WO2013176106A1 - 細胞シート搬送用容器 - Google Patents

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WO2013176106A1
WO2013176106A1 PCT/JP2013/064017 JP2013064017W WO2013176106A1 WO 2013176106 A1 WO2013176106 A1 WO 2013176106A1 JP 2013064017 W JP2013064017 W JP 2013064017W WO 2013176106 A1 WO2013176106 A1 WO 2013176106A1
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WO
WIPO (PCT)
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container
lid
cell sheet
main body
petri dish
Prior art date
Application number
PCT/JP2013/064017
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
慶次郎 山内
和幸 阿部
知之 川瀬
田中　孝明
Original Assignee
Ｙｓｅｃ株式会社
国立大学法人 新潟大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ｙｓｅｃ株式会社, 国立大学法人 新潟大学 filed Critical Ｙｓｅｃ株式会社
Priority to JP2014509534A priority Critical patent/JP5545689B2/ja
Publication of WO2013176106A1 publication Critical patent/WO2013176106A1/ja

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    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5082—Test tubes per se
    • B01L3/50825—Closing or opening means, corks, bungs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/10—Petri dish
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/46—Means for fastening
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps

Definitions

  • the present invention relates to a container that can safely transport a cell sheet such as bone tissue, and more specifically, a cell that is transported between a medical institution and another medical institution and is suitable for supporting medical cooperation between the two.
  • the present invention relates to a sheet conveying container.
  • the specialty fields of regenerative treatment that are good at each hospital that is, the types of cell sheets that are professionally cultured and prepared
  • the types of cell sheets that are professionally cultured and prepared are usually different. Therefore, in order to conduct various regenerative treatments and related researches, it is necessary to transport (ie, interchange) the optimal cell sheets between the base hospitals.
  • the present inventors have urgently required to develop a cell sheet transport container that can be combined with a general-purpose petri dish that is available at the medical site of the transport source or transport destination. I noticed that the potential demand is high.
  • culture flasks bottle-shaped plastic containers (referred to as “culture flasks”) that can be laid down sideways have been used for cell culture. Many of these culture flasks have a lid (for example, a screw cap) attached to an inlet protruding from the bottle body. These culture flasks were used for transporting cells by injecting the culture solution into the flask from this inlet, filling the cells with the culture solution, and tightening the screw cap firmly.
  • This transport method using a normal culture flask is necessary and sufficient for transporting dispersed cells, but in the case of a cell sheet, a cell scraper or tweezers is inserted from a bottleneck inlet in a limited space.
  • the sheet must be peeled off.
  • the cell sheet is collected from the entrance, there is a high possibility that the cell sheet will be folded or agglomerated, and if this happens, the cell sheet (especially, the cell sheet becomes a cornea for transplantation). ) Cannot achieve its intended purpose.
  • it is desirable that the cell sheet is taken out in a state of being cultured (that is, spread in a film shape), but in the culture flask having the bottleneck structure, it is practically impossible to transport the cell sheet. is there.
  • one side of the bottle (upper side when tilted sideways) is configured with a peelable film-like seal (that is, a seal top configuration), and the seal is peeled off.
  • a culture flask having a structure that allows easy access to the cell sheet has been commercialized (see, for example, Patent Document 1 and Non-Patent Document 1).
  • this sealed top type culture flask has the disadvantage that it cannot withstand the water pressure when the flask is filled with the culture solution due to its film-like structure.
  • it is not suitable for long-distance transportation such as transportation between hospitals.
  • a large amount (for example, 500 mL or more) of culture solution is required.
  • Patent Documents 2 to 4 propose containers suitable for culturing and transporting cell sheets.
  • Patent Document 2 discloses a plate-shaped incubator for culturing cells in a liquid medium in the presence of a sheet-like support. More specifically, the incubator includes a bottom portion having a culture surface filled with a liquid medium, a cover portion disposed on the bottom portion to cover the culture surface and moving to expose the culture surface to the outside, a sheet shape Characterized in that it comprises a lift prevention means for supporting a part of the support body and preventing the support body from floating on the liquid medium surface, and a liquid exchange means for exchanging the liquid medium. To do.
  • the cell sheet in the incubator of Patent Document 2, the cell sheet must be transferred to a general-purpose petri dish for transportation, storage, additional culture, or application to a patient at the medical site of the transport source or transport destination. There is usually a concern, and there is a concern that the risk of extra work labor and cell sheet damage will increase.
  • this incubator is filled with a liquid medium, as shown in FIG. 2 of Patent Document 2, it is considered that air is likely to be contained on the medium liquid surface, and even if a floating prevention means is installed, It is considered that there is a sufficient risk of damaging the cell sheet by mixing or moving air in the medium liquid surface during transportation.
  • Patent Document 3 or Patent Document 4 discloses a culture container having an opening at the top, a container that can store a cell sheet and a culture solution, and a lid that can seal the opening. Has been.
  • the inside of the incubator disclosed in Patent Document 3 or Patent Document 4 is likely to contain air in addition to the culture solution as in Patent Document 2, and the cell sheet is deformed even if covered with a support during long-distance conveyance. Or you cannot pay the risk of damage.
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and an object thereof is to provide a transport container for safely transporting a cell sheet even in a long distance such as between a hospital and another hospital.
  • Another object of the present invention is to provide a cell sheet transport container that can be combined with a general-purpose petri dish that can be obtained and used at the medical site of the transport source or transport destination.
  • Another object of the present invention is to provide a cell sheet carrying container that is easily adapted to standardization of regenerative treatment.
  • the inventors of the present invention have made a diligent study, a transport format prepared at the transport source and transported over a long distance while accommodating the general-purpose petri dish with the cell sheet immersed and adhered, and a transport capable of realizing this transport format.
  • the inventors have conceived the structure of the container, and found that the above problem can be solved brilliantly by using this movement type and a transport container suitable for this, and thus completed the present invention.
  • the present invention includes, for example, the following configurations and features.
  • a container body having a bottom and an opening on which a petri dish lower plate can be placed;
  • a lid mounted on the opening and covering the opening and the lower plate;
  • Connection means capable of detachably connecting the lid to the container body;
  • Inside the lid body is provided with a sealing material that contacts the upper end of the lower pan over its entire circumference,
  • the base of the lid is further provided with an inlet for injecting or discharging the culture solution and a closing tool for closing the inlet, and
  • the inner space is partitioned by the inner surface of the lower plate and the inner surface of the lid, and can be filled with the culture solution and the cell sheet
  • a cell sheet carrying container wherein:
  • the connection means includes a first structure provided with a shaft, and a first body partly connected to the shaft and capable of turning about the shaft; And a second structure provided with a receiving portion for receiving the first body at the time of connection and gripping the other part of the first body, and The cell sheet carrying container according to any one of aspects 1 to 3, wherein the first structure and the second structure are provided on one and the other of the container main body or the lid.
  • the other part of the first body is provided with a fastener capable of fastening the first structure to the second structure or a hook part capable of engaging the first structure with the second structure.
  • the “cell sheet” in the present invention is not only a single-layer or multi-layer (stratified) sheet-shaped cultured tissue reconstructed by culturing only with cells, but also bioaffinity such as collagen and fibrin. Also included is a sheet-shaped cultured tissue obtained by seeding and culturing cells on a carrier (scaffold) composed of a functional material.
  • the cells constituting the cell sheet include, for example, periosteal cells collected from alveolar bone, corneal epithelial cells, epidermal keratinocytes, oral mucosal cells, conjunctival epithelial cells, cardiomyocytes, fibroblasts, vascular endothelial cells, Any of hepatocytes or a mixture thereof may be mentioned, but the type is not limited.
  • the origin of the cells is not particularly limited, and examples include humans, dogs, cats, rabbits, rats, pigs, sheep, etc. When the cell sheet of the present invention is used for human therapy, It is preferable to use human-derived cells.
  • examples of the culture medium that supports the culture of these cells include DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), ⁇ MEM (alpha Modified Eagle Medium Medium Medium), RPMI 1640 (RoswellMintPal cell) and the like.
  • DMEM Denbecco's Modified Eagle's Medium
  • ⁇ MEM alpha Modified Eagle Medium Medium Medium
  • RPMI 1640 RoswellMintPal cell
  • a culture medium can be used, it is not limited to these, A various culture solution can be used.
  • the cell sheet transport container of the present invention having the above-described configuration, the cell sheet can be transported without changing the usual culture method conventionally used in many medical sites.
