CN111032046A - 丙酮酸激酶调节剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文描述了使用式(I)的化合物调节受试者的PKM2活性的方法。这些化合物由式(I)表示，其中R1、R2、L1和L2如本文所定义。

Description

丙酮酸激酶调节剂及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求均提交于2018年5月18日的美国临时专利申请第62/673,526号和第62/673,533号的优先权权益。本申请还要求提交于2017年8月15日的国际专利第PCT/CN2017/097496号的优先权权益。上述优先权申请中的每个通过引用整体并入本文。
背景技术
丙酮酸激酶(PK)是在糖酵解期间将磷酸烯醇丙酮酸转化为丙酮酸的代谢酶。四种PK同工型存在于哺乳动物中：L和R同工型(来自PKLR基因)分别在肝脏和红细胞中表达，PKM基因编码两种剪接变体：在大多数成体组织中表达的M1同工型和在胚胎发育期间以及在一些成体组织(包括肾脏和造血干细胞)中表达的M2同工型。许多肿瘤细胞也表达PKM2。这种四聚变构调节的同工型固有地设计为通过转录后修饰、由小分子配体(包括一些氨基酸)变构调节以及通过亚单元解离(为二聚形式)来下调其活性，这导致在最后步骤对糖酵解的部分抑制。这会积累上游糖酵解中间体，作为合成脂质和核酸的合成代谢碳源，而PKM2重新结合成活性四聚体则会补充正常的分解代谢状态，作为细胞分裂后的反馈(PRoteinSci.2010Nov；19(11)：2031–2044)。PKM2的调节(例如抑制或激活)可有效治疗多种疾病，例如癌症、肥胖症、糖尿病(例如糖尿病肾病(DN))、冠状动脉疾病(CAD)、布卢姆综合征(BS)、自身免疫性疾病和增殖依赖性疾病(例如良性前列腺增生(BPH))。
发明内容
本文描述了在需要其的受试者中调节丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括施用有效量的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V-a)、(V-b)、(VI)或(IX)的化合物(在本文中统称为“式(I)-(IX)”)或其可药用盐或式(I’)、(II’)、(III’)、(IV’)、(V’)的化合物(在本文中统称为式(I’)-(V’)”或其可药用盐，上述化合物或其可药用盐调节PKM2野生型和/或突变型酶(诸如本文所描述的那些)。
在一个实施方式中，本发明提供了一种调节受试者的丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐：
Figure BDA0002385339370000021
其中Q、R1、R2、L1、L2和Q如本文所定义。
在一个实施方式中，上述化合物或其可药用盐选自表1以及图1A-1C、2A-2C和3的化合物。
还提供了一种在需要其的受试者中调节丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括施用包含有效量的式(I)-(IX)的化合物或其可药用盐或者式(I’)-(V’)的化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
在另一个实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中调节(例如增加或降低)PKM2活性水平的方法，包括对受试者施用有效量的本文所述的化合物。在一些实施方式中，本文所述的化合物或组合物用于将PKM2保持为其活性构象或者激活增殖细胞中的丙酮酸激酶活性，作为将患者体内的葡萄糖代谢物转化为分解代谢而非合成代谢过程的手段。在某些实施方式中，所提供的方法增加了受试者的PKM2活性水平(即，激活)。在某些实施方式中，所提供的方法降低了受试者的PKM2活性水平。在另一个实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中调节(例如增加或降低)血糖水平的方法，包括对受试者施用有效量的本文所述的化合物。在某些实施方式中，所提供的方法增加了受试者的血糖水平。在某些实施方式中，所提供的方法降低受试者的血糖水平。
在另一个实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中抑制细胞增殖的方法，包括对受试者施用有效量的本文所述的化合物。例如此方法可抑制转化细胞(例如癌细胞)的生长，或通常抑制经历了需氧糖酵解的PKM2依赖性细胞的生长。
在另一个实施方式中，提供一种治疗患有或易患与PKM2功能相关的疾病或病症的受试者的方法，包括对受试者施用有效量的本文所述的化合物。在某些实施方式中，所述方法进一步包括鉴定或选择将受益于PKM2和/或血糖调节(例如激活)的受试者。例如可基于患者细胞中的PKM2水平来鉴定患者以用于治疗与PKM2功能相关的癌症。在另一个实施方式中，所选择的患者是患有或易患本文所鉴定的病症或疾病的受试者，例如特征在于不想要的细胞生长或增殖的病症。在某些实施方式中，所述疾病是肿瘤病。在某些实施方式中，所述疾病是癌症、肥胖症、糖尿病(例如糖尿病肾病(DN))、动脉硬化、再狭窄、冠状动脉疾病(CAD)、布卢姆综合征(BS)、良性前列腺增生(BPH)或自身免疫性疾病。在某些实施方式中，所述疾病是癌症。在某些实施方式中，所述疾病是糖尿病。在某些实施方式中，所述糖尿病是糖尿病肾病(DN)。在某些实施方式中，所述疾病是冠状动脉疾病(CAD)。
在一个实施方式中，提供了本文所述化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物在如上所述的任何本发明的方法中的用途。在一个实施方式中，提供了用于如上所述的任何本发明的方法中的本文所述化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物。在另一个实施方式中，提供了本文所述化合物或其可药用盐或包含其的药物组合物用于制备用于所述的任何本发明的方法中的药物的用途。
附图说明
图1A-1C是本发明方法中使用的其他示例性化合物的结构列表。
图2A-2C是本发明方法中使用的其他示例性化合物的结构列表。
图3是本发明方法中使用的其他示例性化合物的结构列表。
图4示出了实施例1-10中所用的示例性中间体的合成。
发明详述
在以下描述中阐述或在附图中示出的组分的结构和排列并非意味着是限制性的。实施方式可以各种方式实践或实施。本文使用的短语和术语仅出于描述目的，不应视为限制性的。
定义
用于本发明方法中的本文所述的化合物可包含一个或多个不对称中心，因此可以多种立体异构形式存在，例如对映体和/或非对映体。例如本文所述的化合物可为单个对映体、非对映体或几何异构体形式，或者可为立体异构体的混合物形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。可通过本领域技术人员已知的方法将异构体从混合物中分离，包括手性高压液相色谱(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者可通过不对称合成制备优选的异构体。参见，例如Jacques et al.,Enantiomers,Racemates andResolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen et al.,Tetrahedron33:2725(1977)；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962；和Wilen,S.H.Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN1972)。
在一个实施方式中，本文所述的化合物还可包含一个或多个同位素取代。例如具有本发明结构但用氘或氚代替氢、用18F代替19F或者用13C或14C代替12C的的化合物在本公开的范围内。这样的化合物可用作例如生物检验中的分析工具或探针。
本文所述的化合物还可表现为多种互变异构形式，在这样的情况中，明确包含本文所述的化合物的所有互变异构形式，即使可能仅表现单一的互变异构形式(例如环体系的烷基化可能导致在多个位点处烷基化；所有这样的反应产物明确都被包含)。此类化合物的所有这样的异构形式均明确被包含。如果化合物的一个互变异构体是芳香性的，则该化合物是芳香性的。类似地，如果取代基的一个互变异构体是杂芳基，则该取代基为杂芳基。
术语“烷基”是指具有1-10个碳原子的直链或支链饱和烃类基团(“C1-10烷基”)。C1-6烷基的实例包括甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)(例如正丙基、异丙基)、丁基(C4)(例如正丁基、叔丁基、仲丁基、异丁基)，戊基(C5)(例如正戊基、3-戊基、戊基、新戊基、3-甲基-2-丁基、叔戊基)和己基(C6)(例如正己基)。除非另有说明，每个烷基独立为未取代的(“未取代的烷基”)或用一个或多个取代基(例如卤素，诸如F)取代的(“取代的烷基”)。在某些实施方式中，烷基是未取代的-C1-10烷基。在某些实施方式中，烷基是取代的-C1-10烷基。
术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子独立被卤素(例如氟、溴、氯或碘)替换的取代的烷基，并且包括其中所有氢均被卤素替换的烷基部分(例如全氟烷基)。在一些实施方式中，卤代烷基部分具有1至8个碳原子(“C1-8卤代烷基”)。
术语“烷氧基”或“烷氧基”是指–O-烷基。例如具有1-6个碳原子。
术语“芳氧基”是指–O-芳基。在一些实施方式中，芳氧基是苯氧基。
“羟烷基”或“羟基烷基”可包括被一个或多个羟基取代的烷基。
术语“杂烷基”是指进一步包含选自氧、氮或硫的至少一个杂原子(例如1、2、3或4个杂原子)的烷基，其中所述至少一个杂原子在母链内(即，插入到母链中的相邻原子之间)和/或位于母链的一个或多个末端部分。在某些实施方式中，杂烷基是指在母链内具有1至10个碳原子以及一个或多个杂原子的饱和基团。除非另有说明，每个杂烷基独立为未取代的(“未取代的杂烷基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的杂烷基”)。在某些实施方式中，杂烷基是未取代的杂C1-10烷基。在某些实施方式中，杂烷基是取代的杂C1-10烷基。
术语“烯基”是指具有2至10个碳原子和一个或多个碳-碳双键(例如1、2、3或4个双键)的直链或支链烃基团。一个或多个碳-碳双键可为内部的(诸如在2-丁烯基中)或末端的(诸如在1-丁烯基中)。-C2-4烯基的实例包括乙烯基(C2)、1-丙烯基(C3)、2-丙烯基(C3)、1-丁烯基(C4)、2-丁烯基(C4)、丁二烯基(C4)等。除非另有说明，每个烯基独立为未取代的(“未取代的烯基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的烯基”)。在某些实施方式中，烯基是未取代的-C2-10烯基。在某些实施方式中，烯基是取代的-C2-10烯基。在烯基中，C＝C双键可以是(E)-或(Z)-双键。
术语“炔基”是指具有2至10个碳原子和一个或多个碳-碳三键的直链或支链烃基团(例如1、2、3或个三键)(“C2-10炔基”)。炔基的实例包括乙炔基(C2)、1-丙炔基(C3)、2-丙炔基(C3)、1-丁炔基(C4)、2-丁炔基(C4)、戊炔基(C5)、己炔基(C6)、庚炔基(C7)、辛炔基(C8)等。除非另有说明，每个炔基独立为未取代的(“未取代的炔基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的炔基”)。在某些实施方式中，炔基是未取代的-C2-10炔基。在某些实施方式中，炔基是取代的-C2-10炔基。
术语“碳环基”或“碳环的”是指在非芳香性环体系中具有3至14个环碳原子和0个杂原子的非芳香性单环、二环或三环或多环烃环体系基团。碳环基包括完全饱和环体系(例如环烷基)和部分饱和环体系。在一些实施方式中，碳环基具有3-10个环碳原子(“C3-10碳环基”)。
术语“环烷基”如本文所用包括具有包含指定环原子数和碳原子数的具有3至14个碳的饱和环状、二环、三环或多环烃基团(例如C3-C14单环、C4-C14二环、C5-C14三环或C6-C14多环环烷基)。在一些实施方式中，“环烷基”是单环环烷基。单环环烷基的实例包括环戊基(C5)、环己基(C5)、环丙基(C3)、环丁基(C4)、环庚基(C7)和环辛基(C8)。在一些实施方式中，“环烷基”是二环环烷基。二环环烷基的实例包括二环[1.1.0]丁烷(C4)、二环[1.1.1]戊烷(C5)、螺[2.2]戊烷(C5)、二环[2.1.0]戊烷(C5)、二环[2.1.1]己烷(C6)、二环[3.3.3]十一烷(C11)、十氢化萘(C10)、二环[4.3.2]十一烷(C11)、螺[5.5]十一烷(C11)和二环[4.3.3]十二烷(C12)。在一些实施方式中，“环烷基”是三环环烷基。三环环烷基的实例包括金刚烷(C12)。除非另有说明，每个环烷基独立为未取代的(“未取代的环烷基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的环烷基”)。在某些实施方式中，环烷基是未取代的C3-14环烷基。在某些实施方式中，环烷基是取代的C3-14环烷基。
术语“杂环基”或“杂环的”是指具有环碳原子和1至4个环杂原子的3至14元非芳香性环体系基团，其中每个杂原子独立选自氮、氧和硫(“3至14元杂环基”)。在包含一个或多个氮的杂环基中，当化合价允许时，附接点可以是碳或氮原子。杂环基可为单环(“单环杂环基”)或多环(例如稠环、桥环或螺环体系，诸如二环体系(“二环杂环基”)或三环体系(“三环杂环基”))，并且可为饱和的或可包含一个或多个碳-碳双键或三键。杂环基多环环体系可包含在一个或两个环中的一个或多个杂原子。“杂环基”还包括其中如上所定义的杂环基环与一个或多个碳环基稠合的环体系，其中附接点在碳环基或杂环基环上，或者包括其中如上所定义的杂环基环与一个或多个芳基或杂芳基稠合的环体系，其中附接点在杂环基环上，在这样的情况中，环成员数仍然指定为杂环基环体系中的环成员数。除非另有说明，每个杂环基独立为未取代的(“未取代的杂环基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的杂环基”)。在某些实施方式中，杂环基是未取代的3至14元杂环基。在某些实施方式中，杂环基是取代的3至14元杂环基。在一些实施方式中，杂环基是具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-10元非芳香性环体系，其中每个杂原子独立选自氮、氧和硫(“5-10元杂环基”)。
示例性的杂环基包括氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、吡咯烷基、二氢吡咯基、吡咯烷-2,5-二基(pyrrolyl-2,5-dine)、二氧戊环基、氧杂硫杂戊环基、二硫杂戊环基、三唑啉基、噁二唑啉基、噻二唑啉基、哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基、硫杂环己基(thianyl)、哌嗪基、吗啉基、二硫杂环戊烷基、二氧六环基、三嗪烷基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氮杂环辛烷基、氧杂环辛烷基、硫杂环辛烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、四氢苯并噻吩基、四氢苯并呋喃基、四氢吲哚基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、十氢异喹啉基、八氢色烯基、八氢异色烯基、十氢萘啶基、十氢-1,8-萘啶基、八氢吡咯并[3,2-b]吡咯、二氢吲哚基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、色满基、色烯基、1H-苯并[e][1,4]二氮杂
Figure BDA0002385339370000071
基、1,4,5,7-四氢吡喃并[3,4-b]吡咯基、5,6-二氢-4H-呋喃并[3,2-b]吡咯基、6,7-二氢-5H-呋喃并[3,2-b]吡喃基、5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃基、2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、2,3-二氢呋喃并[2,3-b]吡啶基、4,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、4,5,6,7-四氢呋喃并[3,2-c]吡啶基、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶基、1,2,3,4-四氢-1,6-萘啶基等。
术语“芳基”是指具有在芳香性环体系中提供的6-14个碳原子和0个杂原子的单环或多环(例如，二环或三环)4n+2(例如，具有以环状排列共享的6、10或14个π电子)芳香性环体系的基团(“C6-14芳基”)。在一些实施方式中，芳基具有6个环碳原子(“C6芳基”；例如，苯基)。在一些实施方式中，芳基具有10个环碳原子(“C10芳基”；例如，萘基，诸如，1-萘基和2-萘基)。在一些实施方式中，芳基具有14个环碳原子(“C14芳基”；例如，蒽基)。“芳基”还包括其中如上所定义的芳基环与一个或多个碳环基或杂环基稠合的环体系，其中连接基或连接点在芳基环上，在这样的情况中，碳原子数仍然指定为芳基环体系中的碳原子数。除非另有说明，每个芳基独立为未取代的(“未取代的芳基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的芳基”)。在某些实施方式中，芳基是未取代的C6-14芳基。在某些实施方式中，芳基是取代的C6-14芳基。
“芳基烷基”或“芳烷基”是“烷基”的亚组，并且是指被芳基取代的烷基，其中附接点在烷基部分上。“芳基烷基”或“芳烷基”的实例包括苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、9-芴基、二苯甲基和三苯甲基。
术语“杂芳基”是指具有在芳香性环体系中提供的环碳原子和1-4个环杂原子的5-14元单环或多环(例如二环、三环)的4n+2芳香性环体系(例如具有6、10或14个在环阵列中共享的π电子)的基团，其中每个杂原子独立选自氮、氧和硫(“5-14元杂芳基”)。在一些实施方式中，杂芳基可以是包含1-4个杂原子的5-8元单环杂芳基。在一些实施方式中，杂芳基可以是具有1-6个杂原子的8-12元二环杂芳基。在一些实施方式中，杂芳基可以是具有1-9个杂原子的11-14元三环杂芳基环体系。在包含一个或多个氮原子的杂芳基中，当化合价允许时，附接点可以是碳或氮原子。杂芳基多环环体系可包括在一个或两个环中的一个或多个杂原子。“杂芳基”包括其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个碳环基或杂环基稠合的环体系，其中附接点在杂芳基环上，在这样的情况中，环成员数仍然指定为杂芳基环体系中的环成员数。“杂芳基”还包括其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个芳基稠合的环体系，其中附接点在芳基或杂芳基环上，在这样的情况中，环成员数指定为稠多环(芳基/杂芳基)环体系中的环成员数。在其中一个环不含杂原子的多环杂芳基(例如吲哚基、喹啉基、咔唑基等)中，附接点可在任一个环上，即，在带有杂原子的环上(例如2-吲哚基)或不含杂原子的环上(例如5-吲哚基)。在一些实施方式中，杂芳基是具有在芳香性环体系中提供的环碳原子和1-4个环杂原子的单环5-10元芳香性环体系，其中每个杂原子独立选自氮、氧和硫(“5-10元单环杂芳基”)。在一些实施方式中，杂芳基是具有在芳香性环体系中提供的环碳原子和1-6个环杂原子的二环8-12元芳香性环体系，其中每个杂原子独立选自氮、氧和硫(“8-12元二环杂芳基”)。除非另有说明，每个杂芳基独立为未取代的(“未取代的杂芳基”)或被一个或多个取代基取代的(“取代的杂芳基”)。在某些实施方式中，杂芳基是未取代的5-14元杂芳基。在某些实施方式中，杂芳基是取代的5-14元杂芳基。在某些实施方式中，杂芳基是任选取代的5元单环杂芳基。在某些实施方式中，杂芳基是任选取代的6元单环杂芳基。
示例性的单环杂芳基包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基、氮杂
Figure BDA0002385339370000081
基、氧杂
Figure BDA0002385339370000082
基、硫杂
Figure BDA0002385339370000083
基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻二唑基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹喔啉基、酞嗪基、喹唑啉基、菲啶基、二苯并呋喃基、咔唑基、吖啶基、吩噻嗪基、吩噁嗪基和吩嗪基。
“杂芳烷基”或“杂芳基烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中附接点在烷基部分上。
术语“饱和”是指不含双键或三键的部分，即，仅含单键的部分。
向基团添加前缀"亚-”表示该基团是二价，例如亚烷基是烷基的二价部分，亚烯基是烯基的二价部分，亚炔基是炔基的二价部分，杂亚烷基是杂烷基的二价部分，杂亚烯基是杂烯基的二价部分，杂亚炔基是杂炔基的二价部分，亚碳环基是碳环基的二价部分，亚杂环基是杂环基的二价部分，亚芳基是芳基的二价部分，和亚杂芳基是杂芳基的二价部分。
术语“任选取代的”是指取代或未取代的。通常，术语“取代的”表示基团上存在的至少一个氢被可允许的取代基替换，所述可允许的取代基例如在取代时得到稳定化合物的取代基，所述稳定化合物例如不会通过诸如重排、环化、消除或其他反应自发地经历转化的化合物。除非另有说明，否则“取代的”基团在该基团的一个或多个可取代位置处具有取代基(例如，C1-6烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6酰基、C3-6环烷基、C6-10芳基、单环或二环杂芳基以及单环或二环杂环基)，当指定结构中多于一个位置被取代时，取代基在每个位置处可为相同或不同的。术语“取代的”预期包含用所有可允许的有机化合物取代基取代，并且包含导致形成稳定化合物的任何本文所述的取代基。本公开预期了任何和所有这样的组合以得到稳定化合物。对于本公开，杂原子(诸如，氮)可具有氢取代基和/或满足该杂原子化合价并导致形成稳定部分的如本文所述的任何合适的取代基。本公开并非旨在以任何方式受限于本文所述的示例性取代基。
术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“酰基”是指具有如下通式的基团：-C(＝O)RX1、-C(＝O)ORX1、-C(＝O)-O-C(＝O)RX1、-C(＝O)SRX1、-C(＝O)N(RX1)2、-C(＝S)RX1、-C(＝S)N(RX1)2和-C(＝S)S(RX1)、-C(＝NRX1)RX1、-C(＝NRX1)ORX1、-C(＝NRX1)SRX1和-C(＝NRX1)N(RX1)2，其中，当价态允许时，RX1是氢；卤素；取代或未取代的羟基；取代或未取代的硫醇基(thiol)；取代或未取代的氨基；取代或未取代的酰基，环状或非环的、取代或未取代的、支链或非支链的C1-10烷基；环状或非环的、取代或未取代的、支链或非支链的C2-10烯基；取代或未取代的C2-10炔基；取代或未取代的C6-12芳基，取代或未取代的杂芳基。示例性的酰基包括醛(-CHO)、羧酸(-CO2H)、酮、酰卤、酯、酰胺、亚胺、碳酸酯、氨基甲酸酯和脲。
在某些实施方式中，存在于氮原子上、氧原子上或硫原子上的取代基分别是氮保护基团、氧保护基团或硫保护基团。氮、氧和硫保护基团是本领域公知的，并且包括在以下详细描述的那些：Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene andP.G.M.Wuts,3rd edition,John Wiley&Sons,1999，其通过引用并入本文。
例如，氮保护基团包括但不限于甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯乙酰胺、氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、氨基甲酸9-芴基甲基酯(Fmoc)、氨基甲酸叔丁酯(BOC或Boc)、氨基甲酸1-金刚烷基酯(Adoc)、氨基甲酸乙烯酯(Voc)、氨基甲酸烯丙酯(Alloc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)、对甲苯磺酰胺(Ts)、苯磺酰胺、2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(Mtb)、吩噻嗪基-(10)-酰基衍生物、N’-对甲苯磺酰基氨基酰基衍生物等。
示例性的氧和硫保护基团包括但不限于甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、叔丁硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苄氧基甲基(BOM)、对甲氧基苄氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、四氢吡喃基(THP)、甲烷磺酸基(甲磺酸基)、苄基磺酸基和甲苯磺酸基(Ts)。
术语“离去基团”以其在合成有机化学领域中的普通含义给出，其是指能够被亲核基团置换的原子或基团。合适的离去基团的实例包括但不限于卤素(诸如，F、Cl、Br或I(碘))、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、烷磺酰氧基、芳烃磺酰氧基、烷基-羰氧基(例如，乙酰氧基)、磺酸酯，诸如甲苯磺酸酯(tosylate，-OTs)、甲磺酸酯(mesylate，-OMs)、对溴苯磺酰氧基(对溴苯磺酸酯，-OBs)、-OS(＝O)2(CF2)3CF3(全氟丁磺酸酯，-ONf)或三氟甲磺酸酯(triflate，-OTf)。
如本文所用，术语“盐”是指任何和所有盐，并且涵盖可药用盐。
术语“可药用盐”是指在合理的医学判断范围内，适合与人类和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应等并且具有合理的获益/风险比的那些盐。可药用盐是本领域公知的。例如，Berge et al.在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19中详细描述了可药用盐，其通过引用并入本文。本发明化合物的可药用盐包括源于合适的无机和有机酸和碱的那些。可药用的无毒酸加成盐的实例是使用无机酸或有机酸形成的或者使用本领域中已知的其他方法如离子交换形成的盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，所述有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸。其他可药用盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。源于合适的碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4 -盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。当合适时，其他可药用盐包括使用诸如卤离子、氢氧根离子、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷磺酸跟和芳磺酸根形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。
术语“组合物”和“制剂”可互换使用。
预期会对其进行施用的“受试者”是指人(即，任何年龄组的男性或女性，例如，未成年受试者(例如，婴儿、儿童或青少年)或成年受试者(例如，青年成年人、中年人或老年成年人))或非人动物。在某些实施方式中，非人动物是哺乳动物(例如，灵长类动物(例如，食蟹猴或猕猴)、商业相关的哺乳动物(例如，牛、猪、马、绵羊、山羊、猫或狗)或禽类(例如，商业相关的禽类，诸如，鸡、鸭、鹅或火鸡))。在某些实施方式中，非人动物是鱼类、爬行动物类或两栖动物类。非人动物可为任何发育阶段的雄性或雌性。非人动物可为转基因动物或基因工程化动物。在某些实施方式中，受试者是患者。术语“患者”是指需要治疗疾病的人类受试者。在某些实施方式中，术语“患者”是需要治疗疾病的超过18岁的人类成年人。在某些实施方式中，术语“患者”是需要治疗疾病的不超过18岁的人类儿童。在某些实施方式中，患者没有进行定期输液(例如在12个月时间内有不超过四次输液)。在某些实施方式中，患者进行定期输液(例如在12个月时间内有至少4次输液)。
术语“施用(administer,administering或administration)”是指将本文所述化合物或组合物植入、吸收到、摄入、注入、吸入或以其他方式引入到受试者中或受试者上。
术语“治疗(treatment,treat,和treating)”是指逆转、减轻、延迟本文所述疾病的发作或抑制本文所述疾病的进展。在一些实施方式中，治疗可在已发展出或已观察到疾病的一种或多种迹象或症状之后施用(即，治疗性治疗)。在其他实施方式中，治疗可在没有疾病的迹象或症状的情况下施用。例如，可在症状发作前对易感受试者施用治疗(即，预防性治疗)(例如，考虑到症状史和/或根据对病原的暴露)。还可在已解决症状之后继续进行治疗，以例如延迟或防止复发。在某些实施方式中，治疗包括将病症的至少一种症状的发作延迟一定时间。
术语“病症”、“疾病”和“障碍”可互换使用。
本文所述化合物的“有效量”是指足以引起所需生物反应的量。本文所述化合物的有效量可取决于诸如以下因素而变：所需的治疗终点，化合物的药代动力学，要治疗的病症，施用模式，以及受试者的年龄和健康。在某些实施方式中，有效量是治疗有效量。在某些实施方式中，有效量将会产生如下的受试者血红蛋白反应：Hb浓度相对于基线增加≥1.5g/dL。受试者的基线Hb浓度是在用化合物治疗之前所有可得Hb浓度的平均值。在某些情况中，有效量将会产生如下的受试者血红蛋白反应：Hb浓度相对于基线增加≥1.0g/dL。在某些情况中，有效量将会产生如下的受试者血红蛋白反应：Hb浓度相对于基线增加≥2.0g/dL。在某些实施方式中，有效量是单一剂量中本文所述化合物的量。在某些实施方式中，有效量是多个剂量中本文所述化合物的总量。
本文所述化合物的“治疗有效量”是足以在病症的治疗中提供治疗益处或者足以延迟或最小化与病症相关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量表示单独或与其他治疗剂组合的治疗剂量，其在病症的治疗中提供了治疗益处。术语“治疗有效量”可包含改善整体治疗，减少或避免病症的症状、迹象或诱因，和/或增强另一种治疗剂的治疗功效的量。在某些实施方式中，治疗有效量是足以引起野生型或突变型PKM2的可测量激活的量。在某些实施方式中，治疗有效量是足以在有此需要的患者中调节(例如降低)血浆水平的量。在某些实施方式中，治疗有效量是足以引起可测量的治疗增殖性疾病(例如癌症、自身免疫性疾病)的功效的量。在某些实施方式中，治疗有效量是足以引起可测量的治疗和/或预防糖尿病(例如DN)的量。在某些实施方式中，治疗有效量是足以引起可测量的治疗和/或预防CAD的功效的量。
术语“激活剂”如本文所用表示(可测量地)增加丙氨酸激酶(例如PKM2)的活性或者使丙酮酸激酶(例如PKM2)活性增加值高于PKM2的基础活性水平的水平的药物。例如，激活剂可模拟天然配体(例如FBP)的作用。本文所提供的化合物所导致的激活作用可相同于或大于或小于天然配体所导致的激活作用，但导致相同类型的作用。可通过直接或间接测量当给予所述化合物时的丙酮酸激酶活性来评估本文所提供的化合物以确定其是否为激活剂。本文所提供的化合物的活性可例如针对对照物质来测量。在一些情况中，测试化合物所测得的活性是针对PKM2的激活的。可例如通过监测产物(诸如ATP)的浓度或监测在偶联酶测试体系中所用的辅因子(诸如NADH)的水平来测量PKM2的活性(参见PCT/US2010/040486)。
术语“抑制剂”如本文所用表示(可测量地)减缓、停止、降低或失活丙酮酸激酶(例如PKM2)的酶活性以降低至低于丙酮酸激酶(PKM2)的基础活性水平的水平的药物。
涉及方法的术语“离体”如本文所用表示所述方法发生在生物体之外。例如，可从要与本文提供的一种或多种化合物或其可药用盐或其药物组合物接触的生物体提取细胞或组织，任选在人工控制条件(例如，温度)下。
涉及方法的术语“体外”如本文所用表示所述方法发生在生物体外部并且被包含在人工环境中。例如，可在包含的人工环境(例如，培养系统)中(诸如，在试管中，在培养基中，在烧瓶中，在微滴定板中，在Petri培养皿中等)从要与本文提供的一种或多种化合物或其可药用盐或其药物组合物接触的生物体提取细胞或组织。
化合物
本文描述了涉及调节PKM2的化合物和药物组合物的方法以及这些化合物和药物组合物用于这些方法的用途。具体而言，这些方法包括调节受试者的丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，在需要其的受试者中调节(例如增加或降低)PKM2活性水平，在需要其的受试者中调节(例如增加或降低)血糖水平，在需要其的受试者中抑制细胞增殖(转化细胞，例如癌症细胞，或者通常抑制经历需氧糖酵解的PKM2-依赖性细胞中的生长)的方法，治疗患有或易患与PKM2功能相关的疾病或病症的受试者的方法。在一个实施方式中，本文所述的化合物和组合物通过结合变构结合口袋(allosteric binding pocket)来调节PKM2。在一个实施方式中，本文所述的化合物和组合物抑制PKM2。在一个实施方式中，本文所述的化合物和组合物激活PKM2。在一个实施方式中，本文所述的化合物是式(I)-(IX)的化合物或式(I’)-(V’)的化合物或其可药用盐或者包含式(I)-(IX)的化合物或式(I’)-(V’)的化合物或其可药用盐的药物组合物。在一个实施方式中，用于本发明的方法中的化合物是国际专利申请第PCT/CN2017/09496号和美国临时专利申请第62/673,533号和第62/673,526号中所述的化合物，上述专利申请中每个的公开内容通过引用整体并入本文。
在本发明的第一实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中调节丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中：
Figure BDA0002385339370000141
Q是氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
R1是氢、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、-ORo1、-C(＝O)Rc1或氮保护基团；
L1是键、任选取代的亚烷基、-O–、-S–、-S-CH2–、-S(＝O)CH2–、-S(＝O)2CH2–、-NR3–、-NR3C(＝O)–、-C(＝O)NR3–、-–C(＝O)–、-OC(＝O)–、-C(＝O)O–、-NR3C(＝O)O–、-OC(＝O)NR3–、-NR3C(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-C(R4)2O–、-NR3C(R4)2–、-C(R4)2NR3–、-S(＝O)2–、-S(＝O)–、-S(＝O)2O–、-OS(＝O)2–、-S(＝O)O–、-OS(＝O)–、-S(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)2–、-S(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)–、-NR3S(＝O)2O–、-OS(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)O–、-OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、任选取代的亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
R2是氢、卤素、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或者当L1为–NR3–、-NR3C(＝O)–、-NR3C(＝O)O–、-NR3C(R4)2–、-NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、-NR3C(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–时为氮保护基团，或当L1为–O–、-OC(＝O)–、-OC(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-OS(＝O)2–、-OS(＝O)2NR3–、-OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–为氧保护基团，或当L1为–S–时为硫保护基团；
每个R3独立为氢、–ORo2、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或氮保护基团；
每个Ro1和Ro2独立为氢、任选取代的烷基或氧保护基团；
每个Rc1独立为任选取代的烷基或–N(Rcn)2，其中每个Rcn独立为氢、-C1-6烷基或氮保护基团；和
每个R4独立为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
在本发明的第二实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中调节血糖水平的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如第一实施方式中所定义。
在本发明的第三实施方式中，提供了一种在患有或易患与PKM2的功能相关的疾病或病症的受试者中抑制细胞增殖的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如第一实施方式中所定义。
在本发明的第四实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中治疗与PKM2的异常活性相关的疾病的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如第一实施方式中所定义。
在本发明的第五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第四实施方式的方法，其中所述疾病是增殖性疾病。
在本发明的第六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第四实施方式的方法，其中所述疾病是癌症、肥胖症、糖尿病(例如糖尿病肾病(DN))、动脉硬化、再狭窄、冠状动脉疾病(CAD)、布卢姆综合征(BS)、良性前列腺增生(BPH)或自身免疫性疾病。
在本发明的第七实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中治疗高血糖症的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如第一实施方式中所定义。
在本发明的第八实施方式中，提供了一种在需要其的受试者中治疗糖尿病的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如第一实施方式中所定义。
在本发明的第九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第八实施方式的方法，其中所述糖尿病是糖尿病肾病。
在本发明的第十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第九实施方式中任一项的方法，其中所述方法进一步包括鉴定将受益于PKM2的调节的受试者。
在本发明的第十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一实施方式的方法，其中所述调节是激活。
在本发明的第十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十一实施方式中任一项的方法，其中：
Q是氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的6至14元芳基或任选取代的5至14元杂芳基；
R1是氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C1-C6卤代烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的6至12元芳基、-ORo1、-C(＝O)Rc1或氮保护基团；
L1是键、任选取代的C1-6亚烷基、-O–、-S–、-S-CH2–、-S(＝O)CH2–、-S(＝O)2CH2–、-NR3–、-NR3C(＝O)–、-C(＝O)NR3–、-–C(＝O)–、-OC(＝O)–、-C(＝O)O–、-NR3C(＝O)O–、-OC(＝O)NR3–、-NR3C(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-C(R4)2O–、-NR3C(R4)2–、-C(R4)2NR3–、-S(＝O)2–、-S(＝O)–、-S(＝O)2O–、-OS(＝O)2–、-S(＝O)O–、-OS(＝O)–、-S(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)2–、-S(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)–、-NR3S(＝O)2O–、-OS(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)O–、-OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、任选取代的C1-C6亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
R2是氢、卤素、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C1-C6烷氧基、任选取代的-C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的-C6-C12芳基或任选取代的3至14元杂芳基，或者当L1为–NR3–、-NR3C(＝O)–、-NR3C(＝O)O–、-NR3C(R4)2–、-NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、-NR3C(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–为氮保护基团，当L1为–O–、-OC(＝O)–、-OC(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-OS(＝O)–、-OS(＝O)2–、-OS(＝O)2NR3–、-OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–为氧保护基团，或当L1为–S–时为硫保护基团；
每个R3独立为氢、–ORo2、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的C3-C12杂环基、任选取代的C6-C12芳基、任选取代的C5-C12杂芳基或氮保护基团；
每个Ro1和Ro2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc1独立为任选取代的-C1-C6烷基或–N(Rcn)2，其中每个Rcn独立为氢、-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个R4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的C6-C12芳基或任选取代的5至14元杂芳基。
在本发明的第十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十二实施方式中任一项的方法，其中：
Q是C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基或8至12元二环杂芳基，其中的每个被0-3个Rc取代；
R1选自氢、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、C3-C7单环环烷基和3至14元杂环基、-ORo1、-C(＝O)Rc1或氮保护基团；其中每个烷基、环烷基或杂环基被0-3个Rd取代；
R2选自氢、卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、C3-C7单环环烷基、C6-C12二环环烷基、3至14元杂环基、C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基、8至12元二环杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基被0-3个Re取代，或者当L1为–NR3–、-NR3C(＝O)–、-NR3C(＝O)O–、-NR3C(R4)2–、-NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、-NR3C(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–时为为氮保护基团，当L1为–O–、-OC(＝O)–、-OC(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-OS(＝O)–、-OS(＝O)2–、-OS(＝O)2NR3–、-OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–时为氧保护基团，或当L1为–S–时为硫保护基团；
R3选自氢、–ORo2、-C1-C6烷基、C3-C7单环环烷基、C6-C12二环环烷基、3至14元杂环基、C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基和8至12元二环杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基被0-3个Rf取代；
R4选自氢、-C1-C6烷基、C3-C7单环环烷基和3至14元杂环基，其中每个烷基、环烷基或杂环基被0-1个Rg取代；
L1是键、被0-3个Rh取代的亚烷基、-O–、-S–、-S-CH2–、-S(＝O)CH2–、-S(＝O)2CH2–、-NR3–、-NR3C(＝O)–、-C(＝O)NR3–、-–C(＝O)–、-OC(＝O)–、-C(＝O)O–、-NR3C(＝O)O–、-OC(＝O)NR3–、-NR3C(＝O)NR3–、-OC(R4)2–、-C(R4)2O–、-NR3C(R4)2–、-C(R4)2NR3–、-S(＝O)2–、-S(＝O)–、-S(＝O)2O–、-OS(＝O)2–、-S(＝O)O–、-OS(＝O)–、-S(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)2–、-S(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)–、-NR3S(＝O)2O–、-OS(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)O–、-OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、被0-3个Rh取代的亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
每个Rc独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、-NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN和-NO2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Rc与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基C(＝O)OH；
每个Rd独立选自卤素、-C1-C6烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-NH2和-CN；
每个Re独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、-NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN和-NO2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Re与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基；
每个Rf独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷氧基、-OH、-NH2、-CN和-NO2；
每个Rg独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷氧基、-OH、NH2、-CN和NO2；和
每个Rh独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、-NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN和-NO2、S(＝O)2芳基S(＝O)2杂芳基和＝NOH，或附接到相同或相邻碳原子的两个Rh与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基。
在本发明的第十四实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十三实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(II)所代表的化合物：
Figure BDA0002385339370000191
或其可药用盐；其中：
Ra和Rb各自独立为氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、-ORo3、-N(Rn1)2、-C(＝O)N(Rn1)2或–C(＝O)Rc2，或Ra和Rb可与其碳原子共同形成任选取代的环烷基或任选取代的杂环基；
每个Rn1独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro3独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；和
每个Rc2独立为任选取代的-C1-C6烷基；
其中其余变量如第一至第十二实施方式中任一项中所定义。
在本发明的第十五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十三实施方式中任一项的方法，其中L1是键、任选取代的-C1-6亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)–、-S(＝O)2–、-NR3C(＝O)–或–C(＝O)NR3–；和其中其余变量如第一至第十四实施方式任一项中所定义。
在本发明的第十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十四实施方式中任一项的方法，其中L1是被Rj和Rk取代的C1-6亚烷基；
其中每个Rj和Rk独立选自H、卤素、-CN、-ORo7、-N(Rn5)2、-N(Rn5)C(＝O)Rc5、-C(＝O)N(Rn5)2、-C(＝O)Rc5、-C(＝O)ORo7、-SRjs、-S(＝O)2Rjs或–S(＝O)Rjs、任选取代的-C1-C6烷基；或Rj和Rk可与其碳原子共同形成C＝O、C＝NRjn、任选取代的C3-C6单环环烷基环或任选取代的C3-C6单环杂环基环；
Rn5和Rjn中的每个独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基、-ORo8或氮保护基团；
每个Ro7独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc5独立为任选取代的-C1-C6烷基；和
每个Rjs独立为任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的杂芳基或硫保护基团；和
其中其余变量如第一至第十五实施方式任一项中所定义。
在本发明的第十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十六实施方式中任一项的方法，其中所述化合物由式(I’)表示：
Figure BDA0002385339370000201
或其可药用盐，其中：
R1是氢、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、-ORo1、-C(＝O)Rc1或氮保护基团；其中：
Ro1是氢、任选取代的烷基或氧保护基团；
Rc1是任选取代的烷基或–N(Rcn)2，其中每个Rcn独立为氢、-C1-6烷基或氮保护基团；
R2和Q各自独立为任选取代的5-或6元单环杂芳基；
Ra和Rb各自独立为氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、-ORo3、-N(Rn1)2、-C(＝O)N(Rn1)2或–C(＝O)Rc2；或者可选择地，Ra和Rb可与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或任选取代的杂环基；其中：
每个Rn1独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
Ro3是氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；和
Rc2是任选取代的-C1-C6烷基；和
Rj和Rk各自独立为氢、卤素、-CN、-ORo7、-N(Rn5)2、-N(Rn5)C(＝O)Rc5、-C(＝O)N(Rn5)2、-C(＝O)Rc5、-C(＝O)ORo7、-SRjs、-S(＝O)2Rjs、-S(＝O)Rjs或任选取代的-C1-C6烷基；或者可选择地，Rj和Rk可与其所附接的碳原子共同形成C＝O、任选取代的C1-C6单环环烷基环或任选取代的C3-C6单环杂环基环；其中：
每个Rn5独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基、-ORo8或氮保护基团，其中Ro8是氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Ro7独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc5独立为任选取代的-C1-C6烷基；和
每个Rjs独立为任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的杂芳基或硫保护基团。
在本发明的第十八实施方式中，提供了一种根据如上所述的第十七实施方式的方法，其中所述化合物是式(I’)所表示的化合物或其可药用盐，其中R2所表示的5-或6元单环杂芳基在每个可取代的环碳原子处被Rp任选取代和在每个可取代的环氮原子处被Rn6任选取代；其中：
