SU1531858A3 - Способ получени пептидов - Google Patents
Способ получени пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- SU1531858A3 SU1531858A3 SU864028458A SU4028458A SU1531858A3 SU 1531858 A3 SU1531858 A3 SU 1531858A3 SU 864028458 A SU864028458 A SU 864028458A SU 4028458 A SU4028458 A SU 4028458A SU 1531858 A3 SU1531858 A3 SU 1531858A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- formation
- diketopiperazine
- pro
- met
- gly
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 13
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 21
- BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N piperazine-2,5-dione Chemical compound O=C1CNC(=O)CN1 BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VSJAPSMRFYUOKS-IUCAKERBSA-N Met-Pro-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O VSJAPSMRFYUOKS-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 3
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 acetic acid (DOPA) Chemical compound 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N Met-Pro Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 3
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 claims 2
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 claims 2
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 claims 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims 1
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010023968 cyclo(prolylprolyl) Proteins 0.000 claims 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N Met-Gly-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000006477 desulfuration reaction Methods 0.000 description 2
- 230000023556 desulfurization Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- MQASRXPTQJJNFM-JYJNAYRXSA-N Met-Pro-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MQASRXPTQJJNFM-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XOHJOMKCRLHGCY-UNQGMJICSA-N Phe-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOHJOMKCRLHGCY-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 108700031632 somatrem Proteins 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение касаетс получени пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, определ ющую биологически активный пептид или протеин. Цель изобретени - создание универсального способа. Последний включает расщепление пептида формулы H-X-PRO =пептид, где X-MET, LEU, SER, ASP, PHE
пептид - последовательность аминокислот тел чьего панкреатического полипептида, фактора секреции гормона роста, A(SO3 -)4-инсулин-А-цепь сульфонат, B(SO3 -)4-инсулин-В-цепь сульфонат или проинсулин. Процесс расщеплени ведут в слабокислой среде при 25-50°С и концентрации кислоты, например уксусной, 0,25-0,5 моль в апротонном растворителе - N-метилпирролидоне, диметилсульфоксиде, N,N-диметилформамиде, с образованием и расщеплением в момент образовани дикетопиперазинового производного с получением пептида и дикетопиперазинового H-X-PRO -остатка. Эти услови позвол ют расщепл ть белок или пептид, имеющий остаток пролина, и осуществлению этого процесса не мешает присутствие в пептидной цепи метионина, лизина. 2 з.п.ф-лы, 12 табл.
Description
Изобретение относитс к усовершенствованному способу получени пептидов , имеющих аминокислотную последовательность , определ ющую биологически активный пептид или протеин, который может найти применение в биохимии и биотехнологии.
Цель изобретени - создание универсального способа получени пептидов .
Обработку соединени Н-Х-Рго-пеп- тид провод т в среде апг)отонного растворите.ч . Примерами апротонных растворителей могут cjryjKMTb; N-метилпирролидон (ОТШ), N.N-диметилформа- мид (ДМФА), диметилсульфоксид (ДМСО), причем наиболее предпочтительным вл етс ММП.
Реакцию в апротонном растворителе провод т в слабокислых услови х с использованием уксусной кислоты. Процесс провод т в температурном интервале 25-50°С.
Выбор температуры реакции зависит от стабильности пептида и природы третьей кислоты в системе Н-Х-Рго- пептид. Предпочтительной вл етс максимально высока температура, со-
ел
со
00 ел
00
с/
ответствую1ца стабильности и природе третьего аминокислотного остатка.
Реакцию расщеплени -перио/шчески контролируют, след за ходом образовани дикетопиперазина. При необходимости реакцию прерывают и получаемый в результате расщеплени продукт выдел ют из реакционной смеси с использованием известных методов.
Выбранные пептиды, используемые в качестве моделей дл предлагаемого способа, получают методами твердофазного синтеза. Их чистоту подтверждают методом жидкостной хроматографии высокого разрешени . Перед расщеплением такие пептиды хран т в виде аморфных лиифилизированных твердых веществ. Число экспериментальны параметров измен ют (показано их вли ние на реакцию расщеплени ).
Ниже приведены оптимизированные услови с использованием органическо и водной сред соответственно и их применение на пептиде Met-Pro-Gly- -Gly-HHj, где NH обозначает присутствие й)идного фрагмента на С-окон- чании пептида.
