SU1542402A3 - Способ выделени соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина - Google Patents

Способ выделени соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина Download PDF

Info

Publication number
SU1542402A3
SU1542402A3 SU4022043A SU4022043A SU1542402A3 SU 1542402 A3 SU1542402 A3 SU 1542402A3 SU 4022043 A SU4022043 A SU 4022043A SU 4022043 A SU4022043 A SU 4022043A SU 1542402 A3 SU1542402 A3 SU 1542402A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
leu
ser
arg
glu
ala
Prior art date
Application number
SU4022043A
Other languages
English (en)
Inventor
Эндрю Бэнтл Лерри
Уиллиэм Митчелл Джеймс
Брадлей Сторс Стифен
Тсуъеши Шимамото Грант
Original Assignee
Монсанто Компани (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27107301&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SU1542402(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US06/704,677 external-priority patent/US4652630A/en
Application filed by Монсанто Компани (Фирма) filed Critical Монсанто Компани (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU1542402A3 publication Critical patent/SU1542402A3/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/113—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure
    • C07K1/1133—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides without change of the primary structure by redox-reactions involving cystein/cystin side chains
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Beans For Foods Or Fodder (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Dental Preparations (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано дл  выделени  соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина. Цель - упрощение способа и повышение качества целевого продукта за счет сохранени  его нативных свойств. Дл  этого солюбилизацию белка провод т 4,5-10 М раствором мочевины или диметилсульфона при PH 9-12,1 и температуре 4-25°С, а натурацию осуществл ют в водном растворе 2-5 М мочевины при указанных значени х PH и температуры, причем вторую операцию провод т в присутствии м гкого окислител . 2 табл.

