TW201825682A - 用於製備d-阿洛酮糖的組成物、使用凱斯特菌屬的微生物製備d-阿洛酮糖的方法、細粒凱斯特菌lis1菌株以及污泥凱斯特菌lis2菌株 - Google Patents

用於製備d-阿洛酮糖的組成物、使用凱斯特菌屬的微生物製備d-阿洛酮糖的方法、細粒凱斯特菌lis1菌株以及污泥凱斯特菌lis2菌株 Download PDF

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Abstract

本發明提供一種用於製備D-阿洛酮糖的包括凱斯特菌屬的微生物的組成物，以及一種使用所述組成物製備D-阿洛酮糖的方法。

Description

使用凱斯特菌屬的微生物製備D-阿洛酮糖的方法
以下揭露內容是關於使用凱斯特菌屬的微生物製備D-阿洛酮糖的方法。
D-阿洛酮糖（下文稱作「阿洛酮糖」）為單醣，已知為以極小量存在於自然界的一種罕見的糖。其卡路里約為零，但其甜度約為糖的70%，且由於其諸如抑制血糖以及抑制脂質合成等功能作為新食品配料已受到大量關注。
由於這些特性，考慮在各種食品中將阿洛酮糖用作糖的甜味劑替代物。然而，由於阿洛酮糖在自然界中的存在量極少，因此越來越需要有效製備阿洛酮糖的方法。
一種用於製備阿洛酮糖的已知方法包含利用鉬酸根離子的催化的方法（比利克，V.（Bilik,V.），季赫拉日克，K.（Tihlarik,K.），1973年，由鉬酸根離子催化之醣類之反應IX（Reaction of Saccharides Catalyzed by Molybdate Ions. IX），己酮糖之差向異構化（Epimerization of Ketohexoses），《化學論文（Chem .Zvesti）》，28:106-109），一種藉由將乙醇與三乙胺一起加熱自D-果糖製備阿洛酮糖的化學方法（多納，L.W.（Doner,L.W.），1979年，藉由鹼將D-果糖之異構化：D-阿洛酮糖之液相層析評估以及分離（Isomerization of D-Fructose by Base:Liquid-Chromatographic Evaluation and The Isolation of D-Psicose），《碳水化合物研究（Carbohydr.Res.）》，70:209-216），以及一種使用產生D-阿洛酮糖3-表異構酶的微生物自D-果糖製備阿洛酮糖的生物方法（韓國專利早期公開第10-2011-0035805號）。藉由所述化學方法製備阿洛酮糖的問題在於出現大量副產物，且因此要求進行複雜的純化。另外，所述生物方法亦存在的問題在於熱穩定性不高且製備成本較高，且因此需要提供一種能夠自D-果糖產生阿洛酮糖的新微生物。
在這些情形下，本發明人已做出了許多努力來研發一種能夠產生阿洛酮糖的新微生物，且因此，已確認當使用凱斯特菌屬的微生物時可自D-果糖產生阿洛酮糖，因而完成了本發明。 [相關技術文件] （專利文件） 韓國專利第10-1318422號 韓國專利早期公開第10-2011-0035805號 （非專利文件） 比利克，V.，季赫拉日克，K.，1973年，由鉬酸根離子催化之醣類之反應IX，己酮糖之差向異構化，《化學論文》，28:106-109 多納，L.W.，1979年，藉由鹼將D-果糖之異構化：D-阿洛酮糖之液相層析評估以及分離，《碳水化合物研究》，70:209-216 金，H.J.（Kim,H.J.），玄，E.K.（Hyun,E.K.），金，Y.S.（Kim,Y.S.），李，Y.J.（Lee,Y.J.），吳，D.K.（Oh,D.K.），2006年，將D-果糖轉換成D-阿洛酮糖之根癌農桿菌D-阿洛酮糖3-表異構酶的特性化，《應用與環境微生物學（Appl.Environ.Microbiol.）》，72(2):981-5
本發明的一實施例針對提供一種用於製備阿洛酮糖的包括凱斯特菌屬的微生物的組成物。
本發明的另一實施例是針對提供一種製備阿洛酮糖的方法，包括：使凱斯特菌屬的微生物或用於製備阿洛酮糖的包括凱斯特菌屬的微生物的組成物與D-果糖接觸。
本發明的另一實施例是針對提供一種有助於製備阿洛酮糖的凱斯特菌屬的微生物。
根據本發明的一例示性實施例，提供有一種用於製備阿洛酮糖的組成物，包括：凱斯特菌屬的微生物。
本發明之凱斯特菌屬的微生物可包括任何微生物（沒有限制），只要其具有將D-果糖轉換成D-阿洛酮糖的能力。在本發明的一例示性實施例中，本發明之凱斯特菌屬的微生物可為選自由以下所構成的族群的凱斯特菌屬的至少一種微生物：細粒凱斯特菌（Kaistia granuli ）、污泥凱斯特菌（Kaistia defluvii ）、多脂凱斯特菌（Kaistia adipata ）、琴湖河凱斯特菌（Kaistia geumhonensis ）、達西溪凱斯特菌（Kaistia dalseonensis ）、水蛭素凱斯特菌（Kaistia hirudinis ）、土壤凱斯特菌（Kaistia soli ）以及沼澤凱斯特菌（Kaistia terrae ）。特定言之，本發明之凱斯特菌屬的微生物可為選自由以下所構成的族群的凱斯特菌屬的至少一種微生物：細粒凱斯特菌L1S1（寄存編號KCCM11916P）、污泥凱斯特菌LIS2（寄存編號KCCM12020P）、細粒凱斯特菌KCTC12575、污泥凱斯特菌KCTC23766、多脂凱斯特菌KCTC12095、琴湖河凱斯特菌KCTC12849、達西溪凱斯特菌KCTC12850、水蛭素凱斯特菌DSM25966、土壤凱斯特菌DSM19436以及沼澤凱斯特菌DSM21341。
