TW201821105A - 使用ｈｄａｃ１１抑制劑之方法 - Google Patents

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珍妮佛 李
波爾莉 伯耐特
蘇里庫馬 洽勒潘
尼可拉斯 巴賽克
琪雅拉 康提
傑米 A 艾斯可比多
韓冰松
大衛 R 二世 藍西亞
國先 劉
馬修 W 馬汀
佩怡 黃
艾莉克珊卓 路得尼茲卡雅
珍妮佛 R 湯瑪生
孝彰 鄭
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美商弗瑪治療公司
美商Ｈ李莫菲特癌症中心及研究協會公司
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Abstract

本發明提供組蛋白去乙醯化酶11 (HDAC11)之抑制劑治療諸如細胞增殖性疾病之疾病及/或病症之方法及用途。

Description

使用HDAC11抑制劑之方法
本發明係關於可用於治療某些疾病及/或病症，包括與細胞增殖有關之疾病及病症(例如癌症)及/或與具有幹細胞活性之基因表現增加有關之疾病及病症的組蛋白去乙醯化酶11 (HDAC11)之抑制劑。本發明至少部分提供包括HDAC11抑制劑的用於治療或預防疾病及/或病症之方法及組成物。
與細胞增殖有關之疾病，諸如癌症，一直為嚴重的公共健康問題。舉例而言，根據American Cancer Society, Cancer Facts & Figures 2016 (www.cancer.org/acs/groups/content/@research/ documents/document/acspc-047079.pdf)，在美國，預計僅在2016年就有約595,690人死於癌症。儘管已經鑑別出與某些癌症有關的許多標靶，但開發選擇性療法係一項挑戰。因此，仍然需要治療與細胞增殖有關之疾病及/或病症的有效、安全且具選擇性之方法。
本發明提供用於治療或預防與細胞增殖有關及/或與幹細胞活性相關基因擴增有關之疾病及/或病症的化合物及方法。本發明涵蓋認識到，HDAC11抑制劑可能對於治療與細胞增殖有關及/或與幹細胞活性相關基因之活化(例如擴增)有關之疾病及/或病症具有潛在益處。在一些實施例中，與細胞增殖及/或與幹細胞活性相關基因之活化(例如擴增)有關之疾病或病症係癌症。
用HDAC11抑制劑治療之癌症包括但不限於，胃腸癌、神經系統癌症、食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、皮膚癌、肺癌、乳癌、鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、前列腺癌、鼻竇癌、白血病、淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤)、骨髓瘤以及骨髓增生性病症。在一些實施例中，癌症係與JAK/STAT信號傳導之活化有關。在一些實施例中，癌症係與信號轉導及轉錄活化蛋白(STAT)，諸如STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5 (STAT5A及STAT5B)及/或STAT6之活化有關。在一些實施例中，STAT轉錄因子之活化係與基因表現增加及/或蛋白質磷酸化減少有關。在一些實施例中，癌症係與STAT3活化有關。在一些特定實施例中，與STAT3活化有關之癌症係乳癌。在一些實施例中，癌症係與性別決定區Y (sex determining region Y，SRY)-框蛋白2 (SOX2)有關。在一些實施例中，SOX2之活化係SOX2基因表現增加。
本發明提供治療癌症之方法，其中一或多個癌細胞展現幹細胞樣特性。在一些實施例中，方法包括向有需要之患者投予有效量之HDAC11抑制劑。在一些實施例中，展現幹細胞樣特性之一或多個癌細胞係與癌症幹細胞標記物之表現(例如基因擴增)或活性增加有關。在一些實施例中，癌症幹細胞標記物係JAK/STAT信號傳導路徑一或多種組分之活化。在一些實施例中，癌症幹細胞標記物係SOX2之表現(例如基因擴增)或活性增加。在一些實施例中，癌症幹細胞標記物係STAT3之表現(例如基因擴增)或活性增加。
在一些實施例中，本發明提供治療與組蛋白去乙醯化酶11 (HDAC11)有關之疾病及/或病症的方法。與HDAC11有關之疾病及/或病症包括例如具有展現癌症幹細胞特性及/或與癌症幹細胞活性相關基因之擴增有關之癌細胞的細胞增殖性疾病或病症。
在一些實施例中，用於治療HDAC11抑制劑之疾病及/或病症係骨髓增生性贅瘤(MPN)。在一些實施例中，用HDAC11抑制劑治療之MPN包括但不限於，真性紅細胞增多症(PV)、特發性血小板增多症(ET)及原發性骨髓纖維化(PMF)。
在一些實施例中，對HDAC11抑制劑治療起反應之細胞係癌症幹細胞(CSC)。在一些實施例中，對HDAC11抑制劑治療起反應之細胞係與CSC標記物表現有關之細胞。在一些實施例中，CSC標記物係JAK/STAT信號傳導路徑一或多種組分(例如SOX2及/或STAT3)之活化。
在一些實施例中，本發明提供一種抑制及/或減少癌症患者體內幹細胞樣癌細胞增殖之方法，該方法包括向該患者投予如本文所述之HDAC11抑制劑。在一些實施例中，幹細胞樣癌症係與JAK/STAT信號傳導之活化有關。在一些實施例中，幹細胞樣癌症係與SOX2之基因表現有關。在一些實施例中，幹細胞樣癌症係與STAT3活化有關。
在一些實施例中，癌症係肺癌(例如肺腺癌、NSCLC)、血液癌症(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤及骨髓增生性病症)、皮膚癌、乳癌、鱗狀細胞癌、胃腸癌(例如食道癌、胃癌)、子宮癌、前列腺癌及/或神經系統癌症。
在一些實施例中，本發明提供一種治療血液癌症之方法，該方法包括向患者投予有效量之HDAC11抑制劑。在一些實施例中，血液癌症係骨髓增生性病症、淋巴瘤、白血病及/或骨髓瘤。在一些實施例中，血液癌症係骨髓增生性病症。在某些實施例中，骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物(例如小分子)。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係小分子化合物。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍、2,000倍、3,000倍或更高倍數。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及HDAC10中每一種之至少10倍。在一些實施例中，HDAC11抑制劑對人類HDAC11具有特異性。
本發明亦涵蓋認識到，抑制HDAC11可能對治療或預防炎症性疾病及/或自身免疫性疾病有益。在一些實施例中，用HDAC11抑制劑治療之疾病或病症係急性或慢性免疫性或炎症性病症。在一些實施例中，用HDAC11抑制劑治療之疾病或病症係炎症性腸病、銀屑病、類風濕性關節炎、多發性硬化及/或阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)。
在一些實施例中，本文所述之方法可以包括投予一種、兩種、三種或多於三種HDAC11抑制劑。
在一些實施例中，本文所述之方法可以另外包括向有需要之患者投予JAK2抑制劑。在一些實施例中，JAK2抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在某些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)、CYT387、來他替尼(lestaurtinib)或帕瑞替尼(pacritinib)。
在一些實施例中，向已投予或將投予JAK2抑制劑之患者投予HDAC11抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，向已投予或將投予HDAC11抑制劑之患者投予JAK2抑制劑，由此該患者接受二者之治療。
在一些實施例中，本發明提供一種治療患有骨髓增生性病症之患者的方法，該方法包括向有需要之患者投予HDAC11抑制劑及JAK2抑制劑。在一些實施例中，骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
在一些實施例中，本文所述之方法可以另外包括向該患者投予刺猬路徑抑制劑。在一些實施例中，刺猬路徑抑制劑係維莫德吉(vismodegib)、艾莫德吉(erismodegib)、BMS-833923、格拉德吉(glasdegib)、塔拉德吉(taladegib)或薩瑞德吉(saridegib)。在一些實施例中，向已投予或將投予刺猬路徑抑制劑之患者投予HDAC11抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，向已投予或將投予HDAC11抑制劑之患者投予刺猬路徑抑制劑，由此該患者接受二者之治療。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍的小分子。
在一些實施例中，本發明提供一種用於治療患有對JAK2抑制劑具有抗性之骨髓增生性病症的患者之方法，其中該方法包括向該患者投予HDAC11抑制劑。在一些實施例中，骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
在某些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍的小分子。
在一些實施例中，本發明提供一種治療患有骨髓增生性病症之患者的方法，其中該方法包括向患者投予HDAC11抑制劑及刺猬路徑抑制劑。在一些實施例中，骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍的小分子。在一些實施例中，刺猬路徑抑制劑係維莫德吉、艾莫德吉、BMS-833923、格拉德吉、塔拉德吉或薩瑞德吉。
在一些實施例中，本發明提供一種治療癌症之方法，在該癌症中，一或多個癌細胞展現幹細胞樣特性，其中該方法包括用一線療法治療患者及向該患者投予HDAC11抑制劑，由此在用HDAC11抑制劑治療之後，減少或消除自該一線療法存活之任何癌細胞。
在一些實施例中，癌症係肺癌(例如肺腺癌、NSCLC)、血液癌症(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤及骨髓增生性病症)、皮膚癌、乳癌、鱗狀細胞癌、胃腸癌(例如食道癌、胃癌)、子宮癌、前列腺癌及/或神經系統癌症。在一些實施例中，癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌及/或鼻竇癌。在某些實施方案中，該癌症是乳癌。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍的小分子。在某些實施例中，一線療法係切除術、放射及/或幹細胞移植。
在一些實施例中，根據本發明使用之HDAC11化合物具有如本文所定義之式I、I’或II。
在一些實施例中，本發明提供一種式I化合物：(I) 其中Y1 、Y2 、Y3 、Q、L、Z、X1 、X2 、X3 及X4 各自如本文所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種式I’化合物：(I') 其中Y1 、Y2 、Y3 、Y4 、Q、L、Z、X1 、X2 、X3 及X4 各自如本文所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種式II化合物：(II) 其中Y1 、Y2 、Y3 、R、L、m、n、q、r、X1 、X2 、X3 、X4 、X5 及X6 各自如本文所定義。
本申請案主張2016年10月20日提交之美國臨時申請案系列第62/410,766號、2016年10月20日提交之第62/410,767號及2016年10月20日提交之第62/410,768號的權益，所有該等申請案之內容以引用之方式整體併入本文中。
HDAC11與RNA剪接相關蛋白(例如SMN1、Dicer1、Gemin3及Gemin4)、細胞週期相關蛋白(例如Cdt1、BubR1及Cdc25)及免疫細胞信號傳導蛋白(例如IL-10及OX40配體)相互作用或調控該等蛋白質。因此，抑制HDAC11可以具有下游效應，該等下游效應可以在諸如細胞增殖性疾病之某些疾病的發展中起作用。本發明提供使用HDAC11抑制劑治療細胞增殖性疾病及病症，包括MPN、血液惡性疾病及實體腫瘤惡性疾病之方法。本發明亦提供使用HDAC11抑制劑治療具有展現癌症幹細胞特性及/或與癌症幹細胞活性相關基因(例如SOX2以及信號轉導及轉錄活化蛋白3(STAT3))之擴增有關之癌細胞的細胞增殖性疾病或病症之方法。
本發明部分基於以下發現：HDAC11抑制劑阻止JAK2及骨髓增生性白血病基因(MPL)突變細胞株以及患者來源之樣品的生長及存活。此外，如本文詳細論述，在使用MPL突變體骨髓移植小鼠之MPN模型中，敲除HDAC11使血小板增多及紅血球增多減少。本發明亦部分基於以下發現：HDAC11抑制劑阻止幹細胞樣癌細胞生長且亦減少某些幹細胞轉錄因子，諸如SOX2及STAT3之表現。
在以下附加描述中陳述本發明之詳情。儘管可使用與本文所描述之方法及材料類似或等效的方法及材料來實施或測試本發明，但現描述說明性方法及材料。本發明之其他特徵、目的及優勢將自實施方式和圖式以及申請專利範圍顯而易知。在說明書及所附申請專利範圍中，單數形式亦包括複數形式，除非上下文另作清楚規定。除非另作定義，否則本文所使用之所有科技術語均具有與本發明所屬領域之普通技術人員通常所瞭解相同的含義。本說明書中引用的所有專利及出版物皆以引用之方式整體併入本文中。
除非明確作相反指示，否則本發明之實踐將採用此項技術之技能範圍內的病毒學、免疫學、微生物學、分子生物學及重組DNA技術的習知方法，以下描述其中許多方法用於說明之目的。該等技術將於文獻中完整地闡明。參見例如，Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第2版, 1989)；Maniatis等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)；DNA Cloning: A Practical Approach, 第I及II卷 (D. Glover編)；Oligonucleotide Synthesis (N. Gait編, 1984)；Nucleic Acid Hybridization (B. Hames及S. Higgins編, 1985)；Transcription and Translation (B. Hames及S. Higgins編, 1984)；Animal Cell Culture (R. Freshney編, 1986)；Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984)。某些定義
冠詞「一個(種)」在本文中用於指一個(種)或一個(種)以上(亦即，至少一個(種))該冠詞之語法賓語。舉例而言，「一個(種)要素」意思指一個(種)要素或多於一個(種)要素。
除非另作指示，否則術語「及/或」在本發明中用於指「及」或「或」。
如本文所使用，術語「抑制劑」涵蓋阻斷、抑制及/或降低HDAC11之表現或活性的分子。如本文所使用，抑制劑可以為多肽、聚核苷酸、抗體或化合物。HDAC11活性之實例包括脫乙醯化酶功能及與蛋白質複合物或轉錄調控子，諸如啟動子締合。
短語「與……相互作用」及「與……締合」在本文中可互換使用，用以描述經由非共價相互作用形成多蛋白質複合物。在一些實施例中，HDAC11與其所締合之蛋白質共沈澱。
「有效量」當結合抑制劑使用時係有效治療或預防受試者之如本文所描述之疾病的量。
如本發明所使用，術語「載劑」涵蓋涉及將醫藥劑(例如HDAC11抑制劑或JAK2抑制劑)自受試者之一個器官或身體之一部分載運或轉運至另一器官或身體之一部分的材料、組成物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或封裝材料。
關於受試者之術語「治療」係指改善該受試者之病症之至少一種症狀。治療包括治癒、改善或至少部分緩解該病症及/或與該病症有關之症狀。
除非另作指示，否則術語「病症」在本發明中用於指術語疾病、病況或病痛，並且可與該等術語互換使用。
術語「癌症」、「惡性疾病」、「贅瘤」、「腫瘤」及「癌瘤」在本文中用於指這樣一類細胞，該等細胞展現相對異常、不受控制及/或自主生長，由此其展現以明顯喪失對細胞增殖之控制為特徵的異常生長表型。在一些實施例中，腫瘤可以為或包含癌前(例如良性)、惡性、轉移前、轉移及/或非轉移性細胞。本發明特定地鑑別與其教示特別相關的某些癌症。在一些實施例中，相關癌症可以實體腫瘤為特徵。在一些實施例中，相關癌症可以血液腫瘤為特徵。一般而言，此項技術中已知的不同類型癌症之實例包括例如血液癌症，包括白血病、淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤)、骨髓瘤及骨髓增生性病症；肉瘤；黑素瘤；腺瘤；實體組織之癌瘤；口、咽、喉及肺之鱗狀細胞癌；肺癌；泌尿生殖器癌症，諸如前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮癌及子宮內膜癌，以及腎細胞癌；骨癌、胰臟癌、皮膚癌、皮膚或眼內黑素瘤、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、頭頸癌、乳癌、胃腸癌及神經系統癌症；良性病變，諸如乳頭瘤；及類似癌症。
如本發明中所使用，術語「投予(administer/administering/administration)」係指向受試者直接投予治療劑，如化合物或該化合物之醫藥學上可接受之鹽或組成物，或向該受試者投予該治療劑之前藥衍生物或類似物，該前藥衍生物或類似物可以在受試者體內形成等效量之活性化合物。
「患者」或「受試者」係哺乳動物，例如人類、小鼠、大鼠、豚鼠、犬、貓、馬、牛、豬，或非人類靈長類動物，諸如猴、黑猩猩、狒狒或恆河猴。
術語「互補」及「互補性」係指藉由鹼基配對規則關聯之聚核苷酸(亦即，核苷酸序列)。舉例而言，序列「A-G-T」與序列「T-C-A」互補。互補可以係部分的，其中根據鹼基配對規則，僅一些核酸鹼基匹配。或者，核酸之間可以存在「完全」或「全部」互補。核酸鏈之間之互補程度對核酸鏈之間之雜交效率及強度具有顯著影響。儘管通常需要完美互補，但一些實施例可以關於標靶RNA包括一或多個(例如10、9、8、7、6、5、4、3、2或1)錯配。在寡聚物內任何位置處之變異亦包括在內。在某些實施例中，鄰近寡聚物末端之序列變異一般優於在內部中之變異，且若存在變異，則該等變異可以在5'及/或3'末端之約10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個核苷酸範圍內。
「分離」意謂一種物質及/或實體已(1)與在最初產生時(無論在自然界中及/或在實驗環境中)與其締合之組分中之至少一部分分離；及/或(2)由人手工設計、產生、製備及/或製造。分離之物質及/或實體可以自最初與其締合之其他組分約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或超過約99%分離。在一些實施例中，分離之物質或實體係「純」的。如本文所使用，若一種物質或實體實質上或基本上不含在其天然狀態下通常與其伴隨存在之組分，則其為「純」的。在一些實施方案中，一種物質及/或實體係約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或超過約99%純。舉例而言，如本文所使用，「分離之聚核苷酸」或「分離之寡核苷酸」可以指已純化掉或移除在天然存在之狀態下側接其之序列的聚核苷酸，例如這樣一種DNA片段，該片段已自通常與其相鄰之序列移出。在另一實例中，如本文所使用，「分離之多肽」或「分離之抗體」可以指已純化掉或移除其天然存在之環境的一或多種組分之多肽(例如抗體)。
術語「減弱」或「抑制」一般可以指如根據診斷領域中之常規技術所量測的一或多種本發明之抑制劑「降低」相關生物活性或細胞反應，諸如催化活性或本文所述之疾病或病況之症狀的能力。熟習此項技術者將易於瞭解相關生理或細胞反應(在活體內或活體外)，且可以包括MPN症狀或病狀之減輕。生物活性之「降低」相較於由無抑制劑或對照組成物產生之生物活性可以為「統計學顯著」的，且可以包括1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%降低，包括其間所有整數在內。
「同源性」係指相同或組成性保守取代之胺基酸的數量百分比。同源性可以使用序列比較程式，諸如GAP測定(Deveraux等人, 1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395)。以此方式，與本文所引用之序列長度類似或實質上不同的序列可以藉由在比對中插入空位進行比較，該等空位係例如藉由GAP所用比較算法測定。
如本文所使用，表述「序列一致性」或例如，包含「與……50%一致之序列」係指在比較窗內各序列在逐核苷酸基礎上或在逐胺基酸基礎上一致之程度。因此，「序列一致性百分比」可以藉由以下方式計算：在比較窗內比較兩個最佳對準之序列，測定兩個序列中存在一致核酸鹼基(例如A、T、C、G、I)或一致胺基酸殘基(例如Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys及Met)之位置的數量以得到匹配位置之數量，用匹配位置之數量除以比較窗中之位置總數(亦即，窗大小)並將結果乘以100，得到序列一致性百分比。
用於描述兩個或多於兩個聚核苷酸或多肽之間之序列關係的術語包括「參考序列」、「比較窗」、「序列一致性」、「序列一致性百分比」及「大體上一致」。「參考序列」的長度係至少8或10個但常常15至18個且通常至少25個單體單元，包括核苷酸及胺基酸殘基在內。由於兩個聚核苷酸各自可以包含(1)在該兩個聚核苷酸之間類似之序列(亦即，僅完整聚核苷酸序列之一部分)，及(2)在該兩個聚核苷酸之間不同之序列，故兩個(或多於兩個)聚核苷酸之間之序列比較通常藉由比較該兩個聚核苷酸在「比較窗」內之序列以鑑別並比較具有序列相似性之局部區域來進行。「比較窗」係指具有至少6個連續位置，通常約50至約100個，更通常約100至約150個連續位置之概念性區段，其中在最佳對準兩個序列之後，將一個序列與具有相同數量連續位置之參考序列相比較。對於最佳對準之兩個序列，比較窗相較於參考序列(不包含添加或缺失之序列)可以包含約20%或更少之添加或缺失(亦即，空位)。用於比對比較窗的最佳序列對準可以藉由計算機實施算法(Wisconsin Genetics套裝軟體7.0版中之GAP、BESTFIT、FASTA及TFASTA，Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, Wis., USA)或藉由檢查及最佳對準(亦即，在比較窗內實現最高同源係百分比)來進行。亦可參考BLAST系列程式，如例如Altschul等人, 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389所揭示。有關序列分析之詳細論述可見於Ausubel等人, 「Current Protocols in Molecular Biology,」 John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, 第15章第19.3單元。
「dsRNA」係指具有雙鏈體結構且包含兩個互補並且反平行之核酸鏈(亦即，有義鏈及反義鏈)之核糖核酸分子。dsRNA中並非所有的核苷酸皆必須展現Watson-Crick鹼基配對；該兩條RNA鏈可以實質上互補。該等RNA鏈可以具有相同或不同數量之核苷酸。術語「dsRNA」亦包括「siRNA」或短干擾RNA。
「載體」或「核酸構建體」意謂衍生自例如質體、噬菌體、酵母或病毒之聚核苷酸分子，較佳為DNA分子，在該質體、噬菌體、酵母或病毒中可插入或選殖聚核苷酸。載體較佳含有一或多個獨特的限制性位點，且能夠在指定宿主細胞，包括標靶細胞或組織或其祖細胞或組織中自主複製，或者可與指定宿主之基因組整合以使選殖之序列可複製。因此，載體可以為自主複製之載體，亦即，以染色體外實體形式存在之載體，其複製與染色體複製無關，例如線性或閉環質體、染色體外元件、微型染色體或人工染色體。載體可以含有用於確保自複製之任何構件。或者，該載體可為當引入宿主細胞中時整合於基因組中並與整合入載體之染色體一起複製的載體。
野生型基因或基因產物係最常以群體形式觀察到且由此任意設計基因之「正常」或「野生型」形式者。
為本發明之目的，化學元素係根據Handbook of Chemistry and Physics, 第75版之元素週期表(CAS版)標識。此外，有機化學之一般原理描述於「Organic Chemistry」, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999；以及「March’s Advanced Organic Chemistry」, 第5版, 編輯: Smith, M.B.及March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001中，其完整內容以引用之方式併入本文中。
本文使用之縮寫具有其在化學及生物領域內之習知含義。本文陳述之化學結構及化學式係根據化學領域中已知之標準化學價規則構建。
除非另外規定，否則本文描繪之結構亦意欲包括該結構之所有異構(例如對映異構、非對映異構及幾何(或構象)異構)形式；例如，關於各不對稱中心之R及S構型、Z及E雙鍵異構體，以及Z及E構象異構體。因此，本發明化合物之單一立體化學異構體以及對映異構體、非對映異構體及幾何異構體(或構象異構體)混合物在本發明之範圍內。除非另作規定，否則本發明化合物之所有互變異構形式均在本發明之範圍內。此外，除非另作規定，否則本文中所描繪之結構亦意圖包括不同之處僅在於存在一或多個同位素富集之原子的化合物。舉例而言，具有本發明結構且包括氫經氘或氚置換或者碳經富集13 C或14 C之碳置換的化合物係在本發明之範圍內。此類化合物適用作例如分析工具、生物檢定法中之探針或根據本發明之治療劑。
術語「烷基芳基」係指連接至相鄰烷基之芳基，其中鍵聯係位於烷基端。「(C1 -C6 )烷基芳基」係指含有鍵結至芳基之C1 -C6 烷基的基團。因此，如苯甲基、苯乙基或三甲基苯之基團構成本發明之烷基芳基例示性代表。
術語「芳基」係指具有1至2個芳族環之環狀芳族烴基，包括單環或雙環基團，諸如苯基、聯苯或萘基。當含有兩個芳族環(雙環等)時，芳基之芳族環可以在單一點接合(例如聯苯)，或為稠合的(例如萘基)。芳基可以視情況在任一連接點經一或多個取代基，例如1至5個取代基取代。例示性取代基包括但不限於，-H、-鹵素、-O-C1 -C6 烷基、-C1 -C6 烷基、-OC2 -C6 烯基、-OC2 -C6 炔基、-C2 -C6 烯基、-C2 -C6 炔基、-OH、-OP(O)(OH)2 、-OC(O)C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-OC(O)OC1 -C6 烷基、-NH2 、-NH(C1 -C6 烷基)、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 -C1 -C6 烷基、-S(O)NHC1 -C6 烷基及-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 。該等取代基本身可視情況經取代。此外，當含有兩個稠合環時，本文所定義之芳基可具有飽和、不飽和或部分飽和之環與芳族環稠合。該等芳基之例示性環系統包括茚滿基、茚基、四氫萘基及四氫苯并輪烯基。
除非另作明確定義，否則「雜芳基」意謂具有5至24個環原子之單價單環芳族基團或多環芳族基團，該等環原子中含有一或多個選自N、S、P及O之環雜原子，其餘環原子為C。本文所定義之雜芳基亦指雙環雜芳族基團，其中雜原子係選自N、S、P及O。芳族基團視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。實例包括但不限於，呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、吲哚基、噻吩-2-基、喹啉基、苯并哌喃基、異噻唑基、噻唑基、噻二唑、吲唑、苯并咪唑基、噻吩并[3,2-b]噻吩、三唑基、三嗪基、咪唑并[1,2-b]吡唑基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[3,4-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[2,3-b]吡啶基、苯并噻唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲哚啉酮、二氫苯并噻吩基、二氫苯并呋喃基、苯并呋喃、苯并二氫哌喃基、硫代苯并二氫哌喃基、四氫喹啉基、二氫苯并噻嗪、二氫苯并氧雜環丙基、喹啉基、異喹啉基、1,6-萘啶基、苯并[de]異喹啉基、吡啶并[4,3-b][1,6]萘啶基、噻吩并[2,3-b]吡嗪基、喹唑啉基、四唑并[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基、 異吲哚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、吡咯并[3,4-b]吡啶基、吡咯并[3,2-b]吡啶基、咪唑并[5,4-b]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、四氫吡咯并[1,2-a]嘧啶基、3,4-二氫-2H-1λ2 -吡咯并[2,1-b]嘧啶、二苯并[b,d] 噻吩、 吡啶-2-酮、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、1H-吡啶并[3,4-b][1,4]噻嗪基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、呋喃并[2,3-b]吡啶基、苯并噻吩基、1,5-萘啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、苯并[1,2,3]三唑基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]噠嗪、苯并[c][1,2,5]噻二唑基、苯并[c][1,2,5]噁二唑、1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮、3,4-二氫-2H-吡唑并[1,5-b][1,2]噁嗪、4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡啶基、噻唑并[5,4-d]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、噻吩并[2,3-b]吡咯基、3H-吲哚基及其衍生物。此外，當含有兩個稠合環時，本文所定義之雜芳基可具有飽和、不飽和或部分飽和之環與芳族環稠合。該等雜芳基之例示性環系統包括吲哚啉基、吲哚啉酮基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并呋喃、苯并二氫哌喃基、硫代苯并二氫哌喃基、四氫喹啉基、二氫苯并噻嗪、3,4-二氫-1H-異喹啉基、2,3-二氫苯并呋喃、吲哚啉基、吲哚基及二氫苯并氧雜環丙基。
「烷基」係指含有1至12個碳原子之直鏈或分支鏈飽和烴。C1 -C6 烷基含有1至6個碳原子。C1 -C6 烷基之實例包括但不限於，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、第二丁基及第三丁基、異戊基及新戊基。
「烯基」係指含有2至12個碳原子之直鏈或分支鏈不飽和烴。「烯基」在鏈中含有至少一個雙鍵。烯基之雙鍵可以與另一不飽和基團非共軛或共軛。烯基之實例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、戊烯基或己烯基。烯基可以為未取代或經取代的。如本文所定義，烯基可以為直鏈或分支鏈。
「炔基」係指含有2至12個碳原子之直鏈或分支鏈不飽和烴。「炔基」在鏈中含有至少一個參鍵。炔基之實例包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、異丁炔基、戊炔基或己炔基。炔基可以為未取代或經取代的。
術語「環烷基」意謂含有3至18個碳原子之單環或多環飽和碳環。環烷基之實例包括但不限於，環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、降莰基、降莰烯基、雙環[2.2.2]辛基，或雙環[2.2.2]辛烯基。C3 -C8 環烷基係含有在3與8個之間之碳原子的環烷基。環烷基可以為稠合(例如十氫萘)或橋連的(例如降莰烷)。
術語「環烯基」意謂含有4至18個碳原子之單環、非芳族不飽和碳環。環烯基之實例包括但不限於，環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基及降莰烯基。C4 -C8 環烯基係含有在4與8個之間之碳原子的環烯基。
術語「雜環基」或「雜環烷基」或「雜環」係指含有碳及選自氧、磷、氮或硫之雜原子且其中在環碳或雜原子間不存在共用離域π電子(芳香性)之單環或多環3至24員非芳族環。雜環基環包括但不限於，氧雜環丁基、氮雜環丁烷基、四氫呋喃基、吡咯啶基、噁唑啉基、噁唑啶基、噻唑啉基、噻唑啶基、硫代哌喃基、四氫哌喃基、二氧戊環基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基S-氧化物、硫代嗎啉基S-二氧化物、哌嗪基、氮呯基、氧雜環庚烯基、二氮呯基、托品烷基及高托品烷基。雜環基或雜環烷基環亦可為稠合或橋連的，例如可以為雙環。
如本文所使用，術語「鹵基」或「鹵素」意謂氟基、氯基、溴基或碘基。
術語「羰基」係指由碳原子與氧原子形成雙鍵構成之官能基。其在本文中可以簡寫為「側氧基」、C(O)或C=O。
「螺環」或「螺環的」意謂兩個環經由單一原子連接之碳基雙環系統。該等環可以具有不同的大小及性質，或相同的大小及性質。實例包括螺戊烷、螺己烷、螺庚烷、螺辛烷、螺壬烷或螺癸烷。螺環中之一個或兩個環可以與另一碳環、雜環、芳族環或雜芳族環稠合。C5 -C12 螺環係含有在5與12個之間之碳原子的螺環。
術語「螺環烯基」意謂含有5至12個原子且兩個環系統經由單一原子連接的碳基雙環系統，且其中至少一個環含有碳-碳雙鍵。該等環可以具有不同的大小及性質，或相同的大小及性質。一個或兩個環可以含有雙鍵。螺環中之一個或兩個環可以進一步與另一碳環、雜環、芳族環或雜芳族環稠合。
術語「螺環雜環」、「螺雜環基」或「螺雜環」應理解為意謂至少一個環係雜環(例如，至少一個環係呋喃基、嗎啉基或哌啶基)之螺環。螺環雜環可以含有在5與12個之間之原子，其中至少一個係選自N、O、S及P之雜原子。
本發明亦包括醫藥組成物，該等醫藥組成物包含有效量的所揭示之化合物及醫藥學上可接受之載劑。代表性「醫藥學上可接受之鹽」包括例如溶於水及不溶於水之鹽，諸如乙酸鹽、安索酸鹽(amsonate) (4,4-二胺基芪-2,2-二磺酸鹽)、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、鈣、依地酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、克拉維酸鹽(clavulariate)、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依託酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、麩胺酸鹽、對羥乙醯胺基苯砷酸鹽、六氟磷酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、鎂、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、3-羥基-2-萘甲酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽(1,1-亞甲基-雙-2-羥基-3-萘甲酸鹽、恩波酸鹽(einbonate))、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、苦味酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、對甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、鹼式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、磺基水楊酸鹽、蘇拉明鹽(suramate)、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙碘化物及戊酸鹽。組蛋白去乙醯化酶及 HDAC11
組蛋白去乙醯化酶(HDAC, EC編號3.5.1)係自組蛋白之ε-Ν-乙醯離胺酸胺基酸移除乙醯基的一組水解酶。取決於序列同一性及結構域組織，HDAC分類為第I類(包括HDAC1 - 3及8)、第Ila類(HDAC4、5、7、9)、第lib類(HDAC 6及10)、第III類 (包括長壽蛋白(sirtuin))及第IV類 (HDAC11) (Dokmanovic等人, 2007, Mol Cancer Res, 10月5日; 981-989)。
HDAC11係第IV類組蛋白去乙醯化酶(HDAC)。HDAC11在睪丸中大量表現且主要位於核中(Gao等人, J Biol Chem. 2002年7月12日; 277(28):25748-55)。HDAC11可以使核心組蛋白(H2A、H2B、H3及H4)之N末端部分上的離胺酸殘基去乙醯化。不希望受理論束縛，組蛋白去乙醯化可以為表觀遺傳阻遏提供標籤且在轉錄調控、細胞週期進展及發育事件中起重要作用。另外，HDAC受質不限於組蛋白，且經顯示，HDAC可用於眾多細胞調控路徑中。舉例而言，據報導，HDAC11使細胞週期相關蛋白，包括Cdt1、Geminin (Wong等人, Cell Cycle. 2010年11月1日; 9(21):4351-63)、BubR1 (Watanabe等人, Cell Rep. 2014年4月24日;7(2):552-64)及Cdc25 (Lozada等人, Oncotarget. 2016年3月7日)去乙醯化，或與之相締合。另外，據報導，HDAC11可作為與SMN1、Dicer1、Gemin3及Gemin4相關聯之運動神經元存活蛋白(SMN)複合物的一部分在RNA剪接中起作用 (Joshi等人, Mol Syst Biol. 2013, 9:672)。亦據報導，HDAC11在調控樹突生長中起作用(Watanabe等人, Cell Rep. 2014年4月24日;7(2):552-64)。
HDAC11可在某些癌症(Deubzer等人, Int J Cancer. 2013年5月1日;132(9):2200-8；WO 2005/071079；WO 2007/038073)，諸如霍奇金氏淋巴瘤(Buglio等人, Blood. 2011年3月10日;117(10):2910-7)中起作用。
HDAC11之替代性剪接產生多種轉錄變異體。在一些實施例中，HDAC11抑制劑可以選擇性抑制HDAC11之一或多種變異體。HDAC11 抑制劑
在某些實施例中，使用抑制HDAC11表現及/或活性之試劑實踐本發明針對調節HDAC11活性之方法。舉例而言，在某些實施例中，此類調節劑特異性降低或抑制HDAC11與蛋白質複合物締合之能力。在其他實施例中，試劑減少HDAC11之表現。在一些實施例中，調節(例如抑制)HDAC11之試劑係聚核苷酸、多肽、肽、肽核酸、抗體及其片段、小分子、無機化合物及/或有機化合物。在一些實施例中，調節(例如抑制)HDAC11之試劑包括HDAC11拮抗劑。
HDAC11抑制劑包括降低HDAC11表現或活性之任何分子。在某些實施例中，抑制劑藉由多種方式，包括例如抑制HDAC11與蛋白質複合物締合或抑制去乙醯化酶活性來干擾HDAC11活性。
此項技術中已知之任何HDAC11均可用於本文所述之方法中。HDAC11抑制劑之實例包括但不限於，HDTK010、HDTK028、HDTK029、HDTK054、HDTK070、可商購之shRNA (例如Sigma-Aldrich)、可商購之siRNA (例如Sigma-Aldrich及Qiagen)、可商購之規律成簇間隔短回文重複(Clustered regular interspaced short palindromic repeats，CRISPR)相關蛋白9-單導向RNA (CRISPR-Cas9-sgRNA) (例如Origene)及可商購之抗HDAC11抗體(例如Abcam及Sigma-Aldrich)。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係小分子。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係小分子。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種或更多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及HDAC10)之至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍、2,000倍、3,000倍或更高倍數。在某些實施例中，HDAC11抑制劑對HDAC11之選擇性係其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍。在某些實施例中，HDAC11抑制劑係對HDAC11之選擇性為其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少200倍的小分子。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及HDAC10中每一者之至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍、2,000倍、3,000倍或更高倍數。 肽及多肽
在一些實施例中，使用HDAC11之肽或多肽抑制劑來實踐本發明之方法。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係HDAC11之肽或多肽抑制劑。
在一些實施例中，藉由過度表現HDAC11之顯性陰性抑制劑來改變HDAC11之活性。HDAC11之顯性陰性抑制劑通常係HDAC11之突變體形式，其例如藉由競爭與蛋白質複合物或啟動子締合但無法使標靶蛋白去乙醯化來降低或阻斷野生型HDAC11之活性。各種HDAC11顯性陰性抑制劑之實例包括與蛋白質複合物締合之能力降低的突變HDAC11及與蛋白質複合物締合但無法使標靶蛋白去乙醯化的突變HDAC11。舉例而言，一種顯性陰性抑制劑係在催化結構域中具有一或多個胺基酸取代，由此使突變HDAC11與相關蛋白質複合物締合但展現降低之去乙醯化活性的HDAC11。 聚核苷酸
涵蓋用作HDAC11表現及/或活性之調節劑的各種聚核苷酸。在某些實施例中，HDAC11之聚核苷酸抑制劑係反義RNA，或根據此項技術中已知且可用之方法設計成特異性靶向HDAC11之RNA干擾(RNAi)試劑。其他聚核苷酸抑制劑包括例如設計用於整合至基因組中及適於缺失全部或一部分HDAC11等位基因或例如經由插入突變誘發使HDAC11等位基因突變的靶向載體。 反義
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係針對HDAC11聚核苷酸，或HDAC11信號傳導級聯之其他組分的反義RNA。經展示，反義寡核苷酸係有效的蛋白質合成靶向抑制劑，且因此可用於藉由靶向基因特異性抑制蛋白質合成。反義寡核苷酸抑制蛋白質合成之功效已充分確定。舉例而言，已描述抑制且可用於治療多種異常細胞增殖，例如癌症之反義構築體(美國專利5,747,470、美國專利5,591,317及美國專利5,783,683)。
術語「標靶序列」係指該寡核苷酸或反義試劑所針對之標靶DNA或RNA之一部分，該寡核苷酸將藉由互補序列之Watson-Crick鹼基配對與其序列雜交。
術語「靶向序列」或「反義靶向序列」係指寡核苷酸或其他反義試劑中與標靶序列互補(另外意謂大體上互補)之序列。反義化合物之整個序列或僅一部分可與標靶序列互補。舉例而言，在具有20-30個鹼基之寡核苷酸中，約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29個可為與標靶區互補之靶向序列。通常，靶向序列係由連續鹼基形成，但可替代地由不連續序列形成，該等序列當例如自寡核苷酸之相對端放在一起時，構成跨標靶序列之序列。
標靶序列及靶向序列當以反平行構型發生雜交時描述為彼此「互補」。靶向序列可與標靶序列「幾乎完全」或「大體上」互補且仍用於本發明之目的，亦即，其在功能上仍可為「互補的」。在某些實施例中，寡核苷酸可與標靶序列在10個核苷酸中有至多一個錯配，且較佳在20個核苷酸中具有至多一個錯配。或者，寡核苷酸可與標靶序列具有至少90%序列同源性，且較佳至少95%序列同源性。
若寡核苷酸與標靶在生理條件下雜交，且Tm大體上高於45℃，較佳為至少50℃且通常為60℃-80℃或更高，則該寡聚物與標靶序列「特異性雜交」。此類雜交較佳對應於嚴格雜交條件。在給定離子強度及pH下，Tm係使50%標靶序列與互補聚核苷酸雜交之溫度。另外，此類雜交可在反義寡聚物與標靶序列「幾乎完全」或「大體上」互補以及完全互補情況下發生。
因此，在某些實施例中，包含能夠特異性結合至HDAC11標靶聚核苷酸序列，或其補體之任何序列之全部或一部分的寡核苷酸序列可用於本文所述之方法中。在另一實施例中，寡核苷酸序列包含能夠特異性結合至HDAC11聚核苷酸序列或其補體之任何序列的全部或一部分。在一些實施例中，反義寡核苷酸包含DNA或其衍生物。在另一實施例中，寡核苷酸包含RNA或其衍生物。反義寡核苷酸可以為包含硫代磷酸酯修飾之主鏈的經修飾DNA。另外，寡核苷酸序列可以包含肽核酸或其衍生物。在每一情形中，適當時，組成物可包含與HDAC11標靶基因或聚核苷酸序列之一或多個部分互補的序列區域。在一些實施例中，組成物可包含與HDAC11標靶基因或聚核苷酸序列之一或多個部分完全互補的序列區域。
產生反義分子之方法係此項技術中已知的且可容易地用於產生靶向HDAC11之反義分子。對給定序列具有特異性之反義組成物的選擇係基於分析所選標靶序列及確定二級結構、Tm、結合能及相對穩定性。反義組成物可基於其相對不能形成二聚體、髮夾，或會減少或抑制與宿主細胞中之標靶mRNA之特異性結合的其他二級結構來選擇。尤佳之mRNA標靶區域包括在AUG轉譯起始密碼子及與mRNA 5'區大體上互補之該等序列處或附近的區域。該等二級結構分析及標靶位點選擇考慮因素可例如使用第4版OLIGO引子分析軟體及/或BLASTN 2.0.5算法軟體(Altschul等人, Nucleic Acids Res. 1997, 25(17):3389-402)進行。 RNAi分子
使用RNAi分子之RNA干擾法亦可用於破壞包括HDAC11在內的所關注基因或聚核苷酸之表現。RNAi係在進化上保守之基因靜默機制，最初在研究線蟲秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans )時發現(Lee等人, Cell 75:843, 1993；Reinhart等人, Nature 403:901, 2000)。該機制可藉由將dsRNA引入表現適當分子機構之細胞中，接著降解相應的內源性mRNA來觸發。不希望受理論束縛，RNAi機制涉及將dsRNA轉化成短RNA，該等短RNA將核糖核酸酶引導至同源mRNA標靶(例如概述於Ruvkun, Science 2294:797, 2001中)。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係RNAi寡核苷酸。在一些實施例中，RNAi寡核苷酸係單鏈的。在一些實施例中，RNAi寡核苷酸係雙鏈的。
在某些實施例中，本文所提供之方法可利用雙鏈核糖核酸(dsRNA)分子作為調節劑，用於抑制HDAC11。dsRNA一般包含兩個單鏈。在一些實施例中，dsRNA之一條鏈包含與標靶基因或標靶區域之一部分大體上同一之核苷酸序列(「有義」鏈)，且另一條鏈(「互補」或「反義」鏈)包含與標靶區域之一部分大體上互補的序列。該等鏈互補程度足以雜交形成雙鏈體結構。在某些實施例中，互補RNA鏈的長度可以小於30個核苷酸、小於25個核苷酸或甚至長度為19至24個核苷酸。在一些實施例中，互補核苷酸序列的長度可以為20-23個核苷酸，或長度為22個核苷酸。
在某些實施例中，至少一條RNA鏈包含1至4個核苷酸長的核苷酸突出。在其他實施例中，dsRNA可以進一步包含至少一個化學修飾之核苷酸。在某些實施例中，包含1至4個核苷酸之單鏈突出的dsRNA可以包含這樣一種分子，其中直接鄰近末端核苷酸對的該單鏈突出之未配對核苷酸含有嘌呤鹼基。在一些實施例中，在dsRNA兩端上的最後一個互補核苷酸對係G-C對，最後四個末端核苷酸對中至少兩個係G-C對。
本發明之某些實施例可以包含微小RNA(miRNA)。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係miRNA。miRNA表示在生物體中天然產生的一大類小RNA，其中有一些調控標靶基因之表現。miRNA係由含約70個核苷酸之單鏈髮夾前體轉錄物藉由Dicer形成。(V. Ambros等人, Current Biology 13:807, 2003)。miRNA不會轉譯成蛋白質，而是結合至特定信使RNA，由此阻斷轉譯。不希望受理論束縛，認為miRNA與其標靶不嚴密地鹼基配對以抑制轉譯。某些miRNA可以轉錄為髮夾RNA前體，該等前體接著經Dicer酶加工成其成熟形式。
本發明之某些實施例可採用短干擾RNA(siRNA)。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA。在某些實施例中，雙鏈寡核苷酸之第一條鏈含有的核苷殘基比第二條鏈多兩個。在其他實施例中，第一條鏈與第二條鏈具有相同數量之核苷；不過，第一條鏈與第二條鏈偏移，由此使第一條鏈與第二條鏈上的兩個末端核苷不會與互補鏈上之殘基配對。在某些情形中，不配對的兩個核苷係胸苷殘基。
在HDAC11抑制劑係siRNA或包含siRNA之情況下，該抑制劑應包括與標靶區域具有足夠同源性之區域，且核苷酸應具有足夠長度，由此使siRNA試劑，或其片段能夠介導標靶RNA之下調。應瞭解，在經修飾RNA或核苷酸替代物之情況下，術語「核糖核苷酸」或「核苷酸」亦可指經修飾核苷酸，或在一或多個位置處之代用替代部分。因此，siRNA試劑係或包括與標靶RNA至少部分互補之區域。siRNA試劑與標靶之間完全互補係不必要的，但必須具有足夠對應性以使該siRNA試劑，或其裂解產物能夠引導序列特異性靜默，諸如藉由RNAi裂解標靶RNA。與標靶鏈之互補性或同源程度對於反義鏈最為重要。儘管通常需要完全互補，尤其是在反義鏈中，但一些實施例關於標靶RNA包括一或多個錯配，通常10、8、6、5、4、3、2個或更少錯配。在一些實施例中，在末端區域中對錯配之耐受性最高，且若存在錯配，則較佳在一或多個末端區域中，例如在5'及/或3'末端之6、5、4或3個核苷酸內。有義鏈只需與反義鏈充分互補以維持分子之總體雙鏈特性。
此外，siRNA調節劑可以經修飾或包括核苷替代物。siRNA試劑之單鏈區域可以經修飾或包括核苷替代物，例如髮夾結構的一或多個未配對區域，例如連接兩個互補區之區域，可以具有修飾或核苷替代物。使siRNA試劑之一或多個3'或5'末端例如針對外切核酸酶穩定，或有利於反義siRNA試劑進入RISC之修飾亦係有用的。修飾可以包括C3 (或C6、C7、C12)胺基連接子、硫醇連接子、羧基連接子、非核苷酸間隔子(C3、C6、C9、C12、無鹼基、三乙二醇、六乙二醇)、特殊生物素或以胺基膦酸酯形式出現且具有另一DMT保護之羥基，由此允許在RNA合成期間進行多次偶合的螢光素試劑。
siRNA試劑可以包括例如長到足以觸發干擾素反應(其可經Dicer裂解(Bernstein等人, Nature, 409:363-366, 2001)並進入RNAi誘導靜默複合體(RISC))之分子，以及足夠短以使其無法觸發干擾素反應(該等分子亦可經Dicer裂解及/或進入RISC)，例如大小允許進入RISC之分子，例如類似Dicer裂解產物之分子。足夠短以使其無法觸發干擾素反應之分子在本文中稱為siRNA試劑或較短RNAi試劑。「siRNA試劑或較短RNAi試劑」用於指足夠短以使其無法在人類細胞中誘導有害干擾素反應的siRNA試劑，例如其具有少於60個但較佳少於50、40或30個核苷酸對之雙鏈體區域。siRNA調節劑，或其裂解產物，可以例如藉由誘導針對標靶RNA，諸如HDAC11 mRNA之RNAi來下調標靶基因。
siRNA調節劑之每條鏈的長度可以等於或小於35、30、25、24、23、22、21或20個核苷酸。該鏈的長度較佳為至少19個核苷酸。舉例而言，每條鏈之長度可以在21與25個核苷酸之間。較佳siRNA試劑具有含17、18、19、29、21、22、23、24或25個核苷酸對，及一或多個含2-3個核苷酸之突出，較佳一個或兩個3'突出的雙鏈體區域。
除與標靶RNA同源及能夠下調標靶基因外，siRNA調節劑亦可具有以下特性中之一或多種：儘管存在核苷修飾，甚至極大數量或所有核苷之修飾，但其可具有這樣一種反義鏈，該反義鏈可以存在呈適當三維構架之鹼基(或經修飾鹼基)以便能夠形成正確鹼基配對並與同源標靶RNA形成雙鏈體結構，由此足以允許例如藉由裂解標靶RNA下調標靶；儘管存在核苷修飾，甚至極大數量或所有核苷之修飾，但其仍可具有「RNA樣」特性，亦即，其可具有含基於核糖核苷酸之內含物之RNA分子的總體結構、化學及物理特性，即使不是完全地特性，或甚至是部分地特性。舉例而言，siRNA試劑可以含有例如有義鏈及/或反義鏈，其中所有核苷酸糖均含有例如2'氟替代2'羥基。預期該含脫氧核糖核苷酸之試劑仍可展現RNA樣特性。儘管不希望受理論束縛，電負性氟當連接至核糖之C2'位置時偏好軸向取向。氟之此空間偏好又會迫使糖呈現C3'內向摺疊。此與在RNA分子中所觀察到的摺疊模式相同且引起RNA特有的A家族型螺旋。此外，由於氟係良好的氫鍵受體，故其可參與同水分子之氫鍵相互作用，已知該等相互作用使RNA結構穩定。一般而言，較佳在2'糖位置處之經修飾部分能夠進入H鍵結中，該H鍵結在核糖核苷酸之OH部分比在脫氧核糖核苷酸之H部分常見。
如本文所使用，「單鏈RNAi試劑」係由單一分子構成之RNAi試劑。其可包括由鏈內配對形成的雙鏈體區域，例如，其可為或包括髮夾或盤-把手結構(pan-handle structure)。單鏈RNAi調節劑較佳相對於標靶分子為反義的。單鏈RNAi試劑應足夠長以使其能進入RISC中並參與RISC介導的標靶mRNA裂解。單鏈RNAi試劑之長度係至少14個，且更佳至少15、20、25、29、35、40或50個核苷酸。其長度較佳小於200、100或60個核苷酸。
髮夾RNAi調節劑，例如短髮夾RNA(shRNA)可以具有含等於或至少17、18、19、29、21、22、23、24或25個核苷酸對之雙鏈體區域。該雙鏈體區域之長度較佳可等於或小於200、100或50個。該雙鏈體區域之某些範圍係15至30、17至23至19至23及19至21個核苷酸對長。髮夾可具有單鏈突出或末端未配對區域，較佳在3'，且較佳在髮夾之反義側。在某些實施例中，突出之長度係2至3個核苷酸。
根據本文所提供之方法使用的某些調節劑可以包含RNAi寡核苷酸，諸如嵌合寡核苷酸，或「嵌合體」，其含有兩個或兩個以上在化學上截然不同之區域，各自由至少一個單體單元(亦即，在寡核苷酸化合物之情況下為核苷酸)構成。該等寡核苷酸通常含有至少一個區域，其中寡核苷酸經修飾以便使該寡核苷酸對核酸酶降解具有增加之抗性，具有增加之細胞攝取及/或增加的對標靶核酸之結合親和力。因此，當使用嵌合寡核苷酸時，相較於硫代磷酸酯寡聚脫氧核糖核苷酸，利用較短寡核苷酸通常能獲得相當的結果。形成的嵌合寡核苷酸可以為具有兩個或兩個以上寡核苷酸、經修飾寡核苷酸、如上文所述之寡核苷酸及/或寡核苷酸模擬物之複合結構。此類寡核苷酸亦在此項技術中稱為雜合體或缺口體(gapmer)。教示此類雜合體結構之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第5,013,830號、第5,149,797號、第5,220,007號、第5,256,775號、第5,366,878號、第5,403,711號、第5,491,133號、第5,565,350號、第5,623,065號、第5,652,355號、第5,652,356號、第5,700,922號及第5,955,589號，其各自以引用之方式併入本文中。在某些實施例中，嵌合寡核苷酸係RNA-DNA、DNA-RNA、RNA-DNA-RNA、DNA-RNA-DNA或RNA-DNA-RNA-DNA，其中該寡核苷酸之長度係在5與60個核苷酸之間。
在一些實施例中，HDAC11調節劑，諸如RNAi試劑，與包含至少一個繫栓至經改變或非天然核鹼基之配位體的寡核苷酸。許多化合物可用作經改變鹼基。就經改變鹼基不應大體上阻止寡核苷酸與其標靶，例如mRNA之結合而言，該經改變鹼基之結構極為重要。在某些實施例中，該經改變鹼基係二氟甲苯基、硝基吡咯基、硝基咪唑基、硝基吲哚基、萘基、蒽基、吡啶基、喹啉基、芘基，或本文所述非天然核鹼基中之任一種的二價基團。在某些實施例中，非天然核鹼基係二氟甲苯基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。在某些實施例中，非天然核鹼基係二氟甲苯基。此項技術中已知多種配位體且其適用於本發明中。舉例而言，配位體可以為類固醇、膽汁酸、脂質、葉酸、吡哆醛、B12、核黃素、生物素、芳族化合物、多環化合物、冠醚、嵌入劑、裂解分子、蛋白質結合劑或碳水化合物。在某些實施例中，配位體係類固醇或芳族化合物。在某些情形中，配位體係膽固醇基。
在其他實施例中，出於改善細胞靶向及攝取之目的，RNAi試劑係繫栓至配位體之寡核苷酸。舉例而言，RNAi試劑可繫栓至抗體，或其抗原結合片段。作為另一實例，RNAi試劑可繫栓至特定配位體結合分子，諸如特異性結合特定細胞表面受體之多肽或多肽片段。
在一些實施例中，HDAC11調節劑包含非天然核鹼基。在某些實施例中，非天然核鹼基係二氟甲苯基、硝基咪唑基、硝基吲哚基或硝基吡咯基。在某些實施例中，本文提供之HDAC11調節劑與雙鏈寡核苷酸序列有關，其中該兩條鏈中僅一條鏈含有非天然核鹼基。在某些實施例中，本文所使用之HDAC11調節劑與雙鏈寡核苷酸序列有關，其中兩條鏈獨立地包含至少一個非天然核鹼基。
在某些情形中，核苷中天然存在之核糖糖部分經己糖置換。在一些特定實施例中，己糖係阿洛糖(allose)、阿卓糖(altrose)、葡萄糖、甘露糖、古洛糖(gulose)、艾杜糖(idose)、半乳糖、塔羅糖(talose)或其衍生物。在一些特定實施例中，己糖係D-己糖。在某些情形中，核苷中天然存在之核糖糖部分經多環雜烷基環或環己烯基置換。在某些情形中，多環雜烷基係在環中含有一個氧原子之雙環。在某些情形中，多環雜烷基係雙環[2.2.1]庚烷、雙環[3.2.1]辛烷或雙環[3.3.1]壬烷。在某些實施例中，寡核苷酸之主鏈經修飾用於改善寡核苷酸化合物之治療或診斷特性。在某些實施例中，寡核苷酸之至少一個鹼基或至少一個糖經修飾用於改善寡核苷酸化合物之治療或診斷特性。在寡核苷酸係雙鏈之情形中，兩條鏈可為互補、部分互補或嵌合寡核苷酸。
意圖用於本發明之方法中的經修飾RNAi試劑之實例包括含有經修飾主鏈或非天然核苷間鍵聯之寡核苷酸。如此處所定義，具有經修飾主鏈或核苷間鍵聯之寡核苷酸包括在主鏈中保留磷原子之寡核苷酸及在主鏈中不具有磷原子之寡核苷酸。在糖間主鏈中不具有磷原子之經修飾寡核苷酸亦可視為寡核苷酸。特定寡核苷酸化學修飾描述於下。給定化合物中不必所有位置均為均一地修飾的，且事實上，可以將以下修飾中之超過一個修飾併入單一寡核苷酸化合物中或甚至其單一核苷酸中。
經修飾核苷間鍵聯或主鏈之實例包括例如硫代磷酸酯、對掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、甲基及其他烷基膦酸酯(包括3'-伸烷基膦酸酯及對掌性膦酸酯)、亞膦酸酯、胺基磷酸酯(包括3'-胺基胺基磷酸酯及胺基烷基胺基磷酸酯)、硫羰基胺基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯，及具有標準3'-5'鍵聯之硼烷磷酸酯、該等物質之2'-5'連接類似物，以及具有反極性者，其中相鄰核苷單元對係3'-5'連接變為5'-3'或2'-5'連接變為5'-2'。亦包括各種鹽、混合鹽及游離酸形式。
教示以上含磷原子之鍵聯之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第3,687,808號、第4,469,863號、第4,476,301號、第5,023,243號、第5,177,196號、第5,188,897號、第5,264,423號、第5,276,019號、第5,278,302號、第5,286,717號、第5,321,131號、第5,399,676號、第5,405,939號、第5,453,496號、第5,455,233號、第5,466,677號、第5,476,925號、第5,519,126號、第5,536,821號、第5,541,306號、第5,550,111號、第5,563,253號、第5,571,799號、第5,587,361號、第5,625,050號及第5,697,248號，其各自以引用之方式併入本文中。
在其中不包括磷原子之經修飾核苷間鍵聯或主鏈(亦即，寡核苷酸)的實例具有由短鏈烷基或環烷基糖間鍵聯、混合雜原子及烷基或環烷基糖間鍵聯，或者一或多個短鏈雜芳基或雜環糖間鍵聯形成之主鏈。該等主鏈包括具有嗎啉基鍵聯(部分由核苷之糖部分形成)之主鏈；矽氧烷主鏈；硫化物、亞碸及碸主鏈；甲醯基及硫代甲醯基主鏈；亞甲基甲醯基及硫代甲醯基主鏈；含烯烴主鏈；胺基磺酸酯主鏈；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基主鏈；磺酸酯及磺醯胺主鏈；醯胺主鏈；及具有混合N、O、S及CH2 組分部分之其他主鏈。
教示以上寡核苷酸之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第5,034,506號、第5,166,315號、第5,185,444號、第5,214,134號、第5,216,141號、第5,235,033號、第5,264,562號、第5,264,564號、第5,405,938號、第5,434,257號、第5,466,677號、第5,470,967號、第5,489,677號、第5,541,307號、第5,561,225號、第5,596,086號、第5,602,240號、第5,610,289號、第5,602,240號、第5,608,046號、第5,610,289號、第5,618,704號、第5,623,070號、第5,663,312號、第5,633,360號、第5,677,437號及第5,677,439號，其各自以引用之方式併入本文中。
在寡核苷酸模擬物之其他實例中，核苷單元之糖及核苷間鍵聯，亦即主鏈，可經新穎基團置換。保持核鹼基單元以與適當核酸標靶化合物雜交。經顯示具有優良雜交特性的一種此類寡核苷酸，即寡核苷酸模擬物，稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸之糖-主鏈經含醯胺主鏈，尤其是胺基乙基甘胺酸主鏈置換。核鹼基經保留且與該主鏈之醯胺部分的原子直接或間接結合。教示PNA化合物之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第5,539,082號、第5,714,331號及第5,719,262號，其各自以引用之方式併入本文中。有關PNA化合物之其他教示可見於Nielsen等人, Science, 1991, 254, 1497中。
在某些情形中，用於本文所提供之方法的RNAi試劑可經非配位體基團修飾。為了增強寡核苷酸之活性、細胞分佈、細胞靶向或細胞攝取，已將多個非配位體分子偶聯至寡核苷酸，且用於進行此類偶聯之程序可見於科技文獻中。此類非配位體部分包括脂質部分，諸如膽固醇(Letsinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:6553-56, 1989)、膽酸(Manoharan等人, Bioorg. Med. Chem. Lett. 4:1053, 1994)、硫醚，例如己基-5-三苯甲基硫醇(Manoharan等人, Ann. N.Y. Acad. Sci., 660:306, 1992；Manoharan等人, Bioorg. Med. Chem. Let., 3:2765, 1993)、硫代膽固醇(Oberhauser等人, Nucl. Acids Res., 20:533, 1992)、脂族鏈，例如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人, EMBO J. 10:111, 1991；Kabanov等人, FEBS Lett. 259:327, 1990；Svinarchuk等人, Biochimie. 75:49, 1993)、磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-膦酸酯三乙銨(Manoharan等人, Tetrahedron Lett., 36:3651, 1995；Shea等人, Nucl. Acids Res. 18:3777, 1990)、聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人, Nucleosides & Nucleotides. 14:969, 1995)，或金剛烷乙酸(Manoharan等人, Tetrahedron Lett. 36:3651, 1995)、棕櫚醯基部分(Mishra等人, Biochim. Biophys. Acta. 1264:229, 1995)，或十八烷胺或己胺基-羰基-氧基膽固醇部分(Crooke等人, J. Pharmacol. Exp. Ther. 277:923, 1996)。教示此類寡核苷酸偶聯物之製備的代表性美國專利於上文列出。典型的偶聯方案涉及合成在序列之一或多個位置處帶有胺基連接基之寡核苷酸。接著，使用適當偶合或活化試劑，使該胺基與所偶聯之分子反應。偶聯反應可以用仍結合至固體支撐物之寡核苷酸或在寡核苷酸於溶液相中裂解之後進行。利用HPLC純化寡核苷酸偶聯物通常得到純偶聯物。
