JP6952973B2 - シート状生体組織の輸送用容器及びそれを用いた輸送方法 - Google Patents

Description

本発明は、シート状生体組織の輸送用容器に関する。また、本発明はシート状生体組織の輸送方法に関する。

近年、再生医療分野では、損傷や疾患を有する臓器や組織を再生させる方法が模索されている。これらの臓器や組織に対し、治療物質を直接貼付することにより、その臓器や組織の再生を促進する試みが行われている。再生医療技術の１つとして、温度応答性高分子を被覆した培養皿を用い、治療物質として細胞をシート状に回収する技術が開発されており、それを患部に貼付する治療法が試みられている（特許文献１〜３）。この技術により、シート状の培養細胞を移植することが可能となった。

従来、こうしたシート状の培養細胞を患部に移植する場合、培養細胞が付着した培養皿を１枚１枚移植現場に輸送し、移植直前にシート状の培養細胞として回収する必要があった。また、移植する細胞数を増やすために、シート状の培養細胞を積層する必要がある場合、現場で積層処理を行う必要があった。しかし、移植現場で積層化する工程は、（１）時間がかかる、（２）熟練した技術が必要、（３）無菌状態を維持しながらの処理が困難であるなど、多くの課題を抱えていた。

そのため、移植現場ではなく、無菌状態が保たれた施設において、熟練した技術を有する技術者によってシート状の培養細胞を作製し、それを移植現場に輸送する方法が考案された。この方法に用いる輸送用容器が開発され、例えば、特許文献４〜６に開示されている。

特開平０２−２１１８６５号公報 特開平０５−１９２１３８号公報 国際公開第２００２／００８３８７号 特開２００２−３３５９５０号公報 特開２００７−１１９０３３号公報 特開２００４−１８７５１８号公報

従来のシート状生体組織を輸送する容器は、その使用に際して、培養組織の代謝を妨げて生物学的活性を損なうこと、物理的な振動によりシート状生体組織が破損すること、運搬中の振動によって保存液が液漏れすること、航空輸送中に低い気圧にさらされることによって、保存液が発泡すること等の課題を有していた。例えば、特許文献４及び５に開示される容器は、培養組織を支持部材で挟んで保持する方式なので、細胞の代謝を妨げ、長時間の保存輸送に培養組織が耐えられない。特許文献６に開示される容器は、必ずしも、支持部材で包む構成にしていないが、やはり、トレイとリッド間の狭い空間に培養組織を封止するため、代謝が妨げられ、長時間の保存輸送に培養組織が耐えられないという問題点がある。特に、培養組織が代謝に伴って発生する二酸化炭素などのガスを除去できず、また、代謝に必要な酸素などのガスを供給できないために、代謝が妨げられる。
本発明は、このような課題を解決することを目的とする。

本発明は上記課題を解決するものである。すなわち、本発明は、例えば、以下の構成・特徴を有するものである。

［１］ シート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器であって、
本体下部底部及び本体下部側部により、前記シート状生体組織及び保存液を収容する収容空間が形成された本体下部と、
前記本体下部側部の上部に載置されて前記収容空間を封止し、少なくとも１つのエアホールを有する本体上部と、
前記エアホールを封止する、ガス透過性の封止部材と、
を含み、
ここで、前記本体下部底部の少なくとも一部に下部凸部を備え、
ここで、前記本体上部の本体上部内面の少なくとも一部に上部凸部を備え、
前記本体下部と前記本体上部とが組み合わせられた場合、前記下部凸部と前記上部凸部との間隙が、前記シート状生体組織を前記収容空間内の所定の空間に保持することができる、容器。
［２］ 前記下部凸部が、少なくとも１つの下部溝を備える、［１］に記載の容器。
［３］ 前記上部凸部が、少なくとも１つの上部溝を備える、［１］又は［２］に記載の容器。
［４］ 前記本体上部内面が、前記エアホールに向かうスロープを有する、［１］〜［３］のいずれか１項に記載の容器。
［５］ 前記封止部材が、液体非透過性のシーリングフィルムである、［１］〜［４］のいずれか１項に記載の容器。
［６］ 前記シート状生体組織が、さらに支持体を含む、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の容器。
［７］ 前記支持体が、前記シート状生体組織の周辺領域のみを支持する形状である、［６］に記載の容器。
［８］ 前記本体上部及び／又は前記本体下部が、鍔部を備える、［１］〜［６］のいずれか１項に記載の容器。

［９］ シート状生体組織の保存及び／又は輸送する方法であって、
（１）［１］〜［８］のいずれか１項に記載の容器を構成する本体下部の下部凸部に、シート状生体組織を載置し、
（２）前記本体下部に本体上部を適用し、
（３）前記エアホールから保存液を充填して気体を排除し、
（４）前記エアホールを封止部材で塞ぎ、
（５）前記シート状生体組織を載置した前記容器を保存及び／又は輸送すること、
を含む、方法。
［１０］
前記シート状生体組織が、支持体を含む、［９］に記載の方法。

本発明の容器及びその容器を用いた方法によれば、シート状生体組織の保管及び輸送に際して、振動によるシート状生体組織の破損や容器からの液漏れを防止することが可能となる。また、当該シート状生体組織の品質を保ちつつ保存及び／又は輸送することが可能となり、その結果、手術等の現場で迅速・簡便かつ確実に使用可能なシート状生体組織を提供することが可能となる。

