TW201420118A - 以含親水性構造的連結物鍵結之抗體－藥物複合體 - Google Patents

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Masao Yoshida
Shinji Ashida
Takeshi Masuda
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Yuji Kasuya
Yuki Abe
Yusuke Ogitani
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Abstract

本發明係提供一種抗體-藥物複合體，作為為抗腫瘤效果與安全性面優異的抗腫瘤藥，其特徵為透過下式：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-所示的構造之連結物，使下式所示的抗腫瘤性化合物與抗體結合(抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或Lp之末端結合，L1、L2及LP之任1或2部分含親水性構造)。□

Description

以含親水性構造的連結物鍵結之抗體-藥物複合體
本發明係關於有用於作為抗腫瘤藥之抗體-藥物複合體，其透過具有親水性構造的連結物構造部分而使可將腫瘤細胞作為標的之抗體與抗腫瘤性藥物結合。
使具細胞毒性的某藥物結合抗體之抗體-藥物複合體(Antibody-Drug Conjugate；ADC)(該抗體係結合在癌細胞表面上表現、且可細胞內在化的抗原)，藉由可將藥物選擇性地送至癌細胞，可期待使癌細胞內蓄積藥物，且使癌細胞死亡(參照非專利文獻1~3)。就ADC而言，例如，已認可使抗CD33抗體與卡奇黴素(calicheamicin)結合的Mylotarg(吉妥單抗-奥佐米星(Gemtuzumab ozogamicin))作為急性骨髓性白血病之治療藥。又，使抗CD30抗體與奧利它汀E(auristatin E)結合的Adcetris(貝倫妥單抗-維多汀(brentuximab vedotin))最近被認可作為何傑金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)與未分化大細胞淋巴瘤之治療藥(參照非專利文獻4)。迄今被認可的ADC中所含有的藥物係以DNA、或微管蛋白作為標的。
作為抗腫瘤性之低分子化合物之抑制拓樸異 構酶I(topoisomerase I)而表現抗腫瘤作用的化合物喜樹鹼(camptothecin)衍生物為已知。其中，下式所示抗腫瘤性化合物
(依喜替康(exatecan)，化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮)係水溶性之喜樹鹼衍生物(專利文獻1、2)。與現在臨床使用的愛萊諾迪肯(irinotecan)不同，不需要經由酵素的活性化。又，較愛萊諾迪肯之藥效本體SN-38、或相同於臨床使用的托泊替康之拓樸異構酶I抑制活性為強，活體外對各種癌細胞，具有更強的殺細胞活性。尤其，藉由P-醣蛋白之表現而對SN-38等顯示耐性的癌細胞亦顯示效果。又，於小鼠之人類腫瘤皮下移植模式亦顯示強的抗腫瘤效果，雖已進行了臨床試驗，但尚未上市(參照非專利文獻5~10)。然而，關於依喜替康有效地作為ADC之作用則未明瞭。
DE-310係使依喜替康透過GGFG胜肽間隔物而與生物分解性之羧基甲基葡聚糖多元醇聚合物結合的複合體(專利文獻3)。藉由將依喜替康作高分子前藥化，使保持高血中滯留性，又利用腫瘤新生血管之透過性的亢進與腫瘤組織滯留性，被動地提高對腫瘤部位之定向性。DE-310係藉由酵素切斷胜肽間隔物，活性本體的依喜替康及甘胺酸與胺基結合的依喜替康被持續地游離。其結果，藥物動態被改善，於非臨床試驗中的各腫瘤之評價模式，雖然DE-310之依喜替康投與量較依喜替康單劑之投與時更為減少，但較依喜替康單劑之投與時顯示更高的有效性。關於DE-310，已有臨床試驗實施、於人類之有效例被確認、活性本體較正常組織更集聚於腫瘤被確認的報告，另一方面，亦有對人類中的腫瘤之DE-310及活性本體之集聚與對正常組織之集聚無顯著不同，於人類未見到被動的目標導向的報告(參照非專利文獻11~14)。結果為DE-310尚未上市，關於依喜替康作為如此指向標的的藥物的機能是否有效則不清楚。
作為DE-310之關連化合物，將-NH(CH2)4C(=O)-所示的構造部分插入-GGFG-間隔物與依喜替康之間，將-GGFG-NH(CH2)4C(=O)-作為間隔物構造的複合體亦為已知(專利文獻4)，但關於相同複合體之抗腫瘤效果則完全未知。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本特開平5-59061號公報
[專利文獻2]日本特開平8-337584號公報
[專利文獻3]國際公開WO1997/46260小冊
[專利文獻4]國際公開WO2000/25825小冊
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Ducry, L., et al. Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.; Antibody-Drug Conjugates: Linking cytotoxic payloads to monoclonal antibodies.
[非專利文獻2]Alley, S. C., et al. Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537.; Antibody-drug conjugates: targeted drug delivery for cancer.
[非專利文獻3]Damle N.K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452.; Tumour-targeted chemotherapy with immunoconjugates of calicheamicin.
[非專利文獻4]Senter P. D., et al. Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.; The discovery and development of brentuximab vedotin for use in relapsed Hodgkin lymphoma and systemic anaplastic large cell lymphoma.
[非專利文獻5]Kumazawa, E., Tohgo, A., Exp. Opin. Invest. Drugs (1998) 7, 625-632.; Antitumour activity of DX-8951f: a new camptothecin derivative.
[非專利文獻6]Mitsui, I., Kumazawa, E., Hirota, Y., et al. Jpn J. Cancer Res. (1995) 86, 776-786.; A new water-soluble camptothecin derivative, DX-8951f, exhibits potent antitumor activity against human tumors in vitro and in vivo.
[非專利文獻7]Takiguchi, S., Tohgo, A., et al. Jpn J. Cancer Res. (1997) 88, 760-769.; Antitumor effect of DX-8951, a novel camptothecin analog, on human pancreatic tumor cells and their CPT-11-resistant variants cultured in vitro and xenografted into nude mice.
[非專利文獻8]Joto, N. et al. Int J Cancer (1997) 72, 680-686.; DX-8951f, a water-soluble camptothecin analog, exhibits potent antitumor activity against a human lung cancer cell line and its SN-38-resistant variant.
[非專利文獻9]Kumazawa, E. et al. Cancer Chemother. Pharmacol. (1998) 42, 210-220.; Potent and broad antitumor effects of DX-8951f, a water-soluble camptothecin derivative, against various human tumors xenografted in nude mice.
[非專利文獻10]De Jager, R., et al. Ann N Y Acad Sci (2000) 922, 260-273.; DX-8951f: summary of phase I clinical trials.
[非專利文獻11]Inoue, K. et al. Polymer Drugs in the Clinical Stage, Edited by Maeda et al. (2003), 145-153.; CM-dextran-polyalcohol-camptothecin conjugate, DE-310 with a novel carrier system and its preclinical data.
[非專利文獻12]Kumazawa, E. et al. Cancer Sci (2004) 95, 168-175.; DE-310, a novel macromolecular carrier system for the camptothecin analog DX-8951f: Potent antitumor activities in various murine tumor models.
[非專利文獻13]Soepenberg, O. et al. Clinical Cancer Research, (2005) 11, 703-711.; Phase I and pharmacokinetic study of DE-310 in Patients with Advanced Solid Tumors.
[非專利文獻14]Wente M. N. et al. Investigational New Drugs (2005) 23, 339-347.; DE-310, a macromolecular prodrug of the topoisomerase-I-inhibitor exatecan (DX-8951), in patients with operable solid tumors.
於藉由抗體之腫瘤治療，即使抗體辨識抗原而與腫瘤細胞結合，亦有觀察到抗腫瘤效果並不充分的情形，而有更高效果的抗腫瘤抗體為必要的情形。又，於抗腫瘤性之低分子化合物，即使抗腫瘤效果為優異，亦大多有副作用或毒性面等之安全性上的問題，關於低分子抗腫瘤化合物，更提高安全性而獲得更優異的治療效果者亦為一課題。即，本發明之課題係提供於抗腫瘤效果與安全性面為優異、獲得具有優異治療效果的抗腫瘤藥。
本發明者認為以下為可能的：將抗腫瘤性化合物依喜替康變換為透過連結物構造部分而與可標的腫瘤細胞的抗體結合之化合物的抗體-藥物複合體，該抗體即為具備可辨識腫瘤細胞的特性、可與腫瘤細胞結合的特性、可於腫瘤細胞內在化的特性、或者對腫瘤細胞具有細胞障礙性的特性之任一者或其以上之特性的抗體，只要為具有抗腫瘤性的抗體，可達成其抗腫瘤效果，又使抗腫瘤性化合物更確實地移動至腫瘤細胞而可使該化合物之抗腫瘤效果於腫瘤細胞特異性地發揮，據此抗腫瘤效果之確實發揮的同時，可達成抗腫瘤性化合物之投與量較該化合物之單體投與時更為減少的高安全性。
因此，本發明者們創造出特定構造之連結物。
尤其，構築具有以下各者之連結物：於連結物之胜肽部分，使甘胺酸以外之親水性胺基酸與N末端結合的連結物構造；於連結物之胜肽部分，使甘胺酸或甘胺醯基甘胺酸與C末端結合的連結物構造；使具有親水性構造的連結物要素，於連結物中之胜肽部分與抗體之間結合的連結物構造；透過如此連結物而成功獲得使抗體與依喜替康結合的抗體-藥物複合體。而且此等抗體-藥物複合體於發揮抗腫瘤效果的藥物成分之游離為優異，其結果，發現本 發明之抗體-藥物複合體發揮優異的抗腫瘤效果，遂而完成本發明。
即，本發明係關於：
[1]一種抗體-藥物複合體，其特徵為透過下式所示構造之連結物：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-，使下式所示之抗腫瘤性化合物與抗體結合。
其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-( CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示以3至8個胺基酸構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示1至4之整數，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示1至4之整數，ne表示整數1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式所示構造： 其於第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合， -(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式所示構造： 其於第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)係表示1,4-伸環己基，L2係-S-(CH2)n8-C(=O)-時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
惟，連結物之L1、L2、及LP任1部分或2部分係含有親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2，L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]- CH2-C(=O)-的情形。
再者，本發明亦關於以下各者。
[2]如[1]記載之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP為3至8個胺基酸所構成的胜肽殘基，La及Lb為單鍵，Lc為-C(=O)。
[3]如[1]或[2]記載之抗體-藥物複合體，其中L1、L2、或LP之任一部分係含有親水性構造的連結物。
[4]如[3]記載之抗體-藥物複合體，其中含親水性構造的連結物為LP。
[5]如[4]記載之抗體-藥物複合體，其中LP為N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基。
[6]如[5]記載之抗體-藥物複合體，其中甘胺酸以外之親水性胺基酸係天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、酪胺酸、或精胺酸。
[7]如[5]記載之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端 之甘胺酸以外之親水性胺基酸係麩胺酸、天冬胺酸、或離胺酸。
[8]如[6]或[7]記載之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基為選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸的胺基酸而成的胺基酸殘基。
[9]如[8]記載之抗體-藥物複合體，其中於LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基係由3或4胺基酸而成的胜肽殘基。
[10]如[9]記載之抗體-藥物複合體，其中於LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基為GGF或GGFG。
[11]如[5]至[10]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中LP為DGGF、KGGF、EGGF、DGGFG、KGGFG、或EGGFG。
[12]如[5]至[10]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中LP為DGGFG、KGGFG、或EGGFG。
[13]如[1]至[12]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之連結物。
[14]如[13]記載之抗體-藥物複合體，其中Lc為-C(=O)-。
[15]如[14]記載之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，n2為2至5之整數，L2為單鍵。
[16]如[15]記載之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
[17]如[15]或[16]記載之抗體-藥物複合體，其中n1為1至3。
[18]如[5]至[17]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、-NH-(CH2)3-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(=O)-。
[19]如[5]至[17]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、或-NH-(CH2)3-C(=O)-。
[20]如[1]至[12]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之連結物。
[21]如[20]記載之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，n2為2至5之整數，L2為單鍵。
[22]如[21]記載之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
[23]如[4]記載之抗體-藥物複合體，其中LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基。
[24]如[23]記載之抗體-藥物複合體，其中胜肽殘基 係由4至8個胺基酸所構成的連結物。
[25]如[23]記載之抗體-藥物複合體，其中C末端之甘胺酸而成的寡肽係由2或3個甘胺酸而成的寡肽。
[26]如[23]至[25]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中胜肽連結物為GGFGG、或GGFGGG。
[27]如[23]至[26]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，n2為2至5之整數。
[28]如[27]記載之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
[29]如[3]記載之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-。
[30]如[29]記載之抗體-藥物複合體，其中n3為2或3。
[31]如[3]記載之抗體-藥物複合體，其中L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-。
[32]如[31]記載之抗體-藥物複合體，其中n7為2至4。
[33]如[29]至[32]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之連結物。
[34]如[33]記載之抗體-藥物複合體，其中Lc為-C(=O)-。
[35]如[29]至[34]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中n1為1至3。
[36]如[29]至[35]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中LP為GGFG。
[37]如[29]至[36]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、-NH-(CH2)3-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(=O)-。
[38]如[29]至[36]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、或-NH-(CH2)3-C(=O)-。
[39]如[1]至[38]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體與L1之結合係：於抗體之鉸鏈部存在的雙硫鍵部分，形成的硫醚鍵、於抗體之鉸鏈部存在的雙硫鍵部分，形成的雙硫鍵、或於構成抗體的胺基酸之側鍵上存在的胺基或末端之胺基的醯胺鍵。
[40]如[1]至[38]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體與L1之結合係：於抗體之鉸鏈部存在的雙硫鍵部分，形成的硫醚鍵、或於構成抗體的胺基酸之側鍵上存在的胺基或末端之胺基的醯胺鍵。
[41]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH 2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[42]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[43]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[44]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[45]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[46]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造： -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[47]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
[48]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[49]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[50]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
[51]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[52]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[53]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
[54]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選 自下列群組的1種之構造：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[55]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[56]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造： -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[57]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[58]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[59]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[60]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[61]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2C H2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[62]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列群組的1種之構造：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[63]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列構造：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[64]如[1]、[2]、[40]或[41]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下 列任一者之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[65]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[66]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[67]如[1]、[2]、[39]或[40]記載之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係下列任一者之構造：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
其中，於[41]至[67]，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下列式所示構造： 於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，-(NH-DX)表示下列式所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基
[68]如[1]至[67]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為1至10個之範圍。
[69]如[1]至[67]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為1至8個之範圍。
[70]如[1]至[67]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為3至8個之範圍。
[71]如[1]至[70]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體係具備可辨識標的細胞的特性、可與標的細胞結合的特性、可於標的細胞內在化的特性、傷害標的細胞的特性之一個以上之特性的抗體。
[72]如[71]記載之抗體-藥物複合體，其中標的細胞為腫瘤細胞。
[73]如[1]至[72]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗A33抗體、抗B7-H3抗體、抗CanAg抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CEA抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗GPNMB抗體、抗整合蛋白(Integrin)抗體、抗體PSMA抗體、抗肌腱蛋白C(Tenascin-C)抗體、抗SLC44A4抗體、或抗間皮素(Mesothelin)抗體。
[74]如[1]至[72]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗B7-H3抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、或抗CD70抗體。
[75]如[1]至[72]中任一項記載之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗B7-H3抗體。
[76]一種醫藥，其含有如[1]至[75]中任一項記載之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物。
[77]一種抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其含有如[1]至[75]中任一項記載之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物。
[78]如[77]記載之抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
[79]一種醫藥組成物，其含有如[1]至[75]中任一項記載之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物作為活性成分，及藥學上可容許的製劑成分。
[80]如[79]記載之醫藥組成物，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
[81]一種腫瘤及/或癌之治療方法，其特徵為投與如[1]至[75]中任一項記載之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物。
[82]如[81]記載之治療方法，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
[83]一種抗體-藥物複合體，其特徵係將下列式所示的抗腫瘤性化合物與抗體，
透過下列式所示的構造之連結物：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP- 而結合；其中，抗體於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，La表示-O-或單鍵，Lb表示CR2(-R3)-或單鍵，其中，R2及R3表示氫原子，Lc表示-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-表示下列式所示構造： 於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合，惟，連結物之L1、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2，L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形。
[84]一種抗體-藥物複合體，其特徵為使下列式所示的抗腫瘤性化合物與抗體，
透過下列式所示的構造之連結物而結合：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-；其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係第1位之胺基之氮原子作為結合部位，於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，但此等係於抗體之鉸鏈部之雙硫鍵部分以硫醚鍵結合，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，L2表示-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-或單鍵，其中，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，La表示單鍵，Lb表示單鍵，Lc表示-C(=O)-，其中，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下列式所示構造：
於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上 與含此的連結物構造內之亞甲基結合，惟，連結物之L1、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2，L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形。
[85]一種下列式之任一者所示的藥物-連結物中間體化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)，式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-或單鍵， nQ表示整數0至8，L2a表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示1至4之整數，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示1至4之整數，ne表示整數1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下列式所示之氮原子為結合部位的基 (吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下列式所示氮原子為結合部位的基， -(NH-DX)係下列式所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基
惟，連結物之L1a-(CH2)nQ-C(=O)-、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP， LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者、LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1a-(CH2)nQ-C(=O)-，L1a-(CH2)nQ-C(=O)-係-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2a，L2a係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形。
[86]一種下列式之任一者所示的藥物-連結物中間體化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)，式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-或單鍵，nQ表示整數0至8，L2a表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基， n1表示0至6之整數，La、Lb表示單鍵，Lc表示-C(=O)-，其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下列式所示之氮原子為結合部位的基，
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下列式所示氮原子為結合部位的基，
-(NH-DX)係下列式
所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
[87]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 (順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[88]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 (順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[89]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[90]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[91]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 (吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[92]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[93]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O )-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[94]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[95]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)- KGGFG-(NH-DX)。
[96]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[97]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[98]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[99]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[100]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
[101]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
[102]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[103]下列式之構造之[86]記載之化合物：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[104]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[105]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C (=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[106]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
[107]如[86]記載之化合物，其係選自下列群組：(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2C H2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
其中，於上述之[87]至[107]，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下列式所示之氮原子為結合部位的基，
X意指鹵素原子，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下列式所示之氮原子為結合部位的基，
-(NH-DX)係下列式
所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
[108]一種下列式之任一者所示的構造之連結物，其係用以獲得透過連結物而使抗腫瘤性化合物與抗體結合的抗體-藥物複合體，-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-、或-L1-L2-LP-其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-， 其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示1至4之整數，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示1至4之整數，ne表示整數1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下列式所示構造： 於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造： 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
惟，連結物之L1、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者、LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形， 於連結物L2，L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形。[109]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O- CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、 -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-。
[110]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[111]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[112]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[113]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[114]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[115]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左 端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-。
[116]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-、 -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-。
[117]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-。
[118]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-。
[119]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左 端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-。
[120]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-。
[121]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-。
[122]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-。
[123]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-。
[124]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-。
[125]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C( =O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-。
[126]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-。
[127]如[108]記載之連結物，其係選自下列群組，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、 -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-。
[128]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-。
[129]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-。
[130]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-。
[131]如[108]記載之連結物，其係下列之構造，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位： -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-。
[132]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-。
[133]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-。
[134]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-。
[135]如[108]記載之連結物，其係下列任一者，惟左端係與抗體之結合部位，右端係與抗腫瘤性化合物之結合部位： -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-。
其中，於上述之[109]至[135]，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造： 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造： 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基。
[136]一種抗體-藥物複合體之製造方法，其特徵為其係藉由下列方法：使下列式之任一者所示之化合物： Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)，與抗體或其反應性衍生物反應，而於抗體之鉸鏈部存在的雙硫鍵部分，使硫醚鍵形成的方法、或於構成抗體的胺基酸之側鍵上存在的胺基或於末端之胺基使醯胺鍵形成的方法，使藥物-連結物部分與抗體結合；式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)-,HS-,X-CH2-C(=O)-NH-，或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-或單鍵，nQ表示整數0至8，L2a表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示1至4之整數，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷 基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示1至4之整數，ne表示整數1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下列式所示之氮原子為結合部位的基，
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下列式所示氮原子為結合部位的基，
-(NH-DX)係下列式所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基，
惟，連結物之L1a-(CH2)nQ-C(=O)-、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係：於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者、LP係C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽而與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1a-(CH2)nQ-C(=O)-，L1a-(CH2)nQ-C(=O)-係-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2a，L2a係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形。
[137]如[136]記載之抗體-藥物複合體之製造方法，其中使藥物-連結物部分與抗體結合的方法係以下任一者： 將抗體還原處理後，與Q為順丁烯二醯亞胺基或X-CH2-C(=O)-NH-的化合物反應而形成硫醚鍵的方法、使抗體與Q為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-的化合物反應而形成醯胺鍵的方法、或使抗體與式Q1-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-Q2所示的化合物反應後，使與Q為SH的化合物反應而藉由醯胺鍵使藥物-連結物構造形成的方法；[式中，Q1表示(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、(3-磺酸基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、RQ-O-C(=N)-、或O=C=N-，L1a表示-cyc.Hex(1,4)-CH2-、碳數1至10之伸烷基、伸苯基、-(CH2)n4-C(=O)-、-(CH2)n4a-NH-C(=O)-(CH2)n4b-、或-(CH2)n4a-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-，Q2表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)、鹵素原子、或-S-S-(2-吡啶基)，RQ表示碳數1至6之烷基、n4表示1至8之整數，n4a表示0至6之整數、n4b表示1至6之整數，其中，(3-磺酸基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下列式所示氮原子為結合部位的基 此磺酸可形成鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，(2-吡啶基)表示2-吡啶基]。
