TW200843738A

TW200843738A - Inhibitors of serine proteases

Info

Publication number: TW200843738A
Application number: TW097106892A
Authority: TW
Inventors: Kevin M Cottrell; John Maxwell; Qing Tang; Anne-Laure Grillot; Tiran Arnaud Le; Emanuele Perola
Original assignee: Vertex Pharma
Priority date: 2007-02-27
Filing date: 2008-02-27
Publication date: 2008-11-16
Also published as: IL200611A0; AU2008219689A1; AR065499A1; EP2114958A1; US8372873B2; KR20090127292A; CL2008000579A1; EA200970805A1; UY30941A1; PE20081792A1; GEP20125683B; MX2009009174A; AP2009004971A0; BRPI0807904A2; ECSP099601A; NZ579296A; US7964624B1; WO2008106139A1; CA2679429A1; EP2631238A1

Description

200843738 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】毒NS3-NS4A蛋白酶之活性的化合物。干劑本發明係關於抑制絲胺酸蛋白酶活性、尤其c型肝炎病就此而言，其藉由

节於離體用途或。本發明亦係關用於投予至患有HCV感染之患者的組合物。於藉由投予包含本發明之化合物之組合物治療患者之hcv 感染的方法。本申請案主張2007年2月27曰申請之美國專利申請案第 11/711，845的優先權，該案以引用之方式全文併入本文【先前技術】 C型肝炎病毒（’’HCV’’）感染係一引人注目之人類醫學問 4。HC V被公s忍為大多數非a、非B型肝炎之狀況之病原體，據估計全球人類血清發病率為3%[A· Alberti等人， ’’Natural History of Hepatitis C，’’ J. Hepatology，31(增刊 1)，第17-24頁（1999)]。僅在美國可能有將近四百萬人受感染[M.J. Alter等人，’’The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States，Gastroenterol. Clin. North Am.，23，第 437-455(1994); M. J· Alter ’’Hepatitis C Virus Infection in the United States，’’ J· Hepatology，31 ·，（增刊 1)，第 88-91 (1999)]。首次暴露於HCV後，僅約20%的感染個體發展為急性臨 129343-l.doc 200843738 床肝炎，而其他人似乎自發解決了感染。然而，在幾乎 70%之情形中，病毒建立持續數十年的慢性感染[S. Iwarson, f,The Natural Course of Chronic Hepatitis,ff FEMS Microbiology Reviews，14，第 201-204 頁（1994); D. Lavanchy， ?fGlobal Surveillance and Control of Hepatitis C?M J. Viral Hepatitis，6，第35-47(1999)]。其通常形成復發性及漸進性惡化之肝臟炎症，其通常導致更嚴重的病態，例如肝硬化及肝細胞癌[M.C. Kew，’’Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma’’，FEMS Microbiology Reviews，14，第 211-220 (1994); I. Saito 等人，’’Hepatitis C Virus Infection is

Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma，” Proc. Natl. Acad. Sci· USA，87，第 6547-6549 (1990)]。遺憾地是，仍無減弱慢性HCV發展之廣範有效的療法。 HCV基因組編碼3010-3033個胺基酸之聚合蛋白質[Q.L. Choo，等人，’’Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus·’’ Proc. Natl· Acad· Sci. USA，88，第 2451- 2455 頁（1991) ; N. Kato等人，"Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis，’’ Proc· Natl. Acad· Sci· USA，87，第 9524-9528 頁（1990) ; A. Takamizawa 等人，MStructure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers，’’ J. Virol” 6 5，第 1105-1113頁（1991)]。推測HCV非結構（NS)蛋白為病毒複 129343-l.doc 200843738

製提供必需的催化機構。NS蛋白藉由聚合蛋白質之解蛋白裂解而生成[R. Bartenschlager等人，’’Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions," J· Virol·，67，第 3835-3844 頁（1993); A. Grakoui 等人， nCharacterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase : Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites，，，J· Virol·，67，第 2832-2843 頁（1993); A· Grakoui 等人，’’Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products，’’ J· Virol·，67，第 1385-1395 頁（1993) ; L. Tomei等人，’’NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein’’，J. Virol·，67，第 4017-4026 頁（1993)]。 HCV NS蛋白3(NS3)含有有助於加工大部分病毒酶的絲胺酸蛋白酶活性，且因此被認為對病毒複製及感染為必需的。吾人已知，黃熱病毒NS3蛋白酶中之突變降低病毒感染性[Chambers，T.J.等人，’’Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever

Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein’’，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87，第 8898-8902 頁（1990)]。已證明NS3之前 181個胺基酸（病毒聚合蛋白質之殘基1027-1207)含有可加工HCV聚合蛋白質之所有四個下游位點的NS3之絲胺酸蛋白酶域[C. Lin等人，’’Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase ·· Trans- 129343-l.doc 200843738

Cleavage Requirements and Processing Kinetics’’，J. Virol.， 68，第 8147-8157 頁（1994)]。 HCV NS3絲胺酸蛋白酶及其相關輔因數NS4A幫助加工所有病毒酶，且因此被認為對病毒複製為必需的。此加工似乎類似於由亦涉及於病毒酶加工中之人類免疫缺陷病毒天冬胺醯基蛋白酶所進行之加工。抑制病毒蛋白加工之 HIV蛋白酶抑制劑為在人體内有效的抗病毒劑，其表明中斷病毒生命週期之此階段可形成治療活性劑。因此HCV NS3絲胺酸蛋白酶亦為藥物發現之誘人標的。目前仍無任何令人滿意的抗HCV劑或療法。直到最近，僅確立的HCV疾病的療法為干擾素治療。然而，干擾素具有顯著的副作用[M. A. Walker等人，’’Hepatitis C Virus : An Overview of Current Approaches and Progress，" DDT, 4，第 518-29 頁（1999) ; D. Moradpour 等人，"Current and Evolving Therapies for Hepatitis C?f? Eur. J. Gastroenterol. Hepatol·，11，第 1199，1202 頁（1999) ; H. L. A. Janssen等人 ’’Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis/ J. Hepatol·，21，第 241-243 頁 (1994) ; P.F. Renault等人，"Side Effects of Alpha Interferon，’’ Seminars in Liver Disease, 9，第 273-277 頁（1989)]且僅在一部分（=2 5%)狀況中引起長期緩解[〇 · Wei land，"Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”，FEMS Microbiol. Rev·，14，第 279-288 頁（1994)]。新近引入聚乙二醇化形式之干擾素（PEG-INTRON®及PEGASYS®)及病毒 129343-l.doc 200843738 ::聚乙二醇化干擾素(rebetr〇l，之組合治療僅可適度解率且僅可部分降低副作用。此外，有效抗HCV疫苗之前景仍不確定。

且因此、’存在對更有效的抗HCV療法的需要。該等抑制劑八、4蛋白酶抑制劑、尤其作》絲胺酸蛋白酶抑制劑且 :尤乍為HCV NS3蛋白酶抑制劑的治療潛力。具體而、等化口物可適用作抗病毒劑，尤其適用作抗HCV 劑。【發明内容】本發明係關於式⑴之化合物

、 Φ 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：各A4_(cxlX2)a_ ; 各β為; 之r::獨立地為氧、_基、胺基、硫基、視情況經取代基、視情況經取代之芳基，或-〇-XlA; =獨立地為氣、齒基、胺基、硫基、視情況經取代知基、視情況經取代之芳基，或-〇-XlB; 自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況 129343-l.doc -10· 200843738 經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；或者，乂1與\2共同形成側氧基；各1為-zar4，其中zA各自獨立地為一鍵或視情況經取代之脂族基，其中zA之至多至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：-c(o)-、-c(s)-、-c(o)nra-、 -c(o)nranra- 、-c(o)o-、-nrac(o)o-、-0-、 -nrac(o)nra-、-NRANRA-、-s-、-so-、-so2-、-NRA-、 -so2nra-或-NRAS02NRA-，其限制條件為-NRANRA-、 -nrac(o)nra-或-nraso2nra-不直接結合於式（I)之氮環原子； R4各自獨立地為RA、鹵基、-OH、-CN、-N02、-NH2或 -OCF3 ; RA各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；各R2為-ZBR5，其中ZB各自獨立地為一鍵或視情況經取代之脂族基，其中ZB之至多至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：-c(o)-、-c(s)_、-c(o)nrb-、 -c(o)nrbnrb-、-c(o)o-、-nrbc(o)o-、-nrbc(o)nrb-、-NRbNRb-、-S-、-so-、-so2-、-nrb-、-so2nrb-或 -nrbso2nrb-，其限制條件為-so-、-so2-或-so2nrb-不直接結合於式（I)之羰基； R5各自獨立地為RB、鹵基、-OH、-CN、-N02、-NH2、 129343-1.doc 200843738 燒氧基或鹵烷氧基； R各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；或者R】及R2與其所連接之原子共同形成視情況經取代之雜環脂族環；

各R3為視情況經取代之脂族基、胺基、磺醯基、硫基、亞/、基、崎醯胺、績胺、續酸基、_〇_R从、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； R3a各自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； Y及γ’各自獨立地為·ζ%7，其中ZD各自獨立地為一鍵或視情況經取代之直鏈或支鏈C1_6脂族鏈，其中0之至多兩個石反單元視情況且獨立地由以下基團置換：、 -C(s)-、-c(o)nrd-、-C(0)nrdnrD、_c(〇)〇—-nrDc(〇)〇、 -〇-、-NRDC(〇)NRD-、-NRDNRD-、-s-、-so·、·80 -NRD…-S02NRD_、-NRdS〇2_ 或 _nrds〇2NrD，或颂丫，共同形成=0或=s;

R7各自獨立地為RD、鹵基、-〇H、_CN -OCF3 ； D

NO 2、_NH2 或 R各自獨立地為氫或視情況經取代之芳基；且 a與b各自獨立地為〇、丨、2或3 ;其限制條件為之和 129343-l.doc -12- 200843738 為2或3。本發明亦係關於以下式（I)之化合物。

① 在該式中’ 各 A為-CH2-; 各 B 為-CH2-; 各心為-ZAR4，其中各ZA為_C(0)-、·C(S)-、-C(0)NRA-、-c(o)nranra-、-c(o)o-、-NRAC(0)0-、-Ο-、-S-、 -SO-、-S02-、-NRA-或-S02NRA-; R4各自獨立地為RA、鹵基、-OH、-CN、-N02、-NH2、烧氧基或鹵院氧基； ra各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；各R2為-ZBR5，其中ZB各自獨立地為一鍵或視情況經取代之脂族基，其中zB之至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：-c(o)-、-c(s)-、-c(o)nrb_、-c(o)nrbnrb_ 、-c(o)〇-、-c(o)c(o)-nrb-、-nrbc(o)o-、-nrbc(o)nrb- 129343-1.doc -13- 200843738 -NRBNRB-、-s •so· -S02-、-NRB-、-so2nrb-或 -NRBS〇2NRB_，纽制條件為_s〇_、_s〇2_或捣NRB_不直接結合於式（I)中之羰基； R5各自獨立地為RB、南基、-OH、-CN、-N〇2、_腿2、烷氧基或_烷氧基； rb各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；

或者R】及112與其所連接之原子共同形成視情況經取代之雜環脂族環；各I為視情況經取代之脂族基、胺基、磺醯基、硫基、亞石黃醯基、確醯胺、石黃胺、石黃酸基…ΟΙ、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；

Ru各自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且 Y及Y’中之每一者為Η。此外，本發明亦提供式（I)之化合物 129343-l.doc -14- 200843738

或其醫藥學上可接受之鹽。在式⑴中，各 A為-CH2-; 各 B 為-CH2-; 基各Rl為-ZAR4，其中各Za為<(〇)_且&為經取代之烧、各R2為-zbr5，其中zB各自獨立地為—鍵或視情況經取代之脂族基，纟中ZB之至多四個碳單元視情況且獨立地由以下基 m ·€：(0).、·〇：_κΒ_、_c⑼c⑼_NR -NRB-; 〆 R5各自獨立地為rB、_基、-⑽、、_簡2、烧氧基或齒烧氧基； R各自獨立地為氳、視情況經取代之脂族基或視情況經取代之環脂族基；或 1及R2與其所連接之原子共同形成視情況經取代之6員雜％：脂族環； 3為視N況經取代之胺基、_〇_R3a、視情況經取代之韦隹'^月匕方^ 、曰矢土、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳 129343-l.doc -15- 200843738 r3A各自獨立地為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且 Y及Y’中之每一者為H。在一心樣中，本發明特別描述一種包含有效抑制絲胺 s夂蛋白酶之里之式⑴化合物或鹽醫藥學上可接受之鹽；及可接受之载劑、佐劑或媒劑的醫藥組合物。該組合物可包括額外遠自以下藥劑之藥劑：免疫調節劑；抗病毒劑；第二HCV蛋白酶抑制劑；HCV生命週期中另一標的之抑制劑；及細胞色素P_450抑制劑；或其組合。該免疫調節劑為β-或γ-干擾素或胸腺素；該抗病毒劑為病毒。坐、三環癸烧胺或替比夫定（telbivudine);或該hcv生命週期中另一標的之抑制劑為HCV解旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶之抑制劑。=胞色素P-450抑制劑可為利托那韋（出〇navir)。二:：:、樣中，抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法包含使該絲月女酸蛋白酶與式⑴化入舲妓、飞化口物接觸的步驟。絲胺酸蛋白酶可 =:串：:白_。該等方法亦包括藉由投予式⑴化合物 :了一之HCV感染。該方法亦可包括將選自以下藥于至“者·免疫調節劑；抗病毒劑；第一 HCV蛋白酶抑制劑；Hcv 劑;或其組合;其_他藥劑:與相同或與單獨劑型相同之劑型投予至該患者。該免_: 劑為（X-、β-或厂干擾素或胸腺素； σ即三機胺；或該HCV生命週期 HCV解旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶之抑制劑。P制齊Μ 129343-Ldoc 200843738 :、他心樣中’消除或減少生物樣本或醫學或實驗設備二染的方法包括使該生物樣本或醫學或實驗設備與式⑴化合物接觸的步驟。樣本或設備可選自血液、其他體液、生物組織、手術儀哭、、義叩手術服、實驗儀器、實驗服、血液或其他體液收集裝置、血液或其他體液儲存材料。如本文中所述，本發明之化合物亦展現有利的ρκ性質及/或經增加之效能。本發明亦係關於包含以上化合物之組合物及其用途；製備式⑴化合物的方法，及檢定用於絲胺酸蛋白酶活性之化合物的方法。該等組合物可用於預處理待插人患者體内之設備、處理生物樣本且可用來直接投予至患者。在各種狀況中，該組合物將用於降低HCV感染之風險或強度。定義為本發明之目的起見，化學元素係根據元素週期表 (Periodic Table of the Elements)，CAS版本，Handbook of / Chemistry and Physics，第75版加以鑑別。此外，有機化 ^ 學之一般原理描述於，Organic Chemistir丨，Th〇mas

Sorrell，University Science Books，Sausalito ·· 1999，及 ’’Advanced Organic Chemistry”，第 5版，編者：smith， Μ·Β·及 March，J·，John Wiley & Sons，New York : 2001，各文獻之全部内容以引用之方式併入本文中。如本文中所述，本發明之化合物可視情況經一或多個取代基取代，諸如以上一般性所說明或由本發明之特定類別、子類及物質所例示。 129343-l.doc 200843738 如本文中所使用，術語”脂族基”涵蓋術語烷基、烯基、快基，其每一者視情況可如下述經取代。如本文中所使用，f’烷基”係指含有1至12(例如1至丨〇，1 至8，1至6或1至4)個碳原子的飽和脂族烴基。烷基可為直鏈或支鏈。烷基之實例包括但不限於曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、正庚基或2-乙基己基。烷基可經一或多個諸如以下基團之取代基取代（亦即視情況經取代）：_基、膦醯基、環脂族基（例如環烷基或環烯基）、雜環脂族基（例如雜環烷基或雜環烯基）、芳基、雜芳基、烷氧基、芳醯基、雜芳醯基、醯基（例如（脂族基）羰基、（環脂族基）羰基或（雜環脂族基）罗炭基）、硝基、氰基、醯胺基（例如（環烷基烷基）羰基胺基、芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基、（雜環烷基）羰基胺基、（雜環烷基烷基）羰基胺基、雜芳基羰基胺基、雜芳烷基幾基胺基、烷基胺基羰基、環烷基胺基羰基、雜環烷基胺基魏基、芳基胺基羰基或雜芳基胺基羰基）、胺基（例如脂族基胺基、環脂族基胺基或雜環脂族基胺基）、磺醯基 (例如脂族基-S〇2_)、亞磺醯基、硫基、硫氧基、脲、硫脲、胺磺醯基、磺胺、側氧基、羧基、胺甲醯基、環脂族基氧基、雜環脂族基氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烧氧基、烷氧羰基、烷基羰氧基或羥基。不加以限制，經取代之烷基之一些實例包括羧基烷基（諸如 HOOC-院基、烷氧基羰基烷基及烷基羰氧基烷基）、氰基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、醯基烷基、芳烷基、（烷 129343-l.doc -18- 200843738 氧基芳基）院基、（續醯胺基）烧基（諸如（烧基_so2-胺基）烧基）、胺基烧基、醢胺基烧基、（環脂族基）烧基或齒基烧基。如本文中所使用，”烯基’’係指含有2至12(例如2至8，2至 6或2至4)個碳原子及至少一個雙鍵的脂族烴基。如同烧基，烯基可為直鏈或支鏈。烯基之實例包括但不限於稀丙基、異戊細基、2 -丁;^基及2-己烯基。稀基可視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代：_基、膦醯基、環脂族基（例如環烧基或環烯基）、雜環脂族基（例如雜環烧基或雜環烯基）、芳基、雜芳基、烷氧基、芳醯基、雜芳酿基、醯基（例如（脂族基）魏基、（環脂族基m基或（雜環脂族基）羰基）、硝基、氰基、醯胺基（例如（環烷基烷基）羰基胺基、芳基羰基胺基、芳烧基羰基胺基、（雜環烧基）羰基胺基、（雜環烷基烷基）羰基胺基、雜芳基羰基胺基、雜芳烷基幾基胺基、烷基胺基羰基、環烷基胺基羰基、雜環燒基胺基羰基、芳基胺基羰基或雜芳基胺基羰基）、胺基（例如脂族基胺基、環脂族基胺基、雜環脂族基胺基或脂族基磺醯胺基）、磺醯基（例如烷基_S〇2_、環脂族基_8〇2_或芳基 -S〇2_)、亞磺酿基、硫基、硫氧基、脲、硫脲、胺磺醯基、磺胺、側氧基、羧基、胺曱醯基、環脂族基氧基、雜環脂族基氧基芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、烷氧羰基、烷基羰氧基或羥基。不加以限制，經取代之烯基之一些實例包括氰基烯基、烷氧基烯基、醯基烯基、經基烯基、芳烯基、（烷氧基芳基）烯基、（磺醯胺基） 129343-l.doc -19- 200843738 烯基（諸如（烷基-s〇2_胺基）烯基）、胺基烯基、醯胺基稀基、（環脂族基）烯基或鹵基烯基。如本文中所使用，”炔基”係指含有2至12(例如2至8，2至 6或2至4)個碳原子且具有至少一個三鍵的脂族烴基。炔基可為直鏈或支鏈。炔基之實例包括但不限於炔丙基及丁块基。炔基可視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代：芳醯基、雜芳醯基、烷氧基、環烷氧基、雜環烷氧基、^氧基、雜芳氧基、芳燒氧基、石肖基、緩基、氰基、鹵基、羥基、磺酸基、巯基、硫基（例如脂族基硫基或環脂族基硫基）、亞磺醯基（例如脂族基亞磺醯基或環脂族基亞磺醯基）、磺醯基（例如脂族基_S〇2_、脂族基胺基_s〇广或環脂族基-S〇2_)、醯胺基（例如胺基羰基、烷基胺基獄基、烷基羰基胺基、環烷基胺基羰基、雜環烷基胺基羰基、環烷基羰基胺基、芳基胺基羰基、芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基、（雜環烷基）羰基胺基、（環烷基烷基）羰基胺基、雜芳烷基羰基胺基、雜芳基羰基胺基或雜芳基胺基羰基）、脲、硫脲、胺磺醯基、磺胺、烷氧羰基、烷基羰氧基、環脂族基、雜環脂族基、芳基、雜芳基、醯基（例如（環脂族基）魏基或（雜環脂族基）幾基）、胺基（例如脂族基胺基）、硫氧基、側氧基、羧基、胺曱醯基、（環脂族基）氧基、（雜環脂族基）氧基或（雜芳基）烷氧基。如本文中所使用，”醯胺基”涵蓋，，胺基羰基，，與，，羰基胺基”。該等術語當單獨或與另一基團關聯使用時係指醯胺基’諸如-N(Rx)-C(0)-RY或-C(0)-N(Rx)2(當在末端使用時） 129343-l.doc -20- 200843738 及-C(0)-N(Rx)-或-N(Rx)-C(0)-(當在内部使用時），其中Rx 及RY在下文中定義。醯胺基之實例包括烷基醯胺基（諸如烷基羰基胺基或烷基胺基羰基）、（雜環脂族基）醯胺基、 (雜芳烧基）醯胺基、（雜芳基）醯胺基、（雜環烷基）烷基醯胺基、芳基醯胺基、芳烧基醯胺基、（環烧基）烧基醯胺基或環烷基醯胺基。

如本文中所使用，”胺基”係指_Nrxry，其中Rx與ry各自獨立地為氫、脂族基、環脂族基、（環脂族基）脂族基、芳基、芳脂族基、雜環脂族基、（雜環脂族基）脂族基、雜芳基、羧基、硫基、亞磺醯基、磺醯基、（脂族基）羰基、 (環脂族基）羰基、（（環脂族基）脂族基）羰基、芳基羰基、 (芳知知基）羰基、（雜環脂族基）羰基、（（雜環脂族基）脂族基）羰基、（雜芳基）羰基或（雜芳脂族基）羰基，其各如本文中所定義且視情況經取代。胺基之實例包括烷基胺基、二烷基胺基或芳基胺基。當術語”胺基"並非為端基（例如烷基羰基胺基）時，其由_NRx_表示。！^具有與以上定義相同的含義。如本文中所使用丁 W 1 · · " V丨八/、口「刀、戈口杜”牙院基”、方烷氧基”或，，芳氧基烷基”中）之部分所使用之”芳基"係浐 :環(例如苯基)；雙環(例如節基、萘基、四氫萘基、二 2基），及三環狀（例如苐基、四氫荞基或四氫蒽基、蒽 =統1中該單環系統為芳族，或雙環或三環系統中之少者為芳族。雙環及三環基團包括經笨并稠合之貝妷環。舉例而言’笨并稠合基團包括與兩個或兩個 129343-1 .d〇c -21- 200843738 以上Cu碳環部分稠合之苯基。芳基視情況經一或多個勺括以下基團之取代基取代··脂族基[例如燒基、稀基或= 基];環脂族基，·（環脂族基）脂族基；雜環脂族基；（雜广脂族基）脂族基；芳基；雜芳基；烧氧基；（環脂族基^ 基；（雜環脂族基）氧基；芳氧基；雜芳氧基；（芳脂族基）氧基；（雜芳脂族基）氧基；芳醯基；雜芳醯基；胺基，·側氧基（在苯并稠合雙環或三環芳基之非芳族碳環上）；硝基；羧基；醯胺基；醯基[例如（脂族基）羰基；（環脂族基）板基，（（環脂族基）脂族基）羰基；（芳脂族基）羰基；（雜環脂族基）羰基，·（（雜環脂族基）脂族基）羰基；或（雜芳脂= 基）羰基];磺醯基[例如脂族基-so”或胺基_s〇2_];亞磺醯基[例如脂族基-S(O)-或環脂族基-S(0)_];硫基[例如脂族基s ]，氰基’鹵基，經基；疏基；硫氧基；脲；硫脲；胺磺醯基；磺胺；或胺甲醯基。或者，芳基可未經取代。經取代之芳基之非限制性實例包括函基芳基[例如單、二鹵基芳基（諸如對、間-二鹵基芳基）及三（諸如鹵基）芳基];(羧基）芳基[例如（烧氧羰基）芳基、（（芳烷基）幾氧基）芳基及（:》:完氧羰基）芳基];(醯胺基）芳基[例如（胺基羰基）芳基、（(（烷基胺基）烷基）胺基羰基）芳基、（烷基羰基）胺基芳基、（芳基胺基羰基）芳基及（(（雜芳基）胺基）羰基）芳基]; 胺基芳基[例如（（烷基磺醯基）胺基）芳基或（（二烷基）胺基）芳基];(氰基烷基）芳基；（烷氧基）芳基；（胺磺醯基）芳基 [例如（胺基磺醯基）芳基];(烷基磺醯基）芳基；（氰基）芳基；（羥基烷基）芳基；（（烷氧基）烷基）芳基；（羥基）芳基、 129343-l.doc -22- 200843738 ((羧基）烷基）芳基；（(（二烷基）胺基）烷基）芳基；（硝基烷基）芳基；（(（烧基磺酿基）胺基）烧基）芳基；（（雜環脂族基）羰基）芳基；（（烷基磺醯基）烷基）芳基；（氰基烷基）芳基； (羥基烷基）芳基；（烷基羰基）芳基；烷基芳基；（三^基烷基）芳基；對-胺基-間-烷氧基羰基芳基；對-胺基_間_氰基芳基，對-i基_間_胺基芳基；或（間_(雜環脂族基）_鄰_(烷基））芳基。如本文中所使用，”芳脂族基”（諸如"芳烷基”）係指經芳基取代的脂族基（例如c】_4烧基）。”脂族基"、”烧基”及”芳基”如本文中所定義。芳脂族基（諸如芳烷基）之實例為苄基。如本文中所使用，”芳烷基”係指經芳基取代的烷基（例如 C】-4烷基）。"烷基”與”芳基”如以上所定義。芳烷基之實例為苄基。^•烧基視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代：脂族基（例如烷基、烯基或炔基，包括羧基烷基、羥基烷基或諸如三氟甲基之_基烷基）、環脂族基（例如環烷基或環烯基）、（環烷基）烷基、雜環烷基、（雜環烷基）烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環烷氧基、雜環烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、芳醯基、雜芳醯基、硝基、羧基、烷氧羰基、烷基羰氧基、醯胺基（例如胺基羰基、烷基羰基胺基、環烷基羰基胺基、（環烷基烷基）羰基胺基、芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基、（雜環烧基）幾基胺基、（雜環烷基烷基）羰基胺基、雜芳基羰基胺基或雜芳:):完基魏基胺基）、氰基、齒基、經基、醯基、疏 129343-l.doc -23- 200843738 基、烧基硫基、硫氧基、腺、硫服、胺續酿基、碌胺氧基或胺甲醯基。 1 j 如本文中所使用，"雙環狀環系統"包括形成兩個至12(例如9、1G或U)員結構，其中料個環具有至少—個共用原子（例如i個共用原子或2個共用原子）。雙環狀統包括雙環脂族基（例如雙環燒基或雙環稀基）、雙環= 族基、雙環芳基及雙環雜芳基。〃如本文中所使用，"環脂族基"涵蓋”環烧基"及”環稀基" 其每-者視情況如下文所述經取代。如本文中所使用 ”環烧基，，係指3_12(例如5_12)個碳原子的飽和碳環單_或雔環（經稠合或經橋接）。環院基之實例包括環丙基、基％戊基、％己基、環庚基、金鋼烧基、降福基、立方炫基 '八氫節基、十氫萘基、螺[55]十—院基、螺叫辛基、雙環并[3.2.1]辛基、雙環并[2 2 2]辛基、雙環并 [3.3.U壬基、雙環并[3 3 2 ]癸基、雙環并^^辛基、、金

鋼烧基或（（胺基幾基）環燒基）環烧基。 W 如本文中所使用，"環稀基"係指3至12(例如4至8)個碳原子之具有一或多個雙鍵的非芳族碳環單環或雙環。環烯美之實例包括環戊稀基、M•環己·二，、環庚稀、環：烯、六氫節基、八氫萘基、環己稀基、環戊稀基、螺[Μ] 十-3-稀基、螺[2.5]辛_5-烯基、雙環并[2.2·2]辛烯基或雙環并[3·3·1]壬烯基。環烧基或環烯基可視情況經一或多個諸如以下基圏之取代基取代·膦醯基、脂族基（例如烷基、烯基或炔基）、環 129343-1 .doc •24- 200843738 脂族基、（環脂族基）脂族基、雜環脂族基、（雜環脂族基）脂族基、芳基、雜芳基、烷氧基、（環脂族基）氧基、（雜環脂族基）氧基、芳氧基、雜芳氧基、（芳脂族基）氧基、（雜芳脂族基）氧基、芳醯基、雜芳醯基、胺基、醯胺基（例如 (脂族基）羰基胺基、（環脂族基）羰基胺基、（（環脂族基）月旨知基）.基胺基、（芳基）幾基胺基、（芳脂族基）魏基胺基、 (雜環脂族基）羰基胺基、（（雜環脂族基）脂族基）羰基胺基、 (雜芳基）羰基胺基或（雜芳脂族基）羰基胺基）、硝基、竣基 [例如HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰氧基]、醯基（例如（環脂族基）羰基、（（環脂族基）脂族基）羰基、（芳脂族基）幾基、（雜環脂族基）魏基、（（雜環脂族基）脂族基德基或（雜芳脂族基）羰基）、氰基、_基、羥基、巯基、磺醯基（例如烷基-SCV及芳基-S〇2_)、亞磺醯基（例如烷基-s(〇）_)、硫基（例如烷基-S-)、硫氧基、脲、硫脲、胺磺醯基、磺胺、側氧基或胺甲醯基。術語”雜環脂族基"涵蓋雜環烷基及雜環烯基，其每一者視情況如下文所述經取代。如本文中所使用，”雜環烷基”係指3_12員單環或雙環（經稠合或經橋接）（例如5員至12員單環或雙環）飽和環結構，其中環原子中之一或多者為雜原子（例如N、〇、s或其組合）。雜環烷基之實例包括哌啶基、哌嗪基、四氫哌喃基、四氫呋喃基、1，4-二氧戊環基、M_二噻烷基、丨，夂二氧戊環基、噁唑啶基、異噁唑啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、八氫苯并呋喃基、八氫咣烯基、八氫硫代吭烯基、八 129343-l.doc -25- 200843738 η基、八氫^定基、十氫啥琳基、八氫基、3-氮雜-雙環并[3,21]辛基、3_氧雜螺Μ]十一基、6_虱雜螺[2.5]辛_5-烯基及2 6 _ [3.3丄0。壬基。 2各一乳雜_三環并

如本文中所使用，”雜環烯基”係指具有一或多個雙鍵且其中-個或多個環原子為雜原子（例如n、◦或s)的單環或雙環狀（例如5員至10員單環或雙環状）非芳族環結構。單環及雙環雜脂族基根據標準化學命名法編號。雜環燒基或雜環烯基可視情況經—或多個諸如以下基團之取代基取代·科fc基、脂族基[例如炫基、烯基或炔基]、環脂族基知私基）脂族基、雜環脂族基、（雜環脂族基）脂族基、芳基、雜芳基、烷氧基、（環脂族基）氧基、（雜環脂族基）氧基、芳氧基、雜芳氧基、（芳脂族基）氧基、（雜芳脂族基）氧基、芳醯基、雜芳醯基、胺基、醯胺基[例如（脂族基）羰基胺基、（環脂族基）羰基胺基、（（環脂族基）脂族基）羰基胺基、（芳基）羰基胺基、（芳脂族基）羰基胺基、（雜環脂族基）羰基胺基、（（雜環脂族基）脂族基）羰基胺基、（雜芳基）羰基胺基或（雜芳脂族基）羰基胺基]、硝基、羧基[例如 HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰氧基]、醯基[例如（環脂族基）幾基、（（環脂族基）脂族基）羰基、（芳脂族基）羰基、（雜環脂族基）羰基、（（雜環脂族基）脂族基）羰基或（雜芳脂族基）羰基]、硝基、氰基、鹵基、羥基、酼基、磺醯基[例如烧基確Si基或芳基磺醯基]、亞磺醯基[例如烷基亞磺酸 129343-l.doc -26- 200843738 、硫脲、胺磺醯脲基]、硫基[例如烷基硫基]、硫氧基基、磺胺、側氧基或胺甲醯基。 ^本文中所使用，"雜芳基”係指具有4至15個單％、雙環或三環狀環系統，其”、 a夕個裱原子尨雜広子（例如N、〇、8或其組合）且其〜、原力雔〒早'衣狀裱糸統為芳族，或雙核或三環狀環編之至少一者為芳族。雜芳具有2至3個環的苯并稠合環系統。舉例而言，苯并：：義

團包括與-或兩個4至8員雜環脂族基部分祠合之 : (例如吲嗪基、吲哚基、異吲哚基、3H，哚基、吲哚：基、苯并[b]咬淹基、苯并[b]D塞吩基、啥琳基或異㈣基）。雜芳基之-些實例為„丫丁 D定基、吼咬基、ih_十坐基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、四嗤基、苯并。夫°南基、異01琳基、苯并-塞嗤基、二笨并哌喃、噻二苯并哌喃、吩噻嗪、二氫吲哚、〗，2,3,4_四氫異喹啉、異吲哚、苯并π，3]二噁茂、苯并[b]呋喃基、笨并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、啐琳基、喹琳基、喹唑琳基、唓琳基、呔唤基、喹唑琳基、啥嗜琳基、異喹琳基、4h_喹嗪基、苯并4,2,5-嘍二唑基或1，8喑啶基。 tm _ 早％雜芳基包括（但不限於）呋喃基、噻吩基、2H-吡咯基、ϋ比咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異嗟唑基、1，3,4-噻二唑基、2Η-哌喃基、4-Η-哌喃基、吼啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡唑基、呲嗪基或1，3,5、三嘻基。單環雜芳基根據標準化學命名法編號。 129343-1 .doc -27- 200843738 雙環雜芳基包括（但不限於）吲嗪基、吲哚基、異叫丨蜂基、3H-吲哚基、吲哚啉基、苯并[b]呋喃基、苯并㈨噻吩基、喹啉基、異喹啉基、吲嗪基、異吲哚基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、笨并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、啐啉基、呔嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、丨，^喑啶基或喋啶基。雙環雜芳基根據標準化學命名法編號。雜芳基視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代·· 脂族基[例如烷基、烯基或炔基];環脂族基；（環脂族基）脂族基；雜環脂族基；（雜環脂族基）脂族基；芳基；雜芳基，烷氧基；（環脂族基）氧基；（雜環脂族基）氧基；芳氧基，雜芳氧基；（芳脂族基）氧基；（雜芳脂族基）氧基；芳醯基；雜芳醯基；胺基；側氧基（在雙環或三環雜芳基之非芳族碳環或雜環狀環上）；羧基；醯胺基；醯基[例如脂私基妓基，（環脂族基）羰基；（（環脂族基）脂族基）羰基； (芳脂族基）羰基；（雜環脂族基）羰基；（（雜環脂族基）脂族基）羰基；或（雜芳脂族基）羰基];磺醯基[例如脂族基磺醯基或胺基磺醯基];亞磺醯基[例如脂族基亞磺醯基];硫基 [例如脂族基硫基];硝基；氰基；鹵基；羥基；巯基；硫氧基；脲；硫脲，·胺磺醯基；磺胺；或胺甲醯基。或者，雜芳基可未經取代。經取代之雜芳基之非限制性實例包括（齒基）雜芳基[例如單及一（鹵基）雜芳基];(羧基）雜芳基[例如（烷氧基羰基）雜芳基]，氰基雜芳基；胺基雜芳基[例如G烷基磺醯基）胺 129343-] .doc •28- 200843738 基）雜芳基及（（二烷基）胺基）雜芳基];(醯胺基）雜芳基[例如胺基羰基雜芳基、（（烷基羰基）胺基）雜芳基、（((（烷基）胺基）烷基）胺基羰基）雜芳基、（(（雜芳基）胺基）羰基）雜芳基、（（雜環脂族基）羰基）雜芳基及（（烷基羰基）胺基）雜芳基]，（氰基烷基）雜芳基；（烷氧基）雜芳基；（胺磺醯基）雜芳基[例如（胺基磺醯基）雜芳基];(磺醯基）雜芳基[例如（烷基磺醯基）雜芳基];(羥基烷基）雜芳基；（烷氧基烷基）雜芳基；（羥基）雜芳基；（（羧基）烷基）雜芳基；（(（二烷基）胺基）烷基）雜芳基，（雜環脂族基）雜芳基；（環脂族基）雜芳基； (硝基烷基）雜芳基，（(（烷基磺醯基）胺基）烷基）雜芳基； ((烷基磺醯基）烷基）雜芳基；（氰基烷基）雜芳基；（醯基）雜芳基[例如（烷基羰基）雜芳基];(烷基）雜芳基及（鹵基烷基）雜芳基[例如三i基烷基雜芳基]。如本文中所使用，”雜芳脂族基，，（諸如”雜芳烷基”）係指經雜芳基取代的脂族基團（例如Cl-4烷基）。”脂族基”、，,烧基"及”雜芳基"如以上所定義。如本文中所使用，”雜芳烷基”係指經雜芳基取代的烷基 (例如Cm烷基）。，，烷基，，與，，雜芳基，，如以上所定義。雜芳烷基視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代：烷基 [包括羧基烷基、羥基烷基或諸如三氟甲基之_基烷基]、烯基、炔基、裱烷基、（環烷基）烷基、雜環烷基、（雜環烷基）烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環烷氧基、雜環烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、芳醯基、雜芳醯基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰氧基、 129343-l.doc -29· 200843738 胺基羰基、烷基羰基胺基、環烷基羰基胺基、（環烷基烷基）幾基胺基、芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基、（雜環烧基）魏基胺基、（雜環烷基烷基）羰基胺基、雜芳基羰基胺基、雜芳烧基羰基胺基、氰基、！|基、羥基、醯基、魏基、烷基硫基、硫氧基、脲、硫脲、胺磺醯基、磺胺、側氧基或胺甲醯基。如本文中所使用，，，醯基，，係指甲醯基或Rx_c(〇H諸如烷基-C(0)_，亦稱為”烷基羰基”），其中Rx及，，烷基，，如以上所定義。乙醯基及三甲基乙醯基為醯基之實例。如本文中所使用，”芳醯基"或”雜芳醯基”係指芳基 -C(O)-或雜芳基-C(O)-。芳醯基或雜芳醯基之芳基及雜芳基部分如以上定義視情況經取代。如本文中所使用，”烷氧基”係指烷基基團，其中，，烷基”如以上所定義。如本文中所使用，，，胺甲醯基，，係指具有結構_0_C0_ NRxR^-NRx-C0-0-Rz之基團，其中rx&rY如以上所定義，且Rz可為脂族基、芳基、芳脂族基、雜環脂族基、雜芳基或雜芳脂族基。如本文中所使用，”羧基”係指_C〇〇H、_C〇〇rX、 -〇C(〇)H、-0C(0)Rx(當用作端基時）·或〇c(〇)·或 -c(o)o-(當用作内部基團時）。如本文中所使用，”鹵基脂族基”係指經丨_3個鹵素取代的脂族基團。舉例而言，術語i基烷基包括基團_CF3。如本文中所使用，”髄基”係指-SH。 129343-l.doc -30 - 200843738 如本文中所使用，”磺酸基，，係指_8〇311或_S〇3Rx(當使用於末端時）或S(〇)3_(當用於内部時）。如本文中所使用，，，磺胺，，基團係指結構_nrX_s(〇)2-NR R (當用於末端時）及-Nrx_s(〇)2_nrY_(當用於内部時），其中Rx、RY&Rz如以上所定義。如本文中所使用，，，磺醯胺，’基團係指結構-S(0)2-NRxRy 或-nrx-s(o)2-rz(當用於末端時）；或-s(〇)2_nrX_ 或 _nrX-S(〇)2_(當用於内部時），其中Rx、rY&rZ如以上所定義。如本文中所使用，，，硫基”係指-S_RX(當用於末端時）及 -S-(當用於内部時），其中Rx如以上所定義。硫基之實例包括脂族基、環脂族基、芳基-S-或類似基團。如本文中所使用，”亞石黃醯基,,係指_S(〇)_rX (當用於末端時）及-S(0)-(當用於内部時），其中RX如以上所定義。例示性亞磺醯基包括脂族基-s(o)-、芳基_s(0)_、（環脂族基（脂族基）)-s(0)-、環烷基-s(o)-、雜環脂族基_s(〇)_、雜芳基一 s(o)-或類似基團。如本文中所使用，”磺醯基”係指_s(〇)2_Rx(當用於末端時）及-s(o)2-(當用於内部時），其中Rx如以上所定義。例示性磺醯基包括脂族基-s(o)2_、芳基_s(0)2_、（環脂族基（脂族基）)-s(0)2-、環脂族基-s(o)2-、雜環脂族基_s(〇)2_、雜芳基-S(0)2_、（環脂族基（醯胺基（脂族基或類似基團。如本文中所使用，”硫氧基，，係指 Rx(當用於末端時）及-O-S(o)-或-s(〇)_〇气當用於内部時）， 129343-l.doc -31 - 200843738 其中Rx如以上所定義。如本文中所使用，，，齒素”或”函基，，係指氟、氣、漠或埃0 如本文中所使用，單獨或與另—基困關聯使用之由術語羧基涵蓋的”烷氧基羰基，，係指諸如烷基_〇_c(〇)_之基團。如本文中所使用，"烧氧基烧基"係指諸如烧基烧基-之烧基，其中烧基如以上所定義。如本文中所使用，”羰基”係指_〇(〇)_。如本文中所使用，”側氧基”係指。如本文中所使用，術語”膦醯基”係指亞膦酸醋基及膦酸酯基。亞膦酸酯基及膦酸酯基之實例包括邛（0)(rp)2，其中RP為脂族基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、（環脂族基) 氧基、（雜環脂族基）氧基芳基、雜芳基、環脂族基或胺如本文中所使用，”胺基烷基”係指結構（RX)2N_烷基_。如本文中所使用，"氰基烷基”係指結構（Ν〇_烷基_。如本文中所使用，”脲’’基團係指結構_NRx-CO-NRYRz且 ”硫脲”基團係指結構-NRX-CS-NRW當用於末端時）及 -NRx-CO-NRY-或 NRx-CS-NRY-(當用於内部時），其中 Rx、 RY及1^如以上所定義。如本文中所使用，’’胍”基團係指結構_n==c(n(rxry)) N(RXRY)或 NRx-C(=NRx)NRxRy，其中 RxA ry如以上所定義。如本文中所使用，術語”曱_基，，係指結構_c = (nrx)n (RXRY)，其中RXA RY如以上所定義。 129343-l.doc -32- 200843738 一般而言，術語"鄰位π係指取代基在包括兩個或兩個以上個碳原子之基團上的位置，其中該等取代基連接於相鄰碳原子。一般而言，術語”偕位”係指取代基在包括兩個或兩個以上個石反原子之基團上的位置，其中該等取代基連接於同一碳原子。術浯末端’及’’内部”係指基團在取代基内之位置。當一基團存在於取代基之末端且未與該化學結構之其餘部分鍵結時，該基團為端基。羧基烷基（亦即RX〇(〇)c_烷基）為末端所使用之緩基之實例。當—基團存在於化學結構之取代基之中。"寸’讜基團為内部基團。烷基羧基(例如烷基_ ()〇或烧基OC(〇)-)及燒基叛基芳基（例如烧基{⑼ 芳基·或烧基-0(叫芳基·）為在内部戶斤使用之缓基之實戈口 +又T所使用 u、衣狀暴團”或，，環狀部分匕秸早環狀、雙壞狀及三環狀淨备

Α Μ A 、/、、、、，/、匕括環脂族基、雜環脂族基、方基或雜方基’其各如以上所定義。如本文中所使用，”橋接錐 r族〜…》展狀環系統'’係指雙環狀雜環月曰知％糸統或雙裱狀環橋接雙環狀環^之實例包=統’以該等環經橋接。基、雙環并[3.2·〗]辛美雔括但不限於金剛院基、降宿 r,，中基、雙環并[2.2.2]辛基、雔产並 [3.3.!]壬基、雙環并[32 又衣开基、卜氮雜雙環并[2 2 2JA 2·聽雙環并[2.2·2]辛及-二氧雜-三環并 J壬基。橋接雙環狀環系統 129343*1 .doc • 33 - 200843738 可視情況經一或多個諸如以下基團之取代基取代：烷基 (包括魏基烧基、羥基烷基及諸如三氟甲基之鹵基烷基）、烯基、快基、環烷基、（環烷基）烷基、雜環烷基、（雜環烷基）烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環烷氧基、雜環烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、芳醯基、雜芳醯基、硝基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰氧基、胺基羰基、烷基羰基胺基、環烷基羰基胺基、（環烷基烷基）羰基胺基、芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基、（雜環烷基）羰基胺基、（雜環烷基烷基）羰基胺基、雜芳基羰基胺基、雜芳烧基羰基胺基、氰基、函基、羥基、醯基、疏基、烧基硫基、硫氧基、腺、硫脈、胺續酿基、績胺、側氧基或胺甲醯基。如本文中所使用’ ”脂族鏈”係指支鏈或直鏈脂族基團（例如烧基、稀基或炔基）。直鏈脂族鏈具有結構_[ch2]v_，其中V為1-6。支鏈脂族鏈為經一或多個脂族基團取代的直鏈脂族鏈。支鏈脂族鏈具有結構-[CHQ]v-，其中q為氫或脂族基團；然而Q在至少一種情形中應為脂族基團。術語脂族鏈包括烷基鏈、烯基鏈及炔基鏈，其中烷基、烯基及快基如以上所定義。習語”視情況經取代”可與習語”經取代或未經取代”交替使用。如本文中所述，本發明之化合物可視情況經一或多個取代基取代，諸如以上一般性所說明或由本發明之特定類別、子類及物質所例示。如本文中所述，可變基團A、 B、R2、r3、Y及Y，及本文中所述式中戶斤含有之其他 129343-l.doc -34- 200843738 可變基團涵盍特定基團’諸如烧基及芳基。除非另有說明，否則可變基團A、B、R〗、R2、R3、γ及γ，及其中所含有之其他可變基團之特定基團中之每一者可視情況經一或多個本文中所述之取代基取代。特定基團之各取代基視情況進一步經i基、氰基、側氧基、烷氧基、羥基、胺基、硝基、芳基、環脂族基、雜環脂族基、雜芳基、_基烷基及烷基中之一至三個取代。舉例而言，烷基可經烷基硫基取代，且烷基硫基可視情況經鹵基、氰基、側氧基、烷氧基、羥基、胺基、硝基、芳基、鹵基烷基及烷基中之一至三個取代。另外舉例而言，（環烷基）羰基胺基之環烷基部分可視情況經鹵基、氰基、烷氧基、羥基、硝基、鹵基烷基及烷基中之一至三個取代。當兩個烷氧基結合於同一原子或相鄰原子時，該兩個烷氧基可與其所結合之原子共同形成環。、=般而言，術語，’經取代，，，無論是否前置有術語”視情况，均係指給定結構中氳基團經指定取代基之基團置換特疋取代基如在上文定義中及在下文化合物及其實例述中所“述。除非另有說明’否則視情況經取代之基團 :‘基團之每個可取代位置上可具有取代基，且當任何給、構中有一個以上的位置可經一個以上選自指定基團之 s 土取代時，每個位置上的取代基可相或不同。諸如 #、元基之％取代基可與另-環(諸如環烷基)結合，以形 3 =環狀《、统，例如兩環共I個公共原子。如一又无、白该項技術者所公認，本發明所設想之取代基之組合 129343-1 .cioc -35- 200843738 為彼等可形成穩定或化學上可行之化合物的組合。如本文中所使用，習語”穩定或化學上可行”係指當經受容許其產生、偵測及較佳其回收、純化及用於本文中所揭示之一或多個目的之條件時大體上不改變的化合物。在一些實施例中，穩定化合物或化學上可行之化合物為當在 40°C或40°C以下之溫度下、在無水分或其他化學反應性條件下保持至少一週時而大體上不改變的化合物。如本文中所使用，有效量被定義為賦予所治療之患者以治療效果所需的量，且一般基於患者之年齡、體表面積、重量及病狀而確定。Freireich等人，〇&1^1*(：1^111(^1^· Rep” 50.219(1966)描述了用於動物及人類之劑量（以毫克/ 每平方公尺體表面積計）的相互關係。體表面積可大致由患者之身鬲與體重確定。參見例如Scientifie TaMes，Geigy

Pharmaceuticals，Ardsley，New York，537(1970)。如本文中所使用’ ”患者n係指哺乳動物，包括人類。除非另有說明，否則本文中所述結構亦意欲包括該結構之所有異構（例如對映異構、非對映異構及幾何異構（或構形異構））形式；例如，各不對稱中心之尺及8組態、（幻及 (Ε)雙鍵異構體及（ζ)及（Ε)構形異構體。因此，本發明之化合物的單一立體化學異構體以及對映異構體、非對映異構體及幾何異構體（或構形異構體）混合物均在本發明之範疇内。、’、非另有σ兒明，否則本發明之化合物之所有互變異構形式均在本發明之範疇内。此外，除非另有說明，否則本文 129343-] .(j0c -36 - 200843738 中所述結構亦音^> a ，括僅在-或多種同位素富集原子之存 v 1的化合物。該等化合物適用作例如生物檢定中之为析工具或探釺，或適用作治療劑。在其他恶樣中，i 本么明特別描述如在下文令所一般具體描述的化合物 ^ ^ 口物。该等具體描述僅為說明起見，望限制該等化合物或其用途之範圍。不希【實施方式】 I.化合物

Α· —般化合物胺酸蛋白酶活方法。式（I)之在二悲樣中，本發明提供適用於抑制絲 f生的式（I)化5物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的化合物包括：

〇

-37- 1 或其醫藥學上可接受之鹽，其中，各 A為; 200843738 之C〗·4脂族基、視情況經取代之芳基，或; /ΙΑ及X丨Β各自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基·，或者’ 乂1與\2共同形成側氧基；其中ZA各自獨立地為一鍵或視情況經取各 R!為-ZAR4，

代之支鏈或直鏈ClM脂族鏈，其中ZA之至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_c(〇)_、、 -C(〇)NR~、-C(0)NRanrA_、<(〇)〇 …nrAc(〇)〇、4 、-NRAC(0)NRA-、-NRanrA……s〇2、领A_ 、-S〇2NRA-或 _NRAS〇2NRA-，其限制條件為-nranrA_、 -nrac(o)nra·或-NRAS〇2NRA-不直接結合於式⑴之氮環原子； R4各自獨立地為RA、鹵基、·〇Η、-CN、·Ν〇2、-NH2戈 _OCF3 ; 以各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；各R2為-ZBR5，其中ZB各自獨立地為一鍵或視情況經取代之支鏈或直鏈C】·〗2脂族鏈，其中zB之至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_C(0)·、-C(S)-、 _c(o)nrb-、-c(o)nrbnrb-、_c(o)o-、-NRBC(0)0·、 -NRBC(0)NRB-、-NRBNRB-、-s-、-so-、-S02-、-NR、、 -S02NRB-或-NRBS〇2NRB-，其限制條件為 so、so2 或 129343-1.doc -38- 200843738 _S〇2NRB-不直接結合於式⑴之羰基； R5各自獨立地為rb、_基、_〇H…CN、-Ν〇2、·Νίί -〇cf3 ； 23

τι B 各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；或者R]及I與其所連接之原子共同形成視情況經取代之雜環脂族環；各I為視情況經取代之脂族基、胺基、磺醯基、硫基、亞磺醯基、磺醯胺、磺胺、磺酸基、-(Μα、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；

Rm各自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； Y及Y’各自獨立地為-ZDR7，其中ZD各自獨立地為一鍵或視情況經取代之直鏈或支鏈Cw脂族鏈，其中ZD之至多兩個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_c(〇)_、 -C(S)-、-C(0)NRd-、_C(0)NRdNRd、-C(0)0-、_NRdC(0)0- 、-Ο-、-NRdc(〇)nrD、nrdnrD、s、s〇 -NRD-、_S〇2NRD…_nrds〇2urDs〇2NrD，或丫與^ 共同形成=〇或=s ; R7各自獨立地為rd、鹵基、_〇h、-CN、-N〇2、_NH2或 -〇cf3 ； 129343-l.doc -39- 200843738 R各自獨立地為氫或視情況經取代 a與b中每一者獨立地為〇、^、之或^ 之和為2或3。之芳基 ;其限 :且制條件為a與b 在另一態樣中本發明提供以下式（I)之化合物