本発明の容器を示す平面図である。 本発明の容器を示す正面図である。 本発明の容器を構成する本体下部を示す平面図である。 本発明の容器を構成する本体下部を示す斜視図である。 本発明の容器を構成する本体下部を示す正面図である。 本発明の容器を構成する本体下部を示す正面図である。 本発明の容器を構成する本体上部を示す底面図である。 本発明の容器を構成する本体上部を示す斜視図である。 本発明の容器を構成する本体上部を示す正面図である。 本発明の容器の使用例を示す模式図である。 本発明の容器の使用例を示す模式図である。 本発明の容器の使用例を示す模式図（断面）である。 本発明の容器の使用例を示す模式図（断面）である。 本発明の容器を構成する本体下部を示す平面図である（変形例）。 本発明の容器を示す図である（変形例）。 本発明の容器を示す図である（変形例）。

以下、図面を参照して本発明の実施形態について説明する。実施形態の構成は例示であり、本発明の構成は、以下の実施形態の具体的な構成に限定されない。

（シート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器の構成例）
図１Ａ（平面図）及び図１Ｂ（正面図）は、本発明の一実施形態におけるシート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器（単に、「容器１」ともいう）の構成例を示す図である。容器１は、後述のシート状生体組織５（図４Ａ〜Ｃ参照）を収容するための本体下部２と、本体下部２を覆い、本体下部２の収容空間Ｓ（図２Ａ及びＢを参照）を封止するための蓋体としての本体上部３と、本体上部３に設けられたエアホール３５を封止するための封止部材６とを含む。本体下部２及び本体上部３の材質としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ナイロン、ポリウレタン、ポリウレア、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリ（メタ）アクリル酸誘導体、ポリアクリロニトリル、ポリ（メタ）アクリルアミド、ポリ（メタ）アクリルアミド誘導体、ポリスルホン、ポリカーボネート、セルロース、セルロース誘導体、ポリシリコーン、ガラス、セラミック、金属などが挙げられる。

本発明の容器及びそれを用いた方法により保存及び／又は輸送する「シート状生体組織」は、極めて薄い組織であり、支持体に付着していない状態では収縮してしまい、取り扱いが難しい。また、シート状生体組織を保存液中を浮遊させている状態においては、自身が有する接着成分が原因で凝集してしまうという課題がある。そのため、シート状生体組織を移動させる場合は、「支持体」に付着した状態で取扱う。なお、「シート状生体組織」の種類によっては、非常に厚くてある程度の剛性を持ったものもあるため、「支持体」を必要とせずに取り扱い可能なものも存在するが、以下の実施態様では「支持体」に付着させた「シート状生体組織」を収容する例について説明する。

（本体下部の構成例）
図２Ａ〜Ｄは、本発明の一実施形態における容器１を構成する本体下部２の構成例を示す。本実施態様において、本体下部２は、本体下部底部２１と、本体下部底部２１に設けられた中空円筒型状の本体下部側部２２を備える。本体下部底部２１及び本体下部側部２２により、シート状生体組織５及び保存液７（図４Ｄ参照）を収容する収容空間Ｓが形成される。本体下部底部２１の少なくとも一部には、シート状生体組織５の周辺領域の一部を載置して（図４Ａ〜Ｃ参照）、シート状生体組織５を本体下部底部２１から離間するための下部凸部２３を備える。

本実施態様において、下部凸部２３は、本体下部底部２１の円周に沿い、かつ、側部内壁面２２ａと接して配置されている。隣接した下部凸部２３同士の間には下部溝２３ｂが設けられている。下部溝２３ｂが設けられていることにより、ピンセット等の治具を差し込むことができる。これにより、使用時にシート状生体組織５を本体下部２から容易に取り出すことができる。

下部凸部２３は、本実施態様のように、一定間隔の下部溝２３ｂを設けて複数備えられても良く、下部溝２３ｂを設けずに中空円筒型（ドーナッツ形状）としても良い（図示せず）。下部溝２３ｂは、下部チャンバ２８と上部チャンバ３８を交通させることによって、下部チャンバ２８内の保存液中に拡散した代謝ガスを上部チャンバ３８に逃がし、また、上部チャンバ３８内
の酸素を下部チャンバ２８に導く作用があり、１つ以上設けることが好ましい。また、下部溝２３ｂを備えることにより、使用時にピンセット等の治具によりシート状生体組織５を取り出しやすくなるという効果も有する。

一実施形態において、複数の下部凸部２３が設けられている場合、下部凸部２３は後述の上部凸部３３の直下に配置されてもよく、上部溝３３ｂの直下に配置されてもよい（例えば、図４Ｃ及びＤの断面図を参照）。他の実施態様において、本体下部２の下部凸部２３は、下部溝２３ｂを備えない中空円筒型であってもよい（図示しない）。

下部凸部２３において、シート状生体組織５を載置する面（「載置面２３ａ」という）は、同一平面上にあることが好ましい。これにより、下部凸部２３に載置したシート状生体組織５を平らに保つことができる。また、下部凸部２３の垂直方向の高さは、シート状生体組織５の厚さ及び／又は上部凸部３３（図３Ａ及びＢ参照）の形状、大きさ、若しくは配置との関係で決定される。下部凸部２３の形状及び載置面２３ａの形状は、シート状生体組織５を本体下部底部２１から離間し、平らに保つ形状であれば限定されない。下部凸部２３の形状の例としては、円柱形状、円錐台形状、角柱形状等が挙げられる。また、下部凸部２３の形状は、中空円筒形状、中空角柱形状であってもよい。載置面２３ａが大きいほど、シート状生体組織５を安定的に平面に保つ効果は高くなる。

