SE445171B - Forfarande for framstellning av en liposomsuspension som innehaller ett lekemedel - Google Patents

Description

8000443-5 kolven, som innehåller återstoden som tunt skikt, och det hela underkastas därefter under en tidrymd från 10 sekunder till några timmar för en mekanisk eller ultraljudsskakbehandling.

Det därvid erhållna dishomogena skiktet, i allmänhet betecknat liposomsuspension, måste renas frân_fysikaliskt icke-bundet läkemedel. 2)' Separation av liposomerna från.fysikaliskt icke-bundet läkemedel: Detta förfarande genomföres vanligen genom eluering på en kromatografisk kolonn under användning av hartser, som uteslutande besitter molekylsiktfunktion, såsom Sepharoseßfl 2B, 4B eller 6B eller liknande.

Liposomerna utvinnes först under det att det fria läkemedlet hållas kvar av hartset.

Därefter följer en ultracentrifugeringsbehandling vid 100 000 g och därefter sker tvättning, alltid genom ultracentrifugering med buffrad lösning. En annan använd metod är dialys.

Föreliggande uppfinning avser ett nytt förfarande för rening av det dishomogena, som liposomsuspension kända skiktet såväl med hjälp av flytande som även fasta,syntetiska eller organiska reaktionsbenägna polymerer, som kan användas som jonbytare, exempelvis styren, divinylbensen, akryl- eller metakrylsyra, vilka är kända som jonbytarhartser. a Den exakta mängden av ett eller flera av de ovan anförda hart- serna införes direkt i kolven, vilken innehåller den liposom- suspension som skall renas, varpå den skakas lO - 60 minuter.

Efter filtrering genom ett sinterglasfilter, som innehåller jon- bytarhartset med absorberat fysikaliskt icke-bundet läkemedel, erhålles den rena liposomsuspensionen, som kan frystorkas. Detta förfarande för rening av liposomsuspensionen med jonbytarhartser uppvisar den stora fördelen att högkoncentrerade liposomsuspen- sioner (upp till 5 mg/ml Doxorubicin.HCl) kan upprätthållas som icke kunde upprätthållas genom kromatografi på en molekylsikt- kolonn (maximalt 0,3 mg/ml). Den sålunda erhållna liposomsuspen- 8000443-5 sionen är mycket stabil och har icke tendens till sedimentation, såsom är fallet för sådana som erhållits genom ultracentrifuge- ring.

Samma resultat uppnås om man istället för jonbytarhartser an- vänder polymerer och sampolymerer utan någon specifik kemisk funktion, som vanligtvis, men icke uteslutande, reagerar på grund av Van der Waals-krafter och i allmänhet är kända som adsorberande hartser. Dessa hartser kan tack vare polaritets- skillnaden mellan de hydrofoba substanser, som bildar liposom- höljena, och läkemedlen med mer eller mindre hydrofil karaktär användas vid reningen av liposomsuspensioner.

Den kemiska slutstabiliseringen uppnås genom frystorkning av liposomsuspensionen.

Uppfinningen âskådliggöres närmare medelst följande exempel.

Exempel l.

I en förtvålningskolv löstes följande andelar av lipider i klo- roform och indunstades i vakuum till torrhet: 1,5 gram äggleci- tin, 0,4 gram kolesterin och 0,2 gram dicetylfosfat. En lösning av doxorubicinhydroklorid (i en koncentration av lO mg/ml) i fosfatbuffert 0,007N, hälldes i kolven och blandningen behand- lades under l minut med ultraljud. Suspensionen fick stå i 30 minuter under kväve vid rumstemperatur. 2 gram av en metylmet- akrylat-divinylbensenpolymer, som tidigare aktiverats i natrium- form, med fria karboxylgrupper och makroretikulär struktur, som tillåter dess användning även i hydrofoba lösningar, som kan er- hållas i handeln under beteckningen IRC-Sóškrån firma Rohm & Haas, tillsattes därefter (mängden hänför sig till torr massa och motsvarar 5 ml svälltharts).

Kolven skakades ungefär 30 minuter och därefter filtrerades suspensionen genom en glasfritta.

De på detta sätt erhållna liposomerna med olika storlek av 0,5 - ... .-._______....._.___..-.-_.___ 8000443-5 2/lm och med en halt av omkring 60 procent av utgângsmängden av doxorubicin stabiliserades genom frystorkning.

Exempel 2.

Samma förfaringssätt som i exempel l användes, varvid samma an- delar av lipider och doxorubicin användes. Ultraljudskaktiden uppgick dock upp till 10 minuter för att man skulle erhålla liposomer med en storlek av mindre än l/Mm.

Eftersom liposomerna icke uppvisade någon fullständigt homogen storlek användes ett icke-granulerat harts som även besitter en Ksiktfunktion. lO ml av ett under beteckningenDowex SQ-X4(É%lOO-200 mesh) i handeln förekommåggåyflšššsæaššårgiIägåšštvar aktiverat i natri- umform, tillsattes för detta ändamål. Efter filtrering erhölls en suspension som innehöll liposomer med en storlek av 0,2 - 0,8/Im och uppvisade 75 procent av utgângsdoxorubicinen. Lipo- somerna stabiliserades genom frystorkning.

Exempel 3.

En lösning av 5-fluoruracil i en koncentration av 10 mg/ml i fosfatbuffert 0,007N vid pH 8 hälldes i en förtvålningskolv, som innehöll den lipidfas, som framställts såsom beskrevs oven.

