CN104822672A - 治疗性化合物和组合物以及其作为pkm2调节剂的用途 - Google Patents

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Abstract

本文描述了包含通式(I)的调节丙酮酸激酶的化合物的组合物。本文还描述了在治疗疾病中使用调节丙酮酸激酶的化合物的方法。

Description

治疗性化合物和组合物以及其作为PKM2调节剂的用途
优先权要求
本申请要求2012年11月8日提交的U.S.S.N.61/724,266的优先权，其以引用的方式整体并入本文。
发明背景
丙酮酸激酶缺乏(PKD)是人红细胞中的一种归因于PKLR基因的常染色体隐性突变的最常见酶缺陷(Zanella,A.等,Br J Haematol 2005,130(1),11-25)。其也是中心糖酵解路径中的最常见的酶突变并且仅次于单磷酸己糖支路的葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏(Kedar,P.等,Clin Genet 2009,75(2),157-62)。
人红细胞是独特的，因为它们在成熟时无核。不成熟红细胞具有核，但在变成循环网织红细胞之前的早期红细胞生成期间，它们挤压核以及其它细胞器(如线粒体、内质网和高尔基体)以便为载氧血红蛋白腾出空间。由于缺乏线粒体，成熟红细胞与其它正常分化细胞一样不利用其转运的任何氧来经济地合成三磷酸腺苷(ATP)。替代地，红细胞完全依赖厌氧糖酵解来循环烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和产生ATP(一种主要用于驱动ATP酶依赖性K+/Na+和Ca2+泵的必需能源)以在其跨过血管时维持细胞膜完整性和柔韧性。在PKD病症中，两种主要独特的代谢异常是ATP耗竭和相伴2,3-二磷酸甘油酸增加，这与上游糖酵解中间体的积聚一致。此外，ATP和丙酮酸水平降低的一个后果是乳酸水平降低，从而导致不能通过乳酸脱氢酶再生NAD+供在糖酵解中进一步使用。缺乏ATP会干扰跨越红细胞膜的阳离子梯度，从而导致钾和水损失，钾和水损失会导致细胞脱水、收缩和皱缩，并且导致红细胞(RBC)的过早破坏和寿命减少。这类缺陷性RBC在脾中遭到破坏，并且脾中溶血速率过度会导致表现溶血性贫血。PKD螯合脾中新近成熟的RBC以有效缩短循环RBC的总体半衰期所凭借的精确机制尚不明确，但最近研究表明代谢调控异常不仅影响细胞存活而且还影响导致无效红细胞生成的成熟过程(Aizawa,S.等,ExpHematol 2005,33(11),1292-8)。
丙酮酸激酶催化磷酰基从磷酸烯醇丙酮酸(PEP)转移至ADP，从而产生一个丙酮酸分子和一个ATP分子。所述酶对Mg2+和K+阳离子具有绝对需求以驱动催化。PK充当糖酵解中的最后关键步骤，因为其在生理条件下是本质上不可逆的反应。丙酮酸激酶除合成由葡萄糖代谢成丙酮酸所产生的两个ATP分子中的一者的作用之外，它也是重要的细胞代谢调节剂。在维持健康细胞代谢方面，它控制低级糖酵解中的碳通量以提供关键代谢物中间体来馈入生物合成过程，如(除其它之外)磷酸戊糖途径。由于这些关键功能，丙酮酸激酶在基因表达层面与酶促变构层面两者上受紧密控制。在哺乳动物中，完全活化的丙酮酸激酶以四聚体酶的形式存在。四种不同的同工酶(M1、M2、L和R)由两种单独基因表达。红细胞特异性同工酶PKR由位于染色体1q21上的PKLR基因(“L基因”)表达。这个相同基因也编码主要在肝中表达的PKL同工酶。PKLR由12个外显子组成，其中外显子1是类红细胞特异性的，而外显子2是肝特异性的。两种其它哺乳动物同工酶PKM1和PKM2由PKM基因(“M基因”)通过由hnRNP蛋白质控制的选择性剪接事件产生。PKM2同工酶在胎儿组织中和成人增殖性细胞(如癌细胞)中表达。PKR与PKM2两者均实际上在原成红细胞中表达。然而，在类红细胞分化和成熟时，PKM2的表达逐渐降低并且渐进地被成熟红细胞中的PKR替代。
在临床上，遗传性PKR缺乏病症表现为非球形红细胞溶血性贫血。这个病症的临床严重性范围是在完全代偿性溶血中无可观察症状至需要长期输血和/或在早期发展时或在生理应激或严重感染期间进行脾切除的潜在致命性严重贫血。自相矛盾地由于氧转移能力增强而无症状的大多数受影响个体不需要任何治疗。然而，对于一些最严重病例——尽管在人数方面极其稀少，其中估计患病率为每百万人中有51人(Beutler,E.Blood 2000,95(11),3585-8)——除缓解性护理以外不存在可用于这些患者的疾病改善性治疗(Tavazzi,D.等,Pediatr Ann2008,37(5),303-10)。这些遗传性非球形红细胞溶血性贫血(HNSHA)患者提出明确未满足的医学需求。
PKR中的异质性遗传突变导致其催化活性调控异常。自初始克隆PKR和报道单一点突变Thr384>Met与HNSHA患者相关(Kanno,H.等,Proc Natl Acad Sci U S A 1991,88(18),8218-21)以来，目前全世界报道有近200种与这个疾病相关的不同报道的突变(Zanella,A.等,BrJ Haematol 2005,130(1),11-25；Kedar,P.等,Clin Genet 2009,75(2),157-62；Fermo,E.等,Br J Haematol 2005,129(6),839-46；Pissard,S.等,Br J Haematol 2006,133(6),683-9)。尽管这些突变代表广泛范围的包括缺失和转录或翻译异常的遗传病变，但到目前为止，最常见的类型是编码区中的以某种方式影响在结构上对最优PKR催化功能重要的结构域内的保守残基的错义突变。对于特定种族背景而言，突变盛行样式似乎是不均衡分布的。举例而言，对北美和欧洲患者报道的最常见密码子取代似乎是Arg486>Trp和Arg510>Gln，而突变Arg479>His、Arg490>Trp和Asp331>Gly更常见于亚洲患者中(Kedar,P.等,Clin Genet 2009,75(2),157-62)。
癌细胞主要依赖于糖酵解以产生用于生物合成脂质和核苷酸的细胞能量和生物化学中间体，而成人组织的大部分“正常”细胞利用需氧呼吸。细胞代谢中癌细胞与正常细胞之间的这种基本差异(被称为瓦博格(Warburg)效应)已用于诊断目的，但尚未用于治疗益处。
丙酮酸激酶(PK)是一种在糖酵解期间将磷酸烯醇丙酮酸转化成丙酮酸的代谢酶。四种PK同工型存在于哺乳动物中：L和R同工型在肝和红细胞中表达，M1同工型在大多数成人组织中表达，并且M2同工型是在胚胎发育期间表达的M1的剪接变体。所有肿瘤细胞仅表达胚胎M2同工型。PK的M1同工型与M2同工型之间的众所周知的差异是：M2是通过上游糖酵解中间体果糖-1,6-二磷酸(FBP)依赖于变构活化的低活性酶，而M1是组成型活性酶。
所有肿瘤细胞仅表达丙酮酸激酶的胚胎M2同工型，从而表明PKM2作为癌症疗法的潜在靶标。PKM2也在脂肪组织和活化的T细胞中表达。结合PKM2的磷酸酪氨酸肽导致FBP从PKM2的解离和PKM2从活性四聚体形式至无活性形式的构象变化。结合PKM2并且以活性构象锁定酶的化合物将导致将生物化学中间体从糖酵解分流到核苷酸和脂质的生物合成所需的PKM2的别构调控的损失。因此，PKM2的活化可抑制癌细胞、活化的免疫细胞和脂肪细胞的生长和增殖。PKM2的活化因此可有效于治疗癌症、肥胖症、糖尿病、自身免疫性病状以及增殖依赖性疾病，例如，良性前列腺增生(BPH)。
发明概述
本文描述活化丙酮酸激酶的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物，例如，活化PKR和/或PKM2的化合物。
还提供包含特此提供的化合物的药物组合物以及所述组合物在治疗与丙酮酸激酶功能，例如PKR功能和/或PKM2功能相关的疾病和病状(包括例如,癌症、糖尿病、肥胖症、自身免疫性病症和良性前列腺增生(BPH))的方法中的用途。
在一个实施方案中，本文提供一种式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A是芳基或杂芳基，其中芳基或杂芳基是任选取代的，并且芳基或杂芳基任选地稠合至任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
X选自–NH-S(O)2-、-N(烷基)-S(O)2-、-S(O)2-NH-以及–S(O)2-N(烷基)-；
R1b是C2-8烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基或杂芳烷基，其中每个芳基是取代的，并且每个C2-8烷基、环烷基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基是任选取代的；
每个R2独立地选自卤代基和卤代烷基；
每个R4独立地选自烷基、烷氧基、卤代烷基和羟基；
n是0、1或2；并且
m是0、1或2；
其中当R1b是未取代的苄基，X是–NH-S(O)2-并且A是喹啉-8-基时；则n是1。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗或预防(例如治疗)如本文所述的疾病、病状或病症的方法，所述方法包括施用本文所提供的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物、或其药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于增加有需要的红细胞(RBC)的寿命的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其盐、溶剂化物或水合物和载体的组合物；或(3)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物相接触。
在另一个实施方案中，提供一种用于调控有需要的血液中的2,3-二磷酸甘油酸水平的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其盐、溶剂化物或水合物和载体的组合物；或(3)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物相接触。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗遗传性非球形红细胞溶血性贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗镰状细胞贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗溶血性贫血(例如，由磷酸甘油酸激酶缺乏引起的慢性溶血性贫血，Blood Cells Mol Dis,2011；46(3):206)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗与增加的2,3-二磷酸甘油酸水平相关的疾病或病状(例如，肝病(Am J Gastroenterol,1987；82(12):1283)和帕金森氏病(Parkinson’s)(J.Neurol,Neurosurg,and Psychiatry 1976,39:952))的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗地中海贫血(例如β-地中海贫血)、遗传性球形红细胞症、遗传性椭圆形红细胞症、无β脂蛋白血症(或巴森-肯兹维格综合征(Bassen-Kornzweig syndrome))、阵发性夜间血红蛋白尿症、获得性溶血性贫血(例如先天性贫血(例如酶病))或慢性疾病的贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗与增加的2,3-二磷酸甘油酸水平相关的疾病或病状(例如，肝病(Am J Gastroenterol,1987；82(12):1283)和帕金森氏病(Parkinson’s)(J.Neurol,Neurosurg,and Psychiatry 1976,39:952))的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本文所述的化合物和组合物是相较于野生型具有较低活性的PKR突变体的活化剂，因此适用于本发明的方法。PKR中的这类突变可影响酶的酶活性(催化效率)、调控特性(受双磷酸果糖(FBP)/ATP调节)和/或热稳定性。这类突变的实例描述于Valentini等,JBC 2002中。由本文所述的化合物活化的突变体的一些实例包括G332S、G364D、T384M、G37E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q和R490W。在不受理论束缚下，本文所述的化合物通过活化FBP非反应性PKR突变体，恢复稳定性降低的突变体的热稳定性，或恢复受损突变体的催化效率来影响PKR突变体的活性。本发明化合物针对PKR突变体的活化活性可按照实施例2-5中所描述的方法进行测试。本文所述的化合物也是野生型PKR的活化剂。
在一个实施方案中，为了增加红细胞的寿命，将本文所述的化合物、组合物或药物组合物直接体外添加至全血或压积细胞中或直接(例如通过腹膜内(i.p.)、静脉内(i.v.)、肌肉内(i.m.)、口服、吸入(雾化递送)、经皮、舌下和其它递送途径)提供给受试者(例如患者)。在不受理论束缚下，本文所述的化合物增加RBC的寿命，因此通过影响2,3-DPG从血液释放的速率来抵抗储存血液的老化。2,3-DPG浓度水平降低诱导氧-血红蛋白解离曲线向左移动并且使变构平衡向R或氧化状态转移，因此由于2,3-DPG耗竭，通过增加氧亲和力来对潜伏在镰状化下的细胞内聚合产生治疗性抑制，从而使可溶性更大的氧-血红蛋白稳定。因此，在一个实施方案中，本文所述的化合物和药物组合物适用作抗镰状化剂。在另一个实施方案中，为了调控2,3-二磷酸甘油酸，将本文所述的化合物、组合物或药物组合物直接体外添加至全血或压积细胞中或直接(例如通过腹膜内、静脉内、肌肉内、口服、吸入(雾化递送)、经皮、舌下和其它递送途径)提供给受试者(例如患者)。
在另一个实施方案中，提供一种增加有需要的患者中的PKM2活性和/或糖酵解的水平的方法。所述方法包括以下步骤：向有需要的患者施用有效量的本文所述的化合物，从而增加所述患者中的PKM2活性和/或糖酵解的水平。在一些实施方案中，本文所述的化合物或组合物用于以其活性构象维持PKM2或在增殖细胞中活化丙酮酸激酶活性作为在患者中将葡萄糖代谢产物转入分解代谢而非合成代谢过程的方式。
在另一个实施方案中，提供一种抑制有需要的患者中的细胞增殖的方法。所述方法包括以下步骤：向有需要的患者施用有效量的本文所述的化合物，从而抑制所述患者中的细胞增殖。一方面，这种方法可抑制转化细胞、更具体地说癌细胞的生长。另一方面，所述方法总体上抑制经历有氧糖酵解的PKM2依赖性细胞的生长。
在另一个实施方案中，提供一种治疗患有或易患与有需要的患者中降低的PKM2活性或降低的糖酵解相关的疾病或病症的患者的方法。所述方法包括以下步骤：向有需要的患者施用有效量的本文所述的化合物，从而治疗、预防或改善所述患者中的疾病或病症。在某些实施方案中，本文所述的化合物提供于药物组合物中。在某些实施方案中，所述方法包括以下步骤：在治疗之前鉴别或选择将从活化PKM2中受益的患者。鉴别或选择这种患者可基于患者的细胞中的PKM2活性的水平。一方面，所选择的患者患有或易患不想要的细胞生长或增殖，例如癌症、肥胖症、糖尿病、动脉粥样硬化、再狭窄和自身免疫性疾病。另一方面，所选择的患者患有与PKM2功能相关的癌症。
在另一个实施方案中，本文所述的化合物以足以增加乳酸盐产生或氧化磷酸化的剂量和频率施用。
具体实施方式