Услови органического расщеплени
10 мг Met-Pro-Gly-Gly-NH,2. раствор ют в 1 мл №Ш, который обезвоживают хранением в течение недели над молекул рными ситами размером 4Л. Смесь выдерживают при 25 С при посто нном перемешивании и реакцию инициируют добавлением 0,33 М лед ной уксусной кислоты (НОАс). За ходом расщеплени след т по образованию метионин-пролин-дикетопиперазина и исчезновению исходного пептида, анализиру эти величины методом обрати- мофазной хроматографии. Хроматогра- фическое определение провод т с использованием колонки размером 0,46х х25 см с U1trospere в 0,1%-ной трифторуксусной кислоте (ТФК), примен в качестве элюента ацетонитриль- ный градиент. Во врем каждого анализа реакцию останавливают путем дес тикратного разбавлени 0,1%-ным раствором ТФК. Дикетопиперазиновый пик собирают и его идентичность подтверждают a rинoкиv.лoтным и масс-спек ральным аналогзом.
В табл. 1 представлены данные по уровню образовани дикетопиперазина при различных концентраци х кислоты в УСЛ1ЭВИЯХ расщеплени , проводимого при 25° С в среде . Регистрируют замет(ю гкорость реакции и устанав0
5
0
5
0
5
0
5
0
5
ливают, что она зависит от концентрации слабой кислоты. При проведении аналогичной обработки в среде ДМСО установлено уменьпение скорости расщеплени .
Как показано в табл. 2, увеличение температуры раси(еплени до 40°С в среде ДМСО приводит к повышению скорости реакции до значений, сравнимых с теми, что достигаютс в среде ЛМФА при 25°С.
Из табл. 1 следует, что оптимальна концентраци кислоты лежит в интервале 0,25 - 0,5 моль.
В табл. 3 представлены результаты исследовани вли ни температуры на серии пептидов, в которых измен ют только боковую цепь третьего остатка. Повьпценное стерическое затруднение на этом участке замедл ет скорость реакции. Однако во всех случа х отмечаетс заметное расщепление. / Важным фактором вл етс выбор апротонного растворител . В качестве растворител должно быть выбрано вещество , которое промотирует, и.чи по крайпей мере не ингибирует образование дикетопиперазина, что сопровождаетс расщеплением с образованием желаемого конечного продукта, и в то же врем оказывает минимальное деградирующее действие на пептидный продукт.
В табл. 4 приведены данные по стабильности р да протеинов и пептидов в услови х их органического расщеплени , которую определ ют методом обратимофазной жидкостной хроматографии высокого разрешени (HPLC), показано остающеес после воздсзйст- ви на выбранный протеин или пептид количество определенной реакционной среды в течение указанного времени и относительное преимущество по сравнению с ДМФА.
В табл. 3, аналогично табл. 4, представлены результаты по стабильности с использованием метионильного человеческого гормона роста.
В табл. 6 представлены результаты исследовани вли ни р да раствори- ,телей на расщепление rtet-Pro-Gly-Gly- -NH.
Как следует из представленных данных , предпочтительными растворител ми вл ютс МШ, 1МФА и /C-ICO, представл ющие собой апротонные органические растворители.
в табл. 7 приведены результаты исследовани вли ни температуры на р д пептидов при использовании в качестве растворител ДМФА или ЛМСО
Из табл. 1-7 следует, что ДМФА по сравнению с Д1СО оказывает большее вли ние на образование дикетопипера- зина и сопровождаюп|ее его расщепление , однако, это соединение оказывает более сильное деградирующее действие на протеиновый или пептидный продукт. Дл достижени оптимальных результа 18586
желательным растворителем по крайней мере дл данного применени .
Оптимальное водное расщепление Met - Pro - Gly - Gly -.NH достигаетс в результате растворени 1 мг пептида в 1М натрий-фосфатном буфере при рН 8,0. С целью ускорени расщеп24 ч под10
лени температуру в течение (Держивают равной 55 С. Степень рас- щеплени определ ют по предлагаемому способу дл органического расщеплени .
Услови водного расщеплени . Опти
тов следует установить хороший баланс g мальное водное расщепление Met - Pro Gly - Gly - NHj достигаетс в результате растворени 1 мг пептида в 1М натрий-фосфатном буфере при рН 8,0, С целью ускорени расщеплени
24 ч поддержив выборе реакционных условий в отношении конкретного пептидного или протеинового продукта.
