JPH08502021A

JPH08502021A - 生体相容性ソマトトロピン溶液

Info

Publication number: JPH08502021A
Application number: JP5517756A
Authority: JP
Inventors: シーリィ，ジェイムズ・イー; ホルバート，マシュー・エイチ; リッチー，カール・ダブリュ・ジュニア; アウアー，ヘンリー・イー
Original assignee: マリンクロッド・ヴェタラネリィ・インコーポレイテッド
Priority date: 1992-04-07
Filing date: 1993-04-05
Publication date: 1996-03-05
Also published as: AU4278393A; EP0639984A1; CA2133737A1; CN1078910A; WO1993019773A1; CN1089249C

Abstract

(57)【要約】本発明によれば、長期間にわたり、また機械的な攪拌にかけても透明を保つソマトトロピン溶液が、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部のソマトトロピンを含み、凍結乾燥前のｐＨが約７．２ないし約８．５であるソマトトロピン組成物と、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤を含む生体相容性の希釈剤を混合することによって得られる。もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが７．２と７．８の間にある場合は、希釈剤はさらに緩衝剤を含む。それ以外の場合は、前記希釈剤はさらに、緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含むことができる。

Description

【発明の詳細な説明】生体相容性ソマトトロピン溶液発明の背景本発明は、長時間にわたって透明なままでいられ、また機械的な攪拌を施しても透明を保つ新規なソマトトロピン溶液、およびこの溶液を生成するためのキットに関する。成長ホルモンとしても知られるソマトトロピンは、多くの動物種の下垂体腺から分泌されるポリペプチドホルモンである。これらのホルモンは多くの治療において貴重なものであり、またソマトトロピンを含む組成物は、ヒトの下垂体に係る欠乏症の治療および胃腸の出血における治療において、あるいは骨折の治癒を促進し、打撲傷や他の外傷の回復を早めるために投与される。ソマトトロピンはまた、種々の薬投入装置を使ったりあるいは注射で投与することにより、動物の肉や乳の生産を促進するのに役立たせることができる。（ターマン（E.J．Turma n），「Some Effects of Pituitary Anterior Growth Factor」論文，パーデユー（Purdue）大学，１９５３年４月；マックリン（L.J．Machlin），「J．Ani m．Sci.」，第３５号，第７９４〜８００頁（１９７２年）；ケイサー等（T.R． Kasseretal.），「J．Anim．Sci.」，第５３号，第４２０〜４２６頁（１９７２年）；L.J．Machlin，「J.Dairy．Sci.」，第５６号，第５７５〜５８０頁（１９７３年）参照）。ソマトトロピンのようなタンパク質は、ほとんどの場合、溶液の形で処理し、また投与するのが好ましい。しかし、ソマトトロピンのような溶解したタンパク質は、疎水性物質の表面に吸着して副次的な反応を引き起こすことがある。このような反応として、例えば吸着したソマトトロピン分子の形が変わる「変性」がある。さらに、吸着したソマトトロピン分子が凝集して、可溶性もしくは不溶性のポリマーを形成することもある。このような凝集は、例えば溶液の濁りや、水溶液攪拌時におけるソマトトロピンタンパク質の生物学的な不活性化として明らかになる（ヘンソン等（A.F．Henson et al. ），「J．Colloid Interface Sci.」,第３２巻，第１６２頁（１９７０年）参照）。ソマトトロピンは、溶液から沈殿すると、投与には使えなくなる。このため、攪拌時に濁らず、しかも長期間にわたって透明を保持できるソマトトロピン溶液が必要とされている。発明の概要本発明によれば、長期間にわたって透明を保持し、しかも機械的な攪拌時にかけても濁らないソマトトロピン溶液が提供される。ソマトトロピン溶液は、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部の凍結乾燥したソマトトロピン組成物を含み、凍結乾燥に先立って希釈剤に溶解した組成物のｐＨは、約７．２〜約８．５の範囲である。もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物のｐＨが７．