每个Rp独立为氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo6、-SRs2、-N(Rn3)2、-C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)Rc4、-C(＝O)Rc4、-C(＝O)ORo6、-OC(＝O)Rc4、-S(＝O)Rs2、-S(＝O)2Rs2、-S(＝O)ORo6、-OS(＝O)Rc4、-S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)2Rc4、-S(＝O)N(Rn3)2、-S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)Rs2、-N(Rn3)S(＝O)2Rs2、-N(Rn3)C(＝O)ORo6、-OC(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)ORo6、-N(Rn3)S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)N(Rn3)2或–OS(＝O)2N(Rn3)2；或者可选择地，附接到相同或相邻碳原子的两个Rp可与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；其中：
每个Rn3独立为氢、任选取代的–C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro6独立为氢、任选取代的–C1-C6烷基或氧保护基团；和
每个Rc4是任选取代的–C1-C6烷基；
每个Rs2独立为任选取代的–C1-C6烷基或硫保护基团；和
Rn6是氢、任选取代的–C1-C6烷基或氮保护基团；和
其中其余变量如第十七实施方式所定义。
在本发明的第十九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十八实施方式中任一项的方法，其中其中Q是任选取代的5至6元单环杂芳基；和其中其余变量如第一至第十八实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十九实施方式中任一项的方法，其中Q是下式之一：
Figure BDA0002385339370000221
其中：
每个Rn独立为氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、–C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)Rc3、-C(＝O)Rc3、-C(＝O)ORo4、-OC(＝O)Rc3、-S(＝O)Rs1、-S(＝O)2Rs1、-S(＝O)ORo4、-OS(＝O)Rc3、-S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)2Rc3、-S(＝O)N(Rn2)2、–S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)Rs1、-N(Rn2)S(＝O)2Rs1、-N(Rn2)C(＝O)ORo4、–OC(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)ORo4、-N(Rn2)S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)N(Rn2)2或–OS(＝O)2N(Rn2)2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Rn与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；其中：
每个Rn2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc3独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs1独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；
只要化合价允许，n是0、1、2或3；和
Rna、Rnb和Rnd中的每个独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；和
其中其余变量如第一至第十九实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十实施方式中任一项的方法，其中Q所表示的5-或6元单环杂芳基选自以下：
Figure BDA0002385339370000231
和
其中其余变量如第一至第二十实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十一实施方式中任一项的方法，其中Q所表示的5-或6元单环杂芳基选自以下：
Figure BDA0002385339370000241
和
其中其余变量如第一至第二十一实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十二实施方式中任一项的方法，其中Q所表示的5-或6元单环杂芳基选自以下：
Figure BDA0002385339370000242
和
Figure BDA0002385339370000243
和
其中其余变量如第一至第二十二实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十四实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十三实施方式中任一项的方法，其中Q所表示的5-或6元单环杂芳基是
Figure BDA0002385339370000244
和其中其余变量如第一至第二十三实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十六实施方式中任一项的方法，其中Q是任选取代的8至12元二环杂芳基或任选取代的8至12元二环杂环基；和其中其余变量如第一至第十六实施方式任一项中所定义。
在本发明的第二十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十六和第二十五实施方式中任一项的方法，其中Q是下式之一：
Figure BDA0002385339370000251
Figure BDA0002385339370000252
和
Figure BDA0002385339370000253
其中每个Rn独立选自氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)Rc3、-C(＝O)Rc3、-C(＝O)ORo4、-OC(＝O)Rc3、-S(＝O)Rs1、-S(＝O)2Rs1、-S(＝O)ORo4、-OS(＝O)Rc3、-S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)2Rc3、-S(＝O)N(Rn2)2、-S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)Rs1、-N(Rn2)S(＝O)2Rs1、-N(Rn2)C(＝O)ORo4、-OC(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)ORo4、-N(Rn2)S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)N(Rn2)2、-OS(＝O)2N(Rn2)2或附接到相同或相邻碳原子的两个Rn与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；
每个Rna和Rnb独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Rn2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc3独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs1独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；
只要化合价允许，n是0、1、2或3；和
其中其余变量如第一至第十六和第二十五实施方式中任一项所定义。
在本发明的第二十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十六实施方式中任一项的方法，其中R2选自氢、羟基、卤素、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6烷氧基、苯基、萘基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、8元二环杂芳基、9元二环杂芳基，其中每个烷基、烯基、苯基和杂芳基被0-3个Re取代；和其中其余变量如第一至第二十六实施方式中任一项所定义。
在本发明的第二十八实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十七实施方式中任一项的方法，其中R2是下式之一：
Figure BDA0002385339370000271
Figure BDA0002385339370000281
Figure BDA0002385339370000282
和
Figure BDA0002385339370000283
其中每个Rp独立选自氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo6、-SRs2、-N(Rn3)2、-C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)Rc4、-C(＝O)Rc4、-C(＝O)ORo6、-OC(＝O)Rc4、-S(＝O)Rs2、-S(＝O)2Rs2、-S(＝O)ORo6、-OS(＝O)Rc4、-S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)2Rc4、-S(＝O)N(Rn3)2、-S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)Rs2、-N(Rn3)S(＝O)2Rs2、-N(Rn3)C(＝O)ORo6、-OC(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)ORo6、-N(Rn3)S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)N(Rn3)2、-OS(＝O)2N(Rn3)2，或者附接到相同或相邻碳原子的两个Rp与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；
每个Rn3、Rnc和Rnd独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro6独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc4独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs2独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；
只要化合价允许，p是0、1、2或3；和
其中其余变量如第一至第二十七实施方式中任一项所定义。
在本发明的第二十九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十八实施方式中任一项的方法，其中R2所表示的5-或6元单环杂芳基选自以下之一：
Figure BDA0002385339370000291
Figure BDA0002385339370000301
其中：
每个Rnc和Rnd独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
当化合价允许时，p是0、1、2、3或4；
其中其余变量如第一至第二十八实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十九实施方式中任一项的方法，其中R2所表示的5-或6元单环杂芳基选自以下之一：
Figure BDA0002385339370000302
Figure BDA0002385339370000311
Figure BDA0002385339370000312
其中其余变量如第一至第二十九实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第三十实施方式中任一项的方法，其中R2选自以下之一：
Figure BDA0002385339370000313
和其中其余变量如第一至第二十至三十实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第二十七至第三十一实施方式中任一项的方法，其中每个Rp独立为氢、卤素、任选取代的C1-4烷基、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-C(＝O)Rc3或–C(＝O)ORo4；和其中其余变量如第二十八至第三十一实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十六和第二十七至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(III)的化合物：
Figure BDA0002385339370000314
或其可药用盐，其中变量如第一至第十六和第二十七至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十四实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(IV)的化合物：
Figure BDA0002385339370000321
或其可药用盐，其中变量如第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(V-a)的化合物：
Figure BDA0002385339370000322
或其可药用盐，其中m是0、1或2；和其余变量如第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(V-b)的化合物：
Figure BDA0002385339370000323
或其可药用盐，其中m是0、1或2；Rnc独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；和其中其余变量如第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第十六和第二十五至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(VI)的化合物：
Figure BDA0002385339370000331
或其可药用盐，其中Rn7是氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；和其中其余变量如第一至第十六和第二十五至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十八实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(IX)的化合物：
Figure BDA0002385339370000332
或其可药用盐，其中Rnc独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；和其中其余变量如第一至第二十四和第二十七至第三十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第三十九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第三十八实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(II’)的化合物：
Figure BDA0002385339370000333
或其可药用盐，其中Rn6是氢、任选取代的–C1-C6烷基或氮保护基团；q是0、1、2或3；和其中其余变量如第一至第三十八实施方式中任一项所定义。可选择地，变量如第十七、第十八、第二十九、第三十和第三十一实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第三十八实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(III’)的化合物：
Figure BDA0002385339370000341
或其可药用盐，其中q是0、1、2或3；和其中其余变量如第一至第三十八实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第三十八实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(IV’)的化合物：
Figure BDA0002385339370000342
或其可药用盐，其中Rn6是氢、任选取代的–C1-C6烷基或氮保护基团；q是0、1、2或3；和其中其余变量如第一至第三十八实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第三十八实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是式(V’)的化合物：
Figure BDA0002385339370000343
或其可药用盐，其中q是0、1、2或3；和其中其余变量如第一至第三十八实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第三十九至第四十二实施方式中任一项的方法，其中Rn6是氢或-C1-4烷基；和其中其余变量如第三十九至第四十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十四实施方式中，提供了一种根据如上所述的第三十九至第四十二实施方式中任一项的方法，其中每个Rp独立为氢、卤素、任选取代的C1-4烷基、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-C(＝O)Rc3或–C(＝O)ORo4；和其中其余变量如第三十九至第四十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第二十六至第四十二实施方式中任一项的方法，其中Rna是氢或-C1-4烷基；和其中其余变量如第二十六至第四十二实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第二十至第四十五实施方式中任一项的方法，其中每个Rn独立为氢、卤素、任选取代的C1-4烷基、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-C(＝O)Rc3或–C(＝O)ORo4；和其中其余变量如第二十至第四十五实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第四十六实施方式中任一项的方法，其中R1是氢或-C1-C4烷基；和其中其余变量如第一至第四十六实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十八实施方式中，提供了一种根据如上所述的第十六至第四十七实施方式中任一项的方法，其中Rj和Rk各自独立为氢、卤素、-ORo7或-C1-C4烷基；或Rj和Rk连接在一起形成＝O；和其中其余变量如第十六至第四十七实施方式中任一项所定义。
在本发明的第四十九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第十六至第四十八实施方式中任一项的方法，其中Rj和Rk各自是氢；和其中其余变量如第十六至第四十八实施方式中任一项所定义。
在本发明的第五十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第十四至第四十九实施方式中任一项的方法，其中Ra和Rb各自是氢；和其中其余变量如第十四至第四十九实施方式中任一项所定义。
在本发明的第五十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第三十五至第五十实施方式中任一项的方法，其中q是0或1；和其中其余变量如第三十五至第五十实施方式中任一项所定义。
在本发明的第五十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第二十至第五十一实施方式中任一项的方法，其中n是0或1；和其中其余变量如第二十至第五十一实施方式中任一项所定义。
在本发明的第五十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第一至第五十二实施方式中任一项的方法，其中所述化合物是选自表1的化合物或其可药用盐。
在本发明的第五十四实施方式中，提供了一种调节丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括将PKM2接触有效量的如以上第一至第五十三实施方式中任一项的化合物或其可药用盐。
在本发明的第五十五实施方式中，提供了一种抑制表达丙酮酸激酶M2(PKM2)的细胞增殖的方法，包括将细胞接触有效量的如上述第一至第五十三实施方式中任一项的化合物或其可药用盐。
在本发明的第五十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四和第五十五实施方式中任一项的方法，其中所述方法是离体方法。
在本发明的第五十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四和第五十五实施方式中任一项的方法，其中所述方法是体外方法。
在本发明的第五十八实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四至第五十七实施方式中任一项的方法，其中所述方法抑制PKM2的活性。
在本发明的第五十九实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四至第五十七实施方式中任一项的方法，其中所述方法激活PKM2的活性。
在本发明的第六十实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四至第五十九实施方式中任一项的方法，其中PKM2在非红细胞的细胞中表达。
在本发明的第六十一实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十四至第六十实施方式中任一项的方法，其中细胞来源于患有或易患与PKM2的功能相关的疾病或病症的受试者或由其获得。
在本发明的第六十二实施方式中，提供了一种根据如上所述的第六十一实施方式所述的方法，其中疾病或病症与PKM2的异常活性相关。
在本发明的第六十三实施方式中，提供了一种根据如上所述的第六十一实施方式所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症、肥胖症、糖尿病(例如糖尿病、糖尿病肾病(DN))、动脉硬化、再狭窄、冠状动脉疾病(CAD)、布卢姆综合征(BS)、良性前列腺增生(BPH)或自身免疫性疾病。
在本发明的第六十四实施方式中，提供了一种根据如上所述的第六十三实施方式所述的方法，其中所述糖尿病是糖尿病肾病。
在本发明的第六十五实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十五至第六十四实施方式中任一项的方法，其中细胞是过表达PKM2的细胞。
在本发明的第六十六实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十五至第六十五实施方式中任一项的方法，其中细胞是表达具有异常活性的PKM2的细胞。
在本发明的第六十七实施方式中，提供了一种根据如上所述的第五十五至第六十六实施方式中任一项的方法，其中细胞是癌症细胞、胰腺细胞、肝细胞、神经细胞或肾细胞。
在式(I)-(IX)、(I’)-(V’)的化合物或其可药用盐的某些实施方式中，R2和Q各自独立是任选取代的5-或6元单环杂芳基。在式(I)-(IX)、(I’)-(V’)的化合物或其可药用盐的某些实施方式中，R2和Q均是任选取代的5-或6元单环杂芳基；和L1和L2各自独立为任选取代的C1-4亚烷基。在某些实施方式中，R2和Q相同。在某些实施方式中，R2和Q不同。
在某些实施方式中，本文所述的化合物可用作本文所述方法和组合物中的PKM2激活剂，并且通过以下机制或特性中的一个或多个工作或者具有以下机制或特性中的一个或多个：
a.其是PKM2的变构激活剂；
b.其调节(例如稳定)PKM2的FBP结合口袋；
c.其调节(例如促进)FBP从PKM2的结合口袋中的释放；
d.其是FBP的调节剂(例如激动剂)，例如类似物，例如以低于、大致相同于或高于FBP的亲和力结合PKM2的激动剂；
e.其调节(例如促进)四聚体PKM2的溶解；
f.其调节(例如促进)四聚体PKM2的组装；
g.其调节(例如稳定)PKM2的四聚体构型；
h.其调节(例如促进)包含磷酸酪氨酸的多肽与PKM2的结合；
i.其调节(例如促进)包含磷酸酪氨酸的多肽诱导FBP从PKM2释放的能力，例如通过诱导PKM2构型的改变，例如在Lys 433位置处，从而阻碍FBP的释放；
j.调节PKM2经历影响酶活性的转录后修饰(例如在Cys358处氧化或在Lys305处乙酰化)的倾向；
k.相对于FBP结合口袋，其结合或改变Lys 433的位置；
l.相对于至少一种其他的PK同工型，其选择性地调节(例如激活)PKM2，例如相对于PKR、PKM1或PKL中的一个或多个，其对PKM2有选择性；
m.其对PKM2的亲和力大于其对至少一种其他的PK同工型(例如PKR,PKM1或PKL)的亲和力。
可测试本文所述的化合物激活PKM2的能力。为简单起见，这些化合物的激活活性在表2中以AC50表示。在表2中，本文所述的化合物可具有野生型PKM2的AC50。“A”是指AC50小于0.300μM；“B”是指AC50为0.301μM至0.800μM，“C”是指AC50大于0.800μM。
表1.作为PKM2调节剂的示例性化合物
Figure BDA0002385339370000381
Figure BDA0002385339370000391
Figure BDA0002385339370000401
Figure BDA0002385339370000411
Figure BDA0002385339370000421
Figure BDA0002385339370000431
Figure BDA0002385339370000441
Figure BDA0002385339370000451
表2：对于野生型PKM2的示例性化合物的AC50
Figure BDA0002385339370000452
Figure BDA0002385339370000461
在某些实施方式中，式(I)-(IX)、(I’)-(V’)的化合物选自表1中和实施例中所阐述的任何化合物。在某些实施方式中，式(I)-(IX)、(I’)-(V’)的化合物具有下式中任何一种：
Figure BDA0002385339370000471
Figure BDA0002385339370000481
Figure BDA0002385339370000482
其中Rna、Rnc、Ro2和Ro6如本文所定义，和Rox是氢或氧保护基团。在某些实施方式中，Rna是氮保护基团(例如SEM或BOC)。在某些实施方式中，Rnc是氮保护基团(例如SEM或BOC)。在某些实施方式中，Ro2是氧保护基团(例如THP)。在某些实施方式中，Ro6是氧保护基团(例如TBS)。在某些实施方式中，Rox是氧保护基团(例如THP)。
本文所述的化合物可使用实施例中所阐述的多种合成技术制备。可用于合成本文所述化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和去保护)是本领域中已知的，并且包括例如诸如以下所述的那些：R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCHPublishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in OrganicSynthesis,2d.Ed.,John Wiley and Sons(1991)；L.Fieser and M.Fieser,Fieser andFieser's Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；andL.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley andSons(1995)，以及它们的后续版本。
可用作PKM2野生型和/或突变型激活剂的某些激活剂化合物是那些显示在不存在FBP时对PKM2酶(野生型和/或突变型酶)的特异性和激活达到高于存在FBP时的10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100％的化合物。
在一些实施方式中，可使用方案1中所述的方法来制备式(I)的化合物。式S1的噻唑醛与叠氮乙酸乙酯在亲核加成条件(例如碱)下在合适的溶剂(例如乙醇)中反应以得到式S2的中间体。式S2的羟基可被转化为离去基团并经历消除以得到式S3。氨基的环化和后续官能化提供了式S5的二环化合物，其经历与甲硫醇钠的亲核置换，随后氧化以得到式S7。式S7在肼存在下进一步环化，随后用LG1-CH2-Q1在碱存在下亲核置换，提供了式S9的中间体。式S9中的硫基团可被氧化为亚磺酰基或磺酰基以提供式S10或S11，其是用于进一步亲核置换以生成通式S12的底物。如本文所用，X1是如本文所定义的离去基团。在某些实施方式中，X1是卤素、烷磺酰氧基、芳烃磺酰氧基、重氮、烷基二氮烯、芳基二氮烯、烷基三氮烯、芳基三氮烯、硝基、烷基硝酸酯、芳基硝酸酯、烷基磷酸酯、芳基磷酸酯、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、氨、烷基胺、芳基胺、羟基、烷氧基、芳氧基；LG1是如本文所定义的离去基团；Q1是任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；和Nu1是亲核基团，如本文所定义。可使用标准化学转化将式S12的化合物的Nu1进一步转化为其他官能团。R1如第一实施方式中所定义。
方案1
Figure BDA0002385339370000501
方案2
Figure BDA0002385339370000502
在一些实施方式中，可使用方案2中所示的方法制备式(I)的化合物。类似于方案1，可从式S13的噻唑醛制备式S21。式S21的卤化得到式S22，其可经历与烷基金属、烯基金属、炔基金属、芳基金属、杂芳基金属、杂环基金属或环烷基金属的有机偶联以得到式S23的化合物。如本文所用，X3是卤素；R1如本发明的第一实施方式所定义；LG2是如本文所定义的离去基团；Q2是任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；M1是金属(例如Li、Na、K、Mg、锌、Sn、B、Pd、Si、Cu等)，X4是卤素或烷基磺酸酯或芳基磺酸酯；Rr1是任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。在某些实施方式中，有机偶联反应是Negishi反应；X3是I；和M1是锌。
式S22和S23的化合物是可用于在X3和/或Rr1位置处引入更多官能团的中间体(方案3)。在某些实施方式中，式23-i的化合物可进一步氧化以形成式S24。S24与合适的亲核试剂的亲核加成生成了S25的化合物。在另一个实施方式中，式S22的化合物可与乙烯基金属偶联以将乙烯基引入到噻唑环。乙烯基氧化随后亲核加成提供了式S28的化合物。如本文所用，Nu2是亲核试剂。
方案3
Figure BDA0002385339370000511
如本文所用，Rr2是任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，Nu1和Q2如方案2中所定义。
如本文所用，亲核试剂是向亲电试剂贡献电子对形成与反应相关的化学键的化学物质。具有游离电子对或者至少一个π键的所有分子或离子可用作亲核试剂。示例性的亲核试剂包括至少一个具有亲核官能性的基团，例如α碳(例如邻近羰基、磺酰基、亚磺酰基、芳基或杂芳基的碳)、硫醇基团、羟基、伯氨基、仲氨基、卤化物、氰化物、叠氮化物、醇化物、有机金属或无机金属碱。
在一些实施方式中，可使用方案4中所示的方法制备式(I)的化合物。式S30与仲环胺的亲核置换提供了式S31。化合物S32的有机-偶联反应(例如Suzuki偶联、Pd偶联等)提供了式S33(i)-(iii)的化合物。进一步地，可用氨基甲酸铵将式S34的亚磺酰基官能化以得到式S35的亚氨基-砜(sulfanone)。
方案4
Figure BDA0002385339370000512
Figure BDA0002385339370000513
Figure BDA0002385339370000521
如本文所用，
Figure BDA0002385339370000522
代表具有作为环原子的氮的环A。
如本文所用，
Figure BDA0002385339370000523
代表具有在碳环原子上的附接点的环B。
R1如第一实施方式中所定义。每个R35、R36和R37独立为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基或任选取代的环烷基。
X4是卤素或-OTf。M4是化合价允许的有机金属，当需要时具有合适的配体(有机或无机)。示例性的M4包括但不限于有机Li、Sn、B(例如硼酸和硼酸酯)、锌、Mg、Si、Pd和Cu。
治疗方法
在一个实施方式中，提供了一种治疗如本文所述的疾病、病症或障碍(例如治疗)的方法，包括施用本文所述的化合物、化合物的可药用盐或包含化合物的药物组合物(例如实施例中以及表1和图1A-1C、2A-2C、3中的式(I)-(IX)、(I’)-(V’)的化合物)。
本文所述的化合物和组合物可被施用给培养细胞(例如在体外或离体)或施用给受试者(例如在体内)以治疗和/或诊断多种病症，包括本文以下所描述的那些。
增殖性疾病
在一些实施方式中，提供了一种治疗增殖性疾病的方法，包括对受试者施用如本文所述的化合物、其可药用盐或其药物组合物。如这里所用，“增殖性疾病”是指因细胞增殖引起的异常生长或延伸而发生的疾病(WalkeR,CambRidge DictionaRy of Biology；CambRidge UniveRsity PRess：CambRidge,UK,1990)。增殖性疾病可能与以下有关：1)正常静止细胞的病理性增殖；2)细胞由其正常位置的病理性迁移(例如肿瘤细胞的转移)；3)蛋白水解酶(诸如基质金属蛋白酶(例如胶原酶、明胶酶和弹性蛋白酶)的病理性表达；或4)病理性血管新生，如在增生性视网膜病变和肿瘤转移中。示例性的增殖性疾病包括癌症(即，“恶性肿瘤”)、良性肿瘤、血管新生、炎性疾病和自身免疫性疾病。在某些实施方式中，增殖性疾病是癌症。在某些实施方式中，增殖性疾病是自身免疫性疾病。
术语“赘生物或肿瘤(neoplasm或tumor)”在本文中可互换使用，并且是指异常的组织块，其中该块的生长超过正常组织的生长并且与其不协调。赘生物或肿瘤可能是“良性”或“恶性”的，取决于以下特征：细胞分化程度(包括形态和功能)、生长速率、局部浸润和转移。“良性肿瘤”通常具有良好的分化能力，其特征是比恶性肿瘤的生长缓慢，并且仍然局限于起源部位。另外，良性肿瘤不具有浸润、侵袭或转移到远处的能力。示例性的良性肿瘤包括但不限于脂肪瘤、软骨瘤、腺瘤、软垂疣、老年性血管瘤、脂溢性角化病、雀斑和皮脂腺增生。在某些情况下，某些“良性”肿瘤以后可能会引起恶性肿瘤，这可能是由于肿瘤的瘤细胞亚群中的其他遗传变化所致，这些肿瘤被称为“恶性前肿瘤”。示例性的恶性前肿瘤是畸胎瘤。相反，“恶性肿瘤”通常分化较差(发育不良)，并具有快速生长的特征，并伴有周围组织的逐渐浸润、侵袭和破坏。此外，恶性肿瘤通常具有转移至远处的能力。术语“转移”、“转移性”或“转移的”是指癌细胞从原发性或原始肿瘤向另一器官或组织的扩散或迁移，并且通常可通过存在原发性或原始肿瘤的细胞类型的“继发性肿瘤”或“继发性细胞块”的存在而不是继发性(转移性)肿瘤所在的器官或组织来识别。例如，已经迁移到骨骼的前列腺癌被称为转移的前列腺癌，并且包括在骨组织中生长的癌性前列腺癌细胞。
术语“癌症”是指特征在于异常细胞的生长的一类疾病，所述异常细胞不受控制地增殖并且具有浸润和破坏正常身体组织的能力。参见，例如，Stedman’s MedicalDictionary,25th ed.；Hensyl ed.；Williams&Wilkins:Philadelphia,1990。示例性的癌症包括实体肿瘤、软组织肿瘤及其转移。所公开的方法也可用于非实体癌症。示例性的实体肿瘤包括各种器官组织的恶性肿瘤(例如肉瘤、腺癌和癌)，诸如以下中的那些：肺、乳腺、淋巴、胃肠道(例如结肠)和泌尿生殖道(例如直肠、泌尿道上皮或睾丸肿瘤)、咽部、前列腺和卵巢。示例性的腺癌包括结直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌和小肠癌。其他示例性癌症包括：成人急性淋巴细胞白血病；儿童期急性淋巴细胞白血病；成人急性髓性白血病；肾上腺皮质癌；儿童期肾上腺皮质癌；艾滋病相关淋巴瘤；与艾滋病有关的恶性肿瘤；肛门癌；儿童期小脑星形细胞瘤(Astrocytoma,Childhood Cerebellar)；儿童期脑星形细胞瘤(Astrocytoma,Childhood Cerebral)；肝外胆管癌；膀胱癌；儿童期膀胱癌；骨癌、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；儿童期脑干胶质瘤；成人脑肿瘤；脑肿瘤，儿童期脑干胶质瘤；脑肿瘤，儿童期小脑星形细胞瘤；脑肿瘤，儿童期脑星形细胞瘤/恶性脑胶质瘤；脑肿瘤，儿童期室管膜瘤；脑肿瘤，儿童期髓母细胞瘤；脑肿瘤，儿童期幕上原始神经外胚层肿瘤(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors)；脑肿瘤，儿童期视觉通路和下丘脑胶质瘤；脑肿瘤，儿童期(其他)；乳腺癌；乳腺癌和妊娠；儿童期乳腺癌；男性乳腺癌；儿童期支气管腺瘤/类癌；儿童期类癌；胃肠道类癌；肾上腺皮质癌；胰岛细胞癌；不明原因的癌；原发性中枢神经系统淋巴瘤；儿童期小脑星形细胞瘤；儿童期脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤；宫颈癌；儿童癌症；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性骨髓增生性疾病；腱鞘透明细胞肉瘤；结肠癌；儿童期大肠癌；皮肤T细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；儿童期室管膜瘤；卵巢上皮癌；食道癌；儿童期食道癌；尤因氏肿瘤家族；儿童期颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌，眼内黑色素瘤；眼癌，视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胃癌，儿童期胃癌；胃肠道类癌；儿童期颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；卵巢生殖细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤；胶质瘤，儿童脑干；脑胶质瘤，儿童视觉通路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；肝细胞(肝)癌，成人(原发性)；肝细胞(肝)癌，儿童期(原发性)；霍奇金淋巴瘤，成人；霍奇金淋巴瘤，儿童期；妊娠期霍奇金淋巴瘤；下咽癌；下丘脑和视觉通路胶质瘤，儿童期；眼内黑色素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西氏肉瘤；肾癌；喉癌；喉癌，儿童期；急性淋巴细胞性白血病，，成人；急性淋巴细胞性白血病，儿童期；急性髓样白血病，成人；急性髓样白血病，儿童期；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒细胞性白血病；毛细胞性白血病；唇和口腔癌；成人肝癌(原发性)；肝癌，儿童(原发性)；非小细胞肺癌；小细胞肺癌；淋巴细胞白血病，成人急性；淋巴细胞白血病，儿童急性；慢性淋巴细胞性白血病；艾滋病相关的淋巴瘤；淋巴瘤，中枢神经系统(原发性)；淋巴瘤，皮肤T细胞成人霍奇金淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤，儿童期；妊娠期间霍奇金淋巴瘤；成人非霍奇金淋巴瘤；儿童成人非霍奇金淋巴瘤；妊娠期间非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；男性乳腺癌；成人恶性间皮瘤；儿童期恶性间皮瘤；恶性胸腺瘤；髓母细胞瘤，儿童期；黑色素瘤；黑色素瘤，眼内；默克尔细胞癌；间皮瘤，恶性；原发性隐匿性转移性鳞状癌；多发性内分泌瘤形成综合症，儿童期；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；蕈样真菌病；骨髓增生异常综合症；慢性骨髓性白血病；儿童急性骨髓性白血病；多发性骨髓瘤；慢性骨髓增生异常；鼻腔和鼻旁窦癌；鼻咽癌；鼻咽癌，儿童期；神经母细胞瘤；非霍奇金淋巴瘤，成人；非霍奇金淋巴瘤，儿童期；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；非小细胞肺癌；口腔癌，儿童期；口腔和唇癌；口咽癌；骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌，儿童期；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，儿童期；胰腺癌，胰岛细胞；鼻旁窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童期；垂体瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；妊娠和霍奇金淋巴瘤；妊娠和非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；成人原发性肝癌；儿童期原发性肝癌；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾脏)癌；肾细胞癌，儿童期；肾盂和输尿管移行细胞癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童期；唾液腺癌；唾液腺癌，儿童期；肉瘤，尤因的肿瘤家族；卡波西氏肉瘤；骨的肉瘤(骨肉瘤)/恶性纤维组织细胞瘤；肉瘤，横纹肌肉瘤，儿童期；，成人软组织肉瘤；儿童期软组织肉瘤；塞扎里综合症；皮肤癌；皮肤癌，儿童期；皮肤癌(黑色素瘤)；皮肤癌，默克尔细胞；小细胞肺癌；小肠癌；成人软组织肉瘤；儿童期软组织肉瘤；鳞状颈癌伴隐匿性原发性，转移性；胃癌；胃癌，儿童期；幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童期；T-细胞淋巴瘤，皮肤；睾丸癌；胸腺瘤，儿童期；胸腺瘤，恶性；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童期；肾盂和输尿管的移行细胞癌；妊娠期滋养细胞肿瘤；儿童期未知的原发部位癌症；不寻常的儿童期癌症；输尿管和肾盂移行细胞癌；尿道癌；子宫肉瘤；阴道癌；儿童期视觉通路和下丘脑胶质瘤；外阴癌；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；和威尔姆斯氏肿瘤。还可以根据本文所述的方法治疗或预防上述癌症的转移。
癌症组合疗法
在一些实施方式中，所提供的方法进一步包括施用一种或多种其他的癌症治疗。示例性的癌症治疗包括，例如，化学疗法、靶向疗法(如抗体疗法)、免疫疗法和激素疗法。这些治疗中每个的例子在下文中提供。
在一些实施方式中，本文所述的化合物与一种或多种化学疗法共同使用。化学疗法是用可消灭癌细胞的药物治疗癌症。。与靶向疗法相反，“化学疗法”通常是指通常会影响快速分裂细胞的细胞毒性药物。化学疗法药物以各种可能的方式干扰细胞分裂，例如，DNA的复制或新形成的染色体的分离。大多数形式的化学疗法都靶向所有快速分裂的细胞，并且对癌细胞不是特异性的，尽管某种程度的特异性可能来自许多癌细胞无法修复DNA损伤，而正常细胞通常可以。
在癌症治疗中使用的化学治疗剂的例子包括例如抗代谢物(例如叶酸、嘌呤和嘧啶衍生物)和烷基化剂(例如氮芥、亚硝基脲、铂、烷基磺酸盐、肼、三氮烯、氮丙啶、纺锤体毒物、细胞毒剂、拓扑异构酶抑制剂等)。示例性的药物包括阿柔比星(Aclarubicin)、放线菌素(Actinomycin)、阿利维A酸(Alitretinoin)、六甲蜜胺(Altretamine)、氨基蝶呤、氨基乙酰丙酸、氨柔比星(Amrubicin)、安吖啶(Amsacrine)、阿那格雷(Anagrelide)、三氧化二砷、天门冬酸胺酶、阿曲生坦(Atrasentan)、贝洛替康(Belotecan)、贝沙罗汀(Bexarotene)、苯达莫司汀(bendamustine)、博来霉素(Bleomycin)、硼替佐米(Bortezomib)、白消安(Busulfan)、喜树喊(Camptothecin)、卡培他滨(Capecitabine)、卡铂(Carboplatin)、卡波醌(Carboquone)、卡莫氟(Carmofur)、卡莫司汀(Carmustine)、塞来昔布(Celecoxib)、瘤可宁(Chlorambucil)、氮芥(Chlormethine)、顺铂(Cisplatin)、克拉屈滨(Cladribine)、氯法拉滨(Clofarabine)、克立他酶(Crisantaspase)、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D(Dactinomycin)、柔红霉素(Daunorubicin)、地西他滨(Decitabine)、地美可辛(Demecolcine)、多西他赛(Docetaxel)、阿霉素(Doxorubicin)、乙丙昔罗(Efaproxiral)、伊利司莫(Elesclomol)、依沙芦星(Elsamitrucin)、依诺他滨(Enocitabine)、表柔比星(Epirubicin)、雌莫司汀(Estramustine)、依托格鲁(Etoglucid)、依托泊苷(Etoposide)、氟尿苷(Floxuridine)、氟达拉滨(Fludarabine)、氟尿嘧啶(Fluouracil)(5FU)、福莫司汀(Fotemustine)、吉西他滨(Gemcitabine)、Gliadel植入剂(Gliadel implant)、羟基脲(Hydroxycarbamide)、羟基脲(Hydroxyurea)、依达比星(Idarubicin)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、伊立替康(Irinotecan)、伊洛福芬(Irofulven)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、拉罗他赛(Larotaxel)、亚叶酸(Leucovorin)、阿霉素脂质体、柔红霉素脂质体、氯尼达明(Lonidamine)、洛莫司汀(Lomustine)、甲硫蒽酮(Lucanthone)、甘露舒凡(Mannosulfan)、马索罗酚(Masoprocol)、美法仑(Melphalan)、疏基嘌呤、美司那(Mesna)、甲氨蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、二溴甘露醇、米托胍腙(Mitoguazone)、米托坦(Mitotane)、丝裂霉素(Mitomycin)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、奈达铂(Nedaplatin)、尼莫司汀(Nimustine)、奥利默森(Oblimersen)、美玻他辛(Omacetaxine)、奥他赛(Ortataxel)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、培门冬酶(Pegaspargase)、培美曲塞(Pemetrexed)、喷司他汀(Pentostatin)、吡柔比星(Pirarubicin)、匹杉琼(Pixantrone)、普卡霉素(Plicamycin)、卟吩姆钠(Porfimer sodium)、泼尼莫司汀(Prednimustine)、甲基苄肼(Procarbazine)、雷替曲塞(Raltitrexed)、雷莫司汀(Ranimustine)、鲁比替康(Rubitecan)、沙帕他滨(Sapacitabine)、司莫司汀(Semustine)、腺病毒载体定位码基因(Sitimagene ceradenovec)、赛特铂(Strataplatin)、链脲霉素(Streptozocin)、他拉泊芬(Talaporfin)、替加氟-尿嘧啶(Tegafur-uracil)、替莫泊芬(Temoporfin)、替莫唑胺(Temozolomide)、替尼泊苷(Teniposide)、替司他赛(Tesetaxel)、睾内酯(Testolactone)、四硝酸酯(Tetranitrate)、噻替派(Thiotepa)、噻唑呋林(Tiazofurine)、硫鸟嘌呤(Tioguanine)、替吡法尼(Tipifarnib)、拓扑替康(Topotecan)、曲贝替定(Trabectedin)、三亚胺醌(Triaziquone)、三乙撑蜜胺(Triethylenemelamine)、三铂(Triplatin)、维甲酸(Tretinoin)、苏消安(Treosulfan)、曲洛磷胺(Trofosfamide)、乌拉莫司汀(Uramustine)、戊柔比星(Valrubicin)、维替泊芬(Verteporfin)、长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、长春氟宁(Vinflunine)、长春瑞滨(Vinorelbine)、伏立诺他(Vorinostat)、佐柔比星(Zorubicin)和本文所述其它细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。
在一些实施方式中，本文所述的化合物与一种或多种靶向疗法一起施用。靶向疗法构成了对癌细胞的失调蛋白具有特异性的药物的用途。小分子靶向治疗药物通常是癌细胞内突变、过度表达或其他关键蛋白质上酶结构域的抑制剂。显著实例为酪氨酸激酶抑制剂诸如阿西替尼(Axitinib)、博舒替尼(Bosutinib)、西地尼布(Cediranib)、达沙替尼(dasatinib)、埃罗替尼(erlotinib)、伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、来他替尼(Lestaurtinib)、尼罗替尼(Nilotinib)、司马尼布(Semaxanib)、索拉非尼(Sorafenib)、舒尼替尼(Sunitinib)和凡德他尼(Vandetanib)，并且也为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂诸如阿伏西地(Alvocidib)和塞里昔布(Seliciclib)。单克隆抗体疗法是其中治疗剂为与癌细胞表面上的蛋白质特异性结合的抗体的另一种方案。实例包括通常用于乳腺癌的抗HER2/neu抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)(
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)和通常用于多种B细胞恶性肿瘤的抗-CD20抗体利妥昔单抗(rituximab)和托西莫单抗(Tositumomab)。其它示例性抗体包括西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Panitumumab)、曲妥单抗、阿仑单抗(Alemtuzumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、依决洛单抗(Edrecolomab)和吉妥单抗(Gemtuzumab)。示例性融合蛋白包括阿柏西普(Aflibercept)和地尼白介素(Denileukin diftitox)。在一些实施方案中，靶向疗法可与本文所述化合物联合使用。
靶向疗法也可涉及作为可与细胞表面受体结合或影响肿瘤周围的细胞外基质的“归巢装置(homing devices)”的小肽。如果核素在细胞附近衰变，那么与这些肽连接的放射性核素(例如，RGD)最终杀死癌细胞。此类疗法的实例包括
Figure BDA0002385339370000582
在一些实施方案中，本申请所述的化合物与一种或多种免疫治疗剂一起施用。癌症免疫疗法是指设计用于诱导受试者自身的免疫系统对抗肿瘤的不同类型的治疗方案。产生抗肿瘤的免疫反应的当代方法包括用于浅表性膀胱癌的囊内BCG免疫疗法，以及使用干扰素和其它细胞因子在肾细胞癌和黑色素瘤受试者体内诱导免疫反应。
因为供体的免疫细胞常常会以移植物抗肿瘤效应攻击肿瘤，所以同种异体造血干细胞移植可视为一种形式的免疫疗法。在一些实施方案中，免疫治疗剂可与本文所述的化合物或组合物联合使用。
在一些实施方案中，本申请所述的化合物与一种或多种激素治疗剂一起施用。可通过提供或阻断某些激素抑制一些癌症的生长。激素敏感性肿瘤的常见实例包括某些类型的乳腺癌和前列腺癌。去除或阻断雌激素或睾酮常常是重要的附加疗法。在某些癌症中，施用激素激动剂(诸如孕激素)可能在治疗上有益。在一些实施方案中，激素治疗剂可与本文所述的化合物或组合物联合使用。
肥胖症和肥胖障碍
在一些实施方式中，提供了一种通过对人类受试者施用有效量的如本文所述的化合物、其可药用盐或药物组合物而在受试者(例如儿童或成人)中治疗或预防肥胖症的方法。“肥胖症”是指受试者的体重指数大于或等于30的病症。许多本文所述的化合物可用于治疗或预防超重病症。“超重”是指受试者的体重指数大于或等于25.0的病症。体重指数(BMI)和其他定义是根据以下的：“NIH Clinical Guidelines on the Identificationand Evaluation,and Treatment of Overweight and Obesity in Adults”(1998)。用化合物治疗可以有效改变受试者体重的量进行，例如改变至少2、5、7、10、12、15、20、25、30、25、40、45、50或55％。用化合物治疗可以有效减少受试者的体重指数的量进行，例如减少至低于30、28、27、25、22、20或18。化合物可用于治疗或预防异常或不合适的增重、代谢率或脂肪沉积，例如厌食症、贪食症、肥胖症、糖尿病或高脂血症(例如甘油三酯升高和/或胆固醇升高)以及脂肪或脂质代谢障碍。
可施用本文所述的化合物或组合物以治疗与普拉德-威利综合征(PWS)相关的肥胖症。PWS是与肥胖有关的遗传性疾病(例如病态肥胖)。
本文所述的化合物或组合物可用于在患有PWS相关性肥胖的个体中减少体内脂肪，防止体内脂肪增加，降低胆固醇(例如，总胆固醇和/或总胆固醇与HDL胆固醇的比率)和/或降低食欲，和/或减少合并症，例如糖尿病、心血管疾病和中风。
高血糖症
