CN115991679A

CN115991679A - 作为a2a抑制剂的2-氧代噻唑衍生物和用于治疗癌症的化合物

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Publication number: CN115991679A
Application number: CN202211658370.5A
Authority: CN
Inventors: S·克罗西格纳尼; B·戈麦兹; E·候楚伊思
Original assignee: Eteos Belgium SA
Current assignee: Eteos Belgium SA
Priority date: 2017-03-30
Filing date: 2018-03-30
Publication date: 2023-04-21
Also published as: KR20240027885A; RU2019134724A3; MX2022005298A; CA3058260A1; HRP20221039T1; EP3601296B1; TW202344508A; DK3601296T3; CN115873022A; TWI836960B; PL3601296T3; US10995101B2; BR112019020421A2; AU2018246355A1; JP2023027282A; CN110678472B; RS63557B1; IL269710A; ES2926158T3; US20230159564A1

Abstract

本发明涉及式I化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。本发明进一步涉及所述式I化合物作为A2A抑制剂的用途。本发明还涉及所述式I化合物用于治疗和/或预防癌症的用途。本发明还涉及用于制造式I化合物的方法。

Description

作为A2A抑制剂的2-氧代噻唑衍生物和用于治疗癌症的化合物

本申请是PCT申请号为PCT/EP2018/058301的PCT国际申请进入中国国家阶段后申请号为201880034926.9、申请日为2018年3月30日、发明名称为“作为A2A抑制剂的2-氧代噻唑衍生物和用于治疗癌症的化合物”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及新颖的硫代氨基甲酸酯衍生物，包括其药学上可接受的盐和溶剂合物。本发明的化合物是腺苷A2A受体抑制剂并且可用作治疗性化合物，特别用于治疗和/或预防癌症。

背景技术

肿瘤中的许多免疫抑制机制是正常组织中生理免疫调节所共有的。这种免疫调节在保持免疫系统受控制以阻断自身反应性免疫应答以及防止正在进行的免疫应答引起关键组织损伤方面非常重要。缺乏生理免疫调节经常导致伴随自身免疫的压倒性免疫活化。例如，CTLA-4是通过阻断经由CD28-B7相互作用的共刺激信号来负调节T细胞活性的生理机制。缺乏CTLA4引起非特异性T细胞活化，而CTLA-4缺陷小鼠会在数周内因大量淋巴细胞组织浸润而死亡。PD-1在与其配体PD-L1和PD-L2相互作用时也提供T细胞抑制信号。已知小鼠中缺乏PD-1引起各种类型的自身免疫病症，这取决于遗传菌株。

除免疫抑制信号的细胞表面转导物(例如CTLA-4和PD-1)外，肿瘤微环境中的免疫抑制还涉及抗炎细胞因子(IL-10、TGF-β)、酶(吲哚胺-2,3-二加氧酶)和专化的免疫调节细胞(调节性T细胞、髓源性抑制细胞MDSC)。这些免疫抑制机制在控制正常组织中的免疫反应方面起重要作用。由于肿瘤利用此类生理免疫调节机制来保护其组织免受免疫攻击，因此这些意在防止炎症并发症的机制现已证明是阻碍自发性癌症消退和免疫癌症治疗的主要障碍。对肿瘤中免疫抑制机制的鉴别指出了恢复抗肿瘤免疫应答的分子靶标。因此，这些负免疫调节机制，即所谓的免疫检查点，成为药物发现中的焦点。针对PD1、PDL1或CTLA4的抗体已被批准作为大量适应症(诸如转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's Lymphoma)、头颈癌、尿路上皮癌、肝细胞癌)的抗癌疗法，以及治疗具有称为错配修复缺陷和高微卫星不稳定性(与癌症类型无关)的两种特定遗传特征之一的实体瘤患者。

细胞外腺苷已知是免疫功能抑制剂。细胞内腺苷参与能量代谢、核酸代谢和甲硫氨酸循环，而细胞外腺苷在细胞间信号传导中起重要作用。其信号由细胞表面上的G蛋白偶联的腺苷受体传送，并且其影响多种生理功能，包括神经系统、心血管系统和免疫系统。

肿瘤含有高水平的细胞外腺苷，表明肿瘤细胞可能受益于其免疫抑制作用和分解代谢能的产生(Allard等，Curr.Opin.Pharmacol.,2016,29,7-16；Otta A.,Frontiers inImmunology,2016,7:109)。这种高水平的细胞外腺苷可能归因于负责产生细胞外腺苷的CD73酶的过表达。CD73被大量肿瘤过表达，通过免疫组织化学(www.proteinatlas.org)确定所有以下肿瘤在>50％的肿瘤表面中表达中等或高水平的CD73：乳腺肿瘤、类癌瘤、宫颈肿瘤、结直肠肿瘤、子宫内膜肿瘤、神经胶质瘤、头颈肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑色素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、肾肿瘤、胃肿瘤、甲状腺肿瘤、尿路上皮肿瘤。

在四种已知类型的腺苷受体中，A2A腺苷受体(A2AR)是大多数免疫细胞中主要表达的亚型。刺激A2AR通常提供抑制T细胞(增殖、细胞因子产生、细胞毒性)、NK细胞(细胞毒性)、NKT细胞(细胞因子产生、CD40L上调)、巨噬细胞/树突细胞(抗原呈递、细胞因子产生)和中性粒细胞(氧化性爆发(oxidative burst))的活性的免疫抑制信号。发现肿瘤中存在高水平的细胞外腺苷在逃避抗肿瘤免疫应答中起重要作用。特别地，显示A2AR缺陷小鼠可自发地使接种的肿瘤消退，而野生型小鼠则未显示类似的肿瘤消退。A2AR拮抗剂在荷瘤野生型动物中也是有益的。重要的是，T细胞和NK细胞的耗竭削弱了A2AR拮抗剂对肿瘤生长的阻滞，表明抗肿瘤细胞免疫应答的改善。T细胞和NK细胞的效应子功能易受A2AR刺激。另外，当在存在A2AR激动剂的情况下被活化时，即使去除A2AR激动剂后，T细胞的效应子功能也持续受到损害。该结果表明，肿瘤中富含腺苷的环境可诱导对肿瘤细胞无反应性的T细胞。

因此，鉴于A2A受体在大多数免疫细胞、特别是效应免疫细胞(诸如T细胞和NK细胞)中表达，并且鉴于A2A受体参与产生腺苷的组织，认为A2A抑制剂可对所有癌症适应症都有帮助。

因此，需要能够在肿瘤环境中恢复免疫功能的A2A抑制剂。

已知腺苷是许多其他生理功能的内源性调节剂。例如，在中枢神经系统(CNS)水平下，已知腺苷诱导镇静、抗焦虑和抗癫痫作用。

因此，A2A抑制剂先前已被开发用于治疗抑郁症和神经变性疾病，诸如帕金森氏病(Parkinson’s disease)或阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease)(Pinna A.,CNS Drugs,2014,28,455)。经开发用于CNS疾病的最先进的A2A抑制剂之一是瑞德南特(Preladenant)(Hodgson RA等，J.Pharmacol.Exp.Ther.,2009,330(1),294-303；Hauser RA等，JAMANeurol.,2015,72(12),1491-500)。

然而，此类先前开发的A2A抑制剂被设计成穿过血脑屏障，以靶向CNS中的A2A受体。

鉴于与大脑相比，肿瘤中的腺苷水平更高，将需要高得多的量的化合物以实现对免疫功能恢复的期望作用，用于治疗癌症。因此，为了避免有害的副作用，与所有先前开发的A2A抑制剂相反，应当提供具有有限(如果有)的CNS渗透性的A2A抑制剂。

如以下实验部分中所证明的，申请人特此提供了新的A2A抑制剂，其没有任何显著的CNS渗透性，因此可用于治疗癌症。

发明内容

因此，本发明涉及式(I)化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R¹和R²如下文所定义。

根据一个实施方案，式(I)化合物为式(Ia)

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R¹、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如下文所定义。

根据一个实施方案，式(Ia)化合物为式(Ia-1)

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R¹、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如式(Ia)中所定义。

根据一个实施方案，式(Ia)化合物为式(Ia-2)或(Ia-3)

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R¹、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如式(Ia)中所定义。

本发明还涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物以及至少一种药学上可接受的载体。

本发明进一步涉及一种药物，其包含根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

本发明还提供根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其用于治疗和/或预防癌症。

本发明进一步涉及根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其用作A2A抑制剂。

还提供用于制造根据本发明的式(Ia)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的方法，其特征在于其包括以下两者之间的偶合：式(A)的胺中间体

其中X¹、X²、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如下文所定义；

和式(B)中间体

其中R¹如下文所定义并且Y表示卤基、具有1到6个碳原子的烷基磺酰氧基或具有6到10个碳原子的芳基磺酰氧基。

本发明还涉及式(A)的合成中间体。

定义

在本发明中，以下术语具有以下含义：

术语“醛”是指基团–CHO。

术语“醛烷基”是指基团–烷基-CHO，其中烷基如本文所定义。

术语“烯基”是指包含一个或多个碳-碳双键的不饱和烃基，其可以是直链或支链。适合的烯基包含2到6个碳原子，优选2到4个碳原子，仍更优选2到3个碳原子。烯基的示例为乙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基和其异构体、2-己烯基和其异构体、2,4-戊二烯基等。

术语“烯基羰基”是指基团–(C＝O)-烯基，其中烯基如本文所定义。

术语“烯基羰基烷基”是指基团–烷基-(C＝O)-烯基，其中烷基和烯基如本文所定义。

术语“烯基羰基氨基”是指基团–NH-(C＝O)-烯基，其中烯基如本文所定义。

术语“烯基羰基氨基烷基”是指基团–烷基-NH-(C＝O)-烯基，其中烷基和烯基如本文所定义。

术语“烷氧基”是指基团–O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基”是指式C_nH_2n+1的基团，其中n为大于或等于1的数字。通常，本发明的烷基包含1到8个碳原子，更优选地，本发明的烷基包含1到6个碳原子。烷基可以是直链或支链。适合的烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基和辛基。

术语“烷基氨基烷基”是指基团–烷基-NH-烷基-OH，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基氨基烷基氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NH-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为–烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基氨基烷基羰基”是指基团–(C＝O)-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基羰基”是指基团–(C＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基杂芳基”是指任何被烷基取代的杂芳基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷氧基羰基”是指基团–(C＝O)-O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基磺酰基”是指基团–SO₂-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基砜烷基”是指基团–烷基–SO₂-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基磺亚胺酰基”是指基团–S(＝O)(＝NH)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基亚砜基(alkylsulfoxide)”是指基团–(S＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基亚砜烷基(alkylsulfoxidealkyl)”是指基团–烷基-SO-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“炔基”是指一类单价不饱和烃基，其中不饱和起因于一种或多种碳-碳三键的存在。炔基通常且优选具有与上述烷基相同数目的碳原子。炔基的非限制性示例为乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、2-戊炔基和其异构体、2-己炔基和其异构体等。

术语“炔烷基”是指基团–烷基-炔，其中烷基和炔如本文所定义。

术语“炔羰基烷基”是指基团–烷基-(C＝O)-炔，其中烷基和炔如本文所定义。

术语“氨基”是指基团–NH₂。

术语“氨基烷基”是指基团–烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基烷基氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NH-烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基烷基羰基氨基”是指基团–NH-(C＝O)-烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NH₂。

术语“(氨基羰基烷基)(烷基)氨基”是指基团–NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为–烷基-(C＝O)-NH₂基团，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基羰基烷基氨基”是指基团–NH-烷基-(C＝O)-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基磺酰基”是指基团–SO₂-NH₂。

术语“芳基”是指具有单环(即苯基)或多个稠合在一起的芳环(如萘基)的多不饱和芳族烃基，通常含有5到12个、优选5到10个原子；更优选地，所述芳基是5元或6元芳基。芳基的非限制性示例包括苯基、萘基。

术语“羰基”是指基团–(C＝O)-。

术语“羰基氨基”是指基团–NH-(C＝O)-。

术语“环烷基”是指环状烷基，即具有1或2个环状结构的单价、饱和或不饱和烃基。环烷基包括单环或二环烃基。环烷基可在环中包含3个或更多个碳原子，并且根据本发明，通常包含3到10个、更优选3到8个碳原子；仍更优选更优选地，环烷基是5元或6元环烷基。环烷基的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

术语“环烷氧基”是指基团-O-环烷基，其中环烷基如本文所定义。

术语“二烷基氨基”是指基团–NR¹R²，其中R¹和R²均独立地为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基”是指基团–烷基-NR¹R²，其中R¹和R²均独立地为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NH-烷基-NR¹R²，其中R¹和R²均为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基羰基”是指基团–(C＝O)-NH-烷基-NR¹R²，其中R¹和R²均为如本文所定义的烷基。

术语“二羟基烷基”是指如本文所定义被两个羟基(–OH)取代的基团烷基。

术语“卤基”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“杂芳基”是指如本文所定义的芳基，其中至少一个碳原子被杂原子替代。换句话说，它是指5到12个碳原子的芳族单环或含有2个通常含有5到6个原子的稠合在一起的环的环系；其中一个或多个碳原子被氧原子、氮原子和/或硫原子替代，其中氮杂原子和硫杂原子可任选地被氧化，且氮杂原子可任选被季铵化。此类杂芳基的非限制性示例包括：

唑基、噻唑基、咪唑基、呋喃基和吡咯基。优选地，杂芳基为5元或6元杂芳基，更优选地，5元或6元杂芳基为糠基。

术语“杂环基”是指在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子的非芳族、完全饱和或部分不饱和环状基团(例如，3到7元单环、7到11元二环或含有总共3到10个环原子)。优选地，杂环基为5元或6元杂环基。含有杂原子的杂环基的每个环可具有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮杂原子和硫杂原子可任选地被氧化并且氮杂原子可任选地被季铵化。杂环基团可在化合价允许的情况下连接在环或环系的任何杂原子或碳原子上。多环杂环的环可通过一个或多个螺原子稠合、桥接和/或接合。非限制性的示例性杂环基包括氮丙啶基、环氧乙烷基、硫杂环丙烷基、哌啶基、氮杂环丁烷基、2-咪唑啉基、吡唑烷基咪唑烷基、异

唑啉基、

唑烷基、异

唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、哌啶基、琥珀酰亚胺基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、异吲哚啉基、2H-吡咯基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、4H-喹嗪基、2-氧代哌嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、2-吡唑啉基、3-吡唑啉基、四氢-2H-吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、3,4-二氢-2H-吡喃基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、3-二氧戊环基、1,4-二

烷基、2,5-二氧代咪唑烷基(2,5-dioximidazolidinyl)、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、二氢吲哚基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、四氢异喹啉-1-基、四氢异喹啉-2-基、四氢异喹啉-3-基、四氢异喹啉-4-基、硫代吗啉-4-基、1-氧化-1-硫代吗啉-4-基、1-二氧化-1-硫代吗啉-4-基、1,3-二氧戊环基、1,4-氧硫杂环己基、1,4-二噻烷基、1,3,5-三

烷基、1H-吡咯里嗪基(1H-pyrrolizinyl)、四氢-1,1-二氧代噻吩基、N-甲酰基哌嗪基和吗啉-4-基。

术语“杂环基烷基氨基羰基”是指基团–(C＝O)-NH-烷基-杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“(杂环基)(烷基)氨基烷基”是指基团–烷基-NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“杂环基羰基”是指基团–(C＝O)-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“杂环基烷基”是指基团–烷基-杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“杂环基氧基”是指基团–O-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“杂环基磺酰基”是指基团–SO₂-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“羟基烷基”是指基团–烷基-OH，其中烷基如本文所定义。

术语“羟基烷基氨基烷基”是指基团–烷基-NH-烷基-OH，其中烷基如本文所定义。

术语“羟基羰基”是指基团–C(＝O)-OH，其中羰基如本文所定义。换句话说，“羟基羰基”对应于羧酸基团。

术语“氧代”是指＝O取代基。

术语“磺酰基氨基”是指基团–NH-SO₂。

术语“约”在数字前意指所述数字的值的+或-10％。

术语“施用(administration)”或其变体(例如“施用(administering)”意指单独或作为药学上可接受的组合物的一部分，向待治疗或预防病况、症状或疾病的患者提供活性剂或活性成分(例如A2A抑制剂)。

术语“IC₅₀”或“半数最大抑制浓度”表示体外50％抑制所需的抑制剂浓度。

术语“抑制剂”是指具有抑制或显著降低或下调基因和/或蛋白质表达的生物效应或具有抑制或显著降低蛋白质生物活性的生物效应的天然或合成化合物。因此，“A2A抑制剂”是指具有抑制或显著降低或下调A2A受体的生物活性的生物作用的化合物。

术语“人”是指两种性别且处于任何发育阶段的受试者(即新生儿、婴儿、幼年、青少年、成人)。

术语“患者”是指等待接受或正在接受医疗护理或将成为医疗程序的对象的温血动物、更优选人。

表述“药学上可接受的”是指药物组合物的成分彼此相容并且对所施用的受试者无害。

表述“药学上可接受的载体”是指当施用于动物、优选人时，不产生不利的、过敏的或其他不良反应的赋形剂。其包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。对于人施用来说，制剂应当满足如监管局(例如FDA局或EMA)所要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度的标准。

如本文所用的术语“前体药物(predrug)”意指将被修饰以形成药物物质的任何化合物，其中所述修饰可发生体内或体外，并且在前体药物到达身体中指明要施用的区域之前或之后。

如本文所用的术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”是指延迟或阻碍病况或疾病和/或其伴随症状的发作、阻止患者获得病况或疾病、或降低患者获得病况或疾病的风险的方法。

如本文所用的术语“前药(prodrug)”是指式I化合物的药理学上可接受的衍生物，例如酯或酰胺，其体内生物转化产物产生生物活性药物。前药通常以增加的生物利用度为特征，并且在体内容易代谢成生物活性化合物。

术语“治疗”或“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防范性措施；其中目的是预防或减慢目标病理病况或疾病。需要治疗的那些包括已经患有疾病的那些以及易患疾病的那些或将要预防疾病的那些。如果在接受根据本发明的治疗后，受试者或哺乳动物显示出以下一种或多种的可观测到的和/或可测量的降低或不存在，则该受试者或哺乳动物成功地“治疗”了疾病、病变或病况：肿瘤减少；和/或一种或多种与特定疾病或状况相关的症状在一定程度上缓解；发病率和死亡率降低，以及生活质量问题改善。通过医师熟悉的常规程序可容易地测量用于评估疾病的成功治疗和改善的上述参数。

术语“志愿者”或“受试者”是指动物，包括人。在本发明的意义上，受试者可以是患者，即接受医疗照护、正在接受或已经接受过医学治疗或被监测疾病发展的人。在一个实施方案中，受试者为雄性。在另一实施方案中，受试者为雌性。

具体实施方式

化合物

本发明涉及式I化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

R¹表示5元或6元杂芳基或5元或6元芳基，其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自C1-C6烷基(优选甲基)和卤基(优选氟或氯)的取代基取代；优选地，R¹表示5元杂芳基；更优选地，R¹表示呋喃基。

R²表示6元芳基或6元杂芳基，

其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基和烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基烷基磺酰基和烷基砜烷基；

或杂芳基或芳基任选地被两个取代基取代，该两个取代基与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式I中：

R²表示6元芳基或6元杂芳基，

其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基和烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基烷基磺酰基和烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式I中：

R²表示6元芳基或6元杂芳基，

其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、羰基氨基和磺酰基氨基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基。

根据优选实施方案，本发明涉及式(Ia)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

X¹和X²各自独立地表示C或N；

当X¹为N时，R¹'不存在；或者当X¹为C时，R¹'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基；

R²'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

或R1'和R2'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基；

当X²为N时，R3’不存在；或者当X²为C时，R^3’表示H或卤基，优选H或F；

R^4’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^5’表示H或卤基，优选H或F。

根据一个实施方案中，在式(Ia)中：

X¹和X²各自独立地表示C或N；

当X¹为N时，R¹'不存在；或者当X¹为C时，R¹'表示H、卤基、烷基、烷氧基、杂环基氧基、烷基羰基、羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基或杂环基磺酰基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基砜烷基；

R^2’表示H、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、烷基亚砜基、羰基、羰基氨基、氨基羰基或磺酰基氨基；

其中烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、烷基亚砜基、羰基、羰基氨基、氨基羰基或磺酰基氨基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基砜烷基；

或R¹'和R²'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环、5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基；

当X²为N时，R^3’不存在；或者当X²为C时，R^3’表示H或卤基，优选H或F；

R^4’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^5’表示H或卤基，优选H或F。

根据一个实施方案中，在式(Ia)中：

X¹和X²各自独立地表示C或N；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基；

其中烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、烷基亚砜基、羰基、羰基氨基、氨基羰基或磺酰基氨基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基；

或R¹'和R²'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环、5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基；

R^4’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^5’表示H或卤基，优选H或F。

在本发明的一个具体实施方案中，R¹表示5元或6元杂芳基或5元或6元芳基，其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自C1-C6烷基(优选甲基)和卤基(优选氟或氯)的取代基取代。

在优选的实施方案中，R¹表示5元杂芳基；更优选地，R¹表示呋喃基。

在本发明的一个具体实施方案中，X¹和X²各自独立地表示C或N。在另一具体实施方案中，X¹和X²均表示C。

在本发明的一个具体实施方案中，当X¹为N时，R^1’不存在。

在另一具体的实施方案中，当X¹为C时，R¹'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，当X¹为C时，R¹'表示H、卤基、烷基、烷氧基、杂环基氧基、烷基羰基、羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基或杂环基磺酰基；所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基。

在优选的实施方案中，R¹'取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤基、羟基、烷基、杂环基烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、杂环基烷基氨基羰基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基和烷基砜烷基；

在优选的实施方案中，R¹'取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在本发明的一个具体实施方案中，R²'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R²'表示H、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、烷基亚砜基、羰基、羰基氨基、氨基羰基或磺酰基氨基；其中烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、烷基亚砜基、羰基、羰基氨基、氨基羰基或磺酰基氨基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基。

在优选的实施方案中，R²'取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、杂环基烷基、二羟基烷基、二烷基氨基烷基、杂芳基、烷基杂芳基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R²'取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、二烷基氨基烷基、杂芳基、烷基杂芳基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在本发明的另一具体实施方案中，R¹'和R²'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R¹'和R²'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环、5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在本发明的一个具体实施方案中，当X²为N时，R^3’不存在。在本发明的另一具体实施方案中，当X²为C时，R^3’表示H或卤基。在优选的实施方案中，当X²为C时，R^3’表示H或F。

在本发明的一个具体实施方案中，R^4’表示H或卤基。在优选的实施方案中，R^4’表示H或F。

在本发明的一个具体实施方案中，R^5’表示H或卤基。在优选的实施方案中，R^5’表示H或F。

在一个实施方案中，优选的式(Ia)化合物为式(Ia-1)化合物：

在一个实施方案中，优选的式(Ia-1)为式(Ia-1a)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；并且

R^1”表示地被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式(Ia-1a)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；并且

R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式(Ia-1a)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；并且

R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基。

在本发明的一个具体实施方案中，R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基。

在优选的实施方案中，R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在一个实施方案中，优选的式(Ia-1)为式(Ia-1b)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

根据一个实施方案，在式(Ia-1b)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

根据一个实施方案，在式(Ia-1b)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^2”表示任选地被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基。

在本发明的一个具体实施方案中，R^1’表示H或卤基。在优选的实施方案中，R^1’表示H或F。

在本发明的一个具体实施方案中，R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基。

在优选的实施方案中，R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：羟基、氰基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、烷基亚砜基、烷基砜烷基。

在一个实施方案中，优选的式(Ia-1)化合物为式(Ia-1c)或(Ia-1d)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；

R^2’表示H或卤基，优选H或F；

R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基；并且

R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式(Ia-1c)或(Ia-1d)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；

R^2’表示H或卤基，优选H或F；

R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜烷基、烷基砜烷基；并且

R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜烷基、烷基砜烷基。

根据一个实施方案中，在式(Ia-1c)或(Ia-1d)中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R^1’表示H或卤基，优选H或F；

R^2’表示H或卤基，优选H或F；

在本发明的一个具体实施方案中，R^2’表示H或卤基。在优选的实施方案中，R^2’表示H或F。

在本发明的一个具体实施方案中，R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜烷基、烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、烷基、杂环基烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基或杂环基烷基氨基羰基。

在优选的实施方案中，R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基或(杂环基)(烷基)氨基烷基。

在本发明的一个具体实施方案中，R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基。

在优选的实施方案中，R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜烷基。

在优选的实施方案中，R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、烷基、杂环基烷基、二羟基烷基、二烷基氨基烷基或杂环基烷基氨基羰基。在优选的实施方案中，R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、烷基或二烷基氨基烷基。

在一个实施方案中，优选的式(Ia)化合物为式(Ia-2)或(Ia-3)化合物：

本发明的特别优选的式I化合物是在下表1中列出的那些。

表1

和其药学上可接受的盐和溶剂合物。

在表1中，术语“Cpd”意指化合物。

使用

Ultra 12.0版(PerkinElmer)对表1中的化合物进行命名。

对式I和其子式的化合物的所有指代均包括对其对映异构体、盐、溶剂合物、多晶型物、多组分络合物和液晶的指代。

本发明的化合物包括如上文所定义的式I和其子式的化合物，包括其所有多晶型物和晶体形态(crystal habit)、其前药和异构体(包括光学异构体、几何异构体和互变异构异构体)以及经同位素标记的式I和其子式的化合物。

式I和其子式的化合物可含有不对称中心，因此可以不同的立体异构形式存在。因此，本发明包括所有可能的立体异构体，并且不仅包括外消旋化合物，而且还包括单个的对映异构体和其非外消旋混合物。当期望化合物为单一对映异构体时，其可通过立体有择合成，通过最终产物或任何方便的中间体的拆分，或通过手性色谱方法获得，所述方法各自如本领域已知。最终产物、中间体或起始材料的拆分可通过本领域已知的任何适合方法进行。

本发明的化合物可以呈药学上可接受的盐的形式。式I和其子式的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。适合的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。示例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐(xinofoate)。适合的碱盐由形成无毒盐的碱形成。示例包括铝盐、精氨酸盐、苄星(benzathine)盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺(diolamine)盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺(meglumine)盐、乙醇胺(olamine)盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇(tromethamine)盐、2-(二乙基氨基)乙醇盐、乙醇胺盐、吗啉盐、4-(2-羟基乙基)吗啉盐和锌盐。还可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。优选的药学上可接受的盐包括盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、硫酸氢盐/硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐和乙酸盐。

当本发明的化合物含有酸性基团以及碱性基团时，本发明的化合物还可形成内盐，并且此类化合物在本发明的范围内。当本发明的化合物含有供氢的杂原子(例如NH)时，本发明还涵盖通过将所述氢原子转移到分子内的碱性基团或原子而形成的盐和/或异构体。