在一例示性實施例中，本發明之凱斯特菌屬的微生物可為菌株自身、其培養物或微生物的破碎物（disruption）。本發明之凱斯特菌屬的微生物的培養物或破碎物可包括自凱斯特菌屬的微生物製備的D-阿洛酮糖-3-表異構酶。此外，本發明之凱斯特菌屬的微生物的培養物可包含或可不包含所述微生物。另外，本發明之凱斯特菌屬的微生物的破碎物可為藉由破碎凱斯特菌屬的微生物或其培養物獲得的破碎物或藉由離心所述破碎物獲得的上清液。
在本發明的另一例示性實施例中，用於製備本發明之阿洛酮糖的組成物可進一步包括：D-果糖。
在本發明的另一例示性實施例中，本發明之凱斯特菌屬的微生物可固定於待使用之承載基質（carrier）上。能夠用於本發明中之承載基質的一實例包含（但不限於）瓊脂、瓊脂糖、k鹿角菜膠、海藻酸鹽或聚葡萄胺糖。
用於製備本發明之D-阿洛酮糖的組成物可進一步包括金屬。更特定言之，本發明之金屬可為選自由以下所構成的族群的至少一種金屬：錳、鈣、鎂、鐵、鋰以及鈉。更特定言之，金屬可為金屬離子或金屬鹽，且更特定言之，金屬鹽可為選自由以下所構成的族群的至少一種金屬鹽：LiCl、Na2 SO4 、MgCl2 、NaCl、FeSO4 、MgSO4 、MnCl2 、MnSO4 以及CaCl2 。本發明之金屬離子或金屬鹽可具有以下濃度：0.1毫莫耳至10毫莫耳、0.1毫莫耳至7毫莫耳、0.1毫莫耳至4毫莫耳、0.5毫莫耳至10毫莫耳、0.5毫莫耳至7毫莫耳、0.5毫莫耳至4毫莫耳、1毫莫耳至10毫莫耳、1毫莫耳至7毫莫耳、1毫莫耳至4毫莫耳、2毫莫耳至10毫莫耳、2毫莫耳至7毫莫耳或2毫莫耳至4毫莫耳。
根據本發明的另一例示性實施例，提供一種製備阿洛酮糖的方法，包括：使用於製備描述於本發明中之阿洛酮糖的凱斯特菌屬的微生物或所述組成物與D-果糖接觸。
在一例示性實施例中，可在5.0至9.0之酸鹼值下，在40℃至90℃下且/或持續0.5小時至48小時進行本發明之接觸。
特定言之，可在以下酸鹼值下進行本發明之接觸：酸鹼值6.0至酸鹼值9.0、酸鹼值7.0至酸鹼值9.0、酸鹼值7.5至酸鹼值9.0、酸鹼值6.0至酸鹼值8.5、酸鹼值7.0至酸鹼值8.5或酸鹼值7.5至酸鹼值8.5。
此外，亦可在以下溫度下進行本發明之接觸：40℃至80℃、40℃至75℃、40℃至65℃、50℃至90℃、50℃至80℃、50℃至75℃、50℃至65℃、55℃至90℃、55℃至80℃、55℃至75℃、55℃至65℃、60℃至90℃、60℃至80℃、60℃至75℃、60℃至65℃、65℃至90℃、65℃至80℃或65℃至75℃。
此外，可持續執行本發明之接觸0.5小時或大於0.5小時、1小時或大於1小時、3小時或大於3小時、4小時或大於4小時、5個小時或大於5個小時、6小時或大於6小時及/或48小時或小於48小時、36小時或小於36小時、24小時或小於24小時、18小時或小於18小時、12小時或小於12小時、9小時或小於9小時。
在本發明的另一例示性實施例中，凱斯特菌屬的微生物與本發明之D-果糖的重量比可為1:1至1:5。特定言之，所述重量比可為1:1至1:4、1:1至1:3、1:2至1:5、1:2至1:4、1:2至1:3或1:2.5。
在本發明的另一例示性實施例中，本發明之製備方法可進一步包括：在與D-果糖接觸之前、之後或同時添加金屬。
在本發明的另一例示性實施例中，本發明之製備方法可進一步包括：在接觸D-果糖或添加金屬之後，分離及/或純化阿洛酮糖。本發明之分離及/或純化不受特定限制，且可藉由使用本發明之技術領域中通常使用的方法來進行。舉例而言，分離及/或純化可藉由一或多種已知方法進行，諸如滲析、沉澱、吸附、電泳、離子交換層析法以及分步結晶等，但不限於此。
另外，本發明之製備方法可進一步包括：在分離及/或純化之前或之後分別進行脫色及/或淡化。藉由進行脫色及/或淡化，有可能獲得不含雜質的更精煉的阿洛酮糖。
在本發明的另一例示性實施例中，本發明之製備方法可進一步包括：在與D-果糖接觸、添加金屬、分離及/或純化或進行脫色及/或淡化之後，將D-阿洛酮糖結晶。可藉由使用習知使用的結晶方法進行結晶。舉例而言，可藉由使用冷卻結晶方法進行結晶。
在本發明的再一例示性實施例中，本發明之製備方法可進一步包括：在結晶之前濃縮阿洛酮糖。濃縮可增加結晶效率。
在本發明的再一實施例中，本發明之製備方法可進一步包括：在分離及/或純化之後，將未反應之D-果糖與凱斯特菌屬的微生物接觸，或可進一步包括：在結晶之後，再使用在分離及/或純化中結晶自其分離的母液或其組合。經由額外步驟，可以較高產率獲得阿洛酮糖且可減少丟棄的D-果糖的量，由此得到經濟效益。
根據本發明之製備方法自D-果糖轉換成阿洛酮糖的轉換率以重量計可為5%至50%、10%至50%、20%至50%、25%至50%、30%至50%、5%至40%、10%至40%、20%至40%、25%至40%、30%至40%、5%至35%、10%至35%、20%至35%、25%至35%或30%至35%。
描述於製備本發明之阿洛酮糖的方法中的凱斯特菌屬的微生物、D-果糖、阿洛酮糖、金屬以及承載基質與描述於上述例示性實施例中的相同。
根據本發明的再一例示性實施例，提供一種以寄存編號KCCM11916P存放的細粒凱斯特菌LIS1菌株。