調節劑，諸如RNAi寡核苷酸之其他實例可見於以引用之方式併入的美國申請公開案第2007/0275465號、第2007/0054279號、第2006/0287260號、第2006/0035254號、第2006/0008822號中。 CRISPR
在一些實施例中，可使用基因編輯系統使HDAC11基因靜默、增強或突變。此項技術中已知之任何基因編輯系統均可用於本發明之方法中。在某些實施例中，基因編輯系統係CRISPR/Cas系統。CRISPR/Cas系統經改良以用於在諸如小鼠或靈長類動物之真核生物中進行基因編輯(使特定基因靜默、增強或變化)。Wiedenheft等人, 2012. Nature 482: 331-8。此係藉由將含專門設計之CRISPR及一或多種適當之Cas的質體引入真核細胞中來實現。CRISPR序列，有時稱為CRISPR基因座，包含交替重複序列及間隔子。在天然存在之CRISPR中，間隔子通常包含對於細菌而言外來之序列，諸如質體或噬菌體；在HDAC11 CRISPR/Cas系統中，間隔子係來源於HDAC11基因序列。CRISPR基因座之RNA係組成性表現且經Cas蛋白質加工成小RNA。此等間隔子包含重複序列側接之間隔子。RNA引導其他Cas蛋白質在RNA或DNA層面上使外源性遺傳元件靜默。Horvath等人, 2010. Science 327: 167-170；Makarova等人, 2006 Biology Direct 1:7。因此，間隔子用作RNA分子之模板，與siRNA類似。Pennisi 2013. Science 341: 833-836。
在某些實施例中，可以使用此項技術中已知之技術，例如美國專利申請案第13/842859號(以US 20140068797公開)所描述至技術，產生抑制HDAC11之人工CRISPR系統。此類HDAC11抑制性CRISPR系統可以包括嚮導RNA(gRNA)，其包含HDAC11靶向性結構域，亦即與HDAC11 DNA鏈互補之核苷酸序列；及與RNA引導之核酸酶相互作用之第二結構域。 基因敲除構築體
在某些實施例中，藉由使編碼HDAC11分子之基因突變來改變HDAC11之活性。此項技術中已知多種使內源性基因突變之方法且均可用，包括例如插入突變誘發及基因敲除法。因此，本發明提供對HDAC11基因之一或多個等位基因進行基因敲除之方法。應瞭解，根據本發明之基因敲除載體包括能夠破壞HDAC11基因之表現或活性的任何載體，在某些實施例中包括靶向載體。
在較佳方法中，使用靶向載體選擇性破壞HDAC11基因。基因敲除載體包括例如藉由破壞HDAC11基因之調控元件，包括例如插入減少基因表現之調控元件，或者缺失或以其他方式降低積極地影響標靶基因轉錄之內源性元件之活性來改變基因表現之載體。在其他實施例中，基因敲除載體可破壞HDAC11基因之5'區、3'區或編碼區，例如使其缺失或突變。在一些實施例中，基因敲除載體缺失HDAC11基因之一個區域或整個編碼區。在某些實施例中，基因敲除載體缺失HDAC11基因之一個區域，而在其他實施例中，其將外源性序列插入HDAC11基因中。此外，在某些實施例中，包括使用置換型載體之實施例中，基因敲除載體移除基因之一個區域且引入外源性序列。
根據本發明之靶向載體包括能夠與內源性HDAC11基因發生同源重組之所有載體，包括置換型載體。靶向載體包括用於陽性選擇、陰性選擇、陽性-陰性選擇及陽性轉換選擇之方法中的所有載體。採用陽性、陰性及陽性-陰性選擇之靶向載體係此項技術中熟知的且代表性實例描述於Joyner, A.L., Gene Targeting: A Practical Approach, 第2版(2000)及其中引用之參考文獻中。 抗體試劑
在一些實施例中，根據本文所述之方法，可以使用特異性結合HDAC11之抗體試劑。在一些實施例中，抗體試劑特異性結合至HDAC11且抑制其催化活性。如本文所使用，術語「抗體試劑」係指特異性結合至特定抗原之試劑。在一些實施例中，該術語涵蓋包括足以賦予特異性結合之免疫球蛋白結構域元件的任何多肽或多肽複合物。例示性抗體試劑包括但不限於，單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，抗體試劑可包括小鼠、兔、靈長類動物或人類抗體特有的一或多個恆定區序列。在一些實施例中，如此項技術中所知，抗體試劑可包括經人類化、靈長類化、嵌合等的一或多個序列。在許多實施例中，術語「抗體試劑」用於指此項技術中所知或開發的利用呈替代性形式之抗體結構及功能特徵的構築體或格式中之一或多種。舉例而言，在實施例中，根據本發明利用之抗體試劑係呈選自但不限於以下之格式：完整IgA、IgG、IgE或IgM抗體；雙特異性或多特異性抗體(例如Zybodies®等)；抗體片段，諸如Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fd’片段、Fd片段及分離之CDR，或其組；單鏈Fv；多肽-Fc融合物；單結構域抗體(例如鯊魚單結構域抗體，諸如 IgNAR或其片段)；駱駝抗體；經遮蔽抗體(例如Probodies®)；S mallM odularI mmunoP harmaceuticals (「SMIPsTM 」 )；單鏈或串聯雙功能抗體(TandAb®)；VHH；Anticalins®；Nanobodies®微型抗體；BiTE®；錨定蛋白重複蛋白或DARPINs®；Avimers®；DART；TCR樣抗體；Adnectins®；Affilins®；Trans-bodies®；Affibodies®；TrimerX®；MicroProteins；Fynomers®；Centyrins®；及KALBITOR®。在一些實施例中，抗體可缺乏天然產生之抗體所具有的共價修飾(例如連接聚糖)。在一些實施例中，抗體可含有共價修飾(例如，連接聚糖、有效載荷[例如可偵測部分、治療性部分、催化部分等]或其他側接基團[例如聚乙二醇等])。在許多實施例中，抗體試劑係或包含這樣一種多肽，其胺基酸序列包括熟習此項技術者視為互補決定區(CDR)之一或多個結構元件；在一些實施例中，抗體試劑係或包含這樣一種多肽，其胺基酸序列包括至少一個與參考抗體中所見大體上同一之CDR(至少一個重鏈CDR及/或至少一個輕鏈CDR)。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為其序列與參考CDR同一或其相較於參考CDR含有1至5個胺基酸取代。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為其與參考CDR顯示出至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為其與參考CDR顯示出至少96%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為相較於參考CDR，在所包括的CDR內存在至少一個胺基酸缺失或添加或取代，但該所包括的CDR具有在其他方面與參考CDR同一之胺基酸序列。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為相較於參考CDR，在所包括的CDR內存在1至5個胺基酸缺失或添加或取代，但該所包括的CDR具有在其他方面與參考CDR同一之胺基酸序列。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為相較於參考CDR，在所包括的CDR內存在至少一個胺基酸取代，但該所包括的CDR具有在其他方面與參考CDR同一之胺基酸序列。在一些實施例中，所包括的CDR與參考CDR大體上同一，因為相較於參考CDR，在所包括的CDR內存在1至5個胺基酸缺失或添加或取代，但該所包括的CDR具有在其他方面與參考CDR同一之胺基酸序列。在一些實施例中，抗體試劑係或包含這樣一種多肽，其胺基酸序列包括熟習此項技術者視為免疫球蛋白可變結構域之結構元件。在一些實施例中，抗體試劑係具有與免疫球蛋白結合結構域同源或大體上同源之結合結構域的多肽蛋白質。
若抗體試劑與本發明之多肽以可偵測之水準(例如在ELISA檢定內)反應，且在相似條件下，不與不相關多肽以可偵測水準反應，則認為該抗體試劑「特異性結合」、「免疫性結合」該多肽及/或與該多肽「免疫性反應」。當結合親和力係至少1×10-7 M或較佳至少1×10-8 M時，認為抗體特異性結合至標靶多肽。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係特異性結合HDAC11之催化結構域之抗體試劑。
根據本發明使用之抗體試劑包括但不限於，單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、完全人類抗體、單鏈抗體、Fab片段及scFv片段。抗HDAC11抗體之實例描述於WO 2014/096386中。
抗體試劑可藉由一般熟習此項技術者已知之多種技術製備。參見例如，Harlow及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988。一般而言，可藉由細胞培養技術，包括經由此項技術中已知之習知技術，或經由將抗體試劑轉染至適合細菌或哺乳動物細胞宿主中以便允許產生重組抗體來產生單株抗體，由此產生抗體。對所關注抗原多肽具有特異性之單株抗體(Mab)可例如使用Kohler及Milstein, Eur. J. Immunol. 6:511-519, 1976之技術及其改良技術製備。製備嵌合抗體及人類化抗體之方法係此項技術中熟知的(分別參見例如美國專利第4,816,567號、國際申請案第WO84/03712號)。
在某些實施例中，製備單株抗體之方法涉及製備能夠產生具有所需特異性(亦即，與所關注多肽之反應性)之抗體的永生細胞株。此類細胞株可例如由自如上文所述免疫之動物獲得的脾細胞產生。接著，脾細胞藉由例如與骨髓瘤細胞融合搭配物，較佳與經免疫動物同基因之融合搭配物融合實現永生化。可採用多種融合技術。舉例而言，可將脾細胞及骨髓瘤細胞與非離子型清潔劑一起組合數分鐘，且隨後以較低密度塗鋪於支持雜合細胞生長但不支持骨髓瘤細胞生長之選擇性培養基上。較佳選擇技術使用次黃嘌呤、胺基喋呤、胸苷(HAT)選擇。在足夠時間，通常約1至2週後，觀察到雜合體群落。選出單一群落並測試其培養物上清液針對多肽之結合活性。具有較高反應性及特異性之融合瘤係較佳的。
可自生長融合瘤群落之上清液分離出單株抗體。此外，亦可採用多種技術來增大產率，諸如將融合瘤細胞株注入適合脊椎動物宿主，諸如小鼠之腹腔中。接著，可自腹水或血液收集單株抗體。可藉由習知技術，諸如層析法、凝膠過濾、沈澱及萃取移除抗體中之污染物。根據本發明之多肽可用於純化方法中之例如親和層析步驟中。
此項技術中已知包含能夠展現抗體分子之免疫結合特性之抗原結合位點的多種治療上有用之分子。蛋白水解酶木瓜蛋白酶優先裂解IgG分子以得到若干片段，其中兩個(「F(ab)」片段)各自包括含完整抗原結合位點之共價異二聚體。酶胃蛋白酶能夠裂解IgG分子以得到若干片段，包括「F(ab')2」片段，其包含兩個抗原結合位點。「Fv」片段可藉由優先蛋白水解裂解IgM產生，且在極少情況下由蛋白水解裂解IgG或IgA免疫球蛋白分子產生。不過，Fv片段較常使用此項技術中已知之重組技術得到。Fv片段包括非共價VH::VL異二聚體，其包括抗原結合位點且保留天然抗體分子之大部分抗原識別及結合能力。Inbar等人(1972) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 69:2659-2662；Hochman等人(1976) Biochem 15:2706-2710；Ehrlich等人(1980) Biochem 19:4091-4096。
單鏈Fv(「scFv」)多肽係共價連接之VH::VL異二聚體，其係由包括經肽編碼連接子連接之VH及VL編碼基因之基因融合物表現。Huston等人(1988) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85(16):5879-5883。已描述多種方法鑑別用於將抗體V區中天然聚集但在化學上分離之輕鏈及重鏈多肽鏈轉化成scFv分子的化學結構，其將摺疊成與抗原結合位點之結構大體上類似的三維結構。參見例如，頒予Huston等人之美國專利第5,091,513號及第5,132,405號；以及頒予Ladner等人之美國專利第4,946,778號。
在某些實施例中，上述抗體試劑各自可包括重鏈及輕鏈互補決定區(CDR)組，其分別間雜在重鏈與輕鏈構架區之間，該構架區向CDR提供支持且確定CDR相對於彼此之空間關係。如本文所使用，術語「CDR組」係指重鏈或輕鏈V區之三個高變區。自重鏈或輕鏈之N末端起，該等區域分別稱為「CDR1」、「CDR2」及「CDR3」。因此，抗原結合位點包括六個CDR，構成重鏈及輕鏈V區各自之CDR組。包含單一CDR(例如CDR1、CDR2或CDR3)之多肽在本文中稱為「分子識別單元」。關於多種抗原-抗體複合物之結晶學分析證實，CDR之胺基酸殘基與所結合之抗原形成廣泛接觸，其中最廣泛之抗原接觸係與重鏈CDR3實現。因此，分子識別單元主要負責抗原結合位點之特異性。
Fab或F(ab')2片段可為完全動物或人類來源的，或者其可呈嵌合形式，由此恆定結構域係來源於人類免疫球蛋白之恆定區且可變區係來源於親本鼠類mAb。或者，Fv、Fab或F(ab')2可經人類化，由此僅互補決定區(CDR)係來源於動物mAb，且恆定結構域及可變區之構架區係人類來源的。該等嵌合及人類化片段之免疫原性低於其完全動物對應物，且因此更適於在活體內使用，尤其是長期使用。
已描述多種包含來源於非人類免疫球蛋白之抗原結合位點的「人類化」抗體分子，包括具有囓齒動物V區及其相關CDR與人類恆定結構域之融合物的嵌合抗體(Winter等人(1991) Nature 349:293-299；Lobuglio等人(1989) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220-4224；Shaw等人(1987) J Immunol. 138:4534-4538；及Brown等人(1987) Cancer Res. 47:3577-3583)；移植至人類支撐FR且隨後與適當人類抗體恆定結構域融合之囓齒動物CDR(Riechmann等人(1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen等人(1988) Science 239:1534-1536；及Jones等人(1986) Nature 321:522-525)；及由重組鑲飾之囓齒動物FR所支撐之囓齒動物CDR(1992年12月23日公開的歐洲專利公開案第519,596號)。該等「人類化」分子經設計以使不想要的限制該等部分在人類接受體中之治療應用之持續時間及有效性的針對囓齒動物抗人類抗體分子之免疫反應減到最少。
此項技術中已描述用於使非人類抗體人類化之方法。較佳地，人類化抗體在其中引入一或多個來自非人類賴以之胺基酸殘基。這些非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，該等殘基通常係自「輸入」可變結構域獲得。人類化可以基本上遵循Winter及同事(Jones等人, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等人, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人, Science, 239:1534-1536 (1988))之方法，藉由用高變區序列取代人類抗體之相應序列來進行。因此，此類「人類化」抗體係嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中大體上少於完整人類可變結構域經來自非人類物種之相應序列取代。實際上，人類化抗體通常係一些高變區殘基且可能一些FR殘基經來自囓齒動物抗體中類似位點之殘基取代的人類抗體。
用於製備人類化抗體之人類輕鏈及重鏈可變結構域的選擇對於降低抗原性至關重要。根據所謂的「最佳配合」方法，針對已知人類可變結構域序列之完整文庫篩選囓齒動物抗體可變結構域的序列。最接近囓齒動物序列之人類序列可被接受作為人類化抗體之人類構架區(FR)(Sims等人, J. Immunol., 151:2296 (1993)；Chothia等人, J. Mol. Biol., 196:901 (1987))。另一方法使用了來源於具有特定輕鏈或重鏈亞組之所有人類抗體之共同序列的特定構架區。該構架可用於若干不同的人類化抗體(Carter等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；Presta等人, J. Immunol., 151:2623 (1993))。
人類化一般旨在保持對所關注抗體之高親和力及其他有利的生物特性。為達到此目標，可藉由使用親本序列與人類化序列之三維模型分析親本序列與各種概念性人類化產物的方法來製備人類化抗體。三維免疫球蛋白模型通常係可得的且為熟習此項技術者所熟悉的。可用電腦程式圖解並展示了所選候選免疫球蛋白序列之可能的三維構象結構。檢查該等展示允許分析該等殘基在候選免疫球蛋白序列功能中的可能作用，亦即，分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可以自接受體序列及輸入序列中選出FR殘基並組合，以獲得所需抗體特徵，諸如增加對標靶抗原之親和力。一般來說，高變區殘基直接並且最充分地參與影響抗原結合。
作為人類化之替代選擇，可產生人類抗體。舉例而言，現可能產生在免疫接種後能夠在無內源免疫球蛋白產生之情況下產生完全人類抗體譜系的轉殖基因動物(例如小鼠)。舉例而言，已描述嵌合及生殖系突變小鼠中純合性缺失抗體重鏈結合區(JH)基因會導致內源抗體產生的完全抑制。在此類生殖系突變小鼠中轉移人類生殖系免疫球蛋白基因陣列將在抗原激發後產生人類抗體。參見例如，Jakobovits等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)；Jakobovits等人, Nature, 362:255-258 (1993)；Bruggermann等人, Year in Immuno., 7:33 (1993)；及美國專利第5,591,669號、第5,589,369號及第5,545,807號。
根據本發明之人類化抗體或完全人類抗體可根據美國專利第5,770,429號、第5,833,985號、第5,837,243號、第5,922,845號、第6,071,517號、第6,096,311號、第6,111,166號、第6,270,765號、第6,303,755號、第6,365,116號、第6,410,690號、第6,682,928號及第6,984,720號中所述之方法製備。
亦可使用噬菌體展示技術(McCafferty等人, Nature 348:552-553 (1990))在活體外由來自未免疫供體之免疫球蛋白可變(V)結構域基因譜系產生人類抗體及抗體片段。根據此技術，將抗體V結構域基因同框選殖至諸如M13或fd之絲狀噬菌體的主要或次要衣殼蛋白中，並在噬菌體粒子之表面上展示為功能性抗體片段。由於絲狀粒子含有噬菌體基因組之單鏈DNA副本，故基於抗體功能特性進行的選擇亦導致選出編碼展現該等特性之抗體的基因。因此，該噬菌體模擬B細胞之某些特性。
噬菌體展示可以通過多種方式執行；有關其評述，參見例如Johnson, Kevin S.及Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993)。可以使用若干V基因區段來源進行噬菌體展示。Clackson等人, Nature 352:624-628 (1991)自來源於免疫小鼠脾的小型V基因隨機組合文庫分離出一系列不同的抗噁唑酮抗體。可以構築來自未免疫人類供體之V基因譜系，且可以基本上遵循Marks等人, J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)，或Griffith等人, EMBO J. 12:725-734 (1993)所描述之技術分離針對一系列不同抗原(包括自體抗原)的抗體。亦參見美國專利第5,565,332號及第5,573,905號。
可使用噬菌體展示，根據各種方法產生合成抗體或人類抗體。舉例而言，在某些實施例中，利用了噬菌體展示來產生完全人類抗體或其片段之文庫，可針對其結合標靶多肽，諸如HDAC11之能力對該文庫進行篩選。此類文庫之篩選係可商購的，例如由Morphosys (Munich, Germany)進行。人類抗體文庫及其使用方法描述於例如美國專利第7,049,135號、第6,828,422號、第6,753,138號、第6,706,484號及第6,696,248號；以及美國專利申請公開案第2006/0121563號、第2006/0003334號及第2004/0157291號，全部頒予Morphosys。
使用噬菌體展示產生並篩選人類抗體文庫之其他方法描述於例如以下中：Steukers, M.等人, J Immunol Methods. 2006年3月20日;310(1-2):126-35；Huang L.等人, J. Leukoc. Biol. 第80卷, 2006年10月；Wassaf, D.等人, Anal Biochem. 2006年4月15日;351(2):241-53； Shrivastava A等人, Protein Eng Des Sel. 2005年9月;18(9):417-24；Schoonbroodt S.等人, Nucleic Acids Res. 2005年5月19日;33(9)；Hogan S等人, Biotechniques. 2005年4月;38(4):536, 538；Hoet RM,等人, Nat Biotechnol. 2005年3月;23(3):344-8；Huang L等人, J Mol Recognit. 2005年2月10日；Blaise L等人, Gene. 2004年11月24日;342(2):211-8；Fleming T等人, J. Mol. Recognit. 2004 17:1-9；Jostock等人, J Immunol Methods. 2004年6月;289(1-2):65-80；Kelley B等人, J Chro. 2004年6月4日2004;1038(1-2):121-130；Ladner RC等人, Drug Discovery Today. 2004年6月;9(12):525-529；Williams A, Baird LG, Transfus Apheresis Sci. Dec 2003;29(3):255-258；van den Beucken T等人, FEBS Lett. 2003年7月10日;546(2-3):288-294. 2003年7月10日;546(2-3):288-294；Sato A., Biopolymers. 2003年7月;71(3):316；及Nixon AE., Biopolymers. 2003年7月;71(3):302, 398。
在一些實施例中，抗體或其片段藉由結合至HDAC11，且例如阻斷催化結構域，並由此抑制去乙醯化酶活性來抑制HDAC11活性。 小分子
在一些實施例中，根據本發明使用之HDAC11抑制劑係化合物，包括較大或較小的無機或有機分子。在一些實施例中，根據本發明之HDAC11調節劑係小有機分子，或其衍生物或類似物。
在某些實施例中，HDAC11調節劑包括保護基。術語「保護基」係指阻擋至少一些反應性部分並防止該等基團參與化學反應直至移除(或「裂解」)保護基的化學部分。阻擋/保護基團之實例描述於例如Greene及Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 第3版, John Wiley & Sons, New York, NY, 1999中。
HDAC11抑制性化合物中任一種可具有一或多個對掌性中心且每一 中心可以R或S構型存在。在一些實施例中，對掌性中心以R構型存在。在一些實施例中，對掌性中心以S構型存在。本發明之HDAC11抑制性化合物包括所有非對映異構、對映異構及差向異構形式以及其混合物。必要時，可藉由此項技術中已知之方法，例如藉由對掌性層析管柱分離立體異構體，獲得立體異構體。HDAC11抑制性化合物可進一步包括其N-氧化物、結晶形式(又稱多晶形物)及醫藥學上可接受之鹽，以及任何抑制劑之活性代謝物。在本文所提供之HDAC11調節劑的範圍內包括所有互變異構體。另外，本文所述之HDAC11抑制性化合物可以呈未溶劑化形式以及用醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及類似溶劑)溶劑化的形式。HDAC11抑制性化合物之溶劑化形式亦包括在本發明內。
在一些實施例中，小分子抑制劑結合至HDAC11。在一些實施例中，小分子結合至HDAC11之催化結構域且干擾或降低其去乙醯化酶活性或其與其他蛋白質締合形成複合物之能力。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍。在其他實施例中，小分子HDAC11抑制劑對HDAC11之選擇性為其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少200倍。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍、2,000倍、3,000倍或更高倍數。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及HDAC10中每一種之至少10倍。在一些實施例中，HDAC11抑制劑對人類HDAC11具有特異性。
HDAC11抑制劑，包括小有機化合物，可根據此項技術中可用之常規篩選程序，例如使用可商購之此類化合物之文庫鑑別。例示性HDAC11抑制劑於下文更詳細地描述。胺基苯并咪唑及相關化合物
在本發明之一個實施例中，描述式I之化合物：(I) 及其醫藥學上可接受之鹽，其中： Q係-H、-OC(O)NR6 (C1 -C6 )烷基芳基或-OC(O)O(C1 -C6 )烷基芳基； Z係-CH2 -、O、S或NR6 ； X1 、X2 、X3 及X4 在每次出現時各自獨立地係N或CR1 ； Y1 、Y2 及Y3 各自獨立地係N或CR1 ； L係NR6 、O或-(CR1 R2 )p -； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、-OR3 、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R3 、-R5 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； 或兩個出現之R1 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、側氧基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； R6 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； 且 p係0、1、2、3、4、5或6。
在一些實施例中，描述式I’之化合物：(I') 其中Y4 係N或CR1 ，且所有其他變數係如上文關於式I所定義且描述於本文中之類別及亞類中。除非另外說明，否則本文提及式I包括提及式I'。
在一些實施例中，對於式I之化合物，Y1 、Y2 或Y3 之一係N且Y1 、Y2 或Y3 中之另兩個各自獨立地係CR1 。在其他實施例中，Y1 、Y2 或Y3 中之兩個係N且Y1 、Y2 或Y3 中之另一個係CR1 。在一些實施例中，R1 係H。
在一些實施例中，Y1 、Y2 及Y3 係CH；X1 、X2 、X3 及X4 各自係CR1 ；且R1 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； 或兩個出現之R1 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 。
在一些實施例中，對於式I之化合物，L係S。在其他實施例中，對於式I之化合物，L係O。在其他實施例中，對於式I之化合物，L係NR6 。
在一或多個實施例中，提供式I-A 之化合物： I-A 其中X1 、X2 、X3 、X4 及R6 係大體上如上文及本文之種類、亞類及物種中所描述。
在一或多個實施例中，提供式I-B 之化合物： I-B 其中X1 、X2 、X3 、X4 及R6 係大體上如上文及本文之種類、亞類及物種中所描述。
在一或多個實施例中，提供式I-C 之化合物： I-C 其中X1 、X2 、X3 、X4 及R6 係大體上如上文及本文之種類、亞類及物種中所描述。
在一些實施例中，對於式I、I-A、I-B或I-C之化合物，X1 及X4 均為N，且X2 及X3 各自獨立地係CR1 。在一些實施例中，對於式I、I-A、I-B或I-C之化合物，X2 及X4 均為N，且X1 及X3 各自獨立地係CR1 。在一些實施例中，對於式I、I-A、I-B或I-C之化合物，X1 係N且X2 、X3 及X4 各自獨立地係CR1 。
在一些實施例中，對於式I、I-A、I-B或I-C之化合物，R6 在每次出現時獨立地係H、-C1 -C6 烷基、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基。在一些實施例中，對於式I、I-A、I-B或I-C之化合物，R6 在每次出現時獨立地係H、-(CHR5 )p NR3 R4 或-C1 -C6 烷基，其視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 或-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 。
對於以上關於式I、I-A、I-B或I-C之化合物所描述之每一實施例，R1 在每次獨立出現時係鹵素、-CF3 、-OH、-CN、-SO2 (C1 -C3 烷基)、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-C(O)C1 -C3 烷基、-OC1 -C3 烷基、-(C1 -C3 烷基)O(C1 -C3 烷基)、-OCF3 或-OCH2 苯基。
在一些實施例中，在關於式I、I-A、I-B或I-C之化合物之上述實施例中之任一個中，Q係-H。
在一或多個實施例中，式I之化合物可選自表I-1中之化合物之一：表 I-1 或其醫藥學上可接受之鹽。 合成所揭示之化合物之方法
本發明之化合物可藉由多種方法，其包括標準化學方法製備。以下所提供之方案描繪適合的合成途徑。
式I化合物可藉由如以下合成方案及實例部分地陳述的有機合成領域中已知之方法製備。在以下所述之方案中，應充分瞭解，必要時，根據一般原理或化學，採用了敏感性基團或反應性基團之保護基。保護基係根據標準有機合成方法(T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第三版, Wiley, New York 1999)操作。該等基團係在化合物合成之適宜階段，使用熟習此項技術者顯而易知之方法移除。選擇方法以及反應條件及其執行次序應符合式I化合物之製備。
熟習此項技術者將認識到在式I化合物中是否存在立體中心。因此，本發明包括兩種可能的立體異構體(除非在合成中具體說明)且不僅包括外消旋化合物，且亦包括個別對映異構體及/或非對映異構體。當需要呈單一對映異構體或非對映異構體形式之化合物時，其可藉由立體特異性合成或藉由拆分最終產物或任何適宜中間物獲得。最終產物、中間物或起始物質之拆分可藉由此項技術中已知之任何適合方法實現。參見例如，「Stereochemistry of Organic Compounds」, E. L. Eliel, S. H. Wilen及L. N. Mander (Wiley-lnterscience, 1994)。 化合物之製備
本文所述之化合物可由可商購之起始物質製備，或使用已知之有機、無機及/或酶促方法合成。
本發明之化合物可以熟習有機合成技術者熟知之多種方式製備。舉例而言，熟習此項技術者應理解，可使用以下所述之方法，以及合成有機化學領域中已知之合成方法，或其變化形式合成式I化合物。該等方法包括但不限於，以下所述之方法。 通用方案I-1其中X1 、X2 、X3 、X4 及Z如本文所述。
通用方案I-1中概述了使用胺1 製備本發明之化合物的通用方式。胺1 與化合物2 縮合並環化將得到羧酸酯3 。化合物3 與羥基胺最終縮合一般將得到式I化合物。 通用方案II-1其中X1 、X2 、X3 、X4 及Z如本文所述。
通用方案II-1中概述了製備本發明之化合物的另一通用方式。使用金屬催化之偶合，使胺1 與化合物6 在標準條件下交叉偶合將得到羧酸酯7 。化合物7 與羥基胺最終縮合一般將得到式I化合物。 通用方案III-1其中X1 、X2 、X3 、X4 及Z如本文所述。
通用方案III-1中概述了製備本發明之化合物的另一通用方式。使用金屬催化之偶合，使化合物1 與胺9 在標準條件下交叉偶合將得到羧酸酯10 。化合物10 與羥基胺最終縮合一般將得到式I化合物。螺環
本發明之一態樣係關於式II之化合物：(II) 及其醫藥學上可接受之鹽，其中： X1 、X2 、X3 、X4 、X5 及X6 在每次出現時各自獨立地係-CR1 R2 -、-NR3 -、-O-、-C(O)-、-S(O)2 -、-S(O)-或-S-； Y1 、Y2 及Y3 各自獨立地係N或CR1 ； L係一鍵、-(CR1 R2 )p -、-C(O)NR3 -、-S(O)2 -、-S(O)2 NR3 -、-S(O)-、-S(O)NR3 -、-C(O)(CR1 R2 )p O-或-C(O)(CR1 R2 )p -； R獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、-C5 -C12 螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、側氧基、-NO2 、-CN、-R1 、-R2 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 NR3 R4 、-S(O)2 R1 、-C(O)R1 、-C(O)OR1 、-NR3 S(O)2 R1 、-S(O)R1 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R1 、雜環、芳基或雜芳基取代； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基； 或R1 及R2 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基； 或R1 及R2 當在不相鄰原子上時，可以組合形成視情況橋連之環烷基、視情況橋連之雜環或視情況橋連之環烯基； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； p係0、1、2、3、4、5或6； n係0、1、2、3或4； m係0、1或2； q係1或2； r係1或2； 其中q + r之總和 ≤3且 其中m + n之總和 ≤ 4。
在一或多個實施例中，n係0且m係1。在一或多個實施例中，n係1且m係1。在一或多個實施例中，q係1且r係1。在一或多個實施例中，q係2且r係1。在一或多個實施例中，q係1且r係2。在一或多個實施例中，q係1，r係1，m係0且n係1。在一或多個實施例中，q係1，r係1，m係1且n係1。在一或多個實施例中，q係1，r係1，m係2且n係1。在一或多個實施例中，q係1，r係1，m係1且n係2。在一或多個實施例中，X5 係C(O)。在一或多個實施例中，X4 係C(O)。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-。在一些實施例中，X1 係-O-，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-，且X2 係-O-。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-O-，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-O-。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-O-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-NR3 -。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-NR3 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)-。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 - 在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-S(O)2 -，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-C(O)-。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，且X2 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-C(O)-，X2 係-CH2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-NR3 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-NR3 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-S(O)-。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-S(O)2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-S(O)2 -，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，且X2 係-C(O)-。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，且X3 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，且X4 -CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，且X5 係-CH2 -。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，且X6 係-CH2 -。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，且m係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，且n係0。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，且q係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係1。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1，且r係2。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1，且r係2。
在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2，且r係1。在一些實施例中，X1 係-CH2 -，X2 係-C(O)-，X3 係-CH2 -，X4 係-CH2 -，X5 係-CH2 -，X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2，且r係1。
在一些實施例中，Y1 係-CH-。在一些實施例中，Y2 係-CH-。在一些實施例中，Y3 係-CH-。在一些實施例中，Y1 係-N-。在一些實施例中，Y2 係-N-。在一些實施例中，Y3 係-N-。在一些實施例中，Y1 係-CH-，Y2 係-CH-，且Y3 係-CH-。在一些實施例中，Y1 係-N-，Y2 係-CH-，且Y3 係-N-。在一些實施例中，Y1 係-N-，Y2 係-N-，且Y3 係-CH-。在一些實施例中，Y1 係-CH-，Y2 係-N-，且Y3 係-CH-。在一些實施例中，Y1 係-CH-，Y2 係-N-，且Y3 係-N-。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-且X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-且X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -且X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 、X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X1 係-O-，且X2 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-C(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)-，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係0。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0且n係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1且n係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係2且r係1。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係2且r係1。
在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係0，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係0，n係1，q係1且r係2。在一些實施例中，X4 係-S(O)2 -，X2 係-O-，且X1 、X3 、X5 、X6 係-CH2 -，m係1，n係1，q係1且r係2。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-A：(II-A )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-B：(II-B )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-C：(II-C )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-D：(II-D )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-E：(II-E )。
對於以上關於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物所述之每一實施例，L係選自一鍵、-CH2 -、-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-C(O)-、-S(O)2 -、-C(O)NR3 -或-C(O)CH2 -。對於以上關於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物所述之每一實施例，L係選自一鍵、-CH2 -或-C(O)-。對於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物之每一實施例，L係選自一鍵。對於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物之每一實施例，L係選自-CH2 -。對於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物之每一實施例，L係選自-C(O)-。
對於以上關於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物所述之每一實施例，R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：C1 -C6 烷基、芳基、C3 -C8 環烷基、雜環基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基。對於以上關於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物所述之每一實施例，R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：苯基、C1 -C6 烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡啶基或嗎啉基。對於以上關於式II、II-A、II-B、II-C、II-D或II-E之化合物所述之每一實施例，R係視情況經一或多個以下獨立出現之基團取代的苯基：鹵素、CF3 、-SO2 CH3 、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-OCF3 或-OCH2 苯基。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-A-i：(II-A-i )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-B-i：(II-B-i )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-C-i：(II-C-i )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-C-ii：(II-C-ii )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-D-i：(II-D-i )。
在一或多個實施例中，該化合物具有式II-E-i：(II-E-i )。
對於以上關於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物所述之每一實施例，L係選自一鍵、-CH2 -、-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-C(O)-、-S(O)2 -、-C(O)NR3 -或-C(O)CH2 -。對於以上關於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物所述之每一實施例，L係選自一鍵、-CH2 -或-C(O)-。對於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物之每一實施例，L係選自一鍵。對於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物之每一實施例，L係選自-CH2 -。對於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物之每一實施例，L係選自-C(O)-。
對於以上關於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物所述之每一實施例，R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：C1 -C6 烷基、芳基、C3 -C8 環烷基、雜環基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基。對於以上關於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物所述之每一實施例，R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：苯基、C1 -C6 烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡啶基或嗎啉基。對於以上關於式II、II-A-i、II-B-i、II-C-i、II-C-ii、II-D-i或II-E-i之化合物所述之每一實施例，R係視情況經一或多個以下獨立出現之基團取代的苯基：鹵素、CF3 、-SO2 CH3 、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-OCF3 或-OCH2 苯基。
在一或多個實施例中，式II之化合物可選自： 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-1) ； N-羥基-1'-甲基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-2) ； (R)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-3) ； (S)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(HDTK054) ； 1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-5) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-6) ； 1'-(4-氟苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-7) ； N-羥基-1'-(4-(甲基磺醯基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-8) ； 1'-環丙基-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-9) ； 1'-(環丁基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-10) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-11) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-12) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-13) ； 1'-苯甲基-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-14) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-苯基丙基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-15) ； 1'-([1,1'-聯苯]-4-基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-16) ； N-羥基-1'-(3-甲基苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-17) ； 1'-([1,1'-聯苯]-3-基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-18) ； N-羥基-1'-(4-甲氧基苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-19) ； N-羥基-1'-(3-甲氧基苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-20) ； 1'-(2,6-二氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-21) ； 1'-(2,3-二氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-22) ； N-羥基-1'-(2-甲基苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-23) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(吡啶-3-基甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-24) ； 1'-(2-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-25) ； 1'-(3-氟苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-26) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲氧基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-27) ； 1'-(3,5-二氟苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-28) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-29) ； 1'-(3-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-30) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-31) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲氧基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-32) ； 1'-(3-溴苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-33) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((2-苯基噻唑-4-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-34) ； 1'-(2,4-二氟苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-35) ； N-羥基-1'-(2-甲氧基苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-36) ； 1'-([1,1'-聯苯]-2-基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-37) ； 1'-(3,4-二氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-38) ； 1'-(3,4-二甲基苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-39) ； 1'-(3,5-二甲氧基苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-40) ； 1'-(4-(苯甲氧基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-41) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲氧基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-42) ； 1'-(2-氟-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-43) ； 1'-(環己基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-44) ； 1'-(2,5-二氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-45) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((3-苯基異噁唑-5-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-46) ； 1'-((6-(1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-47) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-48) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((5-(四氫-2H-哌喃-4-基)-1,2,4-噁二唑-3-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-49) ； 1'-((3,5-二甲基異噁唑-4-基)甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-50) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-51) ； N-羥基-1'-(2-(N-嗎啉基)乙基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-52) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-((1-苯基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-53) ； N-羥基-1'-(4-(甲基磺醯基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-54) ； 1'-(環丙基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-55) ； N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-56) ； 1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-57) ； N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-58) ； 1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-59) ； 1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-60) ； 1'-(4-氯苯甲醯基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-61) ； 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-62) ； 1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-63) ； 1'-苯甲基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-64) ； 1'-苯甲基-N-羥基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-65) ； 1'-苯甲基-N,1-二羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-66) ； 1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-67) ； 1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-68) ； 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-69) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-70) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-71) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-72) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-73) ； N8-羥基-N1',N1'-二甲基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲醯胺(II-74) ； 1'-(4-氟苯甲醯基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-75) ； 1'-(環己基磺醯基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-76) ； N-羥基-1'-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-羰基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-77) ； N-羥基-1'-(1-(3-(三氟甲基)苯基)環丙烷-1-羰基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-78) ； N-羥基-1'-(2-苯基乙醯基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-79) ； 1'-(4-氟苯甲基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-80) ； 1'-環己基-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-81) ； N-羥基-1'-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-82) ； 1'-(3-氟-4-甲基苯基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-83) ； 1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-84) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-85) ； 1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-86) ； 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-87) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-88) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-89) ； N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲醯胺(II-90) ； 1'-乙醯基-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲醯胺(II-91) ； N-羥基-1'-苯基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲醯胺(II-92) 或 1'-(4-氟苯基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲醯胺(II-93) ， 或其醫藥學上可接受之鹽。 合成所揭示之化合物之方法
本發明之化合物可藉由多種方法，其包括標準化學方法製備。以下所提供之方案描繪適合的合成途徑。
式II化合物可藉由如以下合成方案及實例部分地陳述的有機合成領域中已知之方法製備。在以下所述之方案中，應充分瞭解，必要時，根據一般原理或化學，採用了敏感性基團或反應性基團之保護基。保護基係根據標準有機合成方法(T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第三版, Wiley, New York 1999)操作。該等基團係在化合物合成之適宜階段，使用熟習此項技術者顯而易知之方法移除。選擇方法以及反應條件及其執行次序應符合式II化合物之製備。
熟習此項技術者將認識到在式II化合物中是否存在立體中心。因此，本發明包括兩種可能的立體異構體(除非在合成中具體說明)且不僅包括外消旋化合物，且亦包括個別對映異構體及/或非對映異構體。當需要呈單一對映異構體或非對映異構體形式之化合物時，其可藉由立體特異性合成或藉由拆分最終產物或任何適宜中間物獲得。最終產物、中間物或起始物質之拆分可藉由此項技術中已知之任何適合方法實現。參見例如，「Stereochemistry of Organic Compounds」, E. L. Eliel, S. H. Wilen及L. N. Mander (Wiley-lnterscience, 1994)。 化合物之製備