高葡萄糖水平导致葡萄糖代谢途径中的代谢异常并引起线粒体功能障碍。这也会过量产生活性氧(ROS)。升高的细胞内葡萄糖导致有毒的葡萄糖代谢产物山梨糖醇、甲基乙二醛(MG)和二酰基甘油(DAG)的积累，已提出它们促成了微血管并发症，例如DN。发现小分子PKM2激活剂可逆转高血糖引起的有毒葡萄糖代谢产物和线粒体功能障碍的升高(NatMed.2017,23(6):753–762；美国专利号9921221)。
在某些实施方式中，本文提供了一种在受试者中治疗高血糖症的方法，包括施用治疗有效量的化合物、其可药用盐或药物组合物。
在某些实施方式中，本文提供了一种在受试者中治疗糖尿病的方法，包括施用治疗有效量的化合物、其可药用盐或药物组合物。如本文所用，“糖尿病疾病”是指糖尿病和糖尿病前期以及糖尿病影响。糖尿病是指其中人具有较高血糖的一组代谢性疾病，这可能是因为人体无法产生足够的胰岛素，或者是因为细胞对产生的胰岛素没有应答。这种高血糖会引起多尿(尿频)、多饮(口渴)和多食(饥饿)的典型症状。有几种类型的糖尿病。I型糖尿病是由于人体无法产生胰岛素而导致的，目前需要该人注射胰岛素或佩戴胰岛素泵。II型糖尿病是由胰岛素抵抗导致的，在这种情况下，细胞无法正确使用胰岛素，有时还会出现绝对的胰岛素缺乏症。当妊娠妇女没有事先诊断出糖尿病而血糖升高时，就会发生妊娠糖尿病。糖尿病的其他形式包括由于胰岛素分泌的遗传缺陷引起的先天性糖尿病，与囊性纤维化相关的糖尿病，高剂量糖皮质激素诱导的类固醇糖尿病以及几种形式的单基因糖尿病，例如年轻的成熟型糖尿病(例如，MODY 1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。糖尿病前期指的是当人的血糖水平高于正常水平但不足以诊断出糖尿病时发生的病症。各种形式的糖尿病都会增加长期并发症的风险。这些通常会在多年后发展，但可能是在那之前没有得到诊断的那些人的第一个症状。长期的主要并发症与血管损伤有关。糖尿病的示例性影响包括心血管疾病，缺血性心脏病(心绞痛，心肌梗塞)等大血管疾病，中风和周围血管疾病，微血管并发症(例如，对小血管的损害)，糖尿病性视网膜病变(即糖尿病对眼视网膜中的血管形成的影响)，糖尿病性肾病(即糖尿病对肾脏的影响)，糖尿病性神经病变(例如糖尿病对神经系统的影响，最常见的是引起脚的麻木，刺痛和疼痛，这些还疾病增加了由于感觉改变，糖尿病足溃疡和X综合征引起的皮肤损害的风险)。在某些实施方式中，“糖尿病疾病”包括一种或多种选自高血糖，高胰岛素血症，糖尿病，胰岛素抵抗，葡萄糖代谢受损，葡萄糖耐量(IGT)受损，空腹血糖受损，糖尿病性视网膜病变，糖尿病肾病，肾小球动脉硬化，糖尿病性神经病变和X综合征的疾病。
在某些实施方式中，本文所述的化合物或组合物可用于降低受试者中的活性氧(ROS)和/或葡萄糖代谢产物中的至少一种(例如山梨糖醇、甲基乙二醛(MG)和二酰基甘油(DAG))。
在某些实施方式中，本文所述的化合物或组合物可用于治疗微血管并发症。
在某些实施方式中，本文所述的化合物或组合物可用于治疗DN。在某些实施方式中，DN的治疗可包括减轻与DN相关的任何症状，包括但不限于食欲改变，睡眠改变，血清中的蛋白质改变，虚弱和/或恶心。
在某些实施方式中，所述方法进一步包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种增加一种或多种DN保护因子的水平或活性的辅助药物。示例性的DN保护因子包括但不限于SOD1-超氧化物歧化酶；TPI1-磷酸丙糖异构酶同工型2；SORD-山梨糖醇脱氢酶；ALDOA-醛缩酶A，果糖二磷酸；GAPDH-甘油醛-3-磷酸脱氢酶；PKM-丙酮酸激酶同工酶M1/M2；ENO1-α-烯醇酶；FGB-纤维蛋白原β链；SELENBP1-硒结合蛋白1；PEBP1-磷脂酰乙醇胺结合蛋白1；CRYL1-λ-结晶同系物(美国专利号9921221，通过引用整体并入本文)。辅助药物可以使保护因子的水平或活性增加或使危险因子的水平或活性降低至少50％、100％(1倍)、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍或更多。在某些实施方式中，所提供的方法包括使保护因子的水平或活性基本上达到受保护免于微血管并发症发生的受试者的水平或活性。“基本上在其水平内”是指小于对照值的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％之内。辅助药物可以是小分子，包含保护因子或其生物学活性变体(例如，片段)的蛋白质，或编码包含该保护因子或其生物学活性变体(例如片段)的蛋白质的核酸。保护因子蛋白的生物活性变体还包括全长的未成熟形式和成熟形式或其片段，其氨基酸序列与天然序列或其片段的区别最多为1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或100个氨基酸的缺失、添加或取代，例如保守氨基酸取代。DN保护因子的蛋白质的生物活性变体也可以包括与全长成熟或前体人PEBP1蛋白(或本说明书中鉴定的其他生物标志物)或其片段至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％相同的变体。
在一些实施方式中，提供的方法还包括选择要治疗的受试者。例如，如果受试者患有或有发展DN的风险，则可以选择受试者，例如患有糖尿病的受试者，例如1型或2型糖尿病，或患有糖尿病前期的受试者，例如具有代谢综合征、胰岛素抵抗、高血糖症、高脂血症或超重或肥胖(例如，BMI≥25)的受试者。在一些情况下，如果受试者患有或有发展1型和/或2型糖尿病的风险，则可以选择该受试者。在某些情况下，如果受试者正在服用或将服用例如治疗糖尿病的胰岛素，则可以选择该受试者。
心血管疾病是一种慢性炎性疾病。葡萄糖摄取增加和糖酵解通量促进线粒体中的活性氧。ROS促进PKM2的二聚化并使其核易位。核PKM2发挥蛋白激酶的作用，并增强IL-6和IL-1β的产生。这导致全身和组织炎症。发现减少糖酵解和加强PKM2四聚体可纠正冠状动脉疾病(CAD)巨噬细胞的促炎表型(J.Exp.Med.2016,213(3):337–354)。
在某些实施方式中，本文提供了一种在受试者中治疗心血管疾病的方法，其包括施用治疗有效量的化合物、其可药用盐或药物组合物。本文所述的化合物或组合物可以降低受试者的葡萄糖水平。本申请中定义的“心血管疾病”包括但不限于高血压、充血性心力衰竭、糖尿病、肾小球硬化、慢性肾功能衰竭、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风、血管再狭窄、内皮功能障碍、血管顺应性受损和充血性心力衰竭。在某些实施方式中，心血管疾病是冠状动脉疾病(CAD)。在某些实施方式中，本文所述的化合物或组合物可用于降低受试者线粒体中的活性氧(ROS)。
在某些实施方式中，本文提供了一种在受试者中治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括包括施用治疗有效量的所述化合物，其可药用盐或其药物组合物。发现PKM2的激活减弱了LPS诱导的促炎性M1巨噬细胞表型，同时促进了M2巨噬细胞的典型性状。另外，发现体内TEPP-46激活PKM2抑制了LPS和IL-1β的产生，同时增加了IL-10的产生。(CellMetab.2015,21(1):65–80)。因此，PKM2激活剂可通过促进IL-1β和/或IL-10的产生来治疗自身免疫性疾病。
“自身免疫性疾病”是指由受试者的身体针对体内通常存在的物质和组织的不适当的免疫反应引起的疾病。典型的自身免疫性疾病包括但不限于肾小球肾炎、古德帕斯丘综合征、坏死性血管炎、淋巴结炎、结节性动脉炎、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣、溃疡性结肠炎、全身性硬化症、皮肌炎/多发性肌炎、抗磷脂抗体综合征、硬皮病、寻常性天疱疮、ANCA相关血管炎(例如、韦格纳肉芽肿病、显微镜下多血管炎)、葡萄膜炎、干燥综合征、克罗恩病、瑞特综合征、强直性脊柱炎、莱姆病、格林-巴利综合征、桥本甲状腺炎和心肌病。
组合物和施用途径
本文描述的组合物包括本文描述的化合物(例如本文描述的化合物)以及另外的治疗剂(如果存在的话)，其量可有效用于实现对疾病或疾病症状的调节，包括本文描述的那些。
术语“可药用载体或辅料”是指可以本文所提供的化合物一起施用给患者并且不会破坏其药理活性并且当以足以递送治疗量药物的剂量给药时无毒的载体或辅料。
可用于本文提供的药物组合物中的可药用载体、辅料和媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS)(例如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、用于药物剂型中的表面活性剂(例如吐温或其他类似的聚合物递送基质)、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质、例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(例如α、β和γ环糊精)或化学改性的衍生物(例如羟烷基环糊精，包括2-和3-羟丙基-β-环糊精或其他可溶的衍生物)也可以有利地用于增强本文所述式的化合物的递送。
本文提供的药物组合物可以口服、胃肠外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或经植入的储库给药，优选通过口服给药或通过注射给药。本文提供的药物组合物可以包含任何常规的无毒的可药用载体、辅料或媒介物。在某些情况下，可以用可药用酸、碱或缓冲剂调节制剂的pH，以增强配制的化合物或其递送形式的稳定性。本文所用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。
本文提供的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型口服给药，包括但不限于胶囊、片剂、乳剂和水悬浮液、分散液和溶液。就口服片剂而言，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服水悬浮液和/或乳剂时，可以将活性成分悬浮或溶解在油相中，并与乳化剂和/或悬浮剂混合。如果需要，可以添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
当本文提供的组合物包含本文所述的式的化合物和一种或多种其他治疗剂或预防剂的组合时，该化合物和该另外的药物两者应以在单剂量疗法中通常给药剂量的约1％至100％之间的剂量水平存在，并且更优选约5-95％之间。作为多剂量方案的一部分，可以将其他药物与本文提供的化合物分开施用。或者，那些药物可以是单一剂型的一部分，与本文提供的化合物一起在单一组合物中混合。
本文所述的化合物可例如通过如下方式施用：静脉内、动脉内、真皮下、腹膜内、肌内或皮下注射；或者口服、经颊、经鼻、经粘膜；局部、在眼部制剂中或通过吸入，剂量范围在约0.5至约100mg/kg体重范围内，或者可选择地，剂量在1mg至1000mg/剂之间，每4至120小时或根据具体药物的需要施用。本文的方法预期施用有效量的化合物或化合物组合物以达到期望或陈述的效果。通常，本文提供的药物组合物将以每天约1至约6次或连续输注的形式给药。这样的施用可以用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的主体和特定的给药方式而变化。典型的制剂将包含约5％至约95％的活性化合物(w/w)。或者，此类制剂包含约20％至约80％的活性化合物。
试验
缩写列表：
Figure BDA0002385339370000651
Figure BDA0002385339370000661
一般试验
在以下实施例中，化学试剂购自商业来源(诸如，Alfa、Acros、Sigma Aldrich、TCI和上海化学试剂公司)，并且不经进一步纯化直接使用。快速色谱在Ez Purifier III上通过含有200-300目硅胶颗粒的柱进行。分析和制备色谱板(TLC)为HSGF 254(0.15-0.2mm厚，Shanghai Anbang Company，China)。核磁共振(NMR)谱使用Brucker AMX-300或AMX-400NMR(Brucker，Switzerland)记录。化学位移以每百万份中的份数(ppm，δ)etero(ESI)报告，来自Waters LCT TOF质谱仪(Waters，USA)。HPLC色谱记录在Agilent1200液相色谱(Agilent，USA，柱：ΜLtimate 4.6m x 50mm，5M，流动相A：0.1％甲酸/水；流动相B：乙腈)。微波反应在Initiator 2.5微波合成器(Biotage，Sweden)上进行。
本文所述试验中使用的HPLC条件如下：
方法1：
仪器：Shimadzu LC-2010AHT
柱：YMC-Triart C18，50×4.6mm，5μm
流动相：溶剂A：H2O/CH3OH/TFA＝90/10/0.1，
溶剂B：H2O/CH3OH/TFA＝90/10/0.1
流速：2.5mL/min；
柱温：35℃；
波长：220nm/254nm
方法2：
仪器：Shimadzu LC-2010AHT
柱：YMC-Triart C18，50×4.6mm，5μm
流动相：溶剂A：H2O/CH3OH/TFA＝90/10/0.1，
溶剂B：H2O/CH3OH/TFA＝90/10/0.1
流速：2.5mL/min；
柱温：35℃；
波长：220nm/254nm
本文所述试验中使用的制备型HPLC条件如下：
仪器：Waters 2545B/2767
柱：YMC-Triart C18，50×4.6mm，5μm
流动相：溶剂A：H2O(01.％FA)
溶剂B：CH3OH或CH3CN
流速：20mL/min；
柱温：35℃；
波长：220nm/254nm
实施例1.使用方案E1制备化合物E1-vii
方案E1
Figure BDA0002385339370000671
其中Re1是任选取代的烷基(例如C1-3烷基)；Q是如本发明第一至第二十六实施方式中任一项中所定义；Q’是进一步官能化的Q，和X是离去基团(例如卤素，诸如BR或I；OMs；或OTs)。噻唑5-甲醛E1-i经历与2-叠氮乙酸酯的缩合以得到式E1-ii的化合物。化合物E1-ii在加热的邻二甲苯中经历环化以得到E1-iii的二环体系，随后进行氨基的甲基化和后续氧化以得到E1-iv的化合物。化合物E1-iv与肼反应随后环化以得到E1-v的化合物。化合物E1-v可与诸如X-CH2-Q的亲核基团反应以得到E1-vi，后者可被进一步官能化为具有Q’的E1-vii。
实施例1A.合成6-(3-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000681
步骤A.(Z)-2-叠氮基-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙烯酸乙酯。向约-10℃到约-5℃的NaOET(803mg，11.79mmol)的EtOH(10mL)溶液中逐滴添加2-甲基噻唑-5-甲醛(500mg，3.93mmol)和2-叠氮乙酸乙酯(1.53g，11.79mmol)的无水EtOH(3mL)溶液。将反应混合物搅拌约1小时，同时将温度保持在0℃以下，随后温热至室温并再搅拌2小时。所得的混合物于0℃倒入饱和NH4Cl水溶液(50mL)，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到所需产物(500mg)，其不经任何纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z 239(M+H)+。
步骤B.2-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。(Z)-2-叠氮基-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙烯酸乙酯(500mg，2.1mmol)在邻二甲苯(5mL)中的混合物于140℃搅拌2小时，随后冷却至室温，随后通过柱色谱在硅胶上直接纯化(洗脱剂：戊烷/EtOAc＝6/1，得到所需产物(220mg，49.8％产率)。LCMS:m/z211(M+H)+。
步骤C.2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向2-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(160mg，0.76mmol)的DMF(3mL)溶液中于0℃添加NaH(36.5mg，1.52mmol)。反应混合物于室温搅拌0.5小时，随后添加CH3I(47μL，0.76mmol)。所得的混合物于室温搅拌0.5小时，随后倒入0℃的饱和NH4Cl水溶液中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：戊烷/乙酸乙酯＝6/1)，得到所需产物(124mg，72.6％产率)。LCMS:m/z 225(M+H)+。
步骤D.6-甲酰基-2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(100mg，0.446mmol)在DMF(1mL)中的混合物中于0℃添加POCl3(122.5μL，1.338mmol)。反应混合物于100℃搅拌2小时，随后倒入0℃的饱和NaHCO3水溶液，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：戊烷/乙酸乙酯＝5/1)，得到所需产物(57mg，50.7％产率)。LCMS:m/z 253(M+H)+。
步骤E.2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向6-甲酰基-2,4-二甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(57mg，0.226mmol)在2-乙氧基乙醇(2mL)中的混合物中添加N2H4.H2O(53.7μL，1.130mmol)。反应混合物于100℃搅拌1小时，随后倒入H2O，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：戊烷/乙酸乙酯＝5/1)，得到所需产物(49mg，98.4％产率)。LCMS:m/z 221(M+H)+。
步骤F.6-(3-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(49mg，0.223mmol)在DMF(1mL)中的混合物中于0℃添加t-BuOK(50.8mg，0.454mmol)。反应混合物于室温搅拌0.5小时，随后添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(34.9mg，0.223mmol)。所得的混合物于室温搅拌1小时，随后于0℃倒入饱和NH4Cl水溶液中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：戊烷/乙酸乙酯＝3/1)，得到所需产物。LCMS:m/z 341(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.56(s,1H)，7.23(t，1H)，6.92-6.72(m,3H)，5.32(s,2H)，4.26(s,3H)，3.72(s,3H)，2.85(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面所阐述的方法制备以下混合物。当必要时可使用标准的保护和去保护。
Figure BDA0002385339370000691
Figure BDA0002385339370000701
Figure BDA0002385339370000711
Figure BDA0002385339370000721
Figure BDA0002385339370000731
Figure BDA0002385339370000741
Figure BDA0002385339370000751
实施例1B.合成1-(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯基)脲
Figure BDA0002385339370000752
步骤A.2,4-二甲基-6-(3-硝基苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.45mmol在DMF(5mL)中的混合物中添加1-(溴甲基)-3-硝基苯(194mg，0.9mmol)和t-BuOK(76mg，0.68mmol)。反应于室温搅拌1hr，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(100mg，62.5％产率)。LCMS:m/z 356(M+H)+。
步骤B.6-(3-氨基苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2,4-二甲基-6-(3-硝基苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.28mmol)在MeOH/THF(10mL/10mL)中的混合物中在氮气下添加Pd/C(10％,50mg)。反应混合物于40℃在氢气下搅拌12hr，随后通过硅藻土过滤。滤液减压浓缩，残余物通过制备TLC纯化以得到所需化合物(80mg，88％产率)。LCMS:m/z 326(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),6.94(t,,1H),6.57-6.32(m,3H),5.19(s,2H),5.04(s,2H),4.26(s,3H),2.85(s,3H)。
步骤C.1-(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯基)脲.向6-(3-氨基苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(65mg，0.2mmol)在HOAC(2mL)中的混合物中添加KOCN(160mg，在HOAc:H2O＝2mL:4mL中)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后倒入饱和NaHCO3水溶液中，并用EtOAc萃取。有机层减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需化合物(4mg，5％产率)。LCMS:m/z 369(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60-8.50(m,2H),7.39(d,1H),7.23(s,1H),7.16(t,1H),6.85(d,1H),5.78(s,2H),5.28(s,2H),4.27(s,3H),2.86(s,3H)。
实施例1C.合成2,4-二甲基-6-(3-(甲基氨基)苄基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000761
步骤A.(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯向6-(3-氨基苄基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(90mg，0.28mmol)在1,4-二氧六环(10mL)中的混合物中添加Boc2O(73mg，0.33mmol)。反应混合物回流搅拌过夜，随后减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(90mg，76.3％产率)。LCMS:m/z 426(M+H)+。
步骤B.(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯。向(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.21mmol)在无水DMF(5mL)中的混合物中于0℃添加NaH(13mg，0.32mmol,60wt％)。混合物于0℃搅拌1hr，随后逐滴添加MeI。所得的混合物于0-5℃搅拌3hr，随后倒入冷饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(70mg，75.2％产率)。LCMS:m/z440(M+H)+。
步骤C.2,4-二甲基-6-(3-(甲基氨基)苄基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，0.21mmol)在DCM(3mL)中的混合物中添加TFA(1mL)。混合物于室温搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(25mg，46.4％产率)。LCMS:m/z 340(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.12(t,1H),6.66-6.61(m,3H),5.26(s,2H),4.26(s,3H),2.85(s,3H),2.68(d,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的方法合成以下化合物。当必要时，使用标准的保护和去保护。
Figure BDA0002385339370000771
实施例1D.合成6-(3-羟基苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000781
向6-(3-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(53mg，0.16mmol)在DCM(4mL)中的混合物中于0℃添加BBR3(195mg，0.778mmol)。于室温搅拌2hr，随后用MeOH淬灭。所得的混合物减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(15.6mg，30.70％产率)。LCMS:m/z 327(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.58(s,1H),7.12(t,1H),6.78-6.56(m,3H),5.26(s,2H),4.278(s,3H),2.86(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的方法合成以下化合物。当必要时，使用标准的保护和去保护。
Figure BDA0002385339370000782
实施例1E.合成6-[3-(1-氨基-乙基)-苄基]-2,8-二甲基-6,8-二氢-3-硫杂-1,5,6,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚满-7-酮
Figure BDA0002385339370000791
向6-(3-乙酰基苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.142mmol)在MeOH(4mL)中的搅拌混合物中添加NH4OAC(109mg，1.42mmol)和NaBH3CN(18mg，0.284mmol)。反应混合物于35℃搅拌13hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(20mg，40.0％产率)。LC-MS:m/z 354(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),7.25(dd,3H),7.12(d,1H),5.26(s,2H),4.17(s,3H),4.15-4.06(m,1H),2.76(s,3H),1.27(d,3H)。
实施例1F.合成6-(3-(氨基甲基)苄基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000792
步骤A.2-(3-(溴甲基)苄基)异二氢吲哚-1,3-二酮。向1,3-二(溴甲基)苯(1.3g,4.96mmol)在DMF(20mL)中的搅拌混合物中添加邻苯二甲酰亚胺钾(0.918g,4.96mmol)和K2CO3(1.03g,7.44mol)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后倒入饱和NH4Cl(30mL)中，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝30:1)以得到所需产物(1.1g,67.4％产率)。LC-MS:m/z 330(M+H)+。
步骤B.2-(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苄基)异二氢吲哚-1,3-二酮。向2-(3-(溴甲基)苄基)异二氢吲哚-1,3-二酮(100mg，0.303mmol)在DMF(4mL)中的搅拌混合物中添加2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(66.7mg，0.303mmol)和K2CO3(83.6mg，0.606mol)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后倒入饱和NH4Cl中(15mL)，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(80mg，56.3％产率)。LC-MS:m/z 470(M+H)+。
步骤C.6-(3-(氨基甲基)苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苄基)异二氢吲哚-1,3-二酮(80mg，0.17mmol)在EtOH(5mL)中的搅拌混合物中添加N2H4.H2O(44mg，98wt％,0.85mmol)。反应混合物于100℃搅拌2hr，随后倒入饱和NH4Cl中(15mL)，并用DCM萃取两次。有机层用盐水洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(30mg，52.1％产率)。LC-MS:m/z324(M+H-NH3)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.32(m,3H),7.23(d,1H),5.35(s,2H),4.27(s,3H),3.84(s,2H),2.86(s,3H)。
实施例1G.合成6-(4-(羟甲基)苄基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000801
步骤A.4-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲酸甲酯。向2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.4mmol)在DMF(20mL)中的混合物中加K2CO3(181mg，1.3mmol)。混合物于60℃搅拌30min，随后于0℃添加4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(100mg，0.4mmol)。所得的混合物于60℃搅拌18hr，随后倒入冰水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝50:1至10:1)以得到所需产物(120mg，74.61％)。LCMS:m/z 369(M+H)+。
步骤B.6-(4-(羟甲基)苄基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲酸酯(100mg，0.3mmol)在THF(20mL)中的混合物中于0℃添加LAH(30mg，0.8mmol)。反应于0℃在氮气下搅拌30min，随后用Na2SO4-10H2O淬灭，并过滤。滤液减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(3mg，3.25％)。LCMS:m/z 341(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.36(d,2H),7.25(d,2H),5.37(s,2H),4.59(s,2H),4.31(s,3H),2.80(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的方法合成以下化合物。当必要时，使用标准的保护和去保护。
Figure BDA0002385339370000811
实施例1H.合成6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-2,4-二甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000812
步骤A：6-((6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶-2-基)甲基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将6-((6-氟吡啶-2-基)甲基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]-吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(40mg，0.12mmol)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(102mg，0.6mmol)在NMP(1mL)中的混合物于140℃搅拌直到完成。所得的混合物减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以获得所需产物(20mg，34.5％产率)。LC-MS:477(M+H)+。
步骤B：6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将6-((6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶-2-基)甲基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.042mmol)和TFA(45mg，0.42mmol)在DCM(1mL)中的混合物于室温搅拌直到完成。所得的混合物减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以获得所需产物(20mg，34.5％产率)。LC-MS:327(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.26(t,1H),6.30(d,1H),6.09(d,1H),5.90(s,2H),5.19(s,2H),4.25(s,3H),2.85(s,3H)。
实施例1I.合成6-(羟甲基)-2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000821
将2,4-二甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.14mmol)、甲醛(1.5mL,40wt％)和NH3(0.75mL,33wt％)在二氧六环(2mL)中的混合物于50℃搅拌1hr，随后倒入水中，并用DCM萃取。有机层减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(4.40mg，17％产率)。LCMS:251(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),6.63(t,1H),5.44(d,2H),4.27(s,3H),2.85(s,3H)。
实施例2.使用方案E2制备式E2-vii的化合物
方案E2
Figure BDA0002385339370000822
其中Xa是离去基团(例如卤素，诸如BR或I；OMs；或OTs)；Xb是卤素(例如Cl、Br或I)；n1是0或1；M是氢(例如，用于Heck反应)或有机金属复合物(例如有机复合物，诸如硼酸或频哪醇硼复合物；有机锡复合物，诸如-SN(But)3；有机锌复合物，诸如-Zn(卤素))；Q和R2如本发明第一至第二十六实施方式中任一项中所定义。在某些实施方式中，Q和R2各自独立为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基、任选取代的烷基。类似于实施例1中合成的式E1-v的化合物，可进行若干变化以从噻唑醛E2-i合成化合物E2-iv(例如化合物E2-ii与MsCl反应然后消除以得到化合物E2-iii；可使用催化性的AcOH在2-甲氧基乙醇中形成三环体系)。化合物E2-iv的取代和卤化(例如在LiHMDS存在下使用CBR4或Cl3CCCl3；或在t-BuOK和存在下使用1,2,3,4,5-五氟-6-碘苯)提供了化合物E2-vi。化合物E2-vi与有机金属在催化剂存在下的偶联反应得到了化合物E2-vii或E2-viii。E2-vi与亲核试剂(Nu)的直接亲核反应可生成化合物E2-ix。
实施例2A.合成2-(4-氟苄基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000831
步骤A.2-叠氮基-3-羟基-3-(噻唑-5-基)丙酸乙酯。将钠(12.2g,0.531mol)于室温缓慢添加至无水EtOH(300mL)的搅拌溶液中。反应混合物随后冷却至-20℃，随后逐滴添加2-叠氮乙酸乙酯(68.5g,0.531mol)和噻唑-5-甲醛(20.0g,0.177mol)在无水EtOH(100mL)中的溶液中，同时将温度保持在-20℃至-15℃。在添加之后，反应混合物于-20℃再搅拌1hr，随后倒入饱和NH4Cl(1L)中。所得的混合物用NaCl饱和，并用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化，使用(洗脱剂：PE/EtOAc＝6/1至5/1至1/1)以得到浅色的所需产物(34g)。LCMS:m/z＝243(M+H)+。
步骤B.(Z)-2-叠氮基-3-(噻唑-5-基)丙烯酸乙酯。向2-叠氮基-3-羟基-3-(噻唑-5-基)丙酸乙酯(103g，0.426mol)在无水DCM(1.5L)的搅拌混合物中于-35℃添加MsCl(146g，1.28mol)，随后逐滴添加TEA(301g，2.98mol)，同时将温度保持在-35℃至-30℃。在添加之后，反应混合物于-30℃再搅拌15min，随后倒入NH4Cl水溶液(1.5L)中。所得的混合物用NaCl饱和，用DCM萃取两次。合并的有机层依次用HCl水溶液(1M)和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化，使用(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)，得到所需产物(82.0g，86.3％产率)。LCMS:m/z＝225(M+H)+。
用于合成4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯、4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯和6-甲酰基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯的步骤C-E类似于实施例1A中的方法。
步骤F.(E)-6-(亚肼基甲基)-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向N2H4.H2O(2.0g，98％，40mmol)在2-甲氧基乙醇(50mL)中的搅拌混合物中于室温添加6-甲酰基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(4.8g，20mmol)，随后添加20滴AcOH。反应混合物于室温搅拌约30min，直到混合物变得澄清。将所得的混合物边搅拌边倒入水(100mL)中，用DCM萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到所需产物，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z＝253(M+H)+。
步骤G.4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向(E)-6-(亚肼基甲基)-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(4.8g，0.19mol)在2-甲氧基乙醇(50mL)中的搅拌悬浮液中于室温添加AcOH(20滴)。反应悬浮液于105℃搅拌3小时，随后过滤。滤饼用水洗涤并在高真空下干燥，得到第一批所需产物。滤液用水稀释，用DCM萃取两次。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到第二批所需产物。合并的两批所需产物(2.5g)不经进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z＝207(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.68(s,1H)，9.35(s,1H)，8.55(s,1H)，4.30(s,3H)
步骤H.6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(2g,10.0mmol)和K2CO3(2.7g,20mmol)在DMF(15mL)中的搅拌混合物中添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(2.3g,15mmol)。反应混合物于50℃搅拌3hr，随后倒入水中，并用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(2g,67％产率)。LCMS:m/z＝327(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(s,1H)，8.64(s,1H),7.24(t,1H),6.88-6.80(m,3H),5.33(s,2H)。4.31(s,3H)3.72(s,3H)。
步骤I.2-碘-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(1g,3mmol)和t-BuOK(688mg，6mmol)在甲苯(30mL)中的搅拌混合物中于室温添加1,2,3,4,5-五氟-6-碘苯(3.6g,12mmol)。反应混合物于135℃搅拌4hr(油浴预热)，并随后减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝6/1)以得到所需产物(1g,72％产率)。LCMS:m/z＝453(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),7.23(t,1H),6.88-6.80(m,3H),5.31(s,2H)。4.26(s,3H)3.71(s,3H)。
步骤J.(4-氟苄基)溴化锌(II).向25mL三颈圆底烧瓶中添加锌粉(1300mg，20mmol)。混合物在高真空下脱气，并用氮气反冲三次。经由注射器于室温添加无水THF(15mL)、TMSCl(108mg，1mmol)和1,2-二溴乙烷(186mg，1mmol)。悬浮液加热至65℃并保持30min，随后冷却至0℃，随后逐滴添加1-(溴甲基)-4-氟苯(1.89g,10mmol)。所得的混合物于室温搅拌1.5hr。上清溶液直接用于下一步骤。
步骤K.2-(4-氟苄基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向25mL三颈圆底烧瓶中添加2-碘-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.22mmol)和Pd(PPh3)4(25.4mg，10mol％)。烧瓶在高真空下脱气和并用氮气反冲三次。经由注射器将(4-氟苄基)溴化锌(II)(6mL)的上清溶液添加到烧瓶。所得的混合物在氮气下于65℃搅拌0.5hr，随后减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(6mg)。LCMS:m/z＝435(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.75-7.50(m,1H),7.47(s,2H),7.23(s,3H),6.84(s,2H),5.31(s,2H),4.52(s,2H),4.26(s,3H),3.71(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用如上所阐述的方法制备以下化合物。当需要时，可使用标准的氨基保护和去保护。氨基保护基团的例子包括但不限于SEM。SEM的去保护可在TFA和DCM中进行。
Figure BDA0002385339370000861
Figure BDA0002385339370000871
Figure BDA0002385339370000881
Figure BDA0002385339370000891
Figure BDA0002385339370000901
Figure BDA0002385339370000911
实施例2B.合成2-苄基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000912
步骤A.2-溴-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向2-溴-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1.1g,4mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液中添加NaH(320mg，60％在油中，8mmol)。反应混合物于室温搅拌15min，随后添加MeI(852mg，6mmol)。所得的混合物于室温再搅拌2hr，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(950mg，82.2％产率)。LCMS:m/z 289(M+H)+。
步骤B.2-苄基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向2-溴-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(720mg，2.5mmol)和Pd(PPh3)4(145mg，0.125mmol)在无水THF中的混合物中在氮气下添加苄基溴化锌(20mL,0.5M)。反应混合物于65℃搅拌1hr，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝4/1)以得到所需产物(600mg，80.0％产率)。LCMS:m/z 301(M+H)+。
步骤C.2-苄基-6-甲酰基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向2-苄基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(600mg，2mmol)在1,2-二氯乙烷(6mL)中的溶液中添加磷酰氯(612mg，4mmol)和N-甲基-N-苯基甲酰胺(540mg，4mmol)的混合物。反应混合物回流过夜，随后冷却并倒入冰水中，随后用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(140mg)，其是黄色油状物。LCMS:m/z 329(M+H)+。
步骤D.2-苄基-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向2-苄基-6-甲酰基-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(140mg，粗品)在2-乙氧基乙醇(3mL)中的溶液中添加水合肼(0.5mL,98wt％)。反应混合物于110℃搅拌1hr，随后冷却至室温。过滤收集沉淀物并用MeOH洗涤以得到所需产物(60mg，两个步骤的产率为10.1％)。LCMS:m/z 297(M+H)+。
步骤E.2-苄基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向2-苄基-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.169mmol)和NaHCO3(28mg，0.338mmol)在DMA(1mL)中的混合物中在氮气下添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(40mg，0.254mmol)。反应混合物于120℃搅拌3hr，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层减压浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(8mg，11.4％产率)。LCMS:m/z 417(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.36-7.43(m,4H),7.30-7.32(m,1H),7.20-7.25(m,1H),6.82-6.85(m,3H),5.31(s,2H),4.51(s,2H),4.27(s,3H),3.71(s,3H)。
实施例2C.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(1-苯乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000931
步骤A.使用类似实施例2A的方法合成4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LCMS:m/z 467(M+H)+。
步骤B.使用类似实施例2A的方法合成2-碘-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LCMS:593(M+H)+。
步骤C.2-苄基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将锌粉(1.3g,20mmol)在氮气下悬浮在无水THF(5mL)中，随后添加1,2-二溴乙烷(0.01mL)。混合物于65℃加热5min，随后添加三甲基氯硅烷(0.01mL)。所得的混合物于65℃再加热15min，随后冷却至0℃，随后逐滴添加(溴甲基)苯(1.7g,10mmol)在无水THF(5mL)中的溶液。所得的混合物于65℃搅拌1hr，随后冷却以得到苄基溴化锌(II)(约1M在THF中)，其直接用于下一步骤。向2-碘-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg，0.5mmol)在无水THF(2mL)中的混合物中在氮气下依次添加Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)和上述苄基溴化锌(II)(5ml,1M)。所得的混合物于65℃加热1hr，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/2)以得到所需产物(230mg，82.7％产率)。LCMS:557(M+H)+。
步骤D.2-苯甲酰基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-苄基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加K2CO3(74mg，0.53mmol)。混合物于50℃在空气下搅拌4hr，随后倒入水中。过滤收集沉淀物，用PE洗涤，并高真空干燥以得到所需产物(100mg，98％产率)。LCMS:571(M+H)+。
步骤E.2-(1-羟基-1-苯乙基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向甲基溴化镁(0.6mL,1.5M)在无水THF(2mL)中的混合物中在冰浴下添加2-苯甲酰基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.175mmol)在无水THF中的溶液。混合物搅拌1hr，倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到作为油状物的所需产物(30mg，29.4％产率)。LCMS:587(M+H)+。
步骤F.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(1-苯乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将2-(1-羟基-1-苯乙基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.05mmol)在TFA/TES混合溶液(2mL/0.5mL)中的溶液于室温搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5mg，22.7％产率)。LCMS:m/z 441(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.53(s,1H),8.12(s,1H),7.46-7.41(m,3H),7.37(t,2H),7.28(m,2H),6.95(d,1H),5.65(s,2H),4.71(q,1H),4.28(s,3H),1.78(d,3H)。
通过制备型HPLC还获得了副产物，4-甲基-6-((1-甲基-1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(1-苯乙基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮：
Figure BDA0002385339370000941
LCMS:m/z 455(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),8.09(s,1H),7.41(d,1H),7.42-7.30(m,6H),6.97(d,1H),5.64(s,2H),4.70(q,1H),4.27(s,3H),4.09(s,3H),1.77(d,3H)。
Figure BDA0002385339370000951
实施例2D.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(1-羟基-1-苯乙基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000952
步骤A.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-苯甲酰基-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-苯甲酰基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(75mg，0.13mmol)在DCM(2mL)中的混合物中添加TFA(2mL)。混合物于室温搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(30mg，52.6％产率)。LCMS:441(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(1-羟基-1-苯乙基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向甲基溴化镁(0.22mL,1.5M)在无水THF(1mL)中的混合物中在冰浴下添加6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-苯甲酰基-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.068mmol)在无水THF中的溶液。混合物搅拌30min，随后倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(8mg，25.8％产率)。LCMS:457(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.56(s,1H),8.13(s,1H),7.62(d,2H),7.45(d,1H),7.34(t,2H),7.29-7.23(m,2H),6.99-6.93(m,2H),5.65(s,2H),4.26(s,3H),2.01(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370000961