Description

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано дл  выделени  соматотропного белка из клеток E.Coli.
Цель изобретени  - упрощение способа и повышение качества целевого продукта.
На фиг.1 и 2 приведены графики зависимости общего количества солюбили- зированного белка от концентрации мочевины; на фиг.З - график выхода мономера в зависимости от концентра-/-х. ции мочевины.
П.р и м е р 1. Солюбилизаци  бычьего N-метионилсоматотропина (MBS), экс- прессированного в E.Coli.
Собранные клетки разрывают, пропуска  их два раза через гомогенизатор
типа Man ton-Gaul in homo genizer. Pa- створ гомогената подвергают низкоскоростному центрифугированию, в результате чего светопреломл ющие тела, содержащие MBS, осаждаютс . Надосадоч- ную жидкость выбрасывают, повторно взвешивают светопреломл ющие тела, промывают и снова центрифугируют их. Оп ть выбрасывают надосадочную жидкость и получают преперат светопреломл ющих тел.
Препаратированные описанным образом светопреломл ющие тела при 25°С подвергают воздействию разных концентраций водного раствора мочевины при разных значени х рН. Все забуферованные растворы содержат 100 ммоль трис осно
см
вани . Регулирование значени  рН осуществл ют добавлением НС1. Конечна  концентраци  светопреломл ющих тел составл ет 4 мг/мл раствора. Степень растворени  определ ют спектро- фотометрически, принима  светопреломл ющие тела полностью белковыми и использу  коэффициент экстинкции Е 0,68 при 277 нм в длине пути 1 см в качестве показател  концентрации белка 1 мг/мл. Исход- ; ную концентрацию определ ют спект- рофотометрически дл  полностью растворенной пробы.
Результаты описанного опыта представлены графически (фиг.1). Эти данные подтверждают, что регулировка значени  рН с обеспечением щелочных условий существенно увеличивает сте- пень солюбилизации.
Пример 2. Провод т аналогично примеру 1, но температуру выдерживают на уровне 4 С и значение рН ре- гулируют и в сторону кислой и в сторону щелочной реакции. Все забуферо- ванные растворы содержат 100 ммоль- трис-основани . Регулирование значени  рН в сторону кислой реакции осу- ществл ют добавлением уксусной кислоты .
Результаты этого опыта представлены графически (фиг.2). Сравнение данных фиг.1 и 2 показывает, что при пос то нной концентрации раствора мочевины , и данном значении рН степень солюбилизации при пониженных температурах (4°С) выше, чем при комнатной температуре (25°С).
ПримерА(сравнительный). Содержащие MBS светопреломл ющие тела приготавливают согласно примеру 1. Светопреломл ющие тела смешивают с 10 М раствором мочевины без регулиро- вани  значени  рН, так что окончательна  концентраци  тел составл ет около 5,0 мг/мл. Затем смешивают раствор и в цел х установлени  равновеси  выдерживают его при 4°С в течение но- чи. Затем спектрофотометрическим способом определ ют степень солюбилизации , котора  составл ет всего лишь около 2,9 мг/мл. Исходную концентрацию светопреломлени  тел определ ют путем добавлени  достаточного количества раствора мочевины в цел х полного их растворени  и спектрофотометри- ческого измерени  полностью раство
5
0
5 0
5
0
5 -Q
5
ренного раствора. Затем исходную концентрацию соответственно понижают.
П р и м е р Б (сравнительный). Содержащие MBS светопреломл ющие тела приготавливают согласно примеру 1. Затем смешивают с 8,0 М водным раствором мочевины без регулировани  значени  рН, так что окончательна  концентраци  тел составл ет около 5,0 мг/мл. Раствор затем смешивают и в цел х установлени  равновеси  его выдерживают при 4°С в течение ночи. Спектрофотометрическим способом определ ют степень солюбилизации, котора  составл ет около 2,4 мг/мл. Исходную концентрацию светопреломл ющих тел определ ют путем добавлени  достаточного количества раствора мочевины в цел х полного их растворени  и спектрофотометрического измерени  полностью растворенного раствора. Затем исходную концентрацию соответственно понижают.