В табл. 8 представлены данные, полученные в результате применени условий органического расщеплени на модельном пептиде, имитирующем предлагаемое соединение, в котором группа пептида представл ет собой человеческий гормон роста. В последнем две первые аминокислоты представл ют собой Phe - Pro. Таким образом, возникает возможность образовани ди- кетопиперазина из фрагмента Х-Рго
20
температуру в течение
вают равной 55 С. Степень расщеплени определ ют по предлагаемому способу дл органического расщеплени .
В табл. 9 приведены значени вы- 25 хода расщеплени при рН 7,0 с использованием в качестве субстрата пептида Met - Pro - Gly - Gly - NH.
Реакцию провод т при трех различных температурах с использованием
предлагаемого соединени и нахождени .JQ различных концентраций двух буферных
следующей формы дикетопиперазина из инициируюо;его фрагмента Phe - Pro, полученного в результате применени человеческого гормона роста.
В табл. 8 приводитс сравнение Met - Pro - Phe - Thr - He - NHj с Phe - Pro - Thr - He - NH. Полученные результаты свидетельствуют о медленном образовании дикетопиперазина из последнего вещества.
Таким образом, услови обработки предлагаемого соединени Met - Pro - человеческий гормон роста могут быть точно установлены с тем, чтобы максимизировать первичное образование дикетопиперазина и сопровождающее его расщепление при минимальном вторичном образовании дикетопиперазина. В этом отношении ММП представл ет собой наиболее желательный растворитель , поскольку в его присутствии уровень образовани дикетопиперазина значительно выше, чем в случае ДМСО, и близок к значени м, достигаемым в ДМФА на поздних стади х реакции. Учитыва повьш1енную стабильность гормона роста в NMIl по сравнению с ЛМФА (табл. 5), можно сделать вывод, что первое из указанных веществ вл етс
35
40
45
50
55
солей. Полученные результаты показывают , что фосфатный буфер вл етс предпочтительным по сравнению с ацетатным, причем наилучшие результаты обеспечивает концентраци 1,ОМ.
В табл. 10 представлены результаты исследовани вли ни рН на образование метионин-пролин-дикетопипе- разина из Met - Pro - Gly - Gly - N11 при 40°G в буферной водной среде. В качестве буферной соли примен ют фосфат натри . Полученные результаты свидетельствуют о предпочтительности щелочных значений рН. Поскольку такие нежелательные побочные реакции, как деамидирование и десульфурирова- ние, ускор ютс при повышенных значени х рН, предпочтительным вл етс рН 8.
В табл. 11 приведены резу.тьтаты изучени вли ни различных буферных солей на степень рас 1Рплени Met - Gly - Gly - m при рН 8,0 и 40°С. Предпочтительным буфером вл етс фосфат натри .
В табл. 12 представлены результаты исследовани вли ни температуры на образование метионин-пролин-дике- топиперазина из р да пептидов, в Kf
24 ч поддержи20
температуру в течение
вают равной 55 С. Степень расщеплени определ ют по предлагаемому способу дл органического расщеплени .
В табл. 9 приведены значени вы- хода расщеплени при рН 7,0 с использованием в качестве субстрата пептида Met - Pro - Gly - Gly - NH.
Реакцию провод т при трех различных температурах с использованием
различных концентраций двух буферных
солей. Полученные результаты показывают , что фосфатный буфер вл етс предпочтительным по сравнению с ацетатным, причем наилучшие результаты обеспечивает концентраци 1,ОМ.
В табл. 10 представлены результаты исследовани вли ни рН на образование метионин-пролин-дикетопипе- разина из Met - Pro - Gly - Gly - N11 при 40°G в буферной водной среде. В качестве буферной соли примен ют фосфат натри . Полученные результаты свидетельствуют о предпочтительности щелочных значений рН. Поскольку такие нежелательные побочные реакции, как деамидирование и десульфурирова- ние, ускор ютс при повышенных значени х рН, предпочтительным вл етс рН 8.
В табл. 11 приведены резу.тьтаты изучени вли ни различных буферных солей на степень рас 1Рплени Met - Gly - Gly - m при рН 8,0 и 40°С. Предпочтительным буфером вл етс фосфат натри .
В табл. 12 представлены результаты исследовани вли ни температуры на образование метионин-пролин-дике- топиперазина из р да пептидов, в Kf
торых измен ют только боковую цепь третьего остатка от N-окончани . Как и в случае исследовани , результаты которого представлены в табл. 3, сно , что усиление стерических затруднений на участке третьего остатка замедл ет реакцию. Однако во всех случа х,кроме двух, наблюлаетс заметное расщепление, Повьшение температуры от 40 до 55 С заметно увеличивает скорость и степень расщеплени всех четырех испытанных тетрапепти- дов.