[138]如[136]或[137]記載之抗體-藥物複合體之製造方法，其中下列式之任一者所示的化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)係[87]至[107]中任一項記載的化合物。
[139]一種藉由如[136]至[138]中任一項記載之製造方法所製造的抗體-藥物複合體之製造方法。
藉由透過特定構造之連結物而使抗腫瘤性化合物依喜替康結合的抗體-藥物複合體而可達成優異的抗腫瘤效果及安全性。
第1圖表示B7-H3變異體1之胺基酸序列(序列識別號1)。
第2圖表示B7-H3變異體2之胺基酸序列(序列識別號2)。
第3圖表示M30-H1型重鍵之胺基酸序列(序列識別號9)。
第4圖表示M30-H2型重鍵之胺基酸序列(序列識別號10)。
第5圖表示M30-H3型重鍵之胺基酸序列(序列識別 號11)。
第6圖表示M30-H4型重鍵之胺基酸序列(序列識別號12)。
第7圖表示M30-L1型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號13)。
第8圖表示M30-L2型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號14)。
第9圖表示M30-L3型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號15)。
第10圖表示M30-L4型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號16)。
第11圖表示M30-L5型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號17)。
第12圖表示M30-L6型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號18)。
第13圖表示M30-L7型輕鍵之胺基酸序列(序列識別號19)。
第14圖表示M30抗體重鍵之胺基酸序列(序列識別號20)。
第15圖表示M30抗體輕鍵之胺基酸序列(序列識別號21)。
第16圖表示B7-H3變異體1之核苷酸序列(序列識別號26)。
第17圖表示M30-H1-L4P抗體、抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)及(19)之10mg/kg投與時之對小鼠移植人類黑 色素瘤株A375細胞的效果。白菱形線表示無處置之腫瘤、黑菱形線表示M30-H1-L4P抗體、黑四角形線表示抗體-藥物複合體(1)、白四角形線表示抗體-藥物複合體(2)、黑三角線表示抗體-藥物複合體(18)、白三角線表示抗體-藥物複合體(19)之效果。
第18圖表示抗體-藥物複合體(2)1mg、3mg/kg、抗體-藥物複合體(19)1mg、3mg/kg投與時之對小鼠移植人類黑色素瘤株A375細胞的效果。白菱形線表示無處置之腫瘤、黑四角形線表示抗體-藥物複合體(2)1mg/kg投與時、白四角形線表示3mg/kg投與時、黑圓形線表示抗體-藥物複合體(19)1mg/kg投與時、白圓形線表示3mg/kg投與時之效果。
第19圖表示M30-H1-L4P抗體、抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)之10mg/kg投與時之對小鼠移植人類非小細胞肺癌株Calu-6細胞的效果。白菱形線表示無處置之腫瘤、黑菱形線表示M30-H1-L4P抗體、黑四角形線表示抗體-藥物複合體(1)、白四角形線表示抗體-藥物複合體(2)、黑三角線表示抗體-藥物複合體(18)、白三角線表示抗體-藥物複合體(19)之效果。
第20圖表示抗體-藥物複合體(3)、(20)、(30)(3，10mg/kg)投與時之對小鼠移植人類黑色素瘤株A375細胞的效果。白菱形線表示無處置之腫瘤、黑四角虛線表示抗體-藥物複合體(3)3mg/kg投與時、黑四角實線表示10mg/kg投與時、黑三角虛線表示抗體-藥物複合體(20)3mg/kg投與時、黑三角實線表示10mg/kg投與時、黑 圓虛線表示抗體-藥物複合體(30)3mg/kg投與時、黑圓實線表示10mg/kg投與時之效果。
[實施發明之形態]
本發明之抗體-藥物複合體係於透過連結物構造部分使抗腫瘤性抗體與抗腫瘤性化合物結合的抗腫瘤性藥物，以下詳細地說明。
[抗體]
本發明之抗體-藥物複合體所使用的抗體意指免疫球蛋白，為含有與抗原為免疫特異性地結合的抗原結合部位的分子。作為本發明之抗體，可為IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY之任一群，但IgG為較佳。又，作為亞群，可為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2之任一者，但IgG1及IgG2為較佳。抗體係可來自任一物種，但較佳可例示人類、大鼠、小鼠及兔。來自人類以外的物種的情形，使用周知技術，加以嵌合化或人類化為較佳。本發明之抗體可為多株抗體，亦可為單株抗體，但單株抗體為較佳。
本發明之抗體係可以腫瘤細胞為標的的抗體為宜。即，因將具有抗腫瘤活性的藥物透過連結物而結合，就抗體而言，具備可辨識腫瘤細胞的特性、可與腫瘤細胞結合的特性、可併入腫瘤細胞內而內在化的特性、又傷害腫瘤細胞的特性之一個以上的特性為較佳。
抗體對腫瘤細胞之結合性可使用流式細胞測量術(flow cytometry)來確認。抗體併入腫瘤細胞內係可使用 (1)使用結合治療抗體的二次抗體(螢光標識)而於螢光顯微鏡中將併入細胞內的抗體可視化的試驗(Cell Death and Differentiation(2008)15,751-761)、(2)使用結合治療抗體的二次抗體(螢光標識)而測定細胞內併入的螢光量的試驗(Molecular Biology of the Cell Vol.15,5268-5282,December 2004)或(3)使用結合治療抗體的免疫毒素，而併入細胞內時，毒素被釋放而細胞增殖被抑制的Mab-ZAP試驗(BioTechniques 28：162-165,January 2000)來確認。
抗體之抗腫瘤活性係指對腫瘤細胞之細胞傷害活性、殺細胞效果，於活體外，以細胞之增殖之抑制活性來測定而可確認。例如，培養過度表現抗體之標的蛋白質的癌細胞株，於培養系統中添加各種濃度之抗體，可測定抗焦點形成、群落形成及球狀體增殖的抑制活性。於活體內，例如，對移植高度表現標的蛋白質的腫瘤細胞株的裸鼠投與抗體，藉由測定癌細胞的變化，可確認抗腫瘤活性。又，抗體-藥物複合體係與發揮抗腫瘤效果的藥物結合的緣故，抗體本身具有腫瘤效果者並非必須，但具有抗腫瘤效果者為更佳。由抗腫瘤效果之發揮的點，具有抗體內在化而移行至腫瘤細胞內的性質者，藉由藥物提供對腫瘤細胞賦予特異性．選擇性的傷害的點係重要的，而為較佳。
就如此抗體而言，可例示抗抗A33抗體、抗B7-H3抗體、抗CanAg抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CEA 抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗GPNMB抗體、抗整合蛋白(Integrin)抗體、抗體PSMA抗體、抗肌腱蛋白C(Tenascin-C)抗體、抗SLC44A4抗體、抗間皮素(Mesothelin)抗體，但未限於此等。
本發明之抗體較佳為抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD70抗體及抗B7-H3抗體，更佳為抗B7-H3抗體。
本發明之抗體係可使用此領域通常實施的方法，將成為抗原的多胜肽免疫動物，藉由採取、純化活體內產生的抗體而獲得。抗原之來源並未限定於人類，亦可將來自小鼠、大鼠等之人類以外的動物的抗原來免疫動物。此情形，藉由試驗結合取得的異種抗原的抗體與人類抗原之交叉性，可選出可適用於人類疾病的抗體。
又，依據周知方法(例如，Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497、Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))，藉由使產生對抗抗原的抗體的抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合而建立融合瘤，亦可獲得單株抗體。
又，抗原係可將編碼抗原蛋白質的基因藉由基因操作而使於宿主細胞中產生而獲得。具體而言，製作可表現抗原基因的載體，將其導入宿主細胞而使該基因表現，純化表現的抗原為宜。
抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD70抗體各自基於WO2002/043661、美國專利第5,773,001號、WO2006/113909，藉由周知手段可取得。
就於本發明所使用的B7-H3抗體而言，具有 以下特性的抗體為所欲的。
(1)一種抗體，其特徵為具有以下特性；(a)特異性結合B7-H3，(b)具有抗體依存性細胞吞噬作用(ADCP)活性，(c)於活體內具有抗腫瘤活性。
(2)如上述(1)記載之抗體或該抗體，其中B7-H3係為由序列識別號1或2記載之胺基酸序列而成的分子。
(3)如上述(1)或(2)記載之抗體，其具有序列識別號3記載之胺基酸序列而成的CDRH1、序列識別號4記載之胺基酸序列而成的CDRH2及序列識別號5記載之胺基酸序列而成的CDRH3作為重鍵中的互補決定區，以及具有序列識別號6記載之胺基酸序列而成的CDRL1、序列識別號7記載之胺基酸序列而成的CDRL2及序列識別號8記載之胺基酸序列而成的CDRL3作為輕鍵中的互補決定區。
(4)如上述(1)至(3)中任一項記載之抗體，其恆定區域為來自人類的恆定區域。
(5)如上述(1)至(4)中任一項記載之抗體，其經人類化。
(6)如上述(5)記載之抗體，其具有選自下列群組的胺基酸序列而成的重鍵之可變區：(a)於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列、(b)於序列識別號10之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列、(c)於序列識別號11之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列、(d)於序列識別號12之胺基酸編 號20至141記載之胺基酸序列、(e)對於(a)至(d)之序列具有至少95%以上之相同性的胺基酸序列、及(f)於(a)至(d)之序列中1或數個胺基酸被刪除、取代或添加的胺基酸序列；以及具有選自下列群組的胺基酸序列而成的輕鍵之可變區：(g)於序列識別號13之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(h)於序列識別號14之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(i)於序列識別號15之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(j)於序列識別號16之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(k)於序列識別號17之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(l)於序列識別號18之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(m)於序列識別號19之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列、(n)對(g)至(m)之序列具有至少95%以上之相同性的胺基酸序列、及(o)於(g)至(m)之序列中1或數個胺基酸被刪除、取代或添加的胺基酸序列。
(7)如上述(6)記載之抗體，其具有選自下列組成之群的重鍵可變區及輕鍵可變區，於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號13之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號14之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基 酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號15之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號16之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號17之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號18之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號19之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號13之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號14之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、於序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號15之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區、以及於序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區及於序列識別號16之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區。
(8)如上述(6)或(7)記載之抗體，其係由選自下列組成之群組的重鍵及輕鍵而成，於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號13之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號14之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號15之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號16之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號17之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號18之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號19之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號13之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號14之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、於 序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號15之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵、以及於序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及於序列識別號16之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵。
(9)如上述(14)至(16)中任一項記載之抗體，其係由選自下列組成之群組的重鍵及輕鍵而成，序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號17記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號18記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號19記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14記載之胺基酸序列而成的輕鍵、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15記載之胺基酸序列而成的輕鍵、以及序列識別號12記載 之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16記載之胺基酸序列而成的輕鍵。
(10)如上述(8)或(9)記載之抗體，其中重鍵係於序列識別號9或12記載之胺基酸序列中的羧基末端的胺基酸刪除的重鍵。
(11)一種抗體，其係藉由下列抗體之製造方法而獲得，該方法包含培養藉由含有編碼上述(1)至(10)中任一項記載之抗體的多核苷酸的表現載體而被轉形的宿主細胞的步驟，及由該步驟獲得的培養物採取目的抗體的步驟。
(12)如上述(1)至(11)中任一項記載之抗體，為了使抗體依存性細胞傷害活性增強，而調節糖鍵修飾。
以下，說明本發明所使用的B7-H3抗體。
於本說明書中，「癌」與「腫瘤」係以相同意義使用。
於本說明書中，所謂「基因」的用語不僅包含DNA，亦包含其mRNA、cDNA及其cRNA。
於本說明書中，所謂「多核苷酸」的用語係以與核酸相同的意義來使用，亦包含DNA、RNA、探針、寡核苷酸、及引子。
於本說明書中，「多胜肽」與「蛋白質」並未區別來使用。
於本說明書中，「細胞」亦包含動物個體內之細胞、培養細胞。
於本說明書中，「B7-H3」係與B7-H3蛋白質相同意 義使用，又，意指B7-H3變異體1及/或B7-H3變異體2。
本說明書中的「CDR」係指互補決定區(CDR：Complemetarity deterring region)。抗體分子之重鍵及輕鍵中各自有3處的CDR為已知。CDR亦稱為超可變區(hypervariable domain)，位於抗體之重鍵及輕鍵可變區內，為一次構造之變異性特高的部位，於重鍵及輕鍵之多胜肽鍵之一次構造上，於各自3處所分離。於本說明書中，關於抗體之CDR，重鍵之CDR由重鍵胺基酸序列之胺基末端側記述為CDRH1、CDRH2、CDRH3，輕鍵之CDR由輕鍵胺基酸序列之胺基末端側記述為CDRL1、CDRL2、CDRL3。此等之部位於立體構造上相互近接，決定對結合的抗原的特異性。
於本發明，「嚴格條件下雜交」係指於市售雜交溶液ExpressHyb Hybridization Solution(Clontech公司製)中，於68℃雜交，或使用固定DNA的濾器，於0.7-1.0M之NaCl存在下於68℃進行雜交後，使用0.1-2倍濃度之SSC溶液(1倍濃度SSC係由150mM NaCl、15mM檸檬酸鈉而成)，於68℃洗淨而可鑑定的條件或與其同等之條件下來雜交。
1. B7-H3
B7-H3係對抗原提示細胞表現作為輔助刺激分子的B7家族之一者，一般認為對T細胞上之受體作用而促進或抑制免疫作用。
B7-H3係具有1次膜貫通構造的蛋白質，但於B7-H3之N末端側細胞外區域存有2個變異體。B7-H3變異體1 (4Ig-B7-H3)中存有各2個處所之V或C樣Ig功能域，B7-H3變異體2(2Ig-B7-H3)中存有各1個處所之V或C樣Ig功能域。
本發明使用的B7-H3係由人類、非人類哺乳動物(大鼠、小鼠等)之B7-H3表現細胞直接純化來使用，或者可調製該細胞之細胞膜劃分來使用，又，B7-H3於活體外合成，或者藉由基因操作可使於宿主細胞中產生而獲得。具體而言，基因操作係將B7-H3 cDNA併入可表現的載體後，於含有轉錄及轉譯必要的酵素、基質及能量物質的溶液中合成，或者藉由將其他原核生物、或真核生物之宿主細胞轉形而使B7-H3表現，可獲得該蛋白質。
人類B7-H3變異體1基因之開放讀碼區(ORF)之胺基酸序列係被記載為序列表之序列識別號1。又，序列識別號1之序列被記載於第1圖。
人類B7-H3變異體2基因之ORF之胺基酸序列被記載於序列表之序列識別號2。又，序列識別號2之序列被記載於第2圖。
又，於上述各B7-H3之胺基酸序列中，1或數個胺基酸被取代、刪除及/或添加的胺基酸序列而成之具有與該蛋白質同等生物活性的蛋白質亦包含於B7-H3。
訊號序列被去除的成熟人類B7-H3變異體1相當於序列識別號1所示的胺基酸序列之第27號至第534號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列。又，訊號序列被去除的成熟人類B7-H3變異體2相當於序列識別號2所示的胺基酸序列之第27號至第316號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列。
2.抗B7-H3抗體之製造
本發明之抗B7-H3抗體係使用常法，以B7-H3或由B7-H3之胺基酸序列選擇的任意多胜肽將動物免疫，藉由採取、純化於活體內產生的抗體而可獲得。成為抗原的B7-H3之生物種並未限定於人類，亦可以來自小鼠、大鼠等之人類以外之動物的B7-H3免疫動物。於此情形，藉由試驗結合取得的異種B7-H3的抗體與人類B7-H3之交叉性，可選別可適用人類疾病的抗體。
又，依據周知方法(例如，Kohler and Milstein，Nature(1975)256，p.495-497、Kennet，R.ed.，Monoclonal Antibodies，p.365-367，Plenum Press，N.Y.(1980))，藉由使產生抗B7-H3抗體的抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合而建立融合瘤，亦可獲得單株抗體。
又，成為抗原的B7-H3係藉由基因操作使B7-H3基因於宿主細胞中表現而可獲得。
具體而言，製作可表現B7-H3基因的載體，將其導入宿主細胞而使該基因表現，而純化表現的B7-H3為宜。以下，具體說明抗B7-H3抗體之取得方法。
(1)抗原之調製
就用以製作抗B7-H3抗體的抗原而言，可列舉B7-H3或其至少6個連續部分胺基酸序列而成的多胜肽、或者於此等添加任意之胺基酸序列或載體的衍生物。
B7-H3可由人類之腫瘤組織或者腫瘤細胞直接純化來使用，又，B7-H3於活體外合成、或者藉由基因操作而使於宿主細胞產生而可獲得。
具體而言，基因操作係將B7-H3之cDNA併入可表現的載體後，於含有轉錄及轉譯上必要的酵素、基質及能量物質的溶液中合成，或者藉由使其他原核生物、或真核生物之宿主細胞轉形，而使B7-H3表現，可獲得抗原。
又，藉由將膜蛋白質的B7-H3之細胞外區域與抗體之恆定區域連結的融合蛋白質於適合的宿主．載體系統中表現，亦可獲得呈分泌蛋白質的抗原。
B7-H3之cDNA係例如，將表現B7-H3之cDNA的cDNA庫作為模版，使用特異地增幅B7-H3 cDNA的引子而進行聚合酶鏈反應(以下稱為「PCR」)(參照Saiki，R.K.,et al.Science(1988)239，p.487-489)，可藉由所謂的PCR法而取得。
就多胜肽之活體外(in vitro)合成而言，例如可列舉Roche Diagnostics K.K.公司製之快速轉譯系統(RTS)，但未限定於此。
就原核細胞之宿主而言，例如，可列舉大腸菌(Escherichia coli)或枯草菌(Bacillus subtilis)等。將目的基因於此等宿主細胞內轉形，以宿主與來自可適合的種之複製子(replicon)即複製起點、調節序列的質體載體使宿主細胞轉形。又，就載體而言，於轉形細胞具有可賦與表現形質(表現型)的選擇性的序列者為較佳。
真核細胞之宿主細胞包含脊椎動物、昆蟲、酵母等之細胞，就脊椎動物細胞而言，例如，猴細胞COS細胞(Gluzman，Y.Cell(1981)23，p.175-182、ATCC CRL-1650)、小鼠纖維母細胞NIH3T3(ATCC No.CRL-1658)或中國倉 鼠卵巢細胞(CHO細胞、ATCC CCL-61)之二氫葉酸還原酵素缺損株(Urlaub，G.and Chasin，L.A.Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1980)77，p.4126-4220)等被經常使用，但並未限定於此。
如上述獲得的轉形體可依據常法來培養，藉由該培養使於細胞內、或細胞外產生目的多胜肽。
就用於該培養的培養基而言，因應採用的宿主細胞可適宜選擇慣用的各種培養基，若為大腸菌，例如，可於LB培養基因應必要添加氨比西林(ampicillin)等抗生物質或IPMG來使用。
藉由上述培養，轉形體之細胞內或細胞外產生的重組蛋白質係可藉由利用該蛋白質之物理性質或化學性質等的各種周知的分離操作法而加以分離．純化。
作為該方法，具體而言，例如，可列舉藉由通常之蛋白質沉澱劑的處理、超過濾、分子篩選層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、親和性層析等之各種液體層析、透析法、此等之組合等。
又，藉由於表現的重組蛋白質上連繫6個殘基而成的組胺酸標籤，可於鎳親和性管柱有效率地純化。或者，藉由於表現的重組蛋白質上連繫IgG之Fc區域，於蛋白質A管柱可有效率地純化。
藉由組合上述方法，可容易地於高產率、高純度下大量製造目的之多胜肽。
(2)抗B7-H3單株抗體之製造
就與B7-H3特異性結合的抗體之例而言，可列舉與 B7-H3特異性結合的單株抗體，但其取得方法係如以下記載。
於單株抗體之製造，一般而言，如下述的作業步驟係必要的。
即，(a)作為抗原使用的活體高分子之純化、(b)藉由將抗原注射至動物而免疫後，採取血液而檢定其抗體力價，決定脾臟摘出之時期後，調製抗體產生細胞的步驟、(c)骨髓瘤細胞(以下稱為「骨髓瘤」)之調製、(d)抗體產生細胞與骨髓瘤之細胞融合、(e)產生目的抗體的融合瘤群之選別、(f)單一細胞株之分割(選殖)、(g)依情況，用以大量製造單株抗體的融合瘤之培養、或移植融合瘤的動物之飼育、(h)如此製造的單株抗體之生理活性、及其結合特異性的檢討、或者作為標識試藥之特性之檢定等。
以下，單株抗體之製作法係依據上述步驟而詳述，但該抗體之製作法並未限定於此，例如亦可使用脾細胞以外之抗體產生細胞及骨髓瘤。
(a)抗原之純化
就抗原而言，可使用以如前述方法調製的B7-H3或其一部分。
又，亦可使用藉由B7-H3表現重組體細胞所調製的膜劃份、或B7-H3表現重組體細胞本身，又使用本項技術領 域者周知之方法，將化學合成的本發明蛋白質之部分胜肽作為抗原來使用。
(b)抗體產生細胞之調製
混合步驟(a)獲得的抗原、費氏(Freund)之完全或不完全佐劑、或鉀明礬之類的助劑，作為免疫原對實驗動物免疫。實驗動物係可使用不妨礙用於周知融合瘤製作法所使用的動物。具體而言，例如可使用小鼠、大鼠、山羊、綿羊、牛、馬等。惟，由與摘出的抗體產生細胞融合的骨髓瘤細胞的取得容易性等之觀點，以小鼠或大鼠作為被免疫動物為較佳。
又，實際使用的小鼠及大鼠之系統並未特別限制，於小鼠的情形，例如，各系統各系統A、AKR、BALB/c、BDP、BA、CE、C3H、57BL、C57BL、C57L、DBA、FL、HTH、HT1、LP、NZB、NZW、RF、R III、SJL、SWR、WB、129等，又於大鼠的情形，例如，可使用Wistar、Low、Lewis、Sprague、Dawley、ACI、BN、Fischer等。
此等小鼠及大鼠例如可獲自日本CLEA、日本Charles River等實驗動物飼育販賣業者。
其中，如果考慮與後述之骨髓瘤細胞融合適合性的話，於小鼠以BALB/c系統、於大鼠以Wistar及Low系統作為被免疫動物為特佳。
又，考慮抗原之人類與小鼠之相同性，使用去除自體抗體之使活體機構降低的小鼠，即自體免疫疾病小鼠亦為較佳。
又，此等小鼠或大鼠之免疫時之週齡較佳為5~12週齡，更佳為6~8週齡。
以B7-H3或其重組體來免疫動物係例如，可使用詳細記載於Weir，D.M.，Handbook of Experimental Immunology Vol.I.II.III.，Blackwell Scientific Publications，Oxford(1987)、Kabat，E.A.and Mayer，M.M.，Experimental Immunochemistry，Charles C Thomas Publisher Springfield，Illinois(1964)等之周知方法。
此等之免疫法中，具體呈示本發明之較佳方法，例如如以下所載。
即，首先，將抗原的膜蛋白質劃份、或表現抗原的細胞投與動物之皮內或腹腔內。
惟，為了提高免疫效率，併用兩者為較佳，前半段進行皮內投與、後半段或僅最終次進行腹腔內投與時，可特別地提高免疫效率。
抗原之投與日程依被免疫動物之種類、個體差等而異，一般而言，抗原投與次數3~6次、投與間隔2~6週為較佳，投與次數3~4次、投與間隔2~4週為更佳。
又，抗原之投與量依動物種類、個體差等而異，但一般而言為0.05~5mg，較佳為0.1~0.5mg左右。
追加免疫係如以上之抗原投與之1~6週後，較佳為2~4週後，更佳為2~3週後進行。
又，進行追加免疫之際之抗原投與量，依動物種類、大小等而異，一般而言，例如於小鼠的情形係0.05~5mg，較佳為0.1~0.5mg，更佳為0.1~0.2mg左右。
上述追加免疫後1~10日，較佳為2~5日後，更佳為2~3日後，自被免疫動物無菌取出含抗體產生細胞的脾臟細胞或淋巴球。此時測定抗體力價，若將抗體價變的非常高的動物作為抗體產生細胞之供給源來使用，可提高之後的操作效率。
就本文使用的抗體力價之測定法而言，例如，可列舉RIA法或ELISA法，但並未限於此等方法。
本發明中的抗體力價的測定，例如若根據ELISA法，可如以下記載一樣的順序進行。
首先，使純化或部分純化的抗原吸附於ELISA用96孔盤等之固相表面，再將未吸附抗原的固相表面覆蓋與抗原無關係的蛋白質，例如牛血清白蛋白(以下稱為「BSA」)，將該表面洗淨後，使與作為第一抗體作階段稀釋的試料(例如小鼠血清)接觸，於上述抗原與試料中之抗體結合。
再添加作為第二抗體之抗酵素標識的小鼠抗體的抗體而使與小鼠抗體結合，洗淨後添加該酵素之基質，藉由測定基於基質分解而顯色的吸光度變化，算出抗體力價。
由被免疫動物之脾臟細胞或淋巴球之抗體產生細胞之分離，可依據周知方法(例如，Kohler et al.，Nature(1975)256，p.495，；Kohler et al.，Eur.J.Immunol.(1977)6，p.511，；Milstein et al.，Nature(1977)，266，p.550，；Walsh，Nature，(1977)266，p.495)來進行。例如，於脾臟細胞的情形，可採用將脾臟細切而細胞以不鏽鋼 網過濾後，游離於Eagle最小必須培養基(MEM)而分離抗體產生細胞的一般方法。
(c)骨髓瘤細胞(以下，稱為「骨髓瘤」)之調製
細胞融合所使用的骨髓瘤細胞並未特別限制，可由周知細胞株適宜選擇來使用。惟，考慮由融合細胞選擇融合瘤之際之便利性，使用其選擇手續已確立的HGPRT(黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase))缺損株為較佳。
即，來自小鼠之X63-Ag8(X63)、NS1-ANS/1(NS1)、P3X63-Ag8.U1(P3U1)、X63-Ag8.653(X63.653)、SP2/0-Ag14(SP2/0)、MPC11-45.6TG1.7(45.6TG)、FO、S149/5XXO、BU.1等；來自大鼠之210.RSY3.Ag.1.2.3(Y3)等；來自人類之U266AR(SKO-007)、GM1500．GTG-A12(GM1500)、UC729-6、LICR-LOW-HMy2(HMy2)、8226AR/NIP4-1(NP41)等。此等之HGPRT缺損株，例如，可自American Type Culture Collection(ATCC)等取得。
此等細胞株係於適當培養基，例如以8-氮鳥嘌呤培養基[於RPMI-1640培養基中添加麩醯胺酸、2-氫硫基乙醇、慶大黴素(gentamicin)、及胎牛血清(以下稱為「FBS」)的培養基中添加8-氮鳥嘌呤的培養基]、伊思考夫改良杜爾貝可培養基(Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium；以下稱為「IMDM」)、或達爾伯克改良伊芳格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium；以下稱為「DMEM 」)繼代培養，但細胞融合之3至4日前以正常培養基[例如，含10% FCS的ASF104培養基(味之素(股)製)]繼代培養，使融合當日確保有2×107個以上之細胞數。
(d)細胞融合
抗體產生細胞與骨髓瘤細胞之融合，依據周知方法(Weir，D.M.，Handbookof Experimental Immunology Vol.I.II.III.，Blackwell Scientific Publications，Oxford (1987)、Kabat，E.A.and Mayer，M.M.，Experimental Immunochemistry，Charles C Thomas Publisher Springfield，Illinois(1964)等)，可於使細胞生存率未極度降低的程度的條件下適宜實施。
如此方法，例如，可使用於聚乙二醇等之高濃度聚合物溶液中將抗體產生細胞與骨髓瘤細胞混合的化學方法、利用電刺激的物理方法等。其中，若呈示上述化學方法之具體例則如以下所述。
即，使用為高濃度聚合物溶液的聚乙二醇的情形，於分子量1500~6000，較佳為2000~4000之聚乙二醇溶液中，於30~40℃，較佳為35~38℃之溫度下，將抗體產生細胞與骨髓瘤細胞混合1~10分鐘，較佳為5~8分鐘。
(e)融合瘤群之選擇
藉由上述細胞融合所獲得的融合瘤之選擇方法並未特別限制，但通常使用HAT(次黃嘌呤-胺基蝶呤-胸苷)選擇法(Kohler et al.，Nature(1975)256，p.495；Milstein et al.，Nature(1977)266，p.550)。
此方法係使用於胺基蝶呤無法生存的HGPRT缺欠株之骨髓瘤細胞而獲得融合瘤的情形為有效的。
即，藉由將未融合細胞及融合瘤於HAT培養基中培養，選擇性殘存僅對胺基蝶呤具耐性的融合瘤，且可使增殖。
(f)單一細胞株之分割(選殖)
就融合瘤之選殖法而言，例如可使用甲基纖維素法、軟洋菜法、有限稀釋法等之周知方法(例如參照Barbara，B.M.and Stanley，M.S.：Selected Methods in Cellular Immunology，W.H.Freeman and Company，San Francisco(1980))。此等方法中，尤其甲基纖維素法等之三次元培養法為較佳。例如，將藉由細胞融合所形成的融合瘤群懸浮於ClonaCell-HY Selection Medium D(StemCell Technologies公司製#03804)等之甲基纖維素培養基而培養，回收形成的融合瘤株而單株融合瘤之取得為可能的。培養回收的各融合瘤株，將於獲得的融合瘤培養上清液中為安定而抗體力價被認可者選擇作為B7-H3單株抗體產生融合瘤株。
就如此建立的融合瘤株之例而言，可列舉B7-H3融合瘤M30。又，於本說明書中，將B7-H3融合瘤M30產生的抗體記載為「M30抗體」或僅記載為「M30」。
M30抗體之重鍵具有序列表之序列識別號20所示的胺基酸序列。又，M30抗體之輕鍵具有序列表之序列識別號21所示的胺基酸序列。又，序列表之序列識別號20所示的重鍵胺基酸序列中，第1至19號之胺基酸殘基而成 的胺基酸序列係訊號序列，第20至141號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係可變區，第142至471號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係恆定區域。又，序列表之序列識別號21所示的輕鍵胺基酸序列中，第1至22號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係訊號序列，第23至130號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係可變區，第131至235號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係恆定區域。
(g)由融合瘤培養之單株抗體之調製
如此選擇的融合瘤係藉由將其培養，可效率佳地獲得單株抗體，但在培養之前，篩選產生目的單株抗體的融合瘤係所欲的。
此篩選可採用目前既知之方法。
本發明中的抗體力價的測定可依據例如上述(b)之項目中說明的ELISA法來進行。
依據以上方法所獲得的融合瘤，可於液態氮中或-80℃以下之冷凍庫中以冷凍狀態下保存。
結束選殖的融合瘤係基將培養基由HT培養基換成正常培養基來培養。
大量培養係於使用大型培養瓶的回轉培養、或者旋轉器培養來進行。由此大量培養中的上清液，藉由凝膠過濾等使用本項技術領域中具通常知識周知之方法來純化，可獲得與本發明之蛋白質特異性結合的單株抗體。
又，於同系統之小鼠(例如，上述之BALB/c)、或Nu/Nu小鼠之腹腔內注射融合瘤，藉由使該融合瘤增殖，可獲得含大量本發明單株抗體的腹水。
投與腹腔內的情形，事前(3~7日前)投與2,6,10,14-四甲基十五烷(2,6,10,14-tetramethyl pentadecane)(姥鮫烷(pristane))等之礦物油時，可獲得更多量之腹水。
例如，預先於與融合瘤同系統之小鼠腹腔內注射免疫抑制劑，將T細胞不活性化後，20日後使106~107個之融合瘤．株細胞浮游於不含血清的培養基中(0.5ml)而投與腹腔內，通常腹部會膨滿，積存腹水時自小鼠採取腹水。藉由此方法，與培養液中相比，可獲得約100倍以上濃度之單株抗體。
依據上述方法獲得的單株抗體，可以例如Weir，D.M.：Handbook of Experimental Immunology，Vol.I，II，III，Blackwell Scientific Publications，Oxford(1978)記載的方法來純化。
如此獲得的單株抗體對B7-H3具有高抗原特異性。
(h)單株抗體之檢定
如此獲得的單株抗體之異型及亞群之決定可如以下方式進行。
首先，作為鑑定法可列舉歐氏(Ouchterlony)法、ELISA法、或RIA法。
歐氏法雖簡便，但於單株抗體濃度低的情形，濃縮操作為必要的。
另一方面，使用ELISA法或RIA法的情形，培養上清液直接與抗原吸附固相反應，再使用作為第二次抗體之對應各種免疫球蛋白異型、亞群的抗體，鑑定單株抗體之異型、亞群者為可能的。
又，作為更簡便的方法而言，亦可利用市售之鑑定用套組(例如，小鼠分型套組；Bio-Rad公司製)等。
再者，蛋白質之定量係可藉由斐林-洛瑞法(Folin Lowry assay)、及280nm中的吸光度[1.4(OD280)=免疫球蛋白1mg/ml]而算出的方法來進行。
再者，再度實施(2)之(a)至(h)的步驟而由另外方式獨立取得單株抗體的情形，亦可取得具有與M30抗體同等之細胞傷害活性的抗體。就如此抗體之一例而言，可列舉與M30抗體相同之抗原決定位結合的抗體。M30係辨識B7-H3之細胞外區域中的功能域IgC1功能域或IgC2功能域中的抗原決定位，結合IgC1功能域或IgC2功能域或結合兩者，就該抗原決定位而言，特別可列舉存在於B7-H3之IgC1功能域或IgC2功能域的抗原決定位。新製作的單株抗體若結合M30抗體之結合的部分胜肽或部分立體構造，可判定該單株抗體結合與M30抗體相同之抗原決定位。又，藉由判定相對於M30抗體之對B7-H3的結合，該單株抗體為競合(即，該單株抗體會妨礙M30抗體與B7-H3之結合)，即使具體的抗原決定位之序列或構造未被決定，可判定該單株抗體結合與M30抗體相同之抗原決定位。抗原決定位相同被確認的情形，該單株抗體具有與M30抗體同等之細胞傷害活性被強烈期待。
(3)其他抗體
本發明之抗體除了上述抗B7-H3之單株抗體之外，以使對人類的異種抗原性降低等為目的，亦包含人為改變的基因重組型抗體，例如，嵌合(Chimeric)抗體、人類化 (Humanized)抗體、人類抗體等。此等抗體可使用已知方法來製造。
就嵌合抗體而言，可列舉抗體之可變區與恆定區域彼此為異種的抗體，例如將來自小鼠或大鼠的抗體之可變區與來自人類的恆定區域接合的嵌合抗體(參照Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，81，6851-6855，(1984))。
就人類化抗體而言，可列舉僅將互補決定區(CDR；complementarity determining region)併入來自人類的抗體的抗體(參照Nature(1986)321，p.522-525)、藉由CDR移植法而於CDR之序列加上一部分框架的胺基酸殘基亦移植至人類抗體的抗體(國際公開小冊WO90/07861)。
惟，就來自M30抗體之人類化抗體而言，只要保持M30抗體之6種全部的CDR序列，具有抗腫瘤活性即可，並未限定於特定之人類化抗體。又，M30抗體之重鍵可變區係保有序列表之序列識別號3所示的胺基酸序列而成的CDRH1(NYVMH)、序列識別號4所示的胺基酸序列而成的CDRH2(YINPYNDDVKYNEKFKG)、及序列識別號5所示的胺基酸序列而成的CDRH3(WGYYGSPLYYFDY)。又，M30抗體之輕鍵可變區係保有序列表之序列識別號6所示的胺基酸序列而成的CDRL1(RASSRLIYMH)、序列識別號7所示的胺基酸序列而成的CDRL2(ATSNLAS)、及序列識別號8所示的胺基酸序列而成的CDRL3(QQWNSNPPT)。
就小鼠抗體M30之人類化抗體之實例而言，可列舉包含(1)序列表之序列識別號9、10、11或12之第 20至141號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列、(2)相對於上述(1)之胺基酸序列至少具有95%以上之相同性的胺基酸序列、及(3)於上述(1)之胺基酸序列中1或數個胺基酸被刪除、取代或添加的胺基酸序列之任一者而成的重鍵可變區的重鍵、以及包含(4)序列識別號13、14、15、16、17、18或19之第21至128號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列、(5)相對於上述(4)之胺基酸序列至少具有95%以上之相同性的胺基酸序列、及(6)於上述(4)之胺基酸序列中1或數個胺基酸被刪除、取代或添加的胺基酸序列之任一者而成的輕鍵可變區的輕鍵之任意組合。
又，本說明書中的「數個」係指1至10個、1至9個、1至8個、1至7個、1至6個、1至5個、1至4個、1至3個、或1至2個。
又，就本說明書中的胺基酸之取代而言，以保存的胺基酸取代為較佳。保存的胺基酸取代係指於胺基酸側鍵上有關連的某胺基酸基內所產生的取代。較佳的胺基酸基如以下所示：酸性基團=天冬胺酸、麩胺酸；鹼性基團=離胺酸、精胺酸、組胺酸；非極性基團=丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸；及非帶電極性家族=甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸。其他較佳胺基酸基團如下所示：脂肪族羥基團=絲胺酸及蘇胺酸；含有醯胺之基團=天冬醯胺酸及麩醯胺酸；脂肪族基團=丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；以及芳香族基團=苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸。該胺基酸取代係 於不使原來具有的胺基酸序列的物質之特性降低的範圍內進行者為較佳。
就上述重鍵及輕鍵之較佳組合的抗體而言，可列舉具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號13之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號14之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號15之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號16之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號17之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號18之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號9之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號19 之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號13之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號14之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、具有序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號15之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體、以及具有序列識別號12之胺基酸編號20至141記載之胺基酸序列而成的重鍵可變區的重鍵及具有序列識別號16之胺基酸編號21至128記載之胺基酸序列而成的輕鍵可變區的輕鍵而成的抗體。
就更佳組合之抗體而言，可列舉序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵 及序列識別號16之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號17之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號18之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號19之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13之胺基酸編號21至233之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14之胺基酸編號21至233之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、以及序列識別號12之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體。
又，就其他較佳組合而言，可列舉序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14記載之胺基酸 序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號17記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號18記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號9記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號19記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號13記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號14記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號15記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體、以及序列識別號12記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體。
藉由組合顯示與上述重鍵胺基酸序列及輕鍵胺基酸序列有高相同性的序列，選擇具有與上述各抗體相同細胞傷害性活性的抗體為可能的。如此之相同性，一般而言為80%以上之相同性，較佳為90%以上之相同性，更佳為95%以上之相同性，最佳為99%以上之相同性。又，藉由組合於重鍵或輕鍵之胺基酸序列之1至數個胺基酸殘基被取代、刪除或添加的胺基酸序列，亦可能選擇 具有與上述各抗體相同等細胞傷害性活性的抗體。
二種類之胺基酸序列間之相同性可藉由使用Blast演算版本2.2.2(Altschul，Stephen F.，Thomas L.Madden，Alejandro A.Schaffer，Jinghui Zhang，Zheng Zhang，Webb Miller，and David J.Lipman(1997)，「Gapped BLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database search programs」，Nucleic Acids Res.25：3389-3402)之默認參數(default parameter)來決定。Blast演算亦可藉由利用網際網路www.ncbi.nlm.nih.gov/blast來使用。
又，序列表之序列識別號9、10、11或12所示的重鍵胺基酸序列中，第1至19號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係訊號序列，第20至141號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係可變區，第142至471號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係恆定區域。各自將序列識別號9之序列記載於第3圖、序列識別號10之序列記載於第4圖、序列識別號11之序列記載於第5圖、序列識別號12之序列記載於第6圖。
又，序列表之序列識別號13、14、15、16、17、18或19所示的輕鍵胺基酸序列中，第1至20號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係訊號序列，第21至128號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係可變區，第129至233號之胺基酸殘基而成的胺基酸序列係恆定區域。各自將序列識別號13之序列記載於第7圖、序列識別號14之序列記載於第8圖、序列識別號15之序列記載於第9圖、序列識別號16 之序列記載於第10圖、序列識別號17之序列記載於第11圖、序列識別號18之序列記載於第12圖、序列識別號19之序列記載於第13圖。
