CN105339356B

CN105339356B - 酞嗪衍生物

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Publication number: CN105339356B
Application number: CN201480036171.8A
Authority: CN
Inventors: H-P.布赫施塔勒; D.多施; C.埃斯达尔; B.吕特纳
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2013-06-24
Filing date: 2014-05-30
Publication date: 2018-10-19
Anticipated expiration: 2034-05-30
Also published as: SG11201510584WA; CA2916557C; PL3013804T3; US9751842B2; HK1221468A1; CA2916557A1; LT3013804T; EP3013804A1; ES2623704T3; EP3013804B1; HRP20170291T1; JP2016523272A; US20160318876A1; RS55943B1; CN105339356A; PT3013804T; IL243252A0; AU2014301669B2; MX369393B; KR20160023854A

Abstract

式I化合物其中R¹、X和n具有权利要求1中所指的含义，为端锚聚合酶的抑制剂，并可尤其用于治疗疾病诸如癌症、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

Description

酞嗪衍生物

发明背景

本发明的目的在于发现具有有价值性质的新颖化合物，特别是可用于制备药物的那些化合物。

本发明涉及抑制端锚聚合酶(Tankyrase, TANK)和聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-1的活性的喹唑酮衍生物。因此本发明的化合物可用于治疗疾病例如癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。本发明还提供用于制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药物组合物和利用包含这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。

核酶聚(ADP-核糖)聚合酶-1 (PARP-1)是PARP酶家族的成员。该不断增加的酶家族由下列组成：PARP例如PARP-1、PARP-2、PARP-3和Vault-PARP；和端锚聚合酶(TANK)例如TANK-1和TANK-2。PARP还称为聚(腺苷5'-二磷酸-核糖)聚合酶或PARS (聚(ADP-核糖)合成酶)。

对于有丝分裂纺锤体-相关的聚(ADP-核糖)的聚合，TANK-1似乎是必需的。TANK-1的聚(ADP-核糖)化活性对于纺锤体两极性的准确形成和维持可能是至关重要的。此外，TANK-1的PARP活性已证明对于分裂后期之前的正常端粒分离而言是必需的。端锚聚合酶PARP活性的干扰导致有丝分裂异常，这引起可能由于纺锤体检查点激活所致的瞬时细胞周期停止，接着细胞死亡。端锚聚合酶的抑制因此预期对增殖肿瘤细胞具有细胞毒素作用(WO2008/107478)。

在临床癌症研究中，PARP抑制剂由M. Rouleau等在Nature Reviews, Volume 10,293-301中描述(表2，第298页)。

根据Horvath和Szabo (Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181)的综述，最近的研究证实，PARP抑制剂提高癌症细胞死亡，主要是由于它们在各种水平上干扰DNA修复。更近的研究还已证实，通过抑制生长因子表达或通过抑制生长因子诱导的细胞增殖反应，PARP抑制剂抑制血管发生。这些发现可能还暗示了PARP抑制剂的体内抗癌症作用方式。

Tentori等(Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133)的研究也证明，PARP抑制剂废除VEGF或者胎盘生长因子诱导的迁移并阻止基于细胞的系统中细管样网络的形成，并损害体内血管发生。研究还证实，生长因子诱导的血管发生在PARP-1敲除小鼠中缺乏。研究结果提供靶向PARP以抗血管发生的证据，为PARP抑制剂在癌症治疗中的用途增加新的治疗暗示。

众所周知，保守信号转导途径中的缺陷在基本上所有癌症的起源和行为中起关键作用(E.A.Fearon, Cancer Cell, Vol. 16, Issue 5, 2009, 366-368)。Wnt途径是抗-癌症疗法的靶标。Wnt途径的关键特征是由β-连环蛋白破坏复合物所致的β-连环蛋白的受调节的蛋白水解(降解)。蛋白质像WTX、APC或Axin参与该降解过程。β-连环蛋白的正确降解对避免在许多癌症中观察到的Wnt途径的不适当激活而言是重要的。端锚聚合酶抑制Axin的活性，并因此抑制β-连环蛋白的降解。因此，端锚聚合酶抑制剂增加β-连环蛋白的降解。期刊Nature中的一篇论文不仅为调节Wnt信号转导的蛋白质提供重要的新观点，而且还支持经由小分子拮抗β-连环蛋白水平和定位的途径(Huang等, 2009; Nature, Vol 461, 614-620)。化合物XAV939抑制DLD-1-癌症细胞的生长。他们发现XAV9393通过增加AXIN1和AXIN2蛋白的水平而阻断Wnt-刺激的β-连环蛋白聚集。该作者后续的工作确定了XAV939通过抑制端锚聚合酶1和2 (TNKS1和TNKS2)而调节AXIN水平，这两者都是聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)蛋白家族的成员(S.J. Hsiao等, Biochimie 90, 2008, 83-92)。

已经发现根据本发明的化合物及其盐具有非常有价值的药理学性质，同时是非常耐受的。

本发明特别涉及抑制端锚聚合酶1和2的式I化合物，包含这些化合物的组合物及其用于治疗TANK诱发的疾病和症状(complaint)的方法。

所述式I化合物另外可用于分离和研究TANK的活性或表达。另外，它们特别适合用于与TANK活性失调或扰乱有关的疾病的诊断方法。

宿主或患者可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别为人类；啮齿动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型具有实验研究的意义，提供治疗人类疾病的模型。

特定细胞对于用根据本发明的化合物治疗的敏感性可通过体外试验测定。通常，将细胞的培养物与以各种浓度的根据本发明的化合物混合足以允许活性剂(例如抗IgM)诱发细胞反应(例如表面标志物的表达)的一段时间，通常约1小时-1周。体外试验可使用来自血液或来自活检样品的培养细胞进行。所表达的表面标志物的量通过流式细胞术使用识别该标志物的特异性抗体来评价。

剂量根据所使用的具体化合物、具体疾病、患者状况等而不同。治疗剂量典型地足以显著减少目标组织中不想要的细胞群体，同时维持患者的成活力。该治疗通常持续到出现显著的减少，例如细胞负荷减少至少约50%，且可持续到在体内基本上不再检出不想要的细胞。

现有技术

E. Wahlberg等人，Nature Biotechnology (2012)，30(3)，283。

M. Elagawany等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 23 (2013)2007-2013中描述了化合物

。

该化合物对抑制端锚聚合酶没有活性。

其他端锚聚合酶抑制剂描述在WO 2013/012723、WO 2013/010092和WO 2013/082217中。

发明概述

本发明涉及式I化合物

其中

R¹ 表示H、Hal、CH₃、OCH₃或CH₂OH，

X 表示Ar或Cyc，

Ar 表示苯基、联苯基或萘基，其各自是未取代的或被Hal、NO₂、CN、A、[C(R²)₂]_pOR²、S(O)_mR²、[C(R²)₂]_pN(R²)₂、[C(R²)₂]_pCOOR²、[C(R²)₂]_pCON(R²)₂、[C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂、NR²COR²、NR²SO₂R²、NR²CON(R²)₂、NHCOOA、O[C(R²)₂]_nN(R²)₂、CHO和/或COA一、二或三取代，

R² 表示H或A，

A 表示具有1-10个C-原子的非支链或支链烷基，其中两个相邻的碳原子可形成双键和/或一个或两个非相邻的CH-和/或CH₂-基团可被N-、O-和/或S-原子替代和其中1-7个H-原子可被F、Cl和/或OH替代，

Cyc 表示具有3、4、5、6或7个C-原子的环烷基，

Hal 表示F、Cl、Br或I，

m 表示0、1或2，

n 表示1、2或3，

p 表示0、1、2、3或4，

及其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物。

本发明还涉及这些化合物的光学活性形式(立体异构体)、对映异构体、外消旋体、非对映异构体及水合物和溶剂合物。

此外，本发明涉及式I化合物的药学上可接受的衍生物。

术语化合物的溶剂合物用于指惰性溶剂分子加合至化合物上，其由于它们相互的吸引力而形成。溶剂合物为例如一水合物或二水合物或醇盐。

应理解，本发明还涉及盐的溶剂合物。

术语药学上可接受的衍生物用以指例如根据本发明的化合物的盐以及所谓的前药化合物。

如在本文中所用且除非另外说明，术语“前药”是指式I化合物的衍生物，其在生物条件下(体外或体内)可水解、氧化或另外反应以提供活性化合物，特别是式I化合物。前药的实例包括但不限于包括可生物水解部分的式I化合物的衍生物和代谢物，所述可生物水解部分例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。在某些实施方案中，具有羧基官能团的化合物的前药为羧酸的低级烷基酯。所述羧酸酯适宜通过使在分子上存在的任何羧酸部分酯化而形成。前药典型地使用众所周知的方法来制备，例如Burger's MedicinalChemistry and Drug Discovery，第6版(Donald J. Abraham编，2001年，Wiley)和Designand Application of Prodrugs (H.Bundgaard编，1985，Harwood Academic PublishersGmfh)中描述的那些方法。

表述“有效量”表示在组织、系统、动物或人类中引起例如研究人员或医师所探求或希望的生物学或医学反应的药物或药学活性成分的量。

另外，表述“治疗有效量”表示与没有接收该量的相应个体相比较具有以下结果的量：

改善治疗、治愈、预防或消除疾病、综合征、病况、症状、病症或副作用或者还有降低疾病、症状或病症的进展。

表述“治疗有效量”还涵盖有效增加正常生理功能的量。

本发明还涉及所述式I化合物的混合物例如两种非对映异构体的混合物(例如以比率1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000)的用途。