Анализ продуктов, полученньпс в результате расщеплени образцов пептидов и протеинов, провод т методами анионообменной и обратимофазной хроматографии высокого разрешени . Анионообменную хроматографию провод т на Мопс Q колонке с 0,05 М трис-буфе- ра, рН 8,0, содержащего 30% ацето- нитрила. Элюирование провод т с применением линейного градиента хлористого натри . Анализ методом обратимо- фазной хроматографии осуществл ют на колонке с Zorbax Cg, размер пор 150 Л с использованием ацетонитриль- ного градиента в 0,1 М фосфате аммони при 45 С и рН 7,0.
Предлагаемый способ позвол ет расщепл ть белок или пептид, имеющий остаток пролина, при этом его осуществлению не мешает присутствие в пептидной цепи метионина и лизина.
Образование метионин-пролин-дикетопиперазика из Met - Pro - Gly - NH, при 25°С
Claims (3)
- Формула изобретени Способ получени пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, определ ющую биологически активный пептид или протеин путем расщеплени природных пептидов, отличающийс тем, что, с целью создани универсального способа, соединени общей формулы:Н-Х-Рго-пептид,50505где X - Met, Leu, Ser, Asp, Phe, пептид - последовательность аминокислот тел чьего панкреатического полипептида, фактора секреции гормона роста, A(SO)4 -инсулин-А-цепь сульфонат, В (SO)-инсулин-В-цепь сульфонат или проинсулин, подвергают расщеплению в слабокислых услови х при 25-50 с и концентрации кислоты 0,25 - 0,5 моль в апротон- ном растворителе с образованием и расщеплением в момент образовани дикетопиперазинового производного с получением пептида и дикетопиперазинового Н-Х-Рго-остатка.
- 2.Способ по п. 1,отличаю- щ и и с тем, что в качестве апро- тонного растворител используют N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, N.N-диме тилформамид.
- 3.Способ по п. 1,отличаю- щ и и с тем, что в качестве кислоты используют 0,33 М уксусн то кислоту .Таблица 1Образование метионин-пролин-дикетопиперазина из Met - Pro - Gly - NH, при 4П°СОбразование метионин-пролин-дикетопиперазина в 1М уксусной кислоте (ДОФА)ПептидСодержание компонента, %, при температуре, С100 42 79 100Таблица2Таблица 3Таблица 437 32 О 36124 52 98 100117 90 89 100119 86 86 96Тел чий панкреатический полипептид РР (Met - Pro -).GPF - Фактор секреции гормона роста (Met - Pro - ).A(S07)4 - инсулин-А-цепь 5-сульфонат1В(80 Г)2 -инсулин-В-цепь S-сульфонат jОтносительный процент остатка, определенный по отношению к необработанному внешнему контролю.Таблица 5Определ ют методом обратимофазной HPLC. Определ ют методом анионообменной HPLC.Зависимость расходовани Met - Pro - Gly - Gly - NH от образовани Met - Pro - дикетопиперазинаКоличество оставшегос исходного вещества. Определ ют при ДО С.Продолжение табл.4Таблица 6Та б л и ц а 7Образование метионин-пролин-дикетопиперазина в двух выбранных растворител х в присутствии 1М НОАс при 40°С.ТаблицаВли ние различных буферных систем и их концентраций на образование метионин-пролин-дикетопиперазина из Met - Pro - Gly - Gly - NH при рН 7,0Образование метионин-пролин-дикетопиперазина при 100°С измер ют через 2 ч, образование этого продукта при 40 и 25 С - через 72 ч.-г--т2415153185816ТаблицаВли ние значени рН на образование метионин-пролин- дикетопиперазина в 1,0 М фосфата натри приIТаблицаВли ние различньк буферных солей на образование пролин-дикетопиперазинаиз Met - Pro - Gly - r,ly - NHj pH 8,0 и 40°C35 IОбразование метионин-пролин-дикетопиперазина при разных температурах в 1,0 М фосфатном буфере при рН 8,01011приТаблица 12
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US79183785A | 1985-10-28 | 1985-10-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1531858A3 true SU1531858A3 (ru) | 1989-12-23 |
Family
ID=25154940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU864028458A SU1531858A3 (ru) | 1985-10-28 | 1986-10-27 | Способ получени пептидов |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0220958A3 (ru) |
| JP (1) | JPS62106100A (ru) |
