TW200529823A - Novel compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease - Google Patents

Description

200529823 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於新穎C型肝炎病毒（f’HCV”）蛋白酶抑制劑， 含有一或多種此種抑制劑之醫藥組合物，製備此種抑制劑 之方法，及使用此種抑制劑以治療C型肝炎及相關病症之 方法。本發明另外揭示新穎化合物作為HCVNS3/NS4a絲胺酸 蛋白酶之抑制劑。本申請案係請求得自2004年2月27日提出 申請之美國臨時專利申請案序號60/548,535之優先權。 φ 【先前技術】 C型肝炎病毒（HCV)為（+)-有意義單股RNA病毒，其已被牽 連為非A型、非B型肝炎（NANBH)中之主要病因劑，特別是 在血液有關聯之NANBH (BB-NANBH)中（參閱國際專利申請 案公報案號WO 89/04669與歐洲專利申請案公報案號 EP 381 216)。NANBH係與其他類型之病毒所引致之肝病有區 別，譬如A型肝炎病毒（HAV)、B型肝炎病毒（HBV)、5型肝 炎病毒（HDV)、巨細胞病毒（CMV)及愛氏噸-巴爾（Epstein-Barr) • 病毒（EBV)，以及其他肝病形式，譬如酒精中毒與原發性膽 硬化。 最近，多肽處理與病毒複製所必須之HCV蛋白酶已被確 認、無性繁殖及表現（參閱，例如美國專利5,712，145)。此種 大約3000胺基酸之多蛋白，從胺基末端至羧基末端，係含 有殼包核酸蛋白質（C)、包膜蛋白質（E1與E2)及數種非結構 性蛋白質（NS1，2, 3, 4a，5a及5b)。NS3為大約68 kda蛋白質，被 HCV基因組之大約1893個核苷酸編碼，且具有兩個獨特功 99513 200529823 能部位：⑻絲胺酸蛋白酶功能部位，包含大約200個N-末端 胺基酸；與（b) RNA依賴性ATPase功能部位在蛋白質之C-末 端處。由於蛋白質順序、整體三次元結構及催化作用機制 上之類似性，故NS3蛋白酶被認為是胰凝乳蛋白酶原族群 之一個成員。其他似胰凝乳蛋白酶原酵素為彈性蛋白酶、 Xa因子、凝血酶、胰蛋白酶、血纖維蛋白溶酶、尿激酶、 tPA及PSA。HCVNS3絲胺酸蛋白酶係負責多肽（多蛋白）在 NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a 及 NS5a/NS5b 接合處之蛋白 水解，且因此負責在病毒複製期間產生四種病毒蛋白質。 這已使得HCVNS3絲胺酸蛋白酶成為抗病毒化學療法之吸 引人之標的。本發明化合物可抑制此種蛋白酶。其亦可調 制C型肝炎病毒（HCV)多肽之處理。 已測定出NS4a蛋白質，一種大約6kda之多肽，係為NS3 之絲胺酸蛋白酶活性之輔因子。NS3/NS4a接合處藉由 NS3/NS4a絲胺酸蛋白酶之自動分裂係以分子内方式（意即順 式）發生，然而其他分裂位置係以分子間方式（意即反式） 進行。 HCV蛋白酶之天然分裂位置之分析，揭發半胱胺酸存在 於P1處，而絲胺酸存在於ΡΓ處，且此等殘基係在NS4a/ NS4b、NS4b/NS5a 及 NS5a/NS5b 接合處嚴格地保守。NS3/NS4a 接合處含有蘇胺酸在P1處，與絲胺酸在ΡΓ處。NS3/NS4a處 之Cys-> Thr取代被主張係負責此接合處之順式處理之要求 條件，而非反式。參閱，例如Pizzi等人（1994) Proc· Natl· Acad· Sci (USA) 21: 888-892，Failla 等人（1996)折疊與設計 1 : 35-42。 99513 200529823 NS3/NS4a分裂位置亦比其他位置較容許致突變。參閱，例 如 Kollykhalov 等人 Π 994U. Virol. 68 : 7525-7533。亦已發現在分 裂位置上游區域中之酸性殘基係為有效分裂所需要。參 閱，例如 Komoda 等人 Π994Π. Virol. 68 : 7351·7357。 已經報告之HCV蛋白酶抑制劑，包括抗氧化劑（參閱國際 專利申請案公報案號WO 98/14181)、某些肽與肽類似物（參閱 國際專利申請案公報案號WO 98/17679，Landro等人（1997) Biochem· 36 ： 9340-9348，Ingallinella 箄人 α998) Biochem. 37 : 8906-8914, Llinas-Brunet 等人 Π998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 1713-1718)、 以70-胺基酸多肽也葛林c (eglin c)為基礎之抑制劑（Martin等 人（1998) Biochem. 37 ： 11459-11468)，親和力抑制劑，選自人類 胰分泌胰蛋白酶抑制劑（hPSTI-C3)與微小物體存庫（MBip) (Dimasi 等人（1997) J. Virol· 71 : 7461-7469)，cVHE2 (” 駱駝化 π 可變 功能部位抗體片段 XMartin 等人 Γ1997) Protein Eng._10 ·· 607-614) 及αΐ-抗胰凝乳蛋白酶原（ACT)(Elzouki等人（1997) J. Hepat. 27 ： 42-28) 〇經設計以選擇性地破壞C型肝炎病毒RNA之核糖酵 素最近已被揭示（參閱Bio World Today 9Γ217) : 4 (1998年11月10 曰。 亦參考PCT公報案號1998年4月30日公告之WO 98/17679 (Vertex醫藥公司）；1998年5月28日公告之WO 98/22496 (F· Hoffmann-La Roche AG);及 1999 年 2 月 18 日公告之 WO 99/07734 (Boehringer Ingelheim Canada 公司）〇 HCV係牽連肝硬化及誘發肝細胞癌。對於患有HCV感染 之病患之預後，目前是很貧乏的。HCV感染比其他肝炎形 99513 200529823 式更難以治療，此係由於缺乏與HCV感染有關聯之免疫或 緩解所致。目前資料顯示，肝硬化診斷後第四年低於50% 之存活率。被診斷患有局部可切除肝細胞癌之病患具有 10-30%之五年存活率，然而患有局部不可切除肝細胞癌者 具有低於1%之五年存活率。 參考 WO 00/59929 (US 6,608,027，讓受人：Boehringer Ingelheim (Canada)公司；2000年10月12日公告），其係揭示下式肽衍生 物：

參考 A· Marchetti 等人，办《/故，Si, 1000-1002 (1999)，其係描述 HCVNS3蛋白酉每抑制劑之雙環狀類似物之合成。其中所揭示 之一種化合物具有下式：

亦參考 W· Hm 等人，Bioorganic & Medicinal Chem. Lett，(2QQQ) l〇, 71卜713，其係描述含有烯丙基與乙基官能基之某些α-酮醯 胺、a-酮酯類及a-二酮類之製備。 99513 •10- 200529823 亦參考 WO 00/09558 (讓受人·· Boehringer Ingelheim 有限公司； 2000年2月24日公告），其係揭示下式肽衍生物：

亦參考 WO 00/09543 (讓受人：Boehringer Ingelheim 有限公司； 2000年2月24日公告），其係揭示下式肽衍生物： 99513 -11 - 200529823

其中各種構件係定義於其中。該系列之一種說明性化合物

0 亦參考 U.S. 6,608,027 (Boehringer Ingelheim，Canada)，其係揭示 以下類型之NS3蛋白酶抑制劑：

99513 -12- 200529823 其中各種部份基團係定義於其中。 C型肝炎之現行療法包括干擾素-^ (INF α)，及使用三吐 核苷與干擾素之組合療法。參閲，例如Beremguer等人（1998) Proc. Assoc. Am. Physicians 110(2) : 98-112。此等療法遭遇到低持 續回應率及頻繁之副作用。參閱，例如Hoofhagle等人（1997) N. Enel. J. Med. 336 : 347。目前，無疫苗可用於HCV感染。 進一步參考WO 01/74768 (讓受人：Vertex醫藥公司），2001 年ίο月11日公告，其係揭示某些下列通式化合物（R係定義 於其中）作為C型肝炎病毒之NS3-絲胺酸蛋白酶抑制劑：

前文所提及之WO 01/74768中所揭示之一種特定化合物具 有下式：

PCT 公報 W0 01/77113 ; W0 01/081325 ； W0 02/08198 ； W0 02/08256 ； WO 02/08187 ； W0 02/08244 ； W0 02/48172 ； 99513 -13- 200529823 WO 02/08251 ;及2002年1月ι8日接屮由▲主—/士 ▲ 月H誕出申睛之待審美國專利申 請案序號1G/G52,386，係揭示各種類型之肽及/或复他化人 '，作為C型肝炎病毒之购絲胺酸蛋白酶抑制劑。此； 申叫案之揭示内容均併於本文供參考。 仍需要關於HCV感染之新穎治療藥品與療法。仍需要可 用於治療或預防或改善C型肝炎之—或多種病徵:化合 物0

仍需要治療或預防或改善C型肝炎之一或多種病徵之方 法0 仍需要使用本文中所提供之化合物調制絲胺酸蛋白酶活 性之方法，特別是HCVNS3/NS4a絲胺酸蛋白酶。 仍需要使用本文中所提供之化合物調制Hcv多肤處理之 方法。 【發明内容】 於本發明之許多|體實施例令，纟係提供新颖種類之 HCV蛋白酶抑制劑，含有一或多種此等化合物之醫藥組合 物製備包含一或多種此種化合物之醫藥配方之方法，及 使用一或多種此種化合物或一或多種此種配方，治療或預 防HCV或改善C型肝炎之_或多種病徵之方法。亦提供調 制HCV纽與HCV蛋白酶之交互作狀方法。在本文所提 供之化合物中，會抑制HCVNS3/NS4^€f、胺酸蛋白酶活性之化 合物為較佳。本發明係揭示化合物，或該化合物之對掌異 構物、立體異構物、旋轉異構物、互變異構物、非對映異 構物或外消旋物，或該化合物之藥學上可接受之鹽、溶劑 99513 14 200529823 合物或酯，該化合物具有結構式丨中所示之一般結構

Μ A

Υ、 .R1 〇 R2 Ο Ό 〇 R3

其中： Α1 R1為 Η、OR8、NR9RM 或 chr9r10，其中 r8、r9&r1〇 可為 相同或不同’各獨立選自包括Η、烷基-、烯基-、炔基-、 方基-、雜烷基_、雜芳基·、環烷基_、雜環基_、芳烷基· 及雜芳烷基； Α與Μ可為相同或不同，各獨立選自r、〇r、nhr、nrr，、

SR SC^R及鹵基；或A與M係互相連接，以致使上文式I 中所示之部份基團：

四至八-員雜環 係形成無論是三，四，六，七或八_員環烷基 基、六至十-員芳基或五至十_員雜芳基； E 為 C(H)或 C(R); L 為 C(H)、C⑻、CH2 C(；R)或 C(R)CH2 ; R、R’、R2及R3可為相同或不同，各獨立選自包括Η、烷 基-、烯基…炔基-、環烷基…雜烷基_、雜環基…芳基_、 99513 -15- 200529823 雜方基-、（環烷基）烷基_、（雜環基）烷基_、芳基_烧基-及雜 芳基-烷基或者，NRR，中之反與反，係互相連接，以致使 形成四至八-員雜環基； 且γ係選自下列部份基團：

或 r1-n

其中G為丽或0;且&15，汉16，1117，：^18及尺19可為相同或不 同，各獨立選自包括Η、烧基、雜烧基、稀基、雜稀基、 炔基、雜炔基、環烧基、雜環基、芳基、芳烧基、雜芳基 及雜芳烧基’或者，①無論是R15與R16係互相連接以形成 四至八·員％狀結構，或是Rl 5與Rl 9係互相連接以形成四至 ’員環狀、’、°構，且⑼同樣地，獨立地，R1 7與R1 8係互相連 接，以形成三至八_員環烷基或雜環基； 其中各該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環基可為未經 取代，或視情況獨立被一或多個部份基團取代，取代基選 自U括.I基、烷氧基、芳氧基、硫基、烷硫基、芳基硫 基、胺基、醯胺基、烷胺基、芳胺基、烷基磺醯基、芳基 磺醯基、磺醯胺基、烷基磺醯胺基、芳基磺醯胺基、烷基、 方基、雜方基、酮基、羧基、烷氧羰基、羧醯胺基、烷氧 羰基胺基、烷氧羰基氧基、烷基脲基、芳基脲基、iS基、 氰基及硝基。 99513 -16- 200529823 上文所指之陳述，，，A與Μ係互相連接，以致使上文式 中所示之部份基團：

係形成無論是三，四，六，七或八_員環烷基、四至八·員雜環 基、六至十-員芳基或五至十·員雜芳基"，可如下述在非限

制性事項中說明。因此’例如’在係連接以致使上 文式Ϊ中所示之部份基團：

A

形成六員環烷基（環己Μ之情況中，式1可插繪如

下：

當上文部份基團中所示之Α與]^:

四至八-員雜環 ’具有此藝之_ 係連接而形成三，四，七或八-員環燒基、 基、六至十-員芳基或五至十-員雜芳基時 般技術者將明瞭可達成式I之類似描述。 99513 •17- 200529823 上文陳述·或者，（0無論是R15與R16係互相連接以形成 四至八-員環狀結構，或是！^5與尺19係互相連接以形成四至 八-員環狀結構，且⑼同樣地，獨立地，尺^與“s係互相連 接，以形成三至八·員環烷基或雜環基"，係意謂下述可能 性·（i)R15與R16係連接而形成環狀結構，然而r15與Ri9則 否，⑻Rl%Rl9係連接而形成環狀結構UR^R16則

否，·及與W係獨立連接而形成環狀結構，而’不管① 與（ii)中之可能性存在與否。 在上文所指之汉^及以義中嗜佳烧基係由一至 十個碳原子所製成，較佳烯基或炔基係由二至十個碳原子 所製成’較佳環燒基係由三至人個碳原子所製成；且較佳 雜烧基、雜芳基或雜環烧基具# —至六個氧、&、硫或鱗 原子。 式1表示之化合物，本身或併用一或多種本文中所揭示 之，、他適田藥劑’可用於治療疾病，例如Ha、曆、（a⑽， 後天免疫不王徵候…及相關病症，以及調制^型肝炎病# (HCV)蛋白蛛之活性，預防Hcv，或改善c型肝炎之一或多 種病I此種調制、治療、預防或改善可以本發明化合物 及已厂此種化合物之f藥組合物或配方達成。不希望 咸認咖蛋白酶可為聰或驗蛋㈣。本發明 ㈣此種蛋白酶。其亦可調制C型肝炎病毒(HCV) 夕月太之處理。 99513 在一 項具體實施例中 詳細說明 ，本發明係揭示以結構式丨表示之 -18- 200529823 化合物’或其藥學上可接受之鹽、溶劑合物或醋，其中各 種部份基團均如上文定義。 於另一項具體實施例中，Ri為NR9Rl 〇，且R9為Η，R1 0為 Η或R14，其中Ri4為η、烧基、芳基、雜烧基、雜芳基、環 烷基、烷基-芳基、烷基-雜芳基、芳基-烷基、烯基、炔基 或雜芳基-烷基。 於另一項具體實施例中，Rl4係選自包括：

1-4

p2係選自包括下 列部份基團 於另一項具體實施例中 99513 -19 一 200529823

995 i 3 -20- 200529823 於另一項具體實施例中，R3係選自包括

F ch3、H3iSCH3，

-w c〇2EtCH3V , ，H3c

H3C

0-3 CH3

ch3

ch3 CH3^CH3 .

cf3

/v^NHR32 99513 -21 - 200529823 f3c

及H3C个ch3 r31

其中R31為OH或O-烷基；且 R32為 Η、C(0)CH3、C(0)0tBu 或 C(0)N(H)tBu。 於另一項具體實施例中，R3係選自包括下列部份基團

99513 -22- 200529823

CH4igH3

OH

co2h

co2h

F 於另一項具6體實施例中Μ/係選自下列部份基團：;、/ ΊR16 R17、R18 °

R17R ,18

R17 R18 R19 R17 R18 其中R'R'ri'ris及R19可為相同或不同，各獨立選自 包括Η、烷基、雜烷基、烯基、雜烯基、炔基、雜炔基、 環烷基、雜環基、芳基及雜芳基，或者，（i)無論是R15與以6 係連接而形成四至八-員環狀結構，或是尺^與尺丨9係連接而 形成四至八-員環狀結構，且⑼同樣地，獨立地，以口與“8 係連接而形成三至八-員環烷基或雜環基； 其中各該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環基可為未經 取代，或視情況獨立被一或多個部份基團取代，取代基選 自包括··經基、烧氧基、芳氧基、硫基、烧硫基、芳基硫 99513 -23- 200529823 基、胺基、醯胺基、烧胺基、芳胺基、烧基續醯基、芳基 磺醯基、磺醯胺基、烷基磺醯胺基、芳基磺醯胺基、酮基、 羧基、烷氧羰基、羧醯胺基、烷氧羰基胺基、烷氧羰基氧 基、烷基脲基、芳基脲基、鹵基、氰基及硝基。 於另一項具體實施例中，部份基團··

R17 R18

其中Y32係選自包括： Η Λ

及 99513 •24- 200529823 R16係選自Η、甲基、苯基、芊基；且 R15與R1 9可為相同或不同，各獨立選自下列： ΗΑ * MeA , , . , 丫'Xa.^a.CXa* 〇v 或者，部份基團：