８より小さいときには、希釈剤にはＥＤＴＡ、非イオン性界面活性剤および緩衝剤を含ませる。もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物のｐＨが７．８以上のときには、希釈剤にはＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、そして場合により適当な緩衝剤、もしくは望むならば非緩衝性の薬剤を含ませる。非緩衝性の薬剤を添加する場合は、非緩衝性の薬剤と緩衝剤は併用可能ではあるが、好ましくは緩衝剤は希釈剤には含ませないのがよい。本発明はまた、このような溶液を生成するためのキットも提供する。このキットは、ソマトトロピン溶液は、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部の凍結乾燥したソマトトロピン組成物を含むバイアルを具備する。キットはまた、ＥＤＴＡと非イオン性の界面活性剤を含む生体相容性の希釈剤を含むバイアルを備える。さらに、前述のように、凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨに依存して、上述の希釈剤は緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含有する。もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物のｐＨが７．８より小さいときは、希釈剤を収めるバイアルは、さらに緩衝剤を含む。またｐＨが７．８以上のときは、バイアルは、緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含んでもよい。凍結緩衝したソマトトロピン組成物には希釈剤が添加され、得られた混合物は、攪拌することによってソマトトロピンを溶解する。発明の詳細な説明本発明は、長期間にわたって透明を保持し、しかも振盪や渦巻き混合など機械的な攪拌時にかけても濁らないソマトトロピン溶液を提供するものである。「透明」なままでいるソマトトロピン溶液とは、希釈剤に溶解した後もソマトトロピンが沈殿しない溶液のことである。これらのソマトトロピン溶液は、貯蔵後数日間、典型的には少なくとも５日間は透明を保つ。すなわち、本発明のソマトトロピン溶液は、貯蔵の際、例えば約２５℃において少なくとも５日間は透明を保つ。ソマトトロピン溶液は、これよりわずかに高い貯蔵温度でも透明を保つが、貯蔵期間は短くなる。この透明を保つソマトトロピン溶液の３６０nmにおける見かけの吸光度（Ｏ．Ｄ．３６０）は、０．０１になる。ソマトトロピン溶液は、凍結乾燥したソマトトロピン組成物を含み、この組成物の凍結乾燥前のｐＨは、少なくとも約７．２、通常は約７．２〜約８．５の範囲である。もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物のｐＨが７．８より小さいときには、ソマトトロピンの最終的な溶液を安定化させるため、希釈剤にはＥＤＴＡ、非イオン性界面活性剤および適当な緩衝剤を含ませる。もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物のｐＨが７．８以上のときには、希釈剤にはＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、そして場合により緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含ませる。非緩衝性の薬剤を添加する場合は、非緩衝性の薬剤と緩衝剤は併用可能ではあるが、好ましくは緩衝剤は希釈剤には含ませないのがよい。もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが少なくとも７．８ある場合は、緩衝剤も非緩衝性の薬剤も用いる必要はないが、得られるソマトトロピン溶液が高張性となるのを避け、等張性を調整ないし保持するため、どちらか一方を用いることもできる。もしソマトトロピンが動物に注射されるならば、これは望ましいことである。ソマトトロピン溶液に加える添加剤は、多数の因子を考慮に入れて選択する。これらの因子には、例えば、コスト、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）のＧＲＡＳリスト、オートクレーブ処理が可能か否か、化学的な安定性、ソマトトロピンとの相互作用がないかどうか、生体相容性などがある。凍結乾燥したソマトトロピン組成物は、アルギニンＨＣｌをソマトトロピンとともに溶解し、溶液のｐＨを少なくとも７．２、好ましくは７．２から８．５に調整して、溶解していない物質を瀘過ないし遠心分離によって除去することによって得られる。ソマトトロピンとアルギニンＨＣｌの溶液は、ついで業界で知られている標準的な手順を踏んで凍結乾燥される。