式I和其子式的化合物的药学上可接受的盐可通过以下方法中的一种或多种制备：

(i)通过使式I化合物与期望的酸反应；

(ii)通过使式I化合物与期望的碱反应；

(iii)通过使用期望的酸从式I化合物的适合前体中去除对酸或碱不稳定的保护基，或通过使用期望的酸使适合的环状前体(例如内酯或内酰胺)开环；或

(iv)通过与适当的酸反应或借助于适合的的离子交换柱将式I化合物的一种盐转化为另一种盐。

所有这些反应通常在溶液中进行。该盐可从溶液中沉淀出来，并且可通过过滤收集，或者可通过蒸发溶剂来回收。盐中的电离程度可能从完全电离到几乎未电离变化。

本发明的化合物可以药学上可接受的盐的形式施用。术语“药学上可接受的盐”意在包括所有可接受的盐，诸如乙酸盐、乳糖酸盐、苯磺酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、苹果酸盐、碳酸氢盐、马来酸盐、硫酸氢盐、扁桃酸盐、酒石酸氢盐、甲磺酸盐、硼酸盐、甲基溴化物、溴化物、甲基硝酸盐、依地酸钙、甲基硫酸盐、樟脑磺酸盐、粘酸盐、碳酸盐、萘磺酸盐、氯化物、硝酸盐、克拉维酸盐(clavulanate)、N-甲基葡糖胺、柠檬酸盐、铵盐、二盐酸盐、油酸盐、依地酸盐、草酸盐、乙二磺酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐(embonate))、依托酸盐(estolate)、棕榈酸盐、乙磺酸盐、泛酸盐、富马酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、葡庚糖酸盐、聚半乳糖醛酸盐、葡糖酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、硬脂酸盐、乙醇酰基对氨基苯砷酸盐(glycollylarsanilate)、硫酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、碱式乙酸盐、哈胺(hydrabamine)、琥珀酸盐、氢溴酸盐、丹宁酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、羟基萘二甲酸盐、8-氯茶碱盐(teoclate)、碘化物、甲苯磺酸盐、异硫代硫酸盐(isothionate)、三乙基碘、乳酸盐、双羟萘酸盐(panoate)、戊酸盐等，其可用作用于改变溶解度或水解特性的剂型或可用于缓释或前药制剂中。取决于本发明化合物的具体官能度，本发明化合物的药学上可接受的盐包括由诸如以下的阳离子形成的那些盐：钠、钾、铝、钙、锂、镁、锌；以及由诸如以下的碱形成的那些盐：氨、乙二胺、N-甲基-谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、二乙醇胺、普鲁卡因(procaine)、N-苄基苯乙胺、二乙胺、哌嗪、三(羟甲基)氨基甲烷和氢氧化四甲铵。

这些盐可通过标准程序制备，例如通过使游离酸与适合的有机碱或无机碱反应。在存在诸如氨基的碱性基团的情况下，可将酸性盐即盐酸盐、氢溴酸盐、乙酸盐、棕榈酸盐(palmoate)等用作剂型。

另外，尽管通常就本发明化合物的盐来说，优选药学上可接受的盐，但应注意，本发明在最广泛的意义上还包括可例如用于本发明化合物的分离和/或纯化中的非药学上可接受的盐。例如，与光学活性酸或碱形成的盐可用于形成非对映异构盐，其可促进以上式I化合物的光学活性异构体的分离。

本发明的化合物可以呈药学上可接受的溶剂合物的形式。式I和其子式的化合物的药学上可接受的溶剂合物含有化学计量量或亚化学计量量的一种或多种药学上可接受的溶剂分子，诸如乙醇或水。术语“水合物”是指当所述溶剂为水时。

本发明通常还涵盖式I和其子式的化合物的所有药学上可接受的前体药物和前药。

同样，在存在醇基的情况下，可采用药学上可接受的酯，例如乙酸酯、马来酸酯、新戊酰氧基甲基酯等，以及本领域已知的那些用于改变溶解度或水解特性以用作缓释或前药制剂的酯。

制造方法

式I化合物可通过不同方式用本领域技术人员已知的反应制备。

本发明进一步涉及用于制造式(Ia)化合物的方法：

和其药学上可接受的盐和溶剂合物，其中X¹、X²、R¹、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如式(Ia)中所定义；

其包括：

(a1)使式(A)化合物

其中X¹、X²、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’和R^5’如式(Ia)中所定义；

与式(B)化合物反应

其中R¹如式(Ia)中所定义；

Y表示卤素(优选碘、溴或氯)、具有1到6个碳原子的烷基磺酰氧基(优选甲基磺酰氧基或三氟甲基磺酰氧基)或具有6-10个碳原子的芳基磺酰氧基(优选苯基磺酰氧基或对甲苯基磺酰氧基)或本领域技术人员已知的任何离去基团。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(a1)可在碱存在或不存在下进行。在具体实施方案中，本发明方法的步骤(a1)在碱存在下进行，所述碱选自由但不限于以下组成的组：TEA、DIPEA、吡啶、NaOH、K₃PO₄、K₂CO₃、Na₂CO₃，优选DIPEA或TEA。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(a1)可在诸如但不限于DMF、二

烷、THF、水或其混合物的适合溶剂存在下进行，优选在DMF中进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(a1)可在20℃到约180℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

式(B)化合物可根据以下方案制备：

步骤(b1)：可将5-氨基噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7(3H,6H)-二酮转化为5-氨基-7-羟基-3-(2-甲氧基乙基)-2H,3H-[1,3]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮。

根据一个实施方案，步骤(b1)可通过用1-溴-2-甲氧基乙烷、1-碘-2-甲氧基乙烷、1-甲磺酰基-2-甲氧基乙烷或1-甲苯磺酰基-2-甲氧基乙烷，优选1-溴-2-甲氧基乙烷处理来进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b1)可在碱存在或不存在下进行。在具体实施方案中，步骤(b1)在碱存在下进行，所述碱例如但不限于叔丁醇钠、叔丁醇钾、NaH、CsOH、NaOH、K₂CO₃、Na₂CO₃，优选叔丁醇钠、叔丁醇钾或NaH。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b1)可在诸如但不限于DMF、二

烷、THF、DMA的适合溶剂存在下进行，优选在DMF中进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b1)可在20℃到约180℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

步骤(b2)：可将5-氨基-7-羟基-3-(2-甲氧基乙基)-2H,3H-[1,3]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮转化为5-氨基-7-氯-3-(2-甲氧基乙基)-2H,3H-[1,3]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮。

根据一个实施方案，步骤(b2)可在诸如但不限于POCl₃、PCl₅、SOCl₂(优选POCl₃)的氯化剂存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b2)可在适合的溶剂存在或不存下，优选在溶剂不存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b2)可在20℃到约180℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

步骤(b3)：可通过与式(C)化合物(其中R¹如式(Ia)中所定义)反应，将5-氨基-7-氯-3-(2-甲氧基乙基)-2H,3H-[1,3]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮转化为式(D)化合物，其中R¹如式(Ia)中所定义。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b3)可在适合的碱存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b3)可在诸如乙醇、丙醇、甲醇、THF、水、二

烷或其混合物的适合溶剂存在或不存在下进行，优选在乙醇存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b3)可在20℃到约180℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

步骤(b4)：可将式(D)化合物(其中R¹如式(Ia)所定义)转化为式(E)化合物，其中R¹如式(Ia)中所定义。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b4)可在N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b4)可在六甲基二硅氮烷存在或不存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b4)可在适合的溶剂存在或不存下，优选在溶剂不存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b4)可在20℃到约180℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行1小时到数小时(例如1h到96h)范围的时段。

步骤(b5)：可将式(E)化合物(其中R¹如式(Ia)所定义)转化为式(F)化合物，其中R¹如式(Ia)中所定义。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b5)可在BBr₃存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b5)可在诸如DCM、THF的适合溶剂存在或不存在下进行，优选在DCM存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b5)可在-20℃到约50℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

步骤(b6)：可将式(F)化合物(其中R¹如式(Ia)所定义)转化为式(B)化合物，其中R¹和Y如式(Ia)中所定义。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b6)可使用本领域技术人员已知的用于将醇转化为烷基卤、或烷基磺酸酯或芳基磺酸酯的任何试剂进行，取决于Y的性质，所述试剂诸如但不限于甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、三氟甲磺酰氯(triflic chloride)、三氟甲磺酸酐(triflic anhdydride)、SOCl₂、SO₂Cl₂、POCl₃、PCl₅，优选甲苯磺酰氯或甲磺酰氯。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b6)可在诸如但不限于TEA或DIPEA的适合碱存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b6)可在诸如DMF、DCM、THF的适合溶剂存在或不存在下进行，优选在DMF存在下进行。

根据一个实施方案，本发明方法的步骤(b6)可在-20℃到约50℃范围的温度下，在进行或不进行微波辐照的情况下，进行10分钟到数小时(例如10分钟到24h)范围的时段。

通常，任何单个式(I)化合物的合成途径将取决于每个分子的特定取代基以及所需中间体的现成可用性；同样，此类因素是本领域普通技术人员所理解的。

根据又一一般方法，可采用本领域技术人员众所周知的适合的相互转化技术将式I化合物转化为式I的替代化合物。

式I和相关式的化合物还可通过用溶剂分解剂或氢解剂处理将式I的化合物从它们的一种官能衍生物中释放出而获得。

用于溶剂分解或氢解的优选的起始材料是符合式I和相关式、但含有相应的受保护氨基和/或羟基而不是一个或多个游离氨基和/或羟基的那些，优选带有氨基保护基团而不是键合到N原子的H原子的那些，特别是带有R*-N基团(其中R*表示氨基保护基团)而不是HN基团的那些，和/或带有羟基的保护基团而不是羟基的H原子的那些，例如符合式I、但带有-COOR**基团(其中R**表示羟基保护基团)而不是-COOH的那些。

起始材料分子中还可能存在多个相同或不同的受保护氨基和/或羟基。如果存在的保护基团彼此不同，则它们可在许多情况下被选择性地裂解掉。

术语“氨基保护基团”是一般已知的，并且是指适于保护(阻断)氨基免于化学反应、但在分子中别处进行期望的化学反应后易于去除的基团。此类基团的典型特别是未被取代或取代的酰基、芳基、芳烷氧基甲基或芳烷基。由于氨基保护基在所需的反应(或反应顺序)之后被去除，因此它们的类型和大小也不是关键性的；然而，优选具有1到20个、特别是1到8个碳原子的那些。术语“酰基”应在与本发明方法相关的最广义上理解。其包括衍生自脂族、芳脂族、芳族或杂环羧酸或磺酸的酰基，且特别是烷氧基-羰基、芳氧基羰基，且尤其是芳烷氧基羰基。此类酰基的示例是烷酰基，诸如乙酰基、丙酰基和丁酰基；芳烷酰基，诸如苯基乙酰基；芳酰基，诸如苯甲酰基和甲苯基；芳氧基烷酰基，诸如POA；烷氧基羰基，诸如甲氧基羰基、乙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、BOC(叔丁氧基羰基)和2-碘乙氧基羰基；芳烷氧基羰基，诸如CBZ(“苄氧羰基(carbobenzoxy)”)、4-甲氧基苄氧基羰基和FMOC；以及芳基磺酰基，诸如Mtr。优选的氨基保护基团是BOC和Mtr，还有CBZ、Fmoc、苄基和乙酰基。

术语“羟基保护基团”同样是一般已知的，并且是指适于保护羟基免于化学反应、但在分子中别处进行期望的化学反应后易于去除的基团。此类基团的典型是上述未被取代或取代的芳基、芳烷基或酰基，此外还有烷基。羟基保护基团的性质和大小不是关键，因为它们在期望的化学反应或反应序列(reaction sequence)后被再次去除；优选具有1-20个、特别是1-10个碳原子的基团。羟基保护基团的示例尤其是苄基、4-甲氧基苄基、对硝基苯甲酰基、对甲苯磺酰基、叔丁基和乙酰基，其中特别优选苄基和叔丁基。

使式I和相关式的化合物从它们的官能衍生物中释放出来，这取决于所用的保护基团，例如强无机酸，诸如盐酸、高氯酸或硫酸，强有机羧酸，诸如三氯乙酸、TFA或磺酸，诸如苯磺酸或对甲苯磺酸。可能存在其他惰性溶剂，但并非始终必需。适合的惰性溶剂优选是有机的，例如羧酸，诸如乙酸，醚，诸如四氢呋喃或二

烷，酰胺，诸如DMF，卤代烃，诸如二氯甲烷，此外还有醇，诸如甲醇、乙醇或异丙醇，和水。此外，上述溶剂的混合物是适合的。TFA优选过量使用而不添加其他溶剂，并且高氯酸优选以9:1比率的乙酸和70％高氯酸的混合物形式使用。用于裂解的反应温度有利地为约0到约50℃，优选15到30℃(室温)。

可例如优选在15-30℃下使用于二氯甲烷中的TFA或使用于二

烷中的大约3到5NHCl裂解掉BOC、OtBu和Mtr基团，并且可在15-30℃下使用二甲胺、二乙胺或哌啶于DMF中的大约5％到50％溶液裂解掉FMOC基团。

例如，通过在催化剂(例如贵金属催化剂，诸如钯，有利地在诸如碳的载体上)存在下用氢处理，可裂解掉可氢解去除的保护基团(例如CBZ、苄基或从其

二唑衍生物中释放的脒基)。这里适合的溶剂是上文所示的那些，特别是例如醇，诸如甲醇或乙醇，或酰胺，诸如DMF。氢解通常在约0到100℃的温度和约1到200巴的压力下进行，优选在20-30℃和1-10巴下进行。例如，在20-30℃下，在甲醇中的5％到10％ Pd/C上，或在甲醇/DMF中的Pd/C上使用甲酸铵(代替氢)，CBZ基团的氢解非常成功。

适合的惰性溶剂的示例是烃，诸如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯化烃，诸如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯甲烷、三氟甲基苯、氯仿或二氯甲烷；醇，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，诸如乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃(THF)或二

烷；二醇醚，诸如乙二醇单甲醚或乙二醇单乙醚或乙二醇二甲醚(二甘醇二甲醚)；酮，诸如丙酮或丁酮；酰胺，诸如乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，诸如乙腈；亚砜，诸如二甲亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，诸如甲酸或乙酸；硝基化合物，诸如硝基甲烷或硝基苯；酯，诸如乙酸乙酯、或所述溶剂的混合物。

可在0到100℃的温度下，例如使用HCl、H₂SO₄或使用LiOH、NaOH或KOH在水、水/THF、水/THF/乙醇或水/二

烷中水解酯。

游离氨基还可进一步以常规方式使用酰基氯或酸酐酰化，或使用未取代或取代的烷基卤烷基化，有利地在诸如二氯甲烷或THF的惰性溶剂中和/或在诸如三乙胺或吡啶的碱存在下，在-60℃到+30℃的温度下进行。

关于所有保护和脱保护方法，参见Philip J.Kocienski，“保护基团(ProtectingGroups)”，Georg Thieme Verlag Stuttgart,New York,1994以及Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts，“有机合成中的保护基团(Protective Groups in OrganicSynthesis)”，Wiley Interscience，第3版，1999年。

如实施例部分中所述的反应方案仅是说明性的，且不应解释为以任何方式限制本发明。

合成中间体

本发明还涉及式(A)的合成中间体

以及其盐和溶剂合物，其中：

当X¹为N时，R¹'不存在；或者当X¹为C时，R¹'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基杂环基磺酰基烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

R²'表示H、卤基、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羰基、杂环基羰基、烷基亚砜基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

或R¹'和R²'与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳基环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤基、羟基、氰基、烷基、烯基、醛基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜基、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基和烷基砜烷基；

R^4’表示H或卤基，优选H或F；并且

R^5’表示H或卤基，优选H或F。

根据一个实施方案，用于本发明方法中的式(A)的合成中间体选自由以下组成的组：

-1-(4-((1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)-2-氟苯基)哌嗪；

-1-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪；

-2-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺；

-(S)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(R)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(R,S)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(S)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；和

-(R)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪。

用途

本发明进一步涉及本发明的化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物作为A2A抑制剂的用途。

因此，在特别优选的实施方案中，本发明涉及式I和子式的化合物、特别是上表1的那些、或其药学上可接受的盐和溶剂合物作为A2A抑制剂的用途。

因此，在另一方面，本发明涉及这些化合物或其盐和溶剂合物用于合成诸如A2A抑制剂的药物活性成分中的用途。

根据本发明的又一特征，提供了调节需要此类治疗的患者、优选温血动物且甚至更优选人中的A2A活性的方法，其包括向该患者施用有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物。

在一个实施方案中，本发明涉及式I和子式的化合物、特别是上表1的那些、或其药学上可接受的盐和溶剂合物用于增加癌细胞的免疫识别和破坏的用途。

因此，本发明的化合物可用作药物，特别是用于预防和/或治疗癌症。

本发明进一步涉及用于治疗或预防癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物物种施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

本发明进一步提供式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物用于制造用于治疗和/或预防癌症的药物的用途。

本发明还提供用于在患者中延迟癌症发作的方法，其包括向有需要的患者施用药物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物。

优选地，患者是温血动物，更优选人。

各种癌症是本领域已知的。癌症可以是转移性的或非转移性的。癌症可以是家族性的或散发性的。在一些实施方案中，癌症选自由以下组成的组：白血病和多发性骨髓瘤。可使用本发明的方法治疗的其他癌症包括例如良性和恶性实体瘤以及良性和恶性非实体瘤。在具体实施方案中，癌症选自乳腺癌、类癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、神经胶质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌和尿路上皮癌。在具体实施方案中，癌症是乳腺癌。在具体实施方案中，癌症是类癌。在具体实施方案中，癌症是宫颈癌。在具体实施方案中，癌症是结直肠癌。在具体实施方案中，癌症是子宫内膜癌。在具体实施方案中，癌症是神经胶质瘤。在具体实施方案中，癌症是头颈癌。在具体实施方案中，癌症是肝癌。在具体实施方案中，癌症是肺癌。在具体实施方案中，癌症是黑色素瘤。在具体实施方案中，癌症是卵巢癌。在具体实施方案中，癌症是胰腺癌。在具体实施方案中，癌症是前列腺癌。在具体实施方案中，癌症是肾癌。在具体实施方案中，癌症是胃癌。在具体实施方案中，癌症是甲状腺癌。在具体实施方案中，癌症是尿路上皮癌。

实体瘤的示例包括但不限于：胆道癌、脑癌(包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤)、乳腺癌、类癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、神经胶质瘤、头颈癌、上皮内赘生物(包括鲍恩氏病(Bowen’s disease)和佩吉特氏病(Paget’sdisease))、肝癌、肺癌、神经母细胞瘤、口腔癌(包括鳞状细胞癌)、卵巢癌(包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞引起的那些)、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌(包括腺癌和肾母细胞瘤(Wilms tumor))、肉瘤(包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤)、皮肤癌(包括黑色素瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)和基底细胞癌)鳞状细胞癌)、睾丸癌(包括生殖肿瘤)(精原细胞瘤和非精原细胞瘤，诸如畸胎瘤和绒毛膜癌)、基质肿瘤、生殖细胞瘤、甲状腺癌(包括甲状腺腺癌和髓样癌)和尿路上皮癌。

实体瘤的示例包括但不限于：胆道癌、脑癌(包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤)、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、上皮内赘生物(包括鲍恩氏病(Bowen’s disease)和佩吉特氏病(Paget’sdisease))、肝癌、肺癌、神经母细胞瘤、口腔癌(包括鳞状细胞癌)、卵巢癌(包括由上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞引起的那些)、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌(包括腺癌和肾母细胞瘤(Wilms tumor))、肉瘤(包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤)、皮肤癌(包括黑色素瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)和基底细胞癌)鳞状细胞癌)、睾丸癌(包括生殖肿瘤)(精原细胞瘤和非精原细胞瘤，诸如畸胎瘤和绒毛膜癌)、基质肿瘤、生殖细胞瘤和甲状腺癌(包括甲状腺腺癌和髓样癌)。

非实体瘤的示例包括但不限于血液赘生物。如本文所用，血液赘生物是本领域的术语，其包括淋巴样病症、髓样病症和AIDS相关白血病。

淋巴样病症包括但不限于急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴增生性病症(例如淋巴瘤、骨髓瘤和慢性淋巴样白血病)。淋巴瘤包括例如霍奇金氏病(Hodgkin’s disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)和淋巴细胞性淋巴瘤。慢性淋巴样白血病包括例如T细胞慢性淋巴样白血病和B细胞慢性淋巴样白血病。

本发明进一步涉及根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物用于预防和/或治疗辐射诱导的纤维化、结缔组织疾病(例如舍格伦氏综合征(

syndrome)，即硬皮病)、慢性细菌感染(例如幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori))、异常瘢痕形成(瘢痕瘤)和多微生物败血症的用途。

本发明进一步涉及用于治疗或预防辐射诱导的纤维化、结缔组织疾病(例如舍格伦氏综合征，即硬皮病)、慢性细菌感染(例如幽门螺杆菌)、异常瘢痕形成(瘢痕瘤)和多微生物败血症的方法，其包括向有需要的哺乳动物物种施用治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

本发明进一步提供式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物用于制造用于治疗和/或预防辐射诱导的纤维化、结缔组织疾病(例如舍格伦氏综合征，即硬皮病)、慢性细菌感染(例如幽门螺杆菌)、异常瘢痕形成(瘢痕瘤)和多微生物败血症的药物的用途。

本发明还提供用于在患者中延迟辐射诱导的纤维化、结缔组织疾病(例如舍格伦氏综合征，即硬皮病)、慢性细菌感染(例如幽门螺杆菌)、异常瘢痕形成(瘢痕瘤)和多微生物败血症发作的方法，其包括向有需要的患者施用药物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物。

制剂

本发明还提供包含式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂的药物组合物。如上所述，本发明还涵盖了药物组合物，所述药物组合物除了含有本发明的化合物以外，还含有作为活性成分的其药学上可接受的盐和溶剂合物、另外的治疗剂和/或活性成分。

本发明的另一目的是一种药物，其包含至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物作为活性成分。

根据本发明的又一特征，提供了式I化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物用于制造用于调节需要此类治疗的患者中的A2A活性的药物的用途，其包括向所述患者施用有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物。

通常，对于药物用途，可将本发明的化合物配制成药物制剂，所述药物制剂包含至少一种本发明的化合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂，以及任选地一种或多种另外的药物活性化合物。

借助于非限制性示例，此类制剂可呈适于以下的形式：经口施用，胃肠外施用(诸如通过静脉内、肌内或皮下注射或静脉内输注)，局部施用(包括眼)，通过吸入、通过皮肤贴剂、通过植入物、通过栓剂施用等。此类适合的施用形式(取决于施用方式，其可以是固体、半固体或液体)以及用于制备它们的方法及载体、稀释剂和赋形剂将是本领域技术人员清楚的；参考最新版的雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)。

此类制剂的一些优选但非限制性的示例包括片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小袋、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂、软膏、霜剂、洗剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、滴剂、无菌注射溶液和用于作为大丸剂施用和/或连续施用的无菌包装粉剂(通常在使用前复原)，其可用诸如以下的本身适合此类制剂的载体、赋形剂和稀释剂配制，诸如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇、纤维素、(无菌)水、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、食用油、植物油和矿物油或其适合的混合物。所述制剂可任选地含有药物制剂中常用的其他物质，诸如润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、分散剂、崩解剂、增量剂、填充剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、流量调节剂、脱模剂等。还可配制组合物以提供其中所含的一种或多种活性化合物的快速、持续或延迟的释放。

本发明的药物制剂优选呈单位剂型，并且可适当地包装在例如盒、泡罩、小瓶、瓶、小袋、安瓿中或任何其他适合的单剂量或多剂量保持器或容器(其可经适当地标记)中；任选地带有一个或多个含有产品信息和/或使用说明的传单。

取决于待预防或治疗的病况和施用途径，本发明的活性化合物可以单一日剂量，分成一个或多个日剂量或基本上连续地，例如使用滴注施用。

附图说明

图1是显示在A2a激动剂CGS24680存在下外周血淋巴细胞中释放的细胞因子的百分比相对于本发明化合物7的浓度的图。图1A涉及用LPS刺激的全血细胞培养物并且图1B涉及用抗CD3/CD28刺激的全血细胞培养物。

图2是显示外周血淋巴细胞中的pCREB抑制百分比相对于本发明化合物4的浓度的图。

图3是显示细胞毒性百分比相对于本发明化合物4和31的浓度的图。

实施例

参考以下实施例将更好地理解本发明。这些实施例意在代表本发明的具体实施方案，而不意在限制本发明的范围。

使用以下缩写：

Boc：叔丁氧基羰基，

BSA：双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺或牛血清白蛋白，这取决于上下文，

Cpd：化合物，

DavePhos：2-二环己基膦基-2′-联苯，

DCM：二氯甲烷，

DIPEA：N,N-二异丙基乙胺,

DMF：二甲基甲酰胺，

DMSO：二甲亚砜，

eq.：当量，

EtOAc：乙酸乙酯，

g：克，

h：小时，

HAS：人血清白蛋白，

HPLC：高效液相色谱，

HMDS：六甲基二硅氮烷，

L：升，

LCMS：液相色谱–质谱

LHMDS：双(三甲基甲硅烷基)酰胺化锂，

M：mol.L^-1，

MeOH：甲醇，

μg：微克，

μmol：微摩尔，

μL：微升，

mg：毫克，

mL：毫升，

mmol：毫摩尔

mM：mmol.L^-1，

min：分钟，

mol：摩尔，

N：当量浓度，

N₂：氮，

ng：纳克，

nM：nmol.L^-1，

NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮，

NMR：核磁共振光谱，

quant.：定量(产量)，

SFC：超临界流体色谱，

rt或RT：室温，

tBu：叔丁基，

TEA：三乙胺，

TFA：三氟乙酸，

THF：四氢呋喃，

TLC：薄层色谱，

VTD：真空盘式干燥器。

I.化学实施例

如下获得下述实施例中提供的MS数据：

使用Agilent 6130或6130B多模式(ESI+APCI)记录LCMS。

LCMS方法：

柱：XBridge C8(50×4.6mm)5μm；方法：A：H₂O中的0.1％ TFA，B：ACN中的0.1％TFA，流动速率：2.0mL/min。

柱：Zorbax extend C18(50×4.6mm)5μm；方法：A：H₂O中的10mM NH₄OAc，B：ACN，流动速率：1.2mL/min。

柱：Zorbax XDB C18(50×4.6mm)3.5μm；方法：A：H₂O中的0.1％HCOOH，B：ACN，流动速率：1.5mL/min。

柱：XBridge C8(50×4.6mm)3.5μm；方法：A：H₂O中的10mM NH₄HCO₃，B：ACN，流动速率：1.2mL/min。

如下获得下述实施例中提供的NMR数据：1H-NMR：Bruker DPX 400MHz。在NMR谱中观测到的多重性的缩写如下：s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。

利用以下两种方法之一评价HPLC纯度：

方法XB0595TF；柱：XBridge C8(50×4.6)mm，3.5μm；洗脱液梯度从H₂O中的0.1％TFA到ACN中的0.1％ TFA，流动速率：2.0mL/min。

方法：AM9010A3；柱：Phenomenex gemini NX-C18(150X×4.6)，3.0μm；洗脱液梯度从水中的10mM乙酸铵到ACN，流动速率：1.0mL/min。

方法：XB0595NHC；柱：XBridge C8(50×4.6)mm，3.5μm；洗脱液梯度从水中的10mM碳酸氢铵到ACN，流动速率：1.0mL/min。

除非另有说明，否则溶剂、试剂和起始材料购自商业供应商且按原样使用。

使用

Ultra 12.0版(PerkinElmer)对下述中间体和化合物进行命名。

I.1.中间化合物的合成

中间体1：甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯

步骤1：2,6-二氨基-5-硫代氰基嘧啶-4-醇：在氮气气氛下，在25-30℃下，向乙酸(27500mL)于反应器中的搅拌溶液中添加2,6-二氨基嘧啶-4-醇(500g)。缓慢添加硫氰酸钾(1586g)，并将温度升到90±5℃；直到反应物质变成澄清溶液。一旦变成澄清溶液，将反应混合物冷却到15±5℃，并逐滴添加在乙酸(750mL)中的溴(633g)，在相同温度下搅拌2h。在反应完成后，使用氨水(9000mL)中和反应混合物，并在20±5℃下搅拌16h。将所形成的沉淀物过滤，并用水(2500mL)和甲醇(1000mL)冲洗。将湿材料在VTD中在70℃下干燥24h，得到呈淡黄色固体的标题化合物(206g,quant)。LCMS：184.3[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.36(s,1H),7.03(s,2H),6.64(bs,2H)。