本体下部底部２１における下部凸部２３の配置は、容器１の形状及び所望のシート状生体組織５の形状との関係によっても決定される。例えば、本実施態様のような略円形のシート状生体組織５を収容する場合、シート状生体組織５の周辺領域、例えば、シート状生体組織５の円周周辺を支持する位置に配置される。例えば、シート状生体組織５が多角形（三角形、四角形、五角形、六角形等）である場合、各角及び各辺を支持する位置に配置される（図５Ａ及びＢ参照）。これにより、シート状生体組織５を本体下部底部２１から離間することができ、輸送時に生じる振動によってシート状生体組織５が損傷することを減少させることができる。

本発明の一実施形態において、本体下部側部２２の側部外壁面２２ｂは、Ｏリング２６を備えても良い。Ｏリング２６は、側部外壁面２２ｂに設けられたＯリング溝２２ｃに取り付けられる。Ｏリング２６があることにより、本体上部３を本体下部２へ嵌着した場合、側部外壁面２２ｂと本体上部側部内壁面３２ａ（図３Ｂ参照）との間から流体及び／又は気体が流出入することを防止することができる。Ｏリング２６は、本体下部２と本体上部３との間の空間を封止する部材であれば限定されない。Ｏリング２６の材料として、例えば、ニトリルゴム、シリコーンゴム、フッ素ゴム、ウレタンゴム、ブチルゴム、ポリテトラフロオロエチレン、金属等を用いることができる。同一の効果が得られるＯリングであれば、上記に限定されない。

本発明の別の実施態様において、容器１は、Ｏリング２６に替えて、例えば、側部外壁面２２ｂに雄ねじ構造を備え、かつ、本体上部側部内壁面３２ａに雌ねじ構造を備えてもよい（図示しない）。本体上部３を本体下部２に螺着することにより、側部外壁面２２ｂと本体上部側部内壁面３２ａとの間から流体及び／又は気体が流出入することを防止できる。

本発明の実施態様において、本体下部２は本体下部底部２１の外縁に本体下部鍔部２７を備えている。本体下部鍔部２７は、本体下部底部２１の面積よりも大きく、本体下部２を水平に保つことに役立つ。本体下部鍔部２７は必須ではないが、容器１が比較的小さい場合、例えば、市販される３５ｍｍ培養皿の直径よりも小さい場合に、本体下部鍔部２７を有することにより容器１が転倒することを予防できる。本体下部鍔部２７の大きさ、形状は目的に応じて適宜変形してもよく、本実施態様に限定されない。

（本体上部の構成例）
図３Ａ〜Ｃは、本発明の一実施形態における容器１を構成する本体上部３の構成例を示す。図３Ａは、本体上部３を本体下部２側から見た底面図である。図３Ｂは、本体上部３の斜視図である。図３Ｃは本体上部３を側面から見た側面図であり、図面の下側が本体下部２に適用される側である。本体上部３は、シート状生体組織５が付着した支持体４が振動などで大きく動かないよう、可動範囲を制限する作用を持つ。また、本体上部３が備えるエアスロープ３７とエアホール３５を使って気体を抜く操作を行えるようにする。

本実施形態において、本体上部３は、エアホール３５を有する本体上部天井部３１と、本体上部天井部３１に設けられた本体上部側部３２を備える。本体上部３は、本体下部２の本体下部側部２２の上部に載置され、封止部材６（図１Ａ及びＢ、図４Ｄ参照）と組み合わせることで収容空間Ｓを封止する。収容空間Ｓは、支持体４に支持されたシート状生体組織５によって、上部チャンバ３８と下部チャンバ２８とに分割される（図４Ｄ参照）。エアホール３５からは、収容空間Ｓへ保存液７を充填することができる。また、エアホール３５から保存液７を充填することにより、収容空間Ｓに残存する気体を排除することができる。エアホール３５は、着脱可能な封止部材６によって封鎖される。封止部材６として、栓型、キャップ型、フィルム型などの封止部材６を用いることができるが、ガス透過性の機能を有することが好ましい。栓型の封止部材６としては、例えば、天然ゴム栓、ニトリルゴム栓、シリコーンゴム栓、フッ素ゴム栓、ブチルゴム栓、ウレタン栓、シリコーン樹脂製栓（例えば、シリコセン（登録商標）、バイオシリコ（登録商標））などを用いることができる。栓型の封止部材６として好ましくは、ガス透過性を有するウレタン栓又はシリコーン樹脂栓である。ガス透過性を有する封止部材６を用いることにより、呼吸が必要な材料（例えば、細胞、生体組織）を含むシート状生体組織５であっても、呼吸に必要なガス交換を維持することができる。キャップ型の封止部材６の例としては、例えば、シリコーン樹脂製のキャップ、ポリプロピレン製のキャップが挙げられる。フィルム型の封止部材６としては、ガス透過性及び液体非透過性のシーリングフィルム、例えばポリプロピレンフィルム、レーヨンフィルム、ポリウレタンフィルム等を用いることが可能である。市販されるフィルム型の封止部材６の例としては、Ｐｌａｔｅ Ｓｅａｌ ＡｅｒａＳｅａｌ（商標）（ＥＸＣＥＬ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、ＣＡ、米国）、ブリーズイージー（トーホー社、東京、日本）、Ｂｒｅａｔｈａｂｌｅ Ｆｉｌｍ（コーニング社、ＮＹ、米国）などが挙げられる。材質は上記例に限らないが、エアホール３５から流体が漏れることを防止でき、かつ、ガス透過性であって、細菌、ウイルスなどを通さないものであれば限定されない。収容空間Ｓが封止部材６によって封止された場合であっても、本体上部３に設けられたエアホール３５及びガス透過性の封止部材６を介し、収容されたシート状生体組織の生存に必要な酸素が容器１の外から継続的に保存液に供給される。また、容器１に収容されたシート状生体組織の代謝により生じた代謝ガスも、エアホール３５及びガス透過性の封止部材６を介して容器１の外に排出される。