就本發明之抗體而言，又可列舉與M30抗體相同抗原決定位結合的人類抗體。抗B7-H3人類抗體係意指僅具有來自人類染色體之抗體之基因序列的人類抗體。抗B7-H3人類抗體係可藉由使用具有含人類抗體之重鍵與輕鍵之基因的人類染色體斷片的人類抗體產生小鼠的方法(參照Tomizuka，K.et al.，Nature Genetics(1997)16，p.133-143，；Kuroiwa，Y.et.al.，Nucl.Acids Res.(1998)26，p.3447-3448；Yoshida，H.et.al.，Animal Cell Technology ：Basic and Applied Aspects vol.10，p.69-73(Kitagawa ，Y.，Matsuda，T.and Iijima，S.eds.)，Kluwer Academic Publishers，1999.；Tomizuka，K.et.al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97，p.722-727等)而取得。
如此人類抗體產生小鼠，具體而言，藉由內在性免疫球蛋白重鍵及輕鍵之基因座被破壞，將用以替代之藉由酵母人工染色體(Yeast artificial chromosome，YAC)載體等導入人類免疫球蛋白重鍵及輕鍵之基因座的基因重組動物，藉由基因剃除動物及轉基因動物之製作、及藉由將此等動物彼此雜交而可作出。
又，藉由基因重組技術，藉由各別編碼如此人類抗體之重鍵及輕鍵的cDNA，較佳為含該cDNA的載體，將真核細胞轉形，藉由培養產生基因重組人類單株抗體的轉形細胞，亦可由培養上清液中獲得此抗體。
其中，作為宿主可使用例如真核細胞，較佳為CHO細胞、淋巴球或骨髓瘤等之哺乳動物細胞。
又，亦已知取得來自由人類抗體庫選出的噬菌體展示群的人類抗體的方法(參照Wormstone，I.M.et.al，Investigative Ophthalmology & Visual Science.(2002)43(7)，p.2301-2308；Carmen，S.et.al.，Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002)，1(2)，p.189-203；Siriwardena，D.et.al.，Ophthalmology(2002)109(3)，p.427-431等)。
例如，人類抗體之可變區可使用一條鍵抗體(scFv)於噬菌體表面表現，選擇與抗原結合的噬菌體的噬菌體展示群法(Nature Biotechnology(2005)，23，(9)，p.1105-1116)。
與抗原結合下，藉由解析選擇的噬菌體之基因，可決定編碼與抗原結合的人類抗體之可變區的DNA序列。
若清楚結合抗原的scFv之DNA序列，可藉由製作具有該序列的表現載體，導入適當宿主而使表現，取得人類抗體(WO92/01047、WO92/20791、WO93/06213、WO93/11236、WO93/19172、WO95/01438、WO95/15388、Annu.Rev.Immunol(1994)12，p.433-455、Nature Biotechnology(2005)23(9)，p.1105-1116)。
新製作的人類抗體若結合M30抗體之結合的部分胜肽或部分立體構造，可判定該人類抗體結合與M30抗體相同之抗原決定位。又，藉由確認相對於M30抗體之對B7-H3的結合，該人類抗體為競合(即，該人類抗體會妨 礙M30抗體與B7-H3之結合)，即使未確定具體的抗原決定位之序列或構造，亦可判定該人類抗體結合與M30抗體相同之抗原決定位。確認抗原決定位為相同的情形，強烈期待該人類抗體具有與M30抗體同等之細胞傷害活性。
藉由以上方法獲得地嵌合抗體、人類化抗體、或人類抗體，藉由周知方法等評價對抗原的結合性，可選拔適合的抗體。
就比較抗體性質之際之另一指標的一例而言，可列舉抗體之安定性。示差掃描量熱法(DSC)係可飛快又正確測量成為蛋白之相對的構造安定性佳的指標的熱變性中點(Tm)的裝置。使用DSC來測定Tm值，藉由比較其值，可比較熱安定性的差異。已知抗體之保存安定性與抗體之熱安定性有某程度相關(Lori Burton,et.al.，Pharmaceutical Development and Technology(2007)12，p.265-273)，以熱安定性作為指標，可選拔適合的抗體。作為用以選擇抗體的其他指標，可列舉適切的宿主細胞中的產量高、及水溶液中之凝集性低者。例如因不限於產量最高的抗體顯示最高熱安定性，基於以上所述指標而綜合地判斷，有必要選擇最適合對人類投與的抗體。
本發明之抗體亦包含抗體之修飾體。該修飾體係指對本發明之抗體施予化學的或生物學的修飾者。化學的修飾體包含對胺基酸骨格的化學部分的結合、N-鍵結或O-鍵結碳水化物鍵的化學修飾體等。生物學的修飾體包含轉譯後修飾(例如，對N-鍵結或O-鍵結之糖鍵加 成、N末端或C末端之加工、脫醯胺化、天冬胺酸之異性化、甲硫胺酸之氧化)，使用原核生物宿主細胞而使表現而於N末端加成甲硫胺酸殘基等。又，為了使本發明之抗體或抗原之檢出或單離成為可能，經標識者，例如，酵素標識體、螢光標識體、親和性標識體亦包含於該修飾體的意義。如此本發明之抗體之修飾體有用於原本之本發明之抗體的安定性及血中滯留性的改善、抗原性的減少、該抗體或抗原之檢出或單離等。
又，藉由調節與本發明之抗體鍵結的糖鍵修飾(糖基化、脫岩藻醣化等)，增強抗體依存性細胞傷害活性係可能的。就抗體之糖鍵修飾之調節技術而言，已知WO99/54342、WO00/61739、WO02/31140等，但未限定於此等。本發明之抗體亦包含被調節該糖鍵修飾的抗體。
一旦單離抗體基因後，導入適當宿主而製作抗體的情形，可使用適當宿主與表現載體之組合。就抗體基因之具體例而言，可列舉組合編碼本說明書記載的抗體重鍵序列的基因、及編碼輕鍵序列的基因者。轉形宿主細胞之際，重鍵序列基因與輕鍵序列基因被插入相同表現載體中為可能的，又亦可被插入各別的表現載體中。
將真核細胞作為宿主使用的情形，可使用動物細胞、植物細胞、真核微生物。尤其是作為動物細胞，可列舉哺乳類細胞、例如，猴細胞的COS細胞(Gluzman，Y.Cell(1981)23，p.175-182、ATCC CRL-1650)、小鼠纖維母細胞NIH3T3(ATCC No.CRL-1658)或中國倉鼠卵巢 細胞(CHO細胞、ATCC CCL-61)之二氫葉酸還原酵素缺損株(Urlaub，G.and Chasin，L.A.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1980)77，p.4126-4220)。
使用原核細胞的情形，例如，可列舉大腸菌、枯草菌。
藉由轉形於此等細胞中導入目的之抗體基因，經由於活體外培養經轉形的細而獲得抗體。於該培養，有因抗體之序列而產量為不同的情形，由具有同等結合活性的抗體中以產量作為指標來選擇作為醫藥之生產為容易者係可能的。據此，本發明之抗體亦包含藉由特徵為包含培養上述轉形的宿主細胞的步驟、及自以該步驟獲得的培養物採取目的抗體或該抗體之機能性斷片的步驟之該抗體之製造方法而獲得的抗體。
又，哺乳類培養細胞所生產的抗體之重鍵之羧基末端的離胺酸殘基缺失為已知(Journal of Chromatography A，705：129-134(1995))，又，相同重鍵羧基末端之甘胺酸、離胺酸之2胺基酸殘基缺失、位於新的羧基末端的脯胺酸殘基經醯胺化為已知(Analytical Biochemistry，360：75-83(2007))。然而，此等之重鍵序列的缺失及修飾，並未影響抗體之抗原結合能及效應子機能(補體的活性化或抗體依存性細胞障害作用等)。因而，本發明可列舉受該修飾的抗體及該抗體之機能性斷片亦包含之重鍵羧基末端的1或2個胺基酸被刪除的刪除體、及經醯胺化的該刪除體(例如，羧基末端部位之脯胺酸殘基經醯胺化的重鍵)等。惟，只要保持抗原結合能及 效應子機能，本發明之抗體之重鍵羧基末端的刪除體並未限於上述種類。構成本發明之抗體的2條重鍵可為完全長度及選自上述刪除體組成之群的重鍵之任一種，亦可為組合任二種者。各刪除體之量比可受到產生本發明之抗體的哺乳類培養細胞之種類及培養條件的影響，作為本發明之抗體之主成分，可列舉2條重鍵雙方於羧基末端之1個胺基酸殘基刪除的情形。
就本發明之抗體之異型而言，例如可列舉IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等，較佳可列舉IgG1或IgG2。
就抗體之機能而言，一般而言，可列舉抗原結合活性、中和抗原活性的活性、增強抗原活性的活性、抗體依存性細胞傷害(ADCC)活性及補體依存性細胞傷害(CDC)活性，本發明之抗體具有的機能係對B7-H3的結合活性，較佳為抗體依存性細胞吞噬作用(ADCP)活性，更佳為藉由抗腫瘤細胞的ADCP活性的細胞傷害活性(抗腫瘤活性)。再者，本發明之抗體除了ADCP活性外，可一併具有ADCC活性及/或CDC活性。
獲得的抗體可純化至均一。抗體之分離、純化可使用通常蛋白質所使用的分離、純化方法。例如若適宜選擇、組合管柱層析、過濾器過濾、超過濾、鹽析、透析、調製用聚丙烯醯胺電泳、等電點電泳等，可將抗體分離、純化(Strategies for Protein Purification and Characterization：A Laboratory Course Manual，Daniel R.Marshak et al.eds.，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1996)；Antibodies：A Laboratory Manual.Ed Harlow and David Lane，Cold Spring Harbor Laboratory(1988))，但未限定於此等。
就層析而言，可列舉親和性層析、離子交換層析、疏水性層析、凝膠過濾層析、逆相層析、吸附層析等。
此等層析可使用HPLC或FPLC等之液體層析來進行。
就親和性層析所使用的管柱而言，可列舉蛋白質A管柱、蛋白質G管柱。例如就使用的蛋白質A管柱而言，可列舉Hyper D，POROS，Sepharose F.F.(Pharmacia)等。
又使用將抗原固定化的載體，利用對抗原的結合性亦可純化抗體。
[抗腫瘤性化合物]
陳述關於結合本發明之抗體-藥物複合體的抗腫瘤性化合物。就抗腫瘤性化合物而言，只要為具有抗腫瘤效果的化合物，具有可與連結物構造結合的取代基、部分構造者即可，並未特別限制。抗腫瘤性化合物於腫瘤細胞內中連結物之一部或全部被切斷而抗腫瘤性化合物部分游離而表現抗腫瘤效果。連結物與藥物之結合部分若被切斷，抗腫瘤性化合物於原本構造下被游離，而發揮其原本之抗腫瘤效果。
就抗腫瘤性化合物而言，例如，阿黴素(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、絲裂黴素C、博來黴素(bleomycin)、環胞苷(cyclocytidine)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、白金系抗腫瘤劑(順鉑(cisplatin)或其衍 生物)、塔克素(Taxol)或其衍生物、喜樹鹼或其衍生物(日本特開平6-87746號公報記載的抗腫瘤劑)等。關於本發明之抗體-藥物複合體，可較佳使用喜樹鹼衍生物的依喜替康((1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮；下列式：)
此依喜替康雖具有優異的抗腫瘤活性，但尚未作為抗腫瘤藥被販售。相同化合物可以周知方法容易地取得，較佳可使用第1位之胺基作為對連結物構造的結合部位。又，依喜替康亦有與連結物之一部結合的狀態下於腫瘤細胞內游離的情形，即使為此態樣的狀態，亦為優異的抗腫瘤效果被發揮的優異化合物。
於抗體-藥物複合體，藥物對抗體1分子之結合數，為影響其有效性、安全性的重要因子。抗體-藥物複合體之製造係以藥物之結合數成為一定數的方式，規定反應 的原料．試藥之使用量等之反應條件而實施，但與低分子化合物之化學反應不同，獲得呈相異數目的藥物結合的混合物係通常的。對抗體1分子之藥物之結合數係平均值，即，被特定、記載為平均藥物結合數。原則上本發明只要未指明，除去於具相異的藥物結合數的抗體-藥物複合體混合物中所含的具特定藥物結合數的抗體-藥物複合體的情形，藥物之結合數意指平均值。依喜替康對抗體分子之結合數係可控制的，就每1個抗體之藥物平均結合數而言，可結合1至10個左右的依喜替康，較佳為2至8個，更佳為3至8個。又，只要為本項技術領域中具通常知識者即可由本案之實施例記載，設計使與抗體結合的必要數目的藥物的反應，可取得控制依喜替康之結合數的抗體。
依喜替康因具有喜樹鹼構造的緣故，於酸性水性媒體中(例如pH3左右)，平衡會偏向內脂環形成的構造(閉環體)，另一方面，於鹼性水性媒體中(例如pH10左右)，平衡會偏向內脂環為開環的構造(開環體)係已知的。導入對應如此閉環構造及開環構造的依喜替康殘基的藥物複合體亦被期待有同等之抗腫瘤效果，任一者皆包含於本發明之範圍係不言而喻的。
[連結物構造]
1.含親水性構造之連結物
本發明之抗體-藥物複合體特徵為於連結物構造內成為形成親水性構造部分的連結物構造。此親水性構造部分可存於連結物之LP部分、L1部分、或L2部分，亦可 成為複數個親水性構造。此親水性構造係如以下情形。
於連結物LP，下列2個態樣之任一者，即，LP係其N末端為親水性胺基酸，N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或LP係C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽而與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1係成為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-之態樣的情形，於連結物L2，L2係成為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-之態樣的情形。
以下說明本發明之連結物，其具有下列式之構造任一者：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-。
抗體係於L1之末端結合，於L2結合時在相反側之末端結合。抗腫瘤性藥物係於Lc之末端結合，於Lb結合時在相反側之末端結合，或於LP之末端結合，於L2結合時在相反側之末端結合。
n1表示0至6之整數，但較佳為1至5之整數，更佳為1至3。
2. LP中的親水性構造
說明各連結物中的親水性構造。於連結物LP，作為親水性構造，存有2個態樣。其一者係胜肽殘基LP係於N末端成為具有親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，且N末端無甘胺酸以外之親水性胺基酸的情形。
構成如此胜肽連結物的胺基酸之數目，以全體計係3個至8個之範圍為宜。就甘胺酸以外之親水性胺基酸而言，天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、酪胺酸、或精胺酸為宜。此等中，麩胺酸、天冬胺酸或離胺酸為較佳，更佳為天冬胺酸。此親水性胺基酸之數目可為1或複數個，較佳為1或2，更佳為1。
此親水性胺基酸連接的胜肽以全體計係2個至7個之範圍為宜，以胺基酸3或4個構成的胺基酸為較佳。此胜肽係由選自苯丙胺酸(Phe；F)、酪胺酸(Tyr；Y)、白胺酸(Leu；L)、甘胺酸(Gly；G)、丙胺酸(Ala；A)、纈胺酸(Val；V)、離胺酸(Lys；K)、瓜胺酸(Cit)、絲胺酸(Ser；S)、麩胺酸(Glu；E)、天冬胺酸(Asp；D)等的胺基酸而成的胜肽為宜。又就構成胜肽的胺基酸而言，L-或D-胺基酸之任一者為宜，但較佳為L-胺基酸。又，除α-胺基酸之外，可為β-丙胺酸、ε-胺基己酸、γ-胺基丁酸等之構造之胺基酸，又例如可為經N-甲基化的胺基酸等之非天然型之胺基酸。此等中較佳可列舉苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸。就由胜肽連結物之N末端第2位以下之胜肽而言，GGF、GGFG為較佳。
就於N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物LP而言，DGGF、KGGF、EGGF、DGGFG、KGGFG、或EGGFG為較佳，更佳為DGGF、KGGF、DGGFG、或KGGFG，更佳為DGGF或DGGFG。
就LP成為親水性連結物的另外的態樣而言，連結物LP係可列舉其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽而與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的情形。甘胺酸亦被分類為親水性胺基酸，但於胜肽連結物中使用甘胺酸作為親水性胺基酸的情形，於C末端側使與複數個結合為宜。就如此甘胺酸之寡肽而言，2個或3個以上為宜，較佳為甘胺酸之二-或三-胜肽。
LP係含有由甘胺酸構成的寡肽而成為親水性連結物的情形，較佳可列舉GGFGG或GGFGGG。
又LP係於其C末端含有由甘胺酸而成的寡肽而成為親水性構造的情形，LP成為與藥物直接結合的構造者亦為此胜肽連結物之特徵。
於C末端具有由2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽而與藥物結合的情形，於胜肽連結物LP，此以外之部分之胜肽序列可為由選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸的胺基酸而成的胜肽。惟，此情形之胜肽連結物之N末端，不成為作為親水性胺基酸之先前列舉的天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、酪胺酸、或精胺酸。
就構成胜肽的胺基酸而言，可為L-或D-胺基酸之任一者，但較佳為L-胺基酸。又，α-胺基酸之外，可為β-丙胺酸、ε-胺基己酸、γ-胺基丁酸等之構造之胺基酸，又例如可含有經N-甲基化的胺基酸等之非天然型之胺基酸 。胺基酸之數目可為4至8個之胺基酸而成的胜肽，更佳為4至6。
3. LP
連結物LP係如以下，亦存有不成為親水性構造的態樣。即，即使連結物LP不成為親水性連結物的情形，連結物LP可由3至8個之胺基酸作胜肽鍵結的寡肽之殘基而構成。LP於N末端，與L2結合，於C末端，於連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分或直接與抗腫瘤性化合物結合，但若為依喜替康，於第1位之胺基加以結合。
構成不成為親水性連結物的LP的胺基酸只要不是構成親水性構造之LP的情形之胺基酸的構成即可，並未特別限定。例如，可為L-或D-胺基酸之任一者，但較佳為L-胺基酸。又，α-胺基酸之外，可為β-丙胺酸、ε-胺基己酸、γ-胺基丁酸等之構造之胺基酸，又亦可為例如經N-甲基化的胺基酸等之非天然型之胺基酸。
如此LP之胺基酸序列並未特別限定，但就構成的胺基酸而言，可列舉苯丙胺酸、酪胺酸、白胺酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸等。此等中較佳可列舉為苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸。依據胺基酸之種類，可控制藥物游離的樣式。胺基酸之數目可為3至8個。
就不構成親水性構造的連結物LP之具體例而言，可列舉-GGF- -GGFG--GFLG-，但此等中，較佳可使用-GGF-、-GGFG-。
連結物之-NH-(CH2)n1-所示的構造部分，n1係0至6之整數，但較佳為1至5之整數，更佳為1至3。此部分之胺基部分係結合LP之C末端。
4. L1、L2中的親水性構造
連結物L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-之態樣的情形，本發明中成為所謂的親水性連結物。n3表示1至8之整數，但較佳為2至4，更佳為2。於此親水性構造部分之-(CH2)n3-COOH，羧基部分可為羥基或胺基。又，連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，連結物L2係成為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-，而n6為0至4為較佳。
連結物L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-之態樣的情形，本發明中成為所謂的親水性連結物。n7表示1至4之整數，但較佳為3或4。該連結物係以末端之胺基與連結物L1結合，以相對之末端之羰基與連結物LP之N末端結合。
藉由以上之具有親水性構造的連結物之存在，可達成發揮抗腫瘤效果的藥物成分之優異的游離。
5. L1
連結物L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)- CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-之各構造所示的構造之連結物。其中，n2係2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數。
於L1中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-所示的構造之連結物，『-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-』係具有下列式所示的構造
此部分構造中的第3位為對抗體的結合部位。再者，此第3位與抗體之結合係於抗體之鉸鏈部之雙硫鍵部分形成硫醚而結合為特徵。另一方面，此構造部分之第1位之氮原子係與此構造所含的連結物內存在的亞甲基之碳原子結合。即，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-L2-係下列式所示構造(其中，「抗體-S-」係來自抗體)。
式中，n2係2至8之整數，但較佳為2至5。
L1中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-係先前所述的親水性連結物。
於L1中之-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-所示的構造之連結物，n4係1至8之整數，但較佳為2至6。此連結物係與抗體於末端之亞甲基之碳原子上結合，但具有與先前同樣地形成硫醚而結合的下列構造(其中，「抗體-S-」係來自抗體)：抗體-S-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-L2-。
L1中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-所示構造之連結物，其中『-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-』具有下列式所示構造：
於此構造部分，第1位之氮原子係與含同構造的連結物內存在的亞甲基碳原子結合。第3位之碳原子係與連結物L2中之-S-(CH2)n8-C(=O)-，於其末端之硫原子結合。又，此L2之連結物-S-(CH2)n8-C(=O)-，係形成與L1連結物中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-組合的連結物構造。其中，連結物所含的『-cyc.Hex(1,4)-』表示1,4-伸環己基。連結物-C(=O)-cyc.Hex(1,4)- CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係與抗體於末端之羰基碳形成醯胺鍵而結合(下列式；其中，「抗體-NH-」係來自抗體)。
形成此醯胺鍵的抗體之胺基可為抗體之離胺酸殘基之側鍵或為抗體N末端之胺基。又，此連結物係醯胺鍵外，亦可與抗體之胺基酸具有的羥基形成酯鍵來鍵結。
該連結物所含的『-cyc.Hex(1,4)-』構造部分係1,4-伸環己基之外，可為除此之外的2價飽和環狀伸烷基之伸環丁基、伸環戊基、伸環庚基、伸環辛基等之2價環狀飽和烴基。又，亦可為伸苯基、伸萘基等之2價芳香族烴基，又，可為5員環、6員環之飽和、部分飽和、或芳香族之含1或2個雜原子的2價雜環基。再者，可為碳數1至4之2價伸烷基。又，2價之位置可為鄰接位置，亦可為分離的位置。
於L1中之-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-所示的構造之連結物，n5係1至8之整數，但較佳為2至6。此連結物亦與上述之連結物同樣地，於末端之羰基，與抗體之胺基酸之胺基形成醯胺鍵而鍵結(下列式；於該構造，「抗體-NH-」係來自抗體)。
抗體-NH-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-。
就連結物L1之具體例而言，可列舉-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)--CH2-C(=O)-NH-CH2-C(=O)--CH2-C(=O)NH-CH2CH2-C(=O)--CH2-C(=O)NH-CH2CH2CH2-C(=O)--CH2-C(=O)NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)--CH2-C(=O)NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)- -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)--C(=O)-芳基-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)--C(=O)-cyc.Het-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)--C(=O)-CH2-C(=O)--C(=O)-CH2CH2-C(=O)--C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-等
(芳基表示2價之芳香族烴基，cyc.Het表示2價之環狀雜環基)。
6. L2
連結物L2係-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或-S-(CH2)n8-C(=O)-所示的構造之連結物，但L2可不存在，此情形，L2成為單鍵。又，n6係0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8係1至6之整數。
L2中之-NH-(CH2CH2O)n6-CH2-CH2-C(=O)-所示的構造之連結物，n6係0至6之整數，但較佳為2至4。該連結物係於末端之胺基之氮原子與L1結合，相之末端之羰基與LP之N末端結合。又，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，僅L2中之-NH-(CH2CH2O)n6-CH2-CH2-C(=O)-結合，且n6成為0。
L2中之-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-(C(=O)-所示的連結物係先前所述的親水性連結物。
於L2中之-S-(CH2)n8-C(=O)-，n8係1至6之整數，但較佳為2至4。
就連結物L2之具體例而言，可列舉-NH-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)--N(-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)--N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)--N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)--N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-等。
再者，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-的情形，組合的L1係-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，就-L1-L2-連結物之具體例而言，可列舉-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2-C(=O)--C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-C H2CH2-C(=O)--C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)--C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-等。
7. La
連結物之La係-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-之各構造之任一者、或為單鍵，但n9係1至6之整數，R1係氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，na係整數1至4，nb係1至6之整數。
連結物之La中之醯胺構造的-C(=O)-NH-係氮原子側與Lb鍵結。於連結物之La中之-NR1-(CH2)n9-的構造部分，n9係1至6之整數，較佳為1至3。該部分係亞甲基側與Lb鍵結。R1係氫原子或碳數1至6之烷基，但碳數1至6之烷基的情形，可為直鏈狀亦可為分枝鏈狀。例如，可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基及2-乙基丁基等。此等中較佳為甲基 或乙基。R1為-(CH2)na-COOH所示的構造時，na係整數1至4，但較佳為1或2。R1係-(CH2)nb-OH所示的構造時，n9係1至6之整數，但較佳為1或2。就R1而言，氫原子、甲基、乙基、-CH2COOH、-CH2CH2-COOH、或-CH2CH2-OH為較佳，更佳為氫原子、甲基、-CH2COOH。更佳為氫原子。又，連結物之La部分可為-O-、或單鍵。
8. Lb
連結物之Lb係-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-之各構造之任一者，或為單鍵，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4係氫原子或碳數1至6之烷基，nc係0至6之整數，nd係整數1至4，ne係整數0至4，但nc或ne為0時，R2及R3不成為相同。
R2及R3為烷基時，此烷基係與R1中的烷基同樣地解釋的烷基。R2及R3為-(CH2)nc-NH2之構造時，nc係0至6之整數，但較佳為0，或者3至5。又，nc為0時，R2及R3不成為相同。R2及R3為-(CH2)nd-COOH之構造時，nd係整數1至4，但較佳為1或2。R2及R3為-(CH2)ne-OH之構造時，ne係整數0至4，但較佳為1或2。
R2及R3較佳為氫原子、甲基、乙基、-NH2、-CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2COOH、-CH2CH2-COOH、-CH2OH、或-CH2CH2-OH為較佳，更佳為氫原子、甲基、-NH2、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2COOH、-CH2CH2-COOH、-CH2OH、或-CH2CH2-OH。更佳為氫原子。
R4為碳數1至6之烷基，此烷基係與R1中的烷基同樣地解釋的烷基。就R4而言，氫原子或甲基為較佳，更佳為氫原子。
就連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-所示的構造之具體例而言，可列舉-NH-CH2--NH-CH(-Me)--NH-C(-Me)2--NH-CH2-CHMe--NH-CH(-CH2OH)--NH-CH(-CH2COOH)--NH-CH(-CH2CH2COOH)--NH-CH(-CH2CH2CH2CH2NH2)--NH-CH2CH2--NH-CH2-O-CH2--NH-CH2CH2-O--NH-CH2CH2-O-CH2--NH-CH2CH2C(-Me)2--NH-CH2CH2NH--NH-CH2CH2NH-CH2--NH-CH2CH2NMe-CH2--NH-CH2CH2NH-CH2CH2--NH-CH2CH2NMe-CH2CH2--NH-CH2CH2N(-CH2COOH)-CH2--NH-CH2CH2N(-CH2CH2OH)-CH2- -NH-CH2CH2N(-CH2CH2OH)-CH2CH2--NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2OH)--NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2COOH)--NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2CH2CH2CH2NH2)--NH-CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2CH(NH2)-等。
此等中較佳可列舉-NH-CH2--NH-CH2-CH(Me)--NH-CH(-CH2OH)--NH-CH(-CH2CH2COOH)--NH-CH2CH2--NH-CH2-O-CH2--NH-CH2CH2-O--NH-CH2CH2-O-CH2--NH-CH2CH2C(-Me)2--NH-CH2CH2NH--NH-CH2CH2NH-CH2--NH-CH2CH2NMe-CH2--NH-CH2CH2NMe-CH2CH2--NH-CH2CH2N(-CH2COOH)-CH2--NH-CH2CH2N(-CH2CH2OH)-CH2--NH-CH2CH2N(-CH2CH2OH)-CH2CH2- -NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2OH)--NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2COOH)--NH-CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2CH2-等。
更佳可列舉-NH-CH2--NH-CH2CH2--NH-CH2-O-CH2--NH-CH2CH2-O--NH-CH2CH2-O-CH2--NH-CH2CH2NH--NH-CH2CH2NH-CH2--NH-CH2CH2N(-CH2COOH)-CH2--NH-CH2CH2N(-CH2CH2OH)-CH2CH2--NH-CH2CH2CH2C(=O)-NHCH(-CH2COOH)--NH-CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2--NH-CH2CH2CH2CH2CH2-。
更佳為-NH-CH2--NH-(CH2)2--NH-(CH2)3--NH-CH2-O-CH2--NH-(CH2)2-O-CH2-。
9. Lc
連結物之Lc係-CH2-或-C(=O)-。於該連結物與抗腫瘤性化合物結合。就連結物之Lc而言，-C(=O)-為更佳。
連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係鍵長為4至7個原子之鍵長者為較佳，更佳為具有5或6個原子之鍵長。
本發明之抗體-藥物複合體係移動至腫瘤細胞內後連結物部分被切斷，NH2-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)所示的構造之藥物衍生物游離而表現抗腫瘤作用。就自本發明之抗體-藥物複合體游離的表現抗腫瘤效果的抗腫瘤性衍生物而言，可列舉先前例示的連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-所示構造上與Lc結合，具有末端成為胺基的構造部分的抗腫瘤性衍生物，但特佳者如下：NH2-CH2-C(=O)-(NH-DX)NH2-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)NH2-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)NH2-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)
又，NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)之情形，因同分子內的胺縮醛(aminal)構造為不安定，進一步自己分解而有游離HO-CH2-C(=O)-(NH-DX)。此等之化合物亦可較佳使用作為本發明之抗體-藥物複合體之製造中間體。
於依喜替康作為藥物的本發明之抗體-藥物複合體，使以下記載的構造之藥物-連結物構造部分與抗體結合者為較佳。此等藥物-連結物構造部分係每1抗體 的平均結合數，若使1至10個結合為宜，較佳為2至8，更佳為3至8。作為藥物-連結物構造部分較佳可列舉以下各者。
10. LP含親水性構造的情形之具體例
為藥物-連結物構造部分，LP為於N末端成為具有親水性胺基酸的胜肽殘基的藥物-連結物構造部分，係以-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或-L1-L2-LP-(NH-DX)之任一態樣存在。構成此等之藥物-連結物構造部分的各部分之連結物之組合係如下所示。
連結物L1於將藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體結合時，為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，於藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與抗體結合時，為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-。
連結物L2係，連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-時，可為單鍵，連結物L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-時，選自-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-或單鍵。又，-S-(CH2)n8-C(=O)-之連結物可與連結物L1中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-組合來使用。
連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係3至7個原子之鍵長的情形為較佳。4至7個原子之鍵長的情形，更佳為5或6個原子之鍵長之連結物。連結物之-NH-(CH2)n1- La-Lb-部分之具體例，如先前之說明，但-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為特佳。
連結物之-Lc-部分係-C(=O)-為較佳。
作為含N末端具有親水性胺基酸的胜肽之連結物的藥物-連結物構造部分，具體而言，可列舉以下各者。
就用以使藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結合之藥物-連結物構造部分，可列舉下列式所示構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-EGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-EGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n2為2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-較佳，又， LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言，下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH- CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)所示者為較佳，更佳係n2為2或5。
更佳係n2為，下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-D GGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
此等中更佳為下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-D GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
就藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結用之其他態樣之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示者：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-EGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-EGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n4係2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O -CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言，-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-(NH-DX)為較佳。
更佳係n4為2，-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式： -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
更佳為-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
又，就使藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與 抗體鍵結用之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-EGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-EGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n8係1至6為較佳，更佳為2。-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言，-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)為更佳。
此等中更佳為下列式：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-D X)或下列式：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)所示者。
又，就將藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與抗體鍵結用之其他態樣之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示的構造：-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-EGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-EGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n5為6為宜，L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-或單鍵，但單鍵為較佳。又，n6為0、2或4為宜，較佳為0。-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C (=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言，-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)為較佳。
連結物LP為於C末端具有甘胺酸而成的寡肽的胜肽殘基的情形，藥物-連結物構造部分係如-L1-L2-LP-(NH-DX)，以LP與藥物直接鍵結的態樣存在。LP為於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽殘基的連結物的情形之構成藥物-連結物構造部分的各部分之連結物之組合係如以下所示。
連結物L1於藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結時，為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵鍵結時，為選自-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-。
連結物L2於連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-時，係-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-或單鍵為宜，連結物L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-時，係選自單鍵。又，-S-(CH2)n8-C(=O)-之連結物，可與連結物L1中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-組合來使用。
作為含C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽的連結物的藥物-連結物構造部分，具體而言，可列舉以下各者：就將藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結用之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
其中較佳n2為2或5。
更佳係n2為5，且下列式所示者： -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
就將藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體結合用之其他態樣之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示者：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
此等中更較係為n4為2或5。
此等中更佳係n4為2之下列式所示者：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
又，就使藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵或酯鍵與抗體鍵結用之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示者：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
其中，n8係2為較佳。
具體而言為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX) -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
又，就使藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與抗體鍵結用之其他態樣之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示的構造：-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-GGFGG-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-GGFGGG-(NH-DX)。
其中，n5係6為宜，L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-或單鍵，但單鍵為較佳。又，就n6而言，係0、2或4為宜，較佳為0。
更具體而言為-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
11. L1為含親水性構造的情形之具體例
連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結，而藥物-連結物構造部分係以-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或-L1-L2-LP-(NH-DX)之態樣存在。構成此藥物-連結物構造部分的各部分之連結物之組合係如以下所示。
連結物L2為NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-或單鍵，但單鍵為較佳。又，就n6而言，0、2或4為宜，較佳為0。
連結物LP於其胺基酸序列並未特別限定，但就構成的胺基酸而言，可列舉苯丙胺酸、酪胺酸、白胺酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸等。此等中較佳為苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸。依胺基酸之種類，可控制藥物游離的樣式。胺基酸之數目係3至8個為宜。就具體例而言，可為先前列示者，但特佳為GGFG。
連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係4至7個原子之鍵長的情形為較佳。更佳為5或6個原子之鍵長之連結物。連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-部分之具體例，如先前說明者。
又，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分可為單鍵。