(I) 或其醫藥學上可接受各 A為-CH2-; 各B為-CH2-; 各Ri為-zar4，其基；之鹽。在該式中，中各ZA為-C(〇)_且R4為經取代之烷各 R2 為-ZBR5，中 & 依 a ,L 认

技、各自獨立地為一鍵或視情況經取、 /、τζ之至多四個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_q0)_、 _nrB · ) -C(0)NR •、-c(o)c(o)-nrb-或汉5各自獨立地為rb 焼氧基或函燒氧基；鹵基、-OH、_CN、_N02 -nh2、汉8各自獨立地為氫取代之環脂族基；或及R2與其所連接、視情況經取代之脂族基或視情況經之原子共同形成視情況經取代之6員 129343-1 .doc -40- 200843738 雜環脂族環；視情況經取代之況經取代之雜芳或視情況經取代各1為視情況經取代之胺基、-〇-R3A、雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情基； R3A各自獨立地為視情況經取代之芳基之雜方基；且 Y及Y，中之每一者為H。

Β·特定化合物 I取代基& : 、1為z尺4 ’其中zA各自獨立地為一鍵或視情況經取代之支鏈或直鏈CK12脂族鏈，其中ZA之至多三個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_c(0)_、_c(s)_、 -C(0)NR'、_C(〇)NrAnrA_、_c(〇)〇、_nrAc(〇)〇、〜 -nr C(〇)NRa-、-NRaNRa-、-s-、-SO-、-S〇2-、-NRa_ 、-S〇2NRa-或-NRas〇2NrA_，其限制條件為 _nrAnrA_、 -NRAC(〇)NRA-或-NRas〇2NRa_不直接結合於式⑴之氮環原子。 R4各自獨立地為Ra、鹵基、_〇H、_CN、-N〇2、，仏或 -OCF” 各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。在若干實施例中，R〗視情況經1至4個取代基取代。在某些實施例中，R!為；其中 129343-l.doc -41 - 200843738 w2、W3及w4各自獨立地為一鍵、_c(〇)_、_c(s)_、 -c(o)n(q5)_、-c(0)0_、_〇_、_N( 、、-·scv、_S_、佩)·、抓、仰)·、_n(Q5)2c (⑺〇-或-s〇2N(q5)- ; Ql、q2、q3及Q4各自獨立地為_ 鍵、視知況經取代之Cw脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或氫（tQi、Q2、q^q^r丨之端

基時）’且Q5各自獨立地為氫或視情況經取代之脂族基。在一些特定實施例中，q4為一鍵。在若干實施例中，R】為視情況經取代之醯基。在若干實例中，1為視情況經取代之烷基羰基。心之其他實例包括 (胺基）烷基羰基、（鹵基）烷基羰基、（芳基）烷基羰基、（環脂族基）烷基羰基或（雜環脂族基）烷基羰基。該等實例中包括的實施例中，&為（雜環烷基（氧基（羰基（胺基）))）烷基羰基、（雜芳基（羰基（胺基（烷基（羰基（胺基烷基羰基、 (雙％芳基（磺醯基（胺基川烷基羰基、（芳基（烷氧基（羰基 (胺基）))）烷基羰基、（烷基（羰基（胺基）)）烷基羰基、（烯基 (烷氧基（¾基（胺基）))）烷基羰基、（環脂族基（烷基（胺基（羰基（胺基）)）)）烷基羰基、（雜芳基（羰基（胺基（烷基（羰基（胺基）))))）烷基羰基、（烷基（胺基（羰基（胺基川）烷基羰基或 (雙環芳基（胺基（羰基（胺基）))）烷基羰基，其每一者視情況經1-3個取代基取代。在若干實施例中，Ri為視情況經取代之羧基。在一實例中，R!為視情況經取代之烷氧基羰基。Ri之另一實例包括 129343-l.doc •42- 200843738 c】_4烷氧基羰基或（三環芳基）烷氧基羰基，其每一者視情況經1-3個取代基取代。其他羧基包括（脂族基（氧基））羰基、（雜芳烷基（氧基））羰基、（雜環脂族基（氧基）羰基、（芳烷基（氧基））羰基，其每一者視情況經鹵基、烷氧基、脂族基、環脂族基、雜環脂族基、芳基、雜芳基或其組合中之 1-3個取代。在若干只施例中，Ri為視情況經取代之胺基幾基。之實例包括（烷氧基（芳基（烷基）)）胺基羰基、（烷基）胺基羰基或（芳基（烷氧基（羰基（烷基（胺基（羰基（烷基）)))))）胺基羰基’其每一者視情況經1 -3個取代基取代。在若干實施例中，R1為視情況經取代之雜芳基。在一實例中，R】為視情況經取代之噁唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、二嗪基、吼啶基、吼嗪基、嘧啶基或噠嗪基。在若干實施例中，R1為烷基磺醯基、胺基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、環脂族基磺醯基或雜環脂族基磺酿基，其每一者視情況經1_4個取代基取代。在若干實施例中，Rl為視情況經取代之烷基磺醯基。& 之實例包括（芳基）烷基磺醯基或（烷基（胺基））烷基磺醯基、烷基％醯基、胺基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、壞脂族基磺醯基或雜環脂族基磺醯基，其每一者視情況經 1_3個取代基取代。在某些實施例中，&為視情況經取代之烧基績醯基。在若干實施例中’ R!為（芳基）烷基磺醯基或（烷基（胺基））烷基磺醯基，其每一者視情況經取代。 129343-l.doc -43- 200843738 在一些特定實施例中，心為（胺基）烷基羰基、（鹵基）烷基羰基、（芳基）烷基羰基、（環脂族基）烷基羰基或（雜環脂族基）烷基羰基、（雜環烷基（氧基（羰基（胺基）))）烷基羰基、（雜芳基（羰基（胺基（烷基（羰基（胺基）)))）烷基羰基、 (雙環芳基（磺醯基（胺基）)）烷基羰基、（芳基（烷氧基（羰基 (胺基）))）烷基羰基、（烷基（羰基（胺基）)）烷基羰基、（烯基 (烷氧基（羰基（胺基）)））烷基羰基、（環脂族基（烷基（胺基（羰基（胺基）)))）烧基羰基、（雜芳基（羰基（胺基（烷基（羰基（胺基）))))）烧基羰基、（烷基（胺基（羰基（胺基）))）烷基羰基或 (雙環芳基（胺基（羰基（胺基）))）烷基羰基，其每一者視情況經取代。在其他特定實施例中，R!為雜芳基羰基、（環脂族基（烷基（酸胺基（烷基）)））羰基、（雜環脂族基（氧基（醯胺基（烷基）))）羰基、（芳基（確醯基（胺基（烷基）))）羰基、（芳烷基（氧基（酿胺基（烷基）))）羰基（脂族基（氧基（醯胺基（烷基）)））羰基、（環脂族基（烷基（醯胺基（烷基））)）羰基、（雜環脂族基）羰基或（雜芳基（醯胺基（烷基（醯胺基（烷基h川羰基，其每一者視情況經函基、脂族基、環脂族基、醯基、烷氧基或其組合中之1-4個取代。在其他實施例中，R!為醯胺基。舉例而言，&為（烷氧基（芳基（烷基）)）胺基羰基、（烷基）胺基羰基或（芳基（烷氧基（羰基（烷基（胺基（羰基（烷基）)))))）胺基羰基，其每一者視情況經取代。在若干實施例中，R!為 129343-l.doc •44- 200843738

R8 R，8 RT\n/乂 3 L

RT\ R8 NT Rg 〇y Qll .R'e 'Λ

Qlll

^〜、y乳 π丞、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；R8及仏各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情驗取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情驗取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且化各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之苯基，或結合於相鄰原子上的 8及R9 /、其所連接之原子共同形成5至7員、視情況經取代之早環雜環脂族基，或6至12員、視情況經取代之雙環雜 %月曰知基’或1^及R’8與其所連接之原子共同形成視情況經取代之ί衣脂族基或視情況經取代之雜環脂族基。為澄清起見’當R〗為QVI時，每個亞單元中之&、R，8及尺9各自可如上所述獨立選擇。一個亞單元中之一組R8、R，8及R9可變基團不必與其他亞單元中之同組心、R，8&R9相同。在其他實施例中，1^為(51或QII。在一些實施例中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中之取代基中的R為 129343-l.doc -45- 200843738 ,Ν、

在其他實施例中，，或 1^為QVI且R為

在其他實施例中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中之取代基中的R為

視情況經取代之脂族基、其中Rio及汉，10各自獨立地為氫 129343-l.doc *· 46 - 200843738 視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環脂族基或視情況經取代之環脂族基，或者％及R 1() 14其所結合之原子共同形成視情況經取代之環脂族基或視情況經取代之雜環脂族基；且〖各自獨立地為」 -s(o) -NR] 4- -c(o)-或鍵、C〗.12脂族基、-〇_、-s_ -c(o)NRM-，其中Ru為氫或視情況經取代之Cl…脂族基；且η為1-3。為澄清起見，當、Qn、QIII、QIV、或

QVI中存在一個以上的時，各Ri〇可相同或不同。在若干貝施例中，r1〇或汉’1〇為[Clio環烧基或環稀基]脂族基、（3至10員）_雜環脂族基、（3至1〇員）_雜環脂族基π〗七脂族基—、（5至10員）-雜芳基或（5至10員）-雜芳基-CN12脂族基-〇在其他實施例中，QI、QII、QIII、QIV、QV或QVI中之取代基中的R為

^Γ„ 八例中，QI、QII、QIII、QIV、QV 或 QVI 中之取代基中的R為

HN

Η 129343-1.doc -47- 200843738

129343-l.doc -48- 200843738 立地為單鍵或雙鍵，且R ώ y # 、 R5G各自獨立地為氫、視情況經取代之知私基、視情況經取代取基、視情況經取代之雜環节方基；且…或…或視情况經取代之環脂族在若干實施例中 f

r9 RT—K|、

Ri為〇 II ς 〇 rt-^n

，或 W'R，其 t 丁為一鍵、<(〇> OC(O) NHC(〇). , -S(0)2N(H)- . -C(〇)C(0)-^-S〇2. ;尺各自獨立地為氫、胺基、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂職、視情1經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；R8&R，8各自獨立地為氫、才見情況經取代之脂族I、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且R_9各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之苯基，或者結合於相鄰原子上的&及I與其所連接之原子共同形成5至7員、視情況經取代之單環雜環脂族基，或6至12員、視情況經取代之雙環雜環脂族基，其中各雜環脂族基環；或R8及R、與其所連接之原子共同形成視情況經取代之環脂族基或視情況經取代之雜環脂族基；R及 R’ 1 1各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之苯基、視情況經取代之環 129343-l.doc • 49· 200843738 兄經取代之雜環脂族基;或…"與其所 '、/、同形成現情況經取代之3至7員環脂族基職族基環各自獨立地為氮或保護基。4雜 3二!實：例中，R"輪其所連接之原子共同形成貝衣。非限制性實例包括：

^, s, g Rs及R11之非限制性實例包括：

或者’ 與其所連接之原子可共同形成視情況經取代之5至7M單環雜環脂族基或視情況經取代之6至12員雙環雜環脂族基，#中各雜環脂族基或芳基環視情況含有另一選自0、S及N的雜原子。此外，m9與其所連接之原子可共同形成環，R?與由 Rs及R9所形成之環系統形成視情況經取代之8至14員雙環稠環系其中該雙環稠環系統視情況進—步與視情= 取代之苯基稠合以形成視情況經取代之1()至16員三環稠環 129343-1,doc -50- 200843738 系統。

在若干實施例中，心為：RT ，其中T為-c(o)-，且R為

在若干實施例中，R!為選自以下基團之基團：

129343-l.doc -51 - 200843738

129343-l.doc -52- 200843738

129343-l.doc -53- 200843738

129343-l.doc -54- 200843738

129343-l.doc -55- 200843738

129343-l.doc -56- 200843738

υ ,ν ΗΝ^ w 在若干實施例中，R!為< ，其中U為一鍵或 -Ο- ; V為烷基；T為-C(O)-;且R為脂族基、環脂族基、雜環脂族基、芳基、雜芳基、烷氧基或環烷氧基。I之實例 RT\

/V 包括其中R、U及V如方才所定義 129343-l.doc -57- 200843738

在其他實施例十，R為烷氧基或環烷氧基，以使得r 實例包括： ' 1

在其他實施例中，R為視情況經以下基團取代之暴·氰基、iS基、脂族基、環脂族基、雜環脂族基、芳 129343-l.doc -58- 200843738 或雜芳基，以使得心選自由以下各基團組成之群：

129343-l.doc -59- 200843738

129343-l.doc -60- 200843738

其中 X99為 OR、OC(NH)R或

Xiog為NH、CH2 ;且R定義如上。

RT\

在一些實施例中’ R1為 -A 〇，其中U

為一鍵或; V為烷基（例如曱基）；了為^⑴卜；且尺為烷基、環烧基、雜環完基、芳基、雜芳基、烧氧基或（環烧基）氧基，其每一者視情況經丨至3個各自獨立選自由以下各基團組成之群之取代基取代：函基、羥基、氰基、胺基、硝基、脂族基、_脂族基、（脂族基）氧基、（_基（脂族基））氧基、（脂族基（氧基（芳基）)）氧基、芳基、雜芳基、 ii芳基、環脂族基或雜環脂族基。 R之實例為具有1至4個可選取代基的環丙基，該等可選取代基各自獨立地為芳基、雜芳基、雜環烷基、環烷基、烧基、稀基、氰基或！|基且經由可選羰基連接子與環丙基 129343-l.doc 61 200843738

連接，或該等可選取代基中之兩者連同其所連接之一或多個原子形成雜環烷基或環烷基。該&之特定實例包括：

R之另一貫例為視情況經取代之環丁基（例如視情況經取代之雜環丁基。

)或 R之另 R之另

實例為視情況經取代之雜芳基（例如實例為視情況經取代之烷氧基或視情況經取代 129343-l.doc -62- 200843738 之環烷氧基。該R之特定實例包括：， +〇ΚΖ 、。Ύ"Ύ"

R之另一實例為視情況經取代之烷基。該R之特定實例

本發明之化合物之R!之特定實例包括

129343-l.doc -63 - 200843738

129343-l.doc -64- 200843738

129343-l.doc -65- 200843738

Ri之其他實例說明於PCT公開案WO 2004/103996 A1、 WO 2004/72243 A2、WO 03/064456 A1、WO 03/64455 A2、WO 03/064416 A1及美國專利公開案 US 2005/0090450 以及本文中所引用的彼等其他公開案中，各案以引用之方式全文併入本文中。

2·取代基R2 : 在若干實施例中，R2為-ZBR5，其中zB各自獨立地為一鍵或視情況經取代之支鏈或直鏈Cu脂族鏈，其中ZB之至多二個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：-C(O)-、 -C(S). ^ .C(0)NRb- . -C(0)NRbNRb-，-C(0)〇. , »NRbC(0)〇. 、-NRbC(0)NRb…_nrbnrb…各、s〇、媽、视b 、-S02NRB-或-NRbs〇2NrB·，其限制條件為 s〇、s〇2 或 -Sb〇2NRb.不直接結合於式⑴之幾基上。R5各自獨立地為 RB、鹵基、-OH、-CN、-N02、-顺2或 _0CF3。rb各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。、曰在更多實施例中，112為-Zl_Vi_Z2_V2_Z3_V3，V!、％及 v3各自獨立料-鍵、視情況經取代之脂族基、視情況2經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況：取代之芳基、視情況經取代之雜芳基或氫（當VI、v/、、；為I之端基時）；Zl、各自獨立地為—鍵、C叫 129343-1.d〇c -66- 200843738 、-C(0)c(0)_、-C(S)-、_c(〇)N(Q6y、_n(q6)c(〇)_、 -C(0)C(0)N(Q6)-、-〇-、、_s〇2-、-N(q6)s〇2-、 •N(Q6)C(0)N(Q6)-、-N(Q6)c(s)n(Q6)-、-N(Q6)-、-N(Q6)S02- 、-S02N(Q6)-、-C(0)N(Q6)S〇2_、-S〇2N(q6)c(〇)或氫（當 z!、Z2或Z3為R2之端基時）；且q6各自獨立地為氫或視情況經取代之脂族基。

在其他實施例中’ R2為視情況經取代之（脂族基）胺基，其中R2之脂族基部分為-Z2-V2-Z3-V3或-z3-v3，其中z2及z3 各自獨立地為一鍵、-c(0)_、-N(q5)_、-CH(0H)-、_C(〇)N (Q6)-或-C(0)C(0)N(Q6)_ ; v2獨立地為一鍵、視情況經取代之脂族基或視情況經取代之環脂族基；且V3為氫、視情況經取代之脂族基或視情況經取代之環脂族基。在更多實施例中，Z2為-CH(OH)-，V2為一鍵，且Z3為 •C(〇)N(Q6[ ’ 以使得 r2 為-n(q6)-ch(oh)-c(o)_n(v3) (q6)。在某些實施例中，R2為視情況經取代之（脂族基）胺基、視情況經取代之（環脂族基）胺基、視情況經取代之烷氧基或羥基。在另一實施例中，112為視情況經鹵基、羥基、脂族基、環脂族基或雜環脂族基中之1 _3個取代的烷氧基。在若干實施例，R2為胺基。r2之實例包括經單取代之胺基。R2之其他實例包括（環脂族基（魏基（幾基（烧基）))）胺基 (胺基（羰基（羰基（脂族基）))）胺基、（脂族基（羰基（羰基（脂族基）))）胺基或（芳基（胺基（羰基（羰基（脂族基）)))）胺基，其 129343-l.doc -67- 200843738 每一者視情況經1至3個取代基取代。 *干只把例中，尺2為-NR2zR'2z、_SR2y或-NR2Y· CU ，其中心獨立地為氯、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基’ R2W各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之㈣脂族基或視情況經取代之環脂族基；R2X及R|2X各自 f立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之雜方基、視情況經取代之絮| ^ 弋之本基、視情況經取代之環脂族基、 :情況經取代之雜環脂族基；或者^及〜與其所連接之纟^代之3至7貝環脂族基或雜環脂 ^ 农’各1 為偶·、_c(〇)·、傷、_c⑼c(0)·、 (〇)〇…-s(o)-或 _so2-;各厌22或 R， # 、主、一代之脂族基、視情況經取代月^、、11視f月/兄經取雜環脂族基、視情況經取代之芳；視情況經取代之基，·或者R2Z及〜與其二況經取代之雜芳取代之⑴員雜環脂族基環^共同形成—視情況經在若干實施例中，r2X及R,2X各自獨取代之脂族基、視情況經取代之 :風或視情況經之（環脂族基）脂族基。 Μ I或視情況經取代在若干實施例中，L14_c(0)c(0)·或_so 在若干其他實施例中，各R2W為氧 ^ 脂族基。丨月/凡、、、工取代之環 129343-1,doc 68- 200843738 在若干實施例中’ R24-NH-CHR2X-C(0)-C(0)- n(r2Z) r2W。在若干實施例中，r2為_NH-CHR2X_CH(0H)_C(0> N(R2Z)R2W 0 在若干實施例中，112為 _NH-CHR2X-C(0)-C(0)-NHR2Z，其中-NHR2Z 為 NH-環丙基、_NH-Me、_NH_Et、_NH_iPr、 -NH-nPr 〇在若干實施例中，112為_Nr2zR，2z…Sr2z，其中r2z及 R’2Z各自獨立地為氫、烷基、環烷基或芳烷基。R2Z之非限制性實例包括曱基、乙基、第三丁基、環戊基、環己基及苄基。在其他實施例中，R2g(_NH-CR2xR，2x_Li-C(〇))i-M;其中Μ各自獨立地為-oh、r2X、_NR2zR，2^_〇R2x，各丨為！或2，且L]、R2Z、R2X及尺，22如以上所定義。在若干實施例中，R2g(-NH-CR2zR，2z_Li_c(〇))i_M，其中L】為-C(O)- ’ i為1且M獨立地為r2x、_n(R2xR^)、 -OR2X、-NHS02R2x或-SR2X。在一些實施例中，R，2Z為H且尺22為脂族基、（芳基）脂族

129343-l.doc -69- 200843738 基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之芳烷基、視情況經取代之雜脂族基或視情況經取代之雜芳烷基。R2X之一些非限制性實例包括：

c

其中c為0· 〇

R 在若干實施例中，以2為：· 0 ，其中R2X為

且R X〜ch3, Y . Λ , 4 ’ 為 X ，\，Y^CH3、-CH2CF3 或氫。在一些實施例中，R2係選自由以下各基團組成之群：

Η

0

+¾ 1贿2，^’丫，_|_Π『Ει 及如 0 〇 υ 在些實施例中，I係選自由以下各基團組成之群：

Η 129343-l.doc -70- 200843738

在一些實施例中，R2係選自由以下各基團組成之群：

在一些實施例中，R2

f ^-ch2cf3 〇 ?2X，k?57 7R56 -N.〇/R57 化r，、… „ 在一些實施例中，R2為〇 (〇)m或 Ο ( )Π ，甘中R56各自獨立地為視情況經取代之Ci_6脂族基；視情况細取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之環脂族基或視情況經取代之雜環脂族基；R”各自獨立地為視f月況經取代之脂族基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之脂族基、視情況經取代 — 代之雜方基、視情況經取代之 129343-l.doc -71. 200843738 脂族基、視情況經取代之環脂族基或視情況經取代之胺基；且m為1或2 ;且R2X及心各自獨立地為氯、視情況經取代之脂族基、視情況經取狀環職基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基，·或者r2X及心與其所連接之原子共同形成視情況經取代之3至7員環脂族基或雜環脂族基環。 f、N \〆 σ

在一些其他實施例中，尺2為H ^R59，其中R58及R59各自獨立地選自視情驗取代之脂族基、視情論取代之炫氧基、視情況經取代之芳氧基、視情況經取代之雜芳氧基、視情驗取狀（環U基）氧基、視情驗取代之⑽ 壤脂族幻氧基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜方基、視情況經取代之環脂族基或視情況經取代之胺各自獨立地錢、視情況絲代之脂族

土視h况經取代之環脂族基、視情況姆嵌A 取代之雜環脂族土視清況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；或者广及R2X與其所連接之原子共同形成視情況經取代之貝環脂族基環或雜環脂族基環。至7 部分共同形成視情況經取代一些非限制性在若干實施例中，之一部分可與&之一衣狀、a構，例如5員至i 8員環雜脂族環（例如之6員雜環烷基環）。由此所形成之化合物之實例包括： 129343-1 .doc -72- 200843738

在若干實施例中，r2為選自以下基團之基團：

129343-l.doc -73 - 200843738

129343-l.doc -74- 200843738

129343-l.doc -75- 200843738

129343-l.doc -76- 200843738

129343-l.doc -77- 200843738

中雜環x=基。x2;基

心之其他實例說明於PCT公開案W〇 2〇〇4/1〇3996 A1、在其他實施例中 wo 2004/72243 A2 > WO 03/064456 A1 ^ WO 03/64455 A2 WO 03/064410 A1及美國專利公開案us 2〇〇5/〇〇9〇45〇以及本文中所引用之彼等其他公開案中，各案之全部内容以引用之方式併入本文中。谷 3·取代基R3 : 各R3為脂族基、環脂族基、雜環脂族基、芳基，其每一者視情況經取代。雜方在若干實施例中，R3各自獨立地為-ZCR0，其中Zc各獨立地為-鍵或視情況經取代之脂族基，纟中^之個妷早7L視情況且獨立地由以下基團置換·· _c(〇)·、、 129343-1 .doc -78- 200843738 、-C(0)NRc，、-C(〇)NRcNRc-、-C(0)0-、-NRcC(0)0-、 -〇-、-NRcC(0)NRc-、_NRcNRc…各…s〇s〇2-、 •NRC_、-S02NRc-或-NRcs〇2NRc_。R6各自獨立地為 rC、鹵基、-OH、-CN、-N02、-NH2、烷氧基或_烷氧基。Rc 各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之，脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基1視情況經取代之雜芳基。然而，在很多實施例中二當Zc為一鍵且1為Rc時，則rC獨立地為視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之

雜環脂族基、視情驗取代之芳基或視情驗取代之雜芳基。在1他實施例中，各R3為視情況經取代之脂族基、胺 ^、磺醯基、硫基、亞磺醯基、磺醯胺、磺胺、旙酸二〇:f3;、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之 $衣月曰知基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳二& tR3A各自獨立地為視情況經取代之脂族基、視情況 ===== 況經取代之雜关其·日ρ也3几、、工取代之方基或視情況經取代之雜芳基土。’ 視情況經取代之芳基或視情經取代之芳基 J甲R3為早裱、雙環或三環一只代。舉例而言，R3為視情況經取二之笨：一 2情況經取之萘基或視情況經取代之f 本基、視“經取代環、雙環或三環芳在，、他實例中，R3為單基、硝基、脂：：Λ母—者視情況經齒基、經基、氰 mum基、（月旨族基）氧基、（齒; 129343-l.doc -79- 200843738 (脂族基））氧基、（脂族基（氧基（芳基川氧基、芳基、雜芳基、i基芳基、環脂族基、雜環脂族基或其組合中之1至4 個取代。在若干實例中，R3為視情況經取代之稠合雙環芳基。在若干實例中，R3為視情況經取代之稠合三環芳基。在若干實施例中，為視情況經取代之雜芳基。在若干實例中，I為單環或雙環雜芳基，其每一者視情況經齒基、羥基、氰基、硝基、脂族基、鹵基脂族基、（脂族基）氧基、（鹵基（脂族基））氧基、（脂族基（氧基（芳基）)）氧基、芳基、雜芳基、鹵基芳基、環脂族基、雜環脂族基或其組合中之1至4個取代。在一些實施例中，Rs為視情況經取代之脂族基，諸如曱基、乙基或丙基，其每一者視情況經取代。根據其他實施例，Rs為視情況經取代之脂族基。根據其他實施例，I為視情況經取代之Ci_5脂族基。

在若干實施例中， I為選自以下基團之基團： 129343-l.doc • 80 - 200843738

129343-l.doc -81 - 200843738

F3c

129343-1.doc -82- 200843738

CH3-、CH3CH2-及 CH3CH2CH2-。在一些實施例中，R3係選自由以下各基團組成之群： 129343-l.doc -83- 200843738

-些實施例中’ R3為視情況經取代之單環、雙環或三壞狀雜芳基，其每一 ^ 母者視情況經以下基團中之1-3個取

代：以、《、氰基1基、脂族基、“族基、（脂 Γ二基： “雜方基、自芳基、環脂族基、雜環脂族基或其在其他實施例中

R3係選自由以下各基團組成之群··

129343-l.doc -84- 200843738

在其他實施例中 ;，祝憬況經取代之胺基或視情取代之芳氧基。

e,iX 在一些實施例中’ I係選由自以下各基團組成之群： v、 σ。、/

,n~4 Λ及 4·基團A : 各A為·（cxja-，其中\及&各自獨立地為氫、視情況經取代之Cl·4脂族基或視情況經取代之芳基；或者&及 &一起形成側氧基；且各&為〇至3。在若干實施例中，\或心為氫。在若干實施例中，XistX2為視情況經取代之cm脂族土 X〗或χ2之實例包括三氟甲基或視情況經取代之乙基、丙基、丁基或其異構體。

在若干實施例中，X $ γ 4、H U 1或Χ2為視情況經取代之芳基。又丨或 5二包括視情況經取代之苯基、萘基或蓂基。 5·基團Β : 各8為-(〇又1又2)13— | /、中1及又2各自獨立地為氫、視情況 129343-l.doc -85 - 200843738 或者X!&X2 經取代之c】_4脂族基或視情況經取代之芳芙一起形成側氧基；且各b為〇至3。在若干實施例中，义1或义2為氫。在若干實施例中，Xdx2為視情況經取代之Cm脂族基。X】或X2之實例包括三氟甲基或視情況經取代之乙基、丙基、丁基或其異構體。在其他若干實例中，&或&為視情況經取代之經單-或二-取代之（胺基）_Ci4脂族基。

在若干實施例中’ X丨或χ2為視情況經取代之芳基。^或 x2之實例包括視情況經取代之苯基、萘基、節基或奠基。 6·取代基Υ及Υ， ' 視情況經取在若干實施例中，Υ及Υ，各自獨立地為氫代之脂族基或視情況經取代之芳基。 Υ及Υ各自獨立地為-ZDR7，其中ZD各自獨立地為一鍵或視情況經取代之直鏈或支鏈（Ci_6)_脂族鏈，其中之至多兩個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：_c(〇)_、 -CS-、-C(0)NRD-、-C(0)nrdnrD、_c(〇)〇、_〇c(〇)、

-nrdc(o)o-、·〇_、-Nrdc(0)nrD_、_〇c(〇)nrD -NRdNRd·、·Ν!^(〇)_、_s·、_s〇_、_s〇2…nrD 1〇2ΝΙΙ -、-NRdS〇2_ 或 _nrds〇2NrD·。& 各自獨立地為 RD、鹵基、-OH、-CN、_N〇2、-NH2 或-〇Cf3。Rd 各自獨立地為氫或視情況經取代之芳基。在若干實施例中，選自γ及Y，中之一者為氫。在若干實施例中，選自MY，中之—者為視情況經取代之脂族基。 129343-l.doc -86- 200843738 匕自Y及Y中之一者為視情況經取代，^與丫’均為氫。 ’ y或γ’中之—者為氫且另—者為氟 ’ γ與γι均為氟。在其他實例中，Υ或γ，中之一老 ^ Vf , ^ 者為虱且另一者為甲氧羰基，Υ或Y中之一者為氫且另一、 L且乃者為經基；或者Υ與γ，丑同形成側氧基或形成==s。

在若干實施例中之芳基。在若干實施例中在若干實施例中在若干實施例中 7·除外事項：在式⑴之化合物中，咖之和為2或3。舉例而言，… 且b為3，·嶙！且b為2 ,· a為2且b為1 ;或 c·子類化合物：本發明之另一態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（la)化合物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式（1旬之化合物包括：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3、Α、Β、γ&γ,如以上在式（I)中所定義。其中W2、w3及w4各 129343-l.doc -87- 200843738 自獨立& * .. ——

、-Ο--N(Q士 _s〇2N(Q5)-; Qi、Q2、Q3及q4各自獨立地為一鍵、視情況經取代之c】·4脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基’或氫（當Qi、Q〗、（^或匕為心之端基時）；且 Q5各自獨立地為氫或視情況經取代之脂族基。各R2a為-ZrVrZrWZrVs，V〗、Vjv3各自獨立地為鍵、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基、視h况纟二取代之雜芳基或氫（當V1、V2、為r2之端基日寸）’ Zi、z2及z3各自獨立地為一鍵、-C(〇)_、_c(〇)c(〇)_ 、_C(0)N(Q5)-、_n(q5)c(o)-、-c(o)c(o)n(q5)- 、-。-、-SO_、-S02--N(Q5)C(S)N(Q5)-、- •、-N(Q5)S02-、-N(Q5)C(0)N(Q5)-、 -N(Q5)_、-N(Q5)S(V、-S02N(Q5)-、 C(〇)N(Q5)S02-、-S〇2N(q5)c(〇)或氫（當 z〗、心或匕為^^ 之^基日守）’且Q5各自獨立地為氫或視情況經取代之脂族基。 2a為視情況經取代之（脂族基）胺基、視在若干實例中’ R2a為視情: 情況經取代之烷氧基或羥基。在若干實例中，R2a

鍵、-c(0)-、- 為（脂族基）胺基，其中氮原子視情況，其中Z2及z3各自獨立地為一 N(Q5)-或-C(0)C(0)N(Q5)-;且 •，且V2A v3各自 129343-l.doc -88- 200843738 獨立地為-鍵、視情況經取代之脂族基或視情況經取代之環脂族基。本發明之另一態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（lb)化合物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式之化合物包括： R3

R8 lb 或其醫藥學上可接受之鹽，其中R3、R8、r、t、a、b、γ 及γ，如以上在式（ι)中所定義。各G為視炀況含有丨至3個選自〇、8及^之雜原子的視情況經取代之2至15個原子的脂族鏈。式（lb)化合物之實例包括：

129343-l.doc -89- 200843738

欠、ch3，、或氫；T各自獨立地為一鍵、-(：(0)-、-0(：(0)-、一 NHC(0)-、-S(〇)2N(H)-、-C(0)C(0)-或-S02- ; R各自獨 / 立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；且1各自獨立地為氫、視情二經取代之脂族基'視情況經取代之雜芳月/ 之苯基。丞、視情況經取代式（lb)化合物之其他特定實例為

式（lb)化合物之其他實例包括·· 129343-l.doc -90- 200843738

129343-l.doc -91 -

或其醫藥學上可接受之鹽’其令：

各I為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基. R2Y各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之㈣族基、視情驗取代之雜環㈣基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基； R9各自獨立地錢、視情況經取代之脂族基、視情況姐二代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環脂族基或視情況經取代之環脂族基； R2X及R’2X各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之苯基、視情況經取 129343-] .doc -92- 200843738 代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基；或者及與其所連接之原子共同形成視情況經取代之3至7員環脂族基或雜環脂族基環，或者及r〗y與其所連接之原子共同形成視情況經取代之5至7員雜環脂族基環； ’且為視冑況經取代之6.7㈣脂族基或視情況經取代之第三丁基；

各Riz為視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基；土各R:為氫、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基或視情況經取代之脂族基；且各R2W為氫、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代 :=:基或視情況經取代之脂族基，或者一與 \ Μ子共同形成視情況經取代之雜環脂族基。二:月：另—態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的彳物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式⑽之 129343-l.doc

(III) -93- 200843738 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：

Rle 為、^

R2eA >>^CH3~<] { ; 或氣;且 R3e為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。本發明之另一態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（IV)化合物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式（IV)之化合物包括：

”3f

(IV) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：

129343-l.doc -94- 200843738

〇

CH3，或 ~< 且 R’2e為一 … ▼或氫 R3f及R’3f各自獨立地為氫、續醯胺、磺醯基、亞續酸基、視情況經取代之醯基、視情況經取代之脂族基、視情況經取代之環脂族基、視情況經取代之雜環脂族基、視情况、、二取代之芳基或視情況經取代之雜芳基，或者及R，w /、/、所連接之氮原子共同形成視情況經取代之飽和、部分不飽和或完全不餘飽和之5-8貝雜環脂族基或雜芳基。本發明之另_能 .心7楗仏適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（V)化曰物及扣舍丨合物包括：、’、’、私酸蛋白酶活性的方法。式(V)之化 129343-l.doc

(V) -95. 200843738 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Rk、及玖, (HO中所定義。 2e如以上在式 D各自獨立地為_Cr8·、N、s或〇，其限制兩個D獨立地為s或0，且〜如以上在式（ί)中所定手義為不超過、本i明之另-態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（乂1)化a物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式（V〗）之化合物包括：

汉26及R’2e如以上在式或其醫藥學上可接受之鹽，其中R (III)中所定義。各R3g為經取代之芳基例中，R3g為或經取代之雜芳基。在一些實施

129343-l.doc -96· 200843738

Cl

,〇 ^ ，或3 本發明之另—能# t 白酶活性的法。式（VII) 式()化5物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方之化合物包括：哪/古〖生的万

或其醫藥學上可接受之鹽，其中Rle、R2e及R，2< (ΙΠ)中所疋義’且如在式（VI)中所定義。本發明之另一態樣提供適用於抑制絲胺酸蛋式（VIII)化合物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方$ 之化合物包括：如以上在式白酶活性的 Γ。式（VIII)

129343-l.doc -97· 200843738 或其醫藥學上可接受之赜接又之鹽，其中Rie (III)中所定義，且R3如为4 , 仕式 k★在式（VI)中所定義。本發明之另一態樣提供 4 用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的式（IX)化a物及抑制絲人”；，收®文蛋白酶活性的方法。式（IX)之化合物包括：

/R，2e f 或其醫藥學上可接受之蹄， /τττ、+ π 6、風其中Rle、R2e及R’2e如以上在式 (III)中所疋義，且p , … g在式(VI)中所定義。本發明之另一離揭担〜…致供適用於抑制絲胺酸蛋白酶活性的物及抑制絲胺酸蛋白酶活性的方法。式（x)之化合物包括：

129343-l.doc -98- 200843738 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Rle、R2e及R’2e如以上在式 (III)中所定義，且R3g如在式（VI)中所定義。 D. 實施例之組合其他實施例包括上述取代基R!、R2、R3、A、B、Y及Y’ 之任何組舍。 E. 例示性化合物

本發明意欲包括其中心及R2含有絲胺酸蛋白酶抑制劑之結構元件的化合物。具有絲胺酸蛋白酶抑制劑之結構元件的化合物包括（但不限於）以下公開案之化合物：WO 97/43310、US 20020016294、WO 01/81325、WO 01/58929、 WO 01/32691 、WO 02/08198 、WO 01/77113 > WO

02/08187、WO 02/08256、WO 02/08244 > WO 03/006490、 WO 01/74768 、WO 99/50230 、WO 98/17679 、WO

02/48157、WO 02/08251、WO 02/07761、WO 02/48172、 WO 02/08256、US 20020177725、WO 02/060926、US 20030008828 、WO 02/48116 、WO 01/64678 、WO

01/07407、WO 98/46630、WO 00/59929、WO 99/07733、 WO 00/09588、US 20020016442、WO 00/09543、WO 99/07734、US 6,018,020、US 6,265,380、US 6,608,027、 US 20020032175 > US 20050080017、WO 98/22496、WO 05/028502、US 5,866,684、WO 02/079234、WO 00/31129、 WO 99/38888、WO 99/64442、WO 2004/072243、WO 02/18369、US 2006/046956、US 2005/197301 、WO 2005058821、WO 2005051980、WO 2005030796、WO 129343-l.doc -99- 200843738

2005021584、WO 2005087725、WO 2005085242 、 US 2003062228、WO 2002008187 、 WO

20051 13581、WO 2005087721、WO 2003216325 ^ WO 2002008256、WO 2002048172 、WO

2005087731、WO 2005085275 > WO 2003062265、WO 2002008198、WO 2001081325 、WO 2001077113 ^ US 6251583 > US 5990276 > US 20040224900 >

US 20040229818、WO 2004037855、WO 2004039833、WO 200489974、WO 2004103996、WO 2004030670、WO

2005028501 、 WO 2006007708 > WO 2005073216 、 WO 2004113365 、 WO 2004093798 、 WO 2005051410 、 WO 2005095403 、 WO 2004092161 、 WO

WO 2005070955、WO WO 2005073 195、WO WO 2004072243 > WO US 20050153877 > WO

2006007700 、 2006000085 、 2004026896 、 2005010029 、 2004094452、WO 2005054430、WO 2005077969、WO 2005028502、WO

2005046712、WO 2004032827、WO 2005037860、WO 2003087092 及 WO \ 2005037214，各案以引用之方式併入本文中。本發明之特定例示性化合物展示於以下表1中。 129343-l.doc 100- 200843738

129343-2.doc 101 - 200843738

1293 43-2.doc -102- 200843738

129343-2.doc -103 - 200843738

αχ秦， ° 〇; 〇 9 α^Ο 。丫诗。〇r^N\Wv 10 11 129343-2.doc -104- 200843738

129343-2.doc -105- 200843738

129343-2.doc -106- 200843738 Η 18 Cl ? Ν〇。丨 γ-ΗΜ s 0 QZT \ 19 $ CHj c^m^v OH 0 0 20 -107- 129343-2.doc 200843738 丫 Ο 0^0 ν c 21 </ ° 22 c,<) 23 129343-2.doc -108- 200843738 d 〇、/巩公, 0 c/ 〇 24 r<5 25 Cl<) CM! X 一。 /JTtP 八， c/W >·Ά’ y° Q 26 129343-2.doc -109- 200843738

r 27 h^：H CHj ΓΗΐ 28 CI Ϊ) Ν〇。丨丨 Η A C Η^\ 。 r\^" Υ (>Γ CHl \^rJ CMj 29 129343-2.doc -110- 200843738 c'<) )^：N CHj \Hl 30 CMi I 1 ox路 31 Cl Cl \ o 〇 32 -Ill - 129343-2.doc 200843738

Cl<> 33 一 χ坑4力〇 0 。" 〇 34 c'<) CMj CH, C^^CHrS 35 129343-2.doc -112- 200843738

129343-2.doc -113 - 200843738 。’ Η 〇 39 Q：c, 。::¾ τ Ο X f Μ Λ ° 〇 40 41 129343-2.doc -114- 200843738

129343-2.doc -115- 200843738

129343-2.doc -116- 200843738 A N〇 :WyV 48 ci〇 CHj \一0 Γ1 49 Cl t) °丨丨“产、 ^Λτννν 〇>^ r ° 50 129343-2.doc -117- 200843738

129343-2.doc -118- 200843738

129343-2.doc -119- 200843738

129343-2.doc -120- 200843738

/: Η,/ 60 Γ 。。、义 0 ο 61 /^N cHj S<^° Γ' 62 129343-2.doc -121 - 200843738

129343-2.doc •122- 200843738

\ Cl d CH, V" Γ 66 λ, CUL^y^ 67 }^：H CM \ i P 68 129343-2.doc -123 - 200843738

129343-2.doc 124- 200843738

129343-2.doc -125- 200843738 75 A麟承力 76 c,<) )^：N CXiX〇 Λ 、人义广（ 77 129343-2.doc -126- 200843738

C« Cl 78 c,^〇 79 ο o ° 80 129343-2.doc -127- 200843738

1 滅A，〇 … 81 似成4， ° U 〇 82 CI d 83 129343-2.doc -128- 200843738

129343-2.doc -129- 200843738

129343-2.doc -130- 200843738

129343-2.doc -131 - 200843738

129343-2.doc -132· 200843738

129343-2.doc -133 - 200843738

129343-2.doc -134- 200843738

129343-2.doc -135- 200843738

Cl d 105 Γ α/坑 ψ. 106 107 •136- 129343-2.doc 200843738

129343-2.doc -137- 200843738

111 〇t CM》^*«*。 112 為、〇> 办 xy 一 Η〆一CHj 113 129343-2.doc -138- 200843738

129343-2.doc -139- 200843738 ί %

Cl ρ 〇 Uhl. ,-λΥΝΗ ° wC, CMj 117 1。構ψ. 118 /^N CHj ^^4。 p CHj 119 129343-2.doc -140- 200843738 CM, 120 C'<) CHi \^1 /^°r^ CMj 121 Cl<) 〇〇 122 -141 - 129343-2.doc 200843738 Q 123 C,^Q 124 C,~Q 痛，Λ u 125 129343-2.doc -142- 200843738 :) \ c, 126 丫、广 ^ E ^ X 1 Cm^c CMj 127 128 129343-2.doc -143- 200843738

129343-2.doc 144- 200843738

129343-2.doc -145- 200843738

129343-2.doc -146- 200843738

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129343-2.doc -148- 200843738

129343-2.doc -149- 200843738 今1 C， Wn 0 。° 147 ^:麻 ψΑ;ν 148 d h^：H CHj \^° Ο Ο 149 129343-2.doc -150- 200843738

129343-2.doc -151 - 200843738

129343-2.doc 152- 200843738 i

Cl<) CH \ ^ 156 Cl<) d o 157 /^N CHj \.,a^° j2^1 158 129343-2.doc 153 - 200843738

Cl<) K破〇 ° 159 160 -Q CHj P SC 161 129343-2.doc -154- 200843738

129343-2.doc -155- 200843738

129343-2.doc -156- 200843738

129343-2.doc -157- 200843738

129343-2.doc -158- 200843738

129343-2.doc -159- 200843738

129343-2.doc -160- 200843738

129343-2.doc -161 - 200843738 d CH, P CP。义、 183 Cl t) N〇。：v«Tw- 〇r?。 184 c,^o pc 185 129343-2.doc -162- 200843738

129343-2.doc • 163 - 200843738

129343-2.doc -164- 200843738

129343-2.doc -165- 200843738

129343-2.doc -166- 200843738

129343-2.doc -167- 200843738 1 ςτ。樣Ψ，。、… 201 q CM, |CHl a/坑 ΛΛ, o/ ° 202 c'<> Y端你力 Γ 203 129343-2.doc -168- 200843738

129343-2.doc -169- 200843738 1 207 208 α^Ο y^rN CM^ \Hl 209 129343-2.doc -170- 200843738 /H1 CC勒/ 210 Cl p -yVV 〇T· r 211 α^ιο H u c 212 129343-2.doc -171 - 200843738 伽 213 ρΐΨ% . a , O O 0 v i, 214 CH, r 215 129343-2.doc -172- 200843738 c,~0 。=〇端i4- N 0 〇 h> 216 a-〇 217 c,<> K| chj jCHj 占 218 129343-2.doc -173- 200843738

Cl 219 220 C，<^ ox成4 221 129343-2.doc -174- 200843738

129343-2.doc -175- 200843738 c'<> CHi 『叭 a/^〇V!x/0 225 }^：N 226 c'<) O .cMi O ° 〇f O 227 129343-2.doc -176- 200843738

129343-2.doc 200843738

129343-2.doc -178- 200843738 Η. ο ο 234 1 Cr。魏 4, 235 d CH, ° 〇" 〇 236 129343-2.doc -179- 200843738 cMi Γ' 237 c'<> }^N cHj Γ1 c^?y>4Va。 238 Br 239 129343-2.doc -180- 200843738 % Η, r 240 Cl<) CMj |CMi 241 〇八o 6 CMj (WWA， o ° 242 129343-2.doc -181 - 200843738

129343-2.doc -182- 200843738

129343-2.doc -183- 200843738 249 〇广! j ^ ' ca 〇 r. /mA- ό … 250 p ax巩4力 ° 〇〇 251 129343-2.doc -184- 200843738 c,<> 252 c'^q CHj 叫Kv O 〇 CMj 253 ci〇 CHj 3，,^° P ¢/ ° 254 -185- 129343-2.doc 200843738

129343-2.doc -186- 200843738 c, O 丨- 。。’/ Ο 258 w ^rVr 259 ct<> r a r 。\稱加 260 129343-2.doc -187- 200843738 入cx谢众， ° 0 261 C'<) 在 262 λ, aj；SH O 0 263 129343-2.doc •188- 200843738 M jC ^ CM, 〇 :XArv\arVHi O O o < 264 cu^ w麻 265 。气。-f 灸。〇 ° V 266 129343-2.doc -189- 200843738

129343-2.doc -190- 200843738

129343-2.doc 191 - 200843738

129343-2.doc -192- 200843738

Cl d HN 276 以·〇 277 T。，樣Ψ, 278 129343-2.doc -193 - 200843738 ή 279 ο 0^0 ν c叭 280 q (:ν病 ° 0 Ο 0 281 129343-2.doc -194- 200843738

129343-2.doc -195- 200843738

129343-2.doc -196- 200843738 fl c, Ci p 288 a~Q r 289 8 290 129343-2.doc -197- 200843738 c,<> N Hc f> v Γ 291 ci<) CH, Vi P 292 cu槐 ψ5χ> 293 129343-2.doc -198- 200843738 0 … 294 8 。。、滅忒 ° & 〇 295 々I yr/r^ 296 129343-2.doc -199- 200843738

129343-2.doc -200- 200843738

129343-2.doc -201 - 200843738

129343-2.doc -202- 200843738

129343-2.doc 203 - 200843738

Cl<> CHj 309 今： CU对泰 310 〇1^〇 wc r^3^° 311 129343-2.doc -204- 200843738 312 313 ο αχ取 ψ. 314 129343-2.doc - 205 - 200843738 315 X ό CM, 316 C，<) 317 129343-2.doc -206 - 200843738

129343-2.doc -207- 200843738

129343-2.doc -208 - 200843738 324 J：樣承， 325 CM, Γ' 326 129343-2.doc -209- 200843738

129343-2.doc -210- 200843738

129343-2.doc -211 - 200843738 c'<) η % r 333 334 广 r。樣ψ产 335 129343-2.doc -212- 200843738 c,^o ^CI - 336 </ 〇 337 cl^O r 338 129343-2.doc -213 - 200843738 c,<) 1 CMj V1 339 Q q /Wn CHj \Hl ςρΎν^τ1, 340 h^：u CMj Λ^° |CHj ax巩〜 ° 〇 341 -214- 129343-2.doc 200843738 f

0 ° 342 αχ成4力 ° 。" 〇 343 C1~0 Ό ° 344 129343-2.doc -215- 200843738

129343-2.doc •216- 200843738

129343-2.doc -217- 200843738 ο c, 351 o 352 CH, h/ ύ ax'成 4, 。。" O 353 129343-2.doc -218- 200843738

129343-2.doc -219- 200843738

129343-2.doc -220- 200843738

129343-2.doc -221 - 200843738 X 363 Cl 0 o 364 y, cr病冬4, 365 129343-2.doc -222 - 200843738

129343-2.doc -223 - 200843738

129343-2.doc -224- 200843738 c,<) .Cl r 372 c,-〇〇-樣 Ψ, 373 c'<) CHl Γ' ax巩〜 d 〇 374 129343-2.doc -225 - 200843738

129343-2.doc -226- 200843738 ci~C) 378 c,<^ 端從， 379 Q Ο Γ：丨 χτ〇Ά’ 380 129343-2.doc -227- 200843738

Μ 381 6 η ° 0 382 c W樣Ψ, 383 129343-2.doc •228· 200843738 χχ〇 L。〕 384 "b 。.乂祕， 0 ¢/ 〇 385 ΛΛ 386 129343-2.doc -229- 200843738

ο ° 387 0 。… 388 c,<) CHj \Hl £XQ Λ 人广^ 、Ν〆 389 129343-2.doc -230- 200843738

Qk 390 C，^ )^N o 〇 391 ci<) 392 129343-2.doc -231 - 200843738

129343-2.doc -232 - 200843738

129343-2.doc -233 · 200843738 1 399 1 400 OJ：浓心〇〇 401 129343-2.doc -234 - 200843738

129343-2.doc -235 - 200843738 /CHJ ο <ςΓ。在 V, 405 1 身 CHj一。|CMi 406 ci<> Γ c稱加 407 129343-2.doc - 236 - 200843738

129343-2.doc -237 - 200843738 \ Cl 〇〇 411 Cl d 。丫，丫‘。c π t 412 Γ 0〆 413 129343-2.doc - 238 - 200843738 4 O r ί> ^ X A 414 ό .Ο η 〇^^γ\ >ς ςτΊ 七 V- 415 c,~〇 )^：Ν Ss^° Γ1 416 129343-2.doc -239- 200843738

° 0 417 Cl X) 〇 “Ον。、：W 418 /:翁 CMj 419 129343-2.doc -240- 200843738

129343-2.doc 241 - 200843738

129343-2.doc - 242- 200843738

129343-2.doc -243 - 200843738

129343-2.doc -244- 200843738

129343-2.doc -245 - 200843738 c,<) °k 435 Cl d' CH, Vi p 436 c,~o 々VIA， 437 129343-2.doc -246- 200843738 CHj ftcO 438 c,<> CMj 从1叹 439 CH \ J> p αχ與Xv ° 〇 440 129343-2.doc -247- 200843738

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129343-3.doc 447- 200843738

129343-3.doc 448- 200843738 Q CH, \J 1015 }^N CHi Tl gw加 1016 129343-3.doc -449- 200843738

129343-3.doc 450- 200843738

129343-3.doc 451 · 200843738

129343-3.doc -452- 200843738

129343-3.doc 453 - 200843738

129343-3.doc 454- 200843738 "c> 〇 CHj /X坑A户 HjC， 1027 }^N CMj J^0 1028 455 - 129343-3.doc 200843738 H,C ) 〇气 CH, ^ /'。人d卜Χ^Λ广 HjC^ 1029 H,C I严 v:滅4， CMj ° U Ο 1030 129343-3.doc - 456 - 200843738

129343-3.doc 457- 200843738

129343-3.doc 458 - 200843738 "c> Ο J^0 Ά 人?Yj/rV1 CH, 。 U ΰ 1035 "Vo CH, c, Γ 1036 129343-3.doc 459- 200843738