また、開封する際には、容器１の本体上部３にエアホール３５が設けられ、かつ、封止部材６が備えられていることにより、本体上部３を本体下部２から取り外す前に封止部材６を取り外すことができる。これにより、エアホール３５から収容空間Ｓに空気が流入し、容器１の内外の気圧差が無くなる。その結果、シート状生体組織が保存液の激しい流れによって破損することなく、容易かつ安全に本体上部３を取り外すことが可能となる。

本体上部３に備えるエアホール３５は１つであってもよく、２つ以上備えていても良い。エアホール３５を複数備える場合、封止部材６は、全てのエアホール３５を封止できる個数備える必要がある。封止部材６が、例えばフィルム型である場合、１枚のフィルム型の封止部材６で全てのエアホール３５を封止してもよい。

本体上部内面３１ａには、シート状生体組織５が本体上部内面３１ａに接触することを防止する上部凸部３３を備えている。一実施態様において、上部凸部３３の形状は、側面の一部が複数欠損した部分（図３Ａ及びＢの「上部溝３３ｂ」として示される）を有する中空円筒型である。上部溝３３ｂは、下部チャンバ２８と上部チャンバ３８を交通させることによって、下部チャンバ２８内の保存液中に溶けて拡散した代謝ガスを上部チャンバ３８に拡散させることで逃がし、また、上部チャンバ３８内の保存液に溶けている酸素を下部チャンバ２８に拡散させる作用をもつ。他の実施態様では、上部溝３３ｂを備えない中空円筒型の上部凸部３３であってもよい（図示しない）。

上部凸部３３の配置は、容器１の形状及び所望のシート状生体組織５の形状に依存して決定される。例えば、本実施態様のように略円形のシート状生体組織５を収容する場合、上部凸部３３は、シート状生体組織５の周辺領域、例えば、シート状生体組織５の円周の内側上に配置されるように設けられる。

本体上部３を脱着する場合にシート状生体組織５が本体上部内面３１ａに張り付くこと及び輸送時の振動による損傷を防止するために、上部凸部３３の先端面（上部凸部下面３３ａ）の表面積は小さい方が好ましい。特に好ましくは、上部凸部３３は、載置面２３ａより小さい面積の上部凸部下面３３ａを備える。上部凸部下面３３ａは、同一平面にあることが好ましい。上部凸部３３の形状及び上部凸部下面３３ａの形状は、シート状生体組織５が本体上部内面３１ａに張り付くこと及び輸送時の振動による損傷を防止できる形状であれば限定されない。例えば、上部凸部３３の形状は、円柱形状、円錐台形状、角柱形状等が挙げられる。

一実施態様において、本体上部内面３１ａは、エアホール３５に向かって勾配を有することが好ましい（図４Ｃ及びＤの「エアスロープ３７」）。これにより、容器１に保存液７を満たす際に、容器１の内部（収容空間Ｓ）に含まれる気体（気泡）がエアホール３５に向かって誘導されやすくなる。容器１の内部に含まれる気体が減少することにより、気泡がシート状生体組織５を損傷する機会を減らす。エアスロープ３７は、円錐形であってもよく、角錐形であってもよい。他の実施形態において、エアホール３５は、さらに、エアホール３５と連通する中空円筒形又は中空角柱形などの開口部を有してもよい（図示しない）。

一実施形態において、本体上部３は本体上部鍔部３６を有していてもよい。本体上部鍔部３６は本体上部３の本体下部２への着脱を容易にする。本体上部鍔部３６は、本体上部３の着脱を容易にする形状であれば、限定されない。

一実施形態において、本体上部３は、本体上部３を本体下部２の適切な位置に固定するためのキー３４を有している。本実施形態においては、キー３４は、上部凸部３３と一体となって形成されている。キー３４は、本体下部２のキー溝２４に嵌まり、本体上部３を適切な位置に固定する。また、キー３４がキー溝２４に嵌まることにより、本体上部３が本体下部２に対して回転することを防止する。キー３４とキー溝２４は、本体上部３が回転しない形状であればよく、その形状及び配置は限定されない。