根據本發明的再一例示性實施例，提供一種以寄存編號KCCM12020P存放的污泥凱斯特菌LIS2菌株。
發明效果
根據本發明之凱斯特菌屬的微生物可將D-果糖轉換成阿洛酮糖，同時在50℃或大於50℃的溫度下具有熱穩定性，由此使得有可能以工業規模生產阿洛酮糖。因此，倘若凱斯特菌屬的微生物用於阿洛酮糖之生產，則可經濟地提供阿洛酮糖。
在下文中，將藉由以下實例更詳細地描述本發明。然而，本發明不限於以下實例，且應理解本領域的技術人員在本發明之範疇以及精神內可作出各種修改以及改變。
貫穿本發明之說明書，除非另外指出，否則用以指代特定物質的濃度的「%」是指固體/固體（重量/重量）%、固體/液體（重量/體積）%以及液體/液體（體積/體積）%。
實例
實例 1 ： 將 D- 果糖 轉換成阿洛酮糖的土生微生物的分離
為分離將D-果糖轉換成阿洛酮糖的微生物，使用1%（w/v）阿洛酮糖添加於其中的基本培養基（KH2 PO4 2.4公克/公升、K2 HPO4 5.6公克/公升、（NH4 ）2 SO4 2.6公克/公升、3毫莫耳MnSO4 。 7H2 O 0.1公克/公升、酵母提取物1公克/公升）。將1公克的根際土懸浮於10毫升的0.85%（w/v）NaCl中，且將100微升的懸浮液塗佈在瓊脂培養基上且在30℃下進行培養。具有不同形狀以及大小的菌落選自形成於瓊脂培養基中之菌落中，且每一菌落接種於基本培養基（KH2 PO4 2.4公克/公升、K2 HPO4 5.6公克/公升、（NH4 ）2 SO4 2.6公克/公升、3毫莫耳MnSO4 。 7H2 O 0.1公克/公升、酵母提取物1公克/公升）中，且在30℃下進行振盪培養持續24小時，接著進行離心以僅回收細胞。經回收細胞用0.85%（w/v）NaCl洗滌，且接著藉由以20%（w/w）的細胞濃度添加50%（w/w）D-果糖以及3毫莫耳MnSO4 添加於其中的50毫莫耳Tris-Cl緩衝液（酸鹼值8.0）而使其漂浮，隨後在55℃下與細胞反應2小時。反應產物經離心以自反應溶液移除細胞，且藉由上清液之HPLC確認阿洛酮糖之製備。使用配備有安美納斯（Aminex）HPX-87C管柱（伯樂（BIO-RAD））的HPLC（安捷倫，美國）折射率偵測器（安捷倫1260 RID）進行HPLC分析，其中流動相溶劑為水，溫度為80℃，且流動速率為0.6毫升/分鐘。自D-果糖製備阿洛酮糖的兩種類型的菌株（LIS1及LIS2）大部分藉由HPLC分析（圖1及圖2）選出。
經選擇菌株LIS1及LIS2的16s核糖體DNA（rDNA）的鹼基序列（5'至3'）分別如序列號1及序列號2中所展示。作為序列同源性分析的結果，序列號1展示出與細粒凱斯特菌Ko04的16s核糖體DNA序列（序列號3）約99%的同源性，且序列號2展示出與污泥凱斯特菌B6-12的16s核糖體DNA序列（序列號4）約99%的同源性。因此，分別將菌株LIS1識別為細粒凱斯特菌，且將菌株LIS2識別為污泥凱斯特菌，且分別將細粒凱斯特菌命名為LIS1以及污泥凱斯特菌命名為LIS2。兩種菌株存放於韓國微生物保藏中心（KCCM），其為布達佩斯條約（Budapest Treaty）下的國際保藏中心，其中細粒凱斯特菌LIS1存放於2016年10月20日，且授予寄存編號KCCM11918P，且污泥凱斯特菌LIS2菌株存放於2017年4月24日，且授予寄存編號KCCM12020P。
實例 2 ： 確認藉由凱斯特菌屬的微生物製備阿洛酮糖
確認了是否能夠藉由細粒凱斯特菌LIS1、污泥凱斯特菌LIS2、相同物種的其他菌株以及凱斯特菌屬的不同類型的菌株來製備阿洛酮糖。
特定言之，自韓國典型菌種保藏中心（Korean Collection for Type Cultures；KTCT）以及德國微生物菌種保藏中心（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen）購買八種額外的微生物（相同物種：細粒凱斯特菌KCTC12575以及污泥凱斯特菌KCTC23766；不同物種：琴湖河凱斯特菌KCTC12849；達西溪凱斯特菌KCTC12850、水蛭素凱斯特菌DSM25966、土壤凱斯特菌DSM19436、多脂凱斯特菌KCTC12095以及沼澤凱斯特菌DSM21341），接種於普通培養基（葡萄糖1公克/公升、蛋白腖15公克/公升、NaCl 6公克/公升、酵母提取物3公克/公升）中，且在30℃下進行振盪培養持續24小時，接著進行離心以僅回收細胞。經回收細胞用0.85%（w/v）NaCl洗滌，且接著在與實例1相同的條件下與50%（w/w）D-果糖反應，其中細胞濃度為20%（w/w）。反應完成之後，藉由HPLC分析反應上清液以確認阿洛酮糖的製備量。以與實例1中相同之方式進行HPLC分析。藉由反應之後所產生的阿洛酮糖的量的重量與反應之前D-果糖的量的重量的比率計算阿洛酮糖轉換率。
因此，確認凱斯特菌屬的所有八種菌株自D-果糖製備了阿洛酮糖，且此展示在高溫下凱斯特菌屬的所有類型的微生物可自D-果糖產生阿洛酮糖（表1、圖3至圖10）。 [表1]
根據以上描述，本領域的技術人員將理解在不修改本發明之技術理念或基本特性的情況下可以其他特定形式作出本發明。就此而言，應理解上文所描述之實施例在所有態樣中為說明性且不具限定性。本發明的範疇應解釋為涵蓋自隨附申請專利範圍及其等效物的含義以及範疇所衍生的所有變體或變化而非實施方式。