| KR (1) | KR890004352B1 (ru) |
| CN (1) | CN86107569A (ru) |
| AU (1) | AU6441486A (ru) |
| DK (1) | DK512286A (ru) |
| HU (1) | HUT41811A (ru) |
| IL (1) | IL80422A0 (ru) |
| NZ (1) | NZ218088A (ru) |
| PT (1) | PT83613B (ru) |
| SU (1) | SU1531858A3 (ru) |
| ZA (1) | ZA868168B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2506273C2 (ru) * | 2007-07-09 | 2014-02-10 | Импиэриэл Инноувейшнс Лимитид | Аналог панкреатического полипептида человека (варианты), фармацевтическая композиция на его основе, способ лечения ожирения или диабета, способ снижения аппетита, уменьшения поглощения пищи или снижения потребления калорий и способ косметического снижения массы посредством указанного аналога |
Families Citing this family (81)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648254A (en) * | 1988-01-15 | 1997-07-15 | Zymogenetics, Inc. | Co-expression in eukaryotic cells |
| JPH04503154A (ja) * | 1988-11-07 | 1992-06-11 | ルニベルシー・ド・ルタ・ア・リージュ | 変型ヒト成長ホルモン |
| US5126249A (en) * | 1989-05-09 | 1992-06-30 | Eli Lilly And Company | Enzymatic removal of a protein amino-terminal sequence |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| NZ237857A (en) | 1990-04-24 | 1992-05-26 | Lilly Co Eli | Polypeptide compounds with growth hormone releasing factor activity |
| US5378823A (en) * | 1990-11-29 | 1995-01-03 | Institut National De La Recherche Agronomique-I.N.R.A. | Nucleic acids encoding type I interferon variants |
| FR2669931B1 (fr) * | 1990-11-29 | 1995-03-31 | Transgene | Nouveaux variants derives des interferons-alpha et leur procede de production. |
| US6428771B1 (en) | 1995-05-15 | 2002-08-06 | Pharmaceutical Discovery Corporation | Method for drug delivery to the pulmonary system |
| PT1196430E (pt) * | 1999-06-29 | 2012-04-18 | Mannkind Corp | Purificação e estabilização de péptidos e proteínas em agentes farmacêuticos |
| US9006175B2 (en) | 1999-06-29 | 2015-04-14 | Mannkind Corporation | Potentiation of glucose elimination |
| CA2774959C (en) | 2000-08-04 | 2016-05-31 | Dmi Biosciences, Inc. | Method of using diketopiperazines and composition containing them |
| WO2003080149A2 (en) | 2002-03-20 | 2003-10-02 | Mannkind Corporation | Inhalation apparatus |
| CA2523467C (en) | 2003-05-15 | 2021-10-26 | Dmi Biosciences, Inc. | Treatment of t-cell mediated diseases |
| US20080090753A1 (en) | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
| DE602005024413D1 (de) | 2004-08-20 | 2010-12-09 | Mannkind Corp | Katalyse der diketopiperazinsynthese |
| ES2540886T3 (es) | 2004-08-23 | 2015-07-14 | Mannkind Corporation | Sales de dicetopiperazina para la administración de fármacos |
| KR101557502B1 (ko) | 2005-09-14 | 2015-10-06 | 맨카인드 코포레이션 | 결정질 미립자 표면에 대한 활성제의 친화력의 증가를기반으로 하는 약물 제제의 방법 |
| US8084420B2 (en) | 2005-09-29 | 2011-12-27 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| US7713929B2 (en) | 2006-04-12 | 2010-05-11 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| ES2572952T3 (es) | 2005-11-07 | 2016-06-03 | Indiana University Research And Technology Corporation | Análogos de glucagón que muestran solubilidad y estabilidad fisiológicas |
| AU2007216966C1 (en) | 2006-02-22 | 2014-03-20 | Mannkind Corporation | A method for improving the pharmaceutic properties of microparticles comprising diketopiperazine and an active agent |
| CA2649109A1 (en) | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Biodel, Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| WO2008086086A2 (en) | 2007-01-05 | 2008-07-17 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological ph buffers |
| CA2677932A1 (en) | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon/glp-1 receptor co-agonists |
| MX2010004298A (es) | 2007-10-30 | 2010-05-03 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1. |
| CA2707861A1 (en) | 2007-10-30 | 2009-05-07 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon antagonists |