本文所述之化合物可由可商購之起始物質製備，或使用已知之有機、無機及/或酶促方法合成。
本發明之化合物可以熟習有機合成技術者熟知之多種方式製備。舉例而言，熟習此項技術者應理解，可使用以下所述之方法，以及合成有機化學領域中已知之合成方法，或其變化形式合成式II化合物。該等方法包括但不限於，以下所述之方法。方案 1-2 . 式II-A化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案1-2概述了使用中間物1a-2 、1b-2 、1c-2 、1d-2 、1e-2 、1f-2 及1g-2 製備式(II-A)之標靶分子的通用方法。起始物質(1a-2 )例如在金屬催化劑(例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) (Pd(dppf)Cl2 ))、一氧化碳及鹼(例如三乙胺(Et3 N))存在下羰基化，得到酯1b-2 。使用例如鹼(例如氫化鈉(NaH))在碳酸二甲酯存在下使1b-2 進一步羰基化，得到中間物1c-2 ，可藉由用鹵代腈，在鹼存在下處理使其烷基化以得到中間物1d-2 。在氧化鉑(IV)(PtO2 )、乙酸及甲醇(MeOH)存在下，用例如氫氣還原可得到烷基胺1e-2 。可例如藉由用氨(NH3 )之MeOH溶液處理1e-2 以獲得螺內醯胺1f-2 。可經由例如烷基化、芳基化、醯基化、脲形成或磺化之標準方法添加R-L部分。舉例而言，在鹼(例如NaH)存在下，用烷基鹵化物使1f-2 烷基化，可提供中間化合物1g-2 。或者，在金屬催化劑(例如碘化銅(I) (CuI))、二胺配位體及鹼存在下，用芳基鹵化物使1f-2 芳基化，亦可提供中間化合物1g-2 。用羥基胺及鹼(例如氫氧化鈉(NaOH))處理1g-2 可提供式(II-A)化合物。方案 2-2 . 式II-B化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案2-2概述了使用中間物1f-2 、1g-2 、1h-2 及1j-2 製備式(II-B)之標靶分子的通用方法。可藉由用2,4-雙(4-甲氧基苯基)-2,4-二硫基-1,3,2,4-二硫雜二磷雜環丁烷(Lawesson試劑)處理1f-2 ，隨後在例如六水合氯化鎳(II) (NiCl2 •6H2 O)存在下用硼氫化鈉(NaBH4 )處理，經硫代內醯胺1g-2 還原，獲得螺胺1h-2 。可經由烷基化、芳基化、醯基化、脲形成或磺化之標準方法添加R-L部分以獲得中間物1j-2 。用羥基胺及鹼(例如NaOH)處理1j-2 可得到式(II-B)之化合物。方案 3-2 . 式II-C化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案3-2概述了使用中間物1k-2 、1m-2 、1n-2 、1p-2 、1q-2 及1r-2 製備式(II-C)之標靶分子的通用方法。可經由芳基溴化物1a-2 之雙α-烷基化獲得螺胺1p-2 。可由醇(1k-2 )，在用苯甲基保護1m-2 ，隨後在標準條件(例如用PBr3 處理)下溴化之後，獲得雙烷基溴化胺1n-2 。1p-2 在金屬催化劑(例如Pd(dppf)Cl2 )、一氧化碳及鹼(例如Et3 N)存在下羰基化可得到酯1q-2 。1q-2 在標準條件(例如氫化)下脫苯甲基得到1r-2 ，可經由烷基化、芳基化、醯基化、脲形成或磺化之標準方法添加R-L部分以得到1s-2 。用羥基胺及鹼(例如NaOH)處理1s-2 可得到式(II-C)之化合物。方案 4-2 . 式II-A1及II-A2化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案4-2概述了使用中間物1t-2 、 1u-2 、1v-2 、1w-2 、1x-2 、1y-2 、1z-2 、1aa-2 及1bb-2 製備式II-A (例如II-A1及II-A2)之標靶分子的另一通用方法。使1-溴-2,3-二甲基苯(1t-2 )雙溴化，隨後由1u-2 例如在碘化鈉存在下原位產生反應性二烯，以與丙烯酸甲酯經歷Diels-Alder環加成可得到四氫萘之區位異構體混合物1v-2 。1v-2 在金屬催化劑(例如Pd(dppf)Cl2 )、一氧化碳及鹼(例如Et3 N)存在下羰基化可得到酯1w-2 ，其可藉由用鹵代腈在建存在下處理進行烷基化，得到中間物1x-2 。在PtO2 、乙酸及MeOH存在下，用例如氫氣還原，隨後用NH3 之MeOH溶液處理可得到螺內醯胺1y-2 及1aa-2 ，其可藉由管柱層析法分離。可經由烷基化、醯基化、脲形成、磺化或芳基化之標準方法添加R-L部分。舉例而言，在鹼(例如NaH)存在下用烷基鹵化物使1y-2 或1aa-2 烷基化可得到中間化合物1z-2 及1bb-2 。或者，在金屬催化劑(例如乙酸銅(II)，Cu(OAc)2 )及鹼存在下用芳基硼酸使1y-2 或1aa-2 芳基化，亦可提供中間化合物1z-2 或1bb-2 。用羥基胺及鹼(例如NaOH)處理1z-2 或1bb-2 可得到式(II-A1)及(II-A2)之化合物。方案 5-2 . 式II-C1化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案5-2概述了使用中間物1cc-2 、 1dd-2 、1ee-2 、1ff-2 、1gg-2 及1hh-2 製備式II-C (例如II-C1)之標靶分子的另一通用方法。可由酮1cc-2 與鄰羥基二苯甲酮1dd-2 縮合得到螺環1ee-2 。在MeOH存在下例如用NaBH4 還原可得到醇1ff-2 。1ff-2 可藉由使用三乙基矽烷轉化成矽烷基醚且用TFA處理脫羥基以得到中間物1gg-2 。可經由烷基化、芳基化、醯基化、脲形成或磺化之標準方法添加R-L部分。用羥基胺及鹼(例如NaOH)處理1hh-2 可得到式(II-C1)之化合物。方案 6-2 . 式II-C2化合物之通用合成方法其中L及R係如式(II)中所定義。
方案6-2概述了使用中間物1cc-2 、1jj-2 、1kk-2 、1ll-2 、1mm-2 、1nn-2 及1oo-2 製備式II-C (例如II-C2)之標靶分子的另一通用方法。可由酮1cc-2 與鄰羥基二苯甲酮1jj-2 縮合得到螺環1kk-2 。1kk-2 在金屬催化劑(例如PdCl2 )、一氧化碳及二膦存在下羰基化可得到酯1ll-2 。在MeOH存在下例如用NaBH4 還原可得到醇1mm-2 。1mm-2 可藉由使用三乙基矽烷轉化成矽烷基醚且用TFA處理脫羥基以得到中間物1nn-2 。可經由烷基化、芳基化、醯基化、脲形成或磺化之標準方法添加R-L部分。用羥基胺及鹼(例如NaOH)處理1oo-2 可得到式(II-C2)之化合物。 使用 HDAC11 抑制劑之方法
本發明提供了向需要治療之受試者投予有效量的本文所述之治療劑(例如HDAC11抑制劑)的方法。在一些實施例中，提供了治療有需要之受試者的與HDAC11調節有關之疾病的方法。在一些實施例中，方法涉及向需要治療與HDAC11有關之疾病或病症的患者投予有效量之HDAC11抑制劑。在一些實施例中，供治療之疾病可以為但不限於，細胞增殖性疾病、癌症、神經退化性疾病、神經發育性疾病、炎症性疾病或自身免疫性疾病、感染、代謝疾病、血液疾病或心血管疾病。
在一些實施例中，治療細胞增殖性疾病之方法包括向受試者投予HDAC11抑制劑。在一些實施例中，投予有效量(例如治療量)之HDAC11抑制劑。
在本文所述方法中之任一種中，可使用任一類別之HDAC11抑制劑。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物(例如小分子)。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物(例如小分子)。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係小分子化合物。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型(例如HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及/或HDAC10)之至少10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍、2,000倍、3,000倍或更高倍數。在一些實施例中，小分子HDAC11抑制劑對抑制HDAC11之選擇性係抑制HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9及HDAC10中每一種之至少10倍。在一些實施例中，HDAC11抑制劑對人類HDAC11具有特異性。 癌症
在一些實施例中，提供了治療細胞增殖性疾病或病症，諸如癌症的方法。一般而言，在本發明之上下文中，癌症可理解為患者體內之異常或不受調控之細胞生長。在一些實施例中，癌症可包括但不限於，血液惡性疾病、肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、胰臟癌、肝細胞癌、腎癌、黑素瘤，及白血病，諸如急性骨髓性白血病及急性淋巴母細胞性白血病。其他癌症類型包括T細胞淋巴瘤(例如皮膚T細胞淋巴瘤、周圍T細胞淋巴瘤)、霍奇金氏淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在一些實施例中，本發明涵蓋認識到，HDAC11抑制劑可能有益於靶向癌症幹細胞(CSC)。CSC係在腫瘤或血液癌症內發現的具有與正常幹細胞有關之特徵，特別是能夠產生特定癌症樣品中所發現之所有細胞類型的癌症細胞。因此，CSC可經由幹細胞之自更新及分化過程產生腫瘤且因此可潛在地保留在腫瘤中，藉由產生新腫瘤而引起復發及轉移。靶向CSC之特定療法將有益於治療患者，特別是患有轉移性疾病之患者，不過，開發靶向CSC之療法的問題係鑑別特異性CSC標記物以幫助鑑別可特異性靶向某些CSC之療法。在一些實施例中，HDAC11抑制劑可特異性靶向CSC。在一些實施例中，HDAC11抑制劑可特異性靶向展現癌症幹細胞特性及/或與癌症幹細胞活性相關基因之基因擴增有關的癌症細胞。
在一些實施例中，本發明提供一種治療癌症之方法，其中一或多個癌細胞展現幹細胞樣特性。在一些實施例中，癌症係與SOX2之基因擴增有關。在一些實施例中，與SOX2之基因擴增有關的癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。
在一些實施例中，本發明提供用於抑制癌症患者體內之幹細胞樣癌細胞中之SOX2表現的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑。性別決定區Y框蛋白2(SOX2)係編碼屬於SOX基因家族之轉錄因子的基因且已經描述為必需之胚胎幹細胞基因及誘導細胞重編程所需之因子。近期的研究指出，SOX2常常在多種人類癌症中過度表現且充當致癌基因以賦予癌細胞某些幹細胞特性。因此，SOX2在臨床上之作用已引起廣泛關注且成為選擇性靶向SOX2表現性癌細胞之潛在治療標靶(Weina等人, Clin and Translational Med. 2014年7月; 3:19)，不過，鑑別針對SOX2表現性癌細胞之選擇性標靶及療法仍係挑戰。因此，仍然需要治療與SOX2基因擴增有關之疾病或病症的有效、安全且具選擇性之方法。在一些實施例中，SOX2表現性癌症係肺癌、血液癌症或乳癌。在一些實施例中，血液癌症係MPN、淋巴瘤或白血病。在一些實施例中，癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。
在一些實施例中，用HDAC11治療之癌症係與STAT3之基因活化有關之癌症。在一些實施例中，與STAT3之基因活化有關之癌症係乳癌。
在一些實施例中，治療增生性疾病或病症可包括顯示Treg/效應T細胞比率增加，及/或絕對Treg數量增加，及/或T細胞耐受性相關基因之表現增加的任何癌症。在一些實施例中，Treg數量增加可見於周圍中、腫瘤微環境中及/或四級淋巴結構。此類增生性疾病或病症可包括但不限於：帶有任何Kras突變體之腫瘤(http://cancerimmunolres.aacrjournals.org/content/early/2016/02/13/2326-6066.CIR-15-0241.long)；腎細胞癌；肺癌；子宮頸癌；前列腺癌；卵巢癌；頭頸癌；淋巴瘤；結腸直腸癌、非小細胞肺癌；乳癌(Gobert, M.等人(2009) Cancer Res. 69, 2000-2009)；及膀胱癌。
在一些實施例中，細胞增殖疾病係血液惡性疾病。血液惡性疾病包括但不限於，白血病(例如急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性單核細胞性白血病(AMoL))、淋巴瘤(例如霍奇金氏淋巴瘤(HL)及非霍奇金氏淋巴瘤(NHL))及骨髓瘤(例如多發性骨髓瘤)。
在一些實施例中，細胞增殖疾病係實體腫瘤。實體腫瘤之實例包括但不限於，肉瘤、癌瘤、肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、胰臟癌、肝細胞癌、腎癌及黑素瘤。在一些實施例中，實體腫瘤係良性的。在一些實施例中，實體腫瘤係惡性的。
在一些實施例中，細胞增殖疾病係骨髓增生性贅瘤(MPN)。骨髓增生性贅瘤係以一個或若干個髓細胞系過量及長期產生成熟細胞為特徵之血液疾病(Sonbol等人, Ther Adv Hematol. 2013年2月; 4(1):15-35)。MPN包括但不限於，真性紅細胞增多症(PV)、特發性血小板增多症(ET)、原發性骨髓纖維化(PMF)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性嗜中性球白血病(CNL)及慢性嗜伊紅球性白血病(CEL)。
MPN通常與JAK2或MPL突變有關。當前針對MPN之治療包括使用Janus激酶2(JAK2)抑制劑，諸如魯索替尼；不過，一些細胞仍難以用JAK2抑制劑治療。此外，當前療法係治療症狀而非該疾病。儘管已提出I類及/或II類HDAC抑制劑治療某些MPN(WO 2010/034693、US 2011/0237663及US 2014/0039059)，但全HDAC抑制劑可由於HDAC在調控轉錄中起到較大作用而引起細胞毒性。因此，仍然需要治療細胞增殖性疾病，尤其是MPN的有效、安全且具選擇性之方法。
在某些實施例中，用HDAC11抑制劑治療之MPN係選自PV、ET及PMF。在某些實施例中，MPN係PV。在某些實施例中，MPN係ET。在某些實施例中，MPN係PMF。 炎症性疾病及自身免疫疾病
本發明涵蓋認識到，抑制HDAC11可能對治療或預防炎症性疾病及/或自身免疫性疾病有益。不希望受理論束縛，預計抑制HDAC11可對免疫細胞調控(例如T細胞、B細胞、巨噬細胞及/或抗原呈遞細胞(APC))發揮作用。舉例而言，HDAC11在T細胞中之蛋白質相互作用提出多種受質及生物過程(Joshi等人, Mol Syst Biol. 2013, 9:672)。HDAC11亦調控抗原呈遞細胞及骨髓源性抑制細胞中介白素10 (IL-10)之表現(Villagra等人, Nat Immunol. 2009年1月;10(1):92-100；Cheng等人, Mol Immunol. 2014年7月;60(1):44-53；Sahakian等人, Mol Immunol. 2015年2月;63(2):579-85)。HDAC11亦在調控抗原呈遞細胞中之OX40配體方面起到作用(Buglio等人, Blood. 2011年3月10日;117(10):2910-7)。
在一些實施例中，用HDAC11抑制劑治療之疾病或病症係急性或慢性免疫性或炎症性病症。免疫性及炎症性病症之實例包括炎症性腸病、銀屑病、類風濕性關節炎、多發性硬化及阿茲海默氏病。 組合療法
HDAC11抑制劑可單獨投予或與其他藥物(例如，作為佐劑)組合投予。舉例而言，一或多種HDAC11抑制劑可與用於治療或預防本文所揭示之疾病的其他藥劑組合。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係與至少一種其他抗癌劑組合投予，包括例如此項技術中已知的任何化學治療劑、電離輻射、小分子抗癌劑、手術及/或生物療法(例如抗體試劑、病毒、基因療法、基於細胞之療法等)。
在一些實施例中，用於抑制MPN患者中贅生性細胞增殖之方法包括向該患者投予HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑之組合。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係共投予的。在另一實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係分開投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係連續投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係在JAK2抑制劑之前投予。在另一實施例中，JAK2抑制劑係在HDAC11抑制劑之前投予。在一些實施例中，MPN係PV、ET及/或MPF。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。
在一些實施例中，本發明提供一種減少具有骨髓增生性贅瘤之患者之腫瘤負荷的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑之組合。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係共投予的。在另一實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係分開投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係連續投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係在JAK2抑制劑之前投予。在另一實施例中，JAK2抑制劑係在HDAC11抑制劑之前投予。在一些實施例中，向已投予或將投予JAK2抑制劑之患者投予HDAC11抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，向已投予或將投予HDAC11抑制劑之患者投予JAK2抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，MPN係PV、ET及/或MPF。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼。
在一些實施例中，本發明提供一種用於抑制MPN患者體內對JAK2抑制劑具有抗性之細胞增殖之方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑。在一些實施例中，MPN係PV、ET及/或MPF。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼。
在一些實施例中，本發明提供一種誘導MPN患者體內細胞週期停滯之方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑之組合。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係共投予的。在其他實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係分開投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑係連續投予的。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係在投予JAK2抑制劑之前投予。在其他實施例中，JAK2抑制劑係在HDAC11抑制劑之前投予。在一些實施例中，向已投予或將投予JAK2抑制劑之患者投予HDAC11抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，向已投予或將投予HDAC11抑制劑之患者投予JAK2抑制劑，由此該患者接受二者之治療。
在一些實施例中，MPN係PV、ET及/或MPF。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼。在一些實施例中，細胞週期在G1期停滯。
在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，該方法進一步包括投予JAK2抑制劑。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼。
在一些實施例中，一種方法進一步包括投予刺猬路徑抑制劑。在一些實施例中，刺猬路徑抑制劑係維莫德吉、艾莫德吉、BMS-833923、格拉德吉、塔拉德吉或薩瑞德吉。在一些實施例中，向已投予或將投予刺猬路徑抑制劑之患者投予HDAC11抑制劑，由此該患者接受二者之治療。在一些實施例中，向已投予或將投予HDAC11抑制劑之患者投予刺猬路徑抑制劑，由此該患者接受二者之治療。
在一些實施例中，提供一種用於抑制有需要之患者體內幹細胞樣癌細胞中SOX2之表現的方法，其包括投予HDAC11抑制劑與一或多種額外治療劑之組合。在一些實施例中，癌症係肺癌、血液癌症或乳癌。在一些實施例中，血液癌症係MPN、淋巴瘤或白血病。在一些實施例中，癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
在一些實施例中，用於抑制有需要之患者體內幹細胞樣癌細胞中SOX2之表現的方法包括投予HDAC11抑制劑與JAK2抑制劑之組合。在一些實施例中，JAK2抑制劑係多肽、聚核苷酸、siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼、巴瑞替尼、CYT387、來他替尼或帕瑞替尼。在一些實施例中，JAK2抑制劑係魯索替尼。
在一些實施例中，用於抑制有需要之患者體內幹細胞樣癌細胞中SOX2之表現的方法包括投予HDAC11抑制劑與刺猬路徑抑制劑之組合。在一些實施例中，刺猬路徑抑制劑係維莫德吉、艾莫德吉、BMS-833923、格拉德吉、塔拉德吉或薩瑞德吉。
在另一實施例中，提供治療癌症之方法，其中一或多個癌細胞展現幹細胞樣特性，該等方法包括用一線療法治療患者；及向該患者投予HDAC11抑制劑，由此在用HDAC11抑制劑治療之後，減少或消除自該一線療法存活之任何癌細胞。在一些實施例中，癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。在其他實施例中，該癌症係乳癌。在一些實施例中，HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。在其他實施例中，該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。在一些實施例中，一線療法係切除術、放射或幹細胞移植。 調配物及投藥
本發明所涵蓋之治療劑(例如HDAC11抑制劑及/或JAK2抑制劑或刺猬路徑抑制劑)可經由投予治療劑之任何模式投予。該等模式包括全身或局部投藥，諸如經口、鼻、非經腸、經皮、皮下、陰道、頰、直腸或表面投藥模式。
取決於預定投藥模式，本文所述之治療劑可呈固體、半固體或液體劑型，諸如可注射劑、錠劑、栓劑、丸劑、定時釋放膠囊、酏劑、酊劑、乳液、糖漿、散劑、液體、懸浮液或類似劑型，有時呈單位劑量且符合習知醫藥實踐。同樣，該等治療劑亦可經靜脈內(快速注射及輸注)、腹膜內、皮下或肌肉內形式，皆使用熟習醫藥領域之技術人員熟知的形式投予。
說明性醫藥組成物係包含治療劑及醫藥學上可接受之載劑的錠劑及明膠膠囊，該醫藥學上可接受之載劑諸如a)稀釋劑，例如純化水、甘油三酯油，諸如氫化或部分氫化之植物油，或其混合物、玉米油、橄欖油、向日葵油、紅花油、魚油諸如EPA或DHA，或其酯或甘油三酯或其混合物，ω-3脂肪酸或其衍生物、乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素、糖精鈉、葡萄糖及/或甘胺酸；b)潤滑劑，例如二氧化矽、滑石、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽、油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及/或聚乙二醇；亦針對錠劑；c)黏合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊漿、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、碳酸鎂、天然糖諸如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味劑、天然及合成樹膠諸如阿拉伯膠、黃芪膠或褐藻酸鈉、蠟及/或聚乙烯吡咯啶酮(若需要)；d)崩解劑，例如澱粉、瓊脂、甲基纖維素、膨潤土、黃原膠、褐藻酸或其鈉鹽，或起泡混合物；e)吸收劑、著色劑、調味劑及甜味劑；f)乳化劑或分散劑，諸如Tween 80、Labrasol、HPMC、DOSS、caproyl 909、labrafac、labrafil、peceol、transcutol、capmul MCM、capmul PG-12、captex 355、gelucire、維生素E TGPS或其他可接受之乳化劑；及/或g)增進化合物吸收之試劑，諸如環糊精、羥丙基環糊精、PEG400、PEG200。
液體(特別是注射液)組成物可例如藉由溶解、分散等製備。舉例而言，將所揭示之化合物溶解於醫藥學上可接受之溶劑中或與醫藥學上可接受之溶劑混合，由此形成可注射之等張溶液或懸浮液，該溶劑諸如水、生理食鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇及類似溶劑。可使用蛋白質，諸如白蛋白、乳糜微粒或血清蛋白溶解所揭示之化合物。
治療劑亦可調配為栓劑形式，其可由脂肪乳液或懸浮液；使用聚烷二醇，諸如丙二醇作為載劑製備。
治療劑亦可以脂質體遞送系統，諸如小單層囊泡、大單層囊泡及多層囊泡之形式投予。脂質體可由多種磷脂形成，包含膽固醇、硬脂醯胺或磷脂醯膽鹼。在一些實施例中，用藥物水溶液使脂質組分之膜水合，形成包封藥物之脂質層，如美國專利第5,262,564號中所述。
亦可藉由使用單株抗體作為獨立載劑偶合至所揭示之化合物來遞送治療劑。所揭示之化合物亦可與作為可靶向之藥物載劑的可溶性聚合物偶合。此類聚合物可包括聚乙烯吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯醯胺-苯酚、聚羥乙基天冬醯胺苯酚或經棕櫚醯基殘基取代之聚伸乙基氧化物聚離胺酸。此外，所揭示之化合物可偶合至一類可用於實現藥物之控制釋放的生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩性嵌段共聚物。在一些實施例中，所揭示之化合物不共價結合至聚合物，例如聚羧酸聚合物或聚丙烯酸酯。
非經腸注射投藥一般用於皮下、肌肉內或靜脈內注射及輸注。可注射劑可以製備成習知形式，如液體溶液或懸浮液，或者適於在注射之前溶解於液體中的固體形式。
本發明提供醫藥組成物，其包含治療劑(例如HDAC11抑制劑)及醫藥學上可接受之載劑。該醫藥學上可接受之載劑可進一步包括賦形劑、稀釋劑或界面活性劑。必要時，該組成物亦可含有一或多種另外的治療活性物質。
儘管本文提供的醫藥組成物描述主要係針對在倫理學上適於投予人類的醫藥組成物，但熟練技術人員應瞭解，此類組成物一般適於投予所有種類之動物。應充分瞭解，可對適於投予人類之醫藥組成物進行改良以便使該組成物適於投予各種動物，且普通熟練獸醫藥理學家僅需常規實驗(若存在)即可設計及/或執行該改良。
組成物可分別根據習知混合、製粒或包覆方法製備，且本發明之醫藥組成物可含有以重量或體積計約0.1%至約99%、約5%至約90%，或約1%至約20%的本文所述之治療劑。
利用該治療劑之劑量方案係根據多種因素選擇，包括患者之類型、物種、年齡、體重、性別及醫學病狀；欲治療之病狀的嚴重程度；投藥途徑；患者之腎功能或肝功能；及所採用之特定治療劑。此項技術中具有普通技能的醫師或獸醫可容易地確定並指定預防、對抗或停滯病狀進展所需治療劑之有效量。
當用於指定作用時，根據治療病狀所需，治療劑之有效劑量在約0.5 mg至約5000 mg的所揭示化合物範圍內。用於活體內或活體外使用之組成物可含有約0.5、5、20、50、75、100、150、250、500、750、1000、1250、2500、3500或5000 mg治療劑，或在所列劑量中之一種量至另一種量的範圍內。在一些實施例中，組成物係呈可刻痕之錠劑形式。 套組
本發明進一步提供一種醫藥包裝或套組，其包括一或多個填充有至少一種如本文所述之HDAC11抑制劑的容器。套組可用於任何適用的方法中，包括例如治療、診斷等。視情況隨此類容器附帶之可為政府機構指定形式的規定醫藥或生物產品製造、使用或銷售之說明書，該說明書反映(a)該機構批准製造、使用或銷售用於人類投藥；(b)使用指導；或兩者。
在一些實施例中，套組可包括一或多種偵測試劑(例如偵測HDAC11抑制劑)。在一些實施例中，套組可包括可偵測形式之HDAC11抑制劑(例如與可偵測部分或實體共價締合)。
在一些實施例中，本文所提供之HDAC11抑制劑可包括在套組中用於偵測及/或治療受試者。
以下帶編號之實施例係對本發明某些態樣之例示說明而非限制： 1. 一種式I之化合物： (I) 及其醫藥學上可接受之鹽，其中： Q係-H、-OC(O)NR6 (C1 -C6 )烷基芳基或-OC(O)O(C1 -C6 )烷基芳基 Z係-CH2 -、O、S或NR6 ； X1 、X2 、X3 及X4 在每次出現時各自獨立地係N或CR1 ； Y1 、Y2 及Y3 各自獨立地係N或CR1 ； L係NR6 、O或-(CR1 R2 )p -； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、-OR3 、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R3 、-R5 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； 或兩個出現之R1 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； R6 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； 且 p係0、1、2、3、4、5或6。 2. 如實施例1之化合物，其中Y1 、Y2 或Y3 之一係N且Y1 、Y2 或Y3 中之另兩個各自獨立地係CR1 。 3. 如實施例1之化合物，其中Y1 、Y2 或Y3 中之兩個係N且Y1 、Y2 或Y3 中之另一個係CR1 。 4. 如實施例2或3之化合物，其中R1 係H。 5. 如實施例1之化合物，其中L係S。 6. 如實施例1之化合物，其中L係O。 7. 如實施例1之化合物，其中L係NR6 。 8. 如實施例1之化合物，其中該化合物係由式I-A 表示： (I-A) 。 9. 如實施例1之化合物，其中該化合物係由式I-B 表示： (I-B) 。 10. 如實施例1之化合物，其中該化合物係由式I-C 表示： (I-C) 。 11. 如實施例1、8、9或10之化合物，其中X1 及X4 均為N，且X2 及X3 各自獨立地係CR1 。 12. 如實施例1、8、9或10之化合物，其中X2 及X4 均為N，且X1 及X3 各自獨立地係CR1 。 13. 如實施例1、8、9或10之化合物，其中X1 係N且X2 、X3 及X4 各自獨立地係CR1 。 14. 如實施例1、8、9或10之化合物，其中在每次出現時R6 獨立地係H、-C1 -C6 烷基、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基。 15. 如實施例14之化合物，其中在每次出現時R6 獨立地係H、-(CHR5 )p NR3 R4 或-C1 -C6 烷基，其視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 或-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 。 16. 如實施例1、8、9或10之化合物，其中在每次獨立出現時R1 係鹵素、-CF3 、-OH、-CN、-SO2 (C1 -C3 烷基)、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-C(O)C1 -C3 烷基、-OC1 -C3 烷基、-(C1 -C3 烷基)O(C1 -C3 烷基)、-OCF3 或-OCH2 苯基。 17. 一種式II之化合物：(II) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： X1 、X2 、X3 、X4 、X5 及X6 在每次出現時各自獨立地係-CR1 R2 -、-NR3 -、-O-、-C(O)-、-S(O)2 -、-S(O)-或-S-； Y1 、Y2 及Y3 各自獨立地係N或CR1 ； L係一鍵、-(CR1 R2 )p -、-C(O)NR3 -、-S(O)2 -、-S(O)2 NR3 -、-S(O)-、-S(O)NR3 -、-C(O)(CR1 R2 )p O-或-C(O)(CR1 R2 )p -； R獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、-C5 -C12 螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、側氧基、-NO2 、-CN、-R1 、-R2 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 NR3 R4 、-S(O)2 R1 、-C(O)R1 、-C(O)OR1 、-NR3 S(O)2 R1 、-S(O)R1 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R1 、雜環、芳基或雜芳基取代； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基； 或R1 及R2 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、環烯基、雜環、芳基或含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基； 或R1 及R2 當在不相鄰原子上時，可以組合形成視情況橋連之環烷基、視情況橋連之雜環或視情況橋連之環烯基； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； p係0、1、2、3、4、5或6； n係0、1、2、3或4； m係0、1或2； q係1或2；且 r係1或2； 其中q + r之總和 ≤3且 其中m + n之總和 ≤ 4。 18. 如實施例17之化合物，其中n係0且m係1。 19. 如實施例17之化合物，其中n係1且m係1。 20. 如實施例17之化合物，其中q係1且r係1。 21. 如實施例17之化合物，其中q係2且r係1。 22. 如實施例17之化合物，其中q係1且r係2。 23. 如實施例17之化合物，其中q係1，r係1，m係0且n係1。 24. 如實施例17之化合物，其中q係1，r係1，m係1且n係1。 25. 如實施例17之化合物，其中q係1，r係1，m係2且n係1。 26. 如實施例17之化合物，其中q係1，r係1，m係1且n係2。 27. 如實施例17之化合物，其中X5 係C(O)。 28. 如實施例17之化合物，其中X4 係C(O)。 29. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-A：(II-A)。 30. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-B：(II-B)。 31. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-C：(II-C)。 32. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-D：(II-D)。 33. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-E：(II-E)。 34. 如實施例29至33中任一項之化合物，其中L係選自一鍵、-CH2 -、-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-C(O)-、-S(O)2 -、-C(O)NR3 -或-C(O)CH2 -。 35. 如實施例29至33中任一項之化合物，其中L係選自-CH2 -或-C(O)-。 36. 如實施例29至33中任一項之化合物，其中R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：C1 -C6 烷基、芳基、C3 -C8 環烷基、雜環基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基。 37. 如實施例29至33中任一項之化合物，其中R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：苯基、C1 -C6 烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡啶基或嗎啉基。 38. 如實施例29至33中任一項之化合物，其中R係視情況經一或多個以下獨立出現之基團取代的苯基：鹵素、CF3 、-SO2 CH3 、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-OCF3 或-OCH2 苯基。 39. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-A-i：(II-A-i)。 40. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-B-i：(II-B-i)。 41. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-C-i或II-C-ii：(II-C-i)(II-C-ii)。 42. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-D-i：(II-D-i)。 43. 如實施例17之化合物，其中該化合物具有式II-E-i：(II-E-i)。 44. 如實施例39至43中任一項之化合物，其中L係選自一鍵、-CH2 -、-(CH2 )2 -、-(CH2 )3 -、-C(O)-、-S(O)2 -、-C(O)NR3 -或-C(O)CH2 -。 45. 如實施例39至43中任一項之化合物，其中L係選自-CH2 -或-C(O)-。 46. 如實施例39至43中任一項之化合物，其中R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：C1 -C6 烷基、芳基、C3 -C8 環烷基、雜環基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基。 47. 如實施例39至43中任一項之化合物，其中R係氫或選自以下之視情況經取代之基團：苯基、C1 -C6 烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、吡啶基或嗎啉基。 48. 如實施例39至43中任一項之化合物，其中R係視情況經一或多個以下獨立出現之基團取代的苯基：鹵素、CF3 、-SO2 CH3 、苯基、C1 -C3 烷基、C1 -C3 烷氧基、吡啶基、-OCF3 或-OCH2 苯基。 實例
以下實例進一步說明本發明，該等實例不應解釋為將本發明之範疇或精神侷限於本文所描述之特定程序。應瞭解，提供該等實例係說明某些實施例而非限制本發明之範疇。亦應瞭解，在不偏離本發明之精神及/或所附申請專利範圍之範疇的情況下，熟習此項技術者可提出各種其他實施例、修改及其等效物。
以下實例及本文中別處使用某些縮寫： ACN 乙腈(CH3 CN) AcOH 乙酸 AIBN 2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈) CH3 CN 乙腈 DCE 1,2-二氯乙烷 DCM 二氯甲烷(dichloromethane/methylene chloride) DEA N,N-二乙胺 DIEA N,N-二異丙基乙胺 DMA N,N-二甲基乙醯胺 DMF N,N-二甲基甲醯胺 DMSO 二甲亞碸 DMTMM 氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓鹽 dppf 雙(二苯基膦基)二茂鐵 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 FA 甲酸 h 小時 HATU 六氟磷酸2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓鹽 HBr 溴化氫 HCl 氯化氫 HPLC 高效液相層析法 LC/MS 液相層析法/質譜法 LiOH 氫氧化鋰 K2 CO3 碳酸鉀 MeOH 甲醇 MS 質譜法 NaOH 氫氧化鈉 Na2 SO4 硫酸鈉 NH4 HCO3 碳酸氫銨 NMM 4-甲基嗎啉 NMP N-甲基-2-吡咯啶酮 Pd2 (dba)3 叁(二亞苄基丙酮)二鈀 Pd(dppf)Cl2 [1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) PMB 對甲氧基苯甲基 PPh3 三苯基膦 rt 室溫 RuPhos 2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯苯 RuPhos 2G 氯(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 XantPhos 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃 XPhos 2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯 XPhos 2G 氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II) XPhos 3G 甲烷磺酸根基(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)(2'-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)二氯甲烷加合物 材料
除非另外指出，否則所有材料均自商品供應商獲得且不經進一步純化即使用。無水溶劑係自Sigma-Aldrich (Milwaukee, WI)獲得且直接使用。涉及空氣敏感性或水分敏感性試劑的所有反應均在氮氣氛圍下進行。
除非另外指出，否則質量引起之HPLC純化及/或純度以及低解析度質譜資料係使用以下量測：(1) Waters Acquity超高效液相層析(UPLC)系統(帶有樣品組織器(Sample Organizer)之Waters Acquity UPLC及Waters Micromass ZQ質譜儀)，其中在220 nm下UV偵測且用低解析度電噴霧正離子模式(ESI) (管柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7µm 2.1 × 50 mm；梯度：5-100%溶劑B (95/5/0.09%：乙腈/水/甲酸)/溶劑A (95/5/0.1%：10mM甲酸銨/乙腈/甲酸)，保持2.2分鐘，接著為100-5%溶劑B/溶劑A，保持0.01分鐘，接著在5%溶劑B/溶劑A保持0.29分鐘)；或(2) Waters HT2790 Alliance高效液相層析(HPLC)系統(Waters 996 PDA及Waters ZQ Single Quad質譜儀)，其中在220 nm及254 nm下UV偵測且用低解析度電噴霧電離(正/負)模式(ESI) (管柱：XBridge Phenyl或C18，5 µm 4.6×50 mm；梯度：5-95%溶劑B (95% 甲醇/含0.1%甲酸之5%水)/溶劑A (95%水/含0.1%甲酸之5%甲醇)，保持2.5分鐘，接著在95%溶劑B/溶劑A保持1分鐘(僅針對純度及低解析度MS)。
除非另外指出，否則質子核磁共振(NMR)譜係在以下上獲得：(1) Bruker BBFO ASCEND™400 AVANCE III波譜儀，400 MHz；或(2) Bruker BBFO ULTRASHIELD™300 AVANCE III波譜儀，300 MHz。譜圖係以ppm (δ)給出且偶合常數(J)係以赫茲(Hz)為單位報告。使用四甲基矽烷(TMS)作為內標。質譜係使用Waters ZQ Single Quad質譜儀(離子阱電噴霧電離(ESI))收集。實例 1 HDAC抑制檢定
本實例描述例示性HDAC11抑制劑針對各種HDAC之活體外抑制特性。HDAC抑制檢定係在Nanosyn, Inc. (Santa Clara, CA)使用電泳遷移位移檢定進行。在桿狀病毒系統中表現全長人類重組HDAC蛋白並藉由親和層析法純化。使人類重組HDAC3與核受體輔阻遏子(Ncor2)共表現。使用以下肽受質：對於HDAC3、HDAC6及HDAC8，FAM-RHKK(Ac)-NH2；對於HDAC1、HDAC2及HDAC10，FITC-H3K27(Ac)-NH2；對於HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9及HDAC11，FAM-RHKK(tri-fluor-Ac)-NH2。在25℃下，在反應緩衝液(包含100 mM HEPES，pH7.5，25 mM KCl、0.1%牛血清白蛋白、0.01% Triton X-100)中進行由化合物、酶及受質組成之反應，且藉由添加終止緩衝液(100 mM HEPES，pH7.5，0.01% Triton X-100、0.05% SDS)淬滅反應。使用LabChip® 3000微流控電泳儀(Perkin Elmer/Caliper Life Sciences)量測並分析電泳分離之去乙醯化產物及受質肽的螢光強度。藉由使用XLfit 4軟體(IDBS)將抑制百分比曲線與4參數劑量反應模型擬合來測定抑制劑之IC50 值。
表1顯示來自三種不同化學系列之例示性選擇性HDAC11抑制劑的活性。
相對於HDAC 1-10，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010及HDTK054展示的選擇性＞200倍。
相對於HDAC 1-10，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK070及HDTK028展示的選擇性＞1800倍。 表1. 實例 2 骨髓移植檢定
本實例使用例示性小鼠MPN疾病模型描述在活體內調節HDAC11之活體內作用。使用MPLW515L小鼠骨髓移植模型確定HDAC11基因敲除對MPN疾病之影響。此模型係使用如先前所描述之程序並略加修改(Pikman等人, PloS Med. 2006)而建立。在注射5-氟尿嘧啶(150mg/kg)之後7天，自C57BL/6供體小鼠(野生型(WT)或HDAC11基因敲除(KO)小鼠)收集骨髓細胞。接著，用紅血球溶解緩衝液處理細胞並在37℃及5% CO2下，在移植培養基(RPMI-1640 + 10%胎牛血清(FBS) + 6 ng/ml IL-3、10ng/ml IL-6及10ng/ml幹細胞因子(SCF))中培養隔夜。次日，用過度表現MPLW515L或MPLWT之重組逆轉錄病毒，藉由在30℃下以2500rpm旋轉感染90分鐘來轉導細胞。24小時後，重複旋轉感染。接著，將細胞再懸浮於PBS中並以0.8-1.0×106 個細胞/小鼠注射至經致死性照射(2×450 cGy)之C57BL/6接受體小鼠的尾靜脈中。所用病毒構築體包括MSCV-人類MPLW515L-綠色螢光蛋白(GFP)及MSCV-人類-MPLWT-GFP。在指定時間點量測包括白血球(WBC)、血小板(PLT)及紅血球(RBC)在內之末梢血球細胞計數以評價疾病負擔。分離出脾並量測重量。自兩根股骨及兩根脛骨收集骨髓細胞。在RBC溶解之後，溶解細胞以進行西方墨點分析。將細胞溶解於補充有蛋白酶抑制劑(Roche, Basel, Switzerland)及磷酸酶抑制劑(Sigma P5726)之RIPA緩衝液(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)中。用Pierce BCA蛋白質檢定套組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)測定蛋白質濃度。在4-12% Bis-Tris梯度電泳凝膠(Life Technologies, Carlsbad, CA)上分離蛋白質並轉印至硝基纖維素膜上。接著，在5%脫脂乳粉或5%牛血清白蛋白(BSA)中阻斷膜，隨後與一次抗體一起在4℃下培育隔夜。使用針對p-STAT5 (Abcam 32364)、STAT5 (Cell Signaling 9358)、p-STAT3 (Cell Signaling 9145)及STAT3 (Cell Signaling 9139)之抗體。使用β-肌動蛋白作為上樣對照物。
相較於經MPL WT轉導之WT骨髓的接受體，經MPL W515L轉導之WT骨髓的接受體展示脾腫大以及血小板及紅血球計數增加(圖1)。相較於經MPL W515L轉導之WT骨髓的接受體，經MPL W515L轉導之HDAC11 KO骨髓的接受體顯示疾病改善，且血小板及紅血球明顯減少且脾大小減小。該等結果證實，在MPN小鼠模型中HDAC11基因敲除減少血小板增多及紅血球增多。
在第34天，藉由對全骨髓樣品進行西方墨點分析來檢查STAT3及STAT5磷酸化之量。利用WT供體骨髓細胞，相較於轉導MPL WT，轉導MPL W515L引起STAT3及STAT5磷酸化增加(圖2)。在HDAC11 KO供體骨髓細胞中，轉導MPL W515L引起STAT3及STAT5磷酸化之抑制。實例 3 在表現MPL或JAK2突變之細胞中進行的細胞增殖檢定
本實例描述了用例示性HDAC11抑制劑在活體外抑制細胞增殖。在含有MPN相關突變MPL W515L (Ba/F3 MPL W515L)及JAK2 V617F (Ba/F3 JAK2 V617F、HEL 92.1.7、SET-2)之細胞株中量測選擇性HDAC11抑制劑對細胞增殖之影響。HEL 92.1.7及SET-2細胞分別購自ATCC及DSMZ。藉由用過度表現MPL W515L或JAK2V617F之逆轉錄病毒對Ba/F3細胞轉型來產生過度表現MPL W515L或JAK2V617F之Ba/F3細胞，其不依賴於細胞介素。對於存活率檢定，將細胞以105 個/毫升之密度接種於添加有指定化合物之96孔盤中並在37℃下培育48小時。添加CCK8溶液(Dojindo, Rockville, MD)並在培育3小時後，在450 nm下量測吸光度。針對二甲亞碸(DMSO)處理之細胞對讀數進行標準化。
例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK028及HDTK054抑制Ba/F3 MPLW515L及Ba/F3 JAK2V617F增殖，且IC50值在1-10 µM範圍內。例示性選擇性抑制劑HDTK010及HDTK070抑制HEL 92.1.7細胞株生長，而無活性類似物HDTK069則不抑制(圖3)。例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010及HDTK070儘管效力低於JAK2抑制劑魯索替尼，但其抑制所產生的魯索替尼抗性SET-2細胞株之生長(圖4)。實例 4 細胞週期檢定
本實例描述由例示性HDAC11抑制劑介導的活體外細胞週期抑制。
使用流動式細胞測量術確定選擇性HDAC11化合物對細胞週期之影響。處理後，將HEL 92.1.7細胞固定於70%乙醇中隔夜。次日，用PBS洗滌細胞並將其懸浮於4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)/Triton X-100染色溶液(0.1% Triton X-100、1μg/ml DAPI)中並在暗處保持1小時，隨後藉由LSRII細胞儀(BD Biosciences, San Diego, CA)量測。使用ModFit LT軟體v4.1 (Verity Software House)進行分析。
在10 µM濃度下處理12小時後，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK070誘導HEL 92.1.7細胞中之G1細胞週期停滯(圖5)。實例 5 STAT3及STAT5路徑檢定
本實例描述用例示性HDAC11抑制劑處理後某些JAK/STAT路徑多肽之活體外細胞表現及磷酸化。 STAT3及STAT5磷酸化之西方墨點檢定
藉由西方墨點確定選擇性HDAC11抑制對HEL 92.1.7細胞中STAT3及STAT5磷酸化之影響。用HDAC11抑制劑處理細胞並在補充有蛋白酶抑制劑(Roche, Basel, Switzerland)及磷酸酶抑制劑(Sigma P5726)之RIPA緩衝液(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)中溶解。用Pierce BCA蛋白質檢定套組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)測定蛋白質濃度。在4-12% Bis-Tris梯度電泳凝膠(Life Technologies, Carlsbad, CA)上分離蛋白質並轉印至硝基纖維素膜上。接著，在5%脫脂乳粉或5% BSA中阻斷膜，隨後與一次抗體一起在4℃下培育隔夜。使用針對p-STAT5 (Abcam 32364)、STAT5 (Cell Signaling 9358)、p-STAT3 (Cell Signaling 9145)及STAT3 (Cell Signaling 9139)之抗體。使用β-肌動蛋白作為上樣對照物。
如圖6中所示，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010抑制STAT3及STAT5磷酸化。 JAK/STAT信號傳導路徑PCR陣列
使用JAK/STAT信號傳導路徑PCR陣列(Qiagen)進一步檢查HDAC11抑制對STAT路徑之影響。用HDTK010處理HEL 92.1.7細胞24或48小時。在處理結束時，溶解細胞並使用RNeasy Plus微型套組，遵循製造商之方案(Qiagen)分離總RNA。使用iScript反應混合物(BioRad)將RNA(0.5 µg)轉化成cDNA。將cDNA模板與RT2 SYBR Green Mastermix混合並添加至PCR陣列中。遵照製造商之方案，在Eppendorf Realplex2 ep.gradient Mastercycler中進行反應並分析資料。將由HDAC11處理得到的結果與DMSO對照相比較。
表2列出在HDAC11抑制劑處理之後在JAK/STAT信號傳導路徑中表現增加之基因。 表2. 實例 6 來自患者樣品之群落形成檢定
為了確定選擇性HDAC11抑制對MPN患者樣品之影響，在群落形成檢定中，利用來自MPN患者之紅血球系或骨髓球系細胞評價HDAC11抑制劑之作用。經由Moffitt Cancer Center Total Cancer Care方案(MCC 14690)，自同意之MPN患者獲得末梢血。用HetaSep™ (STEMCELL Technologies, Inc.)處理血液以移除大部分的紅血球。藉由ficoll分離法分離出末梢血單核細胞(PBMC)。接著，將PBMC(1 - 4 × 105 )塗鋪於1 mL含有rhSCF、rhIL-3及顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(rhGM-CSF) (MethoCult™ #H4534；STEMCELL Technologies, Inc.)之甲基纖維素培養基中。所有藥物處理之樣品均含有0.1% DMSO作為最終濃度。在37℃及5% CO2下，於潮濕恆溫箱中培育細胞。塗鋪後12至14天，對群落進行評分。
由兩份患者樣品得到的結果示於圖7中。一位患者患有特發性血小板增多症(ET)，且另一位患有真性紅細胞增多症(PV)且同時具有魯索替尼抗性。例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010減少紅血球系及骨髓球系細胞之群落生長。實例 7 利用幹細胞樣側群NSCLC細胞進行之球體形成檢定
為了研究HDAC11在幹細胞樣癌細胞自更新中的作用，利用NSCLC側群(SP)幹細胞樣細胞進行球體形成檢定。自ATCC獲得A549及NCI-H1650細胞。用磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)洗滌異步生長之A549或NCI-H1650細胞一次，並使用Accutase溶液(Sigma Aldrich)收集並將其以1×106 個細胞/毫升之密度再懸浮於含2%胎牛血清(FBS)之DMEM-F12K培養基(Gibo, Life Technologies)中。在37℃下，在存在或不存在1 µM Fumitremorgin C(Sigma-Aldrich)下將細胞與4 µg/ml Hoechst 33342染料(Life Technologies)一起培育90分鐘，該Fumitremorgin C用作對照樣品以在分選期間設置閘控。使用BD FACSAria細胞分選儀分選經Hoechst染色之細胞。將分選的SP細胞以1000個細胞/100微升/孔之細胞密度塗鋪於96孔超低黏附培養盤(Corning Inc)中的幹細胞選擇性培養基(DMEM:F12K，補充有N2補充劑、10 ng/mL表皮生長因子(EGF)及10 ng/ml鹼性纖維母細胞生長因子 (bFGF) (Sigma-Aldrich)中，在37℃下保持7至10天。使用EVOS FL顯微鏡系統 (Life Technologies Inc., USA)觀察並採集球體。計算大於或等於50 µm之球體的數量。為研究HDAC11抑制劑之作用，在第0天及第5天將適當濃度之化合物添加至孔中，並在第10天採集球體圖像並加以分析。對每一檢定中之每種處理一式三份進行球體形成檢定兩次。
如圖8中所示，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010、HDTK054及HDTK070阻止帶有KRAS (A549)或EGFR (H1650)突變之幹細胞樣癌細胞生長，而無活性類似物HDTK072則不然。實例 8 利用幹細胞樣側群NSCLC細胞進行之小管形成檢定
利用分選之側群細胞進行血管生成性小管檢定以分析血管擬態。如上文所述，分選出H1650側群細胞並使其再在Matrigel (BD Biosciences)上生長以形成血管生成性小管樣結構。將100 µl解凍的Matrigel鋪在96孔組織培養盤各孔中，並使其在37℃下聚合30分鐘。將分選的H1650 SP細胞鋪(12000個細胞/100 µl Matrigel)在聚合之matrigel上並在37℃下培育隔夜。使用EVOS FL顯微鏡系統，在亮視野下評估小管形成並利用EVOS軟體(Life Technologies Inc., USA)採集圖像。對於用HDAC11抑制劑處理，當將細胞接種於Matrigel上進行小管形成檢定時，將適當濃度之化合物添加至細胞中。
例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK054及HDTK070抑制H1650 SP細胞形成小管，而無活性類似物HDTK072則不然(圖9)。實例 9 細胞遷移檢定
使用劃痕檢定確定HDAC11抑制對細胞遷移之影響。使A549細胞(120,000-150,000個細胞/ 2毫升/孔)在6孔組織培養盤(BD Biosciences)中生長。在每孔中使用無菌2 µl移液管尖端製造劃痕。在用DPBS洗滌之後，將含10 % FBS之培養基添加至孔中。為了評估HDAC11抑制劑對細胞遷移之影響，添加在培養基中適當濃度之該等抑制劑。再在37℃下培育細胞。在第0天及之後每24小時，使用EVOS FL顯微鏡系統及EVOS軟體(Life Technologies Inc)獲取圖像並將細胞遷移情況與處理第0天相比較。
例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK054及HDTK070減少A549細胞遷移，而無活性類似物HTK072之作用類似於對照物(圖10)。實例 10 針對幹細胞轉錄因子之QRT-PCR檢定
已知HDAC11抑制對幹細胞樣側群細胞之影響，使用QRT-PCR確定其對幹細胞轉錄因子表現之影響。將A549或H1650細胞塗鋪於60 mm細胞培養皿(120,000個細胞)中。次日，添加各種濃度之HDAC11抑制劑並培育72小時。對於siRNA實驗，將A549細胞塗鋪於60 mm細胞培養皿(120,000個細胞/個培養皿)中。使用Oligofectamine試劑(Invitrogen)，根據製造商之方案，將100 pmol及150 pmol濃度之siRNAs (Santa Cruz Biotechnologies sc-106896或ThermoFisher Scientific目錄號4392420)轉染至細胞中。對於所有轉染實驗，使用非靶向siRNA (Ambion AM4635)作為對照物。在轉染後72小時之後，收集細胞。在處理結束時，刮取細胞，溶解並遵循製造商之方案，利用來自Qiagen之RNeasy miniprep套組，(RNeasy微型套組目錄號74104)分離總RNA。使用iScript cDNA合成套組(BioRad)將1 µg RNA轉化成cDNA，總反應體積為20 µl。使用定量實時PCR (qRT-PCR)進一步分析mRNA含量，該qRT-PCR係在CFX96實時系統中，使用BioRad iQ SYBR Green supermix進行。反應設置具有5 µl SYBR Green、1 µl之1 µM正向引子、1 µl之1 µM反向引子、0.5 µl cDNA及4.5 µl水，總計12 µl反應物。使用GAPDH作為內部對照將數據標準化並利用2-ΔΔ Ct法計算變化倍數。首先計算ΔCt(ΔCt = Ct基因 - Ct GAPDH)。接下來計算ΔΔCt(ΔΔCt = ΔCt處理 - ΔCt對照)。最後利用2-ΔΔ Ct計算變化倍數。
用於擴增之引子如下： YAP1 FP 5'- CCCAAGACGGCCAACGTGCC-3' (SEQ ID NO:1)， YAP1 RP 5'- ACTGGCCTGTCGGGAGTGGG-3' (SEQ ID NO:2)，退火Tm為58℃ Sox2 FP 5' - GGGAAATGGGAGGGGTGCAAAAGA-3' (SEQ ID NO:3)， Sox2 RP 5'- TTGCGTGAGTGTGGATGGGATTGG-3' (SEQ ID NO:4)，退火Tm為55℃ Oct4 FP 5' - ACATCAAAGCTCTGCAGAAAGAACT-3' (SEQ ID NO:5)， Oct4 RP 5'- CTG AAT ACC TTC CCAAAT AGA ACC C-3' (SEQ ID NO:6)，退火Tm為52℃ Nanog FP 5' - AGAAGGCCTCAGCACCTA-3' (SEQ ID NO:7)， Nanog RP 5' - GGCCTGATTGTTCCAGGATT-3' (SEQ ID NO:8)，退火Tm為52℃ GAPDH FP 5'-GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3' (SEQ ID NO:9)， GAPDH RP 5'-GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3' (SEQ ID NO:10)，退火Tm為52 - 60℃ Gli1 FP 5'- CCCAATCACAAGTCAGGTTCCT-3' (SEQ ID NO:11)， Gli1 RP 5'- CCTATGTGAAGCCCTATTTGCC-3' (SEQ ID NO:12)，退火Tm為57℃
在A549細胞中HDAC11及HDAC1基因敲除引起Sox2表現減少。在HDAC1、HDAC6或HDAC11基因敲除存在下，兩種其他的幹細胞轉錄因子Oct4及Nanog之表現不變(圖11)。
用例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010、HDTK028、HDTK054或HDTK070處理亦使A549及H1650細胞中Sox2表現減少。此外，亦觀察到Gli1及Yap1表現減少(圖12)。實例 11 利用癌細胞及癌症相關纖維母細胞之共培養檢定
在共培養檢定中確定選擇性HDAC11抑制對癌細胞及癌症相關纖維母細胞(CAF)之影響。先用胰蛋白酶處理細胞並收集於含血清培養基中，並在該等培養基中在37℃下再培育15至20分鐘進行恢復。將細胞以1 × 106 個 細胞/毫升密度再懸浮於無血清培養基中並在37℃下，用10 uM cytotracker綠色(癌症相關纖維母細胞)或cytotracker紅色染料(H1650細胞)(Life Technologies Inc)染色90分鐘。用無血清培養基洗滌經染色之細胞兩次，以1500 rpm保持5分鐘來移除過量染料。將cytotracker綠色染色之CAF與cytotracker紅色染色之H1650細胞以1:1比率混合並在96孔組織培養盤中生長隔夜。接著，將適當濃度之HDAC11抑制劑添加至混合之黏附細胞(CAF + H1650)中。在第0天及之後每24小時，使用EVOS FL顯微鏡及EVOS軟體(Life Technologies Inc)獲取圖像。