在以下描述中阐述的或在附图中说明的构造的细节和组分的布置并不旨在限制。可以多种方式实践或进行实施方案。同样，本文所使用的措辞和术语是出于描述的目的并且不应被视为限制。使用“包括”、“包含”或“具有”、“含有”、“涉及”以及本文的其变化形式意指涵盖下文所列出的条目及其等效物以及另外条目。
定义
术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘的任何基团。
术语“烷基”是指可为直链或支链的单价烃链，其含有所指示数目的碳原子。例如，C1-C12烷基指示所述基团可在其中具有1至12个(含)碳原子。在某些方面，术语“烷基”是指可为直链或支链的单价烃链，其含有1至6个碳原子。在其它方面，术语“烷基”是指可为直链或支链的单价烃链，其含有1至4个碳原子。
术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素置换的烷基，并且包括其中所有氢已被卤素置换的烷基部分(例如，全氟烷基)。
术语“烯基”是指含有2-12个碳原子并且具有一个或多个双键的单价直链或支链烃链。烯基的实例包括但不限于烯丙基、丙烯基、2-丁烯基、3-己烯基以及3-辛烯基。双键碳之一可任选地为烯基取代基的连接点。在某些方面，术语“烯基”是指含有2-6个碳原子并且具有一个或多个双键的单价直链或支链烃链。在其它方面，术语“烯基”是指含有2-4个碳原子并且具有一个或多个双键的单价直链或支链烃链。
术语“烷氧基”是指-O-烷基基团。
术语“芳基”是指单环、双环或三环芳香族烃环系统。芳基部分的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。
术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指其中烷基氢原子被芳基置换的烷基部分。芳烷基包括其中多于一个氢原子已被芳基置换的基团。“芳基烷基”或“芳烷基”的实例包括苄基、2-苯基乙基、3-苯基丙基、9-芴基、二苯甲基以及三苯甲基。
术语“碳环基”是指非芳香族的单环、双环或三环烃环系统。碳环基包括完全饱和的环系统(例如，环烷基)和部分饱和的环系统。
如本文中所采用的术语“环烷基”包括具有3至12个碳的饱和环、双环、三环或多环烃基。任一环原子都可被取代(例如，被一个或多个取代基取代)。环烷基部分的实例包括但不限于环丙基、环己基、甲基环己基、金刚烷基以及降冰片基。
术语“杂芳基”是指具有1-3个杂原子(如果是单环的)、1-6个杂原子(如果是双环的)、或1-9个杂原子(如果是三环的)的完全芳香族的5-8元单环、8-12元双环、或11-14元三环环系统，所述杂原子选自O、N或S(例如，如果分别是单环、双环或三环的，则碳原子和独立地选自N、O或S的1-3、1-6或1-9个杂原子)。
术语“杂环基”是指具有1-3个杂原子(如果是单环的)、1-6个杂原子(如果是双环的)、或1-9个杂原子(如果是三环的)的非芳香族的3-10元单环、8-12元双环、或11-14元三环环系统，所述杂原子选自O、N或S(例如，如果分别是单环、双环或三环的，则碳原子和N、O或S的1-3、1-6或1-9个杂原子)。杂原子可任选地为杂环基取代基的连接点。杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉代、吡咯啉基、嘧啶基以及吡咯烷基。
含有一个或多个杂原子和芳香族环与非芳香族环二者的双环和三环环系统被认为是根据本发明定义的杂环基。这类双环或三环系统可可替代地表征为稠合至碳环基或杂环基的芳基或杂芳基，特别是在结合至分子的剩余部分的环不需要为芳香族的那些实例中。
如本文所用，术语“杂芳基烷基”和“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基。
如本文所用，术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基。
所有环系统(即，芳基、杂芳基、碳环基、环烷基、杂环基等)或基团的环系统部分(例如，芳烷基的芳基部分)任选地在一个或多个可取代的碳原子处被独立地选自以下的取代基取代：卤代基、-C≡N、C1-C4烷基、＝O、C3-C7环烷基、C1-C4烷基、-OH、-O-(C1-C4烷基)-、-SH、-S-(C1-C4烷基)、-(C1-C4烷基)-N(Rb)(Rb)、-N(Rb)(Rb)、-O-(C1-C4烷基)-N(Rb)(Rb)、-(C1-C4烷基)-O-(C1-C4烷基)-N(Rb)(Rb)、-C(O)-N(Rb)(Rb)、-(C1-C4烷基)-C(O)-N(Rb)(Rb)、-O-(杂芳基)、-O-(杂环)、-O-苯基、-杂芳基、-杂环以及-苯基，其中：
每个Rb独立地选自氢和-C1-C4烷基；或
两个Rb与它们所结合的氮原子一起形成4至8元饱和的杂环，所述杂环任选地包含选自N、S、S(＝O)、S(＝O)2以及O的一个另外杂原子，
任一烷基取代基任选地被-OH、-O-(C1-C4烷基)、卤代基、-NH2、-NH(C1-C4烷基)或-N(C1-C4烷基)2中的一个或多个进一步取代；以及
苯基、环烷基、杂芳基或杂环取代基上的任一碳原子任选地被-(C1-C4烷基)、-(C1-C4氟烷基)、-OH、-O-(C1-C4烷基)、-O-(C1-C4氟烷基)、卤代基、-NH2、-NH(C1-C4烷基)或-N(C1-C4烷基)2中的一个或多个进一步取代；
所有杂环基环系统(和任一环系统上的任何杂环基取代基)任选地在一个或多个任何可取代的氮原子上被-C1-C4烷基或氟取代的C1-C4烷基取代。
术语“取代的”是指氢原子被另一个基团置换。
术语“氧代”是指氧原子，其在与碳连接时形成羰基，与氮连接时形成N-氧化物，并且与硫连接时形成亚砜或砜。
与PKM2活化剂相关的术语“选择性的”意指PKM2的活化比PKM1的活化大至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍或10倍。
如本文所用的术语丙酮酸激酶R的“活化剂”意指(可测量地)增加野生型丙酮酸激酶R(wtPKR)的活性或使野生型丙酮酸激酶R(wtPKR)活性增加至大于wt PKR的基态活性水平的水平的试剂，或(可测量地)增加突变体丙酮酸激酶R(mPKR)的活性或使突变体丙酮酸激酶R(mPKR)活性增加至大于突变体PKR的基态活性水平的水平(例如增加至为野生型PKR的活性的20％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的水平)的试剂。
如本文所用的术语丙酮酸激酶M2的“活化剂”意指(可测量地)增加PKM2的活性或使PKM2活性增加至大于PKM2的基态活性水平的水平的试剂。例如，活化剂可模拟由天然配体(例如，FBP)引起的效应。由本文提供的化合物引起的活化剂效应可与由天然配体引起的活化效应相比为相同或较高或较低程度，但是引起相同类型的效应。可评价本文提供的化合物以当施用所述化合物时通过直接或间接测量丙酮酸激酶的活性来确定其是否为活化剂。可例如通过监测底物如ATP或NADH的浓度来测量PKM2的活性。
缩写Me、Et、Ph、Tf、Nf、Ts、Ms分别表示甲基、乙基、苯基、三氟甲磺酰基、九氟丁磺酰基、对甲苯磺酰基和甲磺酰基。本领域中具有普通技能的有机化学师所用的更综合的缩写列表出现在Journalof Organic Chemistry的每卷的第一期中；所述列表通常示于标题为标 准缩写列表(Standard List of Abbreviations)的表中。所述列表中所含的缩写以及本领域中具有普通技能的有机化学师所用的所有缩写特此以引用的方式并入。
化合物
本文提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物(如以上在发明概述中所描述)，其例如，适用于活化野生型PKR和/或各种突变体PKR(如本文所述的那些突变体)和/或适用于选择性地活化PKM2。
在一个实施方案中，本文提供一种式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A是芳基或杂芳基，其中芳基或杂芳基是任选取代的，并且芳基或杂芳基任选地稠合至任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
X选自–NH-S(O)2-、-N(烷基)-S(O)2-、-S(O)2-NH-以及–S(O)2-N(烷基)-；
R1b是C2-8烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基或杂芳烷基，其中每个芳基是取代的，并且每个C2-8烷基、环烷基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基是任选取代的；
每个R2独立地选自卤代和卤代烷基；
每个R4独立地选自烷基、烷氧基、卤代烷基和羟基；
n是0、1或2；并且
m是0、1或2；
其中当R1b是未取代的苄基，X是–NH-S(O)2-并且A是喹啉-8-基时；则n是1。
在一个实施方案中，提供一种式(I)的化合物，其中m是0(即，在氮杂环丁烷基环上不存在R4取代基)，所述化合物具有式(Ia)：
或其药学上可接受的盐，其中A、X、R1b、R2和n是如针对式(I)所描述。
在式(I)或(Ia)的某些方面，A是任选取代的单环杂芳基。在更具体的方面，A是任选取代的吡啶基(例如，任选取代的3-吡啶基)。在甚至更具体的方面，A是未取代的3-吡啶基。
在式(I)或(Ia)的某些方面，A是任选取代的双环杂芳基。在更具体的方面，A是任选取代的喹啉-8-基(例如，未取代的喹啉-8-基)。在另一更具体的方面，A是任选取代的喹啉-3-基(例如，未取代的喹啉-3-基)。在另一更具体的方面，A是任选取代的异喹啉-5-基(例如，未取代的异喹啉-5-基)。在另一更具体的方面，A是任选取代的苯并[1,2,5]噁二唑(例如，未取代的并[1,2,5]噁二唑)。
在式(I)或(Ia)的某些方面，X是–NH-S(O)2-或–N(烷基)-S(O)2-。在更具体的方面，X是–NH-S(O)2-。在式(I)的甚至更具体的方面，A是任选取代的喹啉-8-基并且X是–NH-S(O)2-，并且化合物具有式(II)中所列出的结构或其药学上可接受的盐：
其中R1b、R2、R4、m以及n是如针对式(I)所定义。
在式(Ia)的甚至更具体的方面，A是任选取代的喹啉-8-基并且X是–NH-S(O)2-，并且化合物具有式(IIa)中所列出的结构或其药学上可接受的盐：
其中R1b、R2以及n是如针对式(Ia)所定义。
在式(I)或(Ia)的某些实施方案中，A是任选取代的单环芳基(例如，任选取代的苯基)。在一些实施方案中，A是4-氯苯基。在一些实施方案中，A是3-氰基苯基。在一些实施方案中，A是2-氯苯基。在一些实施方案中，A是4-氰基苯基。在一些实施方案中，A是2-三氟甲基苯基。在一些实施方案中，A是4-三氟甲基苯基。在一些实施方案中，A是3-三氟甲基苯基。在一些实施方案中，A是3-氯苯基。在一些实施方案中，A是4-三氟甲氧基苯基。在一些实施方案中，A是2,3-二氯苯基。在一些实施方案中，A是2,4-二氟苯基。在一些实施方案中，A是3-三氟甲氧基苯基。
在式(I)或(Ia)的某些实施方案中，A是在形成任选取代的杂环基或碳环基环的相邻碳上被两个取代基取代的苯基(例如，从而导致A包含双环)。在一些实施方案中，A是苯并[3,4]间二氧杂环戊烯。在一些实施方案中，A是2,3-二氢苯并[1,4]二噁英。在一些实施方案中，A是以下式的部分：
在一些实施方案中，A是以下式的部分：
在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的芳烷基(例如，苄基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的芳基(例如，2-甲基苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、2-三氟甲氧基苯基、3-氯苯基、2-氯苯基、3-氟苯基、2-乙基苯基、4-氟苯基或2-甲基-4-氟苯基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的杂芳烷基(例如，甲基-2-吡啶基、3-甲基-甲基-2-吡啶基或3-氟-甲基-2-吡啶基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的杂芳基(例如，2-甲氧基-3-吡啶基、6-甲氧基-2-吡啶基、6-氟-2-吡啶基、6-甲基-2-吡啶基、2-甲基-3-吡啶基，6-氯-2-吡啶基、6-三氟甲基-2-吡啶基、2-氟-3-吡啶基、2-三氟甲基-3-吡啶基或6-二氟甲基-2-吡啶基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的C2-8烷基(例如，乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、异丁基、正丁基、2-羟乙基、1-羟乙基、3-羟丙基或2-羟丙基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的环烷基(例如，环丙基)。在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1b是任选取代的环烷基烷基(例如，甲基环丙基)。
在另一实施方案中，化合物选自以下表1中列出的化合物中的任一种：
表1.式I的示例性化合物：
本文所述的化合物适合用作相较于野生型具有较低活性的PKR突变体的活化剂，因此适用于本发明的方法。PKR中的这类突变可影响酶的酶活性(催化效率)、调控特性(受双磷酸果糖(FBP)/ATP调节)和/或热稳定性。这类突变的实例描述于Valentini等,JBC 2002中。由本文所述的化合物活化的突变体的一些实例包括G332S、G364D、T384M、G37E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q和R490W。在不受理论束缚下，本文所述的化合物通过活化FBP非反应性PKR突变体，恢复稳定性降低的突变体的热稳定性，或恢复受损突变体的催化效率来影响PKR突变体的活性。本发明化合物针对PKR突变体的活化活性可按照实施例8中所描述的方法进行测试。本文所述的化合物也适合用作野生型PKR的活化剂。
在一个实施方案中，为了增加红细胞的寿命，将本文所述的化合物、组合物或药物组合物直接体外添加至全血或压积细胞中或直接(例如通过腹膜内、静脉内、肌肉内、口服、吸入(雾化递送)、经皮、舌下和其它递送途径)提供给患者。在不受理论束缚下，本文所述的化合物增加RBC的寿命，因此通过影响2,3-DPG从血液释放的速率来抵抗储存血液的老化。2,3-DPG浓度水平降低诱导氧-血红蛋白解离曲线向左移动并且使变构平衡向R或氧化状态转移，因此由于2,3-DPG耗竭，通过增加氧亲和力来对潜伏在镰状化下的细胞内聚合产生治疗性抑制，从而使可溶性更大的氧-血红蛋白稳定。因此，在一个实施方案中，本文所述的化合物和药物组合物适用作抗镰状化剂。在另一个实施方案中，为了调控2,3-二磷酸甘油酸，将本文所述的化合物、组合物或药物组合物直接体外添加至全血或压积细胞中或直接(例如通过腹膜内、静脉内、肌肉内、口服、吸入(雾化递送)、经皮、舌下和其它递送途径)提供给患者。
本文所述的化合物可以是PKR的活化剂，所述PKR例如野生型(wt)、突变型PKR(例如，R510Q或R532W)。示例性化合物针对wtPKR(在基于酶或细胞的测定中)和突变体PKR的活性在表2中示出，如通过下文实施例2-5中的测定所测量。如表2中所示，AA是指AC50小于100nM，BB是指AC50为101nM至1.00μM，CC是指AC50为1.01μM至10.00μM，DD是指AC50大于10.01μM，并且EE是指不可获得的AC50。
表2.