R 15 係選自下列部份基團

、N I R Λ 19

ολ 或，ολ 於另一項具體實施例中，Ri6為Η。 於另一項具體實施例中，部份基團：

Μ A \ / L—E

係選自下列結構： 99513 -25- 200529823

99513 -26 200529823

Me

於另一項具體實施例中，部份基團·· 99513 -27- 200529823

係選自下列結構：

Me

0 〇

99513 -28- 200529823

CL

於又其他具體實施例中，部份基團：

Μ A

L—E

Br、/Br

1-4 1-4 1-5 X4 1-3 a 1 1-4 ， Λ a ， 99513 -29· 200529823 卜OH，卜OMe，人H^〇Me , ^Q〇H *

R2係選自包括下列部份基團：

-30- 99513 200529823

S(〇)〇-2 ch3

R3係選自包括下列部份基團 ch3入ch3 , ch3〆 ch3〆 ch3 R31 ，ch3 ch3

Y係選自包括： -31 - 99513 200529823

其中G = NH，且部份基團

R17 R18 係選自包括：

V R16 = H，且 R15與R1 9可為相同或不同，各獨立選自下列： 99513 -32- 200529823 Η〆、，，， 丫、 丫、

或者，部份基團： RV、 R19

係以下列部份基團之一表示 且部份基團：

Μ A

99513 -33- 200529823

本發明之又再另一項具體實施例係揭示本說明文稍後表 1、表1A、表2及表3中所示之化合物。表中亦顯示數種本 發明化合物之生物學活性（為Ki*值）。

於另一項具體實施例中，本發明係揭示表4中之下列化 合物： 表4

99513 34- 200529823

99513 •35- 200529823

99513 -36- 200529823

99513 -37- 200529823

99513 -38 - 200529823

99513 •39- 200529823

99513 -40- 200529823

99513 -41 - 200529823

99513 -42 200529823

99513 -43- 200529823

99513 •44- 200529823

99513 •45 - 200529823

99513 46- 200529823

99513 -47- 200529823

於另一項具體實施例中，本發明係揭示表5中之下列化 合物： 99513 48- 200529823

表5

99513 -49- 200529823

99513 -50- 200529823

99513 -51 - 200529823

當使用於上文及在整個本揭示内容中時，下列術語，除 非另有指出，否則應明瞭係具有下述意義： ’’病患”包括人類與動物兩者。 99513 -52- 200529823 ’’哺乳動物π係意謂人類及其他哺乳動物。 π烷基π係意謂脂族烴基，其可為直鏈或分枝狀，且包含 約1至約20個碳原子在此鏈中。較佳烷基含有約丨至約12個 碳原子在此鏈中。更佳烷基含有約1至約6個碳原子在此鏈 中。分枝狀係意谓一或多個低碳烧基譬如甲基、乙基或丙 基，被連接至線性烷基鏈。"低碳烷基”係意謂具有約i至 約6個碳原子之基團在此鏈中，其可為直鏈或分枝狀。，，經 取代之烷基’’ 一詞，係意謂烷基可被一或多個可為相同或不 同之取代基取代，各取代基係獨立選自包括齒基、烷基、 芳基、環烷基、氰基、羥基、烷氧基、烷硫基、胺基、-NH(烷 基）、-NH(環烷基）、-N(烷基h、-N(烷基)2、羧基及七(〇)〇_烷 基。適當烷基之非限制性實例包括甲基、乙基、正-丙基、 異丙基及第三-丁基。 π烯基”係意謂含有至少一個碳-碳雙鍵之脂族烴基，且其 可為直鏈或分枝狀，並包含約2至約15個碳原子在此鏈中。 較佳浠基具有約2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2 至約6個石反原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳烧基 鉴如甲基、乙基或丙基，被連接至線性烯基鏈。"低碳烯基 係意谓約2至約6個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或分枝 狀。”經取代之烯基”一詞，係意謂烯基可被一或多個可為 相同或不同之取代基取代，各取代基係獨立選自包括鹵 基、烷基、芳基、環烷基、氰基、烷氧基及(烧基）。適當 烯基之非限制性實例，包括乙烯基、丙烯基、Ν-τ烯基、 3-甲基丁 -2-烯基、Ν-戊烯基、辛烯基及癸烯基。 99513 -53· 200529823 ”炔基π係意謂含有至少一個碳-碳參鍵之脂族烴基，且其 可為直鏈或分枝狀，並包含約2至約15個碳原子在此鏈中。 較佳炔基具有約2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2 至約4個碳原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳烷 基，譬如甲基、乙基或丙基，被連接至線性炔基鏈。，，低碳 炔基”係意謂約2至約6個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或 分枝狀。適當炔基之非限制性實例，包括乙炔基、丙炔基、 2-丁炔基及3-甲基丁炔基。"經取代之炔基"一詞，係意謂炔 基可被一或多個可為相同或不同之取代基取代，各取代基 係獨立選自包括烷基、芳基及環烷基。 "芳基"係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，包含約6至 約14個碳原子，較佳為約6至約1〇個碳原子。芳基可視情況 被-或多個"環系統取代基"取代，其可為相同或不同，且 均如本文疋義。適當芳基之非限制性實例，包括苯基與莕 基。 "雜芳基"係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，包含約5 至約14個環原子’較佳為約個環原子，其中一或多 =原子為碳以外之㈣，例如氮、氧或硫，單獨或併用。 ，芳基含有約5至約6個環原子。，，雜芳基"可視情況被 -，個”環系統取代基·，取代，其可為相同或不同，且均 =定：：雜芳基字根名稱前之字首氮、氧或硫，係意 =二Γ、氧或硫原子個別存在作為環原子。雜芳基 雜芳美Ϊ非子可視情況被氧化成其相應之Ν•氧化物。適當 ，、土之非限制性實例，包括,比0定基、_基、咬〇南基、 99513 •54- 200529823 嘍吩基、嘧啶基、吡啶酮（包括取代之吡啶酮）、異嘮唑 基、異遠0坐基、崎唆基、P塞唾基、Ϊ7比β坐基、咬咕基、p比ΪΙ各 基、Ρ比σ坐基、三σ坐基、1，2,4-p塞二嗤基、吨Ρ井基、塔ρ井基、 4 σ若淋基、吹呼基、吟蜊嗓基、味唆并[l，2-a]p比咬基、咪σ坐 并[2，l-b>塞唑基、苯并呋咕基、吲哚基、氮㈤哚基、苯并咪 σ坐基、本并TT塞吩基、VI奎P林基、咪嗤基、P塞吩并？比σ定基、口奎 嗤淋基、碟吩并嘧啶基、吡u各并吡啶基、咪唑并吡啶基、 異喳琳基、苯并氮吲哚基、1，2,4-三畊基、苯并P塞唑基等。 _ π雜芳基"一詞亦指部份飽和雜芳基部份基團，例如四氫異 口奎淋基、四氫峻琳基等。 π芳烷基”或’’芳基烷基"係意謂芳基_烷基-基團，其中芳 基與烷基均如前文所述。較佳芳烷基係包含低碳烷基。適 當芳烷基之非限制性實例，包括苄基、2_苯乙基及莕基甲 基。對母體部份基團之鍵結係經過烷基。 ”烷基芳基”係意謂烷基-芳基_基團，其中烷基與芳基均 _ 如刖文所述。較佳烧基芳基係包含低碳烧基。適當院基芳 基之非限制性實例為甲苯基。對母體部份基團之鍵結係經 過芳基。 "壌烷基"係意謂非芳族單_或多環狀環系統，包含約3至 約10個碳原？，較佳為約5至約1〇個碳原子。較佳環烧基環 含有約5至約7個環原子。環烷基可視情況被一或多個"環 系統取代基”取代’其可為相同或不同，且均如上文定義。 適當單環狀環烧基之非限制性實例，包括環丙基、環戊基、 環己基、環庚基等。適當多環狀環烧基之非限制性實例， 99513 -55- 200529823 包括1-十氫莕基、正福基、金鋼烷基等，以及部份飽和物 種，例如氫茚基、四氫莕基等。 ”鹵素’’或’’鹵基”係意謂氟、氣、溴或碘。較佳為氟、氣 及溴。 環糸統取代基π係意謂連接至芳族或非芳族環系統之取 代基’其例如係置換環系統上之可取用氫。環系統取代基 可為相同或不同，各獨立選自包括烧基、浠基、炔基、芳 基、雜芳基、芳烷基、烷基芳基、雜芳烷基、雜芳基烯基、 雜芳基炔基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧 基、芳烷氧基、醯基、芳醯基、函基、硝基、氰基、羧基、 烷氧羰基、芳氧基羰基、"芳烷氧基羰基、烷基磺醯基、芳 基磺醯基、雜芳基磺醯基、烷硫基、芳基硫基、雜芳基硫 基、芳烷硫基、雜芳烷基硫基、環烷基、雜環基、 NCN)-NH2、-C(=NH)-NH2、-C(=NH)-NH(烷基）、YAN·、 γιΥ2Ν-烷基、…YiY2NS〇2_ 及-sown，其中

Yi與Y2可為相同或不同，且獨立選自包括氫、烷基、芳基、 %烷基及芳烷基。”環系統取代基"亦可意謂單一部份基 團，其同時置換環系統上兩個相鄰碳原子上之兩個可採用 氫（一個Η在每一個碳上）。此種部份基團之實例為亞甲二 氧基、次乙二氧基、_C(CH3)2_及其類似物，其係形成例如 以下之部份基團：

雜％基係意謂非芳族飽和單環狀或多環狀環系統，包 99513 -56· 200529823

含約3至約10個環原子，較佳為約5至約1〇個環原子其中 在此環系統中之一或多個原子為碳以外之元素，例如氮、 氧或硫，單獨或併用。沒有相鄰氧及/或硫原子存在於此環 系統中。較佳雜環基含有約5至約6個環原+。在雜環基字 根名稱前之字首氮' 氧或硫，係意謂至少一個氮、氧或硫 原子個別存在作為環原子。雜環基環中之任何姻可經保 護存在，例如作成_N㈣、_N(CBz)、娜⑹基團冑；此種保 護亦，認為是本發明之一部份。雜環基可視情況被一或多 f環系統取代基"取代，其可為相同或不同，且均如本文 二義。雜環基之氮或硫原子可視情況被氧化成其相應之& 乳化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。適當單環狀雜環基環之 。非限制性實例包括六氫吡啶基、四氫吡咯基、六氫吡畊基、 :¾啉基、硫代嗎福啉基”塞唑啶基、Μ•二氧陸圜基、四 氫呋喃基、四氫硫苯基、内醯胺、内酯等。 應注意的是，在本發明含有雜原子之環系統中，沒有經 基在鄰近N、〇或s之碳原子上， 反革于上以及沒有N或S基團在鄰 近另—個雜原子之碳上。因此，例如在以下環中.：

4 ^ 沒有-OH直接連接至標記2與5之碳。 亦應注意的是’互义異構形式，例如以下部份基團

OH

、N

I Η 99513 -57- 200529823 於本發明之某些具體實施例中被認為是相等的。 炔基烧基π係意謂炔基-烧基-基團，其中快基與烧基均 如前文所述。較佳炔基烷基含有低碳炔基與低碳烷基。對 母體部份基團之鍵結係經過烷基。適當炔基烷基之非限制 性實例包括炔丙基甲基。 π雜芳烷基”係意謂雜芳基-烷基-基團，其中雜芳基與烷 基均如前文所述。較佳雜芳烷基含有低碳烷基。適當芳烷 基之非限制性實例，包括吡啶基甲基與喹啉基甲基。對 母體部份基團之鍵結係經過烷基。 羥烧基π係意謂ΗΟ-烧基-基團，其中烧基係如前文定 義。較佳經烧基含有低碳烧基。適當經烧基之非限制性實 例，包括羥甲基與2-羥乙基。 基”係意謂H-C(0)_、烷基-C(O)-或環烷基-c(0)-基團， 其中各種基團係如前文所述。對母體部份基團之鍵結係經 過羰基。較佳醯基含有低碳烷基。適當醯基之非限制性實 例，包括甲醯基、乙醯基及丙醯基。 •’芳醯基，，係意謂芳基-c(o)-基團，其中芳基係如前文所 述。對母體部份基團之鍵結係經過羰基。適當基團之非限 制性實例，包括苯甲醯基與μ莕甲醯基。 烷氧基係意謂烷基基團，其中烷基係如前文所述。 適當烷氧基之非限制性實例，包括甲氧基、乙氧基、正· 丙氧基、異丙氧基及正-丁氧基。對母體部份基團之鍵結係 經過醚氧。 "芳氧基”係意謂芳基-〇_基團，其中芳基係如前文所述。 99513 -58 - 200529823 適當芳氧基之非限制性實例，包括苯氧基與莕氧基。對母 體部份基團之鍵結係經過醚氧。 f’芳烷氧基”係意謂芳烷基-〇-基團，其中芳烷基係如前文 所述。適當芳烷氧基之非限制性實例，包括苄氧基與1-或 2-莕甲氧基。對母體部份基團之鍵結係經過醚氧。 π烷硫基’’係意謂烷基-S-基團，其中烷基係如前文所述。 烷硫基之非限制性實例適當，包括甲硫基與乙硫基。對母 體部份基團之鍵結係經過硫。 π芳基硫基ff係意謂芳基-S-基團，其中芳基係如前文所 述。適當芳基硫基之非限制性實例，包括苯硫基與莕基硫 基。對母體部份基團之鍵結係經過硫。 ”芳烷硫基π係意謂芳烷基-S-基團，其中芳烷基係如前文 所述。適當芳烷硫基之非限制性實例為苄硫基。對母體部 份基團之鍵結係經過硫。 ’’烷氧羰基’f係意謂烷基-0-C0-基團。適當烷氧羰基之非 限制性實例，包括甲氧羰基與乙氧羰基。對母體部份基團 之鍵結係經過羰基。 ”芳氧基羰基’’係意謂芳基-o-c(o)-基團。適當芳氧基羰基 之非限制性實例，包括苯氧基羰基與莕氧基羰基。對母體 部份基團之鍵結係經過羰基。 π芳烷氧基羰基π係意謂芳烷基-O-C(o)-基團。適當芳烷氧 基羰基之非限制性實例為苄氧羰基。對母體部份基團之鍵 結係經過羰基。 π烷基磺醯基π係意謂烷基-s(o2)-基團。較佳基團係為其 99513 -59- 200529823 中烷基為低碳烷基者。對母體部份基團之鍵結係經過磺醯 基。 " π芳基磺醯基”係意謂芳基-S(〇2)_基團。對母體部份基團 之鍵結係經過磺醯基。 π經取代”一詞，係意謂在所指定原子上之一或多個氫係 被選自所指示之基團取代，其條件是，不會超過所指定原 子於存在情況下之正常價鍵，且此取代會造成安定化人 物。取代基及/或變數之組合，只有在此種組合會造成安定 化合物下才可允許。所謂”安定化合物，，或"安定結構”，係 意指化合物足夠強健而自反應混合物中留存著，單離至有 用純度，及調配成有效治療劑。 π —或多個”或”至少一個"一詞，當表示取代基、化合 物、組合劑等之數目時，係指至少一個，且至高達化學上 及物理上允許之存在或添加之取代基、化合物、組合劑等 之最大數目，依内文而定。此種技術與知識係為相關技師 之技術範圍内所習知。 π視情況經取代”一詞，係意謂以特定基團、原子團或部 份基團之選用取代。 關於化合物之”經單離”或”呈單離形式"術語，係指該化 合物自合成方法或天然來源或其組合單離後之物理狀態。 關於化合物之，，經純化”或”呈純化形式”術語，係指該化合 物得自本文中所述或熟練技師所習知之一或多種純化方法 後之物理狀態，其係呈充分純度，可藉由本文中所述或熟 練技師所習知之標準分析技術特徵鑒定。 99513 -60- 200529823 亦應注意的是’在本文之内文、圖式、實例及表格中， 具有未滿足價鍵之任何雜原子係被假定為具有氫原子，以 滿足該價鍵。 當化合物中之官能基被稱為，，經保護"時，這意謂該基團 係呈經改質形式’以在化合物接受反應時，排除經保護位 置處之不想要副反應。適當保護基係為具有此藝中之一般 技術者以及參考標準教科書所明瞭，例如TWGreene等人， 亦禮合 4 之获護基（1991)，Wiley，New York。 當任何變數（例如芳基、雜環、圮等）在任何成份中或在 式I中出現超過一次時，其在各存在處之定義係與其在每一 個其他存在處之定義無關。 於本文中使用之"組合物"一詞，係意欲涵蓋一種以特定 量包含特定成份之產物，以及直接或間接由特定成份以特 定量組合所形成之任何產物。 本發明化合物之前體藥物與溶劑合物，亦意欲被涵蓋於 此處。當於本文中採用時，，，前體藥物”一詞係表示一種藥 物先質之化合物，其在投予病患時，係藉由代謝或化學過 程進行化學轉化，而產生式〗化合物或其鹽及/或溶劑合 物。則體藥物之討論係提供於τ· HigUchi與V· Stella，者邀秦物 作為新籍燁翰肩·絲（1987)H，A.C.S·論集系列，與在藥物設計 中之生物可逆載劑，（丨987) EdwardB. Roche編著，美國醫藥協會 與Pergamon出版社中，此兩者均併於本文供參考。 心劑合物’f係意謂本發明化合物與一或多種溶劑分子之 物理締合。此物理締合係涉及不同程度之離子與共價鍵 99513 -61 - 200529823 結’包括氫鍵。在某些情況令，溶劑合物能夠隔離，例如 當-或多個溶劑分子被併入結晶性固體之晶格中時。”溶劑 合物”係涵蓋溶液相與可隔離之溶劑合物。適#溶劑合物: 非限制性實例包括乙醇化物、歹醇化物等。"水合物"為溶 劑合物，其中溶劑分子為h2o。 一 "有效量"或"治療上有效量”，係意欲描述本發明化合物 或組合物有效抑制CDK之量，且因此產生所要之治療、改 善、抑制或預防效果。

