSO(10 mL) 중 6-(클로로메틸)-N,N-다이메틸피리딘-2-아민(500 mg, 2.94 mmol)의 교반 혼합물에, 실온에서 PhSO₂Na(1.44 g, 8.82 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 DCM으로 추출하였다. 혼합물을 물로 세척하고, 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~20% 아세트산에틸)로 정제하여 N,N-다이메틸-6-((페닐설포닐)메틸)피리딘-2-아민(380 mg)을 수득하였다. LCMS: 277 (M+H)⁺.

단계 D. 2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)(페닐설포닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 건조 THF(10 mL) 중, 실시예 8A에서의 화합물 E8-1과 유사하게 합성한 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(180 mg, 0.36 mmol)의 교반 혼합물에, 60℃에서 N₂ 하에 N,N-다이메틸-6-((페닐설포닐)메틸)피리딘-2-아민(120 mg, 0.44 mmol) 및 t-BuOK(122 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 N₂ 하에 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하고, 물과 염수로 세척하였다. Na₂SO₄를 이용해 유기층을 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 분취-TLC(PE:EtOAc=1:1.5)로 정제하여 2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)(페닐설포닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg)을 수득하였다. LCMS: 691 (M+H)⁺.

단계 E. 2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: 실온에서 N₂ 하에, THF(5 mL)와 MeOH(5 mL) 중 2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)(페닐설포닐)메틸)-4-메틸-6-((1-((트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.07 mmol)의 혼합물에, -40℃에서 SmI₂(5 mL, THF 중 0.1 M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 10분 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시켰다. 다음 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(PE/EtOAc = 1/1.5)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(10 mg). LCMS: m/z 551 (M+H)+.

단계 F. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DCM/TFA(2 mL/ 2 mL) 중 2-((6-(다이메틸아미노)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(10 mg, 0.018 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(1.4 mg). LCMS: 421 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.51 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.48 (dd, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.05 (s, 6H).

다음의 화합물을 적절한 출발 물질을 사용해 반응식 E8 및 실시예 8C에 따라 합성하였다. 필요한 경우, 표준 보호 및 탈보호를 사용할 수 있다.

실시예 8F. 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 톨루엔(10 mL) 중 4-메틸-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(360 mg, 1.4 mmol)과 2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에탄올(300 mg, 2.4 mmol)의 혼합물에 CMBP(600 mg, 2.1 mmol)를 첨가하였다.. 반응 혼합물을 110℃에서 N₂ 하에 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(500 mg)을 수득하였다.

LC-MS (ESI): m/z 361 (M+1)⁺.

단계 B. 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: DCM(20 mL) 중 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(600 mg, 1.7 mmol)의 혼합물에 m-CPBA(1.01 g, 5.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO₃과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(600 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 393 (M+1)⁺.

단계 C. 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-((페닐설포닐)(피리딘-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(20 mL) 중 3-((페닐설포닐)메틸)피리딘(300 mg,1.3 mmol)의 혼합물에, 실온에서 LiHMDS(2 mL, 2.0 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 N2 하에 15분 동안 교반한 후, 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg, 0.8 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 110 mg의 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(메틸설포닐)(피리딘-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 546 (M+1)⁺.

단계 D. 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(5 mL)와 MeOH(5 mL) 중 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-((페닐설포닐)(피리딘-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(110 mg, 0.2 mmol)의 용액에 SmI₂(5 mL, THF 중 0.1 M)를 실온에서 첨가하였다. 그런 다음, N₂ 하에 실온에서 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 용액을 물로 켄칭시키고, EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 80~100% EtOAc)로 정제하여 6 mg의 4-메틸-6-(2-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 406 (M+1)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H), 8.52 (d, 2H), 7.84 (d, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 6.04 (d, 1H), 4.58 (s, 2H), 4.48 - 4.30 (m, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.12 - 2.75 (m, 2H).

실시예 8G. 4-메틸-6-(프로프-2-인-1-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DMF(5 mL) 중 4-메틸-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(200 mg, 0.70 mmol)의 혼합물에 t-BuOK(157mg, 1.4mmol), 이어서 3-브로모프로프-1-인(0.12 mL, 1.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 현탁액을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 60 mg의 4-메틸-2-(메틸설포닐)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 323 (M+H)⁺.

단계 B. 4-메틸-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(5 mL) 중 4-메틸-2-(메틸술포닐)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg, 0.18 mmol)과 2-((페닐설포닐)메틸)피리딘(87 mg, 0.37 mmol)의 혼합물에 t-BuOK(63 mg, 0.57 mmol)을 첨가하였다. 질소 하에 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(용리제: 석유 에테르 중 70% EtOAc)로 정제하여 50 mg의 4-메틸-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 476 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-6-(프로프-2-인-1-일)-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF/MeOH(4 mL, 1:1) 중 4-메틸-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-6-(프로프-2-인-1-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.11 mmol)의 용액에, -70℃에서 질소 분위기 하에 SmI₂(4.2 mL, THF 중 0.1 M)를 첨가하였다. 실온에서 5분 동안 교반한 다음, 반응물을 물로 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NH₄Cl로 세척하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 5 mg의 4-메틸-6-(프로프-2-인-1일)-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 336 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 - 8.52 (m, 2H), 7.81 (td, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.33 (dd, 1H), 4.93 (d, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.27 (t, 1H).

실시예 8H. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-에틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 에틸 4-에틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: DMF(5 mL) 중 에틸 2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(500 mg, 2.06 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃(856 mg, 6.19 mmol)을 첨가하였다. 70℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, EtI(483 mg, 3.10 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 4-에틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 271 (M+1)⁺.

단계 B. 에틸 4-에틸-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: POCl₃(3.6 ml)과 PhNMeCHO(5 mL)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, DCE(10 mL) 중 에틸 4-에틸-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg, 1.48 mmol)의 용액에 첨가하였다. 100℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 4-에틸-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 299 (M+1)⁺.

단계 C. 6-벤질-4-에틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: AcOH(4 mL) 중 4-에틸-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg, 1.34 mmol)의 혼합물에 벤질히드라진 다이하이드로클로라이드(260 mg, 1.34 mmol)를 N₂ 하에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 250 mg의 6-벤질-4-에틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 357 (M+1)⁺.

단계 D. 6-벤질-4-에틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: DCM(5 mL) 중 6-벤질-4-에틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(250 mg, 0.70 mmol)의 혼합물에 mCPBA(657.5 mg, 3.8 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 1.5시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 6-벤질-4-에틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(90 mg)을 수득하였다. LC-MS: m/z 389 (M+1)⁺.

단계 E. 6-벤질-4-에틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: THF(3 mL) 중 6-벤질-4-에틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(90 mg, 0.23 mmol)과 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(123 mg, 0.35 mmol)의 혼합물에, N₂ 하에 실온에서 KO ^t Bu(85 mg, 0.76 mmol)를 첨가하였다. 30분 동안 실온에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 6-벤질-4-에틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다(140 mg, 92.2% 수율). LC-MS: m/z 661 (M+1)⁺.

단계 F. 6-벤질-4-에틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: EtOH(2 mL)과 DCE(1 mL) 중 6-벤질-4-에틸-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(140 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 아세트산(0.2 mL, 2.8 mmol)과 아연(360 mg, 5.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 30 mg의 6-벤질-4-에틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 521 (M+1)⁺.

단계 G. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-에틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: DCM(4 mL) 중 6-벤질-4-에틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(30 mg, 0.06 mmol)의 혼합물에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 실온에서 1.5시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 20% MeOH)로 정제하여 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-에틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(5 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 391 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.42 - 7.11 (m, 5H), 6.27 (d, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.78 (q, 2H), 4.48 (s, 2H), 1.44 (t, 3H).

실시예 8I. 6-벤질-4-페닐-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: 다이옥산(5 mL) 중 에틸 2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg, 1.7 mmol) 및 PhI(265 mg, 2.55 mmol)의 혼합물에, Cs₂CO₃(1.1 g, 3.4 mmol)에 이어서 CuI(65 mg, 0.34 mmol) 및 (1R,2R)-N1,N2-다이메틸시클로헥산-1,2-다이아민(48 mg, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~10% EtOAc)로 정제하여 에틸 2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 319 (M+1)⁺.

단계 B. 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: DCE(5 mL) 중 PhNMeCHO(1.5 mL)의 용액에 POCl₃(1.2 mL, 12.5 mmol)을 0℃미만의 온도에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그런 다음, 에틸 2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(400 mg, 1.25 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO₃으로 켄칭시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(280 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 347 (M+1)⁺.

단계 C. 6-벤질-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: AcOH(6.0 mL) 중 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(280 mg, 0.81 mmol)의 혼합물에 벤질히드라진 다이하이드로클로라이드(468 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~70% EtOAc)로 정제하여 100 mg의 6-벤질-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 405 (M+1)⁺.

단계 D. 6-벤질-2-(메틸설포닐)-4-페닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(5 mL) 중 6-벤질-2-(메틸티오)-4-페닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.25 mmol)의 용액에 mCPBA(151 mg, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 Na₂S₂O₃로 켄칭시키고, DCM으로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~100% EtOAc)로 정제하여 6-벤질-2-(메틸설포닐)-4-페닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 437 (M+1)⁺.

단계 E. 6-벤질-4-페닐-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 건조 DMF(5 mL) 중 6-벤질-4-페닐-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(60 mg, 0.14 mmol)과 2-((페닐설포닐)메틸)피리딘(50 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 n-BuOK(31 mg, 0.28 mmol)를 N₂ 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 포화 NH₄Cl에 부었다. 다음 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(석유 에테르/EtOAc=1/4)로 정제하여 40 mg의 6-벤질-4-페닐-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 590 (M+1)⁺.