如圖13中所示，例示性選擇性HDAC11化合物HDTK054及HDTK070抑制與來自人肺癌之原代CAF共培養之H1650細胞生長，且對CAF具有極小影響。實例 12 利用組合處理進行之細胞增殖檢定
選擇性HDAC11抑制劑可與其他靶向劑，包括Jak2抑制劑及Smoothened抑制劑。在肺癌細胞株中測試與Smoothened抑制劑GDC-0449 (維莫德吉)及BMS-833923之組合的作用。自ATCC獲得A549及NCI-H2170細胞。H2170係鱗癌細胞株。使用MTT試劑(溴化噻唑藍四唑鎓鹽)(Sigma-Aldrich)評估細胞活力。一式三份，使細胞以3000-5000個細胞/毫升之密度在96孔盤中生長。將不同濃度之HDAC11抑制劑添加至黏附細胞中並處理96小時。處理後，將細胞與1 mg/mL MTT試劑一起在37℃下培育1小時。藉由用DMSO溶解所形成之呋咱(formazan)產物來終止反應。在盤讀取器中記錄在590 nm下的吸光度。
用Smoothened抑制劑或例示性選擇性HDAC11抑制劑單一藥劑處理對細胞生長具有極小影響。不過，例示性選擇性HDAC11抑制劑HDTK010、HDTK028、HDTK054或HDTK070與Smoothened抑制劑之組合使細胞活力降低(圖14)。合成胺基苯并咪唑及相關化合物 實例 1-1 . 3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1. 3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將2-胺基-4,5-二氯苯酚(209 mg，1.17 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(226 mg，1.17 mmol)於THF (17.5 mL)中之溶液攪拌3小時。添加硫酸銅(II)(1.68 g，11.5 mmol)、三乙胺(0.16 mL，1.17 mmol)及矽膠(1.68 g)，且在室溫下攪拌所得混合物隔夜。過濾混合物，並濃縮濾液。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用10:1之二氯甲烷/甲醇溶離)純化，得到呈白色固體狀的3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，25%)。MS: (ESI, m/z): 337[M+H]+ 。 步驟2. 3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.55 mL，8.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.60 mL，0.60 mmol)添加至0℃的3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.30 mmol)於THF/MeOH (4:1，5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。將該溶液冷卻至0℃，並用6 M HCl水溶液將混合物之pH值調至6。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XBridge Prep C18，5μm，19×150mm；移動相A：含0.05% TFA之水；移動相B：ACN；梯度：在2分鐘內5%-95% B；偵測器254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(3.6 mg，3%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.22(s, 1H), 11.05(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.08(s, 1H), 7.95-7.89(m, 2H), 7.77(s, 1H), 7.49-7.38(m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 338[M+H]+ 。實例 2-1 . 3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1. 5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯酚
將第三丁醇鉀(1.68 g，14.97 mmol)分數份添加至-60℃之液氨溶液(20 mL)中。添加第三丁基過氧化物(590 mg，6.55 mmol)及1-溴-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(1.61 g，5.96 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液，且在-30℃下攪拌所得溶液30分鐘。接著藉由添加50 mL飽和氯化銨水溶液淬滅反應，且用3×50 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。真空濃縮合併之有機層。粗產物藉由自石油醚/乙酸乙酯(10:1)再結晶進行純化，得到呈黃色固體狀的5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯酚(1.5 g，88%)。MS: (ESI, m/z): 284[M-H]- 。 步驟2. 2-胺基-5-溴-4-(三氟甲基)苯酚
將氫氣引入5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯酚(500 mg，1.75 mmol)及雷尼鎳(Raney nickel)(50 mg)於甲醇(10 mL)中之混合物中，且在室溫下攪拌反應混合物2小時。濾出固體，且真空濃縮濾液，得到呈黑色固體狀的2-胺基-5-溴-4-(三氟甲基)苯酚(430 mg，96%)。MS: (ESI, m/z): 256[M+H]+ 。 步驟3. 3-(6-溴-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在50℃下，將2-胺基-5-溴-4-(三氟甲基)苯酚(330 mg，1.29 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(300 mg，1.55 mmol)、三乙胺(0.22 mL，1.59 mmol)、硫酸銅(II)(2.2 g)及矽膠(2.8 g)於四氫呋喃(30 mL)中之混合物攪拌3小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用50%乙酸乙酯/石油醚溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(6-溴-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(260 mg，49%)。MS: (ESI, m/z): 415[M+H]+ 。 步驟4. 3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在90℃下將3-(6-溴-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(87 mg，0.21 mmol)、氰化鋅(23 mg，0.20 mmol)、DavePhos (33 mg，0.08 mmol)、Pd2 (dba)3 (60 mg，0.05 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液攪拌1小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著用30 mL水稀釋。用3×50 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用20-50%乙酸乙酯/石油醚梯度溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(65 mg，86%)。MS: (ESI, m/z): 362[M+H]+ 。 步驟5. 3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸
在室溫下，將3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(145 mg，0.40 mmol)、1 M氫氧化鋰水溶液(2 mL，2 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液攪拌隔夜。用2 M HCl水溶液將反應混合物之pH值調至5。所得溶液用10 mL水稀釋並用3×10 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100A；移動相：含0.05% TFA之水及ACN(在30分鐘內20%升至50%)，254及220nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈淺黃色固體狀的3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸(103 mg，74%)。MS: (ESI, m/z): 348[M+H]+ 。 步驟6. 3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
在室溫下，將3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸(103 mg，0.30 mmol)、NMM (149 mg，1.48 mmol)、羥胺鹽酸鹽(22 mg，0.33 mmol)、IPCF (0.041 mL，0.30 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液攪拌4小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05%TFA；移動相B：ACN/0.05% TFA；流動速率：0.7mL/min；梯度：在2.0分鐘內5% B至95%B，保持0.6分鐘；UV 254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(6-氰基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(34.9 mg，32%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.44 (s, 1H), 11.24 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.09 (d, J = 10.8Hz, 2H), 7.93-7.91 (m, 1H), 7.51-7.43 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 363[M+H]+ 。實例 3-1 . N-羥基-3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲醯胺步驟1. 3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在100℃下將3-(6-溴-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(80 mg，0.19 mmol)、Pd(PPh3 )4 (45 mg，0.04 mmol)、碳酸鈉(41 mg，0.39 mmol)及苯基硼酸(26 mg，0.21 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液攪拌2小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用10-50%乙酸乙酯/石油醚梯度溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(50 mg，63%)。MS: (ESI, m/z): 413[M+H]+ 。 步驟2：N-羥基-3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.37 mL，6.1 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.20 mL，0.20 mmol)添加至3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(40 mg，0.10 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液隔夜。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在6.0分鐘內5%B至50 %B，254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的N-羥基-3-(6-苯基-5-(三氟甲基)苯并[d]噁唑-2-基胺基)苯甲醯胺(11.4 mg，28%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.23 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.97-7.91 (m, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.50-7.36 (m, 7H)。MS: (ESI, m/z): 414[M+H]+ 。實例 4-1 . 5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟-N-羥基苯甲醯胺中間物1. 5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-胺
在室溫下，將2-胺基-4,5-二氯苯酚(500 mg，2.81 mmol)、溴化氰(356 mg，3.36 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液攪拌6小時。接著將反應物倒入50 mL之2 M碳酸氫鈉水溶液中並用3×20 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用50 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用25%乙酸乙酯-石油醚溶離)純化，得到呈黃色固體狀的5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-胺(340 mg，60%)。MS: (ESI, m/z): 203[M+H]+ 。 步驟1. 5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟苯甲酸甲酯
將t-BuBrettPhos (24 mg，0.049 mmol)及Pd(OAc)2 (5.6 mg，0.02 mmol)於水(0.05 mL)及第三丁醇(2 mL)中之溶液添加至10-mL密封管中，且系統用惰性氮氣氛圍淨化並維持。在110℃下攪拌所得溶液2分鐘且接著在惰性氮氣氛圍下，經由導管經1分鐘轉移至裝有5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-胺(100 mg，0.49 mmol)、5-溴-2-氟苯甲酸甲酯(138 mg，0.59 mmol)及碳酸鉀(104 mg，0.75 mmol)於第三丁醇(2 mL)中之溶液的10-mL密封管中。在110℃下攪拌所得溶液隔夜。將反應混合物冷卻至室溫且接著用15 mL水稀釋。用3×15 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟苯甲酸甲酯(70 mg，40%)。MS: (ESI, m/z): 355[M+H]+ 。 步驟2. 5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.73 mL，12 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.40 mL，0.40 mmol)添加至5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟苯甲酸甲酯(70 mg，0.20 mmol)於THF/MeOH (4:1，3 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體，且粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，Xbridge RP18 5μm，19×150mm；移動相：水(0.05% TFA)及CH3 CN (在7分鐘內5% CH3 CN升至35%)；偵測器UV 220/254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟-N-羥基苯甲醯胺(11.7 mg，17%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.12 (s, 1H), 11.03 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.00-7.91 (m, 2H), 7.83-7.72 (m, 2H), 7.36-7.31 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 356[M+H]+ 。
以下化合物係根據以上關於5-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-2-氟-N-羥基苯甲醯胺所概述之程序製備。 實例 5-1 . 3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽 步驟1：3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在40℃下，將4,5-二氯-2-碘苯胺(288 mg，1 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(193 mg，1 mmol)、溴化銅(I)(14.2 mg，0.1 mmol)及TBAB (322 mg，1 mmol)於DMSO (7 mL)中之溶液攪拌隔夜。將反應物冷卻至室溫且接著倒入30 mL冰/水中。用2×50 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相用20 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈灰白色固體狀的3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(238 mg，67%)。MS: (ESI, m/z): 353[M+H]+ 。 步驟2：3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽
將羥胺溶液(50%於水中，1.45 mL，23.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.40 mL，0.40 mmol)添加至3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(70 mg，0.20 mmol)於THF/MeOH (4:1，8 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體且粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，Xbridge RP18 5μm，19×150mm；移動相：水(0.05% TFA)及CH3 CN (在8分鐘內5% CH3 CN升至85%)；偵測器UV 220/254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的3-(5,6-二氯苯并[d]噻唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺2,2,2-三氟乙酸鹽(17.7 mg，19%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.22 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.02-8.00 (m, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.48-7.37 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 354[M +H]+ 。實例 6-1 . 3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺
在油浴中，在65℃下將5-氯-2-硝基苯胺(15.0 g，86.7 mmol)及硫代甲醇鈉(24.0 g，346 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(100 mL)中之溶液攪拌20小時。將反應混合物冷卻至室溫並用500 mL乙酸乙酯稀釋。所得混合物用5×400 mL水及500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈紅色固體狀的5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺(12 g，75%)。MS: (ESI, m/z): 185[M+H]+ 。 步驟2：4-溴-5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺
將溴(9.87 mL，30.8 g，193 mmol)逐滴添加至5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺(12 g，65 mmol)於乙酸(100 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液12小時。接著將反應混合物逐滴添加至500 mL飽和NaHSO3 水溶液中。用3×200 mL乙酸乙酯萃取所得混合物，且合併之有機相用500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈紅色固體狀的4-溴-5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺(9.0 g，53%)。MS: (ESI, m/z): 263[M+H]+ 。 步驟3：4-胺基-2-(甲基硫基)-5-硝基苯甲腈
在油浴中，在150℃下將4-溴-5-(甲基硫基)-2-硝基苯胺(9.0 g，34 mmol)、氰化銅(I)(7.6 g，85.4 mmol)及碘化銅(I)(810 mg，4.25 mmol)於DMF (80 mL)中之溶液攪拌12小時。將反應混合物冷卻至室溫且接著倒入1000 mL水中。用3× 500 mL乙酸乙酯萃取所得混合物，且合併之有機相用500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的4-胺基-2-(甲基硫基)-5-硝基苯甲腈(3.5 g，49%)。MS: (ESI, m/z): 210[M+H]+ 。 步驟4：4,5-二胺基-2-(甲基硫基)苯甲腈
在油浴中，在75℃下將4-胺基-2-(甲基硫基)-5-硝基苯甲腈(3.5 g，16.7 mmol)及二水氯化錫(II)(18.8 g，83.3 mmol)於乙酸乙酯(50 mL)及乙醇(25 mL)中之溶液攪拌2小時。將所得溶液冷卻至室溫且接著用500 mL乙酸乙酯稀釋。所得混合物用500 mL之2 M碳酸氫鈉水溶液及500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的4,5-二胺基-2-(甲基硫基)苯甲腈(1.5 g，50%)。MS: (ESI, m/z): 180[M+H]+ 。 步驟5：3-(5-氰基-6-(甲基硫基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在60℃下將4,5-二胺基-2-(甲基硫基)苯甲腈(1.00 g，5.58 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(1.07 g，5.54 mmol)、EDC·HCl (3.2 g，16.7 mmol)於THF (10 mL)中之溶液攪拌3小時。將所得溶液冷卻至室溫且接著用100 mL水稀釋。用3×50 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈紅色固體狀的3-(5-氰基-6-(甲基硫基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(400 mg，21%)。MS: (ESI, m/z): 339[M+H]+ 。 步驟6：3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
將MCPBA (610 mg，3.53 mmol)逐份添加至3-(5-氰基-6-(甲基硫基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(400 mg，1.18 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中並在室溫下攪拌12小時。用100 mL二氯甲烷稀釋反應混合物，且所得溶液用2×100 mL飽和NaHSO3 水溶液、2×100 mL飽和碳酸氫鈉溶液及100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(7:10)溶離)純化，得到呈紅色固體狀的3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，23%)。MS: (ESI, m/z): 371[M+H]+ 。 步驟7：3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.50 mL，8.1 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.54 mL，0.54 mmol)添加至3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.27 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液1小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA；移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在13.0分鐘內14%B至14%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈褐色固體狀的3-(5-氰基-6-(甲基磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(11.7 mg，12%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.22 (s, 1H), 10.35 (s, 1H), 8.05-7.99 (m, 4H), 7.47-7.35 (m, 2H), 3.35 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 372[M+H]+ 。實例 7-1 . N-羥基-3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺步驟1：N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺
在室溫下，將3-溴-4-(三氟甲基)苯胺(10.0 g，41.66 mmol)於乙酸酐(50 mL)中之溶液攪拌12小時，且接著真空濃縮。殘餘物自200 mL己烷再結晶，得到呈白色固體狀的N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(10.3 g，87%)。MS: (ESI, m/z): 282 [M+H]+ 。 步驟2：N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺
將N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(6.00 g，21.3 mmol)逐份添加至硫酸(24 mL)中，且將混合物冷卻至0℃。在0℃下，逐滴添加發煙硝酸(3.1 mL，10.7 mmol)，且在0℃下攪拌所得溶液2小時。將反應混合物逐滴添加至500 mL冰/水中，且過濾所得混合物。濾餅利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:100)溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(5.0 g，72%)。MS: (ESI, m/z): 325[M-H]- 。 步驟3：N-(5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺
在油浴中，在70℃下將N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(3.000 g，9.17 mmol)及硫代甲醇鈉(2.6 g，18.5 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(150 mL)中之溶液攪拌12小時。將所得溶液冷卻至室溫且緩慢倒入1000 mL水中。藉由過濾收集固體並真空乾燥，得到呈黃色固體狀的N-(5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(1.3 g，48%)。MS: (ESI, m/z): 293[M-H]- 。 步驟4：5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯胺
在油浴中，在98℃下將N-(5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(700 mg，2.38 mmol)於6 M HCl水溶液(100 mL)中之溶液攪拌2小時。將反應物冷卻至0℃並用6 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至8-9。用3×50 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相用1×100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(5:1)溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯胺(430 mg，72%)。MS: (ESI, m/z): 251[M-H]- 。 步驟5：4-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺
在室溫下，在氫氣氛圍下將5-(甲基硫基)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯胺(430 mg，1.70 mmol)及10%鈀/碳(50 mg)於甲醇(100 mL)中之混合物攪拌2小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液，得到呈深紅色固體狀的4-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(330 mg，87%)。MS: (ESI, m/z): 223[M+H]+ 。 步驟6：3-(6-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在65℃下將4-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(100 mg，0.45 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(86 mg，0.45 mmol)於THF (10 mL)中之溶液攪拌4小時。添加EDC·HCl (260 mg，1.35 mmol)，且在65℃下再攪拌所得溶液1小時。將反應混合物冷卻至室溫並用30 mL乙酸乙酯稀釋。所得混合物用2×10 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用二氯甲烷/甲醇(10:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(6-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(90 mg，52%)。MS: (ESI, m/z): 382[M+H]+ 。 步驟7：3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將3-(6-(甲基硫基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(120 mg，0.31 mmol)及MCPBA (162.8 mg，0.94 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液攪拌12小時。用20 mL二氯甲烷稀釋反應混合物，並用2 M亞硫酸氫鈉水溶液(10 mL)、2 M碳酸氫鈉水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈白色固體狀的3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(50 mg，38%)。MS: (ESI, m/z): 414[M+H]+ 。 步驟8：N-羥基-3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.22 mL，3.6 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.24 mL，0.24 mmol)添加至3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(50 mg，0.12 mmol)於THF/MeOH (4:1，4 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液1小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在7.0分鐘內5%B至40%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈褐色固體狀的N-羥基-3-(6-(甲基磺醯基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺(2.2 mg，4%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.24 (br, 1H), 10.43 (br, 1H), 10.22 (br, 2H), 8.16 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.99 (d,J = 7.8Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.47-7.35 (m, 2H), 3.26 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 415[M+H]+ 。實例 8-1 . 3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在120℃下，用微波輻射照射2-溴-1H-1,3-苯并二唑(50 mg，0.25 mmol)、3-胺基苯甲酸甲酯(115 mg，0.76 mmol)及6 M HCl水溶液(1滴)於乙醇(3 mL)中之溶液1小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物藉由製備型薄層層析法(用二氯甲烷/甲醇(20:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(78 mg，crude)。MS: (ESI, m/z): 268[M+H]+ 。 步驟2：3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，1.1 mL，17.5 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.58 mL，0.58 mmol)添加至3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(78 mg，0.29 mmol)於THF/MeOH (4:1，10 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體，粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05% TFA；移動相B：ACN/0.05% TFA；流動速率：0.7 mL/min；梯度：在2.0分鐘內5%B至95%B，保持0.6分鐘；UV 254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈粉色固體狀的3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(53.2 mg，68%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 12.95 (br, 1H), 11.28 (br, 1H), 10.94 (br, 1H), 9.13 (br, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.69-7.53 (m, 3H), 7.44-7.40 (m, 2H), 7.27-7.24 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 269[M+H]+ 。實例 9-1 . 3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
在油浴中，在90℃下將4,5-二胺基-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.00 g，9.94 mmol)、二硫化碳(6.04 g，79.52 mmoL)及氫氧化鉀(1.67 g，29.8 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液攪拌5小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。用200 mL水稀釋殘餘物，且用3×200 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈紅色固體狀的2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(1.9 g，79%)。MS: (ESI, m/z): 244[M+H]+ 。 步驟2：2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
在攪拌下，經10分鐘將溴(0.2 mL，4.0 mmol)逐滴添加至2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(267 mg，1.10 mmol)於溴化氫(40%於乙酸中，12 mL)中之0℃溶液中。在0℃下攪拌所得溶液3小時且接著用1 mL水稀釋。用1 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至4。用3×100 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(3:2)溶離)純化，得到呈紅色固體狀的2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(225 mg，71%)。MS: (ESI, m/z): 290[M+H]+ 。 步驟3：3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)苯甲酸甲酯
在150℃下，用微波輻射照射2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(130 mg，0.45 mmol)、3-(甲基胺基)苯甲酸甲酯(101.9 mg，0.62 mmol)及12 M HCl水溶液(1滴)於乙醇(3 mL)中之溶液1小時。真空濃縮所得混合物。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(2:3)溶離)純化，得到呈略帶紅色之固體狀的3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)苯甲酸甲酯(160 mg，95%)。MS: (ESI, m/z): 375[M+H]+ 。 步驟4：3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.87 mL，14.3 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.95 mL，0.95 mmol)添加至3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)苯甲酸甲酯(178 mg，0.48 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XSelect CSH Prep C18 OBD 管柱，19×150mm 5μm 13nm；移動相：移動相A：水/0.05%TFA，移動相B：ACN；梯度：在7分鐘內15% B至35% B；偵測器254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)(甲基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺(45 mg，25%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.29(s, 1H), 7.86-7.84(m, 2H), 7.73-7.66(m, 3H), 7.60-7.56(m, 1H), 3.57(s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 376[M+H]+ 。實例 10-1 . 3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：合成2-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈及2-溴-3-甲基-6-(三氟甲基)-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，28 mg，0.70 mmol)添加至2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(200 mg，0.69 mmol)於DMF (5 mL)中之0℃溶液中，且攪拌混合物30分鐘。在0℃下添加碘甲烷(0.7 mL，11.2 mmol)，且在0℃下再攪拌所得溶液1小時。藉由添加10 mL水淬滅反應，且用3×10 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的2-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈及2-溴-3-甲基-6-(三氟甲基)-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈之混合物(180 mg，86%)。MS: (ESI, m/z): 304[M+H]+ 。 步驟2：合成3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯及3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
向30-mL微波管中裝入2-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈及2-溴-3-甲基-6-(三氟甲基)-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(65 mg，0.21 mmol)之混合物、乙醇(10 mL)、6 M HCl水溶液(1滴)及3-胺基苯甲酸甲酯(97 mg，0.64 mmol)。在150℃下用微波輻射照射反應混合物1小時且接著冷卻至室溫並真空濃縮。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters Sunfire C18，19×150 mm；移動相A：水/0.1% FA；移動相B：ACN；流動速率：28mL/min；梯度：在10分鐘內20%B至50%B；254nm。收集第一溶離異構體並真空濃縮，得到呈白色固體狀的3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(21 mg，26%)。MS: (ESI, m/z): 375[M+H]+ 。收集第二溶離異構體並真空濃縮，得到呈白色固體狀的3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(27.6 mg，34%)。MS: (ESI, m/z): 375[M+H]+ 。 步驟3：3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.45 mL，7.3 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.11 mL，0.11 mmol)添加至3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(21 mg，0.06 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液4小時。用2 M HCl水溶液將溶液之pH值調至6。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Water HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05% TFA；移動相B：ACN/0.05% TFA；流動速率：0.7mL/min；梯度：在2.0分鐘內5%B至95%B，保持0.6分鐘；254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(5-氰基-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(2.8 mg，10%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.23(s, 1H), 9.58(s, 1H), 9.07(s, 1H), 8.18-8.02(m, 4H), 7.47-7.38(m, 2H), 3.87(s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 376[M +H]+ 。實例 11-1 . 3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈
將溴(4.73 g，29.6 mmol)逐滴添加至4-胺基-2-(三氟甲基)苯甲腈(5.0 g，26.9 mmol)於甲醇(80 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。藉由在0℃下添加15 mL飽和NaHSO3 水溶液淬滅所得混合物。在真空下移除甲醇，且用3×20 mL二氯甲烷萃取所得溶液。合併之有機相用3×10 mL水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈白色固體狀的4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(6.5 g，91%)。MS: (ESI, m/z): 263[M-H]- 。 步驟2：4-胺基-5-(甲基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在室溫下，將4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.5 g，5.68 mmol)、甲胺鹽酸鹽(3.81 g，56.82 mmol)、碳酸銫(22.23 g，68.18 mmol)、2,2,6,6-四甲基庚烷-3,5-二酮(2.09 g，11.36 mmol)及碘化銅(I)(1.40 g，7.34 mmol)於DMSO (45 mL)中之溶液攪拌23小時。用30 mL水稀釋所得溶液並用3×30 mL二氯甲烷萃取。合併之有機相用水(30 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:4)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的4-胺基-5-(甲基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(750 mg，62%)。MS: (ESI, m/z): 216[M+H]+ 。 步驟3：3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在70℃下，將4-胺基-5-(甲基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(200 mg，0.93 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(270 mg，1.40 mmol)及EDC·HCl (370 mg，1.86 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液攪拌5小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。將殘餘物溶解於3 mL DMF中並在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100 A；移動相：水/0.05% TFA及ACN (在30分鐘內2%升至50%)；流動速率：80 mL/min；254nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈褐色固體狀的3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(60 mg，17%)。MS: (ESI, m/z): 375[M+H]+ 。 步驟4：3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸
在室溫下，將3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.27 mmol)及單水合氫氧化鋰(56 mg，1.33 mmol)於水(5 mL)及THF (5 mL)中之溶液攪拌10小時。用10 mL水稀釋所得混合物並用10 mL乙酸乙酯萃取。分離出水層並用4 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5。用2×20 mL二氯甲烷萃取所得溶液，且合併之有機相用30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈黃色固體狀的3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(90 mg，94%)。MS: (ESI, m/z): 361[M+H]+ 。 步驟5：3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
在室溫下，將3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(200 mg，0.56 mmol)、IPCF (0.31 g，2.78 mmol)、NMM (250 mg，2.47 mmol)及羥胺鹽酸鹽(0.11 g，1.59 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液攪拌10小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：Column Waters RP 18，19×150 mm，5μm；移動相：水(0.1% FA)/CH3 CN；溶劑B在10分鐘內自20%增加至41%；偵測器220及254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈淺褐色固體狀的3-(6-氰基-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(17 mg，7%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.22 (br, 1H), 9.71 (br, 1H), 8.24-8.15 (m, 3H), 7.91 (d, J = 5.6Hz, 1H), 7.46-7.38 (m, 2H), 3.83 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 376[M+H]+ 。實例 12-1 . 3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4-胺基-2-氟-5-硝基苯甲腈
將氫氧化鋁(13 mL，23.9 mmol)添加至2,4-二氟-5-硝基苯甲腈(4.41 g，23.95 mmol)於乙醇(3 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。過濾所得混合物並乾燥濾餅，得到呈黃色固體狀的4-胺基-2-氟-5-硝基苯甲腈(4.4 g，100%)。MS: (ESI, m/z):182[M +H]+ 。 步驟2：4-氰基-5-氟-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯
將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，1.16 g，29 mmol)添加至4-胺基-2-氟-5-硝基苯甲腈(4.4 g，23.95 mmol)於THF (30 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌溶液30分鐘。添加二碳酸二第三丁酯(6.36 g，29.1 mmol)，且在室溫下攪拌溶液隔夜。藉由添加20 mL水淬滅反應，且用3×20 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相用3×20 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:4)溶離)純化，得到呈白色固體狀的4-氰基-5-氟-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯(4.3 g，63% two steps)。MS: (ESI, m/z):282[M +H]+ 。 步驟3：2-胺基-4-氰基-5-氟苯基胺基甲酸第三丁酯
在油浴中，在90℃下4-氰基-5-氟-2-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯(4.3 g，15.3 mmol)、鐵屑(4.28 g，76.6 mmoL)及氯化銨(810 mg，15.1 mmol)於EtOH/H2 O (4:1，40 mL)中之溶液攪拌4小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液。殘餘物用20 mL水稀釋並用3×20 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用3×20 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用二氯甲烷/甲醇(10:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的2-胺基-4-氰基-5-氟苯基胺基甲酸第三丁酯(4 g)。MS: (ESI, m/z):252[M +H]+ 。 步驟4：4-氰基-5-氟-2-(甲基胺基)苯基胺基甲酸第三丁酯
將2-胺基-4-氰基-5-氟苯基胺基甲酸第三丁酯(4 g，15.3 mmol)、甲醛(1.43 g，47.76 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液攪拌2小時，且接著添加氰基硼氫化鈉(5.00 g，79.6 mmol)。在室溫下攪拌隔夜所得溶液，且接著藉由添加20 mL水淬滅。用3×20 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相用3×20 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的4-氰基-5-氟-2-(甲基胺基)苯基胺基甲酸第三丁酯(2 g，兩個步驟49%)。MS: (ESI, m/z):266[M +H]+ 。 步驟5：4-胺基-2-氟-5-(甲基胺基)苯甲腈
在室溫下，將4-氰基-5-氟-2-(甲基胺基)苯基胺基甲酸第三丁酯(2.00 g，7.54 mmol)於三氟乙酸/二氯甲烷(1:10，30 mL)中之溶液攪拌隔夜，且真空濃縮所得混合物。將殘餘物溶解於10 mL二氯甲烷中，並用飽和碳酸氫鈉水溶液將溶液之pH值調至7。用二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取混合物，且合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用二氯甲烷/甲醇(10:1)溶離)純化，得到呈白色固體狀的4-胺基-2-氟-5-(甲基胺基)苯甲腈(1.6 g)。MS: (ESI, m/z):166[M +H]+ 。 步驟6：6-氟-2-巰基-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
在油浴中，在90℃下將4-胺基-2-氟-5-(甲基胺基)苯甲腈(1.6 g，7.54 mmol)、氫氧化鉀(1.629 g，29.03 mmol)及二硫化碳(1.47 g，19.3 mmoL)於EtOH (10 mL)中之溶液攪拌4小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。添加水(10 mL)且用3×15 mL乙酸乙酯萃取混合物。合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的6-氟-2-巰基-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(550 mg，兩個步驟35%)。MS: (ESI, m/z):208[M +H]+ 。 步驟7：2-溴-6-氟-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
將溴(0.54 mL，10.5 mmol)逐滴添加至6-氟-2-巰基-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(547 mg，2.64 mmol)於溴化氫(40%於乙酸中之溶液，10 mL)中之0℃溶液中，且在0℃下攪拌所得溶液3小時。藉由添加水(15 mL)淬滅反應並冷卻至0℃。用2 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至5，且用3×20 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(3:2)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的2-溴-6-氟-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(120 mg，18%)。MS: (ESI, m/z): 254,256[M +H]+ 。 步驟8：3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
2-溴-6-氟-3-甲基-3H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(100 mg，0.39 mmol)、3-胺基苯甲酸甲酯(119 mg，0.79 mmol)及6 M HCl水溶液(1滴)於EtOH (8 mL)中之溶液。在150℃下，用微波輻射照射反應混合物2小時且接著冷卻至室溫。添加水(10 mL)，且用3×15 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用二氯甲烷/甲醇(20:1)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(50 mg，39%)。MS: (ESI, m/z):325[M +H]+ 。 步驟9：3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.45 mL，7.3 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.24 mL，0.24 mmol)添加至3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(40 mg，0.12 mmol)於THF/MeOH (4:1，1 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時且接著冷卻至0℃。用6 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：0.7mL/min；梯度：在2.0分鐘內5%B至95%B，保持0.6分鐘；254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的3-(6-氰基-5-氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(13 mg，24%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.23(br, 1H), 9.63(s, 1H), 8.14-8.07(m, 2H), 7.92 (d,J = 5.7 Hz, 1H), 7.47-7.38(m, 3H), 3.76 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 326[M+H]+ 。實例 13-1 . 3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4,5-二氯-N-甲基-2-硝基苯胺
在室溫下，將4,5-二氯-2-硝基苯胺(2.00 g，9.66 mmol)、硫酸二甲酯(1.4 g，11.1 mmol)、溴化四丁基銨(0.2 g，0.58 mmol)及氫氧化鈉(4.00 g，100.0 mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液攪拌5小時。反應混合物用飽和氯化銨水溶液稀釋並用3×50 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈白色固體狀的4,5-二氯-N-甲基-2-硝基苯胺(1.9 g，89%)。MS: (ESI, m/z): 219[M-H]- 。 步驟2：4,5-二氯-N1-甲基苯-1,2-二胺