| WO2009099763A1 (en) | 2008-01-30 | 2009-08-13 | Indiana University Research And Technology Corporation | Ester-based peptide prodrugs |
| WO2009146320A1 (en) | 2008-05-27 | 2009-12-03 | Dmi Life Sciences, Inc. | Therapeutic methods and compounds |
| US8485180B2 (en) | 2008-06-13 | 2013-07-16 | Mannkind Corporation | Dry powder drug delivery system |
| PL2293833T3 (pl) | 2008-06-13 | 2016-08-31 | Mannkind Corp | Inhalator proszkowy i układ do dostarczania leku |
| PE20100255A1 (es) | 2008-06-17 | 2010-04-25 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1 |
| CN102105159B (zh) | 2008-06-17 | 2015-07-08 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 基于gip的混合激动剂用于治疗代谢紊乱和肥胖症 |
| US8450270B2 (en) | 2008-06-17 | 2013-05-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability in physiological pH buffers |
| EP2609954B1 (en) | 2008-06-20 | 2021-12-29 | MannKind Corporation | An interactive apparatus for real-time profiling of inhalation efforts |
| TWI532497B (zh) | 2008-08-11 | 2016-05-11 | 曼凱公司 | 超快起作用胰島素之用途 |
| CN102256992B (zh) | 2008-12-19 | 2015-04-22 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 胰岛素类似物 |
| EP2376521B1 (en) | 2008-12-19 | 2016-04-13 | Indiana University Research and Technology Corporation | Amide-based insulin prodrugs |
| BRPI0922969A2 (pt) | 2008-12-19 | 2019-09-24 | Univ Indiana Res & Tech Corp | pró-farmaco de amida baseado na superfamília de glucagon peptídeo. |
| US8314106B2 (en) | 2008-12-29 | 2012-11-20 | Mannkind Corporation | Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents |
| US9060927B2 (en) | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
| EP2405963B1 (en) | 2009-03-11 | 2013-11-06 | MannKind Corporation | Apparatus, system and method for measuring resistance of an inhaler |
| KR20180079458A (ko) | 2009-06-12 | 2018-07-10 | 맨카인드 코포레이션 | 한정된 비표면적을 갖는 디케토피페라진 마이크로입자 |
| ES2751107T3 (es) | 2009-06-12 | 2020-03-30 | Mannkind Corp | Micropartículas de dicetopiperazina con contenido de isómeros definido |
| IN2012DN00377A (ru) | 2009-06-16 | 2015-08-21 | Univ Indiana Res & Tech Corp | |
| US9016147B2 (en) | 2009-11-03 | 2015-04-28 | Mannkind Corporation | Apparatus and method for simulating inhalation efforts |
| EP2512503A4 (en) | 2009-12-18 | 2013-08-21 | Univ Indiana Res & Tech Corp | COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR |
| MX2012008603A (es) | 2010-01-27 | 2013-01-25 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Conjugados de antagonista de glucagon-agonista de gip y composiciones para el tratamiento de desordenes metabolicos y obesidad. |
| CA2797089A1 (en) | 2010-05-13 | 2011-11-17 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting g protein-coupled receptor activity |
| ES2661228T3 (es) | 2010-05-13 | 2018-03-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Péptidos de la superfamilia de glucagón que muestran actividad de receptor nuclear de hormona |
| WO2011159895A2 (en) | 2010-06-16 | 2011-12-22 | Indiana University Research And Technology Corporation | Single chain insulin agonists exhibiting high activity at the insulin receptor |
| CA2801936C (en) | 2010-06-21 | 2021-06-01 | Mannkind Corporation | Dry powder drug delivery system and methods |
| RU2580317C2 (ru) | 2010-06-24 | 2016-04-10 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Пептидные пролекарства, принадлежащие к суперсемейству амид-содержащих глюкагонов |
| JP5912112B2 (ja) | 2010-06-24 | 2016-04-27 | インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | アミド系インスリンプロドラッグ |
| WO2012033792A2 (en) | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Dmi Acquisition Corp. | Treatment of diseases |
| WO2012088116A2 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting gip receptor activity |
| EP2694402B1 (en) | 2011-04-01 | 2017-03-22 | MannKind Corporation | Blister package for pharmaceutical cartridges |