단계 F. 6-벤질-4-페닐-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(1.5 mL)와 MeOH(1.5 mL) 중 6-벤질-4-페닐-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.05 mmol)의 혼합물에 SmI₂(2.5 mL, THF 중 0.1 M)을 -78℃에서 N₂ 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반한 다음, 물로 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 HPLC로 정제하여 6-벤질-4-페닐-2-(피리딘-2-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(5 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 450 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.67 (s, 1H), 8.56 (d, 1H), 7.82-7.76 (m, 1H), 7.59-7.45 (m, 6H), 7.34-7.23 (m, 6H), 5.32 (s, 2H), 4.63 (s, 2H).

실시예 8J. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이벤질-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 4-벤질-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: DMF(3 mL) 중 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(300 mg, 1.1 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃(460mg, 3.3mmol)을 첨가하였다. 70℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, BnBr(0.2 mL, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 4-벤질-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(370 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 361 (M+1)⁺.

단계 B. 4,6-디벤질-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: AcOH(4 mL) 중 에틸 4-벤질-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(370 mg, 1.0 mmol)의 혼합물에 벤질히드라진 다이하이드로클로라이드(390 mg, 2.0 mmol)를 N₂ 하에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 4,6-다이벤질-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(320 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 419 (M+1)⁺.

단계 C. 4,6-다이벤질-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(5 mL) 중 4,6-다이벤질-2-(메틸티오)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(320 mg, 0.76 mmol)의 혼합물에 mCPBA(657.5 mg, 3.2 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 Na₂S₂O₃로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 4,6-다이벤질-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(170 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 451 (M+1)⁺.

단계 D. 4,6-다이벤질-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(3 mL) 중 4,6-다이벤질-2-(메틸설포닐)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(170 mg, 0.38 mmol) 및 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(160 mg, 0.46 mmol)의 혼합물에 KO ^t Bu(85 mg, 0.76 mmol)를 N₂하에 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 4,6-다이벤질-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(200 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 723 (M+1)⁺.

단계 E. 4,6-다이벤질-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: EtOH(2 mL) 및 DCE(1 ml) 중 6-((4-아미노피리미딘-2-일)메틸)-4-메틸-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(200 mg, 0.28 mmol)의 혼합물에 아세트산(0.2 mL, 2.8 mmol) 및 아연(360 mg, 5.5 mmol)을 첨가하였다. 100℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 아세트산에틸)로 정제하여 4,6-다이벤질-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(120 mg)을 수득하였다. LC-MS : m/z 583 (M+1)⁺.

단계 F. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이벤질-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-1의 합성: DCM(4 mL) 중 4,6-다이벤질-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(120 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 20% MeOH)로 정제하여 9 mg의 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이벤질-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 453 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.78 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.42 - 7.04 (m, 10H), 6.25 (d, 1H), 5.98 (s, 2H), 5.37 (s, 2H), 4.48 (s, 2H).

실시예 8K. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-시클로프로필-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 에틸 4-시클로프로필-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: DCE(10 mL) 중 시클로프로필보론산(687 mg, 8 mmol) 및 에틸 2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(970 mg, 4 mmol)의 현탁액에 Na₂CO₃(848 mg, 8 mmol)에 이어서 Cu(OAc)₂(727 mg, 4 mmol) 및 바이피리딘(625 mg, 4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 공기 하에 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온꺼자 냉각시키고, 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 4-시클로프로필-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1.0 g, 88.5% 수율)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 283 (M+1)⁺.

단계 B. 에틸 4-시클로프로필-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: POCl₃(8.6 mL)과 PhNMeCHO(12 mL)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, DCE(10 mL) 중 에틸 4-시클로프로필--2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1.0 g, 3.54 mmol)의 용액에 첨가하였다. 100℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 4-시클로프로필-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(620 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 311 (M+1)⁺.

단계 C. 6-벤질-4-시클로프로필-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: AcOH(4 mL) 중 4-에틸-6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(620 mg, 2 mmol)의 혼합물에 벤질히드라진 다이하이드로클로라이드(390 mg, 2 mmol)을 N₂ 하에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 6-벤질-4-에틸-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(320 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 369 (M+1)⁺.

단계 D. 6-벤질-4-시클로프로필-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: DCM(5 mL) 중 6-벤질-4-시클로프로필-2-(메틸티오)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(320 mg, 0.87 mmol)의 혼합물에 mCPBA(704 mg, 3.5 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 Na₂S₂O₃로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 110 mg의 6-벤질-4-시클로프로필-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 401 (M+1)⁺.

단계 E. 6-벤질-4-시클로프로필-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: THF(3 mL) 중 6-벤질-4-에틸-2-(메틸설포닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(110 mg, 0.27 mmol) 및 3-((페닐설포닐)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(123 mg, 0.35 mmol)의 혼합물에 KO ^t Bu(85 mg, 0.76 mmol)을 N₂ 하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 100 mg의 6-벤질-4-시클로프로필-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 673 (M+1)⁺.

단계 F. 6-벤질-4-시클로프로필-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: MeOH(3 mL) 및 THF(3 mL) 중 6-벤질-4-시클로프로필-2-((페닐설포닐)(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(100 mg, 0.15 mmol)의 혼합물에 SmI₂(4.5 ml, 0.45 mmol)를 -60℃에서 N₂ 하에 첨가하였다. 혼합물을 -60℃에서 10분 동안 교반하고, H₂O로 켄칭시키고 EtOAc로 2회 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 40 mg의 6-벤질-4-시클로프로필-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS: m/z 533 (M+1)⁺.

단계 G. 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-시클로프로필-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: DCM(4 mL) 중 6-벤질-4-시클로프로필-2-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온(40 mg, 0.07 mmol)의 혼합물에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 여액을 분취-TLC(DCM 중 20% MeOH)로 정제하여 5 mg의 2-((1H-피라졸-3-일)메틸)-6-벤질-4-시클로프로필-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 403 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.77 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.35 - 7.23 (m, 5H), 6.26 (d, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.19 (tt, 1H), 1.40 (td, 2H), 1.15 (td, 2H).

실시예 8L. 4-메틸-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(2-(피리딘-3-일)에틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 에틸 6-(히드록시메틸)-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: MeOH(20 mL) 중 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1.3 g, 4.8 mmol)의 용액에 NaBH₄(274 mg, 7.2 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 반응 용액을 EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~10% MeOH), 에틸 6-(히드록시메틸)-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1g)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 273(M+1)⁺.

단계 B. 에틸 6-(히드록시메틸)-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: 다이옥산(30 mL) 중 에틸 6-(히드록시메틸)-2-(메틸티오)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1 g, 3.7 mmol) 및 2-브로모티아졸(3 g, 18.4 mmol)의 용액에 Cs₂CO₃(3 g, 9.2 mmol)에 이어서 CuI(700 mg, 3.7 mmol) 및 N¹,N²-다이메틸시클로헥산-1,2-다이아민(520 mg, 3.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 N₂ 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 30~50% EtOAc)로 정제하여 에틸 6-(히드록시메틸)-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1 g)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 356(M+1)⁺.

단계 C. 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트의 합성: DCM(20 mL) 중 에틸 6-(히이드록시메틸)-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(1 g, 2.8 mmol)의 용액에 데스-마틴(1.3 g, 3.4 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO₃과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 20~30% EtOAc)로 정제하여 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(800 mg)를 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 354 (M+1)⁺.

단계 D. 6-벤질-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: AcOH(10 mL) 중 에틸 6-포르밀-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-피롤로[2,3-d]티아졸-5-카르복실레이트(800 mg, 2.3 mmol)의 용액에 벤질히드라진 다이하이드로클로라이드(449 mg, 2.3 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 1 M 수성 NaOH로 중화시키고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~5% MeOH)로 정제하여 6-벤질-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 412 (M+1)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.40 - 7.15 (m, 5H), 5.31 (s, 2H), 2.76 (s, 3H).

단계 E. 6-벤질-2-(메틸설포닐)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: MeOH(5 mL) 및 THF(5 mL) 중 6-벤질-2-(메틸티오)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(300 mg, 0.73 mmol)의 혼합물에 H₂O(5 mL) 중 옥손(2.2 g, 3.6 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO₃과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~5% MeOH)로 정제하여 6-벤질-2-(메틸설포닐)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(260 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 444 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.40 - 7.18 (m, 5H), 5.35 (s, 2H), 3.53 (s, 3H).

단계 F. 6-벤질-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(3 mL) 중 2-((페닐설포닐)메틸)피리딘(120 mg, 0.51 mmol)의 교반 용액에 LiHMDS(0.7 mL, 0.7 mmol)를 0℃에서 N₂ 분위기 하에 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, THF(3 mL) 중 6-벤질-2-(메틸설포닐)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(150 mg, 0.34 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~5% MeOH)로 정제하여 6-벤질-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 597 (M+1)⁺.

단계 G. 6-벤질-2-(피리딘-2-일메틸)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: AcOH(5 mL) 중 6-벤질-2-((페닐설포닐)(피리딘-2-일)메틸)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.17 mmol)의 용액에 Zn(110 mg, 1.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO₃과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 여액을 분취-TLC(석유 에테르 중 65% EtOAc)로 정제하여 5 mg의 6-벤질-2-(피리딘-2-일메틸)-4-(티아졸-2-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 457 (M+1)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (s, 1H), 8.61 (d,1H), 7.98 (d, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 7.35-7.23 (m, 5H), 5.32 (s, 2H), 4.70 (s, 2H).