無
圖1是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用細粒凱斯特菌LIS1自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖2是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用污泥凱斯特菌LIS2自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖3是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用細粒凱斯特菌KCTC12575自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖4是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用污泥凱斯特菌KCTC23766自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖5是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用琴湖河凱斯特菌KCTC12849自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖6是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用多脂凱斯特菌KCTC12095自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖7是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用達西溪凱斯特菌KCTC12850自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖8是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用水蛭素凱斯特菌DSM25966自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖9是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用土壤凱斯特菌DSM19436自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。 圖10是根據本發明的一例示性實施例的展示可能使用沼澤凱斯特菌DSM21341自D-果糖製備阿洛酮糖的HPLC分析資料。
細粒凱斯特菌L1S1 [國外寄存資訊] 保藏機構名稱：韓國微生物保藏中心（KCCM） 存放日期：20161020 寄存編號：KCCM11916P 污泥凱斯特菌LIS2 [國外寄存資訊] 保藏機構名稱：韓國微生物保藏中心（KCCM） 存放日期：20170424 寄存編號：KCCM12020P
＜110＞ CJ 第一製糖 ＜120＞ 使用凱斯特菌屬的微生物製備D-阿洛酮糖的方法 ＜130＞ 74792-PI-479 ＜150＞ KR 10-2016-0152948 ＜151＞ 2016-11-16 ＜160＞ 4 ＜170＞ KopatentIn 2.0 ＜210＞ 1 ＜211＞ 1401 ＜212＞ DNA ＜213＞ 細粒凱斯特菌LIS1的16s rDNA序列 ＜400＞ 1 agggggttgg cggcaggcct accatgcaag tcgacgccct agcaataggg agtggcagac 60 gggtgagtaa cgcgtgggaa tctaccttgt ggtacggaac aaccaaggga aactttggct 120 aataccgtat gagcccttcg ggggaaagat ttatcgccat aagatgagcc cgcgtaggat 180 tagctagttg gtgaggtaat ggctcaccaa ggcgacgatc cttagctggt ctgagaggat 240 gaccagccac actgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa 300 tattggacaa tgggcgcaag cctgatccag ccatgccgcg tgtgtgatga aggccttagg 360 gttgtaaagc actttcgccg atgaagataa tgactgtagt cggagaagaa gccccggcta 420 acttcgtgcc agcagccgcg gtaatacgaa gggggctagc gttgttcgga attactgggc 480 gtaaagcgta cgtaggcgga tcgttaagtt aggggtgaaa tcccgaggct caacctcgga 540 actgcctctg atactggcga tcttgagtcc gggagaggtg agtggaactc ctagtgtaga 600 ggtgaaattc gtagatatta ggaagaacac cagtggcgaa ggcggctcac