JP5545689B2

JP5545689B2 - 細胞シート搬送用容器

Info

Publication number: JP5545689B2
Application number: JP2014509534A
Authority: JP
Inventors: 慶次郎山内; 和幸阿部; 知之川瀬; 孝明田中
Original assignee: YSEC CO Ltd
Current assignee: YSEC CO Ltd
Priority date: 2012-05-24
Filing date: 2013-05-21
Publication date: 2014-07-09
Anticipated expiration: 2033-05-21
Also published as: JPWO2013176106A1; WO2013176106A1

Description

本発明は、骨組織などの細胞シートを安全に搬送可能な容器に関し、より具体的には、医療機関と他の医療機関との間を搬送し、かつ双方の医療連携の支援に適した細胞シート搬送用容器に関するものである。

近年、細胞や組織（特にシート状の細胞や組織）をｉｎｖｉｔｒｏ（即ち、生体外）で培養して、再び生体に適用する再生治療が注目されている。例えば、歯周再生治療の分野では、患者自身の健康な歯槽骨から採取した骨膜から調製した自家培養骨膜シートを適用し、顕著な治療成績を収めている。

ところで、我が国では病院の拠点化が進み、特定の疾患あるいは状況に対応できるような高度な診療機能を備え、地域の他の医療機関との連携の中心となる病院（「拠点病院」とも呼ぶ。）が設置されている。このような病院の拠点化は、種々の長所もあるが、再生治療の分野においては移植用の細胞シートを適切に加工・調製できる医療機関が限定されるという弊害もある。従って、拠点病院以外の医療施設は、患者に再生治療を施すために、当該医療施設で採取した患者の細胞組織（検体）を拠点病院に送り、拠点病院で培養・調製された細胞シートを拠点病院から当該医療施設に搬送（返送）してもらう必要がある。

また、拠点病院においても、それぞれの病院で得意とする再生治療の専門分野（つまり、専門的に培養・調製する細胞シートの種類）は、通常異なる。従って、様々な再生治療やこれに関連した研究を行うために、拠点病院間でも上記治療や研究に最適な細胞シートを搬送し合う（つまり融通し合う）必要がある。

しかしながら、拠点病院間や拠点病院とそれ以外の医療施設との間で細胞シートを安全に搬送できる搬送容器は現実には見当たらない。また、各病院や医療施設において、細胞シートを培養、調製、又は使用する際には、細胞シートを収容するために、市販されかつ汎用性のあるシャーレが使用されるのが通常である。

加えて、我が国の再生治療の標準化に関する指針やガイドラインは整備されつつあり、運用レベルでは細胞シートの培養や調製のための器具については汎用シャーレの使用が推奨されている。つまり、搬送前後の培養手順や培養器具を大きく変更することはできない。

このような事情の下、本発明者らは、搬送元や搬送先の医療現場で入手可能な汎用シャーレと組み合わせられる細胞シート搬送用容器を開発することが急務であり、このような搬送容器の潜在的需要が高いことに気が付いた。

次に、細胞の培養や運搬に用いられる容器に関する従来技術について説明する。従来から、細胞の培養には、横に倒して培養可能なボトル形状のプラスチック製容器（「培養フラスコ」と呼ばれる。）が利用されてきた。これらの培養フラスコには、ボトル本体から突き出た入口に蓋（例えば、スクリューキャップ）が取り付けられたものが多い。これらの培養フラスコは、この入口から培養液をフラスコ内に注入し、細胞を培養液に満たし、スクリューキャップを硬く締めて、細胞の運搬に用いられていた。

この通常の培養フラスコを利用した運搬方法は、分散細胞の運搬においては必要かつ十分な方法であるが、細胞シートの場合には、限られたスペースのボトルネック入口からセルスクレーパーやピンセットを挿入し、シートを剥離して取り出さなければならない。この入口から細胞シートを採取する際、この細胞シートが折り畳まれたり、塊状になったりする恐れが非常に高く、このような状態になってしまうと細胞シート（特に、細胞シートが移植用の角膜である場合）は、その所期の目的を達成できない。つまり、細胞シートは培養されたまま（即ち、フィルム状に広がったまま）の状態で取り出されることが望ましいが、上記ボトルネック構造を有する培養フラスコでは細胞シートの搬送は現実的には不可能である。

このようなニーズに応えるために、ボトル一側面（横に倒した際には上側面）を、剥離可能なフィルム状のシールにより構成して（つまり、シールトップ構成）にして、このシールを剥がすことによって細胞シートに容易にアクセスできる構造の培養フラスコが商品化されている（例えば、特許文献１及び非特許文献１を参照）。

しかしながら、このシールトップ形式の培養フラスコは、そのフィルム状の構造からフラスコ内を培養液で満たした場合にその水圧に耐えられないという欠点が考えられ、病院内の運搬などの短距離間の搬送はともかく、病院間での運搬などの長距離搬送に不向きであるといった別の欠点も考えられる。また、現行商品のサイズでは、大量（例えば、５００ｍＬ以上）の培養液を必要とするという欠点も考えられる。