（シート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器の使用時の構成例）
図４Ａ〜Ｄは、本発明の容器１の使用時の構成例を示す。本体下部２の下部凸部２３にシート状生体組織５を載置し、本体下部２に本体上部３を適用する（図４Ａ及びＢ参照）。その後、本体上部３のエアホール３５から保存液７を充填する。この時、エアスロープを有することにより、気泡９がエアホール３５へ移動し、容器１から排除される（図４Ｃ参照）。その後、エアホール３５を封止部材６で塞ぐ（図４Ｄ参照）。これにより、シート状生体組織５を載置した容器１を保存及び／又は輸送することが可能となる。

一実施形態においては、支持体４に密着させたシート状生体組織５を使用する。例えば、収容するシート状生体組織５が、細胞を培養して得られたシート状の細胞群（「細胞シート」という）である場合、培養基材から剥離した細胞シートは収縮してしまい、容器１への使用には適さない。従って、本実施形態においては、細胞シートは支持体４とともに使用することが好ましい。本実施態様において使用される支持体４は、保存液と細胞が代謝によって発生するガス及び細胞が代謝に要するガス通すものが好ましい（例えば、メッシュ構造を有する）。円形の支持体の内側領域を同心円状に欠損させた形状であってもよい。欠損部によって細胞シートが保存液に直接ふれることで代謝を妨げない効果がある。この場合、細胞シートと密着させた時に、細胞シートの辺縁部分が支持され、細胞シート内側部分は支持されない。これにより、細胞シートは収縮することなく、シート形状を維持することができる。患部に適用する場合は、支持体４部分を挟持し、支持体４が存在しない細胞シートの内側部分を貼付して使用することができる。支持体４の形状は、シート状生体組織５の形状によって決定されるため、特に限定されない。他の実施形態においては、支持体４は、その内側領域を欠損させていないものであってもよい。

支持体４に密着させた細胞シートを本実施態様の容器１に適用する場合、支持体４により支持された細胞シートの辺縁部分が下部凸部２３に載せられる（図４Ｂ参照）。これにより、シート状生体組織５を本体下部底部２１から離間することができる。

本発明において、本体下部２に本体上部３を嵌め合わせた場合、容器１は、載置面２３ａと上部凸部下面３３ａとが形成する間隙ｈを備える（図４Ｄ参照）。間隙ｈを有することにより、シート状生体組織５は、間隙ｈの空間を浮遊することとなり、所定の空間に保持される。すなわち、本体下部２と本体上部３とが組み合わせられた場合、下部凸部２３と上部凸部３３との間隙ｈが、シート状生体組織５を収容空間Ｓ内の所定の空間に保持することができる。従って、容器１を輸送する際に生じる振動が直接シート状生体組織５に伝わらず、損傷が防止される。間隙ｈは、収容するシート状生体組織５の厚さ又はシート状生体組織を密着させた支持体４の厚さ（総称して、「シート状生体組織の厚さ」という）に依存して決定される。図４Ｄに示されるように、シート状生体組織の厚さは、シート状生体組織５を支持体４に巻き付けた状態の厚さも含まれるものであり、当該シート状生体組織の最も厚い部分の厚さをいう。間隙ｈは、シート状生体組織の厚さ＋０．１ｍｍ〜５．０ｍｍが好ましく、シート状生体組織の厚さ＋０．２ｍｍ〜３．０ｍｍがより好ましく、シート状生体組織の厚さ＋０．３ｍｍ〜２．５ｍｍであることがより好ましい。間隙ｈの距離が所望の距離を有するように、下部凸部２３及び上部凸部３３の垂直方向の高さを決定することができる。

（容器の構成例（改変例１））
図５Ａは、本発明の一実施形態における容器の改変例（本体下部１０２）を示す。本体下部１０２は、シート状生体組織５が長方形である場合に使用できる。本実施態様において、本体下部１０２は、長方形の本体下部底部１２１と、本体下部底部１２１に設けられた中空直方体形の本体下部側部１２２を備える。本体下部底部１２１の少なくとも一部には、シート状生体組織５の周辺領域の一部を載置して、シート状生体組織５を本体下部底部１２１から離間させるための下部凸部１２３を備える。

本実施態様において、下部凸部１２３は、本体下部底部１２１、かつ、本体下部側部１２２の内壁面と接して配置されている。隣接した下部凸部１２３同士の間には下部溝１２３ｂが設けられている。下部溝１２３ｂが設けられていることにより、ピンセット等の治具を差し込むことができる。これにより、使用時にシート状生体組織５を本体下部１０２から容易に取り出すことができる。

下部凸部１２３は、本実施態様のように、一定間隔の下部溝１２３ｂを有して複数備えられても良く、下部溝１２３ｂを有さずに中空円柱形として設けられても良い（図示せず）。上述のように、使用時にシート状生体組織５を取り出しやすいように、少なくとも１つの下部溝１２３ｂを備えていることが好ましい。下部溝１２３ｂの形状は、使用時に治具等によりシート状生体組織５を取り出すことができれば、形状、大きさは特に限定されない。

本実施態様の本体下部１０２に適用される本体上部は、前述の本体上部３の思想を逸脱することなく、本体下部１０２に適用可能な形状のものを採用することができる（図示せず）。

（容器の構成例（改変例２））
図５Ｂは、本発明の一実施形態における容器の改変例（容器２０１）を示す。本体下部２０２は、六角形の本体下部底部２２１と、本体下部底部２２１に設けられた中空六角柱の本体下部側部２２２を備える。本体下部底部２２１の少なくとも一部には、シート状生体組織５の周辺領域の一部を載置して、シート状生体組織５を本体下部底部２２１から離間させるための下部凸部２２３を備える。本実施形態において、下部凸部２２３は、六角形の本体下部底部２２１の各辺の一部と平行になるように設けられている。