这些特别优选是立体异构化合物的混合物。

“互变异构体”是指彼此处于平衡的化合物的异构形式。所述异构形式的浓度将取决于化合物所存在的环境且可视例如该化合物是固体还是在有机或水溶液中而不同。

本发明涉及式I的化合物和其盐，并涉及制备式I的化合物和其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体的方法，其特征在于

使式II化合物

其中R¹具有权利要求1中所指的含义，

与

式III化合物反应

其中X和n具有权利要求1中所指的含义，

和L表示Cl、Br、I或游离或反应性官能修饰的OH基团，

和/或

将式I的碱或酸转化成其盐之一。

在上文和下文中，基团R¹和Ar具有对式I所指的含义，除非另外明确地说明。

A表示烷基，其是非支链(线性)或支链的，并具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个C原子。A优选表示乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，此外还表示戊基、1-、2-或3-甲基丁基、1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基，此外优选表示，例如，三氟甲基。

A非常特别优选表示具有2、3、4、5或6个C原子的烷基，优选乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或1,1,1-三氟乙基。

此外，A优选表示CH₂OCH₃、CH₂CH₂OH或CH₂CH₂OCH₃。

R¹优选表示H、Hal或CH₃。

R²优选表示H、甲基、乙基、丙基、丁基或三氟甲基。

Ar优选表示苯基，其是未取代的或被Hal、NO₂、CN、A和/或[C(R²)₂]_pOR²一、二或三取代。

p优选表示0、1或2。

Hal优选表示F、Cl或Br，以及I，特别优选F或Cl。

Cyc优选表示环戊基或环己基。

在本发明全文中，出现多于一次的所有基团可以是相同的或不同的，即是彼此独立的。

式I化合物可以具有一个或多个手性中心并因此可以多种立体异构形式出现。式I涵盖所有这些形式。

因此，本发明特别涉及式I化合物，其中至少一个所述基团具有以上所指的优选含义之一。化合物的一些优选的基团可以通过以下的子式Ia至Id表示，其符合式I和其中未更详细地指定的基团具有对式I指出的含义，但是其中

在Ia中 R¹表示H、Hal或CH₃；

在Ib中 Ar表示苯基，其是未取代的或被Hal、NO₂、CN、A和/或 [C(R²)₂]_pOR²一、二或三取代；

在Ic中 A表示具有1-6个C-原子的非支链或支链烷基，其中1-5个H-原子可被F替代；

在Id中 R¹ 表示H、Hal或CH₃，

Ar 表示苯基，其是未取代的或被Hal、NO₂、CN、A和/或[C(R²)₂]_pOR²一、二或三取代；

R² 表示H或A，

A 表示具有1-6个C-原子的非支链或支链烷基，其中1-5个H-原子可被F替代；

Hal 表示F、Cl、Br或I，

p 表示0、1、2、3或4

此外，式I化合物以及制备它们的起始材料通过本身已知的方法，如在文献中描述的(例如在标准教科书中，诸如Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie[Methodsof Organic Chemistry]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart)方法制备，确切地说在已知的和适用于所述反应的反应条件下。此处亦可以利用本文未更详细地提及的本身已知的变体。

式II和III的起始化合物是通常已知的。然而，如果它们是新的，它们可通过本身已知的方法制备。

式I化合物可优选通过使式II化合物与式III化合物反应来获得。

在式III化合物中，L优选表示Cl、Br、I或游离或反应性修饰的OH基团，例如，活性酯、咪唑烷(imidazolide)或具有1-6个C原子的烷基磺酰基氧基(优选甲基磺酰基氧基或三氟甲基磺酰基氧基)或具有6-10个C原子的芳基磺酰基氧基(优选苯基-或对甲苯基磺酰基氧基)。

该反应通常在酸结合剂，优选有机碱，诸如DIPEA、三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉的存在下进行。

添加碱金属或碱土金属氢氧化物、碱金属或碱土金属的碳酸盐或碳酸氢盐或其他弱酸盐，所述碱金属或碱土金属优选钾、钠、钙或铯,也可以是有利的。

取决于所用的条件，反应时间在数分钟至14天，反应温度为约-30°至140°，通常-10°至90°，特别是约0°至约70°。

合适的惰性溶剂的实例是烃，诸如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯代烃，诸如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，诸如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃(THF)或二氧杂环己烷；二醇醚，诸如乙二醇单甲基或单乙基醚、乙二醇二甲基醚(二甘醇二甲醚)；酮，诸如丙酮或丁酮；酰胺，诸如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，诸如乙腈；亚砜，诸如二甲亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，诸如甲酸或乙酸；硝基化合物，诸如硝基甲烷或硝基苯；酯，诸如乙酸乙酯，或所述溶剂的混合物。

特别优选乙腈、1,2-二氯乙烷、二氯甲烷和/或DMF。

药学上的盐及其他形式

根据本发明的所述化合物可以其最终非盐形式使用。另一方面，本发明还涵盖以其药学上可接受的盐形式的这些化合物的用途，所述药学上可接受的盐可通过本领域已知的方法得自各种有机和无机的酸和碱。所述式I化合物的药学上可接受的盐形式大部分通过常规方法制备。如果所述式I化合物含有羧基，则其合适盐中的一种可通过使所述化合物与合适的碱反应得到相应的碱加成盐来形成。所述碱例如为碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱，例如哌啶、二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。同样包括所述式I化合物的铝盐。在式I的某些化合物的情况下，酸加成盐可通过用以下药学上可接受的有机和无机酸处理这些化合物来形成：例如卤化氢，例如氯化氢、溴化氢或碘化氢；其它无机酸及其相应盐，例如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等；和烷基和单芳基磺酸盐，例如乙烷磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；及其它有机酸及其相应盐，例如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。因此，式I化合物的药学上可接受的酸加成盐包括以下：乙酸盐、已二酸盐、海藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)(苯磺酸盐(besylate))、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、二氢磷酸盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、甲酸盐、半乳糖二酸盐(galacterate)(来自粘酸)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲烷磺酸盐、甲基苯甲酸盐、单氢磷酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这不代表限制。

另外，根据本发明的化合物的碱盐包括铝、铵、钙、铜、铁(III)、铁(II)、锂、镁、锰(III)、锰(II)、钾、钠及锌盐，但这并非意欲代表限制。在上述盐之中，优选铵、碱金属钠和钾盐及碱土金属钙和镁盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的所述式I化合物的盐包括以下的盐：伯、仲和叔胺；被取代的胺，还包括天然存在的被取代的胺；环胺；和碱离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯普鲁卡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺(苄星青霉素)、二环己胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、利多卡因(lidocaine)、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羟甲基)甲胺(缓血酸胺)，但这并非意欲代表限制。

含有碱性含氮基团的本发明化合物可使用例如以下试剂季胺化：(C₁-C₄)烷基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物；二(C₁-C₄)烷基硫酸盐，例如二甲基、二乙基和二戊基硫酸盐；(C₁₀-C₁₈)烷基卤化物，例如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆蔻基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；和芳基(C₁-C₄)烷基卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴。根据本发明的水溶性和油溶性化合物两者都可使用所述盐制备。

优选的上述药学上的盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和缓血酸胺，但这并非意欲代表限制。

特别优选盐酸盐、二盐酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、硫酸盐和琥珀酸盐。

式I碱性化合物的酸加成盐通过使游离碱形式与足够量的所需酸接触，促使以常规形式形成所述盐来制备。所述游离碱可通过使所述盐形式与碱接触并以常规方式分离所述游离碱而再生。所述游离碱形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与其相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离碱形式一致。

如所提到的，式I化合物的药学上可接受的碱加成盐用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成。优选的金属为钠、钾、镁和钙。优选的有机胺为N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普鲁卡因。

根据本发明的酸性化合物的碱加成盐通过使所述游离酸形式与足够量的所需要的碱接触，促使以常规方式形成所述盐来制备。所述游离酸可通过使所述盐形式与酸接触并以常规方式分离所述游离酸而再生。所述游离酸形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与其相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离酸形式一致。

如果根据本发明的化合物含有多于一个能够形成该类型的药学上可接受的盐的基团，则本发明还涵盖多重盐。典型的多重盐形式例如包括酒石酸氢盐、双乙酸盐、富马酸氢盐、二甲葡胺、二磷酸盐、二钠盐和三盐酸盐，但这并非意欲代表限制。

关于上文所述，可见在这一方面的表述“药学上可接受的盐”用以指活性成分，其包含以其盐中的一种的形式的式I化合物，特别是如果与活性成分的游离形式或先前使用的活性成分的任何其它盐形式相比较，该盐形式赋予活性成分改善的药代动力学性质。所述活性成分的药学上可接受的盐形式还可首次给该活性成分提供先前没有的所期望的药代动力学性质，且关于其在体内的治疗功效，甚至可以对该活性成分的药效学具有有利的影响。