Пример 3. Светопреломл ющие тела, содержащие MBS и приготовленные , аналогично примеру 1, смешивают с небуферованным водным 4,5 М раствором мочевины так, что концентраци  светопреломл ющих тел составл ет около 66 мг/мл. Значение рН раствора с помощью разбавленного раствора едкого натра повышают от 7 до 11. Осветлившийс  раствор показывает полную солюбилизацию. Определенна  по примеру 1 спектрофотометрическим анализом концентраци  светопреломл ющих тел составл ет 66 мг/мл.
Пример 4. Содержащие MBS светопреломл ющие тела, полученные по примеру 1, солюбилизируют в водном 7,5 М растворе мочевины, содержащем 100 ммоль триса при значении рН 10,5. Концентрацию мочевины поддерживают на разных уровн х, добавл ют 100 ммоль триса, и выдерживают общую концентрацию белка около 1 мг/мл, определенную спектрофотометрическим анализом полностью растворенной пробы, добавл   определенное количество соответствующего раствора мочевины. Затем растворенный MBS окисл ют, подверга  раствор воздействию воздуха и перемешива  его в течение суток. Результаты представлены графически (фиг.З). Выход мономера MBS указан в виде весовых процентов общего содержани  MBS. Оптимальна  натураци  достигаетс 
jirpH концентрации мочевины около 4,5М (фиг.З).
Пример 5. Согласно примеру 4 содержащие MBS светопреломл ющие тела солюбилизируют в водном 7,5 М ра -- створе мочевины с содержанием 100 ммоль триса и со значением рН 10,5. После солюбилизации раствор разокисл ют кислородом воздуха в течение ночи с перемешиванием. Данные БЖХ-ана- лиза показывают, что оптимальный выход мономера MPS достигаетс  при концентрации мочевины 3 М.
Пример 8. Аналогично примеру 7 солюбилизируют MPS при 4°С в водном 7,5 М растворе мочевины со значе
бавл ют 100 ммоль триса до концентра- JQ нием рН 11, отрегулированном добавкой ции мочевины 4,5 М, после чего значе- 90 ммоль триса. При этом приготавли- ние рН довод т до значений в пределах вают растворы трех разных концентраций от 10,5 до 8,5. Затем отдельные раст- (20,40 и 80 мг (мокрого) шарика на воры окисл ют кислородом воздуха с 1 мл указанного раствора мочевины), перемешиванием в течение суток. Содер-15 Пробы растворов разбавл ют 90 ммоль жание мономера и олигомера определ ют триса и/или мочевиной в цел х получе- по данным БЖХ. Хот  результаты указы--; ни  3 М концентрации мочевины и кон- вают на то, что зависимость эффектив- центраций MPS 1 мг/мл. Разбавленные
растворы MPS с перемешиванием подвергают воздействию воздуха при 4°С в . течение 56 ч. БЖХ-анализ показывает
ности натурации от значени  рН в течение процесса окислени  относительно ровна , но тенденци  к увеличению эффективности по мере повышени  значени  рН наблюдаетс . Кроме того, процесс катализируемого основанием окис20
средний выход мономера MPS, равный 69 мас.%.
Пример 9. Провод т аналогичлени  протекает тем быстрее, чем но примеру 8, но солюбилизацию и на-,
лее выражена щелочна  реакци  раствора .
Пример 6. К 850 мл водного 5,3 М раствора мочевины при 4°С добавл ют 150 мл полученного по примеру 1 препарата светопреломл ющих тел. Значение рН полученного 4,5 М раствора мочевины 50 мас.%-ного раствора едкого натра довод т до 11. Тела полностью раствор ютс , в результате чего получаетс  обща  концентраци  MBS около 12,4 мг/мл. Затем раствор перемешивают при 4 С в течение ночи в цел х окислени  MBS. В соответствии с данными БЖХ-анализа окисленного раствора в результате получают выход мономера MBS, равный 80 мас.%.
Пример 7. Свиной S-метионил- соматотропин (MPS) экспрессируют в E.Coli. После выделени  содержащих MPS светопреломл ющих тел по описанному методу последние солюбилизируют при 4°С в 7,5 М растворе мочевины со значением рН 11,0, отрегулированном добавкой 90 ммоль триса. Затем на 1 м полученного раствора мочевины раствор ют шарик светопреломл ющего те- ,ла весом 1 13 мг (в мокром состо нии). Затем пробы разбавл ют 90 ммоль триса и/или мочевиной в цел х получени  ра- створа мочевины концентрацией 4,5; 3,0 и 2,0 М с концентрацией MPS 4 мг/мл, счита  на вес мокрого шарика светопреломл ющих тел. Потом пробы