式I化合物可形成鹽，其亦在本發明之範圍内。於本文中 指稱之式I化合物’應明瞭係包括指稱其鹽，非另有指 出。當於本文中採用時，”鹽”一詞係表示以無機及/或有= 酸類形成之酸性鹽’以及以無機及/或有機_形成之驗性 鹽。此外’當式！化合物含有驗性部份基團譬如但不限於口比 定或咪》坐’與酸性部份基團譬如但不限於緩酸日寺，可形成 兩性離子（内鹽")，且係包含在如本文中使用之"鹽"一詞 内。藥學上可接受（意即無毒性、生理學上可接受）之鹽為 較佳’惟其他鹽亦可使用。式I化合物之鹽可例如經由使式 I化合物與某一數量之酸或鹼，譬如等量，在媒質中，譬如 鹽會沉殺於其巾者，或在水性媒質巾反應，接著冷床乾燥 而形成。 舉例之酸加成鹽，包括醋酸鹽、抗壞血酸鹽、苯曱酸鹽、 苯％酸鹽、酸性硫酸鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、擰檬酸鹽、樟 細駄鹽、樟腦磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、 氩《鹽、乳酸鹽、順丁稀：酸鹽、甲㈣酸鹽、蕃績酸 99513 -62- 200529823 鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、柳酸鹽、琥珀酸 鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽（t〇luenesdf〇nate) (亦稱為甲苯磺酸鹽（t0Sylate))等。此外，一般被認為適合由 鹼性醫藥化合物形成藥學上可使用鹽之酸類，係由例如 P· Stahl等人，Camille G·(編著藥邋f册沒#、選淨及居途， (2002) Zurich ·· Wiley-VCH ; S· Berge 等人，夢痹籽學妨夯（1977) MOI1-19，P. Gould，嚴蜃農靜學翁刊（1986)旦2〇1-217 ;如—⑻ 等人，夢#/6學紫務（1996)，大學出版社，New Y〇rk ;及襦犮, 春（食品藥物官理局，Washingt〇n，D.C·在其網站上）討論。此等揭 示内容均併於本文供參考。 舉例之驗性鹽包括銨鹽，鹼金屬鹽，譬如鈉、鋰及鉀鹽， 鹼土金屬鹽，譬如鈣與鎂鹽，與有機鹼（例如有機胺類）之 鹽，該鹼類譬如二環己基胺類、第三叮基胺類，及與胺基 酸之鹽，4胺基酸譬如精胺酸、離胺酸等。驗性含氮基團 可以作用劑四級化，譬如低碳烧基鹵化物（例如甲基、乙基 及丁基氣化物、溴化物及峨化物）、二烧基硫酸鹽（例如二 籲 甲基、二乙基及二丁基硫酸鹽）、長鏈鹵化物（例如癸基、 月桂基及硬脂基氣化物、溴化物及碘化物）、芳烷基齒化物 (例如苄基與苯乙基溴化物）及其他。 所有此種酸鹽與鹼鹽係意欲成為本發明範圍内之藥學上 可接受鹽’且對本發明之目的而言，所有酸與鹼鹽係被認 為相當於相應化合物之自由態形式。 本發明化合物之藥學上可接受酯類包括下列基團：（1)羧 酸酯類，藉由羥基之酯化作用所獲得，其中酯族群之魏酸 99513 -63- 200529823 部份之非羰基部份基團，係選自直鏈或分枝鏈烷基（例如乙 醯基、正-丙基、第三-丁基或正-丁基）、烷氧烷基（例如甲 氧基甲基）、芳烷基（例如芊基）、芳氧基烷基（例如苯氧基 甲基）、芳基（例如苯基，視情況被例如鹵素、Ci *燒基戍 C^4燒氧基或胺基取代）；（2)磺酸酯類，譬如烷基_或芳烧基 磺醯基（例如甲烷磺醯基）；（3)胺基酸酯類（例如L—異纈草胺 醯基或L-異白胺醯基）；⑷膦酸酯類，及（5)單-、二-或三磷 酸酯類。磷酸酯可藉由例如Cl_2Q醇或其反應性衍生物，或 藉由2,3-二（C6_24)醯基甘油進一步醋化。 式I化合物及其鹽、溶劑合物、酯類及前體藥物，可以其 互變異構形式存在（例如作為醯胺或亞胺基醚）。所有此種 互變異構形式係意欲被涵蓋在本文中，作為本發明之一部 份。 本發明化合物（包括化合物之鹽、溶劑合物及前體藥物， 以及該前體藥物之鹽與溶劑合物）之所有立體異構物（例如 幾何異構物、光學異構物等），譬如可由於不同取代基上之 不對稱碳所致而存在者，包括對掌異構物形式（其甚至可於 不對稱碳不存在下存在）、旋轉異構形式、非向性異構物及 非對映異構物形式，係意欲被涵蓋在本發明之範圍内，作 為位置異構物（例如4_,比„定基與3_吨咬基）。本發明化合物之 個別立體異構物可例如實質上不含其他異構物，或可例如 經混合成為外消旋物’或與所有其他或其他經選擇之立體 異構物混h本發明之對掌中心可具有如由職c i 974建議 所定義之WR組態。”鹽"、"溶劑合物"、"前體藥物"等術 99513 -64· 200529823 語之使用，係意欲同樣地適用於本發明化合物之對掌異構 物、立體異構物、旋轉異構物、互變異構物、位置異構物、 外消旋物或前體藥物之鹽、溶劑合物及前體藥物。 式I化合物及式I化合物之鹽、溶劑合物、酯類及前體藥 物之多晶形式，欲被包含於本發明中。

應明瞭的是，式I化合物關於本文中所討論之治療應用之 利用性，係適用於單獨各化合物，或—或多種幻化合物之 一或多種組合，例如在下一緊接段落中所示者。相同之瞭 解亦適用於包含-或多種此種化合物之醫藥組合物，及涉 及一或多種此種化合物之治療方法。 根據本發明之化合物可具有藥理學性質；特定言之，式工 化合物可為HCV蛋白酶之抑制劑，單獨之各化合物，或一 或多種幻化合物可與選自式!内之一或多種化合物併用。 此等化合物可用於治療疾病，例如Hcv、hiv、（aids，後 天免疫不全徵候簇)及相關病症’以及調制c型肝炎病毒 (HCV)蛋白酶之活性，預防HCV，或改善c型肝炎之一或多 種病徵。 式I化合物可用於製造藥劑，以治療與Hcv蛋白酶有關聯 之病症例如此方法包括使式J化合物密切接觸藥學上可接 受之載劑。 於另 項具體實施例中，本發明係提供包含本發明一或 多種化合物作為活性成份之醫藥組合物。此等醫藥組合物 通常另外包含至少一種藥學上可接受之載劑稀釋劑、賦形 劑或載劑（於本文中總稱為載劑物質）。由於此種醫藥组合 99513 -65- 200529823 故其在治療C型肝炎及相關病症上具 於又另—頊 明化人4 、、/、體實施例中，本發明係揭示製備包含本發 殺驢乍為’舌性成份之醫藥組合物之方法。在本發明之 西樂組合物蛊方法士 混人浐予/、去中，活性成份典型上係與適當載劑物質

又 適當地針對所意欲之投藥形式作選擇，意即口 服片劑、膠囊f ^ H

(“、、觸疋固體充填、半固體充填或液體充填）、 七、賦形用之拾古 殮W、、々 末、口服凝膠、酏劑、可分散顆粒、糖漿、 =β、、等並與習用醫藥實務一致。例如，對於呈片劑或 ::形式供口服投藥而言，可將活性藥物成份與任何口服 :毋ϋ藥學上可接受之惰性載劑合併，譬如乳糖、澱粉、 二糖纖維素、硬脂酸鎮、填酸二弼、硫酸飼、滑石、甘 路醇、乙醇(液體形式)等。再者，當想要或需要時，適當 黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑亦可被摻入混合物中。 粉末與片劑可包含約5至約95百分比之本發明組合物。

物之HCV抑制活性 有利用性。 適當黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖類、玉米增甜劑， 天然與合成膠質，譬如阿拉伯膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維 素、聚乙二醇及蠟類。在潤滑劑中，特別可指出硼酸、笨 甲酸鈉、醋酸鈉、氣化鈉等供使用於此等劑型。崩解劑包 括澱粉、甲基纖維素、瓜爾膠等。 增甜與矯味劑及防腐劑，在適當情況下亦可加入。一些 上文指出之術語，意即崩解劑、稀釋劑、潤滑劑、黏合劑 等，係更詳細地討論於下文。 ，以 此外，本發明之組合物可被調配在持續釋出形式中 99513 -66- 200529823 組份或活性成份之速率受控釋出，以使 當活一 受於釋出¥人 其含有數層*㈤料速率層，或 劑开 體基f，其係以活性成份浸潰，且被製成片 = 或含有此種經浸潰或包覆多孔性聚合體基質之膠 :，形式製劑包括溶液、懸浮液及乳化液。以下述作為 、可扣出水或水-丙二醇溶液，用於非經腸注射液，或 增甜劑與鎮靜劑1於口服溶液、懸浮液及乳化液。 液體形式製劑亦可包括供鼻内投藥之溶液。 適用於吸人之氣溶膠製劑可包括溶液及呈粉末形式之固 ’、可併用蕖學上可接受之載劑，譬如惰性壓縮氣體， 例如氮。 為製備;k 4’丨，係首先使低熔點蠟熔解，譬如脂肪酸甘油 匕a物4如可可豆脂，並藉由擾拌或類似混合，使 f成伤句勻地分散於其中。然後，將溶融態均勻混合物 倒入合且大小模具中，使其冷卻及藉以固化。 亦包括固體形式製劑，其係意欲在使用之前不久，被轉 化成液體形式製劑，無論是供口服或非經腸投藥。此種液 體形式包括溶液、懸浮液及乳化液。 ' 本發明化合物亦可以經皮方式傳輸。經皮組合物可採取 乳貧、洗劑、氣溶膠及/或乳化液之形式，並可被包含在基 質或儲器型之經皮貼藥中，如同此項技藝中習用於此項目 的之方式。 99513 -67- 200529823 本發明化合物亦可以經口方式、靜脈内方式、鼻内方式 或皮下方式投藥。 本發明化合物亦可包括呈單㈣型之製#卜在此種形式 中’製劑係被再分成適當大小之單位冑量，含有適當量之 活性成份，例如達成所要目的之有效量。 本發明活性組合物在單位劑量製劑中之量可以一般方式 改變或調整，從約U)毫克至約Μ⑻毫克，較佳為約1〇至約 娜毫克，更佳為約μ至約毫克，及典型上為⑴至約25() 毫克’根據特定應用而$。所採用之實際劑量可依病患之 年齡1±別、體重及被治療症狀之嚴重性而改冑。此種技 術係為熟諳此藝者所習知。 般而σ3有活性成份之人類口服劑型可每天投予i 或2人杈藥之量與頻率係根據負責臨床師之判斷作調整。 仏口服扠藥之一般建議每日劑量服法在單一或分離劑量 中，可涵蓋從每天約丨.0毫克至約丨…⑽毫克之範圍。 些可使用之術語係描述於下文： 膠囊係私特殊容器或封閉物，製自甲基纖維素、聚乙烯 醇或變性明膠或殿粉，用以容納或含有包含活性成份之組 合物。硬殼膠囊典型上係製自相對較高凝膠強度骨質與豬 皮明膠之摻合物。膠囊本身可含有少量染料、不透明化劑、 增塑劑及防腐劑。 片劑-係指含有活性成份與適當稀釋劑之經壓縮或模製 固體劑型。片劑可藉由壓縮混合物或藉由濕式造粒、乾式 造粒所獲得之粒化物或藉由壓實製成。 99513 -68 - 200529823 口服嘁膠·係指經分散或增溶於親水性半固體美質中之 活性成份。 土、 賦形用粉末係指含有活性成份與適當稀釋劑之粉末掺合 物，其可被懸浮於水或汁液中。

㈣至。約90%之範圍，以全部組合物之重量計較佳為約Μ 至約75%，更佳為約30至約60重量％，又更佳為約12至約 60% 〇 稀釋係私經常構成組合物或劑型之主要部份之物 質。適當稀釋劑包括糖類，譬如乳糖、絲、甘露醇及花 揪醇链崎’料自小麥、玉米、稻米及馬鈴薯；及纖維 r、 °级aa丨生纖維素。稀釋劑在組合物中之量可涵蓋從 崩解Μ -係指被添加至組合物中，以幫助其破裂開來（崩 解）並釋出藥劑之物質。適當崩解劑包括澱粉；”冷水溶性” 變性澱粉，譬如竣甲基澱粉納；天然與合成膠質，譬如刺 槐豆刺梧桐、瓜爾膠、西黃蓍樹膠及瓊脂；纖維素衍生 物s如甲基纖維素與羧曱基纖維素鈉；微晶性纖維素與 交聯微晶性纖維素’譬如交賴甲基纖維素納；海藻酸鹽， ，如海藻酸與海藻酸納；黏土，譬如膨土；及起泡混合物。 朋解劑在組合物中之量可涵蓋從約2至約15%之範圍，以組 合物之重量計，更佳為約4至約1〇重量％。 黏合劑-係指使粉末結合或”膠黏，，在一起，並藉由形成顆 粒使彼等内聚之物質，因此在配方中充作，，黏著劑”。黏合 劑會增加已可取用於稀釋劑或膨鬆劑中之内聚強度。適當 黏合劑包括糖類，譬如蔗糖；澱粉，衍生自小麥、玉米、 99513 -69- 200529823 稻米及馬鈴薯；天然膠質，譬如阿拉伯膠、明膠及西黃箸 樹膠；海藻衍生物，譬如海藻酸、海藻酸納及藻酸錢躬； 纖維素物質’譬如甲基纖維素與敌甲基纖維素納及經丙甲 基纖維素；聚乙稀基四氫峨„各嗣；及無機物質，譬如石夕酸 鎂鋁。黏合劑在組合物中之量可涵蓋從約2至約2〇%之範 圍，以組合物之重量計，更佳為約3至約1〇重量％，又更佳 為約3至約6重量％。 潤滑劑係指被加入劑型中以使得片劑、顆粒等在被壓縮 籲後⑨夠藉由減少摩擦或磨損，而自模具或模口釋出之物 貝。適當潤滑劑包括金屬硬脂酸鹽，譬如硬脂酸鎂、硬脂 酸鈣或硬脂酸鉀；硬脂酸；高熔點蠟類；及水溶性潤滑劑， 如氣化鈉、苯甲酸鈉、醋酸鈉、油酸鈉、聚乙二醇及心 白胺酸。潤滑劑經常在壓縮前之那個最後步驟添加，因其 必須存在於顆粒之表面上，及位在彼等與壓片機配件之 間。潤滑劑在組合物中之量可涵蓋從約〇·2至約5%之範圍， 以組合物之重量計，較佳為約0.5至約2% ,更佳為約0.3至 攀 約1_5重量。/〇。 /月劑-預防成塊並改良粒化物之流動特性之物質，以致使 μ動平滑且均勻。適當滑劑包括二氧化矽與滑石。滑劑在 組合物中之量’可涵蓋從全部組合物之約0.1%至約5重量％ 之範圍’較佳為約0.5至約2重量％。 著色劑·對組合物或劑型提供著色之賦形劑。此種賦形劑 可包括食品級染料，及被吸附至適當吸附劑譬如黏土或氧 化銘上之食品級染料。著色劑之量可從約〇1改變至約5%， 99513 -70- 200529823 以組合物之重量計，較佳為約0.1至約1%。 生物利用率-係指當與標準物或對照組比較時，活性藥物 成份或治療部份基團從所投予之劑型被吸收至系統循環中 之速率與程度。 製備片劑之習用方法係為已知。此種方法包括乾式方 法，譬如直接壓縮及藉由壓實所製成粒化物之壓縮，或濕 式方法或其他特殊程序。製造其他投藥形式例如膠囊、栓 劑等之習用方法，亦為習知。 • 本發明之另一項具體實施例，係揭示上文所揭示之本發 明化合物或醫藥組合物於治療疾病例如C型肝炎等之用 途。此方法包括對患有此一或多種疾病且需要此種治療之 病患，投予治療上有效量之本發明化合物或醫藥組合物。 於又另一項具體實施例中，本發明化合物可在人類中用 於治療HCV，其係在單一療法模式中，或在組合療法（例如 雙重組合、三重組合等）模式中，例如併用抗病毒及/或免 疫調制劑。此種抗病毒及/或免疫調制劑之實例包括三唑核 • 嘗（得自 Schering-Plough 公司，Madison，New Jersey)與 LevovirinTM (得自10^醫藥，0^&]^8\€汕免11^)、¥?504067^(得自 Viropharma 公司，Exton，Pennsylvania)、ISIS 14803TM(得自 ISIS 醫 藥，Carlsbad，California)、HeptazymeT M (得自 Ribozyme 醫藥，Boulder， Colorado)、VX 497T M (得自 Vertex 醫藥，Cambridge，Massachusetts)、 ThymosinTM (得自 SciClone 醫藥，San Mateo, California)、MaxamineTM (Maxim 醫藥，San Diego, California)、分枝紛酸莫非替（mycophenolate mofetil)(得自 Hoffinan-LaRoche，Nutley，New Jersey)、干擾素（例如 99513 -71 - 200529823 干擾素-α、PEG-干擾素α共軛物）等。1TEG-干擾素α共軛 物’’係為以共價方式連接至PEG分子之干擾素α分子。說明 性PEG-干擾素α共輛物包括干擾素a-2a(RoferonTM，得自 Hoffinan La-Roche，Nutley，New Jersey)，呈 PEG 化干擾素 a-2a 形式 (例如以商標名PegasysTM銷售），干擾素a-2b (IntronTM，得自 Schering-Plough公司），呈PEG化干擾素a-2b形式（例如以商標 名 PEG-IntronTM 銷售），干擾素 a-2c(BeroforAlphaTM，得自 Boehringer Ingelheim，Ingelheim，Germany)，或同感干擾素，如藉由 天然生成干擾素α之同感順序測定所定義者（InfergenTM，得 自 Amgen，Thousand Oaks，California) 〇 【實施方式】 如前文陳述，本發明亦包括本發明化合物之互變異構 物、旋轉異構物、對掌異構物及其他立體異構物。因此， 正如熟諳此藝者所明瞭，一些本發明化合物可以適當異構 形式存在。此種變型係意欲被涵蓋在本發明之範圍内。 本發明之另一項具體實施例係揭示一種製造本文中所揭 示化合物之方法。此等化合物可藉由此項技藝中已知之數 種技術製備。說明性程序係概述於下列反應圖式中。此等 說明不應被解釋為限制本發明之範圍，該範圍係被定義於 隨文所附之請求項中。替代之機制途徑與類似結構，將為 熟諳此藝者所顯而易見。 應明瞭的是，雖然下述說明性合成圖式係描述少數代表 性本發明化合物之製備，但任何天然與非天然胺基酸類兩 者之適當取代，將會造成所要化合物之形成，以此種取代 99513 -72- 200529823 為基礎。此種變型係意欲被涵蓋在本發明之範圍内。 對於下文所述之程序，係使用下列縮寫： 於下文圖式、製備及實例之描述中所使用之縮寫為： THF :四氮咬喃 DMF : N，N-二甲基甲醯胺 EtOAc :醋酸乙酯 AcOH :醋酸 HOOBt : 3_羥基-1，2,3-苯并三畊-4(3H)-酮 EDCI : 1-(3-二甲胺基丙基>3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 NMM: N-甲基嗎福啉 ADDP : 1，1’_(偶氮二羰基）雙六氩吡啶 DEAD :偶氮二羧酸二乙酯