凍結乾燥する溶液は、普通アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部のソマトトロピン組成物を含む。したがって、溶液は、好ましくは１０〜１５０mg /mlのソマトトロピンと、３０〜４５０mg/mlのアルギニンＨＣｌを含み、その最終的なｐＨは少なくとも７．２である。最も好ましくは、凍結乾燥する溶液は、３０mg/mlのソマトトロピンと、９０mg/mlのアルギニンＨＣｌを含み、その最終的なｐＨは少なくとも７．８〜８．５である。本発明の凍結乾燥したソマトトロピン組成物に用いるソマトトロピンは、天然のものでもよいし、組み替え型のウシ、ブタ、ヒト、鳥類、ヒツジあるいはウマのソマトトロピンでもよい。用いるソマトトロピンは、好ましくはブタのソマトトロピンがよい。本明細書においては、「ソマトトロピン」という語は、天然もしくは組み替え型ソマトトロピンの全長、および成長促進能力をもつその誘導体を含むものとする。また、この誘導体は、ブタのソマトトロピンのアミノ酸列から成熟したホルモンの全長における最初の７個のアミノ酸を除いたアミノ酸列を有するデルタ７ブタのソマトトロピンのようなポリペプチドホルモンの生物学的に活性な小片（フラグメント）あるいは類似物を含む（欧州特許公報第0 104 92 0（Biogen N.V.））。本明細書における「生物学的に活性」という語は、生物に投与した後その生物学的な過程に明示的な効果をもつポリペプチドを意味する。本発明の組成物に用いるソマトトロピンには、金属と会合したソマトトロピンを用いる。金属と会合したソマトトロピンは、ソマトトロピンを含む水溶液に遷移金属の塩を添加することによって生成する。遷移金属の塩は、ソマトトロピンと不溶性の錯体を形成し、ソマトトロピンを溶液から沈殿させる。金属と会合したソマトトロピンは、ソマトトロピンの分子と、Zn⁺²，Ｃｕ⁺²，Ｃｏ⁺²，Ｍｎ⁺² ，Ｆｅ⁺²あるいはＦｅ⁺³などの金属イオンを含む。これらの金属に会合したソマトトロピンは、金属イオンとソマトトロピン分子におけるアミノ酸残基のいくつかにある窒素原子の間に配位結合を含む。金属に会合したソマトトロピンは、凍結乾燥したソマトトロピン組成物の出発物質として用いられる。金属と会合したソマトトロピンが凍結乾燥されると、上述の金属は、凍結乾燥したソマトトロピン組成物中には存在するものの、もはやソマトトロピンとは会合しなくなる。本発明者らによれば、生成物中に遷移金属が存在しても、この生成物を生物に投与したとき、ソマトトロピンの生物学的活性には何の悪影響もないことが示された。本発明のソマトトロピン溶液は、凍結乾燥したソマトトロピン組成物を希釈剤に溶解し、最終的な溶液のｐＨが少なくとも約７．２、典型的には約７．２ないし約８．５、好ましくは約７．２ないし約８．２となるようにしてつくる。溶液のｐＨが約８．５より大きいと、タンパク質の分解が起こる。典型的には、希釈剤１mlに対して、凍結乾燥したソマトトロピン組成物を約０．５ないし約４０mg 、最も好ましくは約２０mg加える。凍結乾燥したソマトトロピン組成物の重量は、アルギニンＨＣｌの重量と、凍結乾燥したソマトトロピン組成物に含まれるソマトトロピンの重量を合計したものになる。もしソマトトロピン溶液の生成に使用するソマトトロピン組成物のｐＨが凍結乾燥前に７．８より小さいときには、希釈剤にはＥＤＴＡ、非イオン性界面活性剤および緩衝剤を含ませる。他方、もし凍結乾燥に先立つソマトトロピン組成物が少なくとも７．８のｐＨを有するときには、希釈剤にはＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、そして場合により緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含ませる。希釈剤が緩衝剤を含む場合は、最終的なソマトトロピン溶液のｐＨは、希釈剤のそれと等しくなる。しかし、希釈剤が緩衝剤を含まない場合は、希釈剤に溶解する凍結乾燥したソマトトロピン組成物のｐＨが、最終的なソマトトロピン溶液のｐＨを決定する。望ましくは、最終的なソマトトロピン溶液のｐＨが約７．２と約７．６の間にあるとき、希釈剤に添加されるＥＤＴＡの濃度が少なくとも１．５mM、好ましくは約１．５ないし約１０mMとなるようにする。最終的なソマトトロピン溶液のｐＨが７．６より大きいときは、希釈剤に添加されるＥＤＴＡの濃度は少なくとも１．０mM、好ましくは約１．０ないし約１０ mMがよい。希釈剤に用いるのに適当な界面活性剤には、ポリオキシエチレン−２３ラウリルエーテル（Brij 35）、Tween 80、ポリオキシエチレン−２０セチルエーテル（Brij 58）、および同じようなＨＬＢ値をもつ他のポリオキシエチレン非イオン性界面活性剤がある。このような界面活性剤は、これまでは、純粋な酵素中において、安定作用と保存作用をもつものとして知られてきた。（キタニ等（T．K itani et al.），「Eur．J．Biochem.」