实施例2E.合成2-(羟基(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000962
步骤A.2-苯甲酰基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-苄基-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(40mg，0.135mmol)和K2CO3(37mg，0.27mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(31mg，0.2mmol)。反应混合物于室温在空气中搅拌过夜，随后倒入水中。过滤收集沉淀物，并用EtOAc洗涤以得到所需产物(30mg，51.7％产率)。LCMS:m/z 431(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),8.46-8.49(m,2H),7.78(t,1H),7.66(t,2H),7.25(t,1H),6.84-6.89(m,3H),5.36(s,2H),4.37(s,3H),3.73(s,3H)。
步骤B.2-(羟基(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-苯甲酰基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.047mmol)在THF(1mL)和MeOH(1mL)中的混合物中添加NaBH4(3.5mg，0.093mmol)。混合物于室温搅拌15min，用水淬灭，并用EtOAc萃取。分离有机层并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(13mg，64.0％产率)。LCMS:m/z 433(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),7.49-7.53(m,2H),7.36-7.40(m,2H),7.28-7.33(m,1H),7.20-7.25(m,1H),7.07(d,1H),6.82-6.85(m,3H),6.08(d,1H),5.31(d,2H),4.21(s,3H),3.71(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370000971
实施例2F.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(苯基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000981
步骤A.使用类似于实施例2E的方法合成2-(羟基(苯基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LCMS:m/z 573(M+H)+。
步骤B.使用类似于实施例2D的方法合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(苯基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LCMS:m/z 443(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.59(s,1H),8.13(s,1H),7.56-7.42(m,3H),7.37(s,2H),7.28(m,2H),7.07(s,1H),6.95(s,1H),6.08(s,1H),5.65(s,2H),4.21(s,3H)。
实施例2G.合成6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酸甲酯
Figure BDA0002385339370000982
向2-碘-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(40mg，0.088mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌混合物中添加Et3N(27mg，0.264mmol)和Pd(dppf)Cl2(6.5mg，0.009mmol)。反应混合物于85℃在CO下搅拌12hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(2mg，5.88％产率)。LC-MS:m/z 385(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),7.24(t,1H),6.95-6.81(m,3H),5.34(s,2H),4.29(s,3H),3.99(s,3H),3.72(s,3H)。
使用2-氯-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮进行类似反应，其生成2-甲氧基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮作为主要副产物。LC-MS:m/z 357(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(s,1H),7.26-7.21(m,1H),6.88-6.80(m,3H),5.30(s,2H),4.19(bRs,6H),3.72(s,3H)。
Figure BDA0002385339370000983
实施例2H.合成2-(氟(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370000991
向2-(羟基(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.046mmol)在DCM(2mL)中的溶液中在-78℃下添加DAST(0.3mL)。混合物于室温搅拌30min随后减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(2.5mg，12.5％产率)。LCMS:435.(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),7.55-7.48(m,5H),7.26-7.07(m,2H),6.92-6.74(m,3H),5.32(s,2H),4.25(s,3H),3.71(s,3H)。
实施例2I.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(氨基(苯基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370000992
步骤A.(Z)-2-((羟基亚氨基)(苯基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将2-苯甲酰基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.175mmol)和NH2OH.HCl(123mg，1.75mmol)在无水MeOH(5mL)中的混合物于100℃在密封管里搅拌12hr。随后倒入饱和NH4Cl中(20mL)，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EA＝2/1)以得到所需产物(40mg，39.1％产率)。LC-MS:m/z 586(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(氨基(苯基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向(Z)-2-((羟基亚氨基)(苯基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(40mg，0.068mmol)在TFA(3mL)中的搅拌混合物中添加锌(44mg，0.68mmol)。反应混合物于室温搅拌16hr，随后倒入饱和NaHCO3水溶液中(20mL)，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(4.6mg，14.8％产率)。LC-MS:m/z 442(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H),7.52-7.40(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.30-7.22(m,2H),6.95(d,1H),5.65(s,2H),5.49(s,1H),4.20(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370001001
实施例2J.合成N-((6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)(1H-吡唑-3-基)甲基)乙酰胺
Figure BDA0002385339370001002
步骤A.N-((6-((1-乙酰基-1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)(1-乙酰基-1H-吡唑-3-基)甲基)乙酰胺.向6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(氨基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.046mmol)在DCM/MeCN(1mL/1mL)中的搅拌混合物中添加Et3N(14mg，0.139mmol)和乙酸酐(24mg，0.23mmol)。所得的混合物于23℃搅拌1hr，随后用水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到粗产物(30mg)，其不经任何进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z 558(M+H)+。
步骤B.N-((6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)(1H-吡唑-3-基)甲基)乙酰胺.向N-((6-((1-乙酰基-1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)(1-乙酰基-1H-吡唑-3-基)甲基)乙酰胺(30mg，0.053mmol)在MeOH(3mL)中的搅拌混合物中在氮气下添加K2CO3(22mL,0.16mmol)。混合物于23℃搅拌30min，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(2.0mg，9％产率)。LC-MS:m/z：474(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.57(s,1H),8.13(s,1H),7.46(s,1H),7.48-7.60(d,1H),7.31-7.27(t,1H),7.00-6.98(d,1H),6.51(s,1H),6.28(s,1H),5.66(s,2H),4.33(s,3H),1.97(s,3H)。
实施例2K.合成2-(二氟(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001011
步骤A.6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(2-苯基-1,3-二硫戊环-2-基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向2-苯甲酰基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(86mg，0.2mmol)在甲苯(3mL)中的混合物中添加p-TsOH(36mg，0.2mmol)和乙烷-1,2-二硫醇(39mg，0.4mmol)。混合物于110℃搅拌4hr，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(80mg，80％产率)。LCMS:m/z 507(M+H)+。
步骤B.2-(二氟(苯基)甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(2-苯基-1,3-二硫戊环-2-基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(65mg，0.13mmol)和NIS(少量)在DCM(5mL)中的混合物中添加Py.HF(1mL)。反应混合物于室温在氮气下搅拌2hr，随后倒入水中，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到固体(50mg，76％产率)。LCMS:m/z 595(M+H)+。
向上述固体(25mg，0.04mmol)在THF/MeOH(3mL/2mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg)。混合物于室温在氢气下搅拌40min，随后过滤。滤液减压浓缩，残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(7mg，36.8％产率)。LCMS:453(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),7.74-7.70(m,2H),7.64-7.56(m,3H),7.26-7.20(m,1H),6.88-6.84(m,3H),5.33(s,2H),4.25(s,3H),3.71(s,3H)。
实施例2L.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(1-苯基环丙基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001021
步骤A.4-甲基-2-(1-苯基环丙基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-苄基-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg，0.1mmol)在无水DMF(2mL)中的混合物中添加1,2-二溴乙烷(10μL,0.1mmol)和TBAB(3mg，0.01mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后添加NaH(8mg，0.2mmol)。混合物于室温搅拌3hr，随后倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(26mg，44.7％产率)。LCMS:583(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(1-苯基环丙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将4-甲基-2-(1-苯基环丙基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(26mg，0.044mmol)在HCl/二氧六环溶液(4M,2mL)中的混合物于室温搅拌3hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(3mg，15％产率)。LCMS:453(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.47(s,1H),8.12(s,1H),7.59-7.52(m,2H),7.50-7.38(m,4H),7.32-7.23(m,1H),6.95(d,1H),5.63(s,2H),4.24(s,3H),1.84-1.81(m,2H),1.59-1.57(m,2H)。
实施例2M.合成3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲酰胺。
Figure BDA0002385339370001022
步骤A.合成3-((2-溴-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈于-40℃，在氮气氛中，向3-((4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈(200mg，0.62mmol)和CBR4(1.03g,3.11mmol)在THF(15mL)中的混合物中逐滴添加LiHMDS(1.24mL,1M在THF中)。反应混合物于-40℃搅拌2hr，用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱纯化(硅胶，0～25％EtOAc/PE)以得到3-((2-溴-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈(200mg，80.6％产率)。LC-MS(ESI):m/z400(M+H)+。
步骤B.合成3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈向3-((2-溴-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈(100mg，0.25mmol)和甲基硼酸(45mg，0.75mmol)在甲苯(2mL)中的混合物中添加Na2CO3(53mg，0.5mmol)，然后添加Pd2(dba)3(23mg，0.025mmol)和呫吨(14mg，0.025mmol)。反应混合物于100℃搅拌15hr。过滤反应混合物并蒸发滤液。残余物通过柱色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈(60mg，71.4％产率)。LC-MS(ESI):m/z 336(M+H)+。
步骤C.合成3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲酰胺将3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲腈(60mg，0.18mmol)在H2SO4(1mL)中的溶液于30℃搅拌过夜。反应通过饱和NaHCO3淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并蒸发。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到3-((2,4-二甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)苯甲酰胺(10mg，15.7％产率)。LC-MS(ESI):m/z 354(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),7.98(s,1H),7.81(s,1H),7.77(d,1H),7.46(d,1H),7.41(t,1H),7.35(s,1H),5.40(s,2H),4.26(s,3H)，2.86(s,3H)。
实施例2N.合成2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001041
步骤A.合成3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑向3-碘-1H-吡唑(1g,5.16mmol)和p-TsOH(88mg，0.52mmol)在DCM(15mL)中的混合物中添加DHP(0.56mL,6.19mmol)，并于室温搅拌2hr。反应混合物用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～10％EtOAc/PE)以得到3-碘-1-(氧杂环己烷-2-基)-1H-吡唑(14g)。LC-MS(m/z 279(M+H)+。
步骤B.合成(E)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)-1H-吡唑在氮气下，向3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑(150mg，0.54mmol)在甲苯(3mL)中的混合物添加2-乙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.18mL,1.08mmol)、Et3N(0.37mL,2.7mmol)和Pd(PBu3)2(14mg，0.03mmol)。反应于100℃搅拌3hr。混合物浓缩，并通过制备TLC纯化(35％EtOAc/PE)以得到1-(氧杂环己烷-2-基)-3-[(E)-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)乙烯基]-1H-吡唑(60mg，37％产率)。LC-MS(ESI):m/z 305(M+H)+。
步骤C.合成4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(500mg，2.42mmol)在DMF(15mL)中的混合物中添加K2CO3(335mg，2.42mmol)。于50℃搅拌30min之后，添加3-(溴甲基)-1-甲基-1H-吡唑(636mg，3.64mmol)在DMF(2mL)中的溶液中。反应于50℃搅拌过夜。悬浮液倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc萃取。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～100EtOAc/PE)以得到4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(280mg)。LC-MS(ESI):m/z 301(M+H)+。
步骤D.合成2-碘-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(280mg，0.93mmol)在甲苯(10mL)中的混合物中添加五氟碘苯(0.50mL,3.73mmol)和t-BuOK(209mg，1.86mmol)。反应于135℃在氮气下搅拌2hr。混合物冷却至室温并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～100％EtOAc/PE)以得到2-碘-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg)。LC-MS(ESI):m/z 427(M+H)+。
步骤E.合成(E)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙烯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮在氮气下，向2-碘-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg，0.71mmol)和(E)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)-1H-吡唑(300mg，0.99mmol)在DME(5mL)和水(1mL)中的混合物添加Na2CO3(149mg，1.41mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(49mg，0.071mmol)。混合物于80℃搅拌3hr。随后，混合物冷却，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～100％EtOAc/PE)以得到(E)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙烯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(170mg)。LC-MS(ESI):m/z 477(M+H)+。
步骤F.合成4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向(E)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙烯基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(80mg，0.17mmol)在THF(3mL)和MeOH(3mL)中的混合物中添加Pd/C(10mg)。反应在氢气下于室温搅拌6hr。过滤混合物并浓缩滤液。残余物通过制备TLC纯化(EtOAc)以得到4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg)。LC-MS(ESI):m/z 479(M+H)+。
步骤G.合成2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.042mmol)在乙醇(2mL)中的混合物中添加HCl(0.5mL,4M在二氧六环中)。反应混合物于50℃搅拌30min。反应混合物冷却并倒入饱和NaHCO3中，用EtOAc萃取。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(10mg，61％产率)。LC-MS(ESI):m/z 395(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.56(s,1H),8.51(s,1H),7.56(d,1H),7.52(s,1H),6.12(d,1H),6.08(d,1H),5.27(s,2H),4.27(s,3H),3.77(s,3H),3.48(t,2H),3.13(t,2H)。
Figure BDA0002385339370001061
实施例2O.合成2-((1H-吡唑-5-基)氧基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001062
步骤A.合成5-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯向(4-甲氧基苄基)肼二盐酸盐(2.25g,10mmol)和K2CO3(4.14g,30mmol)在甲醇(50mL)和水(10mL)中的混合物中添加2-(乙氧基亚甲基)丙二酸二乙酯(2.16g,10mmol)。混合物于80℃搅拌5hr。随后混合物用NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/PE)以得到1.1g 5-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯。
步骤B.合成5-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-甲酸向5-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(800mg，2.9mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加KOH(800mg，15mmol)在水(10mL)中的溶液。混合物于室温搅拌16hr。随后浓缩混合物，残余物直接用于下一步骤。LC-MS(ESI):m/z 249(M+H)+。
步骤C.合成1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-醇将5-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-甲酸的混合物溶解在2MHCl(50mL)中，于60℃搅拌16hr。去除溶剂，残余物通过制备TLC纯化以得到120mg 1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-醇。LC-MS(ESI):m/z 205(M+H)+。
步骤D.合成N-(叔丁氧基)羰基(6-((2-((1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-基)氧基)-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯向1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H-吡唑-5-醇(60mg，0.29mmol)在DMF(8mL)中的溶液中于5℃添加KOH(18mg，0.32mmol)。反应混合物于5℃搅拌30min，添加N-(叔丁氧基)羰基(6-((2-溴-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(174mg，0.29mmol)在DMF(2mL)中的溶液。反应于室温搅拌16hr，随后倒入1M柠檬酸水溶液中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并蒸发。残余物通过制备TLC纯化(EA：PE＝1:1)以得到80mg N-(叔丁氧基)羰基(6-((2-((1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-基)氧基)-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯。LC-MS:m/z 715(M+H)+。
步骤E.合成2-((1H-吡唑-5-基)氧基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮将N-(叔丁氧基)羰基(6-((2-((1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-基)氧基)-4-甲基-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.08mmol)在TFA(2mL)中的溶液于室温搅拌过夜。反应浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到15mg 2-((1H-吡唑-5-基)氧基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 395(M+H)+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.41(s,1H),7.76-7.63(m,2H),6.79(d,1H),6.64(d,1H),6.31(d,1H),5.42(s,2H),4.26(s,3H)。
实施例3.使用方案E3制备化合物式E3-ii和衍生物
方案E3
Figure BDA0002385339370001081
可使E3-i与三丁基(乙烯基)锡烷之间的Stille反应合成化合物E3-ii。E3-ii在催化剂(例如钯催化剂，诸如Pd(Pt-Bu3)2,DMF)下进行Heck反应然后还原烯基可生成化合物E3-ix。可选择地，化合物E3-ii的标准氢化生成化合物E3-iii。将化合物E3-ii硼氢化然后用过硼酸钠氧化得到产物E3-vii。用氧化锇(VIII)和过碘酸钠直接氧化化合物E3-ii提供了醛E3-iv。醛E3-iv的亲核加成得到了产物E3-v。用硼氢化钠对化合物E3-iv进行标准还原得到了化合物E3-vi。化合物E3-iv的还原氨化得到了化合物E3-viii。其中Q和R2如本发明第一至第二十六实施方式中任一项中所定义。在某些实施方式中，Q和R2各自独立为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环或任选取代的杂环基。
实施例3A.合成2-乙基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001082
步骤A.6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-氯-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(600mg，1.67mmol)和三丁基(乙烯基)锡烷(1mL,3.4mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4。混合物在100℃在氮气下搅拌过夜，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/2)以得到所需产物(410mg，68％产率)。LCMS:m/z 353(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),7.23(t,1H),7.10(dd,1H),6.89-6.80(m,3H),6.28(d,1H),5.75(d,1H),5.32(s,2H),4.27(s,3H),3.72(s,3H)。
步骤B.2-乙基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.88mmol)在MeOH(1mL)和THF(1mL)中的混合物中在氮气下添加Pd/C(10mg)。混合物在氢气下于室温搅拌1hr，随后通过硅藻土过滤。滤液减压浓缩，残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(5mg，16.7％产率)。
LCMS:m/z 355(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),7.23(t,1H),6.89-6.78(m,3H),5.32(s,2H),4.26(s,3H),3.72(s,3H),3.17(q,2H),1.38(t,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370001091
实施例3B.合成2-(羟甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001092
步骤A.6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛.向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(410mg，1.16mmol)在二氧六环(6mL)和水(2mL)中的混合物中添加NaIO4(1g,4.6mmol)、2,6-二甲基吡啶(0.27mL,2.32mmol)和OSO4(cat.)。混合物于室温搅拌4hr，随后用饱和Na2S2O3水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝1/1)以得到所需产物(130mg，31.7％产率)。LCMS:m/z 387(M+MeOH+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),8.75(s,1H),7.24(t,1H),6.88-6.83(m,3H),5.34(s,2H),4.34(s,3H),3.72(s,3H)。
步骤B.2-(羟甲基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(30mg，0.08mmol)在甲醇(2mL)中的混合物中添加NaBH4(6mg，0.16mmol)。混合物于室温搅拌10min，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。有机层减压浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(10mg，35.7％产率)。LCMS:m/z 357(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),7.23(t,1H),6.86-6.82(m,3H),6.34(t,1H),5.32(s,2H),4.89(d,2H),4.26(s,3H),3.72(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的方法合成以下化合物。当必要时，使用标准的保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001101
Figure BDA0002385339370001111
实施例3C：合成2-(2-羟基丙-2-基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001112
步骤A.2-(1-羟乙基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(100mg，0.28mmol)在THF(3mL)中的混合物中于0℃逐滴添加甲基氯化镁(0.19mL,0.56mmol)。混合物于室温搅拌10min，随后倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/2)以得到所需产物(40mg)。LCMS:m/z371(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),7.24(t,1H),6.97-6.77(m,3H),6.41(d,1H),5.40-5.23(m,2H),5.18-5.02(m,1H),4.26(s,3H),3.72(s,3H),1.55(d,3H)。
步骤B.2-乙酰基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(1-羟乙基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.08mmol)在DCM(3mL)中的混合物中添加氧化锰(IV)(35mg，0.4mmol)。混合物于室温搅拌1hr，随后通过硅藻土过滤。滤液减压浓缩以得到所需产物(25mg)。LCMS:m/z 369(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),7.35(t,1H),6.99-6.94(m,3H),5.45(s,2H),4.45(s,3H),3.83(s,3H),2.85(s,3H)。
步骤C.2-(2-羟基丙-2-基)-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-乙酰基-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(20mg，0.05mmol)在THF(1mL)中的混合物中于0℃逐滴添加甲基氯化镁(0.08mL,0.15mmol)。混合物于室温搅拌10min，随后倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(10mg)。LCMS:m/z 385(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),7.24(t,1H),6.89-6.81(m,3H),6.28(s,1H),5.33(s,2H),4.26(s,3H),3.72(s,3H),1.60(s,6H)。
实施例3D.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(2-羟乙基)-4-甲基4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001121
步骤A.2-(2-羟乙基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-2-乙烯基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(100mg，0.20mmol)在THF(2mL)中的混合物中于0℃在氮气下添加BH3-THF(0.2mL,1mol/L,0.20mmol)。混合物于室温搅拌2h，随后冷却至0℃，随后添加水(1mL)和NaBO3.4H2O(154mg，1.00mmol)。混合物缓慢温热到室温，并于该温度搅拌3h。所得的混合物倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(30mg)。LC-MS:m/z 511(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(2-羟乙基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向2(30mg，0.18mmol)在DCM(3mL)中的溶液中于0℃逐滴添加TFA(1mL)。所得的混合物于室温搅拌16hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(2.0mg)。LC-MS:m/z 381(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.58(s,1H),8.14(s,1H),7.45(d,1H),7.30-7.26(m,1H),6.96(d,1H),5.66(s,2H),5.02-5.00(m,1H),4.27(s,3H),3.85-3.81(m,2H),3.32-3.25(m,2H)。
实施例3E.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-((甲基氨基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001122
步骤A.4-甲基-2-((甲基氨基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(50mg，0.1mmol)在THF(10mL)中的混合物中于0℃逐滴添加MeNH2(30％在MeOH中，21mg，0.2mmol)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后添加氰基硼氢化钠(19mg，0.3mmol)。所得的混合物于室温搅拌过夜，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(35mg)。LCMS:m/z 511(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-((甲基氨基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-((甲基氨基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(35mg，0.07mmol)在DCM(10mL)中的混合物中于0℃逐滴添加TFA(3mL)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5mg)。LCMS:m/z380(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.13(s,1H),8.59(s,1H),8.16(d,1H),7.45(d,1H),7.31-7.25(m,1H),6.96(d,1H),5.66(s,2H),4.26(s,3H),4.09(s,2H),2.40(s,3H)。
实施例3F.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(氨基甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001131
步骤A.(E)-4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛肟.向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(120mg，0.24mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中于0℃添加盐酸羟胺(50mg，0.73mmol)，随后添加KOAC(71mg，0.73mmol)。反应混合物于室温搅拌8hr，随后用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(90mg)。LCMS:m/z 510(M+H)+。
步骤B.2-(氨基甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向(E)-4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛肟(90mg，0.18mmol)在乙酸(10mL)中的混合物中添加Zn粉(58mg，0.88mmol)。反应混合物于室温搅拌过夜，随后通过硅藻土过滤。滤液减压浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(70mg)。LCMS:m/z 496(M+H)+。
步骤C.使用实施例3D中的方法合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(氨基甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LCMS:m/z366(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.13(s,1H),8.59(s,1H),8.15(s,1H),7.45(d,1H),7.33-7.20(m,1H),6.97(d,1H),5.66(s,2H),4.24(d,3H),4.17(s,2H)。
实施例3G.合成N-((6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)乙酰胺
Figure BDA0002385339370001141
步骤A.N-((4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)乙酰胺.向2-(氨基甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(35mg，0.07mmol)在DCM(10mL)中的混合物中于0℃添加乙酸酐(22mg，0.21mmol)，随后添加三乙胺(22mg，0.21mmol)和DMAP(0.8mg，0.007mmol)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后用水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(25mg)，其是黄色油状物。LCMS:m/z 538(M+H)+。
步骤B.使用实施例3D中的方法合成N-((4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)乙酰胺。LCMS:m/z 408(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.67(s,1H),8.29(s,1H),8.16(s,1H),7.46(d,1H),7.31-7.21(m,1H),6.97(d,1H),5.67(s,2H),4.31(s,3H),1.93(s,3H)。
实施例3H.合成N-((6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)甲烷磺酰胺
Figure BDA0002385339370001152
步骤A.N-((4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)甲烷磺酰胺.向2-(氨基甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.1mmol)在DCM(5mL)的混合物中于0℃添加Et3N(30.62mg，0.3mmol)，随后添加MsCl(9.24mg，0.081mmol)。混合物于20℃搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(20mg)。
步骤B.使用实施例3D中所述的方法合成N-((6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基)甲烷磺酰胺。LCMS:m/z 444(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.62(s,1H),8.22(s,1H),8.17(d,1H),7.45(d,1H),7.34-7.20(m,1H),6.97(d,1H),5.66(s,2H),4.64(d,2H),4.27(s,3H),3.04(s,3H)。
实施例3I.合成2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001151
步骤A.合成N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-溴-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯于-40℃，在氮气氛下，向N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(14g,2.73mmol)和CBR4(4.52g,13.65mmol)在THF(20mL)中的混合物逐滴添加LiHMDS(5.46mL,5.46mmol)。反应混合物于-40℃搅拌30min，随后用水(4mL)淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，PE/EA＝10:1～3:1)以得到500mg N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-溴-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯。LC-MS:m/z 591(M+H)+。
步骤B.合成N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-乙烯基-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯向N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-溴-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.85mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加三丁基(乙烯基)锡烷(536mg，1.69mmol)和DIPEA(327mg，2.53mmol)，随后添加Pd(PPh3)4(105mg，0.08mmol)。反应混合物在氮气氛下于80℃搅拌3hr，随后用H2O淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。LC-MS:m/z 539(M+H)+。
步骤C.合成(E)-3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙烯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯向N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-乙烯基-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.56mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加3-碘-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.61mmol)。反应混合物于100℃搅拌过夜。冷却到室温后，反应混合物用H2O淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(PE/EA＝1:1)以得到200mg(E)-3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙烯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯。LC-MS:m/z 705(M+H)+。
步骤D.合成3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯向(E)-3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙烯基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.28mmol)在THF/MeOH(4mL,10:1)中的溶液中添加Pd/C(6mg，10％wt.)。反应混合物在氢气下于室温搅拌12hr。混合物通过硅藻土垫过滤，并浓缩滤液。残余物通过制备TLC纯化(PE/EA＝1:1)以得到100mg 3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯。LC-MS:m/z 707(M+H)+。
步骤E.合成2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。于0℃，在氮气氛下，向3-(2-(6-((6-((叔丁氧基羰基)[(叔丁氧基)羰基]氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.14mmol)在EtOH(2mL)中的混合物添加HCl(2mL,4M在二氧六环中)。于80℃搅拌1hr后，混合物倒入饱和NaHCO3中，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(DCM/MeOH＝10:1)以得到10mg 2-(2-(1H-吡唑-3-基)乙基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 407(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),8.55(s,1H),7.60-7.10(m,2H),6.30(d,1H),6.18-6.02(m,2H),5.90(s,2H),5.19(s,2H),4.26(s,3H),3.61-3.41(m,2H),3.19-3.12(m,2H)。
实施例4.合成化合物E4-vii和E4-viii
方案E4
Figure BDA0002385339370001171
其中Hal是卤素(例如BR或I)；LG是离去基团(例如卤素，诸如Br或I；OMs；或OTs)；Q是如第一至第二十六实施方式中任一项中所定义；和Q'是进一步官能化的Q(例如任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环或任选取代的杂环基)。化合物E4-i与甲硫醇钠的芳香取代反应提供了化合物E4-ii，其可使用化合物E1-iii到E1-vi的合成而被转化为化合物E4-v。用mCPBA氧化化合物E4-v分别得到了化合物E4-vi和E4-vii。通过将Q进一步官能化为Q'，可从E4-v转化化合物E4-viii。