MeOH :曱醇

EtOH :乙醇

Et20 :乙醚 DMSO :二曱亞颯 HOBt : N-羥基苯并三唑

PyBrOP :六敗填酸溴-參-四氫外匕口各基鱗 DCM :二氣甲烷 DCC : 1，3-二環己基碳化二亞胺 TEMPO : 2,2,6,6-四甲基-1_六氫吡啶基氧基

Phg :苯基甘胺酸

Chg :環己基甘胺酸 99513 -73- 200529823

Bn :芊基 Bzl :芊基 Et ·乙基 Ph:苯基 iBoc :異丁氧基羰基 iPr :異丙基 咖或But :第三-丁基 Boc :第三-丁氧羰基 鲁 Cbz :苄氧羰基 Cp :環戊二烯基 Ts:對·甲笨磺醯基 Me :甲基 HATU ··六氟磷酸0_(7_氮苯并三唑小基卜丨山^^四甲基錁 DMAP : 4-N，N-二甲胺基吡啶 BOP:苯并三唑小基_氧基-參（二甲胺基）六i蛾酸鹽 PCC ·氣絡酸p比鍵 鲁 製備標的化合物之一 本發明化合物係使用下文所述之一般圖式（方法a-ε)合 成。

方法A 1.01之N-Boc官能基於酸性條件下之去除保護係提供其鹽 酸鹽1·02 ,接著，使其在肽偶合操作法下，與N_B〇c_第三· 白胺酸偶合，而得U)3。於N-Boc去除保護後，係接著以適 當異氰酸醋處理’獲得脲L05。甲酷之水解作用係提供酸 99513 -74- 200529823

1.06。酸1.06與適當Pi -Pf —級醯胺部份基團之肽偶合，係提 供羥基醯胺1.07。氧化作用（Moffatt或相關方法-T. T. Tidwell， 1990, 857)或 Dess-Martin 過蛾烧-J· (9rg. CAem.，（1983) 4155)造成標的化合物1.08。 V 、X)CH3

V

V

人义J 1.01

V

0CH3 hci.h2nVvA〇 o

V ^ yco2cH3 H. HCI I. 02

och3 V^o0 1.03

V

1.05 1.04

1.06

NH2 NH

Cap〆

2

方法B 酸1.06與適當Pi -P’二級醯胺部份基團之肽偶合，係提供羥 基醯胺1.09。氧化作用（Moffatt或Dess-Martin)造成標的化合物 1.10。 99513 -75- 200529823

方法c

在另一種變型中，N-B0C-P2-P3 -酸1·17與適當Pi _p，醯胺部份 基團之肽偶合，係提供羥基醯胺U1。氧化作用（M〇ffatt或 Dess-Martin過碘烷）會造成酮醯胺U2。N_Boc官能基之去除保 濩係獲得其鹽酸鹽1·13。以適當異氰酸酯（或異氰酸酯相當 物）處理，造成標的化合物U4。

方法D 在又另一種變型中，係經由與氣甲酸4-硝基苯酯反應’ 99513 -76- 200529823 Α·!3轉化成胺基甲酸4_硝基苯酯U5。以所選擇 胺（或胺鹽酸魄、+ /么α上 欠鹽）之後績處理，提供標的化合物U4。

” cap-NH2"

方法E 在又另種變型中，係如上述使二肽鹽酸鹽1〇3轉化成 胺基甲酸4-硝基苯酯。以所選擇之胺（或胺鹽酸鹽）處理，提 供脲衍生物1·〇5。水解作用及按方法a/b中所述 、^ k進一步精巧 地元成’係提供標的化合物1.14。

中間物之盤備： P1-P’部份某之製備： 中間物10.11輿10.12之製備」 步驟1 : 99513 -77- 200529823

10.02

於N2下，使酮亞胺1〇.仍（5〇克，187·1毫莫耳）在無水 (400毫升）中之經攪拌溶液冷卻至-78。〇，並以K_tBu〇 (22〇毫 升’ L15當量）在THF中之1 Μ溶液處理。使反應混合物溫熱 至〇 C ’並攪拌1小時，且以溴基曱基環丁烷（28毫升，249 毫莫耳）處理。將反應混合物於室溫下攪拌48小時，並在真 空中濃縮。使殘留物溶於Et20 (300毫升）中，並以HC1水溶液 (2 Μ ’ 300毫升）處理。將所形成之溶液於室溫下攪拌5小 時’並以Ε^Ο (1升）萃取。以NaOH (50%水溶液）使水層呈鹼 性至pH〜12-14，並以CH2C12 (3x300毫升）萃取。使合併之有機 層脫水乾燥（MgS04)，過濾，及濃縮，而得純胺（10.02，18 克）’為無色油。 步驟2

10.02 10·03 於〇°C下，將胺10.02 (18克，105.2毫莫耳）在CH2C12(350毫升） 中之溶液，以二碳酸二-第三·丁酯（23克，105.4毫莫耳）處 理，並在室溫下攪拌12小時。於反應完成後（TLC)，使反應 混合物在真空中濃縮，並使殘留物溶於THF/H20 (200毫升， 1: 1)中，且以α〇Η·Η20(6·5克，158.5毫莫耳）處理，並在室 99513 -78- 200529823 溫下攪拌3小時。使反應混合物濃縮，並以Et20萃取鹼性水 層。以濃HC1使水層酸化至pH〜1-2，並以CH2C12萃取。使合 併之有機層脫水乾燥（MgS04)，過濾，及在真空中濃縮，而 產生10.03，為無色黏稠油，將其用於下一步驟，未進行任 何進一步純化。 步驟3 0 0 BOCHN.X BocHN^JC OMe • X ώβ 10.03 10.04

將酸10.03 (15.0克，62毫莫耳）在CH2C12 (250毫升）中之溶 液，以BOP試劑（41.1克，93毫莫耳）、N-甲基嗎福啉（27毫升）、 N，0-二甲基羥基胺鹽酸鹽（9.07克，93毫莫耳）處理，並於室 溫下攪拌過夜。將反應混合物以1 NHC1水溶液（250毫升）稀 釋，並分離液層，且以CH2C12(3x300毫升）萃取水層。使合 併之有機層脫水乾燥（MgSOJ，過濾，並在真空中濃縮，及 藉層析純化（SiO2，EtOAc/己烧2:3)，而產生醯胺l0·04(l5.0 克），為無色固體。 步驟4 〇 BocHNvJlvN.OMe o BocHN^A, l Me 10.04 10.05 將醯胺10.04 (15克，52.1毫莫耳）在無水THF (2〇〇毫升）中之 溶液，於0°C下，以LiAlH4溶液（1M，93毫升，93毫莫耳）逐 99513 -79- 200529823 滴處理。將反應混合物於室溫下攪拌1小時，並在〇。(3下， 以KHSO4溶液（10%水溶液）小心地使反應淬滅，及攪拌〇·5小 時。將反應混合物以HC1水溶液（1Μ，150毫升）稀釋，並以 CH2 (¾ (3x200毫升）萃取。將合併之有機層以HCi水溶液 (1 M)、飽和NaHC〇3、鹽水洗滌，及脫水乾燥（MgS〇4)。過濾 混合物，並於真空中濃縮，而產生1〇·〇5，為黏稠無色油（14 克）。 步驟5 〇 II 〇 BocHN^U^OMe BocHN^A Me • y 10.04 10.05

將醛10.05 (14克，61.6毫莫耳）在CH2C12 (50毫升）中之溶 液，以Et3N(10.73毫升，74·4毫莫耳）與2-氰化丙醇（10.86克， 127.57毫莫耳）處理，並於室溫下攪拌24小時。使反應混合 物在真空中濃縮，並以HC1水溶液（1Μ，200毫升）稀釋，及 萃取在CH2C12(3x200毫升）中。將合併之有機層以Η20、洗滌 鹽水，脫水乾燥（MgS04)，過濾，在真空中濃縮，及藉層析 純化（Si02，EtOAc/己烷1 : 4)，而產生10.06 (10.3克），為無色 液體。 步驟6

99513 -80- 200529823 將〇C下經由使11(：1氣體起泡經過CH3〇H(7⑻毫升）所製成 而以HC1飽和之甲醇*，卩氛醇麵處理，並加熱至回流， 歷Ί 24小日^。使反應物於真空中濃縮，而產生1G.G7，將其 使用於下一步驟，無需純化。 或者，亦可使用藉由添加AcC1至無水甲醇中所製成之_ HC1 〇 步驟7

將月女鹽酸鹽10.07在CH2C12(200毫升）中之溶液，於·78°〇 下，以Et3N(45.0毫升，315毫莫耳）與BoC2〇(45.7克，2〇9毫莫 耳）處理。然後，將反應混合物於室溫下攪拌過夜，並以Ηα (2 Μ，200毫升）稀釋，及萃取在Ch2C12中。使合併之有機層

脫水乾燥（MgS〇4)，過濾，在真空中濃縮，及藉層析純化 (EtOAc/己烧1 : 4) ’而產生經基酯瓜⑽。 步驟8

OH BocHN

10.09 將曱酯10·08 (3克，10·5毫莫耳）在THF/H2〇 (1 ·· i)中之溶液， 以LiOH · % 0 (645毫克，15·75毫莫耳）處理，並於室溫下搜拌 2小時。以HC1水溶液（1Μ，15毫升）使反應混合物酸化，並 99513 -81 - 200529823 在真空中濃縮。使殘留物在真空中乾燥，而得1〇.〇9，定量 產率。 步驟9

OH BocHN

10.10

將酸10.09 (得自上文）在CH2 (¾ (50毫升）與DMF (25毫升）中 之溶液，以 NH4C1(2.94 克，55.5 毫莫耳）、££〇(3.15克，ι6·5 毫莫耳）、HOOBt(2.69克，16.5毫莫耳）及ΝΜΜ(4·4克，44毫 莫耳）處理。將反應混合物於室溫下攪拌3天。於真空下移 除溶劑，並將殘留物以HC1水溶液（250毫升）稀釋，及以 CH2C12萃取。將合併之有機層以飽和NaHC03水溶液洗滌， 脫水乾燥（MgS04)，過濾，在真空中濃縮，獲得lo.io，將其 以本身使用於下列步驟（或者，10.10亦可於0°C下，經由使 10·06(4·5 克，17.7 毫莫耳）與 H2O(10 毫升）、ϋΟΗ·Η2Ο(820 毫 克，20.8毫莫耳）在50毫升CH3OH中之水溶液，反應0.5小時 而直接獲得）。 步驟10

10.10 OH cih3n

10.11 使前一步驟中所獲得之10.10溶液溶於二氧陸圜中之4N HC1内，並在室溫下攪拌2小時。使反應混合物在真空中濃 99513 -82- 200529823 縮，獲得中間物10.11，為固體，使用之而無需進一步純化。

10.09

10.12 所需要之中間物10.12係基本上使用上文步驟9、10中所 述之程序，以適當試劑，得自化合物10.09。

中間物11.01之製備 步驟1

於 4-戊炔-1·醇 11.02 (4.15 克；Aldrich)之溶液中，添加 Dess-Martin 過碘烷（30.25克；Aldrich)，並將所形成之混合物攪拌45分 鐘，然後添加（第三-丁氧羰基亞甲基）三苯基磷烷（26.75克； Aldrich)。將所形成之暗色反應物攪拌過夜，以EtOAc稀釋， 以亞硫酸納水溶液、飽和NaHC03水溶液、水、鹽水洗滌， 並脫水乾燥。於減壓下移除揮發性物質，並使殘留物藉矽 膠管柱層析純化，使用己烷中之1% EtOAc作為溶離劑，而 得所要之化合物11.03 (3.92克）。亦獲得一些不純溶離份，但 此時放在一旁。 步驟2 99513 -83- 200529823 ,ΟΗ

II 11.02

使用正-丙醇（20毫升；Aldrich)中之烯烴11.03 (1·9克）、正-丙醇（40毫升）中之胺基甲酸芊酯（4.95克；Aldrich)、水（79毫 升）中之NaOH (1.29克）、次氯酸第三-丁酯（3.7毫升）、正-丙 醇（37.5毫升）中之（DHQ)2PHAL (0.423克；Aldrich)及餓酸鉀：脫 水物（0.1544 克；Aldrich)，以及 Angew. Chem· Int· Ed. Engl (1998)，35, (23/24)，第2813-7頁中所提出之程序，獲得粗產物，使其藉矽 膠管柱層析純化，使用EtOAc :己烷（1 : 5)，而得所要之胺 基醇11.04 (1.37克，37%)，為白色固體。 步驟3

於酯11·04(0·700克）中，添加二氧陸圜申之4MHC1(20毫 升；Aldrich)，並使所形成之混合物在室溫下靜置過夜。於 減壓下移除揮發性物質，獲得酸11.05 (0.621克），為白色固 體。 步驟4 99513 -84- 200529823

於室溫下，將BOP試劑（3.65克；Sigma)，接著是三乙胺（3.45 毫升），添加至羧酸11.05 (2.00克）之二氯甲烷（20毫升）溶液與 烯丙基胺（〇_616毫升）中，並將所形成之混合物攪拌過夜。 使反應混合物於EtOAc與10% HC1水溶液之間作分液處理。 將有機相分離，以碳酸氫鈉飽和水溶液、水洗滌，脫水乾 燥（硫酸鎂）。使粗製反應產物藉矽膠管柱層析純化，使用 (EtOAc:己烷；70: 30)作為溶離劑，提供所要之醯胺11.01 (1.73 克），為黏稍黃色油。 中間物12.03與12.04之製備 步驟1

〇

OH

使用基本上關於中間物10.11步驟3-8所述之程序，使化合 物12·01轉化成所需要之物質12.02。 步驟2 ΟΗ

ΟΗ

ΝΗ2 使用基本上關於中間物10.11步驟9、10所述之程序，使化 99513 -85- 200529823 合物12.02轉化成所需要之中間物12·〇3。 步驟3

使用基本上關於中間物10.12步驟11所述之程序，使化合 物12.02轉化成所需要之中間物12.03。 中間物13.01之製備 步驟1

OH

13.03 13.02 於1-硝基丁烷13.02(16.5克，0.16莫耳）與乙醛酸在H2〇(281 克，0.305莫耳）與吣〇11(122毫升）中之經攪拌溶液内在〇 °C-5°C下，逐滴添加三乙胺（93毫升，〇667莫耳），歷經二小 鲁 _。使溶液溫熱至室溫，授拌過夜，及濃縮至乾涸，而得 油狀物。然後，使油溶於吆〇中，並以1〇%Ηα酸化至阳， 接著以Et〇AC萃取。將合併之有機溶液以鹽水洗務，以

Na2S〇4脫水乾燥’過濾，及濃縮至乾酒，獲得產物娜_ 克，99%產率）。 步驟2 99513 -86- 200529823

於化合物13.03 (240克，1.35莫耳）在醋酸（ι·25升）中之經攪 拌溶液内，添加10% Pd/C (37克）。使所形成之溶液於59 psi 下氫化3小時，然後在60 psi下過夜。接著蒸發醋酸，並與 甲苯共沸3次，然後以MeOH及醚研製。接著過濾溶液，並 與曱苯共沸兩次，而得13·〇4，為灰白色固體（13丨克，〇·891 莫耳，66%)。

於胺基酸13.04 (2.0克，13.6毫莫耳）在二氧陸圜（1〇毫升）與 Η2〇(5宅升）中之經攪拌溶液内，在〇〇c下，添加mNa〇H溶 # 液(4·3耄升，14·0毫莫耳）。將所形成之溶液攪拌10分鐘，接 著添加二碳酸二-第三-丁酯（0.110克，14〇毫莫耳），並於〇艺 下攪拌15分鐘。然後，使溶液溫熱至室溫，攪拌必分鐘， 並在冷卻器中保持過夜，及濃縮至乾涸，獲得粗製物質。 於此粗製物質在Et〇Ac(100毫升）與冰中之溶液内，添加 KHS〇4(3.36克）與％0(32毫升），並攪拌从分鐘。接著，分 離有機層，並以EtOAc將水層萃取兩次，且將合併之有機層 以水、鹽水洗滌，以N^SO4脫水乾燥，過濾，及濃縮至乾 99513 -87- 200529823 涸，獲得產物13.05，為透明膠質（3.0克，89°/。產率）。 步驟4

使用基本上關於中間物10.12步驟11所述之程序，使化合 物13.05轉化成所需要之中間物13.01。 中間物14.01之製備

14.03 使用基本上關於中間物13.01步驟1-3所述之程序，使化合 物14.02轉化成所需要之物質14.03。 步驟2

OH

使用基本上關於中間物10.12步驟11所述之程序，使化合 物14.03轉化成所需要之中間物14.01。 中間物15.01之製備 步驟1 o2n^s^^cf； 15.02 15.03 99513 -88- 200529823 於亞硝酸銀（9克，58.5毫莫耳）在乙醚（25毫升）中 — 之懸}手 液内，在0°C下，經過添液漏斗，慢慢添加（約15分鐘）4峨 基-1，1，1-三氟丁烷15.02(10克，42.0毫莫耳）在乙醚（25毫升）中 之溶液。將所形成之混合物於(TC下激烈攪拌，並溫熱至室 溫。50小時後，經過矽藻土墊濾出固體物質。使所形成之 乙醚溶液在真空中濃縮，獲得15.03，為無色油，使用之而 無需進一步純化。 步驟2