tggcccggaa 660 ctgacgctga ggtacgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 720 ccgtaaacga tggatgctag ccgtcgggga gcttgctctt cggtggcgca gctaacgcat 780 taagcatccc gcctggggag tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacgggggc 840 ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgcagaacc ttaccagctc 900 ttgacatgtc acgtatgggt accggagacg gtatccttca gttcggctgg cgtgaacaca 960 ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1020 cgcaaccctc gcctctagtt gccatcattc agttgggcac tctagaggga ctgccggtga 1080 taagccgaga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacgg gctgggctac 1140 acacgtgcta caatggcggt gacaatgggc agcgaaaggg cgacctggag ctaatctcaa 1200 aaagccgtct cagttcggat tgcactctgc aactcgagtg catgaagttg gaatcgctag 1260 taatcgtgga tcagcatgcc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1320 acaccatggg agttggtttt acccgaaggc gttgcgctaa cccagcaatg gaggcaggcg 1380 acctctaaag taactactgt g 1401 ＜210＞ 2 ＜211＞ 1398 ＜212＞ DNA ＜213＞ 污泥凱斯特菌LIS2的16s rDNA序列 ＜400＞ 2 gtgctatcgg gtacgctaag atgcttatgg ctcaccctgg ctacagggag tggcagacgg 60 gtgagtaacg cgtgggaatc taccttgtgg tacggaacaa ccaagggaaa ctttggctaa 120 taccgtatga gcccttcggg ggaaagattt atcgccataa gatgagcccg cgtaggatta 180 gctagttggt gaggtaatgg ctcaccaagg cgacgatcct tagctggtct gagaggatga 240 ccagccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata 300 ttggacaatg ggcgcaagcc tgatccagcc atgccgcgtg tgtgatgaag gccttagggt 360 tgtaaagcac tttcgccgat gaagataatg actgtagtcg gagaagaagc cccggctaac 420 ttcgtgccag cagccgcggt aatacgaagg gggctagcgt tgttcggaat tactgggcgt 480 aaagcgtacg taggcggatt gttaagtgag gggtgaaatc ccgaggctca acctcggaac 540 tgcctttcat actggcaatc ttgagtccgg gagaggtgag tggaactcct agtgtagagg 600 tgaaattcgt agatattagg aagaacacca gtggcgaagg cggctcactg gcccggaact 660 gacgctgagg tacgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc 720 gtaaacgatg gatgctagcc gtcggggagc ttgctcttcg gtggcgcagc taacgcatta 780 agcatcccgc ctggggagta cggtcgcaag attaaaactc aaaggaattg acgggggccc 840 gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gcagaacctt accagctctt 900 gacatgtcac gtatgggtac cggagacggt attcttcagt tcggctggcg tgaacacagg 960 tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1020 caaccctcgc ccttagttgc catcattcag ttgggcactc tagggggact gccggtgata 1080 agccgagagg aaggtgggga tgacgtcaag