средний выход мономера MPS, равный 69 мас.%.
Пример 9. Провод т аналогич0
5
0
е
турацию осуществл ют в присутствии 0,1 ммоль 1,4-дитиотрейтола. БЖХ-ана- лиз показывает средний выход мономера MPS, равный 66 мас.%.
Пример 10. Три варианта BGH: A-la(, Ala, и Met, Val ,26 , экспрессируют в E.Coli по известным приемам . Отдельные варианты BGH солюбилизируют и подвергают натурации аналогично примеру 1.
Содержащие соответствующие варианты BGH светопреломл ющие тела выдел ют аналогично примеру 1. Затем взвешивают в воде около 300 г (в мокром состо нии) тел с получением 1 л взвеси. Последнюю добавл ют к 5 л 9 М мочевины и 108 ммоль триса, в результате чего получают солюбилизирую- щий раствор, включающий соответству5 ющий вариант BGH в 7,5 М мочевины и 90 ммоль триса при значении рН 10,5 и 4°С. После перемешивани  в течение нескольких минут солюбилизацию завершают . Затем медленно добавл ют 4 л
0 холодной воды с получением предназна- -ченного дл  натурации раствора, содержащего соответствующий вариант BGH в 4,5 М мочевины и 54 ммоль -триса при значении рН 10,5 и при 4°С. Раствор перемешивают и соответствующий BGH окисл ют, подвергают раствор воздействию воздуха в течение 48 ч. Растворы с окисленными вариантами BGH подвергают БЖХ-анализу, который дл 
всех трех вариантов BGH показывает выход мономера 60-70 мас.%.
Пример 11. Структурную гомологию соматотропинового белка, полу- ченного описанным образом, и сомато- тропина, вырабатываемого гипофизом, определ ют методом Circular dichro- mistn. Сравнивают MBS и вариант Ala., соматотропина BGH с бычьим соматотро- пином. Пробы раствор ют в растворе 50 ммоль бикарбоната натри  при значении рН 9,5 и анализируют их описанным приемом.
Данные этого анализа показывают, что полученный описанным образом ре- комбинантный соматотропин после на- турации имеет свою нативную конформа- цию.
Спектральные данные приведены в табл. 1 и 2.
Пример 12. Содержащие MBS светопреломл ющие тела приготавливают аналогично примеру 1 и смешивают с небуферованным 1,0 М водным раствором мочевины при 4°С. Добавкой гидроокиси натри  довод т значение рН до 12,1 и выдерживают его на этом уровне . Осветление раствора говорит о за- вершении солюбилизации. Концентрацию светопреломл ющих тел определ ют аналогично примеру 1 методом спектрофо- тометрического анализа, котора  coc-v тавл ет около 10 мг/мл.
Пример 13. Содержащие MBS светопреломл ющие тела приготавливают аналогично примеру 1. Затем их раствор ют в 3,0 М раствора диметилсуль- фона при 28°С (рН 11,8) при концент- рации MBS 2 мг/мл. В результате окислени  кислородом воздуха растворенного MBS получают продукт, который (суд  по степени межмолекул рной св зи ), только незначительно отличаютс  от продукта, полученного с применением 4,5 М раствора мочевины со значением рН 11,3 (50 ммоль триса) при 5°С.
Солюбилизованные и натурированные описанным образом соматотропины затем очищаютс  по стандартным хроматогра- фическим приемам. Биоактивность сома- тотропинов показана положительной реакцией , вызванной ими в испытани х, основанных на росте крыс (rat growth, bioassy).
При этом биоактивность гетеролого- вого саматотропина определ ют относи
5
0
5 о
Q 5
0
5
5
тельно известного количества сомато- тропинрвого материала (например, бычьего или свиного гипофизарного соматотропина ), устанавлива  взаимосв зь между увеличением в весе крыс, подвергнутых гипофизэктомии, и разными количествами введенного в их организм испытуемого материала. Наклон регрессии увеличени  в весе тела в сравнении с дозами введенного специфического соматотропинового материала сравнивают с известным стандартным материалом (например, гипофизарным) и подсчитывают относительную биоактивность гетерологового соматотропинового материала в U ед./мг гормона роста .