15.03

OH

使用基本上關於中間物13·01步驟1-3所述之程序，使化合 物15.03轉化成所需要之物質15.04。 步驟3

15.04 15.01 使用基本上關於中間物10.12步驟11所述之程序，使化合 物15.04轉化成所需要之中間物15.01。 中間物16.01之製備 〇H Η 16.01 f2c hci.h2n

〇

BocHN F2C 16.02 將酸 16.02 (Winkler, D.; Burger, K·，办祕1996，1419)按上述處 99513 -89- 200529823 理（中間物10.12之製備），而得所期望之中間物16·01。 Ρ2/Ρ3-Ρ2部份基團之Μ備 中間物20.01之製備 Η3〇^Η3 ^~^C02CH3 H.HC! 20.01

胺基酯20.01係按照R. Zhang與J.S. Madalengoitia之方法 (/· Og· CAem. 1999，(54, 330)製成，惟Boc基團係藉由Boc-保護之 胺基酸與甲醇性HC1之反應而分裂（亦採用二氧陸圜中之 4M HC1，以進行去除保護）。 (註：在所報告合成之變型中，係將锍亞烷基化合物以其相 應之鱗亞烷基化合物置換） 中間物20.04之製備 步驟1

將市售胺基酸Boc-Chg-OH 20·02 (Senn化學品，6.64克，24.1 毫莫耳）與胺鹽酸鹽20.01 (4.5克，22毫莫耳）在CH2C12(100毫 升）中之溶液，於〇°C下，以BOP試劑處理，並在室溫下攪 拌15小時。使反應混合物於真空中濃縮，然後將其以1MHC1 水溶液稀釋，並萃取在EtOAc (3x200毫升）中。將合併之有機 99513 -90- 200529823 層以飽和NaHC03(200毫升）洗滌，脫水乾燥（MgS04)，過濾， 並在真空中濃縮，及層析（Si02，EtOAc/己烷3 : 7)，獲得 20.03 (6.0克），為無色固體。 步驟2

CH3>/CH30^〇ch3 BocHN>A〇 ° Ο 20.03 CH3yCH3 BocHN o 20.04

將甲酯20.03 (4.0克，9.79毫莫耳）在THF/H20 (1 : 1)中之溶 液，以LiOH.H2O(401毫克，9.79毫莫耳）處理，並於室溫下 攪拌3小時。以HC1水溶液使反應混合物酸化，並於真空中 濃縮，獲得所需要之中間物自由態酸20.04。 中間物20.08之製備 步驟1

BocHN

个 20.05

使Boc-第三-Leu20.05(Fluka，5.0克21.6毫莫耳）在無水 CH2C12/DMF (50毫升，1 : 1)中之溶液冷卻至0°C，並以胺鹽 20.01 (5.3 克，25.7 毫莫耳）、NMM (6.5 克，64.8 毫莫耳）及 BOP 試劑（11.6克，25.7毫莫耳）處理。將反應物於室溫下攪拌24 小時，以HC1水溶液（1M)稀釋，並以CH2C12萃取。將合併之 99513 -91 - 200529823 有機層以HC1 (水溶液，1M)、飽和NaHC03、鹽水洗滌，脫 水乾燥（MgS04)，過濾，並在真空中濃縮，及藉層析純化 (Si02，丙酮/己烧1:5)，而產生20.06，為無色固體。 步驟2

20.06

20.07 使甲酯20.06 (4.0克，10.46毫莫耳）溶液溶於二氧陸圜中之 4MHC1内，並在室溫下攪拌3小時。使反應混合物於真空中 濃縮，獲得胺鹽酸鹽20.07，使用之而無需純化。 步驟3

hci.h2n

20.07 个

使胺鹽20.07 (840毫克，2.64毫莫耳）在THF (14毫升）/乙腈（2 毫升）中之溶液冷卻至〇°C。添加氣甲酸4-硝基苯酯（800毫 克，3.96毫莫耳），接著是吡啶(0.64毫升，7.92毫莫耳）。當 TLC顯示反應完成時，使反應物慢慢溫熱至室溫，歷經3小 時。添加乙醚（50毫升），並濾出所形成之沉澱物。將濾液 以飽和氣化銨溶液（lx)、鹽水（lx)洗務，脫水乾燥（Na2 S〇4)， 及濃縮。使殘留物藉急驟式層析純化，使用20/80 EtOAc/己 99513 -92- 200529823 烷，提供U5克所需要之中間物20.08。 中間物21.01之Μ備 步驟1 ζ^〇〇2Η 1 ^N^C02tBu Boc Boc 21.02 21.03 於N-B〇C-3,4-脫氫脯胺酸21.02 (5.0克，23.5毫莫耳）、二碳酸 二-第三-丁酯（7.5克，34.4毫莫耳）及4-N，N-二甲胺基吡啶（〇.4〇 克’ 3.33毫莫耳）在乙腈（1〇〇毫升）中之經攪拌溶液内，在室 溫下，添加三乙胺（5.0毫升，35.6毫莫耳）。將所形成之溶液 於此溫度下攪拌18小時，然後在真空中濃縮。使深褐色殘 留物藉急驟式管柱層析純化，以10_25% EtOAc/己烷溶離，而 得產物21.03，為淡黃色油（5.29克，84%)。 步驟2

C〇2tBu

I

Boc 21.03 於脫氫脯胺酸衍生物21·03 (10.1克，37.4毫莫耳）、爷基三 乙基氣化銨（1.60克，7·〇2毫莫耳）在氣仿（12〇毫升）中之經攪 拌溶液内，在室溫下，添加50%氫氧化鈉水溶液（12〇克）。 於此溫度下激烈攪拌24小時後，以CH2C12(200毫升）與乙醚 (600毫升）稀釋暗色混合物。分離液層後，將水溶液以cH2c^/ Etz0 (1 · 2 ’ 3x600毫升）萃取。使有機溶液脫水乾燥（MgS〇4)， 並濃縮。使殘留物藉急驟式管柱層析純化，使用5-20% EtOAc/ 99513 -93- 200529823 己烷，而得9.34克（71%) 21·04，為灰白色固體。 步驟3

c,Vci /^\ cf3co2h 、入 co2h 21.04 21.05 將 21.04 (9.34 克，26·5 毫莫耳）在 CH2 Cl2 (25 毫升）與 CF3 C02 Η (50毫升）中之溶液，於室溫下攪拌4·5小時，然後在真空中 濃縮’獲得褐色殘留物21.05，將其使用於步驟4，無需進一 步純化。 步驟4

CI

co2h cf3co2h

HCI C02Me 21.01 21.05

將'/辰鹽酸（4.5宅升）添加至得自步驟3中之殘留物21.05在 甲醇（70毫升）中之溶液内，並使所形成之混合物於油浴中 溫熱至65 C。18小時後，於真空中濃縮混合物，獲得褐色 油21.01，進一步使用之而無需純化。 土間物22.01之製備 步驟1 tBoc、

CH0 tBoc Ph3P=<3 N THF,回流

將鉀雙（三甲基矽烷基)胺（158毫升，甲苯中之〇5M溶液； 79毫莫耳）添加至漠化環丙基三苯基鱗（3312克；864毫莫 99513 •94- 200529823 耳）在無水四氫吱喃（130毫升）中之經攪拌懸浮液内，並將所 形成之橘色混合物在氮大氣及室溫下攪拌1小時期間，然後 添加THF (8毫升）中之醛22.02 (9.68克；42_2毫莫耳）。接著， 使反應物於氮大氣下回流2小時期間。於冷卻後，添加甲 醇、乙鱗及Rochelles鹽。將有機相分離，以鹽水洗滌，脫水 乾燥’及在減壓下濃縮。使粗製反應產物藉矽膠管柱層析 純化，使用EtOAc·己烷（1 : 99)至EtOAc-己烷（5 : 95),提供烯 烴22.03 (8.47克），為黃色油。

步驟2 HN、 tBoc

1.HC1(水溶液） 2. tBoc-Gly-OSu, Et3N 22.03 NHtBoc HNjTv HO^ 22.04 1M HC1在MeOH/MeOAc中之溶液係以下述方式製成，將 14.2毫升氣化乙醯逐滴添加至冷甲醇中，並於室溫下將所形 成之溶液稀釋至200毫升。 使胺基甲酸酯22.03 (9.49克；37.5毫莫耳）溶於甲醇（12毫 升）中，並添加至MeOH/MeOAc中之1M HC1 (150毫升）内，同 時在冰浴中冷卻。使所形成之混合物保持在此溫度下1小 時，然後移除冰浴，並於室溫下持續攪拌過夜。於減壓下 移除揮發性物質，而產生黃色油，將其使用於下一步驟， 無需純化。 使黃色油溶於THF (30毫升）與MeOH (20毫升）之混合物 中，並以三乙胺（15毫升；108毫莫耳）處理，直到溶液pH值 = 9-10為止。放置在冰浴中之後，以N-Boc-Gly-OSu(11.22克； 99513 -95- 200529823 41 t莫耳）處理混合物。抽離冰浴，並反應物於室溫下攪拌 1小時。於減壓下移除揮發性物質，並使殘留物藉矽膠管柱 層析純化，使用二氣甲烷中之甲醇（1-3%)，提供所要之醯胺 22.04(9.09 克）。 步驟3

/—NHtBoc HN

2, 2-二f氡基丙烷 BF3:〇Et2 22.04 H0

使醇22·04 (9·09克；33.6毫莫耳）溶於丙酮（118.5毫升）中， 並以2,2-二甲氧基丙烷（37.4毫升；304毫莫耳）與BF3 : Et20 (0.32毫升，2.6毫莫耳）處理，且將所形成之混合物在室溫下 攪拌5.5小時期間。將反應溶液以數滴三乙胺處理，並於減 壓下移除揮發性物質。使殘留物藉矽膠管柱層析純化，使 用己烷中之5-25% EtOAc，提供Ν,Ο-縮醛22.05 (8.85克）。 步驟4

使胺基曱酸酯22.05 (8.81克；28.4毫莫耳）溶於乙腈（45毫 升）中，並使溶液在氮大氣下冷卻至4〇°c。添加吡啶（6.9毫 升；85.3毫莫耳），接著是四氟硼酸亞銷（6·63克；56·8毫莫 耳），並使所形成之反應混合物保持低於〇〇c，直到TLC顯示 99513 -96- 200529823 無起始物質殘留為止（約2.25小時）。添加四氫吡咯(2〇毫升； 240毫莫耳）’並抽離冷卻浴，且於室溫下持續攪拌1小時， 然後在減壓下移除揮發性物質。使殘留物快速地通過矽膠 墊’提供黃色油。使黃色油溶於無水苯（22〇毫升）中，並添 加醋酸鈀（0.317克；1·41毫莫耳），然後將所形成之混合物在 氮大氣下加熱至回流，歷經1.5小時期間。於冷卻後，在減 壓下移除揮發性物質，並使暗色殘留物藉矽膠管柱層析純 化’使用EtOAc-己烧（1: 4)，提供i)反式·四氫峨洛酮22.06 (1.94 籲 克）’接著是ϋ)順式_四氫吡咯酮22·〇7 (I·97克）。 步驟5

將剛製成之MeOAc/MeOH中之1MHC1 (10毫升；如上述）添 加至N，0-縮駿22.06中，並於室溫下授拌1小時。於減壓下移 除溶劑，並使殘留物藉矽膠管柱層析純化，使用二氣甲烷 中之(M°/〇 MeOH作為溶離劑，提供所要之醇22·〇8 (1·42克）， 黃色油。 步驟6

99513 -97 200529823 於内醯胺22.08 (1.29克，· 8.44毫莫耳）在無水四氫呋喃（55毫 升）中之溶液内，添加氫化鋰鋁（2.40克；63.2毫莫耳），並使 所幵> 成之混合物回流8小時。於冷卻後，添加水，接著是μ% NaOH水溶液’並經過矽藻土過濾所形成之混合物，且以thf 與MeOH充分洗滌固體。於減壓下移除溶劑，並使殘留物再 溶解於二氯甲烷中，脫水乾燥，及在減壓下濃縮，提供四 氫吡咯，使用之而無需純化。 於-60°C及氮大氣下，將Hunig氏鹼（4.5毫升；25.8毫莫耳） 添加至N-Boc-L·第三-Leu-OH (1.76克；7.6毫莫耳）、粗製四氫 外匕17各及HATU (2·89克；7.6毫莫耳）在無水二氣甲烧（5〇毫升） 中之混合物内。使所形成之反應物慢慢回復至室溫過夜。 添加EtOAc，並將黃色溶液以稀^^丨水溶液、碳酸氫鈉飽和 水溶液、水、鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，並於減壓下 濃縮。使殘留物藉石夕膠管柱層析純化，使用Et〇Ac :己烧 (1 : 3)，而得所要之醯胺22.09 (2.00克）。 步驟7

使醇22.09 (2.00克；5.67毫莫耳）溶於丙酮（116毫升）中，並 在冰/谷中冷卻10分知。然後，將此溶液添加至已冷卻之 5式劑（14·2笔升；約2宅莫耳/毫升）中，並將所形成之混合物 於5 C下攪拌0.5小時，且移除冰浴。將反應物於室溫下再攪 99513 -98- 200529823 拌2小時，接著添加至EtOAc (100毫升）中之硫酸鈉（28.54克）、 矽藻土（15克）内。1分鐘後添加異丙醇（15毫升），然後再攪 拌10分鐘，並過濾。使濾液在減壓下濃縮，提供褐色油， 使其溶於EtOAc中。將此溶液以水、3%檸檬酸水溶液、鹽 水洗滌，脫水乾燥，及濃縮，提供所要之羧酸22.01 (1.64克）， 為白色固體。 t間物23.01之製備 步驟1

於酯23·02 (6·0克）與分子篩（5.2克）在無水二氯曱烷（35毫 升）中之混合物内，添加四氫吡咯（5.7毫升，66.36毫莫耳）。 將所形成之褐色漿液於室溫及^下攪拌24小時，過濾，並

以無水CH3 CN洗滌。濃縮合併之濾液，而產生所要之產物 23.03。 ±M1 99513

於得自前一步驟之產物23.03在CH3CN (35毫升）中之溶液 -99- 200529823 内’添加無水K：2 C〇3、氣化甲基烯丙烧（2·77克，30.5毫莫耳）、 Nal (1_07克’ 6.7毫莫耳）。將所形成之漿液於環境溫度及n2 下攪拌24小時。添加50毫升冰冷水，接著是2N KHSO4溶液， 直到pH值1為止。添加EtOAc (100毫升），並將混合物擾拌0.75 小時。收集合併之有機層，並以鹽水洗滌，以MgS〇4脫水乾 燥，及蒸發，而產生所要之產物23.04。 步驟3

使得自前一步驟之產物23.04 (2.7克，8·16毫莫耳）溶於二氧 陸圜（20毫升）中，並以剛製成之in LiOH (9毫升）處理。將反 應混合物於環境溫度及N2下攪拌20小時。使反應混合物溶 於EtOAc中，並以η2 Ο洗滌。使合併之水相冷卻至〇°c，並 使用1NHC1酸化至pH 1.65。以EtOAc (2 X 1〇〇毫升）萃取混濁混 合物。將合併之有機層以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及 濃縮，而得所要之酸23.05 (3.40克）。 步驟4

99513 -100 - 200529823 於 NaBH(〇Ac)3 (3·93 克，18.5 毫莫耳）在 CH2 Cl2 (55 毫升）中之 懸浮液内’添加得自前一步驟之產物23.05在無水ch2 Cl2 (20 愛升）與醋酸（2毫升）中之溶液。將漿液於環境溫度下搅拌 20小時。將冰冷水（1〇〇毫升）添加至漿液中，並授拌1/2小 時。將有機層分離，過濾，脫水乾燥，並蒸發，而產生所 要之產物23.06。 步驟5

OH 23.06

CH2N2 / Et20 / MeOH

於得自前一步驟之產物23.06 (1.9克）在MeOH (40毫升）中 之溶液内，以過量CH2N2/Et20溶液處理，並攪拌過夜。使 反應混合物濃縮至乾涸，而產生粗製殘留物。使殘留物於 矽膠上層析，以EtOAc/己烷梯度液溶離，而得1.07克所要之 純產物23.07。

將得自前一步驟之產物23.07 (1.36克）在無水CH2C12 (40毫 升）中之溶液’以BF3 .Me2 0 (0.7毫升）處理。將反應混合物於 99513 • 101 - 200529823 環境溫度下攪拌20小時，並以飽和NaHC〇3(30毫升）使反應 淬滅，且攪拌1/2小時。分離有機層，並將合併之有機層以 鹽水洗務’以MgS〇4脫水乾燥，濃縮，而得粗製殘留物。使 殘留物於矽膠上層析，以EtOAc/己烷梯度液溶離，而得〇·88 克所要之化合物23.08。 步驟7

Η2 -10% Pd 1C

於得自前一步驟之產物23.08 (0.92克）在MeOH (30毫升）中 之溶液内，在室溫下，添加10% Pd/C (0.16克），並於環境溫 度及1大氣壓力下氫化。將反應混合物攪拌4小時，並濃縮 至乾涸，而產生所要之化合物23.01。 部份基困之製備 中間物50.01之芻備 步驟1