本文所述的化合物可使用多种合成技术来制备，所述技术的一般和具体实例在实施例部分中阐述。
如熟练技术人员可理解，合成本文式的化合物的方法将对本领域普通技术人员而言是明显的。此外，各种合成步骤可以替代顺序或次序进行以得到所需化合物。适用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)为本领域所已知，并且包括，例如，如在R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCHPublishers(1989)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups inOrganic Synthesis，第2版，John Wiley and Sons(1991)；L.Fieser和M.Fieser,Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,JohnWiley and Sons(1994)；和L.Paquette编辑，Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其后续版本中所述的方法。
本文提供的化合物可包含一个或多个不对称中心并且因此表现为消旋体和外消旋混合物、单一对映体、单独非对映体和非对映体混合物。这些化合物的所有此类异构形式被明确地包括在本发明范围之内。除非另外说明，当化合物由未详细说明立体化学的结构命名或描绘并且具有一个或多个手性中心时，应理解代表化合物的所有可能立体异构体。本文提供的化合物还可包含可限制键旋转的键联(例如，碳-碳键)或取代基，例如由存在环或双键而引起的限制。因此，明确包括所有顺式/反式和E/Z异构体。
本文提供的化合物(例如式I的化合物)还可包含一种或多种同位素取代。例如，H可以是任何同位素形式，包括1H、2H(D或氘)和3H(T或氚)；C可以是任何同位素形式，包括12C、13C和14C；O可以是任何同位素形式，包括16O和18O；等等。本文提供的化合物还可以多种互变异构形式表示，在此类情况下，明确包括本文所述的化合物的所有互变异构形式，即使可以表示仅仅一种单一互变异构形式(例如，环系统的烷基化可在多个位点发生烷基化；所有此类反应产物明确地包括)。此类化合物的所有此类异构形式明确地包括。本文所述的化合物的所有晶体形式明确地包括。
本文提供的化合物包括化合物自身，以及其盐和其前药(如果适用的话)。例如，盐可在阴离子与本文所述的化合物上的带正电荷的取代基(例如，氨基)之间形成。适合的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根和乙酸根。同样，盐还可在阳离子与本文所述的化合物上的带负电荷的取代基(例如，羧酸根)之间形成。适合的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵离子如四甲基铵离子。前药的实例包括酯和其它药学上可接受的衍生物，其在向受治疗者施用后能够提供活性化合物。
可通过添加适当官能度对本文提供的化合物进行修饰以增强选定的生物特性(例如靶向特定组织)。此类修饰为本领域所已知并且包括增加进入给定生物隔室的生物穿透(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)，增加口服利用度，增加溶解度以允许通过注射施用，改变代谢以及改变排泄速率的那些修饰。
在替代实施方案中，本文所述的化合物可用作平台或支架，所述平台或支架可在用于制备化合物的衍生物和/或化学文库的组合化学技术中应用。化合物的此类衍生物和文库具有生物活性并且适用于鉴别和设计具有特定活性的化合物。适于利用本文所述的化合物的组合技术为本领域所已知(如由Obrecht，D.和Villalgrodo,J.M.,Solid-Supported Combinatorial and Parallel Synthesis of Small-Molecular-Weight Compound Libraries,Pergamon-Elsevier Science Limited(1998)示例)，并且包括如"分裂与汇集(split and pool)"或"平行(parallel)"合成技术、固相和溶液相技术以及编码技术的那些组合技术(参见，例如，Czarnik,A.W.,Curr.Opin.Chem.Bio.,(1997)1,60。因此，一个实施方案涉及使用本文所述的化合物用于产生衍生物或化学文库的方法，所述方法包括：1)提供包含多个孔的本体；2)在每个孔中提供一种或多种由本文所述的方法鉴别的化合物；3)在每个孔中提供另外一种或多种化学品；4)从每个孔中分离所得的一种或多种产物。替代实施方案涉及使用本文所述的化合物用于产生衍生物或化学文库的方法，所述方法包括：1)提供一种或多种连接至固体载体的本文所述的化合物；2)用一种或多种另外化学品处理一种或多种连接至固体载体的由本文所述的方法鉴别的化合物；3)从固体载体中分离所得的一种或多种产物。在上述方法中，"标签"或鉴别剂或标记部分可连接至本文所述的化合物或其衍生物和/或与本文所述的化合物或其衍生物分离，以促进所需产物或其中间体的示踪、鉴别或分离。此类部分为本领域所已知。用于前述方法的化学品可包括，例如溶剂、试剂、催化剂、保护基团和脱保护基团试剂等。此类化学品的实例是在本文提及的各种合成和保护基化学教科书和论文中出现的化学品。
评价化合物的方法
可通过本领域已知的方法评价本文所述的化合物调节PKM2(例如，活化PKM2)的能力。在一些实施方案中，在丝氨酸缺陷条件下评价本文所述的化合物调节PKM2(例如活化PKM2)的能力。在一些实施方案中，示例性方法包括将化合物与允许评估调节(例如，活化)PKM2的能力的基于细胞的测定相接触。例如，可将候选化合物与细胞相接触，并且测量氧消耗量或乳酸盐生成量。细胞的磷酸烯醇丙酮酸的变化、甘油-磷酸的变化、核糖或脱氧核糖的变化、脂质合成的变化或葡萄糖转化为脂质或核酸或氨基酸或蛋白质的变化也可用于评价化合物调节PKM2(例如，活化PKM2)的能力。所述评价也可包括测量丙酮酸的变化或测定线粒体膜电势的改变，例如如通过荧光电位器染料所测量。
用于筛选/测试方法中的PKM1和PKM2可通过本领域已知的任何方法产生，以用于表达重组蛋白质。例如，编码所需多肽的核酸可被引入至各种细胞类型或无细胞系统中用于表达。可产生真核细胞(例如，COS、HEK293T、CHO和NIH细胞系)和原核细胞(例如，大肠杆菌)表达系统，在其中PKM序列被引入至质粒或其它载体中，然后被用于转化活细胞。其中PKM cDNA包含整个开放阅读框或其生物活性片段的构建体以正确定向被插入至表达质粒中并且可用于蛋白质表达。原核细胞和真核细胞表达系统允许表达并回收融合蛋白，其中PKM蛋白被共价连接至氨基末端或羧基末端侧上的标签分子，所述标签分子促进鉴别和/或纯化。可使用的标签的实例包括六聚组氨酸、HA、FLAG和c-myc表位标签。酶促裂解或化学裂解位点可在PKM蛋白质与标签分子之间被工程化以使标得标签可在纯化之后被移除。
筛选/测试测定中所测量的PKM酶的活性可通过例如监测存在于反应混合物中的底物(例如，ATP或NADH)的浓度来测量。通过乳酸脱氢酶将由丙酮酸激酶的酶活性产生的丙酮酸转化为乳酸，其需要消耗NADH(NADH→NAD+)。因此，PKM2的活性可通过监测NADH的消耗量经由例如荧光测定来间接测量。此外，PKM2酶的活性可通过测量ATP的产生来直接监测，因为ATP在磷酸烯醇丙酮酸转化为丙酮酸时产生。用于监测反应混合物中的底物的量的方法包括例如，吸光度、荧光、拉曼散射、磷光、发光、荧光素酶测定法和放射性。
筛选程序需要反应混合物中存在特定组分。测定中所用的组分包括例如，二磷酸核苷(例如，ADP)、磷酸烯醇丙酮酸、NADH、乳酸脱氢酶、FBP、还原剂(例如，二硫苏糖醇)、去污剂(例如，Brij 35)、甘油和溶剂(例如，DMSO)。示例性反应条件存在于表1中。
表1
反应条件的组分 活化测定中的量
ADP 0.1-5.0mM
磷酸烯醇丙酮酸 0.1-5.0mM
NADH 10-1000M
乳酸脱氢酶 0.1-10个单位
果糖-1,6-二磷酸 0
DTT 0.1-50mM
Brij 35 0.01％-1％
甘油 0.1％-10％
丙酮酸激酶M2(用于筛选) 1-100pg
DMSO 1％-10％
适用作PKM2活化剂的化合物是展示PKM2酶在FBP不存在下的特异性和活化的水平为在FBP存在下的10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的那些化合物。此外，可在磷酸酪氨酸肽的存在或不存在下评价化合物。结合PKM2的磷酸酪氨酸肽导致FBP从PKM2的解离和PKM2从活性四聚体形式至无活性形式的构象变化。结合PKM2并且甚至在磷酸酪氨酸肽存在下以活性构象锁定酶的化合物将导致将生物化学中间体从糖酵解分流至其它中间体的生物合成中所需的PKM2的别构调控的损失。反过来，这将导致抑制癌细胞、活化免疫细胞和脂肪细胞的生长。
治疗方法
在一个实施方案中，提供一种用于治疗或预防(例如，治疗)如本文所述的的疾病、病状或病症的方法，所述方法包括施用化合物、化合物的药学上可接受的盐或包含本文所述的化合物(例如，式(I)、(II)或在图1中的化合物)的药物组合物。
可向在培养物中的细胞例如体外或离体施用、或向受试者例如体内施用本文所述的化合物和组合物以治疗、预防和/或诊断多种病症，包括下文所述的那些病症。
如本文所用，术语“治疗(treat/treatment)”被定义为为了治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、改良、改善或影响病症或所述病症的一种或多种症状向受试者(例如患者)单独或与第二治疗剂组合地应用或施用化合物，或向来自具有病症(例如，本文所述的病症)、病症的症状的受试者(例如患者)的分离的组织或细胞(例如细胞系)应用或施用化合物。
如本文所用，化合物有效治疗病症的量或“治疗有效量”是指化合物在向受试者施用单次或多次剂量后在治疗细胞或在治愈、缓和、缓解或改善具有病症的受试者中有效(优于在不存在这类治疗下所预期的)的量。
如本文所用，术语“预防”被定义为为了预防病症的至少一种症状的出现或延迟病症的至少一种症状的发作向受试者(例如患者)单独或与第二治疗剂组合地应用或施用化合物，或向来自具有病症的倾向性的受试者(例如患者)的分离的组织或细胞(例如细胞系)应用或施用化合物。
如本文所用，化合物有效预防病症的量或化合物的“预防有效量”是指在向受试者施用单次或多次剂量施用后在预防或延迟病症或病症的症状发作或复发的出现中有效的量。
如本文所用，术语“受试者”意图包括人和非人动物。示例性人受试者包括具有病症(例如本文所述的病症)的人患者或正常受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(如鸡、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，如非人灵长类动物、家养动物和/或农业有用的动物，例如羊、狗、猫、牛、猪等。
血液相关病状
本文所述的化合物或组合物可用于治疗血液相关病状。在一个实施方案中，提供一种用于增加有需要的红细胞(RBC)的寿命的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其盐、溶剂化物或水合物和载体的组合物；或(3)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物相接触。
在另一个实施方案中，提供一种用于调控有需要的血液中的2,3-二磷酸甘油酸水平的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其盐、溶剂化物或水合物和载体的组合物；或(3)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物相接触。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗遗传性非球形红细胞溶血性贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗镰状细胞贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗溶血性贫血(例如，由磷酸甘油酸激酶缺乏引起的慢性溶血性贫血，Blood Cells Mol Dis,2011；46(3):206)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗与增加的2,3-二磷酸甘油酸水平相关的疾病或病状(例如，肝病(Am J Gastroenterol,1987；82(12):1283)和帕金森氏病(Parkinson’s)(J.Neurol,Neurosurg,and Psychiatry 1976,39:952))的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗地中海贫血(例如β-地中海贫血)、遗传性球形红细胞症、遗传性椭圆形红细胞症、无β脂蛋白血症(或巴森-肯兹维格综合征)、阵发性夜间血红蛋白尿症、获得性溶血性贫血(例如先天性贫血(例如酶病))或慢性疾病的贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个实施方案中，提供一种用于治疗与增加的2,3-二磷酸甘油酸水平相关的疾病或病状(例如，肝病(Am J Gastroenterol,1987；82(12):1283)和帕金森氏病(Parkinson’s)(J.Neurol,Neurosurg,and Psychiatry 1976,39:952))的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；(2)包含本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本文所述的化合物和组合物是相较于野生型具有较低活性的PKR突变体的活化剂，因此适用于本发明的方法。PKR中的这类突变可影响酶的酶活性(催化效率)、调控特性(受双磷酸果糖(FBP)/ATP调节)和/或热稳定性。这类突变的实例描述于Valentini等,JBC 2002中。由本文所述的化合物活化的突变体的一些实例包括G332S、G364D、T384M、G37E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q和R490W。在不受理论束缚下，本文所述的化合物通过活化FBP非反应性PKR突变体，恢复稳定性降低的突变体的热稳定性，或恢复受损突变体的催化效率来影响PKR突变体的活性。本发明化合物针对PKR突变体的活化活性可按照实施例2-5中所描述的方法进行测试。本文所述的化合物也是野生型PKR的活化剂。
在一个实施方案中，为了增加红细胞的寿命，将本文所述的化合物、组合物或药物组合物直接体外添加至全血或压积细胞中或直接(例如通过腹膜内、静脉内、肌肉内、口服、吸入(雾化递送)、经皮、舌下和其它递送途径)提供给受试者(例如患者)。在不受理论束缚下，本文所述的化合物增加RBC的寿命，因此通过影响2,3-DPG从血液释放的速率来抵抗储存血液的老化。2,3-DPG浓度水平降低诱导氧-血红蛋白解离曲线向左移动并且使变构平衡向R或氧化状态转移，因此由于2,3-DPG耗竭，通过增加氧亲和力来对潜伏在镰状化下的细胞内聚合产生治疗性抑制，从而使可溶性更大的氧-血红蛋白稳定。因此，在一个实施方案中，本文所述的化合物和药物组合物适用作抗镰状化剂。
肿瘤性病症
本文所述的化合物或组合物可用于治疗肿瘤性病症。“肿瘤性病症”是特征在于具有自发生长或复制的能力的细胞的疾病或病症，例如特征在于增殖性细胞生长的异常状态或病状。示例性肿瘤性病症包括：癌、肉瘤、转移性病症(例如，从前列腺、结肠、肺、乳房和肝来源产生的肿瘤)、造血肿瘤性病症(例如白血病、转移性肿瘤)。流行性癌包括：乳癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌和胰腺癌。用化合物治疗可以是有效改善肿瘤性病症的至少一种症状(例如细胞增殖减少、肿瘤质量下降等)的量。
所公开的方法适用于预防和治疗癌症，包括例如实体肿瘤、软组织肿瘤及其转移。所公开的方法也适用于治疗非实体癌。示例性实体肿瘤包括各种器官系统的恶性肿瘤(例如，肉瘤、腺癌和癌)，如肺、乳房、淋巴、胃肠道(例如结肠)和泌尿生殖道(例如肾脏、泌尿道上皮或睾丸肿瘤)、咽、前列腺和卵巢的恶性肿瘤。示例性腺癌包括结肠直肠癌、肾细胞癌、肝癌、肺非小细胞癌和小肠癌。
在不受理论约束下，申请人相信改变的PKM2水平表征所有类型的癌症的亚型，而不考虑其在体内的细胞性质或位置因此，本文所公开的化合物和方法适用于治疗特征在于改变的PKM2水平的任何类型的癌症。
癌症组合疗法
在一些实施方案中，本文所述的化合物与一种或多种另外癌症治疗一起施用。示例性癌症治疗包括，例如：化学疗法、靶向疗法如抗体疗法、免疫疗法和激素疗法。以下提供这些治疗中的每种治疗的实例。
化学疗法
在一些实施方案中，本文所述的化合物与一种或多种化学疗法一起施用。化学疗法是用可破坏癌细胞的药物治疗癌症。“化学疗法”通常是指相比于靶向疗法通常快速影响分裂细胞的细胞毒性药物。化学疗法药物以各种可能的方式干扰细胞分裂，例如干扰DNA复制或新形成的染色体的分离。大多数化学疗法形式靶向所有快速分裂的细胞并且对癌细胞不具有特异性，但是由于许多癌细胞不能修复DNA损伤而正常细胞通常可以修复DNA损伤，所以可产生一定程度的特异性。
用于癌症疗法的化疗剂的实例包括，例如抗代谢药(例如甲酸、嘌呤和嘧啶衍生物)和烷化剂(例如，氮芥、亚硝基脲、铂、烷基磺酸酯、肼、三氮烯、氮杂环丙烷、纺锤体毒剂、细胞毒性剂、拓扑异构酶抑制剂及其它)。示例性药剂包括阿柔比星(Aclarubicin)、放线菌素(Actinomycin)、阿曲替诺因(Alitretinon)、六甲蜜胺(Altretamine)、氨基喋呤(Aminopterin)、氨基酮戊酸(Aminolevulinic acid)、氨柔比星(Amrubicin)、安吖啶(Amsacrine)、阿那格雷(Anagrelide)、三氧化二砷、天门冬酰胺酶、阿曲生坦(Atrasentan)、贝洛替康(Belotecan)、贝沙罗汀(Bexarotene)、苯达莫司汀(endamustine)、博来霉素(Bleomycin)、硼替佐米(Bortezomib)、白消安(Busulfan)、喜树碱(Camptothecin)、卡培他滨(Capecitabine)、卡铂(Carboplatin)、卡波醌(Carboquone)、卡莫氟(Carmofur)、卡莫司汀(Carmustine)、塞来昔布(Celecoxib)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、氮芥(Chlormethine)、顺铂(Cisplatin)、克拉屈滨(Cladribine)、氯法拉滨(Clofarabine)、克立他酶(Crisantaspase)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、阿糖胞苷(Cytarabine)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、更生霉素(Dactinomycin)、柔红霉素(Daunorubicin)、地西他滨(Decitabine)、秋水仙胺(Demecolcine)、多西他赛(Docetaxel)、阿霉素(Doxorubicin)、乙丙昔罗(Efaproxiral)、伊利司莫(Elesclomol)、依沙芦星(Elsamitrucin)、依诺他滨(Enocitabine)、表柔比星(Epirubicin)、雌莫司汀(Estramustine)、依托格鲁(Etoglucid)、依托泊苷(Etoposide)、氟尿苷(Floxuridine)、氟达拉滨(Fludarabine)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)(5FU)、福莫司汀(Fotemustine)、吉西他滨(Gemcitabine)、Gliadel植入剂、羟基脲(Hydroxycarbamide)、羟基脲(Hydroxyurea)、伊达比星(Idarubicin)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、伊立替康(Irinotecan)、伊洛福芬(Irofulven)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、拉洛他赛(Larotaxel)、亚叶酸(Leucovorin)、阿霉素脂质体、柔红霉素脂质体、氯尼达明(Lonidamine)、洛莫司汀(Lomustine)、硫蒽酮(Lucanthone)、甘露舒凡(Mannosulfan)、马索罗酚(Masoprocol)、美法仑(Melphalan)、巯基嘌呤(Mercaptopurine)、美司钠(Mesna)、甲氨喋呤(Methotrexate)、氨基酮戊酸甲酯(Methyl aminolevulinate)、二溴甘露醇(Mitobronitol)、米托胍腙(Mitoguazone)、米托坦(Mitotane)、丝裂霉素(Mitomycin)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、奈达铂(Nedaplatin)、尼莫司汀(Nimustine)、奥利莫森(Oblimersen)、奥马他辛(Omacetaxine)、奥他赛(Ortataxel)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、培门冬酶(Pegaspargase)、培美曲塞(Pemetrexed)、喷司他丁(Pentostatin)、吡柔比星(Pirarubicin)、匹杉琼(Pixantrone)、普卡霉素(Plicamycin)、卟吩姆钠(Porfimer sodium)、泼尼莫司汀(Prednimustine)、甲基苄肼(Procarbazine)、雷替曲赛(Raltitrexed)、雷莫司汀(Ranimustine)、鲁比替康(Rubitecan)、沙帕他滨(Sapacitabine)、司莫司汀(Semustine)、腺病毒载体定位码基因注射剂(Sitimagene ceradenovec)、沙铂(Strataplatin)、链脲菌素(Streptozocin)、他拉泊芬(Talaporfin)、替加氟-尿嘧啶(Tegafur-uracil)、替莫泊芬(Temoporfin)、替莫唑胺、替尼泊苷(Teniposide)、紫杉烷类(Tesetaxel)、睾内酯、四硝酸酯、塞替派(Thiotepa)、噻唑呋林(Tiazofurine)、硫鸟嘌呤、替吡法尼(Tipifarnib)、拓扑替康、曲贝替定(Trabectedin)、三亚胺醌(Triaziquone)、曲他胺(Triethylenemelamine)、三铂(Triplatin)、维甲酸(Tretinoin)、曲奥舒凡(Treosulfan)、曲磷胺(Trofosfamide)、乌拉莫司汀(Uramustine)、戊柔比星(Valrubicin)、维替泊芬(Verteporfin)、长春花碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、长春氟宁(Vinflunine)、长春瑞滨(Vinorelbine)、伏立诺他(Vorinostat)、佐柔比星(Zorubicin)以及本文所描述的其它细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。