실시예 9. 화합물 E9-vi 및 E9-vii의 합성

반응식 E9

화합물 E9-iv는 반응식 9에서 2가지 접근법 (i) 및 (ii)로 합성할 수 있다. 접근법 (i)의 경우, 화합물 E9-ii는 실시예 7 또는 실시예 8에 나타난 바와 같이, 알킬화 반응을 통해 화합물 E9-i로부터 합성될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, X^a는 이탈기(예: Br, I, OM, 또는 OT)이다. 화합물 E9-ii와 LiHMDS 및 DMF와의 포르밀화 반응을 통해 중간체 E9-iii을 수득한다. E9-iii을 환원제(예: NAbH₄)와 반응시켜 화합물 E9-iv를 수득한다. 대안적으로 접근법 (ii)에서, 화합물 E9-i의 할로겐화로 화합물 E9-ix를 생성한다. 화합물 E9-ix가 Stille 반응, 오존 분해(ozonolysis), 및 환원을 거치면 화합물 E9-x가 수득된다. E9-viii로 화합물 E9-x를 알킬화하여 화합물 E9-iv를 수득할 수 있다. 반응식 9, (iii)에서, 화합물 E9-iv의 할로겐화를 통해 중간체 E9-v를 수득한다(X^b는 Cl 또는 Br과 같은 할로겐임). 유기 주석, 붕소, 아연 또는 마그네슘과 화합물 E9-vi의 금속(예: Pd 또는 Cu) 촉매 결합을 통해 화합물 E9-vi를 수득한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 화합물 E9-v를 헤테로고리에서의 질소와 같은 일부 친핵체와도 반응시켜 생성물 E9-vii를 수득할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, M은 유기 금속 복합체(예: 보론산 또는 피나코 보론 복합체; -Sn(Bu) ^t )₃와 같은 유기주석 복합체; -Zn(할로겐)과 같은 유기아연 복합체)이고; Ar₁ 및 Ar₂는 각각 독립적으로 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 임의 치환된 탄소고리 또는 임의 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 구현예에서, Ar₁ 및 Ar₂는 각각 독립적으로 임의 치환된 헤테로아릴이다.

실시예 9A. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(티아졸-4-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드의 합성 : 건조 THF(30 mL) 중 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(2.6 g, 5.57 mmol, 1당량)의 혼합물에 LiHMDS(1 M, 11.14 mL, 2.0당량)를 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음, DMF(2.04 g, 27.86 mmol, 2.14 mL, 5.0당량)를 위 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EA=2:1, UV=254 nm)는 하나의 주요 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 혼합물을 차가운 포화 NH₄Cl(20 mL)에 부었다. 그런 다음, 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(40 mL x 3). 유기층을 물(20 mL x 3)로 세척하고, 진공 중에 농축시켜 원하는 생성물(2.6 g, 미정제)을 수득하였다. LCMS: m/z 495.2 [M+H]⁺

단계 B. 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(10 mL) 및 MeOH(10 mL) 중 미정제 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드(1.0 g, 2.02 mmol, 1당량)의 혼합물에 NaBH₄(152.97 mg, 4.04 mmol, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 14시간 동안 교반하였다. TLC(DCM:MeOH=10:1, UV=254 nm)는 출발 물질이 완전히 소모되었고 하나의 주요 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 물(20 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭시키고, EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기상을 진공에서 농축시켰다. 여액을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피(ISCO®; 40 g SepaFlash® 실리카 플래쉬 컬럼, 용리액: 0~5% MeOH/DCM @ 30 mL/분)로 정제하였다. 용리액을 진공에서 농축시켜 원하는 생성물(382 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 497.1 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.61 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.05 (d,), 6.36 (t, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.68 (s, 2H), 4.89 (d, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.50 (t, 2H), 0.78 (t, 2H), -0.12 (s, 9H).

단계 C. 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시))메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(5 mL) 중 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(150.0 mg, 302.02 umol, 1당량) 및 Et₃N(61.12 mg, 604.04 umol, 84.08 uL, 2.0 당량)의 혼합물에 4-메틸벤젠설포닐 클로라이드(75.0 mg, 393.40 umol, 1.30당량)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 5시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EA=4:1, UV=254 nm)는 출발 물질을 완전히 소모되었음을 보여주었다. 물(10 mL) 및 DCM(20 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 진공에서 농축시켜 황색 검(0.1g)을 수득하였다. 여액을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피(ISCO®; 4 g SepaFlash® 실리카 플래쉬 컬럼, 용리액: 석유 에테르 중 0~20% 아세트산에틸의 구배 @ 30 mL/분)로 정제하였다. 원하는 분획을 진공에서 농축시켜 원하는 생성물(40.0 mg, 76.88 umol)을 수득하였다. LCMS: m/z 515.1 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.27 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (dd, 1 H), 7.25 (s, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.40 (s, 3H), 3.50-3.57 (m, 2H), 0.84-0.90 (m, 2H), -0.09 to -0.06 (m, 9H).

단계 D. 4-메틸-2-(티아졸-4-일메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성: 톨루엔(4 mL) 중 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.97 mmol) 및 4-(트리부틸스탄닐)티아졸(114 mg, 2.91 mmol)의 용액에 Pd(PPh₃)₄(402 mg，2.91 mmol)을 첨가하였다. 그런 다음, 혼합물을 MW 반응기에서 N₂ 하에 30분 동안 120℃까지 가열하였다. 용액을 물에 붓고, EtOAc로 추출하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다. 유기층을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르 중 0~50% 아세트산에틸)로 정제하여 4-메틸-2-(티아졸-4-일메틸)-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-인(화합물 E9-4)을 수득하였다(30 mg). LCMS: 564 (M+H)⁺.

단계 E. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-2-(티아졸-4-일메틸)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성 : 실온에서 N₂ 하에, DCM(3 mL) 중 화합물 E9-4(30 mg, 0.05 mmol)의 혼합물에 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취 -HPLC(C18, 0.1% 포름산이 포함된 H₂O 중 0~90% 아세토니트릴)로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다(3.9 mg). LCMS: 434 (M+H)⁺ _. ¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.12 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).

실시예 9B. 2-((1H-이미다졸-1-일)메틸)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 2-((1H-이미다졸-1-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(0.3 mL) 중 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(25.0 mg, 48.53 umol, 1당량) 및 KI(8.06 mg, 48.53 umol, 1당량)의 혼합물에 이미다졸(33.04 mg, 485.34 umol, 10.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃까지 가온하고, 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. LCMS는, 원하는 생성물이 생성되었고 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 또 다른 회분(25 mg)과 조합하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켜 황색 미정제 검(50.0 mg)을 수득하였다. 생성물은 아무런 정제 없이 다음 단계 반응에 사용될 것이다. LCMS: m/z 547.2 [M+H]^+.

단계 B. 2-((1H-이미다졸-1-일)메틸)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 다이옥산(1 mL) 중 2-((1H-이미다졸-1-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50.0 mg, 64.02 umol, 1당량)의 용액에 HCl/다이옥산(4 M, 2 mL, 124.96당량)과 2방울의 물을 첨가하였다. 혼합물을 30 ℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC(PE: EA=1:1, UV=254 nm)는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 혼합물을 진공에서 농축시켜 황색 검(0.2 g)을 수득하고, 이를 분취 HPLC(염기성)로 정제하여 표제 생성물(4.0 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 417.0 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 8.43 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.43-7.49(m, 1H), 7.29-7.36(m, 2H), 7.12(d, 1H), 7.04(s, H), 5.74(s, 2H), 5.73 (s, 2H), 4.34 (s, 3H).

실시예 9C. 4-메틸-2-(피리딘-2-일메틸)-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온: -78℃에서 THF(10 mL) 중 4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(640 mg, 2.15 mmol)의 혼합물에 LiHMDS(4.3 mL, THF 중 1M)를 첨가하였다. 30분 후, 건조 DMF(0.84 mL, 10.8 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 출발 물질이 완전히 소모된 후, EtOH(4 mL) 중 NaBH₄(164 mg, 4.3 mmol)의 혼합물을 첨가하고, 5분 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~5% MeOH)로 정제하여 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(220 mg)을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 328 (M+H)⁺.

단계 B. 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(5 mL) 중 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(100 mg, 0.31 mmol)의 혼합물에 Et₃N(0.43 mL, 3.1 mmol) 및 MsCl(0.12 mL, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 포화 NH₄Cl(수성)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, PE 중 0~50% EtOAc)로 정제하여 65 mg의 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 346 (M+H)⁺.

단계 C. 4-메틸-2-(피리딘-2-일메틸)-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 질소 하에, 톨루엔(3 mL) 중 2-(클로로메틸)-4-메틸-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(50 mg, 0.14 mmol)및 2-(트리부틸스탄닐)피리딘(0.14 mL, 0.43 mmol)의 혼합물에 Pd(PPh₃)₄(17 mg, 0.014 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 여액을 분취-TLC(용리액: DCM 중 10% MeOH)로 정제하여 2 mg의 4-메틸-2-(피리딘-2-일메틸)-6-(피리딘-3-일메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 389 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (m, 3H), 8.48 (dd, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.25 (s, 3H).