また、上述の培養容器の他にも、例えば、特許文献２〜４に細胞シートの培養や搬送に適した容器が提案されている。

特許文献２には、液体培地中、シート状の支持体の存在下で細胞を培養するための平板状の培養器が開示されている。より具体的には、この培養器は、液体培地により満たされる培養面を有する底部と、底部上に配置して培養面を覆うと共に移動して培養面を外界に露出する覆い部と、シート状の支持体の一部を支持して、この支持体が液体培地の液面に浮き上がることを防止する浮き上がり防止手段と、液体培地を交換可能にする液体交換手段と、を備えたことを特徴とするものである。

しかしながら、特許文献２の培養器では、搬送元又は搬送先の医療現場にて、細胞シートの搬送、保管、追加培養、或いは患者への適用の為に、細胞シートを汎用のシャーレに移し替えなければならないのが通常であり、余計な作業労働や細胞シート損傷の危険性が増加することが懸念される。

また、このような従来の培養器を使用した場合、搬送元のクリーンルームやクリーンベンチ等から外界に一旦搬出された培養器自体は、通常、搬送先の医療現場では清潔なものでないと判断されるために、清潔性の維持や微生物汚染の防止の観点からも、このような培養器をそのまま使い続けることはできず、シャーレ等に移し替える必要がある。

また、この培養器内は、液体培地で満たされるものの、特許文献２の図面２に示すように、培地液面の上に空気を含みやすいと考えられ、たとえ浮き上がり防止手段を設置したとしても、搬送中に空気が培地液面中に混ぜ合わされたり、移動したりすることによって、細胞シートを損傷させてしまう危険性が十分にあると考えられる。

特許文献３又は特許文献４には、上方に開口部を有し、細胞シート及び培養液を収容可能な収容体と、この開口部を封止可能な蓋部と、を備えた培養容器が開示されている。

しかしながら、いずれの培養容器を使用した場合でも、その使用前に、搬送元の医療現場においては、先ず、汎用シャーレ或いは特許文献４の図面１に示すような培養フラスコから細胞シートを採取して、不織布等の包装体によって細胞シートを包む作業が必要となる。さらに、培養器内では、細胞シートを、これを包んだ包装体もろとも、スポンジあるいはネット等の支持体でさらに覆って、培養液中に浸漬する必要がある。

また、特許文献３又は特許文献４に開示の培養器内は、特許文献２と同様、培養液の他に空気を含みやすく、長距離搬送中にたとえ支持体で覆ったとしても細胞シートは変形或いは損傷の恐れを払しょくできない。

また、特許文献３又は特許文献４に開示の培養器内は、特許文献２と同様、清潔性の維持や微生物汚染の防止の観点からも、搬送先ではこのような培養器をそのまま使い続けることはできず、シャーレ等に移し返す必要がある。

特表２００１−５０７２１８号公報特開２００１−２９９３２６号公報特開２００２−３３５９５０号公報特開２００４−１８７５１８号公報

""Tissue Culture Flask with re-closable Lid or peel-off Foil",TPP Techno Plastic Products AG社のホームページ、［平成２４年５月２４日検索］，インターネット〈http://www.tpp.ch/page/produkte/02_zellkultur_flasche_spezial.php〉

本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、病院から別の病院までの間といった遠距離間でも細胞シートを安全に搬送する搬送容器を提供することを目的とする。

また、本発明の別の目的は、搬送元や搬送先の医療現場で入手及び利用可能な汎用シャーレと組み合わせられる細胞シート搬送用容器を提供することである。

また、本発明のもう一つの目的は、再生治療の標準化に適合し易い細胞シート搬送用容器を提供することである。

本発明者らは、鋭意検討の末、搬送元で用意され、細胞シートが浸漬・付着した汎用シャーレ下皿をそのまま収容しながら遠距離間を運搬する搬送形式とこの搬送形式を実現可能な搬送容器の構造を想到し、この移動形式とこれに適した搬送容器を用いれば上記課題を見事に解決できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、例えば、以下の構成・特徴を備えるものである。
（態様１）
シャーレ下皿を載置可能な底部と開口部とを備えた容器本体と、
前記開口部に載置され、前記開口部と前記下皿とに蓋をする蓋体と、
前記蓋体を前記容器本体に着脱自在に接続可能な接続手段と、
を備え、かつ、
前記蓋体内側には前記下皿の上端にその全周に亘って接触するシール材が設けられ、
前記蓋体の基部には、培養液を注入又は排出するための入口とこの入口を閉鎖するための閉鎖具とがさらに設けられ、かつ、
前記下皿を載置した前記容器本体に前記蓋体を接続した際に、前記下皿の内面と前記蓋体の内面とによって区画され、かつ、前記培養液と細胞シートとを充填可能な内部空間が形成され、かつ、
前記蓋体の前記基部には、頂点付近が前記入口に接続した中空円錐形又は中空角錐形の隆起部が形成されていることを特徴とする細胞シート搬送用容器。
（態様２）
前記容器本体と前記蓋体とが透明又は半透明の樹脂から作られていることを特徴とする態様１に記載の細胞シート搬送用容器。
（態様３）
前記接続手段は、軸と、該軸に一部が接続しかつ該軸を中心に旋回可能な第１本体と、が設けられた第１構造と、
接続時に該第１本体を受けて該第１本体の他部を把持する受容部が設けられた第２構造と、を備え、かつ、
前記第１構造と前記第２構造とは前記容器本体又は前記蓋体の一方と他方とに設けられることを特徴とする態様１又は２に記載の細胞シート搬送用容器。
（態様４）
前記第１本体の前記他部には、前記第１構造を前記第２構造に締結可能な締結具又は前記第１構造を前記第２構造に係合可能なフック部が設けられていることを特徴とする態様３に記載の細胞シート搬送用容器。