鐵屑(0.76 g，13.56 mmol)分數份添加至4,5-二氯-N-甲基-2-硝基苯胺(500 mg，2.26 mmol)及氯化銨(244 mg，4.56 mmol)於乙醇(30 mL)及水(5 mL)中之60℃溶液中。在油浴中，在80℃下攪拌所得溶液2天。將反應混合物冷卻至室溫。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液。用50 mL水稀釋殘餘物並用3×30 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的4,5-二氯-N1-甲基苯-1,2-二胺(160 mg，37%)。MS: (ESI, m/z): 191[M+H]+ 。 步驟3：3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在70℃下將4,5-二氯-N1-甲基苯-1,2-二胺(100 mg，0.52 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(102 mg，0.53 mmol)、N,N'-二異丙基碳化二亞胺(132 mg，1.05 mmol)於THF (50 mL)中之溶液攪拌隔夜。將反應混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化，得到呈灰白色固體狀的3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(70 mg，38%)。MS: (ESI, m/z): 350[M+H]+ 。
步驟4：3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺 將羥胺溶液(50%於水中，0.53 mL，8.6 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.57 mL，0.57 mmol)添加至3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.29 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液1小時。用6 M HCl水溶液將所得溶液之pH值調至6。藉由過濾收集固體且自2 mL MeOH再結晶，得到呈灰白色固體狀的3-(5,6-二氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(58 mg，58%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.18 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.03 (d,J = 5.7Hz, 2H), 7.63 (d,J = 20.7Hz, 2H), 7.43-7.31 (m, 2H), 3.72 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 351[M+H]+ 。實例 14-1 . 3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4-胺基-5-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在室溫下，將4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(100 mg，0.38 mmol)、丙-2-胺(230 mg，3.89 mmol)、碘化銅(I)(80 mg，0.42 mmol)、碳酸銫(370 mg，1.14 mmol)及2,2,6,6-四甲基庚烷-3,5-二酮(140 mg，0.76 mmol)於DMSO (2 mL)中之溶液攪拌15小時。真空濃縮所得混合物。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈粉色固體狀的4-胺基-5-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(30 mg，33%)。MS: (ESI, m/z): 244[M+H]+ 。 步驟2：3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在70℃下，將4-胺基-5-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(300 mg，1.23 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(470 mg，2.45 mmol)及EDC·HCl (708 mg，3.69 mmol)於THF (30 mL)中之溶液攪拌10小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(200 mg，40%)。MS: (ESI, m/z): 403[M+H]+ 。 步驟3：3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸
在室溫下，將3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.25 mmol)、單水合氫氧化鋰(50 mg，1.24 mmol)於水(4 mL)及THF (5 mL)中之溶液攪拌10小時。用10 mL水稀釋所得混合物並用10 mL乙酸乙酯萃取。分離出水層並用4 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5。用2×20 mL二氯甲烷萃取所得溶液，且合併之有機相用30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈黃色固體狀的3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(80 mg，83%)。MS: (ESI, m/z): 389[M+H]+ 。 步驟4：3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
在室溫下，將3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(80 mg，0.21 mmol)、IPCF (129 mg，1.03 mmol)、NMM (104 mg，1.03 mmol)及羥胺鹽酸鹽(71 mg，1.03 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液攪拌10小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA；移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在10分鐘內20%B至39%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(6-氰基-1-異丙基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(37.2 mg，45%)。1 H-NMR (DMSO, 300MHz), δ (ppm): 11.20 (br, 1H), 9.51 (br, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.08-8.03 (m, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.42-7.34 (m, 2H), 5.04-4.95 (m, 1H), 1.58 (d, J = 6.9Hz, 6H)。MS: (ESI, m/z): 404[M+H]+ 。實例 15-1 . 3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：5-溴-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
將三氟乙酸(0.60 mL，7.96 mmol)逐滴添加至4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.0 g，7.55 mmol)及2,2-二甲氧基丙烷(3.92 g，37.64 mmol)於甲苯(20 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌混合物1小時。將反應混合物冷卻至0℃，且逐滴添加硼烷二甲基硫醚錯合物(10 M，0.83 mL，8.31 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液18小時，且接著將其逐滴添加至40 mL甲醇中。真空濃縮所得混合物。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:7)溶離)純化，得到呈淺褐色固體狀的5-溴-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.583 g，68%)。MS: (ESI, m/z): 305[M-H]- 。 步驟2：5-胺基-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在90℃下，將5-溴-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.0 g，3.26 mmol)、戊烷-2,4-二酮(651 mg，6.51 mmol)、乙醯丙酮酸銅(II)(0.426 g，1.63 mmol)、碳酸銫(2.12 g，6.51 mmol)、氫氧化銨(0.30 mL，16 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液攪拌1天。將所得溶液冷卻至室溫，用20 mL水稀釋，並用3×30 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈藍綠色油狀的5-胺基-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈( 669 mg，84%)。MS: (ESI, m/z): 244[M+H]+ 。 步驟3：3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
將EDC·HCl (790 mg，4.12 mmol)添加至5-胺基-4-(異丙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(400 mg，1.64 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(477 mg，2.47 mmol)於THF (35 mL)中之0℃溶液中，且在75℃下攪拌所得溶液16小時。將混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物用40 mL乙酸乙酯稀釋且用3×20 mL水洗滌。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥並真空濃縮。粗產物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100 A；移動相：水及ACN (在30分鐘內5%升至50%)；流動速率：80 mL/min；254nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈黃色固體狀的3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(265.9 mg，40%)。MS: (ESI, m/z): 403[M+H]+ 。 步驟4：3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.59 mL，9.7 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.65 mL，0.65 mmol)添加至3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(130 mg，0.32 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Xbridge RP18 19×150，5μm，19×100mm；移動相：含0.05% TFA之水及ACN (在7分鐘內4% ACN升至58%)；流動速率：25 ml/min；偵測器：254、220nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(5-氰基-1-異丙基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(10.7 mg，8%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.20 (s, 1H), 9.46(s, 1H), 8.11-8.05 (m, 3H), 7.96 (s, 1H), 7.46-7.38 (m, 2H), 5.10-5.03 (m, 1H), 1.62 (d,J = 6.8Hz, 6H)。MS: (ESI, m/z): 404[M+H]+ 。實例 16-1 . N-羥基-3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺步驟1：N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺
在室溫下，將3-溴-4-(三氟甲基)苯胺(10 g，41.7 mmol)於乙酸酐(50 mL)中之溶液攪拌2小時，且真空濃縮所得混合物。粗產物自20 mL乙酸乙酯-石油醚(1/10)再結晶，得到呈白色固體狀的N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(9.4 g，80%)。MS: (ESI, m/z): 280[M-H]- 。 步驟2：N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺
將濃硝酸(4.2 mL)逐滴添加至N-(3-溴-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(8.4 g，29.8 mmol)於濃硫酸(33.6 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液10分鐘。接著將反應物逐滴添加至1000 mL冰/水中。藉由過濾收集固體且用500 mL水洗滌並真空乾燥，得到呈黃色固體狀的N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺( 8.4 g，86%)。MS: (ESI, m/z): 325[M-H]- 。 步驟3：N-(4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-基)
在90℃下，將N-(5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙醯胺(8.6 g，26.3 mmol)、苯基硼酸(6.4 g，52 mmol)、Pd(dppf)Cl2 二氯甲烷加合物(1.07 g，1.31 mmol)及碳酸鉀(10.9 g，78.8 mmol)於水(20 mL)及1,4-二噁烷(100 mL)中之溶液攪拌隔夜。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。用200 mL水稀釋殘餘物並用2×100 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用1×200 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:5)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的N-(4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-基)(5.4 g，63%)。MS: (ESI, m/z): 323[M-H]- 。 步驟4：4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺
在90℃下，將N-(4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-基)乙醯胺(5.4 g，16.65 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)及6 M HCl水溶液(25 mL)中之溶液攪拌3小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。用100 mL之1 M NaHCO3 水溶液稀釋殘餘物，且用2×150 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相用1×200 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:5)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(4.6 g，98%)。MS: (ESI, m/z): 281[M-H]- 。 步驟5：N-異丙基-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺
將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，85 mg，2.13 mmol)分數份添加至4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(200 mg，0.71 mmol)於DMF (5 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液1小時。逐滴添加2-碘丙烷(241 mg，1.42 mmol)，且在室溫下攪拌所得溶液隔夜。將反應混合物倒入50 mL冰/水中並用2×50 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用2×100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:5)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的N-異丙基-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(140 mg，61%)。MS: (ESI, m/z): 323[M-H]- 。 步驟6：N3-異丙基-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺
在氫氣氛圍下，在室溫下將N-異丙基-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(800 mg，2.47 mmol)及10%鈀/碳(150 mg)於甲醇(50 mL)中之混合物攪拌2小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液，得到呈黃色油狀的N3-異丙基-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺(670 mg，92%)。MS: (ESI, m/z): 295[M+H]+ 。 步驟7：3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將N3-異丙基-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺(200 mg，0.68 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(144 mg，0.75 mmol)於THF (20 mL)中之溶液攪拌2小時。添加CDI (214 mg，1.32 mmol)，且在油浴中，在75℃下攪拌所得溶液隔夜。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。粗產物藉由製備型薄層層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到呈黃色油狀的3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(90 mg，30%)。MS: (ESI, m/z): 454[M+H]+ 。 步驟8：N-羥基-3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.73 mL，11.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.40 mL，0.40 mmol)添加至3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(90 mg，0.20 mmol)於THF/MeOH (3:1，3 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：Sunfire C18管柱，19*150mn；移動相：水/0.05%TFA及CH3 CN (在1.1分鐘內5%B升至55%B)；流動速率：25mL/min；偵測器254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈粉色固體狀的N-羥基-3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺(36.0 mg，32%)。1 H-NMR (CD3 OD, 400MHz), δ (ppm): 7.98 (d,J = 1.4Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.73-7.71 (m, 2H), 7.67-7.64 (m, 2H), 7.47-7.44 (m, 3H), 7.39-7.38 (m, 2H), 4.98-4.91 (m, 1H), 1.75 (d,J = 6.8Hz, 6H)。MS: (ESI, m/z): 455[M+H]+ 。
以下化合物係根據以上關於N-羥基-3-(1-異丙基-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備。 實例 17-1 . 3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：1,2,4-三氯-5-硝基苯
將1,2,4-三氯苯(5.00 g，27.6 mmol)逐滴添加至硝酸(98%，18 mL)及水(2 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。接著將反應混合物逐滴添加至30 mL冰/水中且過濾所得混合物。用水洗滌濾餅並真空乾燥，得到呈黃綠色固體狀的1,2,4-三氯-5-硝基苯(4.9 g，79%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 8.52 (d,J = 4.4Hz, 1H), 8.28 (d,J = 4.4Hz, 1H)。 步驟2：4,5-二氯-N-異丙基-2-硝基苯胺
在油浴中，在65℃下將1,2,4-三氯-5-硝基苯(4.9 g，21.6 mmol)、三乙胺(4.5 mL，32.6 mmol)及丙-2-胺(6.75 g，114.19 mmol)於THF (20 mL)中之溶液攪拌15小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈橙色固體狀的4,5-二氯-N-異丙基-2-硝基苯胺(3.91 g，73%)。1 H-NMR (CDCl3 , 400MHz) δ (ppm): 8.27 (s, 1H), 7.92 (d,J = 4.4Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 3.81-3.73 (m, 1H), 1.34 (d,J = 6.4Hz, 6H)。 步驟3：4,5-二氯-N1-異丙基苯-1,2-二胺
將鋅(5.12 g，78.8 mmol)分數份添加至4,5-二氯-N-異丙基-2-硝基苯胺(3.91 g，15.7 mmol)於乙醇(15 mL)及氫氧化銨(20 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液5小時。濾出固體，且用3×100 mL乙醚萃取所得溶液。合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈黑色油狀的4,5-二氯-N1-異丙基苯-1,2-二胺(1.03 g，30%)。MS: (ESI, m/z): 219[M+H]+ 。 步驟4：3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將4,5-二氯-N1-異丙基苯-1,2-二胺(300 mg，1.37 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(292 mg，1.51 mmol)於THF (20 mL)中之溶液攪拌3小時。添加N,N′-二異丙基碳化二亞胺(347 mg，2.75 mmol)，且在油浴中，在80℃下攪拌所得溶液16小時。將反應混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100A；移動相：含0.05% NH4 HCO3 之水及CAN (在30分鐘內40%升至50%)，254及220nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈粉色固體狀的3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(190 mg，37%)。MS: (ESI, m/z): 378[M+H]+ 。
步驟5：3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺 將羥胺溶液(50%於水中，0.97 mL，15.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.53 mL，0.53 mmol)添加至3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.26 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液4小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA；移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在7.0分鐘5%B至50%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(5,6-二氯-1-異丙基-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(59.3 mg，45%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.20 (br, 1H), 9.65 (br, 1H), 8.04-7.85 (m, 3H), 7.60 (s, 1H), 7.48-7.39 (m, 2H), 4.95-4.91 (m, 1H), 1.57 (d,J = 6.8Hz, 6H)。MS: (ESI, m/z): 379[M+H]+ 。實例 18-1 . 3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4-胺基-5-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在室溫下，將4-胺基-5-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(500 mg，1.89 mmol)、2-甲氧基乙基胺(1.40 g，18.6 mmol)、碳酸銫(1.25 g，3.84 mmol)、碘化銅(I)(360 mg，1.89 mmol)及2,2,6,6-四甲基庚烷-3,5-二酮(500 mg，2.71 mmol)於DMSO (16 mL)中之溶液攪拌18小時。接著，將反應混合物倒入水(100 mL)中並用3×30 mL乙酸乙酯萃取。分離有機相並用10×30 mL水洗滌並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的4-胺基-5-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(200 mg，41%)。MS: (ESI, m/z): 258[M-H]- 。 步驟2：3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在70℃下，將4-胺基-5-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(300 mg，1.16 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(267 mg，1.38 mmol)及DIC (360 mg，2.85 mmol)於THF (10 mL)中之溶液攪拌5.5小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈褐色油狀的3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(70 mg，14%)。MS: (ESI, m/z): 419[M+H]+ 。 步驟3：3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸
將氫氧化鋰(57.7 mg，2.41 mmol)於水(0.5 mL)中之溶液逐滴添加至3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(48 mg，0.11 mmol)於THF (3 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌反應混合物26小時。真空濃縮所得溶液。殘餘物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100A；移動相：水及ACN(在30分鐘內5%升至40%)，254及220nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(26 mg，56%)。MS: (ESI, m/z): 405[M+H]+ 。 步驟4：3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
在室溫下，將3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸(100 mg，0.25 mmol)、IPCF (160 mg，1.27 mmol)、NMM (130 mg，1.27 mmol)及羥胺鹽酸鹽(85 mg，1.27 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液攪拌10小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：0.7mL/min；梯度：在2.0分鐘內5%B至95%B，保持0.6分鐘；254nm；偵測器)。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(6-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(20.8 mg，20%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.22 (br, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.18-8.14 (m, 3H), 7.90 (s, 1H), 7.46-7.38 (m, 2H), 4.59-4.57 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 2H), 3.23 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 420[M+H]+ 。實例 19-1 . 3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在70℃下，將4-胺基-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.00 g，10.7 mmol)、碘化鉀(1.79 g，10.8 mmol)、碳酸銫(10.51 g，32.26 mmol)及1-溴-2-甲氧基乙烷(7.47 g，53.7 mmol)於乙腈(25 mL)中之溶液攪拌18小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。用水(30 mL)稀釋殘餘物並用3×30 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用2×30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈黃色油狀的4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.1 g，80%)。MS: (ESI, m/z): 243[M-H]- 。 步驟2：5-溴-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
將溴(0.58 mL，8.6 mmol)逐滴添加至4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.1 g，8.6 mmol)於甲醇(30 mL)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌反應混合物4小時。藉由添加30 mL飽和NaHSO3 水溶液淬滅所得溶液且在真空下移除甲醇。用3×60 mL二氯甲烷萃取所得溶液，且合併之有機相用2×50 mL水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100A；移動相：水及ACN (在30分鐘內5%升至50%)，254及220nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈淺黃色固體狀的5-溴-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.539 g，55%)。MS: (ESI, m/z): 321[M-H]- 。 步驟3：5-胺基-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈
在90℃下，將5-溴-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.0 g，3.1 mmol)、戊烷-2,4-二酮(619 mg，6.18 mmol)、乙醯丙酮酸銅(II)(405 mg，1.55 mmol)、碳酸銫(2.017 g，6.19 mmol)、氫氧化銨(1.2 mL，15.44 mmol)於DMF (25 mL)中之溶液攪拌2天。用25 mL水稀釋所得溶液並用3×30 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥並真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈黑色油狀的5-胺基-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(255 mg，32%)。MS: (ESI, m/z): 258[M-H]- 。 步驟4：3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
將EDC·HCl (47 mg，0.25 mmol)添加至5-胺基-4-(2-甲氧基乙基胺基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(255 mg，0.98 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(285 mg，1.47 mmol)於THF (30 mL)中之0℃溶液中，且在75℃下攪拌反應6小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。將殘餘物溶解於25 mL乙酸乙酯中且用2×15 mL水洗滌。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在以下條件下藉由逆相管柱純化：管柱：C18管柱，40 g，20-45μm，100A；移動相：水及ACN (在30分鐘內5%升至60%)，254及220nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈黃色油狀的3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(195 mg，47%)。MS: (ESI, m/z): 419 [M+H]+ 。 步驟5：3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.86 mL，14 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.93 mL，0.93 mmol)添加至3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(195 mg，0.47 mmol)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液3小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Xbridge RP18 19×150；移動相：含0.05% TFA之水及ACN (在7分鐘內5% ACN升至59%)；偵測器：254、220nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(5-氰基-1-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(12 mg，6%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.22 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.05(s, 1H), 8.18-8.09 (m, 3H), 7.99 (s, 1H), 7.47-7.38(m, 2H), 4.62-4.60 (m, 2H), 3.69-3.67 (m, 2H), 3.22 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 420[M+H]+ 。實例 20-1 . N-羥基-3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺步驟1：N-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺
將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，709 mg，17.9 mmol)分數份添加至4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(1.00 g，3.54 mmol)於DMF (50 mL)中之0℃溶液中。在室溫下攪拌反應混合物1小時且接著冷卻至0℃。逐滴添加2-溴乙基甲基醚(1.66 g，17.9 mmol)，且在室溫下攪拌所得溶液隔夜。將反應物倒入100 mL冰/水中並用3×100 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用3×100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的N-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(1 g，83%)。MS: (ESI, m/z): 341[M+H]+ 。 步驟2：N3-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺
在氫氣氛圍下，在室溫下將N-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-6-(三氟甲基)聯苯-3-胺(1 g，2.94 mmol)及10%鈀/碳(150 mg)於甲醇(50 mL)中之混合物攪拌2小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液，得到呈黃色油狀的N3-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺(900 mg，粗品)。MS: (ESI, m/z): 311[M+H]+ 。 步驟3：3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在75℃下，將N3-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺(200 mg，0.64 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(137 mg，0.71 mmol)及CDI (203 mg，1.25 mmol)於THF (20 mL)中之溶液攪拌隔夜。將所得溶液冷卻至室溫，倒入50 mL水中並用3×50 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈黃色油狀的N3-(2-甲氧基乙基)-6-(三氟甲基)聯苯-3,4-二胺(200 mg，66%)。MS: (ESI, m/z): 470[M+H]+ 。 步驟4：N-羥基-3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.78 mL，12.8 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.42 mL，0.42 mmol)添加至3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.21 mmol)於THF/MeOH (4:1，3 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：Sunfire C18管柱19*150mn；移動相：含0.05% TFA之水及CH3 CN (25mL/min，在1.1分鐘內5-55%B)；偵測器254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈粉色固體狀的N-羥基-3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺(72.4 mg，72%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz), δ (ppm): 11.23 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.17-8.12 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.48-7.35 (m, 8H), 4.53-4.51 (m, 2H), 3.68-3.65 (m, 2H), 3.23 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 471[M+H]+ 。
以下化合物係根據以上關於N-羥基-3-(1-(2-甲氧基乙基)-6-苯基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備。 實例 21-1 . 3-(1-(5-胺基戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽步驟1：5-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯
在室溫下，將4-氟-2-(三氟甲基)苯甲腈(7.00 g，37.1 mmol)、N-(5-胺基戊基)胺基甲酸第三丁酯(10 g，49.43 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(11 g，85.11 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液攪拌6小時。所得溶液用400 mL乙酸乙酯稀釋，用2×200mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈無色油狀的5-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(11 g，60%)。MS: (ESI, m/z): 372[M+H]+ 。 步驟2：5-(2-溴-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯
在室溫下，將5-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(6.000 g，16.16 mmol)及NBS (3.450 g，19.38 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液攪拌2小時。將所得溶液倒入100 mL水中並用2×100 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用3×200 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化，得到呈無色固體狀的5-(2-溴-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(6 g，82%)。MS: (ESI, m/z): 450[M+H]+ 。 步驟3：5-(2-胺基-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯
在油浴中，在90℃下將5-(2-溴-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(3.00 g，6.67 mmol)、乙醯丙酮酸銅(II)(1.74 g，6.67 mmol)及氫氧化銨(15 mL)於DMF (15 mL)中之溶液攪拌16小時。將所得溶液冷卻至室溫且接著用200 mL乙酸乙酯稀釋。所得溶液用3×100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈紫色固體狀的5-(2-胺基-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(2.4 g，93%)。MS: (ESI, m/z): 387[M+H]+ 。 步驟4：3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
將3-異硫氰基苯甲酸甲酯(550 mg，2.85 mmol)添加至5-(2-胺基-4-氰基-5-(三氟甲基)苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，2.59 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌反應混合物16小時。添加DIC (490 mg，3.89 mmol)，且在80℃下攪拌所得溶液3小時。將反應混合物冷卻至室溫，用100 mL乙酸乙酯稀釋，用2×50 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(850 mg，60%)。MS: (ESI, m/z): 546[M+H]+ 。 步驟5：3-(1-(5-胺基戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽
將羥胺溶液(50%於水中，2.69 mL，44.0 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.74 mL，0.74 mmol)添加至3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(200 mg，0.37 mmol)於THF/MeOH (4:1，5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。用6 M HCl水溶液將溶液之pH值調至2且在室溫下攪拌所得溶液15小時。用4 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至6且粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XBridge Prep C18 OBD 管柱，150mm 5μm；移動相：水(0.1%FA)及ACN (在8分鐘內20.0% ACN升至30.0%)；偵測器UV 254及220nm。凍乾收集之溶離份，得到呈橙色固體狀的3-(1-(5-胺基戊基)-5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽(3.1 mg，2%)。1 H-NMR: (DMSO, 300MHz, ppm): δ 8.50 (s, 1H), 8.27-87.98 (m, 5H), 7.46-7.38 (m, 2H), 4.41-4.35 (m, 2H), 2.66-2.60 (m, 2H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.52-1.39 (m, 4H)。MS: (ESI, m/z): 447[M +H]+ 。實例 22-1 . 3-(1-(5-胺基戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽步驟1：5-(2-胺基-4,5-二氯苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯
在80℃下，將4,5-二氯苯-1,2-二胺(350 mg，1.99 mmol)、N-(5-溴戊基)胺基甲酸第三丁酯(1.05 g，3.94 mmol)、碳酸鉀(819 mg，5.93 mmol)及碘化鈉(297 mg，1.99 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液攪拌18小時。將所得溶液冷卻至室溫，用50 mL水稀釋，並用3×40 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用2×30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用二氯甲烷/甲醇(20:1)溶離)純化，得到呈褐色油狀的5-(2-胺基-4,5-二氯苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(339 mg，44%)。MS: (ESI, m/z): 362[M+H]+ 。 步驟2：3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯
將3-異硫氰基苯甲酸甲酯(219 mg，1.13 mmol)添加至5-(2-胺基-4,5-二氯苯基胺基)戊基胺基甲酸第三丁酯(339 mg，0.87 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌反應混合物18小時。添加DIC (164 mg，1.30 mmol)，且在80℃下攪拌所得溶液4小時。將反應混合物冷卻至室溫，倒入50 mL水中，並用3×50 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用3×30 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物利用矽膠經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離)純化，得到呈褐色油狀的3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(300 mg，38%)。MS: (ESI, m/z): 521 [M+H]+ 。 步驟3：3-(1-(5-胺基戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽
將羥胺溶液(50%於水中，2.41 mL，39.4 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.66 mL，0.66 mmol)添加至3-(1-(5-(第三丁氧基羰基胺基)戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(300 mg，0.33 mmol)於THF/MeOH (4:1，5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液5小時。用6 M HCl水溶液將溶液之pH值調至2且在室溫下攪拌所得溶液15小時。接著用4 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至6。藉由過濾收集固體且在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XBridge Shield RP18 OBD 管柱，5μm，19 × 150 mm；移動相：水(0.1%FA)及ACN (在9分鐘內3.0% ACN升至30.0%)；偵測器UV 220/254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-(1-(5-胺基戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽(36.0 mg，23%)。1 H-NMR: (DMSO, 400 MHz) δ (ppm): 8.85 (br, 3H), 8.47 (s, 1H), 8.17-8.15 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 7.31 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.26-4.22 (m, 2H), 2.71-2.65 (m, 2H), 1.67-1.61 (m, 2H), 1.57-1.50 (m, 2H), 1.40-1.32 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 422[M +H]+ 。
以下化合物係根據以上關於3-(1-(5-胺基戊基)-5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺甲酸鹽所概述之程序製備。 實例 23-1 . N-羥基-3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺步驟1：3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在80℃下，將2-溴-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑(150 mg，0.58 mmol)、3-胺基苯甲酸甲酯(89 mg，0.58 mmol)及甲烷磺酸(76 μL，1.17 mmol)於DMA (3.9 mL)中之溶液加熱隔夜。將所得混合物冷卻至室溫並用乙酸乙酯及水稀釋。藉由抽吸過濾來收集所得白色沈澱並真空乾燥，得到呈白色固體狀的3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(150 mg，78%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 11.05 (s, 1 H) 10.88 - 11.17 (m, 1 H) 8.10 (s, 1 H) 7.80 - 7.93 (m, 2 H) 7.58 - 7.72 (m, 2 H) 7.39 - 7.43 (m, 1 H) 7.25 - 7.37 (m, 2 H) 4.58 (br t,J =4.98 Hz, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.75 (t,J =5.13 Hz, 2 H) 3.27 (s, 3 H)。MS: (ESI, m/z): 326[M+H]+ 。 步驟2：N-羥基-3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，2.5 mL，41.5 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(1.38 mL，1.38 mmol)添加至3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(150 mg，0.46 mmol)於THF/MeOH (4:1，4 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。將反應混合物濃縮一半，接著添加1 N HCl水溶液，直至溶液變為酸性。藉由抽吸過濾來收集所得白色沈澱且在高真空下乾燥，得到呈白色固體狀的N-羥基-3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(105 mg，70%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 11.11 (s, 1 H) 9.79 - 10.08 (m, 1 H) 8.95 (br d,J =1.47 Hz, 1 H) 8.00 - 8.17 (m, 2 H) 7.17 - 7.39 (m, 4 H) 6.92 - 7.05 (m, 2 H) 4.37 (t,J =5.42 Hz, 2 H) 3.59 (t,J =5.42 Hz, 2 H) 3.17 (s, 3 H)。MS: (ESI, m/z): 327 [M+H]+ 。
下表中之化合物係根據N-羥基-3-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺之程序製備。 實例 24-1 . N-羥基-3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺 步驟1：3-((4-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在80℃下，將2-氯-4-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑 (100 mg，0.54 mmol)、3-胺基苯甲酸甲酯(83 mg，0.54 mmol)及甲烷磺酸(71 μL，1.1 mmol)於NMP (3 mL)中之溶液加熱隔夜。將所得混合物冷卻至室溫且接著用乙酸乙酯及水稀釋。藉由抽吸過濾來收集所得白色沈澱並真空乾燥，得到呈白色固體狀的3-((4-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，61%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 10.76 (s, 1 H) 8.07 (br d,J =2.35 Hz, 1 H) 7.73 - 7.87 (m, 2 H) 7.54 - 7.66 (m, 1 H) 7.15 - 7.24 (m, 1 H) 7.03 (d,J =7.92 Hz, 1 H) 6.91 (br d,J =8.50 Hz, 1 H) 3.95 (s, 3 H) 3.88 (s, 3 H)。MS: (ESI, m/z): 298[M+H]+ 。 步驟2：3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
將氫化鈉(60%於礦物油中之分散液，13.5 mg，0.33 mmol)添加至3-((4-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.33 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中，且攪拌混合物20分鐘。添加1-溴-2-甲氧基乙烷(0.031 mL，0.33 mmol)，且攪拌所得溶液隔夜。藉由添加水(10 mL)淬滅反應且用3×10 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。真空濃縮合併之有機物，且殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用5-40%乙酸乙酯/己烷梯度溶離)純化，得到呈無色油狀的3-(4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基胺基)苯甲酸甲酯(31 mg，26%)。MS: (ESI, m/z): 356 [M+H]+ 。 步驟3：N-羥基-3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.16 mL，2.6 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.26 mL，0.26 mmol)添加至3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(31 mg，0.087 mmol)於THF/MeOH (4:1，2.5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。添加2 N HCl水溶液，直至溶液呈酸性，且濃縮所得溶液。殘餘物利用乙腈及水(0.1%甲酸)藉由Gilson製備型HPLC純化，並濃縮所需溶離份且接著凍乾，得到呈白色固體狀的N-羥基-3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(20 mg，65%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 11.17 (s, 1 H) 9.02 (d,J =1.47 Hz, 1 H) 8.87 (s, 1 H) 8.02 - 8.13 (m, 2 H) 7.30 - 7.41 (m, 1 H) 7.25 (br d,J =7.62 Hz, 1 H) 7.00 (q,J =8.01 Hz, 2 H) 6.69 (br d,J =7.62 Hz, 1 H) 4.59 (br t,J =5.72 Hz, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.63 (t,J =5.72 Hz, 2 H) 3.23 (s, 3 H)。MS: (ESI, m/z): 357 [M+H]+ 。
下表中之化合物係根據N-羥基-3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺之程序製備。 實例 25-1 . N-羥基-3-((4-甲氧基-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺步驟1：3-((2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯
在80℃下，將3-溴苯甲酸甲酯(500 mg，2.32 mmol)、碳酸銫(1.136 g，3.49 mmol)、Pd2 (dba)3 (42 mg，0.047 mmol)、BINAP (43 mg，0.07 mmol)及2-甲氧基乙胺(240 μL，1.2 mmol)於甲苯(10 mL)中之溶液加熱隔夜。將所得混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，並用鹽水洗滌。分離有機層並濃縮，且殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用20-70%乙酸乙酯/己烷梯度溶離)純化，得到呈黃色半固體狀的3-((2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯(250 mg，51%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 7.09 - 7.23 (m, 3 H) 6.78 - 6.89 (m, 1 H) 5.96 (t,J =5.72 Hz, 1 H) 3.79 - 3.81 (m, 3 H) 3.48 (t,J =5.72 Hz, 2 H) 3.27 (s, 3 H) 3.15 - 3.25 (m, 2 H)。MS: (ESI, m/z): 210[M+H]+ 。 步驟2：3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯
在150℃下，用微波輻射照射2-溴-1H-苯并[d]咪唑 (57 mg，0.28 mmol)、3-(2-甲氧基乙基胺基)苯甲酸甲酯(60 mg，0.28 mmol)及6 M HCl水溶液(1滴)於乙醇(1.5 mL)中之溶液1小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物利用乙腈及水(0.1%甲酸)經由製備型HPLC純化，並濃縮所需溶離份且接著凍乾，得到呈白色固體狀的3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯(35 mg，38%)。MS: (ESI, m/z): 326[M+H]+ 。 步驟3：3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(2-甲氧基乙基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.33 mL，5.4 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.33 mL，0.33 mmol)添加至3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯(35 mg，0.108 mmol)於THF/MeOH (4:1，2.5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。添加2 N HCl水溶液，直至溶液呈酸性，且濃縮所得溶液。殘餘物利用乙腈及水(0.1%甲酸)藉由Gilson製備型HPLC純化，並濃縮所需溶離份且接著凍乾，得到呈白色固體狀的3-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)(2-甲氧基乙基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺(7 mg，20%)。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 11.27 (br s, 2 H) 8.98 - 9.20 (m, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 7.76 (s, 1 H) 7.61 (br d,J =6.74 Hz, 1 H) 7.50 - 7.58 (m, 1 H) 7.31 - 7.50 (m, 1 H) 7.21 - 7.31 (m, 1 H) 7.12 (br d,J =3.22 Hz, 1 H) 6.93 (s, 1 H) 6.93 (br dd,J =11.29, 4.84 Hz, 2 H) 4.09 (br d,J =6.16 Hz, 2 H) 3.55 - 3.64 (m, 2 H) 3.23 (s, 3 H)。MS: (ESI, m/z): 327 [M+H]+ 。實例 26-1 ：3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
將二硫化碳(4.80 mL，79.6 mmol)分數份添加至4,5-二胺基-2-(三氟甲基)苯甲腈(2.00 g，9.94 mmol)及氫氧化鉀(1.67 g，29.76 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液中，且在油浴中，在90℃下攪拌所得溶液5小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物用100 mL水稀釋，用2 M HCl水溶液將所得溶液之pH值調至7，且用3×200 mL乙酸乙酯萃取混合物。合併之有機相用1×100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈紅色固體狀的2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(1.9 g，79%)。MS: (ESI, m/z): 244[M+H]+ 。 步驟2：2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈
將溴(0.20 mL，3.96 mmol)逐滴添加至2-巰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(267 mg，1.10 mmol)於氫溴酸(40%於乙酸中，12 mL)中之0℃溶液中，且在水/冰浴中，在0℃下攪拌所得溶液3小時。真空濃縮反應混合物，且用10 mL水稀釋殘餘物。用1 M氫氧化鈉水溶液將溶液之pH值調至4。用3×20 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(225 mg，71%)。MS: (ESI, m/z): 331[M+H+CH3 CN]+ 。 步驟3：3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在110℃下將2-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲腈(200 mg，0.69 mmol)、3-羥基苯甲酸甲酯(105 mg，0.69 mmol)、銅(5 mg)及碳酸鉀(286 mg，2.05 mmol)於吡啶 (20 mL)中之溶液攪拌24小時。將所得溶液冷卻至室溫且接著真空濃縮。用20 mL水稀釋殘餘物並用3×20 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用50 mL水及50 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用甲醇/二氯甲烷(1:25)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)苯甲酸甲酯(95 mg，38%)。MS: (ESI, m/z): 362[M+H]+ 步驟4：3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.27 mL，4.2 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.28 mL，0.28 mmol)添加至3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)苯甲酸甲酯(50 mg，0.14 mmol)於THF/MeOH (4:1，1.5 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液6小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱，XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相：移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在7.0分鐘內5%B至54%B；偵測器254 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈紅色固體狀的3-(5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基氧基)-N-羥基苯甲醯胺( 4.6 mg，9%)。1 H-NMR: (DMSO, 300 MHz) δ (ppm):11.31 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.76-7.67 (m, 2H), 7.59-7.57 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 363[M+H]+ 。實例 27-1 ：3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：3-(2-(2-胺基-5-氰基-4-(三氟甲基)苯基胺基)-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯
在25℃下，將4,5-二胺基-2-(三氟甲基)苯甲腈(100 mg，0.50 mmol)、DMC (96 mg，0.57 mmol)、2-[3-(甲氧基羰基)苯基]乙酸(91.9 mg，0.47 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.30 mL，1.9 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液攪拌1小時。接著將反應混合物倒入10 mL水中。用3×10 mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:4)溶離)純化，得到呈白色固體狀的3-(2-(2-胺基-5-氰基-4-(三氟甲基)苯基胺基)-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯(160 mg，90%)。MS: (ESI, m/z): 378[M+H]+ 。 步驟2：3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在110℃下將3-(2-(2-胺基-5-氰基-4-(三氟甲基)苯基胺基)-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.27 mmol)於甲苯(10 mL)及乙酸(1 mL)中之溶液攪拌2小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:3)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)苯甲酸甲酯(65 mg，68%)。MS: (ESI, m/z): 360[M+H]+ 。 步驟3：3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.52 mL，7.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.53 mL，0.53 mmol)添加至3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)苯甲酸甲酯(95 mg，0.26 mmol)於THF/MeOH (4:1，2.0 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液1.5小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters XBridge C18，19*150 mm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在10分鐘內30%B至70%B；偵測器：254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈粉色固體狀的3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-N-羥基苯甲醯胺(34.3 mg，36%)。1 H-NMR: (DMSO, 400 MHz) δ (ppm): 11.20 (br, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.62 (d,J = 7.6Hz, 1H), 7.50 (d,J = 7.6Hz, 1H), 7.43-7.39 (m, 1H), 4.36 (s, 2H)。MS: (ESI, m/z): 361[M+H]+ 。
以下化合物係根據以上關於3-((5-氰基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)-N-羥基苯甲醯胺所概述之程序製備。 實例 28-1 ：3-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：1,2-二氯-4-甲基-5-硝基苯
將發煙硝酸(40 mL)逐滴添加至1,2-二氯-4-甲基苯(20 g，124.20 mmol)中之0℃溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。接著將反應混合物緩慢倒入200 mL水/冰中。藉由過濾收集固體並真空乾燥，得到呈黃色固體狀的1,2-二氯-4-甲基-5-硝基苯(25.2 g，98%)。1 H-NMR: (DMSO, 300 MHz) δ (ppm): 8.39 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 2.48 (s, 3H)。 步驟2：(E)-2-(4,5-二氯-2-硝基苯基)-N,N-二甲基乙烯胺
在130℃下，將1,2-二氯-4-甲基-5-硝基苯(25.2 g，122 mmol)、DMF (50 mL)及DMF-二甲基縮醛(19.8 mL，147.90 mmol)之溶液攪拌3小時。真空濃縮所得混合物。將殘餘物溶解於200 mL乙酸乙酯中，用200 mL水及200 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈紅色固體狀的(E)-2-(4,5-二氯-2-硝基苯基)-N,N-二甲基乙烯胺(37 g)。MS: (ESI, m/z): 261[M+H]+ 。 步驟3：5,6-二氯-1H-吲哚
將鐵屑(133 g，2.39 mmol)添加至(E)-2-(4,5-二氯-2-硝基苯基)-N,N-二甲基乙烯胺(37 g，120 mmol)及乙酸(500 mL)於乙醇(500 mL)中之60℃溶液中，且在90℃下攪拌所得溶液3小時。將反應混合物冷卻至室溫並過濾。濃縮濾液，且用500 mL水稀釋殘餘物並用2×500 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:10)溶離)純化，得到呈褐色固體狀的5,6-二氯-1H-吲哚 (6 g，27%)。MS: (ESI, m/z): 186[M+H]+ 。 步驟4：5,6-二氯-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯
在室溫下，將5,6-二氯-1H-吲哚 (1.7 g，9.14 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(1.4 g，11.46 mmol)、二碳酸二第三丁酯(2.4 g，11.00 mmol)及THF (50 mL)中之溶液攪拌隔夜。接著用50 mL乙酸乙酯稀釋混合物，用50 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:30)溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的5,6-二氯-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(2.0 g，76%)。MS: (ESI, m/z): 286[M+H]+ 。 步驟5：5,6-二氯-2-碘-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯
將第三丁基鋰(1.5 M之戊烷溶液，3.0 mL，4.5 mmol)逐滴添加至5,6-二氯-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(1.25 g，4.37 mmol)於THF (50 mL)中之-78℃溶液中，且在-78℃下將混合物攪拌1小時。逐滴添加碘(3.3 g，12.99 mmol)於THF (5 mL)中之溶液，且在-78℃下攪拌所得溶液2小時。藉由添加5 mL飽和氯化銨水溶液淬滅反應且接著倒入100 mL水中。用3×100 mL乙酸乙酯萃取混合物，且合併之有機相用100 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:20)溶離)純化，得到呈粉色固體狀的5,6-二氯-2-碘-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(1 g，56%)。MS: (ESI, m/z): 412[M+H]+ 。 步驟6：5,6-二氯-2-(3-(甲氧基羰基)苯基胺基)-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯
在100℃下，將5,6-二氯-2-碘-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(120 mg，0.29 mmol)、3-胺基苯甲酸甲酯(60 mg，0.40 mmol)、碳酸銫(180 mg，0.55 mmol)、Pd2 (dba)3 (5 mg)及Xantphos (5 mg，0.01 mmol)於甲苯(12 mL)中之溶液攪拌1小時且接著冷卻至室溫。真空濃縮混合物，且用20 mL水稀釋殘餘物並用2×20 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相用50 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離)純化，得到呈紅色油狀的5,6-二氯-2-(3-(甲氧基羰基)苯基胺基)-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(70 mg，55%)。MS: (ESI, m/z): 335 [M-Boc+H]+ 。 步驟7：3-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(PH-FMA-HD-400-0)
將羥胺溶液(50%於水中，0.55 mL，8.3 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.28 mL，0.28 mmol)添加至5,6-二氯-2-(3-(甲氧基羰基)苯基胺基)-1H-吲哚-1-甲酸第三丁酯(60 mg，0.14 mmol)於THF/MeOH (4:1，2.0 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液4小時。粗產物在以下條件下經由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：30 mL/min；梯度：在6.0分鐘內5%B至40%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈灰色固體狀的3-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(16.6 mg，36%)。1 H-NMR: (DMSO, 400 MHz) δ (ppm): 11.17 (br, 1H), 10.87 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 7.61 (s, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.35-7.27 (m, 1H), 7.25-7.19 (m, 2H), 5.98 (s,1H)。MS: (ESI, m/z): 336 [M+H]+ 。實例 29-1 ：3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在油浴中，在100℃下將吡嗪-2,3-二胺(540 mg，4.91 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(1.04 g，5.40 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液攪拌2小時。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用甲醇/二氯甲烷(1:5)溶離)純化，得到呈黃色固體狀的3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)苯甲酸甲酯(60 mg，5%)。MS: (ESI, m/z): 270 [M+H]+ 。 步驟2：3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.15 mL，2.3 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.23 mL，0.23 mmol)添加至3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)苯甲酸甲酯(21 mg，0.08 mmol)於THF/MeOH (4:1，2.0 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液30分鐘。用1 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5-6。粗產物利用以下條件經由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在7.0分鐘內4%B至20%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈黃色固體狀的3-(1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(16.7 mg，79%)。1 H-NMR: (DMSO, 300 MHz) δ (ppm): 11.19 (br, 1H), 10.26 (br, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.02 (s, 2H), 7.96 (d,J = 7.5Hz, 1H), 7.46-7.37 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 271 [M+H]+ 。實例 30-1 ：3-(9H-嘌呤-8-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺步驟1：3-(9H-嘌呤-8-基胺基)苯甲酸甲酯
將3-異硫氰基苯甲酸甲酯(170 mg，0.88 mmol)於THF (2 mL)中之溶液逐滴添加至嘧啶-4,5-二胺(100 mg，0.91 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中，且在油浴中，在65℃下攪拌所得溶液隔夜。接著逐滴添加DIC (0.43 mL，2.72 mmol)，且在油浴中，在65℃下攪拌所得溶液5小時。將反應混合物冷卻至室溫且接著用25 mL水稀釋。用3×20乙酸乙酯萃取混合物，且合併之有機相用1×10 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物經由製備型薄層層析法(用甲醇/二氯甲烷(1:10)溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的3-(9H-嘌呤-8-基胺基)苯甲酸甲酯(43 mg，18%)。MS: (ESI, m/z): 270 [M+H]+ 。 步驟2：3-(9H-嘌呤-8-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺
將羥胺溶液(50%於水中，0.26 mL，3.9 mmol)及1 M氫氧化鈉水溶液(0.39 mL，0.39 mmol)添加至3-(9H-嘌呤-8-基胺基)苯甲酸甲酯於THF/MeOH (4:1，2.0 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液30分鐘。用1 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5-6。粗產物利用以下條件藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge RP C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：25 mL/min；梯度：在7.0分鐘內4%B至10%B，254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈淺褐色固體狀的3-(9H-嘌呤-8-基胺基)-N-羥基苯甲醯胺(8.9 mg，26%)。1 H-NMR: (DMSO, 400 MHz) δ (ppm): 11.21 (br, 1H), 10.72 (br, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.94 (d,J = 7.6Hz, 1H), 7.50-7.41 9m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 271 [M+H]+ 。實例 31-1 ：6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基吡啶醯胺步驟1：6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸甲酯
在油浴中，在110℃下將Pd(OAc)2 (3 mg，0.01 mmol)及t-BuBrettPhos (12 mg，0.02 mmol)於第三丁醇(1 mL)及水(1滴)中之溶液攪拌1.5分鐘且接著經由導管將其逐滴添加至5,6-二氯-1,3-苯并噁唑-2-胺(50 mg，0.25 mmol)、6-溴吡啶-2-甲酸甲酯(53 mg，0.25 mmol)及碳酸鉀(47.6 mg，0.34 mmol)於第三丁醇(2 mL)中之溶液中。在110℃下攪拌所得溶液3小時且接著冷卻至室溫並真空濃縮。用10 mL水稀釋殘餘物並用3×10 mL乙酸乙酯萃取。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈黃色固體狀的6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸甲酯(95 mg)。MS: (ESI, m/z): 338[M+H]+ 。 步驟2：6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸
將氫氧化鋰(71 mg，2.97 mmol)於水(2 mL)中之溶液添加至6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸甲酯(110 mg，0.30 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液2小時。在真空下移除THF且用5 mL水稀釋反應混合物。用5 mL乙酸乙酯洗滌所得溶液且分離出水層並冷卻至0℃。用2 M HCl水溶液將溶液之pH值調至5，且用3×10 mL乙酸乙酯萃取所得溶液。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈黃色固體狀的6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸( 65 mg)。MS: (ESI, m/z): 324[M+H]+ 。 步驟3：6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基吡啶醯胺
將IPCF (20 μL，0.18 mmol)逐滴添加至6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)吡啶甲酸(65 mg，0.18 mmol)及NMM (99 μL，0.91 mmol)於DMA (5 mL)中之0℃溶液中。添加羥胺鹽酸鹽(14 mg，0.20 mmol)，且在室溫下攪拌所得溶液隔夜。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters HSS C18，2.1×50 mm，1.8μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：ACN；流動速率：0.7 mL/min；梯度：在2.0分鐘內5%B至95%B，保持0.6分鐘；偵測器：UV 254nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的6-(5,6-二氯苯并[d]噁唑-2-基胺基)-N-羥基吡啶醯胺(6.4 mg，11%)。1 H-NMR: (DMSO, 300 MHz) δ (ppm): 11.59 (s, 1H), 10.73 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.29 (d,J = 8.1Hz, 1H), 8.08-8.00 (m, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.60 (d,J = 7.5Hz, 1H)。MS: (ESI, m/z): 339[M+H]+ 。實例 32-1 ：製備N-羥基-3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲醯胺步驟1：3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸甲酯
在100℃下，用微波輻射照射2-胺基吡啶-3-醇(440 mg，4.00 mmol)、3-異硫氰基苯甲酸甲酯(0.63 mL，4.00 mmol)、碘化銅(I)(38 mg，0.20 mmol)及三乙胺(2.22 mL，16.0 mmol)於乙醇(8 mL)中之溶液10分鐘。將所得混合物冷卻至室溫且接著真空濃縮。殘餘物在以下條件下經由製備型HPLC純化：管柱，XBridge RP18 19*250 mm；移動相A：水(0.1%FA)，移動相B：ACN；流動速率：30 mL/min；梯度：在10分鐘內20% B至80% B；254及220 nm。真空濃縮收集之溶離份，得到呈淺黃色固體狀的3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸甲酯(150 mg，14%)。MS: (ESI, m/z): 270[M+H]+ 。 步驟2：3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸
氫氧化鋰(22 mg，0.92 mmol)於水(1 mL)中之溶液添加至3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸甲酯(50 mg，0.19 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌所得溶液12小時。用6 M HCl水溶液將溶液之pH值調至7，且用3×10 mL乙酸乙酯萃取混合物。合併之有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且真空濃縮，得到呈黃色油狀的3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸(35 mg，74%)。MS: (ESI, m/z): 256[M+H]+ 。 步驟3：N-羥基-3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲醯胺
將IPCF (76 μL，0.68 mmol)逐滴添加至3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲酸(35 mg，0.14 mmol)及NMM (75 μL，0.91 mmol)於DMA (5 mL)中之0℃溶液中。在室溫下攪拌混合物1小時且接著添加羥胺鹽酸鹽(47 mg，0.68 mmol)於DMA (1 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液14小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge BEH C18 OBD Prep 管柱，5μm，19×250 mm；移動相A：水(0.1%FA)，移動相B：ACN；流動速率：30 mL/min；梯度：在6分鐘內5% B至30% B；254及220 nm。凍乾收集之溶離份，得到呈白色固體狀的N-羥基-3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲醯胺(10.6 mg，29%)。1 H-NMR (DMSO, 400MHz) δ(ppm): 11.16 (br, 2H), 9.08 (br, 1H), 8.27-8.25 (m, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.94-7.87 (m, 2H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.17-7.13 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 271[M +H]+ 。
以下化合物係根據關於N-羥基-3-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備。 實例 33-1 . 3-((6-氯-5-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺
在2 mL反應小瓶中裝入4-氯-5-氟苯-1,2-二胺(0.2 M之DMF溶液，150 μL，30 μmol)、三乙胺(42 μL，300 μmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(0.2 M之DMF溶液，150 μL，30 μmol)。添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(0.4 M之DMF溶液，225 μL，90 μmol)，且在室溫下振盪所得混合物30分鐘且接著在90℃下振盪隔夜。在氮氣流下移除溶劑。用乙酸乙酯(0.7 mL)及鹽水(0.5 mL)稀釋殘餘物，且振盪混合物。分離有機層且用乙酸乙酯(0.7 mL)萃取水相。在氮氣流下濃縮合併之有機層且將THF/甲醇(3:1，200 µL)添加至殘餘物中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物且接著冷卻至室溫。添加羥胺(50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1 N NaOH水溶液(100 µL)，並密封小瓶且在室溫下振盪16小時。在室溫下，在氮氣流下濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於500 µL DMSO中且在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters SunFire C18，5μm，19×150mm；移動相：A：含0.1%甲酸之水，B：含0.1%甲酸之CH3 CN；流動速率：23 mL/min；梯度：在5分鐘內0% B至5% B；偵測器254、220 nm。濃縮收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的3-((6-氯-5-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺(1.5 mg，15.6%產率)。MS: (ESI, m/z): 321[M+H]+ 。
以下化合物係根據3-((6-氯-5-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)-N-羥基苯甲醯胺所概述之程序製備： 實例 34-1 . N-羥基-3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺 步驟1：3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在室溫下，將4-溴-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(700 mg，2.74 mmol)、三乙胺(1.4 mL，10 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(530 mg，2.74 mmol)於DMF (8 mL)中之溶液攪拌15分鐘且接著添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(1.063 g，6.85 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物30分鐘，接著在90℃下攪拌4小時。減壓蒸發溶劑，且用乙酸乙酯(10 mL)及鹽水(5 mL)稀釋殘餘物。分離水相並用乙酸乙酯(10 mL)萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用乙酸乙酯/己烷(2:1)溶離)純化，得到呈白色固體狀的3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(706 mg，62%)。MS: (ESI, m/z): 415[M+H]+ 。 步驟2：3-((5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
將磷酸三鉀(2 M之水溶液，200 μL，400 μmol)及Pd(PPh3 )4 (11.6 mg，10 μmol)添加至3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(41.4 mg，100 μmol)及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(51.2 mg，250 μmol)於1,4-二噁烷(600 μL)及水(60 μL)中之溶液中並在120℃下攪拌隔夜。將混合物冷卻至室溫且添加乙酸乙酯(1 mL)及水(500 μL)。分離水相並用乙酸乙酯(1 mL)萃取。乾燥合併之有機層並濃縮。粗產物藉由製備型薄層層析法(用DCM/MeOH/NH4 OH=10:1:0.1溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀的3-((5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(29 mg，72%)。MS: (ESI, m/z): 413[M+H]+ )。 步驟3：3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯及3-(甲基(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在2 mL反應小瓶中裝入3-((5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(29 mg，72 μmol)及乙腈(400 μL)。添加碘甲烷(0.4 M之乙腈溶液，500 μL，200 μmol)，隨後添加碳酸銫(130 mg，400 μmol)。在室溫下 振盪混合物隔夜，且減壓移除溶劑。用乙酸乙酯(0.7 mL)及鹽水(0.5 mL)稀釋殘餘物，且振盪混合物。分離水相並用乙酸乙酯(0.7 mL)萃取，且在氮氣流下濃縮合併之有機層。粗產物藉由製備型薄層層析法(用10:0.5:0.05 DCM/MeOH/NH4 OH溶離)純化。TLC板上之頂部條帶視為3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(9.5 mg，31%) MS: (ESI, m/z): 441[M+H]+ 。下部條帶視為3-(甲基(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(3.7 mg，12%) MS: (ESI, m/z): 441[M+H]+ 。 步驟4：(N-羥基-3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺)
在50℃下，將3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(9.5 mg，22 μmol)於THF/甲醇(3:1，200 µL)中之溶液加熱15分鐘 (以溶解固體)且接著冷卻至室溫。添加羥胺(50% v/v於水中之溶液，150 µL)及1 N NaOH水溶液(100 µL)，且在室溫下振盪混合物16小時。在室溫下，在氮氣流下濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於500 µL DMSO中且在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters SunFire C18，5μm，19×150mm；移動相：A：含0.1%甲酸之水，B：含0.1%甲酸之CH3 CN；流動速率：23 mL/min；梯度：在5分鐘內0% B至5% B；偵測器254、220 nm。濃縮收集之溶離份，得到(N-羥基-3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺) (5.8 mg，61%產率)，MS: (ESI, m/z): 442[M+H]+ 。
以下化合物係根據N-羥基-3-(甲基(1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備： 實例 35-1 . N-羥基-3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺 步驟1. 3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在25 mL反應小瓶中裝入4-溴-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(700 mg，2.74 mmol)、DMF (8 mL)、三乙胺(1.4 mL，10 mmol)及3-異硫氰基苯甲酸甲酯(530 mg，2.74 mmol)，且在室溫下攪拌混合物15分鐘。添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(1.06 g，6.85 mmol)，且所得反應混合物在室溫下攪拌30分鐘，接著在90℃下攪拌4小時。減壓移除DMF，且將乙酸乙酯(10 mL)及鹽水(5 mL)添加至殘餘物中。振盪混合物並分離各層。用乙酸乙酯(10 mL)萃取水相，且減壓蒸發合併之有機層。殘餘物在矽膠上經由管柱層析法(用2:1乙酸乙酯/己烷溶離)純化，得到呈白色固體狀的3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(706 mg，62%)。MS: (ESI, m/z): 415[M+H]+ 。 步驟2. (3-((5-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯及3-((6-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯)
在4 mL反應小瓶中裝入3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(100 mg，0.242 mmol)、乙腈(2 mL)及碘甲烷(1M之乙腈溶液，315 μL，0.315 mmol)。添加碳酸銫(95 mg，0.29 mmol)，且在室溫下振盪混合物隔夜。減壓蒸發溶劑，用乙酸乙酯(2 mL)及鹽水(1 mL)稀釋殘餘物，且振盪混合物。分離有機層且用乙酸乙酯(1 mL)萃取水相。在氮氣流下濃縮合併之有機層。粗產物在矽膠上經由管柱層析法(用2:1乙酸乙酯/己烷溶離)純化，得到呈白色固體狀的3-((5-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯及3-((6-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯)之混合物(92 mg，89%)。MS: (ESI, m/z): 429[M+H]+ 。 步驟3. 3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯及3-((1-甲基-6-(吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯
在4 mL反應小瓶中裝入3-((5-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯及3-((6-溴-1-甲基-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(42.8 mg，100 μmol)之混合物、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(51.2 mg，250 μmol)、1,4-二噁烷(600 μL)及水(60 μL)。添加磷酸三鉀(2 M之水溶液，200 μL，400 μmol)及Pd(PPh3 )4 (11.6 mg，10 μmol)，並密封小瓶且在120℃下振盪隔夜。添加乙酸乙酯(1 mL)及鹽水(500 μL)，且振盪混合物。分離有機層且用乙酸乙酯(1 mL)萃取水相。在氮氣流下濃縮合併之有機層且粗產物藉由製備型薄層層析法(用4:1乙酸乙酯/己烷溶離)純化。TLC板之頂部條帶視為3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(6.2 mg，14%) MS: (ESI, m/z): 427[M+H]+ 。下部條帶視為3-((1-甲基-6-(吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(8.1 mg，18.7%)，MS: (ESI, m/z): 427[M+H]+ 。 步驟4. N-羥基-3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺
在2 mL反應小瓶中裝入3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(6.2 mg，14 μmol)及THF/甲醇(3:1，200 µL)，並密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘且接著冷卻至室溫。添加羥胺(50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1 N NaOH水溶液(100 µL)。密封小瓶且接著在室溫下振盪16小時。在室溫下，在氮氣流下濃縮反應混合物，將其溶解於500 µL DMSO中，並在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters SunFire C18，5μm，19×150mm；移動相：A：含0.1%甲酸之水，B：含0.1%甲酸之CH3 CN；流動速率：23 mL/min；梯度：在5分鐘內0% B至5% B；偵測器254、220 nm。濃縮收集之溶離份，得到N-羥基-3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(1.3 mg，20.9%) MS: (ESI, m/z): 428[M+H]+ 。
以下化合物係根據N-羥基-3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備： 實例 36-1 . N-羥基-3-((5-苯基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺
在2 mL反應小瓶中裝入3-((5-溴-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲酸甲酯(0.2 M之1,4-二噁烷溶液，150 μL，30 μmol)、苯基硼酸(0.2 M之1,4-二噁烷溶液，275 μL，45 μmol)、磷酸三鉀(1 M之水溶液，120 μL，120 μmol)及Pd(PPh3 )4 (0.02 M之甲苯溶液，75 μL，1.5 μmol)。密封小瓶並在110℃下加熱隔夜。在N2 氣流下濃縮混合物。用乙酸乙酯(0.7 mL)及鹽水(0.5 mL)稀釋殘餘物，且振盪混合物。分離有機層且用乙酸乙酯(0.7 mL)萃取水相。在氮氣流下濃縮合併之有機層，且將THF/甲醇(3:1，200 µL)添加至殘餘物中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物。添加羥胺(50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1 N NaOH水溶液(100 µL)。密封小瓶且在室溫下振盪16小時，且接著在室溫下，在氮氣流下濃縮。將殘餘物溶解於500 µL DMSO中並在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters SunFire C18，5μm，19×150mm；移動相：A：含0.1%甲酸之水，B：含0.1%甲酸之CH3 CN；流動速率：23 mL/min；梯度：在5分鐘內0% B至5% B；偵測器254、220 nm。濃縮收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的N-羥基-3-((5-苯基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(2.6 mg，20.6%產率)。MS: (ESI, m/z): 413[M+H]+ 。
以下化合物係根據N-羥基-3-((1-甲基-5-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺所概述之程序製備： 實例 37-1 . N-((苯甲基胺甲醯基)氧基)-3-((5-苯基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺
在2 mL反應小瓶中裝入N-羥基-3-((5-苯基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(12.4 mg，30 μmol)、乙腈(600 μL)及1,1'-羰基二咪唑(6.3 mg，39 μmol)。在室溫下振盪混合物30分鐘且接著添加苯甲基胺(4.8 mg，45 μmol)。在室溫下振盪小瓶16小時且接著在氮氣流下濃縮。將殘餘物溶解於500 µL DMSO中並在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters SunFire C18，5μm，19×150mm；移動相：A：含0.1%甲酸之水，B：含0.1%甲酸之CH3 CN；流動速率：23 mL/min；梯度：在5分鐘內0% B至5% B；偵測器254、220 nm。濃縮收集之溶離份，得到呈灰白色固體狀的N-((苯甲基胺甲醯基)氧基)-3-((5-苯基-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)胺基)苯甲醯胺(4 mg，24%)。MS: (ESI, m/z): 546[M+H]+ 。
以下化合物係根據上述方案合成： 實例 38-1 . 活體外組蛋白去乙醯化酶檢定
使用時間分辨螢光(TRF)檢定形式進行探針結合HDAC11檢定。在Sf9昆蟲細胞(SignalChem, # H93-30G-1000)中由桿狀病毒表現重組N末端GST標籤全長人類HDAC11並純化。每一檢定係在1536孔黑色微量板(Corning, #3936)中含有50 mM HEPES (pH 7.5)、50mM KCl、50mM NaCl、0.5mM GSH (還原L-麩胱甘肽，Sigma #G4251)、0.03% BGG (0.22 µM經過濾，Sigma, #G7516-25G)及0.01% Triton X-100 (Sigma, #T9284-10L)之檢定緩衝液中進行，最終體積為8 µL。將100 nL於DMSO中之10點3倍連續稀釋液分別預分配至1536檢定板中之各別孔中，最終測試濃度範圍為25 µM至1.3 nM。在HDAC11及探針(螢光素標記之HDAC11抑制劑)之檢定中，最終濃度分別為2.5 nM及20 nM。將4 µL的2x探針及2x抗GST鋱(Cisbio, #61GSTXLB)添加至檢定板中，隨後添加4 µL之2x HDAC11。在室溫下，培育板16小時，隨後在Envision (在340 nm下激發及在485 nm及535 nm下發射，Perkin Elmer)上讀取時間分辨螢光度。
由HDAC11檢定得到之資料係基於以下等式，以相較於對照孔之抑制(inh)百分比報告：% inh = 1-((FLU - AveLow ) / (AveHigh - AveLow))，其中FLU =所量測之時間分辨螢光度。AveLow = 不含酶對照之平均時間分辨螢光度(n =32)。AveHigh = DMSO對照之平均時間分辨螢光度(n =32)。IC50值係藉由Activity Base套裝軟體中所包括之標準4參數邏輯斯蒂擬合算法(4 parameter logistic fitting algorithm)進行曲線擬合來測定：IDBS XE Designer Model205。資料係使用Levenburg Marquardt算法擬合。
如下表I-2中所述，「+++」指示IC50 低於0.5 µM；「++」指示IC50 在0.5 µM與1 µM之間；且「+」指示IC50 高於1 µM。表 I-2 ： 本發明化合物之IC50 範圍合成螺環化合物 實例 1-2 - 製備1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-1) 步驟 -1 ： 1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-4-甲酸甲酯
向1000-mL壓力罐反應器中放入4-溴-2,3-二氫-1H-茚-1-酮(30 g，142 mmol，1當量)、MeOH (450 mL)、Pd(dppf)Cl2 •CH2 Cl2 (25 g，0.1當量)及Et3 N (150 mL)。在100℃下，在50 MPa CO (g)氛圍下攪拌所得混合物24小時。在冷卻至室溫後，混合物經矽藻土墊過濾且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到17 g (63%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 191 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯
向用惰性氮氣淨化並維持惰性氮氣氛圍之500-mL 3頸圓底燒瓶中放入碳酸二甲酯(180 mL)及1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-4-甲酸甲酯(30 g，0.158 mol，1當量)。在室溫下，向此混合物中添加NaH (60%於油中之分散液，12.6 g，0.316 mol，2當量)。在80℃下攪拌所得溶液2小時。藉由添加40 mL水淬滅反應並用3 × 200 mL EtOAc萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到8 g呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 249 [M+H]+ 。步驟 -3 ： 2-(氰基甲基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯
向500-mL 3頸圓底燒瓶中放入1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯(7 g，28.2 mmol，1當量)、Et3 N (15 g，148 mmol，5當量)、2-溴乙腈(10 g，83 mmol，3當量)及THF (200 mL)。在室溫下攪拌所得溶液16小時且接著真空濃縮。用250 mL水稀釋殘餘物並用3 × 100 mL EtOAc萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥並真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到5 g (62%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 288 [M+H]+ 。步驟 -4 ： 2-(2-胺基乙基)-1-羥基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯乙酸鹽
向配備有H2 (g)球之250-mL圓底燒瓶中放入2-(氰基甲基)-1-側氧基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯(3 g，10.44 mmol，1當量)於MeOH (100 mL)中之溶液、AcOH (60 mL)及PtO2 (1.28 g)。在H2 (g)氛圍下，在室溫下攪拌所得溶液16小時。過濾所得混合物。真空濃縮濾液，得到3.7 g (粗品)呈黃色油狀的標題化合物，不經進一步純化即使用。MS: (ES,m/z ): 294 [M+H]+ 。步驟 -5 ： 1-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放入2-(2-胺基乙基)-1-羥基-2,3-二氫-1H-茚-2,4-二甲酸二甲酯乙酸鹽(3.7 g，10.48 mmol，1當量)於MeOH (60 mL)中之溶液及NH3 之MeOH溶液(40 mL)。在室溫下攪拌所得溶液4小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到1.3 g (48%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 262 [M+H]+ 。步驟 -6 ： 2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放入1-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(1.3 g，4.98 mmol，1當量)、三乙基矽烷(10 mL)及TFA (60 mL)。在室溫下攪拌所得溶液48小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到700 mg (57%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.76-7.73 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.47-7.45 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.32-7.27 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.39-3.12 (m, 5H), 2.92-2.87 (d,J = 16.2 Hz, 1H), 2.03-1.90 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 246 [M+H]+ 。步驟 -7 ： 1'-(4-氯苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸
向50-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(60 mg，0.24 mmol，1當量)於DMF (3 mL)中之溶液，並在室溫下添加NaH (60%於油中之分散液，30 mg，0.75 mmol，3.12當量)。在室溫下攪拌混合物20分鐘且添加1-(溴甲基)-4-氯苯(48 mg，0.23 mmol，0.95當量)。在室溫下攪拌所得溶液3小時。接著藉由添加0.5 mL水淬滅反應。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度在25分鐘內：5% B至70% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到50 mg (57%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 356 [M+H]+ 。步驟 -8 ： 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-[(4-氯苯基)甲基]-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸(50 mg，0.14 mmol，1當量)於DMF (3 mL)中之溶液、氯甲酸異丙酯(17 mg，0.14 mmol，1當量)及NMM (14 mg，0.14 mmol，0.98當量)。攪拌混合物1小時並添加NH2 OH•HCl (30 mg，0.43 mmol，3.1當量)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：X Bridge C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在10分鐘內30% B至70% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到16 mg (28%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91 (s, 1H), 7.46-7.42 (m, 2H), 7.34-7.31 (m, 2H), 7.28-7.20 (m, 3H), 4.47-4.39 (m, 2H), 3.36-2.87 (m, 6H), 2.07-1.94 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 371 [M+H]+ 。
表1-2：以下化合物係根據實例1-2之方法，利用以下修改製備：在步驟7中，所用鹵化物係碘甲烷。 實例 2-2 - 製備(R)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺及(S)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-3及HDTK054) 步驟 -1 ： 1'-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(300 mg，1.22 mmol，1當量)於THF (10 mL)中之溶液。接著在0℃下經15分鐘添加NaH (60%於油中之分散液，100 mg，2.50 mmol，2當量)，隨後添加4-(溴甲基)-1-氯-2-(三氟甲基)苯(655 mg，2.40 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液3小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(2:1)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到300 mg (56%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 438 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 對掌性分離(R)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯及(S)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