tcctcatggc ccttacgggc tgggctacac 1140 acgtgctaca atggcggtga caatgggcag cgaaggggcg acctggagct aatctcaaaa 1200 aaccgtctca gttcggattg cactctgcaa ctcgagtgca tgaagttgga atcgctagta 1260 atcgtggatc agcatgccac ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac 1320 accatgggag tcggttttac ctgtaggcgt tgcgctaacc cagcaagcgt aacaggcgac 1380 cacgaaagga gtaccata 1398 ＜210＞ 3 ＜211＞ 1429 ＜212＞ DNA ＜213＞ 細粒凱斯特菌Ko04的16s rDNA的部分序列 ＜400＞ 3 ccccgtagaa cgaacgctgg cggcaggcct aacacatgca agtcgaacgc cctagcaata 60 gggagtggca gacgggtgag taacgcgtgg gaatctacct tgtggtacgg aacaaccaag 120 ggaaactttg gctaataccg tatgagccct tcgggggaaa gatttatcgc cataagatga 180 gcccgcgtag gattagctag ttggtgaggt aatggctcac caaggcgacg atccttagct 240 ggtctgagag gatgaccagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 300 cagcagtggg gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc gcgtgtgtga 360 tgaaggcctt agggttgtaa agcactttcg ccgatgaaga taatgactgt agtcggagaa 420 gaagccccgg ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc 480 ggaattactg ggcgtaaagc gtacgtaggc ggatcgttaa gttaggggtg aaatcccgag 540 gctcaacctc ggaactgcct ctgatactgg cgatcttgag tccgggagag gtgagtggaa 600 ctcctagtgt agaggtgaaa ttcgtagata ttaggaagaa caccagtggc gaaggcggct 660 cactggcccg gaactgacgc tgaggtacga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc 720 ctggtagtcc acgccgtaaa cgatggatgc tagccgtcgg ggagcttgct cttcggtggc 780 gcagctaacg cattaagcat cccgcctggg gagtacggtc gcaagattaa aactcaaagg 840 aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgcaga 900 accttaccag ctcttgacat gtcacgtatg ggtaccggag acggtatcct tcagttcggc 960 tggcgtgaac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1020 gtcccgcaac gagcgcaacc ctcgcctcta gttgccatca ttcagttggg cactctagag 1080 ggactgccgg tgataagccg agaggaaggt ggggatgacg tcaagtcctc atggccctta 1140 cgggctgggc tacacacgtg ctacaatggc ggtgacaatg ggcagcgaaa gggcgacctg 1200 gagctaatct caaaaagccg tctcagttcg gattgcactc tgcaactcga gtgcatgaag 1260 ttggaatcgc tagtaatcgt ggatcagcat gccacggtga atacgttccc gggccttgta 1320 cacaccgccc gtcacaccat gggagttggt tttacccgaa ggcgttgcgc taacccagca 1380 atgggaggca ggcgaccacg gtagggtcag cgacttgggg tgacaaaaa 1429 ＜210＞ 4 ＜211＞ 1456 ＜212＞ DNA ＜213＞ 污泥凱斯特菌B6-12的16s rDNA的部分序列 ＜400＞ 4 tcagaacgaa cgctggcggc aggcctaaca catgcaagtc gaacgccctg gcaacaggga 60 gtggcagacg