129343-3.doc 460- 200843738

129343-3.doc -461 - 200843738

129343-3.doc -462- 200843738 Ύ c： ° MjC—f 1043 hvL: 〇 Ο ι«ι·Χ^ H 6 C 。 ^ V"〆。 syy-° CH, 1044 II.化合物之合成使用下文所提供之例示性合成路線，可易由可市購之起始物質合成式I之化合物。下文於製備、方法、實例及流程中提供製備式I化合物的例示性合成路線。舉例而言，如 Kurth，M.J.，等人在 J· Org. Chem·，2002，67，第 5673-5 677頁中所報導，且如下文流程1中所說明，螺異噁唑啉 129343-3.doc -463 - 200843738 部分可藉由在腌 θ I化物與亞甲基脯胺酸之間之i，3-偶極加成而得以製備0睥备" ^ 猾虱化物可使用已知方法由氯肪或硝基燒形成。流程1提供用於製備式（I)化合物之方法的一般示意圖。其總體策略為建構式1 h之化合物，繼而在PG2存在下選擇性移除保護基PG!以形成中間物1 j。取代基Rl接著可與j】偶合’其產生含有R1之式1 k中間物。在一些實施例中，r 1 本身可含有保護基，該保護基在PG2存在下可選擇性地移除’繼而進一步加工。繼R1部分之加成之後，將p G 2基團移除以產生中間物lm。接著1m與R2部分偶合，形成式⑴ 之擬肽化合物。

流程1

if

V

Η Ν +

1f

ig 1j

1j PG2

1k 1i 129343-3.doc -464 - 200843738 R3 R3

再參看流程1，在一實例中，使用已知方法將羥基脯胺酸la保護為Boc衍生物（亦即步驟ia)以提供經保護之脯胺酸 lb，其中PG!為第三丁氧基碳酸酯。參見例如T.W. Greene 及 Ρ· G· ML Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第 3版，John Wiley and Sons，Inc· (1999)。將 lb氧化（亦即步驟ib)提供酮基-吡咯啶酸lc。氧化係在TEMPO存在下、以諸如次氯酸鈉之適當試劑完成。接著，在步驟ic中，使用已知條件，使酮基-吡咯啶酸lc與維蒂希試劑（Wittig reagent)(諸如式（Ph)3P=C(Y)(Y，）之三苯鱗内鏽鹽）反應，以提供式Id之外亞甲基化合物。由於僅藉由將ld簡單萃取入驗性水溶液便可方便地使酸Id自中性或鹼性副產物中純化’因此使用游離酸lc提供相應游離酸Id為有利的。隨後，在已知條件下（如上），以適當保護基（諸如第三丁基酉旨）保護酸Id(步驟id)，以提供中間物le。 le與腈氧化物if之反應提供螺異噁唾淋“與^之順式與反式異構體之混合物。如本文中所述及，順式-意謂脯胺酸％之2-羧基部分與異噁唑啉環之氧在如由脯胺酸環所述之平面的同側。術語反式-意謂脯胺酸環之2-羧基部分與異 °惡α坐琳環之氧在如由脯胺酸環所述之平面的對側。因此， ig表示本發明之同侧_化合物且lh表示本發明之對侧-化合 129343-3.doc -465 - 200843738 物。在一些實施例中，當PGlgB0C且PG2為第三丁氧基時，在保護基PG2存在下自lg&lh選擇性移除保護基pG!可在約-40°C至約40°C、約-20°C至約20°C及約-5°C至約5°C之溫度下、在適當有機溶劑中以磺酸（諸如甲烷磺酸）實現。適當的有機溶劑包括例如二氯甲烷及四氫呋喃。

藉由將相應有機酸鹽之混合物結晶可有利地將異構體U 及lj分離，其避免了諸如層析之更複雜的方法。適當的有機鹽包括彼等有機羧酸（例如乙酸、視情況經取代之苯甲酸、酒石酸、丙二酸、反丁稀二酸、草酸、扁桃酸、棒樣酸、對甲苯甲醯基酒石酸及順丁烯二酸）、有機石黃酸（例如甲烧續酸、視情況經取代之苯續酸、三㈣料酸及棒腦磺酸）之鹽。單一的螺異噁唑啉異構體（例如lj)在偶合試劑（諸如 EDCI)存在下與酸RiC〇〇h偶合，以形成中間物螺異噁唑啉址。在約-4(TC至約4〇。〇、約_2〇。〇至約2〇t：及約-5。〇至約 5JC之溫度下，在適當有機溶劑中，藉由適當的無機酸以取小的外消旋作用實現lk之保護基pG2的選擇性移除得到或貝現Rl側鏈之裂解。適當的無機酸包括例如濃鹽酸或/辰硫酸。適當有機溶劑包括例如二氯甲烷及四氫呋喃。接者使螺異噁唑啉lm與胺部分&偶合以提供式〗之化合物。 ° ，參看流程1 ’ PGKCQ).可為胺保護基，其中pGi為例如曱氧基碳基1三丁氧錢基、9_g基甲氧基幾基或节氧 129343-3.doc -466 - 200843738 基幾基。PG2(CO)_可為酸或酸保護基’其中PG2為例如 -OH、甲氧基、第三丁氧基或苄氧基。使用已知方法且如本文中進一步所述，可將PG!&PG2基團中之每一者個別或共同併入核心螺異噁唑啉結構。舉例而言’若經取代之所需R1為除PG1基團（例如保護基）以外的基團，則可移除pGlc=〇基團以形成具有游離胺基之化合物。该胺基與適當部分可在已知耦合條件下偶合以形成 /、中R!為蛋白酶抑制劑之部分的化合物。舉例而言，若將 PG2部分㈣’則可將㈣基移除且可將㈣分併入。製備本I月之化合物的另一方法說明於以下流程2中。流程2

129343-3.doc •467- 200843738

(. 參看流程2，符號Ο表示反應物可藉由官能性所結合之聚合物樹脂，該官能性容許進一步修飾且隨後自該樹脂移除產物。適當的樹月旨為如由Ellman等人在Tetrahedron Letters，I994，35，9333中所述的聚合物結合二氫吡喃 (DHP)樹脂。在步驟iia中，藉由使脯胺酸1 e與酸（例如於二氣曱院中之二氟乙酸）接觸可達成胺與酸兩者同時去保護以得到胺基酸2a。2a與經活化之Fmoc衍生物（例如N-(9H-苐-9-基甲氧基幾氧基）琥ίό醯亞胺（Fmoc-OSu))在溫和的無機鹼（諸如碳酸鈉）存在下反應（步驟iib)得到Fmoc衍生物2b。藉由在偶合試劑（諸如〇_苯并三唑_N，N，N，，N，_四甲基-六氟磷酸錁（HBTU))、外消旋抑制劑（諸如丨·羥基苯并三唑 (HOBT))及第三胺（諸如二·異丙基乙基胺（mEA》存在下使

Fm〇C衍生物2b與卿樹脂結合胺基醇2e(其與游離酸耻應)反應(步驟UiC)，可實現樹脂結合肽2d之製備。在，匕矛巾R3、、i取代之腈氧化物1f可與樹脂結合肽職歷偶極環化加成反應㈣成化合物h之兩種異構體：順式及反式異構體。接荖太安考在步驟iid中，藉由使；^與第二胺 (諸如口辰口定）在極性溶劍（士矣丄 Η啫如二甲基甲醯胺）中接觸而移除 129343-3.doc -468- 200843738 F_保蠖基以得到2f。經由步驟心， HBTU)、外、、古# 4… 偶口 U (啫如户下卜心疋抑制劑（諸如刪〇及第三胺（諸如mEA)存強於^由2f與賴之反應實現肽28之形成。藉由使&與 ::夂諸如，氣乙酸)及水接觸可完成肽伽g之裂解(步驟llf)，以得到α_羥基-醯胺2h。在最後y驟ug中，使用Dess_Martin高碘烷氧化作用戈 Pfhzner-Moffat氧化作用將α·羥基_醯胺2h氧化為2|。艺或者，如以下在流程3中所說明，可使用樹脂結合試劑製備式I之化合物。 Θ 流程3

129343-3.doc -469- 200843738 在流程3中，在PG2存在下選擇性移除PGi(步驟if)提供螺異噁唑啉異構體li及/或lj。在步驟iiia中，“及/或^與經活化之Fmoc衍生物（例如N-(9HU-基甲氧基魏氧基）號轴醯亞胺（Fmoc-OSu))在溫和的無機鹼（諸如碳酸鈉）存在不反應，形成Fmoc衍生物3a。藉由在偶合試劑（例如Ο-苯并三唑-N，N，N，，N，-四甲基-六氟磷酸錁（HBTU))、外消旋抑制劑（例如丨_羥基苯并三嗤 (HOBT))及第三胺（例如二-異丙基乙基胺（DIEA))存在下使 Fmoc衍生物3a與DHP樹脂結合胺基醇2C(其與游離酸外反應）反應（經由步驟iiib)，可實現樹脂結合肽26之製備。在步驟iid中，藉由使2e與第二胺（例如哌啶）在極性溶劑 (諸如二甲基曱醯胺）中接觸而移除Fmoc保護基以得到2f。藉由在偶合試劑（例如HBTU)、外消旋抑制劑（例如hobt) 及第三胺（例如DIEA)存在下使2f與羧酸反應，可實現肽2g 之形成。例如藉由使2g與強酸（例如三氟乙酸）及水接觸可實現肽-樹脂2g之裂解以得到游離肽2h。在最後步驟iig中，例如可以Dess-Martin高蛾烧或次氯酸鈉及TEMPO將2h之醇氧化為2i。以下流程4說明式I化合物的合成途徑，其中與其所連接之原子共同形成視情況經取代之大環雜環脂族基。 129343-3.doc -470- 200843738

E4

Rs

ivc

H4

H5 參看流程4，螺異噁唑啉酸E4在偶合試劑存在下與胺基酯H1反應，得到中間物H2。使H2巨環化，產生化合物 H3。使酯H2水解得到酸H4。使酸H4與磺醯胺或磺胺在偶合試劑存在下反應，得到產物H5。以下在流程5、6、7、8及9中展示根據如上所述方法之一完整合成式（I)化合物的實例。

流程S

OTBS 〇Me

5C OTBS NCS (2 eq.) Cl

PG： OMe

5d TBSQ N-^PGa 〜一 V〇Me 0.

129343-3.doc -471 - 200843738

5f 5g

,2Z)2

參看流程5，將經保護之第三丁基二甲基矽烷基-羥基苯甲醛5b轉化為如上所述之肟醯基氯5d。5d與外亞甲基吡咯咬之反應形成螺異噁唑啉5e。將5e去保護為5f，繼而與三氟甲磺酸酐反應，產生三氟甲磺酸酯5g。5f與胺HNUiU2 反應形成可轉化為如上所述之本發明之化合物的中間物螺異噁唑啉5h。或者，可將羥基_螺異噁唑啉中間物5(烷基化以形成可類似轉化為本發明之化合物的中間物5k。流程6 :

6a

CF2Br2,HMPT Zn, THF

PG2 6b

R3-氰M TEA, DMF

PG2 6c 129343-3.doc -472. 200843738

6a

F

R3-氣^ TEA, DMF

PGi 0 6b

R3

1) LDA，HMPA 2) 氧化劑

乂，TBS PG；

PG^ 6h 參看流程6，經去保護之吡咯啶酮與二氟二溴甲烷在 HMPT及鋅存在下反應，形成二氟外亞曱基中間物6b。與如上所、述之腈氧化物1 f偶極加成，得到二氟螺異噁唑琳 6c。以類似方式、分別由6a及6e製備中間物6b及6f，且轉化為相應的經取代之異1σ坐淋6d及6g。在其他變化中，可使用所說明之試劑將中間物6h溴化以 129343-3.doc -473 - 200843738 以形成6m 得到6j，烷基化以形成6k或氧化流程7 :

參看流程7，所示外亞甲基。比咯啶與if(其中&為 -COOEt)之偶極加成產生酯7a。7a中乙酯水解，轉化為酸氣（未展示）且與氨反應，產生醯胺7c。7C與三氟乙酸酐反應’形成可藉由上述方法轉化為肽中間物7e的腈yd。中間物7e與疊氮化合物山乂反應以形成可氧化為本發明之化合物7g的四唑7f。在該流程之變化中，可將_7a轉化為三唾 7h且隨後轉化為本發明之化合物7i。流程8 :

129343-3.doc -474- 200843738 參看流程8，如上所述但使用經基碳化醯亞胺二溴化物進行偶極加成，產生溴異噁唑啉8a。8a與芳基_酸在鈀觸媒存在下反應（鈴木條件（Suzuki condition))，形成中間物 8b，其可藉由上述方法轉化為本發明之化合物。步驟8&及 8b中之AR表示芳基或雜芳基。流程9 :

\^1N aq. LiOH

bh3-thf

苓看流程9，維蒂希產物9a經歷偶極加成以形成螺異噁唑啉9b。以例如DIBAL將9b還原，產生醇9C，醇、可烷基化以形成中間物9e，其隨後可藉由上述方法轉化為本二之化合物。用例如Li〇H使酯9b水解，產生羧酸9d，其可轉化為如本文中所述之式工化合物。 129343-3.doc -475- 200843738 流程ίο :

麥看流程10，經去保護之哌啶酮10b經歷維蒂希類型反應以形成外亞甲基化合物10c，化合物10c經歷如上述之偶極加成以產生可轉化為如上述之本發明之化合物的4 · 5螺異°惡嗤琳10d。 III.調配、投藥及用途本發明之另一實施例提供包含式⑴化合物或其醫藥學上可接党之鹽或其鹽之混合物的醫藥組合物。根據另一實施例，式（I)之化合物係以有效減少樣本或患者中之病毒負荷之量存在，其中該病毒編碼對病毒生命週期所必需的絲胺酸蛋白酶，及醫藥學上可接受之載劑。若在該等組合物中使用本發明化合物之t藥學上可接受之鹽’則彼等鹽較佳源自於無機或有機酸及驗。該等酸鹽中。括以了乙酉夂鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、天冬胺酸鹽苯甲酉夂鹽、苯石頁酸鹽、硫酸氯鹽、丁酸鹽、捧樣酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦石备酴臨四、早細尹、s夂鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄酸鹽、十二縣硫酸鹽、乙料酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖 129343-3.doc -476- 200843738

庚酸鹽、甘油碟酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2_羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、终酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3_苯基丙酸鹽、苦酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氮酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。鹼鹽包括銨鹽、驗金屬鹽（諸如鈉鹽及鉀鹽）、鹼土金屬鹽（諸如每鹽及鎮鹽）、與有機鹼所形成之鹽（諸如雙環己胺鹽、N_甲基_D_葡糖胺鹽），及與胺基酸（諸如精胺酸、離胺酸）所形成之鹽等。此外’含鹼性氮之基團可以諸如以下之製劑季銨化：低碳烷基i化物，諸如甲基、乙基、丙基及丁基氣化物、溴化物及碘化物；二烷基硫酸鹽，諸如二甲基、二乙美、一丁基及二戊基硫酸鹽；長鏈齒化物，諸如癸基、月秒芙十四烷基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基鹵化物’諸如节基及苯乙基減物及其他。由此可獲得水溶性或油溶性或可分散性產物。本發明之組合物及方法中所使用之化合物亦可藉由附加適當的官能基而改質以增強選擇性生物學性質。該等改質於違項技術中為已知的且包括彼等增加進人給定生物系統 (例如血液、淋巴系統 '中樞神經系統)之生物滲透性、详 :口服利用率、增加溶解性以容許藉由注射投藥、改變：陳代谢及改變排出率的改質。 ” 可用於該等組合物的醫藥於離子交換劑、装丨„ηΛ 劑包括但不限又換J蓉土、硬脂酸銘、印填脂、血清蛋白消 129343-3.doc -477- 200843738 如人血清白蛋白）、緩衝物質（諸如磷酸鹽）、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質（諸如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、辞鹽）、膠狀二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吼洛唆酮、纖維素基物f、聚乙二醇、幾甲基纖維素納、聚丙烯酸酯、41、聚乙烯聚環氧丙烷嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。

根據另實她例，本發明之組合物經調配用於作為醫藥投予至哺乳動物。在—實施例t，該哺乳動物為人。本發明之該等醫藥組合物可經口、非經腸、吸入噴霧、局p J：腸經鼻、口腔、陰道或經由植入式貯器投予。如本文中所使用之術語”非經腸"包括皮下、靜脈内、肌内、關節内、滑膜内、胸骨内、勒内、肝内、病憲内及顧内注射或灌輸技術。較佳地，該等組合物係經口或靜投予。不發明之組合物围止珩形式可為水性或油性懸浮該等懸浮液可根據該項技術中已知技術、使用適當的为政劑或濕潤劑及懸浮劑加以調门况無痛注射製劑亦可為 ιζ腸可接受之稀釋劑或溶财之無菌注射溶液或懸 :1::如為π丁二醇中之溶液。可使用之可接受之媒 β吟副為水、林葛爾氏溶液（Ringer，s s〇㈣化鈉溶液。此外，盔菌專張虱介質。為此目的，可使用包括合成心^ 任何無刺激性不揮發性油。如 ^旨在内的天&的醫樂學上可接受之 129343-3.doc -478- 200843738 油’諸如撖欖油或蓖麻油，尤其其聚氧乙烯化型式，適用於製備可注射劑，諸如油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物亦適用於製備可注射劑。該等油溶液或懸浮液亦可含有通常用於調配醫藥學上可接受之劑型（包括乳液及懸浮液）的長鏈醇稀釋劑或分散劑，諸如羧甲基纖維素或類似分散劑。常用於製備醫藥學上可接受之固體、液體或其他劑型的其他常用界面活性劑，諸如Tween、Span及其他乳化劑或生物利用增強劑亦可用於調配之目的。在一實施例中，每日約〇·〇1與約100 mg/kg體重之間之本文中所述之蛋白酶抑制劑化合物的劑量含量適用於預防及治療抗病毒、尤其抗HCV介導疾病的單一療法。在另一實施例中，每日約0.5與約75 mg/kg體重之間之本文中所述之 2白酶抑制劑化合物的劑量含量適用於預防及治療抗病毒、尤其抗HCV介導疾病的單一療法。一般而言，每曰投予本發明之醫藥組合物約丨至約5次，或連續灌輸。該投藥法可用作忮性或急性療法。可與載劑物質組合以產生單一劑型之活性成份的量將根據所治療之主體及特定投藥方式而改蜒。典型的製劑含有約5%至約95。/。活性化合物 (w/w)。在一實施例中，該等製劑含有約2〇%至約肋％活性化合物。當本發明之組合物包含式I化合物與一或多種其他治療劑或預防劑之組合時，該化合物與其他藥劑均應以單一治療方案中所正常投予之劑量之約1〇至1GG%之間的劑量含里存在。纟另一實施例中，其他藥劑應以單一治療方案中 129343-3.doc -479- 200843738 所正常投予之劑量之約1G至8州之間的劑量含量存在。本1月之醫藥組合物可以任何經口可接受之劑型（包括不限於膠囊劑、鍵劑 '水懸浮液或溶液）經口投予。在 :口使用之錠劑之狀況中，常用載劑包括乳糖及玉米澱 & 般亦添加諸如硬脂酸鎂之潤滑劑。對於膠囊劑形式 =投藥，適用稀釋劑包括乳糖及乾玉米殿粉。當需要二子液以便經口使㈣’將活性成份與乳化劑及懸浮劑二若需要，亦可添加某些甜味劑、調味劑或著色劑。式二予。^明-之醫樂組合物可以用於直腸投藥之栓劑形室溫下為固體但在直腸溫;下、 :::物)混合而製備。該等物質包括可可脂、蜂壤及聚二=醫藥組合物亦可經局部投予，尤其當膚;應，進入之區域㈣時，包括眼睛、皮官是疾病。適合的局部一^ 用於下部腸道之局部應用可以直文）或以適當的灌腸調配物 i見上片。物貢現。亦可使用局部經皮貼對於局部應用，該等醫入 -^ ^ #^ t, . ”、、σ物可以含有懸浮於或溶於化：物= 性組份的適當軟膏調配。用於本發明。物之局部投藥的載劑命蠟、白凡丰# 仁不限於礦物油、液體石匕士林、丙二醇、綮 I衣乳乙烷、聚環氧丙烷化合 129343-3.doc 200843738 物、乳化蠟及水。或或溶於m: 西樂組合物可以含有懸浮於 m = 樂學上可接受之載劑中之活性組份的適田洗液或乳貧調配。適去硬脂酸脫水山梨糖醇m 限於礦物油、單 ; ^ -日來山梨酸酯6〇、十六烷酯蠟、十 /、醇十八醇、^ 肀基十二醇、苯甲醇及水。理1ΤΓ:醫藥組合物可調配為pH經調節之無菌等張生益:之μ粒化懸浮液，或較佳地，調配為pH經調節之 ;囷專張生理鹽水中之溶液(有或無諸如氣节院劑)。或者，用於眼用的醫藥組合物可以諸如石壤油之：貧調配。 ¥ 本《明之醫藥組合物亦可藉由鼻氣霧劑或吸入法投予。該等組合物根據醫藥調配技術中熟知之技術製備且可使用苯甲醇或其他適當防腐劑、吸收促進劑（以增強生物利用度)、碳氟化合物及/或其他習知增溶劑或分散劑製備為於生理鹽水中之溶液。在一實施例中，該等醫藥組合物經調配用於經口投藥。在另-實施例十，本發明之組合物另外包含另—抗病主劑，較佳為抗HCV劑。料抗病毒劑包括但不限於：免: 調節劑，諸如ex-、β-及γ·干擾素、聚乙二醇衍生化干擾素又_ α化合物及胸腺素；其他抗病毒劑，諸如病、二: 一咏努烧胺及替比夫定（telbivudine) ; C型肝炎蛋白酶之其他抑制劑（NS2-NS3抑制劑及NS3_NS4A抑制劑）；Hcv生命週期中其他標的之抑制劑，包括解旋酶及聚合酶抑制劑；内部核糖體進入抑制劑；廣譜病毒抑制劑，諸如IMpDH抑制劑 129343-3.doc -481 · 200843738 (例如美國專利第 5,807,876、6,498，178、6,344,465 及 6,054,472號、WO 97/40028、WO 98/40381、WO 00/5633 1 中之化合物，及黴酚酸及其衍生物，且包括但不限於¥乂-497、VX-148及/或VX-944);或以上任何抗病毒劑之組合。亦參見W. Markland等人，Antimicrobial & Antiviral Chemotherapy，44，第 859 頁（2000)及美國專利第 6,541，496 號0

本文中使用以下定義（其中商標係指至本申請案申請曰為止可獲得之產品）。 ”Peg-Intronn意謂PEG-INTRON⑧，聚乙二醇化干擾素α-2b，購自 Schering Corporation，Kenilworth，NJ ; nIntronf’ 意謂 INTRON-A®，干擾素 a_2b，購自 Schering Corporation，Kenilworth，NJ ; n病毒唑n意謂病毒唑（Ι-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2,4-三唑-3-甲醯胺，購自 ICN Pharmaceuticals，Inc·，Costa Mesa， CA ;描述於Merck Index，詞條8365，第12版；亦可作為 REBETROL®購自 Schering Corporation，Kenilworth，NJ，或作為 COPEGASUS ® 購自 Hoffmann-La Roche，Nutley， NJ)； "Pagasys”意謂PEGASYS®，聚乙二醇化干擾素a-2a，購自 Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ ; 129343-3.doc -482- 200843738 ”Roferon·’意謂ROFERON®，重組干擾素a-2a，購自 Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ ；，’Bereforf’意謂 BEREFOR®，干擾素 α2，購自 Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc.? Ridgefield, CT ； SUMIFERON®，經純化之天然α干擾素掺合物，諸如購自 Sumitomo，Japan之 Sumiferon ; WELLFERON®，干擾素 a nl，購自 Glaxo_Wellcome LTd·，Great Britain ;及 ALFERON®，Interferon Sciences戶斤製造之天然α干擾素之混合物，且購自 Purdue Frederick Co·，CT。如本文中所使用之術語’’干擾素”意謂抑制病毒複製及細胞增生且調節免疫反應之高同源性物種特異性蛋白家族之成員，諸如干擾素a、干擾素β或干擾素γ。The Merck Index，詞條 501 5，第 12版。根據本發明之一實施例，該干擾素為a_干擾素。根據另一實施例，本發明之治療組合使用天然a干擾素2a。或者，本發明之治療組合使用天然α干擾素2b。在另一實施例中，本發明之治療組合使用重組α干擾素2a或2b。在另一實施例中，該干擾素為聚乙二醇化α干擾素2a或2b。適用於本發明之干擾素包括： (a) INTRON-A®(干擾素-α 2B，Schering Plough); (b) PEG-INTRON® ; (c) PEGASYS® ； (d) ROFERON® ； 129343-3.doc -483 - 200843738 (e) BEREFOR® ； (f) SUMIFERON® ； (g) WELLFERON® ； (h) 複合 α干擾素，購自 Amgen，Inc·，Newbury Park，CA ; (i) ALFERON® ； (j) VIRAFERON® ； (k) INFERGEN® ； (l) ALBUFERONTM。如熟習該項技術者所公認，較佳經口投予蛋白酶抑制劑。干擾素一般不經口投予。然而，本文中本發明之方法或組合不限於任何特定劑型或給藥方案。因此，根據本發明之組合中的各組份可單獨、共同或以其任何組合來投予〇在一實施例中，蛋白酶抑制劑及干擾素以單獨劑型投予。在一實施例中，任一其他藥劑可作為與蛋白酶抑制劑之單一劑型之部分投予或作為單獨劑型投予。由於本發明包括化合物之組合，因此各化合物之特定量可視組合中另一化合物之特定量而定。如熟習該項技術者所公認，干擾素之劑量一般以IU計量（例如約4百萬IU至約1千2百萬 IU)。因此，可與本發明之化合物組合使用的藥劑（無論是否充當免疫調節劑）包括但不限於：AlbuferonTM(白蛋白-干擾素〇〇，購自 Human Genome Sciences ; PEG-INTRON㊣（聚乙二醇化干擾素a-2b，購自 Schering Corporation，Kenilworth 129343-3.doc -484- 200843738 NJ) ; INTRON-Α®，（干擾素 a，2b，購自 Schering Corporation， Kenilworth，NJ);病毒唾（1_β-ϋ-σ夫喃核糠基-1H-1，2,4-三峻-3-甲醯胺，購自 ICN Pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa， CA ;描述於 Merck Index，詞條 8365，第 12版）；REBETROL® (Schering Corporation, Kenilworth, NJ) ； COPEGUS 0 (Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ); PEGASYS® (聚乙二醇化干擾素 a，2a，購自 Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ); ROFERON®(重組干擾素 a-2a，購自 Hoffmann，La Roche， Nutley，NJ) ; BEREFOR®(干擾素 a2，購自 Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc” Ridgefield， CT) ; SUMIFERON®(經純化之天然α干擾素摻合物，諸如購自 Sumitomo，Japan之 Sumiferon) ; WELLFERON、購自 Glaxo Wellcome Ltd·，Great Britain之干擾素a nl) ; ALFERON® (Interferon Sciences所製造之天然α干擾素之混合物，且購自Purdue Frederick Co.，CT) ; a-干擾素；天然a干擾素 2a ;天然a干擾素2b ;聚乙二醇化a干擾素2a或2b ;複合a 干擾素（Amgen，Inc·，Newbury Park，CA) ; VIRAFERON® ; INFERGEN® ; REBETRON® (Schering Plough，干擾素-a 2B+病毒唑）；聚乙二醇化干擾素a (Reddy, K.R·等人 ’’Efficacy and Safety of Pegylated(40-kd) Interferon a-2a Compared with Interferon a-2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis Cn(Hepatology，33，第 433-438 頁 (2001)));複合干擾素（Kao，J.H·，等人，，，Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis11 129343-3.doc •485 · 200843738 J· Gastroenterol· HepatoL 15，第 1418-1423 頁（2000));類淋巴母細胞或’’天然’’干擾素；干擾素i(Clayette，Ρ·等人， MIFN-tau? A New Interferon Type I with Antiretroviral activity” Pathol. Biol· (Paris) 47，第 553-559 頁（1999));白細胞介素-2(Davis，G.L·等人，’’Future Options for the Management of Hepatitis C·” Seminars in Liver Disease， 19，第103-112頁（1999));白細胞介素-6 (Davis等人， "Future Options for the Management of Hepatitis C." Seminars in Liver Disease，19，第 103-112 頁（1999)) ·，白細胞介素 _12(Davis，G.L.等人，’’Future Options for the Management of Hepatitis C.f, Seminars in Liver Disease, 19，第103-112頁（1999));及增強1型輔助T細胞反應發生的化合物（Davis等人，’’Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease，19，第 103-112 頁（1999))。亦包括刺激細胞中干擾素合成的化合物 (Tazulakhova, E.B.等人，丨’Russian Experience in Screening， analysis and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res·，21，第 65-73 頁），該等化合物包括但不限於單獨或與托普黴素（tobramycin)及口米啥莫特（Imiquimod)組合之雙股 RNA(3M Pharmaceuticals; Sauder， D.N. f, Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad· Dermatol·，43，第 S6-11 頁（2000)) 〇刺激細胞中干擾素合成的化合物（Tazulakhova，E.B.等 129343-3.doc -486 · 200843738 人，’’Russian Experience in Screening， analysis and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res·，21，第 65-73 頁）包括但不限於單獨或與托普黴素及咪喹莫特組合之雙股RNA(3M Pharmaceuticals; Sauder， D.N. f, Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad. Dermatol·，43，第 S6-11 頁（2000))。其他非免疫調節性或免疫調節性化合物可與本發明之化合物組合使用，該等化合物包括（但不限於）WO 02/18369 中指定之彼等化合物，該專利以引用之方式併入本文中 (參見例如第273頁第9-22行及第274頁第4行至第276頁第11 行）。其他藥劑包括多個已公開之美國專利申請案中所述之彼等藥劑。該等公開案提供可與本發明方法中之VX-950組合使用、尤其用於治療肝炎之化合物及方法之其他教示。預期任何該等方法及組合物可與本發明之方法及組合物組合使用。為簡明起見，儘管彼等公開案之揭示内容以公開案案號提及，但應瞭解，該等化合物之具體揭示内容以引用之方式明確併入本文中。例示性該等公開案包括美國專利公開案第20040058982號；美國專利公開案第20050192212 號；美國專利公開案第20050080005號；美國專利公開案第20050062522號；美國專利公開案第20050020503號；美國專利公開案第20040229818號；美國專利公開案第 20040229817號；美國專利公開案第20040224900號；美國 129343-3.doc -487 - 200843738 專利公開案第20040186125號；美國專利公開案第 20040171626號；美國專利公開案第20040110747號；美國專利公開案第20040072788號；美國專利公開案第 20040067901號；美國專利公開案第20030191067號；美國專利公開案第20030187018號；美國專利公開案第 20030186895號；美國專利公開案第20030181363號；美國專利公開案第20020147160號；美國專利公開案第 20040082574號；美國專利公開案第20050192212號；美國專利公開案第20050187192號；美國專利公開案第 20050187165號；美國專利公開案第20050049220號；及美國專利公開案第US 2005/0222236號。本發明亦可包括投予細胞色素P45 0單加氧酶抑制劑。 CYP抑制劑可適用於增加受CYP抑制之化合物在肝中的濃度及/或在血液中的含量。若本發明之實施例包括CYP抑制劑，則任何可改善相關 NS3/4A蛋白酶之藥物動力學的CYP抑制劑可在本發明之方法中使用。該等CYP抑制劑包括但不限於：利托那韋 (ritonavir)(WO 94/14436)、酮康唾（ketoconazole)、三乙醯夾竹桃黴素（troleandomycin)、4-甲基吡唑、環孢菌素 (cyclosporin)、氣美噻唑（clomethiazole)、曱氰咪胺 (cimetidine)、依曲康唑（itraconazole)、氟康唑 (fluconazole)、咪康唑（miconazole)、氟伏沙明 (fluvoxamine)、氣西汀（fluoxetine)、奈法口坐晒 (nefazodone)、舍曲林（sertraline)、克濾滿（indinavir)、奈 129343-3.doc -488- 200843738 非那韋（nelHnavir)、安普那韋（amprenavir)、福沙那韋 (fosamprenavir)、沙啥那韋（saquinavir)、洛匹那韋 (lopinavir)、地拉韋 °定(delavirdine)、紅黴素 (erythromycin)、VX-944及 VX-497。較佳 CYP抑制劑包括利托那韋、酮康唑、三乙醯夾竹桃黴素、4-甲基。比唑、環孢菌素及氯美噻唑。對於利托那韋之較佳劑型，參見美國專利第6,037，157號及其中所引用之文獻；美國專利第

5,484,801號’美國申請案序號第〇8/4〇2,690號，WO 95/07696及 WO 95/09614。用於量測化合物抑制細胞色素Ρ45〇單加氧酶活性之能力的方法為已知的。參見例如美國專利第6,〇37，157號，及

Yun等人，DrUg Metabolism &以邛⑽⑴⑽，第^卷第 403-407 頁（1993)。患者之病狀改善後，若必要，則可投予本發明之化合物、組合物或組合的維持劑量。隨後’可作為症狀之函數減少投藥劑量或頻率或兩者至經改善之病狀得以保持之程度’當症狀已減輕至所需程度時，應停止治療。然而基於疾病症狀長期的任何復發率，患者可能需要間m療。 /應瞭解，用於任何特定患者之特定劑量及治㈣案視二種因素而定’該等因素包括所用特定化合物之活性、年 :;體重、健康狀況、性別、飲食、投藥時間、排出率 :物組合及治療醫師之判斷及所治療之特定疾 ^在:性成份之量亦視特定描述之化合物及組 = 存在其他抗病毒劑及其性質而定。中疋否 129343-3.doc -489· 200843738 根據另一實施例，本發明藉由將本發明之醫藥學上可接受之組合物投予感染病毒（其特徵在於為病毒生命週期所必需的病毒編碼之絲胺酸蛋白酶;)之患者提供治療該患者的方法。在-實施例中，使用本發明之方法治療患有=cv 感染的患者。該治療可完全根除病毒感染或降低其嚴重程度。在另一實施例中，患者為人類。在一替代實施例中，本發明之方法另外 f齊卜較佳抗HCV劑投予至該患者的步驟。該等抗病毒2 ' 括但不限於：免疫調節劑，諸如α-、β-及γ干擾素、聚乙二醇衍生化干擾素α化合物及胸腺素；其他抗病毒劑，諸如病毒嗤、三環癸燒胺及替比夫定；c型肝炎蛋白酶之其他抑制劑（NS2-NS3抑制劑及NS3_NS4A抑制劑）；hcv生命週期中其他標的之抑制劑，其包括但不限於解旋酶及聚合酶抑制劑；内部核糖體進入抑制劑；廣譜病毒抑制劑，諸如 IMPDH抑制劑（例如νχ_497及美國專利第5，謝，⑺號及第 (6’498,1785虎中所揭不的其他IMpDH抑制劑，黴齡酸及其衍生物）’細胞色素？_45〇之抑制劑，諸如利托那韋，或任何以上抗病毒劑之組合。，額外藥劑可作為包含本發明之化合物與其他抗病毒劑之早-劑型之部分投予至該患者。或者，額外藥劑可作為 f劑型之部分，與本發明之化合物分開投予，其中該額外藥劑係在包含本發明化合物之組合物之前、共同或之後投予。亦可以在單個包裝中含有整個療程之”患者包裝”（通常為 129343-3.doc -490- 200843738 發泡包裝）將醫藥組合物作 w W馬處方開給患者。串去中藥劑師將筚物之志I & 〜匕裝（八方之處在於*者於…、應刀開)優於傳統處内奸百可項取到在患者包裝中所含有之包裝頁，而其在傳統藥方中則通常。頁經證明可提高*者對較 3之包裝内插捉阿μ者對w囑之順應性。應瞭解’藉助於其中含有沪遙* 有扣導心者正確使用本發明之包裝内插頁的單一*去6狀斗、^ 心匕衣或各凋配物之患者包裝投予本發、、且&係本發明之合乎需要的額外特徵。根據本發明之另一態樣，為包含（根據本發明之劑量之）至少一種式I化合物與含有指導使用本發明之組合之資訊插頁的包裝。本發明之任何組合物、劑型、治療方案或苴 :實施例可存在於醫藥包裝中。在一本發明之替代實施例 ’醫藥包裝進—步包含—或多種如本文中所述之其他藥劑。其他藥劑或製劑可提供於同一包裝或單獨包裝中。、本發明之另一態樣包括經包裝之套組供患者在治療赠感染或在預防HCV感染（或用於本發明之另一方法）中使用’該套組包含：一種或複數種各醫藥組份之醫藥調配物，一在儲存期間及在投藥之前容納醫藥調配物的容器；及以有效治療或預防HCV感染之方式進行投藥的說明。因此，本發明提供用於同時或按順序投予至少一種式工化合物（視情況與其他藥劑）之劑量的套組。一般地，嗜套組包含例如各化合物與其他可選藥劑於醫藥學上可接受之載劑中（及於一種或複數種醫藥調配物中）之組合物，以及用於同時或按順序投藥的書面說明。 129343-3.doc -491 - 200843738 在另:實施例t，提供包I套組，其含有—或多種用於自：投樂的劑型’·較佳經密封以在儲存期間及使用之前用納㈣的谷11構件’·及用於患者進行投藥的說明書。說明書一般為包裝内插頁、標籤及/或套組之其他組件上的書面說明，且密，丨划^ 士七丄 J i如本文中所述。各劑型可分別封裝，如在一片金屬落塑耀層屋板中，其中各劑型以獨立單元或乳泡彼此分離，或可將劑型封裝於單個容器内，如在塑膠瓶内。本發明夕表, 、、、一般亦包括用於包裝個別套組組份 (亦即劑型）的構件、交構件及書面使用說明。該包裝構可採用紙板或紙箱、塑膠袋或簿袋等形式。 =據本發明之套組可包含本發明之任何態樣，諸如劑型、治療方案或醫藥包裝。根據本發明之包裝、且視情况包含複數種組合物或劑型。因此，本發明包括各有-種組合物或—種以上組合物的包裝及套組。在另一實施例中，本發明提供預處生物學物質的太本外+丄人仅卞至患者之發明化合Γ 含使該生物學物質與包含本决榀之醫樂學上可接受之組合物接觸的步驟。哕等質包括但不限於：血液及盆^ 以小柘、U 欣及其組伤，諸如血漿、血臟、肺等、似物；器官’諸如腎、肝、心者的流二:髄及其組份’及其他待灌輸“ 崤如生理鹽水、右旋糖等。料！實施例，本發明提供處理可能與病毒接觸之材端的方法，該病毒的特徵在於為其生命週期所編碼的絲胺酸而的病毋夂蛋㈣。該方法包含使該材料與根據本發明 129343-3.doc -492- 200843738 之化口物接觸的步驟。該等材料包括但不限於手術器械及 :卜衣（例如衣服、手套、圍裙、長袍、口罩、眼鏡、鞋權等），實驗儀器及外衣（例如衣服、手套、圍裙、長袍、口罩、眼鏡、鞋襪等）；血液收集裝置及材料；及侵入性設備，諸如分流器及血管内支架。在另一實施例中，本發明之化合物可用作實驗室工具以有助於分離病毒編碼的絲胺酸蛋白酶。該方法包含提供連接於固體支撐物之本發明之化合物的步驟；使該固體支樓物與含有病毒絲胺酸蛋白酶之樣本在使得該蛋白酶結合於該固體支撐物之條件下接觸；及自該固體支撐物溶離該絲胺酸蛋白酶。在-實施例中，藉由該方法所分離之病毒絲胺酸蛋白酶為HCVNS3-NS4A蛋白酶。本文件中所引用之全部參考文獻均以引用的方式併入本文中。 IV·方法及實例為更全面瞭解本文中所述之本發明，提供以下方法及實例。應瞭解，該等方法及實例僅用於說明目的且不應理解為以任何方式限制本發明。 A·製備式I化合物之中間物以下闡明用於製備可用於合成式〗化合物之中間物的各種方法。

HO OH 129343-3.doc -493 - 200843738 製備3-(苄氧基羰基胺基）-4·環丁基_2_經基丁酸將根據WO 04/U3294中所述之方法所製備之氰醇（ι 3·65 mmol)於濃HC1(12 mL)中之溶液加熱至回流歷時18小時。真空中濃縮反應物以得到作為Hc丨鹽之所需胺基酸 (1.7 g)，其無需進一步純化便可用於下一步驟。將以上贈鹽於THF中之溶液以DIPEA(2.68 gRZ_〇Su(5 16 §)處理。將反應混合物在室溫丁攪拌8小時。將反應混合物以甲苯及HC1稀釋（12 N，直至PH=1)。分離後，將有機層以 ( 飽和Ναίί(：Ο3(50 mL·，兩次）萃取。以HC1(6 N)使水層變成酸性直至pH=l為止，且以EtOAc(200 mL)萃取。將合併之有機層乾燥且真空濃縮以得到標題化合物（〇6 g)。（M+1) 308 〇

HO HN— 製備1-環丁基-3-經基-4-(甲基胺基）-4-侧氧基丁 -2-基胺基甲酸苄酯將 HOSu(140 mg，1.22 mmol)、EDC(234 mg，1.22 mmol) 添加至3-(苄氧基羰基胺基）-4-環丁基-2-羥基丁酸（250 mg， 0·81 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中。攪拌1小時後，將於THF中之甲胺（2 N，0.81 mL)添加至以上混合物中。將反應混合物攪拌1 8小時且接著真空濃縮。將殘餘物藉由

Gilson Prep純化以得到標題化合物（135 mg)。i-NNlR (CDC13): δ 7.54-7.28 (m，5H)，6.67 (NH，1H)，5.03 (dd， 129343-4.doc -494- 200843738 2H)，3·68 (m，1Η)，2·73 (m，3H)，2.26 (m，1H)，1.97-1.31 (m，9H)。（M+l) 321 〇

1 M5 .

HO HN-<J 製備1-環丁基-4-(環丙基胺基）-3-羥基-4-側氧基丁-2_基胺基甲酸苄酯將 HOSu(337 mg，2.93 mmol)、EDC(562 mg，2.93 mmol) 添加至3-(卞氧基幾基胺基）-4_環丁基-2-經基丁酸（600 mg， 1.95 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中。攪拌1小時後，將環丙胺（223 mg，3.9 mmol)添加至以上混合物中。將產物以 EtOAc萃取。接著將合併之有機層以HC1(1 N)、水、 NaHC〇3及鹽水洗滌，且接著真空濃縮以得到環丁基-4_ (環丙基胺基）-3-羥基_4_側氧基丁 -2-基胺基甲酸节_ (53〇 mg) 〇 (M+1) 347 〇

製備3-胺基-4-環丁基-N-環丙基-2·羥基丁醯胺將 Pd(OH)2/C(106 mg)添加至 CBz 醯胺（530 mg，1.53 mmol)於MeOH(30 mL)中之溶液中。將混合物在h2(i atm) 下擾拌1 8小時。過濾後，真空中濃縮濾液以得到標題化合物（300 mg)。^-NMR (CDC13): δ 3·29 (m，1H)，2.74 (m， 1H)，2.37-1.66 (m，9H)，1.40 (m，1H)，0·78 (m，2H)，〇·51 129343-4.doc -495 - 200843738 (m，2H) 〇 (M+l) 213。藉由使用適當的胺，以與製備3-胺基-4_環丁基_N_環丙基-2-羥基丁醯胺類似之方式製備以下化合物：

製備3_胺基環丙基-2-經基庚_6_快酿胺

如N· Kobayashi，等人於US 2003/153788(其全部内容以引用方式併入本文中）中所述，製備3-胺基-N-環丙基-2-經基庚-6-炔醯胺。1H-NMR (500 MHz，DMSO-d6): 8.18 (s) 6·34 (s)，4·22 (s)，3·45 (s)，3.17 (s)，2·84 (s)，2·69 (d，J=3.2 Hz)，2·30 (m)，2.24 (m)，1.70 (m)，1.59 (m)，〇·62 (d，J=5,〇

Hz)，0.53 (s) ppm; FIA m/z 197.01 ES+。製備經Cbz-保護之（3S)-3-胺基-4-環丙基-2·經基-N-甲基丁醯胺

129343-4.doc -496 - 200843738

步驟1 :製備（2S)_1_氱基-3-環丙基-1-羥基丙-2-基胺基甲酸苄酯

Cbz 厂 HN—(

/-CN

HO 在 10°C 將 Na2S2〇4(6.13 g，35.2 mmol)添加至酸（7.9 g，32 mmol)於MeOH(50 mL)中之溶液中，且將所得混合物溫熱至室溫且攪拌2小時，接著冷卻至l〇°C。將KCN於水（50 mL)中之溶液添加至該反應混合物中。在室溫下授掉1 $小時後，將混合物以TBME(100 mL，兩次）萃取。將合併之有機層以水及鹽水洗滌，乾燥之且真空濃縮以得到標題化合物（8 g)。（M+1) 275。步驟2 :製備（3S)-3_(节氧基羰基胺基）_4_環丙基_2_羥基丁酸甲酯 HN Cbz

在-2(TC將乾燥HC1氣流鼓泡通過氰醇〇 g，3別_〇ι)於

Me〇H(15 mL)中之溶液達3〇分鐘。將所得混合物在室瓜下搜拌2小時。將反應混合物以氮氣沖洗騎鐘且接著二之。以冰水在（TC將殘餘物驟冷且接著在室溫下授掉= 129343-4.doc -497- 200843738 時。將產物以EtOAc萃取。將合併之有機層以NaHC〇3、水、鹽水洗務，且真空濃縮以得到標題化合物⑺乃^)。々— NMR (CDC13) δ: 7.31-7.30 (m，5H)，5.09 (d，2H)，4.44-4.14 (m，2H)，3.78 (d，3H)，1,58-1.42 (m，2H)，0.70 (m，iH)， 0.47 (t，2H)，0.11-0.01 (m，2H)。（M+l) 308。步琢3 :製備（3S)-3_(苄氧基羰基胺基環丙基-2_羥基

將LiOH(l Ν; 1·37 mL)添加至步驟2之甲酯（400 mg; 1.3 mmol)於THF(8 mL)與水（6·63 mL)中之溶液中。將反應混合物攪拌30分鐘且接著以ι·〇 n HC1酸化至PH=3〜4。將混合物以EtOAc(20 mL，兩次）萃取之。將合併之有機層以水、鹽水洗滌，且接著真空濃縮以得到標題化合物（370 mg) 〇 (M+1) 294。步驟4 :製備（2S)_1-環丙基-3-羥基-4-(甲基胺基）-4-側氧基丁-2-基胺基甲酸苄酯 HN Cbz

將 HOSu(105 mg，0.92 mmol)、EDC(175 mg，0.92 mmol) 添加至（3S)-3-(苄氧基羰基胺基）-4-環丙基-2-羥基丁酸（180 mg，0.26 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中。攪拌30分鐘 129343-4.doc -498- 200843738 後，將於THF(2 Ν，0·92 mL)中之甲胺添加至以上混合物中。將反應混合物攪拌18小時且接著真空濃縮之。將殘餘物藉由Gilson Prep純化以得到標題化合物^❻^^)。！^ NMR (CDC13): δ 7.53-7.26 (m，5H)，6.83 (NH，1H)，5.25 (NH，1H)，5·05 (m，2H)，4.25-3.89 (m，3H)，2·70 (m，3H)， 1·4 (m，1H)，0.86 (m，1H)，0·61 (m，1H)，〇 38 (m，2h)，〇 (m，2H)。（M+l) 307。藉由使用適當的胺、繼而進行氫化，以類似方式製備以下化合物。 h2n

A OH NH2 h2n 及

OH

A 入以Perni，R.等人於W0 G1/74768(其全文以引用方式併本文中）中所述之方法製備以下化合物。汗 h2n

OH NH2 h2n

OH h2n

OH M 力 h2n

OH ，及基丁酸製備（s)_2_(環戊基氧基羰基胺基）3,3_ +

H2N C〇2H a

〇〇' 〇人o，N

丙酉同：.NaHC〇q 80% 、 a

〇 H

ΟΗ 在5 L RB燒瓶中，將第三丁基甘胺酸（74 g，0·56 1·02 eq)溶於飽和碳酸氫鈉（ιι μ】）中。將環戊基2 側 129343-4.doc -499- 200843738 氧基口叫咬-!-基碳酸醋⑽g，0.55nu)1，！呦溶於丙明 (5.5 ν〇υ，且在室溫下將該溶液經由加料漏斗緩慢添加至甘胺酸溶液中。在室溫下將反應混合物攪拌直至完全反應為止(約4小時）。在減壓下將丙酮移除’且將剩餘水溶液以己烷中之30%乙酸乙酯（三次，每次55 ν〇1)萃取。棄去有機層。將水層以2 Ν腦調冑至阳為2且接著以乙酸乙酉旨 (三次’ 5.5 V〇1)萃取。將合併之有機層乾燥㈣叫、過濾，且在減壓下移除溶劑，以產生緩慢結晶之透明油。將粗產物自己烷/乙酸乙酯中結晶，產生白色固體狀(環戊基氧基幾基胺基）-3,3-二甲基丁酸（82 g)。將母液洗提且獲传弟二批晶體（組合產量1 〇 5 · 5 4 g )。製備續酿基化合物

SI t*acHα^α2

以上所示之化合物si、S2、S3及S4係根據WO 2005/095403及PCT/US 2005/010494(其全文以引用方式併入本文）中所述程序加以製備。具體而言，在〇它下，將卜

BuOH(ll mL，1 eq)添加至乳績醯基異氰酸醋（1〇 mL，115 mmol)於CH2C12(200 mL)中之溶液中。將混合物攪拌6〇分鐘，接著在0°c下，經由套管添加至環丙胺（6·6 g)於 CH2C12(200 mL)與三乙胺（30 mL)中之溶液中，同時經由加料漏斗添加三乙胺（50 mL)於CH2Ch(100 mL)中之溶液。使 129343-4.doc -500- 200843738 内部溫度維持在8°C以下。添加完成後在室溫下攪拌4小時。接著將反應物以CH2C12稀釋且轉移至分離漏斗，以1 N HC1(兩次，每次400 mL)、鹽水（300 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)，過濾且濃縮。將產物自乙酸乙酯/己烷中再結晶以產生16.8 g S3(71.3 mmol)。以於CH2C12中之三氟乙酸將化合物S3去保護以得到化合物S4。 f cr if

nh3 THF

H2N

將氨氣經由氣體散布管鼓泡進入THF(40 mL)，冷卻至〇°C歷時5分鐘。在0°C下，將環丙磺醯氯（1公克，7.1 mmol)添加至該溶液。將反應物在室溫下攪拌隔夜，接著經由矽膠塞過濾，繼而以EtOAc溶離，產生750 mg環丙磺醯胺（6.19mmol)。1HNMR(500 MHz，甲醇-d4)··4·79(s， 2H)，2.59-2.54 (m，1H)，1.06-0.96 (m，4H)。 ο ο

ho2c—c〇2CH3 ohc-^co2ch3 -V^〇Mee ^-c〇2CH3 c〇2H ό 一 0 ό — 0 ΧΧ5 ΧΧ6 ΧΧ7 ΧΧ8 在〇°C下，將硼烷-二曱硫（3.85 mL，7.8 mmol，2.0 Μ於曱苯中）逐滴添加至化合物ΧΧ5(1·37 g，6·41 mmol)於THF(30 mL)中之溶液中。伴以逐漸溫熱至室溫將反應混合物攪拌1 h，以H2O(20 mL)中止，且以乙酸乙酯（三次，每次30 mL) 萃取。將合併之有機物乾燥且在減壓下濃縮以產生1.3 g無 129343-4.doc -501 - 200843738 色油’其無需進一步純化便可使用。在8，在惰性氣氛下將 DMSO(2,73 mL，38.5 mmol)於 CH2C12(8 mL)中之溶液逐滴添加至於CH2C12(15 mL，無水）中之草醯氣（2·24 mL，25.6 mmol)中。攪拌10 min後，逐滴添加醇（1·3 g， 6.41 mmol)於CH2C12(6 mL)中之溶液。另外10 min後，添加於CH2C12中之三乙胺（7·15 mL，51·3 mmol)且伴以逐漸溫熱至〇°C將反應物再攪拌30 min。將反應混合物相繼以1 μ HC1(20 mL)、鹽水（20 mL)洗滌。將有機層經MgS〇4乾燥且在減壓下濃縮。將所得油經由矽膠層析法純化得到748 mg 經 XX6(經 2個步驟）。^-NIVIR (500 MHz，CDC13): 9·75 (s， 1Η)，3.67 (s，3Η)，2.91-2.85 (m，1Η)，2.78-2.74 (m，1Η)， 2.56-2.52 (m，1H)，1.74-1.71 (m，2H)，1.66-1.58 (m，4H)， 1 .27-0.95 (m，5H)。將1-重氮基-2-側氧基丙基膦酸二甲酯（676 mg，3.5 mmol，Synlett 1996，第 521 頁）添加至化合物 χχ6(5 81 mg， 2·9 mmol)與 K2C03(811 mg，5·9 mmol)於 MeOH(15 mL)中之溶液中。將反應物在室溫下攪拌i h，以Et2O(20 mL)稀釋，且以飽和NaHC03溶液（10 mL，水溶液）洗滌。將有機層經MgS〇4乾燥且在減壓下濃縮以得到6〇〇 mg炔XX7，其無需進一步純化便可使用。iH-NMR (500 MHz，CDC13): 3·69 (s，3H)，2.48-2.37 (m)，1.95 (s，Η)，1·73-1·60 (m)， 1 .30-0.94 (m) 〇將LiOH單水合物（850 mg，20.3 mmol)添加至化合物 XX7(600 mg，2.9 mmol)於 THF/H2〇/MeOH(25 mL, 2丄2)溶 129343-4.doc -502- 200843738 液中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，使用1 N HC1(25 mL)酸化，且以EtOAc(三次，每次15 mL)萃取。將合併之有機物經MgS04乾燥且濃縮以產生533 mg羧酸 XX8 ’其無需進一步純化便可使用。