Suspensionen behandlades på det i exempel l beskrivna sättet, varvid man som filterharts använde 10 ml av det under bet Ck- . ql .lerël qrsnumarsi ningen Amberlite IRA~40 (Cl) på marknaden förekommande/hartset, som i förväg var aktiverat som hydroklorid.

De sålunda erhållna liposomerna stabiliserades genom frystork- ning.

Exempel 4.

Liposomerna av 5-fluoruracil framställdes, såsom ovan beskrevs, med följande andelar av lipider: 1,5 gram ägglecitin, 0,6 gram kolesterin, 0,2 gram stearylamin.

Som reningssystem användes 10 ml av det under beteckningen _. .-.__ ........_.._-_..--__.-__._....- 8000443-5 ,polymera_granglära; Dowex l®(5O - 100 mesh) på marknaden förekommande/hartset, som i förväg aktiverats. De sålunda erhållna liposomerna stabilise- ras genom frystorkning.

Exempel 5.

Exempel 2 upprenañes varvid dock Dowexyhartset ersattes med polymeraigranulagë® gram av det adsorberande/hàrtset"XÄD från firmaRohm & Haas och skaktiden förlängdes till 40 minuter.

Efter filtrering genom en glasfritta G l erhölls en liposom- suspension med en halt av omkring 50 procent av utgångsmängden av doxorubicin. Liposomerna stabiliserades genom frystorkning.

Exempel 6. 1,5 gram sojalecitin, 0,4 gram kolesterin och 0,3 gram dicetyl- fosfat löstes i CH2Cl2 och till denna lösning sattes en lös- ning av aminosidinsulfat.i 0,02M fosfatbuffert vid pH 6,5 i en koncentration av 3 mg/ml.

De båda faserna emulgerades och emulsionen skakades varpå kväve vid rumstemperatur genomblåstes tills metylenkloriden fullstän- digt avlägsnats.

Suspensionen stabiliserades 4 timmar vid rumstemperatur, varpå i kolven hälldes en andel harts motsvarande 5 gram torrt harts, som i handeln kan erhållas under beteckningen IRC-50 från firma Rohm & Haas.

Efter l timmes skakning filtrerades liposomsuspensionen genom en glasfritta för avlägsnande av hartset, som håller kvar det fysikaliskt.icke bundna läkemedlet. Liposomsuspensionen stabi- liserades sedan genom frystorkning.

Exempel 7 Med smmna tillvägagångssätt som beskrevs i exempel 6 löstes 2,3 granlecitin från ägg, 0,65 gram kolesterol och 0,15 gram oktadecylamin i 50 ml metylenklorid och lösningen hälldes i 8000443-5 en kolv som innehöll 250 mg m-bensoylhydratropsyra.(generiskt namn ketoprofen) i 150 ml Na, K-buffertfosfat 0,02M vid pH 7,4.

Inert gas (kväve) fick strömma in i kolven som hölls under skakning tills fullständigt avlägsnande av det organiska lös- ningsmedlet och resulterande bildning av liposomsuspension täll vilken sattes lO ml anjonbytarharts IRA 400 (klorid) till- verkat av Rohm & Haas. Efter 30 minuters skakning avlägsnades hartset genom filtrering och den renade liposomsuspensionen lyofiliserades.

Claims (7)

8000443-5 PATENTKRAV

1. l. Förfarande för framställning av en liposomsuspension som innehåller ett läkemedel som kan vara doxorubicinhydroklorid, aminosidinsulfat eller 5-fluoro-uracil, k ä n n e t e c k - n a t därav, att det omfattar (a) framställning av liposomsuspensionen genom upplösning av lipidkomponenter i ett lösningsmedel, tillsats av en vatten- haltig lösning av läkemedlet, och emulgering genom inblås- ning av en inert gas tills lösningsmedlet är fullständigt avlägsnat genom avdunstning, och (b) rening av liposomsuspensionen genom behandling av sus- pensionen med ett polymert jonbytarharts eller ett polymert adsorberande harts.

2. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k - n a t d ä r a v, att man använder starka, medelstarka eller svaga katjonbytarhartser, exempelvis fenolformaldehydhartser, styren-divinylbensenhartser, akrylater, metakrylater, olika kol- väten, och olika kondensationshartser i flytande och fast form, vilka bär karboxyl-, fosfon- eller sulfongrupper.

3. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k - n a t d ä r a v, att man använder starka anjonbytarhartser med trimetylammonium- resp. dimetyletylammoniumgrupper eller medel- starka resp. svaga anjonbytarhartser,exempelvis olika primära, sekundära, tertiära amin- eller fosfingrupper i saltform eller hartser som bär andra grupper, exempelvis fenolformaldehydhart- ser, styren-divinylbensenhartser, akrylater, metakrylater, olika kolväten och olika kondensationshartser i flytande och fast form.

4. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k - n a t d ä r a v, att man använder hartserna i saltform eller i aktiverad form. 8000443-5

5. Förfarande enligt något av patentkraven l-4, k ä n n'e - t e c k n att av att liposomsuspensionen renas från fysika- liskt icke-bundet läkemedel genom behandling med polymerer och/eller sampolymerer utan någon specifik kemisk funktion, som exempelvis, men icke uteslutande, reagerar tack vare Van der Waals-krafter och som är kända som adsorberande hart-- SGI'-

6. Förfarande enligt patentkravet 5, k ä n n e t e c k n a t därav, att de adšorberande hartserna förutom av alifatisk och aromatisk natur även kan vara av oorganiskt ursprung.

7. Förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e t e c k n a t därav, att man stabiliserar de rena- de liposomsuspensionerna genom frystorkning.