ggtgagtaac gcgtgggaat ctaccttgtg gtacggaaca accaagggaa 120 actttggcta ataccgtatg agcccttcgg gggaaagatt tatcgccata agatgagccc 180 gcgtaggatt agctagttgg tgaggtaatg gctcaccaag gcgacgatcc ttagctggtc 240 tgagaggatg accagccaca ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc 300 agtggggaat attggacaat gggcgcaagc ctgatccagc catgccgcgt gtgtgatgaa 360 ggccttaggg ttgtaaagca ctttcgccga tgaagataat gactgtagtc ggagaagaag 420 ccccggctaa cttcgtgcca gcagccgcgg taatacgaag ggggctagcg ttgttcggaa 480 ttactgggcg taaagcgtac gtaggcggat tgttaagtga ggggtgaaat cccgaggctc 540 aacctcggaa ctgcctttca tactggcaat cttgagtccg ggagaggtga gtggaactcc 600 tagtgtagag gtgaaattcg tagatattag gaagaacacc agtggcgaag gcggctcact 660 ggcccggaac tgacgctgag gtacgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg 720 tagtccacgc cgtaaacgat ggatgctagc cgtcggggag cttgctcttc ggtggcgcag 780 ctaacgcatt aagcatcccg cctggggagt acggtcgcaa gattaaaact caaaggaatt 840 gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgcagaacct 900 taccagctct tgacatgtca cgtatgggta ccggagacgg tattcttcag ttcggctggc 960 gtgaacacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc 1020 cgcaacgagc gcaaccctcg cccttagttg ccatcattca gttgggcact ctagggggac 1080 tgccggtgat aagccgagag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcctcatgg cccttacggg 1140 ctgggctaca cacgtgctac aatggcggtg acaatgggca gcgaaggggc gacctggagc 1200 taatctcaaa aaaccgtctc agttcggatt gcactctgca actcgagtgc atgaagttgg 1260 aatcgctagt aatcgtggat cagcatgcca cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1320 ccgcccgtca caccatggga gttggtttta cccgaaggcg ttgcgctaac ccagcaatgg 1380 gaggcaggcg accacggtag ggtcagcgac tggggtgaag tcgtaacaag gtagccgtag 1440 gggaacctgc ggctgg 1456

Claims (7)

  1. 一種用於製備D-阿洛酮糖的組成物，包括：凱斯特菌屬的微生物。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用於製備D-阿洛酮糖的組成物，其中所述凱斯特菌屬的所述微生物是選自由以下所構成的族群的所述凱斯特菌屬的至少一種微生物：細粒凱斯特菌、污泥凱斯特菌、琴湖河凱斯特菌、多脂凱斯特菌、達西溪凱斯特菌、水蛭素凱斯特菌、土壤凱斯特菌以及沼澤凱斯特。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之用於製備D-阿洛酮糖的組成物，進一步包括：D-果糖。
  4. 一種用於製備D-阿洛酮糖的方法，包括：使凱斯特菌屬的微生物與D-果糖接觸。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之用於製備D-阿洛酮糖的方法，其中在5.0至9.0的pH下、在40℃至90℃的溫度下或持續0.5小時至48小時進行所述接觸。
  6. 一種細粒凱斯特菌LIS1菌株，以國外寄存編號KCCM11916P存放。
  7. 一種污泥凱斯特菌LIS2菌株，以國外寄存編號KCCM12020P存放。
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