連結物之-Lc-部分係-C(=O)-為較佳。
連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的藥物-連結物構造部分，係透過抗體與硫醚鍵而鍵結，為下列式所示的構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-GGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n6為0。又，n3為2至4，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者為較佳，又，LP係與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言係下列式所示者： -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
其中n3為2者為較佳，下列式：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) 或下列式：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)為較佳。
12. L2為含親水性構造的情形之具體例
連結物L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-時，藥物-連結物構造部分係以-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或-L1-L2-LP-(NH-DX)之態樣存在。構成此藥物-連結物構造部分的各部分之連結物之組合係如以下所示。
連結物L1係使藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結時，為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，使藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與抗體鍵結時，為選自-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-。
連結物LP其胺基酸序列並未特別限定，但就構成的胺基酸而言，可列舉苯丙胺酸、酪胺酸、白胺酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸等。此等中較佳可列舉苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸。依胺基酸之種類，可控制藥物游離的樣式。胺基酸之數目係3至8個為宜。就具體例而言，只要為先前列示者即可，並未特別限定，但較佳為GGFG。
連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係4至7個原子之鍵長的情形為較佳。更佳為5或6個原子之鍵長之連結物。連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-部分之具體例係如先前 說明者。
又，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分可為單鍵。
連結物之-Lc-部分係-C(=O)-為較佳。
連結物L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的藥物-連結物構造部分係下列式所示者：-L1-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)為較佳。
就使藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體結合用之藥物-連結物構造部分而言，係下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n2為2或5，n7為3或4，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言係下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C( =O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳為n2為5、n7為3或4者，但又n7為3者較佳，下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)為較佳。
就藥物-連結物構造部分透過硫醚鍵與抗體鍵結用之其他態樣之藥物-連結物構造部分而言，可列舉下列式所示者：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n4為2或5、n7為3或4、-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
具體而言係下列式所示：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-C H2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
此等中較佳為n4為2、n7為3或4者，但n7為3更佳，為下列式所示：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
又，就使藥物-連結物構造部分透過醯胺鍵與抗體鍵結用之藥物-連結物構造部分而言，係下列式所示：-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n5表示1至8之整數，但較佳為2至6、n7為3或 4、-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言，為下列式所示：-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳為n5為6、n7為3或4，但n7為3者更佳，為下列式所示：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳為下列式所示：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
[製造方法]
其次，說明本發明之抗體-藥物複合體或其製造中間體之代表性的製造方法。又，於以下，化合物以各反應式中所示的化合物編號表示。即，稱為『式(1)之化合物 』、『化合物(1)』等。又除此以外編號的化合物亦同樣地記載。
1.製造方法1
式(1)所示抗體-藥物複合體中，透過硫醚而抗體與連結物構造結合者係可藉由例如下述之方法來製造。
[式中，AB表示具有氫硫基的抗體，L1’係於L1所示連結物構造，表示連結物末端成為順丁烯二醯亞胺基(下列式)的構造
(其中，氮原子為結合部位)、或末端成為鹵素的構造的連結物，但L1中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-部分成為順丁烯二醯亞胺基的基，或L1中的-CH2C(=O)NH-(CH2)n4-C(=O)-之末端的亞甲基經鹵素化而成為鹵乙醯胺之鹵素-CH2C(=O)NH-(CH2)n3-C(=O)-基。
又，-(NH-DX)係下列式所示構造： 表示抗腫瘤性藥物之第1位的胺基之氫原子1個被去除而生成的基。又，於上述之反應式，式(1)之化合物中，被記載由藥物至連結物末端的構造部分1個對1個抗體結合的構造，但此係為了說明而方便的記載，實際上該構造部分對抗體分子大多為複數個結合的情形。又此狀況於以下之製造方法之說明亦為同樣的]。
即，藉由使後述方法獲得的化合物(2)、與具有氫硫基的抗體(3a)反應，可製造抗體-藥物複合體(1)。
具有氫硫基的抗體(3a)可以本項技術領域中具通常知識者周知之方法獲得(Hermanson，G.T、Bioconjugate Techniques、pp.56-136、pp.456-493、Academic Press(1996))。例如，可列舉使Traut’s試藥作用於抗體之胺基；N-琥珀醯亞胺基S-乙醯基硫烷酸酯類作用於抗體之胺 基後，使羥基胺作用；使N-琥珀醯亞胺基3-(吡啶基二硫)丙酸酯作用後，使還原劑作用；使二硫蘇糖醇、2-氫硫基乙醇、參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)等之還原劑與抗體作用而將抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原等等之方法，但並未限於此等例。
具體而言，於具有氫硫基的抗體(3a)之磷酸緩衝食鹽水溶液(pH7.2)中，添加化合物(2)之二甲基亞碸溶液，而可製造抗體-藥物複合體(1)。之後，於使生成抗體藥物結合的反應中如通常使用的方式，添加N-乙醯基-L-半胱胺酸(NAC)，使未反應之化合物(2)之反應性失活，製造的抗體-藥物複合體(1)係藉由以下之操作而濃縮，進行緩衝液交換、純化，進行抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定、及凝集體含有率的算出，可進行抗體-藥物複合體(1)之鑑定。
共通操作A：抗體或抗體-藥物複合體水溶液之濃縮
於Amicon Ultra(50,000MWCO，Millipore Corporation)之容器內置入抗體或抗體-藥物複合體溶液，使用離心機(Allegra X-15R，Beckman Coulter,Inc.)的離心操作(於2000G至3800G離心5至20分鐘)，濃縮抗體或抗體-藥物複合體溶液。
共通操作B：抗體之濃度測定
使用UV測定器(Nanodrop 1000，Thermo Fisher Scientific Inc.)，依據製造商規定的方法，進行抗體濃度的測定。此時，於各抗體使用相異的280nm吸光係數 (1.3-1.8/mg/mL)。
共通操作C-1：抗體之緩衝液交換
使用Sephadex G-25載體的NAP-25管柱(Cat.No.17-0852-02，GE Healthcare Japan Corporation)，依據製造商說明書之方法，以含氯化鈉(137mM)及伸乙基二胺四乙酸(EDTA，5mM)的磷酸緩衝液(10mM，pH6.0；本說明書中稱為PBS6.0/EDTA)使其平衡化。於此NAP-25管柱每一根，負載抗體水溶液2.5mL後，以PBS6.0/EDTA3.5mL分取溶出的劃份(3.5mL)。此劃份依共通操作A加以濃縮，使用共通操作B進行抗體濃度的測定後，使用PBS6.0/EDTA而調整抗體濃度為10mg/mL。
共通操作C-2：抗體之緩衝液交換
使用Sephadex G-25載體的NAP-25管柱(Cat.No.17-0852-02，GE Healthcare Japan Corporation)，依據製造商規定之方法，以含氯化鈉(50mM)及EDTA(2mM)的磷酸緩衝液(50mM，pH6.5；本說明書中稱為PBS6.5/EDTA)平衡化。於此NAP-25管柱每一根中，使負載抗體水溶液2.5mL後，以PBS6.5/EDTA3.5mL分取溶出的劃份(3.5mL)。此劃份藉由共通操作A濃縮，使用共通操作B來進行抗體濃度之測定後，使用PBS6.5/EDTA調整抗體濃度為20mg/mL。
共通操作D-1：抗體-藥物複合體之純化
以市售之磷酸緩衝液(PBS7.4，Cat.No.10010-023，Invitrogen)、含氯化鈉(137mM)的磷酸鈉緩衝液(10mM，pH6.0；本說明書中稱為PBS6.0)或含山梨糖醇(5%)的乙 酸緩衝液(10mM，pH5.5；本說明書中稱為ABS)之任一緩衝液，使NAP-25管柱平衡化。於此NAP-25管柱中，使負載抗體-藥物複合體反應水溶液(約1.5mL)，以製造商規定量的緩衝液溶出，而分取抗體劃份。使此分取劃份再次於負載緩衝液的NAP-25管柱中溶出的凝膠過濾純化操作共計重複2至3次，獲得去除未結合的藥物連結物或低分子化合物(參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)，N-乙醯基-L-半胱胺酸(NAC)，二甲基亞碸)的抗體-藥物複合體。
共通操作D-2：琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸酯(SMCC)衍生物化抗體之純化
以PBS6.5/EDTA使NAP-25管柱平衡化。於此NAP-25管柱中，使負載含琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸酯(本說明書中稱為SMCC)衍生物化抗體的反應液(約0.5mL)，以製造商規定量之緩衝液溶出，分取抗體劃份而進行純化。
共通操作E：抗體-藥物複合體中的抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定
抗體-藥物複合體中的結合藥物濃度係測定抗體-藥物複合體水溶液之例如280nm及370nm二波長中的UV吸光度後，進行下述之計算，而可加以算出。
因某波長中的全吸光度係相等於系統內存在的全部吸收化學種的吸光度的和[吸光度的加成性]，於抗體與藥物的結合前後，暫定抗體及藥物之莫耳吸光係數未變化時，抗體-藥物複合體中的抗體濃度及藥物濃度係以下 述關係式表示。
A280=AD,280+AA,280=εD,280CD+εA,280CA 式(1)
A370=AD,370+AA,370=εD,370CD+εA,370CA 式(2)
其中，A280表示280nm中的抗體-藥物複合體水溶液之吸光度，A370表示370nm中的抗體-藥物複合體水溶液之吸光度，AA280表示280nm中的抗體之吸光度，AA,370表示370nm中的抗體之吸光度，AD,280表示280nm中的複合體前驅物之吸光度，AD,370表示370nm中的複合體前驅物之吸光度，εA,280表示280nm中的抗體之莫耳吸光係數，εA,370表示370nm中的抗體之莫耳吸光係數，εD,280表示280nm中的複合體前驅物之莫耳吸光係數，εD,370表示370nm中的複合體前驅物之莫耳吸光係數，CA表示抗體-藥物複合體中的抗體濃度，CD表示抗體-藥物複合體中的藥物濃度。
其中，εA,280、εA,370、εD,280、εD,370係由事前之測定為已知。測定抗體-藥物複合體水溶液之A280及A370，將此等值代入式(1)及(2)而解出聯立方程式，可求得CA及CD。再者，用CA除CD可求得每1抗體之藥物平均結合數。
製造方法1中的式(2)所示的化合物係下列式之任一者。
Halogen-CH2C(=O)NH-(CH2)n4-C(=O)-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)Halogen-CH2C(=O)NH-(CH2)n4-C(=O)-NH-[(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX) Halogen-CH2C(=O)NH-(CH2n4-C(=O)-L2-LP-(NH-DX)Halogen-CH2C(=O)NH-(CH2)n4-C(=O)-NH-[(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-(NH-DX)
[上述式中，n1、n2、n3、n4、n7、L2、LP、La、Lb及Lc係如已定義者，LP或Lc係成為與藥物之結合部位]。
作為如此本發明之抗體-藥物複合體之製造上有用的中間體，較佳者就n2而言，係整數2至5，連結物L1係不為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，L2為-N[(-CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、n7為3或4、或為單鍵較佳， 就LP而言，較佳者為：於N末端具有親水性胺基酸的胜肽殘基時，係DGGF、KGGF、EGGF、DGGFG、KGGFG、或EGGFG，於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物時，係GGFGG、或GGFGGG，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-之部分構造為較佳。
又，LP與藥物直接鍵結者為較佳，但於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物時，C末端與藥物直接鍵結。
於此等之化合物，具體而言可為以下例示者[其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)意指順丁烯二醯亞胺基(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)]。
連結物LP係於N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物的情形，就製造中間體而言較佳可使用下列式所示的構造之化合物：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n2係2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言係下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) (順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)，較佳為n2為2或5。
於此等中，更佳為n2為5者中之下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)- DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) (順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
連結物LP於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物時，就製造中間體而言，可較佳使用於下列式所示的構造之化合物：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
此等中，n2為2至5為較佳。
此等中，更佳為n2為5者中，係下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)- GGFGG-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
連結物L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，作為製造中間體，可較佳使用於下列式所示的構造之化合物：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n6為0。n3為2至4、-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。LP係GGFG為較佳。
更具體而言係下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-( NH-DX)或下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
此等中，n3為2者較佳，為下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示者：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH(CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)為較佳。
連結物L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-時，就製造中間體而言，可較佳使用於下列式所示的構造之化合物：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n2為2至5，n7為3或4，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。LP係GGFG為較佳。
更具體而言係下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳係n2為5、n7為3或4，但n7為3者更佳，為下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C (=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
具有鹵乙醯基、於N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物時，就製造中間體而言，可較佳使用於下列式所示的構造之化合物：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-EGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX) X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-EGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n4為2至5、-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。又就X而言，溴或碘為較佳。
更具體而言係下列式：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH 2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGF-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGF-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)為更佳。
更佳為n4為2的下列式：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH 2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
其中，上述之式中之X表示溴原子或碘原子。此等之溴化合物及碘化合物係任一者皆可較佳作為製造中間體來使用。
具有鹵乙醯基、於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物時，作為製造中間體，可較佳使用下列式所示的構造之化合物：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
較佳係n4為2或5，但更佳為2之下列式所示者：X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGGFG-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
其中，式中之X表示溴原子或碘原子。以上之溴化合物及碘化合物係任一者皆可較佳使用於製造中間體。
連結物L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-時，作為製造中間體，可較佳使用於下列式所示的構造之化合物：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n4為2至5、n7為3或4、-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。LP係GGFG為較佳。
具體而言為下列式：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(= O)-(NH-DX)或下列式：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳係n4為2、n7為3或4，但n7為3者係更佳，且為下列式所示：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式所示：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)者較佳。
又，為了確保複合體之量，混合同樣條件下製作而獲得的平均藥物數為同程度的複數複合體(例如±1左右)而可作成新的批次。於此情形，平均藥物數滿足於混合 前之平均藥物數之間。
2.製造方法2
式(1)所示的抗體-藥物複合體及彼等之藥理上可容許的鹽中，與抗體之結合為醯胺基，係於連結物內具有硫醚鍵的連結物，具體而言，-L1-L2-係-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-之構造者，可藉由下述方法來製造。
[式中，AB-L1’表示抗體與連結物L1結合，又L1之末端變換為N-順丁烯二醯亞胺基的基，具體而言，於AB-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-被變換為順丁烯二醯亞胺基的構造。L2’表示末端成為氫硫基的HS-(CH2)n8-C(=O)-基，AB表示抗體]。
即，藉由使後述方法取得的化合物(2a)、與具有順丁烯二醯亞胺基的連結物結合的抗體(3b)反應，可製造抗體-藥物複合體(1)。
具有順丁烯二醯亞胺基的抗體(3b)亦可以本項技術領域中具通常知識者周知之方法獲得(Hermanson，G.T、Bioconjugate Techniques、pp.56-136、pp.456-493、Academic Press(1996))。例如可列舉具有具與胺基、羥基之結合性的順丁烯二醯亞胺基的琥珀醯亞胺基-4-(N- 順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)等之二官能性連結物與抗體的胺基作用而導入順丁烯二醯亞胺基等之方法，但未限定於此等。
例如，若為將對胺基之反應性部分、與對硫醇基之反應性部分以連結物結合的化合物可較佳使用。其中對胺基之反應性部分係活性酯、醯亞胺酯等為宜，又硫醇反應性部分係順丁烯二醯亞胺基、鹵素化乙醯基、鹵素化烷基、又二硫吡啶基等為宜。
就於構成抗體的胺基酸之胺基或羥基，尤其是胺基，藉由醯胺鍵而用以構築連結物的方法而言，首先與抗體反應的化合物，若為下列式表示的化合物為宜：Q1-L1a-Q2[式中，Q1表示(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、(3-磺酸基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、RQ-O-C(=N)-、或O=C=N-，L1a-表示-cyc.Hex(1,4)-CH2-、碳數1至10之伸烷基、伸苯基、-(CH2)n4-C(=O)-、-(CH2)n4a-NH-C(=O)-(CH2)n4b-、或-(CH2)n4a-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-，Q2表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)、鹵素原子、或-S-S-(2-吡啶基)，但RQ表示碳數1至6之烷基、n4表示1至8之整數，n4a表示0至6之整數、n4b表示1至6之整數]。
其中，RQ係碳數1至6之烷基為宜，更佳為甲基或乙基。
就L1a中的伸烷基而言，碳數1至10者為宜。就伸苯 基而言，可為鄰位、間位、對位任一者，但對位、或間位為更佳。
作為L1a，較佳可列舉-cyc.Hex(1,4)-CH2-、-(CH2)5-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-、-(CH2)2-NH-C(=O)-CH2-、-(CH2)5-NH-C(=O)-(CH2)2-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)5-、-(CH2)10-、-(對-Ph)-、-(間-Ph)-、-(對-Ph)-CH(-CH3)-、-(CH2)3-(間-Ph)-、或-(間-Ph)-NH-C(=O)-CH2-。
作為Q1，較佳為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，Q2係(順丁烯二醯亞胺-N-基)為較佳，但使雙硫鍵形成時係使用-S-S-(2-吡啶基)為宜。
其中，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下列式所示氮原子為結合部位的基 (3-磺酸基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下列式所示氮原子為結合部位的基 其磺酸可形成鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽，較佳為鈉鹽，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，(順丁烯二醯亞胺-N-基)係下列式所示之氮原子為結合部位的基 (2-吡啶基)表示2-吡啶基，(對-Ph)表示對伸苯基，(間-Ph)表示間伸苯基。
作為如此的化合物，除上述化合物之外，可使用磺酸基琥珀醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sulfo-SMCC)、N-琥珀醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-胺基己酸酯)(LC-SMCC)、κ-順丁烯二醯亞胺基十一酸N-琥珀醯亞胺基酯(KMUA)、γ-順丁烯二醯亞胺基丁酸N-琥珀醯亞胺基酯(GMBS)、ε-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(EMCS)、m-順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀 醯亞胺酯(MBS)、N-(α-順丁烯二醯亞胺基乙醯氧基)-琥珀醯亞胺酯[AMAS]、琥珀醯亞胺基-6-(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、N-琥珀醯亞胺基4-(p-順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸酯(SMPB)、N-(p-順丁烯二醯亞胺基苯基)異氰酸酯(PMPI)、N-琥珀醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀醯亞胺基溴乙酸酯(SBA)、N-琥珀醯亞胺基3-(溴乙醯胺)丙酸酯(SBAP)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)、及琥珀醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(SMPT)等。
具體而言，例如，對抗體(3)，將2至6當量之SMCC於pH6至7之磷酸緩衝液中，使於室溫反應1至6小時，SMCC之活性酯與抗體反應而可獲得具有順丁烯二醯亞胺基的抗體(3b)。獲得的抗體(3b)係藉由下述共通操作D-2加以純化，可用於與以下化合物(2)之反應。
抗體之胺基、羥基係各自表示例如抗體之具有的N末端胺基及/或離胺酸殘基具有的胺基、絲胺酸殘基具有的羥基，但並未限定於此。
製造的抗體-藥物複合體(1)的濃縮、緩衝液交換、純化、抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定、及藉由凝集體含有率的算出的抗體-藥物複合體(1)之鑑定，可與製造方法1所述同樣地進行。
於製造方法2，式(3b)所示的化合物係具有下列構造(下列式；於該構造，「抗體-NH-」係來自抗體)。
用以製造本發明之抗體-藥物複合體之中間體，具有上述構造的化合物係如下式(式中，n表示1至10之整數，但較佳為2至8，更佳為3至7)。
又就末端成為氫硫基的本發明之化合物而言，可列舉以下各者。
就N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物，作為製造中間體，可較佳使用下列式所示的構造之化合物： HS-(CH2)n8-C(=O)-DGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)HS-(CH2)n8-C(=O)-KGGF-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)HS-(CH2)n8-C(=O)-DGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)HS-(CH2)n8-C(=O)-KGGFG-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n8為2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為較佳，又，LP與藥物直接鍵結者為較佳。
更具體而言係n8為2較佳，為下列式：HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)或下列式：HS-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物時，就製造中間體而言，可較佳使用下列式所示的構造之化合物：HS-(CH2)n8-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)HS-(CH2)n8-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
其中n8為2或5者較佳。
更佳n8為2，為下列式：HS-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)HS-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
3.製造方法3
式(1)所示抗體-藥物複合體及彼等之藥理上可容許的鹽中，藉由醯胺鍵而藥物連結物部分與抗體結合者，可以下列方法製造。例如L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其成為活性酯的L1’，例如(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-可較佳地使用。又L2為單鍵的情形，例如可藉由下述方法來製造。
即，藉由使以後述方法取得的化合物(2b)、與抗體(3)反應，可製造抗體-藥物複合體(1)。
化合物(2b)係具有與抗體之胺基、羥基之結合性。抗體之胺基、羥基係如製造方法2記載，各自表示例如抗 體之具有的N末端胺基及/或離胺酸殘基具有的胺基、絲胺酸殘基具有的羥基，但未限定於此等。
化合物(2b)係由N-羥基琥珀醯亞胺基酯基而成的活性酯，但亦可使用其他活性酯，例如磺酸基琥珀醯亞胺基酯基、N-羥基酞醯亞胺基酯、N-羥基磺酸基酞醯亞胺基酯、鄰-硝基苯基酯、對-硝基苯基酯、2,4-二硝基苯基酯、3-磺醯基-4-硝基苯基酯、3-羧基-4-硝基苯基酯、五氟苯基酯等。
化合物(2b)與抗體(3)之反應係每1個抗體(3)使用2至20莫耳當量之化合物(2b)，可製造每1個抗體與1個至10個藥物結合的抗體-藥物複合體(1)。具體而言，於含抗體(3)的緩衝液，藉由添加使化合物(2b)溶解的溶液而使反應，可製造抗體-藥物複合體(1)。其中，作為緩衝液，可使用乙酸鈉溶液、磷酸鈉或硼酸鈉等。反應時之pH係5至9為宜，更佳為pH7左右下使反應為宜。就使化合物(2b)溶解的溶媒而言，可使用二甲基亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2-吡啶酮(NMP)等之有機溶媒。將使化合物(2b)溶解的有機溶媒溶液，加至含抗體(3)的緩衝液中為1至20%v/v，而使反應為宜。反應溫度係0至37℃，更佳為10至25℃，反應時間係0.5至20小時。
製造的抗體-藥物複合體(1)中的濃縮、緩衝液交換、純化、抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定所致的抗體-藥物複合體(1)之鑑定，可與製造方法1同樣地進行。
於製造方法3，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-係具有下列構造。
具有上述之部分構造，就具有於N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物的化合物而言，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 (吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、具有於N末端具有親水性胺基酸的胜肽連結物，且其與藥物直接鍵結的化合物，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、 (吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、具有於C末端具有由甘胺酸而成的寡肽的胜肽連結物，其與藥物直接鍵結的化合物而言，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、於L1具有親水性構造的化合物而言，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、於L1具有親水性構造、胜肽連結物與藥物直接鍵結的化合物而言，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH(CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、於L2具有親水性構造的化合物而言，可列舉以下各者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
就具有上述之部分構造、於L2具有親水性構造、胜肽連結物與藥物直接鍵結的化合物而言，可列舉以下者。
(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
4.製造方法4
以先前之製造方法所使用的中間體的式(2)或(2b)所示的化合物及彼等之藥理上可容許的鹽中，連結物係-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示構造，LP係其N末端為親水性胺基酸，甘胺酸以外之親水性胺基酸為於N末端具有的胜肽殘基的情形，例如可藉由下述方法來製造。
[式中，Lc表示-C(=O)-基，L1’表示末端順丁 烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基、或變換為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的構造之L1，LP係表示-Lp1-Lp2-而成的構造，P1、P2、P3、P4、P5、P6及P7表示保護基]。
LP係為了使Lp1及Lp2結合而形成，LP之N末端之親水性胺基酸係來自Lp1的緣故，Lp1係採用N末端為親水性胺基酸者為宜。又，親水性胺基酸可為複數個。又，若於Lp2採用親水性胺基酸者，對應其位置，可製造LP之N末端或N末端以外之位置含有複數個親水性胺基酸的LP。
將末端之胺基以P1保護的羧酸化合物(5)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，於鹼存在下，藉由使與NH2-DX[表示依喜替康；化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮](日本特開平6-87746號公報之請求項2記載的醫藥品化合物)(4)及彼等之藥理上可容許的鹽反應，可製造化合物(6)。
此反應係援用醯胺化及胜肽合成通常使用的反應試藥或條件即可。活性酯係有各種之物，例如若將p-硝基酚等之酚類、N-羥基苯并三唑或者N-羥基琥珀醯亞胺等與羧酸化合物(5)使用N,N'-二環己基碳化二亞胺或者1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺‧鹽酸鹽等之縮合劑而反應即可製造。又，活性酯亦可藉由羧酸化合物(5)與五氟苯基 三氟乙酸酯等之反應、羧酸化合物(5)與 1-苯并三唑基氧基三吡咯啶鏻 六氟亞磷酸酯之反應、羧酸化合物(5)與氰基膦酸二乙基酯之反應(鹽入法)、羧酸化合物(5)與三苯基膦及2,2'-二吡啶基二硫化物之反應(向山法)、羧酸化合物(5)與氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三-2-基)-4-甲基啉鎓(DMTMM)之類的三衍生物之反應等來製造。又，羧酸化合物(5)於鹼存在下藉由以氯化亞硫醯、草醯氯等之酸鹵素化物加以處理而可製造的酸鹵化物法等亦可進行反應。如上述獲得的羧酸化合物(5)之活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物於化合物(4)與適當鹼存在下，不阻礙反應的溶媒中，使於-78℃~150℃反應，可製造化合物(6)。
就上述各步驟所使用之具體的鹼而言，例如，可列舉碳酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、乙醇鈉、丁醇鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、氫化鉀之類的鹼金屬或鹼土類金屬之碳酸鹽、鹼金屬烷氧化物、鹼金屬氫氧化物或氫化物、或n-丁基鋰之類的烷基鋰、鋰二異丙基醯胺之類的二烷基胺基鋰所代表的有機金屬鹼；鋰雙(三甲基矽烷基)醯胺之類的雙矽烷基胺的有機金屬鹼；或吡啶、2,6-二甲基吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、4-二甲基胺基吡啶、三乙基胺、N-甲基啉、二異丙基乙基胺、二吖雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)之類的有機鹼等。
就使用於本反應之不阻礙反應的溶媒而言，可列舉二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等之鹵素化烷基系溶媒；四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二烷等之醚系溶媒；苯、甲苯等之芳香族系溶媒；N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二 甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶-2-酮等之醯胺系溶媒，除此之外，依情形亦可使用二甲基亞碸、環丁碸等之亞碸系溶媒、甲醇、乙醇等之醇系溶媒、丙酮、甲基乙基酮等之酮系溶媒等。
化合物(6)之La及Lb係如後述，其羥基、羧基、胺基等係可以有機化合物之合成上通常使用的保護基加以保護。具體而言，就羥基之保護基而言，可列舉甲氧基甲基等之烷氧基甲基；苯甲基、4-甲氧基苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；乙醯基等之烷醯基；苯甲醯基等之芳醯基；tert-丁基二苯基矽烷基等之矽烷基等。羧基可呈甲基、乙基、tert-丁基等之烷基、烯丙基、或苯甲基等之芳基甲基之酯等而保護。胺基可藉由tert-丁基氧基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、2-(三甲基矽烷基)乙氧基羰基等之烷氧基羰基；烯丙基氧基羰基、9-茀基甲基氧基羰基、苯甲基氧基羰基、對甲氧基苯甲基氧基羰基、對(或鄰)硝基苯甲基氧基羰基等之芳基甲基之外，可藉由乙醯基等之烷醯基；苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；苯甲醯基等之芳醯基；或2,4-二硝基苯磺醯基、鄰硝基苯磺醯基等之芳基磺醯基等之胜肽合成上通常使用的胺基保護基而加以保護。上述之保護基之附著或脫落係依據通常實施的方法來進行即可。
就化合物(6)之末端胺基之保護基P1而言，可使用tert-丁基氧基羰基或9-茀基甲基氧基羰基、苯甲基氧基羰基等之胜肽合成通常使用的胺基之保護基。就其他胺基之保護基而言，可列舉乙醯基等之烷醯基；甲氧 基羰基、乙氧基羰基等之烷氧基羰基；對甲氧基苯甲基氧基羰基、對(或鄰)硝基苯甲基氧基羰基等之芳基甲氧基羰基；苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；苯甲醯基等之芳醯基；或2,4-二硝基苯磺醯基、鄰硝基苯磺醯基等之芳基磺醯基。保護基P1可因應保護胺基的化合物之性質等加以取捨選擇。
藉由使獲得的化合物(6)之末端胺基之保護基P1脫保護，可製造化合物(7)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將N末端以P2保護的胜肽或胺基酸(8)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由與獲得的化合物(7)反應，可製造化合物(9)。胜肽或胺基酸(8)與化合物(7)之形成醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒為不阻礙反應者即可，由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。胺基之保護基P2係由化合物(6)之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可，因應保護胺基的化合物之性質等加以取捨選擇即可。又，以胜肽合成上通常使用的方式，將構成胜肽或胺基酸(8)的胺基酸或胜肽順次反應及重複脫保護，亦可使延伸而製造化合物(9)。
藉由將獲得的化合物(9)之胺基之保護基P2脫保護，可製造化合物(10)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將N末端以P3保護、側鍵之羧基或羥基、胺基以P4保護的胺基酸或胜肽(11)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由與獲得的化合物(10)反應，可製造化合物(12)。形成 胺基酸或胜肽(11)與化合物(10)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。就保護基P3及P4而言，由化合物(6)之胺基、羧基或羥基之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，有胺基之保護基P3與側鍵之官能基之保護基P4以相異方法或條件可去除的必要。例如可列舉若P3為9-茀基甲基氧基羰基，P4為羧基之保護基，為tert-丁基等，若為羥基之保護基為甲氧基甲基等、若為胺基之保護基為tert-丁基氧基羰基等之組合等作為代表性者。側鍵之官能基之保護基P4係藉由給予酸性條件而脫保護可能的保護基為較佳，但未限定於此，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而由上述者加以取捨選擇即可，即使切斷彼等之保護基之際，選擇因應其保護基的試藥或條件即可。又，如胜肽合成上通常使用者，化合物(12)係可將構成的胺基酸或胜肽依次反應、重複脫保護，而使伸長亦可製造。
藉由使獲得的化合物(12)之末端胺基之保護基P3脫保護，可製造化合物(13)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將羧酸衍生物(14)或(14b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由與獲得的化合物(13)反應，可製造化合物(15)或(15b)。其中羧酸衍生物(14)係L1’之連結物末端具有順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基的構造之化合物，羧酸衍生物(14b)係L1’之連結物末端具有(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-構造之化合物。
形成羧酸衍生物(14)或(14b)與化合物(13)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(15)或(15b)之胜肽部分之胺基酸側鍵之羧基或羥基、胺基之保護基P4脫保護，可製造化合物(2)或(2b)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
化合物(9)係例如亦可以下述方法來製造。
將N末端以P2保護的胜肽或胺基酸(8)誘導為活性酯、混合酸酐等，於鹼存在下，藉由使與末端之羧基以P5保護的胺化合物(16)反應，可製造化合物(17)。胜肽或胺基酸(8)與化合物(16)之胜肽鍵形成的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。化合物(17)之胺基之保護基P2係由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可。就羧基之保護基P5而言，使用有機合成化學中，於胜肽合成通常使用作為羧基之保護基的保護基即可，具體而言，由甲基、乙基、tert-丁基等之烷基酯、烯丙基酯、苯甲基酯等、化合物(6)之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可。於此情形，有胺基之保護基P2與羧基之保護基P5以相異方法或條件可去除去的必要。例如可列舉P2為tert-丁基氧基羰基，P5為苯甲基的組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護胺基與羧基的化合物之性質等而由上述者加以取捨選擇即可，即使彼等之保護基之切斷之際，亦選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的化合物(17)之羧基之保護基P5脫保護，可製造化合物(18)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將獲得的化合物(18)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(9)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(12)係例如亦可以下述方法來製造。