ここで、本発明における「細胞シート」とは、細胞のみで培養することによって再構築された単層または複数層（重層化）のシート形状の培養組織だけでなく、コラーゲンやフィブリンなどの生体親和性材料で構成される担体（スキャフォールド）に細胞を播種し、培養することによって得られるシート形状の培養組織なども含まれる。また、細胞シートを構成する細胞には、例えば、歯槽骨等から採取した骨膜細胞、角膜上皮細胞、表皮角化細胞、口腔粘膜細胞、結膜上皮細胞、心筋細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞、肝実質細胞のいずれか若しくはこれらの混合物が挙げられるが、その種類は、何ら制約されるものではない。また、その細胞の由来は、特に制約されるものではないが、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、ブタ、ヒツジなどが挙げられるが、本発明の細胞シートをヒトの治療に用いる場合はヒト由来の細胞を用いる方が望ましい。

また、これらの細胞の培養を支援する培養液には、例えば、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）、αＭＥＭ（ａｌｐｈａＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）、ＲＰＭＩ１６４０（ＲｏｓｗｅｌｌＰａｒｋＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）などの細胞培養培地が使用可能であるが、これらに限定されず、種々の培養液が使用可能である。

以上のような構成の本発明の細胞シート搬送用容器によれば、従来から多くの医療現場で用いられてきた通常の培養方法を変更することなく、細胞シートを搬送することができる。また、本発明の搬送用容器によれば、汎用シャーレに培養したまま細胞シートを搬送することができるため、搬送や培養に係る操作性やコストの点で大きなメリットがあるとともに、細胞シート調製方法の標準化にも適合し易いものである。従って、本発明の搬送容器は、従来までに提案された培養器に比べ、ＣＰＣ（ＣｅｌｌＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＣｅｎｔｅｒ）などの医療現場へ導入し易いものと期待される。

なお、細胞シートはシャーレ下皿で培養されると、一般に、下皿の底部内面に貼りついた状態になる。従って、細胞シートをシャーレ下皿に入れたまま搬送させようとした場合、搬送中の振動や培養液中を浮遊する気泡の攪拌から細胞シートを保護することを考える必要があるが、本発明の好適な構成によれば、搬送時の振動や気泡の発生を極力無くすことができるため、搬送時の細胞シートの損傷や剥離を未然に防ぐことが可能である。

実施例１の細胞シート搬送用容器を示した分解斜視図である。実施例１の細胞シート搬送用容器を示した斜視図である。実施例１の細胞シート搬送用容器を示した平面図である。図４（ａ）は図３のＡ−Ａ線で破断した断面図であり、図４（ｂ）はシール材の変形例を示した断面図である。実施例２の細胞シート搬送用容器を示した分解斜視図である。実施例２の細胞シート搬送用容器を示した斜視図である。実施例２の細胞シート搬送用容器を示した平面図である。図７のＢ−Ｂ線で破断した断面図である。培養細胞を用いた搬送模擬試験での結果（細胞の様子）を示した図である。

以下、添付の図面を参照しながら下記の具体的な実施形態に基づき本発明を説明するが、本発明はこれらの実施形態に何等限定されるものではない。

公知のシャーレ（特に、哺乳類等の細胞を培養するための公知のシャーレ）は、一般に、蓋と下皿とが密着しないような構造を有している。従って、シャーレの蓋と下皿とを密着させても、下皿内部に満たされた培養液を漏らさずにシャーレを搬送することは困難である。

そこで、本発明では、通常の培養環境や培養手順に手を加えることなく、シャーレ下皿の上端に密着することができ、しかも下皿内部を培養液で満たす際に気泡が残らないような構造の蓋体を備えた搬送用容器を開発した。また、公知の培養用シャーレ下皿の部分は、上述の培養フラスコに比較してやや薄厚であることから、搬送時の衝撃にも耐え得るように下皿全体を包み込める構造の搬送用容器を作製することにした。次に、この構造を実現可能な実施例を詳述する。

（細胞シート搬送用容器の概略）
本発明の実施例１に係る細胞シート搬送用容器１（以下、単に「搬送用容器」、「搬送容器」、又は「容器」とも呼ぶ。）の概略とその構造について説明する。図１は、この搬送用容器１の構成要素を視認できるように示した分解斜視図である。容器１の主な構成要素は、図１に示すように、容器本体２０と、この容器本体２０を覆う蓋体３０である。