ΧΧ5 ΧΧ9 ΧΧ10

將 EDC(107 mg，0.6 mmol)、HOBt(76 mg，0.6 mmol)及三乙胺（195 μΐ，1·4 mmol)添加至化合物 XX5(100 mg，0.5 mmol)於CH2C12(2.5 mL)中之溶液中。將甲胺鹽酸鹽（38 tng，0.6 mmol)添加至經活化之酸溶液中且將反應物在室溫下攪拌12 h。將反應混合物以H20(2 mL)、1 N HC1(2 mL) 及飽和NaHC03溶液（2 mL)洗滌。將有機層經MgS04乾燥且濃縮以得到100 mg醯胺XX9，其無需進一步純化便可使用。1H-NMR (500 MHz，CDC13): 3.61 (s，3H)，2,75-2.70 (m，4H)，2·48-2·42 (m，1H)，2·28-2·24 (m，1H)，1.66-1.48 (m，6H)，1·35-0·90 (m，5H) 〇將LiOH單水合物（124 mg，3 mmol)添加至化合物 XX9(100 mg，0.5 mmol)於 THF/H2〇/MeOH(3 mL，2:1:2)溶液中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌2 h，使用1 N HC1(4 mL)酸化，且以EtOAc(3x5 mL)萃取。將合併之有機物經MgS04乾燥且濃縮以產生87 mg羧酸XX10，其無需進一步純化便可使用。1H-NMR (500 MHz，CDC13) 11.32 (s， 129343-4.doc - 503 - 200843738 H)? 2.75-2.64 (m, H)? 2.52-2.46 (m? H)? 2.37-2.33 (m5 H), 2.25(td，J=8.7，2.9Hz，H)，1.97(s，H)，l.79(s，H)，1.74-1·62 (m，H)，1.59-1.49 (m，H)，1·23·1·ΐ2 (m，h)，1.08-0.81 (m，H) 〇

XX5 XXII χχΐ2 中間物XX12係根據上述製備中間物xxi 〇之程序製備，除使用σ比略σ定而非甲胺鹽酸鹽作為試劑外。1H-NMR (500 MHz，CDC13) 11·47 (s，1Η)，3.45-3.32 (m，4Η)，2·76-2·72 (m，1H)，2.64-2.59 (m，1H)，2.37-2.33 (m，1H)，1.92-1.76 (m，4H)，1.71-1.57 (m)，1.22-0.84 (m) 〇 H〇2C^YC〇2CH3 - b「/\^c〇2Ch3 —^人 ^co2H 0 0 一 ό 一。 XX5 XX13 ΧΧ14 XX15 在回流溫度下，將溴（264 μΐ，5.1 mmol)於CC14(5 mL)中之溶液經30 min逐滴添加至化合物XX5(i g，4.7 mm〇i)與 HgO 黃（1·〇ι g，4.7 mmol)於 CC14(23 mL)中之溶液中。將反應物在回流溫度下攪拌1 h，冷卻至室溫，以CH2C12(20 mL)稀釋，以！ N HC1(10 mL)、H2O(10 mL)及鹽水（10 mL) 洗務。將有機層經MgS04乾燥且在減壓下濃縮以產生1.3 g 無色油狀之化合物XX13，其無需進一步純化便可使用。 129343-4.doc - 504- 200843738 i-NMR (500 MHz，CDC13): 3.67 (s，3H)，3·52-3·44 (m， 2H)，2.63-2.58 (m，1H)，1.70-1.64 (m，3H)，1.60-1.54 (m， 3H)，1.24-0,92 (m，5H)。將硼氫化鈉（177 mg，4,7 mmol)添加至化合物XX13(578 mg，2.3 mmol)於DMSO(12 mL)中之溶液中。將反應混合物在90°C攪拌1 h，以112〇(10 mL)稀釋，且以己烷（3x15 mL) 萃取。將合併之有機物經MgS04乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠層析法純化，以EtOAc/石油醚溶離，得到204 mg化合物 XX14。i-NMR (500 MHz，CDC13)·· 3.59 (s，3H)，2.18 (m，1H)，1.69-1.43 (m，6H)，1.21-0,83 (m，8H)。中間物XX15係根據製備中間物XX10步驟b之程序製備，除使用基質XX14而非XX9之外。

將N，N_二甲基乙醯胺（7.5 mL)添加至（S)-2-胺基- 二曱 XX16 基丁酸（787 mg，6.0 mmol)、溴苯（632 μΐ，6.0 mmol)、 K2C〇3(1.24 g，9·0 mmol)及 Cul(114 mg，0·6 mmol)之溶液中。將内含物於密封壓力容器中在9〇°C下攪拌16 h。將反應混合物以H2〇(l 5 mL)稀釋，冷卻至〇°C，且使用1 n HC1 酸化至pH=5。將混合物以EtOAc(3x20 mL)萃取，且將合併之有機物以鹽水（1x15 mL)洗滌，經MgSCU乾燥，且在減壓下濃縮。將所得殘餘物經由矽膠層析法純化以產生1 5〇 129343-4.doc -505 - 200843738 mg化合物 XX16。1H-NMR (500 MHz，CDC13): 7·1 卜7.09 (m，2H)，6.69 (t，J=7.3 Hz，1H)，6·60- 6.59 (m，2H)，3·69 (s， 1H)，1.02 (s，9H)。

中間物XX17係根據製備XX16之程序製備，除使用1-溴-3-甲氧基苯而非溴苯作為試劑外。1H-NMR (500 MHz， CDC13): 6.98 (t，J = 8.1 Hz，1H)，6.24-6.18 (m，2H)，6.14 (S， 1H)，3.69 (s，1H)，3.66 (s，3H)，1.00 (s，9H)。

XX18 XX19 ho2c^^c〇2CH3 將 EDC(264 mg，1.4 mmol)、HOBt(186 mg，1.4 mmol)及三乙胺（481 pL，3.5 mmol)添加至（S)-3-(曱氧羰基）-4-甲基戊酸（200 mg，1.2 mmol)於CH2C12(6 mL)中之溶液中。將環己胺（158 μΐ，1.4 mmol)添加至經活化之酸溶液中且將反應物攪拌4小時。將反應混合物以H20(3 mL)、1 N HC1(3 mL)及飽和NaHC03溶液（3 mL)洗滌。將有機層經MgS04乾燥且在減壓下濃縮以得到290 mg化合物XX18，其無需進一步純化便可使用。iH-NMR (500 MHz，CDC13): 5.78 (d， J = 7.5Hz，lH)，3,69-3.61(m，4H)，2,73-2.69 (m，lH)，2.45-2.40 (m，1H)，2.24-2.20 (m，1H)，1.85 (m，1H)，1.82-1.76 129343-4.doc -506- 200843738 (m，2H)，1.63-1.60 (m，2H)，1.54-1.50 (m，1H)，1.31-1.22 (m，2H)，1·12-1·00 (m，3H)，0.90-0.85 (m，6H)。中間物XX19係根據上述製備化合物XX10之程序製備，除使用基質XX18而非化合物XX9作為試劑外。ES (+) MS: m/e 256 (M+H)+。

c〇2h XX20

中間物\乂20係根據上述製備化合物\乂18或义又19之程序製備，除使用異丙胺而非環己胺作為試劑外。ES (+) MS: m/e 216 (M+H)+。

Y^c〇2h 〇入 XX21 中間物XX21係根據上述製備XXI 8或XX19之程序製備，除使用苄胺而非環己胺作為試劑外。ES ( + ) MS: m/e 264 (M+H)+。

Ηα · h2nch2c〇2ch3

n^co2ch3 在RT下將甘胺酸甲酯鹽酸鹽（50.0 g)懸浮於MTBE(300 mL)中。將苯甲醛（40.5 mL)及無水Na2S04(33.9 g)添加於其中。將懸浮液於冰水浴中冷卻20分鐘，接著經1 5分鐘逐滴添加三乙胺（80 mL)。5分鐘後，將反應物自冰水浴移除， 129343-4.doc -507- 200843738 且在RT下攪拌24小時。將反應物以200 mL冰水混合物中止，且將有機層分離。將水層以MTBE(200 mL)萃取。將有機層組合，以鹽水與飽和NaHC03(aq)之1:1混合物洗滌，乾燥（]^^804)，且濃縮以產生62.83公克黃色油狀斗苄基亞胺。1H-NMR(500 MHz，CDCl3):8.30(s，lH)，7·78- 7·77 (m，2H)，7.45-7.40 (m，3H)，4.42 (s，2H)，3.78 (s， 3H)。

在室溫下將第三丁醇鋰（15.13 g)懸浮於無水甲苯（200 mL)中。將甘胺酸甲酯之N-苄基亞胺（16.89 g)與1，4-二溴-2-丁烯（19.28 g)於甲苯（100 mL)中之溶液經40分鐘逐滴添加於其中。將紅色溶液攪拌100分鐘，接著以H20(200 mL) 中止。將内含物轉移至分離漏斗且以MTBE(200 mL)稀釋。將各層分離且將水層以MTBE萃取。將合併之有機層與1 N HCl(aq.)(500 mL)—起攪拌3小時。將各層分離且將有機層以H20(100 mL)萃取。將水層組合，添加NaCl(250 g)及 MTBE(700 mL)，且以 10 N NaOH(aq)將 pH調節至二 13。將有機層分離且將水層以MTBE(兩次，每次300 mL) 萃取。將有機層組合，乾燥（MgS04)，且濃縮至=400 mL 之體積。將二碳酸二-第三丁酯（25.0 g)添加至該溶液且將反應物攪拌3天。再添加額外之二碳酸二-第三丁酯（5.6 129343-4.doc - 508 - 200843738 g)，繼而將反應物於60°C浴中加熱1小時。以EtOAc/己烷 (1:9)作為溶離劑，將反應物藉由急驟矽膠柱層析法純化，產生 10,89 g外消旋 N-Boc-(lR，2S)/(lS，2R)-l-胺基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲酯。參見例如WO 00/09558及Beaulieu, P. L·等人，J· Org· Chem·，70(15)，5869-5879, 2005。W-NMR (500 MHz，CDC13): 5.78-5.71 (m，1H)，5.29-5.26 (m，1H)， 5.11 (dd，J=1.2，10.3 Hz，1H)，3.71 (s，3H)，2.14 (q，JU Hz，1H)，1·79 (s，1H)，1.53-1.45 (m，10H) 〇

將外消旋N-Boc_(1R，2S)/(1S，2R)-；U胺基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲酯（4·2 g)溶於丙酮（80 mL)且接著以水（160 mL)稀釋。以0.2 N NaOH(aq)將pH調節至7.8。將枯草桿菌蛋白酶 A(來自 Sigma，St. Louis，MO，USA之產品 P-5380)(4.5 g)添加至該溶液。藉由逐滴添加〇·1 N NaOH(aq·)使其pH在7·4 與8·7之間維持3天。當反應物之HPLC分析（來自Dakel

Chemical Industries，Tokyo之 Chiralpak AD，4.6 mm X 250 mm，0·5 mL / min，i〇-85% 2-丙醇/己烷經1〇分鐘，監視器 215.4 nm)指示僅存在（1R，2S)_對映異構體（（ir，2s)之滯留時間=6.2 min，（1S，2R)之滯留時間=5·9 min)時，以2 n

129343-4.doc -509- 200843738

NaHC03(aq)溶液（3x150 mL)、水（2x200 mL)洗滌且乾燥 (MgSCU)。將溶液過濾，濃縮，以CH2C12稀釋，乾燥 (MgS04)，過濾且濃縮以產生1,95 g仏8〇。-(111，28)-1_胺基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲酯。

在RT下’將N-Boc-(lR，2S)-l -胺基-2 -乙稀基環丙烧甲酸甲酯（125 mg，0.52 mmol)於 CH2C12/TFA(1:1，2 mL)中攪拌 90分鐘。將溶劑在真空下移除以產生（1R，2S)-1-胺基-2-乙烯基環丙烷甲酸甲酯三氟乙酸鹽。

Η 9

Bod.y^O XXI XX2

在至溫下將化合物ΧΧ1(2·34 g, 9.71 mmol)與於 THF/H20/ THF(3:1:0.5, 22 mL)中之Li〇H.H2O(0.45 g，10·7 mmol) —起攪拌隔夜。將溶劑蒸發且將剩餘固體溶於 CH2Cl2/EtOAc及 1 N HCl(aq)中。將水層以ch2C12萃取，且將合併之有機萃取物乾燥（MgSCU)、過濾且濃縮。在室溫下將此物質溶於CH2C12(10 mL)中且以三氟乙酸（10 mL)處理。於第70分鐘之HPLC分析展示無起始物質存在。將溶劑於真空中移除以產生黏性淺色油。將此物溶於另外的 -510- 129343-4.doc 200843738 CH2C12(30 mL)中，且在旋轉蒸發器上蒸發以產生褐色固體。將此固體溶於飽和NaHC03(aq)及丙酮（1:1，50 mL)且以Fmoc-Cl(2.65 g，10·2 mmol)處理。4小時後，將燒瓶内含物轉移至具有CH2C12之分離漏斗且以2 N HCl(aq)酸化。將水層以CH2C12萃取，將合併之有機層乾燥（MgS04)，過濾且濃縮，以產生1.86 g淺黃色固體狀XX2(5.3 mmol)。 (Μ+1)=350·1。

PS-Wang 榭脂 DIC, DMAP DMF, DCM

將PS-Wang樹脂（2.0 g，1.0 eq)於DMF(足以覆蓋）中溶脹。將（1R，2S)-1-(((9H-第-9-基）甲氧基）羰基）胺基）-2-乙烯基環丙烷羧酸（XX3)(922 mg，1.1 eq)於DCM中攪拌。將二異丙基碳化二醯亞胺（409 uL，1.1 eq)添加至DCM溶液中且在4°C攪拌2小時，接著添加至樹脂及DMF中。將於DMF中之二曱基胺基吼°定（29 mg，0.1 eq)添加至樹脂溶液中且搖動5小時。排乾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌，以產生化合物XX4。

XI X2 製備2-(雙環并[4·1·0]庚-1_基）乙酸X2 : 將市售化合物 Xl(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee， 129343-4.doc -511 - 200843738

Wisconsin，USA)根據 E. J. Kantorowski 等人於 j· 〇rg Chem·，1999，64，570-580中所述之方法轉化為又】。1!!-NMR (CDC13, 500 MHz): 9.2 (br s，1H)，2.23 (m，2H)，1·92 (m，1H)，1.76 (m，2H)，1.58 (m，1H)，1.34 (m，1H)，1.18 (m， 4H)，0.85 (m，1H)，0.52 (dd，1H)，0.31 (t，1H) ppm 〇

X3 X4 X5 製備2-(l·羥基環己基）乙酸X5 ·· 大體使用 Bull· Chem. Soc· Jpn·，1971，44，1090 中所述之程序製備化合物X4。具體而言，在80°C將溴乙酸乙酯（8.3 mL)(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，US A)於曱本中之溶液經30 min逐滴添加至環己酿I χ3(4·9 g)與鋅粉 (4.9 g)於甲苯中之經充分攪拌之混合物中。謹慎監視添加操作且將溫度保持在80°C。添加完成後，將混合物回流9〇 min. ’冷卻，以1 n HC1水溶液分解，且以价2〇萃取。將有機物以水、NaHC〇3水溶液洗滌，乾燥（MgS〇4)且真空濃縮以產生Χ4(5·9 g)。W-NMR (CDC13, 500MHz) 4.16 (t，2H) 3.0 (br s，1H)，2.46 (s，2H)，1·40]·69 (m，l〇H)，1.27 (t 3H) ppm; FIA m/z 187.1 ES+。將1 N NaOH水溶液添加至χ4(51〇 mg)於Me〇H*之溶液中。將反應混合物在6(TC下攪拌！ h，且接著真空濃縮。將殘餘物以水稀釋，以玢2〇洗滌且將水層al N檸檬酸水溶液酸化且以EtOAc萃取。將有機物乾燥（MgS〇4)且真空、、曲 129343-4.doc -512- 200843738 縮，再結晶後產生化合物X5(220 mg)。i-NMR (CDC13, 500MHz) 3.63 (s，1H)，2.45 (s，2H)，1.22-1.64 (m，10H) ppm; FIA m/z 157.2 ES、

X6 X7 X8 製備2-(1-甲基環己基）乙酸（X8) 根據 N. Asao 等人於 Tetrahedron Lett·，2003，44，4265 中所述之方法將市售化合物X6(Aldrich Chemical Co·， Milwaukee，Wisconsin, USA)轉化為化合物X7。1H-NMR (CDC13，500 MHz): 4.12 (q，2H)，2.22 (s，2H)，1.30-1.48 (m，10H)，1.25 (t，3H)，1.01 (s，3H) ppm。將1 N NaOH水溶液添加至化合物X7於EtOH中之溶液中。將反應混合物在50°C下攪拌3小時，且接著真空濃縮。將殘餘物以水稀釋，以Et20洗滌且將水層以1 N擰檬酸水溶液酸化且以CH2C12萃取。將有機物乾燥（MgS04)且真空濃縮以產生化合物X8。b-NMR (CDC13，500MHz): 11·7 (s，1H)，2.26 (s，2H)，1.32-1.49 (m，10H)，1.05 (s，3H) ppm o

X9 X10 Xll X12 製備2-(4_甲基四氫-2H-哌喃-4-基）乙酸（XI2) 將（乙氧羰基亞甲基）-三苯基磷烷（12.0 g，Aldrich)添加至 129343-4.doc -513 - 200843738 二氯-2H-派喃-4(3H)-嗣（Χ9)(3·13 g，獲自 Aldrich)於甲笨中之溶液中。將溶液在11(rc下攪拌3天。將所得黑色溶液真空濃縮且將殘餘物直接藉由矽膠管柱層析純化，以產生透明液體狀化合物χΐ〇(4·54 g)。h-NMR (CDC13, 500MHz): 5.66 (s5 1H)，4.16 (q，2H)，3.98 (s，4H)，3.00 (t， 2H)，2·38 (m，2H)，1.77 (m，4H)，1.27 (t，3H) ppm。化合物Xll及X12以與對於化合物及χ8所述類似之方式獲得。1H-NMR (CDC13，500 ΜΗζ): 3·64-3·73 (m，4Η)， 2·35 (s，2H)，1·65 (ddd，2H)，1.50 (ddt，2H)，1·17 (s，3H) ppm 〇

X13 X14 X15 X16 製備2-(順-2,6-二甲基四氫-：211-旅喃_4-基）乙酸（又16) 由市售2,6-二甲基-g-二氧二烯陸圜（Aidrich chemical

Co·，Milwaukee，Wisconsin，USA)製備中間物X13。將g-二氧二烯陸圜之溶液溶於EtOH且以10% Pd/C經2 h氫化（2 atm，HO。隨後將觸媒濾出且將溶液真空濃縮以產生粗 X13，將其藉由柱層析純化以產生純化合物χ13。iH-nMR (CDC139 500 MHz): 3.72 (m? 2H)? 2.35 (m5 2H)? 2.21 (dd5 2H)，1·32 (d，6H) ppm 〇接著以與對於化合物X10所述類似之方式由化合物X13 獲得化合物 X14。W-NMR (CDC13, 500 MHz): 5.65 (s，1H)， 4.15 (q，2H)，3.80 (dt，1H)，3·49 (m，2H)，2·17 (dt，1H)， 129343-4.doc -514- 200843738

2·07 (dd，1H)，1.79 (dt，1H)，1.28 (m，9H) ppm。LC-MS m/z 199.126 ES+。接著將化合物X14於EtOAc中之溶液以i〇%濕pd/c經1小時氫化（1 atm· HO。隨後將觸媒濾出且將溶液真空濃縮以產生粗化合物X1 5，其無需進一步純化便可用於下一步驟。接著，以與對於化合物X8所述類似之方式，由化合物 X15製備化合物X16。W-NMR (CDC13, 500 MHz)主要非對映異構體：3·50 (m，2H)，2.27 (d，2H)，2·07 (m，1H)，L71 (m, 2H), 1.19 (d，6H)，0·92 (m，2H) ppm;主要非對映異構體:3.64 (m，2H)，2·56 (d，2H)，2·47 (m，1H)，1·49 (m，2H) 1.15 (d，6H)，0.86 (m，2H) ppm。

X17

X20 X18 X19 製備2_(1，4_二氧雜螺[4·5】癸_8_基）乙酸χ2〇 : 根據上述製備化合物X16之程序，由化合物χη(獲 Aldrich)製備化合物χ2〇。化合物 X18: iH-NMR (CDC13，500 ΜΗζ): 5·66 (s，1H) 4·15 (q，2Η)，3·98 (s，4Η)，3·00 (m，2Η)，2·38 (m，2Η)，l77 (m，4H)，1·27 (t，3H) ppm。化合物 X19 : W-NMR (CDC13，500 MHz)·· 4·12 (q，2h) 3·93 (s，4H)，（d，2H)，1.83 (m，1H)，1.72 (m，4H)，1·56 ⑷ 2H)，1.33 (m，2H)，1.30 (m，3H) ppm。化合物X20 : i-NMR (CDC13，500 MHz): 3·93 (s，4扣 129343-4.doc -515- 200843738 2.28 (d? 2H)9 1.73-1.86 (m? 4H)? 1.57 (dt, 2H)5 1.35 (m5 2H) ppm 〇

X22 X23 X24 X；製備2_(反式_2,6_二甲基四氫_2H_哌喃_4-基)乙酸25 : f

分別根據 S· Danishefsky 等人於；〇rg chem 1982,叼， 1597-1598 及 D· S· Reddy 等人於 j· 0rg· chem 2〇〇4，69, 1716-1719中所述之方法製備化合物χ21及χ22。根據上述製備化合物Χ16之方法，由化合物χ22製備化合物Χ25。化合物 Χ23 : h-NMR (CDC13，500 ΜΗζ): 5·72 (s，1Η)， 4.16 (q，2Η)，4·〇8 (q，2Η)，3.06 (dd，1Η)，2.75 (dd，1Η)， 2·39 (dd，1H)，2.05 (dd，1H)，1.28 (t，3H)，1·19 (m，6H) ppm o X25:]H-NMR (CDC13? 500 MHz) 4.24 (m? 1H), 3.78 (m, 1H)，2·25 (m，3H)，1.71 (m，1H)，1.53 (m，1H)，1.46 (m， 1H)，1.29 (d，3H)，1.13 (d，3H)，0·90 (m，1H) ppm。

X20 X26 X27 製備2_(4_羥基·4_甲基環己基）乙酸X27 : 以於二噁烷中之4 N HC1處理化合物X20於二噁烷中之溶液。將反應溶液在室溫下攪拌4小時且真空濃縮以得到粗 129343-4.doc -516- 200843738 化合物X26，其無需進一步純化便可用於下一步驟。將 MeMgBr(3 N於THF中）緩慢添加至化合物χ26於THF中之經攪拌之溶液中。將所得混合物在40°C下攪拌3小時，以）N 摔樣酸水溶液中止’且以EtOAc稀釋。分離相且將有機物乾燥（MgSCU)，真空濃縮且藉由矽膠層析法純化以得到作為兩種非對映異構體之混合物的化合物X27 :異構體1· ]H.NMR (CDC13? 500 MHz): 4.50 (br s)5 2.27 (m, 2H)9 1.75 (m，1H)，i·65 (m，4H)，L39 (m，4H)，L22 (s，3H) ppm ;異構體 2: ^-NMR (CDC13, 500 MHz): 2·12 (m，2H)，h69 (m， 3H)，1·56 (m，2H)，1·39 (m，2H)，1.12 (s，3H)，i 〇5 (m，2H) ppm 〇

製備2-(2,2-二甲基四氫-2H_哌喃_4_基）乙酸將 LiOH(l N; 10.75 mL)添加至甲酯（500 mg; 2.69 mmol) 於 THF(21.5 mL)、MeOH(21.5 mL)及水（10.75 mL)中之溶

液中。將反應混合物攪拌3小時。以HC1(1 N，pH=5)將反應物酸化。將產物以EtOAc(兩次，每次20 mL)萃取。接著將合併之有機層以水、鹽水洗務且真空濃縮以得到420 mg 之2-(2,2-二甲基四氫_2Η·旅喃-4-基）乙酸。^-NMR (CDC13): δ 3.76-3.67 (m，2H)，2.56-2.19 (m，3H)，1.63 (m， 2H)，1.26-1.10 (m，8H)。（M+l) 173 〇 129343-4.doc -517- 200843738 X30

X31

X33 X32 將DMSO(400 mL)添加至化合物 X30(64 g，237 mmol)與 EDC(226 g，1.19 mol)於 EtOAc(1.5 L)中之溶液中，且將所得懸浮液冷卻至〇°C。將二氣乙酸於EtOAc(l:l v/' 130 mL)中之溶液添加至該混合物中，將内部反應溫度保持在 25°C以下。將反應物溫熱至室溫，攪拌1 5分鐘，冷卻至 0°C，且以1 N HC1(1 L)中止。將有機層分離，以H20(2x 500 mL)洗滌，經MgS04乾燥，且在減壓下濃縮。以 EtOAc/己烷溶離，將所得油經由矽石塞過濾，得到48 g白色固體狀化合物X31。相繼將 X31(48 g，179 mmol)於 THF(650 mL)中之溶液、乙酸（30 mL)添加至樹脂X32(根據WO 00/23421中所述程序所製備）（100 g，0.88 mmol/g)。將混合物搖動16小時，且將樹脂過濾，以THF(4次，每次400 mL)及CH2C12(4次，每次 400 mL)洗滌且真空乾燥。將濾液與洗液組合且濃縮，且重複以上程序以得到約0.4 mmol/g裝載量之樹脂X33。 129343-4.doc -518- 200843738 製備醛化合物根據 D.L· Comins 等人於 Hetere〇cycles，1987，26(8)，第 2159_2164中所述之方法製備5_氣菸鹼醛。諸如2-氟-5-氯笨甲醛、2_甲氧基_3_甲基苯甲醛、2_甲氧基菸鹼醛、2,3-二氫苯并呋喃_7_碳醛的一些其他醛可根據以下程序由相應酸製備：

1) MeOCOCI TEA, THF 2) NaBH4 製備2,3-二氫苯并呋喃-7-礙醛將2,3-二氫苯并呋喃甲酸（82〇 mg，5㈤则丨）溶於 THF(10 mL)。將丁ΕΑ(〇·7 mL，5 匪〇1)及氣甲酸甲酯（〇 43 mL，5 mmol)添加至該溶液。將該溶液攪拌〇5小時。將白色沈澱物藉由過濾移除，將濾液添加至NaBH^437 12.5 mmol)於H2〇(5 mL)中之溶液中。將所得溶液攪拌隔夜。將反應混合物以2 M HC1水溶液中和且接著以Et〇Ac 萃取。將有機層以鹽水洗滌，經無水]^化8〇4乾燥且真空濃縮。將粗醇溶於DCM。將PCC(1.83 g，7.5 mmol)添加至該溶液中。將混合物在室溫下攪拌2小時且以二乙醚稀釋，接著將醚層傾析。將合併之有機層經由一層Celit,過濾。濃縮濾液以得到粗產物。以10% Et〇Ac/己烷自柱純化粗產物，以得到450 mg淺黃色固體狀2,3_二氫苯并呋喃碳終。HPLC 4.3 min。 129343-4.doc -519- 200843738

Cl

OH

Mn02, CHCI3

Cl

製備4-氣吡啶甲醛將 Μη02(7·3 g，84 mmol)與（4-氯·吡啶-2-基）曱醇（1 g，7 mmol)於CHCI3中之懸浮液加熱至回流溫度歷時9〇分鐘。將混合物經由一層Celite®過濾，且真空濃縮以得到52〇 mg 白色固體狀4-氯吡啶甲醛。HPLC 1·8分鐘且MS 142作為 M= 1 峰。

製備3_氣-5-甲氧基苯曱醛將3-氯-5-甲氧基苄醇（5·〇 g，28·9 mm〇1)與氯鉻酸吡錠 (20%於氧化鋁上，40 g，37 8 mmol)之混合物攪拌125小時。接著添加二乙醚（2〇〇 ml)，繼而過濾沈澱物。將濾液在減壓下濃縮，且使用40%二氯甲烷、6〇%石油醚作為溶離劑，將所得殘餘物經由矽膠層析法純化，以得到3 8 g之 3-氯-5-曱氧基苯甲醛。ih_NMr (CDC13): 3.84 (s 7.13 (s，1H)，7.28 (s，1H)，7.41 (s，1H)，9·89 (s，1H)。

製備1-(溴甲基）-3-氣-5-甲基苯在回流溫度下，相繼將溴丁二醯亞胺（丨4 g 7 5 129343-4.doc -520- 200843738 mmol)、過氧化苯甲醯（1·6 g，6 8

g’ 6·8 mmol)添加至間氣二曱苯析法純化，以得到0.89 g之1_(溴甲； NMR (CDC13)： 2.31 (s? 3H)? 4.37 (s5 氣化碳中之溶液中。將反應物攪拌慮出沈澱物，且將濾液在減壓下濃谷離Μ ’將所得殘餘物經由石夕膠層 (s，1Η)，7.20 (s，ιη)。 §之溴甲基）-3-氯-5_甲基苯。！η· ，Η)，4·37 (s，2Η)，7·〇9 (s，1Η)，7·12

製備3-氣甲基苯甲醛相、、k將2-硝基丙烧（〇 · 23 g，2.4 mmole)、3 -氯-5-曱基苄基溴（〇·5 g，2.3 mmol)添加至金屬鈉（52 mg，2·3 mm〇1)於乙醇中之溶液中。將反應物攪拌3小時且將所形成之沈澱物濾出。將滤液在減壓下濃縮，再溶於二乙醚且以1 N氫氧化鈉（兩次）、水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，過濾且將濾液在減壓下濃縮。使用10%二氣曱烷及90%石油醚，經由矽膠層析法純化所得殘餘物，以得到〇· 15 g之3·氣-5-甲基苯甲醛。】H-NMR (CDC13): 2·46 (s，3H)，7.43(s，1H)，7.56 (s， 1H) 7.68(s，1H)，9·92 (s，1H)。

129343-4.doc -521 - 200843738 在回流溫度下將於THF(40 mL)中之3-氯-5-氟-4-經基苯甲醛（1·0 公克，5,7 mmol)與於水（5 mL)中之 K〇H(534 mg， 9.5 mmol，1·7 eq)及碘乙烷（1 mL，2·2叫）一起加熱17小時。接著將反應物轉移至具有水之分離漏斗中且以二氯甲烧（二次’母次150 mL)萃取。將合併之有機層以% HC1 水溶液（40 mL)洗滌，乾燥（MgS〇4)，且濃縮為黏性橙色液體，以產生1.13 g之3_氯_4_乙氧基-5_氟苯甲醛。1h_nmr (500 MHz，CDC13): 9·84 (d，J=1.9 Hz，1H)，7·71 (t，J=1.6 Hz，1H)，7.53 (dd，J=1.9, 1〇·7 Hz，1H)，4.37-4.32 (m，2H)， 1·47，1·40 (m，3H)。

以類似於製備3_氣-4_乙氧基氟苯甲醛之方式製備乙

(t5 J=7 Hz? 6H) 〇 ΙΜΚ {όΌΌ MHz, CDC13): 9.89 7 Hz，1H)，2.34 (s，6H)，I.44

以類似於製備4 異丙氧基-3,5_二f 9.88 (s5 η 於製備4-乙氧基_3,5_二甲基苯甲醛之方式製備* -，_二甲基苯甲醛。1H-NMR (300 MHz，CDC13). 4.31 (q，J=6 Hz，1 Η)，2·32 ( 1H)，7·55 (s，2H)，4.31 (q，J=6 Hz，1 H)，2·32 (s， 129343-4.doc - 522- 200843738 6H)，1·32 (d，Hz，6H)。

以類似於製備4-乙氧基-3,5-二甲基苯甲醛之方式製備4_ (環丙基曱氧基）-3,5-二甲基苯曱醛。1H-NMR (300 MHz， CDC13)· 9·87 (s，iH)，7.55 (s，2H)，3.69 (d，J=7 Hz，2H)， 2.35 (s, 6H)5 1.35-1.23 (m, 1H), 0.67-.060 (m? 2H)? Ο.35-0·30 (m，2H) 〇製備（s)-i·(第三丁氧基羰基）側氧基v比咯啶甲酸

將（2S,4R)-1 -(弟二丁氧基幾基）_4_經基吼洛咬_2_曱酸 (1.0 eq.)於乙酸異丙酯（5 ν〇ι)中之溶液冷卻至〇。〇，且添加 ΤΕΜΡΟ(0·05 eq·)。接著經1小時緩慢添加漂白劑（12·5 %，1·2 eq·，2·6 vol)溶液，同時將溫度維持在〇_5。〇。將混合物攪拌且藉由HPLC監控其反應是否完成，接著添加1〇% ，且接著分離相。將 KHS04水溶液（2.5 vol)，攪拌1〇分鐘有機相相繼以5% NajO3水溶液（2 v〇1)、鹽水（ι ν〇ι)洗滌，接著共沸乾燥且濃縮，以传到固體狀標題化合物。將

129343-4.doc -523 - 200843738 3.67 (m，1H); 3.15 (m，1H㈣.5〇 (m, m，與 dms〇 — 1·42及1.3 9 (2 s旋轉異構體，9H)。製備（S)-1-(第二丁氧基幾基）_ 4_亞甲基w比洛咬甲睃

Me3PBr(3.0 eq) K+ f-Bu〇- (3.0 eq) THF 0 °C

將溫度維持在約0°C的同時，將固體第三丁醇鉀3 eq ) 快速添加至曱基三苯基溴化鱗（2.2 eq·)於2-甲基四氣呋喃 (3 vol)中之懸浮液中。將溫度在+2(rc下保持2小時（仍為懸浮液）且再冷卻至o°c。將溫度保持在6t:以下的同時，經4〇分鐘添加（S)-l-(第三丁氧基羰基）_4·側氧基吡咯啶_2_曱酸 (1 eq.)。將反應物溫熱至室溫且攪拌16 h且接著冷卻至〇°C。將反應物以飽和NaHC〇3(5 vol)及水（2 ν〇ι)中止，且將水層分離。將有機層以飽和NaHC03/水（1.8 vol/i.8 v⑷ 萃取且將合併之水層經由Celite®過濾。在環境溫度下將水層以6 N HC1(2.6 vol)酸化，且以乙酸異丙酯（16 v〇l，繼而 8 vol)萃取兩次。將有機相乾燥（]V[gS04)且將溶劑移除。將粗產物溶於乙酸異丙酯（10 v〇l)且以0.5 M NaOH( 10 v〇l，繼而1 vol)萃取。在環境溫度下將合併之水層以6 n HC1酸化至pH=3，且以乙酸乙酯（1〇 v〇l，繼而8 vol)萃取兩次。將合併之萃取物乾燥（Na2S04)，將溶劑移除且將粗產物自環己烷（5 vol)中再結晶以得到標題化合物。1H-NMR (400 MHz，DMSO): δ 12.9 (寬，1H); 5.00 (m，2H); 4,24 (dt， 129343-4.doc -524- 200843738 J-1.9 H, J=7.3 Hz? 1H), 3.91 (m? 2H); 2.98 (m? 1H); -2.50 (m，1H ’與DMSO-致）；141及136 (2 s旋轉異構體， 9H)。製備3_(3_氣苯基）·ΐ_氧雜_2，'二氮雜螺[4.4】壬_2_稀_8甲酸（58,88)_第三丁酯

在室溫下將3-氣-Ν-羥基苯并咪唑基氣〇75 g，〇·919莫耳）於EtOAc(2.1 L)中之溶液添加至4_亞甲基吡咯啶·丨，2-二甲酸（s)-二-第三丁酯（200 g，0·7〇7莫耳）於Et〇Ac(2〇 l)中之 /合液中。將混合物於冰浴中冷卻丨〇。〇以下，接著緩慢添加三乙胺（128 mL，0·919莫耳）。將所得混合物攪拌隔夜，接著以水中止（3 L)。將相分離且將有機相以水（2χΐ 〇 L)洗

滌，經MgS〇4乾燥，且移除溶劑，以得到同侧_及對側_螺異。惡σ坐嚇^之油狀混合物。將異構體之混合物溶於THF(0.72 L)且冷卻至20t：。缓慢添加甲烷磺酸（150 mL)，同時將溫度維持在“至川它。將混合物在25°C下攪拌7小時，且藉由謹慎添加K2c〇3(3〇〇 §) 於水（1 L)中之溶液將其中止。將相分離且以乙酸異丙醋（ι L)萃取水相。將有機相組合且在真空下移除約一半的溶劑。以飽和鹽水（250 mL)與水（25G mL)之1:1混合物洗蘇該 129343-4.doc -525 - 200843738 溶液。以乙酸異丙酯（200 mL)萃取水相，且將有機相組合，接著經KAO3乾燥，且過濾，以得到均質溶液。藉由添加乙酸異丙酯將該溶液體積補足至3 L，且接著緩慢添加草酸（2〇 g)於乙酸異丙酯（400 mL)中之溶液。藉由過清將固體分離’且於真空烘箱中乾燥。將固體懸浮於乙酸異丙酯（1·5 L)及水（1.0 L)中，接著緩慢添加KWh直至固體完全溶解。將有機層分離’經KAO3乾燥，過濾，接著緩慢添加草酸（1 2·5 g)於乙酸異丙g旨（250 mL)中之溶液。夢由過濾將固體分離’且於真空烘箱中乾燥，以得到作為98:2 對側同側，非對映異構體混合物之螺異噁唑啉。1h_NMr (400 MHz，DMSO-d6): δ 7.67-7.48 (m，4H)，4.08 (dd，J=7 9 8·9 Hz，1H)，3.55 (s，2H)，3·27 (d，J=4_0 Hz，2H)，2.46 (dd J = 7.8, 13.8 Hz，1H)，2.19 (dd，J=9.1，13.8 Hz，1H)，1.46 (d J=7.5 Hz，9H)。 ’

將化合物Μ2Β(1·0 g，1·〇 eq)及苯甲醯基硝基甲烧（583 mg, 1.0 eq·)及催化三乙胺於20 mL苯中攪拌。緩慢添加異氰酸苯酯（880 μ!〇且攪拌40小時。將暗黑色沈澱物渡出，且將2 mL水添加至濾液，且將混合物攪拌2小時。將有機 129343-4.doc - 526- 200843738 物分離且濃縮，藉由矽膠層析法（1〇_9〇%乙酸乙醋/己烷梯度）純化以得到 350 mg化合物 X37。（Μ+Η=431·2)。！h_nmr 1Η), 7.56-7,46 (m, (500 ΜΗζ，CDC13): 8·19 (d，2Η)，7·61 (t 2H)，4.45-4.36 (m，1H)，3·99·3.88 (m，1H)，3.61 (d，1H)， 3,39-3.33 (m，2H)，2.77 (m，1H)，2.17-2.12 (m，1H)，1.49 (s，9H) 1.46 (s，9H) 〇

將化合物 Χ37(1·3 5 g，1.0 eq·)於 2〇 mL 1/1 TFA/DCM中授拌2小時。將混合物濃縮，且向其添加2〇 mL丙酮、20 mL 飽和碳酸氫鈉溶液及FM0C-C1(1.22 g，1·5 eq·)。將混合物稅拌3小日守且以乙酸乙g旨及2 n HC1溶液稀釋直至水溶液變成酸性。將混合物攪拌，將水性物質以乙酸乙酯萃取，將有機物組合，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。將濃縮物藉由矽膠層析法（100% DCM-10% MeOH/DCM梯度）純化以得到化合物 X38。（M+H二497.1)。

相繼將2·4 Μ之ΝΗ2〇Η(3·3 mL，8.1 mmol)溶液及 1·2 Μ之 129343-4.doc -527- 200843738

Na2C03(3.3 mL，4.05 mmol)添加至 2,3·二氫苯并呋喃 5-羧醛（1 g，6.75 mmol)於乙醇（5 mL)中之溶液。在室溫下將所得溶液攪拌2小時（HPLC展示無起始物質剩下）。將反應混合物以EtOAc稀釋，以鹽水洗滌，經Na2S04乾燥，且在真空下濃縮。其得到1.0 g白色固體狀產物。ES-MS 164為 M+1 岭0

NCS, DMF rt, 16 hr Cl

將 NCS(697 mg，5.2 mmol)添加至酸將（426 mg，2.6 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。將4-亞甲基吡咯啶-1,2-二甲酸（S)-二-第三丁酯、化合物1(600 mg，2.1 mmol)添加至該溶液，且接著經10分鐘添加 TEA(0.37 mL，2.6 mmol)於 DMF(2 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌4 hr，且接著加熱至50-6CTC歷時2小時。將反應混合物以EtOAc(20 mL)稀釋且以H20、鹽水洗滌，經Na2S04乾燥，真空濃縮。以30% EtOAc/己烷溶離，由急驟柱層析法純化粗產物，以得到S異構體（500-600 mg)(Rf=0.3)及 R 異構體（150 mg)(Rf=0.2)。ES-MS 479 作為M+1峰。 B.合成式I之例示性化合物式I之某些例示性化合物可藉由如下所說明之方法1製 129343-4.doc - 528 - 200843738 備。方法1 :

參考方法1 ’將外亞曱基化合物A1去保護為可轉化為相應Fmoc衍生物A3的A2。樹脂結合胺基醇▲4與入3在偶合試劑存在下反應’產生樹脂結合產物A5。A5與現場產生之 129343-4.doc - 529- 200843738 腈虱化物If進行偶極加成反應，產生樹脂結合螺異噁唑啉 A6，將其去保護產生樹脂結合螺異噁唑啉。入7與尺1_甲酸在偶合劑存在下反應產生A8，其中心為仏以⑺…螺異噁唑啉自樹脂解離，產生醇A9。在TEMp〇存在下以氧化試劑（諸如Dess-Martin高碘烷或次氯酸鈉）將入9氧化，產生最終化合物A10。在一些情況中，R4可含有胺官能基。若&含有經保護之胺，則將經保護之胺去保護得到游離胺，繼而與經活化之酸反應，產生經進一步精製之仏。或者，可將&中之游離胺轉化為相應的對-硝基苯基胺基甲酸酯，繼而與胺或醇反應產生含有胺基甲酸酯或脲官能基的心化合物。製備1-(環丙基胺基）-2-(6_(羥甲基）四氩-；2Η-哌喃基氧基）-1-側氧基己-3-基胺基甲酸烯丙酯（miB) 步驟1 : 1-(環丙基胺基）-2_羥基-1-側氧基己_3_基胺基曱酸烯丙酯（M1A)

在〇C將氣甲酸稀丙醋（6.8 mL，64.4 mmol，1.2 eq·)於 DCM(5 0 mL)中之溶液逐滴添加至（3S)_3_胺基環丙基·2_ 經基己醯胺（10 g，53.7 mmol)、DIEA(28 mL，161 mmol，3 eq.)於二氣甲烷（250 mL)中之溶液。將反應溶液溫熱至室 129343-4.doc - 530- 200843738 溫且攪:拌4小時。接著緩慢添加水（3 〇〇 mL)，繼而添加HC1 水溶液（1·0 N，300 mL)。將相分離且將有機物以飽和 NaHC03水溶液（300 mL)、鹽水（300 mL)洗滌，以MgS04乾燥’過濾且真空濃縮。將所得灰白色固體自於Et0Ac(12〇 mL)中之30%己烷再結晶，以產生白色固體狀標題化合物 Ml A。將母液真空濃縮，且自於EtOAc中之50%己烷再結晶以再產生4.04 g M1A。將第二次再結晶所得母液在 Celite®上真空濃縮，且將所得Celite®塞藉由急驟層析（Isc〇

Companion ⑧，Si02，DCM 至於 DCM 中之 70% EtOAc)純化以得到1·46 g之MIA。化合物MIA之總量為13.4 g。（Rf=〇.4〇於 1:1 DCM:EtOAc 中，CAM偵測）。步驟2 : 1-(環丙基胺基）-2-(6-(羥甲基）四氫-2H-哌味-2-基氧基）-1-側氧基己-3_基胺基甲酸稀丙醋結合樹脂（miB)

將 M1A(9.08 g，3 3.6 mmol，3 eq·)、對甲苯石黃酸吼旋（5 6 g，22.4 mmol，2 eq·)、DHP-樹脂（10.2 g，u 2 mm〇1

Novabiochem，Cat# 0卜64-0192,裝載量：Κ1 mmol/g)及二氯乙烷（84 mL，[0.4]!)饋入裝有懸吊式機械攪拌器及回流冷凝器之500 mL二頸圓底燒瓶中。將混合物在8(Γ(：Τ輕柔授 129343-4.doc -531 - 200843738 拌3天，再冷卻至50C且過濾。將樹脂以dcm(2〇〇洗 L且將5併之;慮液真二》辰縮以得到樹脂Μ1 b，將其另外以 DCMU次）、DMF(三次）、DCM Me〇H(連續三次）、价⑷ 洗烏，且在真空下乾燥隔夜以產生淺棕色樹脂。樹脂之裝載量藉由解離樹脂與90% aq· TFA之等分試樣（176 mg) 來測定。裝載量：0.48 mm〇1/g。製備2-(M環丙基胺基）_2_羥基側氧基己基胺甲醯基）-4-亞甲基吡咯啶q•甲酸（9仏葬_9_基）甲酯結合樹脂 (M1E) 步驟1 : 3-胺基環丙基_2_羥基己醯胺結合樹脂（M1D)

將(環丙基胺基）-2-羥基-1-側氧基己_3_基胺基曱酸烯 ί 丙醋結合樹脂M1B(3〇 g，1·〇 eq·)以DCM溶脹。添加13-二甲基巴比妥酸（24.17 g5 12 eq·)及肆（三苯基膦）鈀（1.49 g， 0·1 eq.)且將該混合物搖動隔夜。將混合物過濾且及 DCM洗務以產生樹脂]Vi 1D。步驟2 · 2-(1-(環丙基胺基）_2_羥基_側氧基己_3基胺甲醯基）·4-亞甲基吡咯啶甲睃（9仏苐·、基）甲酯結合樹脂 (Μ1Ε) 129343-4.doc - 532- 200843738

將樹脂M1D(1.0 g，1.0 eq.)與FMOC-4-外亞甲基脯胺酸甲酸（248 mg，1.1 eq.)、HBTU(4.8 mL 之 0·5 M DMF 溶液，5.0 eq.)、HOBt(2.4 mL 之 1·0 M DMF 溶液，5·0 eq·)、 DIEA(836 μί，10.0 eq.)在DMF中一起攪拌3小時。將所得混合物排乾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到標題化合物M1E。製備Fmoc-保護之異噁唑啉化合物結合樹脂（M1F)

將於THF中之樹脂M1E(2 g，0.94 mmol)與3-氯苯曱醛肟 (5 eq.)及漂白劑（5% NaOCl)(15 eq.)—起搖動18小時。接著將樹脂過濾、且以水、DMF及DCM洗務以產生樹脂化合物 M1F。將樹脂之等分試樣裂解以產生用於LC-質譜分析之樣本（M+l=671)。 129343-4.doc - 533 - 200843738 製備Fmoc-保護之異嚼嗤琳結合樹脂化合物（mig)

將樹脂M1F於20%哌啶/DMF中搖動10分鐘，過濾且以〇]^?及001^洗滌。將丁11?樹脂結合螺異噁唑啉脯胺酸（〇.14 mmol，0.3 g)與於 DMF 2.3 mL 中之 FMOC-L-3-苯并噻吩基-ALA(0.56 mmol，〇.25g)、ΗΟΒΤ(0·56 mmol，0.075 g)、 N，N-二異丙基乙胺（〇·56 mmol，0.072g)、HBTU(0.56 mmol， 0·21 g)混合，且攪動48小時。將樹脂過濾且以DMF、二氯甲烧及醚洗條以產生樹脂化合物MlG。製備7-((S)-3-(苯并[b】噻吩-3-基）-2-(2-環己基乙醢胺基）丙釀基）-3-(3-氣苯基）-N-((3 R)-l-(環丙基胺基）-2 -經基-1-側氧基己_3_基）-1-氧雜-2,7-二氮雜螺丨4·4]壬-2_烯_8-甲醯胺（M1H)

129343-4.doc - 534 - 200843738 將於DMF(3 mL)中之20%哌啶添加至結合THP-樹脂的經 FMOC保護之螺異噁唑啉M1G中。將混合物攪動1小時，過濾且以DMF及二氣曱烷洗滌。接著，將樹脂與於DMF 2.3 mL 中之環己基乙酸（0.56 mmol，80 mg)、ΗΟΒΤ(0·56 mmol, 0·075 g)、N，N-二異丙基乙胺（0.56 mmol，0.072 g)、 HBTU(0.56 mmol，0.21 g)混合，且攪動48 hr。將樹脂過濾且以DMF、二氣曱烷及醚洗滌。接著將所獲得之樹脂與 (50:45:5)三氟乙酸、二氣甲烷及三異丙基矽烷之溶液（3 mL)混合且攪;動隔夜。將反應物過濾且以二氯甲烧洗滌。將濾液在真空下濃縮且使用40%乙酸乙酯/60%二氯甲烷至 1 00%乙酸乙酯之梯度、經由矽膠層析法加以純化以產生醇 M1H。實例1 :化合物No· 336

相繼將EDC(35 mg，0.18 mmol)、DMSO(0.070 mL)添加至經基醯胺M1H(14 mg，0.018 mmol)於0.3 8 mL乙酸乙S旨中之溶液。將混合物於冰浴中冷卻且添加於乙酸乙酯（0.1 5 mL)中之二氯乙酸（15 mg，0.12 mmol)。將反應物溫熱至室 129343-4.doc - 535 - 200843738 /m且將其攪拌丨5分鐘且接著於冰浴中冷卻且以1 〇 N HC1(0.21 mL)中止。將溶液分溶於乙酸乙酯與水之間。將有機相以水洗滌且經硫酸鈉乾燥且在真空下將溶劑蒸發。使用乙酸乙酯及己烷（3:1}作為溶離劑，藉由矽膠層析法純化所得殘餘物，以得到白色固體狀化合物N〇. 336。製備8_((3S)-l-(環丙基胺基）_2_羥基_1β側氧基已」基胺甲醯基）·3_苯基-1-氧雜_2,7-二氮雜螺[4.4】壬-2-烯_、甲酸 (9H-苐冬基）甲醋（M1N)

步称1 :經Fmoc保護之苯基取代之異n惡嗤琳結合樹脂 (MIL) 將於THF中之樹脂M1E(2 g，0·94 mmol)與肟（5 eq)及产白劑（5% NaOCl)(15 eq·)—起搖動18小時。接著將樹脂過減且以水、DMF及DCM洗滌以得到經Fmoc保護之苯美取代之異噁唑啉結合樹脂MIL。將樹脂之等分試樣裂解以用於LC-質譜分析（M+l=63 7)。 129343-4.doc - 536- 200843738