Бычий N-метионилсоматотропин, со- любилизированный и натурированный по предлагаемому методу, очищают, а затем ввод т в организм молочных коров. Молочные коровы, которым введен подобный препарат, продуцируют на 10- 40 мас.% больше молока, чем контрольные животные.
Выражение соматотропин включает соматотропины млекопитающих, например человеческий, овечий, свиной и бычий соматотропины, и другие соматотропины , например птичий, а также системы, включающие аналоги и гомологи встречающегос  в природе белка, про вл ющего соматотропиноподобную биоактивность , например пролактин и лактоген (HPL).
Гетерологовые белки - это белки, которые обычно не вырабатываютс  клетками хоз ина. Благодар  технологии рекомбинации ДНК стало возможно экспрессировать относительно большие количества гетерологовых белков из трансформированных клеток хоз ина. Однако, эти посторонние белки часто , замаскированы в нерастворимых светопреломл ющих телах в цитоплазме клеток хоз ина.
Сложение - восстановление общей конформации белка, достаточной дл  осуществлени  окислени  надлежащим образом. Процесс сложени  осуществл етс  путем сокращени  денатурирующего действи  мочевины, если необходимо , за счет понижени  ее концентрации до нужного уровн  дл  обеспечени  взаимодействи  последовательности аминокислот белка и достижени  на- тивной вторичной и третичной структур .
Окисление - образование внутримолекул рных дисульфидных св зей в цел х получени  устойчивой нативной конформации, обеспечивающей требуемую биологическую активность.
М гкий окислитель - вещество, содействующее окислению сульфгидриль- ных групп дл  образовани  внутримолекул рных дисульфидных св зей без окис- ю чий соматотропин, HGH - соматотропин
лени  других заместителей данного белка . Хот  можно пользоватьс  и такими м гкими агентами, как перекись водорода , но вполне достаточно (и предт почтительно) использовать дл  этих целей воздух.
Биологическа  активность - способность соматотропина к осуществлению его предполагаемой физиологической реакции in vivo. В случае отсутстви  испытани  на специфическом виде животного in vivo биологическую активность можно олредел ть путем проведени  подход щих биологических испытаний . Подход щим биоиспытанием дл  со- матотропинов по предлагаемому способу  вл етс  биоиспытание дл  определени  увеличени  в весе у крыс. При этом испытании определ ют биоактивность соматотропиновых препаратов по сравнению с известными препаратами (например, экстрагированным нативным соматотропином), устанавлива  св зь между степенью увеличени  в весе у крыс, подвергнутых гипофизэктомии, и разными количествами введенного в организм крыс препарата.
Соматотр опины - это гормоны, выдел емые аденогипофизом (передней долей гипофиза) и стимулирующие рост скеле- та и увеличение веса тела. Соматотро- пины обычно содержат 191 аминокислотных остатков и имеют мол.массу 2200.0 дальтон. Полна  последователь
ность аминокислотных остатков установ- д солюбилизацию провод т в присутствии
лена дл  соматотропинов разных видов, в том числе людей и животных, например птиц (птичий соматотропин), овец
(овечий соматотропин), свиней (свиной соматотропин), крупного рогатого скота (бычий соматотропин).
В табл.3 изображена первична  структура соматотропинов разных виден. животных, причем BGH - бычий соматотропин , PGH - свиной соматотропин, OGH - овечий соматотропин, AGH - пти5
0
5
д
0
5
человека, символ X обозначает промежуток в последовательности и вставлен дл  иллюстрации расположени  типовых соматотропинов. При нумерации аминокислотных остатков специфической последовательности эта вставка не принимаетс  во внимание, например в BGH позици  1 26- представл ет собой Leu (или Val, как в случае аллельного варианта , использованного в примере 10).
Табулированные относительные количества специфических аминокислот, основанные на описанных последовательност х , приведены в табл.4.