（容器本体の構造）
この容器本体２０は、開口部２１と、細胞シート２を培養するためのシャーレ下皿４０を開口部２１を通して載置可能な底部２２と、底部２２の外縁から立設しかつシャーレ下皿４０（以下、単に「下皿」と呼ぶこともある。）を囲繞可能な周壁部２３と、が設けられる。なお、図１に示すシャーレ下皿４０には、図示しないシャーレ蓋を支持するフランジ部４１が周方向外側に（つまり周壁部４２の外周面に沿って）突設されており、容器本体２０の周壁部２３には、このフランジ部４１の形状に対応した形状を有した段差（つまり肩部）２３_ｓが設けられている。

（蓋体の構造）
一方、蓋体３０は、容器本体２０に組み付けたシャーレ下皿４０の開口部４３を覆うことができる基部３１と、この基部３１の外縁から下側に延びた周壁部３２と、を備える。この蓋体３０の基部３１及び周壁部３２と、容器本体２０の周壁部２３と、によって、容器本体２０の底部２２に載置されたシャーレ下皿４０（通常、薄厚の容器）は完全に内包されるとともに容器１の外側からの衝撃や振動から保護されることになる。

（シール材の構造）
また、基部３１の内面３１_ｉｓにはその外周縁に亘って溝３１_ｔｒが形成されている（図４（ａ）を参照）。この溝３１_ｔｒにはその全長（全周）に亘ってシール材３３（例えば、パッキン）が充填されている。シール材３３は、シャーレ下皿４０が本発明の容器１に格納された際には、シャーレ下皿４０の周壁部４２の上端面４２_ｔに当接可能な形状（例えば、環状）や寸法（例えば、直径及び幅）を有している。

また、シール材３３の変形例として、図４（ｂ）に示すような、周方向に段差が付いたシール材３３を使用してもよい。なお、図４（ｂ）は、説明の便宜上、容器１の構成要素のうち、シール材３３とシャーレ下皿４０の断面のみを示している。この図４（ｂ）の好適な例示には、周方向の内側部分３３_ｉより大きな厚みを備えた外側部分３３_ｏがシール材３３の全周に亘って形成されている。言い換えれば、シール材３３の外側部分３３_ｏは、内側部分３３_ｉよりもシャーレ下皿４０に向かって延びるため、段差が形成されることになる。

シール材３３の段差は、図４（ｂ）に示すように、シャーレ下皿４０の周壁部４２の上端４２_ｔに当接するだけでなくこの上端４２_ｔを含めた周壁部４２の上側部分をすっぽりと囲繞するため、図１及び図４（ａ）に示したシール材３３を使用した場合よりも容器１の密封性をさらに向上できるだけでなく、このシール材３３が形成された蓋体３０のシャーレ下皿４０への嵌合を容易にすることもできる。

（培養液注入用入口及び閉鎖具の構造）
また、蓋体３０（好ましくは、その基部３１の中央部）には、基部３１を貫通する培養液注入用入口３４（以下、単に「入口」とも呼ぶ。）が設けられている。さらに、蓋体３０には、入口３４の形状に対応し、かつ入口３４に着脱自在な閉鎖具３５が設けられる。これにより、蓋体３０は、容器１内に格納した後でも、入口３４を通して下皿４０内に培養液３を満たすことが可能になる。入口３４や閉鎖具３５には種々の構成が採用可能であるが、図面を参照しながら好適な例を以下に述べる。

入口３４は、図１及び図４（ａ）に示すように、基部３１から外側に突き出た中空円筒形を成し、その外周面にネジ３４_ｓ（具体的にはネジ山とネジ溝）が設けられることが好ましい。一方、閉鎖具３５は、図４（ａ）に示すように、入口３４のネジ３４_ｓに対応したネジ３５_ｓ（具体的にはネジ山とネジ溝）が内周面に設けられたスクリューキャップが好ましい。

以上の構成を備えた蓋体３０では、シール材３３が上述の通り下皿４０の周壁部４２の上端面４２_ｔを液密に封止するため、下皿４０の最大容量を超えて入口３４の上端面（閉鎖具３５の内面３５_ｉｓ）までの容器１の内部空間全てを培養液３で完全に満たすことが可能である。これにより、搬送中に細胞シート２の損傷の一因となっていた空気を完全に容器１の内部空間から排除することが可能となる。

また、この実施例１の入口３４と閉鎖具３５とは、上述のように互いに対応したネジ３４_ｓ，３５_ｓを有しているため、入口３４に対して閉鎖具３５を回動することで、入口３４を閉鎖具３５で堅固に締め付けることができる。従って、細胞シート２の搬送中に、閉鎖具３５がふとした拍子で外れ、入口３４から培養液３が漏れだす懸念や心配を無くすことができる。