50.02 50.03 於50.02 (15克）在MeOH (150毫升）中之溶液内，添加濃HC1 (3-4毫升），並使混合物回流16小時。使反應混合物冷卻至 室溫，並濃縮。使殘留物溶於乙醚（250毫升）中，並以冷飽 和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥（Na2S04)， 99513 -102- 200529823 並?辰縮，而付甲S旨50.03 (12.98克），進行之而無需進一步純 化。 步驟2 \^co2ch3 Q 一 -ζΤ 50.03 50.04 使得自上文之甲酯50.03溶於二氯甲烷（1〇〇毫升）中，並在 氮大氣下冷卻至-78°C。逐滴添加DIBAL (二氣甲烧中之 # 溶液，200毫升），歷經2小時期間。使反應混合物溫熱至室 溫，歷經16小時。使反應混合物冷卻至〇t：，並逐滴添加 MeOH (5-8毫升）。慢慢添加1〇%酒石酸鈉鉀溶液（2〇〇毫升）， 並攪拌。以二氣甲烷（1〇〇毫升）稀釋，並分離有機層（伴隨著 一些白色沉澱物）。將有機層以1NHC1 (25〇毫升）、鹽水（2〇〇 毫升）洗滌，脫水乾燥（Na2S04)，及濃縮，提供醇50·04(ΐι·00 克），為透明油。 步驟3

50-〇4 50.05 使得自上文之醇50·04溶於二氣甲烷（4〇〇毫升）中，並在氮 大氣下冷卻至〇°C。分次添加pcc (22.2克），並使反應混合物 慢慢溫熱至室溫，歷經16小時。將反應混合物以乙醚（500 毫升）稀釋’並經過矽藻土墊過濾。濃縮濾液，並使殘留物 溶於乙喊（500毫升）中。使其通過矽膠墊，並濃縮濾液，提 供醛50.05，進行之而無需進一步純化。 99513 200529823 步驟4 \.CHO π HCLH2N\^C02H 50.05 .(h} 50.01 基本上使用 Chakraborty 等人之方法（Tetrahedron，1995，51(33)， 9179-90)，使得自上文之醛50.05轉化成所要之物質50.01。 中間物51.01之製備

所需要之中間物51.01係使用文獻所述之程序（T.K. Chakraborty 等人，1995，51 (33)，9179-90)，得自醛 51.02。 特殊實例之製備 實例1007之數備

V

1007a 1007b 根據文獻程序（Μ·Ε· Duggan，J_S· Imagire 办咐1989，131-2)， 99513 -104- 200529823 使市購可得化合物1007a (Aldrich化學公司，Milwaukee，Wisconsin， USA)轉化成 1007b，90% 產率。LC-MS : 289 (M+H). 步驟2

1007b 1007c

使用二氧陸圜中之4MHC1，使1007b於室溫下去除保護3 小時，提供1007c，定量產率。使用此物質而無需進一步純 化0 步驟3

化合物1007d係使用前文所述之程序（參閱中間物20.08之 製備），得自適當起始物質/試劑。於l〇〇7d (200毫克，0.394 毫莫耳）在二氯曱烷（10毫升）中之溶液内，在〇°C及氮大氣 下，添加1007c (115毫克，0.512毫莫耳），接著是DIPEA (0.22 毫升，1.182毫莫耳）。使反應物於該溫度下保持30分鐘，並 在冷凍庫（-20°C )中儲存48小時。以飽和氯化銨溶液使反應 混合物淬滅，並將產物萃取在二氯甲烷（3x)中。將合併之有 99513 -105- 200529823 機層以鹽水洗滌（lx)，脫水乾燥（]ν^23〇4)，過濾，及濃縮。 使粗製殘留物猎急驟式層析純化，使用30/70丙嗣/己烧，提 供所需要之化合物1007e，69%產率。LC-MS : 557 (M+H)· 步驟4

按前文所述（參閱中間物20.04之製備步驟2)，以適當修正 進行1007e曱酯之水解作用，提供所需要之酸1007f。 步驟5

按前文所述（參閱中間物20.08之製備步驟1)，以修正 (HATU代替BOP，DIPEA代替NMM ;將反應於〇°C下進行15分 鐘，並溫熱至10°C，歷經24小時）與適當量試劑，進行酸 99513 •106- 200529823 1007f (0.125毫莫耳）與胺鹽之偶合反應。將處理後所獲 得之粗製物質1007g繼續進行，無需純化。LC-MS: 697.2 (M+H). 步騍6

於得自上文之物質1007g(0.i25毫莫耳）在DMSO/甲苯（各3 毫升）中之冷（0C)溶液内，添加EDCI (24〇毫克，ι·25毫莫 φ 耳）’接著是二氣醋酸(0·052毫升，0.625毫莫耳）。15分鐘後， 移除冷浴，並使反應混合物溫熱至室溫，歷經16小時。將 反應混合物以EtOAc (20毫升）稀釋，並以1N NaHS〇4水溶液（2〇 毫升）洗滌。分離水層，並以EtOAc (20毫升）萃取。將合併 之有機層以lNNaHS〇4水溶液（2〇毫升）、飽和NaHC〇3(2〇毫 升）、鹽水（20毫升）洗滌，脫水乾燥，過濾，及在 真空中》辰細。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化，使用 40/60丙酮/己烷，提供所需要之標的化合物1〇〇7 (57毫克， 99513 -107- 200529823 0_082 毫莫耳，66% 產率）。LC-MS ·· 695·2 (M+H). 實例1044之製備

1044 步驟1

y

按前文所述（參閱實例1007之製備步驟5)，進行以類似如 關於1007f所述之方式（參閱實例1007之製備）所獲得之酸 1044a與胺鹽14.01之偶合反應。將處理後所獲得之粗製物質 1044b繼續進行，無需純化。LOMS : 725.2 (M+H). 步驟2 : 99513 -108- 200529823

於得自上文之物質1044b (0.054毫莫耳）在二氣甲烷（5毫 升）中之溶液内，添加Dess-Martin過埃烧（68毫克，〇·ΐ6毫莫 耳）。將反應混合物於室溫及氮大氣下攪拌4.5小時。將反 應混合物以二氣曱烷（ίο毫升）稀釋，並以i〇%Na2S2〇3水溶液 (30毫升）、飽和NaHCO3(30毫升）、鹽水(3〇毫升）洗蘇，脫水 乾燥（NadO4)，過濾，及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉急 驟式管柱層析純化，使用35/65丙酮/己烷，提供所需要之標 的化合物1044 (23毫克，0.032毫莫耳，59%產率）。LC-MS: 723.2 (M+H). 下表1與表1A中之化合物基本上係使用上述程序（實例 與1〇44之製備）’以如標的化合物製備之一般圖式方法 A-E中所述之適當試劑與修正製成。 99513 -109- 200529823

袅1 實例 # 結構 Ki* (nM) 分子量 1001 X 1 Qv^^NH 1_1 人 A 696.885 1002 o^^nh (--1 A 662.868 1003 A 648.841 99513 110- 200529823

1004 -j T T 人 A 682.859 1005 X 。 人乂 A 634.815 1006 >l丫阳 αΛ A 668.832 1007 V 人 A 694.87 99513 -Ill - 200529823

1008 Λ又7 A 680.843 1009 A 694.87 1010 A 708.896 1011 y 。丫H V A 734.934 99513 112- 200529823

1012 X 。 ΛΛ^ A 722.923 1013 y 人又子 A 694.87 1014 X Ί 人人f A 708.896 1015 y 人人f 冬 A 776.895 99513 113- 200529823

1016 γ °^/NH >l 丫 H αΛ〇 A 696.885 1017 Y i«人。 A 662.868 1018 \/ 4T /·、NH ΐίΛ。 A 676.895 1019 °^v^NH 7 人 A 632.799 99513 114- 200529823

1020 X 。 办介’ 。明 U 人NH ^人 A 646.826 1021 ΟγΝΗ V^«又 A 660.852 1022 \/ Qx^TsxVn^ A 720.907 1023 ，人f A 708.896 99513 115- 200529823

1024 A 680.843 1025 A 694.87 1026 。丫丁 A 762.868 1027 X 1 A 646.826 99513 116- 200529823

1028 γ ♦會 A 660.852 1029 X 。/ A 674.879 1030 V 从ί A 748.961 1031 从f A 736.95 99513 117- 200529823

1032 。丫Η V 人人^^Η A 708.896 1033 V 。。·^ □ A 722.923 1034 ’人f A 694.87 1035 。 。丫 nh ^ 、人。 A 680.843 99513 118- 200529823

1036 A 668.832 1037 y 〇 。丫咖 、丨人 B 708.896 1038 X 。 B 720.907 1039 χ , 。 丫" 、人 A 706.881 99513 119- 200529823

1040 A 694.87 1041 A 666.816 1042 A 680.843 1043 A 708.896 99513 120- 200529823

1044 X 。 。 。丫糾 k A 722.923 1045 ΛΛ^ ^ A 736.95 1046 X 。 认又1 A 750.977 1047 X 。 Qx^Yxy^ 。丫T 冬 、人。 A 748.841 99513 121 - 200529823

1048 V I。 。丫H 人。^^NH A 674.879 1049 X 。 c^r々s〜 ΛΛ^ 、 A 688.906 1050 X 。 。 丫H V 人 3人|^NH B 686.89 1051 、〆 A 648.841 99513 122- 200529823

1052 X 。 A 620.788 1053 〇^/NH U 义丫NH 、人 I A 634.815 1054 a^YKVrm, λλ^ A 646.826 1055 y 人又子 A 660.852 99513 123- 200529823

1056 y A 688.906 1057 V α^τ个〜 A 702.933 1058 ρ^^ΝΗ —ΝΗ J人。 A 674.879 1059 \/ ^ T Λ HN \〇 A 634.815 99513 124- 200529823

1060 y τ Λ Η「、0 A 606.761 1061 χ 〇! I~I ΝΗ 人 Η| \〇 A 620.788 1062 χ 。 0 。丫 … ' 八8人，γΝΗ B 726.912 1063 Qx^aAw 。 丫H k B 740.938 99513 125- 200529823

1064 Β 696.885 1065 。。丫 … k 八H人。^C A 720.907 1066 A 706.881 1067 ，人f ν A 696.885 99513 126- 200529823

1068 。 。丫NH k B 724.939 1069 y i χ Ύ1 \ B 754.965 1070 ,〇 °y!h ^ 人又。^^NM A 734.934 1071 。 丫H k A 710.912 99513 127- 200529823

1072 i。 k 人人 A 710.912 1073 A 718.892 1074 Β 724.939 1075 Λ ^ΗΝ、。 A 648.841 99513 128- 200529823

1076 A 634.815 1077 X 。 3 丫 Λ A 620.788 1078 B 694.87 1079 χ 。 Qx^TaxV^ A 720.907 99513 129- 200529823

1080 A 668.832 1081 X 。 。丫 NH U A 660.852 1082 X ° A 646.826 1083 丫 Η + ，、人。，ΎΝΗ Η ^ A 728.851 99513 130- 200529823

1084 v 丫 Η 人。^ A 686.89 1085 y 。 。丫 阳 ^ A 义 A 688.906 1086 1 丫Η II a 人。^C A 684.874 1087 X 。 GL^r 女 丫 ◊ 八8人。^^ A 674.871 99513 131 - 200529823

99513 132- 200529823

1092 G^Y^cV^ A 688.898 1093 〇 °V^H I ly〜 1 A 700.908 1094 A 688.898 1095 V Gk^rV 人人ί ' 1 A 712.919 99513 133· 200529823

1096 y A 716.951 1097 ΛΛ^ A 702.924 1098 α^τ々Β〜 ΛΛ^ " A 714.935 1099 ^x〇4r A 714.935 99513 134- 200529823 1100 A 700.908 1101 A 710.903 ΑΙΑ 實例 # 結構 Ki* (nM) LC-MS (M+H) 1102 Ck^BxV^ 。。丫 nh k ，^人，V"NH A 729.2 99513 135- 200529823

1103 y j B 715.2 1104 X 。/ a 又、r " A 725.2 1105 y i α^φτ △人7 丨丨1 A 727.2 1106 X β， 。 。丫 nh k ΗΝ^〇^γΝΗ y ^ A 731.2 99513 136- 200529823 ❿

99513 137- 200529823

99513 138- 200529823

99513 139- 200529823 1119 y j 〇 〇丫制 B 701.2 1120 X 。， juT 丄 A 741.2 1121 X 。γ α^τ々ΝΗ 又乂X a A 741.4

Ki★範圍：A = <75 nM，B = 75-250 nM; C = > 250 nM

實例1441之製備：

步驟1 99513 -140- 200529823

h〇h2(

於1441a (4·28克，10.08毫莫耳）在無水醚（100毫升）中之冰 冷溶液内，添加LAH(1.53克，40.32毫莫耳），並使反應混合 物溫熱至室溫過夜。使反應混合物冷卻至0°C，並將EtOAc (3 毫升）添加至其中，接著是KHS04水溶液（10克，在25毫升 H20中）。將膠黏殘留物以醚（300毫升）萃取，並將有機層以 飽和NaHC03,接著以10%KH2PO4水溶液，鹽水洗滌，以MgS04 脫水乾燥，過濾，及濃縮。使粗製殘留物於Si02上藉急驟 式層析純化，使用醋酸乙酯/DCM (1 : 4)，而產生1441b (2.14 克，92%)。 步驟2

於1441b (743毫克，3.24毫莫耳）在無水吡啶（10毫升）中之 冰冷溶液内，添加氣甲酸甲酯（1毫升，13毫莫耳），接著是 DMAP (1.6克，13毫莫耳），並使反應混合物溫熱至室溫，歷 經2天。使反應混合物濃縮，並將EtOAc (100毫升）添加至其 中，接著是100毫升冰冷5% KH2P04(含有0.05體積1M H3P04)。 將有機層以鹽水洗條，並以MgS04脫水乾燥，過濾、，及濃縮。 使粗製物於Si02上藉急驟式層析純化，使用醋酸乙酯/ DCM(1 : 4)，而產生 1441c(931 毫克，100%產率）。 99513 -141 - 200529823 步驟3 〇

使1441c溶於二氧陸圜中之4M HC1 (10毫升）内，並在30分 鐘後濃縮。將飽和NaHC03 (25毫升）添加至粗製鹽酸鹽（194 毫克，1毫莫耳）在CH2C12 (25毫升）中之冰冷溶液内。將反應 混合物激烈攪拌10分鐘，並將COCl2(PhMe中之1.85M溶液，4 毫升）添加至其中，且於室溫下持續攪拌1小時。將有機層 分離，以MgS04脫水乾燥，過濾，及濃縮至一半體積，而產 生1441d，為CH2C12中之0.05M溶液。 步驟4

nh2

於1.17 (10.4克，28毫莫耳；使用關於中間物20.04步驟2所 述之程序，藉由20.06之水解作用獲得）在DCM (300毫升）中 之-20°C溶液内，添加HATU (1·05當量，29.4毫莫耳，11.2克）、 胺鹽中間物12.03 (1·0當量，28毫莫耳，5.48克）。於-20°C下10 分鐘後，添加DIPEA (3.6當量，100毫莫耳，17.4毫升）。將反 應物於此溫度下攪拌16小時。16小時後，將反應物以EtOAc 稀釋，並以NaHC03、檸檬酸（10% w/w)及鹽水連續洗滌。使 有機層以MgS04脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，而產生 99513 -142- 200529823 14克所需要之中間物1441e。

以關於實例1007步驟6所述之方式，使羥基醯胺1441e氧化 成所需要之酮醯胺1441f。LC-MS = 507 (M+H)+

步驟6

nh2 按關於實例1007步驟2所述，進行t-Boc官能基1441f之去除 保護，獲得所需要之物質1441g。 步驟7

於胺鹽酸鹽1441g (20毫克，0.045毫莫耳）在CH2C12(2.0毫 升）中之冷卻溶液（0°C )内，添加1441d (1.35毫升，0.135毫莫 99513 -143- 200529823 耳），接著是DIPEA (63微升，0.4毫莫耳）。將反應混合物於 室溫下攪拌1.2小時，以醋酸乙酯（20毫升）稀釋，以3%檸檬 酸、鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，過濾，濃縮，及在Si02 上純化，使用EtOAc/DCM (1: 9至9: 1)，而產生1441 (23毫克）。 LCMS=620.3 (M+H)+_ 下表（表2)中之化合物，係基本上使用上述程序（實例 1441之製備），以如標的化合物製備之一般圖式方法A-E中 所述之適當試劑與修正製成。 99513 144- 200529823

實例 # 結構 Ki* (nM) 分子量 1401 γ ίΧ人 A 669.817 1402 〇^Λ A 683.843 1403 (X人 B 697.87 99513 145- 200529823

1404 X 。 Jr A 649.826 1405 X 。 <^^NH '一·* 人·γΝΗ —人。 A 663.853 1406 γ 人。 B 677.88 1407 NH ^ /!·丫 N« V-入 A 633784 99513 -146- 200529823

1408 X 。 〇、^NH *一·' v^°人 A 647.81 1409 0·^^ΝΜ 〉丫咖 人 B 661.837 1410 X 0 ο、^νη ν 。又。 A 635.799 1411 >k^f I_I 人·<ΝΗ 。人 A 649.826 99513 -147- 200529823

1412 °^v^NH γ^Λ A 663.853 1413 ιΤ 、人。 A 593.719 1414 v 。丫 NH V 人·,ΝΗ ΛΛ A 621.773 1415 广人 A 647.81 99513 -148- 200529823

1416 v NH 人.<NM .Λ A 621.773 1417 y ΛΛ A 649.826 1418 γ uT A 675.864 1419 y A 607.746 99513 -149- 200529823

1420 v LI pi NH A 621.773 1421 y j 。^nh :^丫册 A 635.799 1422 y o °-w-nh 又。 C 689.891 1423 γ γΗ 、人。 B 647.81 99513 -150- 200529823

1424 nh '~' 人NH A 607.746 1425 〇、^ΝΗ LI /J、NH ΛΛ A 635.799 1426 入 A 661.837 1427 〇 丫Μ 人。^^NH A 661.837 99513 -151 - 200529823

1428 X 。 A 619.757 1429 y 〇 °c^NH A 675.864 1430 >L^CV 〇 〇丫咖 、人 A 633.784 1431 X 。 0 °^^NH iXAt5 B 709.881 99513 -152- 200529823