在以下條件下藉由製備型SFC分離1'-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯之外消旋物：管柱：Chiralpak IA 2×25 cm，5 μm；移動相A：CO2 ，70%，移動相B：MeOH，30%；流動速率：40 mL/min；偵測器：UV 220 nm。收集第一溶離異構體(Rt 4.87 min)並真空濃縮，得到110 mg (56%產率)白色固體，將其指定為1'-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯之R異構體。MS: (ES,m/z ): 438 [M+H]+ 。收集第二溶離異構體(Rt 6.24 min)並真空濃縮，得到120 mg (61%產率)白色固體，將其指定為1'-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯之S異構體。MS: (ES,m/z ): 438 [M+H]+ 。步驟 -3 ： (R)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入如上文所述的來自步驟2之第一溶離異構體(其指定為(R)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯) (110 mg，0.25 mmol，1當量)於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之溶液、NH2 OH (50%於H2 O中，2 mL，30.21 mmol，120當量)及1N NaOH水溶液(0.50 mL，0.50 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液16小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在8分鐘內5% B至80% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到48 mg (44%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91 (br s, 1H), 8.97 (br s, 1H), 7.74 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 7.55 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.33-7.32 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 4.58-4.48 (m, 2H), 3.37-3.25 (m, 3H), 3.18-3.08 (m, 2H), 2.92 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.98 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。MS: (ES,m/z ): 439 [M+H]+ 。對掌性HPLC (管柱：Chiralpak AS-3，0.46×5 cm，3 μm；移動相A：己烷/0.5% TFA，移動相B：EtOH；流動速率：1 mL/min；梯度：20% B，保持8分鐘；偵測器：UV 254 nm)：Rt 2.25 min；＞99%。步驟 -4 ： (S)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
遵循步驟3之程序，使用如上文所述的來自步驟2之第二溶離異構體(其指定為(S)-1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯) (120 mg，0.27 mmol，1當量)，得到51.3 mg (43%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91 (br s, 1H), 8.97 (br s, 1H), 7.75 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 7.55 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.33-7.32 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 4.58-4.48 (m, 2H), 3.37-3.25 (m, 3H), 3.20-3.06 (m, 2H), 2.92 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 1.98 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。MS: (ES,m/z ): 439 [M+H]+ 。對掌性HPLC：Rt 3.94 min；＞ 99%。實例 3-2 - 製備1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-5) 步驟 -1 ： 1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.20 mmol，1當量)於THF (5 mL)中之溶液。接著，在室溫下添加NaH (60%於油中之分散液，10 mg，0.25 mmol，1.25當量)。攪拌15分鐘之後，添加4-(溴甲基)-2-氟-1-(三氟甲基)苯(60 mg，0.23 mmol，1.2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:1)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到48 mg (56%產率)呈無色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 422 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(3-氟-4-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(43 mg，0.10 mmol，1當量)、THF/MeOH (1:1，3 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，0.2 mL)及NaOH水溶液(8 mg，0.2 mL)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在15分鐘內10% B至80% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到10.2 mg (24%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91(s, 1H), 9.00(br s, 1H), 7.91(t,J = 7.6Hz, 2H), 7.42-7.20(m, 5H), 4.55(s, 2H), 3.47-3.28(m, 4H), 3.20(d,J = 16Hz, 1H), 3.10(d,J = 16Hz, 1H), 2.94(d,J = 16Hz, 1H), 2.01(t,J = 8.4Hz, 2H)。MS: (ES,m/z ): 423 [M+H]+ 。
表2-2：以下化合物係根據實例3-2之方法，利用以下修改製備：在 步驟2中，溶劑系統可以為MeOH或1:1之THF/MeOH混合物。 實例 4-2 - 製備1'-環丙基-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-9) 步驟 -1 ： 1'-環丙基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.20 mmol，1當量)、環丙基硼酸(150 mg，1.75 mmol，10當量)、Cu(OAc)2 (100 mg，0.55 mmol，2.7當量)、Et3 N (150 mg，1.48 mmol，7.27當量)、吡啶(75 mg，0.95 mmol，4.65當量)及THF (10 mL)。在60℃下攪拌所得溶液48小時。濾出固體且真空濃縮濾液。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，用EtOAc/石油醚(1:1)純化。濃縮收集之溶離份，得到38 mg (65%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 286 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-環丙基-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-環丙基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(38 mg，0.13 mmol，1當量)於THF/MeOH (4:1，3 mL)中之溶液、NH2 OH (50%於H2 O中，0.2 mL，3.03 mmol，23當量)及1N NaOH水溶液(0.27 mL，0.27 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：SunFire Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在10分鐘內5% B至48% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到2.8 mg (7%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.90 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 7.32 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.22 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 3.29-3.22 (m, 3H), 3.14 (d,J = 16 Hz, 1H), 3.02 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.84 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.74-2.70 (m, 1H), 1.90 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 0.69-0.67 (m, 4H). .MS: (ES,m/z ): 287 [M+H]+ 。實例 5-2 - 製備1'-(環丁基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-10) 步驟 -1 ： 1'-(環丁基甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸環丁基甲酯
向10-mL小瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(80 mg，0.33 mmol，1當量)、(溴甲基)環丁烷(480 mg，3.22 mmol，10當量)、NaOt Bu (80 mg，0.71 mmol，2.16當量)及DMF (3 mL)。在微波反應器中，在100℃下將反應混合物加熱1小時。冷卻後，濾出固體。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度：在35分鐘內5% B至95% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到40 mg (33%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 368 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(環丁基甲基)-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(環丁基甲基)-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸環丁基甲酯(40 mg，0.11 mmol，1當量)於THF/MeOH (4:1，3 mL)中之溶液、NH2 OH (50%於H2 O中，0.72 mL，10.9 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.44 mL，0.44 mmol，4當量)。在室溫下攪拌所得溶液10小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：SunFire Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在10分鐘內5% B至85% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到3.0 mg (8%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.90 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 3.31-3.25 (m, 4H), 3.14 (d,J = 16 Hz, 1H), 3.02 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.85 (d,J = 16 Hz, 1H), 2.52-2.50 (m, 1H), 2.03-1.81 (m, 7H),1.73-1.61 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 315 [M+H]+ 。實例 6-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-11) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(100 mg，0.41 mmol，1當量)、1-碘-4-(三氟甲基)苯(100 mg，0.37 mmol，1.2當量)、甲基[2-(甲基胺基)乙基]胺(40 mg，0.45 mmol，0.4當量)、CuI (40 mg，0.21 mmol，0.2當量)、Cs2 CO3 (400 mg，1.23 mmol，3當量)及DMSO (15 mL)。在130℃下攪拌所得溶液12小時。冷卻後，將10 mL H2 O添加至溶液中。用20 mL EtOAc萃取所得溶液，經Na2 SO4 乾燥，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，用EtOAc/石油醚(1:10)純化。濃縮收集之溶離份，得到70 mg (44%產率)呈黃色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 390 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.13 mmol，1當量)於THF (10 mL)中之溶液及NaOH (40 mg，1.00 mmol，7.6當量)。在70℃下攪拌所得溶液18小時。用1N HCl將溶液之pH值調至4。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度：在10分鐘內25% B至50% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到20 mg (41%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 376 [M+H]+ 。步驟 -3 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸(50 mg，0.13 mmol，1當量)於DMA (3 mL)中之溶液、NMM (10 mg，0.10 mmol，1當量)、氯甲酸異丙酯(10 mg，0.08 mmol，0.8當量)及NH2 OH•HCl (100 mg，1.45 mmol，14.5當量)。在25℃下攪拌所得溶液12小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在8分鐘內5% B至60% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到16 mg (32%產率)呈淺黃色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91 (br s, 1H), 9.01 (br s, 1H), 7.97 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.77 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.37-7.34 (m, 2H), 7.28-7.23 (m, 1H), 3.93 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.44 (d,J = 16.1 Hz, 1H), 3.33-3.19 (m, 2H), 3.05 (d,J = 16.1 Hz, 1H), 2.15 (t,J = 6.4 Hz, 2H)。MS: (ES,m/z ): 391 [M+H]+ 。實例 7-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-12) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(200 mg，0.82 mmol，1當量)、1-碘-3-(三氟甲基)苯(200 mg，0.74 mmol，1.2當量)、CuI (40 mg，0.21 mmol，0.2當量)、甲基[2-(甲基胺基)乙基]胺(40 mg，0.45 mmol，0.4當量)、Cs2 CO3 (400 mg，1.23 mmol，3當量)及DMSO (5 mL)。在130℃下攪拌所得溶液24小時。冷卻後，將10 mL H2 O添加至溶液中。用15 mL EtOAc萃取所得溶液，經無水Na2 SO4 乾燥，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，用EtOAc/石油醚(1:1)純化。濃縮收集之溶離份，得到80 mg (25%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 390 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(66 mg，0.17 mmol，1當量)於THF/MeOH (4:1，4 mL)中之溶液、NH2 OH (50%於H2 O中，1.12 mL，17 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.34 mL，0.34 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液24小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在8分鐘內18% B至76% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到24.2 mg (37%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.93 (br s, 1H), 9.00 (br s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.89 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.36-7.34 (m, 2H), 7.27-7.24 (m, 1H), 3.98-3.90 (m, 2H), 3.41 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 3.30-3.19 (m, 2H), 3.04 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 2.15 (t,J = 6.8 Hz, 2H)。MS: (ES,m/z ): 391 [M+H]+ 。
表3-2：以下化合物係根據實例7-2之方法製備。 實例 8-2 - 製備1'-苯甲基-N-羥基-2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-14)
用等莫耳量之NaH (60%於油中之分散液，54 mg)使2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯之DMA溶液(0.2M，331 mg，1.35 mmol)去質子化。在2打蘭小瓶中，將該溶液(150 µL，30 µmol，1當量)添加至苯甲基溴之溶液(0.2M之CH3 CN溶液，300 µL，60 µmol，2當量)中。整份添加呈固體形式之NaI (18 mg，120 µmol，4當量)。密封小瓶且在50℃下振盪24小時，接著在N2 (g)氣流下移除溶劑。用鹽水(500 µL)稀釋殘餘物並用EtOAc (2 × 500 µL)萃取。在N2 (g)氣流下乾燥合併之有機層。將THF/MeOH (3:1，200 µL)添加至殘餘物中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物，接著冷卻至室溫。添加NH2 OH (50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1N NaOH水溶液(100 µL)。密封混合物且接著在室溫下振盪18小時。在室溫下，在N2 (g)氣流下濃縮反應混合物，接著溶解於500 µL DMSO中且使用以下條件藉由質量觸發之製備型HPLC純化：管柱：Waters Sunfire C18，19×50 mm，5 µm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN/0.1%甲酸；梯度：在6分鐘內15% B升至100% B；流動速率：23 mL/min；偵測器：UV 254nm，220 nm。合併含產物之溶離份並真空濃縮，得到2.0 mg (20%產率)標題化合物。MS: (ES,m/z ): 337 [M+H]+ 。
表4-2：以下化合物係根據實例8-2之平行合成方法製備。 實例 9-2 - 製備N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-56) 步驟 -1 ： 2'-硫基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(1.5 g，6.12 mmol，1當量)、2,4-雙(4-甲氧基苯基)-2,4-二硫基-1,3,2,4-二硫雜磷雜環丁烷(Lawesson試劑) (2.37 g，5.87 mmol，0.96當量)及THF (15 mL)。在室溫下攪拌所得溶液12小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，用EtOAc/石油醚(1:3)純化。濃縮收集之溶離份，得到600 mg (38%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 262 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放入2'-硫基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(600 mg，2.30 mmol，1當量)、NiCl2 •6H2 O (1.9 g，7.98 mmol，3.5當量)、MeOH (30 mL)及THF (20 mL)。接著，在0℃下分數份添加NaBH4 (400 mg，10.57 mmol，4.66當量)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。濾出固體且真空濃縮濾液。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。濃縮收集之溶離份，得到400 mg (75%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 232 [M+H]+ 。步驟 -3 ： 1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入1-(溴甲基)-4-(三氟甲基)苯(81 mg，0.34 mmol，1.1當量)、1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(69 mg，0.30 mmol，1當量)、THF (10 mL)及一滴DMF。之後添加NaH (30 mg，1.25 mmol，2.1當量)。在室溫下攪拌所得溶液12小時。真空濃縮所得混合物。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:1)純化。濃縮收集之溶離份，得到20 mg (17%產率)呈無色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 390 [M+H]+ 。步驟 -4 ： N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入於THF/MeOH (4:1，2 mL)中之1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(20 mg，0.05 mmol，1當量)、NH2 OH (50%於H2 O中，0.1 mL，1.52 mmol，30當量)及1N NaOH水溶液(0.1 mL，0.1 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：Gemini-NX C18 110A，AXIA Packed 150×21.2 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在12分鐘內10% B至42% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。將1N HCl水溶液(0.05 mL)添加至收集之溶離份中並凍乾，得到3 mg (15%產率)白色固體狀的呈鹽酸鹽形式之標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.92 (br s, 1H), 9.01 (br s, 1H), 7.88-7.83 (m, 4H), 7.24-7.05 (m, 3H), 4.58-4.45 (m, 2H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.44-3.14 (m, 4H), 3.14-2.90 (m, 2H), 2.14-2.00 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H)。MS: (ES,m/z ): 391 [M-HCl+H]+ 。實例 10-2 - 製備1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-57) 步驟 -1 ： 1'-環丙基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(180 mg，0.78 mmol，1當量)於CH2 Cl2 (5 mL)中之溶液、(1-乙氧基環丙氧基)三甲基矽烷(720 mg，4.13 mmol，5.3當量)、AcOH (416 mg，6.93 mmol，8.9當量)及NaBH3 CN (224 mg，3.56 mmol，4.6當量)。在40℃下攪拌所得溶液隔夜。將反應混合物冷卻至室溫並真空濃縮。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度：在30分鐘內5% B至65% B。凍乾收集之溶離份，得到60 mg (28%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 272 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-環丙基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸酯(60 mg，0.22 mmol，1當量)於THF/MeOH (4:1，3 mL)中之溶液、NH2 OH (50%於H2 O中，1.40 mL，21 mmol，96當量)及1N NaOH水溶液(0.44 mL，0.44 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液4小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：X Bridge C18，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在10分鐘內30% B至70% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到1.4 mg (2%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.80 (br s, 1H), 8.95 (br s, 1H), 7.27-7.23 (m, 2H), 7.16-7.12 (m, 1H), 3.07-2.79 (m, 4H), 2.73-2.70 (m, 2H), 2.65-2.57 (m, 2H), 1.75-1.65 (m, 3H), 0.35-0.25 (m, 4H)。MS: (ES,m/z ): 273 [M+H]+ 。實例 11-2 - 製備N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-58) 步驟 -1 ： 1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(30 mg，0.13 mmol，1當量)於CH2 Cl2 (5 mL)中之溶液及吡啶(60 mg，0.76 mmol，5.85當量)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，且接著添加4-(三氟甲基)苯甲醯氯(45 mg，0.22 mmol，1.66當量)。在室溫下攪拌所得溶液1小時，接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:2)純化。濃縮收集之溶離份，得到30 mg (57%產率)呈無色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 404 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸
向50-mL圓底燒瓶中放入1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(30 mg，0.07 mmol，1當量)、1N NaOH水溶液(0.2 mL，0.2 mmol，2.8當量)及THF (3 mL)。在80℃下攪拌所得溶液隔夜。將反應混合物冷卻至室溫。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18, 40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度：在35分鐘內5% B至95% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到25 mg (86%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 390 [M+H]+ 。步驟 -3 ： N-羥基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(4-(三氟甲基)苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸(25 mg，0.06 mmol，1當量)於DMF (3 mL)中之溶液、氯甲酸異丙酯(11 mg，0.10 mmol，1.54當量)及NMM (10 mg，0.10 mmol，1.54當量)。在室溫下攪拌混合物5分鐘且接著添加NH2 OH•HCl (6 mg，0.1 mmol，1.54當量)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：X Bridge RP，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在9分鐘內12% B至34% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到4 mg (15%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91-10.83 (m, 1H), 9.11 (br s, 1H), 7.83-7.71 (m, 4H), 7.35-7.14 (m, 3H), 3.65-3.61 (m, 1H), 3.52-3.49 (m, 2H), 3.38-3.32 (m, 1H), 3.16-2.87 (m, 4H), 1.97-1.86 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 405 [M+H]+ 。實例 12-2 - 製備1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺(II-59) 步驟 -1 ： 1'-乙醯基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(70 mg，0.30 mmol，1當量)於CH2 Cl2 (3 mL)中之溶液及吡啶(240 mg，3.03 mmol，10當量)。在室溫下攪拌該溶液20分鐘且接著添加乙醯氯(35 mg，0.45 mmol，1.47當量)。在室溫下攪拌所得溶液1小時且接著真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:10)純化。濃縮收集之溶離份，得到50 mg (60%產率)呈無色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 274 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入於THF/MeOH (4:1，4 mL)中之1'-乙醯基-1,3-二氫螺[茚-2,3'-吡咯啶]-4-甲酸甲酯(40 mg，0.15 mmol，1當量)、NH2 OH (50%於H2 O中，0.93 mL，14.07 mmol，96當量)及1N NaOH水溶液(0.29 mL，0.29 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：X Bridge RP，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05%甲酸，移動相B：CH3 CN；流動速率：20 mL/min；梯度：在9分鐘內12% B至34% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到2.2 mg (5%產率)呈褐色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.86 (br s, 1H), 7.38-7.17 (m, 3H), 3.56-3.52 (m, 1H), 3.41-3.38 (m, 2H), 3.36 (s, 1H), 3.14-3.00 (m, 2H), 2.91-2.85 (m, 2H), 1.95-1.82 (m, 5H)。MS: (ES,m/z ): 275 [M+H]+ 。實例 13-2 - 製備1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-60) 步驟 -1 ： 2,2'-(苯甲基氮烷二基)二乙醇
向500-mL圓底燒瓶中放入2,2'-氮烷二基二乙醇(10 g，95 mmol，1當量)、MeCN (140 mL)、(溴甲基)苯(12 mL)及K2 CO3 (26.7 g，193 mmol，2當量)。在85℃下攪拌所得溶液隔夜。冷卻反應混合物。濾出固體且真空濃縮濾液。用60 mL水稀釋殘餘物。用3×60 mL CH2 Cl2 萃取所得溶液。合併之有機層用2×60 mL水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到7.53 g (41%產率)呈黃色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 196 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N-苯甲基-2-溴-N-(2-溴乙基)乙胺
在0℃下，向500-mL圓底燒瓶中放入2,2'-(苯甲基氮烷二基)二乙醇(11.3 g，57.9 mmol，1當量)及CH2 Cl2 (100 mL)。之後逐滴添加三溴化磷(34.6 g，128 mmol，2.2當量)。在室溫下攪拌所得溶液8小時。接著藉由添加80 mL冰-水淬滅反應。用飽和Na2 CO3 水溶液將溶液之pH值調至7。用3×80 mL CH2 Cl2 萃取所得溶液。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用CH2 Cl2 /石油醚(1:3)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到3.3 g (18%產率)呈黃色油狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 7.34-7.27 (m, 5H), 3.73 (s, 2H), 3.43 (t,J = 7.2 Hz, 4H), 2.98 (t,J = 7.2 Hz, 1H)。步驟 -3 ： 1'-苯甲基-4-溴螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮
向500-mL 3頸圓底燒瓶中放入4-溴-2,3-二氫-1H-茚-1-酮(7.23 g，34.3 mmol，1當量)、DMF (70 mL)及N-苯甲基-2-溴-N-(2-溴乙基)乙胺(16.5 g，53.8 mmol，1.57當量)。之後在0℃下分數份添加NaH (60%於油中之分散液，5.72 g，143 mmol，4.17當量)。在0℃下攪拌所得溶液1小時。藉由添加80 mL冰-水淬滅反應混合物且用2×100 mL EtOAc萃取所得溶液。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:5)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到4.87 g (38%產率)呈褐色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 370 [M+H]+ 。步驟 -4 ： 1'-苯甲基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向30-mL壓力罐反應器(40 atm)中放入1'-苯甲基-4-溴螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.15 g，3.1 mmol，1當量)、MeOH (15 mL)、Pd(dppf)Cl2 (575 mg，0.79 mmol，0.25當量)及Et3 N (5 mL)。將CO (g)引入反應器中且在100℃下攪拌所得溶液2天。冷卻反應混合物。濾出固體且真空濃縮濾液。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:1)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到518 mg (48%產率)呈褐色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 350 [M+H]+ 。步驟 -5 ： 1'-苯甲基-1-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向500-mL圓底燒瓶中放入1'-苯甲基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(2.16 g，6.2 mmol，1當量)及MeOH (70 mL)。之後在0℃下分數份添加NaBH4 (707 mg，18.7 mmol，3當量)。在0℃下攪拌所得溶液4小時。真空濃縮所得混合物。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到1.85 g (85%產率)呈褐色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 352 [M+H]+ 。步驟 -6 ： 1'-苯甲基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放入1'-苯甲基-1-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(1.6 g，4.5 mmol，1當量)、TFA (60 mL)及三乙基矽烷(15 mL)。在室溫下攪拌所得溶液3天。真空濃縮所得混合物。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到1.84 g (粗品)呈黃色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 336 [M+H]+ 。步驟 -7 ： 1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯乙酸鹽
向30-mL壓力罐反應器(60 atm)中放入1'-苯甲基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(1.58 g，粗品)、AcOH (15 mL)及Pd(OH)2 /碳(Pearlman催化劑) (20 wt.%，960 mg)。將H2 (g)引入反應器中且在室溫下攪拌所得溶液2天。濾出固體且真空濃縮濾液，得到0.9 g (經兩個步驟82%產率)黃色固體狀的呈乙酸鹽形式之標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 9.38 (br s, 2H), 7.86-7.84 (m, 1H), 7.39-7.36 (m, 1H), 7.26-7.23 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.27-3.14 (m, 6H), 2.91-2.83 (m, 2H), 1.92-1.90 (m, 4H)。MS: (ES,m/z ): 246 [M+H]+ 。步驟 -8 ： 1'-乙醯基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯乙酸鹽(40 mg，0.13 mmol，1當量)、CH2 Cl2 (3 mL)、吡啶(64.5 mg，0.82 mmol，6.3當量)及乙醯氯(28 mg，0.36 mmol，2.8當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。真空濃縮所得混合物。殘餘物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，40 g，20-35 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；流動速率：40 mL/min；梯度：在25分鐘內5% B至50% B；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到25.7 mg (68%產率)呈無色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 288 [M+H]+ 。步驟 -9 ：1'-乙醯基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-乙醯基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(25.7 mg，0.09 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，591 mg，8.95 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.18 mL，0.18 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液7小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05%甲酸，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到9 mg (35%產率)呈淺褐色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91-10.83 (m, 1H), 7.32-7.21 (m, 2H), 7.21-7.15 (m, 1H), 3.61-3.37 (m, 4H), 3.02-2.93 (m, 2H), 2.85-2.79 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.57-1.50 (m, 2H), 1.49-1.38 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 289 [M+H]+ 。實例 14-2 - 製備1'-(4-氯苯甲醯基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-61) 步驟 -1 ： 1'-(4-氯苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入4-氯苯甲酸(95.5 mg，0.61 mmol，1.85當量)、DMF (3 mL)、EDC (130.7 mg，0.84 mmol，2.55當量)、HOBt (55.2 mg，0.41 mmol，1.24當量)、Et3 N (136.3 mg，1.35 mmol，4.09當量)及1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯乙酸鹽(100 mg，0.33 mmol，1當量)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。用10 mL水稀釋所得溶液並用3×10 mL EtOAc萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:5)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到58.2 mg (46%產率)呈黃色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 384 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(4-氯苯甲醯基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(4-氯苯甲醯基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(58.2 mg，0.15 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，1003 mg，15 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.3 mL，0.30 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液5小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到17.3 mg (30%產率)呈粉色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91-10.81 (m, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.30-7.18 (m, 3H), 3.79-3.51 (m, 2H), 3.41-3.25 (m, 2H), 2.99 (s, 2H), 2.84 (s, 2H), 1.69-1.42 (m, 4H)。MS: (ES,m/z ): 385 [M+H]+ 。實例 15-2 - 製備1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-62) 步驟 -1 ： 1'-(4-氯苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向25-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯乙酸鹽(100 mg，0.33 mmol，1當量)、CH2 Cl2 (3 mL)及4-氯苯甲醛(60 mg，0.43 mmol，1.3當量)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。接著，添加NaBH(OAc)3 (129.8 mg，0.61 mmol，1.85當量)。在攪拌下，使所得溶液在室溫下反應隔夜。接著用20 mL水淬滅反應混合物並用3 ×20 mL CH2 Cl2 萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:5)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到60 mg (50%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 370 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(4-氯苯甲基)-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(4-氯苯甲基)-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(60 mg，0.16 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，1073 mg，16 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.8 mL，0.8 mmol，5當量)。在室溫下攪拌所得溶液8小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm。凍乾收集之溶離份，得到13.5 mg (20%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.91-10.88 (d,J = 12 Hz, 1H), 10.44-10.38 (m, 1H), 9.05-8.69 (m, 1H), 7.68-7.62 (m, 2H), 7.56-7.52 (m, 2H), 7.32-7.25 (m, 2H), 7.21-7.17 (m, 1H), 4.34-4.29 (m, 2H), 3.25-3.17 (m, 2H), 3.12-3.00 (m, 3H), 2.93 (d,J = 12 Hz, 2H), 2.78 (s, 1H), 1.93-1.84 (m, 2H), 1.78-1.66 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 371 [M+H]+ 。實例 16-2 - 製備1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-63) 步驟 -1 ： 1'-環丙基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯
向8-mL圓底燒瓶中放入1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯乙酸鹽(100 mg，0.33 mmol，1當量)、(1-乙氧基環丙氧基)三甲基矽烷(430 mg，2.47 mmol，7.48當量)、CH2 Cl2 (5 mL)及AcOH (240 mg，4.00 mmol，12.12當量)。在室溫下攪拌所得溶液30分鐘。接著，添加NaBH3 CN (130 mg，2.07 mmol，6.27當量)。在攪拌下，使所得溶液在40℃下反應隔夜。接著將反應混合物冷卻至室溫，用20 mL水稀釋，並用3 ×20 mL CH2 Cl2 萃取。合併之有機層用無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用MeOH/CH2 Cl2 (1:5)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到50 mg (粗品)呈黃色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 286 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-環丙基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺
向100-mL圓底燒瓶中放入1'-環丙基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(66 mg，0.23 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，1.53 g，23 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.46 mL，0.46 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×250 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；梯度：在9分鐘內5% B至23% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。真空濃縮收集之溶離份，得到12.2 mg (18%產率)呈無色油狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.88 (br s, 1H), 10.32 (m, 1H), 7.37-7.11 (m, 3H), 3.38-3.26 (m, 2H), 3.24-3.22 (m, 2H), 3.08 (s, 1H), 2.98-2.76 (m, 4H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.72-1.67 (m, 2 H), 1.10 (s, 2 H), 0.77 (s 2H)。MS: (ES,m/z ): 287 [M+H]+ 。實例 17-2 - 製備1'-苯甲基-N-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-64)
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-苯甲基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.15 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，985 mg，15 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.3 mL，0.30 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液8.5小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm，220 nm。真空濃縮收集之溶離份，得到6.4 mg (12%產率)呈粉色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.88-10.87 (m, 1H), 10.36-10.29 (m, 1H), 9.15-8.82 (m, 1H), 7.63-7.58 (m, 2H), 7.47 (s, 3H), 7.32-7.24 (m, 2H), 7.22-7.18 (m, 1H), 4.35-4.31 (m, 2H), 3.22-3.19 (m, 2H), 3.12-3.02 (m, 3H), 2.94-2.91 (m, 2H), 2.78 (s, 1H), 1.94-1.88 (m, 2H), 1.75-1.70 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 337 [M+H]+ 。實例 18-2 - 製備1'-苯甲基-N-羥基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-65)
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-苯甲基-1-側氧基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.14 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，946 mg，14 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.29 mL，0.29 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% TFA，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm。真空濃縮收集之溶離份，得到3.6 mg (7%產率)呈粉色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 11.19 (s, 1H), 10.02 (br s, 1H), 9.18 (s, 1H), 7.86-7.63 (m, 2H), 7.58-7.48 (m, 6H), 4.39 (s, 2H), 3.39-3.34 (m, 4H), 3.20-3.11 (m, 2H), 2.11-1.95 (m, 2H), 1.66-1.63 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 351 [M+H]+ 。實例 19-2 - 製備1'-苯甲基-N,1-二羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲醯胺(II-66)
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-苯甲基-1-羥基-1,3-二氫螺[茚-2,4'-哌啶]-4-甲酸甲酯(50 mg，0.14 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，2 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，940 mg，14 mmol，100當量)及1N NaOH水溶液(0.28 mL，0.28 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液4小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；偵測器：UV 254 nm，220 nm。真空濃縮收集之溶離份，得到14.5 mg (26%產率)呈粉色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.95 (s, 1H), 10.42-10.01 (m, 1H), 8.99 (s, 1H), 7.63-7.09 (m, 8H), 5.65-5.44 (m, 1H), 4.83-4.59 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.29-2.73 (m, 6H), 2.11-1.22 (m, 4H)。MS: (ES,m/z ): 353 [M+H]+ 。實例 20-2 - 製備1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-67) 步驟 -1 ： 1-溴-2,3-雙(溴甲基)苯
向250-mL 3頸圓底燒瓶中放入1-溴-2,3-二甲基苯(10 g，54 mmol，1當量)、四氯化碳(60 mL)、N-溴代琥珀醯亞胺(38 g，213.5 mmol，3.95當量)、AIBN (253 mg，1.54 mmol，0.03當量)。在油浴中，在85℃下攪拌所得溶液15小時。將反應混合物冷卻至室溫。濾出固體且用2×200 mL水及200 mL鹽水洗滌濾液，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮，得到22 g (粗品)呈褐色油狀的標題化合物。GCMS: (ES,m/z ): 340。步驟 -2 ： 5-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-甲酸甲酯及8-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-甲酸甲酯之混合物
向用惰性氮氣淨化並維持惰性氮氣氛圍的500-mL圓底燒瓶中放入1-溴-2,3-雙(溴甲基)苯(22 g，64 mmol，1當量)、DMF (100 mL)、丙-2-烯酸甲酯(27.5 g，319 mmol，5當量)及碘化鈉(38.4 g，256 mmol，4當量)。在油浴中，在90℃下攪拌所得溶液18小時。將反應混合物冷卻至室溫且接著藉由添加100 mL水淬滅。藉由添加5% Na2 S2 O3 水溶液使所得溶液脫色並用3×150 mL EtOAc萃取。合併之有機層用200 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:20)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到10.5 g (61%產率)呈淺褐色油狀的標題化合物。GCMS: (ES,m/z ): 268。步驟 -3 ： 5,6,7,8-四氫萘-1,6-二甲酸二甲酯及5,6,7,8-四氫萘-1,7-二甲酸二甲酯之混合物
向50-mL壓力罐反應器(60 atm)中放入5-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-甲酸甲酯及8-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-甲酸甲酯之混合物(6.95 g，25.84 mmol，1當量)、MeOH (20 mL)、Pd(dppf)Cl2 (2.30 g，3.14 mmol，0.12當量)及Et3 N (10.44 g，103.17 mmol，4.00當量)。引入CO (g)且在120℃下攪拌所得溶液24小時。將所得混合物冷卻至室溫並真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:10)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到3.14 g (49%產率)呈淺綠色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 249 [M+H]+ 。步驟 -4 ： 6-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫萘-1,6-二甲酸二甲酯及7-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫萘-1,7-二甲酸二甲酯之混合物