实施例4A.合成6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001181
步骤A：4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向2-溴-4-甲基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(500.0mg，1.73mmol)在EtOH(10.0mL)中的混合物中添加NaSMe(240.0mg，3.5mmol)。反应混合物于25℃搅拌3hr，随后用冰水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到所需产物(460mg)，其不经任何纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 257(M+H)+。
步骤B：6-甲酰基-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(460.0mg，1.8mmol)和N-甲基-N-苯基甲酰胺(490mg,3.6mmol)在DCE(10mL)中的溶液中添加POCl3(550.0mg，3.6mmol)。所得的混合物于130℃搅拌3hr，随后用冰水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝8/1)以得到所需产物(320.0mg)。LC-MS:m/z 285(M+H)+。
步骤C：4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向6-甲酰基-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(300.0mg，1.06mmol)在EtOH(5.0mL)中的溶液中添加N2H4.H2O(2mL,98wt％)。反应混合物于室温搅拌1hr，随后加热至60℃搅拌过夜，随后冷却。过滤收集固体并高真空干燥以得到所需产物(180.0mg)。LC-MS:m/z 253(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.48(s,1H),4.22(s,3H),2.81(s,3H)。
步骤D：6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(180.0mg，0.7mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中添加碳酸钾(200mg，14mmol)。混合物于60℃搅拌1hr，随后添加1-(氯甲基)-3-甲氧基苯(170mg,1.07mmol)。所得的混合物于60℃搅拌3hr，随后用冰水淬灭(100.0mL)，并用DCM萃取。(10.0mL x 3)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10:1)以得到所需产物(200.0mg)。LC-MS:m/z 373(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.24(t,1H),6.88-6.82(m,3H),5.32(s,2H),4.24(s,3H),3.72(s,3H),2.82(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的程序制备以下化合物。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001191
Figure BDA0002385339370001201
实施例4B.合成4-甲基-2-(甲硫基)-6-((2-氧代-2,3-二氢嘧啶-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001202
将6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.132mmol)在HCl(10mL)中的混合物于100℃搅拌1hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5.0mg，10.51％产率)。LCMS:m/z361(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.82(s,1H),8.60(s,1H),7.82(s,1H),6.14(s,1H),5.22(s,2H),4.24(s,3H),2.82(s,4H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370001211
实施例4C.合成6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001212
向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(30.0mg，0.08mmol)在DCM(3.0mL)中的溶液中于0℃添加m-CPBA(14.0mg，0.08mmol)。所得的混合物于0℃搅拌1hr，随后用冰水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10:1)以得到所需产物(15.0mg)。LC-MS:m/z 389(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.25(t,1H),6.86(dd,3H),5.35(s,2H),4.30(s,3H),3.73(s,3H),3.11(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的程序制备以下化合物。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001213
Figure BDA0002385339370001221
Figure BDA0002385339370001231
Figure BDA0002385339370001241
实施例4D.合成4-((4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯甲酰胺
Figure BDA0002385339370001242
步骤A：4-((4-甲基-2-(甲硫基)-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯甲酰胺.将4-((4-甲基-2-(甲硫基)-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯甲腈(50.0mg，0.13mmol)在H2SO4(1.0mL)中的混合物于0℃搅拌1hr，随后用饱和NaHCO3水溶液中和，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10:1)以得到所需产物(20.0mg)。LC-MS:m/z 386(M+H)+。
步骤B：4-((4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯甲酰胺.向4-((4-甲基-2-(甲硫基)-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)苯甲酰胺(20.0mg，0.052mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液中于0℃添加m-CPBA(10.0mg，0.052mmol)。所得的混合物于0℃搅拌1hr，随后用冰水淬灭(10.0mL)，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10:1)以得到所需产物(5.0mg)。LC-MS:m/z 402(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),7.93(s,1H),7.82(d,2H),7.38-7.33(m,3H),5.42(s,2H),4.29(s,3H),3.11(s,3H)。
实施例4E.合成6-(3-(2-羟基丙-2-基)苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001243
步骤A.6-(3-(2-羟基丙-2-基)苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-(3-乙酰基苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(120mg，0.31mmol)在无水THF(5mL)中的混合物中于0℃逐滴添加甲基氯化镁(0.3mL,0.9mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后倒入饱和NH4Cl水溶液中，并用EtOAc萃取。分离有机层并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(70mg)。LCMS:m/z 401(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),7.49(s,1H),7.33(d,1H),7.23(t,1H),7.09(d,1H),5.33(s,2H),4.98(s,1H),4.24(s,3H),2.81(s,3H),1.39(s,6H)。
步骤B.6-(3-(2-羟基丙-2-基)苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-(3-(2-羟基丙-2-基)苄基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(46mg，0.115mmol)在DCM(3mL)中的混合物中于0℃添加m-CPBA(20mg，0.1mmol,85％w/w)。混合物于室温搅拌30min，随后用饱和Na2S2O3水溶液淬灭，并用DCM萃取。分离有机层并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(10mg)。LCMS:m/z 417(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),7.49(s,1H),7.34(d,1H),7.24(t,1H),7.09(d,1H),5.37(s,2H),4.98(s,1H),4.30(s,3H),3.11(s,3H),1.39(s,6H)。
实施例4F.合成6-((2-氨基吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001251
步骤A.2-溴-4-(溴甲基)吡啶.将2-溴-4-甲基吡啶(1g,5.81mmol)、NBS(1.1g,6.39mmol)和催化量的AIBN(100mg)在CCl4(10mL)中的混合物于80℃过夜。所得的混合物减压浓缩，残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝200:1)以得到所需产物(500mg)。
步骤B.6-((2-溴吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.40mmol)和K2CO3(164mg，1.19mmol)在DMF(8mL)中的混合物于60℃搅拌2hr，随后添加2-溴-4-(溴甲基)吡啶(199mg，0.80mmol)在DMF(2mL)中的溶液和催化量的TBAB(13mg)。混合物于60℃过夜，随后用水淬灭(20mL)，并用EtOAc萃取。合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝10:1)以得到所需产物(150mg)。LCMS:m/z 423(M+H)+。
步骤C.(4-((4-甲基-2-(甲硫基)-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯。将6-((2-溴吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.24mmol)、氨基甲酸叔丁酯(83mg，0.71mmol)、K3PO4(201mg，0.95mmol)、Pd2(dba)3(18mg，0.02mmol)和呫吨(11mg，0.02mmol)在二氧六环(10mL)中的混合物于100℃在氮气下过夜。所得的混合物用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(100mg)。LCMS:m/z459(M+H)+。
步骤D-E：使用类似于实施例4C的方法合成(4-((4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-5-氧代-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯，使用类似于实施例3G的方法合成6-((2-氨基吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LCMS:m/z 375(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),7.73(d,1H),6.30(d,1H),6.12(s,1H),5.89(s,2H),5.24-5.03(m,2H),4.29(s,3H),3.03(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的程序制备以下化合物。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001261
Figure BDA0002385339370001271
实施例4G.合成6-((2-氨基噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001272
步骤A-B.2-溴-5-(溴甲基)噻唑和6-((2-溴噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮的合成类似于实施例4F。
步骤C.6-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将6-((2-溴噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(130mg，0.30mmol)和DIPEA(0.1mL)在NMP(0.1mL)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.1mL)中的混合物于150℃搅拌4hr。随后，混合物用水淬灭(10mL)，用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(用PE/EtOAc＝5/1洗脱)以得到所需产物(60mg，38.4％产率)。LC-MS:m/z 515(M+H)+。
步骤D.6-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.10mmol)在THF(3mL)中的混合物中于0℃添加过硫酸氢钾(61mg，0.10mmol)。混合物于0℃搅拌1hr，随后用饱和Na2S2O3水溶液淬灭(5mL)，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到所需产物(30mg，50.1％产率)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 531(M+H)+。
步骤E.6-((2-氨基噻唑-5-基)甲基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮的合成类似于实施例3G。LC-MS:m/z381(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),6.97(s,1H),6.87(s,2H),5.28(s,2H),4.29(s,3H),3.11(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的程序制备以下化合物。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001281
实施例4H.合成6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001282
向6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(30.0mg，0.08mmol)在DCM(3.0mL)中的溶液中于0℃添加m-CPBA(35.0mg，0.2mmol)。所得的混合物于0℃搅拌1hr，随后用冰水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10:1)以得到所需产物(10.0mg，32％产率)。LC-MS:m/z 405(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),7.24(t,1H),6.92-6.82(m,3H),5.35(s,2H),4.33(s,3H),3.72(s,3H),3.57(s,3H)。
Figure BDA0002385339370001291
实施例5.用方案E5合成化合物式E5-ii和衍生物。
方案E5
Figure BDA0002385339370001292
其中Q如本发明第一至第二十六实施方式中任一项中所定义；Nu是亲核基团(即，向亲电基团贡献电子对以形成与反应相关的化学键的化学物质)。Nu’是任选取代的烷氧基、任选取代的硫醇基团、任选取代的氨基或任选官能化的碳亲核试剂。
实施例5A.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(苄硫基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001301
步骤A.2-(苄硫基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向苯基甲烷硫醇(91.21mg，734.32μmol)在DCM(5mL)中的溶液中于0℃添加DIPEA(142.3mg，1.10mmol)和4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(200mg，0.37mmol)。混合物于20℃搅拌1hr，随后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1至3/1)以得到所需产物(200mg)。LCMS:m/z 589(M+H)+
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(苄硫基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。将2-(苄硫基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，50.95μmol)在DCM/TFA(V:V＝3:1)中的混合物于20℃搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5mg)。LCMS:m/z 459(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.57(s,1H),8.14(s,1H),7.49(d,2H),7.45(d,1H),7.34(t,2H),7.28(dd,2H),6.95(d,1H),5.65(s,2H),4.62(s,2H),4.26(s,3H)。
实施例5B.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-磺酰胺
Figure BDA0002385339370001302
步骤A.4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-磺酰胺.向2-(苄硫基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.169mmol)在HOAc/H2O(V:V＝1:1,10mL)添中的溶液中加NCS(45mg，0.34mmol)。混合物于40℃搅拌3hr，随后冷却至0℃，随后于该温度缓慢添加NH3/THF(5mL)，直到pH 9。所得的混合物于20℃搅拌0.5hr，随后用EtOAc萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝1/1)以得到所需产物(20mg)。LCMS:m/z 546(M+H)+。
步骤B.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-磺酰胺.将4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-磺酰胺(20mg，36.65μmol)在DCM/TFA(V/V＝3/1)中的混合物于20℃搅拌2hr，随后减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(1.7mg)。LCMS:m/z 416(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.13(s,1H),8.73(s,1H),8.31(bRs,2H),8.17(s,1H),7.47(d,1H),7.36-7.20(m,1H),6.99(d,1H),5.68(s,2H),4.30(s,3H)。
Figure BDA0002385339370001311
Figure BDA0002385339370001321
实施例5C.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)丙二酸二甲酯
Figure BDA0002385339370001331
步骤A.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)丙二酸二甲酯。向t-BuOK(103mg，0.92mmol)和丙二酸二甲酯(91mg，0.69mmol)在THF(5mL)中的混合物中在氮气下添加4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(250mg，0.46mmol)。反应混合物于60℃搅拌16hr，随后倒入冰水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到所需产物(100mg，36.48％产率)。LC-MS:m/z 597(M+H)+。
步骤B.2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)丙二酸酯的合成类似于实施例5A。LC-MS:m/z 467(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.65(s,1H),8.15(s,1H),7.45(d,1H),7.30-7.26(m,1H),6.96(d,1H),5.84(s,1H),5.67(s,2H),4.27(s,3H),3.77(s,6H)。
实施例5D.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸甲酯
Figure BDA0002385339370001332
步骤A.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸甲酯。向2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)丙二酸二甲酯(130mg，0.22mmol)在DMSO(2mL)中的溶液中在氮气下添加饱和LiCl水溶液(0.1mL)。所得的混合物于130℃搅拌10min，随后倒入冰水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。随后残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到所需产物(100mg)。LC-MS:m/z 539(M+H)+。
步骤B.如实施例5A中那样合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸甲酯。LC-MS:m/z 409(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.62(s,1H),8.15(s,1H),7.45(d,1H),7.30-7.26(m,1H),6.96(d,1H),5.67(s,2H),4.39(s,2H),4.27(s,3H),3.70(s,3H)。
实施例5E.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酰胺
Figure BDA0002385339370001341
步骤A.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸.向2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸甲酯(100mg，0.186mmol)在MeOH/H2O(3mL/1mL)中的混合物中于0℃在氮气下添加LiOH(23mg，0.558mmol)。所得的混合物于室温搅拌16hr，随后减压浓缩。残余物用盐酸水溶液(1M)酸化并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 525(M+H)+。
步骤B.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酰胺.向2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酸(50mg，0.095mmol)、EDCI(37mg，0.190mmol)、HOBT(26mg，0.190mmol)和DIPEA(0.05mL,0.286mmol)在DCM(5mL)中的混合物中于0℃添加NH4Cl(26mg，0.477mmol)。所得的混合物于室温搅拌16hr，随后倒入冰水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到所需产物(20mg)。LC-MS:m/z 524(M+H)+。
步骤C.使用如实施例5A中的方法合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)乙酰胺。LCMS:m/z 394(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.59(s,1H),8.15(s,1H)，7.77(s,1H)，7.45(d,1H),7.33-7.22(m,2H),6.96(d,1H),5.66(s,2H),4.27(s,3H),4.07(s,2H)。
实施例5F.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0002385339370001351
步骤A.4-甲基-2-(甲硫基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(1g,3.96mmol)在DMF(25mL)中的混合物中于0℃添加NaH(318mg，7.93mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后于0℃添加4-(溴甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(2g,5.94mmol)在DMF(10mL)中的溶液。混合物于室温搅拌2hr，随后倒入冰水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝50:1to10:1)以得到所需产物(1.85g)。LCMS:m/z 513(M+H)+。
步骤B.4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。
向4-甲基-2-(甲硫基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(700mg，1.37mmol)在DCM(20mL)中的混合物中于0℃添加m-CPBA(831mg，4.01mmol)。混合物于室温搅拌过夜，随后用饱和NaSO3水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到所需产物(360mg)。LCMS:m/z 545(M+H)+。
步骤C.4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲腈.向4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg，0.552mmol)在DMF(10mL)中的混合物中于0℃添加KCN(72mg，1.10mmol)。混合物于室温搅拌2hr，随后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(210mg)。LCMS:m/z 492(M+H)+。
步骤D.6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酰胺.将4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲腈(50mg，0.1mmol)在浓H2SO4(3mL)中的混合物于室温搅拌12hr，随后用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(6mg)。LCMS:m/z 380(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.12(s,1H),8.71(s,1H),8.39(s,1H),8.16(s,1H),8.07(s,1H),7.46(d,1H),7.33-7.23(m,1H),6.98(d,1H),5.68(s,2H),4.33(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用以上所阐述的程序制备以下化合物。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001361
实施例5G.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-N-羟基-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0002385339370001371
步骤A.4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酸甲酯。向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲腈(100mg，0.20mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中于0℃添加MeONA(110mg，0.61mmol,30wt％)。反应混合物于室温搅拌1.5hr，随后用饱和HCl(1M)淬灭，并用DCM萃取(30mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到作为黄色油状物的所需产物(85mg)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z 525(M+H)+。
步骤B.4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酸。向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酸甲酯(90mg，0.18mmol)在THF(10mL)中的混合物中于0℃添加LiOH(12mg，0.48mmol)在H2O(10mL)中的溶液。反应混合物于室温搅拌过夜，随后用HCl水溶液(1M)缓慢调节至pH 5，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到作为白色油状物的所需产物(70mg，84％粗产率)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z 511(M+H)+。
步骤C.4-甲基-5-氧代-N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酰胺.向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酸(70mg，0.14mmol)在DCM(10mL)中的混合物中于0℃添加O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(24mg，0.21mmol)、EDCI(39mg，0.21mmol)和HOBT(28mg，0.21mmol)。反应混合物于室温搅拌过夜，随后用水淬灭，并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到作为黄色油状物的所需产物(35mg)。LCMS:m/z610(M+H)+。
步骤D.使用实施例5A中的方法合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-N-羟基-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲酰胺。LCMS:m/z 396(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.67(s,1H),8.29(s,1H),8.16(s,1H),7.46(d,1H),7.31-7.25(m,1H),6.97(d,1H),5.67(s,2H),4.31(s,3H)。
实施例5H.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯基乙酰胺
Figure BDA0002385339370001381
步骤A.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙腈.向2-苯乙腈(43mg，0.36mmol)在THF(3mL)中的混合物中添加NaH(14mg，0.36mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后添加4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(100mg，0.18mmol)。反应混合物于室温再搅拌3hr，随后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到产物(63mg，59％产率)。LCMS:582(M+H)+。
步骤B.2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯基乙酰胺的合成类似于实施例5F。LCMS:m/z 470(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H)8.01(s,1H)，7.54-7.24(m,8H),6.94(d,1H),5.65(s,2H),5.51(s,1H),4.24(s,3H)。
Figure BDA0002385339370001382
Figure BDA0002385339370001391
实施例5I.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-羟基-2-苯基乙酰胺
Figure BDA0002385339370001392
将2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙腈(100mg，0.18mmol)在浓H2SO4(1mL)中的混合物于室温搅拌2hr，随后倒入水中，并用DCM萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物溶解在MeOH(3mL)中，随后添加NH3.H2O(3mL)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后减压。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(2mg)。LCMS:486(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.12(s,1H),8.61(s,1H),8.14(s,1H)，7.71(d,2H),7.64(d,2H)，7.52(s,1H),7.45(d,1H),7.40-7.24(m,4H),6.95(d,1H),5.66(s,2H)4.27(s,3H)。
实施例5J.合成2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙酸甲酯
Figure BDA0002385339370001393
步骤A.2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙酸甲酯。向2-苯乙酸甲酯(43mg，0.29mmol)在THF(3mL)中的混合物中添加NaH(11mg，0.29mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后添加4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(82mg，0.15mmol)。所得的混合物于室温搅拌3hr，随后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(20mg)。LCMS:615(M+H)+。
步骤B.2-(6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙酸甲酯。将2-(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)-2-苯乙酸甲酯(40mg，0.07mmol)在DCM/TFA(V:V＝1:1,2mL)中的混合物于室温搅拌2hr，随后倒入水中，并用DCM萃取。合并的有机层减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5mg)。LCMS:485(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.11(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H)7.54-7.50(m,2H),7.46-7.36(m,4H),7.30-7.24(m,1H),6.94(d,1H),5.87(s,1H)，5.65(s,2H),4.26(s,3H),3.73(s,3H)。
使用合适的起始材料，使用上面阐述的方法制备以下化合物。
Figure BDA0002385339370001401
实施例6.合成6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-2-(三氟甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001402
向2-碘-6-(3-甲氧基苄基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(90mg，0.2mmol)和CuI(cat.)在DMF(5mL)中的搅拌混合物中添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(58mg，0.3mmol)。反应混合物于70℃搅拌4hr，随后倒入水中，并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝5/1)以得到所需产物(10mg)。LCMS:m/z＝395(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),7.24(t,1H),6.90-6.82(m,3H),5.34(s,2H),4.32(s,3H)3.72(s,3H)。
实施例7.合成化合物E7-v和E7-viii
方案E7
Figure BDA0002385339370001411
化合物E7-iii和化合物E7-i和/或化合物E7-ii之间的亲核芳香取代得到了中间体E7-iv。还原化合物E7-iv的苯磺酰基得到了中间体E7-v。使用E7-vi和碱(例如K2CO3、K3PO4、t-BuOK或Cs2CO3)的标准烷基化反应得到了化合物E7-viii，其中Xa是离去基团，诸如Cl、Br、I、OMs、OTs；Ar1和Ar2各自独立为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环或任选取代的杂环基；任选取代的烷基、任选取代的烷基芳基、任选取代的烷基杂芳基、任选取代的烯基和任选取代的炔基。还可通过Mitsunobu反应，使用氰亚甲基三丁基膦(CMBP)/甲苯从中间体E7-v合成化合物E7-viii。在某些实施方式中，Ar1和Ar2各自独立为任选取代的杂芳基。
实施例7A.合成4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(中间体E7-i)
Figure BDA0002385339370001412
向4-甲基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(1.01g,4.0mmol)在DCM(20mL)中的搅拌悬浮液中于室温添加3-氯-过氧化苯甲酸(0.77g,3.8mmol)。混合物于室温搅拌2hr。随后混合物过滤，用EtOAc洗涤，并用MeOH研磨以得到4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(600mg)。LCMS:m/z 269(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.78(s,1H),8.64(s,1H),4.28(s,3H),3.11(s,3H)。
实施例7B.合成4-甲基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(E7-ii)
Figure BDA0002385339370001421
向装有4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(30g,0.119mol,1.0eq)/DCM(600mL)的三颈烧瓶中于20℃分三份添加m-CPBA(61.5g,3eq)。混合物于30℃搅拌过夜，LC-MS表明起始材料100％消耗。混合物冷却至室温，添加另一份m-CPBA(1.0eq)。反应混合物于30℃搅拌2hr，LC-MS表明E7-iI(LCMS:m/z 269(M+H)+)。混合物冷却至室温并过滤。将滤饼悬浮在MeOH(500mL)中并于室温搅拌1hr。过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥以得到28g 5％E7-i和95％E7-ii的混合物。混合物(28g)悬浮在DMSO(600mL)中，加热至120℃～130℃以形成澄清溶液。随后冷却至室温，沉淀固体。混合物过滤并干燥以提供23g纯E5-1。LCMS:m/z 285(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.87(s,1H),8.69(s,1H),4.32(s,3H),3.56(s,3H)。
实施例7C.合成3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑
Figure BDA0002385339370001422
1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯于0℃，在氮气氛下，向1H-吡唑-3-甲酸甲酯(90g，0.72mol)的THF(1L)溶液中添加NaH(20.7g，0.864mol，60％)。所得的混合物缓慢温热至室温并搅拌1小时。反应混合物随后冷却0℃，逐滴添加SEMCl(151.5mL，0.842mol)。继续再搅拌2小时，随后用饱和NH4Cl淬灭，用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥。真空去除溶剂以提供粗产品210g，其不经纯化直接用于下一步骤。
(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇.于0℃，在氮气氛下，向LAH(16.9g，0.44mol)在THF(760mL)中的悬浮液中添加粗1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(76g)。所得的混合物缓慢温热至室温，搅拌1小时。反应混合物冷却回0℃，连续添加H2O(15.6mL)、10％NaOH(15.6mL)、H2O(15.6mL)。所得的混合物通过硅藻土垫过滤，用MTBE(4x)洗涤。合并的有机级份经Na2SO4干燥。减压去除溶剂，以提供粗产品69.4g，其不经纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 229(M+H)+。
3-(碘甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑.于0℃，在氮气氛下，向(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(61.5g，理论上为0.262mol)在THF(310mL)中的搅拌溶液中添加TEA(55.42mL，0.393mol)，随后添加MsCl(24mL，0.314mol)。反应温热至室温并搅拌1小时，随后引入NaI(196.5g，1.31mol，在310mLDMF中)。所得的混合物再搅拌1小时，用冰水淬灭，用MTBE(3x)萃取。合并的有机层用饱和Na2S2O3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，以提供77.5g粗产品，其不经纯化用于下一步骤。LC-MS:m/z 339(M+H)+。
3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑.于0℃，在氮气氛下，向(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(77.5g，理论上为0.229mol)在DMF(600mL)中的搅拌溶液中添加苯亚磺酸钠(53.5g，0.32mol)并于0℃搅拌1小时。在温热到室温之后，反应混合物用冰水和饱和Na2S2O3淬灭，用乙酸乙酯萃取(3x)。合并的有机层用饱和NaHCO3和盐水连续洗涤，经Na2SO4干燥。真空去除溶剂，残余物通过快速色谱纯化(硅胶，20％～70％乙酸乙酯/石油醚)以提供56.7g。LCMS:[M+H]+353。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.85-7.77(m,4H)，7.62(dd，2H)，6.19(d,1H)，5.35(d,2H)，4.70(d,2H)，3.44-3.38(m,2H)，0.88-0.77(m,2H)，-0.01(s,9H)。
实施例7D.合成4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001431
4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(1.8g，5.1mmol)的无水THF(30mL)溶液中于-40℃逐滴添加LiHMDS(7.5mL，7.5mmol)。混合物于室温搅拌30min，随后于室温添加4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(580mg，2.7mmol)的无水THF(30mL)溶液。混合物于室温再搅拌1小时，倒入冰冷却的饱和NH4Cl水溶液(20mL)中，用EtOAc萃取(3x 100mL)。合并的有机层用水(60mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～2.5％甲醇在二氯甲烷中)，得到所需产物(800mg。LC-MS(ESI)实测值为：557(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.78(s,1H)，8.65(s,1H)，8.03(d,1H)，7.84-7.78(m,3H)，7.67-7.59(m,2H)，6.94(s,1H)，6.72(d,1H)，5.48(d,2H)，4.29(s,3H)，3.56(dd，2H)，0.88(dd，2H)，0.00(s,9H)。
4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(0.8g，1.41mmol)在THF(5mL)和MeOH(10mL)中的混合物中在N2下在冰浴下逐滴添加SmI2(0.1M/THF，45mL)。在搅拌10min后，反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭(50mL)，用EAOAc(50mLx 3)萃取。合并的有机层用水(60mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～3％甲醇在二氯甲烷中)，得到所需产物(310mg。LC-MS实测值为：417(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.31(s,1H)，7.60(d,1H)，6.39(d,1H)，5.49(s,2H)，4.58(s,2H)，4.43(s,3H)，3.62(t，2H)，0.95(t，2H)，0.0(s,9H)。
实施例7E.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001441
步骤A.1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯。向1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯(900mg，5.1mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液中于0℃分份添加NaH(305mg，7.6mmol,60。悬浮液在冰浴下搅拌15min，随后逐滴引入(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(1.07mL,6.0mmol)，并于室温再搅拌1hr。随后混合物倒入饱和NH4Cl(aq.)中，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％乙酸乙酯/石油醚)以得到1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯(1.32g)。LCMS:m/z308(M+H)+。
步骤B.(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲醇.向1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-甲酸甲酯(1g,3.2mmol)在无水THF(10mL)中的溶液中在冰浴下分份添加LiHAl4(146mg，3.8mmol)。混合物于0℃搅拌30min。随后悬浮液倒入饱和NH4Cl(aq.)中，用乙酸乙酯萃取(2x)。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～60％乙酸乙酯/石油醚)以得到(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲醇(500mg)。LCMS:m/z 280(M+H)+。
步骤C.4-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶向(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲醇(120mg，0.43mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加PPh3(225mg，0.86mmol)。混合物冷却至0℃，添加NCS(114mg，0.86mmol)添加。悬浮液温热至室温，并再搅拌1hr。随后反应倒入饱和NaHCO3(aq.)中。水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％乙酸乙酯/石油醚)以得到4-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(70mg)，其是黄色油状物。LCMS:m/z298(M+H)+。
步骤D.4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向K2CO3(41mg，0.3mmol)在无水DMF(2mL)中的混合物中添加4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(41mg，0.1mmol)，于50℃在氩气下搅拌30min。添加4-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(30mg，0.1mmol)在DMF(1mL)中的溶液并再搅拌4hr。悬浮液冷却至室温，并倒入0.5N HCl(aq.)中。分层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(40mg，60％)。LCMS:m/z 678(M+H)+。
步骤E.2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.044mmol)在35％TFA(1mL,在二氯甲烷中)中的溶液于室温搅拌过夜。混合物浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(3mg)。LCMS:m/z 418(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),12.78(s,1H),8.55(s,1H),8.18(d,1H),8.00(s,1H),7.68(s,1H),7.43(d,1H),6.27(d,1H),5.78(s,2H),4.51(s,2H),4.25(s,3H)。
实施例7F.合成6-((1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001461