步骤2：2,5-二氨基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-醇：向2,6-二氨基-5-硫代氰基嘧啶-4-醇(步骤-1)(750g,4.09mol)于THF(15L)中的搅拌溶液中添加氟化四丁基铵(1M，于THF中，6750mL)，并且将反应物质加热到64±3℃且保持24h。在反应完成后，将反应混合物冷却到25±5℃且保持1h。将所形成的沉淀物过滤，并用THF(2.25L)冲洗。将湿固体吸收于水(6L)中，并添加浓盐酸(1.5L)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物过滤，并将固体残余物用水(3.75L)洗涤，且吸干1h。用水(6L)处理湿材料，并添加碳酸氢钠(3kg)。将反应物质搅拌4小时，过滤，用水(3.75L)洗涤，并在VTD中干燥16h，得到呈黄色固体的标题化合物(580g；78％)。LCMS：184.2[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ10.84(s,1H),7.89(s,2H),6.46(s,2H)。

步骤3：5-氨基-7-羟基噻唑并[4,5-d]嘧啶-2(3H)-酮：将2,5-二氨基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-醇(步骤2；570g,3.11mol)和NaNO₂(570g,8.26mol)于水(5700mL)中的热(80℃)混合物缓慢添加到浓HCl的热溶液(80℃)(11400mL,15Vol)中。将反应混合物搅拌2h并通过HPLC监测反应完成。在反应完成后，将反应混合物冷却到15℃，并用NaOH颗粒碱化到pH 12。将反应物质加热到80℃且保持2小时，然后冷却到35℃，并使用浓盐酸将pH调节到5-6。将沉淀的固体过滤，用水(5V)洗涤，并在VTD中干燥，得到呈淡棕色固体的产物(286g,51％)。LCMS：185.6[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ12.08(s,1H),11.10(s,1H),6.88(s,2H)。

步骤4：5-氨基-3-(2-甲氧基乙基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7(3H,4H)-二酮：将5-氨基-7-羟基噻唑并[4,5-d]嘧啶-2(3H)-酮(36.2g,0.196mol,1eq)吸收于无水DMF(600mL)中并且在密封管中加热到90℃。将反应混合物在90℃下搅拌30min，然后冷却到30℃。向该反应混合物中缓慢添加60％ NaH(10.4g，1.1eq)并搅拌30min，之后添加1-溴-2-甲氧基乙烷(32.83g,1.1eq)。将反应混合物再次加热到100℃。通过TLC监测反应完成。在反应完成后，将反应混合物冷却到RT，完全浓缩，并通过使用DCM/甲醇(90:10)的柱色谱进行纯化，得到白色固体(20g,41％)。LCMS：243.6[M+1]⁺。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ11.10(s,1H),6.92(bs,2H),3.93(t,J＝6Hz,2H),3.57(t,J＝6Hz,2H),3.23(s,3H)。

步骤5：5-氨基-7-氯-3-(2-甲氧基乙基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-2(3H)-酮：用POCl₃(100mL)处理5-氨基-7-羟基-3-(2-甲氧基乙基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-2(3H)-酮(10g,0.0412mol)并且将其在密封管中加热到90℃且保持18h。在通过TLC监测反应完成后，将反应混合物浓缩并添加冰冷的水。使用NaHCO₃将反应混合物的pH调节到7，并用DCM萃取。将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到淡黄色固体(6.8g,63％)，其未经进一步纯化即原样用于下一步骤。LCMS：261.2[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ7.37(s,2H),4.01(t,J＝5.6Hz,2H),3.62(t,J＝5.6Hz,2H),3.23(s,3H)。

步骤6：N'-(5-氨基-3-(2-甲氧基乙基)-2-氧代-2,3-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)呋喃-2-碳酰肼：向乙醇中的5-氨基-7-氯-3-(2-甲氧基乙基)噻唑[4,5-d]嘧啶-2(3H)-酮(6.8g,0.026mol)中添加糠酸酰肼(4.9g,0.039mol)并在密封管中加热到100℃且保持19h。通过TLC监测反应。在反应完成后，将反应混合物冷却到RT，在降低的压力下浓缩。向该残余物中添加石油醚，得到固体(7.2g,79％)，将其过滤且未经进一步纯化即原样用于下一步骤。LCMS：351.2[M+1]⁺。

步骤7：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-甲氧基乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮：用BSA(50.8mL,11eq)和HMDS(76mL,25eq)处理N'-(5-氨基-3-(2-甲氧基乙基)-2-氧代-2,3-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)呋喃-2-碳酰肼(7.2g,0.20mol)。将反应混合物加热到127℃且保持20h。在反应完成后，将反应混合物冷却到0℃并添加甲醇(30mL)。将沉淀出的固体过滤，并用石油醚洗涤，得到灰白色固体(5.9g,87％)，其未经进一步纯化即原样用于下一步骤。LCMS：333.2[M+1]⁺。

步骤8：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-羟基乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮：在-50℃下向5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-甲氧基乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(5.9g,0.017mol)于无水DCM(100mL)中的溶液中缓慢添加BBr₃(11.5g,2.6eq)并在25-30℃下维持19h。通过TLC监测反应。在反应完成后，将反应混合物用冷冻水(100mL)淬灭，然后用10％碳酸氢钠溶液中和，过滤并用水洗涤，得到淡黄色固体(3.6g,65％)，其未经进一步纯化即原样用于下一步骤。LCMS：319.2[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ8.31(s,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.24(t,J＝2.8Hz,1H),6.74-6.74(m,1H),4.94(t,J＝5.6Hz,1H),4.01(t,J＝6.4Hz,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H)。

步骤9：甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯：在60℃下将5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-羟基乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2-(3H)-酮(3.6g,0.011mol)溶解于无水DMF(95mL)中，直到反应混合物变得澄清为止。将反应物质冷却到0℃，并添加TEA(3g,3eq)，之后添加甲磺酰氯(1.6g,1.3eq)。将反应混合物在RT下搅拌48h。在反应完成后，添加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)并提取。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发，得到待用于下一步骤的呈黄色固体的分析纯化合物(3.0g,67％)。LCMS：397.2[M+1]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ8.37(s,2H),7.95(s,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.74-6.74(m,1H),4.56(t,J＝5.2Hz,2H),4.26(t,J＝4.8Hz,2H),3.16(s,3H)。

中间体2：2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)-乙醛

向5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-羟基乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并-[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(根据针对中间体1步骤8所述的方案制备，3.6g,10.74mmol)于THF(150mL)中的搅拌溶液中添加IBX(15.04g,53.72mmol)于DMSO(35mL)中的溶液。将所得混合物在RT下搅拌6h。用DCM稀释反应混合物，并分离各层。将有机层依次用饱和NaHCO₃溶液和饱和盐水溶液洗涤。然后将其经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩。所获得的粗制残余物(3.0g,75％)未经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS 317[M+1]⁺。

I.2.最终化合物的合成

实施例1：3-(2-(4-(4-((1H-1,2,3-三唑并-4基)甲氧基-2氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-(8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮：

步骤1：4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)：在0℃下在氮气下向4-溴-3-氟苯酚(10g,0.052mol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11.70g,0.063mol)、DavePhos(0.515g,0.001mol)和Pd₂(dba)₃(0.958g,0.001mol)的混合物中添加LHMDS(115mL于THF中的1.0M溶液，0.115mol)。将反应混合物在65℃下加热24h并通过TLC监测。将粗制反应混合物用饱和NH₄Cl中和，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层浓缩并通过柱色谱纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物(2.25g,14.5％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：296.15；观测值：297.2(M+1)。

步骤2：4-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)：在0℃在氮气下向氢化钠(0.7g,0.0304mol)于DMF(10mL)中的搅拌悬浮液中添加于DMF(20mL)中的羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,4.5g,0.0152mol)。将反应混合物在0℃下搅拌15min，然后添加于DMF(10mL)中的炔丙基溴(2.71g,0.0228mol)，并在RT下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用饱和NH₄Cl(20mL)处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(40％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈棕色胶状液体的4-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.6g,70.8％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：334.17；观测值：335.2(M+1)。

步骤3：1-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪(4)：在0℃下向4-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,3.6g,10.8mmol)于二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中逐滴添加于二

烷(20mL)中的4N HCl并且在RT下搅拌4h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将该盐用碳酸氢钠溶液中和，用DCM萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，然后在降低的压力下浓缩，得到呈棕色固体的1-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪(2.5g,99.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：234.12；观测值：235.2(M+1)。

步骤4：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-(丙-2炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(5)：向1-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪(4,1g,4.3mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.9g,2.2mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,6.8mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下浓缩反应物质。将粗制产物用乙醚和乙腈的混合物洗涤，得到呈棕色固体的5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(0.7g,57.8％)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.63％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：534.16；观测值：534.8(M+1)。

步骤5：3-(2-(4-(4-((1H-1,2,3-三唑并-4基)甲氧基-2氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-(8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物1)：在RT下向5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(丙-2炔-1-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(5，0.4g，0.7摩尔)于DMF(4.5mL)和MeOH(0.5mL)中的搅拌溶液中添加碘化亚铜(0.030g,0.014mmol)。在氮气气氛下在0℃下，向反应混合物中逐滴添加三甲基甲硅烷基叠氮化物(0.2mL,1.4mmol)并加热至100℃且保持16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在降低的压力下浓缩。通过用乙醚和乙腈(50:50)洗涤进一步富集产物，得到呈棕色固体的化合物1：3-(2-(4-(4-((1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-2-氟苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(0.115g,26.6％)。HPLC纯度(XB0595TF)：92.08％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：577.18；观测值：578.0(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ15.12(brs,1H),8.32(brs,2H),7.96(s,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.96-6.89(m,2H),6.79-6.73(m,2H),5.13(s,2H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),2.86(m,4H),2.72-2.63(m,6H)。

实施例2：5-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)-1,3,4-

二唑-2(3H)-酮

步骤1：4-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)：向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,2g,6.75mmol)和溴乙酸乙酯(1.67g,10.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(2.76g,20.0mmol)并且将反应混合物在90℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(20％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈棕色液体的产物(1.9g,73.6％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：382.19；观测值：383.0(M+1)。

步骤2：2-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酸乙酯(3)：向4-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,1.9g,5.0mmol)于二氯甲烷中的冰冷溶液中添加于二

烷(15mL)中的4N HCl，并将反应混合物在RT下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，将反应物质用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在降低的压力下浓缩，得到呈棕色液体的产物(1.00g,71.4％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：282.14；观测值：283.1(M+1)。

步骤3：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酸乙酯(4)：向2-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酸乙酯(3,1.0g,3.52mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(1.12g,2.82mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物中添加DIPEA(1.3g,11.0mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂，并用通过乙醚:乙腈(1:1)混合物再结晶纯化，得到呈深棕色固体的标题化合物(0.70g,42.5％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：582.18；观测值：583.0(M+1)。

步骤4：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酰肼(5)：向2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酸乙酯(4,0.2g,0.34mmol)于乙醇(20mL)中的溶液中添加水合肼(50mg,1.0mmol)并且将反应混合物在90℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂，并通过用乙醚和乙腈混合物再结晶纯化，得到呈白色固体的标题化合物(150mg,76.9％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：568.18；观测值：569.0(M+1)。

步骤5：5-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)-1,3,4-

二唑-2(3H)-酮(化合物2)：向化合物5(0.158g,0.27mol)于1,4-二

烷(10mL)和DMF(1mL)中的悬浮液中添加TEA(0.084g,0.83mol)，并将反应混合物在100℃下搅拌4h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力去除溶剂，并通过制备型HPLC纯化，得到呈白色固体的标题化合物2(21mg,12.7％)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.33％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：594.16；观测值：595.1(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.52(brs,1H),8.32(brs,2H),7.96(d,J＝0.80Hz,1H),7.25(d,J＝3.20Hz,1H),6.99-6.92(m,2H),6.78(dd,J＝2.0和8.8Hz,1H),6.74(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),5.01(s,2H),4.08(t,J＝6.40Hz,2H),2.87(m,4H),2.72-2.63(m,6H)。

实施例3：5-氨基-3-(2-(4-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：1-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪(3)：在RT下向3-氟-4-碘吡啶(2,2g,4.48mmol，1eq)于NMP(20mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.694g,5.38mmol，1.2eq)和哌嗪(1,0.484g,6.72mmol,1.5eq)。将所得混合物在80℃下搅拌16h。在完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将残余物吸收于水中并冻干。将所获得的胶状固体与乙醚和正戊烷研磨，得到呈浅黄色固体的1-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪3(0.750g,92％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：181.21；观测值：182.2(M+1)。

步骤2：5-氨基-3-(2-(4-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物3)：在RT下向1-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪(3,0.071g,0.392mmol,1eq)于DMF(2mL)中的溶液中添加甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[4,5-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]-嘧啶-1(2H)-基)乙酯(4,0.150g,0.392mmol,1.03eq)和DIPEA(0.100g,0.775mmol,2eq)。将反应在80℃下搅拌16h。在完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物用水稀释，并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机相干燥(无水Na₂SO₄)，过滤并在降低的压力下浓缩。通过反相制备型HPLC纯化所获得的粗制产物，得到呈棕色固体的标题化合物3(0.013g,7％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：481.51；观测值：482(M+1)。HPLC纯度(XB0595TF.M)：97.75％。

实施例4：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酰胺

步骤1：1-(苄氧基)-5-溴-2,4-二氟苯(2)的制备：向5-溴-2,4-二氟苯酚(1,20g,95.69mmol)和苄基溴(18g,105.26mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液中添加K₂CO₃(39.62g,287.08mmol)并且将反应混合物在90℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(5％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(24g,85％)。LCMS(ESI负离子)；m/z：计算值：297.98；观测值：296.8(M-1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.60-7.67(m,1H),7.55-7.58(m,1H),7.37-7.44(m,5H)和5.20(s,2H)。

步骤2：4-(5-(苄氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的制备：向1-(苄氧基)-5-溴-2,4-二氟苯(2,24g,80.08mmol)、N-Boc哌嗪(16.55g,88.88mmol)和叔丁醇钠(17.06g,177.77mmol)于甲苯(200mL)中的溶液中添加t-Bu Xphos(3.43g,8.08mmol)。用N₂吹扫反应混合物，并添加Pd₂(dba)₃(3.69g,4.04mmol)。将反应混合物在115℃下加热16h，并在完成(TLC)后，将反应混合物冷却并通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，并通过柱色谱(12-15％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅棕色油状物的标题化合物(18g,55.14％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：404.19；观测值：405(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.34-7.38(m,5H),7.26(t,J＝11.60Hz,1H),6.94(t,J＝8.80Hz,1H),5.16(s,2H),3.45(m,4H),2.90(t,J＝4.8Hz,4H)和1.42(s,9H)。

步骤3：4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)：向4-(5-(苄氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,18g,44.55mmol)于乙醇(180mL)中的澄清溶液中添加10％ Pd-C(2.7g,15％ Wt.)并且将反应混合物在H₂气氛下在RT下搅拌5h。在完成(TLC)后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并用甲醇(500mL)洗涤。将滤液浓缩，并与乙醚研磨，得到呈灰白色固体的标题化合物(13g,92.6％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：314.14；观测值：315.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ6.92(t,J＝8.8Hz,1H),6.56-6.51(m,2H),3.57(m,4H),2.91(t,J＝4.80Hz,4H)和1.49(s,9H)。

步骤4：4-(5-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5)：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,10g,31.7mmol)和溴乙酰胺(5.25g,38.09mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的悬浮液中添加K₂CO₃(13.14g,95.23mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌5h并通过TLC监测。在完成后，将反应混合物用水(100mL)稀释并将粗制产物用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，并与乙醚研磨，得到呈浅灰棕色固体的标题化合物(9.5g,80.7％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：371.17；观测值：372.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ6.92(t,J＝11.2Hz,1H),6.92(m,2H),5.66(brs,1H),4.53(s,2H),3.61(t,J＝5.20Hz,4H),2.98(t,J＝4.40Hz,4H)和1.51(s,9H)。

步骤5：2-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺(6)：向4-(5-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-2,4-二氟苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5,8.0g,21.5mmol)于DCM中的冰冷溶液添加于二

烷(80mL)中的4N HCl并且将反应混合物在RT下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，将HCl盐过滤。将盐溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到呈灰白色固体的游离碱(3.5g,59.9％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：271.11；观测值：272.1(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.49(brs,1H),7.43(brs,1H),7.25(t,J＝11.60Hz,1H),6.75(t,J＝8.80Hz,1H),4.51(s,2H)和2.81-2.86(m,8H)。

步骤6：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酰胺(化合物4)：向2-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺(6,3.5g,12.91mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)-乙酯(5.88g,14.84mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(70mL)中的混合物中添加DIPEA(8.33g,64.57mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，将反应物质在降低的压力下浓缩到体积的一半，并冷却到0℃。产物沉淀为淡黄色固体。将其过滤并干燥。由于纯度不好，因此将其悬浮在DMSO(150mL)中，并在110℃下加热1h且在热条件下过滤。将滤液冷却到0℃，用MeOH稀释，然后缓慢添加水以促进沉淀。将混合物在RT下搅拌1h并过滤。用水和甲醇洗涤固体，得到呈浅黄色固体的化合物4(2.5g,34％)。HPLC纯度(XB_0595TF.M)：92.4％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：571.16；观测值：572.0(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(t,J＝0.8Hz,1H),7.44(brs,1H),7.40(brs,1H),7.27-7.21(m,2H),6.76-6.72(m,2H),4.49(s,2H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),2.90(m,4H),2.71(t,J＝6.00Hz,2H)和2.63(m,4H)。

实施例5和6：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮：

步骤1：4-(2-氟-4-(2-(甲硫基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,0.3g,1.102mmol,1eq)和1-氯-2-甲基硫烷基-乙烷(0.168g,1.519mmol,1eq)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加K₂CO₃(0.419g,3.027mmol,2eq)并且将反应混合物在90℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(50％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制残余物，得到呈灰白色固体的产物(0.3g,53％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：370.48；观测值：370.9(M+)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02(m,1H),6.85(m,1H),6.72(m,1H),4.09-4.12(m,2H),3.45(d,J＝4.40Hz,4H),2.80-2.86(m,6H),2.14(s,3H)和1.42(s,9H)。

步骤2：4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3、4)的合成：向4-(2-氟-4-(2-(甲硫基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,0.3g,0.809mmol,1eq)于乙酸(10mL)中的冰冷溶液中逐滴添加过氧化氢(0.187mL)并且在相同温度下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物倒入4N NaOH溶液(20mL)中，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(80％EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(0.29g,93％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：386.48；观测值：387.9(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02-7.04(m,1H),6.88-6.92(m,1H),6.75-6.78(m,1H),4.28-4.35(m,2H),3.45(d,J＝4.52Hz,4H),3.21-3.27(m,1H),3.00-3.05(m,1H),2.85-2.87(m,4H),2.63(s,3H)和1.41(s,9H)。

对外消旋混合物(0.29g)进行SFC手性分离(将0.29g样品溶解于3mL甲醇中)，柱-Lux A1流动相：70:30(A:B)，A＝液体CO₂，B＝甲醇，流动速率：0.9mL/min；波长：220nm)，分别得到呈灰白色固体的130mg峰1(3)和130mg峰2(4)。注意：来自SFC纯化的峰1被任意地视为(S)异构体，且峰2被视为(R)异构体。

化合物5的合成：

步骤3：(S)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪(5)的合成：向(S)-4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,0.13g)于二氯甲烷(1mL)中的冰冷溶液中添加于二

烷(1mL)中的4M HCl并且将反应混合物在0℃下搅拌1h。在完成后，将反应混合物在室温下在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨。然后将其溶解于甲醇中，通过碳酸硅树脂用以制得游离碱5(0.094g,59％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：286.37；观测值：287(M+1)。

步骤4：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物5)的合成：将甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(7,0.11g,0.303mmol,1eq)、(S)-1-(2-氟-4-(2(甲基亚磺酰基)-乙氧基)苯基)哌嗪(5,0.094g,0.33mmol,1.1eq)和二异丙基乙胺(0.195g,1.514mmol,5eq)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物在120℃下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。对所获得的粗制残余物进行制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体的化合物5(5mg)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：586.66；观测值：587.2(M+1)。HPLC纯度(XB0595TF.M)：91.67％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(s,2H),7.95-7.96(m,1H),7.24-7.25(m,1H),6.93-6.98(m,1H),6.85-6.89(m,1H),6.73-6.74(m,2H),4.25-4.30(m,2H),4.09(s,2H),3.22-3.27(m,1H),3.02(m,1H),2.87(m,5H)和2.63(m,8H)。

化合物6的合成：

步骤1：(R)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪(6)：向(R)-4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,0.13g)于二氯甲烷(1mL)中的冰冷溶液中添加于二

烷(0.5mL)中的4M HCl并且将反应混合物在0℃下搅拌1h。在完成(TLC)后，将反应混合物在室温下在降低的压力下浓缩。将所获得的粗制残余物与乙醚研磨。然后将其溶解于甲醇中，使其通过碳酸硅树脂用以制得游离碱6(0.094g)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：286.37；观测值：287(M+1)。

步骤2：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物6)：将甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(7,0.11g,0.303mmol,1eq)、(R)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)-乙氧基)苯基)哌嗪(6,0.094g,0.33mmol,1.1eq)和二异丙基乙胺(0.195g,1.514mmol,5eq)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物在120℃下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。对所获得的粗制产物进行反相制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体的化合物6(3mg)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：586.66；观测值：587.2(M+1)。HPLC纯度(XB0595TF.M)：96.6％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(宽单峰，2H),7.95-7.95(s,1H),7.24-7.25(m,1H),7.00-6.88(m,1H),6.85(m,1H),6.71-6.74(m,2H),4.25-4.31(m,2H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.22-3.29(m,2H),3.00-3.03(m,1H),2.86(s,4H)和2.62-2.70(m,8H)。

实施例7、8a和8b：(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)-苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]-嘧啶-2(3H)-酮、(+)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和(-)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-(2,4-二氟-5-(2-(甲硫基)乙氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,0.5g,1.591mmol,1eq)和1-氯-2-甲基硫烷基-乙烷(0.264g,2.386mmol,1.5eq)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加K₂CO₃(0.439g,3.181mmol,2eq)并且将反应混合物在90℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(50％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(2,0.5g,77％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：388.47；观测值：389(M+1)。

步骤2：4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3、4)的合成：向4-(2,4-二氟-5-(2-(甲硫基)乙氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,0.5g,0.001mmol，1eq)于乙酸(10mL)中的冰冷溶液中逐滴添加过氧化氢(0.312mL)，并在相同温度下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物倒入4N NaOH溶液(20mL)中，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(80％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(0.38g,86％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：404.47；观测值：348.9(M-叔丁基)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.24-7.32(m,1H),6.89-6.94(m,1H),4.39-4.45(m,2H),3.47(s,4H),3.05(m,2H),2.94(s,4H),2.64(s,3H)和1.42(s,9H)。

对以上外消旋化合物(0.38g)进行SFC手性分离(将0.38g样品溶解于5mL甲醇中，柱-Lux A1流动相：70:30(A:B)，A＝液体CO₂，B＝甲醇，流动速率：0.9mL/min；波长：220nm)，分别得到呈灰白色固体的150mg峰1(3,[α]_D＝+50.7°,c＝1.1,MeOH)和150mg峰2(4,[α]_D＝-45.2°,c＝1.1,MeOH)。

步骤3：(R,S)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪(5RS)的合成：向(R,S)-4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3和4的外消旋混合物，0.15g,0.371mmol,1eq)于二氯甲烷(2mL)中的冰冷溶液中添加于二

烷(0.5mL)中的4M HCl并且将反应混合物在0℃下搅拌1h。在完成(TLC)后，将反应混合物在室温下在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨，得到外消旋产物。然后将其溶解于甲醇中，使其通过碳酸硅树脂用以制得游离碱(0.09g)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：304.36；观测值：305(M+1)。

用于化合物7的步骤4：(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)-苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]-嘧啶-2(3H)-酮的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(6,105mg,0.265mmol,1.0eq)于DMF(2mL)中的溶液中添加(R)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪(5RS,86.46mg,0.278mmol)和DIPEA(170.85mg,0.001mmol,5eq)。将反应物质用氮气脱气并加热到120℃且保持16h。通过LCMS分析监测反应进程。在完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。通过用DCM中的5％甲醇进行的grace柱色谱纯化所获得的粗制产物，得到所需的外消旋化合物。通过制备型HPLC将其进一步纯化，得到标题化合物7(6mg，纯度96％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：604.65；观测值：605.2(M+1)。HPLC纯度(XB0595TF.M)：96.68％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(s,1H),7.50(m,1H),7.27-6.97(m,3H),6.83(m,1H),6.73-6.74(m,1H),4.36-4.45(m,2H),4.08(m,2H),3.25-3.38(m,2H),3.00-3.06(m,2H),2.94(s,3H),2.63-2.71(m,2H)和2.53-2.58(m,6H)。

步骤3’：(+)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪的合成：向(+)-4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,500mg,1.23mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的冰冷搅拌溶液中添加SnCl₄(644mg,2.47mmol)。将所得混合物在RT下搅拌2h。将反应混合物在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物与冷乙酸乙酯(2×10mL)研磨，得到粗制产物(580mg)，将其原样用于下一步骤。LCMS(M+H)305.1。[α]_D＝+24°,c＝0.5,MeOH。

用于化合物8a的步骤4’：根据与针对化合物7所述相同的程序，从(+)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪开始制备合成(+)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)-苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]-嘧啶-2(3H)-酮。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(s,1H),7.50(m,1H),7.27-6.97(m,3H),6.83(m,1H),6.73-6.74(m,1H),4.36-4.45(m,2H),4.08(m,2H),3.25-3.38(m,2H),3.00-3.06(m,2H),2.94(s,3H),2.63-2.71(m,2H)和2.53-2.58(m,6H)。[α]_D＝+24°,c＝0.1,AcOH。手性中心的绝对立体化学未知。

用于化合物8b的步骤3”和步骤4”：根据与针对化合物7所述相同的程序，从(-)-4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸酯(3)开始，由步骤3”产生(-)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪，制备(-)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：604.65；观测值：605.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.81％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,1H),7.96(s,1H),7.22-7.28(m,2H),6.74-6.85(m,2H),6.73-6.74(m,1H),4.36-4.45(m,2H),4.09(s,2H),3.28-3.30(m,1H),3.23-3.26(m,1H),3.00-3.06(m,4H),2.71-2.94(m,3H)和2.64(s,6H)。[α]_D＝-39°,c＝0.1,AcOH。手性中心的绝对立体化学未知。

实施例77：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成：在开放小瓶中将4-(2,4-二氟-5-(2-(甲硫基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20g,51.48mmol，如实施例7步骤1中所述制备)和过氧化氢脲(21.78g,231.68mmol)加热到90℃。在1小时后，使反应混合物达到室温。添加约500mL乙酸乙酯，并搅拌0.5h，然后过滤。浓缩滤液得到粗制产物。通过使用石油醚中的50％乙酸乙酯进行的柱色谱将其纯化，得到呈灰白色固体的产物(9克，42％)LCMS(ESI正离子)m/z：421.