なお、閉鎖具３５を回転させるときのグリップ性を向上させるために、把持部３５_ｇ（例えば、図１〜図３に示した多数の縦溝）を閉鎖具３５の外周面に形成してもよい。

また、蓋体３０の基部３１には、頂点付近が入口３４に接続した中空円錐形（図４（ａ）参照）又は中空角錐形（図示せず）の隆起部３１_ｕｐが形成されていることがさらに好ましい。これにより、下皿４０に培養液３を満たす際に混入する恐れのある気泡が容器１の内部空間に留まりにくくなり、培養液３内で気泡に生ずる浮力により入口３４の上面に誘導され易くなる。従って、空気層のみならず培養液３中の気泡までも容器１の内部空間から効率良く排出可能となる。

（接続手段の構造）
次に、容器本体２０と蓋体３０とを接続及び一体化する接続手段の一例（実施例では、第１・第２構造５１，６１）について説明する。図１に示すように、容器本体２０の周壁部２３の外周面上には４つの第１構造５１が設けられている。第１構造５１は、図３に示すように、周壁部２３の外周の長さを均等に分けるように周壁部２３上に配設されていることが好ましく、これにより、第１構造５１は、蓋体３０を容器本体２０の周壁部２３の外周に沿ってより均等に固定することができる。

第１構造５１の各々には、互いに所定距離だけ離間しかつ周壁部２３から外側へ突出した一対の旋回支持部５２，５２と、これらの旋回支持部５２，５２の間に収容された第１本体５３と、が設けられている。なお、実施例１の第１本体５３は棒状を成す。第１本体５３の一端には軸５４が第１本体５３に対して垂直に接続されており、この軸５４の端部がそれぞれ、旋回支持部５２，５２内に設けられた孔５２_ｈに回転自在に嵌め込まれている。このような構造により、旋回支持部５２，５２間の第１本体５３は軸５４を基点として回転可能となる。なお、第１構造５１には、孔５２_ｈの位置よりさらに外側下方位置に第１本体５３の回転を規制する規制手段５５が設けられてもよい。図示の例では、規制手段５５は旋回支持部５２，５２の間に延びた部材である。この規制手段５５により、第１本体５３の回転は容器本体２０の上方位置から水平位置までに規制され、容器本体２０の底部２２の裏面（図示せず）に接近することは無くなり、容器本体２０のより安定した着座が保証される。

一方、蓋体３０には、その周壁部３２の外周面上に受容部６２を備えた第２構造６１が設けられている。第２構造６１は、蓋体３０を容器本体２０に固定する際には、図２及び３に示すように、上記第１構造５１に対応した位置に配置されることになる。

この受容部６２は、軸５４を中心に第１本体５３をその垂直位置に旋回させた際に第１本体５３を受け入れ可能な形状を成しており、例えば、外側に開口したＵ字形（図示）やＣ字形（図示せず）の断面を有した凹部を成してもよい。

また、第１本体５３の他端（軸５４が形成された一端とは異なる端部）付近の外周面にはネジ部５３ｓ（ネジ山とネジ溝）を設け、このネジ部５３_ｓに沿って第１本体５３の長手方向に移動する締結具５６を他端に設けることがさらに好ましい。図示の締結具５６は、中空円筒形状を成しかつこの内周面に第１本体５３のネジ部５３_ｓに対応したネジ部５６_ｓを備えている。このような構成の第１・第２構造５１，６１によれば、図２及び図３に示すように、締結具５６が軸５４から離れるように締結具５６を移動させておけば、第１本体５３を受容部６２に収容できる。さらに第１本体５３が受容部６２内に受容された後に、軸５４に近づくように締結具５６を回転（移動）させていけば、締結具５６は、図２〜図４（ａ）に示すように最終的には、その下面が受容部６２の上面６２_ｔを押し付けた状態で固定される。従って、以上の構成の接続手段５１，６１により、蓋体３０を容器本体２０に堅固に固定することができる。

また、締結具５６を回転させるときのグリップ性を向上させるために、把持部５６_ｇ（例えば、多数の縦溝）を締結具５６の外周面に形成してもよい。なお、第１構造５１や第２構造６１は、容器本体２０や蓋体３０に一体的に形成されていてもよいし、これらの構成要素２０，３０に別部材として取り付けられていてもよい。

なお、容器１の各構成部材の材質はチタンやステンレス等の金属や樹脂が考えられるが、量産性や軽量な点から樹脂（例えば、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル）が好ましく、容器１の内部状態の視認性向上の観点から透明又は半透明の樹脂がさらに好ましい。なお、医療分野においては、業務の効率化、感染防止の安全面、製造コスト等の観点から、医療器具等のディスポーザブル化（一回きりの使い捨て）が進んでおり、上記樹脂材料を採用することで本発明の容器１をディスポーザブル化に対応させることができる。