由于一些药物共同施用的作用优于单独施用，所以通常同时给予两种或更多种药物。通常，两种或更多种化学治疗剂用作组合化学化疗。在一些实施方案中，化学治疗剂(包括组合化学疗法)可与本文所述的化合物组合使用。
靶向疗法
在一些实施方案中，本文所述的化合物与一种或多种靶向疗法一起施用。靶向疗法指定药剂对癌细胞的失调蛋白具有特异性的用途。小分子靶向疗法药物通常是在癌细胞内的突变、过度表达或另外关键的蛋白质上的酶结构域的抑制剂。突出的实例是酪氨酸激酶抑制剂，如阿西替尼(Axitinib)、博舒替尼(Bosutinib)、西地尼布(Cediranib)、达沙替尼(desatinib)、埃罗替尼(erlotinib)、伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来他替尼(Lestaurtinib)、尼罗替尼(Nilotinib)、司马沙尼(Semaxanib)、索拉非尼(Sorafenib)、舒尼替尼(Sunitinib)和凡德他尼(Nilotinib)，以及还有细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，如阿伏西地(Alvocidib)和塞利西利(Seliciclib)。单克隆抗体疗法是其中治疗剂为与癌细胞表面上的蛋白质特异性结合的抗体的另一策略。实例包括通常用于乳癌的抗-HER2/neu抗体曲妥珠单抗和通常用于多种B细胞恶性肿瘤的抗-CD20抗体利妥昔单抗(rituximab)和托西莫单抗(Tositumomab)。其它示例性抗体包括西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Panitumumab)、曲妥珠单抗、阿仑单抗(Alemtuzumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、依决洛单抗(Edrecolomab)以及吉妥单抗(Gemtuzumab)。示例性融合蛋白包括阿柏西普(Aflibercept)和地尼白介素(Denileukin diftitox)。在一些实施方案中，靶向疗法可与本文所述的化合物组合使用。
靶向疗法还可涉及可与细胞表面受体或肿瘤周围受影响的细胞外基质结合的作为“归巢装置”的小肽。如果与这些肽连接的放射性核素(例如RGD)在细胞附近衰变，那么所述核素最终杀死癌细胞。这种疗法的实例包括
免疫疗法
在一些实施方案中，本文所述的化合物与一种或多种免疫疗法一起施用。癌症免疫疗法是指设计用来诱导患者自身的免疫系统抗击肿瘤的一组不同的治疗策略。用于产生针对抗肿瘤的免疫应答的当前方法包括用于浅表性膀胱癌的血管内BCG免疫疗法，以及使用干扰素和其它细胞因子以诱导肾细胞癌和黑素瘤患者中的免疫应答。
同种异体造血干细胞移植可被认为是一种形式的免疫疗法，因为供体的免疫细胞将经常以移植物抗肿瘤效应攻击肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗剂可与本文所述的化合物组合使用。
激素疗法
在一些实施方案中，本文所述的化合物与一种或多种激素疗法一起施用。可以通过提供或阻断某些激素来抑制一些癌症的生长。激素敏感性肿瘤的常见实例包括某些类型的乳癌和前列腺癌。去除或阻断雌激素或睾酮常常是重要的附加治疗。在某些癌症中，激素激动剂(如孕激素)的施用可以是治疗上有益的。在一些实施方案中，激素疗法剂可与本文所述的化合物组合使用。
肥胖症和脂肪病症
本文所述的化合物或组合物可用于治疗或预防肥胖症，例如在人受试者中，例如儿童或成人受试者。“肥胖症”是指其中受试者的体重指数大于或等于30的病状。许多本文所述的化合物可用于治疗或预防超重病状。“超重”是指其中受试者的体重指数大于或等于25.0的病状。体重指数(BMI)和其它定义是根据“NIH Clinical Guidelines on theIdentification and Evaluation,and Treatment of Overweight and Obesityin Adults”(1998)。用化合物治疗可以是有效改变受试者的重量例如至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、30％、25％、40％、45％、50％或55％的量。用化合物治疗可以是有效降低受试者的体重指数例如至低于30、28、27、25、22、20或18的量。化合物可用于治疗或预防异常或不适当体重增长、代谢速率或脂肪沉积，例如，厌食症、食欲亢进、肥胖症、糖尿病或高脂血症(例如，升高的甘油三酯和/或升高的胆固醇)，以及脂肪或脂质代谢的病症。
可施用本文所述的化合物或组合物以治疗与帕-魏二氏(Prader-Willi)综合征(PWS)相关的肥胖症。PWS是与肥胖症(例如，病态肥胖症)相关的遗传性病症。
本文所述的化合物或组合物可用于减少体脂肪，预防增加的体脂肪，减少胆固醇(例如，总胆固醇和/或总胆固醇与HDL胆固醇的比例)，和/或减少具有PWS相关肥胖症的个体的食欲，和/或减少合并症如糖尿病、心血管疾病和中风。
组合物和施用途径
本文所述的组合物包括本文所述的化合物(例如，本文所述的化合物)，以及另外治疗剂(如果存在)，以有效实现疾病或疾病症状(包括本文所述的那些)的调节的量。
术语“药学上可接受的载体或佐剂”是指可与本文提供的化合物一起施用至患者，且不破坏其药理活性，并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时为无毒的载体或佐剂。
可用于本文提供的药物组合物中的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS)如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、用于药物剂型中的表面活性剂(如吐温或其它类似的聚合物递送基质)、血清蛋白(如人血清蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐、或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。环糊精如α-、β-和γ-环糊精、或化学修饰的衍生物如羟基烷基环糊精(包括2-和3-羟基丙基-β-环糊精)、或其它可溶解的衍生物也可有利地用于增强本文所述的式的化合物的递送。
本文提供的药物组合物可通过口服、胃肠外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻、口腔、阴道或植入储器的形式施用，优选地通过口服施用或通过注射施用。本文提供的药物组合物可包含任何常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。在一些情况下，可用药学上可接受的酸、碱或缓冲液调节制剂的pH以增强所配制的化合物或其递送形式的稳定性。如本文所用的术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内以及颅内注射或输注技术。
药物组合物可以是呈无菌可注射制剂的形式，例如，作为无菌可注射水性或油性混悬液。这种混悬液可根据本领域中已知的技术，使用适合的分散剂或润湿剂(例如像吐温80)和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如，作为1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂有甘露醇、水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，常规采用无菌的不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物适用于制备注射剂，因为它们是天然的药学上可接受的油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是处于其聚氧乙烯化的形式。这些油溶液或混悬液也可包含长链醇稀释剂或分散剂、或羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(如乳剂和或混悬剂)的类似分散剂。其它常用的表面活性剂(如吐温或司盘)和/或其它通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的类似乳化剂或生物利用度增强剂也可用于配制的目的。
本文提供的的药物组合物可以任何口服可接受的剂型口服施用，所述剂型包括但不限于胶囊、片剂、乳剂和水性混悬液、分散液和溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服施用水性悬浮液和/或乳剂时，可悬浮或溶解于油相中的活性成分与乳化剂和/或悬浮剂组合。如果需要，可添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
本文提供的药物组合物也可以混悬剂形式经直肠施用。通过将本文提供的化合物与适合的无刺激性赋形剂混合来制备这些组合物，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，并且因此将在直肠中熔化以释放活性组分。这类材料包括但不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
当所需治疗涉及可通过局部涂敷容易接近的区域或器官时，局部施用本文提供的药物组合物是有用的。对于局部涂敷至皮肤而言，药物组合物应配制成适合的软膏，所述软膏含有悬浮或溶解于载体中的活性组分。用于局部施用本文提供的化合物的载体包括但不限于，矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药物组合物可配制成含有活性化合物的适合的洗剂或乳膏，所述活性化合物与适合的乳化剂一起悬浮或溶解于载体中。适合的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本文提供的药物组合物也可通过直肠栓剂制剂或以适合的灌肠剂制剂局部应用于下肠道。还包括局部透皮贴剂。
本文提供的药物组合物可通过鼻气溶胶或吸入施用。这类组合物根据药物制剂领域中熟知的技术进行制备，并且可制备为盐水溶液，采用苯甲醇或其它适合的防腐剂、可增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物、和/或其它本领域已知的助溶剂或分散剂。
当本文提供的组合物包含本文所述式的化合物与一种或多种另外治疗剂或预防剂的组合时，所述化合物和所述另外药剂二者应以单一疗法方案中通常施用剂量的约1％至100％之间、并且更优选约5％至95％之间的剂量水平存在。另外药剂可作为多次剂量方案的一部分与本文提供的化合物分开施用。或者，那些试剂可以是与本文提供的化合物在单一组合物中混合的单一剂型的一部分。
本文所述的化合物可(例如)通过静脉内、动脉内、经皮、腹膜内、肌内或皮下注射施用；或通过口服、经颊、经鼻、经粘膜、局部、在眼用制剂中或通过吸入施用，其中剂量范围为约0.5至约100mg/kg体重，可选的剂量为1mg与1000mg/剂量之间，每4至120小时服用一次，或根据具体药物的需要。本文的方法涵盖施用有效量的化合物或化合物组合物以实现所需或所述作用。通常，本文提供的药物组合物将每日约1至约6次或可选地以连续输注形式施用。这类施用可用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和具体的施用方式而变化。典型的制剂将包含约5％至约95％活性化合物(w/w)。或者，这类制剂包含约20％至约80％活性化合物。
可能需要低于或高于以上所列举的那些的剂量。任何具体患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，所述因素包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合、疾病、病状或症状的严重程度和病程、患者对疾病、病状或症状的倾向、以及治疗医师的判断。
在改善患者的病状时，如果需要，可施用维持剂量的本文提供的化合物、组合物或组合。随后，施用的剂量或频率、或两者随着症状的变化可减少至当所述症状已被缓和至所需水平时保持改善的病状的水平。然而，在疾病症状的任何复发时，患者可能需要长期的间歇治疗。
患者选择和监测
本文所述的化合物可调节PKM2。因此，可通过以下方式选择用于使用本文所述的化合物进行治疗的患者和/或受试者：首先评价患者和/或受试者以确定所述受试者是否需要调节PKM2，并且如果确定所述受试者需要调节PKM2，则向所述受试者施用本文所述的化合物。
可使用本领域已知的方法例如通过测量患者中PKM2的存在和/或活性，将受试者评价为需要调节PKM2。在一些实施方案中，在癌症中评价PKM2的活性和/或水平。
可监测接受本文所述的化合物的患者，例如监测病状和/或不良作用的改善。可评价患者的病状的改善，例如通过监测癌症(例如，肿瘤)的生长、生长缺乏或消退。在一些实施方案中，使用溶血参数的放射学测定或评价来评价患者。
本文所述的化合物可活化突变体PKR。因此，可通过以下方式选择用于使用本文所述的化合物进行治疗的患者和/或受试者：首先评价患者和/或受试者以确定所述受试者是否携带PKR中的突变(例如如本文所述的一种突变)，并且如果确定所述受试者携带PKR中的突变，则因此需要活化突变体PKR的活性，然后任选地向所述受试者施用本文所述的化合物。可使用本领域已知的方法将受试者评价为携带PKR中的突变。
实施例
在以下实施例中，试剂(化学品)购自商业来源(包括Alfa、Acros、Sigma Aldrich、TCI以及上海化学试剂公司)，并且不经进一步纯化使用。使用具有200-300目的硅胶颗粒的柱在Ez Purifier III上进行快速色谱。分析型和制备型薄层色谱(TLC)板是HSGF 254(0.15-0.2mm厚度，上海安邦公司，中国)。核磁共振(NMR)光谱在Brucker AMX-400NMR(Brucker,Switzerland)上获得。化学位移是以从四甲基硅烷往低磁场的每百万分数(ppm，δ)报道。质谱是用来自Waters LCT TOF质谱仪(Waters，USA)的电喷雾电离(ESI)给予。在Agilent 1200液相色谱(Agilent，USA，柱：Ultimate 4.6mm x50mm，5μm，流动相A：0.1％甲酸于水中；流动相B：乙腈)上记录HPLC色谱。微波反应在Initiator 2.5微波合成器(Biotage,Sweden)上运行。
缩写列表：
通用
anhy.          无水
aq.            水性
Min            分钟
hr             小时
mL             毫升
mmol           毫摩尔
mol            摩尔
s.m.           起始材料
MS             质谱法
NMR            核磁共振
r.t.(rt)       室温
TLC            薄层色谱法
HPLC           高效液相色谱法
光谱
Hz             赫兹
δ             化学位移
J              偶合常数
s              单峰
d              双峰
t              三重峰
q              四重峰
m              多重峰
br             宽
qd             四重双峰
dquin          双重五重峰
dd             双重双峰
dt             双重三重峰
溶剂和试剂
CHCl3          氯仿
DCM            二氯甲烷
DMF            二甲基甲酰胺
Et2O           二乙醚
EtOH           乙醇
EtOAc          乙酸乙酯
MeOH           甲醇
MeCN           乙腈
PE             石油醚
THF            四氢呋喃
AcOH           乙酸
HCl            盐酸
H2SO4          硫酸
NH4Cl          氯化铵
KOH            氢氧化钾
NaOH           氢氧化钠
K2CO3          碳酸钾
Na2CO3         碳酸钠
TFA            三氟乙酸
Na2SO4         硫酸钠
NaBH4          硼氢化钠
NaHCO3         碳酸氢钠
LiHMDS         六甲基二甲硅烷氨基锂
NaHMDS         六甲基二甲硅烷氨基钠
LAH            氢化铝锂
NaBH4          硼氢化钠
LDA            二异丙基氨基锂
Et3N           三乙胺
Py             吡啶
DMAP           4-(二甲基氨基)吡啶
DIPEA          N,N-二异丙基乙胺
NH4OH          氢氧化铵
EDCI           1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
HOBt           1-羟基苯并三唑
HBTU           2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HATU           O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四-甲基脲鎓
Xphos          2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯基
BINAP          2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘基
实施例1.PKM2测定
程序：
·在反应缓冲液中稀释PKM2储备酶溶液
·首先将2μL化合物添加至每孔中，并且然后添加180μL反应混合物。
·将反应混合物与化合物(不含ADP)在4℃下温育30分钟。
·将板重新平衡至室温，然后添加20μL ADP以起始反应。
·将反应进展测量为在室温(25℃)下在340nm波长下的吸光度变化。
反应混合物：在反应缓冲液中的PKM2(50ng/孔)、ADP(0.7mM)、PEP(0.15mM)、NADH(180μM)、LDH(2单位)
反应缓冲液：100mM KCl、50mM Tris pH 7.5、5mM MgCl2、1mM DTT、0.03％ BSA。
实施例2PKR突变体测定
程序：
·在测定缓冲液中稀释PKR或PKR突变酶溶液。
·首先将2μL测试化合物添加至各孔中，并且然后添加180μL反应混合物。
·除ADP之外汇集反应混合物与测试化合物，并且将板在室温下储存60分钟。
·在室温下添加20uL ADP以起始反应并且将反应进展测量为在室温下在340nm波长下的吸光度变化。
测试化合物制备：
·在100×浓度下于100％DMSO中制备测试化合物储备液(10mM)。
·制备11个点的1至3稀释液(即添加50μl第一浓度至100μl100％DMSO中以产生3.33mM，将此50μl添加至100μl DMSO中以产生1.11mM等)
·测定中进行1至100稀释(2μl于200μl中)产生起始浓度100μM，从而使11个点以3倍递减。
测定缓冲液：100mM KCl，50mM Tris 7.5，5mM MgCl2，1mMDTT，0.03％BSA
反应混合物：PKR突变酶：80-400ng/孔；ADP：0.22-1.65mM；PEP：0.1-0.5mM；NADH：180uM；LDH：0.5单位(Sigma#59023)；DTT：1mM；BSA：0.03％。
实施例3.PKR WT单点活化百分比测定
将本文所述的化合物用DMSO稀释并且在1μM浓度下进行测试。在1X缓冲液：(100mM KCl，50mM Tris 7.5，5mM MgCl2，1mMDTT，0.03％BSA)中稀释酶。首先添加2μL化合物溶液至孔中，并且然后添加180μL酶溶液。除ADP之外汇集测定物，并且将板在室温下储存60分钟。添加20μL ADP以起始测定并且在SpectraMax处使用OD340评价测定输出。测定在室温下运行。
最终浓度：PKR wt(100ng/孔)，Tris pH 7.5(50mM)，KCl(100mM)，MgCl2(5mM)，ADP(0.48mM)，PEP(0.15mM)，NADH(180μM)，LDH(0.5单位,Sigma 59023)，DTT(1mM)和BSA(0.03％)。
实施例4.PKR R510Q单点活化百分比测定
将本文所述的化合物用DMSO稀释并且在1μM浓度下进行测试。在1X缓冲液：(100mM KCl，50mM Tris 7.5，5mM MgCl2，1mMDTT，0.03％BSA)中稀释酶。首先添加2μL化合物溶液至孔中，并且然后添加180μL酶溶液。除ADP之外汇集测定物，并且将板在室温下储存60分钟。添加20μL ADP以起始测定并且在SpectraMax处使用OD340评价测定输出。测定在室温下运行。
最终浓度：PKR R510Q(40ng/孔)，Tris pH 7.5(50mM)，KCl(100mM)，MgCl2(5mM)，ADP(0.2mM)，PEP(0.11mM)，NADH(180μM)，LDH(0.5单位,Sigma 59023)，DTT(1mM)和BSA(0.03％)。
