TW201815511A - 細胞層片之切斷方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於將於收容有培養基M之容器4之內部培養之細胞層片S藉由照射雷射光L之切斷裝置3而切斷的細胞層片S之切斷方法。
於維持為無菌狀態之無菌室2之內部，將培養基M自上述容器4去除，並且藉由設置有由雷射光L能夠穿透之素材所構成之穿透部的蓋部13密閉該容器4，將藉由上述蓋部13而密閉之容器4自無菌室2取出並移動至設置於該無菌室2之外部之上述切斷裝置3，於上述切斷裝置3中，使上述雷射光L穿透上述蓋部13之穿透部，藉由該雷射光L而將上述細胞層片S切斷。可維持無菌狀態而將細胞層片S切斷。

Description

細胞層片之切斷方法
本發明係關於一種細胞層片之切斷方法，詳細而言係關於藉由雷射光而將細胞層片切斷之切斷方法。
習知，為了將培養之細胞層片用於檢查或治療，而進行將該細胞層片切斷為所需要之大小，作為此種將細胞層片切斷之方法已知有使用雷射光之方法(專利文獻1，尤其第0050段)。
作為此種使用雷射光之細胞層片之切斷方法中所使用之切斷裝置，已知有如下者，其具備：保持平台，其保持收容有上述細胞層片之培養容器、雷射光照射手段，其照射上述雷射光、及移動手段，其使上述保持平台與雷射光相對移動(專利文獻2)。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第2012/115244號
[專利文獻2]日本特表第2005-534941號公報
此處，如上述專利文獻1般，於利用雷射光將細胞層片切斷時，必須使培養容器移動至上述切斷裝置，但存在此時異物或微生物等附著於上述培養容器內之細胞層片之問題。
鑒於此種問題，本發明提供一種細胞層片之切斷方法，其能夠維持無菌狀態將細胞層片切斷。
即，請求項1之發明之細胞層片之切斷方法使收容有細胞層片之容器移動至照射雷射光之切斷裝置，將該容器內之細胞層片藉由雷射光而切斷，且其特徵在於，於維持為無菌狀態之無菌室之內部，將上述容器利用設置有由雷射光能夠穿透之素材所構成之穿透部的蓋部而密閉，將藉由上述蓋部而密閉之容器自無菌室取出，並使之移動至設置於該無菌室之外部之上述切斷裝置，於上述切斷裝置中，使上述雷射光穿透上述穿透部，藉由該雷射光而將上述細胞層片切斷。
根據上述請求項1之發明，藉由於隔離器之內部將培養容器利用蓋部密閉，可將該培養容器之內部維持無菌狀態而進行細胞層片之切斷。
此時，藉由於上述蓋部設置由雷射光能夠穿透之素材所構成之穿透部，而上述雷射光穿透上述穿透部，能夠藉由該雷射光而將上述細胞層片切斷。
1‧‧‧細胞層片切斷系統
2‧‧‧隔離器
3‧‧‧切斷裝置
4‧‧‧培養容器
11‧‧‧內容器
11b‧‧‧膜片
12‧‧‧外容器
13‧‧‧蓋部
C‧‧‧膠原蛋白凝膠層
L‧‧‧雷射光
M‧‧‧培養基
S‧‧‧細胞層片
圖1係表示本實施例之細胞層片切斷系統之圖。
圖2係表示本實施例之培養容器之圖。
圖3係表示細胞層片之切斷方法之圖。
圖4係表示細胞層片之切斷方法之圖。
圖5係表示具有其他態樣之培養容器之圖。
若對以下當對圖示之實施例進行說明，則圖1係表示將培養之細胞層片S切斷為所需要之大小之細胞層片切斷系統1，由內部維持為無菌狀態之作為無菌室之隔離器2、及藉由雷射光L而將上述細胞層片S切斷之切斷裝置3構成。
作為本實施例中處理之細胞層片S，可處理例如專利文獻1中所記載之藉由視網膜色素上皮細胞而構成者、或由其他組織而構成之細胞層片S。
作為上述隔離器2及切斷裝置3可使用習知公知者，隔離器2之內部藉由未圖示之空氣清潔手段而將內部維持為無菌狀態，相對於此，上述切斷裝置3設置於隔離器2之外部之外部空間。
上述隔離器2及切斷裝置3設置於無塵室等環境下，若為並非如隔離器2之內部空間般維持無菌狀態之環境，則有浮游異物或微生物等之虞。