  • the transport container of the present invention since the cell sheet can be transported while being cultured in a general-purpose petri dish, there are great advantages in terms of operability and cost related to transport and culture, and a method for preparing a cell sheet It is easy to conform to the standardization. Therefore, the transport container of the present invention is expected to be easier to introduce into a medical site such as CPC (Cell Processing Center) than the incubator proposed so far.
  • CPC Cell Processing Center
  • FIG. 3 is an exploded perspective view showing a cell sheet carrying container of Example 1.
  • FIG. FIG. 3 is a perspective view showing a cell sheet conveyance container of Example 1.
  • 3 is a plan view showing a cell sheet carrying container of Example 1.
  • FIG. 4A is a cross-sectional view taken along line AA in FIG. 3, and
  • FIG. 4B is a cross-sectional view showing a modification of the sealing material.
  • 6 is an exploded perspective view showing a cell sheet carrying container of Example 2.
  • FIG. 6 is a perspective view showing a cell sheet carrying container of Example 2.
  • FIG. 6 is a plan view showing a cell sheet carrying container of Example 2.
  • FIG. FIG. 8 is a cross-sectional view taken along line BB in FIG. 7. It is the figure which showed the result (state of a cell) in the conveyance simulation test using a cultured cell.
  • Known petri dishes (particularly known petri dishes for culturing cells of mammals and the like) generally have a structure in which the lid and the lower dish do not adhere to each other. Therefore, even if the lid of the petri dish and the lower dish are brought into close contact with each other, it is difficult to transport the petri dish without leaking the culture solution filled in the lower dish.
  • FIG. 1 is an exploded perspective view showing the components of the transport container 1 so as to be visible.
  • main components of the container 1 are a container body 20 and a lid body 30 that covers the container body 20.
  • the container body 20 includes an opening 21, a bottom 22 on which a petri dish lower plate 40 for culturing the cell sheet 2 can be placed through the opening 21, and a petri dish lower pan 40 (
  • the peripheral wall portion 23 capable of enclosing the lower wall is also provided.
  • the petri dish lower plate 40 shown in FIG. 1 has a flange portion 41 that supports a petri dish lid (not shown) projecting outward in the circumferential direction (that is, along the outer peripheral surface of the peripheral wall portion 42).
  • the peripheral wall portion 23 is provided with a step (that is, a shoulder portion) 23 s having a shape corresponding to the shape of the flange portion 41.
  • the lid 30 includes a base 31 that can cover the opening 43 of the petri dish lower plate 40 assembled to the container body 20, and a peripheral wall 32 that extends downward from the outer edge of the base 31.
  • the petri dish lower plate 40 (usually a thin container) placed on the bottom 22 of the container body 20 is completely contained by the base 31 and the peripheral wall part 32 of the lid 30 and the peripheral wall part 23 of the container body 20. In addition, it is protected from impact and vibration from the outside of the container 1.
  • a groove 31 tr is formed on the inner surface 31 is of the base portion 31 over the outer peripheral edge thereof (see FIG. 4A).
  • the groove 31 tr is filled with a sealing material 33 (for example, packing) over its entire length (entire circumference). Sealing material 33, when the petri dish under tray 40 is stored in the container 1 of the present invention, it can contact shape to the upper end surface 42 t of the circumferential wall portion 42 of the petri dish under pan 40 (e.g., annular) and dimensions ( For example, diameter and width).
  • FIG. 4B shows only the cross section of the sealing material 33 and the petri dish lower plate 40 among the components of the container 1 for convenience of explanation.
  • an outer portion 33 o having a thickness larger than the inner portion 33 i in the circumferential direction is formed over the entire circumference of the sealing material 33.
  • the outer portion 33 o of the seal member 33 extends toward the petri dish lower plate 40 more than the inner portion 33 i, so that a step is formed.
  • Step of the sealing material 33 not only abuts against the upper end 42 t of the circumferential wall portion 42 of the petri dish under pan 40 comfortably an upper portion of the peripheral wall portion 42 including the upper end 42 t 1 and FIG. 4A, not only can the sealing performance of the container 1 be further improved than when the sealing material 33 shown in FIG. 1 and FIG. 4A is used, but also the petri dish of the lid 30 on which the sealing material 33 is formed.
  • the fitting to the lower plate 40 can also be facilitated.
  • the lid 30 (preferably, the central portion of the base portion 31) is provided with a culture solution injection inlet 34 (hereinafter also simply referred to as “inlet”) that penetrates the base portion 31. Further, the lid 30 is provided with a closing tool 35 corresponding to the shape of the inlet 34 and detachable from the inlet 34. Thereby, even after the lid 30 is stored in the container 1, the culture medium 3 can be filled in the lower dish 40 through the inlet 34.
  • Various configurations can be adopted for the inlet 34 and the closing tool 35. Preferred examples will be described below with reference to the drawings.
  • the inlet 34 has a hollow cylindrical shape protruding outward from the base 31, and a screw 34 s (specifically, a thread and a screw groove) is formed on the outer peripheral surface thereof. It is preferable to be provided.
  • the closure 35 has a screw cap in which a screw 35 s (specifically, a thread and a screw groove) corresponding to the screw 34 s of the inlet 34 is provided on the inner peripheral surface. Is preferred.
  • the seal member 33 seals in a liquid tight manner to the upper end surface 42 t of the circumferential wall portion 42 of the street under tray 40 described above, the inlet exceeds the maximum capacity of the lower tray 40 34 It is possible to completely fill the inner space of the container 1 up to the upper end surface (the inner surface 35 is of the closure 35) with the culture solution 3. As a result, it is possible to completely remove air that has been a cause of damage to the cell sheet 2 during conveyance from the internal space of the container 1.
  • Example 1 since the inlet 34 and the closing tool 35 of Example 1 have the screws 34 s and 35 s corresponding to each other as described above, the closing tool 35 is rotated with respect to the inlet 34.
  • the inlet 34 can be firmly tightened with the closure 35. Therefore, it is possible to eliminate the concern and anxiety that the closing device 35 is suddenly released during the conveyance of the cell sheet 2 and the culture solution 3 leaks from the inlet 34.
  • a gripping portion 35 g (for example, a number of vertical grooves shown in FIGS. 1 to 3) may be formed on the outer peripheral surface of the closing tool 35. Good.
  • the base portion 31 of the lid 30 is formed with a hollow conical shape (see FIG. 4A) or a hollow pyramid shape (not shown) having a raised portion 31 up whose apex is connected to the inlet 34. Is more preferable.
  • bubbles that may be mixed when the lower dish 40 is filled with the culture solution 3 are less likely to stay in the internal space of the container 1, and are easily guided to the upper surface of the inlet 34 by buoyancy generated in the bubbles in the culture solution 3. . Therefore, not only the air layer but also the bubbles in the culture solution 3 can be efficiently discharged from the internal space of the container 1.
  • connection means for connecting and integrating the container body 20 and the lid body 30 (in the embodiment, the first and second structures 51 and 61)
  • first and second structures 51 and 61 connection means for connecting and integrating the container body 20 and the lid body 30
  • four first structures 51 are provided on the outer peripheral surface of the peripheral wall portion 23 of the container body 20.
  • the first structure 51 is preferably disposed on the peripheral wall portion 23 so as to equally divide the length of the outer periphery of the peripheral wall portion 23, whereby the first structure 51 is
  • the lid 30 can be more evenly fixed along the outer periphery of the peripheral wall portion 23 of the container body 20.
  • Each of the first structures 51 includes a pair of swivel support portions 52 and 52 that are separated from each other by a predetermined distance and protrude outward from the peripheral wall portion 23, and a first housing accommodated between the swivel support portions 52 and 52.
  • a main body 53 is provided.
  • the 1st main body 53 of Example 1 comprises a rod shape. Shaft 54 to one end of the first body 53 is connected perpendicularly to the first main body 53, the rotation end of the shaft 54 respectively, the hole 52 h provided in the pivot support portions 52, 52, Fits freely. With such a structure, the first main body 53 between the swivel support portions 52 and 52 can rotate around the shaft 54.
  • the first structure 51 may be provided with a restricting means 55 that restricts the rotation of the first main body 53 at a position further outward and lower than the position of the hole 52 h .
  • the regulating means 55 is a member extending between the turning support portions 52 and 52.
  • the lid 30 is provided with a second structure 61 having a receiving portion 62 on the outer peripheral surface of the peripheral wall portion 32.
  • the second structure 61 is disposed at a position corresponding to the first structure 51 as shown in FIGS. 2 and 3.
  • the receiving portion 62 has a shape that can receive the first main body 53 when the first main body 53 is turned to the vertical position around the shaft 54.