实施例5.PKR R532W单点活化百分比测定
将本文所述的化合物用DMSO稀释并且在1μM浓度下进行测试。在1X缓冲液：(100mM KCl，50mM Tris 7.5，5mM MgCl2，1mMDTT，0.03％BSA)中稀释酶。首先添加2μL化合物溶液至孔中，并且然后添加180μL酶溶液。除ADP之外汇集测定物，并且将板在室温下储存60分钟。添加20μL ADP以起始测定并且在SpectraMax处使用OD340评价测定输出。测定在室温下运行。
最终浓度：PKR R532W(100ng/孔)，Tris pH 7.5(50mM)，KCl(100mM)，MgCl2(5mM)，ADP(0.36mM)，PEP(0.1mM)，NADH(180μM)，LDH(0.5单位,Sigma 59023)，DTT(1mM)和BSA(0.03％)。
实施例6：
方案1：中间体1的制备
步骤A：4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸(1)
在0℃下向4-氨基苯甲酸(10g，73mmol)于100mL无水THF中的溶液添加吡啶(1.15g，146mmol)、喹啉-8-磺酰氯(20g，88mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌过夜。在过滤之后，将残余物用EtOH洗涤，并且获得14g的标题化合物作为纯产物。
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.71(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.47(dd,J＝7.5,1.3Hz,1H),8.51(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.62-7.79(m,4H),7.14-7.22(m,2H)。LC-MS:m/z329.3(M+H)+。
实施例7.
方案2.一般程序1
步骤A：在-78℃下向相应芳基溴化物(1.0当量)于超干燥THF中的溶液逐滴添加n-BuLi于THF(1.05当量)中的溶液。在添加完成之后，将混合物在-78℃下搅拌约0.5小时。然后在-78℃下通过注射器逐滴添加Boc-3-氮杂环丁烷于THF中的溶液。在添加之后，将所得混合物在-78℃下在N2下搅拌2小时，并且然后允许温至室温。然后通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并且用EtOAc(50mL，30mL)萃取残余混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(PE/EtOAc)进行纯化，其得到所需化合物B2。
步骤B：向化合物B2(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)。当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的所需产物3。
步骤C：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物B3(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体1(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释，用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
通过实施例7制备以下化合物。
N-(4-(3-羟基-3-(2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(2)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.21(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.87(s,1H),8.42(d,J＝7.3Hz,1H),8.38(d,J＝8.4Hz,1H),8.08(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.69(dd,J＝8.4,4.4Hz,1H),7.67–7.62(m,1H),7.46–7.40(m,2H),7.37–7.30(m,1H),7.25(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.16–7.09(m,2H),6.99(td,J＝7.5,0.9Hz,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,1H),4.58(s,2H),4.39(s,2H),3.89(s,3H),3.34(s,1H)。LC-MS:m/z 490.5(M+H)+
N-(4-(3-(2-氟苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(3)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.4Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.65(dd,J＝7.5,3.5Hz,1H),7.63–7.59(m,1H),7.47–7.41(m,2H),7.39–7.33(m,2H),7.21–7.16(m,1H),7.15–7.07(m,3H),4.66(dd,J＝20.6,11.3Hz,2H),4.42(dd,J＝38.7,10.2Hz,2H),2.60(s,1H)。LC-MS:m/z 478.5(M+H)+。
N-(4-(3-(3-氟苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(4)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.60(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.4Hz,1H),8.32(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),8.06(d,J＝6.9Hz,1H),7.69–7.58(m,2H),7.45(d,J＝8.6Hz,2H),7.38(td,J＝8.0,5.8Hz,1H),7.27–7.23(m,1H),7.22–7.17(m,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),7.07–7.01(m,1H),4.45(s,4H),2.53(s,1H)。LC-MS:m/z 478.5(M+H)+。
N-(4-(3-(2-氯苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(5)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:10.58(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.8Hz,1H),8.51(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.44(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H),8.29(dd,J＝8.3,1.2Hz,1H),7.77–7.68(m,2H),7.50–7.44(m,1H),7.44–7.38(m,3H),7.35–7.28(m,2H),7.14(d,J＝8.7Hz,2H),6.30(s,1H),4.75(d,J＝9.4Hz,1H),4.50(d,J＝11.1Hz,1H),4.29(d,J＝9.2Hz,1H),4.13(d,J＝11.0Hz,1H)。LC-MS:m/z 494.6(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(6)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.31(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),8.06(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.56-7.67(m,3H),7.50(s,1H),7.36-7.45(m,3H),7.08-7.13(m,2H),4.71(br.s.,2H),4.46(br.s.,2H)。LC-MS:m/z 528.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(7)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.59(s,1H),9.13(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.52(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.45(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.69-7.78(m,2H),7.53(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.39-7.48(m,3H),7.29-7.37(m,2H),7.12-7.19(m,2H),6.40(s,1H),4.66(d,J＝9.1Hz,1H),4.39(d,J＝10.9Hz,1H),4.25(d,J＝9.7Hz,1H),4.11(d,J＝10.6Hz,1H)。LC-MS:m/z 544.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(8)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.12(d,J＝2.8Hz,1H),8.33(d,J＝7.3Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.49-7.63(m,2H),7.26-7.37(m,2H),7.20(t,J＝7.9Hz,1H),7.03(d,J＝8.3Hz,2H),6.90-6.99(m,2H),6.77(d,J＝6.8Hz,1H),4.54-4.79(m,1H),4.35(br.s.,3H),4.23-4.31(m,1H),3.73(s,3H)。LC-MS:m/z490.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(9)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.59(br.s.,1H),9.13(dd,J＝4.1,1.8Hz,1H),8.52(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),8.45(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.30(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.79-7.84(m,2H),7.69-7.78(m,2H),7.59-7.69(m,2H),7.46-7.52(m,J＝8.8Hz,2H),7.12-7.19(m,J＝8.8Hz,2H),6.61(s,1H),4.56(d,J＝8.5Hz,1H),4.29(d,J＝8.5Hz,1H),4.18(br.s.,2H)。LC-MS:m/z 544.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(10)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.15(dd,J＝4.4,1.5Hz,1H),8.36(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.29(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),8.03(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.54-7.66(m,2H),7.31-7.40(m,5H),7.12(d,J＝7.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),4.36(br.s.,4H)。LC-MS:m/z 544.6(M+H)+。
N-(4-(3-(3-氯苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(11)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.61(s,1H),9.13(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),8.52(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.45(dd,J＝7.5,1.3Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.69-7.78(m,2H),7.43-7.54(m,4H),7.40(t,J＝7.8Hz,1H),7.32-7.37(m,1H),7.15(d,J＝8.8Hz,2H),6.50(s,1H),4.51(d,J＝8.5Hz,1H),4.25(d,J＝8.5Hz,1H),4.09-4.17(m,2H)。LC-MS:m/z 494.5(M+H)+。
N-(4-(3-(4-氟-2-甲基苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(12)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.60(br.s.,1H),9.13(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.51(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),8.45(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.67-7.78(m,2H),7.41-7.47(m,J＝8.5Hz,2H),7.30(dd,J＝8.5,6.2Hz,1H),7.11-7.18(m,J＝8.8Hz,2H),7.03(dd,J＝10.0,2.6Hz,1H),6.90-7.00(m,1H),6.14(s,1H),4.73(d,J＝9.1Hz,1H),4.45(d,J＝10.6Hz,1H),4.27(d,J＝9.4Hz,1H),4.09-4.16(m,1H),2.22-2.30(m,3H),LC-MS:m/z 492.6(M+H)+。
N-(4-(3-(2-乙基苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(13)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.59(br.s.,1H),9.13(dd,J＝4.1,1.8Hz,1H),8.52(d,J＝7.3Hz,1H),8.45(d,J＝6.5Hz,1H),8.29(d,J＝7.9Hz,1H),7.68-7.78(m,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.22-7.29(m,3H),7.15(d,J＝8.8Hz,3H),6.15(s,1H),4.72(d,J＝9.1Hz,1H),4.45(d,J＝10.3Hz,1H),4.30(d,J＝9.4Hz,1H),4.15(d,J＝10.0Hz,1H),2.52-2.57(m,3H),1.16(t,J＝7.5Hz,3H)。LC-MS:m/z 488.5(M+H)+。
N-(4-(3-(4-氟苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(14)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.60(s,1H),9.13(dd,J＝4.1,1.8Hz,1H),8.51(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),8.45(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.68-7.78(m,2H),7.42-7.55(m,4H),7.13-7.20(m,4H),6.41(s,1H),4.47(d,J＝8.8Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.15(br.s.,2H)。LC-MS:m/z 478.6(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(邻甲苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(15)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.16(s,1H),8.5-8.6(m,1H),8.2-8.4(m,2H),8.05-8.1(m,1H),7.6(m,2H),7.4(m,2H),7.0-7.2(m,6H),4.7(m,2H),4.4(m,2H),4.38-4.48(m,2H),2.3(s,3H)。LC-MS:m/z 474.5(M+H)+。
N-(4-(3-丁基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(16)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.56(s,1H),9.13(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.52(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),8.44(d,J＝7.3Hz,1H),8.29(d,J＝7.9Hz,1H),7.69-7.78(m,2H),7.37-7.42(m,J＝8.5Hz,2H),7.11-7.15(m,J＝8.5Hz,2H),5.51(s,1H),4.03(d,J＝8.8Hz,1H),3.92(d,J＝8.8Hz,1H),3.79-3.85(m,1H),3.73(br.s.,1H),1.54(d,J＝7.3Hz,2H),1.22-1.28(m,4H),0.82-0.87(m,3H)。LC-MS:m/z 440.6(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(17)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.61(br.s.,1H),9.13(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.68(d,J＝4.1Hz,1H),8.52(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.46(dd,J＝7.3,1.5Hz,1H),8.30(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),8.09(d,J＝7.9Hz,1H),7.65-7.79(m,3H),7.41-7.47(m,J＝8.8Hz,2H),7.13-7.19(m,J＝8.8Hz,2H),6.59(s,1H),4.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.53(d,J＝10.9Hz,1H),4.28(d,J＝8.2Hz,1H),4.11-4.19(m,1H)。LC-MS:m/z 529.6(M+H)+。