| WO2012174472A1 (en) | 2011-06-17 | 2012-12-20 | Mannkind Corporation | High capacity diketopiperazine microparticles |
| BR112013032717A2 (pt) | 2011-06-22 | 2017-01-24 | Univ Indiana Res & Tech Corp | coagonistas do receptor de glucagon/glp-1 |
| DK2723367T3 (en) | 2011-06-22 | 2017-07-17 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Glucagon / GLP-1 receptor-CO-AGONISTS |
| AU2012323305B2 (en) | 2011-10-10 | 2017-07-27 | Ampio Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of degenerative joint disease |
| MY172699A (en) | 2011-10-10 | 2019-12-10 | Ampio Pharmaceuticals Inc | Implantable medical devices with increased immune tolerance, and methods for making and implanting |
| EP2776053A1 (en) | 2011-10-24 | 2014-09-17 | MannKind Corporation | Methods and compositions for treating pain |
| AU2012328605B9 (en) | 2011-10-28 | 2017-08-03 | Ampio Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of rhinitis |
| WO2013074910A1 (en) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting glucocorticoid receptor activity |
| EP2793932B1 (en) | 2011-12-20 | 2018-10-03 | Indiana University Research and Technology Corporation | Ctp-based insulin analogs for treatment of diabetes |
| TWI599575B (zh) | 2012-06-21 | 2017-09-21 | 印第安納大學科技研究公司 | 表現ｇｉｐ受體活性之胰高血糖素類似物 |
| AU2013289957B2 (en) | 2012-07-12 | 2017-02-23 | Mannkind Corporation | Dry powder drug delivery systems and methods |
| EP3395358B1 (en) | 2012-09-26 | 2019-11-06 | Indiana University Research and Technology Corporation | Insulin analog dimers |
| EP2911690A1 (en) | 2012-10-26 | 2015-09-02 | MannKind Corporation | Inhalable influenza vaccine compositions and methods |
| JP6538645B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-07-03 | インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | インスリン‐インクレチン複合物 |
| US9808454B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-11-07 | Ampio Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for the mobilization, homing, expansion and differentiation of stem cells and methods of using the same |
| KR102499439B1 (ko) | 2013-03-15 | 2023-02-13 | 맨카인드 코포레이션 | 미세결정성 디케토피페라진 조성물 및 방법 |
| MX2020009878A (es) | 2013-07-18 | 2022-07-27 | Mannkind Corp | Composiciones farmaceuticas en polvo seco estables al calor y metodos. |
| JP2016530930A (ja) | 2013-08-05 | 2016-10-06 | マンカインド コーポレイション | 通気装置及び方法 |
| US10307464B2 (en) | 2014-03-28 | 2019-06-04 | Mannkind Corporation | Use of ultrarapid acting insulin |
| US9956217B2 (en) | 2014-08-18 | 2018-05-01 | Ampio Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of joint conditions |
| WO2016049174A1 (en) | 2014-09-24 | 2016-03-31 | Indiana University Research And Technology Corporation | Lipidated amide-based insulin prodrugs |
| US10232020B2 (en) | 2014-09-24 | 2019-03-19 | Indiana University Research And Technology Corporation | Incretin-insulin conjugates |
| US10561806B2 (en) | 2014-10-02 | 2020-02-18 | Mannkind Corporation | Mouthpiece cover for an inhaler |
| WO2016209969A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Ampio Pharmaceuticals, Inc. | Use of low molecular weight fractions of human serum albumin in treating diseases |
| CN106855477A (zh) * | 2015-12-09 | 2017-06-16 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于埃德曼降解的蛋白质c-末端肽富集方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2921216A1 (de) * | 1979-05-25 | 1980-12-04 | Teschemacher Hansjoerg | Pharmakologisch aktive peptide |
| IL60184A (en) * | 1979-05-31 | 1984-05-31 | Schering Ag | Process for the specific cleavage of protein sequences from proteins |
| WO1986007380A1 (en) * | 1985-06-04 | 1986-12-18 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Process for preparing polypeptide |
-
1986
- 1986-10-24 PT PT83613A patent/PT83613B/pt unknown
- 1986-10-27 DK DK512286A patent/DK512286A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-10-27 KR KR1019860008982A patent/KR890004352B1/ko active IP Right Grant
- 1986-10-27 AU AU64414/86A patent/AU6441486A/en not_active Abandoned