步骤2：1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(7)的合成：向4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9g,21.40mmol)于二氯甲烷(50mL)中的冰冷溶液中添加HCl于乙醚(50mL)中的溶液。在0℃下搅拌0.5h后，使其达到室温并搅拌16h。将反应混合物在室温下在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨，得到纯产物(10g)。LCMS(ESI正离子)；m/z：321(M+1)。

步骤3：向1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(7g,22.13mmol)于无水二氯乙烷(70mL)中的搅拌悬浮液中添加三乙胺(6.259g,61.97mmol)和新制备的2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)-乙醛(7g,22.13mmol)。在室温下搅拌3h后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(9.339g,44.26mmol)。将所得混合物在室温下搅拌24h。在完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释。将分离的有机层依次用饱和碳酸氢盐溶液和饱和盐水溶液洗涤。然后将其经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(230-400硅胶，5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(3.2g,26％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：621(M+1)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(s,2H),7.95(d,J＝0.92Hz,1H),7.23-7.29(m,2H),6.82(t,J＝8.60Hz,1H),6.73-6.74(m,1H),4.40(t,J＝5.64Hz,2H),4.08(t,J＝5.96Hz,2H),3.62(t,J＝5.44Hz,2H),3.07(s,3H),2.94(s,4H),2.71(t,J＝6.04Hz,2H)和2.67-2.68(m,4H)。

实施例78：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：在0℃下在氮气下向4-溴-3-氟苯酚(1,10g,0.052mol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11.70g,0.063mol)、DavePhos(0.515g,0.001mol)和Pd₂(dba)₃(0.958g,0.001mol)的混合物中添加LHMDS(115mL于THF中的1.0M溶液，0.115mol)。将反应混合物在65℃下加热24h并通过TLC监测。将粗制反应混合物用饱和NH₄Cl中和，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层浓缩并通过柱色谱纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物(2.25g,14.5％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：296.15；观测值：297.2(M+1)。

步骤2：4-(2-氟-4-(2-(甲硫基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成：向4-(2-氟-4-(2-(甲硫基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,0.3g,1.102mmol)和1-氯-2-甲基硫烷基-乙烷(0.168g,1.519mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加碳酸钾(0.419g,3.027mmol)并且将反应混合物在90℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(50％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(0.3g,52.8％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：370.48；观测值：370.9(M+)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02(m,1H),6.85(d,J＝2.80Hz,1H),6.72(d,J＝2.00Hz,1H),4.09-4.12(m,2H),3.45(d,J＝4.40Hz,4H),2.80-2.86(m,6H),2.14(s,3H)和1.42(s,9H)。

步骤3：4-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：向4-[2-氟-4-(2-甲基硫烷基乙氧基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,0.5g,0.001mmol)于1,4-二

烷(2mL)中的溶液中添加过氧化氢脲(507.49g,0.005mmol)。将混合物加热到85℃且保持16h。在反应完成后，将其在降低的压力下浓缩。将残余物吸收于乙酸乙酯中并过滤。将滤液用水洗涤，经Na₂SO₄干燥且在降低的压力下浓缩。对所获得的粗制产物进行柱色谱(于DCM溶剂混合物中的1％甲醇作为洗脱剂)，得到产物4-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.22g,40％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：402.48；观测值：403.3(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02(宽单峰，1H),6.65-6.72(m,2H),4.41(t,J＝5.60Hz,2H),3.64(s,4H),3.44(t,J＝5.20Hz,2H),3.07(s,3H),3.00(s,4H)和1.50(s,9H)。

步骤4：1-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪(5)的合成：向4-[2-氟-4-(2-甲基磺酰基乙氧基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,0.22g,0.547mmol)于二氯甲烷(5mL)中的冰冷溶液中添加于乙醚(2mL)中的2M HCl并且将反应混合物在0℃下搅拌1h。在完成(TLC)后，将反应混合物在室温下在降低的压力下浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨，得到纯产物。然后将其溶解于甲醇中，使其通过碳酸硅树脂用以制得直接用于下一步骤的游离碱(0.105g粗制化合物)。

步骤5：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物78)的合成：向1-[2-氟-4-(2-甲基亚磺酰基乙氧基)苯基]哌嗪(5,105mg,0.347mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(125mg,0.315mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加DIPEA(204mg,1.577mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下浓缩反应物质。通过用DCM中的5％甲醇进行的柱色谱纯化粗制产物，得到产物。通过RP制备型HPLC将其进一步纯化，得到标题化合物。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：602.66；观测值：603(M+1)。HPLC纯度(PG_AM9010A3)：93.64％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),6.87-6.98(m,2H),6.73-6.74(m,2H),4.29(t,J＝5.60Hz,2H),4.08(t,J＝5.60Hz,2H),3.58(t,J＝5.60Hz,2H),3.05(s,3H),2.86(s,4H)和2.68-2.72(m,6H)。

实施例80：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(S-甲基磺亚胺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：1,2-二氟-4-(甲基亚磺酰基)苯(2)的合成：向(3,4-二氟苯基)(甲基)硫烷(1,3.0g,18.73mmol)于DCM中的冰冷溶液中添加3-氯过苯甲酸(6.78g,39.33mmol)，并在RT下将反应混合物搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用冰冷水(30mL)稀释并将粗制产物用DCM萃取。将有机层依次用硫代硫酸钠水溶液、10％ NaHCO₃、盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(50％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制产物，得到呈灰白色固体的标题产物2(2.8g,85％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：176.18；观测值：177.1(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.83-7.79(m,1H),7.73-7.66(m,1H),7.60-7.57(m,1H),2.78(s,1H)。

步骤2：(3,4-二氟苯基)(亚氨基)(甲基)-16-亚砜(sulfanone)(3)的合成：向1,2-二氟-4-(甲基亚磺酰基)苯(2,2.8g,15.89mmol)于二氯甲烷(60mL)中的溶液中添加三氟乙酰胺(3.59g,31.79mmol)、氧化镁(2.54g,63.57mmol)和二乙酸铑二聚体(0.172g,0.429mmol)并且将反应混合物用N₂吹扫2min。添加二乙酸碘苯(10.23g,31.79mmol)，并将反应混合物在RT下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，浓缩并通过制备型柱色谱纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物3(0.7g,23.0％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：191.20；观测值：192.1(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.07-8.02(m,1H),7.86-7.83(m,1H),7.75-7.71(m,1H),3.28(s,3H)。

步骤3：(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)(亚氨基)(甲基)-16-亚砜(4)的合成：向(3,4-二氟苯基)(亚氨基)(甲基)-16-亚砜(0.7g,3.66mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加哌嗪(0.32g,3.66mmol)、碳酸钾(1.51g,10.98mmol)，并将反应混合物在100℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水稀释，并将粗制产物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩。通过制备型柱色谱纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的期望产物4。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：257.33；观测值：258.1(M+1)。

步骤4：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(S-甲基磺亚胺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物80)的合成：在120℃下将(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)(亚氨基)(甲基)-16-亚砜(4,0.14g,0.545mmol)、甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.18g,0.45mmol)和DIPEA(0.176g,1.36mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水稀释，并将粗制产物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：557.62；观测值：558.1(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF.M)：93.12％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.61-7.57(m,2H),7.24(d,J＝4.8Hz,1H),7.15(t,J＝9.2Hz,1H),6.73-6.72(m,1H),4.14(s,1H),4.10(t,J＝6.00Hz,2H),3.08(m,4H),3.03(s,3H),2.73(t,J＝6.00Hz,2H),2.67-2.65(m,4H)。

实施例81：5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟苯甲酰胺

步骤1：5-氨基-2,4-二氟苯甲酸甲酯(2)的合成：向5-氨基-2,4-二氟-苯甲酸(1,0g,0.017mol)于甲醇(20.0mL)中的冰冷溶液中添加亚硫酰氯(2.514mL,0.035mol)。将所得混合物在80℃下加热1h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物在降低的压力下浓缩。将DCM和水添加到反应混合物中。将合并的有机层经硫酸钠干燥，在降低的压力浓缩，得到产物5-氨基-2,4-二氟-苯甲酸甲酯(2.8g,86.0％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：187.15；观测值：188.2(M+1)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.35-7.39(m,1H),6.82-6.87(m,1H)和3.92(s,3H)。

步骤2：2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(3)的合成：将5-氨基-2,4-二氟-苯甲酸甲酯(2,3.0g,0.016mol)和2-氯-N-(2-氯乙基)乙胺盐酸盐(3.719g,0.021mol)于二乙二醇单甲醚(12mL)中的混合物加热到170℃且保持2.5h。通过TLC监测反应进程。将水添加到反应混合物中，并用乙酸乙酯萃取。丢弃有机部分。然后用碳酸氢钠调节含水部分的pH，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机部分经无水硫酸钠干燥，并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制产物，得到产物(1.5g,29.9％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：256.25；观测值：257.0(M+1)。

步骤3：4-(2,4-二氟-5-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：向2,4-二氟-5-哌嗪-1-基-苯甲酸甲酯(3,1.0g,0.009mol)于DCM(10mL)中的冰冷溶液中添加三乙胺(1.510mL,0.012mol)和boc酐(1.278mL,0.006mol)。将所得混合物在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机部分用饱和盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，在降低的压力下浓缩，得到产物(0.800g,58％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：356.37；观测值：357.2(M+1)。

步骤4：5-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯甲酸(5)的合成：向4-(2,4-二氟-5-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,1.0g,0.003mol)于THF:水(20mL,3:1)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.176g,0.004mol)并且在RT下将反应混合物搅拌16h。通过TLC监测反应进程。浓缩反应混合物以去除THF。添加1.5N HCl以使pH呈酸性。将所形成的固体过滤，得到5-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯甲酸(0.800g,97％)。LCMS(ESI负离子)m/z：计算值：342.34；观测值：341.0(M-1)。

步骤5：4-(5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基甲酰基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6)的合成：向5-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯甲酸(5,0.200g,0.0005mol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中依次添加N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.062g,0.0007mol)、DIPEA(0.306mL,0.002mol)和T3P溶液(0.438mL,0.001mol)。将所得混合物在RT下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。将水添加到反应混合物中，并用二氯甲烷萃取。将合并的有机部分经无水硫酸钠干燥，并在降低的压力下浓缩，得到产物(0.13g,46.4％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：412.48；观测值：413.6(M+1)。

步骤6：N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)-苯甲酰胺(7)的合成：向4-(5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基甲酰基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6,0.200g,0.0004mol)于DCM(10mL)中的冰冷溶液中添加于乙醚中的HCl溶液(0.121mL，4M溶液)。将所得混合物在RT下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物在降低的压力下浓缩。将残余物用碳酸氢钠中和，并用DCM萃取。浓缩有机部分，得到N-(2-(二甲基氨基)-乙基)-2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(0.130g,62.28％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：312.36；观测值：313.2(M+1)。

步骤7：5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并-[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟苯甲酰胺(化合物81)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(8,120mg,0.0003mol)和N-[2-(二甲基氨基)乙基]-2,4-二氟-5-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(7,113mg,0.00036mol)于DMF(5mL)中的搅拌混合物中添加DIPEA(0.129mL,0.0009mol)。将所得混合物加热到120℃且保持16h。在反应完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。通过反相制备型HPLC纯化来纯化所获得的粗制残余物，得到产物。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：612.66；观测值：613.2(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：92.76％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.72(s,1H),7.52-7.56(m,1H),7.20(s,1H),7.11-7.17(m,1H),6.63(t,J＝2.00Hz,1H),4.31(bs,2H),3.91(t,J＝7.84Hz,2H),3.83(m,4H),3.63(t,J＝6.12Hz,3H),2.85(m,5H)和2.56(宽单峰，6H)。

实施例83和84：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-氨基-3-氟苯酚(2)的合成：在氮气气氛下向3-氟-4-硝基苯酚(1,10g,0.064mol)于乙酸乙酯(140mL)中的搅拌溶液中添加Pd/C(4.0g,0.038mol)。将反应混合物在氢气囊(hydrogen bladder)压力下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物通过硅藻土床过滤，并将滤液在降低的压力下浓缩，得到呈浅粉红色固体的4-氨基-3-氟苯酚(6.9g,94％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：127.12；观测值：128.2(M+1)。

步骤2：3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯酚盐酸盐(3)的合成：向4-氨基-3-氟苯酚(2,6.9g,0.054mol)于环丁砜(15mL)中的搅拌溶液中添加双(2-氯乙基)胺盐酸盐(13.56g,0.076mol)。将反应混合物在150℃下加热16h。在反应完成后，将反应混合物冷却到RT。添加约30mL冷丙酮，并在0℃下搅拌0.5h。将所形成的固体过滤并干燥，得到呈黑色固体的3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯酚盐酸盐(10g,98％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：196.23；观测值：197.1(M+1)。

步骤3：4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：向3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯酚盐酸盐(3,3.0g,0.015mol)于DMF(30mL)中的冰冷搅拌溶液中添加三乙胺，直到它变成碱性。然后添加BOC酐(3.0mL,0.041mol)，并将反应在0℃下保持0.5h。在反应完成后，将其用乙酸乙酯和水稀释。将有机层经无水硫酸钠干燥，并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制产物，得到4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g,86％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：296.34；观测值：297.1(M+1)。

步骤4：4-(2-氟-4-((4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5)的合成：向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,1.5g,0.005mol)于二

烷(25mL)中的搅拌溶液中添加3,6-二氧杂二环[3.1.0]己烷(1.089g,0.013mol)和碳酸铯(2.47g,0.008mol)。将反应混合物在100℃下加热16h。通过TLC监测反应进程。然后将反应混合物用10mL水稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将合并的有机层经无水MgSO₄干燥，在降低的压力下浓缩，得到呈棕色固体的4-(2-氟-4-((4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.800g,98％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：382.43；观测值：383.1(M+1)。

步骤5：4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢呋喃-3-醇(6)的合成：向4-(2-氟-4-((4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5,0.500g,0.001mol)于二

烷(10mL)中的冰冷溶液中添加于二

烷中的HCl溶液(4M溶液，1mL)。在室温下搅拌16h后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将残余物用10％碳酸氢钠溶液中和，并用DCM萃取。浓缩有机部分得到4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢呋喃-3-醇(0.250g,88％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：282.3；观测值：283.2(M+)。

步骤6：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]-嘧啶-2(3H)-酮(化合物83)和5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-羟基-四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e]-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物84)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)-乙酯(7,0.320g,0.00080mol)于DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢呋喃-3-醇(6,0.273g,0.0009mol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.218mL,0.002mol)。将反应混合物在120℃下加热16h。在反应完成后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC纯化来纯化残余物。然后通过手性SFC纯化将纯产物纯化，得到两种异构体5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(5.29mg)和5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

第一洗脱对映异构体：LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：582.61；观测值：583.2(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：96.23％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(bs,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝3.20Hz,1H),6.92-6.96(m,1H),6.83-6.87(m,1H),6.70-6.74(m,2H),5.48(bs,1H),4.58(d,J＝4.00Hz,1H),4.58(d,J＝4.00Hz,1H),4.07(t,J＝6.40Hz,2H),3.99-4.03(m,1H),3.85-3.89(m,1H),3.71-3.74(m,1H),3.55-3.58(m,1H),2.61(s,4H),2.708(m,2H)和2.67(m,4H)。

第二洗脱对映异构体：LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：582.61；观测值：583.2(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：93.44％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(bs,2H),7.96(s,1H),7.24(d,J＝3.32Hz,1H),6.94(t,J＝9.36Hz,1H),6.83-6.87(m,1H),6.70-6.74(m,2H),5.46(d,J＝3.84Hz,1H),4.58(d,J＝3.40Hz,1H),4.16(s,1H),4.08(t,J＝6.24Hz,2H),4.02-4.03(m,1H),3.86-3.89(m,1H),3.72(d,J＝9.96Hz,1H),3.57(d,J＝9.60Hz,1H),2.9277(m,4H),2.9363(m,2H)和2.7029(s,4H)。

实施例88：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(2-(3-溴-4-氟苯氧基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(2)的合成：将3-溴-4-氟苯酚(1,2.3g,0.012mol)、(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(3.74g,0.016mol)于DMF(30mL)、K₂CO₃(2.49g,0.018mol)中的混合物加热到70℃且保持16h。通过TLC监测反应进程。在反应完成后，将水(20mL)添加到反应混合物中，并用二氯甲烷(30mL×2)萃取。将合并的有机部分用饱和盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在降低的压力下浓缩，得到标题化合物(2g,29％)，将其原样用于下一步骤。

步骤2：1-(5-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氟苯基)-哌嗪(3)的合成：向2-(3-溴-4-氟-苯氧基)乙氧基-叔丁基二甲基硅烷(2,1.0g,0.003mol)和哌嗪(499mg,0.006mol))于甲苯(15mL)中的搅拌溶液中添加NaOBu-t(412mg)。将所得混合物用氮气脱气。然后添加BINAP(107mg,0.00017mol)和乙酸钯(262mg,0.0003mol)，并将所得混合物加热到110℃且保持16h。在完成后，将反应混合物过滤，并将滤液在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制残余物，得到标题化合物(0.3g,29.5％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：354.54；观测值：355.3(M+1)。

步骤3：2-(4-氟-3-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇(4)的合成：向1-(5-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氟苯基)-哌嗪(3,0.354g,0.0009mol)于THF(10mL)中的冰冷溶液中缓慢添加TBAF(0.499mL，4M于THF中)。使所得混合物达到RT并在此搅拌16h。在反应完成后，将反应混合物用水和乙酸乙酯稀释。将分离的有机层经无水硫酸钠干燥，在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制产物，得到标题化合物(0.240g,98.99％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：240.28；观测值：241.2(M+1)。

步骤4：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物88)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.300g,0.0007mol)于DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加2-(4-氟-3-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇(4,0.218g,0.0009mol)和DIPEA(0.397mL,0.002mol)。将反应混合物加热到120℃且保持16h。在完成后，将反应混合物浓缩并通过反相制备型HPLC纯化来纯化所获得的粗制产物，得到呈灰白色固体的标题化合物。HPLC纯度(XB_0595TF)：98.29％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：540.57；观测值：541.0(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.19(s,1H),8.39-8.45(bs,2H),7.97(s,1H),7.11(m,1H),6.75(s,1H),6.59(m,2H),4.86(m,1H),4.32(m,2H),3.95-3.98(m,4H),3.68-3.70(m,2H),3.63(m,3H),2.94-3.00(m,2H)和3.69(s,2H)。

实施例90：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：3-((5-(4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1,1.2g,2.9mmol)和3-(羟基甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(1.1g,4.3mmol)于甲苯(10mL)中的搅拌溶液中添加三苯基膦(1.8g,6.9mol)，之后在0℃下逐滴添加DIAD(1.39g,6.9mmol)。将反应混合物在110℃下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(20％ EtOAc/己烷)纯化所获得的粗制物，得到呈棕色液体的标题化合物(1.4g,63.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：547.25；观测值：548.1(M+1)。

步骤2：3-((2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3)的合成：在氮气气氛下向3-((5-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(0.5g,0.91mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中添加10％ Pd/C(0.2g)。将反应混合物在室温下在氢化气氛下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，使用硅藻土过滤反应混合物以去除Pd/C。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在降低的压力下浓缩，得到呈棕色胶状固体的标题化合物(280mg,73.5％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：413.21；观测值：414.3(M+1)。

步骤3：3-((5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4)的合成：在50mL密封管中向3-((2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(3,100mg,0.242mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(86mg,0.218mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(94mg,0.726mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂。将反应物质用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过制备型TLC纯化粗制产物，得到呈深棕色固体的标题化合物(25mg,14.4％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：713.26；观测值：714.1(M+1)。

步骤4：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(吗啉-3-基甲氧基)-苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物90)的合成：在0℃下向3-((3-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-4,5-二氟苯氧基)-甲基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(4,25mg,0.035mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加于二

烷(1.5mL)中的4N HCl并且将反应混合物在RT下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩，得到粗制产物，将其用乙腈洗涤，得到呈棕色固体的标题化合物(16mg,73.3％)。HPLC纯度(AM9010A3)：98.49％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：613.20；观测值：614.1(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.33(brs,1H),9.53(brs,2H),8.41(brs,2H),7.97(s,1H),7.40(t,J＝11.20Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.01(t,J＝7.60Hz,1H),6.75-6.74(m,1H),4.33-4.23(m,4H),4.02-3.93(m,4H),3.69-3.62(m,6H),3.27(m,3H),2.98(m,4H)。

实施例91：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-(5-((1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-3-基)氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6.0g,17.22mmol)和6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(3.82g,20.67mmol)于无水DMF(30mL)中的悬浮液中添加K₂CO₃(7.13g,51.67mmol)并且将反应混合物在100℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩，并通过柱色谱纯化粗制物，得到呈无色液体的标题化合物2(3.5g,36％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：533.57；观测值：534.1(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.38-7.28(m,6H),6.89-6.88(m,1H),5.49-5.48(m,1H),5.10-4.65(m,2H),4.15(m,1H),4.05-4.03(m,1H),3.59-3.49(m,6H),2.96-2.88(m,4H),1.40(s,9H)。

步骤2：4-(5-(((3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成：将4-(5-((1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-3-基)氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3.5g,6.56mmol)于二氯甲烷(60mL)中的溶液冷却到-70℃并且缓慢添加DAST(2.11g,0.013mmol)，并且将反应混合物在RT下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水稀释并将粗制产物用二氯甲烷萃取。将有机层依次用10％NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗制产物。通过正相二氧化硅柱色谱将所形成的非对映异构体分离为峰1和峰2。通过SFC手性柱分离存在于峰1中的对映异构体；方法：YMC纤维素SC_IPA；70:30(A:B)，A＝液体CO₂，B＝IPA，流动速率：0.9mL/min；波长：220nm。浓缩从手性柱洗脱出的第一峰，得到呈灰白色固体的标题化合物3(0.7g,19％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：535.56；观测值：536.2(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.38-7.29(m,6H),6.97-6.95(m,1H),5.38-5.25(m,1H),5.11-5.04(m,2H),3.84-3.79(m,7H),3.22-3.16(m,4H),1.42(s,9H)。

步骤3：(3S,4S)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：向4-(5-(((3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.23g,0.429mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的悬浮液装入10％碳载钯(0.049g)并且在氢气囊压力下在室温下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，将反应物质通过硅藻土垫过滤并浓缩，得到呈淡棕色固体的标题化合物4(0.16g,92.8％)；LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：401.43；观测值：402.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ6.92(t,J＝8.8Hz,1H),6.56-6.51(m,2H),3.57(m,4H),2.91(t,J＝4.80Hz,4H),1.49(s,9H)。

步骤4：(3R,4R)-3-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5)的合成：向(3S,4S)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.16g,0.399mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.15g,0.39mmol)于无水DMF(3mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.13g,0.83mmol)并且将反应混合物在密封管中在120℃下加热16h。在反应完成(LCMS)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物5(0.06g,21.4％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：701.73；观测值：702.3(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(s,2H),7.95(t,J＝0.80Hz,1H),7.30-7.23(m,2H),6.88(t,J＝8Hz,1H),6.73-6.72(m,1H),5.32(s,1H),5.06-5.04(m,1H),4.06(t,J＝12Hz,2H),3.60-3.49(m,4H),2.92(s,4H),2.73-2.68(m,2H),2.67-2.51(m,4H),1.41(s,9H)。

步骤5：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物91)的合成：在氮气压力下向(3R,4R)-3-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.06g,0.086mmol)于二氯甲烷(3mL)中的冰冷却溶液中添加于乙醚(3mL)中的2M HCl。将反应混合物在RT下搅拌3h。在反应完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩，与乙醚研磨并干燥，得到呈灰白色固体的标题化合物91(0.02g,38.9％)。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：601.61；观测值：602.2(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF)：97.51％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.26(brs,1H),9.83(brs,2H),8.41(brs,2H),7.96(d,J＝0.30Hz,1H),7.46-7.43(m,1H),7.40-7.26(m,1H),7.25-7.08(m,1H),6.75-6.74(m,1H),5.42(s,1H),5.26-5.24(m,1H),4.33(m,2H),3.94-3.91(m,2H),3.64-3.55(m,10H),3.39-3.27(m,2H),3.17-3.05(m,2H)。

实施例95：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(R)-甲磺酸2-氧代吡咯烷-3-基酯(6)的合成：在0℃下向(3R)-3-羟基吡咯烷-2-酮(5,1.0g,9.9mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加TEA(2.0g,19.8mmol)和甲磺酰氯(1.36g,11.9mmol)。将所得反应混合物在RT下搅拌2h。在反应完成后，将反应混合物用NH₄Cl溶液淬灭，并用DCM萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化粗制产物，得到纯产物(1.2g,67.0％)；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ5.17(t,J＝7.96Hz,1H),3.53-3.50(m,1H),3.43-3.38(m,1H),3.27(s,3H),2.69-2.64(m,1H),2.43-2.36(m,1H)。

步骤2：(S)-4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,900mg,2.86mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(791mg,5.73mmol)和(R)-甲磺酸2-氧代吡咯烷-3-基酯(6,769mg,4.3mmol)并且在80℃下加热16h。在反应完成后，将反应混合物用饱和NH₄Cl溶液处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化粗制反应混合物，得到标题化合物(900mg,78％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：397.18；观测值：398.1(M+1)。

步骤3：(S)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)吡咯烷-2-酮(3)的合成：在0℃下向(S)-4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,900mg,2.26mmol)于二氯甲烷(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加于二

烷(2.5mL)中的4NHCl并且在RT下搅拌3h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将盐溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到呈灰白色固体胶状物的游离碱(400mg,58.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：297.13；观测值：298.1(M+1)。

步骤4：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)-苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物95)的合成：向(S)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)吡咯烷-2-酮(3,350mg,1.18mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(608mg,4.71mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(420mg,1.06mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力去除溶剂，并使反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并过滤。将滤液在降低的压力下浓缩，并通过使用(3％甲醇/二氯甲烷)进行的快速柱色谱纯化，得到标题化合物(250mg,34.1％)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.08％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：597.17；观测值：598.0(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),8.08(s,1H),7.95(s,1H),7.24-7.18(m,2H),6.97(t,J＝8.80Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),4.92(t,J＝7.60Hz,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.27-3.18(m,2H),2.91(m,4H),2.73-2.64(m,6H),2.03-1.98(m,1H)。

实施例96：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(S)-甲磺酸2-氧代吡咯烷-3-基酯(6)的合成：在0℃下向(S)-3-羟基吡咯烷-2-酮(5,2.0g,0.02mol)于DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(4.0g,0.04mol)和甲磺酰氯(2.49g,0.022mol)。将所得反应混合物在RT下搅拌2h。在反应完成后，将反应混合物用NH₄Cl溶液淬灭，并用DCM萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩，得到呈淡黄色液体的(S)-甲磺酸2-氧代吡咯烷-3-基酯(1.4g,39.5％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：179.03；观测值：180.1(M+1)。

步骤2：(R)-4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,1.5g,4.8mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加(S)-2-氧代吡咯烷-3-基甲磺酸酯(6,1.3g,7.2mmol)和K₂CO₃(1.32g,9.6mmol)，并将其加热到90℃且保持16h。在反应完成后，将反应混合物用饱和NH₄Cl溶液处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化粗制反应混合物，得到呈淡棕色固体的标题化合物(1.0g 45.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：397.18；观测值：398.1(M+1)。

步骤3：(R)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)吡咯烷-2-酮(3)的合成：在0℃下向4-[2,4-二氟-5-[(3R)-2-氧代吡咯烷-3-基]氧基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2,1.0g,2.5mmol)于二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中逐滴添加于二