藉由使化合物(17)之胺基之保護基P2脫保護，可製造化合物(19)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將胺基酸或胜肽(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與獲得的化合物(19)反應，可製造化合物(20)。形成胺基酸或胜肽(11)與化合物(19)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒，由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。其中，胺基酸或胜肽(11)之保護基P3、P4與化合物(19)之保護基P5有各自以相異方法或條件下可除去的必要。例如可列舉P3為9-茀基甲基氧基羰基、P4為tert-丁基氧基羰基或tert-丁基、或甲氧基甲基、P5為苯甲基等的組合等作為代表性者。又，如上述，側鍵之官能基之保護基P4藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而由上述者加以取捨選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，亦選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的化合物(20)之羧基之保護基P5脫保護，可製造化合物(21)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將化合物(21)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(12)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(15)係例如亦可以下述方法來製造。
藉由使化合物(20)之胺基之保護基P3脫保護，可製造化合物(22)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將羧酸衍生物(14)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與獲得的化合物(22)反應，可製造化合物(23)。形成羧酸衍生物(14)與化合物(22)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(23)之羧基之保護基P5脫保護，可製造化合物(24)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將化合物(24)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(15)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(15)係例如亦可以下述方法來製造。
將羧酸衍生物(14)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與羧基以P6、側鍵之羧基、羥基或胺基以P4保護的胺基酸或胜肽(25)反應，可製作化合物(26)。形成羧酸衍生物(14)與化合物(25)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。其中就化合物(26)之保護基P4及P6而言，由化合物(6)之羧基、羥基或胺基之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，羧基之保護基P6與側鍵之官能基之保護基P4有必要為以相異方法或條件可去除。例如可列舉若P6為苯甲基、P4為羧基之保護基，為tert-丁基等，若為羥基之保護基，為甲氧基甲基等，若為胺基之保護基，為tert-丁基氧基羰基等的組合等為代表性者。側鍵之官能基之保護基P4藉由交附酸性條件而為可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等，由上述者加以取捨選擇即可，即使彼等之保護基之切斷之際，亦為選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的化合物(26)之羧基之保護基P6脫保護，可製造化合物(27)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將化合物(27)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(10)反應，可製造化合物(15)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒，由化 合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
又，將化合物(27)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與羧基以P7保護的胺基酸或胜肽(28)反應，可製造化合物(29)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。其中，就化合物(29)之保護基P4及P7而言，由化合物(6)之羧基、羥基或胺基之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，羧基之保護基P7與側鍵之官能基之保護基P4有可以相異方法或條件下去除的必要。例如可列舉若P7為苯甲基、P4為羧基之保護基，為tert-丁基等，若為羥基之保護基，為甲氧基甲基等，若為胺基之保護基，為tert-丁基氧基羰基等組合等作為代表性者。側鍵之官能基之保護基P4藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等，由上述者加以取捨選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，亦選擇因應其保護基的試藥或條件即可。又，亦可將構成的胺基酸或胜肽順次反應、重覆脫保護、使伸長而製造化合物(29)。
藉由將獲得的化合物(29)之羧基之保護基P7脫保護，可製造化合物(30)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將化合物(30)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由與使化合物(7)反應，可製造化 合物(15)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒，係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(29)係例如亦可以下述方法來製造。
將胺基酸或胜肽(28)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與N末端以P3、側鍵之羧基、羥基或胺基以P4保護的胺基酸或胜肽(11)反應，可製造胜肽(31)。形成胺基酸或胜肽(28)與胺基酸或胜肽(11)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。其中就胺基酸或胜肽(28)之羧基之保護基P7、及胺基酸或胜肽(11)之保護基P3及P4而言，係如上述，但有以彼此相異的方法或條件下可去除的必要。例如可列舉若P3為9-茀基甲基氧基羰基、P4為羧基之保護基，為tert-丁基等，若為羥基之保護基，為甲氧基甲基等，若為胺基之保護基，為tert-丁基氧基羰基等、P7為苯甲基的組合等作為代表性者。側鍵之官能基之保護基P4係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等，由上述者加以取捨選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，亦為選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的胜肽(31)之N末端之保護基P3脫保護，可製造胜肽(32)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將羧酸衍生物(14)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸 鹵素化物等，鹼存在下，藉由使獲得的胜肽(32)反應，可製造化合物(29)。形成羧酸衍生物(14)與胜肽(32)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(12)係例如亦可以下述方法來製造。
藉由使上述之胜肽(31)之C末端之保護基P7脫保護，可製造胜肽(33)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將獲得的胜肽(33)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與上述之化合物(7)反應，可製造化合物(12)。胜肽(33)與化合物(7)之形成醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
5.製造方法5
式(2)或(2b)所示的製造中間體中，連結物係-L1-L2-LP-所示構造，LP係其N末端為親水性胺基酸，於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，亦可藉由下述方法來製造。
[式中，L1’表示末端順丁烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基、或變換為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的構造之L1，LP表示-Lp1-Lp2-而成的構造，P2、P3、P4、及P7表示保護基]。
因LP係使Lp1及Lp2結合而形成，LP之N末端之 親水性胺基酸係由Lp1構成的緣故，Lp1係採用N末端為親水性胺基酸者即可。又，親水性胺基酸可為複數個。又，若於Lp2採用親水性胺基酸，對應其位置，可製造LP之N末端或N末端以外的位置可含有複數個親水性胺基酸的LP。
將製造方法4記載之N末端以P2保護的胜肽或胺基酸(8)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由與化合物(4)及其鹽反應，可製造化合物(34)。形成胜肽或胺基酸(8)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒只要不阻礙反應者即可，由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇即可。保護基P2由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可，因應保護胺基的化合物之性質等加以取捨選擇即可。又，如胜肽合成上通常使用的方式，將構成胜肽或胺基酸(8)的胺基酸或胜肽一次反應並重複脫保護，而使伸長，亦可製造化合物(34)。
藉由使獲得的化合物(34)之胺基之保護基P2脫保，可製造化合物(35)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
製造方法4記載之N末端以P3保護、側鍵之羧基、羥基或胺基以P4保護的胺基酸或胜肽(11)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與獲得的化合物(35)反應，可製造化合物(36)。胺基酸或胜肽(11)與化合物(35)之形成胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。就保護基P3及P4而言，係如製造方法4所記載。又，如胜肽合成上通常使用的 方式，將構成的胺基酸或胜肽依次反應、重複脫保護，而使伸長，亦可製造化合物(36)。
藉由使獲得的化合物(36)之胺基之保護基P3脫保護，可製造化合物(37)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將羧酸衍生物(14)或(14b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由與獲得的化合物(37)反應，可製造化合物(38)或(38b)。形成羧酸衍生物(14)或(14b)與化合物(37)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(38)或(38b)之羧基或羥基、胺基之保護基P4脫保護，可製造化合物(2)或(2b)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
化合物(36)係例如亦可以下述方法來製造。
將製造方法4記載之胜肽(33)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(36)。形成胜肽(33)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(38)係例如亦可以下述方法來製造。
藉由使製造方法4記載之化合物(30)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下、與化合物(4)反應，或藉由使製造方法4記載之胺基酸或胜肽(27)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，與上述之化合物(35)反應，可製造化合物(38)。形成各自之胜肽鍵的反應條件或試藥、及 鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
6.製造方法6
式(2)所示的製造中間體中，連結物為具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-之任一者之構造，LP係其N末端為親水性胺基酸，於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，例如亦可藉由下述方法來製造。
[式中，L1’表示末端順丁烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基、或變換為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的構造之L1，LP表示-Lp1-Lp2-而成的構造，P3、P8表示保護基]。
式(2)所示的製造中間體中，連結物有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造、及-L1-L2-LP-所示的構造之二個態樣。
連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之化合物(2)可如以下方式製造。
化合物(40)係可與製造方法4記載之化合物(12)同樣地合成，但與化合物(12)不同，其胺基之保護基P3與側鍵之官能基之保護基P8可無於相異的方法或條件下可去除去的必要。側鍵之官能基為羧基或羥基，亦可使其胺基之保護基P3與側鍵之羧基或羥基之保護基P8同時地脫保護。例如可列舉P3為tert-丁基氧基羰基、P8為tert-丁基或三苯甲基、或者P3為苯甲基氧基羰基、P8為苯甲基等組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可，即使於彼等之保護基之切斷之際亦可選擇因應其保護基的試藥或條件。化合物(40)若使用滿足上述性質的經保護胺基酸或胜肽，可與製造方法4同樣地合成。
藉由使化合物(40)之保護基P3、P8依序或同時脫保護，可製造化合物(41)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
化合物(41)係LP之親水性側鍵之官能基並未被特別保護，但藉由於鹼存在下，使與被誘導為活性酯、混合酸酐等的化合物(14)或(14b)反應，可製造化合物(2)。形成各自之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之化合物(2)可如以下方式製造。
化合物(42)亦可與製造方法5記載之化合物(36)同樣地合成，但與化合物(36)不同，其胺基之保護基P3與側鍵之官能基之保護基P8可無以相異方法或條件下去除地必要。側鍵之官能基為羧基或羥基、其胺基之保護基P3與側鍵之羧基或羥基之保護基P8亦可同時地脫保護。例如可列舉P3為tert-丁基氧基羰基、P8為tert-丁基或三苯甲基、或者P3為苯甲基氧基羰基、P8為苯甲基等組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等，由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥或條件即可。化合物(42)若使用滿足上述性質的經保護胺基酸或胜肽，可與製造方法5同樣地合成。
藉由將化合物(42)之保護基P3、P8依次或同時地脫保護，可製造化合物(43)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
化合物(43)係LP之親水性側鍵之官能基並未特別被保護，但於鹼存在下，藉由與被誘導為活性酯、混合酸酐等的化合物(14)或(14b)反應，可製造化合物(2)。形成各自之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
7.製造方法7
製造方法5所示的化合物(36)中，連結物-LP-為具有-Lp1-Gly-Gly-Phe-Gly-而成的構造的情形，亦可藉由下述方法來製造。
[式中，L1’表示末端順丁烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基、或被變換為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的構造之L1、-LP-表示由-Lp1-Gly-Gly-Phe-Gly-構成的構造、P3、P4表示保護基]。
將製造方法4記載之胺基酸或胜肽(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺(WO97/46260記載的醫藥化合物的游離體)(44)及其鹽反應，可製造化合物(45)。胺基酸或胜肽(11)與化合物(44)之形成胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。就N末端之保護基P3、側鍵 之官能基之保護基P4而言，如上述製造方法4。又，可無側鍵之官能基之保護基P4，使用僅有N末端保護的胺基酸或胜肽(11)來進行反應，可獲得化合物(45)。
8.製造方法8
式(2)或(2b)所示的化合物中，連結物係-L1-L2-LP-所示構造，LP係其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形亦可例如以下述方法製造。
[式中，L1’表示末端順丁烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基、或變換為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的構造之L1，LP表示Lp1-Lp2而成的構造、P7及P9表示保護基]。
LP係使Lp1及Lp2結合而形成的緣故，此等所含的LP之用以構成C末端的甘胺酸的數目，係考慮LP具有的 C末端之甘胺酸數目、又反應時使用此等的重複次回而設計為宜。
胜肽(46)係於其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基，其N末端係經P9保護。胜肽(46)係如胜肽合成上通常使用的方式，將其構成的胺基酸或胜肽依序縮合反應與重複脫保護而可合成。
將胜肽(46)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(47)。胜肽(46)與化合物(4)之形成胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P9係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
又，藉由將N末端以P9保護的胺基酸或胜肽(48)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與製造方法5記載之化合物(35)反應，亦可製造化合物(47)。胺基酸或胜肽(48)與化合物(35)之形成胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P9係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(47)之胺基之保護基P9脫保護，可製造化合物(49)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由將羧酸衍生物(14)或(14b)誘導為活性酯、混合 酸酐、或酸鹵素化物等，使與獲得的化合物(49)反應，可製造化合物(2)或(2b)。羧酸衍生物(14)或(14b)與化合物(49)之形成醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
化合物(2)亦可以下述方法來製造。
化合物(50)係Lp1之N末端之甘胺酸與L2結合，可與製造方法4記載之化合物(27)同樣地合成。將製造方法4記載的胺基酸或胜肽(28)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與化合物(50)反應，可製造化合物(51)。其中，其中，胺基酸或胜肽(28)係甘胺酸或其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽，其C末端經P7保護。胺基酸或胜肽(28)與化合物(50)之形成醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
將化合物(14)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與C末端經P7保護的胜肽(52)反應，亦可製造化合物(51)。其中，胜肽(52)係其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基。胜肽(52)係如胜肽合成上通常使用的方式，將其構成的胺基酸或胜肽依序縮合反應與重複脫保護而可合成。胜肽(52)與化合物(14)之形成胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P7係於酸條件下可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此，由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選 擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(51)之羧基之保護基P7脫保護，可製造化合物(53)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由將化合物(53)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(2)。形成化合物(53)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
除此之外，化合物(2)亦可以下述方法製造。
將製造方法5記載之化合物(35)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與化合物(50)反應，可製造化合物(2)。形成化合物(50)與化合物(35)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
9.製造方法9
製造方法2記載的式(2a)所示的製造中間體，且L2’為變換為末端氫硫基烷醯基的構造之L2的化合物，可藉由下述方法來製造。
[式中，LP表示Lp1-Lp2而成的構造，P4、P5、P7、P10表示保護基]。
式(2a)所示的製造中間體係有連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造與-L1-L2-LP-所示的構造之二個態樣。
連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之化合物(2a)係如以下方式可加以製造。
將末端之氫硫基以P10保護的羧酸化合物(54)誘導為 活性酯、或混合酸酐等，藉由與製造方法4記載之化合物(13)反應，可製造化合物(55)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。就氫硫基之保護基P10而言，可使用於有機合成化學中作為氫硫基之保護基而通常使用的保護基，具體而言，由S-甲基硫醚基、S-乙基硫醚基、S-2-吡啶基硫醚基等之硫醚基、乙醯基等之酯基、苯甲基、9-茀基甲基、三苯甲基等之芳基甲基醚基、S-2-氰基乙基等之乙基醚基等加以適宜選擇來使用為宜。於此情形，就Lp1之側鍵之胺基、羧基或羥基之保護基P4而言，藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而由上述者加以取捨選擇來使用為宜，但氫硫基之保護基P10係有以與Lp1之側鍵之羧基或羥基、胺基之保護基P4相異的方法或條件下可去除的必要。例如可列舉於羧基之情形，保護基P4為tert-丁基、保護基P10為S-甲基硫醚基的組合等作為代表性者。又，保護基P10可不存在，此情形化合物(55)之氫硫基為以無保護的狀態下存在。
藉由使獲得的化合物(55)之Lp1之側鍵的羧基或羥基、胺基之保護基P4脫保護，可製造化合物(56)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的化合物(56)之氫硫基之保護基P10脫保護，可製造製造(2a)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
化合物(55)亦可以下述方法來製造。
將上述之氫硫基以P10保護的羧酸化合物(54)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與製造方法4記載之化合物(22)反應，可製造化合物(57)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P4及P10如上述，就羧基之保護基P5而言，由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可，但氫硫基之保護基P10及側鍵之官能基之保護基P4有以與羧基之保護基P5相異的方法或條件下可去除的必要。例如可列舉若P4為羧基之保護基，為tert-丁基、P10為S-甲基硫醚基、P5為烯丙基的組合等作為代表性者。又，P10可不存在，於此情形，化合物(57)之氫硫基係以無保護下存在。
藉由使獲得的化合物(57)之羧基之保護基P5脫保護，可製造化合物(58)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將化合物(58)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(55)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。
連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之化合物(2a)、LP係其N末端為親水性胺基酸，且於N末段具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，可如以下方式製造。
將上述之氫硫基以P10保護的羧酸化合物(54)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與製造方法5記載之化合物(37)反應，可製造化合物(59)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P4及P10係如上述。
化合物(59)例如亦可以下述方法來製造。
藉由將氫硫基以P10保護的羧酸化合物(54)誘導為活性酯、或混合酸酐等，使與製造方法4記載之胜肽(32)反應，可製造化合物(60)。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P4、P7及P10係如上述，由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可，但氫硫基之保護基P10及側鍵之官能基之保護基P4係有以與羧基之保護基P7相異方法或條件下可去除的必要。例如可列舉若P4為羧基之保護基，為tert-丁基、P10為S-甲基硫醚基、P7為烯丙基的組合等作為代表性者。又，P10可不存在，此情形化合物(60)之氫硫基係於無保護下存在。
藉由使獲得的化合物(60)之胜肽之羧基之保護基P7脫保護，可製造化合物(61)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將獲得的化合物(61)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，鹼存在下，藉由與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(59)。此反應係援用胜肽合成上通常使 用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(59)之LP1之側鍵的保護基P4脫保護，可製造化合物(62)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
藉由使獲得的化合物(62)之氫硫基之保護基P10脫保護，可製造化合物(2a)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之化合物(2a)、LP係其C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽而與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，可如以下方式製造。
將羧酸化合物(54)誘導為活性酯、或混合酸酐等，藉由使與製造方法8記載之化合物(49)反應，可製造化合物(2a)。其中，氫硫基可不以P10保護。此反應係援用胜肽合成上通常使用的反應試藥或條件即可，反應條件或試藥、及鹼或溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
10.製造方法10
式(2)所示的製造中間體中，L1’為變換為末端(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的構造之L1，可藉由下述之方法來製造。
[式中，P11、P12表示保護基]。
式(2)所示的製造中間體係有連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造及-L1-L2-LP-所示的構造之二個態樣。
連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之化合物(2)係可如以下方式製造。
將側鍵之羧基以P11保護的胺基酸(63)與N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺(64)於水中，碳酸氫鈉等之鹼存在下，藉由使於-40℃至100℃下反應，可製造(順丁烯二醯亞胺-N-基)-化的化合物(65)。順丁烯二醯亞胺基化合物可由具有胺基的化合物，使用N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺，而藉由周知之方法(例如Keller，O.；Rudinger，J.Helv.Chem.Acta 1975，58(2)，531-541.)或依據其之方法而合 成。就羧基之保護基P11而言，使用有機合成化學中作為羧基之保護基所通常使用的保護基即可，藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等。
將末端之胺基經P12保護的化合物(66)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與製造方法6記載的化合物(41)反應，可製造化合物(67)。形成化合物(67)與化合物(41)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。化合物(66)之胺基之保護基P12係由化合物(6)之保護基中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(67)之胺基之保護基P12脫保護，可製造化合物(68)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將上述化合物(65)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與獲得的化合物(68)反應，可製造化合物(69)。化合物(65)與化合物(68)之醯胺鍵形成的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(69)之羧基之保護基P11脫保護，可製造化合物(2)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之化合物(2)係可如以下方式製造。
同樣地，將末端之胺基經P12保護的化合物(66)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與製造方法6 記載的化合物(43)反應，可製造化合物(70)。形成化合物(66)與化合物(43)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P12係如上述。
藉由使獲得的化合物(70)之胺基之保護基P12脫保護，可製造化合物(71)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
將上述的化合物(65)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與獲得的化合物(71)反應，可製造化合物(72)。化合物(65)與化合物(71)之醯胺鍵形成之反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(72)之羧基之保護基P11脫保護，可製造化合物(2)。選擇因應其保護基的試藥或條件即可。
11.製造方法11
式(2)所示的製造中間體中，L1’為變換為末端順丁烯二醯亞胺基或末端鹵乙醯基的構造之L1、L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-者，可藉由下述方法來製造。
[式中，P13表示保護基、X表示脫離基]。
式(2)所示的製造中間體係連結物有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造與-L1-L2-LP-所示的構造之二個態樣。
連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之化合物(2)可如以下方式製造。
C末端經P13保護的甘胺酸衍生物(73)，於鹼存在下，藉由使與化合物(74)反應，可製造化合物(75)。羧基之保護基P13藉由交付酸性條件而為可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此。化合物(74)之脫離基X為p-甲苯磺酸 酯、甲基磺酸酯、三氟甲基磺酸酯等之磺酸酯之外，可列舉碘、溴、氯等鹵素化物等。此反應依據N-烷基化通常使用的反應條件即可，鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以取捨選擇即可。
將羧酸衍生物(76)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與獲得的化合物(75)反應，可製造化合物(77)。形成羧酸衍生物(76)與化合物(75)之胜肽鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(77)之羧基之保護基P13脫保護，可製造化合物(78)因應其保護基的試藥或條件即可。
將獲得的化合物(78)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與製造方法6記載之化合物(41)反應，可製造化合物(2)。形成羧酸衍生物(78)與化合物(41)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之化合物(2)可如以下方式製造。
同樣地，將化合物(78)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵素化物等，藉由使與製造方法6記載之化合物(43)反應，可製造化合物(2)。形成羧酸衍生物(78)與化合物(43)之醯胺鍵的反應條件或試藥、及鹼、溶媒係由化合物(6)之合成中所述者加以適宜選擇來使用即可。
又，製造方法1至製造方法11之中間體之化合物任一者皆可成為鹽。
又，本發明之抗體-藥物複合體放置於大氣中、或經再結晶，有吸收水分、帶吸附水、成為水合物的情形，含如此水的化合物及鹽亦包含於本發明。
又，本發明亦包含以各種放射性或非放射性同位素標示的化合物。構成本發明之抗體-藥物複合體的原子之1個以上，亦可含有原子同位素之非天然比率。就原子同位素而言，例如，可列舉氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)等。又，本發明化合物可以例如，氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)之類的放射性同位素被放射性標識。經放射性標識的化合物作為治療或預防劑、研究試藥、例如，分析試藥、及診斷劑，例如，活體內影像診斷劑為有用的。本發明之抗體-藥物複合體之全部的同位素變異體無論是否為放射性，皆包含於本發明之範圍。
[醫藥]
因本發明之抗體-藥物複合體對癌細胞顯示細胞傷害活性，故可使用作為醫藥，尤其是作為對癌症的治療劑及/或預防劑。
就本發明之抗體-藥物複合體適用的癌症種類而言，可列舉肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、食道癌等，但關於成為治療對象的癌細胞，只要表現抗體-藥物複合體中之抗體可辨識的蛋白質的癌細胞即可，並未限定於此等。
本發明之抗體-藥物複合體可適合投與哺乳 動物，但較佳為人類。
就於含本發明之抗體-藥物複合體的醫藥組成物中使用的物質而言，於投與量或投與濃度，可由此領域通常使用的製劑添加物之外適宜選擇而適用。
本發明之抗體-藥物複合體係可呈含有1種以上之藥學上適合性的成分的藥學的組成物而被投與。例如，上述藥學組成物含有，代表性地，為1種以上之藥學載劑(例如，包含滅菌液體(例如，水及油(石油、動物、植物、或合成起源的油(例如，花生油、大豆油、礦物油、胡麻油等)))。水係於上述藥學的組成物為靜脈內投與的情形中較為代表性的載劑。又食鹽水溶液、以及右旋糖水溶液及甘油水溶液，亦可使用作為液體載劑，尤其使用於注射用溶液。適當的藥學的賦形劑係於本項領域中周知。又上述組成物，只要是期望的，可含有微量濕潤劑或乳化劑、或pH緩衝化劑。適當的藥學的載劑之例記載於E.W.Martin之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」。其處方係對應投與之態樣。
各種送達系統為周知，可使用於投與本發明之抗體-藥物複合體。就導入方法而言，可列舉皮內、肌肉內、腹腔內、靜脈內、及皮下的路徑，但未限定於此等。投與係可經由例如，注入或團式(bolus)注射。於特定之較佳實施形態，上述連結物藥物結合體之投與係經注入者。非經口的投與為較佳投與路徑。
關於代表的實施形態，上述藥學的組成物作為對人類之靜脈內投與適合的藥學的組成物，可依據慣 用的順序而被調配。代表性地，靜脈內投與用之組成物係滅菌之等張性之水性緩衝液中的溶液。必要的情形，上述醫藥亦可含有可溶化劑及緩和注射部位的疼痛的局部麻醉劑(例如，利多卡因(lignocaine))。一般而言，上述成分係呈下列任一者被供給，例如，密封呈現活性劑的量的安瓿或小袋等之封存的容器中之乾燥冷凍乾燥粉末或呈無水之濃縮物，各別地，或於單位劑型中一起混合。預定上述醫藥經注入而被投與的情形，其可例如，以含滅菌之製藥等級的水或食鹽水的注入瓶被投藥。上述醫藥經注射而被投與的情形，注射用滅菌水或食鹽水之安瓿，例如，上述成分可於投與前被混合而被提供。
本發明之醫藥組成物可為僅含本案之抗體-藥物複合體的醫藥組成物，亦可為含有抗體-藥物複合體及至少一個此以外之癌治療劑的醫藥組成物。本發明之抗體-藥物複合體亦可與其他癌治療劑共同投與，藉此可使抗癌效果增強。如此目的下使用的其他抗癌劑，可與抗體-藥物複合體同時、各別、或者連續投與個體，亦可變換各自之投與間隔而投與。就如此癌治療劑而言，可列舉阿布拉庫(abraxane)、卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、愛萊諾迪(irinotecan)(CPT-11)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、索拉非尼(sorafenib)、長春鹼(vinblastin)或國際公開第WO2003/038043號小冊記載之藥劑，又LH-RH同族體(亮丙瑞林(leuprorelin)、戈舍瑞林(goserelin)等)、磷酸雌莫司汀(estramustine phosphate) 、雌激素拮抗藥(它莫西芬(tamoxifen)、雷洛西芬(raloxifene)等)、芳香酶(aromatase)阻害劑(阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)等)等，但只要具有抗腫瘤活性的藥劑即可，並未限定。
如此醫藥組成物係呈具有選擇的組成及必要的純度的製劑，作為冷凍乾燥製劑或者液狀製劑加以製劑化即可。作為冷凍乾燥製劑而製劑化之際，可為含有於此領域使用的適當製劑添加物的製劑。又於液劑亦同樣地，可呈含有此領域使用的各種製劑添加物的液狀製劑而加以製劑化。
醫藥組成物之組成及濃度亦依投與方法而變化，本發明之醫藥組成物所含的抗體-藥物複合體，於抗體-藥物複合體之對抗原地親和性，即，於對抗原之解離定數(Kd值)的點，親和性越高(Kd值低)，即使少量之投與量亦可發揮藥效。據此，於抗體-藥物複合體之投與量的決定，亦可基於抗體-藥物複合體與抗原之親和性的狀況而設定投與量。本發明之抗體-藥物複合體對人類投與之際，例如，可將約0.001~100mg/kg以1次投與或者於1~180日之間隔投與複數次。
[實施例]
藉由以下所示實施例以具體說明本發明，但本發明並未限定於此等。又，此等並未於任何意義下被限定解釋。又，於本說明書，未特別記載的試藥、溶媒及起始材料可由市售供給源而容易取得。
參考例1 M30-H1-L4抗體
抗B7-H3抗體之人類化抗體中，藉由周知方法製造序列識別號9之胺基酸編號20至471記載之胺基酸序列而成的重鍵及序列識別號16之胺基酸編號21至233記載之胺基酸序列而成的輕鍵而成的抗體，獲得的人類化抗B7-H3抗體為M30-H1-L4抗體。
參考例2 M30-H1-L4P抗體
結合上述獲得的M30-H1-L4抗體的糖鍵修飾係藉由周知方法加以脫岩藻醣化來調節，獲得的糖鍵修飾被調節的抗體為M30-H1-L4P抗體。
參考例3 抗CD30抗體
抗CD30抗體係參照特表2005-506035來製作。其序列示於序列識別號27、28。
參考例4 抗CD33抗體
抗CD33抗體係參照日本特開平8-48637號來製作。其序列示於序列識別號29、30。
參考例5 抗CD70抗體
抗CD70抗體參照特表2008-538292來製作。其序列示於序列識別號31、32。
實施例1：4-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]丁醯胺
步驟1：tert-丁基(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)胺基甲酸酯
將4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸(0.237g，1.13mmoL)溶解於二氯甲烷(10mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.130g、1.13mmoL)及、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.216g、1.13mmoL)並攪拌1小時。將其反應溶液滴加到添加化合物(4)之甲烷磺酸鹽(0.500g、0.941mmoL)及三乙基胺(0.157mL、1.13mmoL)的N,N’-二甲基甲醯胺溶液(10.0mL)，並於室溫攪拌1日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈濃黃色固體之標題化合物(0.595g、定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.31(9H，s)，1.58(1H，t，J=7.2Hz)，1.66(2H，t，J=7.2Hz)，1.82-1.89(2H，m)，2.12-2.21(3H，m)，2.39(3H，s)，2.92(2H，t，J=6.5Hz)，3.17(2H，s)，5.16(1H，d，J=18.8Hz)，5.24(1H，d，J=18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.59(1H，m)，6.53(1H，s)，6.78(1H，t，J=6.3Hz)，7.30(1H，s)，7.79(1H，d，J=11.0Hz)，8.40(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：621(M+H)+
步驟2：4-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]丁醯胺
將上述步驟1獲得的化合物(0.388g、0.626mmoL)溶解於二氯甲烷(9.00mL)。添加三氟乙酸(9.00mL)並攪拌4小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.343g、定量)之三氟乙酸鹽。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.79-1.92(4H，m)，2.10-2.17(2H，m)，2.27(2H，t，J=7.0Hz)，2.40(3H，s)，2.80-2.86(2H，m)，3.15-3.20(2H，m)，5.15(1H，d，J=18.8Hz)，5.26(1H，d，J=18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.54-5.61(1H，m)，6.55(1H，s)，7.32(1H，s)，7.72(3H，brs)，7.82(1H，d，J=11.0Hz)，8.54(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：521(M+H)+
實施例2：抗體-藥物複合體(1)
步驟1：N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
將N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(80.9mg、0.185mmoL)溶解於二氯甲烷 (3.00mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(21.3mg、0.185mmoL)及、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(35.5mg、0.185mmoL)並攪拌3.5小時。將其反應溶液滴加到實施例1之化合物(80.4mg、0.154mmoL)的N,N’-二甲基甲醯胺溶液(1.50mL)中，於室溫攪拌4小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.106g、73%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.36(9H，s)，1.71(2H，m)，1.86(2H，t，J=7.8Hz)，2.15-2.19(4H，m)，2.40(3H，s)，2.77(1H，dd，J=12.7，8.8Hz)，3.02(1H，dd，J=14.1，4.7Hz)，3.08-3.11(2H，m)，3.16-3.19(2H，m)，3.54(2H，d，J=5.9Hz)，3.57-3.77(4H，m)，4.46-4.48(1H，m)，5.16(1H，d，J=19.2Hz)，5.25(1H，d，J=18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，7.00(1H，t，J=6.3Hz)，7.17-7.26(5H，m)，7.31(1H，s)，7.71(1H，t，J=5.7Hz)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，7.92(1H，t，J=5.7Hz)，8.15(1H，d，J=8.2Hz)，8.27(1H，t，J=5.5Hz)，8.46(1H，d，J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：939(M+H)+
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1獲得的化合物(72.6mg、77.3μmoL)與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(64.8g、定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.71-1.73(2H，m)，1.82-1.90(2H，m)，2.12-2.20(4H，m)，2.40(3H，s)，2.75(1H，dd，J=13.7，9.4Hz)，3.03-3.09(3H，m)，3.18-3.19(2H，m)，3.58-3.60(2H，m)，3.64(1H，d，J=5.9Hz)，3.69(1H，d，J=5.9Hz)，3.72(1H，d，J=5.5Hz)，3.87(1H，dd，J=16.8，5.9Hz)，4.50-4.56(1H，m)，5.16(1H，d，J=19.2Hz)，5.25(1H，d，J=18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.60(1H，m)，7.17-7.27(5H，m)，7.32(1H，s)，7.78-7.81(2H，m)，7.95-7.97(3H，m)，8.33-8.35(2H，m)，8.48-8.51(2H，m).