因此，於該細胞層片切斷系統1中，於上述隔離器2之無菌環境下對細胞層片S進行所需要之作業，並且使用下述培養容器4，藉此可維持著無菌狀態而於上述切斷裝置3中將細胞層片S切斷，防止將細胞層片S切斷時之異物或微生物之附著。
圖2係表示收容上述細胞層片S之培養容器4，由收容細胞層片S之內容器11、及收容多個該內容器11並且收容培養基M之外容器12而構成，又，本實施例之培養容器4係藉由蓋部13而將內部空間密閉。
上述內容器11係由形成為錐狀之樹脂製之筒狀部11a、及設置於該筒狀部11a之底面之樹脂製之膜片11b而構成，上述細胞層片S於上述膜片11b之上部培養。
上述膜片11b具有未圖示之無數個貫通孔，上述培養基M能夠於該貫通孔流通。
又，於培養上述細胞層片S時，於上述膜片11b之上表面形成由膠原蛋白所構成之膠原蛋白凝膠層C，於該膠原蛋白層之上表面培養細胞層片S。
上述外容器12係藉由使雷射光L穿透之素材而構成並且具有有底箱狀，於底部形成有多個用以支持上述內容器11之凹狀之支持部12a，能夠藉由多個內容器11而培養多個細胞層片S。
於上述支持部12a分別收容培養基M，且藉由支持部12a而支持之內容器11中，上述膜片11b相對於上述外容器12之底面向上方隔離。
藉由此種構成，而收容於各支持部12a之培養基M能夠自上述間隙經由形成於上述膜片11b之貫通孔，而於與內容器11之內部之間流通。
上述蓋部13安裝於形成在上述外容器12之上方之開口部，且藉由覆蓋上述外容器12之開口部的上表面部分13a、設置於該上表面部分13a之外周的側部13b、及設置於該側部13b與外容器12之間的密封手段14而構成。
藉由利用上述蓋部13將上述外容器12閉鎖，而上述密封手段14密接於外容器12之外周面，防止異物或微生物等混入至培養容器4之內部。
又，上述蓋部13中之上表面部分13a構成「由聚苯乙烯等樹脂、丙烯酸、被璃、石英玻璃等使雷射光L穿透之素材所構成」之穿透部。再者，亦可將僅上述上表面部分13a之一部分設為穿透部，又，亦可藉由構成穿透部之素材而形成蓋部13之整體。
於上述隔離器2之側面，設置有用以供作業者穿戴並於該隔離器2之內部進行作業之手套2a，及用以進行將材料等自該隔離器2內搬出或將材料等搬入至該隔離器2內之通道箱(pass box)21。
於上述通道箱21設置有能夠向外部打開之搬出搬入門21a，及設置於與上述隔離器2之間之連接門21b，又，於通道箱21雖未圖示但設置有使用過氧化氫蒸氣等之去除汙染手段。
於將材料等搬入至上述隔離器2內時，於將上述連接門21b閉鎖之狀態下自上述搬出搬入門21a將材料搬入至通道箱21內，於將搬出搬入門21a閉鎖之狀態下進行通道箱21內之材料等之去除汙染。
然後，藉由將上述連接門21b打開使材料移動至隔離器2內，能夠於 在外部空間將附著於材料等之異物或微生物等去除汙染之狀態下使該材料移動至隔離器2內。
又，於隔離器2雖未圖示但能夠相接分離地設置有用以培養細胞層片S之培養箱(incubator)，連同上述培養容器4一起將上述細胞層片S收容至培養箱，於利用隔離器2隔離之位置進行細胞之培養。
上述隔離器2與培養箱能夠維持無菌狀態進行相接分離，於隔離器2與培養箱之間能夠於將上述蓋部13卸除之打開狀態下使培養容器4移動。
上述切斷裝置3具備保持上述培養容器4之保持平台22，照射雷射光L之雷射光照射手段23，及使上述保持平台22與雷射光照射手段23相對移動之未圖示之移動手段。再者，此種切斷裝置3本身如專利文獻2中所記載般為以往所公知。
於上述保持平台22能夠載置安裝有上述蓋部13之培養容器4，上述移動手段使培養容器4連同該保持平台22一起於水平方向移動。
上述雷射光照射手段23朝向下方照射雷射光L，藉此，所照射之雷射光L穿透構成安裝於上述培養容器4之蓋部13之穿透部而照射至收容於內部之上述細胞層片S。
另一方面，藉由上述移動手段使培養容器4移動，可將上述細胞層片S藉由雷射光L切斷為所需要之形狀，此時保持細胞層片S之膠原蛋白凝膠層C亦藉由雷射光L而被切斷。
將上述細胞層片S及膠原蛋白凝膠層C切斷之雷射光L穿透上述膜片11b及外容器12之底面而被上述保持平台22吸收。