1) 20% 味口定 DMF 2) RiCC^H，HBTU, HOBt DIEA niy|p__

rv 將樹脂Ml L(0.47 mmol)於20%哌啶/DMF中搖動10分鐘，且接著過濾且以DMF及DCM洗滌。將所得樹脂與卩111〇(：-tBG-OH(480 mg，3·0 eq·)、HOBT(2,82 mL之 0·5 Μ於 DMF 中，3.0 eq.)、HBTU(2.82 mL之 0·5 Μ於 DMF 中，3·0 eq·)及 DIEA(0.493 mL，6.0 eq·)之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF及DCM洗滌以得到樹脂化合物M1M，其無需進一步純化便可用於下一反應。

步驟2 :化合物M1N

將樹脂M1M(0.47 mmol)於20%哌啶/DMF中搖動10分鐘。將樹脂過濾，以DMF及DCM洗滌。將所得樹脂（140 mg，0.065 mmol)與異氰酸苄酯（1 76 mg，20·0 eq.) —起搖動隔夜，接著過濾且以DMF及DCM洗滌。將樹脂與90% TFA 129343-4.doc - 537- 200843738 於水中一起搖動30 min。將所得溶液真空濃縮以得到無需進一步純化便可用於下一反應的化合物M1N(0.065 mmol)，（M+l)661 〇實例2 :化合物No. 107

將醯胺化合物MlN於DCM(3 mL)中之溶液與Dess-Martin 高碘烷（54 mg，2 eq·)及t_BuOH(54 μι) —起攪拌1小時，且接著將硫代硫酸鈉添加至該混合物中。將產物以EtOAc萃取，且接著將合併之有機層以水、NaHC03、鹽水洗滌，且真空濃縮，且藉由Gilson Prep HPLC純化以得到化合物 No. 107。（M+l)659。實例3 :化合物No· 283 129343-4.doc 538 - 200843738

化合物No. 283 將THP樹脂M1M(0.065 mmol)於20%哌啶/DMF中搖動10 分鐘，且接著過濾且以DMF及DCM洗滌。將所得樹脂與2-(吼啶-3-基）乙酸（0.25 mmol，3.0 eq·)、HOBT(0.5 mL 之 0.5 M於DMF 中，3·85 eq·)、HBTU(0.5 mL之 0·5 M於DMF 中， 3.85 eq·)及 DIEA(0.5 mmol，7.69 eq·)之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF及DCM洗滌且與於水中之 90% TFA—起搖動3〇分鐘。將所得溶液真空濃縮以得到無需進一步純化便可用於下一反應的羥基醯胺化合物 M1P(0.065 mmol) 〇 (M+1) 647 〇將羥基醯胺ΜΐΡ(〇.〇65 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液與 Dess-Martin 高碘烷（41 mg，1.5 eq.)及 t-BuOH(41 μι)—起攪拌。攪拌1小時後，將硫代硫酸鈉添加至上述混合物。將產物以EtOAc萃取。接著將合併之有機層以水、NaHC03、 129343-4.doc - 539- 200843738 鹽水洗滌並真空濃縮，且藉由Gilson Prep HPLC純化以得到化合物 No· 283(4 mg)。（M+1) 645。實例4 :化合物No· 61

1.硝基丙院 PhNCO TEA Benzene 1) 20% 哌定,DMF 2)

將化合物M1E(750 mg，1.0 eq.)與1-硝基丙烷（315 μί， 10.0 eq.)及異氰酸苯酯（385 μί，10.0 eq.)於苯中一起攪拌。添加三乙胺（5 μΙ〇，且將所得混合物搖動隔夜，排乾，且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌。重複該過程以產生化合物 M1Q。（Μ+Η=5 89·0)。接著將化合物M1Q(750 mg，1.0 eq.)於20%哌啶/DMF中搖動10分鐘。將樹脂過濾且以DMF(三次）、繼而以 DCM(三次）洗滌。重複該過程。將所得樹脂與（S)-3,3-二甲基- 2- (((S)-四氣σ夫喃-3 -基氧基）魏基胺基）丁酸（216 mg，2·5 eq.)、HBTU(1.76 mL 之 0.5 Μ 於 DMF 中，3·0 eq.)、 HOBt(0.88 mL之 1.0 Μ於 DMF 中，2.5 eq·)及 DIEA(307 μί， 129343-4.doc - 540 - 200843738 。接著將樹脂過濾且得到化合物M1R。 5.0 eq.)於DMF中之溶液一起搖動隔夜以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以 (Μ+Η=593·9) 〇將化合物 M1R(750 mg，1.0 eq·)於 in Tfa/Dcm 中攪拌 3 小時。將樹脂排乾且以DCM(三次）洗滌。將所有有機物濃縮且相繼添加DCM、Dess_Martin高硬燒（5〇 mg 3 〇 )

將所得混合物攪拌1小時，添加1 N Na2S2〇s，且再授掉。將化合物No· 61之外消旋混合物藉由矽膠層析法（1〇_9〇% 乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生作為一種非對映異構體之化合物 No· 61。（Μ+Η=591·8)。W-NMR (5〇〇 MHz，CDCl3): 7·12 (d，1H)，6.91 (d，1H)，5·48 (d，1H)，5.34 (td，1Η)，5·24 (s，1H)，4·69 (t，1H)，4.28 (d，1H)，4.13 (s，2H)，3·93-3·82 (m，4H)，3.60 (d，1 H)，3.06 (s，0·5Η)，3.03 (s，〇.5H)，2.95 (d，1H)，2.90 (d，1H)，2·78 (td，1H)，2.51-2.47 (m，1H)， 2.44-2.34 (m，3H)，2.14-2.10 (m，1H)，1·94]·88 (m，1H)， 1.63-1.57 (m，1H)，1.46-1.36 (m，2H)，1·17 (t，3H)，〇 98 (s， 9H)，0.95-0.83 (m，5H)，0.59 (dd，2 H)。實例5 :化合物No. 146

129343-4.doc

200843738 將化合物M1E(50 mg，1·0 eq.)與2-氯-2-(羥基亞胺基）乙酸（Z)-乙酯（7.1 mg，2.0 eq·)於DCM中一起攪拌。將於DCM 中之ΤΕΑ(6.6 μί，2.0 eq.)緩慢添加至該混合物中且將混合物搖動3小時，接著排乾，且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌。重複該過程以得到化合物M1S(M+H=632.4)。

MIS

將化合物M1S(1.0 g，1.0 eq.)於20%哌啶/DMF中搖動10 分鐘。將樹脂過濾且以DMF(三次）、繼而以DCM(三次）洗滌。重複該過程。將所得樹脂與（S)-3,3-二甲基_2-(((S)四氫呋喃-3·基氧基）羰基胺基）丁酸（230 mg，2.0 eq·)、 HBTU(1.88 mL之 0.5 Μ於 DMF 中，2.0 eq.)、HOBt(0.94 mL 之 1.0 M於 DMF 中，2.0 eq·)及 DIEA(327 μί，4.0 eq·)於 2 mL DMF中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以 DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到化合物M1T(M+H= 638.0) ° 129343-4.doc - 542 - 200843738

MIT M1U

將化合物 M1T(750 mg，1.0 eq·)與 KOTMS(133 mg，3·0 eq.)於THF中一起搖動3小時。接著將混合物排乾且以THF/ 水（1/1)、THF、DMF及DCM(各三次）洗滌以得到化合物 M1U。（M+H=609.5)。

將化合物M1U(250 mg，1.0 eq.)與乙胺（22 mg，3.0 eq.)、 HBTU(0.54 mL之 0.5 M於DMF 中，3·0 eq·)、HOBt(0.27 mL 之 1·0 M 於 DMF 中，3.0 eq.)及 DIEA(47 μί，3.0 eq.)於 DMF 中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到化合物M1V。（Μ+Η=63 7·2)。

1) TFA/DCM 2) Dess Martin 高概 DCM

化合物No· 146 129343-4.doc - 543 - 200843738 將化合物M1V(0.4 g，1·0 eq.)於1/1 TFA/DCM中攪拌2小時，且接著排乾且以DCM(三次）洗滌。將有機相組合且乾燥，且向其相繼添加DCM、Dess-Martin高蛾烧（97 mg，3.0 eq.)。將溶液攪拌1小時，且向其添加1 N Na2S2〇3，且將該混合物進一步攪拌。將溶液藉由矽膠層析法（10-90%乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生6· 1 mg化合物No. 146。 (Μ+Η=635·0)。iH-NMR (CDC13): 5.5-5.2 (m，2H)，5.1-5.0 (m，lH)，4.9-4.7(m，2H)，4.5-4.2(m，3H)，4.1(m，lH)，3.9-3.7 (m，3H)，3.6-3.5 (m，2H)，3.5-3.2 (m，2H)，2.8-2.4 (m， 2H)，2·1 (m，1H)，2.0-1.8 (m，3H)，1.8-1.5 (m，3H)，1.5-1.3 (m，3H)，1.3-1.2 (m，2H)，1.0 (s，9H)，0.9 (t，3H)，0,8 (m， 2H)，0.6 (m，2H)。亦根據方法1及其項下所述之製法製備以下式I化合物。 r3

表2:藉由方法1所製備之其他式I化合物化合物 No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 7 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-(4-氟苯基)丙酸 3-氯苯曱醛肟 12 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸 3-氯苯甲醛肟 14 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯戊基曱醇 3-氣苯甲醛肟 24 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氟苯甲醛肟 27 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯丁基甲醇 3-氯苯甲醛肟 29 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 2-(1_曱基環己基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 129343-4.doc -544- 200843738 化合物 No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 30 n-fmool-第三丁基甘胺酸 (S)-5-側氧基噻吩·2-基曱基)吡咯啶-2-甲酸 3-氯苯甲醛肟 33 k-FMOC-L·第三丁基甘胺酸異氰酸環己酯 3-氣苯甲醛肟 34 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 5·羥基戊-2-酮 3-氯苯甲醛肟 37 N-FMOOL-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2Η-哌喃-4-基）乙酸 3-氣苯甲醛肟 39 N-FIvIOC-L-第三丁基甘胺酸氯甲酸2-氣苄酯 3_氯苯甲醛將_ 44 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 4-側氧基-戊酸 3-氯苯甲醛肟 53 N/A 2-(1-(2,6-二氯苄基)哌啶斗基)乙酸苯甲醛肟 61 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 硝基丙烷 71 N-FMOC-L-第二丁基甘胺酸 (R)-2,3 -二氫苯并[b] [ 1，4]二氧雜環己烯-2-甲酸 3-氣苯甲醛肟 72 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2_環戊基乙酸一 3-氣苯甲醛肟 75 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(2,4-二甲基噻唑-5-基）乙酸 3-氣苯甲醛肟 76 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸環丙酯 3-氣苯甲醛肟 85 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氣曱酸2-氟乙醋 3-氯苯甲醛肟 92 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基）乙酸 3-氯苯甲醛肟 93 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸環己烷甲酸 ^ 3-氯苯甲醛肟 94 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-胺基乙醯胺 3-氯苯甲醛肟 102 N-FMOC-L-第二丁基甘胺酸 _ 2-(3-氟-4-甲基苯基)乙酸 3-氣苯甲醛肟 107 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸苄酯苯甲醛肟 108 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸順-4-曱氧基環己烧甲酸 3-氣苯甲醛肟 110 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氟曱酸节酉旨 3-氣-4,6-二甲氧基苯甲醛肟 112 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-呢喃-4-基）乙酸 2-硝基-1-苯基乙酉同 118 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(4-氟苯基)乙醢 3-氯苯甲醛肟 119 N-FMOC-L-第二丁基甘胺酸異氰酸第三丁 a旨 2-硝基-1-苯基乙酮 122 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異fl酸3-氟^苄j旨 3-氣笨甲醛肟 123 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異乱酸乙酉旨 3-氣茉甲醛肟 124 N-FMOC-0-甲基-L-蘇胺酸 3-Λ 125 (2R，3S)-N-FMOC-2-胺基-3-苯基丁酸 2-¾¾¾ ^ ><rw 1 w本 /ν ν 3-氯苯甲醛肟 128 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸4_(1Η-η比略-2,5·二 S同)苯酯 3-氯苯甲醛肟 - 545 - 129343-4.doc 200843738 化合物 No. Ρ1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 135 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 1-異丙基冬側m1，4· 一氫哇琳-3-甲酸 - 3-氯苯甲醛肟 139 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 (R)-2-羥基-2-苯基丙酸 3-氯苯甲醛肟 146 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2-氣-2-經亞胺基乙酸乙酉曰 (氣將） 152 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 ί四氤ϋ夫喃-3-基)甲醇 _ 3-氯苯甲醛肟 154 N-Alloc-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 4-氟苯甲醛肟 155 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(5-氟-2-甲基苯基）乙酸 _ 3-氯苯甲醛肟 156 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異丁胺 3-氯苯甲醛肟 159 N-FMOC-L·第二丁基甘胺酸 2-( 口塞吩-3-基)乙醇___ 3-氯苯甲醛肟 160 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-氟苯甲醛肟 161 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 5-乙醯胺基-2-乙醯基噻吩_ 3-甲酸 _ 3-氯苯甲醛肟 164 N-CBZ-L·第三丁基甘胺酸 N/A 2-氯苯甲醛肟 167 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 (2-甲基吡啶-3-基)甲醇 3-氯苯甲醛肟 173 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2,2-二氟乙胺 3-氯苯甲醛肟 174 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸間-曱苯基甲醇 __ 3-氯苯甲醛肟 180 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸 _ 硝基乙烷 183 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氟苯甲醛肟 185 N-FMOC-L_3-噻吩基-丙胺酸 2-環己基乙酸 3-氣苯曱醛肟 193 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯甲酸異丙酯 3-氯苯甲醛肟 199 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 9-蒽曱醛肟 201 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 (3-曱氧基苯基)甲醇 3-氣苯甲醛肟 203 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 (3,5·二氟苯基)甲醇 3-氯苯甲醛肟 205 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸苄酯 1 3-氣苯甲醛肟 207 N-FMOC-L-甘胺酸氯甲酸乙酯 3-氯苯甲醛肟 208 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2-萘甲醛肟 209 " N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 (3-氟苯基)曱醇 3-氣苯曱醛肟 210 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯甲酸2-氯苄酯 3-氣-4,6-二甲氧基苯甲醛肟 213 N-FMOC-4-甲氧基-L-苯丙胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 216 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 5-侧氧基-1-(噻吩-2-基曱基)吡咯啶-3-甲酸 3-氣苯曱醛肟 235 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 硝基丁烷 237 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-(2·甲基-1H-咪唑-1-基）丙酸 3-氣苯曱醛肟 129343-4.doc -546- 200843738 化合物 No. Ρ1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質_ 241 N-FMOOL-第三丁基甘胺酸 (S)-l-異丙基-5-側氧基吼咯啶-2-甲酸 3-氣苯甲醛肟 242 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FM0C-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪甲酸胡椒醛肟 243 N-((S)-四氫呋喃-3 -基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 硝基丁烷 249 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸異氰酸環己烷曱酯苯甲醛肟 254 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 1 -(σ塞吩-2-基)丙-2-醇 3-氣苯甲醛肟 259 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸異氰酸3,4,5-三曱氧基苄酯 3-氯苯曱醛肟 260 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氣甲酸2-甲氧基乙酯 3-氣苯甲醛肟 261 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 4-異氰酸基派啶-1-甲酸苄酯 3-氯苯甲醛肟 262 N/A 氣甲酸4-硝基苯酯 3-氯苯曱醛肟_ 276 2-((3S，4aS，8aS)-3-(第二丁基胺甲醯基）八氫異喹啉-2(1H)-基)乙酸 — 3-氯苯甲醛肟 278 N-FM0C-L·第三丁基甘胺酸氣曱酸苄醋 2-(4-甲氧基苯氧基）苯甲醛肟苯甲醛肟 283 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(〇比0定-3-基)乙酸 287 N-FM0C-L-第二丁基甘胺酸 i(3-甲氧基苯基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 288 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸異氣酸1-茶醋苯甲醛肟 289 N-FM0C-2-三氣曱基-L-苯丙胺酸 i環己基乙酸 '~ 3-氣苯甲醛肟 291 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸螺[節-1，4·-旅。定]-3(2H)-酮 3-氣苯甲醛肟 294 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 2-¾己基乙酸 3-氣笨曱醛肟 308 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 (四氫-2沁哌喃-2-基)甲醇 3-氯苯甲醛肟 311 N-FM0C-L-第二丁基甘胺酸 2-(吡咯啶-1-羰基）環己烷甲酸 3·氯苯曱醛肟 313 N/A 異乱酸苄6旨 3-氣-4,6-二曱 I[其笑甲齡肟 317 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 2-〇側氧基異吲哚啉-2-基）丙酸 3-氣苯甲醛肟 324 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸氰基乙基)苯甲酴 3-翕笑甲盤蔣 329 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸環己基乙酸硝基丙烧 331 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸乙酸 4-ϋ笑审够躬· 333 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸甲基苄胺 3-氣茉甲醛肟 334 N-FM0C-L-第三丁基甘胺酸 (S)-2-甲基-3-笨基丙酴 3-翕笑甲酸將 336 N-FM0C-L-3-苯并噻吩基-丙胺酸 2-¾己基乙酸 ^ 1 WJL /Ί ^ 3·氣苯曱醛肟 338 N-FM0C-2-氟-L·苯丙胺酸 2_環己基乙蛟 3-氣苯曱醛肟 129343-4.doc - 547 - 200843738 化合物 lV〇 P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 340 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4·苯基苯甲醛肟 341 N-((S)-四氫σ夫喃-3-基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2-氯-2-羥亞胺基乙酸乙酯 (氯肟），繼而酯水解及乙胺偶合 342 N/A 吡啶3-甲醇 j 3-氣苯甲醛肟_ 345 N-(5-甲基-3-硝基吼σ定基)_L_ 第三丁基甘胺酸 N/A 3-氣苯甲醛肟 349 财MOC-L-第三丁基甘胺酸 2-Γ4-氟笨基)乙醇 3-氯苯甲醛肟 352 N;((S>四氫呋喃各基氧基）幾基；)-L·第三丁基甘胺酸 N/A —— 一吡啶-4-醛肟 357 N-_F_M〇C-L-第三丁基甘胺酸〇比0定-4-基甲醇 3-氣苯甲醛肟 358 N;((S)·四氫呋喃-3-基氧基） -幾基)_L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-三敗曱氧基苯甲醛肟 _ 365 第三丁基甘胺酸 N/A 4-三氟甲氧基苯甲醛肟 367 N/A 異氰酸3,4,5-三甲氧基苄酯苯甲醛肟 _ 373 N-f M〇〇L·第三丁基甘胺酸 3-(°比咬-2-基)丙-1-醇 3-氣苯甲醛肪 374 第三丁基甘胺酸四氫-2H-略喃-4-醇 3-氣苯甲醛肟 377 M-FMuu-L·第三丁基甘胺酸 (S)-l-(3-氯苄基)-5-側氧基吼口各咬-2-甲酸 3-氣苯甲醛肟 378 N-FMOC心第：丁基甘胺酸 0比咬-2-基曱醇 3-氣苯甲醛肟 379 N-l· MOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸異丙酯 3·氣苯甲醛肟 381 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 4-側氧基-3,4-二氫S太嗪小甲酸 3-氣苯甲醛肟 383 N-CBZ-L·第三丁基甘胺酸 N/A 硝基丙烧 387 N-l· m(JC-L·第三丁基甘胺酸 (3R，3aS，6aR)-六氫吱喃并 P，3-b]呋喃各醇 3-氣苯甲醛肟 389 ^^^^第二丁基甘胺酸 3-(〇比〇定-3-基)丙-1-醇 3-氣苯甲醛肟 390 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸環己基乙酸 2-硝基小苯基乙酮 398 A f\(\ N-((S)，氫呋喃氺基氧基）基甘胺酸 N/A 4-氟苯甲醛肟 400 a r\r\ N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-d比嗪曱酸硝基丁烷 402 a r\fn N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(5-側氧基-2-(σ塞吩-2-基）環戊-1-婦基)乙酸 3-氣苯甲醛肟 407 ΑΛΠ 第二丁基甘胺酸氣甲酸乙酉旨 3-氣苯曱醛肟 417 N-FM(JC-L-第三丁基甘胺酸 — N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸，繼而2-°比嗪曱酸 4-氟苯甲醛肟 129343-4.doc - 548- 200843738 化合物 No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 427 N-FMOC-L-苯丙胺酸氯甲酸乙酯 3-氣苯甲醛肟 431 ν-fmoc-l-第三丁基甘胺酸 2-鄰·甲苯基乙酸 3-氣苯甲醛肟 432 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-甲基乙胺 3-氯苯甲醛肟 437 N-FMOC-S-第三丁基-L-半胱胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 450 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸，繼而2-吡嗪曱酸胡椒醛肟 454 N-FMOC-L·第三丁基甘胺醢 2-(喧淋-8-基硫基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 459 N-FMOC-L-正白胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 462 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸環己基乙酸胡椒醛肟 463 N-FMOC-L·第三丁某甘胺醢 2-苯基乙醇 3-氯苯甲醛肟 465 N-(環戊基甲酿基)第三丁基甘胺酸一 N/A 4-氟苯甲醛肟 467 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 2·(雙環并[2.2.1]庚-2-基）乙酸 3-氣苯甲醛肟 471 N-FMOOL-第三丁某甘胺酸對-甲苯基甲醇 3-氣苯甲醛肟 474 N-FM0C-L·第三丁基甘胺酸 2-甲基-3-(3-曱基-1Η-吡唑-1-基)丙酸 3_氯苯甲醛肟 477 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 (S)-l-曱氧基-3,3-二曱基丁炫r2•胺 3-氯苯甲醛肟 484 N-FM0C-L·第三丁基甘胺酸丁二酸酐 3-氣苯甲醛肟 487 N-FMOC-L·•第三丁基甘胺酸 2-(6-甲氧基-3-側氧基-2,3-二氫-1Η-茚-1-基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 487 N-tM〇OL·第三丁基甘胺酸 2-(3·側氧基-2,3-二氫-1Η-節-1-基)乙酸 3-氣苯甲醛肟 492 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸「異氰酸第三丁酯 3-氯苯甲醛肟 497 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸吡啶-3-基甲胺 3-氯苯甲醛肟 503 第三丁基甘胺酸反·4_甲氧基環己烷甲酸 3-氣苯甲醛肟 504 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-(°比咬-3-基)丙酸 3-氣苯甲醛肟 505 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-(2,5-二側氧基咪唑啶-4-基)丙酸 3·氣苯甲醛肟 512 N-FM〇OL-第三丁基甘胺酸 (2-氣笨基)甲醇 3-氯苯甲醛肟 515 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸四氮-2Η-派喃-3-醇 3-氣苯甲醛肟 517 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 硝基乙烧 518 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 (S)-l-(3-甲基苄基)-5-側氧基吼嘻。定-2-甲酸 3·氣苯甲醛肟 520 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯曱酸苄酯苯甲醛肟 523 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸四氫-2Η-哌喃-4-甲酸 3-氣苯甲醛肟 526 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸氯甲酸苄酯 3-氣苯曱醛肟 528 N -moc-L-第三丁基甘胺酸 3-(1Ηα引唑-1-基)丙酸 3-氯苯甲醛肟 532 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 3-曱基丁酸 3-氣苯甲醛肟 533 N/A Ν/Α 4-氟苯甲醛肟 129343-4.doc -549- 200843738 化合物 No. 下質 C1之起始物質 R3之起始物質 538 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-氰基-2-甲基-3-苯基丙酸 3-氯苯甲醛肟 544 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-(1Η-苯并[d]咪唑小基)-2-甲基丙酸 3-氯苯曱醛肟 547 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪甲酸硝基丙烷 553 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(2,6-二側氧基-1，2,3,6-四氫嘧啶-4-基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 557 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 (lR，6S)-6-(甲氧羰基)環己-3_烯曱酸 3-氯苯甲醛肟 558 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸苯酯 3-氯苯甲醛肟 559 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸第三丁酯硝基丙院 561 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 (2,5_二氟苯基)曱醇 3-氯苯甲醛肟 563 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 0比咬3-甲醇 3-氣苯甲醛肟 566 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-211·哌喃冰基）乙酸硝基丙院 576 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 3-吼°定基異氰酸酉旨 3-氯苯甲醛肟 580 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸乙S旨苯甲醛肟 582 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(σ塞吩-2-基)乙醇 3-氣苯甲醛肟 583 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸节6旨 3-氣苯甲醛肟表2以及本文中所有其他表中所列R3之所有起始物質均可市面上購得（硝基或肟）或易由相應的醛前驅物製備。此外，化合物 Nos. 20、22、53、81、103、116、166、 187 、 189 、 194 、 197 、 200 、 220 、 223 、 226 、 245 、 252 、 271 、 204 、 307 ' 319 、 339 、 354 、 360 、 361 、 371 、 392 、 3 93、43 5、449、506、514、531及585亦藉由使用方法1製本發明之其他某些化合物可如方法2之說明加以製備。 550- 129343-4.doc 200843738 方法2 ： r

o A-——N H

NIO

o

R3. B

DH

B1 B2

3 B r3

r3

A7

r3 Ri

R3 Ri

A9 A10 參考方法2，將經保護之螺異噁唑啉B1去保護為B2，其又被轉化為Fmoc衍生物B3。B3與樹脂結合胺基醇A4反應，產生樹脂結合螺異噁唑啉A6，將其如方法1中所述轉化為A10。實例6 :化合物No. 281

Boc2〇 TEA, DMAP ACN

l29343-4.doc -551 - 200843738 將化合物M2A(5_0 g，1.0 eq·)於100 niL乙腈中擾掉且將二碳酸二-第三丁酯（9.6 g，2·0 eq·)、二甲基胺基吡咬（537 mg，0·2 eq.)及三乙胺（6·13 mL，2·〇 eq.)添加至該混合物中且授摔隔夜。將所得混合物濃縮，添加乙酸乙醋，且將、、見合物以1.0 N HC1洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由石夕膠層析法（10-30%乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生化合物M2B。 (M+H=284.0)。iH-NMR (CDC13)·· 5.0 (m，2H)，4.3-4.5 (m， 1H)，4.0-4.1 (m，2H)，2·9-3·0 (m，1H)，2.5-2,6 (d，1H)，1 5 (s，3/9之 18H)，1.4 (s，6/9之 18H)。

將化合物 Μ2Β(2·0 g，1.0 eq.)與苯甲醛肟（2·67 g，2〇於35 mL DCM中攪拌。將該溶液在冰浴上冷卻且向其緩慢添加漂白劑（5% NaOCl)(34.9 mL)。接著將混合物溫熱至室溫且搜拌2小時。將水層分離且以dcm萃取兩次。將有機物組合且經硫酸鎂乾燥、過濾且濃縮。經由矽膠層析法 3〇%乙酸乙酯/己烷梯度）純化，產生化合物M2(：。（m+h==： 4〇3.1)〇 ]H-NMR (500 MHz? CDC13): 7.64-7.63 (m5 2H), 7·41-7·40 (m，3H)，4.43-4.37 (t，1H)，3·94-3·85 (dd，1H)， 3.62 (t? 1H)5 3.44-3.38 (m? 1H)? 3.29-3.24 (m? iH)5 2.74 (m, 129343-4.doc - 552 - 200843738 1Η)，2.14-2.10 (m，1Η)，1.49 (s，9Η)，1.46 (s，9Η) 〇

M2C M2D 將化合物M2C於1/1 TFA/DCM中攪拌3小時。將該混合物濃縮。將17 mL DMF、5 mL水、碳酸鈉（713 mg，2.5 eq.)、FMOC-OSu(951 mg，1.05 eq.)添加至該經濃縮之混合物中，且攪拌3小時。接著，添加乙酸乙酯，且將所得混合物相繼以1 ·〇 N HC1、鹽水洗滌。將其經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮，以產生化合物M2D。（Μ+Η=468·9)。

M1D 將化合物 M2D(1.26 g，2.0 eq.)與 M1D(2.5 g，1.0 eq·)、 HBTU(12 mL之 0.5 M於 DMF 中，5.0 eq.)、HOBt(6 mL之 1.0 M 於 DMF 中，5.0 eq.)及 Hlinig 氏鹼（2.09 mL，10.0 eq.)於 DMF中攪拌隔夜。將混合物排乾且以DMF(三次）及 DCM(三次）洗滌以產生化合物MIL。（Μ+Η=637·0)。 129343-4.doc - 553 - 200843738

MIL M1M 將化合物M1L(0.4 g，1.0 eq.)於20%哌啶/DMF中搖動10 分鐘，再過濾且相繼以DMF(三次）、DCM(三次）洗滌。重複該過程。將所得樹脂與FMOC-第三丁基甘胺酸（200 mg， 3·0 eq·)、HBTU(1，15 mL 之 0·5 Μ於 DMF 中，3.0 eq.)、 HOBt(0.58 mL 之 1.0 Μ於 DMF 中，3·0 eq.)及 DIEA(167 μΐ^， 5.0 eq.)於2 mL DMF中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到化合物 M1M。（Μ+Η=750·1)。

將化合物M1M(0.4 g，1.0 eq.)於20%哌啶/DMF中搖動10 分鐘，且將樹脂過濾且相繼以DMF(三次）、DCM(三次）洗滌。重複該過程以得到化合物M2H。 129343-4.doc - 554 - 200843738

M2H M2I 將化合物Μ2Η(0·4 g，1.0 eq·)與FMOC-環己基甘胺酸 (218 mg，3.0 eq·)、HBTU(1.15 mL之 0·5 Μ於DMF 中，3.0 eq·)、HOBt(0.58 mL 之 1·0 M 於 DMF 中，3.0 eq·)及 DIEA (167 pL，5.0 eq.)於2 mL DMF中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌。接著將樹脂以20%哌啶/DMF處理10分鐘。將樹脂過濾且相繼以 DMF(三次）、DCM(三次）洗滌。重複該過程以得到化合物 M2I。

V HN

M2I M2J 將化合物Μ2Ι(0·4 g，1.0 eq·)與吡嗪甲酸（71 mg，3.0 eq·)、HBTU(1.15 mL之 0.5 Μ於 DMF 中，3.0 eq.)、HOBt (0.58 mL之 1·0 M於 DMF 中，3·0 eq·)及 DIEA(167 pL，5.0 129343-4.doc - 555 - 200843738 eq·)於2 mL DMF中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到化合物M2 J。 (Μ+Η=772·9)。

C

將化合物M2J(0.4 g，1·〇 eq·)於1/1 tfa/dcm中攪拌2小時。將樹脂排乾且以DCM(三次）洗滌。將所得全部有機物 /辰縮且相繼添加DCM、Dess-Martin高礙烷（97 mg，3.0 eq·)。攪拌1小時且添加！ Ν Ν^82〇3且攪拌。將該溶液藉由矽膠層析法（10-90。/。乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生42 mg 化合物 No· 281。（Μ+Η=771 〇)。ih_nmr (5〇〇 ΜΗζ,

CDC13)· 9.38 (d，1Η)，8·75 (d，lH)，8.56 (t，1 Η)，8.31 (d， 1H)’ 7.64-7.62 (m，2H)，7.42-7.38 (m，3H)，7.33 (d，1H)， 6.89 (d, 1H), 5.45-5.41 (m, 1H)? 4.85 (t5lH)? 4.69 ^lH)M.57.4.54 (m5lH)?4.26 (,5ΐΗ)53.76 (d? m； ;*4vr^2H)? 2·82 (t" ih)^ 2·56 ^ H} , ；；"6 4H" ^65^59 (- 2H, ,48.,42 (m?

2H), 1.24 (m? 2H)5 1 〇9 A 0.88-0.84 (m 2H) 〇6w 5 2H)i 0 97 9H), 0.93 (t, 2H), 、m，2H)，0.65 (t5 2H)。以下在表3中列舉藉由方法2所製備之其他幻化合物。 129343-4.doc -556- 200843738 R3

表3:藉由方法2所製備之其他式I化合物化合物 No· P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 40 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,6-二氯苯甲醛肟 51 N/A 1H-吡咯-2-甲酸胡椒醛肟 80 N/A 1H-吡咯-2-甲酸苯甲醛肟 101 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 I-秦基石黃酿氯苯甲醛肟 147 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪甲酸 2,6-二氣苯曱醛肟 151 N-Alloc-L-第三丁基甘胺酸 N/A 苯甲醛肟 202 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 苯曱醛肟 228 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸苯曱醛肟 281 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪曱酸苯曱醛肟 325 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸胡椒醛肟 327 N-Alloc-L-第三丁基甘胺酸 N/A 胡椒醛肟 343 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 胡椒醛肟 428 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪曱酸苯曱醛肟 464 N/A 1H-吡咯-2-甲酸胡椒醛肟 491 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 苯甲醛肟 527 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘 N/A 胡椒醛肟 129343-4.doc - 557 - 200843738 化合物 No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質胺酸 536 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 1-奈基石黃酿氯胡椒醛肟 570 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸胡椒醛肟 578 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸乙酸苯曱醛肟 584 N/A 1H-吡咯-2-曱酸苯曱醛肟式I之其他某些化合物可如方法3之說明加以製備。方法3 :

參考方法3，將如方法1中所製備之樹脂結合Fmoc外亞曱 • 558 - 129343-4.doc 200843738 基化合物A5去保護，以得到Cl。Cl與心羧酸在偶合試劑存在下反應，產生C2，其中1為R4C(0)-。C2與腈氧化物 If反應生成A8，將A8如方法1中之說明轉化為A10。實例7 :化合物No. 239

化合物239 將樹脂M1E(0.47 mmol)於20°/〇哌啶/DMF中搖動10分鐘，且接著過濾且以DMF及DCM洗滌。將所得樹脂再與0^2-tBG-OH(374 mg，3.0 eq·)、ΗΟΒΤ(2·82 mL之 0.5 Μ於 DMF 中，3.0 eq·)、HBTU(2.82 mL之 0.5 Μ於 DMF 中，3.0 eq.)及 129343-4.doc - 559 - 200843738 DIEA(0.493 mL，6.0 eq.)之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以DMF及DCM洗滌以得到樹脂化合物Μ3Α(0·47 g)，其無需進一步純化便可用於下一反應。將於THF中之Cbz樹月旨Μ3Α(0·0611 mmol)與3-溴-苯基肟 (10 eq·)及漂白劑（5% NaOCl)(20 eq.) —起搖動12小時。接著將樹脂過濾且以水、DMF、DCM洗滌以得到樹脂M3B。將樹脂M3B與於水中之95% TFA—起搖動30分鐘，且將所得溶液真空濃縮以得到化合物M3C(0.031 mmol)， (M+l)740，其無需進一步純化便可用於下一反應。將化合物M3C(0.031 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液與 Dess_Martin 高埃炫（26 mg，2 eq·)及 t-BuOH(26 pL)—起授拌。攪拌1小時後，將硫代硫酸鈉添加至上述混合物。將產物以EtOAc萃取，且接著將合併之有機層以水、 NaHC03、鹽水洗條，且真空濃縮，且藉由Gilson Prep HPLC純化以得到化合物No. 239。（M+l) 738。實例8 :化合物No· 535

將化合物M1E(10.0 g，1.0 eq·)於20%哌啶/DMF中搖動10 分鐘。將樹脂過濾且相繼以DMF(三次）、DCM(三次）洗務。重複該過程。將所得樹脂與（S)-2,3-二甲基- 2- (((S) -四 129343-4.doc - 560- 200843738 氫呋喃-3-基氧基）羰基胺基）丁酸（3.46 g，3·0 eq.)、 HBTU(28.2 mL之 0·5 Μ於 DMF 中，3.0 eq·)、HOBt(14.1 mL 之 1.0 M於 DMF 中，3.0 eq.)及 DIEA(4.91 mL，6.0 eq.)於 DMF中之溶液一起搖動隔夜。接著將樹脂過濾且以 DMF(三次）及DCM(三次）洗滌以得到化合物M3E。（M+H= 523.1) °

將化合物M3E(300 mg，1.0 eq.)於THF中攪拌，且相繼將 2-硝基-卜苯基乙酮（272 mg，10.0 eq,)、異氰酸苯酯（179 μί，10.0 eq·)及催化性ΤΕΑ(10 μί)添加至該混合物中。將所得混合物搖動隔夜，排乾且以DMF、THF及DCM(各三次）洗滌以得到化合物M3F(M+H=669.8)。

1) TFA/DCM 2) Dess Martin

將化合物M3F(0,4 g，1.0 eq·)於1/1 TFA/DCM中攪拌2小時。將樹脂排乾且以DCM(三次）洗滌，將所有有機物濃縮，且相繼添加DCM、Dess-Martin高蛾烧（97 mg，3.0 129343-4.doc -561 - 200843738 叫)。將所得混合物攪拌1小時，添加i N Na2S2〇3,且再撥拌將反應此合物經由矽膠層析法(i 〇_9〇%乙酸乙酯/己烧梯度）純化以產生化合物Ν〇· 535。m+h==668 i。〗h_nmr (500 MHz，CDC13): 8.19 (d，2H)，7.61 (t，1H)，7·47 (t，2H)， 7.19 (d5 1H)? 6.93 (d? 1H), 5.52 (d, 1H)? 5.37-5.33 (m? 1H)? 5.24 (s，1H)，4.78 (t，1H)，4·32-4·29 (m，2H)，3.93-3.79 (m， 4H)’3’70(d，lH)，3.48-3.36 (m，2H)，2.79(td，lH)，2.68- 2.63 (m? 1H)? 2.55-2.50 (m? iH^ 2.12-2.04 (m5 1H)? 1.96- 1·89 (m，1H)，1.66-1.59 (m，1H)，1.47-1.37 (m，2H)，1.00 (s，9H)，0.94-0.81 (m，6H)，0.63-0.57 (m，2H)。以下在表4中列舉藉由方法3所製備之其他式以匕合物。

表4:藉由方法3所製備之其他化合物化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 4 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯-5-氟苯甲醛肟 8 N-((S)-四氫呋喃各基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3·(環戊基氧基)-4-甲氧基苯曱醛 9 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二(三氟甲基)苯甲醛肟 11 ~ N/A (S)-2,5-二側氧基吼口各口定-l-基四氫σ夫喃-3-基碳酸酯 3-1-4-甲基苯甲醛肟 129343-4.doc - 562- 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 15 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯-4-甲氧基苯曱醛肟 16 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基)乙酸 4-曱氧基苯甲醛肟 25 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二氟苯曱醛肟 32 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,4-二氯苯甲醛肟 36 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,冬二甲基苯曱醛肟 47 N/A (S)-2,5-二側氧基口比口各口定-1-基四氮咬喃-3-基碳酸酉旨 4-乙基苯甲醛肟 52 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-三氟甲基苯曱醛肟 55 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4-氯苯甲醛肟 56 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3,5-二氯苯甲醛肟 64 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-三氟甲基苯曱醛肟 66 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-4-氟苯甲醛肟 70 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 環戊烷羧醛 78 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 3,4-二氯苯曱醛肟 82 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基)乙酸胡椒醛肟 83 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯苯曱醛肟 95 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-5-氣苯曱酸肪 106 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二氟苯甲醛肟 129343-4.doc - 563 - 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 109 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第二丁基甘胺酸 N/A 3-甲基-4-氯苯甲醛肟 142 N-((S)-四氫σ夫喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 環己烷苯甲醛肟 149 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第二丁基甘胺酸 N/A 3-三氟曱氧基苯曱醛肟 150 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,2-二曱基17克院-6-碳酸 171 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基)乙酸 3-氰基苯曱醛肟 177 N-FMOC-L·第三丁基甘胺酸 2-(四氮基)乙酸 4-氰基苯曱醛肟 191 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二甲基-4-曱氧基苯甲醛肟 196 N-((S)-四氫呋喃_3-基氧基)叛基)-L-第二丁基甘胺酸 N/A 3,4-二曱氧基苯曱醛肟 198 N/A (S)-2,5-二側氧基吼口各°定-1-基四鼠咬喃-3-基碳酸酯 3,5-二曱基-4·曱氧基苯甲醛肟 215 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)第三丁基甘胺酸 N/A 3,4,5-三氟苯曱醛肟 222 N/A (S)-2,5-二側氧基口比口各咬-1-基四氮咬喃-3-基碳酸S旨 2,2-二氣-1，3-苯并二噁茂-5-羧醛 224 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二曱基-4-甲氧基苯甲醛肟 229 N-((S)-四氮p夫喃-3-基氧基)裁基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-硝基丁酸甲酯 234 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H·旅喃-4-基)乙酸 3-氯-5-氟苯甲醛肟 236 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯-4-曱氧基苯甲醛肟 239 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-溴苯甲醛肟 129343-4.doc - 564- 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 240 N/A (S)-四氮咬喃-3-基-碳酸酯 4-三氟曱基苯甲醛肟 244 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3·三氟甲氧基苯曱醛肟 251 N-((S)·四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 苯基石肖基乙院 257 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-苯基苯甲醛肟 258 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氟-5-三氟曱基苯曱醛肟 270 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 3-氯-4-氟苯甲醛肟 274 N/A (S)-四鼠σ夫喃-3-基-碳酸酯 3,5-二氯苯甲醛肟 279 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氮-2Η-旅喃-4-基)乙酸 3-氣-4-甲氧基苯曱醛肟 285 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2Η-旅°南-4-基)乙酸 3,5-二氯苯甲醛肟 299 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氮基)乙酸 4-氯苯甲醛肟 301 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯-4-氟苯甲醛肟 306 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L·第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二氯苯甲醛肟 314 N-((S>四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-甲醯基苯甲酸曱酯 316 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,2-二氟-1，3-苯并二噁茂-5-羧醛 318 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-氣苯甲醛肟 322 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氯-5-氣苯曱酸月亏 323 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3,4-二氯苯甲酸肪 129343-4.doc - 565 - 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 330 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二(三氟甲基)苯甲醛肟 348 N/A (S)-四鼠咬喃-3-基-碳酸酯 3-氟-5-三氟甲基苯曱醛肟 353 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)幾基)-L-第二丁基甘胺酸 N/A 3-曱醯基苯甲酸甲酯 362 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3,5-二曱基-4-曱氧基苯甲醛肟 363 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,2-二氟-1,3-苯并二噁茂-5-羧醛 364 N-((S)-四氮咬喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 氣化4-氣苯基乙醛羥戊烧 385 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-甲基苯甲醛肟 391 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)魏基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3,5-二氯苯甲醛肟 403 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2-氯-6-氟苯甲醛肟 405 N/A (S)-四氮0夫喃-3-基-碳酸酯 4-異丙基苯甲醛肟 413 N/A (S)-四氫呋喃各基-碳酸酯 3-曱基-4-氟苯甲醛肟 414 N/A (S)-四氮咬喃-3-基-碳酸酯 3,4,5-三氟苯甲醛肟 423 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氟-4-甲基苯甲醛肟 425 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-(4-吡啶基)苯曱醛 434 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,3-二曱氧基苯曱醛肟 436 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-曱基-4-氣苯曱醛肟 444 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-曱基苯曱醛肟 129343-4.doc - 566 - 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 448 N-((S)-四氮咬喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-(4-氯苯基)-2，1_苯并異噁唑-5-碳醛肟 451 N/A (S)-四氮σ夫喃-3-基-碳酸酯 3-三氟甲基-4-氟苯甲醛肟 455 N-((S)-四氮11 夫喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3,4,5-三氟苯甲醛肟 456 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 1，4-苯并二噁烷-6- 羧醛 472 N-((S)-四氮σ夫喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 2-呋喃醛肟 480 N-((S)-四氫呋喃-3·基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3-曱醯基苯甲酸曱酯 481 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3-(羧基)苯甲醛肟 482 N-((S>四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 2-氯-6-氟苯曱醛肟 486 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-4-甲氧基苯曱醛肟 490 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-211-派喃-4-基)乙酸 3-甲基-4-氣苯曱酸肪 498 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3-氟-5-三氟曱基苯曱醛肟 509 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3-三氟甲基苯甲醛肟 511 N-((S)-四氮σ夫喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 4-硝基苯曱酸月亏 519 N-((S)-四氫呋喃-3·基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 Ν/Α 3,5-二甲基苯甲醛肟 524 N/A (S)-四鼠咬喃-3-基-碳酸酯 4-三氟甲氧基苯甲醛肟 525 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-211-派喃-4-基)乙酸 3-甲氧基苯甲醛肟 129343-4.doc - 567- 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 530 N-((S)-四氮咬喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-羥基苯甲醛肟 535 N-((S)·四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2-硝基-1 -苯基乙画同 539 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基)乙酸 3-甲基-4-氟苯甲醛肟 543 N-((S)-四氫呋喃-3·基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 4-(羧基)苯甲醛肟 545 N-((S)-四鼠咬喃-3-基氧基)幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-三氟曱基-4-氟苯甲醛肟 548 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-4-氟苯甲醛肟 550 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)叛基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氟-4-甲基苯曱醛肟 551 N-((S)-四氮咬喃-3-基氧基)魏基)-L-第二丁基甘胺酸 N/A 4-曱醯基苯甲酸甲酯 555 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-甲基-4-氟苯曱醛肟 560 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-三氟甲基苯甲醛肟 572 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-派喃-4-基)乙酸 3,5-二曱基-4-甲氧基苯甲醛肟式I之其他某些化合物可如方法4之說明加以製備。方法4 :

129343-4.doc - 568 - 200843738

R3

Ri

R3—〇

Ri

r3 Ri

參考方法4，如方法1中所述製備Fm〇c衍生物A3。人3與樹脂結合亞胺基醯胺D1在偶合試劑存在下反應，產生化合物結合樹脂D2。由二酮基化合物X31藉由與胺基樹脂（諸如衍生化胺基甲基化聚苯乙烯，例如χ32)反應可製備樹脂結合亞胺基醯胺D1。將D2去保護產生D3，使03與111羧酸在偶合試劑存在下反應，以產生D4，其中Ri為R4C(〇)_。D4 與腈氧化物If反應產生D5，將其自樹脂水解產生A10。 129343-4.doc -569- 200843738 實例9 :化合物No· 303

將 PPh3(21 g，80 mmol)、二甲基巴比妥酸（12.5 g，80 mmol)及 Pd(PPh3)4(920 mg，0·8 mmol)添加至樹脂 M4A(其具有與X33相同之結構）（20 g，0.4 mmol/g, 8 mmol)於 DCM(100 mL)中之懸浮液中。將懸浮液搖動隔夜，排乾，以DMF(10次）及DCM(4次）洗滌。將N-Fmoc-4-亞甲基脯胺酸（3.0 g，8·8 mmol)、HBTU(3.3 g，8·8 mmol)及 HOBt(l.l g， 8.8 mmol)及 DIEA(1.6 mL，8·8 mmol)溶於 DMF(100 mL)。將溶液添加至樹脂且搖動隔夜。接著將樹脂排乾，以 DMF( 10次）、DCM(4次）洗務且乾燥以得到樹脂M4B。將於DMF中之20%哌啶（100 mL)添加至樹脂M4B(20 g，8 mmol)中，搖動1小時，且接著以DMF(10次）、DCM(4次）洗滌。將Fmoc-第三丁基甘胺酸（5.6 g，16 mmol)、HBTU (6·1 g，16 mmol)、H〇Bt(2.2 g，16 mmol)及（iPr)2NEt(2.9 mL，16 mmol)於DMF(100 mL)中之混合物添加至樹脂中。將懸浮液搖動隔夜，排乾，以DMF(10次）、DCM(4次）洗滌 129343-4.doc - 570- 200843738 且乾燥以得到樹脂M4C。將於DMF中之20°/〇哌啶（100 mL)添加至樹脂M4C(20 g，8 mmol)中，搖動1小時，且接著以DMF(10次）、DCM(4次）洗滌。將環己基乙酸（1.42 g，10 mmol)、HBTU(3.8 g，10 mmol)、HOBt(1.35 g，10 mmol)及（iPr)2NEt(1.8 mL，10 mmol)於DMF(100 mL)中之混合物添加至樹脂。將懸浮液搖動隔夜，排乾，以DMF(10次）、DCM(4次）洗滌且乾燥以得到樹脂M4D。

NOH

1) M4D，TEA，DMF 2) 95% TFA

M4F

將 NCS(134 mg，1 mmol)添加至 3-吡啶醛肟（M4E)(122 mg，1 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中。將混合物加熱至 50-60°C歷時30分鐘。冷卻至室溫後，將3-吡啶氣肟（M4F) 溶液添加至樹脂 M4D(300 mg，0.12 mmol)。將 ΤΕΑ(0·14 mL，1 mmol)添加至該混合物中，且將反應混合物加熱至 50-60°C歷時4小時。接著將反應混合物排乾且以DMF(6次）及DCM(6次）洗滌。將樹脂以95% TFA處理5小時。將混合 129343-4.doc -571 - 200843738 物排乾，且以DCM洗滌。將濾液真空濃縮，自柱50-100% Et〇Ac/Hex純化，以得到7 mg無色固體作為產物化合物No-303 。 HPLC 5.7-6.4 分鐘； MS 651.5 及 LC-MS 3.9 分鐘。以下在表5中列舉藉由方法4所製備之其他化合物。 r3

〇表5:藉由方法4所製備之其他式I化合物化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 41 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5->臭碳备 179 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-溴-2-糠酸 230 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2_環己基乙酸 2-甲基苯并呋喃-3-碳醛 303 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-吡啶-羧醛 495 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4-氯-1-曱基-1H-吡唑-3- 碳醛 552 N-FMOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,3-二氫苯并[b]呋喃-5- 羧醛本發明之其他某些化合物可如方法5A及5B之說明加以製備。方法5A :

-572- 129343-4.doc 200843738 Λν

Α9 Α10 參考方法5a，將外亞曱基酸化合物Α1保護以形成二甲酸二-第三丁酯E1。使E1與式If之腈氧化物反應，產生中間物B1，將其轉化為胺基酸衍生物E2。使E2與胺基醇E5反應，產生A9。將化合物A9如方法1中所述轉化為A10。方法5B :

129343-4.doc - 573 - 200843738 參考方法5b，將甲間化合物B1轉化為胺基酸醋以。使以與〜羧酸在偶合試劑存在下反應，產生E7，置中&為 ¥叫。將E7去保護產生E2，將其如方法ι中所述轉化為 A10 〇實例10 :化合物Ν〇· 422

C

Boc20 TEA, DMAP ACN

M2B 將化合物10A(5.0 g，1·0 eq·)於loo mL乙腈中攪拌且將二

碳酸二·第三丁酯（9·6 g，2 eq·)、二甲基胺基吡啶（537 mg， 0·2 eq.)及三乙胺（6.13 mL，2.0 eq·)添加至該溶液。將混合物攪拌隔夜，濃縮，添加乙酸乙酯，以1 ·〇 N HC1洗務，經硫酸鈉乾燥，濃縮，且以石夕膠層析法（10-3 0%乙酸乙酯/己烧梯度）純化以得到化合物M2B。（Μ+Η=284·0)。^-NMR

18H)。 (CDCl3):5.0(m，2H)，4.3-4.5(m，lH)，4.0-4.1(m，2H)，2.9-3.0 (m，1H)，2.5-2.6 (d，1H)，1.5(s，3/9之 18H)，1.4(s，6/9之

129343-4.doc - 574- 200843738 將化合物10Β(10·0 g，1·〇 eq·)與胡椒醛肟（n 5 ’ g，2·0 eq·) 一起於175 mL DCM中攪拌。將該溶液在冰浴上冷卻且口其緩慢添加漂白劑（175 mL)。接著將混合物溫熱至室溫，攪拌2小時，分離且將其水層以DCM萃取兩次。脸士騎有機物組合且經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。藉由；ς夕膠層析、去（5 3 0%乙酸乙酯/己烷梯度）將殘餘物純化且分離為非對映異

構體，以產生 4.1 g化合物 10C。（Μ+Η=446·9)。ih_Nmr (CDC13): 7·25 (m，1H)，7.0 (d，1H)，6·8 (d，1H)，6·〇 (s，2H) 4.6-4.4 (m，1H)，4.0-3.8 (m，1H)，3.7-3.6 (m，1H)，3·4_3 3 (m，1H)，3.3-3.2 (m，1H)，2.8-2.7 (m，1H)，2.3-2,2 (m，iH) 1·5 (s，9H)，1.4 (s，9H)。 ’ 或者，化合物10B藉由以下程序製備：製備：亞甲基吡咯啶-I，2-二甲酸（s)-二-第三