烷(10mL)中的4N HCl并且在RT下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将盐溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到呈灰白色固体胶状物的游离碱(600mg,72.9％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：297.13；观测值：298.2(M+1)。

步骤4：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)-苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物96)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(300mg,0.76mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(0.49g,3.79mmol)和(R)-3-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)吡咯烷-2-酮(337mg,1.14mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力去除溶剂，并使反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并过滤。将滤液在降低的压力下浓缩，并通过使用(3％甲醇/二氯甲烷)进行的快速柱色谱纯化，得到标题化合物。HPLC纯度(XB0595TF)：97.73％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：597.17；观测值：598.0(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),8.09(s,1H),7.95(s,1H),7.19-7.25(m,2H),6.97(t,J＝8.64Hz,1H),6.74(s,1H),4.93(t,J＝7.56Hz,2H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.18-3.26(m,2H),2.91(m,4H),2.64-2.73(m,6H),1.98-2.03(m,1H)。

实施例99：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：3-((4-(4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2)的合成：在RT下向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1,2.0g,6.05mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加3-(羟基甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2.63g,12.1mmol)、三苯基膦(4.76g,12.1mmol)和DIAD(2.45g,12.1mmol)。将反应混合物在密封管中在120℃下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在反应完成后，使反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配，并将分离的有机层用盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并且在真空下浓缩，得到粗制产物。通过柱色谱(20％ EtOAc/己烷)纯化所获得的粗制物，得到3-((4-(4-(((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(1.0g,31.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：529.26；观测值：530.1(M+1)。

步骤2：3-((3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(3)的合成：在RT下向3-((4-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2,600mg,1.1mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加10％ Pd/C(120mg)并且在氢气气氛下搅拌16h。在完成后，使用硅藻土过滤反应混合物以去除Pd/C。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在降低的压力下浓缩，得到呈胶状固体的3-((3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(350mg,61.7％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：395.22；观测值：396.1(M+1)。

步骤3：3-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e]-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-甲基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(4)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(200mg,0.631mmol)和3-((3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(300mg,0.756mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(292mg,2.27mmol)并且将反应混合物在100℃下搅拌16h。通过TLC监测反应进程，使反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。将分离的有机层用NaHCO₃溶液、盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在降低的压力下浓缩，得到粗制产物。通过制备型HPLC纯化粗制产物，得到纯3-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(80mg,21.4％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：695.26；观测值：696.1(M+1)。

步骤4：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物99)的合成：向3-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e]-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4,80mg,0.11mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加于乙醚(2mL)中的2N HCl并且将所得反应混合物在RT下搅拌2h。在完成反应后，在降低的压力下浓缩反应混合物，得到粗制化合物，并且通过制备型HPLC将其纯化，得到呈灰白色固体的纯5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(15mg,22％)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.90％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：595.21；观测值：596.1(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(m,1H),7.24(dd,J＝0.80Hz和3.40Hz,1H),6.92(t,J＝10.00Hz,1H),6.80(dd,J＝2.80Hz和14.00Hz,1H),6.73(dd,J＝2.00Hz和3.40Hz,1H),6.67(dd,J＝2.40Hz和8.80Hz,1H),4.08(t,J＝6.40Hz,2H),3.81-3.74(m,3H),3.67-3.64(m,1H),3.34(m,1H),3.18(t,J＝10.80Hz,1H),3.01-2.98(m,1H),2.85(m,4H),2.77-2.67(m,4H),2.63(m,4H)。

实施例100：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-2-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2)的合成：向2-(羟基甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(1,5.0g,23.01mmol)于无水DCM(50mL)中的冷却悬浮液中逐滴添加甲烷磺酰氯(3.42g,29.92mmol)并且将反应混合物在RT下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水稀释，并将粗制产物用DCM萃取，浓缩并通过柱色谱(30％EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈浅黄色胶状物的标题化合物2(6.0g,87％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：295.35；观测值：196.1(M+1-100)。

步骤2：2-((4-(4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3)的合成：向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2,0.5g,1.51mmol)和2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(0.53g,1.81mmol)于无水DMF(10mL)中的悬浮液中添加K₂CO₃(0.63g,4.54mmol)并且将反应混合物在100℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应物质通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩并且通过柱色谱(30％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物3(0.35g,39％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：529.61；观测值：530.3(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.39-7.35(m,5H),7.32-7.00(m,1H),6.97-6.85(m,1H),6.84-6.72(m,1H),5.11(s,2H),3.98-3.96(m,2H),3.86-3.73(m,2H),3.70-3.66(m,2H),3.64-3.43(m,2H),3.38-3.34(m,4H),3.32(m,1H),2.89(m,4H)。

步骤3：2-((3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4)的合成：向2-((4-(4-((苄氧基)羰基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3,0.33g,0.62mmol)于乙酸乙酯(6mL)中的溶液中装入10％碳载钯(0.060g)并且将反应混合物在氢气囊压力下在室温下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液在降低的压力下浓缩，得到呈浅棕色固体的叔丁基标题化合物4(0.18g,65％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：395.48；观测值：396.3(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ6.95(t,J＝10.00Hz,1H),6.84-6.80(m,1H),6.72-6.70(m,1H),3.96-3.95(m,2H),3.92-3.83(m,2H),3.74-3.67(m,2H),3.65-3.64(m,1H),3.33-2.99(m,9H),1.42(s,9H)。

步骤4：2-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-甲基)-吗啉-4-羧酸叔丁酯(5)的合成：在密封管中将甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.16g,0.40mmol)、2-((3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4,0.176g,0.444mmol)和DIPEA(0.26g,2.01mmol)于无水DMF(3mL)中的混合物在120℃下加热16h。在完成(TLC)后，将反应混合物冷却到RT，用水稀释，并将粗制固体过滤并且通过柱色谱(70％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物5(0.05g,16.4％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：695.77；观测值：696.0(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95(brs,1H),7.24(s,1H),6.92(m,1H),6.83-6.73(m,1H),6.69(d,J＝8.80Hz,2H),4.08-3.95(m,2H),3.85-3.83(m,2H),3.70(m,2H),3.43(m,2H),3.33(m,1H),2.85(m,4H),2.68-2.63(m,4H),2.45-2.33(m,4H),1.41(s,9H)。

步骤5：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-2-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物100)的合成：向2-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(5,0.04g,0.057mmol)于二氯甲烷(1mL)中的冰冷溶液添加于乙醚(1mL)中的2M HCl并且将反应混合物在RT下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将形成的固体(HCl盐)过滤，在降低的压力下干燥，得到呈灰白色固体的标题化合物100(0.014g,36％)；HPLC纯度(XB_0595TF.M)：95.72％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：595.35；观测值：596.2(M+1)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.11(brs,1H),9.39-9.41(m,2H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.26-7.27(m,1H),7.04(t,J＝9.64Hz,1H),6.90-6.94(m,1H),6.74-6.77(m,2H),4.14(t,J＝3.32Hz,2H),3.99-4.03(m,4H),3.91-3.94(m,2H),3.78(t,J＝12.12Hz,1H),3.60-3.61(m,2H),3.30-3.48(m,3H),3.271-3.198(m,2H),3.17-3.00(m,4H)。

实施例101和102：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成：向4-溴-3-氟苯酚(1,15g,0.079mol)、哌嗪-1-羧酸苄酯(20.76g,0.094mol)、DavePhos(3.704g,0.009mol)、Pd₂(dba)₃(7.186g,0.008mol)于THF(100mL)中的冰冷搅拌溶液中添加LHMDS(100mL)。在添加后，使反应达到室温。然后将其加热到65℃且保持24h。在完成后，将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(230-400硅胶，30％ EA/石油醚作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(10.00g,30.1％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：330.36；观测值：331.1(M+1)。

步骤2：4-(4-((1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成：向4-(2-氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6.8g,20.58mmol)、6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-羧酸叔丁酯(4.986g,26.76mmol)于1,4-二

烷(20mL)中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃(10.3g,30.88mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16h。然后将其过滤以去除无机物。通过柱色谱(230-400硅胶，30％ EA/石油醚作为洗脱剂)纯化在浓缩滤液后获得的粗制残余物，得到灰白色固体(6.00g,56.0％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：515.58；观测值：516.2(M+1)。

步骤3：4-(4-((-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4A和4B)的合成：在-20℃向4-(4-((1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-3-基)氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3,6g,11.64mmol)于DCM(30mL)中的冰冷搅拌溶液中添加DAST(5.816g,34.91mmol)。将所得混合物在-20℃下搅拌0.5h，然后在RT下搅拌16h。在反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO₃溶液淬灭，并用DCM萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(230-400硅胶，30％ EA/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到两个产物级分。级分-1-1.4g，级分-2-900mg。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：517.57；观测值：518.2(M+1)。

通过手性SFC纯化(IPA中的0.5％ DEA，YMC纤维素-SC)进一步纯化这两个级分，得到对映异构体4A和4B

步骤4：(3R,4R)-3-氟-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5A)的合成：在氮气气氛下向4-(4-(((3R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4A,430mg,0.831mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加Pd/C 10％(200mg)。将所得混合物在RT下在氢气气氛下搅拌32h。然后将其通过硅藻土垫过滤以去除Pd/C。浓缩滤液后获得粗制残余物，得到粘性材料。粗制材料未经纯化即用于下一步骤(0.23g,69.3％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：383.44；观测值：384.3(M+1)。

步骤5：(3R,4R)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并-[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(7A)的合成：向(3R,4R)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并-[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5A,100mg,0.261mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙醛(82mg,0.261mmol)和Et₃N(52mg,0.552mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3h。然后添加NaBH(OAc)₃(165mg 0.522mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌24h。在完成后，将反应混合物用DCM稀释。将分离的有机部分依次用饱和碳酸氢盐溶液、饱和盐水溶液洗涤。在经无水Na₂SO₄干燥后，将其过滤并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(230-400硅胶，5％ MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(0.025g,14.0％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：683.74；观测值：684.3(M+1)。

步骤6：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物101)的合成：

向(3R,4R)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(7A,25mg,0.037mmol)于DCM(1mL)中的冰冷搅拌溶液中添加于醚(0.073mL)中的HCl。将所得混合物在0℃下搅拌1h。在反应完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将所获得的粗制产物与醚研磨，得到灰白色固体的产物(0.013g,52.75％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：583.62；观测值：584.0(M+1)。HPLC纯度(XB0595TF)：92.31％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.86(宽单峰，1H),9.69(宽单峰，1H),9.47(宽单峰，1H),8.42(m,2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.06-7.10(m,2H),6.87(d,J＝8.40Hz,1H),6.74-6.76(m,1H),5.49(m,1H),5.07-5.13(m,1H),4.32(brs,2H),3.72-3.92(m,2H)3.62(d,J＝5.20Hz,2H),3.39(t,J＝5.20Hz,5H)和3.02(brs,5H)。

步骤4：(3S,4S)-3-氟-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5B)的合成：在氮气气氛下向4-(4-(((3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4B,380mg,0.734mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加Pd/C 10％(200mg)。将所得混合物在RT下在氢气气氛下搅拌32h。然后将其通过硅藻土垫过滤以去除Pd/C。浓缩滤液后获得粗制残余物，得到粘性材料。粗制材料未经纯化即用于下一步骤(0.2g,71.04％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：383.44；观测值：384.3(M+1)。

步骤5：(3S,4S)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并-[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(7B)的合成：向(3S,4S)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并-[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5B,70mg,0.187mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)-乙醛(57mg,0.187mmol)和Et₃N(52mg,0.548mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3h。然后添加NaBH(OAc)₃(77mg,0.365mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌24h。在完成后，将反应混合物用DCM稀释。将分离的有机部分依次用饱和碳酸氢盐溶液、饱和盐水溶液洗涤。在经无水Na₂SO₄干燥后，将其过滤并在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(230-400硅胶，5％ MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(0.027g,19.9％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：683.74；观测值：684.3(M+1)。

步骤6：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)-苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物102)的合成：向(3S,4S)-3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-苯氧基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(7B,25mg,0.037mmol)于DCM(1mL)中的冰冷搅拌溶液中添加于醚(0.073mL)中的HCl。将所得混合物在0℃下搅拌1h。在反应完成后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将所获得的粗制产物与醚研磨，得到灰白色固体的产物(0.017g,69.7％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：583.62；观测值：584.4(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：93.18％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.27(宽单峰，1H),9.69-9.82(m,2H),8.41(宽单峰，2H),7.97(m,1H),7.26-7.27(m,1H),7.05-7.10(m,2H),6.87-6.90(m,1H),6.75(t,J＝1.60Hz,1H),5.49(d,J＝4.00Hz,1H),5.07-5.13(m,1H),4.32(d,J＝5.20Hz,2H),3.73-3.93(m,2H),3.49-3.66(m,2H),3.40-3.44(m,3H),3.30-3.39(m,2H),3.25-3.30(m,3H)和3.07-3.10(m,2H)。

实施例111：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：甲磺酸四氢-2H-噻喃-4-基酯(2)的合成：向四氢-2H-噻喃-4-醇(2.0g,16.94mmol)和三乙胺(4.26g,42.2mmol)于二氯甲烷(30mL)中的冰冷溶液中添加甲烷磺酰氯(2.1g,18.62mmol)并且将反应混合物在RT下搅拌12h。在反应完成后，将反应混合物用水稀释并将粗制产物用二氯甲烷萃取。将有机层干燥，浓缩并通过柱色谱(20％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈浅棕色液体的标题化合物2(3.1g,94％)。粗制物直接原样用于下一步骤。

步骤2：4-(2,4-二氟-5-((四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成：向甲磺酸四氢-2H-噻喃-4-基酯(2,2.25g,11.45mmol)和4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3g,9.55mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加K₂CO₃(2.69g,19.04mmol)并且将反应混合物在100℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液、水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩，得到粗制产物，通过柱色谱(20％EtOAc/己烷作为洗脱剂)将其进一步纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物3(1.7g，42.54％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：414.51；观测值：415.1(M+1)。

步骤3：4-(2,4-二氟-5-((1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：将4-(2,4-二氟-5-(四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,1.7g,4.101mmol)于乙酸(20mL)中的溶液冷却到0℃，添加H₂O₂(30％,2mL)并且将反应混合物在相同温度下搅拌1h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用冷却的10％ NaOH溶液中和，并将粗制产物用二氯甲烷萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在降低的压力下浓缩，得到呈灰白色固体的外消旋产物。产率：(1.62g,91.8％)。通过SFC手性法分离外消旋混合物中存在的异构体。浓缩洗脱出的第一峰(峰1)，得到呈灰白色固体的标题化合物4(0.65g,80％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：430.51；观测值：431.1(M+1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.31(t,J＝12Hz,1H),6.97-6.93(s,J＝8.8Hz 1H),4.43-4.40(m,1H),3.46-3.16(m,4H),2.96-2.90(m,6H),2.75-2.67(m,2H),2.50-2.30(m,2H),1.86-1.83(m,2H),1.42(s,9H)。

步骤4：(1s,4s)-4-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(5)的合成：向4-(2,4-二氟-5-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(4,0.48g,1.11mmol)于二氯甲烷(10mL)中的冰冷溶液中添加三氟乙酸(1.3mL)，并将反应混合物在RT下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，通过蒸发去除过量的TFA，并通过对甲苯磺酸树脂处理中和反应混合物，得到呈灰白色固体的标题化合物5(0.31g,84％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：330.39；观测值：331.0(M+1)。

步骤5：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物111)的合成：在密封管中将甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.35g,0.88mmol)、(1s,4s)-4-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(5,0.32g,0.97mmol)和DIPEA(0.34g,2.64mmol)于无水DMF(3mL)中的混合物在120℃下加热16h。在完成(TLC)后，将反应混合物冷却到RT，用水稀释，并将粗制固体过滤并且通过柱色谱(70％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物111。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：630.39；观测值：631.1(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF.M)：96.25％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.29(s,2H),7.94(s,1H),7.23(t,J＝10.72Hz,2H),6.80(t,J＝8.52Hz,1H),6.72(t,J＝1.72Hz,1H),4.36(t,J＝9.08Hz,1H),4.05(t,J＝7.32Hz,2H),2.90(s,6H),2.79(d,J＝11.56Hz,2H),2.73(d,J＝8.80Hz,2H),2.69(t,J＝9.92Hz,4H),2.14(q,J＝10.68Hz,2H),1.97(d,J＝12.84Hz,2H)。

实施例112：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(1r,4r)-4-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,0.3g,0.697mmol)于二氯甲烷(10mL)中的冰冷溶液中添加三氟乙酸(1.3mL)并且将反应混合物在RT下搅拌5h。在反应完成(TLC)后，通过蒸发去除过量的TFA，并将反应混合物通过对甲苯磺酸树脂处理中和，得到呈灰白色固体的标题化合物2(0.20g,85％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：330.39；观测值：331.0(M+1)。

步骤2：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物112)的合成：在密封管中将甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.23g,0.58mmol)、(1r,4r)-4-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(2,0.21g,0.63mmol)和DIPEA(0.23g,1.74mmol)于无水DMF(2.5mL)中的混合物在120℃下加热16h。在完成(TLC)后，将反应混合物冷却到RT，用水稀释，并将粗制固体过滤并且通过柱色谱(70％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体的标题化合物3。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：630.39；观测值：631.1(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF.M)：94.36％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.29(s,2H),7.94(s,1H),7.23(t,J＝11.8Hz,2H),6.85(t,J＝8.64Hz,1H),6.72(t,J＝1.72Hz,1H),4.57(s,1H),4.05(t,J＝7.32Hz,2H),2.93(brs,6H),2.72-2.67(m,4H),2.62(s,6H),2.34-2.32(m,2H),1.85(d,J＝12.84Hz,2H)。

实施例119和120：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(3,4-二氟苯基)(甲基)硫烷(2)的合成：在密封管中在0℃下向3,4-二氟苯硫醇(1,8.0g,54.74mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(9.08g,65.68mmol)，之后添加MeI(8.5g,60.21mmol)并且在RT下搅拌16h。在完成(TLC)后，将反应物质倒入冰冷的水中，并用乙醚萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩，得到标题化合物。粗制产物未经纯化即用于下一步骤(8.05g,88.1％)。

步骤2：1,2-二氟-4-(甲基亚磺酰基)苯(3)的合成：在0℃下向(3,4-二氟苯基)(甲基)硫烷(2,8.0g,49.94mmol)于DCM(120mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(8.6g,49.94mmol)并且在RT下搅拌16h。在完成(TLC)后，将反应物质用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并用DCM萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制物，得到标题化合物(5.0g,55.6％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：176.01；观测值：177.0(M+1)。

步骤3：4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4、5)的合成：在0℃下向哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3g,28.38mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K₂CO₃(7.8g,56.76mmol)，之后添加1,2-二氟-4-(甲基亚磺酰基)-苯(3,5.0g,28.38mmol)。将反应混合物在145℃下搅拌16h。在完成(TLC)后，将反应物质用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制物，得到标题化合物(2.2g,22.7％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：342.14；观测值：343.0(M+1)。对外消旋混合物(0.22g)进行SFC手性分离(将0.22g样品溶解于3mL甲醇中)，柱-Lux A1流动相：70:30(A:B)，A＝液体CO₂，B＝甲醇，流动速率：3.0mL/min；波长：220nm)，分别得到810mg峰1(4)和820mg峰2(5)。

注意：来自SFC纯化的峰1被任意地视为(S)异构体，且峰2被视为(R)异构体。

步骤4：(S)-1-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪(6)的合成：在0℃下向(S)-4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,800mg,0.292mmol)于DCM(18mL)中的搅拌溶液中添加TFA(1.3g,11.68mmol)。将反应混合物在RT下搅拌3h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将盐溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到呈游离碱的标题化合物(510mg,88.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：242.09；观测值：243.1(M+1)。

步骤5：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物120)的合成：在密封管中向(S)-1-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪(6,200mg,0.825mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(426.7mg,3.302mmol)，之后添加甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(294mg,0.743mmol)并且在120℃下搅拌16h。在完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂。将反应物质用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制物，得到标题化合物(180mg,37.7％)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.08％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：542.13；观测值：543.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95(m,1H),7.48-7.39(m,2H),7.24(d,J＝3.60Hz,1H),7.15(t,J＝8.40Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),4.09(m,2H),3.04(m,4H),2.72(s,3H),2.67(m,4H)。

实施例119：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(R)-1-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪(7)的合成：

在0℃下向(R)-4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5,800mg,0.292mmol)于DCM(18mL)中的搅拌溶液中添加TFA(1.3g,11.68mmol)。将反应混合物在RT下搅拌3h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将盐溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到呈游离碱的标题化合物(510mg,88.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：242.09；观测值：243.1(M+1)。

步骤2：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物119)的合成：在密封管中向(R)-1-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪(7,200mg,0.825mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(426.7mg,3.302mmol)，之后添加甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(294mg,0.743mmol)并且在120℃下搅拌16h。在完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂。将反应物质用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱纯化所获得的粗制物，得到标题化合物(120mg,25.1％)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.75％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：542.13；观测值：541.0(M-1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.96(s,1H),7.49-7.40(m,2H),7.25(d,J＝3.16Hz,1H),7.16(t,J＝8.52Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),4.09(m,2H),3.04(m,4H),2.76-2.66(m,9H)。

实施例121和122：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮和5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：四氢-2H-噻喃-4-醇(11)的合成：向四氢噻喃-4-酮(10,5g,0.043mol)于甲醇(40mL)中的冰冷溶液中缓慢添加5N氢氧化钠溶液(10mL)。然后分批添加硼氢化钠(0.488g,0.013mol)。在添加后，使反应混合物达到室温。在反应完成(约1h)后，将反应混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在降低的压力下浓缩。通过使用DCM中的5％甲醇进行的柱色谱纯化粗制产物，得到纯产物(4g,51.90％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ4.69(d,J＝4.24Hz,1H),3.41-3.47(m,1H),2.65-2.70(m,2H),2.50-2.54(m,1H),2.47(d,J＝2.76Hz,1H),2.00-2.02(m,2H)和1.96-1.99(m,2H)。

步骤2：甲磺酸四氢-2H-噻喃-4-基酯(12)的合成：向四氢噻喃-4-醇(11,3.5g,0.030mol)于二氯甲烷(40mL)中的冰冷溶液中添加三乙胺(5.982g,0.059mol)和甲烷磺酰氯(0.727g,0.006mol)。在3h后，将反应混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在降低的压力下浓缩。使用DCM中的2％甲醇作为洗脱剂对粗制残余物进行柱色谱，得到产物(6g,98.07％)。

步骤3：4-(2-氟-4-((四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1,1.6g,5.399mmol)和甲磺酸四氢噻喃-4-基酯(12,1.272g,6.479mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加K₂CO₃(1.490g,10.80mmol)。将所得混合物加热到100℃且保持16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(50％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(1.5g,69％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：396.52；观测值：397.1(M+1)。

步骤4：4-(2-氟-4-((1-氧化四氢(oxidotetrahydro)-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3、4)的合成：向4-(2-氟-4-四氢噻喃-4-基氧基-苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.650g,4.161mmol,1eq)于乙酸(25mL)中的冰冷混合物中逐滴添加过氧化氢(1mL)中并且在相同温度下搅拌1h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物倒入4N氢氧化钠溶液(20mL)中，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(80％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈灰白色固体的产物(1.4g,80.7％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：412.52；观测值：413.2(M+1)。

对外消旋混合物(1.4g)进行SFC手性分离(将1.4g样品溶解于10mL甲醇中)，柱-YMC直链淀粉-SA流动相：70:30(A:B)，A＝液体CO₂，B＝于甲醇中的0.5％ DEA，流动速率：3mL/min；波长：210nm。得到600mg峰1(3)和500mg峰2(4)。

步骤5：(1s,4s)-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(5)的合成：向4-(2-氟-4-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3,0.5g,1.212mmol)于二氯甲烷(10mL)中的冰冷溶液中添加三氟乙酸(0.207g,0.002mol)。在0℃下搅拌1h后，将反应混合物在环境温度下在降低的压力浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨。然后将其溶解于甲醇中，通过碳酸硅树脂，得到直接用于下一步骤的游离碱(0.38g,99.35％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02(d,J＝9.20Hz,1H),6.90-6.98(m,1H),6.76-6.79(m,1H),4.40-4.43(m,1H),3.18(s,1H),3.05(t,J＝2.40Hz,4H),2.93-2.99(m,4H),2.85(t,J＝11.20Hz,1H),2.79(d,J＝2.40Hz,2H),2.12(t,J＝10.00Hz,2H)和1.96(d,J＝12.40Hz,2H)。

步骤6：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1s,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并-[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物121)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(7,0.385g,0.971mmol)和(1s,4s)-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(0.334g,1.068mmol)于DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(0.626g,4.856mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌16h。在完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗制产物，得到呈灰白色固体的产物(0.045g,7.5％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：612.70；观测值：613(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：99.21％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),6.88-6.93(m,2H),6.73-6.77(m,2H),4.59(s,1H),4.08(t,J＝5.60Hz,2H),3.50(d,J＝12.80Hz,2H),2.86-2.95(m,6H),2.63-2.71(m,6H),2.27-2.33(m,2H)和1.80-1.83(m,2H)。

实施例122：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤5：(1r,4r)-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(6)的合成：向4-(2-氟-4-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,0.5g,1.212mmol)于二氯甲烷(10mL)中的冰冷溶液中添加三氟乙酸(0.207g,0.002mol)。在0℃下搅拌1h后，将反应混合物在环境温度下在降低的压力浓缩。将所获得的残余物与乙醚研磨。然后将其溶解于甲醇中，通过碳酸硅树脂，得到直接用于下一步骤的游离碱(0.375g,98.05％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.02(d,J＝9.20Hz,1H),6.90-6.98(m,1H),6.76-6.79(m,1H),4.40-4.43(m,1H),3.18(s,1H),3.05(t,J＝2.40Hz,4H),2.93-2.99(m,4H),2.85(t,J＝11.20Hz,1H),2.79(d,J＝2.40Hz,2H),2.12(t,J＝10.00Hz,2H)和1.96(d,J＝12.40Hz,2H)。

步骤6：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物122)的合成：向甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(7,0.235g,0.593mmol)和(1s,4s)-4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)四氢-2H-噻喃1-氧化物(0.204g,0.652mmol)于DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.382g,2.964mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌16h。在完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。通过反相制备型HPLC纯化粗制产物，得到呈灰白色固体的产物(0.031g,8.4％)。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：612.70；观测值：613.1(M+1)。HPLC纯度(XB_0595TF)：98.46％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),6.88-6.93(m,2H),6.73-6.77(m,2H),4.39(t,J＝9.20Hz,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.50(d,J＝12.40Hz,2H),2.72-2.95(m,6H),2.63-2.70(m,6H),2.13-2.33(m,2H)和1.85-1.99(m,2H)。

实施例126：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧化硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：4-溴-2-氟苯胺(2)的合成：向4-溴-2-氟-1-硝基苯(1,9.0g,13.64mmol)和乙酸(11.5g,0.57mol)于乙醇(60mL)中的搅拌溶液中添加铁粉(15.9g,0.285mol)。将反应混合物在80℃下搅拌1h。在反应完成后，将反应混合物用EtOAc稀释并通过硅藻土床过滤。在降低的压力浓缩滤液，得到粗制化合物且其直接用于下一步骤(6.0g，76.5％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：188.96；观测值：192.0(M+1)。

步骤2：1-(4-溴-2-氟苯基)哌嗪(3)的合成：向4-溴-2-氟苯胺(2,6.0g,31.58mmol)于二甘醇二甲醚(4.8mL)中的搅拌溶液中添加双(2-氯乙基)胺氯化氢(6.7g,37.89mmol)并且将反应混合物在160℃下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物冷却到RT，并用冷丙酮处理。将沉淀的固体过滤，并直接用于下一步骤(5.0g,61％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：258.02；观测值：259.0(M+1)。