同位素

另外意图使式I化合物包括其同位素标记形式。除了所述化合物的一个或多个原子已经被具有与通常自然存在的原子的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的一个或多个原子置换的事实之外，式I化合物的同位素标记形式与该化合物相同。易于购得且可通过众所周知的方法掺入式I化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。含有一个或多个上述同位素和/或其它原子的其它同位素的式I化合物、其前药或任一个的药学上可接受的盐意指为本发明的一部分。式I的同位素标记化合物可以许多有益的方式使用。例如，已经掺入例如放射性同位素如³H或¹⁴C的式I的同位素标记化合物适合用于药物和/或底物组织分布测定。这些放射性同位素，即氚(³H)和碳-14(¹⁴C)由于制备简单和可检测性优异而特别优选。将较重同位素如氘(²H)掺入式I化合物，由于该同位素标记化合物的较高代谢稳定性而具有治疗优势。较高的代谢稳定性直接转变为体内半衰期增加或剂量降低，其在大多数情况下将代表本发明的优选实施方案。式I的同位素标记化合物通常可通过进行在本文中的合成方案和相关描述、实施例部分和制备部分中公开的程序用易于得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物来制备。

出于通过一级动力学同位素效应操控化合物的氧化代谢的目的，氘(²H)也可掺入式I的化合物中。所述一级动力学同位素效应是由同位素核的交换引起的化学反应的速率改变，其继而由在该同位素交换之后共价键形成所必需的基态能量的改变引起。较重同位素的交换通常引起化学键的基态能量降低且因此引起速率限制性键断裂的速率降低。如果键断裂在沿多产物反应的坐标的鞍点区域中或该区域附近发生，则产物分布比会明显地改变。为解释目的：如果氘在不可交换的位置键合到碳原子，则k_M/k_D = 2-7的率差是典型的。如果将该率差成功地应用到对氧化敏感的式I化合物，则该化合物在体内的概况可剧烈改变并产生改善的药代动力学性质。

在发现和研发治疗剂时，本领域技术人员试图优化药代动力学参数，同时保持合乎需要的体外性质。假定具有差的药代动力学概况的许多化合物对氧化代谢敏感是合理的。目前可用的体外肝微粒体测定提供关于该类型的氧化代谢过程的有价值信息，这进而容许合理地设计经由抵抗所述氧化代谢而具有改善稳定性的式I的氘化化合物。由此获得在式I化合物的药代动力学概况方面的显著改善，且所述改善可根据体内半衰期(t/2)、在最大治疗效应下的浓度(C_max)、在剂量响应曲线下的面积(AUC)和F的增加；及根据清除率、剂量和材料成本的降低来定量地表述。

以下意欲对上文进行说明：将具有多个氧化代谢攻击的潜在位点如苄型氢原子和键合到氮原子的氢原子的式I化合物制备为一系列类似物，其中各种组合的氢原子被氘原子置换，以使得这些氢原子中的一些、大多数和全部被氘原子置换。半衰期测定能够实现有利且精确测定改进对氧化代谢的抵抗性的改善程度。以此方式，确定母体化合物的半衰期可由于该类型的氘-氢交换而延长到高达100%。

在式I化合物中的氘-氢交换还可用以实现起始化合物的代谢物谱的有利改进，以减少或消除不想要的毒性代谢物。例如，如果毒性代谢物经由氧化的碳-氢(C-H)键断裂产生，则可合理地假设氘化类似物将大大减少或消除不必要代谢物的产生，即使特定的氧化不是一个限速步骤。关于氘-氢交换的现有技术水平的另外信息可参见例如：Hanzlik等，J.Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990；Reider等，J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987；Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985；Gillette等，Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994；和Jarman等，Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993。

本发明另外涉及药物，所述药物包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的衍生物、溶剂合物及立体异构体，包括其所有比例的混合物，及任选的赋形剂和/或助剂。

药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式给予。所述单位可根据所治疗的病况、给药方法及患者的年龄、体重和状况而包含例如0.5 mg-1 g、优选1mg-700 mg、特别优选5 mg-100 mg的本发明化合物，或者药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式给予。优选的剂量单位制剂为包含如上指出的日剂量或份剂量的那些或其相应部分的活性成分。另外，该类型的药物制剂可使用在制药领域中通常已知的方法制备。

药物制剂可适合经由任何需要的合适方法，例如经口(包括颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括颊、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内)方法给予。所述制剂可使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与赋形剂或助剂组合来制备。

适合口服给予的药物制剂可作为独立单位给予，例如胶囊或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或泡沫食品；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。

因此，例如，在以片剂或胶囊形式口服给予的情况下，可将活性成分组分与经口、无毒且药学上可接受的惰性赋形剂例如乙醇、甘油、水等组合。粉剂通过将化合物粉碎成合适的小尺寸并将其与以类似方式粉碎的药用赋形剂例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘露糖醇混合来制备。同样可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和染料。

胶囊通过制备如上所述的粉末混合物并用其填充成型的明胶壳来生成。在填充操作之前可将例如以固体形式的高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或聚乙二醇的助流剂和润滑剂加到所述粉末混合物中。同样可加入例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠的崩解剂或增溶剂以改善服用胶囊之后的药物利用度。

另外，如果需要或必需，则同样可将合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料掺入所述混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制造的甜味剂、天然和合成橡胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。所述崩解剂包括(而不受此限制)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。所述片剂通过例如制备粉末混合物、造粒或压干所述混合物、加入润滑剂和崩解剂并压制全部混合物以给出片剂来配制。粉末混合物通过混合以合适方式粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质和任选粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；溶解延缓剂如石蜡；吸收加速剂如季盐；和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙来制备。所述粉末混合物可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚胶浆或纤维素或聚合物材料的溶液将其润湿并挤压穿过筛网来造粒。作为造粒的替代，可使所述粉末混合物穿过制片机，给出不均匀形状的结块，将其破碎以形成颗粒剂。所述颗粒剂可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油润滑以免粘住片剂铸模模具。随后将润滑的混合物压制以给出片剂。根据本发明的化合物也可与自由流动的惰性赋形剂组合且随后直接压制给出片剂而不进行造粒或压干步骤。可存在由虫胶封闭层、糖或聚合物材料的层和石蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可将染料加到这些涂层中以能够区分开不同的剂量单位。

口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以剂量单位形式制备，以使得给定的量包含预定量的所述化合物。糖浆可通过将化合物溶解于具有合适矫味剂的水溶液中来制备，而酏剂使用无毒醇溶媒制备。混悬剂可通过将所述化合物分散在无毒溶媒中来配制。同样可加入增溶剂和乳化剂，例如乙氧化异十八醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚；防腐剂；调味添加剂，例如薄荷油；或天然甜味剂或糖精；或其他人工甜味剂等。

如果需要，可将用于口服给药的剂量单位制剂封装在微囊中。所述制剂还可以延迟释放或阻释方式来制备，例如通过将微粒材料涂布或包埋在聚合物、蜡等中。

式I化合物及其药学上的盐、互变异构体和立体异构体还可以脂质体递送系统如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡的形式给予。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。

式I化合物及其盐、互变异构体和立体异构体还可使用单克隆抗体作为化合物分子与其偶联的单独的载体来递送。所述化合物也可偶联到作为靶向药物载体的可溶性聚合物。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺基苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺基苯酚或聚环氧乙烷聚赖氨酸(被棕榈酰基取代)。所述化合物可另外偶联到一类可生物降解的聚合物，所述可生物降解的聚合物适合用于实现药物的受控释放，例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲的嵌段共聚物。

适合经皮给予的药物制剂可作为独立膏剂给予以便与接受者的表皮延长地紧密接触。因此，例如，活性成分可通过离子电渗从膏剂中递送，如在PharmaceuticalResearch, 3(6), 318 (1986)的一般术语中所述。

可将适合局部给予的药物化合物配制为软膏、乳膏、混悬剂、洗液、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气溶胶或油剂。

为了治疗眼睛或其它外部组织如口和皮肤，所述制剂优选作为局部软膏或乳膏施用。在产生软膏的制剂的情况下，活性成分可与石蜡或水混溶的膏基一起使用。或者，活性成分可用水包油膏基或油包水基质一起配制以产生乳膏。

适合局部施用到眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适载体、特别是水性溶剂中。

适合在口中局部施用的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。

适合直肠给予的药物制剂可以栓剂或灌肠剂的形式给予。

其中载体物质为固体的适合经鼻给予的药物制剂包括具有例如在20-500微米范围内的粒度的粗粉剂，其以吸取嗅剂的方式，即通过从保持靠近鼻的含有粉剂的容器经鼻道迅速吸入来给予。用于作为具有液体作为载体物质的鼻喷剂或滴鼻剂给予的合适制剂包括在水或油中的活性成分溶液。

适合通过吸入给予的药物制剂包括细微粒粉尘或烟雾，其可通过各种类型的具有气溶胶的加压分配器、喷雾器或吹入器产生。

适合阴道给予的药物制剂可作为子宫托、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂施用。

适合肠胃外给予的药物制剂包括水性和非水性无菌注射液，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，借助于所述无菌注射液使所述制剂与欲治疗的接受者的血液等渗；和水性和非水性无菌混悬液，其可包含悬浮介质和增稠剂。所述制剂可以单剂量或多剂量容器如密封安瓿和小瓶给予并以冷冻干燥(冻干)状态储存，以使得仅需要紧接在使用之前加入无菌载液，例如用于注射目的的水。根据该配方制备的注射液和混悬液可由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。