Boc20 (2.0 eq) DMAP (0.2 eq) Et3N (2.0 eq)

MeCN 3 h 25 °C 程序l 在環境溫度下將二乙胺（2 eq·)添加至（S)-1 _(第三丁氧基羰基）-4-亞甲基吡咯啶-2-甲酸（1·〇 eq·)、二碳酸二-第三丁酉旨（2.0 eq·)及DMAP(0.2 eq·)於乙腈（i〇v〇i)中之溶液。將反應混合物撥拌1 6 h，接著以乙酸異丙g旨（25 vol)稀釋。以水 (20 vol·，兩次）洗滌，繼而經Na2S〇4過濾，且將溶劑移除。將粗產物藉由過濾通過矽膠墊（37 v〇l矽石，先以庚烷 (80 vol)沖洗’再以於庚烷中之10〇/〇乙酸乙酯（3〇 v〇i)沖洗） 129343-4.doc - 575 - 200843738 純化。自第二次沖洗移除溶劑後得到化合物1〇B。程序2

將二碳酸二·第三丁酯（1·1 eq·)於MTBE(2 vol·)中之溶液添加至（S)-l-(第三丁氧基羰基）_4_亞甲基吡咯啶-2_甲峻 (1.0 eq.)與 DMAP(0.2 eq·)於 ΜΤΒΕ(8 ν〇1)與第三丁醇（1.75 ν〇1·)中之混合物中。將混合物攪拌丨小時，在該時點，氣體產生停止。將混合物相繼以1 N HC1(3 vol.)、飽和 NaHC03水溶液（3 v〇l·)、鹽水（3 ν〇1·)洗滌。接著將溶劑移除以得到化合物10B。

將化合物10C(4.0 g，1.0 eq·)於1/1 TFA/DCM中授拌3小時且將溶液濃縮。向該濃縮物添加1〇〇 mL丙酮、1〇〇瓜[飽和碳酸氫鈉溶液及二碳酸二-第三丁酯，且將所得溶液擾拌隔夜，且接著以1.0 N HC1溶液酸化，且以乙酸乙酿（三次）萃取。將有機物以鹽水溶液洗滌，且經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以產生4.0 g化合物10D (Μ+Η=391·1)。 129343-4.doc - 576- 200843738

10D

10E

將化合物 10D(50 mg，1.0 eq.)與 EDC(37 mg，1·5 eq·)、 PS-HOBt(137 mg，1·5 eq.)及 NMM(56 μί，4.0 eq.)於 0.5 mL DMF中攪拌，且將0.5mL DCM添加至該溶液中以有助於樹脂之溶脹。向該混合物添加3_胺基-2-羥基己醯胺（30 mg， 1.3 eq.)，且將該混合物攪拌隔夜，過濾，以乙酸乙酯稀釋，以1.0 N HC1洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將該溶液藉由矽膠層析法（100% DCM-5°/〇 MeOH/DCM梯度）純化以產生21 mg粗產物，接著將其於4.0 N HC1/二噁烷中攪拌2小時且濃縮以產生作為HC1鹽之化合物 10Ε(Μ+Η=419·0)。

〇,"。又心

EDC PS-HOBt NMM, DMF

10E 10F 將化合物 10E(21 mg，1·0 eq·)與 NMM(13 μί，1·4 eq·)於 129343-4.doc - 577 - 200843738 DMF中攪拌，且向該溶液添加（s)_3,3_二甲基四氫呋喃-3·基氧基）羰基胺基）丁酸（14叫，1.4 eq.)、EDC(li mg, 1.4 eq·)及 PS-HOBt(40 mg，1·4 eq·)於 DMF 中之溶液，以足夠的DCM使樹脂溶脹。將該混合物攪拌隔夜，過渡，以1 · 0 N HC1洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且接著濃縮以得到化合物10F，其無需進一步純化便可使用。（μ+Η=646·4)。

化合物No· 422

將化合物10F於DCM中攪拌且將Dess_Martin高埃烧& 3.0 eq.)添加至該溶液。將溶液攪拌1小時，向其添加1〇 N Na^Os，且攪拌。將該混合物藉由矽膠層析法（1〇_9〇%乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生9 mg化合物ν〇· 422(M+H = 644.3)。b-NMR (CDC13): 7·3 (m，1H)，7.15(m，1H)，6·95 (m，1H)，6·8 (m，1H)，6.75 (m，1H)，6·0 (s，2H)，5.5-5 4 (m， 2H)，5.4-5.3 (m，2H)，4.8-4.7 (m，1H)，4.3 (m，ih)，4·2 (m， 1H)，4.0-3·8 (m，3H)，3.7 (m，1H)，3.4_3·2 (m，2H)，2.6 (m， 1H，），2·5 (m，1H)，2.2-2.1 (m，1H)，2·1-2·〇 (m，1H)，19 (m， 1H)，1.6 (m，1H)，1.5-1.4 (m，2H)，1.〇-〇·9 (m，13H)。實例11 ··化合物No· 562 129343-4.doc - 578 - 200843738

在室溫下經2 h將N-氯丁二醯亞胺（6.6 g，49.7 mmol)於 DMF(135 mL)中之溶液逐滴添加至於DMF(135 mL)中之 2,4-二甲氧基苯甲醛肟（4.5 g，24.8 mmol)中。將反應物攪拌14小時且添加化合物M2B(5.2 g，1 8.4 mmol)，繼而經1 h 逐滴添加三乙胺於DMF(2.6 mL，18.4 mmol，於15 mL中）中之溶液。攪拌3 h後，將反應混合物以H20洗滌且經 MgS04乾燥。將所得殘餘物經由矽膠層析法純化以得到5.8 g褐色固體狀化合物 11B。ES ( + ) MS: m/e 497 (M+H)+。將三氟乙酸（30 mL)添加至於CH2C12(30 mL)中之化合物 11B(5.5 g，11.1 mmol)中。將反應混合物在室溫下授拌90 分鐘且在減壓下濃縮以產生褐色固體，將其溶於MeOH(60 mL)且加熱至回流。逐滴添加濃硫酸（=5 mL)且將反應物回流3小時，其後將溶劑在減壓下移除。將所得殘餘物溶 129343-4.doc - 579- 200843738 於CH2C12(75 mL)中且謹慎地以飽和NaHC03溶液處理直至 pH=9為止。將有機層經MgS04乾燥且濃縮以形成中間物胺基 g旨。將 EDC(2.6 g，13.6 mmol)、HOBt(1.8 g，13·6 mmol) 及三乙胺（5.5 mL，39·5 mmol)添加至於CH2Cl2(60 mL)中之 N-Boc-第三丁基甘胺酸（3·1 g，13.6 mmol)中。攪拌5分鐘後，添加上述胺基酯且將反應物在室溫下攪拌14小時。將反應混合物以H20、1 N HC1及飽和NaHC03溶液洗滌。將有機層經MgS04乾燥且真空濃縮以產生5.6 g棕色固體狀化合物11C(經3個步驟），其無需進一步純化便可使用。ES (+ ) MS: m/e 568 (M+H)+。將三氟乙酸（3 mL)添加至於CH2C12(3 mL)中之化合物 11C(600 mg，1.1 mmol)中。將反應物攪拌1小時且在減壓下濃縮以得到作為TFA鹽之所需胺產物。將EDC(243 mg， 1.3 mmol)、HOBt( 1 71 mg，1·3 mmol)及三乙胺（516 pL，3.7 mmol)添加至於CH2Cl2(6 mL)中之環己基乙酸（181 mg，1.3 mmol)中。攪拌5分鐘後，添加上述胺且將反應物在室溫下攪拌14小時。將反應混合物以H20、1 N HC1及飽和 NaHC03溶液洗滌。將有機層經MgS04乾燥且真空濃縮，且將所得殘餘物經由矽膠層析法純化以產生460 mg灰白色固體狀化合物11D(經2個步驟）。ES (+) MS: m/e 592 (M+H)+。將LiOH單水合物（82 mg，1·9 mmol)添加至於THF/H20(5 mL，3 :1 v/v)溶液中之化合物 11D(460 mg，0.8 mmol)中。將反應混合物在室溫下攪拌14小時，使用1 N HC1酸化，且 129343-4.doc - 580 - 200843738 以EtOAc萃取。將有機層經MgS04乾燥且在減壓下濃縮以產生405 mg化合物11E，其無需進一步純化便可使用。ES (+) MS: m/e 578 (M+H)+ 〇

將 EDC(38 mg，0.2 mmol)、HOBt(27 mg、0·2 mmol)及三乙胺（68 μί，0·5 mmol)添加至於CH2C12(1 mL)中之化合物 11E(80 mg，0.14 mmol)中。攪拌5分鐘後，添加化合物11F

且將反應物在室溫下攪拌14小時。將反應混合物以H20、1 N HC1及飽和NaHCCh溶液洗滌。將有機層經MgS04乾燥且真空濃縮以產生95 mg棕色固體狀化合物ug(95%)，其無需進一步純化便可使用。ES (+) MS: m/e 718 (M+H)+。將 Dess-Martin 高峨烧（71 mg，0· 17 mmol)添加至於 CH2C12(1 mL)中之化合物 11G(95 mg，0·14 mmol)中。搜拌 30分鐘後’以1 N Na2S2〇3中止反應。將有機層經由石夕膠層析法純化以得到白色固體狀化合物No· 562，亦即以上所示之化合物 11H。ES (+) MS: m/e 716 (M+H)+。實例12 :化合物No. 362

12A 將4 -甲氧基-3,5-一甲基苯甲酸（186 g，11·3 mmol)溶於乙醇（30 mL)且在室溫下與羥胺鹽酸鹽（2·4 Μ水溶液，5.65 mL ’ 1.2 eq·)及 Na2C03(l,2 Μ 溶液，5.65 mL，0.6 eq.)—起 129343-4.doc •581 - 200843738 攪拌2.5小時。接著將混合物加熱至6〇它，且添加額外的羥胺鹽酸鹽及ΝαΧ〇3。在6(TC下將混合物再攪拌隔夜，轉移至分離漏斗，以EtO Ac稀釋。將有機層分離，以鹽水洗務，經MgSCU乾燥，過濾且濃縮。以Et〇Ac/己烷溶離劑將產物藉由ISCO層析法純化以產生155 g(8.56 mmol，77%) 白色固體狀4-甲氧基-3,5-二甲基苯甲醛肟。m+1 = i80.0。將N-氣丁一醯亞胺（1·76 g，13.2 mmol)添加至4-甲氧基_ — 甲基苯甲酸辟（1·34 g，7·48 mmol)於 DMF(l〇 mL)中之溶液中。將該溶液攪拌直至起始物質如藉由HPLC所指不被耗盡為止。接者向该溶液中添加4 -亞甲基ϋ比略σ定_ 1，2 _ 二甲酸（S)-二-第三丁酯（2.1 g，1·〇 eq·)於 DMF(5 mL)中之溶液。將三乙胺（1 ·2 eq·)逐滴添加至該溶液中，且將反應混合物攪拌2小時。接著將反應物以EtOAc稀釋，且將有機相以水、鹽水洗滌，乾燥（MgS04)，過濾且濃縮。使用 EtOAc/己烷作為溶離劑，將產物經ISCO Combiflash矽膠純化，以產生912 mg(1.98 mmol)化合物12A。M+l = 461.4。W-NMR (500 MHz，CDC13): 7·30 (s，2H)，4.40-4.32 (m，1Η)，3.98-3.79 (m，1Η)，3.74 (s，3Η)，3.64-3.58 (m， 1H)，3.40-3.34 (m，1H)，3.24-3.19 (m，1H)，2·72 (dd，J=8,7, 12.9 Hz，1H)，2·29 (s，6H)，2.11-2.07 (m，1H)，1.54-1.45 (m，18H)。 129343-4.doc - 582 - 200843738

12A

將化合物12A(910 mg，1.98 mmol)於CH2C12/三氟乙酸 (1:1，20 mL)中攪拌直至HPLC指示完全將起始物質去保護為止。將中間物胺基酸濃縮且接著溶於甲醇（30 mL)且與濃112804—起加熱至回流直至起始物質如藉由HPLC所指示耗盡為止。將物質真空濃縮，接著溶於EtOAc且以 NaHC03、鹽水洗滌，經MgS04乾燥且濃縮以得到化合物 12B。Μ+1=319·0。

將化合物12B(727 mg，2.28 mmol)與Boc-第三丁基甘胺酸（686 mg，3.0 mmol)、EDC.HC1(659 mg，3.43 mmol)、 HOBt(460 mg，3.4 mmol)及 DIEA(1.2 mL，6.89 mmol)溶於 DMF(3 mL)，且在室溫下攪拌隔夜。接著將反應物轉移至分離漏斗且以EtOAc稀釋。將有機層以1 N HC1(兩次，每次20 mL)、飽和NaHC03水溶液（25 mL)、水（10 mL)、鹽水 129343-4.doc - 583 - 200843738 (10 mL)洗滌，經MgS04乾燥且濃縮。以EtOAc/己烷作為溶離劑，將粗產物12C經ISCO Combiflash矽膠純化以產生 231 mg(0.435 mmol)透明無色油狀化合物12C。LCMS (Μ+1) = 532·45。

將化合物12C(231 mg，0.435 mmol)在於二噁烷中之4 Ν HC1(15 mL)中攪拌90分鐘，於該時點TLC分析指示反應混合物中無起始物質存在。將HC1及二噁烷蒸發以產生灰白色發泡體。將一部分該中間物（0.35 mmol)、EDC · HC1(96 mg，0·5 0 mmol)、HOBt(72 mg，0.53 mmol)及環己烧乙酸 (78 mg，0·55 mmol)於 DMF(3.5 mL)中攪拌。將 DIEA(0.18 mL，1 ·0 mmol)添加於其中，且將反應物擾拌隔夜。接著將反應物以EtOAc稀釋且轉移至分離漏斗，在分離漏斗中將層分離且將有機相以1.0 N HC1、飽和NaHC03水溶液、鹽水洗滌，經MgS04乾燥且濃縮。以EtOAc/己烷作為溶離劑，將產物經ISCO Combiflash石夕膠純化以產生219 mg(0.3 94 mmol)透明油狀化合物 12D。M+1 = 556.4。 129343-4.doc - 584 - 200843738

在室溫下將於THF/H20/Me0H(4:l:l，6 mL)中之化合物 12D(219 mg，0·394 mmol)與 υ〇Η·Η20(1·5 eq·)—起攪拌隔夜。接著將反應物以l.o N HC1酸化且以CH2C12萃取。將有機層以鹽水洗滌，經MgS04乾燥且濃縮以產生207 mg(0.382 mmol)化合物 12E。Μ+1=548·4。

在室溫下將化合物 12E(207 mg，0.382 mmol)與 HOBt(107 mg，0.792 mmol)、EDC.HC1(144 mg，0.764 mmol)及經胺鹽酸鹽（168 mg，0·75 mmol)於DMF(2.0 mL)中攪拌，且以 DIEA(0.400 mL，2.3 mmol)處理。將反應物攪拌隔夜，以 EtOAc稀釋，以1 N HC1、飽和NaHC03洗滌，且將合併之水層再以EtOAc萃取。將有機層組合，經MgS04乾燥，濃縮，且以EtOAc/己烷作為溶離劑，經ISCO combiflash矽膠純化，以產生227 mg(0.3 20 mmol)白色固體狀化合物12F。 129343-4.doc - 585 - 200843738 (M+TFA) Μ-1 = 822·6。

12F 化合物No· 362 在室溫下將化合物12F(227 mg，0.320 mmol)溶解於 CH2C12(4 mL)中，且以Dess-Martin 高蛾烧（142 mg，1·0 eq.) 處理。1 5分鐘後’ TLC展示反應完全，且藉由添加水及劇烈攪拌使反應溶液中止。添加額外的CH2C12，將有機層分離，且以EtOAc/己烷作為溶離劑，經ISCO combiflash矽膠純化，以產生 159 mg(0.225 mmol)化合物 No· 362。FIA MS (Μ+1)=708·42。W-NMR (500 MHz，CDC13): 7.30 (s，2H)， 7·17 (d，1H)，6.93 (d，1H)，6.15 (d，1H)，5·39-5·33 (m，1H)， 4.72(t，lH)，4,66(d，lH)，4.25(d，lH)，3.74(s，3H)，3.74-3·69 (m，1H)，3.42 (d，1H)，3.30 (d，1H)，2.81-2.75 (m，1H)， 2,58-2.46 (m，2H)，2.29(s，6H)，2.16-2.10(m，lH)，2.08-2.00(m，lH)，1.97-1.88 (m，lH)，1.85-1.57 (m，8H)，1.51-1.35 (m? 2H)? 1.33-1.22 (m? 2H)5 1.20-1.07 (m? 1H)? 1.02- 0.96 (m，10H)，0.92 (t，3H)，0.88-0.80 (m，2H)，0.66-0.56 (m，2H)。實例13 :化合物No. 247 129343-4.doc - 586- 200843738

將ΤΕΑ(0·14 mL)及異氰酸第三丁酯（0.6 mmol)添加至化合物13A(222 mg，0.5 mmol)之溶液中。將所得溶液攪拌隔夜且接著以EtOAc(20 mL)稀釋，以水（10 mL)洗滌，經 Na2S04乾燥且真空濃縮。將粗產物藉由矽膠層析加以純化以得到白色固體狀化合物13B(190 mg)。HPLC 8·48 min; LC-MS m/z 507.2 ES+。

將化合物13B溶於THF，且將溶液以1.0 N LiOH水溶液及水處理。將反應混合物攪拌1小時且真空濃縮。接著將殘餘物以水稀釋，以Et20洗滌且以1 N HC1水溶液酸化。將所得混合物以CH2C12萃取兩次，且將合併之有機物經 MgS04乾燥，過濾且真空濃縮，以得到粗化合物13C，其無需進一步純化便可用於下一步驟。LC-MS m/z 493.22 ES +，491.21 ES_。 129343-4.doc - 587 - 200843738

將化合物13C(20.6 mg)於CH2C12(800 μι)中之溶液以卜 (3-二甲基胺基丙基）-3 -乙基碳化二酿亞胺鹽酸鹽（1〇 mg)及經基苯并三嗤（7 mg)處理1小時。接著添加一份二異丙胺 (16 μΐ^)及3-胺基-4-環丁基-2-沒基丁酿胺D(10.5 mg)，且將所得反應溶液在室溫下另外攪拌16小時。接著將混合物連續以1 N HC1水溶液、1 N K2C03水溶液：IN NaHC03水溶液之1:1溶液及鹽水洗滌。接著將有機物乾燥（MgS〇4)，真空濃縮且藉由矽石層析（於CH2C12中之0%至4% MeOH)純化以產生化合物 13D(11.6 mg)。LC-MS m/z 647.25 ES+。

13D

將Dess-Martin高碘烷（8·4 mg)饋入化合物13D(U6 mg) 於CH2C12(1 mL)中之溶液中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小訏。接著將所得白色混合物以1.0 N Na2S203水溶液洗滌’將相分離且將有機物經MgS〇4乾燥，真空濃縮且藉由矽石層析（於己烷中之3〇%至65% Et〇Ac)純化以產生6.7 叫白色固體狀化合物No. 247 : W-NMR (500 MHz， 129343-4.doc 200843738 CDC13): 7.61 (s)，7.52 (d，J=6.1 Ηζ)，7·39 (d，J=7.8 Hz)， 7.34 (t，J=7.8 Hz)，6·87 (s)，6.77 (s)，5.89 (s)，5.67 (s)， 5.23-5.19 (m)，4.83-4.79 (m)，4.47 (s)，4.38 (d，J=ll.〇 Hz)， 3·72 (dd，J=3.1，11·2 Hz)，3.45 (m)，3.30 (d)，2.64 (m)，2.56 (m)，2.44-2.36 (m)，2.08-1.98 (m)，1.86-1.68 (m)，1.64-1.58 (m)，1.33-1.22 (m)，1.05-1.00 (m，H)，0.95-0.92 (m，H) ppm。LC-MS m/z 647.25 ES+。實例14 :化合物No. 57 (

14A 14B 以於二噁烷中之4 N HC1處理化合物14A(512 mg)於二噁烧中之溶液。將反應溶液在室溫下攪拌45分鐘且真空濃縮。將所得殘餘物溶於少量CH2C12且自Et20/己烷中結晶以得到白色固體狀化合物14B(362 mg)。LC-MS m/z 468.24 ES+。

14B 14C

Milwaukee，將環庚烧乙酸（83 mg, Aldrich Chemical Co.， 129343-4.doc - 589- 200843738

Wise.)於CH2C12(4 mL)中之溶液以1-(3-二曱基胺基丙基）-3-乙基碳化二酸亞胺鹽酸鹽（103 mg)及經基苯并三唾（72 mg) 處理1小時。隨後添加一份二異丙胺（1 60 μΙ〇及中間物 14Β( 179 mg)且將所得反應溶液在室溫下另外攪拌2小時。接著將混合物連續以1 N HC1水溶液、IN K2C03水溶液：1 N NaHC03水溶液之1:1溶液及鹽水洗滌。將有機物乾燥 (MgS04)，真空濃縮且藉由矽石層析（於己烷中之15%至 60% EtOAc)純化以產生化合物 14C(188 mg)。LC_MS m/z 606.25 ES+。

14C 14D 將化合物14C(186 mg)溶於THF(3 mL)且將該溶液以1 N LiOH水溶液（620 μί)及水（1 mL)處理。將反應混合物在室溫下攪拌45分鐘，且真空濃縮。接著將殘餘物以水稀釋，以Et20洗滌且以1 N HC1水溶液酸化。將所得混合物以 EtOAc萃取兩次，且將合併之有機物經MgS04乾燥，過濾且真空濃縮，以得到粗化合物14D，其無需進一步純化便可用於下一步驟。LC-MS m/z 592.25 ES +，590.35 ES-。 129343-4.doc - 590- 200843738

14F

14D

將化合物 14D(89 mg)於 CH2C12(1 mL)/DMF(l mL)中之溶液以1-(3-二甲基胺基丙基）-3-乙基碳化二醯亞胺鹽酸鹽（44 mg)及經基苯并三哇（3 1 mg)處理1小時。接著添加一份二異丙胺（70 μ!〇及（3S)-3-胺基-4_環丙基-2-羥基丁醯胺（35 mg)，且將所得反應溶液在室溫下另外攪拌1 6小時。接著將混合物連續以1 N HC1、1 N K2C03水溶液：1 N NaHC03 水溶液之1:1溶液及鹽水洗務。將有機物經MgS〇4乾燥，真空濃縮且藉由矽石層析（於CH2C12中之0%至5% MeOH)純化以產生 96 mg 化合物 14F。LC-MS m/z 732.21 ES+。

14F

化合物No· 57 將Dess-Martin高蛾烧（83 mg)饋入化合物14F(96 mg)於 CH2C12(1.5 mL)中之溶液，且將反應混合物在室溫下攪拌2 小時。接著將所得白色混合物以1 N Na2S203水溶液洗滌，將相分離且將有機物經MgS04乾燥，真空濃縮且藉由矽石 129343-4.doc -591 - 200843738 層析（於己烷中之10%至95% EtOAc)純化以產生白色固體狀化合物 No. 57(44 mg)。]H-NMR (500 MHz，CDC13): 7.76 (s)5 6.75 (br s)，6.48 (s)，6·07 (d)，5·40 (m)，4.67 (m)，4.22 (d)，3.95 (s)，3.87 (s)，3.75 ⑷，3.43 (m)，2.51 (m)，2.10 (m)，1.30-1.87 (m)，1.12-1.28 (m)，0.97 (m)，0.79 (m)，0.15 (m)，0,03 (m) ppm。LC-MS m/z 730.35 ES +，728.35 ES、實例15 :化合物No. 600

化合物600具有與表1中之化合物266相同之結構。將 EDC(458 mg，2.4 mmol)、HOBt(324 mg，2.4 mmol)及三乙胺（836 μ、6.0 mmol)添加至（R)-2-環己基丁-3-炔酸 (43 0 mg，2·4 mmol)於 CH2C12(10 mL)中之溶液中。攪拌 5分鐘後，添加化合物15A(800 mg，2·0 mmol)且將反應物攪拌 16小時。將混合物以h20、1 N HC1及飽和NaHC03溶液洗滌。將有機層經MgS04乾燥且在減壓下濃縮以產生1.23 g 粗化合物15B，將其藉由矽膠層析法純化。es ( + ) MS: m/e 129343-4.doc - 592 - 200843738 570 (M+H)十。將LiOH早水合物（11 5 mg，3 添加至化合物i5B(220 mg，0·4 mmol)於 THF/H20(2 mL，3:1 v/v)中之溶液中。將混合物攪拌2小時，使用1 N HC1(6 mL)酸化，且以 EtOAc(三次’ 10 mL)萃取。將合併之有機物經MgS〇4乾燥且激縮以得到無色油，其無需進一步純化便可使用。將油溶於 CH2C12(2 mL)，接著添加 EDC(90 mg，0.5 mmol)、 HOBt(63 mg，〇·5 mmol)及三乙胺（163 μί，1.2 mmol)。攪拌 5分鐘後’添加（3S)-3-胺基-N-環丙基-2-經基己醢胺（87 mg，0,5 mmol)。將反應物攪拌12小時，以H2〇、1 N HC1及飽和NaHC〇3溶液洗滌。將有機層經MgS04乾燥且在減壓下濃縮以產生215 mg無色油狀化合物15C，其無需進一步純化便可使用。ES (+) MS: m/e 724 (M+H)+。將Dess_Martin高蛾烧（41 mg，0· 1 mmol)添加至化合物 15C(53 mg，〇·〇7 mmol)於 CH2C12(0.5 mL)中之溶液中。將混合物攪拌30分鐘，以1 Na〗S2〇3中止，且分離。將有機層藉由矽膠層析法純化以產生20 mg化合物No. 600。々胃 NMR (500 MHz，CDC13): 7.53 (d，J=1.6 Hz，1H)，7.43 (d， J=7.6 Hz, 1H)，7.31-7.25 (m，2H)，6.83 (d，J=3.3 Hz，1H)， 6.24-6.21 (m，1H)，5.30-5.26 (m，1H)，4·70-4,58 (m，2H)， 4.23-4.21(m，lH)，3.64(dd，lH)，3.36-3.20 (m，2H)，2.70-2·68 (m，1H)，2.57-2.35 (m)，2.04-1.82 (m)，1.72-1.30 (m， l〇H), 1.18-0.75 (m), 0.55-0.40 (m) 〇實例l6 :化合物No. 602 129343-4.doc - 593 - 200843738

化合物602具有與表1中之化合物212相同之結構。相繼將抗壞血酸鈉之水溶液（10 0，〇.〇1 mmol, 1.0 M)、硫酸銅（II)五水合物之水溶液（5叫，o.ooi mmol，0.3 Μ)添加至如上所製備之化合物15C(20 mg，0.03 mmol)與特戊酸疊氮基曱酯（4 mg，〇·〇3 mmol，根據 Syn. Lett.，2005，18，第2847-2850頁所製備）於第三丁醇/h2〇(12〇 u v/v)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌12小時，以H2〇稀釋，且以EtOAc萃取。將合併之有機物相繼以5%氫氧化銨、鹽水洗滌，經MgS〇4乾燥且在減壓下濃縮以產生25 mg粗化合物16B，其無需進一步純化便可使用。ES ( + ) MS: m/e 881 (M+H)+。將NaOH水溶液（120 pL，1 M)添加至化合物16B於 MeOH(120 μί)中之溶液中。將反應物在室溫下攪拌2小時，接著相繼以1 M HC1(120 μι)、Η2〇(120 μΙ〇處理。將 129343-4.doc -594- 200843738 混合物以CH2C12(三次，每次200 μΙ〇萃取。將合併之萃取物以鹽水洗滌且濃縮為約100 pL之體積。將Dess-Martin高碘烷（17 mg，0.04 mmol)添加至該溶液且將反應物攪拌30分鐘。將混合物以1 M Na2S2O3(150 μ!〇中止’且將有機層分離且經由矽膠層析法純化以得到3 mg化合物Νο· 602 ° ES (+) MS: m/e 765 (M+H)+。以下在表6中列舉藉由方法5a及5b所製備之其他式1化合物。 r3

表6 :藉由方法5a及5b所製備之其他式1化合物。彳匕合物No· p|之起始物質 C：1之起始物質 R3之起始物質_ 5 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(4-羥基-4-甲基環己基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 10 (S)-4-(苄胺基)-2-異丙基-4- 側氧基丁酸 N/A 3-氯苯甲醛肟 13 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-降冰片院乙酸 3-氯苯甲醛肟 19 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(雙環并[4·1·〇]庚-1-基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 21 (S)_4-(i^己基胺基)-2-異丙基-4-側氧基丁酸 Ν/Α 3-氯苯甲醛肟 23 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 26 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 Ν-苯甲醯基脯胺酸 3-氯苯甲醛肟 27 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸環丁烷乙酸 3-氯苯甲醛肟 43 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟_ 48 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-降冰片院乙酸 2,4·二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 50 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣苯甲醛肟 129343-4.doc - 595 - 200843738 彳匕合物No· P1之起始物質 C1之起始物質 Rs之起始物質 59 三丁基甘胺酸 2-環庚基乙酸 2,4-二曱氧基-5-氣苯甲醛肟 63 三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣苯甲醛肟 67 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-211-旅喃-4- 基)乙酸 3-氣-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟 86 90 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸異丙醋胡椒醛肟 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氣苯甲酸將 104 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸第三丁基乙酸 2，孓二甲氧基-5- 氯苯甲醛肟 105 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 N/A 3-氣苯甲醛肟 117 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 4-甲基四氫-2H-哌喃-4-曱酸 3-氣苯甲醛肟 121 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(2,2-二甲基四氫-2H-11辰喃-4-基)乙酸 3-氣苯甲醛肟 126 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟 129 N-B OC-L-第三丁基甘胺酸 2-環庚基乙酸 2,4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 131 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 N/A 2,4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 136 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-5·氣-4-乙氧基苯甲醛肟 145 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氮基)乙酸胡椒醛肟 153 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-((2R，5R)-2，I^~ 基四氫-2H-派喃《4-基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 168 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-壤己基乙酸噻吩-3-羧醛 3-氯苯甲醛肟— 172 N-苯基-L-第三丁基甘胺酸 178 N-BOC-L-弟二丁基甘胺酸 2-(四氫基)乙酸 3-氣-5-氟-4-乙氧基苯甲醛肟 3-氣苯曱醛肟 184 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 4-曱基四喃-4-甲酸 188 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己 3-氯苯甲醛肟_ 2,4-二曱氧基-5-氣笨曱醛肟 192 1 r\^ N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2,5-一側啶-1-基碳酸環戊酯 195 N-BOC-L-第二丁基甘胺酸 2-環 3-氣-4-甲氧基-5-甲甚lM：甲躬* 211 2-(第三丁氧基羰基胺基)-2-(1-甲氧基環丙基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 3-氯苯甲醛肟 212 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 (3)-2-環£^^- -596- 129343-4.doc 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 214 基)-L•第三丁基甘胺酸 N/A 3-氣苯甲醛肟 217 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 219 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環庚基乙酸 3-氯苯甲醛肟_ 225 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基碳酸環戊酯 3-氯苯甲醛肟 231 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟_ 233 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(1-經基環己基）乙酸 3-氣苯甲醛肟 247 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸第三丁酯 3-氣苯曱醛肟 256 N-BOOL-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-乙基-2-糠醛肟 263 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-5-氣-4-乙氧基苯甲醛肟 264 N-BOOL-第三丁基甘胺酸 N/A 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 _ 266 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 (S)-2-環己基戊冰炔酸 3-氣苯曱醛肟 268 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 273 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 280 (S)-2-異丙基-4-(異丙胺基)-4-側氧基丁酸 N/A 3-氯苯甲醛肟 282 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2Η-π辰嗔-4-基)乙酸 2,4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 284 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 (8)-2-¾己基丙酸 3-氯苯甲醛肟 286 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸 2,4-二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 290 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 胡椒醛肟 294 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣苯甲醛肟 295 N-((S)-四氫σ夫喃基氧基）幾基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 胡椒醛肟 297 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸第三丁基乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 307 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,4-二甲氧基-5- 氣苯甲醛肟 310 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-娘喃-4-基)乙酸 3,5-二甲基斗甲氧基苯甲醛肟 326 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸 2,4-二甲氧基-5-氯苯曱醛肟 335 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,4-二甲氧基苯曱醛肟 337 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基碳酸環戊酯 3-氯苯曱醛肟 - 597- 129343-4.doc 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 344 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪甲酸 3-氯苯甲醛肟 346 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-降冰片烷乙酸 3-氯苯甲醛肟 351 N/A 第三丁基乙酸 3-氯苯曱醛肟 356 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-(4-曱基四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 362 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3,5-二甲基-4-甲氧基苯甲醛肟 369 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2,5-二側氧基吼哈啶-1-基碳酸環戊酯 3-氯苯曱醛肟 375 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸胡椒醛肟 382 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸異丙酯胡椒醛肟 388 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸環己基乙酸 3-氯苯曱醛肟 411 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氮-2H-旅喃-4-基)乙酸 3-氣-5-敗-4-乙氧基苯曱醛肟 415 N-CBZ-L-第三丁基甘胺酸 N/A 胡椒醛肟 418 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-((2S，5R)-2,5-二曱基四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 419 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2·(2,2-二甲基四氫-2Η-旅喃-4-基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 440 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基碳酸環戊酯 2,4-二曱氧基-5-氣苯甲醛肟 442 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-((2S，5R)-2,5-二曱基四氫-2H-派ϋ南-4-基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 445 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(1，4·二氧雜螺[4.5] 癸-8-基)乙酸 3-氣苯曱醛肟 446 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-降冰片烷乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 453 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3_氯苯曱醛肟 468 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-((2R，5R)-2,5-二曱基四ί^-2Η-ϋ辰喃-4-基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 473 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸第三丁基乙酸 2,4·二甲氧基-5-氯苯甲醛肟 485 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸反-2-苯基-1-¾丙烧曱酸 3-氣苯甲醛肟 502 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 N-FMOC-L-環己基甘胺酸，繼而2-吡嗪甲酸 3-氯苯曱醛肟 - 598 - 129343-4.doc 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 510 N-BOOL-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 516 N-((S)-四氫呋喃-3-基氧基）羰基)-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,4-二甲氧基苯甲醛肟 522 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 529 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2_(4_甲基四氫-2H-哌喃-4-基）乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 541 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(4·甲基四氫-2H-口辰喃-4-基)乙酉楚 3-氯苯甲醛肟 542 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸異氰酸第三丁酯 3-氯苯甲醛肟 549 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 (S)-2-環己基-4-側氧基-4-(σ比鳴►σ定-1 -基）丁酸 3-氯苯甲醛肟 554 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-211-旅喃-4-基)乙酸 5-乙基-2-糖搭肪 562 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,4-二甲氧基-5-氣苯甲醛肟 569 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 (S)-2-(環己基)-4-(甲基胺基)-4-側氧基丁酸 3-氣苯甲醛肟 575 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-(4-經基-4-甲基環己基)乙酸 3-氯苯甲醛肟 577 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,4-二甲氧基-5- 氣苯甲醛肟 581 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 N/A 2,4-二曱氧基_5_ 氣苯甲醛肟 589 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-8-啥琳碳酸肟 590 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2-曱氧基-3-甲基苯曱醛肟式I之某些其他化合物可藉由如下所說明之方法6加以製備。方法6 :

F1 F2 F3 129343-4.doc -599- 200843738

參考方法6，將中間物A1轉化為Boc_甲酯pi。自幻移除 Boc基團，產生胺酯F2，在偶合試劑存在下使其與&羧酸反應以產生F3，其中R!為R4C(〇)-。F3與腈氧化物反應’以在相應曱酯E3之水解後產生螺異噁唑啉酸e4。如方法5a中所述使E4轉化為E7。實例17 :化合物No. 267

將於丁11?(10〇1111^)中之4-經基-3,5-二曱基苯甲酸（258, 16·6 mmol)以 ΚΟΗ(1·5 eq.之 1 N水溶液，25 mL)及 2-碘丙烧（2.0 eq·)處理且在回流溫度下加熱5天。接著將反應物冷卻，轉移至分離漏斗，以MTBE稀釋，以h2〇、1 N NaOH(兩次）、〇·5 N HC1(aq·)、鹽水洗滌，經MgS〇4乾燥且濃縮。將產物經ISCO combiflash石夕膠純化以產生ι ·99 g(10.34 mmol)無色液體狀4-異丙氧基_3,5_二甲基苯甲醛。 129343-4.doc -600- 200843738 4 NMR (300 MHz，CDC13) 9·89 (s，1Η)，7·55 (s，2H)，4.41 -4.26 (m，1 H)，2.32 (s，6H)，1·32 (d，J=6 Hz，6H)。

在室溫下將於EtOH(60 mL)中之4-(異丙氧基）-3,5-二曱基苯甲醛（1·98 g，10·3 mmol)與羥胺鹽酸鹽（2.4 Μ水溶液， 5.2 mL，1.2 eq.)及 Na2C03(1.2 Μ 溶液，5.2 mL，0.6 eq.)加熱至60°C歷時2小時。將反應物轉移至分離漏斗，以EtOAc 稀釋；將有機層分離，以鹽水洗務，乾燥（MgS04)，過濾且濃縮以產生710 mg(3.24 mmol)淺黃色油狀4-(異丙氧基）-3,5-二甲基苯甲醛肟。111以^1尺（500 ^/〇^，€〇(：13):8.10(3, 1H)，7.23 (s，2H)，4.29-4.18 (m，1H)，2·29 (s，6H)，1·29 (d， 6H)。

在室溫下將於DMF(3 mL)中之4·(異丙氧基）-3,5-二曱基苯甲酸肪（166 mg，0.801 mmol)與 NCS(130 mg，0.974 mmol)—起攪拌隔夜。向此反應物中添加於DMF( 1.5 mL) 中之甲酯（25 7 11^，0,679 111111〇1)及三乙胺（1.2 69.)。將其在 129343-4.doc -601 - 200843738 室溫下攪拌。接著將反應物以EtOAc/己烷（4:1)稀釋且以1 N HCl(aq.)洗滌。將層分離且將水層再以EtOAc/己烷（4:1) 萃取。將有機層組合，以鹽水洗滌，乾燥（MgS04)，且濃縮。以EtOAc/己烷作為溶離劑，將該化合物經ISCO Combiflash石夕膠純化以產生173 mg(0.296 mmol)白色固體狀化合物 17A。LCMS (M+1) = 5 84.3。

17A 17B 在 RT 下，將化合物 17A(173 mg，0·30 mmol)與 Li0H.H20

(1 · 1 eq.)於 THF/Me0H/H20(4:1:1，3 mL)中一起攪拌隔夜。將反應物以EtOAc稀釋，以1 N HCl(aq)酸化，且將層分離。將水層再以EtOAc萃取，將有機層組合，以鹽水洗滌，乾燥（MgS04)且濃縮以產生171 mg(0.30 mmol)白色固體狀化合物 17B。FIA MS (Μ+1) = 570·3。

17C 129343-4.doc -602- 200843738 在室溫下將羧酸 17B(83 mg，0.146 mmol)、EDC .HC1(37 mg，1.3 eq·)、HOBt(26 mg，1.3 eq.)、（3S)-3-胺基-N-環丙基-2-羥基己醯胺鹽酸鹽（64 mg，2〇 eq )及DIEA(〇 1〇〇 mL， 4.0 eq.)於DMF(0,9 mL)中攪拌隔夜。接著將反應混合物以 EtOAc稀釋且以1 N HCl(aq)(兩次）洗滌。將水層分離且再以EtOAc萃取。將有機層組合，以鹽水洗滌，乾燥 (MgS04)，且濃縮。將產物經ISC〇 Combiflash矽膠純化，以產生85 mg(0.115 mmol)化合物 17C。LCMS (Μ+1)=738·3。

17C

化合物No· 267 將於 CH2C12(1.0 mL)中之化合物 17C(85 mg，0.115 mmol) 以Dess-Martin高蛾烧（54 mg，1.1 eq·)處理30分鐘。將反應以等體積1 mL)之NaHC03飽和水溶液及1 NNa2S203(aq) 中止。將有機層分離且直接經ISCO combiHash石夕膠純化以產生 77 mg(0.105 mmol)化合物 No. 267。FIA MS(M+1)= 736.2。WNMR (300 MHz，CDC13): 7.33-7.26 (m，2H)， 7.12 (d，1H)，6.91 (d，1H)，6·12 (d，1H)，5·45-5·32 (m，1H)， 4.78-4.63 (m，2H)，4.29-4.17 (m，2H)，3.71 (d，1H)，3.43 (d， 1H)，3.30 (d，1H)，2.86-2.74 (m，1H)，2.63-2.42 (m，2H)， 129343-4.doc -603 - 200843738 2.29 (s, 6H)5 2.19-1.85 (m, 3H)? 1.84-0.82 (m? 34H)? 0.65-〇·58 (m，2H)。實例18 :化合物No· 556

將4-乙氧基苯曱酸肪（2〇4111§，1.24 111111〇1)溶於〇^^(至〇·2 M)且以NCS(1 eq·)處理。將反應物攪拌直至起始物質耗盡為止。將一半反應體積移除且以另外的NCS(1.5 eq.) 處理且攪拌隔夜。接著向該溶液中添加於DMF(0.3 mL)中之甲酯（200 mg，0·85 eq·)及三乙胺（〇·1〇 mL，1·1 eq·)。將反應物在室溫下攪拌隔夜，接著以Et〇Ac稀釋，以1 n HCl(aq·)洗滌，且以鹽水洗滌。將水層再以EtOAc萃取且將合併之有機層以鹽水洗滌，乾燥（MgS04)，且濃縮為黑色油狀物。將產物經ISCO Combiflash矽膠純化，以產生97 mg(0.168 mmol)化合物 18A。LCMS (Μ+1)=576·3。 V〇 V〇

129343-4.doc -604- 200843738 將化合物 18A(97 mg，0.168 mmol)溶於 THF/Me0H/H20 (8:1:1，5 mL)且在室溫下以Li〇H.H20(l.l eq·)處理隔夜。將反應物濃縮，以EtOAc及甲醇稀釋，且以1 n HCl(aq)洗滌。將水層分離且以EtOAc萃取。將合併之有機層以鹽水洗條，經M g S Ο 4乾燦且濃縮以產生7 6 m g (0.1 3 5 m m ο 1)化合物 18B 〇 FIA MS (Μ-1) = 560·4 〇

在室溫下將化合物 18B(3 5 mg，0.062 mmol)、EDC.HC1 (15 111§，1.3 69.)、11(^412 11^，1.3 69.)、胺基醇鹽酸鹽（5 5 mg，2.0 eq·)及 DIEA(0.044 mL，4.0 eq.)於 DMF(0.7 mL)中授拌隔夜。接著將反應物以EtOAc稀釋且以i n HCl(aq)(兩次）洗條。將水層分離且再以EtO Ac萃取。將有機層組合，以鹽水洗滌’乾燥（MgS〇4) ’且濃縮。將產物經〖geo combiflash矽膠純化以產生28 mg(〇.〇38 mmol)化合物 18C。LCMS (Μ+1)=730·2。 129343-4.doc - 605 - 200843738 V-o

化合物No· 556 將於 CH2Cl2(0.7 mL)中之化合物 18C(28 mg，0.038 mmol) 以Dess-Martin高碘烷（18 mg，l.leq.)處理30分鐘。將反應以等體積（二1 mL)飽和NaHC03水溶液及1 N Na2S203(aq.)中止。將有機層分離且直接經ISC0 0ptix 1〇x矽膠純化以產生 24 mg(〇.〇33 mmol)化合物 No. 556。FIA MS (M+l)-728.2。】H-NMR (300 MHz，CDC13): 7·65 (d，1H)， 7·48 (dd，1H)，7.11 (d，ih)，6,95-6.88 (m，2H)，6·08 (d， ),.40 5.3 1 (m? 2H)5 4.78-4.63 (m5 2H)? 4.26 (d? 1H)? 4.20-4.11 (m，2h) 3 7i ’ 2.8心2 73 r · (d，1H)，3.42 (d，1H)，3.27 (d，1H)， ! 62_〇 85 ( 5 1H)，2·63'2·46 2H), 2.20-1.86 (m, 3H), 〇 85(^3〇H),〇.66.〇.58(m5 2H)〇以下在表7中列舉藉由去6所製備之其他式I化合物。 R3

129343-4.doc -606 200843738 表7:藉由方法6所製備之式I之其他化合物。化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 18 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 7-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-碳醛肟 19 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-4-甲基苯甲醛肟 28 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2-氰基苯曱醛肟 31 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 8-喹啉-碳醛肟 38 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2,5-二氣-3-甲氧基苯甲醛肟 42 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 8-喹啉碳醛肟 62 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-3-σ塞吩碳駿肪 68 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 8·啥琳-碳酸將 74 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 8-氯-2,2-二甲基克烷-6- 碳醛肟 89 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-硝基苯甲醛肟 97 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-4-異丙氧基苯甲醛肟 111 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛肟 114 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-4-甲氧基-5-甲基苯甲醛肟 132 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-於驗酸肪 134 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣·2,3-二氫苯并[b]呋。南-7-碳酸肪 158 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-6-甲氧基苯甲醛肟 165 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氯-2-曱氧基於驗酸肪 168 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-噻吩碳醛肟 169 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3_氯-2-氟苯曱醛肟 170 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-2,2-二甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃-7-碳醛肟 250 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-5-甲氧基苯甲醛肟 267 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4_異丙氧基-3,5-二甲基苯甲醛肟 292 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-於驗酸肪 305 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 6-氣-1，3-苯弁二σ惡稀Ά-碳醛肟 312 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氯-6-甲氧基菸鹼醛肟 315 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氯-4-曱基-3,4-二氫· 2Η-1，4-苯并噁嗪-7-碳醛肟 321 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氯-2,3-二甲氧基-苯甲醛肟 129343-4.doc -607- 200843738 化合物No. P1之起始物質 C1之起始物質 R3之起始物質 366 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5-氣-4-甲氧基-2-甲基苯曱醛肟 370 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2·環己基乙酸 5-氣-胡椒酿躬r 396 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-5-甲基苯曱醛肟 406 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4-環丙基甲氧基-3,5-二曱基苯甲醛肟 430 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 8-氯小曱基-1，2,3,4·四氮-嗤琳-6-碳酸聘 469 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2-甲氧基-菸鹼醛肟 478 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 5 -氣-2 -113塞吩碳酸月亏 494 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3·氯-4,5-二甲氧基苯曱醛肟 499 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 7-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-碳酸躬Γ 500 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2·環己基乙酸 4-甲氧基-3-甲基苯甲醛肟 513 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4-乙氧基-3,5-二甲基苯甲醛肟 556 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣-4-乙乳基苯甲駿月亏 591 N-BOC-L·第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2-吡啶羧醛肟 592 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 2-吡啶羧醛肟 593 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 4-氣-2-吡啶羧醛肟 594 N-BOC-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯-6-氟苯甲醛肟本發明之某些其他化合物可藉由以下所說明之方法7加以製備。方法7 : OH Cbz〆

OH G1

OH

-608 - 129343-4.doc 200843738

參考方法7，將Cbz羥酸G1轉化為甲酯G2且去保護以產生胺基-酯G3。G3與螺異噁唑啉酸G4在偶合試劑存在下反應，產生中間物G5。G5之甲酯水解，產生羥酸G6，以例如Dess-Martin高峨烧將其氧化產生酮酸G7。G7與胺 R13R1GNH在偶合試劑存在下反應產生最終產物G8。

實例19 :化合物No· 275 步驟1 :製備化合物Q

19A

1. H2, Pd(〇H)2/C 2.4MHCI/二噁烷

19B 129343-4.doc -609- 200843738

將1·〇〇 g酸19A溶於14 mL甲醇且加熱至回流。添加兩滴濃HjO4且將反應物回流隔夜。將混合物冷卻至室溫，且以

5 0 mL· NaHC〇3(飽和水溶液）中和。將反應混合物以5〇 rnL 乙酸乙酯萃取三次。將合併之有機萃取物經硫酸鎂乾燥且蒸發以產生1.01 g白色粉末狀化合物19B。主要非對映異構體 iH-NMR (300 MHz，CDC13) δ: 7.40-7.31 (m，5H)，5·12 (s， 2Η)，4.99 (d，1Η，J=8.7 Ηζ)，4·35 (s，1Η)，4.15-4.02 (m，1Η)， 3·81 (s，3H)，3.05 (br s，1H)，1.67-1.17 (m，4H)，0.91 (t，3H， J=6.8 Hz)。次要非對映異構體 (300 MHZ，CDC13) δ: 7.40-7.31 (m，5H)，5.07 (s，2H)，4·90 (d，1H，J=9.8 Hz)，4·19 (s，1H)，4.15-4.02 (m，1H)，3·76 (s，3H), 3.03 (br s，1H)， 1.67-1.17 (m，4H)，0.96 (t，3H，J=7.l Hz)。將1·00 g經CBz-保護之甲酯19B溶於11 mL甲醇。添加 129343-4.doc -610- 200843738 150 mg Pd(OH)2(20 wt%，載於碳上），且將混合物以1 atm 氫氣沖洗且在室溫下攪拌3小時。將該甲醇溶液經由 Celite®塞過濾且將濾墊以額外之甲醇沖洗。蒸發後，收集到淺黃色油，且將其再溶於5 mL DCM且以1.5 mL於二噁烷中之4 M HC1溶液處理。攪拌1分鐘後，將反應物蒸發。收集到0.65 g白色粉末狀化合物19C，且藉由LCMS表徵 (Μ+1 = 162·0) 〇將0.80 g化合物19D之螺異噁唑啉酸與0.33 g HOBt、 0.81 g HBTU及 15 mL DMF — 起攪拌。將 807 μ!^ DIPEA添加至攪拌溶液，且攪拌10分鐘。添加〇·33 g鹽酸鹽19C。將反應物在室溫下攪拌3小時。將200 mL EtOAc添加至反應混合物，將混合物相繼以100 mL NaHC03(飽和水溶液）、100 mL鹽水洗滌兩次。將有機相經MgS04乾燥且蒸發。將粗反應混合物藉由經由矽膠柱（40 g柱，梯度溶離， 40-55% EtOAc:己烷）溶離加以純化以得到1.02 g白色粉末狀化合物19E，將其藉由LCMS鑑別（M+l=661.3)。將1.04 g甲酯19E於6 mL THF中攪拌且將3 mL之1 Μ LiOH(aq)添加至該溶液。將反應物在室溫下攪拌2小時，其中由HPLC測定其是否反應完全。將反應物以6 mL之1 Μ HC1處理，且以15 mL乙酸乙酯萃取三次。將合併之萃取物蒸發以得到1 ·〇〇 g米色固體狀化合物Q，其可繼續用於下一步驟。

步驟2:製備化合物R 129343-4.doc -611 - 200843738

將5·58 mL Dess Martin高碘烷於CH2C12中之〇·16 Μ溶液逐滴添加至化合物 Q(0.300 g，0.46 mmol)於 CH2Cl2(15 mL)

中之溶液中。將其在室溫下攪拌4小時後，添加i〇 mL之 1M Na2S2〇3溶液且在環境溫度下將反應混合物攪拌30分鐘。將有機層分離，以水洗滌，經Na2S04乾燥，過濾且濃縮。將粗混合物再溶於CH2C12，且以己烷使其沈澱，且過濾以得到 230 mg化合物 R。LC/MS: m/z 645.7 (M+H)+，在 1·99 分鐘時（10-99% CH3CN (0.035% TFA)/H20 (0.05% TFA))。步驟3 :製備化合物No. 275

將π比17定（10 μι，0.124 mmol)、2 -氯-1-甲基-σ比鍵埃化物 (15.3 mg，0·06 mmol)、HOBt(6.8 mg，0.05 mmol)添加至化 129343-4.doc -612- 200843738 合物R(20 mg, 0.0.031 mmol)於無水乙腈中之懸浮液中，繼而添加50 μί異丙胺（3.7 mg，0.062 mmol)於無水乙腈中之溶液。將反應物在室溫下攪拌且兩小時後反應完全。將反應混合物以1 mL飽和碳酸氫鈉水溶液中止，將層分離且將水層以CH2C12萃取三次。將合併之有機物經Na2S04乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物溶於1.5 mL CH2C12且藉由正常相HPLC(10-99% EtOAc/己烷）純化以產生化合物No· 275。LC/MS: m/z 686.7 (M+H)+，在 2·01 分鐘時（10-99% CH3CN (0.035% TFA)/H20 (0.05% TFA)) 〇實例20 :化合物No. 181