  • the receiving portion 62 has a U-shape (not shown) that opens to the outside. ) Or a C-shaped (not shown) cross section.
  • a fastener 56 that moves in the longitudinal direction of the first main body 53 is provided at the other end.
  • the illustrated fastener 56 has a hollow cylindrical shape and includes a screw portion 56 s corresponding to the screw portion 53 s of the first main body 53 on the inner peripheral surface thereof.
  • the fastener 56 is rotated (moved) so as to approach the shaft 54, and the fastener 56 is shown in FIGS.
  • the lower surface is fixed in a state where the upper surface 62 t of the receiving portion 62 is pressed. Therefore, the lid 30 can be firmly fixed to the container body 20 by the connecting means 51 and 61 having the above-described configuration.
  • the gripping portion 56 g (for example, a number of vertical grooves) may be formed on the outer peripheral surface of the fastener 56.
  • the 1st structure 51 and the 2nd structure 61 may be integrally formed in the container main body 20 and the cover body 30, and may be attached to these components 20 and 30 as another member.
  • each structural member of the container 1 can consider metals and resin, such as titanium and stainless steel, resin (for example, polycarbonate, polyethylene, a polypropylene, a polystyrene, an acryl) is preferable from a mass-productivity and a lightweight point, and the container 1 From the viewpoint of improving the visibility of the internal state, a transparent or translucent resin is more preferable.
  • resin for example, polycarbonate, polyethylene, a polypropylene, a polystyrene, an acryl
  • a transparent or translucent resin is more preferable.
  • the container 1 of the present invention can be made disposable.
  • the cell sheet 2 is cultured using a general-purpose petri dish in a clean space such as a clean bench while following a culture procedure approved in the country or the like.
  • the petri dish lid (not shown) is removed, and only the lower plate 40 is placed on the bottom 22 of the container body 20. .
  • the lid body 30 is covered from the upper side of the container main body 20, the first main body 53 is turned around the shaft 54, accommodated in the receiving portion 62 on the outer peripheral surface of the lid body 30, and a fastener at the other end of the first main body 53.
  • the lid 30 is fixed to the container body 20 by rotating 56.
  • the culture medium 3 is further injected from the inlet 34 located at the center of the base 31 of the lid 30, and the internal space in the container 1 is completely filled with the culture liquid 3.
  • the inlet 34 is closed with a closing tool 35 (screw cap).
  • a car or an airplane is mentioned as a well-known moving means, and it is also possible to send the container 1 of this invention to home and abroad by a home delivery etc.
  • the operator who has received the container 1 at the delivery destination removes the closing tool 35, inserts a spoid or the like (not shown) into the inlet 34, etc., and discharges (discards) most of the culture solution 3 to the outside of the container. Further, the fastener 56 is loosened, the lid 30 is removed from the container main body 20, and the exposed petri dish lower plate 40 is taken out from the container main body 20.
  • the container 1 of the present invention is disposable, the container main body 20 and the lid 30 that have been in contact with the external environment during transportation are discarded at this point. When it is desired to reuse the container 1, it is necessary to sterilize each component member 20, 30 of the container 1.
  • the petri dish lower plate 40 is normally stored in a clean space in a clean bench before being transported and is stored in the container 1 of the present invention even during transport. It is. Therefore, if a clean petri dish lid (not shown) newly prepared at the transport destination is attached to the petri dish lower plate 40, the culture can be resumed. Alternatively, if the culture solution 3 is discarded as described above and the cell sheet 2 is washed several times with physiological saline or the like, this can be immediately applied to transplantation treatment. As described above, since the petri dish lower plate 40 as the transfer source can be effectively used as it is, the cell sheet 2 can be easily and quickly used at the transfer destination.
  • the structure of the connection means of the present invention is not limited to the above-described preferred embodiment 1, and various connection structures are conceivable.
  • the pair of the first structure 51 and the second structure 61 in the first embodiment is not limited to four pairs.
  • the lid 30 can be fixed to the container body 20 by at least two pairs. Of course, the larger the number of pairs, the more firmly the lid 30 is secured in the circumferential direction.
  • a container (not shown) is further disposed in the container 1, the petri dish 40 can be stored in the container 1 and the lid 30 can be connected to the container body 20, as in the first embodiment.
  • the present invention is not limited to these examples, and various modifications such as a known clamping structure and a structure in which the lid 30 can be slid into the container body 20 and locked are conceivable.
  • the petri dish applied to the container 1 is assumed to be a round petri dish, and the container body 20 and the lid 30 are circular or cylindrical, but are not limited to this shape.
  • a petri dish having general versatility is assumed to use a petri dish having a square shape or other shape.
  • the container body 20 and the lid 30 are shaped to correspond to the petri dish to be used (for example, a rectangular shape). Or a cube).
  • an adapter member (not shown) that can be applied to the inside of the peripheral wall 23 of the container body 20 is provided. You may prepare.
  • a through hole (not shown) is provided in a part of the bottom 22 of the container body 20, and a film (not shown) is bonded to the outer periphery of one end surface of the through hole so as to cover the through hole (for example, Heat sealing) may be performed.
  • a film (not shown) is bonded to the outer periphery of one end surface of the through hole so as to cover the through hole (for example, Heat sealing) may be performed.
  • the container 1 according to the second embodiment includes a container main body 20 and a lid 30 which are basic components of the container 1 shown in the first embodiment.
  • a specific structure relating to the connection means 51 and 61 for connecting and integrating the container body 20 and the lid 30 and the closure 35 on the lid 30. Is different from the structure of the first embodiment.
  • the constituent elements shown in FIGS. 5 to 8 and denoted by the same reference numerals as in the first embodiment have the same functions as the corresponding constituent elements in the first embodiment. The description of is omitted.
  • the container 1 of the second embodiment is also provided with four first structures 51 on the outer peripheral surface of the peripheral wall portion 23 of the container main body 20.
  • the first structure 51 of the second embodiment is also preferably arranged so that the length of the outer periphery of the peripheral wall portion 23 is evenly divided.
  • the first structure 51 of the second embodiment includes a first main body 53 having a shaft (not shown) provided at one end.
  • the 1st main body 53 of Example 2 comprises plate shape as a whole.
  • each of the first structures 51 is provided with a pair of turning support portions 52 and 52 that are separated from each other by a predetermined distance and protrude outward from the peripheral wall portion 23.
  • the ends of the shaft of the first main body 53 are rotatably fitted into holes 52 h provided in the turning support portions 52 and 52, respectively.
  • the turning support parts 52 and 52 can accommodate the first main body 53 rotatably.
  • the lid 30 is provided with a second structure 61 having receiving portions 62 and 62 on the outer peripheral surface of the peripheral wall portion 32 thereof. Similar to that of the first embodiment, the second structure 61 is arranged at the number of installations and installation positions corresponding to the first structure 51 when the lid 30 is to be fixed to the container body 20. Note that the receiving portions 62 and 62 of the second embodiment may be configured by two members separated from each other by substantially the same distance as the separation distance of the turning support portions 52 and 52.
  • a handle 57 may be provided at the other end of the first main body 53 of the first structure 51. The operator can easily turn the first main body 53 around the axis while holding the handle 57 with his / her finger. Further, convex portions (for example, cylindrical convex portions) 58 and 58 are provided on both sides of the handle 57, while each receiving portion 62 has a notch portion 63 for accommodating the convex portions 58 and 58. 63 and detachment preventing portions 64 and 64 for preventing the convex portions 58 and 58 accommodated in the notched portions 63 and 63 from escaping may be formed.
  • the convex portions 58 and 58 can cause the first structure 51 (that is, the container body 20) to be the second.
  • the role of the hook part for engaging with the structure 61 (that is, the lid body 30) is exhibited.
  • connection means 51 and 61 are preferably made of resin from the viewpoint of light weight and moldability, it may be made of other raw materials.
  • the closing tool 35 can close the inlet 34 in a state where the extension 35 e is inserted into the inlet 34 of the lid 30. That is, the amount of the culture solution 3 necessary for transporting the container 1 can be further reduced.
  • the extension 35 e preferably has a length corresponding to the depth of the inlet 34. Further, it is preferable that spiral grooves 34 s and 35 s having a structure corresponding to each other are formed on the inner peripheral surface of the inlet 34 and the outer peripheral surface of the extension portion 35 e . Note that the outer periphery of the flange portion 35 f, it is preferable that the grip portion 35 g for gripping improve is formed. Moreover, the hole 35h may be formed inside the closing tool 35, and thereby, raw material costs can be suppressed.