不用说，关于特定制剂类型，除了以上特定提到的成分之外，所述制剂还可包含本领域中常用的其他试剂；因此，例如，适合口服给予的制剂可包含矫味剂。

式I化合物的治疗有效量取决于许多因素，例如包括动物的年龄和体重、需要治疗的精确病况及其严重性、制剂的性质和给药方法，且其最终由治疗医师或兽医确定。然而，根据本发明的化合物的有效量通常在0.1-100 mg/kg接受者(哺乳动物)体重/日的范围内且特别典型地在1-10 mg/kg体重/日的范围内。因此，对于体重为70 kg的成年哺乳动物每日的实际量通常为70-700 mg，其中该量可以每日单一剂量或通常以每日一系列多份剂量(例如2、3、4、5或6份)给予，以使得日总剂量相同。盐或溶剂合物或其生理学功能衍生物的有效量可确定为本发明的化合物的有效量本身的部分。可假设类似的剂量适合用于治疗上述其他病况。

该类型的组合治疗可借助于同时、连续或单独分配该治疗的单独组分来实现。该类型的组合产物采用根据本发明的化合物。

本发明另外涉及药物，其包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，及至少一种另外的药物活性成分。

本发明还涉及由以下单独包装组成的套装(set)(药盒)：

(a) 有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，

和

(b) 有效量的其它药物活性成分。

所述套装包含合适的容器，例如盒(box)、单个瓶、袋或安瓿。所述套装例如可包括单独的安瓿，其各自含有有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，

和有效量的以溶解或冻干形式的其它药物活性成分。

本文使用的“治疗”是指完全或部分地减轻与病症或疾病相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防处于发展该疾病或病症的风险之中的个体的疾病或病症。

关于式(I)化合物的术语“有效量”可以指能够完全或部分地减轻与病症或疾病相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或提供预防具有本文公开的疾病或处于发展本文公开的疾病的风险之中的个体的疾病或病症的量，所述疾病例如为炎性病况、免疫病况、癌症或代谢病况。

在一个实施方案中，式(I)化合物的有效量为例如在体外或体内抑制细胞中的端锚聚合酶的量。在一些实施方案中，与在未治疗的细胞中的端锚聚合酶的活性相比较，有效量的式(I)化合物抑制细胞中的端锚聚合酶达10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或99%。例如在药物组合物中的式(I)化合物的有效量可处于产生所需效果的水平；例如对于口服给药和肠胃外给药两者，在单位剂量中约0.005 mg/kg个体体重-约10 mg/kg个体体重。

用途

本发明化合物适合作为药物活性成分用于哺乳动物，特别是人，以治疗癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

本发明包括式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体在制备用于治疗或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症的药物中的用途。

炎性疾病的实例包括类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎、迟发型超敏反应等。

还包括式I的化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体在制备用于在哺乳动物中治疗或预防端锚聚合酶诱导的疾病或端锚聚合酶诱导的病况的药物中的用途，其中对于该方法，将治疗有效量的本发明化合物给予需要所述治疗的患病哺乳动物。治疗量根据特定疾病而改变，可通过本领域技术人员确定，而无需过度努力。

表述"端锚聚合酶诱导的疾病或病况"是指病理学病况，其依赖于一种或多种端锚聚合酶的活性。与端锚聚合酶活性相关的疾病包括癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，用于治疗其中端锚聚合酶的抑制、调节和/或调节抑制起作用的疾病。

本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，用于抑制端锚聚合酶。

本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，用于治疗癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。

本发明特别涉及用于治疗或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症的方法，包括给予需要其的个体有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体或溶剂合物。

式I化合物可用于治疗或预防的代表性癌症包括但不限于，头、颈、眼、口、咽喉、食管、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、宫颈、乳腺、卵巢、睾丸或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统、实体瘤和血载肿瘤(blood-borne tumor)的癌症。

式I化合物可用于治疗或预防的代表性心血管疾病包括但不限于，再狭窄、动脉粥样硬化和其后果例如中风、心肌梗死、对心脏、肺、肠、肾、肝、胰腺、脾或脑的缺血性损伤。

本发明涉及治疗增殖性、自体免疫、抗炎性或感染疾病病症的方法，其包括向需要其的个体给予治疗有效量的式I化合物。

优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法。

特别优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法，其中给药与至少一种其它活性药剂的给予同时、序贯或交替进行。

所公开的式I化合物可与包括抗癌剂的其它已知治疗剂组合给予。如在此使用，术语“抗癌剂”涉及为治疗癌症的目的而给予癌症患者的任何药剂。

本文定义的抗癌治疗可作为唯一疗法施用，或除了本发明化合物之外还可包括常规手术或放射疗法或化学疗法。所述化学疗法可包括一种或多种以下类别的抗肿瘤剂：

(i) 抗增殖/抗肿瘤/DNA-损伤剂及其组合，如在医学肿瘤学中使用，例如烷基化剂(例如，顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢药(例如，抗叶酸剂，例如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲赛、甲氨喋呤、阿糖胞苷、羟基脲和吉西他宾)；抗肿瘤抗生素(例如，蒽环霉素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和普卡霉素)；抗有丝分裂剂(例如，长春花生物碱类，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞宾，和紫杉烷类，如紫杉醇和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如，表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康和喜树碱)和细胞分化剂(例如，全-反-视黄酸、13-顺-视黄酸和芬维A胺)；

(ii) 细胞生长抑制剂，例如抗雌激素(例如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和依多昔芬)、雌激素受体下调剂(例如，氟维司群)、抗雄激素(例如，比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如，戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、黄体酮(例如，乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如，阿纳托唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂，例如非那雄胺；

(iii) 抑制癌症细胞入侵的药剂(例如，金属蛋白酶抑制剂，如马马司他和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能抑制剂)；

(iv) 生长因子功能抑制剂，例如所述抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-erbb2抗体曲妥单抗[Herceptin^TM]和抗-erbb1抗体西妥昔单抗[C225])、法呢基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如上皮生长因子家族的抑制剂(例如，EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(尔洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂；

(v) 抗血管形成药剂，例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些，(例如，抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]；化合物，例如在公布的国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的那些和通过其他机制起作用的化合物(例如，利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂和血管他丁)；

(vi) 血管损伤剂，例如考布他汀A4和在国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；

(vii) 反义疗法，例如针对以上列举的靶标的反义疗法，例如ISIS 2503、抗-Ras反义药物(anti-Ras antisense)；

(viii) 基因治疗方法，包括例如替换异常基因例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法；GDEPT (基因引导的酶前药疗法)方法，例如用胞嘧啶脱酰胺酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法，和增加患者对化疗或放疗的耐受性的方法，例如多重耐药性基因疗法；和

(ix) 免疫疗法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞巨嗜细胞集落刺激因子转染；减少T细胞无反应性的方法；用转染的免疫细胞例如细胞因子-转染的树突细胞的方法；用细胞因子-转染的肿瘤细胞系的方法，和用抗独特型抗体的方法。

以上定义的抗癌治疗可作为单一疗法应用，或除了本文公开的式I化合物外可包括常规手术或放射疗法或药物治疗。此类药物治疗例如化疗或靶向治疗可包括一种或多种，但优选为以下抗肿瘤药物中的一种：

烷化剂

诸如六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、甲磺丙胺、洛莫司汀、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、苏消安、mechloretamine、卡波醌、阿帕齐醌、福莫司汀、葡磷酰胺、帕利伐米、哌血生、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；

铂化合物

诸如卡铂、顺铂、依铂、米铂水合物、奥沙利铂、洛铂、奈达铂、皮卡铂、沙铂；

DNA改变剂

诸如氨柔比星、比生群、地西他滨、米托蒽醌、甲苄肼、曲贝替定、氯法拉滨、安吖啶(amsacrin)、溴他里辛(brostallicin)、匹克生琼、laromustine；

拓扑异构酶抑制剂

诸如依托泊苷、依立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊苷、托泊替康、氨萘非特、贝洛替康、依利醋铵、voreloxin；

微管调节剂

诸如卡巴他赛、多西他赛、艾日布林、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛、长春氟宁、康布斯汀(fosbretabulin)、替司他赛；

抗代谢药

诸如天门冬酰胺酶、阿扎胞苷、左亚叶酸钙、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、依诺他滨、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、巯嘌呤、甲氨蝶呤、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲沙、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、卡莫氟、去氧氟尿苷、艾西拉滨、雷替曲塞、沙帕他滨、替加氟、曲美沙特；

抗癌抗生素

诸如博来霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、左旋咪唑、米替福新、丝裂霉素C、罗米地辛、链佐星、戊柔比星、净司他丁、佐柔比星、道诺霉素、光神霉素、阿柔比星、培来霉素、吡喃阿霉素；

激素/拮抗剂

诸如阿巴瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡鲁睾酮、三对甲氧苯氯乙烯、地加瑞克、地塞米松、雌二醇、氟可龙、氟羚甲基睾丸素、氟他胺、氟维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮丙瑞林、甲地孕酮、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肽、泼尼松龙、雷洛昔芬、他莫昔芬、促甲状腺激素α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己烯雌酚、阿考比芬、达那唑、德舍瑞林、环硫雄醇、orteronel、恩杂鲁胺；