將吼 σ定（7.6 pL，0·093 mmol)添加至 R(20 mg，0.031 mmol)於無水1，4-二°惡烧中之懸浮液中，接著添加三氟乙酸五氟苯酯（8.8 μι, 0.05 mmol)且在室溫下攪拌1.5小時，接著添力π 7-胺基-4-甲基-1H-喹啉-2·酮（14 mg, 0.08 mmol)。可將反應物在室溫下攢;拌且一小時後反應完全。將反應混合物以1 mL飽和碳酸氫鈉水溶液中止，將層分離且將水層以CH2C12萃取三次。將合併之有機物經Na2S04乾 129343-4.doc -613 - 200843738 燥，過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物溶於1.5 mL CH2C12且藉由正常相HPLC(10-99% EtOAc/己烧）純化以產生化合物

No. 181。LC/MS: m/z 801.7 (M+H)+，在 2.06 分鐘時（1〇_ 99% CH3CN (0.035% TFA)/H20 (0.05% TFA))。實例21 :化合物No. 605

化合物No. 605 將（3S)-3-((5S，8S)-3_(3-氣苯基）-7-((S)-2-(2-環己基乙醯胺基）-3,3-二曱基丁醯基）-1-氧雜-2,7-二氮雜螺[4.4]壬-2-烯魏醯胺基）-2•經基己酸（〇·〇2 g，0.03 mmol)、（3，5-二曱氧基苯基）甲胺（5.68 mg，0.033 mmol)、HOBt(6.8 mg，0.05 mmol)、DIPEA(22 μ、0.124 mmol)及 CH2C12(70 pL)之混合物在室溫下攪:拌10分鐘。接著將Mukaiyama氏試劑（2-氣 [4-(1Η，1Η，2Η，2Η-全氟-9-曱基癸基）苄基]吼錠六氟磷酸鹽）於2 0 0 μί乙腈中之溶液添加至該混合物且在室溫下攪拌反應物。5小時後，添加1.34 mL於CH2C12中之0.3 M Dess_ Martin高碘烷且將混合物攪拌。2小時後，將氧化劑以1 ,〇 mL飽和NaHC03、1 mL之1 N Na2S203中止且劇烈搜拌。將 129343-4.doc -614- 200843738 有機層分離，經Na2S04乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶於 1.5 mL CH2C12且藉由正常相HPLC(10%-99%乙酸乙酯/己烷）純化以產生化合物No· 605，（5S，8S)-3-(3-氯苯基）-7-((S)-2-(2-環己基乙醯胺基）-3,3-二甲基丁醯基）-N-((S)-l-(3,5-二甲氧基苄胺基）-1，2-二側氧基己-3-基）-1-氧雜-2,7· 二氮雜螺[4.4]壬-2-烯-8-甲醯胺。LC/MS: m/z 794.7 (M+H)+ ，在 4.11 分鐘時（10%-99% CH3CN (0.035% TFA)/H20 (0.05% TFA))。以下在表8中列舉用於藉由方法7製備其他式I化合物的試劑。表8:用於藉由方法7製備其他式I化合物的試劑。化合物No. R2zR2wNH 2 第三丁基胺 6 2-胺基茚滿 17 苯并[d]噻唑-2-胺 49 3-((四氫呋喃-3-基)甲氧基)吖丁啶 58 ⑻-(+)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺 69 6-甲氧基色胺 73 4-1H-吡唑-1-基-苄胺 77 苄胺 79 吖丁啶 84 2,5-二甲氧基苯胺 91 (4-(4-曱氧基苯基)四氫-2H-哌喃-4-基)曱胺 96 3-氣基-4-曱基苯胺 99 環己胺 113 N，N-二乙胺 120 苯基-2-°比°定曱胺 127 3’,5’-二甲氧基苄胺 133 3-乙氧基吖丁啶 138 1-(3-(2-胺基丙基)-1Η-ϋ弓|σ朵-5-基)乙S同 140 乙胺 141 2,3-二氫-1，4-苯并二氧己環-2-基甲胺 143 異丁胺 148 Ν-(3-胺基苯基)甲磺醯胺 129343-4.doc -615 - 200843738 化合物No. R2zR2wNH 176 (2-苯基-1，3-噻唑-4-基）甲胺 181 7-胺基-4-甲基喹啉-2(1H)-酮 182 N-甲基乙基胺 186 (3R)-(+)-3-乙醯胺基吼咯啶 206 β-丙胺酸-4-甲氧基-β萘醯胺 221 Ν-乙基-3,4-亞甲基二氧基安非他命 238 (R)-3-((四氫呋喃-2-基)甲氧基)吖丁啶 253 二甲胺 255 (S)-(-)-l-(3-曱氧基苯基)乙胺 265 環丙基甲基胺 275 異丙胺 277 (S)-(+)-四鼠糖胺 293 3-胺基異噁唑 296 (S)-a-甲基苄胺 298 3-吡唑-1-基-苄胺 300 1·(乙基)丙胺 302 5-甲氧基色胺 347 (R)-(-)-2-(甲氧基曱基户比咯啶 350 N-甲基-N-丙胺 355 3-胺基节醯胺 368 3-(四氮咬喃-3-基氧基)σ丫丁〇定 372 環戊胺 399 1-胺基環丙烷-1-甲酸甲酯 401 環丁胺 404 2-甲氧基乙胺 408 3-(胺基乙基户比啶 410 嗎琳 426 3·^基-3-甲基17丫丁咬 429 1-苯基環丙胺 433 [3-(4-氯苯基)-5-異噁唑基]甲胺 441 糠胺 447 2-(3-吼啶基)乙胺 452 (R)-2_ 丁胺 458 3-(2-胺乙基)ϋ弓卜朵琳-2-酉同 461 4-(胺曱基)吡啶 479 2-氟乙胺 488 2-曱氧基苯氧基乙胺 493 甲胺 496 °比口各咬 507 (S)-2-胺基-1，1-二苯基-1-丙醇 508 (s)-(+)-2-(曱氧基甲基户比咯啶 521 3,3-二氣-σ丫丁 °定 129343-4.doc -616- 200843738 ί

EtOH Δ(3 h)

〇Et

化合物No. R2zR2wNH 537 丙胺 540 2-(3-甲氧基苯基)乙胺 546 (R)-a-甲基苄胺 565 h2h ^)s〇2 567 2-胺基甲基苯并咪唑 568 曱基哌啶 573 3,4-二氟苯胺 588 3-氣基苯胺製備表8中所列舉之非市售吖丁啶將N-二苯甲基-3-甲烷磺醯基吖丁啶（104 mg)與乙醇（1.0 mL)組合且於密封小瓶中在95°C加熱隔夜。藉由TLC(30% EtOAc:己烧）監控反應。藉由添力口 1 mL飽和碳酸鉀溶液進行處理，且以0.5 mL乙酸乙酯萃取兩次。將合併之有機萃取物在矽石（4 g柱，梯度溶離，0-30% EtOAc:己烷）上純化。產生49 mg透明無色油狀N-二苯甲基-3-乙氧基吖丁啶。LCMS (Μ+1=268·2)。將Ν-二苯甲基-3-乙氧基吖丁啶（49 mg)溶於1 mL甲醇。添加22 mg之10% Pd/C(Degussa-型），且使反應在氫氣氛下進行。將反應物在室溫下攪拌64 h。將混合物經由Celite® 過濾，以甲醇充分洗滌，且蒸發以得到黃色油（30 mg)。該油由二苯基甲烷與游離吖丁啶組成。將粗油混合物用於後續轉化且過量使用。以與上述類似之方式藉由使用相應醇製備以下吖丁啶。 129343-4.doc -617- 200843738

口丫丁咬酬係、以Frigola，J 0993)，801-810中所述之方法製備。

式1之某些其他化合物可藉由如下_ 備。方法8 :

Med· Chem·，36 明之方法8加以製

參考方法8，使螺異噁唑啉酸£4在偶合試劑存在下與胺基醋H1反應以產纟中間物H2。似之大環化作帛生成化合物H3。醋H2之水解產生酸H4。酸H4與磺醯胺或磺胺在= 合試劑存在下反應產生產物H5。實例22 :化合物No. 409 129343-4.doc -618- 200843738

HBTU, HOBt DIEA，DMF

22A

將（S)-2-(第三丁氧基羰基胺基）壬-8-烯酸（購自位於 Massachusetts 之 RSp Amino Acid)( 179 mg，1 ·0 eq·)與 HBTU(376 mg， 1.5 eq·)、HOBt(94 mg， 1.05 eq·)及 DIEA(345 μί，3.0 eq·)於DMF中攪拌15分鐘。添加化合物 22A(194 mg，1 ·0 eq·)且擾拌隔夜。向該溶液添加乙酸乙酯。將溶液相繼以1 N HC1(三次）、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽石層析法（10-30%乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生化合物22B(253 mg)。（Μ+Η=548·2)。

22Β

22C 129343-4.doc •619- 200843738 將化合物 22B(253 mg，1.0 eq.)於 THF(1 mL)及甲醇（0·5 mL)中攪拌。將氫氧化鋰（97 mg，5,0 eq.)於水（0.5 mL)中之溶液添加至該溶液，且攪拌2小時以上。將混合物以乙酸乙酯稀釋，相繼以1 N HC1、鹽水洗滌，且將溶液經 MgS04乾燥，過濾且濃縮以產生純白色固體化合物22C (235 mg)(M+H=534.2)。

將化合物22C(247 mg，1.0 eq,)於1 mL乙腈中攪拌。將 TBTU(297 mg，2.0 eq·)、DIEA(241 pL，3.0 eq.)、接著將 (1R，2S)-甲基-1-胺基-2-乙烯基環丙烷甲酸酯（86 mg，1.2 eq·)添力口至該溶液且擾掉隔夜。將溶液以乙酸乙6旨稀釋且相繼以1 N HC1、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽石層析法（10-70%乙酸乙酯/己烷梯度）純化以產生化合物 22D(230 mg)。（Μ+Η=657·2)。 129343-4.doc -620- 200843738

22D

在回流溫度下將化合物22D(230 mg，1 .Oeq·)與Hoveyda-Grubbs觸媒（22 mg, 0·1 eq.)於70 mL CH2C12中攪拌 1小時，且將溶液冷卻至室溫且藉由矽石層析法（10-70%乙酸乙@旨/ 己烷）純化以產生化合物22E( 172 mg)。

22E 化合物137 將化合物 22E(172 mg，1.0 eq·)於 THF(1 mL)及曱醇（0.5 mL)中搜拌。將於0.5 mL水中之LiOH(46 mg，4.0 eq·)添加至該溶液，且將溶液攪拌2個小時以上。再將乙酸乙酯添加至該溶液且以1 N HC1及鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以產生純白色固體狀化合物22F(155 mg) (M+H=617.1)。 129343-4.doc -621 - 200843738

1) CDI, DMF 80 deg 2) DBU

化合物No. 409 在80°C將化合物22F(155 mg, 1.0 eq·)與羰基二咪唑（49 ί % mg, 1.2 eq·)於1 mL DMF中攪拌15分鐘。相繼將環丙烷磺醯胺（49 mg，U eq·)、DBU(36 μ[，1〇 eq)添加至該溶液且在80 C另外攪拌1〇分鐘。接著將乙酸乙酯添加至該溶液且將〜夜以1 N HC1及鹽水洗務，經MgS〇4乾燥，過渡且辰細將產物藉由石夕石層析法〇〇〇% Dd5%甲醇梯度）純化以得^匕合物N〇 4 64 3 。 (Μ + Η=718·1)〇

以下在表9中列舉藉由方法8所製備之其他式][化合物

Ra

129343-4.doc -622- 200843738 表9:藉由方法8所製備之式I之其他化合物。化合物編號 W之起始物質 R3之起始物質 1 OH 7-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-甲醛肟 137 OH 3-氯苯甲醛肟 163 環丙烷磺醯胺氯化苯乙醛羥肟 232 環丙烷磺醯胺 3-氯苯甲醛肟 320 OH 氯化苯乙醛羥肟 386 環丙烷磺醯胺 7-氯·2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-甲醛肟 409 環丙烷磺醯胺 3-氯苯曱醛肟 470 OH 3-氯苯甲醛肟式I之某些其他化合物可藉由如下所說明之方法9加以製備。方法9 :

A10

參考方法9，使經保護之螺異噁唑啉B3(藉由方法2所製備）與樹脂結合亞胺基-胺D1反應以產生中間物II。將II去保護產生胺12，使胺12與&甲酸在偶合試劑存在下反應， 129343-4.doc - 623 - 200843738 以產生13，其中R!為R4C(0)_。13水解產生最終化合物 A10。熟習該項技術者可使用本文中所述之該等實例及方法以及已知的合成方法，根據以上所說明之方法9合成式I之化合物。以下表1 0中列舉藉由方法9所製備之式I之其他化合物。

CI

C 表10:藉由方法9所製備之式I之其他化合物化合物編號 P1 46 5-溴吲哚-2-甲酸 54 乙醯基-D-乙硫胺酸 60 2-(R)-[[(4-曱基苯基)磺醯基]胺基]-2-苯基乙酸 65 2-側氧基-1 -苯基吡咯啶-3-曱酸 88 乙醯基-D-甲基酪胺酸-OH 98 N-乙醯基-L_白胺酸 100 2-[[(4-氟苯基)磺醯基]胺基]-3-甲基丁酸 157 5,6-二甲氧基吲嗓-2-曱酸 218 Pyr-Val-OH 227 1-胺甲醯基環丙烷甲酸 246 5-(2,4-二甲基苯基胺基)-5-側氧基戊酸 248 4-氣-2-(6-甲氧基吡啶-3-基胺基)苯曱酸 309 3-[[(4-乙醯胺基苯基)磺醯基]胺基]-3·丙酸 328 3-(3,4-二氫異喹啉-2(1H)-基磺醯基)苯曱酸 332 (S)-2-乙醯胺基-3-(4-異丙氧基苯基)丙酸 376 3-(2-側氧基苯并[d]噁冬3(2H)-基)丙酸 380 4-三氟曱氧基苯基乙酸 395 2-[[(4_曱氧基苯基)磺醯基]胺基]-3-甲基丁酸 129343-4.doc -624- 200843738 化合物編號 P1 397 2-((S)-2-側氧基斗苯基噁唑啶-3·基）乙酸 412 乙醯基-D-酪胺酸-OH 416 2-(R)-[[(4-氯苯基)磺醯基]胺基]-3-甲基戊酸 420 3-(2-二乙基胺基)-2-側氧基乙基-1H·叫卜朵-2-曱酸 421 反-2-苯基-1 -¾丙烧曱酸 466 2-[[(4-氟苯基)磺醯基]胺基]-2-苯基乙酸 476 2-(S)-[[(4-甲基苯基)磺醯基]胺基]-2-苯基乙酸 483 3 -(N-苯基苯基續醯胺基)丙酸 489 2_⑻-[[(4_甲氧基苯基)磺醯基]胺基]-3-曱基丁酸 501 2-[(苯基磺醯基)胺基]-2-苯基乙酸 534 2-⑻-[[(4-甲氧基苯基)磺醯基]胺基]-3-甲基戊酸 574 二心-側氧基異叫卜朵咐^-基丨丙酸 586 6-(2,5-二曱氧基苯基)-2-側氧基-1，2,3,6-四氫嘧啶-4-曱酸 587 2-⑻-[[(4-甲氧基苯基)磺醯基]胺基]斗甲基戊酸式I之某些其他化合物可藉由如下所說明之方法10加以製備。方法10 :

B3 M10A M10B

M10C M10D 參考方法10，經保護之螺異噁唑啉B3(例如RigFmoc)與 M10A(R”例如可為甲基或固定於PS-Wang樹脂上）反應以產 129343-4.doc -625 - 200843738 生中間物M10B。M10B水解產生羧酸M10C ’隨後將其與適當的磺醯胺偶合以得到最終化合物M1〇D。M1〇C亦可為最終式I化合物。類似地，熟習該項技術者可使用本文中所述之該等實例及方法以及已知的合成方法，根據以上所說明之方法1〇合成式I之化合物。以下表11中列舉藉由方法10所製備之其他式1化合物。 R3

〇 // 表11 :藉由方法10所製備之其他式1化合物 P1 起 ci起始ϋ- R3起始 Ί 口 AM} 3vu 35 環丙烷磺醯胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 ΝΑ 3-氯苯甲醛肟 45 環丙烷磺醯胺 N-((S)-四虱咬喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 ΝΑ 3-氯苯甲醛肟 57 環丙烷磺醯胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 ΝΑ 7-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-甲醛肟 115 °V° P^NT、nh2 Η - N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氣苯甲醛肟 130 環丙烷磺醯胺 N-Alloc-L-第三丁基甘胺酸 ΝΑ 3-氯苯甲醛肟 144 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 162 環丙烷磺醯胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 2-環己基乙酸 3-氯苯甲醛肟 129343-4.doc -626- 200843738 190 環丙烧續醢胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸環戊基2,5-二氧吡咯啶-1-基碳酸酯 3-氯苯甲醛肟 269 OH N-((S)-四氲ϋ夫喃-3-基氧基)羰基)-L-第三丁基甘胺酸 NA 3-氯苯曱醛肟 272 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸環戊基2,5-二氧吡咯啶-1-基碳酸酯石肖基丙烧 359 環丙烧續醯胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 384 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 2-(四氫-2H-旅喃-4-基)乙酸 3-氯苯曱醛肟 438 環丙烷磺醯胺 N-Boc-L-第三丁基甘胺酸環戊基2,5-二氧吡咯啶-1-基碳酸酯硝基丙烷 439 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸 NA 3-氯苯曱醛肟 443 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸環戊基2,5-二氧口比洛淀-1-基碳酸酯 3-氯苯曱醛肟 457 OH N-Boc-L-第三丁基甘胺酸第三丁基異氰酸酯 3_氯苯曱醛肟 460 OH N-Alloc-L-第三丁基甘胺酸 NA 3-氣苯甲醛肟本發明之其他化合物可如流程方法11中所說明製備。方法11 :

參考方法11，使亞甲基化合物Mil A與1,1-二溴甲醛肟在弱鹼（諸如碳酸氫鈉）存在下反應產生溴螺異噁唑啉Ml 1B。使M11B與胺RXRYNH或芳基醇RxOH反應產生中間物 -627- 129343-4.doc 200843738 :匕ic纟中r3為視情況經取代之胺基或視情況經取代之方氧基。使M11C去保護，提供相應冑，隨後根據上述程序與適當胺基化合物反應，產生本發明之化合物。實例23:製備其中R3為胺基或芳氧基之化合物之中間物。步驟1 :

M11D M11E 將化合物M11D(6 、 3，μ mL乙酸乙酯中攪拌。相繼添加碳酸氫鈉（6·30 g，4·4 eq)、二溴曱醛肟（4 ΐι g，1·2 eq)，且將混合物在室溫下攪拌隔夜。添加水（85 mL)且將混合物攪拌直至澄清。將各相分離，用乙酸乙酯萃取水相且將組合之有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。用乙酸乙酯/己烷梯度經二氧化矽管柱層析，產生5.55公克化合物M11E及0.93公克其非對映異構體（6:丨比率）。

M11F M11G 在95°C下將化合物M11F(100 mg，1 ·〇 eq)於270 pL異叫丨哚 129343-4.doc -628- 200843738 啉中攪拌隔夜。將混合物用乙酸乙酯稀釋且用1 N HC1洗滌。將有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。用乙酸乙醋/ 己烧經二氧化石夕層析，產生83 mg之化合物MilG。

將苯酚（20 mg，1.1 eq)於350 pL DMF中攪拌。添加氫化鈉（8.3 mg，l.leq，60%)且將混合物攪拌5分鐘。添加化合物M11F且將混合物在90°C下攪拌隔夜。將混合物於1 N HC1與乙酸乙酯之間分溶，且將有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到70 mg化合物Ml 1H。額外之實例實例23 :化合物No· 610

將肟 23Α(6·29 g，40.4 mmol)溶於 DMF(63 mL)且將 N-氯丁二醯亞胺（5.39 g，40.4 mmol)逐份添加至擾拌溶液中。在室溫下繼續攪拌3小時，此時轉化率經測定為56%(藉由 HPLC) 〇藉由在70。。溫和加熱45分鐘使反應完成。添加4-亞甲基脯胺酸衍生物（8.81 g，31.1 mmol)且使用DMF(5 mL) 129343-4.doc -629- 200843738 將其沖洗成溶液。經3〇分鐘謹慎逐滴添加三乙胺（5 7 mL)。接著將反應物在室溫下攪拌16小時隔夜。藉由Ηρα 分析等分試樣且其經測定含有4:1比率之環加成非對映異構體。添加乙酸乙酯（2〇〇 mL)且將有機相以水（三次，每次 200 mL)及鹽水（2〇〇 mL)洗滌。接著將有機相經硫酸鎂乾燥且蒸發。將粗油分成兩份，且使用裝有33〇 g；g夕石柱之 ISCO c〇mbiflash(10-20% EtOAc:石油醚，72分鐘）將各份粗油純化。所需產物為先於次要異構體自柱所溶離之主要異構體且獲得9.42 g橙色油狀23B。亦將次要異構體分離，使其經受自EtOAc:己烷中之再結晶，且獲得為灰白色晶體粉末（1.53 g)。

將化合物23B(9.42 g)於三氟乙酸（12 mL)中攪拌2小時。將溶劑蒸發且以甲醇（50 mL)置換。將溶液加熱至回流且逐滴添加H2S〇4(3.0 mL)。將反應物回流總共6小時，此時藉由HPLC測定轉化成甲酯的轉化率大於95%。將反應物冷卻且蒸發以移除過量甲醇。將所得油再溶於CH2C12(200 mL)且以飽和碳酸氫鈉（200 mL)中和。收集有機相，且將水相以CH2C12(兩次，每次1〇〇 mL)萃取。將有機萃取物組合，經硫酸錢蒸發’且蒸發以得到5.09 g油狀化合物 129343-4.doc -630- 200843738 23C，其立即用於下一步驟。

23C 23D

將胺基酯 23C(1.25 g，4.24 mmol)以於 THF/H20(3:1，10 mL)中之 Li0H.H20(186 mg，4.4 mmol)處理 45 分鐘。於真空中將溶劑移除以獲得固體。在室溫下將此固體於丙酮 (20 mL)及飽和NaHCO3(aq)(20 mL)中製成漿液。添加 Fmoc-Cl(1.12 g，4.33 mmol)且藉由 HPLC 監控反應。20 分鐘後，將反應燒瓶之内含物轉移至具有CH2C12之分離漏斗且以2 N HCl(aq.)酸化。將水相以CH2C12(兩次，每次100 mL)萃取。將所得乳液過濾，且將有機層組合，經MgS04 乾燥且濃縮以得到化合物23D。

將化合物XX4在20%哌啶於DMF(20 mL)中之溶液中搖動 60分鐘。將樹脂以DMF(三次）、CH2C12(三次）洗滌且重 129343-4.doc -631 - 200843738 複。接著將所得樹脂與化合物23D(437 mg，〇 87 mm〇i)、 HATU(392 mg5 l.〇3 mmol)^ DIEA(0.3 〇〇 mL, 1.72 mmol)^ DMF(10 mL)中搖動隔夜。接著將所得化合物結合樹脂以DMF(二-人）、CH2Ci2(三次）洗滌且重複。 612.26 °

將化合物結合樹脂23F於DMF(8 mL)中之20%哌啶中搖動2小時。接著將樹脂以DMF(三次）、CH2Ci2(三次）洗滌且重複。（M+l) = 390_l。接著將該樹脂與（s)_2_(環戊基氧基羰基胺基）-3,3-二甲基丁酸（3 eq·)、h〇bt(3 eq )、hbtu(3 eq.)及DIEA(6 eq.)於DMF中搖動隔夜。將樹脂以DMF(三次）及(三次）洗滌且重複。接著於TFA(5 mL)中搖動 1 00分鐘。將所得樹脂過濾且將濾液濃縮且藉由逆相層析法純化以產生9.4 mg白色固體狀化合物443。（μ+1) = 615·6, 】Η_ΝΜΙΙ (500 MHz，DMSO-d6): 8.63 (s，1Η)，7.67 (s，1Η)， 7.63 (d，J=6.7 Hz，1H)，7.55:49 (m，2H)，6.9〇 (d，卜8 4

Hz，1H)，5·77-5·69 (m，1H)，5.20-5.17 (m，1H)，5.06 (d，

J-10.5 Hz, 1H)5 4.93 (brs? 1H), 4.35 (t, J=7.7 Hz? 1H), 4.H 129343-4.doc -632- 200843738 (d，J=8.8 Hz，1H)，4.06 (d，J=10.9 Hz，1H)，3.80 (d，J=11.6 Hz，1H)，3.62-3.50 (m，2H)，2.63-2.31 (m，2H)，2.18-2.13 (m，1H)，2.07-2.01 (m，1H)，1.87-1.51 (m，9H)，1.29-1.28 (m，1H)，0.95-0.91 (brs，9H) 〇

在 80°C 將化合物 23G(6.6 mg，0·011 mmol)與 CDI(2.8 mg， 0.017 mmol)於DMF(0.5 mL)中攪拌1小時。添加環丙基石黃醯胺（3.8 mg，0.03 1 mmol)及 DBU(0.0 1 mL)，移除熱且在室溫下將反應物攪拌隔夜。將反應物藉由逆相層析法純化以產生 2.8 mg化合物 No. 190(0.0039 mmol)。1 ) = 71 8 1。 W-NMR (500 MHz，曱醇-d4): 9.26 (s，〇·4Η)，9 〇2 (s， 0·6Η)，7.72 (d，J=1.7 Ηζ，1Η)，7·61 (dd，J=l.3, 7·3 Ηζ，1Η)， 7.47-7.41 (m，2Η)，5.81-5.73 (m，1Η)，5·33-5·3〇 (m，1Η)， 5.14-5.10(m，lH)，5.03(brs，lH)，4.45-4.41(m，1H)，431- 4.25 (m，2H)，3.94 (d，J=11.0 Hz，1H)，3.62-3.53 (m，2H) 2·99-2·92 (m，1H)，2.55-2.49 (m，1H)，2.29-2,23 (m，2H)， 1·89_1·53 (m，l〇H)，1.44-1.40 (m，1H)，1.32-1.24 (m，ih) 1.19-1.02 (m，2H)，0.90 (s，9H)。 129343-4.doc 633 - 200843738 實例24 :化合物No. 618

24A 24B 24C \ 將羧酸 24A(69 mg，0·13 mmol)、HATU(50 mg，0·13 mmol)、化合物 24B(0.13 mmol)及 DIEA(0.045 mL，0.26 mmol)於乙腈（1.5 mL)中攪拌2小時。接著將反應物以 EtOAc稀釋，以飽和NaHC03(aq)、鹽水洗滌，乾燥 (MgS04)且濃縮。矽膠純化產生76 mg(0.12 mmol)化合物 24C。LCMS (M+1)二614·4。

CI

化合物144 將甲酯24C(76 mg，0.12 mmol)溶於 THF/H20(5:1，2 mL) 且與LiOH · Η20(1·5 eq·)—起攪拌隔夜。將反應物以1 N HCl(aq)酸化且濃縮。將殘餘物溶於CH2Cl2/MeOH(93:7)且經由石夕膠塞溶離產生75 mg(0.1 1 mmol)化合物No. 144。 LCMS (Μ+1=627·4)。W-NMR (500 MHz，甲醇-d4): 7.84 129343-4.doc -634- 200843738 (d，J=9.1 Hz，0.5H)，7.71 (s，1H)，7.60 (d，J = 7.2 Hz，1H)， 7.45-7.40 (m，2H)，5·90-5·83 (m，1H)，5.23 (d，J=1.4 Hz， 1H)，5.07 (d，J=10.3 Hz，1H)，4.60 (m，1H)，4.52-4.49 (m， 1H)，4.27 (m，1H)，3.90 (m，1H)，3.59-3.48 (m，2H)，2.58 (dd，J = 8.0，12·6 Hz，1H)，2.37-2.32 (m，1H)，2.21-2.12 (m， 4H)，1.76-1.61 (m，6H)，1.45-1.42 (m，1H)，1.32-1.14 (m， 4H)，1.05-0.95 (m，9H)，0.91 (m，3H)。 ci

24D 24E 化合物 No· 115 在 80°C 將羧酸 22D(18.5 mg，0·029 mmol)與 CDI(6.0 mg) 於DMF(1.5 mL)中攪拌l〇分鐘。將反應物冷卻至室溫且添加於DMF(0· 1 5 mL)中之化合物24E以及DBU(4 eq.)，且將反應物於80°C溫浴中加熱20分鐘。將反應物直接藉由逆相層析法純化以產生7.6 mg化合物No. 115。LCMS (Μ+1=745·2)，i-NMR (500 MHz，甲醇-d4): 9.30 (s， 0·5Η)，8.02 (m，0.5H)，7.71 (m，1H)，7.60 (dt，J=7.2，1·3 Hz，1H)，7.46-7.41 (m，2H)，5.86-5.79 (m，1H)，5·35-5·28 (m，lH)，5.12_5.10(m，iH)，4.65(m，lH)，4.42(dd，J=6.9, 10·6 Hz，1H)，4.28 (d，J=".3 Hz，1H)，3.95 (d，J=11.4 Hz， 1H)，3.62-3.47 (m，2H)，2.51-2.47 (m，1H)，2.35-2.31 (m， 129343-4.doc - 635 - 200843738 lH)，2.25-2.12(m，4H)，1.89(dd，J=5.4,8.1Hz，lH)，1.80-1.64(m，6H)，1.45-1.39 (m，lH),1.33-1.15(m，3H)，1.04-0.97 (m，11H)，0.73-0.57 (m，4H)。以下表1 2中列舉式I之例示性化合物之一些物理資料。 LC/MS資料使用以下儀器獲得：質譜儀：PESciex API-150-EX 或 Waters/Micromass ZQ 或 Waters/Micromass Quattro II，或 Waters/Micromass ZMD ; 泵：Shimadzu LC_8A 或 Agilent 1100 ;自動取樣器：Gilson 215 或 Gilson 819。使用以下方法：3.0 mL/min流速，10-99% CH3CN (0.035% TFA)/H20(0.05% TFA)梯度，Phenomenex Luna 5m C18 column(50x4.60 mm) ; 1.5 mL/min 流速，3 分鐘内 10-90% CH3CN(0.2% 甲酸）/H2O(0.2% 甲酸），YMC-Pack Pro-C18 管柱（50x4.6 mm) ; 1.0 mL/min 流速，5 分鐘内 10-90% CH3CN(0.2% 曱酸）/Η2Ο(0·2% 曱酸），YMC-Pro-C18 管柱（50 χ2·0 mm) ; 1·5 mL/min 流速，3 分鐘内 10-90% CH3CN(0,1% TFA))/H2O(0.1% TFA)，YMC-Pack Pro-C18 管柱（50χ4·60 mm) ο 表12 ··式I之例示性化合物之物理資料。化合物 No. LCMS (M+1) LCMS RT FIA-MS (Ml) FIA-MS (M+1) NMR 1 754.4 756.1 2 700.2 3.99 3 698.8 3.84 4 763 765 5 686.3 2.8 6 760.9 2.4 7 710.2 3.35 129343-4.doc -636- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 8 707.9 9 638 640 10 724 726.1 11 662.4 664.3 12 602 2.94 13 668.2 3.6 14 580.9 15 725.1 726.1 16 691.8 17 791.8 2.29 18 752.4 3.74 19 696.3 3.7 H-NMR (500 MHz, CDC13)7.61 (d, J=1.7 Hz，H)，7.51(d，J=7.7 Hz，H), 7.38(d5 J=8.2 Hz, H), 7.33(t? J=7.8 Hz? H)，7.26(s，CDC13)，7·16 (t，J=6.5 Hz， H)，6.91 (d，J=3.3 Hz，H)，6.55-6.50(m， H)，5.35 (dd，J=4.1，8.5Hz，H)，4.77-4.74 (m，H)，4.66(d，J=9.4 Hz，H)， 4.29(d5 J=1U Hz，H), 3.71(d，J=11.2 Hz，H)，3.47 (d，1H)，3·29 (d，1H)，2.78 (td，J=7.3, 3.7 Hz，H)，2.63-2.59 (m， H)，2.52-2.49 (m，H)，2.07-2.30 (m， 2H)，1.98-1.92 (m，H)，1.77-1.61 (m， H)，1.47-1.40 (m，H)，1.35-1.25 (m, H)， 1.21(dd，J=6.6, 12.5 Hz，H)，1.01 (s， 9H)，0.98-0.83 (m，H)，0.61-0.51 (m， H)，0.39 (t，J=4.8 Hz，H) ppm 20 672 3.24 21 697.9 699.8 22 713 3.9 CDC13; 7.77 (d，2H)，7.58 (m，4H)，7.41 (t，2Η)，7·32 (3H) 23 710 4.5 24 630.3 632.2 25 684.6 686.5 26 761.4 3.23 27 672.4 3.7 28 675.3 3.44 29 698.361 3.8 30 767.6 3.15 31 701.3 2.74 32 730.3 732.1 33 685 3.5 34 559 35 706.1 3.66 36 675.5 677.3 37 712 3.19 38 748.1 3.86 129343-4.doc -637 - 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 39 728 3.82 40 655.3 657.2 41 729 3.4 42 701.3 2.75 43 654.1 656.1 44 658 3 45 720.2 3.29 46 670 3.78 47 734.2 736.1 48 728.2 3.47 49 784.2 3.71 50 696.6 3.76 51 548.1 550 52 704 53 696 2.04 54 634 3.24 55 642.3 644.2 56 600.6 602.4 57 755 58 778.9 2.38 59 730.2 3.58 60 734.4 3.67 61 591.8 2.6 62 690.2 3.64 63 698 3.83 64 595 65 634.4 1.8 66 734.4 736.2 67 720.4 722.2 68 675.2 2.6 69 817.7 3.97 70 712.4 714.3 71 722.1 3.59 72 670 3.53 73 800.7 3.97 74 682 684 75 713,1 2.8 76 643 3.09 77 734.2 3.92 78 79 684.2 3.7 80 553.1 555 81 687 2.1 82 611 612.6 83 772.1 774 84 780.9 4.39 85 650 3.26 129343-4.doc -638 - 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 86 676.5 678.3 87 712 3.2 88 666 3.31 89 695.2 3.53 90 758 759.9 91 848.7 2.3 92 686 3.05 93 670.4 3.56 94 660 2.69 95 583.9 585.7 96 759.3 4.02 97 670.1 672.1 98 602.6 1.63 99 726.7 2.4 100 704 3.64 101 666.1 668.3 102 710.2 3.6 103 657 3.2 104 690 3.24 105 682.1 684.2 106 690.1 691.9 107 659 3.22 108 700 3.32 109 706.4 708.4 110 754 3.6 111 652.1 654 112 684 113 700.7 2.3 114 712.4 714.3 115 745.2 3.73 116 716.3 718 117 653 118 726.4 3.6 119 691.8 120 811.5 3.95 121 714 3.27 122 711 3.42 123 631 3.09 124 686.2 3.4 125 732.2 3.7 126 680.55 682.4 127 794.7 4.11 128 774 3.28 129 758.2 3.78 130 690.2 3.48 131 720 3.53 132 711.4 3.5 129343-4.doc -639- 200843738 化合物 No· LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 133 728.6 3.8 134 726.2 3.7 135 773.1 3.5 136 666 668.1 137 708.2 710.1 138 843.9 2.2 139 708 3.35 140 672.7 2.13 141 792.7 4.13 142 676,2 677.9 143 700.7 2.32 144 627.4 3.43 145 707.8 146 635 2.47 147 690 691.9 148 813.9 2.15 149 606.8 150 713.5 715.2 151 706 707.8 152 688.4 3.2 153 714.3 3.2 154 700.1 701.9 155 709.6 3.59 156 658 3.35 157 650 3.32 158 714.3 3.72 159 688.3 690.3 160 613.5 615.4 161 769.1 3.5 162 730.2 3.7 163 708 164 630.1 632.1 165 715.2 3.73 166 710 3.46 167 709.4 2.2 168 656.3 3.46 169 702.2 3.71 170 754.2 3.96 171 613.1 172 717.1 173 667 3.17 174 642.3 644.3 175 701.2 2.76 176 817.7 4.1 177 787 789 178 576.1 578.1 179 718.2 3.55 129343-4.doc -640- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 180 770.1 772.1 181 801.7 2.06 182 686.7 2.19 183 714 715.9 184 672.2 2.96 185 724.2 3.6 186 755.3 3.41 187 708 3.53 188 698 3.76 189 722 3.5 190 718.1 3.68 191 710.4 712.4 192 683.3 685.3 193 646 3.44 702 703.7 194 672.1 674 195 700.2 3.59 196 672.1 674 197 722 3.39 198 723.8 725.7 199 766.2 768.2 200 746.2 748.1 201 567.1 568.8 202 638 640 203 730.3 3.7 204 734.2 3.85 205 637 3.35 206 871.9 3.96 207 576 2.87 208 718.2 719.95 209 716.3 718.1 210 675 3.5 211 698.2 3.47 212 692.6 694.5 213 748.2 3.6 214 769.3 770.9 215 733.3 735.3 216 767.1 3.1 217 670 3.6 218 657 3 219 670.2 3.65 220 504.1 506 221 792.9 4.1 222 593 594.9 223 678 3.42 224 707.9 710.1 225 795 226 698 3.89 129343-4.doc •641 - 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 227 558.5 2.91 228 670 229 649.7 2.55 230 704.3 3.7 231 684 3.73 232 718.1 3.82 233 700.34 3.3 1H-NMR (500MHz，CDC13): 7.61 (t， J=1.6 Hz，1H)，7.53 (dd, J=1.2, 7.6 Hz, 1H)，7.39 (dd，J=1.7, 6.9 Hz，1H)，7.34 (t，J=7.8 Hz，1H)，7尨6 (s，CDCB)，7.16 (d，J=7.3 Hz，1H), 6.91 (d，J=3.4 Hz， 1H)，6.62 (d，J=9.2 Hz，1H)，5.35 (d， J=4.1 Hz，1H)，4.76 (t，J=7.8 Hz，1H)， 4.64 (d，J=9.3 Hz，1H)，4.29 (d，J=10.8 Hz，lH)，3.71(d，J=11.2Hz，lH)，3.29-3.49(dd，J=2H)，2.78(m，lH)，2.63· 2.59 (m，1H)，2.53-2.51 (m，1H)，2.37 (d，J=2.2 Hz, H)，1.90-1.96 (m，1H)， 1.68-1.60 (m，H)，1.47-1.40 (m，H)， 1.21-1.32 (m)5 0.99 (s，9H)，0.95-0.83 (m? H)? 0.60 (dd, J=3.4, 9.5 Hz? H) ppm 234 722 724 235 626.1 3.34 236 716.1 718.2 237 696.2 2.04 238 784.2 3.77 239 738 3,8 240 668.2 670.2 241 713.4 2.94 242 667.4 669.4 243 605.9 2.77 244 653.2 245 682 3.58 246 664.7 3.39 247 645.3 3.3 248 707.4 3.7 249 665 3.49 250 714.2 3.8 251 613.4 615.2 252 682 3.7 253 672.3 3.72 254 728.4 3.6 255 778.9 2.37 256 668.5 3.6 257 626 628 258 566.3 568.1 259 783 3.24 129343-4.doc -642- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 260 662 3.16 261 821 3.21 262 612 3.4 263 608.9 611 264 692 3.31 265 698.3 3.87 266 704.3 706.2 267 575.6 577.4 268 752 3.87 269 617.6 2.71 270 720 271 704 3.61 272 696 698.1 273 644 3.46 274 714.1 716.2 275 686.7 2.21 276 716.1 717.8 277 728.3 3.75 278 782 3.9 279 670.3 672.2 280 638.2 640 281 684.5 686.4 282 772.2 3.19 283 645 2.02 284 698 3.8 285 695.7 697.6 286 760 3.13 287 708 3.4 288 695 3.46 289 786.2 3.7 290 695.7 697.6 291 787 3.02 292 685.4 3.36 293 711.1 3.7 294 684 3.76 295 654.5 656.5 296 748.7 2.37 297 718 3.48 298 800.6 2.3 299 706.6 708.3 300 714.7 2.36 301 692.1 694.1 302 817.9 3.96 303 651.5 2.9 304 727 2.87 305 726.2 3.52 306 757.5 759.5 129343-4.doc - 643 - 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 307 744 3.57 308 702.5 3.4 309 715.3 3.59 310 683 685 311 767.2 3.4 312 789.1 791 313 640 3.1 314 718 720 315 755.3 3.67 316 813 815 317 747.2 3.35 318 644.1 645.9 319 658 3.57 320 775.3 777.1 321 744.3 3.75 322 666 323 746.3 324 716.9 3.5 325 676.5 326 654.1 655.9 327 686.5 688.4 328 746.7 3.65 329 613.4 615.2 330 678 331 726.5 728.3 332 694.5 1.82 333 707 3.43 334 705.8 3.66 335 720 3.5 336 774.2 3.8 337 680.6 682.6 338 736.2 3.6 339 757 3.24 340 682 684 341 697.1 2.86 342 626 2.3 343 559 344 684.2 345 696 3.98 346 710.2 3.52 347 742.7 2.28 348 531.6 533.3 349 730.4 3.5 350 700.3 3.94 351 634.5 636.3 352 675.6 677.3 353 691.9 129343-4.doc -644- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 354 700.6 702.5 355 762.2 3.91 356 760 3.11 357 695 2.24 358 686.1 687.9 359 732.4 3.12 360 698 3.87 361 698 3.83 362 652 654 363 722 724.1 364 701.9 3.21 365 676.1 366 728.1 3.6 367 636 2.8 368 770.2 3.64 369 721.1 723.2 370 728.3 3.62 371 695 3.7 372 712.3 3.98 373 723.4 2.3 374 688.4 3.2 375 656 658 376 636.3 3.36 377 795.4 3.29 378 761.1 763 379 645 3.16 380 649.5 1.97 381 731.4 3.3 382 758.3 760.1 383 612.1 3.2 384 629.4 2.78 385 504.1 506 386 504.1 506 387 716 3.13 388 656 3.42 389 723.4 2.3 390 696.1 698 391 583 584.8 392 660 3.05 393 696 4.05 394 703.351 3.3 395 730 3.55 396 698.25 3.89 397 650.5 1.73 398 696.1 698 399 742.7 2.16 400 583 584.8 129343-4.doc -645 - 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 401 698.3 3.9 402 764.1 3.4 403 716.9 719 404 702.5 2.07 405 406 670.1 672.2 407 632 3.35 408 735.7 3.14 409 410 714.5 2.12 411 566.10 568 412 652 3 413 717.9 719.8 414 769.1 771 415 639.5 641.5 416 734.5 3.83 417 653.3 418 686.3 3.1 419 714 3.26 420 704 3.56 421 591.6 1.87 422 693.4 695.4 423 714.2 716.1 424 706 3.31 425 691.8 693.8 426 714.2 3.48 427 666 3.38 428 702.1 704 429 760.9 2.38 430 753.2 3.86 431 691.9 3.3 432 645 3.05 433 835.7 4.16 434 720 3.5 435 744 3.56 436 774 776.2 437 730.2 3.7 438 548.2 549.9 439 603.4 3.34 440 602.6 604.4 441 724.9 2.22 442 712.6 714.5 443 615.6 3.25 444 676.2 678.2 445 742.35 3.2 446 756.2 3.68 447 749.7 1.78 129343-4.doc -646- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 448 608.1 610 449 756 351 450 698.3 700.2 451 630 452 700.3 3.94 453 694.3 3.64 454 761.1 3.3 455 724.4 456 710.5 712.2 457 602.4 3.12 458 803.7 3.97 459 684.2 3.6 460 587.5 3.01 461 735.7 1.8 462 610.1 611.9 463 708.4 3.7 464 706.1 708.2 465 740.4 742.2 466 738.6 3.63 467 696.345 3.7 468 686.2 2.98 469 681.3 3.39 470 610.1 612.05 471 708.2 3.5 472 837 839.1 473 706 708.1 474 710.2 3.2 475 714 3.3 476 734.4 3.67 477 717.37 3.3 478 690.2 3.73 479 690.2 3.66 480 672 673.9 481 718 720 482 698.2 700.1 483 734.6 1.87 484 660 1.44 485 676 3.38 486 803.6 805.4 487 762 3.26 488 794.7 4.07 489 716.5 3.59 490 709.4 711.4 491 754 492 659 3.39 734.4 736.2 493 658.3 3.61 494 744.2 3.71 129343-4.doc -647- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 495 688.2 3.3 496 698.3 3.83 497 694 2.16 498 670.3 672.2 499 726.2 3.65 500 694.3 3.64 501 720.5 3.62 502 724.1 725.9 503 700 3.36 504 692.8 2.13 505 713.8 2.73 506 718 1.87 507 854.7 4.15 508 686.7 2.21 509 724.3 510 756.2 2.95 511 680.5 682.54 512 746.4 748.3 513 726.4 728.2 514 635 3.68 515 688.4 3.2 516 700 2.98 517 744.1 746.1 518 775.2 3.3 519 636 520 660 3.5 521 720.1 3.84 522 670 3.59 523 672 3.1 524 525 735.2 737 526 694 3.64 527 746.1 748.1 528 731.9 3.38 529 732 2.89 530 722 531 650 3.46 532 644 3.39 533 694 696 534 730.5 3.67 535 668.2 3 536 705.8 707.9 537 742.7 2.25 538 731.2 3.7 539 743.2 744.2 540 778.9 4.15 541 700.34 3.2 129343-4.doc -648- 200843738 化合物 No. LCMS (M+l) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+l) NMR 542 685.34 3.5 543 695.7 697.7 544 746.2 2.3 545 696.1 697.9 546 748.7 2.38 547 726.4 728.25 548 682 684 549 696 697.9 550 653.3 654 551 609.3 552 692.3 3.51 553 712.2 2.6 554 670.5 2.9 555 556 557 725.8 3.4 558 679 3.46 559 702 704 560 696.2 698 561 730.4 3.7 562 716 3.41 563 695 2.46 564 707.9 565 762.2 3.55 566 628 630 567 774.7 3.19 568 712.7 2.3 569 671,9 570 656.1 658.2 571 730.2 3.4 572 639,1 641,2 573 694.1 574 634.5 1.7 575 714.4 3.1 576 680 2.2 577 718 3.51 578 680.5 682.4 579 698 3.72 580 597 2.87 581 720 3.51 582 714.4 3.6 583 693 3.35 584 744 585 762 3.68 586 707 3.2 587 730.5 3.68 588 745.7 4.09 129343_4.doc -649- 200843738 化合物 No. LCMS (M+1) LCMS RT FIA-MS (M-l) FIA-MS (M+1) NMR 589 735.20 3.70 590 694.30 3.65 591 651.30 3.26 592 651.30 3.24 593 685.20 3.53 594 700.20 3.72 表13中提供其他化合物、其一些物理資料及合成方法。表13 化編號 LC/MASS 正 ΪΙΑ MS+ 合成方法 595 715.23 5Β 596 689.24 5Β 597 727.20 6 598 775.10 6 599 685.20 6 600 729.1 6 601 729.10 6 602 687.20 5Β 603 673.17 5Β 604 703.00 5Β 605 716.00 5Β 606 742.00 5Β 607 676.00 5Β 608 702.00 5Β 609 676.00 5Β 610 690.00 5Β 611 716.00 5Β 612 650.00 5Β 613 676.00 5Β 614 724.20 6 615 708.20 6 616 744.1 5Β 617 684.1 5Β 618 704.70 5Β 619 677.60 5Β 620 688 5Β 621 662 5Β 622 702 5Β 化編號 LC/MASS 正 FIA MS+ 合成方法 623 676 5Β 624 662 5Β 625 636 5Β 626 664 5Β 627 638 5Β 628 704 5Β 629 678 5Β 630 678 5Β 631 652 5Β 632 688.20 5Β 633 686.10 5Β 634 702.20 5Β 635 700.10 5Β 636 674.10 5Β 637 688.20 5Β 638 735.10 6 639 723.10 6 640 688.20 5Β 641 702.20 5Β 642 714.20 5Β 643 728.10 6 644 651.21 5Β 645 704.00 5Β 646 678.00 5Β 647 663.70 5Β 648 689.70 5Β 649 728.70 5Β 650 690 5Β -650- 129343-4.doc 200843738 編號 LC/MASS 正 FIA MS+ 合成方法 651 676 5B 652 690 5B 653 664 5B 654 650 5B 655 732.70 5B 656 718.70 5B 657 730.60 5B 658 700.10 5B 659 701.00 6 660 689.00 6 661 714 5B 662 728 5B 663 688 5B 664 702 5B 665 716 5B 666 673.10 6 667 701.19 5B 668 684.12 5B 669 708.2 6 670 687.70 5B 671 665.20 6 672 742.00 6 673 716.00 6 674 728.00 6 675 742.00 6 676 728.00 6 677 700.40 6 678 700.40 6 679 688.10 5B 680 662.10 5B 681 648.20 5B 682 690.10 5B 683 664.10 5B 684 650.10 5B 685 702.10 5B 686 676.10 5B 687 662.10 5B 688 674.10 5B 689 704.00 6 690 690.00 6 129343-4.doc

LC/MASS F1A 合成編號正 MS+ 方法 691 692.1 5A 692 706.1 5A 693 692.1 5A 694 690.04; Lot 2:690.10 5B 695 690.04; Lot 2:690.10 5B 696 704.62 5B 697 704.04 5B 698 676.06 5B 699 676.07 5B 700 675.00 6 701 663.00 6 702 634.00 5B 703 672.00 5B 704 686.10 5B 705 700.10 5B 706 740.1 5B 707 628.10 5B 708 740 5B 709 754 5B 710 728 5B 711 714 5B 712 682.2 5B 713 744 5B 714 696.10 5B 715 682.2 5B 716 670.1 5B 717 684.60 5B 718 658.80 5B 719 644.60 5B 720 670.60 5B 721 656.60 5B 722 682.60 5B 723 668.70 5B 724 694.70 5B 725 680.70 5B 726 696.70 5B 727 682.70 5B 728 708.70 5B -651 - 200843738 化操編號 LC/MASS 正 FIA MS+ 合成方法 729 694.80 5B 730 682.70 5B 731 656.60 5B 732 642.70 5B 733 668.70 5B 734 654.70 5B 735 674.80 6 736 702.10 6 737 714.10 6 738 696.00 5B 739 696.00 5B 740 684.6 5A 741 708 5B 742 744.60 5B 743 718.70 5B 744 732.70 5B 745 706.60 5B 746 694.50 5B 747 650.10 5B 748 628.10 5B 749 628.10 5B 750 706.00 5B 751 684.10 5B 752 727.00 5B 753 716.00 5B 754 656.10 5B 755 656.10 5B 756 697.00 5B 757 697.00 5B 758 670.90 5B 759 656.90 5B 760 709.00 5B 761 682.90 5B 762 668.90 5B 763 721.00 5B 764 671.00 5B 765 656.90 5B 766 709.00 5B 767 682.90 5B 768 668.90 5B 129343-4.doc

編號 LC/MASS 正 FIA MS+ 合成方法 769 700.00 5B 770 713.00 6 771 674.00 5B 772 660.10 5B 773 648.10 5B 774 634.10 5B 775 696.10 5B 776 682.10 5B 777 670.10 5B 778 656.10 5B 779 720.00 5B 780 734,00 5B 781 718.1 6 782 692.1 6 783 730.2 6 784 704 6 785 685.80 6 786 724.60 5B 787 710.41 5B 788 712.60 5B 789 698.60 5B 790 736.50 5B 791 750.60 5B 792 724.50 5B 793 764.60 5B 794 700.50 5B 795 714.50 5B 796 700.50 5B 797 714.50 5B 798 694.64 6 799 750.50 5B 800 724.50 5B 801 736.30 5B 802 727.80 6 803 772.00 6 804 693.60 5B 805 693.60 5B 806 707.70 5B 807 707.60 5B 808 698 5B -652 - 200843738 編號 LC/MASS 正 ΪΤΑ MS+ 合成方法 809 684 5B 810 720.00 5B 811 734.00 5B 812 652.90 6 813 658.00 5B 814 742.00 5B 815 728.00 5B 816 716.00 5B 817 758.60 6 818 758.50 6 819 728.60 6 820 640.80 6 821 722.7 5B 822 653.4 5B 823 684.6 5B 824 710.6 5B 825 698.5 5B 826 742.60 5B 827 716.50 5B 828 742.60 5B 829 728.60 5B 830 714.50 5B 831 680.60 5B 832 680.50 5B 833 738.50 5B 834 764.33 5B 835 684.00 5B 836 716.00 5B 837 704.00 5B 838 639.30 5B 839 670.50 5B 840 696.60 5B 841 684.50 5B 842 642.30 5B 843 628.30 5B 844 728.6 5B 845 728.70 5B 846 702.60 5B 847 714.30 6 848 728.30 6 129343-4.doc