  • the closure 35 is preferably made of resin from the viewpoint of light weight and moldability, but may be made of rubber or other raw materials.
  • the peripheral wall portion 23 of the container body 20 of the second embodiment includes an upper portion 23 u and a lower portion 23 d with the shoulder portion 23 s as a boundary, and the lower portion 23 d is outside the upper portion 23 u .
  • the outer diameter may be slightly smaller than the diameter. Thereby, it is possible to reduce the thickness of the lower portion 23 d and, consequently, the raw material cost of the container body 20.
  • the container 1 was hung up vertically, the state was hold
  • FIG. 9 (a) shows the state of the cells before storing the petri dish 40 in the transport container 1.
  • the cells had a spindle shape with a relatively short major axis like a rugby ball, and the cell density was in a confluent state of about 30 to 40%.
  • the lid 30 was removed from the lower dish 40, replaced with a normal petri dish lid, returned to the CO 2 incubator, and further cultured for 24 hours. The observation result in this state is shown in FIG. Cells were regaining normal growth rate and cell density tended to increase.
  • the cell sheet transport container of the present invention can seal and store the cell sheet in a clean state while effectively using the lower dish of the transport source. Therefore, the present invention contributes to the cooperation between hospitals using the cell sheet in the medical field and to the correction of medical level disparity, and the industrial utility value is very high.

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Abstract

【課題】病院から別の病院までの間といった遠距離間でも細胞シートを安全に搬送し、どの医療現場でも入手可能な汎用シャーレと組み合わせられる搬送用容器を提供する。 【解決手段】本発明の容器１は、シャーレ下皿４０を載置可能な底部２２と開口部２１とを備えた容器本体２０と、開口部２１に載置されかつ開口部２１と下皿４０とに蓋をする蓋体３０と、蓋体３０を容器本体２０に着脱自在に接続可能な接続手段と、を備える。蓋体３０内側には下皿４０の上端４２ｔにその全周に亘って接触するシール材３３が設けられ、蓋体３０の基部３１には、培養液３を注入又は排出するための入口３４と、入口３４を閉鎖するための閉鎖具３５とが設けられる。下皿４０を載置した容器本体２０に蓋体３０を接続した際に、下皿４０の内面４４ｉｓ，４２ｉｓと蓋体３０の内面３１ｉｓとによって区画され、かつ、培養液３と細胞シート２とを充填可能な内部空間が形成される。

Description

細胞シート搬送用容器
　本発明は、骨組織などの細胞シートを安全に搬送可能な容器に関し、より具体的には、医療機関と他の医療機関との間を搬送し、かつ双方の医療連携の支援に適した細胞シート搬送用容器に関するものである。
　近年、細胞や組織（特にシート状の細胞や組織）をｉｎ　ｖｉｔｒｏ（即ち、生体外）で培養して、再び生体に適用する再生治療が注目されている。例えば、歯周再生治療の分野では、患者自身の健康な歯槽骨から採取した骨膜から調製した自家培養骨膜シートを適用し、顕著な治療成績を収めている。
　ところで、我が国では病院の拠点化が進み、特定の疾患あるいは状況に対応できるような高度な診療機能を備え、地域の他の医療機関との連携の中心となる病院（「拠点病院」とも呼ぶ。）が設置されている。このような病院の拠点化は、種々の長所もあるが、再生治療の分野においては移植用の細胞シートを適切に加工・調製できる医療機関が限定されるという弊害もある。従って、拠点病院以外の医療施設は、患者に再生治療を施すために、当該医療施設で採取した患者の細胞組織（検体）を拠点病院に送り、拠点病院で培養・調製された細胞シートを拠点病院から当該医療施設に搬送（返送）してもらう必要がある。
　また、拠点病院においても、それぞれの病院で得意とする再生治療の専門分野（つまり、専門的に培養・調製する細胞シートの種類）は、通常異なる。従って、様々な再生治療やこれに関連した研究を行うために、拠点病院間でも上記治療や研究に最適な細胞シートを搬送し合う（つまり融通し合う）必要がある。
　しかしながら、拠点病院間や拠点病院とそれ以外の医療施設との間で細胞シートを安全に搬送できる搬送容器は現実には見当たらない。また、各病院や医療施設において、細胞シートを培養、調製、又は使用する際には、細胞シートを収容するために、市販されかつ汎用性のあるシャーレが使用されるのが通常である。
　加えて、我が国の再生治療の標準化に関する指針やガイドラインは整備されつつあり、運用レベルでは細胞シートの培養や調製のための器具については汎用シャーレの使用が推奨されている。つまり、搬送前後の培養手順や培養器具を大きく変更することはできない。
　このような事情の下、本発明者らは、搬送元や搬送先の医療現場で入手可能な汎用シャーレと組み合わせられる細胞シート搬送用容器を開発することが急務であり、このような搬送容器の潜在的需要が高いことに気が付いた。
　次に、細胞の培養や運搬に用いられる容器に関する従来技術について説明する。従来から、細胞の培養には、横に倒して培養可能なボトル形状のプラスチック製容器（「培養フラスコ」と呼ばれる。）が利用されてきた。これらの培養フラスコには、ボトル本体から突き出た入口に蓋（例えば、スクリューキャップ）が取り付けられたものが多い。これらの培養フラスコは、この入口から培養液をフラスコ内に注入し、細胞を培養液に満たし、スクリューキャップを硬く締めて、細胞の運搬に用いられていた。
　この通常の培養フラスコを利用した運搬方法は、分散細胞の運搬においては必要かつ十分な方法であるが、細胞シートの場合には、限られたスペースのボトルネック入口からセルスクレーパーやピンセットを挿入し、シートを剥離して取り出さなければならない。この入口から細胞シートを採取する際、この細胞シートが折り畳まれたり、塊状になったりする恐れが非常に高く、このような状態になってしまうと細胞シート（特に、細胞シートが移植用の角膜である場合）は、その所期の目的を達成できない。つまり、細胞シートは培養されたまま（即ち、フィルム状に広がったまま）の状態で取り出されることが望ましいが、上記ボトルネック構造を有する培養フラスコでは細胞シートの搬送は現実的には不可能である。
　このようなニーズに応えるために、ボトル一側面（横に倒した際には上側面）を、剥離可能なフィルム状のシールにより構成して（つまり、シールトップ構成）にして、このシールを剥がすことによって細胞シートに容易にアクセスできる構造の培養フラスコが商品化されている（例えば、特許文献１及び非特許文献１を参照）。