芳香酶抑制剂

诸如氨鲁米特、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、来曲唑、睾内脂、福美坦；

小分子激酶抑制剂

诸如克唑替尼、达沙替尼、厄洛替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、瑞格非尼、鲁索利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、维罗非尼、博舒替尼、吉非替尼、阿西替尼、阿法替尼、alisertib、达拉菲尼、达可替尼、dinaciclib、多韦替尼、恩扎妥林、尼达尼布、乐伐替尼、利尼伐尼、linsitinib、马赛替尼、米哚妥林、莫特塞尼、来那替尼(neratinib)、orantinib、哌立福辛、普纳替尼、拉多替尼、rigosertib、替吡法尼、tivantinib、tivozanib、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼、卡波替尼S-苹果酸盐、卡非佐米、依鲁替尼、埃克替尼；

光敏剂

诸如甲氧沙林、卟吩姆钠、他拉泊芬、替莫泊芬；

抗体

诸如阿仑单抗、贝西索单抗、贝伦妥单抗-维多汀、西妥昔单抗、迪诺塞麦、易普利单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、群司珠单抗、贝伐单抗、卡妥索单抗、elotuzumab、依帕珠单抗、farletuzumab、mogamulizumab、necitumumab、尼妥珠单抗、奥奴珠单抗、ocaratuzumab、奥戈伏单抗、雷莫芦单抗、利妥木单抗、司妥昔单抗、托珠单抗、扎鲁木单抗、扎木单抗、马妥珠单抗、达妥珠单抗、onartuzumab、帕妥珠单抗、雷妥莫单抗、tabalumab；

细胞因子

诸如阿地白介素、干扰素α、干扰素α2a、干扰素α2b、他索纳明、替西白介素、奥普瑞白介素；

药物轭合物

诸如地尼白介素-毒素连接物、替伊莫单抗、碘苄胍I123、松龙苯芥、曲妥珠单抗-emtansine、雌莫司汀、吉妥珠单抗奥唑米星、阿柏西普、cintredekin besudotox、依多曲肽、奥英妥珠单抗、那莫单抗、莫奥珠单抗、锝(99mTc)阿西莫单抗、vintafolide；

疫苗

诸如sipuleucel、维特斯朋、emepepimut-S、oncoVAX、rindopepimut、troVax、stimuvax；

其他药物

阿利维A酸、贝沙罗汀、硼替佐米、依维莫司、伊班膦酸、咪喹莫特、来那度胺、蘑菇多糖、甲酪氨酸、米伐木肽、帕米磷酸、培加帕酶、喷司他丁、sipuleucel3、西佐糖、他米巴罗汀、替西莫司、沙利度胺、维甲酸、维莫德吉、唑来膦酸、沙利度胺、伏立诺他、塞来考昔、西仑吉肽、恩替诺特、依他硝唑、ganetespib、idronoxil、iniparib、ixazomib、氯尼达明、尼莫唑、帕比司他、培瑞维A酸、plitidepsin、泊马度胺、procodazol、ridaforolimus、他喹莫德、telotristat、胸腺法新、替拉扎明、托多司他、trabedersen、乌苯美司、伐司朴达、今又生(gendicine)、溶链菌、reolysin、盐酸瑞他霉素、trebananib、维鲁利秦。

下列缩写分别指以下定义：

aq(水性)，h (小时)，g(克)，L (升)，mg (毫克)，MHz(兆赫)，min. (分钟)，mm (毫米)，mmol (毫摩尔)，mM(毫摩尔当量)，m.p. (熔点)，eq (当量)，mL (毫升)，L(微升)，ACN(乙腈)，AcOH (乙酸)，CDCl₃ (氘化氯仿)，CD₃OD (氘化甲醇)，CH₃CN (乙腈)，c-hex (环己烷)，DCC (二环己基碳二亚胺)，DCM (二氯甲烷)，DIC (二异丙基碳二亚胺)，DIEA (二异丙基乙胺)，DMF (二甲基甲酰胺)，DMSO (二甲亚砜)，DMSO-d₆ (氘化二甲亚砜)，EDC (1-(3-二甲基-氨基-丙基)-3-乙基碳二亚胺)，ESI (电喷雾电离)，EtOAc (乙酸乙酯)，Et₂O (乙醚)，EtOH (乙醇)，HATU (二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐)，HPLC (高效液相色谱)，i-PrOH (2-丙醇)，K₂CO₃ (碳酸钾)，LC(液相色谱)，MeOH (甲醇)，MgSO₄(硫酸镁)，MS (质谱)，MTBE (甲基叔丁基醚)，NaHCO₃ (碳酸氢钠)，NaBH₄ (硼氢化钠)，NMM (N-甲基吗啉)，NMR (核磁共振)，PyBOP (苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷子基-磷鎓六氟磷酸盐)，RT (室温)，Rt(保留时间)，SPE (固相提取)，TBTU(2-(1-H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐)，TEA (三乙胺)，TFA (三氟乙酸)，THF (四氢呋喃)，TLC (薄层色谱)，UV (紫外线)。

体外测定法的描述

缩写：

GST = 谷胱甘肽-S-转移酶

FRET= 荧光共振能量转移

HTRF® = (均相时间分辨荧光)

HEPES = 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸缓冲液

DTT = 二硫苏糖醇

BSA = 牛血清白蛋白

CHAPS = 去垢剂；

CHAPS = 3-[(3-胆酰氨基(cholamido)丙基)二甲基铵基(ammonio)]-1-丙烷磺酸盐。

链霉抗生物素-XLent®是高等级链霉抗生物素-XL665缀合物，对此偶合条件已被优化以产生具有用于一些测定，特别是需要高灵敏性的测定的增强性能的缀合物。

端锚聚合酶1和2的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化(Autoparsylation)测定

自动聚ADP核糖化测定以两个步骤进行：酶促反应(其中GST-标记的端锚聚合酶-1、resp端锚聚合酶-2将生物素化ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD转移至其自身)和检测反应(其中分析了结合于酶的GST标签的穴状化合物标记的抗-GST和结合生物素-聚ADP核糖化残基的Xlent®标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。

自动聚ADP核糖化测定作为格雷纳低量(Greiner low volume) nb 384-孔微量滴定板中的384-孔HTRF® (Cisbio, Codolet, France)测定形式进行并用于高通量筛选。在试验化合物(10倍稀释浓度)不存在或存在下，将250 nM GST-标记的端锚聚合酶-1 (1023-1327 aa)，分别约250 nM GST-标记的端锚聚合酶-2 (873-1166 aa)和5 µM bio-NAD(Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany)作为共同底物以总体积5 µl (50 mMHEPES、4 mM 氯化镁、0.05 %普流罗尼克F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMSO, pH 7.7)于30℃孵育90 min。通过加入1 µl 50 mM EDTA溶液停止反应。加入2 µl检测溶液(1.6 µM SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 7.4 nM抗-GST-K® (Eu-标记的抗-GST, Cisbio,Codolet, France)在下列中：50 mM HEPES，800 mM KF、0.1 % BSA、20 mM EDTA、0.1 %CHAPS, pH 7.0)。于室温下孵育1小时后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LASGermany GmbH)以激发波长340 nm (激光模式)和发射波长615 nm和665 nm测量HTRF。测定发射信号的比率。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5 µM的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值(IC50)使用程序Symyx Assay Explorer®或者来自GeneData的Condosseo®测定。

端锚聚合酶的细胞抑制作用的测定

因为端锚聚合酶已被描述为调节Axin2的细胞水平(Huang等人, 2009；Nature)，Axin2水平的增加被用作在基于Luminex的测定法中测定端锚聚合酶的细胞抑制作用的读数。

将结肠癌细胞系DLD1的细胞以每孔1.5x10⁴个细胞接种于96孔板。第二天，用系列稀释的试验化合物以7个步骤，按0.3%的最终DMSO浓度一式三份处理细胞。24小时后，在裂解缓冲液(20mM Tris/HCl pH 8.0、150mM NaCl、1% NP40、10%甘油)中裂解细胞并通过96孔滤出板(0.65µm)离心清除裂解产物。通过与结合于荧光羧基珠粒(carboxybeads)的单克隆抗-Axin2抗体(R&D Systems #MAB6078)一起孵育从细胞裂解产物分离Axin2蛋白。然后，用多克隆抗-Axin2抗体(Cell Signaling #2151)和适宜的PE-荧光第二抗体特异性检测结合的Axin2。根据制造商说明书，在Luminex²⁰⁰机器(Luminex Corporation)上，通过计算每孔中100个事件，测定分离的Axin2蛋白的量。试验化合物对端锚聚合酶的抑制作用导致较高水平的Axin2，其与可检测荧光的增加直接相关。作为对照，仅用溶剂(中性对照)和用端锚聚合酶参考抑制剂IWR-2 (3E-06 M) (其指作为对Axin2的最大增加的对照)处理细胞。为了分析，将获得的数据针对未处理的溶剂对照标准化并使用Assay Explorer软件(Accelrys)进行拟合，以确定EC₅₀值。

PARP1测定的描述

PARP-1的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化测定

自动聚ADP核糖化测定以两个步骤进行：酶促反应(其中His-标记的Parp-1将生物素化ADP-核糖/ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD/NAD转移至其自身)和检测反应(其中分析了结合于酶的His标签的穴状化合物标记的抗-His抗体和结合生物素-聚ADP核糖化残基的Xlent®标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。