步骤A.1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醛：将NaH样品在N2下用己烷(2x 10mL)洗涤。烧瓶装入无水DMF(20mL)，分小份添加1H-咪唑-2-甲醛(500mg，5.2mmol)。于室温搅拌1.5小时之后，逐滴添加SEMCl(864mg，5.2mmol)。反应混合物于室温搅拌30min。反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，减压浓缩，得到粗1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醛(800mg)。LCMS:227(M+H)+。
步骤B.(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲醇：向1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-甲醛(1.6g，7mmol)在THF(20mL)中的搅拌混合物中于0℃添加NaBH4(1.34g，35mmol)。反应混合物于室温搅拌30min。反应混合物倒入NH4Cl水溶液中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，减压浓缩，得到粗(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲醇(1.3g)。
步骤C.2-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑：向(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲醇(400mg，1.75mmol)在DCM(20mL)中的搅拌混合物中于室温添加NCS(466mg，3.5mmol)和PPh3(920mg，3.5mmol)。混合物于室温搅拌2小时。反应混合物倒入水中，用DCM萃取。混合物用水洗涤，有机层减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(PE：EtOAc＝1：1)，得到2-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑。LCMS:247(M+H)+。向4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.12mmol)在无水DMF(5mL)中的搅拌混合物中于60℃在N2下添加K2CO3(66mg，0.48mmol)。20min后，于60℃在N2下添加在无水DMF(2mL)中的化合物E7-2(60mg，0.24mmol)。混合物在N2下于60℃搅拌1.5小时。反应混合物冷却至室温，并用0.5N盐酸水溶液调节到pH＝5～6。随后混合物用EtOAc萃取，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，减压浓缩，并通过制备TLC纯化(PE：EtOAc＝1：1.5)，得到4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(25mg)。LCMS:627(M+H。将4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-基)甲基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(25mg，0.04mmol)在DCM/TFA(2mL/2mL)中的混合物于室温搅拌1小时。反应混合物浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，得到所需产物(1.3mg)。LCMS:367(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H)，7.66(d,1H)，6.9(s,2H)，6.27(d,1H)，5.34(s,2H)，4.51(s,2H)，4.27(s,3H)。
根据方案E7和实施例7C-7E中的方法合成以下化合物，使用合适的起始材料。
Figure BDA0002385339370001481
Figure BDA0002385339370001491
Figure BDA0002385339370001501
Figure BDA0002385339370001511
Figure BDA0002385339370001521
Figure BDA0002385339370001531
Figure BDA0002385339370001541
Figure BDA0002385339370001551
Figure BDA0002385339370001561
Figure BDA0002385339370001571
Figure BDA0002385339370001581
Figure BDA0002385339370001591
Figure BDA0002385339370001601
Figure BDA0002385339370001611
Figure BDA0002385339370001621
Figure BDA0002385339370001631
Figure BDA0002385339370001641
Figure BDA0002385339370001651
Figure BDA0002385339370001661
Figure BDA0002385339370001671
Figure BDA0002385339370001681
Figure BDA0002385339370001691
Figure BDA0002385339370001701
Figure BDA0002385339370001711
Figure BDA0002385339370001721
Figure BDA0002385339370001731
Figure BDA0002385339370001741
Figure BDA0002385339370001751
Figure BDA0002385339370001761
Figure BDA0002385339370001771
Figure BDA0002385339370001781
Figure BDA0002385339370001791
Figure BDA0002385339370001801
Figure BDA0002385339370001811
实施例7F.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001812
步骤A.合成2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯向2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酸乙酯(2g,10.7mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加t-BuONO(1.6g,16.1mmol)。反应混合物于50℃搅拌16hr。在冷却至室温后，反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/PE)以得到2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(400mg)。LC-MS(ESI):m/z 172(M+1)+。
步骤B.合成2-(噻唑-4-基)乙醇向2-(噻唑-4-基)乙酸乙酯(400mg，2.3mmol)在DCM(20mL)搅拌溶液中添加DIBAL-H(4.7mL,7.0mmol)。反应混合物于室温在氮气下搅拌3hr。反应用饱和NaHCO3淬灭，用DCM萃取，有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，50-100％EtOAc/PE)以得到2-(噻唑-4-基)乙醇(200mg)。LC-MS(ESI):m/z 130(M+1)+。
步骤C.合成4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg，0.14mmol)和2-(噻唑-4-基)乙醇(55mg，0.4mmol)在甲苯(5mL)中的混合物中添加CMBP(104mg，0.4mmol)。反应混合物于110℃在氮气下搅拌3hr。在冷却至室温后，反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/PE)以得到60mg4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 528(M+1)+。
步骤D.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg，0.1mmol)在DCM(1mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)。反应混合物于室温搅拌3hr。反应混合物用饱和NaHCO3调节至pH＝7.5，用DCM萃取，用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到10mg 2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-(2-(噻唑-4-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 398(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.47(s,1H),7.67(s,1H),7.41(s,1H),6.27(s,1H),4.58-4.40(m,4H),4.26(s,3H),3.23(t,2H)。
Figure BDA0002385339370001821
Figure BDA0002385339370001831
实施例8.合成化合物E8-v、E8-vi和E8-viii
方案E8
Figure BDA0002385339370001832
Figure BDA0002385339370001841
可通过类似于实施例E7-v至E7-viii的烷基化或Mitsunobu反应将化合物E8-i转化为中间体。用mCPBA或过硫酸氢钾氧化E8-ii生成化合物E8-v和E8-vi。还可通过先氧化再烷基化或Mitsumobu反应而从E8-i形成E8-v和E8-vi的化合物二者。其中Xa是离去基团(例如Cl、Br、I、OMs、OTs)；可通过与化合物E-vii的亲核芳香取代反应使用LiHMDS或t-BuOK作为碱化合物将E8-v和E8-vi转化为中间体E8-viii。可使用SmI2或锌/AcOH或者TES+AlCl3从化合物E8-viii合成化合物E8-xi。如本文所用，R1是任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环或任选取代的杂环基；Ar1和Ar2各自独立为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环或任选取代的杂环基；任选取代的烷基、任选取代的烷基芳基、任选取代的烷基杂芳基、任选取代的烯基和任选取代的炔基。在某些实施方式中，R1是任选取代的C1-6烷基(例如甲基或乙基)。在某些实施方式中，R1是C1-6烷基；和Ar1和Ar2各自独立为任选取代的杂芳基
实施例8A.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-((5-氯-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001842
5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯：向5-氯-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(100mg，0.575mmol)和TEA(0.24mL,1.44mmol)在无水DCM(10mL)中的搅拌混合物中于室温添加TrtCl(192mg，0.689mmol)。反应混合物于室温搅拌2hr，随后倒入H2O中。所得的混合物用DCM萃取。有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0-4％乙酸乙酯/石油醚)以得到所需产物(粗品，240mg，100％)。
(5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇：向5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1.20g,2.88mmol)在无水THF(10mL)中的搅拌混合物中于-30℃添加LAH(400mg，10.5mmol)。反应混合物于-30℃搅拌0.5hr。缓慢添加Na2SO410H2O(2g)以淬灭反应。所得的混合物用EtOAc稀释并通过硅藻土垫过滤。滤液浓缩和残余物通过快速色谱纯化(硅胶，10％～15％乙酸乙酯/石油醚)以得到所需产物(540mg)。
甲烷磺酸(5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲基酯：向(5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇(100mg，0.267mmol)和DIPEA(0.14mL,0.801mmol)在无水DCM(10mL)中的搅拌混合物中于10℃添加MsCl(46mg，0.401mmol)。反应混合物于室温搅拌1h。反应混合物用水淬灭。所得的混合物用DCM萃取(2X)。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到所需产物(粗品，150mg)，其是粘性油状物。
5-氯-3-((苯磺酰基)甲基)-1-三苯甲基-1H-吡唑：向甲烷磺酸(5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲基酯(150mg粗制,0.267mmol)在无水DMF(10mL)中的搅拌混合物中于室温添加PhSO2NA(100mg，0.610mmol)。反应混合物于室温搅拌20hr。反应混合物用水稀释。所得的混合物用EtOAc萃取(2X)。有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(洗脱剂：PE/EtOAc＝3/1)以得到所需产物(80mg)。LCMS:m/z521(M+Na)+。
2-((5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)(苯磺酰基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮：向5-氯-3-((苯磺酰基)甲基)-1-三苯甲基-1H-吡唑(100mg，0.2mmol)和4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.2mmol)在无水THF(10mL)中的混合物中于10℃逐滴添加LiHMDS(1mL,10mmol,1M在THF中)。反应混合物于室温搅拌10min，并倒入NH4Cl水溶液中。随后混合物用EtOAc萃取(2X)。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％乙酸乙酯/石油醚)以得到E8-3的所需产物(75mg)，其是黄色油状物。LCMS:m/z 985(M+Na)+。
2-((5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向化合物E8-3(75mg，0.0779mmol)在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的混合物中于室温在氮气下添加SmI2(5mL,0.1M在THF中)。反应混合物于室温搅拌10min，随后用水淬灭。随后混合物用EtOAc萃取(2X)。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1)以得到2-((5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg)。LCMS:m/z 845(M+23)+。
6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-((5-氯-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-((5-氯-1-三苯甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.0608mmol)在DCM(6mL)中的混合物中于室温在氮气下添加TFA(2mL)。反应混合物于室温搅拌1h。随后混合物用NaHCO3水溶液调节至pH＝8，用80％DCM/iPROH(2X)萃取。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(C18,0～50％乙腈/H2O，含有0.1％甲酸)以得到所需产物(10mg)。LCMS:m/z 451(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.10-13.2(bRs,2H),8.58(s,1H),8.14(s,1H),7.43-7.46(m,1H),7.25-7.30(m,1H),6.94-6.97(m,1H),6.32(s,1H),5.65(s,2H),4.55(s,2H),4.27(s,3H)。
实施例8B.合成2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001861
步骤A.合成4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向NaH(130mg，3.2mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(270mg，1.1mmol)于0℃在氮气下。5分钟后，将1-(溴甲基)-3-(三氟甲氧基)苯(420mg，1.65mmol)在DMF(2mL)中的混合物添加到反应混合物中。混合物于室温搅拌2hr。反应用饱和NH4Cl淬灭，并用EA萃取。有机层用饱和NaCl(3x)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％乙酸乙酯/石油醚)以得到4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(420mg)。LCMS:427(M+H)+。
步骤B.合成4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-(甲硫基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(420mg，0.99mmol)在DCM(10ml)中的溶液中于0℃在氮气下添加mCPBA(520mg，3.0mmol)。反应混合物继续搅拌过夜。溶液用饱和Na2S2O3淬灭，并用DCM萃取(3x)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％乙酸乙酯/石油醚)以得到4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(330mg)。LCMS:m/z459(M+H)+。
步骤C.合成4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(165mg，0.36mmol)和4-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑(50mg，0.54mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物中于65℃添加Cs2CO3(351mg，1.08mmol)。反应混合物于65℃搅拌2hr，并倒入NH4Cl水溶液中。所得的混合物用EtOAc萃取(2x)。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～35％乙酸乙酯/石油醚)以得到所需产物4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(E8-6)(200mg)。LCMS:m/z 732(M+H)+。
步骤D.合成2-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-(3-(三氟甲氧基)苄基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。类似于实施例8A，化合物E8-与SmI2反应，随后用TFA去保护以得到所需产物。LCMS:462(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.52(s,1H),7.88(s,1H),7.46(dd,1H),7.39-7.2(m,3H),5.40(s,2H),4.63(s,2H),4.26(s,3H)。
实施例8C.合成2,6-二((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001881
步骤A：4-((苯硫基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑.向4-(溴甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(340mg，1.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加苯硫酚钠(265mg，2mmol)。混合物于室温搅拌2hr，随后用冰水淬灭(10.0mL)，并用EtOAc萃取(3x 50.0mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩以得到粗产物(370mg)，其直接用于下一步骤。LCMS:m/z 371(M+H)+。
步骤B：4-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑.向4-((苯硫基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(370mg)在THF(20mL)中的溶液中于0℃添加过硫酸氢钾(Oxone)(2.15g,3.5mmol)在H2O(20mL)中的溶液。混合物于室温搅拌1hr，随后用冰水淬灭(50mL)，并用AcOET(3x 50.0mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(洗脱剂：EA/PE＝1/5)以得到所需产物(300mg)。LCMS:m/z 403(M+H)+。
步骤C：4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(163mg，0.40mmol,2.2eq)在无水THF(5mL)中的溶液中于-40℃逐滴添加LiHMDS(0.46mL,0.46mmol,2.5eq)。混合物于此温度搅拌10min，随后于-40℃逐滴添加4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.18mmol,1.0eq)在无水THF(3mL)中的溶液。混合物于此温度再搅拌30min直至完成。所得的混合物倒入冰饱和NH4Cl水溶液(20mL)中，并用EtOAc萃取(3x 10mL)。合并的有机层用水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化以得到所需产物(100mg)。LCMS:m/z 867(M+H)+。
步骤D：2,6-二((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.06mmol,1.0eq)在无水DCE(2mL)中的溶液中在氮气下添加AlCl3(38mg，0.30mmol,5.0eq)和TES(34mg，0.30mmol,5.0eq)。混合物加热至60℃搅拌30min，随后冷却至室温，倒入水(10mL)中，并用DCM萃取/MeOH(V:V＝20:1,3x 10mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(5mg)。LCMS:m/z 467(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.15(s,1H),13.10(s,1H),8.50(s,1H),8.18(s,1H),8.13(s,1H),7.49(d,1H),7.44(d,1H),7.38-7.30(m,1H),7.29-7.21(m,1H),7.14(d,1H),6.93(d,1H),5.64(s,2H),4.84(s,2H),4.28(s,3H)。
实施例8D.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370001901
步骤A.N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-甲烷磺酰基-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯将4-甲基-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(7.5g,26.4mmol)和K3PO4(8.3g,39.3mmol)在无水MeCN(300mL)中的混合物于70℃在氮气下搅拌1hr。随后添加N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-(溴甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(11.2g,29.0mmol)在MeCN(30mL)中的溶液中。于70℃在氮气下搅拌2.5hr后，反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，并用EA萃取(300mLX 3)。合并的有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩有机相。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％乙酸乙酯/石油醚)以得到N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-甲烷磺酰基-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(5.5g)。LC-MS(ESI)实测值：591.1(M+H)+。
步骤B.(6-((4-甲基-5-氧代-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯。向3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(11.9g,33.8mmol)在无水THF(200mL)中的搅拌混合物中于-40℃在氩气下添加LiHMDS(50mL,1M在THF中)。在10min后，混合物温热至10℃，并搅拌1hr，随后添加N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-({4-甲烷磺酰基-7-甲基-9-氧代-3-硫杂-5,7,10,11-四氮杂三环[6.4.0.0{2,6}]十二碳-1(8),2(6),4,11-四烯-10-基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(9.1g,15.4mmol，在35mL THF中)。反应于10℃再搅拌30min。反应混合物倒入NH4Cl中，用EtOAc萃取(200mL X 3)。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％乙酸乙酯/石油醚)以得到(6-((4-甲基-5-氧代-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.6g)。LC-MS(ESI)实测值：763.2(M+H)+。
步骤C.(6-((4-甲基-5-氧代-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯将(6-((4-甲基-5-氧代-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.0g,7.86mmol)在EtOH/AcOH(35mL/50mL)中的溶液加热至50℃，并且在锌(2.55g,117.9mmol)存在下剧烈搅拌40min。每40分钟添加额外的锌(2.55g，两次，通过TLC/LC-MS监测反应以避免副产物和过度还原产物)。过滤溶液，滤饼用DCM洗涤。滤液部分蒸发，用和NaHCO3溶液中和，经MgSO4干燥，并减压去除溶剂。粗产物通过快速色谱纯化(硅胶，DCM：MeOH＝40:1)以得到(6-((4-甲基-5-氧代-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3.1g)。LC-MS(ESI)实测值：623.3(M+H)+。
步骤D.2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向(6-((4-甲基-5-氧代-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g,4.8mmol)在乙醇(30mL)中的混合物中添加HCl(30mL,4M在二氧六环中)。反应混合物于80℃搅拌40min。反应混合物冷却至室温，过滤并收集固体，悬浮在水中并于10°用NaHCO3水溶液中和。过滤以得到所需化合物2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(1.5g)。LC-MS(ESI)实测值：393.2(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),8.53(s,1H),7.72(s,1H),7.25(dd,1H),6.33-6.24(m,2H),6.08(d,1H),5.90(s,2H),5.19(s,2H),4.49(s,2H),4.26(s,3H)。
步骤E.合成(6-((4-甲基-5-氧代-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯向(6-((4-甲基-5-氧代-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加K2CO3(88mg，0.64mmol)。混合物于70℃搅拌8hr。混合物倒入水中，并通过制备TLC纯化(2％MeOH/DCM)以得到(6-((4-甲基-5-氧代-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20mg)。LC-MS(ESI):m/z 637(M+H)+。
步骤F.合成6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向(6-((4-甲基-5-氧代-2-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6(5H)-基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.03mmol)在EtOH(1mL)中的溶液中添加HCl(1mL,4mol/L在二氧六环中)。混合物于80℃搅拌1hr和冷却。过滤收集沉淀物，并用饱和NaHCO3中和，用水洗涤并干燥以得到5mg 6-((6-氨基吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 407(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.75(s,1H),7.96(s,1H),7.50(s,1H),7.31-7.22(m,1H),6.31(d,1H),6.14(d,1H),5.91(s,2H),5.23(s,2H),4.38(s,3H)。
实施例8E.合成6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370001921
步骤A.(6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲醇.向(6-氯吡啶-2-基)甲醇(500mg，2.67mmol)在二甲胺/THF(35mL)中的溶液中添加Pd(OAc)2(78mg，0.35mmol)、呫吨(170mg，0.29mmol)和t-BuONA(385mg，4.01mmol)。反应混合物于100℃搅拌18h。反应混合物过滤并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～35％乙酸乙酯/石油醚)以得到(6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲醇(180mg)。LCMS:153(M+H)+。
步骤B.6-(氯甲基)-N,N-二甲基吡啶-2-胺.向(6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲醇(170mg，1.1mmol)在DCM(10mL)中的搅拌混合物中于0℃添加SoCl2(665mg，5.6mmol)。反应混合物于室温搅拌1hr。反应混合物用aq.NaHCO3调节至pH＝7～8。随后混合物用DCM萃取，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，减压浓缩以得到6-(氯甲基)-N,N-二甲基吡啶-2-胺(70mg)。LCMS:171(M+H)+。
步骤C.N,N-二甲基-6-((苯磺酰基)甲基)吡啶-2-胺.向6-(氯甲基)-N,N-二甲基吡啶-2-胺(500mg，2.94mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌混合物中于室温添加PhSO2Na(1.44g,8.82mmol)。混合物于室温搅拌18hr。反应混合物倒入水中，并用DCM萃取。混合物用水洗涤，有机层减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～20％乙酸乙酯/石油醚)以得到N,N-二甲基-6-((苯磺酰基)甲基)吡啶-2-胺(380mg)。LCMS:277(M+H)+。
步骤D.2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)(苯磺酰基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(180mg，0.36mmol)(其合成类似于实施例8A中的化合物E8-1)在无水THF(10mL)中的搅拌混合物中于60℃在氮气下添加N,N-二甲基-6-((苯磺酰基)甲基)吡啶-2-胺(120mg，0.44mmol)和t-BuOK(122mg，1.1mmol)。混合物于60℃在氮气下搅拌2h。随后混合物倒入水中并用EtOAc萃取，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，减压浓缩，并通过制备TLC纯化(PE：EtOAc＝1:1.5)以得到2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)(苯磺酰基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg)。LCMS:691(M+H)+。
步骤E.2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)(苯磺酰基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.07mmol)在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的混合物中于室温在氮气下于-40℃添加SmI2(5mL,0.1M在THF中)。反应混合物于-40℃搅拌10min，随后用水淬灭。随后混合物用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤(30mL)，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(PE/EtOAc＝1/1.5)以得到所需产物(10mg)。LCMS:m/z 551(M+H)+。
步骤F.6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将2-((6-(二甲基氨基)吡啶-2-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(10mg，0.018mmol)在DCM/TFA(2mL/2mL)中的混合物于室温搅拌1hr。反应混合物浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(14mg)。LCMS:421(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),7.55(s,1H),7.48(dd,1H),6.64(d,1H),6.54(d,1H),6.11(d,1H),5.32(s,2H),4.44(s,2H),4.26(s,3H),3.05(s,6H)。
根据方案E8和实施例8C合成以下化合物，使用合适的起始材料。当必要时可使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370001941
Figure BDA0002385339370001951
Figure BDA0002385339370001961
Figure BDA0002385339370001971
Figure BDA0002385339370001981
Figure BDA0002385339370001991
Figure BDA0002385339370002001
Figure BDA0002385339370002011
Figure BDA0002385339370002021
Figure BDA0002385339370002031
Figure BDA0002385339370002041
Figure BDA0002385339370002051
Figure BDA0002385339370002061
Figure BDA0002385339370002071
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Figure BDA0002385339370002091
Figure BDA0002385339370002101
Figure BDA0002385339370002111
Figure BDA0002385339370002121
Figure BDA0002385339370002131
Figure BDA0002385339370002141
Figure BDA0002385339370002151
Figure BDA0002385339370002161
Figure BDA0002385339370002171
Figure BDA0002385339370002181
Figure BDA0002385339370002191
Figure BDA0002385339370002201
Figure BDA0002385339370002211
Figure BDA0002385339370002221
Figure BDA0002385339370002231
实施例8F.合成4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002241
步骤A.合成4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(360mg，1.4mmol)和2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙醇(300mg，2.4mmol)在甲苯(10mL)中的混合物中添加CMBP(600mg，2.1mmol)。反应混合物于110℃在氮气下搅拌3hr。在冷却至室温后，反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/石油醚)以得到4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(500mg)。LC-MS(ESI):m/z 361(M+1)+。
步骤B.合成4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(600mg，1.7mmol)在DCM(20mL)中的混合物中添加m-CPBA(1.01g,5.0mmol)。反应混合物于室温搅拌3hr。反应混合物用EtOAc稀释，用NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/PE)以得到4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(600mg)。LC-MS(ESI):m/z 393(M+1)+。
步骤C.合成4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-((苯磺酰基)(吡啶-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向3-((苯磺酰基)甲基)吡啶(300mg，1.3mmol)于THF(20mL)中的混合物中于室温添加LiHMDS(2mL,2.0mmol)。于室温在氮气下搅拌15min后，将4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg，0.8mmol)添加至反应混合物，所得的溶液于室温搅拌3hr。反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/石油醚)以得到110mg 4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-((苯磺酰基)(吡啶-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 546(M+1)+。
步骤D.合成4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-((苯磺酰基)(吡啶-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(110mg，0.2mmol)在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的溶液中于室温添加SmI2(5mL,0.1M在THF中)。随后反应混合物在氮气下于室温搅拌10min。反应溶液用水淬灭，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，80-100％EtOAc/石油醚)以得到6mg 4-甲基-6-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 406(M+1)+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.52(d,2H),7.84(d,1H),7.54(d,1H),7.41(dd,1H),6.04(d,1H),4.58(s,2H),4.48-4.30(m,2H),4.26(s,3H),3.75(s,3H),3.12-2.75(m,2H)。
实施例8G.合成4-甲基-6-(丙-2-炔-1-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002251
步骤A.合成4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(200mg，0.70mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加t-BuOK(157mg，14mmol)，随后是3-溴丙-1-炔(0.12mL,14mmol)。反应于室温搅拌15min。随后悬浮液倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/PE)以得到60mg 4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 323(M+H)+。
步骤B.合成4-甲基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-2-(甲磺酰基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg，0.18mmol)和2-((苯磺酰基)甲基)吡啶(87mg，0.37mmol)在THF(5mL)中的混合物中添加t-BuOK(63mg，0.57mmol)。于室温在氮气下搅拌1hr之后，反应倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(洗脱剂：70％EtOAc/石油醚)以得到50mg 4-甲基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 476(M+H)+。
步骤C.合成4-甲基-6-(丙-2-炔-1-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4-甲基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-6-(丙-2-炔-1-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.11mmol)在THF/MeOH(4mL,1:1)中的溶液中于-70℃在氮气氛下添加SmI2(4.2mL,0.1M在THF中)。在搅拌5min之后，反应用水淬灭。混合物用EtOAc稀释，用饱和NH4Cl洗涤。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到5mg 4-甲基-6-(丙-2-炔-1-基)-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 336(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60-8.52(m,2H),7.81(td,1H),7.51(d,1H),7.33(dd,1H),4.93(d,2H),4.67(s,2H),4.26(s,3H),3.27(t,1H)。
实施例8H.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-乙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002271
步骤A.合成4-乙基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(500mg，2.06mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加K2CO3(856mg，6.19mmol)。于70℃搅拌1.5hr中，添加EtI(483mg，3.10mmol)。混合物于70℃再搅拌1hr。反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取。合并的有机相减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％EtOAc/石油醚)以得到4-乙基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg)。LC-MS(ESI):m/z 271(M+1)+。
步骤B.合成4-乙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯将POCl3(3.6ml)和PhNMeCHO(5mL)的混合物于室温搅拌1hr，随后添加到4-乙基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg，1.48mmol)在DCE(10mL)中的溶液中。于100℃搅拌2hr之后，反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％EtOAc/PE)以得到4-乙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg)。LC-MS(ESI):m/z 299(M+1)+。
步骤C.合成6-苄基-4-乙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向4-乙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸酯(400mg，1.34mmol)在AcOH(4mL)中的混合物中在氮气下添加苄基肼二盐酸盐(260mg，1.34mmol)。混合物于100℃搅拌3hr。反应混合物减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到250mg 6-苄基-4-乙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS:m/z 357(M+1)+。
步骤D.合成6-苄基-4-乙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-乙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(250mg，0.70mmol)在DCM(5mL)中的混合物中于0℃添加mCPBA(657.5mg，3.8mmol)。在搅拌1.5hr之后，反应混合物减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到6-苄基-4-乙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(90mg)。LC-MS:m/z 389(M+1)+。
步骤E.合成6-苄基-4-乙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-乙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(90mg，0.23mmol)和3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(123mg，0.35mmol)在THF(3mL)中的混合物中在氮气下于室温添加KOtBu(85mg，0.76mmol)。于室温搅拌30min后，反应混合物用饱和NH4Cl淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机相减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到6-苄基-4-乙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(140mg，92.2％产率)。LC-MS:m/z 661(M+1)+。
步骤F.合成6-苄基-4-乙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-乙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(140mg，0.21mmol)在EtOH(2mL)和DCE(1mL)中的混合物中添加乙酸(0.2mL,2.8mmol)和锌(360mg，5.5mmol)。混合物于80℃搅拌3hr。过滤反应混合物，滤液减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到30mg 6-苄基-4-乙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS(ESI):m/z521(M+1)+。
步骤G.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-乙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-乙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(30mg，0.06mmol)在DCM(4mL)中的混合物中添加TFA(4mL)。室温搅拌1.5hr之后，反应混合物减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(20％MeOH/DCM)以得到2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-乙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(5mg)。LC-MS(ESI):m/z 391(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.53(s,1H),7.72(s,1H),7.42-7.11(m,5H),6.27(d,1H),5.36(s,2H),4.78(q,2H),4.48(s,2H),1.44(t,3H)。
实施例8I.合成6-苄基-4-苯基-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002291
步骤A.合成2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg，1.7mmol)和PhI(265mg，2.55mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(1.1g,3.4mmol)，随后添加CuI(65mg，0.34mmol)和(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(48mg，0.34mmol)。混合物搅拌在氮气氛下于100℃搅拌7hr。混合物倒入水中，并用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～10％EtOAc/石油醚)以得到2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg)。LC-MS(ESI):m/z 319(M+1)+。
步骤B.合成6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向PhNMeCHO(1.5mL)在DCE(5mL)中的溶液中于0℃添加POCl3(1.2mL,12.5mmol)。混合物于室温搅拌30min。随后将2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(400mg，1.25mmol)添加至混合物，混合物于50℃搅拌过夜。混合物用饱和NaHCO3淬灭，并用DCM萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(280mg)。LC-MS(ESI):m/z 347(M+1)+。