1432 v 丫 Η ^ Ρ、 ΝΗ 入 A 645795 1433 〇、^NH LI 人 A 659.821 1434 ajr r人 B 673.848 1435 X 。 〇 丫Η (Τ。人t5 B 695.854 99513 -153- 200529823

1436 丫 ^ 丫… A 605.73 1437 γ >^τ8^ α^Τ .Λ A 619.757 1438 γ V^v... ^nh .Λ B 633.784 1439 γ X V 0^5 B 723.908 99513 -154- 200529823

1440 0.7 B 647.81 1441 OJT Λ A 619.757 1442 X 。 A 633.784 1443 \/ 义。 B 675.864 99513 -155- 200529823 1444 X 。 Λ 人 A 647.81 1445 X 。 J*» t~I OJT A 661.837 1446 α^τ 入。 B 687.875 1447 /ΝΗ ^ O-J .Λ A 659.821 99513 -156- 200529823

Ki* 範圍 A = < 75 nM ; B = 75-250 nM ; C =〉250 nM 實例1655之製備

步驟1 >r°i N>

、OH 个

och3 1655b 1655a

於市購可得化合物1655a (Aldrich化學公司，Milwaukee， Wisconsin，USA，950毫克，4.38毫莫耳）在乙腈（40毫升）中之溶 液内，在室溫下，添加碳化甲炫（4.63毫升，74.42毫莫耳）。 然後，於氮大氣下添加氧化銀（1)(1.62克，7.01毫莫耳），並 使反應混合物回流大約16小時（註：將反應燒瓶以鋁箔覆 蓋）。此時，使反應混合物冷卻至室溫，並經過矽藻土墊過 濾。將濾餅以醋酸乙酯沖洗數次。使合併之濾液濃縮，並 藉急驟式管柱層析純化，使用20/80至40/60醋酸乙酯/己烷， 99513 -157- 200529823 而得720毫克所期望之產物1655b。 步驟2 ^0tXochs HCI. OCH3 1655b 个 1655c 1655b之轉化成化合物1655c，係使用前文所述程序（實例 1007步驟2)進行，定量產率。 步驟3

HCI. OCHq 个 1655c 〇^nY^och3 个 1655d 於化合物1655c (514毫克，3.08毫莫耳）在二氣甲烷（20毫 升）中之溶液内，添加飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。將此混 合物激烈攪拌，並冷卻至〇°C。逐滴添加光氣（20重量％，在 甲苯中，6.5毫升）。將反應混合物激烈攪拌4.5小時，同時 保持溫度在於或低於5°C。此時，將反應混合物倒入分液漏 斗中，並分離有機層。將有機層以飽和氣化銨溶液（lx)、水 (lx)洗滌，脫水乾燥（Na2S04)，及濃縮。將殘留物1655d以二 氣曱烷（10毫升）稀釋，並以0.308 Μ溶液進一步使用。 步驟4 99513 -158- 200529823

於1655e (176毫克，0.5毫莫耳；1655e係按關於中間物20.08 步驟1與2所述，使用適當起始物質製成）在二氣甲烷(4毫 升）中之冷（0°C )溶液内，添加1655d (0.308M溶液，4.87毫升， L5亳莫耳），接著是DIPEA (0.276毫升，1·5毫莫耳）。使反應 混合物於1〇。(：下保持16小時。以飽和氣化銨溶液使反應淬 滅’並以二氣甲烷萃取水層（3x)。將合併之有機層以鹽水洗 務’脫水乾燥（Na2S04)，過濾，及在真空中濃縮。使粗製殘 留物藉急驟式管柱層析純化，使用2〇/8〇丙酮/己烷，提供所 需要之化合物 1655f (240 毫克，100% 產率）。LC-MS: 480.1 (M+H). 步驟5 99513

1655 -159 200529823 使用中間物10.11與上述程序（實例1007步驟4-6)，使得自 上文之化合物1655f轉化成所需要之標的化合物1655。1655 之 LC-MS =618.1 (M+H)· 實例1614之製備

步驟1

B〇cHN^〇h + 1655a 於N-Boc-第三·白胺醇1655a (2.0克，9.22毫莫耳）、酚（1·0克， 1〇·6毫莫耳）及ADDP (3.8克，15.1毫莫耳）在CH2C12(80毫升） 中之經攪拌溶液内，在室溫下，以氬氣起泡15分鐘。然後， 以一份添加三苯膦。將所形成之溶液於室溫下攪拌18小 時。濾出沉澱物，並以乙醚（2 X 30毫升）洗滌。使濾液於真 空中濃縮。使殘留物藉急驟式管柱層析純化，以2-10% EtOAc/ 己烷溶離，而得所要之產物1614a (0.33克，12%)。 步驟2

BocHN^^^

hci.h2nv^〇

1614b 1614a 使化合物1614a (0.32克，1·13毫莫耳）溶於對-二氧陸圜中之 99513 -160- 200529823 4M氣化氫溶液（20毫升）内，並在室溫下攪拌3小時。於真 空中濃縮，獲得化合物1614b，使用之而無需進一步純化。 步驟3 HCI.H2N>s^\

Ο X) 个 1614b 个 1614c 化合物1614c係根據關於實例1655所述之程序，步驟3，製 自 1614b 。

步驟4

〇Χ)

0=C=N 个 1614c 按一般圖式方法C中所述，使用適當試劑與中間物，使 異氰酸酯1614c轉化成標的化合物1614。 實例1610之盥備

V r\

步驟1

CbzHN^〇H + 1610a

CbzHNv^〇 个 1610b 於無水硫酸鎂在無水CH2C12中之經攪拌懸浮液（40毫升） 99513 -161 - 200529823 内，在室溫下，添加濃硫酸（0.32毫升，5.76毫莫耳）。將混 合物激烈攪拌30分鐘，然後添加1610a (2.0克，7.90毫莫耳） 在無水CH2C12 (15毫升）中之溶液。接著，將混合物於室溫下 激烈攪拌68小時。小心添加飽和NaHC03溶液（50毫升），伴 隨著CH2C12(100毫升）與水（50毫升）。分離兩相，並以CH2C12 (2X100毫升）萃取水層。使合併之有機溶液脫水乾燥(MgS04)， 過濾，及在真空中濃縮，而得1610b。 步驟2 1610c 1610b 將化合物1610b與10% Pd-C在無水乙醇中之懸浮液，於氫 大氣下激烈攪拌4小時。經過矽藻土墊濾出觸媒。使濾液在 真空中濃縮，獲得1610c，使用之而無需進一步純化。 步驟3 〇J< _ o=c=n^〇J< • + ^ 1610c 1610d 化合物1610d係根據關於實例1655步驟3所述之程序，製 自 1610c 。 步驟4

0=C=Nv^〇J< 1610d 99513 -162- 200529823 按一般圖式方法c中所述，使用適當試劑與中間物，使 異氰酸酯1610d轉化成標的化合物1610。 實例1620之製備

V

步驟1

BocHN

1620a • b〇chn^〇h + 1655a

將醇1655a (3.46克，12.8毫莫耳）、溴化芊（10毫升，84.2毫 莫耳）及氧化銀（1)(5.0克，21.6毫莫耳）在乙腈中之懸浮液， 於76°C下，在油浴中激烈攪拌過夜（18小時）。濾出固體物 質，並使溶液在真空t濃縮。使產物藉急驟式管柱層析純 化，以5-40% EtOAc/己烷溶離，而得所要之產物1620a (0.78克， 20%)。 步驟2 ^ HCLT°^〇 1620a 1620b 化合物16120b係根據關於實例1614步驟2所述之程序，製 自 1620a 。 步驟3 99513 -163- 200529823 HCI.H2N、/\ 1620b

O 〇=C=Nv^/\^. 1620c

化合物1620e係根據關於實例1655步驟3所述之程序，製自 1620b 。 步驟4

V

| v NH?

0=C:Nx^〇〆· v

+ 1620c 按一般圖式方法C中所述，使用適當試劑與中間物，使 異氰酸酯1620c轉化成標的化合物1620。 實例1629之製備

ΒηΟ〆

nh2 ,ΝΗ 1629 步驟1

νη2

νη2 1629a 於1441e (600毫克）中，添加二氧陸圜中之4Μ HC1 (25毫 升）。將反應物於室溫下攪拌30分鐘，並濃縮，而產生白色 99513 -164- 200529823 固體1629a (490毫克），進行之無需純化。 步驟2

於化合物1629a (395毫克）在CH2C12 (25毫升）中之經冷卻（0 °C )溶液内，以上述方式（實例1655步驟4)，添加Et3N (0.57毫 升），接著是異氰酸酯 16291}(11(加115〇11，尺&也11?.;]\43]^1:，如^1〇117· 五狀尸故· 乂即/· (1991)，EP 436333 A2 19910710,第53頁）。使用所獲得 之粗製羥基醯胺，而無需純化。 使粗製羥基醯胺在甲苯-DMSO (各2.0毫升）之溶液冷卻 至0°C。於反應混合物中，添加EDCI.HC1 (410.0毫克），接著 是二氣醋酸（0.087毫升），在室溫下攪拌2小時後，將其以 EtOAc稀釋，以IN HC1、飽和NaHC03、鹽水洗滌，以MgS04 脫水乾燥，過濾，濃縮，而產生白色固體，使其在矽膠上 藉層析純化，使用丙酮-己烷（40 : 60)，而得標題化合物1629 (280.0毫克），為白色固體··對C33H49N506之質譜（611.77);實 測值 FAB(M+H)+= 612.5 99513 •165- 200529823 實例1628之數備

於化合物1629 (37.0毫克）在MeOH (2.0毫升）中之溶液内，添 加Pd-C (10% w/v，5.0毫克），並將反應物在氫大氣下攪拌1小 時，經過矽藻土墊過濾，濃縮，及在矽膠上藉層析純化， 使用丙酮-己烷（4 : 6)，而產生所需要之化合物1628 (22.0毫 克），為白色固體。對C26H43N506之質譜（521.65);實測值 FAB (M+H)+= 522.6. 實例1633之製備

V

1633 所需要之標題化合物1633係使用關於實例1629所述之程 序，得自異氰酸酯1629b與化合物1633a (製自1.17與10.11)。 對 C3 4 H5 i N5 06 之質譜（625.80);實測值 FAB (M+H)+ =626.8· 實例1632之數備 99513 -166- 200529823

於化合物1633 (10.0毫克）在MeOH (2.0毫升）中之溶液内，添 加Pd-C(10%w/v，2.0毫克），並將反應物在氫大氣下攪拌1小 時，經過矽藻土墊過濾，濃縮，及在矽膠上藉層析純化， 使用丙酮-己烷（4: 6)，產生標題化合物1632，為白色固體（4.2 毫克）。對 C27H45N506 之質譜（535.68);實測值 FAB (M+H)+ = 536.7. 實例1647之製備

1647a 1647b 於市購可得化合物1647a (Aldrich化學公司，Milwaukee， Wisconsin，USA，250.0毫克）在MeOH中之經攪拌溶液内，添加 99513 -167- 200529823 三甲基矽烷基重氮甲烷（2.0毫升，PhMe中之2M溶液）。20分 鐘後，移除溶劑，並使粗製物再溶解於CH2C12(2.0毫升）中， 且添加芊氧基氯化甲烷（1_5當量），伴隨著Et3N(1.5當量）。 將反應混合物攪拌過夜，以EtOAc稀釋，以5%Na2S203、飽 和NaHC03、1NHC1、鹽水連續洗滌，以MgS04脫水乾燥，過 濾，濃縮，而產生白色固體，使其在矽膠上藉層析純化， 使用EtOAc-己烷（1 : 3)，獲得化合物1647b (413毫克），為白色 固體：對 C20H24O4 之質譜（328.40);實測值 FAB (Μ+Η)+= 329·4· 步驟2

1647b 1647c 1647d c/V^Ph

Ph"^c〇2Me 於0.413克化合物1647b在Me0H/H20 (5.0/0.5毫升）中之溶液 内，添加0.735克KOH。使反應混合物回流過夜，冷卻至室 溫，及濃縮。使粗製物再溶解於H20 (10.0毫升）中，並以10% HC1水溶液酸化，且以CH2C12萃取，以MgS04脫水乾燥，過 濾，及濃縮，而得其相應之羧酸1647c (392毫克）。將粗製物 直接使用於下一步驟。於123.2毫克酸1647c在甲苯（5.0毫升） 中之溶液内，添加DPPA (0.09毫升）與Et3N (0.055毫升）。將反 應混合物於110°C下加熱40分鐘，冷卻，並以飽和NaHC03洗 滌，以MgS04脫水乾燥，過濾，及濃縮，而得異氰酸酯1647d。 使用所獲得之粗製物，而無需純化。 步驟3 99513 -168 - 200529823

以實例1629中所述之方式，將異氰酸酯1647d以化合物 1629a (90.0毫克）處理，提供標題化合物1647。對C40H55N5O7 之質譜（717.89);實測值 FAB (M+H)+= 718.8· 實例1648之製備

於化合物1647在MeOH中之溶液内，添加6N HC1，30分鐘 後，移除MeOH，並使粗製物再溶解於醋酸乙酯中，及以飽 和NaHC03洗滌。使粗製物於矽膠上藉層析純化，使用丙酮-己烷（40: 60)，而得標題化合物1648 (25.0毫克），為白色固體： 對 C32H47N506 之質譜（597.75);實測值 FAB (Μ+Η)+= 598·7· 下表（表3)中之化合物，係基本上使用上述程序（實例 99513 -169- 200529823 1610,1614,1620,1628,1629,1632,1633,1647,1648,1655 之製備），以 如標的化合物製備之一般圖式方法A-E中所述之適當試劑 與修正製成。 Μ

實例 # 結構 Ki* (nM) 分子量 1601 X 。 \〇 〇CV"NH Ο Β 577.763 1602 γ \〇 > Β 563.736 1603 y nh °t〇 A 637.818 99513 -170- 200529823

1604 V Of HO A 547.693 1605 X 1 办个， A 665,871 1606 X 。 A 651.845 1607 °wnh ρ Of HO A 561.72 99513 171 - 200529823

1608 it 。 丫H 〇 B 679.855 1609 X 。 〇 〇、^啪 B 691.866 1610 ί A 619.843 1611 X 。 〇<^nh V/" V >p^〇 A 633.827 99513 172- 200529823

1612 X 。 °wnh Ο 丫 nh >Λ A 647.854 1614 y 4 丫 Or) B 625.807 1616 V 。丫- u OLD C 663.856 1617 A 。 q^NH LI a: B 573.731 99513 173- 200529823

1618 X Or〉 B 639.834 1619 χ 。 LJ B 653.86 1620 ΝΗ ^ j 丫 NH cy B 639.834 1621 y A 665.871 99513 174· 200529823

1622 v 〇lo C 725.926 1623 y o^Ay 〇<^NH V7 〇lo B 691.909 1624 X 〇 cx OH A 601.785 1625 X Q^r令 ci OH B 635.802 99513 175- 200529823

1626 〇、/νη β of HO A 575.747 1627 。NH A 591.79 1628 V7 少NH .-X A 521.656 1629 X 。 °^/NH ^ ^NH /Λ J O-7 B 611.78 99513 176- 200529823

1630 A 623791 1631 %JtstV NH LJ A 637.818 1632 X 。 °^-νη LJ -NH HO / ' A 535.682 1633 X 。 °·^χνη L] .ΝΗ B 625.807 99513 177- 200529823

1634 。丫 ΝΗ B 743.942 1635 X 〇 。丫 ΝΗ A 623.791 1636 y 。NH k. 丫 NH B 673.935 1641 V 〇γΝΗ A 757.968 99513 178- 200529823

1642 v Οξ A 637.818 1643 X 。 0^0 B 771.995 1644 X 。 ΑτΛ^ Ο^ΝΗ ^ % A 651.845 1647 V^NH B 717.904 99513 179- 200529823

1648 B 597.753 1649 y q^r个〜 。丫喲 k A 645.881 1650 y Q^r 々一 °wnh k B 631.854 1651 %^TwxVm， °^/NH A 609.764 99513 180- 200529823

X 1652

A 623.791

1653

B 653.817

1654

A 603.801

1655

A 617.827 99513 -181 - 200529823

1656 X 。丫 * v A 589.774 1657 V o^r\V 〇丫斯 U J^NH A 603.801 1658 y r T B 611.78 1659 x „ 0丫NH u 、γ A 603.801 99513 182- 200529823

1660 。丫 Η \σ^\Γ^ΝΗ A 589774 1661 y \〇^Y^NH B 671.799 1662 B 629.838 1663 y 。丫 nh [C B 651.845 99513 183- 200529823

99513 184- 200529823

1668 v 巳 653.86 1669 V c6：v A 625.807 1670 X 。 。丫 ΚΗ \〇^Y^ A 589.774 1671 V O^rW 0丫 ΝΗ B 617.827 99513 185- 200529823

1672 X 。 H LJ 、/γΝΗ A 603.801 1673 Ck^r^ Η I—J B 617.827 1674 V NH \7 、？:H B 603.801 1675 。丫 nh \ C 687.953 99513 186- 200529823

1676 V 〇〜 B 683.921 1677 X 。 人ί A 645.873 1678 X 。 B 659.899 1679 X 。 c^v ^ Ym k /、 B 647.889 99513 187- 200529823

1680 V α^τ个〜 A 695.932 1681 入。 C 699.963 1682 y C^r女 ^ Ym ◊ B 671.910 1683 X 。 Ο^τ女 A 657.884 99513 188- 200529823

1684 y 0γΝΗ V 义。 B 659.899 1685 y 丫 II Y B 655.868 1686 y nh k T C 659.899 1687 y o^Ay y A 617.820 99513 189- 200529823