步骤3：4-(4-溴-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成：在0℃下向1-(4-溴-2-氟苯基)哌嗪(3,4.0g,15.4mmol)和TEA(3.1g,30.9mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(5.04g,23.1mmol)。将反应混合物在RT下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水处理，并用DCM萃取。将分离的有机层用NaHCO₃溶液、盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在降低的压力下浓缩，得到粗制产物。通过柱色谱纯化粗制产物，得到标题化合物(4.0g,72.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：358.07；观测值：259.0(M-99+1)。

步骤4：4-(2-氟-4-硫代吗啉基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5)的合成：于密封管中向4-(4-溴-2-氟苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4,4.0g,11.1mmol)和硫代吗啉(1.3g,12.3mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加XPhos(530mg,1.11mmol)，之后添加NaO^tBu(2.34g,24.4mmol)。用N₂气体吹扫反应混合物，并添加Pd(OAc)₂(250mg,1.11mmol)。将反应混合物在110℃下加热16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将分离的有机层用NaHCO₃溶液、盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在降低的压力下浓缩，得到粗制产物。通过柱色谱纯化粗制产物，得到标题化合物(1.53g,33.9％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：381.19；观测值：382.1(M+1)。

步骤5：4-(2-氟-4-硫代吗啉基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6)的合成：在0℃下向4-(2-氟-4-硫代吗啉基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5,1.8g,4.7mmol)于乙酸(20mL)中的搅拌溶液中添加过氧化氢(160.48mg,4.7mmol)。将反应混合物在RT下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物用10％NaOH溶液(水性)处理，并用DCM萃取。将分离的有机层用NaHCO₃溶液、盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在降低的压力下浓缩，得到粗制产物。通过柱色谱纯化粗制产物，得到标题化合物(1.2g,62.6％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：397.18；观测值：398.1(M+1)。

步骤6：4-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)硫代吗啉1-氧化物(7)的合成：在0℃下向4-(2-氟-4-(1-氧化硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6,1.2g,3.0mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加TFA(330mg,9.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。在反应完成(TLC)后，将反应混合物在降低的压力下浓缩。将残余物溶解于甲醇中，并使用对甲苯磺酸清除剂树脂中和，得到游离碱(750mg,82.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：297.13；观测值：298.1(M+1)。

步骤7：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧化硫代吗啉基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物126)的合成：向1-(3-氟-4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-4-酮(350mg,1.26mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[4,5-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-1(2H)-基)乙酯(500mg,1.26mmol)和DIPEA(815mg,6.31mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌16h。在完成后，将反应物质在降低的压力下浓缩，并用乙腈和乙醚再结晶，得到纯的5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧化硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]-三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物126)(150mg,19％)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.08％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：597.17；观测值：598.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.92-6.85(m,2H),6.73-6.71(m,2H),4.08-4.05(m,2H),3.70-3.66(m,2H),3.53-3.50(m,2H),2.93-2.86(m,7H),2.74-2.63(m,7H)。

实施例127：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：(S)-甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(7)的合成：在0℃下向(R)-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲醇(6,2.5g,19mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(9.6g,95mmol)和甲烷磺酰氯(4.33g,38mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌3h。通过TLC监测反应，且在完成后，将反应混合物用水稀释，并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后降低的压力浓缩，得到呈黄色胶状液体的标题化合物(3.0g,75.4％)；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ4.39-4.43(m,1H),4.25(d,J＝5.20Hz,2H),4.11-4.15(m,1H),3.84-3.87(m,1H),3.09-3.15(m,3H),1.45(s,3H),1.43(s,3H)。

步骤2：(R)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1,1g,2.9mmol)和(S)-甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(7,1.15g,5.8mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(1.19g,8.7mmol)并且将反应混合物加热到90℃且保持16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，将反应物质用水稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(30％EtOAc/己烷)纯化粗制物，得到呈浅棕色固体的(R)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)(800mg,56.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：462.20；观测值：463.0(M+1)。

步骤3：(R)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟-苯基)哌嗪(3)的合成：在氮气气氛下向(R)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2,0.8g,1.73mmol)于EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中添加10％ Pd/C(0.2g)。将反应混合物在H₂气氛下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，使用硅藻土过滤反应混合物以去除Pd/C。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并降低的压力下浓缩，得到呈棕色胶状材料的(R)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧杂戊-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪(3)(0.45g,76.2％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：328.16；观测值：329.1(M+1)。

步骤4：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(4)的合成：向(R)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪(3,0.45g,1.4mmol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(0.48g,1.2mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.71g,5.5mmol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂。将反应物质用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(14-16％ MeOH/DCM)纯化粗制产物并且通过用50％ACN/乙醚混合物洗涤将其进一步富集，得到呈浅黄色固体的(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮化合物(4)(100g,13.1％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：628.20；观测值：629.0(M+1)；

步骤5：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物127)的合成：在0℃下向(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(4,50mg,0.08mmol)于1,4-二

烷(4mL)中的搅拌溶液中添加于二

烷(20mL)中的4N HCl。将反应混合物在室温搅拌1h。通过TLC监测反应进程。在反应完成后，将其在降低的压力下浓缩以去除溶剂。使用乙腈使粗制产物再结晶，得到呈浅棕色固体的(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物127)(35mg,67.3％)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.58％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：588.17；观测值：589.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.67(brs,1H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.35-7.26(m,2H),6.86(t,J＝8.40Hz,1H),6.75-6.74(m,1H),4.31(m,2H),4.09-4.05(m,1H),3.97-3.92(m,3H),3.77(t,J＝5.20Hz,1H),3.43(m,2H),3.29(m,2H),3.06-2.99(m,2H)。

实施例128：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮

步骤1：5-氨基-2,4-二氟苯酚(2)的合成：向2,4-二氟-5-硝基苯酚(1,25g,0.143mol)于EtOAc(200mL)中的搅拌溶液中添加10％ Pd/C(4.55g,0.043mol)。将反应混合物在RT下在H₂下搅拌16h。在反应完成(TLC)后，通过使用硅藻土床将反应混合物过滤，用EtOAc(1000mL)洗涤，并在降低的压力下浓缩，得到呈灰棕色固体的5-氨基-2,4-二氟苯酚(2)(20.10g,94.6％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：145.03；观测值：146.2(M+1)。

步骤2：2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯酚(3)的合成：向5-氨基-2,4-二氟苯酚(2,20g,0.131mol)于环丁砜(30mL)中的搅拌溶液中添加双(2-氯乙基)胺氯化氢(31g,0.170mol)。将所得混合物在氮气气氛下在150℃下搅拌16h。将其冷却到RT并将丙酮添加到粗制反应混合物中，并且在0℃下搅拌1h。在1h后，将沉淀的固体过滤并在氮气气氛下用冷丙酮洗涤。将固体材料在真空下干燥，得到呈灰白色固体的2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯酚(3)(23g,80.3％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：214.09；观测值：215.1(M+1)。

步骤3：4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4)的合成：在0℃下向2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯酚盐酸盐(3,25g,0.117mol)于THF(250mL)中的搅拌溶液中添加NaHCO₃(14.7g,0.175mol)和Cbz-Cl(16.66mL,0.117mol)。将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物用乙酸乙酯萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，然后在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(30％ EtOAc/己烷作为洗脱剂)纯化所获得的粗制物，得到呈白色固体的4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(20g,45.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：348.13；观测值：349.2(M+1)。

步骤4：(R)-甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(10)的合成：在0℃下向(S)-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲醇(9,12g,0.091mol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(37.76mL,0.272mol)和甲烷磺酰氯(8.4mL,0.109mol)。将反应混合物在0℃下搅拌3h。通过TLC监测反应，且在完成后，将反应混合物用水稀释，并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后降低的压力浓缩，得到呈黄色胶状液体的标题化合物(21.8g,77.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：210.06；观测值：211.0(M+1)。

步骤5：(S)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5)的合成：向4-(2,4-二氟-5-羟基苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4.10g,0.029mol)和(R)-甲磺酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯(10,7.2g,0.034mol)于DMF(70mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(11.9g,0.086mol)并且将反应混合物加热到90℃且保持16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，将反应物质用水稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，然后在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(30％EtOAc/己烷)纯化粗制物，得到呈浅棕色固体的(S)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5)(13g,70.50％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：462.20；观测值：463.1(M+1)。

步骤6：(S)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟-苯基)哌嗪(6)的合成：在氮气气氛下向(S)-4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5,13g,0.028mol)于EtOAc(100mL)中的搅拌溶液中添加10％ Pd/C(4g)。将反应混合物在H₂气氛下搅拌16h。通过TLC监测反应进程。在完成后，使用硅藻土过滤反应混合物以去除Pd/C。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并在降低的压力下浓缩，得到呈棕色胶状材料的(S)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪(6)(8.55g,93.0％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：328.16；观测值：329.2(M+1)。

步骤7：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(7)的合成：向(S)-1-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪(6,7g,0.021mol)和甲磺酸2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并-[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙酯(7.6g,0.019mol)于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(11.12mL,0.064mol)并且将反应混合物在120℃下搅拌16h。在反应完成(TLC和LCMS)后，在降低的压力下去除溶剂。将反应物质用水处理，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在降低的压力下浓缩。通过柱色谱(14-16％ MeOH/DCM)纯化粗制产物并且通过用50％ ACN/乙醚混合物洗涤将其进一步富集，得到呈浅黄色固体的(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮化合物(7)(2.6g,17.8％)；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：628.20；观测值：629.2(M+1)。

步骤8：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物128)的合成：在0℃向(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(7,1.4g,2.23mmol)于1,4-二

烷(20mL)中的搅拌溶液中添加于二

烷(20mL)中的4N HCl。将反应混合物在室温搅拌1h。通过TLC监测反应进程。在反应完成后，将其在降低的压力下浓缩以去除溶剂。使用乙腈使粗制产物再结晶，得到呈白色固体的(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮(化合物128)(1.2g,87％)；HPLC纯度(AM9010A3)：95.05％；LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：588.17；观测值：589.2(M+1)；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.34(brs,1H),8.40(brs,2H),7.95(s,1H),7.33-7.24(m,2H),6.87-6.82(m,1H),6.73(s,1H),4.31(m,2H),4.08-4.05(m,1H),3.96-3.91(m,3H),3.76(m,1H),3.59(m,2H),3.51-3.48(m,2H),3.42-3.38(m,2H),3.29-3.27(m,2H),3.14-3.08(m,2H)。

根据与针对上文实施例所述的程序类似的程序制备以下实施例：

实施例9：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：522.18；观测值：523.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.0％；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)：δ7.79(s,1H),7.28(d,J＝3.2Hz,1H),7.01(d,J＝8.1Hz,2H),6.93(d,J＝9.2Hz,2H),6.69(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.49(m,2H),4.01(t,J＝4.4Hz,2H),3.86(t,J＝4.4Hz,2H),3.67(m,4H)。

实施例10：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙酸盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：536.16；观测值：536.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.00％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.92(brs,1H),9.72(brs,1H),8.44(brs,2H),7.97(t,J＝0.8Hz,1H),7.26(dd,J＝0.6和3.2Hz,1H),6.96-6.94(m,2H),6.88-6.84(m,2H),6.75(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.60(s,2H),4.32(m,2H),3.92-3.90(m,2H),3.72-3.69(m,2H),3.27-3.24(m,2H),2.92(m,2H)。

实施例11：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：535.58；观测值535.8(M+)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.65％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.94(m,1H),7.44(m,1H),7.36(m,1H),7.23(d,J＝3.20Hz,1H),6.85(t,J＝4.40Hz,4H),6.73(s,1H),4.31(s,2H),4.08(m,1H),2.95(m,4H),2.68(d,J＝6.00Hz,2H),2.61(m,3H)和2.30(s,2H)。

实施例12：5-氨基-3-(2-(4-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：552.19；观测值：552.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：91.20％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.7(brs,1H),9.0(brs,1H),8.41(brs,2H),7.98(dd,J＝0.8和1.6Hz,1H),7.27(m,1H),6.87(m,2H),6.76-7.68(m,3H),4.39(m,3H),3.28(m,3H),2.85(m,4H)。

实施例13：5-氨基-3-(2-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：521.6；观测值：522.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.52％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.41(brs,2H),8.23(brs,3H),7.96(dd,J＝2Hz,1H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),6.99(d,J＝9.20Hz,2H),6.93(d,J＝2.40Hz,2H),6.74(t,J＝1.60Hz,1H),4.33(t,J＝5.60Hz,2H),4.12(t,J＝5.20Hz,2H),3.88(d,J＝10.80Hz,2H),3.69(d,J＝12.00Hz,2H),3.58(m,2H)和3.14-3.20(m,6H)。

实施例14：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：505.56；观测值：506.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.08％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(brs,1H),7.73(brs,3H),7.24(brs,1H),6.91-7.01(m,3H),6.73(brs,1H),4.09(brs,2H),3.19(brs,4H)和2.69(brs,6H)。

实施例15：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-甲基苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：519.58；观测值：520.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.07％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.33(brs,2H),8.13(d,J＝4.40Hz,1H),7.95(s,1H),7.70(d,J＝8.60Hz,2H),7.24(d,J＝3.32Hz,1H),6.91(d,J＝8.64Hz,2H),6.73(d,J＝1.72Hz,1H),4.09(t,J＝6.16Hz,2H),3.18(m,4H),2.72-2.74(m,5H)和2.62-2.70(m,4H)。

实施例16：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：591.24；观测值：592.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.39％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.85-6.79(m,4H),6.73-6.72(m,1H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),3.99(t,J＝5.6Hz,2H),3.57(t,J＝4.0Hz,4H),2.94(m,4H),2.71-2.62(m,8H),2.46(m,4H)。

实施例17：5-氨基-3-(2-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：549.22；观测值：549.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.54％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝2.8Hz,1H),6.85-6.79(m,4H),6.73(m,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.95(t,J＝6.0Hz,2H),2.94(m,4H),2.69(m,2H),2.61(m,4H),2.56(t,J＝6.0Hz,2H),2.19(s,6H)。

实施例18：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯磺酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：541.13；观测值：542.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.64％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.94(d,J＝0.40Hz,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝3.6Hz,1H),7.07-6.98(m,4H),6.72(m,1H),4.08(m,2H),3.20(m,4H),2.70-2.61(m,6H)。

实施例19：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-甲基苯磺酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：555.15；观测值：556.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.45％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.33(brs,2H),7.95(s,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.11(q,J＝4.80Hz,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,2H),6.73(m,1H),4.10(t,J＝5.6Hz,2H),3.24(m,4H),2.73-2.62(m,6H),2.34(d,J＝5.20Hz,3H)。

实施例20：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(甲基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS：(ESI正离子)m/z：计算值：540.62；观测值：541.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.58％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.67(d,J＝8.80Hz,2H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),7.05(d,J＝8.80Hz,2H),6.73(q,J＝2.00Hz,1H),4.11-4.05(m,2H),3.27(m,4H),3.08(m,3H),2.71(t,J＝6.00Hz,2H)和2.51(m,4H)。

实施例21：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：524.14；观测值：525.1；HPLC纯度(XB0595TF)：98.99％；¹H NMR:(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.09(t,J＝6.0Hz,2H),3.18(m,4H),2.72-2.62(m,9H)。

实施例22：3-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：505.16；观测值：506.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.01％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.33(brs,2H),7.95(s,1H),7.89(s,1H),7.38(s,1H),7.26-7.23(m,4H),7.05(m,1H),6.73(m,1H),4.10(t,J＝6.0Hz,2H),3.12(m,4H),2.73-2.63(m,6H)。

实施例23：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：522.18；观测值：522.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.67％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.98(brs,1H),8.43(brs,2H),7.96(t,J＝0.8Hz,1H),7.26(d,J＝0.8Hz,1H),7.16(t,J＝8.0Hz,1H),6.74(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),6.57-6.52(m,2H),6.46(dd,J＝2.0和8.0Hz,1H),4.31(t,J＝5.6Hz,2H),3.97-3.85(m,6H),3.70(t,J＝5.2Hz,2H),3.60(m,2H),3.03(m,2H)。

实施例24：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：622.68；观测值：623.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.01％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.90(brs,2H),8.41(brs,2H),7.97(d,J＝0.80Hz,1H),7.26(t,J＝5.20Hz,1H),7.00(d,J＝8.40Hz,1H),6.90(d,J＝13.60Hz,1H),6.75-6.74(m,2H),4.86(m,2H),4.30(b s,2H),3.94(b s,2H),3.64(t,J＝4.80Hz,4H),3.49(t,J＝5.20Hz,2H),3.22(m,4H),3.18(brs,2H),3.1(brs,2H)和2.94(brs,2H)。

实施例25：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌啶-4-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：593.23；观测值：594.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.25％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.25(brs,1H),8.85(brs,1H),8.55(brs,1H),8.41(brs,2H),7.96(s,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.03(t,J＝9.60Hz,1H),6.88(dd,J＝2.4和14.0Hz,1H),6.74(m,2H),4.32(m,2H),4.06(m,4H),3.62(m,2H),3.39(m,2H),3.28(m,4H),3.05(t,J＝12.4Hz,2H),2.90(m,2H),2.01(m,1H),1.89(m,2H),1.47(m,2H)。

实施例26：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌嗪-1-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：592.21；观测值：592.9(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.39％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.30(brs,1H),9.22(brs,2H),8.42(brs,2H),7.96(s,1H),7.34(dd,J＝1.6和12.8Hz,1H),7.28(m,2H),7.14(t,J＝8.8Hz,1H),6.74(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.33(m,2H),3.96-3.88(m,2H),3.17(m,6H),2.32(m,6H)。

实施例27：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：608.24；观测值：609.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：91.12％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.52(brs,1H),9.71(brs,2H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.10-6.99(m,2H),6.84-6.74(m,2H),4.40(t,J＝4.4Hz,2H),4.33(t,J＝4.8Hz,2H),3.92(m,2H),3.45-3.40(m,4H),3.24(m,3H),3.11(m,3H)。

实施例28：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：628.18；观测值：628.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.55％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ10.91(brs,1H),9.26(brs,2H),8.42(brs,2H),7.96(s,1H),7.64-7.54(m,2H),7.3(t,J＝8.4Hz,1H),7.25(m,1H),6.74(s,1H),4.33(m,2H),4.07(m,8H),3.95(m,2H),3.76(m,2H),3.60(m,2H),3.33(m,4H)。

实施例29：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS：(ESI正离子)m/z：计算值：558.61；观测值：559.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.88％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.62(t,J＝8.40Hz,2H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),7.16(t,J＝8.40Hz,1H),6.73(s,1H),4.11-4.04(m,2H),3.18(s,3H),3.12(brs,4H)和2.73-2.65(m,6H)。

实施例30：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-氨基乙基)-3-氟苯甲酰胺盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)m/z：计算值：566.62；观测值：567.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.16％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.92(brs,1H),8.79(t,J＝5.60Hz,1H),8.41(brs,2H),8.10(s,3H),7.97-7.96(m,1H),7.79-7.75(m,2H),7.26-7.25(m,1H),7.16(t,J＝9.20Hz,1H),6.74(q,J＝1.60Hz,1H),4.33(t,J＝5.20Hz,2H),3.94-3.92(m,2H),3.69-3.66(m,2H),3.59(m,2H),3.53-3.49(m,2H),3.26(m,4H)和2.97(m,2H)。

实施例31：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基氨基)乙基)苯甲酰胺盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)m/z：计算值：580.21；观测值：581.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.97％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.81(b s,1H),8.94(brs,2H),8.83(t,J＝4.80Hz,1H),8.41(br s,2H),7.97(s,1H),7.80-7.76(m,2H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.16(t,J＝8.80Hz,1H),6.74(q,J＝1.20Hz,1H),4.33(m,2H),3.93(d,J＝9.20Hz,2H),3.68(m,6H),3.26(t,J＝11.60Hz,4H),3.09-3.08(m,2H)和2.563(t,J＝4.8Hz,3H)。

实施例32：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：594.23；观测值：595.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF.M)：96.47％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(m,3H),7.95(d,J＝1.20Hz,1H),7.62-7.57(m,2H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),7.02(t,J＝8.80Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.09(t,J＝6.40Hz,2H),3.04(m,4H),2.72(d,J＝6.0Hz,2H),2.66(m,4H),2.42(t,J＝6.00Hz,2H),2.19(s,6H)。

实施例33：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-羟基乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：567.18；观测值：567.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.37％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.34(brs,2H),7.95(s,1H),7.63(s,2H),7.24(m,1H),7.01-6.95(m,1H),6.73(m,1H),4.72(m,2H),4.57(m,2H),4.09(m,2H),3.48(m,6H),3.03(m,4H)。

实施例34：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-3-氟苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：597.19；观测值：597.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.11％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.36-8.31(m,4H),7.95(s,1H),7.64-7.60(m,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.02(m,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.80(m,1H),4.59(m,2H),4.09(t,J＝6.0Hz,2H),3.61(m,4H),3.10(m,4H),2.65(m,4H)。

实施例35：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：554.15；观测值：555.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.30％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.20(brs,1H),8.42(brs,2H),7.97(t,J＝0.8Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.03(t,J＝9.2Hz,1H),6.88(dd,J＝2.8,14.0Hz,1H),6.75-6.74(m,2H),4.67(s,2H),4.31(m,2H),3.91(m,2H),3.60(m,2H),3.42(m,2H),3.28(q,J＝10.0Hz,2H),3.05(t,J＝12.00Hz,2H)。

实施例36：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3,5-二氟苯氧基)乙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：572.14；观测值：572.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.07％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.83(brs,1H),8.41(brs,2H),7.97(dd,J＝0.8和2.0Hz,1H),7.26(dd,J＝0.80和3.2Hz,1H),6.78-6.74(m,3H),4.72(s,2H),4.31(m,2H),3.88(m,2H),3.60(m,2H),3.25(m,4H)。

实施例37：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：568.17；观测值：568.8(M+1)；HPLC(XB0595TF)：95.55％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.15(brs,1H),8.41(brs,2H),7.96(s,1H),7.26(s,1H),7.03(t,J＝9.60Hz,1H),6.82(d,J＝14.00Hz,1H),6.74(d,J＝1.60Hz,1H),6.67(d,J＝8.40Hz,1H),4.83(q,J＝6.80Hz,1H),4.32(m,2H),3.91(m,2H),3.59(m,2H),3.40(m,2H),3.28(m,2H),3.04(m,2H),1.48(t,J＝6.4Hz,3H)。

实施例38和53：(S)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸和(R)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸

如针对以上实施例所述制备的产物的外消旋混合物(135mg)进行手性分离(将0.08g样品溶解于10mL乙醇中)，Phenomenex Lux C4流动相：于正己烷中的0.1％ TFA:乙醇(30:70)，流动速率：1.0mL/min：分别得到13mg峰1(S)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸和13mg峰2((R)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸)。注意：峰1被任意地视为(S)异构体，且峰2被视为(R)异构体。

(S)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：568.17；观测值：568.9(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.79％；手性HPLC纯度：100％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.03(brs,1H),9.21(brs,1H),8.41(brs,2H),7.96(s,1H),7.26(s,1H),7.04(m,1H),6.82(m,1H),6.75(s,1H),6.67(m,1H),4.82(q,J＝5.2Hz,1H),4.31(m,2H),3.97(m,2H),3.63(m,2H),2.93(m,2H),1.48(d,J＝5.60Hz,3H)。

(R)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：568.17；观测值：569.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.05％；手性HPLC纯度：95.46％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.03(brs,1H),9.25(brs,1H),8.41(brs,2H),7.97(s,1H),7.26(s,1H),7.03(m,1H),6.82(m,1H),6.75(s,1H),6.67(m,1H),4.82(q,J＝6.4Hz,1H),4.30(m,2H),3.96(m,2H),3.62(m,2H),3.30(m,2H),2.93(m,2H),1.48(d,J＝6.0Hz,3H)。

实施例39：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-2-甲基丙酸盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：582.61；观测值：582.8(M+)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.46％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.9(br s,1H),8.40(brs,2H),7.96(d,J＝1.20Hz,1H),7.25-7.26(m,1H),7.01(t,J＝10.00Hz,1H),6.75-6.73(m,2H),6.65-6.63(m,1H),4.32(t,J＝5.60Hz,2H),3.88(d,J＝11.20Hz,2H),3.57(d,J＝4.00Hz,2H),3.41(t,J＝8.80Hz,2H),3.25(t,J＝9.60Hz,2H),3.13(t,J＝11.60Hz,2H)和1.48(s,6H)。

实施例40：3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：553.18；观测值：552.9；HPLC纯度(XB0595TF)：93.92％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.62(brs,1H),8.41(brs,2H),7.96(m,1H),7.25(m,1H),7.10(m,1H),6.99(m,2H),6.74(dd,J＝2.0和3.6Hz,1H),4.32(m,2H),3.95(m,2H),3.28(m,2H),2.99(m,2H),2.32(m,2H)。

实施例41：4-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丁酸盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：582.61；观测值：582.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.04％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.31(br s,1H)8.41(brs,2H),7.97(d,J＝0.80Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.02(t,J＝9.60Hz,1H),6.87(q,J＝2.40Hz,1H),6.75-6.72(m,2H),4.32(m,2H),3.96-3.89(m,4H),3.59(m,2H),3.40(d,J＝11.60Hz,2H),3.28(d,J＝10.00Hz,2H),3.06-3.03(m,2H),2.36(t,J＝7.20Hz,2H)和1.91(t,J＝6.80Hz,2H)。

实施例42：2-(3-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,6-二氟苯氧基)乙酸盐酸盐。LCMS(ESI正离子)；m/z：计算值：572.55；观测值：573.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.35％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.41(brs,1H),8.42(brs,2H),7.97(t,J＝0.96Hz,1H),7.27(d,J＝4.04Hz,1H),7.07(t,J＝9.40Hz,1H),6.81-6.78(m,1H),6.75-6.74(m,1H),4.77(m,2H),4.32(d,J＝5.20Hz,2H),3.92(d,J＝8.84Hz,2H),3.60(m,2H),3.46(d,J＝12.04Hz,2H),3.29(d,J＝9.16Hz,2H)和3.10(t,J＝11.28Hz,2H)。

实施例43：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酸盐酸盐。LC-MS：(ESI正离子)；m/z：计算值：572.55；观测值：573.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.60％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.06(brs,1H),10.23(brs,1H),8.40(brs,2H),7.96-7.96(m,1H),7.33(t,J＝11.60Hz,1H),7.25(d,J＝3.20Hz,1H),6.82(t,J＝8.80Hz,1H),6.73-6.75(m,1H),4.79(s,2H),4.32(m,2H),3.89-3.92(m,2H),3.60(brs,2H),3.49-3.46(m,2H),3.30-3.27(m,2H),)和3.07(t,J＝11.6Hz,2H)。

实施例44：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯甲酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：524.14；观测值：525.0；HPLC纯度(XB0595TF)：89.07％；¹H NMR：(400MHz,DMSO-d6)：δ12.80(brs,1H),8.30(brs,2H),7.95(dd,J＝0.8和1.6Hz,1H),7.66(dd,J＝2.0和8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝2.0和14.0Hz,1H),7.23(dd,J＝0.8和3.2Hz,1H),7.04(t,J＝8.8Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),3.08(m,4H),2.73-2.65(m,6H)。