，第１１９号第１１７〜１８１頁（１９８１年）；プリチャーノ等（M．Pritchard et al.），「Biochem．Biophys．Res ．Commun.」，第１００号，第１５９７〜１６０３頁（１９８１年）；シーリィ等（Seely et al.），「Biochemistry」，第２１巻，第１４号，第３３９４〜３３９９頁（１９８２年）参照）。一毅的に、界面活性剤は、約０．０８ないし約２．０％の濃度をもつ。もし界面活性剤としてBrij 35を用いる場合は、Brij 35 の濃度は少なくとも０．０８％、好ましくは、約０．１ないし約０．２％である。もしTween 80もしくはBrlj 58を用いる場合は、その濃度は、好ましくは約０．１ないし約１．０％である。凍結乾燥前のソマトトロピンの濃度が少なくとも７．２あって、かつ７．８より小さい場合には、ソマトトロピン溶液の安定性を増加させるため、希釈剤に緩衝剤を添加する。この緩衝剤には、トリスＨＣｌ、リン酸塩、あるいは他の中性でホスト溶液と相容性の緩衝剤を用いる。通常、緩衝剤は、約０．２ないし０．５Ｍの濃度で存在させる。もしトリスＨＣｌを緩衝剤として用いる場合は、このトリスＨＣの濃度ｌは、通常少なくとも０．２Ｍ、好ましくは約０．２ないし約０．３Ｍとする。もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが少なくとも約７．８ある場合には、得られるソマトトロピン溶液の等張性を調整ないし維持するため、所望ならば、上述の緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を希釈剤に添加する。非緩衝性の薬剤もまた、ホスト溶液に相容性のものを用いる。そのような薬剤には、スクロース、トレハロースあるいはＮａＣｌがある。非緩衝性の薬剤は、もし存在する場合は、通常その濃度は約０．０５ないし約０．５Ｍである。非緩衝性の薬剤としてスクロースもしくはトレハロースを用いる場合は、好ましい濃度は約０．１ないし約０．３Ｍである。もしＮａＣｌを用いる場合は、その濃度は通常０．０５ないし０．１５Ｍが好ましい。本発明のソマトトロピン組成物は、上述の凍結乾燥したソマトトロピン組成物を入れたバイアルと、上述の希釈剤を入れたバイアルを備えたキットを用いて調製することができる。希釈剤は、凍結乾燥したソマトトロピン組成物に加えられ、得られた生成物は、ソマトトロピンを溶解するため振盪される。本発明のソマトトロピン組成物は、さらに処理を施したり、あるいは直接動物に投与することもできる。ソマトトロピン組成物の溶液は、通常少なくとも約５日間は室温、典型的には約２５℃で濁ることなく保存できる。この溶液はまた、先の温度よりわずかに高い温度でも貯蔵できるが、この場合その透明を保持できる期間は短くなる。これらの溶液はまた、振盪や混合などの機械的な攪拌にかけても、ソマトトロピンが溶液から沈殿することはない。これらの溶液におけるソマトトロピンは、その生物学的な活性を保持することができ、成長を促進するための従来の手法に従って動物に投与される。本発明は、以下に実施例を介してさらに詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を限定する意味で掲げるのではない。実施例以下の各実施例においては、溶液の透明度は、肉眼による検査および／または３６０nm（ソマトトロピンが何ら固有の吸収をもたない波長）における見かけの吸光度（Ｏ．Ｄ．３６０）の測定によって決定した。吸光度の決定に当っては、ソマトトロピン溶液をサンプルキュベットに入れ、Shimadzu UVU160分光光度計を用いてＯ．Ｄ．３６０を測定した。このとき参照キュベットには、ソマトトロピンを含まない希釈剤溶液を入れた。キュベットは、すべての溶液についてクォーツ製のものを用いた。以下の各実施例において、「透明」な溶液とは、Ｏ．Ｄ．３６０が０．１０未満のものを指す。実施例１Ｚｎと会合したブタのソマトトロピン（ｐＳＴ；欧州特許公告第83300803.9号に記載された手順に従って調製）３３ｇとアルギニンＨＣｌ９０ｇを殺菌した水１ｌに溶解した。ｐＨは、ＨＣｌもしくはＮａＯＨの水溶液を加えて７．８に調整し、不溶の物質は、ポリビニリデンジフロリド膜を介した濾過によって除去した。透明になった溶液は、ついで凍結乾燥する。得られた配合物（「凍結乾燥済みブタのソマトトロピン（ｐＳＴ）組成物」と呼ぶ）は、最初のｐＳＴ３３ｇから、先の濾過の工程で不溶の物質として約１０％が失われ、アルギニンＨＣｌ９０ｇ当り約３０ｇのｐＳＴを含有していた。実施例２固体のアルギニンＨＣｌ（１．９２ｇ）を、Ｚｎとともに錯体化していない、０．６３９ｇのｐＳＴを含むｐＳＴ溶液２１．６m1（ｐＨは９．８、０．４６mM の炭酸ナトリウム緩衝溶液）に添加した。アルギニンは攪拌によって溶解し、溶液のｐＨは、１ＭのＮａＯＨを滴下して７．８に調整した。得られた溶液は１ml当り約３０mgのｐＳＴと１ｌ当り９０mgのアルギニンを含んでいた。