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    Способ выделени  соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина, включающий проведение солю- билизации с последующей натурацией и очисткой целевого продукта, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа и повышени  качества целевого продукта за счет сохранени  его нативных свойств, в качестве клеток хоз ина используют бактерии E.Coli, солюбилизацию провод т 4,5- 10 М раствором мочевины или диметил- сульфона при рН 9-12,1 и температуре -25°С, а натурацию осуществл ют в водном растворе 2-5 М мочевины при рН 9 - -12,1 и температуре 4-25°С, причем
    или отсутствии восстанавливающего агента,-а натурацию - в присутствии, м гкого окислител .
    I
    макс НМ
    А, см
    278,2
    15,042 ±440
    0,690
    278,2
    14,935± 216 0,680
    Примечание. Ем - коэффициент экстинкции при 278 нм.
    А10°- нормализованна  абсорбци  I мг/мл раствора в  чейке размером I,0 см при 278 нм.
    291 285 265 221 об-спираль
    278,5
    15,150± 100 0,693
    Таблица 2
    13 154240214
    Таблица 3
    120
    ВОНPhe-Pro-Ala-Mel-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Phe-Ala-Asn-Ala-Va I-Leu-Arg-Al a-Gin-Hie-LeuPGH-ProSer----
    OCH
    ACH-ProAsn
    HCHThr-lle-ProArgAspMetHis-Arg
    3040
    BGHHis-Gln-Leu-Ala-Ala-Asp-Thr-Phe-Lys-Glu-Phe-Glu-Arg-Thr-Tyr-Ile-Pro-Clu-Gly-GlnPGH-TyrAla-
    OGH
    AGHLeuGinTyr-Aip--HGHPheTyr-GlnGlu-AlaLys-Glu
    5060
    BGHArg-Tyr-Ser--X--Ile-Gln-Asn-Thr-Gln-Val-Ala-Phe-Cys-Phe-Ser-Glu-Thr-Ile-Pro-AlaPGHAlaAla
    OGH-
    AGHThrAsn-LysSerAlaTyr-
    HGHLys---Phe-Leu--ProThr-Ser-Leu-Ser--Thr7080
    BGHPro-Thr-Gly-Lys-Asn-Glu-Ala-Gln-Cln-Lys-Ser-Asp-Leu-Glu-Leu-Leu-Arg-Ile-Ser-LeuPGHAsp-ArgValPhe
    OGH«
    AGHAsp-AspMet-GlyPhe
    HGHSer-Asn-Arg-GluThrAsnGin
    90,100BGHLeu-Leu-Ile-Gln-Ser-Trp-Leu-Gly-Pro-Leu-Gln-Phe-Leu-Ser-Arg-Val-Phe-Thr-Atn-Ser-
    PGHVal
    OGHr-
    AGHVal™--ThrValTyrLysAsnHGH--GluVal---Arg-Ser--:Ala
    110120
    BGHLeu-Val-Phe-Gly-Thr-Ser-Asp-Arg-X--Val-Tyr-Glu-Lys-Leu-Lys-Asp-Leu-Glu-Glu-GlyPGH-
    OGH---
    AGH-Phe
    HGHTyrAlaAsn-Ser-AspAsp-Leu
    r 130140
    BGHlle-Leu-Ala-Leu-Met-Arg-Glu-Leu-Glu-Asp-Gly-Thr-Pro-Arg-Ala-Gly-Gln-Ile-Leu-LysPGHGin-Ser
    OCHVal-
    ACHGin-Arg-SerGly-ProLeuArgHGHGln-ThrGly-ArgSerThr-Phe
    150160
    BGHGln-Thr-Tyr-Asp-Lys-Phe-Asp-Thr-Asn-Met-Arg-Ser-Asp-Asp-Ala-Leu-Leu-Lys-Asn-TyrPGHLeu
    OGHT-
    AGHPro-Ile-His-LeuAsn-Glu---
    HGHSer-Sec-His-Asn
    170180
    BGHCly-Leu-Leu-Ser-Cys-Phe-Arg-Lys-Asp-Leu-His-Lys-Thr-Glu-Thr-Tyr-Leu-Arg-Val-MetPGHLysAla
    OGH--ACT LysValLys--
    HGHTyr-ttet-AspValPhe-Ile-Val190
    BGHLys-Cys-Arg-Arg-Phe-Gly-Glu-Ala -Ser-Cys-Ala-PhePGHValSer
    OGH
    AGH---.Ser-AsnThr-IleHGHGinXSer-ValtGly-Gly
    ц кнпвэьои впъ-одшнаЬноч
    L9S
    -I1|
    l Щ
    W 9W/1p9hOW П.ЬоС/ ан9ПНО
    1111H
    nxgodru/fiisd суд dogungj
    to/ 5
    MZ
    и
    {
    Qh f
    с
    ю|
    i г
    af I
    at
    OB
    №
    m
    0г
    са
    + 0
    i« S
    4 л
    Л
    ooi$ V
    20WWI
    70-#
    I
    Ј
    &
    § да I
    c
    t567
    Концентраци  мочебинь H
    Фие.З
SU4022043A 1985-02-22 1986-02-21 Способ выделени соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина SU1542402A3 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US70434185A 1985-02-22 1985-02-22
US06/704,677 US4652630A (en) 1985-02-22 1985-02-22 Method of somatotropin naturation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1542402A3 true SU1542402A3 (ru) 1990-02-07