N-(4-(3-(2-氟吡啶-3-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(18)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.61(br.s.,1H),9.13(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),8.43-8.53(m,2H),8.27(d,J＝8.2Hz,1H),8.16(d,J＝4.7Hz,1H),8.02(ddd,J＝10.1,7.8,1.8Hz,1H),7.67-7.78(m,2H),7.43-7.50(m,J＝8.2Hz,2H),7.30-7.38(m,1H),7.14-7.23(m,J＝7.9Hz,2H),6.64(s,1H),4.66(d,J＝9.1Hz,1H),4.42(d,J＝10.6Hz,1H),4.31(d,J＝9.4Hz,1H),4.14(d,J＝5.0Hz,1H)。LC-MS:m/z 479.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-甲基吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(19)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.62(s,1H),9.13(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),8.52(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),8.44-8.50(m,2H),8.30(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),7.96(br.s.,1H),7.69-7.79(m,2H),7.37-7.49(m,3H),7.15(d,J＝8.8Hz,2H),6.47(br.s.,1H),4.80(d,J＝8.8Hz,1H),4.53(d,J＝10.6Hz,1H),4.33(d,J＝9.1Hz,1H),4.16(d,J＝9.7Hz,1H)。LC-MS:m/z 528.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(20)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.15(dd,J＝5.0,1.8Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.67–7.63(m,1H),7.63–7.61(m,1H),7.56(dd,J＝7.4,1.9Hz,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,2H),7.10(d,J＝8.7Hz,2H),6.94(dd,J＝7.4,5.0Hz,1H),4.62(d,J＝10.3Hz,1H),4.46(dd,J＝18.3,11.4Hz,2H),4.31(d,J＝10.9Hz,1H),4.01(s,3H),3.37(s,1H)。LC-MS:m/z 491.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(3-甲氧基吡啶-2-基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(21)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.6Hz,1H),8.57(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.14(dd,J＝4.6,0.7Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.65(dd,J＝7.2,3.1Hz,1H),7.63–7.58(m,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),7.33–7.29(m,1H),7.26(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),6.28(s,1H),4.71(d,J＝10.5Hz,1H),4.62(d,J＝9.0Hz,1H),4.43(d,J＝9.3Hz,1H),4.26(d,J＝10.5Hz,1H),3.83(s,3H)。LC-MS:m/z 491.4(M+H)+。
N-(4-(3-(3-氟吡啶-2-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(22)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.18(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.63(s,1H),8.49(d,J＝2.5Hz,1H),8.47(d,J＝4.3Hz,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.07(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.65(dd,J＝7.7,3.6Hz,1H),7.64–7.59(m,1H),7.46–7.42(m,2H),7.42–7.39(m,1H),7.12(d,J＝8.7Hz,2H),4.64(d,J＝10.3Hz,2H),4.40(d,J＝30.4Hz,2H),2.98(s,1H)。LC-MS:m/z 479.1(M+H)+。
N-(4-(3-(3-氯吡啶-2-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(23)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.24(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),9.01(s,1H),8.48(dd,J＝4.7,1.4Hz,1H),8.45(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.41(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.10(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.71(dd,J＝8.3,4.3Hz,1H),7.69–7.63(m,1H),7.47(d,J＝8.7Hz,2H),7.33(dd,J＝8.0,4.7Hz,1H),7.16(d,J＝8.6Hz,2H),4.89(d,J＝10.5Hz,2H),4.50–4.29(m,2H)。LC-MS:m/z 495.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(24)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.18(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.73(d,J＝3.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.13–8.01(m,2H),7.68–7.59(m,2H),7.50–7.34(m,3H),7.15–7.06(m,2H),5.06(d,J＝9.2Hz,1H),4.85(d,J＝11.2Hz,1H),4.35(dd,J＝15.0,3.1Hz,2H),3.14(s,1H)。LC-MS:m/z529.6(M+H)+。
N-(4-(3-(3-(二氟甲氧基)吡啶-2-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(25)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.43–8.35(m,2H),8.31(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.63(dt,J＝15.4,6.2Hz,3H),7.44(d,J＝8.7Hz,2H),7.37(dd,J＝8.3,4.7Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,2H),6.59(t,J＝71.8Hz,1H),6.02(s,1H),4.65(dd,J＝22.1,10.2Hz,2H),4.47(d,J＝9.4Hz,1H),4.34(d,J＝10.8Hz,1H)。LC-MS:m/z 527.6(M+H)+。
通过实施例7的步骤A制备以下化合物。
3-羟基-3-(2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(26)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.37–7.29(m,2H),7.02(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),6.96(d,J＝8.2Hz,1H),4.16(dd,J＝9.5,1.0Hz,2H),3.92(s,3H),3.52(d,J＝5.5Hz,1H),3.37(s,1H),1.47(s,9H)。LC-MS:m/z 280.3(M+H)+。
3-(2-氟苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(27)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.40(td,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.35(ddd,J＝7.2,4.7,2.0Hz,1H),7.19(td,J＝7.6,1.1Hz,1H),7.13(ddd,J＝11.1,8.2,1.0Hz,1H),4.46(d,J＝9.5Hz,2H),4.19(d,J＝9.6Hz,2H),3.83(dd,J＝21.5,9.3Hz,1H),2.77(d,J＝1.3Hz,1H),1.64(s,1H),1.46(d,J＝5.4Hz,9H)。LC-MS:m/z 168.3(M+H)+
3-羟基-3-(3-甲氧基吡啶-2-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(28)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:8.16(dd,J＝3.4,2.6Hz,1H),7.33–7.30(m,2H),4.52(d,J＝6.6Hz,2H),4.12(d,J＝8.7Hz,2H),3.95(s,3H),1.51(s,9H)。LC-MS:m/z 281.4(M+H)+。
3-(3-氟苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(29)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.38(td,J＝7.9,5.8Hz,1H),7.33–7.29(m,1H),7.28–7.22(m,1H),7.02(tdd,J＝8.4,2.5,1.0Hz,1H),4.25–4.15(m,4H),3.48(s,1H),1.47(s,9H)。LC-MS:m/z 268.3(M+H)+。
3-(2-氯苯基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(30)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.45–7.42(m,1H),7.40–7.36(m,1H),7.32(ddd,J＝5.0,2.8,1.4Hz,2H),4.52(d,J＝9.7Hz,2H),4.24(d,J＝9.8Hz,2H),3.07(s,1H),1.47(s,9H)。LC-MS:m/z 284.5(M+H)+。
实施例8.
方案3.一般程序2
步骤A：在-30℃下通过注射器向Boc-3-氮杂环丁烷1(1当量)于THF中的溶液逐滴添加于THF(4当量)中的相应RMgBr溶液。在添加之后，将所得混合物在-30℃下在N2下搅拌2小时，然后允许温至室温。通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并且用EtOAc(50mL，30mL)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(PE/EtOAc)进行纯化以得到化合物C2。
步骤B：向化合物C2(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)，当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物保持在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的所需产物C3。粗产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤C：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物C3(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体1(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水洗涤，用乙酸乙酯萃取，将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
通过实施例8制备以下化合物。
N-(4-(3-(叔丁基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(31)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.58(s,1H),8.39(dd,J＝7.3,1.4Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.06(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.68–7.57(m,2H),7.46–7.36(m,2H),7.14–7.05(m,2H),4.25(dd,J＝20.5,10.0Hz,2H),3.95(d,J＝9.0Hz,1H),3.85–3.75(m,1H),0.95(s,9H)。LC-MS:m/z 466.6(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-异丙基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(32)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.25(s,1H),9.13(s,1H),8.50–8.39(m,2H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(dd,J＝18.7,10.9Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.5Hz,2H),4.11(d,J＝9.9Hz,2H),3.98(d,J＝8.9Hz,2H),3.79–3.75(m,1H),1.96–1.90(m,1H),0.93(d,J＝6.8Hz,6H)。LC-MS:m/z 426.5(M+H)+。
N-(4-(3-环丙基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(33)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.23–9.17(m,1H),8.76(s,1H),8.41(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.35(d,J＝7.0Hz,1H),8.08(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.70–7.60(m,2H),7.40(d,J＝8.6Hz,2H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),3.97(d,J＝8.4Hz,4H),1.21(ddd,J＝10.4,6.7,4.2Hz,1H),0.58(d,J＝8.1Hz,2H),0.36(d,J＝5.2Hz,2H)。LC-MS:m/z 424.5(M+H)+。
N-(4-(3-乙基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(34)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.2,1.6Hz,1H),8.59(s,1H),8.38(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.31(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),8.06(d,J＝7.2Hz,1H),7.69–7.55(m,2H),7.40(d,J＝8.6Hz,2H),7.09(d,J＝8.6Hz,2H),4.07(s,3H),3.98(s,1H),2.15(s,1H),1.76(q,J＝7.4Hz,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。LC-MS:m/z 412.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-异丁基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(35)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.56(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.8Hz,1H),8.52(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),8.44(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H),8.29(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.81–7.66(m,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H),7.13(d,J＝8.7Hz,2H),5.52(s,1H),4.07(d,J＝8.8Hz,1H),3.94(d,J＝8.8Hz,1H),3.84(d,J＝10.0Hz,1H),3.76(d,J＝9.8Hz,1H),1.80(dt,J＝13.5,6.7Hz,1H),1.51(d,J＝6.9Hz,2H),0.85(dd,J＝13.2,6.6Hz,6H)。LC-MS:m/z 440.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-丙基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(36)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.17(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),8.59(s,1H),8.38(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),8.31(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.06(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.69–7.57(m,2H),7.40(d,J＝8.6Hz,2H),7.09(d,J＝8.6Hz,2H),4.03(d,J＝40.8Hz,4H),2.08(s,1H),1.71(dd,J＝10.3,6.1Hz,2H),1.44–1.36(m,2H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H)。LC-MS:m/z 426.5(M+H)+。
实施例9.
方案4.化合物37的制备
步骤A：3-(环丙基甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D2)
在-78℃下在N2下向4,4’-二-叔丁基-联苯基(DTBB)(30.33mg，0.114mmol)和Li(56.7mg，8.09mmol)于50mL无水THF中的悬浮液逐滴添加(溴甲基)环丙烷(307.9mg，2.28mmol)和3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.5mmol)于无水THF(5mL)中的溶液。将所得混合物在-78℃下在N2下搅拌8小时。在-78℃下通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物。将所得混合物用EtOAc(50mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。柱色谱法(15％PE/EtOAc)得到262.5mg呈无色液体的标题化合物。1HNMR(CHLOROFORM-d)δ:3.89(dd,J＝24.2,9.0Hz,4H),2.84(s,1H),1.69(d,J＝6.7Hz,2H),1.45(s,9H),0.80-0.70(m,1H),0.59-0.49(m,2H),0.20-0.12(m,2H)。
步骤B：N-(4-(3-(环丙基甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(D3)
向化合物D2(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)，当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的所需产物D3。粗产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 128.2(M+H)+
N-(4-(3-(环丙基甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(37)
向圆底烧瓶中顺序地添加3-(环丙基甲基)氮杂环丁烷-3-醇(化合物D3)(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体1(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.67(s,1H),9.32(d,J＝4.0Hz,1H),8.54(t,J＝6.6Hz,2H),8.16(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(dd,J＝8.3,4.9Hz,1H),7.74(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),4.12(dd,J＝22.9,10.1Hz,4H),1.69(d,J＝6.7Hz,2H),0.79-0.64(m,1H),0.55(q,J＝5.4Hz,2H),0.23-0.10(m,2H)。LC-MS:m/z 438.6(M+H)+。
实施例10.