实施例45：2-((2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)氨基)乙酰胺盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：596.64；观测值：597.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.28％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.62(brs,1H),9.12(brs,2H),7.96(t,J＝0.80Hz,1H),7.92(s,1H),7.58(brs,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.07(t,J＝9.60Hz,1H),6.96(dd,J＝2.80,13.60Hz,1H),6.81-6.78(m,2H),4.33-4.32(m,2H),4.24(t,J＝5.20Hz,2H),3.76-3.77(m,2H),3.59(s,2H),3.42-3.35(m,8H)和3.118(m,2H)。

实施例46：2-((2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)(甲基)氨基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：610.22；观测值：611.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.25％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.24(m,1H),7.16(brs,1H),7.11(brs,1H),6.93(d,J＝9.6Hz,1H),6.79(dd,J＝2.8和14.0Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),6.67(m,1H),4.08-4.02(m,4H),2.96(s,2H),2.85(m,4H),2.75-2.63(m,8H),2.31(s,3H)。

实施例47：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌啶-4-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：579.22；观测值：580.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.3％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.29(brs,1H),8.89(brs,2H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.06-6.97(m,2H),6.82-6.75(m,2H),4.60(m,1H),4.32(m,2H),3.92(m,2H),3.60(m,2H),3.41(m,2H),3.29-3.20(m,4H),3.06(m,4H),2.06(m,2H),1.81(m,2H)。

实施例48：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：565.20；观测值：566.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.96％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.72(brs,1H),9.72(brs,1H),9.50(brs,1H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.05(t,J＝9.2Hz,1H),6.95(dd,J＝2.4和13.6Hz,1H),6.80-6.74(m,2H),5.10(m,1H),4.33(m,2H),3.90(m,2H),3.59(m,2H),3.42(m,3H),3.28(m,5H),3.13(m,2H),2.14(m,2H)。

实施例49：3-(2-(4-(4-((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：577.17；观测值：578.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.44％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ14.09(brs,1H),8.56(brs,1H),8.31(brs,3H),7.96(s,1H),7.24(d,J＝3.20Hz,1H),6.96-6.90(m,2H),6.79-6.74(m,2H),5.08(s,2H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),2.86(m,4H),2.72-2.68(m,6H)。

实施例50：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：610.22；观测值：611.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.20％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.36(brs,1H),8.79(brs,2H),8.42(brs,3H),7.97(t,J＝0.8Hz,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.06(t,J＝9.6Hz,1H),6.96(dd,J＝2.4和13.6Hz,1H),6.80(m,1H),6.74(t,J＝1.6Hz,1H),4.50(s,2H),4.33(m,2H),3.59(m,2H),3.46-3.40(m,4H),3.28(m,2H),3.10-2.99(m,4H),2.55(s,3H)。

实施例51：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：624.24；观测值：625.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.22％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(m,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.94(t,J＝9.6Hz,1H),6.83(d,J＝14.0Hz,1H),6.74-6.69(m,2H),4.42(s,2H),4.08(m,2H),3.20(q,J＝6.4Hz,2H),2.86(m,4H),2.70-2.63(m,6H),2.29(t,J＝6.4Hz,2H),2.13(s,6H)。

实施例52：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-氨基乙基)乙酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：596.21；观测值：597.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.18％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.40(brs,1H),8.39(brs,3H),7.97(m,3H),7.26(dd,J＝0.8和3.2Hz,1H),7.06(t,J＝9.6Hz,1H),6.95(dd,J＝2.4和13.6Hz,1H),6.81-6.78(m,2H),4.49(s,2H),4.32(t,J＝5.2Hz,2H),3.90(m,2H),3.60(m,2H),3.40(m,4H),3.28(a,J＝10.00Hz,2H),3.08(m,2H),2.90(m,2H)。

实施例54：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：553.16；观测值：554.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.07％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.43(brs,1H),8.41(brs,2H),7.97(s,1H),7.52(brs,1H),7.40(brs,1H),7.27(m,1H),7.05(t,J＝9.20Hz,1H),6.91-6.87(m,1H),6.75(m,2H),4.41(s,2H),4.31(m,2H),3.97(m,2H),3.31(m,4H),2.96(m,4H)。

实施例55：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)苯甲酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：594.23；观测值：595.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.61％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.13(brs,1H),8.63(brs,2H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.40(m,1H),7.32-7.26(m,2H),7.14(t,J＝8.80Hz,1H),6.75(dd,J＝0.8和3.2Hz,1H),4.35(m,2H),3.98(m,2H),3.67(m,6H),3.15(m,6H),2.96(s,3H)。

实施例56：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟-N-甲基苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：608.70；观测值：609.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.46％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(s,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.36Hz,1H),7.18-7.12(m,2H),7.00(t,J＝8.48Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),4.09(t,J＝12.60Hz,2H),3.37-3.30(m,2H),3.01-2.93(m,4H),2.91(s,3H),2.73-2.62(m,8H),2.22(m,3H)和2.02(m,3H)。

实施例57：(R)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-3-氟苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：608.24；观测值：609.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.79％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),8.02(m,1H),7.95(s,1H),7.62-7.59(m,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.02(t,J＝8.8Hz,1H),6.74(m,1H),4.09(m,3H),3.04(m,4H),2.73-2.66(m,6H),2.15(m,6H),1.11(d,J＝6.4Hz,3H)。

实施例58：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：624.24；观测值：625.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.37％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.10(brs,1H),8.63(brs,2H),8.41(brs,1H),7.96(dd,J＝0.8和1.6Hz,1H),7.35(d,J＝2.4Hz,1H),7.06-6.90(m,2H),6.78-6.74(m,2H),4.81(s,2H),4.32(m,2H),3.91(d,J＝10.80Hz,2H),3.59(m,4H),3.30(m,2H),3.06(m,3H),3.00(s,3H),2.60-2.55(m,3H)。

实施例59：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-2-甲基丙酸盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：600.60；观测值：601.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.84％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.30(brs,1H),8.40(brs,2H),7.96(brs,1H),7.34(t,J＝11.20Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),6.80(t,J＝8.40Hz,1H),6.79-6.73(m,1H),4.32(m,2H),3.93-3.90(m,2H),3.60(t,J＝6.40Hz,2H),3.46-3.43(m,2H),3.30-3.28(m,2H),3.03(t,J＝11.20Hz,2H)和1.45(s和6H)。

实施例60和61：(S)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸和(R)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸

对如针对以上实施例所述制备的产物的外消旋混合物(0.08mg)进行手性分离(将0.08g样品溶解于10mL乙醇中)，柱-chiralpak AD-H和流动相：于正己烷中的0.1％二乙胺:乙醇(70:30)，流动速率：1.0mL/min；分别得到10mg峰1((S)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸)和13mg峰2((R)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸)。注意：峰1被任意地归属为(S)异构体，且峰2被视为(R)异构体。

(S)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：586.16；观测值：587.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.69％；手性HPLC纯度：100％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.03(brs,1H),8.29(brs,2H),7.94(s,1H),7.24-7.18(m,2H),6.72(m,1H),6.67(t,J＝8.8Hz,1H),4.90(q,J＝6.80Hz,1H),4.07(m,2H),2.86(m,4H),2.70-2.62(m,6H),1.47(d,J＝6.80Hz,3H)。

(R)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：586.16；观测值：587.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.42％；手性HPLC纯度：98.71％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.98(brs,1H),8.30(brs,2H),7.95(s,1H),7.25-7.19(m,2H),6.73-6.68(m,2H),4.91(q,J＝6.40Hz,1H),4.07(m,2H),2.90(m,4H),2.70-2.67(m,6H),1.48(d,J＝6.40Hz,3H)。

实施例62：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：628.21；观测值：629.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.15％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.40(brs,1H),8.66(brs,2H),8.42(brs,2H),8.33(t,J＝6.0Hz,1H),7.97(d,J＝1.2Hz,1H),7.38(t,J＝11.60Hz,1H),7.26(m,1H),6.90(t,J＝8.40Hz,1H),6.75(dd,J＝2.00和3.6Hz,1H),4.63(s,2H),4.33(m,2H),3.92(m,2H),3.52-3.41(m,6H),3.30(m,2H),3.11(m,2H),3.00(t,J＝6.0Hz,2H),2.56(s,3H)。

实施例63：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：642.23；观测值：643.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.98％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.29(brs,2H),7.95-7.91(m,2H),7.24(m,2H),6.67-6.74-6.67(m,2H),4.53(s,2H),4.07(t,J＝6.40Hz,2H),3.19(q,J＝6.40Hz,2H),2.88(m,4H),2.71(t,J＝6.40Hz,2H),2.63(m,4H),2.27(t,J＝6.0Hz,2H),2.07(s,6H)。

实施例64：5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟-N-甲基苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：626.69；观测值：627.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.93％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(m,2H),7.95(s,1H),7.33-7.24(m,2H),6.94-6.88(m,1H),6.74-6.73(m,1H),4.09-4.06(m,2H),3.53-3.49(m,1H),3.33(m,1H),2.97-2.56(m,13H),2.34-2.29(m,5H)和1.90(s,3H)。

实施例65：4-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丁酸。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：600.17；观测值：601.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.64％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.90(brs,1H),8.42(brs,2H),7.96(s,1H),7.35-7.26(m,2H),6.84(t,J＝9.60Hz,1H),6.75(dd,J＝1.6和3.6Hz,1H),4.32(m,2H),4.06(t,J＝6.40Hz,2H),3.91(m,2H),3.51(m,2H),3.29(m,2H),3.07(t,J＝12.00Hz,2H),2.39(m,2H),1.93(t,J＝6.80Hz,2H)。

实施例66：3-(2-(4-(5-((1H-四唑-5-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：596.16；观测值：596.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.14％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.28-7.24(m,2H),6.98(t,J＝8.0Hz,1H),6.73(d,J＝1.20Hz,1H),5.48(s,2H),4.10(m,2H),2.95(m,4H),2.78-2.67(m,4H)。

实施例67：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-((1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：591.63；观测值：592.8(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.87％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.43(s,1H),8.30(m,2H),7.95(m,1H),7.24(m,1H),7.01-6.73(m,4H),4.99(s,2H),4.09-4.03(m,2H),3.90(s,3H),2.98-2.86(m,4H)和2.72-2.67(m,6H)。

实施例68：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：609.62；观测值：610.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.03％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.70(宽单峰，1H),8.49(s,1H),7.94(s,1H),7.32-7.07(m,3H),6.72(m,1H),5.15(m,2H),4.35-4.31(m,2H),3.91-3.86(m,5H),3.69(m,4H)和3.08(m,4H)。

实施例69：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基(氧杂环丁烷－3-基)氨基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：636.24；观测值：637.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：97.10％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.34(brs,2H),7.96(s,1H),7.60(m,2H),7.24(m,1H),7.03(m,1H),6.73(m,1H),4.51(m,2H),4.37(m,2H),4.09(m,2H),3.55(m,1H),3.05(m,4H),2.68(m,6H),2.11(s,3H)。

实施例70：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-((2-羟基乙基)氨基)乙基)苯甲酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：610.22；观测值：611.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.51％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.25(brs,1H),8.72(brs,3H),8.40(brs,2H),7.95(t,J＝0.8Hz,1H),7.72(m,2H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),7.16(t,J＝7.6Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),5.26(brs,1H),4.32(m,2H),3.94(d,J＝10.8Hz,2H),3.68-3.56(m,8H),3.16-3.03(m,6H)。

实施例71：2-氨基-N-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)乙酰胺盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：596.64；观测值：597.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.31％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,1H),8.22(d,J＝5.20Hz,1H),7.95(t,J＝0.40Hz,1H),7.24(t,J＝0.80Hz,1H),6.95-6.91(m,1H),6.81(dd,J＝2.80,14.00Hz,1H),6.73-6.74(m,1H),6.69(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),5.00(brs,1H),4.08(t,J＝6.40Hz,2H),3.95(t,J＝5.60Hz,2H),3.45(q,J＝5.60Hz,2H),3.24(brs,2H),2.85(brs,4H),2.70-2.67(m,2H)和2.63(m,4H)。

实施例72：(S)-2-氨基-N-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)-3-甲基丁酰胺盐酸盐。LCMS：(ESI正离子)；m/z：计算值：638.72；观测值：639.1(M+1)；HPLC纯度(AM9010A3)：98.36％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.44(brs,1H),8.30(brs,2H),7.94(s,1H),7.23(d,J＝3.20Hz,1H),6.92(t,J＝9.60Hz,1H),6.80-6.73(m,3H),4.05-4.08(m,4H),3.56-3.53(m,1H),3.41-3.40(m,1H),2.84(m,4H),2.71-2.671(m,3H),2.62(m,3H),2.33(m,1H),1.94-1.99(m,1H)和0.894-0.853(m,6H)。

实施例73：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酸乙酯。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：600.17；观测值：601.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.15％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.96(s,1H),7.24(m,2H),6.72(m,2H),4.85(s,2H),4.16(q,J＝6.80Hz,2H),4.08(m,2H),2.89(m,4H),2.71-2.63(m,6H),1.19(t,J＝6.80Hz,3H)。

实施例74：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙腈。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：553.14；观测值：554.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.92％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(d,J＝0.80Hz,1H),7.33(t,J＝10.80Hz,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.94(t,J＝8.4Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),5.22(s,2H),4.09(t,J＝5.6Hz,2H),2.93(m,4H),2.74-2.64(m,6H)。

实施例75：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：463.15；观测值：464.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.77％；¹H NMR:(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),8.13(d,J＝6.40Hz,2H),7.94(d,J＝0.80Hz,1H),7.23(d,J＝3.60Hz,1H),6.77(d,J＝6.40Hz,2H),6.72(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.23(m,4H),2.71-2.67(m,2H),2.58(m,4H)。

实施例76：5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：464.15；观测值：465.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.02％；¹H NMR:(400MHz,DMSO-d6)：δ8.47(s,1H),8.31(brs,2H),8.16(d,J＝6.40Hz,1H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝2.8Hz,1H),6.79(dd,J＝0.8和6.0Hz,1H),6.73(dd,J＝1.6和3.2Hz,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.53(m,4H),2.69(t,J＝6.80Hz,2H),2.55(m,4H)。

实施例79：5-氨基-3-(2-(4-(6-氟-2-氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：535.16；观测值：536.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：82.71％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.26(s,1H),8.30(brs,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.60Hz,1H),6.94(d,J＝8.40Hz,1H),6.73-6.74(m,1H),6.60(d,J＝12.00Hz,1H),4.08(t,J＝5.60Hz,2H),3.39(s,2H),2.84(m,4H),2.72-2.63(m,6H)。

实施例82：5-氨基-3-(2-(4-(5-氟-2-甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：495.54；观测值：496.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.17％；H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(宽单峰，2H),8.08(d,J＝5.60Hz,1H),7.95(s,1H),7.24(t,J＝2.40Hz,1H),6.72-6.79(m,2H),4.06-4.11(m,2H),3.16(t,J＝6.00Hz,4H),2.68-2.72(m,2H),2.62(s,4H)和2.33(s,3H)。

实施例85：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-羟基-2-甲基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：568.20；观测值：569.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.42％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(brs,2H),7.95(s,1H),7.24(s,1H),6.92(t,J＝9.60Hz,1H),6.79-6.66(m,3H),4.60(s,1H),4.07(m,2H),3.65(s,2H),2.85(m,4H),2.70-2.63(m,6H),1.17(s,6H)。

实施例86：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：538.60；观测值：539.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.02％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(bs,2H),7.95(s,1H),7.24(s,1H),7.15(m,2H),6.90(m,1H),6.73(m,1H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),2.92(宽单峰，4H),2.64-2.71(m,6H)和1.38(s,6H)。

实施例87：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(3,3,3-三氟-2-羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：608.16；观测值：609.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.69％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95(dd,J＝0.8Hz和1.6Hz,1H),7.24(dd,J＝0.8Hz和3.2Hz,1H),6.94(t,J＝9.60Hz,1H),6.85(dd,J＝2.80Hz和14.00Hz,1H),6.74-6.71(m,2H),6.63(d,J＝6.80Hz,1H),4.35-4.33(m,1H),4.10-3.99(m,4H),2.86(m,4H),2.70(t,J＝6.40Hz,2H),2.63(m,4H)。

实施例89：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(吗啉-2-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：613.64；观测值614.2(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF)：96.82％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.95(brs,1H),9.71(m,1H),9.51-9.49(m,1H),8.40(brs,2H),7.96(s,1H),7.36(t,J＝11.6Hz,1H),7.25-7.24(m,1H),6.89(t,J＝8.4Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),4.33-4.31(m,2H),4.18-4.11(m,3H),4.01-3.79(m,2H),3.58-3.48(m,2H),3.29-3.31(m,4H),3.15-2.96(m,6H),2.95-2.93(m,2H)。

实施例92：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：601.61；观测值：602.2(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF)：96.09％1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.50(s,1H),9.92(s,2H),8.40(s,2H),7.96(d,J＝0.8Hz,1H),7.46(t,J＝11.6Hz,1H),7.26-7.25(m,1H),7.13-7.08(m,1H),6.75-6.74(m,1H),5.42(s,1H),5.26-5.24(m,1H),4.33(m,2H),3.93-3.90(m,2H),3.70-3.54(m,8H),3.41-3.36(m,2H),3.30-3.16(m,2H)。

实施例93：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：601.61；观测值：602.1(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF)：95.74％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.60(s,1H),9.83-9.75(m,2H),8.41(s,2H),7.97(s,1H),7.41(t,J＝11.60Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.02(t,J＝8.40Hz,1H),6.74(q,J＝1.60Hz,1H),5.45(m,1H),5.21-5.15(m,1H),4.42(s,2H),3.91(d,J＝10.80Hz,2H),3.69-3.64(m,2H),3.61(s,4H),3.38(s,4H),3.16(d,J＝8.80Hz,2H)。

实施例94：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：601.61；观测值：602.2(M+1)；HPLC纯度(PG_AM9010.M)：91.76％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.31(s,2H),7.95(s,1H),7.26-7.23(m,2H),6.83(d,J＝8Hz,1H),6.74(d,J＝5.6Hz,1H),5.24-5.15(m,1H),4.73-4.71(m,1H),4.09(t,J＝6Hz,2H),2.91(m,5H),2.73-2.63(m,8H),1.92(s,4H)。

实施例97：2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-吗啉基乙基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：684.24；观测值：685.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.92％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95(d,J＝0.80Hz,1H),7.90(d,J＝5.60Hz,1H),7.29-7.18(m,2H),6.76-6.70(m,2H),4.55(s,2H),4.08(t,J＝6.40Hz,2H),3.53(m,4H),3.23(t,J＝6.00Hz,2H),2.90(m,4H),2.72(m,2H),2.67(m,4H),2.35(m,6H)。

实施例98：5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(吗啉-3-基甲基)苯甲酰胺盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：640.67；观测值：641.1(M+1)；HPLC纯度(XB_0595TF)：95.86％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.57(s,1H),9.50(d,J＝7.60Hz,1H),9.29(d,J＝8.00Hz,1H),8.64(s,1H),8.41(s,2H),7.97(s,1H),7.44(m,2H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),6.75(q,J＝1.60Hz,1H),4.33(m,2H),3.90(m,4H),3.49-3.57(m,8H),3.11-3.33(m,7H)。

实施例103：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：583.62；观测值：584.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：90.29％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.27(宽单峰，1H),9.69-9.82(m,2H),8.41(宽单峰，2H),7.97(m,1H),7.26-7.27(m,1H),7.05-7.10(m,2H),6.87-6.90(m,1H),6.75(t,J＝1.60Hz,1H),5.49(m,1H),5.07-5.13(m,1H),4.32(d,J＝5.20Hz,2H),3.73-3.93(m,2H),3.49-3.66(m,2H),3.40-3.44(m,3H),3.30-3.39(m,3H),3.25-3.30(m,3H),3.07-3.10(m,2H)。

实施例104：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：583.62；观测值：584.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.80％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.40(宽单峰，1H),δ9.94(m,2H),8.42(宽单峰，2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.06-7.10(m,2H),6.87(d,J＝8.40Hz,1H),6.74-6.76(m,1H),5.49(d,J＝4.00Hz,1H),5.07-5.13(m,1H),4.32(s,2H),3.90(m,2H),3.62(d,J＝5.20Hz,2H),3.39(m,6H)和3.02-3.33(brs,4H)。

实施例105：2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-吗啉基乙基)乙酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：666.25；观测值：667.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.35％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.95-7.90(m,2H),7.24(dd,J＝0.8Hz和3.2Hz,1H),6.94(t,J＝10.00Hz,1H),6.85-6.80(m,1H),6.74-6.69(m,2H),4.43(s,2H),4.08(t,J＝6.00Hz,2H),3.53(m,4H),3.22(m,2H),2.90(m,4H),2.72-2.63(m,6H),2.37-2.34(m,6H)。

实施例106：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-吗啉基乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：636.71；观测值：637.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.87％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.29-8.32(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.59(m,2H),7.24(s,1H),7.02(m,1H),6.73(m,1H),4.07-4.10(m,2H),3.55-3.57(m,4H),3.33(m,2H),3.04(m,4H),2.72(m,2H),2.67-2.68(m,4H)和2.51(m,6H)。

实施例107：4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(吗啉-3-基甲基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：622.68；观测值：623.3(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.43％；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.58(宽单峰，1H),9.52(d,J＝8.80Hz,1H),9.33(d,J＝8.40Hz,1H),8.81(d,J＝5.20Hz,1H),8.42(宽单峰，2H),7.97(s,1H),7.75-7.79(m,2H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.17(t,J＝8.80Hz,1H),6.74-6.75(m,1H),4.33(宽单峰，2H),3.86-3.96(m,3H),3.71(s,1H),3.58(t,J＝11.60Hz,2H),3.46-3.51(m,4H),3.44(d,J＝5.60Hz,1H),3.41(d,J＝9.60Hz,1H),3.18-3.32(m,6H)和3.05-3.08(m,1H)。

实施例108：5-氨基-3-(2-(4-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：533.20；观测值：534.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：88.50％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.17(brs,1H),9.22(brs,1H),9.09(brs,1H),8.41(brs,2H),7.96(s,1H),7.25(d,J＝3.56Hz,1H),6.95(d,J＝8.80Hz,2H),6.80(d,J＝8.92Hz,2H),6.73(t,J＝1.64Hz,1H),4.98(m,1H),4.41-4.32(m,4H),3.94-3.90(m,4H),3.72(m,2H),3.24-3.21(m,2H),2.97(m,2H)。

实施例109：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：560.12；观测值：561.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.33％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.45(dd,J＝9.2Hz和12.0Hz,1H),7.29-7.24(m,2H),6.73(dd,J＝1.6Hz和3.2Hz,1H),4.08(t,J＝8.0Hz,2H),2.99(m,4H),2.80(s,3H),2.73-2.67(m,6H)。

实施例110：(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：560.12；观测值：561.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：98.18％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.47-7.42(dd,J＝9.2Hz和12.0Hz,1H),7.29-7.23(m,2H),6.74-6.73(dd,J＝1.6Hz和3.2Hz,1H),4.08(t,J＝8.0Hz,2H),2.99-2.98(m,4H),2.8(s,3H),2.73-2.67(m,6H)。

实施例113：(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：631.68；观测值：632.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.04％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)8.52(d,J＝2.00Hz,1H),8.32(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.28-7.34(m,1H),7.20-7.25(m,2H),6.73-6.74(m,1H),4.07(d,J＝6.40Hz,2H),3.58-3.64(m,2H),2.99-3.06(m,4H),2.84-2.93(m,2H),2.69-2.72(m,2H),2.65-2.69(m,4H)和2.60(s,3H)。

实施例114：(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：631.68；观测值：632.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：96.65％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝2.00Hz,1H),8.32(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.28-7.34(m,1H),7.20-7.25(m,2H),6.73-6.74(m,1H),4.07(d,J＝6.40Hz,2H),3.58-3.64(m,3H),3.30(m,2H),2.99-3.06(m,4H),2.84-2.93(m,2H),2.69-2.72(m,2H),2.65-2.69(m,4H),2.60(s,3H)。

实施例115：(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-甲基-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：645.70；观测值：646.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：99.10％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.13(br s,1H),7.85(br s,1H),7.37(t,J＝9.28Hz,1H),7.01-7.10(m,3H),6.64-6.66(m,1H),4.17(t,J＝9.08Hz,2H),3.87(m,1H),3.72-3.78(m,2H),3.39-3.66(m,2H),3.08-3.17(m,10H),2.89-3.01(m,2H)和2.60-2.67(m,3H)。

实施例116：(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-甲基-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：645.7；观测值：646.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：93.418％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.29(br s,2H),7.94(s,1H),7.22-7.32(m,2H),6.95(t,J＝7.72Hz,1H),6.72(d,J＝1.28Hz,1H),4.06(t,J＝5.92Hz,2H),3.50-3.54(m,1H),3.06-3.11(m,1H),2.96-3.02(m,2H),2.86-3.00(m,4H),2.78-2.86(m,2H),2.68-2.71(m,2H),2.62(s,6H)和2.47-2.50(m,2H)。

实施例117：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(1-氧化硫代吗啉-4-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：643.69；观测值：644.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：92.78％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.85-7.88(m,2H),7.38-7.44(m,1H),7.18-7.22(m,1H),7.04-6.98(m,1H),6.81(s,1H),6.65-6.71(m,1H),4.35(宽单峰，1H),4.16(t,J＝9.20Hz,2H),3.79-4.01(m,1H),3.51-3.77(m,3H),3.41-3.49(m,4H),3.17-3.39(m,2H),2.95-3.07(m,4H)和2.75-2.90(m,3H)。

实施例118：5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(1-氧化硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：615.68；观测值：616.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：93.08％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(宽单峰，2H),7.95(s,1H),7.24(s,1H),7.16(m,1H),6.72(m,2H),4.06-4.10(m,2H),3.49-3.54(m,2H),3.14-3.18(m,2H),2.93-3.00(m,6H),2.82-2.85(m,2H),2.67-2.72(m,2H)和2.50-2.63(m,4H)。

实施例123：(S)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：613.17；观测值：612.0(M-1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：99.46％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),8.09(m,1H),7.95(s,1H),7.58(t,J＝8.8Hz,1H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),6.79-6.71(m,3H)。4.09(t,J＝6.0Hz,2H),3.61(q,J＝6.0Hz,2H),3.22(m,4H),3.07-3.00(m,1H),2.90-2.85(m,1H),2.72-2.69(m,2H),2.60(m,7H)。

实施例124：(R)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：613.17；观测值：614.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：98.08％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),8.09(m,1H),7.95(s,1H),7.58(t,J＝8.8Hz,1H),7.24(m,1H),6.79-6.70(m,3H)。4.09(t,J＝6.0Hz,2H),3.61(q,J＝6.0Hz,2H),3.22(m,4H),3.05-3.00(m,1H),2.90-2.85(m,1H),2.72-2.68(m,2H),2.60(m,7H)。

实施例125：5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧化硫代吗啉-4-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：625.17；观测值：626.0(M+1)；HPLC纯度(XB0595TF)：95.09％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.94(s,1H),7.24(m,2H),6.79-6.72(m,3H),4.36-4.35(m,1H),4.08(t,J＝6.04Hz,2H),3.78-3.62(m,2H),3.55-3.46(m,1H),3.17(m,4H),2.83(m,3H),2.71-2.66(m,3H),2.59(m,4H)。

实施例129：(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-2,4-二氟苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：615.62；观测值：616.1(M+1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：97.60％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：在1H NMR中观测到宽峰。

实施例130：(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-2,4-二氟苯甲酰胺。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：615.62；观测值：616.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：95.00％；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(宽多重峰，2H),8.09(s,1H),7.95(s,1H),7.24-7.42(m,3H),6.73(s,1H),4.84(s,1H),4.60(s,1H),4.32(s,1H),3.96-4.08(m,2H),3.56(t,J＝2.80Hz,2H),3.17(t,J＝6.04Hz,2H),2.94(s,4H),2.65-2.71(m,6H)。