此處，上述雷射光照射手段23所照射之雷射光L之波長較理想的是300 nm~500nm之範圍。於將波長設定為未達300nm之情形時，雷射光L無法穿透上述蓋部13，於設定為超過500nm之情形時，不適合於微細加工。
以下，使用圖3、圖4，對利用具有上述構成之細胞層片切斷系統1之上述細胞層片S之切斷方法進行說明。
預先於培養容器4中進行細胞層片S之培養。具體而言，於上述培養容器4之內容器11中，於形成於上述膜片11b之上表面之膠原蛋白凝膠層C之上表面播種細胞。
繼而，將上述內容器11設置於形成於上述外容器12之底面之支持部12a，對內容器11之內部及外容器12之各支持部12a分別供給特定量之培養基M。
然後，將培養容器4移載至連接於隔離器2之培養箱，將該培養箱自隔離器2分離而進行特定期間之上述細胞之培養。然後，藉由重複培養基M之更換等作業而獲得上述細胞層片S。
於該期間，於上述內容器11之內部及外容器12之各支持部12a之間，能夠經由上述內容器11之膜片11b而流通培養基M，向膜片11b上之細胞層片S之正面及背面供給培養基M而進行高效率之培養。
圖3(a)係表示自收容於上述隔離器2內之培養容器4將培養基M去除之作業之圖。
若於培養容器4內完成細胞層片S之培養，則將收容有該細胞層片S之培養箱連接於隔離器2，並將上述培養容器4移送至該隔離器2。此時，於培養容器4之外容器12未安裝蓋部13，又，於外容器12收容有上述培養基M。
自該狀態，作業者穿戴上述隔離器2之手套2a而操作吸管等抽吸手段，自上述內容器11之內部及外容器12之支持部12a抽吸培養基M，藉此，將於此之前覆蓋細胞層片S之培養基M去除。
圖3(b)係表示於隔離器2內將蓋部13安裝於上述培養容器4之作業之圖。
上述隔離器2之內部維持無菌狀態，故而若將蓋部13安裝於上述培養容器4之外容器12，則藉由外容器12及蓋部13而密閉之內部空間會維持為無菌狀態。
圖3(c)係表示使安裝有上述蓋部13之培養容器4移動至上述切斷裝置3之作業之圖。
上述培養容器4經由圖3(c)中未圖示之上述通道箱21而被送出至隔離器2之外部，於安裝有上述蓋部13之狀態下載置於上述切斷裝置3之保持平台22。
此時，培養容器4內之內部空間藉由上述蓋部13而密閉，故而可防止培養容器4內之細胞層片S被外部空間之異物或微生物污染。
圖4(d)係表示藉由上述切斷裝置3而將培養容器4內之細胞層片S切斷之作業。
於上述切斷裝置3中，上述雷射光照射手段23朝向下方照射雷射光L，雷射光L穿透構成上述蓋部13之穿透部後照射至培養容器4內之細胞層片S，配合於此，藉由移動手段而移動上述保持平台22，藉此將細胞層片S藉由雷射光L而切斷為所需要之形狀。
此時，雷射光L自上側照射至細胞層片S，且細胞層片S為固定於膠 原蛋白凝膠層C之狀態，故而能夠高精度地切斷細胞層片S。
又，培養容器4內之培養基M被去除，故而穿透蓋部13之雷射光L不會被培養基M吸收而可照射至細胞層片S並將其切斷。
將細胞層片S切斷之雷射光L亦將上述膠原蛋白凝膠層C切斷，且穿透其下方之膜片11b及外容器12之底部，然後被上述保持平台22吸收。
而且，當將收容於所需要之內容器11之細胞層片S切斷時，移動手段使其他內容器11移動至雷射光L之照射位置而重複細胞層片S之切斷。
圖4(b)係表示為了將上述切斷結束之細胞層片S再次移送至隔離器2，而將上述培養容器4於通道箱21中去除汙染之作業。
由於上述切斷裝置3設置於外部空間，故而為了於該切斷裝置3將細胞層片S切斷，必須將上述培養容器4取出至外部，其結果，存在異物或微生物等附著於培養容器4之外表面之虞。
因此，為了自上述培養容器4將細胞層片S於隔離器2之內部取出，必須將培養容器4之外表面去除汙染以不污染隔離器2之內部空間。
因此，將上述培養容器4收容於通道箱21而將其外表面藉由過氧化氫蒸氣等去除汙染。此處，由於培養容器4係藉由蓋部13密閉，故而上述過氧化氫蒸氣等不會進入至培養容器4內，從而不會損及細胞層片S。