向用惰性氮氣淨化並維持惰性氮氣氛圍的250-mL 3頸圓底燒瓶中放入於THF (25 mL)中之5,6,7,8-四氫萘-1,6-二甲酸二甲酯及5,6,7,8-四氫萘-1,7-二甲酸二甲酯之混合物(3.14 g，12.66 mmol，1當量)。之後在攪拌下，在-78℃下逐滴添加二異丙基胺基鋰溶液(2M之THF溶液，12.6 mL，25.32 mmol，2當量)且接著在-78℃下攪拌混合物1小時。在攪拌下，在-78℃下向其中逐滴添加2-溴乙腈(4.56 g，38.02 mmol，3當量)。在-78℃下攪拌所得溶液3小時。接著藉由添加5 mL飽和NH4 Cl水溶液淬滅反應混合物且緩慢升溫至室溫。將所得混合物倒入50 mL水中並用3×50 mL EtOAc萃取。合併之有機層用100 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:5)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到2.22 g (61%產率)呈褐色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 288 [M+H]+ 。步驟 -5 ： 2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲酸甲酯及2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放入6-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫萘-1,6-二甲酸二甲酯及7-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫萘-1,7-二甲酸二甲酯之混合物(2.22 g，7.74 mmol，1當量)、MeOH (60 mL)、AcOH (14 mL)及PtO2 (2 g，8.81 mmol，1.14當量)。引入H2 (g)且在室溫下攪拌所得溶液3.5小時。濾出固體且真空濃縮濾液。將殘餘物溶解於20 mL NH3 溶液(7M之MeOH溶液)中且在室溫下攪拌18小時。真空濃縮所得混合物。粗產物在以下條件下藉由逆相層析法純化：管柱：C18，120 g，20-45 μm，100Å；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；梯度：在50分鐘內15% B至45% B；偵測器：UV 254 nm。收集第一溶離異構體並真空濃縮，得到100 mg (7%產率)呈白色固體狀的標題化合物2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲酸甲酯。結構命名係基於 NOESY、HSQC及HMBC NMR實驗：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.68 (s, 1H,NH ), 7.61 (d, 1H,CH2 ), 7.32 (d, 1H,CH4 ), 7.22 (t, 1H,CH3 ), 3.81 (s, 3H,CH3 ), 3.19-3.22 (m, 2H,CH9 ), 2.92-3.18 (m, 2H,CH7 ), 2.76 (dd, 2H,CH5 ), 1.70-1.95 (m, 4H,CH6 及CH10 )。13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 180.1, 167.6, 136.22, 136.18, 133.5, 129.6, 127.7, 125.4, 51.9, 41.1, 37.9, 36.2 (C5 ), 31.1, 28.5, 23.9 (C7 )。在H4 與H5 之間觀察到NOESY相關性。在H4 與C5 之間觀察到HMBC相關性。MS: (ES,m/z ): 260 [M+H]+ 。
收集第二溶離異構體並真空濃縮，得到800 mg (53%產率)呈淺黃色固體狀的標題化合物2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯。結構命名係基於NOESY、HSQC及HMBC NMR實驗：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.68 (s, 1H,NH ), 7.60 (d, 1H,CHb ), 7.34 (d, 1H,CHd ), 7.23 (app t, 1H,CHc ), 3.80 (s, 3H,CH3 ), 3.17-3.21 (m, 2H,CHi ), 2.87-2.94 (m, 2H,CHg ), 2.80-2.85 (m, 2H,CHe ), 1.61-1.93 (m, 4H,CHf 及CHj )。13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 180.3, 167.6, 136.8, 135.5, 132.7, 130.4, 127.6, 125.4, 51.9, 41.6, 37.9, 34.1 (Cg ), 31.5, 27.9, 25.8 (Ce )。在Hd 與He 之間觀察到NOESY相關性。在Hd 與Ce 之間觀察到HMBC相關性。MS: (ES,m/z ): 260 [M+H]+ 。步驟 -6 ： 1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向8-mL小瓶中放入2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(50 mg，0.19 mmol，1當量)、DMF (3 mL)。之後在0℃下分數份添加NaH (60%於油中之分散液，23 mg，0.58 mmol，3當量)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。在攪拌下，在0℃下向其中逐滴添加4-(溴甲基)-1-氯-2-(三氟甲基)苯(158 mg，0.58 mmol，3當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液2小時。接著將反應混合物倒入20 mL冰-水中並用3×20 mL EtOAc萃取。合併之有機層用30 mL鹽水洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，用EtOAc/石油醚(1:3)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到100 mg (粗品)呈淺黃色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 452 [M+H]+ 。步驟 -7 ： 1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-N-羥基-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入1'-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲基)-2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(100 mg，0.13 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，3 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，0.26 mL，4 mmol，30當量)及1N NaOH水溶液(0.26 mL，0.26 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液4小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；梯度：在8分鐘內35% B至50% B，在1分鐘內升至52% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到20.5 mg (20%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.79 (br s, 1H), 9.03 (br s, 1H), 7.76-14 (m, 2H), 7.76-7.74 (m, 2H), 7.55-7.52 (m, 1H), 7.22-7.07 (m, 3H), 4.60 (d,J = 15.3 Hz, 1H), 4.43 (d,J = 15.3 Hz, 1H), 3.27-3.22 (m, 2H), 2.98-2.88 (m, 3H), 2.66 (d,J = 17.4 Hz, 1H), 1.93-1.81 (m, 2H), 1.70-1.63 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 453 [M+H]+ 。
表5-2：以下化合物係根據實例20-2之方法製備。
表6-2：以下化合物係根據實例20-2之方法，利用以下修改製備：在步驟6中，使用2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲酸甲酯。 實例 21-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-70) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向8-mL小瓶中放入2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(150 mg，0.58 mmol，1當量)及DMF (4 mL)。之後在0℃下分數份添加NaH (60%於油中之分散液，69 mg，1.74 mmol，3當量)。在室溫下攪拌所得混合物30分鐘。在攪拌下，在0℃下向其中逐滴添加1-(溴甲基)-4-(三氟甲基)苯(276 mg，1.16 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。接著將反應混合物倒入20 mL飽和NH4 Cl水溶液中。用3×20 mL EtOAc萃取所得溶液。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(1:2)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到76 mg (31%產率)呈淺黃色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 418 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(76 mg，0.18 mmol，1當量)及THF (3 mL)。之後在攪拌下，在0℃下逐滴添加於水(3 mL)中之LiOH (40 mg，1.67 mmol，9當量)。在室溫下攪拌所得溶液20小時。用2N HCl將溶液之pH值調至3且用3×20 mL EtOAc萃取所得溶液。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。真空濃縮收集之溶離份，得到29 mg (39%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物 。MS: (ES,m/z ): 404 [M+H]+ 。步驟 -3 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺
向8-mL小瓶中放入2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯甲基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸(29 mg，0.07 mmol，1當量)及DMA (3 mL)。之後在攪拌下，在0℃下逐滴添加氯甲酸異丙酯(88 mg，0.72 mmol，10當量)。在攪拌下，在0℃下向其中逐滴添加NMM (73 mg，0.72 mmol，10當量)。在0℃下攪拌混合物5分鐘。在攪拌下，在0℃下向混合物中逐滴添加NH2 OH•HCl (50 mg，0.72 mmol，10當量)於DMA (1 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液24小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；梯度：在7分鐘內25% B至39% B，在39% B保持5分鐘；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到8.3 mg (27%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.80 (br s, 1H), 9.03 (br s, 1H), 7.74 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.45 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.21-7.07 (m, 3H), 4.59-4.44(m, 2H), 3.23-3.21 (m, 2H), 2.98-2.83 (m, 3H), 2.72-2.63 (m, 1H), 1.97-1.79 (m, 2H), 1.69-1.64 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 419 [M+H]+ 。實例 22-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-71) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(50 mg，0.19 mmol，1當量)、CH2 Cl2 (10 mL)、[4-(三氟甲基)苯基]硼酸(72.2 mg，0.38 mmol，2當量)、Cu(OAc)2 (69.2 mg，0.38 mmol，2當量)、吡啶(22.5 mg，0.28 mmol，1.5當量)、Et3 N (57.6 mg，0.57 mmol，3當量)及4Å分子篩(100 mg)。引入O2 (g)且在60℃下攪拌所得溶液36小時。接著將反應混合物冷卻至室溫。濾出固體且真空濃縮濾液。殘餘物藉由製備型TLC，利用EtOAc/石油醚(1:3)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到30 mg (38%產率)呈白色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 404 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(50 mg，0.12 mmol，1當量)、THF/MeOH (4:1，3 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，491 mg，7.44 mmol，60當量)。之後在攪拌下，逐滴添加1N NaOH水溶液(0.25 mL，0.25 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.05% NH3 •H2 O，移動相B：CH3 CN；梯度：在7分鐘內27% B至48% B，在48% B保持2分鐘；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到4.2 mg (8%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.97 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.77 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.20-7.13 (m, 3H), 3.92-3.83 (m, 2H), 2.92-2.76 (m, 4H), 2.08-1.75(m, 4H), MS: (ES,m/z ): 405 [M+H]+ 。
表7-2：以下化合物係根據實例22-2之方法，利用以下修改製備：在步驟1中，使用2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲酸甲酯。 實例 23-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-72) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向50-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(50 mg，0.19 mmol，1當量)、THF (10 mL)、[3-(三氟甲基)苯基]硼酸(183.116 mg，0.96 mmol，5當量)、Cu(OAc)2 (35 mg，0.19 mmol，1當量)、Et3 N (59 mg，0.58 mmol，3當量)、吡啶(22.879 mg，0.29 mmol，1.5當量)及4Å 分子篩(100 mg)。引入O2 (g)且在油浴中，在60℃下攪拌所得溶液18小時。濾出固體。真空濃縮所得混合物。殘餘物在矽膠上經由正相層析法，使用EtOAc/石油醚(2:3)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到32 mg (41%產率)呈淺褐色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 404 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸
向25-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(32 mg，0.08 mmol，1當量)及THF (5 mL)。之後在攪拌下，在0℃下逐滴添加LiOH (19 mg，0.79 mmol，10當量)於水(4 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液1.5天。在0℃下，用2N HCl將溶液之pH值調至3 並用3×15 mL EtOAc 萃取。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。真空濃縮收集之溶離份，得到30 mg (85%產率)呈淺黃色固體狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 390 [M+H]+ 。步驟 -3 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺
向8-mL小瓶中放入2'-側氧基-1'-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸(30 mg，0.08 mmol，1當量)於DMA (3 mL)中之溶液。之後在攪拌下，在0℃下逐滴添加氯甲酸異丙酯(95 mg，0.78 mmol，10當量)。在攪拌下，在0℃下向其中逐滴添加NMM (78 mg，0.77 mmol，10當量)。攪拌混合物5分鐘。在攪拌下，在0℃下向混合物中逐滴添加NH2 OH•HCl (54 mg，0.78 mmol，10當量)於DMA (1 mL)中之溶液。在室溫下攪拌所得溶液24小時。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN；梯度：在8分鐘內20% B至41% B，在41% B保持4分鐘；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到12.6 mg (40%產率)呈橙色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.84 (br s, 1H), 9.04 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.89 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.51 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.24-7.09 (m, 3H), 3.95-3.84 (m, 2H), 2.97-2.74 (m, 4H), 2.09-2.03 (m, 1H), 1.95-1.79 (m, 3H)。MS: (ES,m/z ): 405 [M+H]+ 。實例 24-2 - 製備N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺(II-73) 步驟 -1 ： 2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯
向用惰性氮氣淨化並維持惰性氮氣氛圍的20-mL微波管中放入2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯(100 mg，0.39 mmol，1當量)於甲苯(5 mL)中之溶液、1-碘-2-(三氟甲基)苯(210 mg，0.77 mmol，2當量)、CuI (7 mg，0.04 mmol，0.1當量)、甲基[2-(甲基胺基)乙基]胺(7 mg，0.08 mmol，0.2當量)及K3 PO4 (250 mg，1.18 mmol，3當量)。在110℃下攪拌所得溶液隔夜。將反應混合物冷卻至室溫且接著倒入20 mL水中。用3×20 mL EtOAc萃取所得溶液。合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥，過濾，且真空濃縮。殘餘物藉由製備型TLC，利用EtOAc/石油醚(1:3)純化。真空濃縮收集之溶離份，得到50 mg (32%產率)呈黃色油狀的標題化合物。MS: (ES,m/z ): 404 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N-羥基-2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲醯胺
向10-mL圓底燒瓶中放入2'-側氧基-1'-(2-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-8-甲酸甲酯之溶液(50 mg，0.12 mmol，1當量)、THF/MeOH(4:1，3 mL)、NH2 OH (50%於H2 O中，491 mg，7.2 mmol，60當量)及1N NaOH水溶液(0.24 mL，0.24mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。濾出固體。粗產物在以下條件下藉由製備型HPLC純化：管柱：XBridge Prep C18 OBD，19×150 mm，5 μm；移動相A：水/10 mM NH4 HCO3 ，移動相B：CH3 CN；梯度：在7分鐘內30% B至40% B；偵測器：UV 254 nm，220 nm。凍乾收集之溶離份，得到11.5 mg (23%產率)呈白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.80 (br s, 1H), 9.05 (br s, 1H), 7.85-7.77 (m, 2H), 7.65-7.52 (m, 2H), 7.23-7.09 (m, 3H), 3.69-3.59 (m, 2H), 3.01-2.77 (m, 4H), 2.17-2.07 (m, 1H), 1.91-1.81 (m, 3H)。MS: (ES,m/z ): 405 [M+H]+ 。
表8-2：以下化合物係根據實例24-2之方法，利用以下修改製備：在步驟1中，使用2'-側氧基-3,4-二氫-1H-螺[萘-2,3'-吡咯啶]-5-甲酸甲酯。 實例 25-2 - 製備螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯(中間物) 步驟 -1 ： 1'-(第三丁基) 8-甲基4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲酸酯
在室溫下，將N -第三丁氧基羰基-4-哌啶酮(1.0 g，5.0 mmol，1當量)添加至3-乙醯基-2-羥基苯甲酸甲酯(0.97 g，5.0 mmol，1當量)及吡咯啶(418 μL, 5.0 mmol，1當量)於MeOH (10 mL)中之經攪拌溶液中。在室溫下攪拌反應混合物24小時。接著濃縮反應混合物並使其在EtOAc (75 mL)與2N HCl (75 mL)之間分配。分離各層且用EtOAc (2×150 mL)萃取水層。合併之有機層用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾，並減壓濃縮。粗產物在矽膠上藉由急驟層析法(30% EtOAc/己烷)純化，得到1.71 g (91%產率)呈淺黃色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 8.08-8.04 (m, 2H), 7.05 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 3.96 (br s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.28 (br s, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.05 (app d,J = 12.5 Hz, 2H), 1.59 (dt,J = 13.2, 4.9 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H)。MS: (ES,m/z ): 276 [M+H-Boc]+ 。步驟 -2 ： 1'-(第三丁基) 8-甲基4-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲酸酯
將NaBH4 (190 mg，5.01 mmol，1.1當量)添加至1'-(第三丁基)-8-甲基-4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲酸酯(1.71 g，4.55 mmol，1當量)於MeOH (15 mL)中之經攪拌溶液中, 冷卻至0℃。使反應物經15分鐘升溫至室溫，接著用60 mL飽和NH4 Cl水溶液淬滅。用EtOAc (4×50 mL)萃取混合物並經Na2 SO4 乾燥。濾出Na2 SO4 並在真空中移除溶劑，得到呈灰白色固體狀的標題化合物，不經進一步純化即使用。步驟 -3 ： 螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯
將1'-(第三丁基)-8-甲基-4-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲酸酯溶解於3 mL三乙基矽烷中。接著，添加2 mL TFA。在室溫下攪拌混合物48小時。接著用EtOAc (100 mL)稀釋反應混合物並用10% K2 CO3 水溶液(30 mL)淬滅過量的酸。接著，分離各層且有機相經Na2 SO4 乾燥。過濾後，將有機相減少至10 mL並添加4N HCl之二噁烷溶液。形成白色沈澱。添加己烷(50 mL)且濕磨混合物並過濾，得到1.48 g (經2個步驟85%產率)白色固體狀的呈TFA鹽形式之標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.87 (br s, 1H), 8.55 (br s, 1H), 7.54 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.93 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.26-3.14 (m, 4H), 2.82 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 1.92-1.75 (m, 6H)。13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 166.3, 151.6, 133.8, 129.1, 122.8, 119.8, 119.4, 71.8, 51.9, 30.6, 30.1, 20.6。MS: (ES,m/z ): 262 [M+H-TFA]+ 。實例 26-2 - 製備螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲酸甲酯(中間物) 步驟 -1 ： 5-溴-4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯
將N-第三丁氧基羰基-4-哌啶酮(0.996 g，5 mmol)添加至1-(2-溴-6-羥基苯基)乙酮(1.08 g，5 mmol)於5 mL MeOH中之經攪拌溶液中，隨後添加吡咯啶(0.82 mL，10 mmol)。密封反應混合物且隨後在室溫下保持48小時。接著用75 mL EtOAc稀釋混合物且用1N HCl (2×50 mL)及鹽水(1×50 mL)洗滌。有機相經Na2 SO4 乾燥。過濾後，在真空中移除有機溶劑。黏性紅色殘餘物在矽膠上藉由急驟層析法(40% EtOAc/己烷)純化，得到1.19 g (60%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 7.41 (t,J = 8.2 Hz, 1H), 7.28 (dd,J = 8.2, 1.0 Hz, 1H), 7.10 (dd,J = 8.6, 1.0 Hz, 1H), 3.69 (app d, 2H), 3.12 (br s, 2H), 2.88 (s, 2H), 1.85-1.82 (m, 2H), 1.66-1.58 (m, 2H)。13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 189.8, 160.2, 153.8, 153.9, 127.6, 119.8, 118.4, 118.3, 78.8, 77.8, 47.3, 32.9, 28.1。MS: (ES,m/z ): 296 [M+H-Boc]+ 。步驟 -2 ： 1'-(第三丁基) 5-甲基4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸酯
在壓力容器中，將5-溴-4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1'-甲酸第三丁酯(1.31 g，3.3 mmol)添加至氯化鈀(II) (47 mg，0.26 mmol)及1,3-雙(二苯基磷烷基)丙烷(110 mg，0.26 mmol)於無水MeOH (10 mL)及無水DMF (1.5 mL)中之經攪拌溶液中。使CO (g)劇烈鼓泡通過反應混合物，同時添加Et3 N (1.5 mL)。在CO (g)下密封容器並在75℃下加熱24小時。接著將反應混合物冷卻至室溫並用EtOAc (100 mL)稀釋且用1M HCl (2×50 mL)及鹽水(1×50 mL)洗滌。有機相經Na2 SO4 乾燥。過濾後，在真空中移除有機溶劑且殘餘物在矽膠上藉由急驟層析法(40% EtOAc/己烷)純化，得到400 mg (32%產率)呈灰白色固體狀的標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 7.50 (dd,J = 8.2, 0.8 Hz, 1H), 7.07 (dd,J = 8.2, 0.8 Hz, 1H), 6.97 (dd,J = 7.4, 1.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (br s, 2H), 3.21 (app t,J = 11.7 Hz, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.02 (app d,J = 13.3 Hz, 2H), 1.62 (dt,J = 12.9, 5.1 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。13 C NMR (100 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 190.1, 169.8, 158.9, 154.6, 135.7, 133.9, 120.0, 117.7, 79.8, 78.3, 52.8, 47.9, 33.9, 28.4。MS: (ES,m/z ): 398 [M+Na]+ 。步驟 -3 ： 1'-(第三丁基) 5-甲基4-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸酯
將NaBH4 (161 mg，4.28 mmol)添加至1'-(第三丁基)-5-甲基-4-側氧基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸酯(0.400 g，1.07 mmol)於10 mL MeOH中之經攪拌溶液中，冷卻至0℃。使反應物經15分鐘升溫至室溫，接著用60 mL飽和NH4 Cl水溶液淬滅。混合物用EtOAc (4×50 mL)萃取且經Na2 SO4 乾燥。濾出Na2 SO4 且在真空在移除溶劑，得到呈灰白色固體狀的標題化合物，不經進一步純化即使用。步驟 -4 ： 螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲酸甲酯
將1'-(第三丁基)-5-甲基-4-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',5-二甲酸酯溶解於3 mL三乙基矽烷中。接著，添加2 mL TFA。在室溫下攪拌混合物48小時。接著用EtOAc (100 mL)稀釋反應混合物且用10% K2 CO3 水溶液(30 mL)淬滅過量的酸。分離各層且有機相經Na2 SO4 乾燥。過濾後，將有機相 濃縮至10 mL且添加4N HCl之二噁烷溶液。形成白色沈澱。添加50 mL己烷且濕磨混合物並過濾，得到236 mg (經2個步驟75%產率)白色固體狀的呈鹽酸鹽形式之標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 10.0 (br s, 1H), 8.63 (br s, 1H), 7.54 (dd,J = 7.8, 1.1 Hz, 1H), 7.19 (t,J = 8.2 Hz, 1H), 7.04 (dd,J = 7.8, 1.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.23 (br s, 4H), 3.13 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 1.98 (br s, 4H), 1.88 (t,J = 7.0 Hz, 2H)。13 C NMR (100 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 167.5, 152.9, 130.2, 127.1, 123.4, 122.9, 121.7, 70.5, 51.9, 39.3, 31.6, 31.2, 20.1。MS: (ES,m/z ): 262 [M+H]+ 。實例 27-2 - 製備N8-羥基-N1',N1'-二甲基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲醯胺(II-74) 步驟 -1 ： 1'-(二甲基胺甲醯基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯
在2-mL小瓶中裝入螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯TFA之溶液 (0.2M之 DCE/DIPEA (10:1)溶液，200 µL，0.040 mmol，1當量)，隨後二甲基胺基甲醯氯(0.2M之DCE溶液，200 µL，0.040 mmol，1當量)。密封小瓶且在室溫下振盪18小時，接著在N2 (g)氣流下移除溶劑。用鹽水(500 µL)稀釋殘餘物並用EtOAc (2 × 500 µL)萃取。在N2 (g)氣流下乾燥合併之有機層，得到淡黃色殘餘物，不經進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 7.65 (dd,J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.86 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.57-3.52 (m, 2 H), 3.67 (dt,J = 12.5, 2.0 Hz, 2H), 2.84-2.80 (m, 8H), 1.84-1.79 (m, 4H), 1.67-1.59 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 333 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N8-羥基-N1',N1'-二甲基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-1',8-二甲醯胺
將來自步驟1之殘餘物溶解於THF/MeOH (3:1，200 µL)中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物，接著冷卻至室溫。添加NH2 OH (50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1N NaOH水溶液(100 µL)。密封混合物且在室溫下振盪18小時。在N2 (g)氣流下，在室溫下濃縮 反應混合物，接著溶解於500 µL DMSO中且使用以下條件藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters Sunfire C18，19×50 mm，5 µm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN/0.1%甲酸；梯度：在6分鐘內15% B升至100% B；流動速率：23 mL/min；偵測器：UV 254 nm，220 nm。合併含產物之溶離份並濃縮，得到2.5 mg (經2個步驟19%)標題化合物。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 8.08 (s, 1H), 8.01 (dd,J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.23 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.01 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 3.55 (dt,J = 13.7, 3.9 Hz, 1H), 3.22 (ddd,J = 13.9, 11.3, 2.9 Hz, 1H), 2.88-2.83 (m, 8H), 1.94-1.88 (m, 4H), 1.81-1.73 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 334 [M+H]+ 。
表9-2：以下化合物係根據實例27-2之平行合成方法製備。
表10-2：以下化合物係根據實例27-2之平行合成方法，利用以下修改製備：在步驟1中，使用螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲酸甲酯HCl。 實例 28-2 - 製備1'-(4-氟苯甲基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-80) 步驟 -1 ： 1'-(4-氟苯甲基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯
在2-mL小瓶中裝入螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯TFA之溶液(0.2M之DCE/DIPEA (10:1)溶液，200 µL，0.040 mmol，1當量)，隨後裝入4-氟苯甲醛溶液(0.2M 之DCE溶液，200 µL，0.040 mmol，1當量)。接著，整份添加NaBH(OAc)3 (42 mg，0.080 mmol，2當量)。密封小瓶且在室溫下振盪18小時，接著在N2 (g)氣流下移除溶劑。用鹽水(500 µL)稀釋殘餘物並用EtOAc (2×500 µL)萃取。在N2 (g)氣流下乾燥合併之有機層，得到淡黃色殘餘物，不經進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 7.64 (dd,J = 7.8, 2.0 Hz, 1H), 7.41 (dd,J = 8.4, 5.3 Hz, 2H), 7.20 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (t,J = 8.6 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.84 (br s, 2H), 2.97-2.86 (m, 4H), 2.82 (t,J = 8.6 Hz, 2H), 1.96-1.85 (m, 6H)。MS: (ES,m/z ): 370 [M+H]+ 。步驟 -2 ： 1'-(4-氟苯甲基)-N-羥基螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺
將來自步驟1之殘餘物溶解於THF/MeOH (3:1，200 µL)中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物，接著冷卻至室溫。添加NH2 OH (50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1N NaOH水溶液(100 µL)。密封混合物且在室溫下振盪18小時。在N2 (g)氣流下，在室溫下濃縮 反應混合物，接著溶解於500 µL DMSO中且使用以下條件藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters Sunfire C18，19×50 mm，5 µm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN/0.1%甲酸；梯度：在6分鐘內15% B升至100% B；流動速率：23 mL/min；偵測器：UV 254 nm，220 nm。合併含產物之溶離份並濃縮，得到標題化合物。MS: (ES,m/z ): 371 [M+H]+ 。
表11-2：以下化合物係根據實例28-2之平行合成方法製備。 實例 29-2 - 製備N-羥基-1'-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺(II-82) 步驟 -1 ： 1'-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯
在2-mL小瓶中裝入螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲酸甲酯TFA (0.2M之二噁烷溶液，200 µL，40 µmol，1當量)及Cs2 CO3 (39 mg，120 µmol，3當量)。接著，添加2-氯-5-(三氟甲基)吡啶之溶液(0.2M之二噁烷溶液，400 µL，80 µmol，2當量)。密封小瓶並放入手套箱中。接著，添加溴化銅(I)及N,N -二甲基乙烷-1,2-二胺配位體(0.02M之DMA溶液，150 µL，3.0 µmol)之脫氣溶液。密封小瓶並在105℃下加熱18小時。在N2 (g)氣流下移除溶劑。用鹽水(500 µL)稀釋殘餘物並用EtOAc (2×500 µL)萃取。在N2 (g)氣流下乾燥合併之有機層。殘餘物不經進一步純化即使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ (ppm): 8.39 (s, 1H), 7.67 (dd,J = 7.8, 2.0 Hz, 1H), 7.60 (dd,J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 7.22 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.89 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 9.0 Hz, 1H), (dt,J = 13.4, 2.3 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.59-3.51 (m, 2H), 2.86 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 1.93 (dd,J = 14.3, 2.2 Hz, 2H), 1.85 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 1.67-1.59 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 407 [M+H]+ 。步驟 -2 ： N-羥基-1'-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)螺[色原烷-2,4'-哌啶]-8-甲醯胺
將來自步驟1之殘餘物溶解於THF/MeOH (3:1，200 µL)中。密封小瓶且在50℃下振盪15分鐘以溶解殘餘物，接著冷卻至室溫。添加NH2 OH (50% v/v於水中之溶液，150 µL)，隨後添加1N NaOH水溶液(100 µL)。密封混合物且接著在室溫下振盪18小時。在N2 (g)氣流下，在室溫下濃縮反應混合物，接著溶解於500 µL DMSO中且使用以下條件藉由製備型HPLC純化：管柱：Waters Sunfire C18，19×50 mm，5 µm；移動相A：水/0.1%甲酸，移動相B：CH3 CN/0.1%甲酸；梯度：在6分鐘內15% B升至100% B；流動速率：23 mL/min；偵測器：UV 254 nm，220 nm。合併含產物之溶離份並濃縮，得到4.0 mg (25%產率)標題化合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10.52 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.41 (s, 7.78 (dd,J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 7.27 (dd,J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.01 (d,J = 9.4 Hz, 1H), 6.89 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 4.23 (d,J = 13.3 Hz, 2H), 3.39 (t,J = 11.3 Hz, 2H), 2.79 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 1.84-1.80 (m, 4H), 1.65-1.57 (m, 2H)。MS: (ES,m/z ): 408 [M+H]+ 。
表12-2：以下化合物係根據實例29-2之平行合成方法製備。
表13-2：以下化合物係根據實例29-2之平行合成方法，利用以下修改製備：在步驟1中，使用螺[色原烷-2,4'-哌啶]-5-甲酸甲酯HCl。 實例 30-2 - 活體外組蛋白去乙醯化酶檢定
使用電泳遷移位移檢定進行酶HDAC11檢定。在桿狀病毒系統中表現全長人類重組HDAC11蛋白並藉由親和層析法純化。在384孔板中，在由以下構成之反應緩衝液中進行酶反應，總體積25 µL：100 mM HEPES，pH 7.5，25 mM KCl、0.1%牛血清白蛋白、0.01% Triton X-100、1% DMSO (來自化合物) 2 µM螢光標記之肽受質及酶。添加酶，最終濃度為10 nM。使用肽受質FAM-RHKK(tri-fluor-Ac)-NH2 。以3x稀釋間隔的12種濃度測試化合物。在每一檢定板中，一式四份操作陰性對照樣品(0%在無抑制劑存在下之抑制)及陽性對照樣品(100%抑制)。在25℃下培育反應物且藉由添加45 µL終止緩衝液(100 mM HEPES，pH 7.5，0.01% Triton X-100、0.05% SDS)淬滅。
在LabChip® 3000微流控電泳儀(Perkin Elmer/Caliper Life Sciences)上分析經終止之檢定板。量測電泳分離之去乙醯化產物及受質肽的螢光強度。以產物與總量比(PSR)測定每一樣品之活性：P/(S+P)，其中P係產物肽之峰高度，且S係受質肽之峰高度。抑制百分比(Pinh )係使用以下等式計算： Pinh = (PSR0% - PSRinh )/(PSR0% - PSR100%)*100， 其中PSRinh 係在抑制劑存在下之產物總量比，PSR0%係在無抑制劑存在下之平均產物總量比且PSR100%係在100%抑制對照樣品中之平均產物總量比。藉由使用XLfit 4軟體將抑制百分比曲線與4參數劑量反應模型擬合來測定抑制劑之IC50 值。
如下表14-2中所述，「+++」指示IC50 低於0.5 µM；「++」指示IC50 在0.5 µM與1 µM之間；且「+」指示IC50 高於1 µM。
表14-2：本發明化合物之IC50 範圍
無
由以下圖式構成的本文所包括之附圖僅用於說明目的而非限制。
圖 1 顯示在骨髓移植MPN模型中HDAC11缺乏使疾病負擔減輕。
圖 2 顯示在骨髓移植MPN模型中HDAC11缺乏使STAT3及STAT5磷酸化減少。
圖 3 顯示HDAC11抑制劑抑制表現MPL或JAK2突變體之細胞株生長。
圖 4 顯示HDAC11抑制劑及魯索替尼抑制HEL92.1.7及SET-2細胞株生長。
圖 5 顯示在用HDAC11抑制劑治療之後HEL92.1.7細胞中G1細胞週期停滯。
圖 6 顯示在用HDAC11抑制劑治療之後HEL92.1.7細胞中STAT3及STAT5磷酸化受抑制。
圖 7 顯示在用HDAC11抑制劑治療之後患者來源的紅血球系及骨髓球系細胞之群落生長受抑制。
圖 8 顯示HDAC11抑制劑抑制A549及H1650幹細胞樣癌細胞之生長。
圖 9 顯示HDAC11抑制劑抑制H1650 SP細胞中之小管形成。
圖 10 顯示HDAC11抑制劑減少A549細胞遷移。
圖 11 顯示HDAC11及HDAC1基因敲減使SOX2表現減少。
圖 12 顯示用HDAC11抑制劑治療使A549及H1650細胞株中SOX2表現減少。
圖 13 顯示HDAC11抑制劑化合物抑制與癌症相關纖維母細胞共培養之H1650細胞株之生長。
圖 14 顯示HDAC11抑制劑與Smoothened抑制劑之組合抑制A549及H2170細胞生長。
圖 15 顯示若干例示性HDAC11抑制劑。

Claims (49)

  1. 一種抑制或減少有需要之患者體內癌細胞增殖之方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該等癌細胞中至少一些表現一或多種幹細胞標記物。
  3. 如申請專利範圍第2項之方法，其中該幹細胞標記物係SOX2之基因擴增及/或STAT3之活化。
  4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之方法，其中該癌症係肺癌、血液癌症、乳癌、鱗狀細胞癌、食道癌、胃癌、乳癌或肺腺癌。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  6. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  7. 一種治療有需要之患者之癌症的方法，其包括向患者投予有效量的HDAC11抑制劑，其中該患者體內的一或多個癌細胞展現幹細胞樣特性。
  8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中該一或多個癌細胞與癌症幹細胞標記物之基因擴增有關。
  9. 如申請專利範圍第7項或第8項之方法，其中該一或多個癌細胞與SOX2之基因擴增有關。
  10. 如申請專利範圍第7項至第9項中任一項之方法，其中該癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。
  11. 如申請專利範圍第7項至第10項中任一項之方法，其中該癌症與STAT3活化有關。
  12. 如申請專利範圍第11項之方法，其中該癌症係乳癌。
  13. 如申請專利範圍第7項至第12項中任一項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  14. 如申請專利範圍第13項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  15. 一種治療血液癌症之方法，其包括向患者投予有效量之HDAC11抑制劑。
  16. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該血液癌症係骨髓增生性病症、淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。
  17. 如申請專利範圍第16項之方法，其中該血液癌症係骨髓增生性病症。
  18. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
  19. 如申請專利範圍第15項至第18項中任一項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  20. 如申請專利範圍第19項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制一或多種其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  21. 如申請專利範圍第1項、第7項及第15項中任一項之方法，其進一步包括向該患者投予JAK2抑制劑。
  22. 如申請專利範圍第21項之方法，其中該JAK2抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  23. 如申請專利範圍第22項之方法，其中該JAK2抑制劑係魯索替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)、CYT387、來他替尼(lestaurtinib)或帕瑞替尼(pacritinib)。
  24. 如申請專利範圍第1項、第7項、第15項及第21項中任一項之方法，其進一步包括向該患者投予刺猬路徑抑制劑。
  25. 如申請專利範圍第24項之方法，其中該刺猬路徑抑制劑係維莫德吉(vismodegib)、艾莫德吉(erismodegib)、BMS-833923、格拉德吉(glasdegib)、塔拉德吉(taladegib)或薩瑞德吉(saridegib)。
  26. 一種治療患有骨髓增生性病症之患者的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑及JAK2抑制劑。
  27. 如申請專利範圍第26項之方法，其中該骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
  28. 如申請專利範圍第26項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  29. 如申請專利範圍第28項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  30. 一種治療患有抗JAK2抑制劑之骨髓增生性病症之患者的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑。
  31. 如申請專利範圍第30項之方法，其中該骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
  32. 如申請專利範圍第30項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  33. 如申請專利範圍第32項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  34. 一種治療患有骨髓增生性病症之患者的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑及刺猬路徑抑制劑。
  35. 如申請專利範圍第34項之方法，其中該骨髓增生性病症係真性紅細胞增多症、特發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病、慢性嗜中性球白血病、慢性嗜伊紅球性白血病或肥大細胞增生病。
  36. 如申請專利範圍第34項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  37. 如申請專利範圍第36項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  38. 如申請專利範圍第37項之方法，其中該刺猬路徑抑制劑係維莫德吉、艾莫德吉、BMS-833923、格拉德吉、塔拉德吉或薩瑞德吉。
  39. 一種治療接受過一線療法之患者之癌症的方法，其包括向該患者投予HDAC11抑制劑，由此在用該HDAC11抑制劑治療後，減少或消除自該一線療法存活之任何癌細胞。
  40. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該癌症係食道鱗狀細胞癌、口腔鱗狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌或鼻竇癌。
  41. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該癌症係乳癌。
  42. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該HDAC11抑制劑係siRNA、shRNA、抗體試劑或化合物。
  43. 如申請專利範圍第42項之方法，其中該化合物係對抑制HDAC11之選擇性為抑制其他組蛋白去乙醯化酶同功型之至少10倍的小分子。
  44. 如申請專利範圍第39項之方法，其中該一線療法係切除術、放射及/或幹細胞移植。
  45. 如申請專利範圍第1項至第44項中任一項之方法，其中該HDAC11抑制劑係式I之化合物：(I’) 及其醫藥學上可接受之鹽，其中： Q係-H、-OC(O)NR6 (C1 -C6 )烷基芳基或-OC(O)O(C1 -C6 )烷基芳基； Z係-CH2 -、O、S或NR6 ； X1 、X2 、X3 及X4 在每次出現時各自獨立地係N或CR1 ； Y1 、Y2 、Y3 及Y4 各自獨立地係N或CR1 ； L係NR6 、O或-(CR1 R2 )p -； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、-OR3 、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R3 、-R5 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； 或兩個出現之R1 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基，其各自視情況經一或多個獨立出現之R3 及R4 取代； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、側氧基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； R6 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； 且 p係0、1、2、3、4、5或6。
  46. 如申請專利範圍第1項至第44項中任一項之方法，其中該HDAC11抑制劑係式II之化合物：(II) 及其醫藥學上可接受之鹽，其中： X1 、X2 、X3 、X4 、X5 及X6 在每次出現時各自獨立地係-CR1 R2 -、-NR3 -、-O-、-C(O)-、-S(O)2 -、-S(O)-或-S-； Y1 、Y2 及Y3 各自獨立地係N或CR1 ； L係一鍵、-(CR1 R2 )p -、-C(O)NR3 -、-S(O)2 -、-S(O)2 NR3 -、-S(O)-、-S(O)NR3 -、-C(O)(CR1 R2 )p O-或-C(O)(CR1 R2 )p -； R獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、-C5 -C12 螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或含有1-5個選自由N、S、P或O組成之群之雜原子的雜芳基，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、螺環、雜環基、螺雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、側氧基、-NO2 、-CN、-R1 、-R2 、-SR3 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 NR3 R4 、-S(O)2 R1 、-C(O)R1 、-C(O)OR1 、-NR3 S(O)2 R1 、-S(O)R1 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R1 、雜環、芳基或雜芳基取代； R1 及R2 在每次出現時獨立地係-H、-R3 、-R4 、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基或-(CHR5 )p NR3 R4 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基各自視情況經一或多個-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-OR3 、-NHR3 、-NR3 R4 、-S(O)2 N(R3 )2 -、-S(O)2 R5 、-C(O)R5 、-C(O)OR5 、-NR3 S(O)2 R5 、-S(O)R5 、-S(O)NR3 R4 、-NR3 S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基取代； 或R1 及R2 可以與其二者所連接之碳原子組合形成螺環、螺雜環或螺環烯基； 或R1 及R2 當在相鄰原子上時，可以組合形成環烷基、雜環、芳基、含有1-5個選自由N、S、P及O組成之群之雜原子的雜芳基，或環烯基； 或R1 及R2 當在不相鄰原子上時，可以組合形成視情況橋連之環烷基、視情況橋連之雜環或視情況橋連之環烯基； R3 及R4 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 (C1 -C6 烷基)、-(C1 -C6 烷基)S(O)2 R5 、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基或-(CHR5 )p N(C1 -C6 烷基)2 ，其中烷基、烯基、環烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基及雜芳基各自視情況經一或多個選自以下之取代基取代：-OH、鹵素、-NO2 、側氧基、-CN、-R5 、-O(C1 -C6 )烷基、-NH(C1 -C6 )烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NHC1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)S(O)2 C1 -C6 烷基、-S(O)R5 、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)R5 、雜環、芳基或雜芳基； R5 在每次出現時獨立地係-H、-C1 -C6 烷基、-C2 -C6 烯基、-C4 -C8 環烯基、-C2 -C6 炔基、-C3 -C8 環烷基、雜環基、芳基、含有1-5個選自N、S、P及O之雜原子的雜芳基、-OH、鹵素、-NO2 、-CN、-NHC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 NH(C1 -C6 烷基)、-S(O)2 N(C1 -C6 烷基)2 、-S(O)2 C1 -C6 烷基、-C(O)C1 -C6 烷基、-C(O)OC1 -C6 烷基、-N(C1 -C6 烷基)SO2 C1 -C6 烷基、-S(O)(C1 -C6 烷基)、-S(O)N(C1 -C6 烷基)2 、-N(C1 -C6 烷基)S(O)(C1 -C6 烷基)或-(CH2 )p N(C1 -C6 烷基)2 ； p係0、1、2、3、4、5或6； n係0、1、2、3或4； m係0、1或2； q係1或2； r係1或2； 其中q + r之總和 ≤3且 其中m + n之總和 ≤ 4。
  47. 一種式I之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  48. 一種式I'之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  49. 一種式II之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
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