실시예 9D. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-((4H-1,2,4-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-2-카르브알데히드의 합성: DCM(500 mL) 중 1H-피라졸-3-카르브알데히드(10.0 g, 104.07 mmol, 1당량) 및 DIPEA(33.63 g, 260.18 mmol, 45.32 mL, 2.5당량)의 현탁액에 2-(클로로메톡시)에틸-트리메틸-실란(26.03 g, 156.11 mmol, 27.63 mL, 1.5당량)을 -40℃에서 적가하였다. 그런 다음, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 16시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 5:1)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고, 2개의 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 여액을 또 다른 2개의 회분(각각 10.0g)와 조합하고, 콤비플래시(석유 에테르의 100% 내지 석유 에테르 중 40% EtOAc)로 정제하여 원하는 생성물 60.0g 을 수득하였다(참고: 2가지 구조적 이성질체의 약 5/4비율의 혼합물). ¹H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 10.06 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.56 (s, 2H), 3.61-3.67 (m, 4H), 0.91-1.01 (m, 4H), -0.09-0.05 (m, 18H).

단계 B. (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메탄올의 합성: THF(200 mL)/MeOH(100 mL) 중 1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-카르브알데히드(30 g, 132.54 mmol, 1당량, 2개의 구조적 이성질체의 약 5/4 비율의 혼합물)의 용액에 NaBH₄(7.52 g, 198.81 mmol, 1.50당량)을 0℃에서 여러 번 나눠서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃내지 실온에서 18시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 2:1)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고, 2개의 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 용제를 진공에서 농축시켰다. 여액을 콤비플래시(석유 에테르의 100% 내지 EtOAc의 100%)로 정제하여 25 g의 원하는 생성물을 수득하였다. (참고: 2개의 구조적 이성질체 약 ~3/2 비율의 혼합물). ¹H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 7.55 (d, 1H), 7.47 (brs, 1H), 6.36 (d, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.74-4.76 (m, 4H), 3.55-3.60 (m, 4H), 0.85-0.96 (m, 4H), 0.00-0.06 (m, 18H).

단계 C. 3-(브로모메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸의 합성: DCM(200 mL) 중 (1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메탄올(23 g, 100.72 mmol, 1당량, 2개의 구조적 이성질체의 약 3/2 비율의 혼합물) 및 PPh₃(36.98 g, 141.00 mmol, 1.4당량)의 용액에 CBr₄(46.76 g, 141.00 mmol, 1.4당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 5:1)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고, 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 여액을 또 다른 회분(2.0 g)과 조합하고, 콤비플래시(석유 에테르의 100% 내지 석유 에테르 중 50% EtOAc)로 정제하여 원하는 생성물 22.0 g(75.53 mmol)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 7.51 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.52-3.57 (m, 2H), 0.86-0.96 (m, 2H), -0.03-0.02 (m, 9H).

단계 D. 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DMF(15 mL) 중 4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(1.0 g, 4.85 mmol, 1당량), 3-(브로모메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸(2.12 g, 7.27 mmol, 1.5당량), K₃PO₄(2.57 g, 12.12 mmol, 2.5당량) 및 NaI(218.05 mg, 1.45 mmol, 0.3당량)의 현탁액을 60℃에서 N₂ 하에 18시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 1:1)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고, 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 또 다른 3개의 회분(각각 1.0g)과 조합하고, 얼음물(250 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(150 mL x 3). 합쳐진 유기층을 물(120 mL x 2)과 염수(120 mL)로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다 용제를 진공에서 농축시켰다. 미정제 생성물을 콤비플래시(석유 에테르의 100% 내지 석유 에테르 중 EtOA 80%)로 정제하여 원하는 생성물(3.6g)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.91 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.40 (m, 2H), 4.45 (s, 3 H), 3.52-3.58 (m, 2H), 0.85-0.90 (m, 2H), -0.05 (s, 9H).

단계 E. 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드의 합성: 아르곤 하에, THF(30 mL) 중 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(1.7 g, 4.09 mmol, 1당량)의 용액에 LiHMDS(1.0 M, 8.18 mL, 2당량)을 -78℃에서 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음, THF(3 mL) 중 DMF(1.49 g, 20.45 mmol, 1.57 mL, 5당량)의 용액을 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르: EtOAc = 1:1)는 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 0℃에서 수성 NH₄Cl(50 mL)에 적가한 다음, 혼합물을 EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다 용제를 진공에서 제거하여 원하는 미정제 생성물(1.8 g)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

단계 F. 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: THF(20 mL)와 MeOH(10 mL) 중 4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드(1.8 g, 3.24 mmol, 1당량)의 용액에 NaBH₄(245.08 mg, 6.48 mmol, 2당량)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 1:2)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고 새로운 스폿이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 콤비플래시(100% DCM 내지 DCM 중 5% MeOH)로 정제하였다. 원하는 생성물(1.1g)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.63 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 6.44 (t, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.40-5.42 (m, 4H), 4.98 (d, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.55-3.61 (m, 2H), 0.86-0.91 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).

단계 G. (4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-일)메틸 메탄술포네이트의 합성: DCM(15 mL) 중 2-(히드록시메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(700 mg, 1.57 mmol, 1당량) 및 Et₃(317.21 mg, 3.13 mmol, 436.33 uL, 2.0당량)의 용액에 MsCl(269.32 mg, 2.35 mmol, 181.97 uL, 1.5당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 1:1)는, 출발 물질이 완전히 소모되었고, 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 EtOAc(80 mL)로 희석하고, 물(30 mL x 4)과 염수(40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다. 용제를 진공에서 제거하여 미정제 생성물(700 mg)을 수득하였다. LCMS: (m/z 525.5(M+H).

단계 H. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 2-((4H-1,2,4-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: MeCN(8 mL) 중 (4-메틸-5-옥소-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[5,3-d]피리다진-2-일)메틸 메탄술포네이트(150 mg, 285.88 umol, 1당량), 1H-1,2,4-트리아졸(197.45 mg, 2.86 mmol, 10당량), 및 CsF(86.85 mg, 571.77 umol, 21.08 uL, 2당량)의 혼합물을 60℃에서 N₂ 하에 18시간 동안 교반하였다. LCMS는, 출발 물질이 완전히 소모되었고 2개의 새로운 피크가 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 콤비플래시(DCM 100% 내지 DCM 중 8% DCM)로 정제하였다. 생성물 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(55 mg) 및 2-((4H-1,2,4-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg)을 수득하였다.

단계 I. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(3 mL) 중 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(55 mg, 110.52 umol, 1당량) 및 HCl/다이옥산(4 M, 1 mL, 36.19당량)의 현탁액에 H₂O(1.99 mg, 110.52 umol, 0.05 mL, 1당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. LCMS는, 출발 물질이 완전히 소모되었고 원하는 생성물의 84%가 발견되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 생성물(24.1 mg, 65.60 umol, 59.35% 수율)을 수득하였다. 컬럼: Xtimate C18 150*25mm*5um, 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 13%-43%, 11.2분 LCMS: m/z 367.9(M+H)^{+ 1}H NMR (400 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 8.72 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.52 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.30 (s, 3H).

단계 J. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-((4H-1,2,4-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(3 mL) 중 2-((4H-1,2,4-트리아졸-4-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 60.28 umol, 1당량) 및 HCl/다이옥산(4 M, 1 mL, 66.35당량)의 현탁액에 H₂O (50.00 mg, 2.78 mmol, 0.05 mL, 46.04당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 완전히 소모되었고 원하는 생성물이 발견되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 산물(2.1 mg, 5.72 umol)을 수득하였다. 컬럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN];B%: 13%-43%, 11.2분 LCMS: m/z 368.0(M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 8.74 (s, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.31 (s, 3H).

다음 화합물을 적절한 출발 물질을 사용해 반응식 E9 및 실시예 9A-9B의 절차에 따라 합성하였다.

실시예 9E. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-아미노피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-클로로-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 건조 THF(80 mL) 중 4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(3 g, 14.5 mmol)의 혼합물에 LiHMDS(30.5 mL)를 -65℃에서 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 건조 THF(20 mL) 중 헥사클로로에탄(1.8 mL, 16 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간에 걸쳐 -20℃까지 가온시켰다. 그런 다음, 혼합물을 포화 NH₄Cl로 켄칭시키고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. 여과에 의해 침전물을 수집하고 EtOAc로 세척하여 3.5 g의 2-클로로-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 241 (M+H)⁺.

단계 B. 4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 질소 하에, DMF(30 mL) 중 2-클로로-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(1.5 g, 6.2 mmol) 및 트리부틸(에테닐)스탄난(5.5 mL, 18.7 mmol)의 혼합물에 Pd(PPh₃)₄(0.36 g, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~10% MeOH)로 정제하여 1.4 g의 4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 233 (M+H)+^.

단계 C. 4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드의 합성: -60℃ 아래에서, DCM/MecN(500 mL, 1:1 부피) 중 4-메틸-2-비닐-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(500 mg, 2.15 mmol)의 혼합물을 O₃으로　２０분　동안　퍼징하였다．그런 다음, 반응물을 다이메틸설판으로　켄칭시키고，　농축시켜 4－메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드를　수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 235 (M+H)⁺.

단계　D. 2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의　합성: EtOH(3 ｍＬ) 중 4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르브알데히드(500 mg, 2.13 mmol)의 혼합물에 NａＢＨ₄(81 mg, 2.13 mmol)을　０℃에서　첨가하였다．반응물을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, 현탁액을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~８% MeOH)로 정제하여 1２０　ｍｇ의 2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 237 (M+H)⁺.