MS(APCI)m/z：839(M+H)+
步驟3：tert-丁基(3S,12S)-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一烷-1-酸酯
將(2S)-4-tert-丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(0.625g、1.52mmoL)溶解於二氯甲烷(10.0mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.175g、1.52moL)及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.291g、1.52mmoL)並攪拌1小時。將其反應溶液滴加到添加上 述步驟2獲得的化合物(1.00g、1.01mmoL)的N,N’-二甲基甲醯胺溶液(10.0mL)中，於室溫下攪拌20小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.873g、70%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.88(3H，t，J=7.4Hz)，1.37(9H，s)，1.68-1.78(2H，m)，1.81-1.93(2H，m)，2.10-2.23(4H，m)，2.41(3H，s)，2.68-2.85(3H，m)，2.99-3.22(5H，m)，3.58-3.81(6H，m)，4.19-4.36(3H，m)，4.38-4.52(2H，m)，5.17(1H，d，J=19.2Hz)，5.25(1H，d，J=19.2Hz)，5.43(2H，s)，5.54-5.62(1H，m)，6.55(1H，s)，7.15-7.34(8H，m)，7.41(2H，t，J=7.2Hz)，7.66-7.75(4H，m)，7.81(1H，d，J=11.0Hz)，7.88(2H，d，J=7.4Hz)，8.01-8.06(1H，m)，8.14(1H，d，J=8.2Hz)，8.17-8.22(1H，m)，8.25-8.30(1H，m)，8.47(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1232(M+H)+
步驟4：tert-丁基(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一烷-1-酸酯
將上述步驟3獲得的化合物(0.800g、0.649mmoL)溶解於N,N’-二甲基甲醯胺(3.00mL)，添加哌啶(0.643mL、 6.49mmoL)並攪拌1小時。減壓乾固溶媒，將獲得的殘留物溶解於N,N’-二甲基甲醯胺(10mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(0.300g、0.974mmoL)，並攪拌20小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.224g、29%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.6Hz)，1.15-1.22(2H，m)，1.35(9H，s)，1.44-1.47(4H，m)，1.71-1.73(2H，m)，1.80-1.91(2H，m)，2.08(2H，t，J=7.6Hz)，2.13-2.20(4H，m)，2.40(3H，s)，2.67(1H，dt，J=11.1，4.8Hz)，2.78(1H，dd，J=13.6，9.4Hz)，2.99-3.17(6H，m)，3.31-3.36(2H，m)，3.57-3.76(6H，m)，4.45-4.47(1H，m)，4.57-4.60(1H，m)，5.16(1H，d，J=18.7Hz)，5.25(1H，d，J=18.7Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(2H，s)，7.15-7.27(5H，m)，7.31(1H，s)，7.70(1H，t，J=5.4Hz)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，7.99(1H，t，J=5.7Hz)，8.09-8.12(3H，m)，8.25(1H，t，J=6.0Hz)，8.45(1H，d，J=9.1Hz).
MS(APCI)m/z：1203(M+H)+
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
使上述步驟4獲得的化合物(0.224g、0.186mmoL)與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(21.2mg、10%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.13-1.21(2H，m)，1.42-1.45(6H，m)，1.70-1.72(2H，m)，1.85-1.88(2H，m)，2.06-2.20(6H，m)，2.39(3H，s)，2.63-2.67(1H，m)，2.78-2.81(1H，m)，3.04-3.12(6H，m)，3.63-3.70(6H，m)，4.46-4.52(2H，m)，5.16(1H，d，J=18.8Hz)，5.25(1H，d，J=18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.58(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(2H，s)，7.18-7.23(6H，m)，7.30(1H，s)，7.71(1H，t，J=5.5Hz)，7.79(1H，d，J=10.9Hz)，7.99-8.02(1H，m)，8.10-8.11(3H，m)，8.27-8.30(1H，m)，8.47-8.50(1H，m).
MS(APCI)m/z：1147(M+H)+
步驟6：抗體-藥物複合體(1)
抗體之還原：參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(8.0mL)於15mL試管中採取，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.124mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.400mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10 分鐘後，添加含10mM上述步驟5獲得的化合物的二甲基亞碸溶液(0.249mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.050mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液18.5mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.56mg/mL，抗體產量：66mg(83%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3
實施例3：抗體-藥物複合體(2)
步驟1：抗體-藥物複合體(2)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。採取本溶液(8.0mL)於15mL，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.187mL；相對於抗體一分子為3.5當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.400mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含10mM實施例2之步驟5獲得的化合物之二甲基亞碸溶液(0.373mL；相對於抗體一分子為6.9當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液0.075mL(相對於抗體一分子為13.8當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)進行純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液16mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.55mg/mL，抗體產量：57mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.5
實施例4：抗體-藥物複合體(3)
步驟1：抗體-藥物複合體(3)
抗體之還原：參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.025mL；相對於抗體一分子為3.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，於室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.109mL)及實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，使用試管迴 轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)，室溫下攪拌40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.008mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用共通方法A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：10.63mg/mL，抗體產量：7.4mg(59%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4
實施例5：抗體-藥物複合體(4)
步驟1：抗體-藥物複合體(4)
抗體之還原：參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.051mL；相對於抗體一分子為6.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC)0.067mL及實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.085mL；相對於抗體一分子為10.0當量)，使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌60分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.013mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.48mg/mL，抗體產量：8.88mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.8
實施例6：抗體-藥物複合體(5)
步驟1：抗體-藥物複合體(5)
抗體之還原：參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.051mL；相對於抗體一分子為6.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.025mL)與實 施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.127mL；相對於抗體一分子為15.0當量)，使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌60分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.019mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用共通方法A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.99mg/mL，抗體產量：5.94mg(48%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9
實施例7：抗體-藥物複合體(6)
混合實施例5與實施例6之抗體-藥物複合體的約略全量，使用共通方法A而濃縮溶液，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：10.0mg/mL，抗體產量：14.36mg，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.2
實施例8：抗體-藥物複合體(7)
步驟1：抗體-藥物複合體(7)
抗體之還原：將以參考例3製作的抗CD30抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.75mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=270400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.18mg/mL，抗體產量：7.08mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.6
實施例9：抗體-藥物複合體(8)
步驟1：抗體-藥物複合體(8)
抗體之還原：將以參考例3製作的抗CD30抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.75mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=270400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.07mg/mL，抗體產量：6.42mg(64%)， 抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.9
實施例10：抗體-藥物複合體(9)
步驟1：抗體-藥物複合體(9)
抗體之還原：將以參考例4製作的抗CD33抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.66mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量) ，於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=256400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.09mg/mL，抗體產量：6.54mg(65%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.4
實施例11：抗體-藥物複合體(10)
步驟1：抗體-藥物複合體(10)
抗體之還原：將以參考例4製作的抗CD33抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.66mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=256400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.04mg/mL，抗體產量：6.24mg(62%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.6
實施例12：抗體-藥物複合體(11)
步驟1：抗體-藥物複合體(11)
抗體之還原：將以參考例5製作的抗CD70抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.69mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例2之步驟5獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液 (0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=262400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.12mg/mL，抗體產量：6.72mg(67%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.5
實施例13：抗體-藥物複合體(12)
步驟1：抗體-藥物複合體(12)
抗體之還原：將以參考例5製作的抗CD70抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使 用1.69mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例1之步驟7獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=262400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.03mg/mL，抗體產量：6.18mg(62%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.9
實施例14：抗體-藥物複合體(13)
步驟1：tert-丁基N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸酯
2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基4-甲基苯磺酸酯(Bioorg.Med.Chem.Lett.，2011年，21卷，550項；1.75g，5.00mmoL)、及甘胺酸tert-丁基酯鹽酸鹽(1.26g，7.52mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(50.0mL)溶液中，添加N,N-二異丙基乙基胺(1.94g，15.0mmoL)，並於60℃攪拌10小時。於反應溶液中添加氯仿，有機層以1N鹽酸洗淨，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒 ，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：1(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(426mg，28%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.47(9H，s)，2.80(2H，t，J=5.3Hz)，3.32(2H，s)，3.76-3.54(17H，m).
步驟2：tert-丁基N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸酯
使上述步驟1獲得的化合物(426mg，1.39mmoL)，與實施例2之步驟4同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(489mg，70%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.28-1.36(2H，m)，1.45(9H，s)，1.57-1.71(4H，m)，2.39(2H，t，J=7.3Hz)，3.48-3.76(3H，m)，4.02(2H，s)，6.68(2H，s).
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸
使上述步驟2獲得的化合物(489mg，0.977mmoL)與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈無色固體之標題化合物(211mg，49%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.38-1.28(2H，m)，1.73-1.55(4H，m)，2.28(2H，t，J=7.0Hz)，3.50-3.79(18H，m)，4.12(2H，s)，6.68(2H，s).
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙 氧基}乙基)甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
將上述步驟3獲得的化合物(48.9mg，0.110mmoL)，使用實施例2之步驟2獲得的化合物(84.0mg，0.100mmoL)替代化合物(4)之甲烷磺酸鹽，與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(54.0mg，43%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.14-1.26(2H，m)，1.39-1.51(4H，m)，1.68-1.76(2H，m)，1.81-1.91(2H，m)，2.08-2.23(4H，m)，2.40(3H，s)，2.73-2.84(1H，m)，2.98-3.21(5H，m)，3.25-3.79(26H，m)，3.93(2H，s)，4.43-4.49(1H，m)，4.54-4.61(1H，m)，5.21(2H，q，J=18.6Hz)，5.42(2H，s)，5.54-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，7.00(2H，s)，7.14-7.27(5H，m)，7.31(1H，s)，7.68-7.74(1H，m)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，8.02-8.32(4H，m)，8.46(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1265(M+H)+
步驟5：抗體-藥物複合體(13)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟4獲得的化合物，藉由與實施例2之步驟6相同之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：13.13mg/mL，抗體產量：9.2mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4
實施例15：抗體-藥物複合體(14)
步驟1：N-(tert-丁氧基羰基)-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
將實施例2之步驟2獲得的化合物(0.839g，1.00mmoL)，使用N-(tert-丁氧基羰基)-β-丙胺酸替代6- 順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，而與實施例2之步驟3同樣地反應，獲得的粗生成物未純化而使用於下一步驟。
步驟2：β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
使上述步驟1獲得的粗生成物，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.610g，67%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.67-1.77(2H，m)，1.79-1.92(2H，m)，2.09-2.22(4H，m)，2.40(3H，s)，2.46-2.55(2H，m)，2.82-2.73(1H，m)，2.95-3.13(5H，m)，3.14-3.21(2H，m)，3.55-3.80(6H，m)，4.44-4.52(1H，m)，5.20(2H，dd，J=35.0，19.0Hz)，5.42(2H，s)，5.53-5.60(1H，m)，6.54(1H，s)，7.14-7.28(5H，m)，7.31(1H，s)，7.67(2H，brs)，7.72-7.78(1H，m)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，8.10-8.17(2H，m)，8.29(1H，t，J=5.9Hz)，8.42(1H，t，J=5.7Hz)，8.47(1H，d，J=8.6Hz).
步驟3：(2S)-5-tert-丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊酸
將L-麩胺酸5-tert-丁基酯(1.02g，5.00mmoL)溶解於飽和碳酸水素鈉水溶液(20.0mL)，並於0℃添加N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺(0.775g，5.00mmoL)，於0℃攪拌30 分鐘後，於室溫攪拌1小時。於反應溶液中，於0℃添加5N鹽酸，並作成酸性後，以乙酸乙酯萃取。獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，獲得粗生成物。獲得的粗生成物並未純化而使用於下一步驟。
步驟4：N-[(2S)-5-tert-丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊醯基]-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
使上述步驟3獲得的粗生成物(85.0mg，0.300mmoL)，使用上述步驟2獲得的化合物(182mg，0.200mmoL)替代化合物(4)之甲烷磺酸鹽，與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(102mg，43%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.35(9H，s)，1.67-1.76(2H，m)，1.81-1.90(2H，m)，2.35-2.05(10H，m)，2.40(3H，s)，2.75-2.83(1H，m)，2.99-3.13(3H，m)，3.14-3.26(4H，m)，3.55-3.76(6H，m)，4.36-4.50(2H，m)，5.21(2H，q，J=18.9Hz)，5.42(2H，s)，5.54-5.61(1H，m)，6.53(1H，s)，7.03(2H，s)，7.17-7.26(5H，m)，7.31(1H，s)，7.68-7.73(1H，m)，7.80(1H，d，J=10.6Hz)，8.00-8.05(2H，m)，8.12(1H，d，J=7.8Hz)，8.16-8.20(1H，m)，8.23-8.28(1H，m)，8.46(1H，d，J=8.6Hz).
步驟5：N-[(2S)-4-羧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
使上述步驟4獲得的化合物(102mg，86.8μmoL)，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(76.0mg，78%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.68-1.75(2H，m)，1.84-1.91(2H，m)，2.35-2.05(10H，m)，2.40(3H，s)，2.74-2.83(1H，m)，2.99-3.12(3H，m)，3.14-3.26(4H，m)，3.55-3.77(6H，m)，4.41-4.49(2H，m)，5.21(2H，dd，J=38.7，18.8Hz)，5.42(2H，s)，5.54-5.61(1H，m)，6.54(1H，s)，7.03(2H，s)，7.15-7.27(5H，m)，7.31(1H，s)，7.69-7.74(1H，m)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，8.01-8.07(2H，m)，8.12(1H，d，J=8.2Hz)，8.19(1H，t，J=5.5Hz)，8.27(1H，t，J=6.3Hz)，8.47(1H，d，J=8.6Hz)，12.12(1H，s).
MS(ESI)m/z：1119(M+H)+
步驟6：抗體-藥物複合體(14)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟5獲得的化合物，藉由與實施例2之步驟6相同之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：12.77mg/mL，抗體產量：8.9mg(71%)， 抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.0
實施例16：抗體-藥物複合體(15)
步驟1：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基 丁基)-L-苯丙胺酸醯胺
將實施例1之步驟2獲得的化合物(300mg，0.473mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(日本特開2002-60351號公報記載的化合物；346mg，0.691mmoL)替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(230mg，40%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.85(3H，t，J=7.2Hz)，1.67-1.68(2H，m)，1.81-1.84(2H，m)，2.13(4H，t，J=6.8Hz)，2.39(3H，s)，2.76(1H，t，J=11.4Hz)，2.96-3.08(4H，m)，3.16-3.17(2H，m)，3.59-3.74(4H，m)，4.22-4.28(2H，m)，4.39-4.42(1H，m)，5.16-5.22(2H，m)，5.36-5.41(2H，m)，5.56-5.59(1H，m)，6.52(1H，s)，7.14-7.20(5H，m)，7.29-7.31(3H，m)，7.38-7.41(2H，m)，7.61(1H，t，J=6.0Hz)，7.69(2H，d，J=7.4Hz)，7.79(1H，d，J=11.0Hz)，7.87(2H，d，J=7.8Hz)，7.95(1H，s)，8.07(2H，t，J=4.3Hz)，8.42(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1004(M+H)+
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-苯丙胺酸醯胺
於上述步驟1獲得的化合物(226mg，0.225mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)溶液中，添加哌啶(0.223mL，2.25mmoL)，並於室溫攪拌5小時。減壓餾除溶媒，獲 得含標題化合物的混合物。本混合物不再純化而使用於下一反應。
步驟3：tert-丁基(3S,12S)-12-苯甲基-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八烷-1-酸酯
將上述步驟2獲得的化合物(0.225mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-tert-丁基酯(104mg，0.337mmoL)替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(114mg，43%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.86(3H，t，J=7.2Hz)，1.35(9H，s)，1.66-1.69(2H，m)，1.84-1.85(2H，m)，2.11-2.13(4H，m)，2.39(3H，s)，2.43-2.45(1H，m)，2.68-2.79(2H，m)，2.94-3.16(5H，m)，3.66(5H，tt，J=30.5，10.0Hz)，4.23-4.30(3H，m)，4.39-4.41(1H，m)，5.15(1H，d，J=19.2Hz)，5.21(1H，d，J=18.8Hz)，5.37(1H，d，J=17.2Hz)，5.42(1H，d，J=16.0Hz)，5.53-5.57(1H，m)，6.54(1H，s)，7.15-7.22(5H，m)，7.26-7.34(3H，m)，7.38-7.40(2H，m)，7.68-7.70(2H，m)，7.79(1H，d，J=10.9Hz)，7.86-7.87(2H，m)，7.88-7.90(1H，m)，7.96(1H，t，J=6.3Hz)，8.03-8.07(2H，m)，8.20(1H，t，J=5.5Hz)，8.43(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1175(M+H)+
步驟4：tert-丁基(3S,12S)-3-胺基-12-苯甲基-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八烷-1-酸酯
將上述步驟3獲得的化合物(110mg，0.0936mmoL)，使與上述步驟2同樣地反應，獲得含標題化合物的混合物。本混合物不再純化而使用於下一反應。
步驟5：tert-丁基(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八烷-1-酸酯
使上述步驟4獲得的化合物(0.0936mmoL)與實施例2之步驟4同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(40.2mg，38%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.86(3H，t，J=7.4Hz)，1.17-1.19(2H，m)，1.35(9H，s)，1.44-1.47(4H，m)，1.66-1.67(2H，m)，1.81-1.88(2H，m)，2.06-2.13(6H，m)，2.39-2.41(1H，m)，2.40(3H，s)，2.67(1H，dd，J=16.0，5.5Hz)，2.76(1H，dd，J=13.3，9.0Hz)，2.96(1H，dd，J=13.5，4.9Hz)，3.04(2H，td，J=13.4,6.6Hz)，3.18(2H，s)，3.36(2H，d，J=7.0Hz)，3.58(1H，dd，J=16.8 ，5.5Hz)，3.70(3H，dt，J=21.5，7.2Hz)，4.38-4.41(1H，m)，4.57-4.59(1H，m)，5.16(1H，d，J=18.8Hz)，5.24(1H，d，J=19.2Hz)，5.38(1H，d，J=16.4Hz)，5.43(1H，d，J=16.0Hz)，5.57-5.58(1H，m)，6.54(1H，s)，6.99(2H，s)，7.13-7.25(5H，m)，7.31(1H，s)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，7.94-8.04(3H，m)，8.13-8.16(2H，m)，8.43(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1146(M+H)+
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-苯丙胺酸醯胺
使上述步驟5獲得的化合物(40.0mg，0.0349mmoL)與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(33.6g，88%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，q，J=7.2Hz)，1.14-1.20(2H，m)，1.46(4H，td，J=14.8，7.3Hz)，1.67(2H，td，J=12.9，6.3Hz)，1.84(2H，dq，J=25.5，7.2Hz)，2.11(6H，dt，J=23.4，7.3Hz)，2.39(3H，s)，2.45-2.47(1H，m)，2.69(1H，dd，J=16.5，5.5Hz)，2.76(1H，dd，J=13.7，9.3Hz)，2.94-3.01(1H，m)，3.05(2H，dq，J=25.1，6.4Hz)，3.17-3.19(1H，m)，3.34-3.46(4H，m)，3.59(1H，dd，J=16.6，5.6Hz)，3.69(2H，dt，J=20.1，6.8Hz)， 4.37-4.41(1H，m)，4.55(1H，dd，J=13.5，7.7Hz)，5.16(1H，d，J=19.0Hz)，5.22(1H，d，J=18.6Hz)，5.38(1H，d，J=16.4Hz)，5.43(1H，d，J=16.4Hz)，5.55-5.59(1H，m)，6.54(1H，s)，6.99(2H，s)，7.19(5H，dq，J=31.6，7.9Hz)，7.31(1H，s)，7.79(1H，d，J=11.0Hz)，7.99(3H，ddd，J=25.1，14.2,6.2Hz)，8.11(1H，t，J=5.5Hz)，8.17(1H，d，J=7.6Hz)，8.44(1H，d，J=8.5Hz)，12.32(1H，s).
MS(APCI)m/z：1090(M+H)+
步驟7：抗體-藥物複合體(15)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液0.025mL(相對於抗體一分子為3.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.)0.0625mL。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，於室溫下下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC)0.102mL與上述步驟6獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液0.047mL(相對於抗體一分子為5.5當量)，使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其添加次，100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液0.009mL，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用共通方法A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：9.16mg/mL，抗體產量：6.4mg(51%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.0
實施例17：抗體-藥物複合體(16)
步驟1：N6-(tert-丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌 喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
將實施例2之步驟2獲得的化合物(167mg，0.176mmoL)，使用Nε-(tert-丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(103mg，0.22mmoL)替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物未純化而用於下一步驟。
步驟2：N6-(tert-丁氧基羰基)-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
於上述步驟1獲得的粗生成物之N,N-二甲基甲醯胺(4.00mL)溶液中，添加哌啶(0.400mL)，並於室溫攪拌2小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(113mg，60%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.18-1.49(5H，m)，1.36(9H，s)，1.51-1.60(1H，m)，1.67-1.76(2H，m)，1.80-1.91(2H，m)，2.09-2.20(4H，m)，2.39(3H，s)，2.76-2.89(3H，m)，2.99-3.22(6H，m)，3.58-3.77(6H，m)，4.43-4.49(1H，m)，5.20(2H，q，J=18.5Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.60(1H，m)，6.54(1H，s)，6.76(1H，t，J=5.5Hz)，7.15-7.26(5H，m)，7.31(1H，s)，7.69-7.74(1H，m)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，8.08(1H ，t，J=5.7Hz)，8.14(1H，d，J=7.8Hz)，8.22-8.30(2H，m)，8.47(1H，d，J=8.6Hz).