この溶液の一部（７．２ml）をピペットで３個の容積５０mlのバイアルにとり、−８０℃に冷凍して凍結乾燥した。この凍結乾燥したｐＳＴ組成物は、２０mMのトリスＨＣｌ、２mMのＥＤＴＡおよび０．１５％のBriJ 35 （pH７．８）に１ml当り２０mgの割合で容易に溶解した（溶解時間は３分未満）。得られた溶液は、目視検査の結果、透明と判定された。実施例３次の溶液を調製した。１．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，0.15% Brlj 35，pH 7.8 ２．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，0.15% Brij 35，pH 7.4 ３．2mM EDTA，0.15% Brij 35，pH 7.8 Ｚｎと会合したｐＳＴ（Ｚｎ−ｐＳＴ）、金属と錯体を形成していないｐＳＴ（非Ｚｎ−ｐＳＴ）および凍結乾燥したｐＳＴ組成物（実施例１に記載したもの）を、１ml当り５mgのｐＳＴ（凍結乾燥したｐＳＴ組成物については１ｍｌ当り２０mgのｐＳＴ）を含むよう、それぞれ上述の溶液中で２分間振盪した。この振盪の後、溶液の透明度を目視観察と３６０nmでの濁り度測定によって決定した。表１に示すように、凍結乾燥したｐＳＴ組成物だけが、これら条件下での溶解の後透明な溶液を生成した。結果は、表１に示す。実施例４次の希釈剤溶液を調製した。１．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.15 % Brij 35 ２．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.125% Brij 35 ３．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.10 % Brij 35 ４．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.08 % Brij 35 ５．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.06 % Brij 35 ６．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，O.04 % Brij 35 ７．0.2M トリスHCl，2mM EDTA，pH 7.8，0.00 % Brij 35 凍結乾燥したｐＳＴ組成物（実施例１に記載したもの）４０mgを、７本の試験管（口径１３mm，高さ１００mm）にそれぞれ計量して分け、それぞれ上述の希釈剤溶液２mlに溶解した。これらの溶液は、ついでVortex-Genieミキサーを４．５に設定し３０秒間機械的な攪拌にかけた。そして溶液の透明度を目視検査とＯ．Ｄ．３６０によって決定した。結果を表２に示す。表２に示すように、少なくとも０．０８％の濃度のBrij 35を含むソマトトロピン溶液は、これらの条件下において、希釈剤中で凍結乾燥したｐＳＴ組成物を渦巻き攪拌した後に、透明な溶液となった。他方、０．０８％未満の濃度のBrij 35を含むソマトトロピン溶液は、渦巻き混合による機械的攪拌の後には、透明な溶液とはならなかった。実施例５凍結乾燥したｐＳＴ組成物４０mgを、２ドラムのガラス製バイアルに秤量して分け、２００mMのトリスＨＣｌと０．１０％のBrij 35、ならびに次の濃度のＥＤＴＡを含み、さらに以下の最終ｐＨを有する希釈剤に溶解した。１．２．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．２２．０．２５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４３．０．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４４．１．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４５．１．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．２６．２．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４７．０．２５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．６８．０．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．６９．１．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．６１０．１．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．６１１．