　しかしながら、このシールトップ形式の培養フラスコは、そのフィルム状の構造からフラスコ内を培養液で満たした場合にその水圧に耐えられないという欠点が考えられ、病院内の運搬などの短距離間の搬送はともかく、病院間での運搬などの長距離搬送に不向きであるといった別の欠点も考えられる。また、現行商品のサイズでは、大量（例えば、５００ｍＬ以上）の培養液を必要とするという欠点も考えられる。
　また、上述の培養容器の他にも、例えば、特許文献２～４に細胞シートの培養や搬送に適した容器が提案されている。
　特許文献２には、液体培地中、シート状の支持体の存在下で細胞を培養するための平板状の培養器が開示されている。より具体的には、この培養器は、液体培地により満たされる培養面を有する底部と、底部上に配置して培養面を覆うと共に移動して培養面を外界に露出する覆い部と、シート状の支持体の一部を支持して、この支持体が液体培地の液面に浮き上がることを防止する浮き上がり防止手段と、液体培地を交換可能にする液体交換手段と、を備えたことを特徴とするものである。
　しかしながら、特許文献２の培養器では、搬送元又は搬送先の医療現場にて、細胞シートの搬送、保管、追加培養、或いは患者への適用の為に、細胞シートを汎用のシャーレに移し替えなければならないのが通常であり、余計な作業労働や細胞シート損傷の危険性が増加することが懸念される。
　また、このような従来の培養器を使用した場合、搬送元のクリーンルームやクリーンベンチ等から外界に一旦搬出された培養器自体は、通常、搬送先の医療現場では清潔なものでないと判断されるために、清潔性の維持や微生物汚染の防止の観点からも、このような培養器をそのまま使い続けることはできず、シャーレ等に移し替える必要がある。
　また、この培養器内は、液体培地で満たされるものの、特許文献２の図面２に示すように、培地液面の上に空気を含みやすいと考えられ、たとえ浮き上がり防止手段を設置したとしても、搬送中に空気が培地液面中に混ぜ合わされたり、移動したりすることによって、細胞シートを損傷させてしまう危険性が十分にあると考えられる。
　特許文献３又は特許文献４には、上方に開口部を有し、細胞シート及び培養液を収容可能な収容体と、この開口部を封止可能な蓋部と、を備えた培養容器が開示されている。
　しかしながら、いずれの培養容器を使用した場合でも、その使用前に、搬送元の医療現場においては、先ず、汎用シャーレ或いは特許文献４の図面１に示すような培養フラスコから細胞シートを採取して、不織布等の包装体によって細胞シートを包む作業が必要となる。さらに、培養器内では、細胞シートを、これを包んだ包装体もろとも、スポンジあるいはネット等の支持体でさらに覆って、培養液中に浸漬する必要がある。
　また、特許文献３又は特許文献４に開示の培養器内は、特許文献２と同様、培養液の他に空気を含みやすく、長距離搬送中にたとえ支持体で覆ったとしても細胞シートは変形或いは損傷の恐れを払しょくできない。
　また、特許文献３又は特許文献４に開示の培養器内は、特許文献２と同様、清潔性の維持や微生物汚染の防止の観点からも、搬送先ではこのような培養器をそのまま使い続けることはできず、シャーレ等に移し返す必要がある。
特表２００１－５０７２１８号公報 特開２００１－２９９３２６号公報 特開２００２－３３５９５０号公報 特開２００４－１８７５１８号公報
""Tissue Culture Flask with re-closable Lid or peel-off Foil",TPP Techno Plastic Products AG社のホームページ、［平成２４年５月２４日検索］，インターネット〈http://www.tpp.ch/page/produkte/02_zellkultur_flasche_spezial.php〉
　本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、病院から別の病院までの間といった遠距離間でも細胞シートを安全に搬送する搬送容器を提供することを目的とする。
　また、本発明の別の目的は、搬送元や搬送先の医療現場で入手及び利用可能な汎用シャーレと組み合わせられる細胞シート搬送用容器を提供することである。
　また、本発明のもう一つの目的は、再生治療の標準化に適合し易い細胞シート搬送用容器を提供することである。
　本発明者らは、鋭意検討の末、搬送元で用意され、細胞シートが浸漬・付着した汎用シャーレ下皿をそのまま収容しながら遠距離間を運搬する搬送形式とこの搬送形式を実現可能な搬送容器の構造を想到し、この移動形式とこれに適した搬送容器を用いれば上記課題を見事に解決できることを見出し、本発明を完成した。
　すなわち本発明は、例えば、以下の構成・特徴を備えるものである。
（態様１）
　シャーレ下皿を載置可能な底部と開口部とを備えた容器本体と、
　前記開口部に載置され、前記開口部と前記下皿とに蓋をする蓋体と、
　前記蓋体を前記容器本体に着脱自在に接続可能な接続手段と、
　を備え、かつ、
　前記蓋体内側には下皿の上端にその全周に亘って接触するシール材が設けられ、
　前記蓋体の基部には、培養液を注入又は排出するための入口とこの入口を閉鎖するための閉鎖具とがさらに設けられ、かつ、
　前記下皿を載置した前記容器本体に前記蓋体を接続した際に、前記下皿の内面と前記蓋体の内面とによって区画され、かつ、培養液と細胞シートとを充填可能な内部空間が形成されることを特徴とする細胞シート搬送用容器。
（態様２）
　前記容器本体と前記蓋体とが透明又は半透明の樹脂から作られていることを特徴とする態様１に記載の細胞シート搬送用容器。
（態様３）
　前記蓋体の前記基部には、頂点付近が前記入口に接続した中空円錐形又は中空角錐形の隆起部が形成されていることを特徴とする態様１又は２に記載の細胞シート搬送用容器。
（態様４）
　前記接続手段は、軸と、該軸に一部が接続しかつ該軸を中心に旋回可能な第１本体と、が設けられた第１構造と、
　接続時に該第１本体を受けて該第１本体の他部を把持する受容部が設けられた第２構造と、を備え、かつ、
　前記第１構造と前記第２構造とは前記容器本体又は前記蓋体の一方と他方とに設けられることを特徴とする態様１～３のいずれかに記載の細胞シート搬送用容器。
（態様５）
　前記第１本体の他部には、前記第１構造を前記第２構造に締結可能な締結具又は前記第１構造を前記第２構造に係合可能なフック部が設けられていることを特徴とする態様４に記載の細胞シート搬送用容器。
　ここで、本発明における「細胞シート」とは、細胞のみで培養することによって再構築された単層または複数層（重層化）のシート形状の培養組織だけでなく、コラーゲンやフィブリンなどの生体親和性材料で構成される担体（スキャフォールド）に細胞を播種し、培養することによって得られるシート形状の培養組織なども含まれる。また、細胞シートを構成する細胞には、例えば、歯槽骨等から採取した骨膜細胞、角膜上皮細胞、表皮角化細胞、口腔粘膜細胞、結膜上皮細胞、心筋細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞、肝実質細胞のいずれか若しくはこれらの混合物が挙げられるが、その種類は、何ら制約されるものではない。また、その細胞の由来は、特に制約されるものではないが、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、ブタ、ヒツジなどが挙げられるが、本発明の細胞シートをヒトの治療に用いる場合はヒト由来の細胞を用いる方が望ましい。
　また、これらの細胞の培養を支援する培養液には、例えば、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ）、αＭＥＭ（ａｌｐｈａ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｉｎｉｍｕｍ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ）、ＲＰＭＩ１６４０（Ｒｏｓｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）などの細胞培養培地が使用可能であるが、これらに限定されず、種々の培養液が使用可能である。
　以上のような構成の本発明の細胞シート搬送用容器によれば、従来から多くの医療現場で用いられてきた通常の培養方法を変更することなく、細胞シートを搬送することができる。また、本発明の搬送用容器によれば、汎用シャーレに培養したまま細胞シートを搬送することができるため、搬送や培養に係る操作性やコストの点で大きなメリットがあるとともに、細胞シート調製方法の標準化にも適合し易いものである。従って、本発明の搬送容器は、従来までに提案された培養器に比べ、ＣＰＣ（Ｃｅｌｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ）などの医療現場へ導入し易いものと期待される。