Family

ID=27107301

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU4022043A SU1542402A3 (ru) 1985-02-22 1986-02-21 Способ выделени соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP0192629B2 (ru)
JP (1) JP2572963B2 (ru)
KR (1) KR890003082B1 (ru)
CN (1) CN1010097B (ru)
AT (1) ATE66930T1 (ru)
AU (3) AU587423B2 (ru)
CA (1) CA1268300C (ru)
DE (1) DE3681185D1 (ru)
DK (1) DK172526B1 (ru)
ES (1) ES8800957A1 (ru)
IE (1) IE58871B1 (ru)
IL (1) IL77951A (ru)
NZ (1) NZ215259A (ru)
SU (1) SU1542402A3 (ru)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU612133B2 (en) * 1987-02-20 1991-07-04 Natinco Nv Production of proteins in active forms
JP2669859B2 (ja) * 1987-08-04 1997-10-29 協和醗酵工業株式会社 タンパク質の再活性化法
US4985544A (en) * 1987-08-04 1991-01-15 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for renaturing fish growth hormone
JPH01132598A (ja) * 1987-10-14 1989-05-25 Pitman Moore Inc 変性剤溶液中に含まれる組換え蛋白質における分子内ジスルフィド結合の生成を促進する方法
JPH01257491A (ja) * 1988-04-08 1989-10-13 Tosoh Corp 不溶性融合異種蛋白質の処理方法
US5089473A (en) 1988-08-29 1992-02-18 Monsanto Company Somatotropin variants and their use
DE3835350A1 (de) * 1988-10-17 1990-04-19 Boehringer Mannheim Gmbh Aktivierung von gentechnologisch hergestellten, in prokaryonten exprimierten antikoerpern
US5064943A (en) * 1988-12-16 1991-11-12 American Cyanamid Company Method for solubilization and naturation of somatotropin
JP2517100B2 (ja) * 1989-03-08 1996-07-24 協和醗酵工業株式会社 ヒト顆粒球コロニ―刺激因子活性を有する蛋白質の精製法
US5182369A (en) * 1990-02-28 1993-01-26 Monsanto Company Method for purifying somatotropin monomers
US5023323A (en) * 1990-09-12 1991-06-11 Monsanto Company Method of somatotropin naturation
AU2592395A (en) * 1994-05-19 1995-12-18 Monsanto Company Method for purifying somatotropin monomers
JPH11505507A (ja) * 1994-07-25 1999-05-21 ノバルティス アクチェンゲゼルシャフト 組換えヒルジンまたは表皮増殖因子のようなタンパク質の折りたたみ方法
ZA9711733B (en) 1996-12-31 1998-07-01 Monsanto Co Method for solubilization and naturation of somatotropins
US5962416A (en) * 1997-06-27 1999-10-05 Monsanto Company Accelerating animal hoof growth with somatotropin
BRPI0613653A2 (pt) * 2005-07-25 2011-01-25 Trubion Pharmaceuticals Inc composições e métodos para desagregação de proteìna
JP4766052B2 (ja) 2005-11-24 2011-09-07 株式会社村田製作所 電気音響変換器
WO2007130154A2 (en) 2005-12-22 2007-11-15 Genentech, Inc. Recombinant production of heparin binding proteins
WO2008008975A2 (en) 2006-07-14 2008-01-17 Genentech, Inc. Refolding of recombinant proteins
CN110249048A (zh) * 2016-09-15 2019-09-17 太阳基因组学公司 用于从样品中的一种或多种类型的微生物的多样性群体中提取核酸分子的通用方法
US11959125B2 (en) 2016-09-15 2024-04-16 Sun Genomics, Inc. Universal method for extracting nucleic acid molecules from a diverse population of one or more types of microbes in a sample

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU553017B2 (en) * 1982-06-07 1986-06-26 Chr. Hansen A/S A process for the preparation of chymosin
GR79124B (ru) * 1982-12-22 1984-10-02 Genentech Inc
WO1984003711A1 (en) * 1983-03-25 1984-09-27 Celltech Ltd A process for the production of a protein