- 1986-10-27 IL IL80422A patent/IL80422A0/xx unknown
- 1986-10-27 ZA ZA868168A patent/ZA868168B/xx unknown
- 1986-10-27 SU SU864028458A patent/SU1531858A3/ru active
- 1986-10-27 EP EP86308337A patent/EP0220958A3/en not_active Withdrawn
- 1986-10-27 HU HU864501A patent/HUT41811A/hu unknown
- 1986-10-28 CN CN198686107569A patent/CN86107569A/zh active Pending
- 1986-10-28 JP JP61258085A patent/JPS62106100A/ja active Pending
- 1986-10-28 NZ NZ218088A patent/NZ218088A/xx unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Шредер 3. , Любке К. Пептиды. : М.: МИР, 1967. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2506273C2 (ru) * | 2007-07-09 | 2014-02-10 | Импиэриэл Инноувейшнс Лимитид | Аналог панкреатического полипептида человека (варианты), фармацевтическая композиция на его основе, способ лечения ожирения или диабета, способ снижения аппетита, уменьшения поглощения пищи или снижения потребления калорий и способ косметического снижения массы посредством указанного аналога |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ218088A (en) | 1989-01-27 |
| CN86107569A (zh) | 1987-07-08 |
| ZA868168B (en) | 1988-06-29 |
| JPS62106100A (ja) | 1987-05-16 |
| DK512286A (da) | 1987-04-29 |
| KR870004056A (ko) | 1987-05-07 |
| EP0220958A3 (en) | 1989-01-25 |
| IL80422A0 (en) | 1987-01-30 |
| EP0220958A2 (en) | 1987-05-06 |
| KR890004352B1 (ko) | 1989-10-31 |
| DK512286D0 (da) | 1986-10-27 |
| HUT41811A (en) | 1987-05-28 |
| PT83613A (en) | 1986-11-01 |
| AU6441486A (en) | 1987-04-30 |
| PT83613B (en) | 1988-11-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1531858A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| Goldberger et al. | The reversible masking of amino groups in ribonuclease and its possible usefulness in the synthesis of the protein | |
| US4782139A (en) | Selective chemical removal of a protein amino-terminal residue | |
| US4086196A (en) | Parathyroid hormone | |
| US5473049A (en) | Process for obtaining proinsulin possessing correctly linked cystine bridges | |
| Levy et al. | The synthesis of triaminoacyl-insulins and the use of the t-butyloxycarbonyl group for the reversible blocking of the amino groups of insulin | |
| Foster et al. | A new, improved technique for automated sequencing of non-polar peptides | |
| JPH0570433B2 (ru) | ||
| Huberman et al. | A neuropeptide with molt-inhibiting hormone activity from the sinus gland of the Mexican crayfish Procambarus bouvieri (Ortmann) | |
| JPH01235600A (ja) | カルボキシル末端ペプチドの分取方法 | |
| EP0127108A1 (en) | Process for preparing polypeptides | |
| Yumoto et al. | Studies on aspartase. VI. Trypsin-mediated activation releasing carboxy-terminal peptides | |
| JPS63284196A (ja) | 選択的ペプチド結合開裂法 | |
| JPH03503958A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチドの製造方法 | |
| Antorini et al. | Hydroxylamine-induced cleavage of the asparaginyl–glycine motif in the production of recombinant proteins: the case of insulin-like growth factor I | |
| DE69130530D1 (de) | Methode zur bildung eines aminosäurehydantoinderivats unter verwendung eines n-substituierten ketenimins als aktivator | |
| Finlayson | The compositions of some peptides produced by an enzymic hydrolysis of wheat gliadin | |
| Hartley | Derivatives of bacillus amyloliquefaciens ribonuclease (barnase) isolated after limited digestion by carboxypeptidases A and B | |
| HU185416B (en) | Process for preparing insuline | |
| JPH05339290A (ja) | 変性ヒトインシュリン | |
| JPH0586400B2 (ru) | ||
| JP2632526B2 (ja) | 新規ペプチド | |
| KASUYA et al. | THE CHEMICAL STRUCTURE OF THE TUBERCULIN ACTIVE PEPTIDE I. ISOLATION OF β-ALANINE AS THE N-TERMINAL RESIDUE OF THE ACTIVE PEPTIDE | |
| Gattner et al. | Trypsin catalyzed peptide synthesis: modification of the B-chain C-terminal region of insulin | |
| RU2081122C1 (ru) | Способ выделения и очистки инсулина или его биотехнологических предшественников |