　なお、細胞シートはシャーレ下皿で培養されると、一般に、下皿の底部内面に貼りついた状態になる。従って、細胞シートをシャーレ下皿に入れたまま搬送させようとした場合、搬送中の振動や培養液中を浮遊する気泡の攪拌から細胞シートを保護することを考える必要があるが、本発明の好適な構成によれば、搬送時の振動や気泡の発生を極力無くすことができるため、搬送時の細胞シートの損傷や剥離を未然に防ぐことが可能である。
実施例１の細胞シート搬送用容器を示した分解斜視図である。 実施例１の細胞シート搬送用容器を示した斜視図である。 実施例１の細胞シート搬送用容器を示した平面図である。 図４（ａ）は図３のＡ－Ａ線で破断した断面図であり、図４（ｂ）はシール材の変形例を示した断面図である。 実施例２の細胞シート搬送用容器を示した分解斜視図である。 実施例２の細胞シート搬送用容器を示した斜視図である。 実施例２の細胞シート搬送用容器を示した平面図である。 図７のＢ－Ｂ線で破断した断面図である。 培養細胞を用いた搬送模擬試験での結果（細胞の様子）を示した図である。
　以下、添付の図面を参照しながら下記の具体的な実施形態に基づき本発明を説明するが、本発明はこれらの実施形態に何等限定されるものではない。
　公知のシャーレ（特に、哺乳類等の細胞を培養するための公知のシャーレ）は、一般に、蓋と下皿とが密着しないような構造を有している。従って、シャーレの蓋と下皿とを密着させても、下皿内部に満たされた培養液を漏らさずにシャーレを搬送することは困難である。
　そこで、本発明では、通常の培養環境や培養手順に手を加えることなく、シャーレ下皿の上端に密着することができ、しかも下皿内部を培養液で満たす際に気泡が残らないような構造の蓋体を備えた搬送用容器を開発した。また、公知の培養用シャーレ下皿の部分は、上述の培養フラスコに比較してやや薄厚であることから、搬送時の衝撃にも耐え得るように下皿全体を包み込める構造の搬送用容器を作製することにした。次に、この構造を実現可能な実施例を詳述する。
　（細胞シート搬送用容器の概略）
　本発明の実施例１に係る細胞シート搬送用容器１（以下、単に「搬送用容器」、「搬送容器」、又は「容器」とも呼ぶ。）の概略とその構造について説明する。図１は、この搬送用容器１の構成要素を視認できるように示した分解斜視図である。容器１の主な構成要素は、図１に示すように、容器本体２０と、この容器本体２０を覆う蓋体３０である。
　（容器本体の構造）
　この容器本体２０は、開口部２１と、細胞シート２を培養するためのシャーレ下皿４０を開口部２１を通して載置可能な底部２２と、底部２２の外縁から立設しかつシャーレ下皿４０（以下、単に「下皿」と呼ぶこともある。）を囲繞可能な周壁部２３と、が設けられる。なお、図１に示すシャーレ下皿４０には、図示しないシャーレ蓋を支持するフランジ部４１が周方向外側に（つまり周壁部４２の外周面に沿って）突設されており、容器本体２０の周壁部２３には、このフランジ部４１の形状に対応した形状を有した段差（つまり肩部）２３ｓが設けられている。
　（蓋体の構造）
　一方、蓋体３０は、容器本体２０に組み付けたシャーレ下皿４０の開口部４３を覆うことができる基部３１と、この基部３１の外縁から下側に延びた周壁部３２と、を備える。この蓋体３０の基部３１及び周壁部３２と、容器本体２０の周壁部２３と、によって、容器本体２０の底部２２に載置されたシャーレ下皿４０（通常、薄厚の容器）は完全に内包されるとともに容器１の外側からの衝撃や振動から保護されることになる。
　（シール材の構造）
　また、基部３１の内面３１ｉｓにはその外周縁に亘って溝３１ｔｒが形成されている（図４（ａ）を参照）。この溝３１ｔｒにはその全長（全周）に亘ってシール材３３（例えば、パッキン）が充填されている。シール材３３は、シャーレ下皿４０が本発明の容器１に格納された際には、シャーレ下皿４０の周壁部４２の上端面４２ｔに当接可能な形状（例えば、環状）や寸法（例えば、直径及び幅）を有している。
　また、シール材３３の変形例として、図４（ｂ）に示すような、周方向に段差が付いたシール材３３を使用してもよい。なお、図４（ｂ）は、説明の便宜上、容器１の構成要素のうち、シール材３３とシャーレ下皿４０の断面のみを示している。この図４（ｂ）の好適な例示には、周方向の内側部分３３ｉより大きな厚みを備えた外側部分３３ｏがシール材３３の全周に亘って形成されている。言い換えれば、シール材３３の外側部分３３ｏは、内側部分３３ｉよりもシャーレ下皿４０に向かって延びるため、段差が形成されることになる。
　シール材３３の段差は、図４（ｂ）に示すように、シャーレ下皿４０の周壁部４２の上端４２ｔに当接するだけでなくこの上端４２ｔを含めた周壁部４２の上側部分をすっぽりと囲繞するため、図１及び図４（ａ）に示したシール材３３を使用した場合よりも容器１の密封性をさらに向上できるだけでなく、このシール材３３が形成された蓋体３０のシャーレ下皿４０への嵌合を容易にすることもできる。
　（培養液注入用入口及び閉鎖具の構造）
　また、蓋体３０（好ましくは、その基部３１の中央部）には、基部３１を貫通する培養液注入用入口３４（以下、単に「入口」とも呼ぶ。）が設けられている。さらに、蓋体３０には、入口３４の形状に対応し、かつ入口３４に着脱自在な閉鎖具３５が設けられる。これにより、蓋体３０は、容器１内に格納した後でも、入口３４を通して下皿４０内に培養液３を満たすことが可能になる。入口３４や閉鎖具３５には種々の構成が採用可能であるが、図面を参照しながら好適な例を以下に述べる。
　入口３４は、図１及び図４（ａ）に示すように、基部３１から外側に突き出た中空円筒形を成し、その外周面にネジ３４ｓ（具体的にはネジ山とネジ溝）が設けられることが好ましい。一方、閉鎖具３５は、図４（ａ）に示すように、入口３４のネジ３４ｓに対応したネジ３５ｓ（具体的にはネジ山とネジ溝）が内周面に設けられたスクリューキャップが好ましい。
　以上の構成を備えた蓋体３０では、シール材３３が上述の通り下皿４０の周壁部４２の上端面４２ｔを液密に封止するため、下皿４０の最大容量を超えて入口３４の上端面（閉鎖具３５の内面３５ｉｓ）までの容器１の内部空間全てを培養液３で完全に満たすことが可能である。これにより、搬送中に細胞シート２の損傷の一因となっていた空気を完全に容器１の内部空間から排除することが可能となる。
　また、この実施例１の入口３４と閉鎖具３５とは、上述のように互いに対応したネジ３４ｓ，３５ｓを有しているため、入口３４に対して閉鎖具３５を回動することで、入口３４を閉鎖具３５で堅固に締め付けることができる。従って、細胞シート２の搬送中に、閉鎖具３５がふとした拍子で外れ、入口３４から培養液３が漏れだす懸念や心配を無くすことができる。
　なお、閉鎖具３５を回転させるときのグリップ性を向上させるために、把持部３５ｇ（例えば、図１～図３に示した多数の縦溝）を閉鎖具３５の外周面に形成してもよい。
　また、蓋体３０の基部３１には、頂点付近が入口３４に接続した中空円錐形（図４（ａ）参照）又は中空角錐形（図示せず）の隆起部３１ｕｐが形成されていることがさらに好ましい。これにより、下皿４０に培養液３を満たす際に混入する恐れのある気泡が容器１の内部空間に留まりにくくなり、培養液３内で気泡に生ずる浮力により入口３４の上面に誘導され易くなる。従って、空気層のみならず培養液３中の気泡までも容器１の内部空間から効率良く排出可能となる。
　（接続手段の構造）
　次に、容器本体２０と蓋体３０とを接続及び一体化する接続手段の一例（実施例では、第１・第２構造５１，６１）について説明する。図１に示すように、容器本体２０の周壁部２３の外周面上には４つの第１構造５１が設けられている。第１構造５１は、図３に示すように、周壁部２３の外周の長さを均等に分けるように周壁部２３上に配設されていることが好ましく、これにより、第１構造５１は、蓋体３０を容器本体２０の周壁部２３の外周に沿ってより均等に固定することができる。
　第１構造５１の各々には、互いに所定距離だけ離間しかつ周壁部２３から外側へ突出した一対の旋回支持部５２，５２と、これらの旋回支持部５２，５２の間に収容された第１本体５３と、が設けられている。なお、実施例１の第１本体５３は棒状を成す。第１本体５３の一端には軸５４が第１本体５３に対して垂直に接続されており、この軸５４の端部がそれぞれ、旋回支持部５２，５２内に設けられた孔５２ｈに回転自在に嵌め込まれている。このような構造により、旋回支持部５２，５２間の第１本体５３は軸５４を基点として回転可能となる。なお、第１構造５１には、孔５２ｈの位置よりさらに外側下方位置に第１本体５３の回転を規制する規制手段５５が設けられてもよい。図示の例では、規制手段５５は旋回支持部５２，５２の間に延びた部材である。この規制手段５５により、第１本体５３の回転は容器本体２０の上方位置から水平位置までに規制され、容器本体２０の底部２２の裏面（図示せず）に接近することは無くなり、容器本体２０のより安定した着座が保証される。