本実施態様において、下部凸部２２３は、本体下部底部２２１、かつ、本体下部側部２２２の内壁面と接して配置されている。隣接した下部凸部２２３同士の間には下部溝２２３ｂが設けられている。

下部凸部２２３は、本実施態様のように、一定間隔の下部溝１２３ｂを有して複数備えられても良く、下部溝２２３ｂを有さずに中空六角柱として設けられても良い（図示せず）。上述のように、使用時にシート状生体組織５を取り出しやすいように、少なくとも１つの下部溝２２３ｂを備えていることが好ましい。

本実施態様の本体下部２０２に適用される本体上部２０３は、エアホール２３５と、上部凸部２３３とを備えている。本実施形態において、上部凸部２３３は、本体下部側部２２と嵌め合わされるように、本体下部側部の内壁面より小さい中空六角柱構造を有している。上部凸部２３３の一部には、六角柱の側面が一部欠損した上部溝２３３ｂ構造を有している。本体下部２０２に本体上部２０３を嵌め合わせた時、上部凸部２３３と下部凸部２２３が空間的に互い違いになる。この構造により、シート状生体組織５（図示せず）を収容した場合に下部チャンバ（図示せず）と上部チャンバ（図示せず）を効率よく交通させることが可能となり、下部チャンバ内の保存液中に溶けて拡散した代謝ガスを上部チャンバ３８に拡散させることで逃がし、また、上部チャンバ内の保存液に溶けている酸素を下部チャンバに拡散させる作用をもつ。

（容器の構成例（改変例３））
図６は、本発明の一実施形態における容器の改変例（容器３０１）を示す。容器３０１は本体下部３０２と本体上部３０３を備えており、基本的な構造は上述の通りである。本体下部３０２は、さらに、脚部３０４を複数備えている。脚部３０４は、本体下部３０２が載置された場合に平行に保たれるように、３つ以上備えられていることが好ましい。本実施形態において、本体上部３０３の本体上部上面３３１ｂには、脚部３０４を挿入可能な脚挿入部３０５を備える。脚部３０４を脚挿入部３０５に挿入することにより、容器３０１を積み上げることができる。これにより、少ない空間でより多くのシート状生体組織を運搬可能になる。脚部３０４の長さ及び脚挿入部３０５の深さは、本体上部天井部３３１の厚さを超えない程度であれば限定されない。

本実施形態において、本体上部３０３の本体上部上面３３１ｂには、封止部材６（図示せず）を貼付するための封止部材貼付部３０６を備えている。封止部材貼付部３０６は、本体上部上面３３１ｂの平面より窪んでいるため、封止部材６を貼付した場合に封止部材６の厚みによる凹凸が形成されることが防止され、運搬中に剥がれることが防止される。封止部材貼付部３０６の一部には、貼付した封止部材６を剥がしやすいように封止部材剥がし部３０６ａを備えている。

本実施形態において、本体上部３０３の本体上部上面３３１ｂには、ラベルを貼付するためのラベル貼付部３０７を備えている。ラベル貼付部３０７は、本体上部上面３３１ｂの平面より窪んでいるため、ラベル（図示せず）を貼付した場合にラベルの厚みによる凹凸が形成されることが防止され、運搬中に剥がれることが防止される。ラベル貼付部３０７には、例えば、容器３０１内に封入されたシート状生体組織を識別する情報を含んでいる。ラベルは、バーコード、マトリックス型二次元コード、ＲＦＩＤタグなど、公知のものを使用することができる。容器３０１にラベルが貼付されることにより、大量の容器３０１を運搬する場合であっても取り間違いを防止することが可能となる。

（シート状生体組織）
本明細書において、「シート状生体組織」とは、生体から採取した生体組織や細胞を含む薄膜状の組織をいう。シート状生体組織は、生体から採取したシート状生体組織（例えば皮膚組織、上皮組織、粘膜組織、筋膜、硬膜、骨膜など）や、生体から採取した組織をシート状に加工した生体組織であってもよい。本発明の容器１は、特に、生体から採取した脆弱なシート状組織又は脆弱な細胞シートの保存及び／又は輸送に優れた効果を発揮する。

本明細書において、「細胞シート」とは、複数の任意の細胞を含む細胞群を細胞培養基材上で培養し、細胞培養基材上から剥離することで得られる１層又は複数層のシート状の細胞群をいう。細胞シートを得る方法としては、例えば、温度、ｐＨ、光等の刺激によって分子構造が変化する高分子を被覆した刺激応答性培養基材上で細胞を培養し、温度、ｐＨ、光等の刺激の条件を変えて刺激応答性培養基材表面を変化させることで、細胞同士の接着状態は維持しつつ、刺激応答性培養基材から細胞をシート状に剥離する方法や、任意の培養基材上で細胞培養し、物理的にピンセット等により剥離して得る方法等が挙げられる。細胞シートを得るための刺激応答性培養基材としては、０〜８０℃の温度範囲で水和力が変化するポリマーを表面に被覆した温度応答性培養基材が知られている。温度応答性培養基材上で、ポリマーの水和力が弱い温度域で細胞を培養し、その後、培養液をポリマーの水和力が強い状態となる温度に変化させることで細胞をシート状に剥離して回収することができる。