自动聚ADP核糖化测定作为格雷纳低量nb 384-孔微量滴定板中的384-孔HTRF®(Cisbio, Codolet, France)测定形式进行。在试验化合物(10倍稀释浓度)不存在或存在下，将35 nM His-标记的Parp-1 (人，重组体，Enzo Life Sciences GmbH, Lörrach,Germany)和作为共同底物的125 nM bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen,Germany)和800 nM NAD的混合物以总体积6 µl (100 mM Tris/HCl、4 mM氯化镁、0.01 %IGEPAL® CA630、1mM DTT、0.5 % DMSO, pH 8、13 ng/µl激活的DNA (BPS Bioscience,San Diego, US))于23℃孵育150 min。通过加入4 µl的终止/检测溶液(70 nM SA-Xlent®(Cisbio, Codolet, France)、2.5 nM抗-His-K® (Eu-标记的抗-His, Cisbio, Codolet,France)在下列中：50 mM HEPES, 400 mM KF、0.1 % BSA、20 mM EDTA, pH 7.0)终止反应。于室温下孵育1小时后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LAS Germany GmbH)以激发波长340 nm (激光模式)和发射波长615 nm和665 nm测量HTRF。测定发射信号的比率。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在1 µM的最终浓度中的Olaparib(LClabs, Woburn, US)。抑制值(IC50)使用程序Symyx Assay Explorer®或者来自GeneData的Condosseo®测定。

TNKS1和TNKS2 ELISA测定的描述

TNKS 1和2的生物化学活性测试：活性ELISA (自动聚ADP核糖化测定)

为分析TNKS 1和2的自动聚ADP核糖化活性，进行活性ELISA：在第一步中，在谷胱甘肽涂布的板上捕获GST标记的TNKS。然后在化合物不存在/存在下，用生物素化NAD进行活性测定。在酶促反应期间，GST标记的TNKS将生物素化ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD转移至其自身。为了检测，加入结合于生物素化TNKS的链霉抗生物素-HRP缀合物，由此被捕获到板上。生物素化resp自动聚ADP核糖化TNKS的量用HRP的发光底物检测。发光信号的水平与自动聚ADP核糖化TNKS的量直接相关，由此也与TNKS活性直接相关。

活性ELISA在384孔谷胱甘肽涂布的微量滴定板(快速捕获谷胱甘肽涂布的板(Express capture Glutathione coated plate), Biocat, Heidelberg, Germany)上进行。用PBS预平衡各板。然后将板用50 µl 20 ng/孔GST-标记的Tnks-1 (1023-1327 aa, 内部制备)，分别GST-标记的Tnks-2 (873-1166 aa, 内部制备)在测定缓冲液(50 mM HEPES、4 mM氯化镁、0.05 %普流罗尼克F-68、2 mM DTT, pH 7.7)于4℃孵育过夜。用PBS-Tween-20洗涤各板3次。通过于室温下用50 µl封闭缓冲液(PBS、0.05 % Tween-20、0.5 % BSA)孵育20分钟封闭各孔。此后用PBS-Tween-20洗涤各板3次。酶促反应在试验化合物(10倍稀释浓度)不存在或存在下，在50 µl反应溶液(50 mM HEPES、4 mM氯化镁、0.05 %普流罗尼克F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMSO, pH 7.7)中，用10 µM bio-NAD (Biolog, Life scienceInst., Bremen, Germany)作为共同底物于30℃进行1小时。通过用PBS-Tween-20洗涤3次终止反应。为了检测，加入在PBS/0.05%Tween-20/0.01%BSA中的50 µl 20ng/µl链霉抗生物素、HRP缀合物(MoBiTec, Göttingen, Germany)并于室温下将各板孵育30分钟。用PBS-Tween-20洗涤3次后，加入50 µl SuperSignal ELISA Femto最大灵敏性(Maximumsensitivity)底物溶液(ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany)。于室温下孵育1分钟后，用Envision多模阅读器(Perkin Elmer LAS Germany GmbH)于700 nm测量发光信号。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5 µM的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值(IC50)使用程序Symyx Assay Explorer®或者来自GeneData的Condosseo®测定。

在上下文中，所有的温度以℃表示。在以下实施例中，"常规后处理(work-up)"意指：必要时加入水，必要时调节pH值至2-10，这取决于终产物的组成，混合物用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，分离各相，有机相经硫酸钠干燥并蒸发，残留物经硅胶色谱和/或结晶纯化。硅胶上的Rf值；洗脱液：乙酸乙酯/甲醇9:1。

P：HPLC-方法：

梯度：5.5 min；流速：2.75 ml/min，99:1至0:100 H₂O/乙腈；

水+ TFA (0.01 %体积)；乙腈+ TFA (0.01 %体积)

柱：Chromolith SpeedROD RP 18e 50-4.6

波长：220 nm

Merck HitachiLa Chrome

N：HPLC-方法：

梯度：5.5 min；流速：2.75 ml/min，90:10至0:100 H₂O/乙腈；

水+ TFA (0.01 %体积)；乙腈+ TFA (0.01 %体积)

柱：Chromolith SpeedROD RP 18e 50-4.6

波长：220 nm

Merck HitachiLa Chrome

X：HPLC/MS条件

柱：Chromolith Performance ROD RP-18e，100 x 3 mm²

梯度：A:B = 99:1至0:100在1.8 min内

流速：2.0 ml/min

洗脱液A：水+ 0.05 %甲酸

洗脱液B：乙腈+ 0.04 %甲酸

波长：220 nm。

¹H NMR在Bruker DPX-300、DRX-400或AVII-400分光计上记录，使用氘化溶剂的残留信号作为内标。化学位移(δ)以相对于残留溶剂信号的ppm报告(对于在DMSO-d₆中的¹HNMR，δ = 2.49 ppm)。¹H NMR数据报告如下：化学位移(多重性，偶合常数和氢数)。多重性缩写如下：s (单峰)，d (双峰)，t (三重峰)，q (四重峰)，m (多重峰)，br (宽峰)。

微波化学在CEM微波反应器上进行。

酞嗪：合成

。

实施例1

2-苯基-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A1”)的合成

1.1 4-氯-酞嗪-1-基胺

将五水合硫酸铜(II) (632.4 mg；2.53 mmol)溶于氨水溶液(32 %，25 mL)。加入1,4-二氯-酞嗪(2 g；10.05 mmol)在THF(25 mL)中悬浮液并将 2-相混合物在65-80 ℃(最大13 bar)下加热1.5 h 和在100 ℃下在微波炉(CEM Discover)中加热1.5 h。有机相中形成沉淀物。将反应混合物冷却至室温，通过抽吸滤出沉淀物，用水、少量乙酸乙酯和乙醚洗涤并在50 ℃下真空干燥14 h；产量：1.6 g (89 %)，粉红色晶体(纯度：100 %，Rt：2.49min)。

1.2: 酞嗪-1-基胺

在室温下将4-氯-酞嗪-1-基胺(750 mg；4.18 mmol)在含 Pd/C(5%)的甲醇(20mL)和2N氢氧化钠溶液(3.7 mL)中氢化14 h。将反应溶液过滤并浓缩。水性残留物用水(5mL)稀释并用乙酸乙酯 (3x)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。残留物用乙醚研磨，通过抽吸滤出并干燥。

将萃取的水相蒸发至干。将残留物溶于水和乙腈的混合物并冻干。将固体悬浮于二氯甲烷/甲醇(10 %)中，搅拌30 min并通过抽吸滤出。将滤液蒸发至干。残留物用二氯甲烷研磨，通过抽吸滤出，用乙醚洗涤并干燥。合并两次固体；产量：545 mg (90 %)，淡棕色固体(纯度：100 %，Rt：2.25 min)。

1.3 2-苯基-N-酞嗪-1-基-乙酰胺

将酞嗪-1-基胺(50 mg；0.34 mmol)悬浮于THF(2 mL)中并在氩气下用N-乙基二异丙胺(76.2 µl；0.45 mmol)处理。在室温下滴加苯乙酰氯(54.6 µl；0.41 mmol)并将混合物加热至70 ℃。短时间形成澄清黄色溶液，随后固体发生沉淀。在70 ℃下搅拌1 h后，加入THF (2 mL)、N-乙基二异丙胺(76.2 µl；0.45 mmol)和苯乙酰氯(54.6 µl；0.41 mmol)并将反应混合物在70 ℃下搅拌14 h。将反应混合物冷却至室温，用甲醇(0.5 mL)处理并蒸发至干。淡棕色残留物用乙腈(1 mL)和甲醇(1 mL)处理并超声。通过抽吸过滤形成的沉淀物，用甲醇和乙醚洗涤并在50 ℃下真空干燥。经由柱色谱法进一步从滤液中分离产物；产量：25mg (28 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：2.89 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.97 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.17 (d，J =7.9 Hz，1H)，8.08 – 7.82 (m，3H)，7.47 – 7.20 (m，5H)，3.89 (s，2H)。

实施例2

2-(3-甲氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A2”)的合成

在氩气下将酞嗪-1-基胺(57 mg；0.39 mmol)悬浮于1,2-二氯乙烷 (4 mL)中。加入N-乙基二异丙胺(0.141 mL；0.83 mmol)，随后经由注射器滴加(3-甲氧基苯基)-乙酰氯(0.123 ml；0.79 mmol)。在加入过程中，温度由20 ℃升至35 ℃。一分钟后，获得澄清淡棕色溶液。将反应在室温下搅拌18 h。在真空下除去溶剂。残留物通过色谱(柱：40 g RP18硅胶；combiflash companion)纯化；产量：6 mg (5 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：2.94min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.96 (s，1H)，9.59 (s，1H)，8.19 (d，J =8.0 Hz，1H)，8.08 – 7.79 (m，3H)，7.29 (t，J = 7.9 Hz，1H)，7.10 – 6.74 (m，3H)，3.86(s，2H)，3.77 (s，3H)。