２．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．６１２．０．２５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．８１３．０．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．８１４．１．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．８１５．１．５０ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．８１６．２．００ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．８これらのサンプルは、ついで２５℃の恒温チャンバに入れ、掲示的に目視で透明度を調べた。結果を表３に示す。表３に示すように、ｐＨが７．２ないし７．６で、少なくとも１．５mMのＥＤＴＡ濃度を有するソマトトロピン溶液は、凍結乾燥したｐＳＴ組成物を上述の条件下で希釈剤に溶解した後少なくとも１０日間は透明を保つ。さらに、ｐＨが７．６以上で、少なくとも１．０mMのＥＤＴＡ濃度を有するソマトトロピン溶液は、凍結乾燥したｐＳＴ組成物を上述の条件下で希釈剤に溶解した後少なくとも５日間は透明を保つ。実施例６凍結乾燥したｐＳＴ組成物４０mgを、２ドラムのガラス製バイアル１６個に秤量して分けた。そして以下の希釈剤２mlをそれぞれ添加した。１． 300mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.4 ２． 200mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.4 ３ 100mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.4 ４． 50mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.4 ５． 25mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.4 ６． 200mM トリスHCl，0.15% Brij 35，2.0mM EDTA，pH 7.2 ７． 200mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.5mM EDTA，pH 7.2 ８． 200mM トリスHCl，0.15% Brij 35，1.0mM EDTA，pH 7.2 ９． 10% スクロース， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA １０． 5% スクロース， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA １１． 1% スクロース， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA １２．0.2 M NaCl， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA １３．0.1 M NaCl， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA １４．0.0 M NaCl， 0.15% Brij 35，2.0mM EDTA 希釈剤番号９−１４で再構成した後のサンプルの最終的なｐＨは、約７．８ないし７．９であった（あるいは凍結乾燥直前のｐＳＴ／アルギニン溶液の最終調整ｐＨにほぼ等しい）。これらのサンプルは、Ｏ．Ｄ．３６０nmによる濁り度の測定が終わった後、２５℃の恒温チャンバ内で６日間培養した。結果を表４に示す。表４の溶液番号１〜５に示すように、濃度が少なくとも２００mMのトリスＨＣｌは、ソマトトロピン溶液を６日間透明に保つため、０．１５％のBrij 35と１．５mMのＥＤＴＡを含むｐＨ７．４の希釈剤に用いなければならない。また、溶液番号６〜８は、ソマトトロピン溶液を６日間透明に保つためには、０．１５％のBrij 35と濃度が少なくとも２００mMのトリスＨＣｌに加えて（ｐＨは７．２）、濃度が少なくとも１．５mMのＥＤＴＡが必要であることを示している。溶液番号９〜１４は、希釈剤が０．１５％のBriJ 35と２mMのＥＤＴＡ、および１％、５％もしくは１０％のスクロース、または０．２Ｍ、０．１Ｍもしくは０．０ＭのＮａＣｌを含み、サンプルの最終ｐＨは約７．８〜７．９であるときは、ソマトトロピン溶液は６日後でも透明を保つことを示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 47/26 Ｚ 7433−4Ｃ 47/34 Ｚ 7433−4Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者リッチー，カール・ダブリュ・ジュニアアメリカ合衆国、80501 コロラド州、ロングモント、セブンティーンス・アベニュー 26 (72)発明者アウアー，ヘンリー・イーアメリカ合衆国、02172 マサチューセッツ州、ウォータータウン、テンプルトン・パークウェイ 137、アパートメント１