단계 E. 6-((2-클로로피리미딘-4-일)메틸)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의　합성: DMF(8 ｍＬ) 중 2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(200 mg, 0.85 mmol)의 혼합물에　Ｋ₂CO₃(351 mg, 2.54 mmol)을　첨가하였다. ６0℃에서 30분 동안 교반한 후, DMF(2 mL) 중 ２-클로로－４－(클로로메틸)피리미딘(２７6 mg, １．７　mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 ４시간 동안 추가로　교반한 다음, 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, DCM 중 0~８% MeOH)로 정제하여 1６０　ｍｇ의 ６-(（２－클로로피리미딘－４－일）메틸)-２-（히드록시메틸）－４－메틸－4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 363 (M+H)⁺.

단계　F. 6-((2-(비스(2,4-디메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의　합성: MecN(5 ｍＬ) 중 6-((2-클로로피리미딘-4-일)메틸)-2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(160 mg, 0.44 mmol)의 혼합물에 비스(2,4-디메톡시벤질)아민(280 mg, 0.88 mmol)과　AcOH(1 방울)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 ８0℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고，　여액을　분취-TLC(용리제: DCM 중 5% MeOH)로　정제하여 ７５　ｍｇ의　6-((2-(비스(2,4-디메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 644 (M+H)⁺.

단계 G. 6-((2-(비스(2,4-디메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(클로로메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의　합성: 0℃　아래에서，　DCM(5 ｍＬ)　중 6-((2-(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(히드록시메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피리다진[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(75 mg, 0.12 mmol)의 용액에 Et₃N(0.16 ｍＬ, 1.16 mmol) 및 MsCl(0.05 mL, 0.58 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서　밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 포화 NH₄Cl과 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켜 70 mg의 미정제 생성물인 6-((2-(비스(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(클로로메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 662 (M+H)+^.

단계 H. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-(비스(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DMF(3 mL) 중 4H-1,2,4-트리아졸(39 mg, 0.57 mmol) 및 K₂CO₃(78 mg, 0.57 mmol)의 혼합물을 60℃에서 30분 동안 교반하였다. 6-((2-(비스(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-2-(클로로메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(75 mg, 0.11 mmol)을 첨가하고 30분 동안 추가로 교반하였다. 현탁액을 포화 NH₄Cl에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, MeOH 중 0~10% DCM)로 정제하여 60 mg의 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-(비스(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 695 (M+H)⁺.

단계 I. 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-아미노피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: EtOH(2 mL) 중 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-(비스(2,4-다이메톡시벤질)아미노)피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(30 mg, 0.043 mmol)의 혼합물에 HCl(0.5 mL, 다이옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 ８0℃에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 포화 NaHCO₃에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 8 mg의 2-((1H-1,2,4-트리아졸-1-일)메틸)-6-((2-아미노피리미딘-4-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 수득하였다. LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.12-8.10 (m, 2H), 6.60 (s, 2H), 6.19 (d, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).

실시예 10. 화합물 E10-ii의 합성

반응식 E10

반응식 E10에 나타낸 바와 같이, 염기(예: LiHMDS)의 존재 하에 E10-i를 알데히드와 반응시켜 화합물 E10-ii를 생성하는데, 키랄 HPLC 또는 SFC로 이를 분리하면 2개의 거울상 이성질체를 수득할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 할로알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴이다.

실시예 10A. (S)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온 및 (R)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 2-(히드록시(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 아르곤 하에, THF(15 mL) 중 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(0.5 g, 1.07 mmol, 1당량)의 용액에 LiHMDS(1.0 M, 2.14 mL, 2.0당량)를 -78℃에서 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음, THF(2 mL) 중 1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)피라졸-3-카르브알데히드(1.21 g, 5.36 mmol, 5당량)를 반응 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 2:1)는 2개의 새로운 스팟을 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 수성 NH₄Cl(15 mL)로 -70℃에서 켄칭시키고, 물(20 mL)로 희석하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다(20 mL x 3). 합쳐진 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다 용제를 진공에서 농축시켰다. 여액을 콤비플래시(석유 에테르의 100% 내지 EtOAc의 100%)로 정제하여 원하는 생성물(70 mL, 101.01 umol)을 수득하였다. LCMS: m/z 693.2(M+H)⁺

단계 B. 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(3 mL) 중 2-(히드록시(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(0.04 g, 57.72 umol, 1당량)의 용액에 TFA(65.82 mg, 577.22 umol, 42.74 uL, 10당량)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 완전히 소모되었고 원하는 생성물의 57%가 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 산물(11 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 432.9 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 13.10 (brs, 2H), 8.58 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.26 (dd, 1H), 6.93 (d, 2H), 6.19 (d, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.20 (s, 3H).

단계 C. (S)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 (R)-6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 화합물 6-((1H-인다졸-4-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 SFC에 의해 분리하였다. SFC 조건: 칼럼은 DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm, 5um)이고; 이동상: A: 55%의 CO2; B: 45%의 [EtOH 중 0.1% NH₃H₂O]/분이다. SFC 분리를 통해 2개의 거울상 이성질체를 수득하였다. 하나의 거울상 중합체(2.6mg): LCMS: m/z 433.0 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.63 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.64 (brs, 1H), 7.47 (brd, 1H), 7.27-7.32 (m, 1H), 6.97 (brd, 1H), 6.22 (d, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.64 (s, 2H), 5.34 (brs, 1H), 4.24 (s, 3H). 그리고, 3.5 mg의 또 다른 거울상 이성질체: LCMS: m/z 433.0 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.63 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.64 (brs, 1H), 7.48 (brd, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 6.98 (brd, 1H), 6.23 (d, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.64 (s, 2H), 5.34 (brs, 1H), 4.25 (s, 3H).

실시예 10B. (R)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 (S)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성

단계 A. 2-(히드록시(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 아르곤에 하에, THF(10 mL) 중 4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(0.5 g, 1.20 mmol, 1당량)의 용액에 LiHMDS(1.0 M, 2.41 mL, 2당량)를 -78℃에서 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음, THF(1 mL) 중 1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)피라졸-3-카르브알데히드(816.97 mg, 3.61 mmol, 3당량)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:EtOAc = 1:1)는 2개의 새로운 스팟이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 수성 NH₄Cl(5 mL)로 -70℃에서 켄칭시킨 다음, 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 물(10 mL)로 희석하고, EtOAc(8 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄를 이용해 건조시켰다 용제를 진공에서 농축시켰다. 여액을 콤비플래시(석유 에테르 100% 내지 EtOAc 100%)로 정제하여 미정제 생성물(130 mg)을 담갈색 검(gum)으로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용되었다. LCMS: m/z 643.2 [M+H]⁺

단계 B. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: DCM(8 mL) 중 2-(히드록시(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-6-((1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온(0.13 g, 202.20 umol, 1당량)의 용액에 TFA(4.62 g, 40.52 mmol, 3 mL, 200.38당량)에 이어서 H₂O(500.00 mg, 27.75 mmol, 0.5 mL, 137.26당량)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, 18시간 동안 40℃로 가열하였다. LCMS는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 여액을 분취-HPLC로 정제하여 원하는 산물(20.5 mg)을 수득하였다. LCMS: m/z 382.9 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 12.72 (brs, 1H), 12.61 (brs, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.56-7.62 (m, 2H), 6.82 (brs, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.99-6.09 (m, 2H), 5.24-5.32 (m, 2H), 4.19 (s, 3H).

단계 C. (R)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온 및 (S)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온의 합성: 화합물 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5(6H)-온을 SFC에 의해 분리하였다. SFC 조건: 칼럼은 DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm, 5um)이고; 이동상: A: 55%의 CO2; B: 45% [EtOH 중 0.1% NH₃H₂O]/분. SFC 분리로 2-[(R)-히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸]-4-메틸-6-(1H-피라졸-3-일메틸)티아졸로[3,4]피롤로[1,3-d]피리다진-5-온 및 2-[(S)-히드록시(1H-피라졸-3-일)메틸]-4-메틸-6-(1H-피라졸-3-일메틸)티아졸로[3,4]피롤로[1,3-d]피리다진-5-온을 수득하였다. 하나의 이성질체(4.4mg): LCMS: m/z 383 [M+H]^+. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (brs, 1H), 7.55 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.25 (brs, 1H), 6.18 (brs, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H). 또 다른 이성질체 (4.1 mg): LCMS: m/z 383 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d ₄) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.59 (brs, 1H), 7.54 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.26 (brs, 1 H), 6.19 (brs, 1 H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H).

실시예 10C: 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(다이플루오로(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 3-(6-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르보닐)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드: DCM(1.5 mL) 중 3-((2-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)(히드록시)메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(50 mg, 83.80 umol, E10-1과 유사하게 제조됨)의 혼합물에 MnO₂(72.85 mg, 838.00 umol)를 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물(60 mg, 미정제)을 수득하였다. LCMS: m/z 595.1 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.49 (s, 3H), 3.10 (s, 6H) 2.93 (s, 6H).

단계 B. 3-((2-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)다이플루오로메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드: DCE(4 mL) 중 3-(6-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르보닐)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(240 mg, 403.60 umol)의 용액에 BAST(1.34 g, 6.05 mmol, 1.33 mL)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이클로로메탄(20 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO₃(10 mL *2)으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄를 이용해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물(300 mg, 미정제)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS: m/z 617.1 (M+H)⁺.

단계 C. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-2-(다이플루오로(1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DCM(2 mL) 중 3-((2-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)다이플루오로메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(240 mg, 163.47 umol)의 혼합물에 TFA(2.07 g, 18.15 mmol, 1.34 mL)를 첨가하고, 혼합물을 5시간 동안 50℃까지 가온시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC(컬럼: Agela ASB 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% HCl)-ACN]; B%: 30%-60%, 8분)로 정제하여 원하는 생성물(3.9 mg, 5.45% 수율, 92% 순도)을 백색 고형분으로서 수득하였다. LCMS: m/z 403.1 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.67 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.28 (s, 3H).