　一方、蓋体３０には、その周壁部３２の外周面上に受容部６２を備えた第２構造６１が設けられている。第２構造６１は、蓋体３０を容器本体２０に固定する際には、図２及び３に示すように、上記第１構造５１に対応した位置に配置されることになる。
　この受容部６２は、軸５４を中心に第１本体５３をその垂直位置に旋回させた際に第１本体５３を受け入れ可能な形状を成しており、例えば、外側に開口したＵ字形（図示）やＣ字形（図示せず）の断面を有した凹部を成してもよい。
　また、第１本体５３の他端（軸５４が形成された一端とは異なる端部）付近の外周面にはネジ部５３ｓ（ネジ山とネジ溝）を設け、このネジ部５３ｓに沿って第１本体５３の長手方向に移動する締結具５６を他端に設けることがさらに好ましい。図示の締結具５６は、中空円筒形状を成しかつこの内周面に第１本体５３のネジ部５３ｓに対応したネジ部５６ｓを備えている。このような構成の第１・第２構造５１，６１によれば、図２及び図３に示すように、締結具５６が軸５４から離れるように締結具５６を移動させておけば、第１本体５３を受容部６２に収容できる。さらに第１本体５３が受容部６２内に受容された後に、軸５４に近づくように締結具５６を回転（移動）させていけば、締結具５６は、図２～図４（ａ）に示すように最終的には、その下面が受容部６２の上面６２ｔを押し付けた状態で固定される。従って、以上の構成の接続手段５１，６１により、蓋体３０を容器本体２０に堅固に固定することができる。
　また、締結具５６を回転させるときのグリップ性を向上させるために、把持部５６ｇ（例えば、多数の縦溝）を締結具５６の外周面に形成してもよい。なお、第１構造５１や第２構造６１は、容器本体２０や蓋体３０に一体的に形成されていてもよいし、これらの構成要素２０，３０に別部材として取り付けられていてもよい。
　なお、容器１の各構成部材の材質はチタンやステンレス等の金属や樹脂が考えられるが、量産性や軽量な点から樹脂（例えば、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル）が好ましく、容器１の内部状態の視認性向上の観点から透明又は半透明の樹脂がさらに好ましい。なお、医療分野においては、業務の効率化、感染防止の安全面、製造コスト等の観点から、医療器具等のディスポーザブル化（一回きりの使い捨て）が進んでおり、上記樹脂材料を採用することで本発明の容器１をディスポーザブル化に対応させることができる。
　（搬送容器を用いた搬送方法）
　次に、本発明の容器１を用いた搬送方法の一例を示す。搬送元の病院等の医療施設では、国等で認可を受けた培養手順に従いながらクリーンベンチ等の清潔な空間内で汎用シャーレを用いて細胞シート２を培養する。シャーレ下皿４０の底部内面４４ｉｓに付着した細胞シート２が所望の状態まで培養された後、シャーレの蓋（図示せず）を取り外し、下皿４０のみを容器本体２０の底部２２に載置する。次いで、容器本体２０の上側から蓋体３０を被せ、第１本体５３を軸５４回りに旋回して蓋体３０外周面の受容部６２に収容し、第１本体５３の他端にある締結具５６を回転させることによって蓋体３０を容器本体２０に固定させる。そして、蓋体３０の基部３１の中央に位置した入口３４から培養液３をさらに注入して、容器１内の内部空間を培養液３で完全に満たすことで、この内部空間から空気層や気泡を排除する。その後、閉鎖具３５（スクリューキャップ）で入口３４を閉栓する。これで、搬送元の施設での搬送準備が完了し、搬送元から搬送先まで公知の移動手段で容器１を移動する。なお、公知の移動手段として車や飛行機が挙げられ、本発明の容器１を宅配便等により国内外へ送ることも可能である。
　搬送先で容器１を受け取ったオペレータは、閉鎖具３５を取り外し、入口３４等に図示しないスポイド等を挿入して大半の培養液３を容器の外へ排出（廃棄）する。また、締結具５６を緩めて、蓋体３０を容器本体２０から取り外して、露出したシャーレ下皿４０を容器本体２０から取り出す。本発明の容器１がディスポーザブルの場合、搬送中に外部環境に接触していた容器本体２０や蓋体３０をこの時点で廃棄する。容器１の再利用を望む場合には、容器１の各構成部材２０，３０に滅菌処理等を行う必要がある。
　一方、シャーレ下皿４０は、搬送前はクリーンベンチ内の清潔空間に通常保管され、搬送中も本発明の容器１内に格納されているので、容器１の上記構成部材２０，３０に比べ清潔である。従って、搬送先で新たに用意した清潔なシャーレ蓋（図示せず）をシャーレ下皿４０に取り付ければ培養を再開することができる。あるいは、培養液３を上述のように廃棄して生理的食塩水などで細胞シート２を数回洗浄すれば、これを直ちに移植治療に適用できる。このように、搬送元のシャーレ下皿４０をそのまま有効に利用できるため、搬送先での簡便かつ迅速な細胞シート２の利用が可能となる。
　（実施例１の変形例）
　また、本発明の接続手段の構造も上記の好適な実施例１に限定されず、様々な接続構造が考えられる。例えば、上記実施例１の第１構造５１及び第２構造６１の対は４対に限定されない。例えば、少なくとも２対だけでも容器本体２０への蓋体３０の固定は可能である。もちろん、この対の数が多くなる程、堅固かつ周方向に均一な蓋体３０の固定が保証される。また、上記実施例１の第１構造５１及び第２構造６１の対を１対のみ容器１に設けた場合でも、容器本体２０と蓋体３０とを接続しつつ蓋体３０を開閉可能なヒンジ（図示せず）を容器１にさらに配設すれば、実施例１と同様に、シャーレ下皿４０を容器１内に格納して蓋体３０を容器本体２０に接続することができる。
　また、これらの例に限らず、接続手段には、公知のクランプ構造や、蓋体３０を容器本体２０内にスライドしてロック可能な構造など様々な変形例が考えられる。
　なお、上記実施例１では容器１に適用するシャーレとして丸形シャーレを前提とし、容器本体２０や蓋体３０は円形や円筒形を成していたが、この形状に限定されない。例えば、汎用性のあるシャーレには、角形シャーレやその他の形状のシャーレの使用も想定され、このような場合には、容器本体２０や蓋体３０は使用するシャーレに対応した形状（例えば、矩形や立方体）を有してもよい。
　加えて、市販シャーレが丸形であっても、製造元が変わればその外形寸法が多少異なる場合があるため、容器本体２０の周壁部２３内側にあてがうことが可能なアダプター部材（図示せず）を用意してもよい。
　また、容器本体２０の底部２２の一部に貫通穴（図示せず）を設け、貫通穴を覆うようにフィルム（図示せず）を当該貫通穴のいずれかの端面の外周に接着（例えば、ヒートシール）するようにしてもよい。このような構成により、搬送先で容器本体２０から蓋体３０をはずした際に、このフィルムを剥がして貫通穴から指等でシャーレ下皿４０を押し出すことができるようになるため、さらに、容器本体２０からのシャーレ下皿４０の取外しが容易になる。
　次に、図５～図８を参照しながら、実施例２の細胞シート搬送用容器１を例示する。実施例２の容器１は、実施例１で示した容器１の基本的な構成要素である容器本体２０と蓋体３０と備えている。しかしながら、実施例２の容器１では、後述するように、容器本体２０と蓋体３０とを接続及び一体化するための接続手段５１，６１や蓋体３０上の閉鎖具３５に関する具体的な構造が実施例１の構造と異なる。なお、図５～図８に表記され、かつ、上述の実施例１と同様の符号を付されている構成要素は、実施例１において対応する構成要素と同様の役目を果たすため、ここではこれらの説明を省略する。
　（実施例２の接続手段）
　実施例２の容器１も、実施例１の容器１と同様に、容器本体２０の周壁部２３の外周面上には４つの第１構造５１が設けられている。実施例２の第１構造５１も、図５～図７に示すように、周壁部２３の外周の長さを均等に分けるように配設されていることが好ましい。実施例２の第１構造５１は、一端に軸（図示せず）が設けられた第１本体５３を有する。なお、実施例２の第１本体５３は、全体的に板状を成す。実施例２の場合も、第１構造５１の各々には、互いに所定距離だけ離間しかつ周壁部２３から外側へ突出した一対の旋回支持部５２，５２が設けられる。第１本体５３の軸の端部はそれぞれ、旋回支持部５２，５２内に設けられた孔５２ｈに回転自在に嵌め込まれる。これにより、旋回支持部５２，５２は、第１本体５３を回転自在に収容できるようになる。