細胞シートを得るために用いられる温度応答性培養基材は、細胞が培養可能な温度域でその表面の水和力を変化させる基材であることが好ましい。その温度域は、一般に細胞を培養する温度、例えば３３℃〜４０℃であることが好ましい。細胞シートを得るために用いられる培養基材に被覆される温度応答性高分子は、ホモポリマー、コポリマーのいずれであってもよい。このような高分子としては、例えば、特開平２−２１１８６５号公報に記載されているポリマーが挙げられる。

刺激応答性高分子、特に温度応答性高分子としてポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）を用いた場合を例（温度応答性培養皿）に説明する。ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）は３１℃に下限臨界溶解温度を有するポリマーとして知られ、遊離状態であれば、水中で３１℃以上の温度で脱水和を起こしポリマー鎖が凝集して白濁する。逆に３１℃未満の温度ではポリマー鎖は水和し、水に溶解した状態となる。本発明では、このポリマーがシャーレなどの基材表面に被覆されて固定されたものである。したがって、３１℃以上の温度であれば、培養基材表面のポリマーも同じように脱水和するが、ポリマー鎖が培養基材表面に固定されているため、培養基材表面が疎水性を示すようになる。逆に、３１℃未満の温度では、培養基材表面のポリマーは水和するが、ポリマー鎖が培養基材表面に被覆されているため、培養基材表面が親水性を示すようになる。このときの疎水的な表面は細胞が付着し、増殖できる適度な表面であり、また、親水的な表面は細胞が付着できない表面となる。そのため、該基材を３１℃未満に冷却すると、細胞が基材表面から剥離する。細胞が培養面一面にコンフルエントになるまで培養されていれば、該基材を３１℃未満に冷却することによって細胞シートを回収できる。温度応答性培養基材は、同一の効果を有するものであれば限定されるものではないが、例えば、セルシード社（東京、日本）が市販するＵｐＣｅｌｌ（登録商標）などが挙げられる。

本発明で保存及び／又は輸送する細胞シートは、複数枚の細胞シートを積層した細胞シート（積層化細胞シート）を用いても良い。積層化細胞シートを作製する方法としては、ピペット等によって培養液中に浮かんでいる細胞シートを培養液ごと吸い取り、別の培養皿の細胞シート上に放出して液流によって積層する方法や、細胞移動治具を用いて積層する方法等が挙げられる。その他、公知の方法によって積層化細胞シートが得られる。

一実施形態において、シート状生体組織を密着させる支持体４としては、例えば、ポリビニリデンジフルオライド（ＰＶＤＦ）、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、シリコーン樹脂、ポリビニルアルコール、ウレタン、セルロース及びその誘導体、キチン、キトサン、コラーゲン、ゼラチン、フィブリンゲル、金属等を用いることができる。支持体４は、膜状、不織布状、織布状、又はメッシュ状で使用される。本発明の実施形態では、支持体４はシート状生体組織の性質を変えることなく、その損傷を防止するものであれば、上記に限定されない。

シート状生体組織５を支持体４に密着させる方法としては、特に限定されるものではないが、支持体４からはみ出した部分のシート状生体組織５を折り曲げてひっかける方法（例えば、図４Ｃ及びＤを参照）、生体適合性の接着成分（例えば、フィブリンゲル）を用いて支持体４に接着させる方法、シート状生体組織が分泌する細胞外マトリクスによって支持体４に接着させる方法などが挙げられる。

（シート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器の使用方法）
本発明の容器１は、シート状生体組織の保存及び／又は輸送する方法に用いられる。一実施形態において、当該方法は、
（１）容器を構成する本体下部２の下部凸部２３に、シート状生体組織５を載置し、
（２）本体下部２に本体上部３を適用し、
（３）本体上部３のエアホール３５から保存液７を充填して、エアスロープ３７に沿って気体を上昇させて、気体を排除し、
（４）エアホール３５を封止部材６で塞ぎ、
（５）シート状生体組織５を載置した容器１を、を保存及び／又は輸送すること、
を含む方法である。

一実施形態において、該方法は、さらに、
（６）シート状生体組織５を載置した１以上の容器１を、エアタイトな二次容器に収納し、保存及び／又は輸送すること、を含む。エアタイトな二次容器とは、当該二次容器の内外で空気の流出入しない容器を指す。当該に二次容器には、数百ｍＬ程度の空気及び／又は酸素が含まれる。本発明の容器に収容されたシート状生体組織は、この空気を使用して代謝することが可能となる。当該二次容器には、本発明の容器と共にＣＯ_２吸収剤を収容してもよい。また、当該二次容器には、本発明の容器の輸送時の衝撃を吸収するための緩衝材も同梱される。

一実施形態において、該方法は、さらに、
（７）１以上の該二次容器を、エアタイトでかつ断熱性をもつ三次容器に収納して、４℃〜４０℃程度の一定温度に保つこと、
を含む。エアタイトな三次容器とは、当該三次容器の内外で空気の流出入しない容器を指す。当該三次容器内は、約１気圧に保たれる。また、当該三次容器内は、任意の温度、例えば、４℃〜４０℃程度の一定温度に保つことができる。これにより、本発明の容器に収容されたシート状生体組織を、輸送時の気圧変化、温度変化及び／又は衝撃から保護しつつ、使用する場所に輸送することが可能となる。すなわち、本発明によって、シート状生体組織を、その活性を維持したままで、様々な運送手段によって使用する場所に輸送可能となる。例えば、航空機、船舶、車両など、いずれの手段によっても運搬可能となる。