实施例3

2-(4-甲氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A3”)的合成

“A3”由酞嗪-1-基胺(60 mg；0.41 mmol)、N-乙基二异丙胺(0.148 mL；0.87 mmol)和(4-甲氧基苯基)-乙酰氯(0.126 mL；0.83 mmol)在1,2-二氯乙烷(3 mL)中根据实施例2的程序制备；产量：16 mg (13 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：2.91 min)；¹H NMR (400MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.92 (s，1H)，9.58 (s，1H)，8.19 (d，J = 7.9 Hz，1H)，8.07 –7.83 (m，1H)，7.34 (d，J = 8.5 Hz，1H)，6.94 (d，J = 8.6 Hz，1H)，3.81 (s，1H)，3.76(s，2H)。

实施例4

2-(4-乙氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A4”)的合成

在室温下将(4-乙氧基苯基)-乙酸(74.5 mg；0.41 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(65.3 mg；0.41 mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(103 mg；0.54mmol)溶于DMF(2 mL)。搅拌15 min后，加入酞嗪-1-基胺(60 mg；0.41 mmol)并将反应混合物搅拌2 h。滤出反应过程中沉淀的固体，用一小部分的DMF、乙腈和乙醚洗涤并在50 ℃下真空干燥。

滤液用水(40 mL)稀释并用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。残留物(淡黄色固体)用乙醇研磨，滤出，用乙醇和乙醚洗涤并在50 ℃下真空干燥。合并两种固体；产量：81 mg (63 %)，无定形的无色固体(纯度：100 %，Rt：3.03 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.91 (s，1H)，9.58 (s，1H)，8.18 (d，J =7.9 Hz，1H)，8.07 – 7.84 (m，3H)，7.33 (d，J = 8.6 Hz，2H)，6.92 (d，J = 8.6 Hz，2H)，4.03 (q，J = 6.9 Hz，2H)，3.81 (s，2H)，1.33 (t，J = 6.9 Hz，3H)。

实施例5

N-酞嗪-1-基-2-(3-三氟甲氧基苯基)-乙酰胺(“A5”)的合成

“A5”由(3-三氟甲氧基苯基)-乙酸(93.8 mg；0.41 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(65.3 mg；0.41 mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(103 mg；0.54mmol)和酞嗪-1-基胺(60 mg；0.41 mmol)在DMF(2 mL)中如实施例4所述制备。在室温下搅拌3 h后，反应混合物用水(40 mL)稀释并用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发至干。在乙醇中研磨残留物，滤出，用乙醚洗涤并在50 ℃下真空干燥。通过色谱(柱：40 g RP18硅胶；combiflash companion)从滤液中获得其他产物；产量：58mg (39 %)，淡黄色固体(纯度：98 %，Rt：3.29 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 11.02 (s，1H)，9.58 (s，1H)，8.26 – 8.15(m，1H)，8.09 – 7.84 (m，3H)，7.58 – 7.38 (m，3H)，7.34 – 7.22 (m，1H)，3.98 (s，2H)。

实施例6

2-(3-氰基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A6”)的合成

“A6”由(3-氰基苯基)-乙酸(66.6 mg；0.41 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(65.3mg；0.41)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(103 mg；0.54 mmol)和酞嗪-1-基胺(60 mg；0.41 mmol)在DMF(2 mL)中如实施例5所述制备；产量：89 mg (75 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：2.91 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 11.03 (s，1H)，9.60 (s，1H)，8.26 – 8.15(m，1H)，8.12 – 7.94 (m，3H)，7.92 – 7.52 (m，4H)，4.03 (s，2H)。

实施例7

2-(3-硝基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A7”)的合成

“A7”由(3-硝基苯基)-乙酸(62.4 mg；0.34 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(54.4mg；0.34 mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(85.8 mg；0.45 mmol)和酞嗪-1-基胺(50 mg；0.34 mmol)在DMF(2.5 mL)中如实施例4所述制备；

产量：84 mg (79 %)，淡黄色固体(纯度：100 %，Rt：3.01 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 11.07 (s，1H)，9.60 (s，1H)，8.32 (t，J =2.0 Hz，1H)，8.25 – 8.11 (m，2H)，8.10 – 7.96 (m，3H)，7.88 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.68(t，J = 7.9 Hz，1H)，4.12 (s，2H)。

实施例8

N-酞嗪-1-基-2-(4-三氟甲氧基苯基)-乙酰胺(“A8”)的合成

“A8”由(4-三氟甲氧基苯基)-乙酸(92.9 mg；0.41 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(65.3 mg；0.41 mmol) 、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(103 mg；0.54mmol)和酞嗪-1-基胺 (60 mg；0.41)在DMF(2 mL)中如实施例4所述制备；产量：105 mg (72%)，无色固体(纯度：99 %，Rt：3.29 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm]10.99 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.23 – 8.14(m，1H)，8.09 – 7.86 (m，3H)，7.53 (d，J = 8.7 Hz，2H)，7.41 – 7.30 (m，2H)，3.95 (s，2H)。

实施例9

2-(4-叔丁基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A9”)的合成

“A9”由(4-叔丁基苯基)-乙酸(66.2 mg；0.34 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(54.4mg；0.34 mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(85.8 mg；0.45 mmol)和酞嗪-1-基胺(50 mg；0.34)在DMF(2 mL)中如实施例5所述制备；产量：67 mg (61 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：3.38 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.93 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.23 – 8.14(m，1H)，8.08 – 7.83 (m，3H)，7.43 – 7.28 (m，4H)，3.84 (s，2H)，1.28 (s，9H)。

实施例10

2-(2,6-二氯苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺(“A10”)的合成

“A9”由(2,6-二氯苯基)-乙酸(70.6 mg；0.34 mmol)、苯并三唑-1-醇水合物(54.4mg；0.34 mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(85.8 mg；0.45 mmol)和酞嗪-1-基胺(50 mg；0.34)在DMF(2 mL)中如实施例5所述制备；产量：74 mg (65 %)，无色固体(纯度：100 %，Rt：3.27 min)；

¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 11.12 (s，1H)，9.59 (s，1H)，8.27 – 8.15(m，1H)，7.98 – 8.07 (m，3H)，7.51 (d，J = 8.1 Hz，2H)，7.35 (t，J = 8.0 Hz，1H)，4.31(s，2H)。

类似地制备以下化合物：

2-(4-乙氧基-苯基)-N-(5-氟-酞嗪-1-基)-乙酰胺(“A11”)

M+H 326；HPLC 1.73 (X)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.96 (s，1H)，9.61 (d，J = 2.6 Hz，1H)，8.07 – 7.99 (m，2H)，7.80 – 7.69 (m，1H)，7.31 – 7.23 (m，2H)，6.94 – 6.84 (m，2H)，4.00 (q，J = 7.0 Hz，2H)，3.72 (s，2H)，1.32 (t，J = 7.0 Hz，3H)；

N-(5-氟-酞嗪-1-基)-2-(4-甲氧基-苯基)-乙酰胺(“A12”)

M+H 312；HPLC 1.61 (X)；

3-环己基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺(“A13”)

M+H 284；HPLC 2.37 (N)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.68 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.22 - 8.14 (m，1H)，8.06 - 7.93 (m，3H)，2.55 (t，J = 7.8 Hz，2H)，1.79- 1.54 (m，7H)，1.36 - 1.11 (m，4H)，0.99 - 0.87 (m，2H)；

3-苯基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺(“A14”)

M+H 278；HPLC 1.99 (N)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.74 (s，1H)，9.56 (s，1H)，8.16 (d，J = 8.0 Hz，1H)，8.04 - 7.97 (m，1H)，7.96 - 7.88 (m，1H)，7.75(d，J = 8.3 Hz，1H)，7.37 - 7.28 (m，4H)，7.27 - 7.19 (m，1H)，3.00 (t，J = 7.3 Hz，2H)，2.88 (t，J = 7.9 Hz，2H)；

3-环戊基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺(“A15”)

M+H 270；HPLC 2.19 (N)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.68 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.21 - 8.15 (m，1H)，8.05 - 7.93 (m，3H)，2.59 - 2.53 (m，2H)，1.90 -1.74 (m，3H)，1.74 - 1.65 (m，2H)，1.65 - 1.46 (m，4H)，1.22 - 1.09 (m，2H)；

3-(2-氯-苯基)-N-酞嗪-1-基-丙酰胺(“A16”)

HPLC 2.21 (N)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.79 (s，1H)，9.57 (s，1H)，8.18 (d，J = 7.9 Hz，1H)，8.08 - 7.99 (m，1H)，7.99 - 7.91 (m，1H)，7.85 (d，J =8.2 Hz，1H)，7.49 - 7.41 (m，2H)，7.36 - 7.24 (m，2H)，3.10 (t，J = 7.6 Hz，2H)，2.91(t，J = 7.7 Hz，2H)；

3-(2,3-二氯-苯基)-N-酞嗪-1-基-丙酰胺(“A17”)

