SU1367839A3 - Способ очистки липосом - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине . Цель изобретени  - повышение стабильности целевого продукта. Ионообменную смолу ввод т в колбу с липо- сомной суспензией и перемешивают. Смесь фильтруют и чистую липосомную суспензию лиофилизируют. Способ позвол ет получить высококонцентрированные липосомные суспензии, которые не подвергаютс  осаждению. 1 табл.

Description

СО

00 а

vj

00

оо

сн

Изобретение относитс  к медицине, в частности к способам получени  и очистки фармацевтических составов (лиофильные липосомы).

Целью изобретени   вл етс  повышение стабильности липосомы за счет очистки липосомной суспензии с помощью ионообменных смол.

Способ осуществл етс  следующим образом.

Ионообменную смолу, например, из группы стирола, дивинилбензола, акриловой и метакриловой кислоты ввод т непосредственно в колбу с липосомной суспензией, после чего,содержимое колбы перемешивают 10-60 мин. Затем фильтруют через фильтр из спекшегос  стекла, способного -зйдержи- вать ионообменную смолу, на которой адсорбировалс  незахваченньм препарат . Получаем чистую липосомную суспензию , которую затем лиофилизируют. Предложенный способ очистки позвол ет получать высококонцентрированные липосомные суспензии (до ,5 мг/мл хлористоводородного доксорубицина),которые не могут быть получены посредством , хроматографии на колонке с молекул рным ситом (максимум 0,3мг/мл Кроме того, данна  липосомна  суспензи   вл етс  б.олее устойчивой и не подвергаетс  осаждению в отличие от суспензий, полученных ультрацент ри- фугированием.

и мер 1. В колбе дл  омылени  раствор ют в хлороформе следующее количество липидов: 1,5 г  ичного лецитина, 0,4 г холестерина и 0,2 дицетилфосфата, и вьшаривают в услови х вакуума до сухого состо ни , Раствор хлористоводородного доксорубицина (с концентрацией 10 мг/мл) и 0,007 Н буферный раствор фосфата выливают в колбу, после чего полученную суспензию подвергают ультразвуковому перемешиванию в течение 1 мин. Суспензию отстаивают 30 мин под слоем азота при комнатной температуре . Затем в нее добавл ют 2 г смолы, предварительно активированной в муравьинокислом натрии и полученной посредством полимеризации метил- метакрилата, образовавшего поперечную св зь с дивинилбензолом, обладающей функциональностью карбоновой кислоты и имеющей макропористую структуру, что позвол ет ее использовать также в гидрофобных растворах , имеющих фирменное наименование IRC 50 (сухой вес эквивалентен 5 мл наполненной смолы). Содержимое колбы перемешивают 30 мин, после чего суспензию фильтруют через пористый лист, размер G 1. Липосомы, размер которых измен етс  от 0,5 до 2 мк и содержащие около 60% начального количества доксорубицина,стабилизируют посредством лиофилизации.

П р и м е р 2. Используют те же количества липидов и те же услови  проведени  растворени , что в приме- ре 1. Затем в колбу добавл ют раствор доксорубицина и перемешивают полученную суспензию в течение 10 мин дл  получени  липосом с размером менее 1 мк. Поскольку размер липосом был неоднороден, примен ют негранулированную смолу, котора  также выполн ет и функцию сита. Поэтому добавл ют 10 мл смолы с торговым знаком Дауэкс-50-Х4 (100-200 меш),пред- варительно активированную в муравьинокислом натрии. После фильтровани  бьша получена суспензи , содержаща  липосомы с размером 0,2-0,8 мк и , включающа  75% исходного доксорубици-- на. Липосомы стабилизируют лиофили- зацией. . , .

Пример 3. Раствор 5-фторура- цила с концентрацией 10 мг/мл в 0,007 Н буферном растворе фосфата при рН 8 выливают в колбу дл  омылени ,со- держащую также липидную фазу, полученную аналогично примеру 1. Полученную суспензию обрабатывают по примеру 1 с использованием 10 мл фильтрующей смолы, имеющей фирменное наименование Амберлит IRA 400 (С1), предварительно активированной в хлоргидра- те. Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

П р и м е р 4. Липосомы готов т аналогично примеру 1, использу  следующие липиды: 1,5 г  ичного лецитина , 0,4 г холестерина и 0,2 г сте- ариламина. Дл  очистки использовали 10 мл смолы Дауэкс-1 (50-100 меш), которую предварительно активировали. Полученные липосомы стабилизировали лиофилизацией.