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Arck. of Biochem. and Biophys., 1970, v.138, p.338-346. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP0192629B1 (en) 1991-09-04
AU587423B2 (en) 1989-08-17
DE3681185D1 (de) 1991-10-10
CA1268300A (en) 1990-04-24
CN86100915A (zh) 1986-08-20
NZ215259A (en) 1989-11-28
KR890003082B1 (ko) 1989-08-21
DK172526B1 (da) 1998-11-16
KR860006541A (ko) 1986-09-13
AU618386B2 (en) 1991-12-19
ES8800957A1 (es) 1987-12-01
DK80986A (da) 1986-08-23
EP0192629A3 (en) 1988-07-27
CA1268300C (en) 1990-04-24
IL77951A (en) 1990-11-05
JP2572963B2 (ja) 1997-01-16
ES552233A0 (es) 1987-12-01
AU3925889A (en) 1990-04-05
JPS61195698A (ja) 1986-08-29
IE58871B1 (en) 1993-11-17
EP0192629A2 (en) 1986-08-27
DK80986D0 (da) 1986-02-21
EP0192629B2 (en) 1997-03-05
ATE66930T1 (de) 1991-09-15
AU621111B2 (en) 1992-03-05
IE860466L (en) 1986-08-22
AU3498089A (en) 1989-09-14
AU5385386A (en) 1986-08-28
CN1010097B (zh) 1990-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU1542402A3 (ru) Способ выделени соматотропного белка из светопреломл ющих тел клеток хоз ина
US4652630A (en) Method of somatotropin naturation
Medugorac Characterization of intramuscular collagen in the mammalian left ventricle
DE3588249T2 (de) Methode zur Herstellung von menschlichen Wachstumshormonen
FARMER et al. Purification and properties of avian growth hormones
US4731440A (en) Method of somatotropin solubilization using dimethylsulfone and naturation
JPH04500519A (ja) 安定で生物活性のある成長ホルモン
Mills et al. Metabolic effects of plasmin digests of human growth hormone in the rat and man
GORIN et al. Covalent binding of growth hormone to surface receptors on rat adipocytes
JPH08502021A (ja) 生体相容性ソマトトロピン溶液
JP4865728B2 (ja) ポリペプチドの三硫化物誘導体の形成を防止する方法
DE69911024T2 (de) Methoden zur herstellung von rekombinanten peptiden mit einer geringen menge von trisulfiden
EP0282318A2 (en) Bovine growth hormone analogs
US3420810A (en) Process for joining the a and b chains of insulin
Luck et al. Analysis of disuiphide bridge function in recombinant bovine prolactin using site-specific mutagenesis and renaturation under mild alkaline conditions: a crucial role for the central disuiphide bridge in the mitogenic activity of the hormone
CN1033759C (zh) 猪生长激素类似物
Skottner et al. Biological characterization of charge isomers of human growth hormone
KR930008096B1 (ko) S-술폰화 칼시토닌 유도체, 그 제조방법, 약제학적 조성물 및 치료방법
US3705142A (en) Synthetic thyroprotein containing triiodothyronine prepared by addition of multiple charges of iodine to a protein
Cameron et al. Reduced and S-carboxymethylated human growth hormone: a probe for diabetogenic action
US3455894A (en) Process of preparing high potency iodinated protein which comprises reacting said protein with ba(oh)2 at a temperature of at least 110 c.
KAPLAN et al. Constitutive biosynthesis of bone gla protein in a human osteosarcoma cell line
JP2995440B2 (ja) 幼齢動物用飼料
US5244882A (en) Porcine growth hormone analogs, and compositions
Doneen et al. Biological actions of human somatotrophin and its derivatives on mouse mammary gland and teleost urinary bladder

Legal Events

Date Code Title Description
REG Reference to a code of a succession state

Ref country code: RU

Ref legal event code: MM4A

Effective date: 20040222