Claims

【特許請求の範囲】１．長期間にわたり、また機械的な攪拌にかけても透明を保つソマトトロピン溶液であって、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部の凍結乾燥したソマトトロピン組成物を含み、このソマトトロピン組成物の凍結乾燥前のｐＨは約７．２ないし約８．５であり、またこのソマトトロピンは、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤を含む希釈剤であって、もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが７．２と７．８の間にある場合は、さらに緩衝剤を含む希釈剤に溶解するソマトトロピン溶液。２．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨは少なくとも７．８であり、前記希釈剤はさらに、ホスト溶液と相容性の非緩衝性薬剤を含む請求の範囲第１項記載のソマトトロピン溶液。３．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが少なくとも７．８であり、前記希釈剤はさらに、ホスト溶液と相容性の緩衝剤を含む請求の範囲第１項記載のソマトトロピン溶液。４．前記ソマトトロピンは、天然もしくは組み替え型のウシ、ブタ、ヒト、鳥類、ヒツジあるいはウマのソマトトロピン、またはその生物学的活性を有する小片もしくは類似物である請求の範囲第１項、第２項または第３項記載のソマトトロピン溶液。５．前記ソマトトロピンはｐＳＴである請求の範囲第４項記載のソマトトロピン溶液。６．前記ｐＳＴはデルタ７ｐＳＴである請求の範囲第５項記載のソマトトロピン溶液。７．前記ソマトトロピンは金属と会合したソマトトロピンである請求の範囲第４項記載のソマトトロピン溶液。８．前記非イオン性界面活性剤は、濃度が０．０８ないし２．０％のポリオキシエチレン−２３ラウリルエーテル（Brij 35）、Tween 80、またはポリオキシエチレン−２０セチルエーテル（Brij 58）である請求の範囲第１項、第２項または第３項記載のソマトトロピン溶液。９．前記非イオン性界面活性剤は、濃度が少なくとも０．０８％のBrij35である請求の範囲第８項記載のソマトトロピン溶液。１０．前記非イオン性界面活性剤は、濃度が約０．１ないし０．２％のBrij 35 である請求の範囲第９項記載のソマトトロピン溶液。１１．前記非イオン性界面活性剤は、濃度が約０．０８ないし１．０％のTween 80またはBrij 58である請求の範囲第９項記載のソマトトロピン溶液。１２．前記緩衝剤は、濃度が０．２ないし０．５Ｍで、中性のｐＨを有する請求の範囲第１項または第２項記載のソマトトロピン溶液。１３．前記緩衝剤は、トリスＨＣｌまたはリン酸塩である請求の範囲第１２項記載のソマトトロピン溶液。１４．前記緩衝剤は、濃度が０．２ないし０．３ＭのトリスＨＣｌである請求の範囲第１３項記載のソマトトロピン溶液。１５．前記非緩衝性薬剤の濃度は約０．１ないし約０．５Ｍである請求の範囲第３項記載のソマトトロピン溶液。１６．前記非緩衝性薬剤は、スクロース、トレハロースまたはＮａＣｌである請求の範囲第１５項記載のソマトトロピン溶液。１７．前記希釈剤中のＥＤＴＡの濃度は、前記ソマトトロピン溶液のｐＨが７．６未満のときは、少なくとも１．５mMであり、他方ソマトトロピン溶液のｐＨが７．６以上のときは、少なくとも１．０mMである請求の範囲第１項、第２項または第３項記載のソマトトロピン溶液。１８．機械的攪拌にかけても透明を保ち、長期間にわたって濁らないソマトトロピン溶液を調製するためのキットであって、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり約１重量部の凍結乾燥したソマトトロピン組成物であって、凍結乾燥前のｐＨは約７．２ないし約８．５のソマトトロピン組成物を収めたバイアルと、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、ならびに、もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが７．２と７．８の間にある場合は、さらに緩衝剤を含む希釈剤を収めたバイアルを具備するキット。１９．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが少なくとも７．