（搬送容器を用いた搬送方法）
次に、本発明の容器１を用いた搬送方法の一例を示す。搬送元の病院等の医療施設では、国等で認可を受けた培養手順に従いながらクリーンベンチ等の清潔な空間内で汎用シャーレを用いて細胞シート２を培養する。シャーレ下皿４０の底部内面４４ｉｓに付着した細胞シート２が所望の状態まで培養された後、シャーレの蓋（図示せず）を取り外し、下皿４０のみを容器本体２０の底部２２に載置する。次いで、容器本体２０の上側から蓋体３０を被せ、第１本体５３を軸５４回りに旋回して蓋体３０外周面の受容部６２に収容し、第１本体５３の他端にある締結具５６を回転させることによって蓋体３０を容器本体２０に固定させる。そして、蓋体３０の基部３１の中央に位置した入口３４から培養液３をさらに注入して、容器１内の内部空間を培養液３で完全に満たすことで、この内部空間から空気層や気泡を排除する。その後、閉鎖具３５（スクリューキャップ）で入口３４を閉栓する。これで、搬送元の施設での搬送準備が完了し、搬送元から搬送先まで公知の移動手段で容器１を移動する。なお、公知の移動手段として車や飛行機が挙げられ、本発明の容器１を宅配便等により国内外へ送ることも可能である。

搬送先で容器１を受け取ったオペレータは、閉鎖具３５を取り外し、入口３４等に図示しないスポイド等を挿入して大半の培養液３を容器の外へ排出（廃棄）する。また、締結具５６を緩めて、蓋体３０を容器本体２０から取り外して、露出したシャーレ下皿４０を容器本体２０から取り出す。本発明の容器１がディスポーザブルの場合、搬送中に外部環境に接触していた容器本体２０や蓋体３０をこの時点で廃棄する。容器１の再利用を望む場合には、容器１の各構成部材２０，３０に滅菌処理等を行う必要がある。

一方、シャーレ下皿４０は、搬送前はクリーンベンチ内の清潔空間に通常保管され、搬送中も本発明の容器１内に格納されているので、容器１の上記構成部材２０，３０に比べ清潔である。従って、搬送先で新たに用意した清潔なシャーレ蓋（図示せず）をシャーレ下皿４０に取り付ければ培養を再開することができる。あるいは、培養液３を上述のように廃棄して生理的食塩水などで細胞シート２を数回洗浄すれば、これを直ちに移植治療に適用できる。このように、搬送元のシャーレ下皿４０をそのまま有効に利用できるため、搬送先での簡便かつ迅速な細胞シート２の利用が可能となる。

（実施例１の変形例）
また、本発明の接続手段の構造も上記の好適な実施例１に限定されず、様々な接続構造が考えられる。例えば、上記実施例１の第１構造５１及び第２構造６１の対は４対に限定されない。例えば、少なくとも２対だけでも容器本体２０への蓋体３０の固定は可能である。もちろん、この対の数が多くなる程、堅固かつ周方向に均一な蓋体３０の固定が保証される。また、上記実施例１の第１構造５１及び第２構造６１の対を１対のみ容器１に設けた場合でも、容器本体２０と蓋体３０とを接続しつつ蓋体３０を開閉可能なヒンジ（図示せず）を容器１にさらに配設すれば、実施例１と同様に、シャーレ下皿４０を容器１内に格納して蓋体３０を容器本体２０に接続することができる。

また、これらの例に限らず、接続手段には、公知のクランプ構造や、蓋体３０を容器本体２０内にスライドしてロック可能な構造など様々な変形例が考えられる。

なお、上記実施例１では容器１に適用するシャーレとして丸形シャーレを前提とし、容器本体２０や蓋体３０は円形や円筒形を成していたが、この形状に限定されない。例えば、汎用性のあるシャーレには、角形シャーレやその他の形状のシャーレの使用も想定され、このような場合には、容器本体２０や蓋体３０は使用するシャーレに対応した形状（例えば、矩形や立方体）を有してもよい。

加えて、市販シャーレが丸形であっても、製造元が変わればその外形寸法が多少異なる場合があるため、容器本体２０の周壁部２３内側にあてがうことが可能なアダプター部材（図示せず）を用意してもよい。

また、容器本体２０の底部２２の一部に貫通穴（図示せず）を設け、貫通穴を覆うようにフィルム（図示せず）を当該貫通穴のいずれかの端面の外周に接着（例えば、ヒートシール）するようにしてもよい。このような構成により、搬送先で容器本体２０から蓋体３０をはずした際に、このフィルムを剥がして貫通穴から指等でシャーレ下皿４０を押し出すことができるようになるため、さらに、容器本体２０からのシャーレ下皿４０の取外しが容易になる。

次に、図５〜図８を参照しながら、実施例２の細胞シート搬送用容器１を例示する。実施例２の容器１は、実施例１で示した容器１の基本的な構成要素である容器本体２０と蓋体３０と備えている。しかしながら、実施例２の容器１では、後述するように、容器本体２０と蓋体３０とを接続及び一体化するための接続手段５１，６１や蓋体３０上の閉鎖具３５に関する具体的な構造が実施例１の構造と異なる。なお、図５〜図８に表記され、かつ、上述の実施例１と同様の符号を付されている構成要素は、実施例１において対応する構成要素と同様の役目を果たすため、ここではこれらの説明を省略する。

