SU1531859A3 - Способ получени биологически активных мукополисахаридов - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к получению биологически активных мукополисахаридов деполимеризацией гепарина, примен емых в биологии и медицине. Изобретение позвол ет повысить выход целевого продукта до 80% и упростить способ его получени . Деполимеризацию гепарина осуществл ют в водной среде при концентрации гепарина 8-12 мас.% и температуре 15-20°С в присутствии в реакционной среде 0,03-0,07 моль нитрита натри . Предварительно ввод т в реакционную смесь сол ную кислоту до PH 2,5-2,95, а по окончании деполимеризации довод т рН реакционной смеси до 7 и осаждают целевой продукт. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к получению биологически активных мукополисахари- дов, способных специфически управл ть некоторыми этaпa ш свертывани  крови и про вл ющих более селективную, чем гепарин, активность по отношению к более ограниченному количеству факторов свертывани  крови, например к активированному фактору X или фактору Ха крови, может быть использовано в биологии и медицине.

Целью изобретени   вл етс  повышение выхода биологически активных му- кополисахаридов при упрощении способа .

Пример1.В15л дистиллированной воды при + 20° С раствор ют 1500 г гепарина (10%-ный раствор) с соотнош.нием YT-J/USF около 1 и с титром 1БР, равным 160 ui. Добавл ют

51,8 г нитрита натри , растворенного в 30 М.П дистиллированной воды (0,05 М), и снижают рН до 2,5 с помощью чистой сол ной кислоты.

Тогда происходит реакци , за ходом которой след т до установлени  отсутстви  азотистокислых ионов. Через 40 мин определ ют через равные промежутки времени наличие или отсутствие азотистокислых ионов в реакционной среде, дл  чего используют иодкрахмальную бумагу, провод  проверку каждые 5 мин. Через 60 мин реакции азотиста  кислота полностью расходуетс , и в реакционной смеси не остаетс  больше ионов N0 . Тогда значение рН довод т до 7 с помощью чистой щелочи натри , а продукты реакции выдел ютс  посредством добавлени  31 л чистого этанола (2 объема).

сл

со

00

ел

со

см

Образоваватийс  осадок отдел ют центрифугированием, промывают этанолом и высушивают в вакууме при 60°С. Получают 1200 г мукополисахаридов (MIIC) со следующими характеристиками Титр USP19 ui/мг

Титр АРТТ1 3 ui/мг

Титр Yin и Wessler 202 u/мг Содержание нитритов/ нитратов А м.д.

Молекул рна  масса полученного продукта 2000-8000. Содержание цепей имеющих сродство к ATIII, составл ет 20%. Выход продукта 80%. Продукт содержит 3% цепей гексасахаридов, 2% тетрасахаридов, 0% диcaxap щoв.

Пример 2. Провод  процесс по методике примера 1, исход  из 10%- ного раствора гепарина (100 г/л), получают MIIC с соотношени ми YW/USP, в зависимости от концентрации введенного в реакцию NaNO. Результпты приведены в таблице.

Предпочтительные MIIC соответствуют МПС, полученным с использованием 0,03-0,07 М NaNo.

Молекул рна  масса и выход получаемого продукта аналогичны примеру 1.

Пример 3. В Юл дистиллированной воды при температуре окружающей среды (15°С) раствор ют 1000 г годного дл  инъекций гепарина с титром USP 170 ш/мг и с титром YW

0

5

0

5

0

Средний молекул рньш вес менее 6000.

Процентное содержание веп1ества с молекул рным весом, превосход щим 10000, менее 1%.

П р и м е р 4. Используют реакционную смесь, содержащую в 125 мл дистиллированную воду, 10 г гепарина (8мас.%) и 380 мг (0,055 М); нитрита натри . рН снижают до 2,95 за счет добавлени  чистой сол ной кислоты и смесь перемешивают в течение примерно 45 мин.

Получают продукт деполимеризации с выходом 80% титра USP 34 ui на мг и YW 219 ед. на мг.

П р и м е р 5. Осуществл ют аналогично примеру 4, но Используют 15 г гепарина (12,0 мас.%). Получают де- полимеризованную смесь с аналогичными характеристиками полученных продуктов :

ШР32 м.е./мг.

YW226 ед./мг.

Выход продукта 80%.

Изобретение позвол ет получить биолог ическп активные мукополисахари- ды с выходом 80% при содержании реактивных цепей с 6,4 и 2 звень ми сахара до 5% (70% по известному способу ) и цепей, имею1чих сродство к ATII1 до 20% (2% по известному сгюсобу). Упрощеьп1е способа по сравнению с известным обусловлено снижением числа

160 и/мг. Добавл ют 38 г нитрита нат- 35 стадий и отсутствием контрол  за

ри  (конечна  мол рна  концентраци  0,055 М), растворенного в 200 мл воды . Значение рН сразу снижают до 2,5 использу  сол ную кислоту. Реакцию контролируют, как в примере 1, через регул рные промежутки времени (5-10 мин). Примерно через 30 мин ионы N0 больше в ,ионной среде не обнар ткиваютс . Тогда значение рН довод т до 7 с помощью раствора 5 N едкого натра: продукты реакции выдел ют путем добавлени  21 л чистого этанола (2 объема). Образовавшийс  остаток отдел ют центрифугированием, промывают зтанолом и высушивают в вакууме при 60°С, Выход продукта 80% Получан)т 780 г порощка белого цвета со следующими характеристиками:

Титр ШР Титр Yin | Титр АРТТ Сод p.K iHiie нитра Ч ;

We S S1е г

нитритов22

260

10

ui/мг и/мг ui /мг

t- 5 м . д.

0

5

0

5

Claims (1)

1. продолжительностью реакции деполимеризации , уменьшением объемов реакци- oHHoii среды, благодар  повьшенной ,ентрации renapiuia (8-12 мас.% по сравнению с 3,3 мас.%). Формула изобретени 

   Способ получени  биологически активных мукополисахаридов деполимери- запией гепарина в водной среде в присутствии продукта, образуюи1его азотистую кислоту, с последующ|-ш осаждением мукополисахаридов этилопь м спиртом, о т л и ч а ю щ и и с   тем, что, с целью повьш1ени  выхода биологически активных мукополисахаридов при упрО1цении способа, в качестве продукта, образующего азотистую кислоту . Используют нитрит натри  при концентрации его и реакцрюнной i;pe- де 0,03-0,07 моль и ;ичюли 1рризацш() (и;уще(:твл ют по1:,Г вврлени  в ре кци- (0 смесь соп,чн.)1 laii-j OT M по соз515318596

   Дани  рН 2,5-2,95 при концентрации туре 15-20°С, при этом перед осаж- гепарина 8,0-12,0 мас.% и темпера- дением довод т рН среды до 7,

   Концентраци  I Отношение титров YW

   NaNGj, Мк титрам 1БР МПС

   Т

   (140/51)2,7

   (214/26)В

   (250/19)13

   (194/12)16

   (201/9)22

   (132/6,4)19

   (110/2)44

   Величина соотношени  титров