HPLC 2.44 (N)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.81 (s，1H)，9.56 (s，1H)，8.17 (d，J = 8.0 Hz，1H)，8.05 - 7.99 (m，1H)，7.99 - 7.93 (m，1H)，7.85 (d，J =8.3 Hz，1H)，7.55 - 7.50 (m，1H)，7.44 - 7.40 (m，1H)，7.38 - 7.29 (m，1H)，3.15 (t，J= 7.6 Hz，2H)，2.93 (t，J = 7.6 Hz，2H)；

N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-2-苯基-乙酰胺(“A18”)

M+H 278；HPLC 1.61 (X)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.92 (s，1H)，9.68 (s，1H)，7.87 – 7.77 (m，2H)，7.77 – 7.68 (m，1H)，7.45 – 7.39 (m，2H)，7.36 (m，2H)，7.32 – 7.24 (m，1H)，3.87 (s，2H)，2.77 (s，3H)；

N-(5-甲基-酞嗪-1-基)-2-苯基-乙酰胺(“A19”)

M+H 278；HPLC 1.71 (X)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.74 (s，1H)，9.54 (s，1H)，8.02 (d，J = 6.8 Hz，1H)，7.87 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.74 (dd，J = 7.2，1.4 Hz，1H)，7.42 – 7.30 (m，4H)，7.30 – 7.22 (m，1H)，3.80 (s，2H)，2.59 (s，3H)；

2-(4-甲氧基-苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-乙酰胺(“A20”)

M+H 308；HPLC 1.61 (X)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆) δ [ppm] 10.85 (s，1H)，9.68 (s，1H)，7.88 – 7.76 (m，2H)，7.71 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.38 – 7.27 (m，2H)，6.98– 6.88 (m，2H)，3.79 (s，2H)，3.75 (s，3H)，2.77 (s，3H)；

2-(4-甲氧基-苯基)-N-(5-甲基-酞嗪-1-基)-乙酰胺(“A21”)

M+H 308；HPLC 1.69 (X)；¹H NMR (400 MHz，DMSO-d₆，TFA-d₁) δ [ppm] 10.11(s，1H)，8.44 (d，J = 7.6 Hz，1H)，8.23 (t，J = 7.6 Hz，1H)，8.15 (d，J = 7.5 Hz，1H)，7.34 (d，J = 8.6 Hz，2H)，6.94 (d，J = 8.6 Hz，2H)，3.89 (s，2H)，3.78 (s，3H)，2.80(s，3H)；

3-环己基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺(“A22”)

；

3-苯基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺(“A23”)

；

3-环戊基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺(“A24”)

；

3-(2-氯苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺(“A25”)

；

3-(2,3-二氯苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺(“A26”)

。

药理学数据

表1 一些代表性式I化合物对端锚聚合酶的抑制作用

IC₅₀： < 0.3 μM = A 0.3 - 3 μM = B 3-50 μM = C

表1中显示的化合物为根据本发明的特别优选的化合物。

表2 一些代表性式I化合物对端锚聚合酶的抑制作用

IC₅₀: < 0.3 μM = A 0.3 - 3 μM = B 3-50 μM = C

表2中显示的化合物为根据本发明的特别优选的化合物。

以下实施例涉及药物：

实施例A: 注射小瓶

用2 N盐酸将100 g的式I的活性成分和5 g磷酸氢二钠在3 l重蒸馏水中的溶液调节至pH 6.5，无菌过滤，转移至注射小瓶中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。每个注射小瓶含有5 mg活性成分。

实施例B: 栓剂

将20 g的式I的活性成分与100 g大豆卵磷脂和1400 g可可脂的混合物熔化，倾入模具中并使之冷却。每个栓剂含有20 mg活性成分。

实施例C：溶液

由1 g式I的活性成分、9.38 g NaH₂PO₄∙2 H₂O、28.48 g Na₂HPO₄∙12 H₂O和0.1 g苯扎氯铵在940 ml重蒸馏水中制备溶液。将pH调节至6.8，并使溶液补充至1 l并经辐照灭菌。这种溶液可用于滴眼剂形式。

实施例D：软膏剂

将500 mg式I的活性成分与99.5 g凡士林在无菌条件下混合。

实施例E：片剂

将1 kg式I的活性成分、4 kg乳糖、1.2 kg马铃薯淀粉、0.2 kg滑石粉和0.1 kg硬脂酸镁的混合物以常规方式压制，得到片剂，以这样的方式使得每一片剂含有10 mg活性成分。

实施例F：糖衣丸

类似于实施例E压制片剂，随后用蔗糖、马铃薯淀粉、滑石粉、黄蓍胶和染料的包衣料以常规方式包衣。

实施例G: 胶囊

将2 kg式I的活性成分以常规方式引入硬明胶胶囊，以这样的方式使得每粒胶囊含有20 mg活性成分。

实施例H：安瓿

将1 kg式I的活性成分在60 l重蒸馏水中的溶液无菌过滤，转移至安瓿中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。每个安瓿含有10 mg活性成分。

Claims

1.式I化合物

其中

R¹ 表示H、Hal或CH₃，

X 表示Ar或Cyc，

Ar 表示苯基，其是未取代的或被Hal、NO₂、CN、A和/或[C(R²)₂]_pOR²一、二或三取代，

R² 表示H或A，

A 表示具有1-10个C-原子的非支链或支链烷基，其中1-7个H-原子可被F、Cl和/或OH替代，

Cyc 表示具有3、4、5、6或7个C-原子的环烷基，

Hal 表示F、Cl、Br或I，

n 表示1、2或3，

p 表示0、1、2、3或4，

及其药学上可接受的盐和互变异构体，包括其所有比例的混合物。

2.根据权利要求1的化合物，其中

A 表示具有1-6个C-原子的非支链或支链烷基，其中1-5个H-原子可被F替代，

3.根据权利要求1的化合物，其中

R¹ 表示H、Hal或CH₃，

X 表示Ar或Cyc，

R² 表示H或A，

Cyc 表示具有3、4、5、6或7个C-原子的环烷基，

Hal 表示F、Cl、Br或I，

p 表示0、1、2、3或4，

n 表示1、2或3，

4.根据权利要求1的化合物，所述化合物选自：

编号名称 “A1” 2-苯基-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A2” 2-(3-甲氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A3” 2-(4-甲氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A4” 2-(4-乙氧基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A5” N-酞嗪-1-基-2-(3-三氟甲氧基苯基)-乙酰胺 “A6” 2-(3-氰基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A7” 2-(3-硝基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A8” N-酞嗪-1-基-2-(4-三氟甲氧基苯基)-乙酰胺 “A9” 2-(4-叔丁基苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A10” 2-(2,6-二氯苯基)-N-酞嗪-1-基-乙酰胺 “A11” 2-(4-乙氧基-苯基)-N-(5-氟-酞嗪-1-基)-乙酰胺 “A12” N-(5-氟-酞嗪-1-基)-2-(4-甲氧基-苯基)-乙酰胺 “A13” 3-环己基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺 “A14” 3-苯基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺 “A15” 3-环戊基-N-酞嗪-1-基-丙酰胺 “A16” 3-(2-氯-苯基)-N-酞嗪-1-基-丙酰胺 “A17” 3-(2,3-二氯-苯基)-N-酞嗪-1-基-丙酰胺 “A18” N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-2-苯基-乙酰胺 “A19” N-(5-甲基-酞嗪-1-基)-2-苯基-乙酰胺 “A20” 2-(4-甲氧基-苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-乙酰胺 “A21” 2-(4-甲氧基-苯基)-N-(5-甲基-酞嗪-1-基)-乙酰胺 “A22” 3-环己基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺 “A23” 3-苯基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺 “A24” 3-环戊基-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺 “A25” 3-(2-氯苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺 “A26” 3-(2,3-二氯苯基)-N-(8-甲基-酞嗪-1-基)-丙酰胺

5.制备根据权利要求1-4的式I化合物及其药学上可接受的盐和互变异构体的方法，其特征在于

使式II化合物

其中R¹具有权利要求1-4中所指的含义，

与

式III化合物反应

其中X和n具有权利要求1-4中所指的含义，

和L表示Cl、Br、I或游离或反应性官能修饰的OH基团，

和/或

使式I的碱或酸转化为其盐中的一种。

6.包含至少一种根据权利要求1-4中任一项的式I化合物和/或其药学上可接受的盐和互变异构体，包括其所有比例的混合物，和任选的药学上可接受的载体、赋形剂或溶媒的药物。

7.根据权利要求1-4中任一项的式I化合物及其药学上可接受的盐和互变异构体、包括其所有比例的混合物在制备用于治疗和/或预防与端锚聚合酶活性相关的癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症的药物中的用途。

8.根据权利要求7的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防选自以下的疾病：实体瘤和血载肿瘤。

9.根据权利要求7的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防选自以下的疾病：头、颈、眼、口、咽喉、食管、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、宫颈、乳腺、卵巢、睾丸、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑和中枢神经系统的癌症。

10.药物，其包含至少一种根据权利要求1-4中任一项的式I化合物和/或其药学上可接受的盐，包括其所有比例的混合物，和至少一种其他药物活性成分。

11.由以下分开的包装组成的套装或药盒：

(a) 有效量的根据权利要求1-4中任一项的式I化合物和/或其药学上可接受的盐，包括其所有比例的混合物，

和

(b) 有效量的其他药物活性成分。