步骤C.合成6-苄基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(280mg，0.81mmol)在AcOH(6.0mL)中的混合物中添加苄基肼二盐酸盐(468mg，2.4mmol)。反应混合物于100℃搅拌2hr。蒸发滤液并通过快速色谱纯化(硅胶，0～70％EtOAc/石油醚)以得到100mg 6-苄基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 405(M+1)+。
步骤D.合成6-苄基-2-(甲磺酰基)-4-苯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-苄基-2-(甲硫基)-4-苯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.25mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加mCPBA(151mg，0.75mmol)。混合物于室温搅拌4hr。混合物用aq.Na2S2O3淬灭，并用DCM萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～100％EtOAc/石油醚)以得到6-苄基-2-(甲磺酰基)-4-苯基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg)。LC-MS(ESI):m/z 437(M+1)+。
步骤E.合成6-苄基-4-苯基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-苄基-4-苯基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(60mg，0.14mmol)和2-((苯磺酰基)甲基)吡啶(50mg，0.21mmol)在无水DMF(5mL)中的混合物中在氮气下添加t-BuOK(31mg，0.28mmol)。反应混合物于60℃搅拌1.5hr。冷却到室温后，混合物倒入饱和NH4Cl。随后混合物用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(石油醚/EtOAc＝1/4)以得到40mg 6-苄基-4-苯基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 590(M+1)+。
步骤F.合成6-苄基-4-苯基-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮于-78℃在氮气下向6-苄基-4-苯基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.05mmol)在THF(1.5mL)和MeOH(1.5mL)中的混合物中添加SmI2(2.5mL,0.1M在THF中)。反应混合物于-78℃搅拌10min，随后用水淬灭。混合物用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过HPLC纯化以得到6-苄基-4-苯基-2-(吡啶-2-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(5mg)。LC-MS(ESI):m/z450(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.56(d,1H),7.82-7.76(m,1H),7.59-7.45(m,6H),7.34-7.23(m,6H),5.32(s,2H),4.63(s,2H)。
实施例8J.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二苄基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002311
步骤A.合成4-苄基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯。向6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(300mg，1.1mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加K2CO3(460mg，3.3mmol)。于70℃搅拌1.5hr后，添加BnBR(0.2mL,1.6mmol)。混合物于70℃搅拌1hr，反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％EtOAc/石油醚)以得到4-苄基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(370mg)。LC-MS(ESI):m/z 361(M+1)+。
步骤B.合成4,6-二苄基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮在氮气下向4-苄基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(370mg，1.0mmol)在AcOH(4mL)中的混合物中添加苄基肼二盐酸盐(390mg，2.0mmol)。混合物于100℃搅拌3hr。反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到4,6-二苄基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(320mg)。LC-MS(ESI):m/z 419(M+1)+。
步骤C.合成4,6-二苄基-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4,6-二苄基-2-(甲硫基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(320mg，0.76mmol)在DCM(5mL)中的混合物中添加mCPBA(657.5mg，3.2mmol)。于0℃搅拌1.5hr之后，反应混合物用饱和Na2S2O3淬灭，用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到4,6-二苄基-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(170mg)。LC-MS(ESI):m/z 451(M+1)+。
步骤D.合成4,6-二苄基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向4,6-二苄基-2-(甲磺酰基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(170mg，0.38mmol)和3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(160mg，0.46mmol)在THF(3mL)中的混合物中在氮气下于室温添加KOtBu(85mg，0.76mmol)。于室温搅拌3hr之后，反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取两次。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到4,6-二苄基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(200mg)。LC-MS(ESI):m/z 723(M+1)+。
步骤E.合成4,6-二苄基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-((4-氨基嘧啶-2-基)甲基)-4-甲基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(200mg，0.28mmol)在EtOH(2mL)和DCE(1mL)中的混合物中添加乙酸(0.2mL,2.8mmol)和锌(360mg，5.5mmol)。于100℃搅拌3hr之后，过滤反应混合物，滤液减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到4,6-二苄基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(120mg)。LC-MS：m/z583(M+1)+。
步骤F.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二苄基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4,6-二苄基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(120mg，0.21mmol)在DCM(4mL)中的混合物中添加TFA(4mL)。混合物于室温搅拌1.5hr。反应混合物减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(20％MeOH/DCM)以得到9mg 2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二苄基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS:m/z 453(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),8.57(s,1H),7.71(s,1H),7.42-7.04(m,10H),6.25(d,1H),5.98(s,2H),5.37(s,2H),4.48(s,2H)。
实施例8K.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-环丙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002331
步骤A.合成4-环丙基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向环丙基硼酸(687mg，8mmol)和2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(970mg，4mmol)在DCE(10mL)中的悬浮液添加Na2CO3(848mg，8mmol)，随后添加Cu(OAc)2(727mg，4mmol)和联吡啶(625mg，4mmol)。混合物于70℃在空气下搅拌2h。所得的混合物冷却至室温并用饱和NH4Cl淬灭，用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％EtOAc/石油醚)以得到4-环丙基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1.0g,88.5％产率)。LC-MS(ESI):m/z 283(M+1)+。
步骤B.合成4-环丙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯将POCl3(8.6mL)和PhNMeCHO(12mL)的混合物于室温搅拌1hr，随后添加到4-环丙基--2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1.0g,3.54mmol)在DCE(10mL)中的溶液中。于100℃搅拌2hr之后，反应混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～30％EtOAc/石油醚)以得到4-环丙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(620mg)。LC-MS(ESI):m/z 311(M+1)+。
步骤C.合成6-苄基-4-环丙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向4-乙基-6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸酯(620mg，2mmol)在AcOH(4mL)中的混合物中添加苄基肼二盐酸盐(390mg，2mmol)在氮气下。混合物于100℃搅拌3hr。反应混合物减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到6-苄基-4-乙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(320mg)。LC-MS(ESI):m/z 369(M+1)+。
步骤D.合成6-苄基-4-环丙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-环丙基-2-(甲硫基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(320mg，0.87mmol)在DCM(5mL)中的混合物中添加mCPBA(704mg，3.5mmol)。于0℃搅拌1.5hr之后，反应混合物用饱和Na2S2O3淬灭，用EtOAc萃取。有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(10％MeOH/DCM)以得到110mg 6-苄基-4-环丙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS:m/z 401(M+1)+。
步骤E.合成6-苄基-4-环丙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-乙基-2-(甲磺酰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(110mg，0.27mmol)和3-((苯磺酰基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(123mg，0.35mmol)在THF(3mL)中的混合物中在氮气下于室温添加KOtBu(85mg，0.76mmol)。混合物于室温搅拌3hr。反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc萃取两次。合并的有机相减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到100mg 6-苄基-4-环丙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS:m/z673(M+1)+。
步骤F.合成6-苄基-4-环丙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-环丙基-2-((苯磺酰基)(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(100mg，0.15mmol)在MeOH(3mL)和THF(3mL)中的混合物中于-60℃在氮气下添加SmI2(4.5ml,0.45mmol)。混合物于-60℃搅拌10min，用H2O淬灭，并用EtOAc萃取两次。合并的有机相经Na2SO4干燥并减压蒸发。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/石油醚)以得到40mg 6-苄基-4-环丙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS:m/z 533(M+1)+。
步骤G.合成2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-环丙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮向6-苄基-4-环丙基-2-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮(40mg，0.07mmol)在DCM(4mL)中的混合物中添加TFA(4mL)。混合物于室温搅拌1.5hr。反应混合物减压蒸发。残余物通过制备TLC纯化(20％MeOH/DCM)以得到5mg 2-((1H-吡唑-3-基)甲基)-6-苄基-4-环丙基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。LC-MS(ESI):m/z 403(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),8.50(s,1H),7.68(s,1H),7.35-7.23(m,5H),6.26(d,1H),5.35(s,2H),4.48(s,2H),4.19(tt,1H),1.40(td,2H),1.15(td,2H)。
实施例8L.合成4-甲基-6-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(2-(吡啶-3-基)乙基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002351
步骤A.合成6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向6-甲酰基-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1.3g,4.8mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加NaBH4(274mg，7.2mmol)于0℃。于0℃搅拌20min中之后，反应溶液用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～10％MeOH/DCM)以得到6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1g)。LC-MS(ESI):m/z 273(M+1)+。
步骤B.合成6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1g,3.7mmol)和2-溴噻唑(3g,18.4mmol)在二氧六环(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(3g,9.2mmol)，随后添加CuI(700mg，3.7mmol)和N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(520mg，3.7mmol)。反应混合物于110℃在氮气氛下搅拌16hr。反应混合物冷却至室温，过滤。滤液用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，30～50％EtOAc/石油醚)以得到6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1g)。LC-MS(ESI):m/z 356(M+1)+。
步骤C.合成6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯向6-(羟甲基)-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(1g,2.8mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加戴斯-马丁试剂(1.3g,3.4mmol)。于室温搅拌2hr之后，反应溶液用DCM稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，20～30％EtOAc/石油醚)以得到6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(800mg)。LC-MS(ESI):m/z 354(M+1)+。
步骤D.合成6-苄基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-甲酰基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-吡咯并[2,3-d]噻唑-5-甲酸乙酯(800mg，2.3mmol)在AcOH(10mL)中的溶液中添加苄基肼二盐酸盐(449mg，2.3mmol)。于室温搅拌1hr之后，反应混合物加热至100℃并搅拌2hr。反应混合物冷却至0℃，用1M aq.NaOH中和，用DCM萃取。有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～5％MeOH/DCM)以得到6-苄基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg)。LC-MS(ESI):m/z 412(M+1)+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),7.98(d,1H),7.87(d,1H),7.40–7.15(m,5H),5.31(s,2H),2.76(s,3H)。
步骤E.合成6-苄基-2-(甲磺酰基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-苄基-2-(甲硫基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(300mg，0.73mmol)在MeOH(5mL)和THF(5mL)中的混合物中于0℃添加过硫酸氢钾(2.2g,3.6mmol)在H2O(5mL)中的溶液。反应混合物于室温搅拌2hr。反应混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～5％MeOH/DCM)以得到6-苄基-2-(甲磺酰基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(260mg)。LC-MS(ESI):m/z 444(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.04(d,1H),7.91(d,1H),7.40-7.18(m,5H),5.35(s,2H),3.53(s,3H)。
步骤F.合成6-苄基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向2-((苯磺酰基)甲基)吡啶(120mg，0.51mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中于0℃在氮气氛下添加LiHMDS(0.7mL,0.7mmol)。于0℃搅拌30min之后，添加6-苄基-2-(甲磺酰基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(150mg，0.34mmol)在THF(3mL)中的溶液。所得的混合物于室温搅拌1hr。反应用饱和NH4Cl淬灭，用DCM萃取。有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～5％MeOH/DCM)以得到6-苄基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg)。LC-MS(ESI):m/z 597(M+1)+。
步骤G.合成6-苄基-2-(吡啶-2-基甲基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向6-苄基-2-((苯磺酰基)(吡啶-2-基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.17mmol)在AcOH(5mL)中的溶液中添加锌(110mg，1.7mmol)。反应混合物于室温搅拌15min。反应混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。残余物通过制备TLC纯化(65％EtOAc/石油醚)以得到5mg 6-苄基-2-(吡啶-2-基甲基)-4-(噻唑-2-基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI):m/z 457(M+1)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),8.61(d,1H),7.98(d,1H),7.92-7.84(m,2H),7.55(d,1H),7.41(dd,1H),7.35-7.23(m,5H),5.32(s,2H),4.70(s,2H)。
实施例9.合成化合物E9-vi和E9-vii
方案E9
Figure BDA0002385339370002381
可通过方案9的两种方法(i)和(ii)合成化合物E9-iv。对于方法(i)，可通过如实施例7或实施例8所示的烷基化反应从化合物E9-i合成化合物E9-ii。如本文所用，Xa是离去基团(例如Br、I、OMs或OTs)。化合物E9-ii与LiHMDS和DMF的甲酰化反应提供了中间体E9-iii。E9-iii与还原剂(例如，NaBH4)反应以提供化合物E9-iv。可选择地，在方法(ii)中，卤化化合物E9-i生成了化合物E9-ix。化合物E9-ix经历Stille反应、臭氧分解和还原以修饰化合物E9-x。化合物E9-x可用E9-viii烷基化以提供化合物E9-iv。在方案9(iii)中，化合物E9-iv经历卤化，得到中间体E9-v(Xb是卤素，诸如，Cl或Br)。E9-v与有机锡、硼、锌或镁的金属(例如，Pd或Cu)催化偶联提供了化合物E9-vi。如本文所用，化合物E9-v也可与一些亲核试剂(诸如杂环中的氮)反应以得到产物E9-vii。如本文所用，M是有机金属复合物(例如，有机碳复合物，诸如，硼酸或频哪醇硼复合物；有机锡复合物，诸如，-SN(But)3；有机锌复合物，诸如，-ZN(卤素))；Ar1和Ar2各自独立是任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基。在某些实施方式中，Ar1和Ar2各自独立是任选取代的杂芳基。
实施例9A.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002391
步骤A.合成4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛。向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(2.6g,5.57mmol,1当量)在无水THF(30mL)中的混合物中于-78℃添加LiHMDS(1M,11.14mL,2.0当量)。混合物于-78℃搅拌2小时。随后将DMF(2.04g,27.86mmol,2.14mL,5.0当量)逐滴添加至混合物。混合物于-78℃搅拌2小时。TLC(PE:EA＝2：1,UV＝254nm)显示形成一个新的主要斑点。混合物倒入冷饱和NH4Cl(20mL)中。随后混合物温热至室温。混合物用EtOAc(40mL x 3)萃取。有机层用水(20mL x 3)洗涤并真空浓缩，得到所需产物(2.6g，粗品)。LCMS:m/z 495.2[M+H]+。
步骤B.合成2-(羟甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向粗4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(1.0g，2.02mmol，1当量)在THF(10mL)和MeOH(10mL)中的混合物中添加NaBH4(152.97mg，4.04mmol，2当量)。混合物于30℃搅拌14小时，TLC(DCM：MeOH＝10：1，UV＝254nm)表明起始材料完全消耗并形成一个新的主要斑点。反应通过加入水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mLx 3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤。有机相真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱纯化(
Figure BDA0002385339370002392
40g
Figure BDA0002385339370002393
硅胶快速柱，洗脱剂0～5％MeOH/DCM@30mL/min)。洗脱剂真空浓缩，得到所需产物(382mg)。LCMS:m/z 497.1[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.61(s,1H)，8.25(s,1H)，7.66(d,1H)，7.38(t，1H)，7.05(d)，6.36(t，1H)，5.74(s,2H)，5.68(s,2H)，4.89(d,2H)，4.26(s,3H)，3.50(t，2H)，0.78(t，2H)，-0.12(s,9H)。
步骤C.合成2-(氯甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(羟甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(150.0mg，302.02μmol，1当量)和Et3N(61.12mg，604.04μmol，84.08μL，2.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中添加4-甲基苯磺酰氯(75.0mg，393.40μmol，1.30当量)。混合物于30℃搅拌5小时。TLC(PE:EA＝4：1，UV＝254nm)表明起始材料完全消耗。将水(10mL)和DCM(20mL)添加到混合物中。有机层真空浓缩，得到黄色胶状物(0.1g)。残余物通过快速硅胶色谱纯化(
Figure BDA0002385339370002401
4g
Figure BDA0002385339370002402
硅胶快速柱，洗脱剂0～20％乙酸乙酯/石油醚梯度@30mL/min)。所需级份真空浓缩，得到所需产物(40.0mg，76.88μmol)。LCMS:m/z 515.1[M+H]+。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 8.27(d,1H)，8.26(s,1H)，7.52(d,1小时)，7.39(dd，1小时)，7.25(s,1H)，5.76(s,2H)，5.72(s,2H)，4.96(s,2H)，4.40(s,3H)，3.50-3.57(m,2H)，0.84-0.90(m,2H)，-0.09至-0.06(m,9H)。
步骤D.合成4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮。向2-(氯甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.97mmol)和4-(三丁基锡烷基)噻唑(114mg，2.91mmol)的甲苯(4mL)溶液中添加Pd(PPh3)4(402mg，2.91mmol)。随后将混合物在MW反应器中在N2下于120℃加热30min。溶液倒入水中，用EtOAc萃取，经无水Na2SO4干燥。有机层减压浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％乙酸乙酯/石油醚)，得到4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg)(化合物E9-4)。LCMS:564(M+H)+。、
步骤E.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-2-(噻唑-4-基甲基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮.向化合物E9-4(30mg，0.05mmol)在DCM(3mL)中的的混合物于室温在N2下添加TFA(3mL)。反应混合物于室温搅拌1小时。混合物减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(C18，0～90％乙腈/H2O，含有0.1％甲酸)，得到所需产物(3.9mg)。LCMS:434(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO)δ13.12(s,1H)，9.12(d,1H)，8.56(s,1H)，8.14(s,1H)，7.71(d,1H)，7.45(d,1H)，7.35-7.24(m,1H)，6.96(d,1H)，5.65(s,2H)，4.70(s,2H)，4.27(s,3H)。
实施例9B.合成2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002411
步骤A.合成2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(氯甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(25.0mg，48.53μmol,1eq)和KI(8.06mg，48.53μmol,1eq)在THF(0.3mL)中的混合物中添加咪唑(33.04mg，485.34μmol,10.0eq)。混合物温热至60℃，并于60℃搅拌12hr。LCMS显示生成所需产物，并且起始材料完全消耗。反应混合物与另一批(25mg)合并。混合物真空浓缩以得到黄色粗胶状物(50.0mg)。产物不经任何纯化用于下一步骤。LCMS:m/z 547.2[M+H]+。
步骤B.合成2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-((1H-咪唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50.0mg，64.02μmol,1eq)在二氧六环(1mL)中的溶液中添加HCl/二氧六环(4M,2mL,124.96eq)和2滴水。混合物于30℃搅拌12hr。TLC(PE:EA＝1:1,UV＝254nm)显示起始材料完全消耗。混合物真空浓缩以得到黄色胶状物(0.2g)，其通过制备型HPLC(基本)纯化以得到title产物(4.0mg)。LCMS:m/z 417.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.43(s,1H),8.22(s,1H),7.89(s,1H),7.43-7.49(m,1H),7.29-7.36(m,2H),7.12(d,1H),7.04(s,H),5.74(s,2H),5.73(s,2H),4.34(s,3H)。
实施例9C.合成4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002412
步骤A.合成2-(羟甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮于-78℃，向4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(640mg，2.15mmol)在THF(10mL)中的混合物中添加LiHMDS(4.3mL，1M，在THF中)。在30min后，将无水DMF(0.84mL，10.8mmol)添加到混合物。在起始材料完全消耗之后，添加NaBH4(164mg，4.3mmol)在EtOH(4mL)中的混合物，并搅拌5min。随后混合物倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～5％MeOH/DCM)，得到2-(羟甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(220mg)。LC-MS(ESI)：m/z 328(M+H)+。
步骤B.合成2-(氯甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮向2-(羟甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(100mg，0.31mmol)在DCM(5mL)中的的混合物中添加Et3N(0.43mL，3.1mmol)和MsCl(0.12mL，1.5mmol)。反应于室温搅拌6小时。随后混合物用饱和NH4Cl(水溶液)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～50％EtOAc/PE)，得到65mg 2-(氯甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 346(M+H)+。
步骤C.合成4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮在氮气下，向2-(氯甲基)-4-甲基-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(50mg，0.14mmol)和2-(三丁基锡烷基)吡啶(0.14mL，0.43mmol)在甲苯(3mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(17mg，0.014mmol)。反应混合物于搅拌100℃过夜。随后混合物冷却，减压浓缩。残余物通过制备TLC纯化(洗脱剂：10％MeOH/DCM)，得到2mg 4-甲基-2-(吡啶-2-基甲基)-6-(吡啶-3-基甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 389(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.56(m,3H)，8.48(dd，1H)，7.81(td，1H)，7.71(d,1H)，7.50(d,1H)，7.37-7.30(m,2H)，5.38(s,2H)，4.67(s,2H)，4.25(s,3H)。
实施例9D.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002431
步骤A.合成1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲醛。向1H-吡唑-3-甲醛(10.0g，104.07mmol，1当量)和DIPEA(33.63g，260.18mmol，45.32mL，2.5当量)在DCM(500mL)中的悬浮液中于-40℃逐滴添加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基-甲硅烷(26.03g，156.11mmol，27.63mL，1.5当量)。随后反应混合物温热至室温，并搅拌16小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5：1)表明起始材料完全消耗，并形成两个新的斑点。反应混合物真空浓缩。残余物与另两个批次(各10.0g)合并，通过Combiflash纯化(从100％石油醚到40％EtOAc/石油醚)，得到所需产物60.0g。(注：两种位置异构体的混合物，比率为约～5/4)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 10.06(s,1H)，10.00(s,1H)，7.68(d,1H)，7.67(d,1H)，7.03(d,1H)，6.92(d,1H)，5.87(s,2H)，5.56(s,2H)，3.61-3.67(m,4H)，0.91-1.01(m,4H)，-0.09-0.05(m,18H)。
步骤B.合成(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇。向1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-甲醛(30g，132.54mmol，1当量，2种位置异构体的混合物，比率为约～5/4)的THF(200mL)/MeOH(100mL)溶液中于0℃分多次添加NaBH4(7.52g，198.81mmol，1.50当量)，反应混合物于0℃至室温搅拌18小时。TLC(石油醚:EtOAc＝2：1)表明起始材料完全消耗，并且形成两个新的斑点。将溶剂真空浓缩。残余物通过Combiflash纯化(100％石油醚至100％EtOAc)，得到25g所需产物。(注：两种位置异构体的混合物，比率为～3/2)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 7.55(d,1H)，7.47(brs，1H)，6.36(d,1H)，6.34(d,1H)，5.57(s,2H)，5.42(s,2H)，4.74-4.76(m,4H)，3.55-3.60(m,4H)，0.85-0.96(m,4H)，0.00-0.06(m,18H)。
步骤C.合成3-(溴甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑。向(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲醇(23g，100.72mmol，1当量，两种位置异构体的混合物，比率为～3/2)和PPh3(36.98g，141.00mmol，1.4当量)的DCM(200mL)溶液中于0℃添加CBr4(46.76g，141.00mmol，1.4当量)。反应混合物于0℃搅拌3小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5：1)表明起始材料完全消耗，并且形成一个新的斑点。反应混合物真空浓缩。残余物与另一批次(2.0g)合并，并且通过Combiflash纯化(从100％石油醚到50％EtOAc/石油醚)，得到所需产物22.0g(75.53mmol)。1H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm7.51(d,1H)，6.39(d,1H)，5.38(s,2H)，4.50(s,2H)，3.52-3.57(m,2H)，0.86-0.96(m,2H)，-0.03-0.02(m,9H)。
步骤D.合成4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮.将4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(1.0g，4.85mmol，1当量)、3-(溴甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(2.12g，7.27mmol，1.5当量)、K3PO4(2.57g，12.12mmol，2.5当量)和NaI(218.05mg，1.45mmol，0.3当量)在DMF(15mL)中的悬浮液于60℃在N2下搅拌18小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1：1)表明起始材料完全消耗，并且形成一个新的斑点。反应混合物与另外3个批次合并(各1.0g)，倒入冰水(250mL)中。混合物用EtOAc(150mL x 3)萃取。合并的有机层用水(120mL x 2)、盐水(120mL)洗涤，并经Na2SO4干燥。将溶剂真空浓缩。粗产品通过Combiflash纯化(从100％石油醚到80％EtOA/石油醚)，得到所需产物(3.6g)。1HNMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δppm 8.91(s,1H)，8.27(s,1H)，7.49(d,1H)，6.36(d,1H)，5.51(s,2H)，5.40(m,2H)，4.45(s,3H)，3.52-3.58(m,2H)，0.85-0.90(m,2H)，-0.05(s,9H)。
步骤E.合成4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛。在氩气下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(1.7g，4.09mmol，1当量)的THF(30mL)溶液中于-78℃缓慢添加LiHMDS(1.0M，8.18mL，2当量)，反应混合物于-70℃搅拌1小时。随后将DMF(1.49g，20.45mmol，1.57mL，5当量)的THF(3mL)溶液逐滴添加至混合物。所得的混合物于-70℃搅拌1小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1：1)表明形成一个新的斑点。反应混合物于0℃逐滴添加到NH4Cl水溶液(50mL)中，随后混合物用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤(40mL)并经Na2SO4干燥。真空去除溶剂，得到所需产物粗品(1.8g)，其不经进一步纯化用于下一步骤。
步骤F.合成2-(羟甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(1.8g，3.24mmol，1当量)的THF(20mL)/MeOH(10mL)溶液中于0℃添加NaBH4(245.08mg，6.48mmol，2当量)，反应混合物于室温搅拌18小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1：2)表明起始材料完全消耗，并且形成一个新的斑点。反应混合物真空浓缩，残余物通过Combiflash纯化(从100％DCM至5％MeOH/DCM)。获得所需产物(1.1g)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.63(s,1H)，7.86(d,1H)，6.44(t，1H)，6.27(d,1H)，5.40-5.42(m,4H)，4.98(d,2H)，4.34(s,3H)，3.55-3.61(m,2H)，0.86-0.91(m,2H)，0.00(s,9H)。
步骤G.合成(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基甲磺酸酯。向2-(羟甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(700mg，1.57mmol，1当量)和Et3N(317.21mg，3.13mmol，436.33μL，2.0当量)的DCM(15mL)溶液中于0℃逐滴添加MsCl(269.32mg，2.35mmol，181.97μL，1.5当量)，反应混合物于室温搅拌1小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1：1)表明起始材料完全消耗，并且形成一个新的斑点。反应混合物用EtOAC(80mL)稀释，并用水(30mL x 4)、盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥。真空去除溶剂，得到粗产品(700mg)。LCMS:(m/z 525.5(M+H)。
步骤H.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。将(4-甲基-5-氧代-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-基)甲基甲烷磺酸酯(150mg，285.88μmol，1当量)、1H-1,2,4-三唑(197.45mg，2.86mmol，10当量)和CsF(86.85mg，571.77μmol，21.08μL，2当量)在MeCN(8mL)中的混合物于60℃在N2下搅拌18小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且形成两个新的峰。反应混合物真空浓缩，残余物通过Combiflash纯化(从100％DCM至8％MeOH/DCM)。获得产物2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(55mg)和2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg)。
步骤I.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(55mg，110.52μmol，1当量)和HCl/二氧六环(4M，1mL，36.19当量)在DCM(3mL)中的悬浮液中添加H2O(1.99mg，110.52μmol，0.05mL，1当量)，反应混合物于室温搅拌18小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并发现84％的所需产物。反应混合物真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化，得到所需产物(24.1mg，65.60μmol，59.35％产率)。柱：Xtimate C18 150*25mm*5um，流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：13％-43％，11.2min。LCMS:m/z 367.9(M+H)+1H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δppm 8.72(s,1H)，8.35(s,1H)，8.05(s,1H)，7.52(brs，1H)，6.26(d,1H)，5.92(s,2H)，5.43(s,2H)，4.30(s,3H)。
步骤J.合成6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，60.28μmol，1当量)和HCl/二氧六环(4M，1mL，66.35当量)在DCM(3mL)中的悬浮液中添加H2O(50.00mg，2.78mmol，0.05mL，46.04当量)，反应混合物于室温搅拌18小时。LCMS显示起始材料完全消耗，发现所需产物。反应混合物真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化，得到所需产物(2.1mg，5.72μmol)。柱：XtimateC18 150*25mm*5um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：13％-43％,11.2min。LCMS:m/z368.0(M+H)+。1H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δppm 8.74(s,2H)，8.38(s,1H)，7.52(d,1H)，6.26(d,1H)，5.84(s,2H)，5.44(s,2H)，4.31(s,3H)。
根据方案E9和实施例9A-9B的程序，使用合适的起始材料，合成以下化合物。在必要时，使用标准保护和去保护。
Figure BDA0002385339370002471
Figure BDA0002385339370002481
Figure BDA0002385339370002491
Figure BDA0002385339370002501
Figure BDA0002385339370002511
Figure BDA0002385339370002521
Figure BDA0002385339370002531
Figure BDA0002385339370002541
Figure BDA0002385339370002551
Figure BDA0002385339370002561
实施例9E.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-氨基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002562
步骤A.合成2-氯-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(3g，14.5mmol)在无水THF(80mL)中的混合物中于-65℃逐滴添加LiHMDS(30.5mL，)。在搅拌1小时之后，添加六氯乙烷(1.8mL，16mmol)的无水THF(20mL)溶液。反应混合物在3小时之内升温到-20℃。随后混合物用饱和NH4Cl淬灭，并于室温搅拌20min。过滤收集沉淀，用EtOAc洗涤，得到3.5g 2-氯-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 241(M+H)+。
步骤B.合成4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。在氮气下，向2-氯-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(1.5g，6.2mmol)和三丁基(乙烯基)锡烷(5.5mL,18.7mmol)在DMF(30mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(0.36g，0.31mmol)。反应混合物于100℃搅拌2小时。随后混合物冷却并用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～10％MeOH/DCM)，得到1.4g 4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 233(M+H)+。
步骤C.合成4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛。在-60℃下，将4-甲基-2-乙烯基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(500mg，2.15mmol)在DCM/MeCN(500mL，1：1体积)中的混合物用O3净化20min。随后反应用二甲基砜淬灭并浓缩，得到500mg 4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛。LC-MS(ESI)：m/z 235(M+H)+。
步骤D.合成2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮，向4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-甲醛(500mg，2.13mmol)在EtOH(3mL)中的混合物中于0℃添加NaBH4(81mg，2.13mmol)。反应于室温搅拌5min。随后混合物倒入饱和NH4Cl，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～8％MeOH/DCM)，得到120mg 2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 237(M+H)+。
步骤E.合成6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(200mg，0.85mmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加K2CO3(351mg，2.54mmol)。于60℃搅拌30min之后，添加2-氯-4-(氯甲基)嘧啶(276mg，1.7mmol)的DMF(2mL)溶液。将反应混合物再搅拌4小时，倒入饱和NH4Cl中，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～8％MeOH/DCM)，得到160mg 6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 363(M+H)+。
步骤F.合成6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向6-((2-氯嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(160mg，0.44mmol)在MeCN(5mL)中的混合物中添加二(2,4-二甲氧基苄基)胺(280mg，0.88mmol)和AcOH(1滴)。反应混合物于80℃搅拌过夜。蒸发反应混合物，残余物通过制备TLC纯化(洗脱剂：5％MeOH/DCM)，得到75mg 6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z644(M+H)+。