（実施例２の接続手段）
実施例２の容器１も、実施例１の容器１と同様に、容器本体２０の周壁部２３の外周面上には４つの第１構造５１が設けられている。実施例２の第１構造５１も、図５〜図７に示すように、周壁部２３の外周の長さを均等に分けるように配設されていることが好ましい。実施例２の第１構造５１は、一端に軸（図示せず）が設けられた第１本体５３を有する。なお、実施例２の第１本体５３は、全体的に板状を成す。実施例２の場合も、第１構造５１の各々には、互いに所定距離だけ離間しかつ周壁部２３から外側へ突出した一対の旋回支持部５２，５２が設けられる。第１本体５３の軸の端部はそれぞれ、旋回支持部５２，５２内に設けられた孔５２_ｈに回転自在に嵌め込まれる。これにより、旋回支持部５２，５２は、第１本体５３を回転自在に収容できるようになる。

一方、蓋体３０には、その周壁部３２の外周面上に受容部６２，６２を備えた第２構造６１が設けられている。第２構造６１は、実施例１のそれと同様に、蓋体３０を容器本体２０に固定しようとする際には、第１構造５１に対応した設置数と設置位置に配置されることになる。なお、実施例２の受容部６２，６２は、旋回支持部５２，５２の離間距離とほぼ同じ距離だけ互いに離れた２つの部材で構成されてもよい。

第１構造５１の第１本体５３の他端にはハンドル５７が設けられてもよい。操作者は自身の指でこのハンドル５７を摘まみながら、第１本体５３を軸回りに容易に旋回させることができるようになる。さらに、ハンドル５７の両側には凸部（例えば、円筒状凸部）５８，５８を設置し、一方、それぞれの受容部６２には、凸部５８，５８を収容するための切欠き部６３，６３と、一旦、切欠き部６３，６３に収容された凸部５８，５８が逃げないようにするための外れ止め部６４，６４が形成されてもよい。このような切欠き部６３，６３及び外れ止め部６４，６４を受容部６２，６２に設置することによって、これらの凸部５８，５８は、第１構造５１（つまり容器本体２０）を第２構造６１（つまり蓋体３０）に係合するためのフック部の役目を発揮することになる。

なお、上述の接続手段５１，６１の各構成部品は、軽量や成形性の観点から樹脂製であることが好ましいが、別の原材料で作られてもよい。

（実施例２の閉鎖具）
実施例２の閉鎖具３５は、図５に示すように、入口３４の内径に対応した寸法の外径を有しかつ円筒状を成す延長部３５_ｅと、延長部３５_ｅの外径より大きな外径を有した鍔部３５_ｆとを備える。このような構造により、閉鎖具３５は、延長部３５_ｅが蓋体３０の入口３４に内挿された状態で入口３４を閉鎖できる。つまり、容器１の搬送に必要な培養液３の量をさらに削減できる。

また、延長部３５_ｅは、図５及び図８に示すように、好ましくは、入口３４の深さに対応した長さを有する。また、この入口３４の内周面と延長部３５_ｅの外周面とには、互いに対応した構造を成す螺旋溝３４_ｓ，３５_ｓが形成されることが好ましい。なお、鍔部３５_ｆの外周には、グリップ性向上のための把持部３５_ｇが形成されることが好ましい。また、閉鎖具３５の内側には孔３５_ｈが形成されてもよく、これにより、原材料コストを抑制することができる。なお、上述の閉鎖具３５は、軽量や成形性の観点から樹脂製であることが好ましいが、ゴムその他の原材料で作られてもよい。

なお、実施例２の容器本体２０の周壁部２３は、肩部２３_ｓを境として上側部分２３_ｕと下側部分２３_ｄとを備え、かつ、下側部分２３_ｄは上側部分２３_ｕの外径よりやや小さな外径を有するように構成されていてもよい。これにより、下側部分２３_ｄの肉厚、ひいては容器本体２０の原材料コストを削減することが可能となる。

（性能確認試験）
本発明の実施例１に係る容器１の搬送性能を確認するために、次に述べる水漏れ確認試験と培養細胞を用いた搬送模擬試験とを行った。なお、今回の確認試験では、３Ｄプリンターによって作製された樹脂製の容器１を使用した。

（水漏れ確認試験）
シャーレ下皿４０を格納する容器本体２０の底部２２にティッシュペーパーを薄く敷き、その上にシャーレ下皿４０を置いた。さらに蓋体３０を置き、接続手段により蓋体３０を容器本体２０に固定して下皿４０を容器１内に格納した。次に、赤い色素（ケルンエヒト液）を含んだ蒸留水を容器１内（つまり、下皿４０の内面４４_ｉｓ，４２_ｉｓと蓋体３０の内面３１_ｉｓで区画された内部空間内、図４（ａ）を参照）に満たし、この空間から気泡を可及的に排出し、閉鎖具３５（スクリューキャップ）でこの内部空間を硬く締めた。

そして、容器１を垂直に立て懸け、その状態を４８時間ほど保持し、下皿４０内部からの水漏れの有無を観察した。具体的には、容器１内の色素を含んだ蒸留水を吸い出した後、底部２２に敷いたティッシュペーパーに色素付着の有無を確認した。その結果、ティッシュペーパーに色の付着は確認されず、下皿４０からの蒸留水の漏れは認められなかった。従って、蓋体３０の内面３１_ｉｓに設けられたシール材３３と下皿４０との密封性が確保されており、この容器１は水漏れ試験をパスしたものと判断できる。