圖4(c)係表示於隔離器2內回收已切斷之細胞層片S之作業。
已於上述通道箱21中去除汙染之培養容器4經由上述連接門21b而移動至隔離器2內，於維持為無菌狀態之隔離器2之內部將上述蓋部13卸除。
繼而，作業者向內容器11投入膠原酶，而將形成於上述膜片11b之上 表面且保持上述細胞層片S之膠原蛋白凝膠層C分解。
藉此，在此之前密接於膠原蛋白凝膠層C之細胞層片S游離，成為僅載置於上述膜片11b之上表面之狀態。再者，關於具體之作業，由於專利文獻1中已有記載，故而省略說明。
而且，作業者使用吸管等採集用具，採集切斷為所需要之形狀之細胞層片S。此時由於細胞層片S不密接於膜片11b之上表面，故而可不損傷細胞層片S地採集細胞層片S。
根據上述實施例，將收容有細胞層片S之培養容器4藉由蓋部13而密閉，使雷射光L穿透構成上述蓋部13之穿透部後照射至細胞層片S，藉此，於難以設置於無菌環境之切斷裝置3，可維持無菌環境而進行細胞層片S之切斷。
又，由於在上述內容器11之膜片11b之上表面設置由膠原蛋白所構成之層，藉由雷射光L而將細胞層片S連同膠原蛋白一起切斷，故而可高精度地切斷細胞層片S，又，然後將上述膠原蛋白藉由膠原酶分解，故而可自容器游離之狀態採集細胞層片S。
再者，於上述實施例中，自內容器11及外容器12排出培養基M，然後於該外容器12安裝蓋部13並使之移動至隔離器2之外部，但亦可將收容有上述細胞層片S之內容器11自收容有培養基之外容器12取出，使其移動至未收容培養基M之其他外容器12，於該其他外容器12安裝蓋部13。
又，於上述實施例中，藉由雷射光L而將細胞層片S連同膠原蛋白一起切斷，但亦可於圖3(a)之步驟中將膠原蛋白層C分解，然後將細胞層 片S藉由雷射光L切斷。
而且，根據本發明之切斷方法，如圖5所示，若於培養皿(Schale)狀之培養容器4中培養細胞層片S，將培養基M自該培養容器4去除，並且安裝上述蓋部13，則可使用與上述實施例相同之切斷方法於無菌狀態下進行細胞層片S之切斷。

Claims (5)

  1. 一種細胞層片之切斷方法，其係使收容有細胞層片之容器移動至照射雷射光之切斷裝置，將該容器內之細胞層片藉由雷射光而切斷，且其特徵在於，於維持為無菌狀態之無菌室之內部，將上述容器利用設置有由雷射光能夠穿透之素材所構成之穿透部之蓋部而密閉，將藉由上述蓋部而密閉之容器自無菌室取出，並使之移動至設置於該無菌室之外部之上述切斷裝置，於上述切斷裝置中，使上述雷射光穿透上述穿透部，藉由該雷射光而將上述細胞層片切斷。
  2. 如申請專利範圍第1項之細胞層片之切斷方法，其中，將培養基收容至上述容器，並且使用該培養基進行上述細胞層片之培養，於將藉由上述蓋部而密閉之容器自無菌室取出並移動至上述切斷裝置時，預先於無菌室之內部將培養基自上述容器去除。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之細胞層片之切斷方法，其中，上述容器由能夠收容培養基及上述細胞層片之內容器、及收容上述內容器之外容器構成，於將上述容器藉由蓋部密閉時，將上述蓋部安裝於上述外容器。
  4. 如申請專利範圍第3項之細胞層片之切斷方法，其中，上述內容器係於底部具備使上述培養基穿透之膜片，於培養上述細胞層片時，於上述內容器之膜片上培養上述細胞層片，並且將上述培養基收容至上述外容器，該培養基為能夠經由上述 膜片而於內容器及外容器之間流通之狀態。
  5. 如申請專利範圍第4項之細胞層片之切斷方法，其中，於上述內容器之膜片之上表面設置由膠原蛋白所構成之層，於該膠原蛋白之上表面培養細胞層片，藉由上述切斷裝置之雷射光而將細胞層片切斷，使收容有該已切斷之細胞層片之容器移動至無菌室之內部，自上述外容器卸除蓋部之後，藉由膠原酶分解上述內容器之膠原蛋白，自該內容器取出已切斷之細胞層片。
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