步骤G.合成6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(氯甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。在0℃下，向6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(羟甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(75mg，0.12mmol)的DCM(5mL)溶液中添加Et3N(0.16mL，1.16mmol)和MsCl(0.05mL，0.58mmol)。混合物于室温搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释，用饱和NH4Cl和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并浓缩，得到70mg 6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(氯甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮粗产品。LC-MS(ESI)：m/z 662(M+H)+。
步骤H.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨 基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮 将4H-1,2,4-三唑(39mg，0.57mmol)和K2CO3(78mg，0.57mmol)在DMF(3mL)中的混合物于60℃搅拌30min。添加6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-2-(氯甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(75mg，0.11mmol)并再搅拌30min。悬浮液倒入饱和NH4Cl，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过快速色谱纯化(硅胶，0～10％DCM/MeOH)，得到60mg 2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。LC-MS(ESI)：m/z 695(M+H)+。
步骤I.合成2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-氨基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲 基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮 向2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-(二(2,4-二甲氧基苄基)氨基)嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(30mg，0.043mmol)在EtOH(2mL)中的混合物中添加HCl(0.5mL，4M在二氧六环中)。反应混合物于80℃搅拌过夜。随后混合物冷却，倒入饱和NaHCO3，用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，得到8mg 2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-6-((2-氨基嘧啶-4-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮.LC-MS(ESI)：m/z 395(M+H)+.1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.80(s,1H)，8.62(s,1H)，8.12-8.10(m,2H)，6.60(s,2H)，6.19(d,1H)，6.01(s,2H)，5.19(s,2H)，4.26(s,3H)。
Figure BDA0002385339370002591
实施例10.合成化合物E10-ii
方案E10
Figure BDA0002385339370002601
如方案E10中所示，E10-i与醛在碱(例如LiHMDS)存在下反应生成化合物E10-ii，后者可用手性HPLC或SFC分离以得到两种对映体。如本文所用，Ar1和Ar2各自独立为任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基。
实施例10A.合成(S)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮和(R)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002602
步骤A.合成2-(羟基(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。在氩气下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(0.5g,1.07mmol,1eq)在THF(15mL)中的溶液中于-78℃缓慢添加LiHMDS(1.0M,2.14mL,2.0eq)，反应混合物于-78℃搅拌1hr，随后将1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-3-甲醛(1.21g,5.36mmol,5eq)在THF(2mL)的溶液中逐滴添加至反应混合物。所得的混合物于-78℃搅拌1hr。TLC(石油醚:EtOAc＝2：1)显示形成两个新的斑点。反应混合物于-70℃通过aq NH4Cl(15mL)淬灭，并用水(20mL)稀释。混合物用EtOAc萃取(20mL x 3)。合并的有机层用盐水洗涤(20mL)，经Na2SO4干燥。溶剂真空浓缩。残余物通过Combiflash纯化(从100％石油醚到100％EtOAc)以得到所需产物(70mg，101.01μmol)。LCMS:m/z 693.2(M+H)+
步骤B.合成6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(羟基(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(0.04g,57.72μmol,1eq)在DCM(3mL)中的溶液中于0℃添加TFA(65.82mg，577.22μmol,42.74uL,10eq)，反应混合物于室温搅拌36hr。LCMS显示起始材料完全消耗，并且形成57％的所需产物。反应混合物真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(11mg)。LCMS:m/z432.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.10(bRs,2H),8.58(s,1H),8.12(s,1H),7.60(s,1H),7.43(d,1H),7.26(dd,1H),6.93(d,2H),6.19(d,1H),6.07(s,1H),5.63(s,2H),4.20(s,3H)。
步骤C.合成(S)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和(R)-6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。通过SFC分离化合物6-((1H-吲唑-4-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。SFC条件：柱是DAICELCHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm,5um)；流动相：A：55％CO2；B：45％[0.1％NH3H2O/EtOH]/min。SFC分离得到了两种对映体。一种对映体(2.6mg):LCMS:m/z 433.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.63(s,1H),8.16(s,1H),7.64(bRs,1H),7.47(bRd,1H),7.27-7.32(m,1H),6.97(bRd,1H),6.22(d,1H),6.11(s,1H),5.64(s,2H),5.34(bRs,1H),4.24(s,3H)，以及3.5mg另一种对映体：LCMS:m/z 433.0(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.63(s,1H),8.17(s,1H),7.64(bRs,1H),7.48(bRd,1H),7.28-7.32(m,1H),6.98(bRd,1H),6.23(d,1H),6.11(s,1H),5.64(s,2H),5.34(bRs,1H),4.25(s,3H)。
实施例10B.合成(R)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和(S)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮
Figure BDA0002385339370002621
步骤A.合成2-(羟基(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。在氩气下，向4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(0.5g,1.20mmol,1eq)在THF(10mL)中的溶液中于-78℃缓慢添加LiHMDS(1.0M,2.41mL,2eq)，反应混合物于-70℃搅拌1hr，随后将1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡唑-3-甲醛(816.97mg，3.61mmol,3eq)在THF(1mL)的溶液中添加至反应混合物。所得的混合物于-70℃搅拌1hr。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示形成了两个新的斑点。反应混合物于-70℃通过aq NH4Cl(5mL)淬灭，随后温热至室温。混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc萃取(8mLx3)。合并的有机层用盐水洗涤(10mL)和经Na2SO4干燥。溶剂真空浓缩。残余物通过Combiflash纯化(从100％石油醚到100％EtOAc)以得到粗产物(130mg)，其是浅棕色胶状物，其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS:m/z 643.2[M+H]+
步骤B.合成6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。向2-(羟基(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-6-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(0.13g,202.20μmol,1eq)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(4.62g,40.52mmol,3mL,200.38eq)，随后添加H2O(500.00mg，27.75mmol,0.5mL,137.26eq)，随后反应混合物于室温搅拌18hr，随后加热至40℃搅拌18hr。LCMS显示起始材料完全消耗。反应混合物真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(20.5mg)。LCMS:m/z 382.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.72(bRs,1H),12.61(bRs,1H),8.52(s,1H),7.56-7.62(m,2H),6.82(bRs,1H),6.18(d,1H),5.99-6.09(m,2H),5.24-5.32(m,2H),4.19(s,3H)。
步骤C.合成(R)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮和(S)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮。化合物6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(羟基(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4H-噻唑并[5',4':4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮通过SFC分离。SFC条件：柱是DAICELCHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm,5um)；流动相：A：55％of CO2；B：45％[0.1％NH3H2O/EtOH]/min。SFC分离得到了2-[(R)-羟基(1H-吡唑-3-基)甲基]-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基甲基)噻唑并[3,4]吡咯并[1,3-d]哒嗪-5-酮和2-[(S)-羟基(1H-吡唑-3-基)甲基]-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基甲基)噻唑并[3,4]吡咯并[1,3-d]哒嗪-5-酮。一种异构体(4.4mg):LCMS:m/z383[M+H]+.1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.39(s,1H),7.61(bRs,1H),7.55(bRs,1H),6.34(bRs,1H),6.25(bRs,1H),6.18(bRs,1H),5.44(s,2H),4.29(s,3H)。另一种异构体(4.1mg):LCMS:m/z 383(M+H)+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.40(s,1H),7.59(bRs,1H),7.54(bRs,1H),6.34(bRs,1H),6.26(bRs,1H),6.19(bRs,1H),5.44(s,2H),4.29(s,3H)。
实施例10C：合成6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(二氟(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002631
步骤A.3-(6-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺.向3-((2-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)(羟基)甲基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(50mg，83.80μmol，类似于E10-1制备)在DCM(1.5mL)中的混合物中添加MnO2(72.85mg，838.00μmol)，混合物于15℃搅拌1.5小时。反应混合物过滤，减压浓缩，得到粗产物(60mg，粗品)。LCMS:m/z 595.1(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(s,1H)，8.12(d,1H)，7.90(d,1H)，7.41(d,1H)，6.38(d,1H)，5.54(s,2H)，4.49(s,3H)，3.10(s,6H)2.93(s,6H)。
步骤B.3-((2-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)二氟甲基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺。向3-(6-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(240mg，403.60μmol)的DCE(4mL)溶液中添加BAST(1.34g，6.05mmol，1.33mL)，混合物于50℃搅拌12小时。反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用饱和NaHCO3(10mL*2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产品(300mg，粗品)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS:m/z 617.1(M+H)+。
步骤C.6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-2-(二氟(1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮.向3-((2-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)二氟甲基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(240mg，163.47μmol)在DCM(2mL)中的的混合物中添加TFA(2.07g，18.15mmol，1.34mL)，混合物温热至50℃并保持5小时。反应混合物减压浓缩，.残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Agela ASB 150*25mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：30％-60％，8min)，得到所需产物(3.9mg，5.45％产率，92％纯度)，其是白色固体。LCMS:m/z 403.1(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.67(s,1H)，7.95(s,1H)，7.61(s,1H)，6.72(s,1H)，6.16(s,1H)，5.36(s,2H)，4.28(s,3H)。
实施例10D：合成2-(1-(1H-吡唑-3-基)乙基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002641
步骤A：3-((2-(1-(1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)-1-羟乙基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺。向3-(6-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(160mg，269.07μmol)的THF(3mL)溶液中添加CH3MgBR(3M，179.38μL)，反应混合物于0℃搅拌3小时。反应混合物于0℃倒入饱和NH4Cl(10mL)中，用乙酸乙酯萃取(20mL*3)。合并的有机层用盐水洗涤(10mL)，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩.残余物通过快速硅胶色谱纯化(
Figure BDA0002385339370002652
12g
Figure BDA0002385339370002653
硅胶快速柱，洗脱剂0～90％乙酸乙酯/石油醚梯度@40mL/min)，得到所需产物(50mg，81.87μmol)。LCMS:m/z 611.1(M+H)+。
步骤B：2-(1-(1H-吡唑-3-基)乙基)-6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮.向3-((2-(1-(1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)-1-羟乙基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢-6H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-6-基)甲基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(50mg，81.87μmol)在DCE(0.5mL)中的混合物中于0℃添加Et3SiH(19.04mg，163.75μmol，26.15μL)，随后添加TFA(1.54g，13.51mmol，1mL,164.96当量)，于0℃搅拌1小时。混合物温热至50℃，再保持1小时。反应混合物减压浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Agela ASB 150*25mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：25％-55％,7min)，得到7.0mg所需产物。LCMS:m/z 381.2(M+H)+。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.46(s,1H)，8.15(d,2H)，6.78(d,1H)，6.74(d,1H)，5.60(s,2H)，5.00(q，1H)，4.33(s,3H)，1.94(d,3H)。
实施例10E：合成6-((1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-4,6-二氢-5H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-5-酮
Figure BDA0002385339370002651
步骤A.4-甲基-2-(1H-吡唑-3-羰基)-6-(1H-吡唑-3-基甲基)噻唑并[3,4]吡咯并[1,3-d]哒嗪-5-酮。向3-(6-((1-(N,N-二甲基氨磺酰基)-1H-吡唑-3-基)甲基)-4-甲基-5-氧代-5,6-二氢-4H-噻唑并[5',4’:4,5]吡咯并[2,3-d]哒嗪-2-羰基)-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺(50mg，84.08μmol)的DCE(1.5mL)溶液中添加TFA(2.31g，20.26mmol，1.5mL)，反应混合物温热至50℃并保持12小时。反应混合物真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化，得到6.0mg所需产物。LCMS:m/z 381.1(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.72(s,1H)，7.96(d,1H)，7.64(d,1H)，7.49(d,1H)，6.19(d,1H)，5.37(s,2H)，4.38(s,3H)。
实施例11.PKM2检验
方法：
将PKM2酶储备溶液稀释以制备1.11x反应混合物(不含ADP)。首先将1μL测试化合物添加到孔中，随后添加40μL 1.11x反应混合物(不含ADP)并于室温(25℃)温育60min。用10μL ADP(0.4mM最终浓度)启动反应，使最终反应混合物为1x，以室温时340nm波长下的吸光度变化来测量反应进程。
测试化合物制备：测试化合物在DMSO中制备为50x最终浓度。对11个点进行1至3倍稀释(例如，将50μL 5000μM化合物添加至100μL 100％DMSO中，得到1667μM，将50μL的这种添加到100μL DMSO中，得到556μM，以此类推)。将化合物添加至测试中进行1至50的稀释(1μL/50μL)得到100μM的最高浓度，对于11个点，降低3倍。
反应混合物：PKM2(5ng/well,0.1μg/ml)、ADP(0.4mM)、PEP(0.11mM)、NADH(180μM)、LDH(0.005U/μL,Sigma#L3888)、1mM DTT、0.03％BSA在1x反应缓冲液中。
反应缓冲液：100mM KCl，50mM TRis pH 7.5，5mM MgCl2。
由此描述了若干实施方式的若干方面，应理解各种改变、修改和改进对于本领域的技术人员来说是容易作出的。这些改变、修改和改进旨在作为本公开的一部分，并且旨在落入本发明的精神和范围之内。因此，以上描述和附图仅作为示例。

Claims (42)

1.一种在需要其的受试者中调节丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中：
Figure FDA0002385339360000011
Q是氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
R1是氢、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、–ORo1、–C(＝O)Rc1或氮保护基团；
L1是键、任选取代的亚烷基、–O–、–S–、–S-CH2–、–S(＝O)CH2–、–S(＝O)2CH2–、–NR3–、–NR3C(＝O)–、–C(＝O)NR3–、––C(＝O)–、–OC(＝O)–、–C(＝O)O–、–NR3C(＝O)O–、–OC(＝O)NR3–、–NR3C(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–C(R4)2O–、–NR3C(R4)2–、–C(R4)2NR3–、–S(＝O)2–、–S(＝O)–、–S(＝O)2O–、–OS(＝O)2–、–S(＝O)O–、–OS(＝O)–、–S(＝O)2NR3–、–NR3S(＝O)2–、–S(＝O)NR3–、–NR3S(＝O)–、NR3S(＝O)2O–、–OS(＝O)2NR3–、NR3S(＝O)O–、–OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、任选取代的亚烷基、–C(＝O)–、–S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
R2是氢、卤素、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或者当L1是–NR3–、–NR3C(＝O)–、–NR3C(＝O)O–、–NR3C(R4)2–、–NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、–NR3C(＝O)NR3–、–NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–时为氮保护基团，当L1为–O–、–OC(＝O)–、–OC(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–OS(＝O)2–、–OS(＝O)2NR3–、–OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–时为氧保护基团，或者当L1为–S–时为硫保护基团；
每个R3独立为氢、–ORo2、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或氮保护基团；
每个Ro1和Ro2独立为氢、任选取代的烷基或氧保护基团；
每个Rc1独立为任选取代的烷基或–N(Rcn)2，其中每个Rcn独立为氢、-C1-6烷基或氮保护基团；和
每个R4独立为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
2.一种在需要其的受试者中调节血糖水平的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如权利要求1中所定义。
3.一种在患有或易患与PKM2功能相关的疾病或病症的受试者中抑制细胞增殖的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如权利要求1中所定义。
4.一种在需要其的受试者中治疗与PKM2的异常活性相关的疾病的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如权利要求1中所定义。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述疾病是增殖性疾病。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述疾病是癌症、肥胖症、糖尿病(例如糖尿病肾病(DN))、动脉硬化、再狭窄、冠状动脉疾病(CAD)、布卢姆综合征(BS)、良性前列腺增生(BPH)或自身免疫性疾病。
7.一种在需要其的受试者中治疗高血糖症的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如权利要求1中所定义。
8.一种在需要其受试者中治疗糖尿病的方法，包括施用有效量的式(I)的化合物或其可药用盐，其中式(I)如权利要求1中所定义。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述糖尿病是糖尿病肾病。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，还包括鉴定将受益于PKM2的调节的受试者。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述调节是激活。
12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中：
Q是氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的6至14元芳基或任选取代的5至14元杂芳基；
R1是氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C1-C6卤代烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的6至12元芳基、–ORo1、–C(＝O)Rc1或氮保护基团；
L1是键、任选取代的C1-6亚烷基、–O–、–S–、–S-CH2–、–S(＝O)CH2–、–S(＝O)2CH2–、–NR3–、–NR3C(＝O)–、–C(＝O)NR3–、––C(＝O)–、–OC(＝O)–、–C(＝O)O–、–NR3C(＝O)O–、–OC(＝O)NR3–、–NR3C(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–C(R4)2O–、–NR3C(R4)2–、–C(R4)2NR3–、–S(＝O)2–、–S(＝O)–、–S(＝O)2O–、–OS(＝O)2–、–S(＝O)O–、–OS(＝O)–、–S(＝O)2NR3–、–NR3S(＝O)2–、–S(＝O)NR3–、–NR3S(＝O)–、NR3S(＝O)2O–、–OS(＝O)2NR3–、–NR3S(＝O)O–、–OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、任选取代的C1-C6亚烷基、–C(＝O)–、–S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
R2是氢、卤素、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C1-C6烷氧基、任选取代的-C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的-C6-C12芳基或任选取代的3至14元杂芳基，或者当L1为–NR3–、–NR3C(＝O)–、–NR3C(＝O)O–、–NR3C(R4)2–、–NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、–NR3C(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–时为或氮保护基团，当L1为–O–、–OC(＝O)–、–OC(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–OS(＝O)–、–OS(＝O)2–、–OS(＝O)2NR3–、–OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–时为氧保护基团，或者当L1为–S–时为硫保护基团；
每个R3独立为氢、–ORo2、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的C3-C12杂环基、任选取代的C6-C12芳基、任选取代的C5-C12杂芳基或氮保护基团；
每个Ro1和Ro2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc1独立为任选取代的-C1-C6烷基或–N(Rcn)2，其中每个Rcn独立为氢、-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个R4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的-C2-C6烯基、任选取代的-C2-C6炔基、任选取代的C3-C12环烷基、任选取代的3至14元杂环基、任选取代的C6-C12芳基或任选取代的5至14元杂芳基。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中：
Q是C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基或8至12元二环杂芳基，其中的每个被0-3个Rc取代；
R1选自氢、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、C3-C7单环环烷基和3至14元杂环基、–ORo1、–C(＝O)Rc1或氮保护基团；其中每个烷基、环烷基或杂环基被0-3个Rd取代；
R2选自氢、卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、C3-C7单环环烷基、C6-C12二环环烷基、3至14元杂环基、C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基、8至12元二环杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基被0-3个Re取代，或者当L1为–NR3–、–NR3C(＝O)–、–NR3C(＝O)O–、–NR3C(R4)2–、–NR3S(＝O)2–、-NR3S(＝O)–、–NR3C(＝O)NR3–、-NR3S(＝O)2O–或–NR3S(＝O)O–时为氮保护基团，当L1为–O–、–OC(＝O)–、–OC(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–OS(＝O)–、–OS(＝O)2–、–OS(＝O)2NR3–、–OS(＝O)NR3–或–OS(＝O)–时为氧保护基团，或者当L1为–S–时为硫保护基团；
R3选自氢、–ORo2、-C1-C6烷基、C3-C7单环环烷基、C6-C12二环环烷基、3至14元杂环基、C6-C12芳基、5至6元单环杂芳基和8至12元二环杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基被0-3个Rf取代；
R4选自氢、-C1-C6烷基、C3-C7单环环烷基和3至14元杂环基，其中每个烷基、环烷基或杂环基被0-1个Rg取代；
L1是键、被0-3个Rh取代的亚烷基、–O–、–S–、–S-CH2–、–S(＝O)CH2–、–S(＝O)2CH2–、–NR3–、–NR3C(＝O)–、–C(＝O)NR3–、––C(＝O)–、–OC(＝O)–、–C(＝O)O–、–NR3C(＝O)O–、–OC(＝O)NR3–、–NR3C(＝O)NR3–、–OC(R4)2–、–C(R4)2O–、–NR3C(R4)2–、–C(R4)2NR3–、–S(＝O)2–、–S(＝O)–、–S(＝O)2O–、–OS(＝O)2–、–S(＝O)O–、–OS(＝O)–、–S(＝O)2NR3–、–NR3S(＝O)2–、–S(＝O)NR3–、–NR3S(＝O)–、-NR3S(＝O)2O–、–OS(＝O)2NR3–、-NR3S(＝O)O–、–OS(＝O)NR3–或–S(＝O)(＝NR3)–，其中R2的附接点在左手侧上；
L2是键、被0-3个Rh取代的亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)2–或–S(＝O)–，其中Q的附接点在右手侧上；
每个Rc独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN、和-NO2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Rc与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基C(＝O)OH；
每个Rd独立选自卤素、-C1-C6烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-NH2和-CN；
每个Re独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、-NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN和-NO2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Re与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基；
每个Rf独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷氧基、-OH、-NH2、-CN和-NO2；
每个Rg独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷氧基、-OH、NH2、-CN和NO2；和
每个Rh独立选自卤素、-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟基烷基、-OH、-OC1-C6烷基、-C1-C6氨基烷基、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-C(＝O)OC1-C6烷基、-C(＝O)OH、-C(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C6烷基)、-C(＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)、-NH(C＝O)N(C1-C6烷基)2、-NHC(＝O)(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)C(＝O)(C1-C6烷基)、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C6烷基)、-S(＝O)2N(C1-C6烷基)2、-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)、-NH2、-CN和-NO2、S(＝O)2芳基、S(＝O)2杂芳基和＝NOH，或附接到相同或相邻碳原子的两个Rh与其所附接的碳原子共同形成环烷基或杂环基。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物是式(II)：
Figure FDA0002385339360000061
或其可药用盐，其中：
Ra和Rb各自独立是氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、-ORo3、-N(Rn1)2、-C(＝O)N(Rn1)2或–C(＝O)Rc2，或者Ra和Rb可与其碳原子共同形成任选取代的环烷基或任选取代的杂环基；
每个Rn1独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro3独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；和
每个Rc2独立为任选取代的-C1-C6烷基。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中L1是键、任选取代的-C1-6亚烷基、-C(＝O)–、-S(＝O)–、-S(＝O)2–、-NR3C(＝O)–或–C(＝O)NR3-。
16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中L1是被Rj和Rk取代的C1-6亚烷基；
其中每个Rj和Rk独立选自H、卤素、-CN、-ORo7、-N(Rn5)2、-N(Rn5)C(＝O)Rc5、-C(＝O)N(Rn5)2、-C(＝O)Rc5、-C(＝O)ORo7、-SRjs、-S(＝O)2Rjs或–S(＝O)Rjs、任选取代的-C1-C6烷基；或Rj和Rk可与碳原子共同形成C＝O、C＝NRjn、任选取代的C3-C6单环环烷基环或任选取代的C3-C6单环杂环基环；
Rn5和Rjn中的每个独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基、-ORo8或氮保护基团；
每个Ro7独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc5独立为任选取代的-C1-C6烷基；和
每个Rjs独立为任选取代的-C1-C6烷基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的杂芳基或硫保护基团。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中Q是任选取代的5至6元单环杂芳基。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中Q是下式之一：
Figure FDA0002385339360000071
其中：
每个Rn独立为氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、–C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)Rc3、-C(＝O)Rc3、-C(＝O)ORo4、-OC(＝O)Rc3、-S(＝O)Rs1、-S(＝O)2Rs1、-S(＝O)ORo4、-OS(＝O)Rc3、-S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)2Rc3、-S(＝O)N(Rn2)2、–S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)Rs1、-N(Rn2)S(＝O)2Rs1、-N(Rn2)C(＝O)ORo4、–OC(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)ORo4、-N(Rn2)S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)N(Rn2)2或–OS(＝O)2N(Rn2)2；或附接到相同或相邻碳原子的两个Rn与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；其中：
每个Rn2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc3独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs1独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；
当化合价允许时，n是0、1、2或3；和
Rna、Rnb和Rnd中的每个独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团。
19.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中Q是任选取代的8至12元二环杂芳基或任选取代的8至12元二环杂环基。
20.如权利要求1-16和19中任一项所述的方法，其中Q是下式之一：
Figure FDA0002385339360000081
其中每个Rn独立选自氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo4、-SRs1、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)Rc3、-C(＝O)Rc3、-C(＝O)ORo4、-OC(＝O)Rc3、-S(＝O)Rs1、-S(＝O)2Rs1、-S(＝O)ORo4、-OS(＝O)Rc3、-S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)2Rc3、-S(＝O)N(Rn2)2、-S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)Rs1、-N(Rn2)S(＝O)2Rs1、-N(Rn2)C(＝O)ORo4、-OC(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)C(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)2N(Rn2)2、-N(Rn2)S(＝O)ORo4、-N(Rn2)S(＝O)2ORo4、-OS(＝O)N(Rn2)2、-OS(＝O)2N(Rn2)2或附接到相同或相邻碳原子的两个Rn与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；
每个Rna和Rnb独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Rn2独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro4独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc3独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs1独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；和
当化合价允许时，n是0、1、2或3。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中R2选自氢、羟基、卤素、-C1-C6烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6烷氧基、苯基、萘基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、8元二环杂芳基、9元二环杂芳基，其中每个烷基、烯基、苯基和杂芳基被0-3个Re取代。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中R2是下式之一：
Figure FDA0002385339360000101
Figure FDA0002385339360000111
其中每个Rp独立选自氢、卤素、-CN、-NO2、-N3、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ORo6、-SRs2、-N(Rn3)2、-C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)Rc4、-C(＝O)Rc4、-C(＝O)ORo6、-OC(＝O)Rc4、-S(＝O)Rs2、-S(＝O)2Rs2、-S(＝O)ORo6、-OS(＝O)Rc4、-S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)2Rc4、-S(＝O)N(Rn3)2、-S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)Rs2、-N(Rn3)S(＝O)2Rs2、-N(Rn3)C(＝O)ORo6、-OC(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)C(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)2N(Rn3)2、-N(Rn3)S(＝O)ORo6、-N(Rn3)S(＝O)2ORo6、-OS(＝O)N(Rn3)2、-OS(＝O)2N(Rn3)2，或者附接到相同或相邻碳原子的两个Rp与其所附接的碳原子共同形成任选取代的环烷基或杂环烷基；
每个Rn3、Rnc和Rnd独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团；
每个Ro6独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氧保护基团；
每个Rc4独立为任选取代的-C1-C6烷基；
每个Rs2独立为任选取代的-C1-C6烷基或硫保护基团；和
当化合价允许时，p是0、1、2或3。
23.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2选自以下之一：
Figure FDA0002385339360000121
24.根据权利要求22和23中任一项所述的方法，其中每个Rp独立为氢、卤素、任选取代的C1-4烷基、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-C(＝O)Rc3或–C(＝O)ORo4。
25.如权利要求1-16和21-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(III)：
Figure FDA0002385339360000122
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn和n如权利要求18或权利要求20中所定义。
26.如权利要求1-18和21-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(IV)：
Figure FDA0002385339360000131
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn和n如权利要求18或权利要求20中所定义。
27.如权利要求1-18和21-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(V-a)：
Figure FDA0002385339360000132
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn如权利要求18或权利要求20中所定义；m是0、1或2。
28.如权利要求1-18和21-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(V-b)：
Figure FDA0002385339360000133
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn如权利要求18或权利要求20中所定义；m是0、1或2；和Rnc独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团。
29.如权利要求1-16和19-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(VI)：
Figure FDA0002385339360000134
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn和n如权利要求18或权利要求20中所定义；Rn7是氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团。
30.如权利要求1-18和21-24中任一项所述的方法，其中所述化合物为式(IX)：
Figure FDA0002385339360000141
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rn和n如权利要求18或权利要求20中所定义；Rnc独立为氢、任选取代的-C1-C6烷基或氮保护基团。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物由以下结构式表示：
Figure FDA0002385339360000142
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rj和Rk如权利要求16中所定义；Rp如权利要求22中所定义；和q是0、1、2或3。
32.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述化合物由以下结构式表示：
Figure FDA0002385339360000143
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rj和Rk如权利要求16中所定义；Rp如权利要求22中所定义；和q是0、1、2或3。
33.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述化合物由以下结构式表示：
Figure FDA0002385339360000151
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rj和Rk如权利要求16中所定义；Rp如权利要求22中所定义；q是0、1、2或3；Rn6是氢、任选取代的–C1-C6烷基或氮保护基团。
34.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述化合物由以下结构式表示：
Figure FDA0002385339360000152
或其可药用盐，其中Ra和Rb如权利要求14中所定义；Rj和Rk如权利要求16中所定义；Rp如权利要求22中所定义；和q是0、1、2或3。
35.根据权利要求20-34中任一项所述的方法，其中Rna是氢或-C1-4烷基。
36.根据权利要求18-35中任一项所述的方法，其中每个Rn独立为氢、卤素、任选取代的C1-4烷基、-CN、-NO2、-N3、-ORo4、-N(Rn2)2、-C(＝O)N(Rn2)2、-C(＝O)Rc3或–C(＝O)ORo4。
37.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中R1是氢或-C1-C4烷基。
38.根据权利要求16-37中任一项所述的方法，其中Rj和Rk各自独立是氢、卤素、-ORo7或-C1-C4烷基。
39.根据权利要求14-38中任一项所述的方法，其中Ra和Rb各自是氢。
40.根据权利要求31-39中任一项所述的方法，其中q是0或1。
41.根据权利要求18-40中任一项所述的方法，其中n是0或1。
42.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述化合物选自表1。
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