П р и м е р 5. Все операции про- вод т аналогично примеру 1, за исключением того, что дл  очистки исполь- зуют 15 г смолы Дауэкс-50ЫХ (100 - 200 меш), при этом врем  перемешивани  увеличивали до 40 мин. После

3

фильтровани  через фильтр из спекшегос  стекла G 1 была получена суспе зи  липосом, содержаща  около 50% первоначального количества доксоруби цина. Липосомы стабилизировали лио- филизацией.

Пример 6. Все операции провод т аналогично примеру 1, за исключением того, что дл  очистки используют IRC 50 (эквивалентную 5 г сухой смолы), перемешивание провод т 1ч, после чего липосомную суспензию фильтруют на фильтре из спекшегос  стекла с последующей лиофилизацией продукта.

Предложенный способ  вл етс  менее дорогосто щим (за счет экономии времени и материала) по сравнению с известным. Кроме того, он пригоден дл  промьшшенного использовани . Полученный продукт более концентрирован (в соотношении не менее 1:20 к продукту, полученному с применением гель-фипьтрации), в процессе использовани  гель-фильтрации продукт получают в 20 раз более разбавленный ,

более стабилен, что очень важно дл  промьшшенного применени  и обусловлено тем фактом, что диализ, используемый в известном способе, требует не менее 24 ч. В данном способе процесс осуществл етс  за 30 мин. Поскольку данный продукт меньшее врем  остаетс  в растворе, то он более стабилен.

Сведени  о стабильности и других характеристик липосом, а также условий обработки приведены в таблице.

15Фор мула изобретени 

Способ очистки липосом, включающий обработку препаратов с последующей лиофилизацией, отличающийс  тем, что, с целью повышени  стабильности целевого продукта, обработку провод т встр хиванием в течение 10-60 мин с ионообменной смолой: Амберлит IRC 50 или Дауэкс-50, или Амберлит IRA 400 (С1), или Дауэкс-1 или Даузкс-50ЫХ, а затем фильтруют через стекл нный .

„- ё § «I

а u ID nan

и ё н - V о 9 ж о, - ш с; S п а «

«

  n «

n

о

vO

s

о

о

1Л

см W1

о « Ри о

о м

о

U-I

гч

I о

о, ь

I

ш о

., . но, о ш к о с;

П П,  ) g о

а; и ш

CQ

о S ш «1 к it It &

СЧ

м

1Л

г:2

Й

о н

о п

о

п

S

S

и

йй

I 5Й

о

о

о о

о

55  . Si

о & в

о о ts

о о ч

о

00

око S о к с( сх

г

г о о

о

00

о

S

1Л

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ очистки липосом, включающий обработку препаратов с последующей лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности целевого продукта, обработку проводят встряхиванием в течение 10-60 мин с ионообменной смолой: Амберлит IRC = 50 или Дауэкс-50, или Амберлит IRA = 400 (С1), или Дауэкс-1, или Дауэкс-50ИХ, а затем фильтруют через стеклянный фильтр. 'ι

   ю и α X 5 4! й и ф Ф а ф t? Ф ф X X h Ф ж Я X д и X Ь Ф tt 9 и Ф h Ф х а ф со ф о ЕС Ф X X Ф о. (0 и CJ

   μ х о X X о *с о О. *4· a tn а> 1 ф I з ю о • X Ού «С м < н

   Продолжение таблицы

   I ф и

   ф о ф о к X X л и я о ¢- ф •к X к V о X S X ь ф ti СП и X О К О о а е и X с

   <4

   X

   § я a 1 <4 Й ф ί- а X а ο 3 X PQ X X

   X X X X Ж X а О о S ·€>

   о Ф 1 η Ф X ь чох ю О Ф о X я

   доксоХолесте- рубицин

   Рин 3 2.1