步驟3：N6-(tert-丁氧基羰基)-N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
使上述步驟2獲得的化合物(113mg，0.106mmoL)，與實施例2之步驟4同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(102mg，61%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.11-1.53(11H，m)，1.35(9H，s)，1.56-1.65(1H，m)，1.68-1.76(2H，m)，1.81-1.92(2H，m)，2.06-2.20(6H，m)，2.40(3H，s)，2.74-2.90(3H，m)，2.96-3.39(7H，m)，3.57-3.74(6H，m)，4.14-4.21(1H，m)，4.42-4.49(1H，m)，5.20(2H，q，J=18.9Hz)，5.42(2H，s)，5.55-5.60(1H，m)，6.54(1H，s)，6.72-6.78(1H，m)，7.00(2H，s)，7.15-7.26(5H，m)，7.31(1H，s)，7.69-7.72(1H，m)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，7.93(1H，d，J=7.4Hz)，7.99-8.04(1H，m)，8.10-8.18(2H，m)，8.26(1H，t，J=6.1Hz)，8.46(1H，d，J=8.2Hz).
步驟4：N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基 -10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺酸醯胺
於上述步驟3獲得的化合物(102mg，80.9μmoL)之二氯甲烷(4.00mL)中，添加三氟乙酸(1.00mL)，並於室溫下攪拌2小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(57.0mg，61%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.12-1.35(4H，m)，1.41-1.55(7H，m)，1.61-1.77(3H，m)，1.80-1.91(2H，m)，2.07-2.22(6H，m)，2.40(3H，s)，2.84-2.71(3H，m)，2.97-3.40(7H，m)，3.59-3.76(6H，m)，4.20-4.25(1H，m)，4.45-4.50(1H，m)，5.20(2H，q，J=18.5Hz)，5.42(2H，s)，5.54-5.60(1H，m)，6.55(1H，s)，7.01(2H，s)，7.15-7.26(5H，m)，7.31(1H，s)，7.74(1H，t，J=5.7Hz)，7.81(1H，d，J=10.9Hz)，7.97(1H，d，J=7.8Hz)，8.05(1H，t，J=6.1Hz)，8.13-8.18(2H，m)，8.28(1H，t，J=5.7Hz)，8.47(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1160(M+H)+
步驟5：抗體-藥物複合體(16)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟4獲得的化合物，藉由與實施例16之步驟7同樣之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：19.26mg/mL，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8
實施例18 N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺酸醯胺
步驟1：tert-丁基(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)胺基甲酸酯
將化合物(4)之甲磺酸鹽(500mg、0.941mmoL)，使用N-(tert-丁氧基羰基)-β-丙胺酸替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈黃茶色固體之標題化合物(616mg、定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.29(9H，s)，1.86(2H，dt，J=15.1，7.3Hz)，2.04-2.22(2H，m)，2.31(2H，t，J=6.8Hz)，2.40(3H，s)，3.10-3.26(4H，m)，5.15(1H，d，J=18.8Hz)，5.26(1H，d，J=19.2Hz)，5.42(2H，dd，J=18.8，16.4Hz)，5.57(1H，dt，J=8.5，4.2Hz)，6.53(1H，s)，6.78(1H，t，J=5.5Hz)，7.30(1H，s)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，8.46(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：607(M+H)+
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺酸醯胺
使上述步驟1獲得的化合物與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(499mg、86%)之三氟乙酸鹽。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.86(2H，dquin，J=14.6，7.2，7.2，7.2，7.2Hz)，2.06-2.27(1H，m)，2.41(3H，s)，2.46-2.57(2H，m)，3.08(2H，t，J=6.8Hz)，3.14-3.24(2H，m)，5.22(1H，d，J=18.8Hz)，5.29(1H，d，J=18.8Hz)，5.43(2H，s)，5.58(1H，dt，J=8.5，4.5Hz)，6.55(1H，s)，7.32(1H，s)，7.74(3H，brs)，7.82(1H，d，J=11.0Hz)，8.67(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：507(M+H)+
實施例19：抗體-藥物複合體(17)
步驟1：N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺酸醯胺
使實施例18之化合物(484mg、0.780mmoL)，與實施例2之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(626mg、87%)。
1H-NMR(400MHz，400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H ，t，J=7.4Hz)，1.27-1.42(9H，m)，1.77-1.93(2H，m)，2.06-2.22(2H，m)，2.36(2H，t，J=7.2Hz)，2.40(3H，d，J=1.6Hz)，2.44-2.54(2H，m)，2.76(1H，dd，J=14.5，10.2Hz)，3.02(1H，dd，J=13.9，4.5Hz)，3.12-3.22(2H，m)，3.52(6H，d，J=6.3Hz)，4.42-4.54(1H，m)，5.19(1H，d，J=19.2Hz)，5.26(1H，d，J=18.4Hz)，5.42(1H，dd，J=18.4，16.4Hz)，5.57(1H，dt，J=8.7，4.4Hz)，6.53(1H，s)，6.98(1H，t，J=5.9Hz)，7.14-7.28(5H，m)，7.31(1H，s)，7.77-7.84(1H，m)，7.91(1H，t，J=5.5Hz)，8.16(1H，d，J=7.8Hz)，8.27(1H，t，J=5.1Hz)，8.52(1H，d，J=9.0Hz).
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺酸醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1獲得的化合物(624mg、0.675mmoL)與實施例2之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(626mg、92%)。
1H-NMR(400MHz，400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.86(2H，tt，J=14.5，7.2Hz)，2.07-2.22(2H，m)，2.36(2H，t，J=7.2Hz)，2.40(3H，s)，2.44-2.54(2H，m)，2.75(1H，dd，J=13.7，9.8Hz)，3.04(1H，dd，J=13.7，4.3Hz)，3.12-3.22(2H，m)，3.58(2H，d，J=4.7Hz)，3.69(3H，td，J=11.2,5.7Hz)，3.87(1H，dd，J=17.0，5.7Hz)，4.54(1H，m，J=17.8，4.5Hz)，5.19(1H，d，J=19.2Hz) ，5.26(1H，d，J=18.8Hz)，5.43(2H，s)，5.51-5.60(1H，m)，6.55(1H，s)，7.14-7.29(5H，m)，7.32(1H，s)，7.81(1H，d，J=10.9Hz)，7.88(1H，t，J=5.7Hz)，7.97(3H，br.s.)，8.29-8.38(2H，m)，8.50(1H，t，J=5.7Hz)，8.55(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：825(M+H)+
步驟3：tert-丁基(9S，18S)-9-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-18-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十烷-20-酸酯
將上述步驟2獲得的化合物(150mg，0.182mmoL)，使用(2S)-4-tert-丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(90.0mg，0.219mmoL)替代N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸，使與實施例2之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(84.0mg，38%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.82-0.91(3H，m)，1.35(9H，s)，1.85(2H，tt，J=14.0，7.3Hz)，2.06-2.21(2H，m)，2.39(3H，s)，2.31-2.53(5H，m)，2.64-2.73(1H，m)，2.78(1H，dd，J=13.7，9.8Hz)，3.02(1H，dd，J=13.9，4.5Hz)，3.11-3.20(2H，m)，3.55-3.80(6H，m)，4.17-4.35(3H，m)，4.35-4.43(1H，m)，4.44-4.51(1H，m)，5.18(1H，d，J=19.2Hz)，5.24(1H，d，J=19.2Hz)， 5.41(2H，dd，J=18.8，16.4Hz)，5.51-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，7.13-7.20(1H，m)，7.20-7.27(4H，m)，7.27-7.34(3H，m)，7.39(2H，t，J=7.2Hz)，7.65-7.73(3H，m)，7.79(2H，d，J=10.6Hz)，7.87(2H，d，J=7.4Hz)，8.00(1H，t，J=6.1Hz)，8.08-8.20(2H，m)，8.22-8.31(1H，m)，8.52(1H，d，J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：1218(M+H)+
步驟4：tert-丁基(9S，18S)-9-苯甲基-18-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十烷-20-酸酯
使上述步驟3獲得的化合物(81.0mg，0.0665mmoL)與實施例2之步驟4同樣地反應，獲得標題化合物(56.0mg，71%)。
MS(ESI)m/z：1189.5(M+H)+
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺酸醯胺
使上述步驟4獲得的化合物(52.0mg，0.0437mmoL)與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(35.0mg，71%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.12-1.22(2H，m)，1.39-1.51(4H，m)，1.78-1.92(2H，m)，2.04-2.19(2H，m)，2.08(2H，t，J=7.2Hz)，2.40(3H，s)，2.31-2.46(6H，m)，2.61-2.72(1H，m)，2.73-2.85(1H，m)，3.02(1H，dd，J=14.1，4.7Hz)，3.17(2H，m，J=5.5Hz)，3.26-3.43(2H，m)，3.55-3.77(6H，m)，4.42-4.50(1H，m)，4.51-4.58(1H，m)，5.19(1H，d，J=18.4Hz)，5.26(1H，d，J=18.4Hz)，5.42(2H，brs)，5.52-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(2H，s)，7.12-7.27(5H，m)，7.31(1H，s)，7.80(2H，d，J=10.9Hz)，7.93-8.02(1H，m)，8.03-8.17(3H，m)，8.22-8.31(1H，m)，8.53(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1133(M+H)+
步驟6：抗體-藥物複合體(17)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟5獲得的化合物，藉由與實施例4之步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：9.56mg/mL，抗體產量：6.7mg(54%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5
實施例20：抗體-藥物複合體(18)
步驟1：tert-丁基(5S，14S)-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-14-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸酯
冰冷下，於甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基 -N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺(WO97/46260記載的醫藥化合物之游離體；0.250g，0.332mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(57.2mg，0.497mmoL)、及N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-tert-丁基酯(0.205g，0.497mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加N,N’-二環己基碳化二亞胺(0.123g，0.497mmoL)，於室溫攪拌2日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.278g，73%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.86(3H，t，J=7.1Hz)，1.35(9H，s)，1.79-1.90(2H，m)，2.03-2.25(2H，m)，2.40(3H，s)，2.40-2.51(2H，m)，2.64-2.82(2H，m)，2.98(1H，dd，J=13.7，4.6Hz)，3.16(2H，brs)，3.55(1H，dd，J=16.7，5.7Hz)，3.63-3.80(4H，m)，4.16-4.34(3H，m)，4.36-4.50(2H，m)，5.23(2H，s)，5.37(1H，d，J=16.5Hz)，5.43(1H，d，J=16.5Hz)，5.51-5.62(1H，m)，6.52(1H，s)，7.10-7.25(5H，m)，7.26-7.33(3H，m)，7.39(2H，t，J=7.3Hz)，7.65-7.72(3H，m)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，7.86(2H，d，J=7.3Hz)，7.98(1H，t，J=5.5Hz)，8.07(1H，d，J=7.8Hz)，8.15(1H，t，J=5.5Hz)，8.31(1H，t，J=5.5Hz)，8.41(1H，d，J=8.7Hz).
MS(ESI)m/z：1147(M+H)+
步驟2：tert-丁基(5S，14S)-14-胺基-5-苯甲 基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸酯
於上述步驟1獲得的化合物(0.279g，0.242mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)溶液中，添加哌啶(0.240mL，2.42mmoL)，於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=2：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.265g，定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.88(3H，t，J=7.2Hz)，1.39(9H，s)，1.81-1.94(1H，m)，2.07-2.28(2H，m)，2.37(1H，dd，J=15.8，8.0Hz)，2.43(3H，s)，2.60(1H，dd，J=15.8，4.9Hz)，2.75-2.82(1H，m)，3.00(1H，dd，J=13.9，4.5Hz)，3.16-3.25(2H，m)，3.50-3.61(2H，m)，3.65-3.81(5H，m)，4.40-4.51(1H，m)，5.27(2H，dd，J=24.1，19.0Hz)，5.43(2H，dd，J=21.3，16.2Hz)，5.56-5.65(1H，m)，6.55(1H，s)，7.15-7.28(5H，m)，7.33(1H，s)，7.83(1H，d，J=11.0Hz)，8.04(1H，t，J=5.7Hz)，8.09(1H，d，J=8.2Hz)，8.26-8.39(2H，m)，8.44(1H，d，J=8.2Hz).
步驟3：tert-丁基(5S，14S)-5-苯甲基-14-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7] 吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸酯
於上述步驟2獲得的化合物(0.100g，0.108mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)溶液中，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(40.0mg，0.130mmoL)，於室溫攪拌2日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(80.0mg，66%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.88(3H，t，J=7.2Hz)，1.13-1.23(2H，m)，1.37(9H，s)，1.42-1.54(4H，m)，1.80-1.96(2H，m)，2.08-2.25(4H，m)，2.35-3.76(15H，m)，2.43(3H，s)，4.39-4.49(1H，m)，4.55-4.67(1H，m)，5.21-5.34(2H，m)，5.43(2H，dd，J=21.1，16.4Hz)，5.56-5.64(1H，m)，6.55(1H，s)，7.01(2H，d，J=0.8Hz)，7.16-7.26(5H，m)，7.33(1H，s)，7.83(1H，d，J=11.3Hz)，8.04-8.18(3H，m)，8.30-8.37(1H，m)，8.43(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1118(M+H)+
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
冰冷下，於上述步驟3獲得的化合物(70.0mg，62.6μmoL)中添加三氟乙酸(4.00mL)，並於室溫攪拌1小 時。減壓餾除溶媒，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(55.0mg，83%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.88(3H，t，J=7.4Hz)，1.14-1.24(2H，m)，1.41-1.53(4H，m)，1.79-1.95(2H，m)，2.08-2.28(4H，m)，2.37-2.60(2H，m)，2.42(3H，s)，2.63-2.82(2H，m)，2.99(1H，dd，J=14.1,5.1Hz)，3.12-3.25(2H，m)，3.29-3.44(1H，m)，3.52-3.80(6H，m)，4.38-4.48(1H，m)，4.56(1H，dd，J=13.7，7.4Hz)，5.27(2H，dd，J=24.3，18.8Hz)，5.43(2H，dd，J=21.5，16.4Hz)，5.57-5.62(1H，m)，6.55(1H，s)，7.01(2H，s)，7.15-7.26(5H，m)，7.33(1H，s)，7.82(1H，d，J=11.0Hz)，7.98(1H，brs)，8.08(1H，d，J=6.7Hz)，8.15(1H，d，J=7.8Hz)，8.34(1H，brs)，8.44(1H，d，J=8.6Hz)，12.26(1H，brs).
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+
步驟5：抗體-藥物複合體(18)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(8.0mL)採取於15mL試管，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.124mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.400mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含上述步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.249mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.050mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液17.5mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.56mg/mL，抗體產量：62mg(77%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5
實施例21：抗體-藥物複合體(19)
步驟1：抗體-藥物複合體(19)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(8.0mL)採取於15mL試管，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.187mL；相對於抗體一分子為3.5當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.400mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.373mL；相對於抗體一分子為6.9當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液 (0.075mL；相對於抗體一分子為13.8當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液16mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.66mg/mL，抗體產量：59mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.2
實施例22：抗體-藥物複合體(20)
步驟1：抗體-藥物複合體(20)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.025mL；相對於抗體一分子為3.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.109mL)與實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液0.008mL，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用製造方法1記載的共通操作A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：11.14mg/mL，抗體產量：7.8mg(62%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8
實施例23：抗體-藥物複合體(21)
步驟1：抗體-藥物複合體(21)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.051mL；相對於抗體一分子為6.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.067mL)與實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.085mL；相對於抗體一分子為10.0當量)，使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌60分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.013mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.88mg/mL，抗體產量：5.28mg(42%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.4
實施例24：抗體-藥物複合體(22)
步驟1：抗體-藥物複合體(22)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.051mL；相對於抗體一分子為6.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.025mL)與實施例20之步驟4獲得的化合物10mM含的二甲基亞碸溶液(0.127mL；相對於抗體一分子為15.0當量)，使用試管迴 轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌60分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.019mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用製造方法1記載的共通操作A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.19mg/mL，抗體產量：7.14mg(57%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9
實施例25：抗體-藥物複合體(23)
混合實施例23與實施例24之抗體-藥物複合體之約略全量，使用製造方法1記載的共通操作A而濃縮 溶液，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：10.0mg/mL，抗體產量：9.07mg，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.6
實施例26：抗體-藥物複合體(24)
步驟1：抗體-藥物複合體(24)
抗體之還原：將參考例3製作的抗CD30抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.75mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=270400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.95mg/mL，抗體產量：5.70mg(57%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.9
實施例27：抗體-藥物複合體(25)
步驟1：抗體-藥物複合體(25)
抗體之還原：將參考例3製作的抗CD30抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.75mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液 (0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=270400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.04mg/mL，抗體產量：6.24mg(62%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.8
實施例28：抗體-藥物複合體(26)
步驟1：抗體-藥物複合體(26)
抗體之還原：將參考例4製作的抗CD33抗體，使用 製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.66mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=256400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.96mg/mL，抗體產量：5.76mg(58%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.0
實施例29：抗體-藥物複合體(27)
步驟1：抗體-藥物複合體(27)
抗體之還原：將參考例4製作的抗CD33抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.66mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。 其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=256400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.95mg/mL，抗體產量：5.70mg(57%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.1
實施例30：抗體-藥物複合體(28)
步驟1：抗體-藥物複合體(28)
抗體之還原：將參考例5製作的抗CD70抗體，使用 製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.69mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0148mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=262400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.01mg/mL，抗體產量：6.06mg(61%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.8
實施例31：抗體-藥物複合體(29)
步驟1：抗體-藥物複合體(29)
抗體之還原：將參考例5製作的抗CD70抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.69mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於2mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0297mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含有實施例20之步驟4獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0593mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液 (0.0119mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=262400(計算推定值)、εA,370=0(計算推定值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.18mg/mL，抗體產量：7.08mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.0
實施例32：抗體-藥物複合體(30)
步驟1：N6-(tert-丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
將甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基 -2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺(WO97/46260記載的醫藥化合物之游離體；0.300g，0.397mmoL)，使用Nε-(tert-丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸替代N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-tert-丁基酯，使與實施例20之步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.471g，98%)。
MS(ESI)m/z：1204(M+H)+
步驟2：N6-(tert-丁氧基羰基)-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使上述步驟1獲得的化合物(0.417g，0.391mmoL)，與實施例20之步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.272g，71%)。
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+
步驟3：N6-(tert-丁氧基羰基)-N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使上述步驟2獲得的化合物(0.210g，0.213mmoL)，與實施例20之步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(63.0mg，21%)。
MS(ESI)m/z：1175(M+H)+
步驟4：N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺三氟乙酸鹽
冰冷下，於上述步驟3獲得的化合物(63.0mg，53.6μmoL)中添加三氟乙酸(2.00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得呈黃色固體之標題化合物(50.0mg，78%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.89(3H，t，J=7.2Hz)，1.13-1.39(4H，m)，1.43-1.58(7H，m)，1.61-1.73(1H，m)，1.80-1.94(2H，m)，2.07-2.28(4H，m)，2.43(3H，s)，2.72-2.84(4H，m)，3.00(1H，dd，J=13.7，3.9Hz)，3.20(2H，brs)，3.55-3.80(6H，m)，4.20-4.3((1H，m)，4.42-4.52(1H，m)，5.27(2H，dd，J=23.7，19.8Hz)，5.43(2H，dd，J=21.9，16.4Hz)，5.55-5.65(1H，m)，6.56(1H，s)，7.02(2H，s)，7.15-7.27(5H，m)，7.34(1H，s)，7.64(3H，brs)，7.83(1H，d，J=10.6Hz)，7.98-8.04(2H，m)，8.09-8.20(2H，m)，8.37(1H，t，J=5.5Hz)，8.47(1H，d，J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1075(M+H)+
步驟5：抗體-藥物複合體(30)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟4獲得的化合物，藉由與實施例4之步驟1相同之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：12.04mg/mL，抗體產量：8.4mg(67%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2
實施例33：抗體-藥物複合體(31)
步驟1：抗體-藥物複合體(31)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及實施例32之步驟4獲得的化合物，藉由與實施例5之步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：1.79mg/mL，抗體產量：10.74mg(86%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.1
實施例34：抗體-藥物複合體(32)
步驟1：抗體-藥物複合體(32)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及實施例32之步驟4獲得的化合物，藉由與實施例6之步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：1.87mg/mL，抗體產量：11.22mg(90%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.0
實施例35：抗體-藥物複合體(33)
混合實施例33與實施例34之抗體-藥物複合體之約略全量，使用製造方法1記載的共通操作A而濃縮溶液，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：10.0mg/mL，抗體產量：22.21mg，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.9
實施例36：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
步驟1：tert-丁基(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基甲酸酯
於N-(tert-丁氧基羰基)-甘胺酸(0.395g，2.26mmoL)之二氯甲烷(3.00mL)溶液中，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.260g，2.26mmoL)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.433mg，2.26mmoL)，並於室溫攪拌1小時。將此溶液添加至包含化合物(4)之甲烷磺酸鹽(1.00g，1.88mmoL)、三乙基胺(0.315mL，2.26mmoL)、及N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)的溶液中，於室溫攪拌16.5小時 。反應溶液以氯仿稀釋，並以10%檸檬酸溶液洗淨後，有機層以無水硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈黃色固體之標題化合物(1.16g，99%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.86(3H，t，J=7.2Hz)，1.30(9H，s)，1.81-1.89(2H，m)，2.09-2.21(2H，m)，2.38(3H，s)，3.15-3.17(2H，m)，3.55-3.56(2H，m)，5.15(1H，d，J=18.8Hz)，5.23(1H，d，J=19.2Hz)，5.41(2H，s)，5.55-5.56(1H，m)，6.53(1H，s)，6.95(1H，t，J=5.5Hz)，7.28(1H，s)，7.77(1H，d，J=11.0Hz)，8.39(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：593(M+H)+
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使上述步驟1獲得的化合物(0.513g，1.01mmoL)，與實施例17之步驟4同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.463g，93%)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：0.96(3H，t，J=7.0Hz)，1.89-1.91(2H，m)，2.14-2.16(1H，m)，2.30(3H，s)，2.40-2.42(1H，m)，3.15-3.21(2H，m)，3.79-3.86(2H，m)，4.63-4.67(1H，m)，5.00-5.05(1H，m)，5.23(1H，d，J=16.0Hz)，5.48(1H，d，J=16.0Hz)，5.62-5.64(1H，m)，7.40-7.45(2H，m).
MS(APCI)m/z：493(M+H)+
實施例37：抗體-藥物複合體(34)
步驟1：N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
將N-(tert-丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.292mg、0.669mmoL)溶解於二氯甲烷(5.00mL)，並添加N-羥基琥珀醯亞胺(77.0mg，0.0.669mmoL)及N,N’-二環己基碳化二亞胺(128mg，0.669mmoL)，攪拌1小時20分鐘。將其反應溶液滴加到實施例36之化合物(0.275g，0.558mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(5.00 mL)，並於室溫攪拌1日。添加10%檸檬酸水溶液(20.0mL)，以20mL之氯仿萃取3次。減壓餾除獲得的有機層，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.430g，85%)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：0.94(3H，t，J=7.2Hz)，1.43(9H，s)，1.83-1.85(2H，m)，2.20-2.22(1H，m)，2.29(3H，s)，2.36-2.39(2H，m)，2.50-2.53(1H，m)，2.67(1H，s)，3.08-3.11(1H，m)，3.18-3.21(1H，m)，3.63-3.67(4H，m)，3.78-3.82(1H，m)，3.99(2H，dd，J=23.5，16.8Hz)，4.16(1H，s)，4.58(1H，d，J=18.8Hz)，5.15(1H，d，J=19.2Hz)，5.25(1H，d，J=16.4Hz)，5.52(1H，d，J=16.4Hz)，5.59-5.61(1H，m)，6.89(2H，d，J=6.7Hz)，7.15-7.17(3H，m)，7.28(1H，d，J=10.6Hz)，7.41(1H，s).
MS(APCI)m/z：911(M+H)+
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
將上述步驟1獲得的化合物(0.227g，0.249mmoL)溶解於二氯甲烷(1.00mL)。添加三氟乙酸(3.00mL)並攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.200g，99%)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ：0.93(3H，t，J=7.4Hz)，1.85(2H，q，J=7.3Hz)，2.24-2.45(5H，m)，2.32(3H ，s)，2.56(1H，dd，J=13.7，5.5Hz)，3.09-3.25(2H，m)，3.66-3.76(6H，m)，4.18-4.24(1H，m)，4.76(1H，d，J=19.2Hz)，5.18(1H，d，J=18.8Hz)，5.30(1H，t，J=18.4Hz)，5.52(1H，d，J=16.0Hz)，5.63(1H，t，J=5.9Hz)，6.93(2H，d，J=6.6Hz)，7.17(3H，q，J=7.3Hz)，7.30(1H，d，J=10.9Hz)，7.42(1H，s).
MS(APCI)m/z：811(M+H)+
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使上述步驟2獲得的化合物(0.125g，0.154mmoL)與實施例20之步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.0775g，50%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.86(3H，t，J=7.2Hz)，1.18-1.19(2H，m)，1.45-1.48(4H，m)，1.83-1.85(2H，m)，2.12-2.17(4H，m)，2.39(3H，s)，2.68(1H，dd，J=24.4，14.7Hz)，2.83-2.87(1H，m)，3.17-3.78(12H，m)，4.42-4.45(1H，m)，5.23(2H，s)，5.41(2H，s)，5.58-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(2H，s)，7.15-7.29(6H，m)，7.76(1H，d，J=10.9Hz)，7.97-8.00(1H，m)，8.09-8.12(3H，m)，8.25-8.28(1H，m)，8.44(1H，d，J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：1004(M+H)+
步驟4：抗體-藥物複合體(34)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作C-1及B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)，將媒體替換為PBS6.0/EDTA，而調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製試管中，於其中添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.025mL；相對於抗體一分子為3.0當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，於37℃培育1小時下，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：對上述溶液，於室溫下添加含二甲基亞碸(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.102mL)與上述步驟3獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.047mL；相對於抗體一分子為5.5當量)，並使用試管迴轉器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫下攪拌40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.009mL)，再於室溫下攪拌20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用ABS)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL後，使用製造方法1記載的共通操作A，而濃縮溶液。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算值)、εA,370=0(計算值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值 ))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：12.4mg/mL，抗體產量：8.7mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1
實施例38：抗體-藥物複合體(35)
步驟1：N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
將化合物(4)之甲烷磺酸鹽(0.800g，1.51mmoL)，使用N-(tert-丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺酸(0.419g、1.81mmoL)替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.965g，99%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.23(9H，s)，1.82-1.89(2H，m)，2.11-2.19(2H，m)，2.40(3H，s)，3.16-3.17(2H，m)，3.52(2H，ddd，J=21.3，15.5，4.7Hz)，3.77(2H，ddd，J=24.3，16.8，5.9Hz)，5.23(2H，s)，5.43(2H，s)，5.56-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，7.04(1H，t，J=5.9Hz)，7.31(1H，s)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，8.12(1H，t，J=5.5Hz)，8.31(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：650(M+H)+
步驟2：甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1獲得的化合物(0.884g，1.36mmoL)，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.787g，定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz) ，1.82-1.89(2H，m)，2.11-2.18(2H，m)，2.41(3H，s)，3.17-3.18(2H，m)，3.63(2H，s)，3.88(2H，d，J=5.5Hz)，5.19(1H，d，J=18.8Hz)，5.25(1H，d，J=19.2Hz)，5.42(2H，s)，5.56-5.61(1H，m)，6.56(1H，s)，7.32(1H，s)，7.81(1H，d，J=11.0Hz)，8.01(3H，brs)，8.65(1H，d，J=8.6Hz)，8.72(1H，t，J=5.5Hz).
MS(APCI)m/z：550(M+H)+
步驟3：N-(tert-丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
將上述步驟2獲得的化合物(0.400g，0.728mmoL)，使用N-(tert-丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.381mg、0.873mmoL)替代4-(tert-丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1之步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.545g，77%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.37(9H，s)，1.80-1.90(2H，m)，2.09-2.11(1H，m)，2.18-2.21(1H，m)，2.40(3H，s)，2.72-2.77(1H，m)，3.01(1H，dd，J=13.7，4.3Hz)，3.16-3.17(2H，m)，3.52-3.83(10H，m)，4.48-4.51(1H，m)，5.21(1H，d，J=19.2Hz)，5.26(1H，d，J=18.8Hz)，5.43(2H，s)，5.55-5.59(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(1H，t，J=5.9Hz)，7.18-7.24(5H，m)，7.31(1H，s)，7.80(1H，d，J=11.0Hz) ，7.90(1H，t，J=5.3Hz)，8.02(1H，t，J=5.5Hz)，8.15-8.19(2H，m)，8.30(1H，t，J=5.5Hz)，8.43(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：968(M+H)+
步驟4：甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟3獲得的化合物(0.429g，0.443mmoL)，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.385g，定量)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.82-1.89(2H，m)，2.11-2.19(2H，m)，2.40(3H，s)，2.74(1H，dd，J=13.7，9.8Hz)，3.03(1H，dd，J=13.7，4.3Hz)，3.16-3.18(2H，m)，3.57-3.58(2H，m)，3.67-3.76(7H，m)，3.82-3.90(1H，m)，4.53-4.56(1H，m)，5.23(2H，s)，5.43(2H，s)，5.55-5.59(1H，m)，6.55(1H，s)，7.17-7.19(1H，m)，7.22-7.29(4H，m)，7.31(1H，s)，7.80(1H，d，J=10.9Hz)，8.00(3H，brs)，8.07(1H，t，J=5.7Hz)，8.22(1H，t，J=5.7Hz)，8.36(2H，dd，J=10.9，7.0Hz)，8.47-8.52(2H，m).