方案5.一般程序3
步骤A：3-羟基-3-乙烯基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(E2)
在-30℃下通过注射器向Boc-3-氮杂环丁烷(1当量)于THF中的溶液逐滴添加于THF(4当量)中的乙烯基溴化镁溶液。在添加之后，将所得混合物在-30℃下在N2下搅拌2小时，并且然后允许温至室温。通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并且用EtOAc(50mL，30mL)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(PE/EtOAc)进行纯化以得到化合物E2。LC-MS:m/z 200.2(M+H)+。
步骤B：3-羟基-3-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和3-羟基-3-(1-羟乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(E3)和(E4)
在0℃下向化合物E2(1当量)于THF中的溶液添加BH3于THF(10当量)中的溶液，将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后缓慢添加水性NaOH(20当量)，接着添加H2O2(2当量)，并且当LCMS检测无s.m.时，将混合物搅拌另外3小时。将反应混合物过滤并且浓缩滤液以得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法进行纯化以获得化合物E3和E4的混合物。化合物E3和E4不进行分离而是一起用于下一步骤。LC-MS:m/z 218.3(M+H)+。
步骤C：3-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-醇和3-(1-羟乙基)氮杂环丁烷-3-醇(E5)和(E6)
向化合物E3和E4(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)，当LCMS检测到无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的产物E5和E6的所需混合物，所述混合物不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 118.3(M+H)+。
步骤D：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物5和6(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体4(1当量)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
N-(4-(3-羟基-3-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(38)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.14(dd,J＝4.3,1.8Hz,1H),8.43(ddd,J＝5.9,3.9,1.6Hz,2H),8.19(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.72–7.63(m,2H),7.45–7.37(m,2H),7.23–7.14(m,2H),4.26(d,J＝9.2Hz,1H),4.08(dd,J＝20.2,10.4Hz,2H),3.92(d,J＝10.9Hz,1H),3.72(t,J＝6.4Hz,2H),1.93(t,J＝6.4Hz,2H)。LC-MS:m/z 428.6(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(1-羟乙基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(39)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.16(d,J＝2.8Hz,1H),8.68(s,1H),8.38(d,J＝7.0Hz,1H),8.31(d,J＝7.2Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.69–7.54(m,2H),7.35(d,J＝8.5Hz,2H),7.07(d,J＝8.2Hz,2H),4.09(ddd,J＝60.3,28.4,22.5Hz,4H),3.88(dd,J＝12.8,6.4Hz,1H),1.15(d,J＝4.6Hz,3H)。LC-MS:m/z 428.6(M+H)+。
实施例11.
方案6.一般程序4
步骤A：3-烯丙基-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(F2)
在10℃下向Boc-3-氮杂环丁烷(5.02mmol)、烯丙基溴化物(12.4mmol)、THF(1mL)和饱和氯化铵溶液(5mL)的溶液中分批添加锌粉(10mmol)。在添加后，当TLC显示完全转化时，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物用水(5mL)稀释并且添加10％H2SO4(水溶液)以实现pH约6。将混合物用乙酸乙酯萃取(3X)。将有机层合并并且用NaHCO3的饱和溶液和盐水洗涤，并且最终经无水Na2SO4干燥。蒸发挥发物以得到呈无色油状的化合物F2。LC-MS:m/z 214.3(M+H)+。
步骤B：在0℃下向化合物F2(1当量)于THF中的溶液添加BH3于THF(10当量)中的溶液，将反应混合物在室温下搅拌过夜。缓慢添加水性NaOH(20当量)，接着添加H2O2(2当量)。当LCMS检测无s.m.时，将混合物搅拌另外3小时。将反应混合物过滤并且浓缩滤液以得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法进行纯化以获得化合物F3和F4。
3-羟基-3-(3-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(F3)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:3.84(s,16H),3.68-3.75(m,12H),3.06(br.s.,14H),1.90-1.97(m,8H),1.68-1.78(m,12H),1.45(s,38H)。LC-MS:m/z 232.3(M+H)+。
3-羟基-3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(F4)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:4.15-4.24(m,5H),3.86-3.94(m,15H),3.77-3.83(m,5H),1.89-1.95(m,9H),1.42-1.49(m,48H),1.29-1.33(m,17H)。LC-MS:m/z 232.3(M+H)+。
步骤C：3-(3-羟丙基)氮杂环丁烷-3-醇(F5)
向化合物3(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)，并且当LCMS检测到无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的化合物5。粗产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 132.2(M+H)+。
步骤E：3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-醇(F6)
向化合物F4(1当量)于DCM中的溶液添加TFA(10当量)，并且当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到作为TFA盐的化合物F6。粗产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 132.2(M+H)+。
步骤D：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物F5(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体1(1当量)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥并且过滤，并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
N-(4-(3-羟基-3-(3-羟丙基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(40)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:9.21(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),8.82(br.s.,1H),8.39(dd,J＝12.0,1.5Hz,1H),8.32-8.46(m,1H),8.08(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.60-7.74(m,2H),7.38-7.44(m,J＝8.5Hz,2H),7.08-7.16(m,J＝8.8Hz,2H),4.06(br.s.,4H),3.75(t,J＝5.4Hz,2H),1.91-1.97(m,2H),1.68-1.75(m,2H)。LC-MS:m/z 442.5(M+H)+。
步骤F：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物F6(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体1(1当量)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
还通过实施例11制备以下化合物。
N-(4-(3-羟基-3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(41)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:10.56(s,1H),9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.52(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.44(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.29(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),7.81–7.67(m,2H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),7.13(d,J＝8.6Hz,2H),5.65(s,1H),4.44(dt,J＝18.2,8.9Hz,1H),4.26–3.93(m,2H),3.81(dt,J＝19.3,10.2Hz,2H),3.17(d,J＝5.2Hz,1H),1.81–1.55(m,2H),1.05(dd,J＝13.4,6.6Hz,3H)。LC-MS:m/z442.6(M+H)+。
实施例12.
方案7.化合物42的制备。
步骤A：4-(2,4-二氟苯基磺酰胺基)苯甲酸(G1)
在0℃下向4-氨基苯甲酸(622mg，4.5mmol)于10mL无水THF中的溶液添加吡啶(0.9g，9mmol)、2,4-二氟苯-1-磺酰氯(1.1g，5.0mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌过夜。在过滤之后并且将残余物用EtOH洗涤，并且获得呈白色固体的化合物G1。LC-MS:m/z 314.3(M+H)+。
步骤B：3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(G2)
在-78℃下向1-溴-3-(三氟甲基)苯(1.0当量)于干燥THF中的溶液逐滴添加n-BuLi于THF(1.05当量)中的溶液。在添加之后，将混合物在-78℃下搅拌约0.5小时。然后在-78℃下通过注射器逐滴添加Boc-3-氮杂环丁烷于THF中的溶液。在添加之后，将所得混合物在-78℃下在N2下搅拌2小时，并且然后允许温至室温。通过饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并且用EtOAc(50mL，30mL)萃取混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(PE/EtOAc)进行纯化以得到化合物G2。LC-MS:m/z 318.3(M+H)+。
步骤C：3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-3-醇(G3)
向化合物G2(1当量)于二噁烷中的溶液添加HCl于二噁烷(3当量)中的溶液，并且当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到化合物G3。粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:m/z 218.3(M+H)+。
步骤D：向圆底烧瓶中顺序地添加化合物G2(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和中间体G1(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。
2,4-二氟-N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)苯磺酰胺(42)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.93(d,J＝6.2Hz,1H),7.80(s,1H),7.71(d,J＝7.3Hz,1H),7.53-7.66(m,4H),7.12-7.25(m,3H),6.90-7.03(m,2H),4.44-4.65(m,4H)。LC-MS:m/z 513.4(M+H)+
实施例13：
方案8.一般程序5。
步骤A：4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基氨基甲酸叔丁酯(H2)
向圆底烧瓶中顺序地添加化合物H1(1当量)、DMF(5mL)、DIPEA(3.0当量)、HBTU(1.2当量)和4-(叔丁氧基羰基氨基)苯甲酸(1当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜或直到TLC显示s.m.被消耗。将混合物用盐水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化所需产物。LC-MS:m/z437.4(M+H)+。
步骤B：(4-氨基苯基)(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(H3)
向化合物H2(1当量)于二噁烷中的溶液添加HCl于二噁烷(3当量)中的溶液，并且当LCMS检测无s.m.时，将反应混合物在室温下搅拌约2小时。浓缩反应混合物以得到所需产物H3。粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS:m/z 337.3(M+H)+。
步骤C：向(4-氨基苯基)(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(H2，1当量)于DCM中的溶液添加吡啶(2当量)和相应芳基磺酰氯(1.1当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用盐水洗涤，浓缩有机层，并且将残余物通过硅胶色谱法进行纯化以获得所需产物。
N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)异喹啉-5-磺酰胺(43)
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.21(s,1H),9.47(s,1H),8.73(d,J＝6.2Hz,1H),8.39-8.57(m,3H),7.77-7.96(m,3H),7.47-7.73(m,4H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),6.62(s,1H),4.56(br.s.,1H),4.28(br.s.,1H),4.21(br.s.,2H)。LC-MS:m/z 528.5(M+H)+。
N-(4-(3-羟基-3-(3-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-5-磺酰胺(44)
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:8.99-9.08(m,2H),8.23-8.48(m,2H),7.74-7.86(m,2H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.50-7.65(m,6H),7.22(s,1H),7.04(d,J＝8.5Hz,2H),4.47(br.s.,4H)。LC-MS:m/z 528.5(M+H)+。
实施例14：
方案9.一般程序6。
步骤A：3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(J2)
将Boc-3-氮杂环丁烷(10g，58.47mmol)置于干燥THF(60mL)中。将混合物冷却至-78℃并且搅拌15分钟。在-78℃下在氮气氛下经15分钟添加苄基氯化镁(17.64g，116.9mmol)2M于THF中的溶液。允许所得混合物升温至室温并且搅拌4小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将反应混合物用饱和氯化铵溶液(500mL)淬灭并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。使用硅胶(100-200目)和己烷中的10％EtOAc通过柱色谱法纯化粗产物以得到呈无色油状的所需化合物J2。产率：-7g(45.31％)。
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.36-7.29(m,3H),7.26-7.21(m,2H),3.98(d,2H,J＝9.2Hz),3.80(d,2H,J＝9.2Hz),3.04(s,2H),1.37(s,9H)。
步骤B：3-苄基氮杂环丁烷-3-醇(J3)
将化合物J2(1当量)溶解于DCM中并且冷却至0℃。在0℃下添加TFA(10当量)，并且将反应混合物在室温下搅拌3-4小时直到LCMS和TLC确认反应完成。将反应混合物浓缩至干，用DCM研磨3至4次并且用正戊烷洗涤以得到呈灰白色固体的化合物J3的所需TFA盐。产率70％。
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.40(bs,1H),8.81(bs,1H),730-7.21(m,5H),4.53-4.48(m,2H),4.07-4.06(m,2H),2.24(s,2H)。
步骤C：在室温下在氮气氛下向化合物J4(1当量)于DCM和吡啶的混合物(1:1)中的溶液缓慢添加磺酰氯(1.2当量)。允许所得混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将粗混合物用DCM稀释并且用水、接着1N HCl洗涤。然后将所得有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将所得固体用二乙醚研磨以得到所需化合物J5。
J5a：2-氟-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸甲酯
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.03(s,1H),9.10-9.09(m,1H),8.52-8.50(m,2H),8.31(d,1H,J＝8Hz),7.79-7.61(m,3H),7.02-6.95(m,2H),4.16(q,2H,J＝7.2Hz),1.20(t,3H,J＝6.8Hz)。LC-MS:m/z 375.0
J5b：3-氟-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸甲酯
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.23(bs,1H),9.04(dd,1H,J＝1.6Hz),8.54(dd,1H,J＝1.6Hz&1.2Hz),8.35-8.30(m,2H),7.74-7.70(m,2H),7.64(m,1H),7.53-7.48(m,2H),4.22(q,2H,J＝6.8Hz),1.24(t,3H,J＝6.8Hz)。LC-MS:m/z 375.0
J5c：3-甲基-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸甲酯
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.50(bs,1H),9.12-9.11(m,1H),8.55(d,1H,J＝8.4Hz),8.30(d,2H,J＝6.8Hz),7.75-7.69(m,2H),7.26(d,2H,J＝8.8Hz),4.20(q,2H,J＝7.2Hz),2.09(s,3H),1.22(t,3H,J＝7.2Hz)。LC-MS:m/z 370.9
J5d：2-甲氧基-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸甲酯
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.6(bs,1H),9.12-9.11(m,1H),8.50(t,2H,J＝7.6Hz),8.29(d,1H,J＝8Hz),7.77-7.68(m,2H),7.42(d,1H,J＝8.4Hz),6.86(s,1H),6.69(d,1H,J＝8.4Hz),3.63(s,3H),3.61(s,3H)。LC-MS:m/z 372.9
步骤D：向化合物J5(1当量)于THF和水(1:1)中的溶液添加LiOH.H2O(5当量)。允许所得混合物在80℃下搅拌15小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，用EtOAc洗涤粗混合物。将水层用柠檬酸酸化并且过滤。然后将所得固体用水洗涤并且在减压下与甲苯共沸以得到呈白色固体的化合物J6。
J6a：2-氟-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸
1H NMR(DMSO-d6)δ:12.69(bs,1H),10.98(bs,1H),9.109-9.100(m,1H),8.53-8.49(m,2H),8.32-8.27(m,1H),7.79-7.69(m,2H),7.61(t,1H,J＝8.4Hz),6.99-6.93(m,2H)。LC-MS:m/z 347.1
J6b：3-氟-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸
1H NMR(DMSO-d6)δ:12.94(bs,1H),10.14(bs,1H),9.059-9.052(m,1H),8.54(d,1H,J＝8.4Hz),8.32(t,2H,J＝8.4Hz),7.72(t,2H,J＝6.8Hz),7.62(d,1H,8.4Hz),7.51-7.45(m,2H)。LC-MS:m/z 347.1
J6c：3-甲基-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.65(bs,1H),9.12-9.11(m,1H),8.55(d,1H,J＝8Hz),8.30(d,2H,J＝7.6Hz),7.75-7.69(m,2H),7.60-7.54(m,2H),7.19(d,1H,J＝8Hz),2.08(s,3H)。LC-MS:m/z 342.9
J6d：2-甲氧基-4-(喹啉-8-磺酰胺基)苯甲酸
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.39(bs,2H),9.12-9.11(m,1H),8.51-8.46(m,2H),8.28(d,1H,J＝8Hz),7.75-7.68(m,2H),7.39(d,1H,J＝8.4Hz),6.81(s,1H),6.65(d,1H,J＝8.4Hz),3.59(s,3H)。LC-MS:m/z358.9
步骤E：在室温下在氮气氛下向相应化合物J6(1当量)于DMF中的溶液添加化合物J3(3当量)，接着添加DIPEA(10当量)和HATU(1.5当量)。允许所得混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将粗混合物用EtOAc稀释并且用水、接着饱和碳酸氢钠洗涤。然后将所得有机层分离并且经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。使用硅胶(100-200目)和DCM中的0.5％MeOH通过柱色谱法纯化所得粗产物以得到所需产物。
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-3-氟苯基)喹啉-8-磺酰胺(45)
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.10(bs,1H),8.47-8.39(m,2H),8.18(d,1H,J＝8.4Hz),7.70-7.62(m,2H),7.27-7.18(m,5H),7.03-6.96(m,2H),4.60-4.58(m,2H),4.27-4.11(m,2H),2.26(s,2H)。LC-MS:m/z492.1。
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-2-氟苯基)喹啉-8-磺酰胺(46)
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.08-9.07(m,1H),8.44-8.39(m,2H),8.20(d,1H,J＝8Hz),7.69-7.63(m,3H),7.36(d,1H,J＝8.4Hz),7.27-7.15(m,6H),4.63(d,1H,J＝10.8Hz),4.40(d,1H,J＝9.6Hz),4.28(d,1H,J＝10.4Hz),2.81(s,2H),2.30(s,3H)。LC-MS:m/z 492.1。
实施例15.