实施例131：5-氨基-3-(2-(4-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮盐酸盐。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：551.19；观测值：552.2(M+1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：90.50％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.33(brs,1H),9.33(brs,1H),9.21(brs,1H),8.42(brs,2H),7.97(s,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.05(t,J＝9.6Hz,1H),6.87(d,J＝13.6Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),5.03(s,1H),4.44-4.32(m,4H),3.93(m,4H),3.60(m,2H),3.43-3.06(m,6H)。

实施例132：5-氨基-3-(2-(4-(5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：569.18；观测值：570.0(M-1)；HPLC纯度(XB0595TF)：94.68％；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.32(brs,2H),7.95(s,1H),7.27-7.21(m,2H),6.74(s,1H),6.43(t,J＝8.40Hz,1H),5.01(m,1H),4.07(t,J＝5.60Hz,2H),3.71(t,J＝7.20Hz,2H),3.53-3.47(m,2H),2.90(m,4H),2.72-2.63(m,6H)。

实施例133：(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(3-(甲基亚磺酰基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。LCMS(ESI正离子)m/z：计算值：618.16；观测值：617.2(M-1)；HPLC纯度(XB0595NHC)：97.91％；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.30(brs,2H),7.94(s,1H),7.23-7.18(m,2H),6.77-6.73(m,2H),4.14-4.07(m,4H),2.89(m,5H),2.77-2.55(m,10H),2.05(m,2H)。

II.生物学实施例

II.1.A2A功能活性测定

以下两种测定的目的在于通过显示它们抑制其功能活性来显示本发明的化合物有效地抑制A2A受体。

II.1.A.HEK细胞中cAMP产生的抑制

目的。当A2A受体被活化时，其诱导cAMP的产生。因此，本测定的目的在于显示HEK细胞中响应于其暴露于本发明化合物而抑制cAMP产生。

方法。经A2A受体稳定转染的HEK-293细胞购自

(编号ES-011-C)。在37℃和5％ CO₂下，在补充有10％ FBS(Lonza，编号DE14-801F)和200μg/mL G418(Tocris，编号4131)的EMEM培养基(Lonza，编号BE12-611F)中培养细胞。在实验即将进行的前一天，添加没有选择标志物的新鲜培养基以终止选择压力。

使用来自

(编号TRF0262)的

Ultra cAMP试剂盒在白色半区96孔板(

编号6005560)上获取cAMP抑制和拮抗剂IC₅₀确定。在两种不同的刺激缓冲液中进行测定：

a)具有1×HBSS(

编号141750-95)、5mM HEPES(Lonza，编号BE17-737E)、0.1％ BSA和25μM咯利普兰(Rolipram)的正常缓冲液，和

b)具有1×HBSS(

编号141750-95)、5mM HEPES(Lonza，编号BE17-737E)、2％人血清白蛋白(Sigma-

-A1653)、30μMEHNA(Tocris-编号1261)和100μM咯利普兰的HSA。刺激缓冲液b)通过增加测定中存在的白蛋白量来模拟人的状态。

取决于进行的测定，将本发明的化合物在任一缓冲液中稀释100×。在添加相应EC80的A2A激动剂(正常缓冲液中3nM NECA和HSA缓冲液中5nM NECA)或5μM腺苷之前，将每孔总共1000个细胞与本发明的化合物预培育10分钟，总反应时间为30分钟。反应总体积为20μl(10μl细胞、5μl拮抗剂和5μl激动剂)。通过添加10μl 4×EU-cAMP示踪剂工作溶液和10μl 4×ULight-抗cAMP工作溶液来完成反应。1小时后使用Spectramax Paradigm(Molecular Devices)测量TR-FRET信号。

结果。如下表2中所证明的，本发明的化合物抑制在不同条件下响应于用A2A激动剂或腺苷刺激过表达A2A的HEK细胞的cAMP产生。

表2

II.1.B.人T细胞产生促炎性细胞因子的恢复

目的。当T细胞被活化时，它们产生促炎性细胞因子。当A2A受体在T细胞中被活化时，T细胞响应于刺激而产生的细胞因子量降低。因此，本测定的目的在于显示可通过暴露于本发明的化合物恢复由T细胞产生促炎细胞因子。

PBMC和CD3+T细胞分离。经由ImmuneHealth(Centre Hospitalier UniversitaireTivoli,La Louviere,Belgium)获得来自健康志愿者的静脉血，所有志愿者均签署了伦理委员会批准的知情同意书(FOR-UIC-BV-050-01-01ICF_HBS_HD 5.0版)。根据制造商说明书，使用SepMate-50管(StemCell Technologies,Grenoble,France)和Lymphoprep(Axis-shield,Oslo,Norway)，通过密度梯度离心收集单核细胞。依照制造商说明书，使用EasySep人T细胞分离试剂盒(StemCell Technologies)，通过免疫磁性阴性选择分离CD3+T细胞。将CD3+T细胞储存在液氮中含有10％ DMSO的热灭活的胎牛血清(hiFBS；Gibco,ThermoFisherScientific,Merelbeke,Belgium)中。

人IL-2T细胞测定。将纯化的人CD3+T细胞解冻，并用补充有1×非必需氨基酸(Lonza)、2％青霉素/链霉素(Pen/Strep)(Lonza)和1mM丙酮酸钠(Gibco)的含有10％hiFBS的RPMI1640培养基(含UltraGlutamine；Lonza,Verviers,Belgium)(完全培养基)洗涤两次。将细胞悬浮在含有20％hiFBS的完全培养基中或100％热灭活的人血清(hiHS；Sigma-Aldrich,Diegem,Belgium)中。通过添加抗CD3和抗CD28包被的微珠(Dynabeads人T活化剂CD3/CD28；Life Technologies,Paisley,UK)将细胞活化，将其悬浮在含有20％hiFBS的完全培养基中或100％hiHS中。以0.5μM或5μM的最终测定浓度添加选择性A_2AR激动剂CGS-21680(Sigma-Aldrich；DMSO中的10mM母液)。制备本发明化合物的连续稀释物并将其添加到孔中。将细胞置于具有5％ CO₂的37℃加湿组织培养培育箱中且保持72小时。在72小时后，根据制造商说明书对上清液进行取样，并使用IL-2(人)AlphaLISA无生物素检测试剂盒(AL333F；Perkin-Elmer,Zaventem,Belgium)对IL-2进行定量。

结果。向CD3+T细胞中添加A2A选择性激动剂CGS-21680降低响应用抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激而产生的细胞因子量。本发明的化合物剂量依赖性地恢复经CGS-21680处理的人T细胞中促炎性细胞因子IL2的产生，效力示于下表3中。

表3

II.1.C.人全血中促炎细胞因子的产生的恢复

测试管的准备。装有所选刺激剂(SEB、LPS、酵母聚糖、抗CD3/CD28)和TruCulture培养基的管购自Myriad RBM(目录编号分别为782-001124、782-001087、782-001259和782-001125)并添加A2a激动剂(CGS-21680和NECA)，并且将管直接冷冻在-20℃，直到用于细胞培养实验。

将化合物7以10mM溶解于DMSO中，然后用TC培养基稀释。在显微镜下检查溶液以排除粒子的存在。将新制备的含化合物7的溶液添加到解冻的TC管中，该管中装有刺激剂和1μM CGS-21680(在适当时)。

细胞培养。从来自HOT Screen GmbH预先测试的供体库的健康供体抽取血液(年龄：20-65岁，两性)。将来自3位健康供体的肝素化新鲜外周全血(1mL)添加到解冻的TC管中，并在加热块中于37℃培育24小时(LPS和酵母聚糖刺激)或48小时(SEB和抗CD3/CD28刺激)。在培养期结束时，插入seraplas过滤器用于收获上清液。仔细收集上清液，将其混合，等分并在-20℃下冷冻。

介体定量。使用用于Luminex测定的人细胞因子MAP A板(panel)测量TC上清液中释放的细胞因子和趋化因子。分析以下介体：GM-CSF、IFNg、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-18、MCP-1、MIP-1a、MIP-1b、TNF-a、TNF-b。

数据分析。为了评估CGS-21680和NECA的生物活性，分析了通过增加A2A激动剂剂量而诱导的TC上清液中细胞因子和趋化因子分泌的改变。如下计算每种刺激条件下可溶性介体(SM)浓度的百分比变化：

变化％＝100×[SMTC+A2A激动剂]/[SMTC-A2A激动剂]。

为了评估化合物7的生物活性，分析了在补充CGS-21680的TC中由化合物7诱导的细胞因子和趋化因子分泌向基线水平(即不补充CGS-21680的TC刺激)的恢复。

通过如下计算全血TC的每种刺激条件的对照百分比来估计细胞因子分泌的挽救(rescue)：

对照％＝100×[SMTC+CGS+化合物7]/[SMTC-CGS-化合物7]。

结果。LPS、酵母聚糖、SEB和抗CD3/CD28诱导全血细胞培养物中若干细胞因子和趋化因子的分泌。评估了两种A2A激动剂(CGS-21680和NECA)对用LPS、酵母聚糖、SEB或抗CD3/CD28刺激的全血细胞培养物的生物活性。两种激动剂均剂量依赖性地改变几种细胞因子和趋化因子的分泌。尽管个体之间改变的程度不同，但该作用在三个测试的供体之间是可再现的。

当向LPS或酵母聚糖刺激的全血培养物中添加1μM CGS-21680或NECA时，对促炎细胞因子和抗炎细胞因子两者的释放的作用达到稳定。特别地，促炎细胞因子IFNg和TNFa的水平降低了超过50％，而抗炎细胞因子IL-8和IL-10的水平增加了一倍。

评估了化合物7恢复CGS-21680在用LPS、酵母聚糖或抗CD3/CD28刺激的全血细胞培养物上诱导的细胞因子和趋化因子分泌改变的能力。如图1A和1B中所示，取决于测试条件，化合物7剂量依赖性地恢复由CGS-21680诱导的细胞因子和趋化因子分泌的改变，其中以100-1000nM浓度的化合物实现了完全挽救。尽管个体之间改变的程度不同，但该作用在三个测试的供体之间是可再现的。

LPS和酵母聚糖刺激的全血TC中IFNg、TNFa、IL-8和IL-10的分泌主要受CGS-21680处理影响，并且被40-100nM化合物7完全挽救。

II.2.pCREB的调节

II.2.A.人免疫细胞中pCREB的调节

目的。已知A2A受体介导CREB磷酸化。本测定的目的在于通过显示可通过将人免疫细胞暴露于本发明化合物而抑制CREB磷酸化来显示本发明化合物有效抑制A2A受体。

方法。经由ImmuneHealth(Centre Hospitalier Universitaire Tivoli,LaLouviere,Belgium)获得来自健康志愿者的静脉血，所有志愿者均签署了伦理委员会批准的知情同意书(FOR-UIC-BV-050-01-01ICF_HBS_HD 5.0版)。用A2AR激动剂CGS-21680或NECA(Sigma-Aldrich,Diegem,Belgium)和本发明化合物的连续稀释物(全部使用DMSO中的10mM母液)处理外周血细胞。在RPMI1640培养基(含UltraGlutamine；Lonza,Verviers,Belgium)中制备所有稀释物，并将细胞与化合物在具有5％ CO₂的37℃加湿组织培养培育箱中培育。在刺激后，将细胞固定并透化，之后在室温下使用小鼠抗人pCREB抗体(克隆J151-21；BD Biosciences)进行细胞内染色。使用LSRFortessa流式细胞仪(BDBiosciences)采集数据，并使用FlowJo软件(FlowJo,LLC,Ashland,Oregon)进行分析。

结果。发现本发明的化合物抑制A2A介导的CREB磷酸化。例如，如图2中所示，化合物4在被NECA活化的外周血淋巴细胞中展现20nM的IC₅₀。

II.2.B.小鼠中的pCREB离体调节

目的。已知A2A受体介导CREB磷酸化。本测定的目的在于通过显示可通过向小鼠给予本发明化合物而在小鼠中抑制CREB磷酸化来显示本发明化合物有效抑制A2A受体。

方法。在10％ DMSO、10％solutol、80％水(pH 3)配制化合物7以获得均匀溶液。计算体积以便以100μl经口(PO)施用最终剂量。BALB/cANNCrl雌性小鼠购自Charles RiverLaboratories。用单剂量的A2A受体拮抗剂经口治疗小鼠。在特定时间点，通过腹膜内注射PBS中的200μl氯胺酮10％/甲苯噻嗪0.1％麻醉动物，并通过眼眶后放血在EDTA管中收集血液。将45μl的血液/孔分配在主区块(master block)中。在补充有2％青霉素/链霉素(Lonza)和50μM 2-巯基乙醇(Sigma)的RPMI 1640培养基(Lonza)中以3μM的浓度制备A2A受体激动剂NECA(Tocris)，且将50μl添加到各孔中并且在具有5％ CO₂的37℃加湿细胞培养培育箱中培育45分钟。测定中DMSO的最终浓度为0.125％。通过在每个孔中添加1ml预热的溶解/固定缓冲液(BD Biosciences)将细胞固定，小心混合并在具有5％CO₂的37℃加湿细胞培养培育箱中培育10分钟。通过以600×g离心5分钟使细胞沉淀。用1ml含Ca2+Mg2+的DPBS(Lonza)洗涤后，将细胞用200μl冰冷的Perm缓冲液II(BD Biosciences)透化，并且在冰上培育30分钟。在透化期间，将细胞转移到96孔U型底板。使细胞沉淀并用由PBS(Lonza)、0.1％ BSA(VWR)、2mM EDTA(Ambion)构成的FACS缓冲液洗涤两次。进行FACS染色，将细胞重悬于含有Fc阻断物(block)(CD16/CD32单克隆抗体(93)，eBioscience)的FACS缓冲液中；在室温下培育5min后，添加抗体混合物，并将细胞在室温下培育1小时。用FACS缓冲液洗涤细胞，并将其再悬浮于同一缓冲液中以供在BD Fortessa(BD Biosciences)处获取数据。

利用FlowJo 10.4软件分析用流式细胞术获得的数据。评估了我们的目标标志物pCREB的MFI(中值荧光强度)，通过各自的DMSO对照(比率)将其归一化并报告于图中。使用适用于S形剂量响应模型的非线性回归，使用GraphPad Prism 7.0软件分析剂量响应数据。使用LSRFortessa流式细胞仪(BD Biosciences)采集数据，并使用FlowJo软件(FlowJo,LLC,Ashland,Oregon)进行分析。

结果。化合物8a证实在以0.1mg/Kg的剂量经口施用后30分钟对CD4+T细胞的A2A信号传导途径的完全抑制(表4)。在给药后12小时，以1mg/Kg的剂量仍然观测到超过70％的对A2A信号传导途径的抑制。对于CD8+T细胞，获得类似数据(表5)。

表4.经口施用后30分钟化合物8a的活性。在CD4+T细胞中评估的CREB磷酸化

表5.经口施用后12小时化合物8a的活性。在CD4+T细胞中评估的CREB磷酸化

II.3.细胞毒性测定

目的。A2A受体的活化提供了抑制细胞毒性的免疫抑制信号。本测定的目的在于通过显示可通过暴露于本发明化合物而增加细胞毒性来显示本发明化合物有效抑制A2A受体。

方法。进行细胞毒性测定以评估OT-I CD8细胞对OVA脉冲靶细胞的抗原特异性细胞毒性活性，以及本发明化合物缓解A2AR介导的细胞毒性抑制的作用：从C57BL/6-Tg(TcraTcrb)1100Mjb/Crl小鼠(Charles River)的脾脏分离OT1细胞。在存在5μM CGS-21680(Sigma-Aldrich)且增加本发明化合物的浓度的情况下，在具有5％ CO₂的37℃加湿组织培养培育箱中用1ug/ml OVA肽(卵清蛋白(257-264)鸡(S7951-1MG)，Sigma Aldrich)将OT1细胞引发(primed)3天。在第3天，汇集所有细胞并计数。为了在第3天进行细胞毒性测定，将Panc02(靶细胞)用1μg/ml的OVA脉冲。根据制造商说明书，分别用CFSE(C1157(ThermoFisher))和CellTrace^TM远红外细胞增殖试剂盒(Far Red Cell ProliferationKit)(C34564,ThermoFisher)标记靶细胞和非脉冲Panc02细胞(非靶旁观者(bystander))。受刺激的OT-1细胞作为效应细胞以10:1的效应物与靶的比率添加。在具有5％ CO₂的37℃湿润组织培养培育箱中培育共培养反应物。在24小时后，将细胞洗涤并用活/死的可固定紫色死细胞染色试剂盒(Molecular Probes,L34955)染色。然后，通过借助流式细胞术(

分析仪10-Miltenyi Biotec)监测活靶细胞与非靶细胞之比的变化来测量靶细胞的细胞毒性杀伤。

细胞毒性％计算如下：细胞毒性％＝(1-R1/R2)*100

其中R1＝在效应细胞存在下的(靶细胞％)/(非靶细胞％)*100，并且R2＝在效应细胞不存在下的(靶细胞％)/(非靶细胞％)*100。

结果。向培养基中添加A2A激动剂CGS-21680使细胞毒性降低，细胞毒性可被本发明的化合物剂量依赖性地降低(表6)。这例如在图3中针对本发明的化合物4和31进行了举例说明。

表6

化合物	IC₅₀(nM)
		化合物31	12.6
化合物4	25.7
		化合物7	108.5
化合物8a	107.4
		化合物77	663.9

III.药物代谢动力学实施例

III.1.确定Caco-2细胞中的渗透性和外排

目的。如引言中所提到的，本发明的化合物不得不展现出有限(如果有)的CNS渗透性，以避免在这些化合物显著渗透到脑中时可能发生的有害副作用。

本测定的目的在于通过显示本发明的化合物是从脑中排出它们的转运蛋白的底物来显示本发明的化合物不具有任何显著的CNS渗透性。

实际上，在本领域中众所周知，作为转运蛋白(诸如P-糖蛋白)底物的异生物质在穿透血脑屏障方面并不有效，因此在中枢神经系统中不太有效(Alfred H.Schinkel，“P-糖蛋白，血脑屏障的守护者(P-Glycoprotein,agatekeeper in the blood–brainbarrier)”，Advanced Drug Delivery Reviews 36(1999)179–194)。

因此，本测定的目的在于显示本发明的化合物是存在于Caco-2细胞系中的此类转运蛋白的底物，因此不穿过血脑屏障。

材料。用于本研究中的转运缓冲液(TB,pH 7.4)是具有10mM HEPES(pH 7.4)的Hank缓冲盐水溶液(HBSS，Gibco，目录编号14025-076)。胎牛血清(FBS)(Corning，目录编号Corning-35-076-CV或其他供应商)、最低必需培养基(MEM)(Gibco，目录编号41500-034)以及其补充剂购自Invitrogen(Carlsbad,CA,USA)。Caco-2细胞系(目录编号HTB-37)购自ATCC(Rockville,MD,USA)。用于研究中的有机溶剂购自Sigma Aldrich(St.Louis,MO,USA)。

工作溶液的制备。对于参考化合物(非诺特罗(fenoterol)、普萘洛尔(propranolol)和地高辛(digoxin))和测试化合物，通过用DMSO稀释10mM或其他适当浓度的DMSO母液来制备0.4mM中间溶液。通过在有和无1μM Zosuquidar的情况下将适当体积的中间溶液掺加到TB中来制备用于参考化合物和测试化合物的2μM给药溶液。DMSO的最终浓度不超过1％(v/v)。

Caco-2细胞培养。使Caco-2细胞在补充有2mM L-谷氨酰胺、10％FBS、100U/mL青霉素-G和100μg/mL链霉素的MEM中生长。在37℃、5％CO₂和相对饱和的湿度下培育细胞。在达到80％到90％汇合后，用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液轻轻分离细胞。将传代30-50次的细胞以1×10⁵个细胞/cm²的密度接种在96孔BD嵌件系统(insert system)(目录编号359274)上，并培养21-28天，每4-5天更换培养基。

转运程序：在转运测定之前，将TB和给药溶液预热到37℃。用含有10mM HEPES的HBSS将细胞单层洗涤两次。对于A-B(顶端到基底侧)定向转运测定，将75μL给药溶液添加到顶端孔中。用250μL TB填充每个基底侧孔。对于B-A(基底侧到顶端)定向转运测定，在用75μL TB填充每个顶端孔后，将250μL给药溶液添加到基底侧孔中。在1μMzosuquidar存在或不存在下，以2μM的浓度一式两份双向测试一种或多种测试化合物和地高辛。在zosuquidar不存在下，在A到B方向上一式两份以2μM测试阿替洛尔(Atenolol)和普萘洛尔。将板在37℃与5％ CO₂和饱和湿度下培育120分钟。通过将测试化合物或参考化合物的50μL初始给药溶液与100μL TB和250μL淬灭溶液(具有一种或多种内标的乙腈(ACN)或其他适当的溶剂，基于生物分析方法开发)混合来生成零时样品(time zero sample)。在120分钟时，从每个A-B接受者(receiver)孔中收集150μL溶液，之后添加250μL淬灭溶液以获得A-B接受者样品。并且对于其他样品(A-B供体、B-A供体和接受者)，从每个相应的孔中收集50μL溶液，之后添加250μL淬灭溶液和100μL TB。将所有样品涡旋混合并以3220g离心20分钟。随后，用超纯水稀释上清液用于LC-MS/MS分析。通过LC-MS/MS确定所有样品中测试化合物的浓度，并将其表示为分析物与内标的峰面积比。

使用分析物与内标物的峰面积比(分析物/IS)表示样品的浓度。

使用下式计算表观渗透系数(Papp)：

P_app＝V_R/(面积*时间)*(C_R/C₀)

其中V_R是接受者腔中的溶液体积(顶侧为0.075mL，基底侧为0.25mL)；面积是用于转运的表面积，即单层面积为0.0804cm²；时间是以秒表示的培育时间，2h＝2×3600s；C₀是供体室中的初始浓度；C_R是接受者室中的最终浓度。

使用下式计算外排比：

外排比＝Papp(A-B)/Papp(B-A)

其中Papp(A-B)和Papp(B-A)分别是化合物在顶端向基底侧方向转运和基底侧向顶端方向转运中的Papp值。

结果。当外排比>3时，通常将化合物视为P-糖蛋白底物。如下表7中所证明的，本发明的化合物通常具有＞3的外排比。

表7

III.2.确定A2A拮抗剂与血浆相比在脑和脑脊液中的浓度

目的。本测定的目的在于通过确定这些化合物与血浆相比在脑和脑脊液(CSF)中的浓度来显示本发明的化合物不具有任何显著的CNS渗透性。

方法。以10mg/kg的剂量向7-9周龄雌性Balb-c小鼠(从SLAC Laboratory Animal有限公司，Shanghai,China或SIPPR-B&K Laboratory Animal有限公司，Shanghai,China获得)经口给予1.00mg/mL于10％DMSO+10％solutol+80％水中的悬浮液(调节到pH 3-4)(均匀的不透明悬浮液)。

在施用前使动物禁食至少12小时。所有动物均在给药后4小时任意获取合格的啮齿动物饮食(目录编号M01-F，SLAC Laboratory Animal有限公司，Shanghai,China)。从下颌下静脉或隐静脉进行连续性放血(每个时间点约30μL血液)。将这些样品转移到装有2μLK2EDTA(0.5M)作为抗凝剂的预冷微量离心管中，并且置于湿冰上用于进一步处理。采血后立即在设计的时间点收获全脑。在给药后的所选时间点，从小脑延髓池收集CSF。

在半小时收集内，通过在大约4℃、3000g下离心15min来处理血样的血浆。将血浆样品储存在聚丙烯管中，在干冰上快速冷冻，并保持在-70℃直到LC/MS/MS分析。称量脑样品，在冷蒸馏水中冲洗以去除血液，并且使用预冷水以1:4(1g脑使用4mL水)的比率均质化。脑均质化保持在-70℃，直到LC/MSMS分析。将CSF在干冰上快速冷冻，并保持在-70℃直到LC/MS/MS分析。

结果。例如，对于本发明的化合物4，在这些条件下在小鼠的脑或CSF中未能发现可测量的量。

经口施用(10mg/kg)后实施例4的单个浓度和平均浓度提供于下表8中。

表8

血浆浓度(ng/mL)
					时间(h)	小鼠1	小鼠2	小鼠3	平均值
0.500	576	995	765	779
					脑浓度(ng/g)
时间(h)	小鼠1	小鼠2	小鼠3	平均值
					0.500	<15	16.9	<15	<16
CSF浓度(ng/mL)
					时间(h)	小鼠1	小鼠2	小鼠3	平均值
0.500	<3	<3	<3	<3
					脑/血浆比率
时间(h)	小鼠1	小鼠2	小鼠3	平均值
					0.500	<0.026	0.0169	<0.020	<0.021
CSF/血浆比率
					时间(h)	小鼠1	小鼠2	小鼠3	平均值
0.500	<0.005	<0.003	<0.004	<0.004

III.3.通过运动测定确定CNS活性

目的。除了腺苷的免疫抑制作用外，还确定了腺苷在中枢神经系统中通过其与A2AR的相互作用来调节神经元功能。该相互作用介导了一部分参与移动的多巴胺途径。已显示，通过高度脑渗透性的A2AR拮抗剂化合物(诸如瑞德南特，最初合成用于预防帕金森氏病)预防脑中的这种信号传导诱导动物运动过度(hyper locomotion)。对于用于Parksons疗法的化合物(如Prelandenant)(正被改用于癌症免疫疗法)，这可能构成问题。

本测定的目的在于通过使用Hodgson等(J.Pharma.And Exp.Thera.2009)公开的方法显示本发明的化合物不具有任何显著的CNS活性。该测定的原理是CGS21680(脑渗透性A2AR特异性腺苷类似物)在小鼠皮下(s.c.)注射后数分钟内诱导不动(运动过少(hypoocomotion))。因此，在用CGS21680治疗之前用脑渗透性A2AR拮抗剂治疗的小鼠可预防运动过少。

以经口(PO)的各种浓度比较瑞德南特(参考型脑渗透性化合物)与本发明化合物对CGS21680诱导的不动的作用。

方法。在CGS21680之前30min施用化合物，并且经30min时期监测运动。使用表10中所述的一系列评分对小鼠进行不动评分(表9)。

结果。当以1mg/kg(皮下)单独施用时，在30分钟后，CGS21680诱导完全不动。当以10mg/kg经口施用时，瑞德南特抑制CGS21680诱导的不动，而当以相当量的剂量施用时，本发明的化合物未能完全预防不动。这些数据支持来自脑和脊髓液的PK数据，确认与瑞德南特相比，本发明的化合物具有降低的脑渗透性和CNS活性。

表9.本发明的化合物具有降低的脑渗透活性

化合物	剂量(PO)	评分*
			媒介物	n/a	++++
化合物4	10mg/kg	+++
			化合物7	10mg/kg	+++
瑞德南特	1mg/kg	+
			瑞德南特	10mg/kg	0

*在至少60-100％的小鼠中观测30分钟的评分，每组n＝3-5只小鼠

表10.运动评分

Claims

1.一种化合物，其选自由以下组成的组：

-1-(4-((1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)-2-氟苯基)哌嗪；

-1-(2-氟-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)哌嗪；

-2-(2,4-二氟-5-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺；

-(S)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(R)-1-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(R,S)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(S)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

-(R)-1-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪；

和其盐或溶剂合物。