MS(APCI)m/z：868(M+H)+
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基 -10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]1吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使上述步驟4獲得的化合物(0.278g，0.320mmoL)，與實施例20之步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.166g，49%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.2Hz)，1.14-1.22(2H，m)，1.44-1.49(4H，m)，1.80-1.90(2H，m)，2.06-2.13(3H，m)，2.20(1H，d，J=14.1Hz)，2.40(3H，s)，2.77(1H，dd，J=13.3，8.7Hz)，3.01(1H，dd，J=13.3，4.3Hz)，3.17(2H，t，J=6.7Hz)，3.35-3.38(2H，m)，3.56-3.84(10H，m)，4.48(1H，dd，J=13.1，9.2Hz)，5.23(2H，s)，5.43(2H，s)，5.55-5.59(1H，m)，6.53(1H，s)，6.99(2H，s)，7.20-7.24(5H，m)，7.31(1H，s)，7.80(1H，d，J=11.0Hz)，8.00(2H，q，J=5.5Hz)，8.06(1H，t，J=5.9Hz)，8.13(1H，d，J=8.2Hz)，8.18(1H，t，J=5.7Hz)，8.28(1H，t，J=5.7Hz)，8.43(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1061(M+H)+
步驟6：抗體-藥物複合體(35)
使用參考例2製作的M30-H1-L4P抗體及上述步驟5獲得的化合物，藉由與實施例16之步驟7同樣的方法，獲得標題抗體-藥物複合體。
抗體濃度：11.7mg/mL，抗體產量：8.2mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5
實施例39：抗體-藥物複合體(36)
步驟1：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺
使甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,1,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺酸醯胺(WO97/46260記載的醫藥化合物之游離體；0.150g，0.200moL)，與實施例20之步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(70.0mg，37%)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.87(3H，t，J=7.4Hz)，1.15-1.21(2H，m)，1.41-1.50(4H，m)，1.80-1.90(2H，m)，2.07-2.12(4H，m)，2.17-2.23(1H，m)，2.35-2.40(1H ，m)，2.41(3H，s)，2.73-2.81(1H，m)，2.98(1H，dd，J=13.7，4.6Hz)，3.15-3.20(2H，m)，3.53(1H，dd，J=16.6，5.7Hz)，3.62-3.77(5H，m)，4.39-4.45(1H，m)，5.22(1H，d，J=18.9Hz)，5.27(1H，d，J=18.9Hz)，5.39(1H，d，J=16.0Hz)，5.44(1H，d，J=16.0Hz)，5.55-5.60(1H，m)，6.53(1H，s)，6.98(2H，s)，7.13-7.24(5H，m)，7.32(1H，s)，7.81(1H，d，J=10.3Hz)，7.95-8.00(1H，m)，8.05-8.09(2H，m)，8.28-8.31(1H，m)，8.41(1H，d，J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：947(M+H)+
步驟2：抗體-藥物複合體(36)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取於1.5mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0147mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含上述步驟1獲得的化合物10mM含的二甲基亞碸溶液(0.0295mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液 (0.00590mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用PBS7.4)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算值)、εA,370=0(計算值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.23mg/mL，抗體產量：7.38mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.0
實施例40：抗體-藥物複合體(37)
步驟1：抗體-藥物複合體(37)
抗體之還原：將參考例2製作的M30-H1-L4P抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數 ，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。採取本溶液(1.0mL)於1.5mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0295mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例39之步驟1獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0590mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0118mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用PBS7.4)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算值)、εA,370=0(計算值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.22mg/mL，抗體產量：7.32mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.7
實施例41：抗體-藥物複合體(38)
步驟1：抗體-藥物複合體(38)
抗體之還原：將參考例1製作的M30-H1-L4抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。採取本溶液(1.0mL)於1.5mL試管中，添加10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0147mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例39之步驟1獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0295mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.00590mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用PBS7.4)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算值)、εA,370=0(計算值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.11mg/mL，抗體產量：6.66mg(67%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：1.8
實施例42：抗體-藥物複合體(39)
步驟1：抗體-藥物複合體(39)
抗體之還原：將參考例1製作的M30-H1-L4抗體，使用製造方法1記載的共通操作B(作為280nm吸光係數，使用1.61mLmg-1cm-1)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。採取本溶液(1.0mL)於1.5mL試管中，添加 10mM TCEP(東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.0295mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，經由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連結物之結合：上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含實施例39之步驟1獲得的化合物10mM的二甲基亞碸溶液(0.0590mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連結物對抗體結合。其次，添加100mM NAC(Sigma-Aldrich Co.LLC)水溶液(0.0118mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連結物的反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用製造方法1記載的共通操作D-1(作為緩衝液，使用PBS7.4)的純化，獲得含有標題抗體-藥物複合體的溶液6mL。
特性評價：使用製造方法1記載的共通操作E(作為莫耳吸光係數，使用εA,280=235300(計算值)、εA,370=0(計算值)、εD,280=5000(實測平均值)、εD,370=19000(實測平均值))，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.00mg/mL，抗體產量：6.00mg(60%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4
(試驗例1)全長人類B7-H3變異體1表現載體之製作
將由LNCaP細胞(American Type Culture Collection：ATCC)總RNA所合成的cDNA作為模板而使用引子組： 引子1：5’-ctatagggagacccaagctggctagcatgctgcgtcggcggggcag-3’(序列識別號22)，及引子2：5’-aacgggccctctagactcgagcggccgctcaggctatttcttgtccatcatcttctttgctgtcag-3’(序列識別號23)
進行PCR反應，增幅編碼人類B7-H3變異體1的cDNA。
其次，獲得的PCR產物以MagExtractor PCR & Gel cleanup(TOYOBO公司)純化。此外，以限制酶(NheI/NotI)消化後，以MagExtractor PCR & Gel cleanup(TOYOBO公司)純化。pcDNA3.1(+)質體DNA(Life Technologies公司)以相同限制酶(NheI/NotI)消化後，以MagExtractor PCR & Gel cleanup(TOYOBO公司)純化。
將上述純化DNA溶液混合，再添加Ligation high(TOYOBO公司)，於16℃培育8小時，加以連結。
將上述反應物加到大腸菌DH5α勝任細胞(competent cell)(Life Technologies公司)，並轉形。
於上述獲得的株，以PCR引子與BGH反向引子進行菌落直接PCR(Colony Direct PCR)，選擇候補株。
獲得的候補株以液體培養基(LB/Amp)培養，以MagExtractor-Plasmid-(TOYOBO公司)萃取質體DNA。
將獲得的質體DNA作為模板，進行引子3(CMV啟動子引子)：5’-cgcaaatgggcggtaggcgtg-3’(序列識別號24)，及 引子4(BGH反向引子)：5’-tagaaggcacagtcgagg-3’(序列識別號25)
之間的序列解析，將取得株與提供CDS序列比較。
確認序列後，獲得的株以200mL之LB/Amp培養基培養，使用VioGene公司Plasmid Midi V-100套組，進行質體DNA之萃取。
將本載體命名為pcDNA3.1-B7-H3。本載體經選殖的B7-H3變異體1基因之ORF部分之序列示於序列表之序列識別號26(第16圖)之核苷酸編號1至1602。又，B7-H3變異體1之胺基酸序列示於序列表之序列識別號1。
(試驗例2)B7-H3變異體1基因安定表現CCRF-CEM細胞之調製
將試驗例1製作的pcDNA3.1-B7-H3，對CCRF-CEM細胞(ATCC)使用Nucleofector II(Lonza公司製)而以電穿孔法加以轉染。之後，於含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培養基(Life Technologies公司)(以下為10%FBS-RPMI1640)中，於37℃、5%CO2之條件下再培養2晚。
2日間培養後，為了選擇pcDNA3.1-B7-H3安定地併入之CCRF-CEM細胞，以含有750μg/mL G418(Life Technologies公司)之10%FBS-RPMI1640開始培養。
培養1個月後，進行使用用以獲得單一細胞株之限界稀釋法進行選擇。具體而言，將具有抗G418的耐性的細胞稀釋為10個細胞/mL而以100μL/穴之濃度接種於96孔盤，培養，由各別穴回收增殖的細胞。
為了確認經回收的各株之B7-H3表現，使用流式細胞測量術法。具體而言，回收的各株以含有5%FBS的PBS洗淨2次後，添加含有10μg/mL M30的5%FBS的PBS並懸浮，於4℃靜置30分鐘。以含有5%FBS的PBS洗淨2次後，添加以含有5%FBS的PBS稀釋1000倍的共軛螢光素的山羊IgG份對小鼠IgG(全部分子)(ICN Pharmaceuticals公司製#55493)而懸浮，於4℃靜置30分鐘。以含有5%FBS的PBS洗淨2次後，以含有5%FBS的PBS再懸浮，以流式細胞儀(FC500：BeckmanCoulter公司)進行檢測。
藉由本操作將獲得的B7-H3變異體1基因安定表現CCRF-CEM細胞命名為CEM_V1_3.1_2細胞。親株CCRF-CEM細胞作為B7-H3非表現細胞株來使用。
(試驗例3)抗體-藥物複合體之抗細胞試驗(1)
試驗例2製作的CEM_V1_3.1_2細胞、CCRF-CEM細胞(ATCC)係以含10%胎牛血清(MOREGATE)的RPMI1640(GIBCO)(以下，培養基)培養。CEM_V1_3.1_2細胞、CCRF-CEM細胞以培養基調製為8×104個細胞/mL，於置入65μL之培養基的96穴細胞培養用微量盤中各添加25μ而培養一晚。翌日，將以培養基稀釋為1000nM、200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM、0.064nM的M30-H1-L4抗體、M30-H1-L4P抗體及抗體-藥物複合體，各添加10μL於微量盤。被驗物質非添加穴中各添加培養基10μL。37度、5%CO2下培養3日。培養後，培育微量盤後取出於室溫下靜置30分鐘。添加與培養液等量之CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega)並攪拌。於室溫靜置10分鐘後，並以平盤讀數機(PerkinElmer)計測發光量。IC50值以下列式算出。
IC50(nM)=antilog((50-d)×(LOG10b-LOG10a)÷(d-c)+LOG10b)
a：被驗物質之濃度a
b：被驗物質之濃度b
c：添加濃度a之被驗物質時之活細胞率
d：添加濃度b之被驗物質時之活細胞率
a、b係高於活細胞率50%的濃度下，a>b
各濃度中的細胞生存率係以下列式算出。
細胞生存率(%)=a÷b×100
a：被驗物質添加穴之發光量之平均值(n=2)
b：被驗物質非添加穴之發光量之平均值(n=10)
對CEM_V1_3.1_2細胞，抗體-藥物複合體(6)、(23)呈現IC50<0.1(nM)之抗細胞效果。抗體-藥物複合體(3)、(33)、(39)係呈現0.1<IC50<1(nM)之抗細胞效果。抗體-藥物複合體(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(20)、(30)、(35)、(37)係呈現1<IC50<100(nM)之抗細胞效果。另一方面，對CCRF-CEM細胞，上述任一者之抗體-藥物複合體皆未呈現抗細胞效果(>100(nM))。M30-H1-L4抗體及M30-H1-L4P抗體對任一細胞，亦未呈現細胞傷害活性(>100(nM))。
(試驗例4)抗體-藥物複合體之抗細胞試驗(2)
抗原陽性細胞之SR細胞(ATCC)、抗原陰性細胞之Daudi細胞(ATCC)係以含10%之胎牛血清(MOREGATE) 的RPMI1640(GIBCO)(以下，培養基)培養。SR細胞、Daudi細胞以培養基調製為2.8×104個細胞/mL，於96穴細胞培養用微量盤中各添加90μL。2小時後，將以培養基稀釋為40nM、8nM、1.6nM、320pM、64pM、12.8pM、2.6pM的抗CD30抗體及抗體-藥物複合體(7)、(8)、(24)、(25)各添加10μL於微量盤。被驗物質非添加穴中各添加10μL培養基。37度、5%CO2下培養3日。培養後，將微量盤自培育箱取出並於室溫下靜置30分鐘。添加培養液與等量之CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)並攪拌。於室溫下靜置10分鐘後，以平盤讀數機(PerkinElmer)計測發光量。IC50值以下列式算出。
IC50(nM)=antilog((50-d)×(LOG10b-LOG10a)÷(d-c)+LOG10b)
a：被驗物質之濃度a
b：被驗物質之濃度b
c：添加濃度a之被驗物質時之活細胞率
d：添加濃度b之被驗物質時之活細胞率
a、b係高於活細胞率50%的濃度下，a>b
各濃度中的細胞生存率係以下列式算出。
細胞生存率(%)=a÷b×100
a：被驗物質添加穴之發光量之平均值(n=2)
b：被驗物質非添加穴之發光量之平均值(n=12)
抗體-藥物複合體(7)、(8)、(24)、(25)係對SR細胞，呈現IC50<0.01(nM)之抗細胞效果。另一方面，對Daudi 細胞，抗體-藥物複合體任一者皆未呈現抗細胞效果(>4.0(nM))。又，抗CD30抗體係對任一細胞皆未呈現抗細胞效果(>4.0(nM))。
(試驗例5)抗體-藥物複合體之抗細胞試驗(3)
抗原陽性細胞之HL-60細胞(ATCC)、抗原陰性細胞之Raji細胞(ATCC)係以含10%之胎牛血清(MOREGATE)的RPMI1640(GIBCO)(以下，培養基)培養。HL-60細胞、Raji細胞以培養基調製成為8×104個細胞/mL，於置入65μL之培養基的96穴細胞培養用微量盤中各添加25μL。於微量盤中各添加10μL以培養基稀釋為1000nM、200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM、0.064nM的抗CD33抗體及抗體-藥物複合體(9)、(10)、(26)、(27)。被驗物質非添加穴中各添加10μL培養基。37度、5%CO2下培養3日。培養後，將微量盤自培育箱中取出並於室溫下靜置30分鐘。添加培養液與等量之CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)並攪拌。於室溫靜置10分鐘後，以平盤讀數機(PerkinElmer)計測發光量。IC50值係以下列式算出。
IC50(nM)=antilog((50-d)×(LOG10b-LOG10a)÷(d-c)+LOG10b)
a：被驗物質之濃度a
b：被驗物質之濃度b
c：添加濃度a之被驗物質時之活細胞率
d：添加濃度b之被驗物質時之活細胞率
a、b係高於活細胞率50%的濃度下，a>b
各濃度中的細胞生存率係以下列式算出。
細胞生存率(%)=a÷b×100
a：被驗物質添加穴之發光量之平均值(n=2)
b：被驗物質非添加穴之發光量之平均值(n=5)
抗體-藥物複合體(10)係對HL-60細胞呈現IC50<1(nM)之抗細胞效果。抗體-藥物複合體(9)、(26)、(27)係呈現1<IC50<100(nM)之抗細胞效果。另一方面，對Raji細胞，抗體-藥物複合體任一者皆未呈現抗細胞效果(>100(nM))。又，抗CD33抗體係對任一細胞皆未呈現抗細胞效果(>100(nM))。
(試驗例6)抗體-藥物複合體之抗細胞試驗(4)
抗原陽性細胞之U251細胞(ATCC)、抗原陰性細胞之MCF-7細胞(ATCC)係以含10%之胎牛血清(MOREGATE)的RPMI1640(GIBCO)(以下，培養基)培養。U251細胞、MCF-7細胞以培養基調製成為2.8×104個細胞/mL，於96穴細胞培養用微量盤中各添加90μL並培養一晚。翌日，於微量盤中各添加10μL之以各培養基稀釋為1000nM、200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM、0.064nM的抗CD70抗體及抗體-藥物複合體(11)、(12)、(28)、(29)。被驗物質非添加穴中各添加10μL培養基。37度、5%CO2下培養6日。培養後，將微量盤自培育箱中取出並於室溫下靜置30分鐘。添加培養液與等量之CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)並攪拌。於室溫靜置10分鐘後，以平盤讀數機(PerkinElmer)計測發光量。IC50值係以下列式算出。
IC50(nM)=antilog((50-d)×(LOG10b-LOG10a)÷(d-c)+LOG10b)
a：被驗物質之濃度a
b：被驗物質之濃度b
c：添加濃度a之被驗物質時之活細胞率
d：添加濃度b之被驗物質時之活細胞率
a、b係高於活細胞率50%的濃度下，a>b
各濃度中的細胞生存率係以下列式算出。
細胞生存率(%)=a÷b×100
a：被驗物質添加穴之發光量之平均值(n=2)
b：被驗物質非添加穴之發光量之平均值(n=12)
抗體-藥物複合體(12)、(29)係對U251細胞呈現1<IC50<10(nM)之抗細胞效果。抗體-藥物複合體(11)、(28)係呈現10<IC50<100(nM)之抗細胞效果。另一方面，對MCF-7細胞，抗體-藥物複合體任一者皆未呈現抗細胞效果(≧90(nM))。又，抗CD70抗體對任一細胞皆未顯示抗細胞效果(>100(nM))。
(試驗例7)抗腫瘤試驗(1)
小鼠：將5-6週齡之雌BALB/c裸鼠(日本Charles River公司)於實驗使用前，以SPF條件化馴化4-7日。對小鼠給餌經滅菌的固形飼料(FR-2，Funabashi Farms Co.，Ltd)，給予經滅菌的自來水(添加5-15ppm次氯酸鈉溶液而調製)。
測定、計算式：於全部之研究，腫瘤之長徑及短徑以電子式數位卡尺(CD-15C，Mitutoyo Corp.)於每1週測 量2次，計算腫瘤體積(mm3)。計算式係如以下所示。
腫瘤體積(mm3)=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]2
抗體-藥物複合體係全部以生理食鹽水(大塚製藥工場)稀釋，將10mL/kg之液量於尾靜脈內投與。人類黑色素瘤株A375細胞購自ATCC(American Type Culture Collection)。將懸浮於生理食鹽水的8×106個細胞皮下移植於雌裸鼠之右側腹部(第0日)，第11日實施任意之分組。M30-H1-L4P抗體及抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)於第11、18、25日全部以10mg/kg之用量，以qw×3的規劃，於尾靜脈內投與。
結果示於第17圖。圖中之白菱形線表示無處置之腫瘤、黑菱形線表示M30-H1-L4P抗體、黑四角形線表示抗體-藥物複合體(1)投與時、白四角形線表示抗體-藥物複合體(2)投與時、黑三角線表示抗體-藥物複合體(18)投與時、白三角線表示抗體-藥物複合體(19)投與時之效果。
藉由抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)之投與而腫瘤體積顯著地減少，尤其抗體-藥物複合體(2)、(19)之投與，於第18日，腫瘤完全消失，於第39日後亦不認為有再度復發。
又，投與抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)的小鼠中，沒有體重減少等等之特別突出可見，認為此等抗體-藥物複合體係毒性弱、又安全性亦高。
(試驗例8)抗腫瘤試驗(2)
人類黑色素瘤株A375細胞由ATCC(American Type Culture Collection)購入。將懸浮於生理食鹽水的6×106 個細胞皮下移植至雌裸鼠之右側腹部(第0日)，第18日實施任意之分組。抗體-藥物複合體(2)、(19)(1，3mg/kg)於第18、25、32日以各用量qw×3之規劃於尾靜脈內投與。
結果示於第18圖。圖中之白菱形線係呈現無處置之腫瘤、黑四角形線係呈現抗體-藥物複合體(2)1mg/kg投與時、白四角形線係呈現3mg/kg投與時、黑圓形線係呈現抗體-藥物複合體(19)1mg/kg投與時、白圓形線係呈現3mg/kg投與時之效果。
抗體-藥物複合體(2)、(19)發揮用量依存性之腫瘤增殖抑制效果。
(試驗例9)抗腫瘤試驗(3)
人類非小細胞肺癌株Calu-6細胞由ATCC(American Type Culture Collection)購入。將懸浮於生理食鹽水的5×106個細胞皮下移植至雌裸鼠之右側腹部(第0日)，第11日實施任意之分組。M30-H1-L4P抗體及抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)於第11、18、25日以qw×3之規劃，全部以10mg/kg之用量由尾靜脈內投與。
結果示於第19圖。圖中之白菱形線係呈現無處置之腫瘤、黑菱形線係呈現M30-H1-L4P抗體、黑四角形線係呈現抗體-藥物複合體(1)投與時、白四角形線係呈現抗體-藥物複合體(2)投與時、黑三角線係呈現抗體-藥物複合體(18)投與時、白三角線係呈現抗體-藥物複合體(19)投與時之效果。
藉由抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)之投與而 腫瘤體積顯著減少，最終投與後更看不到腫瘤增殖。
又，投與抗體-藥物複合體(1)、(2)、(18)、(19)的小鼠中，沒有體重減少等等之特別突出可見，認為此等抗體-藥物複合體係毒性弱、又安全性亦高。
(試驗例10)抗腫瘤試驗(4)
人類黑色素瘤株A375細胞由ATCC(American Type Culture Collection)購入。將懸浮於生理食鹽水的8×106個細胞皮下移植至雌裸鼠之右側腹部(第0日)，第14日實施任意之分組。抗體-藥物複合體(3)、(20)、(30)(3，10mg/kg)於第14日以qd×1之規劃用量由尾靜脈內投與。
結果示於第20圖。圖中之白菱形線係呈現無處置之腫瘤、黑四角虛線係呈現抗體-藥物複合體(3)3mg/kg投與時、黑四角實線係呈現10mg/kg投與時、黑三角虛線係呈現抗體-藥物複合體(20)3mg/kg投與時、黑三角實線係呈現10mg/kg投與時、黑圓虛線係呈現抗體-藥物複合體(30)3mg/kg投與時、黑圓實線係呈現10mg/kg投與時之效果。
藉由抗體-藥物複合體(3)、(20)、(30)之投與，腫瘤體積顯著減少，任一者皆發揮用量依存性之腫瘤增殖抑制效果。
又，投與抗體-藥物複合體(3)、(20)、(30)的小鼠中，沒有體重減少等等之特別突出可見，認為此等抗體-藥物複合體係毒性弱、又安全性亦高。
[序列表自由輸入欄位]
序列識別號1-B7-H3變異體1之胺基酸序列
序列識別號2-B7-H3變異體2之胺基酸序列
序列識別號3-M30抗體之CDRH1之胺基酸序列
序列識別號4-M30抗體之CDRH2之胺基酸序列
序列識別號5-M30抗體之CDRH3之胺基酸序列
序列識別號6-M30抗體之CDRL1之胺基酸序列
序列識別號7-M30抗體之CDRL2之胺基酸序列
序列識別號8-M30抗體之CDRL3之胺基酸序列
序列識別號9-M30-H1型重鍵之胺基酸序列
序列識別號10-M30-H2型重鍵之胺基酸序列
序列識別號11-M30-H3型重鍵之胺基酸序列
序列識別號12-M30-H4型重鍵之胺基酸序列
序列識別號13-M30-L1型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號14-M30-L2型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號15-M30-L3型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號16-M30-L4型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號17-M30-L5型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號18-M30-L6型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號19-M30-L7型輕鍵之胺基酸序列
序列識別號20-M30抗體重鍵之胺基酸序列
序列識別號21-M30抗體輕鍵之胺基酸序列
序列識別號22-PCR引子1
序列識別號23-PCR引子2
序列識別號24-CMV啟動子引子：引子3
序列識別號25-BGH反向引子：引子4
序列識別號26-B7-H3變異體1之核苷酸序列
序列識別號27-抗CD30抗體重鍵之胺基酸序列
序列識別號28-抗CD30抗體輕鍵之胺基酸序列
序列識別號29-抗CD33抗體重鍵之胺基酸序列
序列識別號30-抗CD33抗體輕鍵之胺基酸序列
序列識別號31-抗CD70抗體重鍵之胺基酸序列
序列識別號32-抗CD70抗體輕鍵之胺基酸序列
<110> 第一三共股份有限公司
<120> 以含親水性構造的連結物鍵結之抗體-藥物複合體
<130> PD20-9004WO
<150> JP2012-231579
<151> 2012-10-19
<160> 32
<170> PatentIn版本3.5
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<213>
<220>
<223>
<400> 32

Claims (54)

  1. 一種抗體-藥物複合體，其特徵為透過下列式所示的構造之連結物：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-將下列式 所示的抗腫瘤性化合物與抗體結合，(其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數， L2表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示以3至8個之胺基酸構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示1至4之整數，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3各自獨立表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示1至4之整數，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下列式所示構造： 於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合， -(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造： 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-；惟，連結物之L1、L2、及LP之任1部分或2部分係含親水性構造的構造，此親水性構造係於連結物LP，LP係其N末端為親水性胺基酸，而於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，或者LP係C末端為2或3個以上甘胺酸而成的寡肽，而與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸時，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，於連結物L1，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，於連結物L2，L2係-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形)。
  2. 如請求項1之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP為3至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La及Lb為單鍵，Lc為-C(=O)-。
  3. 如請求項1或2之抗體-藥物複合體，其中L1、L2、或LP之任一部分係含親水性構造的連結物。
  4. 如請求項3之抗體-藥物複合體，其中含水性構造的連結物為LP。
  5. 如請求項4之抗體-藥物複合體，其中LP係於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基。
  6. 如請求項5之抗體-藥物複合體，其中甘胺酸以外之親水性胺基酸係天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、酪胺酸、或精胺酸。
  7. 如請求項5之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端之甘胺酸以外之親水性胺基酸係麩胺酸、天冬胺酸、或離胺酸。
  8. 如請求項6或7之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基係選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸的胺基酸而成的胺基酸殘基。
  9. 如請求項8之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基係由3或4個胺基酸而成的胜肽殘基。
  10. 如請求項9之抗體-藥物複合體，其中LP中的N末端之親水性胺基酸連接的胜肽殘基為GGF或GGFG。
  11. 如請求項5至10中任一項之抗體-藥物複合體，其中LP為DGGF、KGGF、EGGF、DGGFG、KGGFG、或EGGFG。
  12. 如請求項5至10中任一項之抗體-藥物複合體，其中LP為DGGFG、KGGFG、或EGGFG。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之連結物。
  14. 如請求項13之抗體-藥物複合體，其中Lc為-C(=O)-。
  15. 如請求項14之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，n2為2至5之整數，L2為單鍵。
  16. 如請求項15之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
  17. 如請求項15或16之抗體-藥物複合體，其中n1為1至3之整數。
  18. 如請求項5至17中任一項之抗體-藥物複合體，其中連 結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為：-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、-NH-(CH2)3-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(=O)-。
  19. 如請求項5至17中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造為：-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、或-NH-(CH2)3-C(=O)-。
  20. 如請求項1至12中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物為-L1-L2-LP-所示的構造之連結物。
  21. 如請求項20之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，n2為2至5之整數，L2為單鍵。
  22. 如請求項21之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
  23. 如請求項4之抗體-藥物複合體，其中LP係C末端為2或3個以上之甘胺酸而成的寡肽，其與抗腫瘤性化合物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形，亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基。
  24. 如請求項23之抗體-藥物複合體，其中胜肽殘基係由4至8個胺基酸所構成的連結物。
  25. 如請求項23之抗體-藥物複合體，其中C末端之由甘胺酸而成的寡肽係由2或3個甘胺酸而成的寡肽。
  26. 如請求項23至25中任一項之抗體-藥物複合體，其中胜肽連結物為GGFGG、或GGFGGG。
  27. 如請求項23至26中任一項之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、n2為2至5之整數。
  28. 如請求項27之抗體-藥物複合體，其中n2為5。
  29. 如請求項3之抗體-藥物複合體，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-。
  30. 如請求項29之抗體-藥物複合體，其中n3為2或3。
  31. 如請求項3之抗體-藥物複合體，其中L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-。
  32. 如請求項31之抗體-藥物複合體，其中n7為2至4。
  33. 如請求項29至32中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物係-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的構造之連結物。
  34. 如請求項33之抗體-藥物複合體，其中Lc係-C(=O)-。
  35. 如請求項29至34中任一項之抗體-藥物複合體，其中n1為1至3。
  36. 如請求項29至35中任一項之抗體-藥物複合體，其中LP為GGFG。
  37. 如請求項29至36中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造係：-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、-NH-(CH2)3-C(=O)-、 -NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(=O)-。
  38. 如請求項29至36中任一項之抗體-藥物複合體，其中連結物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分之構造係：-NH-CH2-C(=O)-、-NH-(CH2)2-C(=O)-、或-NH-(CH2)3-C(=O)-。
  39. 如請求項1或2之抗體-藥物複合體，其中抗體-藥物複合體中的藥物-連結物構造部分係選自下列之藥物-連結物構造之群組的1種之構造：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O) -KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(N H-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O) -KGGFG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGF-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGG-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFGGG-(NH-DX)；其中，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下列式所示構造： 於其第3位與抗體結合，於第1位之氮原子上與含此的連結物構造內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下列式所示構造： 於其第3位與L2結合，於第1位之氮原子上與含此構造的連結物構造內之亞甲基結合，-(NH-DX)係下列式所示之第1位之胺基之氮原子成為結合部位的基
  40. 如請求項1至39中任一項之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為1至10個之範圍。
  41. 如請求項1至39中任一項之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為1至8個之範圍。
  42. 如請求項1至39中任一項之抗體-藥物複合體，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物之平均結合數為3至8個之範圍。
  43. 如請求項1至42中任一項之抗體-藥物複合體，其中抗體係具備可辨識標的細胞的特性、可與標的細胞結合 的特性、可於標的細胞內在化的特性、傷害標的細胞的特性之一個以上之特性的抗體。
  44. 如請求項43之抗體-藥物複合體，其中標的細胞為腫瘤細胞。
  45. 如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗A33抗體、抗B7-H3抗體、抗CanAg抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CEA抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗GPNMB抗體、抗整合蛋白(Integrin)抗體、抗體PSMA抗體、抗肌腱蛋白C(Tenascin-C)抗體、抗SLC44A4抗體、或抗間皮素(Mesothelin)抗體。
  46. 如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗B7-H3抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、或抗CD70抗體。
  47. 如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體，其中抗體為抗B7-H3抗體。
  48. 一種醫藥，其係含有如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體或其鹽。
  49. 一種抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其係含有如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體或其鹽。
  50. 如請求項49之抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
  51. 一種醫藥組成物，其含有如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物作為活性成分、及藥學上可容許的製劑成分。
  52. 如請求項51之醫藥組成物，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
  53. 一種腫瘤及/或癌之治療方法，其特徵為投與如請求項1至44中任一項之抗體-藥物複合體、其鹽、或彼等之水合物。
  54. 如請求項53之治療方法，其係用以適用於肺癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、前列腺癌、多形神經膠母細胞瘤、卵巢癌、胰癌、乳癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌、胃癌、或食道癌。
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