方案10.一般程序7。
步骤A：4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基氨基甲酸叔丁酯(K3)
在室温下在氮气氛下向化合物K1(1当量)于DMF中的溶液添加化合物K2(3当量)，接着添加DIPEA(10当量)和HATU(1.5当量)。允许所得混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将粗混合物用EtOAc稀释并且用水、接着饱和碳酸氢钠洗涤。然后将所得有机层分离、经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗产物。使用硅胶(100-200目)和DCM中的0.5％MeOH通过柱色谱法纯化粗产物以得到所需化合物K3。LC-MS:m/z 383.1
步骤B：(4-氨基苯基)(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(K4)
将化合物K3(1当量)溶解于DCM中并且冷却至0℃。然后在0℃下添加TFA(10当量)，并且将反应混合物在室温下搅拌3-4小时直到LCMS和TLC确认反应完成。将反应混合物浓缩至干，用DCM研磨3至4次并且用正戊烷洗涤以得到呈浅棕色固体的化合物K4的所需TFA盐。
1H NMR(DMSO-d6)δ:7.44(d,2H,J＝8Hz),7.32-7.16(m,5H),6.66(d,2H,J＝8.4Hz),4.80(m,2H),4.37(m,2H),2.29(s,2H).LC-MS:m/z 283.1。
步骤C：将化合物K4(1当量)置于吡啶(10当量)中并且在室温下搅拌30分钟。然后将反应混合物冷却至0℃，并且添加磺酰氯(ArSO2Cl)(2当量)。允许所得反应混合物升温至室温并且搅拌15小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将混合物用水淬灭并且用DCM萃取。将合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到作为TFA盐的所需产物。将最终磺酰胺目标的TFA盐溶解于EtOAc中，并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。将合并的有机层再次用NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以得到呈灰白色固体的所需目标。
通过实施例15制备以下化合物。
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)异喹啉-5-磺酰胺(48)
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.17(bs,1H),9.45(s,1H),8.71(d,1H,J＝6Hz),8.49(d,1H,J＝6.4Hz),8.43(d,1H,J＝8Hz),7.82(t,1H,J＝7.6Hz),7.49(d,2H,J＝8.4Hz),7.26(d,1H,J＝7.6Hz),7.20-7.13(m,5H),7.08(d,1H,J＝8Hz),6.10(s,1H),4.73(d,1H,J＝8.8Hz),4.48(d,1H,J＝9.6Hz),4.28(d,1H,J＝8.8Hz),4.13(d,1H,J＝10Hz),2.24(s,2H)。LC-MS:m/z 474.1
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-2-氯苯磺酰胺(49)
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.03(bs,1H),8.10(d,1H,J＝7.6Hz),7.64-7.63(m,1H),7.54(d,4H,J＝8.4Hz),7.30-7.11(m,6H),6.12(s,1H),4.79(d,1H,J＝8.8Hz),4.50(d,1H,J＝10Hz),4.16(d,1H,J＝10.8Hz),2.26(s,2H)。LC-MS:m/z 457.1
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-4-(三氟甲基)苯磺酰胺(50)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.91(s,1H),8.15-7.90(m,4H),7.58(d,2H,J＝8.4Hz),7.28(d,1H,J＝6.8Hz),7.24-7.05(m,5H),6.13(s,1H),4.79(d,1H,J＝8.8Hz),4.52(d,1H,J＝10.8Hz),4.34(d,1H,J＝8.8Hz),4.17(d,1H,J＝10.4Hz),2.26(s,2H)。LC-MS:m/z 491.1
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-2-(三氟甲基)苯磺酰胺(51)
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.00(bs,1H),8.12(d,1H,J＝7.2Hz),8.02(d,1H,J＝7.2Hz),7.91-7.80(m,2H),7.59(d,2H,J＝8.4Hz),7.29(d,1H,J＝7.2Hz),7.22-7.10(m,5H),6.14(s,1H),4.79(d,1H,J＝8.8Hz),4.52(d,1H,J＝10.8Hz),4.34(d,1H,J＝8.8Hz),4.17(d,1H,J＝10.4Hz),2.27(s,2H)。LC-MS:m/z 491.1
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-2,3-二氯苯磺酰胺(52)
1H NMR(DMSO-d6)δ:11.18(bs,1H),8.09(d,1H,J＝6.8Hz),7.49(d,1H,J＝8Hz),7.59-7.55(m,3H),7.30-7.12(m,6H),4.79(d,1H,J＝8.8Hz),4.51(d,1H,J＝10.8Hz),4.34(d,1H,J＝8.4Hz),4.16(d,1H,J＝10.4Hz),2.26(s,2H)。LC-MS:m/z 491.1
N-(4-(3-苄基-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-磺酰胺(53)
1H NMR(DMSO-d6)δ:10.46(s,1H),7.55(d,2H,J＝8.4Hz),7.37-7.26(m,2H),7.22-7.08(m,6H),6.25-6.05(m,1H),4.80(d,1H,J＝8.4Hz),4.50(d,1H,J＝10.4Hz),4.34(d,1H,J＝9.2Hz),4.29-4.26(m,4H),4.16(d,1H,J＝10.8Hz)。LC-MS:m/z 481.1。
实施例16.
方案10.化合物54的制备。
步骤A：3-((6-氟吡啶-2-基)甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(M2)
将2-氟-6-甲基吡啶(1当量)置于干燥THF中并且冷却至-78℃。在-78℃下在氮气氛下经15分钟将正丁基锂(1.2当量)2.5M于己烷中的溶液添加至上述反应混合物并且在相同温度下搅拌30分钟。然后将反应混合物在-5℃下搅拌30分钟并且冷却至-78℃。在15分钟的一段时间内添加3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.9当量)于THF中的溶液。然后允许所得反应混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将混合物用饱和氯化铵溶液(500mL)淬灭并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。使用硅胶(100-200目)和己烷中的10％EtOAc通过柱色谱法纯化粗产物以得到呈浅黄色油状的所需产物M2。
1H NMR(CHLOROFORM-d)δ:7.80-7.74(m,1H),7.11(d,1H,J＝8Hz),6.85(d,1H,J＝8Hz),5.27(bs,1H),3.90(d,2H,J＝9.6Hz),3.79(d,2H,J＝9.6Hz),3.20(s,2H),1.43(s,9H)。LC-MS:m/z283.1。
步骤B：3-((6-氟吡啶-2-基)甲基)氮杂环丁烷-3-醇(M3)
将化合物M2(1当量)溶解于DCM中并且冷却至0℃，接着在0℃下添加TFA(10当量)。然后将反应混合物在室温下搅拌3-4小时直到LCMS和TLC确认反应完成。将反应混合物浓缩至干，用DCM研磨3至4次并且用正戊烷洗涤以得到呈无色油状的化合物M3的TFA盐。粗产物不经纯化直接用于下一步骤。LC-MS:m/z 183.1
步骤C：在室温下在氮气氛下向化合物M3(1当量)于DMF中的溶液添加中间体1(3当量)，接着添加DIPEA(10当量)和HATU(1.5当量)。允许所得混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应的进展。在反应完成之后，将粗混合物用EtOAc稀释并且相继用水和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。然后将所得有机层分离，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗产物，使用硅胶(100-200目)和DCM中的0.5％MeOH通过柱色谱法纯化所述粗产物以得到所需产物。
N-(4-(3-((6-氟吡啶-2-基)甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(54)
1H NMR(DMSO-d6)δ:9.12-9.11(s,1H),8.47(dd,2H,J＝8.4Hz&J＝7.2),8.28(d,1H,J＝7.2Hz),7.87-7.69(m,3H),7.33(d,2H,J＝8.4Hz),7.20(d,1H,J＝7.2Hz),7.12(d,2H,J＝7.2Hz),4.29(d,1H,J＝8Hz),4.11(d,1H,J＝9.2Hz),3.99(d,1H,J＝8.4Hz),3.74(d,1H,J＝9.6Hz),2.99(s,2H)。LC-MS:m/z 493.2
还通过实施例16制备以下化合物。
化合物55(使用2-甲基吡啶作为起始材料)
N-(4-(3-羟基-3-(吡啶-2-基甲基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(55)
1H NMR(DMSO-d6):δ10.53(bs,1H),9.12-.911(m,1H),8.47(dd,2H,J＝8Hz&J＝7.2Hz),8.39-8.38(m,1H),8.28(d,1H,J＝8Hz),7.75-7.63(m,3H),7.32-7.10(m,6H),5.87(s,1H),4.28(d,1H,J＝7.2Hz),4.10(d,1H,J＝8.8Hz),3.98(d,1H,J＝7.6Hz),3.74-3.72(d,1H,J＝8.8Hz),3.02(s,2H)。LC-MS:m/z 475.2
化合物56(使用2,6-二甲基吡啶作为起始材料)
N-(4-(3-羟基-3-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)氮杂环丁烷-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺酰胺(56)
1H NMR(CDCl3):δ9.14-9.13(m,1H),8.52(s,1H),8.35-8.27(m,2H),8.02(d,1H,J＝8Hz),7.62-7.51(m,3H),8.4(d,2H,J＝8.4Hz),7.05-6.94(m,5H),4.18-4.16(m,1H),4.02-3.95(m,3H),2.80(s,2H),2.49(s,3H)。LC-MS:m/z 489.2。
虽然已经以此方式描述了几个实施方案的几个方面，但应理解本领域的技术人员将容易地想到各种改变、修改和改进。这类改变、修改和改进意图是本公开的一部分，并且意图在本发明的精神和范围内。因此，前述说明和附图仅作为举例。

Claims (31)

1.一种式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A是芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基是任选取代的，并且所述芳基或杂芳基任选地稠合至任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
X选自–NH-S(O)2-、-N(烷基)-S(O)2-、-S(O)2-NH-以及–S(O)2-N(烷基)-；
R1b是C2-8烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基或杂芳烷基，其中每个芳基是取代的，并且每个C2-8烷基、环烷基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基是任选取代的；
每个R2独立地选自卤代基和卤代烷基；
每个R4独立地选自烷基、烷氧基、卤代烷基和羟基；
n是0、1或2；以及
m是0、1或2；
其中当R1b是未取代的苄基，X是–NH-S(O)2-并且A是喹啉-8-基时；则n是1。
2.如权利要求1所述的化合物，其中A是任选取代的双环杂芳基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中A是任选取代的喹啉-8-基。
4.如权利要求2所述的化合物，其中A是任选取代的异喹啉-5-基
5.如权利要求1所述的化合物，其中A是任选取代的单环芳基(例如，任选取代的苯基)。
6.如权利要求1所述的化合物，其中A是在形成任选取代的杂环基或碳环基环的相邻碳上被两个取代基取代的苯基。
7.如权利要求1所述的化合物，其中X是–NH-S(O)2-或–N(烷基)-S(O)2-。
8.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)中所列出的结构或其药学上可接受的盐：
9.如权利要求1或8所述的化合物，其中R1b是任选取代的芳烷基。
10.如权利要求1或8所述的化合物，其中R1b是任选取代的杂芳烷基。
11.如权利要求1或8所述的化合物，其中R1b是任选取代的C2-8烷基。
12.如权利要求1或8所述的化合物，其中R1b是环烷基或环烷基烷基。
13.如权利要求1-12中任一项所述的化合物，其选自以下化合物中的任一种：
14.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
15.一种调节有需要的受试者中的PKM2活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求14所述的药物组合物。
16.一种治疗有需要的受试者中与PKM2活性相关的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求14所述的药物组合物。
17.如权利要求14所述的药物组合物在制造用于调节PKM2活性的药剂中的用途。
18.如权利要求14所述的药物组合物在制造用于治疗与PKM2活性相关的癌症的药剂中的用途。
19.一种用于增加有需要的红细胞(RBC)的寿命的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或(2)如权利要求14所述的组合物相接触。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物直接体外添加至全血或压积细胞中。
21.如权利要求19所述的方法，其中将所述药物组合物施用至有需要的受试者。
22.一种用于调控有需要的血液中的2,3-二磷酸甘油酸水平的方法，所述方法包括使血液与有效量的(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物；或(2)如权利要求14所述的组合物相接触。
23.一种用于治疗遗传性非球形红细胞溶血性贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物；或(2)如权利要求14所述的药学上可接受的组合物。
24.一种用于治疗镰状细胞贫血的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物；或(2)如权利要求14所述的药学上可接受的组合物。
25.如权利要求14所述的药物组合物用于调节受试者中的PKM2活性的用途。
26.如权利要求14所述的药物组合物用于治疗受试者中与PKM2活性相关的癌症的用途。
27.(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或(2)如权利要求14所述的组合物用于增加受试者中的红细胞(RBC)的寿命的用途。
28.如权利要求27所述的用途，其中所述化合物直接体外添加至全血或压积细胞中。
29.(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或(2)如权利要求14所述的组合物用于调节受试者中的2,3-二磷酸甘油酸水平的用途。
30.(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或(2)如权利要求14所述的组合物用于治疗受试者中的遗传性非球形红细胞溶血性贫血的用途。
31.(1)如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或(2)如权利要求14所述的组合物用于治疗受试者中的镰状细胞贫血的用途。
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