編號 LC/MASS 正 F1A MS+ 合成方法 849 682.30 5B 850 644.30 5B 851 682.30 5B 852 646.30 5B 853 682.30 5B 854 724.30 5B 855 748.00 5B 856 742.00 5B 857 672.00 5B 858 698.00 5B 859 710 5B 860 696 5B 861 684 5B 862 708.50 5B 863 698.3 11 864 731.38 6 865 726.30 5B 866 720.50 5B 867 680.60 5B 868 691.20 5B 869 691.20 5B 870 698.60 5B 871 710.60 5B 872 724.70 5B 873 718.50 5B 874 744.50 5B 875 730.40 5B 876 744.50 5B 877 686.50 5B 878 712.50 5B 879 698.50 5B 880 712.50 5B 881 696.50 5B 882 716.40 5B 883 684.50 5B 884 691.20 5B 885 691.20 5B 886 690.20 5B 887 690.10 5B 888 748.00 5B -653 - 200843738

編號 LC/MASS 正 FIA MS+ 合成方法 889 722.00 5B 890 709.10 5B 891 720.40 5B 892 674.20 5B 893 688.30 5B 894 662.10 5B 895 687.70 5B 896 670.30 5B 897 694.20 5B 898 680.50 5B 899 720.10 5B 900 706.10 5B 901 706.20 5B 902 720.10 5B 903 679.3 11 904 654.20 11 905 704.50 5B 906 718.60 5B 907 718.60 5B 908 704.60 5B 909 656.20 5B 910 642.20 5B 911 748.00 5B 912 762.00 5B 913 736.00 5B 914 761.00 5B 915 672.20 5B 916 658.50 5B 917 694.50 5B 918 694.50 5B 919 710.2 5B 920 710.3 5B 921 684.2 5B 922 698.2 5B

化^^7 編號 LC/MASS 正 F1A MS+ 合成方法 923 696.2 5B 924 670.3 5B 925 696.2 5B 926 684.2 5B 927 684.2 5B 928 684.2 5B 929 658.4 5B 930 672.2 5B 931 670.4 5B 932 670.2 5B 933 644.3 5B 934 658.5 5B 935 605.3 11 936 667.3 11 937 734.00 5B 938 722.00 5B 939 708 5B 940 734 5B 941 720 5B 942 732 5B 943 744 5B 944 720 5B 945 746 5B 946 732 5B 947 696 5B 948 744.60 5B 949 730.60 5B 950 708.20 5B 951 700.60 5B 952 696.20 5B 953 696.20 5B 954 694.10 5B 955 738.67 5B

實例編號 HAMASS 負 HAMASS 正 LC MASS 負 LC MASS正合成方法 957 686.41 688.06 5B 958 663.50 665.10 665.10 5B 959 706.60 5B 960 720.60 5B 961 704.00 5B 129343-4.doc -654 - 200843738

實例編號 HAMASS 負 FIAMASS 正 LC MASS 負 LC MASS正合成方法 962 691.70 693.30 11 963 645.30 11 964 679.20 11 965 665.20 11 966 690.00 5B 967 709.60 5B 968 734.10 5B 969 708.10 5B 970 734.00 5B 971 706.00 5B 972 730.00 5B 973 718.00 5B 974 670.00 5B 975 694.00 5B 976 682.00 5B 977 672.00 5B 978 658.00 5B 979 770.70 772.10 5B 980 741.70 743.20 5B 981 743.10 5B 982 741.60 743.20 5B 983 706.60 708.20 5B 984 746.50 748.20 5B 985 756.60 758.20 5B 986 727.60 729.10 5B 987 727.50 729.20 5B 988 727.60 729.10 5B 989 692.50 694.20 5B 990 732.60 734.30 5B 991 744.50 746.10 5B 992 680.60 682.30 5B 993 720.60 722.30 5B 994 759.80; 759.60 760.20 5B 995 734.20 5B 996 760.20 5B 997 734.20 5B 998 746.20 5B 999 744.50 746.10 5B 1000 689.50 691.10 691.10 5B 1001 703.60 705.10 705.10 5B 1002 716.40 718.30 718.30 5B 1003 718.60 720.00 720.00 5B 1004 718.60 720.00 720.00 5B 1005 772.10 5B 1006 744.80 746.00 5B 1007 710.70 712.30 5B 1008 724.60 726.20 5B 1009 724.70 726.20 5B 129343-4.doc - 655 - 200843738

實例編號 HAMASS 負 HAMASS 正 LC MASS 負 LC MASS正合成方法 1010 696.50 698.20 5B 1011 710.60 712.20 5B 1012 710.60 712.20 5B 1013 698.70 700.20 5B 1014 876.30 5B 1015 679.70 681.20 11 1016 713.50 715.10 11 1017 693.60 695.10 11 1018 743.60 745.70 5B 1019 676.60 678.00 11 1020 627.70 629.20 11 1021 629.20 11 1022 702.60 704.20 11 1023 626.60 628.30 11 1024 712.30 5B 1025 686.20 5B 1026 698.40 5B 1027 712.20 5B 1028 686.30 5B 1029 698.30 5B 1030 712.20 5B 1031 686.20 5B 1032 698.30 5B 1033 740.00 5B 1034 714.30 5B 1035 726,30 5B 1036 702.00 5B 1037 670.00 5B 1038 698.00 5B 1039 710.00 5B 1040 684.20 5B 1041 696.70 698.20 5B 1042 696.60 698.20 5B 1043 684.70 686.20 5B 1044 698.70 700.20 5B ν·偵測及量測化合物之抑制性質的檢定 A. HCV酶檢定 1.構建及表現HCVNS3絲胺酸蛋白酶域

藉由自HCV Coni複製子質體I377neo/NS3-37wt(在該研究中重新命名為 pBR322-HCV-Neo)[V· Lohmann 等人， Science，285，第 110-113 頁（1999)]進行 PCR 獲得編碼 HCV 129343-4.doc -656 - 200843738 NS3蛋白酶之殘基Ala^Ser181的DNA片段（GenBank CAB46913)，且將其插入 pBEV 11 (S. Chamber，等人， personal communi cation)用於表現具有大腸桿菌中之C末端六組胺酸標記的HCV蛋白。所有構築體由測序確定。將HCV NS3絲胺酸蛋白酶域之表現構築體轉化至 BL21/DE3 pLysS大腸桿菌細胞（Stratagene)中。使岡J經轉化之細胞在37°C於補充有100 pg/ml魏苄青黴素（carbenicillin) 及 35 pg/ml 氯黴素（chloramphenicol)之 BHI 培養基（Difco Laboratories)中生長直至在600 nm下之光學密度為0·75。在24°C以1 mM IPTG進行誘發四小時。藉由離心作用收穫細胞漿，且在蛋白純化之前在-80°C下急驟冷凍。所有純化步驟係在4°C下執行。接著，將100 g細胞漿溶解於1.5 L 緩衝液 A 中（50 mM HEPES(pH 8.0)，300 mM NaCl，0.1% 正辛基-β-D·葡萄哌喃糖苷，5 mM β-巯基乙醇，10%(v/v) 甘油）且攪拌30分鐘。使用微射流機（Microfluidics， Newton, Mass·)將溶胞物均質化，繼而在54,000 X g下離心 45分鐘。將咪唑連同2 mL預先經含有5 mM咪唑之緩衝液A 平衡過的Ni-NTA樹脂一起添加至清液層中直至終濃度為5 mM。將混合物搖動三小時且以20個管柱體積之緩衝液A外加5 mM咪唑加以洗滌。將HCV NS3蛋白溶離於含有300 mM咪唑之緩衝液A中。將溶離液濃縮且裝載於Hi-Load 16/60 Superdex 200柱（經緩衝液A預平衡）上。收集經純化之HCV蛋白的適當溶離份且在-80°C下儲存。 2. HCV NS3蛋白酶域肽裂解檢定 129343-4.doc -657- 200843738 該檢定為 Landro 等人（Landro JA，Raybuck SA，Luong YC，O丨Malley ET，Harbeson SL，Morgenstern KA，Rao G及 Livingston DL. Biochemistry 1997，36，9340-9348)所述檢定之修改方案，且使用基於基因型la HCV之NS5A/NS5B 裂解位點之肽受質（NS5AB)。於含有0.2 M DTT之DMSO中製備受質儲備溶液（25 mM)且將其於-20°C下儲存。使用合成肽輔因數（KK4A)作為NS4A之中心核區域之替代物。肽序列展示於以下表中。以96-孔微量滴定板形式使用於含有 50 mM HEPES pH 7.8、100 mM NaC卜 20%甘油、5 mM DTT及 25 μΜ KK4A之緩衝液中之25 ηΜ至 50 ηΜ HCV NS3 蛋白酶域執行反應。終DMSO濃度不大於2% v/v。藉由添加三氟乙酸（TFA)使反應中止以產生2.5%之終濃度。與HCV NS3蛋白酶域一起使用之肽序列肽序列 NS5AB NH2-EDVV-(a)Abu-CSMSY-COOH [SEQ ID NO:2] KK4A NH2-KKGSVVIVGRIVLSGK-COOH [SEQ ID NO:3] 使用微孔分離方法將SMSY產物自受質及KK4A分離。所用儀器為配有G1322A除氣器、G1312A二元泵或G1311A四元泵、G1313A自動取樣器、G1316A管柱恆溫室及G1315A 二極體陣列"[貞測器之Agilent 1100。管柱為Phenomenex Jupiter，5 μπι C18，300 人，150x2 mm，P/O 00F-4053-B0，流動速率為0.2 mL/min。管柱恆溫器維持在40°C。移動相為 HPLC 級 Η2Ο/0·1% TFA(溶劑 Α)及 HPLC 級 CH3CN/0.1% TFA(溶劑B)。使用在210 ηΜ所收集之數據，將SMSY產物峰定量。 129343-4.doc -658 - 200843738 3. 構建及表現NS3*4A蛋白酶使用標準重組DNA技術，將含有N末端六-組胺酸序列編碼NS3及NS4A(來自HCV子型株la之殘基Ala1G27至Cys1711) 之序列的cDNA片段選殖進桿狀病毒傳送載體pvL1392 (Webb NR 及 Summers MD(1990) Expression of proteins using recombinant baculoviruses, Techniques 2:173-188) ° 藉由將pVL1392-His-NS3 · 4A與線性化苜蓿丫紋夜蛾 (Autographa californica)核型多角體病毒（AcMNPV)DNA共轉染入草地夜蛾（Spodoptera frugoperda)(Sf9)昆蟲細胞製備含有NS3 · 4A之重組桿狀病毒。隨後藉由空斑純化分離經轉染之含有重組桿狀病毒純系之昆蟲細胞。高效價純系桿狀病毒通常用於感染S f 9昆蟲細胞以用於蛋白質生產。生產中，使Sf9細胞在27°C生長直至其達到2·0-χ1〇6個細胞/ 毫升之密度為止。此時，昆蟲細胞感染上病毒。72小時後或當細胞生活力在70-80%之間時，收穫培養物且準備細胞用於純化。 4. NS3-4A蛋白之純化如下純化NS3’4A蛋白（SEQ ID ΝΟ:1)。使細胞漿於每公克細胞漿至少五體積之溶胞緩衝液（50 mM Na2HP04 pH 8·0，10%甘油，300 mM NaCl，5 mM β-疏基乙醇，0.2 mM PMSF，2.5 pg /ml 亮抑蛋白酶肽，1 ·0 pg/ml E64，2.0 gg/ml抑胃酶肽）中融解。接著使用杜恩斯勻漿器（Dounce homogenizer)在冰上使細胞漿均質化。接著藉由使細胞通過微射流機（Microfluidics Corporation，Newton，MA)—次 129343-4.doc •659 - 200843738 而將其機械破壞’且於冰上收集細胞溶胞物。將細胞溶胞物在4C、在1〇〇,〇〇〇 χ g離心3〇分鐘，且將清液層傾析。視炀况將離心塊再懸浮於洗滌緩衝液（溶解緩衝液+〇·丨％卜辛基葡萄旅喃糖苷），使用杜恩斯勻漿器均質化，且在 4C、在1〇〇,〇〇〇 x g離心3〇分鐘。使用2 5 mi/g細胞漿，藉由將離心塊再懸浮於萃取緩衝液（溶解緩衝液+〇·5%月桂基麥芽糖苷）而將不溶性NS3 · 4Α自離心塊中萃取出。使用杜 ( 恩斯勻漿器將混合物均質化且在混合三小時或三小時以上。將混合物在4它、在1〇〇,〇〇〇 χ g離心分鐘。傾析且果集清液層。使用鎳-NTA金屬親和層析法進一步純化NS3 · 4A蛋白。將來自2 Μ儲備溶液（pH 8〇)之咪唑添加至經彙集之清液層以使彳于咪唑之終濃度為丨〇 mM。分批將清液層與已經溶解緩衝液+10 m Μ咪唑預平衡之鎳-N T a親和樹脂在4它一起培養隔夜。每5 pg之預期NS3-4A使用1 ml樹脂。接著藉由重 ( 力或藉由在500 x g下離心5分鐘使樹脂沈澱。接著將樹脂傾入重力流動柱且以1 〇個或丨〇個以上柱體積之鎳洗滌緩衝液G谷解緩衝液+〇 . 1 %月桂基麥芽糖苷+ 1 峻）洗務。接著將管柱以三至四個柱體積之鎳溶離緩衝液（鎳洗滌緩衝液+300 mM咪唑）溶離。於冰上收集溶離份，且使用 SDS-PAge評估。為防止NS3_4A蛋白分解，在添加sds樣本緩衝液且沸騰之前將100 μΜ DFp蛋白酶抑制劑添加至凝夕樣本中。果集峰〉谷離份且错由量測在280 ηηι下之吸光率且藉由除以消光係數（e)(其對於NS3 · 4A為1.01)來測定蛋白 129343-4.doc -660- 200843738 質濃度。使用凝膠過濾層析進一步純化NS3 · 4A。將2〇〇

26/60管柱以3 ml/min速率之Superdex緩衝液（2〇 mM HEPES pH 8.0，10%甘油，300 mM NaCM，β …甘 W mM β•綺基乙醇，0.05%月桂基麥芽糖苷）平衡。將鎳純化ns34a濃縮於Centriprep 30中至大於2 mg/ml，且若需要則經由〇 2 μηι注射過渡器過爐、且將多達至多1 〇 ml裝載於sUperdex 2〇〇柱上。通過0·3個柱體積後，收集到4-5 mU容離份。藉由 SDS-PAGE評估溶離份。NS3 · 4A蛋白溶離於兩個峰中。峰 1含有聚集之NS3 · 4A且峰2含有活性蛋白質。將峰2之溶離份彙集，等分且在-70°C下冷凍。 NS3.4A蛋白之分析分析完整蛋白質 '^- 長度 695個胺基酸 -- 分子量 —74,347.78 -- 1微克 13.450皮莫耳 -- 莫耳消光係數 "73430 --- 1 a28G對應於 1.01 mg/ml 等電點 "ό3〇 — pH 7時之電荷 -3.58 5· HCV NS3肽裂解檢定該檢定係根據全長C型肝炎病毒蛋白質NS3.4A對肽受質之裂解。使用基於基因型la HCV之NS5A/NS5B裂解位點的三種肽受質中之一種量測酶活性。以含有〇·2 M DTT之 DMSO製備所有受質儲備溶液（25 mM)且將其於-20°C下儲存。使用合成肽辅因數（NS4A肽）補充NS4A。肽序列展示如下。使用於含有 50 mM HEPES pH 7.8、100 mM NaCn、 129343-4.doc •661 - 200843738 20%甘油、5 mM DTT及25 μΜ NS4A肽之緩衝液中之100 ηΜ至125 ηΜ HCV NS3.4A，以96-孔微量滴定板形式執行水解反應。終DMSO濃度不大於2% ν/ν。藉由添加10%三氟乙酸（TFA)中止使用NS5AB或NS5AB-EDANS作為受質之反應，以產生2.5%之終TFA濃度。藉由添加0.4 Μ甲酸中止使用FITC-NS5AB-1作為受質之反應，以產生0.08 Μ酸之終濃度。藉由逆相HPLC分離受質與產物來評估酶活性。所用儀器為配有G1322A除氣器、G1312A二元泵或G1311A四元泵、G1313A自動取樣器、G1316A管柱恆溫室、G1321A螢光偵測器及G1315A二極體陣列偵測器之Agilent 1100。管柱恆溫器為40°C。對於受質NS5AB，該管柱為Phenomenex Jupiter，5 μπι C1 8，300 A，1 50x2 mm，P/O 00F-4053-B0，流動速率為0·2 mL/min，使用 HPLC 級 Η2Ο/0·1% TFA(溶劑 A) 及HPLC級CH3CN/0.1% TFA(溶劑B)作為移動相。使用在 210 ηπι下所收集之吸光率數據，定量C末端產物峰（NH2-SMSY-COOH)。對於受質NS5AB-EDANS，該管柱為 Phenomenex Aqua，5 μπι C18，125 人，50x4.6 mm，P/O 00B-4299-EO，流動速率為 1.0 mL/min，使用 HPLC級 Η2Ο/0·1% TFA(溶劑A)及HPLC級CH3CN/0.1% TFA(溶劑Β)作為移動相。使用在350 ηηι激發/490 ηπι發射下所收集之螢光數據，定量 C 末端產物峰（NH2-SMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH)。對於受質 FITC-NS5AB-1，該管柱為 Phenomenex Prodigy, 5 μιη ODS(2)? 125 A? 50x4.6 mm? P/O 00B-3300- 129343-4.doc -662- 200843738 E0，流動速率為1.0 mL/min，使用於HPLC級H20中之1 〇 mM磷酸鈉pH 7·0(溶劑Α)及於HPLC級Η20中之65% HPLC 級CH3CN/35% 10 mM磷酸鈉pH 7·0(溶劑B)作為移動相。使用在440 nm激發/520 nm發射下所收集之螢光數據定量N 末端產物峰（FITC-Ahx-EDVV-(cx)Abu-C-COOH)。或者，使用 Caliper Lab Chip 3000，在 488 nm激發 / 53 0 nm發射下使用 100 mM Tris pH 7.0、10 mM EDTA、0·01ο/〇(ν/ν) Brij-35 及0. l%(v/v) CR-3之晶片緩衝液來測定N末端產物與未反應之FITC-NS5AB-1受質的比率。與HCV NS3—起使用的肽序列肽序列 NS4A 肽 NH2-KKGSVVIVGRIVLSGKPAIIPKK-COOH [SEQ ID NO:4] NS5AB NH2-EDVV-(a)Abu-CSMSY-COOH [SEQ IDNO:2] NS5AB-EDANS NH2-EDVV-(a)Abu-CSMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH [SEQ ID NO:5] FITC-NS5AB-1 FITC-Ahx-EDVV-(a)Abu-CSMSYTKK-NH2 [SEQ ID NO:6] 6.測定Km及Vmax 為測定動力學參數Km及Vmax，使HCV NS3蛋白酶域或 HCV NS3_4A與肽受質在上述檢定條件下反應。肽受質濃度在3 μΜ與200 μΜ之間變化，其中在所有的受質濃度下轉化率均小於20%。產物峰面積（如藉由逆相HPLC所測定）與反應時間之比率產生酶催化水解反應之速率。使用非線性回歸將該等速率對受質濃度數據點擬合為米門方程式 (Michaelis-Menten equation)。使用標稱蛋白酶濃度及完全裂解之受質肽作為儀器校正標準，自Vmax確定kcat值。與HCV NS3或NS3蛋白酶域一起使用之肽受質的動力學 129343-4.doc -663 - 200843738 參數

7 ·測定化合物效能為算出表觀Ki值，將除測試化合物及受質外的所有組份在室溫下預培養5-10分鐘。接著，將溶kDMS〇中之測試 f 化合物添加至該混合物中且在3(TC培養15分鐘或60分鐘。包括作為無抑制劑對照之純DMS0。藉由添加濃度等於Km 或等於Km之一半的肽受質來引發裂解反應，且容許在 3 0°C進行20分鐘。反應結束時，將混合物中止，且如上所述測定反應程度。使用化合物之十一倍濃度滴定用於抑制之酶活性。使用非線性回歸將活性對抑制劑濃度數據點擬合為描述競爭性緊密結合酶抑制之莫里森（M〇rris〇n)方程 (Sculley MJ及 Morrison JF· Biochim· Biophys· Acta. 1986, l 874, 44-53)。式I之測試化合物通常展現約〇·008至約2〇 μΜ之Ki值。在一些實施例中，式I之化合物展現約〇 008至約〇1〇〇之Κι值。在一些其他實施例中，式I之化合物展現約〇·丨〇〇至約0.5 00 μΜ之Ki值。在一些其他實施例中，式I之化合物展現0.500至約5.000 μΜ之Ki值。

以下在表14中展示式（I、]^及ib)化合物對抑制絲胺酸蛋白酶受體之活性的實例。對於使用HCV酶檢定所量測的對於絲胺酸蛋白酶之化合物活性，若活性經量測為小於〇· J 129343-4.doc -664- 200843738 μΜ，則以’’ + + + ’’說明絲胺酸蛋白酶活性；若活性經量測為 0·1 μΜ至0.5 μΜ，則以”說明；若活性經量測為大於0.5 μΜ，則以” + ”說明；且若無數據可用，則以說明。應注意，0°/。功效為僅以DMSO對照所獲得之最小反應。酶檢定 1係指HCV NS3蛋白酶域肽裂解檢定且酶檢定2係指HCV NS3肽裂解檢定。表14 :根據式I之例示性化合物之HCV酶檢定活性及功效

化合物編號酶檢定1 酶檢定2 1 - - 2 - - 3 ++ +++ 4 ++ 5 +++ +++ 6 + + 7 + - 8 + - 9 + - 10 + + 11 + - 12 ++ +++ 13 +++ +++ 14 + - 15 ++ 16 + - 17 + ++ 18 +++ +++ 19 ++ +++ 20 + - 21 + + 22 - - 23 +++ ++ 24 ++ - 25 + - 26 ++ +++ 27 ++ - 28彳 + ++ 29 ++ ++ 30 ++ +++ 31 - ++ 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 32 ++ - 33 +++ - 34 + - 35 - - 36 ++ - 37 + - 38 - ++ 39 ++ - 40 + - 41 +++ - 42 ++ +++ 43 ++ +++ 44 ++ - 45 + ++ 46 + + 47 + - 48 - - 49 - +++ 50 - +++ 51 + - 52 ++ - 53 + - 54 + ++ 55 ++ - 56 ++ - 57 - - 58 + + 59 - +++ 60 ++ ++ 61 + - 62 ++ ++ 129343-4.doc - 665 - 200843738 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 63 + + 64 + - 65 + + 66 ++ - 67 +++ +++ 68 - +++ 69 + ++ 70 + - 71 + - 72 ++ - 73 + ++ 74 ++ +++ 75 ++ - 76 ++ - 77 ++ +++ 78 ++ - 79 ++ +++ 80 + - 81 + - 82 ++ - 83 ++ - 84 + + 85 ++ - 86 ++ - 87 ++ ++ 88 + ++ 89 - ++ 90 - +++ 91 + + 92 ++ - 93 ++ +++ 94 +++ - 95 ++ - 96 + ++ 97 - +++ 98 + ++ 99 + + 100 + + 101 + - 102 ++ - 103 ++ - 104 - +++ 105 - +++ 106 + - 107 ++ - 108 ++ - 109 +++ - 110 ++ - 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 111 ++ ++ 112 ++ +++ 113 + + 114 +++ +++ 115 + ++ 116 + - 117 - ++ 118 + - 119 ++ ++ 120 + + 121 ++ +++ 122 ++ - 123 +++ - 124 + ++ 125 ++ ++ 126 ++ ++ 127 ++ ++ 128 ++ - 129 - +++ 130 ++ +++ 131 - +++ 132 ++ ++ 133 ++ ++ 134 ++ +++ 135 + - 136 ++ ++ 137 - - 138 + + 139 + - 140 ++ +++ 141 + ++ 142 + - 143 ++ ++ 144 + + 145 ++ - 146 + 讎 147 +++ - 148 + + 149 + - 150 ++ - 151 ++ - 152 ++ 153 ++ ++ 154 ++ - 155 + - 156 +++ - 157 + + 158 +++ +++ 129343-4.doc -666- 200843738 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 159 ++ - 160 + - 161 + - 162 ++ +++ 163 +++ +++ 164 + - 165 ++ +++ 166 ++ - 167 ++ - 168 ++ ++ 169 - ++ 170 - +++ 171 + + 172 + ++ 173 +++ - 174 ++ - 175 - - 176 ++ ++ 177 + ++ 178 ++ ++ 179 ++ - 180 + - 181 + + 182 + + 183 ++ - 184 - +++ 185 + ++ 186 + + 187 + - 188 + + 189 + - 190 ++ +++ 191 + - 192 - - 193 ++ - 194 + - 195 - +++ 196 ++ - 197 ++ - 198 + - 199 + - 200 + - 201 ++ - 202 + - 203 ++ - 204 ++ ++ 205 + - 206 ++ ++ 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 207 + - 208 ++ - 209 ++ - 210 + - 211 - +++ 212 ++ +++ 213 + + 214 + - 215 ++ - 216 + - 217 +++ - 218 + + 219 - +++ 220 + - 221 ++ ++ 222 + - 223 ++ - 224 ++ - 225 - +++ 226 ++ - 227 + + 228 + - 229 + - 230 ++ - 231 ++ - 232 - - 233 ++ +++ 234 ++ • 235 + - 236 + - 237 ++ - 238 - + 239 ++ - 240 + - 241 + ++ 242 +++ - 243 + - 244 ++ - 245 ++ - 246 + + 247 +++ - 248 + + 249 ++ - 250 - +++ 251 + - 252 ++ +++ 253 + + 254 ++ - 129343-4.doc -667- 200843738 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 255 ++ ++ 256 ++ - 257 ++ - 258 + - 259 ++ - 260 ++ - 261 ++ - 262 + - 263 ++ +++ 264 - +++ 265 + ++ 266 ++ ++ 267 - - 268 ++ + 269 + + 270 ++ - 271 ++ +++ 272 + + 273 ++ - 274 + - 275 ++ ++ 276 + - 277 + ++ 278 + - 279 ++ - 280 + + 281 +++ - 282 + ++ 283 + - 284 ++ ++ 285 ++ - 286 - +++ 287 ++ - 288 ++ - 289 + ++ 290 ++ - 291 + - 292 ++ +++ 293 + + 294 ++ - 295 ++ - 296 + + 297 - +++ 298 ++ ++ 299 + - 300 ++ ++ 301 ++ - 302 ++ ++ 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 303 + - 304 ++ +++ 305 - ++ 306 + - 307 ++ +++ 308 ++ - 309 + + 310 + + 311 + - 312 +++ +++ 313 + - 314 ++ - 315 +++ +++ 316 ++ - 317 + - 318 ++ - 319 ++ - 320 + + 321 ++ +++ 322 + - 323 ++ - 324 + - 325 + - 326 ++ ++ 327 + - 328 + + 329 + + 330 ++ 讎 331 + - 332 + ++ 333 ++ - 334 + - 335 + - 336 + + 337 - +++ 338 + ++ 339 ++ +++ 340 ++ - 341 + - 342 + - 343 + - 344 - - 345 + - 346 - +++ 347 + + 348 + - 349 ++ - 350 + + 129343-4.doc -668 - 200843738 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 351 + + 352 + - 353 + - 354 + - 355 + + 356 - +++ 357 ++ - 358 ++ - 359 ++ +++ 360 + - 361 ++ +++ 362 ++ +++ 363 + - 364 + 365 ++ - 366 ++ +++ 367 + - 368 - ++ 369 - +++ 370 ++ +++ 371 ++ - 372 ++ ++ 373 ++ - 374 ++ - 375 + - 376 + + 377 ++ +++ 378 ++ - 379 +++ - 380 - + 381 ++ - 382 +++ - 383 + - 384 十 + 385 + - 386 - - 387 ++ - 388 +++ +++ 389 + - 390 ++ +++ 391 ++ - 392 ++ - 393 ++ - 394 +++ - 395 + + 396 - +++ 397 + + 398 + - 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 399 + + 400 +++ - 401 ++ ++ 402 ++ - 403 + - 404 + ++ 405 + - 406 - +++ 407 ++ - 408 + ++ 409 - - 410 + + 411 ++ +++ 412 ++ ++ 413 + - 414 + - 415 ++ - 416 + ++ 417 +++ - 418 ++ +++ 419 ++ ++ 420 + + 421 - + 422 ++ - 423 + - 424 ++ - 425 + - 426 + ++ 427 + - 428 ++ - 429 + + 430 ++ +++ 431 ++ - 432 + - 433 + + 434 ++ - 435 ++ - 436 ++ - 437 + + 438 + ++ 439 + + 440 - - 441 + ++ 442 ++ +++ 443 + + 444 ++ - 445 ++ +++ 446 一 +++ 129343-4.doc -669- 200843738 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 447 + ++ 448 ++ - 449 ++ - 450 +++ - 451 + - 452 + ++ 453 ++ - 454 ++ 455 + - 456 ++ - 457 + + 458 + + 459 + ++ 460 + + 461 + ++ 462 ++ - .463 + - 464 + - 465 ++ - 466 + + 467 ++ +++ 468 - +++ 469 + ++ 470 - - 471 ++ - 472 + - 473 - - 474 + - 475 ++ - 476 ++ ++ 477 +++ - 478 ++ - 479 - - 480 + - 481 + - 482 + - 483 + + 484 ++ - 485 - +++ 486 ++ - 487 ++ - 488 + ++ 489 + ++ 490 ++ - 491 + - 492 +++ - 493 ++ +++ 494 +++ - 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 495 + - 496 + + 497 ++ - 498 ++ - 499 +++ +++ 500 ++ +++ 501 + + 502 - - 503 ++ - 504 ++ - 505 ++ - 506 + - 507 + + 508 ++ ++ 509 + - 510 ++ +++ 511 ++ - 512 ++ - 513 - +++ 514 + - 515 ++ - 516 + - 517 + - 518 +++ - 519 ++ - 520 + - 521 ++ +++ 522 - +++ 523 ++ - 524 + - 525 + - 526 ++ - 527 ++ - 528 ++ - 529 - +++ 530 + - 531 ++ ++ 532 + - 533 + - 534 + + 535 ++ - 536 + - 537 + + 538 + - 539 ++ - 540 ++ ++ 541 ++ +++ 542 +++ 一 129343-4.doc -670- 200843738

化合物編號酶檢定1 酶檢定2 543 + - 544 ++ - 545 ++ - 546 ++ ++ 547 +++ - 548 ++ - 549 +++ - 550 ++ - 551 ++ - 552 ++ - 553 ++ - 554 + - 555 ++ - 556 - +++ 557 ++ - 558 ++ - 559 + + 560 ++ _ 561 ++ - 562 - +++ 563 ++ - 564 + 565 + + 566 + + 567 + ++ 568 + + 569 +++ - 化合物編號酶檢定1 酶檢定2 570 ++ - 571 ++ - 572 ++ - 573 + + 574 + + 575 +++ +++ 576 ++ - 577 - +++ 578 + - 579 ++ - 580 ++ - 581 - +++ 582 ++ - 583 +十 - 584 + - 585 ++ - 586 + + 587 + ++ 588 + + 589 - - 590 - - 591 - - 592 - - 593 - - 594 - - 化合物編號酶檢定2 595 +++ 596 ++ 597 ++ 598 ++ 599 ++ 600 ++ 601 +++ 602 +++ 603 +++ 604 ++ 605 ++ 606 ++ 607 ++ 608 ++ 609 +++ 610 +++ 611 +++ 612 +++ 化合物編號酶檢定2 613 +++ 614 +++ 615 ++ 616 +++ 617 ++ 618 +++ 619 +++ 620 +++ 621 +++ 622 ++ 623 +++ 624 ++ 625 +++ 626 +++ 627 +++ 628 ++ 629 +++ 630 ++ 129343-4.doc -671 - 200843738 化合物編號酶檢定2 631 +++ 632 +++ 633 +++ 634 +++ 635 +++ 636 +++ 637 +++ 638 +++ 639 +++ 640 +++ 641 +++ 642 +++ 643 +++ 644 ++ 645 +++ 646 +++ 647 ++ 648 ++ 649 ++ 650 ++ 651 ++ 652 +++ 653 ++ 654 +++ 655 ++ 656 ++ 657 +++ 658 ++ 659 - 660 +++ 661 +++ 662 ++ 663 ++ 664 +++ 665 +++ 666 +++ 667 +++ 668 +++ 669 +++ 670 +++ 671 ++ 672 ++ 673 +++ 674 +++ 675 +++ 676 +++ 677 +++ 678 ++ 化合物編號酶檢定2 679 + 680 +++ 681 ++ 682 +++ 683 +++ 684 +++ 685 +++ 686 +++ 687 +++ 688 +++ 689 +++ 690 ++ 691 ++ 692 ++ 693 ++ 694 ++ 695 +++ 696 +++ 697 +++ 698 +++ 699 +++ 700 +++ 701 ++ 702 ++ 703 +++ 704 +++ 705 +++ 706 +++ 707 ++ 708 +++ 709 ++ 710 ++ 711 +++ 712 +++ 713 +++ 714 - 715 +++ 716 +++ 717 + 718 +++ 719 +++ 720 +++ 721 +++ 722 +++ 723 +++ 724 +++ 725 +++ 726 +++ 129343-4.doc -672- 200843738 化合物編號酶檢定2 727 +++ 728 +++ 729 +++ 730 +++ 731 +++ 732 ++ 733 +++ 734 +++ 735 +++ 736 ++ 737 ++ 738 ++ 739 +++ 740 +++ 741 +++ 742 ++ 743 +++ 744 +++ 745 +++ 746 +++ 747 +++ 748 +++ 749 +++ 750 +++ 751 ++ 752 +++ 753 +++ 754 +++ 755 +++ 756 +++ 757 +++ 758 +++ 759 +++ 760 +++ 761 +++ 762 +++ 763 +++ 764 ++ 765 + 766 ++ 767 ++ 768 ++ 769 ++ 770 +++ 771 +++ 772 +++ 773 ++ 774 ++ 化合物編號酶檢定2 775 +++ 776 +++ 111 +++ 778 +++ 779 +++ 780 +++ 781 +++ 782 +++ 783 +++ 784 ++ 785 +++ 786 ++ 787 +++ 788 +++ 789 +++ 790 +++ 791 +++ 792 +++ 793 +++ 794 +++ 795 +++ 796 +++ 797 +++ 798 +++ 799 +++ 800 +++ 801 +++ 802 +++ 803 ++ 804 ++ 805 +++ 806 +++ 807 ++ 808 +++ 809 +++ 810 +++ 811 +++ 812 +++ 813 + 814 +++ 815 +++ 816 +++ 817 +++ 818 +++ 819 +++ 820 +++ 821 + 822 ++ 129343-4.doc - 673 - 200843738 化合物編號酶檢定2 823 +++ 824 +++ 825 ++ 826 +++ 827 +++ 828 +++ 829 +++ 830 +++ 831 +++ 832 ++ 833 +++ 834 +++ 835 +++ 836 +++ 837 ++ 838 +++ 839 ++ 840 ++ 841 ++ 842 +++ 843 ++ 844 ++ 845 +++ 846 +++ 847 +++ 848 +++ 849 +++ 850 +++ 851 +++ 852 +++ 853 +++ 854 +++ 855 +++ 856 +++ 857 +++ 858 +++ 859 +++ 860 +++ 861 +++ 862 ++ 863 +++ 864 ++ 865 +++ 866 ++ 867 +++ 868 +++ 869 +++ 870 ++ 化合物編號酶檢定2 871 +++ 872 +++ 873 +++ 874 +++ 875 +++ 876 +++ 877 +++ 878 +++ 879 +++ 880 +++ 881 +++ 882 +++ 883 +++ 884 +++ 885 ++ 886 +++ 887 ++ 888 +++ 889 +++ 890 +++ 891 +++ 892 +++ 893 +++ 894 +++ 895 +++ 896 +++ 897 +++ 898 +++ 899 +++ 900 +++ 901 +++ 902 +++ 903 +++ 904 +++ 905 ++ 906 ++ 907 ++ 908 +++ 909 +++ 910 +++ 911 +++ 912 +++ 913 +++ 914 +++ 915 +++ 916 ++ 917 ++ 918 ++ 129343-4.doc -674- 200843738

化合物編號酶檢定2 919 +++ 920 ++ 921 +++ 922 +++ 923 +++ 924 ++ 925 +++ 926 +++ 927 +++ 928 ++ 929 +++ 930 +++ 931 ++ 932 +++ 933 +++ 934 +++ 935 +++ 936 + 937 +++ 938 +++ 939 +++ 940 ++ 941 +++ 942 +++ 943 +++ 944 +++ 945 +++ 946 +++ 947 +++ 948 +++ 949 +++ 950 +++ 951 +++ 952 +++ 953 +++ 954 +++ 955 +++ 956 +++ 957 ++ 958 +++ 959 +++ 960 +++ 961 + 962 ++ 963 ++ 964 十+ 965 ++ 966 + 化合物編號酶檢定2 967 +++ 968 +++ 969 +++ 970 +++ 971 +++ 972 +++ 973 +++ 974 +++ 975 +++ 976 +++ 977 +++ 978 +++ 979 - 980 ++ 981 +++ 982 ++ 983 +++ 984 +++ 985 +++ 986 ++ 987 - 988 - 989 - 990 - 991 +++ 992 +++ 993 +++ 994 +++ 995 +++ 996 +++ 997 +++ 998 - 999 - 1000 - 1001 - 1002 - 1003 - 1004 - 1005 - 1006 - 1007 - 1008 - 1009 - 1010 - 1011 - 1012 - 1013 - 1014 129343-4.doc -675 - 200843738 化合物編號酶檢定2 1015 - 1016 - 1017 - 1018 - 1019 - 1020 - 1021 - 1022 - 1023 麵 1024 - 1025 - 1026 - 1027 - 1028 - 1029 - B. HCV細胞檢定化合物編號酶檢定2 1030 - 1031 - 1032 - 1033 - 1034 - 1035 - 1036 - 1037 - 1038 - 1039 - 1040 - 1041 - 1042 - 1043 - 1044 - 在補充有10%熱失活FBS(胎牛血清）、2 mM L-麩胺醯胺及非必需胺基酸（JRH)之經Dulbecco氏改良依格氏培養基 (Dulbecco's modified Eagle’s medium)(DMEM， JRH Biosciences，Lenexa, Kansas)中繁殖 uh-7 細胞。以與如由 Lohmann等人（1999)所述之複製子I377neo/NS3-3，/wt相同之體外轉錄HCV複製子RNA轉染該等細胞。選擇穩定細胞純系’且將其在 250 pg/mL G418(Invitrogen，Carlsbad， California)存在下維持。將該等純系之一 24-2用於隨後的 HCV複製子檢定。將該等複製子細胞於補充有10% FBS、 2 mM L-麩胺醯胺、非必需胺基酸及250 pg/mL G418的 DMEM中繁殖。將該等細胞在達成融合後於新鮮培養基中每週分開兩次。在每個複製子細胞中存在約200-300個 HCV RNA複本。使用 Quantigene Discover XL 套組（Panomics Inc·， Fremont California)，按照製造商說明書，量測來自細胞 129343-4.doc -676· 200843738 之HCV複製子RNA。簡言之，將經化合物處理之複製子細胞溶解且使用HCV特異性募聚核苷酸將其固定於捕獲板隔夜，且使用寡聚核苷酸探針組按照製造商說明書量測經捕獲之RNA的相對量。 1. 2日HCV複製子IC5G檢定在檢定前當日，在96-孔板之每孔中塗佈104個複製子細胞，且使其附著且於補充有10%熱失活FBS(JRH Biosciences，Lenexa，Kansas)、2 mM L·麩胺酸胺 (Invitrogen)、非必需胺基酸（Invitrogen)及 250 pg/ml G41 8(Invitrogen)之 DMEM(Invitrogen，Carlsbad，California) 生長隔夜。連續以不含G418之DMEM外加2% FBS及0.5% DMSO(Sigma Chemical Co., St. Louis，MO)將化合物稀釋。使用 Quantigene Discover XL 套組（Panomics Inc·， Fremont California)，按照製造商說明書，量測來自細胞之HCV複製子RNA。簡言之，將經化合物處理之複製子細胞溶解且使用HCV特異性募聚核苷酸將其固定於捕獲板隔夜，且使用寡聚核苷酸探針組按照製造商說明書量測經捕獲之RN A的相對量。除非另有說明，否則各數據點表示三次重複之平均值。IC5G為使細胞中之HCV複製子RNA含量減少50%(與未經處理之複製子細胞對照相比）的化合物濃度。為監測化合物對細胞增殖或細胞生活力之作用，將複製子細胞以經連續稀釋之化合物處理48 h，其後使用 CellTiter Glo檢定（Promega，Madison，Wisconsin)測定細胞生活力。自三次重複中獲得各CC5〇，且其為使有生活力之 129343-4.doc -677- 200843738 細胞之數目減少5 0%(與未經處理之細胞對照相比）的化合物濃度。使用於 SoftMax Pro 程式（Molecular Devices， Sunnyvale，California)中擬合的4參數曲線確定IC5〇及 CC50 ° 2. 5曰HCV複製子IC99檢定在檢定前當天，以每孔2500個細胞之低密度將HCV複製子細胞塗佈於96-孔板中以使得該等細胞在5天培養期間不會達到融合。以含有10% FBS及0.5% DMSO之DMEM(不存在G418)連續稀釋化合物。在第1天及第3天將新鮮培養基及化合物添加至細胞中。在將該等細胞以抗病毒化合物處理 5天後，使用 QuantigeneDiscoverXL 套組（Panomicslnc·， Fremont California)按照製造商說明書量測來自細胞之 HCV複製子RNA。簡言之，將經化合物處理之複製子細胞溶解且使用HCV特異性寡聚核苷酸將其固定於捕獲板隔夜’且使用募聚核苷酸探針組（Panomics)按照製造商說明書量測經捕獲之RNA的相對量。各數據點表示兩次重複之平均值。IC99為使細胞中HCV複製子RNA含量減少2 log(與未經處理之細胞對照相比）的化合物濃度。為監測化合物對細胞增殖或細胞生活力之作用，將複製子細胞以經連續稀釋之化合物處理5天，其後使用CellTiter Glo檢定 (Promega，Madison，Wisconsin)測定細胞生活力。自兩次重複中獲得各CC5〇，且其為使有生活力之細胞之數目減少 5〇%(與未經處理之細胞對照相比）的化合物濃度。使用 Prism軟體（GraphPad Software Inc.，San Diego，California) 129343-4.doc -678- 200843738 及 Excel程式（Microsoft Corporation，Redmond，Washington) 藉由4參數曲線擬合法確定ic99及CC50。使用以上檢定’確定本發明之化合物為適用的絲胺酸蛋白酶抑制劑。其他實施例應瞭解，儘管本發明已聯繫其實施方式加以描述，但以上描述意欲說明而非限制本發明之範疇，本發明之範疇由 ( 所附申請專利範圍之範疇界定。以下申請專利範圍之範疇涵蓋其他態樣、優點及修改案。 129343-4.doc -679-

Claims

200843738 十、申請專利範圍： l 一種式（I)之化合物

或其醫藥學上可接受之鹽，其中：各 A 為-CH2-; 各 B 為-CH2-; 各為-zar4，纟中z、_c(0)jR4為經取代之烧基；各R2為-ZBR5，其中ZB各自獨立地為一鍵或視情況經取代之脂族基，其中ZB之至多四個碳單元視情況且獨立地由以下基團置換：-c(〇)-、-c(o)nrb-、_c(〇)c(〇)· NRB-或-nrb-; R5各自獨立地為Rb、_基…〇H…CN、-N〇2、_NH2、烧氧基或_烷氧基；各自獨立地為氫、視情況經取代之脂族基或視情況經取代之環脂族基；或 Rl及R2與其所連接之原子共同形成視情況經取代之6 員雜環脂族環；各I為視情況經取代之胺基、-O-Rw、視情況經取代 129343-4.doc 200843738 之之雜環脂族基、視情況經取代雜芳基；方基或視情況經取代尺3八各自獨立地為視情況經取 — 代之雜芳基；且方基或視情況經取 Y及Y’中之每一者為Η。 2. 如請求们之化合物，其中&為視情況經取 3. 如凊求項2之化合物，其中R 、平衣雙^或三環狀芳土 ’且視情況經1至3個各自獨立地選自由以下各基團组成之群之取代基取代：函基、經基、氮基、胺基、确基、脂族基、i脂族基、（脂族基）氧基、（齒基（脂族基）) 乳基、（脂族基（氧基（芳基）)）氧基、芳基、雜芳基、齒芳基、環脂族基或雜環脂族基。 4 ·如明求項3之化合物，其中r3為：

129343-4.doc 200843738

5. 士 °月求項1之化合物，其中I為單環、雙環或三環雜芳甘々土，且視情況經1至3個各自獨立地選自由以下各基團組、羊之取代基取代：鹵基、經基、氰基、胺基、石肖基脂族基、iS脂族基、（脂族基）氧基、（_基（脂族基）) 氧基、（脂族基（氧基（芳基）)）氧基、芳基、雜芳基、鹵芳

環脂族基或雜環脂族基。 6·如請求項5之化合物，其中R3為··

7·如請求項1之化合物，其中&為視情況經取代之胺基、視情况經取代之雜環脂族基或視情況經取代之芳氧基。π η,8.如請求項7厶化合物’其中R3為f

Λ 众 (ch3)2n- ，或 σ°: 129343-4.doc 200843738

9 ·如請求項1之化合物其中： U為一鍵或- Ο-; V為燒基；

τ為-c(0)-;且 R為烷基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基或（環烷基）氧基，其中每一者視情況經丨至3個各自獨立地選自由以下各基團組成之群取代基取代：_基、羥基、氰基、胺基、硝基、脂族基、自脂族基、（脂族基）氧基、（_基（脂族基））氧基、（脂族基（氧基（芳基）)）氧基、芳基、雜芳基、函芳基、環脂族基或雜環脂族基。 10·如請求項9之化合物，其中r

且V為-CH: 11·如請求項1〇之化合物，其中R為具有丨至4個可選取代基之環丙基。 12.如請求項10之化合物，其中環丙基上之該等丨至4個可選取代基中之每一者獨立地為芳基、雜芳基、雜環烷基、環烷基、烷基、烯基、氰基或函基，且經由可選羰基連接子與環丙基連接；或該等可選取代基中之兩者連同其所連接之一或多個原子形成雜環烷基或環烷基。 13·如請求項10之化合物，其中r為 129343-4.doc 200843738

14·如睛求項1〇之化合物，其中R為視情況經取代之環丁基或視情況經取代之雜環丁基。 15·如請求項14之化合物，其中R為一^0。月夂項1 0之化合物，其中R為視情況經取代之雜芳基0

N一〇如請 17· 18. 項16之化合物，其中R為如請求項10之化合物，其中R為視情 +、e & 『月况經取代之烷氧基或視情況經取代之環烷氧基。 129343-4.doc 200843738 七〇、 1 9·如請求項1 8之化合物，其中R為 ^°χ 以〉-卜Ό

-羣-0

20. 如請求項10之化合物，其中R為視情況經取代之烷基。Λ-χ〇\ Λγ 21. 如請求項20之化合物，其中R為 /\ ， / \ΊΑ

23.如請求項9之化合物，其中1為

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24.如請求項9之化合物，其中1^為

129343-4.doc 200843738

129343-4.doc 200843738

26·如請求項9之化合物，其中R

27.如請求項α化合物，其中以2為（環脂族基（幾基（羧基（脂族基））））胺基、（胺基（羰基（羰基（脂族基））)）胺基或（脂族基（羰基（羰基（脂族基）))）胺基，其中每一者視情況經取代0 28·如請求項27之化合物，其中R2係選自由以下各基團組成之群：

0 0 0 29·如請求項27之化合物，其中R2係選自由以不各基團組成之群：

129343-4.doc 200843738

3 0 ·如凊求項2 7之化合物’其中R2係選自由以下各基團組成之群：

3 1 ·如請求項1之化合物

# 連同其所連接之原子 32· 一種式（Π)之化合物，其中

r2 (II) 各汉1為（環烷基（烷基）羰基）胺基）（烧基）幾美· 胺各為（環烧基胺基（Μ基）（幾基）烷基）)胺'±'基或（院基基（緩基））（羰基）烷基）胺基；且土各汉3為視情況經取代之芳芙。 33.如請求項32之化合物，= 八 3為經1至3個各自獨立地選 129343-4.doc '10· 200843738 自由C!_4烷氧基、Cw烷基及函基組成之群之取代基取代之苯基。 34. —種式（II)之化合物，其中

各1為（環烷基（烷基）羰基）胺基）(烷基）纟炭基基）烷基）胺基或（烷基胺各R2為（環烧基胺基（幾基）（罗炭基（羰基））（羰基）烷基）胺基；且各I為視情況經1至3個各自獨立地 ^曰田L丨_ 4貌复基、C】·4烷基及!I基組成之群之取代基取代之雜芳義 35. —種式（Π)之化合物，其中方又

(II) 為、(環烷基（烧基m基））胺基）（燒基）幾美，胺各&為（環烷基胺基（羰基）)（羰基）烷基二二七基（羰基））（羰基）烷基））胺基；且 &基 129343-4.doc -11 - 200843738 各I為視情況經取代之胺基、視情況經取代之雜環脂族基或視情況經取代之芳氧基。 36· —種化合物，選自由化合物第595號至第⑺⑽號組成之群。 37. —種醫藥組合物，其包含如請求項】或請求項％之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。 f 38·如請求項37之組合物，其進一步包含另一藥劑，其選自、免疫調節劑、抗病毒劑、第二HCV蛋白酶抑制劑、hcv 生命週期中另一標的之抑制劑及細胞色素145〇抑制劑。 39.如凊求項38之組合物，其中該免疫調節劑為心干擾素、擾素或γ-干擾素或胸腺素（thym〇sin);該抗病毒劑為病毒唑（ribavirin)、三環癸烷胺（amantadine)或替比夫定 (telbivudine);且該Hcv生命職中另一標的之抑制劑為 HCV解螺旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶之抑制劑。 (40•如清求項38之組合物，其中該細胞色素^彻抑制劑為利托那羊（ritonavir)。 4丨.一種抑制細胞中絲胺酸蛋白酶之方法，其包含使該細胞與如請求項1或如請求項36之化合物接觸。 42·如明求項41之方法，其中該絲胺酸蛋白酶為此v㈣蛋白酶。 43. -種，療受HCV感染之患者之方法，其包含向該患者投予如請求項1或如請求項36之化合物。 44. 如請求項43之方法，其進一步包含向該患者投予另一藥 129343-4.doc 200843738 劑，其選自免疫調節劑、抗病毒劑、卜第一HC V蛋白酶抑制劑及HCV生命週期t另—標的之抑制劑。 45·如請求項44之方法，苴中兮〜，、甲4免疫調節劑為心干擾素、p — 干擾素或y-干擾素或胸腺素；該抗病毒劑為利巴韋林 (ribaVann)或三環癸燒胺；且該HCV生命週期中另一標二之抑制劑為HCV解螺旋酶、聚合酶或金屬蛋制劑。 / 46. —種清除赤染的方 /减少生物樣本或醫學或實驗室設備之HCV污 4 ^ +去’其包含使該生物樣本或醫學或實驗室設備與如明求項^武、巧如請求項36之化合物接觸的步驟。

129343-4.doc 13- 200843738 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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