８であり、前記希釈剤はさらに、ホスト溶液と相容性の非緩衝性薬剤を含む請求の範囲第１８項記載のキット。２０．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨは少なくとも７．８であり、前記希釈剤はさらに、ホスト溶液と相容性の緩衝剤を含む請求の範囲第１８項記載のキット。２１．前記凍結乾燥したソマトトロピン組成物は、希釈剤１ml当たり約０．５ないし４０mg添加される請求の範囲第１８項ないし第２０項のいずれか一項記載のキット。２２．前記ソマトトロピンは、天然もしくは組み替え型のウシ、ブタ、ヒト、鳥類、ヒツジあるいはウマのソマトトロピン、またはその生物学的活性を有する小片もしくは類似物である請求の範囲第１８項ないし第２０項のいずれか一項記載のキット。２３．８．前記界面活性剤は、濃度が０．０８ないし２．０％のポリオキシエチレン−２３ラウリルエーテル（Brij 35）、Tween 80、またはポリオキシエチレン−２０セチルエーテル（Brij 58）である請求の範囲第１８項ないし第２０項のいずれか一項記載のキット。２４．前記緩衝剤は、濃度が０．２ないし０．５ＭのトリスＨＣｌまたはリン酸塩である請求の範囲第１８項または第２０項記載のキット。２５．前記非緩衝性薬剤は、濃度が０．１ないし０．５Ｍのスクロース、トレハロースまたはＮａＣｌである請求の範囲第１９項記載のキット。２６．機械的攪拌にかけても透明を保ち、長期間にわたって濁らないソマトトロピン溶液を調製する方法であって、（１）アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり凍結乾燥したソマトトロピン１重量部の割合で、アルギニンとソマトトロピンを溶解し、ｐＨを約７．２ないし約８．５の範囲に調整し、不溶の物質を瀘過または遠心分離で除去し、得られた溶液を凍結乾燥する工程と、（２）得られた凍結乾燥したソマトトロピン組成物を、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、ならびに、もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが７．２と７．８の間にある場合は、さらに緩衝剤を含む希釈剤中に溶解する工程を含む方法。２７．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨは少なくとも７．８であり、前記希釈剤は、濃度が約０．１ないし約０．５Ｍで生体相容性の非緩衝性薬剤をさらに含む請求の範囲第２６項記載の方法。２８．前記凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨは少なくとも７．８であり、前記希釈剤は、濃度が約０．２ないし約０．５Ｍで中性の、ホスト溶液に相容性の緩衝剤をさらに含む請求の範囲第２６項記載の方法。２９．前記緩衝剤は、トリスＨＣｌまたはリン酸塩である請求の範囲第２６項または第２８項記載の方法。３０．前記非緩衝性薬剤は、スクロース、トレハロースまたはＮａＣｌである請求の範囲第２７項記載の方法。３１．前記ソマトトロピンは、天然もしくは組み替え型のウシ、ブタ、ヒト、鳥類、ヒツジあるいはウマのソマトトロピン、またはその生物学的活性を有する小片もしくは類似物である請求の範囲第２６項ないし第２８項のいずれか一項記載の方法。３２．前記界面活性剤は、濃度が０．０８ないし２．０％のポリオキシエチレン −２３ラウリルエーテル（Brij 35）、Tween 80、またはポリオキシエチレン− ２０セチルエーテル（Brij 58）である請求の範囲第２６項ないし第２８項のいずれか一項記載の方法。３３．成長を促進させる方法であって、成長促進量のソマトトロピン溶液を投与する工程を含み、前記ソマトトロピン溶液は、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり凍結乾燥したソマトトロピン組成物を約１重量部の割合で含み、前記ソマトトロピン組成物は、凍結乾燥前のｐＨは約７．２ないし約８．５で、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、ならびに、もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが約７．８未満の場合は、さらに緩衝剤を含む希釈剤中に溶解される方法。３４．成長を促進させる方法であって、成長促進量のソマトトロピン溶液を投与する工程を含み、前記ソマトトロピン溶液は、アルギニンＨＣｌ２〜８重量部当たり凍結乾燥したソマトトロピン組成物を約１重量部の割合で含み、前記ソマトトロピン組成物は、凍結乾燥前のｐＨは約７．２ないし約８．５で、ＥＤＴＡと非イオン性界面活性剤、ならびに、もし凍結乾燥前のソマトトロピン組成物のｐＨが７．８以上の場合は、さらに緩衝剤もしくは非緩衝性の薬剤を含む希釈剤中に溶解される方法。