抑制HCVNS2/NS4a絲胺酸蛋白酶之能力証明。關於此種証實 之一般程序係藉由下述活體外檢測說明。 HCV蛋白酶抑制活性之檢測： 分光光度測定檢測:對HCV絲胺酸蛋白酶之分光光度測定 檢測可在本發明化合物上，按照由R. Zhang等人，Analytical Biochemistry, 270(1999) 268-275所述之程序進行，其揭示内容係 併於本文供參考。以色原質酯受質之蛋白水解為基礎之檢 測，係適用於連續監測HCVNS3蛋白酶活性。該受質係衍生 自 NS5A_NS5B 接合順序之 P 側（Ac-DTEDWX(Nva)，其中 X = A 或P)。其C-末端羧基係以四種不同發色團醇類（3-或4-硝基 酚、7-羥基-4-曱基-香豆素或4-苯基偶氮酚）之一酯化。下文 所示者為此等新穎分光光度測定酯受質之合成、特徵鑒 定，及應用至HCVNS3蛋白酶抑制劑之高通過量篩檢與詳細 動力學評估。 物質與方法·· 物質：供檢測相關緩衝劑用之化學試劑係得自Sigma化學 99513 -190- 200529823 公司（St. Louis，Missouri)。供肽合成用之試劑係得自Aldrich化學 品，Novabiochem (San Diego, California)、Applied Biosystems (Foster City， California)及 Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts)。肽禮： 以手動方式或在自動化ABI431A型合成器（得自Applied Biosystems)上合成。UV/VIS分光計LAMBDA 12型係得自 Perkin Elmer (Norwalk，Connecticut)，而 96-井 UV 板係得自 Coming (Coming，New York)。預熱板塊可得自 USA 科學（Ocala, Florida)， 而96-井板旋渦器係得自Labline儀器（Melrose Park，Illinois)。具有 單色計之Spectramax Plus微滴定板讀取器係得自Molecular裝置 (Sunnyvale，California) 〇 酵素製備:重組異種二聚體HCVNS3/NS4A蛋白酶（菌種la) 係利用先前發表之程序（D. L. Sali等人，所oc/zem汾〇；，ϋ(1998) 3392-3401)製成。蛋白質濃度係藉由Biomd染色方法，使用先 前藉由胺基酸分析定量之重組HCV蛋白酶標準物測定。在 檢測引發之前，利用Biorad Bio-Spin P-6預填充柱，將酵素儲 存緩衝液（50 mM磷酸鈉pH 8.0, 300 mM NaCl，10%甘油，0.05%月 桂基麥芽苷及10 mM DTT)交換成檢測緩衝液（25 mM MOPS pH 6.5, 300 mM NaCl，10% 甘油，0.05% 月桂基麥芽：y：，5 /zM EDTA 及 5 //M DTT)。 受質合成與純化:受質之合成係按由R· Zhang等人（同前出 處）所報告進行，並經由使用標準擬案，將Fmoc-Nva-OH固定 至氣化2-氣基三苯甲烷樹脂而引發（K. Barlos等人，/狀/ Pe〆· 尸欣咖及從，α(1991)，513-520)。接著使用Fmoc化學，將肽組合 在一起，無論是以手動方式或在自動ABI431型肽合成器 99513 -191 - 200529823 上。使經N-乙醯化及完全保護之肽片段自樹脂分裂，無論 是藉由二氣甲烷（DCM)中之1〇〇/0醋酸（h〇Ac)與10%三敦乙醇 (TFE) ’歷經30分鐘，或藉由DCM中之2%三氟醋酸（TFA)， 歷經10分鐘。使合併之濾液與DCM洗液以共沸方式蒸發（或 藉由Na2C〇3溶液重複萃取），以移除使用於分裂中之酸。使 DCM相以Na2S04脫水乾燥，並蒸發。 使用標準酸-醇偶合程序，將酯受質組合在一起 (K· Holmber 等人，也鉍 C%em.汾肌/·，B33 Π979) 410-412)。使肽片段 溶於無水吡啶（30-60毫克/毫升）中，於其中添加1〇莫耳當量 發色團與催化量（0.1當量）之對-甲苯磺酸（pTSA)。添加二環 己基碳化二亞胺（DCC , 3當量），以引發偶合反應。產物形 成係藉HPLC監控，並可在室溫下反應12_72小時之後發現完 成。於真空下蒸發吡啶溶劑，並藉由與甲苯共沸蒸發而進 一步移除。使肽酯以DCM中之95%TFA去除保護兩小時，並 以無水乙St萃取三次，以移除過量發色團。使經去除保護 之受質於C3或C8管柱上藉由逆相HPLC，以3〇%至6〇%乙腈 梯度液（使用六份管柱體積）純化。在HPLC純化後之總產率 可為大約20-30%。分子質量可藉由電噴霧離子化作用質量 光譜確認。將受質於乾燥下以乾粉形式儲存。 產物之光譜受質及其相應發色團產物之光譜，係 在pH6_5檢測緩衝液中獲得。消光係數係使用多重稀釋液， 在1公分比色杯中之最適宜偏離峰波長（對3-Np與HMC為 340耄微米，對PAP為370耄微米，及對4-Np為400毫微米）下 測知。最適且偏離峰波長係被定義為在受質與產物間之吸 99513 -192- 200529823 光率上產生最大分率差異（產物OD -受質〇d)/受質OD)之波 長。 蛋白酶檢測:HCV蛋白酶檢測係於30°C下，在96-井微滴定 板中，使用200微升反應混料進行。使檢測緩衝液條件 (25 mM MOPS pH 6.5, 300 mMNaCl，10% 甘油，0.05% 月桂基麥芽 牮，5 //MEDTA及5 /zMDTT)，對NS3/NS4A異種二聚體達最佳 化（D. L· Sali等人，同前出處）。典型上，係將150微升緩衝劑、 受質及抑制劑之混合物放置在井中（DMSO之最後濃度$ 4 % v/v) ’並允許在30°C下預培養大約3分鐘。然後，使用五 十微升檢測緩衝液中之預先溫熱蛋白酶（12 nM，30°C )，以 引發反應（最後體積200微升）。板係使用裝有單色計之 Spectromax Plus微滴定板讀取器，監測適當波長（對3-Np與 HMC為340毫微米，對PAP為370毫微米，及對4-Np為400毫 微米）下之吸光率變化，歷經檢測長度（60分鐘）（可接受之結 果可以利用截止濾器之板讀取器獲得）。於Nva與發色團間 之酯鏈結蛋白分解之分裂作用係於適當波長下，對著作為 對照組進行非酵素水解作用之無酵素空白試驗進行監測。 受質動力學參數之評估係涵蓋30倍受質濃度範圍（〜6-200 v M)進行。初速度係使用線性回歸測得，而動力學常數係經 由使用非線性回歸分析，使數據吻合至Michaelis-Menten方程 式而獲得（Mac曲線吻合1.1，K. Raner)。計算轉換數(kcat)，假 設酵素為完全活性。 抑制劑與失活劑之評估:競爭性抑制劑Ac-D^D-GlahL-HCha)-C-OH (27)、Ac-DTEDWA(Nva)_OH 及 Ac-DTEDWP(Nva)-OH 之抑制 99513 -193- 200529823 常數（κο，係於酵素與受質之固定濃度下，根據關於競爭 性抑制動力學之重排Michaelis-Menten方程式：乂。/% = l + [I]〇/(Ki(l + [SL/Km))，其中V。為未被抑制之初速度，％為在 任何特定抑制劑濃度（[I]。）之抑制劑存在下之初速度，而[S]。 為所使用之受質濃度，經由將v。/%對抑制劑濃度（[I]。）作 圖，以實驗方式測得。使用線性回歸，使所形成之數據吻 合，並使用所形成之斜率l/(Ki(l+[SL/Km)計算&值。本發明 一些化合物之Ki*值係示於下表6與表6A中： Μ 實例 # 結構 Ki* (nM) 1654 y 12 99513 194- 200529823

99513 195- 200529823

1024 X 。 7.3 1086 X α^τΒχ ，人f 1 1 8 1090 y G^tV A入f I 9 1085 ^JUX' 11 99513 196- 200529823

1023 33 1012 X 。 人人f 40 1056 a^rKxV^ ΛΛ^ 30 1029 ^人。 14 99513 197- 200529823

袅6A 實例 # 結構 Ki* (nM) 1104 。人7 1 13 198- 99513 200529823

99513 199- 200529823

99513 200- 200529823

雖然本發明已搭配上文所提出之特殊具體實施例加以描 述，但其許多替代方式、修正及其他變異將為一般熟諳此 項技藝者所明瞭。所有此種替代方式、修正及變異，均意 欲落在本發明之精神與範圍内。

99513 201 -

Claims (1)

1. 200529823 十、申請專利範圍： 1·種化合物，或該化合物之對掌異構物、立體異構物、旋 轉異構物、互變異構物或外消旋物，或該化合物之藥學上 可接受之鹽、溶劑合物或酯，該化合物具有式ί中所示之 一般結構：

   iLi 其中： R1 為 Η、OR8、NR9R10 或 CHR9R10，其中 R8、R9 及 Ri 0 可 為相同或不同，各獨立選自包括Η、烷基_、烯基…炔基… 芳基-、雜烷基_、雜芳基_、環烷基_、雜環基_、芳烷基_ 及雜芳烷基； Α與Μ可為相同或不同，各獨立選自r、〇R、njjr、 NRR’、SR、SC^R及鹵基；或a與μ係互相連接，以致使上 文式I中所示之部份基團： M A L-E ^ > 係形成無論是三，四，六，七或八-員環烷基、四至八-員雜環 基、六至十-員芳基或五至十-員雜芳基； 99513 200529823 E 為 C(H)或 C(R); L 為 C(H)、C(R)、CH2 C(R)或 c(R)ch2 ; R、R，、R2及R3可為相同或不同，各獨立選自包括H、 燒基-、稀基·、炔基-、環燒基·、雜燒基_、雜環基.、芳 基-、雜芳基-、（環烷基）烷基_、（雜環基）烷基—、芳基-燒 基-及雜芳基-烧基或者’ NRR，中之尺與尺，係互相連接^ 以致使NRR’形成四至八-員雜環基； 且Y係選自下列部份基團：

   R17 R18 R1^GV Λο^-y ^〇ΧΧ〇γ Rif 〇 U O R16 或R1 〜又〇^XG、/ R19 R17 R18 其中G為NH或〇;且仏心^^及汉”可為相同或不 同’各獨立選自包括H、烧基、雜烧基、烯基、雜稀基、 快基、雜快基、環烧基、雜環基、芳基、芳烷基、雜芳基 及雜芳烷基，或者，（i)無論是汉15與尺!6係互相連接而形成 四至八-員環狀結構，或是R15與R19係互相連接而形成四 至八·員環狀結構，且⑻同樣地，獨立地，Rl7與…s係互 相連接，以形成三至八_員環烷基或雜環基； 其中各該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環基可為未經 取代，或視情況獨立被一或多個部份基團取代，取代基選 自包括：羥基、烷氧基、芳氧基、硫基、烷硫基、芳基硫 基、胺基、醯胺基、烷胺基、芳胺基、烷基磺醯基、芳基 99513 200529823 石黃醢基、確醜脸款 _ ^ ^ 土、烧基％醯胺基、芳基磺醯胺基、烷基、 芳基、雜芳基、%话 — 獅基、竣基、烷氧羰基、羧醯胺基、烷氧 羰基胺基、燒裊M山贫β 乳％基乳基、烷基脲基、芳基脲基、齒基、 氰基及硝基。 2·如吻求項1之化合物，其中Rl為nr9r1 〇，且Μ為H , Rl〇為 Η或RW，其中RM為η、烷基、芳基、雜烷基、雜芳基、 環烧基、烷基·芳基、烷基-雜芳基、芳基-烷基、烯基、炔 基或雜芳基-烷基。 3·如請求項2之化合物，其中R14係選自包括：

   99513 200529823 Me

   OH

   99513 -4- 200529823

   5.如請求項1之化合物，其中R3係選自包括：

   99513 200529823

   其中R31為OH或0-烷基；且 R32 為 Η、C(0)CH3、C(0)0ti3u 或 C(0)N(H)tBu。 6.如請求項5之化合物，其中R3係選自包括下列部份基團：

   99513 200529823

   R,5K〇X.Gy R15 R17 R18 R17 R18

   7.如請求項二化合物’。其二Y係選自下列部份基團: G、/ r17、R18

   其中G = NH或O ;且 R'RiWW可為相同或不同，各獨立選自包 括HU雜炫基、縣、雜稀基、炔基、雜炔基、環 炫基、雜環基、芳基及雜芳基，或纟，（i)無論是r15與Ri6 係直接連接而形成四至八_員環狀結構，或尺^與⑴9係直 接連接而形成四至八.員環狀結構，且⑼同樣地，獨立地， RlWR18係直接連接’而形成三至八-員環烷基或雜環基; ’、中各次烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環基可為未經 取代’或視情況獨立被—或多個部份基團取代，取代基選 99513 200529823 自包括：羥基、烷氧基、芳氧基、硫基、烷硫基' 芳基硫 基、胺基、醯胺基、烷胺基、芳胺基、烷基磺醯基、芳基 石尹、龜基、續醯胺基、烧基續醯胺基、芳基績醯胺基、_基、 羧基、烷氧羰基、羧醯胺基、烷氧羰基胺基、烷氧羰基氧 基、燒基|尿基、芳基脲基、_基、氰基及硝基。 8·如請求項7之化合物，其中〇為朋。 9.如請求項8之化合物，其中

   其中γ32係選自包括： 99513 200529823 入 yy'yy'KW 及丫、 R16係選自Η、甲基、苯基、苄基；且 R15與R19可為相同或不同，各獨立選自下列： ，Me入，， 丫Άη.〜、从 丫、，人入义a , OLa及

   或者，部份基團：

   Λ

   係選自下列部份基團：

   οΛ 或，〇νΛ

   10. 如請求項9之化合物，其中R16為Η。 11. 如請求項1之化合物，其中部份基團： Μ A \ / L—E

   係選自下列結構： 99513 200529823

   99513 -10- 200529823

   12·如請求項11之化合物，其中部份基團： 99513 -11 - 200529823

   ο

   0 } N

   係選自下列結構： 烷基、

   Me >Me Cl >c, ο Me

   Ο Ο

   〇 99513 -12- 200529823

   14.如請求項1之化合物，其中R14係選自包括： ^ ^ 1-4 1-4

   99513 -13 - 200529823 \-0Ht 卜 OMe,

   Me Me Me

   99513 14 200529823

   99513 -15- 200529823

   γ係選自包括：

   且部份基團：

   其中G = NH

   係選自包括：

   99513 -16- 200529823

   Υ γ32

   V r16=h ;且 R15與R19可為相同或不同，且係選自下列之一：

   丫'人Λ ,义Λ , OLa 及 Ογ 或者，部份基團： 係以下列部份基團之一表示

   RV、 R19

   且部份基團： Μ A

   99513 -17- 200529823

   Ο 15·—種醫藥組合物，其包含至少一 丄、 禮如印永項1之化合物作 為活性成份。 16.如請求項15之醫藥組合物’其係用於治療與Hcv有 病症 關聯之

   醫藥組合物’其另外包含至少-種藥學上可 18·如請求項I? 劑 之醫藥組合物，其另外含有至少一種抗病毒 19. 如請求項 — 至少一種干擾 、之醫樂組合物，其又另外含有 素。 20. 如請求項 ^ 、之醫藥組合物，其中該至少一種抗病毒劑為三 唑核：y：， = 且該至少一種干擾素為α-干擾素或經PEG化之干 99513 -18- 200529823 擾素。 21· —種如請求項1之化合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係 用以治療與HCV有關聯之病症。 22. -種製備醫藥組合物以治療與HCV有關聯病症之方法，該 方法包括使至少一種如請求項丨之化合物與至少一種藥學 上可接受之載劑進行密切物理接觸。 、 23·:種顯示HCV蛋白酶抑制活性之化合物，或該化合物之對 掌異構物、立體異構物、旋轉異構物、互變異構物、非對 映異構物或外消旋物，或該化合物之藥學上可接受之鹽、 溶劑合物或醋，該化合物係選自具有下文所列示、:構：化

   99513 -19- 200529823

   99513 -20- 200529823

   99513 -21- 200529823

   99513 -22- 200529823

   99513 -23- 200529823

   99513 -24- 200529823

   99513 -25- 200529823

   99513 -26 - 200529823

   99513 -27- 200529823

   99513 -28- 200529823

   99513 -29- 200529823

   99513 -30- 200529823

   99513 •31 - 200529823

   99513 -32- 200529823

   24. -種醫藥組合物，其係用於治療與HCV有關聯之病症，該 組5物包含治療上有效量之一或多種如請求項Μ之化合 物及藥學上可接受之載劑。 25. 如請求項24之醫藥組合物，其另外含有至少一種抗病毒 劑。 26. 如呀求項25之醫藥組合物，其另外含有至少一種干擾素或 PEG-干擾素α共軛物。 扛如請求項26之醫藥組合物，其中該至少一種抗病毒劑為三 坐核甘，且該至少一種干擾素為α干擾素或經pEG化之干 擾素。 汉一種如請求項23之化合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係 用於治療與C型肝炎病毒有關聯之病症。 種如叫求項1之化合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係 用於調制C型肝炎病毒（HCV)蛋白酶之活性。 99513 -33- 200529823 30· —種如請求項1之化合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係 用於治療、預防或改善C型肝炎之一或多種病徵。 31. 如請求項30之用途，其中HCV蛋白酶為NS3/NS4a蛋白酶。 32. 如請求項31之用途，其中一或多種化合物會抑制HCVNS3/ NS4a蛋白酶。 33. —種如請求項1之化合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係 用於調制C型肝炎病毒（HCV)多肽之處理。 34. —種醫藥組合物在藥劑製造上之用途，該藥劑係用於治療 與HCV有關聯之病症，其中該醫藥組合物包含治療上有效 量之至少一種化合物，或該化合物之對掌異構物、立體異 構物、旋轉異構物、互變異構物、非對映異構物或外消旋 物，該化合物之或藥學上可接受之鹽、溶劑合物或酯，該 化合物係選自下列：

   99513 -34- 200529823

   99513 35- 200529823

   99513 36- 200529823

   99513 37- 200529823

   35·如請求項1之化合物，其係呈經純化形式。 99513 38- 200529823 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明: 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   99513