本発明に用いられる保存液７は、保存及び輸送の目的とするシート状生体組織５の治療効果を損なわない液体であればよく、適宜変更される。例えば、シート状生体組織５が、細胞シート又は生体組織であれば、当該細胞シート又は生体組織の維持に適した培地、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などを用いることができる。

本発明の方法により、シート状生体組織５の物理的な振動による破損、流体の漏れを防止しながら保管や輸送が可能となる。また、本発明により、従来は使用直前に限られた場所（例えば手術室）で調製する必要があったシート状生体組織５の処理を、予め清浄度を保った場所で実施し、得られたシート状生体組織５を輸送可能になった。

なお、上述の実施形態は本発明の実施の一例ではあるが、その範囲を限定するものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々変形実施可能である。

上記の実施態様では、シート状生体組織を付着させた支持体を収容する容器及びその方法の例について説明してきたが、支持体に付着させない状態で収縮しないシート状生体組織も、本発明の容器及び／又はそれを用いた方法によって保存及び／又は輸送可能であるため、本発明の範囲から限定されない。

１、２０１、３０１：容器
２、１０２、２０２、３０２：本体下部
２１、１２１、２２１：本体下部底部
２２、１２２、２２２、３２２：本体下部側部
２２ａ：側部内壁面
２２ｂ：側部外壁面
２２ｃ：Ｏリング溝
２３、１２３、２２３、３２３：下部凸部
２３ａ：載置面
２３ｂ、１２３ｂ、２２３ｂ、３２３ｂ：下部溝
２４：キー溝
２６：Ｏリング
２７、１２７、２２７、３２７：本体下部鍔部
２８：下部チャンバ
３、２０３、３０３：本体上部
３１、３３１：本体上部天井部
３１ａ：本体上部内面
３３１ｂ：本体上部上面
３２：本体上部側部
３２ａ：本体上部側部内壁面
３２ｂ：本体上部側部外壁面
３３、２３３、３３３：上部凸部
３３ａ：上部凸部下面
３３ｂ、２３３ｂ、３３３ｂ：上部溝
３４：キー
３５、２３５、３３５：エアホール
３６、２３６：本体上部鍔部
３７、２３７：エアスロープ
３８：上部チャンバ
３０４：脚部
３０５：脚挿入部
３０６：封止部材貼付部
３０６ａ：封止部材剥がし部
３０７：ラベル貼付部
４：支持体
５：シート状生体組織
６：封止部材
７：保存液
８：ピペット
９：気泡
Ｓ：収容空間
ｈ：間隙

Claims (7)

1. 培養基材から剥離されたシート状生体組織の保存及び／又は輸送用容器であって、
   本体下部底部及び本体下部側部により、前記シート状生体組織及び保存液を収容する収容空間が形成された本体下部と、
   前記本体下部側部の上部に載置されて前記収容空間を封止し、少なくとも１つのエアホールを有する本体上部と、
   前記エアホールを封止する、ガス透過性の封止部材と、
   を含み、
   ここで、前記本体下部底部の少なくとも一部に下部凸部を備え、
   ここで、前記本体上部の本体上部内面の少なくとも一部に上部凸部を備え、
   前記本体下部と前記本体上部とが組み合わせられた場合、前記下部凸部と前記上部凸部との間隙が、前記シート状生体組織を前記収容空間内の所定の空間に保持することができるものであって、
   前記本体上部の本体上部内面が、前記エアホールに向かうスロープを有し、
   前記封止部材が、液体非透過性のシーリングフィルムであり、
   前記封止部材は、前記本体上部の平面状の本体上部天井部の前記エアホールを覆うように貼付されて封止するものであり、
   前記シート状生体組織が、さらに支持体を含み、前記支持体が、前記シート状生体組織の周辺領域のみを支持する形状である、容器。
2. 前記下部凸部が、少なくとも１つの下部溝を備える、請求項１に記載の容器。
3. 前記上部凸部が、少なくとも１つの上部溝を備える、請求項１又は２に記載の容器。
4. 前記本体上部天井部は、前記エアホールの周辺が窪んでいる封止部材貼付部を備える、請求項１〜３のいずれか１項に記載の容器。
5. 前記間隙が、０．１ｍｍ〜５．０ｍｍである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の容器。
6. 前記本体上部及び／又は前記本体下部が、鍔部を備える、請求項１〜５のいずれか１項に記載の容器。
7. 培養基材から剥離されたシート状生体組織の保存及び／又は輸送する方法であって、
   （１）請求項１〜６のいずれか１項に記載の容器を構成する本体下部の下部凸部に、シート状生体組織を載置し、
   （２）前記本体下部に請求項１〜６のいずれか１項に記載の本体上部を適用し、
   （３）前記エアホールから保存液を充填して気体を排除し、
   （４）前記エアホールを請求項１〜６のいずれか１項に記載の封止部材で塞ぎ、
   （５）前記シート状生体組織を載置した前記容器を保存及び／又は輸送すること、
   を含むものであって、
   前記シート状生体組織が、さらに支持体を含み、前記支持体が、前記シート状生体組織の周辺領域のみを支持する形状である、方法。

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