　一方、蓋体３０には、その周壁部３２の外周面上に受容部６２，６２を備えた第２構造６１が設けられている。第２構造６１は、実施例１のそれと同様に、蓋体３０を容器本体２０に固定しようとする際には、第１構造５１に対応した設置数と設置位置に配置されることになる。なお、実施例２の受容部６２，６２は、旋回支持部５２，５２の離間距離とほぼ同じ距離だけ互いに離れた２つの部材で構成されてもよい。
　第１構造５１の第１本体５３の他端にはハンドル５７が設けられてもよい。操作者は自身の指でこのハンドル５７を摘まみながら、第１本体５３を軸回りに容易に旋回させることができるようになる。さらに、ハンドル５７の両側には凸部（例えば、円筒状凸部）５８，５８を設置し、一方、それぞれの受容部６２には、凸部５８，５８を収容するための切欠き部６３，６３と、一旦、切欠き部６３，６３に収容された凸部５８，５８が逃げないようにするための外れ止め部６４，６４が形成されてもよい。このような切欠き部６３，６３及び外れ止め部６４，６４を受容部６２，６２に設置することによって、これらの凸部５８，５８は、第１構造５１（つまり容器本体２０）を第２構造６１（つまり蓋体３０）に係合するためのフック部の役目を発揮することになる。
　なお、上述の接続手段５１，６１の各構成部品は、軽量や成形性の観点から樹脂製であることが好ましいが、別の原材料で作られてもよい。
　（実施例２の閉鎖具）
　実施例２の閉鎖具３５は、図５に示すように、入口３４の内径に対応した寸法の外径を有しかつ円筒状を成す延長部３５ｅと、延長部３５ｅの外径より大きな外径を有した鍔部３５ｆとを備える。このような構造により、閉鎖具３５は、延長部３５ｅが蓋体３０の入口３４に内挿された状態で入口３４を閉鎖できる。つまり、容器１の搬送に必要な培養液３の量をさらに削減できる。
　また、延長部３５ｅは、図５及び図８に示すように、好ましくは、入口３４の深さに対応した長さを有する。また、この入口３４の内周面と延長部３５ｅの外周面とには、互いに対応した構造を成す螺旋溝３４ｓ，３５ｓが形成されることが好ましい。なお、鍔部３５ｆの外周には、グリップ性向上のための把持部３５ｇが形成されることが好ましい。また、閉鎖具３５の内側には孔３５ｈが形成されてもよく、これにより、原材料コストを抑制することができる。なお、上述の閉鎖具３５は、軽量や成形性の観点から樹脂製であることが好ましいが、ゴムその他の原材料で作られてもよい。
　なお、実施例２の容器本体２０の周壁部２３は、肩部２３ｓを境として上側部分２３ｕと下側部分２３ｄとを備え、かつ、下側部分２３ｄは上側部分２３ｕの外径よりやや小さな外径を有するように構成されていてもよい。これにより、下側部分２３ｄの肉厚、ひいては容器本体２０の原材料コストを削減することが可能となる。
　（性能確認試験）
　本発明の実施例１に係る容器１の搬送性能を確認するために、次に述べる水漏れ確認試験と培養細胞を用いた搬送模擬試験とを行った。なお、今回の確認試験では、３Ｄプリンターによって作製された樹脂製の容器１を使用した。
　（水漏れ確認試験）
　シャーレ下皿４０を格納する容器本体２０の底部２２にティッシュペーパーを薄く敷き、その上にシャーレ下皿４０を置いた。さらに蓋体３０を置き、接続手段により蓋体３０を容器本体２０に固定して下皿４０を容器１内に格納した。次に、赤い色素（ケルンエヒト液）を含んだ蒸留水を容器１内（つまり、下皿４０の内面４４ｉｓ，４２ｉｓと蓋体３０の内面３１ｉｓで区画された内部空間内、図４（ａ）を参照）に満たし、この空間から気泡を可及的に排出し、閉鎖具３５（スクリューキャップ）でこの内部空間を硬く締めた。
　そして、容器１を垂直に立て懸け、その状態を４８時間ほど保持し、下皿４０内部からの水漏れの有無を観察した。具体的には、容器１内の色素を含んだ蒸留水を吸い出した後、底部２２に敷いたティッシュペーパーに色素付着の有無を確認した。その結果、ティッシュペーパーに色の付着は確認されず、下皿４０からの蒸留水の漏れは認められなかった。従って、蓋体３０の内面３１ｉｓに設けられたシール材３３と下皿４０との密封性が確保されており、この容器１は水漏れ試験をパスしたものと判断できる。
　（培養細胞を用いた搬送模擬試験）
　ヒト骨膜シートの使用は倫理審査規定に抵触する恐れがあるため、市販のヒト骨肉腫細胞（Ｓａｏｓ－２）を分散状態でシャーレ内に培養した。このシャーレの下皿４０を上述のように搬送容器１内に格納し、室温（１６～１８℃）で４８時間、振とう器にかけ、細胞の剥離や形態的変異に及ぼす影響を検討した。
　図９（ａ）は、搬送容器１にシャーレ下皿４０を格納する前の細胞の様子を示したものである。細胞はラグビーボールようにその長径が比較的短い紡錘形を成し、細胞密度は３０～４０％程度のコンフルエント状態であった。
　４８時間後にシャーレ下皿４０を取り出して、細胞の様子を観察した。その様子を図９（ｂ）に示す。細胞密度は若干上がっていたが、４８時間の振とう後においても、細胞の基本的形態に変化は無いことが確認できた。また、剥離した細胞の数を比較しても、有意な増加は認められなかった。
　蓋体３０を下皿４０から外し、通常のシャーレの蓋に付け替え、ＣＯ２インキュベータ内に戻して、さらに２４時間培養した。この状態の観察結果を図９（ｃ）に示す。細胞は通常の増殖速度を取り戻しつつあり、細胞密度も上がる傾向にあった。
　この試験結果と、容器１からの蒸留水の水漏れは認めなかった上記結果と、を考え合わせると、細胞への有害な影響は認められず、本発明の容器１は本発明の目的に合致した性能を実現していると評価できる。
　上述したように、再生医療分野、特に歯周科、口腔外科、眼科、心臓外科などの分野で、細胞シートを適用した治療が注目されているが、医療施設から他の医療施設まで等の遠距離を安全かつ搬送準備の手間が掛らない搬送器具は存在していない。
　これに対して、本発明の細胞シート搬送用容器は、上述の通り、搬送元のシャーレ下皿を有効に利用しながら清潔な状態で細胞シートを密封・格納できるものである。従って、本発明は、上記医療分野での細胞シートを利用した病院間連携の後押し、並びに、医療レベル格差の是正に寄与するものであり、産業上の利用価値は非常に高い。
　１　　細胞シート搬送用容器
　２　　細胞シート
　３　　培養液
　２０　　容器本体
　２１　　容器本体の開口部
　２２　　容器本体の底部
　３０　　蓋体
　３１　　蓋体の基部
　３１ｉｓ　　蓋体（の基部）の内面
　３１ｕｐ　　蓋体（の基部）の隆起部
　３３　　シール材
　３４　　入口
　３５　　閉鎖具
　４０　　シャーレの下皿
　４２　　下皿の周壁部
　４２ｉｓ　　下皿の周壁部内面
　４２ｔ　　下皿の上端
　４３　　下皿の開口部
　４４　　下皿の底部
　４４ｉｓ　　下皿の底部内面
　５１　　接続手段（の第１構造）
　５２　　旋回支持部
　５３　　第１本体
　５４　　軸
　５５　　規制手段
　５６　　締結具
　５７　　ハンドル
　５８　　凸部
　６１　　接続手段（の第２構造）
　６２　　受容部
　６３　　切欠き部
　６４　　外れ止め部

Claims (5)

  1. 　シャーレ下皿を載置可能な底部と開口部とを備えた容器本体と、
    　前記開口部に載置され、前記開口部と前記下皿とに蓋をする蓋体と、
    　前記蓋体を前記容器本体に着脱自在に接続可能な接続手段と、
    　を備え、かつ、
    　前記蓋体内側には下皿の上端にその全周に亘って接触するシール材が設けられ、
    　前記蓋体の基部には、培養液を注入又は排出するための入口とこの入口を閉鎖するための閉鎖具とがさらに設けられ、かつ、
    　前記下皿を載置した前記容器本体に前記蓋体を接続した際に、前記下皿の内面と前記蓋体の内面とによって区画され、かつ、培養液と細胞シートとを充填可能な内部空間が形成されることを特徴とする細胞シート搬送用容器。
  2. 　前記容器本体と前記蓋体とが透明又は半透明の樹脂から作られていることを特徴とする請求項１に記載の細胞シート搬送用容器。
  3. 　前記蓋体の前記基部には、頂点付近が前記入口に接続した中空円錐形又は中空角錐形の隆起部が形成されていることを特徴とする請求項１又は２に記載の細胞シート搬送用容器。
  4. 　前記接続手段は、軸と、該軸に一部が接続しかつ該軸を中心に旋回可能な第１本体と、が設けられた第１構造と、
    　接続時に該第１本体を受けて該第１本体の他部を把持する受容部が設けられた第２構造と、を備え、かつ、
    　前記第１構造と前記第２構造とは前記容器本体又は前記蓋体の一方と他方とに設けられることを特徴とする請求項１～３のいずれかに記載の細胞シート搬送用容器。
  5. 　前記第１本体の他部には、前記第１構造を前記第２構造に締結可能な締結具又は前記第１構造を前記第２構造に係合可能なフック部が設けられていることを特徴とする請求項４に記載の細胞シート搬送用容器。
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