실시예 10D. 2-(1-(1H-피라졸-3-일)에틸)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A: 3-((2-(1-(1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)-1-히드록시에틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드: THF(3 mL) 중 3-(6-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-2-카르보닐)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(160 mg, 269.07 umol)의 용액에 CH3MgBr(3 M, 179.38 uL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NH4Cl(10 Ml)에 붓고, 아세트산에틸(20 mL * 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4를 이용해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 여액을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피(ISCO®; 12 g SepaFlash® 실리카 플래쉬 컬럼, 용리액: 석유 에테르 중 0~90% 아세트산에틸의 구배 @ 40 mL/분)로 정제하여 원하는 생성물(50 mg, 81.87 umol)을 수득하였다. LCMS: m/z 611.1 (M+H)⁺.

단계 B: 2-(1-(1H-피라졸-3-일)에틸)-6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온: DCE(0.5 mL) 중 3-((2-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)-1-히드록시에틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-다이하이드로-6H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-6-일)메틸)-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(50 mg, 81.87 umol)의 혼합물에, 0℃에서 Et3SiH(19.04 mg, 163.75 umol, 26.15 uL)에 이어서 TFA(1.54 g, 13.51 mmol, 164.96당량)를 첨가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 50℃까지 가온하고, 1시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC(컬럼: Agela ASB 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% HCl)-ACN]; B%: 25%-55%, 7분)로 정제하여 7.0 mg의 원하는 생성물을 수득하였다. LCMS: m/z 381.2 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.46 (s, 1H), 8.15 (d, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.33 (s, 3H), 1.94 (d, 3H).

실시예 10E. 6-((1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-2-(1H-피라졸-3-카르보닐)-4,6-다이하이드로-5H-티아졸로[5',4':4,5]피롤로[2,3-d]피리다진-5-온의 합성

단계 A. 4-메틸-2-(1H-피라졸-3-카르보닐)-6-(1H-피라졸-3-일메틸)티아졸로[3,4]피롤로[1,3-d]피리다진-5-온: DCE(1.5 mL) 중 3-(6-((1-(N,N-다이메틸설파모일)-1H-피라졸-3-일)메틸)-4-메틸-5-옥소-5,6-다이하이드로-4H-티아졸로[5',4':4,5]피리다진[2,3-d]피리다진-2-카르보닐-N,N-다이메틸-1H-피라졸-1-설폰아미드(50 mg, 84.08 umol)의 용액에 TFA(2.31 g, 20.26 mmol, 1.5 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 최대 50℃까지 가온하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다. 여액을 분취-HPLC로 정제하여 6.0 mg의 원하는 생성물을 수득하였다. LCMS: m/z 381.1 (M+H)⁺.¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.72 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).

실시예 11. PKM2 분석

절차

PKM2 효소 모액을 희석하여 1.11x 반응 혼합물(ADP 없음)을 제조하였다. 1 μL의 시험 화합물을 웰에 먼저 첨가한 후, 40 μL의 1.11x 반응 혼합물(ADP 없음)을 첨가하고, 실온(25℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 10 μl ADP(0.4 mM 최종 농도)로 반응을 개시하고, 반응 혼합물을 1x로 만들고, 실온에서 340 nm 파장에서의 흡광도 변화로서 반응 진행을 측정하였다.

시험 화합물 제조: 시험 화합물을 DMSO 중 50x 최종 농도로 제조하였다. 11개 포인트에 대해서는 1/3으로 희석하였다(예를 들어, 5000 μM 화합물의 50 μl를 100% DMSO의 100 μl에 첨가하여 1667 μM을 만들고, 이 중 50 μl를 DMSO의 100 μl에 첨가하여 556 μM로 만드는 등의 방식). 화합물을 1/50 희석액(1 μL/50 μL)으로서 분석에 첨가하여 100 μM의 최고 농도를 얻고, 이를 11개 포인트에 대해서는 3배로 감소시켰다.

반응 혼합물 : PKM2 (5 ng/웰, 0.1 μg/ml), ADP (0.4 mM), PEP (0.11 mM), NADH (180 μM), LDH (0.005 U/μL, Sigma# L3888), 1 mM DTT, 1x 반응 완충액 중 0.03% BSA

반응 완충액 : 100 mM KCl, 50 mM 트리스 pH 7.5, 5 mM MgCl₂.

여러 가지 구현예의 여러 양태를 이렇게 기술하였지만, 다양한 변경, 변형 및 개선이 당업자에게 쉽게 일어날 것임을 이해해야 한다. 이러한 변경, 변형 및 개선은 본 발명의 일부가 되도록 의도되고, 본 발명의 사상 및 범위 내에 포함되도록 의도된다. 따라서, 전술한 설명 및 도면은 단지 예시일 뿐이다.

Claims

화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 피루브산 키나아제 M2(PKM2) 활성의 조절과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물:

(화학식 I)
식 중,
Q는 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이고;
R¹은 임의 치환된 알킬, 또는 임의 치환된 아릴이고;
L¹은 결합, 임의 치환된 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH₂-, -S(=O)CH₂-, -S(=O)₂CH₂-, -NR³-, -NR³C(=O)-, -C(=O)NR³-, -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -NR³C(=O)O-, -OC(=O)NR³-, -NR³C(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂O-, -NR³C(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂NR³-, -S(=O)₂-, -S(=O)-, -S(=O)₂O-, -OS(=O)₂-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)₂-, -S(=O)NR³-, -NR³S(=O)-, -NR³S(=O)₂O-, -OS(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)O-, -OS(=O)NR³-, 또는 -S(=O)(=NR³)-이고(여기서, R²에 대한 부착점은 좌측에 있음);
L²는 임의 치환된 알킬렌이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);
R²는 수소, 할로겐, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알콕시, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이거나, L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, -NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산소 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이고;
R³의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -OR^o2, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 임의 치환된 헤테로아릴, 또는 질소 보호기이고;
R^o2의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R⁴의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 알킬, 임의 치환된 알케닐, 임의 치환된 알키닐, 임의 치환된 시클로알킬, 임의 치환된 헤테로시클릴, 임의 치환된 아릴, 또는 임의 치환된 헤테로아릴이고;
질소 보호기는 포름아미드, 아세트아미드, 클로로아세타아미드, 트리클로로아세타아미드, 트리플루오로아세트아미드, 페닐아세트아미드, 메틸 카바메이트, 에틸 카바메이트, 9-플루오레닐메틸 카바메이트(Fmoc), t-부틸 카바메이트(BOC 또는 Boc), 1-아다만틸 카바메이트(Adoc), 비닐 카바메이트(Voc), 알릴 카바메이트(Alloc), 2-(트리베틸실릴)에톡시]메틸(SEM), p-톨루엔설폰아미드(Ts), 벤젠설폰아미드, 2,3,6-트리메틸-4-메톡시벤젠설폰아미드(Mtr), 2,4,6-트리메톡시벤젠설폰아미드(Mtb)로부터 선택되고;
산소 보호기 및 황 보호기는 메틸, 메톡시메틸(MOM), 메틸티오메틸(MTM), t-부틸티오메틸, (페닐다이메틸실릴)메톡시메틸(SMOM), 벤질옥시메틸(BOM), p-메톡시벤질옥시메틸(PMBM), (4-메톡시페녹시)메틸(p-AOM), 테트라하이드로피라닐(THP), 메탄설포네이트(메실레이트), 벤질설포네이트, 및 토실레이트(Ts)로부터 독립적으로 선택되고;
여기서 임의 치환은 치환되지 않은 것 또는 하나 이상의 치환기로 치환된 것을 지칭하고, 여기서 치환기의 각각의 경우는 C_1-6 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 니트로, 시아노, -N₃, 히드록실, C_1-6 히드록시알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 할로알콕시, C_1-6 아미노알킬, C_1-6 아실, C_3-6 시클로알킬, C_6-10 아릴, 단환 또는 이환 헤테로아릴, 단환 또는 이환 헤테로시클릴, -NH₂, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(OH)₂, -N(OC₁-C₆ 알킬)₂, -N(O-산소 보호기)₂, -N(질소 보호기)₂, -OC₁-C₆ 알킬, -O(산소 보호기), -S(C₁-C₆ 알킬), -S(C_6-12 아릴), -S(헤테로아릴), -S(황 보호기), -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)N(OH)₂, -C(=O)N(OC₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)N(O-산소 보호기)₂, -C(=O)N(질소 보호기)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)O(산소 보호기), -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -N(OH)C(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(OC₁-C₆ 알킬)C(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(O-산소 보호기)C(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(질소 보호기)C(=O)(C₁-C₆ 알킬), -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)N(질소 보호기)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)NH₂, -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)N(질소 보호기)₂, -N(질소 보호기)C(=O)NH₂, -N(질소 보호기)C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(질소 보호기)C(=O)N(질소 보호기)₂, -NHC(=O)OH, -NHC(=O)OC₁-C₆ 알킬, -NHC(=O)O(산소 보호기), -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)OH, -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)O C₁-C₆ 알킬, -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)O(산소 보호기), -N(질소 보호기)C(=O)OH, -N(질소 보호기)C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -N(질소 보호기)C(=O)O(산소 보호기), -NHS(=O)(C₁-C₆ 알킬), -NHS(=O)(황 보호기), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)(황 보호기), -N(질소 보호기)S(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(질소 보호기)S(=O)(황 보호기), -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NHS(=O)₂(황 보호기), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂(황 보호기), -N(질소 보호기)S(=O)₂(C₁-C₆ 알킬), -N(질소 보호기)S(=O)₂(황 보호기), -NHS(=O)NH₂, -NHS(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)N(질소 보호기)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)NH₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)N(질소 보호기)₂, -N(질소 보호기)S(=O)NH₂, -N(질소 보호기)S(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(질소 보호기)S(=O)N(질소 보호기)₂, -NHS(=O)₂NH₂, -NHS(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂N(질소 보호기)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂NH₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂N(질소 보호기)₂, -N(질소 보호기)S(=O)₂NH₂, -N(질소 보호기)S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -N(질소 보호기)S(=O)₂N(질소 보호기)₂, -NHS(=O)OH, -NHS(=O)OC₁-C₆ 알킬, -NHS(=O)O(산소 보호기), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)OH, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)OC₁-C₆ 알킬, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)O(산소 보호기), -N(질소 보호기)S(=O)OH, -N(질소 보호기)S(=O)OC₁-C₆ 알킬, -N(질소 보호기)S(=O)O(산소 보호기), -NHS(=O)₂OH, -NHS(=O)₂OC₁-C₆ 알킬, -NHS(=O)₂O(산소 보호기), -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂OH, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂OC₁-C₆ 알킬, -N(C₁-C₆ 알킬)S(=O)₂O(산소 보호기), -N(질소 보호기)S(=O)₂OH, -N(질소 보호기)S(=O)₂OC₁-C₆ 알킬, -N(질소 보호기)S(=O)₂O(산소 보호기), -OC(=O)(C₁-C₆ 알킬), -OC(=O)NH₂, -OC(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -OC(=O)N(질소 보호기)₂, -OS(=O)C₁-C₆ 알킬, -OS(=O)₂C₁-C₆ 알킬, -OS(=O)NH₂, -OS(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -OS(=O)N(질소 보호기)₂, -OS(=O)₂NH₂, -OS(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -OS(=O)₂N(질소 보호기)₂, -S(=O)(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)(C_6-12 아릴), -S(=O)헤테로아릴, -S(=O)(황 보호기), -S(=O)₂아릴, -S(=O)₂헤테로아릴, -S(=O)₂(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂(황 보호기), -S(=O)NH₂, -S(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -S(=O)N(질소 보호기)₂, -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -S(=O)₂N(질소 보호기)₂, -S(=O)OH, -S(=O)OC₁-C₆ 알킬, -S(=O)O(산소 보호기), -S(=O)₂OH, -S(=O)₂OC₁-C₆ 알킬, -S(=O)₂O(산소 보호기), =NOH, 및 질소 보호기로부터 독립적으로 선택되거나; 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 치환기는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 C=O, C=NH, C=N(C₁-C₆ 알킬), C=N(OH), C=N(OC₁-C₆ 알킬), C=N(O-산소 보호기), C=N(질소 보호기), 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;
여기서 질환은 암, 비만, 당뇨성 질환, 동맥경화증, 관상 동맥 질환(CAD), 블룸 증후군(BS), 및 자가 면역 질환으로부터 선택된다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 고혈당증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물이며,
여기서 화학식 I은 제1항에 정의된 바와 같은 것인 약학적 조성물.
화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 당뇨성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하는 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물이며,
여기서 화학식 I은 제1항에 정의된 바와 같은 것인 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 당뇨성 질환은 당뇨성 신병증인 약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 PKM2의 조절로부터 혜택을 받을 대상체를 식별하는 단계를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 조절하는 것은 활성화시키는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
Q는 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 6-원 내지 14-원 아릴, 또는 임의 치환된 5-원 내지 14-원 헤테로아릴이고;
R¹은 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 임의 치환된 6-원 내지 12-원 아릴이고;
L¹은 결합, 임의 치환된 C_1-6 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH₂-, -S(=O)CH₂-, -S(=O)₂CH₂-, -NR³-, -NR³C(=O)-, -C(=O)NR³-, -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -NR³C(=O)O-, -OC(=O)NR³-, -NR³C(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂O-, -NR³C(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂NR³-, -S(=O)₂-, -S(=O)-, -S(=O)₂O-, -OS(=O)₂-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)₂-, -S(=O)NR³-, -NR³S(=O)-, -NR³S(=O)₂O-, -OS(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)O-, -OS(=O)NR³-, 또는 -S(=O)(=NR³)-이고(여기서, R²에 대한 부착점은 좌측에 있음);
L²는 임의 치환된 C₁-C₆ 알킬렌이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);
R²는 수소, 할로겐, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알콕시, 임의 치환된 -C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 -C₆-C₁₂ 아릴, 또는 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로아릴이거나, L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, -NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산소 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이고;
R³의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -OR^o2, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알케닐, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알키닐, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 헤테로시클릴, 임의 치환된 C₆-C₁₂ 아릴, 임의 치환된 C₅-C₁₂ 헤테로아릴, 또는 질소 보호기이고;
R^o2의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R⁴의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 임의 치환된 -C₁-C₆ 알킬, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알케닐, 임의 치환된 -C₂-C₆ 알키닐, 임의 치환된 C₃-C₁₂ 시클로알킬, 임의 치환된 3-원 내지 14-원 헤테로시클릴, 임의 치환된 C₆-C₁₂ 아릴, 또는 임의 치환된 5-원 내지 14-원 헤테로아릴인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
Q는 C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴, 또는 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴이고, 이들 각각은 0 내지 3개의 R^c로 치환되며;
R¹은 -C₁-C₆ 알킬이고(여기서, 알킬은 0 내지 3개의 R^d로 치환됨);
R²는수소, 할로겐, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 알콕시, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, C₆-C₁₂ 이환 시클로알킬, 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴, C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴, 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴로부터 선택되거나(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0 내지 3개의 R^e로 치환됨), L¹이 -NR³-, -NR³C(=O)-, -NR³C(=O)O-, -NR³C(R⁴)₂-, -NR³S(=O)₂-, -NR³S(=O)-, -NR³C(=O)NR³-, -NR³S(=O)₂O-, 또는 -NR³S(=O)O-일 때 질소 보호기이거나, L¹이 -O-, -OC(=O)-, -OC(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -OS(=O)-, -OS(=O)₂-, -OS(=O)₂NR³-, -OS(=O)NR³-, 또는 -OS(=O)-일 때 산소 보호기이거나, L¹이 -S-일 때 황 보호기이며;
R³은 수소, -OR^o2, -C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, C₆-C₁₂ 이환 시클로알킬, 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴, C₆-C₁₂ 아릴, 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴 및 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴로부터 선택되고(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 0 내지 3개의 R^f로 치환됨);
R⁴는 수소, -C₁-C₆ 알킬, C₃-C₇ 단환 시클로알킬, 및 3-원 내지 14-원의 헤테로시클릴로부터 선택되고(여기서, 각각의 알킬, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 0개 내지 1개의 R^g로 치환됨);
L¹은 결합, 0개 내지 3개의 R^h로 치환된 알킬렌, -O-, -S-, -S-CH₂-, -S(=O)CH₂-, -S(=O)₂CH₂-, -NR³-, -NR³C(=O)-, -C(=O)NR³-, -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -NR³C(=O)O-, -OC(=O)NR³-, -NR³C(=O)NR³-, -OC(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂O-, -NR³C(R⁴)₂-, -C(R⁴)₂NR³-, -S(=O)₂-, -S(=O)-, -S(=O)₂O-, -OS(=O)₂-, -S(=O)O-, -OS(=O)-, -S(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)₂-, -S(=O)NR³-, -NR³S(=O)-, -NR³S(=O)₂O-, -OS(=O)₂NR³-, -NR³S(=O)O-, -OS(=O)NR³-, 또는 -S(=O)(=NR³)-이고(여기서, R²에 대한 부착점은 좌측에 있음);
L²는 0개 내지 3개의 R^h로 치환된 알킬렌이고(여기서, Q에 대한 부착점은 우측에 있음);
각각의 R^c는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^c는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R^d는 할로, -C₁-C₆알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -NH₂ 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R^e는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^e는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R^f는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 알콕시, -OH, -NH₂, -CN 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R^g는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 알콕시, -OH, -NH₂, -CN 및 NO₂로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 R^h는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆ 알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂, S(=O)₂아릴, S(=O)₂헤테로아릴 및 =NOH로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^h는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하는 것인
약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 II의 화합물

(화학식 II)
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO_{2, -}N₃, 알킬, -OR^o3, -N(Rⁿ¹)₂, -C(=O)N(Rⁿ¹)₂, 또는 -C(=O)R^c2이거나, R^a 및 R^b는 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성할 수 있고;
Rⁿ¹의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
R^o3의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이며;
R^c2의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆알킬인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, L¹은 결합, 임의 치환된 -C_1-6 알킬렌, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)₂-, -NR³C(=O)-, 또는 -C(=O)NR³-인 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
L¹은 R^j 및 R^k로 치환된 C_1-6 알킬렌이고;
여기서,
R^j 및 R^k의 각각의 경우는 H, 할로겐, -CN, -OR^o7, -N(Rⁿ⁵)₂, -N(Rⁿ⁵)C(=O)R^c5, -C(=O)N(Rⁿ⁵)₂, -C(=O)R^c5, -C(=O)OR^o7, -SR^js, -S(=O)₂R^js, 또는 -S(=O)R^js, -C₁-C₆ 알킬로부터 독립적으로 선택되거나; R^j 및 R^k는 탄소 원자와 합쳐져 C=O, C=NR^jn, C₃-C₆ 단환 시클로알킬 고리 또는 C₃-C₆ 단환 헤테로시클릴 고리를 형성할 수 있고;
Rⁿ⁵ 및 R^jn 각각은 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, -OR^o8, 또는 질소 보호기이고;
R^o7의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R^c5의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆알킬이며;
R^js의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆ 알킬, C_6-12 아릴, 헤테로아릴, 또는 황 보호기이고;
R^o8의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 임의 치환된 5-원 내지 6-원의 단환 헤테로아릴인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, Q는 다음 화학식 중 하나이고:

식 중,
Rⁿ의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, -OR^o4, -SR^s1, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)R^c3, -C(=O)R^c3, -C(=O)OR^o4, -OC(=O)R^c3, -S(=O)R^s1, -S(=O)₂R^s1, -S(=O)OR^o4, -OS(=O)R^c3, -S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)₂R^c3, -S(=O)N(Rⁿ²)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ²)_{2, -}N(Rⁿ²)S(=O)R^s1, -N(Rⁿ²)S(=O)₂R^s1, -N(Rⁿ²)C(=O)OR^o4, -OC(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)₂N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)OR^o4, -N(Rⁿ²)S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)N(Rⁿ²)₂, 또는 -OS(=O)₂N(Rⁿ²)₂이거나; 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 Rⁿ는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;
여기서,
Rⁿ²의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
R^o4의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R^c3의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆알킬이고;
R^s1의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이고;
n은 허용되는 원자가에 따라 0, 1, 2 또는 3이며;
R^na, R^nb 및 R^nd 각각은 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬 또는 질소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 임의 치환된 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로아릴 또는 임의 치환된 8-원 내지 12-원의 이환 헤테로시클릴인 약학적 조성물.
제1항에 있어서, Q는 다음 화학식 중 하나이고:

식 중,
Rⁿ의 각각의 경우는 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, -OR^o4, -SR^s1, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)R^c3, -C(=O)R^c3, -C(=O)OR^o4, -OC(=O)R^c3, -S(=O)R^s1, -S(=O)₂R^s1, -S(=O)OR^o4, -OS(=O)R^c3, -S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)₂R^c3, -S(=O)N(Rⁿ²)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ²)_{2, -}N(Rⁿ²)S(=O)R^s1, -N(Rⁿ²)S(=O)₂R^s1, -N(Rⁿ²)C(=O)OR^o4, -OC(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)C(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)₂N(Rⁿ²)₂, -N(Rⁿ²)S(=O)OR^o4, -N(Rⁿ²)S(=O)₂OR^o4, -OS(=O)N(Rⁿ²)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ²)₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 Rⁿ는 이들이 부착된 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;
R^na 및 R^nb의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
Rⁿ²의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
R^o4의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R^c3의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆알킬이고;
R^s1의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이며;
n은 허용되는 원자가에 따라 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R²는 수소, 히드록실, 할로겐, -C₁-C₆알킬, -C₂-C₆알케닐, -C₂-C₆알콕실, 페닐, 나프탈레닐, C_3-6 시클로알킬, 5-원 헤테로아릴, 6-원 헤테로아릴, 8-원 이환 헤테로아릴, 9-원 이환 헤테로아릴로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 페닐 및 헤테로아릴은 0 내지 3개의 R^e로 치환되는 것이고;
각각의 R^e는 할로, -C₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 할로알킬, -C₁-C₆ 히드록시알킬, -OH, -OC₁-C₆ 알킬, -C₁-C₆ 아미노알킬, -NH(C₁-C₆ 알킬), -N(C₁-C₆ 알킬)₂, -C(=O)OC₁-C₆ 알킬, -C(=O)OH, -C(=O)C₁-C₆ 알킬, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -C(=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)NH₂, -NHC(=O)NH(C₁-C₆ 알킬), -NH(C=O)N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHC(=O)(C₁-C₆알킬), -N(C₁-C₆알킬)C(=O)(C₁-C₆알킬), -S(=O)₂NH₂, -S(=O)₂NH(C₁-C₆ 알킬), -S(=O)₂N(C₁-C₆ 알킬)₂, -NHS(=O)₂(C₁-C₆알킬), -NH₂, -CN, 및 -NO₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^e는 이들이 부착된 탄소 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하는 것인
약학적 조성물.
제1항에 있어서, R²는 다음 화학식 중 하나이고:

식 중,
R^p의 각각의 경우는 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, -OR^o6, -SR^s2, -N(Rⁿ³)₂, -C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)R^c4, -C(=O)R^c4, -C(=O)OR^o6, -OC(=O)R^c4, -S(=O)R^s2, -S(=O)₂R^s2, -S(=O)OR^o6, -OS(=O)R^c4, -S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)₂R^c4,-S(=O)N(Rⁿ³)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ³)_2,-N(Rⁿ³)S(=O)R^s2, -N(Rⁿ³)S(=O)₂R^s2, -N(Rⁿ³)C(=O)OR^o6, -OC(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)₂N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)OR^o6, -N(Rⁿ³)S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)N(Rⁿ³)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ³)₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^p는 이들이 부착된 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;
Rⁿ³, R^nc 및 R^nd의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
R^o6의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 산소 보호기이고;
R^c4의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆알킬이고;
R^s2의 각각의 경우는 독립적으로 -C₁-C₆ 알킬, 또는 황 보호기이며;
p는 허용되는 원자가에 따라 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R²는 다음 화학식 중 하나:

로부터 선택되고,
R^p의 각각의 경우는 수소, 할로겐, -CN, -NO₂, -N₃, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, -OR^o6, -SR^s2, -N(Rⁿ³)₂, -C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)R^c4, -C(=O)R^c4, -C(=O)OR^o6, -OC(=O)R^c4, -S(=O)R^s2, -S(=O)₂R^s2, -S(=O)OR^o6, -OS(=O)R^c4, -S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)₂R^c4,-S(=O)N(Rⁿ³)₂, -S(=O)₂N(Rⁿ³)_2,-N(Rⁿ³)S(=O)R^s2, -N(Rⁿ³)S(=O)₂R^s2, -N(Rⁿ³)C(=O)OR^o6, -OC(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)C(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)₂N(Rⁿ³)₂, -N(Rⁿ³)S(=O)OR^o6, -N(Rⁿ³)S(=O)₂OR^o6, -OS(=O)N(Rⁿ³)₂, -OS(=O)₂N(Rⁿ³)₂로부터 독립적으로 선택되거나, 동일하거나 인접한 탄소 원자에 부착된 2개의 R^p는 이들이 부착된 원자와 합쳐져 시클로알킬 또는 헤테로시클로알킬을 형성하고;
R^nc 및 R^nd의 각각의 경우는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기이고;
p는 허용되는 원자가에 따라 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제17항에 있어서, R^p의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, C_1-4 알킬, -CN, -NO_{2, -}N₃, -OR^o4, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -C(=O)R^c3 또는 -C(=O)OR^o4인 약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 III의 화합물

(화학식 III);
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ과 n은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같은 것인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 IV의 화합물

(화학식 IV);
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ과 n은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같은 것인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 V-a의 화합물

(화학식 V-a),
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같으며;
m은 0, 1 또는 2인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 V-b의 화합물

(화학식 V-b),
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같고;
m은 0, 1 또는 2이며;
R^nc는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 VI의 화합물

(화학식 VI)
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ과 n은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같으며;
Rⁿ⁷은 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 IX의 화합물

(화학식 IX),
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
Rⁿ과 n은 제13항 또는 제15항에 정의된 바와 같으며;
R^nc는 독립적으로 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 다음의 구조 화학식에 의해 대표되는 화합물

(화학식 II')
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
R^j 및 R^k는 제11항에 정의된 바와 같고;
R^p는 제17항에 정의된 바와 같으며,
q는 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 다음의 구조 화학식에 의해 대표되는 화합물

(화학식 III')
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
R^j 및 R^k는 제11항에 정의된 바와 같고;
R^p는 제17항에 정의된 바와 같으며,
q는 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 다음의 구조 화학식에 의해 대표되는 화합물

(화학식 IV')
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
R^j 및 R^k는 제11항에 정의된 바와 같고;
R^p는 제17항에 정의된 바와 같고;
q는 0, 1, 2 또는 3이며;
Rⁿ⁶은 수소, -C₁-C₆ 알킬, 또는 질소 보호기인
약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 다음의 구조 화학식에 의해 대표되는 화합물

(화합물 V')
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이며,
식 중,
R^a 및 R^b는 제9항에 정의된 바와 같고;
R^j 및 R^k는 제11항에 정의된 바와 같고;
R^p는 제17항에 정의된 바와 같으며,
q는 0, 1, 2 또는 3인
약학적 조성물.
제15항에 있어서, R^na는 수소 또는 -C_1-4 알킬인 약학적 조성물.
제13항에 있어서, Rⁿ의 각각의 경우는 독립적으로 수소, 할로겐, C_1-4 알킬, -CN, -NO_{2, -}N₃, -OR^o4, -N(Rⁿ²)₂, -C(=O)N(Rⁿ²)₂, -C(=O)R^c3 또는 -C(=O)OR^o4인 약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹은 -C₁-C₄ 알킬인 약학적 조성물.
제11항에 있어서, R^j 및 R^k는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -OR^o7 또는 -C₁-C₄ 알킬인 약학적 조성물.
제9항에 있어서, R^a 및 R^b는 각각 수소인 약학적 조성물.
제26항에 있어서, q는 0 또는 1인 약학적 조성물.
제13항에 있어서, n은 0 또는 1인 약학적 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은
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로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 약학적 조성물.
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