（培養細胞を用いた搬送模擬試験）
ヒト骨膜シートの使用は倫理審査規定に抵触する恐れがあるため、市販のヒト骨肉腫細胞（Ｓａｏｓ−２）を分散状態でシャーレ内に培養した。このシャーレの下皿４０を上述のように搬送容器１内に格納し、室温（１６〜１８℃）で４８時間、振とう器にかけ、細胞の剥離や形態的変異に及ぼす影響を検討した。

図９（ａ）は、搬送容器１にシャーレ下皿４０を格納する前の細胞の様子を示したものである。細胞はラグビーボールようにその長径が比較的短い紡錘形を成し、細胞密度は３０〜４０％程度のコンフルエント状態であった。

４８時間後にシャーレ下皿４０を取り出して、細胞の様子を観察した。その様子を図９（ｂ）に示す。細胞密度は若干上がっていたが、４８時間の振とう後においても、細胞の基本的形態に変化は無いことが確認できた。また、剥離した細胞の数を比較しても、有意な増加は認められなかった。

蓋体３０を下皿４０から外し、通常のシャーレの蓋に付け替え、ＣＯ_２インキュベータ内に戻して、さらに２４時間培養した。この状態の観察結果を図９（ｃ）に示す。細胞は通常の増殖速度を取り戻しつつあり、細胞密度も上がる傾向にあった。

この試験結果と、容器１からの蒸留水の水漏れは認めなかった上記結果と、を考え合わせると、細胞への有害な影響は認められず、本発明の容器１は本発明の目的に合致した性能を実現していると評価できる。

上述したように、再生医療分野、特に歯周科、口腔外科、眼科、心臓外科などの分野で、細胞シートを適用した治療が注目されているが、医療施設から他の医療施設まで等の遠距離を安全かつ搬送準備の手間が掛らない搬送器具は存在していない。

これに対して、本発明の細胞シート搬送用容器は、上述の通り、搬送元のシャーレ下皿を有効に利用しながら清潔な状態で細胞シートを密封・格納できるものである。従って、本発明は、上記医療分野での細胞シートを利用した病院間連携の後押し、並びに、医療レベル格差の是正に寄与するものであり、産業上の利用価値は非常に高い。

１細胞シート搬送用容器
２細胞シート
３培養液
２０容器本体
２１容器本体の開口部
２２容器本体の底部
３０蓋体
３１蓋体の基部
３１_ｉｓ蓋体（の基部）の内面
３１_ｕｐ蓋体（の基部）の隆起部
３３シール材
３４入口
３５閉鎖具
４０シャーレの下皿
４２下皿の周壁部
４２_ｉｓ下皿の周壁部内面
４２_ｔ下皿の上端
４３下皿の開口部
４４下皿の底部
４４_ｉｓ下皿の底部内面
５１接続手段（の第１構造）
５２旋回支持部
５３第１本体
５４軸
５５規制手段
５６締結具
５７ハンドル
５８凸部
６１接続手段（の第２構造）
６２受容部
６３切欠き部
６４外れ止め部

Claims

シャーレ下皿を載置可能な底部と開口部とを備えた容器本体と、
前記開口部に載置され、前記開口部と前記下皿とに蓋をする蓋体と、
前記蓋体を前記容器本体に着脱自在に接続可能な接続手段と、
を備え、かつ、
前記蓋体内側には前記下皿の上端にその全周に亘って接触するシール材が設けられ、
前記蓋体の基部には、培養液を注入又は排出するための入口とこの入口を閉鎖するための閉鎖具とがさらに設けられ、かつ、
前記下皿を載置した前記容器本体に前記蓋体を接続した際に、前記下皿の内面と前記蓋体の内面とによって区画され、かつ、前記培養液と細胞シートとを充填可能な内部空間が形成され、かつ、
前記蓋体の前記基部には、頂点付近が前記入口に接続した中空円錐形又は中空角錐形の隆起部が形成されていることを特徴とする細胞シート搬送用容器。
前記容器本体と前記蓋体とが透明又は半透明の樹脂から作られていることを特徴とする請求項１に記載の細胞シート搬送用容器。
前記接続手段は、軸と、該軸に一部が接続しかつ該軸を中心に旋回可能な第１本体と、が設けられた第１構造と、
接続時に該第１本体を受けて該第１本体の他部を把持する受容部が設けられた第２構造と、を備え、かつ、
前記第１構造と前記第２構造とは前記容器本体又は前記蓋体の一方と他方とに設けられることを特徴とする請求項１又は２に記載の細胞シート搬送用容器。
前記第１本体の前記他部には、前記第１構造を前記第２構造に締結可能な締結具又は前記第１構造を前記第２構造に係合可能なフック部が設けられていることを特徴とする請求項３に記載の細胞シート搬送用容器。